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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2023-10-30
(45)【発行日】2023-11-08
(54)【発明の名称】大腸癌の診断を補助する方法、キット及びバイオマーカー
(51)【国際特許分類】
G01N 33/574 20060101AFI20231031BHJP
C07K 14/47 20060101ALN20231031BHJP
C07K 14/81 20060101ALN20231031BHJP
【ＦＩ】
G01N33/574 B
C07K14/47 ZNA
C07K14/81
【請求項の数】
8
(21)【出願番号】P 2021556158
(86)(22)【出願日】2020-11-12
(86)【国際出願番号】 JP2020042344
(87)【国際公開番号】W WO2021095824
(87)【国際公開日】2021-05-20
【審査請求日】2022-05-13
(31)【優先権主張番号】P 2019206727
(32)【優先日】2019-11-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】306037311
【氏名又は名称】富士フイルム株式会社
(73)【特許権者】
【識別番号】505155528
【氏名又は名称】公立大学法人横浜市立大学
(74)【代理人】
【識別番号】110000109
【氏名又は名称】弁理士法人特許事務所サイクス
(72)【発明者】
【氏名】川崎 ナナ
(72)【発明者】
【氏名】太田 悠葵
【審査官】三木 隆
(56)【参考文献】
【文献】特開２０１５－１８４１６８（ＪＰ，Ａ）
【文献】JABERIE Hajar et al.，Evaluation of Alpha 1-Antitrypsin for the Early Diagnosis of Colorectal Cancer，Pathology & Oncology Research，2019年06月10日，Vol.26 No.2，Page.1165-1173
【文献】Cormac McCarthy，The Role and Importance of Glycosylation of Acute Phase Proteins with Focus on Alpha-1 Antitrypsin in Acute and Chronic Inflammatory Conditions，J. Proteome Res，2014年06月03日，Vol.13，Page.3131-3143
【文献】Haidi Yin，Quantitative Analysis of α-1-Antitrypsin Glycosylation Isoforms in HCC Patients Using LC-HCD-PRM-MS，Anal. Chem，2020年05月19日，Vol.92，Page.8201-8208
【文献】L. Renee Ruhaak，Targeted Biomarker Discovery by High Throughput Glycosylation Profiling of Human Plasma Alpha1- Antitrypsin and Immunoglobulin A，PLoS ONE，2013年09月09日，Vol.8 No.9，Page.e73082
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｇ０１Ｎ ３３／５７４
Ｃ０７Ｋ １４／４７
Ｃ０７Ｋ １４／８１
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記（１）に記載された糖鎖を含む、大腸癌の診断を補助するためのバイオマーカー：（１）被検動物由来の試料中に含まれるアルファ１アンチトリプシンに存在する、下記式１’’、式１’’’、式２’’又は式２’’’で表される少なくとも１つの糖鎖であって、前記糖鎖は、アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より７０番目のアスパラギン残基に結合しており、前記試料が全血、血清又は血漿である。
【請求項2】
前記糖鎖が、前記式２’’又は式２’’’で表される糖鎖である、請求項１に記載のバイオマーカー。
【請求項3】
被検動物由来の試料中の、下記（１）に記載の糖鎖を測定することを含み、前記試料が全血、血清又は血漿である、データの取得方法：
（１）アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より７０番目のアスパラギン残基に結合している、下記式１’’、１’’’、２’’又は２’’’で表される少なくとも１つの糖鎖。
【請求項4】
前記糖鎖が、前記式２’’又は式２’’’で表される糖鎖である、請求項３に記載のデータの取得方法。
【請求項5】
被検動物由来の試料中の、下記（１）に記載された糖鎖を測定し、得られた測定結果をカットオフ値と比較する、得られた測定結果を健常動物由来の試料を用いて前記測定により得られた値と比較する、又は、同一の被検動物においてある時点における被検動物由来の測定結果と、異なる時点での被検動物由来の測定結果を比較し、
前記試料が、全血、血清又は血漿である、
大腸癌の診断を補助する方法：
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、下記式１’’、式１’’’、式２’’又は式２’’’で表される少なくとも１つの糖鎖であって、前記糖鎖は、アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より７０番目のアスパラギン残基に結合している。
【請求項6】
前記糖鎖が、前記式２’’又は式２’’’で表される糖鎖である、請求項５に記載の大腸癌の診断を補助する方法。
【請求項7】
下記（１）に記載された糖鎖に親和性を有する物質を含み、全血、血清又は血漿に対して用いられる、大腸癌の診断を補助するための試薬キット：（１）アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のN末端より７０番目のアスパラギン残基に結合している、下記式１’’、式１’’’、式２’’又は式２’’’で表される少なくとも１つの糖鎖。
【請求項8】
前記糖鎖が、前記式２’’又は式２’’’で表される糖鎖である、請求項７に記載の大腸癌の診断を補助するための試薬キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、大腸癌の診断を補助する方法、キット及びバイオマーカーに関する。
【背景技術】
【0002】
糖鎖とは、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、キシロース、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン等の単糖及びこれらの誘導体がグリコシド結合によって鎖状に結合した分子の総称である。
糖鎖は、生体内ではタンパク質や脂質と結合した複合糖質の形態で主に細胞表面に存在しており、細胞の増殖、細菌やウィルスへの感染、神経の伸長、炎症、免疫等の生理作用に関与している。
糖鎖は、生体内ではタンパク質や脂質と結合した複合糖質の形態で主に細胞表面に存在しており、細胞の増殖、細菌やウィルスへの感染、神経の伸長、炎症、免疫等の生理作用に関与している。
【0003】
一方、糖鎖は、大腸癌等の疾患に伴いその構造が変化することも知られている。近年、糖鎖を大腸癌等の疾患のバイオマーカーとして用いるための研究が盛んに行われている。
上記バイオマーカーとしては、例えば、癌胎児性抗原（ＣＥＡ：ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ）、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテイン等が知られている（特許文献１）。
上記バイオマーカーとしては、例えば、癌胎児性抗原（ＣＥＡ：ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ）、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテイン等が知られている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【文献】特開２０１５－１８４１６８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
しかしながら、上記の公知のバイオマーカーは、正確度の点で十分ではなかった。
本発明は、新たな大腸癌のバイオマーカー、キット及び診断補助方法の提供を課題とする。
特に、正確度の高い大腸癌のバイオマーカーの提供を課題とする。
本発明は、新たな大腸癌のバイオマーカー、キット及び診断補助方法の提供を課題とする。
特に、正確度の高い大腸癌のバイオマーカーの提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明は、上記課題を解決する目的でなされたものであり、以下の構成よりなる。
［１］
下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖を含む、大腸癌の診断を補助するためのバイオマーカー：
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、下記式１で表される糖鎖、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４）補体成分９に存在する、下記式１で表される糖鎖。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
［２］
前記糖鎖が、下記（１－１）～（４－１）の何れか１つで表される糖鎖である、［１］に記載のバイオマーカー：
（１－１）アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２－１）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より７９番目のアスパラギン残基、１８６番目のアスパラギン残基又は２６９番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１で表される糖鎖、
（３－１）アルファ１アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より９３番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４－１）補体成分９のアミノ酸配列のＮ末端より４１５番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１で表される糖鎖。
［３］
前記糖鎖が、アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖である、［１］又は［２］に記載のバイオマーカー。
［４］
被検動物由来の試料中の、下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖を測定し、得られた測定結果に基づいて被検動物が大腸癌に罹患しているか否かを判定する、大腸癌の診断を補助する方法：
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、下記式１で表される糖鎖、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４）補体成分９に存在する、下記式１で表される糖鎖。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
［５］
前記糖鎖が、下記（１－１）～（４－１）の何れか１つで表される糖鎖である、［４］に記載の方法：
（１－１）アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２－１）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より７９番目のアスパラギン残基、１８６番目のアスパラギン残基又は２６９番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１で表される糖鎖、
（３－１）アルファ１アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より９３番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４－１）補体成分９のアミノ酸配列のＮ末端より４１５番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１で表される糖鎖。
［６］
前記糖鎖が、アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖である、［４］又は［５］に記載の方法。
［７］
前記試料が、全血、血清又は血漿である、［４］～［６］の何れか１つに記載の方法。
［８］
下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖に親和性を有する物質を含む、大腸癌の診断を補助するための試薬キット：
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、下記式１で表される糖鎖、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４）補体成分９に存在する、下記式１で表される糖鎖。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
［９］
前記糖鎖が、下記（１－１）～（４－１）の何れか１つで表される糖鎖である、［８］に記載の試薬キット：
（１－１）アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２－１）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より７９番目のアスパラギン残基、１８６番目のアスパラギン残基又は２６９番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１で表される糖鎖、
（３－１）アルファ１アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より９３番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４－１）補体成分９のアミノ酸配列のＮ末端より４１５番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１で表される糖鎖。
［１］
下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖を含む、大腸癌の診断を補助するためのバイオマーカー：
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、下記式１で表される糖鎖、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４）補体成分９に存在する、下記式１で表される糖鎖。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
［２］
前記糖鎖が、下記（１－１）～（４－１）の何れか１つで表される糖鎖である、［１］に記載のバイオマーカー：
（１－１）アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２－１）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より７９番目のアスパラギン残基、１８６番目のアスパラギン残基又は２６９番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１で表される糖鎖、
（３－１）アルファ１アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より９３番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４－１）補体成分９のアミノ酸配列のＮ末端より４１５番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１で表される糖鎖。
［３］
前記糖鎖が、アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖である、［１］又は［２］に記載のバイオマーカー。
［４］
被検動物由来の試料中の、下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖を測定し、得られた測定結果に基づいて被検動物が大腸癌に罹患しているか否かを判定する、大腸癌の診断を補助する方法：
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、下記式１で表される糖鎖、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４）補体成分９に存在する、下記式１で表される糖鎖。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
［５］
前記糖鎖が、下記（１－１）～（４－１）の何れか１つで表される糖鎖である、［４］に記載の方法：
（１－１）アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２－１）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より７９番目のアスパラギン残基、１８６番目のアスパラギン残基又は２６９番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１で表される糖鎖、
（３－１）アルファ１アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より９３番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４－１）補体成分９のアミノ酸配列のＮ末端より４１５番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１で表される糖鎖。
［６］
前記糖鎖が、アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖である、［４］又は［５］に記載の方法。
［７］
前記試料が、全血、血清又は血漿である、［４］～［６］の何れか１つに記載の方法。
［８］
下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖に親和性を有する物質を含む、大腸癌の診断を補助するための試薬キット：
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、下記式１で表される糖鎖、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４）補体成分９に存在する、下記式１で表される糖鎖。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
［９］
前記糖鎖が、下記（１－１）～（４－１）の何れか１つで表される糖鎖である、［８］に記載の試薬キット：
（１－１）アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２－１）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より７９番目のアスパラギン残基、１８６番目のアスパラギン残基又は２６９番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１で表される糖鎖、
（３－１）アルファ１アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より９３番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４－１）補体成分９のアミノ酸配列のＮ末端より４１５番目のアスパラギン残基に結合している、前記式１で表される糖鎖。
【発明の効果】
【0007】
本発明の大腸癌の診断を補助するためのバイオマーカー及び方法、並びにそのための試薬キットによれば、高い正確度で大腸癌の診断を補助することができる。
【図面の簡単な説明】
【0008】
【図1】糖ペプチドＡ、Ｂ、Ｃ及びＤのピーク面積値について、大腸癌患者（ｎ＝１８）の平均値及び健常者（ｎ＝２０）の平均値を示した図である。
【図2】糖ペプチドＥ，Ｆ、Ｇ及びＨのピーク面積値について、大腸癌患者（ｎ＝１８）の平均値及び健常者（ｎ＝２０）の平均値を示した図である。
【図3】糖ペプチドＩ、Ｊ、Ｋ及びＬのピーク面積値について、大腸癌患者（ｎ＝１８）の平均値及び健常者（ｎ＝２０）の平均値を示した図である。
【図4】糖ペプチドＭのピーク面積値について、大腸癌患者（ｎ＝１８）の平均値及び健常者（ｎ＝２０）の平均値を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【0009】
＜本発明の大腸癌の診断を補助するためのバイオマーカー＞
本発明の大腸癌の診断を補助するためのバイオマーカー（以下、本発明のバイオマーカーと略記する場合がある。）は、下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖を含むものである。
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖（以下、本発明のバイオマーカー（１）と略記する場合がある。）、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、下記式１で表される糖鎖（以下、本発明のバイオマーカー（２）と略記する場合がある。）、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖（以下、本発明のバイオマーカー（３）と略記する場合がある。）、
（４）補体成分９に存在する、下記式１で表される糖鎖（以下、本発明のバイオマーカー（４）と略記する場合がある。）。
尚、本発明のバイオマーカーは、本発明のバイオマーカー（１）～（４）の何れかを単独で含むものでも、或いは複数種を含むものであってもよい。
以下に本発明のバイオマーカー（１）～（４）についてそれぞれ説明する。
本発明の大腸癌の診断を補助するためのバイオマーカー（以下、本発明のバイオマーカーと略記する場合がある。）は、下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖を含むものである。
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖（以下、本発明のバイオマーカー（１）と略記する場合がある。）、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、下記式１で表される糖鎖（以下、本発明のバイオマーカー（２）と略記する場合がある。）、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖（以下、本発明のバイオマーカー（３）と略記する場合がある。）、
（４）補体成分９に存在する、下記式１で表される糖鎖（以下、本発明のバイオマーカー（４）と略記する場合がある。）。
尚、本発明のバイオマーカーは、本発明のバイオマーカー（１）～（４）の何れかを単独で含むものでも、或いは複数種を含むものであってもよい。
以下に本発明のバイオマーカー（１）～（４）についてそれぞれ説明する。
【0010】
［本発明のバイオマーカー（１）］
本発明のバイオマーカー（１）は、アルファ１アンチトリプシンに存在する下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖を含むものである。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
本発明のバイオマーカー（１）は、アルファ１アンチトリプシンに存在する下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖を含むものである。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
【0011】
上記式１及び２における、Ｎｅｕ５ＡｃはＮ－アセチルノイラミン酸、Ｇａｌはガラクトース、ＧｌｃＮＡｃはＮ－アセチルグルコサミン、Ｍａｎはマンノース、Ｆｕｃはフコース、Ｈは水素原子を表す。
上記式１及び２における、Ｘ１がＨの場合（Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６又は／及びＸ７がＨの場合も同様）、Ｘ１－ＧｌｃＮＡｃは、ＧｌｃＮＡｃを表す。また、上記式１及び２における末端のＡ１がＨの場合（Ａ２、Ａ３、Ａ４又は／及びＡ５がＨの場合も同様）、Ａ１－Ｇａｌ－は、Ｇａｌ－を表す。以下、本明細書において同じ意味を表す。
上記式１及び２における、Ｘ１がＨの場合（Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６又は／及びＸ７がＨの場合も同様）、Ｘ１－ＧｌｃＮＡｃは、ＧｌｃＮＡｃを表す。また、上記式１及び２における末端のＡ１がＨの場合（Ａ２、Ａ３、Ａ４又は／及びＡ５がＨの場合も同様）、Ａ１－Ｇａｌ－は、Ｇａｌ－を表す。以下、本明細書において同じ意味を表す。
【0012】
尚、本発明のバイオマーカー（１）としては、上記式１で表される糖鎖及び上記式２で表される糖鎖のうち、式１で表される糖鎖のみを有するものでも、式２で表される糖鎖のみを有するものでも、式１で表される糖鎖と式２で表される糖鎖の両方を有するものでもよい。また、式１に含まれる単一の糖鎖のみを有するものでも、式１に含まれる複数の糖鎖を有するものでもよく、式２に含まれる単一の糖鎖のみを有するものでも、式２に含まれる複数の糖鎖を有するものでもよい。
【0013】
本発明のバイオマーカー（１）に係るアルファ１アンチトリプシンとは、３９４個のアミノ酸からなる糖タンパク質であり、主に肝細胞で生成され、種々の炎症時に血中で増加する急性相反応物質の一つである。また、血中における最も主要なプロテアーゼインヒビターとして機能していることも知られている。
また、上記アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列は、例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ（アクセッション番号：Ｐ０１００９）等のデータベースに登録されている。
本発明のバイオマーカー（１）に係るアルファ１アンチトリプシンは、上記データベースに登録されているもののみならず、生体内で生じ得る変異体等も含む。例えば、当該アルファ１アンチトリプシンにおいて１～５個、好ましくは１又は２個のアミノ酸が欠失、置換又は／及び付加されたものであって、多型性や突然変異等により生じるものである。
但し、変異体であっても、本発明のバイオマーカー（１）における式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖とアルファ１アンチトリプシンとの結合部位である、当該アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）が保存されているものが好ましい。
また、上記アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列は、例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ（アクセッション番号：Ｐ０１００９）等のデータベースに登録されている。
本発明のバイオマーカー（１）に係るアルファ１アンチトリプシンは、上記データベースに登録されているもののみならず、生体内で生じ得る変異体等も含む。例えば、当該アルファ１アンチトリプシンにおいて１～５個、好ましくは１又は２個のアミノ酸が欠失、置換又は／及び付加されたものであって、多型性や突然変異等により生じるものである。
但し、変異体であっても、本発明のバイオマーカー（１）における式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖とアルファ１アンチトリプシンとの結合部位である、当該アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）が保存されているものが好ましい。
【0014】
本発明のバイオマーカー（１）における式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖（末端のＮ－アセチルグルコサミン）は、アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）に結合（Ｎ－グリコシド結合）しているものが好ましい。
以下に、本発明のバイオマーカー（１）における式１又は２で表される糖鎖について、それぞれ説明する。
以下に、本発明のバイオマーカー（１）における式１又は２で表される糖鎖について、それぞれ説明する。
【0015】
［アルファ１アンチトリプシンに存在する式１で表される糖鎖］
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
【0016】
上記式１におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３は、下記表１に示す組み合わせが好ましく、組み合わせ４～７がより好ましい。
【0017】
【表1】
【0018】
上記式１におけるＡ１及びＡ２は、下記表２に示す組み合わせが好ましく、組み合わせ１、２及び４がより好ましい。
【0019】
【表2】
【0020】
上記式１におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２の組み合わせとしては、下記表３に示すものが好ましく、組み合わせ１６、１７、１９、２１、２２、２４、２６、２７、２９、３１、３２及び３４がより好ましい。
【0021】
【表3】
【0022】
上記式１で表される糖鎖は、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、Ｇａｌ、Ｎｅｕ５Ａｃ、Ｆｕｃ等の各単糖同士の結合様式により、例えば、下記式１’で表されるものが好ましい。
（式１’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ）
（式１’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ）
【0023】
更に、上記式１’は、下記式１’’又は式１’’’で表されるものが好ましい。
【0024】
（式１’’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ（但し、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３の何れか１つがＦｕｃ、残り２つがそれぞれＨであり、Ａ１及びＡ２におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
（式１’’’中、Ａ１及びＡ２は、上記と同じ（但し、Ａ１及びＡ２におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
（式１’’’中、Ａ１及びＡ２は、上記と同じ（但し、Ａ１及びＡ２におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
【0025】
上記式１’、式１’’及び式１’’’におけるＸ１、Ｘ２又はＸ３がＦｕｃである場合、Ｆｕｃは、例えば、α１－６グリコシド結合によりＧｌｃＮＡｃと結合するのが好ましい。Ａ１又は／及びＡ２がＮｅｕ５Ａｃである場合、Ｎｅｕ５Ａｃは、例えば、α２－３グリコシド結合又はα２－６グリコシド結合によりＧａｌと結合するのが好ましい。また、Ａ１又はＡ２がＮｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃである場合、Ｎｅｕ５Ａｃは、例えば、α２－８グリコシド結合によりＮｅｕ５Ａｃと結合するのが好ましい。
式１’、式１’’及び式１’’’におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２の具体例、組み合わせは、上記式１と同じである。
式１’、式１’’及び式１’’’におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２の具体例、組み合わせは、上記式１と同じである。
【0026】
［アルファ１アンチトリプシンに存在する式２で表される糖鎖］
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
【0027】
上記式２におけるＸ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７は、例えば、下記表４に示す組み合わせが好ましい。
【0028】
【表4】
【0029】
上記式２におけるＡ３、Ａ４及びＡ５は、下記表５に示す組み合わせが好ましい。
【0030】
【表5】
【0031】
上記式２におけるＸ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５の組み合わせとしては、下記表６に示すものが好ましい。
【0032】
【表6】
【0033】
上記式２で表される糖鎖は、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、Ｇａｌ、Ｎｅｕ５Ａｃ、Ｆｕｃ等の各単糖同士の結合様式により、例えば、下記式２’で表されるものが好ましい。
（式２’中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５は、上記と同じ）
（式２’中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５は、上記と同じ）
【0034】
更に、上記式２’は、下記式２’’又は式２’’’で表されるものが好ましい。
（式２’’中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５は、上記と同じ（但し、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７の何れか１つがＦｕｃ、残り３つがそれぞれＨであり、Ａ３、Ａ４及びＡ５におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
（式２’’中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５は、上記と同じ（但し、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７の何れか１つがＦｕｃ、残り３つがそれぞれＨであり、Ａ３、Ａ４及びＡ５におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
【0035】
（式２’’’中、Ａ３、Ａ４及びＡ５は、上記と同じ（但し、Ａ３、Ａ４及びＡ５におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
【0036】
上記式２’、式２’’及び式２’’’におけるＸ４、Ｘ５、Ｘ６又はＸ７がＦｕｃである場合、Ｆｕｃは、例えば、α１－６グリコシド結合によりＧｌｃＮＡｃと結合するのが好ましい。Ａ３、Ａ４又は／及びＡ５がＮｅｕ５Ａｃである場合、Ｎｅｕ５Ａｃは、例えば、α２－３グリコシド結合又はα２－６グリコシド結合によりＧａｌと結合するのが好ましい。また、Ａ３、Ａ４又はＡ５がＮｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃである場合、Ｎｅｕ５Ａｃは、例えば、α２－８グリコシド結合によりＮｅｕ５Ａｃと結合するのが好ましい。
式２’、式２’’及び式２’’’におけるＸ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５の具体例、組み合わせは、上記式２と同じである。
式２’、式２’’及び式２’’’におけるＸ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５の具体例、組み合わせは、上記式２と同じである。
【0037】
本発明のバイオマーカー（１）、即ち、アルファ１アンチトリプシンに存在する式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖を含む、バイオマーカーとしては、（ｉ）アルファ１アンチトリプシンに存在する式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖そのもの、（ｉｉ）式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖が結合したアルファ１アンチトリプシン、（ｉｉｉ）アルファ１アンチトリプシンの一部分であって、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖が結合したペプチド断片等が挙げられ、（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）が好ましい。
尚、上記ペプチド断片とは、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖とアルファ１アンチトリプシンとの結合部位である、アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）を少なくとも有する任意の断片である。具体的には、例えば、生体内で生じるものや、アルファ１アンチトリプシンを、トリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、ＡｓｐＮ等のプロテアーゼ処理に付した結果生じるものが挙げられ、より具体的には、２～５０個のアミノ酸残基からなるもの等が挙げられ、配列番号１で表されるものが好ましい。
尚、上記ペプチド断片とは、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖とアルファ１アンチトリプシンとの結合部位である、アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）を少なくとも有する任意の断片である。具体的には、例えば、生体内で生じるものや、アルファ１アンチトリプシンを、トリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、ＡｓｐＮ等のプロテアーゼ処理に付した結果生じるものが挙げられ、より具体的には、２～５０個のアミノ酸残基からなるもの等が挙げられ、配列番号１で表されるものが好ましい。
【0038】
［本発明のバイオマーカー（２）］
本発明のバイオマーカー（２）は、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する下記式１で表される少なくとも１つの糖鎖を含むものである。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
尚、本発明のバイオマーカー（２）としては、上記式１に含まれる単一の糖鎖のみを有するものでも、式１に含まれる複数の糖鎖を有するものでもよい。
本発明のバイオマーカー（２）は、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する下記式１で表される少なくとも１つの糖鎖を含むものである。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
尚、本発明のバイオマーカー（２）としては、上記式１に含まれる単一の糖鎖のみを有するものでも、式１に含まれる複数の糖鎖を有するものでもよい。
【0039】
本発明のバイオマーカー（２）に係るロイシンリッチアルファ２グリコプロテインとは、血液に含まれるタンパク質であり、ロイシンリッチリピート構造を有することを特徴とするものである。関節リウマチ、炎症性腸疾患等種々の疾患に関与していることが報告されている。
また、上記ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列は、例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ（アクセッション番号：Ｐ０２７５０）等のデータベースに登録されている。
本発明のバイオマーカー（２）に係るロイシンリッチアルファ２グリコプロテインは、上記データベースに登録されているもののみならず、生体内で生じ得る変異体等も含む。例えば、当該ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインにおいて１～５個、好ましくは１又は２個のアミノ酸が欠失、置換又は／及び付加されたものであって、多型性や突然変異等により生じるものである。
但し、変異体であっても、本発明のバイオマーカー（２）における式１で表される糖鎖とロイシンリッチアルファ２グリコプロテインとの結合部位である、当該ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より７９番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）、１８６番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）、又は２６９番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）が保存されているものが好ましい。
また、上記ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列は、例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ（アクセッション番号：Ｐ０２７５０）等のデータベースに登録されている。
本発明のバイオマーカー（２）に係るロイシンリッチアルファ２グリコプロテインは、上記データベースに登録されているもののみならず、生体内で生じ得る変異体等も含む。例えば、当該ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインにおいて１～５個、好ましくは１又は２個のアミノ酸が欠失、置換又は／及び付加されたものであって、多型性や突然変異等により生じるものである。
但し、変異体であっても、本発明のバイオマーカー（２）における式１で表される糖鎖とロイシンリッチアルファ２グリコプロテインとの結合部位である、当該ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より７９番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）、１８６番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）、又は２６９番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）が保存されているものが好ましい。
【0040】
本発明のバイオマーカー（２）における式１で表される糖鎖（末端のＮ－アセチルグルコサミン）は、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より７９番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）、１８６番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）、又は２６９番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）に結合（Ｎ－グリコシド結合）しているものが好ましい。
以下に、本発明のバイオマーカー（２）における式１で表される糖鎖について、説明する。
以下に、本発明のバイオマーカー（２）における式１で表される糖鎖について、説明する。
【0041】
［ロイシンリッチアルファ２グリコプロテイに存在する式１で表される糖鎖］
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
【0042】
上記式１におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３は、上記表１に示す組み合わせが好ましい。
【0043】
上記式１におけるＡ１及びＡ２は、上記表２に示す組み合わせが好ましい。
【0044】
上記式１におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２の組み合わせとしては、上記表３に示すものが好ましい。
【0045】
上記式１で表される糖鎖は、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、Ｇａｌ、Ｎｅｕ５Ａｃ、Ｆｕｃ等の各単糖同士の結合様式により、例えば、下記式１’で表されるものが好ましい。
（式１’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ）
（式１’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ）
【0046】
更に、上記式１’は、下記式１’’、式１’’’又は式１’’’’で表されるものが好ましい。
（式１’’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ（但し、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３の何れか１つがＦｕｃ、残り２つがそれぞれＨであり、Ａ１及びＡ２におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
（式１’’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ（但し、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３の何れか１つがＦｕｃ、残り２つがそれぞれＨであり、Ａ１及びＡ２におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
【0047】
（式１’’’中、Ａ１及びＡ２は、上記と同じ（但し、Ａ１及びＡ２におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
【0048】
（式１’’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ（但し、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３の何れか２つがそれぞれＦｕｃ、残り１つがＨであり、Ａ１及びＡ２におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が１である））
【0049】
上記式１’、式１’’、式１’’’及び式１’’’’におけるＸ１、Ｘ２又はＸ３がＦｕｃである場合、Ｆｕｃは、例えば、α１－６グリコシド結合によりＧｌｃＮＡｃと結合するのが好ましい。Ａ１又は／及びＡ２がＮｅｕ５Ａｃである場合、Ｎｅｕ５Ａｃは、例えば、α２－３グリコシド結合又はα２－６グリコシド結合によりＧａｌと結合するのが好ましい。また、Ａ１又はＡ２がＮｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃである場合、Ｎｅｕ５Ａｃは、例えば、α２－８グリコシド結合によりＮｅｕ５Ａｃと結合するのが好ましい。
式１’、式１’’及び式１’’’におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２の具体例、組み合わせは、上記式１と同じである。
式１’、式１’’及び式１’’’におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２の具体例、組み合わせは、上記式１と同じである。
【0050】
本発明のバイオマーカー（２）、即ち、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する式１で表される糖鎖を含む、バイオマーカーとしては、（ｉ）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する式１で表される糖鎖そのもの、（ｉｉ）式１で表される糖鎖が結合したロイシンリッチアルファ２グリコプロテイン、（ｉｉｉ）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインの一部分であって、式１で表される糖鎖が結合したペプチド断片等が挙げられ、（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）が好ましい。
尚、上記ペプチド断片とは、式１で表される糖鎖とロイシンリッチアルファ２グリコプロテインとの結合部位である、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）、１８６番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）、又は２６９番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）を少なくとも有する任意の断片である。具体的には、例えば、生体内で生じるものや、アルファ１アンチトリプシンを、トリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、ＡｓｐＮ等のプロテアーゼ処理に付した結果生じるものが挙げられ、より具体的には、２～５０個のアミノ酸残基からなるもの等が挙げられ、配列番号２、配列番号３又は配列番号４で表されるものが好ましい。
尚、上記ペプチド断片とは、式１で表される糖鎖とロイシンリッチアルファ２グリコプロテインとの結合部位である、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）、１８６番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）、又は２６９番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）を少なくとも有する任意の断片である。具体的には、例えば、生体内で生じるものや、アルファ１アンチトリプシンを、トリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、ＡｓｐＮ等のプロテアーゼ処理に付した結果生じるものが挙げられ、より具体的には、２～５０個のアミノ酸残基からなるもの等が挙げられ、配列番号２、配列番号３又は配列番号４で表されるものが好ましい。
【0051】
［本発明のバイオマーカー（３）］
本発明のバイオマーカー（３）は、アルファ１アンチキモトリプシンに存在する下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖を含むものである。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
本発明のバイオマーカー（３）は、アルファ１アンチキモトリプシンに存在する下記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖を含むものである。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
【0052】
尚、本発明のバイオマーカー（３）としては、上記式１で表される糖鎖及び上記式２で表される糖鎖のうち、式１で表される糖鎖のみを有するものでも、式２で表される糖鎖のみを有するものでも、式１で表される糖鎖と式２で表される糖鎖の両方を有するものでもよい。また、式１に含まれる単一の糖鎖のみを有するものでも、式１に含まれる複数の糖鎖を有するものでもよく、式２に含まれる単一の糖鎖のみを有するものでも、式２に含まれる複数の糖鎖を有するものでもよい。
【0053】
本発明のバイオマーカー（３）に係るアルファ１アンチキモトリプシンとは、４３３個のアミノ酸からなる糖タンパク質であり、血清中に存在するセリンプロテアーゼインヒビターファミリーの１つである。また、血中における最も主要なプロテアーゼインヒビターとして機能していることが知られている。
また、上記アルファ１アンチキモトリプシンのアミノ酸配列は、例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ（アクセッション番号：Ｐ０１０１１）等のデータベースに登録されている。
本発明のバイオマーカー（３）に係るアルファ１アンチキモトリプシンは、上記データベースに登録されているもののみならず、生体内で生じ得る変異体等も含む。例えば、当該アルファ１アンチキモトリプシンにおいて１～５個、好ましくは１又は２個のアミノ酸が欠失、置換又は／及び付加されたものであって、多型性や突然変異等により生じるものである。
但し、変異体であっても、本発明のバイオマーカー（３）における式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖とアルファ１アンチキモトリプシとの結合部位である、当該アルファ１アンチキモトリプシのアミノ酸配列のＮ末端より９３番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）が保存されているものが好ましい。
また、上記アルファ１アンチキモトリプシンのアミノ酸配列は、例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ（アクセッション番号：Ｐ０１０１１）等のデータベースに登録されている。
本発明のバイオマーカー（３）に係るアルファ１アンチキモトリプシンは、上記データベースに登録されているもののみならず、生体内で生じ得る変異体等も含む。例えば、当該アルファ１アンチキモトリプシンにおいて１～５個、好ましくは１又は２個のアミノ酸が欠失、置換又は／及び付加されたものであって、多型性や突然変異等により生じるものである。
但し、変異体であっても、本発明のバイオマーカー（３）における式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖とアルファ１アンチキモトリプシとの結合部位である、当該アルファ１アンチキモトリプシのアミノ酸配列のＮ末端より９３番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）が保存されているものが好ましい。
【0054】
本発明のバイオマーカー（３）における式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖（末端のＮ－アセチルグルコサミン）は、アルファ１アンチキモトリプシのアミノ酸配列のＮ末端より９３番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）に結合（Ｎ－グリコシド結合）しているものが好ましい。
以下に、本発明のバイオマーカー（３）における式１又は２で表される糖鎖について、それぞれ説明する。
以下に、本発明のバイオマーカー（３）における式１又は２で表される糖鎖について、それぞれ説明する。
【0055】
［アルファ１アンチキモトリプシンに存在する式１で表される糖鎖］
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
【0056】
上記式１におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３は、上記表１に示す組み合わせが好ましく、組み合わせ４～７がより好ましい。
【0057】
上記式１におけるＡ１及びＡ２は、上記表２に示す組み合わせが好ましく、組み合わせ１、２及び４がより好ましい。
【0058】
上記式１におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２の組み合わせとしては、上記表３に示すものが好ましく、組み合わせ１６、１７、１９、２１、２２、２４、２６、２７、２９、３１、３２及び３４がより好ましい。
【0059】
上記式１で表される糖鎖は、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、Ｇａｌ、Ｎｅｕ５Ａｃ、Ｆｕｃ等の各単糖同士の結合様式により、例えば、下記式１’で表されるものが好ましい。
（式１’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ）
（式１’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ）
【0060】
更に、上記式１’は、下記式１’’又は式１’’’で表されるものが好ましい。
（式１’’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ（但し、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３の何れか１つがＦｕｃ、残り２つがそれぞれＨであり、Ａ１及びＡ２におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
（式１’’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ（但し、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３の何れか１つがＦｕｃ、残り２つがそれぞれＨであり、Ａ１及びＡ２におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
【0061】
（式１’’’中、Ａ１及びＡ２は、上記と同じ（但し、Ａ１及びＡ２におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
【0062】
上記式１’、式１’’及び式１’’’におけるＸ１、Ｘ２又はＸ３がＦｕｃである場合、Ｆｕｃは、例えば、α１－６グリコシド結合によりＧｌｃＮＡｃと結合するのが好ましい。Ａ１又は／及びＡ２がＮｅｕ５Ａｃである場合、Ｎｅｕ５Ａｃは、例えば、α２－３グリコシド結合又はα２－６グリコシド結合によりＧａｌと結合するのが好ましい。また、Ａ１又はＡ２がＮｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃである場合、Ｎｅｕ５Ａｃは、例えば、α２－８グリコシド結合によりＮｅｕ５Ａｃと結合するのが好ましい。
式１’、式１’’及び式１’’’におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２の具体例、組み合わせは、上記式１と同じである。
式１’、式１’’及び式１’’’におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２の具体例、組み合わせは、上記式１と同じである。
【0063】
［アルファ１アンチキモトリプシンに存在する式２で表される糖鎖］
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式２中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ３、Ａ４及びＡ５はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
【0064】
上記式２におけるＸ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７は、例えば、上記表４に示す組み合わせが好ましい。
【0065】
上記式２におけるＡ３、Ａ４及びＡ５は、上記表５に示す組み合わせが好ましい。
【0066】
上記式２におけるＸ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５の組み合わせとしては、上記表６に示すものが好ましい。
【0067】
上記式２で表される糖鎖は、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、Ｇａｌ、Ｎｅｕ５Ａｃ、Ｆｕｃ等の各単糖同士の結合様式により、例えば、下記式２’で示されるものが好ましい。
（式２’中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５は、上記と同じ）
（式２’中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５は、上記と同じ）
【0068】
更に、上記式２’は、下記式２’’又は式２’’’で表されるものが好ましい。
（式２’中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５は、上記と同じ（但し、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７の何れか１つがＦｕｃ、残り３つがそれぞれＨであり、Ａ３、Ａ４及びＡ５におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
（式２’中、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５は、上記と同じ（但し、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７の何れか１つがＦｕｃ、残り３つがそれぞれＨであり、Ａ３、Ａ４及びＡ５におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
【0069】
（式２’’’中、Ａ３、Ａ４及びＡ５は、上記と同じ（但し、Ａ３、Ａ４及びＡ５におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
【0070】
上記式２’、式２’’及び式２’’’におけるＸ４、Ｘ５、Ｘ６又はＸ７がＦｕｃである場合、Ｆｕｃは、例えば、α１－６グリコシド結合によりＧｌｃＮＡｃと結合するのが好ましい。Ａ３、Ａ４又はＡ５がＮｅｕ５Ａｃである場合、Ｎｅｕ５Ａｃは、例えば、α２－３グリコシド結合又はα２－６グリコシド結合によりＧａｌと結合するのが好ましい。また、Ａ１又はＡ２がＮｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃである場合、Ｎｅｕ５Ａｃは、例えば、α２－８グリコシド結合によりＮｅｕ５Ａｃと結合するのが好ましい。
式２’、式２’’及び式２’’’におけるＸ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５の具体例、組み合わせは、上記式１と同じである。
式２’、式２’’及び式２’’’におけるＸ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７、並びにＡ３、Ａ４及びＡ５の具体例、組み合わせは、上記式１と同じである。
【0071】
本発明のバイオマーカー（３）、即ち、アルファ１アンチキモトリプシンに存在する式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖を含む、バイオマーカーとしては、（ｉ）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖そのもの、（ｉｉ）式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖が結合したアルファ１アンチキモトリプシン、（ｉｉｉ）アルファ１アンチキモトリプシンの一部分であって、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖が結合したペプチド断片等が挙げられ、（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）が好ましい。
尚、上記ペプチド断片とは、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖とアルファ１アンチキモトリプシンとの結合部位である、アルファ１アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より９３番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）を少なくとも有する任意の断片である。具体的には、例えば、生体内で生じるものや、アルファ１アンチキモトリプシンを、トリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、ＡｓｐＮ等のプロテアーゼ処理に付した結果生じるものが挙げられ、より具体的には、２～５０個のアミノ酸残基からなるもの等が挙げられ、配列番号５で表されるものが好ましい。
尚、上記ペプチド断片とは、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖とアルファ１アンチキモトリプシンとの結合部位である、アルファ１アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より９３番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）を少なくとも有する任意の断片である。具体的には、例えば、生体内で生じるものや、アルファ１アンチキモトリプシンを、トリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、ＡｓｐＮ等のプロテアーゼ処理に付した結果生じるものが挙げられ、より具体的には、２～５０個のアミノ酸残基からなるもの等が挙げられ、配列番号５で表されるものが好ましい。
【0072】
［本発明のバイオマーカー（４）］
本発明のバイオマーカー（４）は、補体成分９に存在する下記式１で表される糖鎖を含むものである。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
本発明のバイオマーカー（４）は、補体成分９に存在する下記式１で表される糖鎖を含むものである。
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
【0073】
本発明のバイオマーカー（４）に係る補体成分９とは、免疫反応（抗原抗体反応）を補助するタンパク質の１つである。生理的な機能としては、抗原のオプソニン化、膜侵襲複合体による細菌の破壊、マクロファージ等の貪食細胞の活性化等が知られている。
また、上記補体成分９のアミノ酸配列は、例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ（アクセッション番号：Ｐ０２７４８）等のデータベースに登録されている。
本発明のバイオマーカー（４）に係る補体成分９は、上記データベースに登録されているもののみならず、生体内で生じ得る変異体等も含む。例えば、当該補体成分９において１～５個、好ましくは１又は２個のアミノ酸が欠失、置換又は／及び付加されたものであって、多型性や突然変異等により生じるものである。
但し、変異体であっても、本発明のバイオマーカー（４）における式１で表される糖鎖と補体成分９との結合部位である、当該補体成分９のアミノ酸配列のＮ末端より４１５番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）が保存されているものが好ましい。
また、上記補体成分９のアミノ酸配列は、例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ（アクセッション番号：Ｐ０２７４８）等のデータベースに登録されている。
本発明のバイオマーカー（４）に係る補体成分９は、上記データベースに登録されているもののみならず、生体内で生じ得る変異体等も含む。例えば、当該補体成分９において１～５個、好ましくは１又は２個のアミノ酸が欠失、置換又は／及び付加されたものであって、多型性や突然変異等により生じるものである。
但し、変異体であっても、本発明のバイオマーカー（４）における式１で表される糖鎖と補体成分９との結合部位である、当該補体成分９のアミノ酸配列のＮ末端より４１５番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）が保存されているものが好ましい。
【0074】
本発明のバイオマーカー（４）における式１で表される糖鎖（末端のＮ－アセチルグルコサミン）は、補体成分９のアミノ酸配列のＮ末端より４１５番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）に結合（Ｎ－グリコシド結合）しているものが好ましい。
以下に、本発明のバイオマーカー（４）における式１で表される糖鎖について、それぞれ説明する。
以下に、本発明のバイオマーカー（４）における式１で表される糖鎖について、それぞれ説明する。
【0075】
［補体成分９に存在する式１で表される糖鎖］
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
（式１中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３はそれぞれ独立してＦｕｃ又はＨを表し、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立してＮｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃ又はＨを表す）
【0076】
上記式１におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３は、上記表１に示す組み合わせが好ましく、組み合わせ７がより好ましい。
【0077】
上記式１におけるＡ１及びＡ２は、上記表２に示す組み合わせが好ましく、組み合わせ１、２及び４がより好ましい。
【0078】
上記式１におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２の組み合わせとしては、上記表３に示すものが好ましく、組み合わせ３１、３２及び３４がより好ましい。
【0079】
上記式１で表される糖鎖は、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、Ｇａｌ、Ｎｅｕ５Ａｃ、Ｆｕｃ等の各単糖同士の結合様式により、例えば、下記式１’で示されるものが好ましい。
（式１’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ）
（式１’中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２は、上記と同じ）
【0080】
更に、上記式１’は、下記式１’’’で表されるものが好ましい。
（式１’’’中、Ａ１及びＡ２は、上記と同じ（但し、Ａ１及びＡ２におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
（式１’’’中、Ａ１及びＡ２は、上記と同じ（但し、Ａ１及びＡ２におけるＮｅｕ５Ａｃの総数が２である））
【0081】
上記式１’におけるＸ１、Ｘ２又はＸ３がＦｕｃである場合、Ｆｕｃは、例えば、α１－６グリコシド結合によりＧｌｃＮＡｃと結合するのが好ましい。上記式１’及び式１’’’におけるＡ１又は／及びＡ２がＮｅｕ５Ａｃである場合、Ｎｅｕ５Ａｃは、例えば、α２－３グリコシド結合又はα２－６グリコシド結合によりＧａｌと結合するのが好ましい。また、Ａ１又はＡ２がＮｅｕ５Ａｃ－Ｎｅｕ５Ａｃである場合、Ｎｅｕ５Ａｃは、例えば、α２－８グリコシド結合によりＮｅｕ５Ａｃと結合するのが好ましい。
式１’及び式１’’’におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２の具体例、組み合わせは、上記式１と同じである。
式１’及び式１’’’におけるＸ１、Ｘ２及びＸ３、並びにＡ１及びＡ２の具体例、組み合わせは、上記式１と同じである。
【0082】
本発明のバイオマーカー（４）、即ち、補体成分９に存在する式１で表される糖鎖を含む、バイオマーカーとしては、（ｉ）補体成分９に存在する式１で表される糖鎖そのもの、（ｉｉ）式１で表される糖鎖が結合した補体成分９、（ｉｉｉ）補体成分９の一部分であって、式１で表される糖鎖が結合したペプチド断片等が挙げられ、（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）が好ましい。
尚、上記ペプチド断片とは、式１で表される糖鎖と補体成分９との結合部位である、補体成分９のアミノ酸配列のＮ末端より４１５番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）を少なくとも有する任意の断片である。具体的には、例えば、生体内で生じるものや、補体成分９を、トリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、ＡｓｐＮ等のプロテアーゼ処理に付した結果生じるものが挙げられ、より具体的には、２～５０個のアミノ酸残基からなるもの等が挙げられ、配列番号６で表されるものが好ましい。
尚、上記ペプチド断片とは、式１で表される糖鎖と補体成分９との結合部位である、補体成分９のアミノ酸配列のＮ末端より４１５番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）を少なくとも有する任意の断片である。具体的には、例えば、生体内で生じるものや、補体成分９を、トリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、ＡｓｐＮ等のプロテアーゼ処理に付した結果生じるものが挙げられ、より具体的には、２～５０個のアミノ酸残基からなるもの等が挙げられ、配列番号６で表されるものが好ましい。
【0083】
本発明のバイオマーカーとしては、（ｉ）アルファ１アンチトリプシンに存在する、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖を含むもの又は（ｉｉ）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、式１で表される糖鎖を含むものが好ましく、（ｉ）アルファ１アンチトリプシンに存在する、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖を含むものがより好ましく、（ｉｉｉ）アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列Ｎ末端より７０番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）に結合している式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖が特に好ましい。
【0084】
［本発明に係る大腸癌］
本発明に係る大腸癌とは、大腸から発生した癌（悪性腫瘍）のことである。本発明に係る大腸癌には、例えば、結腸癌、直腸癌等が含まれる。
本発明に係る大腸癌とは、大腸から発生した癌（悪性腫瘍）のことである。本発明に係る大腸癌には、例えば、結腸癌、直腸癌等が含まれる。
【0085】
＜本発明の大腸癌の診断を補助する方法＞
本発明の大腸癌の診断を補助する方法（以下、本発明の補助方法と略記する場合がある）は、被検動物由来の試料中の下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖を測定し（以下、本発明に係る測定工程と略記する場合がある）、得られた測定結果に基づいて被検動物が大腸癌に罹患しているか否かを判定すること（以下、本発明に係る判定工程と略記する場合がある）によりなされる。
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、上記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖（本発明のバイオマーカー（１））、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、上記式１で表される糖鎖（本発明のバイオマーカー（２））、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、上記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖（本発明のバイオマーカー（３））、
（４）補体成分９に存在する、上記式１で表される糖鎖（本発明のバイオマーカー（４））
尚、本発明の補助方法は、本発明のバイオマーカー（１）～（４）の何れか単独を用いてなされても、或いは複数種を用いてなされてもよい。
本発明の大腸癌の診断を補助する方法（以下、本発明の補助方法と略記する場合がある）は、被検動物由来の試料中の下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖を測定し（以下、本発明に係る測定工程と略記する場合がある）、得られた測定結果に基づいて被検動物が大腸癌に罹患しているか否かを判定すること（以下、本発明に係る判定工程と略記する場合がある）によりなされる。
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、上記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖（本発明のバイオマーカー（１））、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、上記式１で表される糖鎖（本発明のバイオマーカー（２））、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、上記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖（本発明のバイオマーカー（３））、
（４）補体成分９に存在する、上記式１で表される糖鎖（本発明のバイオマーカー（４））
尚、本発明の補助方法は、本発明のバイオマーカー（１）～（４）の何れか単独を用いてなされても、或いは複数種を用いてなされてもよい。
【0086】
［本発明に係る被検動物］
本発明に係る被検動物としては、ヒト、サル、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ブタ、ウサギ、チンパンジー等の哺乳動物が挙げられ、ヒト、サル、マウス又はラットが好ましく、ヒトがより好ましい。
本発明に係る被検動物としては、ヒト、サル、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ブタ、ウサギ、チンパンジー等の哺乳動物が挙げられ、ヒト、サル、マウス又はラットが好ましく、ヒトがより好ましい。
【0087】
［本発明に係る試料］
本発明に係る試料としては、上記被検動物由来のものであればよく、例えば、血清、血漿、全血、尿、唾液、脳脊髄液、組織液、汗、涙、羊水、骨髄液、胸水、腹水、間接液、眼房水、硝子体液等の生体由来試料が挙げられ、血清、血漿、全血等の血液由来試料が好ましく、血清がより好ましい。
本発明に係る試料としては、上記被検動物由来のものであればよく、例えば、血清、血漿、全血、尿、唾液、脳脊髄液、組織液、汗、涙、羊水、骨髄液、胸水、腹水、間接液、眼房水、硝子体液等の生体由来試料が挙げられ、血清、血漿、全血等の血液由来試料が好ましく、血清がより好ましい。
【0088】
本発明に係る試料を上記被検動物から得る（採取する）方法は、特に限定されず、例えば、自体公知の方法に基づいて、当該被検動物から当該試料を得る（採取する）ことによりなされればよく、要すれば自体公知の方法に従って、分離、濃縮、精製等を行ってもよい。
尚、上記試料は、上記被検動物から得られた（採取された）直後のものであっても、当該試料を保存したものであってもよい。試料を保存する方法としては、通常この分野で行われている方法であれば何れでもよい。
尚、上記試料は、上記被検動物から得られた（採取された）直後のものであっても、当該試料を保存したものであってもよい。試料を保存する方法としては、通常この分野で行われている方法であれば何れでもよい。
【0089】
［本発明に係る測定工程］
本発明に係る測定工程は、下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖を測定することによりなされる。
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、上記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、上記式１で表される糖鎖、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、上記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４）補体成分９に存在する、下記式１で表される糖鎖
尚、本発明に係る測定工程としては、本発明のバイオマーカー（１）～（４）の何れか単独を測定することによりなされても、或いは複数種を測定することによりなされてもよい。
本発明に係る測定工程は、下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖を測定することによりなされる。
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、上記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、上記式１で表される糖鎖、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、上記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４）補体成分９に存在する、下記式１で表される糖鎖
尚、本発明に係る測定工程としては、本発明のバイオマーカー（１）～（４）の何れか単独を測定することによりなされても、或いは複数種を測定することによりなされてもよい。
【0090】
本発明に係る測定工程における上記（１）～（４）から選ばれる糖鎖の測定とは、本発明のバイオマーカー（１）～（４）から選ばれる１つを測定することであり、具体的には、例えば、（ｉ）本発明のバイオマーカーにおけるコアタンパク質に結合した（由来する）糖鎖そのものの量の測定、（ｉｉ）本発明のバイオマーカーにおける糖鎖が結合したコアタンパク質の量の測定、（ｉｉｉ）本発明のバイオマーカーにおけるコアタンパク質の一部分であって、糖鎖が結合したペプチド断片の量の測定等が挙げられ、（ｉｉ）又は（ｉｉｉ）が好ましい。
上記本発明のバイオマーカーにおけるコアタンパク質とは、本発明のバイオマーカーにおける糖鎖以外の部分を意味し、本発明のバイオマーカー（１）であれば、アルファ１アンチトリプシンを意味し、本発明のバイオマーカー（２）であれば、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインを意味し、本発明のバイオマーカー（３）であれば、アルファ１アンチキモトリプシンを意味し、本発明のバイオマーカー（４）であれば、補体成分９を意味する。
尚、上記「量」とは、容量、質量等の絶対値又は濃度、イオン強度、吸光度、蛍光強度、濁度、ピーク面積等から算出された値等の相対値の何れであってもよい。
上記本発明のバイオマーカーにおけるコアタンパク質とは、本発明のバイオマーカーにおける糖鎖以外の部分を意味し、本発明のバイオマーカー（１）であれば、アルファ１アンチトリプシンを意味し、本発明のバイオマーカー（２）であれば、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインを意味し、本発明のバイオマーカー（３）であれば、アルファ１アンチキモトリプシンを意味し、本発明のバイオマーカー（４）であれば、補体成分９を意味する。
尚、上記「量」とは、容量、質量等の絶対値又は濃度、イオン強度、吸光度、蛍光強度、濁度、ピーク面積等から算出された値等の相対値の何れであってもよい。
【0091】
本発明に係る測定工程における測定方法としては、通常この分野で行われているものであれば何れでもよく、具体的には、例えば、（Ａ）本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質（例えば、抗体、レクチン等）を用いる方法、（Ｂ）質量分析法を利用する方法等が挙げられ、（Ａ）が好ましい。
以下に、上記（Ａ）及び（Ｂ）についてそれぞれ具体的に説明する。
以下に、上記（Ａ）及び（Ｂ）についてそれぞれ具体的に説明する。
【0092】
（Ａ）本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質を用いる方法
【0093】
上記本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質とは、本発明のバイオマーカーにおけるコアタンパク質（又はペプチド断片）に特異的に結合する抗体や、本発明のバイオマーカーにおける糖鎖に特異的に結合するレクチンや抗体等が挙げられる。
本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質として、抗体のみを用いる場合は免疫学的測定方法により、抗体以外の物質（例えばレクチン等）あるいは抗体以外の物質及び抗体を用いる場合は免疫学的測定方法に準じた方法により、本発明のバイオマーカーを測定すればよい。これらの測定方法の原理としては、例えばサンドイッチ法や競合法が挙げられ、また、ホモジニアスな測定系であってもヘテロジニアスな測定系であってもよい。
本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質として、抗体のみを用いる場合は免疫学的測定方法により、抗体以外の物質（例えばレクチン等）あるいは抗体以外の物質及び抗体を用いる場合は免疫学的測定方法に準じた方法により、本発明のバイオマーカーを測定すればよい。これらの測定方法の原理としては、例えばサンドイッチ法や競合法が挙げられ、また、ホモジニアスな測定系であってもヘテロジニアスな測定系であってもよい。
【0094】
上記本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質を用いる方法としては、具体的には、例えば、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとを接触させて、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体を形成させ、本発明のバイオマーカーの量を測定することによりなされればよい。
【0095】
本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質を用いる方法としては、具体的には、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ法）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）、放射免疫測定法（ＲＩＡ法）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ法）、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ法）、ラテックス凝集比濁法等の免疫比濁法、免疫比ろう法、イムノクロマト法、ウェスタンブロット法、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｏｘｙｇｅｎ ＣｈａｎｎｅｌｉｎｇＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（ＬＯＣＩ法）、Ｌｉｑｕｉｄ－ｐｈａｓｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ａｓｓａｙ－ＥｌｅｃｔｒｏＫｉｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｔｅ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ Ａｓｓａｙ（ＬＢＡ－ＥＡＴＡ法）、レクチン電気泳動法等のキャピラリー電気泳動法、表面プラズモン共鳴法、レクチンカラム法等が挙げられ、ＥＬＩＳＡ法、ＥＩＡ法、ＲＩＡ法、ＦＩＡ法、ＣＬＥＩＡ法、ＬＢＡ－ＥＡＴＡ法、レクチン電気泳動法等のキャピラリー電気泳動法がより好ましい。
【0096】
上記本発明のバイオマーカーにおけるコアタンパク質（又はペプチド断片）に特異的に結合する抗体としては、具体的には、例えば、本発明のバイオマーカー（１）であれば、抗アルファ１アンチトリプシン抗体、本発明のバイオマーカー（２）であれば、抗ロイシンリッチアルファ２グリコプロテイン抗体、本発明のバイオマーカー（３）であれば、抗アルファ１アンチキモトリプシン抗体、本発明のバイオマーカー（４）であれば、抗補体成分９抗体等が挙げられる。
上記抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよく、これらを単独で或いは組み合わせて用いてもよい。
上記抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’２）、Ｆｖ、ｓＦｖ等の抗体フラグメントやダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ等の合成抗体等であってもよい。
また、上記抗体は、市販の抗体を用いても、自体公知の方法に従って調製したものを用いてもよい。
尚、自体公知の方法に従って、上記抗体を調製する場合には、例えば、「免疫測定法」（生物化学的測定研究会編集、講談社、２０１４年）等に記載の方法に従ってなされればよい。
上記抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよく、これらを単独で或いは組み合わせて用いてもよい。
上記抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’２）、Ｆｖ、ｓＦｖ等の抗体フラグメントやダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ等の合成抗体等であってもよい。
また、上記抗体は、市販の抗体を用いても、自体公知の方法に従って調製したものを用いてもよい。
尚、自体公知の方法に従って、上記抗体を調製する場合には、例えば、「免疫測定法」（生物化学的測定研究会編集、講談社、２０１４年）等に記載の方法に従ってなされればよい。
【0097】
また、上記抗体は、標識物質で標識されたものであってもよい。当該標識物質としては、具体的には、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、ウシ小腸アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ等の酵素、９９ｍＴｃ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１４Ｃ、３Ｈ、３２Ｐ、３５Ｓ等の放射性同位元素、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、４－メチルウンベリフェロン、ローダミン或いはこれらの誘導体等の蛍光性物質、ルシフェリン、ルミノール、ルテニウム錯体等の発光性物質、フェノール、ナフトール、アントラセン或いはこれらの誘導体等の紫外部に吸収を有する物質、４－アミノ－２，２，６，－テトラメチルピぺリジン－１－オキシル等のオキシル基を有する化合物に代表されるスピンラベル化剤としての性質を有する物質、ＨｉＬｙｔｅ系色素、Ａｌｅｘａ系色素、ＣｙＤｙｅ系色素等の色素、金コロイド、量子ドット等のナノ粒子等が挙げられる。
尚、上記標記物質を抗体に結合させる方法としては、自体公知の方法に従ってなされればよい。
尚、上記標記物質を抗体に結合させる方法としては、自体公知の方法に従ってなされればよい。
【0098】
上記本発明のバイオマーカーにおける糖鎖に特異的に結合するレクチンとしては、具体的には、例えば、下記の通りである。
即ち、本発明のバイオマーカー（１）であれば、上記式１で表される糖鎖のＦｕｃ（フコース）に結合するＡｌｅｕｒｉａ Ａｕｒａｎｔｉａ Ｌｅｃｔｉｎ（ＡＡＬ）やＬｏｔｕｓ Ｔｅｔｒａｇｏｌｏｎｏｂｕｓ Ｌｅｃｔｉｎ（ＬＴＬ）等、Ｎｅｕ５Ａｃ（Ｎ－アセチルノイラミン酸）に結合するＥｌｄｅｒｂｅｒｒｙ Ｂａｌｋ Ｌｅｃｔｉｎ（ＥＢＬ），Ｍａａｃｋｉａ Ａｍｕｒｅｎｓｉｓ Ｌｅｃｔｉｎ（ＭＡＡ）等、上記式２で表される糖鎖のＦｕｃ（フコース）に結合するＡＡＬやＬＴＬ等、Ｎｅｕ５Ａｃ（Ｎ－アセチルノイラミン酸）に結合するＥＢＬ、ＭＡＡ等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー（２）であれば、上記式１で表される糖鎖のＦｕｃ（フコース）に結合するＡＡＬやＬＴＬ等、Ｎｅｕ５Ａｃ（Ｎ－アセチルノイラミン酸）に結合するＥＢＬ、ＭＡＡ等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー（３）であれば、上記式１で表される糖鎖のＦｕｃ（フコース）に結合するＡＡＬやＬＴＬ等、Ｎｅｕ５Ａｃ（Ｎ－アセチルノイラミン酸）に結合するＥＢＬ、ＭＡＡ等が挙げられる。
また、本発明のバイオマーカー（４）であれば、上記式１で表される糖鎖のＦｕｃ（フコース）に結合するＡＡＬやＬＴＬ等、Ｎｅｕ５Ａｃ（Ｎ－アセチルノイラミン酸）に結合するＥＢＬ、ＭＡＡ等が挙げられる。
即ち、本発明のバイオマーカー（１）であれば、上記式１で表される糖鎖のＦｕｃ（フコース）に結合するＡｌｅｕｒｉａ Ａｕｒａｎｔｉａ Ｌｅｃｔｉｎ（ＡＡＬ）やＬｏｔｕｓ Ｔｅｔｒａｇｏｌｏｎｏｂｕｓ Ｌｅｃｔｉｎ（ＬＴＬ）等、Ｎｅｕ５Ａｃ（Ｎ－アセチルノイラミン酸）に結合するＥｌｄｅｒｂｅｒｒｙ Ｂａｌｋ Ｌｅｃｔｉｎ（ＥＢＬ），Ｍａａｃｋｉａ Ａｍｕｒｅｎｓｉｓ Ｌｅｃｔｉｎ（ＭＡＡ）等、上記式２で表される糖鎖のＦｕｃ（フコース）に結合するＡＡＬやＬＴＬ等、Ｎｅｕ５Ａｃ（Ｎ－アセチルノイラミン酸）に結合するＥＢＬ、ＭＡＡ等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー（２）であれば、上記式１で表される糖鎖のＦｕｃ（フコース）に結合するＡＡＬやＬＴＬ等、Ｎｅｕ５Ａｃ（Ｎ－アセチルノイラミン酸）に結合するＥＢＬ、ＭＡＡ等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー（３）であれば、上記式１で表される糖鎖のＦｕｃ（フコース）に結合するＡＡＬやＬＴＬ等、Ｎｅｕ５Ａｃ（Ｎ－アセチルノイラミン酸）に結合するＥＢＬ、ＭＡＡ等が挙げられる。
また、本発明のバイオマーカー（４）であれば、上記式１で表される糖鎖のＦｕｃ（フコース）に結合するＡＡＬやＬＴＬ等、Ｎｅｕ５Ａｃ（Ｎ－アセチルノイラミン酸）に結合するＥＢＬ、ＭＡＡ等が挙げられる。
【0099】
上記レクチンは、標識物質で標識されたものであってもよく、当該標識物質としては、上記本発明のバイオマーカーにおけるコアタンパク質（又はペプチド断片）に特異的に結合する抗体にて説明した通りであり、具体例等も同じである。また、上記標識物質をレクチンに結合させる方法としては、自体公知の方法に従ってなされればよい。
【0100】
上記本発明のバイオマーカーにおける糖鎖に特異的に結合する抗体としては、具体的には、例えば、下記の通りである。
即ち、本発明のバイオマーカー（１）であれば、上記式１で表される糖鎖に特異的に結合する抗体、上記式２で表される糖鎖に特異的に結合する抗体等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー（２）であれば、上記式１で表される糖鎖に特異的に結合する抗体等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー（３）であれば、上記式１で表される糖鎖に特異的に結合する抗体、上記式２で表される糖鎖に特異的に結合する抗体等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー（４）であれば、上記式１で表される糖鎖に特異的に結合する抗体等が挙げられる。
即ち、本発明のバイオマーカー（１）であれば、上記式１で表される糖鎖に特異的に結合する抗体、上記式２で表される糖鎖に特異的に結合する抗体等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー（２）であれば、上記式１で表される糖鎖に特異的に結合する抗体等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー（３）であれば、上記式１で表される糖鎖に特異的に結合する抗体、上記式２で表される糖鎖に特異的に結合する抗体等が挙げられる。
本発明のバイオマーカー（４）であれば、上記式１で表される糖鎖に特異的に結合する抗体等が挙げられる。
【0101】
上記抗体は、標識物質で標識されたものであってもよく、当該標識物質としては、上記本発明のバイオマーカーにおけるタンパク質（又はペプチド断片）に特異的に結合する抗体にて説明した通りであり、具体例等も同じである。
また、上記標識物質をレクチンに結合させる方法としては、自体公知の方法に従ってなされればよい。
また、上記標識物質をレクチンに結合させる方法としては、自体公知の方法に従ってなされればよい。
【0102】
上記本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体の量を測定する方法としては、当該複合体の量を測定し得る方法であれば何れでもよく、具体的には、例えば、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質に結合した標識物質に由来するシグナルを検出する方法、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体に由来する性質を利用する方法等が挙げられ、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質に結合した標識物質に由来するシグナルを検出する方法が好ましい。
【0103】
上記本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質に結合した標識物質に由来するシグナルを検出する方法としては、具体的には、例えば、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質に結合した標識物質に由来するシグナルを自体公知の方法により検出することによりなされればよい。例えば、標識物質が酵素の場合には、免疫測定法の常法、例えば「酵素免疫測定法」（蛋白質 核酸 酵素 別冊 Ｎｏ．３１、北川常廣・南原利夫・辻章夫・石川榮治編集、５１～６３，共立出版、１９８７）等に記載された方法に準じて測定を行えばよく、標識物質が放射性物質の場合には、例えばＲＩＡで行われている常法に従い、該放射性物質の出す放射線の種類および強さに応じて液浸型ＧＭカウンター、液体シンチレーションカウンター、井戸型シンチレーションカウンター、ＨＰＬＣ用カウンター等の測定機器を適宜選択して使用し、測定を行えばよい（例えば医化学実験講座、第８巻、山村雄一監修、第１版、中山書店、１９７１等参照）。また、標識物質が蛍光物質の場合には、例えば蛍光光度計等の測定機器を用いるＦＩＡで行われている常法、例えば「図説 蛍光抗体、川生明著、第１版、ソフトサイエンス社、１９８３」等に記載された方法に準じて測定を行えばよく、標識物質が発光物質の場合にはフォトカウンター等の測定機器を用いる常法、例えば「酵素免疫測定法」（蛋白質 核酸 酵素 別冊 Ｎｏ．３１、北川常廣・南原利夫・辻章夫・石川榮治編集、２５２～２６３、共立出版、１９８７）等に記載された方法に準じて測定を行えばよい。さらに、標識物質が紫外部に吸収を有する物質の場合には分光光度計等の測定機器を用いる常法によって測定を行えばよく、標識物質がスピンの性質を有する場合には電子スピン共鳴装置を用いる常法、例えば「酵素免疫測定法」（蛋白質 核酸 酵素 別冊 Ｎｏ．３１、北川常廣・南原利夫・辻章夫・石川榮治編集、２６４～２７１、共立出版、１９８７）等に記載された方法に準じてそれぞれ測定を行えばよい。
【0104】
上記本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体に由来する性質を利用する方法としては、具体的には、例えば、表面プラズモン共鳴法等のホモジニアスイムノアッセイ系等の方法等が挙げられる。
尚、上記方法の具体的な手法については、自体公知の手法に従ってなされればよい。
尚、上記方法の具体的な手法については、自体公知の手法に従ってなされればよい。
【0105】
以下に、（Ａ）本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質を用いる方法について、より具体的に説明する。
尚、下記説明において、本発明のバイオマーカーにおけるコアタンパク質（又はペプチド断片）を「標的コアタンパク質（又は標的ペプチド断片）」、本発明のバイオマーカーにおける糖鎖を「標的糖鎖」と表記する。
例えば、本発明のバイオマーカー（１）を測定する場合、アルファ１アンチトリプシンが「標的コアタンパク質（又は標的ペプチド断片）」を、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖が「標的糖鎖」を意味する。
本発明のバイオマーカー（２）を測定する場合、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインが「標的コアタンパク質（又は標的ペプチド断片）」を、式１で表される糖鎖が「標的糖鎖」を意味する。
本発明のバイオマーカー（３）を測定する場合、アルファ１アンチキモトリプシンが「標的コアタンパク質（又は標的ペプチド断片）」、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖が「標的糖鎖」を意味する。
本発明のバイオマーカー（４）を測定する場合、補体成分９が「標的コアタンパク質（又は標的ペプチド断片）」を、式１で表される糖鎖が「標的糖鎖」を意味する。
尚、下記説明において、本発明のバイオマーカーにおけるコアタンパク質（又はペプチド断片）を「標的コアタンパク質（又は標的ペプチド断片）」、本発明のバイオマーカーにおける糖鎖を「標的糖鎖」と表記する。
例えば、本発明のバイオマーカー（１）を測定する場合、アルファ１アンチトリプシンが「標的コアタンパク質（又は標的ペプチド断片）」を、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖が「標的糖鎖」を意味する。
本発明のバイオマーカー（２）を測定する場合、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインが「標的コアタンパク質（又は標的ペプチド断片）」を、式１で表される糖鎖が「標的糖鎖」を意味する。
本発明のバイオマーカー（３）を測定する場合、アルファ１アンチキモトリプシンが「標的コアタンパク質（又は標的ペプチド断片）」、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖が「標的糖鎖」を意味する。
本発明のバイオマーカー（４）を測定する場合、補体成分９が「標的コアタンパク質（又は標的ペプチド断片）」を、式１で表される糖鎖が「標的糖鎖」を意味する。
【0106】
上記（Ａ）本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質を用いる方法としては、具体的には、例えば、下記工程１及び２を含む方法が挙げられる。
（工程１）試料から標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質（本発明のバイオマーカー）を分離する工程、
（工程２）前記工程１で分離された標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質の量を測定する工程
（工程１）試料から標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質（本発明のバイオマーカー）を分離する工程、
（工程２）前記工程１で分離された標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質の量を測定する工程
【0107】
工程１としては、試料から標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質を分離し得る方法であれば何れでもよく、具体的には、例えば、試料中に存在する標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質と他の成分とを分離する方法が挙げられる。このような方法としては、具体的には、例えば、２種以上の親和性を有する物質、即ち、標的糖鎖に特異的に結合する物質、及び標的コアタンパク質に特異的に結合する物質を用いて、標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質と親和性を有する物質との複合体（標的コアタンパク質に特異的に結合する物質－本発明のバイオマーカー標的糖鎖に特異的に結合する物質）を形成させ、自体公知の方法により、標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質を分離すればよい。
また、例えば、標的糖鎖に特異的に結合する物質（例えば、上記の本発明のバイオマーカーにおける糖鎖に特異的に結合するレクチン）と本発明のバイオマーカーとの相互作用を利用して、本発明のバイオマーカー等の標的糖鎖と相互作用する成分と他の成分を分離し、さらに標的コアタンパク質に特異的に結合する物質を用いて、本発明のバイオマーカーと他の成分を分離する方法、例えば、標的コアタンパク質に特異的に結合する物質を用いて、本発明のバイオマーカーと他の成分を分離し、さらに標的糖鎖に特異的に結合する物質（例えば、上記の本発明のバイオマーカーにおける糖鎖に特異的に結合するレクチン）と本発明のバイオマーカーとの相互作用を利用して、本発明のバイオマーカー等の標的糖鎖と相互作用する成分と他の成分を分離する方法により、試料から標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質（本発明のバイオマーカー）を分離してもよい。当該本発明のバイオマーカーの分離は、例えばレクチン電気泳動法やレクチンカラム法によりおこなうことができる。
尚、標識物質で標識された親和性を有する物質を用いる場合には、標的糖鎖が結合した標的タンパク質の分離は、標識物質で標識された親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体の分離と言い換えてもよく、この場合、標識物質で標識された親和性を有する物質と本発明のバイオマーカー以外の成分との複合体又は／及び遊離の標識物質で標識された親和性を有する物質とを分離すればよい。標識物質で標識された親和性を有する物質を構成成分として含まない成分との分離は不要である。
また、上記糖鎖に特異的に結合する親和性を有する物質及びコアタンパク質に特異的に結合する親和性を有する物質については、上述の通りであり、具体例等も同じである。
また、例えば、標的糖鎖に特異的に結合する物質（例えば、上記の本発明のバイオマーカーにおける糖鎖に特異的に結合するレクチン）と本発明のバイオマーカーとの相互作用を利用して、本発明のバイオマーカー等の標的糖鎖と相互作用する成分と他の成分を分離し、さらに標的コアタンパク質に特異的に結合する物質を用いて、本発明のバイオマーカーと他の成分を分離する方法、例えば、標的コアタンパク質に特異的に結合する物質を用いて、本発明のバイオマーカーと他の成分を分離し、さらに標的糖鎖に特異的に結合する物質（例えば、上記の本発明のバイオマーカーにおける糖鎖に特異的に結合するレクチン）と本発明のバイオマーカーとの相互作用を利用して、本発明のバイオマーカー等の標的糖鎖と相互作用する成分と他の成分を分離する方法により、試料から標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質（本発明のバイオマーカー）を分離してもよい。当該本発明のバイオマーカーの分離は、例えばレクチン電気泳動法やレクチンカラム法によりおこなうことができる。
尚、標識物質で標識された親和性を有する物質を用いる場合には、標的糖鎖が結合した標的タンパク質の分離は、標識物質で標識された親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体の分離と言い換えてもよく、この場合、標識物質で標識された親和性を有する物質と本発明のバイオマーカー以外の成分との複合体又は／及び遊離の標識物質で標識された親和性を有する物質とを分離すればよい。標識物質で標識された親和性を有する物質を構成成分として含まない成分との分離は不要である。
また、上記糖鎖に特異的に結合する親和性を有する物質及びコアタンパク質に特異的に結合する親和性を有する物質については、上述の通りであり、具体例等も同じである。
【0108】
工程２としては、前記工程１で分離された標的糖鎖が結合した標的コアタンパク質を測定し得る方法であれば何れでもよく、具体例等は上述の通りである。
【0109】
上記方法において、工程１を行う前に、予め試料中の全タンパク質（標的タンパク質を含む）をペプチド断片化し、工程１で標的糖鎖が結合した標的ペプチド断片を分離し、工程２で当該標的糖鎖が結合した標的ペプチド断片を測定してもよい。
該断片化処理としては、具体的には、例えば、工程１を行う前に、試料にトリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、ＡｓｐＮ等のプロテアーゼを加えることによりなされればよく、工程１で標的糖鎖に結合する物質、及び標的ペプチド断片に結合する物質をそれぞれ用いて、標的糖鎖が結合した標的ペプチド断片と親和性を有する物質との複合体（標的ペプチド断片に特異的に結合する物質－本発明のバイオマーカー標的糖鎖に特異的に結合する物質）を形成させ、該複合体を上述の如く分離した後、該複合体の量を測定すればよい。
該断片化処理としては、具体的には、例えば、工程１を行う前に、試料にトリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、ＡｓｐＮ等のプロテアーゼを加えることによりなされればよく、工程１で標的糖鎖に結合する物質、及び標的ペプチド断片に結合する物質をそれぞれ用いて、標的糖鎖が結合した標的ペプチド断片と親和性を有する物質との複合体（標的ペプチド断片に特異的に結合する物質－本発明のバイオマーカー標的糖鎖に特異的に結合する物質）を形成させ、該複合体を上述の如く分離した後、該複合体の量を測定すればよい。
【0110】
また、上記全タンパク質の断片化を行った場合、当該断片化に引き続いて、レクチンカラム等のカラムによる濃縮を行ってもよい。当該濃縮は自体公知の方法に従ってなされればよく、市販のレクチンカラム等のカラムを用いればよい。
【0111】
更に、上記方法において、工程２のかわりに、工程１で分離された標的糖鎖が結合した標的タンパク質から標的糖鎖を分離し、当該標的糖鎖のみを測定してもよい。
具体的には、例えば、工程１で分離された標的糖鎖が結合した標的タンパク質を、グリカナーゼ、ヒドラジン等にて処理することにより標的糖鎖を分離した後、当該糖鎖の量のみを上述の如く測定すればよい。
具体的には、例えば、工程１で分離された標的糖鎖が結合した標的タンパク質を、グリカナーゼ、ヒドラジン等にて処理することにより標的糖鎖を分離した後、当該糖鎖の量のみを上述の如く測定すればよい。
【0112】
（Ｂ）質量分析法を利用する方法
質量分析法を利用する方法としては、具体的には、例えば、液体クロマトグラフィー質量分析計（ＬＣ／ＭＳ）、キャピラリー電気泳動質量分析計（ＣＥ／ＭＳ）、ガスクロマトグラフィー質量分析計（ＧＣ／ＭＳ）、液体クロマトグラフィータンデム型質量分析計（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）等を利用する方法が挙げられる。
上記方法としては、具体的には、例えば、液体クロマトグラフ等のクロマトグラフを有する分離部にて、試料中の成分を分離し、分離された種々の成分を質量分析部にてイオン化させ、更に質量電荷比（ｍ／ｚ）毎に分離することによりなされればよい。
尚、上記質量分析法を利用する方法における具体的な手法は自体公知の手法やＷＯ２０１４／０３８５２４、ＷＯ２０１７／１９５８８、ＷＯ２０１８／０３４３４６等に記載の手法に従ってなされればよい。
質量分析法を利用する方法としては、具体的には、例えば、液体クロマトグラフィー質量分析計（ＬＣ／ＭＳ）、キャピラリー電気泳動質量分析計（ＣＥ／ＭＳ）、ガスクロマトグラフィー質量分析計（ＧＣ／ＭＳ）、液体クロマトグラフィータンデム型質量分析計（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）等を利用する方法が挙げられる。
上記方法としては、具体的には、例えば、液体クロマトグラフ等のクロマトグラフを有する分離部にて、試料中の成分を分離し、分離された種々の成分を質量分析部にてイオン化させ、更に質量電荷比（ｍ／ｚ）毎に分離することによりなされればよい。
尚、上記質量分析法を利用する方法における具体的な手法は自体公知の手法やＷＯ２０１４／０３８５２４、ＷＯ２０１７／１９５８８、ＷＯ２０１８／０３４３４６等に記載の手法に従ってなされればよい。
【0113】
上記質量分析法を利用する方法において、試料から予め全タンパク質を抽出してもよく、その方法としては、具体的には、例えば、試料に、アセトン、メタノール、エタノール、トリクロロ酢酸、塩酸水溶液等の溶媒を加えて全タンパク質を沈殿させることによりなされればよい。
【0114】
また、必要に応じ、試料から全タンパク質を抽出する前又は後に、全タンパク質を断片化してもよく、断片化を行った場合、当該断片化に引き続いて、レクチンカラム等のカラムによる濃縮を行ってもよい。当該断片化及び濃縮については、上述の通りである。
【0115】
［好ましい測定工程］
本発明に係る測定工程では、（ｉ）アルファ１アンチトリプシンに存在する、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖又は（ｉｉ）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、式１で表される糖鎖を測定することが好ましく、（ｉ）アルファ１アンチトリプシンに存在する、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖を測定することがより好ましく、（ｉ）アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）に結合している式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖を測定することが更に好ましい。
また、上記測定を行う場合には、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質を用いる方法が好ましく、ＥＬＩＳＡ法、ＥＩＡ法、ＲＩＡ法、ＦＩＡ法、ＣＬＥＩＡ法、ラテックス凝集比濁法等の免疫比濁法、免疫比ろう法、イムノクロマト法、ウェスタンブロット法、ＬＯＣＩ法、ＬＢＡ－ＥＡＴＡ法、レクチン電気泳動法等のキャピラリー電気泳動法、表面プラズモン共鳴法、レクチンカラム法がより好ましく、ＥＬＩＳＡ法、ＥＩＡ法、ＲＩＡ法、ＦＩＡ法、ＣＬＥＩＡ法、ＬＢＡ－ＥＡＴＡ法、レクチン電気泳動法等のキャピラリー電気泳動法がさらに好ましい。
本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとを接触させて、本発明のバイオマーカーを分離し、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体を形成させ、当該複合体の量を測定する方法がより好ましく、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとを接触させて、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体を形成させ、当該複合体に結合した標識物質に由来するシグナルを検出する方法がさらに好ましい。
また、標的糖鎖に特異的に結合する物質（例えば、上記の本発明のバイオマーカーにおける糖鎖に特異的に結合するレクチン）と本発明のバイオマーカーとの相互作用を利用して、本発明のバイオマーカー等の標的糖鎖と相互作用する成分と他の成分を分離し、さらに標的コアタンパク質に特異的に結合する物質を用いて、本発明のバイオマーカーと他の成分を分離し、本発明のバイオマーカーの量を測定するのがより好ましく、
標的糖鎖に特異的に結合する物質と本発明のバイオマーカーとの相互作用を利用して、本発明のバイオマーカー等の標的糖鎖と相互作用する成分と他の成分を分離し、さらに標的コアタンパク質に特異的に結合する物質を用いて、本発明のバイオマーカーと他の成分を分離し、標的コアタンパク質に特異的に結合する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体に結合した標識物質に由来するシグナルを検出する方法がさらに好ましい。
本発明に係る測定工程では、（ｉ）アルファ１アンチトリプシンに存在する、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖又は（ｉｉ）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、式１で表される糖鎖を測定することが好ましく、（ｉ）アルファ１アンチトリプシンに存在する、式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖を測定することがより好ましく、（ｉ）アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアミノ酸残基（アスパラギン残基）に結合している式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖を測定することが更に好ましい。
また、上記測定を行う場合には、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質を用いる方法が好ましく、ＥＬＩＳＡ法、ＥＩＡ法、ＲＩＡ法、ＦＩＡ法、ＣＬＥＩＡ法、ラテックス凝集比濁法等の免疫比濁法、免疫比ろう法、イムノクロマト法、ウェスタンブロット法、ＬＯＣＩ法、ＬＢＡ－ＥＡＴＡ法、レクチン電気泳動法等のキャピラリー電気泳動法、表面プラズモン共鳴法、レクチンカラム法がより好ましく、ＥＬＩＳＡ法、ＥＩＡ法、ＲＩＡ法、ＦＩＡ法、ＣＬＥＩＡ法、ＬＢＡ－ＥＡＴＡ法、レクチン電気泳動法等のキャピラリー電気泳動法がさらに好ましい。
本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとを接触させて、本発明のバイオマーカーを分離し、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体を形成させ、当該複合体の量を測定する方法がより好ましく、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとを接触させて、本発明のバイオマーカーに対して親和性を有する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体を形成させ、当該複合体に結合した標識物質に由来するシグナルを検出する方法がさらに好ましい。
また、標的糖鎖に特異的に結合する物質（例えば、上記の本発明のバイオマーカーにおける糖鎖に特異的に結合するレクチン）と本発明のバイオマーカーとの相互作用を利用して、本発明のバイオマーカー等の標的糖鎖と相互作用する成分と他の成分を分離し、さらに標的コアタンパク質に特異的に結合する物質を用いて、本発明のバイオマーカーと他の成分を分離し、本発明のバイオマーカーの量を測定するのがより好ましく、
標的糖鎖に特異的に結合する物質と本発明のバイオマーカーとの相互作用を利用して、本発明のバイオマーカー等の標的糖鎖と相互作用する成分と他の成分を分離し、さらに標的コアタンパク質に特異的に結合する物質を用いて、本発明のバイオマーカーと他の成分を分離し、標的コアタンパク質に特異的に結合する物質と本発明のバイオマーカーとの複合体に結合した標識物質に由来するシグナルを検出する方法がさらに好ましい。
【0116】
［本発明に係る判定工程］
本発明に係る判定工程は、本発明に係る測定工程により得られた測定結果に基づいて被検動物が大腸癌に罹患しているか否かを判定する工程である。
本発明に係る判定工程は、本発明に係る測定工程により得られた測定結果に基づいて被検動物が大腸癌に罹患しているか否かを判定する工程である。
【0117】
本発明に係る判定工程は、具体的には、例えば、被検動物由来の試料を用いて本発明に係る測定工程により得られた値（以下、被検動物由来の値と略記する場合がある）と予め設定した基準値（カットオフ値等）とを用いてなされる。
即ち、（ｉ）被検動物由来の値が、予め設定した基準値（カットオフ値等）以上の場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれがある、或いは被検動物が大腸癌に罹患しているおそれが高い」等の判定を下すことができ、（ｉｉ）被検動物由来の値が、予め設定した基準値（カットオフ値等）未満の場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれはない、或いは大腸癌に罹患しているおそれが低い」等の判定を下すことができる。
また、別の態様として、（ｉ）被検動物由来の値が、予め設定した基準値（カットオフ値等）以下の場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれがある、或いは被検動物が大腸癌に罹患しているおそれが高い」等の判定を下すことができ、（ｉｉ）被検動物由来の値が、予め設定した基準値（カットオフ値等）超の場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれはない、或いは大腸癌に罹患しているおそれが低い」等の判定を下すことができる。
尚、上記基準値（カットオフ値等）は、大腸癌に罹患している動物由来の試料を用いて本発明に係る測定工程により得られた測定値と健常動物由来の試料を用いて本発明に係る測定工程により得られた値（以下、健常動物由来の値と略記する場合がある）とを用いてＲＯＣ（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）曲線解析等の統計解析に基づいて決定することができる。
また、上記基準値（カットオフ値等）の感度又は／及び特異度は、例えば６０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、更に好ましくは９０％以上である。
即ち、（ｉ）被検動物由来の値が、予め設定した基準値（カットオフ値等）以上の場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれがある、或いは被検動物が大腸癌に罹患しているおそれが高い」等の判定を下すことができ、（ｉｉ）被検動物由来の値が、予め設定した基準値（カットオフ値等）未満の場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれはない、或いは大腸癌に罹患しているおそれが低い」等の判定を下すことができる。
また、別の態様として、（ｉ）被検動物由来の値が、予め設定した基準値（カットオフ値等）以下の場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれがある、或いは被検動物が大腸癌に罹患しているおそれが高い」等の判定を下すことができ、（ｉｉ）被検動物由来の値が、予め設定した基準値（カットオフ値等）超の場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれはない、或いは大腸癌に罹患しているおそれが低い」等の判定を下すことができる。
尚、上記基準値（カットオフ値等）は、大腸癌に罹患している動物由来の試料を用いて本発明に係る測定工程により得られた測定値と健常動物由来の試料を用いて本発明に係る測定工程により得られた値（以下、健常動物由来の値と略記する場合がある）とを用いてＲＯＣ（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）曲線解析等の統計解析に基づいて決定することができる。
また、上記基準値（カットオフ値等）の感度又は／及び特異度は、例えば６０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、更に好ましくは９０％以上である。
【0118】
別の形態として、被検動物由来の値と健常動物由来の値とを比較し、（ｉ）被検動物由来の値が、健常動物由来の値より多い場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれがある、或いは被検動物が大腸癌に罹患しているおそれが高い」等の判定を下すことができ、（ｉｉ）被検動物由来の値と、健常動物由来の値との間に顕著な差が認められない場合、「被検動物が大腸癌に罹患しているおそれはない、或いは大腸癌に罹患しているおそれが低い」等の判定を下すことができる。
【0119】
更に別の形態として、同一の被検動物において、ある時点における被検動物由来の値と、異なる時点での被検動物由来の値とを比較し、該値の有無又は／及び増減の程度を評価することにより、大腸癌の進行度、悪性度の診断、術後の予後診断等が可能である。即ち、（ｉ）値の増加が認められた場合、大腸癌へ病態が進行した（或いは大腸癌の悪性度が増した）、又は大腸癌への病態の進行の兆候が認められる（或いは大腸癌の悪性度が増す兆候が認められる）等の判定を下すことができ、（ｉｉ）値の減少が認められた場合、大腸癌の病態が改善した、又は大腸癌の病態の改善の兆候が認められる等の判定を下すことができる。
【0120】
尚、本発明に係る測定工程にて本発明のバイオマーカーを複数種測定した場合は、得られた複数の値を用いて上述の通りに本発明に係る判定工程を行えばよく、より正確度の高い判定が可能となる。
【0121】
＜本発明の大腸癌の診断を補助するための試薬キット＞
本発明の大腸癌の診断を行うための試薬キット（以下、本発明のキットと略記する場合がある）は、下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖に親和性を有する物質を含むものである。
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、上記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、上記式１で表される糖鎖、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、上記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４）補体成分９に存在する、上記式１で表される糖鎖。
本発明のキットは、本発明のバイオマーカー、言い換えると、本発明のバイオマーカー（１）～（４）にそれぞれ親和性を有する物質を含むものである。
尚、本発明のキットにおける、本発明のバイオマーカー及び大腸癌については、＜本発明のバイオマーカー＞及び＜本発明の補助方法＞にて説明した通りであり、具体例、好ましい例等も同じである。
本発明の大腸癌の診断を行うための試薬キット（以下、本発明のキットと略記する場合がある）は、下記（１）～（４）から選ばれる糖鎖に親和性を有する物質を含むものである。
（１）アルファ１アンチトリプシンに存在する、上記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（２）ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに存在する、上記式１で表される糖鎖、
（３）アルファ１アンチキモトリプシンに存在する、上記式１又は２で表される少なくとも１つの糖鎖、
（４）補体成分９に存在する、上記式１で表される糖鎖。
本発明のキットは、本発明のバイオマーカー、言い換えると、本発明のバイオマーカー（１）～（４）にそれぞれ親和性を有する物質を含むものである。
尚、本発明のキットにおける、本発明のバイオマーカー及び大腸癌については、＜本発明のバイオマーカー＞及び＜本発明の補助方法＞にて説明した通りであり、具体例、好ましい例等も同じである。
【0122】
上記親和性を有する物質とは、本発明のバイオマーカーにおける糖鎖やタンパク質（又はペプチド断片）に特異的に結合するものであり、レクチン、抗体等が挙げられる。
上記親和性を有する物質については、＜本発明の補助方法＞にて説明した通りであり、具体例、好ましい例等も同じである。
上記親和性を有する物質については、＜本発明の補助方法＞にて説明した通りであり、具体例、好ましい例等も同じである。
【0123】
本発明のキットには、更に、通常この分野で用いられる試薬類、例えば、トリプシン、リシルエンドペプチダーゼ、ＡｓｐＮ等のペプチド断片化用試薬、レクチンカラム等の濃縮用カラム、タンパク質抽出用溶媒、緩衝剤、洗浄剤、反応促進剤、糖類、タンパク質、塩類、界面活性剤等の安定化剤、防腐剤、試料を希釈するための液、レクチン固定化固相、抗体固定化固相、抗原固定化固相等の固定化固相、標識物質で標識された二次抗体又は該二次抗体の断片、標識物質検出用試薬等であって、共存する試薬等の安定性を阻害しないものが含まれていてもよい。また、その濃度、ｐＨも通常この分野で用いられている範囲であればよい。
【0124】
上記レクチン固定化固相、抗体固定化固相、抗原固定化固相等の固定化固相としては、磁性シリカ粒子等の磁性粒子、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリビニルトルエン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ナイロン、ポリメタクリレート、ゼラチン、アガロース、セルロース、ポリエチレンテレフタレート、ガラス、セラミック等の素材に、本発明のバイオマーカーにおけるタンパク質（又はペプチド断片）や糖鎖に特異的に結合する親和性を有する物質（レクチン、抗体又は該抗体の断片等）を固相化したものであれば何れでもよい。
尚、上記レクチン固定化固相、抗体固定化固相、抗原固定化固相等の固定化固相における素材については、自体公知の方法により製造されたものを用いても、市販のものを用いてもよい。例えば、自体公知の方法により上記磁性シリカ粒子等の磁性粒子を製造する場合、ＷＯ２０１２／１７３００２に記載の方法により製造することができる。
尚、上記レクチン固定化固相、抗体固定化固相、抗原固定化固相等の固定化固相における素材については、自体公知の方法により製造されたものを用いても、市販のものを用いてもよい。例えば、自体公知の方法により上記磁性シリカ粒子等の磁性粒子を製造する場合、ＷＯ２０１２／１７３００２に記載の方法により製造することができる。
【0125】
上記標識物質で標識された二次抗体又はその抗体断片とは、上記固相化された親和性を有する物質（レクチン、抗体又は当該抗体の断片等）にそれぞれ結合する抗体又はその抗体断片である。
尚、上記標識物質で標識された二次抗体又はその抗体断片における、標識物質及び標識物質を結合させる方法については、＜本発明の補助方法＞にて説明した通りであり、好ましい例、具体例等も同じである。
尚、上記標識物質で標識された二次抗体又はその抗体断片における、標識物質及び標識物質を結合させる方法については、＜本発明の補助方法＞にて説明した通りであり、好ましい例、具体例等も同じである。
【0126】
上記標識物質検出用試薬とは、レクチン、抗体又は当該抗体の断片等の親和性を有する物質が標識物質で標識されている場合、標識物質で標識されたレクチン、抗体又は当該抗体の断片等の親和性を有する物質中の標識又は／及び上記標識された二次抗体又は当該二次抗体の断片中の標識を検出するものであり、テトラメチルベンジジン、オルトフェニレンジアミン等の吸光度測定用基質、ヒドロキシフェニルプロピオン酸、ヒドロキシフェニル酢酸等の蛍光基質、ルミノール等の発光物質が挙げられ、４－ニトロフェニルフォスフェート等の吸光度測定用試薬、４－メチルウンベリフェリルフォスフェート等の蛍光基質等が挙げられる。
【0127】
更に、本発明のキットには、本発明の補助方法を行うための説明書等を含まれていてもよい。当該「説明書」とは、本発明の補助方法の特徴、原理、操作手順、判定手順等が文章又は／及び図表により実質的に記載されている本発明に係る試薬の取扱い説明書、添付文書、パンフレット（リーフレット）等を意味する。具体的には、例えば、（ｉ）本発明に係る測定工程の原理、操作手順等が記載されたもの、（ｉｉ）本発明に係る測定工程及び判定工程の原理、操作手順等が記載されたもの等が挙げられる。
【0128】
このように本発明のキットによれば、本発明の補助方法を簡便、短時間且つ精度よく行うことができる。
【0129】
＜本発明に係る大腸癌の診断を補助するための装置＞
本発明に係る大腸癌の診断を補助するための装置（以下、本発明に係る補助装置と略記する場合がある）は、少なくとも（１）測定部を備えている。更に、（２）判定部、（３）出力部及び（４）入力部を備えていてもよい。
本発明に係る大腸癌の診断を補助するための装置（以下、本発明に係る補助装置と略記する場合がある）は、少なくとも（１）測定部を備えている。更に、（２）判定部、（３）出力部及び（４）入力部を備えていてもよい。
【0130】
本発明に係る補助装置における（１）測定部は、試料中の上記本発明のバイオマーカー（１）～（４）から選ばれる糖鎖の量を測定するように構成されている。具体的には、例えば、本発明に係る測定工程にて用いられる各種質量分析計、免疫学的測定法に準じた方法に用いられる装置等の測定装置が挙げられる。
尚、要すれば、（１）測定部では、測定された測定値に基づいて、上記本発明のバイオマーカー（１）～（４）の量を算出するように構成されていてもよい。
尚、要すれば、（１）測定部では、測定された測定値に基づいて、上記本発明のバイオマーカー（１）～（４）の量を算出するように構成されていてもよい。
【0131】
本発明に係る補助装置における（２）判定部は、（１）測定部にて得られる結果に基づいて被検動物が大腸癌に罹患しているか否かを判定するように構成されている。
【0132】
本発明に係る補助装置における（３）出力部は、（１）測定部にて得られる結果又は／及び（２）判定部にて得られる結果を出力するよう構成されている。
【0133】
本発明に係る補助装置における（４）入力部は、操作する者の操作を受けて、（１）測定部へ、当該（１）測定部を作動させるための信号を送るよう構成されている。
【0134】
尚、上記本発明に係る補助装置の（１）測定部及び（２）判定部によりなされる測定、判定等については、＜本発明の補助方法＞にて説明した通りであり、好ましい例、具体例等も同じである。
【0135】
上記本発明に係る補助装置によれば、本発明の補助方法を簡便、短時間且つ精度よく行うことができる。
【0136】
＜本発明に係る大腸癌を治療する方法＞
本発明に係る大腸癌を治療する方法（以下、本発明に係る治療方法と略記する場合がある）は、被検動物由来の試料中の本発明のバイオマーカー（１）～（４）から選ばれる糖鎖の量を測定し、得られた測定結果に基づいて被検動物が大腸癌に罹患しているか否かを判定し、その判定結果に基づいて大腸癌のおそれがある又は大腸癌のおそれが高いと判定された患者に適切な治療を施すことによりなされる。
尚、本発明に係る治療方法における試料、マーカー、測定、判定等については、＜本発明の補助方法＞にて説明した通りであり、好ましい例、具体例等も同じである。
本発明に係る治療方法における適切な治療としては、具体的には、例えば、内視鏡治療、開腹手術、腹腔鏡手術等の外科療法、化学放射線療法等の放射線治療、オキサリプラチン（一般名）、イリノテカン（一般名）、フルオロウラシル（一般名）、ベバシズマブ（一般名）、ラムシルマブ（一般名）、アフリベルセプト（一般名）、セツキシマブ（一般名）、パニツムマブ（一般名）等の薬剤を投与することによりなされる薬物療法等が挙げられる。
本発明に係る大腸癌を治療する方法（以下、本発明に係る治療方法と略記する場合がある）は、被検動物由来の試料中の本発明のバイオマーカー（１）～（４）から選ばれる糖鎖の量を測定し、得られた測定結果に基づいて被検動物が大腸癌に罹患しているか否かを判定し、その判定結果に基づいて大腸癌のおそれがある又は大腸癌のおそれが高いと判定された患者に適切な治療を施すことによりなされる。
尚、本発明に係る治療方法における試料、マーカー、測定、判定等については、＜本発明の補助方法＞にて説明した通りであり、好ましい例、具体例等も同じである。
本発明に係る治療方法における適切な治療としては、具体的には、例えば、内視鏡治療、開腹手術、腹腔鏡手術等の外科療法、化学放射線療法等の放射線治療、オキサリプラチン（一般名）、イリノテカン（一般名）、フルオロウラシル（一般名）、ベバシズマブ（一般名）、ラムシルマブ（一般名）、アフリベルセプト（一般名）、セツキシマブ（一般名）、パニツムマブ（一般名）等の薬剤を投与することによりなされる薬物療法等が挙げられる。
【0137】
以下、実施例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は実施例によって何ら限定されるものではない。
【実施例】
【0138】
実施例１．大腸癌マーカーの選別
［（１）検体（サンプル）］
横浜市立大学センター病院及び横浜市立大学先端医科学研究センターバイオバンクより提供された、大腸癌患者由来の血清（１８検体）及び健常者由来の血清（２０検体）を検体（サンプル）として用いた。
［（１）検体（サンプル）］
横浜市立大学センター病院及び横浜市立大学先端医科学研究センターバイオバンクより提供された、大腸癌患者由来の血清（１８検体）及び健常者由来の血清（２０検体）を検体（サンプル）として用いた。
【0139】
［（２）糖ペプチドの調製］
１２ｍＭ Ｓｏｄｉｕｍｎ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ（ＳＤＣ）、１２ｍＭ Ｎ－ｌａｕｒｏｙｌｓａｒｃｏｓｉｎｅ（ＬＳ）を含む１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ９．０）からなる消化バッファーを調製し、当該消化バッファー９０μＬと上記（１）の大腸癌患者由来の血清及び健常者由来の血清１０μＬとをそれぞれ混合した。次いで、メルカプトエタノール溶液を最終濃度１０ｍＭとなるようそれぞれ添加し、９５℃で５分間インキュベートすることにより、タンパク質を変性させた。次いで、最終濃度２０ｍＭとなるようａｃｒｙｌａｍｉｄｅ（ＡＡ）溶液をそれぞれ添加し、２５℃で３０分間、暗所でインキュベートすることにより、システインをアルキル化させた。次いで、５μｇのＬｙｓ－Ｃを用いて３７℃で１時間インキュベートすることにより、タンパク質を消化した。次いで、１．５ｍＭ ＣａＣｌ２を含む４００μＬの５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）でそれぞれ希釈した後、５μｇのトリプシンを用いて３７℃で１２時間インキュベートすることにより、タンパク質を更に消化した。次いで、５００μＬの酢酸エチルと１０μＬのギ酸をそれぞれ加えた後、３０秒間ボルテックスし、１４０００×ｇで５分間遠心した。その後、ＳＤＣとＬＣを含む上層（酢酸エチル層）を除去し、遠心エバポレーターで約３０μＬまで蒸発させることにより、糖ペプチドをそれぞれ調製した。
１２ｍＭ Ｓｏｄｉｕｍｎ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ（ＳＤＣ）、１２ｍＭ Ｎ－ｌａｕｒｏｙｌｓａｒｃｏｓｉｎｅ（ＬＳ）を含む１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ９．０）からなる消化バッファーを調製し、当該消化バッファー９０μＬと上記（１）の大腸癌患者由来の血清及び健常者由来の血清１０μＬとをそれぞれ混合した。次いで、メルカプトエタノール溶液を最終濃度１０ｍＭとなるようそれぞれ添加し、９５℃で５分間インキュベートすることにより、タンパク質を変性させた。次いで、最終濃度２０ｍＭとなるようａｃｒｙｌａｍｉｄｅ（ＡＡ）溶液をそれぞれ添加し、２５℃で３０分間、暗所でインキュベートすることにより、システインをアルキル化させた。次いで、５μｇのＬｙｓ－Ｃを用いて３７℃で１時間インキュベートすることにより、タンパク質を消化した。次いで、１．５ｍＭ ＣａＣｌ２を含む４００μＬの５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）でそれぞれ希釈した後、５μｇのトリプシンを用いて３７℃で１２時間インキュベートすることにより、タンパク質を更に消化した。次いで、５００μＬの酢酸エチルと１０μＬのギ酸をそれぞれ加えた後、３０秒間ボルテックスし、１４０００×ｇで５分間遠心した。その後、ＳＤＣとＬＣを含む上層（酢酸エチル層）を除去し、遠心エバポレーターで約３０μＬまで蒸発させることにより、糖ペプチドをそれぞれ調製した。
【0140】
［（３）糖ペプチドの濃縮］
上記（２）で調製した３８検体分（大腸癌患者：１８検体、健常者：２０検体）の各糖ペプチドを、下記手順によりそれぞれ濃縮した。
即ち、先ず、１５ｍＬ遠心管内で、セルロース微結晶樹脂３００μＬを１０ｍＬの０．１％ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（ＴＦＡ）／９０％ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（ＡＣＮ）を用いて洗浄した。次いで、洗浄済の３００μＬセルロース微結晶樹脂、１０ｍｌの０．１％ＴＦＡ／９０％ＡＣＮ及び８μＬの（２）で調製した各糖ペプチドをそれぞれ混合し、１ｒｐｍで６分間インキュベートした。次いで、各糖ペプチドを吸着させたセルロース微結晶樹脂を、１０ｍＬの０．１％ＴＦＡ／８０％ＡＣＮでそれぞれ４回洗浄した。次いで、各糖ペプチドを６００μＬの３０％ＡＣＮでそれぞれ２回洗浄し、上記セルロース微結晶性樹脂から各糖ペプチドをそれぞれ溶出させることにより、糖ペプチドをそれぞれ濃縮した。尚、濃縮後、微細なセルロース粒子を除去するために、１４０００×ｇで遠心分離し、遠心エバポレーターで蒸発させ、５０μＬの０．１％ギ酸／３％ＡＣＮでそれぞれ再溶解した
上記（２）で調製した３８検体分（大腸癌患者：１８検体、健常者：２０検体）の各糖ペプチドを、下記手順によりそれぞれ濃縮した。
即ち、先ず、１５ｍＬ遠心管内で、セルロース微結晶樹脂３００μＬを１０ｍＬの０．１％ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（ＴＦＡ）／９０％ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（ＡＣＮ）を用いて洗浄した。次いで、洗浄済の３００μＬセルロース微結晶樹脂、１０ｍｌの０．１％ＴＦＡ／９０％ＡＣＮ及び８μＬの（２）で調製した各糖ペプチドをそれぞれ混合し、１ｒｐｍで６分間インキュベートした。次いで、各糖ペプチドを吸着させたセルロース微結晶樹脂を、１０ｍＬの０．１％ＴＦＡ／８０％ＡＣＮでそれぞれ４回洗浄した。次いで、各糖ペプチドを６００μＬの３０％ＡＣＮでそれぞれ２回洗浄し、上記セルロース微結晶性樹脂から各糖ペプチドをそれぞれ溶出させることにより、糖ペプチドをそれぞれ濃縮した。尚、濃縮後、微細なセルロース粒子を除去するために、１４０００×ｇで遠心分離し、遠心エバポレーターで蒸発させ、５０μＬの０．１％ギ酸／３％ＡＣＮでそれぞれ再溶解した
【0141】
［（４）脱糖鎖ペプチドの調製］
上記（３）で調製した濃縮糖ペプチド試料２５μＬを、糖鎖修飾部位の同定のために、ＰＮＧａｓｅ Ｆ処理にそれぞれ付した。即ち、上記試料に、２０μＬの１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）をそれぞれ添加することで中和し、１ユニットのＰＮＧａｓｅ Ｆとそれぞれ混合した。次いで、３７℃で１時間インキュベートした後、５μＬのＡＣＮと０．１％ギ酸で事前に洗浄した脱塩カラムにそれぞれロードした。５μＬの０．１％ギ酸でそれぞれ２回洗浄した後、５μＬの５０％ＡＣＮでそれぞれ溶出することにより、脱糖鎖ペプチドをそれぞれ調製した。尚、調製後、２０μＬの０．１％ギ酸でそれぞれ希釈し、使用するまでは－３０℃で保存した。
上記（３）で調製した濃縮糖ペプチド試料２５μＬを、糖鎖修飾部位の同定のために、ＰＮＧａｓｅ Ｆ処理にそれぞれ付した。即ち、上記試料に、２０μＬの１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）をそれぞれ添加することで中和し、１ユニットのＰＮＧａｓｅ Ｆとそれぞれ混合した。次いで、３７℃で１時間インキュベートした後、５μＬのＡＣＮと０．１％ギ酸で事前に洗浄した脱塩カラムにそれぞれロードした。５μＬの０．１％ギ酸でそれぞれ２回洗浄した後、５μＬの５０％ＡＣＮでそれぞれ溶出することにより、脱糖鎖ペプチドをそれぞれ調製した。尚、調製後、２０μＬの０．１％ギ酸でそれぞれ希釈し、使用するまでは－３０℃で保存した。
【0142】
［（５）ナノ液体クロマトグラフィー質量分析（ｎａｎｏＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）による解析］
上記（３）で調製した各濃縮糖ペプチドを、Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析計Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ（サーモフィッシャーサイエンティフィック製）にてそれぞれ解析（分離／分析）した。
具体的には、Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅに接続したｎａｎｏＬＣ、ＥＡＳＹ－ｎＬＣ１０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック製）に各糖ペプチド１．６μＬを２００ｂａｒでナノボアトラップカラムにそれぞれ注入し、２０μＬの０．１％ギ酸でそれぞれ洗浄した。次いで、流量３００ｎＬ／分にて０．１％ギ酸（溶媒Ａ）及び０．１％ギ酸／ＡＣＮの二元線形グラジエントでそれぞれ溶出することにより、糖ペプチドの量を測定した（０－１５０分：０％溶媒Ｂ－３５％溶媒Ｂ、１５０－１５５分：１００％溶媒Ｂ）。
尚、ナノボアトラップカラムと分析カラムは、各分析の前に、それぞれ１２μＬ及び５μＬの０．１％ＦＡで初期化した。フルＭＳはｍ／ｚ３５０からｍ／ｚ２０００までＲｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ７００００でモニタリングし、プロダクトイオンスキャンはＤａｔａ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎにより取得した。上記測定におけるイオン化パラメーター及びＱ－ＥｘａｃｔｉｖｅのＤａｔａ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎパラメーターは、それぞれ下記の通りである。
＜イオン化パラメーター＞
ｓｐｒａｙ ｖｏｌｔａｇｅ：１８００Ｖ
ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：２５０℃
Ｓ－ｌｅｎｓ ＲＦ ｌｅｖｅｌ：５０（単位なし）
尚、オグジリラリガス及びシースガスは使用しなかった。また、健常者と大腸癌患者由来の血清サンプルの測定順序は、交絡因子の影響を避けるためにランダム化した。
＜Ｑ－ＥｘａｃｔｉｖｅのＤａｔａ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎパラメーター＞
Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ：１７５００
ＡＧＣ ｔａｒｇｅｔ：１００００００
ｍａｘｉｍｕｍ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ：３５０ミリ秒
ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｗｉｄｔｈ：３．０ｍ／ｚ
：ｓｔｅｐｐｅｄ ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｃｏｌｌｉｓｉｏｎ ｅｎｅｒｇｙ：２５及び３５
上記（３）で調製した各濃縮糖ペプチドを、Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析計Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ（サーモフィッシャーサイエンティフィック製）にてそれぞれ解析（分離／分析）した。
具体的には、Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅに接続したｎａｎｏＬＣ、ＥＡＳＹ－ｎＬＣ１０００（サーモフィッシャーサイエンティフィック製）に各糖ペプチド１．６μＬを２００ｂａｒでナノボアトラップカラムにそれぞれ注入し、２０μＬの０．１％ギ酸でそれぞれ洗浄した。次いで、流量３００ｎＬ／分にて０．１％ギ酸（溶媒Ａ）及び０．１％ギ酸／ＡＣＮの二元線形グラジエントでそれぞれ溶出することにより、糖ペプチドの量を測定した（０－１５０分：０％溶媒Ｂ－３５％溶媒Ｂ、１５０－１５５分：１００％溶媒Ｂ）。
尚、ナノボアトラップカラムと分析カラムは、各分析の前に、それぞれ１２μＬ及び５μＬの０．１％ＦＡで初期化した。フルＭＳはｍ／ｚ３５０からｍ／ｚ２０００までＲｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ７００００でモニタリングし、プロダクトイオンスキャンはＤａｔａ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎにより取得した。上記測定におけるイオン化パラメーター及びＱ－ＥｘａｃｔｉｖｅのＤａｔａ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎパラメーターは、それぞれ下記の通りである。
＜イオン化パラメーター＞
ｓｐｒａｙ ｖｏｌｔａｇｅ：１８００Ｖ
ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：２５０℃
Ｓ－ｌｅｎｓ ＲＦ ｌｅｖｅｌ：５０（単位なし）
尚、オグジリラリガス及びシースガスは使用しなかった。また、健常者と大腸癌患者由来の血清サンプルの測定順序は、交絡因子の影響を避けるためにランダム化した。
＜Ｑ－ＥｘａｃｔｉｖｅのＤａｔａ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎパラメーター＞
Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ：１７５００
ＡＧＣ ｔａｒｇｅｔ：１００００００
ｍａｘｉｍｕｍ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ：３５０ミリ秒
ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｗｉｄｔｈ：３．０ｍ／ｚ
：ｓｔｅｐｐｅｄ ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｃｏｌｌｉｓｉｏｎ ｅｎｅｒｇｙ：２５及び３５
【0143】
また、（４）で調製した各脱糖鎖糖ペプチド１．６ μＬを、上記と同一の条件にてそれぞれ解析（分離／分析）した。その後、Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ １．４（サーモフィッシャーサイエンティフィック製）を用いて脱糖鎖ペプチドにおける糖鎖結合部位をそれぞれ同定した。更に、上記同定情報を基に、糖ペプチドの構造をそれぞれ確認した。
【0144】
［（６）結果］
上記（１）～（５）により、下記表７に示す通り、アルファ１アンチトリプシン、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテイン、アルファ１アンチキモトリプシン及び補体成分９にそれぞれ由来する糖ペプチドＡ～Ｍが同定された。
また、上記糖ペプチドＡ～Ｍのピーク面積値について、大腸癌患者（１８検体）の平均値及び健常者（２０検体）の平均値を表８及び図１～４にそれぞれ示す。
上記（１）～（５）により、下記表７に示す通り、アルファ１アンチトリプシン、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテイン、アルファ１アンチキモトリプシン及び補体成分９にそれぞれ由来する糖ペプチドＡ～Ｍが同定された。
また、上記糖ペプチドＡ～Ｍのピーク面積値について、大腸癌患者（１８検体）の平均値及び健常者（２０検体）の平均値を表８及び図１～４にそれぞれ示す。
【0145】
【表7】
【0146】
【表8】
【0147】
上記表７及び８、並びに図１より、アルファ１アンチトリプシンに由来する、（ｉ）式１’’で表される糖鎖を有する糖ペプチドＡ（大腸癌患者平均ピーク面積値：１９３９３５８１８６．２２２２２、健常者平均ピーク面積値：３０６３３５０２９．７）、（ｉｉ）式１’’’で表される糖鎖を有する糖ペプチドＢ（大腸癌患者平均ピーク面積値：１０９９６７５５０３．７７７７８、健常者平均ピーク面積値：２４５３９５１９１．４）、（ｉｉｉ）式２’’で表される糖鎖を有する糖ペプチドＣ（大腸癌患者平均ピーク面積値：１３２９７５９０７．４４４４４４、健常者平均ピーク面積値；１４０２７９３２．４５）及び（ｉｖ）式２’’’で表される糖鎖を有する糖ペプチドＤ（大腸癌患者平均ピーク面積値：１３８２６３８７３．０５５５５６、健常者平均ピーク面積値：２５９８５００５．７５）の発現量は、健常者と比較して、大腸癌患者において有意に増加していることが分かった。
また、上記糖ペプチドＡにおける式１’’で表される糖鎖、糖ペプチドＢにおける式１’’’で表される糖鎖、糖ペプチドＣにおける式２’’で表される糖鎖及び糖ペプチドＤにおける式２’’’で表される糖鎖は、アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。
また、上記糖ペプチドＡにおける式１’’で表される糖鎖、糖ペプチドＢにおける式１’’’で表される糖鎖、糖ペプチドＣにおける式２’’で表される糖鎖及び糖ペプチドＤにおける式２’’’で表される糖鎖は、アルファ１アンチトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より７０番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。
【0148】
上記表７及び８、並びに図２より、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインに由来する、（ｉ）式１’’で表される糖鎖を有する糖ペプチドＥ（大腸癌患者平均ピーク面積値：３６２０４５４５．５５５５５５６、健常者平均ピーク面積値：２０３７２９７．６）、（ｉｉ）式１’’’’で表される糖鎖を有する糖ペプチドＦ（大腸癌患者平均ピーク面積値：５３９９５６０９．７７７７７７８、健常者平均ピーク面積値：３４１５３３３．５５）、（ｉｉｉ）式１’’’’で表される糖鎖を有する糖ペプチドＧ（大腸癌患者平均ピーク面積値：５３９９５６０９．７７７７７７８、健常者平均ピーク面積値：３４１５３３３．５５）及び（ｉｖ）式１’’’で表される糖鎖を有する糖ペプチドＨ（大腸癌患者平均ピーク面積値：３８７３９０３６４．５５５５５６、健常者平均ピーク面積値：９２３５７２０５．６）の発現量は、健常者と比較して、大腸癌患者において有意に増加していることが分かった。
また、上記糖ペプチドＥにおける１’’で表される糖鎖及び糖ペプチドＦにおける式１’’’’で表される糖鎖は、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より７９番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。上記糖ペプチドＧにおける式１’’’’で表される糖鎖は、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より１８６番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。上記糖ペプチドＨにおける式１’’’で表される糖鎖は、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より２６９番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。
また、上記糖ペプチドＥにおける１’’で表される糖鎖及び糖ペプチドＦにおける式１’’’’で表される糖鎖は、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より７９番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。上記糖ペプチドＧにおける式１’’’’で表される糖鎖は、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より１８６番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。上記糖ペプチドＨにおける式１’’’で表される糖鎖は、ロイシンリッチアルファ２グリコプロテインのアミノ酸配列のＮ末端より２６９番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。
【0149】
上記表７及び８、並びに図３より、アルファ１アンチキモトリプシンに由来する、（ｉ）式２’’で表される糖鎖を有する糖ペプチドＩ（大腸癌患者平均ピーク面積値：１６２９０３６６９．９４４４４４、健常者平均ピーク面積値：８８９９０４０．７５）、（ｉｉ）式２’’’で表される糖鎖を有する糖ペプチドＪ（大腸癌患者平均ピーク面積値：２０６５１４５５０．４４４４４４、健常者平均ピーク面積値：１８９５２７３７．３５）、（ｉｉｉ）式１’’で表される糖鎖を有する糖ペプチドＫ（大腸癌患者平均ピーク面積値：１３３２１１１０．３３３３３３３、健常者平均ピーク面積値：９１３０７７）及び（ｉｖ）式１’’’で表される糖鎖を有する糖ペプチドＬ（大腸癌患者平均ピーク面積値：１４０９８４９７．３３３３３３３、健常者平均ピーク面積値：２２９０７７０．７）の発現量は、健常者と比較して、大腸癌患者において有意に増加していることが分かった。
また、上記糖ペプチドＩにおける式２’’で表される糖鎖、糖ペプチドＪにおける式２’’’で表される糖鎖、糖ペプチドＫにおける式１’’で表される糖鎖及び糖ペプチドＬにおける式１’’’で表される糖鎖は、アルファ１アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より９３番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。
また、上記糖ペプチドＩにおける式２’’で表される糖鎖、糖ペプチドＪにおける式２’’’で表される糖鎖、糖ペプチドＫにおける式１’’で表される糖鎖及び糖ペプチドＬにおける式１’’’で表される糖鎖は、アルファ１アンチキモトリプシンのアミノ酸配列のＮ末端より９３番目のアスパラギン残基に結合していることを確認した。
【0150】
上記表７及び８、並びに図１より、補体成分９に由来する、（ｉ）式１’’’で表される糖鎖を有する糖ペプチドＭ（大腸癌患者平均ピーク面積値：７３３３５１２６７．６６６６６７、健常者平均ピーク面積値：２０２５５７１２１．８５）の発現量は、健常者と比較して、大腸癌患者において有意に増加していることが分かった。
【0151】
更に、上記糖ペプチドＡ～Ｍの発現量について、ＲＯＣ（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）曲線解析によりＡＵＣ値（Ａｒｅａ Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ Ｃｕｒｖｅ：曲線面積値）を算出した。
その結果を下記表９に示す。尚、ＡＵＣ値については、１に近づく程高い判定能があるとされている。
その結果を下記表９に示す。尚、ＡＵＣ値については、１に近づく程高い判定能があるとされている。
【0152】
【表9】
【0153】
上記表９より、上記糖ペプチドＡ～Ｍは、何れも良好なＡＵＣ値を示した。
【0154】
以上より、上記糖ペプチドＡ～Ｍを大腸癌のバイオマーカーとして用いることにより、被験者が大腸癌に罹患しているか否かを判定することができることが分かった。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【配列表】