▶ ベンチマーク アニマル ヘルス エルティーディー．の特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022078254
(43)【公開日】2022-05-24
(54)【発明の名称】イヌアトピー性皮膚炎の治療
(51)【国際特許分類】
A61K 47/69 20170101AFI20220517BHJP
A61K 39/00 20060101ALI20220517BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20220517BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20220517BHJP
A61K 47/64 20170101ALI20220517BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220517BHJP
【ＦＩ】
A61K47/69
A61K39/00 H
A61P37/08
A61P17/00
A61K47/64
A61P43/00 171
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022036245
(22)【出願日】2022-03-09
(62)【分割の表示】P 2019508291の分割
【原出願日】2017-04-26
(31)【優先権主張番号】16167264.7
(32)【優先日】2016-04-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(71)【出願人】
【識別番号】518381190
【氏名又は名称】ベンチマーク アニマル ヘルス エルティーディー．
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100209037
【弁理士】
【氏名又は名称】猪狩 俊博
(72)【発明者】
【氏名】タース， カスパルス
(57)【要約】 （修正有）
【課題】イヌ科、好ましくは飼いイヌのイヌアトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）を防止または治療する方法において使用するための組成物を提供する。
【解決手段】（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するコア粒子；および（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含み、（ａ）および（ｂ）は前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位により、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される、組成物とする。
【選択図】なし
【解決手段】（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するコア粒子；および（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含み、（ａ）および（ｂ）は前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位により、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される、組成物とする。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
イヌ科、好ましくは飼いイヌのイヌアトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）を防止または治療する
方法において使用するための組成物であって、有効量の前記組成物が前記イヌ科、好まし
くは前記飼いイヌに投与され、前記組成物は
（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するコア粒子；および
（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン
－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）
を含み、
前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列を有す
るタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましくは少な
くとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも
９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくは
これから構成され；
（ａ）および（ｂ）は前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の
付着部位により、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される、組成物。
方法において使用するための組成物であって、有効量の前記組成物が前記イヌ科、好まし
くは前記飼いイヌに投与され、前記組成物は
（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するコア粒子；および
（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン
－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）
を含み、
前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列を有す
るタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましくは少な
くとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも
９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくは
これから構成され；
（ａ）および（ｂ）は前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の
付着部位により、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される、組成物。
【請求項2】
前記コア粒子はウイルス様粒子（ＶＬＰ）、好ましくは組換えＶＬＰである、前記請求
項のいずれか一項に記載の使用するための組成物。
項のいずれか一項に記載の使用するための組成物。
【請求項3】
前記ＶＬＰは植物ウイルスに由来する、請求項２に記載の使用するための組成物。
【請求項4】
前記ＶＬＰは少なくとも１つの改変ＶＬＰポリペプチドを含み、これから本質的に構成
され、あるいはこれから構成される改変ＶＬＰであり、前記改変ＶＬＰポリペプチドは、
（ａ）ＶＬＰポリペプチド、および
（ｂ）ヘルパーＴ細胞エピトープ、
を含み、または好ましくはこれから構成され、
前記ＶＬＰポリペプチドは、
（ｉ）ウイルスのコートタンパク質のアミノ酸配列、好ましくは植物ウイルスのコートタ
ンパク質のアミノ酸配列；または
（ｉｉ）変異アミノ酸配列、
を含み、または好ましくはこれから構成され、
前記変異されるアミノ酸配列はウイルスの前記コートタンパク質のアミノ酸配列であり
、前記変異アミノ酸配列およびウイルスの前記コートタンパク質は、少なくとも９０％、
好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましく
は少なくとも９９％の配列同一性を示す、請求項２～３のいずれか一項に記載の使用する
ための組成物。
され、あるいはこれから構成される改変ＶＬＰであり、前記改変ＶＬＰポリペプチドは、
（ａ）ＶＬＰポリペプチド、および
（ｂ）ヘルパーＴ細胞エピトープ、
を含み、または好ましくはこれから構成され、
前記ＶＬＰポリペプチドは、
（ｉ）ウイルスのコートタンパク質のアミノ酸配列、好ましくは植物ウイルスのコートタ
ンパク質のアミノ酸配列；または
（ｉｉ）変異アミノ酸配列、
を含み、または好ましくはこれから構成され、
前記変異されるアミノ酸配列はウイルスの前記コートタンパク質のアミノ酸配列であり
、前記変異アミノ酸配列およびウイルスの前記コートタンパク質は、少なくとも９０％、
好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましく
は少なくとも９９％の配列同一性を示す、請求項２～３のいずれか一項に記載の使用する
ための組成物。
【請求項5】
前記ＶＬＰはキュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ＣＭＶの前記
改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改変ＣＭＶポリペプチドを含み、これから本質的に構成
され、あるいはこれから構成され、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、
（ａ）ＣＭＶポリペプチド、および
（ｂ）ヘルパーＴ細胞エピトープ
を含み、または好ましくはこれから構成され；ならびに
前記ＣＭＶポリペプチドは、
（ｉｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列；または
（ｉｉ）変異アミノ酸配列、
を含み、または好ましくはこれから構成され、
前記変異されるアミノ酸配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、前記
変異アミノ酸配列およびＣＭＶの前記コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましく
は少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なく
とも９９％の配列同一性を示す、請求項２～４のいずれか一項に記載の使用するための組
成物。
改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改変ＣＭＶポリペプチドを含み、これから本質的に構成
され、あるいはこれから構成され、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、
（ａ）ＣＭＶポリペプチド、および
（ｂ）ヘルパーＴ細胞エピトープ
を含み、または好ましくはこれから構成され；ならびに
前記ＣＭＶポリペプチドは、
（ｉｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列；または
（ｉｉ）変異アミノ酸配列、
を含み、または好ましくはこれから構成され、
前記変異されるアミノ酸配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、前記
変異アミノ酸配列およびＣＭＶの前記コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましく
は少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なく
とも９９％の配列同一性を示す、請求項２～４のいずれか一項に記載の使用するための組
成物。
【請求項6】
前記ＣＭＶポリペプチドは、
（ａ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１を含み、または好ましくはこれから構成される、アミノ酸配列、または
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列
を含み、または好ましくはこれから構成され；ならびに
この請求項で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：２３を含み；あるいは
この請求項で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はアミノ酸配列領
域を含み、前記アミノ酸配列領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも９０％の配列
同一性を有する、請求項５に記載の使用するための組成物。
（ａ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１を含み、または好ましくはこれから構成される、アミノ酸配列、または
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列
を含み、または好ましくはこれから構成され；ならびに
この請求項で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：２３を含み；あるいは
この請求項で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はアミノ酸配列領
域を含み、前記アミノ酸配列領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも９０％の配列
同一性を有する、請求項５に記載の使用するための組成物。
【請求項7】
前記ヘルパーＴ細胞エピトープは前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域にとって代わり
、前記ＣＭＶポリペプチドの前記Ｎ末端領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸２－１
２に対応する、請求項５～６のいずれか一項に記載の使用するための組成物。
、前記ＣＭＶポリペプチドの前記Ｎ末端領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸２－１
２に対応する、請求項５～６のいずれか一項に記載の使用するための組成物。
【請求項8】
前記Ｔｈ細胞エピトープはＰＡＤＲＥ配列であり、前記Ｔｈ細胞エピトープはＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され；あるいは、
前記Ｔｈ細胞エピトープは、破傷風毒素に由来し、前記Ｔｈ細胞エピトープは、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を有し、好ましくはこれから構成される、請求項５～７の
いずれか一項に記載の使用するための組成物。
ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され；あるいは、
前記Ｔｈ細胞エピトープは、破傷風毒素に由来し、前記Ｔｈ細胞エピトープは、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を有し、好ましくはこれから構成される、請求項５～７の
いずれか一項に記載の使用するための組成物。
【請求項9】
前記ＣＭＶポリペプチドは、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列を含み、または
好ましくはこれから構成され、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、また
は好ましくはこれから構成され；ならびに、前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３
を含み、前記ヘルパーＴ細胞エピトープは前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域にとって
代わり、前記ＣＭＶポリペプチドの前記置き換えられたＮ末端領域は１１～１３の連続ア
ミノ酸、好ましくは１１の連続アミノ酸から構成され、さらに好ましくは、前記ＣＭＶポ
リペプチドの前記Ｎ末端領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸２－１２に対応する、
請求項５～８のいずれか一項に記載の使用するための組成物。
好ましくはこれから構成され、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、また
は好ましくはこれから構成され；ならびに、前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３
を含み、前記ヘルパーＴ細胞エピトープは前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域にとって
代わり、前記ＣＭＶポリペプチドの前記置き換えられたＮ末端領域は１１～１３の連続ア
ミノ酸、好ましくは１１の連続アミノ酸から構成され、さらに好ましくは、前記ＣＭＶポ
リペプチドの前記Ｎ末端領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸２－１２に対応する、
請求項５～８のいずれか一項に記載の使用するための組成物。
【請求項10】
前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
７のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される、請求項５～９のいずれ
か一項に記載の使用するための組成物。
７のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される、請求項５～９のいずれ
か一項に記載の使用するための組成物。
【請求項11】
前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記から選択されるアミノ配列を有するタ
ンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される、前記請求項のいずれか一項に記
載の使用するための組成物：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２；または
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。
ンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される、前記請求項のいずれか一項に記
載の使用するための組成物：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２；または
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。
【請求項12】
前記組成物の前記投与は少なくとも１つのＣＡＤパラメータまたは症状を、前記投与前
の前記少なくとも１つのＣＡＤパラメータまたは症状と比べて低減させ、好ましくは前記
少なくとも１つのＣＡＤパラメータまたは症状は皮膚病変またはかゆみのレベルまたは重
症度グレードであり、さらに好ましくは皮膚病変の前記レベルまたは重症度グレードの前
記低減は症状および病変スコアリング試験により決定される、前記請求項のいずれか一項
に記載の使用するための組成物。
の前記少なくとも１つのＣＡＤパラメータまたは症状と比べて低減させ、好ましくは前記
少なくとも１つのＣＡＤパラメータまたは症状は皮膚病変またはかゆみのレベルまたは重
症度グレードであり、さらに好ましくは皮膚病変の前記レベルまたは重症度グレードの前
記低減は症状および病変スコアリング試験により決定される、前記請求項のいずれか一項
に記載の使用するための組成物。
【請求項13】
（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するウイルス様粒子（ＶＬＰ）；
（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキ
ン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）
を含む組成物であって、
前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列を有す
るタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましくは少な
くとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも
９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくは
これから構成され、重ねてさらに好ましくは前記抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のア
ミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され；
（ａ）および（ｂ）は前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の
付着部位により、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される、組成物。
（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキ
ン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）
を含む組成物であって、
前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列を有す
るタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましくは少な
くとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも
９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくは
これから構成され、重ねてさらに好ましくは前記抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のア
ミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され；
（ａ）および（ｂ）は前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の
付着部位により、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される、組成物。
【請求項14】
前記ＶＬＰはキュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、前記改変ＣＭ
Ｖポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配
列を含み、または好ましくはこれから構成される、請求項１３または１４に記載の組成物
。
Ｖポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配
列を含み、または好ましくはこれから構成される、請求項１３または１４に記載の組成物
。
【請求項15】
前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、好ましくは、前記スルフヒドリル基は
、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ
）との反応から誘導され、好ましくは前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記か
ら選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され
る、請求項１３または１４に記載の組成物：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２；または
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。
、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ
）との反応から誘導され、好ましくは前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記か
ら選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され
る、請求項１３または１４に記載の組成物：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２；または
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、イヌアトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）の防止または治療のための組成物、免疫原
性もしくはワクチン組成物および医薬組成物に関する。さらに、本発明は、ＣＡＤを防止
または治療するための方法を提供する。本発明の組成物は、イヌにおいて効率的な免疫応
答、特に抗体応答を誘導し、そのため、ＣＡＤの治療および／または防止のために有用で
ある。
性もしくはワクチン組成物および医薬組成物に関する。さらに、本発明は、ＣＡＤを防止
または治療するための方法を提供する。本発明の組成物は、イヌにおいて効率的な免疫応
答、特に抗体応答を誘導し、そのため、ＣＡＤの治療および／または防止のために有用で
ある。
【背景技術】
【0002】
イヌアトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）は、遺伝因子と環境因子の間の相互作用により引き起
こされる炎症性、かつそう痒性のアレルギー性皮膚疾患として規定され、全てのイヌの最
大１０％までに影響する（Ｈｅｎｓｅｌ Ｐ ｅｔ ａｌ．， （２０１５） ＢＭＣ
Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １１：１９６－２０９； Ｍｅｕｒｙ Ｓ
ｅｔ ａｌ．， （２０１１） Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２２： ３２７－３３４；
Ｎｏｄｔｖｅｄｔ Ａ， ｅｔ ａｌ．， （２００７） Ｐｒｅｖ Ｖｅｔ Ｍｅｄ
７８： ２１０－２２２）。それは、ノミアレルギーのみが超える、イヌ科、特に飼い
イヌにおける２番目に最も一般的なアレルギー性皮膚病状である。アレルギー性症状は湿
疹性皮膚として現れ、アトピー性皮膚炎を有する飼いイヌなどのイヌ科はしばしば、そう
痒、または激しいかゆみ、脱毛、極端なひっかきからの皮膚の擦りむき、それらの足を頻
繁になめること、および過剰な涙液産生に苦しむ。二次的な皮膚の問題も一般的であり、
皮膚感染および過剰な皮脂分泌が挙げられる。
こされる炎症性、かつそう痒性のアレルギー性皮膚疾患として規定され、全てのイヌの最
大１０％までに影響する（Ｈｅｎｓｅｌ Ｐ ｅｔ ａｌ．， （２０１５） ＢＭＣ
Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １１：１９６－２０９； Ｍｅｕｒｙ Ｓ
ｅｔ ａｌ．， （２０１１） Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２２： ３２７－３３４；
Ｎｏｄｔｖｅｄｔ Ａ， ｅｔ ａｌ．， （２００７） Ｐｒｅｖ Ｖｅｔ Ｍｅｄ
７８： ２１０－２２２）。それは、ノミアレルギーのみが超える、イヌ科、特に飼い
イヌにおける２番目に最も一般的なアレルギー性皮膚病状である。アレルギー性症状は湿
疹性皮膚として現れ、アトピー性皮膚炎を有する飼いイヌなどのイヌ科はしばしば、そう
痒、または激しいかゆみ、脱毛、極端なひっかきからの皮膚の擦りむき、それらの足を頻
繁になめること、および過剰な涙液産生に苦しむ。二次的な皮膚の問題も一般的であり、
皮膚感染および過剰な皮脂分泌が挙げられる。
【0003】
臨床徴候は、通常は幼齢で発症し、発症のピーク年齢は典型的には６ヶ月と３年の間で
ある。顔、耳、足、四肢、腹部（ｖｅｎｔｒｕｍ）および屈曲ゾーンが典型的にはそう痒
および紅斑に影響される（Ｇｒｉｆｆｉｎ ＣＥ， ＤｅＢｏｅｒ ＤＪ （２００１）
Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏ
ｇｙ ８１： ２５５－２６９）。それは典型的には慢性再発性病状であり、ほとんどの
イヌが継続的な、通常一生の療法を必要とする（Ｎｕｔｔａｌｌ Ｔ．， ｅｔ ａｌ．
， Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｃｏｒｄ （２０１４） １７４ （ｓｕｐｐｌ ２）
， ３－１２）。
ある。顔、耳、足、四肢、腹部（ｖｅｎｔｒｕｍ）および屈曲ゾーンが典型的にはそう痒
および紅斑に影響される（Ｇｒｉｆｆｉｎ ＣＥ， ＤｅＢｏｅｒ ＤＪ （２００１）
Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏ
ｇｙ ８１： ２５５－２６９）。それは典型的には慢性再発性病状であり、ほとんどの
イヌが継続的な、通常一生の療法を必要とする（Ｎｕｔｔａｌｌ Ｔ．， ｅｔ ａｌ．
， Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｒｅｃｏｒｄ （２０１４） １７４ （ｓｕｐｐｌ ２）
， ３－１２）。
【0004】
ＣＡＤおよびそう痒のためのいくつかの治療はすでに記載されており、フェキソフェナ
ジンなどの抗ヒスタミン薬、またはシクロスポリンのような薬物の使用が挙げられる。ヤ
ヌスキナーゼ、またはＪＡＫ、阻害剤として知られている最近承認された製品もまた、Ｃ
ＡＤに使用可能である（Ｎｕｔｔａｌｌ Ｔ．， ｅｔ ａｌ．， Ｖｅｔｅｒｉｎａｒ
ｙ Ｒｅｃｏｒｄ （２０１４） １７４ （ｓｕｐｐｌ ２）， ３－１２）； ＷＯ
２０１５／０４２５９６号）。
ジンなどの抗ヒスタミン薬、またはシクロスポリンのような薬物の使用が挙げられる。ヤ
ヌスキナーゼ、またはＪＡＫ、阻害剤として知られている最近承認された製品もまた、Ｃ
ＡＤに使用可能である（Ｎｕｔｔａｌｌ Ｔ．， ｅｔ ａｌ．， Ｖｅｔｅｒｉｎａｒ
ｙ Ｒｅｃｏｒｄ （２０１４） １７４ （ｓｕｐｐｌ ２）， ３－１２）； ＷＯ
２０１５／０４２５９６号）。
【0005】
これらの薬物は有効であると考えられるが、それらは、それらの長期使用を妨げる可能
性のある著しい副作用を有する。例えば、これらの薬物はイヌ科、例えば飼いイヌの免疫
系を抑制し、それにより、感染に至らしめることがある。コルチコステロイドはまた、イ
ヌ科および飼いイヌにおいて骨粗鬆症、内分泌の問題および白内障を引き起こす可能性が
ある。加えて、コルチコステロイドにより、飼いイヌなどのイヌ科は頻繁に食べ、飲み、
かつ、排尿するようになる傾向があり、これは、ペット所有者により望ましくないと考え
られる。その上、薬物の多くは経口的にかつ毎日与えられなければならず、このため、そ
れらの使用は非常に不便なものとなる。ＣＡＤはしばしば慢性病状であるので、これらの
安全性および副作用の問題は、安全で有効な長期治療に対する重要な未だ対処されていな
い医学的必要性を作り出す。その上、安全性だけでなく服薬遵守が依然として、さらなる
懸案事項となっている。よって、ＣＡＤに対する治療選択肢が必要とされたままである。
本発明はこの要求を満たす。
性のある著しい副作用を有する。例えば、これらの薬物はイヌ科、例えば飼いイヌの免疫
系を抑制し、それにより、感染に至らしめることがある。コルチコステロイドはまた、イ
ヌ科および飼いイヌにおいて骨粗鬆症、内分泌の問題および白内障を引き起こす可能性が
ある。加えて、コルチコステロイドにより、飼いイヌなどのイヌ科は頻繁に食べ、飲み、
かつ、排尿するようになる傾向があり、これは、ペット所有者により望ましくないと考え
られる。その上、薬物の多くは経口的にかつ毎日与えられなければならず、このため、そ
れらの使用は非常に不便なものとなる。ＣＡＤはしばしば慢性病状であるので、これらの
安全性および副作用の問題は、安全で有効な長期治療に対する重要な未だ対処されていな
い医学的必要性を作り出す。その上、安全性だけでなく服薬遵守が依然として、さらなる
懸案事項となっている。よって、ＣＡＤに対する治療選択肢が必要とされたままである。
本発明はこの要求を満たす。
【発明の概要】
【0006】
本発明はイヌ科、例えば、好ましくは、飼いイヌ（カニス・ルプス・ファミリアーリス
またはカニス・ファミリアーリス）、およびそのファミリーの他のメンバーにおけるアト
ピー性皮膚炎の防止および治療のための組成物を提供する。特に、本発明は、イヌアトピ
ー性皮膚炎（ＣＡＤ）の防止および治療のための組成物およびその使用を提供し、ここで
、好ましい発明の組成物は、Ｔｈ細胞エピトープ、特にユニバーサルＴｈ細胞エピトープ
の組み込みにより改変された植物ウイルスキュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）のウイル
ス様粒子上で提示されるイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含む。
さらに、これらの改変ＶＬＰは、ｃＩＬ－３１に対する免疫応答、特に抗体応答を生成さ
せるためのワクチンとして機能する。Ｔｈ細胞エピトープ、特にユニバーサルＴｈ細胞エ
ピトープの存在は、生成された免疫応答におけるさらなる増加、よって、ＣＡＤの防止お
よび治療のための有益な効果につながる。
またはカニス・ファミリアーリス）、およびそのファミリーの他のメンバーにおけるアト
ピー性皮膚炎の防止および治療のための組成物を提供する。特に、本発明は、イヌアトピ
ー性皮膚炎（ＣＡＤ）の防止および治療のための組成物およびその使用を提供し、ここで
、好ましい発明の組成物は、Ｔｈ細胞エピトープ、特にユニバーサルＴｈ細胞エピトープ
の組み込みにより改変された植物ウイルスキュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）のウイル
ス様粒子上で提示されるイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含む。
さらに、これらの改変ＶＬＰは、ｃＩＬ－３１に対する免疫応答、特に抗体応答を生成さ
せるためのワクチンとして機能する。Ｔｈ細胞エピトープ、特にユニバーサルＴｈ細胞エ
ピトープの存在は、生成された免疫応答におけるさらなる増加、よって、ＣＡＤの防止お
よび治療のための有益な効果につながる。
【0007】
よって、本発明の組成物のイヌ科、特に飼いイヌへの投与は、ＣＡＤ疾患パラメータお
よび症状の効率的な低減につながる。特に、本発明の組成物のイヌ科、特に飼いイヌへの
投与は、イヌ科、特に飼いイヌの血液および皮膚における自己抗体の誘導およびインター
ロイキン３１レベルの低減につながるだけでなく、さらに、ｃＩＬ－３１レベルの前記低
減はＣＡＤ疾患症状の低減と相関する。その上、本発明の組成物のイヌ科、特に飼いイヌ
への投与はＣＡＤに罹患したイヌのかゆみの低減および皮膚病変の重症度グレードの効率
的な低減につながる。
よび症状の効率的な低減につながる。特に、本発明の組成物のイヌ科、特に飼いイヌへの
投与は、イヌ科、特に飼いイヌの血液および皮膚における自己抗体の誘導およびインター
ロイキン３１レベルの低減につながるだけでなく、さらに、ｃＩＬ－３１レベルの前記低
減はＣＡＤ疾患症状の低減と相関する。その上、本発明の組成物のイヌ科、特に飼いイヌ
への投与はＣＡＤに罹患したイヌのかゆみの低減および皮膚病変の重症度グレードの効率
的な低減につながる。
【0008】
本発明による治療により、処置イヌ科、特に飼いイヌにおけるアトピー性皮膚炎病変指
数（Ａｔｏｐｉｃ Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ Ｌｅｓｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ）、またはＡＤＬ
Ｉ、およびそう痒ビジュアルアナログスケール、またはＰＶＡＳの低下が得られる。ＡＤ
ＬＩスコアは、５つの特定の身体領域において評価されたイヌアトピー性皮膚炎と関連す
る６つの臨床症状の検証された複合指数である。各特定された身体領域で、各パラメータ
がスコアラーにより０から５までスコア化され、０のスコアは、病変なしとして規定され
、５のスコアは重篤／広範な病変として規定される。ＰＶＡＳはスコアラーにより、０～
１０アナログスケールを用いてスコア化され、０のスコアはそう痒／咀嚼なしを表し、１
０のスコアは絶え間ないおよび激烈なそう痒／咀嚼に相当する。
数（Ａｔｏｐｉｃ Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ Ｌｅｓｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ）、またはＡＤＬ
Ｉ、およびそう痒ビジュアルアナログスケール、またはＰＶＡＳの低下が得られる。ＡＤ
ＬＩスコアは、５つの特定の身体領域において評価されたイヌアトピー性皮膚炎と関連す
る６つの臨床症状の検証された複合指数である。各特定された身体領域で、各パラメータ
がスコアラーにより０から５までスコア化され、０のスコアは、病変なしとして規定され
、５のスコアは重篤／広範な病変として規定される。ＰＶＡＳはスコアラーにより、０～
１０アナログスケールを用いてスコア化され、０のスコアはそう痒／咀嚼なしを表し、１
０のスコアは絶え間ないおよび激烈なそう痒／咀嚼に相当する。
【0009】
この説明に縛られないが、本発明は、多面的な疾患であると考えられるＣＡＤに影響を
与えると考えられる。ＣＡＤでは、Ｔｈ２極性化および微生物の存在の組み合わせが、免
疫細胞、ケラチノサイトによる炎症およびそう痒、およびかゆみを引き起こす直接神経刺
激を駆動するｃＩＬ－３１媒介効果につながる可能性があると考えられる。イヌ科、例え
ば、特に飼いイヌにおける本発明の組成物および方法によるｃＩＬ－３１に対して誘導さ
れた自己抗体は、よって、ｃＩＬ－３１のレベルを低減させ、よって、かゆみ、その結果
として、イヌのひっかきを低減させ、ひっかきの下流イベント（炎症および感染を含む）
を全て阻止することにより、ＣＡＤに対してプラスの影響を有する。
与えると考えられる。ＣＡＤでは、Ｔｈ２極性化および微生物の存在の組み合わせが、免
疫細胞、ケラチノサイトによる炎症およびそう痒、およびかゆみを引き起こす直接神経刺
激を駆動するｃＩＬ－３１媒介効果につながる可能性があると考えられる。イヌ科、例え
ば、特に飼いイヌにおける本発明の組成物および方法によるｃＩＬ－３１に対して誘導さ
れた自己抗体は、よって、ｃＩＬ－３１のレベルを低減させ、よって、かゆみ、その結果
として、イヌのひっかきを低減させ、ひっかきの下流イベント（炎症および感染を含む）
を全て阻止することにより、ＣＡＤに対してプラスの影響を有する。
【0010】
よって、第１の態様では、本発明は、イヌ科、好ましくは飼いイヌのイヌアトピー性皮
膚炎（ＣＡＤ）を防止または治療する方法において使用するための組成物を提供し、ここ
で、有効量の前記組成物が前記イヌ科、好ましくは前記飼いイヌに投与され、ここで、前
記組成物は（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するコア粒子；および（ｂ）少な
くとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原
（ｃＩＬ－３１抗原）を含み、ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２２から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２
と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％
、重ねてさらに好ましくは少なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有する
タンパク質を含み、または好ましくは、これから構成され；ここで、（ａ）および（ｂ）
は、前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位によって、
少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される。
膚炎（ＣＡＤ）を防止または治療する方法において使用するための組成物を提供し、ここ
で、有効量の前記組成物が前記イヌ科、好ましくは前記飼いイヌに投与され、ここで、前
記組成物は（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するコア粒子；および（ｂ）少な
くとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原
（ｃＩＬ－３１抗原）を含み、ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２２から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２
と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％
、重ねてさらに好ましくは少なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有する
タンパク質を含み、または好ましくは、これから構成され；ここで、（ａ）および（ｂ）
は、前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位によって、
少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される。
【0011】
好ましい実施形態では、前記コア粒子はウイルス様粒子（ＶＬＰ）、好ましくは組換え
ＶＬＰである。さらに好ましい実施形態では、前記ＶＬＰはキュウリモザイクウイルス（
ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ここで、ＣＭＶの前記改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改
変ＣＭＶポリペプチドを含み、これから本質的に構成され、あるいはこれから構成され、
ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）ＣＭＶポリペプチド、および（ｂ）ヘル
パーＴ細胞エピトープを含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、前記ＣＭＶ
ポリペプチドは、（ｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列；または（ｉｉ）変異
アミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、変異されるアミノ酸
配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、ここで、前記変異アミノ酸配列
およびＣＭＶの前記コートタンパク質は少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％
、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同
一性を示す。さらに非常に好ましい実施形態では、前記ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）Ｃ
ＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１を含み、または好ましくはこれから構成される、アミノ酸配列、または（ｂ）Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ま
たは好ましくはこれから構成され；ならびにここで、この請求項で（ａ）または（ｂ）に
おいて規定される前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み；またはここで、こ
の請求項で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はアミノ酸配列領域を
含み、ここで、前記アミノ酸配列領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも９０％の
配列同一性を有する。さらに非常に好ましい実施形態では、前記ＶＬＰはキュウリモザイ
クウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好ま
しくはこれから構成される。
ＶＬＰである。さらに好ましい実施形態では、前記ＶＬＰはキュウリモザイクウイルス（
ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ここで、ＣＭＶの前記改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改
変ＣＭＶポリペプチドを含み、これから本質的に構成され、あるいはこれから構成され、
ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）ＣＭＶポリペプチド、および（ｂ）ヘル
パーＴ細胞エピトープを含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、前記ＣＭＶ
ポリペプチドは、（ｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列；または（ｉｉ）変異
アミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、変異されるアミノ酸
配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、ここで、前記変異アミノ酸配列
およびＣＭＶの前記コートタンパク質は少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％
、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同
一性を示す。さらに非常に好ましい実施形態では、前記ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）Ｃ
ＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１を含み、または好ましくはこれから構成される、アミノ酸配列、または（ｂ）Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ま
たは好ましくはこれから構成され；ならびにここで、この請求項で（ａ）または（ｂ）に
おいて規定される前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み；またはここで、こ
の請求項で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はアミノ酸配列領域を
含み、ここで、前記アミノ酸配列領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも９０％の
配列同一性を有する。さらに非常に好ましい実施形態では、前記ＶＬＰはキュウリモザイ
クウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好ま
しくはこれから構成される。
【0012】
さらに非常に好ましい実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記
から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成さ
れる：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２２；または（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５－３０。さらに非常に好
ましい実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記から選択されるア
ミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される：（ａ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２２；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５または（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。さらに
非常に好ましい実施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、
好ましくは前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－
アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導される。さらに非常に好ましい実
施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましくは前記ス
ルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のリジン残基の反応から誘導される。
から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成さ
れる：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２２；または（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５－３０。さらに非常に好
ましい実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記から選択されるア
ミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される：（ａ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２２；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５または（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。さらに
非常に好ましい実施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、
好ましくは前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－
アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導される。さらに非常に好ましい実
施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましくは前記ス
ルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のリジン残基の反応から誘導される。
【0013】
さらなる態様では、本発明は、有効量の、発明の前記組成物を含む、免疫原性もしくは
ワクチン組成物を提供し、ここで、好ましくは前記免疫原性もしくはワクチン組成物は、
アジュバントをさらに含む。
ワクチン組成物を提供し、ここで、好ましくは前記免疫原性もしくはワクチン組成物は、
アジュバントをさらに含む。
【0014】
さらなる態様では、本発明は、下記を含む医薬組成物を提供する：（ａ）発明の組成物
または発明の免疫原性もしくはワクチン組成物；および（ｂ）薬学的に許容される担体。
または発明の免疫原性もしくはワクチン組成物；および（ｂ）薬学的に許容される担体。
【0015】
さらなる態様では、本発明は、免疫化の方法を提供し、ここで、前記方法は、発明の組
成物、発明の免疫原性もしくはワクチン組成物または発明の医薬組成物をヒトに投与する
ことを含む。
成物、発明の免疫原性もしくはワクチン組成物または発明の医薬組成物をヒトに投与する
ことを含む。
【0016】
さらなる態様では、本発明は、薬剤として使用するための、発明の組成物、発明の免疫
原性もしくはワクチン組成物、または発明の医薬組成物を提供する。
原性もしくはワクチン組成物、または発明の医薬組成物を提供する。
【0017】
さらなる態様では、本発明は、飼いイヌのイヌアトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）の防止また
は治療の方法において使用するための、発明の組成物、発明の免疫原性もしくはワクチン
組成物、または発明の医薬組成物を提供し、ここで、有効量の、前記発明の組成物、前記
発明の免疫原性もしくはワクチン組成物、または前記発明の医薬組成物が前記飼いイヌに
投与される。好ましくは、前記発明の組成物、前記発明の免疫原性もしくはワクチン組成
物、または前記発明の医薬組成物の前記投与は、前記投与前の少なくとも１つの症状と比
較すると、前記イヌアトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）の少なくとも１つの症状を低減させる。
は治療の方法において使用するための、発明の組成物、発明の免疫原性もしくはワクチン
組成物、または発明の医薬組成物を提供し、ここで、有効量の、前記発明の組成物、前記
発明の免疫原性もしくはワクチン組成物、または前記発明の医薬組成物が前記飼いイヌに
投与される。好ましくは、前記発明の組成物、前記発明の免疫原性もしくはワクチン組成
物、または前記発明の医薬組成物の前記投与は、前記投与前の少なくとも１つの症状と比
較すると、前記イヌアトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）の少なくとも１つの症状を低減させる。
【0018】
さらなる態様では、本発明は、飼いイヌのイヌアトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）の防止また
は治療の方法を提供し、ここで、前記方法は、有効量の、前記発明の組成物、前記発明の
免疫原性もしくはワクチン組成物、または前記発明の医薬組成物を前記飼いイヌに投与す
ることを含む。
は治療の方法を提供し、ここで、前記方法は、有効量の、前記発明の組成物、前記発明の
免疫原性もしくはワクチン組成物、または前記発明の医薬組成物を前記飼いイヌに投与す
ることを含む。
【0019】
別の態様では、本発明は、飼いイヌのイヌアトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）の防止または治
療のための薬剤の製造のための、前記発明の組成物、前記発明の免疫原性もしくはワクチ
ン組成物、または前記発明の医薬組成物の使用を提供し、ここで、典型的にかつ好ましく
は、有効量の、前記発明の組成物、前記発明の免疫原性もしくはワクチン組成物、または
前記発明の医薬組成物が前記飼いイヌに投与される。
療のための薬剤の製造のための、前記発明の組成物、前記発明の免疫原性もしくはワクチ
ン組成物、または前記発明の医薬組成物の使用を提供し、ここで、典型的にかつ好ましく
は、有効量の、前記発明の組成物、前記発明の免疫原性もしくはワクチン組成物、または
前記発明の医薬組成物が前記飼いイヌに投与される。
【0020】
別の態様では、本発明は、飼いイヌのイヌアトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）を防止または治
療する方法において使用するための組成物を提供し、ここで、有効量の前記組成物が前記
飼いイヌに投与され、ここで、前記組成物は（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有
するコア粒子であって、前記コア粒子は好ましくはウイルス様粒子（ＶＬＰ）、さらに好
ましくは組換えＶＬＰである、コア粒子；および（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位
を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含み
、ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配
列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好まし
くは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少
なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好
ましくはこれから構成され；ここで、（ａ）および（ｂ）は、前記少なくとも１つの第１
のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位によって、少なくとも１つの非ペプチド共
有結合を介して連結される。
療する方法において使用するための組成物を提供し、ここで、有効量の前記組成物が前記
飼いイヌに投与され、ここで、前記組成物は（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有
するコア粒子であって、前記コア粒子は好ましくはウイルス様粒子（ＶＬＰ）、さらに好
ましくは組換えＶＬＰである、コア粒子；および（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位
を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含み
、ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配
列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好まし
くは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少
なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好
ましくはこれから構成され；ここで、（ａ）および（ｂ）は、前記少なくとも１つの第１
のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位によって、少なくとも１つの非ペプチド共
有結合を介して連結される。
【0021】
さらなる態様では、本発明は、（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するウイル
ス様粒子（ＶＬＰ）；（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つの
イヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含む組成物を提供し、ここで、
前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列を有する
タンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましくは少なく
とも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９
８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこ
れから構成され、重ねてさらに好ましくは、前記抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のア
ミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、（ａ
）および（ｂ）は、前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着
部位によって、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される。
ス様粒子（ＶＬＰ）；（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つの
イヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含む組成物を提供し、ここで、
前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列を有する
タンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましくは少なく
とも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９
８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこ
れから構成され、重ねてさらに好ましくは、前記抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のア
ミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、（ａ
）および（ｂ）は、前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着
部位によって、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される。
【0022】
さらに非常に好ましい実施形態では、前記ＶＬＰはキュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ
）の改変ＶＬＰであり、ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成
される。
）の改変ＶＬＰであり、ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成
される。
【0023】
さらに非常に好ましい実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記
から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成さ
れる：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２２；または（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５－３０。さらに非常に好
ましい実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記から選択されるア
ミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される：（ａ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２２；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５または（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。さらに
非常に好ましい実施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、
好ましくは前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－
アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導される。さらに非常に好ましい実
施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましくは前記ス
ルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のリジン残基の反応から誘導される。
から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成さ
れる：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２２；または（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５－３０。さらに非常に好
ましい実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記から選択されるア
ミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される：（ａ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２２；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５または（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。さらに
非常に好ましい実施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、
好ましくは前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－
アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導される。さらに非常に好ましい実
施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましくは前記ス
ルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のリジン残基の反応から誘導される。
【0024】
本発明のさらなる態様および実施形態は、この説明が続くにつれ、明らかになるであろ
う。
う。
【図面の簡単な説明】
【0025】
【図1】ｐＥＴ－ＣＭＶｗｔプラスミドマップである。関連遺伝子および制限酵素部位の相対位置が示される。
【図2A】精製ＣＭＶｗｔ ＶＬＰの動的光散乱を示す。粒子のサイズを、ゼータサイザーナノＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ．、英国）を使用することにより検出した。
【図2B】精製ＣＭＶｗｔ ＶＬＰの電子－顕微鏡分析を示す。ＶＬＰの形態学的な分析については、ＪＥＭ－１２３０電子顕微鏡（Ｊｅｏｌ Ｌｔｄ．、東京、日本）を使用した。
【図3A】精製ＣＭＶ由来ＶＬＰの質量分析を示す。マトリックス支援レーザー脱離／イオン化（ＭＡＬＤＩ）－ＴＯＦＭＳ分析を、ＡｕｔｏｆｌｅｘＭＳ（ＢｒｕｋｅｒＤａｌｔｏｎｉｋ、ドイツ）上で実施した。質量決定のために、タンパク質分子質量（ＭＭ）較正標準ＩＩ（２２．３－６６．５ｋＤａ；ＢｒｕｋｅｒＤａｌｔｏｎｉｋ）を使用した。ＣＭＶ野生型（「ｗｔ」）；理論ＭＭ＝２４０６９；観測ＭＭ＝２４０５８
【図3B】ＣＭＶ－Ｎｐａｄｒ；理論ＭＭ＝２４１６１（第１のＭｅｔなし）；観測ＭＭ＝２４１６０
【図3C】ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０；理論ＭＭ＝２４４８３（第１のＭｅｔなし）；観測ＭＭ＝２４４７７
【図4A】精製ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ＶＬＰの動的光散乱を示す。粒子のサイズを、ゼータサイザーナノＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ．、英国）を使用することにより検出した。
【図4B】精製ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ＶＬＰの電子－顕微鏡分析を示す。ＶＬＰの形態学的分析では、ＪＥＭ－１２３０電子顕微鏡（Ｊｅｏｌ Ｌｔｄ．、東京、日本）を使用した。
【図5A】精製ＣＭＶ－Ｎｐａｄｒ ＶＬＰの動的光散乱を示す。粒子のサイズを、ゼータサイザーナノＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＬｔｄ．、英国）を使用することにより検出した。
【図5B】精製ＣＭＶ－Ｎｐａｄｒ ＶＬＰの電子－顕微鏡分析を示す。ＶＬＰの形態学的分析では、ＪＥＭ－１２３０電子顕微鏡（Ｊｅｏｌ Ｌｔｄ．、東京、日本）を使用した。
【図6】大腸菌における６×ＨｉｓタグおよびＣ末端システインを有するｃＩＬ－３１の産生を示す。レーン１－誘導前の総細胞溶解物、レーン２－誘導後の総細胞溶解物、レーン３－マーカー。ＣＩＬ－３１タンパク質の位置が矢印で示される。
【図7】６×ＨｉｓタグおよびＣ末端システインを有するｃＩＬ－３１の精製を示す。レーン１－マーカー、レーン２－細胞溶解物（可溶画分）、レーン２－洗浄バッファーＷＢ１によるペレット抽出物、レーン２－洗浄バッファーＷＢ２によるペレット抽出物、レーン３－８Ｍ尿素を含む溶離バッファーＥＢによるペレット抽出物。
【図8A】６×ＨｉｓタグおよびＣ末端システインを有するｃＩＬ－３１のリフォールディングを示す。レーン１－マーカー、レーン２－リフォールディング後の不溶画分、レーン３－リフォールディング後の可溶画分。
【図8B】６×ＨｉｓタグおよびＣ末端システインを有するリフォールディングされたｃＩＬ－３１のゲル濾過プロファイルを示す。ピークはカラムの空隙容量に対応し、材料が凝集したことを示す。
【図9】天然組換えイヌｃＩＬ－３１の生成を示す。レーン１－誘導前の総細胞溶解物、レーン２－誘導後の総細胞溶解物、レーン３－マーカー。ＣＩＬ－３１タンパク質の位置が矢印で示される。
【図10A】ゲル濾過カラム上でのリフォールディングされた天然組換えｃＩＬ－３１の精製を示す。タンパク質はカラム空隙容量よりずっと遅くに溶離され、材料が凝集していないことが示される。
【図10B】ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上でのピーク画分の分析を示す。
【図11】ＣＭＶ ＶＬＰにカップリングされたｃＩＬ－３１のＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動分析を示す。レーン１－マーカー、レーン２－ＣＭＶ ＶＬＰ、レーン３－ＳＭＰＨで処理されたＣＭＶ ＶＬＰ、レーン４－ｃＩＬ３１、レーン５－ＣＭＶ ＶＬＰにカップリングされたｃＩＬ－３１。レーン５上のカップリング生成物は矢印で示される。
【図12】ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ＶＬＰおよびカップリングされたｃＩＬ－３１を有する同じＶＬＰの電子顕微鏡法を示す。
【図13A】ｃＩＬ－３１に対するワクチン接種は免疫化アレルギーイヌにおいてひっかきを強く低減させる。ワクチン接種前後での屋内チリダニ抽出物による誘発後６時間にわたるひっかき。
【図13B】ひっかきの欠如のｃＩＬ－３１特異抗体の誘導との相関を示す。
【発明を実施するための形態】
【0026】
別に規定されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語はこの発
明が属する分野の当業者により普通に理解されるものと同じ意味を有する。
明が属する分野の当業者により普通に理解されるものと同じ意味を有する。
【0027】
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）：「ウイルス様粒子（ＶＬＰ）」という用語は、本明細書で
は、非複製的なもしくは非感染性の、好ましくは非複製的なかつ非感染性のウイルス粒子
を示し、または、非複製的なもしくは非感染性の、好ましくはウイルス粒子に似ている非
複製的なかつ非感染性の構造、好ましくはウイルスのカプシドを示す。「非複製的な」と
いう用語は、本明細書では、ＶＬＰにより含まれるゲノムを複製することができないこと
を示す。「非感染性」という用語は、本明細書では、宿主細胞に入ることができないこと
を示す。発明によるウイルス様粒子は、ウイルスゲノムまたはゲノム機能の全てまたは一
部を欠いているので、非複製的かつ非感染性である。発明によるウイルス様粒子は、それ
らのゲノムとは異なる核酸を含み得る。組換えにより生成されたウイルス様粒子は典型的
には、宿主細胞由来ＲＮＡを含む。本発明によるウイルス様粒子の典型的な、かつ好まし
い実施形態は、発明のポリペプチドからなるウイルスカプシドである。ウイルス様粒子は
、典型的には、１つのウイルス様粒子あたり、６０、１２０、１８０、２４０、３００、
３６０、または３６０超のタンパク質サブユニットを含むウイルスコートタンパク質から
なる、典型的には、巨大分子集合体である。典型的にかつ好ましくは、これらのサブユニ
ットの相互作用は、固有の繰り返し組織を有するウイルスカプシドまたはウイルス－カプ
シド様構造の形成につながる。ウイルス様粒子の１つの特徴は、そのサブユニットのその
高度に秩序化された反復配列である。
は、非複製的なもしくは非感染性の、好ましくは非複製的なかつ非感染性のウイルス粒子
を示し、または、非複製的なもしくは非感染性の、好ましくはウイルス粒子に似ている非
複製的なかつ非感染性の構造、好ましくはウイルスのカプシドを示す。「非複製的な」と
いう用語は、本明細書では、ＶＬＰにより含まれるゲノムを複製することができないこと
を示す。「非感染性」という用語は、本明細書では、宿主細胞に入ることができないこと
を示す。発明によるウイルス様粒子は、ウイルスゲノムまたはゲノム機能の全てまたは一
部を欠いているので、非複製的かつ非感染性である。発明によるウイルス様粒子は、それ
らのゲノムとは異なる核酸を含み得る。組換えにより生成されたウイルス様粒子は典型的
には、宿主細胞由来ＲＮＡを含む。本発明によるウイルス様粒子の典型的な、かつ好まし
い実施形態は、発明のポリペプチドからなるウイルスカプシドである。ウイルス様粒子は
、典型的には、１つのウイルス様粒子あたり、６０、１２０、１８０、２４０、３００、
３６０、または３６０超のタンパク質サブユニットを含むウイルスコートタンパク質から
なる、典型的には、巨大分子集合体である。典型的にかつ好ましくは、これらのサブユニ
ットの相互作用は、固有の繰り返し組織を有するウイルスカプシドまたはウイルス－カプ
シド様構造の形成につながる。ウイルス様粒子の１つの特徴は、そのサブユニットのその
高度に秩序化された反復配列である。
【0028】
ＣＭＶのウイルス様粒子：「ＣＭＶのウイルス様粒子」またはＣＭＶ ＶＬＰという用
語は、少なくとも１つのＣＭＶポリペプチドを含む、または好ましくはこれから本質的に
構成される、または好ましくはこれから構成されるウイルス様粒子を示す。好ましくは、
ＣＭＶのウイルス様粒子は、カプシド構造の主要タンパク質成分として、さらにいっそう
好ましくは単独タンパク質成分として前記ＣＭＶポリペプチドを含む。典型的にかつ好ま
しくは、ＣＭＶのウイルス様粒子はＣＭＶのカプシドの構造に類似する。ＣＭＶのウイル
ス様粒子は、非複製的および／または非感染性であり、少なくともＣＭＶの複製機構をコ
ードする１つまたは複数の遺伝子を欠き、典型的には、宿主へのウイルス付着またはこの
中への侵入に関与する１つまたは複数のタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子
も欠く。この定義はまた、前記１つまたは複数の遺伝子が依然として存在するが、不活性
であるウイルス様粒子を含む。ＣＭＶのウイルス様粒子を非複製的および／または非感染
性にする好ましい方法は、物理的または化学的不活性化によるものであり、例えばＵＶ照
射、ホルムアルデヒド処理である。好ましくは、ＣＭＶのＶＬＰは、ＣＭＶの複製機構を
コードする１つまたは複数の遺伝子を欠き、また、宿主へのウイルス付着またはこの中へ
の侵入に関与する１つまたは複数のタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子を欠
く。重ねてより好ましくは、非複製的および／または非感染性ウイルス様粒子は、組換え
遺伝子技術により得られる。本発明による、組換えにより生成されたＣＭＶのウイルス様
粒子は、典型的にかつ好ましくはウイルスゲノムを含まない。しばしばモザイクＶＬＰと
呼ばれる、１を超える種のポリペプチドを含むウイルス様粒子もまた、本発明により包含
される。よって、１つの実施形態では、本発明によるウイルス様粒子は、少なくとも２つ
の異なる種のポリペプチドを含み、ここで、ポリペプチドの前記種の少なくとも１つはＣ
ＭＶポリペプチドである。好ましくは、ＣＭＶのＶＬＰは、典型的には１ＶＬＰあたり１
８０のコートタンパク質サブユニットを含むＣＭＶコートタンパク質からなる巨大分子集
合体である。典型的にかつ好ましくは、ＣＭＶのＶＬＰは、本明細書では、下記を含む、
または好ましくはこれから構成される少なくとも１つのＣＭＶポリペプチドを含み、これ
から本質的に構成され、あるいはこれから構成され：（ｉ）ＣＭＶのコートタンパク質の
アミノ酸配列；または（ｉｉ）変異アミノ酸配列、ここで、変異されるアミノ酸配列はＣ
ＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、ここで、前記変異アミノ酸配列および前
記変異されるアミノ酸配列は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに
好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示
す。
語は、少なくとも１つのＣＭＶポリペプチドを含む、または好ましくはこれから本質的に
構成される、または好ましくはこれから構成されるウイルス様粒子を示す。好ましくは、
ＣＭＶのウイルス様粒子は、カプシド構造の主要タンパク質成分として、さらにいっそう
好ましくは単独タンパク質成分として前記ＣＭＶポリペプチドを含む。典型的にかつ好ま
しくは、ＣＭＶのウイルス様粒子はＣＭＶのカプシドの構造に類似する。ＣＭＶのウイル
ス様粒子は、非複製的および／または非感染性であり、少なくともＣＭＶの複製機構をコ
ードする１つまたは複数の遺伝子を欠き、典型的には、宿主へのウイルス付着またはこの
中への侵入に関与する１つまたは複数のタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子
も欠く。この定義はまた、前記１つまたは複数の遺伝子が依然として存在するが、不活性
であるウイルス様粒子を含む。ＣＭＶのウイルス様粒子を非複製的および／または非感染
性にする好ましい方法は、物理的または化学的不活性化によるものであり、例えばＵＶ照
射、ホルムアルデヒド処理である。好ましくは、ＣＭＶのＶＬＰは、ＣＭＶの複製機構を
コードする１つまたは複数の遺伝子を欠き、また、宿主へのウイルス付着またはこの中へ
の侵入に関与する１つまたは複数のタンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子を欠
く。重ねてより好ましくは、非複製的および／または非感染性ウイルス様粒子は、組換え
遺伝子技術により得られる。本発明による、組換えにより生成されたＣＭＶのウイルス様
粒子は、典型的にかつ好ましくはウイルスゲノムを含まない。しばしばモザイクＶＬＰと
呼ばれる、１を超える種のポリペプチドを含むウイルス様粒子もまた、本発明により包含
される。よって、１つの実施形態では、本発明によるウイルス様粒子は、少なくとも２つ
の異なる種のポリペプチドを含み、ここで、ポリペプチドの前記種の少なくとも１つはＣ
ＭＶポリペプチドである。好ましくは、ＣＭＶのＶＬＰは、典型的には１ＶＬＰあたり１
８０のコートタンパク質サブユニットを含むＣＭＶコートタンパク質からなる巨大分子集
合体である。典型的にかつ好ましくは、ＣＭＶのＶＬＰは、本明細書では、下記を含む、
または好ましくはこれから構成される少なくとも１つのＣＭＶポリペプチドを含み、これ
から本質的に構成され、あるいはこれから構成され：（ｉ）ＣＭＶのコートタンパク質の
アミノ酸配列；または（ｉｉ）変異アミノ酸配列、ここで、変異されるアミノ酸配列はＣ
ＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、ここで、前記変異アミノ酸配列および前
記変異されるアミノ酸配列は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに
好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示
す。
【0029】
ポリペプチド：「ポリペプチド」という用語は、本明細書では、ペプチド結合（アミド
結合としても知られている）により直線連結されたアミノ酸モノマからなるポリマを示す
。ポリペプチドという用語は、アミノ酸の連続した鎖を示し、生成物の特定の長さは示さ
ない。よって、ペプチド、およびタンパク質はポリペプチドの定義内に含められる。
結合としても知られている）により直線連結されたアミノ酸モノマからなるポリマを示す
。ポリペプチドという用語は、アミノ酸の連続した鎖を示し、生成物の特定の長さは示さ
ない。よって、ペプチド、およびタンパク質はポリペプチドの定義内に含められる。
【0030】
キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）ポリペプチド：「キュウリモザイクウイルス（Ｃ
ＭＶ）ポリペプチド」という用語は、本明細書では、下記を含む、または好ましくはこれ
から構成されるポリペプチドを示し：（ｉ）キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）のコー
トタンパク質のアミノ酸配列、または（ｉｉ）変異アミノ酸配列、ここで、変異されるア
ミノ酸配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、ここで、前記変異アミノ
酸配列および前記変異されるアミノ酸配列、すなわちＣＭＶの前記コートタンパク質は、
少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、
重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。典型的にかつ好ましくは、
ＣＭＶポリペプチドは、自己組織化により発現で、ＣＭＶのウイルス様粒子を形成するこ
とができる。
ＭＶ）ポリペプチド」という用語は、本明細書では、下記を含む、または好ましくはこれ
から構成されるポリペプチドを示し：（ｉ）キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）のコー
トタンパク質のアミノ酸配列、または（ｉｉ）変異アミノ酸配列、ここで、変異されるア
ミノ酸配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、ここで、前記変異アミノ
酸配列および前記変異されるアミノ酸配列、すなわちＣＭＶの前記コートタンパク質は、
少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、
重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。典型的にかつ好ましくは、
ＣＭＶポリペプチドは、自己組織化により発現で、ＣＭＶのウイルス様粒子を形成するこ
とができる。
【0031】
キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）のコートタンパク質（ＣＰ）：「キュウリモザイ
クウイルス（ＣＭＶ）のコートタンパク質（ＣＰ）」という用語は、本明細書では、本質
的に起こるキュウリモザイクウイルスのコートタンパク質を示す。キュウリモザイクウイ
ルスの非常に広い宿主範囲のために、ＣＭＶの多くの異なる株および分離株が知られてお
り、前記株および分離株のコートタンパク質の配列は決定されており、よって、同様に当
業者に知られている。ＣＭＶの前記コートタンパク質（ＣＰ）の配列は公知のデータベー
ス、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ、ｗｗｗ．ｄｐｖｗｅｂ．ｎｅｔ、またはｗｗｗ．ｎｃｂｉ
．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／に記載されており、そこから検索すること
ができる。例はＥＰ出願番号第１４１８９８９７．３号に記載される。ＣＭＶコートタン
パク質のさらなる例がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１－３で提供される。これらの株および分離株
はコートタンパク質のＮ末端を含む異なるタンパク質ドメインで、高度に類似するコート
タンパク質配列を有することは注目すべきである。特に、全ての完全に配列決定されたＣ
ＭＶ分離株の９８．１％がそれらのコートタンパク質配列の最初の２８アミノ酸内で８５
％を超える配列同一性を共有し、全ての完全に配列決定されたＣＭＶ分離株のさらに７９
．５％がそれらのコートタンパク質配列の最初の２８アミノ酸内で９０％を超える配列同
一性を共有する。
クウイルス（ＣＭＶ）のコートタンパク質（ＣＰ）」という用語は、本明細書では、本質
的に起こるキュウリモザイクウイルスのコートタンパク質を示す。キュウリモザイクウイ
ルスの非常に広い宿主範囲のために、ＣＭＶの多くの異なる株および分離株が知られてお
り、前記株および分離株のコートタンパク質の配列は決定されており、よって、同様に当
業者に知られている。ＣＭＶの前記コートタンパク質（ＣＰ）の配列は公知のデータベー
ス、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ、ｗｗｗ．ｄｐｖｗｅｂ．ｎｅｔ、またはｗｗｗ．ｎｃｂｉ
．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／に記載されており、そこから検索すること
ができる。例はＥＰ出願番号第１４１８９８９７．３号に記載される。ＣＭＶコートタン
パク質のさらなる例がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１－３で提供される。これらの株および分離株
はコートタンパク質のＮ末端を含む異なるタンパク質ドメインで、高度に類似するコート
タンパク質配列を有することは注目すべきである。特に、全ての完全に配列決定されたＣ
ＭＶ分離株の９８．１％がそれらのコートタンパク質配列の最初の２８アミノ酸内で８５
％を超える配列同一性を共有し、全ての完全に配列決定されたＣＭＶ分離株のさらに７９
．５％がそれらのコートタンパク質配列の最初の２８アミノ酸内で９０％を超える配列同
一性を共有する。
【0032】
典型的にかつ好ましくは、本発明のために使用されるＣＭＶのコートタンパク質は、自
己組織化により発現で、ＣＭＶのウイルス様粒子を形成することができる。好ましくは、
本発明のために使用されるＣＭＶのコートタンパク質は、大腸菌における自己組織化によ
り発現で、ＣＭＶのウイルス様粒子を形成することができる。
己組織化により発現で、ＣＭＶのウイルス様粒子を形成することができる。好ましくは、
本発明のために使用されるＣＭＶのコートタンパク質は、大腸菌における自己組織化によ
り発現で、ＣＭＶのウイルス様粒子を形成することができる。
【0033】
キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ウイルス様粒子（ＶＬＰ）：「キュウリモ
ザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ウイルス様粒子（ＶＬＰ）」という用語は、本明細書で
は、少なくとも１つの改変ＣＭＶポリペプチドを含む、または好ましくはこれから本質的
に構成される、または好ましくはこれから構成されるような改変物であるＣＭＶのＶＬＰ
を示し、ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＣＭＶポリペプチド、およびヘルパー
Ｔ細胞エピトープを含み、または好ましくはこれから構成される。典型的にかつ好ましく
は、前記ヘルパーＴ細胞エピトープは、（ｉ）前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端に融合さ
れ、（ｉｉ）前記ＣＭＶポリペプチドのＣ末端に融合され、（ｉｉｉ）前記ＣＭＶポリペ
プチドの連続アミノ酸の領域にとって代わり、ここで、前記ＣＭＶポリペプチドの連続ア
ミノ酸の前記置き換えられた領域とヘルパーＴ細胞エピトープの間の配列同一性は少なく
とも１５％、好ましくは少なくとも２０％であり、または（ｉｖ）前記ＣＭＶポリペプチ
ドのＮ末端領域にとって代わり、ここで、前記ＣＭＶポリペプチドの前記置き換えられた
Ｎ末端領域は５～１５の連続アミノ酸から構成される。好ましくは、前記ヘルパーＴ細胞
エピトープは前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域にとって代わり、ここで、前記ＣＭＶ
ポリペプチドの前記置き換えられたＮ末端領域は５～１５の連続アミノ酸、好ましくは９
～１４の連続アミノ酸、より好ましくは１１～１３の連続アミノ酸、最も好ましくは１１
、１２または１３の連続アミノ酸から構成される。好ましくは本発明のＣＭＶの前記改変
ＶＬＰは、ＣＭＶの組換え改変ＶＬＰである。
ザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ウイルス様粒子（ＶＬＰ）」という用語は、本明細書で
は、少なくとも１つの改変ＣＭＶポリペプチドを含む、または好ましくはこれから本質的
に構成される、または好ましくはこれから構成されるような改変物であるＣＭＶのＶＬＰ
を示し、ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＣＭＶポリペプチド、およびヘルパー
Ｔ細胞エピトープを含み、または好ましくはこれから構成される。典型的にかつ好ましく
は、前記ヘルパーＴ細胞エピトープは、（ｉ）前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端に融合さ
れ、（ｉｉ）前記ＣＭＶポリペプチドのＣ末端に融合され、（ｉｉｉ）前記ＣＭＶポリペ
プチドの連続アミノ酸の領域にとって代わり、ここで、前記ＣＭＶポリペプチドの連続ア
ミノ酸の前記置き換えられた領域とヘルパーＴ細胞エピトープの間の配列同一性は少なく
とも１５％、好ましくは少なくとも２０％であり、または（ｉｖ）前記ＣＭＶポリペプチ
ドのＮ末端領域にとって代わり、ここで、前記ＣＭＶポリペプチドの前記置き換えられた
Ｎ末端領域は５～１５の連続アミノ酸から構成される。好ましくは、前記ヘルパーＴ細胞
エピトープは前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域にとって代わり、ここで、前記ＣＭＶ
ポリペプチドの前記置き換えられたＮ末端領域は５～１５の連続アミノ酸、好ましくは９
～１４の連続アミノ酸、より好ましくは１１～１３の連続アミノ酸、最も好ましくは１１
、１２または１３の連続アミノ酸から構成される。好ましくは本発明のＣＭＶの前記改変
ＶＬＰは、ＣＭＶの組換え改変ＶＬＰである。
【0034】
改変ＣＭＶポリペプチド：「改変ＣＭＶポリペプチド」という用語は、本明細書では、
本明細書で規定されるように、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＣＭＶポリペプチド、お
よびヘルパーＴ細胞エピトープを含み、または好ましくはこれから構成されるように改変
されたＣＭＶポリペプチドを示す。典型的には、改変ＣＭＶポリペプチドは、自己組織化
により発現で、ＣＭＶのウイルス様粒子を形成することができる。好ましくは、改変ＣＭ
Ｖポリペプチドは組換え改変ＣＭＶポリペプチドであり、大腸菌における自己組織化によ
り発現で、ＣＭＶのウイルス様粒子を形成することができる。
本明細書で規定されるように、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＣＭＶポリペプチド、お
よびヘルパーＴ細胞エピトープを含み、または好ましくはこれから構成されるように改変
されたＣＭＶポリペプチドを示す。典型的には、改変ＣＭＶポリペプチドは、自己組織化
により発現で、ＣＭＶのウイルス様粒子を形成することができる。好ましくは、改変ＣＭ
Ｖポリペプチドは組換え改変ＣＭＶポリペプチドであり、大腸菌における自己組織化によ
り発現で、ＣＭＶのウイルス様粒子を形成することができる。
【0035】
ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域：「ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域」という用語は
、本明細書では、前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端、特にＣＭＶのコートタンパク質のＮ
末端、または前記ＣＭＶポリペプチドまたはＣＭＶの前記コートタンパク質のＮ末端であ
るが、前記ＣＭＶポリペプチドまたは前記コートタンパク質がＮ末端メチオニン残基を含
む場合、前記ＣＭＶポリペプチドまたはＣＭＶの前記コートタンパク質のＮ末端の第２の
アミノ酸で始まる領域のいずれかを示す。好ましくは、前記ＣＭＶポリペプチドまたは前
記コートタンパク質がＮ末端メチオニン残基を含む場合、実用的な観点から、メチオニン
をコードする開始コドンは通常欠失され、Ｔｈ細胞エピトープのＮ末端に付加される。さ
らに好ましくは、１、２または３つの追加のアミノ酸、好ましくは１つのアミノ酸が、ク
ローニング目的のために、任意で、開始メチオニンとＴｈ細胞エピトープの間に挿入され
得る。「ＣＭＶポリペプチドまたはＣＭＶコートタンパク質の変異アミノ酸配列のＮ末端
領域」という用語は、本明細書では、前記ＣＭＶポリペプチドまたはＣＭＶの前記コート
タンパク質の前記変異アミノ酸配列のＮ末端、または、前記ＣＭＶポリペプチドまたはＣ
ＭＶの前記コートタンパク質の前記変異アミノ酸配列のＮ末端であるが、前記変異アミノ
酸配列がＮ末端メチオニン残基を含む場合、前記ＣＭＶポリペプチドまたはＣＭＶの前記
コートタンパク質の前記変異アミノ酸配列のＮ末端の第２のアミノ酸で始まる領域のいず
れかを示す。好ましくは、前記ＣＭＶポリペプチドまたは前記コートタンパク質がＮ末端
メチオニン残基を含む場合、実用的な観点から、メチオニンをコードする開始コドンは通
常欠失され、Ｔｈ細胞エピトープのＮ末端に付加される。さらに好ましくは、１、２また
は３つの追加のアミノ酸、好ましくは１つのアミノ酸が、クローニング目的のために、任
意で開始メチオニンとＴｈ細胞エピトープの間に挿入され得る。
、本明細書では、前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端、特にＣＭＶのコートタンパク質のＮ
末端、または前記ＣＭＶポリペプチドまたはＣＭＶの前記コートタンパク質のＮ末端であ
るが、前記ＣＭＶポリペプチドまたは前記コートタンパク質がＮ末端メチオニン残基を含
む場合、前記ＣＭＶポリペプチドまたはＣＭＶの前記コートタンパク質のＮ末端の第２の
アミノ酸で始まる領域のいずれかを示す。好ましくは、前記ＣＭＶポリペプチドまたは前
記コートタンパク質がＮ末端メチオニン残基を含む場合、実用的な観点から、メチオニン
をコードする開始コドンは通常欠失され、Ｔｈ細胞エピトープのＮ末端に付加される。さ
らに好ましくは、１、２または３つの追加のアミノ酸、好ましくは１つのアミノ酸が、ク
ローニング目的のために、任意で、開始メチオニンとＴｈ細胞エピトープの間に挿入され
得る。「ＣＭＶポリペプチドまたはＣＭＶコートタンパク質の変異アミノ酸配列のＮ末端
領域」という用語は、本明細書では、前記ＣＭＶポリペプチドまたはＣＭＶの前記コート
タンパク質の前記変異アミノ酸配列のＮ末端、または、前記ＣＭＶポリペプチドまたはＣ
ＭＶの前記コートタンパク質の前記変異アミノ酸配列のＮ末端であるが、前記変異アミノ
酸配列がＮ末端メチオニン残基を含む場合、前記ＣＭＶポリペプチドまたはＣＭＶの前記
コートタンパク質の前記変異アミノ酸配列のＮ末端の第２のアミノ酸で始まる領域のいず
れかを示す。好ましくは、前記ＣＭＶポリペプチドまたは前記コートタンパク質がＮ末端
メチオニン残基を含む場合、実用的な観点から、メチオニンをコードする開始コドンは通
常欠失され、Ｔｈ細胞エピトープのＮ末端に付加される。さらに好ましくは、１、２また
は３つの追加のアミノ酸、好ましくは１つのアミノ酸が、クローニング目的のために、任
意で開始メチオニンとＴｈ細胞エピトープの間に挿入され得る。
【0036】
組換えポリペプチド：発明との関連で「組換えポリペプチド」という用語は、組換えＤ
ＮＡ技術の少なくとも１つのステップを含むプロセスにより得られるポリペプチドを示す
。典型的にかつ好ましくは、組換えポリペプチドは原核生物発現系において生成される。
大腸菌などの原核生物発現系において発現される組換えにより生成されたポリペプチドは
、Ｎ末端メチオニン残基を含み得ることは当業者には明らかである。Ｎ末端メチオニン残
基は典型的には、発現宿主において、組換えポリペプチドの成熟中に組換えポリペプチド
から切断される。しかしながら、Ｎ末端メチオニンの切断は不完全である可能性がある。
よって、組換えポリペプチドの調製物は、Ｎ末端メチオニン残基を有する、および有さな
い、他の部分は同一であるポリペプチドの混合物を含み得る。典型的にかつ好ましくは、
組換えポリペプチドの調製物は、１０％未満、より好ましくは５％未満、さらにより好ま
しくは１％未満の、Ｎ末端メチオニン残基を有する組換えポリペプチドを含む。
ＮＡ技術の少なくとも１つのステップを含むプロセスにより得られるポリペプチドを示す
。典型的にかつ好ましくは、組換えポリペプチドは原核生物発現系において生成される。
大腸菌などの原核生物発現系において発現される組換えにより生成されたポリペプチドは
、Ｎ末端メチオニン残基を含み得ることは当業者には明らかである。Ｎ末端メチオニン残
基は典型的には、発現宿主において、組換えポリペプチドの成熟中に組換えポリペプチド
から切断される。しかしながら、Ｎ末端メチオニンの切断は不完全である可能性がある。
よって、組換えポリペプチドの調製物は、Ｎ末端メチオニン残基を有する、および有さな
い、他の部分は同一であるポリペプチドの混合物を含み得る。典型的にかつ好ましくは、
組換えポリペプチドの調製物は、１０％未満、より好ましくは５％未満、さらにより好ま
しくは１％未満の、Ｎ末端メチオニン残基を有する組換えポリペプチドを含む。
【0037】
組換えＣＭＶポリペプチド：「組換えＣＭＶポリペプチド」という用語は、組換えＤＮ
Ａ技術の少なくとも１つのステップを含むプロセスにより得られる、以上で規定されるＣ
ＭＶポリペプチドを示す。典型的にかつ好ましくは、組換えＣＭＶポリペプチドの調製物
は、１０％未満、より好ましくは５％未満、さらにより好ましくは１％未満の、Ｎ末端メ
チオニン残基を有する組換えＣＭＶポリペプチドを含む。その結果として、発明の組換え
ウイルス様粒子は、Ｎ末端メチオニン残基を有する、および有さない、他の部分は同一で
ある組換えポリペプチドを含み得る。
Ａ技術の少なくとも１つのステップを含むプロセスにより得られる、以上で規定されるＣ
ＭＶポリペプチドを示す。典型的にかつ好ましくは、組換えＣＭＶポリペプチドの調製物
は、１０％未満、より好ましくは５％未満、さらにより好ましくは１％未満の、Ｎ末端メ
チオニン残基を有する組換えＣＭＶポリペプチドを含む。その結果として、発明の組換え
ウイルス様粒子は、Ｎ末端メチオニン残基を有する、および有さない、他の部分は同一で
ある組換えポリペプチドを含み得る。
【0038】
組換え改変ＣＭＶポリペプチド：「組換え改変ＣＭＶポリペプチド」という用語は、組
換えＤＮＡ技術の少なくとも１つのステップを含むプロセスにより得られる、以上で規定
される改変ＣＭＶポリペプチドを示す。典型的にかつ好ましくは、組換え改変ＣＭＶポリ
ペプチドの調製物は、１０％未満、より好ましくは５％未満、さらにより好ましくは１％
未満の、Ｎ末端メチオニン残基を有する組換え改変ＣＭＶポリペプチドを含む。その結果
として、発明の組換えウイルス様粒子は、Ｎ末端メチオニン残基を有する、および有さな
い、他の部分は同一である組換えポリペプチドを含み得る。
換えＤＮＡ技術の少なくとも１つのステップを含むプロセスにより得られる、以上で規定
される改変ＣＭＶポリペプチドを示す。典型的にかつ好ましくは、組換え改変ＣＭＶポリ
ペプチドの調製物は、１０％未満、より好ましくは５％未満、さらにより好ましくは１％
未満の、Ｎ末端メチオニン残基を有する組換え改変ＣＭＶポリペプチドを含む。その結果
として、発明の組換えウイルス様粒子は、Ｎ末端メチオニン残基を有する、および有さな
い、他の部分は同一である組換えポリペプチドを含み得る。
【0039】
組換えウイルス様粒子：発明との関連で、「組換えウイルス様粒子」という用語は、組
換えＤＮＡ技術の少なくとも１つのステップを含むプロセスにより得られるウイルス様粒
子（ＶＬＰ）を示す。典型的にかつ好ましくは、組換えウイルス様粒子は、少なくとも１
つの組換えポリペプチド、好ましくは組換えＣＭＶポリペプチドまたは組換え改変ＣＭＶ
ポリペプチドを含む。最も好ましくは、組換えウイルス様粒子は、組換えＣＭＶポリペプ
チドまたは組換え改変ＣＭＶポリペプチドからなり、またはこれから構成される。結果と
して、本発明との関連で、発明の組換えＶＬＰの定義がＮ末端メチオニン残基を含む特定
のアミノ酸配列に関連して達成される場合、これらの発明の組換えＶＬＰの範囲は、前記
Ｎ末端メチオニン残基を有さない前記特定のアミノ酸配列により形成されるＶＬＰ、同様
に、典型的には、本明細書で示される少量であっても、前記Ｎ末端メチオニンを有する前
記特定のアミノ酸配列により形成されるＶＬＰを包含する。さらに、発明の組換えＶＬＰ
の定義がＮ末端メチオニン残基を含む特定のアミノ酸配列に関連して達成される場合、依
然として前記Ｎ末端メチオニン残基を含むアミノ酸配列およびＮ末端メチオニン残基を欠
くアミノ酸配列の両方を含むＶＬＰが包含される。
換えＤＮＡ技術の少なくとも１つのステップを含むプロセスにより得られるウイルス様粒
子（ＶＬＰ）を示す。典型的にかつ好ましくは、組換えウイルス様粒子は、少なくとも１
つの組換えポリペプチド、好ましくは組換えＣＭＶポリペプチドまたは組換え改変ＣＭＶ
ポリペプチドを含む。最も好ましくは、組換えウイルス様粒子は、組換えＣＭＶポリペプ
チドまたは組換え改変ＣＭＶポリペプチドからなり、またはこれから構成される。結果と
して、本発明との関連で、発明の組換えＶＬＰの定義がＮ末端メチオニン残基を含む特定
のアミノ酸配列に関連して達成される場合、これらの発明の組換えＶＬＰの範囲は、前記
Ｎ末端メチオニン残基を有さない前記特定のアミノ酸配列により形成されるＶＬＰ、同様
に、典型的には、本明細書で示される少量であっても、前記Ｎ末端メチオニンを有する前
記特定のアミノ酸配列により形成されるＶＬＰを包含する。さらに、発明の組換えＶＬＰ
の定義がＮ末端メチオニン残基を含む特定のアミノ酸配列に関連して達成される場合、依
然として前記Ｎ末端メチオニン残基を含むアミノ酸配列およびＮ末端メチオニン残基を欠
くアミノ酸配列の両方を含むＶＬＰが包含される。
【0040】
変異アミノ酸配列：「変異アミノ酸配列」という用語は、規定される組の突然変異を変
異されるアミノ酸配列に導入することにより得られるアミノ酸配列を示す。発明との関連
で、前記変異されるアミノ酸配列は、典型的にかつ好ましくはＣＭＶのコートタンパク質
のアミノ酸配列である。よって、変異アミノ酸配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ
酸配列と、少なくとも１つのアミノ酸残基が異なり、ここで、前記変異アミノ酸配列およ
び前記変異されるアミノ酸配列は少なくとも９０％の配列同一性を示す。典型的にかつ好
ましくは、前記変異アミノ酸配列および前記変異されるアミノ酸配列は少なくとも９１％
、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一
性を示す。好ましくは、前記変異アミノ酸配列および前記変異される配列は、せいぜい１
１、１０、９、８、７、６、４、３、２、または１つのアミノ酸残基が異なり、ここで、
さらに好ましくは前記違いは挿入、欠失およびアミノ酸交換から選択される。好ましくは
、変異アミノ酸配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列と、少なくとも１つのア
ミノ酸が異なり、ここで、好ましくは前記違いはアミノ酸交換である。
異されるアミノ酸配列に導入することにより得られるアミノ酸配列を示す。発明との関連
で、前記変異されるアミノ酸配列は、典型的にかつ好ましくはＣＭＶのコートタンパク質
のアミノ酸配列である。よって、変異アミノ酸配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ
酸配列と、少なくとも１つのアミノ酸残基が異なり、ここで、前記変異アミノ酸配列およ
び前記変異されるアミノ酸配列は少なくとも９０％の配列同一性を示す。典型的にかつ好
ましくは、前記変異アミノ酸配列および前記変異されるアミノ酸配列は少なくとも９１％
、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一
性を示す。好ましくは、前記変異アミノ酸配列および前記変異される配列は、せいぜい１
１、１０、９、８、７、６、４、３、２、または１つのアミノ酸残基が異なり、ここで、
さらに好ましくは前記違いは挿入、欠失およびアミノ酸交換から選択される。好ましくは
、変異アミノ酸配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列と、少なくとも１つのア
ミノ酸が異なり、ここで、好ましくは前記違いはアミノ酸交換である。
【0041】
残基に対応する位置：別のアミノ酸配列の所定の残基に対応している、アミノ酸配列上
の位置は、配列アライメントにより、典型的にかつ好ましくは、ＢＬＡＳＴＰアルゴリズ
ムを使用する、最も好ましくは標準設定を使用することにより同定することができる。典
型的かつ好ましい標準設定は下記である：予想閾値（ｅｘｐｅｃｔ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ
）：１０；ワードサイズ（ｗｏｒｄ ｓｉｚｅ）：３；クエリーレンジにおける最大一致
（ｍａｘ ｍａｔｃｈｅｓ ｉｎ ａ ｑｕｅｒｙ ｒａｎｇｅ）：０；マトリックス：
ＢＬＯＳＵＭ６２；ギャップコスト：存在１１、拡張１；組成調節：条件的組成スコアマ
トリックス調節。
の位置は、配列アライメントにより、典型的にかつ好ましくは、ＢＬＡＳＴＰアルゴリズ
ムを使用する、最も好ましくは標準設定を使用することにより同定することができる。典
型的かつ好ましい標準設定は下記である：予想閾値（ｅｘｐｅｃｔ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ
）：１０；ワードサイズ（ｗｏｒｄ ｓｉｚｅ）：３；クエリーレンジにおける最大一致
（ｍａｘ ｍａｔｃｈｅｓ ｉｎ ａ ｑｕｅｒｙ ｒａｎｇｅ）：０；マトリックス：
ＢＬＯＳＵＭ６２；ギャップコスト：存在１１、拡張１；組成調節：条件的組成スコアマ
トリックス調節。
【0042】
配列同一性：２つの所定のアミノ酸配列の配列同一性は、両方の配列のアライメントに
基づき決定される。配列同一性を決定するためのアルゴリズムは当業者に入手可能である
。好ましくは、２つのアミノ酸配列の配列同一性は公的に入手可能なコンピュータ相同性
プログラム、例えば、「ＢＬＡＳＴ」プログラム（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ
．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ）または「ＣＬＵＳＴＡＬＷ」（ｈｔｔ
ｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｊｐ／ｔｏｏｌｓ／ｃｌｕｓｔａｌｗ／）を用いて、こ
こでは、好ましくはｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂ
ｌａｓｔ．ｃｇｉのＮＣＢＩホームページで提供される「ＢＬＡＳＴ」プログラムにより
、その中で提供されるデフォルト設定を用いて決定される。典型的かつ好ましい標準設定
は下記である：予想閾値（ｅｘｐｅｃｔ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）：１０；ワードサイズ（
ｗｏｒｄ ｓｉｚｅ）：３；クエリーレンジにおける最大一致：０；マトリックス：ＢＬ
ＯＳＵＭ６２；ギャップコスト：存在１１、拡張１；組成調節：条件的組成スコアマトリ
ックス調節。
基づき決定される。配列同一性を決定するためのアルゴリズムは当業者に入手可能である
。好ましくは、２つのアミノ酸配列の配列同一性は公的に入手可能なコンピュータ相同性
プログラム、例えば、「ＢＬＡＳＴ」プログラム（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ
．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ）または「ＣＬＵＳＴＡＬＷ」（ｈｔｔ
ｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｊｐ／ｔｏｏｌｓ／ｃｌｕｓｔａｌｗ／）を用いて、こ
こでは、好ましくはｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂ
ｌａｓｔ．ｃｇｉのＮＣＢＩホームページで提供される「ＢＬＡＳＴ」プログラムにより
、その中で提供されるデフォルト設定を用いて決定される。典型的かつ好ましい標準設定
は下記である：予想閾値（ｅｘｐｅｃｔ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）：１０；ワードサイズ（
ｗｏｒｄ ｓｉｚｅ）：３；クエリーレンジにおける最大一致：０；マトリックス：ＢＬ
ＯＳＵＭ６２；ギャップコスト：存在１１、拡張１；組成調節：条件的組成スコアマトリ
ックス調節。
【0043】
アミノ酸交換：アミノ酸交換という用語は、アミノ酸配列における所定のアミノ酸残基
の、異なる化学構造を有する任意の他のアミノ酸残基による、好ましくは、別のタンパク
質原性アミノ酸残基による交換を示す。よって、アミノ酸の挿入または欠失と対照的に、
アミノ酸交換は前記アミノ酸配列のアミノ酸の総数を変化させない。発明との関連で、前
記変異されるアミノ酸配列の、リジン残基またはシステイン残基によるアミノ酸残基の交
換が非常に好ましい。
の、異なる化学構造を有する任意の他のアミノ酸残基による、好ましくは、別のタンパク
質原性アミノ酸残基による交換を示す。よって、アミノ酸の挿入または欠失と対照的に、
アミノ酸交換は前記アミノ酸配列のアミノ酸の総数を変化させない。発明との関連で、前
記変異されるアミノ酸配列の、リジン残基またはシステイン残基によるアミノ酸残基の交
換が非常に好ましい。
【0044】
エピトープ：エピトープという用語は、抗原、好ましくはポリペプチドの連続または不
連続部分を示し、ここで、前記部分はＭＨＣ分子という関係の中で、抗体により、または
Ｔ－細胞受容体により特異的に結合させることができる。抗体に関しては、特異的結合は
非特異的結合を排除するが、必ずしも交差反応性を排除しない。エピトープは典型的には
、抗原部位に独特である空間的立体構造で５－２０のアミノ酸を含む。
連続部分を示し、ここで、前記部分はＭＨＣ分子という関係の中で、抗体により、または
Ｔ－細胞受容体により特異的に結合させることができる。抗体に関しては、特異的結合は
非特異的結合を排除するが、必ずしも交差反応性を排除しない。エピトープは典型的には
、抗原部位に独特である空間的立体構造で５－２０のアミノ酸を含む。
【0045】
ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞エピトープ：「ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞エピトープ」という用
語は、本明細書では、ヘルパーＴｈ細胞により認識できるエピトープを示す。別の好まし
い実施形態では、前記ヘルパーＴ細胞エピトープはユニバーサルヘルパーＴ細胞エピトー
プである。
語は、本明細書では、ヘルパーＴｈ細胞により認識できるエピトープを示す。別の好まし
い実施形態では、前記ヘルパーＴ細胞エピトープはユニバーサルヘルパーＴ細胞エピトー
プである。
【0046】
ユニバーサルＴｈ細胞エピトープ：「ユニバーサルＴｈ細胞エピトープ」という用語は
、本明細書では、少なくとも１つ、好ましくは１を超えるＭＨＣクラスＩＩ分子に結合す
ることができるＴｈ細胞エピトープを示す。ペプチド配列がユニバーサルＴｈ細胞エピト
ープであるかどうかを決定する最も簡単な方法は、ペプチドの個々のＭＨＣクラスＩＩ分
子に結合する能力を測定することである。ペプチドが、公知のＴｈ細胞エピトープペプチ
ドのＭＨＣクラスＩＩ分子への結合と競合する能力により測定され得る。ＨＬＡ－ＤＲ分
子の代表的な選択が、例えばＡｌｅｘａｎｄｅｒ Ｊ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｉ
ｔｙ （１９９４） １：７５１－７６１に記載される。ＭＨＣクラスＩＩ分子に対する
Ｔｈ細胞エピトープの親和性は少なくとも１０－５Ｍでなければならない。Ｔｈ細胞エピ
トープの「ユニバーサリティ」を決定する、他の、より退屈であるが、より関連性もある
方法は、より大きな割合の人々（＞３０％）が、ＩＦＡで製剤化されたＴｈ細胞エピトー
プを含むタンパク質を用いた１ヶ月後の、免疫化およびブースティングで、測定可能なＴ
細胞応答を生成させるという証明である。異なる個体中に存在するＭＨＣクラスＩＩ分子
の代表集団は、Ｐａｎｉｎａ－Ｂｏｒｄｉｇｎｏｎ Ｐ， ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ （１９８９） １９：２２３７－２２４２において与えられる。結果
として、「ユニバーサルＴｈ細胞エピトープ」という用語は、本明細書では、好ましくは
、Ｐａｎｉｎａ－Ｂｏｒｄｉｇｎｏｎ Ｐ， ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ （１９８９） １９：２２３７－２２４２において記載されるように、個体の選択
された群の３０％超において、免疫化およびブースティング（１ヶ月後、ＩＦＡで製剤化
されたＴｈ細胞エピトープを含むタンパク質を用いて）で測定可能なＴ細胞応答を生成さ
せるＴｈ細胞エピトープを示す。その上、かつ重ねてさらに好ましくは、「ユニバーサル
Ｔｈ細胞エピトープ」という用語は、本明細書では、好ましくは、ＤＲ１、ＤＲ２ｗ２ｂ
、ＤＲ３、ＤＲ４ｗ４、ＤＲ４ｗ１４、ＤＲ５、ＤＲ７、ＤＲ５２ａ、ＤＲｗ５３、ＤＲ
２ｗ２ａから選択される；好ましくはＤＲ１、ＤＲ２ｗ２ｂ、ＤＲ４ｗ４、ＤＲ４ｗ１４
、ＤＲ５、ＤＲ７、ＤＲｗ５３、ＤＲ２ｗ２ａから選択される、少なくとも１つ、好まし
くは少なくとも２つ、さらにいっそう好ましくは少なくとも３つのＤＲアレルに、少なく
とも５００ｎＭの親和性で結合することができるＴｈ細胞エピトープを示し（Ａｌｅｘａ
ｎｄｅｒ Ｊ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ （１９９４） １：７５１－７６
１および本明細書で引用される参考文献において記載される）；前記親和性を評価するた
めの好ましい結合アッセイはＳｅｔｔｅ Ａ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ
（１９８９） １４２：３５－４０により記載されるものである。さらに重ねてより好ま
しい様式では、「ユニバーサルＴｈ細胞エピトープ」という用語は、本明細書では、ＤＲ
１、ＤＲ２ｗ２ｂ、ＤＲ４ｗ４、ＤＲ４ｗ１４、ＤＲ５、ＤＲ７、ＤＲｗ５３、ＤＲ２ｗ
２ａから選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、さらにいっそう好まし
くは少なくとも３つのＤＲアレルに、少なくとも５００ｎＭの親和性で結合することがで
きるＴｈ細胞エピトープを示し（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ Ｊ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕ
ｎｉｔｙ （１９９４） １：７５１－７６１および本明細書で引用される参考文献にお
いて記載される）；前記親和性を評価するための好ましい結合アッセイはＳｅｔｔｅ Ａ
， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （１９８９） １４２：３５－４０により記
載されるものである。
、本明細書では、少なくとも１つ、好ましくは１を超えるＭＨＣクラスＩＩ分子に結合す
ることができるＴｈ細胞エピトープを示す。ペプチド配列がユニバーサルＴｈ細胞エピト
ープであるかどうかを決定する最も簡単な方法は、ペプチドの個々のＭＨＣクラスＩＩ分
子に結合する能力を測定することである。ペプチドが、公知のＴｈ細胞エピトープペプチ
ドのＭＨＣクラスＩＩ分子への結合と競合する能力により測定され得る。ＨＬＡ－ＤＲ分
子の代表的な選択が、例えばＡｌｅｘａｎｄｅｒ Ｊ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｉ
ｔｙ （１９９４） １：７５１－７６１に記載される。ＭＨＣクラスＩＩ分子に対する
Ｔｈ細胞エピトープの親和性は少なくとも１０－５Ｍでなければならない。Ｔｈ細胞エピ
トープの「ユニバーサリティ」を決定する、他の、より退屈であるが、より関連性もある
方法は、より大きな割合の人々（＞３０％）が、ＩＦＡで製剤化されたＴｈ細胞エピトー
プを含むタンパク質を用いた１ヶ月後の、免疫化およびブースティングで、測定可能なＴ
細胞応答を生成させるという証明である。異なる個体中に存在するＭＨＣクラスＩＩ分子
の代表集団は、Ｐａｎｉｎａ－Ｂｏｒｄｉｇｎｏｎ Ｐ， ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ （１９８９） １９：２２３７－２２４２において与えられる。結果
として、「ユニバーサルＴｈ細胞エピトープ」という用語は、本明細書では、好ましくは
、Ｐａｎｉｎａ－Ｂｏｒｄｉｇｎｏｎ Ｐ， ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ （１９８９） １９：２２３７－２２４２において記載されるように、個体の選択
された群の３０％超において、免疫化およびブースティング（１ヶ月後、ＩＦＡで製剤化
されたＴｈ細胞エピトープを含むタンパク質を用いて）で測定可能なＴ細胞応答を生成さ
せるＴｈ細胞エピトープを示す。その上、かつ重ねてさらに好ましくは、「ユニバーサル
Ｔｈ細胞エピトープ」という用語は、本明細書では、好ましくは、ＤＲ１、ＤＲ２ｗ２ｂ
、ＤＲ３、ＤＲ４ｗ４、ＤＲ４ｗ１４、ＤＲ５、ＤＲ７、ＤＲ５２ａ、ＤＲｗ５３、ＤＲ
２ｗ２ａから選択される；好ましくはＤＲ１、ＤＲ２ｗ２ｂ、ＤＲ４ｗ４、ＤＲ４ｗ１４
、ＤＲ５、ＤＲ７、ＤＲｗ５３、ＤＲ２ｗ２ａから選択される、少なくとも１つ、好まし
くは少なくとも２つ、さらにいっそう好ましくは少なくとも３つのＤＲアレルに、少なく
とも５００ｎＭの親和性で結合することができるＴｈ細胞エピトープを示し（Ａｌｅｘａ
ｎｄｅｒ Ｊ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ （１９９４） １：７５１－７６
１および本明細書で引用される参考文献において記載される）；前記親和性を評価するた
めの好ましい結合アッセイはＳｅｔｔｅ Ａ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ
（１９８９） １４２：３５－４０により記載されるものである。さらに重ねてより好ま
しい様式では、「ユニバーサルＴｈ細胞エピトープ」という用語は、本明細書では、ＤＲ
１、ＤＲ２ｗ２ｂ、ＤＲ４ｗ４、ＤＲ４ｗ１４、ＤＲ５、ＤＲ７、ＤＲｗ５３、ＤＲ２ｗ
２ａから選択される少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、さらにいっそう好まし
くは少なくとも３つのＤＲアレルに、少なくとも５００ｎＭの親和性で結合することがで
きるＴｈ細胞エピトープを示し（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ Ｊ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕ
ｎｉｔｙ （１９９４） １：７５１－７６１および本明細書で引用される参考文献にお
いて記載される）；前記親和性を評価するための好ましい結合アッセイはＳｅｔｔｅ Ａ
， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （１９８９） １４２：３５－４０により記
載されるものである。
【0047】
ユニバーサルＴｈ細胞エピトープは、例えば、Ａｌｅｘａｎｄｅｒ Ｊ， ｅｔ ａｌ
．， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ （１９９４） １：７５１－７６１、Ｐａｎｉｎａ－Ｂｏｒｄ
ｉｇｎｏｎ Ｐ， ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （１９８９） １９
：２２３７－２２４２、Ｃａｌｖｏ－Ｃａｌｌｅ ＪＭ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ （１９９７） １５９：１３６２－１３７３、およびＶａｌｍｏｒｉ Ｄ，
ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （１９９２） １４９：７１７－７２１により記
載され、当業者に公知である。
．， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ （１９９４） １：７５１－７６１、Ｐａｎｉｎａ－Ｂｏｒｄ
ｉｇｎｏｎ Ｐ， ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （１９８９） １９
：２２３７－２２４２、Ｃａｌｖｏ－Ｃａｌｌｅ ＪＭ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ （１９９７） １５９：１３６２－１３７３、およびＶａｌｍｏｒｉ Ｄ，
ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （１９９２） １４９：７１７－７２１により記
載され、当業者に公知である。
【0048】
アジュバント：「アジュバント」という用語は、本明細書では、免疫応答の非特異的刺
激剤または宿主においてデポーの生成を可能にする物質を示し、それは、本発明の、それ
ぞれ、ワクチンおよび医薬組成物と組み合わせると、さらにいっそう増強された免疫応答
を提供することができる。好ましいアジュバントはフロイント完全および不完全アジュバ
ント、アルミニウム含有アジュバント、好ましくは水酸化アルミニウム、および改変ムラ
ミルジペプチドである。さらに好ましいアジュバントは、ミネラルゲル、例えば水酸化ア
ルミニウム、界面活性物質、例えばリゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオ
ン、ペプチド、油エマルジョン、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノー
ル、およびヒトアジュバント、例えばＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌）およびコリネバ
クテリウム・パルバムである。そのようなアジュバントはまた当技術分野でよく知られて
いる。本発明の組成物と共に投与することができるさらなるアジュバントとしては、モノ
ホスホリルリピド免疫調節物質、ＡｄｊｕＶａｘ１００ａ、ＱＳ－２１、ＱＳ－１８、Ｃ
ＲＬ１００５、アルミニウム塩（Ａｌｕｍ）、ＭＦ－５９、ＯＭ－１７４、ＯＭ－１９７
、ＯＭ－２９４、およびＶｉｒｏｓｏｍａｌアジュバント技術が挙げられるが、それらに
限定されない。アジュバントはまた、これらの物質の混合物を含む。ウイルス様粒子は、
一般にアジュバントとして記載されてきた。しかしながら、「アジュバント」という用語
は、本出願の関係の中で使用されるように、発明のウイルス様粒子ではないアジュバント
を示す。むしろ、「アジュバント」は、発明の組成物、ワクチンまたは医薬組成物の追加
の異なる成分を示す。
激剤または宿主においてデポーの生成を可能にする物質を示し、それは、本発明の、それ
ぞれ、ワクチンおよび医薬組成物と組み合わせると、さらにいっそう増強された免疫応答
を提供することができる。好ましいアジュバントはフロイント完全および不完全アジュバ
ント、アルミニウム含有アジュバント、好ましくは水酸化アルミニウム、および改変ムラ
ミルジペプチドである。さらに好ましいアジュバントは、ミネラルゲル、例えば水酸化ア
ルミニウム、界面活性物質、例えばリゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオ
ン、ペプチド、油エマルジョン、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノー
ル、およびヒトアジュバント、例えばＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌）およびコリネバ
クテリウム・パルバムである。そのようなアジュバントはまた当技術分野でよく知られて
いる。本発明の組成物と共に投与することができるさらなるアジュバントとしては、モノ
ホスホリルリピド免疫調節物質、ＡｄｊｕＶａｘ１００ａ、ＱＳ－２１、ＱＳ－１８、Ｃ
ＲＬ１００５、アルミニウム塩（Ａｌｕｍ）、ＭＦ－５９、ＯＭ－１７４、ＯＭ－１９７
、ＯＭ－２９４、およびＶｉｒｏｓｏｍａｌアジュバント技術が挙げられるが、それらに
限定されない。アジュバントはまた、これらの物質の混合物を含む。ウイルス様粒子は、
一般にアジュバントとして記載されてきた。しかしながら、「アジュバント」という用語
は、本出願の関係の中で使用されるように、発明のウイルス様粒子ではないアジュバント
を示す。むしろ、「アジュバント」は、発明の組成物、ワクチンまたは医薬組成物の追加
の異なる成分を示す。
【0049】
有効量：本明細書では、「有効量」という用語は、所望の生物学的効果を実現するのに
必要な、または十分な量を示す。組成物、あるいは医薬組成物の有効量は、この選択され
た結果を達成する量であり、そのような量は当業者によりルーチンとして決定することが
できる。好ましくは、「有効量」という用語は、本明細書では、ｃＩＬ－３１のレベルを
イヌにおいてかゆみの低減を引き起こし、ＣＡＤを改善するレベルまで低減させるのに有
効となるのに必要な、または十分な量を示す。好ましくは、「有効量」という用語は、本
明細書では、炎症の部位で、ｃＩＬ－３１の活性を中和するのに有効となるのに必要な、
または十分な量を示す。有効量は、投与される特定の組成物および被験体のサイズによっ
て変動し得る。当業者は、過度の実験を必要とすることなく本発明の特定の組成物の有効
量を経験的に決定することができる。
必要な、または十分な量を示す。組成物、あるいは医薬組成物の有効量は、この選択され
た結果を達成する量であり、そのような量は当業者によりルーチンとして決定することが
できる。好ましくは、「有効量」という用語は、本明細書では、ｃＩＬ－３１のレベルを
イヌにおいてかゆみの低減を引き起こし、ＣＡＤを改善するレベルまで低減させるのに有
効となるのに必要な、または十分な量を示す。好ましくは、「有効量」という用語は、本
明細書では、炎症の部位で、ｃＩＬ－３１の活性を中和するのに有効となるのに必要な、
または十分な量を示す。有効量は、投与される特定の組成物および被験体のサイズによっ
て変動し得る。当業者は、過度の実験を必要とすることなく本発明の特定の組成物の有効
量を経験的に決定することができる。
【0050】
治療：本明細書では、「治療」、「治療する」、「治療された」または「治療している
」という用語は、予防および／または療法を示す。１つの実施形態では、「治療」、「治
療する」、「治療された」または「治療している」という用語は、治療的処置を示す。別
の実施形態では、「治療」、「治療する」、「治療された」または「治療している」とい
う用語は、予防的処置を示す。
」という用語は、予防および／または療法を示す。１つの実施形態では、「治療」、「治
療する」、「治療された」または「治療している」という用語は、治療的処置を示す。別
の実施形態では、「治療」、「治療する」、「治療された」または「治療している」とい
う用語は、予防的処置を示す。
【0051】
付着部位、第１：本明細書では、「第１の付着部位」という句は、ウイルス様粒子と共
に天然に生じ、またはウイルス様粒子に人工的に付加された要素を示し、これに、第２の
付着部位が連結され得る。第１の付着部位は好ましくはタンパク質、ポリペプチド、アミ
ノ酸、ペプチド、糖、ポリヌクレオチド、天然もしくは合成ポリマ、二次代謝産物または
化合物（ビオチン、フルオレセイン、レチノール、ジゴキシゲニン、金属イオン、フッ化
フェニルメチルスルホニル）、または化学的反応基、例えばアミノ基、カルボキシル基、
スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、グアニジニル基、ヒスチジニル基、またはそれらの
組み合わせである。第１の付着部位である化学的反応基の好ましい実施形態は、アミノ酸
残基、好ましくは、リジン残基のアミノ基である。第１の付着部位は、典型的には、表面
上、好ましくはＶＬＰの外面上に位置する。複数の第１の付着部位が表面、好ましくはＶ
ＬＰの外面上に、典型的には反復配置で存在する。好ましい実施形態では、第１の付着部
位は、少なくとも１つの共有結合を介して、好ましくは少なくとも１つのペプチド結合を
介して、ＶＬＰと結合される。さらに好ましい実施形態では、第１の付着部位はＶＬＰと
共に天然に生じる。あるいは、好ましい実施形態では、第１の付着部位は、ＶＬＰに人工
的に付加される。非常に好ましい実施形態では、前記第１の付着部位は、前記ＶＬＰポリ
ペプチドのアミノ酸配列のリジン残基のアミノ基である。
に天然に生じ、またはウイルス様粒子に人工的に付加された要素を示し、これに、第２の
付着部位が連結され得る。第１の付着部位は好ましくはタンパク質、ポリペプチド、アミ
ノ酸、ペプチド、糖、ポリヌクレオチド、天然もしくは合成ポリマ、二次代謝産物または
化合物（ビオチン、フルオレセイン、レチノール、ジゴキシゲニン、金属イオン、フッ化
フェニルメチルスルホニル）、または化学的反応基、例えばアミノ基、カルボキシル基、
スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、グアニジニル基、ヒスチジニル基、またはそれらの
組み合わせである。第１の付着部位である化学的反応基の好ましい実施形態は、アミノ酸
残基、好ましくは、リジン残基のアミノ基である。第１の付着部位は、典型的には、表面
上、好ましくはＶＬＰの外面上に位置する。複数の第１の付着部位が表面、好ましくはＶ
ＬＰの外面上に、典型的には反復配置で存在する。好ましい実施形態では、第１の付着部
位は、少なくとも１つの共有結合を介して、好ましくは少なくとも１つのペプチド結合を
介して、ＶＬＰと結合される。さらに好ましい実施形態では、第１の付着部位はＶＬＰと
共に天然に生じる。あるいは、好ましい実施形態では、第１の付着部位は、ＶＬＰに人工
的に付加される。非常に好ましい実施形態では、前記第１の付着部位は、前記ＶＬＰポリ
ペプチドのアミノ酸配列のリジン残基のアミノ基である。
【0052】
付着部位、第２：本明細書では、「第２の付着部位」という句は、ｃＩＬ－３１抗原と
共に天然に生じ、またはこれに人工的に付加される要素を示し、これに、第１の付着部位
が連結され得る。ｃＩＬ－３１抗原の第２の付着部位は好ましくはタンパク質、ポリペプ
チド、ペプチド、アミノ酸、糖、ポリヌクレオチド、天然もしくは合成ポリマ、二次代謝
産物または化合物（ビオチン、フルオレセイン、レチノール、ジゴキシゲニン、金属イオ
ン、フッ化フェニルメチルスルホニル）、または化学的反応基、例えばアミノ基、カルボ
キシル基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、グアニジニル基、ヒスチジニル基、また
はそれらの組み合わせである。第２の付着部位である化学的反応基の好ましい実施形態は
スルフヒドリル基であり、好ましくはアミノ酸システインのスルフヒドリル基であり、最
も好ましくはシステイン残基のスルフヒドリル基である。そのため、「少なくとも１つの
第２の付着部位を有する抗原」または「少なくとも１つの第２の付着部位を有するｃＩＬ
－３１抗原」という用語は、ｃＩＬ－３１抗原および少なくとも１つの第２の付着部位を
含むコンストラクトを示す。しかしながら、特に、ｃＩＬ－３１抗原内の天然起源ではな
い第２の付着部位では、そのようなコンストラクトは、典型的にかつ好ましくは、「リン
カー」をさらに含む。別の好ましい実施形態では、第２の付着部位は、少なくとも１つの
共有結合を介して、好ましくは少なくとも１つのペプチド結合を介して、ｃＩＬ－３１抗
原と結合される。さらなる実施形態では、第２の付着部位はｃＩＬ－３１抗原内で天然に
生じる。別のさらに非常に好ましい実施形態では、第２の付着部位は、ｃＩＬ－３１抗原
にリンカーを介して人工的に付加され、ここで、前記リンカーは、システインを含み、あ
るいはこれから構成される。好ましくは、リンカーは、ペプチド結合によりｃＩＬ－３１
抗原に融合され、または化学結合により付加される。
共に天然に生じ、またはこれに人工的に付加される要素を示し、これに、第１の付着部位
が連結され得る。ｃＩＬ－３１抗原の第２の付着部位は好ましくはタンパク質、ポリペプ
チド、ペプチド、アミノ酸、糖、ポリヌクレオチド、天然もしくは合成ポリマ、二次代謝
産物または化合物（ビオチン、フルオレセイン、レチノール、ジゴキシゲニン、金属イオ
ン、フッ化フェニルメチルスルホニル）、または化学的反応基、例えばアミノ基、カルボ
キシル基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、グアニジニル基、ヒスチジニル基、また
はそれらの組み合わせである。第２の付着部位である化学的反応基の好ましい実施形態は
スルフヒドリル基であり、好ましくはアミノ酸システインのスルフヒドリル基であり、最
も好ましくはシステイン残基のスルフヒドリル基である。そのため、「少なくとも１つの
第２の付着部位を有する抗原」または「少なくとも１つの第２の付着部位を有するｃＩＬ
－３１抗原」という用語は、ｃＩＬ－３１抗原および少なくとも１つの第２の付着部位を
含むコンストラクトを示す。しかしながら、特に、ｃＩＬ－３１抗原内の天然起源ではな
い第２の付着部位では、そのようなコンストラクトは、典型的にかつ好ましくは、「リン
カー」をさらに含む。別の好ましい実施形態では、第２の付着部位は、少なくとも１つの
共有結合を介して、好ましくは少なくとも１つのペプチド結合を介して、ｃＩＬ－３１抗
原と結合される。さらなる実施形態では、第２の付着部位はｃＩＬ－３１抗原内で天然に
生じる。別のさらに非常に好ましい実施形態では、第２の付着部位は、ｃＩＬ－３１抗原
にリンカーを介して人工的に付加され、ここで、前記リンカーは、システインを含み、あ
るいはこれから構成される。好ましくは、リンカーは、ペプチド結合によりｃＩＬ－３１
抗原に融合され、または化学結合により付加される。
【0053】
連結された：「連結された」または「連結」という用語は、本明細書では、これにより
、少なくとも１つの第１の付着部位および少なくとも１つの第２の付着部位が一緒にされ
る、全ての可能な様式、好ましくは化学的相互作用を示す。化学的相互作用としては、共
有および非共有結合性相互作用が挙げられる。非共有結合性相互作用の典型的な例は、イ
オン性相互作用、疎水性相互作用または水素結合であり、一方、共有結合性相互作用は、
例として、共有結合、例えばエステル、エーテル、リン酸エステル、炭素－リン結合、炭
素－硫黄結合、例えばチオエーテル、またはイミド結合に基づく。ある一定の好ましい実
施形態では、第１の付着部位および第２の付着部位は、少なくとも１つの共有結合を介し
て、好ましくは少なくとも１つの非ペプチド結合を介して、さらにいっそう好ましくは、
排他的に非ペプチド結合（複数可）を介して連結される。しかしながら、「連結された」
という用語は、本明細書では、少なくとも１つの第１の付着部位および少なくとも１つの
第２の付着部位の直接連結を示すだけでなく、その代わりに、かつ好ましくは、少なくと
も１つの第１の付着部位および少なくとも１つの第２の付着部位の、中間分子（複数可）
を介する、これによって、典型的にかつ好ましくは、少なくとも１つの、好ましくは１つ
の、ヘテロ二官能性架橋剤を使用することによる間接連結を示す。他の好ましい実施形態
では、第１の付着部位および第２の付着部位は、少なくとも１つの共有結合を介して、好
ましくは少なくとも１つのペプチド結合を介して、さらにいっそう好ましくは、排他的に
ペプチド結合（複数可）を介して連結される。
、少なくとも１つの第１の付着部位および少なくとも１つの第２の付着部位が一緒にされ
る、全ての可能な様式、好ましくは化学的相互作用を示す。化学的相互作用としては、共
有および非共有結合性相互作用が挙げられる。非共有結合性相互作用の典型的な例は、イ
オン性相互作用、疎水性相互作用または水素結合であり、一方、共有結合性相互作用は、
例として、共有結合、例えばエステル、エーテル、リン酸エステル、炭素－リン結合、炭
素－硫黄結合、例えばチオエーテル、またはイミド結合に基づく。ある一定の好ましい実
施形態では、第１の付着部位および第２の付着部位は、少なくとも１つの共有結合を介し
て、好ましくは少なくとも１つの非ペプチド結合を介して、さらにいっそう好ましくは、
排他的に非ペプチド結合（複数可）を介して連結される。しかしながら、「連結された」
という用語は、本明細書では、少なくとも１つの第１の付着部位および少なくとも１つの
第２の付着部位の直接連結を示すだけでなく、その代わりに、かつ好ましくは、少なくと
も１つの第１の付着部位および少なくとも１つの第２の付着部位の、中間分子（複数可）
を介する、これによって、典型的にかつ好ましくは、少なくとも１つの、好ましくは１つ
の、ヘテロ二官能性架橋剤を使用することによる間接連結を示す。他の好ましい実施形態
では、第１の付着部位および第２の付着部位は、少なくとも１つの共有結合を介して、好
ましくは少なくとも１つのペプチド結合を介して、さらにいっそう好ましくは、排他的に
ペプチド結合（複数可）を介して連結される。
【0054】
リンカー：「リンカー」は、本明細書では、第２の付着部位をｃＩＬ－３１抗原と結合
させるか、または、すでに、第２の付着部位を含んでいる、これから本質的に構成される
、またはこれから構成される。好ましくは、「リンカー」は、本明細書では、すでに第２
の付着部位を、典型的にかつ好ましくは－必ずしもではないが－１つのアミノ酸残基とし
て、好ましくはシステイン残基として含む。好ましいリンカーはアミノ酸リンカー、すな
わち少なくとも１つのアミノ酸残基を含むリンカーである。アミノ酸リンカーという用語
は、そのようなリンカーが排他的にアミノ酸残基から構成されることを意味しない。しか
しながら、排他的にアミノ酸残基から構成されるリンカーは発明の好ましい実施形態であ
る。リンカーのアミノ酸残基は、好ましくは、当技術分野で知られている天然アミノ酸ま
たは非天然アミノ酸、全て－Ｌまたは全て－Ｄまたはそれらの混合物からなる。この発明
によるリンカーのさらに好ましい実施形態はスルフヒドリル基またはシステイン残基を含
む分子であり、そのため、そのような分子もまた、この発明内に包含される。リンカーと
ｃＩＬ－３１抗原との結合は好ましくは少なくとも１つの共有結合による、より好ましく
は少なくとも１つのペプチド結合による。
させるか、または、すでに、第２の付着部位を含んでいる、これから本質的に構成される
、またはこれから構成される。好ましくは、「リンカー」は、本明細書では、すでに第２
の付着部位を、典型的にかつ好ましくは－必ずしもではないが－１つのアミノ酸残基とし
て、好ましくはシステイン残基として含む。好ましいリンカーはアミノ酸リンカー、すな
わち少なくとも１つのアミノ酸残基を含むリンカーである。アミノ酸リンカーという用語
は、そのようなリンカーが排他的にアミノ酸残基から構成されることを意味しない。しか
しながら、排他的にアミノ酸残基から構成されるリンカーは発明の好ましい実施形態であ
る。リンカーのアミノ酸残基は、好ましくは、当技術分野で知られている天然アミノ酸ま
たは非天然アミノ酸、全て－Ｌまたは全て－Ｄまたはそれらの混合物からなる。この発明
によるリンカーのさらに好ましい実施形態はスルフヒドリル基またはシステイン残基を含
む分子であり、そのため、そのような分子もまた、この発明内に包含される。リンカーと
ｃＩＬ－３１抗原との結合は好ましくは少なくとも１つの共有結合による、より好ましく
は少なくとも１つのペプチド結合による。
【0055】
秩序反復抗原アレイ：本明細書では、「秩序反復抗原アレイ」という用語は、典型的に
かつ好ましくは、それぞれ、コア粒子およびＶＬＰに関する前記抗原の空間配置における
高次の均一性により特徴付けられるｃＩＬ－３１抗原の反復パターンを示す。発明の１つ
の実施形態では、反復パターンは幾何的パターンであってもよい。好ましい秩序反復抗原
アレイは、その上、ｃＩＬ－３１抗原の厳密反復準結晶秩序を有し、好ましくは、間隔は
１～３０ナノメートル、好ましくは２～１５ナノメートル、さらにいっそう好ましくは２
～１０ナノメートル、さらに重ねてより好ましくは２～８ナノメートル、さらにより好ま
しくは１．６～７ナノメートルである。
かつ好ましくは、それぞれ、コア粒子およびＶＬＰに関する前記抗原の空間配置における
高次の均一性により特徴付けられるｃＩＬ－３１抗原の反復パターンを示す。発明の１つ
の実施形態では、反復パターンは幾何的パターンであってもよい。好ましい秩序反復抗原
アレイは、その上、ｃＩＬ－３１抗原の厳密反復準結晶秩序を有し、好ましくは、間隔は
１～３０ナノメートル、好ましくは２～１５ナノメートル、さらにいっそう好ましくは２
～１０ナノメートル、さらに重ねてより好ましくは２～８ナノメートル、さらにより好ま
しくは１．６～７ナノメートルである。
【0056】
免疫賦活物質：本明細書では、「免疫賦活物質」という用語は、免疫応答を誘導する、
および／または増強することができる物質を示す。免疫賦活物質としては、本明細書では
、トール様受容体活性化物質およびサイトカイン分泌を誘導する物質が挙げられるが、そ
れらに限定されない。トール様受容体活性化物質としては、免疫賦活性核酸、ペプチドグ
リカン、リポ多糖、リポテイコ酸（ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、イミダゾ
キノリン化合物、フラゲリン、リポタンパク質、および免疫賦活性有機物質、例えばタキ
ソールが挙げられるが、それらに限定されない。
および／または増強することができる物質を示す。免疫賦活物質としては、本明細書では
、トール様受容体活性化物質およびサイトカイン分泌を誘導する物質が挙げられるが、そ
れらに限定されない。トール様受容体活性化物質としては、免疫賦活性核酸、ペプチドグ
リカン、リポ多糖、リポテイコ酸（ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、イミダゾ
キノリン化合物、フラゲリン、リポタンパク質、および免疫賦活性有機物質、例えばタキ
ソールが挙げられるが、それらに限定されない。
【0057】
免疫賦活性核酸（ＩＳＳ－ＮＡ）：本明細書では、免疫賦活性核酸という用語は、免疫
応答を誘導する、および／または増強することができる核酸を示す。免疫賦活性核酸はリ
ボ核酸、特にデスオキシリボ核酸を含み、ここで、リボ核酸およびデスオキシリボ核酸は
どちらも、二本鎖または一本鎖のいずれかであってもよい。好ましいＩＳＳ－ＮＡはデス
オキシリボ核酸であり、ここで、さらに好ましくは前記デスオキシリボ核酸は一本鎖であ
る。好ましくは、免疫賦活性核酸は、非メチル化Ｃを含む、少なくとも１つのＣｐＧモチ
ーフを含む。非常に好ましい免疫賦活性核酸は少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、
ここで、前記少なくとも１つのＣｐＧモチーフは、少なくとも１つの、好ましくは１つの
、ＣＧジヌクレオチドを含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、Ｃはメチル
化されていない。好ましくは、必ずしもではないが、前記ＣＧジヌクレオチドは、パリン
ドローム配列の一部である。免疫賦活性核酸という用語はまた、修飾塩基、好ましくは４
－ブロモ－シトシンを含む核酸を示す。発明との関連で特に好ましいのは、樹状細胞にお
けるＩＦＮ－α産生を刺激することができるＩＳＳ－ＮＡである。発明の目的のために有
用な免疫賦活性核酸は、例えば、ＷＯ２００７／０６８７４７Ａ１号において記載される
。
応答を誘導する、および／または増強することができる核酸を示す。免疫賦活性核酸はリ
ボ核酸、特にデスオキシリボ核酸を含み、ここで、リボ核酸およびデスオキシリボ核酸は
どちらも、二本鎖または一本鎖のいずれかであってもよい。好ましいＩＳＳ－ＮＡはデス
オキシリボ核酸であり、ここで、さらに好ましくは前記デスオキシリボ核酸は一本鎖であ
る。好ましくは、免疫賦活性核酸は、非メチル化Ｃを含む、少なくとも１つのＣｐＧモチ
ーフを含む。非常に好ましい免疫賦活性核酸は少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含み、
ここで、前記少なくとも１つのＣｐＧモチーフは、少なくとも１つの、好ましくは１つの
、ＣＧジヌクレオチドを含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、Ｃはメチル
化されていない。好ましくは、必ずしもではないが、前記ＣＧジヌクレオチドは、パリン
ドローム配列の一部である。免疫賦活性核酸という用語はまた、修飾塩基、好ましくは４
－ブロモ－シトシンを含む核酸を示す。発明との関連で特に好ましいのは、樹状細胞にお
けるＩＦＮ－α産生を刺激することができるＩＳＳ－ＮＡである。発明の目的のために有
用な免疫賦活性核酸は、例えば、ＷＯ２００７／０６８７４７Ａ１号において記載される
。
【0058】
オリゴヌクレオチド：本明細書では、「オリゴヌクレオチド」という用語は、２つ以上
のヌクレオチド、好ましくは約６～約２００のヌクレオチド、より好ましくは２０～約１
００のヌクレオチド、最も好ましくは２０～４０のヌクレオチドを含む核酸配列を示す。
非常に好ましくは、オリゴヌクレオチドは約３０のヌクレオチドを含み、より好ましくは
オリゴヌクレオチドは、正確に３０のヌクレオチドを含み、最も好ましくはオリゴヌクレ
オチドは正確に３０のヌクレオチドから構成される。オリゴヌクレオチドはポリリボヌク
レオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドであり、好ましくは下記から選択される：
（ａ）未修飾ＲＮＡまたはＤＮＡ、および（ｂ）修飾ＲＮＡまたはＤＮＡ。修飾物は、バ
ックボーンまたはヌクレオチド類似体を含み得る。オリゴヌクレオチドは好ましくは下記
からなる群より選択される：（ａ）一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、（ｂ）一本鎖および二本
鎖領域の混合物であるＤＮＡ、（ｃ）一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、（ｄ）一本鎖および二
本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、および（ｅ）一本鎖、より好ましくは、二本鎖または一
本鎖および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子。好ま
しいヌクレオチド修飾物／類似体は下記からなる群より選択される：（ａ）ペプチド核酸
、（ｂ）イノシン、（ｃ）トリチル化塩基、（ｄ）ホスホロチオエート、（ｅ）アルキル
ホスホロチオエート、（ｆ）５－ニトロインドールデスオキシリボフラノシル（ｄｅｓｏ
ｘｙｒｉｂｏｆｌｉｒａｎｏｓｙｌ）、（ｇ）５－メチルデスオキシシトシン、および（
ｈ）５，６－ジヒドロ－５，６－ジヒドロキシデスオキシチミジン。ホスホチオエート化
ヌクレオチドは細胞または生物における分解に対して保護され、そのため、好ましいヌク
レオチド修飾物となる。ホスホジエステル結合されたヌクレオチドから排他的に構成され
る未修飾オリゴヌクレオチドは、典型的には修飾ヌクレオチドより活性であり、そのため
、発明との関連で一般に好ましい。最も好ましいのはホスホジエステル結合されたデオキ
シヌクレオチドから排他的に構成されるオリゴヌクレオチドであり、ここで、さらに好ま
しくは、前記オリゴヌクレオチドは一本鎖である。さらに好ましいのは、細胞、好ましく
は樹状細胞におけるＩＦＮ－α産生を刺激することができるオリゴヌクレオチドである。
細胞におけるＩＦＮ－α産生を刺激することができる非常に好ましいオリゴヌクレオチド
は、Ａ型ＣｐＧｓおよびＣ型ＣｐＧｓから選択される。さらに好ましいのは、キャップを
有さないＲＮＡ－分子である。
のヌクレオチド、好ましくは約６～約２００のヌクレオチド、より好ましくは２０～約１
００のヌクレオチド、最も好ましくは２０～４０のヌクレオチドを含む核酸配列を示す。
非常に好ましくは、オリゴヌクレオチドは約３０のヌクレオチドを含み、より好ましくは
オリゴヌクレオチドは、正確に３０のヌクレオチドを含み、最も好ましくはオリゴヌクレ
オチドは正確に３０のヌクレオチドから構成される。オリゴヌクレオチドはポリリボヌク
レオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドであり、好ましくは下記から選択される：
（ａ）未修飾ＲＮＡまたはＤＮＡ、および（ｂ）修飾ＲＮＡまたはＤＮＡ。修飾物は、バ
ックボーンまたはヌクレオチド類似体を含み得る。オリゴヌクレオチドは好ましくは下記
からなる群より選択される：（ａ）一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、（ｂ）一本鎖および二本
鎖領域の混合物であるＤＮＡ、（ｃ）一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、（ｄ）一本鎖および二
本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、および（ｅ）一本鎖、より好ましくは、二本鎖または一
本鎖および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子。好ま
しいヌクレオチド修飾物／類似体は下記からなる群より選択される：（ａ）ペプチド核酸
、（ｂ）イノシン、（ｃ）トリチル化塩基、（ｄ）ホスホロチオエート、（ｅ）アルキル
ホスホロチオエート、（ｆ）５－ニトロインドールデスオキシリボフラノシル（ｄｅｓｏ
ｘｙｒｉｂｏｆｌｉｒａｎｏｓｙｌ）、（ｇ）５－メチルデスオキシシトシン、および（
ｈ）５，６－ジヒドロ－５，６－ジヒドロキシデスオキシチミジン。ホスホチオエート化
ヌクレオチドは細胞または生物における分解に対して保護され、そのため、好ましいヌク
レオチド修飾物となる。ホスホジエステル結合されたヌクレオチドから排他的に構成され
る未修飾オリゴヌクレオチドは、典型的には修飾ヌクレオチドより活性であり、そのため
、発明との関連で一般に好ましい。最も好ましいのはホスホジエステル結合されたデオキ
シヌクレオチドから排他的に構成されるオリゴヌクレオチドであり、ここで、さらに好ま
しくは、前記オリゴヌクレオチドは一本鎖である。さらに好ましいのは、細胞、好ましく
は樹状細胞におけるＩＦＮ－α産生を刺激することができるオリゴヌクレオチドである。
細胞におけるＩＦＮ－α産生を刺激することができる非常に好ましいオリゴヌクレオチド
は、Ａ型ＣｐＧｓおよびＣ型ＣｐＧｓから選択される。さらに好ましいのは、キャップを
有さないＲＮＡ－分子である。
【0059】
ＣｐＧモチーフ：本明細書では、「ＣｐＧモチーフ」という用語は、非メチル化中心Ｃ
ｐＧ、すなわち非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むヌクレオチドのパターンを示し、
ここで、Ｃはメチル化されておらず、中心ＣｐＧに隣接している（その３’および５’側
で）少なくとも１つの塩基、好ましくは１または２つのヌクレオチドにより囲まれている
。典型的にかつ好ましくは、ＣｐＧモチーフは本明細書では、非メチル化ＣｐＧジヌクレ
オチドおよびその５’および３’端上の２つのヌクレオチドを含む、あるいはこれから構
成される。理論に縛られないが、ＣｐＧに隣接している塩基は活性のかなりの部分をＣｐ
Ｇオリゴヌクレオチドに与える。
ｐＧ、すなわち非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含むヌクレオチドのパターンを示し、
ここで、Ｃはメチル化されておらず、中心ＣｐＧに隣接している（その３’および５’側
で）少なくとも１つの塩基、好ましくは１または２つのヌクレオチドにより囲まれている
。典型的にかつ好ましくは、ＣｐＧモチーフは本明細書では、非メチル化ＣｐＧジヌクレ
オチドおよびその５’および３’端上の２つのヌクレオチドを含む、あるいはこれから構
成される。理論に縛られないが、ＣｐＧに隣接している塩基は活性のかなりの部分をＣｐ
Ｇオリゴヌクレオチドに与える。
【0060】
非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド：本明細書では、「非メチル化ＣｐＧ含有オ
リゴヌクレオチド」または「ＣｐＧ」という用語は、少なくとも１つのＣｐＧモチーフを
含むオリゴヌクレオチド、好ましくはオリゴデスオキシヌクレオチドを示す。よって、Ｃ
ｐＧは少なくとも１つの非メチル化シトシン、グアニンジヌクレオチドを含む。好ましい
ＣｐＧは脊椎動物骨髄由来細胞を刺激／活性化する、例えば、これに対して分裂促進効果
を有する、またはこれによるサイトカイン発現を誘導する、もしくは増加させる。例えば
、ＣｐＧは、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および抗原提示細胞、例えば樹状細胞、単球およびマクロ
ファージを活性化するのに有用となり得る。好ましくは、ＣｐＧは、非メチル化シトシン
、続いて３’グアノシンを含む、オリゴデスオキシヌクレオチド、好ましくは一本鎖オリ
ゴデスオキシヌクレオチドに関連し、前記非メチル化シトシンおよび前記グアノシンはリ
ン酸結合により連結され、ここで、好ましくは結合された前記リン酸は、結合されたホス
ホジエステル、または、結合されたホスホチオエートであり、ここで、さらに好ましくは
前記リン酸結合は結合されたホスホジエステルである。ＣｐＧは、ヌクレオチド類似体、
例えばホスホロチオエステル結合を含む類似体を含むことができ、二本鎖または一本鎖と
することができる。一般に、二本鎖分子はインビボでより安定であり、一方、一本鎖分子
は増加した免疫活性を有する。好ましくは、本明細書では、ＣｐＧは、少なくとも約１０
ヌクレオチドの長さであり、少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチド
であり、ここで、さらに好ましくは前記ＣｐＧは１０～６０、より好ましくは１５～５０
、さらにより好ましくは２０～４０、さらにより好ましくは約３０、最も好ましくは正確
に３０ヌクレオチドの長さである。ＣｐＧは、メチル化および／または非メチル化ヌクレ
オチドから構成され得、ここで、前記少なくとも１つのＣｐＧモチーフは少なくとも１つ
のＣＧジヌクレオチドを含み、ここで、Ｃはメチル化されていない。ＣｐＧはまた、メチ
ル化および非メチル化配列区間を含むことができ、ここで、前記少なくとも１つのＣｐＧ
モチーフは少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドを含み、ここで、Ｃはメチル化されてい
ない。非常に好ましくは、ＣｐＧは非メチル化シトシン、続いて３’グアノシンを含む一
本鎖オリゴデスオキシヌクレオチドに関連し、ここで、前記非メチル化シトシンおよび前
記グアノシンは結合されたホスホジエステルにより連結される。ＣｐＧはヌクレオチド類
似体、例えばホスホロチオエステル結合を含む類似体を含むことができ、二本鎖または一
本鎖とすることができる。一般に、ホスホジエステルＣｐＧは以下で示されるＡ型ＣｐＧ
であり、ホスホチオエステル安定化ＣｐＧはＢ型ＣｐＧである。発明との関連で好ましい
ＣｐＧオリゴヌクレオチドはＡ型ＣｐＧである。
リゴヌクレオチド」または「ＣｐＧ」という用語は、少なくとも１つのＣｐＧモチーフを
含むオリゴヌクレオチド、好ましくはオリゴデスオキシヌクレオチドを示す。よって、Ｃ
ｐＧは少なくとも１つの非メチル化シトシン、グアニンジヌクレオチドを含む。好ましい
ＣｐＧは脊椎動物骨髄由来細胞を刺激／活性化する、例えば、これに対して分裂促進効果
を有する、またはこれによるサイトカイン発現を誘導する、もしくは増加させる。例えば
、ＣｐＧは、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および抗原提示細胞、例えば樹状細胞、単球およびマクロ
ファージを活性化するのに有用となり得る。好ましくは、ＣｐＧは、非メチル化シトシン
、続いて３’グアノシンを含む、オリゴデスオキシヌクレオチド、好ましくは一本鎖オリ
ゴデスオキシヌクレオチドに関連し、前記非メチル化シトシンおよび前記グアノシンはリ
ン酸結合により連結され、ここで、好ましくは結合された前記リン酸は、結合されたホス
ホジエステル、または、結合されたホスホチオエートであり、ここで、さらに好ましくは
前記リン酸結合は結合されたホスホジエステルである。ＣｐＧは、ヌクレオチド類似体、
例えばホスホロチオエステル結合を含む類似体を含むことができ、二本鎖または一本鎖と
することができる。一般に、二本鎖分子はインビボでより安定であり、一方、一本鎖分子
は増加した免疫活性を有する。好ましくは、本明細書では、ＣｐＧは、少なくとも約１０
ヌクレオチドの長さであり、少なくとも１つのＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチド
であり、ここで、さらに好ましくは前記ＣｐＧは１０～６０、より好ましくは１５～５０
、さらにより好ましくは２０～４０、さらにより好ましくは約３０、最も好ましくは正確
に３０ヌクレオチドの長さである。ＣｐＧは、メチル化および／または非メチル化ヌクレ
オチドから構成され得、ここで、前記少なくとも１つのＣｐＧモチーフは少なくとも１つ
のＣＧジヌクレオチドを含み、ここで、Ｃはメチル化されていない。ＣｐＧはまた、メチ
ル化および非メチル化配列区間を含むことができ、ここで、前記少なくとも１つのＣｐＧ
モチーフは少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドを含み、ここで、Ｃはメチル化されてい
ない。非常に好ましくは、ＣｐＧは非メチル化シトシン、続いて３’グアノシンを含む一
本鎖オリゴデスオキシヌクレオチドに関連し、ここで、前記非メチル化シトシンおよび前
記グアノシンは結合されたホスホジエステルにより連結される。ＣｐＧはヌクレオチド類
似体、例えばホスホロチオエステル結合を含む類似体を含むことができ、二本鎖または一
本鎖とすることができる。一般に、ホスホジエステルＣｐＧは以下で示されるＡ型ＣｐＧ
であり、ホスホチオエステル安定化ＣｐＧはＢ型ＣｐＧである。発明との関連で好ましい
ＣｐＧオリゴヌクレオチドはＡ型ＣｐＧである。
【0061】
Ａ型ＣｐＧ：本明細書では、「Ａ型ＣｐＧ」または「Ｄ型ＣｐＧ」という用語は、少な
くとも１つのＣｐＧモチーフを含むオリゴデスオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を示す。Ａ
型ＣｐＧは優先的にＴ細胞の活性化および樹状細胞の成熟を刺激し、ＩＦＮ－α産生を刺
激することができる。Ａ型ＣｐＧでは、少なくとも１つのＣｐＧモチーフのヌクレオチド
は、少なくとも１つのホスホジエステル結合により連結される。Ａ型ＣｐＧは少なくとも
１つのホスホジエステル結合ＣｐＧモチーフを含み、それは、その５’端および／または
、好ましくは、その３’端でホスホロチオエート結合ヌクレオチドにより隣接され得る。
好ましくは、ＣｐＧモチーフ、ここでは好ましくはＣＧジヌクレオチド、および少なくと
も１つの、好ましくは２つのヌクレオチドを含むその直近の隣接領域は、ホスホジエステ
ルヌクレオチドからなる。好ましいＡ型ＣｐＧは、ホスホジエステル（ＰＯ）結合ヌクレ
オチドから排他的に構成される。典型的にかつ好ましくは、ポリＧモチーフは少なくとも
１つ、好ましくは少なくとも３、少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２
、１３、１４、または１５のＧ（グアノシン）、最も好ましくは少なくとも１０のＧを含
む、あるいはこれから構成される。好ましくは、発明のＡ型ＣｐＧはパリンドローム配列
を含む、あるいはこれから構成される。
くとも１つのＣｐＧモチーフを含むオリゴデスオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を示す。Ａ
型ＣｐＧは優先的にＴ細胞の活性化および樹状細胞の成熟を刺激し、ＩＦＮ－α産生を刺
激することができる。Ａ型ＣｐＧでは、少なくとも１つのＣｐＧモチーフのヌクレオチド
は、少なくとも１つのホスホジエステル結合により連結される。Ａ型ＣｐＧは少なくとも
１つのホスホジエステル結合ＣｐＧモチーフを含み、それは、その５’端および／または
、好ましくは、その３’端でホスホロチオエート結合ヌクレオチドにより隣接され得る。
好ましくは、ＣｐＧモチーフ、ここでは好ましくはＣＧジヌクレオチド、および少なくと
も１つの、好ましくは２つのヌクレオチドを含むその直近の隣接領域は、ホスホジエステ
ルヌクレオチドからなる。好ましいＡ型ＣｐＧは、ホスホジエステル（ＰＯ）結合ヌクレ
オチドから排他的に構成される。典型的にかつ好ましくは、ポリＧモチーフは少なくとも
１つ、好ましくは少なくとも３、少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２
、１３、１４、または１５のＧ（グアノシン）、最も好ましくは少なくとも１０のＧを含
む、あるいはこれから構成される。好ましくは、発明のＡ型ＣｐＧはパリンドローム配列
を含む、あるいはこれから構成される。
【0062】
パッケージングされた：「パッケージングされた」という用語は、本明細書では、それ
ぞれ、コア粒子およびＶＬＰとの関連でのポリアニオン性巨大分子または免疫賦活物質の
状態を示す。「パッケージングされた」という用語は、本明細書では、例えば、化学的カ
ップリングによる共有結合、または非共有結合、例えば、イオン性相互作用、疎水性相互
作用、水素結合、などであってもよい結合を含む。その用語はまた、ポリアニオン性巨大
分子の封入、または部分封入を含む。よって、ポリアニオン性巨大分子または免疫賦活物
質はＶＬＰにより、実際の結合、特に共有結合の存在なしで、封入させることができる。
好ましい実施形態では、少なくとも１つのポリアニオン性巨大分子または免疫賦活物質は
、ＶＬＰの内側に、最も好ましくは非共有結合様式でパッケージングされる。前記免疫賦
活物質が核酸、好ましくはＤＮＡである場合、パッケージングされたという用語は、前記
核酸はヌクレアーゼ加水分解に到達できない、好ましくはＤＮＡｓｅ加水分解（例えばＤ
ＮａｓｅＩまたはベンゾナーゼ）に到達できないことを意味し、ここで、好ましくは前記
到達性はＷＯ２００３／０２４４８１Ａ２号の実施例１１－１７において記載されるよう
にアッセイされる。
ぞれ、コア粒子およびＶＬＰとの関連でのポリアニオン性巨大分子または免疫賦活物質の
状態を示す。「パッケージングされた」という用語は、本明細書では、例えば、化学的カ
ップリングによる共有結合、または非共有結合、例えば、イオン性相互作用、疎水性相互
作用、水素結合、などであってもよい結合を含む。その用語はまた、ポリアニオン性巨大
分子の封入、または部分封入を含む。よって、ポリアニオン性巨大分子または免疫賦活物
質はＶＬＰにより、実際の結合、特に共有結合の存在なしで、封入させることができる。
好ましい実施形態では、少なくとも１つのポリアニオン性巨大分子または免疫賦活物質は
、ＶＬＰの内側に、最も好ましくは非共有結合様式でパッケージングされる。前記免疫賦
活物質が核酸、好ましくはＤＮＡである場合、パッケージングされたという用語は、前記
核酸はヌクレアーゼ加水分解に到達できない、好ましくはＤＮＡｓｅ加水分解（例えばＤ
ＮａｓｅＩまたはベンゾナーゼ）に到達できないことを意味し、ここで、好ましくは前記
到達性はＷＯ２００３／０２４４８１Ａ２号の実施例１１－１７において記載されるよう
にアッセイされる。
【0063】
よって、第１の態様では、本発明は、イヌ科、好ましくは飼いイヌのイヌアトピー性皮
膚炎（ＣＡＤ）を防止または治療する方法において使用するための組成物を提供し、ここ
で、有効量の前記組成物が前記イヌ科、好ましくは前記飼いイヌに投与され、ここで、前
記組成物は（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するコア粒子；および（ｂ）少な
くとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原
（ｃＩＬ－３１抗原）を含み、ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２２から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２
と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％
、重ねてさらに好ましくは少なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有する
タンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、（ａ）および（ｂ）は
、前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位によって、少
なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される。
膚炎（ＣＡＤ）を防止または治療する方法において使用するための組成物を提供し、ここ
で、有効量の前記組成物が前記イヌ科、好ましくは前記飼いイヌに投与され、ここで、前
記組成物は（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するコア粒子；および（ｂ）少な
くとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原
（ｃＩＬ－３１抗原）を含み、ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２２から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２
と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％
、重ねてさらに好ましくは少なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有する
タンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、（ａ）および（ｂ）は
、前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位によって、少
なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される。
【0064】
好ましい実施形態では、前記コア粒子はウイルス様粒子（ＶＬＰ）、好ましくは組換え
ＶＬＰである。さらに好ましい実施形態では、前記ＶＬＰはキュウリモザイクウイルス（
ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ここで、ＣＭＶの前記改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改
変ＣＭＶポリペプチドを含み、これから本質的に構成され、あるいはこれから構成され、
ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）ＣＭＶポリペプチド、および（ｂ）ヘル
パーＴ細胞エピトープを含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、前記ＣＭＶ
ポリペプチドは、（ｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列；または（ｉｉ）変異
アミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、変異されるアミノ酸
配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、ここで前記変異アミノ酸配列お
よびＣＭＶの前記コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％
、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同
一性を示す。さらに非常に好ましい実施形態では、前記ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）Ｃ
ＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１を含み、または好ましくはこれから構成される、アミノ酸配列、または（ｂ）Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ま
たは好ましくはこれから構成され；ならびにここで、この請求項で（ａ）または（ｂ）に
おいて規定される前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み；または、ここで、
この請求項で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はアミノ酸配列領域
を含み、ここで、前記アミノ酸配列領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも９０％
の配列同一性を有する。さらに非常に好ましい実施形態では、前記ＶＬＰはキュウリモザ
イクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好
ましくはこれから構成される。
ＶＬＰである。さらに好ましい実施形態では、前記ＶＬＰはキュウリモザイクウイルス（
ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ここで、ＣＭＶの前記改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改
変ＣＭＶポリペプチドを含み、これから本質的に構成され、あるいはこれから構成され、
ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）ＣＭＶポリペプチド、および（ｂ）ヘル
パーＴ細胞エピトープを含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、前記ＣＭＶ
ポリペプチドは、（ｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列；または（ｉｉ）変異
アミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、変異されるアミノ酸
配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、ここで前記変異アミノ酸配列お
よびＣＭＶの前記コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％
、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同
一性を示す。さらに非常に好ましい実施形態では、前記ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）Ｃ
ＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１を含み、または好ましくはこれから構成される、アミノ酸配列、または（ｂ）Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ま
たは好ましくはこれから構成され；ならびにここで、この請求項で（ａ）または（ｂ）に
おいて規定される前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み；または、ここで、
この請求項で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はアミノ酸配列領域
を含み、ここで、前記アミノ酸配列領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも９０％
の配列同一性を有する。さらに非常に好ましい実施形態では、前記ＶＬＰはキュウリモザ
イクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好
ましくはこれから構成される。
【0065】
さらに非常に好ましい実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記
から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成さ
れる：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２２；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５－３０。さらに非常に好ましい
実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記から選択されるアミノ配
列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される：（ａ）ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５；または（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。さらに非常
に好ましい実施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ま
しくは、前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－ア
セチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導される。さらに非常に好ましい実施
形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましくは、前記ス
ルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のリジン残基の反応から誘導される。
から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成さ
れる：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２２；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５－３０。さらに非常に好ましい
実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記から選択されるアミノ配
列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される：（ａ）ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５；または（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。さらに非常
に好ましい実施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ま
しくは、前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－ア
セチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導される。さらに非常に好ましい実施
形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましくは、前記ス
ルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のリジン残基の反応から誘導される。
【0066】
別の態様では、本発明は、飼いイヌのイヌアトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）を防止または治
療する方法において使用するための組成物を提供し、ここで、有効量の前記組成物が前記
飼いイヌに投与され、ここで、前記組成物は（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有
するコア粒子であって、前記コア粒子は好ましくはウイルス様粒子（ＶＬＰ）、さらに好
ましくは組換えＶＬＰである、コア粒子；および（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位
を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含み
、ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配
列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好まし
くは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少
なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好
ましくはこれから構成され；ここで、（ａ）および（ｂ）は、前記少なくとも１つの第１
のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位によって、少なくとも１つの非ペプチド共
有結合を介して連結される。
療する方法において使用するための組成物を提供し、ここで、有効量の前記組成物が前記
飼いイヌに投与され、ここで、前記組成物は（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有
するコア粒子であって、前記コア粒子は好ましくはウイルス様粒子（ＶＬＰ）、さらに好
ましくは組換えＶＬＰである、コア粒子；および（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位
を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含み
、ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配
列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好まし
くは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少
なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好
ましくはこれから構成され；ここで、（ａ）および（ｂ）は、前記少なくとも１つの第１
のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位によって、少なくとも１つの非ペプチド共
有結合を介して連結される。
【0067】
好ましい実施形態では、前記ウイルス様粒子（ＶＬＰ）は植物ウイルスに由来する。別
の好ましい実施形態では、前記ＶＬＰは組換えＶＬＰであり、ここで、好ましくは前記組
換えＶＬＰは植物ウイルスに由来する。別の好ましい実施形態では、前記ＶＬＰはキュウ
リモザイクウイルス（ＣＭＶ）のＶＬＰである。
の好ましい実施形態では、前記ＶＬＰは組換えＶＬＰであり、ここで、好ましくは前記組
換えＶＬＰは植物ウイルスに由来する。別の好ましい実施形態では、前記ＶＬＰはキュウ
リモザイクウイルス（ＣＭＶ）のＶＬＰである。
【0068】
好ましい実施形態では、前記ＶＬＰは少なくとも１つの改変ＶＬＰポリペプチドを含み
、これから本質的に構成され、あるいはこれから構成される改変ＶＬＰであり、ここで、
前記改変ＶＬＰポリペプチドは、（ａ）ＶＬＰポリペプチド、および（ｂ）ヘルパーＴ細
胞エピトープを含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、前記ＶＬＰポリペプ
チドは、（ｉ）ウイルスのコートタンパク質のアミノ酸配列、好ましくは植物ウイルスの
コートタンパク質のアミノ酸配列；または（ｉｉ）変異アミノ酸配列を含み、または好ま
しくはこれから構成され、ここで、変異されるアミノ酸配列はウイルスの前記コートタン
パク質のアミノ酸配列であり、ここで、前記変異アミノ酸配列およびウイルスの前記コー
トタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少
なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
、これから本質的に構成され、あるいはこれから構成される改変ＶＬＰであり、ここで、
前記改変ＶＬＰポリペプチドは、（ａ）ＶＬＰポリペプチド、および（ｂ）ヘルパーＴ細
胞エピトープを含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、前記ＶＬＰポリペプ
チドは、（ｉ）ウイルスのコートタンパク質のアミノ酸配列、好ましくは植物ウイルスの
コートタンパク質のアミノ酸配列；または（ｉｉ）変異アミノ酸配列を含み、または好ま
しくはこれから構成され、ここで、変異されるアミノ酸配列はウイルスの前記コートタン
パク質のアミノ酸配列であり、ここで、前記変異アミノ酸配列およびウイルスの前記コー
トタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少
なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
【0069】
好ましい実施形態では、前記ＶＬＰはキュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬ
Ｐであり、ここで、ＣＭＶの前記改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改変ＣＭＶポリペプチ
ドを含み、これから本質的に構成され、あるいはこれから構成され、ここで、前記改変Ｃ
ＭＶポリペプチドは、（ａ）ＣＭＶポリペプチド、および（ｂ）ヘルパーＴ細胞エピトー
プを含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、前記ＣＭＶポリペプチドは、（
ｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列；または（ｉｉ）変異アミノ酸配列を含み
、または好ましくはこれから構成され、ここで、変異されるアミノ酸配列はＣＭＶのコー
トタンパク質のアミノ酸配列であり、ここで、前記変異アミノ酸配列およびＣＭＶの前記
コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましく
は少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
Ｐであり、ここで、ＣＭＶの前記改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改変ＣＭＶポリペプチ
ドを含み、これから本質的に構成され、あるいはこれから構成され、ここで、前記改変Ｃ
ＭＶポリペプチドは、（ａ）ＣＭＶポリペプチド、および（ｂ）ヘルパーＴ細胞エピトー
プを含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、前記ＣＭＶポリペプチドは、（
ｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列；または（ｉｉ）変異アミノ酸配列を含み
、または好ましくはこれから構成され、ここで、変異されるアミノ酸配列はＣＭＶのコー
トタンパク質のアミノ酸配列であり、ここで、前記変異アミノ酸配列およびＣＭＶの前記
コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましく
は少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
【0070】
好ましい実施形態では、前記ＣＭＶポリペプチドは、ＣＭＶのコートタンパク質のアミ
ノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される。別の好ましい実施形態では、前
記ＣＭＶポリペプチドは変異アミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、
ここで、変異されるアミノ酸配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、こ
こで、前記変異アミノ酸配列およびＣＭＶの前記コートタンパク質は、少なくとも９０％
、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好まし
くは少なくとも９９％の配列同一性を示す。典型的にかつ好ましくは、前記変異アミノ酸
配列および前記変異されるアミノ酸配列は、少なくとも１つ、かつせいぜい１１、１０、
９、８、７、６、５、４、３、または２つのアミノ酸残基が異なり、ここで、好ましくは
これらの違いは（ｉ）挿入、（ｉｉ）欠失、（ｉｉｉ）アミノ酸交換、および（ｉｖ）（
ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組み合わせから選択される。
ノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される。別の好ましい実施形態では、前
記ＣＭＶポリペプチドは変異アミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、
ここで、変異されるアミノ酸配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、こ
こで、前記変異アミノ酸配列およびＣＭＶの前記コートタンパク質は、少なくとも９０％
、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好まし
くは少なくとも９９％の配列同一性を示す。典型的にかつ好ましくは、前記変異アミノ酸
配列および前記変異されるアミノ酸配列は、少なくとも１つ、かつせいぜい１１、１０、
９、８、７、６、５、４、３、または２つのアミノ酸残基が異なり、ここで、好ましくは
これらの違いは（ｉ）挿入、（ｉｉ）欠失、（ｉｉｉ）アミノ酸交換、および（ｉｖ）（
ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組み合わせから選択される。
【0071】
別の好ましい実施形態では、前記ＣＭＶポリペプチドは、（ｉ）（ａ）ＣＭＶのコート
タンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含
み、または好ましくはこれから構成される、アミノ酸配列、または（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも
８５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９０％、重ねてより好ましくは少なくとも９
５％、いっそうさらに好ましくは少なくとも９８％、いっそう重ねてさらにより好ましく
は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；あるいは（ｉｉ）変異アミノ酸
配列であって、前記変異されるアミノ酸配列はこの請求項の（ｉ）で規定される前記アミ
ノ酸配列である、アミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、前
記変異アミノ酸配列および前記変異されるアミノ酸配列は少なくとも９５％、好ましくは
少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
タンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含
み、または好ましくはこれから構成される、アミノ酸配列、または（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも
８５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９０％、重ねてより好ましくは少なくとも９
５％、いっそうさらに好ましくは少なくとも９８％、いっそう重ねてさらにより好ましく
は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；あるいは（ｉｉ）変異アミノ酸
配列であって、前記変異されるアミノ酸配列はこの請求項の（ｉ）で規定される前記アミ
ノ酸配列である、アミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、前
記変異アミノ酸配列および前記変異されるアミノ酸配列は少なくとも９５％、好ましくは
少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
【0072】
別の好ましい実施形態では、前記ＣＭＶポリペプチドは、下記を含み、または好ましく
はこれから構成される：（ａ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前記
アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含み、または好ましくはこれから構成される
、アミノ酸配列、または（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも７５％、好ましくは
少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、重ねてさらに好ましくは少なくと
も９０％、重ねてより好ましくは少なくとも９５％、いっそうさらに好ましくは少なくと
も９８％、いっそう重ねてさらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有する
アミノ酸配列。
はこれから構成される：（ａ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前記
アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含み、または好ましくはこれから構成される
、アミノ酸配列、または（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも７５％、好ましくは
少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、重ねてさらに好ましくは少なくと
も９０％、重ねてより好ましくは少なくとも９５％、いっそうさらに好ましくは少なくと
も９８％、いっそう重ねてさらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有する
アミノ酸配列。
【0073】
別の好ましい実施形態では、前記ＣＭＶポリペプチドは、（ｉ）（ａ）ＣＭＶのコート
タンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含
む、アミノ酸配列、または（ｂ）アミノ酸配列領域を含むＣＭＶのコートタンパク質のア
ミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも
７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、重ねてさらに
好ましくは少なくとも９０％、重ねてより好ましくは少なくとも９５％、いっそうさらに
好ましくは少なくとも９８％、いっそう重ねてさらにより好ましくは少なくとも９９％の
配列同一性を有する、アミノ酸配列；あるいは（ｉｉ）変異アミノ酸配列であって、前記
変異されるアミノ酸配列はこの請求項の（ｉ）で規定される前記アミノ酸配列である、ア
ミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、前記変異アミノ酸配列
および前記変異されるアミノ酸配列は少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９８％、
より好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
タンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含
む、アミノ酸配列、または（ｂ）アミノ酸配列領域を含むＣＭＶのコートタンパク質のア
ミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも
７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、重ねてさらに
好ましくは少なくとも９０％、重ねてより好ましくは少なくとも９５％、いっそうさらに
好ましくは少なくとも９８％、いっそう重ねてさらにより好ましくは少なくとも９９％の
配列同一性を有する、アミノ酸配列；あるいは（ｉｉ）変異アミノ酸配列であって、前記
変異されるアミノ酸配列はこの請求項の（ｉ）で規定される前記アミノ酸配列である、ア
ミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、前記変異アミノ酸配列
および前記変異されるアミノ酸配列は少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９８％、
より好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す。
【0074】
さらに好ましい実施形態では、前記ＣＭＶポリペプチドは、下記を含み、または好まし
くはこれから構成される：（ａ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前
記アミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含む、アミノ酸配列、または（ｂ）アミノ
酸配列領域を含む、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配
列領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％
、より好ましくは少なくとも８５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９０％、重ねて
より好ましくは少なくとも９５％、いっそうさらに好ましくは少なくとも９８％、いっそ
う重ねてさらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、アミノ酸配列。
くはこれから構成される：（ａ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前
記アミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含む、アミノ酸配列、または（ｂ）アミノ
酸配列領域を含む、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配
列領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％
、より好ましくは少なくとも８５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９０％、重ねて
より好ましくは少なくとも９５％、いっそうさらに好ましくは少なくとも９８％、いっそ
う重ねてさらにより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、アミノ酸配列。
【0075】
別の好ましい実施形態では、前記ＣＭＶポリペプチドは、（ｉ）（ａ）ＣＭＶのコート
タンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含
み、または好ましくはこれから構成される、アミノ酸配列、または（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも
８５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９０％、重ねてより好ましくは少なくとも９
５％、いっそうさらに好ましくは少なくとも９８％、いっそう重ねてさらにより好ましく
は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；ここで、この請求項で（ａ）ま
たは（ｂ）において規定される前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み；ある
いは、ここで、この請求項で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はア
ミノ酸配列領域を含み、ここで、前記アミノ酸配列領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と
少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、重
ねてさらに好ましくは少なくとも９０％、重ねてより好ましくは少なくとも９５％、いっ
そうさらに好ましくは少なくとも９８％、いっそう重ねてさらにより好ましくは少なくと
も９９％の配列同一性を有する；または（ｉｉ）変異アミノ酸配列であって、前記変異さ
れるアミノ酸配列はこの請求項の（ｉ）で規定される前記アミノ酸配列である、変異アミ
ノ酸配列、を含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、前記変異アミノ酸配列
および前記変異されるアミノ酸配列は少なくとも９８％好ましくは少なくとも９９％の配
列同一性を示す。
タンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含
み、または好ましくはこれから構成される、アミノ酸配列、または（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも
８５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９０％、重ねてより好ましくは少なくとも９
５％、いっそうさらに好ましくは少なくとも９８％、いっそう重ねてさらにより好ましく
は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；ここで、この請求項で（ａ）ま
たは（ｂ）において規定される前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み；ある
いは、ここで、この請求項で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はア
ミノ酸配列領域を含み、ここで、前記アミノ酸配列領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と
少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、重
ねてさらに好ましくは少なくとも９０％、重ねてより好ましくは少なくとも９５％、いっ
そうさらに好ましくは少なくとも９８％、いっそう重ねてさらにより好ましくは少なくと
も９９％の配列同一性を有する；または（ｉｉ）変異アミノ酸配列であって、前記変異さ
れるアミノ酸配列はこの請求項の（ｉ）で規定される前記アミノ酸配列である、変異アミ
ノ酸配列、を含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、前記変異アミノ酸配列
および前記変異されるアミノ酸配列は少なくとも９８％好ましくは少なくとも９９％の配
列同一性を示す。
【0076】
別の好ましい実施形態では、前記ＣＭＶポリペプチドは、（ａ）ＣＭＶのコートタンパ
ク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含み、好
ましくはこれから構成さる、アミノ酸配列、または（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少な
くとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成
され；ここで、この請求項で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はＳ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み；あるいはこの請求項で（ａ）または（ｂ）において規定
される前記アミノ配列はアミノ酸配列領域を含み、ここで、前記アミノ酸配列領域はＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
ク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含み、好
ましくはこれから構成さる、アミノ酸配列、または（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少な
くとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成
され；ここで、この請求項で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はＳ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み；あるいはこの請求項で（ａ）または（ｂ）において規定
される前記アミノ配列はアミノ酸配列領域を含み、ここで、前記アミノ酸配列領域はＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
【0077】
別の好ましい実施形態では、前記ヘルパーＴ細胞エピトープは前記ＣＭＶポリペプチド
のＮ末端領域にとって代わる。別の好ましい実施形態では、置き換えられた前記Ｎ末端領
域のアミノ酸の数は、前記ヘルパーＴ細胞エピトープを構成するアミノ酸の数以下である
。
のＮ末端領域にとって代わる。別の好ましい実施形態では、置き換えられた前記Ｎ末端領
域のアミノ酸の数は、前記ヘルパーＴ細胞エピトープを構成するアミノ酸の数以下である
。
【0078】
さらに非常に好ましい実施形態では、前記ヘルパーＴ細胞エピトープは前記ＣＭＶポリ
ペプチドのＮ末端領域にとって代わり、ここで、置き換えられた前記Ｎ末端領域のアミノ
酸の数は、前記ヘルパーＴ細胞エピトープを構成するアミノ酸の数以下である。典型的に
かつ好ましくは、前記ＣＭＶポリペプチドの前記置き換えられたＮ末端領域は、５～１５
の連続アミノ酸、好ましくは９～１４の連続アミノ酸、より好ましくは１１～１３の連続
アミノ酸から構成される。
ペプチドのＮ末端領域にとって代わり、ここで、置き換えられた前記Ｎ末端領域のアミノ
酸の数は、前記ヘルパーＴ細胞エピトープを構成するアミノ酸の数以下である。典型的に
かつ好ましくは、前記ＣＭＶポリペプチドの前記置き換えられたＮ末端領域は、５～１５
の連続アミノ酸、好ましくは９～１４の連続アミノ酸、より好ましくは１１～１３の連続
アミノ酸から構成される。
【0079】
さらに非常に好ましい実施形態では、前記ＣＭＶポリペプチドの前記Ｎ末端領域はＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸２－１２に対応する。
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸２－１２に対応する。
【0080】
別の非常に好ましい実施形態では、前記ヘルパーＴ細胞エピトープはユニバーサルヘル
パーＴ細胞エピトープである。別の好ましい実施形態では、前記ヘルパーＴ細胞エピトー
プはせいぜい２０のアミノ酸から構成される。
パーＴ細胞エピトープである。別の好ましい実施形態では、前記ヘルパーＴ細胞エピトー
プはせいぜい２０のアミノ酸から構成される。
【0081】
非常に好ましい実施形態では、前記Ｔｈ細胞エピトープはＰＡＤＲＥ配列である。さら
に非常に好ましい実施形態では、前記Ｔｈ細胞エピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５の
アミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される。別の非常に好ましい実施形
態では、前記Ｔｈ細胞エピトープはＰＡＤＲＥ配列であり、ここで、前記Ｔｈ細胞エピト
ープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成
される。
に非常に好ましい実施形態では、前記Ｔｈ細胞エピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５の
アミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される。別の非常に好ましい実施形
態では、前記Ｔｈ細胞エピトープはＰＡＤＲＥ配列であり、ここで、前記Ｔｈ細胞エピト
ープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成
される。
【0082】
別の好ましい実施形態では、前記ヘルパーＴ細胞エピトープは、ヒトワクチンに由来す
る。非常に好ましい実施形態では、前記Ｔｈ細胞エピトープは、破傷風毒素に由来する。
さらに非常に好ましい実施形態では、前記Ｔｈ細胞エピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
４のアミノ酸配列を有し、好ましくはこれから構成される。別の非常に好ましい実施形態
では、前記Ｔｈ細胞エピトープは、破傷風毒素に由来し、ここで、前記Ｔｈ細胞エピトー
プは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を有し、好ましくはこれから構成される。
る。非常に好ましい実施形態では、前記Ｔｈ細胞エピトープは、破傷風毒素に由来する。
さらに非常に好ましい実施形態では、前記Ｔｈ細胞エピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
４のアミノ酸配列を有し、好ましくはこれから構成される。別の非常に好ましい実施形態
では、前記Ｔｈ細胞エピトープは、破傷風毒素に由来し、ここで、前記Ｔｈ細胞エピトー
プは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を有し、好ましくはこれから構成される。
【0083】
非常に好ましい実施形態では、前記Ｔｈ細胞エピトープはＰＡＤＲＥ配列であり、ここ
で、前記Ｔｈ細胞エピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、または
好ましくはこれから構成され；あるいはここで、前記Ｔｈ細胞エピトープは、破傷風毒素
に由来し、ここで、前記Ｔｈ細胞エピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列
を有し、好ましくはこれから構成される。
で、前記Ｔｈ細胞エピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、または
好ましくはこれから構成され；あるいはここで、前記Ｔｈ細胞エピトープは、破傷風毒素
に由来し、ここで、前記Ｔｈ細胞エピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列
を有し、好ましくはこれから構成される。
【0084】
非常に好ましい実施形態では、前記ＣＭＶポリペプチドは、ＣＭＶのコートタンパク質
のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、前記アミノ酸配列
は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９５％の配列同
一性を有するアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、前記ア
ミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み、ここで、前記ヘルパーＴ細胞エピトープは
前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域にとって代わり、ここで、前記ＣＭＶポリペプチド
の前記置き換えられたＮ末端領域は１１～１３の連続アミノ酸、好ましくは１１の連続ア
ミノ酸から構成され、ここで、さらに好ましくは前記ＣＭＶポリペプチドの前記Ｎ末端領
域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸２－１２に対応する。
のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、ここで、前記アミノ酸配列
は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９５％の配列同
一性を有するアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、前記ア
ミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み、ここで、前記ヘルパーＴ細胞エピトープは
前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域にとって代わり、ここで、前記ＣＭＶポリペプチド
の前記置き換えられたＮ末端領域は１１～１３の連続アミノ酸、好ましくは１１の連続ア
ミノ酸から構成され、ここで、さらに好ましくは前記ＣＭＶポリペプチドの前記Ｎ末端領
域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸２－１２に対応する。
【0085】
別の非常に好ましい実施形態では、前記改変ＣＭＶポリペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：６のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される。別の非常に好ましい
実施形態では、前記改変ＣＭＶポリペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を
含み、または好ましくはこれから構成される。請求項６～８のいずれか一項に記載の組成
物の使用、ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される。
：６のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される。別の非常に好ましい
実施形態では、前記改変ＣＭＶポリペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を
含み、または好ましくはこれから構成される。請求項６～８のいずれか一項に記載の組成
物の使用、ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される。
【0086】
非常に好ましい実施形態では、前記第１の付着部位および前記第２の付着部位は少なく
とも１つの共有非ペプチド結合を介して連結される。別の非常に好ましい実施形態では、
前記第１の付着部位は、アミノ基、好ましくはリジンのアミノ基を含み、好ましくはこれ
である。さらに非常に好ましい実施形態では、前記第２の付着部位は、スルフヒドリル基
、好ましくはシステインのスルフヒドリル基を含み、好ましくはこれである。
とも１つの共有非ペプチド結合を介して連結される。別の非常に好ましい実施形態では、
前記第１の付着部位は、アミノ基、好ましくはリジンのアミノ基を含み、好ましくはこれ
である。さらに非常に好ましい実施形態では、前記第２の付着部位は、スルフヒドリル基
、好ましくはシステインのスルフヒドリル基を含み、好ましくはこれである。
【0087】
非常に好ましい実施形態では、少なくとも１つの第１の付着部位は、アミノ基、好まし
くはリジン残基のアミノ基であり、少なくとも１つの第２の付着部位はスルフヒドリル基
、好ましくはシステイン残基のスルフヒドリル基またはｃＩＬ－３１抗原に化学的に付着
されたスルフヒドリル基である。さらに好ましい実施形態では、前記第２の付着部位のた
った１つが前記第１の付着部位と、少なくとも１つの非ペプチド共有結合により結合し、
前記ｃＩＬ－３１抗原の前記改変ウイルス様粒子への単一の均一な型の結合につながり、
ここで、前記第１の付着部位と結合する前記たった１つの第２の付着部位はスルフヒドリ
ル基であり、ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原および前記改変ウイルス様粒子は前記結合に
より相互作用し、秩序反復抗原アレイ、すなわちｃＩＬ－３１抗原の秩序反復アレイを形
成する。
くはリジン残基のアミノ基であり、少なくとも１つの第２の付着部位はスルフヒドリル基
、好ましくはシステイン残基のスルフヒドリル基またはｃＩＬ－３１抗原に化学的に付着
されたスルフヒドリル基である。さらに好ましい実施形態では、前記第２の付着部位のた
った１つが前記第１の付着部位と、少なくとも１つの非ペプチド共有結合により結合し、
前記ｃＩＬ－３１抗原の前記改変ウイルス様粒子への単一の均一な型の結合につながり、
ここで、前記第１の付着部位と結合する前記たった１つの第２の付着部位はスルフヒドリ
ル基であり、ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原および前記改変ウイルス様粒子は前記結合に
より相互作用し、秩序反復抗原アレイ、すなわちｃＩＬ－３１抗原の秩序反復アレイを形
成する。
【0088】
発明の１つの好ましい実施形態では、ｃＩＬ－３１抗原は、典型的にかつ好ましくは、
ヘテロ二官能性架橋剤を使用することにより、化学架橋により改変ＶＬＰ連結される。好
ましい実施形態では、ヘテロ二官能性架橋剤は、好ましい第１の付着部位と、好ましくは
アミノ基と、より好ましくは改変ＶＬＰのリジン残基（複数可）のアミノ基と反応するこ
とができる官能基、および、ｃＩＬ－３１抗原に固有の、またはこれに付加された、およ
び、任意で還元により反応に使用可能とされる、好ましい第２の付着部位、すなわち、好
ましくはシステイン（複数可）残基のスルフヒドリル基と反応することができる、さらな
る官能基を含む。いくつかのヘテロ二官能性架橋剤は当技術分野で知られている。これら
としては、好ましい架橋剤ＳＭＰＨ（Ｐｉｅｒｃｅ）、Ｓｕｌｆｏ－ＭＢＳ、Ｓｕｌｆｏ
－ＥＭＣＳ、Ｓｕｌｆｏ－ＧＭＢＳ、Ｓｕｌｆｏ－ＳＩＡＢ、Ｓｕｌｆｏ－ＳＭＰＢ、Ｓ
ｕｌｆｏ－ＳＭＣＣ、Ｓｕｌｆｏ－ＫＭＵＳ ＳＶＳＢ、ＳＩＡ、および、例えばＰｉｅ
ｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙから入手可能であり、アミノ基に対して反応
性である１つの官能基およびスルフヒドリル基に対して反応性である１つの官能基を有す
る他の架橋剤が挙げられる。上記架橋剤は全て、アミノ基との反応後のアミド結合および
スルフヒドリル基とのチオエーテル結合の形成に至らしめる。発明の実施において好適な
架橋剤の別のクラスは、カップリングでの、ｃＩＬ－３１抗原と改変ＶＬＰの間のジスル
フィド連結の導入により特徴付けられる。このクラスに属する好ましい架橋剤としては、
例えば、ＳＰＤＰおよびＳｕｌｆｏ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（Ｐｉｅｒｃｅ）が挙げられる。非
常に好ましい実施形態では、前記ヘテロ二官能性架橋剤はＳＭＰＨである。
ヘテロ二官能性架橋剤を使用することにより、化学架橋により改変ＶＬＰ連結される。好
ましい実施形態では、ヘテロ二官能性架橋剤は、好ましい第１の付着部位と、好ましくは
アミノ基と、より好ましくは改変ＶＬＰのリジン残基（複数可）のアミノ基と反応するこ
とができる官能基、および、ｃＩＬ－３１抗原に固有の、またはこれに付加された、およ
び、任意で還元により反応に使用可能とされる、好ましい第２の付着部位、すなわち、好
ましくはシステイン（複数可）残基のスルフヒドリル基と反応することができる、さらな
る官能基を含む。いくつかのヘテロ二官能性架橋剤は当技術分野で知られている。これら
としては、好ましい架橋剤ＳＭＰＨ（Ｐｉｅｒｃｅ）、Ｓｕｌｆｏ－ＭＢＳ、Ｓｕｌｆｏ
－ＥＭＣＳ、Ｓｕｌｆｏ－ＧＭＢＳ、Ｓｕｌｆｏ－ＳＩＡＢ、Ｓｕｌｆｏ－ＳＭＰＢ、Ｓ
ｕｌｆｏ－ＳＭＣＣ、Ｓｕｌｆｏ－ＫＭＵＳ ＳＶＳＢ、ＳＩＡ、および、例えばＰｉｅ
ｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙから入手可能であり、アミノ基に対して反応
性である１つの官能基およびスルフヒドリル基に対して反応性である１つの官能基を有す
る他の架橋剤が挙げられる。上記架橋剤は全て、アミノ基との反応後のアミド結合および
スルフヒドリル基とのチオエーテル結合の形成に至らしめる。発明の実施において好適な
架橋剤の別のクラスは、カップリングでの、ｃＩＬ－３１抗原と改変ＶＬＰの間のジスル
フィド連結の導入により特徴付けられる。このクラスに属する好ましい架橋剤としては、
例えば、ＳＰＤＰおよびＳｕｌｆｏ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（Ｐｉｅｒｃｅ）が挙げられる。非
常に好ましい実施形態では、前記ヘテロ二官能性架橋剤はＳＭＰＨである。
【0089】
以上で記載される好ましい方法に従う、ヘテロ二官能性架橋剤を使用することによるｃ
ＩＬ－３１抗原の改変ＶＬＰへの連結により、配向様式でのｃＩＬ－３１抗原の改変ＶＬ
Ｐへのカップリングが可能になる。ｃＩＬ－３１抗原を改変ＶＬＰに連結させる方法は、
ｃＩＬ－３１抗原が改変ＶＬＰに、カルボジイミドＥＤＣ、およびＮＨＳを使用して架橋
される方法を含む。ｃＩＬ－３１抗原はまた、例えばＳＡＴＡ、ＳＡＴＰまたはイミノチ
オランとの反応により、最初にチオール化されてもよい。ｃＩＬ－３１抗原は、必要なら
脱保護後、下記の通り、その後、改変ＶＬＰにカップリングされてもよい。過剰のチオー
ル化試薬の分離後、ｃＩＬ－３１抗原は、システイン反応性部分を含むヘテロ二官能性架
橋剤で前に活性化され、そのため、システイン残基に対して反応性の少なくとも１つまた
は複数の官能基を提示する改変ＶＬＰと反応させられ、チオール化されたｃＩＬ－３１抗
原は、それに対して、例えば以上で記載されるように反応することができる。任意で、低
量の還元剤が反応混合物中に含められる。さらなる方法では、ｃＩＬ－３１抗原はホモ二
官能性架橋剤、例えばグルタルアルデヒド、ＤＳＧ、ＢＭ［ＰＥＯ］４、ＢＳ３、（Ｐｉ
ｅｒｃｅ）または、改変ＶＬＰのアミン基またはカルボキシル基に対して反応性である官
能基を有する他の公知のホモ二官能性架橋剤を用いて、改変ＶＬＰに付着される。
ＩＬ－３１抗原の改変ＶＬＰへの連結により、配向様式でのｃＩＬ－３１抗原の改変ＶＬ
Ｐへのカップリングが可能になる。ｃＩＬ－３１抗原を改変ＶＬＰに連結させる方法は、
ｃＩＬ－３１抗原が改変ＶＬＰに、カルボジイミドＥＤＣ、およびＮＨＳを使用して架橋
される方法を含む。ｃＩＬ－３１抗原はまた、例えばＳＡＴＡ、ＳＡＴＰまたはイミノチ
オランとの反応により、最初にチオール化されてもよい。ｃＩＬ－３１抗原は、必要なら
脱保護後、下記の通り、その後、改変ＶＬＰにカップリングされてもよい。過剰のチオー
ル化試薬の分離後、ｃＩＬ－３１抗原は、システイン反応性部分を含むヘテロ二官能性架
橋剤で前に活性化され、そのため、システイン残基に対して反応性の少なくとも１つまた
は複数の官能基を提示する改変ＶＬＰと反応させられ、チオール化されたｃＩＬ－３１抗
原は、それに対して、例えば以上で記載されるように反応することができる。任意で、低
量の還元剤が反応混合物中に含められる。さらなる方法では、ｃＩＬ－３１抗原はホモ二
官能性架橋剤、例えばグルタルアルデヒド、ＤＳＧ、ＢＭ［ＰＥＯ］４、ＢＳ３、（Ｐｉ
ｅｒｃｅ）または、改変ＶＬＰのアミン基またはカルボキシル基に対して反応性である官
能基を有する他の公知のホモ二官能性架橋剤を用いて、改変ＶＬＰに付着される。
【0090】
さらに好ましい実施形態では、前記組成物は、少なくとも１つの免疫賦活物質をさらに
含む。非常に好ましい実施形態では、前記免疫賦活物質は、発明の改変ＶＬＰにパッケー
ジングされる。別の好ましい実施形態では、免疫賦活物質は、発明の改変ＶＬＰと混合さ
れる。発明に有用な免疫賦活物質は、一般に当技術分野で知られており、とりわけ、ＷＯ
２００３／０２４４８１Ａ２号で開示される。
含む。非常に好ましい実施形態では、前記免疫賦活物質は、発明の改変ＶＬＰにパッケー
ジングされる。別の好ましい実施形態では、免疫賦活物質は、発明の改変ＶＬＰと混合さ
れる。発明に有用な免疫賦活物質は、一般に当技術分野で知られており、とりわけ、ＷＯ
２００３／０２４４８１Ａ２号で開示される。
【0091】
本発明の別の実施形態では、前記免疫賦活物質は、非真核生物起源のＤＮＡまたはＲＮ
Ａから構成される。さらに好ましい実施形態では、前記免疫賦活物質は下記からなる群よ
り選択される：（ａ）免疫賦活性核酸；（ｂ）ペプチドグリカン；（ｃ）リポ多糖；（ｄ
）リポテイコ酸（ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｎｉｃ ａｃｉｄ）；（ｅ）イミダゾキノリン化
合物；（ｆ）フラゲリン；（ｇ）リポタンパク質；および（ｈ）（ａ）～（ｇ）の少なく
とも１つの物質の任意の混合物。さらに好ましい実施形態では、前記免疫賦活物質は免疫
賦活性核酸であり、ここで、前記免疫賦活性核酸は下記からなる群より選択される：（ａ
）リボ核酸；（ｂ）デオキシリボ核酸；（ｃ）キメラ核酸；および（ｄ）（ａ）、（ｂ）
および／または（ｃ）の任意の混合物。さらに好ましい実施形態では、前記免疫賦活性核
酸はリボ核酸であり、ここで、前記リボ核酸は細菌由来ＲＮＡである。さらに好ましい実
施形態では、前記免疫賦活性核酸は、ポリ－（ＬＣ）またはその誘導体である。さらに好
ましい実施形態では、前記免疫賦活性核酸はデオキシリボ核酸であり、ここで、前記デオ
キシリボ核酸は非メチル化ＣｐＧ－含有オリゴヌクレオチドである。
Ａから構成される。さらに好ましい実施形態では、前記免疫賦活物質は下記からなる群よ
り選択される：（ａ）免疫賦活性核酸；（ｂ）ペプチドグリカン；（ｃ）リポ多糖；（ｄ
）リポテイコ酸（ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｎｉｃ ａｃｉｄ）；（ｅ）イミダゾキノリン化
合物；（ｆ）フラゲリン；（ｇ）リポタンパク質；および（ｈ）（ａ）～（ｇ）の少なく
とも１つの物質の任意の混合物。さらに好ましい実施形態では、前記免疫賦活物質は免疫
賦活性核酸であり、ここで、前記免疫賦活性核酸は下記からなる群より選択される：（ａ
）リボ核酸；（ｂ）デオキシリボ核酸；（ｃ）キメラ核酸；および（ｄ）（ａ）、（ｂ）
および／または（ｃ）の任意の混合物。さらに好ましい実施形態では、前記免疫賦活性核
酸はリボ核酸であり、ここで、前記リボ核酸は細菌由来ＲＮＡである。さらに好ましい実
施形態では、前記免疫賦活性核酸は、ポリ－（ＬＣ）またはその誘導体である。さらに好
ましい実施形態では、前記免疫賦活性核酸はデオキシリボ核酸であり、ここで、前記デオ
キシリボ核酸は非メチル化ＣｐＧ－含有オリゴヌクレオチドである。
【0092】
非常に好ましい実施形態では、前記免疫賦活物質は非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレ
オチドである。さらに好ましい実施形態では、前記非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオ
チドはＡ型ＣｐＧである。さらに好ましい実施形態では、前記Ａ型ＣｐＧは、配列ＧＡＣ
ＧＡＴＣＧＴＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を含む。さらに好ましい実施形態では、前
記パリンドローム配列はその５’末端およびその３’末端でグアノシンエンティティによ
り隣接される。さらに好ましい実施形態では前記パリンドローム配列はその５’末端で少
なくとも３つ、かつせいぜい１５のグアノシンエンティティにより隣接され、ここで、前
記パリンドローム配列は、その３’末端で少なくとも３つかつせいぜい１５グアノシンエ
ンティティにより隣接される。
オチドである。さらに好ましい実施形態では、前記非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオ
チドはＡ型ＣｐＧである。さらに好ましい実施形態では、前記Ａ型ＣｐＧは、配列ＧＡＣ
ＧＡＴＣＧＴＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を含む。さらに好ましい実施形態では、前
記パリンドローム配列はその５’末端およびその３’末端でグアノシンエンティティによ
り隣接される。さらに好ましい実施形態では前記パリンドローム配列はその５’末端で少
なくとも３つ、かつせいぜい１５のグアノシンエンティティにより隣接され、ここで、前
記パリンドローム配列は、その３’末端で少なくとも３つかつせいぜい１５グアノシンエ
ンティティにより隣接される。
【0093】
別の好ましい実施形態では、前記免疫賦活物質は非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオ
チドであり、ここで、好ましくは前記非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドはパリン
ドローム配列を含み、ここで、さらに好ましくは、前記非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌク
レオチドのＣｐＧモチーフは、パリンドロームの一部であり、ここで、重ねてさらに好ま
しくは前記パリンドローム配列はＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）で
ある。
チドであり、ここで、好ましくは前記非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドはパリン
ドローム配列を含み、ここで、さらに好ましくは、前記非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌク
レオチドのＣｐＧモチーフは、パリンドロームの一部であり、ここで、重ねてさらに好ま
しくは前記パリンドローム配列はＧＡＣＧＡＴＣＧＴＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）で
ある。
【0094】
非常に好ましい実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原はスルフヒドリ
ル基を介して前記コア粒子、好ましくは前記ＶＬＰ、重ねてさらに好ましくは前記改変Ｃ
ＭＶ ＶＬＰに連結され、ここで、好ましくは前記スルフヒドリル基は、前記第２の付着
部位に含まれ、ここで、前記スルフヒドリル基は前記ｃＩＬ－３１抗原と共に天然に生じ
ず、ここで、好ましくは前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシン
イミジルＳ－アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）、Ｎ－スクシンイミジルＳ－アセチル
チオプロピオナート（ＳＡＴＰ）またはイミノチオランとの反応から誘導され、さらに好
ましくは、ここで、前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミ
ジルＳ－アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導される。さらに非常に好
ましい実施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましく
は前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のリジン残基の反応から誘導される。
ル基を介して前記コア粒子、好ましくは前記ＶＬＰ、重ねてさらに好ましくは前記改変Ｃ
ＭＶ ＶＬＰに連結され、ここで、好ましくは前記スルフヒドリル基は、前記第２の付着
部位に含まれ、ここで、前記スルフヒドリル基は前記ｃＩＬ－３１抗原と共に天然に生じ
ず、ここで、好ましくは前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシン
イミジルＳ－アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）、Ｎ－スクシンイミジルＳ－アセチル
チオプロピオナート（ＳＡＴＰ）またはイミノチオランとの反応から誘導され、さらに好
ましくは、ここで、前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミ
ジルＳ－アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導される。さらに非常に好
ましい実施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましく
は前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のリジン残基の反応から誘導される。
【0095】
発明の他の好ましい実施形態では、ｃＩＬ－３１抗原は、ｃＩＬ－３１抗原のＮ末端ま
たはＣ末端のいずれかに付加されたシステイン残基、またはこれ内の天然システイン残基
を介して、改変ウイルス様粒子のリジン残基に連結される。好ましい実施形態では、発明
の組成物はリンカーをさらに含み、前記リンカーは前記ｃＩＬ－３１抗原を前記第２の付
着部位と結合させ、ここで、好ましくは前記リンカーは前記第２の付着部位を含む、ある
いはこれから構成される。
たはＣ末端のいずれかに付加されたシステイン残基、またはこれ内の天然システイン残基
を介して、改変ウイルス様粒子のリジン残基に連結される。好ましい実施形態では、発明
の組成物はリンカーをさらに含み、前記リンカーは前記ｃＩＬ－３１抗原を前記第２の付
着部位と結合させ、ここで、好ましくは前記リンカーは前記第２の付着部位を含む、ある
いはこれから構成される。
【0096】
好ましい実施形態では、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なく
とも９０％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ま
しくはこれから構成される。別の好ましい実施形態では、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９２％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有する
タンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに好ましい実施形態では
、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９５％のアミノ酸配
列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され
る。非常に好ましい実施形態では、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２
と少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、ま
たは好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい実施形態では、前記ｃＩＬ－
３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、また
は好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい実施形態では、前記少なくとも
１つのｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ配列を有するタンパク質
を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい実施形態では、前
記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ配列を有す
るタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい実施
形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましくは前記スル
フヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－アセチルチオアセテ
ート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導される。さらに非常に好ましい実施形態では、前記第
２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましくは前記スルフヒドリル基は、
前記ｃＩＬ－３１抗原のリジン残基の反応から誘導される。
とも９０％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ま
しくはこれから構成される。別の好ましい実施形態では、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９２％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有する
タンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに好ましい実施形態では
、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９５％のアミノ酸配
列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され
る。非常に好ましい実施形態では、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２
と少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、ま
たは好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい実施形態では、前記ｃＩＬ－
３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、また
は好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい実施形態では、前記少なくとも
１つのｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ配列を有するタンパク質
を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい実施形態では、前
記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ配列を有す
るタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい実施
形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましくは前記スル
フヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－アセチルチオアセテ
ート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導される。さらに非常に好ましい実施形態では、前記第
２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましくは前記スルフヒドリル基は、
前記ｃＩＬ－３１抗原のリジン残基の反応から誘導される。
【0097】
さらなる態様では、本発明は、（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するウイル
ス様粒子（ＶＬＰ）；（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つの
イヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含む組成物を提供し、ここで、
前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列を有する
タンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましくは少なく
とも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９
８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこ
れから構成され、重ねてさらに好ましくは、前記抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のア
ミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、（ａ
）および（ｂ）は、前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着
部位によって、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される。
ス様粒子（ＶＬＰ）；（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つの
イヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含む組成物を提供し、ここで、
前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列を有する
タンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましくは少なく
とも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９
８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこ
れから構成され、重ねてさらに好ましくは、前記抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のア
ミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され；ここで、（ａ
）および（ｂ）は、前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着
部位によって、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される。
【0098】
さらに非常に好ましい実施形態では、前記ＶＬＰはキュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ
）の改変ＶＬＰであり、ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成
される。
）の改変ＶＬＰであり、ここで、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成
される。
【0099】
さらに非常に好ましい実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記
から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成さ
れる：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２２；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５－３０。さらに非常に好ましい
実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記から選択されるアミノ配
列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される：（ａ）ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５；または（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。さらに好ま
しい実施形態では、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９
５％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくは
これから構成される。非常に好ましい実施形態では、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタン
パク質を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい実施形態で
は、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を有するタンパ
ク質を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい実施形態では
、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ配列を
有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい
実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１の
アミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに非
常に好ましい実施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好
ましくは前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－ア
セチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導される。さらに非常に好ましい実施
形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましくは前記スル
フヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のリジン残基の反応から誘導される。
から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成さ
れる：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２２；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５－３０。さらに非常に好ましい
実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記から選択されるアミノ配
列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される：（ａ）ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１８；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５；または（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。さらに好ま
しい実施形態では、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９
５％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくは
これから構成される。非常に好ましい実施形態では、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタン
パク質を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい実施形態で
は、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を有するタンパ
ク質を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい実施形態では
、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ配列を
有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに非常に好ましい
実施形態では、前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１の
アミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される。さらに非
常に好ましい実施形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好
ましくは前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－ア
セチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導される。さらに非常に好ましい実施
形態では、前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、ここで、好ましくは前記スル
フヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のリジン残基の反応から誘導される。
【0100】
別の態様では、本発明は、イヌ科、好ましくは飼いイヌのイヌアトピー性皮膚炎（ＣＡ
Ｄ）を防止または治療する方法であって、有効量の組成物を前記イヌ科、好ましくは前記
飼いイヌに投与することを含む方法を提供し、ここで、前記組成物は（ａ）少なくとも１
つの第１の付着部位を有するコア粒子；および（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を
有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含み、
ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列
を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましく
は少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少な
くとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ま
しくはこれから構成され；ここで、（ａ）および（ｂ）は、前記少なくとも１つの第１の
および前記少なくとも１つの第２の付着部位によって、少なくとも１つの非ペプチド共有
結合を介して連結され、ここで、好ましくは前記方法または前記組成物は、本明細書で記
載されるようにさらに規定される。
Ｄ）を防止または治療する方法であって、有効量の組成物を前記イヌ科、好ましくは前記
飼いイヌに投与することを含む方法を提供し、ここで、前記組成物は（ａ）少なくとも１
つの第１の付着部位を有するコア粒子；および（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を
有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含み、
ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列
を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましく
は少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少な
くとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ま
しくはこれから構成され；ここで、（ａ）および（ｂ）は、前記少なくとも１つの第１の
および前記少なくとも１つの第２の付着部位によって、少なくとも１つの非ペプチド共有
結合を介して連結され、ここで、好ましくは前記方法または前記組成物は、本明細書で記
載されるようにさらに規定される。
【0101】
別の態様では、本発明は、イヌ科、好ましくは飼いイヌのイヌアトピー性皮膚炎（ＣＡ
Ｄ）を防止または治療するための薬剤の製造のための、（ａ）少なくとも１つの第１の付
着部位を有するコア粒子；および（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なく
とも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含む組成物の使用を
提供し、ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるア
ミノ配列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、
好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好まし
くは少なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、ま
たは好ましくはこれから構成され；ここで、（ａ）および（ｂ）は、前記少なくとも１つ
の第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位によって、少なくとも１つの非ペプ
チド共有結合を介して連結され；ここで、有効量の前記組成物が前記イヌ科、好ましくは
前記飼いイヌに投与され、ここで、好ましくは前記方法または前記組成物は、本明細書で
記載されるようにさらに規定される。
Ｄ）を防止または治療するための薬剤の製造のための、（ａ）少なくとも１つの第１の付
着部位を有するコア粒子；および（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なく
とも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）を含む組成物の使用を
提供し、ここで、前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるア
ミノ配列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、
好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好まし
くは少なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、ま
たは好ましくはこれから構成され；ここで、（ａ）および（ｂ）は、前記少なくとも１つ
の第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位によって、少なくとも１つの非ペプ
チド共有結合を介して連結され；ここで、有効量の前記組成物が前記イヌ科、好ましくは
前記飼いイヌに投与され、ここで、好ましくは前記方法または前記組成物は、本明細書で
記載されるようにさらに規定される。
【0102】
実施例
実施例１
キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）のコートタンパク質（ＣＰ）の単離およびクローニ
ング
ＣＭＶ感染ユリ葉由来の全ＲＮＡをＴＲＩ試薬（Ｓｉｇｍａ、Ｓａｉｎｔ Ｌｏｕｉｓ
、ＵＳＡ）を使用して、製造者の指示にしたがい単離した。ｃＤＮＡ合成では、ＯｎｅＳ
ｔｅｐ ＲＴ－ＰＣＲキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖｅｎｌｏ、オランダ）を使用した。ＣＭ
Ｖ ＣＰ遺伝子の増幅では、プライマー配列をＧｅｎＢａｎｋからのＣＭＶ配列の分析後
に選択した：ＣＭｃｐＦ（ＣＡＣＣＡＴＧＧＡＣＡＡＡＴＣＴＧＡＡＴＣＡＡＣＣＡＧＴ
ＧＣＴＧＧＴ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）およびＣＭｃｐＲ（ＣＡＡＡＧＣＴＴＡＴＣ
ＡＡＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＣＣＡＧＡＴＧＴＧＧＧＡ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）
；ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ部位には下線が付けられている。対応するＰＣＲ産物を
ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔベクター（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、Ｖｉｌｎｉｕｓ、リトアニア）にクロ
ーニングした。大腸菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ細胞をクローニングおよびプラスミド増幅のため
の宿主として使用した。ＰＣＲエラーを含むクローンの選択を回避するために、いくつか
のＣＰ遺伝子含有ｐＴＺ５７プラスミドクローンを、ＢｉｇＤｙｅサイクル配列決定キッ
トおよびＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ３１００ジェネティックアナライザ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＵＳＡ）を使用して、配列決定した。配列決定後
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＭＶコートタンパク質をコードする、配列エラーのないＣ
ＭＶ ＣＰ遺伝子のｃＤＮＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をその後、ｐＥＴ２８ａ（＋
）発現ベクターのＮｃｏＩ／ＨｉｎｄＩＩＩ部位にサブクローニングし（Ｎｏｖａｇｅｎ
、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＵＳＡ）、発現プラスミドｐＥＴ－ＣＭＶｗｔを得た（図１）。
実施例１
キュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）のコートタンパク質（ＣＰ）の単離およびクローニ
ング
ＣＭＶ感染ユリ葉由来の全ＲＮＡをＴＲＩ試薬（Ｓｉｇｍａ、Ｓａｉｎｔ Ｌｏｕｉｓ
、ＵＳＡ）を使用して、製造者の指示にしたがい単離した。ｃＤＮＡ合成では、ＯｎｅＳ
ｔｅｐ ＲＴ－ＰＣＲキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖｅｎｌｏ、オランダ）を使用した。ＣＭ
Ｖ ＣＰ遺伝子の増幅では、プライマー配列をＧｅｎＢａｎｋからのＣＭＶ配列の分析後
に選択した：ＣＭｃｐＦ（ＣＡＣＣＡＴＧＧＡＣＡＡＡＴＣＴＧＡＡＴＣＡＡＣＣＡＧＴ
ＧＣＴＧＧＴ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）およびＣＭｃｐＲ（ＣＡＡＡＧＣＴＴＡＴＣ
ＡＡＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＣＣＡＧＡＴＧＴＧＧＧＡ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）
；ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ部位には下線が付けられている。対応するＰＣＲ産物を
ｐＴＺ５７Ｒ／Ｔベクター（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、Ｖｉｌｎｉｕｓ、リトアニア）にクロ
ーニングした。大腸菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ細胞をクローニングおよびプラスミド増幅のため
の宿主として使用した。ＰＣＲエラーを含むクローンの選択を回避するために、いくつか
のＣＰ遺伝子含有ｐＴＺ５７プラスミドクローンを、ＢｉｇＤｙｅサイクル配列決定キッ
トおよびＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ３１００ジェネティックアナライザ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＵＳＡ）を使用して、配列決定した。配列決定後
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＭＶコートタンパク質をコードする、配列エラーのないＣ
ＭＶ ＣＰ遺伝子のｃＤＮＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をその後、ｐＥＴ２８ａ（＋
）発現ベクターのＮｃｏＩ／ＨｉｎｄＩＩＩ部位にサブクローニングし（Ｎｏｖａｇｅｎ
、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＵＳＡ）、発現プラスミドｐＥＴ－ＣＭＶｗｔを得た（図１）。
【0103】
実施例２
ＣＭＶのＶＬＰにつながる、大腸菌におけるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＰの発現
ＣＭＶ ＶＬＰを得るために、大腸菌Ｃ２５６６細胞（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉ
ｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＵＳＡ）を、ＣＭＶ ＣＰ遺伝子含有プラスミドｐＥＴ－
ＣＭＶｗｔで形質転換させた。最高発現レベルの標的タンパク質を有するクローンの選択
後、大腸菌培養物を、回転式振盪機（２００ｒｅｖ／分；Ｉｎｆｏｒｓ、Ｂｏｔｔｍｉｎ
ｇｅｎ、スイス）上にて、カナマイシン（２５ｍｇ／ｌ）を含む２×ＴＹ培地中で、３０
℃にて、０．８－１．０のＯＤ６００まで増殖させた。その後、細胞を、０．２ｍＭ Ｉ
ＰＴＧで誘導し、培地に５ｍＭ ＭｇＣｌ２を補充した。インキュベーションを回転式振
盪機上で２０℃にて１８時間の間続けた。得られたバイオマスを低速遠心分離により収集
し、－２０℃で凍結させた。氷上での解凍後、細胞を、５０ｍＭクエン酸ナトリウム、５
ｍＭホウ酸ナトリウム、５ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭメルカプトエタノールを含むバッファ
ー（ｐＨ９．０、バッファーＡ）中に懸濁させ、超音波処理により破壊させた。不溶性タ
ンパク質および細胞デブリを遠心分離により除去した（１３，０００ｒｐｍ、５℃で３０
分）。清澄ライセート中の可溶性ＣＭＶ ＣＰタンパク質を、飽和硫酸アンモニウム（１
：１、ｖｏｌ／ｖｏｌ）を用いて、一晩＋４℃でペレット化した。沈殿したタンパク質を
同じバッファーＡ（メルカプトエタノールなし）中で４時間の間＋４℃で可溶化した。不
溶性タンパク質を低速遠心分離により除去した（１３，０００ｒｐｍ、４℃で１５分）。
可溶性ＣＭＶ ＣＰ含有タンパク質溶液を細胞タンパク質から、超遠心分離法（ＳＷ２８
ローター、Ｂｅｃｋｍａｎ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＵＳＡ；２５，０００ｒｐｍで６時間
、５℃）により、スクロース勾配中で分離した（バッファーＡ中２０－６０％スクロース
、メルカプトエタノールなし、０．５％トリトンＸ－１００補充）。勾配を勾配の底部で
開始して、６つの画分に分割し、画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分析した（データ示さず
）。組換えＣＭＶ ＣＰを含む画分Ｎｏ．２およびＮｏ．３を合わせ、２００体積のバッ
ファー（５ｍＭホウ酸ナトリウム、２ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ９．０）に対して透析し、ス
クロースおよびトリトンＸ－１００を除去した。透析後、ＣＭＶ ＣＰ溶液を０．２μフ
ィルタに通す濾過により滅菌した。次に、ＣＭＶ ＣＰを、Ｔｙｐｅ７０ローター（Ｂｅ
ｃｋｍａｎ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＵＳＡ）超遠心分離法を用いて、２０％スクロース「
クッション」により、無菌条件下で（５００００ｒｐｍ、４時間、＋５℃）濃縮した。精
製ＣＭＶｗｔの濃度を、ＱｕＢｉｔ蛍光光度計を用いて、製造者の推奨にしたがい推定し
た（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＵＳＡ）。濃ＶＬＰ溶液（ａｐｐｒｏｘ．３
ｍｇ／ｍｌ）を、＋４℃で、５ｍＭホウ酸ナトリウム、２ｍＭ ＥＤＴＡ、バッファー（
ｐＨ９．０）中で保存した。ＶＬＰの発現および精製に関与する全てのステップをＳＤＳ
－ＰＡＧＥにより１２．５％ゲルを用いてモニタした。
ＣＭＶのＶＬＰにつながる、大腸菌におけるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＰの発現
ＣＭＶ ＶＬＰを得るために、大腸菌Ｃ２５６６細胞（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉ
ｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＵＳＡ）を、ＣＭＶ ＣＰ遺伝子含有プラスミドｐＥＴ－
ＣＭＶｗｔで形質転換させた。最高発現レベルの標的タンパク質を有するクローンの選択
後、大腸菌培養物を、回転式振盪機（２００ｒｅｖ／分；Ｉｎｆｏｒｓ、Ｂｏｔｔｍｉｎ
ｇｅｎ、スイス）上にて、カナマイシン（２５ｍｇ／ｌ）を含む２×ＴＹ培地中で、３０
℃にて、０．８－１．０のＯＤ６００まで増殖させた。その後、細胞を、０．２ｍＭ Ｉ
ＰＴＧで誘導し、培地に５ｍＭ ＭｇＣｌ２を補充した。インキュベーションを回転式振
盪機上で２０℃にて１８時間の間続けた。得られたバイオマスを低速遠心分離により収集
し、－２０℃で凍結させた。氷上での解凍後、細胞を、５０ｍＭクエン酸ナトリウム、５
ｍＭホウ酸ナトリウム、５ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭメルカプトエタノールを含むバッファ
ー（ｐＨ９．０、バッファーＡ）中に懸濁させ、超音波処理により破壊させた。不溶性タ
ンパク質および細胞デブリを遠心分離により除去した（１３，０００ｒｐｍ、５℃で３０
分）。清澄ライセート中の可溶性ＣＭＶ ＣＰタンパク質を、飽和硫酸アンモニウム（１
：１、ｖｏｌ／ｖｏｌ）を用いて、一晩＋４℃でペレット化した。沈殿したタンパク質を
同じバッファーＡ（メルカプトエタノールなし）中で４時間の間＋４℃で可溶化した。不
溶性タンパク質を低速遠心分離により除去した（１３，０００ｒｐｍ、４℃で１５分）。
可溶性ＣＭＶ ＣＰ含有タンパク質溶液を細胞タンパク質から、超遠心分離法（ＳＷ２８
ローター、Ｂｅｃｋｍａｎ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＵＳＡ；２５，０００ｒｐｍで６時間
、５℃）により、スクロース勾配中で分離した（バッファーＡ中２０－６０％スクロース
、メルカプトエタノールなし、０．５％トリトンＸ－１００補充）。勾配を勾配の底部で
開始して、６つの画分に分割し、画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分析した（データ示さず
）。組換えＣＭＶ ＣＰを含む画分Ｎｏ．２およびＮｏ．３を合わせ、２００体積のバッ
ファー（５ｍＭホウ酸ナトリウム、２ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ９．０）に対して透析し、ス
クロースおよびトリトンＸ－１００を除去した。透析後、ＣＭＶ ＣＰ溶液を０．２μフ
ィルタに通す濾過により滅菌した。次に、ＣＭＶ ＣＰを、Ｔｙｐｅ７０ローター（Ｂｅ
ｃｋｍａｎ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＵＳＡ）超遠心分離法を用いて、２０％スクロース「
クッション」により、無菌条件下で（５００００ｒｐｍ、４時間、＋５℃）濃縮した。精
製ＣＭＶｗｔの濃度を、ＱｕＢｉｔ蛍光光度計を用いて、製造者の推奨にしたがい推定し
た（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＵＳＡ）。濃ＶＬＰ溶液（ａｐｐｒｏｘ．３
ｍｇ／ｍｌ）を、＋４℃で、５ｍＭホウ酸ナトリウム、２ｍＭ ＥＤＴＡ、バッファー（
ｐＨ９．０）中で保存した。ＶＬＰの発現および精製に関与する全てのステップをＳＤＳ
－ＰＡＧＥにより１２．５％ゲルを用いてモニタした。
【0104】
ＣＭＶコートタンパク質は、大腸菌細胞においてうまく発現させることができ、得られ
たかなり部分は可溶画分中に存在することができる。その上、これらのタンパク質は、ス
クロース勾配分析（図２Ａ）、動的光散乱および電子－顕微鏡分析（図２Ｂ）により証明
されるように、大腸菌細胞抽出物中で、等軸ＶＬＰの形態で直接見出される。
たかなり部分は可溶画分中に存在することができる。その上、これらのタンパク質は、ス
クロース勾配分析（図２Ａ）、動的光散乱および電子－顕微鏡分析（図２Ｂ）により証明
されるように、大腸菌細胞抽出物中で、等軸ＶＬＰの形態で直接見出される。
【0105】
実施例３
破傷風トキソイドエピトープを含むＣＭＶの改変コートタンパク質のクローニング（ＣＭ
Ｖ－Ｎｔｔ８３０）
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＭＶ ＣＰのＮ末端の元のアミノ酸を破傷風トキソイドエ
ピトープコード配列で置き換えるために、ｐＥＴ－ＣＭＶｗｔプラスミドをＰＣＲ増幅お
よび変異誘発のために使用した。ＣＭＶｗｔ遺伝子内に位置するＳａｌＩ部位（図１）を
対応するＰＣＲ産物をクローニングするために使用した。
破傷風トキソイドエピトープを含むＣＭＶの改変コートタンパク質のクローニング（ＣＭ
Ｖ－Ｎｔｔ８３０）
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＭＶ ＣＰのＮ末端の元のアミノ酸を破傷風トキソイドエ
ピトープコード配列で置き換えるために、ｐＥＴ－ＣＭＶｗｔプラスミドをＰＣＲ増幅お
よび変異誘発のために使用した。ＣＭＶｗｔ遺伝子内に位置するＳａｌＩ部位（図１）を
対応するＰＣＲ産物をクローニングするために使用した。
【0106】
破傷風トキソイドエピトープコード配列をＣＭＶｗｔ遺伝子中に導入するために、ツー
ステップＰＣＲ変異誘発を使用した。第１ステップ増幅では、下記プライマーを使用した
：ｐＥＴ－２２０（ＡＧＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＡＧＧＡＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
１１）－ポリリンカーから上流、増幅領域はＢｇｌＩＩ部位を含む）およびＣＭＶ－ｔｔ
８３－１Ｒ（ＡＴＴＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＴＴＡＡＴＡＴＡＣＴＧＧＣＣＣＡＴＧＧＴ
ＡＴＡＴＣＴＣＣＴＴＣＴＴＡＡＡＧＴ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）。第２ラウンド
では、第１の増幅からのＰＣＲ産物を１：５０で希釈し、プライマーｐＥＴ－２２０（Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）およびＣＭＶ－ｔｔ８３Ｓａｌ－Ｒ２（ＧＡＣＧＴＣＧＡＣＧ
ＣＴＣＧＧＴＡＡＴＣＣＣＧＡＴＡＡＡＴＴＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＴＴＡＡＴＡＴＡＣ
ＴＧ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）を用いて再増幅させた。得られたＰＣＲ産物（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：６のＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０をコードするＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のｃ
ＤＮＡ）をｐＥＴ－ＣＭＶｗｔのＢｇｌＩＩ／ＳａＬＩ部位でサブクローニングさせた。
妥当なクローンを配列決定により同定し、ｐＥＴ－ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０と指定した。
ステップＰＣＲ変異誘発を使用した。第１ステップ増幅では、下記プライマーを使用した
：ｐＥＴ－２２０（ＡＧＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＡＧＧＡＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
１１）－ポリリンカーから上流、増幅領域はＢｇｌＩＩ部位を含む）およびＣＭＶ－ｔｔ
８３－１Ｒ（ＡＴＴＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＴＴＡＡＴＡＴＡＣＴＧＧＣＣＣＡＴＧＧＴ
ＡＴＡＴＣＴＣＣＴＴＣＴＴＡＡＡＧＴ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）。第２ラウンド
では、第１の増幅からのＰＣＲ産物を１：５０で希釈し、プライマーｐＥＴ－２２０（Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）およびＣＭＶ－ｔｔ８３Ｓａｌ－Ｒ２（ＧＡＣＧＴＣＧＡＣＧ
ＣＴＣＧＧＴＡＡＴＣＣＣＧＡＴＡＡＡＴＴＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＴＴＡＡＴＡＴＡＣ
ＴＧ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）を用いて再増幅させた。得られたＰＣＲ産物（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：６のＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０をコードするＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のｃ
ＤＮＡ）をｐＥＴ－ＣＭＶｗｔのＢｇｌＩＩ／ＳａＬＩ部位でサブクローニングさせた。
妥当なクローンを配列決定により同定し、ｐＥＴ－ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０と指定した。
【0107】
実施例４
ＣＭＶの改変ＶＬＰにいたる、大腸菌におけるＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０の発現
ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰを得るために、大腸菌Ｃ２５６６細胞（Ｎｅｗ Ｅｎｇ
ｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＵＳＡ）を、ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０遺伝子
含有プラスミドｐＥＴ－ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０で形質転換させた。最高発現レベルの標的
タンパク質を有するクローンの選択後、大腸菌培養物を、カナマイシン（２５ｍｇ／ｌ）
を含む２×ＴＹ培地中で、回転式振盪機（２００ｒｅｖ／分；Ｉｎｆｏｒｓ、Ｂｏｔｔｍ
ｉｎｇｅｎ、スイス）において３０℃で、０．８－１．０のＯＤ６００まで増殖させた。
細胞をその後、０．２ｍＭ ＩＰＴＧで誘導し、培地に５ｍＭ ＭｇＣｌ２を補充した。
インキュベーションを回転式振盪機上で２０℃で１８時間の間続けた。得られたバイオマ
スを低速遠心分離により収集し、－２０℃で凍結させた。氷上での解凍後、細胞を、５０
ｍＭクエン酸ナトリウム、５ｍＭホウ酸ナトリウム、５ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭメルカプ
トエタノールを含むバッファー中に懸濁させ（ｐＨ９．０、バッファーＡ）、超音波処理
により破壊した。不溶性タンパク質および細胞デブリを遠心分離により除去した（１３，
０００ｒｐｍ、５℃で３０分）。清澄ライセート中の可溶性ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０タンパ
ク質を、飽和硫酸アンモニウム（１：１、ｖｏｌ／ｖｏｌ）を一晩＋４℃で用いてペレッ
ト化した。沈殿したタンパク質を、バッファーＡ（メルカプトエタノールなし）中で４時
間の間＋４℃で可溶化した。不溶性タンパク質を低速遠心分離により除去した（１３，０
００ｒｐｍ、４℃で１５分）。可溶性ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０含有タンパク質溶液を細胞タ
ンパク質から超遠心分離法（ＳＷ２８ローター、Ｂｅｃｋｍａｎ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、
ＵＳＡ；２５，０００ｒｐｍ、６時間、５℃）により、スクロース勾配中で（バッファー
Ａ中２０－６０％スクロース、メルカプトエタノールなし、０．５％トリトンＸ－１００
補充）分離した。勾配を、勾配の底部で開始して、６画分に分割した。組換えＣＭＶ－Ｎ
ｔｔ８３０を含む画分を合わせ、２００体積の５ｍＭホウ酸ナトリウム、２ｍＭ ＥＤＴ
Ａ（ｐＨ９．０）に対して透析し、スクロースおよびトリトンＸ－１００を除去した。透
析後、ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０溶液を０．２μフィルタを通す濾過により滅菌した。次に、
ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０を、Ｔｙｐｅ７０ローター（Ｂｅｃｋｍａｎ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ
、ＵＳＡ）超遠心分離法を用いて、２０％スクロース「クッション」により、無菌条件下
で（５００００ｒｐｍ、４時間、＋５℃）濃縮した。精製ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０の濃度を
、ＱｕＢｉｔ蛍光光度計を用いて、製造者の推奨にしたがい推定した（Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＵＳＡ）。濃ＶＬＰ溶液（ａｐｐｒｏｘ．３ｍｇ／ｍｌ）を、＋４
℃で、５ｍＭホウ酸ナトリウム、２ｍＭ ＥＤＴＡ、バッファー（ｐＨ９．０）中で保存
した。ＶＬＰの発現および精製に関与する全てのステップをＳＤＳ－ＰＡＧＥにより１２
．５％ゲルを用いてモニタした。ＣＭＶ ＶＬＰ中の破傷風トキソイドエピトープの存在
を証明するために、精製ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ＶＬＰの質量分析を使用した。図３Ｃに示
されるように、得られた主ピークは、大腸菌細胞中のタンパク質合成中に生じる第１のメ
チオニンが除去される場合、タンパク質の理論分子質量に対応する。動的光散乱および電
子顕微鏡法により、ＣＭＶｗｔ ＶＬＰに類似する等軸粒子形態が確認された（図４Ａお
よび４Ｂ）。
ＣＭＶの改変ＶＬＰにいたる、大腸菌におけるＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０の発現
ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰを得るために、大腸菌Ｃ２５６６細胞（Ｎｅｗ Ｅｎｇ
ｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＵＳＡ）を、ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０遺伝子
含有プラスミドｐＥＴ－ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０で形質転換させた。最高発現レベルの標的
タンパク質を有するクローンの選択後、大腸菌培養物を、カナマイシン（２５ｍｇ／ｌ）
を含む２×ＴＹ培地中で、回転式振盪機（２００ｒｅｖ／分；Ｉｎｆｏｒｓ、Ｂｏｔｔｍ
ｉｎｇｅｎ、スイス）において３０℃で、０．８－１．０のＯＤ６００まで増殖させた。
細胞をその後、０．２ｍＭ ＩＰＴＧで誘導し、培地に５ｍＭ ＭｇＣｌ２を補充した。
インキュベーションを回転式振盪機上で２０℃で１８時間の間続けた。得られたバイオマ
スを低速遠心分離により収集し、－２０℃で凍結させた。氷上での解凍後、細胞を、５０
ｍＭクエン酸ナトリウム、５ｍＭホウ酸ナトリウム、５ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭメルカプ
トエタノールを含むバッファー中に懸濁させ（ｐＨ９．０、バッファーＡ）、超音波処理
により破壊した。不溶性タンパク質および細胞デブリを遠心分離により除去した（１３，
０００ｒｐｍ、５℃で３０分）。清澄ライセート中の可溶性ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０タンパ
ク質を、飽和硫酸アンモニウム（１：１、ｖｏｌ／ｖｏｌ）を一晩＋４℃で用いてペレッ
ト化した。沈殿したタンパク質を、バッファーＡ（メルカプトエタノールなし）中で４時
間の間＋４℃で可溶化した。不溶性タンパク質を低速遠心分離により除去した（１３，０
００ｒｐｍ、４℃で１５分）。可溶性ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０含有タンパク質溶液を細胞タ
ンパク質から超遠心分離法（ＳＷ２８ローター、Ｂｅｃｋｍａｎ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、
ＵＳＡ；２５，０００ｒｐｍ、６時間、５℃）により、スクロース勾配中で（バッファー
Ａ中２０－６０％スクロース、メルカプトエタノールなし、０．５％トリトンＸ－１００
補充）分離した。勾配を、勾配の底部で開始して、６画分に分割した。組換えＣＭＶ－Ｎ
ｔｔ８３０を含む画分を合わせ、２００体積の５ｍＭホウ酸ナトリウム、２ｍＭ ＥＤＴ
Ａ（ｐＨ９．０）に対して透析し、スクロースおよびトリトンＸ－１００を除去した。透
析後、ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０溶液を０．２μフィルタを通す濾過により滅菌した。次に、
ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０を、Ｔｙｐｅ７０ローター（Ｂｅｃｋｍａｎ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ
、ＵＳＡ）超遠心分離法を用いて、２０％スクロース「クッション」により、無菌条件下
で（５００００ｒｐｍ、４時間、＋５℃）濃縮した。精製ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０の濃度を
、ＱｕＢｉｔ蛍光光度計を用いて、製造者の推奨にしたがい推定した（Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＵＳＡ）。濃ＶＬＰ溶液（ａｐｐｒｏｘ．３ｍｇ／ｍｌ）を、＋４
℃で、５ｍＭホウ酸ナトリウム、２ｍＭ ＥＤＴＡ、バッファー（ｐＨ９．０）中で保存
した。ＶＬＰの発現および精製に関与する全てのステップをＳＤＳ－ＰＡＧＥにより１２
．５％ゲルを用いてモニタした。ＣＭＶ ＶＬＰ中の破傷風トキソイドエピトープの存在
を証明するために、精製ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ＶＬＰの質量分析を使用した。図３Ｃに示
されるように、得られた主ピークは、大腸菌細胞中のタンパク質合成中に生じる第１のメ
チオニンが除去される場合、タンパク質の理論分子質量に対応する。動的光散乱および電
子顕微鏡法により、ＣＭＶｗｔ ＶＬＰに類似する等軸粒子形態が確認された（図４Ａお
よび４Ｂ）。
【0108】
実施例５
ＰＡＤＲＥエピトープを含むＣＭＶの改変コートタンパク質のクローニング
（ＣＭＶ－Ｎｐａｄｒ）
ＰＡＤＲＥエピトープコード配列をＣＭＶｗｔ遺伝子に導入するために、ＰＣＲ変異誘
発を、増幅およびサブクローニングのための鋳型としてｐＥＴ－ＣＭＶｗｔプラスミドを
使用して実施した（実施例２および３も参照されたい）。増幅のために、下記プライマー
を使用した：ｐＥＴ－２２０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）およびＣＭＶ－ｐａｄｒＳａ
ｌ－Ｒ（ＧＡＣＧＴＣＧＡＣＧＣＧＣＧＧＣＣＧＣＣＴＴＧＡＧＧＧＴＣＣＡＣＧＣＧＧ
ＣＣＡＣＡＡＡＴＴＴＣＧＣＣＡＴＧＧＴ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）。得られたＰ
ＣＲ産物（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のＣＭＶ－ＮｐａｄｒをコードするＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１６のｃＤＮＡ）をｐＥＴ－ＣＭＶｗｔのＢｇｌＩＩ／ＳａｌＩ部位で重ねてサブク
ローニングさせた。妥当なクローンを配列決定により同定し、ｐＥＴ－ＣＭＶ－Ｎｐａｄ
ｒと指定した。
ＰＡＤＲＥエピトープを含むＣＭＶの改変コートタンパク質のクローニング
（ＣＭＶ－Ｎｐａｄｒ）
ＰＡＤＲＥエピトープコード配列をＣＭＶｗｔ遺伝子に導入するために、ＰＣＲ変異誘
発を、増幅およびサブクローニングのための鋳型としてｐＥＴ－ＣＭＶｗｔプラスミドを
使用して実施した（実施例２および３も参照されたい）。増幅のために、下記プライマー
を使用した：ｐＥＴ－２２０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）およびＣＭＶ－ｐａｄｒＳａ
ｌ－Ｒ（ＧＡＣＧＴＣＧＡＣＧＣＧＣＧＧＣＣＧＣＣＴＴＧＡＧＧＧＴＣＣＡＣＧＣＧＧ
ＣＣＡＣＡＡＡＴＴＴＣＧＣＣＡＴＧＧＴ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）。得られたＰ
ＣＲ産物（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のＣＭＶ－ＮｐａｄｒをコードするＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１６のｃＤＮＡ）をｐＥＴ－ＣＭＶｗｔのＢｇｌＩＩ／ＳａｌＩ部位で重ねてサブク
ローニングさせた。妥当なクローンを配列決定により同定し、ｐＥＴ－ＣＭＶ－Ｎｐａｄ
ｒと指定した。
【0109】
実施例６
ＣＭＶの改変ＶＬＰに至る大腸菌におけるＣＭＶ－Ｎｐａｄｒの発現
ＣＭＶ－Ｎｐａｄｒの発現および精製についての手順は、ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０に対す
るものと本質的に同じであり、実施例４で記載される。ＣＭＶ ＶＬＰにおけるＰＡＤＲ
Ｅエピトープの存在を証明するために、精製ＣＭＶ－Ｎｐａｄｒ ＶＬＰの質量分析を使
用した。図３Ｂに示されるように、得られた主ピークは、大腸菌細胞中のタンパク質合成
中に生じる第１のメチオニンが除去される場合、タンパク質の理論分子質量に対応する。
動的光散乱および電子顕微鏡分析により等軸粒子形態が確認された（図５Ａおよび図５Ｂ
）。
ＣＭＶの改変ＶＬＰに至る大腸菌におけるＣＭＶ－Ｎｐａｄｒの発現
ＣＭＶ－Ｎｐａｄｒの発現および精製についての手順は、ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０に対す
るものと本質的に同じであり、実施例４で記載される。ＣＭＶ ＶＬＰにおけるＰＡＤＲ
Ｅエピトープの存在を証明するために、精製ＣＭＶ－Ｎｐａｄｒ ＶＬＰの質量分析を使
用した。図３Ｂに示されるように、得られた主ピークは、大腸菌細胞中のタンパク質合成
中に生じる第１のメチオニンが除去される場合、タンパク質の理論分子質量に対応する。
動的光散乱および電子顕微鏡分析により等軸粒子形態が確認された（図５Ａおよび図５Ｂ
）。
【0110】
実施例７
６×ＨｉｓタグおよびＣ末端システインを有するイヌＩＬ－３１のクローニングおよび産
生
大腸菌最適化コドン、Ｎ末端６×Ｈｉｓタグ、ＴＥＶプロテアーゼ切断部位、Ｃ末端シ
ステインおよび隣接しているＮｃｏＩおよびＰｓｔＩ制限部位を有するイヌＩＬ３１ｃＤ
ＮＡ配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）をＩＤＴ社で製造した。さらに、ＮｃｏＩ／Ｐｓ
ｔＩ断片をベクターｐＥＴ４２の対応する部位中に連結させた。コンストラクトを化学的
コンピテント大腸菌ＤＨ５α細胞において形質転換させ、コロニーをアンピシリンを含む
ＬＢ寒天プレート上に播種した。得られたクローンの配列を、Ｓａｎｇｅｒ配列決定によ
り検証した。得られたコンストラクトｐＥＴ４２＿６ＨｃＩＬ３１Ｃを化学的コンピテン
ト大腸菌ＢＬ２１－ＤＥ３細胞においてさらに形質転換させた。
６×ＨｉｓタグおよびＣ末端システインを有するイヌＩＬ－３１のクローニングおよび産
生
大腸菌最適化コドン、Ｎ末端６×Ｈｉｓタグ、ＴＥＶプロテアーゼ切断部位、Ｃ末端シ
ステインおよび隣接しているＮｃｏＩおよびＰｓｔＩ制限部位を有するイヌＩＬ３１ｃＤ
ＮＡ配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）をＩＤＴ社で製造した。さらに、ＮｃｏＩ／Ｐｓ
ｔＩ断片をベクターｐＥＴ４２の対応する部位中に連結させた。コンストラクトを化学的
コンピテント大腸菌ＤＨ５α細胞において形質転換させ、コロニーをアンピシリンを含む
ＬＢ寒天プレート上に播種した。得られたクローンの配列を、Ｓａｎｇｅｒ配列決定によ
り検証した。得られたコンストラクトｐＥＴ４２＿６ＨｃＩＬ３１Ｃを化学的コンピテン
ト大腸菌ＢＬ２１－ＤＥ３細胞においてさらに形質転換させた。
【0111】
播種材料ストックをＩＬ３１－ｐＥＴ４２形質転換ＢＬ３１－ＤＥ３細胞を５０μｇ／
ｍｌアンピシリンを含むＬＢ培地中に播種し、一晩＋３７℃でインキュベートすることに
より調製した。ストックをその後、２ＴＹ培地に体積比１：２０で添加した。細胞を＋３
７℃で振盪させながら、５４０ｎｍでの光学密度が０．７単位に到達するまで増殖させた
。その後タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）発現を１ｍＭ ＩＰＴＧで誘導し、細
胞をさらに４時間の間、＋３７℃で振盪させながら増殖させた。タンパク質産生を、総細
胞溶解物をＳＤＳ－ＰＡＧＥ上にロードすることにより確認した（図６）。
ｍｌアンピシリンを含むＬＢ培地中に播種し、一晩＋３７℃でインキュベートすることに
より調製した。ストックをその後、２ＴＹ培地に体積比１：２０で添加した。細胞を＋３
７℃で振盪させながら、５４０ｎｍでの光学密度が０．７単位に到達するまで増殖させた
。その後タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）発現を１ｍＭ ＩＰＴＧで誘導し、細
胞をさらに４時間の間、＋３７℃で振盪させながら増殖させた。タンパク質産生を、総細
胞溶解物をＳＤＳ－ＰＡＧＥ上にロードすることにより確認した（図６）。
【0112】
バイオマスを遠心分離を用いて収集し、４０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、
２００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ ＭｇＳＯ４、０．１ｍｇ／ｍｌ ＤＮａｓｅＩ、１ｍ
Ｍ ＰＭＳＦおよび１％トリトンＸ－１００を含む氷冷溶解バッファーに、１ｇウェット
細胞／５ｍｌの溶解バッファーの比率を維持して、懸濁させた。細胞を氷上での超音波処
理により溶解させ、得られたライセートを４０分間１５０００ｇで遠心分離し、上清を廃
棄した。２０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ、ｐＨ＝８．０および１Ｍ ＮａＣｌを含む洗浄バッ
ファーＷＢ１をペレットに、３ｍｌＷＢ１／１ｇの初期ウェット細胞質量の比率を維持し
て添加した。ペレットをボルテックスにより再懸濁させ、回転式振盪機上で１時間の間、
室温でインキュベートし、１５分間１５０００ｇで遠心分離させた。ペレット洗浄をもう
１回、２０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ、ｐＨ＝８．０、２００ｍＭ ＮａＣｌおよび１Ｍ尿素
を含む洗浄バッファーＷＢ２を用いて繰り返した。標的タンパク質はペレット画分中に位
置した。ペレットをその後、８Ｍ尿素、２０ｍＭ ｔｒｉｓＨＣｌ、ｐＨ＝８、および１
００ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４を含む溶離バッファーＥＢ１に、３ｍｌＥＢ１／１ｇの初期ウ
ェット細胞質量の比率を維持して再懸濁させ、回転式振盪機上、室温で一晩インキュベー
トした。遠心分離後、上清はおおよそ９０％純度を有するタンパク質を含んだ（図７）。
１ｍｌの得られた上清を、１滴ずつ、２０ｍＭ ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ＝８．０、５０
ｍＭ ＮａＣｌ、１Ｍグリシン、および５ｍＭ β－メルカプトエタノールを含む、２０
ｍＬのリフォールディングバッファーＲＢに添加し、２時間の間室温で撹拌しながらイン
キュベートした。上清をその後、Ａｍｉｃｏｎフィルタユニットにより１ｍｌまで濃縮し
（ＭＷＣＯ １０ｋＤａ）、４８時間の間、＋４℃で１０００ｍｌのＰＢＳに対して透析
した。その後、試料を遠心分離し、ＳｕｐｅｒｄｅｘＴＭ２００ １０／３００ＧＬカラ
ム上にＰＢＳ中でロードした。カラムプロファイルから、標的タンパク質は空隙容量中に
溶離され、そのため、おそらく、可溶性凝集体を形成することが示された（図８）。
２００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ ＭｇＳＯ４、０．１ｍｇ／ｍｌ ＤＮａｓｅＩ、１ｍ
Ｍ ＰＭＳＦおよび１％トリトンＸ－１００を含む氷冷溶解バッファーに、１ｇウェット
細胞／５ｍｌの溶解バッファーの比率を維持して、懸濁させた。細胞を氷上での超音波処
理により溶解させ、得られたライセートを４０分間１５０００ｇで遠心分離し、上清を廃
棄した。２０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ、ｐＨ＝８．０および１Ｍ ＮａＣｌを含む洗浄バッ
ファーＷＢ１をペレットに、３ｍｌＷＢ１／１ｇの初期ウェット細胞質量の比率を維持し
て添加した。ペレットをボルテックスにより再懸濁させ、回転式振盪機上で１時間の間、
室温でインキュベートし、１５分間１５０００ｇで遠心分離させた。ペレット洗浄をもう
１回、２０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ、ｐＨ＝８．０、２００ｍＭ ＮａＣｌおよび１Ｍ尿素
を含む洗浄バッファーＷＢ２を用いて繰り返した。標的タンパク質はペレット画分中に位
置した。ペレットをその後、８Ｍ尿素、２０ｍＭ ｔｒｉｓＨＣｌ、ｐＨ＝８、および１
００ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４を含む溶離バッファーＥＢ１に、３ｍｌＥＢ１／１ｇの初期ウ
ェット細胞質量の比率を維持して再懸濁させ、回転式振盪機上、室温で一晩インキュベー
トした。遠心分離後、上清はおおよそ９０％純度を有するタンパク質を含んだ（図７）。
１ｍｌの得られた上清を、１滴ずつ、２０ｍＭ ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ＝８．０、５０
ｍＭ ＮａＣｌ、１Ｍグリシン、および５ｍＭ β－メルカプトエタノールを含む、２０
ｍＬのリフォールディングバッファーＲＢに添加し、２時間の間室温で撹拌しながらイン
キュベートした。上清をその後、Ａｍｉｃｏｎフィルタユニットにより１ｍｌまで濃縮し
（ＭＷＣＯ １０ｋＤａ）、４８時間の間、＋４℃で１０００ｍｌのＰＢＳに対して透析
した。その後、試料を遠心分離し、ＳｕｐｅｒｄｅｘＴＭ２００ １０／３００ＧＬカラ
ム上にＰＢＳ中でロードした。カラムプロファイルから、標的タンパク質は空隙容量中に
溶離され、そのため、おそらく、可溶性凝集体を形成することが示された（図８）。
【0113】
実施例８
組換え天然イヌＩＬ－３１のクローニングおよび産生
イヌＩＬ－３１を、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７を含むプラスミドから、ＰＣＲを用いて
、ＰｓｔＩおよびＮｃｏＩ部位を含む、プライマーｃＩＬ３１ＮＡＴｆ（ＴＡＣＡＣＣＡ
ＴＧＧＣＣＴＣＣＣＡＣＡＴＧＧＣＴＣＣＡＡＣＧ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）および
ｃＩＬ３１ＮＡＴｒ（ＣＡＴＡＣＴＧＣＡＧＴＴＡＣＴＧＣＧＧＴＣＣＡＣＴＧＴＴＴＡ
ＡＧ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）を使用して増幅させた。得られたｃＩＬ－３１ＰＣＲ
断片を、ＰｓｔＩおよびＮｃｏＩ制限酵素で消化させ、ｐＥＴ４２ベクターの対応する部
位において連結させた。コンストラクトを化学的コンピテント大腸菌ＤＨ５α細胞におい
て形質転換させ、コロニーをアンピシリンを含むＬＢ寒天プレート上に播種した。陽性ク
ローンを、Ｓａｎｇｅｒ配列決定により同定した。ｃＩＬ３１－ｐＥＴ４２コンストラク
トをその後、化学的コンピテント大腸菌ＢＬ２１－ＤＥ３細胞において形質転換させた。
組換え天然イヌＩＬ－３１のクローニングおよび産生
イヌＩＬ－３１を、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７を含むプラスミドから、ＰＣＲを用いて
、ＰｓｔＩおよびＮｃｏＩ部位を含む、プライマーｃＩＬ３１ＮＡＴｆ（ＴＡＣＡＣＣＡ
ＴＧＧＣＣＴＣＣＣＡＣＡＴＧＧＣＴＣＣＡＡＣＧ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）および
ｃＩＬ３１ＮＡＴｒ（ＣＡＴＡＣＴＧＣＡＧＴＴＡＣＴＧＣＧＧＴＣＣＡＣＴＧＴＴＴＡ
ＡＧ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）を使用して増幅させた。得られたｃＩＬ－３１ＰＣＲ
断片を、ＰｓｔＩおよびＮｃｏＩ制限酵素で消化させ、ｐＥＴ４２ベクターの対応する部
位において連結させた。コンストラクトを化学的コンピテント大腸菌ＤＨ５α細胞におい
て形質転換させ、コロニーをアンピシリンを含むＬＢ寒天プレート上に播種した。陽性ク
ローンを、Ｓａｎｇｅｒ配列決定により同定した。ｃＩＬ３１－ｐＥＴ４２コンストラク
トをその後、化学的コンピテント大腸菌ＢＬ２１－ＤＥ３細胞において形質転換させた。
【0114】
播種材料ストックを、ｃＩＬ３１－ｐＥＴ４２形質転換ＢＬ３１－ＤＥ３細胞を５０μ
ｇ／ｍｌアンピシリンを含むＬＢ培地中に播種し、一晩、＋３７℃でインキュベートする
ことにより調製した。ストックをその後、２ＴＹ培地に体積比１：２０で添加した。細胞
を＋３７℃で振盪させながら、５４０ｎｍでの光学密度が０．７単位に到達するまで増殖
させた。その後、タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）発現を１ｍＭ ＩＰＴＧで誘
導し、細胞をさらに４時間の間、＋３７℃で振盪させながら増殖させた。タンパク質産生
を、総細胞溶解物をＳＤＳ－ＰＡＧＥ上にロードすることにより確認した（図９）。
ｇ／ｍｌアンピシリンを含むＬＢ培地中に播種し、一晩、＋３７℃でインキュベートする
ことにより調製した。ストックをその後、２ＴＹ培地に体積比１：２０で添加した。細胞
を＋３７℃で振盪させながら、５４０ｎｍでの光学密度が０．７単位に到達するまで増殖
させた。その後、タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）発現を１ｍＭ ＩＰＴＧで誘
導し、細胞をさらに４時間の間、＋３７℃で振盪させながら増殖させた。タンパク質産生
を、総細胞溶解物をＳＤＳ－ＰＡＧＥ上にロードすることにより確認した（図９）。
【0115】
バイオマスを遠心分離により収集し、４０ｍＭ ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、２
００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ ＭｇＳＯ４、０．１ｍｇ／ｍｌ ＤＮａｓｅＩ、１ｍＭ
ＰＭＳＦおよび１％トリトンＸ－１００を含む氷冷溶解バッファーに、１ｇ細胞／５ｍ
ｌの溶解バッファーの比率を維持して懸濁させた。細胞を氷上での超音波処理により溶解
させ、得られたライセートを４０分間１５０００ｇで遠心分離した。上清を廃棄し、溶解
バッファーをペレットに、１．５ｍｌの溶解バッファー対１ｇの初期ウェット細胞質量の
比率を維持して添加した。ペレットを、超音波処理により溶液に懸濁させ、溶液を２０分
間１５０００ｇで遠心分離した。上清を廃棄し、ペレットをもう５回、以上で記載される
通りの溶解バッファーで洗浄した。洗浄ステップ後、ペレットを６．８６Ｍ尿素および２
０ｍＭジチオトレイトール（ｄｉｔｈｉｏｔｒｅｉｔｈｏｌに）超音波処理により再懸濁
させた。溶液を２０分間１５０００ｇで遠心分離し、上清を、５０ｍＭ ｔｒｉｓ－ＨＣ
ｌ、１Ｍグリシン、１ｍＭ ＥＤＴＡおよび５ｍＭ β－メルカプトエタノールを含むリ
フォールディングバッファー中で、７５ｍｌリフォールディングバッファー／１ｍｌの尿
素－ジチオトレイトール（ｄｉｔｈｉｏｔｒｅｉｔｈｏｌ）溶液の比率を維持して希釈し
た。リフォールディングを一晩＋４℃で撹拌しながら実施した。溶液をその後、２２μｍ
フィルタを使用して濾過し、限外濾過により１０ｋＤａ装置（Ａｍｉｃｏｎ）を用いて２
００ｍｌから４ｍｌに濃縮した。溶液をその後、１５０００ｇで１０分間遠心分離し、残
りの沈殿物を除去した。溶液を、リフォールディングバッファー中で前に平衡化させたＳ
ｕｐｅｒｄｅｘ２００ゲル濾過カラム（１６×６００ｍｍ）上にロードし、分画した（２
ｍｌ／画分、流速２ｍｌ／分）。ｃＩＬ－３１タンパク質を含む画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥ
電気泳動を用いて同定し、プールし、限外濾過により、１０ｋＤａ装置（Ａｍｉｃｏｎ）
を用いて３ｍｌの体積まで濃縮した。リクロマトグラフィーを前と同じＳｕｐｅｒｄｅｘ
２００ゲル濾過カラム上で実施した。リクロマトグラフィーステップにおけるカラムは、
ＰＢＳバッファー（０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２および０．１５Ｍ ＮａＣｌ
）中で平衡化させた。画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動で分析し（図１０）、最も純粋な
ｃＩＬ－３１タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）を含む４つの画分をプールし、４
ｍｇ／ｍｌまで限外濾過により１０ｋＤａ装置（Ａｍｉｃｏｎ）で濃縮し、ＣＭＶ ＶＬ
Ｐへのカップリング実験のためにさらに使用した。
００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ ＭｇＳＯ４、０．１ｍｇ／ｍｌ ＤＮａｓｅＩ、１ｍＭ
ＰＭＳＦおよび１％トリトンＸ－１００を含む氷冷溶解バッファーに、１ｇ細胞／５ｍ
ｌの溶解バッファーの比率を維持して懸濁させた。細胞を氷上での超音波処理により溶解
させ、得られたライセートを４０分間１５０００ｇで遠心分離した。上清を廃棄し、溶解
バッファーをペレットに、１．５ｍｌの溶解バッファー対１ｇの初期ウェット細胞質量の
比率を維持して添加した。ペレットを、超音波処理により溶液に懸濁させ、溶液を２０分
間１５０００ｇで遠心分離した。上清を廃棄し、ペレットをもう５回、以上で記載される
通りの溶解バッファーで洗浄した。洗浄ステップ後、ペレットを６．８６Ｍ尿素および２
０ｍＭジチオトレイトール（ｄｉｔｈｉｏｔｒｅｉｔｈｏｌに）超音波処理により再懸濁
させた。溶液を２０分間１５０００ｇで遠心分離し、上清を、５０ｍＭ ｔｒｉｓ－ＨＣ
ｌ、１Ｍグリシン、１ｍＭ ＥＤＴＡおよび５ｍＭ β－メルカプトエタノールを含むリ
フォールディングバッファー中で、７５ｍｌリフォールディングバッファー／１ｍｌの尿
素－ジチオトレイトール（ｄｉｔｈｉｏｔｒｅｉｔｈｏｌ）溶液の比率を維持して希釈し
た。リフォールディングを一晩＋４℃で撹拌しながら実施した。溶液をその後、２２μｍ
フィルタを使用して濾過し、限外濾過により１０ｋＤａ装置（Ａｍｉｃｏｎ）を用いて２
００ｍｌから４ｍｌに濃縮した。溶液をその後、１５０００ｇで１０分間遠心分離し、残
りの沈殿物を除去した。溶液を、リフォールディングバッファー中で前に平衡化させたＳ
ｕｐｅｒｄｅｘ２００ゲル濾過カラム（１６×６００ｍｍ）上にロードし、分画した（２
ｍｌ／画分、流速２ｍｌ／分）。ｃＩＬ－３１タンパク質を含む画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥ
電気泳動を用いて同定し、プールし、限外濾過により、１０ｋＤａ装置（Ａｍｉｃｏｎ）
を用いて３ｍｌの体積まで濃縮した。リクロマトグラフィーを前と同じＳｕｐｅｒｄｅｘ
２００ゲル濾過カラム上で実施した。リクロマトグラフィーステップにおけるカラムは、
ＰＢＳバッファー（０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２および０．１５Ｍ ＮａＣｌ
）中で平衡化させた。画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動で分析し（図１０）、最も純粋な
ｃＩＬ－３１タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）を含む４つの画分をプールし、４
ｍｇ／ｍｌまで限外濾過により１０ｋＤａ装置（Ａｍｉｃｏｎ）で濃縮し、ＣＭＶ ＶＬ
Ｐへのカップリング実験のためにさらに使用した。
【0116】
実施例９
組換えイヌＩＬ－３１コンストラクトのＣＭＶ－Ｎｐａｄｒ ＶＬＰおよびＣＭＶ－Ｎｔ
ｔ８３０ ＶＬＰへのカップリングならびにマウスおよびイヌの免疫化
Ａ．ｃＩＬ－３１のＶＬＰへのカップリング
実施例８で得られた、１００μｌの、ｃＩＬ－３１タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２１）の溶液（ＰＢＳバッファー中４ｍｇ／ｍｌ）を、４．８μｌの５５ｍＭ Ｎ－スク
シンイミジルＳ－アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むＤＭＳＯと混合し、３０分間室温（ＲＴ）でインキュベート
した。未反応ＳＡＴＡをアミコンウルトラ－０．５ ３Ｋ濾過ユニット（Ｍｅｒｃｋ－Ｍ
ｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いたＰＢＳ（０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．２およ
び０．１５Ｍ ＮａＣｌ）への４×バッファー交換により除去し、最終体積を１００μｌ
に調整した。スルフヒドリル基を１０μＬの脱アセチル溶液（０．５Ｍヒドロキシルアミ
ンおよび２５ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ）の添加および２時間室温でのインキュベーシ
ョンにより脱保護した。脱アセチル溶液を、アミコンウルトラ－０．５ ３Ｋ濾過ユニッ
ト（Ｍｅｒｃｋ－Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いたＰＢＳへの４×バッファー交換により除
去し、最終体積を１００μｌに調整した。
組換えイヌＩＬ－３１コンストラクトのＣＭＶ－Ｎｐａｄｒ ＶＬＰおよびＣＭＶ－Ｎｔ
ｔ８３０ ＶＬＰへのカップリングならびにマウスおよびイヌの免疫化
Ａ．ｃＩＬ－３１のＶＬＰへのカップリング
実施例８で得られた、１００μｌの、ｃＩＬ－３１タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２１）の溶液（ＰＢＳバッファー中４ｍｇ／ｍｌ）を、４．８μｌの５５ｍＭ Ｎ－スク
シンイミジルＳ－アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むＤＭＳＯと混合し、３０分間室温（ＲＴ）でインキュベート
した。未反応ＳＡＴＡをアミコンウルトラ－０．５ ３Ｋ濾過ユニット（Ｍｅｒｃｋ－Ｍ
ｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いたＰＢＳ（０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．２およ
び０．１５Ｍ ＮａＣｌ）への４×バッファー交換により除去し、最終体積を１００μｌ
に調整した。スルフヒドリル基を１０μＬの脱アセチル溶液（０．５Ｍヒドロキシルアミ
ンおよび２５ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ）の添加および２時間室温でのインキュベーシ
ョンにより脱保護した。脱アセチル溶液を、アミコンウルトラ－０．５ ３Ｋ濾過ユニッ
ト（Ｍｅｒｃｋ－Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いたＰＢＳへの４×バッファー交換により除
去し、最終体積を１００μｌに調整した。
【0117】
２５０μｌの体積の、５ｍＭ ＮａＨＰＯ４ ｐＨ７．５、２ｍＭ ＥＤＴＡ中１．５
ｍｇ／ｍｌの濃度を有するＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰを３μｌの、ＤＭＳＯ中の５０
ｍＭスクシンイミジル－６－（ｂ－マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭ
ＰＨ）溶液と混合し、１時間の間室温でインキュベートした。ＳＭＰＨの量は、１つのＶ
ＬＰモノマ、すなわち１つのＣＭＶポリペプチドに関して７．５×モル過剰を示す。未反
応ＳＭＰＨを５ｍＭ ＮａＨＰＯ４ ｐＨ７．５、２ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ８．０への４
×バッファー交換により、アミコンウルトラ－０．５ ３Ｋ濾過ユニット（Ｍｅｒｃｋ－
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて除去し、最終体積を２５０μｌに調整した。
ｍｇ／ｍｌの濃度を有するＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰを３μｌの、ＤＭＳＯ中の５０
ｍＭスクシンイミジル－６－（ｂ－マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭ
ＰＨ）溶液と混合し、１時間の間室温でインキュベートした。ＳＭＰＨの量は、１つのＶ
ＬＰモノマ、すなわち１つのＣＭＶポリペプチドに関して７．５×モル過剰を示す。未反
応ＳＭＰＨを５ｍＭ ＮａＨＰＯ４ ｐＨ７．５、２ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ８．０への４
×バッファー交換により、アミコンウルトラ－０．５ ３Ｋ濾過ユニット（Ｍｅｒｃｋ－
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて除去し、最終体積を２５０μｌに調整した。
【0118】
カップリング反応のために、１００μｌのＳＭＰＨ－処理ＶＬＰを４３μｌの、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２１の、ＳＡＴＡ処理かつ脱アセチル化ｃＩＬ－３１と混合し、３時間の
間室温でインキュベートした。得られた生成物をＳＤＳ－ＰＡＧＥ（図１１）および電子
顕微鏡法（図１２）により調査した。ＳＤＳゲル上での分析により予想される分子量の化
学カップリング生成物の存在が確認され、ＥＭによる分析により無傷のＶＬＰの存在が確
認された。
ＩＤ ＮＯ：２１の、ＳＡＴＡ処理かつ脱アセチル化ｃＩＬ－３１と混合し、３時間の
間室温でインキュベートした。得られた生成物をＳＤＳ－ＰＡＧＥ（図１１）および電子
顕微鏡法（図１２）により調査した。ＳＤＳゲル上での分析により予想される分子量の化
学カップリング生成物の存在が確認され、ＥＭによる分析により無傷のＶＬＰの存在が確
認された。
【0119】
Ｂ．ＣＭＶ－ＮｐａｄｒおよびＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰにカップリングされたｃＩ
Ｌ－３１によるマウスの免疫化
５匹の雌Ｂａｌｂ／ｃマウスの群を第０日および第１４日に、ＰＢＳ中で製剤化された
、５０μｇの、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のｃＩＬ－３１に、ＳＡＴＡを介してカップリ
ングさせたＣＭＶ－Ｎｐａｄｒ ＶＬＰおよびＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０のいずれかを用いて
ｓ．ｃ．で免疫化する。マウスを第０日（免疫前）、第１４日、および第２８日に採血し
、血清をｃＩＬ－３１特異的ＥＬＩＳＡを用いて分析する。
Ｌ－３１によるマウスの免疫化
５匹の雌Ｂａｌｂ／ｃマウスの群を第０日および第１４日に、ＰＢＳ中で製剤化された
、５０μｇの、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のｃＩＬ－３１に、ＳＡＴＡを介してカップリ
ングさせたＣＭＶ－Ｎｐａｄｒ ＶＬＰおよびＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０のいずれかを用いて
ｓ．ｃ．で免疫化する。マウスを第０日（免疫前）、第１４日、および第２８日に採血し
、血清をｃＩＬ－３１特異的ＥＬＩＳＡを用いて分析する。
【0120】
ＥＬＩＳＡ．マウス血清における抗体応答を指示された時間に分析する。ｃＩＬ－３１
に特異的な抗体を、ＥＬＩＳＡプレートを５μｇ／ｍｌの濃度の組換えｃＩＬ－３１を含
む１００μｌの体積のＰＢＳ（ｐＨ７．２）で４℃にて一晩コートすることにより分析す
る。ＥＬＩＳＡプレートを５×、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む２００μｌのＰＢＳ（
ｐＨ７．２、ＰＢＳＴ）を用いて洗浄する。非特異的結合を回避するために、ＥＬＩＳＡ
プレートを２００μｌの２％ＢＳＡを含むＰＢＳＴでブロックし、２時間の間室温でイン
キュベートする。血清試料を２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中で希釈する。予備希釈された血清を
コートプレート上に移し、さらに段階希釈し、ＯＤ５０計算に基づく抗体価を取得する。
室温での２時間のインキュベーション後、ＥＬＩＳＡプレートを５×、２００μｌのＰＢ
ＳＴを用いて洗浄する。血清抗体の結合をセイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲー
トヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）により検出す
る。検出抗体を２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中で１：１０００希釈し、１００μｌの体積／試料
を移した。プレートを１時間の間室温でインキュベートする。ＥＬＩＳＡプレートを前に
記載されるように洗浄する。洗浄前に、基質溶液を調製する。この目的を達成するために
、１錠剤（１０ｍｇ）のＯＰＤ（１，２－フェニレンジアミン二塩酸塩）および９μｌの
３０％Ｈ２Ｏ２を２５ｍｌのクエン酸バッファー（０．０６６Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、０．
０３５Ｍクエン酸、ｐＨ５．０）に溶解する。１００μｌの体積の基質溶液をプレート上
にピペッティングし、７分間室温で正確にインキュベートする。反応を停止させるために
、５０μｌの停止液（５％Ｈ２ＳＯ４のＨ２Ｏ溶液）をプレート上に直接ピペッティング
する。１，２－フェニレンジアミン二塩酸塩呈色反応の４５０ｎｍでの吸光度測定値を分
析する。
に特異的な抗体を、ＥＬＩＳＡプレートを５μｇ／ｍｌの濃度の組換えｃＩＬ－３１を含
む１００μｌの体積のＰＢＳ（ｐＨ７．２）で４℃にて一晩コートすることにより分析す
る。ＥＬＩＳＡプレートを５×、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む２００μｌのＰＢＳ（
ｐＨ７．２、ＰＢＳＴ）を用いて洗浄する。非特異的結合を回避するために、ＥＬＩＳＡ
プレートを２００μｌの２％ＢＳＡを含むＰＢＳＴでブロックし、２時間の間室温でイン
キュベートする。血清試料を２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中で希釈する。予備希釈された血清を
コートプレート上に移し、さらに段階希釈し、ＯＤ５０計算に基づく抗体価を取得する。
室温での２時間のインキュベーション後、ＥＬＩＳＡプレートを５×、２００μｌのＰＢ
ＳＴを用いて洗浄する。血清抗体の結合をセイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲー
トヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）により検出す
る。検出抗体を２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中で１：１０００希釈し、１００μｌの体積／試料
を移した。プレートを１時間の間室温でインキュベートする。ＥＬＩＳＡプレートを前に
記載されるように洗浄する。洗浄前に、基質溶液を調製する。この目的を達成するために
、１錠剤（１０ｍｇ）のＯＰＤ（１，２－フェニレンジアミン二塩酸塩）および９μｌの
３０％Ｈ２Ｏ２を２５ｍｌのクエン酸バッファー（０．０６６Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、０．
０３５Ｍクエン酸、ｐＨ５．０）に溶解する。１００μｌの体積の基質溶液をプレート上
にピペッティングし、７分間室温で正確にインキュベートする。反応を停止させるために
、５０μｌの停止液（５％Ｈ２ＳＯ４のＨ２Ｏ溶液）をプレート上に直接ピペッティング
する。１，２－フェニレンジアミン二塩酸塩呈色反応の４５０ｎｍでの吸光度測定値を分
析する。
【0121】
Ｃ．ＣＭＶ－ＮｐａｄｒおよびＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰにカップリングされたｃＩ
Ｌ－３１によるイヌの免疫化
５匹のイヌの群を、第０日および第１４日、第２８日および第４２日に、ＰＢＳ中で製
剤化された、５０μｇの、ＳＡＴＡを介してＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のｃＩＬ－３１に
カップリングさせたＣＭＶ－Ｎｐａｄｒ ＶＬＰおよびＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰの
いずれかを用いてｓ．ｃ．で免疫化する。イヌを第０日（免疫前）、第１４日、第２８日
、第４２日および第５６日に採血し、血清をｃＩＬ－３１特異的ＥＬＩＳＡを用いて分析
する。
Ｌ－３１によるイヌの免疫化
５匹のイヌの群を、第０日および第１４日、第２８日および第４２日に、ＰＢＳ中で製
剤化された、５０μｇの、ＳＡＴＡを介してＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のｃＩＬ－３１に
カップリングさせたＣＭＶ－Ｎｐａｄｒ ＶＬＰおよびＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰの
いずれかを用いてｓ．ｃ．で免疫化する。イヌを第０日（免疫前）、第１４日、第２８日
、第４２日および第５６日に採血し、血清をｃＩＬ－３１特異的ＥＬＩＳＡを用いて分析
する。
【0122】
ＥＬＩＳＡ．イヌ血清における抗体応答を指示された時間に分析する。ｃＩＬ－３１に
特異的な抗体をＥＬＩＳＡプレートを、５μｇ／ｍｌの濃度の組換えｃＩＬ－３１を含む
１００μｌの体積のＰＢＳ（ｐＨ７．２）で４℃にて一晩コートすることにより分析する
。ＥＬＩＳＡプレートを５×、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む２００μｌのＰＢＳ（ｐ
Ｈ７．２、ＰＢＳＴ）を用いて洗浄する。非特異的結合を回避するために、ＥＬＩＳＡプ
レートを２００μｌの２％ＢＳＡを含むＰＢＳＴでブロックし、２時間の間室温でインキ
ュベートする。血清試料を２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中で希釈する。予備希釈された血清をコ
ートプレート上に移し、さらに段階希釈し、ＯＤ５０計算に基づく抗体価を取得する。室
温での２時間のインキュベーション後、ＥＬＩＳＡプレートを５×、２００μｌのＰＢＳ
Ｔを用いて洗浄する。血清抗体の結合をセイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲート
ヤギ抗イヌＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）により検出する。
検出抗体を２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中で１：１０００希釈し、１００μｌの体積／試料を移
した。プレートを１時間の間室温でインキュベートする。ＥＬＩＳＡプレートを前に記載
されるように洗浄する。洗浄前に、基質溶液を調製する。この目的を達成するために、１
錠剤（１０ｍｇ）のＯＰＤ（１，２－フェニレンジアミン二塩酸塩）および９μｌの３０
％Ｈ２Ｏ２を２５ｍｌのクエン酸バッファー（０．０６６Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、０．０３
５Ｍクエン酸、ｐＨ５．０）に溶解する。１００μｌの体積の基質溶液をプレート上にピ
ペッティングし、７分間室温で正確にインキュベートする。反応を停止させるために、５
０μｌの停止液（５％Ｈ２ＳＯ４のＨ２Ｏ溶液）をプレート上に直接ピペッティングする
。１，２－フェニレンジアミン二塩酸塩呈色反応の４５０ｎｍでの吸光度測定値を分析す
る。
特異的な抗体をＥＬＩＳＡプレートを、５μｇ／ｍｌの濃度の組換えｃＩＬ－３１を含む
１００μｌの体積のＰＢＳ（ｐＨ７．２）で４℃にて一晩コートすることにより分析する
。ＥＬＩＳＡプレートを５×、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む２００μｌのＰＢＳ（ｐ
Ｈ７．２、ＰＢＳＴ）を用いて洗浄する。非特異的結合を回避するために、ＥＬＩＳＡプ
レートを２００μｌの２％ＢＳＡを含むＰＢＳＴでブロックし、２時間の間室温でインキ
ュベートする。血清試料を２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中で希釈する。予備希釈された血清をコ
ートプレート上に移し、さらに段階希釈し、ＯＤ５０計算に基づく抗体価を取得する。室
温での２時間のインキュベーション後、ＥＬＩＳＡプレートを５×、２００μｌのＰＢＳ
Ｔを用いて洗浄する。血清抗体の結合をセイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲート
ヤギ抗イヌＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）により検出する。
検出抗体を２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中で１：１０００希釈し、１００μｌの体積／試料を移
した。プレートを１時間の間室温でインキュベートする。ＥＬＩＳＡプレートを前に記載
されるように洗浄する。洗浄前に、基質溶液を調製する。この目的を達成するために、１
錠剤（１０ｍｇ）のＯＰＤ（１，２－フェニレンジアミン二塩酸塩）および９μｌの３０
％Ｈ２Ｏ２を２５ｍｌのクエン酸バッファー（０．０６６Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、０．０３
５Ｍクエン酸、ｐＨ５．０）に溶解する。１００μｌの体積の基質溶液をプレート上にピ
ペッティングし、７分間室温で正確にインキュベートする。反応を停止させるために、５
０μｌの停止液（５％Ｈ２ＳＯ４のＨ２Ｏ溶液）をプレート上に直接ピペッティングする
。１，２－フェニレンジアミン二塩酸塩呈色反応の４５０ｎｍでの吸光度測定値を分析す
る。
【0123】
実施例１０
イヌアトピー性皮膚炎の治療のためのＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰにカップリングされ
た組換えイヌＩＬ－３１コンストラクトによるイヌの治療的免疫化
１５匹のアトピー性皮膚炎を有するイヌの群を第０日および第１４日、第２８日、第５
６日よびおよび第８０日に、Ａｌｕｍ中で製剤化された、５０μｇの、ＳＡＴＡを介して
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のｃＩＬ－３１にカップリングさせたＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０
ＶＬＰまたはＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０単独を用いてｓ．ｃ．で免疫化する。疾患重症度を免
疫化前ならびに第２８日、第５６日、第８０日および第１２０日に目視検査により測定す
る。
イヌアトピー性皮膚炎の治療のためのＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰにカップリングされ
た組換えイヌＩＬ－３１コンストラクトによるイヌの治療的免疫化
１５匹のアトピー性皮膚炎を有するイヌの群を第０日および第１４日、第２８日、第５
６日よびおよび第８０日に、Ａｌｕｍ中で製剤化された、５０μｇの、ＳＡＴＡを介して
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のｃＩＬ－３１にカップリングさせたＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０
ＶＬＰまたはＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０単独を用いてｓ．ｃ．で免疫化する。疾患重症度を免
疫化前ならびに第２８日、第５６日、第８０日および第１２０日に目視検査により測定す
る。
【0124】
実施例１１
ＣＡＤスコアリング
ＣＡＤ症状スコアリングでは、アトピー性皮膚炎病変指数（Ａｔｏｐｉｃ Ｄｅｒｍａ
ｔｉｔｉｓ Ｌｅｓｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ）（ＡＤＬＩ）およびそう痒ビジュアルアナログ
スケール（ＰＶＡＳ）を実験イヌにおいて使用する。ＡＤＬＩスコアは、５つの特定の身
体領域において評価されるイヌアトピー性皮膚炎と関連する、６つの臨床症状の検証され
た複合指数である。各特定の身体領域で、各パラメータがスコアラーにより０から５まで
スコア化され、０のスコアは病変なしとして規定され、５のスコアは重篤／広範な病変と
して規定される。ＰＶＡＳはスコアラーにより０から１０のアナログスケールによりスコ
ア化され、０のスコアはそう痒／咀嚼なしを表し、１０のスコアは、絶え間ない、かつ激
烈なそう痒／咀嚼に等しい。処置したイヌのＣＡＤスコアリングをベースライン、ならび
にプラセボで処置したイヌのスコアと比較する。
ＣＡＤスコアリング
ＣＡＤ症状スコアリングでは、アトピー性皮膚炎病変指数（Ａｔｏｐｉｃ Ｄｅｒｍａ
ｔｉｔｉｓ Ｌｅｓｉｏｎ Ｉｎｄｅｘ）（ＡＤＬＩ）およびそう痒ビジュアルアナログ
スケール（ＰＶＡＳ）を実験イヌにおいて使用する。ＡＤＬＩスコアは、５つの特定の身
体領域において評価されるイヌアトピー性皮膚炎と関連する、６つの臨床症状の検証され
た複合指数である。各特定の身体領域で、各パラメータがスコアラーにより０から５まで
スコア化され、０のスコアは病変なしとして規定され、５のスコアは重篤／広範な病変と
して規定される。ＰＶＡＳはスコアラーにより０から１０のアナログスケールによりスコ
ア化され、０のスコアはそう痒／咀嚼なしを表し、１０のスコアは、絶え間ない、かつ激
烈なそう痒／咀嚼に等しい。処置したイヌのＣＡＤスコアリングをベースライン、ならび
にプラセボで処置したイヌのスコアと比較する。
【0125】
実施例１２
屋内チリダニにアレルギー性のイヌのｃＩＬ－３１－ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰを用
いたワクチン接種およびその後の誘発
６匹のアレルギーイヌをＡｌｕｍ中で製剤化された、１００μｇのｃＩＬ－３１－ＣＭ
Ｖ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰを用いて免疫化し、６匹のアレルギーイヌをプラセボ（ａｌｕ
ｍ）で処置した。３週間後、イヌを３００μｇのワクチンまたはプラセボで追加免疫した
。血液を第２８日に採取した。ｄ－２８日に、毛を腹部皮膚からテープストリッピングに
より除去し、屋内チリダニ誘発を１日１回１０分間、連続５日間実施した。皮膚病変およ
びそう痒を１２匹のイヌについて、６時間／日の間のイヌの臨床検査録画によりスコア化
した。
屋内チリダニにアレルギー性のイヌのｃＩＬ－３１－ＣＭＶ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰを用
いたワクチン接種およびその後の誘発
６匹のアレルギーイヌをＡｌｕｍ中で製剤化された、１００μｇのｃＩＬ－３１－ＣＭ
Ｖ－Ｎｔｔ８３０ ＶＬＰを用いて免疫化し、６匹のアレルギーイヌをプラセボ（ａｌｕ
ｍ）で処置した。３週間後、イヌを３００μｇのワクチンまたはプラセボで追加免疫した
。血液を第２８日に採取した。ｄ－２８日に、毛を腹部皮膚からテープストリッピングに
より除去し、屋内チリダニ誘発を１日１回１０分間、連続５日間実施した。皮膚病変およ
びそう痒を１２匹のイヌについて、６時間／日の間のイヌの臨床検査録画によりスコア化
した。
【0126】
【0127】
ｃＩＬ－３１特異的ＩｇＧ力価の決定
イヌ血清における抗体応答を第２８日に分析した。ｃＩＬ－３１に特異的な抗体を、Ｅ
ＬＩＳＡプレートを、３μｇ／ｍｌの濃度の組換えｃＩＬ－３１を含む１００μｌの体積
のＰＢＳ（ｐＨ７．２）で４℃にて一晩コートすることにより分析した。ＥＬＩＳＡプレ
ートを５×、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む２００μｌのＰＢＳ（ｐＨ７．２、ＰＢＳ
Ｔ）で洗浄した。非特異的結合を回避するために、ＥＬＩＳＡプレートを２００μｌの２
％ＢＳＡを含むＰＢＳＴでブロックし、２時間の間室温でインキュベートした。血清試料
を２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中で希釈する。予備希釈された血清（１０倍）をコートプレート
上に移し、さらに段階希釈し（３倍ステップ）、ＯＤ５０計算に基づく抗体力価を取得し
た。室温での２時間のインキュベーション後、ＥＬＩＳＡプレートを５×、２００μｌの
ＰＢＳＴで洗浄した。血清抗体の結合をセイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲート
ヤギ抗イヌＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）により検出した。
検出抗体を２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中で１：１０００希釈し、１００μｌの体積／試料を移
した。プレートを１時間の間室温でインキュベートした。ＥＬＩＳＡプレートを前に記載
されるように洗浄する。洗浄前に、５つの基質溶液を調製した。この目的を達成するため
に、１錠剤（１０ｍｇ）のＯＰＤ（１，２－フェニレンジアミン二塩酸塩）および９μｌ
の３０％Ｈ２Ｏ２を２５ｍｌクエン酸バッファー（０．０６６Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、０．
０３５Ｍクエン酸、ｐＨ５．０）に溶解した。１００μｌの体積の基質溶液をプレート上
にピペッティングし、７分間室温で正確にインキュベートした。反応を停止させるために
、５０μｌの停止液（５％Ｈ２ＳＯ４のＨ２Ｏ溶液）をプレート上に直接ピペッティング
する。１，２－フェニレンジアミン二塩酸塩呈色反応の４５０ｎｍでの吸光度測定値を分
析し、１０倍予備希釈血清のｌｏｇ３として表した（図１３Ｂ）。図１３ＢはＩＬ－３１
特異抗体力価とひっかき強度の間の相関を示す。依然としてひっかいていた１匹のイヌは
最低抗体応答を開始し、＜１／３００の指示力価が保護的であることが見出された。
なお、本発明は以下の態様を含みうる。
［１］イヌ科、好ましくは飼いイヌのイヌアトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）を防止または治療する方法において使用するための組成物であって、有効量の前記組成物が前記イヌ科、好ましくは前記飼いイヌに投与され、前記組成物は
（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するコア粒子；および
（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）
を含み、
前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され；
（ａ）および（ｂ）は前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位により、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される、組成物。
［２］前記コア粒子はウイルス様粒子（ＶＬＰ）、好ましくは組換えＶＬＰである、上記のいずれかに記載の使用するための組成物。
［３］前記ＶＬＰは植物ウイルスに由来する、上記［２］に記載の使用するための組成物。
［４］前記ＶＬＰは少なくとも１つの改変ＶＬＰポリペプチドを含み、これから本質的に構成され、あるいはこれから構成される改変ＶＬＰであり、前記改変ＶＬＰポリペプチドは、
（ａ）ＶＬＰポリペプチド、および
（ｂ）ヘルパーＴ細胞エピトープ、
を含み、または好ましくはこれから構成され、
前記ＶＬＰポリペプチドは、
（ｉ）ウイルスのコートタンパク質のアミノ酸配列、好ましくは植物ウイルスのコートタンパク質のアミノ酸配列；または
（ｉｉ）変異アミノ酸配列、
を含み、または好ましくはこれから構成され、
前記変異されるアミノ酸配列はウイルスの前記コートタンパク質のアミノ酸配列であり、前記変異アミノ酸配列およびウイルスの前記コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す、上記［２］～［３］のいずれかに記載の使用するための組成物。
［５］前記ＶＬＰはキュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ＣＭＶの前記改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改変ＣＭＶポリペプチドを含み、これから本質的に構成され、あるいはこれから構成され、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、
（ａ）ＣＭＶポリペプチド、および
（ｂ）ヘルパーＴ細胞エピトープ
を含み、または好ましくはこれから構成され；ならびに
前記ＣＭＶポリペプチドは、
（ｉｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列；または
（ｉｉ）変異アミノ酸配列、
を含み、または好ましくはこれから構成され、
前記変異されるアミノ酸配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、前記変異アミノ酸配列およびＣＭＶの前記コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す、上記［２］～［４］のいずれかに記載の使用するための組成物。
［６］前記ＣＭＶポリペプチドは、
（ａ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含み、または好ましくはこれから構成される、アミノ酸配列、または
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され；ならびに
この項目で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み；あるいは
この項目で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はアミノ酸配列領域を含み、前記アミノ酸配列領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも９０％の配列同一性を有する、上記［５］に記載の使用するための組成物。
［７］前記ヘルパーＴ細胞エピトープは前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域にとって代わり、前記ＣＭＶポリペプチドの前記Ｎ末端領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸２－１２に対応する、上記［５］～［６］のいずれかに記載の使用するための組成物。
［８］前記Ｔｈ細胞エピトープはＰＡＤＲＥ配列であり、前記Ｔｈ細胞エピトープはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され；あるいは、前記Ｔｈ細胞エピトープは、破傷風毒素に由来し、前記Ｔｈ細胞エピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を有し、好ましくはこれから構成される、上記［５］～［７］のいずれかに記載の使用するための組成物。
［９］前記ＣＭＶポリペプチドは、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され；ならびに、前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み、前記ヘルパーＴ細胞エピトープは前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域にとって代わり、前記ＣＭＶポリペプチドの前記置き換えられたＮ末端領域は１１～１３の連続アミノ酸、好ましくは１１の連続アミノ酸から構成され、さらに好ましくは、前記ＣＭＶポリペプチドの前記Ｎ末端領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸２－１２に対応する、上記［５］～［８］のいずれかに記載の使用するための組成物。
［１０］前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される、上記［５］～［９］のいずれかに記載の使用するための組成物。
［１１］前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される、上記のいずれかに記載の使用するための組成物：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２；または
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。
［１２］前記組成物の前記投与は少なくとも１つのＣＡＤパラメータまたは症状を、前記投与前の前記少なくとも１つのＣＡＤパラメータまたは症状と比べて低減させ、好ましくは前記少なくとも１つのＣＡＤパラメータまたは症状は皮膚病変またはかゆみのレベルまたは重症度グレードであり、さらに好ましくは皮膚病変の前記レベルまたは重症度グレードの前記低減は症状および病変スコアリング試験により決定される、上記のいずれかに記載の使用するための組成物。
［１３］（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するウイルス様粒子（ＶＬＰ）；
（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）
を含む組成物であって、
前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され、重ねてさらに好ましくは前記抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され；
（ａ）および（ｂ）は前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位により、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される、組成物。
［１４］前記ＶＬＰはキュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される、上記［１３］または［１４］に記載の組成物。
［１５］前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、好ましくは、前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導され、好ましくは前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される、上記［１３］または［１４］に記載の組成物：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２；または
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。
イヌ血清における抗体応答を第２８日に分析した。ｃＩＬ－３１に特異的な抗体を、Ｅ
ＬＩＳＡプレートを、３μｇ／ｍｌの濃度の組換えｃＩＬ－３１を含む１００μｌの体積
のＰＢＳ（ｐＨ７．２）で４℃にて一晩コートすることにより分析した。ＥＬＩＳＡプレ
ートを５×、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む２００μｌのＰＢＳ（ｐＨ７．２、ＰＢＳ
Ｔ）で洗浄した。非特異的結合を回避するために、ＥＬＩＳＡプレートを２００μｌの２
％ＢＳＡを含むＰＢＳＴでブロックし、２時間の間室温でインキュベートした。血清試料
を２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中で希釈する。予備希釈された血清（１０倍）をコートプレート
上に移し、さらに段階希釈し（３倍ステップ）、ＯＤ５０計算に基づく抗体力価を取得し
た。室温での２時間のインキュベーション後、ＥＬＩＳＡプレートを５×、２００μｌの
ＰＢＳＴで洗浄した。血清抗体の結合をセイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲート
ヤギ抗イヌＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）により検出した。
検出抗体を２％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中で１：１０００希釈し、１００μｌの体積／試料を移
した。プレートを１時間の間室温でインキュベートした。ＥＬＩＳＡプレートを前に記載
されるように洗浄する。洗浄前に、５つの基質溶液を調製した。この目的を達成するため
に、１錠剤（１０ｍｇ）のＯＰＤ（１，２－フェニレンジアミン二塩酸塩）および９μｌ
の３０％Ｈ２Ｏ２を２５ｍｌクエン酸バッファー（０．０６６Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４、０．
０３５Ｍクエン酸、ｐＨ５．０）に溶解した。１００μｌの体積の基質溶液をプレート上
にピペッティングし、７分間室温で正確にインキュベートした。反応を停止させるために
、５０μｌの停止液（５％Ｈ２ＳＯ４のＨ２Ｏ溶液）をプレート上に直接ピペッティング
する。１，２－フェニレンジアミン二塩酸塩呈色反応の４５０ｎｍでの吸光度測定値を分
析し、１０倍予備希釈血清のｌｏｇ３として表した（図１３Ｂ）。図１３ＢはＩＬ－３１
特異抗体力価とひっかき強度の間の相関を示す。依然としてひっかいていた１匹のイヌは
最低抗体応答を開始し、＜１／３００の指示力価が保護的であることが見出された。
なお、本発明は以下の態様を含みうる。
［１］イヌ科、好ましくは飼いイヌのイヌアトピー性皮膚炎（ＣＡＤ）を防止または治療する方法において使用するための組成物であって、有効量の前記組成物が前記イヌ科、好ましくは前記飼いイヌに投与され、前記組成物は
（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するコア粒子；および
（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）
を含み、
前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され；
（ａ）および（ｂ）は前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位により、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される、組成物。
［２］前記コア粒子はウイルス様粒子（ＶＬＰ）、好ましくは組換えＶＬＰである、上記のいずれかに記載の使用するための組成物。
［３］前記ＶＬＰは植物ウイルスに由来する、上記［２］に記載の使用するための組成物。
［４］前記ＶＬＰは少なくとも１つの改変ＶＬＰポリペプチドを含み、これから本質的に構成され、あるいはこれから構成される改変ＶＬＰであり、前記改変ＶＬＰポリペプチドは、
（ａ）ＶＬＰポリペプチド、および
（ｂ）ヘルパーＴ細胞エピトープ、
を含み、または好ましくはこれから構成され、
前記ＶＬＰポリペプチドは、
（ｉ）ウイルスのコートタンパク質のアミノ酸配列、好ましくは植物ウイルスのコートタンパク質のアミノ酸配列；または
（ｉｉ）変異アミノ酸配列、
を含み、または好ましくはこれから構成され、
前記変異されるアミノ酸配列はウイルスの前記コートタンパク質のアミノ酸配列であり、前記変異アミノ酸配列およびウイルスの前記コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す、上記［２］～［３］のいずれかに記載の使用するための組成物。
［５］前記ＶＬＰはキュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、ＣＭＶの前記改変ＶＬＰは、少なくとも１つの改変ＣＭＶポリペプチドを含み、これから本質的に構成され、あるいはこれから構成され、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、
（ａ）ＣＭＶポリペプチド、および
（ｂ）ヘルパーＴ細胞エピトープ
を含み、または好ましくはこれから構成され；ならびに
前記ＣＭＶポリペプチドは、
（ｉｉ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列；または
（ｉｉ）変異アミノ酸配列、
を含み、または好ましくはこれから構成され、
前記変異されるアミノ酸配列はＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であり、前記変異アミノ酸配列およびＣＭＶの前記コートタンパク質は、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９８％、重ねてより好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を示す、上記［２］～［４］のいずれかに記載の使用するための組成物。
［６］前記ＣＭＶポリペプチドは、
（ａ）ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列であって、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含み、または好ましくはこれから構成される、アミノ酸配列、または
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され；ならびに
この項目で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み；あるいは
この項目で（ａ）または（ｂ）において規定される前記アミノ配列はアミノ酸配列領域を含み、前記アミノ酸配列領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３と少なくとも９０％の配列同一性を有する、上記［５］に記載の使用するための組成物。
［７］前記ヘルパーＴ細胞エピトープは前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域にとって代わり、前記ＣＭＶポリペプチドの前記Ｎ末端領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸２－１２に対応する、上記［５］～［６］のいずれかに記載の使用するための組成物。
［８］前記Ｔｈ細胞エピトープはＰＡＤＲＥ配列であり、前記Ｔｈ細胞エピトープはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され；あるいは、前記Ｔｈ細胞エピトープは、破傷風毒素に由来し、前記Ｔｈ細胞エピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を有し、好ましくはこれから構成される、上記［５］～［７］のいずれかに記載の使用するための組成物。
［９］前記ＣＭＶポリペプチドは、ＣＭＶのコートタンパク質のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され、前記アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成され；ならびに、前記アミノ配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含み、前記ヘルパーＴ細胞エピトープは前記ＣＭＶポリペプチドのＮ末端領域にとって代わり、前記ＣＭＶポリペプチドの前記置き換えられたＮ末端領域は１１～１３の連続アミノ酸、好ましくは１１の連続アミノ酸から構成され、さらに好ましくは、前記ＣＭＶポリペプチドの前記Ｎ末端領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸２－１２に対応する、上記［５］～［８］のいずれかに記載の使用するための組成物。
［１０］前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される、上記［５］～［９］のいずれかに記載の使用するための組成物。
［１１］前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される、上記のいずれかに記載の使用するための組成物：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２；または
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。
［１２］前記組成物の前記投与は少なくとも１つのＣＡＤパラメータまたは症状を、前記投与前の前記少なくとも１つのＣＡＤパラメータまたは症状と比べて低減させ、好ましくは前記少なくとも１つのＣＡＤパラメータまたは症状は皮膚病変またはかゆみのレベルまたは重症度グレードであり、さらに好ましくは皮膚病変の前記レベルまたは重症度グレードの前記低減は症状および病変スコアリング試験により決定される、上記のいずれかに記載の使用するための組成物。
［１３］（ａ）少なくとも１つの第１の付着部位を有するウイルス様粒子（ＶＬＰ）；
（ｂ）少なくとも１つの第２の付着部位を有する少なくとも１つのイヌインターロイキン－３１抗原（ｃＩＬ－３１抗原）
を含む組成物であって、
前記ｃＩＬ－３１抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２から選択されるアミノ配列を有するタンパク質、または、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、さらに好ましくは少なくとも９５％、重ねてさらに好ましくは少なくとも９８％アミノ酸配列同一性のアミノ酸配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され、重ねてさらに好ましくは前記抗原は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成され；
（ａ）および（ｂ）は前記少なくとも１つの第１のおよび前記少なくとも１つの第２の付着部位により、少なくとも１つの非ペプチド共有結合を介して連結される、組成物。
［１４］前記ＶＬＰはキュウリモザイクウイルス（ＣＭＶ）の改変ＶＬＰであり、前記改変ＣＭＶポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、または好ましくはこれから構成される、上記［１３］または［１４］に記載の組成物。
［１５］前記第２の付着部位はスルフヒドリル基であり、好ましくは、前記スルフヒドリル基は、前記ｃＩＬ－３１抗原のＮ－スクシンイミジルＳ－アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）との反応から誘導され、好ましくは前記少なくとも１つのｃＩＬ－３１抗原は、下記から選択されるアミノ配列を有するタンパク質を含み、または好ましくはこれから構成される、上記［１３］または［１４］に記載の組成物：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２；または
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図4A】
【図4B】
【図5A】
【図5B】
【図6】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図9】
【図10A】
【図10B】
【図11】
【図12】
【図13A】
【図13B】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2022-04-06
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
明細書に記載された発明。