特許7293493７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン化合物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-06-09
(45)【発行日】2023-06-19
(54)【発明の名称】７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン化合物
(51)【国際特許分類】
C07D 487/04 20060101AFI20230612BHJP
A61K 31/55 20060101ALI20230612BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20230612BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20230612BHJP
【ＦＩ】
C07D487/04 150
C07D487/04 CSP
A61K31/55
A61P35/00
A61P35/02
【請求項の数】
13
(21)【出願番号】P 2022507313
(86)(22)【出願日】2020-08-03
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2022-10-11
(86)【国際出願番号】 US2020044718
(87)【国際公開番号】W WO2021026059
(87)【国際公開日】2021-02-11
【審査請求日】2022-03-24
(31)【優先権主張番号】19382680.7
(32)【優先日】2019-08-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100139310
【弁理士】
【氏名又は名称】吉光 真紀
(72)【発明者】
【氏名】ルメラス アマダー，ヴェンセスラオ
(72)【発明者】
【氏名】ブランドーバー，バーバラ ジェーン
【審査官】三木 寛
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１７／２０５５３８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１７－５３７１００（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１７－５３０１７６（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１７／２０５５３６（ＷＯ，Ａ２）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ ４８７／０４
Ａ６１Ｋ ３１／５５
Ａ６１Ｐ ３５／００
Ａ６１Ｐ ３５／０２
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の式：【化1】
（式中、Ｒ１が、－ＣＨ３もしくは－ＣＨ２ＣＨ３である）
の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
Ｒ１が、－ＣＨ３である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項3】
Ｒ１が、－ＣＨ２ＣＨ３である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項4】
下記：【化2】
である、請求項２に記載の化合物。
【請求項5】
下記：【化3】
である、請求項３に記載の化合物。
【請求項6】
有効量の請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、がんの治療用医薬。
【請求項7】
前記がんが、扁平上皮がん、膀胱尿路上皮がん、乳がん、結腸がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、上部尿路上皮がん、類内膜がん、子宮内膜がん、ＳＣＬＣ、前立腺がん、リンパ腫、食道がん、肺がん、膀胱がん、扁平上皮組織学、子宮内膜、ＨＰＶ駆動がん、ＡＭＬ－ＥＴＯ転座関連状態、アンドロゲン受容体陽性関連状態、ｍｙｃ過剰発現関連状態、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、ヒトパピローマウイルス駆動がん、および前立腺がんである、請求項６に記載の医薬。
【請求項8】
前記扁平上皮がんが、肛門がん、膀胱がん、子宮頸がん、頭頸部がん、肺がん、および中咽頭がんから選択される、請求項７に記載の医薬。
【請求項9】
請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とともに含む、医薬組成物。
【請求項10】
がんの治療に用いられる、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項11】
前記がんが、扁平上皮がん、膀胱尿路上皮がん、乳がん、結腸がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、上部尿路上皮がん、類内膜がん、子宮内膜がん、ＳＣＬＣ、前立腺がん、リンパ腫、食道がん、肺がん、膀胱がん、扁平上皮組織学、子宮内膜、ＨＰＶ駆動がん、ＡＭＬ－ＥＴＯ転座関連状態、アンドロゲン受容体陽性関連状態、ｍｙｃ過剰発現関連状態、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、ヒトパピローマウイルス駆動がん、および前立腺がんから選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項12】
前記扁平上皮がんが、肛門がん、膀胱がん、子宮頸がん、頭頸部がん、肺がん、および中咽頭がんから選択される、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項13】
がんを治療するための薬剤の製造のための、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００ブロモドメイン二重阻害剤である特定の新規化合物、化合物を含む医薬組成物、化合物を使用して特定のがんを治療する方法、ならびに化合物の合成に有用なプロセスに関する。
【背景技術】
【0002】
本発明は、がんを治療する分野に属する。ＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００は、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）であり、多くの転写因子のコアクチベーターとして機能する。ＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００ブロモドメイン二重阻害剤は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などの血液がん細胞株（例えば、Ｔ．Ｄ．Ｃｒａｗｆｏｒｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌ．５９，ｐａｇｅｓ １０５４９－１０５６３（２０１６）を参照されたい）、および多発性骨髄腫細胞株（例えば、Ａ．Ｒ．Ｃｏｎｅｒｙ，ｅＬＩＦＥ ２０１６；５：ｅ１０４８３を参照されたい）において抗増殖応答を媒介することが報告されている。がんの治療には引き続き満たされていないニーズがあり、新しい治療オプションが望まれている。
【0003】
ＷＯ２０１７／２０５５３８Ａ１は、ＣＢＰおよび／またはＥＰ３００の阻害剤であり、がん、炎症性障害、および自己免疫疾患などの様々なＣＢＰおよび／またはＥＰ３００媒介性障害の治療に有用である特定のピラゾロピリジン誘導体を開示する。ＵＳ２０１７／０３３３４０６Ａ１は、ＣＢＰおよび／またはＥＰ３００媒介性障害の治療に有用なＣＢＰおよび／またはＥＰ３００の阻害剤である特定のピラゾロピリジン誘導体を開示する。
【発明の概要】
【0004】
追加のＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００ブロモドメイン二重阻害剤化合物が望まれている。本発明は、ＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００ブロモドメインのうちの少なくとも１つを阻害し、好ましくは、ＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００ブロモドメインの二重阻害剤である特定の化合物を提供する。加えて、本発明は、ブロモドメイン含有タンパク質４（「ＢＲＤ４」）よりもＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００ブロモドメインの選択的二重阻害剤である化合物を提供する。
【0005】
本発明はさらに、扁平上皮がん、膀胱尿路上皮がん、乳がん、結腸がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、上部尿路上皮がん、類内膜がん、子宮内膜がん、ＳＣＬＣ、前立腺がん、およびリンパ腫などのがんを治療するために有用な化合物を提供する。
【0006】
加えて、本発明の化合物は、食道がん、肺がん、ＳＣＬＣ、リンパ腫、膀胱がん、扁平上皮組織学、肛門がん、子宮頸がん、頭頸部がん、肺がん、および中咽頭がんを含む扁平上皮がん、類内膜がん、ならびにＨＰＶ駆動がんなどのＣＲＥＢＢＰおよび／またはＥＰ３００の変異を有する腫瘍を治療するために有用であり得る。本明細書に開示される化合物はまた、ＡＭＬ－ＥＴＯ転座関連状態、アンドロゲン受容体陽性関連状態、ｍｙｃ過剰発現関連状態、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ－ＥＴＯ融合を含む）、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、および前立腺がんを治療するために有用であり得る。扁平上皮がんは、肛門がん、膀胱がん、子宮頸がん、頭頸部がん、肺がん、および中咽頭がんを含む。
【0007】
したがって、本発明は、式Ｉ：
（式中、Ｒ１が、－ＣＨ３もしくは－ＣＨ２ＣＨ３である）、
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【化1】
（式中、Ｒ１が、－ＣＨ３もしくは－ＣＨ２ＣＨ３である）、
の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0008】
本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法も提供する。治療することができるがんは、これらに限定されないが、扁平上皮がん、膀胱尿路上皮がん、乳がん、結腸がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、上部尿路上皮がん、類内膜がん、子宮内膜がん、ＳＣＬＣ、前立腺がん、リンパ腫、食道がん、肺がん、膀胱がん、扁平上皮組織学、子宮内膜、ＨＰＶ駆動がん、ＡＭＬ－ＥＴＯ転座関連状態、アンドロゲン受容体陽性関連状態、ｍｙｃ過剰発現関連状態、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、ヒトパピローマウイルス駆動がん、および前立腺がんを含む。
【0009】
本発明は、患者における小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。本発明は、患者におけるリンパ腫を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法も提供する。本発明は、患者における扁平上皮がんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法も提供する（Ｖｅｔｔｏｒｅ，ＡＬ．，Ｒａｍｎａｒａｙａｎａｎ，Ｋ．，Ｐｏｏｒｅ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ ｌａｎｄｓｃａｐｅｓ ｏｆ ｔｏｎｇｕｅ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｒｅｖｅａｌ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｒｅｌｅｖａｎｃｅ．Ｇｅｎｏｍｅ Ｍｅｄ．７（１）９８（２０１５）（口腔舌扁平上皮がんにおけるＣＲＥＢＢＰ遺伝子改変を記載する）を参照されたく、Ｍａｒｔｉｎ Ｄ，Ａｂｂａ ＭＣ，Ｍｏｌｉｎｏｌｏ ＡＡ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｏｎｃｏｇｅｎｏｍｅ：ａ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．５（１９）：８９０６－８９２３．（２０１４）（頭頸部扁平上皮がんにおけるＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００遺伝子改変を記載する）も参照されたい）。本発明は、患者におけるヒトパピローマウイルス駆動がんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法も提供する。
【0010】
患者におけるＣＲＥＢＢＰおよび／またはＥＰ３００の変異を有する腫瘍を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法も開示される。患者における膀胱尿路上皮がんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される（Ｇｕｉ，Ｙ．，Ｇｕｏ，Ｇ．，Ｈｕａｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｅｑｕｅｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｂｌａｄｄｅｒ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ４３（９），８７５－８（２０１１）（膀胱がん患者におけるＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００遺伝子異常を記載する）を参照されたい）。さらに、患者における乳がんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される。患者における結腸がんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される（Ｂｒｙａｎ，ＥＪ．，Ｊｏｋｕｂａｉｔｉｓ，ＶＪ．，Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ，ＮＬ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＥＰ３００ ｉｎ ｃｏｌｏｎ，ｂｒｅａｓｔ ａｎｄ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．１０２（２）：１３７－１４１（２００２）（ヒト結腸がん、乳がん、および卵巣がんにおけるＥＰ３００遺伝子変異を記載する）を参照されたい）。さらに、患者におけるびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法がさらに開示される（Ｍｏｒｉｎ，ＲＤ．，Ｍｅｎｄｅｚ－Ｌａｇｏ，Ｍ．，Ｍｕｎｇａｌｌ，ＡＪ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｅｑｕｅｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｓｔｏｎｅ－ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｎｏｎ－Ｈｏｄｇｋｉｎ ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｎａｔｕｒｅ．４７６（７３６０）２９８－３０３（非ホジキンリンパ腫におけるＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００遺伝子変異を記載する）を参照されたい）。患者における濾胞性リンパ腫を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される（Ｏｋｏｓｕｎ Ｊ，Ｂｏｄｏｒ Ｃ，Ｗａｎｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｇｅｎｏｍｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｄｒｉｖｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ４６（２）１７６－１８１（２０１４）（濾胞性リンパ腫におけるＣＲＥＢＢＰ遺伝子変異を記載する）を参照されたい）。患者における辺縁帯リンパ腫を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される（Ｊｕｎｇ，Ｈ．，Ｙｏｏ，ＨＹ．，Ｌｅｅ，ＳＨ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ ｌａｎｄｓｃａｐｅ ｏｆ ｏｃｕｌａｒ ｍａｒｇｉｎａｌ ｚｏｎｅ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｆｒｅｑｕｅｎｔ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ＴＮＦＡＩＰ３ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ＴＢＬ１ＸＲ１ ａｎｄ ＣＲＥＢＢＰ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ８（１０）１７０３８－１７０４９（２０１７）（眼辺縁帯リンパ腫におけるＣＲＥＢＢＰ遺伝子変異を記載する）を参照されたい）。患者における上部尿路上皮がんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される（Ｇｒｉｖａｓ，Ｐ．，Ｍｏｒｔａｚａｖｉ，Ａ．，Ｐｉｃｕｓ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｍｏｃｅｔｉｎｏｓｔａｔ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ ｔｒｅａｔｅｄ，ｌｏｃａｌｌｙ ａｄｖａｎｃｅｄ／ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｇｅｎｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ．１２５（４）５３３－５４０．（２０１９）（進行／転移性尿路上皮がんにおけるＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００遺伝子変異を記載する）を参照されたい）。患者における類内膜がんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される。患者における子宮内膜がんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される。患者におけるＳＣＬＣを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される。患者における前立腺がんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される（Ｌｉｕ，Ｊ．，Ｈｅ，Ｄ．，Ｃｈｅｎｇ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．ｐ３００／ＣＢＰ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ １ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ３９，３９３９－３９５１（２０２０）（前立腺がんの治療におけるＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００阻害剤の効果を記載する）を参照されたい）。
【0011】
患者における食道がん、肺がん、ＳＣＬＣ、リンパ腫、膀胱がん、および扁平上皮組織学などのＣＲＥＢＢＰおよび／またはＥＰ３００の変異を有する腫瘍を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法も開示される。患者における扁平上皮がんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される（Ｍｏｒｒｉｓ，Ｖ．，Ｒａｏ，Ｘ．，Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｏｆ Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｓｑｕａｍｏｕｓ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎａｌ Ｃａｎａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １５（１１），１５４２－１５５０（２０１７）（肛門管の扁平上皮がんにおけるＥＰ３００遺伝子変異を記載する）、Ｖｅｔｔｏｒｅ，ＡＬ．，Ｒａｍｎａｒａｙａｎａｎ，Ｋ．，Ｐｏｏｒｅ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ ｌａｎｄｓｃａｐｅｓ ｏｆ ｔｏｎｇｕｅ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｒｅｖｅａｌ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｒｅｌｅｖａｎｃｅ．Ｇｅｎｏｍｅ Ｍｅｄ．７（１）９８（２０１５）（口腔舌のがん腫におけるＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００遺伝子変異を記載する）、およびＭａｒｔｉｎ Ｄ，Ａｂｂａ ＭＣ，Ｍｏｌｉｎｏｌｏ ＡＡ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｏｎｃｏｇｅｎｏｍｅ：ａ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．５（１９）：８９０６－８９２３．（２０１４）（頭頸部扁平上皮がんにおけるＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００遺伝子変異を記載する）を参照されたい）。患者における子宮内膜を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法がさらに開示される。患者におけるＨＰＶ駆動がんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される。患者におけるＡＭＬ－ＥＴＯ転座関連状態を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される（Ｚｈａｎｇ，Ｊ．，Ｋａｌｋｕｍ，Ｍ．，Ｙａｍａｍｕｒａ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｂｙ ｔｈｅ ｌｅｕｋｅｍｏｇｅｎｉｃ ＡＭＬ１－ＥＴＯ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．３０５（５６８８）１２８６－１２８９（２００４）（急性骨髄性白血病症例におけるＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００遺伝子変異を記載する）を参照されたい）。患者におけるアンドロゲン受容体陽性関連状態を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される（Ｇａｒｃｉａ－Ｃａｒｐｉｚｏ，Ｖ．，Ｒｕｉｚ－Ｌｌｏｒｅｎｔｅ，Ｓ．，Ｓａｒｍｅｎｔｅｒｏ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．ＣＲＥＢＢＰ／ＥＰ３００ Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ Ａｆｆｅｃｔｓ ｔｈｅ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＲ－Ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １７（３），７２０－７３０（２０１９）（アンドロゲン受容体陽性乳がん細胞株におけるＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００阻害剤の効果を記載する）を参照されたく、Ａａｒｎｉｓａｌｏ，Ｐ．，Ｐａｌｖｉｍｏ，ＪＪ．＆Ｊａｎｎｅ，ＯＡ．ｅｔ ａｌ．ＣＲＥＢ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ａｎｄｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．ＰＮＡＳ ９５（５），２１２２－２１２７（１９９８）（アンドロゲン依存性シグナル伝達経路におけるＣＲＥＢＢＰの存在を記載する）も参照されたい）。患者におけるｍｙｃ過剰発現関連状態を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される。
【0012】
患者におけるＡＭＬ－ＥＴＯ融合を含む、急性骨髄性白血病を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される（Ｂｒｏｏｋｓ ｅｔ ａｌ，ＣＣＳ１４７７：Ａ Ｎｏｖｅｌ Ｓｍａｌｌ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｐ３００／ＣＢＰ Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋａｅｍｉａ ａｎｄ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ（２０１９）１３４（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ＿１）：２５６０を参照されたい）（ＡＭＬ治療におけるＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００阻害剤の効果を記載する）。患者における急性リンパ芽球性白血病を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される（Ｑｉａｎ，Ｍ．，Ｚｈａｎｇ，Ｈ．，Ｋｈａｍ，ＳＫ．ｅｔ ａｌ．Ｗｈｏｌｅ－ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｓｕｂｔｙｐｅ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｗｉｔｈ ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ ｇｅｎｏｍｉｃ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ｏｆ ＥＰ３００ ａｎｄ ＣＲＥＢＢＰ．Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１７）２７ １８５－１９５を参照されたい）（急性リンパ芽球性白血病症例におけるＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００遺伝子変異を記載する）。患者における多発性骨髄腫を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法も開示される（Ｂｒｏｏｋｓ ｅｔ ａｌ，ＣＣＳ１４７７：Ａ Ｎｏｖｅｌ Ｓｍａｌｌ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｐ３００／ＣＢＰ Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｃｕｔｅ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｌｅｕｋａｅｍｉａ ａｎｄ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ（２０１９）１３４（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ＿１）：２５６０を参照されたい）。患者における前立腺がんを治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法が開示される（Ｌｉｕ，Ｊ．，Ｈｅ，Ｄ．，Ｃｈｅｎｇ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．ｐ３００／ＣＢＰ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ－ｌｉｇａｎｄ １ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ３９，３９３９－３９５１（２０２０）（前立腺がん治療におけるＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００阻害剤の効果を記載する）を参照されたい）。
【0013】
さらに、本発明は、療法における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。本発明は、がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。治療することができるがんは、扁平上皮がん、膀胱尿路上皮がん、乳がん、結腸がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、上部尿路上皮がん、類内膜がん、子宮内膜がん、ＳＣＬＣ、前立腺がん、リンパ腫、食道がん、肺がん、膀胱がん、扁平上皮組織学、子宮内膜、ＨＰＶ駆動がん、ＡＭＬ－ＥＴＯ転座関連状態、アンドロゲン受容体陽性関連状態、ｍｙｃ過剰発現関連状態、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、ヒトパピローマウイルス駆動がん、および前立腺がんを含む。
【0014】
本発明は、小細胞肺がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。加えて、本発明は、リンパ腫の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。加えて、本発明は、扁平上皮がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。加えて、本発明は、ヒトパピローマウイルス駆動がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0015】
本発明は、扁平上皮がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、膀胱尿路上皮がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、乳がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、結腸がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、濾胞性リンパ腫の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、辺縁帯リンパ腫の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、上部尿路上皮がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、類内膜がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、子宮内膜がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、ＳＣＬＣの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、前立腺がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、リンパ腫の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。
【0016】
加えて、本発明は、ＣＲＥＢＢＰおよび／またはＥＰ３００の変異を有する腫瘍の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、食道がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、肺がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、ＳＣＬＣの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、リンパ腫の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、膀胱がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、扁平上皮組織学の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、扁平上皮がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、子宮内膜駆動がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、ＨＰＶ駆動がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、ＡＭＬ－ＥＴＯ転座関連状態の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、アンドロゲン受容体陽性関連状態の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、ｍｙｃ過剰発現関連状態の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ－ＥＴＯ融合を含む）の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、急性リンパ芽球性白血病の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、多発性骨髄腫の治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。本発明は、前立腺がんの治療における使用のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩も提供する。
【0017】
本発明は、がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。治療することができるがんは、扁平上皮がん、膀胱尿路上皮がん、乳がん、結腸がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、上部尿路上皮がん、類内膜がん、子宮内膜がん、ＳＣＬＣ、前立腺がん、リンパ腫、食道がん、肺がん、膀胱がん、扁平上皮組織学、子宮内膜、ＨＰＶ駆動がん、ＡＭＬ－ＥＴＯ転座関連状態、アンドロゲン受容体陽性関連状態、ｍｙｃ過剰発現関連状態、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、ヒトパピローマウイルス駆動がん、および前立腺がんを含む。
【0018】
加えて、本発明は、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。本発明は、リンパ腫を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、扁平上皮がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、ヒトパピローマウイルス駆動がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。
【0019】
本発明は、扁平上皮がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、膀胱尿路上皮がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、乳がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、結腸がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、濾胞性リンパ腫を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、辺縁帯リンパ腫を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、上部尿路上皮がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、類内膜がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、子宮内膜がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、ＳＣＬＣを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、前立腺がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、リンパ腫を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。
【0020】
本発明は、ＣＲＥＢＢＰおよび／またはＥＰ３００の変異を有する腫瘍を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、食道がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、肺がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、ＳＣＬＣを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、リンパ腫を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、膀胱がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、扁平上皮組織学を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、肛門がん、子宮頸がん、頭頸部がん、肺がん、および中咽頭がんを含む、扁平上皮がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、子宮内膜駆動がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、ＨＰＶ駆動がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、ＡＭＬ－ＥＴＯ転座関連状態を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、アンドロゲン受容体陽性関連状態を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、ｍｙｃ過剰発現関連状態を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ－ＥＴＯ融合を含む）を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、急性リンパ芽球性白血病を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、多発性骨髄腫を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。本発明は、前立腺がんを治療するための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用も提供する。
【0021】
本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とともに含む、医薬組成物をさらに提供する。本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合することを含む、医薬組成物を調製するためのプロセスをさらに提供する。本発明は、式Ｉの化合物の合成のための新規の中間体およびプロセスも包含する。
【0022】
本明細書で使用される場合、「処置すること」、「処置」、または「処置する」という用語は、既存の症状または障害の進行または重症度を抑制すること、遅延させること、阻止すること、または改善することを含む。
【0023】
本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、哺乳類、特にヒトを指す。
【0024】
本明細書で使用する場合、「有効量」という用語は、患者への単回または複数回投与の際に、診断中または治療中の患者に所望の効果を提供する、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の量または用量を示す。
【0025】
有効量は、既知技法の使用によって、かつ同様の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者により容易に決定され得る。患者のための有効量を決定する際には、患者の人種、そのサイズ、年齢、および全体的な健康状態、関与する特定の疾患または障害、疾患または障害の程度または関与または重症度、個々の患者の反応、投与される特定の化合物、投与の法式、投与される製剤の生物学的利用能特性、選択された投与レジメン、付随する薬物の使用、ならびに他の関連する状況を含むが、これらに限定されない、多数の要因が担当診断医によって考慮される。
【0026】
本発明の化合物は、本化合物を生物学的に利用可能にする任意の経路によって投与される医薬組成物として製剤化される。より好ましくは、かかる組成物は、経口投与用である。かかる医薬組成物およびそれを調製するためのプロセスは、当該技術分野で周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌ．Ｖ．Ａｌｌｅｎ，Ｅｄｉｔｏｒ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１２を参照されたい）。
【0027】
以下の調製に記載されるある特定の中間体は、１つ以上の窒素保護基を含んでもよい。本明細書で使用される場合、「ＰＧ」は、好適な保護基を指す。保護基は、特定の反応条件および実施される特定の変換に応じて、当業者によって認識されるように変化し得ることが理解される。保護および脱保護の条件は、当業者に周知であり、文献に記載されている（例えば、“Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｂｙ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．２００７を参照されたい）。
【0028】
一態様では、本明細書に記載される化合物および／または塩は、結晶性である。一実施形態では、本明細書に開示される化合物は、遊離アミンである。さらなる態様では、遊離アミンは、結晶性である。あるいは、遊離アミンは、以下に開示されるように、薬学的に許容される塩に変換され得る。
【0029】
一態様では、本明細書に記載される化合物および／または塩は、１つ以上の他の薬剤と組み合わせて投与される。本明細書に記載される化合物および／または塩、ならびに１つ以上の他の薬剤は、同時に、または互いに１時間程度以内に投与され得る。本明細書に記載される化合物および／または塩と組み合わせるための他の薬剤の非限定的な例には、他の抗がん薬、ステロイド、および抗炎症剤が含まれる。他の抗がん薬の非限定的な例には、ダロルタミド、エンザルタミド、アベマシクリブ、アルペリシブ、およびＢＲＤ４阻害剤が含まれる。ＢＲＤ４阻害剤の非限定的な例には、ＣＰＩ－０６１０、ＰＬＸ５１１０７、ＧＳＫ２８２０１５１（Ｉ－ＢＥＴ１５１）、ＯＴＸ０１５（ＭＫ－８６２８）、ＡＢＢＶ－０７５、ＦＴ－１１０１、ＧＳＫ５２５７６２（Ｉ－ＢＥＴ７６２）、ＺＥＮ００３６９４、およびＡＢＢＶ－７４４が含まれる。一実施形態では、本明細書に記載される化合物および／または塩、ならびに１つ以上の他の薬剤は、単一の剤形として製剤化される。他の実施形態では、それらは、別個に製剤化される。
【0030】
本発明の化合物の薬学的に許容される塩を、例えば、当該技術分野で周知の標準的な条件下で、ジエチルエーテルなどの好適な溶媒中で、本発明の化合物の適切な遊離塩基の、適切な薬学的に許容される酸の反応によって形成することができる。加えて、かかる薬学的に許容される塩の形成は、窒素保護基の脱保護と同時に起こり得る。例えば、Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，“Ｓａｌｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂａｓｉｃ ｄｒｕｇｓ，”Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３：２０１－２１７（１９８６）、Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．“Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｎｅｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｔｉｔｉｅｓ，”Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４：４２７－４３５（２０００）、およびＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１－１９，（１９７７）を参照されたい。
【0031】
特定の略語は、次のように定義される：「ＡＣＮ」は、アセトニトリルを指し、「ＡＲ」は、アンドロゲン受容体を指し、「ａｑ」は、水性を指し、「ビス（ピナコラート）ジボロン」は、ビス（ピナコラート）ジボランまたは４，４，５，５－テトラメチル－２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１，３，２－ジオキサボロランを指し、「ｃＡＭＰ」は、環状アデノシン一リン酸塩を指し、「ｃａｔａＣＸｉｕｍ（登録商標）Ａ Ｐｄ Ｇ３」は、メシラート［（ジ（１－アダマンチル）－ｎ－ブチルホスフィン）－２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）または［（ジ（１－アダマンチル）－ブチルホスフィン）－２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）メタンスルホネートを指し、「ＣＢＰ」、「ＣＲＥＢ結合タンパク質」、および「ＣＲＥＢＢＰ」は、互換的に使用することができ、ｃＡＭＰ応答エレメント結合タンパク質－結合タンパク質を指し、「ＣＤＩ」は、１，１’－カルボニルジイミダゾールを指し、「ＣＰＭＥ」は、シクロペンチルメチルエーテルを指し、「ＤＣＣ」は、１，３－ジシクロヘキシルカルボジイミドを指し、「ＤＣＭ」は、ジクロロメタンまたは塩化メチレンを指し、「ＤＩＣ」は、１，３－ジイソプロピルカルボジイミドを指し、「ＤＩＰＥＡ」は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンまたはＮ－エチル－Ｎ－イソプロピル－プロパン－２－アミンを指し、「ＤＭＡＰ」は、４－ジメチルアミノピリジンを指し、「ＤＭＦ」は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを指し、「ＤＭＥＭ」は、ダルベッコ改良イーグル培地を指し、「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシドを指し、「ＤＮＡ」は、デオキシリボ核酸を指し、「ＥＤＣＩ」は、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩を指し、「ＥｔＯＡｃ」は、酢酸エチルを指し、「ＥｔＯＨ」は、エチルアルコールまたはエタノールを指し、「ＦＢＳ」は、ウシ胎児血清を指し、「ＨＡＴＵ」は、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＨＢＴＵ」は、３－［ビス（ジメチルアミノ）メチリウムイル］－３Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－オキシドヘキサフルオロホスフェートを指し、「ＨＥＫ」は、ヒト胎児腎臓を指し、「ＨＯＡｔ」は、１－ヒドロキシ－７－アゾベンゾトリアゾールを指し、「ＨＯＢｔ」は、１－ヒドロキシルベンゾトリアゾール水和物を指し、「ＨＰＬＣ」は、高速液体クロマトグラフィーを指し、「ｉＰｒＯＨ」は、イソプロパノールまたはイソプロピルアルコールを指し、「ＫＯＡｃ」は、酢酸カリウムを指し、「ＭＥＭ」は、最小必須培地を指し、「ＭｅＯＨ」は、メタノールまたはメチルアルコールを指し、「ＭＴＢＥ」は、メチルｔ－ブチルエーテルを指し、「ＯＮｆ」は、ノナフラートまたはＣＦ３（ＣＦ２）３ＳＯ３－を指し、「ＰＢＳ」は、リン酸緩衝生理食塩水を指し、「Ｐｄ２（ｄｂａ）３」は、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）を指し、「Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２」は、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）を指し、「Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２
．ＤＣＭ」は、［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム錯体ジクロロメタンを指し、「パールマン触媒」は、炭素上の水酸化パラジウムまたはＰｄ（ＯＨ）２／Ｃを指し、「ｐｓｉ」は、１平方インチあたりのポンドを指し、「ＰｙＢＯＰ」は、（ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）を指し、「ＰｙＢｒＯＰ」は、ブロモ（トリピロリジニル）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートを指し、「ｒｐｍ」は、１分あたりの回転を指し、「ＲＴ」は、室温を指し、「ＳＣＸ」は、強陽イオン交換クロマトグラフィーを指し、「Ｔ３Ｐ」は、２，４，６－トリ－ｎ－プロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスホリナン－２，４，６－トリオキシドまたはｎ－プロピルホスホン酸無水物を指し、「ＴＦＡ」は、トリフルオロ酢酸を指し、「ＴＨＦ」は、テトラヒドロフランを指し、「キサントホス」は、４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテンを指し、「キサントホス－Ｐｄ－Ｇ２」は、クロロ［（４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン）－２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）を指し、「ＸＰｈｏｓ」は、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピルビフェニルを指し、「ＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２」は、クロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピル－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）を指す。
【0032】
本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は、当業者に既知の様々な手順によって調製されてもよく、そのうちのいくつかが、以下のスキーム、調製、および実施例に示される。以下のスキームにおける各ステップの生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、および結晶化を含む、当該技術分野で周知の従来の方法によって回収することができる。以下のスキームにおいて、すべての置換基は、別途指示のない限り、すでに定義したとおりである。試薬および出発材料は、当業者にとって容易に入手可能である。本発明の範囲を限定することなく、以下のスキーム、調製、および実施例は、本発明をさらに説明するために提供される。
【化2】
【0033】
スキーム１は、ピラゾロ［４，３，－ｃ］アゼピン－６－オン、化合物（６）の形成を示す。スキーム１、ステップＡ１では、置換５－クロロ４－カルバルデヒドピラゾール（１）を、１，４－ジオキサンおよび水などの溶媒、ならびにＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２などの触媒中の炭酸セシウムなどの塩基を使用して、鈴木パラジウムカップリング条件下でカリウム－トリフルオロホウ素プロピルｔ－ブトキシ基とカップリングし、約１１０℃に加熱して、化合物（２ａ）を得る。パラジウムクロスカップリング反応は、当該技術分野で周知であり、当業者は、そのようなクロスカップリング反応を促進するために有用な様々な条件があることを認識するであろう。好適なパラジウム触媒には、ＸａｎｔＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２、ｃａｔａＣＸｉｕｍ（登録商標）Ａ Ｐｄ Ｇ３、塩化ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２、Ｐｄ２ｄｂａ３、パラジウムテトラキストリフェニルホスフィン、および酢酸パラジウム（ＩＩ）が含まれる。必要に応じて好適なリガンドには、トリシクロヘキシルホスフィンおよびトリフェニルホスフィンが含まれ得る。好適な塩基には、フッ化カリウム、炭酸セシウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、ナトリウムｔ－ブトキシド、およびリン酸カリウム三塩基性一水和物が含まれる。
【0034】
スキーム１、ステップＢ１では、化合物（２ａ）は、還元的アミノ化を受けて、メチルアミノ化合物（３）を提供することができる。還元的アミノ化は、ＤＣＭ中の化合物（２ａ）の溶液、または触媒量の酢酸などの酸を有するＭｅＯＨ溶液にメチルアミンを添加し、約１時間などの好適な時間にわたって撹拌するなどの、当該技術分野で周知の条件を使用して達成することができる。次いで、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムなどの好適な還元剤を加える。メチルアミノ化合物（３）を提供するために、ＮａＢＨ４またはＬｉＢＨ４などの当該技術分野で既知の他の還元剤を利用することができる。
【0035】
スキーム１、ステップＣでは、メチルアミノ化合物（３）は、室温でＴＦＡまたは塩酸を使用してカルボン酸（４）を提供するなどの、当該技術分野で周知の酸性条件下で脱保護することができる。「ＰＧ」は、カルボン酸のために開発された保護基である。そのような保護基は、当該技術分野において周知であり、認識されている。次いで、カルボン酸（４）をアミドカップリング試薬で環化して、化合物（５）を得ることができる。内部アミド環化は、ＤＭＦなどの極性非プロトン性溶媒中、室温、ＤＩＰＥＡなどの塩基およびＴ３Ｐなどのカップリング試薬で達成することができる。当業者は、カルボン酸とアミンとの反応から生じるアミド形成のためのいくつかの方法および試薬があることを認識するであろう。例えば、ＤＩＰＥＡまたはトリエチルアミンなどの有機塩基を含むか、または含まないカップリング試薬の存在下での、アミンと適切なカルボン酸との反応は、化合物（５）を提供することができる。カップリング試薬としては、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＣＩ、またはＣＤＩなどのカルボニルジイミダゾールなどのカルボジイミドが挙げられる。ＨＯＢｔおよびＨＯＡｔなどのアミドカップリング添加剤をまた使用して、反応を増強することができる。加えて、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＰｙＢＯＰ、およびＰｙＢｒＯＰなどの非求核性陰イオンのウロニウムまたはホスホニウム塩を、より伝統的なカップリング試薬の代わりに使用することができる。ＤＭＡＰなどの添加剤を使用して反応を増強し得る。あるいは、ＥｔＯＨ中の化合物３の粗溶液を、連続反応系で２，２，２－トリフルオロエタノールで処理して、インサイチュで脱保護および環化することができ、濃縮時に化合物（５）が得られる。
【0036】
次いで、化合物（５）を、ＥｔＯＨなどの溶媒中のヨウ素および硫酸銀を使用してピラゾール上でヨウ素化して、化合物（６）を提供することができる。当業者は、好適な対応するハロゲン化化合物（６）を提供するために、ヨウ素の代わりに臭素および塩素などの他のハロゲンが置換され得、すなわち、ヨウ素は、臭素または塩素でもあり得、以下のスキーム２における使用のために好適な中間体を提供することを認識するであろう。
【0037】
スキーム１における代替反応ステップ後、ステップＡ２では、化合物（１）をヘック反応条件下でアクリル酸ｔｅｒｔ－ブチルで処理して、１，４－ジオキサンなどの溶媒およびクロロ［（トリ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィン）－２－（２－アミノビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）］などの好適なパラジウム触媒中のＮ，Ｎ－ジシクロヘキシルメチルアミンなどの塩基を使用して化合物（２ｂ）の置換アルケンを形成することができる。ヘック反応で使用される典型的な触媒は、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、塩化パラジウム、および酢酸パラジウム（ＩＩ）である。典型的なリガンドは、トリフェニルホスフィン、トリ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィン、キサントホス、ＸＰｈｏｓ、およびビス（ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－ホスフィノ）フェロセンである。
【0038】
スキーム１、ステップＢ２では、化合物（２ｂ）を全体的な２ステップの反応において化合物（３）に変換することができる。メチルアミンをＥｔＯＨなどの溶媒中の化合物（２ｂ）に添加し、約９０分間撹拌して、イミンの形成をもたらすことができる。次いで、アルケンおよびイミンは、パールマン触媒などの好適な触媒を使用して水素化条件下で還元し、水素化して化合物（３）を提供することができる。
【化3】
【0039】
スキーム２、ステップＡでは、化合物（９）は、スキーム１、ステップＡ１における化合物２ａについて記載される条件に類似した鈴木クロスカップリング条件下で、化合物（８）と３－ブロモ－８－クロロ－イソキノリン、化合物（７）（Ｘ＝Ｂｒ、ＯＮｆ）とのボロン酸エステルカップリングから調製することができる。例えば、化合物（７）は、化合物（８）と組み合わされ、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２ ＤＣＭなどの触媒を使用して、窒素条件下で、１，４－ジオキサンおよび水などの溶媒中の炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウムなどの塩基で処理し、約８０～９５℃に加熱して、化合物（９）を提供する。あるいは、化合物８は、６０～９５℃でＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２を使用してＣＰＭＥ中の５－ブロモ－Ｎ－メチルピリジン－２－カルボキサミド、ビス（ピナコラート）ジボロン、およびＫＯＡｃからインサイチュで生成することができる。約４～８時間の適切な反応時間後、混合物を冷却し、化合物（９）を、溶媒をＣＰＭＥとして維持し、触媒としてＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２を使用して上記のように調製する。スキーム２、ステップＢでは、化合物（９）の塩化物を、宮浦ホウ素化条件下、ビス（ピナコラート）ジボロン（Ｒ＝ＣＨ３の場合）またはテトラヒドロキシジボロン（Ｒ＝Ｈの場合）を使用して置換して、化合物（１０）を得ることができる。例えば、ＫＯＡｃを塩基として使用することができ、ＸＰｈｏｓをリガンドとして使用することができ、ＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２を１，４－ジオキサン（Ｒ＝ＣＨ３の場合）ならびにエチレングリコールおよびＭｅＯＨ（Ｒ＝Ｈの場合）などの溶媒中の触媒として使用することができる。次いで、反応混合物を約４０℃（Ｒ＝Ｈの場合）および約９０℃（Ｒ＝ＣＨ３の場合）に加熱して、化合物（１０）を提供する。使用され得る他の触媒は、酢酸パラジウム（ＩＩ）またはＰｄ２（ｄｂａ）３であり、他の溶媒は、トルエンまたは２－メチル－２－ブタノールであり得る。
【0040】
スキーム２、ステップＣでは、化合物（１０）は次いで、スキーム１、ステップＡ１に記載される標準的なパラジウムクロスカップリング条件下で化合物（６）とカップリングすることができる。例えば、１，４－ジオキサンまたはＥｔＯＨなどの好適な溶媒、リン酸カリウムなどの好適な塩基、およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２ ＤＣＭまたはＰｄ２ｄｂａ３などの適切な触媒、必要に応じてトリシクロヘキシルホスフィンをリガンドとして使用し、約５０～９５℃に加熱することは、式Ｉの化合物を提供する。
【0041】
以下の調製および実施例は、本発明をさらに例示する。
【0042】
調製１
ｔｅｒｔ－ブチル３－（４－ホルミル－２－メチル－ピラゾール－３－イル）プロパノエート
スキーム１、ステップＡ１：１，４－ジオキサン（２９８ｍＬ）中の５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルバルデヒド（１７．８ｇ、１１９ｍｍｏｌ）およびカリウム（３－ｔｅｒｔ－ブトキシ－３－オキソ－プロピル）－トリフルオロ－ボラヌイド（３８．０ｇ、１６１ｍｍｏｌ）の懸濁液を水（６０ｍＬ）中の炭酸セシウム（１１７ｇ、３５８ｍｍｏｌ）の溶液で処理し、窒素で５分間パージする。ＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２（９．４ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を再度１０分間パージし、１１０℃で窒素下２０時間加熱する。冷却された反応混合物を珪藻土のパッドに通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（９００ｍＬ）、ＤＣＭ（２００ｍＬ）で洗浄し、真空濃縮する。得られる油をＥｔＯＡｃ（１．２Ｌ）に溶解し、１Ｍ水性ＮａＯＨ（３×２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させる。粗材料を、ＥｔＯＡｃに対して０～５０％ヘキサンの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（１５．７ｇ、５３％）を淡黄色の油として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２３９（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ９．８０（ｓ、１Ｈ）、７．９１（ｓ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．１３（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５８（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．３６（ｓ、９Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル３－（４－ホルミル－２－メチル－ピラゾール－３－イル）プロパノエート
【化4】
スキーム１、ステップＡ１：１，４－ジオキサン（２９８ｍＬ）中の５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルバルデヒド（１７．８ｇ、１１９ｍｍｏｌ）およびカリウム（３－ｔｅｒｔ－ブトキシ－３－オキソ－プロピル）－トリフルオロ－ボラヌイド（３８．０ｇ、１６１ｍｍｏｌ）の懸濁液を水（６０ｍＬ）中の炭酸セシウム（１１７ｇ、３５８ｍｍｏｌ）の溶液で処理し、窒素で５分間パージする。ＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２（９．４ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を再度１０分間パージし、１１０℃で窒素下２０時間加熱する。冷却された反応混合物を珪藻土のパッドに通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（９００ｍＬ）、ＤＣＭ（２００ｍＬ）で洗浄し、真空濃縮する。得られる油をＥｔＯＡｃ（１．２Ｌ）に溶解し、１Ｍ水性ＮａＯＨ（３×２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させる。粗材料を、ＥｔＯＡｃに対して０～５０％ヘキサンの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（１５．７ｇ、５３％）を淡黄色の油として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２３９（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ９．８０（ｓ、１Ｈ）、７．９１（ｓ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．１３（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５８（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．３６（ｓ、９Ｈ）。
【0043】
調製２
ｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－３－（４－ホルミル－２－メチル－ピラゾール－３－イル）プロパ－２－エノエート
スキーム１、ステップＡ２：５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルバルデヒド（５０．０ｇ、３２９ｍｍｏｌ）、アクリル酸ｔｅｒｔ－ブチル（７０ｍＬ、４６８ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジシクロヘキシルメチルアミン（１４０ｍＬ、６５０ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（４００ｍＬ）に溶解する。混合物を窒素で１５分間パージし、次いでクロロ［（トリ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィン）－２－（２－アミノビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）］（３．４６ｇ、６．６２ｍｍｏｌ）を加え、窒素で再度パージし、反応混合物を８５℃（内部温度）で１６時間、次いで９９℃（内部温度）でさらに３時間撹拌する。加熱を停止し、内部温度が６０℃を下回ると、混合物を水（３００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈する。相を分離し、水相を水（５００ｍＬ）で再度希釈し、その後さらなる有機相が形成される。相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機相を１０％水性クエン酸（５００ｍＬ）で振盪し、珪藻土に通して濾過し、水（０．１Ｌ）およびＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で洗浄する。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下、５０℃で濃縮して、粘性の赤橙色の油（９２ｇ）を与える。ヘプタン（５００ｍＬ）を５０℃で混合物に加え、次いで室温で一晩撹拌し、その間に初期の油が固体に変換する。得られる固体を濾過によって収集し、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（５０ｍＬ）、続いてヘプタン（１００ｍＬ）で洗浄する。固体を真空オーブン（４０℃、１０ｍｂａｒ）中で２２時間乾燥させて、表題化合物（５７．１ｇ、７３％）をクリーム状固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２３７（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ９．９６（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｓ、１Ｈ）、７．６４（ｄ、Ｊ＝１６．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．０２（ｄ、Ｊ＝１６．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．０２（ｓ、３Ｈ）、１．５７（ｓ、９Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－３－（４－ホルミル－２－メチル－ピラゾール－３－イル）プロパ－２－エノエート
【化5】
スキーム１、ステップＡ２：５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－カルバルデヒド（５０．０ｇ、３２９ｍｍｏｌ）、アクリル酸ｔｅｒｔ－ブチル（７０ｍＬ、４６８ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジシクロヘキシルメチルアミン（１４０ｍＬ、６５０ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（４００ｍＬ）に溶解する。混合物を窒素で１５分間パージし、次いでクロロ［（トリ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィン）－２－（２－アミノビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）］（３．４６ｇ、６．６２ｍｍｏｌ）を加え、窒素で再度パージし、反応混合物を８５℃（内部温度）で１６時間、次いで９９℃（内部温度）でさらに３時間撹拌する。加熱を停止し、内部温度が６０℃を下回ると、混合物を水（３００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈する。相を分離し、水相を水（５００ｍＬ）で再度希釈し、その後さらなる有機相が形成される。相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機相を１０％水性クエン酸（５００ｍＬ）で振盪し、珪藻土に通して濾過し、水（０．１Ｌ）およびＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で洗浄する。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下、５０℃で濃縮して、粘性の赤橙色の油（９２ｇ）を与える。ヘプタン（５００ｍＬ）を５０℃で混合物に加え、次いで室温で一晩撹拌し、その間に初期の油が固体に変換する。得られる固体を濾過によって収集し、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（５０ｍＬ）、続いてヘプタン（１００ｍＬ）で洗浄する。固体を真空オーブン（４０℃、１０ｍｂａｒ）中で２２時間乾燥させて、表題化合物（５７．１ｇ、７３％）をクリーム状固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２３７（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ９．９６（ｓ、１Ｈ）、７．９９（ｓ、１Ｈ）、７．６４（ｄ、Ｊ＝１６．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．０２（ｄ、Ｊ＝１６．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．０２（ｓ、３Ｈ）、１．５７（ｓ、９Ｈ）。
【0044】
調製３
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－メチル－４－（メチルアミノメチル）ピラゾール－３－イル］プロパノエート
スキーム１、ステップＢ１：ＴＨＦ中のメタンアミン２Ｍ（１０．２ｍＬ、２０．４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１７ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル３－（４－ホルミル－２－メチル－ピラゾール－３－イル）プロパノエート（０．８１ｇ、３．４ｍｍｏｌ）および酢酸（０．２ｍＬ、３．４ｍｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を室温で１時間撹拌する。トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（２．８８ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１７時間撹拌する。反応混合物を飽和水性ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）およびＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈する。水相をＤＣＭ（４×１００ｍＬ）で抽出する。組み合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させて、褐色の油を得る。粗材料を、ＭｅＯＨ中ＤＣＭ／７Ｎ ＮＨ３（９：１）に対して０～７０％ＤＣＭの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（０．６４ｇ、７３％）を油として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５４（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ７．２２（ｓ、１Ｈ）、３．７２（ｓ、３Ｈ）、３．４２（ｓ、２Ｈ）、２．８５（ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．４７（ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．２４（ｓ、３Ｈ）、１．３８（ｓ、９Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－メチル－４－（メチルアミノメチル）ピラゾール－３－イル］プロパノエート
【化6】
スキーム１、ステップＢ１：ＴＨＦ中のメタンアミン２Ｍ（１０．２ｍＬ、２０．４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１７ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル３－（４－ホルミル－２－メチル－ピラゾール－３－イル）プロパノエート（０．８１ｇ、３．４ｍｍｏｌ）および酢酸（０．２ｍＬ、３．４ｍｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を室温で１時間撹拌する。トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（２．８８ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１７時間撹拌する。反応混合物を飽和水性ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）およびＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈する。水相をＤＣＭ（４×１００ｍＬ）で抽出する。組み合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させて、褐色の油を得る。粗材料を、ＭｅＯＨ中ＤＣＭ／７Ｎ ＮＨ３（９：１）に対して０～７０％ＤＣＭの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（０．６４ｇ、７３％）を油として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５４（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ７．２２（ｓ、１Ｈ）、３．７２（ｓ、３Ｈ）、３．４２（ｓ、２Ｈ）、２．８５（ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．４７（ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．２４（ｓ、３Ｈ）、１．３８（ｓ、９Ｈ）。
【0045】
代替調製３
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－メチル－４－（メチルアミノメチル）ピラゾール－３－イル］プロパノエート
スキーム１、ステップＢ２：メチルアミン（ＥｔＯＨ中３３％、８５ｍＬ、６８３ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（１８０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－３－（４－ホルミル－２－メチル－ピラゾール－３－イル）プロッパ－２－エノエート（５７．１ｇ、２３９ｍｍｏｌ）の溶液に加え、室温で９０分間撹拌する。ＥｔＯＨ（６０ｍＬ）中で湿った（２０重量％乾燥ベース、２．５ｇ、１８ｍｍｏｌ）パールマン触媒のスラリーを、窒素パージ下で３１６ ＳＳオートクレーブ容器に入れる。最初に調製されたイミンの溶液を加え、ＥｔＯＨ（６０ｍＬ）ですすぐ。オートクレーブを取り付け、容器を閉じ、パージし、水素で１１０ｐｓｉ（７．１ｂａｒ）まで満たし、室温で２０時間撹拌する（約１４時間後さらなる水素消費なし）。混合物を珪藻土のパッドに通して濾過し、ＥｔＯＨですすぐ。濾液を減圧下で約２００ｍＬの体積まで濃縮する。溶液のＥＳ／ＭＳおよび１Ｈ ＮＭＲは、予想される化合物と一致している。ＥｔＯＨ溶液を、表題化合物の単離およびさらなる精製なしに使用し、定量的収率（６５．９ｇ、２３９ｍｍｏｌ）を推定する。
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－メチル－４－（メチルアミノメチル）ピラゾール－３－イル］プロパノエート
スキーム１、ステップＢ２：メチルアミン（ＥｔＯＨ中３３％、８５ｍＬ、６８３ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（１８０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（Ｅ）－３－（４－ホルミル－２－メチル－ピラゾール－３－イル）プロッパ－２－エノエート（５７．１ｇ、２３９ｍｍｏｌ）の溶液に加え、室温で９０分間撹拌する。ＥｔＯＨ（６０ｍＬ）中で湿った（２０重量％乾燥ベース、２．５ｇ、１８ｍｍｏｌ）パールマン触媒のスラリーを、窒素パージ下で３１６ ＳＳオートクレーブ容器に入れる。最初に調製されたイミンの溶液を加え、ＥｔＯＨ（６０ｍＬ）ですすぐ。オートクレーブを取り付け、容器を閉じ、パージし、水素で１１０ｐｓｉ（７．１ｂａｒ）まで満たし、室温で２０時間撹拌する（約１４時間後さらなる水素消費なし）。混合物を珪藻土のパッドに通して濾過し、ＥｔＯＨですすぐ。濾液を減圧下で約２００ｍＬの体積まで濃縮する。溶液のＥＳ／ＭＳおよび１Ｈ ＮＭＲは、予想される化合物と一致している。ＥｔＯＨ溶液を、表題化合物の単離およびさらなる精製なしに使用し、定量的収率（６５．９ｇ、２３９ｍｍｏｌ）を推定する。
【0046】
調製４
３－［２－メチル－４－（メチルアミノメチル）ピラゾール－３－イル］プロパン酸
スキーム１、ステップＣ：ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル３－［２－メチル－４－（メチルアミノメチル）ピラゾール－３－イル］プロパノエート（９．６ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（４３ｍＬ、５６２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌する。溶液を減圧下で濃縮し、微量のＴＦＡをＡＣＮと共蒸発させて、無色の油を得、それをさらに精製なしに次のステップで使用し、定量的収率（７．５４ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）を推定する。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：１９８（Ｍ＋Ｈ）。
３－［２－メチル－４－（メチルアミノメチル）ピラゾール－３－イル］プロパン酸
【化7】
スキーム１、ステップＣ：ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル３－［２－メチル－４－（メチルアミノメチル）ピラゾール－３－イル］プロパノエート（９．６ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（４３ｍＬ、５６２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌する。溶液を減圧下で濃縮し、微量のＴＦＡをＡＣＮと共蒸発させて、無色の油を得、それをさらに精製なしに次のステップで使用し、定量的収率（７．５４ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）を推定する。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：１９８（Ｍ＋Ｈ）。
【0047】
調製５
１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン
スキーム１、ステップＤ：３－［２－メチル－４－（メチルアミノメチル）ピラゾール－３－イル］プロパン酸（７．５４ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３７５ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（２４．２ｇ、１８７ｍｍｏｌ）およびＴ３Ｐ（ＤＭＦ中５０％）（４３．８ｍＬ、７５．０ｍｍｏｌ）の滴下で処理し、室温で５時間撹拌する。反応混合物を水（８００ｍＬ）で希釈し、ｐＨを飽和水性ＮａＨＣＯ３でｐＨ８に調整する。溶液をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（８：２）（８×２５０ｍＬ）で抽出する。組み合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させる。残渣を以下の条件を使用してＳＣＸクロマトグラフィーで精製する：カラムを２体積のＭｅＯＨで平衡化し、化合物をＭｅＯＨ（５＋５ｍＬ）に溶解し、カラムに加え、ＭｅＯＨ（６体積）で洗浄し、ＭｅＯＨ中の７Ｎ ＮＨ３（２５０ｍＬ）で溶出する。塩基性画分を蒸発させて、表題化合物（５．５６ｇ、８３％）をオフホワイトの固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８０（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ７．２３（ｓ、１Ｈ）、４．３４（ｓ、２Ｈ）、３．６５（ｓ、３Ｈ）、２．８６（ｓ、３Ｈ）、２．８５－２．７７（ｍ、４Ｈ）。
１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン
【化8】
スキーム１、ステップＤ：３－［２－メチル－４－（メチルアミノメチル）ピラゾール－３－イル］プロパン酸（７．５４ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３７５ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（２４．２ｇ、１８７ｍｍｏｌ）およびＴ３Ｐ（ＤＭＦ中５０％）（４３．８ｍＬ、７５．０ｍｍｏｌ）の滴下で処理し、室温で５時間撹拌する。反応混合物を水（８００ｍＬ）で希釈し、ｐＨを飽和水性ＮａＨＣＯ３でｐＨ８に調整する。溶液をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（８：２）（８×２５０ｍＬ）で抽出する。組み合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させる。残渣を以下の条件を使用してＳＣＸクロマトグラフィーで精製する：カラムを２体積のＭｅＯＨで平衡化し、化合物をＭｅＯＨ（５＋５ｍＬ）に溶解し、カラムに加え、ＭｅＯＨ（６体積）で洗浄し、ＭｅＯＨ中の７Ｎ ＮＨ３（２５０ｍＬ）で溶出する。塩基性画分を蒸発させて、表題化合物（５．５６ｇ、８３％）をオフホワイトの固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８０（Ｍ＋Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ７．２３（ｓ、１Ｈ）、４．３４（ｓ、２Ｈ）、３．６５（ｓ、３Ｈ）、２．８６（ｓ、３Ｈ）、２．８５－２．７７（ｍ、４Ｈ）。
【0048】
代替調製５
１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン
スキーム１、ステップＤ：代替調製３からのＥｔＯＨ中のｔｅｒｔ－ブチル３－［２－メチル－４－（メチルアミノメチル）ピラゾール－３－イル］プロパノエートの溶液（約２３９ｍｍｏｌ）を０．４５μｍポリプロピレンメンブレンに通して濾過する。ＥｔＯＨを使用して体積を０．３Ｌに調整し、２，２，２－トリフルオロエタノール（７５０ｍＬ）を加えて、フィード溶液を得る。４０００ｋＰａ背圧レギュレーターを備えた６０ｍＬの３１６－ＳＳ管状反応器（１／８”ＯＤ）を、２，２，２－トリフルオロエタノールおよびＥｔＯＨの３：１混合物（フラッシュ溶媒）で洗い流す。反応器を２２０℃に加熱し、フィード溶液を耐薬品性ＨＰＬＣポンプを使用して３ｍＬ／分（滞留時間２０分）の速度で反応器にポンプで送る。すべての溶液を反応器に送った後、反応器を同じ流量で２，２，２－トリフルオロエタノールおよびＥｔＯＨの３：１混合物（約１００ｍＬ）で洗い流す。出力溶液およびフラッシュ液を減圧下、５０℃で濃縮して、粗表題化合物（４８．３８ｇ、８９％ＬＣＭＳ純度、１Ｈ ＮＭＲによる約２０重量％溶媒、１８６．３ｍｍｏｌ）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８０（Ｍ＋Ｈ）。
１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン
スキーム１、ステップＤ：代替調製３からのＥｔＯＨ中のｔｅｒｔ－ブチル３－［２－メチル－４－（メチルアミノメチル）ピラゾール－３－イル］プロパノエートの溶液（約２３９ｍｍｏｌ）を０．４５μｍポリプロピレンメンブレンに通して濾過する。ＥｔＯＨを使用して体積を０．３Ｌに調整し、２，２，２－トリフルオロエタノール（７５０ｍＬ）を加えて、フィード溶液を得る。４０００ｋＰａ背圧レギュレーターを備えた６０ｍＬの３１６－ＳＳ管状反応器（１／８”ＯＤ）を、２，２，２－トリフルオロエタノールおよびＥｔＯＨの３：１混合物（フラッシュ溶媒）で洗い流す。反応器を２２０℃に加熱し、フィード溶液を耐薬品性ＨＰＬＣポンプを使用して３ｍＬ／分（滞留時間２０分）の速度で反応器にポンプで送る。すべての溶液を反応器に送った後、反応器を同じ流量で２，２，２－トリフルオロエタノールおよびＥｔＯＨの３：１混合物（約１００ｍＬ）で洗い流す。出力溶液およびフラッシュ液を減圧下、５０℃で濃縮して、粗表題化合物（４８．３８ｇ、８９％ＬＣＭＳ純度、１Ｈ ＮＭＲによる約２０重量％溶媒、１８６．３ｍｍｏｌ）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８０（Ｍ＋Ｈ）。
【0049】
調製６
３－ヨード－１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン
スキーム１、ステップＥ：ＥｔＯＨ（６０ｍＬ）中の１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン（５ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ヨウ素（粉砕、１０ｇ、３９．４ｍｍｏｌ）、続いて硫酸銀（１５．２ｇ、４８．７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で４８時間撹拌する。ＤＣＭ（５００ｍＬ）を加え、懸濁液を２時間撹拌し、液体をデカントし、固体をＤＣＭ（６００ｍＬ）中の２０％ｉＰｒＯＨで粉砕し、４時間撹拌する。混合物を濾過し、固体を廃棄し、濾液を真空濃縮する。水性ＮＨ３（３２％、１５０ｍｌ）を加え、溶液をＤＣＭ（２×３５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮して、固体を得る。固体をヘキサン：ＭＴＢＥ（９０ｍＬ）の１：１混合物中で２時間粉砕する。固体を濾過し、オーブンで真空下、１６時間４５℃で乾燥させて、表題化合物（７．３６ｇ、８９％）を白色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０６（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ４．２０（ｓ、２Ｈ）、３．６８（ｓ、３Ｈ）、２．８７（ｓ、３Ｈ）、２．８６－２．８０（ｍ、４Ｈ）。
３－ヨード－１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン
【化9】
スキーム１、ステップＥ：ＥｔＯＨ（６０ｍＬ）中の１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン（５ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ヨウ素（粉砕、１０ｇ、３９．４ｍｍｏｌ）、続いて硫酸銀（１５．２ｇ、４８．７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で４８時間撹拌する。ＤＣＭ（５００ｍＬ）を加え、懸濁液を２時間撹拌し、液体をデカントし、固体をＤＣＭ（６００ｍＬ）中の２０％ｉＰｒＯＨで粉砕し、４時間撹拌する。混合物を濾過し、固体を廃棄し、濾液を真空濃縮する。水性ＮＨ３（３２％、１５０ｍｌ）を加え、溶液をＤＣＭ（２×３５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮して、固体を得る。固体をヘキサン：ＭＴＢＥ（９０ｍＬ）の１：１混合物中で２時間粉砕する。固体を濾過し、オーブンで真空下、１６時間４５℃で乾燥させて、表題化合物（７．３６ｇ、８９％）を白色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０６（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ４．２０（ｓ、２Ｈ）、３．６８（ｓ、３Ｈ）、２．８７（ｓ、３Ｈ）、２．８６－２．８０（ｍ、４Ｈ）。
【0050】
代替調製６
３－ヨード－１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン
スキーム１、ステップＥ：ＥｔＯＨ（２５０ｍＬ）中の１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン（３１．６ｇ、９４％ＬＣＭＳ純度、１６６ｍｍｏｌ）の溶液を硫酸銀（６２．３ｇ、２００ｍｍｏｌ）に加える。溶液を窒素下で撹拌する。ＤＣＭ中の一塩化ヨウ素の溶液（１．０Ｍ、２２０ｍｌ、２２０ｍｍｏｌ）を、１５分間隔で４つのほぼ等しい部分で加える。発熱を低減するために外部水浴を使用する。２３時間撹拌した後、ＤＣＭ中の一塩化ヨウ素のさらなる部分（１．０Ｍ、３３ｍｌ、３３ｍｍｏｌ）を加える。さらに７３．５時間撹拌した後、混合物を珪藻土に通して濾過し、濾過ケーキをＤＣＭ（３００ｍＬ）で洗浄する。濾液および洗浄液を２０％水性ＮａＨＳＯ３および飽和水性ＮａＣｌ（４００ｍＬ）の１：１混合物で１．５時間撹拌し、次いで珪藻土に通して濾過し、濾過ケーキをＤＣＭ（２００ｍＬ）で洗浄する。濾液の相を分離し、水相をＤＣＭ（２００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下５０℃で濃縮して、淡黄色の残渣（５７ｇ）を得る。残渣をＤＣＭ（２５０ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭで洗浄されたシリカパッド（直径９ｃｍ×深さ５ｃｍ）に注ぎ、１：４のＥｔＯＨ：ＤＣＭ（５００ｍＬ）の部分を使用して吸引下で溶出する。目的物を含有する画分を減圧下、５０℃で濃縮し、得られる残渣をＭＴＢＥ（２５０ｍＬ）中、周囲温度で約１６時間粉砕する。固体を濾過によって収集し、ＭＴＢＥ（０．１Ｌ）で洗浄し、５０℃および１０ｍｂａｒで８．５時間乾燥させて、表題化合物を微細化された白色の粉末（４１．０ｇ、８０％）として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０６（Ｍ＋Ｈ）。
３－ヨード－１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン
スキーム１、ステップＥ：ＥｔＯＨ（２５０ｍＬ）中の１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン（３１．６ｇ、９４％ＬＣＭＳ純度、１６６ｍｍｏｌ）の溶液を硫酸銀（６２．３ｇ、２００ｍｍｏｌ）に加える。溶液を窒素下で撹拌する。ＤＣＭ中の一塩化ヨウ素の溶液（１．０Ｍ、２２０ｍｌ、２２０ｍｍｏｌ）を、１５分間隔で４つのほぼ等しい部分で加える。発熱を低減するために外部水浴を使用する。２３時間撹拌した後、ＤＣＭ中の一塩化ヨウ素のさらなる部分（１．０Ｍ、３３ｍｌ、３３ｍｍｏｌ）を加える。さらに７３．５時間撹拌した後、混合物を珪藻土に通して濾過し、濾過ケーキをＤＣＭ（３００ｍＬ）で洗浄する。濾液および洗浄液を２０％水性ＮａＨＳＯ３および飽和水性ＮａＣｌ（４００ｍＬ）の１：１混合物で１．５時間撹拌し、次いで珪藻土に通して濾過し、濾過ケーキをＤＣＭ（２００ｍＬ）で洗浄する。濾液の相を分離し、水相をＤＣＭ（２００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下５０℃で濃縮して、淡黄色の残渣（５７ｇ）を得る。残渣をＤＣＭ（２５０ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭで洗浄されたシリカパッド（直径９ｃｍ×深さ５ｃｍ）に注ぎ、１：４のＥｔＯＨ：ＤＣＭ（５００ｍＬ）の部分を使用して吸引下で溶出する。目的物を含有する画分を減圧下、５０℃で濃縮し、得られる残渣をＭＴＢＥ（２５０ｍＬ）中、周囲温度で約１６時間粉砕する。固体を濾過によって収集し、ＭＴＢＥ（０．１Ｌ）で洗浄し、５０℃および１０ｍｂａｒで８．５時間乾燥させて、表題化合物を微細化された白色の粉末（４１．０ｇ、８０％）として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０６（Ｍ＋Ｈ）。
【0051】
調製７
（８－クロロ－３－イソキノリル）１，１，２，２，３，３，４，４，４－ノナフルオロブタン－１－スルホン酸
炭酸カリウム（７５ｇ、５４２．７ｍｍｏｌ）およびフッ化１，１，２，２，３，３，４，４，４－ノナフルオロブタン－１－スルホニル（７０ｍＬ、３９８．８ｍｍｏｌ）をＡＣＮ（５００ｍＬ）中の８－クロロ－２Ｈ－イソキノリン－３－オン（６３ｇ、３５０．７ｍｍｏｌ）に加え、得られる混合物を６０℃で１５時間撹拌する。混合物を濾過し、固体をさらにＡＣＮで洗浄する。濾液を減圧下で濃縮する。残渣を水（３００ｍＬ）に懸濁させ、ｐＨを飽和水性ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で＞７に調整する。懸濁液を２時間撹拌し、次いで濾過する。濾過ケーキを水およびヘプタンで洗浄し、次いで減圧下３５℃で乾燥させる。乾燥した固体をＤＣＭに溶解し、シリカゲル（１００ｍＬ）を加え、混合物を減圧下で濃縮する。得られる固体をシリカパッド（４００ｍＬシリカ、予め１：４のＥｔＯＡｃ：ｎ－ヘキサンで洗浄）に充填し、１：４のＥｔＯＡｃ：ｎ－ヘキサン（１．５Ｌ）を使用して吸引下で溶出する。溶出液を元の体積の約１／２０まで減圧下で濃縮し、固体を沈殿させるためにｎ－ヘキサン（５０ｍＬ）を加える。固体を濾過によって収集し、固体のさらなる群を濾液の同様の処理によって得る（合計４群）。固体の群を合わせ、減圧下、５０℃で一晩乾燥させて、表題化合物を白色の固体（５０．８２ｇ、５５．９％）として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ）：４６２／４６４（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ９．５３（ｓ、１Ｈ）、７．８９－７．８２（ｍ、１Ｈ）、７．７７－７．６９（ｍ、２Ｈ）、７．６２（ｓ、１Ｈ）、１９Ｆ｛１Ｈ｝ＮＭＲ（３７６．５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ－８０．６（ｍ）、－１０８．７（ｍ）、－１２０．８（ｍ）、－１２５．７（ｍ）。
（８－クロロ－３－イソキノリル）１，１，２，２，３，３，４，４，４－ノナフルオロブタン－１－スルホン酸
【化10】
炭酸カリウム（７５ｇ、５４２．７ｍｍｏｌ）およびフッ化１，１，２，２，３，３，４，４，４－ノナフルオロブタン－１－スルホニル（７０ｍＬ、３９８．８ｍｍｏｌ）をＡＣＮ（５００ｍＬ）中の８－クロロ－２Ｈ－イソキノリン－３－オン（６３ｇ、３５０．７ｍｍｏｌ）に加え、得られる混合物を６０℃で１５時間撹拌する。混合物を濾過し、固体をさらにＡＣＮで洗浄する。濾液を減圧下で濃縮する。残渣を水（３００ｍＬ）に懸濁させ、ｐＨを飽和水性ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で＞７に調整する。懸濁液を２時間撹拌し、次いで濾過する。濾過ケーキを水およびヘプタンで洗浄し、次いで減圧下３５℃で乾燥させる。乾燥した固体をＤＣＭに溶解し、シリカゲル（１００ｍＬ）を加え、混合物を減圧下で濃縮する。得られる固体をシリカパッド（４００ｍＬシリカ、予め１：４のＥｔＯＡｃ：ｎ－ヘキサンで洗浄）に充填し、１：４のＥｔＯＡｃ：ｎ－ヘキサン（１．５Ｌ）を使用して吸引下で溶出する。溶出液を元の体積の約１／２０まで減圧下で濃縮し、固体を沈殿させるためにｎ－ヘキサン（５０ｍＬ）を加える。固体を濾過によって収集し、固体のさらなる群を濾液の同様の処理によって得る（合計４群）。固体の群を合わせ、減圧下、５０℃で一晩乾燥させて、表題化合物を白色の固体（５０．８２ｇ、５５．９％）として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ）：４６２／４６４（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ ９．５３（ｓ、１Ｈ）、７．８９－７．８２（ｍ、１Ｈ）、７．７７－７．６９（ｍ、２Ｈ）、７．６２（ｓ、１Ｈ）、１９Ｆ｛１Ｈ｝ＮＭＲ（３７６．５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ－８０．６（ｍ）、－１０８．７（ｍ）、－１２０．８（ｍ）、－１２５．７（ｍ）。
【0052】
調製８
５－（８－クロロ－３－イソキノリル）－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド
スキーム２、ステップＡ：３－ブロモ－８－クロロ－イソキノリン（５００ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチル－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－２－カルボキサミド（５８４ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）、および炭酸ナトリウム（６５５ｍｇ、６．１９ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（８．２ｍＬ）および水（１．６ｍＬ）に懸濁させる。混合物を窒素でパージする（５分）。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２ ．ＤＣＭ（１３５ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を９５℃で２３時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、珪藻土で濾過し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）およびＤＣＭ（１００ｍＬ）ですすぐ。濾液を真空下で濃縮し、残渣を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９：１）に対して０％～４０％ＤＣＭの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（６１０ｍｇ、９８％）を淡褐色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ）：２９８／３００（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ９．６９（ｓ、１Ｈ）、９．４６（ｄｄ、Ｊ＝０．７、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．８７－８．８５（ｍ、１Ｈ）、８．７８（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．７７－８．７６（ｍ、１Ｈ）、８．２０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．０９（ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３－７．８３（ｍ、２Ｈ）、２．８７（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、３Ｈ）。
５－（８－クロロ－３－イソキノリル）－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド
【化11】
スキーム２、ステップＡ：３－ブロモ－８－クロロ－イソキノリン（５００ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチル－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－２－カルボキサミド（５８４ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）、および炭酸ナトリウム（６５５ｍｇ、６．１９ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（８．２ｍＬ）および水（１．６ｍＬ）に懸濁させる。混合物を窒素でパージする（５分）。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２ ．ＤＣＭ（１３５ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を９５℃で２３時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、珪藻土で濾過し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）およびＤＣＭ（１００ｍＬ）ですすぐ。濾液を真空下で濃縮し、残渣を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９：１）に対して０％～４０％ＤＣＭの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（６１０ｍｇ、９８％）を淡褐色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ）：２９８／３００（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ９．６９（ｓ、１Ｈ）、９．４６（ｄｄ、Ｊ＝０．７、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．８７－８．８５（ｍ、１Ｈ）、８．７８（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．７７－８．７６（ｍ、１Ｈ）、８．２０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．０９（ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３－７．８３（ｍ、２Ｈ）、２．８７（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、３Ｈ）。
【0053】
代替調製８
５－（８－クロロ－３－イソキノリル）－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド
スキーム２、ステップＡ：ＣＰＭＥ（１２０ｍＬ）中の５－ブロモ－Ｎ－メチルピリジン－２－カルボキサミド（１０．０ｇ、４６．０ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（１５．５ｇ、５９．８ｍｍｏｌ）、およびＫＯＡｃ（１１．５ｇ、１１５ｍｍｏｌ）を一緒に加え、混合物を窒素で約１０分間パージする。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１．０ｇ、１．３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を６０℃に加熱する。窒素を窒素下で約４時間８１℃（内部温度）で撹拌する。温度を９４℃（内部温度）に上昇させ、４５分後に追加のビス（ピナコラート）ジボロン（２．５ｇ、９．６ｍｍｏｌ）を加える。加熱を４時間続け、次いで混合物を周囲温度に冷却する。窒素でパージした２Ｍ水性炭酸カリウム（７０ｍｌ、１４０ｍｍｏｌ）、続いて１０分後に（８－クロロ－３－イソキノリル）１，１，２，２，３，３，４，４，４－ノナフルオロブタン－１－スルホネート（２２．２８ｇ、４７．８ｍｍｏｌ）を加える。混合物を窒素で約１０分間パージし、次いで８４℃の内部温度に加熱する。５時間後、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．５ｇ、０．７ｍｍｏｌ）を加え、加熱を３時間続ける。加熱を停止し、混合物を５０℃に放冷し、次いで２Ｍ水性炭酸カリウム（７５ｍＬ、１５０ｍｍｏｌ）およびＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）で希釈する。混合物を周囲温度まで冷却し、濾過する。濾過ケーキを押下し、水（２００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で洗浄する。濾液の相を分離し、有機相を５０ｍＬずつの２Ｍ水性リン酸カリウムおよび飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をＤＣＭ（３００ｍＬ）中で濾過によって収集される固体と合わせ、約２時間激しく撹拌する。混合物を濾過し、ケーキをＤＣＭ（１００ｍＬ）で洗浄し、次いで廃棄する。少量の水相を濾液から分離し、廃棄し、有機相をブラインで洗浄し、次いでシリカパッド（直径９ｃｍ×深さ２．５ｃｍ）に注ぎ、ＤＣＭ（３×５００ｍＬ）および１：９アセトン：ＤＣＭ（４×５００ｍＬ）で吸引下で溶出する。目的物を含有する画分を合わせ、減圧下で濃縮し、得られる残渣をＭＴＢＥ（２５０ｍＬ）で５０℃で１時間粉砕し、次いで氷水浴で１時間冷却する。固体を濾過によって収集し、低温ＭＴＢＥ（２×５０ｍＬ）で洗浄し、減圧（４５℃、１０ｍｂａｒ）下で１８時間乾燥させて、表題化合物をオフホワイトの固体（７．５１ｇ、５４．８％）として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ （３５Ｃｌ／３７Ｃｌ）： ２９８／３００ （Ｍ＋Ｈ）、
５－（８－クロロ－３－イソキノリル）－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド
スキーム２、ステップＡ：ＣＰＭＥ（１２０ｍＬ）中の５－ブロモ－Ｎ－メチルピリジン－２－カルボキサミド（１０．０ｇ、４６．０ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（１５．５ｇ、５９．８ｍｍｏｌ）、およびＫＯＡｃ（１１．５ｇ、１１５ｍｍｏｌ）を一緒に加え、混合物を窒素で約１０分間パージする。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１．０ｇ、１．３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を６０℃に加熱する。窒素を窒素下で約４時間８１℃（内部温度）で撹拌する。温度を９４℃（内部温度）に上昇させ、４５分後に追加のビス（ピナコラート）ジボロン（２．５ｇ、９．６ｍｍｏｌ）を加える。加熱を４時間続け、次いで混合物を周囲温度に冷却する。窒素でパージした２Ｍ水性炭酸カリウム（７０ｍｌ、１４０ｍｍｏｌ）、続いて１０分後に（８－クロロ－３－イソキノリル）１，１，２，２，３，３，４，４，４－ノナフルオロブタン－１－スルホネート（２２．２８ｇ、４７．８ｍｍｏｌ）を加える。混合物を窒素で約１０分間パージし、次いで８４℃の内部温度に加熱する。５時間後、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．５ｇ、０．７ｍｍｏｌ）を加え、加熱を３時間続ける。加熱を停止し、混合物を５０℃に放冷し、次いで２Ｍ水性炭酸カリウム（７５ｍＬ、１５０ｍｍｏｌ）およびＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）で希釈する。混合物を周囲温度まで冷却し、濾過する。濾過ケーキを押下し、水（２００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で洗浄する。濾液の相を分離し、有機相を５０ｍＬずつの２Ｍ水性リン酸カリウムおよび飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をＤＣＭ（３００ｍＬ）中で濾過によって収集される固体と合わせ、約２時間激しく撹拌する。混合物を濾過し、ケーキをＤＣＭ（１００ｍＬ）で洗浄し、次いで廃棄する。少量の水相を濾液から分離し、廃棄し、有機相をブラインで洗浄し、次いでシリカパッド（直径９ｃｍ×深さ２．５ｃｍ）に注ぎ、ＤＣＭ（３×５００ｍＬ）および１：９アセトン：ＤＣＭ（４×５００ｍＬ）で吸引下で溶出する。目的物を含有する画分を合わせ、減圧下で濃縮し、得られる残渣をＭＴＢＥ（２５０ｍＬ）で５０℃で１時間粉砕し、次いで氷水浴で１時間冷却する。固体を濾過によって収集し、低温ＭＴＢＥ（２×５０ｍＬ）で洗浄し、減圧（４５℃、１０ｍｂａｒ）下で１８時間乾燥させて、表題化合物をオフホワイトの固体（７．５１ｇ、５４．８％）として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ （３５Ｃｌ／３７Ｃｌ）： ２９８／３００ （Ｍ＋Ｈ）、
【0054】
調製９
５－（８－クロロ－３－イソキノリル）－Ｎ－エチル－ピリジン－２－カルボキサミド
スキーム２、ステップＡ：（８－クロロ－３－イソキノリル）１，１，２，２，３，３，４，４，４－ノナフルオロブタン－１－スルホネート（５００ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）、Ｎ－エチル－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－２－カルボキサミド（３９０ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（１１ｍＬ）に懸濁させ、２Ｍ水性炭酸カリウム（１．６２ｍＬ、３．２４ｍｍｏｌ）を加える。溶液を窒素で５分間パージする。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２ ．ＤＣＭ（４４ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、溶液を再度窒素でパージし、反応物を９０℃で１５時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、水でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させて、褐色の油を得る。残渣を、ＥｔＯＡｃに対して０％～７０％ｎ－ヘキサンの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（２７５ｍｇ、８１％）を淡褐色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ）：３１２／３１４（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ９．７０（ｔ、Ｊ＝０．８Ｈｚ、１Ｈ）、９．４７（ｄｄ、Ｊ＝０．８、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．９１（ｔ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、１Ｈ）、８．７９－８．７６（ｍ、２Ｈ）、８．２０（ｄｄ、Ｊ＝０．８、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．１１－８．０９（ｍ、１Ｈ）、７．９０－７．８３（ｍ、２Ｈ）、３．３４－３．４１（ｍ、２Ｈ）、１．１７（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。
５－（８－クロロ－３－イソキノリル）－Ｎ－エチル－ピリジン－２－カルボキサミド
【化12】
スキーム２、ステップＡ：（８－クロロ－３－イソキノリル）１，１，２，２，３，３，４，４，４－ノナフルオロブタン－１－スルホネート（５００ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）、Ｎ－エチル－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－２－カルボキサミド（３９０ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（１１ｍＬ）に懸濁させ、２Ｍ水性炭酸カリウム（１．６２ｍＬ、３．２４ｍｍｏｌ）を加える。溶液を窒素で５分間パージする。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２ ．ＤＣＭ（４４ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、溶液を再度窒素でパージし、反応物を９０℃で１５時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、水でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させて、褐色の油を得る。残渣を、ＥｔＯＡｃに対して０％～７０％ｎ－ヘキサンの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（２７５ｍｇ、８１％）を淡褐色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（３５Ｃｌ／３７Ｃｌ）：３１２／３１４（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ９．７０（ｔ、Ｊ＝０．８Ｈｚ、１Ｈ）、９．４７（ｄｄ、Ｊ＝０．８、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．９１（ｔ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、１Ｈ）、８．７９－８．７６（ｍ、２Ｈ）、８．２０（ｄｄ、Ｊ＝０．８、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．１１－８．０９（ｍ、１Ｈ）、７．９０－７．８３（ｍ、２Ｈ）、３．３４－３．４１（ｍ、２Ｈ）、１．１７（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。
【0055】
調製１０
Ｎ－メチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミド
スキーム２、ステップＢ：１，４－ジオキサン（３２ｍＬ）中の５－（８－クロロ－３－イソキノリル）－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド（７５０ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（１．７３ｇ、６．８０ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（５５６ｍｇ、５．６７ｍｍｏｌ）、およびＸＰｈｏｓ（１１１ｍｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）の混合物を窒素でパージする。ＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２（１８２ｍｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を窒素でパージする。混合物を９０℃で１７時間撹拌する。反応混合物を室温に冷却し、珪藻土に通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で洗浄する。混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、水（２×８０ｍＬ）で洗浄する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、褐色の油を得、それをＥｔＯＡｃに対して０～７０％ヘキサンの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（４８２ｍｇ、５４％）を白色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９０（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ １０．０８（ｓ、１Ｈ）、９．４７（ｄｄ、Ｊ＝０．７、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．８７（ｑ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．７７（ｄｄ、Ｊ＝２．２、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．６８（ｄ、Ｊ＝０．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．２１－８．１７（ｍ、２Ｈ）、８．１３（ｄｄ、Ｊ＝１．２、６．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．８６（ｄｄ、Ｊ＝６．９、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．８７（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、３Ｈ）、１．４３（ｓ、１２Ｈ）。
Ｎ－メチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミド
【化13】
スキーム２、ステップＢ：１，４－ジオキサン（３２ｍＬ）中の５－（８－クロロ－３－イソキノリル）－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド（７５０ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（１．７３ｇ、６．８０ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（５５６ｍｇ、５．６７ｍｍｏｌ）、およびＸＰｈｏｓ（１１１ｍｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）の混合物を窒素でパージする。ＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２（１８２ｍｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を窒素でパージする。混合物を９０℃で１７時間撹拌する。反応混合物を室温に冷却し、珪藻土に通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で洗浄する。混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、水（２×８０ｍＬ）で洗浄する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、褐色の油を得、それをＥｔＯＡｃに対して０～７０％ヘキサンの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（４８２ｍｇ、５４％）を白色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９０（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ １０．０８（ｓ、１Ｈ）、９．４７（ｄｄ、Ｊ＝０．７、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．８７（ｑ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．７７（ｄｄ、Ｊ＝２．２、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．６８（ｄ、Ｊ＝０．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．２１－８．１７（ｍ、２Ｈ）、８．１３（ｄｄ、Ｊ＝１．２、６．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．８６（ｄｄ、Ｊ＝６．９、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．８７（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、３Ｈ）、１．４３（ｓ、１２Ｈ）。
【0056】
調製１１
５－［８－（１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド
スキーム２、ステップＢ：無水エチレングリコール（１５ｍｌ）およびＭｅＯＨ（６０ｍＬ）中の５－（８－クロロ－３－イソキノリル）－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド（５．８ｇ、１９．３ｍｍｏｌ）、テトラヒドロキシジボロン（２．９ｇ、３１ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（５．０ｇ、４９．９ｍｍｏｌ）、およびＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２（０．３９ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の混合物を窒素で１５分間パージする。次いで混合物を４０℃で１４時間撹拌する。水（１５０ｍＬ）を加え、混合物を３時間周囲温度で撹拌する。固体を濾過によって収集し、１：３のＭｅＯＨ：水（５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）、およびＭＴＢＥ（５０ｍＬ）で洗浄する。濾過ケーキを真空オーブン（４０℃、１０ｍｂａｒ）で２４時間乾燥させて、表題化合物を、主要な種（６．９６ｇ、９１％ＬＣＭＳ純度、９９％）としてグリコールエステルと一致する、ベージュ色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０８（ボロン酸の場合Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ４－ＭｅＯＨ）δ ９．４２（ｓ、１Ｈ）、９．３８（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．６６（ｄｄ、Ｊ＝２．０、８．４Ｈｚ）、８．４３（ｓ、１Ｈ）、８．２２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝０．８、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．０９－８．０３（ｍ、１Ｈ）、７．８７－７．７８（ｍ、１Ｈ）、３．６２（ｓ、３Ｈ）、３．０３（ｓ、３Ｈ）。
５－［８－（１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド
【化14】
スキーム２、ステップＢ：無水エチレングリコール（１５ｍｌ）およびＭｅＯＨ（６０ｍＬ）中の５－（８－クロロ－３－イソキノリル）－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド（５．８ｇ、１９．３ｍｍｏｌ）、テトラヒドロキシジボロン（２．９ｇ、３１ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（５．０ｇ、４９．９ｍｍｏｌ）、およびＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２（０．３９ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の混合物を窒素で１５分間パージする。次いで混合物を４０℃で１４時間撹拌する。水（１５０ｍＬ）を加え、混合物を３時間周囲温度で撹拌する。固体を濾過によって収集し、１：３のＭｅＯＨ：水（５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）、およびＭＴＢＥ（５０ｍＬ）で洗浄する。濾過ケーキを真空オーブン（４０℃、１０ｍｂａｒ）で２４時間乾燥させて、表題化合物を、主要な種（６．９６ｇ、９１％ＬＣＭＳ純度、９９％）としてグリコールエステルと一致する、ベージュ色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０８（ボロン酸の場合Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ４－ＭｅＯＨ）δ ９．４２（ｓ、１Ｈ）、９．３８（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．６６（ｄｄ、Ｊ＝２．０、８．４Ｈｚ）、８．４３（ｓ、１Ｈ）、８．２２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝０．８、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．０９－８．０３（ｍ、１Ｈ）、７．８７－７．７８（ｍ、１Ｈ）、３．６２（ｓ、３Ｈ）、３．０３（ｓ、３Ｈ）。
【0057】
調製１２
Ｎ－エチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミド
スキーム２、ステップＢ：１，４－ジオキサン（１１ｍＬ）中の５－（８－クロロ－３－イソキノリル）－Ｎ－エチル－ピリジン－２－カルボキサミド（２７５ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（６７２ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（２１６ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ）、およびＸＰｈｏｓ（４３ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）の混合物を窒素でパージする。ＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２（６９ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を窒素でパージし、９０℃で２１時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、珪藻土に通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）で洗浄する。混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈し、水（２×８０ｍＬ）で洗浄する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、褐色の油を得、それをＥｔＯＡｃに対して０～５０％ヘキサンの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（２０２ｍｇ、５７％）をオフホワイトの固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０４（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ １０．０８（ｓ、１Ｈ）、９．４８（ｄｄ、Ｊ＝０．７、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．９０（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．７７（ｄｄ、Ｊ＝２．２、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．６７（ｄ、Ｊ＝０．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．２２－８．１７（ｍ、２Ｈ）、８．１３（ｄｄ、Ｊ＝１．２、６．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．８６（ｄｄ、Ｊ＝６．９、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．４１－３．３４（ｍ、２Ｈ）、１．４３（ｓ、１２Ｈ）、１．１５－１．１８（ｍ、３Ｈ）。
Ｎ－エチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミド
【化15】
スキーム２、ステップＢ：１，４－ジオキサン（１１ｍＬ）中の５－（８－クロロ－３－イソキノリル）－Ｎ－エチル－ピリジン－２－カルボキサミド（２７５ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（６７２ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）、ＫＯＡｃ（２１６ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ）、およびＸＰｈｏｓ（４３ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）の混合物を窒素でパージする。ＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２（６９ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を窒素でパージし、９０℃で２１時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、珪藻土に通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）で洗浄する。混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈し、水（２×８０ｍＬ）で洗浄する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、褐色の油を得、それをＥｔＯＡｃに対して０～５０％ヘキサンの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（２０２ｍｇ、５７％）をオフホワイトの固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０４（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．２１ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ １０．０８（ｓ、１Ｈ）、９．４８（ｄｄ、Ｊ＝０．７、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．９０（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．７７（ｄｄ、Ｊ＝２．２、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．６７（ｄ、Ｊ＝０．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．２２－８．１７（ｍ、２Ｈ）、８．１３（ｄｄ、Ｊ＝１．２、６．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．８６（ｄｄ、Ｊ＝６．９、８．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．４１－３．３４（ｍ、２Ｈ）、１．４３（ｓ、１２Ｈ）、１．１５－１．１８（ｍ、３Ｈ）。
【0058】
実施例１
５－［８－（１，５－ジメチル－６－オキソ－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－３－イル）－３－イソキノリル］－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド
スキーム２、ステップＣ：１，４－ジオキサン（２．２ｍＬ）およびＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（０．２２ｍＬ）中の３－ヨード－１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）およびＮ－メチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミド（１５３ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の溶液を、１Ｍ水性リン酸カリウム（０．９８ｍＬ ０．９８ｍｍｏｌ）で処理し、窒素で５分間パージする。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２ ．ＤＣＭ（２７ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を９５℃で５．５時間撹拌する。粗材料を珪藻土に通して濾過し、ＤＣＭおよびＥｔＯＡｃで洗浄し、蒸発乾固させる。残渣を以下の条件を使用してＳＣＸクロマトグラフィーで精製する：カラムを２カラム体積のＭｅＯＨで平衡化し、化合物をＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶解し、カラムに加え、ＭｅＯＨ（３体積）で洗浄し、ＭｅＯＨ中の２Ｍ ＮＨ３（２０ｍＬ）で溶出する。溶媒を蒸発させて、褐色の油を得る。油を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９：１）に対して０～７０％ＤＣＭの勾配で溶出する、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによってさらに精製する。固体を真空オーブンにおいて４０℃で１６時間乾燥させて、表題化合物（１３０ｍｇ、９０％）を淡褐色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４１（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ９．５６（ｓ、１Ｈ）、９．４６（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．８５（ｑ、Ｊ＝４．９Ｈｚ、１Ｈ）、８．７６（ｄｄ、Ｊ＝２．０、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．７３（ｓ、１Ｈ）、８．１９（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．１３（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３（ｄｄ、Ｊ＝７．１、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．５８（ｄｄ、Ｊ＝１．２、７．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．３３（ｓ、２Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ）、３．０３－２．９１（ｍ、４Ｈ）、２．８７（ｄ、Ｊ＝４．９Ｈｚ、３Ｈ）、２．７７（ｓ、３Ｈ）。
５－［８－（１，５－ジメチル－６－オキソ－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－３－イル）－３－イソキノリル］－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド
【化16】
スキーム２、ステップＣ：１，４－ジオキサン（２．２ｍＬ）およびＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（０．２２ｍＬ）中の３－ヨード－１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）およびＮ－メチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミド（１５３ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の溶液を、１Ｍ水性リン酸カリウム（０．９８ｍＬ ０．９８ｍｍｏｌ）で処理し、窒素で５分間パージする。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２ ．ＤＣＭ（２７ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を９５℃で５．５時間撹拌する。粗材料を珪藻土に通して濾過し、ＤＣＭおよびＥｔＯＡｃで洗浄し、蒸発乾固させる。残渣を以下の条件を使用してＳＣＸクロマトグラフィーで精製する：カラムを２カラム体積のＭｅＯＨで平衡化し、化合物をＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶解し、カラムに加え、ＭｅＯＨ（３体積）で洗浄し、ＭｅＯＨ中の２Ｍ ＮＨ３（２０ｍＬ）で溶出する。溶媒を蒸発させて、褐色の油を得る。油を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９：１）に対して０～７０％ＤＣＭの勾配で溶出する、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによってさらに精製する。固体を真空オーブンにおいて４０℃で１６時間乾燥させて、表題化合物（１３０ｍｇ、９０％）を淡褐色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４１（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ９．５６（ｓ、１Ｈ）、９．４６（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．８５（ｑ、Ｊ＝４．９Ｈｚ、１Ｈ）、８．７６（ｄｄ、Ｊ＝２．０、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．７３（ｓ、１Ｈ）、８．１９（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．１３（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３（ｄｄ、Ｊ＝７．１、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．５８（ｄｄ、Ｊ＝１．２、７．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．３３（ｓ、２Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ）、３．０３－２．９１（ｍ、４Ｈ）、２．８７（ｄ、Ｊ＝４．９Ｈｚ、３Ｈ）、２．７７（ｓ、３Ｈ）。
【0059】
代替調製実施例１
５－［８－（１，５－ジメチル－６－オキソ－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－３－イル）－３－イソキノリル］－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド
スキーム２、ステップＣ：２－メチル－２－ブタノール（１００ｍＬ）中の３－ヨード－１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン（９．３ｇ、３０．１７ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミド（約５２ｇ、６８％ＬＣＭＳ純度、１０．５ｍｍｏｌ）、および２Ｍ水性リン酸カリウム（３０ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．７１ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）の添加前に窒素で３０分間パージする。混合物を加熱ブロックにおいて９０℃設定値で加熱する。ブロック温度が６０℃に達するとき、パージチューブを除去する。Ｎ－メチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミドのさらなる部分を２時間および３．５時間で加える（総添加量：１５．４５ｇ、６８％ＬＣＭＳ純度、３１．５３ｍｍｏｌ）。合計２０時間加熱した後、混合物を周囲温度に冷却し、水（１００ｍＬ）およびＭＴＢＥ（２５０ｍＬ）で希釈する。混合物を濾過し、濾過した固体を水（１００ｍＬ）およびＭＴＢＥ（１００ｍＬ）で洗浄する。濾液の相を分離し、ヘプタン（４００ｍＬ）を有機相に加える。追加の固体沈殿物は、１時間後に濾過によって収集し、予め収集された固体と合わせる。合わせた固体をＤＣＭ（５００ｍＬ）、アセトン（２００ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）の混合物に溶解し、珪藻土に減圧下５０℃で濃縮する。固体を好適なカートリッジに充填し、０～１５％ＥｔＯＨ／ＤＣＭの勾配で溶出する、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（７５０ｇシリカゲル）を使用して精製する。目的物を含有する画分を合わせ、減圧下で約６０ｍＬの透明な褐色の溶液に濃縮する。溶液を６０℃で撹拌し、予め調製された目的物の試料を播種する。得られるスラリーを１時間６０℃で窒素の陽圧下さらに撹拌し、次いで周囲温度に冷却する。１６時間後、固体を濾過によって収集し、氷冷ＥｔＯＨ（３５ｍＬ）で洗浄する。追加の材料を濾液の濃縮およびさらなるクロマトグラフィーによって単離する。２つの群の固体を合わせ、ＴＨＦ（２００ｍＬ）に溶解し、ジメルカプトトリアジン官能化金属捕捉剤樹脂（ＳｉｌｉＣｙｃｌｅ Ｉｎｃ、ＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）ＤＭＴ、２ｇ、ジメルカプトトリアジンとして１．２ｍｍｏｌ）と４０℃で６７時間撹拌する。捕捉剤を０．４５μｍポリプロピレンメンブレンフィルターに通す濾過によって除去し、固体をＴＨＦ（１００ｍＬ）ですすいだ。濾液および洗浄液を減圧下５０℃で濃縮し、ＥｔＯＨに溶媒交換し（最終体積約５０ｍＬ）、その間に白色のスラリーが形成される。スラリーを１時間６０℃で窒素の陽圧下で熟成し、次いで周囲温度に冷却する。６時間後、固体を濾過によって収集し、氷冷ＥｔＯＨ（２５ｍＬ）で洗浄する。固体を減圧下で３０時間（６０℃で５時間、５０℃で２５時間）乾燥させて、表題化合物を白色の粉末（８．９５ｇ、６６％）として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４１（Ｍ＋Ｈ）。
５－［８－（１，５－ジメチル－６－オキソ－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－３－イル）－３－イソキノリル］－Ｎ－メチル－ピリジン－２－カルボキサミド
スキーム２、ステップＣ：２－メチル－２－ブタノール（１００ｍＬ）中の３－ヨード－１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン（９．３ｇ、３０．１７ｍｍｏｌ）、Ｎ－メチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミド（約５２ｇ、６８％ＬＣＭＳ純度、１０．５ｍｍｏｌ）、および２Ｍ水性リン酸カリウム（３０ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．７１ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）の添加前に窒素で３０分間パージする。混合物を加熱ブロックにおいて９０℃設定値で加熱する。ブロック温度が６０℃に達するとき、パージチューブを除去する。Ｎ－メチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミドのさらなる部分を２時間および３．５時間で加える（総添加量：１５．４５ｇ、６８％ＬＣＭＳ純度、３１．５３ｍｍｏｌ）。合計２０時間加熱した後、混合物を周囲温度に冷却し、水（１００ｍＬ）およびＭＴＢＥ（２５０ｍＬ）で希釈する。混合物を濾過し、濾過した固体を水（１００ｍＬ）およびＭＴＢＥ（１００ｍＬ）で洗浄する。濾液の相を分離し、ヘプタン（４００ｍＬ）を有機相に加える。追加の固体沈殿物は、１時間後に濾過によって収集し、予め収集された固体と合わせる。合わせた固体をＤＣＭ（５００ｍＬ）、アセトン（２００ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）の混合物に溶解し、珪藻土に減圧下５０℃で濃縮する。固体を好適なカートリッジに充填し、０～１５％ＥｔＯＨ／ＤＣＭの勾配で溶出する、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（７５０ｇシリカゲル）を使用して精製する。目的物を含有する画分を合わせ、減圧下で約６０ｍＬの透明な褐色の溶液に濃縮する。溶液を６０℃で撹拌し、予め調製された目的物の試料を播種する。得られるスラリーを１時間６０℃で窒素の陽圧下さらに撹拌し、次いで周囲温度に冷却する。１６時間後、固体を濾過によって収集し、氷冷ＥｔＯＨ（３５ｍＬ）で洗浄する。追加の材料を濾液の濃縮およびさらなるクロマトグラフィーによって単離する。２つの群の固体を合わせ、ＴＨＦ（２００ｍＬ）に溶解し、ジメルカプトトリアジン官能化金属捕捉剤樹脂（ＳｉｌｉＣｙｃｌｅ Ｉｎｃ、ＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）ＤＭＴ、２ｇ、ジメルカプトトリアジンとして１．２ｍｍｏｌ）と４０℃で６７時間撹拌する。捕捉剤を０．４５μｍポリプロピレンメンブレンフィルターに通す濾過によって除去し、固体をＴＨＦ（１００ｍＬ）ですすいだ。濾液および洗浄液を減圧下５０℃で濃縮し、ＥｔＯＨに溶媒交換し（最終体積約５０ｍＬ）、その間に白色のスラリーが形成される。スラリーを１時間６０℃で窒素の陽圧下で熟成し、次いで周囲温度に冷却する。６時間後、固体を濾過によって収集し、氷冷ＥｔＯＨ（２５ｍＬ）で洗浄する。固体を減圧下で３０時間（６０℃で５時間、５０℃で２５時間）乾燥させて、表題化合物を白色の粉末（８．９５ｇ、６６％）として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４１（Ｍ＋Ｈ）。
【0060】
実施例２
５－［８－（１，５－ジメチル－６－オキソ－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－３－イル）－３－イソキノリル］－Ｎ－エチル－ピリジン－２－カルボキサミド
スキーム２、ステップＣ：１，４－ジオキサン（２．８５ｍＬ）およびＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（０．２８ｍＬ）中の３－ヨード－１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン（１３０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）、Ｎ－エチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミド（３５３ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液を、１Ｍ水性リン酸カリウム（１．２７ｍＬ、１．２７ｍｍｏｌ）で処理し、窒素で５分間パージする。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２ ．ＤＣＭ（３５ｍｇ、０．０４２８５９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を９０℃で１７時間撹拌する。材料を室温に冷却し、珪藻土に通して濾過し、ＤＣＭおよびＥｔＯＡｃで洗浄し、蒸発乾固させる。残渣を以下の条件を使用してＳＣＸクロマトグラフィーで精製する：カラムを２カラム体積のＭｅＯＨで平衡化し、化合物をＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶解し、カラムに加え、ＭｅＯＨ（３体積）で洗浄し、ＭｅＯＨ中の２Ｍ ＮＨ３（２０ｍＬ）で溶出する。溶媒を蒸発させて、褐色の油を得る。材料を、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９を使用し、緩衝液中の２０％～６０％ＡＣＮの勾配で溶出する逆相クロマトグラフィーによってさらに精製して、表題化合物（８３ｍｇ、４２％）を淡褐色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５５（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ９．５７（ｓ、１Ｈ）、９．４６（ｄｄ、Ｊ＝０．７、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．８９（ｔ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．７６（ｄｄ、Ｊ＝２．２、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．７３（ｓ、１Ｈ）、８．２０－８．１８（ｍ、１Ｈ）、８．１３（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３（ｄｄ、Ｊ＝７．１、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．５８（ｄｄ、Ｊ＝１．１、７．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．３３（ｓ、２Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ）、３．４１－３．３４（ｍ、２Ｈ）、３．０４－２．９１（ｍ、４Ｈ）、２．７７（ｓ、３Ｈ）、１．１７（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。
５－［８－（１，５－ジメチル－６－オキソ－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－３－イル）－３－イソキノリル］－Ｎ－エチル－ピリジン－２－カルボキサミド
【化17】
スキーム２、ステップＣ：１，４－ジオキサン（２．８５ｍＬ）およびＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（０．２８ｍＬ）中の３－ヨード－１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン（１３０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）、Ｎ－エチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミド（３５３ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液を、１Ｍ水性リン酸カリウム（１．２７ｍＬ、１．２７ｍｍｏｌ）で処理し、窒素で５分間パージする。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２ ．ＤＣＭ（３５ｍｇ、０．０４２８５９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を９０℃で１７時間撹拌する。材料を室温に冷却し、珪藻土に通して濾過し、ＤＣＭおよびＥｔＯＡｃで洗浄し、蒸発乾固させる。残渣を以下の条件を使用してＳＣＸクロマトグラフィーで精製する：カラムを２カラム体積のＭｅＯＨで平衡化し、化合物をＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶解し、カラムに加え、ＭｅＯＨ（３体積）で洗浄し、ＭｅＯＨ中の２Ｍ ＮＨ３（２０ｍＬ）で溶出する。溶媒を蒸発させて、褐色の油を得る。材料を、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ＝９を使用し、緩衝液中の２０％～６０％ＡＣＮの勾配で溶出する逆相クロマトグラフィーによってさらに精製して、表題化合物（８３ｍｇ、４２％）を淡褐色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５５（Ｍ＋Ｈ）、１Ｈ ＮＭＲ（４００．１３ＭＨｚ、ｄ６－ＤＭＳＯ）δ ９．５７（ｓ、１Ｈ）、９．４６（ｄｄ、Ｊ＝０．７、２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．８９（ｔ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．７６（ｄｄ、Ｊ＝２．２、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．７３（ｓ、１Ｈ）、８．２０－８．１８（ｍ、１Ｈ）、８．１３（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３（ｄｄ、Ｊ＝７．１、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．５８（ｄｄ、Ｊ＝１．１、７．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．３３（ｓ、２Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ）、３．４１－３．３４（ｍ、２Ｈ）、３．０４－２．９１（ｍ、４Ｈ）、２．７７（ｓ、３Ｈ）、１．１７（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。
【0061】
代替調製実施例２
５－［８－（１，５－ジメチル－６－オキソ－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－３－イル）－３－イソキノリル］－Ｎ－エチル－ピリジン－２－カルボキサミド
スキーム２、ステップＣ：ＥｔＯＨ（３５ｍＬ）中の３－ヨード－１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン（３．５０ｇ、１１．３６ｍｍｏｌ）およびＮ－エチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミド（４．７１ｇ、１１．５６ｍｍｏｌ）、ならびに２Ｍ水性リン酸カリウム（１１ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）の混合物を窒素で１５分間パージする。トリシクロヘキシルホスフィン（０．１９ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）およびＰｄ２ｄｂａ３（０．２１ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を加え、窒素パージをさらに１０分間続ける。加熱を開始し、加熱ブロックが５０℃に達するとパージチューブを除去する。混合物を４時間還流し、次いで室温に冷却する。ジメルカプトトリアジン官能化金属捕捉剤樹脂（ＳｉｌｉＣｙｃｌｅ，Ｉｎｃ、ＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）ＤＭＴ、充填０．６０ｍｍｏｌ／ｇ、２．０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で３．５時間撹拌し、次いで室温に冷却する。水（１２０ｍＬ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌する。混合物を珪藻土に通して濾過し、パッドを１：３のＥｔＯＨ／水（４０ｍＬ）ですすぐ。濾液を水（４００ｍＬ）で希釈し、周囲温度で１．５時間撹拌する。得られる白色固体を濾過によって収集し、１：６のＥｔＯＨ／水（７０ｍＬ）、水（１００ｍＬ）で洗浄し、減圧下、１６時間５０℃で乾燥させて、粗表題化合物を得る。粗固体をＥｔＯＨ（４０ｍＬ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、珪藻土に通して濾過する。濾液を減圧下、５０℃で約２０ｍＬの溶液が残るまで濃縮する。溶液を７０℃の加熱ブロックで撹拌し、ヘプタン（２０ｍＬ）を約２分かけて加える。混合物を加熱ブロックで１時間撹拌し、その間に白色の固体が形成される。加熱を停止し、混合物を撹拌しながら放冷する。６時間後、固体を濾過によって収集し、１：１のＥｔＯＨ／ヘプタン（１０ｍＬ）およびヘプタン（１０ｍＬ）で洗浄し、次いで減圧下、５０℃で１３時間乾燥させて、表題化合物（４．２ｇ、８１％）を白色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５５（Ｍ＋Ｈ）。
５－［８－（１，５－ジメチル－６－オキソ－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－３－イル）－３－イソキノリル］－Ｎ－エチル－ピリジン－２－カルボキサミド
スキーム２、ステップＣ：ＥｔＯＨ（３５ｍＬ）中の３－ヨード－１，５－ジメチル－７，８－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］アゼピン－６－オン（３．５０ｇ、１１．３６ｍｍｏｌ）およびＮ－エチル－５－［８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－イソキノリル］ピリジン－２－カルボキサミド（４．７１ｇ、１１．５６ｍｍｏｌ）、ならびに２Ｍ水性リン酸カリウム（１１ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）の混合物を窒素で１５分間パージする。トリシクロヘキシルホスフィン（０．１９ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）およびＰｄ２ｄｂａ３（０．２１ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を加え、窒素パージをさらに１０分間続ける。加熱を開始し、加熱ブロックが５０℃に達するとパージチューブを除去する。混合物を４時間還流し、次いで室温に冷却する。ジメルカプトトリアジン官能化金属捕捉剤樹脂（ＳｉｌｉＣｙｃｌｅ，Ｉｎｃ、ＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）ＤＭＴ、充填０．６０ｍｍｏｌ／ｇ、２．０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で３．５時間撹拌し、次いで室温に冷却する。水（１２０ｍＬ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌する。混合物を珪藻土に通して濾過し、パッドを１：３のＥｔＯＨ／水（４０ｍＬ）ですすぐ。濾液を水（４００ｍＬ）で希釈し、周囲温度で１．５時間撹拌する。得られる白色固体を濾過によって収集し、１：６のＥｔＯＨ／水（７０ｍＬ）、水（１００ｍＬ）で洗浄し、減圧下、１６時間５０℃で乾燥させて、粗表題化合物を得る。粗固体をＥｔＯＨ（４０ｍＬ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、珪藻土に通して濾過する。濾液を減圧下、５０℃で約２０ｍＬの溶液が残るまで濃縮する。溶液を７０℃の加熱ブロックで撹拌し、ヘプタン（２０ｍＬ）を約２分かけて加える。混合物を加熱ブロックで１時間撹拌し、その間に白色の固体が形成される。加熱を停止し、混合物を撹拌しながら放冷する。６時間後、固体を濾過によって収集し、１：１のＥｔＯＨ／ヘプタン（１０ｍＬ）およびヘプタン（１０ｍＬ）で洗浄し、次いで減圧下、５０℃で１３時間乾燥させて、表題化合物（４．２ｇ、８１％）を白色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５５（Ｍ＋Ｈ）。
【0062】
生物学的アッセイ
ＮａｎｏＢＲＥＴアッセイ
ＨＥＫ２９３細胞を、Ｔ－７５フラスコにおいてＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ中に１０×１０６細胞／１６ｍＬで播種し、４～６時間付着したままにする。トランスフェクション試薬を、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培地（フェノールレッドなし、ＦＢＳなし）および８％Ｆｕｇｅｎｅ ＨＤ含有発現プラスミドに、以下の最終濃度：１：ヒストンＨ３．３ ＨａｌｏＴａｇ ＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ、０．０２μｇ）＋ＮａｎｏＬｕｃ－ＣＲＥＢＢＰ－ＢＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ、０．０００２μｇ）、２：ヒストンＨ３．３ ＨａｌｏＴａｇ ＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ、０．０２μｇ）＋ＮａｎｏＬｕｃ－ＥＰ３００－ＢＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ、０．０００２μｇ）、３：ヒストンＨ４ ＨａｌｏＴａｇ ＤＮＡ（０．０２μｇ）＋ＮａｎＬｕｃ－ＢＲＤ４全長（Ｐｒｏｍｅｇａ、０．０００２μｇ）で希釈する。ＤＮＡ／Ｆｕｇｅｎｅ混合物を室温で１０分間放置する。トランスフェクションミックス（８００μＬ）をフラスコごとに加え、すぐに回転させて細胞を覆う。プレートを一晩のトランスフェクションのためにインキュベーターに戻す。翌日、ＨａｌｏＴａｇ ＮａｎｏＢＲＥＴ ６１８リガンド（０．１ｍＭの２０μＬ／バイアル）を室温で解凍する。培養培地をトランスフェクトされた細胞フラスコから取り出し、ＰＢＳ（５ｍＬ）で洗浄し、トリプシン（３ｍＬ）で室温で処理して、細胞を分離する。トリプシン処理細胞をＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ（７ｍＬ）に再懸濁させ、コニカルチューブ（５０ｍＬ）に収集する。細胞を１５００ｒｐｍで５分間回転させ、次いでＯｐｔｉ－ＭＥＭ（フェノールレッドなし）＋４％ＦＢＳに再懸濁させる。ＨａｌｏＴａｇ ＮａｎｏＢＲＥＴ ６１８リガンド（１μＬの０．１ｍＭ）を最終濃度１００ｎｍで細胞に加える。細胞を白色、不透明な底の９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ ３９１７）に加え、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベートする。
ＮａｎｏＢＲＥＴアッセイ
ＨＥＫ２９３細胞を、Ｔ－７５フラスコにおいてＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ中に１０×１０６細胞／１６ｍＬで播種し、４～６時間付着したままにする。トランスフェクション試薬を、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培地（フェノールレッドなし、ＦＢＳなし）および８％Ｆｕｇｅｎｅ ＨＤ含有発現プラスミドに、以下の最終濃度：１：ヒストンＨ３．３ ＨａｌｏＴａｇ ＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ、０．０２μｇ）＋ＮａｎｏＬｕｃ－ＣＲＥＢＢＰ－ＢＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ、０．０００２μｇ）、２：ヒストンＨ３．３ ＨａｌｏＴａｇ ＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ、０．０２μｇ）＋ＮａｎｏＬｕｃ－ＥＰ３００－ＢＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ、０．０００２μｇ）、３：ヒストンＨ４ ＨａｌｏＴａｇ ＤＮＡ（０．０２μｇ）＋ＮａｎＬｕｃ－ＢＲＤ４全長（Ｐｒｏｍｅｇａ、０．０００２μｇ）で希釈する。ＤＮＡ／Ｆｕｇｅｎｅ混合物を室温で１０分間放置する。トランスフェクションミックス（８００μＬ）をフラスコごとに加え、すぐに回転させて細胞を覆う。プレートを一晩のトランスフェクションのためにインキュベーターに戻す。翌日、ＨａｌｏＴａｇ ＮａｎｏＢＲＥＴ ６１８リガンド（０．１ｍＭの２０μＬ／バイアル）を室温で解凍する。培養培地をトランスフェクトされた細胞フラスコから取り出し、ＰＢＳ（５ｍＬ）で洗浄し、トリプシン（３ｍＬ）で室温で処理して、細胞を分離する。トリプシン処理細胞をＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ（７ｍＬ）に再懸濁させ、コニカルチューブ（５０ｍＬ）に収集する。細胞を１５００ｒｐｍで５分間回転させ、次いでＯｐｔｉ－ＭＥＭ（フェノールレッドなし）＋４％ＦＢＳに再懸濁させる。ＨａｌｏＴａｇ ＮａｎｏＢＲＥＴ ６１８リガンド（１μＬの０．１ｍＭ）を最終濃度１００ｎｍで細胞に加える。細胞を白色、不透明な底の９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ ３９１７）に加え、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベートする。
【0063】
化合物を段階希釈し、９６ウェルプレートに加える（２μＬ、１０ｍＭ、３倍希釈液、１００％ＤＭＳＯ）。培地（９８μＬ）／４％ＦＢＳを、２００μＭ、２％ＤＭＳＯの最終濃度のために化合物プレートに加える。対照化合物プレート（ＭＩＮ）を、参照阻害剤（１０μＬ）を培地（４９０μＬ）／４％ＦＢＳに加えることによって、２００μＭ、２％ＤＭＳＯ（最終２０μＭ、最終０．２％）で調製する。ＭＩＮ参照阻害剤（５０μＬ）を対照プレートカラム１Ａ～１Ｈに加える。ＭＡＸプレートを、ＤＭＳＯ（１０μＬ）を培地（１０μＬ）／４％ＦＢＳに加えることによって、２％ＤＭＳＯ（最終濃度０．２％）で調製する。最大（５０μＬ）を対照プレートカラム１２Ａ～１２Ｈに加える。細胞を１０μＬ／ウェルの段階希釈した実施例１で処理する。細胞プレートを３７℃／５％ＣＯ２でインキュベートする。ＣＲＥＢＢＰ／ＥＰ３００プレートを４時間のインキュベーション後に読み取り、ＢＲＤ４プレートを一晩のインキュベーション後に読み取る。読み取りのためにプレートを展開するには、すべての試薬を使用前に室温に到達させる。ＮａｎｏＢＲＥＴ Ｎａｎｏ－Ｇｌｏ基質の５ｍＭストックをＯｐｔｉ－ＭＥＭで５０μＭに希釈する（フェノールレッドなし、血清なし）。Ｎａｎｏ－Ｇｌｏ基質（２５μＬ／ウェルの５０μＭ）を加える。プレートを１分間振盪して混合し、１０分以内に、以下の設定：ミラー：ルミネセンス、吸収フィルター：Ｅ６００ＬＰ、第２の吸収フィルター：Ｄ４６０／５０、測定高さ（ｍｍ）：６．５、測定時間（秒）：０．２秒で、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで読み取る。
【表1】
【0064】
表１に示されるように、データは、実施例１および実施例２の化合物が、インビトロでＣＲＥＢＢＰおよびＥＰ３００を強力に阻害することを実証する。加えて、表１は、実施例１および実施例２の化合物が、ＢＲＤ４ブロモドメインよりもＣＲＥＢＢＰ／ＥＰ３００について選択性を示すことを示す。
【0065】
２２Ｒｖ１における細胞増殖アッセイ
以下の細胞増殖アッセイの目的は、実施例２の化合物およびその組み合わせが細胞増殖に影響を与えるかを検出することである。
以下の細胞増殖アッセイの目的は、実施例２の化合物およびその組み合わせが細胞増殖に影響を与えるかを検出することである。
【0066】
２２Ｒｖ１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２５０５から購入）細胞を、ＲＭＰＩ １０％ＦＢＳ（２０μＬ体積）中ウェルあたり１，０００細胞の密度で、透明底３８４ウェル細胞培養プレートに播種する。プレートを３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートする。翌日、実施例２の化合物および以下の表に見られる既知の抗がん治療剤と組み合わされた実施例２の化合物を細胞に投与する。Ｅｃｈｏ ５５５アコースティックディスペンサーを使用して、６０μＭ～０．００３μＭの範囲の濃度で、実施例２の化合物、およびその組み合わせの段階希釈液（１：３）を調製する。次いで、実施例２の化合物およびその組み合わせについて、段階希釈プレートから細胞プレートに５μＬを加えることによって細胞を投与し、２０μＭ～０．００１μＭの範囲の最終濃度用量で０．２％の最終ＤＭＳＯ濃度をもたらす。
【0067】
０．２％ＤＭＳＯを含有する培地が最大点に使用され、０．２％ＤＭＳＯを含有する成長培地中の２μＭスタウロスポリンが最小点に使用される。実施例２の化合物およびその組み合わせを投与した後、細胞プレートを３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートする。試験化合物添加から７日後、プレートをインキュベーターから取り出し、冷ＥｔＯＨ（９６％、６５μＬ）を各ウェルに加える。３０分後、培地を除去し、ＲＮａｓｅ（２０μＬ、５０μｇ／ｍＬ）（Ｓｉｇｍａ）およびＰＢＳ中の１：１０００ヨウ化プロピジウム希釈液を各ウェルに加える。プレートを密封し、室温で１時間インキュベートし、光から保護する。次いでプレートをＡＣＵＭＥＮ ＥＸＰＬＯＲＥＲ（商標）で走査する。２２Ｒｖ１細胞の数は、面積パラメータ（総細胞集団の総面積の比）、ＦＬ－３（ＰＩ）のピーク強度の指定範囲、および周囲長によって定義される単一細胞集団の平均面積によって計算される、推定細胞数によって評価する。次いで、データをＮＧＲスクリーニングツールを通して処理する。データは、４パラメータ非線形ロジスティック方程式（４パラメータロジスティック濃度－応答曲線）：Ｙ＝ｂｏｔ＋［（ｔｏｐ－ｂｏｔ）／１＋（ｘ／ＩＣ５０）ｓｌｏｐｅ］を使用して分析し、式中、Ｙ＝阻害％、Ｘ＝ｙ阻害％をもたらす濃度、「ｂｏｔ」＝曲線が到達したｙの最小値、「ｔｏｐ」＝曲線が到達したｙの最大値、「ｓｌｏｐｅ」＝ＩＣ５０での曲線の勾配である。阻害％＝［（最大中央値－ｘ／最大中央値－最小中央値）］１００。
【0068】
様々な濃度の２２Ｒｖ１前立腺がん細胞における、実施例２の化合物およびその組み合わせの阻害％を、以下の表２および３に示す。
【表2】
【表3】
【0069】
このアッセイの結果は、２２Ｒｖ１（ＡＲＦＬ／ＡＲＶ７、ＰＩＫ３ＣＡｍｕｔ）前立腺がん細胞における、実施例２の化合物ならびに抗がん治療剤ダロルタミド、エンザルタミド、アベマシクリブ、およびアルペリシブと組み合わせた実施例２の化合物の抗増殖活性を実証する。表２に見られるように、細胞増殖は、実施例２の化合物によって阻害される。加えて、細胞増殖は、表２に記載される抗がん治療剤と組み合わせた実施例２の化合物によって阻害される。同様に、表３に見られるように、細胞増殖は、実施例２の化合物によって阻害される。加えて、細胞増殖は、表３に記載される抗がん治療剤と組み合わせた実施例２の化合物によって阻害される。
【0070】
細胞成長阻害アッセイ
腫瘍細胞株を９６ウェル、黒色の壁のポリ－Ｄ－リジンプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３５４６４０）に播種し、３７℃、５％ＣＯ２で１８～２４時間インキュベートする。化合物をＤＭＳＯ中の１：３希釈液で加え、細胞を３７℃、５％ＣＯ２で７日間インキュベートした。粘着細胞株について、細胞を固定し、ヨウ化プロピジウムで染色し、Ａｃｕｍｅｎ（チャネル３設定）で走査した。懸濁細胞株について、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を使用して細胞成長を監視した。
腫瘍細胞株を９６ウェル、黒色の壁のポリ－Ｄ－リジンプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３５４６４０）に播種し、３７℃、５％ＣＯ２で１８～２４時間インキュベートする。化合物をＤＭＳＯ中の１：３希釈液で加え、細胞を３７℃、５％ＣＯ２で７日間インキュベートした。粘着細胞株について、細胞を固定し、ヨウ化プロピジウムで染色し、Ａｃｕｍｅｎ（チャネル３設定）で走査した。懸濁細胞株について、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を使用して細胞成長を監視した。
【表4】
【0071】
表４は、実施例１および実施例２の化合物によるがん細胞株における成長阻害を示す。
【0072】
ＢｒｏｍｏＫｄＥＬＥＣＴ（登録商標）プラットフォームアッセイ
このアッセイの目的は、インビトロターゲットエンゲージメントおよび選択性を評価することである（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ．ｃｏｍ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｄｒｕｇ－ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ－ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ－ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ－ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ／ｂｒｏｍｏｓｃａｎ－ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ－ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ／ｂｒｏｍｏｋｄｅｌｅｃｔ）。アッセイ測定は、ブロモドメインに関連するＤＮＡ標識を検出する定量的ＰＣＲ技術を使用することによる、試験および対照試料において捕捉されるブロモドメインの量に基づく。ブロモドメイン活性部位に結合する化合物は、固定化されたリガンドへのその結合を防止し、固体支持体に捕捉されるブロモドメインの量を低減するであろう。しかしながら、ブロモドメインに結合しない分子は、固体支持体に捕捉されるタンパク質の量に影響を与えない。よって、化合物活性は、ｑＰＣＲを使用することによって試験対対照試料において捕捉されたブロモドメインの量を測定することによって監視される。試験化合物－ブロモドメイン相互作用の結合親和性は、試験化合物濃度の関数として固体支持体に捕捉されたブロモドメインの量を測定することによって計算される。
このアッセイの目的は、インビトロターゲットエンゲージメントおよび選択性を評価することである（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ．ｃｏｍ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｄｒｕｇ－ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ－ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ－ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ－ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ／ｂｒｏｍｏｓｃａｎ－ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ－ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ／ｂｒｏｍｏｋｄｅｌｅｃｔ）。アッセイ測定は、ブロモドメインに関連するＤＮＡ標識を検出する定量的ＰＣＲ技術を使用することによる、試験および対照試料において捕捉されるブロモドメインの量に基づく。ブロモドメイン活性部位に結合する化合物は、固定化されたリガンドへのその結合を防止し、固体支持体に捕捉されるブロモドメインの量を低減するであろう。しかしながら、ブロモドメインに結合しない分子は、固体支持体に捕捉されるタンパク質の量に影響を与えない。よって、化合物活性は、ｑＰＣＲを使用することによって試験対対照試料において捕捉されたブロモドメインの量を測定することによって監視される。試験化合物－ブロモドメイン相互作用の結合親和性は、試験化合物濃度の関数として固体支持体に捕捉されたブロモドメインの量を測定することによって計算される。
【0073】
実施例１および２の化合物のＣＲＥＢＢＰ、ＥＰ３００、およびＢＲＤ４（ブロモドメイン１（ＢＤ１）およびブロモドメイン２（ＢＤ２））に対する結合親和性（Ｋｄ）は、１１点用量応答研究において決定される（表５を参照されたい）。データは、重複実験の平均として表される。
【表5】
【0074】
表５に示されるように、実施例１の化合物は、ＥＰ３００について０．１６ｎＭの結合親和性およびＣＲＥＢＢＰについて１．１ｎＭの結合親和性を示す。加えて、表５に示されるように、実施例１の化合物の結合親和性は、ＢＲＤ４ブロモドメインよりもＣＲＥＢＢＰ／ＥＰ３００について選択的である。同様に表５に示されるように、実施例２の化合物は、ＥＰ３００について０．０９５ｎＭの結合親和性およびＣＲＥＢＢＰについて０．３２５ｎＭの結合親和性を示す。加えて、表５に示されるように、実施例２の化合物の結合親和性は、ＢＲＤ４ブロモドメインよりもＣＲＥＢＢＰ／ＥＰ３００について選択的である。