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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023055608
(43)【公開日】2023-04-18
(54)【発明の名称】細胞入容器、細胞播種方法、および細胞播種装置
(51)【国際特許分類】
C12M 3/00 20060101AFI20230411BHJP
C12M 1/32 20060101ALI20230411BHJP
C12Q 1/02 20060101ALI20230411BHJP
【ＦＩ】
C12M3/00 Z
C12M1/32
C12Q1/02
【審査請求】未請求
【請求項の数】28
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022065799
(22)【出願日】2022-04-12
(31)【優先権主張番号】P 2021164656
(32)【優先日】2021-10-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(71)【出願人】
【識別番号】000003193
【氏名又は名称】凸版印刷株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100149548
【弁理士】
【氏名又は名称】松沼 泰史
(74)【代理人】
【識別番号】100139686
【弁理士】
【氏名又は名称】鈴木 史朗
(74)【代理人】
【識別番号】100169764
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 雄一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100147267
【弁理士】
【氏名又は名称】大槻 真紀子
(72)【発明者】
【氏名】川島 健太
(72)【発明者】
【氏名】郡嶋 政司
(72)【発明者】
【氏名】木島 匡彦
(72)【発明者】
【氏名】岸 優輔
【テーマコード（参考）】
4B029
4B063
【Ｆターム（参考）】
4B029AA01
4B029AA09
4B029BB01
4B029CC01
4B029DF06
4B029DG10
4B029FA15
4B029GA03
4B029GB05
4B029GB10
4B029HA05
4B029HA09
4B063QA20
4B063QQ05
4B063QS39
4B063QS40
4B063QX10
(57)【要約】
【課題】容器に充填された培地液に対して、均一に細胞が存在する細胞入容器を提供する。また、均一に細胞が存在する細胞入容器を実現するための播種方法を提供する。
【解決手段】細胞入容器１は、培地液１１が充填された容器１０に細胞懸濁液１２を入れた細胞入容器１であって、培地液１１には細胞懸濁液１２が少なくとも２点以上に存在していることを特徴とする。細胞播種方法は、培地液１１が充填された容器１０に対して少なくとも２点以上で細胞懸濁液１２を滴下することを特徴とする。
【選択図】 図１
【解決手段】細胞入容器１は、培地液１１が充填された容器１０に細胞懸濁液１２を入れた細胞入容器１であって、培地液１１には細胞懸濁液１２が少なくとも２点以上に存在していることを特徴とする。細胞播種方法は、培地液１１が充填された容器１０に対して少なくとも２点以上で細胞懸濁液１２を滴下することを特徴とする。
【選択図】 図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を入れた細胞入容器であって、
前記培地液には細胞懸濁液が少なくとも２点以上に存在していることを特徴とする細胞入容器。
前記培地液には細胞懸濁液が少なくとも２点以上に存在していることを特徴とする細胞入容器。
【請求項2】
前記細胞懸濁液は、平面格子状または列状に存在していることを特徴とする請求項１記載の細胞入容器。
【請求項3】
培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を吐出する細胞懸濁液吐出手段を有し、培地液が充填された容器に対して少なくとも２点以上で細胞懸濁液を滴下することを特徴とする細胞播種方法。
【請求項4】
前記細胞懸濁液吐出手段を前記容器上方で走査可能な吐出移動手段を有し、
少なくとも２点以上で前記細胞懸濁液を吐出することを特徴とする請求項３記載の細胞播種方法。
少なくとも２点以上で前記細胞懸濁液を吐出することを特徴とする請求項３記載の細胞播種方法。
【請求項5】
前記容器を移動させる容器移動手段を有し、
少なくとも２点以上で前記細胞懸濁液を吐出することを特徴とする請求項３記載の細胞播種方法。
少なくとも２点以上で前記細胞懸濁液を吐出することを特徴とする請求項３記載の細胞播種方法。
【請求項6】
前記細胞懸濁液吐出手段は、前記細胞懸濁液の吐出量を調整可能であることを特徴とする請求項３～５のいずれか一項に記載の細胞播種方法。
【請求項7】
前記細胞懸濁液吐出手段は、前記細胞懸濁液の吐出速度を調整可能であることを特徴とする請求項３～５のいずれか一項に記載の細胞播種方法。
【請求項8】
前記細胞懸濁液吐出手段は、前記細胞懸濁液を吐出する吐出部を複数有することを特徴とする請求項３～５のいずれか一項に記載の細胞播種方法。
【請求項9】
培地液が充填された容器に対して平面格子状または列状に細胞懸濁液を吐出する際に、平面格子または列の、吐出間隔およびパターン種を変更可能であること特徴とする請求項３～５のいずれか一項に記載の細胞播種方法。
【請求項10】
培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を吐出する細胞懸濁液吐出機構を有し、培地液が充填された容器に対して少なくとも２点以上で細胞懸濁液を滴下することを特徴とする細胞播種装置。
【請求項11】
前記細胞懸濁液吐出機構を前記容器上方で走査可能な吐出移動機構を有し、
少なくとも２点以上で前記細胞懸濁液を吐出することを特徴とする請求項１０記載の細胞播種装置。
少なくとも２点以上で前記細胞懸濁液を吐出することを特徴とする請求項１０記載の細胞播種装置。
【請求項12】
前記容器を移動させる容器移動機構を有し、
少なくとも２点以上で前記細胞懸濁液を吐出することを特徴とする請求項１０記載の細胞播種装置。
少なくとも２点以上で前記細胞懸濁液を吐出することを特徴とする請求項１０記載の細胞播種装置。
【請求項13】
培地液が充填された容器に対して平面格子状または列状に細胞懸濁液を吐出する際に、平面格子または列の、吐出間隔およびパターン種を変更可能であること特徴とする請求項１０～１２のいずれか一項に記載の細胞播種装置。
【請求項14】
前記細胞懸濁液吐出機構は、細胞懸濁液の吐出量を調整可能であることを特徴とする請求項１０～１２のいずれか一項に記載の細胞播種装置。
【請求項15】
前記細胞懸濁液吐出機構は、細胞懸濁液の吐出速度を調整可能であることを特徴とする請求項１０～１２のいずれか一項に記載の細胞播種装置。
【請求項16】
前記細胞懸濁液吐出機構は、前記細胞懸濁液を吐出する吐出部を複数有することを特徴とする請求項１０～１２のいずれか一項に記載の細胞播種装置。
【請求項17】
培地液を充填した任意の容器に細胞懸濁液を播種した細胞入容器であって、
前記容器には細胞懸濁液が線状に播種されていることを特徴とする細胞入容器。
前記容器には細胞懸濁液が線状に播種されていることを特徴とする細胞入容器。
【請求項18】
前記細胞懸濁液は、１つの線または複数の線から構成されていることを特徴とする請求項１７記載の細胞入容器。
【請求項19】
培地液が充填された任意の容器に対して細胞懸濁液を線状に滴下し、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成することを特徴とする細胞播種方法。
【請求項20】
培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を吐出する細胞懸濁液吐出手段と、前記細胞懸濁液吐出手段を前記容器上方で走査可能な吐出移動手段と、を有し、
前記細胞懸濁液を線状に吐出して、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成することを特徴とする請求項１９記載の細胞播種方法。
前記細胞懸濁液を線状に吐出して、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成することを特徴とする請求項１９記載の細胞播種方法。
【請求項21】
培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を吐出する細胞懸濁液吐出手段と、前記容器を移動させる容器移動手段と、を有し、
前記細胞懸濁液を線状に吐出して、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成することを特徴とする請求項１９記載の細胞播種方法。
前記細胞懸濁液を線状に吐出して、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成することを特徴とする請求項１９記載の細胞播種方法。
【請求項22】
前記細胞懸濁液吐出手段は、前記細胞懸濁液の単位時間あたり吐出量を調整可能であることを特徴とする請求項２０～２１のいずれか一項に記載の細胞播種方法。
【請求項23】
培地液が充填された容器に対して吐出される前記細胞懸濁液の線パターンを自在に変更可能であることを特徴とする請求項１９～２１のいずれか一項に記載の細胞播種方法。
【請求項24】
培地液が充填された任意の容器に対して細胞懸濁液を線状に滴下し、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成することを特徴とする細胞播種装置。
【請求項25】
培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を吐出する細胞懸濁液吐出機構と、前記細胞懸濁液吐出機構を前記容器上方で走査可能な吐出移動機構と、を有し、
前記細胞懸濁液を線状に吐出して、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成することを特徴とする請求項２４記載の細胞播種装置。
前記細胞懸濁液を線状に吐出して、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成することを特徴とする請求項２４記載の細胞播種装置。
【請求項26】
培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を吐出する細胞懸濁液吐出機構と、前記容器を移動させる容器移動機構と、を有し、前記細胞懸濁液を線状に吐出して、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成することを特徴とする請求項２４記載の細胞播種装置。
【請求項27】
前記細胞懸濁液吐出機構は、前記細胞懸濁液の単位時間あたり吐出量を調整可能であることを特徴とする請求項２５～２６のいずれか一項に記載の細胞播種装置。
【請求項28】
培地液が充填された容器に対して吐出される前記細胞懸濁液の線パターンを自在に変更可能であることを特徴とする請求項２４～２６のいずれか一項に記載の細胞播種装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、細胞入容器、細胞を培養するために用いる細胞播種方法、および細胞播種装置に関する。
【背景技術】
【0002】
近年、生化学分野の発展により、多種多様な細胞の培養が可能となっている。創薬、再生医療、細胞治療、細胞工学等の分野において、細胞や組織を人工的に培養することが求められている。
【0003】
細胞を培養する際、一般的には培地液が充填された培養容器（以下、単に「容器」とも呼ぶ。）に細胞を播種し、インキュベーターなどの温度、二酸化炭素濃度が管理された環境下で細胞を培養する。
【0004】
細胞培養は、細胞が密集した状態（コンフルエンシー１００％以上）では、接触阻害が生じて細胞の成長速度を低下させる。このため、一般的には、培養容器の底面積に対して細胞の密集度合（コンフルエンシー）が７０～８０％の状態で培養することが望まれている。
しかし、細胞を播種した際に培養容器内における細胞の濃度分布の差が大きいと、細胞はその分布に従って細胞分裂を繰り返して増殖する。このため、細胞が疎に培養される部分と、局所的に細胞が密に培養されてしまう部分とが存在し、コンフルエンシーが１００％以上になることがある。
しかし、細胞を播種した際に培養容器内における細胞の濃度分布の差が大きいと、細胞はその分布に従って細胞分裂を繰り返して増殖する。このため、細胞が疎に培養される部分と、局所的に細胞が密に培養されてしまう部分とが存在し、コンフルエンシーが１００％以上になることがある。
【0005】
そのため、細胞の濃度分布をより均一にし、効率的に細胞を培養するために、容器内に細胞懸濁液をピペットなどで播種した後に、作業者が容器をゆすって細胞を分散させている。
しかし、細胞の播種位置、播種量、および播種速度、さらにはゆすりの手技や条件も作業者によって異なる。そのため、理想的な細胞の分散状態を再現性良く確保することは困難である。
しかし、細胞の播種位置、播種量、および播種速度、さらにはゆすりの手技や条件も作業者によって異なる。そのため、理想的な細胞の分散状態を再現性良く確保することは困難である。
【0006】
また、実験プロトコルで規定した条件下で細胞を培養しても、容器内の細胞分散状態を再現しにくく、下記に示すような対策が講じられている。
【0007】
特許文献１には、多数の培養容器をラックにセットした状態で個々の培養容器を揺動させることができる装置が開示されている。
【0008】
特許文献２には、軟骨細胞を均等に播種できる軟骨細胞の播種方法及び該軟骨細胞の播種方法に用いる軟骨細胞播種用治具セットが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0009】
【特許文献1】特開２０２１－７３５０号公報
【特許文献2】特開２０２１－９０３６７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0010】
しかしながら、特許文献１の技術では、容器を揺動運動させることで細胞の分散状態を制御しているが、細胞懸濁液や培地液の濃度や粘度などによっては、細胞を容器内に均一に分散できない可能性がある。
【0011】
特許文献２の技術では、均一な播種を目的としているが、軟骨細胞を生体吸収性不織布に播種するという方法であり、培地液に播種可能な方法ではない。
【0012】
本発明は、上記問題点を鑑み、容器に充填された培地液に対して、均一に細胞が存在する細胞入容器を提供すること、並びに、均一に細胞が存在する細胞入容器を実現するための播種方法および播種装置を提供することを目的とする。
【0013】
さらには、容器内で均一に細胞を存在させることにより、安定してより多く細胞を培養できる細胞入容器を提供すること、並びに、均一に細胞が存在する細胞入容器を実現するための播種方法および播種装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0014】
本発明の細胞入容器は、培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を入れた細胞入容器であって、前記培地液には細胞懸濁液が少なくとも２点以上に存在していることを特徴とする。
【0015】
前記細胞入容器において、前記細胞懸濁液は、平面格子状または列状に存在していてもよい。
【0016】
本発明の細胞播種方法は、培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を吐出する細胞懸濁液吐出手段を有し、培培地液が充填された容器に対して少なくとも２点以上で細胞懸濁液を滴下することを特徴とする。
【0017】
前記細胞播種方法は、前記細胞懸濁液吐出手段を前記容器上方で走査可能な吐出移動手段を有し、少なくとも２点以上で前記細胞懸濁液を吐出してもよい。
【0018】
前記細胞播種方法は、前記容器を移動させる容器移動手段を有し、少なくとも２点以上で前記細胞懸濁液を吐出してもよい。
【0019】
前記細胞播種方法において、前記細胞懸濁液吐出手段は、前記細胞懸濁液の吐出量を調整可能であってよい。
【0020】
前記細胞播種方法において、前記細胞懸濁液吐出手段は、前記細胞懸濁液の吐出速度を調整可能であってよい。
【0021】
前記細胞播種方法において、前記細胞懸濁液吐出手段は、前記細胞懸濁液を吐出する吐出部を複数有してよい。
【0022】
前記細胞播種方法においては、培地液が充填された容器に対して平面格子状または列状に細胞懸濁液を吐出する際に、平面格子または列の、吐出間隔およびパターン種を変更可能であってよい。
【0023】
本発明の細胞播種装置は、培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を吐出する細胞懸濁液吐出機構を有し、培地液が充填された容器に対して少なくとも２点以上で細胞懸濁液を滴下することを特徴とする。
【0024】
前記細胞播種装置は、前記細胞懸濁液吐出機構を前記容器上方で走査可能な吐出移動機構を有し、少なくとも２点以上で前記細胞懸濁液を吐出してもよい。
【0025】
前記細胞播種装置は、前記容器を移動させる容器移動機構を有し、少なくとも２点以上で前記細胞懸濁液を吐出してもよい。
【0026】
前記細胞播種装置においては、培地液が充填された容器に対して平面格子状または列状に細胞懸濁液を吐出する際に、平面格子または列の、吐出間隔およびパターン種を変更可能であってよい。
【0027】
前記細胞播種装置において、前記細胞懸濁液吐出機構は、細胞懸濁液の吐出量を調整可能であってよい。
【0028】
前記細胞播種装置において、前記細胞懸濁液吐出機構は、細胞懸濁液の吐出速度を調整可能であってよい。
【0029】
前記細胞播種装置において、前記細胞懸濁液吐出機構は、前記細胞懸濁液を吐出する吐出部を複数有してよい。
【0030】
本発明の細胞入容器は、培地液を充填した任意の容器に細胞懸濁液を播種した細胞入容器であって、前記容器には細胞懸濁液が線状に播種されていることを特徴とする。
【0031】
前記細胞入容器において、前記細胞懸濁液は、１つの線または複数の線から構成されてよい。
【0032】
本発明の細胞播種方法は、培地液が充填された任意の容器に対して細胞懸濁液を線状に滴下し、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成することを特徴とする。
【0033】
前記細胞播種方法は、培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を吐出する細胞懸濁液吐出手段と、前記細胞懸濁液吐出手段を前記容器上方で走査可能な吐出移動手段と、を有し、前記細胞懸濁液を線状に吐出して、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成してよい。
【0034】
前記細胞播種方法は、培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を吐出する細胞懸濁液吐出手段と、前記容器を移動させる容器移動手段と、を有し、前記細胞懸濁液を線状に吐出して、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成してよい。
【0035】
前記細胞播種方法において、前記細胞懸濁液吐出手段は、前記細胞懸濁液の単位時間あたり吐出量を調整可能であってよい。
【0036】
前記細胞播種方法においては、培地液が充填された容器に対して吐出される前記細胞懸濁液の線パターンを自在に変更可能であってよい。
【0037】
本発明の細胞播種装置は、培地液が充填された任意の容器に対して細胞懸濁液を線状に滴下し、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成することを特徴とする。
【0038】
前記細胞播種装置は、培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を吐出する細胞懸濁液吐出機構と、前記細胞懸濁液吐出機構を前記容器上方で走査可能な吐出移動機構と、を有し、前記細胞懸濁液を線状に吐出して、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成してよい。
【0039】
前記細胞播種装置は、培地液が充填された任意の容器に細胞懸濁液を吐出する細胞懸濁液吐出機構と、前記容器を移動させる容器移動機構と、を有し、前記細胞懸濁液を線状に吐出して、１つの線または複数の線から構成された前記細胞懸濁液を形成してよい。
【0040】
前記細胞播種装置において、前記細胞懸濁液吐出機構は、前記細胞懸濁液の単位時間あたり吐出量を調整可能であってよい。
【0041】
前記細胞播種装置においては、培地液が充填された容器に対して吐出される前記細胞懸濁液の線パターンを自在に変更可能であってよい。
【発明の効果】
【0042】
本発明の細胞播種方法および細胞播種装置によれば、培地液が充填された容器に対して細胞を均一に播種可能である。
【0043】
さらに、細胞播種方法または細胞播種装置により実現される細胞入容器を用いれば、均一に細胞を存在させることにより、安定してより多くの細胞を培養できる。
【図面の簡単な説明】
【0044】
【図1】本発明の第一実施形態に係る細胞入容器の一例を示す模式図である。
【図2】本発明の第一実施形態に係る細胞入容器の他の例を示す模式図である。
【図3】本発明の第一実施形態に係る細胞播種装置の第一例を示す模式図である。
【図4】本発明の第一実施形態に係る細胞播種装置の第二例を示す模式図である。
【図5】本発明の第一実施形態に係る細胞播種装置の第三例を示す模式図である。
【図6】本発明の第一実施形態に係る細胞播種装置の第四例を示す模式図である。
【図7】比較例１における容器内の細胞分布を示した図である。
【図8】実施例１における容器内の細胞分布を示した図である。
【図9】実施例２における容器内の細胞分布を示した図である。
【図10】実施例３における容器内の細胞分布を示した図である。
【図11】実施例４における容器内の細胞分布を示した図である。
【図12】実施例１～４で細胞を５日間培養した際の生細胞数を示したグラフである。
【図13】本発明の第二実施形態に係る細胞入容器の第一例を示す模式図である。
【図14】本発明の第二実施形態に係る細胞入容器の第二例を示す模式図である。
【図15】本発明の第二実施形態に係る細胞播種装置の第一例を示す模式図である。
【図16】本発明の第二実施形態に係る細胞播種装置の第二例を示す模式図である。
【図17】本発明の第二実施形態に係る細胞播種装置の第三例を示す模式図である。
【図18】実施例５における容器内の細胞分布を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【0045】
本発明による細胞入容器、細胞播種方法および細胞播種装置の実施形態について、図を用いて説明する。以下に示す実施形態は、発明の技術的思考を具体化するための、細胞入容器、細胞播種方法、細胞播種装置の一例であって、本発明を特定するものではない。また、図示する実施形態は発明の実施形態の一事例にすぎず、寸法、形状、構造、配置などを限定するものではない。
【0046】
（第一実施形態）
図１～１２を参照して、本発明による細胞入容器、細胞播種方法および細胞播種装置の第一実施形態について説明する。
図１～１２を参照して、本発明による細胞入容器、細胞播種方法および細胞播種装置の第一実施形態について説明する。
【0047】
（細胞入容器）
図１（ａ）は、細胞入容器１の平面図を示している。図１（ｂ）は、図１（ａ）のＡ－Ａ線断面図である。図１等においては、Ｚ軸方向が上下方向を示しており、Ｚ軸正方向が上方向を示している。また、Ｘ軸方向及びＹ軸方向は、Ｚ軸方向に直交する水平方向である。Ｘ軸方向は横方向であり、Ｙ軸方向はＸ軸方向に直交する縦方向である。
図１に示すように、細胞入容器１は、培地液１１が充填された容器１０に、細胞懸濁液１２を入れたものである。容器１０に充填された培地液１１には、細胞懸濁液１２が多点（少なくとも２つ以上）に存在している。培地液１１において隣り合う細胞懸濁液１２同士は、例えば図１に例示するように互いに間隔をあけて存在していてもよいし、例えば互いに接触して存在していてもよい。
図１（ａ）は、細胞入容器１の平面図を示している。図１（ｂ）は、図１（ａ）のＡ－Ａ線断面図である。図１等においては、Ｚ軸方向が上下方向を示しており、Ｚ軸正方向が上方向を示している。また、Ｘ軸方向及びＹ軸方向は、Ｚ軸方向に直交する水平方向である。Ｘ軸方向は横方向であり、Ｙ軸方向はＸ軸方向に直交する縦方向である。
図１に示すように、細胞入容器１は、培地液１１が充填された容器１０に、細胞懸濁液１２を入れたものである。容器１０に充填された培地液１１には、細胞懸濁液１２が多点（少なくとも２つ以上）に存在している。培地液１１において隣り合う細胞懸濁液１２同士は、例えば図１に例示するように互いに間隔をあけて存在していてもよいし、例えば互いに接触して存在していてもよい。
【0048】
図１（ａ）において、細胞懸濁液１２は、培地液１１が充填された容器１０に対して、Ｎx×Ｎｙの播種点数で縦横に配列されている。ＮxはＸ軸方向における播種点数を示し、ＮｙはＹ軸方向における播種点数を示している。また、細胞懸濁液１２は、Ｐｘ×Ｐｙの播種ピッチで配列されている。ＰｘはＸ軸方向における細胞懸濁液１２同士の播種ピッチを示し、ＰｙはＹ軸方向における細胞懸濁液１２同士の播種ピッチを示している。図１に示す細胞入容器１では、容器１０に充填された培地液１１に細胞懸濁液１２が多点（少なくとも２つ以上）に存在していることで、均一に細胞が存在している。
【0049】
容器１０における細胞懸濁液１２の播種点数Ｎx×Ｎｙおよび播種ピッチＰｘ×Ｐｙには、細胞懸濁液１２の細胞濃度、細胞種、量に応じた最適値が存在することが考えられる。このため、細胞懸濁液１２の播種点数Ｎx×Ｎｙおよび播種ピッチＰｘ×Ｐｙは、あらかじめ実験にて最適な条件を求めておくと尚よい。
【0050】
細胞懸濁液１２は、図１（ａ）に例示するように、上方から見た容器１０の中心点に対して対称に存在することが望ましい。この場合、容器１０の培地液１１内において細胞懸濁液１２がより均一な条件になる。
【0051】
図２（ａ）～（ｅ）は、培地液１１が充填された容器１０に対して、平面格子状に細胞懸濁液１２が存在している例を示している。図２（ａ）、図２（ｂ）、図２（ｃ）、図２（ｄ）および図２（ｅ）は、平面格子がそれぞれ斜方格子、六方格子、正方格子、長方格子および面心長方格子であるものを示している。細胞懸濁液１２の格子パターンは、図２（ａ）～（ｅ）に例示したいずれの平面格子でもよいし、図２（ａ）～（ｅ）以外の格子パターンであってもよい。なお、図１（ａ）に例示した格子パターンは、図２（ｃ）と同様の正方格子である。
図２（ｆ）は、培地液１１が充填された容器１０に対して、列状（例えば一列）に細胞懸濁液１２が存在している例を示している。細胞懸濁液１２を列状に存在させるパターン（列パターン）は、図２（ｆ）に例示したように容器１０が細長い形状をしている場合などに実施可能である。
図２（ｆ）は、培地液１１が充填された容器１０に対して、列状（例えば一列）に細胞懸濁液１２が存在している例を示している。細胞懸濁液１２を列状に存在させるパターン（列パターン）は、図２（ｆ）に例示したように容器１０が細長い形状をしている場合などに実施可能である。
【0052】
（細胞播種装置）
次に、上記した細胞入容器１を実現するための細胞播種装置について説明する。
図３は、第一例の細胞播種装置１００Ａを示している。この細胞播種装置１００Ａは、培地液１１が充填された容器１０に対して、図１，２に例示したように多点（少なくとも２点以上）で細胞懸濁液１２を滴下するためのものである。細胞播種装置１００Ａは、細胞懸濁液吐出機構１０２と、吐出移動機構１０１ａと、を有する。
次に、上記した細胞入容器１を実現するための細胞播種装置について説明する。
図３は、第一例の細胞播種装置１００Ａを示している。この細胞播種装置１００Ａは、培地液１１が充填された容器１０に対して、図１，２に例示したように多点（少なくとも２点以上）で細胞懸濁液１２を滴下するためのものである。細胞播種装置１００Ａは、細胞懸濁液吐出機構１０２と、吐出移動機構１０１ａと、を有する。
【0053】
細胞懸濁液吐出機構１０２は、培地液１１が充填された容器１０に細胞懸濁液１２を吐出する。具体的に、細胞懸濁液吐出機構１０２は、細胞懸濁液１２を吐出する吐出部１０２ａを有する。図３に例示する細胞懸濁液吐出機構１０２は、吐出部１０２ａを１つ有する。吐出部１０２ａを含む細胞懸濁液吐出機構１０２は、例えばピペット、シリンジポンプ、ディスペンサーなどのように定量吐出可能であってよい。また、細胞懸濁液吐出機構１０２は、細胞懸濁液１２の吐出量を調整可能であってよい。また、細胞懸濁液吐出機構１０２は、例えばピペット、シリンジポンプ、ディスペンサーのように吐出速度を制御可能であってよい。
【0054】
細胞懸濁液吐出機構１０２は、吐出移動機構１０１ａに取り付けられている。吐出移動機構１０１ａは、細胞懸濁液吐出機構１０２をＸ軸方向（横方向）、Ｙ軸方向（縦方向）およびＺ軸方向（高さ方向）に移動させるように構成されている。吐出移動機構１０１ａは、Ｘ軸移動部１０１ａ１、Ｙ軸移動部１０１ａ２およびＺ軸移動部１０１ａ３を有する。Ｘ軸移動部１０１ａ１、Ｙ軸移動部１０１ａ２、Ｚ軸移動部１０１ａ３は、それぞれ細胞懸濁液吐出機構１０２をＸ軸方向、Ｙ軸方向、Ｚ軸方向に移動させる。Ｘ軸移動部１０１ａ１およびＹ軸移動部１０１ａ２は、細胞懸濁液吐出機構１０２を容器１０の上方でＸ軸方向およびＹ軸方向に走査可能とし、図３（ａ）に示すように細胞懸濁液吐出機構１０２の平面格子状の移動を実現する。なお、図示しないが、Ｘ軸移動部１０１ａ１やＹ軸移動部１０１ａ２は、細胞懸濁液吐出機構１０２の列状の移動も実現する。Ｚ軸移動部１０１ａ３は、図３（ｂ）に示すように細胞懸濁液吐出機構１０２の培地液１１へのアクセスを実現する。図３においては、細胞懸濁液吐出機構１０２がＸ軸移動部１０１ａ１に取り付けられ、Ｘ軸移動部１０１ａ１がＹ軸移動部１０１ａ２に取り付けられ、Ｙ軸移動部１０１ａ２がＺ軸移動部１０１ａ３に取り付けられているが、これに限ることはない。
【0055】
以上のように構成される細胞播種装置１００Ａでは、細胞懸濁液吐出機構１０２がＸ軸方向やＹ軸方向に予め設定された距離（播種ピッチ）だけ移動するごとに、細胞懸濁液１２を容器１０（培地液１１）に向けて吐出（滴下）することで、細胞懸濁液１２を平面格子状または列状に存在させることができる。すなわち、図１，２に例示したような細胞入容器１が得られる。
【0056】
なお、細胞播種装置１００Ａでは、容器１０に対して平面格子状または列状に細胞懸濁液１２を吐出する際に、平面格子または列の、吐出間隔（播種ピッチ）およびパターン種を変更可能である。平面格子のパターン種（格子パターン）には、例えば斜方格子、六方格子、正方格子、長方格子、面心長方格子などがある。これにより、同一の細胞播種装置１００Ａによって、様々な播種ピッチ、パターン種を有する細胞入容器１を得ることができる。
【0057】
図３に示すような細胞播種装置１００Ａを使用せずとも、作業者がピペットなどを用いて細胞懸濁液１２を培地液１１で満たされた容器１０に対して播種することも可能である。しかし、作業者による細胞懸濁液１２の播種では、播種の位置精度や再現性が低いため、均等な間隔で細胞懸濁液１２を吐出するには難度を有する。また、作業者の手や腕などが容器１０の上を何度となく行き来するため、作業者の手や腕が汚染されていた場合に、コンタミネーションのリスクが発生する。
これに対し、図３に示すような細胞播種装置１００Ａを用いる場合には、吐出移動機構１０１ａは決められた範囲内を高い再現性で移動できるため、均等な間隔で細胞懸濁液１２を吐出することができる。すなわち、細胞播種装置１００Ａでは、均一に細胞が存在する細胞入容器を実現することができる。均一に細胞が存在する細胞入容器を実現できることで、安定してより多くの細胞を培養することができる。また、前述したコンタミネーションのリスクを低減することも可能である。
これに対し、図３に示すような細胞播種装置１００Ａを用いる場合には、吐出移動機構１０１ａは決められた範囲内を高い再現性で移動できるため、均等な間隔で細胞懸濁液１２を吐出することができる。すなわち、細胞播種装置１００Ａでは、均一に細胞が存在する細胞入容器を実現することができる。均一に細胞が存在する細胞入容器を実現できることで、安定してより多くの細胞を培養することができる。また、前述したコンタミネーションのリスクを低減することも可能である。
【0058】
播種する細胞懸濁液１２の細胞濃度、細胞種、量（吐出量）、または吐出する細胞懸濁液１２の吐出速度により、播種点における細胞の拡散度合は異なる。そのため、播種点数Ｎx×Ｎｙおよび播種ピッチＰｘ×Ｐｙは、細胞懸濁液１２の細胞濃度、細胞種、量によって最適値が存在すると考えられ、予備実験にて最適な条件を求めておくと尚よい。
【0059】
図４は、第二例の細胞播種装置１００Ｂを示している。細胞播種装置１００Ｂは、培地液１１が充填された容器１０に対して多点（少なくとも２点以上）で細胞懸濁液１２を滴下するためのものである。細胞播種装置１００Ｂは、細胞懸濁液吐出機構１０２と、容器移動機構１０１ｂと、を有する。細胞懸濁液吐出機構１０２は、第一例の細胞播種装置１００Ａ（図３参照）と同様である。
容器移動機構１０１ｂは、容器１０をＸ軸方向、Ｙ軸方向およびＺ軸方向に移動させる。具体的に、容器移動機構１０１ｂは、容器１０を載置するように構成されている。容器移動機構１０１ｂは、細胞懸濁液吐出機構１０２の下方に配置され、細胞懸濁液吐出機構１０２に対してＸ軸方向、Ｙ軸方向およびＺ軸方向に移動する。これにより、容器１０が細胞懸濁液吐出機構１０２の下方でＸ軸方向およびＹ軸方向に移動可能となる。その結果として、図４（ａ）に示すように容器１０に対する細胞懸濁液吐出機構１０２の平面格子状の移動が実現する。なお、図示しないが、細胞懸濁液吐出機構１０２の列状の移動も実現する。また、容器移動機構１０１ｂのＺ軸方向への移動により、図３（ｂ）に示すように細胞懸濁液吐出機構１０２の培地液１１へのアクセスが実現する。
第二例の細胞播種装置１００Ｂは、前述した第一例の細胞播種装置１００Ａと同様に動作することができ、第一例の細胞播種装置１００Ａと同様の効果を奏する。
容器移動機構１０１ｂは、容器１０をＸ軸方向、Ｙ軸方向およびＺ軸方向に移動させる。具体的に、容器移動機構１０１ｂは、容器１０を載置するように構成されている。容器移動機構１０１ｂは、細胞懸濁液吐出機構１０２の下方に配置され、細胞懸濁液吐出機構１０２に対してＸ軸方向、Ｙ軸方向およびＺ軸方向に移動する。これにより、容器１０が細胞懸濁液吐出機構１０２の下方でＸ軸方向およびＹ軸方向に移動可能となる。その結果として、図４（ａ）に示すように容器１０に対する細胞懸濁液吐出機構１０２の平面格子状の移動が実現する。なお、図示しないが、細胞懸濁液吐出機構１０２の列状の移動も実現する。また、容器移動機構１０１ｂのＺ軸方向への移動により、図３（ｂ）に示すように細胞懸濁液吐出機構１０２の培地液１１へのアクセスが実現する。
第二例の細胞播種装置１００Ｂは、前述した第一例の細胞播種装置１００Ａと同様に動作することができ、第一例の細胞播種装置１００Ａと同様の効果を奏する。
【0060】
細胞播種装置は、例えば吐出移動機構１０１ａおよび容器移動機構１０１ｂの両方を有していてもよい。
ただし、細胞懸濁液１２の細胞濃度、細胞種、量によっては、培地液１１および細胞懸濁液１２が容器１０内で移動することで、均一な細胞懸濁液１２の分散には不向きとなることも想定される。この場合には、容器移動機構１０１ｂを有さない細胞播種装置、あるいは、容器移動機構１０１ｂを用いない細胞播種方法を選択することが好ましい。
ただし、細胞懸濁液１２の細胞濃度、細胞種、量によっては、培地液１１および細胞懸濁液１２が容器１０内で移動することで、均一な細胞懸濁液１２の分散には不向きとなることも想定される。この場合には、容器移動機構１０１ｂを有さない細胞播種装置、あるいは、容器移動機構１０１ｂを用いない細胞播種方法を選択することが好ましい。
【0061】
図５は、第三例の細胞播種装置１００Ｃを示している。細胞播種装置１００Ｃは、培地液１１が充填された容器１０に対して多点（少なくとも２点以上）で細胞懸濁液１２を滴下するためのものである。この細胞播種装置１００Ｃは、細胞懸濁液吐出機構１０２が吐出部１０２ａを複数（図５（ｂ）では４つ）有する点を除いて、第一例の細胞播種装置１００Ｃと同じである。この細胞播種装置１００Ｃでは、吐出移動機構１０１ａの１回の移動で複数の細胞懸濁液１２を吐出することができる。これにより、細胞懸濁液吐出機構１０２の吐出部１０２ａが１つである場合と比較して、より早く容器１０に対する複数の細胞懸濁液１２の滴下処理を実現することができる。
細胞懸濁液吐出機構１０２の吐出部１０２ａを複数とする構成は、第二例の細胞播種装置１００Ｂにも適用可能である。
細胞懸濁液吐出機構１０２の吐出部１０２ａを複数とする構成は、第二例の細胞播種装置１００Ｂにも適用可能である。
【0062】
図６は、第四例の細胞播種装置１００Ｄを示している。細胞播種装置１００Ｄは、培地液１１が充填された容器１０に対して多点（少なくとも２点以上）で細胞懸濁液１２を滴下するためのものである。この細胞播種装置１００Ｄでは、細胞懸濁液吐出機構１０２をＸ軸方向（横方向）、Ｙ軸方向（縦方向）およびＺ軸方向（高さ方向）に移動させる吐出移動機構１０１ａが、ロボットで構成されている。
【0063】
第四例の細胞播種装置１００Ｄは、前述した第一例の細胞播種装置１００Ａと同様に動作することが可能であり、第一例の細胞播種装置１００Ａと同様の効果を奏し得る。
また、第四例の細胞播種装置１００Ｄでは、細胞懸濁液吐出機構１０２を複雑に動かすことができる。したがって、第四例の細胞播種装置１００Ｄは、容器１０に対する細胞懸濁液１２の播種に際して細胞懸濁液吐出機構１０２に複雑な動作が要求される場合に好適である。
また、第四例の細胞播種装置１００Ｄでは、細胞懸濁液吐出機構１０２を複雑に動かすことができる。したがって、第四例の細胞播種装置１００Ｄは、容器１０に対する細胞懸濁液１２の播種に際して細胞懸濁液吐出機構１０２に複雑な動作が要求される場合に好適である。
【0064】
（細胞播種方法）
次に、前述した細胞入容器１（図１，２参照）を実現するための細胞播種方法について説明する。
細胞播種方法では、培地液１１が充填された容器１０に対して、図１，２に例示したように多点（少なくとも２点以上）で細胞懸濁液１２を滴下する。この細胞播種方法は、例えば培地液１１が充填された容器１０に細胞懸濁液１２を吐出する細胞懸濁液吐出手段と、細胞懸濁液吐出手段を容器１０上方で走査可能な吐出移動手段を有し、多点（少なくとも２点以上）で細胞懸濁液１２を吐出してよい。細胞懸濁液吐出手段は、細胞懸濁液１２の吐出量や吐出速度を調整可能であってよい。細胞懸濁液吐出手段は、１つ又は複数の吐出部を有してよい。また、細胞播種方法では、容器１０に対して平面格子状または列状に細胞懸濁液１２を吐出する際に、平面格子または列の、吐出間隔（播種ピッチ）およびパターン種を変更可能であってよい。
次に、前述した細胞入容器１（図１，２参照）を実現するための細胞播種方法について説明する。
細胞播種方法では、培地液１１が充填された容器１０に対して、図１，２に例示したように多点（少なくとも２点以上）で細胞懸濁液１２を滴下する。この細胞播種方法は、例えば培地液１１が充填された容器１０に細胞懸濁液１２を吐出する細胞懸濁液吐出手段と、細胞懸濁液吐出手段を容器１０上方で走査可能な吐出移動手段を有し、多点（少なくとも２点以上）で細胞懸濁液１２を吐出してよい。細胞懸濁液吐出手段は、細胞懸濁液１２の吐出量や吐出速度を調整可能であってよい。細胞懸濁液吐出手段は、１つ又は複数の吐出部を有してよい。また、細胞播種方法では、容器１０に対して平面格子状または列状に細胞懸濁液１２を吐出する際に、平面格子または列の、吐出間隔（播種ピッチ）およびパターン種を変更可能であってよい。
【0065】
なお、細胞播種方法は、吐出移動手段に代えて、例えば容器１０を細胞懸濁液吐出手段に対して移動させる容器移動手段を有してもよい。また、細胞播種方法は、上記の吐出移動手段および容器移動手段の両方を有してよい。
上記した細胞播種方法は、例えば図３～６に示したような細胞播種装置１００Ａ～１００Ｄなどを用いることで実現することができる。
上記した細胞播種方法は、例えば図３～６に示したような細胞播種装置１００Ａ～１００Ｄなどを用いることで実現することができる。
【0066】
以下、第一実施形態の細胞入容器、細胞播種方法について、１つの比較例および４つの実施例（実施例１～４）を用いてさらに説明する。本発明は、４つの実施例の具体的内容により、何ら限定されない。
【0067】
（比較例１）
先ず、比較例１について説明する。
比較例１では、培養容器（容器１０）に対し、培地液を７７．８ｍｌ充填した後、作業者がピペットを用いて細胞懸濁液を滴下させた。図７に例示するように、細胞懸濁液１２の滴下点は容器１０の中央近傍の1点である。
培地液の組成は、基礎培地ＤＭＥＭ、ウシ胎児血清ＦＢＳ、ペニシリンストレプトマイシン溶液をそれぞれ体積比で８９％、１０％および１％である。
細胞懸濁液は、ヒト皮膚繊維芽細胞ＮＨＤＦを培地液で懸濁したものを使用した。
培養容器に滴下する細胞総数は、３．０×１０６個になるように、細胞懸濁液の濃度を１．４×１０６ 個/ｍｌに調整し、２２００ｕｌ滴下した。
また、培地総量は８０ｍｌになるようにした。
先ず、比較例１について説明する。
比較例１では、培養容器（容器１０）に対し、培地液を７７．８ｍｌ充填した後、作業者がピペットを用いて細胞懸濁液を滴下させた。図７に例示するように、細胞懸濁液１２の滴下点は容器１０の中央近傍の1点である。
培地液の組成は、基礎培地ＤＭＥＭ、ウシ胎児血清ＦＢＳ、ペニシリンストレプトマイシン溶液をそれぞれ体積比で８９％、１０％および１％である。
細胞懸濁液は、ヒト皮膚繊維芽細胞ＮＨＤＦを培地液で懸濁したものを使用した。
培養容器に滴下する細胞総数は、３．０×１０６個になるように、細胞懸濁液の濃度を１．４×１０６ 個/ｍｌに調整し、２２００ｕｌ滴下した。
また、培地総量は８０ｍｌになるようにした。
【0068】
細胞懸濁液の滴下後に、作業者が容器をゆすって細胞を培地に拡散させた。その後、１５分間静置させた後にインキュベーターへ投入し、５日間培養させた。
【0069】
図７に、５日間培養した容器１０内の細胞の分布を示す。図７に示す画像１ａは細胞懸濁液１２の滴下点直下の顕微鏡画像である。画像１ｂは画像１ａよりも細胞が疎と想定される部分の顕微鏡画像である。画像１ｃは画像１ｂよりも細胞が疎な状態と想定される部分の顕微鏡画像である。滴下点直下の画像１ａでは、コンフルエンシー１００％を超えて細胞が密集していた。画像１ｂでは、画像１ａほどではないが密に細胞が培養されていた。また、画像１ｃでは、細胞がほぼ存在していなかった。つまり、この方法では、容器全体に細胞を拡散できず、容器面内で細胞の均一な培養ができないことが分かった。
【0070】
次に、実施例１～４について説明する。実施例１～４では、同一形状および大きさの培養容器（容器１０）を用い、表１に示すように互いに異なる条件で細胞懸濁液を滴下させている。以下、実施例１～４について順番に説明する。
【0071】
【表1】
【0072】
（実施例１）
実施例１では、図８に示すように、上方から見て正方形状の培養容器（容器１０）に対し、培地液を７９．１ｍｌ充填した後、表１の実施例１に示す条件（播種点数、播種ピッチの条件）にて列状に細胞懸濁液１２を滴下させた。列状に滴下された細胞懸濁液１２は、上方から見た容器１０の中心点に対して対称に存在する。そして、細胞懸濁液１２の播種ピッチ（横方向の播種ピッチ）は小さい。このため、横方向に列状に滴下された細胞懸濁液１２は、上方から見た容器１０の中央部分に密集している。
培地液の組成は、基礎培地ＤＭＥＭ、ウシ胎児血清ＦＢＳ、ペニシリンストレプトマイシン溶液をそれぞれ体積比で８９％、１０％および１％である。
また細胞懸濁液は、ヒト皮膚繊維芽細胞ＮＨＤＦを培地液で懸濁したものを使用した。
培養容器に滴下する細胞総数は、３．０×１０６個になるように細胞懸濁液濃度を調整してある。また、培地総量も８０ｍｌになるようにした。
実施例１では、図８に示すように、上方から見て正方形状の培養容器（容器１０）に対し、培地液を７９．１ｍｌ充填した後、表１の実施例１に示す条件（播種点数、播種ピッチの条件）にて列状に細胞懸濁液１２を滴下させた。列状に滴下された細胞懸濁液１２は、上方から見た容器１０の中心点に対して対称に存在する。そして、細胞懸濁液１２の播種ピッチ（横方向の播種ピッチ）は小さい。このため、横方向に列状に滴下された細胞懸濁液１２は、上方から見た容器１０の中央部分に密集している。
培地液の組成は、基礎培地ＤＭＥＭ、ウシ胎児血清ＦＢＳ、ペニシリンストレプトマイシン溶液をそれぞれ体積比で８９％、１０％および１％である。
また細胞懸濁液は、ヒト皮膚繊維芽細胞ＮＨＤＦを培地液で懸濁したものを使用した。
培養容器に滴下する細胞総数は、３．０×１０６個になるように細胞懸濁液濃度を調整してある。また、培地総量も８０ｍｌになるようにした。
【0073】
細胞懸濁液の播種後、１５分間静置させた後にインキュベーターへ投入し、５日間培養させた。
【0074】
図８に５日間培養した容器１０内の細胞の分布を示す。図８に示す画像４ａは細胞懸濁液１２の滴下点直下の顕微鏡画像である。画像４ｂは横方向に隣り合う滴下点（細胞懸濁液１２）の中点部分の顕微鏡画像である。画像４ｃは細胞が疎な状態と想定される部分の顕微鏡画像である。
図８に示すように、画像４ａおよび画像４ｂでは、コンフルエンシー１００％を超えて細胞が密に培養されている。一方、画像４ｃには細胞がほぼ存在していなかった。
図８に示すように、画像４ａおよび画像４ｂでは、コンフルエンシー１００％を超えて細胞が密に培養されている。一方、画像４ｃには細胞がほぼ存在していなかった。
【0075】
図１２及び表１に示すように、容器から回収された生細胞数は、試行回数３回の平均値で１０．９×１０６個であった。
【0076】
（実施例２）
実施例２では、図９に示すように、培養容器（容器１０）に対し、培地液を７９．１ｍｌ充填した後、表１の実施例２に示す条件（播種点数、播種ピッチの条件）にて実施例１と同様に列状に細胞懸濁液１２を滴下させた。
実施例２の条件は、実施例１の条件と比較して、播種ピッチの条件のみが異なっている。実施例２の播種ピッチは、実施例１の播種ピッチの３倍程度となっている。このため、列状に滴下された細胞懸濁液１２は、実施例１と比較して容器１０の横方向に分散している。実施例２の他の条件は、実施例１と全て同じである。例えば実施例２の培地液および細胞懸濁液は、実施例１と同組成である。また、実施例２の培地総量も実施例１と同量の８０ｍｌになる。さらに、実施例２において培養容器に滴下する細胞総数は、３．０×１０６である。
実施例（実施例４）に比べ、播種点数を３２分の１に間引き、列状に播種した条件である。
実施例２では、図９に示すように、培養容器（容器１０）に対し、培地液を７９．１ｍｌ充填した後、表１の実施例２に示す条件（播種点数、播種ピッチの条件）にて実施例１と同様に列状に細胞懸濁液１２を滴下させた。
実施例２の条件は、実施例１の条件と比較して、播種ピッチの条件のみが異なっている。実施例２の播種ピッチは、実施例１の播種ピッチの３倍程度となっている。このため、列状に滴下された細胞懸濁液１２は、実施例１と比較して容器１０の横方向に分散している。実施例２の他の条件は、実施例１と全て同じである。例えば実施例２の培地液および細胞懸濁液は、実施例１と同組成である。また、実施例２の培地総量も実施例１と同量の８０ｍｌになる。さらに、実施例２において培養容器に滴下する細胞総数は、３．０×１０６である。
実施例（実施例４）に比べ、播種点数を３２分の１に間引き、列状に播種した条件である。
【0077】
細胞懸濁液の播種後、１５分間静置させた後にインキュベーターへ投入し、５日間培養させた。
【0078】
図９に５日間培養した容器１０内の細胞の分布を示す。図９に示す画像３ａは細胞懸濁液の滴下点直下の顕微鏡画像である。画像３ｂは横方向に隣り合う滴下点（細胞懸濁液１２）の中点部分の顕微鏡画像である。画像３ｃは細胞が最も疎な状態と想定される点近傍の顕微鏡画像である。
図９に示すように、画像３ａおよび画像３ｂでは、密に培養されていた。また、画像３ｃでは細胞は存在していなかった。
図９に示すように、画像３ａおよび画像３ｂでは、密に培養されていた。また、画像３ｃでは細胞は存在していなかった。
【0079】
図１２及び表１に示すように、容器から回収された生細胞数は、試行回数３回の平均値で１３．９×１０６個であった。
【0080】
実施例２では、実施例１と同様に、細胞が容器面内で不均一に培養されている。ただし、実施例２では、実施例１と比較して、培養された細胞数が増加している。この結果は、播種ピッチをある程度大きくすることで、細胞の過度な密集を抑制できたためであると考えられる。
【0081】
（実施例３）
実施例３では、図１０に示すように、培養容器（容器１０）に対し、培地液を７６．２ｍｌ充填した後、表１の実施例３に示す条件（播種点数、播種ピッチの条件）にて長方格子状に細胞懸濁液１２を滴下させた。細胞懸濁液１２が長方格子状に配列されていることで、横方向の播種ピッチＰｘが縦方向の播種ピッチＰｙよりも小さくなっている。
実施例３の条件は、実施例１，２に対し、平面格子状に播種した条件となっている。また、実施例３の播種点数は、実施例１，２の４倍となっている。実施例３の他の条件は、実施例２と全て同じである。例えば実施例３の横方向の播種ピッチＰｘは、実施例２と同じである。また、培地液および細胞懸濁液は、実施例２（実施例１）と同組成である。また、実施例３の培地総量も実施例２（実施例１）と同量の８０ｍｌになる。さらに、実施例３において培養容器に滴下する細胞総数は、３．０×１０６個である。
実施例３では、図１０に示すように、培養容器（容器１０）に対し、培地液を７６．２ｍｌ充填した後、表１の実施例３に示す条件（播種点数、播種ピッチの条件）にて長方格子状に細胞懸濁液１２を滴下させた。細胞懸濁液１２が長方格子状に配列されていることで、横方向の播種ピッチＰｘが縦方向の播種ピッチＰｙよりも小さくなっている。
実施例３の条件は、実施例１，２に対し、平面格子状に播種した条件となっている。また、実施例３の播種点数は、実施例１，２の４倍となっている。実施例３の他の条件は、実施例２と全て同じである。例えば実施例３の横方向の播種ピッチＰｘは、実施例２と同じである。また、培地液および細胞懸濁液は、実施例２（実施例１）と同組成である。また、実施例３の培地総量も実施例２（実施例１）と同量の８０ｍｌになる。さらに、実施例３において培養容器に滴下する細胞総数は、３．０×１０６個である。
【0082】
細胞懸濁液の播種後、１５分間静置させた後にインキュベーターへ投入し、５日間培養させた。
【0083】
図１０に５日間培養した容器１０内の細胞の分布を示す。図１０に示す画像２ａは細胞懸濁液を滴下点直下の顕微鏡画像である。画像２ｂは横方向に隣り合う滴下点（細胞懸濁液１２）の中点部分の顕微鏡画像である。画像２ｃは細胞が最も疎な状態と想定される点近傍の顕微鏡画像である。
図１０に示すように、画像２ａでは、密に細胞が培養されている。しかし、画像２ｂや画像２ｃでは細胞が疎であり画像２ａに比べて明らかに細胞数が少ない。
図１０に示すように、画像２ａでは、密に細胞が培養されている。しかし、画像２ｂや画像２ｃでは細胞が疎であり画像２ａに比べて明らかに細胞数が少ない。
【0084】
図１２及び表１に示すように、容器から回収された生細胞数は、試行回数３回の平均値で２０．５×１０６個であった。
【0085】
実施例３では、容器面内で不均一に細胞が培養されている。ただし、実施例３では、実施例２と比較して、培養された細胞数がさらに増加している。この結果は、正方形状など縦横に長い容器では、細胞懸濁液１２を列状に配列するよりも平面格子状に配列する方が細胞を効率よく培養できることを意味していると考えられる。
【0086】
（実施例４）
実施例４では、図１１に示すように、培養容器（容器１０）に対し、培地液を４９．８ｍｌ充填した後、表１の実施例４に示す条件（播種点数、播種ピッチの条件）にて正方格子状に細胞懸濁液を滴下させた。細胞懸濁液１２が正方格子状に配列されていることで、横方向の播種ピッチＰｘと縦方向の播種ピッチＰｙとが等しい。
実施例４の播種点数は、実施例３の８倍となっている。また、実施例４における横方向の播種ピッチＰｘおよび縦方向の播種ピッチＰｙは、いずれも実施例３よりも小さい、実施例４の他の条件は、実施例１と全て同じである。例えば培地液および細胞懸濁液は、実施例１と同組成である。また、実施例４の培地総量も実施例１と同量の８０ｍｌになる。さらに、実施例４において培養容器に滴下する細胞総数は、３．０×１０６個である。
実施例４では、図１１に示すように、培養容器（容器１０）に対し、培地液を４９．８ｍｌ充填した後、表１の実施例４に示す条件（播種点数、播種ピッチの条件）にて正方格子状に細胞懸濁液を滴下させた。細胞懸濁液１２が正方格子状に配列されていることで、横方向の播種ピッチＰｘと縦方向の播種ピッチＰｙとが等しい。
実施例４の播種点数は、実施例３の８倍となっている。また、実施例４における横方向の播種ピッチＰｘおよび縦方向の播種ピッチＰｙは、いずれも実施例３よりも小さい、実施例４の他の条件は、実施例１と全て同じである。例えば培地液および細胞懸濁液は、実施例１と同組成である。また、実施例４の培地総量も実施例１と同量の８０ｍｌになる。さらに、実施例４において培養容器に滴下する細胞総数は、３．０×１０６個である。
【0087】
細胞懸濁液の播種後、１５分間静置させた後にインキュベーターへ投入し、５日間培養させた。
【0088】
図１１に５日間培養した容器内の細胞の分布を示す。図１１に示す画像０ａは細胞懸濁液を滴下点直下の顕微鏡画像である。画像０ｂは横方向に隣り合う滴下点（細胞懸濁液１２）の中点部分の顕微鏡画像である。画像０ｃは細胞が最も疎な状態と想定される部分の顕微鏡画像である。
図１１に示すように、画像０ａ，０ｂ，０ｃのいずれにおいても、同等のコンフルエンシーであり、容器全面に均一に細胞が培養されていることを確認できた。
図１１に示すように、画像０ａ，０ｂ，０ｃのいずれにおいても、同等のコンフルエンシーであり、容器全面に均一に細胞が培養されていることを確認できた。
【0089】
図１２及び表１に示すように、容器から回収された生細胞数は、試行回数３回の平均値で２８．８×１０６個であった。
【0090】
実施例４では、実施例１～３と比較して容器面内で均一に培養されている。また、実施例４では、実施例３と比較して、培養された細胞数がさらに増加している。この結果は、播種間隔（ピッチ）をある程度狭くしつつ、かつ、播種点数を増やすことで、細胞の均一な培養が可能になったと考えられる。また、播種量を多くすることで細胞をより広い範囲に存在させることでも均一な培養は可能と考えられる。
【0091】
以上のように、容器１０の形状や大きさ、細胞懸濁液１２の細胞濃度、細胞腫、量に応じて、細胞の培養に最適な播種点数Ｎx×Ｎｙおよび播種ピッチＰｘ×Ｐｙが存在することが分かった。このような事柄に対し、第一実施形態の細胞播種装置や細胞播種方法では、播種ピッチ（吐出間隔）やパターン種（平面格子や列などのパターン種）を適宜変更可能である。これにより、最適な播種点数および播種ピッチで細胞の播種を行うことができる。
また、細胞懸濁吐出機構あるいは細胞懸濁吐出手段では、細胞懸濁液の吐出量や吐出速度を調整可能である。これにより、単一の滴下点に滴下される細胞懸濁液の量や範囲を適切に調整して、培養される細胞数のさらなる増加に寄与することができる。
また、細胞懸濁吐出機構あるいは細胞懸濁吐出手段では、細胞懸濁液の吐出量や吐出速度を調整可能である。これにより、単一の滴下点に滴下される細胞懸濁液の量や範囲を適切に調整して、培養される細胞数のさらなる増加に寄与することができる。
【0092】
（第二実施形態）
次に、図１３～１８を参照して、本発明による細胞入容器、細胞播種方法および細胞播種装置の第二実施形態について説明する。以降の説明において、既に説明したものと共通する構成については、同一の符号を付して重複する説明を省略する。
次に、図１３～１８を参照して、本発明による細胞入容器、細胞播種方法および細胞播種装置の第二実施形態について説明する。以降の説明において、既に説明したものと共通する構成については、同一の符号を付して重複する説明を省略する。
【0093】
（細胞入容器）
図１３（ａ）は、第二実施形態の第一例の細胞入容器２Ａを示している。図１３（ｂ）は、図１３（ａ）のＢ－Ｂ線断面図である。図１４（ａ）は、第二実施形態の第二例の細胞入容器２Ｂを示している。図１４（ｂ）は、図１４（ａ）のＣ－Ｃ線断面図である。
図１３（ａ）は、第二実施形態の第一例の細胞入容器２Ａを示している。図１３（ｂ）は、図１３（ａ）のＢ－Ｂ線断面図である。図１４（ａ）は、第二実施形態の第二例の細胞入容器２Ｂを示している。図１４（ｂ）は、図１４（ａ）のＣ－Ｃ線断面図である。
【0094】
図１３に示す第一例の細胞入容器２Ａ、および、図１４に示す第二例の細胞入容器２Ｂは、いずれも培地液１１が充填された容器１０に、細胞懸濁液１２を入れたものである。培地液１１は平面視した容器１０の全体にわたって均一に充填されている。容器１０には、細胞懸濁液１２が線状に播種されている。図１３（ｂ）、図１４（ｂ）に示すように、線状に播種された細胞懸濁液１２は、培地液１１の上部に播種されている。図１３（ａ）、図１４（ａ）に示すように、細胞懸濁液１２は、一筆書き状の１つの線から構成されている。細胞懸濁液１２の線は、例えば、直線のみ、あるいは、曲線のみによって形成されてよい。図１３および図１４に示す細胞入容器２Ａ，２Ｂにおいて、細胞懸濁液１２の線は、直線および曲線を組み合わせて形成されている。
【0095】
図１３に示す細胞入容器２Ａにおいて、細胞懸濁液１２の線は、Ｘ軸方向に蛇行する１つの線によって形成されている。具体的に、細胞懸濁液１２の蛇行する線は、それぞれＸ軸方向に延びると共に、Ｙ軸方向に間隔をあけて配列された複数の直線部と、Ｙ軸方向に隣り合う直線部同士をつなぐ半円状の曲線部と、を組み合わせて形成されている。
【0096】
図１３（ａ）に示す第一例の細胞入容器２Ａにおいて、Ｙ軸方向における細胞懸濁液１２の直線部のピッチＰは、細胞培養が安定化する任意のピッチであってよく、実験等により決定することができる。
また、図１３（ａ）に示す細胞入容器２Ａにおいて、細胞懸濁液１２の曲線部の曲率半径ｒは、細胞培養が安定化する任意の曲率半径であってよく、実験等により決定することができる。
また、図１３（ａ）に示す細胞入容器２Ａにおいて、Ｘ軸方向において容器１０の壁面から線状の細胞懸濁液１２に至るまでの距離Ｄｘ、および、Ｙ軸方向において容器１０の壁面から線状の細胞懸濁液１２に至るまでの距離Ｄｙは、それぞれ細胞培養が安定化する任意の距離であってよく、実験等により決定することができる。
また、図１３（ａ）に示す細胞入容器２Ａにおいて、細胞懸濁液１２の曲線部の曲率半径ｒは、細胞培養が安定化する任意の曲率半径であってよく、実験等により決定することができる。
また、図１３（ａ）に示す細胞入容器２Ａにおいて、Ｘ軸方向において容器１０の壁面から線状の細胞懸濁液１２に至るまでの距離Ｄｘ、および、Ｙ軸方向において容器１０の壁面から線状の細胞懸濁液１２に至るまでの距離Ｄｙは、それぞれ細胞培養が安定化する任意の距離であってよく、実験等により決定することができる。
【0097】
図１４に示す第二例の細胞入容器２Ｂにおいて、細胞懸濁液１２の線は、１つの渦巻き状の線によって形成されている。具体的に、細胞懸濁液１２の渦巻き状の線は、複数の直線部および曲線部を組み合わせてなる矩形の渦巻き状の線に形成されている。矩形の渦巻き状の辺は、Ｘ軸方向とＹ軸方向とに延びる。細胞懸濁液１２の線のうち、直線部は矩形の各辺に対応し、曲線部は矩形の各角部に対応する。互いに平行する複数の直線部は、渦巻き状の径方向（Ｘ軸方向、Ｙ軸方向）に間隔をあけて並んでいる。曲線部は、互いに直交する直線部同士をつなぐ。
【0098】
図１４（ａ）に示す細胞入容器２Ｂにおいて、Ｘ軸方向における細胞懸濁液１２の直線部のピッチＰｘ、および、Ｙ軸方向における細胞懸濁液１２の直線部のピッチＰｙは、細胞培養が安定化する任意のピッチであってよく、実験等により決定することができる。
また、図１４（ａ）に示す細胞入容器２Ｂにおいて、Ｘ軸方向において容器１０の壁面から線状の細胞懸濁液１２に至るまでの距離Ｄｘ、および、Ｙ軸方向において容器１０の壁面から線状の細胞懸濁液１２に至るまでの距離Ｄｙは、それぞれ細胞培養が安定化する任意の距離であってよく、実験等により決定することができる。
また、図１４（ａ）に示す細胞入容器２Ｂにおいて、Ｘ軸方向において容器１０の壁面から線状の細胞懸濁液１２に至るまでの距離Ｄｘ、および、Ｙ軸方向において容器１０の壁面から線状の細胞懸濁液１２に至るまでの距離Ｄｙは、それぞれ細胞培養が安定化する任意の距離であってよく、実験等により決定することができる。
【0099】
図１３および図１４で示した細胞懸濁液１２の線パターンは一例にすぎず、細胞培養が安定化する条件であれば、任意の線パターンであってよい。また、容器１０に播種された細胞懸濁液１２は、１つの線から構成されることに限らず、例えば複数の線から構成されてもよい。細胞懸濁液１２の線パターンは、例えば、それぞれＸ軸方向に延びる複数の直線によって構成され、これら複数の直線が、Ｙ軸方向に間隔をあけて配列されてもよい。
【0100】
（細胞播種装置）
次に、第二実施形態の細胞入容器２Ａ，２Ｂを実現するための細胞播種装置について説明する。
図１５は、第一例の細胞播種装置２００Ａを示している。細胞播種装置２００Ａは、培地液１１が充填された容器１０に対して、図１３，１４に例示したように細胞懸濁液１２を線状に滴下し、１つの線または複数の線から構成される細胞懸濁液１２を形成するためのものである。第一例の細胞播種装置２００Ａは、細胞懸濁液吐出機構２０２と、吐出移動機構２０１ａと、を有する。
次に、第二実施形態の細胞入容器２Ａ，２Ｂを実現するための細胞播種装置について説明する。
図１５は、第一例の細胞播種装置２００Ａを示している。細胞播種装置２００Ａは、培地液１１が充填された容器１０に対して、図１３，１４に例示したように細胞懸濁液１２を線状に滴下し、１つの線または複数の線から構成される細胞懸濁液１２を形成するためのものである。第一例の細胞播種装置２００Ａは、細胞懸濁液吐出機構２０２と、吐出移動機構２０１ａと、を有する。
【0101】
細胞懸濁液吐出機構２０２は、培地液１１が充填された容器１０に細胞懸濁液１２を吐出する。細胞懸濁液吐出機構２０２は、細胞懸濁液１２を継続して吐出することができる。細胞懸濁液吐出機構２０２には、細胞懸濁液１２の単位時間あたり吐出量を調整可能である電動ピペット、シリンジポンプ、ディスペンサーなどを使用することができる。
【0102】
細胞懸濁液吐出機構２０２は、吐出移動機構２０１ａに取り付けられている。吐出移動機構２０１ａは、細胞懸濁液吐出機構２０２をＸ軸方向（横方向）およびＹ軸方向（縦方向）に移動させるように構成されている。また、吐出移動機構２０１ａは、細胞懸濁液吐出機構２０２をＺ軸方向（高さ方向）にも移動させるように構成されている。吐出移動機構２０１ａは、Ｘ軸移動部２０１ａ１、Ｙ軸移動部２０１ａ２およびＺ軸移動部２０１ａ３を有する。Ｘ軸移動部２０１ａ１、Ｙ軸移動部２０１ａ２、Ｚ軸移動部２０１ａ３は、それぞれ細胞懸濁液吐出機構２０２をＸ軸方向、Ｙ軸方向、Ｚ軸方向に移動させる。Ｘ軸移動部２０１ａ１およびＹ軸移動部２０１ａ２は、細胞懸濁液吐出機構２０２を容器１０の上方でＸ軸方向およびＹ軸方向に走査可能とする。Ｘ軸移動部２０１ａ１およびＹ軸移動部２０１ａ２は、例えば図１５（ａ）に示すように、細胞懸濁液吐出機構２０２がＸ軸方向に蛇行するような移動を実現する。図示しないが、Ｘ軸移動部２０１ａ１およびＹ軸移動部２０１ａ２は、例えば細胞懸濁液吐出機構２０２の渦巻き状の移動なども実現できる。Ｚ軸移動部２０１ａ３は、図１５（ｂ）に示すように細胞懸濁液吐出機構２０２の培地液１１へのアクセスを実現する。図１５においては、細胞懸濁液吐出機構２０２がＸ軸移動部２０１ａ１に取り付けられ、Ｘ軸移動部２０１ａ１がＹ軸移動部２０１ａ２に取り付けられ、Ｙ軸移動部２０１ａ２がＺ軸移動部２０１ａ３に取り付けられているが、これに限ることはない。
【0103】
以上のように構成される細胞播種装置２００Ａでは、Ｘ軸移動部２０１ａ１およびＹ軸移動部２０１ａ２による細胞懸濁液吐出機構２０２のＸ軸方向およびＹ軸方向へのそれぞれの移動を制御しながら、細胞懸濁液吐出機構２０２が細胞懸濁液１２を継続的に吐出することで、細胞懸濁液１２を線状に吐出することができ、自在な播種曲線を実現可能である。すなわち、細胞播種装置２００Ａでは、容器１０に向けて吐出される細胞懸濁液１２の線パターンを自在に変更可能である。線パターンには、直線、曲線、あるいはこれら直線および曲線を組み合わせたものが含まれる。したがって、図１３，１４に例示したような細胞入容器２Ａ，２Ｂを得ることができる。
【0104】
図１６は、第二例の細胞播種装置２００Ｂを示している。細胞播種装置２００Ｂは、培地液１１が充填された容器１０に対して、図１３，１４に例示したように細胞懸濁液１２を線状に滴下し、１つの線または複数の線から構成される細胞懸濁液１２を形成するためのものである。細胞播種装置２００Ｂは、細胞懸濁液吐出機構２０２と、容器移動機構２０１ｂと、を有する。細胞懸濁液吐出機構２０２は、第一例の細胞播種装置２００Ａ（図１５参照）と同様である。
容器移動機構２０１ｂは、容器１０をＸ軸方向、Ｙ軸方向およびＺ軸方向に移動させる。具体的に、容器移動機構２０１ｂは、細胞懸濁液吐出機構２０２の下方に配置され、容器１０を載置するように構成されている。容器移動機構２０１ｂは、細胞懸濁液吐出機構２０２に対してＸ軸方向、Ｙ軸方向およびＺ軸方向に移動する。これにより、容器１０が細胞懸濁液吐出機構２０２の下方でＸ軸方向およびＹ軸方向に移動可能となる。その結果として、例えば図１６（ａ）に示すように容器１０に対する細胞懸濁液吐出機構２０２の蛇行した移動が実現する。なお、図示しないが、細胞懸濁液吐出機構２０２の渦巻き状の移動なども実現する。また、容器移動機構２０１ｂのＺ軸方向への移動により、図１６（ｂ）に示すように細胞懸濁液吐出機構２０２の培地液１１へのアクセスが実現する。
第二例の細胞播種装置２００Ｂは、前述した第一例の細胞播種装置２００Ａと同様に動作することができ、第一例の細胞播種装置２００Ａと同様の効果を奏する。
容器移動機構２０１ｂは、容器１０をＸ軸方向、Ｙ軸方向およびＺ軸方向に移動させる。具体的に、容器移動機構２０１ｂは、細胞懸濁液吐出機構２０２の下方に配置され、容器１０を載置するように構成されている。容器移動機構２０１ｂは、細胞懸濁液吐出機構２０２に対してＸ軸方向、Ｙ軸方向およびＺ軸方向に移動する。これにより、容器１０が細胞懸濁液吐出機構２０２の下方でＸ軸方向およびＹ軸方向に移動可能となる。その結果として、例えば図１６（ａ）に示すように容器１０に対する細胞懸濁液吐出機構２０２の蛇行した移動が実現する。なお、図示しないが、細胞懸濁液吐出機構２０２の渦巻き状の移動なども実現する。また、容器移動機構２０１ｂのＺ軸方向への移動により、図１６（ｂ）に示すように細胞懸濁液吐出機構２０２の培地液１１へのアクセスが実現する。
第二例の細胞播種装置２００Ｂは、前述した第一例の細胞播種装置２００Ａと同様に動作することができ、第一例の細胞播種装置２００Ａと同様の効果を奏する。
【0105】
細胞播種装置は、例えば吐出移動機構２０１ａおよび容器移動機構２０１ｂの両方を有していてもよい。
なお、容器移動機構２０１ｂを有する細胞播種装置では、動作条件によっては容器１０が移動することで培地液１１の液面が揺動することもあるため注意を要する。
なお、容器移動機構２０１ｂを有する細胞播種装置では、動作条件によっては容器１０が移動することで培地液１１の液面が揺動することもあるため注意を要する。
【0106】
図１７は、第三例の細胞播種装置２００Ｃを示している。細胞播種装置２００Ｃは、培地液１１が充填された容器１０に対して、図１３，１４に例示したように細胞懸濁液１２を線状に滴下し、１つの線または複数の線から構成される細胞懸濁液１２を形成するためのものである。この細胞播種装置２００Ｃでは、細胞懸濁液吐出機構２０２をＸ軸方向（横方向）、Ｙ軸方向（縦方向）およびＺ軸方向（高さ方向）に移動させる吐出移動機構２０１ａが、ロボットで構成されている。
【0107】
第三例の細胞播種装置２００Ｃは、前述した第一例の細胞播種装置２００Ａと同様に動作することが可能であり、第一例の細胞播種装置２００Ａと同様の効果を奏し得る。
また、第三例の細胞播種装置２００Ｃでは、細胞懸濁液吐出機構２０２を複雑に動かすことができる。したがって、第三例の細胞播種装置２００Ｃは、容器１０に対する細胞懸濁液１２の播種に際して細胞懸濁液吐出機構２０２に複雑な動作が要求される場合に好適である。
また、第三例の細胞播種装置２００Ｃでは、細胞懸濁液吐出機構２０２を複雑に動かすことができる。したがって、第三例の細胞播種装置２００Ｃは、容器１０に対する細胞懸濁液１２の播種に際して細胞懸濁液吐出機構２０２に複雑な動作が要求される場合に好適である。
【0108】
図１５～１７に示した第一例～第三例の細胞播種装置２００Ａ～２００Ｃを用いて細胞懸濁液１２を線状に播種することで、作業者が細胞懸濁液１２を播種する場合と比較して、播種量を精度良く制御することが可能となる。これにより、同一条件で安定した細胞培養を実現することができる。
また、図１５～１７に示した第一例～第三例の細胞播種装置２００Ａ～２００Ｃを用いることで、作業者の手や腕が頻繁に容器１０上を移動することがなくなり、安定した細胞培養を実現することができる。
また、図１５～１７に示した第一例～第三例の細胞播種装置２００Ａ～２００Ｃを用いることで、作業者の手や腕が頻繁に容器１０上を移動することがなくなり、安定した細胞培養を実現することができる。
【0109】
（細胞播種方法）
次に、第二実施形態の細胞入容器２Ａ，２Ｂを実現するための細胞播種方法について説明する。
第二実施形態の細胞播種方法では、培地液１１が充填された容器１０に対して、細胞懸濁液１２を線状に滴下し、１つの線または複数の線から構成される細胞懸濁液１２を形成する。この細胞播種方法は、例えば培地液１１が充填された容器１０に細胞懸濁液１２を吐出する細胞懸濁液吐出手段と、細胞懸濁液吐出手段を容器１０上方で走査可能な吐出移動手段を有し、細胞懸濁液１２を線状に吐出して、１つの線または複数の線から構成された細胞懸濁液１２を形成してよい。細胞懸濁液吐出手段は、細胞懸濁液１２の単位時間あたり吐出量を調整可能であってよい。また、細胞播種方法では、容器１０に対して細胞懸濁液１２を線状に吐出する際に、細胞懸濁液１２の線パターンを自在に変更可能であってよい。
次に、第二実施形態の細胞入容器２Ａ，２Ｂを実現するための細胞播種方法について説明する。
第二実施形態の細胞播種方法では、培地液１１が充填された容器１０に対して、細胞懸濁液１２を線状に滴下し、１つの線または複数の線から構成される細胞懸濁液１２を形成する。この細胞播種方法は、例えば培地液１１が充填された容器１０に細胞懸濁液１２を吐出する細胞懸濁液吐出手段と、細胞懸濁液吐出手段を容器１０上方で走査可能な吐出移動手段を有し、細胞懸濁液１２を線状に吐出して、１つの線または複数の線から構成された細胞懸濁液１２を形成してよい。細胞懸濁液吐出手段は、細胞懸濁液１２の単位時間あたり吐出量を調整可能であってよい。また、細胞播種方法では、容器１０に対して細胞懸濁液１２を線状に吐出する際に、細胞懸濁液１２の線パターンを自在に変更可能であってよい。
【0110】
なお、細胞播種方法は、吐出移動手段に代えて、例えば容器１０を細胞懸濁液吐出手段に対して移動させる容器移動手段を有してもよい。また、細胞播種方法は、上記の吐出移動手段および容器移動手段の両方を有してよい。
上記した細胞播種方法は、例えば図１５～１７に示したような細胞播種装置２００Ａ～２００Ｃなどを用いることで実現することができる。
上記した細胞播種方法は、例えば図１５～１７に示したような細胞播種装置２００Ａ～２００Ｃなどを用いることで実現することができる。
【0111】
以下、第二実施形態の細胞入容器、細胞播種方法について、１つの実施例（実施例５）を用いてさらに説明する。本発明は、実施例の具体的内容により、何ら限定されない。
【0112】
（実施例５）
実施例５では、図１８に示すように、上方から見て２４０ｍｍ角の正方形状に形成された培養容器（容器１０）に対し、培地液を７７．８ｍｌ充填した後、作業者がピペットを用いて細胞懸濁液１２を線状に滴下させた。細胞懸濁液１２の線状の滴下に際しては、図１３に例示した細胞入容器２Ａのように、細胞懸濁液１２を左右方向（Ｘ軸方向）に蛇行する１つの線に形成する。具体的には、ピペットから細胞懸濁液１２を容器１０に向けて吐出させながら、最初に、ピペットを上方から見て容器１０の手前側（図１８において下側）の左端付近から右方向に直線的に移動させる。次いで、ピペットが容器１０の右端付近に到達したら、細胞懸濁液１２の吐出を継続しながら、ピペットを容器１０の奥側に向けて１０ｍｍ移動させた後に、容器１０の左端付近まで、左方向に直線的に移動させる。ピペットが容器１０の左端付近に到達したら、ピペットを容器１０の奥側に向けて１０ｍｍ移動させた後に、再びピペットを容器１０の右端まで右方向に直線的に移動させる。以上の動作を繰り返すことで、一筆書き状の蛇行した線を形成する。このように形成された蛇行線のうち、左右方向に延びる直線部は、容器１０の手前側から奥側に向けて１０ｍｍの間隔をあけて２１個並んでいる。
実施例５では、図１８に示すように、上方から見て２４０ｍｍ角の正方形状に形成された培養容器（容器１０）に対し、培地液を７７．８ｍｌ充填した後、作業者がピペットを用いて細胞懸濁液１２を線状に滴下させた。細胞懸濁液１２の線状の滴下に際しては、図１３に例示した細胞入容器２Ａのように、細胞懸濁液１２を左右方向（Ｘ軸方向）に蛇行する１つの線に形成する。具体的には、ピペットから細胞懸濁液１２を容器１０に向けて吐出させながら、最初に、ピペットを上方から見て容器１０の手前側（図１８において下側）の左端付近から右方向に直線的に移動させる。次いで、ピペットが容器１０の右端付近に到達したら、細胞懸濁液１２の吐出を継続しながら、ピペットを容器１０の奥側に向けて１０ｍｍ移動させた後に、容器１０の左端付近まで、左方向に直線的に移動させる。ピペットが容器１０の左端付近に到達したら、ピペットを容器１０の奥側に向けて１０ｍｍ移動させた後に、再びピペットを容器１０の右端まで右方向に直線的に移動させる。以上の動作を繰り返すことで、一筆書き状の蛇行した線を形成する。このように形成された蛇行線のうち、左右方向に延びる直線部は、容器１０の手前側から奥側に向けて１０ｍｍの間隔をあけて２１個並んでいる。
【0113】
培地液の組成は、基礎培地ＤＭＥＭ、ウシ胎児血清ＦＢＳ、ペニシリンストレプトマイシン溶液をそれぞれ体積比で８９％、１０％および１％である。
また、細胞懸濁液は、ヒト皮膚繊維芽細胞ＮＨＤＦを培地液で懸濁したものを使用した。
培養容器に滴下する細胞総数は、３．０×１０６個になるように、細胞懸濁液の濃度を１．４×１０６ 個/ｍｌに調整し、２２００ｕｌ滴下した。
また、培地総量は８０ｍｌになるようにした。
また、細胞懸濁液は、ヒト皮膚繊維芽細胞ＮＨＤＦを培地液で懸濁したものを使用した。
培養容器に滴下する細胞総数は、３．０×１０６個になるように、細胞懸濁液の濃度を１．４×１０６ 個/ｍｌに調整し、２２００ｕｌ滴下した。
また、培地総量は８０ｍｌになるようにした。
【0114】
細胞懸濁液の播種後、１５分間静置させた後にインキュベーターへ投入し、５日間培養させた。
【0115】
図１８に５日間培養した容器内の細胞の分布を示す。図１８の画像５ａは容器１０中央付近における顕微鏡画像である。画像５ｂは画像５ａの奥側（図１８において上側）に位置する容器１０の壁面付近における顕微鏡画像である。画像５ｃは容器１０の右手前（図１８において右下）の角部の壁面付近における顕微鏡画像である。
図１８に示すように、画像５ａ，５ｂ，５ｃのいずれの点においても、同等のコンフルエンシーであり、容器前面に均一に細胞が培養されていることが確認できた。すなわち、実施例５が図７に示した比較例１と比較して優位であることを確認できた。
図１８に示すように、画像５ａ，５ｂ，５ｃのいずれの点においても、同等のコンフルエンシーであり、容器前面に均一に細胞が培養されていることが確認できた。すなわち、実施例５が図７に示した比較例１と比較して優位であることを確認できた。
【符号の説明】
【0116】
１，２Ａ，２Ｂ 細胞入容器
１０ 容器
１１ 培地液
１２ 細胞懸濁液
１００Ａ，１００Ｂ，１００Ｃ，１００Ｄ，２００Ａ，２００Ｂ，２００Ｃ 細胞播種装置
１０１ａ，２０１ａ 吐出移動機構
１０１ｂ，２０１ｂ 容器移動機構
１０２，２０２ 細胞懸濁液吐出機構
１０２ａ吐出部
１０ 容器
１１ 培地液
１２ 細胞懸濁液
１００Ａ，１００Ｂ，１００Ｃ，１００Ｄ，２００Ａ，２００Ｂ，２００Ｃ 細胞播種装置
１０１ａ，２０１ａ 吐出移動機構
１０１ｂ，２０１ｂ 容器移動機構
１０２，２０２ 細胞懸濁液吐出機構
１０２ａ吐出部
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
