(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B1)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-11-05
(45)【発行日】2024-11-13
(54)【発明の名称】チョウザメ卵を含む混合物の高圧処理物からなる組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 8/98 20060101AFI20241106BHJP
A61K 8/34 20060101ALI20241106BHJP
A61Q 19/08 20060101ALI20241106BHJP
A61K 35/60 20060101ALI20241106BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20241106BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20241106BHJP
【ＦＩ】
A61K8/98
A61K8/34
A61Q19/08
A61K35/60
A61P29/00
A61P17/00
【請求項の数】
2
(21)【出願番号】P 2024101665
(22)【出願日】2024-06-25
【審査請求日】2024-06-25
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】504406014
【氏名又は名称】株式会社粧薬研究所
(74)【代理人】
【識別番号】100145126
【弁理士】
【氏名又は名称】金丸 清隆
(72)【発明者】
【氏名】若命 浩二
(72)【発明者】
【氏名】小山 直文
(72)【発明者】
【氏名】瀬崎 卓也
(72)【発明者】
【氏名】野中 佐智子
【審査官】佐々木 典子
(56)【参考文献】
【文献】特開２００８－１２７３２８（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００９－２５６２２３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０１４－１５９４９３（ＪＰ，Ａ）
【文献】韓国公開特許第１０－２０１７－０１２６３１６（ＫＲ，Ａ）
【文献】韓国登録特許第１２１１６５２（ＫＲ，Ｂ１）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ８／００－ ８／９９
Ａ６１Ｑ １／００－９０／００
Ａ６１Ｋ ３５／６０
Ａ６１Ｐ ２９／００
Ａ６１Ｐ １７／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
チョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとの混合物の高圧処理物からなる組成物であって、下記の（ａ）、（ｂ）および（ｃ）からなる群より選択される１または２以上の組成物；（ａ）抗炎症組成物、
（ｂ）美肌促進組成物、
（ｃ）育毛組成物。
【請求項2】
化粧料組成物である、請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、チョウザメ卵を含む混合物の高圧処理物からなる組成物に関し、詳細には、チョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとの混合物の高圧処理物からなる組成物であって、抗炎症組成物、美肌促進組成物および育毛組成物からなる群より選択される１または２以上の組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
チョウザメとは、チョウザメ（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ）属、ダウリアチョウザメ（Ｈｕｓｏ）属、シャベルノーズスタージョン（Ｓｃａｐｈｉｒｈｙｎｃｈｕｓ）属およびプセウドスカフィリンクス（Ｐｓｅｕｄｏｓｃａｐｈｉｒｈｙｎｃｈｕｓ）属を含む、チョウザメ（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒｉｄａｅ）科の多数の魚種についての慣用名である。高級食材として重宝されているキャビアは、一般には、チョウザメ（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ）属またはダウリアチョウザメ（Ｈｕｓｏ）属に属する雌のチョウザメの卵巣からの無精卵または卵を塩漬けしたものを指す。
【0003】
昨今、魚卵を原料とする化粧料が用いられている。その多くは、加水分解物や有機溶媒を用いた抽出物である。そのような魚卵としては、高級食材の原料となるチョウザメの卵も利用されており、例えば、１，３－ブチレングリコールと水との混合溶媒を用いて抽出したチョウザメ卵抽出物や、３０℃で水に任意の割合では相溶しない有機溶媒を用いてリン脂質を除いた後に１，３－ブチレングリコールを用いて抽出したチョウザメ卵抽出液が存在する（特許文献１，２）。また、魚卵を原料とする化粧料ではないものの、胎盤を高圧処理して得られたプラセンタエキスが存在する（特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【文献】特許第５２１０５１３号
【文献】特許第５５６１９１２号
【文献】特許第６１１７４５６号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
しかしながら、特許文献１および特許文献２には、１，３－ブチレングリコールのみを溶媒として用いて抽出したチョウザメ卵抽出物やチョウザメ卵抽出液については、比較例としてすら開示されておらず、示唆もない。従って、特許文献１または特許文献２と特許文献３とを組み合わせたとしても、チョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとの混合物の高圧処理物からなる組成物に想到することはできない。
【0006】
本発明は、チョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとの混合物の高圧処理物からなる組成物であって、マクロファージ増殖促進組成物、抗炎症組成物、ヒト線維芽細胞増殖促進組成物、ヒト表皮ケラチノサイト増殖促進組成物、美肌促進組成物および育毛組成物からなる群より選択される１または２以上の組成物、ならびに化粧料組成物を提供することを目的とし、特に、チョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとの混合物の高圧処理物からなる組成物であって、マクロファージの増殖を促進させるとともに、炎症性サイトカインおよび／またはＮＯ合成酵素が起因する炎症を抑制する抗炎症組成物；ヒト線維芽細胞あるいはヒト表皮ケラチノサイトの増殖を促進させるとともに、表皮や真皮においてヒアルロン酸の合成を促し、皮膚の張りを保ち、皮膚の結合力を強固にし、皮膚のバリア機能を向上させ、皮膚表面の強度や保水機能を高め、あるいは、皮膚の抗老化を促す美肌促進組成物；ヒト表皮ケラチノサイトの増殖を促進させるとともに、皮膚表面の強度を向上させ、育毛を促す育毛組成物；ならびにそれらの化粧料組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明者らは、鋭意研究の結果、チョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとの混合物の高圧処理物からなる組成物が、マクロファージ増殖促進効果、抗炎症効果、ヒト線維芽細胞増殖促進効果、ヒト表皮ケラチノサイト増殖促進効果、美肌促進効果、あるいは育毛効果を奏することを見いだし、下記の各発明を完成した。
【0008】
（１）チョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとの混合物の高圧処理物からなる組成物であって、下記の（ａ）、（ｂ）および（ｃ）からなる群より選択される１または２以上の組成物；
（ａ）抗炎症組成物、
（ｂ）美肌促進組成物、
（ｃ）育毛組成物。
（ａ）抗炎症組成物、
（ｂ）美肌促進組成物、
（ｃ）育毛組成物。
【0009】
（２）チョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとの混合物の高圧処理物からなる組成物であって、下記の（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）からなる群より選択される１または２以上の組成物；
（ｄ）マクロファージ増殖促進組成物、
（ｅ）ヒト線維芽細胞増殖促進組成物、
（ｆ）ヒト表皮ケラチノサイト増殖促進組成物。
（ｄ）マクロファージ増殖促進組成物、
（ｅ）ヒト線維芽細胞増殖促進組成物、
（ｆ）ヒト表皮ケラチノサイト増殖促進組成物。
【0010】
（３）化粧料組成物である、（１）または（２）に記載の組成物。
【発明の効果】
【0011】
本発明に係る高圧処理物からなる組成物や化粧料組成物によれば、マクロファージ、ヒト線維芽細胞、あるいは、ヒト表皮ケラチノサイトの増殖を促進させることができるとともに、特に炎症性サイトカインおよび／またはＮＯ合成酵素が起因する炎症を抑制し、表皮や真皮においてヒアルロン酸の合成を促し、皮膚の張りを保ち、皮膚の結合力を強固にし、皮膚のバリア機能を向上させ、皮膚表面の強度や保水機能を高め、皮膚の抗老化を促し、あるいは、皮膚表面の強度を向上させるとともに育毛を促すことができる。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【図1A】コントロール、ならびに、高圧処理物である（１）試料１、（２）試料２、（３）試料３および（４）試料４についての、マクロファージ（ＲＡＷ２６４．７細胞）の増殖率（％）を示す棒グラフ図である。
【図1B】コントロール、ならびに、高圧処理物である（１）試料５および（２）試料６についての、マクロファージ（ＲＡＷ２６４．７細胞）の増殖率を示す棒（％）グラフ図である。
【図2】コントロール、ならびに、高圧処理物ではない（１）試料７、（２）試料８および（３）試料９についての、マクロファージ（ＲＡＷ２６４．７細胞）の増殖率を示す棒グラフ図である。
【図3】コントロール、試料２、試料３および試料５についての、それらの濃度（μｇ／ｍＬ）とマクロファージの増殖率（％）との関係を示す折れ線グラフ図である。
【図4】コントロール、ＬＰＳ（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；大腸菌由来リポ多糖）、試料２、試料３、試料５、ＬＰＳ＋試料２、ＬＰＳ＋試料３、ＬＰＳ＋試料５についての、マクロファージ（ＲＡＷ２６４．７細胞）における（１）ＴＮＦ－αｍＲＮＡの発現量、（２）ｉＮＯＳｍＲＮＡの発現量および（３）ＩＬ－６ｍＲＮＡの発現量を示す棒グラフ図である。
【図5】コントロール、試料２、試料３および試料５についての、それらの濃度（μｇ／ｍＬ）とヒト線維芽細胞の増殖率（％）との関係を示す折れ線グラフ図である。
【図6】コントロール、試料２、試料３および試料５についての、ヒト線維芽細胞における（１）ＨＡＳ１ｍＲＮＡの発現量および（２）ＨＡＳ３ｍＲＮＡの発現量を示す棒グラフ図である。
【図7】コントロール、試料２、試料３および試料５についての、ヒト線維芽細胞における（１）ＣＯＬ１Ａ１ｍＲＮＡの発現量および（２）ＣＯＬ７Ａ１ｍＲＮＡの発現量を示す棒グラフ図である。
【図8】コントロール、試料２、試料３および試料５についての、それらの濃度（μｇ／ｍＬ）とヒト表皮ケラチノサイトの増殖率（％）との関係を示す折れ線グラフ図である。
【図9】コントロール、試料２、試料３および試料５についての、ヒト表皮ケラチノサイトにおける（１）ＯＣＬＮｍＲＮＡの発現量および（２）ＦＬＧｍＲＮＡの発現量を示す棒グラフ図である。
【図10】コントロール、試料２、試料３および試料５についての、ヒト表皮ケラチノサイトにおける（１）ＡＱＰ３ｍＲＮＡの発現量および（２）ＴＧＭ１ｍＲＮＡの発現量を示す棒グラフ図である。
【図11】コントロール、試料２、試料３および試料５についての、ヒト表皮ケラチノサイトにおけるＳＩＲＴ１ｍＲＮＡの発現量を示す棒グラフ図である。
【図12】コントロール、試料２、試料３および試料５についての、ヒト表皮ケラチノサイトにおけるＣＯＬ１７Ａ１ｍＲＮＡの発現量を示す棒グラフ図である。
【発明を実施するための形態】
【0013】
以下、本発明に係る剤について詳細に説明する。本発明に係る組成物は、チョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとの混合物の高圧処理物からなる組成物であって、マクロファージ増殖促進組成物、抗炎症組成物、ヒト線維芽細胞増殖促進組成物、ヒト表皮ケラチノサイト増殖促進組成物、美肌促進組成物および育毛組成物からなる群より選択される１または２以上の組成物である。
【0014】
本発明において用いられるチョウザメ卵は、チョウザメ目のチョウザメ科に分類される魚の卵であればよく、例えば、チョウザメ（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ）属、ダウリアチョウザメ（Ｈｕｓｏ）属、シャベルノーズスタージョン（Ｓｃａｐｈｉｒｈｙｎｃｈｕｓ）属およびプセウドスカフィリンクス（Ｐｓｅｕｄｏｓｃａｐｈｉｒｈｙｎｃｈｕｓ）属に属する魚の卵を挙げることができ、天然か養殖かを問わないが、ワシントン条約遵守の観点から養殖が好ましい。また、チョウザメからどのような手法により取り出された卵であるかは問われず、チョウザメを切開して取り出された卵やチョウザメから搾取された卵等、当業者において適宜選択可能な手法により取り出された卵であればよい。さらに、本発明に係る組成物の調製には、チョウザメから取り出された卵をそのまま用いてもよく、生理食塩水等で洗浄した卵や、本発明の特徴や効果を損なわない範囲で加工した卵を用いてもよい。あるいはそれらの卵を冷凍して保存した後、解凍して用いてもよい。
【0015】
本発明において用いられる１，３－ブチレングリコール（１，３－Ｂｕｔｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ）は、別名を１，３－ブタンジオール（１，３－Ｂｕｔａｎｅｄｉｏｌ）または１，３－ジヒドロキシブタン（１，３－Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔａｎｅ）といい、「ＢＧ」と略されることがある二価アルコールである。分子式はＣ４Ｈ１０Ｏ２であり、アセトアルデヒドから合成することができる。１，３－ブチレングリコールは化粧品や医薬品（外用剤）に用いられており、化粧品用途の目的としては、角層水分量増加による保湿や防腐補助、溶剤としての使用を挙げることができ、医薬品（外用剤）用途の目的としては、基剤としての使用、抗酸化、湿潤、粘稠、溶剤としての使用、溶解補助を挙げることができる。
【0016】
本発明において、「チョウザメ卵と濃度が１００％（ｖ／ｖ）の１，３－ブチレングリコールとの混合物」は、チョウザメ卵と濃度が１００％（ｖ／ｖ）の１，３－ブチレングリコールとを混合してなる混合物（チョウザメ卵と濃度が１００％（ｖ／ｖ）の１，３－ブチレングリコールとからなる混合物）の他、チョウザメ卵と、濃度が１００％（ｖ／ｖ）の１，３－ブチレングリコールと、本発明の特徴や効果を損なわない範囲で添加可能な物質との混合物が含まれることが好ましい。そのような場合の、本発明の特徴や効果を損なわない範囲で添加可能な物質としては特に限定されないが、例えば、エタノール、ブタノール、プロパノール等の１価アルコール類；プロピレングリコール、１，２－ヘキサンジオール、１，４－ペンタンジオール等の２価アルコール類；グリセリン等の多価アルコール類；水分等が考えられる。
【0017】
本発明において、「高圧処理物」とは、上述した所定の混合物が高圧処理された物質をいう。本発明における「高圧処理」とは高圧を加える処理をいい、本発明における「高圧」は５０ＭＰａ以上の圧力であれば特に限定されないが、５０ＭＰａ以上４００ＭＰａ以下の圧力であることが好ましく、６０ＭＰａ以上３００ＭＰａ以下の圧力であることがより好ましく、７０ＭＰａ以上２５０ＭＰａ以下の圧力であることがさらに好ましく、８０ＭＰａ以上２００ＭＰａ以下の圧力であることがよりさらに好ましく、９０ＭＰａ以上１５０ＭＰａ以下の圧力であることがもっとも好ましい。なお、本願明細書実施例においては、１００ＭＰａの圧力を好適な圧力として選択している。
【0018】
また、「高圧処理」における温度条件としては、常温以上であって、かつ、タンパク質が凝集して不可逆とならない温度条件であれば特に限定されないが、３０℃以上８０℃未満の温度条件であることが好ましく、３５℃以上７５℃以下の温度条件であることがより好ましく、４０℃以上７０℃以下の温度条件であることがさらに好ましく、４５℃以上６５℃以下の温度条件であることがよりさらに好ましく、５０℃以上６０℃以下の温度条件であることがもっとも好ましい。なお、本願明細書実施例においては、５５℃の温度条件を好適な温度条件として選択している。
【0019】
また、「高圧処理」に要する時間は、処理の対象である混合物の量や得られる処理物の量の設定に応じて、適宜選択することができる。
【0020】
「抗炎症組成物」とは、炎症を抑制する組成物をいい、本発明においては特に、炎症性サイトカインおよび／またはＮＯ合成酵素が起因する炎症を抑制する組成物をいう。そのような抗炎症組成物としては、マクロファージの増殖を促進し、マクロファージにおいてＴＮＦ－α（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ－α）ｍＲＮＡ、ｉＮＯＳ（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ Ｓｙｎｔｈａｓｅ；ＮＯＳ２）ｍＲＮＡおよびＩＬ－６（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６）ｍＲＮＡからなる群から選択される１または２以上のｍＲＮＡの発現を抑制し、ＴＮＦ－α、ｉＮＯＳ（ＮＯＳ２）およびＩＬ－６からなる群から選択される１または２以上のサイトカインおよび／またはＮＯ合成酵素が起因する炎症を抑制し得る組成物を挙げることができる。
【0021】
「美肌促進組成物」とは、美肌の維持や美肌の形成を促進する組成物をいい、本発明においては特に、表皮や真皮においてヒアルロン酸の合成を促す組成物、皮膚の張りを保つ組成物、皮膚の結合力を強固にする組成物、皮膚のバリア機能を向上させる組成物、皮膚表面の強度を高める組成物、皮膚の保水機能を高める組成物および皮膚の抗老化を促す組成物からなる群から選択される１または２以上の組成物に該当する組成物をいう。また、そのような組成物は、例えば、顔面のしみ、そばかす、くま、くすみを軽減または予防するといった効果を奏する組成物であってもよい。そのような美肌促進組成物としては、ヒト線維芽細胞の増殖を促進し、ヒト線維芽細胞においてＨＡＳ１（Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ Ｓｙｎｔｈａｓｅ Ｉ）ｍＲＮＡ、ＨＡＳ３（Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ Ｓｙｎｔｈａｓｅ ＩＩＩ）ｍＲＮＡ、ＣＯＬ１Ａ１（Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ Ｉ Ａｌｐｈａ １）ｍＲＮＡおよびＣＯＬ７Ａ１（Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ ＶＩＩ Ａｌｐｈａ １）ｍＲＮＡからなる群から選択される１または２以上のｍＲＮＡの発現を促進し、ＨＡＳ１、ＨＡＳ３、ＣＯＬ１Ａ１およびＣＯＬ７Ａ１からなる群から選択される１または２以上のヒアルロン酸合成酵素および／またはコラーゲンを皮膚において産生し得る組成物を挙げることができる他、ヒト表皮ケラチノサイトの増殖を促進し、ヒト表皮ケラチノサイトにおいてＯＣＬＮ（Ｏｃｃｌｕｄｉｎ）ｍＲＮＡ、ＦＬＧ（Ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）ｍＲＮＡ、ＡＱＰ３（Ａｑｕａｐｏｒｉｎ ＩＩＩ）ｍＲＮＡ、ＴＧＭ１（Ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ Ｉ）ｍＲＮＡおよびＳＩＲＴ１（Ｓｉｌｅｎｔ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ Ｉ）ｍＲＮＡからなる群から選択される１または２以上のｍＲＮＡの発現を促進し、ＯＣＬＮ、ＦＬＧ、ＡＱＰ３、ＴＧＭ１およびＳＩＲＴ１からなる群から選択される１または２以上のタンパク質および／または酵素を皮膚において産生し得る組成物を挙げることができる。
【0022】
「育毛組成物」とは、産毛を含め、既存の毛を成長させる組成物、あるいは、既存の毛を維持する組成物の他、新しい毛の生成を促進する組成物や既存の毛が抜けることを予防する組成物をいう。本発明においては特に、皮膚表面の強度を向上させるとともに育毛を促す組成物をいう。そのような育毛組成物としては、ヒト表皮ケラチノサイトの増殖を促進し、ヒト毛包ケラチノサイトにおいてＣＯＬ１７Ａ１（Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ ＸＶＩＩ Ａｌｐｈａ １）ｍＲＮＡの発現を促進し、ＣＯＬ１７Ａ１を皮膚において産生し得る組成物を挙げることができる。
【0023】
「マクロファージ増殖促進組成物」、「ヒト線維芽細胞増殖促進組成物」、「ヒト表皮ケラチノサイト増殖促進組成物」とは、それぞれ、マクロファージの増殖を促進する組成物、ヒト線維芽細胞の増殖を促進する組成物、ヒト表皮ケラチノサイトの増殖を促進する組成物をいう。
【0024】
本発明における化粧料組成物は、本発明の特徴を損なわない範囲で、化粧品の分野において通常用いられる添加成分を適宜配合して用いることができ、そのような添加成分としては、例えば、保湿剤、防腐剤、真珠光沢材料、酸化防止剤、色素、増粘剤およびｐＨ調整剤から選択される１種または２種以上の添加成分を挙げることができる。また、芳香剤、抗菌剤、各種の油性成分、紫外線吸収剤、活性酸素除去剤、抗酸化剤、抗微生物剤、ミネラル、アミノ酸などを添加して用いることができ、さらには、公知の美白成分を添加して用いてもよい。
【0025】
本発明に係る組成物の製造方法は、（ｉ）チョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとを混合して混合物を調製する工程（混合物調製工程）、（ｉｉ）混合物調製工程（ｉ）において調製した混合物を高圧処理して高圧処理物を調製する工程（高圧処理物調製工程）、（ｉｉｉ）高圧処理物調製工程（ｉｉ）において調製した高圧処理物をろ過して残渣を除去してろ液を得る工程（ろ過工程）の、以上（ｉ）～（ｉｉｉ）の工程を備える。
【0026】
混合物調製工程（ｉ）におけるチョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとの混合は、当業者において適宜可能な手法により行うことができ、また、所望に応じ、本発明の特徴や効果を損なわない範囲で添加可能な物質を添加して混合することができる。
【0027】
高圧処理物調製工程（ｉｉ）における高圧処理は、混合物調製工程（ｉ）において調製した混合物について、上述した圧力条件や温度条件の下、当業者において適宜可能な手法により行うことができる。そのような高圧処理は、高圧処理装置を用いて行うのが一般であり、そのような高圧処理装置としては、例えば、各種まるごとエキス装置（（株）東洋高圧）を挙げることができる。
【0028】
ろ過工程（ｉｉｉ）におけるろ過は、高圧処理物調製工程（ｉｉ）において調製した高圧処理物について、当業者において適宜可能な手法により行うことができる。そのようなろ過は、ろ過器具を用いて行うのが一般であり、そのようなろ過器具としては、例えば、ストッキングタイプ水切り袋や各種メッシュを挙げることができる。
【0029】
なお、出願時において本願発明に係る組成物を、その構造または特性により直接特定するためには、まず、チョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとの混合物の高圧処理物を分画しなければならないが、例えば、クロマトグラフィーによる分画においては、多大な時間と費用を要して、極めて多種類の分離樹脂と展開溶媒の中から適切な分離樹脂と展開溶媒を選択しなければならず、そのうえで、多種類の分画液から抗炎症作用、美肌促進作用、育毛作用、マクロファージ増殖促進作用、ヒト線維芽細胞増殖促進作用および／またはヒト表皮ケラチノサイト増殖促進作用を指標として有効成分を含有する分画液を特定しなければならない。さらに、前記作用を指標にした目的分画液の取得を行う実験を、目的有効成分を純品として単離するまで繰り返さなければならない。この点、有効成分は単一でなく、複数種類にのぼる場合があることから、当該実験には多大な労力を要する。
【0030】
たとえ、有効成分の単離に成功した場合であっても、その化学構造をＮＭＲやＩＲ、Ｍａｓｓ、化学分解反応等を駆使して、おおよそでも有効成分の構造決定を行わなければならず、さらにその決定した化学構造を、本願発明に係るの中から選択するのではなく、全く異なる手段によって当該想定される化合物を化学合成し、その純品を単離しなければならない。
【0031】
そしてさらには、当該高圧処理物から得られる単離された純品と、当該化学合成された純品であって当該高圧処理物から得られる単離された純品と化学構造が同じ純品とが、抗炎症作用、美肌促進促進作用、育毛作用、マクロファージ増殖促進作用、ヒト線維芽細胞増殖促進作用および／またはヒト表皮ケラチノサイト増殖促進作用の程度において完全に同一であることに到達して、初めて目的とする当該高圧処理物の化学構造が決定されることになるのである。
【0032】
上述した実験は、一人の有能な当業者であっても、通常、数年を必要とするのであるが、これは現実的でない回数の実験等を行うことを要するものであって、著しく過大な経済的支出を伴うものである（特許・実用新案審査ハンドブック 第ＩＩ部 第２章 特許請求の範囲の記載要件「２２０５ 物の発明についての請求項にその物の製造方法が記載されている場合の審査における『不可能・非実際的事情』についての判断」の第１６ページ最下行～第１７ページ第１～４行目を参照）。すなわち、当該高圧処理物をその構造または特性により直接特定するためには、出願時において、当業者は採算的に現実的でない時間と費用を要することとなり、そのような特定作業を要求することは、先願主義の下、一日も早い出願日を追い求める出願人にとって、技術の急速な進展と国際規模での競争の激しい特許取得の場面においては余りにも酷なことある（最高裁平成２４年（受）１２０４号の第１０ページ、または最高裁平成２４年（受）２６５８号の第１０～１１ページ等）。
【実施例】
【0033】
以下、本発明に係る高圧処理物からなる組成物について、実施例に基づいて説明する。なお、本発明の技術的範囲は、これらの実施例によって示される実施態様に限定されない。
【0034】
１．試料および試験用サンプルの調製
［１－１］高圧処理したチョウザメ卵と各種溶媒との混合物
チョウザメ卵（中国産、冷凍品）と、溶媒として７０％（ｖ／ｖ、以下すべて同じ）エタノール、１００％の１，３－ブチレングリコール（以下、「１００％ＢＧ」という。）、５０％の１，３－ブチレングリコール（以下、「５０％ＢＧ」という。）、純水（イオン交換水）または酵素水を、各々レトルト袋に入れて密封、脱気して混合物を得た後、５５℃、１００ＭＰａの条件下で２４時間高圧処理した。チョウザメ卵と酵素水との混合物については、配合が異なる二種類を用意し、いずれについても、高圧処理後に８５～９０℃で１０分間湯煎して酵素を失活させた。それら酵素水に用いた酵素としてタンパク質分解複合酵素（まるごと酵素ＰｒＥ；（株）超臨界技術研究所）を、それら酵素水に用いた水として純水（イオン交換水）を、各々の高圧処理には、まるごとエキス装置ＴＦＳ－１００（（株）東洋高圧）を、それぞれ用いた。
［１－１］高圧処理したチョウザメ卵と各種溶媒との混合物
チョウザメ卵（中国産、冷凍品）と、溶媒として７０％（ｖ／ｖ、以下すべて同じ）エタノール、１００％の１，３－ブチレングリコール（以下、「１００％ＢＧ」という。）、５０％の１，３－ブチレングリコール（以下、「５０％ＢＧ」という。）、純水（イオン交換水）または酵素水を、各々レトルト袋に入れて密封、脱気して混合物を得た後、５５℃、１００ＭＰａの条件下で２４時間高圧処理した。チョウザメ卵と酵素水との混合物については、配合が異なる二種類を用意し、いずれについても、高圧処理後に８５～９０℃で１０分間湯煎して酵素を失活させた。それら酵素水に用いた酵素としてタンパク質分解複合酵素（まるごと酵素ＰｒＥ；（株）超臨界技術研究所）を、それら酵素水に用いた水として純水（イオン交換水）を、各々の高圧処理には、まるごとエキス装置ＴＦＳ－１００（（株）東洋高圧）を、それぞれ用いた。
【0035】
計６種類の混合物を高圧処理した後、ストッキングタイプ水切り袋（ＤＣＭ（株））を用いて各々の混合物をろ過して大半の残渣を除去した。続いて、２００μｍメッシュを用いてさらにろ過し、残った残渣を除去して各々のろ液を得た。得られたろ液を１．５ｍＬチューブに小分けし、－２０℃の条件にて保存した。
【0036】
保存した６種類のろ液を試験に用いる際、解凍した各々のろ液を３００μＬ滴下した５ｍＬシャーレ（６０×１５ｍｍ）を２枚ずつ、計１２枚作成して乾燥機に入れ、７２℃の条件下で４８時間乾燥させた後、ろ液の滴下前、滴下後および乾燥後のシャーレの重さから固形分含量（％）を算出し、得られた固形分含量（％）に基づき、各々のろ液が１１０００μｇ／ｍＬとなるように高圧蒸気滅菌水（以下、「ＤＤＷ」という。）を用いて希釈した。それら６種類のろ液を、０．４５μｍフィルターを用いてろ過滅菌し、試料１～６とした後、それぞれについてＤＤＷを用いて１０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬおよび３００μｇ／ｍＬに希釈したものを調製し、試験用サンプルとした。試料１～６の配合等を下掲の表１に示す。
【0037】
【表1】
【0038】
［１－２］高圧処理しないチョウザメ卵と各種溶媒との混合物
チョウザメ卵（中国産、冷凍品）と、純水（イオン交換水）、１００％ＢＧまたは酵素水を、各々レトルト袋に入れて密封、脱気し、高圧処理せずに２４時間静置した後、チョウザメ卵と酵素水との混合物については高圧処理物と同様に、８５～９０℃で１０分間湯煎することにより酵素を失活させた。それぞれの混合物について、ストッキングタイプ水切り袋（ＤＣＭ（株））を用いてろ過し、大半の残渣を除去した後、２００μｍメッシュを用いてさらにろ過し、残った残渣を除去して各々のろ液を得た。得られた各々のろ液を３００μＬ滴下した５ｍＬシャーレ（６０×１５ｍｍ）を２枚ずつ、計６枚作成して乾燥機に入れ、７２℃の条件下で４８時間乾燥させた後、ろ液の滴下前、滴下後および乾燥後のシャーレの重さから固形分含量（％）を算出し、得られた固形分含量（％）に基づき、各々のろ液が１１０００μｇ／ｍＬとなるようにＤＤＷを用いて希釈した。それら３種類のろ液を、０．４５μｍフィルターを用いてろ過滅菌し、試料７～９とした後、細胞実験をする際には培地中の最終濃度が１０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬおよび３００μｇ／ｍＬとなるように適時濃度を調整したものを試験用サンプルとした。試料７～９の配合等を下掲の表２に示す。
チョウザメ卵（中国産、冷凍品）と、純水（イオン交換水）、１００％ＢＧまたは酵素水を、各々レトルト袋に入れて密封、脱気し、高圧処理せずに２４時間静置した後、チョウザメ卵と酵素水との混合物については高圧処理物と同様に、８５～９０℃で１０分間湯煎することにより酵素を失活させた。それぞれの混合物について、ストッキングタイプ水切り袋（ＤＣＭ（株））を用いてろ過し、大半の残渣を除去した後、２００μｍメッシュを用いてさらにろ過し、残った残渣を除去して各々のろ液を得た。得られた各々のろ液を３００μＬ滴下した５ｍＬシャーレ（６０×１５ｍｍ）を２枚ずつ、計６枚作成して乾燥機に入れ、７２℃の条件下で４８時間乾燥させた後、ろ液の滴下前、滴下後および乾燥後のシャーレの重さから固形分含量（％）を算出し、得られた固形分含量（％）に基づき、各々のろ液が１１０００μｇ／ｍＬとなるようにＤＤＷを用いて希釈した。それら３種類のろ液を、０．４５μｍフィルターを用いてろ過滅菌し、試料７～９とした後、細胞実験をする際には培地中の最終濃度が１０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬおよび３００μｇ／ｍＬとなるように適時濃度を調整したものを試験用サンプルとした。試料７～９の配合等を下掲の表２に示す。
【0039】
【表2】
【0040】
２．試験
［２－１］マクロファージにおける増殖活性試験
上述した［１－１］および［１－２］において調製した試料１～９から得られた、計２７の試験用サンプルについて、それぞれマクロファージ（ＲＡＷ２６４．７細胞；以下、「ＲＡＷ細胞」という。）と７２時間共培養した後、ＭＴＴ法によって細胞の生存率（％）を求めた。
［２－１］マクロファージにおける増殖活性試験
上述した［１－１］および［１－２］において調製した試料１～９から得られた、計２７の試験用サンプルについて、それぞれマクロファージ（ＲＡＷ２６４．７細胞；以下、「ＲＡＷ細胞」という。）と７２時間共培養した後、ＭＴＴ法によって細胞の生存率（％）を求めた。
【0041】
具体的には、ＲＡＷ細胞を９６ウェルプレートに１００μＬ／ｗｅｌｌずつ播種し（ｎ＝３）、ＣＯ２インキュベーター（３７℃、ＣＯ２が５％濃度）内にて２４時間培養した後、上記試料１～９から得られた計２７の試験用サンプルをそれぞれ１０μＬ／ｗｅｌｌずつ添加し、ＣＯ２インキュベーター内にてさらに７２時間培養した。培地は、２％のＦｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ（以下、「ＦＢＳ」という。）および１％のペニシリンを含むＤ－ＭＥＭ（高グルコース）培地を用いた。それらの培養上清を除去し、細胞培養用試薬であるＰＢＳ（－）（富士フイルム和光純薬（株））を５０μＬ／ｗｅｌｌずつと、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（Ｒ） ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ；プロメガ（株））を１０μＬ／ｗｅｌｌずつを添加して、ＣＯ２インキュベーター内にて３時間培養した後、マイクロプレートリーダーを用いて波長４９０ｎｍの吸光度を測定した。続いて、試験用サンプルを添加しなかった細胞の波長４９０ｎｍの吸光度をコントロールとし、細胞増殖率を算出し、Ｄｕｎｎｅｔｔ ｔｅｓｔによって統計計算を実施し、コントロール対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１を有意差ありとした。それらの結果を図１Ａ、図１Ｂおよび図２に示す。
【0042】
図１Ａおよび図１Ｂは、試料１～６の試験用サンプルの結果を、図２は、試料７～９の試験用サンプルの結果をそれぞれ示す。図１Ａ、図１Ｂおよび図２に示す通り、コントロールと比較して有意にマクロファージの増殖が認められたのは、試料２の１０μｇ／ｍＬ希釈、１００μｇ／ｍＬ希釈および３００μｇ／ｍＬ希釈の各試験用サンプル、試料３の３００μｇ／ｍＬ希釈の試験用サンプル、および、試料５の１００μｇ／ｍＬ希釈および３００μｇ／ｍＬ希釈の各試験用サンプルであった。これらのことから、試料２すなわちチョウザメ卵と１００％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物、試料３すなわちチョウザメ卵と５０％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物、および、試料５すなわちチョウザメ卵とタンパク質分解複合酵素水溶液との混合物の高圧処理物からなる組成物は、マクロファージの増殖活性を有することが明らかとなった。そのため、以後の各種細胞における増殖活性試験および遺伝子発現試験は、試料２、試料３および試料５を用いて実施することとした。
【0043】
［２－２］マクロファージにおける増殖活性試験および遺伝子発現試験
（１）増殖活性試験
マクロファージにおける増殖活性試験については、上述した［２－１］の結果の通りであり、試料２すなわちチョウザメ卵と１００％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物、試料３すなわちチョウザメ卵と５０％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物、および、試料５すなわちチョウザメ卵とタンパク質分解複合酵素水溶液との混合物の高圧処理物からなる組成物は、マクロファージの増殖活性を有する。それらについて図３に示す。図３は、それら試料２、試料３および試料５についての、マクロファージの増殖率（％）を示す折れ線グラフ図である。なお、図３では、Ｄｕｎｎｅｔｔ ｔｅｓｔによって統計計算を実施し、コントロール対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１を有意差ありとした。
（１）増殖活性試験
マクロファージにおける増殖活性試験については、上述した［２－１］の結果の通りであり、試料２すなわちチョウザメ卵と１００％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物、試料３すなわちチョウザメ卵と５０％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物、および、試料５すなわちチョウザメ卵とタンパク質分解複合酵素水溶液との混合物の高圧処理物からなる組成物は、マクロファージの増殖活性を有する。それらについて図３に示す。図３は、それら試料２、試料３および試料５についての、マクロファージの増殖率（％）を示す折れ線グラフ図である。なお、図３では、Ｄｕｎｎｅｔｔ ｔｅｓｔによって統計計算を実施し、コントロール対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１を有意差ありとした。
【0044】
（２）遺伝子発現試験
マクロファージすなわちＲＡＷ細胞を６ウェルプレートに３ｍＬ／ｗｅｌｌずつ播種して２日間培養後、最終濃度１００μｇ／ｍＬの試料２、試料３および試料５を、それぞれ２ウェルプレートに対し３００μＬずつ添加して２時間培養した。各試料の最終濃度を１００μｇ／ｍＬとなるようにした後、ＲＡＷ細胞に炎症性サイトカイン（ＴＮＦ－α（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ－α）、ＮＯ合成酵素ｉＮＯＳ（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ Ｓｙｎｔｈａｓｅ；ＮＯＳ２）、炎症性サイトカインＩＬ－６（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６））の産生を促進させるため、最終濃度が０．１μｇ／ｍＬになるようにＬＰＳ（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；大腸菌由来リポ多糖，富士フイルム和光純薬（株））を添加し、４時間培養した。培養後、ＲＮＡ抽出キット（ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ ＫｉｔおよびＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒ（ＱＩＡＧＥＮ））を用いて、測定遺伝子であるＴＮＦ－α、ｉＮＯＳ（ＮＯＳ２）およびＩＬ－６のＲＮＡを抽出した。抽出したＲＮＡからＨｉｇｈ－Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてｃＤＮＡを作製した後、ｍＲＮＡの発現量を、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｆａｓｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）５ｍＬとＳｔｅｐ Ｏｎｅ Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて測定し、比較定量法（比較Ｃｔ法／△△Ｃｔ法）により相対値を算出した。コントロール（ハウスキーピング遺伝子）にはＧＡＰＤＨを用いた。その結果を図４に示し、Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにおいて用いたプライマーを下記に示す。なお、図４では、Ｓｔｕｄｅｎｔ Ｔ．ｔｅｓｔ によって統計計算を実施し、†Ｐ＜０．５、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１を有意差ありとした。
マクロファージすなわちＲＡＷ細胞を６ウェルプレートに３ｍＬ／ｗｅｌｌずつ播種して２日間培養後、最終濃度１００μｇ／ｍＬの試料２、試料３および試料５を、それぞれ２ウェルプレートに対し３００μＬずつ添加して２時間培養した。各試料の最終濃度を１００μｇ／ｍＬとなるようにした後、ＲＡＷ細胞に炎症性サイトカイン（ＴＮＦ－α（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ－α）、ＮＯ合成酵素ｉＮＯＳ（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｎｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ Ｓｙｎｔｈａｓｅ；ＮＯＳ２）、炎症性サイトカインＩＬ－６（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６））の産生を促進させるため、最終濃度が０．１μｇ／ｍＬになるようにＬＰＳ（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；大腸菌由来リポ多糖，富士フイルム和光純薬（株））を添加し、４時間培養した。培養後、ＲＮＡ抽出キット（ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ ＫｉｔおよびＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒ（ＱＩＡＧＥＮ））を用いて、測定遺伝子であるＴＮＦ－α、ｉＮＯＳ（ＮＯＳ２）およびＩＬ－６のＲＮＡを抽出した。抽出したＲＮＡからＨｉｇｈ－Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてｃＤＮＡを作製した後、ｍＲＮＡの発現量を、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｆａｓｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）５ｍＬとＳｔｅｐ Ｏｎｅ Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて測定し、比較定量法（比較Ｃｔ法／△△Ｃｔ法）により相対値を算出した。コントロール（ハウスキーピング遺伝子）にはＧＡＰＤＨを用いた。その結果を図４に示し、Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにおいて用いたプライマーを下記に示す。なお、図４では、Ｓｔｕｄｅｎｔ Ｔ．ｔｅｓｔ によって統計計算を実施し、†Ｐ＜０．５、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１を有意差ありとした。
【0045】
＜Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにおいて用いたプライマー＞
いずれも、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のものであり、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓの、下記のＩＤにより特定される。
ＴＮＦ－αｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１
ＴＮＦ－α：Ｍｍ００４４３２５８＿ｍ１
ｉＮＯＳｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１
ｉＮＯＳ：Ｍｍ００４４０５２＿ｍ１
ＩＬ－６ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１
ＩＬ－６：Ｍｍ００４４６１９０＿ｍ１
いずれも、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のものであり、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓの、下記のＩＤにより特定される。
ＴＮＦ－αｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１
ＴＮＦ－α：Ｍｍ００４４３２５８＿ｍ１
ｉＮＯＳｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１
ｉＮＯＳ：Ｍｍ００４４０５２＿ｍ１
ＩＬ－６ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｍｍ９９９９９９１５＿ｇ１
ＩＬ－６：Ｍｍ００４４６１９０＿ｍ１
【0046】
ＲＡＷ細胞をＬＰＳで刺激すると、炎症性サイトカインであるＴＮＦ－α、ＮＯ合成酵素であるｉＮＯＳ（ＮＯＳ２）、炎症性サイトカインであるＩＬ－６を産生するところ、図４に示す通り、試料２、試料３および試料５は、ＲＡＷ細胞におけるＴＮＦ－αｍＲＮＡ、ｉＮＯＳ（ＮＯＳ２）ｍＲＮＡおよびＩＬ－６ｍＲＮＡの発現を抑制することが明らかとなり、特に、試料２すなわちチョウザメ卵と１００％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物が、ＲＡＷ細胞におけるそれらｍＲＮＡの発現抑制について、最も高い活性を示した。ここで、測定遺伝子が関与する機能等を下掲の表３に示す。
【0047】
【表3】
【0048】
（３）結論
上述した（１）および（２）のマクロファージにおける増殖活性試験結果および遺伝子発現試験結果により、試料２すなわちチョウザメ卵と１００％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、マクロファージの増殖活性を有するとともに、マクロファージにおいて、炎症性サイトカインであるＴＮＦ－α、ＮＯ合成酵素であるｉＮＯＳ（ＮＯＳ２）、炎症性サイトカインであるＩＬ－６のｍＲＮＡの発現を明確に抑制することから、チョウザメ卵とＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、抗炎症組成物であるといえる。
上述した（１）および（２）のマクロファージにおける増殖活性試験結果および遺伝子発現試験結果により、試料２すなわちチョウザメ卵と１００％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、マクロファージの増殖活性を有するとともに、マクロファージにおいて、炎症性サイトカインであるＴＮＦ－α、ＮＯ合成酵素であるｉＮＯＳ（ＮＯＳ２）、炎症性サイトカインであるＩＬ－６のｍＲＮＡの発現を明確に抑制することから、チョウザメ卵とＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、抗炎症組成物であるといえる。
【0049】
［２－３］ヒト線維芽細胞における増殖活性試験および遺伝子発現試験
（１）増殖活性試験
上述した［１－１］において調製した試料２、試料３および試料５について、２％ＦＢＳおよび１％ペニシリンを含むＤ－ＭＥＭ（高グルコース）培地に代えて２％ＦＢＳおよび１％ペニシリンを含む線維芽細胞培地（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ）を用いたことと、培養細胞の剥離回収にトリプシン－ＥＤＴＡ（富士フイルム和光純薬（株））を用いたことを除いては、上述した［２－１］と同様に手法により、ヒト線維芽細胞における増殖活性試験を行った。その結果を図５に示す。なお、図５では、Ｄｕｎｎｅｔｔ ｔｅｓｔによって統計計算を実施し、コントロール対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１を有意差ありとした。
（１）増殖活性試験
上述した［１－１］において調製した試料２、試料３および試料５について、２％ＦＢＳおよび１％ペニシリンを含むＤ－ＭＥＭ（高グルコース）培地に代えて２％ＦＢＳおよび１％ペニシリンを含む線維芽細胞培地（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ）を用いたことと、培養細胞の剥離回収にトリプシン－ＥＤＴＡ（富士フイルム和光純薬（株））を用いたことを除いては、上述した［２－１］と同様に手法により、ヒト線維芽細胞における増殖活性試験を行った。その結果を図５に示す。なお、図５では、Ｄｕｎｎｅｔｔ ｔｅｓｔによって統計計算を実施し、コントロール対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１を有意差ありとした。
【0050】
図５に示す通り、コントロールと比較して有意にヒト線維芽細胞の増殖が認められたのは、試料２を培地に添加した際の終濃度１０μｇ／ｍＬサンプルおよび試料３を培地に添加した際の終濃度１０μｇ／ｍＬサンプルであった。これらのことから、試料２すなわちチョウザメ卵と１００％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物、および、試料３すなわちチョウザメ卵と５０％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、ヒト線維芽細胞の増殖活性を有することが明らかとなった。
【0051】
（２）遺伝子発現試験
上述した［１－１］において調製した試料２、試料３および試料５について、ＬＰＳを添加せずに培養したことと、測定遺伝子であるＨＡＳ１（Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ Ｓｙｎｔｈａｓｅ Ｉ）、ＨＡＳ３（Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ Ｓｙｎｔｈａｓｅ ＩＩＩ）、ＣＯＬ１Ａ１（Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ Ｉ Ａｌｐｈａ １）およびＣＯＬ７Ａ１（Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ ＶＩＩ Ａｌｐｈａ １）のＲＮＡを抽出したことと、測定遺伝子に応じてＲｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにおいて用いたプライマーを変更したことを除いては、上述した［２－２］（２）と同様の手法により、ヒト線維芽細胞における遺伝子発現試験を行った。その結果を図６および図７に示し、Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにおいて用いたプライマーを下記に示す。なお、図６および図７では、Ｄｕｎｎｅｔｔ ｔｅｓｔによって統計計算を実施し、コントロール対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１を有意差ありとした。
上述した［１－１］において調製した試料２、試料３および試料５について、ＬＰＳを添加せずに培養したことと、測定遺伝子であるＨＡＳ１（Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ Ｓｙｎｔｈａｓｅ Ｉ）、ＨＡＳ３（Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ Ｓｙｎｔｈａｓｅ ＩＩＩ）、ＣＯＬ１Ａ１（Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ Ｉ Ａｌｐｈａ １）およびＣＯＬ７Ａ１（Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ ＶＩＩ Ａｌｐｈａ １）のＲＮＡを抽出したことと、測定遺伝子に応じてＲｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにおいて用いたプライマーを変更したことを除いては、上述した［２－２］（２）と同様の手法により、ヒト線維芽細胞における遺伝子発現試験を行った。その結果を図６および図７に示し、Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにおいて用いたプライマーを下記に示す。なお、図６および図７では、Ｄｕｎｎｅｔｔ ｔｅｓｔによって統計計算を実施し、コントロール対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１を有意差ありとした。
【0052】
＜Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにおいて用いたプライマー＞
いずれも、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のものであり、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓの、下記のＩＤにより特定される。
ＨＡＳ１ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＨＡＳ１：Ｈｓ００７５８０５３＿ｍ１
ＨＡＳ３ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＨＡＳ３：Ｈｓ００１９３４３６＿ｍ１
ＣＯＬ１Ａ１ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＣＯＬ１Ａ１：Ｈｓ００１６４００４＿ｍ１
ＣＯＬ７Ａ１ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＣＯＬ７Ａ１：Ｈｓ００１６４３１０＿ｍ１
いずれも、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のものであり、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓの、下記のＩＤにより特定される。
ＨＡＳ１ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＨＡＳ１：Ｈｓ００７５８０５３＿ｍ１
ＨＡＳ３ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＨＡＳ３：Ｈｓ００１９３４３６＿ｍ１
ＣＯＬ１Ａ１ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＣＯＬ１Ａ１：Ｈｓ００１６４００４＿ｍ１
ＣＯＬ７Ａ１ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＣＯＬ７Ａ１：Ｈｓ００１６４３１０＿ｍ１
【0053】
図６および図７に示す通り、試料２を培地に添加した際の終濃度１００μｇ／ｍＬサンプルは、コントロールと比較して、ヒト線維芽細胞において有意に、ＨＡＳ１ｍＲＮＡ、ＨＡＳ３ｍＲＮＡ、ＣＯＬ１Ａ１ｍＲＮＡおよびＣＯＬ７Ａ１ｍＲＮＡを多く発現させることが明らかとなった。ここで、測定遺伝子が関与する機能等を下掲の表４に示す。
【0054】
【表4】
【0055】
（３）結論
上述した（１）および（２）のヒト線維芽細胞における増殖活性試験結果および遺伝子発現試験結果により、試料２すなわちチョウザメ卵と１００％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、ヒト線維芽細胞の増殖活性を有するとともに、ヒト線維芽細胞において、ヒアルロン酸合成酵素であって表皮に多く存在するＨＡＳ１のｍＲＮＡ、ヒアルロン酸合成酵素であって真皮に多く存在するＨＡＳ３のｍＲＮＡ、Ｉ型コラーゲンであって皮膚の張りを保つＣＯＬ１Ａ１のｍＲＮＡおよびＶＩＩ型コラーゲンであって皮膚の結合力を強固にするＣＯＬ７Ａ１のｍＲＮＡの発現を促進することから、チョウザメ卵とＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、美肌促進組成物であるといえる。
上述した（１）および（２）のヒト線維芽細胞における増殖活性試験結果および遺伝子発現試験結果により、試料２すなわちチョウザメ卵と１００％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、ヒト線維芽細胞の増殖活性を有するとともに、ヒト線維芽細胞において、ヒアルロン酸合成酵素であって表皮に多く存在するＨＡＳ１のｍＲＮＡ、ヒアルロン酸合成酵素であって真皮に多く存在するＨＡＳ３のｍＲＮＡ、Ｉ型コラーゲンであって皮膚の張りを保つＣＯＬ１Ａ１のｍＲＮＡおよびＶＩＩ型コラーゲンであって皮膚の結合力を強固にするＣＯＬ７Ａ１のｍＲＮＡの発現を促進することから、チョウザメ卵とＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、美肌促進組成物であるといえる。
【0056】
［２－４］ヒト表皮ケラチノサイトにおける増殖活性試験、ならびに、ヒト表皮ケラチノサイトおよびヒト毛包ケラチノサイトにおける遺伝子発現試験
（１）増殖活性試験
上述した［１－１］において調製した試料２、試料３および試料５について、培養細胞の剥離回収にトリプシン－ＥＤＴＡ（富士フイルム和光純薬（株））を用いたことを除いては、上述した［２－１］と同様に手法により、ヒト表皮ケラチノサイトにおける増殖活性試験を行った。その結果を図８に示す。なお、図８では、Ｄｕｎｎｅｔｔ ｔｅｓｔによって統計計算を実施し、コントロール対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１を有意差ありとした。
（１）増殖活性試験
上述した［１－１］において調製した試料２、試料３および試料５について、培養細胞の剥離回収にトリプシン－ＥＤＴＡ（富士フイルム和光純薬（株））を用いたことを除いては、上述した［２－１］と同様に手法により、ヒト表皮ケラチノサイトにおける増殖活性試験を行った。その結果を図８に示す。なお、図８では、Ｄｕｎｎｅｔｔ ｔｅｓｔによって統計計算を実施し、コントロール対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１を有意差ありとした。
【0057】
図８に示す通り、コントロールと比較して有意にヒト表皮ケラチノサイトの増殖が認められたのは、試料２を培地に添加した際の終濃度１０μｇ／ｍＬサンプル、１００μｇ／ｍＬサンプルおよび３００μｇ／ｍＬサンプル、ならびに、試料３を培地に添加した際の終濃度１００μｇ／ｍＬサンプルであった。これらのことから、試料２すなわちチョウザメ卵と１００％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物、および、試料３すなわちチョウザメ卵と５０％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、ヒト表皮ケラチノサイトの増殖活性を有することが明らかとなった。
【0058】
（２）遺伝子発現試験
上述した［１－１］において調製した試料２、試料３および試料５について、ＬＰＳを添加せずに培養したことと、測定遺伝子であるＯＣＬＮ（Ｏｃｃｌｕｄｉｎ）、ＦＬＧ（Ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）、ＡＱＰ３（Ａｑｕａｐｏｒｉｎ ＩＩＩ）、ＴＧＭ１（Ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ Ｉ）、ＳＩＲＴ１（Ｓｉｌｅｎｔ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ Ｉ）およびＣＯＬ１７Ａ１（Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ ＸＶＩＩ Ａｌｐｈａ １）のＲＮＡを抽出したことと、測定遺伝子に応じてＲｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにおいて用いたプライマーを変更したことを除いては、上述した［２－２］（２）と同様に手法により、ヒト表皮ケラチノサイトおよびヒト毛包ケラチノサイトにおける遺伝子発現試験を行った。その結果を図９～１２に示し、Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにおいて用いたプライマーを下記に示す。なお、図９～１２では、Ｄｕｎｎｅｔｔ ｔｅｓｔによって統計計算を実施し、コントロール対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１を有意差ありとした。
上述した［１－１］において調製した試料２、試料３および試料５について、ＬＰＳを添加せずに培養したことと、測定遺伝子であるＯＣＬＮ（Ｏｃｃｌｕｄｉｎ）、ＦＬＧ（Ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）、ＡＱＰ３（Ａｑｕａｐｏｒｉｎ ＩＩＩ）、ＴＧＭ１（Ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ Ｉ）、ＳＩＲＴ１（Ｓｉｌｅｎｔ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ Ｉ）およびＣＯＬ１７Ａ１（Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ ＸＶＩＩ Ａｌｐｈａ １）のＲＮＡを抽出したことと、測定遺伝子に応じてＲｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにおいて用いたプライマーを変更したことを除いては、上述した［２－２］（２）と同様に手法により、ヒト表皮ケラチノサイトおよびヒト毛包ケラチノサイトにおける遺伝子発現試験を行った。その結果を図９～１２に示し、Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにおいて用いたプライマーを下記に示す。なお、図９～１２では、Ｄｕｎｎｅｔｔ ｔｅｓｔによって統計計算を実施し、コントロール対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１を有意差ありとした。
【0059】
＜Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲにおいて用いたプライマー＞
いずれも、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のものであり、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓの、下記のＩＤにより特定される。
ＯＣＬＮｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＯＣＬＮ：Ｈｓ０５４６５８３７＿ｇ１
ＦＬＧｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＦＬＧ：Ｈｓ００８５６９２７＿ｇ１
ＡＱＰ３ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＡＱＰ３：Ｈｓ００１８５０２０＿ｍ１
ＴＧＭ１ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＴＧＭ１：Ｈｓ００１６５９２９＿ｍ１
ＳＩＲＴ１ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＳＩＲＴ１：Ｈｓ０１００９００６＿ｍ１
ＣＯＬ１７Ａ１ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＣＯＬ１７Ａ１：Ｈｓ００９９００３６＿ｍ１
いずれも、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のものであり、ＴａｑＭａｎ（Ｒ） Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓの、下記のＩＤにより特定される。
ＯＣＬＮｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＯＣＬＮ：Ｈｓ０５４６５８３７＿ｇ１
ＦＬＧｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＦＬＧ：Ｈｓ００８５６９２７＿ｇ１
ＡＱＰ３ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＡＱＰ３：Ｈｓ００１８５０２０＿ｍ１
ＴＧＭ１ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＴＧＭ１：Ｈｓ００１６５９２９＿ｍ１
ＳＩＲＴ１ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＳＩＲＴ１：Ｈｓ０１００９００６＿ｍ１
ＣＯＬ１７Ａ１ｍＲＮＡ
ＧＡＰＤＨ：Ｈｓ０２７８６６２４＿ｇ１
ＣＯＬ１７Ａ１：Ｈｓ００９９００３６＿ｍ１
【0060】
図９～１１に示す通り、試料２を培地に添加した際の終濃度１００μｇ／ｍＬサンプルは、コントロールと比較して、ヒト表皮ケラチノサイトにおいて有意に、ＯＣＬＮｍＲＮＡ、ＦＬＧｍＲＮＡ、ＡＱＰ３ｍＲＮＡ、ＴＧＭ１ｍＲＮＡおよびＳＩＲＴ１ｍＲＮＡを多く発現させること、ならびに、試料３を培地に添加した際の終濃度１００μｇ／ｍＬサンプルおよび試料５を培地に添加した際の終濃度１００μｇ／ｍＬサンプルは、コントロールと比較して、ヒト表皮ケラチノサイトにおいて有意にＳＩＲＴ１ｍＲＮＡを多く発現させることが明らかとなった。また、図１２に示す通り、試料２を培地に添加した際の終濃度１００μｇ／ｍＬサンプルは、コントロールと比較して有意に、ヒト毛包ケラチノサイトにおいてＣＯＬ１７Ａ１ｍＲＮＡを多く発現させることが明らかとなった。ここで、測定遺伝子が関与する機能等を下掲の表５および表６に示す。
【0061】
【表5】
【0062】
【表6】
【0063】
（３）結論
上述した（１）および（２）のヒト表皮ケラチノサイトにおける増殖活性試験結果、ならびに、ヒト表皮ケラチノサイトおよびヒト毛包ケラチノサイトにおける遺伝子発現試験結果により、試料２すなわちチョウザメ卵と１００％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、ヒト表皮ケラチノサイトの増殖活性を有するとともに、ヒト表皮ケラチノサイトにおいて、タイトジャンクション構成タンパク質であってバリア機能を有するＯＣＬＮのｍＲＮＡ、角層構成タンパク質であって保湿機能を有するＦＬＧのｍＲＮＡ、水チャネルタンパク質であって皮膚の水分保持や弾力維持に関わるとともにバリア機能を向上させるＡＱＰ３のｍＲＮＡ、タンパク質架橋に働く表皮酵素であって皮膚表面の強度や保水機能を高めるＴＧＭ１のｍＲＮＡおよびＮＡＤ依存性脱アセチル化酵素であって抗老化の機能を有するＳＩＲＴ１のｍＲＮＡの発現を促進することから、チョウザメ卵とＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、美肌促進組成物であるといえる。
上述した（１）および（２）のヒト表皮ケラチノサイトにおける増殖活性試験結果、ならびに、ヒト表皮ケラチノサイトおよびヒト毛包ケラチノサイトにおける遺伝子発現試験結果により、試料２すなわちチョウザメ卵と１００％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、ヒト表皮ケラチノサイトの増殖活性を有するとともに、ヒト表皮ケラチノサイトにおいて、タイトジャンクション構成タンパク質であってバリア機能を有するＯＣＬＮのｍＲＮＡ、角層構成タンパク質であって保湿機能を有するＦＬＧのｍＲＮＡ、水チャネルタンパク質であって皮膚の水分保持や弾力維持に関わるとともにバリア機能を向上させるＡＱＰ３のｍＲＮＡ、タンパク質架橋に働く表皮酵素であって皮膚表面の強度や保水機能を高めるＴＧＭ１のｍＲＮＡおよびＮＡＤ依存性脱アセチル化酵素であって抗老化の機能を有するＳＩＲＴ１のｍＲＮＡの発現を促進することから、チョウザメ卵とＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、美肌促進組成物であるといえる。
【0064】
また、試料２すなわちチョウザメ卵と１００％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物、および、試料３すなわちチョウザメ卵と５０％ＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、ヒト表皮ケラチノサイトの増殖活性を有するとともに、ヒト毛包ケラチノサイトにおいて、ＸＶＩＩ型コラーゲンであって皮膚表面の強度を向上させるとともに育毛機能を有するＣＯＬ１７Ａ１のｍＲＮＡの発現を促進することから、チョウザメ卵とＢＧとの混合物の高圧処理物からなる組成物は、育毛組成物であるといえる。
【要約】
【課題】 マクロファージの増殖を促進させるとともに、炎症性サイトカインおよび／またはＮＯ合成酵素が起因する炎症を抑制する抗炎症組成物；ヒト線維芽細胞あるいはヒト表皮ケラチノサイト細胞の増殖を促進させるとともに、表皮や真皮においてヒアルロン酸の合成を促し、皮膚の張りを保ち、皮膚の結合力を強固にし、皮膚のバリア機能を向上させ、皮膚表面の強度や保水機能を高め、あるいは、皮膚の抗老化を促す美肌促進組成物；ヒト表皮ケラチノサイト細胞の増殖を促進させるとともに、皮膚表面の強度を向上させ、育毛を促す育毛組成物；ならびにそれらの化粧料組成物を提供する。
【解決手段】 チョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとの混合物の高圧処理物からなる組成物である。
【選択図】 図３
【解決手段】 チョウザメ卵と１，３－ブチレングリコールとの混合物の高圧処理物からなる組成物である。
【選択図】 図３
【図1A】
【図1B】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
