特許 7017015 ヒトＣＤ１９に特異的な抗体剤及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-01-31

(45)【発行日】2022-02-08

(54)【発明の名称】ヒトＣＤ１９に特異的な抗体剤及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/30 20060101AFI20220201BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20220201BHJP

   C12N 15/85 20060101ALI20220201BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220201BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220201BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20220201BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20220201BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20220201BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220201BHJP

【ＦＩ】

C07K16/30 ZNA

C12N15/13

C12N15/85 Z

C12N5/10

A61K39/395 N

A61K35/17 Z

A61K47/68

A61K48/00

A61P35/00

【請求項の数】 21

(21)【出願番号】P 2018539226

(86)(22)【出願日】2016-10-11

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2018-12-20

(86)【国際出願番号】 US2016056325

(87)【国際公開番号】W WO2017066136

(87)【国際公開日】2017-04-20

【審査請求日】2019-10-11

(31)【優先権主張番号】62/240,624

(32)【優先日】2015-10-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】518129259

【氏名又は名称】エウレカ セラピューティクス インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100079049

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 淳

(74)【代理人】

【識別番号】100084995

【弁理士】

【氏名又は名称】加藤 和詳

(72)【発明者】

【氏名】リュウ、 ホン

(72)【発明者】

【氏名】ルー、 チンウェイ

(72)【発明者】

【氏名】ヤン、 チーユアン

(72)【発明者】

【氏名】ロン、 リー

(72)【発明者】

【氏名】チェン、 ニール

【審査官】小川 知宏

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１２／０１０５６１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Blood，2010年，Vol.116, No.21，Abstract 2865

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ １６／２８ － １６／３０

Ｃ１２Ｎ １５／００ － １５／９０

Ｃ１２Ｎ ５／００ － ５／２８

Ａ６１Ｋ ３９／３９５

Ａ６１Ｋ ３５／１２ － ３５／５５

Ａ６１Ｋ ４７／６８

Ａ６１Ｋ ４８／００

Ａ６１Ｐ １／００ － ４３／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号１５１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、
配列番号１５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２（ＨＣ－ＣＤＲ２）及び
配列番号１５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３（ＨＣ－ＣＤＲ３）、並びに、
配列番号２５９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、
配列番号２６０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣ－ＣＤＲ２）及び
配列番号２６１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣ－ＣＤＲ３）を含み、ヒト分化抗原群１９（ＣＤ１９）と特異的に結合する抗体又は抗体断片、ただし、前記抗体又は抗体断片は以下の（ｉ）～（ｖｉ）のうちいずれか１つの置換を有していてもよい：
（ｉ）ＨＣ－ＣＤＲ３の配列番号１５３のアミノ酸配列におけるＮ末端側から２１番目のＬ残基のＭ残基への置換；
（ｉｉ）ＨＣ－ＣＤＲ３の配列番号１５３のアミノ酸配列におけるＮ末端側から２１番目のＬ残基のＭ残基への置換、及び、ＬＣ－ＣＤＲ３の配列番号２６１のアミノ酸配列におけるＮ末端側から８番目のＤ残基のＥ残基への置換；
（ｉｉｉ）ＨＣ－ＣＤＲ３の配列番号１５３のアミノ酸配列におけるＮ末端側から２１番目のＬ残基のＭ残基への置換、及び、ＬＣ－ＣＤＲ３の配列番号２６１のアミノ酸配列におけるＮ末端側から８番目のＤ残基のＧ残基への置換；
（ｉｖ）ＨＣ－ＣＤＲ３の配列番号１５３のアミノ酸配列におけるＮ末端側から２１番目のＬ残基のＭ残基への置換、及び、ＬＣ－ＣＤＲ３の配列番号２６１のアミノ酸配列におけるＮ末端側から６番目のＳ残基のＴ残基への置換；
（ｖ）ＨＣ－ＣＤＲ３の配列番号１５３のアミノ酸配列におけるＮ末端側から２１番目のＬ残基のＭ残基への置換、及び、ＨＣ－ＣＤＲ３の配列番号１５３のアミノ酸配列におけるＮ末端側から１２番目のＹ残基のＮ残基への置換；
（ｖｉ）ＨＣ－ＣＤＲ３の配列番号１５３のアミノ酸配列におけるＮ末端側から２１番目のＬ残基のＭ残基への置換、ＨＣ－ＣＤＲ１の配列番号１５１のアミノ酸配列におけるＮ末端側から７番目のＹ残基のＦ残基への置換、及び、ＨＣ－ＣＤＲ３の配列番号１５３のアミノ酸配列におけるＮ末端側から１番目のＡ残基のＶ残基への置換。

【請求項2】

前記置換（ｉ）、前記置換（ｉｉ）、前記置換（ｉｉｉ）又は前記置換（ｖｉ）を含んでいてもよい、請求項１に記載の抗体又は抗体断片。

【請求項3】

前記置換（ｉ）～（ｖｉ）を有しない、請求項１に記載の抗体又は抗体断片。

【請求項4】

前記ＨＣ－ＣＤＲ１、前記ＨＣ－ＣＤＲ２、前記ＨＣ－ＣＤＲ３、前記ＬＣ－ＣＤＲ１、前記ＬＣ－ＣＤＲ２及び前記ＬＣ－ＣＤＲ３を含むアミノ酸配列として配列番号４２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体又は抗体断片。

【請求項5】

免疫グロブリン、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）若しくはｄＡｂであるか、又は、免疫グロブリン、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）若しくはｄＡｂを含む、請求項１～請求項４のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片。

【請求項6】

治療薬、検出剤、細胞傷害性薬剤、細胞傷害性部分又は放射性同位元素と結合している、請求項１～請求項５のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片。

【請求項7】

ヒト抗体又はヒト抗体断片である、請求項１～請求項６のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片。

【請求項8】

第一の抗原結合部位及び第二の抗原結合部位を含み、前記第一の抗原結合部位が、請求項１～請求項７のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片から得られたものであり、前記第一の抗原結合部位によりヒト分化抗原群１９（ＣＤ１９）と特異的に結合する、二重特異性抗体。

【請求項9】

前記第二の抗原結合部位がＴ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、好中球、間葉系幹細胞及び神経幹細胞からなる群より選択される免疫細胞と結合する、請求項８に記載の二重特異性抗体。

【請求項10】

請求項１～請求項７のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片の抗原結合部位を含み、ヒト分化抗原群１９（ＣＤ１９）と特異的に結合する、キメラ抗原受容体。

【請求項11】

膜貫通ドメイン、並びに、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列及びＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項１０に記載のキメラ抗原受容体。

【請求項12】

請求項１～請求項７のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片、
請求項８若しくは請求項９に記載の二重特異性抗体、又は
請求項１０若しくは請求項１１に記載のキメラ抗原受容体
の全体をコードする核酸分子。

【請求項13】

請求項１２に記載の核酸分子を含むベクター。

【請求項14】

請求項１２に記載の核酸分子若しくは請求項１３に記載のベクターを含む、又は、請求項１～請求項７のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片、請求項８若しくは請求項９に記載の二重特異性抗体、若しくは請求項１０若しくは請求項１１に記載のキメラ抗原受容体を発現する、細胞。

【請求項15】

請求項１～請求項７のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片、請求項８若しくは請求項９に記載の二重特異性抗体、又は請求項１０若しくは請求項１１に記載のキメラ抗原受容体を発現する、エフェクター細胞。

【請求項16】

Ｔ細胞である、請求項１５に記載のエフェクター細胞。

【請求項17】

請求項１～請求項７のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片、請求項８若しくは請求項９に記載の二重特異性抗体、請求項１０若しくは請求項１１に記載のキメラ抗原受容体、請求項１２に記載の核酸分子、請求項１３に記載のベクター、又は請求項１５若しくは請求項１６に記載のエフェクター細胞を含み、且つ、医薬的に許容される担体又は希釈剤をさらに含む、医薬組成物。

【請求項18】

請求項１～請求項７のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片、請求項８若しくは請求項９に記載の二重特異性抗体、請求項１０若しくは請求項１１に記載のキメラ抗原受容体、請求項１２に記載の核酸分子、請求項１３に記載のベクター、請求項１５若しくは請求項１６に記載のエフェクター細胞、又は請求項１７に記載の医薬組成物を含む、対象におけるＣＤ１９発現を特徴とする医学的状態の治療用組成物。

【請求項19】

前記ＣＤ１９発現を特徴とする医学的状態がＢ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球白血病、慢性リンパ球性白血病、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫又は急性骨髄性白血病である、請求項１８に記載の治療用組成物。

【請求項20】

請求項１～請求項７のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片、請求項８若しくは請求項９に記載の二重特異性抗体、請求項１０若しくは請求項１１に記載のキメラ抗原受容体、請求項１２に記載の核酸分子、請求項１３に記載のベクター、請求項１５若しくは請求項１６に記載のエフェクター細胞、又は請求項１７に記載の医薬組成物を含む、がんの治療用組成物。

【請求項21】

請求項１～請求項７のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片、請求項８若しくは請求項９に記載の二重特異性抗体、請求項１０若しくは請求項１１に記載のキメラ抗原受容体、請求項１２に記載の核酸分子、請求項１３に記載のベクター、請求項１５若しくは請求項１６に記載のエフェクター細胞、又は請求項１７に記載の医薬組成物を含む、
腫瘍の増殖阻害又は腫瘍細胞の殺滅用の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその全内容が本明細書に援用される、２０１５年１０月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／２４０，６２４号の利益を主張するものである。

【0002】

配列表
本明細書は、ファイル名「ＥＴＩ－２０１５－１１＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」の．ｔｘｔファイルとして電子データで提出された配列表を参照する。この．ｔｘｔファイルは２０１６年１０月５日に作成されたものであり、サイズは１７８，５２４バイトである。この配列表の全内容は参照によって本明細書に援用される。

【背景技術】

【0003】

抗体に基づく技術の出現によって、がん治療用の新規な抗体ベースの治療薬の開発が過去１０年間の非常に大きな関心事となっていた。実際に、種々の抗体フォーマット（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、放射性標識抗体、薬剤結合型抗体、多重特異性抗体等）の開発が続けられており、中にはがん治療においてかなりの見込みを示したものもある。２０１５年のリストには、新たに２ダースの治療用抗体剤が、種々のがんを適応症として、アメリカ又はヨーロッパにおいて、市販承認された、又は検討中であると報告された（Ｊａｎｉｃｅ Ｍ． Ｒｅｉｃｈｅｒｔ， ＰｈＤ， Ｒｅｉｃｈｅｒｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ ＬＬＣ， Ｍａｙ ２６， ２０１５を参照）。特に有効な抗体剤の開発が尚も課題となっている。

【発明の概要】

【0004】

本発明はとりわけ、ＣＤ１９、特にヒトＣＤ１９、と特異的に結合する、ヒト抗体剤、多重特異性結合剤（例えば、二重特異性抗体）及びキメラ抗原受容体を提供する。いくつかの実施形態では、１又は複数の参照ヒト抗体剤、参照多重特異性結合剤及び／又は参照キメラ抗原受容体よりも、天然型の（例えば、細胞表面上に発現された）ヒトＣＤ１９に対する特異性が高い、ヒト抗体剤、多重特異性結合剤及びキメラ抗原受容体が提供される。いくつかの実施形態では、提供されるヒト抗体剤、多重特異性結合剤（例えば、二重特異性抗体）及びキメラ抗原受容体は、確立された技術（例えば、操作された非ヒト動物、ファージディスプレイ、マウス由来抗体から作製されたヒト化抗体等）を用いて開発された抗体を基とした抗ＣＤ１９治療薬に付随する次善的選択性（ｓｕｂｏｐｔｉｍａｌ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ）を超えるものである。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９発現を特徴とするがん細胞（例えば、リンパ腫及び／又は白血病）の殺滅を効果的に媒介する、ヒト抗体剤、多重特異性結合剤（例えば、二重特異性抗体）及びキメラ抗原受容体が提供される。

【0005】

本明細書では、ヒト配列（すなわち、ヒトＣＤＲ配列を含むヒト重鎖可変領域配列及びヒト軽鎖可変領域配列）を含む抗体剤を使用する実施形態が広範に論じられるが、本発明は非ヒト抗体剤も提供する。いくつかの実施形態では、非ヒト抗体剤は、本明細書に記載の抗体剤から得られるヒトＣＤＲ配列と非ヒトフレームワーク配列とを含む。非ヒトフレームワーク配列には、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１又は複数のヒトＣＤＲ配列を用いた合成重鎖可変領域及び／又は合成軽鎖可変領域の作製に使用可能なあらゆる配列が包含され、例えば、哺乳類、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ（例えば、雌ウシ、雄ウシ、水牛）、シカ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、ネコ、イヌ、フェレット、霊長類（例えば、マーモセット、アカゲザル）等のフレームワーク配列が挙げられる。いくつかの実施形態では、提供される抗体剤として、本明細書に記載の１又は複数のヒトＣＤＲ配列を非ヒトフレームワーク配列（例えば、マウス又はニワトリフレームワーク配列）に移植することにより作製される抗体剤が包含される。多くの実施形態では、提供される抗体剤は、ヒト抗体剤（例えば、ヒトモノクローナル抗体又はその断片、ヒト抗原結合性のタンパク質又はポリペプチド、ヒト多重特異性結合剤［例えば、ヒト二重特異性抗体］、ヒト免疫グロブリンポリペプチドの１又は複数の構造成分を有するヒトポリペプチド）である。

【0006】

いくつかの実施形態では、本発明は、重鎖ＣＤＲ１（ＨＣ－ＣＤＲ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＨＣ－ＣＤＲ２）及び重鎖ＣＤＲ３（ＨＣ－ＣＤＲ３）、並びに軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣ－ＣＤＲ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣ－ＣＤＲ２）及び軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣ－ＣＤＲ３）を含む、ヒトＣＤ１９と特異的に結合する抗体剤であって、
前記ＨＣ－ＣＤＲ１はＧ－Ｘ_１－Ｘ_２－Ｆ－Ｘ_３－Ｓ－Ｘ_４－Ｘ_５（配列番号２９１）を含み、ここで、Ｘ_１はＦ、Ｇ、Ｙ若しくはＶであり、Ｘ_２はＳ若しくはＴであり、Ｘ_３はＳ若しくはＴであり、Ｘ_４はＮ若しくはＹであり、Ｘ_５はＡ、Ｗ若しくはＹである；
前記ＨＣ－ＣＤＲ２はＩ－Ｘ_６－Ｐ－Ｘ_７－Ｘ_８－Ｘ_９－Ｘ_１０－Ｔ（配列番号２９２）を含み、ここで、Ｘ_６はＳ、Ｄ若しくはＹであり、Ｘ_７はＥ、Ｓ、Ｇ若しくはＩであり、Ｘ_８はＤ、Ｆ若しくはＶであり、Ｘ_９はＧ若しくはＳであり、Ｘ_１０はＫ、Ｅ、Ｙ、Ｄ若しくはＴである；
前記ＬＣ－ＣＤＲ１はＳ－Ｓ－Ｎ－Ｘ_１１－Ｇ－Ｘ_１２－Ｘ_１３－Ｘ_１４（配列番号２９３）若しくはＮ－Ｉ－Ｇ－Ｓ－Ｘ_１５－Ｓ（配列番号２９４）を含み、ここで、Ｘ_１１はＩ若しくはＶであり、Ｘ_１２はＮ、Ｓ若しくはＴであり、Ｘ_１３はＮ、Ｈ若しくはＫであり、Ｘ_１４はＹ、Ａ若しくはＴであり、Ｘ_１５はＫ若しくはＥである；且つ／又は
前記ＬＣ－ＣＤＲ２はＸ_１６－Ｘ_１７－Ｘ_１８（配列番号２９５）を含み、ここで、Ｘ_１６はＤ、Ｅ、Ｓ、Ｒ若しくはＹであり、Ｘ_１７はＮ若しくはＤであり、Ｘ_１８はＮ、Ｙ、Ｓ若しくはＤである、
前記抗体剤を提供する。

【0007】

いくつかの実施形態では、本発明は、表２から選択される１若しくは複数の重鎖ＣＤＲと少なくとも５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％）同一の配列を有する１若しくは複数の重鎖ＣＤＲ、及び／又は、表３から選択される１若しくは複数の軽鎖ＣＤＲと少なくとも５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％）同一の配列を有する１若しくは複数の軽鎖ＣＤＲを含む、ヒトＣＤ１９と特異的に結合するヒト抗体剤を提供する。

【0008】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号１８１、配列番号１８２及び配列番号１８３に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0009】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号７６、配列番号７７及び配列番号７８に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号１８４、配列番号１８５及び配列番号１８６に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号１８７、配列番号１８８及び配列番号１８９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0011】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号８２、配列番号８３及び配列番号８４に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号１９０、配列番号１９１及び配列番号１９２に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0012】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号１９３、配列番号１９４及び配列番号１９５に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0013】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号８８、配列番号８９及び配列番号９０に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号１９６、配列番号１９７及び配列番号１９８に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号１９９、配列番号２００及び配列番号２０１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0015】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号９４、配列番号９５及び配列番号９６に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号２０２、配列番号２０３及び配列番号２０４に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0016】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号２０５、配列番号２０６及び配列番号２０７に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0017】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１００、配列番号１０１及び配列番号１０２に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号２０８、配列番号２０９及び配列番号２１０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１０３、配列番号１０４及び配列番号１０５に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号２１１、配列番号２１２及び配列番号２１３に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0019】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１０６、配列番号１０７及び配列番号１０８に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号２１４、配列番号２１５及び配列番号２１６に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0020】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１０９、配列番号１１０及び配列番号１１１に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号２１７、配列番号２１８及び配列番号２１９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0021】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号２２０、配列番号２２１及び配列番号２２２に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0022】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１１５、配列番号１１６及び配列番号１１７に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号２２３、配列番号２２４及び配列番号２２５に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0023】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１１８、配列番号１１９及び配列番号１２０に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号２２６、配列番号２２７及び配列番号２２８に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0024】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１２１、配列番号１２２及び配列番号１２３に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに配列番号２２９、配列番号２３０及び配列番号２３１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0025】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１８１、配列番号１８２及び配列番号１８３の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0026】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号７６、配列番号７７及び配列番号７８の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１８４、配列番号１８５及び配列番号１８６の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0027】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１８７、配列番号１８８及び配列番号１８９の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0028】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号８２、配列番号８３及び配列番号８４の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９０、配列番号１９１及び配列番号１９２の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0029】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９３、配列番号１９４及び配列番号１９５の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0030】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号８８、配列番号８９及び配列番号９０の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９６、配列番号１９７及び配列番号１９８の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0031】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９９、配列番号２００及び配列番号２０１の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0032】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号９４、配列番号９５及び配列番号９６の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２０２、配列番号２０３及び配列番号２０４の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0033】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２０５、配列番号２０６及び配列番号２０７の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0034】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１００、配列番号１０１及び配列番号１０２の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２０８、配列番号２０９及び配列番号２１０の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0035】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１０３、配列番号１０４及び配列番号１０５の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２１１、配列番号２１２及び配列番号２１３の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0036】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１０６、配列番号１０７及び配列番号１０８の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２１４、配列番号２１５及び配列番号２１６の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0037】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１０９、配列番号１１０及び配列番号１１１の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２１７、配列番号２１８及び配列番号２１９の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0038】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２０、配列番号２２１及び配列番号２２２の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0039】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１１５、配列番号１１６及び配列番号１１７の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２３、配列番号２２４及び配列番号２２５の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0040】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１１８、配列番号１１９及び配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２６、配列番号２２７及び配列番号２２８の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0041】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１２１、配列番号１２２及び配列番号１２３の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２９、配列番号２３０及び配列番号２３１の軽鎖ＣＤＲを含む。

【0042】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ１９との結合において、以下を含むヒト抗体剤と競合するヒト抗体剤を提供する：（ａ）配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１８１、配列番号１８２及び配列番号１８３の軽鎖ＣＤＲ；（ｂ）配列番号７６、配列番号７７及び配列番号７８の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１８４、配列番号１８５及び配列番号１８６の軽鎖ＣＤＲ；（ｃ）配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１８７、配列番号１８８及び配列番号１８９の軽鎖ＣＤＲ；（ｄ）配列番号８２、配列番号８３及び配列番号８４の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９０、配列番号１９１及び配列番号１９２の軽鎖ＣＤＲ；（ｅ）配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９３、配列番号１９４及び配列番号１９５の軽鎖ＣＤＲ；（ｆ）配列番号８８、配列番号８９及び配列番号９０の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９６、配列番号１９７及び配列番号１９８の軽鎖ＣＤＲ；（ｇ）配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９９、配列番号２００及び配列番号２０１の軽鎖ＣＤＲ；（ｈ）配列番号９４、配列番号９５及び配列番号９６の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２０２、配列番号２０３及び配列番号２０４の軽鎖ＣＤＲ；（ｉ）配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２０５、配列番号２０６及び配列番号２０７の軽鎖ＣＤＲ；（ｊ）配列番号１００、配列番号１０１及び配列番号１０２の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２０８、配列番号２０９及び配列番号２１０の軽鎖ＣＤＲ；（ｋ）配列番号１０３、配列番号１０４及び配列番号１０５の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２１１、配列番号２１２及び配列番号２１３の軽鎖ＣＤＲ；（ｌ）配列番号１０６、配列番号１０７及び配列番号１０８の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２１４、配列番号２１５及び配列番号２１６の軽鎖ＣＤＲ；（ｍ）配列番号１０９、配列番号１１０及び配列番号１１１の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２１７、配列番号２１８及び配列番号２１９の軽鎖ＣＤＲ；（ｎ）配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２０、配列番号２２１及び配列番号２２２の軽鎖ＣＤＲ；（ｏ）配列番号１１５、配列番号１１６及び配列番号１１７の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２３、配列番号２２４及び配列番号２２５の軽鎖ＣＤＲ；（ｐ）配列番号１１８、配列番号１１９及び配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２６、配列番号２２７及び配列番号２２８の軽鎖ＣＤＲ；又は（ｑ）配列番号１２１、配列番号１２２及び配列番号１２３の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２９、配列番号２３０及び配列番号２３１の軽鎖ＣＤＲ。

【0043】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、重鎖ＣＤＲ内及び／又は軽鎖ＣＤＲ内に１又は複数のアミノ酸置換をさらに含む。

【0044】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、重鎖ＣＤＲ内及び／又は軽鎖ＣＤＲ内に１以上又は５以下のアミノ酸置換をさらに含む。

【0045】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、重鎖ＣＤＲ内及び／又は軽鎖ＣＤＲ内に１以上又は３以下のアミノ酸置換をさらに含む。

【0046】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、重鎖フレームワーク内及び／又は軽鎖フレームワーク内に１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの特定の実施形態では、ヒト抗体剤は、重鎖フレームワーク内及び／又は軽鎖フレームワーク内に１～５個のアミノ酸置換を含む。

【0047】

いくつかの特定の実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換（例えば、１～５個のアミノ酸置換）が、フレームワーク領域内（すなわち、重鎖フレームワーク内及び／又は軽鎖フレームワーク内）及び／又はＣＤＲ内（すなわち、重鎖ＣＤＲ内及び／又は軽鎖ＣＤＲ内）に存在する。

【0048】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、表８に示される１又は複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、表８に示されるバリアントクローンに見られるアミノ酸置換を含む。

【0049】

いくつかの実施形態では、本発明は、表１に示される重鎖可変領域配列と少なくとも５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％）同一の配列を有する重鎖可変領域、及び、表１に示される軽鎖可変領域配列と少なくとも５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％）同一の配列を有する軽鎖可変領域を含む、ヒトＣＤ１９と特異的に結合するヒト抗体剤を提供する。

【0050】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号２に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号２に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0051】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号４に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号４に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0052】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号６に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号６に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0053】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号８に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号８に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0054】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１０に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号１０に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0055】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１２に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号１２に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0056】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１４に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号１４に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0057】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１６に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号１６に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0058】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１８に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号１８に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0059】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号２０に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号２０に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0060】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号２２に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号２２に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0061】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号２４に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号２４に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0062】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号２６に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号２６に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0063】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号２８に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号２８に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0064】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号３０に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号３０に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0065】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号３２に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号３２に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0066】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号３４に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号３４に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0067】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２及び配列番号３４のいずれか１つに現れる重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む。

【0068】

いくつかの実施形態では、本発明は、ヒトＣＤ１９と特異的に結合するヒト抗体剤であって、親（又は参照）ヒト抗体剤と比べて１又は複数のアミノ酸置換を含み、且つ、以下を含む、前記ヒト抗体剤を提供する：（ａ）配列番号１２４、配列番号１２５及び配列番号１２６の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２３２、配列番号２３３及び配列番号２３４の軽鎖ＣＤＲ；（ｂ）配列番号１２７、配列番号１２８及び配列番号１２９の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２３５、配列番号２３６及び配列番号２３７の軽鎖ＣＤＲ；（ｃ）配列番号１３０、配列番号１３１及び配列番号１３２の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２３８、配列番号２３９及び配列番号２４０の軽鎖ＣＤＲ；（ｄ）配列番号１３３、配列番号１３４及び配列番号１３５の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２４１、配列番号２４２及び配列番号２４３の軽鎖ＣＤＲ；（ｅ）配列番号１３６、配列番号１３７及び配列番号１３８の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２４４、配列番号２４５及び配列番号２４６の軽鎖ＣＤＲ；（ｆ）配列番号１３９、配列番号１４０及び配列番号１４１の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２４７、配列番号２４８及び配列番号２４９の軽鎖ＣＤＲ；（ｇ）配列番号１４２、配列番号１４３及び配列番号１４４の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２５０、配列番号２５１及び配列番号２５２の軽鎖ＣＤＲ；（ｈ）配列番号１４５、配列番号１４６及び配列番号１４７の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２５３、配列番号２５４及び配列番号２５５の軽鎖ＣＤＲ；（ｉ）配列番号１４８、配列番号１４９及び配列番号１５０の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２５６、配列番号２５７及び配列番号２５８の軽鎖ＣＤＲ；（ｊ）配列番号１５１、配列番号１５２及び配列番号１５３の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２５９、配列番号２６０及び配列番号２６１の軽鎖ＣＤＲ；（ｋ）配列番号１５４、配列番号１５５及び配列番号１５６の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２６２、配列番号２６３及び配列番号２６４の軽鎖ＣＤＲ；（ｌ）配列番号１５７、配列番号１５８及び配列番号１５９の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２６５、配列番号２６６及び配列番号２６７の軽鎖ＣＤＲ；（ｍ）配列番号１６０、配列番号１６１及び配列番号１６３の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２６８、配列番号２６９及び配列番号２７０の軽鎖ＣＤＲ；（ｎ）配列番号１６３、配列番号１６４及び配列番号１６５の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２７１、配列番号２７２及び配列番号２７３の軽鎖ＣＤＲ；（ｏ）配列番号１６６、配列番号１６７及び配列番号１６８の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２７４、配列番号２７５及び配列番号２７６の軽鎖ＣＤＲ；（ｐ）配列番号１６９、配列番号１７０及び配列番号１７１の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２７７、配列番号２７８及び配列番号２７９の軽鎖ＣＤＲ；（ｑ）配列番号１７２、配列番号１７３及び配列番号１７４の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２８０、配列番号２８１及び配列番号２８２の軽鎖ＣＤＲ；（ｒ）配列番号１７５、配列番号１７６及び配列番号１７７の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２８３、配列番号２８４及び配列番号２８５の軽鎖ＣＤＲ；又は（ｓ）配列番号１７８、配列番号１７９及び配列番号１８０の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２８６、配列番号２８７及び配列番号２８８の軽鎖ＣＤＲ。いくつかの特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体剤は、本明細書に記載の親（又は参照）抗体剤と比べて１～５個のアミノ酸置換を含む。

【0069】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、１０、１６、２５、３４、５２、５４、６８、６９、７２、７５、９３、９５及びこれらの組み合わせからなる群より選択されるアミノ酸位置のいずれかに１又は複数のアミノ酸置換を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの特定の実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ｖ１０Ｍ、Ｋ１６Ｅ、Ｓ２５Ｎ、Ｖ３４Ｉ、Ｄ５２Ｎ、Ｌ５４Ｑ、Ｎ６８Ｔ、Ｔ６９Ｍ、Ｌ７２Ｍ、Ｓ７５Ｎ、Ｓ９３Ｔ、Ｄ９５Ｅ、Ｄ９５Ｇ又はこれらの組み合わせを包含する。

【0070】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、３、１２、１６、１７、２５、２６、３２、６３、６９、９７、１０２、１０６、１０８、１０９、１１３、１１６、１１７及びこれらの組み合わせからなる群より選択されるアミノ酸位置のいずれかに１又は複数のアミノ酸置換を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの特定の実施形態では、１又は複数のアミノ酸置換は、Ｑ３Ｒ、Ｋ１２Ｅ、Ｅ１６Ｇ、Ｓ１７Ｆ、Ｓ２５Ａ、Ｇ２６Ａ、Ｙ３２Ｆ、Ｓ６３Ｆ、Ｔ６９Ａ、Ａ９７Ｖ、Ｔ１０２Ｓ、Ｍ１０６Ｌ、Ｙ１０８Ｎ、Ｄ１０９Ｅ、Ｑ１１３Ｌ、Ｌ１１６Ｍ、Ｍ１１７Ｌ又はこれらの組み合わせを包含する。

【0071】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｓ７５Ｎを有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｔ６９Ｍを有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｄ５２Ｎ及びＤ９５Ｅを有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｖ１０Ｍ及びＤ９５Ｇを有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｓ９３Ｔを有する軽鎖可変領域、並びにアミノ酸置換Ｓ１７Ｆ及びＴ６９Ａを有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｎ６８Ｔを有する軽鎖可変領域、並びにアミノ酸置換Ｓ１７Ｆ及びＹ１０８Ｎを有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｓ６３Ｆを有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｑ３Ｒ、Ｙ３２Ｆ及びＡ９７Ｖを有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｋ１６Ｅを有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｍ１１７Ｌを有する重鎖可変領域を含む。

【0072】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｌ７２Ｍを有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸置換Ｓ２５Ａを有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｔ１０２Ｓ及びＬ１１６Ｍを有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｓ２５Ｎ及びＶ３４Ｉを有する軽鎖可変領域、並びにアミノ酸置換Ｋ１２Ｅ及びＤ１０９Ｅを有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｅ１６Ｇを有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｌ５４Ｑを有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸置換Ｍ１０６Ｌを有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｓ２５Ｎを有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｇ２６Ａ及びＱ１１３Ｌを有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｌ５４Ｑを有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、アミノ酸置換Ｔ１０２Ｓを有する重鎖可変領域を含む。

【0073】

いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は表８から選択されるものである。

【0074】

いくつかの実施形態では、本発明は、ヒトＣＤ１９と特異的に結合するヒト抗体剤であって、親（又は参照）ヒト抗体剤と比べて１又は複数のアミノ酸置換（例えば、１～５個のアミノ酸置換）を含み、且つ、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０及び配列番号７２のうちいずれか１つに現れる重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む、前記ヒト抗体剤を提供する。いくつかの特定の実施形態では、親（又は参照）抗体剤は、配列番号３０又は配列番号３２のＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。

【0075】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、ヒトモノクローナル抗体又はその断片である。

【0076】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、バリアントＦｃ領域を含むヒトモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域は、親（又は参照）Ｆｃ領域と比較すると一つ又は複数のアミノ酸が置換されている。いくつかの実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、野生型（又は親、又は参照）Ｆｃ領域を含む親ヒトモノクローナル抗体と比べると異なっているグリコシル化パターンを含む。いくつかの実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体又はＩｇＧ４抗体である。いくつかの特定の実施形態では、ヒトモノクローナル抗体はＩｇＧ１である。

【0077】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は治療薬又は検出剤に結合されている。

【0078】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は細胞傷害性薬剤又は細胞傷害性部分に結合されている。

【0079】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は放射性同位元素に結合されている。

【0080】

いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、免疫グロブリン、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はｄＡｂであるか、又はそれを含む。いくつかの特定の実施形態では、ヒト抗体剤はｓｃＦｖであるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖはリンカー配列を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは治療薬又は検出剤に結合されている。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖはキメラ抗原受容体の一部である。

【0081】

いくつかの実施形態では、本発明は、治療又は診断で使用するための、本明細書に記載のヒト抗体剤を提供する。

【0082】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ１９発現を特徴とする疾患の治療、予防又は改善で使用するための、本明細書に記載のヒト抗体剤を提供する。

【0083】

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療、予防又は改善で使用するための、本明細書に記載のヒト抗体剤を提供する。

【0084】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載のヒト抗体剤の抗原結合部位（複数可）と、細胞傷害性薬剤又は細胞傷害性部分とを含む、抗体－薬物複合体を提供する。

【0085】

いくつかの実施形態では、細胞傷害性薬剤又は細胞傷害性部分は、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）又はメイタンシンであるか、又はそれを含む。

【0086】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載のヒト抗体剤から得られる（又はそれを基とした）第一の抗原結合部位、及び第二の抗原結合部位を含む、二重特異性抗体を提供する。

【0087】

いくつかの実施形態では、第一及び／又は第二の抗原結合部位は、免疫グロブリン分子、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、Ｆａｂ、Ｆｖ及びこれらの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、第一及び第二の抗原結合部位は、それらが１本鎖ポリペプチドを形成するように構成されている。いくつかの実施形態では、第一及び第二の抗原結合部位はｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、第一及び第二の抗原結合部位はペプチドリンカーによって連結されている。いくつかの実施形態では、第二の抗原結合部位は第一の抗原結合部位のＣ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、第二の抗原結合部位は第一の抗原結合部位のＮ末端に連結されている。

【0088】

いくつかの実施形態では、第一の抗原結合部位は免疫グロブリン分子から構成されており、第二の抗原結合部位はｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、Ｆａｂ又はＦｖから構成される。

【0089】

いくつかの実施形態では、第二の抗原結合部位は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、好中球、間葉系幹細胞及び神経幹細胞からなる群より選択される免疫細胞と結合する。いくつかの実施形態では、第二の抗原結合部位はＴ細胞上のＣＤ３と結合する。

【0090】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載のヒト抗体剤の抗原結合部位を含む二重特異性Ｔ細胞動員モノクローナル抗体を提供する。

【0091】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ１９と特異的に結合する第一のｓｃＦｖ及びＴ細胞上のＣＤ３と特異的に結合する第二のｓｃＦｖから構成される二重特異性抗体であって、前記第一のｓｃＦｖが配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０及び配列番号７２のいずれか１つを含む、前記二重特異性抗体を提供する。

【0092】

いくつかの実施形態では、第一のｓｃＦｖのＮ末端が第二のｓｃＦｖのＣ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、第一のｓｃＦｖのＣ末端が第二のｓｃＦｖのＮ末端に連結されている。

【0093】

いくつかの実施形態では、第一のｓｃＦｖのＮ末端がリンカー配列を介して第二のｓｃＦｖのＣ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、第一のｓｃＦｖのＣ末端がリンカー配列を介して第二のｓｃＦｖのＮ末端に連結されている。

【0094】

いくつかの実施形態では、本発明は、治療又は診断で使用するための、本明細書に記載の二重特異性抗体を提供する。

【0095】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ１９発現を特徴とする疾患の治療、予防又は改善で使用するための、本明細書に記載の二重特異性抗体を提供する。

【0096】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載のヒト抗体剤の抗原結合部位を含むキメラ抗原受容体を提供する。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、本明細書に記載のヒト抗体剤のの抗原結合部位を含み、且つ、天然細胞受容体の膜貫通ドメイン及び／又は細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む。いくつかの特定の実施形態では、天然細胞受容体はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、本明細書に記載のヒト抗体剤の抗原結合部位を含み、且つ、膜貫通ドメイン、並びに、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３ζ）細胞内シグナル伝達配列及びＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む。

【0097】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体の抗原結合部位は、ｓｃＦｖであるか、又はそれを含む。

【0098】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗原受容体の抗原結合部位は、Ｖ_Ｌ領域であるか、又はそれを含む。いくつかの特定の実施形態では、Ｖ_Ｌ領域は以下の軽鎖ＣＤＲを含む：（ａ）配列番号１８１、配列番号１８２及び配列番号１８３；（ｂ）配列番号１８４、配列番号１８５及び配列番号１８６；（ｃ）配列番号１８７、配列番号１８８及び配列番号１８９；（ｄ）配列番号１９０、配列番号１９１及び配列番号１９２；（ｅ）配列番号１９３、配列番号１９４及び配列番号１９５；（ｆ）配列番号１９６、配列番号１９７及び配列番号１９８；（ｇ）配列番号１９９、配列番号２００及び配列番号２０１；（ｈ）配列番号２０２、配列番号２０３及び配列番号２０４；（ｉ）配列番号２０５、配列番号２０６及び配列番号２０７；（ｊ）配列番号２０８、配列番号２０９及び配列番号２１０；（ｋ）配列番号２１１、配列番号２１２及び配列番号２１３；（ｌ）配列番号２１４、配列番号２１５及び配列番号２１６；（ｍ）配列番号２１７、配列番号２１８及び配列番号２１９；（ｎ）配列番号２２０、配列番号２２１及び配列番号２２２；（ｏ）配列番号２２３、配列番号２２４及び配列番号２２５；（ｐ）配列番号２２６、配列番号２２７及び配列番号２２８；（ｑ）配列番号２２９、配列番号２３０及び配列番号２３１；（ｒ）配列番号２３２、配列番号２３３及び配列番号２３４；（ｓ）配列番号２３５、配列番号２３６及び配列番号２３７；（ｔ）配列番号２３８、配列番号２３９及び配列番号２４０；（ｕ）配列番号２４１、配列番号２４２及び配列番号２４３；（ｖ）配列番号２４４、配列番号２４５及び配列番号２４６；（ｗ）配列番号２４７、配列番号２４８及び配列番号２４９；（ｘ）配列番号２５０、配列番号２５１及び配列番号２５２；（ｙ）配列番号２５３、配列番号２５４及び配列番号２５５；（ｚ）配列番号２５６、配列番号２５７及び配列番号２５８；（ａｂ）配列番号２５９、配列番号２６０及び配列番号２６１；（ａｃ）配列番号２６２、配列番号２６３及び配列番号２６４；（ａｄ）配列番号２６５、配列番号２６６及び配列番号２６７；（ａｅ）配列番号２６８、配列番号２６９及び配列番号２７０；（ａｆ）配列番号２７１、配列番号２７２及び配列番号２７３；（ａｇ）配列番号２７４、配列番号２７５及び配列番号２７６；（ａｈ）配列番号２７７、配列番号２７８及び配列番号２７９；（ａｉ）配列番号２８０、配列番号２８１及び配列番号２８２；（ａｊ）配列番号２８３、配列番号２８４及び配列番号２８５；又は（ａｋ）配列番号２８６、配列番号２８７及び配列番号２８８。いくつかの特定の実施形態では、Ｖ_Ｌ領域は、以下のいずれか１つに現れる配列を含む：配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０及び配列番号７２。

【0099】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラ受容体（ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）の抗原結合部位は、Ｖ_Ｈ領域であるか、又はそれを含む。いくつかの特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ領域は、以下の重鎖ＣＤＲを含む：（ａ）配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５；（ｂ）配列番号７６、配列番号７７及び配列番号７８；（ｃ）配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１；（ｄ）配列番号８２、配列番号８３及び配列番号８４；（ｅ）配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７；（ｆ）配列番号８８、配列番号８９及び配列番号９０；（ｇ）配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３；（ｈ）配列番号９４、配列番号９５及び配列番号９６；（ｉ）配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９；（ｊ）配列番号１００、配列番号１０１及び配列番号１０２；（ｋ）配列番号１０３、配列番号１０４及び配列番号１０５；（ｌ）配列番号１０６、配列番号１０７及び配列番号１０８；（ｍ）配列番号１０９、配列番号１１０及び配列番号１１１；（ｎ）配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４；（ｏ）配列番号１１５、配列番号１１６及び配列番号１１７；（ｐ）配列番号１１８、配列番号１１９及び配列番号１２０；（ｑ）配列番号１２１、配列番号１２２及び配列番号１２３；（ｒ）配列番号１２４、配列番号１２５及び配列番号１２６；（ｓ）配列番号１２７、配列番号１２８及び配列番号１２９；（ｔ）配列番号１３０、配列番号１３１及び配列番号１３２；（ｕ）配列番号１３３、配列番号１３４及び配列番号１３５；（ｖ）配列番号１３６、配列番号１３７及び配列番号１３８；（ｗ）配列番号１３９、配列番号１４０及び配列番号１４１；（ｘ）配列番号１４２、配列番号１４３及び配列番号１４４；（ｙ）配列番号１４５、配列番号１４６及び配列番号１４７；（ｚ）配列番号１４８、配列番号１４９及び配列番号１５０；（ａｂ）配列番号１５１、配列番号１５２及び配列番号１５３；（ａｃ）配列番号１５４、配列番号１５５及び配列番号１５６；（ａｄ）配列番号１５７、配列番号１５８及び配列番号１５９；（ａｅ）配列番号１６０、配列番号１６１及び配列番号１６３；（ａｆ）配列番号１６３、配列番号１６４及び配列番号１６５；（ａｇ）配列番号１６６、配列番号１６７及び配列番号１６８；（ａｈ）配列番号１６９、配列番号１７０及び配列番号１７１；（ａｉ）配列番号１７２、配列番号１７３及び配列番号１７４；（ａｊ）配列番号１７５、配列番号１７６及び配列番号１７７；又は（ａｋ）配列番号１７８、配列番号１７９及び配列番号１８０。いくつかの特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ領域は、以下のいずれか１つに現れる配列を含む：配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０及び配列番号７２。

【0100】

いくつかの実施形態では、本発明は、治療又は診断で使用するための、本明細書に記載のキメラ抗原受容体を提供する。

【0101】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ１９発現を特徴とする疾患の治療、予防又は改善で使用するための、本明細書に記載のキメラ抗原受容体を提供する。

【0102】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載のキメラ抗原受容体（又は抗体剤若しくは二重特異性抗体）を発現する免疫エフェクター細胞を提供する。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞又はナチュラルキラーＴ細胞）又はＮＫ細胞である。

【0103】

いくつかの実施形態では、本発明は、治療又は診断で使用するための、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞を提供する。

【0104】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ１９発現を特徴とする疾患の治療、予防又は改善で使用するための、本明細書に記載の免疫エフェクター細胞を提供する。

【0105】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の、ヒト抗体剤、二重特異性抗体のポリペプチド鎖若しくは二重特異性抗体、又はキメラ抗原受容体を、全体又は一部としてコードする単離核酸分子を提供する。いくつかの実施形態では、単離核酸配列はコドン最適化配列を含む。

【0106】

いくつかの実施形態では、単離核酸配列は、以下のいずれか１つに現れる配列であるか、又はそれを含む：配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９及び配列番号７１。

【0107】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の単離核酸分子を含むベクターを提供する。いくつかの実施形態では、ベクターは、組換えベクター、発現ベクター、レンチウイルス（ｌｅｎｔ－ｖｉｒａｌ）ベクター、又はレトロウイルスベクターである。

【0108】

いくつかの実施形態では、本発明は、ベクター若しくは核酸分子を含む、又は、本明細書に記載の抗体剤、二重特異性抗体若しくはキメラ抗原受容体を発現する、細胞を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞又は哺乳類細胞から選択される。いくつかの実施形態では、細胞は哺乳類リンパ球（例えば、ヒトリンパ球）である。

【0109】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載のヒト抗体剤、二重特異性抗体、キメラ抗原受容体、単離核酸分子、ベクター又は細胞を含むキットを提供する。

【0110】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ１９関連疾患に罹患した対象、若しくはその素因を有する対象を診断するための、又は前記対象の状態の予後予測を与えるためのキットを提供する。前記キットは試験対象から得られた試料中に存在するＣＤ１９の濃度を検出するための検出手段を含み、前記検出手段は、各々所望により誘導体化されていてもよい、本明細書に記載のヒト抗体剤の抗原結合部位、本明細書に記載の二重特異性結合剤、本明細書に記載のキメラ抗原受容体、又は本明細書に記載の免疫エフェクター細胞を含み、前記試料中のＣＤ１９の存在によって前記対象がＣＤ１９関連疾患に罹患していることが示される。

【0111】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の単離核酸分子を含むワクチンを提供する。

【0112】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載のヒト抗体剤、二重特異性抗体又はキメラ抗原受容体を含む組成物を提供する。いくつかの特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物のヒト抗体剤又は二重特異性抗体は、細胞傷害性薬剤又は細胞傷害性部分に結合されている。

【0113】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載のキメラ抗原受容体を発現するヒト抗体剤、二重特異性抗体、キメラ抗原受容体、又は免疫細胞（若しくはその集団）を含み、且つ、医薬的に許容される担体又は希釈剤をさらに含む、医薬組成物を提供する。

【0114】

いくつかの実施形態では、本発明は、ヒト抗体剤、二重特異性抗体又はキメラ抗原受容体（又はキメラ抗原受容体を発現する細胞）の発現を可能にする条件下において培地中で本明細書に記載の細胞を培養する工程、及び、前記培地からヒト抗体剤、二重特異性抗体又はキメラ抗原受容体（又はキメラ抗原受容体を発現する細胞）を分離する工程を含む、本明細書に記載のヒト抗体剤、二重特異性抗体又はキメラ抗原受容体（又はキメラ抗原受容体を発現する細胞）の生産方法を提供する。

【0115】

いくつかの実施形態では、本発明は、治療有効量の、本明細書に記載のヒト抗体剤、二重特異性抗体、キメラ抗原受容体（若しくはキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞）、核酸分子、又はベクターを前記対象に投与する工程を含む、対象におけるＣＤ１９発現を特徴とする医学的状態の治療方法を提供する。

【0116】

いくつかの実施形態では、ＣＤ１９発現を特徴とする医学的状態は、Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球白血病、慢性リンパ球性白血病、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫又は急性骨髄性白血病である。

【0117】

いくつかの実施形態では、ＣＤ１９発現を特徴とする医学的状態は、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、糖尿病又は強皮症である。

【0118】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載のヒト抗体剤、二重特異性抗体、キメラ抗原受容体（若しくはキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞）、核酸分子又はベクターを対象に投与する工程を含む、がんの治療方法を提供する。

【0119】

いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍増殖を阻害する方法であって、腫瘍細胞と、本明細書に記載のヒト抗体剤を基とした第一の抗原結合部位及び免疫細胞と結合する第二の抗原結合部位から構成される、二重特異性抗体（又は本明細書に記載のヒト抗体剤、本明細書に記載のキメラ抗原受容体、又は本明細書に記載の免疫エフェクター細胞、本明細書に記載の核酸分子、又は本明細書に記載のベクター）とを接触させる工程を含み、前記接触は腫瘍細胞の殺滅が確認される（又は、二重特異性抗体が結合している免疫細胞が腫瘍細胞の増殖を阻害する）のに十分な条件及び時間で実行される、前記方法を提供する。

【0120】

いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍細胞を殺滅する方法であって、腫瘍細胞と、本明細書に記載のヒト抗体剤を基とした第一の抗原結合部位及び免疫細胞と結合する第二の抗原結合部位から構成される、二重特異性抗体（又は本明細書に記載のヒト抗体剤、本明細書に記載のキメラ抗原受容体、又は本明細書に記載の免疫エフェクター細胞、本明細書に記載の核酸分子、又は本明細書に記載のベクター）とを接触させる工程を含み、前記接触は腫瘍細胞増殖の阻害が認められる（又は、二重特異性抗体が結合している免疫細胞が腫瘍細胞の殺滅を媒介する）のに十分な条件及び時間で実行される、前記方法を提供する。

【0121】

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗体剤（又は本明細書に記載の二重特異性抗体若しくはキメラ抗原受容体）を投与する工程、及び、前記対象におけるＣＤ１９発現細胞への前記抗体剤（又は二重特異性抗体若しくはキメラ抗原受容体）の結合を測定する工程を含む、対象におけるＣＤ１９発現を特徴とする医学的状態を診断する方法を提供する。

【0122】

医学的状態を診断する方法のいくつかの実施形態では、前記方法は、前記対象の１又は複数の細胞の１又は複数の活性を測定する工程をさらに含む。いくつかの特定の実施形態では、１又は複数の活性には、細胞成長及び／又はアポトーシスが包含される。

【0123】

いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍増殖の阻害において使用するための、本明細書に記載のヒト抗体剤を基とした第一の抗原結合部位及び免疫細胞と結合する第二の抗原結合部位から構成される二重特異性抗体を提供する。

【0124】

いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍細胞の殺滅において使用するための、本明細書に記載のヒト抗体剤を基とした第一の抗原結合部位及び免疫細胞と結合する第二の抗原結合部位から構成される二重特異性抗体を提供する。

【0125】

いくつかの実施形態では、免疫細胞はＴ細胞又はＮＫ細胞である。

【0126】

いくつかの実施形態では、第一及び第二の抗原結合部位はｓｃＦｖである。

【0127】

いくつかの実施形態では、第二の抗原結合部位はＴ細胞上のＣＤ３と結合する。

【0128】

いくつかの実施形態では、本発明は、Ｔ細胞にＣＤ１９発現標的細胞の殺滅を指示する方法であって、１又は複数のＣＤ１９発現標的細胞と、１又は複数のＴ細胞、並びに／又は、本明細書に記載のヒト抗体剤の第一の抗原結合部位及びＴ細胞上のＣＤ３と結合する第二の抗原結合部位を含む二重特異性抗体（若しくは本明細書に記載のヒト抗体剤、本明細書に記載のキメラ抗原受容体若しくは本明細書に記載の免疫エフェクター細胞）とを接触させる工程を含み、前記接触は二重特異性抗体が結合しているＴ細胞がＣＤ１９発現標的細胞の殺滅を媒介するのに十分な条件及び時間で実行される、前記方法を提供する。いくつかの特定の実施形態では、第一及び第二の抗原結合部位はｓｃＦｖである。

【0129】

いくつかの実施形態では、本発明は、Ｔ細胞へのＣＤ１９発現標的細胞の殺滅の指示において使用するための、本明細書に記載のヒト抗体剤を基とした第一の抗原結合部位及びＴ細胞上のＣＤ３と結合する第二の抗原結合部位から構成される二重特異性抗体を提供する。

【0130】

種々の実施形態において、リンカー配列は、（Ｇ_４Ｓ）_ｎ配列であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上と等しい。

【0131】

種々の実施形態において、リンカー配列は、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２８９）であるか、又はそれを含む。

【0132】

種々の実施形態において、ＣＤ１９はヒトＣＤ１９である。

【0133】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ１９発現と関連した状態の治療又は検出のための、本明細書に記載のヒト抗体剤、二重特異性抗体又はキメラ抗原受容体（又はキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞）の使用を提供する。

【0134】

いくつかの実施形態では、本発明は、医薬用の薬物の製造における、本明細書に記載のヒト抗体剤、二重特異性抗体又はキメラ抗原受容体（又はキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞）の使用を提供する。

【0135】

いくつかの実施形態では、本発明は、診断テスト用又は診断アッセイ用の薬物の製造における、本明細書に記載のヒト抗体剤、二重特異性抗体又はキメラ抗原受容体（又はキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞）の使用を提供する。

【0136】

いくつかの実施形態では、本発明は、がん診断用又はがん治療用の薬物の製造における、本明細書に記載のヒト抗体剤、二重特異性抗体又はキメラ抗原受容体（又はキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞）の使用を提供する。

【0137】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ１９の発現を特徴とする医学的状態の診断用又は治療用の薬物の製造における、本明細書に記載のヒト抗体剤、二重特異性抗体又はキメラ抗原受容体（又はキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞）の使用を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0138】

本明細書に含まれる図面は、以下の図から構成され、例示のみを目的とし、限定は意図していない。

【図1】図１は、代表的な、選択された抗ＣＤ１９ヒト抗体剤についての、ヒトＣＤ１９に対するファージクローン結合を示している。図１Ａは、代表的な、組換えヒトＣＤ１９－Ｆｃのファージクローン結合（ＯＤ_４５０）を示している。図１Ｂは、代表的な、細胞表面発現型ヒトＣＤ１９のファージクローン結合（平均蛍光強度、ＭＦＩ）を示している。コントロール１：非ＣＤ１９結合性ファージｓｃＦｖ抗体クローン；コントロール２：市販のマウス抗ヒトＣＤ１９抗体（バイオレジェンド社（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ））；コントロール３：二次抗体のみ。

【図2】図２は、代表的な、選択された抗ＣＤ１９ヒト抗体剤についてのフローサイトメトリーアッセイにおける、ヒトＣＤ１９陽性Ｒａｊｉ細胞（Ｒａｊｉ）、ＣＤ１９ノックアウトＲａｊｉ細胞（Ｒａｊｉ －ＣＤ１９ ｋ．ｏ．）及びヒトＣＤ１９陰性Ｊｕｒｋａｔ細胞（Ｊｕｒｋａｔ）のファージクローン結合の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示している。コントロール１：二次抗体のみ（マウス抗Ｍ１３抗体及びＰＥ標識抗マウス抗体を含む）

【図3】図３は、代表的な、実施例２に記載される選択された二重特異性抗体を示すＳＤＳ－ＰＡＧＥの画像を示している。レーンの番号がゲル画像上部に示されている。レーン１：マーカー；レーン２：クローン２を使用したＣＤ１９×ＣＤ３二重特異性抗体；レーン３：クローン３を使用したＣＤ１９×ＣＤ３二重特異性抗体；レーン４：クローン４を使用したＣＤ１９×ＣＤ３二重特異性抗体；レーン５：クローン３７を使用したＣＤ１９×ＣＤ３二重特異性抗体；レーン６：ＢＬ１９（比較対照用の二重特異性抗体；米国特許第７，６３５，４７２号の配列番号３０を参照）。

【図4】図４は、代表的な、経時的（Ｘ軸、秒単位）な組換えヒトＣＤ１９ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質への例示的な二重特異性抗体分子の結合（Ｙ軸、ｎｍ単位）についての、Ｏｃｔｅｔによる結合／解離曲線を示している。動態段階（垂直の点線で分割）が各センサーグラムの上に示されている。ａ：ベースライン；ｂ：ビオチン化ヒトＣＤ１９－Ｆｃ（５μｇ／ｍＬ）；ｃ：再平衡；ｄ：ヒトＣＤ１９－Ｆｃ（１０μｇ／ｍＬ）への抗体結合；ｅ：抗体解離。試験された二重特異性抗体には、ファージクローン４、５、６、７、３７を基としたＣＤ１９×ＣＤ３二重特異性抗体、及びＢＬ１９（比較対照用の二重特異性抗体；米国特許第７，６３５，４７２号の配列番号３０を参照）が含まれた。

【図5】図５Ａは、代表的な、ＣＤ２０（Ｙ軸）及びＣＤ３（Ｘ軸）で染色されたヒトＰＢＭＣのフローサイトメトリー解析、並びに、図５Ｂにおける二重特異性抗体の結合性解析に使用されたＢ細胞集団のゲートを示している。図５Ｂは、代表的な、クローン４、５、６及び３７を基とした例示的な二重特異性抗体分子についての、種々の細胞株のがん細胞の殺滅（単位は％特異的細胞溶解、Ｙ軸）を示している。

【図6】図６Ａは、代表的な、選択された親抗体ファージクローンの親和性成熟によって作製された例示的なバリアント抗体ファージクローンの細胞結合（フローサイトメトリーアッセイにおけるＭＦＩで測定）を示している。バリアントクローンはハイフン付きで示されている（すなわち、クローン５－１、クローン５－３、クローン５－４等は親クローン５から得られ；クローン６－１、クローン６－２等は親クローン６から得られた）。アステリスク：クローン５－１３は、Ｊｅｋｏ－１細胞株、Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ ｋ．ｏ．細胞株又はＪｕｒｋａｔ細胞株への結合について試験されなかった。図６Ｂは、代表的な、それぞれの親クローンと比較された、Ｒａｊｉ細胞への選択されたバリアント抗体ファージクローンの細胞結合を示している。バリアントクローンはハイフン付きで示されており、すなわち、クローン５－１、クローン５－３、クローン５－４等は親クローン５から得られ；クローン６－１、クローン６－２等は親クローン６から得られた。破線は、対応する二重特異性抗体の競合的結合の下での、それぞれの親クローンのバックグラウンド結合を示している。

【図7】図７Ａは、代表的な、実施例４に記載された親和性成熟抗体ファージクローンから構築された選択された二重特異性抗体を示すＳＤＳ－ＰＡＧＥの画像を示している。クローンの番号を各レーンの上部に示す。図７Ｂは、代表的な、親和性成熟抗ＣＤ１９ヒト抗体剤から構築された選択された二重特異性抗体分子についての、種々の細胞株のがん細胞の殺滅（単位は％特異的細胞溶解、Ｙ軸）を示している。

【0139】

【図8】図８は、代表的な、抗ＣＤ１９ヒト抗体剤から作製された選択されたキメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）についての、種々の細胞株のがん細胞の殺滅（単位は％特異的細胞溶解、Ｙ軸）を示している。標的細胞株（ＣＤ１９^＋）にはＲａｊｉ及びＪｅｋｏ－１が含まれ；ネガティブコントロール細胞株（ＣＤ１９^－）にはＪｕｒｋａｔ細胞及びＲａｊｉ－ＣＤ１９ ｋ．ｏ．細胞が含まれ；ＢＬ１９は米国特許第７，６３５，４７２号の配列番号３０を基とした比較対照用ＣＡＲであり；ＦＭＣ６３はＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＤＤ０６４９０２、米国特許第７，４４６，１７９号を基とした比較対照用ＣＡＲであり；コントロールはモック形質導入Ｔ細胞である。

【図9】図９は、代表的な、選択された抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ又はコントロールＴ細胞（モック形質導入）を用いた、種々のがん細胞株のＣＡＲ発現（上段パネル）及びインビトロ細胞の殺滅（下段パネル）を示している。ＣＤ１９^＋細胞：Ｒａｊｉ、ＣＡ４６、Ｊｅｋｏ－１及びＤａｕｄｉ；ＣＤ１９^－細胞：Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ＫＯ（すなわち、Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ ｋ．ｏ．）、Ｊｕｒｋａｔ、ＴＨＰ－１、ＨｅＬａ、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＣＦ－７、ＳＫ－Ｈｅｐ－１及びＨｅｐＧ２。

【図10】図１０は、代表的な、種々のＣＤ１９^＋細胞株（Ｒａｊｉ、ＣＡ４６）及びＣＤ１９^－細胞株（Ｒａｊｉ－Ｋ／Ｏ、すなわち、Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ ｋ．ｏ．、Ｊｕｒｋａｔ）と共培養した後の、モック形質導入Ｔ細胞（ｍｏｃｋ）又は抗ＣＤ１９ ＣＡＲ（クローン５－３を基としたＣａｒ）を形質導入されたＴ細胞の、サイトカイン放出を示している。

【図11】図１１は、代表的な、抗ＣＤ１９ヒト抗体剤クローン５－９を基とした例示的な抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔによる、ＮＳＧマウスにおけるインビボ腫瘍増殖の阻害を示している。左：代表的な、曲線下面積（ＡＵＣ）で表示及び分析された、担癌ＮＳＧマウスからの光子放射のカイネティクス；右：代表的な、各処置群からの３週目のＲａｊｉ－ｌｕｃ－ＧＦＰ担癌マウスの光子放射画像。

【図12】図１２は、３Ｔ３（左）及びＲａｊｉ（右）由来細胞株におけるＣＤ１９発現のＦＡＣｓヒストグラムを示している。

【図13】図１３は、代表的な、抗ＣＤ１９ヒト抗体剤クローン５－１３を基とした例示的な抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔで処置されたＮＳＧマウスにおけるＲａｊｉリンパ腫異種移植片からの腫瘍由来生物発光を示している。図１３Ａ：代表的な、リン酸緩衝食塩水（ビヒクル、ｎ＝５）、ＣＡＲをコードするコンストラクト無しで形質導入されたＴ細胞（モック、ｎ＝６）、又は抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔクローン５－１３をコードするコンストラクトを形質導入されたＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ ５－１３、ｎ＝７；５×１０^６ ＣＡＲ^＋Ｔ細胞／マウスで１回処置されたＮＳＧマウスにおけるＲａｊｉリンパ腫異種移植片からの腫瘍由来生物発光の多色画像；日数は腫瘍移植後日数である；投与は５日目に行った）。グレースケール変換されたヒートマップは、マウス画像上に重ねられた暗いスポットとして現れる、腫瘍部位における総光子／秒を示している；図１３Ｂ：代表的な、ＮＳＧマウスにおける、Ｒａｊｉリンパ腫異種移植片の全光束（ｐ／ｓ）対移植後日数として表された、モック処置群及びＣＡＲ－Ｔ ５－１３処置群における腫瘍増殖の定量化；Ｃ：代表的な、初回移植及び処置の７週間後に腫瘍細胞を再投与されたＮＳＧマウス（ｎ＝３、最初の移植後３５日目にマウス１匹当たり０．５×１０^６個のＲａｊｉ細胞を注射）における、全光束（ｐ／ｓ）対再投与（ｒｅ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）後日数として表された、モック処置群及びＣＡＲ－Ｔ ５－１３処置群における腫瘍増殖の定量化。無処置マウス（ｎ＝２）は、コントロールとして、１×１０^６個のモック形質導入Ｔ細胞の注射の１日後にＲａｊｉ細胞を移植された。

【図14】図１４は、代表的な、抗ＣＤ１９ヒト抗体剤クローン５－１３を基とした例示的な抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔで処置されたＮＳＧマウスにおけるＮＡＬＭ－６白血病異種移植片からの腫瘍由来生物発光を示している。図１４Ａ：代表的な、リン酸緩衝食塩水（ビヒクル、ｎ＝６）、ＣＡＲをコードするコンストラクト無しで形質導入されたＴ細胞（モック、ｎ＝６）、又は抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔクローン５－１３をコードするコンストラクトを形質導入されたＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ ５－１３、ｎ＝６；５×１０^６ ＣＡＲ＋Ｔ細胞／マウスで１回処置されたＮＳＧマウスにおけるＮＡＬＭ－６白血病異種移植片からの腫瘍由来生物発光の多色画像；日数は腫瘍移植後日数である；投与は５日目に行った）；図１４Ｂ：代表的な、ＮＳＧマウスにおける、全光束（ｐ／ｓ）対ＮＡＬＭ－６白血病異種移植片移植後日数として表された、ビヒクル処置群、モック処置群及びＣＡＲ－Ｔ ５－１３処置群における腫瘍増殖の定量化。

【図15】図１５は、代表的な、選択された抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ又はコントロールＴ細胞（モック形質導入）を用いた、種々のがん細胞株のＣＡＲ発現（下段パネル）及びインビトロ細胞の殺滅（上段パネル）を示している。ＣＤ１９^＋細胞：Ｒａｊｉ、ＩＭ９及びＪｅｋｏ－１；ＣＤ１９^－細胞：Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ＫＯ（すなわち、Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ ｋ．ｏ．）及びＴＨＰ－１。

【発明を実施するための形態】

【0140】

定義

【0141】

本発明の範囲は、本明細書に添付される特許請求の範囲によって定められ、本明細書に記載される特定の実施形態に限定されない。当業者であれば、本開示の教示により、そのような記載された実施形態と同等であり得る、あるいは特許請求の範囲内である、様々な変更形態に気が付くであろう。

【0142】

概して、本明細書で使用される専門用語は、特に指示がない限り、本技術分野において理解されるその意味に従うものとする。ある特定の用語の明確な定義を以下に記載するが、本明細書中の特定の場合におけるこれら及び他の用語の意味は、文脈から当業者には明らかとなる。

【0143】

本発明の理解をより容易にするために、まず、ある特定の用語を以下で定義する。本明細書の全体を通して、以下の用語及び他の用語への追加の定義が記載される。

【0144】

投与
本明細書で使用される場合、用語「投与」は、対象又は系（例えば、細胞、器官、組織、生物、又は関連成分、すなわちその一連の成分）への組成物の投与を指す。投与経路が、例えば、組成物が投与されている対象又は系、組成物の性質、投与の目的等によって異なる場合があることは、当業者には理解される。例えば、ある特定の実施形態では、動物対象（例えば、ヒト）への投与は、気管支投与（気管支注入による投与を含む）、頬側投与、経腸投与、皮中（ｉｎｔｅｒｄｅｒｍａｌ）投与、動脈内投与、皮内投与、胃内投与、肝内投与、髄内投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、腹腔内投与、くも膜下腔内投与、腫瘍内投与、静脈内投与、脳室内投与、粘膜投与、 経鼻投与、経口投与、直腸内投与、皮下投与、舌下投与、局所投与、気管投与（気管内注入による投与を含む）、経皮投与、膣内投与及び／又は硝子体内投与であり得る。いくつかの実施形態では、投与は、間欠的に投与するものであり得る。いくつかの実施形態では、投与は、少なくとも選択された期間持続的に投与するもの（例えば、灌流）であり得る。

【0145】

親和性
本技術分野で知られているように、「親和性」は、特定のリガンドのそのパートナーへの結合に伴う堅固さの尺度である。親和性は様々な方法で測定可能である。いくつかの実施形態では、親和性は定量的アッセイによって測定される。そのようないくつかの実施形態では、生理的条件の模倣のために、結合パートナーの濃度がリガンド濃度以上に固定され得る。あるいは又はさらに、いくつかの実施形態では、結合パートナー濃度及び／又はリガンド濃度が変動され得る。そのようないくつかの実施形態では、親和性は類似条件（例えば、濃度）下のリファレンスと比較され得る。

【0146】

親和性成熟（又は親和性成熟抗体）
親和性成熟（又は親和性成熟抗体）とは、本明細書で使用される場合、その１又は複数のＣＤＲ内（又は、いくつかの実施形態では、フレームワーク領域内）に１又は複数の変化を有する抗体であって、それらの変化を有さない親抗体との比較で、抗原に対する抗体の親和性が向上した抗体を指す。いくつかの実施形態では、親和性成熟抗体は標的抗原に対して、ナノモル、さらにはピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は本技術分野において公知の種々の方法のいずれにより作製されてもよい。Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．， １９９２， ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３には、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインシャッフリングによる親和性成熟が記載されている。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム変異誘発が以下に記載されている：Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， Ｕ．Ｓ．Ａ． ９１：３８０９－３８１３； Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｇｅｎｅ １６９： １４７－１５５； Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９９５． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５５：１９９４－２００４； Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５４（７）：３３１０－９；およびＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．， １９９２， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２６：８８９－８９６。結合特性が向上した結合剤の選別が、Ｔｈｉｅ ｅｔ ａｌ．， ２００９， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏ． ５２５：３０９－２２に記載されている。

【0147】

剤
剤とは、本明細書で使用される場合、例えば、ポリペプチド、核酸、糖類、脂質、小分子、金属、又はこれらの組み合わせを含む、あらゆるケミカルクラスの化合物又は実体を指し得る。いくつかの実施形態では、剤は、天然に存在する、且つ／又は天然から得られるという点で、天然物であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、剤は、人為的に設計、操作、及び／若しくは生産される、且つ／又は天然に存在しないという点で、１若しくは複数の人工的な実体であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、剤は、単離された形態で利用されてもよいし、純粋な形態で利用されてもよい。いくつかの実施形態では、剤は未精製の形態で利用されてもよい。いくつかの実施形態では、有望な剤が、例えば、中に含まれる活性薬剤を同定又は特徴付けするためにスクリーニングされ得る、コレクション又はライブラリーとして得られる。本発明において利用され得る剤のいくつかの特定の実施形態には、小分子、抗体、抗体断片、アプタマー、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム）、ペプチド、ペプチド模倣薬等が包含される。いくつかの実施形態では、剤は重合体であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、剤は重合体ではない、且つ／又は、いかなる重合体も実質的に含まない。いくつかの実施形態では、剤は、少なくとも１つの重合体部分を含有する。いくつかの実施形態では、剤は、重合体部分を欠いているか、又は、いかなる重合体部分も実質的に含まない。

【0148】

改善
改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）とは、本明細書で使用される場合、ある状態の予防、低減若しくは一時的緩和、又は、対象のある状態の改善（ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ）を指す。改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）には、疾患、傷害又は状態（例えば、放射線損傷）の、完全な回復又は完全な予防が含まれるが、それが必要というわけではない。

【0149】

アミノ酸
本明細書で使用される場合、用語「アミノ酸」は、その最も広い意味では、ポリペプチド鎖に組み入れることが可能なあらゆる化合物及び／又は物質を指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸は一般構造Ｈ２Ｎ－Ｃ（Ｈ）（Ｒ）－ＣＯＯＨを有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸は天然アミノ酸である。いくつかの実施形態では、アミノ酸は合成アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸はｄ－アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸はｌ－アミノ酸である。「標準アミノ酸」とは、天然ペプチドによく見られる２０種の標準ｌ－アミノ酸のいずれかを指す。「非標準アミノ酸」とは、合成によって作製されたか天然源から得られたかに関わらず、標準アミノ酸以外のあらゆるアミノ酸を指す。本明細書で使用される場合、「合成アミノ酸」は化学修飾アミノ酸を包含し、例えば、限定はされないが、塩、アミノ酸誘導体（アミド等）、及び／又は置換が挙げられる。ペプチド内のカルボキシ末端及び／又はアミノ末端のアミノ酸を含むアミノ酸は、活性を邪魔せずにペプチドの循環系内半減期を変化させ得る、メチル化、アミド化、アセチル化、保護基、及び／又は他の化学基との置換によって修飾することが可能である。アミノ酸は、ジスルフィド結合に参加している場合がある。アミノ酸は、１又は複数の化学成分（例えば、メチル基、酢酸基、アセチル基、リン酸基、ホルミル部分、イソプレノイド基、硫酸基、ポリエチレングリコール部分、脂質部分、炭水化物部分、ビオチン部分等）との結合等、一つ又は翻訳後修飾を含み得る。用語「アミノ酸」は、「アミノ酸残基」と同義的に使用され、遊離アミノ酸及び／又はペプチドのアミノ酸残基を指し得る。遊離アミノ酸又はペプチドの残基のどちらを指しているかは、前記用語が使用されている文脈から明らかである。

【0150】

動物
動物は、本明細書で使用される場合、動物界のあらゆる構成員を指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、いずれかの性別の、あらゆる発達段階の、ヒトを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、あらゆる発達段階の、非ヒト動物を指す。ある特定の実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、及び／又はブタ）である。いくつかの実施形態では、動物には、限定はされないが、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚、昆虫（ｉｎｓｅｃｔ）、及び／又は蠕虫（ｗｏｒｍ）が包含される。いくつかの実施形態では、動物は、遺伝子導入動物、遺伝子改変動物、及び／又はクローンであり得る。

【0151】

抗体
抗体は、本明細書で使用される場合、本技術分野で理解される意味を有し、特定の抗原に特異的に結合する免疫グロブリン（Ｉｇ）を指す。当業者には公知であるように、天然において産生される抗体は、典型的には、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖からなる４つのポリペプチド鎖から構成される。それぞれの重鎖及び軽鎖は、可変領域（本明細書では、それぞれＨＣＶＲ又はＶ_Ｈ及びＬＣＶＲ又はＶ_Ｌと略される）及び定常領域から構成される。重鎖の定常領域は、Ｃ_Ｈ１ドメイン、Ｃ_Ｈ２ドメイン及びＣ_Ｈ３ドメイン（並びに、ＩｇＭ及びＩｇＥの場合では、所望によりＣ_Ｈ４ドメイン）を含む。軽鎖の定常領域は１個のＣ_Ｌドメインから構成される。Ｖ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域はさらに、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が挟まれた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域を含有する。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌはそれぞれ、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、以下の順番で配置された、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。免疫グロブリン分子は、あらゆる種類（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥ）、あらゆるクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、又はあらゆるサブクラス、の免疫グロブリン分子とすることができる。

【0152】

抗体剤
本明細書で使用される場合、用語「抗体剤」は、特定の抗原に特異的に結合する剤を指す。いくつかの実施形態では、前記用語は、特異的な結合性を付与するのに十分な免疫グロブリン構造要素を有するあらゆるポリペプチドを包含する。種々の実施形態において、好適な抗体剤としては、限定はされないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体又は多重特異性抗体、単一ドメイン抗体（例えば、サメ単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲ又はその断片））、結合型抗体（すなわち、他のタンパク質、放射標識、細胞毒に結合又は融合した抗体）、Ｓｍａｌｌ Ｍｏｄｕｌａｒ ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（「ＳＭＩＰｓ（商標）」）、一本鎖抗体、ラクダ科（ｃａｍｅｌｏｉｄ）抗体、抗体断片等が挙げられ得る。いくつかの実施形態では、前記用語はステープルペプチドを指す可能性がある。いくつかの実施形態では、前記用語は抗体様結合性ペプチド模倣薬（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｌｉｋｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）を指す可能性がある。いくつかの実施形態では、前記用語は抗体様結合性足場タンパク質（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｌｉｋｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｃａｆｆｏｌｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）を指す可能性がある。いくつかの実施形態では、前記用語はモノボディ（ｍｏｎｏｂｏｄｙ）又はアドネクチン（ａｄｎｅｃｔｉｎ）を指す可能性がある。多くの実施形態において、抗体剤は、相補性決定領域（ＣＤＲ）として当業者が認識する１又は複数の構造要素を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドであるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、抗体剤は、参照抗体（例えば、親抗体）に存在するものと実質的に同一な少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、少なくとも１つの重鎖ＣＤＲ及び／又は少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ）を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドであるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲとの比較で、配列が同一である、又は１～５個のアミノ酸置換を含有するという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲと少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を示すという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲと少なくとも９６％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を示すという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲとの比較で、含まれるＣＤＲ内の少なくとも１つのアミノ酸が欠失、付加、又は置換されているという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一であるが、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲのアミノ酸配列と他の点では同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲとの比較で、含まれるＣＤＲ内の１～５個のアミノ酸が欠失、付加、又は置換されているという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一であるが、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲと他の点では同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲとの比較で、含まれるＣＤＲ内の少なくとも１つのアミノ酸が置換されているという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一であるが、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲのアミノ酸配列と他の点では同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲとの比較で、含まれるＣＤＲ内の１～５個のアミノ酸が置換されているという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一であるが、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲと他の点では同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体剤は、免疫グロブリン可変ドメインとして当業者が認識する構造要素を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドであるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、抗体剤は、免疫グロブリン結合ドメインと相同又は大部分相同である結合ドメインを有するポリペプチドタンパク質（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）である。いくつかの実施形態では、抗体剤は、特定の参照抗体の１つ又は複数の鎖（例えば、重鎖及び／又は軽鎖）に存在する全てのＣＤＲを含むポリペプチドであるか、又はそれを含む。

【0153】

抗体成分（Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）
抗体成分とは、本明細書で使用される場合、エピトープ又は抗原に特異的に結合し、且つ、１又は複数の免疫グロブリン構造特徴を含む、ポリペプチド成分（完全ポリペプチドであってもよいし、又は、例えば本明細書に記載の融合ポリペプチド等のより大きなポリペプチドの一部であってもよい）を指す。一般的に、抗体成分は、抗体結合領域に特有の成分（例えば、所望により１又は複数のフレームワーク領域の存在下の、抗体軽鎖若しくはその可変領域若しくはその１若しくは複数の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）、又は、抗体重鎖若しくはその可変領域若しくはその１つ複数のＣＤＲ）を含むアミノ酸配列を有するあらゆるポリペプチドである。いくつかの実施形態では、抗体成分は、完全長抗体であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、抗体成分は、完全長に満たないが、少なくとも１つの結合部位（既知の抗体「可変領域」の構造を有する少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つの配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、用語「抗体成分」は、免疫グロブリン結合ドメインと相同又は大部分相同である結合ドメインを有するあらゆるタンパク質を包含する。特定の実施形態では、含まれる「抗体成分」は、免疫グロブリン結合ドメインと少なくとも９９％の同一性を示す結合ドメインを有するポリペプチドを包含する。いくつかの実施形態では、含まれる「抗体成分」は、免疫グロブリン結合ドメイン、例えば参照免疫グロブリン結合ドメインと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９８％の同一性を示す結合ドメインを有するあらゆるポリペプチドである。含まれる「抗体成分」は、天然源に存在する抗体（又はその一部、例えば、その抗原結合性部分）のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有してもよい。抗体成分は、単一特異性であっても、二重特異性であっても、又は多重特異性であってもよい。抗体成分は、あらゆるヒトクラス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）を含む、あらゆる免疫グロブリンクラスに特有の構造要素を含んでもよい。抗体の抗原結合性機能は完全長抗体の断片によって実行可能であることが示されている。そのような抗体の実施形態は、２つ以上の異なる抗原に特異的に結合する、二重特異性（ｂｉ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ）フォーマットであってもよいし、両特異性（ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃ）フォーマットであってもよいし、又は多重特異性フォーマットであってもよい。抗体の用語「抗原結合性部分」に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、Ｃ_Ｈ１ドメイン及びＣ_Ｌドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋で連結された２個のＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）_２断片；（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈドメイン及びＣ_Ｈ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体のシングルアームのＶ_Ｈドメイン及びＶ_ＬドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一可変ドメインを含むｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ， １９８９， Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）；並びに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン（Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメイン）は別々の遺伝子にコードされているが、組換え法を用いて、Ｖ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域が対となって一価の分子を形成している単一タンパク質鎖（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ８５：５８７９－５８８３を参照）としての作製を可能にする合成リンカーによって、連結可能である。いくつかの実施形態では、「抗体成分」は、本明細書に記載されるように、そのような一本鎖抗体であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、「抗体成分」は、ダイアボディであるか、又はそれを含む。ダイアボディは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを１本鎖ポリペプチド上で発現させ、ただし、同一鎖上のこの２つのドメイン間での対合を可能とするには短過ぎるリンカーを使用することで、これらのドメインと別の鎖の相補的ドメインとを強制的に対合させ、２つの抗原結合部位をつくり出した、二価の二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ， Ｐ．， ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ９０：６４４４－６４４８； Ｐｏｌｊａｋ， Ｒ． Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３を参照）。このような抗体結合部分は本技術分野において公知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．， Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ２００１， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ． ７９０ ｐｐ． ＩＳＢＮ ３－５４０－４１３５４－５）。いくつかの実施形態では、抗体成分は、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒になって一対の抗原結合領域を形成する、一対の直列型Ｆｖセグメント（Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１）を含む、一本鎖「直鎖抗体」であるか、又はそれを含む（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． ８（１０）：１０５７－１０６２；及び米国特許第５，６４１，８７０号）。いくつかの実施形態では、抗体成分は、キメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体に特有の構造要素を有し得る。一般的に、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力（ｃａｐａｃｉｔｙ）を有するマウス、ラット又はウサギ等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲの残基によって置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの実施形態では、抗体成分は、ヒト抗体に特有の構造要素を有し得る。いくつかの実施形態では、抗体成分は、１又は複数の追加のポリペプチド又はポリペプチド断片（例えば、シグナル伝達成分、膜貫通型成分等）をさらに含むキメラ分子に含まれ得る。

【0154】

抗体断片
本明細書で使用される場合、「抗体断片」には、例えば抗体の抗原結合性領域又は可変領域等の、インタクトな抗体の一部が包含される。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；トリアボディ；テトラボディ；直鎖抗体；一本鎖抗体分子；並びに抗体断片から形成された多重特異性抗体に含まれるＣＤＲ含有部分が挙げられる。用語「抗体断片」が、いかなる特定の作製様式も暗示せず、それに限定されないことは、当業者に理解される。抗体断片は、インタクトな抗体の切断、化学合成、組換え産生等を含むがこれらに限定はされない、あらゆる適切な方法論の使用を通じて生産され得る。

【0155】

抗体ポリペプチド
本明細書で使用される場合、用語「抗体ポリペプチド（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」又は「抗体」、又は「その抗原結合性断片」は、同義的に使用されている場合があり、エピトープに結合することが可能なポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、抗体ポリペプチドは完全長抗体であり、いくつかの実施形態では、完全長に満たないが少なくとも１つの結合部位（抗体「可変領域」の構造を有する、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つの配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、用語「抗体ポリペプチド」は、免疫グロブリン結合ドメインと相同又は大部分相同である結合ドメインを有するあらゆるタンパク質を包含する。特定の実施形態では、含まれる「抗体ポリペプチド」は、免疫グロブリン結合ドメインと少なくとも９９％の同一性を示す結合ドメインを有するポリペプチドを包含する。いくつかの実施形態では、「抗体ポリペプチド」は、免疫グロブリン結合ドメイン、例えば参照免疫グロブリン結合ドメインと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の同一性を示す結合ドメインを有するあらゆるポリペプチドである。含まれる「抗体ポリペプチド」は、天然源に存在する抗体のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有してもよい。本発明における抗体ポリペプチドは、例えば、天然源若しくは抗体ライブラリーからの単離、宿主系内での、若しくは宿主系による組換え産生、化学合成等、又はこれらの組み合わせを含む、利用可能なあらゆる手段によって作製され得る。抗体ポリペプチドはモノクローナルであってもポリクローナルであってもよい。抗体ポリペプチドは、あらゆるヒトクラス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）を含む、あらゆる免疫グロブリンクラスの構成要素を含んでもよい。ある特定の実施形態では、抗体はＩｇＧ免疫グロブリンクラスの構成要素であり得る。本明細書で使用される場合、用語「抗体ポリペプチド」又は「抗体の特徴的部分」は、同義的に使用され、目的のエピトープへの結合能を有する抗体のあらゆる誘導体を指す。ある特定の実施形態では、「抗体ポリペプチド」は、完全長抗体の特異的結合能の、少なくとも１つの重要な部分を保持する抗体断片である。抗体断片の例としては、限定はされないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄｓＦｖダイアボディ、及びＦｄ断片が挙げられる。あるいは又はさらに、抗体断片は、例えばジスルフィド結合によって互いに連結されている複数の鎖を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、抗体ポリペプチドはヒト抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗体ポリペプチドはヒト化抗体であり得る。包含されるヒト化抗体ポリペプチドは、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又は抗体ポリペプチド（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２又は他の抗原結合性抗体部分配列等）であり得る。一般的に、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット又はウサギ等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲの残基によって置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。

【0156】

抗原結合性断片（Ａｎｔｉｇｅｎ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｆｒａｇｍｅｎｔ）
用語「抗原結合性断片」は、本明細書で使用される場合、抗原への結合能を保持する、抗体の１又は複数の断片を指す。抗体の抗原結合性機能はインタクトな抗体の断片によって実行可能であることが示されている。抗体の用語「抗原結合性断片」に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｖ_Ｌドメイン、Ｖ_Ｈドメイン、Ｃ_Ｌドメイン及びＣ_Ｈ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋で連結された２個のＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）_２断片；（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈドメイン及びＣ_Ｈ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体のシングルアームのＶ_Ｌドメイン及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）Ｖ_ＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．， （１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）；（ｖｉ）追加配列（リンカー、フレームワーク領域等）を含む又は含まない、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、例えば、Ｖ_Ｈ ＣＤＲ３、並びに、（ｖｉｉ）追加配列（リンカー、フレームワーク領域等）を含む又は含まない、２～６個の単離ＣＤＲの組み合わせが挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン（ＶＬドメイン及びＶＨドメイン）は別々の遺伝子にコードされているが、組換え法を用いて、ＶＬ領域及びＶＨ領域が対合して一価の分子を形成している単一ポリペプチド鎖（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照）としての作製を可能にする合成リンカーによって、連結可能である。そのような一本鎖抗体も、抗体の「抗原結合性断片」という用語に包含されることが意図される。さらに、抗原結合性断片には、（ｉ）免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドに融合された結合ドメインポリペプチド（重鎖可変領域、軽鎖可変領域、又はリンカーペプチドを介して軽鎖可変領域に融合された重鎖可変領域等）、（ｉｉ）ヒンジ領域に融合された免疫グロブリン重鎖ＣＨ２定常領域、及び、（ｉｉｉ）ＣＨ２定常領域に融合された免疫グロブリン重鎖ＣＨ３定常領域、を含む、結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質が包含される。前記ヒンジ領域は、二量体化を阻止する目的で、１又は複数のシステイン残基のセリン残基との置換により、修飾されていてもよい。そのような結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質については、米国特許出願公開第２００３／０１１８５９２Ａ１号及び米国特許出願公開第２００３／０１３３９３９Ａ１号にさらなる開示がある。抗体断片は、当業者に公知の従来技術を用いて得られ、インタクトな抗体と同様に有効性についてスクリーニングされる。さらに、抗原結合性断片は、二価の一本鎖可変断片（ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｂｉ－ｓｃＦｖ）又は、あるいは、標準的な分子生物学的手段によって操作可能な、いわゆるダイアボディも包含する。

【0157】

生物活性（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ）
本明細書で使用される場合、生物活性とは、目的の剤若しくは実体によって達成される、観察可能な生物学的効果又は結果を指す。例えば、いくつかの実施形態では、特異的結合相互作用が生物活性である。いくつかの実施形態では、生物学的経路又は生物学的事象の調節（例えば、誘導、増強、又は阻害）が生物活性である。いくつかの実施形態では、生物活性の存在又は程度が、目的の生物学的経路又は生物学的事象によって産生された直接的又は間接的な産物の検出を通じて評価される。

【0158】

二重特異性抗体（Ｂｉ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）
本明細書で使用される場合、二重特異性抗体とは、結合部分の少なくとも一方、典型的には両方が、抗体成分であるか、又はそれを含む、二重特異性結合剤を指す。種々様々な二重特異性抗体の構造が本技術分野において公知である。いくつかの実施形態では、抗体成分であるか、又はそれを含む、二重特異性抗体内の各結合部分は、Ｖ_Ｈ領域及び／又はＶ_Ｌ領域を含み；いくつかのそのような実施形態では、Ｖ_Ｈ領域及び／又はＶ_Ｌ領域は特定のモノクローナル抗体に存在するＶ_Ｈ領域及び／又はＶ_Ｌ領域である。二重特異性抗体が２個の抗体成分結合部分を含有するいくつかの実施形態では、各々は、異なるモノクローナル抗体に由来するＶ_Ｈ領域及び／又はＶ_Ｌ領域を含む。

【0159】

二重特異性結合剤（Ｂｉ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）
二重特異性結合剤とは、本明細書で使用される場合、異なる標的と各々結合する２個の別々の結合部分を有するポリペプチド剤を指す。いくつかの実施形態では、二重特異性結合剤は単一ポリペプチドであり；いくつかの実施形態では、二重特異性結合剤は複数のペプチドであるか、又はそれを含み、いくつかのそのような実施形態では、前記複数のペプチドは、例えば架橋結合によって、互いに共有結合している場合がある。いくつかの実施形態では、二重特異性結合剤の２個の結合部分は、同じ標的（例えば、抗原）の異なる部位（例えば、エピトープ）を認識し；いくつかの実施形態では、二重特異性結合剤の２個の結合部分は、異なる標的を認識する。いくつかの実施形態では、二重特異性結合剤は、構造が異なる２つの標的に同時に結合することが可能である。

【0160】

担体
担体とは、本明細書で使用される場合、組成物と共に投与される、希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。いくつかの例示的な実施形態では、担体には、例えば、水及び、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、ミネラルオイル、ゴマ油等の、石油由来、動物由来、植物由来又は合成由来の油を包含する油等の、無菌の液体が包含され得る。いくつかの実施形態では、担体は、１又は複数の固体成分であるか、又はそれを含む。

【0161】

ＣＤＲ
ＣＤＲとは、本明細書で使用される場合、抗体可変領域内の相補性決定領域を指す。重鎖及び軽鎖の各可変領域には３つのＣＤＲが存在し、可変領域の各々においてＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と称される。「一連のＣＤＲ」又は「ＣＤＲセット」とは、抗原と結合可能な単一の可変領域、又は抗原と結合可能な同起源の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のＣＤＲのいずれかに生じる、３個又は６個のＣＤＲ群を指す。ＣＤＲの境界は系に応じて定義が異なっており、その中のいくつかは本技術分野において公知である（例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ等）。

【0162】

キメラ抗原受容体（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＣＡＲ）
単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）を包含する本発明の抗体剤は、キメラ抗原受容体の調製に使用され得るが、その調製及び使用は本技術分野において一般に知られている。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、典型的には、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）シグナル伝達ドメインに連結された、ｓｃＦｖの抗原結合性ドメイン、又は他の抗体剤を含有する、人工的に構築されたハイブリッドタンパク質又はハイブリッドポリペプチドである。ＣＡＲの特徴としては、モノクローナル抗体の抗原結合特性を活用して、ＭＨＣ拘束的（ＴＣＲ模倣抗体の場合）又は非ＭＨＣ拘束的（Ｔ細胞表面タンパク質に対する抗体の場合）に、選択された標的に対する特異性及び反応性を免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に再指示する能力が挙げられる。非ＭＨＣ拘束性抗原認識が、ＣＡＲを発現している免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に抗原プロセシングとは無関係の抗原認識能を与えることで、腫瘍エスケープの主要機構が迂回される。

【0163】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法（又は養子免疫細胞療法）
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法（又は養子免疫細胞療法）とは、本明細書で使用される場合、例えば養子免疫細胞療法（ａｄｏｐｔｉｖｅ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ）を含む、治療的処置のための、キメラ抗原受容体の使用を指す。養子免疫細胞療法は、典型的には、免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞又はＴ細胞）の単離及び生体外増殖及び／又は操作を行うことと、その後に、例えばがん治療のために、患者にこれらの細胞を投与することと、を含む治療的アプローチである。投与される細胞は自己細胞であっても同種細胞であってもよい。細胞は、例えば、全て本技術分野において公知の技術である、ＲＮＡ及びＤＮＡトランスフェクション、ウイルスによる形質導入、エレクトロポレーションの使用による、公知の方法のいずれか１つにおいて、キメラ抗原受容体を発現するように操作され得る。

【0164】

同等の（ｃｏｍｐａｒａｂｌｅ）
同等の（ｃｏｍｐａｒａｂｌｅ）とは、本明細書で使用される場合、２つ以上の剤、実体、状況、一連の条件等が、互いに同一でなくともよいが、互いの比較が可能であり、その結果、観察された差異又は類似に基づいて結論が合理的に引き出され得るほど、十分に類似していることを指す。いくつかの実施形態では、同等の一連の条件、状況、個体、又は集団は、複数の実質的に同一な特徴及び１つ又は少数の異なる特徴によって特徴づけられる。あらゆる所与の状況において、２つ以上のそのような剤、実体、状況、一連の条件等が同等と見なされるために、どの程度の同一性が必要とされているかは、文脈によって当業者に理解される。例えば、異なる一連の状況、個体、又は集団の下で、又はそれを用いて、得られた結果又は観察された現象における差異が、異なる特徴における差異によって生じたものである、又はそれを示すものであるという、合理的な結論の根拠となるほどの、十分な数及び種類の実質的に同一な特徴によって特徴付けられた場合に、一連の状況、個体、又は集団が互いに同等であることは、当業者に理解される。

【0165】

コントロール
コントロールとは、本明細書で使用される場合、結果を比較する際の基準となる、本技術分野において理解される意味の「コントロール」を指す。典型的には、コントロールは、変項に関しての結論を出すために、そのような変項を分離することにより、実験の完全性を増強するために使用される。いくつかの実施形態では、コントロールは、比較対照を与えるために、試験反応又は試験分析と同時に実行される反応又は分析である。本明細書で使用される場合、「コントロール」は「コントロール抗体」を指し得る。「コントロール抗体」は、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、多重特異性抗体、又は本明細書に記載の二重特異性抗体、本明細書に記載の異なる抗体、抗体断片又は抗体成分、又は親抗体であり得る。１つの実験には、「試験」（すなわち、試験対象の変項）が適用される。第二の実験、「コントロール」では、前記試験対象の変項が適用されない。いくつかの実施形態では、コントロールはヒストリカルコントロール（すなわち、以前に行われた試験若しくは分析のコントロール、又は既知の量若しくは結果）である。いくつかの実施形態では、コントロールは、印刷された、又は保存された記録であるか、又はそれを含む。コントロールはポジティブコントロール又はネガティブコントロールであり得る。

【0166】

対応する（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｔｏ）
本明細書で使用される場合、対応する（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｔｏ）とは、目的のポリペプチド中のアミノ酸残基の位置／同一性を示す。簡素化のため、ポリペプチド中の残基は、参照関連ポリペプチドに基づいて規範的番号付けシステムを用いてしばしば示され、その結果、例えば、１９０位の残基「に対応する」アミノ酸は、実際には特定のアミノ酸鎖中の１９０番目のアミノ酸である必要はなく、むしろ、参照ポリペプチドの１９０位に存在する残基と対応していることは当業者には理解され、「対応する」アミノ酸を特定する方法は当業者に容易に理解される。

【0167】

検出体／検出剤
検出体／検出剤は、本明細書で使用される場合、検出可能なあらゆる要素、分子、官能基、化合物、断片又は部分を指す。いくつかの実施形態では、検出体は、単独で提供又は利用される。いくつかの実施形態では、検出体は、別の剤と組み合わせて（例えば、連結されて）提供及び／又は利用される。検出体の例としては、限定はされないが、種々のリガンド、放射性核種（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^１９Ｆ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^１３５Ｉ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^６４Ｃｕ、^１８７Ｒｅ、^１１１Ｉｎ、^９０Ｙ、^９９ｍＴｃ、^１７７Ｌｕ、^８９Ｚｒ等）、蛍光色素（特定の例示的な蛍光色素については下記を参照）、化学発光剤（例えば、アクリジニウムエステル（ａｃｒｉｄｉｎｕｍ ｅｓｔｅｒ）、安定化ジオキセタン等）、生物発光剤、スペクトル的に分解可能な（ｓｐｅｃｔｒａｌｌｙ ｒｅｓｏｌｖａｂｌｅ）無機蛍光性半導体ナノ結晶（すなわち、量子ドット）、金属ナノ粒子（例えば、金、銀、銅、白金等）ナノクラスター、常磁性金属イオン、酵素（酵素の具体例については下記を参照）、比色標識（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｌａｂｅｌ）（例えば、色素、コロイド金等）、ビオチン、ジオキシゲニン（ｄｉｏｘｉｇｅｎｉｎ）、ハプテン、及び抗血清又はモノクローナル抗体が利用可能なタンパク質が挙げられる。

【0168】

エフェクター機能
エフェクター機能とは、本明細書で使用される場合、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を指す。エフェクター機能には、限定はされないが、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）、及び補体媒介性細胞傷害（ＣＭＣ）が包含される。いくつかの実施形態では、エフェクター機能は、抗原の結合後に作動する機能、抗原結合とは無関係に作動する機能、又はその両方である。

【0169】

エフェクター細胞
エフェクター細胞とは、本明細書で使用される場合、１又は複数のエフェクター機能を媒介する免疫系の細胞を指す。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞としては、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、マスト細胞、血小板、大顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球のうちの１又は複数が包含され得るが、これらに限定されなくてもよく、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルを含むがこれらに限定されない、あらゆる生物に由来し得る。

【0170】

操作された（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）
本明細書で使用される場合、操作された（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）とは、概して、人為的に操作された（ｍａｎｉｐｕｌａｔｅｄ）態様を指す。例えば、いくつかの実施形態では、天然においてその順序で連結されていない２つ以上の配列が、操作された（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）ポリヌクレオチドにおいては互いに直接的に連結しているように人為的に操作されている（ｍａｎｉｐｕｌａｔｅｄ）場合、ポリヌクレオチドは「操作された（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）」と見なされ得る。いくつかの特定のそのような実施形態では、操作されたポリヌクレオチドは、天然においては、第一のコード配列とは作動的に結合しているが、第二のコード配列とは作動的に結合せずに存在している、第二のコード配列と作動的に結合しているように人為的に連結された、制御配列を含み得る。あるいは又はさらに、いくつかの実施形態では、天然においては互いに連結されていないポリペプチドエレメント又はドメインを各々コードする第一及び第二の核酸配列が、単一の操作されたポリヌクレオチドにおいて互いに連結され得る。同等に、いくつかの実施形態では、細胞又は生物は、その遺伝情報が変化するように操作されている（ｍａｎｉｐｕｌａｔｅｄ）（例えば、以前は存在しなかった新たな遺伝物質が導入されている、又は以前は存在した遺伝物質が変化若しくは除去されている）場合、「操作された（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）」と見なされ得る。慣習であり、当業者には理解されることであるが、実際の操作が前の実体に対して行われたものであったとしても、操作されたポリヌクレオチド又は細胞の子孫は「操作された」と通常見なされる。さらに、当業者には理解されることであるが、本明細書に記載の「操作（ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）」を達成し得る、種々の方法論が利用可能である。例えば、いくつかの実施形態では、「操作」は、解析若しくは比較を実行するように、又は、配列、変化等を解析、推奨、及び／若しくは選択するようにプログラムされているコンピュータシステムの使用を通じた、選択又は設計（例えば、核酸配列、ポリペプチド配列、細胞、組織、及び／又は生物の選択又は設計）を含み得る。あるいは又はさらに、いくつかの実施形態では、「操作」は、インビトロ化学合成法、及び／又は、例えば、核酸増幅（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応を介した） ハイブリダイゼーション、変異、形質転換、トランスフェクション等の組換え核酸技術、及び／又は、種々の制御交配法（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｍａｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ）の使用を含み得る。当業者には理解されることであるが、種々の確立されたそのような手法（例えば、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、並びに組織培養及び形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション等）のための手法）は、本技術分野において周知であり、本明細書の全体を通して引用及び／又は考察される種々の一般的な参考文献及びより具体的な参考文献に記載されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （２ｄ ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．， １９８９）を参照されたい。

【0171】

エピトープ
エピトープには、本明細書で使用される場合、免疫グロブリン（例えば、抗体又は受容体）の結合成分によって特異的に認識されるあらゆる部分が包含される。いくつかの実施形態では、エピトープは、抗原上の複数の化学的原子又は化学基から構成される。いくつかの実施形態では、そのような化学的原子又は化学基は、抗原が関連する立体構造をとっている場合、表面に露出されている。いくつかの実施形態では、そのような化学的原子又は化学基は、抗原がそのような高次構造をとっている場合、空間的に物理的に互いに近接している。いくつかの実施形態では、少なくともいくつかのそのような化学的原子又は化学基は、抗原が別の高次構造をとった場合（例えば、直線化された場合）、物理的に互いに隔てられている。

【0172】

賦形剤
賦形剤とは、本明細書で使用される場合、例えば所望の稠度又は安定化効果を与える、又はそれに寄与する、医薬組成物に含まれる場合がある非治療的な剤を指す。好適な医薬品賦形剤としては、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、白亜、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等が挙げられる。

【0173】

Ｆｃリガンド
Ｆｃリガンド（Ｆｃ ｌｉｇａｎｄ）とは、本明細書で使用される場合、抗体のＦｃ領域に結合してＦｃ－リガンド複合体（Ｆｃ－ｌｉｇａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｘ）を形成する、あらゆる生物由来の分子、好ましくはポリペプチド、を指す。Ｆｃリガンドとしては、限定はされないが、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６Ｂ）、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）、ＦｃＲｎ、Ｃｌｑ、Ｃ３、ブドウ球菌プロテインＡ、連鎖球菌プロテインＧ、及びウイルス性ＦｃγＲが挙げられる。Ｆｃリガンドには、Ｆｃと結合する未発見の分子も包含され得る。

【0174】

フレームワーク又はフレームワーク領域
フレームワーク又はフレームワーク領域とは、本明細書で使用される場合、ＣＤＲを抜いた可変領域の配列を指す。ＣＤＲ配列は様々な系によって決定され得るため、同様にフレームワーク配列も、対応して様々な解釈を受ける。６個のＣＤＲによって、重鎖上及び軽鎖上のフレームワーク領域が、各鎖上で４つの小領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）に分割され、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２との間に位置し、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３との間に位置し、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４との間に位置する。特定の小領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３又はＦＲ４と指定しない、別の呼び方としての、フレームワーク領域は、単一の天然免疫グロブリン鎖の可変領域内のＦＲの組み合わせを表す。本明細書で使用される場合、ＦＲ（ａ ＦＲ）は、これら４つの小領域のうちの１つを表し、例えば、ＦＲ１は可変領域のアミノ末端に最も近く且つＣＤＲ１の５’側の第一のフレームワーク領域を表し、ＦＲ（ＦＲｓ）はフレームワーク領域を構成するこれらの小領域のうちの２つ以上を表す。

【0175】

宿主細胞
宿主細胞とは、本明細書で使用される場合、外来ＤＮＡ（組換えＤＮＡ又は別のＤＮＡ）を導入された細胞を指す。当業者であれば、本開示を読み取る際に、係る用語が、特定の対象細胞を指すだけでなく、そのような細胞の子孫も指すと理解するだろう。突然変異又は環境の影響によってある特定の改変が後の世代において生じ得るため、そのような子孫は実際には親細胞と同一でない場合があるが、本明細書で使用される用語「宿主細胞」の範囲内に尚も包含される。いくつかの実施形態では、宿主細胞には、外来ＤＮＡ（例えば、組換え核酸配列）の発現に好適な、あらゆる界の生命から選択される原核細胞及び真核細胞が含まれる。例示的な細胞としては、原核生物及び真核生物の細胞（単細胞又は多細胞）、細菌細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、バチルス属種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、ストレプトマイセス属種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）等の菌株）、マイコバクテリア細胞、真菌細胞、酵母細胞（例えば、出芽酵母（Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、分裂酵母（Ｓ． ｐｏｍｂｅ）、メタノール資化酵母（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）、メチロトローフ酵母（Ｐ． ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）等）、植物細胞、昆虫細胞（例えば、ＳＦ－９、ＳＦ－２１、バキュロウイルス感染昆虫細胞、イラクサギンウワバ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ）等）、非ヒト動物細胞、ヒト細胞、又は、例えばハイブリドーマ若しくはクアドローマ等の細胞融合物が挙げられる。いくつかの実施形態では、宿主細胞はヒト細胞、サル細胞、類人猿細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、又はマウス細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核細胞であり、以下の細胞から選択される：ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ Ｋｌ、ＤＸＢ－１１ ＣＨＯ、Ｖｅｇｇｉｅ－ＣＨＯ）、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ－７）、網膜細胞、Ｖｅｒｏ、ＣＶ１、腎臓（例えば、ＨＥＫ２９３、２９３ＥＢＮＡ、ＭＳＲ２９３、ＭＤＣＫ、ＨａＫ、ＢＨＫ）、ＨｅＬａ、ＨｅｐＧ２、ＷＩ３８、ＭＲＣ５、Ｃｏｌｏ２０５、ＨＢ８０６５、ＨＬ－６０、（例えば、ＢＨＫ２１）、Ｊｕｒｋａｔ、Ｄａｕｄｉ、Ａ４３１（上皮）、ＣＶ－１、Ｕ９３７、３Ｔ３、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、ＳＰ２／０、ＮＳ－０、ＭＭＴ０６０５６２、Ｓｅｒｔｏｌｉ細胞、ＢＲＬ３Ａ細胞、ＨＴ１０８０細胞、骨髄腫細胞、腫瘍細胞、及び前記細胞由来の細胞株。いくつかの実施形態では、宿主細胞は１又は複数のウイルス遺伝子を含み、例えば、ウイルス遺伝子を発現する網膜細胞（例えば、ＰＥＲ．Ｃ６（商標）細胞）がある。

【0176】

ヒト抗体
ヒト抗体には、本明細書で使用される場合、ヒト免疫グロブリン配列から作製（又は構築）された可変領域及び定常領域を有する抗体が包含されることが意図される。いくつかの実施形態では、抗体（又は抗体成分）は、それらのアミノ酸配列が、例えば１又は複数のＣＤＲ内に、具体的にはＣＤＲ３内に、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされない残基又は要素を含んでいても（例えば、インビトロにおけるランダム変異誘発若しくは部位特異的変異誘発によって、又はインビボにおける体細胞突然変異によって（最初に）導入されている場合がある、配列多様性を含んでいても）、「ヒト」抗体（又はヒト抗体成分）と見なされ得る。

【0177】

ヒト化（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ）
本技術分野で知られているように、用語「ヒト化」は、一般には、非ヒト種（例えば、マウス）で産生された参照抗体由来のＶ_Ｈ領域配列及びＶ_Ｌ領域配列を含むが、より「ヒト様」にする、すなわちヒト生殖細胞系列可変配列により似せることを目的とした参照抗体に対する配列内の改変も含む、アミノ酸配列を有する抗体（又は抗体成分）を指して用いられる。いくつかの実施形態では、「ヒト化」抗体（又は抗体成分）は、目的抗原に免疫特異的（ｉｍｍｕｎｏｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）に結合し、且つ、ヒト抗体のフレームワーク（ＦＲ）領域のアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有するＦＲ領域、及び、非ヒト抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有するＣＤＲを有する、抗体である。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー免疫グロブリン）のものに一致し、フレームワーク領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全てを含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖、及び重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。前記抗体は重鎖定常領域のＣ_Ｈ１領域、ヒンジ領域、Ｃ_Ｈ２領域、Ｃ_Ｈ３領域、及び、所望により、Ｃ_Ｈ４領域も含み得る。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体はヒト化Ｖ_Ｌ領域のみを含有する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体はヒト化Ｖ_Ｈ領域のみを含有する。いくつかの特定の実施形態では、ヒト化抗体はヒト化Ｖ_Ｈ領域及びヒト化Ｖ_Ｌ領域を含有する。

【0178】

親水性
本明細書で使用される場合、用語「親水性」及び／又は「極性」とは、水と混ざる、又は水に容易に溶解する傾向を指す。

【0179】

疎水性
本明細書で使用される場合、用語「疎水性」及び／又は「無極性」とは、水をはじく、水と混ざらない、又は水に容易に溶解し得ない傾向を指す。

【0180】

改善、増加又は減少
本明細書で使用される場合、改善、増加若しくは減少、又はその文法的同等物は、本明細書に記載の治療開始前の同一個体における測定値、又は本明細書に記載の治療のない場合のコントロール個体（又は複数のコントロール個体）における測定値等の、ベースライン測定値に対しての値を表す。「コントロール個体」は、治療を受けている個体と同じ形態の疾患又は傷害を患う個体である。

【0181】

インビトロ
インビトロとは、本明細書で使用される場合、多細胞生物内ではなく、人工環境、例えば、試験管内又は反応器内、細胞培養液中等で起こる事象を指す。

【0182】

インビボ
インビボとは、本明細書で使用される場合、ヒト及び非ヒト動物等の多細胞生物内で起こる事象を指す。細胞に基づく系との関連においては、前記用語は、生細胞内で起こる事象を指して用いられ得る（例えば、インビトロ系とは対照的）。

【0183】

単離された（ｉｓｏｌａｔｅｄ）
単離された（ｉｓｏｌａｔｅｄ）とは、本明細書で使用される場合、（１）最初に生産された（天然及び／若しくは実験環境にかかわらず）ときに付随した成分のうちの少なくともいくつかから分離された、並びに／又は、（２）人工的に設計、生産、作製、及び／若しくは製造された、物質及び／又は実体を指す。単離された物質及び／又は実体は、元は付随していた、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超のその他の成分と分離されたものであり得る。いくつかの実施形態では、単離された剤は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超の純度を有する。本明細書で使用される場合、物質は、他の成分を実質的に含んでいないならば、「純粋」とする。いくつかの実施形態では、当業者には理解されることであるが、物質は、例えば１又は複数の担体又は賦形剤（例えば、緩衝液、溶媒、水等）等のある特定の他の成分と組み合わされた後も、「単離されている」、又は、さらには「純粋である」と見なされ得る。そのような実施形態では、前記物質の単離パーセント又は純度パーセントはそのような担体又は賦形剤を含まずに算出される。一例に過ぎないが、いくつかの実施形態では、天然に生じるポリペプチド又はポリヌクレオチド等の生体高分子は、以下の場合に「単離されている」と見なされる：ａ）その派生の起点又は源に基づいて、天然において未変性状態のそれに付随する成分のうちのいくらか又は全てを伴わない場合；ｂ）天然においてそれを産生する種由来の同一種の他のポリペプチド又は核酸を実質的に含まない場合；ｃ）天然においてそれを産生する種のものではない細胞若しくは他の発現系によって発現される場合、又は、それとは異なり、該細胞若しくは該発現系由来の成分を伴う場合。したがって、例えば、いくつかの実施形態では、化学合成された、又は、天然においてそれを産生する細胞系と異なる細胞系で合成されたポリペプチドは、「単離された」ポリペプチドであると見なされる。あるいは又はさらに、いくつかの実施形態では、１又は複数の精製法にかけられたポリペプチドは、ａ）天然において付随する他の成分、及び／又は、ｂ）最初に産生されたときに付随した他の成分、から分離されている限り、「単離された」ポリペプチドであると見なされ得る。

【0184】

Ｋ_Ｄ
Ｋ_Ｄとは、本明細書で使用される場合、結合剤（例えば、抗体剤又はその結合成分）の、そのパートナー（例えば、抗体剤又はその結合成分が結合するエピトープ）との複合体からの解離定数を指す。

【0185】

ｋ_ｏｆｆ
ｋ_ｏｆｆとは、本明細書で使用される場合、結合剤（例えば、抗体剤又はその結合成分）の、そのパートナー（例えば、抗体剤又はその結合成分が結合するエピトープ）との複合体からの解離速度定数（ｏｆｆ ｒａｔｅ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｆｏｒ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）を指す。

【0186】

ｋ_ｏｎ
ｋ_ｏｎとは、本明細書で使用される場合、結合剤（例えば、抗体剤又はその結合成分）の、そのパートナー（例えば、抗体剤又はその結合成分が結合するエピトープ）との複合体からの結合速度定数（ｏｎ ｒａｔｅ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｆｏｒ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）を指す。

【0187】

リンカー
リンカーとは、本明細書で使用される場合、複数の構成要素からなるポリペプチドの、異なる構成要素を互いに連結させる部分を指して用いられる。例えば、２つ以上の機能ドメイン又は組織ドメイン（ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎａｌ ｄｏｍａｉｎ）を含む構造を有するポリペプチドが、係るドメインの間に、それらを互いに繋げる一続きのアミノ酸をしばしば含むことは、当業者に理解される。いくつかの実施形態では、リンカー要素を含むポリペプチドは一般形態Ｓ１－Ｌ－Ｓ２の全体構造を有し、ここでＳ１及びＳ２は、同じであっても異なっていてもよく、リンカーを介して互いに結合している２つのドメインを表す。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００又はそれ以上のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、堅くて曲がらない三次元構造をとらない傾向にあり、むしろ当該ポリペプチドに可動性を与えるという特徴を有する。本技術分野において公知の、ポリペプチドを操作する場合（例えば、融合ポリペプチド）に適切に使用できる種々様々なリンカー要素（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ， Ｐ．， ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ９０：６４４４－６４４８； Ｐｏｌｊａｋ， Ｒ． Ｊ． ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３を参照）。

【0188】

多価結合剤（又は多重特異性結合剤）
多価結合剤（又は多重特異性結合剤）とは、本明細書で使用される場合、同一分子上又は異なる分子上に存在し得る２つ以上の抗原に結合可能な結合剤を指す。本明細書に記載の多価結合剤は、いくつかの実施形態では、２つ以上の抗原結合部位を有するように操作されており、通常は自然発生するタンパク質ではない。本明細書に記載の多価結合剤は、２つ以上の関連し合う標的又は関連がない標的と結合することが可能な結合剤を指す。多価結合剤は、単一の抗体成分の複数のコピーから構成されていてもよいし、あるいは、異なる抗体成分の複数のコピーから構成されていてもよい。そのような結合剤は、２つ以上の抗原に結合することが可能であり、四価又は多価の結合剤とされる。多価結合剤は、例えば、免疫調節剤、毒素又はＲＮａｓｅ等の治療薬をさらに含んでいてもよい。本明細書に記載の多価結合剤は、いくつかの実施形態では、構造が異なる少なくとも２つの標的、例えば、２つの異なる抗原、同一抗原上の２つの異なるエピトープ、又はハプテン及び／若しくは抗原若しくはエピトープに、同時に結合することが可能である。多くの実施形態において、本発明の多価結合剤は、本明細書に記載の多価結合剤の特徴を有するように操作されたタンパク質である。本発明の多価結合剤は、単一特異性（１つの抗原と結合可能）であっても、又は多重特異性（２つ以上の抗原と結合可能）であってもよく、２つの重鎖ポリペプチド及び２つの軽鎖ポリペプチドから構成され得る。各々の結合部位は、いくつかの実施形態では、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインから構成され、１つの抗原結合部位あたり抗原結合に関与する合計６個のＣＤＲが含まれる。

【0189】

核酸
核酸とは、本明細書で使用される場合、その最も広い意味では、オリゴヌクレオチド鎖に組み入れられている、又は組み入れることが可能な、あらゆる化合物及び／又は物質を指す。いくつかの実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合を介してオリゴヌクレオチド鎖に組み入れられている、又は組み入れることが可能な、あらゆる化合物及び／又は物質を指す。文脈から明らかとなるが、いくつかの実施形態では、「核酸」は個々の核酸残基（例えば、ヌクレオチド及び／又はヌクレオシド）を指し；いくつかの実施形態では、「核酸」は個々の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖を指す。いくつかの実施形態では、「核酸」はＲＮＡであるか、又はそれを含み；いくつかの実施形態では、「核酸」はＤＮＡであるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、１又は複数の天然核酸残基であるか、それらを含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、核酸は、１又は複数の核酸アナログであるか、それらを含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、核酸アナログは、ホスホジエステル骨格を利用していないという点において核酸と異なる。例えば、いくつかの実施形態では、核酸は、本技術分野において公知であり、且つ、骨格内にホスホジエステル結合ではなくペプチド結合を有する、１又は複数の「ペプチド核酸」であるか、それらを含むか、又はそれらからなり、これも本発明の範囲内と見なされる。あるいは又はさらに、いくつかの実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合ではなく、１又は複数のホスホロチオエート結合及び／又は５’－Ｎ－ホスホラミダイト結合を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、１又は複数の天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシチジン）であるか、それらを含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、核酸は、１又は複数のヌクレオシド類似体（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ－５プロピニル－シチジン、Ｃ－５プロピニル－ウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、Ｏ（６）－メチルグアニン、２－チオシチジン、メチル化塩基、介在塩基（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｅｄ ｂａｓｅ）、及びこれらの組み合わせ）であるか、それらを含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、核酸は、天然核酸内の糖との比較した場合に、１又は複数の修飾された糖（例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノース、及びヘキソース）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡ又はタンパク質等の機能的な遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、１又は複数のイントロンを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、天然源からの単離、相補的な鋳型に基づく重合による酵素的合成（インビボ又はインビトロ）、組換え細胞又は組換え系における複製、及び化学合成のうちの１又は複数によって調製される。いくつかの実施形態では、核酸は、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２０、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、少なくとも３５０、少なくとも３７５、少なくとも４００、少なくとも４２５、少なくとも４５０、少なくとも４７５、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、少なくとも１５００、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００、少なくとも４０００、少なくとも４５００、少なくとも５０００又はそれ以上の残基長である。いくつかの実施形態では、核酸は一本鎖であり；いくつかの実施形態では、核酸は二本鎖である。いくつかの実施形態では、核酸は、ポリペプチドをコードする、又はポリペプチドをコードする配列の相補体である、少なくとも１つのエレメントを含むヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸は酵素活性を有する。

【0190】

機能的に連結した
機能的に連結したとは、本明細書で使用される場合、記載された成分同士が、それらの意図された様式で、機能することを互いに許容し合う関係にある、並列を指す。コード配列に「機能的に連結した」制御配列は、該制御配列に適合する条件下で該コード配列の発現が達成されるように、連結されている。「機能的に連結した」配列には、目的遺伝子と隣接した発現制御配列及び前記目的遺伝子を制御するトランス作動性すなわち遠位作動性の発現制御配列の両方が包含される。用語「発現制御配列」は、本明細書で使用される場合、連結しているコード配列の発現及びプロセシングの実行に欠かせないポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列には、適切な転写開始配列、転写終結配列、プロモーター配列及びエンハンサー配列；スプライシングシグナル及びポリアデニル化シグナル等の効率的なＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質内ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を増強する配列（すなわち、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列）；タンパク質安定性を増強する配列；並びに、所望の場合、タンパク質分泌を増強する配列が包含される。そのような制御配列の性質は宿主生物によって異なる。例えば、原核生物では、そのような制御配列としては、プロモーター、リボソーム結合部位、及び転写終結配列が通常含まれ、一方、真核生物では、そのような制御配列としてはプロモーター及び転写終結配列が通常含まれる。用語「制御配列」は、発現及びプロセシングのために存在することが必須とされる成分を含むことが意図され、存在することが有利とされる追加成分、例えば、リーダー配列及び融合パートナー配列を含む可能性もある。

【0191】

ペプチド
用語「ペプチド」とは、ペプチド結合又は修飾ペプチド結合によって互いに連結した２つ以上のアミノ酸を指す。特定の実施形態では、「ペプチド」は、約１００アミノ酸未満、約５０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満、又は１０アミノ酸未満の長さを有するポリペプチドを指す。

【0192】

生理的条件
生理的条件は、本明細書で使用される場合、本技術分野において理解されるその意味を有し、細胞又は生物が生存及び／又は繁殖する条件を指す。いくつかの実施形態では、前記用語は、生物系又は細胞系において自然に発生し得る外部環境又は内部環境の条件を指す。いくつかの実施形態では、生理的条件は、ヒト又は非ヒト動物の身体内に存在する条件、特に、手術部位に、及び／又は手術部位内に存在する条件である。生理的条件には、典型的には、例えば、２０～４０℃の温度範囲、気圧１、ｐＨ６～８、グルコース濃度１～２０ｍＭ、大気中レベルのの酸素濃度、及び地上で受ける重力が含まれる。いくつかの実施形態では、実験室中の条件が生理的条件に操作及び／又は維持される。いくつかの実施形態では、生理的条件は生物内で見られるものである。

【0193】

ポリペプチド
ポリペプチドとは、本明細書で使用される場合、あらゆるアミノ酸重合鎖を指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然において生じるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然においては生じないアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、人工的に設計及び／又は生産されたという点において操作されたアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、又はその両方を含み得るか、又はそれからなり得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然アミノ酸のみ又は非天然アミノ酸のみを含み得るか、又はそれからなり得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｄ－アミノ酸、Ｌ－アミノ酸、又はその両方を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｄ－アミノ酸のみを含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸のみを含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、例えば、１若しくは複数のアミノ酸側鎖を修飾する、又はそれに結合した、１又は複数の側基又は他の修飾を、ポリペプチドのＮ末端において、ポリペプチドのＣ末端において、又はそのあらゆる組み合わせにおいて、含み得る。いくつかの実施形態では、そのような側基又は修飾は、アセチル化、アミド化、脂質化、メチル化、ペグ化等（これらの組み合わせも含む）からなる群より選択され得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、環式であり得る、且つ／又は、環式部分を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、環式ではなく、且つ／又は、いかなる環式部分も含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは直鎖状である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ステープルペプチドであり得るか、又はそれを含み得る。いくつかの実施形態では、用語「ポリペプチド」は、参照ポリペプチドの名称、活性、又は構造に付記される場合があり；そのような場合、前記用語は、関連する活性又は構造を共有し、故に同じポリペプチドクラス又はポリペプチドファミリーの構成員と見なすことができる、ポリペプチドを言及するために、本明細書では使用される。そのようなクラスの各々について、アミノ酸配列及び／又は機能が既知である、該クラスに含まれる例示的なポリペプチドが、本明細書によって提供され、及び／又は、当業者によって知られており、いくつかの実施形態では、そのような例示的なポリペプチドは、該ポリペプチドクラスについての参照ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドクラス又はポリペプチドファミリーの構成員は、該クラスの参照ポリペプチドと（いくつかの実施形態では、該クラス内の全てのポリペプチドと）、有意な配列相同性又は配列同一性を示し、共通の配列モチーフ（例えば、特有の配列エレメント）を共有し、且つ／又は、共通の活性（いくつかの実施形態では、同等レベル又は指定範囲内の共通の活性）を共有する。例えば、いくつかの実施形態では、一構成員のポリペプチドは、参照ポリペプチドと、少なくとも約３０～４０％の、しばしば約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％若しくはそれ以上を超える、全体的な配列相同性又は配列同一性の程度を示し、且つ／又は、しばしば９０％、さらには９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％を超える非常に高い配列同一性を示す、少なくとも１つの領域（すなわち、いくつかの実施形態では、特有の配列エレメントであり得る、若しくはそれを含み得る、保存領域）を含む。そのような保存領域は通常、３～４個以上、且つしばしば２０個以下、又はそれ以上のアミノ酸を含み；いくつかの実施形態では、保存領域は、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５又はそれ以上の連続アミノ酸からなる少なくとも１配列を含む。いくつかの実施形態では、有用なポリペプチドは、親ポリペプチドの断片を含み得るか、又はそれからなり得る。いくつかの実施形態では、有用なポリペプチドは、目的ポリペプチド内で存在する空間配置とは互いに異なる空間配置で同一の親ポリペプチド内に各々存在する複数の断片（例えば、該親ポリペプチド内では直接連結されている断片は、目的ポリペプチド内では空間的に分離されている場合があり（逆もまた同じ）、及び／又は、断片は、親ポリぺプチド内での順番と異なる順番で、目的ポリペプチド内で存在している場合がある）を含み得るか、又はそれからなり得ることから、目的ポリペプチドはその親ポリペプチドの類縁体である。

【0194】

予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）又は予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）
本明細書で使用される、予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）又は予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）とは、疾患、障害、及び／又は状態の発生との関連において使用されている場合、該疾患、障害及び／若しくは状態に罹るリスクを低減すること、並びに／又は、該疾患、障害若しくは状態の１若しくは複数の特徴若しくは症状の発症を遅延させること、を指す。予防は、疾患、障害又は状態の発症が所定の期間遅延された場合、完全予防と見なされ得る。

【0195】

組換え体（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ）
組換え体（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ）とは、本明細書で使用される場合、以下を指すことが意図される：組換え手段によって設計、操作、調製、発現、産生若しくは単離されたポリペプチド（例えば、本明細書に記載の抗体若しくは抗体成分、若しくは多重特異性結合剤）、例えば、宿主細胞内にトランスフェクションされた組換え発現ベクターを用いて発現されたポリペプチド、組換えヒトポリペプチドコンビナトリアルライブラリーから単離されたポリペプチド（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．Ｒ．， １９９７， ＴＩＢ Ｔｅｃｈ． １５：６２－７０； Ａｚｚａｚｙ Ｈ．， ａｎｄ Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ Ｗ．Ｅ．， ２００２， Ｃｌｉｎ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ３５：４２５－４５； Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ Ｊ．Ｖ．， ａｎｄ Ｌａｒｒｉｃｋ Ｊ．Ｗ．， ２００２， ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２９：１２８－４５； Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．， ａｎｄ Ｃｈａｍｅｓ Ｐ．， ２０００， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｔｏｄａｙ ２１：３７１－８）、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ， Ｌ．Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， １９９２， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２０：６２８７－９５； Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ Ｓ－Ａ．， ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ Ｌ．Ｌ．， ２００２， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． １３：５９３－７； Ｌｉｔｔｌｅ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｔｏｄａｙ ２１：３６４－７０； Ｍｕｒｐｈｙ， Ａ．Ｊ． ｅｔ ａｌ．， ２０１４， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． １１１（１４）：５１５３－８を参照）、又は、選択された配列エレメントを互いにスプライスすることを含むあらゆる他の手段により調製、発現、産生若しくは単離されたポリペプチド。いくつかの実施形態では、そのような選択された配列エレメントのうちの１又は複数は、天然に存在している。いくつかの実施形態では、そのような選択された配列エレメントのうちの１又は複数は、コンピュータで設計される。いくつかの実施形態では、１又は複数のそのような選択された配列エレメントは、例えば天然又は合成の供給源由来の、既知の配列エレメントの変異誘発（例えば、インビボ又はインビトロ）から得られる。例えば、いくつかの実施形態では、組換え抗体ポリペプチドは、目的の供給源生物（例えば、ヒト、マウス等）の生殖細胞系列に存在する配列を含む。いくつかの実施形態では、組換え抗体が、変異誘発（例えば、インビトロ又はインビボでの変異誘発、例えば遺伝子導入動物におけるインビボ変異誘発）から生じたアミノ酸配列を有することで、組換え抗体のＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域のアミノ酸配列が、生殖系列Ｖ_Ｈ配列及び生殖系列Ｖ_Ｌ配列に由来し、それと関連している一方で、インビボにおける生殖系列抗体レパートリー内には天然に存在しない可能性がある、配列となる。

【0196】

参照
参照とは、本明細書で使用される場合、それに対して本明細書に記載の比較が行われる、スタンダード、コントロール、又は他の適切な参照を示す。例えば、いくつかの実施形態では、参照は、それに対して目的の剤、動物、個体、集団、試料、配列、一連の工程、一連の条件、又は値が比較される、スタンダード又はコントロールとしての剤、動物、個体、集団、試料、配列、一連の工程、一連の条件、又は値である。いくつかの実施形態では、参照は、目的の試験又は測定と実質的に同時に、試験及び／又は測定される。いくつかの実施形態では、参照は、ヒストリカルな（ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ）参照であり、所望により有形媒体に含まれている。典型的には、当業者には理解されることであるが、参照は、目的の評価で利用された条件と同等の条件下で測定又は特徴付けされる。

【0197】

特異的結合
特異的結合とは、本明細書で使用される場合、結合が起こる環境内の可能なパートナーを区別する結合剤の能力を指す。他の標的候補が存在する場合にある特定の標的と相互作用する結合剤は、相互作用する標的に「特異的に結合する」と言われる。いくつかの実施形態では、特異的結合は、結合剤とそのパートナーとの間の結合を検出する、又はその程度を測定することによって評価され；いくつかの実施形態では、特異的結合は、結合剤－パートナー複合体の解離を検出する、又はその程度を測定することによって評価され；いくつかの実施形態では、特異的結合は、結合剤による、そのパートナーと別の実体との間の別の相互作用に対する競合を検出する、又はその能力を測定することによって評価される。いくつかの実施形態では、特異的結合は、一連の濃度に亘ってそのような検出又は測定を行うことにより評価される。いくつかの実施形態では、特異的結合は、同系標的と非同系標的との間の結合親和性の差を測定することにより評価される。例えば、結合剤は、非同系標的に対する結合親和性の約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍又はそれ以上の、同系標的に対する結合親和性を有し得る。

【0198】

特異性
本技術分野で知られているように、「特異性」は、特定のリガンドがその結合パートナーを他の可能な結合パートナーから区別する能力の尺度である。

【0199】

対象
対象とは、本明細書で使用される場合、ヒトを含むあらゆる哺乳動物を意味する。本発明のある特定の実施形態では、対象は成人、青年又は乳児である。いくつかの実施形態では、用語「個体」又は「患者」が使用されており、これらは「対象」と代替可能であると意図される。また、胎内での医薬組成物の投与及び／又は治療法の実施も、本発明によって企図されている。

【0200】

実質的
本明細書で使用される場合、用語「実質的に」とは、目的の特徴又は特性の完全又はほぼ完全な範囲又は程度を示している、質的状態を指す。生物学的現象及び化学的現象が、例えあるにしても、めったに完結しないこと、及び／又は、めったに完全性へと進行しない、すなわち、めったに絶対的な結果を達成しない、すなわち絶対的な結果を回避することは、生物学の当業者に理解される。用語「実質的に」は、従って、多くの生物学的現象及び化学的現象が内包する潜在的な完全性の欠如を捕える目的で、本明細書では使用されている。

【0201】

実質的配列相同性
本明細書で使用される場合、句「実質的相同性」とは、アミノ酸配列間又は核酸配列間の比較を指す。当業者には理解されるように、２つの配列は、対応する位置に相同の残基を含有するならば、「実質的に相同」と一般に見なされる。相同残基は同一残基であり得る。あるいは、相同残基は、構造的及び／又は機能的特徴が適当に類似している、非同一残基であり得る。例えば、当業者にはよく知られていることであるが、ある特定のアミノ酸は、典型的には、「疎水性」アミノ酸若しくは「親水性」アミノ酸に分類され、及び／又は、「極性」側鎖若しくは「無極性」側鎖を有するものと分類される。あるアミノ酸の同じ種類の別のアミノ酸への置換は、しばしば、「相同」置換と見なされ得る。典型的なアミノ酸分類は以下の通りに要約される。

【0202】

【0203】

【0204】

本技術分野において周知であるように、アミノ酸又は核酸配列は、ヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴＮ、及びＢＬＡＳＴＰ、ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、並びにアミノ酸配列用のＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ等の市販のコンピュータプログラムで利用可能なアルゴリズムを含む、種々のアルゴリズムのうちのいずれかを用いて比較され得る。そのようなプログラムの例示が、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， １９９０， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２１５（３）：４０３－４１０； Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｍｅｔｈ． Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２６６：４６０－４８０； Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５：３３８９－３４０２； Ｂａｘｅｖａｎｉｓ ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ｗｉｌｅｙ， １９９８；およびＭｉｓｅｎｅｒ， ｅｔ ａｌ， （ｅｄｓ．）， Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ （Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． １３２）， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， １９９９に記載されている。相同配列の同定に加えて、上記のプログラムは、典型的には、相同性の度合いの指標を与える。いくつかの実施形態では、２つの配列は、それらの対応する残基の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又はそれ以上が関連する一続きの残基に亘って相同である場合、実質的に相同であると見なされる。いくつかの実施形態では、前記関連する一続きは完全配列である。いくつかの実施形態では、前記関連する一続きは、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、少なくとも３５０、少なくとも３７５、少なくとも４００、少なくとも４２５、少なくとも４５０、少なくとも４７５、少なくとも５００又はそれ以上の残基である。

【0205】

実質的同一性
本明細書で使用される場合、句「実質的同一性」とは、アミノ酸配列間又は核酸配列間の比較を指す。当業者には理解されるように、２つの配列は、対応する位置に同一の残基を含有するならば、「実質的に同一」と一般に見なされる。本技術分野において周知であるように、アミノ酸又は核酸配列は、ヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴＮ、及びＢＬＡＳＴＰ、ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、並びにアミノ酸配列用のＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ等の市販のコンピュータプログラムで利用可能なアルゴリズムを含む、種々のアルゴリズムのうちのいずれかを用いて比較され得る。そのようなプログラムの例示が、Ａｌｔｓｃｈｕｌ， ｅｔ ａｌ， １９９０， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２１５（３）：４０３－４１０， １９９０； Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ， １９９６， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２６６：４６０－４８０； Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ， １９９７， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５：３３８９－３４０２； Ｂａｘｅｖａｎｉｓ ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ｗｉｌｅｙ， １９９８；およびＭｉｓｅｎｅｒ， ｅｔ ａｌ， （ｅｄｓ．）， Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ （Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． １３２）， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， １９９９に記載されている。同一配列の同定に加えて、上記のプログラムは、典型的には、同一性の度合いの指標を与える。いくつかの実施形態では、２つの配列は、それらの対応する残基の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又はそれ以上が関連する一続きの残基に亘って同一である場合、実質的に同一であると見なされる。いくつかの実施形態では、前記関連する一続きは完全配列である。いくつかの実施形態では、前記関連する一続きは、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、少なくとも３５０、少なくとも３７５、少なくとも４００、少なくとも４２５、少なくとも４５０、少なくとも４７５、少なくとも５００又はそれ以上の残基である。ＣＤＲとの関連においては、「実質的同一性」とは、典型的には、参照ＣＤＲのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。

【0206】

表面プラズモン共鳴
表面プラズモン共鳴とは、本明細書で使用される場合、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（ファルマシア・バイオセンサーＡＢ社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ）、ウプサラ、スウェーデン及びピスカタウェイ、ニュージャージー州）等の使用による、バイオセンサーマトリックス内でのタンパク質濃度における変化の検出を介した、特異的結合相互作用のリアルタイム解析を可能にする光学現象を指す。さらなる説明については、Ｊｏｎｓｓｏｎ， Ｕ． ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ａｎｎ． Ｂｉｏｌ． Ｃｌｉｎ． ５１：１９－２６； Ｊｏｎｓｓｏｎ， Ｕ． ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １１：６２０－６２７； Ｊｏｈｎｓｓｏｎ， Ｂ． ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｒｅｃｏｇｎｉｔ． ８：１２５－１３１；およびＪｏｈｎｎｓｏｎ， Ｂ． ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． １９８：２６８－２７７を参照されたい。

【0207】

治療薬
治療薬とは、本明細書で使用される場合、通常は、生物に投与された場合に所望の薬理効果を及ぼすあらゆる剤を指す。いくつかの実施形態では、剤は、適切な集団の全体に亘って統計的に有意な効果を示す場合、治療薬であると見なされる。いくつかの実施形態では、前記適切な集団は、モデル生物の集団であり得る。いくつかの実施形態では、適切な集団は、ある特定の年齢群、性別、遺伝的背景、先在臨床状態等の様々な基準によって定められ得る。いくつかの実施形態では、治療薬は、疾患、障害、及び／又は状態の１又は複数の症状又は特徴を、軽減する、改善する、緩和する、抑制する、予防する、その発症を遅延する、その重症度を低減する、及び／又はその発生率を減少させるのに使用することができる物質である。いくつかの実施形態では、「治療薬」は、ヒトへの投与用に販売可能となるのに先立ち、政府機関によって承認された、又は承認が必要とされる、剤である。いくつかの実施形態では、「治療薬」は、ヒトへの投与のために処方箋が必要とされる剤である。

【0208】

治療有効量
治療有効量とは、本明細書で使用される場合、所望の効果を与えるために投与される量を意味する。いくつかの実施形態では、前記用語は、疾患、障害、及び／又は状態に罹患した、又は罹患し易い集団に、治療的投与計画に従って投与された場合に、前記疾患、障害、及び／又は状態を治療するのに十分な量を指す。いくつかの実施形態では、治療有効量は、前記疾患、障害、及び／若しくは状態の発生率及び／若しくは重症度を減少させ、且つ／又は、前記疾患、障害、及び／若しくは状態の１若しくは複数の症状の発症を遅延させる量である。用語「治療有効量」が、特定の個体における好結果の治療の達成を実際には必要としないことは、当業者に理解される。むしろ、治療有効量は、そのような治療を必要としている患者に投与された場合に、有意な数の対象において特定の所望の薬理反応をもたらす量であり得る。いくつかの実施形態では、治療有効量とは、１又は複数の特定組織（例えば、疾患、障害又は状態の影響を受ける組織）又は体液（例えば、血液、唾液、血清、汗、涙、尿等）において測定される量を指し得る。当業者には理解されることであるが、いくつかの実施形態では、治療有効量の特定の剤又は療法は、単回量で処方及び／又は投与され得る。いくつかの実施形態では、治療効果のある剤は、例えば投与計画の一部として、複数回量で処方及び／又は投与され得る。

【0209】

形質転換
形質転換とは、本明細書で使用される場合、それにより外来ＤＮＡが宿主細胞に導入される、あらゆるプロセスを指す。形質転換は、本技術分野において周知の種々の方法を用いて、天然条件下又は人工条件下で起こり得る。形質転換は、外来核酸配列を原核宿主細胞又は真核宿主細胞に挿入するための、あらゆる公知の方法に依存し得る。いくつかの実施形態では、形質転換される宿主細胞に基づいて特定の形質転換法が選択され、形質転換法としては、限定はされないが、ウイルス感染、エレクトロポレーション、交配、リポフェクションが包含され得る。いくつかの実施形態において、「形質転換された」細胞は、挿入されたＤＮＡが、自己複製プラスミドとして、又は宿主染色体の一部として複製可能であるという点で、安定に形質転換されたものである。いくつかの実施形態では、形質転換細胞は、限定された期間、導入された核酸を一過性に発現する。

【0210】

処置
本明細書で使用される場合、用語「処置」（また、「処置する」又は「処置すること」）は、その最も広い意味において、特定の疾患、障害、及び／又は状態の１又は複数の症状、特徴、及び／又は原因を、部分的又は完全に、軽減する、改善する、緩和する、抑制する、その発症を遅延する、その重症度を低減する、及び／又は、その発生率を減少させる物質（例えば、提供される組成物）の、あらゆる投与を指す。いくつかの実施形態では、そのような処置は、関連する疾患、障害及び／若しくは状態の兆候を示していない対象、並びに／又は、該疾患、障害、及び／若しくは状態の初期兆候のみを示している対象に投与され得る。あるいは又はさらに、いくつかの実施形態では、処置は、関連する疾患、障害及び／又は状態の１又は複数の確立された兆候を示している対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、処置は、前記関連する疾患、障害、及び／又は状態に罹患していると診断された対象の処置であり得る。いくつかの実施形態では、処置は、前記関連する疾患、障害、及び／又は状態の発症リスクの増加と統計的に相関している１又は複数の感受性因子を有することが知られている対象の処置であり得る。

【0211】

バリアント
本明細書で使用される場合、用語「バリアント」とは、参照実体との有意な構造的同一性を示すが、該参照実体と比較した場合に、１又は複数の化学部分の有無又はレベルにおいて該参照実体と構造的に異なる、実体を指す。多くの実施形態では、バリアントはその参照実体と機能的にも異なっている。一般的に、特定の実体が参照実体の「バリアント」であると適切に見なされるかどうかは、該参照実体との構造的同一性の程度に基づく。当業者には理解されることであるが、あらゆる生物学的又は化学的な参照実体が、ある特定の特徴的な構造要素を有している。バリアントは、定義によれば、１又は複数のそのような特徴的な構造要素を共有する、異なる化学的実体である。少数の単なる例示として、ポリペプチドは、線形空間若しくは三次元空間において互いに対して指定の位置を有する複数のアミノ酸を含み、且つ／若しくは、特定の生物学的機能に寄与する、特徴的な配列エレメントを有し得る；核酸は、線形空間若しくは三次元空間において互いに対して指定の位置を有する複数のヌクレオチド残基を含む、特徴的な配列エレメントを有し得る。例えば、バリアントポリペプチドは、アミノ酸配列における１若しくは複数の差異、及び／又は、ポリペプチド骨格に共有結合した化学部分（例えば、炭水化物、脂質等）における１若しくは複数の差異、の結果として、参照ポリペプチドと異なり得る。いくつかの実施形態では、バリアントポリペプチドは、参照ポリペプチドと、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％の配列同一性を全体として示す。あるいは又はさらに、いくつかの実施形態では、バリアントポリペプチドは、少なくとも１つの特徴的配列エレメントを参照ポリペプチドと共有していない。いくつかの実施形態では、参照ポリペプチドは１又は複数の生物活性を有する。いくつかの実施形態では、バリアントポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物活性のうちの１又は複数を共有する。いくつかの実施形態では、バリアントポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物活性のうちの１又は複数を欠いている。いくつかの実施形態では、バリアントポリペプチドは、参照ポリペプチドと比較して、レベルが低下した１又は複数の生物活性を示す。多くの実施形態では、目的ポリペプチドが、特定の位置における少数の配列変異を除いて、親ポリペプチドのアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有する場合、目的ポリペプチドは、親ポリペプチド又は参照ポリペプチドの「バリアント」であると見なされる。典型的には、親と比較すると、バリアント内の残基のうちの２０％未満、１５％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満が置換されている。いくつかの実施形態では、バリアントは、親と比べて１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個の置換残基を有する。しばしば、バリアントは、非常に少数（例えば、５未満、４未満、３未満、２未満、又は１）の置換された機能的残基（すなわち、特定の生物活性に関与する残基）を有する。さらに、バリアントは、親と比較すると、典型的には、５以下、４以下、３以下、２以下、又は１以下の挿入又は欠失を有し、しばしば、挿入も欠失も有していない。さらに、いかなる付加又は欠失も、典型的には約２５未満、約２０未満、約１９未満、約１８未満、約１７未満、約１６未満、約１５未満、約１４未満、約１３未満、約１０未満、約９未満、約８未満、約７未満、約６未満の残基であり、一般には、約５未満、約４未満、約３未満、又は約２未満の残基である。いくつかの実施形態では、親ポリペプチド又は参照ポリペプチドは、天然に存在するものである。当業者には理解されることであるが、特定の目的ポリペプチドの複数のバリアントが天然には通常存在し得る（特に目的ポリペプチドが感染体ポリペプチドである場合）。

【0212】

ベクター
ベクターとは、本明細書で使用される場合、それに連結された別の核酸を運搬可能な核酸分子を指す。１種のベクターとして「プラスミド」があり、プラスミドとは、その中に追加のＤＮＡセグメントが連結され得る、環状の二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターとしてウイルスベクターがあり、ウイルスゲノムの中に追加のＤＮＡセグメントが連結され得る。ある特定のベクターは導入された宿主細胞内で自律増殖が可能である（例えば、細菌性複製開始点を有する細菌ベクター及びエピソーム性の哺乳類ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性の哺乳類ベクター）は、宿主細胞内への導入後に宿主細胞のゲノムに組み入れられることで、宿主ゲノムと共に複製され得る。さらに、ある特定のベクターは、機能的に連結した遺伝子の発現を指示することが可能である。そのようなベクターは「発現ベクター」と呼ばれる。

【0213】

野生型
本明細書で使用される場合、用語「野生型」は、本技術分野において理解されるその意味を有し、「正常な」（変異した、異型の、患部の、変化した、等とは対照的）状態又は状況において、天然に存在するような構造及び／又は活性を有する実体を指す。野生型遺伝子及び野生型ポリペプチドがしばしば複数の異なる形態（例えば、対立遺伝子）で存在することは、当業者に理解される。

【0214】

実施形態の詳細
本発明は、部分的には、天然型（すなわち、細胞表面上に発現された形態）のＣＤ１９への優先的結合性を有する、ＣＤ１９、具体的にはヒトＣＤ１９、に対して高い特異性を有するヒト抗体剤（例えば、ヒトモノクローナル抗体）を作製できるという認識に基づく。さらに、そのようなヒト抗体剤は、概して、組換え型又は固定化型のＣＤ１９（例えば、プレートに結合したＣＤ１９）に優先的結合する抗体剤と比べて、より良好なインビボ特性を伴う。また本発明は、無処理のレパートリーから開発されたヒト抗体剤が、いくつかの実施形態では、臨床的に意義のあるエピトープに対して特異性を有するヒト抗体剤を提供しない場合があるという認識に基づく。単なる一例であるが、本開示により、特に、本明細書に記載の抗ＣＤ１９ヒト抗体剤、具体的には、自己免疫疾患対象より得られた配列から作製された抗体ライブラリーを用いて開発されたヒト抗体剤が、細胞表面上に発現されたＣＤ１９に対する結合性は示すが、一方、融合タンパク質との関連において組換え型ヒトＣＤ１９に対しては結合性を示さなかったことが示される。すなわち、提供されたヒト抗体剤は、いくつかの実施形態では、治療上の関連性がほとんどない可能性がある非天然型のヒトＣＤ１９ではなく、天然ヒトＣＤ１９に対する高い特異性によって、特徴付けられ得る。

【0215】

本発明により、特に、いくつかのがん細胞株及び初代ヒトＢ細胞の表面上に発現されたヒトＣＤ１９と発現する多重特異性結合剤（例えば、二重特異性抗体）の産生の成功が示される。具体的には、本発明により、特に、ＣＤ１９特異的にいくつかのがん細胞株と結合し、且つ、高効率の標的細胞溶解を媒介する、多重特異性結合剤（例えば、二重特異性抗体）が提供される。そのような多重特異性結合剤は、細胞毒性（ｃｙｔｏｘｉｃｉｔｙ）アッセイにおける高い特異性及び効力によって特徴づけられる。

【0216】

また本発明により、提供されたヒト抗体剤を用いたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の作製と、その後の形質導入Ｔ細胞における発現、それによる操作されたＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）の作製、の成功も示される。具体的には、本開示により、種々のがん細胞株の表面上に発現されたヒトＣＤ１９を特異的に認識するＣＡＲ－Ｔが提供される。本明細書に記載されるように、提供された抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔは、いくつかの実施形態においては、他の抗ＣＤ１９抗体成分から作製されたＣＡＲ－Ｔに優って効率的に標的細胞を殺滅する。さらに、本明細書に記載されるように、提供された抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔは、ヒトリンパ腫異種移植片を移植された動物から、腫瘍を効果的に根絶する。すなわち、本開示は、少なくともいくつかの実施形態において、がん診断用及びがん治療用の天然ヒトＣＤ１９に対する高い特異性を有するヒト抗体剤の開発を包含し、ヒト用の多重特異性結合剤及びＣＡＲ発現免疫細胞の作製のための抗体成分の供給源を提供する。

【0217】

ＣＤ１９
表面抗原分類（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）１９、又はＣＤ１９は、Ｂ細胞、具体的には、形質細胞を除く広範なＢ細胞系統、の上に発現される膜貫通型糖タンパク質である。ＣＤ１９は多くの悪性Ｂ細胞上にも発現される。ＣＤ１９は、抗原－ＢＣＲ相互作用の刺激閾値の制御において、Ｂ細胞表面上の補助受容体として機能する。ＣＤ１９はまた、ＣＤ２１、ＣＤ８１及びＣＤ８２等の細胞表面上の他の分子とも相互作用する。ＣＤ１９の活性化（すなわち、細胞質ドメインのリン酸化）は、種々のキナーゼ（例えば、Ｓｒｃファミリー）を含む種々のシグナル伝達経路を惹起し、種々の免疫細胞プロセスをもたらす。ＣＤ１９は、様々ながん及び自己免疫疾患と結び付けられている。実際に、ＣＤ１９は、がん治療用の抗体ベースの治療薬を開発するための標的として鋭意研究されたが（例えば、Ｈａｍｍｅｒ， ２０１２， ｍＡｂｓ ４：５， ５７１－５７７； Ｒｅｉｃｈｅｒｔ， Ｊ．Ｍ． ａｎｄ Ｅ． Ｄｈｉｍｏｌｅａ， ２０１２， Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ １７（１７／１８）：９５４－９６３； Ｓｕｒｅｓｈ， Ｔ． ｅｔ ａｌ．， ２０１４， Ｊ． Ｈｅｍａｔｏｌ． ７：５８を参照）、そのような抗体剤の大部分は、ヒト化型及び／又はキメラ型のマウス抗体である。理想的には、ヒト患者の治療用には完全ヒト抗体剤が好ましい。ヒトＣＤ１９のアミノ酸配列を以下に記載する（シグナル配列は下線部）。

【0218】

【0219】

抗ＣＤ１９抗体剤
抗ＣＤ１９抗体は、公知であり、ヒトにおけるがん及び自己免疫障害を治療するための治療薬としての将来性を示してきたが、その多くがマウス起源である。この関連においてはヒト抗体剤の使用が特に好ましく、というのも、ヒト抗体剤の使用が、投与された抗体に対する免疫応答の可能性を減らすためである。したがって、本発明は、ヒトＣＤ１９に対して高い特異性を示し、且つ、いくつかの実施形態では、既存のヒト化型及び／又はキメラ型の非ヒト由来（例えば、マウス）抗体に付随する制限を克服する、ヒトＢ細胞ライブラリーから開発された完全ヒト抗体剤（例えば、ヒトモノクローナル抗体及びその断片）を提供する。

【0220】

本発明は、抗ＣＤ１９ヒト抗体剤（例えば、モノクローナル抗体）、並びに、いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ１９と結合する第一の抗原結合部位及び免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）と結合する第二の抗原結合部位を有する多重特異性結合剤（例えば、二重特異性抗体）の投与に基づく、ＣＤ１９が関連した疾患、障害及び状態、並びに関連悪性腫瘍を治療するための方法及び組成物を提供する。

【0221】

本発明は特に、ヒトＣＤ１９と結合する、特にその天然型（すなわち、細胞表面発現型）に結合する、ある特定のヒト抗体の配列、及びまた、ある特定の親和性成熟抗体の配列を提供する。例えば、本明細書では特に、本明細書に記載の配列エレメントを含有するポリペプチドを含む、ヒト抗体剤（例えば、完全長抗体、その断片、一本鎖抗体、二重特異性抗体、又は本明細書に記載の若しくは本技術分野において公知の他の抗体剤フォーマット）が例示される。

【0222】

ヒトＣＤ１９と結合する例示的なヒト抗体剤（例えば、ｓｃＦｖ）を表１に示す（軽鎖可変領域配列（ＤＮＡ及びアミノ酸）は太字で示し、重鎖可変領域配列（ＤＮＡ及びアミノ酸）はイタリック体で示し、リンカー配列は下線で示す）。

【0223】

【表1】

【0224】

【0225】

【0226】

【0227】

【0228】

【0229】

【0230】

【0231】

【0232】

【0233】

【0234】

【0235】

【0236】

【0237】

【0238】

【0239】

【0240】

【0241】

種々の実施形態において、本発明による抗ＣＤ１９ヒト抗体剤は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域から構成され、前記重鎖可変領域は表１に示される重鎖可変領域と少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％）同一の配列を有する。

【0242】

種々の実施形態において、本発明による抗ＣＤ１９ヒト抗体剤は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域から構成され、前記重鎖可変領域は表１に示される重鎖可変領域と同一又は実質的に同一の配列を有する。

【0243】

種々の実施形態において、本発明による抗ＣＤ１９ヒト抗体剤は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域から構成され、前記軽鎖可変領域は表１に示される軽鎖可変領域と少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％）同一の配列を有する。

【0244】

種々の実施形態において、本発明による抗ＣＤ１９ヒト抗体剤は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域から構成され、前記軽鎖可変領域は表１に示される軽鎖可変領域と同一又は実質的に同一の配列を有する。

【0245】

種々の実施形態において、本発明による抗ＣＤ１９ヒト抗体剤は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域から構成され、前記重鎖可変領域は表１に示される重鎖可変領域と少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％）同一の配列を有し、前記軽鎖可変領域は表１に示される軽鎖可変領域と少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％）同一の配列を有する。

【0246】

種々の実施形態において、本発明による抗ＣＤ１９ヒト抗体剤は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域から構成され、前記重鎖可変領域は表１に示される重鎖可変領域と同一又は実質的に同一の配列を有し、前記軽鎖可変領域は表１に示される軽鎖可変領域と同一又は実質的に同一の配列を有する。

【0247】

種々の実施形態において、本発明による抗ＣＤ１９ヒト抗体剤は、表１に示される重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列から選択される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域から構成される。

【0248】

種々の実施形態において、本発明による抗ＣＤ１９ヒト抗体剤は、表１に示されるｓｃＦｖと少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％）同一の配列を含む単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）であるか、又はそれを含む。

【0249】

種々の実施形態において、本発明による抗ＣＤ１９ヒト抗体剤は、表１に示されるｓｃＦｖと同一又は実質的に同一の配列を含む単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）であるか、又はそれを含む。

【0250】

種々の実施形態において、本発明による抗ＣＤ１９ヒト抗体剤は、表１から選択される単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）であるか、又はそれを含む。

【0251】

抗体及び／若しくはその特徴的部分を包含する、提供される抗体剤、又はそれらをコードする核酸は、利用可能ないかなる手段で産生されてもよい。例えば、抗体産生のためのプロトコルは、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， （１９８８）に記載されている。抗体（例えば、モノクローナル抗体及び／又はポリクローナル抗体）を作製するための技術は、本技術分野において周知である。広範な動物種が抗血清の作製に使用可能であることは理解されることであり、例えば、ウサギ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット又はヤギが挙げられる。当業者であれば知っているように、動物の選択は処置の容易さ、費用又は必要な血清量に基づいて決定され得る。抗体剤が、目的の免疫グロブリンの重鎖配列及び軽鎖配列を遺伝子導入された哺乳動物又は植物（例えば、ヒト免疫グロブリンの重鎖遺伝子及び軽鎖遺伝子を遺伝子導入されたトランスジェニックげっ歯類）の作製を通じて、遺伝子導入によっても産生可能であることは理解されよう。哺乳類における遺伝子導入による産生に関連して、抗体は、ヤギ、雌ウシ、又は他の哺乳類の乳において産生させ、それから回収することが可能である（例えば、米国特許第５，８２７，６９０号、同第５，７５６，６８７号、同第５，７５０，１７２号、及び同第５，７４１，９５７号；これらの全体が参照によって本明細書に援用される）。典型的には、抗体はマウス、ラット、モルモット、ハムスター、ラクダ、ラマ、サメ、又は他の適切な宿主において作製可能である。あるいは、抗体はＩｇＹ分子を産生するニワトリにおいて作製される場合がある（Ｓｃｈａｄｅ ｅｔ ａｌ．， １９９６， ＡＬＴＥＸ １３（５）：８０－８５）。いくつかの実施形態では、本発明に好適な抗体は、類人猿抗体である。例えば、ヒヒにおいて治療上有効な抗体を産生させるための一般的手法が、例えば、国際特許出願第１９９１／１１４６５号及びＬｏｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．， １９９０， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ４６：３１０に見出され得る。いくつかの実施形態では、ハイブリドーマ法（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ， １９８３， Ｎａｔｕｒｅ ３０５（５９３４）：５３７－４０）を用いてモノクローナル抗体が作製され得る。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は組換え法（例えば、米国特許第４，１６６，４５２号）によっても作製され得る。

【0252】

Ｂ細胞不死化によるモノクローナル抗体作製に付随する困難の多くは、ファージディスプレイを用いた、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（又は酵母）における抗体断片の操作と発現を行うことにより、克服することができる。高親和性モノクローナル抗体が確実に回収するために、コンビナトリアル免疫グロブリンライブラリーは通常、大サイズのレパートリーを含んでいる必要がある。典型的な戦略には、免疫化マウスのリンパ球又は脾臓細胞から得られたｍＲＮＡが利用され、逆転写酵素によりｃＤＮＡが合成される。重鎖遺伝子及び軽鎖遺伝子をＰＣＲにより別々に増幅し、ファージクローニングベクター内に連結する。２つの異なるライブラリーが作製され、１つは重鎖遺伝子を含有し、１つは軽鎖遺伝子を含有する。これらのライブラリーは無処理ライブラリーとすることもできるし、あるいは、重鎖ＣＤＲ３が合成された、全てのアミノ酸（システイン以外）が等しく重鎖ＣＤＲ３領域内のあらゆる所与の位置に存在している可能性が高い、半合成ライブラリーとすることもできる。ファージＤＮＡが各ライブラリーから単離され、重鎖配列と軽鎖配列とが連結及びパッケージ化されて、コンビナトリアルライブラリーが形成される。各々のファージは重鎖ｃＤＮＡ及び軽鎖ｃＤＮＡのランダムペアを含有しており、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）感染後、感染細胞内でのこれらの抗体鎖の発現を指示する。目的の抗原（例えば、ＣＤ１９）を認識する抗体を同定するため、ファージライブラリーを蒔き、プラーク内に存在する抗体分子をフィルターに移す。フィルターを放射標識抗原と一緒にインキュベートし、その後洗浄により過剰な未結合リガンドを除去する。オートラジオグラフ上の放射性スポットにより、目的抗原と結合する抗体を含有するプラークを特定する。あるいは、目的の抗原（例えば、ＣＤ１９）を認識する抗体の同定は、固相、例えばビーズ又は哺乳類細胞に結合された目的抗原にファージを繰り返し結合させた後、未結合のファージを除去し、特異的に結合したファージを溶出することにより、達成され得る。そのような実施形態では、抗原をまず、例えばストレプトアビジン結合型Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｍ－２８０への固定化のためにビオチン化する。ファージライブラリーをこれらの細胞、ビーズ又は他の固相とインキュベートし、未結合ファージを洗浄により取り除く。目的抗原と結合する抗体ファージクローンを選別し、さらなる特徴付けのために試験する。

【0253】

選別後、陽性ｓｃＦｖクローンを、生細胞表面上に発現された目的抗原への結合力について、インダイレクトフローサイトメトリーにより試験する。簡潔に説明すると、ファージクローンを、目的抗原を発現する、又は発現しない、細胞（例えば、目的抗原を発現するように操作された細胞、又は抗原を天然に発現する細胞）とインキュベートする。細胞を洗浄し、その後マウス抗Ｍ１３コートタンパク質モノクローナル抗体で標識する。細胞を再度洗浄し、蛍光結合型二次抗体（例えば、ＦＩＴＣ－ヤギ（Ｆａｂ）_２抗マウスＩｇＧ）で標識し、その後フローサイトメトリーにかける。ヒト免疫グロブリンファージライブラリーを作製するために有用なクローニングベクター及び発現ベクターは、例えば、ストラタジーン・クローニング・システムズ社（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ）（カリフォルニア州ラ・ホーヤ）から入手することができる。

【0254】

高親和性ｓｃＦｖを得るために、同様の戦略を使用できる（例えば、Ｖａｕｇｈｎ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １４：３０９－３１４を参照）。大きなレパートリーを有するｓｃＦｖライブラリーは、全ての既知のＶ_Ｈ遺伝子ファミリー、Ｖκ遺伝子ファミリー及びＶλ遺伝子ファミリーに対応するＰＣＲプライマーを用いて、非免疫ヒトドナーからＶ遺伝子を単離することによって、構築できる。増幅後、Ｖκプール及びＶλプールを合わせて１つのプールにする。これらの断片をファージミドベクター内に連結する。次に、ｓｃＦｖリンカー（例えば、（Ｇ_４Ｓ）_ｎ）を、ファージミド内のＶ_Ｌ断片の上流（又は、望ましい場合はＶ_Ｈ断片の上流）に連結する。Ｖ_Ｈ及びリンカー－Ｖ_Ｌ断片（又はＶ_Ｌ及びリンカー－Ｖ_Ｈ断片）を増幅し、Ｊ_Ｈ領域上でアセンブルする。得られたＶ_Ｈ－リンカー－Ｖ_Ｌ（又はＶ_Ｌ－リンカー－Ｖ_Ｈ）断片を、ファージミドベクター内に連結する。ファージミドライブラリーは、上記のようにフィルターを用いて、又は、イムノチューブ（ヌンク社；Ｍａｘｉｓｏｒｐ）を用いて、パニングすることができる。免疫ウサギのリンパ球又は脾臓細胞からコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリーを構築することにより、及び、メタノール資化酵母（Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ）においてｓｃＦｖコンストラクトを発現させることにより（例えば、Ｒｉｄｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １３：２５５－２６０を参照）、同様の結果を達成できる。さらに、適切なｓｃＦｖを単離した後、ＣＤＲ３変異誘発及び鎖シャフリング等の親和性成熟プロセスを通じて、結合親和性がより高く、解離速度がより遅い抗体断片を得ることができる（例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ｂｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ， ７８：１８１－１８８）； Ｏｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ２：１８１－１９６を参照）。

【0255】

抗体断片の別の形態は、単一のＣＤＲをコードするペプチドである。ＣＤＲペプチド（「最小認識単位」）は、目的の抗体のＣＤＲをコードする遺伝子を構築することにより、得ることができる。そのような遺伝子は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応を用いて抗体産生細胞のＲＮＡから可変領域を合成することにより、作製される（例えば、Ｌａｒｒｉｃｋ ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｍｅｔｈｏｄｓ： Ａ Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２：１０６； Ｃｏｕｒｔｅｎａｙ－Ｌｕｃｋ， “Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，” ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ， Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ， Ｒｉｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， ｐ． １６６－１７９， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ １９９５；およびＷａｒｄ ｅｔ ａｌ．， “Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，” ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｂｉｒｃｈ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， ｐ． １３７－１８５， Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ． １９９５を参照）。

【0256】

ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリー（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２８（９）：１０２７－３７； Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２２（３）：５８１－９７）及びヒトモノクローナル抗体の作製（Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ａｎｄ Ｓｅｌｌ， １９８５， Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｒｖ． ４（ｌ）：２７１－９０）を含む、様々な手法を用いて産生可能である。同様に、内因性Ｉｇ遺伝子が部分的又は完全に不活性化されている遺伝子導入動物に、ヒトＩｇ遺伝子を導入することは、ヒト抗体を合成するのに利用できる（例えば、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １４（７）：８４５－５１； Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｎａｔｕｒｅ ３６８（６４７４）：８５６－９； Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ， １９９５， Ｉｎｔ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３：６５－９３； Ｔａｙｌｏｒ， Ｌ．Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， １９９２， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２０：６２８７－９５； Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ Ｓ－Ａ．， ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ Ｌ．Ｌ．， ２００２， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １３：５９３－７； Ｌｉｔｔｌｅ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｔｏｄａｙ ２１：３６４－７０； Ｍｕｒｐｈｙ， Ａ．Ｊ． ｅｔ ａｌ．， ２０１４， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． １１１（１４）：５１５３－８を参照）。暴露後、ヒト抗体産生が認められる。いくつかの実施形態では、抗原暴露に応答してヒト抗体を産生するように操作された非ヒト動物の、ヒトＣＤ１９による免疫化によって、抗ＣＤ１９ヒト抗体が作製される。

【0257】

提供されるヒト抗体剤（抗体及び／又は特徴的な部分を含む）は、例えば、本発明の抗体をコードする核酸を発現するように操作された宿主細胞系を利用することによって、産生され得る。あるいは又はさらに、提供されるヒト抗体剤は、部分的又は完全に、化学合成によって（例えば、自動ペプチド合成機又は抗体剤をコードする核酸の遺伝子合成を用いて）作製され得る。

【0258】

目的のヒト抗体剤は、あらゆる適切なベクターを用いて発現させることができる。種々のベクター（例えば、ウイルスベクター）が本技術分野において知られており、そのようなベクターが導入された細胞（又はそのような細胞の子孫）は、本技術分野において知られているように（例えば、連続培養系又は流加培養系を用いて）培養することができる。いくつかの実施形態では、細胞は遺伝子操作されてもよく；操作されたポリペプチド（例えば、本明細書に記載の抗体剤ポリペプチド）を発現するように細胞を遺伝子操作するための技術は、本技術分野において周知である（例えば、Ａｕｓａｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， １９９０， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （ワイリー社、ニューヨーク）を参照）。

【0259】

いくつかの実施形態では、提供されるヒト抗体剤は、所望により、濾過、遠心分離及び／又はＨＰＬＣ若しくはアフィニティークロマトグラフィー等の種々のクロマトグラフ技術を用いて精製され得る。いくつかの実施形態では、ペプシン若しくはパパイン等の酵素による消化を含む方法によって、及び／又は、化学還元によるジスルフィド結合の切断によって、提供されるヒト抗体剤の断片が得られる。

【0260】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、提供されるヒト抗体剤は、例えば、ポリクローナル抗体；モノクローナル抗体若しくはその抗原結合性断片；親和性成熟抗体、バリアント抗体（例えば、参照抗体と比べて１若しくは複数のアミノ酸置換を有する）、若しくはその断片（例えば、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２）等の改変抗体；又は、生合成抗体、例えば、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体（ＤＡＢ）、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、多重特異性結合剤（例えば、二重特異性抗体）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）等であり得るか、又はそれを含み得る。

【0261】

提供されるヒト抗体剤が、抗体剤の特徴及び／又は活性が向上するように、操作、産生、及び／又は精製され得ることは、理解されよう。例えば、提供される抗体剤の特徴の向上としては、特に、安定性の増加、結合親和性及び／又は結合活性の向上、結合特異性の増加、産生の増加、凝集の減少、非特異的結合の減少が挙げられるが、これらに限定はされない。

【0262】

いくつかの実施形態では、提供されるヒト抗体剤は、タンパク質安定性、抗原結合、発現レベルを向上する、又は、治療薬、診断薬若しくは検出剤を結合するための部位若しくは位置を与える、１又は複数のアミノ酸置換（例えば、免疫グロブリン又はその断片［例えば、ｓｃＦｖ］との関連ではフレームワーク領域内に）を含み得る。

【0263】

いくつかの実施形態では、提供されるヒト抗体剤は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、又はこれらの断片からなる群より選択される抗体クラスの構成員（すなわち、アイソタイプ）である免疫グロブリン（すなわち、抗体）であるか、又はそれを含む。

【0264】

いくつかの実施形態では、提供されるヒト抗体剤には、参照Ｆｃ領域（又は親Ｆｃ領域）に対して少なくとも１つのアミノ酸改変を含むバリアントＦｃ領域を含むヒトモノクローナル抗体が包含される。そのような実施形態では、バリアントＦｃ領域を含むヒト抗体剤は、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ）に対して変化した親和性を示し得るが、ただし、Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｎａｔｕｒｅ， ４０６：２６７－２７３に開示されるもの等の、Ｆｃ－Ｆｃ受容体相互作用の結晶学的及び構造学的な解析に基づいて、前記バリアントＦｃ領域がＦｃ受容体と直接接触する位置に置換を持たない。ＦｃγＲ等のＦｃ受容体と直接接触するＦｃ領域内の位置の例は、アミノ酸２３４～２３９（ヒンジ領域）、アミノ酸２６５～２６９（Ｂ／Ｃループ）、アミノ酸２９７～２９９（Ｃ’／Ｅループ）、及びアミノ酸３２７～３３２（Ｆ／Ｇ）ループである。いくつかの実施形態では、提供される、本発明の、バリアントＦｃ領域を含むヒト抗体剤は、構造学的及び結晶学的な解析に基づいてＦｃγＲと直接接触する少なくとも１つ残基の改変を含む。

【0265】

いくつかの実施形態では、提供されるヒト抗体剤は、参照Ｆｃ領域（又は親Ｆｃ領域）と比べて１又は複数のアミノ酸改変を含むバリアントＦｃ領域を有する抗ＣＤ１９ヒトモノクローナル抗体である。例えば活性化及び／又は抑制性受容体に対する親和性を変化させたり、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）等のエフェクター機能の向上をもたらしたり、Ｃ１ｑに対する結合親和性を増加させたり、ＦｃＲ結合性を低減又は除去したり、半減期を延長したりするようなバリアントＦｃ領域をもたらすＦｃ領域内のアミノ酸改変は、本技術分野において公知である（例えば、米国特許第９，０５１，３７３号、同第９，０４０，０４１号、同第８，９３７，１５８号、同第８，８８３，９７３号、同第８，８８３，１４７号、同第８，８５８，９３７号、同第８，８５２，５８６号、同第８，８０９，５０３号、同第８，８０２，８２３号、同第８，８０２，８２０号、同第８，７９５，６６１号、同第８，７５３，６２９号、同第８，７５３，６２８号、同第８，７３５，５４７号、同第８，７３５，５４５号、同第８，７３４，７９１号、同第８，６９７，３９６号、同第８，５４６，５４３号、同第８，４７５，７９２号、同第８，３９９，６１８号、同第８，３９４，９２５号、同第８，３８８，９５５号、同第８，３８３，１０９号、同第８，３６７，８０５号、同第８，３６２，２１０号、同第８，３３８，５７４号、同第８，３２４，３５１号、同第８，３１８，９０７号、同第８，１８８，２３１号、同第８，１２４，７３１号、同第８，１０１，７２０号、同第８，０９３，３５９号、同第８，０９３，３５７号、同第８，０８８，３７６号、同第８，０８４，５８２号、同第８，０３９，５９２号、同第８，０１２，４７６号、同第７，７９９，９００号、同第７，７９０，８５８号、同第７，７８５，７９１号、同第７，７４１，０７２号、同第７，７０４，４９７号、同第７，６６２，９２５号、同第７，４１６，７２７号、同第７，３７１，８２６号、同第７，３６４，７３１号、同第７，３３５，７４２号、同第７，３３２，５８１号、同第７，３１７，０９１号、同第７，２９７，７７５号、同第７，１２２，６３７号、同第７，０８３，７８４号、同第６，７３７，０５６号、同第６，５３８，１２４号、同第６，５２８，６２４号及び同第６，１９４，５５１号を参照）。

【0266】

いくつかの実施形態では、提供されるヒト抗体剤は、（例えば、グリコシル化されていない）親Ｆｃ領域（ｐａｒｅｎｔ Ｆｃ ｒｅｇｉｏｎ （ｅ．ｇ．，ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）と比べてバリアントグリコシル化されたＦｃ領域（Ｆｃ ｒｅｇｉｏｎ ｗｉｔｈ ｖａｒｉａｎｔ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）を有する抗ＣＤ１９ヒトモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バリアントグリコシル化は、操作された細胞株における発現から生じる（例えば、Ｕｍａｎａ， Ｐ． ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １７（２）：１７６－８０； Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ， Ｎ． ｅｔ ａｌ．， ２００４， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｂｉｏｅｎｇ． ８７（５）：６１４－２２； ｖｏｎ Ｈｏｒｓｔｅｎ， Ｈ．Ｈ． ｅｔ ａｌ．， ２０１０， Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ． ２０（１２）：１６０７－１８； Ｂｅｃｋ， Ａ． ｅｔ ａｌ．， ２０１０， Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ． Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ． ５（１）：９５－１１１；並びに米国特許第８，０８０，４１５号及び同第８，０８４，２２２号を参照；これらは全て参照によって本明細書に援用される）。いくつかの実施形態では、本発明は、バリアントＦｃ領域を含むヒト抗ＣＤ１９抗体成分を有する多重特異性結合剤を提供する。いくつかの実施形態では、提供される多重特異性結合剤は、抗体成分が由来し得る親抗体との比較において、バリアントグリコシル化（例えば、非グリコシル化）を示す抗体成分（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｔｈａｔ ｓｈｏｗｓ ｖａｒｉａｎｔ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ （ｅ．ｇ．， ｉｓ ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ））を含む。

【0267】

いくつかの実施形態では、本発明は、エフェクター機能及び／又はＦｃＲに対する親和性の変化（例えば、増加及び／又は減少）が参照Ｆｃと比較して増強又は減弱されたことを特徴とする、バリアントＦｃ領域（すなわち、Ｆｃ領域が適切な参照Ｆｃに対し１又は複数の付加、欠失、及び／又は置換を含む）を含む抗体又は抗体剤を提供及び／又は利用する。これらのバリエーションも当業者の技術の範囲内である。

【0268】

したがって、本発明は特に、より高い親和性で１又は複数のＦｃγＲに結合するバリアントＦｃ領域を含む抗体剤及び多重特異性結合剤（例えば、抗体剤）を提供する。そのような剤は、後述のように、より効率的にエフェクター機能を媒介するため好ましい。いくつかの実施形態では、本発明は、より弱い親和性で１又は複数のＦｃγＲに結合するバリアントＦｃ領域を含む抗体剤及び多重特異性結合剤（例えば、二重特異性抗体）を提供する。エフェクター機能の低減又は消失は、ある特定の場合、例えば、その作用機序が、ブロッキング又は拮抗作用を含むが、標的抗原を有する細胞の殺滅は含まない抗体の場合、望ましい。さらに、いくつかの実施形態において、後述の二重特異性抗体を作製する場合、エフェクター機能の消失は望ましい。エフェクター機能の低減又は消失は、エフェクター細胞におけるＦｃγＲ活性化受容体が遮断される（この種の機能は宿主細胞に存在する）自己免疫疾患の場合、望ましいであろう。一般に、エフェクター機能の増加は、腫瘍及び外来抗原を発現する細胞に向けられ得るが、いくつかの実施形態では、腫瘍細胞から離れるようにエフェクター機能が方向付けられ得る。

【0269】

本発明における使用のためのＦｃバリアントは、例えばエフェクター機能を変化させる改変を含む、他のＦｃ改変と組み合わせられ得る。本発明は、抗体又はＦｃ融合物における相加的、相乗的、又は新規の特性をもたらす、本明細書に記載のＦｃバリアントと、他のＦｃ改変との組み合わせを含む。そのようないくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、組み合わされた改変物の表現型を増強し得る。例えば、Ｆｃバリアントが、野生型Ｆｃ領域を含む対比分子よりも高い親和性でＦｃγＲＩＩＩＡと結合することが知られている変異体と組み合わされる場合、変異体との組み合わせは、ＦｃγＲＩＩＩＡ親和性におけるより高い倍率の増強をもたらす。

【0270】

本発明におけるいくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントが、抗体又はＦｃ融合物に組み込まれることにより、操作された剤（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ａｇｅｎｔ）が作製される。当該剤は、Ｆｃ領域を含む分子に対して、Ｆｃグリコフォームを１又は複数（すなわち、１又は複数の炭水化物が共有結合しているＦｃポリペプチドを１又は複数）含み、ここで、グリコフォームの炭水化物組成は、Ｆｃ領域を含む親分子のそれとは化学的に異なる。

【0271】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の多重特異性結合剤（例えば、抗体剤）は、バリアントグリコシル化を示すＦｃバリアントを含み得、且つ／又は、適切な参照Ｆｃ領域（例えば、親Ｆｃ領域）、若しくはグリコシル化が欠乏していない細胞株で発現されたＦｃ領域と比べて、前記剤のＦｃ領域がグリコシル化を欠いて産生されるように、グリコシル化欠乏性細胞株において発現され得る。

【0272】

いくつかの実施形態では、本発明において利用される抗体は、好ましくは、抗体の機能性、例えば、抗原に対する結合活性を変化させない、目的抗原（例えば、ＣＤ１９）に結合する適切な参照抗体と比較して改変された糖鎖付加部位を有し得る。本明細書で使用される場合、「糖鎖付加部位」は、オリゴ糖（すなわち、互いに結合した２つ以上の単糖を含有する炭水化物）が特異的且つ共有結合的に結合する、抗体内のあらゆる特定のアミノ酸配列を含む。オリゴ糖側鎖は、典型的には、Ｎ結合又はＯ結合を介して抗体の骨格に連結される。Ｎ結合型グリコシル化とは、アスパラギン残基の側鎖へのオリゴ糖部分の結合をいう。Ｏ結合型グリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸、例えば、セリン、スレオニンへのオリゴ糖部分の結合をいう。例えば、フコースを含むある特定のオリゴ糖及び末端のＮ－アセチルグルコサミンを欠くＦｃ－グリコフォームは、特殊なＣＨＯ細胞で産生され、増強されたＡＤＣＣエフェクター機能を示し得る。

【0273】

いくつかの実施形態では、本発明は、糖鎖付加部位を付加又は欠失させることにより、本明細書に記載の抗体の炭水化物内容物を改変する方法を包含する。抗体の炭水化物内容物を改変するための方法は、本技術分野において周知であり、本開示に包含される（例えば、米国特許第６，２１８，１４９号、同第６，４７２，５１１号；米国特許出願公開第２００３－０１１５６１４Ａ１号、同第２００２－００２８４８６Ａ１号；国際公開第２００３／０３５８３５号；欧州特許第０３５９０９６Ｂ１号を参照）。いくつかの実施形態では、本発明は、抗体の１又は複数の内在性炭水化物部分を欠失させることにより、抗体の炭水化物内容物（又はその関連する部分又は成分）を改変する方法を提供する。

【0274】

操作されたグリコフォームは、エフェクター機能の増強又は低減を含むがこれらに限定はされない、種々の目的において有用であり得る。操作されたグリコフォームは、当業者に公知のあらゆる方法によって、例えば、操作された発現株若しくはバリアント発現株を使用することにより、１若しくは複数の酵素、例えばＮ－アセチルグルコサミン転移酵素Ｉ（ＧｎＴＩ）との共発現により、種々の生物若しくは種々の生物に由来する細胞株においてＦｃ領域（又はバリアントＦｃ領域）を含む分子を発現させることにより、又は、Ｆｃ領域を含む分子が発現された後に炭水化物を改変することにより、作製され得る。操作されたグリコフォームを作製するための方法は、本技術分野において公知であり、限定はされないが、以下に記載されるものが挙げられる：Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １７：１７６－１８０； Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｂｉｏｅｎｇ． ７４：２８８－２９４； Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．， ２００２， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７７：２６７３３－２６７４０； Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．， ２００３， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７８：３４６６－３４７３；米国特許第６，６０２，６８４号；米国特許出願公開第２００３－０１５７１０８Ａ１号、同第２００３－０００３０９７Ａ１号；国際公開第２０００／６１７３９号、同第２００１／２９２２４６号、同第２００２／３１１１４０号及び同第２００２／３０９５４号；ＰＯＴＩＬＬＥＧＥＮＴ（商標）技術（バイオワ社（Ｂｉｏｗａ， Ｉｎｃ．）、ニュージャージー州プリンストン）；ＧＬＹＣＯＭＡＢ（商標）グリコシル化操作技術（グリカート・バイオテクノロジー社（ＧＬＹＣＡＲＴ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＧ）、スイス、チューリヒ）。例えば、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．， ２００４， ＪＭＢ， ３３６：１２３９－４９；米国特許出願公開第２００３－０１１５６１４Ａ１号；国際公開第２０００／０６１７３９号を参照されたい。

【0275】

特定の例示的実施形態：免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の組み合わせ
いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号２に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号２に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号２に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号２に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0276】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号４に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号４に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号４に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号４に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0277】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号６に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号６に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号６に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号６に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0278】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号８に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号８に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号８に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号８に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0279】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号１０に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号１０に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１０に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号１０に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0280】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号１２に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号１２に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１２に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号１２に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0281】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号１４に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号１４に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１４に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号１４に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0282】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号１６に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号１６に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１６に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号１６に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0283】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号１８に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号１８に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号１８に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号１８に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0284】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号２０に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号２０に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号２０に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号２０に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0285】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号２２に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号２２に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号２２に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号２２に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0286】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号２４に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号２４に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号２４に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号２４に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0287】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号２６に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号２６に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号２６に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号２６に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0288】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号２８に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号２８に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号２８に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号２８に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0289】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号３０に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号３０に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号３０に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号３０に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0290】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号３２に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号３２に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号３２に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号３２に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0291】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号３４に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は配列番号３４に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤は、配列番号３４に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域及び配列番号３４に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む抗体である。

【0292】

特定の例示的実施形態：特定のアミノ酸置換
いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、アミノ酸位置３、１２、１６、１７、２５、２６、３２、６３、６９、９７、１０２、１０６、１０８、１０９、１１３、１１６、１１７及びこれらの組み合わせのいずれかにおける１又は複数のアミノ酸置換を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、フレームワーク内及び／又はＣＤＲ領域内に１以上５以下のアミノ酸置換を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含む。

【0293】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２及び３４からなる群より選択される配列番号に現れる免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、且つ、アミノ酸位置３、１２、１６、１７、２５、２６、３２、６３、６９、９７、１０２、１０６、１０８、１０９、１１３、１１６、１１７及びこれらの組み合わせのいずれかにおける１又は複数のアミノ酸置換をさらに含む。

【0294】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、Ｑ３Ｒ、Ｋ１２Ｅ、Ｅ１６Ｇ、Ｓ１７Ｆ、Ｓ２５Ａ、Ｇ２６Ａ、Ｙ３２Ｆ、Ｓ６３Ｆ、Ｔ６９Ａ、Ａ９７Ｖ、Ｔ１０２Ｓ、Ｍ１０６Ｌ、Ｙ１０８Ｎ、Ｄ１０９Ｅ、Ｑ１１３Ｌ、Ｌ１１６Ｍ、Ｍ１１７Ｌ及びこれらの組み合わせからなる群より選択される１又は複数の置換を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含む。

【0295】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、参照免疫グロブリン重鎖可変領域と比べて１又は複数の置換を含み、且つ、配列番号３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０及び７２のいずれか１つに現れる配列を有する、免疫グロブリン重鎖可変領域を含む。

【0296】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、アミノ酸位置１０、１６、２５、３４、５２、５４、６８、６９、７２、７５、９３、９５及びこれらの組み合わせのいずれかにおける１又は複数のアミノ酸置換を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、フレームワーク内及び／又はＣＤＲ領域内に１以上５以下のアミノ酸置換を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。

【0297】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２及び３４からなる群より選択される配列番号に現れる免疫グロブリン軽鎖可変領域を含み、且つ、アミノ酸位置１０、１６、２５、３４、５２、５４、６８、６９、７２、７５、９３、９５及びこれらの組み合わせのいずれかにおける１又は複数のアミノ酸置換をさらに含む。

【0298】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、Ｖ１０Ｍ、Ｋ１６Ｅ、Ｓ２５Ｎ、Ｖ３４Ｉ、Ｄ５２Ｎ、Ｌ５４Ｑ、Ｎ６８Ｔ、Ｔ６９Ｍ、Ｌ７２Ｍ、Ｓ７５Ｎ、Ｓ９３Ｔ、Ｄ９５Ｅ、Ｄ９５Ｇ及びこれらの組み合わせからなる群より選択される１又は複数の置換を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。

【0299】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、参照免疫グロブリン軽鎖可変領域と比べて１又は複数の置換を含み、且つ、配列番号３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０及び７２のいずれか１つに現れる配列を有する、免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。

【0300】

いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤は、フレームワーク内及び／又はＣＤＲ領域内に１以上５以下のアミノ酸置換を共に含む、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。

【0301】

特に、本開示は、本発明の抗ＣＤ１９ヒト抗体剤内のそのようなアミノ酸置換の存在が、親ヒト抗体剤との比較において、ヒト抗体剤のヒトＣＤ１９に対する結合親和性及び／又は特異性を増加させることを示す。すなわち、抗ＣＤ１９ヒト抗体剤内へのかかるアミノ酸置換の導入は、ＣＤ１９に対する、特に天然ＣＤ１９（すなわち、細胞表面発現型ＣＤ１９）に対する、結合親和性を向上させる。

【0302】

かかる導入を達成するための、又は、他の方法でかかる配列を含有するポリペプチドを作製、準備、又は製造するための、本技術分野において公知の種々の技術は、当業者に知られている。この関連で有用な例示的な技術は、例えば、Ｇｒｅｅｎ ＆ Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ ２０１２に記載されている。

【0303】

具体的な例示的実施形態……具体的なＣＤＲ
本技術分野において一般に知られているように、モノクローナル抗体は、可変領域及び定常領域を各々含む、２つの重鎖及び２つの軽鎖からできている。重鎖可変領域は通常、フレームワーク領域に挟まれた、本明細書ではＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３とされる、３つのＣＤＲを含む（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍ Ｅ． Ｐａｕｌ， Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （７ｔｈ ｅｄ．）， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ ２０１３参照）。軽鎖可変領域は通常、フレームワーク領域に挟まれた、本明細書ではＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３とされる、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。

【0304】

本発明は、表２（ＨＣＤＲ）及び表３（ＬＣＤＲ）に記載のＣＤＲをあらゆる可能な組み合わせで含むヒト抗体剤を提供する。限定を意図していない例示として、本発明は、それぞれ配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号１８１、配列番号１８２及び配列番号１８３である、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含むヒト抗体剤を包含する。

【0305】

所望のＣＤＲ領域及び／又はフレームワーク領域を有する抗体の製造は、本技術分野において一般的に知られており、例えば、Ｓｔｒｏｈｌ ＆ Ｓｔｒｏｈｌ， Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｌｉｍｉｔｅｄ ２０１２に記載されている。

【0306】

【表2】

【0307】

【0308】

【0309】

【表3】

【0310】

【0311】

【0312】

種々の実施形態において、本発明のヒト抗体剤は、表２に示されるＨＣＤＲのうちの少なくとも１つ及び／又は表３に示されるＬＣＤＲのうちの少なくとも１つを含む。

【0313】

種々の実施形態において、本発明のヒト抗体剤は、表２に示されるＨＣＤＲのうちの少なくとも２つ及び／又は表３に示されるＬＣＤＲのうちの少なくとも２つを含む。

【0314】

種々の実施形態において、本発明のヒト抗体剤は、表２に示されるいずれか３つのＨＣＤＲ及び／又は表３に示されるいずれか３つのＬＣＤＲを含む。

【0315】

種々の実施形態において、本発明のヒト抗体剤は、表２に示される一連の３つのＨＣＤＲ及び／又は表３に示される対応する一連の３つのＬＣＤＲを含む。

【0316】

種々の実施形態において、本発明のヒト抗体剤は、表２に示される３つのＨＣＤＲと少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％）同一の配列をそれぞれ有する、３つのＨＣＤＲを含む。

【0317】

種々の実施形態において、本発明のヒト抗体剤は、表３に示される３つのＬＣＤＲと少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％）同一の配列をそれぞれ有する、３つのＬＣＤＲを含む。

【0318】

種々の実施形態において、本発明のヒト抗体剤は３つのＨＣＤＲ及び３つのＬＣＤＲを含み、前記３つのＨＣＤＲはそれぞれ、表２に示される３つのＨＣＤＲと少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％）同一の配列を有し、前記３つのＬＣＤＲはそれぞれ、表３に示される３つのＬＣＤＲと少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％）同一の配列を有する。

【0319】

種々の実施形態において、本発明のヒト抗体剤は３つのＨＣＤＲ及び／又は３つのＬＣＤＲを含み、前記ＨＣＤＲ及びＬＣＤＲはそれぞれ、表２及び表３にそれぞれ示されるＨＣＤＲ及びＬＣＤＲと同一又は実質的に同一の配列を有する。

【0320】

種々の実施形態において、本発明のヒト抗体剤は、それぞれ表２及び表３から選択されるＨＣＤＲ及びＬＣＤＲを含む免疫グロブリン（例えば、モノクローナル抗体）であるか、又はそれを含む。

【0321】

一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）
一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、本技術分野において広く知られ、広く使用されている。一本鎖Ｆｖは、短いリンカーペプチドで連結されている場合がある、免疫グロブリンの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）の融合タンパク質である（例えば、Ｂｅｎｎｙ Ｋ． Ｃ． Ｌｏ （ｅｄ．）， Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ － Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ ２００４、及びそれに引用された参考文献を参照）。

【0322】

本発明は、ヒトＣＤ１９と特異的に結合する一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を提供し、いくつかの実施形態では、リンカー配列を含有するｓｃＦｖが提供される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるｓｃＦｖのＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域は、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２８９）であるか、又はそれを含む、リンカー配列を含む。いくつかの実施形態では、リンカー配列は（Ｇ_４Ｓ）_ｎ配列であるか、又はそれを含み、ここで、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上と等しい。

【0323】

いくつかの実施形態では、リンカーのアミノ酸長は、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００又はそれ以上である。いくつかの実施形態では、リンカーは、堅くて曲がらない三次元構造をとらない傾向にあり、むしろポリペプチド（例えば、第一及び／又は第二の結合成分）に可動性を与えるという特徴を有する。

【0324】

いくつかの実施形態では、提供されるｓｃＦｖポリペプチドは、以下のいずれか１つに現れる配列を含む：配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０及び配列番号７２。

【0325】

種々の実施形態において、本発明のヒト抗体剤は、それぞれ表２及び表３から選択されるＨＣＤＲ及びＬＣＤＲを含む単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）であるか、又はそれを含む。

【0326】

種々の実施形態において、本発明のヒト抗体剤は、表１に示される重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む、単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）であるか、又はそれを含む。

【0327】

いくつかの実施形態では、提供されるｓｃＦｖポリペプチドは、治療薬又は検出剤に結合されている。

【0328】

当業者に公知であるように、本発明におけるｓｃＦｖの作製及びそれらの改変は、本技術分野において公知である（例えば、Ｂｅｎｎｙ Ｋ． Ｃ． Ｌｏ （ｅｄ．）， Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ － Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ ２００４、及びそれに引用された参考文献を参照）。

【0329】

多重特異性結合剤
多重特異性結合剤が、２つ以上の標的（例えば、エピトープ）に特異的に結合する結合成分を含む分子的な独立体又は複合体であることは、当業者が認めるところである。そのような多重特異性結合剤には、本技術分野において、治療用途を含め、種々の利用法が見出されている。一例に過ぎないが、当業者に知られているように、多重特異性結合剤は、細胞傷害性Ｔ細胞を腫瘍部位に向かわせる（又はリクルートする）ことにより腫瘍細胞の殺滅を促進するように操作されたものである。腫瘍抗原の例としては、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＣＡ１５－３、ＣＡ２７－２９、ＣＡ１９－９、ＣＡ－１２５、カルレチニン、癌胎児抗原、ＣＤ３４、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、上皮膜タンパク質（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＥＭＡ）、第ＶＩＩＩ因子、ＣＤ３１ ＦＬ１、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、嚢胞症液タンパク質（ｇｒｏｓｓ ｃｙｓｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｆｌｕｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＧＣＤＦＰ－１５）、ＨＭＢ－４５、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、インヒビン、ケラチン、ＣＤ４５、リンパ球マーカー、ＭＡＲＴ－１（Ｍｅｌａｎ－Ａ）、Ｍｙｏ Ｄｌ、筋特異的アクチン（ｍｕｓｃｌｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｃｔｉｎ）（ＭＳＡ）、神経フィラメント、神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、胎盤型アルカリフォスファターゼ（ＰＬＡＰ）、前立腺特異的抗原、Ｓ１００タンパク質、平滑筋アクチン（ＳＭＡ）、シナプトフィジン、チログロブリン、甲状腺転写因子１（ｔｈｙｒｏｉｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ－ １）、腫瘍内Ｍ２－ＰＫ（ｔｕｍｏｒ Ｍ２－ＰＫ）、及びビメンチンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0330】

いくつかの実施形態では、本発明に係る使用のための多重特異性結合剤は、二重特異性結合剤である。多くの実施形態において、そのような二重特異性結合剤は腫瘍細胞に結合することが可能である。多くの実施形態において、そのような二重特異性結合剤は、ＣＤ１９^＋細胞、すなわち細胞表面上にＣＤ１９ポリペプチドを発現している細胞（例えば、腫瘍細胞）、に結合することが可能である。

【0331】

いくつかの実施形態では、本明細書にて提供される多重特異性結合剤（例えば、二重特異性結合剤）は、抗体成分であるか、それを含む。抗体成分を含む多重特異性結合剤を設計、構築、及び／又は産生するための種々の技術は、本技術分野において公知である。

【0332】

例えば、完全免疫グロブリンフレームワーク（例えば、ＩｇＧ）、単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）、又はこれらの組み合わせを利用する多重特異性結合剤が構築されている。縦一列の２つのｓｃＦｖユニットから構成される二重特異性結合剤は、臨床において好結果をもたらす二重特異性抗体フォーマットであることが示されている。抗腫瘍免疫療法の場合においては、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ等）との結合によりＴ細胞を引き付けるｓｃＦｖを腫瘍抗原と結合するｓｃＦｖと連結した形で、２つの単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）を縦一列として含む二重特異性結合剤が、設計されている。このようにして、前記二重特異性結合剤が、ある特定のＴ細胞が有する細胞傷害特性による腫瘍細胞の殺滅を媒介し得ることを期待して、Ｔ細胞が腫瘍部位にリクルートされる。かかる二重特異性結合剤の一例として、リンパ腫用のＣＤ１９及びＣＤ３を標的とするものが作製されており（二重特異性Ｔ細胞誘導抗体、又はＢｉＴＥ抗体と呼ばれる；例えば、Ｄｒｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００３， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７０：４３９７－４４０２； Ｗｏｌｆ， Ｅ． ｅｔ ａｌ．， ２００５， Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ １０（１８）：１２３７－１２４４； Ｍｏｌｈｏｊ， Ｍ． ｅｔ ａｌ． ２００７， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ４４：１９３５－４３； Ｂａｒｇｏｕ ｅｔ ａｌ．， ２００８， Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２１：９７４－９７７； Ｂａｅｕｅｒｌｅ， Ｐ．Ａ． ａｎｄ Ｃ． Ｒｅｉｎｈａｒｄｔ， ２００９， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６９（１２）：４９４１－４４； Ｈｏｆｆｍａｎ， Ｌ．Ｍ ａｎｄ Ｌ． Ｇｏｒｅ， Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌ． ４（Ａｒｔ． ６３）， ５頁を参照）、これは、動物異種移植片試験において腫瘍増殖の予防において好結果を残した。ヒト試験において、この二重特異性結合剤は、５例の部分寛解及び２例の完全寛解を含む、客観的な腫瘍反応を示した。

【0333】

例示的な二重特異性結合剤として、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）に特異的な第一の抗体成分及び免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞等）に特異的な第二の抗体成分を有するものが挙げられる。二重特異性結合剤は、例えば、同一又は異なる抗原の異なるエピトープを認識する重鎖及び／又は軽鎖を組み合わせることにより、作製することができる。いくつかの実施形態では、分子機能により、二重特異性結合剤は、その２本の結合腕の一方（一方のＶ_Ｈ／Ｖ_Ｌ対）上で１つの抗原（又はエピトープ）と結合し、且つ、その第二の腕（異なるＶ_Ｈ／Ｖ_Ｌ対）上で異なる抗原（又はエピトープ）と結合する。この定義によると、二重特異性結合剤は、２つの異なる抗原結合腕を有し（特異性及びＣＤＲ配列の両方において）、且つ、結合するそれぞれの抗原に対し一価である。

【0334】

いくつかの実施形態では、本発明の二重特異性結合剤は、構造が異なる２つの標的に同時に結合できることを特徴とする。いくつかの実施形態では、本発明の二重特異性結合剤は、例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、骨髄、血漿、又はマスト細胞抗原又はエピトープに特異的に結合する少なくとも１つの他の成分、及び、ＣＤ１９、具体的には細胞表面上に発現されたＣＤ１９、と特異的に結合する少なくとも１つの他の成分を有する。

【0335】

種々の実施形態において、本発明に係る二重特異性結合剤（例えば、二重特異性抗体）は、第一の結合成分及び第二の結合成分から構成される。多くの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性結合剤の第一及び第二の結合成分は、それぞれ、異なる特異性を特徴とする抗体成分から構成される。多くの実施形態において、抗体成分は表１から選択される。

【0336】

種々の実施形態において、本発明に係る二重特異性結合剤は、第一の結合成分及び第二の結合成分を含む。種々の実施形態において、本発明に係る二重特異性結合剤は、第一の結合成分、第二の結合成分、並びに前記第一及び第二の結合成分の両方に連結されたリンカー（例えば、前記第一及び第二の結合成分の間に位置する）を含む。

【0337】

種々の実施形態において、本明細書に記載の第一及び／又は第二の結合成分は、抗体成分を含むか、又は抗体成分である。種々の実施形態において、本明細書に記載の第一及び／又は第二の結合成分は、リンカー配列を含むか、又はリンカー配列を介して連結されている。

【0338】

いくつかの実施形態では、リンカーのアミノ酸長は、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００又はそれ以上である。いくつかの実施形態では、リンカーは、堅くて曲がらない三次元構造をとらない傾向にあり、むしろポリペプチド（例えば、第一及び／又は第二の結合成分）に可動性を与えるという特徴を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、例えば、凝集の低減及び／又は安定性の増加などの、二重特異性結合剤に付与された特定の性質に基づいて、本明細書に記載の二重特異性結合剤に使用される。いくつかの実施形態では、本発明の二重特異性結合剤はＧ_４Ｓリンカーを含む。いくつかの特定の実施形態では、本発明の二重特異性結合剤は（Ｇ_４Ｓ）_ｎリンカーを含み、式中、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又はそれ以上である。

【0339】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第一及び／又は第二の結合成分は、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）であるか、それを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第一及び／又は第二の結合成分は、抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）であるか、それを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第一の結合成分は抗体断片であるかそれを含み、第二の結合成分は免疫グロブリンであるかそれを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第一の結合成分は免疫グロブリンであるかそれを含み、第二の結合成分は抗体断片であるかそれを含む。いくつかの特定の実施形態では、第一の結合成分は免疫グロブリンであり、第二の結合成分は抗体断片である。いくつかの特定の実施形態では、第一の結合成分はＩｇＧであり、第二の結合成分はｓｃＦｖである。

【0340】

いくつかの特定の実施形態では、本発明に係る二重特異性結合剤は、第一及び第二のｓｃＦｖを含む。いくつかの特定の実施形態では、第一のｓｃＦｖは第二のｓｃＦｖのＣ末端に連結されている。いくつかの特定の実施形態では、第二のｓｃＦｖが第一のｓｃＦｖのＣ末端に連結されている。いくつかの特定の実施形態では、ｓｃＦｖはリンカー配列を介して互いに連結されている。いくつかの特定の実施形態では、ｓｃＦｖはリンカー配列無しで互いに連結されている。

【0341】

いくつかの実施形態では、本発明の二重特異性結合剤は、２つの異なる重鎖又は重鎖可変領域及び２つの異なる軽鎖又は軽鎖可変領域を含む。

【0342】

いくつかの実施形態では、本発明の二重特異性結合剤は２つの特異性を有し、その１つはヒトＣＤ１９と結合し、もう一方はＴ細胞上のヒトＣＤ３（例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ等）と結合する。

【0343】

いくつかの実施形態では、本発明の二重特異性結合剤は、表１に示される１又は複数の配列と少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％）同一の１又は複数の配列を含む。

【0344】

いくつかの実施形態では、本発明の二重特異性結合剤は、表１に示される１又は複数の配列と実質的に同一又は同一の１又は複数の配列を含む。

【0345】

種々の実施形態において、本明細書に記載の二重特異性結合剤の第一の結合成分は１又は複数のＨＣＤＲ及び１又は複数のＬＣＤＲを含み、前記１又は複数のＨＣＤＲはそれぞれ、表２に示される１又は複数のＨＣＤＲと少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上）同一の配列を有し、前記１又は複数のＬＣＤＲはそれぞれ、表３に示される１又は複数のＬＣＤＲと少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上）同一の配列を有する。

【0346】

種々の実施形態において、本明細書に記載の二重特異性結合剤の第一の結合成分は３つのＨＣＤＲ及び３つのＬＣＤＲを含み、前記３つのＨＣＤＲはそれぞれ、表２に示される３つのＨＣＤＲと少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上）同一の配列を有し、前記３つのＬＣＤＲはそれぞれ、表３に示される３つのＬＣＤＲと少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上）同一の配列を有する。

【0347】

種々の実施形態において、本明細書に記載の二重特異性結合剤の第一の結合成分は一連の３つのＨＣＤＲ及び一連の３つのＬＣＤＲを含み、前記一連の３つのＨＣＤＲはそれぞれ、表２に示される一連の３つのＨＣＤＲと少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上）同一の配列を有し、前記一連の３つのＬＣＤＲはそれぞれ、表３に示される一連の３つのＬＣＤＲと少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上）同一の配列を有する。

【0348】

種々の実施形態において、本明細書に記載の二重特異性結合剤の第一の結合成分は、表２に示される一連の３つのＨＣＤＲ及び表３に示される一連の３つのＬＣＤＲを含む。

【0349】

種々の実施形態において、本明細書に記載の二重特異性結合剤の第一の結合成分は、表１に示される抗体成分と少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上）同一の配列を有する抗体成分を含む。

【0350】

種々の実施形態において、本明細書に記載の二重特異性結合剤の第一の結合成分は、表１に示される抗体成分と同一又は実質的に同一の配列を有する抗体成分を含む。

【0351】

種々の実施形態において、本明細書に記載の二重特異性結合剤の第二の結合成分は、Ｔ細胞と結合する抗体成分を含む。本明細書に記載の二重特異性結合剤の第二の結合成分の標的として利用できる例示的なＴ細胞マーカーとしては、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ等）、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＯＸ４０（ＴＮＦＲＳＦ４又はＣＤ１３４）、ＧＩＴＲ（ＴＮＦＲＳＦ１８又はＣＤ３５７）、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９又は４－１ＢＢ）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ４０Ｌ（ＴＮＦＳＦ５又はＣＤ１５４）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）等が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性結合剤の第二の結合成分は、ＣＤ３と結合する抗体成分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性結合剤の第二の結合成分は、ＣＤ３εと結合する抗体成分を含む。本発明の二重特異性結合剤に利用できる例示的な抗ＣＤ３抗体成分は、本技術分野において公知であり、例えば、Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２１：２７１７－２５； Ａｄａｉｒ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｈｕｍ． Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５：４１－７； Ｎｏｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｃｌｉｎ． Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ． ７０（１２）：１７０７－１２； Ｃｈａｔｅｎｏｕｄ， ２００３， Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３（２）：１２３－３２； Ｃｈｅａｄｌｅ， ２００６， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． ８（１）：６２－８； Ｈｅｒｏｌｄ ｅｔ ａｌ．， ２００９， Ｃｌｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３２：１６６－７３； Ｈｅｉｓｓ ａｎｄ Ｍｕｒａｗａ， ２０１０， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ １２７（９）：２２０９－２１； Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１０， Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ， ５３： ６１４－２３； Ｓｉｌｋｅ ａｎｄ Ｇｉｒｅｓ， ２０１１， ＭＡｂｓ， ３（１）：３１－７； Ｃｉｏｆｆｉ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．， ２０１２， Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １８：４６５－４７４； Ｄｅａｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１２， Ｓｗｉｓｓ Ｍｅｄ． Ｗｋｌｙ． １４２：ｗ１３７１１； Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１３， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． １１０（１３）：５１４５－５０； Ｐｏｒｔｅｌｌ ｅｔ ａｌ．， ２０１３， Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ５：５－１１；米国特許第７，１１２，３２４号、同第７，５７５，９２３号、同第８，０７６，４５９号、同第８，１０１，７２２号に見出すことができ、これらは全てその全体が参照によって本明細書に援用される。

【0352】

あるいは、既存の非ヒト（例えば、マウス）抗ＣＤ３抗体成分が、本発明の二重特異性結合剤に利用するための抗体成分の貴重な供給源を提供する（例えば、ＥＭＢＬ登録番号Ａ２２２５９．１ ＧＬ６４１４６４マウスＯＫＴ３軽鎖、及びＥＭＢＬ登録番号Ａ２２２６１．１ ＧＬ２１７２７１４４のマウスＯＫＴ３重鎖を参照）。そのような非ヒト抗体成分は有用ではあるが、ヒト対象の治療においてはそのヒト化型のほうが好ましく、これは、特に、投与抗体（又は二重特異性結合剤）に対する免疫反応の可能性がヒト化型では低減されるからである。ヒト化抗体を作製するための方法は本技術分野において周知である。

【0353】

キメラ抗原受容体
本発明はまた、本明細書に記載のヒト抗体剤及び／又は多重特異性結合剤を含むキメラ抗原受容体を提供する。ＣＡＲは、本技術分野において公知の方法によって構築され得る（例えば、国際特許出願第２０１２／０７９０００号、同第２０１３／１２６７２６号、同第２０１５／１７７７８９号及び同第２０１５／０８０９８１号；米国特許出願公開第２０１２／０２１３７８３Ａ１号、米国特許第７，４４６，１７９号及び同第５，９１２，１７２号；Ｍｉｌｏｎｅ， Ｍ．Ｃ． ｅｔ ａｌ．， ２００９， Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒａｐｙ １７（８）：１４５３－６４； Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ， Ｊ．Ｎ． ｅｔ ａｌ．， ２０１０， Ｂｌｏｏｄ １１６（１９）：３８７５－８６； ２０１１， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３６５（２０）：１９３７－９； Ｇｒｕｐｐ， Ｓ．Ａ． ｅｔ ａｌ．， ２０１３， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３６８（１６）：１５０９－１８； Ｒｏｍａｓ， Ｃ．Ａ． ｅｔ ａｌ．， ２０１４， Ｃａｎｃｅｒ Ｊ． ２０（２）：１１２－１８； Ｓｉｎｇｈ， Ｈ． ｅｔ ａｌ．， ２０１４， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｒｅｖ． ２５７（１）：１８１－９０； Ｆｕｊｉｗａｒａ， Ｈ．， ２０１４， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ７：１０４９－６８； Ｍａｕｄｅ， Ｓ．Ｌ． ｅｔ ａｌ．， ２０１５， Ｂｌｏｏｄ １２５（２６）：４０１７－２３を参照；これらは全て参照によって本明細書に援用される）。免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞等）を、本明細書に記載の抗体成分を含有するキメラ抗原受容体を発現するように操作することで、検出回避のためにがん細胞が用いる免疫系監視機構に打ち克つ抗腫瘍性免疫エフェクター細胞を作製することができる。いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞を提供し、ここでキメラ抗原受容体は、本明細書に記載のヒト抗体剤又は多重特異性結合剤の抗原結合部位を、１又は複数含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞には、本明細書に記載のヒト抗体剤の抗原結合部位を発現するよう操作されたＴ細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、抗原結合部位は、本明細書に記載の抗体成分であるか、又はそれを含む。

【0354】

いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ヒトの、且つ／又は、人為的に操作された（例えば、１又は複数のアミノ酸置換を含む）、キメラ抗原受容体を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の成分（例えば、抗体成分、結合成分、シグナル伝達成分等）を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、膜貫通型成分及び／又は細胞内シグナル伝達成分を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、該キメラ抗原受容体を発現した免疫細胞に由来する成分（例えば、天然免疫細胞受容体）を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチドの、１又は複数の膜貫通型成分及び／又は１又は複数の細胞内成分を含む。

【0355】

用語「Ｔ細胞受容体」、又は「ＴＣＲ」とは、本明細書で使用される場合、Ｔ細胞の表面上で対合するαβ鎖又はγδ鎖から構成されるヘテロ二量体の受容体を指す。α鎖、β鎖、γ鎖、及びδ鎖はそれぞれ２つのＩｇ様ドメインから構成される。ＴＣＲのＣＤＲを介した抗原認識を与える可変ドメイン（Ｖ）、これに、Ｃ－ペプチド及び膜貫通（ＴＭ）領域によって細胞膜に繋留された定常ドメイン（Ｃ）が続き、定常ドメイン（Ｃ）は細胞質内配列／細胞内成分と連絡している。ＴＭ領域はＣＤ３シグナル伝達装置のインバリアントサブユニットと協同する。ＴＣＲ Ｖドメインのそれぞれは３つのＣＤＲを有する。これらのＣＤＲは、主要組織適合遺伝子複合体（ｐＭＨＣ）にコードされるタンパク質に結合した抗原ペプチドの間で複合体と相互作用する（例えば、Ｄａｖｉｓ ａｎｄ Ｂｊｏｒｋｍａｎ，１９８８， Ｎａｔｕｒｅ ３３４：３９５－４０２； Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １６：５２３－４４； Ｍｕｒｐｈｙ， Ｋｅｎｎｅｔｈ Ｐ． Ｊａｎｅｗａｙ’ｓ Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ． ８^ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ Ｇｒｏｕｐ， ＬＬＣ， ２０１２． Ｐｒｉｎｔ． Ｃｈａｐｔｅｒｓ ５ ＆ ６を参照されたい）。ＴＣＲのＶドメイン及びＣＤＲ配列は典型的には、抗体のＶドメイン及びＣＤＲ配列と非常に異なる。

【0356】

いくつかの実施形態では、提供されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドのヘテロ二量体から構成され、前記第一のポリペプチドは本明細書に記載の抗ＣＤ１９重鎖可変領域及びＴＣＲγ鎖のＴＭ領域を含み、前記第二のポリペプチドは本明細書に記載の抗ＣＤ１９軽鎖可変領域及びＴＣＲδ鎖のＴＭ領域を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲヘテロ二量体の前記第一のポリペプチドは本明細書に記載の抗ＣＤ１９重鎖可変領域及びＴＣＲδ鎖のＴＭ領域を含み、前記第二のポリペプチドは本明細書に記載の抗ＣＤ１９軽鎖可変領域及びＴＣＲγ鎖のＴＭ領域を含む。いくつかの実施形態では、提供されるキメラ抗原受容体はＴＣＲαβ鎖のＴＭ領域を含む。いくつかの実施形態では、提供されるキメラ抗原受容体はＴＣＲの細胞内ドメインを含む。特定の実施形態では、提供されるキメラ抗原受容体はＴＣＲのＴＭ領域及び細胞内領域の両方を含む。

【0357】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗原受容体の成分は、免疫細胞のＣＤ１９^＋細胞への結合を促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗原受容体は、本明細書に記載の抗体剤である、又はそれを基としている、抗体成分を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗原受容体は、ヒトＣＤ１９と結合する抗体成分を含み、且つ、１又は複数の細胞質内シグナル伝達ドメインの全体又は一部、及び、１又は複数の共起刺激分子の全体又は一部を、さらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗原受容体の抗体成分はｓｃＦｖであるか、又はそれを含む。いくつかのある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは表１から選択される。

【0358】

標的
特に、本発明は、多重特異性結合剤（及び／又はキメラ抗原受容体）、特に、二重特異性抗体等の二重特異性結合剤が、細胞殺滅を促進するのに特に有用且つ／又は有効であるという認識を有する。具体的には、本発明は、標的細胞関連エピトープ（例えば、がん細胞上のＣＤ１９）及びリンパ球関連エピトープ（例えば、Ｔ細胞表面タンパク質）の両方に特異的に結合する多重特異性結合剤の活性が、Ｂ細胞関連疾患及び悪性腫瘍に対する有効な免疫療法となり得ることを示すものである。

【0359】

例えば、本発明のいくつかの実施形態では、多重特異性結合剤は腫瘍細胞関連エピトープ及びＴ細胞エピトープに特異的に結合する。そのような実施形態においては、前記多重特異性結合剤は、その標的エピトープの一方又は両方への前記剤の結合を促進させることができ、且つ／又は、標的Ｔ細胞によって媒介される標的腫瘍細胞の殺滅を増強させることができる。単なる別の例示として、本発明のいくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体はがん細胞上のＣＤ１９と結合する。そのような実施形態においては、前記キメラ抗原受容体のその標的エピトープとの結合後に、免疫細胞がＣＤ１９^＋細胞の殺滅を促進させ得る。

【0360】

いくつかの実施形態では、殺滅対象の標的細胞として、例えば、ＣＤ１９を発現する細胞（例えば、リンパ腫又は白血病細胞）が含まれる。当業者であれば、本明細書に記載の多重特異性結合剤が望ましく結合する細胞上の適切な標的エピトープを知っているであろう。

【0361】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的細胞の殺滅を媒介し得るリンパ球細胞として、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８^＋Ｔ細胞）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、顆粒球及び抗体依存性細胞傷害性細胞が含まれる。当業者であれば、本明細書に記載の多重特異性結合剤が望ましく結合するリンパ球上の適切な標的エピトープを知っているであろう。代表的なそのようなエピトープは、例えば、ＩｇＧのＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＢ）、ＣＤ１ｄ、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ等）、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３１、ＣＤ３８、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＭＡＣ－ｌ／ＭＡＣ－３、ＩＬ－２Ｒａ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、Ｌｙ４９、及びＣＤ９４、ＣＤ１３７等の抗原上に見出され得る。

【0362】

核酸の構築及び発現
本明細書に記載のヒト抗体剤（例えば、ヒトモノクローナル抗体、ｓｃＦｖ等）、多重特異性結合剤（例えば、二重特異性抗体）及びキメラ抗原受容体は、本技術分野で公知の分子生物学的方法を用いて、核酸分子から産生され得る。適切な宿主細胞内に導入された場合に融合タンパク質を発現することが可能なベクター内に核酸分子が挿入される。適切な宿主細胞として、限定はされないが、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、及び哺乳類細胞が挙げられる。ベクター内にＤＮＡ断片を挿入するための当業者に公知のいかなる方法も、転写／翻訳調節シグナルの制御下の、本発明の融合タンパク質をコードする発現ベクターの構築に使用されてよい。これらの方法には、インビトロにおける組換えＤＮＡ法及び合成的手法、並びにインビボにおける組換えが含まれ得る（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ； Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｅｄｓ． Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ， Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌ． Ａｓｓｏｃ．， Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， ＮＹを参照）。

【0363】

本発明においては、核酸分子の発現は、組換えＤＮＡ分子で形質転換された宿主内で該分子が発現されるように、第二の核酸配列によって制御され得る。例えば、本発明の核酸分子の発現はプロモーターエレメント及び／又はエンハンサーエレメントによって制御され得るが、このことは本技術分野において公知である。

【0364】

核酸構築体は、抗体及び／又は抗体成分から作製された多重特異性結合タンパク質（又はキメラ抗原受容体）をコードする領域を含む。典型的には、そのような多重特異性結合タンパク質（又はキメラ抗原受容体）はＶ_Ｈ領域よび／又はＶ_Ｌ領域から作製される。所望の結合特性及び／又は機能特性を示す抗体の同定及び選別の後、各抗体の可変領域が単離、増幅、クローン化及び配列決定される。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌのヌクレオチド配列に修飾を加えてもよく、例えば、アミノ酸をコードする、及び／若しくは制限酵素認識部位を保有するヌクレオチド配列の付加、アミノ酸をコードするヌクレオチド配列の欠失、又はアミノ酸をコードするヌクレオチド配列の置換が挙げられる。前記抗体及び／又は抗体成分は、ヒト抗体、非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体から作製され得る。

【0365】

本発明の核酸構築体は、本技術分野において公知の方法によって発現ベクター又はウイルスベクター内に挿入され、核酸分子は発現制御配列に機能的に連結される。

【0366】

適切であれば、本明細書に記載のヒト抗体剤、多重特異性結合剤、及びキメラ抗原受容体をコードする核酸配列は、特定の細胞型又は生物内での発現用に最適化されたコドンを含むように修飾されてよい（例えば、米国特許第５，６７０，３５６号及び同第５，８７４，３０４号を参照）。コドン最適化配列は合成配列であり、非コドン最適化親ポリヌクレオチドにコードされた同一ポリペプチド（又は、完全長ポリペプチドと実質的に同一の活性を有する完全長ポリペプチドの生物学的に活性な断片）をコードすることが好ましい。いくつかの実施形態では、抗体成分をコードする遺伝物質のコード領域は、全体又は一部として、特定の細胞型（例えば、真核細胞又は原核細胞）用にコドン使用頻度を最適化するために、改変配列を含み得る。例えば、本明細書に記載のヒト重鎖（又は軽鎖）可変領域のコード配列は、細菌細胞内での発現用に最適化され得る。あるいは、前記コード配列は、哺乳類細胞（例えば、ＣＨＯ）内での発現用に最適化され得る。そのような配列はコドン最適化配列と称され得る。

【0367】

核酸分子を含有する発現ベクターが好適な宿主細胞に形質転換されることで、該核酸構築体にコードされるタンパク質の産生が可能となる。例示的な宿主細胞として、原核生物（例えば、大腸菌）及び真核生物（例えば、ＣＯＳ細胞又はＣＨＯ細胞）が挙げられる。発現ベクターで形質転換された宿主細胞が、本発明のヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体の産生を可能とする条件下で増殖された後、ヒトモノクローナル抗体、多重特異性結合剤又はキメラ抗原受容体の回収が行われる。いくつかの実施形態では、宿主細胞には、１又は複数の発現ポリペプチドにおいて異なるグリコシル化パターンを示すものが含まれる（例えば、米国特許第８，０８０，４１５号及び同第８，０８４，２２２号を参照）。

【0368】

本発明のヒト抗体剤及び／又は多重特異性結合剤は、後の安定な抗体分子又は結合剤分子の形成を可能にするいかなる手法で精製されてもよい。例えば、理論に束縛されることを望むものではないが、ヒト抗体剤及び／又は多重特異性結合剤は、細胞から可溶性ポリペプチドとして、又は封入体として回収され、該可溶性ポリペプチド又は該封入体から、８Ｍグアニジニウム塩酸塩及び透析により定量的に抽出され得る。本発明のヒト抗体剤及び／又は多重特異性結合剤をさらに精製する目的で、従来のイオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー又はゲル濾過を使用してよい。本発明のヒト抗体剤及び／又は多重特異性結合剤は、真核細胞又は原核細胞から分泌された後に、培養上清から回収されてもよい。

【0369】

キメラ抗原受容体の免疫細胞表面上での発現は、本技術分野において公知の方法によって達成され得る。典型的には、キメラ抗原受容体ポリペプチドをコードする核酸配列を保有する発現ベクターを、発現用の宿主細胞に形質転換する。上記のように、そのような宿主細胞は、ＰＢＭＣ由来Ｔ細胞等の、細胞株又は初代ヒト細胞単離物とすることができる。キメラ抗原受容体の発現が細胞膜へと標的化されるように、前記発現ベクターはシグナルペプチド及び／又は膜貫通ドメイン及び／又はシグナル伝達ドメインをコードする配列を含んでもよい。そのようなシグナルペプチドは当業者に公知である。キメラ抗原受容体ポリペプチドをコードする発現ベクターは、本技術分野において公知の方法によって宿主細胞に導入され、これらの方法としては、例えば、ＤＮＡトランスフェクション、エレクトロポレーション、トランスフェクション及び感染（例えば、アデノウイルス又はレトロウイルス等のウイルスの感染）が挙げられる。

【0370】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗原受容体をコードする核酸分子は、Ｔ細胞における発現を可能にし、それによりキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）の作製を可能にする。キメラ抗原受容体をコードする核酸分子は、Ｔ細胞等の、宿主免疫エフェクター細胞における発現のために、１又は複数のベクター（例えば、レンチウイルスベクター又はレトロウイルスベクター）に含ませることができる。例示的な免疫細胞としては、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、及び調節性Ｔ細胞が挙げられる。キメラ抗原受容体をコードする核酸分子及び係るキメラ抗原受容体を含むＴ細胞を作製する方法は、本技術分野において公知である（例えば、Ｔｉｌｌ， Ｂ．Ｇ． ｅｔ ａｌ．， ２００８， Ｂｌｏｏｄ １１２（６）：２２６１－７１； Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ， Ｒ． ｅｔ ａｌ．， ２０１０， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １８（４）：６６６－８； Ｍｏｒｇａｎ， Ｒ．Ａ． ｅｔ ａｌ．， ２０１０， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １８（４）：８４３－５１； Ｐａｒｋ， Ｔ．Ｓ． ｅｔ ａｌ．， ２０１１， Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２９（１１）：５５０－７； Ｇｒｕｐｐ， Ｓ．Ａ． ｅｔ ａｌ．， ２０１３， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３６８（１６）：１５０９－１８； Ｈａｎ， Ｅ．Ｑ． ｅｔ ａｌ．， ２０１３， Ｊ． Ｈｅｍａｔｏｌ． Ｏｎｃｏｌ． ６：４７；国際公開第２０１２／０７９０００号、同第２０１３／１２６７２６号；及び米国特許出願公開第２０１２／０２１３７８３号を参照）。

【0371】

抱合体
抗体剤に治療薬又は検出剤を結合又は抱合するためのいくつかの技術が、本技術分野において公知である。結合技術の中には金属キレート錯体の使用を含むものもあり、例えば、抗体に結合された、ジエチレントリアミン五酢酸無水物（ＤＴＰＡ）等の有機キレート化剤；エチレントリアミン五酢酸；Ｎ－クロロ－ｐ－トルエンスルホンアミド；及び／又はテトラクロロ－３α－６α－ジフェニルグリコルリル－３を使用する（例えば、米国特許第４，４７２，５０９号及び同第４，９３８，９４８号を参照）。提供されたヒト抗体剤は、グルタルアルデヒド又は過ヨウ素酸塩等のカップリング剤の存在下で酵素と反応させてもよい。フルオレセインマーカーとの抱合体は、例えば、これらのカップリング剤の存在下で、又は、イソチオシアン酸塩との反応によって作製される。

【0372】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト抗体剤は積載実体（ｐａｙｌｏａｄ ｅｎｔｉｔｙ）と結合されている。いくつかの実施形態では、積載実体は治療薬であるか、又はそれを含み；いくつかの実施形態では、積載実体は検出剤であるか、又はそれを含む。

【0373】

保護基
本発明のヒト抗体剤（又は多重特異性結合剤又はキメラ抗原受容体）は、本技術分野において公知の保護基を備えていてもよい。いかなる特定の理論にも束縛されることを望むものではないが、保護基の付加により、いくつかの実施形態では、保護基が付加されたポリペプチド又はペプチドの１又は複数の特徴、例えば安定性及び／又は有効性等、が向上され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト抗体剤（又は多重特異性結合剤又はキメラ抗原受容体）は、１又は複数の（例えば、１、２、３、４、５又はそれ以上の）保護基を有し得る。保護基は、本明細書に記載のヒト抗体剤（又は多重特異性結合剤又はキメラ抗原受容体）のポリペプチド鎖又はポリペプチド鎖のＮ末端及び／又はＣ末端に結合され得る。本発明における使用に好適な保護基としては、参照によって本明細書に援用される米国仮特許出願第６２／１３１，１２８号に記載のものが挙げられる。

【0374】

治療薬
治療薬は、例えば、限定はされないが、タンパク質、炭水化物、脂質、核酸、有機小分子、非生体高分子、金属、イオン、放射性同位元素等を含む、あらゆる種類の化学的実体であり得る、又はそれを含み得る。いくつかの実施形態では、本発明における使用のための治療薬は、がんの１又は複数の症状又は原因の治療に関連する生物活性を有し得る。いくつかの実施形態では、本発明における使用のための治療薬は、免疫系の調節及び／又はＴ細胞媒介性細胞傷害の増強に関連する生物活性を有し得る。いくつかの実施形態では、本発明における使用のための治療薬は、１又は複数の他の活性を有する。

【0375】

いくつかの実施形態では、抱合される治療薬は、放射性同位元素、薬剤抱合体、ナノ粒子、免疫毒素、又はあらゆる他の治療用積載物である。

【0376】

検出剤
検出剤は、例えばその特定の機能特性及び／又は化学的特徴により、アッセイを用いて検出され得るあらゆる部分を含む。そのような剤の非限定例としては、酵素、放射標識、ハプテン、蛍光ラベル、リン光性分子、化学発光性分子、発色団、発光性分子、光親和性分子、着色粒子又はビオチン等のリガンドが挙げられる。

【0377】

多くの検出剤が本技術分野において公知であり、それらを抗体に結合するためのシステムも同様である（例えば、米国特許第５，０２１，２３６号；同第４，９３８，９４８号；及び同第４，４７２，５０９号を参照）。そのような検出剤の例としては、特に、常磁性イオン、放射性同位元素、蛍光色素、ＮＭＲで検出可能な物質、Ｘ線造影剤が挙げられる。例えば、いくつかの実施形態では、常磁性イオンは、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、エルビウム（ＩＩＩ）、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）、及び／又はビスマス（ＩＩＩ）のうちの１又は複数である。

【0378】

前記放射性同位元素は、アクチニウム－２２５、アスタチン－２１１、ビスマス－２１２、炭素－１４、クロム－５１、塩素－３６、コバルト－５７、コバルト－５８、銅－６７、ユウロピウム－１５２、ガリウム－６７、水素－３、ヨウ素－１２３、ヨウ素－１２４、ヨウ素－１２５、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、鉄－５９、鉛－２１２、ルテチウム－１７７、リン－３２、ラジウム－２２３、ラジウム－２２４、レニウム－１８６、レニウム－１８８、セレン－７５、硫黄－３５、テクネチウム（ｔｅｃｈｎｉｃｉｕｍ）－９９ｍ、トリウム－２２７、イットリウム－９０、及びジルコニウム－８９のうちの１又は複数であり得る。放射標識されたヒト抗体剤は、本技術分野において周知の技術に従って作製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、ヨウ化ナトリウム及び／又はヨウ化カリウム、並びに、次亜塩素酸ナトリウム等の化学的酸化剤、又はラクトペルオキシダーゼ等の酵素的酸化剤との接触によりヨウ素化することが可能である。提供されるヒト抗体剤は、テクネチウム－９９ｍで、配位子交換法により、例えば、第一スズ溶液で過テクネチウム酸を還元し、還元したテクネチウムをセファデックスカラム上にキレート化し、このカラムに抗体をアプライすることにより、標識され得る。いくつかの実施形態では、提供されるヒト抗体剤は、直接標識手法を用いて、例えば、過テクネチウム酸、ＳＮＣｌ_２等の還元剤、フタル酸ナトリウム－カリウム溶液等の緩衝溶液、及び抗体をインキュベートすることによって、標識される。いくつかの実施形態では、提供されるヒト抗体剤は、介在官能基に結合され得る。介在官能基は、金属イオンとして存在する放射性同位元素を抗体に結合するためにしばしば使用される。放射性同位元素は、例えば、線量測定によって検出され得る。

【0379】

蛍光ラベルは、特に、Ａｌｅｘａ３５０、Ａｌｅｘａ４３０、ＡＭＣＡ、ＢＯＤＩＰＹ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ６５０／６６５、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ、ＢＯＤＩＰＹ－Ｒ６Ｇ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＭＲ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＲＸ、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｌｕｅ、Ｃｙ３、Ｃｙ５，６－ＦＡＭ、フルオレセインイソチオシアネート、ＨＥＸ、６－ＪＯＥ、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ４８８、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ５００、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ５１４、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、ＲＥＧ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｇｒｅｅｎ、Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｒｅｄ、Ｒｅｎｏｇｒａｐｈｉｎ、ＲＯＸ、ＴＡＭＲＡ、ＴＥＴ、テトラメチルローダミン、及び／又はＴｅｘａｓ Ｒｅｄのうちの１又は複数であり得る、又はそれを含み得る。

【0380】

いくつかの実施形態では、抱合された検出剤は診断薬又は造影剤である。

【0381】

スクリーニング、検出及び治療法
本発明のヒト抗体剤、多重特異性結合剤及び／又はキメラ抗原受容体は、１つの細胞又は複数の細胞の１又は複数の活性（例えば、アポトーシス又は細胞増殖）を検出及び／又は測定することが望ましい、インビトロスクリーニング法又はインビボスクリーニング法においても使用され得る。スクリーニング法は本技術分野において周知であり、無細胞アッセイ、細胞ベースアッセイ、及び動物アッセイを包含する。インビトロアッセイは、標的分子（例えば、細胞表面抗原）に結合しているヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体を同定可能な標識又は検出可能基の使用を含む、本技術分野で公知のいくつかの方法で達成され得る、固体又は可溶性の標的分子検出とすることができる。検出可能標識は、本発明のヒト抗体剤、多重特異性結合剤又はキメラ抗原受容体を用いるアッセイと併せて使用され得る。

【0382】

ＣＤ１９に対し高親和性及び／又は特異性を示す、本発明のヒト抗体剤、多重特異性結合剤及び／又はキメラ抗原受容体の能力は、ＣＤ１９を発現する細胞（例えば、リンパ腫又は白血病細胞）の効率的な標的化において、それらを治療上有用なものにしている。すなわち、いくつかの実施形態では、ヒト抗体剤又は多重特異性結合剤の、ある標的抗原（例えば、ＣＤ１９）に対する親和性を増加させ、該多重特異性結合剤（又はヒトモノクローナル抗体の場合はＦｃ受容体）が結合するその他の標的抗原に対する親和性は増加させないことが望ましい場合がある。例えば、腫瘍殺滅においては、ある特定の条件は、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）に対する親和性の増加から恩恵を受けることができるが、腫瘍の殺滅を媒介可能な細胞（例えば、Ｔ細胞）の表面上の抗原に対する親和性の増加からは恩恵を受けることはできない。すなわち、本明細書に記載のヒト抗体剤、多重特異性結合剤又はキメラ抗原受容体の使用を通じて、ヒト抗体剤、多重特異性結合剤又はキメラ抗原受容体の、腫瘍抗原を発現する腫瘍を有する患者における腫瘍抗原に対する結合親和性及び／又は特異性を増加することは、有益であり得る。

【0383】

本発明は、本明細書に記載のヒト抗体剤、多重特異性結合剤及び／又はキメラ抗原受容体を、それが結合可能な抗原を発現する腫瘍を有する患者を治療するための治療薬として、提供する。そのようなヒト抗体剤、多重特異性結合剤及び／又はキメラ抗原受容体は、ヒト若しくは動物の身体の治療法において、又は診断法において、使用され得る。

【0384】

いくつかの実施形態では、提供されるヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体は、医学において有用である。いくつかの実施形態では、提供されるヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体は、ＣＤ１９関連疾患又は悪性腫瘍の治療又は予防において、（例えば、予防薬として）有用である。いくつかの実施形態では、提供されるヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体は、ＣＤ２０関連疾患又は悪性腫瘍と関連又は相関した負の結果（例えば、非効率的な内部移行）を示す患者の治療において有用である。いくつかの実施形態では、提供されるヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体は、例えば、ＣＤ１９関連疾患若しくは悪性腫瘍に罹患した、又はそれに罹患し易い個体における治療適用において有用である。

【0385】

投与
本発明は、有効量の本明細書に記載の治療薬（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｃｔｉｖｅ）（例えば、ヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体）を、治療を必要としている対象に投与する方法を提供する。

【0386】

本明細書に記載のヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体は、対象における標的細胞殺滅若しくは増殖阻害のための、ヒト抗体剤、多重特異性結合剤若しくはキメラ抗原受容体、又は、本発明のヒト抗体剤、多重特異性結合剤、若しくはキメラ抗原受容体をコードする核酸の治療的送達に使用することができる、タンパク質又は核酸等の剤の治療的送達のための本技術分野において公知の様々な方法、例えば、細胞トランスフェクション、遺伝子治療、送達ビヒクル又は医薬的に許容される担体との直接的投与、本発明のヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体をコードする核酸を含む組換え細胞を与えることによる間接的送達、を通じて投与され得る。

【0387】

例えばリポソーム内封入、微小粒子内封入、マイクロカプセル内封入、前記抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体を発現可能な組換え細胞、受容体依存性エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ， １９８７， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６２：４４２９－３２を参照）、レトロウイルスベクター又は他のベクターの一部としての核酸の構築等、様々な送達系が知られており、本発明のヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体を投与するために使用することができる。投与経路は経腸又は非経口とすることができ、静脈内、皮下、筋肉内、非経口、経皮、又は経粘膜（例えば、経口又は経鼻）を含むがこれらに限定はされない。いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体は、静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体は、皮下投与される。いくつかの実施形態では、本発明のヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体は、１又は複数の生理活性物質と共に投与される。

【0388】

医薬組成物
本発明はさらに、本発明のヒト抗体剤、多重特異性結合剤、又はキメラ抗原受容体、及び医薬的に許容される担体又は賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。前記組成物は、必要であれば、追加的な、治療効果を有する物質も、１又は複数含有することができる。

【0389】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体を含む医薬組成物は、対象から単離された自家性Ｔ細胞を感染させるために使用される、ウイルス（例えば、レンチウイルス又はレトロウイルス）として提供され得る。そのような実施形態では、自家性Ｔ細胞を、本明細書に記載のキメラ抗原受容体を発現するよう操作されたウイルスに感染させ、それにより、対象（例えば、ヒト患者）に再注入するためのキメラ抗原受容体Ｔ細胞を作製する。

【0390】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体を含む医薬組成物は、前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞（又はその集団）、及び医薬的に許容される（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔｏｒ）担体として提供され得る。例示的な宿主細胞としては、Ｔ細胞又はＮＫ細胞が挙げられ、自家性であっても同種間のものであってもよい。すなわち、本明細書に記載のキメラ抗原受容体を発現する宿主細胞を、対象（例えば、ヒト）への投与のための医薬組成物に含ませて製剤化することができる。そのような医薬組成物は、同一又は異なる（２種、３種、４種等）本明細書に記載のキメラ抗原受容体を発現する宿主細胞集団を含み得る。あるいは、本明細書に記載のキメラ抗原受容体を発現する宿主細胞を含む医薬組成物は、例えば、化学療法剤、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン等の、１又は複数の追加の薬剤的に活性な剤又は薬をさらに含んでいてもよい。種々の実施形態において、本明細書に記載のキメラ抗原受容体を含む医薬組成物は、前記キメラ抗原受容体を発現する宿主細胞又はその集団として提供される。

【0391】

本明細書にて提供される医薬組成物の説明は主にヒトへの倫理的（ｅｔｈｉｃａｌ）投与に好適な医薬組成物を対象としているが、そのような組成物が概してあらゆる動物への投与に好適であることは、当業者には理解される。組成物を種々の動物への投与に好適なものにするための、ヒトへの投与に好適な医薬組成物の改変は十分に理解されており、当業者である獣医薬理学者は、たとえあっても通常の実験法のみで、そのような改変を設計及び／又は実行し得る。

【0392】

医薬組成物は無菌注射剤の剤形（例えば、皮下注射又は点滴静注に好適な剤形）で提供され得る。例えば、いくつかの実施形態では、医薬組成物は注射に好適な液体剤形で提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、所望により真空下の、散剤（例えば、凍結乾燥及び／又は滅菌した散剤）として提供され、注射前に水性希釈剤（例えば、水、緩衝液、塩類溶液等）で再構成される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、水、塩化ナトリウム溶液、酢酸ナトリウム溶液、ベンジルアルコール溶液、リン酸緩衝食塩水等で希釈及び／又は再構成される。いくつかの実施形態では、散剤は水性希釈剤と穏やかに混合されるべきである（例えば、振盪しない）。

【0393】

本明細書に記載の医薬組成物の製剤形態は、薬理学分野において公知又は今後開発される、あらゆる方法で調製され得る。一般に、そのような調製法には、活性成分に、希釈剤若しくは別の賦形剤、及び／又は１若しくは複数の他の副成分を付随させる工程、並びにその後の、必要な場合及び／又は望ましい場合、生成物を所望の単回又は多回投与単位に成形及び／又は包装する工程が含まれる。

【0394】

本発明の医薬組成物は、単回単位用量として、及び／又は複数の単回単位用量として、バルクで、調製、包装、及び／又は販売され得る。本明細書で使用される場合、「単位用量」は、所定量の活性成分を含む、分散させた医薬組成物の量である。活性成分の量は、一般に、対象に投与されるであろう活性成分の投与量に等しく、及び／又は、例えば、そのような投与量の２分の１若しくは３分の１等、そのような投与量の好都合な分数である。

【0395】

本発明の医薬組成物中の活性成分、医薬的に許容される賦形剤、及び／又はあらゆる追加成分の相対量は、処置される対象の素性、サイズ、及び／又は状態に応じて、並びに、さらには組成物の投与経路に応じて、変動する。例として、前記組成物は０．１％～１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。

【0396】

医薬製剤は医薬的に許容される賦形剤をさらに含んでいてもよく、前記医薬的に許容される賦形剤には、本明細書で使用される場合、望まれる特定の剤形に好適な、あらゆる溶媒、分散媒、希釈剤、又は他の液状ビヒクル、分散又は懸濁補助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤又は乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤等が包含される。ＲｅｍｉｎｇｔｏｎのＴｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ａ． Ｒ． Ｇｅｎｎａｒｏ （Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， ＭＤ， ２００６）には、医薬組成物の製剤化で使用される種々の賦形剤、及びその調製のための公知の手法が開示されている。任意の従来の賦形剤媒体が、任意の望ましくない生物学的効果を生じさせるか、又はそうでなければ医薬組成物の任意の他の成分と有害に相互作用するなどにより、物質又はその誘導体と不適合である場合を除いて、その使用は本発明の範囲内であると企図される。

【0397】

いくつかの実施形態では、医薬的に許容される賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％純粋である。いくつかの実施形態では、賦形剤はヒトでの使用が認可されている。いくつかの実施形態では、賦形剤は動物で使用が認可されている。いくつかの実施形態では、賦形剤は米国食品医薬品局に認可されている。いくつかの実施形態では、賦形剤は医薬品グレードである。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び／又は国際薬局方の基準を満たしている。

【0398】

医薬組成物の製造で使用される医薬的に許容される賦形剤としては、不活性希釈剤、分散剤及び／又は造粒剤、界面活性剤及び／又は乳化剤、崩壊剤、結合剤、保存剤、緩衝剤、滑沢剤、及び／又は油が挙げられ、これらに限定はされない。このような賦形剤が、所望により医薬製剤中に含まれていてもよい。処方者の判断に従って、カカオ脂及び座薬ワックス等の賦形剤、着色料、コーティング剤、甘味剤、香味剤、並びに／又は芳香剤が、前記組成物中に存在できる。

【0399】

いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物は、１又は複数の医薬的に許容される賦形剤（例えば、保存剤、不活性希釈剤、分散剤、界面活性剤及び／又は乳化剤、緩衝剤等）を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１又は複数の保存剤を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は保存剤を含まない。

【0400】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は冷蔵及び／又は凍結可能な形態で提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は冷蔵及び／又は凍結不可な形態で提供される。いくつかの実施形態では、再構成液及び／又は液体剤形は、再構成後にある特定の期間（例えば、２時間、１２時間、２４時間、２日間、５日間、７日間、１０日間、２週間、１ヵ月間、２ヵ月間、又はそれより長期間）貯蔵され得る。いくつかの実施形態では、抗体を基とした組成物の特定の時間よりも長期の貯蔵は、抗体を基とした実体の分解をもたらす。

【0401】

液体剤形及び／又は再構成液は、投与前に微粒子状物質及び／又は変色を含み得る。いくつかの実施形態では、溶液は、変色若しくは濁っていた場合、且つ／又は、微粒子状物質が濾過後も残っていた場合、使用されるべきではない。

【0402】

医薬品の製剤及び／又は製造における一般的な考察は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２１ｓｔ ｅｄ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， ２００５に見出され得る。

【0403】

キット
本発明はさらに、本明細書に記載の少なくとも１つヒト抗体剤、多重特異性結合剤（例えば、二重特異性抗体）、又はキメラ抗原受容体（又はキメラ抗原受容体免疫エフェクター細胞）が詰められた１又は複数の容器を含む医薬品パック又はキットを提供する。キットは、例えば診断方法を含む、あらゆる適用可能な方法において使用され得る。そのような容器には、医薬品若しくは生物由来物質の製造、使用若しくは販売を規制する政府当局が定めた形式の、（ａ）ヒトへの投与のための製造、使用又は販売に関する当局による承認、（ｂ）使用方法、又は両方を示す通知が、付随されていてもよい。

【0404】

本発明の他の特徴は以下の例示的な実施形態を説明する過程で明らかとなるが、これらの実施形態は、本発明の例示を目的としており、その限定を意図していない。本明細書で引用された全ての特許及び非特許文献は、それらの全体が参照によって本明細書に援用される。

【実施例】

【0405】

以下の実施例は、本発明の方法及び組成物をいかに作製及び使用するかを当業者に説明するためのものであり、本発明者らが発明と見なすものの範囲を限定することを意図していない。特に指示が無い限り、温度は摂氏単位で示され、圧力は大気圧か又はそれに近い圧力である。

【0406】

実施例１：ヒトＣＤ１９に特異的なヒト抗体剤の作製及び選別
本実施例は、ヒトＣＤ１９に特異的なヒト抗体剤の生産を示すものである。具体的には、本実施例は、天然型のヒトＣＤ１９と特異的に結合するヒト単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）の生産を示すものである。本明細書に記載のヒト抗体剤が、健常ドナー及び／又は自己免疫疾患患者ドナー（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｄｏｎｏｒ）から作製した無処理又は半合成のヒト抗体ライブラリーを用いて開発され、天然高次構造を有する細胞表面発現型ヒトＣＤ１９に対するパニングにより、ヒトＣＤ１９に対する高い特異性に基づいて選別された。すなわち、そのようなヒト抗体剤によって、天然に存在するレパートリーから削除されかねない、特に、完全長ＩｇＧ、多重特異性結合剤及びキメラ抗原受容体を構築するための貴重な抗体成分源が提供される。

【0407】

簡潔にではあるが、抗ヒトＣＤ１９抗体剤の開発の例示的な概略を表４に示す。この方法は、エウレカ社製（Ｅｕｒｅｋａ）ＡＬＰＨＡ（商標）ファージライブラリーからの、ヒトＣＤ１９に特異的であり且つ生物学的に活性な抗体剤の同定から開始された。最上位の抗体剤候補を親和性成熟にかけ、標的がん細胞に対する結合親和性が向上し且つ細胞傷害性がより良好となった抗体剤を作製した。

【0408】

ＡＬＰＨＡ（商標）ファージライブラリーという名称の、エウレカ・セラピューティクス社（Ｅｕｒｅｋａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）で構築されたヒトｓｃＦｖ抗体ファージディスプレイライブラリーコレクション（多様性＝１０×１０^１０）を、ヒトＣＤ１９に特異的なヒト抗体剤の選別に用いた。ＡＬＰＨＡ（商標）ファージライブラリーは、完全無処理ヒト重鎖レパートリー及び完全無処理ヒト軽鎖レパートリーからなる無処理ライブラリー、並びに、完全無処理ヒト軽鎖レパートリー及び完全ランダム化重鎖ＣＤＲ３領域を有する半合成重鎖を含有する半合成ライブラリーを含むものであった。無処理抗体レパートリーは、健常ドナーのＰＢＭＣ及び脾臓から、又は自己免疫疾患患者ドナー（全身性エリテマトーデス及び関節リウマチ等）のＰＢＭＣから、クローニングした。ｓｃＦｖライブラリーを、組換えヒトＣＤ１９ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質並びにＲａｊｉ細胞及び３Ｔ３－ＣＤ１９細胞を含むヒトＣＤ１９陽性細胞に対するパニングで使用した（以下に記載）。タンパク質パニングでは、Ｆｃ融合タンパク質を９６ウェルプレート上に直接コートし、ヒトｓｃＦｖファージライブラリーと混合した。ＰＢＳ緩衝液で長期に洗浄した後、結合したクローンを溶出し、Ｅ．ｃｏｌｉ ＸＬ１－Ｂｌｕｅ感染に使用した。細胞パニングでは、まず、３Ｔ３－ＣＤ１９細胞又はＲａｊｉ細胞をヒトｓｃＦｖファージライブラリーと混合した。ＰＢＳで延長洗浄した後、ｓｃＦｖ抗体ファージが結合した細胞を遠心沈殿させた。次に、結合したクローンを溶出し、Ｅ．ｃｏｌｉ ＸＬ１－Ｂｌｕｅ細胞感染に使用した。ファージクローンを細菌内で発現させ、精製した。このパニングを３～４回行って、ヒトＣＤ１９の細胞外領域と特異的に結合したｓｃＦｖファージクローンを濃縮した。

【0409】

表５（ＡＬＰＨＡ（商標）ファージディスプレイの概要）に示されるように、タンパク質パニングがパニング工程として使用され、且つ、組換えヒトＣＤ１９ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質に対するＥＬＩＳＡ結合が一次ファージクローンスクリーニング法として使用された場合、パニングにより濃縮されたファージプール中の７６２のファージクローンをスクリーニングした後、ただ１つのユニークな抗体クローンが、細胞表面ヒトＣＤ１９結合剤として同定された。次に本発明者らは、細胞パニングのみを実施し、ヒトＣＤ１９陽性細胞株を一次スクリーニング法としてのＦＡＣＳアッセイで使用した。このパニングキャンペーン（ｐａｎｎｉｎｇ ｃａｍｐａｉｇｎ）を用いてスクリーニングされた６９０のクローンから、細胞表面ヒトＣＤ１９と結合したユニークなクローンが、追加で７つ同定された。

【0410】

ＥＬＩＳＡアッセイでは、標準的なＥＬＩＳＡプレートを、それぞれヒトＣＤ１９ ＥＣＤ－Ｆｃ又はネガティブコントロールの９０１－Ｆｃで被覆した。濃縮されたファージディスプレイパニングプールからの個々のファージクローンを、被覆プレート内でインキュベートした。ファージクローンの結合をＨＲＰ結合型抗Ｍ１３抗体で検出し、ＨＲＰ基質を用いて発色させた。４５０ｎｍでの吸光度を測定した。複数のヒトＣＤ１９ＥＬＩＳＡ特異的ファージクローンが同定された。例示的なクローンを図１Ａに示した。ＥＬＩＳＡアッセイによる測定により、スクリーニングされた７６２のファージクローンのうち、８５のユニークな抗体クローンが、ｈＣＤ１９特異的であることが分かった。

【0411】

ＥＬＩＳＡで陽性を示したファージクローンを、次に、細胞表面ヒトＣＤ１９との結合性について、ヒトＣＤ１９陽性のＲａｊｉ細胞株及び３Ｔ３－ｈＣＤ１９細胞株、並びにヒトＣＤ１９陰性のＪｕｒｋａｔ細胞株及び３Ｔ３細胞株を用いたフローサイトメトリーによって調べた（図１Ｂ）。まず、細胞を、精製されたｓｃＦｖファージクローン、次いでマウス抗Ｍ１３モノクローナル抗体、最後にＲ－ＰＥ結合型ウマ抗マウスＩｇＧ（ベクター・ラボラトリーズ社（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ））と混合して染色した。各染色工程は氷上で３０～６０分間行い、染色間で２回細胞を洗浄した。１つのユニークなクローン（クローン３７）が、ヒトＣＤ１９陽性のＲａｊｉ細胞及び３Ｔ３－ＣＤ１９細胞と特異的に結合し、ヒトＣＤ１９陰性のＪｕｒｋａｔ細胞及び３Ｔ３細胞とは特異的に結合しないことが特定された（図１Ｂ）。

【0412】

細胞パニングのみによりファージクローンを選別した二次スクリーニングのヒットを、ＥＬＩＳＡ結合スクリーニングを使用せずに、細胞表面ヒトＣＤ１９との直接的な結合性について調べた。図２に示されるように、例示的なクローン４、クローン５及びクローン６はＲａｊｉ細胞に対して特異的な結合を示し、一方、クローン７はＲａｊｉ－ＣＤ１９ノックアウト細胞に対してもいくらかの検出可能な結合を示した。

【0413】

本実施例で示されたように、一次スクリーニングで同定された１４５２の個別のファージクローンから特異的且つ（配列が）ユニークなクローンはたった８つしか同定されず、ヒトＣＤ１９抗体のファージ－パニング効率は非常に低いものであった。１つのクローン（３７）が自己免疫疾患無処理ライブラリーから作製され、他７つのクローンが健常ドナーＢ細胞由来の無処理又は半合成のヒト抗体ライブラリーから作製された。

【0414】

【表4】

【0415】

【表5】

【0416】

実施例２：ヒトＣＤ１９抗体剤を用いた二重特異性抗体コンストラクトの作製
本実施例は、ヒトＣＤ１９に特異的なヒトｓｃＦｖ断片を用いた多重特異性結合剤の構築を示すものである。具体的には、本実施例は、特に、天然型の（細胞表面に発現された）ヒトＣＤ１９と結合する第一の抗原結合部位及びＴ細胞上のＣＤ３と結合する第二の抗原結合部位を有する二重特異性抗体の構築を示すものである。すなわち、本実施例は、いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体成分を含有する多重特異性結合剤を用いることで、Ｔ細胞に、ヒトＣＤ１９を発現する標的細胞の殺滅を指示可能であることを示すものである。

【0417】

ヒトＣＤ１９特異的ファージクローンのｓｃＦｖ配列を用いて、二重特異性抗体を作製した。これらの二重特異性抗体は、Ｎ末端にヒトＣＤ１９特異的ファージクローンのＶ_Ｌ－Ｖ_Ｈ ｓｃＦｖ配列を含み、Ｃ末端には抗ヒトＣＤ３εマウスモノクローナルｓｃＦｖを含む、一本鎖フォーマットを用いて構築した（例えば、Ｂｒｉｓｃｈｗｅｉｎ， Ｋ． ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ４３：１１２９－１１４３， ２００６を参照）。ヒトＣＤ１９ ｓｃＦｖ及び抗ヒトＣＤ３ε ｓｃＦｖをコードするＤＮＡ断片を、ジーンウィズ社（Ｇｅｎｅｗｉｚ）又はジェンスクリプト社（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）に合成させ、標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて哺乳類発現ベクターｐＱＤ－Ｔ（エウレカ・セラピューティクス社）にサブクローニングした。精製及び検出用に、ヘキスヒスタミンタグ（ｈｅｘｈｉｓｔａｍｉｎｅ ｔａｇ）をＣ末端に挿入した。ＨＥＫ２９３細胞を二重特異性抗体発現ベクターでトランスフェクトし、二重特異性抗体を産生させるために７日間培養した。ＨＥＫ２９３細胞上清から、ＦＰＬＣ ＡＫＴＡシステムにより、ＨｉｓＴｒａｐ ＨＰカラム（ＧＥヘルスケア社）を用いて、二重特異性抗体を精製した。ＨＥＫ２９３細胞培養物を純化し、低イミダゾール濃度（２０ｍＭ）でカラムにロードし、次いで、均一溶媒の高イミダゾール濃度の溶出緩衝液（５００ｍＭ）を用いて、結合した二重特異性抗体を溶出させた。精製されたヒトＣＤ１９二重特異性抗体の分子量を、非還元条件下でゲル電気泳動により測定した。タンパク質（４μｇ）を、２．５μＬのＮｕＰＡＧＥ ＬＤＳ Ｓａｍｐｌｅ Ｂｕｆｆｅｒ（ライフテクノロジーズ社、ＮＰ０００８）と混合し、１０μＬとなるように脱イオン水を加えた。試料を７０℃で１０分間加熱し、ゲルにロードした。ゲル電気泳動を１８０Ｖで１時間行った。二重特異性抗体に対応するバンド（約５５ｋＤ）がゲル上の主要物質種として認められた（図３）。

【0418】

まとめると、本実施例は、細胞表面上に発現された（すなわち、天然型の）ヒトＣＤ１９に特異的な第一の抗原結合部位及びＣＤ３に特異的な第二の抗原結合部位を有する二重特異性分子の構築が成功したことを示すものである。さらに、このような二重特異性分子の特徴付けについて、以下の実施例で説明する。

【0419】

実施例３：ヒトＣＤ１９二重特異性抗体の特徴付け
本実施例は、選択された二重特異性分子のＣＤ１９結合プロファイルを示すものである。具体的には、本実施例は、特に、溶液中の組換えヒトＣＤ１９（すなわち、ヒトＣＤ１９ ＥＣＤ－Ｆｃ）に対する選択された二重特異性抗体分子の結合プロファイルについて記述する。

【0420】

組換えヒトＣＤ１９ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質に対する結合性
細胞表面ヒトＣＤ１９に対する特異的な結合剤として同定されたファージクローンを、溶液中の組換えヒトＣＤ１９ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質に対する結合性について、フォルテバイオ社製（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）Ｏｃｔｅｔを用いて調べた。ビオチン化ヒトＣＤ１９ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質（５μｇ／ｍＬ）を、ストレプトアビジンバイオセンサー上にロードした。過剰な抗原を洗い流した後、二重特異性抗体を、ＰＢＳ緩衝液中１０μｇ／ｍＬにおいて、結合及び解離について調べた。ＥＬＩＳＡ陽性クローンであったクローン３７を含む、細胞表面表現型ヒトＣＤ１９を認識した試験クローンのいずれも、組換えヒトＣＤ１９ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質に対して結合性を示さなかった。図４は、例示的なクローン及び比較対照用抗ＣＤ１９二重特異性抗体であるＢＬ１９の、ＯｃｔｅｔによるｈＣＤ１９結合性データを示している。ここから、本発明者らは、組換えｈＣＤ１９タンパク質が、天然ヒトＣＤ１９（すなわち、細胞表面上のヒトＣＤ１９）及びＥＬＩＳＡプレートに結合したヒトＣＤ１９とは異なる高次構造を有しているかもしれないと推論した。組換えヒトＣＤ１９によるＥＬＩＳＡプレートの被覆は、天然ｈＣＤ１９を模倣するある特定の高次構造を形成させ得るが、その効率は極めて低い。８５のヒトＣＤ１９ ＥＬＩＳＡ特異的抗体クローンのうち１つだけが、細胞表面ヒトＣＤ１９に対する特異性を示した。ヒトＣＤ１９発現細胞を用いた細胞パニングでは、細胞表面表現型ヒトＣＤ１９に特異的な、より陽性の抗体クローンが得られていた。

【0421】

初代ヒトＢ細胞に対する結合性
ヒトＰＢＭＣをＰｅｒＣＰ結合型抗ヒトＣＤ２０抗体、ＡＰＣ標識抗ヒトＣＤ３抗体及び抗ＣＤ１９二重特異性抗体で共染色することによって、ヒトＢ細胞を、抗ＣＤ１９抗体との結合性について調べた。ＰＢＳ緩衝液で短く１回洗浄した後、ＦＩＴＣ標識抗Ｈｉｓタグ抗体を、二重特異性抗体を検出するための二次抗体として混合物に添加した。フローサイトメトリーアッセイでは、ヒトＢ細胞はＣＤ２０染色陽性及びＣＤ３染色陰性でゲーティングした（図５Ａ中のボックスを参照）。これらのＣＤ２０^＋ＣＤ３^－細胞上で発現されたヒトＣＤ１９を認識する能力について、抗ＣＤ１９二重特異性抗体を評価した。

【0422】

ＣＤ２０^＋ＣＤ３^－細胞に対する抗ＣＤ１９の結合性レベルを、ＦＩＴＣチャネルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）により測定した。表６に示されるように、ネガティブコントロールの二重特異性抗体（ＮＣ－ＥＴ９０１）は、ヒトＢ細胞と結合しなかった。その一方、試験された全ての抗ヒトＣＤ１９二重特異性抗体クローンがヒトＢ細胞を認識し、陽性の結合シグナルを示した。

【0423】

Ｔ細胞殺滅アッセイ
ＬＤＨ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ａｓｓａｙ（プロメガ社）を用いて腫瘍細胞傷害性を評価した。ヒトＴ細胞（オールセルズ社（ＡｌｌＣｅｌｌｓ））又は全血（ブラッド・センターズ・オブ・ザ・パシフィック社（Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃ））からＦｉｃｏｌｌで精製された細胞を、ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（インビトロジェン社）で、製造者の仕様書に従って、活性化及び増殖させた。活性化Ｔ細胞を、１０％ＦＢＳ及び１００Ｕ／ｍＬ ＩＬ－２を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で培養及び維持し、活性化後７～１４日目に使用した。ＦＡＣＳ解析により、Ｔ細胞は９９％超がＣＤ３^＋であった。活性化Ｔ細胞及び標的細胞を５：１の比で二重特異性抗体と一緒に１６時間共培養した。培養上清中のＬＤＨ活性の測定により、細胞傷害性を測定した。

【0424】

図５Ｂに示されるように、クローン４、クローン５及びクローン６を基とした二重特異性抗体分子は、０．２μｇ／ｍｌにおいて、ヒトＣＤ１９特異的に、がん細胞の殺滅を効果的に仲介した。また、クローン３７を基とした二重特異性抗体分子は、ＣＤ１９陰性細胞株（Ｊｕｒｋａｔ及びＴＨＰ－１）に対しても、いくらかの検出可能な殺滅効果を示した。ｓｃＦｖについては、クローン３７は、フローサイトメトリーではＪｕｒｋａｔ細胞に対し結合性を示さなかった（図１Ｂ）。

【0425】

【表6】

【0426】

実施例４：抗ヒトＣＤ１９抗体剤の親和性成熟
本実施例は、抗ヒトＣＤ１９抗体剤の親和性成熟を示すものである。具体的には、本実施例は、特に、選択された抗ヒトＣＤ１９抗体剤（クローン４、５及び６）へのランダム変異の組み込みと、その後の抗体バリアントのスクリーニング及び特徴付けによる、一連の抗体バリアントの作製を示すものである。

【0427】

バリアントファージライブラリーの作製
抗ヒトＣＤ１９ ｓｃＦｖをコードするＤＮＡを、ＧｅｎｅＭｏｒｐｈ ＩＩ Ｒａｎｄｏｍ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ｋｉｔ（アジレント・テクノロジー社）を用い、製造者の仕様書に従って、ランダム変異誘発にかけた。変異誘発後、ＤＮＡ配列をｓｃＦｖ発現ファージミドベクターにクローニングし、バリアント抗体ファージライブラリーを構築した。抗ヒトＣＤ１９特異的クローンの各々について別々に、変異ライブラリーを構築した。各変異ライブラリーには約５×１０^８のユニークなファージクローンが含まれた。バリアントクローンは、親抗ヒトＣＤ１９クローンと比較して、ｓｃＦｖ配列１つあたり１～４個の範囲のヌクレオチド変異、平均２個のヌクレオチド変異を有する。親クローン４、５及び６から３つのライブラリーを構築した（表７）。それぞれの親クローンと比較した場合の、選択された親和性成熟抗ヒトＣＤ１９抗体剤のＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域における例示的な変異を、表８に示す。

【0428】

バリアントクローンと名付けられた、濃縮されたファージパニングプールからの個々のファージクローンを、それぞれの親クローンと比較した場合の、細胞表面ヒトＣＤ１９に対する増強された結合性について試験した。図６Ａに示されるように、複数のバリアントファージクローンが、Ｒａｊｉ細胞及びＪｅｋｏ－１細胞を含むヒトＣＤ１９陽性がん細胞株を特異的に認識した。いずれのクローンも、Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ ｋ．ｏ．細胞又はＪｕｒｋａｔ細胞等のヒトＣＤ１９陰性細胞株に対しては結合性を示さなかった。特に、複数のクローンが、それぞれの親クローンと比較して、Ｒａｊｉ細胞及びＪｅｋｏ－１細胞に対して増強された結合性を示した。

【0429】

競合的細胞結合アッセイ（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ ｃｅｌｌ－ｂｉｎｄｉｎｇ ａｓｓａｙ）を行って、親クローンとの比較において、バリアントクローンの結合親和性を比較した（図６Ｂ）。簡潔に説明すると、バリアントファージクローンを、対応する親二重特異性抗体クローンとプレインキュベートされたＲａｊｉ細胞と混合し、その後、マウス抗Ｍ１３抗体及びＰＥ結合型抗マウス抗体で染色した。

【0430】

バリアントクローン５－１、５－３、５－４、５－９、５－１３、及び６－１が、親クローンとの比較において改善された標的結合性を示した。親二重特異性抗体クローンの存在下において、これらのファージクローンは、親ファージクローンのクローン５又は６と比べると、Ｒａｊｉ細胞に対する結合性が増強されていた。フローサイトメトリーを用いた二重特異性抗体のタイトレーションによって、抗体結合親和性をより正確に測定した（後掲の表９を参照）。

【0431】

【表7】

【0432】

【表8】

【0433】

実施例５：抗ヒトＣＤ１９抗体剤バリアントを基とした二重特異性抗体分子の作製及び特徴付け
本実施例は、ヒトＣＤ１９に特異的なバリアントヒトｓｃＦｖ断片を用いた多重特異性結合剤の構築を示すものである。具体的には、本実施例は、特に、天然型の（細胞表面に発現された）ヒトＣＤ１９と結合する第一の抗原結合部位及びＴ細胞上のＣＤ３と結合する第二の抗原結合部位を有する二重特異性抗体の構築を示すものである。すなわち、本実施例は、いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体成分を含有する多重特異性結合剤を用いることで、Ｔ細胞に、ヒトＣＤ１９を発現する標的細胞の殺滅を指示可能であることを示すものである。

【0434】

バリアント二重特異性抗体クローンの作製
親和性が向上されたバリアント抗体クローン由来の二重特異性抗体を、実施例２に記載の通りに作製した。クローンの大部分がＳＤＳ－ＰＡＧＥで純度９０％超のシングルバンドを示した（図７Ａ）。

【0435】

バリアント二重特異性抗体の結合親和性測定
親抗体及びそれらの誘導体（バリアントクローン）は、その全てが細胞表面表現型ヒトＣＤ１９には結合したが、そのいずれも組換えヒトＣＤ１９は認識しなかった。これから、本発明者らは、親抗体と比較した場合のバリアントクローンの相対結合親和性を、ヒトＣＤ１９陽性がん細胞を用いたフローサイトメトリーによる抗体のタイトレーションを通じて決定した（表９）。

【0436】

段階希釈濃度の二重特異性抗体クローンを、同量のＲａｊｉ細胞と混合した。フローサイトメトリーの結合シグナルに基づいて、抗体のＥＣ_５０及び見掛けのＫ_Ｄを算出した。表９に示されるように、親クローン５を基としたバリアントクローンの多くが、ただしクローン５－４を除いて、わずかに増加した親和性（より低いＥＣ_５０及び見掛けのＫ_Ｄ）を示した。親クローン６を基としたバリアントクローンについて、クローン６－１及びクローン６－４も、それぞれの親クローンと比べて親和性（より低いＥＣ_５０及び見掛けのＫ_Ｄ）が増加していた。

【0437】

Ｔ細胞殺滅アッセイ
ＬＤＨ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ａｓｓａｙ（プロメガ社）を用いて腫瘍細胞傷害性を測定した。ヒトＴ細胞を、製造者の仕様書に従ってＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（インビトロジェン社）を用いて活性化及び増殖した。活性化Ｔ細胞を、１０％ＦＢＳ及び１００Ｕ／ｍＬ ＩＬ－２を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で培養及び維持し、活性化後７～１４日目に使用した。ＦＡＣＳ解析により、Ｔ細胞は９９％超がＣＤ３^＋であった。活性化Ｔ細胞及び標的細胞を５：１の比で二重特異性抗体と一緒に１６時間共培養した。培養上清中のＬＤＨ活性の測定により、細胞傷害性を測定した（図７Ｂ）。

【0438】

図８に示されるように、試験されたバリアントクローンは、親抗体としての元の結合特異性を維持していた。図１１に示される細胞殺滅アッセイでは、例示的なバリアントクローンが、クローン３７（このクローンはヒトＣＤ１９陰性細胞のＲａｊｉ－ＣＤ１９ ｋ．ｏ．、Ｊｕｒｋａｔ及びＴＨＰ－１に対して検出可能な非特異的細胞傷害性を示したため、ポジティブコントロール二重特異性抗体として使用した）と共に、試験された。複数の試験バリアントクローンが、それぞれの親クローンとの比較において、ヒトＣＤ１９陽性細胞株（Ｒａｊｉ及びＪｅｋｏ－１）の一方又は両方に対して、等しい又は増加した細胞殺滅効率を示した。

【0439】

【表9】

【0440】

実施例６：抗ヒトＣＤ１９キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）の特徴付け
本実施例は、上記実施例に記載された抗ヒトＣＤ１９抗体剤を用いたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の構築を示すものである。具体的には、本実施例は、特に、ＣＤ１９ヒト抗体剤の抗原結合部位を含み、且つ、Ｔ細胞表面上に発現される、ＣＡＲの構築を示すものである。さらに、Ｔ細胞によって発現されたＣＡＲを、ヒトリンパ腫異種移植モデルに対する細胞傷害性アッセイに使用した。すなわち、本実施例は、いくつかの実施形態において、本明細書に記載のヒト抗体剤由来の抗原結合部位を含むＣＡＲの使用が、ヒトＣＤ１９を発現する標的細胞（例えば、リンパ腫）の殺滅に有用であることを示すものである。

【0441】

ヒトＣＤ１９形質導入Ｔ細胞のインビトロ細胞傷害性
２９３Ｔ細胞をＣＡＲベクターでトランスフェクトすることにより、ヒトＣＤ１９特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含有するレンチウイルスを産生させた。ヒトＴ細胞を、１００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２の存在下でＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）、インビトロジェン社）により１日刺激した後に、形質導入に使用した。濃縮したレンチウイルスを、Ｒｅｔｒｏｎｅｃｔｉｎ（タカラバイオ社）被覆６ウェルプレート内で７２時間、Ｔ細胞に適用した。ＬＤＨ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ａｓｓａｙを用いて、形質導入Ｔ細胞（ＣＤ１９／ＣＡＲ－Ｔ細胞）の機能評価を行った。エフェクター細胞対標的細胞の比は５：１とした。代表的な結果を図８に示す。

【0442】

図８に示されるように、バリアント抗体クローン（クローン５－３、５－９及び５－１３）を基とした３種のＣＡＲが、親クローン５との比較において、Ｒａｊｉ細胞株及びＪｅｋｏ－１細胞株の両方に対して、有意に増加したがん細胞殺滅効率を示した。この実験で使用したエフェクター細胞対標的細胞の比は５：１であった。ヒトＣＤ１９陰性細胞（Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ ｋ．ｏ．及びＪｕｒｋａｔ）の殺滅レベルが低いことが示されたことから、殺滅特異性がＣＤ１９特異的であることが確認された。さらに、本明細書に記載のヒト抗体剤を用いて作製されたＣＡＲを発現するＴ細胞は、他の抗ＣＤ１９抗体（ＢＬ１９、ＦＭＣ６３）を用いて作製されたＣＡＲ－Ｔと同様又はより高い細胞殺滅効率を示した。

【0443】

同様の実験において、大きなＣＤ１９陽性及び陰性がん細胞株パネルを用いて、ヒトＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ（上述）を試験した。簡潔に説明すると、初代Ｔ細胞に、モック（Ｍｏｃｋ）又は抗ＣＤ１９抗体をコードする選択されたＣＡＲを形質導入した。形質導入Ｔ細胞を、抗ｍｙｃ抗体を用いてＣＡＲ構築物の細胞外ドメイン内のｍｙｃタグを検出するＦＡＣＳで解析した。

【0444】

その結果、上記の通りにヒト抗体剤から作製された抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞が約８０％の導入効率を有することが示された（図９、上段）。ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＤ１９発現がん細胞を特異的に殺滅する能力を、５：１のエフェクター細胞対標的細胞比で試験した。図９（下段）に示されるように、試験された抗ＣＤ１９クローンを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞は、共にＣＤ１９^＋細胞（Ｒａｊｉ、ＣＡ４６、Ｊｅｋｏ－１及びＤａｕｄｉ）を特異的に殺滅したが、ＣＤ１９^－細胞（Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ ｋ．ｏ．、Ｊｕｒｋａｔ、ＴＨＰ－１、ＨｅＬａ、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＣＦ－７、ＳＫ－Ｈｅｐ－１及びＨｅｐＧ２）の特異的な殺滅は認められなかった。

【0445】

別の同様の実験において、上記の通りに、ＣＤ１９陽性及び陰性がん細胞株パネルを用いて、本明細書に記載の選択されたヒト抗体剤から作製されたＣＡＲ－Ｔ及び非ヒト（例えば、マウス）抗体から作製されたＣＡＲ－Ｔを試験した。簡潔に説明すると、初代Ｔ細胞に、モック（Ｍｏｃｋ）、又は本明細書に記載の抗ヒトＣＤ１９ ｓｃＦｖをコードする選択されたＣＡＲ（ＣＡＲ－Ｔ５、ＣＡＲ－Ｔ５－９、又はＣＡＲ－Ｔ５－１３）若しくはマウス抗ヒトＣＤ１９ ｍＡｂのＦＭＣ６３（Ｚｏｌａ， Ｈ． ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． ６９（Ｐｔ ６）：４１１－２２）由来の可変領域配列を有する抗ヒトＣＤ１９ ｓｃＦｖをコードするＣＡＲを形質導入した。Ｖ_Ｌ－リンカー（下線付き）－Ｖ_Ｈのフォーマットを有するマウス抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖの配列を以下に示す。形質導入Ｔ細胞を上記の通りにＦＡＣｓで解析した。

【0446】

【0447】

配列番号２９６に記載のマウス抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖのＣＤＲ配列は以下の通りである：
ＬＣ－ＣＤＲ１：ＱＤＩＳＫＹ（配列番号２９７）
ＬＣ－ＣＤＲ２：ＨＴＳ（配列番号２９８）
ＬＣ－ＣＤＲ３：ＱＱＧＮＴＬＰＹＴ（配列番号２９９）
ＨＣ－ＣＤＲ１：ＧＶＳＬＰＤＹＧ（配列番号３００）
ＨＣ－ＣＤＲ２：ＩＷＧＳＥＴＴ（配列番号３０１）
ＨＣ－ＣＤＲ３：ＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹ（配列番号３０２）

【0448】

これらの結果から、ヒトｓｃＦｖクローン５及び２つの親和性成熟バリアント（５－９、５－１３）から作製された抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞が、マウス抗ＣＤ１９抗体から作製された抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、より高い導入効率及び有意により高いＣＤ１９特異的がん細胞溶解を示したことが示された（図１５）。

【0449】

別の実験において、活性化ヒトＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞の例示的なサイトカインの放出プロファイルを決定した。モック形質導入Ｔ細胞（ｍｏｃｋ）又は選択された抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ（クローン５－３が示される）を、標的細胞と共培養した。インビトロ殺滅後のＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの培地への放出を、Ｂｉｏ－ｐｌｅｘ Ｐｒｏ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ８－ｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ（バイオラド社）と共にＭａｇｐｉｘマルチプレックスシステム（ルミネックス社）を用いて測定した。培地、標的細胞単独及びクローン５－３形質導入Ｔ細胞単独からの放出を減算した後、既知の検量線を用いてサイトカイン濃度を決定した。代表的な結果を図１０に示す。

【0450】

図１０に示されるように、サイトカイン放出は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞がＣＤ１９^＋細胞（Ｒａｊｉ及びＣＡ４６）と共培養された場合にのみ検出され、ＣＤ１９^－細胞（Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ ｋ．ｏ．及びＪｕｒｋａｔ）と共培養された場合は検出されなかった。ＣＤ１９^＋がん細胞と共培養されたモック形質導入Ｔ細胞は最低量のサイトカインしか放出しなかった。同様に、クローン５－１３を基とした活性化ヒトＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞のサイトカイン放出プロファイルは、サイトカイン（ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－α）の放出を、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞がＣＤ１９^＋細胞（Ｒａｊｉ及びＪｅＫｏ－１）と共培養された場合にのみ示し、ＣＤ１９^－細胞（Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ ｋ．ｏ．）と共培養された場合は示さなかった。また、ＣＤ１９^＋がん細胞と共培養されたモック形質導入Ｔ細胞はゼロ～最低量のサイトカインしか放出しなかった。

【0451】

ヒトリンパ腫異種移植片におけるＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビボ有効性
例示的なＣＡＲ－Ｔ細胞（クローン５－９を基としたもの）のインビボにおける抗腫瘍活性を、ＮＯＤ ＳＣＩＤγ（ＮＳＧ）マウスのＣＤ１９陽性ヒトリンパ腫異種移植モデルにおいて試験した。簡潔に説明すると、Ｒａｊｉ－ｌｕｃ－ＧＦＰ細胞をコンパラティブ・バイオサイエンス社（Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｉｎｃ．）（９４０８５、カリフォルニア州サニーベール）から購入し、ＲＰＭＩ培地＋１０％ＦＢＳ及び１％Ｌ－グルタミン中、加湿雰囲気下５％ＣＯ_２、３７℃で培養した。Ｒａｊｉ－ｌｕｃ－ＧＦＰ細胞は、生物発光イメージングを用いてインビボで追跡できる細胞をもたらす、ホタルルシフェラーゼ（ｌｕｃ）及び緑色蛍光タンパク質を両方コードするデュアルレポーター遺伝子の安定導入の後の、ＣＤ１９陽性バーキットリンパ腫細胞株のＲａｊｉから得られたものである。ＮＳＧマウスを、ジャクソン・ラボラトリーズ社（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）（０４６０９、メーン州バーハーバー、米国）から購入し、実験の前に少なくとも７日間順化させた。Ｒａｊｉ－ｌｕｃ－ＧＦＰ細胞をＰＢＳに再懸濁し、１×１０^６細胞／１００μＬ／マウスで尾静脈を介してＮＳＧマウスに静脈内移植した。移植後の５日目に、腫瘍量の評価のために、Ｘｅｎｏｇｅｎ ＩＶＩＳイメージングシステムを用いて、動物をイメージングした。マウスを光子放射に基づいて平均光子放射が６．７×１０^５光子となるように３群に無作為化した（１群あたりｎ＝６マウス）：（ｉ）無処置、（ｉｉ）モック（ＣＡＲ－Ｔ細胞の同一ドナーから得られた形質導入していない活性化ヒトＴ細胞）、及び（ｉｉｉ）５－９ ＣＡＲ－Ｔ。無作為化後直ちに、動物にＭｏｃｋ又はクローン５－９ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、１０^７Ｔ細胞／マウス（群（ｉｉｉ）については、１用量あたり６～８×１０^６ ＣＡＲ＋Ｔ細胞を含む）の用量で、２週間に１回、計３回、静脈内処置した。投与後、動物を注意深くモニターした。Ｘｅｎｏｇｅｎ ＩＶＩＳシステムを用いた生物発光イメージングを、週１回撮影した。以下の状態を呈した動物は安楽死させ、「条件付き死亡（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ ｄｅａｔｈ）」と記録した：（ｉ）初期体重の２５％超の体重減少、及び（ｉｉ）マウスの移動に影響する肢麻痺。代表的な結果を図１１に示す。

【0452】

モックＴ細胞及び５－９ ＣＡＲ－Ｔ細胞の両方が、今回の用量及びスケジュールにおいて、耐容性良好であった（図１１）。投与に関連した健康への悪影響は試験全体を通じて観察されなかった。モックＴ細胞処置はＲａｊｉ－ｌｕｃ－ＧＦＰ腫瘍の成長を遅延させ（ｐ＜０．０５）、一方、ＣＡＲ－Ｔ ５－９処置は腫瘍成長を有意に阻害した（ｐ＜０．０５；図１１、右）。

【0453】

同様の実験において、別の例示的なＣＡＲ－Ｔ細胞（クローン５－１３を基としたもの）のインビボにおける抗腫瘍活性を、ＮＳＧマウスのＣＤ１９陽性ヒトリンパ腫異種移植モデルにおいて試験した。抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－形質導入Ｔ細胞（５×１０^６個の、クローン５－１３を基としたＣＡＲ^＋Ｔ細胞）の各マウスへの投与が１回のみであったことを除き、上述のクローン５－９におけると同様に実験を行った。代表的な結果を図１３に示す。

【0454】

図１３Ａに示されるように、腫瘍はビヒクル処置群及びモック処置群のマウスにおいては急速に成長したが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ ５－１３形質導入Ｔ細胞で処置されたＮＳＧマウスは腫瘍成長の阻害を示した。実際には、早くも１１日目には処置群間の腫瘍成長に有意差が検出可能であった（ｐ＜０．０００１、ダネット検定、図１３Ｂ）。さらに、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ ５－１３形質導入Ｔ細胞で処理したＮＳＧマウスは、移植後４５日目まで腫瘍の退縮を示した。

【0455】

腫瘍移植後３５日目に、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ ５－１３形質導入Ｔ細胞処置群から代表して３匹のマウスに、５×１０^５個のＲａｊｉリンパ腫細胞を静脈内移植により再投与し、抗ＣＤ１９－ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞が存続しているかどうか、及び、抗原（ＣＤ１９）への応答能を維持しているかどうかを確認した。無処置ＮＳＧマウス（すなわち、Ｒａｊｉリンパ腫細胞を移植されなかった、又はＴ細胞で事前に処置されたマウス、ｎ＝２）には、コントロールとして、１×１０^６個のモック形質導入Ｔ細胞の注射（３４日目に注射）の１日後に５×１０^５個のＲａｊｉリンパ腫細胞を移植した。本発明者らは、そのようなモック形質導入Ｔ細胞が、Ｒａｊｉリンパ腫細胞の移植より前のマウスにおける循環Ｔ細胞が低レベルである状態を模倣するであろうと推論した。各群の腫瘍量をルシフェラーゼ活性によって測定した（上記の通り）。代表的な結果を図１３Ｃに示す。

【0456】

図１３Ｃに示されるように、腫瘍はモック処置群では急速に成長した。対照的に、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ ５－１３形質導入Ｔ細胞による事前処置は、Ｒａｊｉリンパ腫細胞の再投与後の腫瘍成長を妨げた（ｐ＜０．０１）。すなわち、これらのデータは、抗ＣＤ１９－ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞が、移植後３５日目になってもこれらのマウスに残存していたこと、及び、ＣＤ１９に応答してＣＤ１９^＋腫瘍細胞を殺滅する能力を維持することで、腫瘍量再増加（ｒｅｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｂｕｒｄｅｎ）に対する保護をあたえていたこと、を示している。

【0457】

別の同様の実験において、例示的なＣＡＲ－Ｔ細胞（クローン５－１３を基としたもの）のインビボにおける抗腫瘍活性を、ＮＳＧマウスのＣＤ１９陽性ヒト白血病異種移植モデル（ＮＡＬＭ）において試験した。ＮＡＬＭ－６－ｌｕｃ－ＧＦＰ細胞（スローンケタリング記念がんセンターのＥｒｉｃ Ｓｍｉｔｈ博士の好意により提供を受けた）は、生物発光イメージングを用いてインビボで追跡できる細胞をもたらす、ホタルルシフェラーゼ（ｌｕｃ）及び緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を両方コードするデュアルレポーター遺伝子の安定導入後の、ＣＤ１９陽性急性リンパ芽球白血病細胞株ＮＡＬＭ－６から得られたものである。

【0458】

簡潔に説明すると、ＮＡＬＭ－６－ｌｕｃ－ＧＦＰを、ＲＰＭＩ培地＋１０％ＦＢＳ中、加湿雰囲気下５％ＣＯ_２、３７℃で培養した。ＮＳＧマウスを、ジャクソン・ラボラトリーズ社（０４６０９、メーン州バーハーバー、米国）から購入し、実験の前に少なくとも３日間順化させた。ＮＡＬＭ－６－ｌｕｃ－ＧＦＰ細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁し、５×１０^５細胞／１００μＬ／マウスで、尾静脈注射により、雌ＮＳＧマウス（ｎ＝２０、６～８週齢）に静脈内移植した。移植後の４日目に、腫瘍量の評価のために、Ｘｅｎｏｇｅｎ ＩＶＩＳイメージングシステムを用いて、動物をイメージングした。ＮＳＧマウスを光子放射に基づいて３群に無作為化した：（ｉ）ビヒクル（ＰＢＳ、ｎ＝６）；（ｉｉ）１０^７個のモック形質導入ヒトＴ細胞（ｎ＝６）；及び（ｉｉｉ）５×１０^６個のクローン５－１３抗ＣＤ１９ ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ ５－１３、ｎ＝８）。上記の通りのＴ細胞又はビヒクルの移植及び投薬の後、動物を注意深くモニターした。代表的な結果を図１４に示す。

【0459】

図１４のパネルＡ及びパネルＢに示されるように、ビヒクル処置群及びモック処置群はＮＡＬＭ－６腫瘍成長の急速な進行を示した。対照的に、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（クローン５－１３を基としたもの）による処置は、早くも１１日目には、腫瘍成長を有意に（ｐ＜０．０００１）阻害し、腫瘍成長の巻き戻し（ｒｅｖｅｒｔ）さえ起こした。これらのデータは、ＣＡＲ－Ｔ ５－１３細胞が、インビボにおいてＣＤ１９^＋ＮＡＬＭ－６腫瘍を標的化して溶解したことを証するものであり、それにより、例示的なＣＡＲフォーマットで本明細書にて提供される抗ＣＤ１９抗体が、複数のがんモデルにおける腫瘍成長を阻害するのに有効であることを示すものである。

【0460】

まとめると、本実施例は、前述の実施例に従って作製された抗ＣＤ１９ヒト抗体剤を基としたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）発現Ｔ細胞の作製及び使用の成功を示すものである。さらに、そのような抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９特異的に、種々のがん細胞株を効率的に殺滅した。すなわち、本明細書に記載のヒト抗体剤は、種々のＢ細胞疾患及び悪性腫瘍、具体的にはＣＤ１９発現を特徴とするもの、の治療及び診断で使用することができる。

【0461】

方法
Ｒａｊｉ細胞株、Ｊｅｋｏ－１細胞株、Ｊｕｒｋａｔ細胞株、ＴＨＰ－１細胞株及びＮＩＨ／３Ｔ３細胞株はアメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から入手された。Ｒａｊｉ細胞株はＣＤ１９陽性のバーキットリンパ腫細胞株（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－８６）である。Ｊｅｋｏ－１細胞株はＣＤ１９陽性のマントル細胞リンパ腫細胞株（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－３００６）である。Ｊｕｒｋａｔ細胞株は、Ｔ細胞白血病由来のヒトＴリンパ球細胞株であり、ＣＤ１９陰性である。ＴＨＰ－１細胞株は、急性単球性白血病細胞株であり、これもＣＤ１９陰性（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－２０２）である。ＮＩＨ／３Ｔ３細胞株はマウス胎仔線維芽細胞株（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６５８）である。Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ノックアウト細胞株（Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ ｋ．ｏ．）は、市販のＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９ベクター（オリジン社（Ｏｒｉｇｅｎｅ））を用いてＣＤ１９をノックアウトすることにより作製された。Ｒａｊｉ－ＣＤ１９ ｋ．ｏ．細胞は、配列決定、及び市販のマウス抗ヒトＣＤ１９抗体（バイオレジェンド社（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ））を用いたＦＡＣＳ（図１２）によって、ＣＤ１９陰性であることが確認された。３Ｔ３－ＣＤ１９は、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞株に、高レベルのｈＣＤ１９細胞表面発現をもたらすヒトＣＤ１９（ｈＣＤ１９）発現哺乳類ベクターを形質導入することにより、作製された（図１６）。ＣＡ４６、Ｄａｕｄｉ、Ｈｅｌａ、ＨｅｐＧ２、ＳＫ－Ｈｅｐ１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１及びＭＣＦ７等の、ＣＡＲ－Ｔ殺滅アッセイで試験された他の細胞株も、ＡＴＣＣから購入された。細胞株は、１０％ＦＢＳが添加されたＲＰＭＩ１６４０又はＤＭＥＭ中、３７℃／５％ＣＯ_２で培養された。

【0462】

ファージＭ１３に対するマウスモノクローナル抗体はＧＥ社（カタログ番号２７－９４２１－０１）から購入された。ＰＥ標識抗マウスＩｇＧ二次抗体はベクター・ラボラトリーズ社（カタログ番号ＥＩ－２００７）から購入された。ＰＥ結合型マウス抗ｈＣＤ１９抗体はバイオレジェンド社（カタログ番号３０２２０８）から購入された。９０１－Ｆｃ及びＮＣ－ＥＴ９０１二重特異性抗体は、エウレカ・セラピューティクス社で作製された、ヒトＩｇＧ１フォーマット及び二重特異性抗体フォーマットをそれぞれ有するネガティブコントロール抗体である。前記抗体はいかなるヒト抗原も認識しない。ＦＩＴＣ標識抗Ｈｉｓ抗体は、Ｃ末端に６×Ｈｉｓタグを有する二重特異性抗体の検出用に、サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック社（カタログ番号ＭＡ１－８１８９１）から購入された。ＰｅｒＣＰ結合型抗ヒトＣＤ２０抗体は、ヒトＢ細胞の検出用に、ＢＤ社（９Ｃａｔ ３０２２０８）から購入された。

【0463】

組換えヒトＣＤ１９ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ_Ｈ１ドメインを欠くがヒンジ領域を含むヒトＩｇＧ１のＦｃに融合された、ヒトＣＤ１９の細胞外ドメインを含む。ＨＥＫ２９３（インビトロジェン社）細胞は、リポフェクタミン３０００（インビトロジェン社）によって、ヒトＣＤ１９ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質をコードするベクターでトランスフェクトされた。融合タンパク質はプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって培養上清から精製された。

【0464】

特定の態様の列挙
本発明は以下に列挙される態様も提供する。
１． ヒトＣＤ１９と特異的に結合するヒト抗体剤であって、表２から選択される１若しくは複数の重鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である配列を有する１若しくは複数の重鎖ＣＤＲ、並びに／又は、表３から選択される１若しくは複数の軽鎖ＣＤＲと少なくとも９５％同一である配列を有する１若しくは複数の軽鎖ＣＤＲを含む、前記ヒト抗体剤。
２． 配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号１８１、配列番号１８２及び配列番号１８３に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
３． 配列番号７６、配列番号７７及び配列番号７８に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号１８４、配列番号１８５及び配列番号１８６に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
４． 配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号１８７、配列番号１８８及び配列番号１８９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
５． 配列番号８２、配列番号８３及び配列番号８４に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号１９０、配列番号１９１及び配列番号１９２に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
６． 配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号１９３、配列番号１９４及び配列番号１９５に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
７． 配列番号８８、配列番号８９及び配列番号９０に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号１９６、配列番号１９７及び配列番号１９８に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
８． 配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号１９９、配列番号２００及び配列番号２０１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
９． 配列番号９４、配列番号９５及び配列番号９６に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号２０２、配列番号２０３及び配列番号２０４に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
１０． 配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号２０５、配列番号２０６及び配列番号２０７に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
１１． 配列番号１００、配列番号１０１及び配列番号１０２に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号２０８、配列番号２０９及び配列番号２１０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
１２． 配列番号１０３、配列番号１０４及び配列番号１０５に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号２１１、配列番号２１２及び配列番号２１３に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
１３． 配列番号１０６、配列番号１０７及び配列番号１０８に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号２１４、配列番号２１５及び配列番号２１６に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
１４． 配列番号１０９、配列番号１１０及び配列番号１１１に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号２１７、配列番号２１８及び配列番号２１９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
１５． 配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号２２０、配列番号２２１及び配列番号２２２に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
１６． 配列番号１１５、配列番号１１６及び配列番号１１７に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号２２３、配列番号２２４及び配列番号２２５に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
１７． 配列番号１１８、配列番号１１９及び配列番号１２０に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号２２６、配列番号２２７及び配列番号２２８に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
１８． 配列番号１２１、配列番号１２２及び配列番号１２３に記載の重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３、並びに、配列番号２２９、配列番号２３０及び配列番号２３１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３の各々と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３を含む、態様１に記載のヒト抗体剤。
１９． 配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１８１、配列番号１８２及び配列番号１８３の軽鎖ＣＤＲを含む、態様２に記載のヒト抗体剤。
２０． 配列番号７６、配列番号７７及び配列番号７８の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１８４、配列番号１８５及び配列番号１８６の軽鎖ＣＤＲを含む、態様３に記載のヒト抗体剤。
２１． 配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１８７、配列番号１８８及び配列番号１８９の軽鎖ＣＤＲを含む、態様４に記載のヒト抗体剤。
２２． 配列番号８２、配列番号８３及び配列番号８４の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９０、配列番号１９１及び配列番号１９２の軽鎖ＣＤＲを含む、態様５に記載のヒト抗体剤。
２３． 配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９３、配列番号１９４及び配列番号１９５の軽鎖ＣＤＲを含む、態様６に記載のヒト抗体剤。
２４． 配列番号８８、配列番号８９及び配列番号９０の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９６、配列番号１９７及び配列番号１９８の軽鎖ＣＤＲを含む、態様７に記載のヒト抗体剤。
２５． 配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９９、配列番号２００及び配列番号２０１の軽鎖ＣＤＲを含む、態様８に記載のヒト抗体剤。
２６． 配列番号９４、配列番号９５及び配列番号９６の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２０２、配列番号２０３及び配列番号２０４の軽鎖ＣＤＲを含む、態様９に記載のヒト抗体剤。
２７． 配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２０５、配列番号２０６及び配列番号２０７の軽鎖ＣＤＲを含む、態様１０に記載のヒト抗体剤。
２８． 配列番号１００、配列番号１０１及び配列番号１０２の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２０８、配列番号２０９及び配列番号２１０の軽鎖ＣＤＲを含む、態様１１に記載のヒト抗体剤。
２９． 配列番号１０３、配列番号１０４及び配列番号１０５の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２１１、配列番号２１２及び配列番号２１３の軽鎖ＣＤＲを含む、態様１２に記載のヒト抗体剤。
３０． 配列番号１０６、配列番号１０７及び配列番号１０８の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２１４、配列番号２１５及び配列番号２１６の軽鎖ＣＤＲを含む、態様１３に記載のヒト抗体剤。
３１． 配列番号１０９、配列番号１１０及び配列番号１１１の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２１７、配列番号２１８及び配列番号２１９の軽鎖ＣＤＲを含む、態様１４に記載のヒト抗体剤。
３２． 配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２０、配列番号２２１及び配列番号２２２の軽鎖ＣＤＲを含む、態様１５に記載のヒト抗体剤。
３３． 配列番号１１５、配列番号１１６及び配列番号１１７の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２３、配列番号２２４及び配列番号２２５の軽鎖ＣＤＲを含む、態様１６に記載のヒト抗体剤。
３４． 配列番号１１８、配列番号１１９及び配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２６、配列番号２２７及び配列番号２２８の軽鎖ＣＤＲを含む、態様１７に記載のヒト抗体剤。
３５． 配列番号１２１、配列番号１２２及び配列番号１２３の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２９、配列番号２３０及び配列番号２３１の軽鎖ＣＤＲを含む、態様１８に記載のヒト抗体剤。
３６． ＣＤ１９との結合において、以下を含むヒト抗体剤と競合するヒト抗体剤：（ａ）配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１８１、配列番号１８２及び配列番号１８３の軽鎖ＣＤＲ；（ｂ）配列番号７６、配列番号７７及び配列番号７８の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１８４、配列番号１８５及び配列番号１８６の軽鎖ＣＤＲ；（ｃ）配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１８７、配列番号１８８及び配列番号１８９の軽鎖ＣＤＲ；（ｄ）配列番号８２、配列番号８３及び配列番号８４の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９０、配列番号１９１及び配列番号１９２の軽鎖ＣＤＲ；（ｅ）配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９３、配列番号１９４及び配列番号１９５の軽鎖ＣＤＲ；（ｆ）配列番号８８、配列番号８９及び配列番号９０の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９６、配列番号１９７及び配列番号１９８の軽鎖ＣＤＲ；（ｇ）配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号１９９、配列番号２００及び配列番号２０１の軽鎖ＣＤＲ；（ｈ）配列番号９４、配列番号９５及び配列番号９６の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２０２、配列番号２０３及び配列番号２０４の軽鎖ＣＤＲ；（ｉ）配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２０５、配列番号２０６及び配列番号２０７の軽鎖ＣＤＲ；（ｊ）配列番号１００、配列番号１０１及び配列番号１０２の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２０８、配列番号２０９及び配列番号２１０の軽鎖ＣＤＲ；（ｋ）配列番号１０３、配列番号１０４及び配列番号１０５の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２１１、配列番号２１２及び配列番号２１３の軽鎖ＣＤＲ；（ｌ）配列番号１０６、配列番号１０７及び配列番号１０８の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２１４、配列番号２１５及び配列番号２１６の軽鎖ＣＤＲ；（ｍ）配列番号１０９、配列番号１１０及び配列番号１１１の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２１７、配列番号２１８及び配列番号２１９の軽鎖ＣＤＲ；（ｎ）配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２０、配列番号２２１及び配列番号２２２の軽鎖ＣＤＲ；（ｏ）配列番号１１５、配列番号１１６及び配列番号１１７の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２３、配列番号２２４及び配列番号２２５の軽鎖ＣＤＲ；（ｐ）配列番号１１８、配列番号１１９及び配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２６、配列番号２２７及び配列番号２２８の軽鎖ＣＤＲ；又は（ｑ）配列番号１２１、配列番号１２２及び配列番号１２３の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２２９、配列番号２３０及び配列番号２３１の軽鎖ＣＤＲ。
３７． 重鎖ＣＤＲ内及び／又は軽鎖ＣＤＲ内に１又は複数のアミノ酸置換をさらに含む、態様１～３６のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
３８． 重鎖ＣＤＲ内及び／又は軽鎖ＣＤＲ内に１以上又は５以下のアミノ酸置換をさらに含む、態様３７に記載のヒト抗体剤。
３９． 重鎖ＣＤＲ内及び／又は軽鎖ＣＤＲ内に１以上又は３以下のアミノ酸置換をさらに含む、態様３８に記載のヒト抗体剤。
４０． ヒトＣＤ１９と特異的に結合するヒト抗体剤であって、表１に示される重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、表１に示される軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、前記ヒト抗体剤。
４１． 配列番号２に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号２に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
４２． 配列番号４に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号４に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
４３． 配列番号６に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号６に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
４４． 配列番号８に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号８に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
４５． 配列番号１０に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号１０に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
４６． 配列番号１２に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号１２に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
４７． 配列番号１４に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号１４に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
４８． 配列番号１６に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号１６に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
４９． 配列番号１８に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号１８に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
５０． 配列番号２０に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号２０に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
５１． 配列番号２２に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号２２に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
５２． 配列番号２４に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号２４に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
５３． 配列番号２６に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号２６に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
５４． 配列番号２８に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号２８に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
５５． 配列番号３０に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号３０に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
５６． 配列番号３２に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号３２に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
５７． 配列番号３４に現れる重鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する重鎖可変領域、及び、配列番号３４に現れる軽鎖可変領域配列と少なくとも９５％同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様４０に記載のヒト抗体剤。
５８． 配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２及び配列番号３４のいずれか１つに現れる重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む、態様４０～５７のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
５９． ヒトＣＤ１９と特異的に結合するヒト抗体剤であって、親ヒト抗体剤と比べて１又は複数のアミノ酸置換を含み、且つ、以下を含む、前記ヒト抗体剤：（ａ）配列番号１２４、配列番号１２５及び配列番号１２６の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２３２、配列番号２３３及び配列番号２３４の軽鎖ＣＤＲ；（ｂ）配列番号１２７、配列番号１２８及び配列番号１２９の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２３５、配列番号２３６及び配列番号２３７の軽鎖ＣＤＲ；（ｃ）配列番号１３０、配列番号１３１及び配列番号１３２の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２３８、配列番号２３９及び配列番号２４０の軽鎖ＣＤＲ；（ｄ）配列番号１３３、配列番号１３４及び配列番号１３５の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２４１、配列番号２４２及び配列番号２４３の軽鎖ＣＤＲ；（ｅ）配列番号１３６、配列番号１３７及び配列番号１３８の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２４４、配列番号２４５及び配列番号２４６の軽鎖ＣＤＲ；（ｆ）配列番号１３９、配列番号１４０及び配列番号１４１の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２４７、配列番号２４８及び配列番号２４９の軽鎖ＣＤＲ；（ｇ）配列番号１４２、配列番号１４３及び配列番号１４４の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２５０、配列番号２５１及び配列番号２５２の軽鎖ＣＤＲ；（ｈ）配列番号１４５、配列番号１４６及び配列番号１４７の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２５３、配列番号２５４及び配列番号２５５の軽鎖ＣＤＲ；（ｉ）配列番号１４８、配列番号１４９及び配列番号１５０の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２５６、配列番号２５７及び配列番号２５８の軽鎖ＣＤＲ；（ｊ）配列番号１５１、配列番号１５２及び配列番号１５３の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２５９、配列番号２６０及び配列番号２６１の軽鎖ＣＤＲ；（ｋ）配列番号１５４、配列番号１５５及び配列番号１５６の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２６２、配列番号２６３及び配列番号２６４の軽鎖ＣＤＲ；（ｌ）配列番号１５７、配列番号１５８及び配列番号１５９の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２６５、配列番号２６６及び配列番号２６７の軽鎖ＣＤＲ；（ｍ）配列番号１６０、配列番号１６１及び配列番号１６３の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２６８、配列番号２６９及び配列番号２７０の軽鎖ＣＤＲ；（ｎ）配列番号１６３、配列番号１６４及び配列番号１６５の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２７１、配列番号２７２及び配列番号２７３の軽鎖ＣＤＲ；（ｏ）配列番号１６６、配列番号１６７及び配列番号１６８の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２７４、配列番号２７５及び配列番号２７６の軽鎖ＣＤＲ；（ｐ）配列番号１６９、配列番号１７０及び配列番号１７１の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２７７、配列番号２７８及び配列番号２７９の軽鎖ＣＤＲ；（ｑ）配列番号１７２、配列番号１７３及び配列番号１７４の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２８０、配列番号２８１及び配列番号２８２の軽鎖ＣＤＲ；（ｒ）配列番号１７５、配列番号１７６及び配列番号１７７の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２８３、配列番号２８４及び配列番号２８５の軽鎖ＣＤＲ；又は（ｓ）配列番号１７８、配列番号１７９及び配列番号１８０の重鎖ＣＤＲ、並びに配列番号２８６、配列番号２８７及び配列番号２８８の軽鎖ＣＤＲ。
６０． １０、１６、２５、３４、５２、５４、６８、６９、７２、７５、９３、９５及びこれらの組み合わせからなる群より選択されるアミノ酸位置のいずれかに１又は複数のアミノ酸置換を含む軽鎖可変領域を含む、態様５９に記載のヒト抗体剤。
６１． 前記１又は複数のアミノ酸置換がＶ１０Ｍ、Ｋ１６Ｅ、Ｓ２５Ｎ、Ｖ３４Ｉ、Ｄ５２Ｎ、Ｌ５４Ｑ、Ｎ６８Ｔ、Ｔ６９Ｍ、Ｌ７２Ｍ、Ｓ７５Ｎ、Ｓ９３Ｔ、Ｄ９５Ｅ、Ｄ９５Ｇ又はこれらの組み合わせを包含する、態様６０に記載のヒト抗体剤。
６２． ３、１２、１６、１７、２５、２６、３２、６３、６９、９７、１０２、１０６、１０８、１０９、１１３、１１６、１１７及びこれらの組み合わせからなる群より選択されるアミノ酸位置のいずれかに１又は複数のアミノ酸置換を含む重鎖可変領域を含む、態様５９～６１のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
６３． 前記１又は複数のアミノ酸置換がＱ３Ｒ、Ｋ１２Ｅ、Ｅ１６Ｇ、Ｓ１７Ｆ、Ｓ２５Ａ、Ｇ２６Ａ、Ｙ３２Ｆ、Ｓ６３Ｆ、Ｔ６９Ａ、Ａ９７Ｖ、Ｔ１０２Ｓ、Ｍ１０６Ｌ、Ｙ１０８Ｎ、Ｄ１０９Ｅ、Ｑ１１３Ｌ、Ｌ１１６Ｍ、Ｍ１１７Ｌ又はこれらの組み合わせを包含する、態様６２に記載のヒト抗体剤。
６４． アミノ酸置換Ｓ７５Ｎを有する軽鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
６５． アミノ酸置換Ｔ６９Ｍを有する軽鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
６６． アミノ酸置換Ｄ５２Ｎ及びＤ９５Ｅを有する軽鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
６７． アミノ酸置換Ｖ１０Ｍ及びＤ９５Ｇを有する軽鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
６８． アミノ酸置換Ｓ９３Ｔを有する軽鎖可変領域、並びにアミノ酸置換Ｓ１７Ｆ及びＴ６９Ａを有する重鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
６９． アミノ酸置換Ｎ６８Ｔを有する軽鎖可変領域、並びにアミノ酸置換Ｓ１７Ｆ及びＹ１０８Ｎを有する重鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
７０． アミノ酸置換Ｓ６３Ｆを有する重鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
７１． アミノ酸置換Ｑ３Ｒ、Ｙ３２Ｆ及びＡ９７Ｖを有する重鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
７２． アミノ酸置換Ｋ１６Ｅを有する軽鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
７３． アミノ酸置換Ｍ１１７Ｌを有する重鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
７４． アミノ酸置換Ｌ７２Ｍを有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸置換Ｓ２５Ａを有する重鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
７５． アミノ酸置換Ｔ１０２Ｓ及びＬ１１６Ｍを有する重鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
７６． アミノ酸置換Ｓ２５Ｎ及びＶ３４Ｉを有する軽鎖可変領域、並びにアミノ酸置換Ｋ１２Ｅ及びＤ１０９Ｅを有する重鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
７７． アミノ酸置換Ｅ１６Ｇを有する重鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
７８． アミノ酸置換Ｌ５４Ｑを有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸置換Ｍ１０６Ｌを有する重鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
７９． アミノ酸置換Ｓ２５Ｎを有する軽鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
８０． アミノ酸置換Ｇ２６Ａ及びＱ１１３Ｌを有する重鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
８１． アミノ酸置換Ｌ５４Ｑを有する軽鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
８２． アミノ酸置換Ｔ１０２Ｓを有する重鎖可変領域を含む、態様５９～６３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
８３． 配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０及び配列番号７２のいずれか１つに現れる重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む、態様５９～８２のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
８４． バリアントＦｃ領域を含むヒトモノクローナル抗体である、態様１～８３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
８５． 前記ヒトモノクローナル抗体が、野生型Ｆｃ領域を含む親ヒトモノクローナル抗体と比べると異なっているグリコシル化パターンを含む、態様８４に記載のヒト抗体剤。
８６． 治療薬又は検出剤に結合されている、態様１～８５のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
８７． 細胞傷害性薬剤又は細胞傷害性部分に結合されている、態様１～８５のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
８８． 放射性同位元素に結合されている、態様１～８５のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
８９． 免疫グロブリン、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はｄＡｂであるか、又はそれを含む、態様１～８８のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
９０． ｓｃＦｖであるか、又はそれを含む、態様８９に記載のヒト抗体剤。
９１． 前記ｓｃＦｖがリンカー配列を含む、態様９０に記載のヒト抗体剤。
９２． 前記ｓｃＦｖが治療薬又は検出剤に結合されている、態様９０又は９１に記載のヒト抗体剤。
９３． 前記ｓｃＦｖがキメラ抗原受容体の一部である、態様９０又は９１に記載のヒト抗体剤。
９４． 治療又は診断で使用するための、態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
９５． ＣＤ１９発現を特徴とする疾患の治療、予防又は改善で使用するための、態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤。
９６． がんの治療、予防又は改善で使用するための、態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤の使用。
９７． 態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤をコードする単離核酸分子。
９８． コドン最適化配列を含む、態様９７に記載の単離核酸分子。
９９． 配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９及び配列番号７１のいずれか１つに現れる配列であるか、又はそれを含む、態様９７に記載の単離核酸分子。
１００． 態様９７～９９のいずれか１つに記載の単離核酸分子を含むベクター。
１０１． 態様１００に記載のベクターを含む細胞。
１０２． 態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤、態様９７～９９のいずれか１つに記載の単離核酸分子、態様１００に記載のベクター、又は態様１０１に記載の細胞を含むキット。
１０３． 態様９７～９９のいずれか１つに記載の単離核酸分子を含むワクチン。
１０４． ヒト抗体剤の発現を可能にする条件下において培地中で態様１０１に記載の細胞を培養する工程、及び培地からヒト抗体剤を分離する工程を含む、態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤の生産法。
１０５． 態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤を含む組成物。
１０６． 前記ヒト抗体剤が細胞傷害性薬剤又は細胞傷害性部分に結合されている、態様１０５に記載の組成物。
１０７． 態様１０５若しくは１０６に記載の組成物又は態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤を含み、且つ、医薬的に許容される担体又は希釈剤をさらに含む、医薬組成物。
１０８． 対象におけるＣＤ１９発現を特徴とする医学的状態を治療する方法であって、治療有効量の、態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤を前記対象に投与する工程を含む、前記方法。
１０９． ＣＤ１９発現を特徴とする医学的状態がＢ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球白血病、慢性リンパ球性白血病、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫又は急性骨髄性白血病である、態様１０８に記載の方法。
１１０． ＣＤ１９発現を特徴とする前記医学的状態が関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、糖尿病又は強皮症である、態様１０８に記載の方法。
１１１． 態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤を対象に投与する工程を含む、がんを治療する方法。
１１２． ＣＤ１９発現と関連した状態の治療又は検出のための、態様１～９３のいずれか１つに記載の抗体剤の使用。
１１３． 態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤由来の第一の抗原結合部位、及び第二の抗原結合部位を含む、二重特異性抗体。
１１４． 前記第一及び第二の抗原結合部位がｓｃＦｖである、態様１１３に記載の二重特異性抗体。
１１５． 前記第一の抗原結合部位が免疫グロブリン分子から構成されており、且つ、前記第二の抗原結合部位がｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、Ｆａｂ又はＦｖから構成されている、態様１１３に記載の二重特異性抗体。
１１６． 前記第二の抗原結合部位がＴ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、好中球、間葉系幹細胞及び神経幹細胞からなる群より選択される免疫細胞と結合する、態様１１３～１１５のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
１１７． 前記第二の抗原結合部位がＴ細胞上のＣＤ３と結合する、態様１１６に記載の二重特異性抗体。
１１８． 態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤の抗原結合部位を含む、二重特異性Ｔ細胞動員モノクローナル抗体。
１１９． 治療又は診断で使用するための、態様１１３～１１８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
１２０． 態様１１３～１１８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体のポリペプチド鎖を全体又は一部としてコードする単離核酸分子。
１２１． コドン最適化配列を含む、態様１２０に記載の単離核酸分子。
１２２． 態様１２０又は１２１に記載の核酸配列を含むベクター。
１２３． 態様１２２に記載のベクターを含む細胞。
１２４． 態様１１３～１１８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、態様１２０又は１２１に記載の単離核酸分子、態様１２２に記載のベクター、又は態様１２３に記載の細胞を含む、キット。
１２５． 態様１１３～１１８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体を含む組成物。
１２６． 態様１２５に記載の組成物又は態様１１３～１１８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体を含み、且つ、医薬的に許容される担体又は希釈剤をさらに含む、医薬組成物。
１２７． 態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤の抗原結合部位を含むキメラ抗原受容体。
１２８． 抗原結合部位がｓｃＦｖであるか、又はそれを含む、態様１２７に記載のキメラ抗原受容体。
１２９． 抗原結合部位がＶ_Ｌ領域であるか、又はそれを含む、態様１２７に記載のキメラ抗原受容体。
１３０． 前記Ｖ_Ｌ領域が以下の軽鎖ＣＤＲを含む、態様１２９に記載のキメラ抗原受容体：（ａ）配列番号１８１、配列番号１８２及び配列番号１８３；（ｂ）配列番号１８４、配列番号１８５及び配列番号１８６；（ｃ）配列番号１８７、配列番号１８８及び配列番号１８９；（ｄ）配列番号１９０、配列番号１９１及び配列番号１９２；（ｅ）配列番号１９３、配列番号１９４及び配列番号１９５；（ｆ）配列番号１９６、配列番号１９７及び配列番号１９８；（ｇ）配列番号１９９、配列番号２００及び配列番号２０１；（ｈ）配列番号２０２、配列番号２０３及び配列番号２０４；（ｉ）配列番号２０５、配列番号２０６及び配列番号２０７；
（ｊ）配列番号２０８、配列番号２０９及び配列番号２１０；（ｋ）配列番号２１１、配列番号２１２及び配列番号２１３；（ｌ）配列番号２１４、配列番号２１５及び配列番号２１６；（ｍ）配列番号２１７、配列番号２１８及び配列番号２１９；（ｎ）配列番号２２０、配列番号２２１及び配列番号２２２；（ｏ）配列番号２２３、配列番号２２４及び配列番号２２５；（ｐ）配列番号２２６、配列番号２２７及び配列番号２２８；（ｑ）配列番号２２９、配列番号２３０及び配列番号２３１；（ｒ）配列番号２３２、配列番号２３３及び配列番号２３４；（ｓ）配列番号２３５、配列番号２３６及び配列番号２３７；（ｔ）配列番号２３８、配列番号２３９及び配列番号２４０；（ｕ）配列番号２４１、配列番号２４２及び配列番号２４３；（ｖ）配列番号２４４、配列番号２４５及び配列番号２４６；（ｗ）配列番号２４７、配列番号２４８及び配列番号２４９；（ｘ）配列番号２５０、配列番号２５１及び配列番号２５２；（ｙ）配列番号２５３、配列番号２５４及び配列番号２５５；（ｚ）配列番号２５６、配列番号２５７及び配列番号２５８；（ａｂ）配列番号２５９、配列番号２６０及び配列番号２６１；（ａｃ）配列番号２６２、配列番号２６３及び配列番号２６４；（ａｄ）配列番号２６５、配列番号２６６及び配列番号２６７；（ａｅ）配列番号２６８、配列番号２６９及び配列番号２７０；（ａｆ）配列番号２７１、配列番号２７２及び配列番号２７３；（ａｇ）配列番号２７４、配列番号２７５及び配列番号２７６；（ａｈ）配列番号２７７、配列番号２７８及び配列番号２７９；（ａｉ）配列番号２８０、配列番号２８１及び配列番号２８２；（ａｊ）配列番号２８３、配列番号２８４及び配列番号２８５；又は（ａｋ）配列番号２８６、配列番号２８７及び配列番号２８８。
１３１． 前記Ｖ_Ｌ領域が以下の配列番号のいずれか１つに現れる配列を含む、態様１２９に記載のキメラ抗原受容体：配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０及び配列番号７２。
１３２． 抗原結合部位がＶ_Ｈ領域であるか、又はそれを含む、態様１２７に記載のキメラ抗原受容体。
１３３． 前記Ｖ_Ｈ領域が以下の重鎖ＣＤＲを含む、態様１３２に記載のキメラ抗原受容体：（ａ）配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５；（ｂ）配列番号７６、配列番号７７及び配列番号７８；（ｃ）配列番号７９、配列番号８０及び配列番号８１；（ｄ）配列番号８２、配列番号８３及び配列番号８４；（ｅ）配列番号８５、配列番号８６及び配列番号８７；（ｆ）配列番号８８、配列番号８９及び配列番号９０；（ｇ）配列番号９１、配列番号９２及び配列番号９３；（ｈ）配列番号９４、配列番号９５及び配列番号９６；（ｉ）配列番号９７、配列番号９８及び配列番号９９；（ｊ）配列番号１００、配列番号１０１及び配列番号１０２；（ｋ）配列番号１０３、配列番号１０４及び配列番号１０５；（ｌ）配列番号１０６、配列番号１０７及び配列番号１０８；（ｍ）配列番号１０９、配列番号１１０及び配列番号１１１；（ｎ）配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４；（ｏ）配列番号１１５、配列番号１１６及び配列番号１１７；（ｐ）配列番号１１８、配列番号１１９及び配列番号１２０；（ｑ）配列番号１２１、配列番号１２２及び配列番号１２３；（ｒ）配列番号１２４、配列番号１２５及び配列番号１２６；（ｓ）配列番号１２７、配列番号１２８及び配列番号１２９；（ｔ）配列番号１３０、配列番号１３１及び配列番号１３２；（ｕ）配列番号１３３、配列番号１３４及び配列番号１３５；（ｖ）配列番号１３６、配列番号１３７及び配列番号１３８；（ｗ）配列番号１３９、配列番号１４０及び配列番号１４１；（ｘ）配列番号１４２、配列番号１４３及び配列番号１４４；（ｙ）配列番号１４５、配列番号１４６及び配列番号１４７；（ｚ）配列番号１４８、配列番号１４９及び配列番号１５０；（ａｂ）配列番号１５１、配列番号１５２及び配列番号１５３；（ａｃ）配列番号１５４、配列番号１５５及び配列番号１５６；（ａｄ）配列番号１５７、配列番号１５８及び配列番号１５９；（ａｅ）配列番号１６０、配列番号１６１及び配列番号１６３；（ａｆ）配列番号１６３、配列番号１６４及び配列番号１６５；（ａｇ）配列番号１６６、配列番号１６７及び配列番号１６８；（ａｈ）配列番号１６９、配列番号１７０及び配列番号１７１；（ａｉ）配列番号１７２、配列番号１７３及び配列番号１７４；（ａｊ）配列番号１７５、配列番号１７６及び配列番号１７７；又は（ａｋ）配列番号１７８、配列番号１７９及び配列番号１８０。
１３４． 前記Ｖ_Ｈ領域が以下の配列番号のいずれか１つに現れる配列を含む、態様１３２に記載のキメラ抗原受容体：配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０及び配列番号７２。
１３５． 治療又は診断で使用するための、態様１２７～１３４のいずれか１つに記載のキメラ抗原受容体。
１３６． ＣＤ１９発現を特徴とする疾患の治療、予防又は改善で使用するための、態様１２７～１３４のいずれか１つに記載のキメラ抗原受容体。
１３７． 態様１２７～１３４のいずれか１つに記載のキメラ抗原受容体をコードする単離核酸分子。
１３８． コドン最適化配列を含む、態様１３７に記載の単離核酸分子。
１３９． 態様１２７～１３４のいずれか１つに記載のキメラ抗原受容体を発現する免疫エフェクター細胞。
１４０． Ｔ細胞又はＮＫ細胞である、態様１３９に記載の免疫エフェクター細胞。
１４１． 治療又は診断で使用するための、態様１３９又は態様１４０に記載の免疫エフェクター細胞。
１４２． ＣＤ１９発現を特徴とする疾患の治療、予防又は改善で使用するための、態様１３９又は態様１４０に記載の免疫エフェクター細胞。
１４３． 態様１２７～１３４のいずれか１つに記載のキメラ抗原受容体、態様１３７若しくは態様１３８に記載の単離核酸分子、又は態様１３９若しくは態様１４０に記載の免疫エフェクター細胞を含む、キット。
１４４． ＣＤ１９発現と関連した医学的状態の治療又は検出のための、態様１２７～１３４のいずれか１つに記載のキメラ抗原受容体の使用。
１４５． 腫瘍増殖を阻害する方法であって、腫瘍細胞と、態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤を基とした第一の抗原結合部位及び免疫細胞と結合する第二の抗原結合部位から構成される二重特異性抗体とを接触させる工程を含み、前記接触は腫瘍細胞の殺滅が認められるのに十分な条件及び時間で実行される、前記方法。
１４６． 腫瘍細胞を殺滅する方法であって、腫瘍細胞と、態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤を基とした第一の抗原結合部位及び免疫細胞と結合する第二の抗原結合部位から構成される二重特異性抗体とを接触させる工程を含み、前記接触は腫瘍細胞増殖の阻害が認められるのに十分な条件及び時間で実行される、前記方法。
１４７． 前記免疫細胞がＴ細胞又はＮＫ細胞である、態様１４５又は態様１４６に記載の方法。
１４８． 前記第一及び第二の抗原結合部位がｓｃＦｖである、態様１４５～１４７のいずれか１つに記載の方法。
１４９． 前記第二の抗原結合部位がＴ細胞上のＣＤ３と結合する、態様１４８に記載の方法。
１５０． 腫瘍増殖の阻害において使用するための、態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤を基とした第一の抗原結合部位及び免疫細胞と結合する第二の抗原結合部位から構成される二重特異性抗体。
１５１． 腫瘍細胞の殺滅において使用するための、態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤を基とした第一の抗原結合部位及び免疫細胞と結合する第二の抗原結合部位から構成される二重特異性抗体。
１５２． Ｔ細胞にＣＤ１９を発現する標的細胞の殺滅を指示する方法であって、１又は複数のＣＤ１９発現標的細胞と、態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤の第一の抗原結合部位及びＴ細胞上のＣＤ３と結合する第二の抗原結合部位を含む二重特異性抗体とを接触させる工程を含み、前記接触は前記二重特異性抗体が結合しているＴ細胞がＣＤ１９発現標的細胞の殺滅を媒介するのに十分な条件及び時間で実行される、前記方法。
１５３． 前記第一及び第二の抗原結合部位がｓｃＦｖである、態様１５２に記載の方法。
１５４． Ｔ細胞へのＣＤ１９発現標的細胞の殺滅の指示において使用するための、態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤を基とした第一の抗原結合部位及びＴ細胞上のＣＤ３と結合する第二の抗原結合部位から構成される二重特異性抗体。
１５５． ＣＤ１９と特異的に結合する第一のｓｃＦｖ及びＴ細胞上のＣＤ３と特異的に結合する第二のｓｃＦｖを含む二重特異性抗体であって、前記第一のｓｃＦｖのＮ末端が前記第二のｓｃＦｖのＣ末端に連結されており、且つ、前記第一のｓｃＦｖが配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、配列番号７０及び配列番号７２のいずれか１つを含む、前記二重特異性抗体。
１５６． 前記第一のｓｃＦｖのＮ末端がリンカー配列を介して前記第二のｓｃＦｖのＣ末端に連結されている、態様１５５に記載の二重特異性抗体。
１５７． 前記リンカー配列が（Ｇ_４Ｓ）_ｎリンカーを含む、態様１５６に記載の二重特異性抗体。
１５８． ｎが１、２、３、４又は５と等しい、態様１５７に記載の二重特異性抗体。
１５９． 前記リンカー配列がＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２８９）であるか、又はそれを含む、態様１５６に記載の二重特異性抗体。
１６０． 態様１５５～１５９のいずれか１つに記載の二重特異性抗体を含み、且つ、医薬的に許容される担体又は希釈剤をさらに含む、医薬組成物。
１６１． 治療又は診断で使用するための、態様１５５～１５９のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
１６２． 態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤の抗原結合部位、及び細胞傷害性薬剤又は細胞傷害性部分を含む、抗体－薬物複合体。
１６３． ＣＤ１９関連疾患に罹患した対象、若しくはその素因を有する対象を診断するための、又は前記対象の状態の予後予測を与えるためのキットであって、前記キットは試験対象から得られた試料中に存在するＣＤ１９の濃度を検出するための検出手段を含み、前記検出手段は、各々所望により誘導体化されていてもよい、態様１～９３のいずれか１つに記載のヒト抗体剤の抗原結合部位、態様１１３～１１８及び態様１５５～１５９のいずれか１つに記載の二重特異性結合剤、態様１２７～１３４のいずれか１つに記載のキメラ抗原受容体、又は態様１３８若しくは態様１３９に記載の免疫エフェクター細胞を含み、前記試料中のＣＤ１９の存在によって前記対象がＣＤ１９関連疾患に罹患していることが示される、前記キット。

【0465】

均等物
特許請求の範囲における、「第一の」、「第二の」、「第三の」等の順序を示す語の使用によるクレーム構成要素の修飾は、それ自体は、あるクレーム構成要素の別のクレーム構成要素に対する、いかなる優先（ｐｒｉｏｒｉｔｙ）、優先（ｐｒｅｃｅｄｅｎｃｅ）、若しくは序列（ｏｒｄｅｒ）も、又はある方法の行為が実行される時間的順序も意味しておらず、ある特定の名称を有するあるクレーム構成要素を、同じ名称（順序を示す語の使用は除く）を有する別のクレーム構成要素と区別することで、これらのクレーム構成要素を区別するための、単なる標示として使用されている。

【0466】

本明細書及び特許請求の範囲において使用される、冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、反対の趣旨が示されていない限り、複数の指示対象を包含すると理解されるべきである。ある群の１又は複数の構成要素の間に「又は」を含むクレーム又は記述は、反対の趣旨が示されていない限り、又は文脈から明らかでない限り、前記群の構成要素の１、２以上、又は全てが、所与の製品又は工程に存在していれば、それに使用されていれば、又はそれに関連していれば、満たされているものとする。本発明は、前記群の厳密に１つの構成要素が所与の製品又は工程に存在している、それに使用されている、又はそれに関連している、実施形態を包含する。また本発明は、前記群の２以上又は全ての構成要素が所与の製品又は工程に存在している、それに使用されている、又はそれに関連している、実施形態も包含する。さらに、特に記載がない限り、又は矛盾又は不一致が生じることが当業者に明らかでない限り、本発明には、列挙されたクレームのうちの１又は複数からの１又は複数の限定、構成要素、節、記述用語等が、同じ基本クレームに従属した（又は、関連するあらゆる他のクレームとしての）別のクレームに導入された、全ての変形形態、組み合わせ、及び置き換えが包含されることを理解されたい。構成要素が列挙として（例えば、マーカッシュ群形式又は類似の形式で）示されている場合、その構成要素の各々の部分群も開示されており、任意の要素（複数可）をその群から除去できることを理解されたい。一般に、本発明又は本発明の態様が、特定の構成要素、特徴等を含むものとして言及される場合、本発明又は本発明の態様の特定の実施形態は、係る構成要素、特徴等からなる、又は本質的になることが理解されよう。本明細書では簡素化のために、それらの実施形態は、あらゆる場合において、それほど多くの言葉では、具体的に記載されていない。また、本発明のあらゆる実施形態又は態様は、特定の除外が本明細書に記載されているか否かにかかわらず、特許請求の範囲から明確に除外できることを理解されたい。発明の背景の記述及びその実施に関するさらなる詳細の提供のために本明細書で引用された刊行物、ウェブサイト及び他の参考資料は、参照によって本明細書に援用される。

【0467】

本発明の少なくとも１つの実施形態のいくつかの側面についてこれまで説明したが、様々な変更、修正、及び改善が当業者には容易に明らかになることが理解されよう。そのような変更、修正、及び改善は本開示の一部であることが意図されており、本発明の精神及び範囲に含まれることが意図されている。したがって、上記の説明及び図面は単なる例示であり、本発明は以下の特許請求の範囲によって詳細に記述される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【配列表】

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