▶ ハンクク ユニバーシティ オブ フォーリン スタディーズ リサーチ アンド ビジネス ファウンデーションの特許一覧
特表2022-521275炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有するペプチドとその用途
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-04-06
(54)【発明の名称】炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有するペプチドとその用途
(51)【国際特許分類】
C07K 14/52 20060101AFI20220330BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220330BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20220330BHJP
A61K 38/02 20060101ALI20220330BHJP
A61P 1/18 20060101ALI20220330BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20220330BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20220330BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20220330BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20220330BHJP
A61P 11/08 20060101ALI20220330BHJP
A61P 11/04 20060101ALI20220330BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20220330BHJP
A61P 9/04 20060101ALI20220330BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20220330BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20220330BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20220330BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20220330BHJP
A61P 7/06 20060101ALI20220330BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20220330BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220330BHJP
A61P 5/38 20060101ALI20220330BHJP
A61P 15/08 20060101ALI20220330BHJP
A61P 7/04 20060101ALI20220330BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20220330BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20220330BHJP
A61P 7/00 20060101ALI20220330BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20220330BHJP
A61P 5/14 20060101ALI20220330BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20220330BHJP
A61P 27/16 20060101ALI20220330BHJP
A61P 21/04 20060101ALI20220330BHJP
A61P 9/08 20060101ALI20220330BHJP
A61P 13/02 20060101ALI20220330BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220330BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20220330BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20220330BHJP
A61P 17/14 20060101ALI20220330BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20220330BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20220330BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20220330BHJP
【ＦＩ】
C07K14/52 ZNA
A61P29/00
A61P37/06
A61K38/02
A61P1/18
A61P1/16
A61P1/00
A61P1/04
A61P11/00
A61P11/08
A61P11/04
A61P9/10
A61P9/04
A61P25/28
A61P19/02
A61P13/12
A61P17/06
A61P7/06
A61P3/10
A61P43/00 105
A61P29/00 101
A61P5/38
A61P15/08
A61P7/04
A61P17/00
A61P9/00
A61P7/00
A61P21/00
A61P5/14
A61P25/00
A61P27/16
A61P21/04
A61P9/08
A61P13/02
A61P35/00
A61P37/02
A61P27/02
A61P17/14
A61P11/06
A61P37/08
A61P43/00 121
C12N15/12
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021549194
(86)(22)【出願日】2019-02-28
(85)【翻訳文提出日】2021-08-19
(86)【国際出願番号】 KR2019002415
(87)【国際公開番号】W WO2020171274
(87)【国際公開日】2020-08-27
(31)【優先権主張番号】10-2019-0019957
(32)【優先日】2019-02-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
２．ｗｉｔｅｐｓｏｌ
(71)【出願人】
【識別番号】517050879
【氏名又は名称】ハンクク ユニバーシティ オブ フォーリン スタディーズ リサーチ アンド ビジネス ファウンデーション
(74)【代理人】
【識別番号】110000523
【氏名又は名称】アクシス国際特許業務法人
(72)【発明者】
【氏名】ヨン・エ・キム
(72)【発明者】
【氏名】ミン・ソン・キム
【テーマコード（参考）】
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA01
4C084AA02
4C084AA07
4C084BA02
4C084MA13
4C084MA16
4C084MA17
4C084MA22
4C084MA23
4C084MA28
4C084MA31
4C084MA35
4C084MA37
4C084MA41
4C084MA43
4C084MA44
4C084MA52
4C084MA55
4C084MA56
4C084MA63
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZA011
4C084ZA012
4C084ZA161
4C084ZA162
4C084ZA331
4C084ZA332
4C084ZA341
4C084ZA342
4C084ZA371
4C084ZA372
4C084ZA401
4C084ZA402
4C084ZA511
4C084ZA512
4C084ZA551
4C084ZA552
4C084ZA591
4C084ZA592
4C084ZA611
4C084ZA612
4C084ZA621
4C084ZA622
4C084ZA661
4C084ZA662
4C084ZA681
4C084ZA682
4C084ZA751
4C084ZA752
4C084ZA811
4C084ZA812
4C084ZA891
4C084ZA892
4C084ZA921
4C084ZA922
4C084ZA941
4C084ZA942
4C084ZA961
4C084ZA962
4C084ZB081
4C084ZB082
4C084ZB111
4C084ZB112
4C084ZB131
4C084ZB132
4C084ZB151
4C084ZB152
4C084ZB211
4C084ZB212
4C084ZC061
4C084ZC062
4C084ZC081
4C084ZC082
4C084ZC351
4C084ZC352
4C084ZC751
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA41
4H045DA01
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、配列番号１のアミノ酸配列、配列番号２のアミノ酸配列、配列番号３のアミノ酸配列及び配列番号４のアミノ酸配列からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のアミノ酸配列を含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有するペプチドに関する。
本発明は、さらに配列番号１～４のうちいずれか一つ以上のペプチドを含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療用薬学的組成物ないし抗炎症用組成物に関する。
本発明は、さらに配列番号１～４のうちいずれか一つ以上のペプチドを含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療方法ないし治療薬物の製造時に使用するための用途に関する。
本発明の配列番号１～４のアミノ酸配列のうちいずれか一つの配列を含むペプチドは、ＩＬ－１７などの炎症性サイトカインの分泌ないし発現を有意に抑制でき、炎症性または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有することができる。したがって、前記ペプチドのうちいずれか一つ以上を含む組成物は、炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療用薬学的組成物、治療方法、治療薬物の製造時に使用するための用途ないし抗炎症用組成物として効果的である。
本発明は、さらに配列番号１～４のうちいずれか一つ以上のペプチドを含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療用薬学的組成物ないし抗炎症用組成物に関する。
本発明は、さらに配列番号１～４のうちいずれか一つ以上のペプチドを含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療方法ないし治療薬物の製造時に使用するための用途に関する。
本発明の配列番号１～４のアミノ酸配列のうちいずれか一つの配列を含むペプチドは、ＩＬ－１７などの炎症性サイトカインの分泌ないし発現を有意に抑制でき、炎症性または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有することができる。したがって、前記ペプチドのうちいずれか一つ以上を含む組成物は、炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療用薬学的組成物、治療方法、治療薬物の製造時に使用するための用途ないし抗炎症用組成物として効果的である。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
配列番号１のアミノ酸配列、配列番号２のアミノ酸配列、配列番号３のアミノ酸配列及び配列番号４のアミノ酸配列からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のアミノ酸配列を含む、炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有するペプチド。
【請求項2】
配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドと、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドと、
からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のペプチドを含む、炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療用薬学的組成物。
【請求項3】
前記配列番号１を暗号化する塩基配列は、配列番号７であり、前記配列番号２を暗号化する塩基配列は、配列番号８であり、前記配列番号３を暗号化する塩基配列は、配列番号９であり、前記配列番号４を暗号化する塩基配列は、配列番号１０であることを特徴とする、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項4】
前記炎症性疾患は、膵炎、慢性肝炎、食道炎、胃炎、大腸炎、肺炎、気管支炎、咽喉炎、心筋梗塞、心不全、アルツハイマー病、関節炎、腎不全、乾癬、貧血、糖尿及び線維化症からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項5】
前記関節炎は、骨関節炎、退行性関節炎、炎症性関節炎、関節リウマチ、剥離性骨軟骨炎、関節靭帯損傷、半月板損傷、関節の不正整列、無血性壊死症、及び若年性特発性関節炎からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項6】
前記自己免疫性疾患は、アロペシア・グレアータ（ａｌｏｐｅｃｉａ ｇｒｅａｔａ）、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫アジソン疾患、副腎の自己免疫性疾患、自己免疫溶血性貧血、自己免疫肝炎、自己免疫卵巣炎及び睾丸炎、自己免疫血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、腹腔スプルー－皮膚炎（ｃｅｌｉａｃ ｓｐｒｕｅ－ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、慢性疲労免疫異常症候群、慢性炎症性脱髓鞘多発性神経病症、Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素疾患、クローン病、円板性狼瘡、本態性複合寒冷グロブリン血症、線維筋痛－線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス疾患、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ神経炎、骨軟骨腫関節炎、扁平苔癬、メニエール病、混合性結合組織疾患、多発性硬化症、タイプＩまたは免疫－媒介糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発軟骨炎、自己免疫性多腺症候群、リウマチ多発性筋痛、多発性筋炎と皮膚筋炎、一次性無ガンマグロブリン血症、一次性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイド症、鞏皮症、スティッフパーソン症候群、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス、ダガヤス動脈炎、一時的動脈炎、巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、強皮症、ベーチェット病、円形脱毛症、喘息、アレルギー、白斑症及びウェゲナー肉芽腫からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項7】
配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドと、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドと、
からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のペプチドを含む、抗炎症用組成物。
【請求項8】
配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドと、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドと、
からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のペプチドを炎症性疾患または自己免疫性疾患の患者に投与する段階を含む、炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療方法。
【請求項9】
前記配列番号１を暗号化する塩基配列は、配列番号７であり、前記配列番号２を暗号化する塩基配列は、配列番号８であり、前記配列番号３を暗号化する塩基配列は、配列番号９であり、前記配列番号４を暗号化する塩基配列は、配列番号１０であることを特徴とする、請求項８に記載の炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療方法。
【請求項10】
前記炎症性疾患は、膵炎、慢性肝炎、食道炎、胃炎、大腸炎、肺炎、気管支炎、咽喉炎、心筋梗塞、心不全、アルツハイマー病、関節炎、腎不全、乾癬、貧血、糖尿及び線維化症からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項８に記載の炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療方法。
【請求項11】
前記関節炎は、骨関節炎、退行性関節炎、炎症性関節炎、関節リウマチ、剥離性骨軟骨炎、関節靭帯損傷、半月板損傷、関節の不正整列、無血性壊死症、及び若年性特発性関節炎からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項１０に記載の炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療方法。
【請求項12】
前記自己免疫性疾患は、アロペシア・グレアータ（ａｌｏｐｅｃｉａ ｇｒｅａｔａ）、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫アジソン疾患、副腎の自己免疫性疾患、自己免疫溶血性貧血、自己免疫肝炎、自己免疫卵巣炎及び睾丸炎、自己免疫血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、腹腔スプルー－皮膚炎（ｃｅｌｉａｃ ｓｐｒｕｅ－ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、慢性疲労免疫異常症候群、慢性炎症性脱髓鞘多発性神経病症、Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素疾患、クローン病、円板性狼瘡、本態性複合寒冷グロブリン血症、線維筋痛－線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス疾患、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ神経炎、骨軟骨腫関節炎、扁平苔癬、メニエール病、混合性結合組織疾患、多発性硬化症、タイプＩまたは免疫－媒介糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発軟骨炎、自己免疫性多腺症候群、リウマチ多発性筋痛、多発性筋炎と皮膚筋炎、一次性無ガンマグロブリン血症、一次性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイド症、鞏皮症、スティッフパーソン症候群、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス、ダガヤス動脈炎、一時的動脈炎、巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、強皮症、ベーチェット病、円形脱毛症、喘息、アレルギー、白斑症及びウェゲナー肉芽腫からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項８に記載の炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療方法。
【請求項13】
配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドと、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドと、
からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のペプチドを含む、ペプチドの炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療薬物の製造時に使用するための用途。
【請求項14】
前記配列番号１を暗号化する塩基配列は、配列番号７であり、前記配列番号２を暗号化する塩基配列は、配列番号８であり、前記配列番号３を暗号化する塩基配列は、配列番号９であり、前記配列番号４を暗号化する塩基配列は、配列番号１０であることを特徴とする、請求項１３に記載の用途。
【請求項15】
前記炎症性疾患は、膵炎、慢性肝炎、食道炎、胃炎、大腸炎、肺炎、気管支炎、咽喉炎、心筋梗塞、心不全、アルツハイマー病、関節炎、腎不全、乾癬、貧血、糖尿及び線維化症からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項１３に記載の用途。
【請求項16】
前記関節炎は、骨関節炎、退行性関節炎、炎症性関節炎、関節リウマチ、剥離性骨軟骨炎、関節靭帯損傷、半月板損傷、関節の不正整列、無血性壊死症、及び若年性特発性関節炎からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項１５に記載の用途。
【請求項17】
前記自己免疫性疾患は、アロペシア・グレアータ（ａｌｏｐｅｃｉａ ｇｒｅａｔａ）、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫アジソン疾患、副腎の自己免疫性疾患、自己免疫溶血性貧血、自己免疫肝炎、自己免疫卵巣炎及び睾丸炎、自己免疫血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、腹腔スプルー－皮膚炎（ｃｅｌｉａｃ ｓｐｒｕｅ－ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、慢性疲労免疫異常症候群、慢性炎症性脱髓鞘多発性神経病症、Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素疾患、クローン病、円板性狼瘡、本態性複合寒冷グロブリン血症、線維筋痛－線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス疾患、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ神経炎、骨軟骨腫関節炎、扁平苔癬、メニエール病、混合性結合組織疾患、多発性硬化症、タイプＩまたは免疫－媒介糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発軟骨炎、自己免疫性多腺症候群、リウマチ多発性筋痛、多発性筋炎と皮膚筋炎、一次性無ガンマグロブリン血症、一次性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイド症、鞏皮症、スティッフパーソン症候群、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス、ダガヤス動脈炎、一時的動脈炎、巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、強皮症、ベーチェット病、円形脱毛症、喘息、アレルギー、白斑症及びウェゲナー肉芽腫からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることを特徴とする、請求項１３に記載の用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、２０１９年０２月２０日付で出願された大韓民国特許出願第１０－２０１９－００１９９５７号を優先権として主張し、前記明細書の全体は、本出願の参考文献である。
【0002】
本発明は、配列番号１のアミノ酸配列、配列番号２のアミノ酸配列、配列番号３のアミノ酸配列及び配列番号４のアミノ酸配列からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のアミノ酸配列を含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有するペプチドに関する。
【0003】
本発明は、さらに配列番号１～４のうちいずれか一つ以上のペプチドを含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療用薬学的組成物ないし抗炎症用組成物に関する。
【0004】
本発明は、さらに配列番号１～４のうちいずれか一つ以上のペプチドを含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療方法ないし治療薬物の製造時に使用するための用途に関する。
【背景技術】
【0005】
免疫寛容（ｉｍｍｕｎｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）とは、ある特定の抗原に免疫反応性のない状態（ｕｎｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ）をいい、免疫力が全体的にない免疫不全とは区分される。これは免疫恒常性の維持及び体内の炎症の抑制に重要であるため、もし欠乏する場合、炎症性疾患ないし自己免疫性疾患などの疾患を誘発し得る。
【0006】
前記疾患のうち関節炎は、大きく二つのカテゴリーに分けられ、１００種以上の様々なタイプがある。１番目のカテゴリーとして「骨関節炎」は、関節を保護する軟骨の損傷または退行性変化により、骨ないし靭帯などで炎症と痛みが生じる疾患で、よく「退行性関節炎」と呼ばれる。２番目のカテゴリーは、「炎症性関節炎」で、過度の免疫体系が関節の内壁を攻撃して発生するすべてのタイプを含む。前記炎症性関節炎では、関節リウマチが代表的であるが、これは遺伝的または環境的要因によって発生することが知られており、代表的な自己免疫性疾患でもある。関節リウマチは、全体の人口の約１％が経験しており、女性ホルモンの影響で女性が男性よりもよく発生することが知られている。関節リウマチが発症する原因の一つは、炎症性サイトカインと抗炎症性サイトカインとの間の不均衡であるが、関節リウマチの炎症部位にはＴＮＦ－α、ＩＬ－１またはＩＬ－６のような炎症を誘発するサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）とリンパ球及びマクロファージのような免疫細胞が活性化されている。前記炎症誘発性サイトカインは、関節内に炎症誘発性サイトカインを集め、破骨細胞を直接活性化させる。また、Ｔ ｃｅｌｌとＢ ｃｅｌｌを活性化させ、軟骨と軟骨細胞の異化作用（分解する作用）を促進させる。
【0007】
医薬品産業は、大きく化学的合成を介して生産される低分子化学医薬品産業と生物学的方法によって生産されてタンパク質及びワクチンなどが中心となる高分子のバイオ医薬品産業に分けられる。化学医薬品は、分子量が小さく、体内によく吸収されるので、錠剤などの経口投与剤として多く開発されるが、バイオ医薬品は、分子量が大きく、吸収されにくい点、タンパク質などが胃で分解されるおそれがある点ないし水溶液でより安定した性質などにより、主に注射剤の形態で開発されている。
【0008】
最近では、生物体の機能及び情報を活用して作られたバイオ医薬品市場が、化学的合成医薬品市場よりも急速に成長して変化しているが、バイオ医薬品は、特異性が高く、副作用が少なく、異常免疫反応確率も少ないだけでなく、体内不足タンパク質の代替医薬品として使用可能であるという長所がある。また、生物由来の物質を用いるため、毒性が低く、安全性が大きく、難治性・慢性疾患においても優れた治療効果を持っている。しかし、合成医薬品に対して大きな分子量と複雑な分子構造を有しており、製造過程が難しいという短所がある。
【0009】
したがって、大きく複雑な分子構造を持つタンパク質のようなバイオ医薬品においてターゲット受容体に特異的に結合する部分だけを選択的に探し出して低分子のペプチドとして開発する研究が進められている。ペプチドは、機械的な合成による大量生産が可能で、長さが短いので抗原性が低く、生産工程が単純で生産コストが少ないという利点があるため、既存のタンパク質治療剤に代わる製品として注目されている。
【0010】
また、分子量が高い物質や脂溶性が高い物質が体内に適用されたとき、生体内で肝臓等に蓄積されているものとは異なり、低分子量ペプチドは、生体内で作用後に体外に排出されて生体内の毒性のリスクがなく、タンパク質医薬品とともに体内注射の際、免疫反応による抗体発生などの副作用のリスクが少なく、標的となる物質と特異的に結合するため、高い活性を示すことができる。
【0011】
最近、白血病細胞株であるＫ５６２細胞培養液から最初に分離されたＫ５６２タンパク質は、炎症性サイトカイン発現の抑制調節因子で炎症因子と抗炎症因子との間の不均衡を合わせることができる新しい抗炎症剤の候補物質として知られている。また、Ｋ５６２タンパク質全長（ｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈ）の３１６番メチオニン（ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ）残基から翻訳されたタンパク質は、ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２タンパク質（ｔＫ５６２、１９ｋＤａ）と呼ばれ、これはＫ５６２タンパク質全長と似たような程度の炎症性サイトカイン阻害効果を示すことが確認された。
【0012】
非特許文献１では、慢性リンパ性白血病（Ｂ－ｃｅｌｌ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ）細胞株にＩＬ－１０受容体が発現し、前記細胞株にＩＬ－１０を処理する場合、増殖が抑制されることが開示されている。しかし、炎症性疾患、特に自己免疫性関節炎の発生メカニズムは、まだ明確ではなく、治療法は、依然として制限的である。また、慢性骨髄性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ）細胞株であるＫ５６２細胞株とＩＬ－１０との関連性ないしＫ５６２タンパク質の抗炎症効果を引き起こす実質的な部位に対する研究ないし記載は開示されたことがない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0013】
【非特許文献1】１．Ｊｅｓｐｅｒ Ｊｕｒｌａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＩｎｔｅｒＬｅｕｋｉｎ－１０ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｂ－ｃｅｌｌ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ」（Ｂｌｏｏｄ、Ｖｏｌ ８９、Ｎｏ １１（Ｊｕｎｅ １）、１９９７：ｐｐ ４１４６－４１５２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0014】
そこで、本発明者らは、抗炎症効果ないし自己免疫性疾患の予防または治療に効果があり、安全かつ医薬品などに開発されるのに適したサイズ（分子量）のペプチドを生物学的製剤として提供するために鋭意努力した。その結果、ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（ｔＫ５６２）の中から実質的に抗炎症効果を起こすのに必ず必要なペプチド（エピトープ）を分離し、これはｔＫ５６２全長よりサイズも小さく、より効果的に炎症性サイトカインの分泌を抑制することを確認し、本発明を完成した。
【0015】
したがって、本発明の目的は、配列番号１のアミノ酸配列、配列番号２のアミノ酸配列、配列番号３のアミノ酸配列及び配列番号４のアミノ酸配列からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のアミノ酸配列を含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有するペプチドを提供するものである。
【0016】
本発明のさらに他の目的は、配列番号１～４のうちいずれか一つ以上のペプチドを含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療用薬学的組成物ないし抗炎症用組成物を提供するものである。
【0017】
本発明のさらに他の目的は、配列番号１～４のうちいずれか一つ以上のペプチドを含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療方法ないし治療薬物の製造時に使用するための用途を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【0018】
前記目的を達成するため、本発明は、配列番号１のアミノ酸配列、配列番号２のアミノ酸配列、配列番号３のアミノ酸配列及び配列番号４のアミノ酸配列からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のアミノ酸配列を含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有するペプチドを提供する。
【0019】
本発明は、さらに配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドと、
からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のペプチドを含む、炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療用薬学的組成物、炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療方法、ないし炎症性疾患または自己免疫性疾患治療の薬物の製造の際に使用するための用途を提供する。
配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドと、
からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のペプチドを含む、炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療用薬学的組成物、炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療方法、ないし炎症性疾患または自己免疫性疾患治療の薬物の製造の際に使用するための用途を提供する。
【0020】
本発明の好適な一実施例によれば、前記配列番号１を暗号化する塩基配列は、配列番号７であり、前記配列番号２を暗号化する塩基配列は、配列番号８であり、前記配列番号３を暗号化する塩基配列は、配列番号９であり、前記配列番号４を暗号化する塩基配列は、配列番号１０であってもよい。
【0021】
本発明の好適な一実施例によれば、前記炎症性疾患は、膵炎、慢性肝炎、食道炎、胃炎、大腸炎、肺炎、気管支炎、咽喉炎、心筋梗塞、心不全、アルツハイマー病、関節炎、腎不全、乾癬、貧血、糖尿及び線維化症からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のものであってもよい。
【0022】
本発明の好適な一実施例によれば、前記関節炎は、骨関節炎、退行性関節炎、炎症性関節炎、関節リウマチ、剥離性骨軟骨炎、関節靭帯損傷、半月板損傷、関節の不正整列、無血性壊死症、及び若年性特発性関節炎からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のものであってもよい。
【0023】
本発明の好適な一実施例によれば、前記自己免疫性疾患は、アロペシア・グレアータ（ａｌｏｐｅｃｉａ ｇｒｅａｔａ）、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫アジソン疾患、副腎の自己免疫性疾患、自己免疫溶血性貧血、自己免疫肝炎、自己免疫卵巣炎及び睾丸炎、自己免疫血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、腹腔スプルー－皮膚炎（ｃｅｌｉａｃ ｓｐｒｕｅ－ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、慢性疲労免疫異常症候群、慢性炎症性脱髓鞘多発性神経病症、Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素疾患、クローン病、円板性狼瘡、本態性複合寒冷グロブリン血症、線維筋痛－線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス疾患、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ神経炎、骨軟骨腫関節炎、扁平苔癬、メニエール病、混合性結合組織疾患、多発性硬化症、タイプＩまたは免疫－媒介糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発軟骨炎、自己免疫性多腺症候群、リウマチ多発性筋痛、多発性筋炎と皮膚筋炎、一次性無ガンマグロブリン血症、一次性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイド症、鞏皮症、スティッフパーソン症候群、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス、ダガヤス動脈炎、一時的動脈炎、巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、強皮症、ベーチェット病、円形脱毛症、喘息、アレルギー、白斑症及びウェゲナー肉芽腫からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のものであってもよい。
【0024】
本発明は、さらに配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドと、
からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のペプチドを含む抗炎症用組成物を提供する。
配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドと、
からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のペプチドを含む抗炎症用組成物を提供する。
【0025】
以下、本発明の用語を説明する。
【0026】
本発明の「ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン」ないし「ｔＫ５６２」は、Ｋ５６２タンパク質（サイトカイン）の全配列のうち、３１６番メチオニン（ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ）残基から翻訳されたタンパク質（サイトカイン）を意味する。
【0027】
本発明の「エピトープ」とは、単一または複数のペプチドを含有するペプチドを意味する。本発明では、ｔＫ５６２を構成するペプチドの中でｔＫ５６２の抗炎症効果を示すのに実質的に必要なペプチド部分及びこれと実質的に同一のすべての類似体を意味する。
【0028】
本発明の「抗炎症」とは、炎症に関連した因子ないし症状などが抑制ないし緩和されて炎症が悪化しないようにすることを意味する。
【0029】
以下、本発明をより詳細に説明する。
【0030】
上述したように、従来の炎症性疾患の予防または治療のために使用されるＫ５６２サイトカインのようなペプチドは、そのサイズないし分子量があまりにも大きすぎて体内吸収が難しいという点など医薬品として開発されるのに問題が存在した。これを克服するため、サイズないし分子量が小さいながらも効果に優れたペプチドに対する研究ないし開発が求められているのが実情である。
【0031】
本発明による配列番号１～４のうちいずれか一つのアミノ酸配列からなるペプチドは、Ｋ５６２サイトカインないしｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカインで抗炎症効果を起こすのに実質的に必要なエピトープであって、Ｋ５６２サイトカインないしｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン全長を使用する場合に比べて炎症性サイトカイン分泌抑制効果に優れており、そのサイズないし分子量も小さいので、炎症性疾患ないし自己免疫性疾患の予防または治療効果のある組成物として活用されるのに適している。
【0032】
本発明は、ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（ｔＫ５６２）の３次元構造を独自的な電算シミュレーション手法を用いた相同性モデリング（ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｍｏｄｅｌｉｎｇ）を介して最初に生成した（図１）。具体的には、ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ検索を通じてｔＫ５６２と高い相同性を有するタンパク質を探し出し、これを多重配列アラインメント（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ；、ＭＳＡ）により様々な鋳型タンパク質を作製した。ｔＫ５６２と前記様々な鋳型タンパク質の相同性モデリングを行った後、エネルギー最小化過程によって構造を最適化してｔＫ５６２の３次元構造を確定した（図３）。
【0033】
前記ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴは、タンパク質－タンパク質配列の類似性検索方法により、しきい値以上の点数を持つ配列の多重配列アラインメント（ＭＳＡ）からＰＳＳＭ（ｐｏｓｉｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｃｏｒｉｎｇ ｍａｔｒｉｘ）を生成する（図２）。ＰＳＳＭは、反復検索を通じて、高い点数（すなわち、高い類似性）を持つ配列を発見し、結果的に、タンパク質間の遠い関係を検出しうる。本発明のｔＫ５６２の場合、その全体配列に対して高い相同性を有するタンパク質が存在しないため、配列の一部分と高い相同性を有するタンパク質を選んだ。多重配列アラインメントは、配列データの簡潔かつ有益な要約を生成し、結果から相同性を推論し、配列間の進化関係を検証するために類似した長さの３つ以上の配列を整列する。
【0034】
ＩＬ－１０は、関節リウマチなどの自己免疫性疾患において多く生成されるサイトカインであるＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの抑制作用をする。ＩＬ－１０とＩＬ－１０受容体（ＩＬ－１０Ｒ－α）との結合は、免疫抑制信号を調節して炎症性サイトカインの合成を抑制し、Ｔ細胞及びＢ細胞の成長及び分化を調節して免疫刺激機能を果たす。具体的には、ＩＬ－１０は、二量体（ｄｉｍｅｒ）の形態でＩＬ－１０受容体に結合することにより、段階的にチロシンキナーゼ（ＴＹＫ２）とヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ１）をリン酸化させ、ＳＴＡＴ３をリン酸化させることにより、結果的に抗炎作用の信号を伝達する。このとき、ｔＫ５６２によってリン酸化されるチロシン４９６番がまさにヤヌスキナーゼ部位である（実施例２）。
【0035】
本発明において独自に構築された相同性モデリングによって作製されたｔＫ５６２構造をドッキングプロトコルを使用して二量体に作製した後、ＩＬ－１０と比較した結果、量子配列ないし構造的に類似していることを確認しており（実施例３）、特にＩＬ－１０がＩＬ－１０受容体と結合する部分（活性部位）が有意に類似していることを確認した（実施例４）。
【0036】
そこで、本発明者らは、前記ＩＬ－１０の活性部位と相同性の高いｔＫ５６２部分の中で炎症性疾患ないし自己免疫性疾患に対して予防または治療活性を有することができる短いエピトープを選別し、本発明の配列番号１～４のペプチド（ＡＩＰ－ＹＫ１～４）として提案した（表１）。配列番号５は、ｔＫ５６２のアミノ酸配列を示し、配列番号６は、ｔＫ５６２の塩基配列を示す。
【0037】
本発明のＡＩＰ－ＹＫ１～ＡＩＰ－ＹＫ４エピトープが実質的に抗炎症活性を有するかどうかを確認するため、Ｔｈ１７細胞分化実験を行った。Ｔｈ１７細胞は、カビやバクテリアの免疫防御に重要な役割を果たすが、炎症性（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）サイトカインであるＩＬ－１７またはＩＬ－２２などを生産し、様々な自己免疫性疾患を誘発する細胞として知られている。その結果、本発明のエピトープは、すべてｔＫ５６２（配列番号５または配列番号６）と同じであるか、または優れたレベルの抗炎症活性を示し、その中でもＡＩＰ－ＹＫ４がＶＩＰ（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ）と類似したレベルの抗炎症活性を示した（実施例５）。すなわち、Ｋ５６２の中で実質的に抗炎症活性を示すのに必要な部位は、ＡＩＰ－ＹＫ１～ＡＩＰ－ＹＫ４であることが確認できた。
【0038】
前記ＶＩＰ（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ）は、２８個のアミノ酸配列（Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｓｎ）を有するニューロ（神経）ペプチドで、関節リウマチの炎症ないし自己免疫成分を減少させる効果があることが知られている。
【0039】
したがって、本発明は、配列番号１のアミノ酸配列、配列番号２のアミノ酸配列、配列番号３のアミノ酸配列及び配列番号４のアミノ酸配列からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のアミノ酸配列を含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有するペプチドを提供しうる。
【0040】
前記配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドは、そのＮ末端及びＣ末端にアミノ酸が追加された形態でも炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有してもよく、これは配列番号１のアミノ酸配列の形態であってもよい。
【0041】
また、本発明は、配列番号４のアミノ酸配列を含む炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有するペプチドを提供しうる。
【0042】
前記配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドは、そのＮ末端及びＣ末端にアミノ酸が追加された形態でも炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有してもよく、これは配列番号２のアミノ酸配列の形態であってもよい。
【0043】
また、本発明は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドと、
からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のペプチドを含む、炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療用薬学的組成物、炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療方法ないし炎症性疾患または自己免疫性疾患治療の薬物の製造の際に使用するための用途を提供しうる。
配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドと、
からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のペプチドを含む、炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療用薬学的組成物、炎症性疾患または自己免疫性疾患の治療方法ないし炎症性疾患または自己免疫性疾患治療の薬物の製造の際に使用するための用途を提供しうる。
【0044】
本発明の前記薬学的組成物は、配列番号１～４のアミノ酸配列をそれぞれ暗号化する塩基配列であれば制限なく含んでもよいが、前記配列番号１を暗号化する塩基配列は、配列番号７であり、前記配列番号２を暗号化する塩基配列は、配列番号８であり、前記配列番号３を暗号化する塩基配列は、配列番号９であり、前記配列番号４を暗号化する塩基配列は、配列番号１０であることが好ましい。
【0045】
本発明の前記炎症性疾患は、Ｔｈ１７またはＩＬ－１７が関与する炎症性疾患であれば制限なしに該当し得るが、膵炎、慢性肝炎、食道炎、胃炎、大腸炎、肺炎、気管支炎、咽喉炎、心筋梗塞、心不全、アルツハイマー病、関節炎、腎不全、乾癬、貧血、糖尿及び線維化症からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることが好ましく、さらに好ましくは、関節炎であることが好ましい。
【0046】
本発明の前記関節炎は、骨関節炎、退行性関節炎、炎症性関節炎、関節リウマチ、剥離性骨軟骨炎、関節靭帯損傷、半月板損傷、関節の不正整列、無血性壊死症、及び若年性特発性関節炎からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることが好ましいが、これに限定されるものではない。
【0047】
本発明の前記自己免疫性疾患は、Ｔｈ１７またはＩＬ－１７が関与する自己免疫性疾患であれば制限なく該当してもよいが、アロペシア・グレアータ（ａｌｏｐｅｃｉａ ｇｒｅａｔａ）、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫アジソン疾患、副腎の自己免疫性疾患、自己免疫溶血性貧血、自己免疫肝炎、自己免疫卵巣炎及び睾丸炎、自己免疫血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、腹腔スプルー－皮膚炎（ｃｅｌｉａｃ ｓｐｒｕｅ－ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、慢性疲労免疫異常症候群、慢性炎症性脱髓鞘多発性神経病症、Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素疾患、クローン病、円板性狼瘡、本態性複合寒冷グロブリン血症、線維筋痛－線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス疾患、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ神経炎、骨軟骨腫関節炎、扁平苔癬、メニエール病、混合性結合組織疾患、多発性硬化症、タイプＩまたは免疫－媒介糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発軟骨炎、自己免疫性多腺症候群、リウマチ多発性筋痛、多発性筋炎と皮膚筋炎、一次性無ガンマグロブリン血症、一次性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイド症、鞏皮症、スティッフパーソン症候群、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス、ダガヤス動脈炎、一時的動脈炎、巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、強皮症、ベーチェット病、円形脱毛症、喘息、アレルギー、白斑症及びウェゲナー肉芽腫からなる群から選ばれるいずれか一つ以上であることが好ましく、さらに好ましくは、関節リウマチであることが好ましい。
【0048】
本発明の組成物は、経口または非経口の様々な剤形であってもよい。前記組成物を剤形化する場合には、一つ以上の緩衝剤（例えば、生理食塩水またはＰＢＳ）、抗酸化剤、静菌剤、キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン）、充填剤、増量剤、結合剤、アジュバント（例えば、アルミニウムハイドロオキサイド）、懸濁剤、濃厚剤、湿潤剤、崩解剤または界面活性剤、希釈剤または賦形剤を使用して調製されてもよい。
【0049】
経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、これらの固形製剤は、一つ以上の化合物の少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉（トウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、ジャガイモ澱粉などを含む）、炭酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）、ラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、デキストロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトールマルチトール、セルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及びヒドロキシプロピルメチル－セルロースまたはゼラチンなどを混合して調剤される。例えば、活性成分を固体賦形剤と配合した後、これを粉砕し、適切な補助剤を添加した後、顆粒混合物に加工することにより、錠剤または糖衣錠剤が得られる。
【0050】
また、単純な賦形剤の他にステアリン酸マグネシウム、タルクなどの潤滑剤も使用される。経口投与のための液状製剤としては懸濁剤、内用液剤、乳剤またはシロップ剤などが該当するが、よく使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィンの他に様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤または保存剤などが含まれてもよい。また、場合に応じて架橋結合ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはナトリウムアルギネートなどを崩解剤として添加してもよく、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤及び防腐剤などをさらに含んでもよい。
【0051】
非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁溶剤、乳剤、凍結乾燥製剤または坐剤などが含まれる。非水性溶剤及び懸濁溶剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルなどの植物油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステルなどが使用されてもよい。坐剤の基剤としては、ウィテプソル（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロール、ゼラチンなどが使用されてもよい。
【0052】
本発明の薬学的組成物は、経口または非経口で投与されてもよく、非経口投与時に皮膚外用と、腹腔内、直腸、静脈、筋肉、皮下、子宮内硬膜または脳血管内に注射する注射剤と、経皮投与剤と、または鼻腔吸入剤の形態で当業界に公知された方法によって剤形化してもよい。
【0053】
前記注射剤の場合には、必ず滅菌されなければならず、バクテリア及び真菌のような微生物の汚染から保護されなければならない。注射剤の場合、適切な担体の例としては、これに限定されないが、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコールなど）、これらの混合物及び／又は植物油を含む溶媒または分散媒質であってもよい。より好ましくは、適切な担体としては、ハンクス溶液、リンガー溶液、トリエタノールアミンが含有されたＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）または注射用滅菌水、１０％エタノール、４０％プロピレングリコール及び５％デキストロースなどの等張溶液などを使用してもよい。前記注射剤を微生物汚染から保護するためには、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどの様々な抗菌剤及び抗真菌剤をさらに含んでもよい。また、前記注射剤は、ほとんどの場合、糖又はナトリウムクロリドのような等張化剤をさらに含んでもよい。
【0054】
経皮投与剤の場合、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、外用液剤、パスタ剤、リニメント剤、エアロール剤などの形態が含まれる。前記において経皮投与は、薬学組成物を局所的に皮膚に投与して薬学組成物に含有された有効な量の活性成分が皮膚内に伝達されることを意味する。
【0055】
吸入投与剤の場合、本発明により使用される化合物は、適切な推進剤、例えば、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切な気体を使用して、加圧パックまたは煙霧機からエアゾールスプレーの形態で便利に伝達しうる。加圧エアロゾルの場合、投薬単位は、計量された量を伝達する弁を提供して決定してもよい。例えば、吸入器または吹込器に使用されるゼラチンカプセル及びカートリッジは、化合物、及びラクトースまたは澱粉などの適切な粉末基剤の粉末混合物を含有するように剤形化してもよい。非経口投与用剤形は、すべての製薬化学に一般的に公知された処方書である文献（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ's Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、１５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９７５．Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １８０４２，Ｃｈａｐｔｅｒ８７：Ｂｌａｕｇ，Ｓｅｙｍｏｕｒ）に記載されている。
【0056】
本発明の組成物は、薬剤学的に有効な量で投与する。薬剤学的に有効な量は、医学的治療に適用可能な合理的な受恵／リスク比で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効容量のレベルは、患者の疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路及び排出割合、治療期間、同時に使用される薬物を含む要素及びその他の医療分野によく知られている要素によって決定されてもよい。本発明の組成物は、個別治療剤として投与するか、または他の治療剤と併用して投与されてもよく、従来の治療剤とは、順次または同時に投与されてもよく、単一または多重投与されてもよい。すなわち、本発明の組成物の総有効量は、単一投与量（ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｓｅ）で患者に投与されてもよく、多重投与量（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｏｓｅ）で長期間投与される分割治療方法（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌ）によって投与されてもよい。前記要素をすべて考慮し、副作用なしに最小限の量で最大の効果が得られる量を投与することが重要であり、これは当業者によって容易に決定され得る。
【0057】
本発明の薬学的組成物の投与量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率及び疾患の重症度に応じてその範囲は多様である。一日投与量としては、非経口投与時に本発明のペプチドを基準に一日に体重１ｋｇ当たり、好ましくは、０.０１～５０ｍｇ、より好ましくは、０.１～３０ｍｇの量で投与されるように、そして、経口投与時には、本発明のペプチドを基準に一日に体重１ｋｇ当たり、好ましくは、０.０１～１００ｍｇ、より好ましくは、０.０１～１０ｍｇの量で投与されるように、１ないし数回に分けて投与してもよい。しかし、投与経路、肥満の重症度、性別、体重、年齢などによって増減してもよいので、前記投与量がどのような方法でも本発明の範囲を限定するものではない。
【0058】
本発明の組成物は単独で、または手術、放射線治療、ホルモン治療、化学治療及び生物学的反応調節剤を使用する方法と併用して使用してもよい。
【0059】
本発明の薬学組成物は、さらにペプチドを有効成分として含む外用剤の剤形として提供しうる。本発明の炎症性ないし自己免疫性疾患の予防及び治療用薬学組成物を皮膚外用剤として使用する場合、さらに脂肪物質、有機溶媒、溶解剤、濃縮剤及びゲル化剤、軟化剤、抗酸化剤、懸濁化剤、安定化剤、発泡剤（ｆｏａｍｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、芳香剤、界面活性剤、水、イオン型乳化剤、非イオン型乳化剤、充填剤、金属イオン封鎖剤、キレート化剤、保存剤、ビタミン、遮断剤、湿潤化剤、必須オイル、染料、顔料、親水性活性剤、親油性活性剤または脂質小胞など皮膚外用剤に通常使用される任意の他の成分のような皮膚科学分野において通常使用される補助剤を含有してもよい。また、前記成分は、皮膚科学分野において一般的に使用される量で導入されてもよい。
【0060】
本発明の炎症性ないし自己免疫性疾患の予防及び治療用薬学組成物が皮膚外用剤として提供される場合、これに制限されるものではなく、軟膏、パッチ、ゲル、クリームまたは噴霧剤などの剤形であってもよい。
【0061】
また、本発明は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドと、
からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のペプチドを含む抗炎症用組成物を提供しうる。
配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドと、
配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドと、
からなる群から選ばれるいずれか一つ以上のペプチドを含む抗炎症用組成物を提供しうる。
【発明の効果】
【0062】
本発明の配列番号１～４のアミノ酸配列のうちいずれか一つの配列を含むペプチドは、ＩＬ－１７などの炎症性サイトカインの分泌ないし発現を有意に抑制でき、炎症性または自己免疫性疾患の予防または治療活性を有することができる。したがって、前記ペプチドのうちいずれか一つ以上を含む組成物は、炎症性疾患または自己免疫性疾患の予防または治療用薬学的組成物、治療方法、治療薬物の製造時に使用するための用途ないし抗炎症用組成物として効果的である。
【図面の簡単な説明】
【0063】
【図2】図２は、ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカインのＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ検索結果を示す。ＢＬＯＳＵＭ４５ ｓｃｏｒｉｎｇ ｍａｔｒｉｘ及びＥ－値カットオフ値３０を用いて高い点数を持つ６つの相同性タンパク質を確認した。
【図4】図４は、ＩＬ－１０（上段）及びｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（下段）のアミノ酸配列の比較結果及びその構造を示す。両配列の類似度が高いほど濃い青色で表示され、類似度が低いほど色は明るくなり、最終的に白色で表示された。
【発明を実施するための形態】
【0064】
以下、実施例によって本発明をより詳細に説明する。これらの実施例は、単に本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲がこれらの実施例によって制限されるものと解釈しないことは、当該技術分野において通常の知識を有する者にとって自明であろう。
【実施例1】
【0065】
ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン３次構造確認
ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（ｔＫ５６２）の３次構造を確認するため、すべてのモデリングと計算は、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｓｔｕｄｉｏ ４.５（Ｂｉｏｖｉａ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）のプロトコルを使用して行った。
ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（ｔＫ５６２）の３次構造を確認するため、すべてのモデリングと計算は、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｓｔｕｄｉｏ ４.５（Ｂｉｏｖｉａ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）のプロトコルを使用して行った。
【0066】
具体的には、ＰＳＩ ｂｌａｓｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ（ｐｏｓｉｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｔｅｒａｔｅｄ ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ）を介してｔＫ５６２の配列と部分的に相同性の高い多様なタンパク質を確認したが、相同性タンパク質は、Ｅ値カットオフ値３０を持つＢＬＯＳＵＭ４５スコアリングマトリックスを使用して調査した。前記相同性の高い様々なタンパク質を再び多重整列（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ；ＭＳＡ）を行って多数の鋳型タンパク質とｔＫ５６２サイトカインの相同性モデリングを行った（図２）。その後、エネルギー最小化過程を介して構造を正確に最適化した。
【0067】
その結果、図３に示すように、ｔＫ５６２サイトカインの３次元的な構造が得られた。
【実施例2】
【0068】
ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカインのリン酸化パターン分析
Ｋ５６２サイトカインないしｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（ｔＫ５６２）の抗炎症効果メカニズムを確認するため、リン酸化パターンを分析した。
Ｋ５６２サイトカインないしｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（ｔＫ５６２）の抗炎症効果メカニズムを確認するため、リン酸化パターンを分析した。
【0069】
具体的には、Ｋ５６２サイトカイン全長ないしｔＫ５６２を発現する形質転換マウスを作製し、その細胞信号伝達タンパク質のリン酸化パターンを分析した。
【0070】
その結果、マクロファージにおいてリン酸化が大きく変化した受容体または細胞内のタンパク質が発見された。そのうち、ＩＬ－１０が結合するＩＬ－１０受容体サブユニットアルファ（ＩＬ－１０Ｒ－α）のチロシン４９６がリン酸化されたことを確認した。したがって、本発明者らは、Ｋ５６２サイトカインないしｔＫ５６２がＩＬ－１０と類似したメカニズムでＩＬ－１０受容体に作用すると判断した。
【実施例3】
【0071】
ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカインエピトープ選別
本発明者らは、ＩＬ－１０とｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（ｔＫ５６２）が類似してＩＬ－１０受容体に作用して抗炎症効果を示すものと予想し、ｔＫ５６２とＩＬ－１０を比較してｔＫ５６２で実際の抗炎症効果を示すのに必ず必要な部分（エピトープ；ｅｐｉｔｏｐｅ）が存在できる領域の候補を確認した。
本発明者らは、ＩＬ－１０とｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（ｔＫ５６２）が類似してＩＬ－１０受容体に作用して抗炎症効果を示すものと予想し、ｔＫ５６２とＩＬ－１０を比較してｔＫ５６２で実際の抗炎症効果を示すのに必ず必要な部分（エピトープ；ｅｐｉｔｏｐｅ）が存在できる領域の候補を確認した。
【0072】
具体的には、ｔＫ５６２とＩＬ－１０の配列及び構造類似性を比較し、ｔＫ５６２とＩＬ－１０Ｒ－αの間のドッキングシミュレーションは、ＺＤＯＣＫアルゴリズムのドッキングプロトコルを使用して行った。これによってｔＫ５６２二量体を作製して脱溶媒（ｄｅｓｏｌｖａｔｉｏｎ）エネルギー、静電気及び構造相補性に基づいて可能なすべての結合モードを探し出し、ＩＬ－１０の活性部位と相同性の高いｔＫ５６２エピトープを選別した。
【0073】
【表1】
【0074】
その結果、図４に示すように、二つのタンパク質の配列は、約４８％の高い相同性を有し、特に前記相同性を有する配列部位は、ＩＬ－１０とＩＬ－１０受容体（ＩＬ－１０Ｒ－α）が結合する部分、すなわち、ＩＬ－１０の活性部位に該当することを確認した。また、前記表１及び図５に示すように、計４種類の短いペプチド配列を有するｔＫ５６２エピトープ（ＡＩＰ－ＹＫ１、ＡＩＰ－ＹＫ２、ＡＩＰ－ＹＫ３及びＡＩＰ－ＹＫ４）を最終的に選別した。各エピトープの分子量は、２ｋＤａ未満であった。
【実施例4】
【0075】
ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカインエピトープのＴｈ１７細胞分化実験
前記実施例３で提案した４種のｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（ｔＫ５６２）エピトープの抗炎症効果を確認するため、Ｔｈ１７細胞の分化実験を行った。
前記実施例３で提案した４種のｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（ｔＫ５６２）エピトープの抗炎症効果を確認するため、Ｔｈ１７細胞の分化実験を行った。
【0076】
具体的には、製作者の指針によって磁気活性化細胞選別(ｍａｇｎｅｔｉｃ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｏｒｔｉｎｇ；ＭＡＣＳ)ＣＤ４＋Ｔ細胞分離キット(Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ)を使用して野生型Ｂａｌｂ／ｃマウスの脾臓からｎａｉｖｅＣＤ４＋Ｔ細胞を分離した。分離したｎａｉｖｅ ＣＤ４＋Ｔ細胞は、リン酸緩衝食塩水(ＰＢＳ)、ＶＩＰ(ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ)またはＡＩＰ－ＹＫ１～４を処理した後、ＲＰＭＩ培地で３日間培養した。前記ＲＰＭＩ培地は、Ｔｈ１７細胞の分化を刺激するため、１ｇ／ｍｌ抗－ＣＤ３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）、１ｇ／ｍｌ抗－ＣＤ２８（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、２ｎｇ／ｍｌＴＧＦ－β（Ｒ＆Ｄシステム、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）、２０ｎｇ／ｍｌＩＬ－６（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）、５μｇ／ｍｌ抗－ＩＦＮ－γ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）及び５ｇ／ｍｌ抗－ＩＬ－４（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を含む。培養後、抗－ＣＤ３及び抗－ＣＤ２８抗体で２４時間刺激してＴｈ１７細胞から分泌されたＩＬ－１７のレベルをｑＰＣＲで測定した。
【0077】
その結果、図６に示すように、本発明のＡＩＰ－ＹＫ１～４ペプチドは、すべてＩＬ－１７抑制活性を示すことが確認できた。具体的には、ＩＬ－１７サイトカインの濃度は、炎症誘発時（ＴＨ１７[Ｗ１]）に９３５ｐｇ／ｍｌ、陽性対照群であるＶＩＰ処理時に５４７ｐｇ／ｍｌ、ＡＩＰ－ＹＫ１（ｐｅｐ １）、２（ｐｅｐ ２）、３（ｐｅｐ ３）または４（ｐｅｐ ４）処理時にそれぞれ７４８，６６６，７５０または５６９ｐｇ／ｍｌであった。すなわち、本発明で選別したエピトープは、ＩＬ－１７を効果的に抑制でき、特にＡＩＰ－ＹＫ４は、ＶＩＰと類似したレベルで最も優れたＩＬ－１７の抑制効果を示すことを確認した。
【産業上の利用可能性】
【0078】
本発明で提供するペプチドは、ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（ｔＫ５６２）の中で実質的に抗炎症効果を起こすのに必ず必要なペプチド（エピトープ）を分離して抗炎症効果ないし自己免疫性疾患の予防または治療に効果があり、安全かつ医薬品などに開発されるのに適したサイズ（分子量）のペプチドなので、産業上の利用可能性が大きい。
【0079】
配列表Ｆｒｅｅ Ｔｅｘｔ
配列番号１は、本発明で提供する抗炎症効果ないし自己免疫性疾患の予防または治療効果があるＡＩＰ－ＹＫ１ペプチド（エピトープ）の配列で、３１個のアミノ酸配列である。
配列番号１は、本発明で提供する抗炎症効果ないし自己免疫性疾患の予防または治療効果があるＡＩＰ－ＹＫ１ペプチド（エピトープ）の配列で、３１個のアミノ酸配列である。
【0080】
配列番号２は、本発明で提供する抗炎症効果ないし自己免疫性疾患の予防または治療効果があるＡＩＰ－ＹＫ２ペプチド（エピトープ）の配列で、３１個のアミノ酸配列である。
【0081】
配列番号３は、本発明で提供する抗炎症効果ないし自己免疫性疾患の予防または治療効果があるＡＩＰ－ＹＫ３ペプチド（エピトープ）の配列で、２６個のアミノ酸配列である。
【0082】
配列番号４は、本発明で提供する抗炎症効果ないし自己免疫性疾患の予防または治療効果があるＡＩＰ－ＹＫ４ペプチド（エピトープ）の配列で、１８個のアミノ酸配列である。
【0083】
配列番号５は、ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（ｔＫ５６２）のアミノ酸配列である。
【0084】
配列番号６は、ｔｒｕｎｃａｔｅｄ Ｋ５６２サイトカイン（ｔＫ５６２）の塩基配列である。
【0085】
配列番号７は、ＡＩＰ－ＹＫ１（配列番号１）の塩基配列である。
【0086】
配列番号８は、ＡＩＰ－ＹＫ２（配列番号２）の塩基配列である。
【0087】
配列番号９は、ＡＩＰ－ＹＫ３（配列番号３）の塩基配列である。
【0088】
配列番号１０は、ＡＩＰ－ＹＫ４（配列番号４）の塩基配列である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【配列表】
【国際調査報告】