▶ ディセルナ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-04-19
(45)【発行日】2024-04-30
(54)【発明の名称】ＬＰＡ発現を阻害するための組成物及び方法
(51)【国際特許分類】
C12N 15/113 20100101AFI20240422BHJP
A61K 31/712 20060101ALI20240422BHJP
A61K 31/7125 20060101ALI20240422BHJP
A61K 31/713 20060101ALI20240422BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20240422BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20240422BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20240422BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240422BHJP
【ＦＩ】
C12N15/113 Z ZNA
A61K31/712
A61K31/7125
A61K31/713
A61P1/16
A61P3/06
A61P9/00
A61P9/10 101
【請求項の数】
10
(21)【出願番号】P 2023507767
(86)(22)【出願日】2021-08-05
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-08-30
(86)【国際出願番号】 US2021071109
(87)【国際公開番号】W WO2022032288
(87)【国際公開日】2022-02-10
【審査請求日】2023-11-08
(31)【優先権主張番号】63/061,676
(32)【優先日】2020-08-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/074,779
(32)【優先日】2020-09-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】521359667
【氏名又は名称】ディセルナ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＤＩＣＥＲＮＡ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】100094569
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 伸一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100103610
【弁理士】
【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦
(74)【代理人】
【識別番号】100109070
【弁理士】
【氏名又は名称】須田 洋之
(74)【代理人】
【識別番号】100093300
【弁理士】
【氏名又は名称】浅井 賢治
(74)【代理人】
【識別番号】100119013
【弁理士】
【氏名又は名称】山崎 一夫
(74)【代理人】
【識別番号】100123777
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 さつき
(74)【代理人】
【識別番号】100111796
【弁理士】
【氏名又は名称】服部 博信
(74)【代理人】
【識別番号】100123766
【弁理士】
【氏名又は名称】松田 七重
(72)【発明者】
【氏名】ブラウン ボブ デール
(72)【発明者】
【氏名】ドゥデク ヘンリク ティー
(72)【発明者】
【氏名】エイブラムス マーク
(72)【発明者】
【氏名】ハン ウェン
(72)【発明者】
【氏名】トゥラノフ アントン
【審査官】福間 信子
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１７／０５９２２３（ＷＯ，Ａ２）
【文献】国際公開第２０１９／０９２２８３（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／１１８６３８（ＷＯ，Ａ２）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｎ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記センス鎖が、5’[mUs][mU][mG][mC][mC][mA][mA][fG][fC][fU][fU][mG][mG][mU][mC][mA][mU]
[mC][mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] (配列番号393)
であり、前記アンチセンス鎖が、
5’[MePhosphonate-4O-mUs][fAs][fGs][fA][fU][mG][fA][mC][mC][fA][mA][mG][mC]
[fU][mU][mG][mG][mC][mA][mAs][mGs][mG] (配列番号793)
であり、ここで、
mUsは、3’-ホスホロチオエート結合を有する2’-OMeウリジンを示し、
mUは、2‘-OMeウリジンを示し、
mGは、2‘-OMeグアノシンを示し、
mCは、2‘-OMeシトシンを示し、
mAは、2‘-OMeアデノシンを示し、
fGは、2‘-Fグアノシンを示し、
fCは、2‘-Fシトシンを示し、
fUは、2‘-Fウリジンを示し、
ademA-GalNAcは、2‘-アミノジエトキシメタノール-アデニン-GalNAcを示し、
MePhosphonate-4O-mUsは、
を示し、
fAsは、3’-ホスホロチオエート結合を有する2’-Fアデノシンを示し、
fGsは、3’-ホスホロチオエート結合を有する2’-Fグアノシンを示し、
fAは、2‘-Fアデノシンを示し、
mAsは、3’-ホスホロチオエート結合を有する2‘-OMeアデノシンを示し、そして、
mGsは、3’-ホスホロチオエート結合を有する2‘-OMeグアノシンを示す、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
【請求項2】
ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含み、前記センス鎖が、5’[mUs][mU][mG][mC][mC][mA][mA][fG][fC][fU][fU][mG][mG][mU][mC][mA][mU]
[mC][mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] (配列番号393)
であり、前記アンチセンス鎖が、
5’[MePhosphonate-4O-mUs][fAs][fGs][fA][fU][mG][fA][mC][mC][fA][mA][mG][mC]
[fU][mU][mG][mG][mC][mA][mAs][mGs][mG] (配列番号793)
であり、ここで、
mUsは、3’-ホスホロチオエート結合を有する2’-OMeウリジンを示し、
mUは、2‘-OMeウリジンを示し、
mGは、2‘-OMeグアノシンを示し、
mCは、2‘-OMeシトシンを示し、
mAは、2‘-OMeアデノシンを示し、
fGは、2‘-Fグアノシンを示し、
fCは、2‘-Fシトシンを示し、
fUは、2‘-Fウリジンを示し、
ademA-GalNAcは、2‘-アミノジエトキシメタノール-アデニン-GalNAcを示し、
MePhosphonate-4O-mUsは、
を示し、
fAsは、3’-ホスホロチオエート結合を有する2’-Fアデノシンを示し、
fGsは、3’-ホスホロチオエート結合を有する2’-Fグアノシンを示し、
fAは、2‘F-アデノシンを示し、
mAsは、3’-ホスホロチオエート結合を有する2‘-OMeアデノシンを示し、そして、
mGsは、3’-ホスホロチオエート結合を有する2‘-OMeグアノシンを示す、医薬組成物。
【請求項3】
静脈内投与に適した担体を更に含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記担体が、水を含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項5】
前記担体が、ホスフェート緩衝生理食塩水を含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項6】
細胞、細胞の集団、または対象におけるアポリポタンパク質（ａ）（ＬＰＡ）遺伝子発現を減少するのに使用するための、請求項１に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、または請求項２～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項7】
前記ＬＰＡ遺伝子発現を減少することが、前記ＬＰＡのｍＲＮＡの量もしくはレベル、前記ＬＰＡの量もしくはレベル、またはその両方を減少させることを含む、請求項６に記載の、使用のためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物。
【請求項8】
前記対象が、心臓代謝疾患、アテローム性動脈硬化症、脂質異常症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を有する、請求項６または７に記載の、使用のためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物。
【請求項9】
心臓代謝疾患、アテローム性動脈硬化症、脂質異常症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を有する対象を治療するのに使用するための、請求項１に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、または請求項２～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項10】
第２の組成物または治療剤と組み合わせて投与される、請求項６～９のいずれか１項に記載の、使用のためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、アポリポタンパク質（ａ）（「ＬＰＡ」）の発現を阻害するオリゴヌクレオチド及びその使用、特にＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、及び／または状態を治療することに関する使用に関する。
【0002】
配列表への参照
配列表は、ＤＲＮＡ＿Ｃ００２ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔのファイル名であり、２０２１年８月５日の作成日であり、２３８キロバイトのサイズである、ＡＳＣＩＩ形式のテキストファイルとして明細書と同時に提出される。この配列表の電子形式の情報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
配列表は、ＤＲＮＡ＿Ｃ００２ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔのファイル名であり、２０２１年８月５日の作成日であり、２３８キロバイトのサイズである、ＡＳＣＩＩ形式のテキストファイルとして明細書と同時に提出される。この配列表の電子形式の情報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0003】
リポタンパク質（ａ）（Ｌｐ（ａ））は、脂質コアとアポリポタンパク質Ｂ（ａｐｏＢ－１００）を含む不均一な低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）様粒子であり、ジスルフィド結合を介してａｐｏＢ－１００に結合する独自の成分であるアポリポタンパク質（ａ）（ａｐｏ（ａ））を含む。ａｐｏ（ａ）遺伝子（ＬＰＡ）は主に肝臓で発現し、発現はヒト及び非ヒト霊長類に限定される。ヒトでのＬｐ（ａ）レベルは遺伝的に定義されており、食事、運動、またはその他のライフスタイルの変化によって大きく変化することはない。ＬＰＡは、存在するクリングルＫＩＶ２ドメインの数に応じて長さが異なり、その発現は存在するドメインの数と反比例する。通常のＬｐ（ａ）レベルは０．１～２５ｍｇ／ｄｌの範囲であり、アメリカ合衆国の人口の約２５％が３０ｍｇ／ｄｌ以上のＬｐ（ａ）レベルを有している。複数の研究におけるＬｐ（ａ）レベルの分析は、高Ｌｐ（ａ）レベルが心血管疾患、脳卒中、及びアテローム性動脈硬化性狭窄を含む他の関連障害の独立した危険因子であることを示唆している。さらに、ゲノム全体の関連分析は、ＬＰＡがアテローム性動脈硬化性狭窄などの疾患の遺伝的危険因子であることも示唆している。高脂血症患者のＬｐ（ａ）とＬＤＬレベルの両方を下げるために治療用リポタンパク質アフェレーシスを使用すると、心血管イベントの大幅な減少が観察されている。
【0004】
したがって、これら及び他のＬＰＡ関連疾患に関連する療法及び治療の必要性が存在する。
【発明の概要】
【0005】
本開示の実施形態は、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、及び／または状態を治療するための組成物及び方法に関する。この開示は、部分的に、肝臓でのＬＰＡ発現を選択的に阻害する、及び／または減少させるオリゴヌクレオチドの発見と開発に基づいている。したがって、ＬＰＡのｍＲＮＡ内の標的配列が同定され、これらの標的配列に結合してＬＰＡ ｍＲＮＡ発現を阻害するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが生成された。本明細書に示されるように、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、肝臓におけるサル及びヒトのＬＰＡ発現を阻害した。理論に縛られることなく、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態（例えば、心臓代謝疾患、アテローム性動脈硬化症、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨ）を治療するのに有用である。
【0006】
したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。
【0007】
前述のまたは関連する実施形態のいずれかにおいて、センス鎖は、１５～５０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、１８～３６個のヌクレオチドの長さである。
【0008】
前述のまたは関連する態様のいずれかにおいて、アンチセンス鎖は、１５～３０個のヌクレオチドの長さである。
【0009】
前述のまたは関連する態様のいずれかにおいて、アンチセンス鎖は２２個のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖とセンス鎖は、少なくとも１９個のヌクレオチドの長さ、任意選択で少なくとも２０個のヌクレオチドの長さの二重鎖領域を形成する。
【0010】
前述のまたは関連する態様のいずれかにおいて、相補性の領域は、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で少なくとも２０個のヌクレオチドの長さである。
【0011】
前述のまたは関連する態様のいずれかにおいて、センス鎖の３’末端は、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１はＳ２と相補的であり、ＬはＳ１とＳ２との間に３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する。
【0012】
いくつかの態様では、本開示は、ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが１５～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。
【0013】
他の態様では、本開示は、ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが１５～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と１５～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。
【0014】
さらに他の態様では、本開示は、ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが１５～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。
【0015】
さらなる態様では、本開示は、ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが１８～３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。
【0016】
他の態様では、本開示は、ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが１８～３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。
【0017】
いくつかの態様では、本開示は、ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが１８～３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１はＳ２と相補的であり、ＬはＳ１とＳ２との間に３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成し、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。
【0018】
他の態様では、本開示は、ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１はＳ２と相補的であり、ＬはＳ１とＳ２との間に３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成し、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。
【0019】
さらに他の態様では、本開示は、ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が少なくとも１９個のヌクレオチドの長さ、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さの二重鎖領域を形成し、センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１はＳ２と相補的であり、ＬはＳ１とＳ２との間に３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成し、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。
【0020】
前述のまたは関連する態様のいずれかにおいて、Ｌはトリループまたはテトラループである。いくつかの実施形態では、Ｌは、テトラループである。いくつかの実施形態では、テトラループは配列５’－ＧＡＡＡ－３’を含む。
【0021】
前述のまたは関連する実施形態のいずれかにおいて、Ｓ１とＳ２は、１～１０個のヌクレオチドの長さであり、同じ長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｓ１とＳ２は、１個のヌクレオチド、２個のヌクレオチド、３個のヌクレオチド、４個のヌクレオチド、５個のヌクレオチド、６個のヌクレオチド、７個のヌクレオチド、８個のヌクレオチド、９個のヌクレオチド、または１０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、Ｓ１とＳ２は、６個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、ステムループは、配列５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号１１９７）を含む。
【0022】
前述のまたは関連する実施形態のいずれかにおいて、アンチセンス鎖は、１個以上のヌクレオチドの長さの３’突出配列を含む。いくつかの実施形態では、３’突出配列は２個のヌクレオチドの長さであり、任意選択で３’突出配列はＧＧである。
【0023】
前述のまたは関連する実施形態のいずれかにおいて、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは２’修飾を含む。いくつかの実施形態では、２’修飾は、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸から選択される修飾である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドを構成するすべてのヌクレオチドが修飾され、任意選択で、修飾は、２’－フルオロ及び２’－Ｏ－メチルから選択される２’－修飾である。
【0024】
前述のまたは関連する実施形態のいずれかにおいて、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
【0025】
前述のまたは関連する実施形態のいずれかにおいて、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は、ホスフェート類似体を含む。いくつかの実施形態では、ホスフェート類似体は、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、またはマロニルホスホネートであり、任意選択で、ホスフェート類似体は、５’－メトキシホスホネート－４’－オキシを含む４’－ホスフェート類似体である。
【0026】
前述のまたは関連する実施形態のいずれかにおいて、オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドは、１つ以上の標的化リガンドにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、それぞれの標的化リガンドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、または脂質を含む。いくつかの実施形態では、それぞれの標的化リガンドは、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分、または四価ＧａｌＮＡｃ部分である。いくつかの実施形態では、ステムループのＬの最大４個のヌクレオチドが、それぞれ一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされる。
【0027】
前述のまたは関連する実施形態のいずれかにおいて、センス鎖は、配列番号３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、及び４０３のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含む。
【0028】
前述のまたは関連する実施形態のいずれかにおいて、アンチセンス鎖は、配列番号７８８、７８９、７９０、７９１、７９２、７９３、７９４、７９５、７９６、７９７、７９８、７９９、８００、８０１、８０２、及び８０３のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含む。
【0029】
前述のまたは関連する実施形態のいずれかにおいて、センス鎖とアンチセンス鎖は、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む：
（ａ） それぞれ配列番号３９３と７９３；
（ｂ） それぞれ配列番号３８８と７８８；
（ｃ） それぞれ配列番号３８９と７８９；
（ｄ） それぞれ配列番号３９０と７９０；
（ｅ） それぞれ配列番号３９１と７９１；
（ｆ） それぞれ配列番号３９２と７９２；
（ｇ） それぞれ配列番号３９４と７９４；
（ｈ） それぞれ配列番号３９５と７９５；
（ｉ） それぞれ配列番号３９６と７９６；
（ｊ） それぞれ配列番号３９７と７９７；
（ｋ） それぞれ配列番号３９８と７９８；
（ｌ） それぞれ配列番号３９９と７９９；
（ｍ） それぞれ配列番号４００と８００；
（ｎ） それぞれ配列番号４０１と８０１；
（ｏ） それぞれ配列番号４０２と８０２；及び
（ｐ） それぞれ配列番号４０３と８０３。
（ａ） それぞれ配列番号３９３と７９３；
（ｂ） それぞれ配列番号３８８と７８８；
（ｃ） それぞれ配列番号３８９と７８９；
（ｄ） それぞれ配列番号３９０と７９０；
（ｅ） それぞれ配列番号３９１と７９１；
（ｆ） それぞれ配列番号３９２と７９２；
（ｇ） それぞれ配列番号３９４と７９４；
（ｈ） それぞれ配列番号３９５と７９５；
（ｉ） それぞれ配列番号３９６と７９６；
（ｊ） それぞれ配列番号３９７と７９７；
（ｋ） それぞれ配列番号３９８と７９８；
（ｌ） それぞれ配列番号３９９と７９９；
（ｍ） それぞれ配列番号４００と８００；
（ｎ） それぞれ配列番号４０１と８０１；
（ｏ） それぞれ配列番号４０２と８０２；及び
（ｐ） それぞれ配列番号４０３と８０３。
【0030】
いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９３に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９３に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３８８に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７８８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３８９に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７８９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９０に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９０に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９１に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９２に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９４に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９４に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９５に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９５に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９６に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９７に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９７に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９８に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９９に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号４００に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号８００に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号４０１に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号８０１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号４０２に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号８０２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号４０３に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号８０３に示されるヌクレオチド配列を含む。
【0031】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、センス鎖とアンチセンス鎖を構成するすべてのヌクレオチドが修飾され、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。
【0032】
さらなる実施形態では、本開示は、ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、センス鎖とアンチセンス鎖を構成するすべてのヌクレオチドが修飾され、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素がホスフェート類似体を含み、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。
【0033】
他の実施形態では、本開示は、ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、センス鎖とアンチセンス鎖を構成するすべてのヌクレオチドが修飾され、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素がホスフェート類似体を含み、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。
【0034】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、センス鎖とアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、センス鎖とアンチセンス鎖を構成するすべてのヌクレオチドが修飾され、アンチセンス鎖とセンス鎖が１つ以上の２’－フルオロ及び２’－Ｏ－メチルで修飾されたヌクレオチドならびに少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含み、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素がホスフェート類似体を含み、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。
【0035】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象を治療するための方法であって、方法が、先行請求項のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたはその医薬組成物の治療有効量を対象に投与し、それによって対象を治療することを含む、方法を提供する。
【0036】
他の実施形態では、本開示は、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される担体、送達剤、または賦形剤と、を含む医薬組成物を提供する。
【0037】
他の実施形態では、本開示は、オリゴヌクレオチドを対象に送達する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。
【0038】
別の実施形態では、本開示は、細胞、細胞の集団、または対象におけるＬＰＡ発現を減少させるための方法であって、方法が：
ｉ． 細胞または細胞の集団を、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物と接触させること；または
ｉｉ． 本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を対象に投与すること、を含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現を減少させることは、ＬＰＡのｍＲＮＡの量もしくはレベル、ＬＰＡタンパク質の量もしくはレベル、またはその両方を減少させることを含む。いくつかの実施形態では、対象は、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態は、心臓代謝疾患、任意選択でアテローム性動脈硬化症、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物は、第２の組成物または治療剤と組み合わせて投与される。
ｉ． 細胞または細胞の集団を、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物と接触させること；または
ｉｉ． 本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を対象に投与すること、を含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現を減少させることは、ＬＰＡのｍＲＮＡの量もしくはレベル、ＬＰＡタンパク質の量もしくはレベル、またはその両方を減少させることを含む。いくつかの実施形態では、対象は、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態は、心臓代謝疾患、任意選択でアテローム性動脈硬化症、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物は、第２の組成物または治療剤と組み合わせて投与される。
【0039】
別の態様では、本開示は、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象を治療するための方法であって、方法が、センス鎖とアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの治療有効量を対象に投与することを含み、センス鎖とアンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、方法を提供する。
【0040】
別の実施形態では、本開示は、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象を治療するための方法であって、方法が、表５に示される行から選択されるセンス鎖とアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたはその医薬組成物の治療有効量を対象に投与し、それによって対象を治療することを含む、方法を提供する。
【0041】
他の実施形態では、本開示は、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象を治療するための方法であって、方法が、センス鎖とアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの治療有効量を対象に投与することを含み、センス鎖とアンチセンス鎖が以下からなる群から選択される方法を提供する：
（ａ） それぞれ配列番号３９３と７９３；
（ｂ） それぞれ配列番号３８８と７８８；
（ｃ） それぞれ配列番号３８９と７８９；
（ｄ） それぞれ配列番号３９０と７９０；
（ｅ） それぞれ配列番号３９１と７９１；
（ｆ） それぞれ配列番号３９２と７９２；
（ｇ） それぞれ配列番号３９４と７９４；
（ｈ） それぞれ配列番号３９５と７９５；
（ｉ） それぞれ配列番号３９６と７９６；
（ｊ） それぞれ配列番号３９７と７９７；
（ｋ） それぞれ配列番号３９８と７９８；
（ｌ） それぞれ配列番号３９９と７９９；
（ｍ） それぞれ配列番号４００と８００；
（ｎ） それぞれ配列番号４０１と８０１；
（ｏ） それぞれ配列番号４０２と８０２；及び
（ｐ） それぞれ配列番号４０３と８０３。
（ａ） それぞれ配列番号３９３と７９３；
（ｂ） それぞれ配列番号３８８と７８８；
（ｃ） それぞれ配列番号３８９と７８９；
（ｄ） それぞれ配列番号３９０と７９０；
（ｅ） それぞれ配列番号３９１と７９１；
（ｆ） それぞれ配列番号３９２と７９２；
（ｇ） それぞれ配列番号３９４と７９４；
（ｈ） それぞれ配列番号３９５と７９５；
（ｉ） それぞれ配列番号３９６と７９６；
（ｊ） それぞれ配列番号３９７と７９７；
（ｋ） それぞれ配列番号３９８と７９８；
（ｌ） それぞれ配列番号３９９と７９９；
（ｍ） それぞれ配列番号４００と８００；
（ｎ） それぞれ配列番号４０１と８０１；
（ｏ） それぞれ配列番号４０２と８０２；及び
（ｐ） それぞれ配列番号４０３と８０３。
【0042】
いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９３に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９３に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３８８に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７８８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３８９に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７８９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９０に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９０に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９１に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９２に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９４に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９４に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９５に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９５に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９６に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９６に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９７に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９７に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９８に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号３９９に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号７９９に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号４００に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号８００に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号４０１に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号８０１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号４０２に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号８０２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は配列番号４０３に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は配列番号８０３に示されるヌクレオチド配列を含む。
【0043】
いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態は、心臓代謝疾患、任意選択でアテローム性動脈硬化症、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨである。
【0044】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態の治療のための、任意選択で心臓代謝疾患、任意選択でアテローム性動脈硬化症、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨの治療のための医薬品の製造における、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の使用を提供する。
【0045】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態の治療における、任意選択で心臓代謝疾患、任意選択でアテローム性動脈硬化症、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨの治療のための使用のための、または使用に適用可能な、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の使用を提供する。
【0046】
他の実施形態では、本開示は、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと、任意選択の薬学的に許容される担体と、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象への投与のための使用説明書を含む添付文書と、を含むキットを提供する。
【0047】
前述のまたは関連する実施形態のいずれかにおいて、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態は、心臓代謝疾患、任意選択でアテローム性動脈硬化症、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨである。
【図面の簡単な説明】
【0048】
【図1】対照のモック処理細胞のＬＰＡのｍＲＮＡのパーセント（％）と比較した、示されたＤｓｉＲＮＡをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３－ＬＰＡ細胞におけるＬＰＡのｍＲＮＡの％を示すグラフを提供する。
【図2】対照のモック処理細胞のＬＰＡのｍＲＮＡのパーセント（％）と比較した、示されたＤｓｉＲＮＡをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３－ＬＰＡ細胞におけるＬＰＡのｍＲＮＡの％を示すグラフを提供する。
【図3】対照のモック処理細胞のＬＰＡのｍＲＮＡのパーセント（％）と比較した、示されたＤｓｉＲＮＡをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３－ＬＰＡ細胞におけるＬＰＡのｍＲＮＡの％を示すグラフを提供する。
【図4】対照のモック処理細胞のＬＰＡのｍＲＮＡのパーセント（％）と比較した、示されたＤｓｉＲＮＡをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３－ＬＰＡ細胞におけるＬＰＡのｍＲＮＡの％を示すグラフを提供する。
【図5】対照のモック処理細胞のＬＰＡのｍＲＮＡのパーセント（％）と比較した、示されたＤｓｉＲＮＡをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２－ＬＰＡ細胞におけるＬＰＡのｍＲＮＡの％を示すグラフを提供する。
【図6】対照のモック処理細胞のＬＰＡのｍＲＮＡのパーセント（％）と比較した、示されたＤｓｉＲＮＡをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３－ＬＰＡ細胞におけるＬＰＡのｍＲＮＡの％を示すグラフを提供する。
【図7】対照のモック処理細胞のＬＰＡのｍＲＮＡのパーセント（％）と比較した、示されたＤｓｉＲＮＡをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３－ＬＰＡ細胞におけるＬＰＡのｍＲＮＡの％を示すグラフを提供する。
【図8】ホスフェート緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処理されたマウスと比較した、示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドで処理されたマウスからの肝臓試料中のＬＰＡのｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。
【図9】ホスフェート緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処理されたマウスと比較した、示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドで処理されたマウスからの肝臓試料中のＬＰＡのｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。
【図10】一般的なＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）コンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドの構造及び化学修飾パターンを示す概略図を提供する。
【図11A】処置後２８日目の、ＰＢＳで処理された非ヒト霊長類（ＮＨＰ）と比較した、示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドで処理されたＮＨＰからの肝臓試料中のＬＰＡのｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。
【図11B】処置後５６日目の、ＰＢＳで処理された非ヒト霊長類（ＮＨＰ）と比較した、示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドで処理されたＮＨＰからの肝臓試料中のＬＰＡのｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。
【図11C】処置後８４日目の、ＰＢＳで処理された非ヒト霊長類（ＮＨＰ）と比較した、示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドで処理されたＮＨＰからの肝臓試料中のＬＰＡのｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。
【図11D】２８日目の、ＰＢＳで処理されたＮＨＰと比較した、示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドで処理されたＮＨＰからの肝臓試料中のＰＬＧのｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。
【図12】経時的な、ＰＢＳで処理されたＮＨＰと比較した、示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドで処理されたＮＨＰからの血清中のａｐｏ（ａ）タンパク質の平均パーセント（％）を示すグラフを提供する。
【発明を実施するための形態】
【0049】
Ｉ．定義
本明細書で使用される場合、目的の１つ以上の値に適用される「約」は、記述される参照値と類似する値を指す。特定の実施形態では、「約」は、特に明記されていない限り、または文脈から明らかでない限り、言及された参照値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ以下のいずれかの方向（より大きいまたはより小さい）の範囲内の値の範囲を指す（そのような数が可能な値の１００％を超える場合を除く）。
本明細書で使用される場合、目的の１つ以上の値に適用される「約」は、記述される参照値と類似する値を指す。特定の実施形態では、「約」は、特に明記されていない限り、または文脈から明らかでない限り、言及された参照値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ以下のいずれかの方向（より大きいまたはより小さい）の範囲内の値の範囲を指す（そのような数が可能な値の１００％を超える場合を除く）。
【0050】
本明細書で使用される場合、「投与する」、「投与すること」、「投与」などは、薬理学的に有用な様式で（例えば、対象の状態を治療するために）対象に物質（例えば、オリゴヌクレオチド）を提供することを指す。
【0051】
本明細書で使用される場合、「アポリポタンパク質（ａ）」及び「ａｐｏ（ａ）」と略される用語は、脂質に結合してリポタンパク質を形成するポリペプチドのアポリポタンパク質クラスのメンバーであるアポリポタンパク質（ａ）ポリペプチドを指す。Ａｐｏ（ａ）は、ヒトにおけるＬＰＡ遺伝子によってコードされる多型糖タンパク質である。ＬＰＡのｍＲＮＡ及びａｐｏ（ａ）ポリペプチドは主に肝臓で発現する。リポタンパク質（ａ）（Ｌｐ（ａ）と略される）は、肝臓で形成されるリポタンパク質のクラスであり、ａｐｏ（ａ）に共有結合したアポリポタンパク質（ａｐｏ）Ｂ－１００（Ａｐｏ－Ｂ１００）の単一コピーを含む。ヒトでは、ａｐｏ（ａ）には、ＫＩＶ1のそれぞれの１コピー、ＫＩＶ2の複数のコピー、及びＫＩＶ3～ＫＩＶ10のそれぞれの１コピーから構成される、少なくとも１０のサブタイプのＫＩＶリピート、ＫＶ、及び不活性なプロテアーゼ様ドメインが含まれる。ａｐｏ（ａ）の存在は、Ｌｐ（ａ）を他のすべてのリポタンパク質クラスから区別する（Ｍａｒｃｏｖｉｎａ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ．４１（２）：２４６－５５）。本開示の目的のために、「アポリポタンパク質（ａ）」または「ａｐｏ（ａ）」は、ヒト、マウス、霊長類、サル、ウシ、ニワトリ、げっ歯類、ラット、ブタ、ヒツジ、及びモルモットを含むがこれらに限定されない、任意の脊椎動物または哺乳動物由来のａｐｏ（ａ）ポリペプチドを指す。「Ａｐｏ（ａ）」はまた、天然ａｐｏ（ａ）のインビボまたはインビトロ活性の少なくとも１つを維持する天然ａｐｏ（ａ）の断片またはバリアントを指す。Ａｐｏ（ａ）には、Ａｐｏ（ａ）の全長の未プロセッシング前駆体のほか、翻訳後のプロセッシングによる成熟型も含まれる。ヒトＬＰＡのｍＲＮＡ転写物の例示的な配列は、公的に入手可能（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００５５７７．３）であり、本明細書に開示されている（配列番号１）。カニクイザルのＬＰＡのｍＲＮＡの例示的な配列は公的に入手可能（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＸＭ＿０１５４４８５１７．１）であり、本明細書に開示されている（配列番号２）。
【0052】
本明細書で使用される場合、「アシアロ糖タンパク質受容体」または「ＡＳＧＰＲ」は、４８ｋＤａのメジャーサブユニット（ＡＳＧＰＲ－１）及び４０ｋＤａのマイナーサブユニット（ＡＳＧＰＲ－２）によって形成される二部分Ｃ型レクチンを指す。ＡＳＧＰＲは、主として肝細胞の類洞表面で発現し、末端ガラクトースまたはＧａｌＮＡｃ残基を含む循環糖タンパク質（アシアロ糖タンパク質）の結合、内在化、及びその後の排出に主要な役割を有する。
【0053】
本明細書で使用される場合、「減弱する」、「減弱する」、「減弱」などは、減少させるかまたは効果的に停止させることを指す。非限定的な例として、本明細書の治療の１つ以上は、対象におけるアテローム性動脈硬化症を含む心臓代謝疾患、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨの発症または進行を減少させるかまたは効果的に停止させることができる。この減弱は、例えば、アテローム性動脈硬化症を含む心臓代謝疾患、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨの１つ以上の態様（例えば、症状、組織特性、及び細胞、炎症または免疫学的活性など）の減少、アテローム性動脈硬化症を含む心臓代謝疾患、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨの１つ以上の態様の検出可能な進行（悪化）がないこと、または別の方法で予想される場合に、アテローム性動脈硬化症を含む心臓代謝疾患、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨの検出可能な態様がないこと、によって例示され得る。
【0054】
本明細書で使用される場合、「相補的」は、（例えば、２つの対向する核酸上のまたは単一の核酸鎖の対向する領域上の）２個のヌクレオチドが互いに塩基対を形成することを可能にする２個のヌクレオチド間の構造的関係を指す。例えば、対向する核酸のピリミジンヌクレオチドに相補的である１つの核酸のプリンヌクレオチドは、互いに水素結合を形成することにより一緒に塩基対形成し得る。いくつかの実施形態では、相補的なポリヌクレオチド鎖は、ワトソン・クリック型、または、安定した二重鎖の形成を可能にする他の任意の形で、塩基対を形成することができる。いくつかの実施形態では、２本の核酸は、本明細書に記載されるように、互いに相補的であることで相補性の領域を形成する複数のヌクレオチドの領域を有することができる。
【0055】
本明細書で使用される場合、「デオキシリボヌクレオチド」は、リボヌクレオチドと比較する場合、そのペントース糖の２’位のヒドロキシルの代わりに水素を有するヌクレオチドを指す。修飾デオキシリボヌクレオチドは、糖、ホスフェート基または塩基の修飾または置換を含む、２′位以外の原子に１つ以上の修飾または置換を有するデオキシリボヌクレオチドである。
【0056】
本明細書で使用される場合、「二本鎖オリゴヌクレオチド」または「ｄｓオリゴヌクレオチド」は、実質的に二本鎖形態であるオリゴヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、ｄｓオリゴヌクレオチドの二重鎖領域（複数可）の相補的塩基対形成は、共有結合的に分離した核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成される。いくつかの実施形態では、ｄｓオリゴヌクレオチドの二重鎖領域（複数可）の相補的塩基対形成は、共有結合した核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成される。いくつかの実施形態では、ｄｓオリゴヌクレオチドの二重鎖領域（複数可）の相補的塩基対形成は、（例えば、ヘアピンを介して）フォールディングし、一緒に塩基対を形成するヌクレオチドの相補的な逆平行配列を提供する単一の核酸鎖から形成される。いくつかの実施形態では、ｄｓオリゴヌクレオチドは、互いに完全に二本鎖である２つの共有結合的に分離した核酸鎖を含む。しかしながら、いくつかの実施形態では、ｄｓオリゴヌクレオチドは、部分的に二重鎖である（例えば、一方または両方の末端に突出を有する）２つの共有結合的に分離した核酸鎖を含む。いくつかの実施形態では、ｄｓオリゴヌクレオチドは、部分的に相補的であるヌクレオチドの逆平行配列を含み、したがって、内部ミスマッチまたは末端ミスマッチを含み得る１つ以上のミスマッチを有し得る。
【0057】
本明細書で使用される場合、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）に関して、「二重鎖」は、ヌクレオチドの２つの逆平行配列の相補的塩基対形成により形成される構造を指す。
【0058】
本明細書で使用される場合、「賦形剤」は、例えば、所望の稠度または安定化効果を与えるかまたはこれらに寄与するために組成物中に含めることができる非治療剤を指す。
【0059】
本明細書で使用される場合、「肝細胞」または「複数の肝細胞」は、肝臓の実質組織の細胞を指す。これらの細胞は肝臓の質量の約７０％～８５％を構成し、血清アルブミン、ＦＢＮ、及び凝固因子のプロトロンビングループ（因子３及び４を除く）を製造する。肝細胞系列細胞のマーカーとしては、トランスサイレチン（Ｔｔｒ）、グルタミン合成酵素（Ｇｌｕｌ）、肝細胞核因子１ａ（Ｈｎｆ１ａ）、及び肝細胞核因子４ａ（Ｈｎｆ４ａ）が挙げられるが、これらに限定されない。成熟肝細胞のマーカーとしては、シトクロムＰ４５０（Ｃｙｐ３ａ１１）、フマリルアセト酢酸ヒドロラーゼ（Ｆａｈ）、グルコース６－ホスフェート（Ｇ６ｐ）、アルブミン（Ａｌｂ）、及びＯＣ２－２Ｆ８が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｈｕｃｈ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎａｔｕｒｅ ４９４：２４７－２５０を参照されたい。
【0060】
本明細書で使用される場合、「肝毒性剤」は、それ自体が肝臓に対して毒性であるか、または処理されて肝臓に対して毒性である代謝産物を形成することができる化合物、ウイルス、または他の物質を指す。肝毒性剤としては、四塩化炭素（ＣＣｌ4）、アセトアミノフェン（パラセタモール）、塩化ビニル、ヒ素、クロロホルム、非ステロイド性抗炎症薬（アスピリン及びフェニルブタゾンなど）が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【0061】
本明細書で使用される場合、「不安定なリンカー」は、（例えば、酸性ｐＨによって）切断され得るリンカーを指す。「かなり安定なリンカー」とは、切断できないリンカーを指す。
【0062】
本明細書で使用される場合、「肝臓の炎症」または「肝炎」は、肝毒性剤への曝露によって引き起こされる可能性があるような、特に損傷もしくは感染の結果として、肝臓の腫脹、機能不全及び／または疼痛をもたらす、身体的状態を指す。症状としては、黄疸（皮膚や目の黄変）、疲労、衰弱、悪心、嘔吐、食欲減退、体重減少などが挙げられ得る。肝臓の炎症は、治療せずに放置すると、線維症、肝硬変、肝不全、または肝癌に進行する可能性がある。
【0063】
本明細書で使用される場合、「肝線維症」または「肝臓の線維症」は、炎症や肝細胞死に起因する、コラーゲン（Ｉ、ＩＩＩ、及びＩＶ）、ＦＢＮ、ウンドゥリン、エラスチン、ラミニン、ヒアルロナン、及びプロテオグリカンを含み得る細胞外マトリックスタンパク質の肝臓における過剰な蓄積を指す。肝線維症は、治療せずに放置すると、肝硬変、肝不全、または肝癌に進行する可能性がある。
【0064】
本明細書で使用される場合、「ループ」は、互いに十分に相補的な核酸の２つの逆平行領域によって挟まれている核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）の非対形成領域であって、適切なハイブリダイゼーション条件下（例えば、ホスフェート緩衝溶液中、細胞内）で、非対形成領域を挟んだ２つの逆平行領域がハイブリダイズして二重鎖（「ステム」と呼ばれる）を形成する、核酸の非対形成領域を指す。
【0065】
本明細書で使用される場合、「修飾されたヌクレオチド間結合」は、ホスホジエステル結合を含む参照ヌクレオチド間結合と比較して１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチド間結合を指す。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、天然に存在しない結合である。典型的には、修飾ヌクレオチド間結合は、修飾ヌクレオチド間結合が存在する核酸に１つ以上の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、可溶性、バイオアベイラビリティ、生物活性、免疫原性の低下などを改善することができる。
【0066】
本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド」は、アデニンリボヌクレオチド、グアニンリボヌクレオチド、シトシンリボヌクレオチド、ウラシルリボヌクレオチド、アデニンデオキシリボヌクレオチド、グアニンデオキシリボヌクレオチド、シトシンデオキシリボヌクレオチド、及びチミジンデオキシリボヌクレオチドから選択される対応する参照ヌクレオチドと比較して、１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、天然に存在しないヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、その糖、核酸塩基、及び／またはホスフェート基に１つ以上の化学修飾を有する。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、対応する参照ヌクレオチドにコンジュゲートされた１つ以上の化学部分を有する。典型的には、修飾ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドが存在する核酸に１つ以上の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、可溶性、バイオアベイラビリティ、生物活性、免疫原性の低下などを改善することができる。
【0067】
本明細書で使用される場合、「ニックテトラループ構造」は、センス（パッセンジャー）鎖がアンチセンス（ガイド）鎖と相補的な領域を有し、鎖の少なくとも１つ（一般にセンス鎖）が、当該少なくとも１つの鎖内に形成された隣接するステム領域を安定化するように構成されたテトラループを有する、別個のセンス及びアンチセンス鎖によって特徴付けられるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの構造を指す。
【0068】
本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」は、（例えば、約１００個未満のヌクレオチドの長さの）短い核酸を指す。オリゴヌクレオチドは、一本鎖（ｓｓ）またはｄｓであり得る。オリゴヌクレオチドは二重鎖領域を有していても有していなくてもよい。一連の非限定的な例として、オリゴヌクレオチドは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ダイサー基質干渉ＲＮＡ（ｄｓｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、短いｓｉＲＮＡ、またはｓｓ ｓｉＲＮＡであり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ｄｓオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである。
【0069】
本明細書で使用される場合、「突出」は、１つの鎖または領域が、その１つの鎖または領域が二重鎖を形成する相補鎖の末端を超えて伸長していることから生じる末端の非塩基対形成ヌクレオチド（複数可）を指す。いくつかの実施形態では、突出は、ｄｓオリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端で二重鎖領域から伸長している１つ以上の非対形成ヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、突出は、ｄｓオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖またはセンス鎖上の３’または５’の突出である。
【0070】
本明細書で使用される場合、「ホスフェート類似体」は、ホスフェート基の静電特性及び／または立体特性を模倣する化学部分を指す。いくつかの実施形態では、ホスフェート類似体は、しばしば酵素的除去を受けやすい５’－ホスフェートの代わりにオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドに配置される。いくつかの実施形態では、５’ホスフェート類似体はホスファターゼ耐性結合を含む。ホスフェート類似体の例としては、５’－メチレンホスホネート（５’－ＭＰ）、及び５’－（Ｅ）－ビニルホスホネート（５’－ＶＰ）などの５’－ホスホネートが挙げられる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドにおいて、糖の４’位の炭素にホスフェート類似体を有する（４’－ホスフェート類似体と呼ぶ）。４’－ホスフェート類似体の例として、オキシメチル基の酸素原子が糖部分（例えば、その４’－炭素）に結合したオキシメチルホスホネートまたはその類似体がある。例えば、米国仮特許出願第６２／３８３，２０７号（２０１６年９月２日に出願）及び同第６２／３９３，４０１号（２０１６年９月１２日に出願）を参照されたい。オリゴヌクレオチドの５’末端に対する他の修飾が開発されている（例えば、国際特許出願第ＷＯ２０１１／１３３８７１号；米国特許第８，９２７，５１３号；及びＰｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４３：２９９３－３０１１を参照されたい）。
【0071】
本明細書で使用される場合、ある遺伝子（例えば、ＬＰＡ）の「減少した発現」は、適切な参照（例えば、参照の細胞、細胞の集団、試料、または対象）と比較する場合の、細胞、細胞の集団、試料、または対象におけるその遺伝子によってコードされるＲＮＡ転写産物（例えば、ＬＰＡのｍＲＮＡ）もしくはタンパク質の量もしくはレベルの減少、及び／またはその遺伝子の活性の量もしくはレベルの減少を指す。例えば、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＬＰＡのｍＲＮＡを含むヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチド）と細胞を接触させる行為は、ｄｓオリゴヌクレオチドで処理されていない細胞と比較する場合、（例えば、ＲＮＡｉ経路によるＬＰＡのｍＲＮＡの不活性化及びまたは分解による）ＬＰＡのｍＲＮＡ、ａｐｏ（ａ）タンパク質、及び／またはａｐｏ（ａ）活性の量またはレベルの減少をもたらし得る。同様に、本明細書で使用される場合、「発現を減少させること」は、遺伝子（例えば、ＬＰＡ）の減少した発現をもたらす行為を指す。本明細書で使用される場合、「ＬＰＡ発現の減少」は、適切な参照（例えば、参照の細胞、細胞の集団、試料、または対象）と比較する場合の、細胞、細胞の集団、試料、または対象における、ＬＰＡのｍＲＮＡ、ａｐｏ（ａ）タンパク質、及び／またはａｐｏ（ａ）活性の量またはレベルの減少を指す。
【0072】
本明細書で使用される場合、「相補性の領域」は、ヌクレオチドの逆平行配列と十分に相補的であることにより、（例えば、ホスフェート緩衝液中、細胞内などの）適切なハイブリダイゼーション条件下で２つのヌクレオチドの配列間のハイブリダイゼーションを可能にするような、核酸のヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）の配列を指す。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡ標的配列に相補的な領域を有する標的化配列を含む。
【0073】
本明細書で使用される場合、「リボヌクレオチド」は、そのペントース糖として、２’位にヒドロキシル基を有するリボースを有するヌクレオチドを指す。修飾リボヌクレオチドは、リボース、ホスフェート基または塩基において、またはそれらの修飾または置換を含む、２′位以外の原子に１つ以上の修飾または置換を有するリボヌクレオチドである。
【0074】
本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド」は、（ａ）センス鎖（パッセンジャー）とアンチセンス鎖（ガイド）を有するｄｓオリゴヌクレオチドであって、アンチセンス鎖またはアンチセンス鎖の一部がアルゴノート２（Ａｇｏ２）エンドヌクレアーゼによって標的ｍＲＮＡ（例えば、ＬＰＡのｍＲＮＡ）の切断に使用されるｄｓオリゴヌクレオチド、または（ｂ）一本鎖アンチセンス鎖を有するｓｓオリゴヌクレオチドであって、そのアンチセンス鎖（またはそのアンチセンス鎖の一部）が、Ａｇｏ２エンドヌクレアーゼによって標的ｍＲＮＡ（例えば、ＬＰＡのｍＲＮＡ）の切断に使用されるｓｓオリゴヌクレオチドのいずれかを指す。
【0075】
本明細書で使用される場合、「鎖」は、ヌクレオチド間結合（例えば、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合）を介して互いに連結されたヌクレオチドの単一の連続した配列を指す。いくつかの実施形態では、鎖は、２つの自由末端（例えば、５’末端及び３’末端）を有する。
【0076】
本明細書で使用される場合、「対象」は、マウス、ウサギ、及びヒトを含む任意の哺乳動物を意味する。一実施形態では、対象は、ヒトまたはＮＨＰである。また、「個体」または「患者」は、「対象」と交換可能に用いられ得る。
【0077】
本明細書で使用される場合、「合成」は、人工的に合成された（例えば、機械（例えば、固相核酸合成装置）を使用して）か、またはその分子を通常生成する天然の供給源（例えば、細胞または生物）に由来していない核酸または他の分子を指す。
【0078】
本明細書で使用される場合、「標的化リガンド」とは、目的の組織または細胞の同族分子（例えば、受容体）に選択的に結合し、目的の組織または細胞に他の物質を標的化する目的で、別の物質にコンジュゲート可能な分子（例えば、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチドまたは脂質）を指す。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドを目的の特定の組織または細胞に標的化する目的で、標的化リガンドをオリゴヌクレオチドにコンジュゲートすることができる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、細胞表面受容体に選択的に結合する。したがって、いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、オリゴヌクレオチドにコンジュゲートされると、細胞の表面に発現する受容体への選択的結合及びオリゴヌクレオチド、標的化リガンド、及び受容体を含む複合体の細胞によるエンドソーム内在化を介して、特定の細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を促進する。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、オリゴヌクレオチドが細胞内の標的化リガンドから放出されるように細胞内部移行後または細胞内在化中に切断されるリンカーを介して、オリゴヌクレオチドにコンジュゲートされる。
【0079】
本明細書で使用される場合、「テトラループ」は、ヌクレオチドの隣接配列のハイブリダイゼーションによって形成される隣接二重鎖の安定性を増加させるループを指す。安定性の増加は、ランダムに選択されたヌクレオチドの配列からなる同等の長さのループのセットからの平均として予想される隣接したステム二重鎖のＴmよりも高い、隣接したステム二重鎖の融解温度（Ｔm）の上昇として検出可能である。例えば、テトラループは、少なくとも２塩基対（ｂｐ）の長さの二重鎖を含むヘアピンに、１０ｍＭのＮａＨＰＯ4中で、少なくとも約５０℃、少なくとも約５５℃、少なくとも約５６℃、少なくとも約５８℃、少なくとも約６０℃、少なくとも約６５℃、または少なくとも約７５℃のＴmをもたらし得る。いくつかの実施形態では、テトラループは、スタッキング相互作用によって、隣接したステム二重鎖のｂｐを安定化させることができる。さらに、テトラループ内のヌクレオチド間の相互作用としては、非ワトソン－クリック塩基対形成、スタッキング相互作用、水素結合、及び接触相互作用が挙げられるが、これらに限定されない（Ｃｈｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４６：６８０－８２；Ｈｅｕｓ ＆ Ｐａｒｄｉ（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：１９１－９４）。いくつかの実施形態では、テトラループは、３個～６個のヌクレオチドを含むか、またはそれからなり、典型的には４～５個のヌクレオチドである。特定の実施形態では、テトラループは、修飾されていてもされていなくてもよい（例えば、標的化部分にコンジュゲートされていてもいなくてもよい）３、４、５、または６個のヌクレオチドを含むか、またはそれらからなる。一実施形態では、テトラループは、４個のヌクレオチドからなる。テトラループでは任意のヌクレオチドを使用することができ、Ｃｏｒｎｉｓｈ－Ｂｏｗｄｅｎ（１９８５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３０２１－３０３０に記載されるようにそのようなヌクレオチドの標準的なＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ記号を使用することができる。例えば、「Ｎ」という文字は、任意の塩基がその位置にあり得ることを意味するために使用することができ、「Ｒ」という文字は、Ａ（アデニン）またはＧ（グアニン）がその位置にあり得ることを示すために使用することができ、「Ｂ」は、Ｃ（シトシン）、Ｇ（グアニン）、Ｔ（チミン）、またはＵ（ウラシル）がその位置にあり得ることを示すために使用できる。テトラループの例としては、ＵＮＣＧファミリーのテトラループ（例えば、ＵＵＣＧ）、ＧＮＲＡファミリーのテトラループ（例えば、ＧＡＡＡ）、及びＣＵＵＧテトラループが挙げられる（Ｗｏｅｓｅ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：８４６７－８４７１；Ａｎｔａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：５９０１－５９０５）。ＤＮＡテトラループの例としては、ｄ（ＧＮＮＡ）ファミリーのテトラループ（例えば、ｄ（ＧＴＴＡ））、ｄ（ＧＮＲＡ）ファミリーのテトラループ、ｄ（ＧＮＡＢ）ファミリーのテトラループ、ｄ（ＣＮＮＧ）ファミリーのテトラループ、及びｄ（ＴＮＣＧ）ファミリーのテトラループ（例えば、ｄ（ＴＴＣＧ））が挙げられる。例えば、Ｎａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．４１：４２８１－１４２９２；Ｓｈｉｎｊｉ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎｉｐｐｏｎ Ｋａｇａｋｋａｉ Ｋｏｅｎ Ｙｏｋｏｓｈｕ ７８：７３１を参照されたい。いくつかの実施形態では、テトラループは、ニックを有するテトラループ構造内に含まれる。
【0080】
本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療すること」は、例えば、既存の状態（例えば、疾患、障害）に関して、対象の健康及び／または生活状態を改善する目的で、または状態の発生の可能性を予防または減少させるために、対象に治療剤（例えば、本明細書のオリゴヌクレオチド）を投与することによって、ケアを必要とする対象にケアを提供する行為を指す。いくつかの実施形態では、治療は、対象が経験する状態（例えば、疾患、障害）の少なくとも１つの徴候、症状、または寄与因子の頻度または重症度を減少させることを含む。
【0081】
ＩＩ．ＬＰＡ発現のオリゴヌクレオチド阻害剤
本開示は、とりわけ、ＬＰＡ発現を阻害するオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、本明細書におけるＬＰＡ発現を阻害するオリゴヌクレオチドは、ＬＰＡのｍＲＮＡを標的とする。
本開示は、とりわけ、ＬＰＡ発現を阻害するオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、本明細書におけるＬＰＡ発現を阻害するオリゴヌクレオチドは、ＬＰＡのｍＲＮＡを標的とする。
【0082】
ｉ．ＬＰＡ標的配列
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＬＰＡのｍＲＮＡを含む標的配列を標的とする。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド、またはその一部、断片もしくは鎖（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖またはガイド鎖）は、ＬＰＡのｍＲＮＡを含む標的配列に結合またはアニールし、それによってＬＰＡ発現を阻害する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、インビボでＬＰＡ発現を阻害する目的でＬＰＡ標的配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ標的配列を標的とするオリゴヌクレオチドによるＬＰＡ発現の阻害の量または程度は、オリゴヌクレオチドの効力と相関する。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ標的配列を標的とするオリゴヌクレオチドによるＬＰＡ発現の阻害の量または程度は、オリゴヌクレオチドで治療されたＬＰＡの発現と関連する疾患、障害、または状態を有する対象または患者における治療効果の量または程度と相関する。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＬＰＡのｍＲＮＡを含む標的配列を標的とする。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド、またはその一部、断片もしくは鎖（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖またはガイド鎖）は、ＬＰＡのｍＲＮＡを含む標的配列に結合またはアニールし、それによってＬＰＡ発現を阻害する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、インビボでＬＰＡ発現を阻害する目的でＬＰＡ標的配列を標的とする。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ標的配列を標的とするオリゴヌクレオチドによるＬＰＡ発現の阻害の量または程度は、オリゴヌクレオチドの効力と相関する。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ標的配列を標的とするオリゴヌクレオチドによるＬＰＡ発現の阻害の量または程度は、オリゴヌクレオチドで治療されたＬＰＡの発現と関連する疾患、障害、または状態を有する対象または患者における治療効果の量または程度と相関する。
【0083】
複数の異なる種（例えば、ヒト、カニクイザル、及びアカゲザル；例えば、実施例１を参照されたい）のｍＲＮＡを含む、ａｐｏ（ａ）をコードするＬＰＡのｍＲＮＡのヌクレオチド配列の調査及び分析を通じて、ならびにインビトロ及びインビボ試験（例えば、実施例２及び実施例３を参照されたい）の結果により、ＬＰＡのｍＲＮＡの特定のヌクレオチド配列は、他のものよりもオリゴヌクレオチドに基づくＬＰＡ発現の阻害を受けやすく、したがって本明細書のオリゴヌクレオチドの標的配列として有用であることが発見された。いくつかの実施形態では、本明細書（例えば、表５）に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）のセンス鎖は、ＬＰＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書（例えば、表５）に記載のｄｓオリゴヌクレオチドのセンス鎖の一部または領域は、ＬＰＡ標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ標的配列は、配列番号４～３８７のいずれか１つの配列を含むか、またはそれからなる。
【0084】
ｉｉ．ＬＰＡ標的化配列
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、細胞内のＬＰＡのｍＲＮＡを標的とし、ＬＰＡの発現を阻害する目的で、ＬＰＡのｍＲＮＡに対して相補的な領域を有する（例えば、ＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列内に）。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、相補的な（ワトソン・クリック）塩基対形成によってＬＰＡ標的配列に結合またはアニールする相補性の領域を有するＬＰＡ標的化配列（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖またはガイド鎖）を含む。標的化配列または相補性の領域は一般に、ＬＰＡのｍＲＮＡの発現を阻害する目的でオリゴヌクレオチド（またはその鎖）のＬＰＡのｍＲＮＡへの結合またはアニーリングを可能にする適切な長さ及び塩基含有量のものである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補的の領域は、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、少なくとも約２０個、少なくとも約２１個、少なくとも約２２個、少なくとも約２３個、少なくとも約２４個、少なくとも約２５個、少なくとも約２６個、少なくとも約２７個、少なくとも約２８個、少なくとも約２９個、または少なくとも約３０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、約１２～３０個（例えば、１２～３０個、１２～２２個、１５～２５個、１７～２１個、１８～２７個、１９～２７個、または１５～３０個）のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、は、約１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、または３０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、１８個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、１９個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２１個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２２個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２３個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２４個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、細胞内のＬＰＡのｍＲＮＡを標的とし、ＬＰＡの発現を阻害する目的で、ＬＰＡのｍＲＮＡに対して相補的な領域を有する（例えば、ＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列内に）。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、相補的な（ワトソン・クリック）塩基対形成によってＬＰＡ標的配列に結合またはアニールする相補性の領域を有するＬＰＡ標的化配列（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖またはガイド鎖）を含む。標的化配列または相補性の領域は一般に、ＬＰＡのｍＲＮＡの発現を阻害する目的でオリゴヌクレオチド（またはその鎖）のＬＰＡのｍＲＮＡへの結合またはアニーリングを可能にする適切な長さ及び塩基含有量のものである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補的の領域は、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、少なくとも約２０個、少なくとも約２１個、少なくとも約２２個、少なくとも約２３個、少なくとも約２４個、少なくとも約２５個、少なくとも約２６個、少なくとも約２７個、少なくとも約２８個、少なくとも約２９個、または少なくとも約３０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、約１２～３０個（例えば、１２～３０個、１２～２２個、１５～２５個、１７～２１個、１８～２７個、１９～２７個、または１５～３０個）のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、は、約１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、または３０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、１８個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、１９個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２１個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２２個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２３個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２４個のヌクレオチドの長さである。
【0085】
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ＬＰＡ標的配列に完全に相補的である、標的化配列または相補性の領域（例えば、二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖またはガイド鎖）を含む。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、ＬＰＡ標的配列に部分的に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号４～３８７のいずれか１つの配列に完全に相補的である標的化配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号４～３８７のいずれか１つの配列に部分的に相補的である標的化配列または相補性の領域を含む。
【0086】
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ＬＰＡのｍＲＮＡを含むヌクレオチドの連続配列に相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続配列は、約１２～約３０個のヌクレオチドの長さ（例えば、１２～３０個、１２～２８個、１２～２６個、１２～２４個、１２～２０個、１２～１８個、１２～１６個、１４～２２個、１６～２０個、１８～２０個、または１８～１９個のヌクレオチドの長さ）である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＬＰＡのｍＲＮＡを含むヌクレオチドの連続配列に相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続配列は、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、または２０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＬＰＡのｍＲＮＡを含むヌクレオチドの連続配列に相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続配列は、１９個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＬＰＡのｍＲＮＡを含むヌクレオチドの連続配列に相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続配列は、２０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号４～３８７のいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、任意選択で、ヌクレオチドの連続配列は、１９個のヌクレオチドの長さである。
【0087】
いくつかの実施形態では、配列番号４～３８７のいずれか１つに示される配列の連続的なヌクレオチドに相補的であるオリゴヌクレオチドの標的化配列または相補性の領域は、アンチセンス鎖の全長にわたる。いくつかの実施形態では、配列番号４～３８７のいずれか１つに示される配列の連続的なヌクレオチドに相補的であるオリゴヌクレオチドの相補性の領域は、アンチセンス鎖の全長の一部にわたる。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号４～３８７に示される配列のヌクレオチド１～２０にわたるヌクレオチドの連続ストレッチと少なくとも部分的に（例えば、完全に）相補的である相補性の領域を（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖上に）含む。
【0088】
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、対応するＬＰＡ標的配列と１つ以上の塩基対（ｂｐ）ミスマッチを有する標的化配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、対応するＬＰＡ標的配列と、最大約１、最大約２、最大約３、最大約４、最大約５などのミスマッチを有し得るが、但し、適切なハイブリダイゼーション条件下でＬＰＡのｍＲＮＡに結合またはアニーリングする標的化配列または相補性の領域の能力、及び／またはＬＰＡ発現を減少させるかまたは阻害するオリゴヌクレオチドの能力は維持されるという条件である。代替的に、いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、対応するＬＰＡ標的配列との１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、または５つ以下のミスマッチを含むが、但し、適切なハイブリダイゼーション条件下でＬＰＡのｍＲＮＡに結合またはアニーリングする標的化配列または相補性の領域の能力、及び／またはＬＰＡ発現を減少させるかまたは阻害するオリゴヌクレオチドの能力は維持されるという条件である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と１つのミスマッチを有する標的配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と２つのミスマッチを有する標的配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と３つのミスマッチを有する標的配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と４つのミスマッチを有する標的配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と５つのミスマッチを有する標的配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列との１つを超えるミスマッチ（例えば、２、３、４、５つまたはそれ以上のミスマッチ）の標的配列または相補性の領域を含み、少なくとも２つ（例えば、すべて）のミスマッチは連続して配置されるか（例えば、連続して２、３、４、５もしくはそれ以上のミスマッチ）、またはミスマッチは標的化配列または相補性の領域全体の任意の位置に散在する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列との１つを超えるミスマッチ（例えば、２、３、４、５つまたはそれ以上のミスマッチ）の標的配列または相補性の領域を含み、少なくとも２つ（例えば、すべて）のミスマッチは連続して配置されるか（例えば、連続して２、３、４、５もしくはそれ以上のミスマッチ）、または少なくとも１つ以上のミスマッチしていない塩基対がミスマッチの間に位置するか、またはそれらの組み合わせである。
【0089】
ｉｉｉ．オリゴヌクレオチドの種類
非限定的に、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｍｉＲＮＡなどを含む、さまざまな種類のオリゴヌクレオチド及び／または構造が、本明細書の方法においてＬＰＡのｍＲＮＡを標的とするのに有用である。本明細書または他の箇所に記載されるオリゴヌクレオチドの種類のいずれも、ＬＰＡ発現を阻害する目的で、本明細書のＬＰＡのｍＲＮＡ標的化配列を組み込むためのフレームワークとしての使用が企図される。
非限定的に、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｍｉＲＮＡなどを含む、さまざまな種類のオリゴヌクレオチド及び／または構造が、本明細書の方法においてＬＰＡのｍＲＮＡを標的とするのに有用である。本明細書または他の箇所に記載されるオリゴヌクレオチドの種類のいずれも、ＬＰＡ発現を阻害する目的で、本明細書のＬＰＡのｍＲＮＡ標的化配列を組み込むためのフレームワークとしての使用が企図される。
【0090】
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ダイサー関与の上流または下流でＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路に関与することによってＬＰＡ発現を阻害する。例えば、それぞれの鎖が約１９～２５個のヌクレオチドのサイズを有し、少なくとも１つの１～５個のヌクレオチドの３’突出を有するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが開発されている（例えば、米国特許第８，３７２，９６８号を参照されたい）。ダイサーによってプロセシングされて活性ＲＮＡｉ産物を生ずるより長いオリゴヌクレオチドも開発されている（例えば、米国特許第８，８８３，９９６を参照されたい）。さらなる研究により、一方の鎖が熱力学的に安定したテトラループ構造を有する構造を含む、少なくとも一方の鎖の少なくとも一方の末端が二重鎖の標的化領域を越えて伸長している伸長ｄｓオリゴヌクレオチドが作製されている（例えば、米国特許第８，５１３，２０７号及び同第８，９２７，７０５号、並びに国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／０３３２２５号を参照されたい）。そのような構造は、ｓｓ伸長部（分子の片側または両側の）及びｄｓ伸長部を含むことができる。
【0091】
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ダイサーの関与（例えば、ダイサー切断）の下流でＲＮＡｉ経路に関与する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の３’末端に突出（例えば、１、２、または３個のヌクレオチドの長さ）を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ）は、標的ｍＲＮＡ（例えば、ＬＰＡのｍＲＮＡ）に対してアンチセンスである２１個のヌクレオチドのガイド鎖と、相補的なパッセンジャー鎖とを含み、両方の鎖はアニールして１９ｂｐの二重鎖と一方または両方の３’末端に２個のヌクレオチドの突出を形成する。２３個のヌクレオチドの長さのガイド鎖及び２１個のヌクレオチドの長さのパッセンジャー鎖を有し、分子の右側（パッセンジャー鎖の３’末端／ガイド鎖の５’末端）に平滑端及び分子の左側（パッセンジャー鎖の５’末端／ガイド鎖の３’末端）に２個のヌクレオチドの３’ガイド鎖突出が存在するオリゴヌクレオチドを含む、より長いオリゴヌクレオチドの設計もまた企図されている。このような分子には、２１ｂｐの二重鎖領域がある。例えば、米国特許第９，０１２，１３８号；同第９，０１２，６２１号、及び同第９，１９３，７５３号を参照されたい。
【0092】
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、両方ともが約１７～２６個（例えば、１７～２６個、２０～２５個、または２１～２３個）のヌクレオチドの長さの範囲にあるセンス鎖とアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、約１９～２２個のヌクレオチドの長さの範囲にあるセンス鎖とアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖は等しい長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖とアンチセンス鎖を含み、センス鎖もしくはアンチセンス鎖のいずれか、またはセンス鎖とアンチセンス鎖の両方に３’突出が存在する。いくつかの実施形態では、両方ともが約２１～２３個のヌクレオチドの長さの範囲にあるセンス鎖とアンチセンス鎖を有するオリゴヌクレオチドについて、センス鎖、アンチセンス鎖、またはセンス鎖とアンチセンス鎖の両方の３’突出は、１個または２個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２２個のヌクレオチドの長さのガイド鎖及び２０個のヌクレオチドの長さのパッセンジャー鎖を有し、分子の右側（パッセンジャー鎖の３’末端／ガイド鎖の５’末端）に平滑端及び分子の左側（パッセンジャー鎖の５’末端／ガイド鎖の３’末端）に２個のヌクレオチドの３’ガイド鎖突出が存在する。このような分子には、２０ｂｐの二重鎖領域がある。
【0093】
本明細書の組成物及び方法との使用のための他のオリゴヌクレオチド設計としては、１６－ｍｅｒのｓｉＲＮＡ（例えば、ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＩＮ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ＡＮＤ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ（ｅｄ．），Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６を参照されたい）、ｓｈＲＮＡ（例えば、１９ｂｐまたはそれより短いステムを有するもの；例えば、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．６２９：１４１－５８を参照されたい）、平滑ｓｉＲＮＡ（例えば、１９ｂｐの長さのもの；例えば、Ｋｒａｙｎａｃｋ ＆ Ｂａｋｅｒ（２００６）ＲＮＡ １２：１６３－７６を参照されたい）、非対称ｓｉＲＮＡ（ａｉＲＮＡ；例えば、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：１３７９－８２を参照されたい）、非対称の短い二重鎖ｓｉＲＮＡ（例えば、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７：７２５－３２を参照されたい）、フォークｓｉＲＮＡ（例えば、Ｈｏｈｊｏｈ（２００４）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．５５７：１９３－１９８を参照されたい）、ｓｓ ｓｉＲＮＡ（Ｅｌｓｎｅｒ（２０１２）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３０：１０６３）、ダンベル型環状ｓｉＲＮＡ（例えば、Ａｂｅ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２９：１５１０８－０９を参照されたい）、及び低分子内部セグメント化干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ；例えば、Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３５：５８８６－９７を参照されたい）が挙げられる。ＬＰＡの発現を減少させるかまたは阻害するためにいくつかの実施形態で使用することができるオリゴヌクレオチド構造のさらなる非限定的な例は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びショートｓｉＲＮＡがある（例えば、Ｈａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）ＥＭＢＯ Ｊ．２１：４６７１－７９を参照されたい；米国特許出願公開第２００９／００９９１１５号も参照されたい）。
【0094】
また、いくつかの実施形態では、本明細書のＬＰＡ発現を減少させるかまたは阻害するためのオリゴヌクレオチドは、一本鎖（ｓｓ）である。そのような構造としては、ｓｓ ＲＮＡｉ分子が挙げられ得るが、これらに限定されない。最近の取り組みにより、ｓｓ ＲＮＡｉ分子の活性が実証されている（例えば、Ｍａｔｓｕｉ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２４：９４６－９５５を参照されたい）。しかしながら、いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’から３’方向に書くかまたは示した場合に特定の核酸の標的化セグメントの逆方向の相補体を含む核酸塩基配列を有し、（例えば、ギャップマーとして）細胞内でその標的ＲＮＡのＲＮａｓｅＨによって媒介される切断を誘導するように、または（例えば、ミクスマーとして）細胞内の標的ｍＲＮＡの翻訳を阻害するように、適切な修飾が行われた、ｓｓオリゴヌクレオチドである。本明細書で使用するためのＡＳＯは、例えば、米国特許第９，５６７，５８７号（例えば、核酸塩基（ピリミジン、プリン）の長さ、糖部分、及び核酸塩基の複素環部分の改変を含む）に示されるものを含む、当該技術分野では周知の任意の適切な方法で改変することができる。さらに、ＡＳＯは特定の標的遺伝子の発現を減少させるために何十年も使用されてきた（例えば、Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５７：８１－１０５を参照されたい）。
【0095】
ｉｖ．二本鎖オリゴヌクレオチド
本開示は、センス鎖（本明細書ではパッセンジャー鎖とも呼ばれる）とアンチセンス鎖（本明細書ではガイド鎖とも呼ばれる）を含む、ＬＰＡのｍＲＮＡを標的としてＬＰＡ発現を阻害する（例えば、ＲＮＡｉ経路を介して）ための二本鎖（ｄｓ）オリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖とセンス鎖とは別個の鎖であり、共有結合していない。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖とセンス鎖とは共有結合している。
本開示は、センス鎖（本明細書ではパッセンジャー鎖とも呼ばれる）とアンチセンス鎖（本明細書ではガイド鎖とも呼ばれる）を含む、ＬＰＡのｍＲＮＡを標的としてＬＰＡ発現を阻害する（例えば、ＲＮＡｉ経路を介して）ための二本鎖（ｄｓ）オリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖とセンス鎖とは別個の鎖であり、共有結合していない。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖とセンス鎖とは共有結合している。
【0096】
いくつかの実施形態では、センス鎖は、第１の領域（Ｒ１）及び第２の領域（Ｒ２）を有し、Ｒ２は、第１のサブ領域（Ｓ１）、テトラループ（Ｌ）またはトリループ（ｔｒｉＬ）、及び第２のサブ領域（Ｓ２）を含み、ＬまたはｔｒｉＬはＳ１とＳ２の間に位置し、Ｓ１とＳ２は第２の二重鎖（Ｄ２）を形成する。Ｄ２はさまざまな長さであり得る。いくつかの実施形態では、Ｄ２は約１～６ｂｐの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ２は、２～６、３～６、４～６、５～６、１～５、２～５、３～５、または４～５ｂｐの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ２は、１、２、３、４、５または６ｂｐの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ２は６ｂｐの長さである。
【0097】
いくつかの実施形態では、センス鎖のＲ１及びアンチセンス鎖は、第１の二重鎖（Ｄ１）を形成する。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、少なくとも約１５個（例えば、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、または少なくとも２１個）のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、約１２～３０個のヌクレオチドの長さ（例えば、１２～３０個、１２～２７個、１５～２２個、１８～２２個、１８～２５個、１８～２７個、１８～３０個、または２１～３０個のヌクレオチドの長さ）の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、少なくとも１２個のヌクレオチドの長さ（例えば、少なくとも１２個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、または少なくとも３０個のヌクレオチドの長さ）である。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、または３０個のヌクレオチドの長さであり得る。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、２０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖を含むＤ１は、センス鎖及び／またはアンチセンス鎖の全長にはわたらない。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖を含むＤ１は、センス鎖とアンチセンス鎖いずれかまたはその両方の全長にわたる。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖を含むＤ１は、センス鎖とアンチセンス鎖の両方の全長にわたる。
【0098】
いくつかの実施形態では、本明細書のｄｓオリゴヌクレオチドは、表３に配置されるように、配列番号３８８～４０３のいずれか１つの配列を有するセンス鎖と、配列番号７８８～８０３から選択される相補配列を含むアンチセンス鎖とを含む。特定の実施形態では、センス鎖は、配列番号３９３の配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号７９３の配列を含む。
【0099】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）または他の核酸の構造を説明する際に配列表に示された配列を参照している場合がある点は理解されよう。そのような実施形態では、実際のオリゴヌクレオチドまたは他の核酸は、特定された配列と本質的に同じまたは同様の相補的特性を保持しながら、特定された配列と比較して１つ以上の代替的ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡヌクレオチドのＲＮＡ対応物またはＲＮＡヌクレオチドのＤＮＡ対応物）及び／または１つ以上の修飾ヌクレオチド及び／または１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合及び／または１つ以上の他の修飾を有し得る。
【0100】
いくつかの実施形態では、本明細書のｄｓオリゴヌクレオチドは、２５個のヌクレオチドのセンス鎖と、ダイサー酵素が作用すると、成熟ＲＩＳＣに組み込まれるアンチセンス鎖を生じる２７個のヌクレオチドのアンチセンス鎖とを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓオリゴヌクレオチドのセンス鎖は、２７個のヌクレオチドよりも長い（例えば、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、または４０個のヌクレオチド）。いくつかの実施形態では、ｄｓオリゴヌクレオチドのセンス鎖は、２５個のヌクレオチドよりも長い（例えば、２６個、２７個、２８個、２９個、または３０個のヌクレオチド）。
【0101】
いくつかの実施形態では、本明細書のｄｓオリゴヌクレオチドは、他方の５’末端と比較して熱力学的に不安定である１つの５’末端を有する。いくつかの実施形態では、センス鎖の３’末端に平滑末端を、アンチセンス鎖の３’末端に３’突出を有する非対称なｄｓオリゴヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖上の３’突出は、約１～８個のヌクレオチドの長さ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または８個のヌクレオチドの長さ）である。典型的には、ＲＮＡｉのためのｄｓオリゴヌクレオチドは、アンチセンス（ガイド）鎖の３’末端に２個のヌクレオチドの突出を有する。しかしながら、他の突出も可能である。いくつかの実施形態では、突出は、１から６個のヌクレオチド、任意選択で１～５個、１～４個、１～３個、１～２個、２～６個、２～５個、２～４個、２～３個、３～６個、３～５個、３～４個、４～６個、４～５個、５～６個ヌクレオチドの、または１個、２個、３個、４個、５個、もしくは６個のヌクレオチドの長さを含む３’突出である。しかしながら、いくつかの実施形態では、突出は、１から６個のヌクレオチド、任意選択で１～５個、１～４個、１～３個、１～２個、２～６個、２～５個、２～４個、２～３個、３～６個、３～５個、３～４個、４～６個、４～５個、５～６個ヌクレオチドの、または１個、２個、３個、４個、５個、もしくは６個のヌクレオチドの長さを含む５’突出である。
【0102】
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端の２個の末端ヌクレオチドが修飾されている。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端の２個の末端ヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡ（例えば、ＬＰＡのｍＲＮＡ）と相補的である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端の２個の末端ヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡと相補的ではない。いくつかの実施形態では、ニックの入ったテトラループ構造におけるオリゴヌクレオチドのそれぞれの３’末端の２個の末端ヌクレオチドはＧＧである。典型的には、ｄｓオリゴヌクレオチドのそれぞれの３’末端の２個の末端ＧＧヌクレオチドの一方または両方は、標的ｍＲＮＡと相補的ではない。
【0103】
いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に、１個以上（例えば、１個、２個、３個、４個、または５個）のミスマッチがある。センス鎖とアンチセンス鎖との間に１個を超えるミスマッチが存在する場合、それらは連続して（例えば、２個、３個、またはそれ以上が連続して）配置してもよく、または相補性の領域全体にわたって散在してもよい。いくつかの実施形態では、センス鎖の３’末端が１個以上のミスマッチを含む。一実施形態では、２個のミスマッチがセンス鎖の３’末端に組み込まれる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖の３’末端におけるセグメントの塩基ミスマッチまたは不安定化は、ｄｓオリゴヌクレオチドの効力を改善または増加させる。
【0104】
ａ．アンチセンス鎖
いくつかの実施形態では、ＬＰＡのｍＲＮＡを標的としてＬＰＡ発現を阻害するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、配列番号４０４～８０３のいずれか１つに示される配列を含むかまたはそれからなるアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号４０４～８０３のいずれか１つに示される配列の少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、または少なくとも２３個）の連続したヌクレオチドを含むかまたはそれからなるアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＰＡのｍＲＮＡを標的としてＬＰＡ発現を阻害するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、配列番号４０４～８０３のいずれか１つに示される配列を含むかまたはそれからなるアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号４０４～８０３のいずれか１つに示される配列の少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、または少なくとも２３個）の連続したヌクレオチドを含むかまたはそれからなるアンチセンス鎖を含む。
【0105】
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、約４０個までのヌクレオチドの長さ（例えば、４０個まで、３５個まで、３０個まで、２７個まで、２５個まで、２１個まで、１９個まで、１７個まで、または１２個までのヌクレオチドの長さ）のアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも約１２個のヌクレオチドの長さ（例えば、少なくとも１２個、少なくとも１５個、少なくとも１９個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、少なくとも２５個、少なくとも２７個、少なくとも３０個、少なくとも３５個、または少なくとも３８個のヌクレオチドの長さ）のアンチセンス鎖を有することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１２～約４０個（例えば、１２～４０個、１２～３６個、１２～３２個、１２～２８個、１５～４０個、１５～３６個、１５～３２個、１５～２８個、１７～２２個、１７～２５個、１９～２７個、１９～３０個、２０～４０個、２２～４０個、２５～４０個、または３２～４０個）のヌクレオチドの長さの範囲のアンチセンス鎖を有することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、または４０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を有することができる。
【0106】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、「ガイド鎖」と呼ばれる。例えば、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と係合し、Ａｇｏ２などのアルゴノートタンパク質と結合する、または１つ以上の類似の因子と結合し、標的遺伝子のサイレンシングを誘導するアンチセンス鎖はガイド鎖と呼ばれる。いくつかの実施形態では、ガイド鎖に相補的なセンス鎖は、「パッセンジャー鎖」と呼ばれる。
【0107】
ｂ．センス鎖
いくつかの実施形態では、ＬＰＡのｍＲＮＡを標的としてＬＰＡ発現を阻害するための本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、配列番号４～４０３のいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号４～４０３のいずれか１つに示される配列の少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、または少なくとも２３個）の連続したヌクレオチドを含むかまたはそれからなるセンス鎖を有する。
いくつかの実施形態では、ＬＰＡのｍＲＮＡを標的としてＬＰＡ発現を阻害するための本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、配列番号４～４０３のいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号４～４０３のいずれか１つに示される配列の少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、または少なくとも２３個）の連続したヌクレオチドを含むかまたはそれからなるセンス鎖を有する。
【0108】
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、約４０個までのヌクレオチドの長さ（例えば、４０個まで、３６個まで、３０個まで、２７個まで、２５個まで、２１個まで、１９個まで、１７個まで、または１２個までのヌクレオチドの長さ）のセンス鎖（またはパッセンジャー鎖）を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも約１２個のヌクレオチドの長さ（例えば、少なくとも１２個、少なくとも１５個、少なくとも１９個、少なくとも２１個、少なくとも２５個、少なくとも２７個、少なくとも３０個、少なくとも３６個、または少なくとも３８個のヌクレオチドの長さ）のセンス鎖を有することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１２～約４０個（例えば、１２～４０個、１２～３６個、１２～３２個、１２～２８個、１５～４０個、１５～３６個、１５～３２個、１５～２８個、１７～２１個、１７～２５個、１９～２７個、１９～３０個、２０～４０個、２２～４０個、２５～４０個、または３２～４０個）のヌクレオチドの長さの範囲のセンス鎖を有することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、または４０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を有することができる。
【0109】
いくつかの実施形態では、センス鎖は、３’末端にステムループ構造を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、５’末端にステムループ構造を含む。いくつかの実施形態では、ステムは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４ｂｐの長さの二重鎖である。いくつかの実施形態では、ステムループは、オリゴヌクレオチドを分解（例えば、酵素分解）から保護し、標的細胞、組織、もしくは器官（例えば、肝臓）、またはその両方に標的化及び／または送達することを促進または向上する。例えば、いくつかの実施形態では、ステムループのループは、標的ｍＲＮＡ（例えば、ＬＰＡのｍＲＮＡ）への標的化、標的遺伝子発現（例えば、ＬＰＡ発現）の阻害、及び／または標的細胞、組織、または器官（例えば、肝臓）、またはその両方への送達を促進、向上、または増加させる１つ以上の修飾を含むヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、ステムループ自体またはステムループへの修飾（複数可）は、オリゴヌクレオチドの固有の遺伝子発現阻害活性に実質的に影響を及ぼさないが、安定性（例えば、分解に対する保護を提供する）、及び／またはオリゴヌクレオチドの標的細胞、組織、または器官（例えば、肝臓）への送達を促進、改善、または増加させる。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、（例えば、その３’末端に）Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１がＳ２と相補的であり、ＬがＳ１とＳ２との間に約１０個までのヌクレオチドの長さ（例えば、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個のヌクレオチドの長さ）の一本鎖ループを形成する、センス鎖を含む。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌ）は、４個のヌクレオチドの長さである。図１０は、そのようなオリゴヌクレオチドの非限定的な例を描写する。いくつかの実施形態では、上述の構造Ｓ１－Ｌ－Ｓ２を有するステムループのループ（Ｌ）は、テトラループ（例えば、ニックを有するテトラループ構造内の）である。いくつかの実施形態では、テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、送達リガンド、及びそれらの組み合わせを含む。
【0110】
ｖ．オリゴヌクレオチドの修飾
ａ．糖の修飾
いくつかの実施形態では、修飾糖（本明細書では糖類似体とも呼ばれる）は、例えば、１つ以上の修飾が糖の２’、３’、４’、及び／または５’位の炭素に生じるような、修飾デオキシリボースまたはリボース部分を含む。いくつかの実施形態では、修飾糖は、ロックド核酸（「ＬＮＡ」；例えば、Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｏｎ ５４：３６０７－３０を参照されたい）、アンロックド核酸（「ＵＮＡ」；例えば、Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ－Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ ２：ｅ１０３を参照されたい）、及び架橋化核酸（「ＢＮＡ」；例えば、Ｉｍａｎｉｓｈｉ ＆ Ｏｂｉｋａ（２００２）Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍｕｎ．（Ｃａｍｂ）２１：１６５３－５９を参照されたい）に存在するもののような非天然の代替炭素構造も含み得る。
ａ．糖の修飾
いくつかの実施形態では、修飾糖（本明細書では糖類似体とも呼ばれる）は、例えば、１つ以上の修飾が糖の２’、３’、４’、及び／または５’位の炭素に生じるような、修飾デオキシリボースまたはリボース部分を含む。いくつかの実施形態では、修飾糖は、ロックド核酸（「ＬＮＡ」；例えば、Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｏｎ ５４：３６０７－３０を参照されたい）、アンロックド核酸（「ＵＮＡ」；例えば、Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ－Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ ２：ｅ１０３を参照されたい）、及び架橋化核酸（「ＢＮＡ」；例えば、Ｉｍａｎｉｓｈｉ ＆ Ｏｂｉｋａ（２００２）Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍｕｎ．（Ｃａｍｂ）２１：１６５３－５９を参照されたい）に存在するもののような非天然の代替炭素構造も含み得る。
【0111】
いくつかの実施形態では、糖におけるヌクレオチドの修飾は、２’－修飾を含む。いくつかの実施形態では、２’－修飾は、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－フルオロ（２’－Ｆ）、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、または２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）であり得る。いくつかの実施形態では、修飾は、２’－Ｆ、２’－ＯＭｅ、または２’－ＭＯＥである。いくつかの実施形態では、糖における修飾は糖環の修飾を含み、糖環の１つ以上の炭素の修飾を含み得る。例えば、ヌクレオチドの糖の修飾は、糖の２’－酸素が糖の１’－炭素または４’－炭素に結合している、または２’－酸素がエチレンまたはメチレンブリッジを介して１’－炭素または４’－炭素に結合しているものを含み得る。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’－炭素と３’－炭素との結合を欠く非環式糖を有する。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、例えば、糖の４’位にチオール基を有する。
【0112】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、少なくとも約１個（例えば、少なくとも１個、少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、少なくとも３０個、少なくとも３５個、少なくとも４０個、少なくとも４５個、少なくとも５０個、少なくとも５５個、少なくとも６０個、またはそれ以上）の修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、少なくとも約１個（例えば、少なくとも１個、少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、少なくとも３０個、少なくとも３５個、またはそれ以上）の修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、少なくとも約１個（例えば、少なくとも１個、少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、またはそれ以上）の修飾ヌクレオチドを含む。
【0113】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖のすべてのヌクレオチドが修飾されている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖のすべてのヌクレオチドが修飾されている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチド（すなわち、センス鎖とアンチセンス鎖の両方）が修飾されている。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’－修飾（例えば、２’－Ｆまたは２’－ＯＭｅ、２’－ＭＯＥ、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは２’－修飾（例えば、２’－Ｆまたは２’－ＯＭｅ）を含む。
【0114】
本開示は、異なる修飾パターンを有するオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、表３及び表４（ならびに図１０）のいずれか１つに示される修飾パターンを有するセンス鎖配列と、表３及び表４の（ならびに図１０）のいずれか１つに示される修飾パターンを有するアンチセンス鎖とを含む。いくつかの実施形態では、これらのオリゴヌクレオチドについて、センス鎖の８、９、１０または１１位のうちの１つ以上が２’－Ｆ基で修飾されている。他の実施形態では、これらのオリゴヌクレオチドについて、センス鎖の１～７位及び１２～２０位のヌクレオチドのそれぞれの糖部分が２’－ＯＭｅで修飾されている。
【0115】
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、糖部分の２’位で２’－Ｆで修飾されている３個のヌクレオチドを有する。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の２、５、及び１４位の糖部分、及び任意選択で１、３、７、及び１０位の３個までのヌクレオチドが、２’－Ｆで修飾される。他の実施形態では、アンチセンス鎖の２、５及び１４位の位置のそれぞれの糖部分は、２’－Ｆで修飾されている。他の実施形態では、アンチセンス鎖の１、２、５及び１４位の位置のそれぞれの糖部分は、２’－Ｆで修飾されている。さらに他の実施形態では、アンチセンス鎖の１、２、３、５、７、及び１４位の位置のそれぞれの糖部分は、２’－Ｆで修飾されている。さらに別の実施形態では、アンチセンス鎖の１、２、３、５、１０、及び１４位の位置のそれぞれの糖部分は、２’－Ｆで修飾されている。別の実施形態では、アンチセンス鎖の２、３、５、７、１０、及び１４位の位置のそれぞれの糖部分は、２’－Ｆで修飾されている。
【0116】
ｂ．５’末端ホスフェート
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの５’末端ホスフェート基は、Ａｇｏ２との相互作用を増強する。しかしながら、５’－ホスフェート基を含むオリゴヌクレオチドは、ホスファターゼまたは他の酵素による分解を受けやすくなり得、インビボでのバイオアベイラビリティを制限する可能性がある。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、このような分解に耐性のある５’ホスフェートの類似体を含む。いくつかの実施形態では、ホスフェート類似体は、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、マロニルホスホネート、またはそれらの組み合わせである。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド鎖の３’末端は、天然の５’－ホスフェート基の静電特性及び立体特性を模倣する化学的部分（「ホスフェート模倣体」）に結合している。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの５’末端ホスフェート基は、Ａｇｏ２との相互作用を増強する。しかしながら、５’－ホスフェート基を含むオリゴヌクレオチドは、ホスファターゼまたは他の酵素による分解を受けやすくなり得、インビボでのバイオアベイラビリティを制限する可能性がある。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、このような分解に耐性のある５’ホスフェートの類似体を含む。いくつかの実施形態では、ホスフェート類似体は、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、マロニルホスホネート、またはそれらの組み合わせである。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド鎖の３’末端は、天然の５’－ホスフェート基の静電特性及び立体特性を模倣する化学的部分（「ホスフェート模倣体」）に結合している。
【0117】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、糖の４’位の炭素にホスフェート類似体（４’－ホスフェート類似体と呼ぶ）を有する。例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０４５３１７号を参照されたい。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドに４’－ホスフェート類似体を含む。いくつかの実施形態では、ホスフェート類似体は、オキシメチル基の酸素原子が（例えば、その４’－炭素で）糖部分に結合したオキシメチルホスホネートまたはその類似体である。他の実施形態では、４’－ホスフェート類似体は、チオメチル基の硫黄原子またはアミノメチル基の窒素原子が、糖部分の４’－炭素に結合したチオメチルホスホネートもしくはアミノメチルホスホネートまたはそれらの類似体である。特定の実施形態では、４’－ホスフェート類似体はオキシメチルホスホネートである。いくつかの実施形態では、オキシメチルホスホネートは、式－Ｏ－ＣＨ2－ＰＯ（ＯＨ）2または－Ｏ－ＣＨ2－ＰＯ（ＯＲ）2で表され、式中、Ｒは独立して、Ｈ、ＣＨ3、アルキル基、ＣＨ2ＣＨ2ＣＮ、ＣＨ2ＯＣＯＣ（ＣＨ3）3、ＣＨ2ＯＣＨ2ＣＨ2Ｓｉ（ＣＨ3）3、または保護基から選択される。特定の実施形態では、アルキル基は、ＣＨ2ＣＨ3である。より典型的には、Ｒは独立して、Ｈ、ＣＨ3、またはＣＨ2ＣＨ3から選択される。
【0118】
ｃ．修飾ヌクレオシド間結合
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態では、ホスフェートの修飾または置換は、少なくとも約１個（例えば、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または少なくとも５個）の修飾ヌクレオチド間結合を含むオリゴヌクレオチドを生じ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つは、約１～約１０個（例えば、１～１０個、２～８個、４～６個、３～１０個、５～１０個、１～５個、１～３個、または１～２個）の修飾ヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個の修飾ヌクレオチド間結合を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態では、ホスフェートの修飾または置換は、少なくとも約１個（例えば、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または少なくとも５個）の修飾ヌクレオチド間結合を含むオリゴヌクレオチドを生じ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つは、約１～約１０個（例えば、１～１０個、２～８個、４～６個、３～１０個、５～１０個、１～５個、１～３個、または１～２個）の修飾ヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個の修飾ヌクレオチド間結合を含む。
【0119】
修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロジチオエート結合、ホスホロチオエート結合、ホスホトリエステル結合、チオノアルキルホスホネート結合、チオアルキルホスホトリエステル結合、ホスホロアミダイト結合、ホスホネート結合、及び／またはボラノホスファート結合であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つの少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
【0120】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の３位と４位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及びアンチセンス鎖の２１位と２２位のうちの１つ以上の間にホスホロチオエート結合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及びアンチセンス鎖の２１位と２２位のそれぞれの間にホスホロチオエート結合を含む。
【0121】
ｄ．塩基の修飾
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾核酸塩基を有する。いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基（本明細書では塩基類似体とも呼ばれる）は、ヌクレオチド糖部分の１’位に連結されている。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、窒素塩基である。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、窒素原子を含まない。例えば、米国特許出願公開第２００８／０２７４４６２号を参照されたい。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む。しかしながら、特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、核酸塩基を含まない（脱塩基）。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾核酸塩基を有する。いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基（本明細書では塩基類似体とも呼ばれる）は、ヌクレオチド糖部分の１’位に連結されている。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、窒素塩基である。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、窒素原子を含まない。例えば、米国特許出願公開第２００８／０２７４４６２号を参照されたい。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む。しかしながら、特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、核酸塩基を含まない（脱塩基）。
【0122】
いくつかの実施形態では、ユニバーサル塩基は、二重鎖中に存在する場合に二重鎖の構造を実質的に変えることなく、１つを超える種類の塩基の反対側に配置することができる修飾ヌクレオチドのヌクレオチド糖部分の１’位、またはヌクレオチド糖部分置換の同等の位置に配置された複素環部分である。いくつかの実施形態では、標的核酸と完全に相補的である参照一本鎖核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）と比較して、ユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸は、相補的な核酸と形成される二重鎖よりも低いＴmを有する標的核酸と二重鎖を形成する。しかしながら、いくつかの実施形態では、ユニバーサル塩基が塩基に置き換えられて１個のミスマッチを生じている参照一本鎖核酸と比較して、ユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸は、ミスマッチ塩基を含む核酸と形成される二重鎖よりも高いＴmを有する標的核酸と二重鎖を形成する。
【0123】
ユニバーサル結合ヌクレオチドの非限定的な例としては、イノシン、１－β－Ｄ－リボフラノシル－５－ニトロインドール、及び／または１－β－Ｄ－リボフラノシル－３－ニトロピロールが挙げられるが、これらに限定されない（米国特許出願公開第２００７／０２５４３６２号；Ｖａｎ Ａｅｒｓｃｈｏｔ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：４３６３－７０；Ｌｏａｋｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：２３６１－６６；及びＬｏａｋｅｓ ＆ Ｂｒｏｗｎ（１９９４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：４０３９－４３を参照されたい）。
【0124】
ｅ．可逆的修飾
標的細胞に到達する前に、インビボ環境からオリゴヌクレオチドを保護する特定の修飾を行うことができるが、オリゴヌクレオチドが標的細胞のサイトゾルに到達すると、オリゴヌクレオチドの効力または活性が低下する可能性がある。分子が細胞外で望ましい特性を保持するように、可逆的な修飾を行うことができ、その後、可逆的な修飾は細胞のサイトゾル環境に入ると除去される。可逆的修飾は、例えば、細胞内酵素の作用によって、または細胞内の化学的条件によって（例えば、細胞内グルタチオンによる還元によって）除去することができる。
標的細胞に到達する前に、インビボ環境からオリゴヌクレオチドを保護する特定の修飾を行うことができるが、オリゴヌクレオチドが標的細胞のサイトゾルに到達すると、オリゴヌクレオチドの効力または活性が低下する可能性がある。分子が細胞外で望ましい特性を保持するように、可逆的な修飾を行うことができ、その後、可逆的な修飾は細胞のサイトゾル環境に入ると除去される。可逆的修飾は、例えば、細胞内酵素の作用によって、または細胞内の化学的条件によって（例えば、細胞内グルタチオンによる還元によって）除去することができる。
【0125】
いくつかの実施形態では、可逆的修飾ヌクレオチドは、グルタチオン感受性部分を含む。典型的に、核酸分子は、ヌクレオチド間二ホスフェート結合によって生じる負電荷をマスクし、細胞取り込み及びヌクレアーゼ耐性を改善するために、環状ジスルフィド部分によって化学的に修飾されている。米国特許出願公開第２０１１／０２９４８６９号、国際特許出願公開第ＷＯ２０１４／０８８９２０号、及び同第ＷＯ２０１５／１８８１９７号、ならびにＭｅａｄｅ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３２：１２５６－６３を参照されたい。ヌクレオチド間二ホスフェート結合のこの可逆的修飾は、サイトゾルの還元的環境（例えば、グルタチオン）によって細胞内で切断されるように設計されている。初期の例としては、中和ホスホトリエステル修飾があり、細胞内で切断可能であることが報告されている（Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２５：９４０－５０を参照されたい）。
【0126】
いくつかの実施形態では、そのような可逆的修飾は、オリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ及び他の過酷な環境条件（例えば、ｐＨ）に曝露されるインビボ投与（例えば、血液及び／または細胞のリソソーム／エンドソーム区画を通過する輸送）における保護を与える。細胞外空間と比較してグルタチオンのレベルが高い細胞のサイトゾルに放出されると、修飾が逆転し、切断されたオリゴヌクレオチドが得られる。可逆的なグルタチオン感受性部分を使用すると、不可逆的な化学修飾を使用して利用可能な選択肢と比較して、目的のオリゴヌクレオチドに立体的に大きな化学基を導入することが可能である。これは、これらのより大きな化学基がサイトゾルで除去されるためであり、したがって、細胞のサイトゾル内のオリゴヌクレオチドの生物活性を妨げない。その結果、これらのより大きな化学基を操作して、ヌクレアーゼ耐性、親油性、電荷、熱安定性、特異性、低下した免疫原性など、ヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドにさまざまな利点を与えることができる。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分の構造を操作して、その放出の動態を改変することができる。
【0127】
いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、ヌクレオチドの糖に結合している。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、修飾ヌクレオチドの糖の２’－炭素に結合している。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドである場合、糖の５’－炭素に配置される。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオチドである場合、糖の３’－炭素に配置される。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、スルホニル基を含む。例えば、２０１６年８月２３日に出願された、「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｙ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆ」と題する、米国仮特許出願第６２／３７８，６３５号を参照されたい。
【0128】
ｖｉ．標的化リガンド
いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドを１つ以上の細胞または１つ以上の器官に標的化することが望ましい。そのような戦略は、他の器官における望ましくない影響を回避する、またはオリゴヌクレオチドから恩恵を受けない細胞、組織、または臓器へのオリゴヌクレオチドの過度の損失を回避するのに役立ち得る。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、組織、細胞、または器官の標的化及び／または送達を促進する（例えば、肝臓へのオリゴヌクレオチドの送達を促進する）ように修飾される。特定の実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、肝臓の肝細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を促進するように修飾される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の標的化リガンドにコンジュゲートされた少なくとも１個のヌクレオチド（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、またはそれ以上のヌクレオチド）を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドを１つ以上の細胞または１つ以上の器官に標的化することが望ましい。そのような戦略は、他の器官における望ましくない影響を回避する、またはオリゴヌクレオチドから恩恵を受けない細胞、組織、または臓器へのオリゴヌクレオチドの過度の損失を回避するのに役立ち得る。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、組織、細胞、または器官の標的化及び／または送達を促進する（例えば、肝臓へのオリゴヌクレオチドの送達を促進する）ように修飾される。特定の実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、肝臓の肝細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を促進するように修飾される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の標的化リガンドにコンジュゲートされた少なくとも１個のヌクレオチド（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、またはそれ以上のヌクレオチド）を含む。
【0129】
いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質もしくはタンパク質の一部（例えば、抗体または抗体断片）、または脂質を含み得る。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、アプタマーである。例えば、標的化リガンドは、腫瘍血管系または神経膠腫細胞を標的化するために使用されるＲＧＤペプチド、腫瘍血管系または腫瘍間質を標的化するためのＣＲＥＫＡペプチド、ＣＮＳ血管系上で発現するトランスフェリン受容体を標的化するためのトランスフェリン、ラクトフェリン、もしくはアプタマー、または神経膠腫細胞上のＥＧＦＲを標的化するための抗ＥＧＦＲ抗体であってよい。特定の実施形態では、標的化リガンドは、１つ以上のＧａｌＮＡｃ部分である。
【0130】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの１個以上（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、または６個）のヌクレオチドが、それぞれ別個の標的化リガンドにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの２～４個のヌクレオチドが、それぞれ別個の標的化リガンドにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、センス鎖またはアンチセンス鎖のいずれかの末端の２～４個のヌクレオチドにコンジュゲートされる（例えば、標的化リガンドはセンス鎖またはアンチセンス鎖の５’末端または３’末端の２～４個のヌクレオチドの突出または伸長部分にコンジュゲートされる）ため、標的化リガンドが歯ブラシの毛の部分に似ており、オリゴヌクレオチドが歯ブラシに似た格好となっている。例えば、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の５’末端または３’末端のいずれかにステムループを含むことができ、ステムのループの１個、２個、３個、または４個のヌクレオチドを標的化リガンドに個別にコンジュゲートさせることができる。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）は、センス鎖の３’末端にステムループを含み、ステムループのループは、トリループまたはテトラループを含み、トリループまたはテトラループをそれぞれ構成する３個または４個のヌクレオチドは、標的化リガンドに個別にコンジュゲートされている。
【0131】
ＧａｌＮＡｃは、主として肝細胞の類洞表面で発現するＡＳＧＰＲに対する高親和性リガンドであり、末端ガラクトースまたはＧａｌＮＡｃ残基を含む循環糖タンパク質（アシアロ糖タンパク質）の結合、内在化、及びその後の排出に主要な役割を有する。本開示のオリゴヌクレオチドにＧａｌＮＡｃ部分をコンジュゲート（間接的または直接的に）させて、細胞で発現するＡＳＧＰＲにこれらのオリゴヌクレオチドを標的化するのに使用することができる。いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つ以上のＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされ、ＧａｌＮＡｃ部分は、オリゴヌクレオチドをヒト肝臓の細胞（例えば、ヒト肝細胞）上に発現するＡＳＧＰＲに標的化させる。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、オリゴヌクレオチドを肝臓に標的化させる。
【0132】
いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、一価のＧａｌＮＡｃに直接的または間接的にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つを超える一価ＧａｌＮＡｃに直接的または間接的にコンジュゲートされる（すなわち、２個、３個、または４個の一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされ、典型的には３個または４個の一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされる）。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の二価ＧａｌＮＡｃ、三価ＧａｌＮＡｃ、または四価ＧａｌＮＡｃの部分にコンジュゲートされる。
【0133】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの１つ以上（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、または６個）のヌクレオチドが、それぞれＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、テトラループの２～４個のヌクレオチドが、それぞれ別個のＧａｌＮＡｃにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、トリループの１～３個のヌクレオチドが、それぞれ別個のＧａｌＮＡｃにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、センス鎖またはアンチセンス鎖のいずれかの末端の２～４個のヌクレオチドにコンジュゲートされる（例えば、リガンドはセンス鎖またはアンチセンス鎖の５’末端または３’末端の２～４個のヌクレオチドの突出または伸長部分にコンジュゲートされる）ため、ＧａｌＮＡｃ部分が歯ブラシの毛の部分に似ており、オリゴヌクレオチドが歯ブラシに似た格好となっている。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、センス鎖のヌクレオチドにコンジュゲートされる。例えば、４個のＧａｌＮＡｃ部分をセンス鎖のテトラループ内のヌクレオチドにコンジュゲートさせることができ、それぞれのＧａｌＮＡｃ部分は１個のヌクレオチドにコンジュゲートされる。
【0134】
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、下記に示されるような［ａｄｅｍＧ－ＧａｌＮＡｃ］または２’－アミノジエトキシメタノール－グアニン－ＧａｌＮＡｃと呼ばれる、グアニンヌクレオチドに結合された一価のＧａｌＮＡｃを含む。
【化1】
【0135】
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、下記に示されるような［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］または２’－アミノジエトキシメタノール－アデニン－ＧａｌＮＡｃと呼ばれる、アデニンヌクレオチドに結合された一価のＧａｌＮＡｃを含む。
【化2】
【0136】
そのようなコンジュゲーションの例を、５’から３’方向にヌクレオチド配列ＧＡＡＡを含むループについて下記に示す（Ｌ＝リンカー、Ｘ＝ヘテロ原子）。ステム結合点が示されている。このようなループは、例えば、表５に列挙され、図３に示されるセンス鎖の２７～３０位に存在し得る。化学式中、
が、オリゴヌクレオチド鎖への結合点を表すために用いられている。
【化3】
【化4】
【0137】
適切な方法または化学的手法（例えば、クリックケミストリー）を用いて標的化リガンドをヌクレオチドに連結することができる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、クリックリンカーを使用してヌクレオチドにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、アセタールベースのリンカーを用いて標的化リガンドを本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのいずれか１つのヌクレオチドにコンジュゲートする。アセタールベースのリンカーは、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／１００４０１号に開示されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、不安定なリンカーである。しかしながら、他の実施形態では、リンカーは安定している。ＧａｌＮＡｃ部分がアセタールリンカーを使用してループのヌクレオチドに結合されている、５’から３’方向にヌクレオチドＧＡＡＡを含むループの例を下記に示す。このようなループは、例えば、表３または表４に列挙され、図１０に示されるセンス鎖のいずれか１つの２７～３０位に存在し得る。化学式中、
は、オリゴヌクレオチド鎖への結合点である。
【化5】
【化6】
【0138】
前述のように、さまざまな適切な方法または化学的合成技法（例えば、クリックケミストリー）を用いて標的化リガンドをヌクレオチドに連結することができる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、クリックリンカーを使用してヌクレオチドにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、アセタールベースのリンカーを用いて標的化リガンドを本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのいずれか１つのヌクレオチドにコンジュゲートする。アセタールベースのリンカーは、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／１００４０１号に開示されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、不安定なリンカーである。しかしながら、他の実施形態では、リンカーは安定なリンカーである。
【0139】
いくつかの実施形態では、二重鎖伸長部分（例えば、３、４、５、または６ｂｐまでの長さ）が、標的化リガンド（例えば、ＧａｌＮＡｃ部分）とｄｓオリゴヌクレオチドとの間に配置される。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、それにコンジュゲートされたＧａｌＮＡｃを有しない。
【0140】
ＩＩＩ．製剤
オリゴヌクレオチドの使用を促進するために、さまざまな製剤が開発されている。例えば、オリゴヌクレオチドは、分解を最小限に抑え、送達及び／または取り込みを促進し、または製剤中のオリゴヌクレオチドに別の有益な特性を与える製剤を使用して対象または細胞環境に送達することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ホスフェート緩衝生理食塩水などの緩衝液、リポソーム、ミセル構造、及びカプシド中に製剤化される。
オリゴヌクレオチドの使用を促進するために、さまざまな製剤が開発されている。例えば、オリゴヌクレオチドは、分解を最小限に抑え、送達及び／または取り込みを促進し、または製剤中のオリゴヌクレオチドに別の有益な特性を与える製剤を使用して対象または細胞環境に送達することができる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ホスフェート緩衝生理食塩水などの緩衝液、リポソーム、ミセル構造、及びカプシド中に製剤化される。
【0141】
カチオン性脂質を含むオリゴヌクレオチドの製剤を使用して、細胞内へのオリゴヌクレオチドのトランスフェクションを促進することができる。例えば、リポフェクチン、カチオン性グリセロール誘導体、及びポリカチオン性分子（例えば、ポリリジン）などのカチオン性脂質を使用することができる。適切な脂質としては、オリゴフェクタミン、リポフェクタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＮＣ３８８（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、またはＦｕＧｅｎｅ６（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられ、これらはいずれも製造者の使用説明書に従って使用することができる。
【0142】
したがって、いくつかの実施形態では、製剤は脂質ナノ粒子を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、リポソーム、脂質、複合脂質、マイクロスフェア、マイクロ粒子、ナノスフェア、またはナノ粒子を含むか、または投与を必要とする対象の細胞、組織、器官、もしくは身体に投与するための他の形で製剤化することができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ，２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１３を参照されたい）。
【0143】
いくつかの実施形態では、本明細書の製剤は、賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、活性成分の改善された安定性、改善された吸収性、改善された溶解性、及び／または治療増強効果を組成物に付与する。いくつかの実施形態では、賦形剤は、緩衝剤（例えば、クエン酸ナトリウム、ホスフェートナトリウム、トリス塩基、または水酸化ナトリウム）、またはビヒクル（例えば、緩衝液、ペトロラタム、ジメチルスルホキシド、または鉱油）である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、その貯蔵寿命を延ばすために凍結乾燥された後、使用（例えば、対象への投与）に先立って溶液とされる。したがって、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのいずれか１つを含む組成物中の賦形剤は、凍結乾燥保護剤（例えば、マンニトール、ラクトース、ポリエチレングリコール、もしくはポリビニルピロリドン）、または崩壊温度調節剤（例えば、デキストラン、フィコール（商標）、もしくはゼラチン）であり得る。
【0144】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、その意図された投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例としては、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮内、皮下）、経口（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜、及び直腸投与が挙げられる。
【0145】
注射用途に適した医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）、または分散液、及び滅菌注射溶液または分散液の即時調製用の滅菌粉末が含まれる。静脈内投与の場合、適切な担体には、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）またはホスフェート緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの適当な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、塩化ナトリウムを本組成物に含めることが好ましいであろう。滅菌注射用溶液は、必要な量のオリゴヌクレオチドを選択された溶媒に、必要に応じて上記に列挙した成分のうちの１つまたは組み合わせと共に混合し、その後濾過滅菌することによって調製され得る。
【0146】
いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも約０．１％以上の治療剤を含み得るが、活性成分（複数可）のパーセンテージは、全組成物の重量または体積の約１％～約８０％またはそれ以上とすることができる。溶解度、バイオアベイラビリティ、生物学的半減期、投与経路、製品の貯蔵寿命、及び他の薬理学的考慮事項などの因子は、そのような医薬製剤の調製の分野における当業者によって想到されるものであり、したがって、さまざまな投与量及び治療レジメンが望ましい場合がある。
【0147】
いくつかの実施形態は、本明細書のオリゴヌクレオチドのいずれかの肝臓標的化送達を対象としているが、他の組織の標的化も企図される。
【0148】
ＩＶ．使用方法
ｉ．細胞内のＬＰＡ発現の減少
本開示は、ＬＰＡ発現を減少させる目的で、有効量の本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）のいずれかを細胞または細胞の集団に接触させるかまたは送達する方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現の減少は、細胞におけるＬＰＡのｍＲＮＡ、ａｐｏ（ａ）タンパク質、またはａｐｏ（ａ）活性の量またはレベルの減少を測定することによって決定される。これらの方法は、本明細書に記載のステップを含むことができ、これらは記載された順序で実行されてもよいが、必ずしもそうである必要はない。しかしながら、他の順序も考えられる。さらに、個別または複数のステップを並行して、及び／または時間が重なって、及び／または個別に、または複数回繰り返されるステップで実施してもよい。さらに、方法は、追加の不特定のステップを含んでもよい。
ｉ．細胞内のＬＰＡ発現の減少
本開示は、ＬＰＡ発現を減少させる目的で、有効量の本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）のいずれかを細胞または細胞の集団に接触させるかまたは送達する方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現の減少は、細胞におけるＬＰＡのｍＲＮＡ、ａｐｏ（ａ）タンパク質、またはａｐｏ（ａ）活性の量またはレベルの減少を測定することによって決定される。これらの方法は、本明細書に記載のステップを含むことができ、これらは記載された順序で実行されてもよいが、必ずしもそうである必要はない。しかしながら、他の順序も考えられる。さらに、個別または複数のステップを並行して、及び／または時間が重なって、及び／または個別に、または複数回繰り返されるステップで実施してもよい。さらに、方法は、追加の不特定のステップを含んでもよい。
【0149】
本明細書の方法は、任意の適切な細胞型で有用である。いくつかの実施形態では、細胞は、ｍＲＮＡを発現するあらゆる細胞（例えば、肝細胞、マクロファージ、単球由来細胞、前立腺癌細胞、脳、内分泌組織、骨髄、リンパ節、肺、胆嚢、肝臓、十二指腸、小腸、膵臓、腎臓、胃腸管、膀胱、脂肪及び軟部組織、ならびに皮膚の細胞）である。いくつかの実施形態では、細胞は、対象から得られた初代細胞である。いくつかの実施形態では、初代細胞は、限られた数の継代を行っており、それにより、細胞は天然の表現型特性を実質的に維持している。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドが送達される細胞は、エクスビボまたはインビトロである（すなわち、培養中の細胞または細胞が存在する生物に送達することができる）。
【0150】
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドを含む溶液の注入、オリゴヌクレオチドで被覆した粒子によるボンバードメント、オリゴヌクレオチドを含む溶液への細胞もしくは細胞の集団の曝露、またはオリゴヌクレオチドの存在下での細胞膜のエレクトロポレーションを含むがこれらに限定されない、当該技術分野で知られている核酸送達方法を使用して細胞または細胞の集団に送達される。例えば、脂質媒介担体輸送、化学媒介輸送、及びホスフェートカルシウムなどのカチオン性リポソームトランスフェクションなどの、オリゴヌクレオチドを細胞に送達するための他の当該技術分野で知られている方法を使用することができる。
【0151】
いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現の減少は、ＬＰＡ発現に関連する細胞もしくは細胞の集団の１つ以上の分子、特性、もしくは特性を評価するアッセイもしくは技法によって（例えば、ＬＰＡ発現バイオマーカーを使用して）、または細胞もしくは細胞の集団におけるＬＰＡ発現を直接的に示す分子（例えば、ＬＰＡのｍＲＮＡもしくはａｐｏ（ａ）タンパク質）を評価するアッセイもしくは技法によって決定される。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドがＬＰＡ発現を減少させる程度は、オリゴヌクレオチドと接触させた細胞または細胞の集団におけるＬＰＡ発現を対照細胞または細胞の集団（例えば、オリゴヌクレオチドと接触させていないか、または対照オリゴヌクレオチドと接触させた細胞または細胞の集団）と比較することによって評価される。いくつかの実施形態では、対照細胞または細胞の集団におけるＬＰＡ発現の対照の量またはレベルは、アッセイまたは技法が実施されるすべての場合において対照の量またはレベルを測定する必要がないように、予め決定される。所定のレベルまたは値は、さまざまな形態のものとすることができる。いくつかの実施形態では、所定のレベルまたは値は、中央値または平均などの単一のカットオフ値とすることができる。
【0152】
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）を細胞または細胞の集団に接触させるかまたは送達すると、ＬＰＡ発現が減少する。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現の減少は、オリゴヌクレオチドと接触させていない、または対照オリゴヌクレオチドと接触させた細胞または細胞の集団におけるＬＰＡ発現の対照の量またはレベルと比較する。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現の減少は、ＬＰＡ発現の対照の量またはレベルと比較して、約１％以下、約５％以下、約１０％以下、約１５％以下、約２０％以下、約２５％以下、約３０％以下、約３５％以下、約４０％以下、約４５％以下、約５０％以下、約５５％以下、約６０％以下、約７０％以下、約８０％以下、または約９０％以下である。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現の対照の量またはレベルは、本明細書のオリゴヌクレオチドと接触させていない細胞または細胞の集団中のＬＰＡのｍＲＮＡ及び／またはａｐｏ（ａ）タンパク質の量またはレベルである。いくつかの実施形態では、本明細書の方法による細胞または細胞の集団へのオリゴヌクレオチドの送達の効果は、任意の有限期間または一定時間（例えば、分、時間、日、週、月）後に評価される。例えば、いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現は、細胞または細胞の集団にオリゴヌクレオチドを接触させるかまたは送達した後、少なくとも約４時間、約８時間、約１２時間、約１８時間、約２４時間；または少なくとも約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約２１日間、約２８日間、約３５日間、約４２日間、約４９日間、約５６日間、約６３日間、約７０日間、約７７日間、または約８４日間、またはそれ以上で、細胞または細胞の集団において決定される。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現は、細胞または細胞の集団にオリゴヌクレオチドを接触させるかまたは送達した後、少なくとも約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、または約６ヶ月、またはそれ以上で細胞または細胞の集団において決定される。
【0153】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、細胞内でオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドを含む鎖（例えば、そのセンス鎖及びアンチセンス鎖）を発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、本明細書に開示される任意のオリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子を使用して送達される。導入遺伝子は、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス、もしくは単純ヘルペスウイルス）、または非ウイルスベクター（例えば、プラスミドもしくは合成ｍＲＮＡ）を使用して送達され得る。いくつかの実施形態では、導入遺伝子を対象に直接注射することができる。
【0154】
ｉｉ．医療用途
本開示はまた、ＬＰＡ発現を減少させることから恩恵を受ける対象（例えば、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有するヒト）を治療するために使用するための、または使用に適合可能なオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＰＡの発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象を治療するために使用するための、または使用するように適合されたオリゴヌクレオチドを提供する。本開示はまた、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を治療するための医薬品または医薬組成物の製造における使用のための、または使用に適合可能なオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、使用のための、または使用に適合可能なオリゴヌクレオチドは、ＬＰＡのｍＲＮＡを標的とし、ＬＰＡ発現を減少させる（例えば、ＲＮＡｉ経路を介して）。いくつかの実施形態では、使用のための、または使用に適合可能なオリゴヌクレオチドは、ＬＰＡのｍＲＮＡを標的とし、ＬＰＡのｍＲＮＡ、ａｐｏ（ａ）タンパク質、及び／またはａｐｏ（ａ）活性の量またはレベルを減少させる。
本開示はまた、ＬＰＡ発現を減少させることから恩恵を受ける対象（例えば、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有するヒト）を治療するために使用するための、または使用に適合可能なオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＬＰＡの発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象を治療するために使用するための、または使用するように適合されたオリゴヌクレオチドを提供する。本開示はまた、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を治療するための医薬品または医薬組成物の製造における使用のための、または使用に適合可能なオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、使用のための、または使用に適合可能なオリゴヌクレオチドは、ＬＰＡのｍＲＮＡを標的とし、ＬＰＡ発現を減少させる（例えば、ＲＮＡｉ経路を介して）。いくつかの実施形態では、使用のための、または使用に適合可能なオリゴヌクレオチドは、ＬＰＡのｍＲＮＡを標的とし、ＬＰＡのｍＲＮＡ、ａｐｏ（ａ）タンパク質、及び／またはａｐｏ（ａ）活性の量またはレベルを減少させる。
【0155】
さらに、本明細書の方法のいくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有するか、またはその素因がある対象が、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓオリゴヌクレオチド）による治療のために選択される。いくつかの実施形態では、本方法は、ＬＰＡ発現に関連する、疾患、障害、または状態のマーカー（例えば、バイオマーカー）、例えば、これらに限定されないが、ＬＰＡのｍＲＮＡ、ａｐｏ（ａ）タンパク質、リポタンパク質（ａ）、またはそれらの組み合わせを有するか、またはその素因がある個体を選択することを含む。同様に、以下に詳述するように、本開示によって提供される方法のいくつかの実施形態は、ＬＰＡ発現のマーカー（例えば、リポタンパク質（ａ））のベースライン値を測定または取得し、次いで、そのように取得された値を１つまたは複数の他のベースライン値または対象にオリゴヌクレオチドを投与した後に得られる値と比較して治療の有効性を評価することなどのステップを含む。
【0156】
ｉｉｉ．治療の方法
本開示はまた、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する、有する疑いがある、または発症するリスクがある対象を、本明細書のオリゴヌクレオチドで治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書のオリゴヌクレオチドを使用して、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態の発症または進行を治療または軽減する方法を提供する。他の実施形態では、本開示は、本明細書のオリゴヌクレオチドを使用して、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象において１つ以上の治療効果を達成する方法を提供する。本明細書の方法のいくつかの実施形態では、対象は、治療有効量の本明細書のオリゴヌクレオチドのいずれか１つ以上を投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、治療はＬＰＡ発現を減少させることを含む。いくつかの実施形態では、対象は治療的に処置される。いくつかの実施形態では、対象は予防的に処置される。
本開示はまた、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する、有する疑いがある、または発症するリスクがある対象を、本明細書のオリゴヌクレオチドで治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書のオリゴヌクレオチドを使用して、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態の発症または進行を治療または軽減する方法を提供する。他の実施形態では、本開示は、本明細書のオリゴヌクレオチドを使用して、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象において１つ以上の治療効果を達成する方法を提供する。本明細書の方法のいくつかの実施形態では、対象は、治療有効量の本明細書のオリゴヌクレオチドのいずれか１つ以上を投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、治療はＬＰＡ発現を減少させることを含む。いくつかの実施形態では、対象は治療的に処置される。いくつかの実施形態では、対象は予防的に処置される。
【0157】
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、対象においてＬＰＡ発現が減少して、それによって対象を治療するように、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＬＰＡのｍＲＮＡの量またはレベルは、対象において減少する。いくつかの実施形態では、ａｐｏ（ａ）タンパク質の量またはレベルは、対象において減少する。いくつかの実施形態では、リポタンパク質（ａ）の量またはレベルは、対象において減少する。いくつかの実施形態では、ａｐｏ（ａ）活性の量またはレベルは、対象において減少する。いくつかの実施形態では、トリグリセリド（ＴＧ）（例えば、１つ以上のＴＧまたは総ＴＧ）の量またはレベルは、対象において減少する。いくつかの実施形態では、コレステロール（例えば、総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、及び／またはＨＤＬコレステロール）の量またはレベルは、対象において減少する。いくつかの実施形態では、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールの量またはレベルは、対象において減少する。いくつかの実施形態では、ＯｘＰＬの量または活性は、対象において減少または変動する。いくつかの実施形態では、ＬＤＬ－Ｃの量または活性は、対象において減少または変動する。いくつかの実施形態では、ａｐｏＢ－１００の量または活性は、対象において減少または変動する。いくつかの実施形態では、以下の任意の組み合わせが対象において減少または変動する：ＬＰＡ発現、ＬＰＡのｍＲＮＡの量またはレベル、ａｐｏ（ａ）タンパク質の量またはレベル、ａｐｏ（ａ）活性の量またはレベル、ＴＧの量またはレベル、コレステロールの量またはレベル、ＯｘＰＬの量または活性、ＬＤＬ－Ｃの量または活性、及び／またはａｐｏＢ－１００の量または活性。
【0158】
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、対象におけるＬＰＡ発現が、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の投与前のＬＰＡ発現と比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少するように、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、対象におけるＬＰＡ発現は、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を受けていないか、または対照のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または治療を受けた対象（例えば、参照または対照対象）におけるＬＰＡ発現と比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少する。
【0159】
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、対象におけるＬＰＡのｍＲＮＡの量またはレベルが、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の投与前のＬＰＡのｍＲＮＡの量またはレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少するように、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、対象におけるＬＰＡのｍＲＮＡの量またはレベルは、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を受けていないか、または対照のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または治療を受けた対象（例えば、参照または対照対象）におけるＬＰＡのｍＲＮＡの量またはレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少する。
【0160】
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、対象におけるａｐｏ（ａ）タンパク質の量またはレベルが、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の投与前のａｐｏ（ａ）タンパク質の量またはレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少するように、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、対象におけるａｐｏ（ａ）タンパク質の量またはレベルは、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を受けていないか、または対照のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または治療を受けた対象（例えば、参照または対照対象）におけるａｐｏ（ａ）タンパク質の量またはレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少する。
【0161】
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、対象におけるａｐｏ（ａ）活性の量またはレベルが、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の投与前のａｐｏ（ａ）活性の量またはレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少するように、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、対象におけるａｐｏ（ａ）活性の量またはレベルは、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を受けていないか、または対照のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または治療を受けた対象（例えば、参照または対照対象）におけるａｐｏ（ａ）活性の量またはレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少する。
【0162】
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、対象におけるリポタンパク質（ａ）の量またはレベルが、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の投与前のリポタンパク質（ａ）の量またはレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少するように、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、対象におけるリポタンパク質（ａ）の量またはレベルは、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を受けていないか、または対照のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または治療を受けた対象（例えば、参照または対照対象）におけるリポタンパク質（ａ）の量またはレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少する。
【0163】
リポタンパク（ａ）のレベルは、ヒトの成人において広い範囲であり、０．１ｍｇ／ｄＬ未満から２００ｍｇ／ｄＬを超えるまでの血漿レベルであり、したがって、個人間で最大３桁の違いを示す（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｊ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．５７（８）：１３３９－１３５９）。リポタンパク質（ａ）レベルは、米国及びカナダにおいて、３０ｍｇ／ｄｌ未満が最適と考えられている（Ａｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｃａｎ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ ３２：１２６３－８２）。欧州アテローム性動脈硬化学会（ＥＡＳ）は、５０ｍｇ／ｄＬ未満を最適として提案し、ドイツと英国ではアフェレーシスの償還のカットオフとして６０ｍｇ／ｄｌ未満のリポタンパク質（ａ）レベルが使用されている（Ｔｓｉｍｉｋａｓ（２０１７）Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ．６９（６）：６９２－７１１）。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドでの治療のために選択されるかまたはそれで治療される対象は、約３０ｍｇ／ｄＬ以上のリポタンパク質（ａ）の量またはレベルを有することが確認または決定される。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドでの治療のために選択されるかまたはそれで治療される対象は、３０ｍｇ／ｄＬを超えるリポタンパク質（ａ）の量またはレベルを有することが確認または決定される。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドでの治療のために選択されるかまたはそれで治療される対象は、約５０ｍｇ／ｄＬ以上のリポタンパク質（ａ）の量またはレベルを有することが確認または決定される。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドでの治療のために選択されるかまたはそれで治療される対象は、約６０ｍｇ／ｄＬ以上のリポタンパク質（ａ）の量またはレベルを有することが確認または決定される。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドでの治療のために選択されるかまたはそれで治療される対象は、３０ｍｇ／ｄＬ～３００ｍｇ／ｄＬの範囲のリポタンパク質（ａ）の量またはレベルを有することが確認または決定される。
【0164】
一般に、ヒト患者の正常または望ましいＴＧ範囲は、血液の１５０ｍｇ／ｄＬ未満であり、１００ｍｇ／ｄＬ未満が理想的とみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、１５０ｍｇ／ｄＬ以上のＴＧの量またはレベルを有することが確認または決定される。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、１５０～１９９ｍｇ／ｄＬの範囲のＴＧの量またはレベルを有することが確認または決定され、これは、ボーダーラインの高ＴＧレベルとみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、２００～４９９ｍｇ／ｄＬの範囲のＴＧの量またはレベルを有することが確認または決定され、これは、高ＴＧレベルとみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、５００ｍｇ／ｄＬまたはそれ以上（すなわち、５００ｍｇ／ｄＬ以上）の範囲のＴＧの量またはレベルを有することが確認または決定され、これは、非常に高いＴＧレベルとみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、１５０ｍｇ／ｄＬ以上、２００ｍｇ／ｄＬ以上、または５００ｍｇ／ｄＬ以上であるＴＧの量またはレベルを有することが確認または決定される。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、２００～４９９ｍｇ／ｄＬ、または５００ｍｇ／ｄＬ以上のＴＧのレベルの量を有することが確認または決定される。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、２００ｍｇ／ｄＬ以上であるＴＧの量またはレベルを有することが確認または決定される。
【0165】
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、対象におけるコレステロール（例えば、総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、及び／またはＨＤＬコレステロール）の量またはレベルが、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の投与前のコレステロールの量またはレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少するように、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、対象におけるコレステロールの量またはレベルは、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を受けていないか、または対照のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または治療を受けた対象（例えば、参照または対照対象）におけるコレステロールの量またはレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少する。
【0166】
一般に、成人ヒト患者の正常または望ましいコレステロール範囲（総コレステロール）は、血液の２００ｍｇ／ｄＬ未満である。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、２００ｍｇ／ｄＬ以上のコレステロールの量またはレベルを有することが確認または決定される。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、２００～２３９ｍｇ／ｄＬの範囲のコレステロールの量またはレベルを有することが確認または決定され、これは、ボーダーラインの高コレステロールレベルとみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、２４０ｍｇ／ｄＬ及びそれ以上（すなわち、２４０ｍｇ／ｄＬ以上）の範囲のコレステロールの量またはレベルを有することが確認または決定され、これは、高コレステロールレベルとみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、２００～２３９ｍｇ／ｄＬ、または２４０ｍｇ／ｄＬ以上のコレステロールの量またはレベルを有することが確認または決定される。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、２００ｍｇ／ｄＬ以上、または２４０ｍｇ／ｄＬもしくはそれ以上のコレステロールの量またはレベルを有することが確認または決定される。
【0167】
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、対象におけるＬＤＬコレステロールの量またはレベルが、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の投与前のＬＤＬコレステロールの量またはレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少するように、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、対象におけるＬＤＬコレステロールの量またはレベルは、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を受けていないか、または対照のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または治療を受けた対象（例えば、参照または対照対象）におけるＬＤＬコレステロールの量またはレベルと比較した場合、少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％を超えて減少する。
【0168】
一般に、成人ヒト患者の正常または望ましいＬＤＬコレステロール範囲は、血液の１００ｍｇ／ｄＬ未満である。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、１００ｍｇ／ｄＬ以上のコレステロールの量またはレベルを有することが確認または決定される。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、１００～１２９ｍｇ／ｄＬの範囲のＬＤＬコレステロールの量またはレベルを有することが確認または決定され、これは最適以上とみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、１３０～１５９ｍｇ／ｄＬの範囲のＬＤＬコレステロールの量またはレベルを有することが確認または判定され、これはボーダーラインの高レベルとみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、１６０～１８９ｍｇ／ｄＬの範囲のＬＤＬコレステロールの量またはレベルを有することが確認または決定され、これは、高ＬＤＬコレステロールレベルとみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、１９０ｍｇ／ｄＬ及びそれ以上（すなわち、１９０ｍｇ／ｄＬ以上）の範囲のＬＤＬコレステロールの量またはレベルを有することが確認または決定され、これは、非常に高いＬＤＬコレステロールレベルとみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、１００ｍｇ／ｄＬ以上、１３０ｍｇ／ｄＬ以上、１６０ｍｇ／ｄＬ以上、または１９０ｍｇ／ｄＬ以上、またはそれ以上、好ましくは１６０ｍｇ／ｄＬ以上、または１９０ｍｇ／ｄＬ以上またはそれ以上であるＬＤＬコレステロールの量またはレベルを有することが確認または決定される。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるかまたは治療される患者は、１００～１２９ｍｇ／ｄＬ、１３０～１５９ｍｇ／ｄＬ、１６０～１８９ｍｇ／ｄＬ、または１９０ｍｇ／ｄＬ及びそれ以上のＬＤＬコレステロールの量またはレベルを有することが確認または決定される。
【0169】
対象または対象からの試料中の、ＬＰＡ発現、ＬＰＡのｍＲＮＡの量またはレベル、ａｐｏ（ａ）タンパク質の量またはレベル、ａｐｏ（ａ）活性の量またはレベル、リポタンパク質（ａ）の量またはレベル、及び／またはＯｘＰＬ、ＬＤＬ－Ｃ、ａｐｏＢ－１００、ＴＧ、及び／またはＬＤＬコレステロールの量またはレベルを決定するための適切な方法は、当該技術分野で知られている。さらに、本明細書に記載の実施例は、ＬＰＡ発現を決定するための例示的な方法を説明する。
【0170】
いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現、ＬＰＡのｍＲＮＡ、ａｐｏ（ａ）タンパク質、ａｐｏ（ａ）活性、ＯｘＰＬ、ＬＤＬ－Ｃ、ａｐｏＢ－１００、ＴＧ、ＬＤＬコレステロール、またはそれらの任意の組み合わせの量またはレベルは、細胞（例えば、肝細胞）、細胞の集団またはグループ（例えば、オルガノイド）、器官（例えば、肝臓）、血液またはその一部（例えば、血漿）、組織（例えば、肝臓組織）、試料（例えば、肝生検試料）、または対象から得られるかまたは単離される任意の他の生物学的材料において減少する。いくつかの実施形態では、ＬＰＡ発現、ＬＰＡのｍＲＮＡ、ａｐｏ（ａ）タンパク質、ａｐｏ（ａ）活性、ＯｘＰＬ、ＬＤＬ－Ｃ、ａｐｏＢ－１００、ＴＧ、ＬＤＬコレステロール、またはそれらの任意の組み合わせの量またはレベルは、対象から得られるかまたは単離される１種を超える細胞（例えば、肝細胞と１種以上の他の種類の細胞）、１つを超える細胞グループ、１つを超える器官（例えば、肝臓と１つ以上の他の器官）、１つを超える血液画分（例えば、血漿及び１つ以上の他の血液画分）、１種を超える組織（例えば、肝臓組織及び１種以上の他の種類の組織）、１種を超える試料（例えば、肝生検試料及び１種以上の他の種類の生検試料）において減少する。
【0171】
ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態の例としては、バーガー病、末梢動脈疾患、冠動脈疾患、メタボリックシンドローム、急性冠症候群、大動脈弁狭窄症、大動脈弁逆流、大動脈解離、網膜動脈閉塞、脳血管疾患、腸間膜虚血、上腸間膜動脈閉塞、腎動脈狭窄、安定・不安定狭心症、急性冠症候群、ヘテロ接合体またはホモ接合体の家族性高コレステロール血症、高アポβリポタンパク血症、脳血管アテローム性動脈硬化症、脳血管疾患、及び静脈血栓症、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【0172】
それらの高い特異性のために、本明細書のオリゴヌクレオチドは、細胞、組織、または器官（例えば、肝臓）の標的遺伝子のｍＲＮＡを特異的に標的とする。疾患の予防において、標的遺伝子は、疾患の開始または維持に必要とされるもの、または疾患に罹患するリスクが高いことに関連すると同定されたものであり得る。疾患の治療において、本オリゴヌクレオチドは、疾患を示すか、または疾患を媒介する役割を担う細胞または組織と接触させることができる。例えば、ＬＰＡ発現に関連する障害または状態に関連する野生型（すなわち、天然型）または変異型遺伝子の全部または一部と実質的に同一のオリゴヌクレオチドを、肝細胞やその他の肝臓細胞などの目的の細胞または組織型と接触させるか、またはそれらに導入することができる。
【0173】
いくつかの実施形態では、標的遺伝子は、ヒトなどの任意の哺乳動物由来の標的遺伝子であり得る。本明細書に記載の方法に従って、任意の遺伝子をサイレンシングすることができる。
【0174】
本明細書に記載の方法は、典型的には、治療有効量、すなわち、望ましい治療結果を生じることができる量の本明細書のオリゴヌクレオチドを対象に投与することを含む。治療許容量は、疾患または障害を治療することができる量とすることができる。任意の１人の対象に対する適切な投与量は、対象のサイズ、体表面積、年齢、投与される特定の組成物、組成物中の活性成分（複数可）、投与の時間及び経路、全体的な健康状態、及び同時に投与されている他の薬剤を含む特定の因子に応じて決められる。
【0175】
いくつかの実施形態では、対象は、本明細書中の組成物のいずれか１つを、経腸的に（例えば、経口、胃栄養チューブによって、十二指腸栄養チューブによって、胃瘻造設を介して、もしくは直腸に）、非経口的に（例えば、皮下注射、静脈内注射もしくは注入、動脈内注射もしくは注入、骨内注射、筋肉内注射、脳内注射、脳室内注射、髄腔内注射）、局所（例えば、経皮、吸入、点眼薬、もしくは粘膜を介して）、または標的臓器（例えば、対象の肝臓）への直接注射によって投与される。典型的には、本明細書のオリゴヌクレオチドは、静脈内または皮下に投与される。
【0176】
非限定的の一組の例として、本開示のオリゴヌクレオチドは、典型的には、四半期ごと（３か月ごとに１回）、隔月ごと（２か月ごとに１回）、毎月または毎週投与される。例えば、オリゴヌクレオチドは、毎週、または２週間もしくは３週間の間隔で投与され得る。代替的に、オリゴヌクレオチドを毎日投与してもよい。いくつかの実施形態では、対象は、オリゴヌクレオチドの１回以上の負荷用量、続いてオリゴヌクレオチドの１回以上の維持用量を投与される。
【0177】
いくつかの実施形態では、治療される対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類または他の哺乳動物の対象である。他の例示的な対象としては、イヌ及びネコなどの飼育動物、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、及びニワトリなどの家畜、ならびにマウス、ラット、モルモット、及びハムスターなどの動物が挙げられる。
【0178】
Ｖ．キット
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書のオリゴヌクレオチドと、使用説明書と、を含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書のオリゴヌクレオチドと、キット及び／またはその任意の構成要素の使用説明書を含む添付文書と、を含む。いくつかの実施形態では、キットは、適切な容器内に、本明細書のオリゴヌクレオチド、１つ以上の対照、ならびに当該技術分野で周知のさまざまな緩衝液、試薬、酵素及びその他の標準成分を含む。いくつかの実施形態では、容器は、オリゴヌクレオチドが入れられ、場合によっては、適切に分注される、少なくとも１つのバイアル、ウェル、試験管、フラスコ、ボトル、注射器、または他の容器手段を含む。追加の構成要素が提供されるいくつかの実施形態では、キットは、この構成要素が配置される追加の容器を含む。キットはまた、オリゴヌクレオチド及び任意の他の試薬を商業販売のために厳重に封じ込めるための手段を含むことができる。このような容器としては、所望のバイアルが保持される射出成形またはブロー成形のプラスチック容器が挙げられ得る。コンテナ及び／またはキットには、使用説明書及び／または警告のラベルを含めることができる。
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書のオリゴヌクレオチドと、使用説明書と、を含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書のオリゴヌクレオチドと、キット及び／またはその任意の構成要素の使用説明書を含む添付文書と、を含む。いくつかの実施形態では、キットは、適切な容器内に、本明細書のオリゴヌクレオチド、１つ以上の対照、ならびに当該技術分野で周知のさまざまな緩衝液、試薬、酵素及びその他の標準成分を含む。いくつかの実施形態では、容器は、オリゴヌクレオチドが入れられ、場合によっては、適切に分注される、少なくとも１つのバイアル、ウェル、試験管、フラスコ、ボトル、注射器、または他の容器手段を含む。追加の構成要素が提供されるいくつかの実施形態では、キットは、この構成要素が配置される追加の容器を含む。キットはまた、オリゴヌクレオチド及び任意の他の試薬を商業販売のために厳重に封じ込めるための手段を含むことができる。このような容器としては、所望のバイアルが保持される射出成形またはブロー成形のプラスチック容器が挙げられ得る。コンテナ及び／またはキットには、使用説明書及び／または警告のラベルを含めることができる。
【0179】
いくつかの実施形態では、キットは、それを必要とする対象におけるＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を治療するか、またはその進行を遅らせるための、本明細書のオリゴヌクレオチド及び薬学的に許容される担体、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物と、使用説明書と、を含む。
【実施例】
【0180】
本開示を以下の実施例に示される具体的な実施態様を参照して説明したが、本開示の真の趣旨と範囲を逸脱することなくさまざまな変更がなされたり、均等物と置き換えたりすることができることは当業者によって理解されるであろう。さらに、以下の実施例は、例示のために提示され、いかなる様式でも本開示の範囲を限定することは意図されない。さらに、状況、物質、物質の組成、プロセス、プロセスのステップまたは複数のステップを本開示の目的、趣旨及び範囲に適合させるために多くの改変がなされ得る。すべてのそのような改変は、本開示の範囲内に入ることが意図される。当該技術分野で周知の標準的な技術、または以下に具体的に説明する技術が利用される。
【0181】
実施例１：二本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの調製
オリゴヌクレオチドの合成及び精製
オリゴヌクレオチドの合成及び精製
【0182】
前述の実施例に記載のｄｓＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、本明細書に記載の方法を使用して化学合成される。一般に、ｄｓＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、１９～２３ｍｅｒのｓｉＲＮＡについて記載された固相オリゴヌクレオチド合成法を用いて合成される（例えば、Ｓｃａｒｉｎｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１８：５４３３－４１及びＵｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：７８４５－４５を参照されたい；米国特許第５，８０４，６８３号；同第５，８３１，０７１号；同第５，９９８，２０３号；同第６，００８，４００号；同第６，１１１，０８６号；同第６，１１７，６５７号；同第６，３５３，０９８号；同第６，３６２，３２３号；同第６，４３７，１１７号；及び同第６，４６９，１５８号も参照されたい）。
【0183】
標準方法（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ，ＩＡ）に従って、個々のＲＮＡ鎖を合成してＨＰＬＣ精製する。例えば、固相ホスホラミダイト化学反応を使用してＲＮＡオリゴヌクレオチドを合成し、脱保護し、標準技法（Ｄａｍｈａ ＆ Ｏｌｇｉｖｉｅ（１９９３）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０：８１－１１４；Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：２６７７－８４）を使用してＮＡＰ－５カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）上で脱塩する。１５分間の段階的線形勾配を使用したＡｍｅｒｓｈａｍ Ｓｏｕｒｃｅ １５Ｑカラム（１．０ｃｍ×２５ｃｍ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）上でイオン交換高速液体クロマトグラフィ（ＩＥ－ＨＰＬＣ）を使用して、オリゴマーを精製する。勾配は、９０：１０緩衝液Ａ：Ｂから５２：４８緩衝液Ａ：Ｂへと変動し、緩衝液Ａは、ｐＨ８．５の１００ｍＭのＴｒｉｓであり、緩衝液Ｂは、ｐＨ８．５の１００ｍＭのＴｒｉｓ、１ＭのＮａＣｌである。試料を２６０ｎｍでモニターし、全長オリゴヌクレオチド種に対応するピークを収集し、プールし、ＮＡＰ－５カラム上で脱塩し、凍結乾燥する。
【0184】
Ｂｅｃｋｍａｎ ＰＡＣＥ ５０００（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．；Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）上のキャピラリ電気泳動（ＣＥ）によって、それぞれのオリゴマーの純度を決定する。ＣＥキャピラリは、１００μｍの内径を有し、ｓｓＤＮＡ １００Ｒ Ｇｅｌ（Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ）を含む。典型的には、約０．６ｎｍｏｌｅのオリゴヌクレオチドが、キャピラリに注入され、４４４Ｖ／ｃｍの電場で流され、２６０ｎｍにおけるＵＶ吸光度によって検出される。変性Ｔｒｉｓ－ホウ酸塩－７Ｍ－尿素ランニング緩衝液をＢｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒから購入する。以下で説明される実験で使用するためにＣＥによって評価されるときに少なくとも９０％純粋であるオリゴリボヌクレオチドが得られる。製造者の推奨プロトコールに従って、Ｖｏｙａｇｅｒ ＤＥ（商標）Ｂｉｏｓｐｅｃｔｏｍｅｔｒｙ Ｗｏｒｋ Ｓｔａｔｉｏｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）上でのマトリクス支援レーザ脱離イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分析法によって、化合物の特性を検証する。しばしば想定される分子量の０．２％以内で、すべてのオリゴマーの相対分子量が得られる。
【0185】
二重鎖の調製
【0186】
１００ｍＭの酢酸カリウム、３０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５からなる二重鎖緩衝液中で、ｓｓＲＮＡオリゴマーを再懸濁する（例えば、濃度１００μＭ）。相補的なセンス鎖とアンチセンス鎖を等モル量で混合して、例えば、５０μＭの二重鎖の最終溶液を得る。試料をＲＮＡ緩衝液（ＩＤＴ）中で５分間１００℃まで加熱し、使用前に室温まで冷ます。ｄｓＲＮＡオリゴヌクレオチドは－２０℃で保存される。ｓｓＲＮＡオリゴマーは、凍結乾燥で、またはヌクレアーゼを含まない水中で、－８０℃で保存される。
【0187】
実施例２：インビトロでのＬＰＡ発現のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド阻害
ＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列の同定
ＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列の同定
【0188】
ＬＰＡ発現のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド阻害剤を同定するために、コンピューターベースのアルゴリズムを使用して、ＲＮＡｉ経路によるＬＰＡ発現の阻害をアッセイするのに適したＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列をコンピューターで同定した。アルゴリズムは、ヒトＬＰＡのｍＲＮＡ（例えば、配列番号１；表１）の適切なＬＰＡ標的配列に対する相補性の領域をそれぞれ有するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドガイド（アンチセンス）鎖配列を提供する。アルゴリズムによって同定されたガイド鎖配列の一部は、サルＬＰＡのｍＲＮＡ（配列番号２；表１）の対応するＬＰＡ標的配列にも相補的である。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（ＤｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドとしてフォーマットされた）が生成され（表２）、アルゴリズムによって同定されたＬＰＡ標的配列に対する相補性の領域を有する固有のガイド鎖をそれぞれが有する。表２に提供されるＤｓｉＲＮＡのパッセンジャー（センス）鎖は、アルゴリズムによって同定された固有のヒトＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列を含む。
【0189】
【表1】
【0190】
【表2-1】
【表2-2】
【表2-3】
【表2-4】
【表2-5】
【表2-6】
【表2-7】
【表2-8】
【表2-9】
【表2-10】
【表2-11】
【表2-12】
【表2-13】
【表2-14】
【表2-15】
【表2-16】
【表2-17】
【表2-18】
【表2-19】
【表2-20】
【表2-21】
【表2-22】
【0191】
インビトロでの細胞ベースのアッセイ
【0192】
表２に列挙されているＤｓｉＲＮＡのそれぞれがＬＰＡ発現を阻害する能力は、インビトロでの細胞ベースのアッセイを使用して決定された。簡潔に述べると、ヒトＬＰＡ遺伝子を安定的に発現するヒト胎児腎２９３（ＨＥＫ２９３）細胞またはＨｅｐＧ２細胞に、マルチウェル細胞培養プレートの別々のウェルで０．５ｎＭの表２に列挙したＤｓｉＲＮＡのそれぞれをトランスフェクトした。細胞は、トランスフェクション後２４時間維持され、次いで、トランスフェクトされた細胞からの残存したＬＰＡのｍＲＮＡの量が、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ベースのｑＰＣＲアッセイを使用して決定された。２つのｑＰＣＲアッセイ、３’アッセイと５’アッセイを使用して、６－カルボキシフルオレセイン（６－ＦＡＭ）にコンジュゲートしたＰＣＲプローブを使用して測定したＬＰＡのｍＲＮＡレベルを決定した。
【0193】
表２に列挙したＤｓｉＲＮＡがＬＰＡ発現を阻害する能力を評価するためのＨＥＫ２９３及びＨｅｐＧ２細胞ベースのアッセイの結果を、それぞれ図１～４及び図５に示す。ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチド（ＧａｌＸＣ－ＬＰＡ－３６７５、配列番号１１８８及び１１８９）でトランスフェクトされた細胞を陽性対照として使用した。モックトランスフェクト細胞と比較した場合、ＤｓｉＲＮＡトランスフェクト細胞に約１５％～２０％以下のＬＰＡのｍＲＮＡが残る結果をもたらしたＤｓｉＲＮＡは、一般に、さらなる評価のために標的ｍＲＮＡ発現の適切な量のノックダウンまたは減少を提供する配列を含むと考えられた。図１～５に、ＤｓｉＲＮＡでトランスフェクトされた細胞に残るＬＰＡのｍＲＮＡのパーセントを、示されているように、時間を一致させた対照細胞と比較して示す（３’アッセイ＝円の形；５’アッセイ＝三角形の形）。
【0194】
ＤｓｉＲＮＡヒットをさらに評価するために、表２に列挙したＤｓｉＲＮＡのサブセットを試験して、２つの異なるＤｓｉＲＮＡ濃度でインビトロでの細胞ベースのアッセイを使用してＬＰＡ発現を阻害する能力を決定した（図６及び図７）。簡潔に述べると、ヒトＬＰＡ遺伝子を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞に、マルチウェル細胞培養プレートの別々のウェルで０．１ｎＭ及び０．５ｎＭでＤｓｉＲＮＡをトランスフェクトした。細胞は、トランスフェクション後２４時間維持され、次いで、トランスフェクトされた細胞からの残存したＬＰＡのｍＲＮＡの量が、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ベースのｑＰＣＲアッセイを使用して決定された。２つのｑＰＣＲアッセイ、３’アッセイと５’アッセイを使用して、ヘキサクロロフルオレセイン（ＨＥＸ）にコンジュゲートしたＰＣＲプローブを使用して測定したＬＰＡのｍＲＮＡレベルを決定した。非トランスフェクト細胞（ＵＴ）、モックトランスフェクト細胞（Ｍｏｃｋ）、及び対照オリゴヌクレオチドでトランスフェクトされた細胞（ＮＣ１、配列番号１１９１及び１１９２；ＮＣ５、配列番号１１９３及び１１９４；ならびにＮＣ７、配列番号１１９５及び１１９６）を陰性対照として使用した。図６及び図７に示すように、示されたＤｓｉＲＮＡでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞に残るＬＰＡのｍＲＮＡのパーセントは、３’アッセイ及び５’アッセイからのＬＰＡのｍＲＮＡレベルの平均であり、時間を一致させ、モックトランスフェクトされた対照ＨＥＫ２９３細胞に対して正規化される。
【0195】
まとめると、これらの結果は、対照細胞と比較してＤｓｉＲＮＡトランスフェクト細胞におけるＬＰＡのｍＲＮＡの減少した量によって決定されるとき、ヒトＬＰＡのｍＲＮＡを標的とするように設計されたＤｓｉＲＮＡが細胞内のＬＰＡ発現を阻害することを示している。これらの結果は、ＤｓｉＲＮＡを含むヌクレオチド配列が、ＬＰＡ発現を阻害するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを生成するのに有用であることを示している。さらに、これらの結果は、複数のＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列が、ＬＰＡ発現のＲＮＡｉを介した阻害に適していることを示している。
【0196】
実施例３：インビボでのＬＰＡ発現のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド阻害
実施例２に記載の細胞ベースのアッセイでスクリーニングされたＤｓｉＲＮＡのうち、１４個のＤｓｉＲＮＡのヌクレオチド配列が、インビボでのさらなる評価のために選択された。簡潔に述べると、１４個の選択されたＤｓｉＲＮＡのヌクレオチド配列を使用して、３６－ｍｅｒのパッセンジャー鎖と２２－ｍｅｒのガイド鎖を有する、ニックの入ったテトラループＧａｌＮＡｃコンジュゲート構造（本明細書では「ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチド」と呼ばれる）を含む１４個の対応する二本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを生成した（表３）。さらに、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドのパッセンジャー鎖及びガイド鎖を含むヌクレオチド配列は、修飾ヌクレオチド及びホスホロチオエート結合の明確なパターンを有する（例えば、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドの一般構造及び化学修飾パターン（Ｍ１、Ｍ２、及びＭ３）の概略図については図１０を参照されたい）。テトラループを構成する３つのアデノシンヌクレオチドは、それぞれＧａｌＮＡｃ部分（ＣＡＳ番号：１４１３１－６０－３）に結合している。
実施例２に記載の細胞ベースのアッセイでスクリーニングされたＤｓｉＲＮＡのうち、１４個のＤｓｉＲＮＡのヌクレオチド配列が、インビボでのさらなる評価のために選択された。簡潔に述べると、１４個の選択されたＤｓｉＲＮＡのヌクレオチド配列を使用して、３６－ｍｅｒのパッセンジャー鎖と２２－ｍｅｒのガイド鎖を有する、ニックの入ったテトラループＧａｌＮＡｃコンジュゲート構造（本明細書では「ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチド」と呼ばれる）を含む１４個の対応する二本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを生成した（表３）。さらに、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドのパッセンジャー鎖及びガイド鎖を含むヌクレオチド配列は、修飾ヌクレオチド及びホスホロチオエート結合の明確なパターンを有する（例えば、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドの一般構造及び化学修飾パターン（Ｍ１、Ｍ２、及びＭ３）の概略図については図１０を参照されたい）。テトラループを構成する３つのアデノシンヌクレオチドは、それぞれＧａｌＮＡｃ部分（ＣＡＳ番号：１４１３１－６０－３）に結合している。
【0197】
【表3】
【0198】
マウス研究
【0199】
表３に列挙されるＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドをＨＤＩマウスモデルで評価した。ＨＤＩマウスは、肝細胞でヒトＬＰＡのｍＲＮＡを一過性に発現するように操作されていた。ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドであるＬＰＡ－３６７５－Ｍ２をベンチマーク対照として使用した。簡潔に述べると、６～８週齢のメスのＣＤ－１マウス（ｎ＝５）を、示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドの、０．５ｍｇ／ｋｇの用量レベル（図８）、または０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、及び１ｍｇ／ｋｇの用量レベル（図９）で皮下処理した。３日（７２時間）後、ユビキタスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列の制御下で完全なヒトＬＰＡ遺伝子をコードするＤＮＡプラスミドをマウスに流体力学的に注入（ＨＤＩ）した。ＤＮＡプラスミド導入の１日後、マウスから肝臓試料を採取した。これらのマウスに由来する全ＲＮＡを、同量のＰＢＳのみで処理したマウスと比較して、ＬＰＡのｍＲＮＡのｑＲＴ－ＰＣＲ分析に供した。値は、プラスミドに含まれるＮｅｏＲ遺伝子を使用して、トランスフェクション効率について正規化された。
【0200】
図８に示されるように、示されるＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドは、ＰＢＳで処理されたマウスと比較して、オリゴヌクレオチドで処理されたＨＤＩマウスからの肝臓試料中のＬＰＡのｍＲＮＡの量の減少によって決定されるとき、ＬＰＡ発現を阻害した。ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドがＬＰＡ発現を阻害する能力をさらに評価するために、それぞれ異なる化学修飾パターン（Ｍ２及びＭ３）を有する２つのＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチド配列（ＬＰＡ－２９００及びＬＰＡ－３６７５）を、３つの異なる濃度（０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、及び１．０ｍｇ／ｋｇ）で上述のＨＤＩマウスにおいてＬＰＡ発現を阻害するそれらの能力について試験した。図９に示されるように、示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドは、用量依存的にＨＤＩマウスにおけるＬＰＡ発現を阻害した。
【0201】
まとめると、これらの結果は、ヒトＬＰＡのｍＲＮＡを標的とするように設計されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドが、ＰＢＳで処理した対照マウスと比較したＨＤＩマウス肝臓のＬＰＡのｍＲＮＡの量の減少によって決定されるとき、マウスにおけるＬＰＡ発現を阻害することを示している。これらの結果に基づいて、ＨＤＩマウスで評価された１４個のＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドのうち１０個が、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）でのＬＰＡ発現を阻害するそれらの能力の評価のために選択された。表４に列挙された１０個のＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドは、図１０に記載されたパターンＭ１、Ｍ２、またはＭ３を有する化学的に修飾されたヌクレオチドを含む。
【0202】
【表4】
【0203】
非ヒト霊長類（ＮＨＰ）研究
【0204】
表４に列挙されるＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドをカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）で評価した。この研究では、サルの平均体重（約５．４ｋｇ）が対照群と実験群の間で同等になるように、サルをグループ分けする。それぞれのコホートには、２匹のオス対象と３匹のメス対象が含まれる。ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドは、研究０日目に皮下投与した。血液試料は、研究－８日目、－５日目、及び０日目に採取し、投与後毎週採取した。超音波ガイド下コアニードル肝生検は、研究２８日目、５６日目、及び８４日目に採取された。それぞれの時点で、肝生検試料に由来する全ＲＮＡをｑＲＴ－ＰＣＲ分析に供し、同等量のＰＢＳで処理したサルと比較して、オリゴヌクレオチドで処理したサルのＬＰＡのｍＲＮＡを測定した。データを正規化するために、２つの参照遺伝子、ＰＰＩＢ及び１８Ｓ ｒＲＮＡの幾何平均に対して測定を行った。図１１Ａ（２８日目）、図１１Ｂ（５６日目）、及び図１１Ｃ（８４日目）に示されるように、表４に列挙されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドによるＮＨＰの処理は、ＰＢＳで処理されたＮＨＰと比較して、オリゴヌクレオチドで処理されたＮＨＰ由来の肝臓試料におけるＬＰＡのｍＲＮＡの量の減少によって決定されるとき、肝臓におけるＬＰＡ発現を阻害した。処理されたＮＨＰの肝臓試料中のプラスミノーゲン（ＰＬＧ）のｍＲＮＡの量も決定され、図１１Ｄに示されている。同じＮＨＰ研究から、ＬＰＡ発現の阻害を、処理されたＮＨＰからのａｐｏ（ａ）タンパク質血清をＥＬＩＳＡによって測定することによっても決定した。図１２に示されるように、ＰＢＳで処理したＮＨＰと比較して、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドで処理したＮＨＰでは、血清ａｐｏ（ａ）タンパク質の大幅な減少が観察された。投与前の３つの試料の値を平均して１００％に設定し、データは、投与前の平均と比較した相対値として報告されている。まとめると、これらの結果は、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドによるＮＨＰの処理により、肝臓におけるＬＰＡのｍＲＮＡの量が減少し、血清におけるａｐｏ（ａ）タンパク質の量が減少したことを示している。
【0205】
まとめると、これらの結果は、ヒトＬＰＡのｍＲＮＡを標的とするように設計されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＬＰＡオリゴヌクレオチドが、（処理動物におけるＬＰＡのｍＲＮＡ及びａｐｏ（ａ）タンパク質の量の減少によって決定されるとき）インビボでＬＰＡ発現を阻害することを示している。
【0206】
配列表
次の核酸及び／またはアミノ酸の配列は、上記の開示で言及されており、参照のために以下に提供される。
次の核酸及び／またはアミノ酸の配列は、上記の開示で言及されており、参照のために以下に提供される。
【0207】
【表5-1】
【表5-2】
【表5-3】
【表5-4】
【表5-5】
【表5-6】
【表5-7】
【表5-8】
【表5-9】
【表5-10】
【表5-11】
【表5-12】
【表5-13】
【表5-14】
【表5-15】
【表5-16】
【表5-17】
【表5-18】
【表5-19】
【表5-20】
【表5-21】
【表5-22】
【表5-23】
【表5-24】
【表6-1】
【表6-2】
【表6-3】
【表6-4】
【表6-5】
【表6-6】
【表6-7】
【表6-8】
【表7-1】
【表7-2】
【表7-3】
【表7-4】
ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシド；ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシド；ｓ＝ホスホロチオエート；ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵｓ＝
【化7】
【化8】
〔１〕ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２〕前記センス鎖が、１５～５０個のヌクレオチドの長さである、前記〔１〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３〕前記センス鎖が、１８～３６個のヌクレオチドの長さである、前記〔１〕または〔２〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４〕前記アンチセンス鎖が、１５～３０個のヌクレオチドの長さである、前記〔１〕～〔３〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５〕前記アンチセンス鎖が２２個のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖と前記センス鎖が、少なくとも１９個のヌクレオチドの長さ、任意選択で少なくとも２０個のヌクレオチドの長さの二重鎖領域を形成する、前記〔１〕～〔４〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６〕前記相補性の領域が、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で少なくとも２０個のヌクレオチドの長さである、前記〔１〕～〔５〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔７〕前記センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１がＳ２と相補的であり、ＬがＳ１とＳ２との間に３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、前記〔１〕～〔６〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔８〕ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが、１５～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、アンチセンス鎖とを含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔９〕ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが、１５～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、１５～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖とを含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１０〕ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが、１５～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、アンチセンス鎖とを含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１１〕ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが、１８～３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、アンチセンス鎖とを含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１２〕ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが、１８～３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖とを含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１３〕ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが、１８～３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖とを含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１がＳ２と相補的であり、ＬがＳ１とＳ２との間に３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１４〕ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが、３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖とを含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１がＳ２と相補的であり、ＬがＳ１とＳ２との間に３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１５〕ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが、３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖とを含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が少なくとも１９個のヌクレオチドの長さ、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さの二重鎖領域を形成し、前記センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１がＳ２と相補的であり、ＬがＳ１とＳ２との間に３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、１９個の連続するヌクレオチドの長さであり、任意選択で２０個のヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１６〕Ｌがトリループまたはテトラループである、前記〔７〕及び〔１３〕～〔１５〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１７〕Ｌがテトラループである、前記〔１６〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１８〕前記テトラループが配列５’－ＧＡＡＡ－３’を含む、前記〔１７〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔１９〕Ｓ１とＳ２が１～１０個のヌクレオチドの長さであり、同じ長さを有する、前記〔１６〕～〔１８〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２０〕Ｓ１とＳ２が、１個のヌクレオチド、２個のヌクレオチド、３個のヌクレオチド、４個のヌクレオチド、５個のヌクレオチド、６個のヌクレオチド、７個のヌクレオチド、８個のヌクレオチド、９個のヌクレオチド、または１０個のヌクレオチドの長さである、前記〔１９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２１〕Ｓ１とＳ２が６個のヌクレオチドの長さである、前記〔２０〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２２〕前記ステムループが配列５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号１９０）を含む、前記〔１６〕～〔２１〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２３〕前記アンチセンス鎖が、１個以上のヌクレオチドの長さの３’突出配列を含む、前記〔１〕～〔２２〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２４〕前記３’突出配列が２個のヌクレオチドの長さであり、任意選択で前記３’突出配列がＧＧである、前記〔２３〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２５〕前記オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾ヌクレオチドを含む、先行態様のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２６〕前記修飾ヌクレオチドが、２’修飾を含む、前記〔２５〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２７〕前記２’修飾が、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸から選択される修飾である、前記〔２６〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２８〕前記オリゴヌクレオチドを構成するすべてのヌクレオチドが修飾され、任意選択で、前記修飾が、２’－フルオロ及び２’－Ｏ－メチルから選択される２’－修飾である、前記〔２５〕～〔２７〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔２９〕前記オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾ヌクレオチド間結合を含む、先行態様のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３０〕前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合である、前記〔２９〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３１〕前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素が、ホスフェート類似体を含む、先行態様のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３２〕前記ホスフェート類似体が、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、またはマロニルホスホネートであり、任意選択で、前記ホスフェート類似体が、５’－メトキシホスホネート－４’－オキシを含む４’－ホスフェート類似体である、前記〔３１〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３３〕前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドが、１つ以上の標的化リガンドにコンジュゲートされる、先行態様のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３４〕それぞれの標的化リガンドが、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、または脂質を含む、前記〔３３〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３５〕それぞれの標的化リガンドがＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む、前記〔３３〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３６〕前記ＧａｌＮＡｃ部分が、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分、または四価ＧａｌＮＡｃ部分である、前記〔３５〕に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３７〕前記ステムループのＬの４個までのヌクレオチドがそれぞれ一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされる、前記〔１６〕～〔３２〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３８〕前記センス鎖が、配列番号３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、及び４０３のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３７〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔３９〕前記アンチセンス鎖が、配列番号７８８、７８９、７９０、７９１、７９２、７９３、７９４、７９５、７９６、７９７、７９８、７９９、８００、８０１、８０２、及び８０３のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３８〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４０〕前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド：
（ａ） それぞれ配列番号３９３と７９３；
（ｂ） それぞれ配列番号３８８と７８８；
（ｃ） それぞれ配列番号３８９と７８９；
（ｄ） それぞれ配列番号３９０と７９０；
（ｅ） それぞれ配列番号３９１と７９１；
（ｆ） それぞれ配列番号３９２と７９２；
（ｇ） それぞれ配列番号３９４と７９４；
（ｈ） それぞれ配列番号３９５と７９５；
（ｉ） それぞれ配列番号３９６と７９６；
（ｊ） それぞれ配列番号３９７と７９７；
（ｋ） それぞれ配列番号３９８と７９８；
（ｌ） それぞれ配列番号３９９と７９９；
（ｍ） それぞれ配列番号４００と８００；
（ｎ） それぞれ配列番号４０１と８０１；
（ｏ） それぞれ配列番号４０２と８０２；及び
（ｐ） それぞれ配列番号４０３と８０３。
〔４１〕前記センス鎖が配列番号３９３に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９３に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４２〕前記センス鎖が配列番号３８８に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７８８に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４３〕前記センス鎖が配列番号３８９に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７８９に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４４〕前記センス鎖が配列番号３９０に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９０に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４５〕前記センス鎖が配列番号３９１に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９１に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４６〕前記センス鎖が配列番号３９２に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９２に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４７〕前記センス鎖が配列番号３９４に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９４に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４８〕前記センス鎖が配列番号３９５に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９５に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔４９〕前記センス鎖が配列番号３９６に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９６に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５０〕前記センス鎖が配列番号３９７に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９７に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５１〕前記センス鎖が配列番号３９８に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９８に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５２〕前記センス鎖が配列番号３９９に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９９に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５３〕前記センス鎖が配列番号４００に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号８００に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５４〕前記センス鎖が配列番号４０１に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号８０１に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５５〕前記センス鎖が配列番号４０２に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号８０２に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５６〕前記センス鎖が配列番号４０３に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号８０３に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔１〕～〔３９〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５７〕ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖を構成するすべてのヌクレオチドが修飾されており、前記アンチセンス鎖が配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５８〕ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖を構成するすべてのヌクレオチドが修飾され、前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素がホスフェート類似体を含み、前記アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔５９〕ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖を構成するすべてのヌクレオチドが修飾され、前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素がホスフェート類似体を含み、前記アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６０〕ＬＰＡ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドがセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖を構成するすべてのヌクレオチドが修飾され、前記アンチセンス鎖と前記センス鎖が１つ以上の２’－フルオロ及び２’－Ｏ－メチルで修飾されたヌクレオチドならびに少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含み、前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素がホスフェート類似体を含み、前記アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
〔６１〕ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象を治療するための方法であって、前記方法が、先行態様のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたはその医薬組成物の治療有効量を前記対象に投与し、それによって前記対象を治療することを含む、前記方法。
〔６２〕前記〔１〕～〔６０〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される担体、送達剤、または賦形剤と、を含む医薬組成物。
〔６３〕オリゴヌクレオチドを対象に送達する方法であって、前記方法が前記〔６１〕に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
〔６４〕細胞、細胞の集団、または対象におけるＬＰＡ発現を減少させる方法であって、前記方法が：
ｉ． 前記細胞または前記細胞の集団を、前記〔１〕～〔６０〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは前記〔６２〕に記載の医薬組成物と接触させるステップ；または
ｉｉ． 前記対象に、前記〔１〕～〔８３〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは前記〔８５〕に記載の医薬組成物を投与するステップ、を含む、前記方法。
〔６５〕前記ＬＰＡ発現を減少させることが、ＬＰＡのｍＲＮＡの量もしくはレベル、ＬＰＡタンパク質の量もしくはレベル、またはその両方を減少させることを含む、前記〔６４〕に記載の方法。
〔６６〕前記対象が、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する、前記〔６４〕または〔６５〕に記載の方法。
〔６７〕前記ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態が、心臓代謝疾患、任意選択でアテローム性動脈硬化症、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨである、前記〔６６〕に記載の方法。
〔６８〕前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物が、第２の組成物または治療剤と組み合わせて投与される、前記〔６１〕及び〔６３〕～〔６７〕のいずれか１項に記載の方法。
〔６９〕ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象を治療するための方法であって、前記方法が、センス鎖とアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの治療有効量を前記対象に投与することを含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が二重鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号４～３８７のうちのいずれか１つのＬＰＡのｍＲＮＡ標的配列に対する相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、前記方法。
〔７０〕ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象を治療するための方法であって、前記方法が、表５に示される行から選択されるセンス鎖とアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたはその医薬組成物の治療有効量を前記対象に投与し、それによって前記対象を治療することを含む、前記方法。
〔７１〕ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象を治療するための方法であって、前記方法が、センス鎖とアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの治療有効量を前記対象に投与することを含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖が以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、前記方法：
（ａ） それぞれ配列番号３９３と７９３；
（ｂ） それぞれ配列番号３８８と７８８；
（ｃ） それぞれ配列番号３８９と７８９；
（ｄ） それぞれ配列番号３９０と７９０；
（ｅ） それぞれ配列番号３９１と７９１；
（ｆ） それぞれ配列番号３９２と７９２；
（ｇ） それぞれ配列番号３９４と７９４；
（ｈ） それぞれ配列番号３９５と７９５；
（ｉ） それぞれ配列番号３９６と７９６；
（ｊ） それぞれ配列番号３９７と７９７；
（ｋ） それぞれ配列番号３９８と７９８；
（ｌ） それぞれ配列番号３９９と７９９；
（ｍ） それぞれ配列番号４００と８００；
（ｎ） それぞれ配列番号４０１と８０１；
（ｏ） それぞれ配列番号４０２と８０２；及び
（ｐ） それぞれ配列番号４０３と８０３。
〔７２〕前記センス鎖が配列番号３９３に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９３に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔７３〕前記センス鎖が配列番号３８８に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７８８に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔７４〕前記センス鎖が配列番号３８９に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７８９に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔７５〕前記センス鎖が配列番号３９０に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９０に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔７６〕前記センス鎖が配列番号３９１に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９１に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔７７〕前記センス鎖が配列番号３９２に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９２に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔７８〕前記センス鎖が配列番号３９４に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９４に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔７９〕前記センス鎖が配列番号３９５に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９５に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔８０〕前記センス鎖が配列番号３９６に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９６に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔８１〕前記センス鎖が配列番号３９７に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９７に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔８２〕前記センス鎖が配列番号３９８に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９８に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔８３〕前記センス鎖が配列番号３９９に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号７９９に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔８４〕前記センス鎖が配列番号４００に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号８００に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔８５〕前記センス鎖が配列番号４０１に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号８０１に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔８６〕前記センス鎖が配列番号４０２に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号８０２に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔８７〕前記センス鎖が配列番号４０３に示されるヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号８０３に示されるヌクレオチド配列を含む、前記〔７１〕に記載の方法。
〔８８〕前記ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態が、心臓代謝疾患、任意選択でアテローム性動脈硬化症、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨである、前記〔６９〕～〔８７〕のいずれか１項に記載の方法。
〔８９〕ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態の治療のための、任意選択で心臓代謝疾患、任意選択でアテローム性動脈硬化症、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨの治療のための医薬品の製造における、前記〔１〕～〔６０〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは前記〔６２〕に記載の医薬組成物の使用。
〔９０〕ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態の治療における、任意選択で心臓代謝疾患、任意選択でアテローム性動脈硬化症、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨの治療のための使用のための、または使用に適用可能な、前記〔１〕～〔６０〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは前記〔６２〕に記載の医薬組成物。
〔９１〕前記〔１〕～〔６０〕のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと、任意選択の薬学的に許容される担体と、ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態を有する対象への投与のための使用説明書を含む添付文書と、を含むキット。
〔９２〕前記ＬＰＡ発現に関連する疾患、障害、または状態が心臓代謝疾患、任意選択でアテローム性動脈硬化症、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨである、前記〔８９〕に記載の使用、前記〔９０〕に記載の使用のための、もしくは使用に適用可能な、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドもしくは医薬組成物、または前記〔９１〕に記載のキット。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11A】
【図11B】
【図11C】
【図11D】
【図12】
【配列表】