▶ シャーメン アモイトップ バイオテック カンパニー， リミテッドの特許一覧 ▶ バイオスティード ジーン トランスフォーメーション テック． カンパニー リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-09-29
(54)【発明の名称】インターフェロンベースの疾患治療法
(51)【国際特許分類】
A61K 38/21 20060101AFI20220921BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220921BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20220921BHJP
A61P 31/18 20060101ALI20220921BHJP
A61P 31/22 20060101ALI20220921BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220921BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20220921BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220921BHJP
A61K 31/282 20060101ALI20220921BHJP
A61K 31/704 20060101ALI20220921BHJP
A61K 31/337 20060101ALI20220921BHJP
A61K 31/7068 20060101ALI20220921BHJP
C07K 14/555 20060101ALN20220921BHJP
C07K 14/56 20060101ALN20220921BHJP
C07K 14/565 20060101ALN20220921BHJP
C07K 14/57 20060101ALN20220921BHJP
C12N 9/99 20060101ALN20220921BHJP
C07K 16/30 20060101ALN20220921BHJP
【ＦＩ】
A61K38/21 ZNA
A61P43/00 111
A61P31/12
A61P31/18
A61P31/22
A61P35/00
A61P35/02
A61K45/00
A61K31/282
A61K31/704
A61K31/337
A61K31/7068
C07K14/555
C07K14/56
C07K14/565
C07K14/57
C12N9/99
C07K16/30
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2022504577
(86)(22)【出願日】2020-07-22
(85)【翻訳文提出日】2022-03-11
(86)【国際出願番号】 CN2020103613
(87)【国際公開番号】W WO2021013204
(87)【国際公開日】2021-01-28
(31)【優先権主張番号】201910660749.1
(32)【優先日】2019-07-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】522030208
【氏名又は名称】シャーメン アモイトップ バイオテック カンパニー， リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＸＩＡＭＥＮ ＡＭＯＹＴＯＰ ＢＩＯＴＥＣＨ ＣＯ．， ＬＴＤ．
(71)【出願人】
【識別番号】522030219
【氏名又は名称】バイオスティード ジーン トランスフォーメーション テック． カンパニー リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＢＩＯＳＴＥＥＤ ＧＥＮＥ ＴＲＡＮＳＦＯＲＭＡＴＩＯＮ ＴＥＣＨ．ＣＯ．， ＬＴＤ．
(74)【代理人】
【識別番号】100107456
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 成人
(74)【代理人】
【識別番号】100162352
【弁理士】
【氏名又は名称】酒巻 順一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100123995
【弁理士】
【氏名又は名称】野田 雅一
(72)【発明者】
【氏名】スン， リー
(72)【発明者】
【氏名】チョウ， ウェイドン
(72)【発明者】
【氏名】リャオ， シャオジン
(72)【発明者】
【氏名】チュワン， ル
(72)【発明者】
【氏名】ヘ， リュオイー
(72)【発明者】
【氏名】チョウ， チン
(72)【発明者】
【氏名】ゼン， リンイン
(72)【発明者】
【氏名】ヤン， メイファ
(72)【発明者】
【氏名】ワン， シーユアン
(72)【発明者】
【氏名】チェン， ジェファ
(72)【発明者】
【氏名】チャン， リンジョン
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
4C206
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA19
4C084DA21
4C084DA22
4C084DA23
4C084DA24
4C084MA02
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZB26
4C084ZB27
4C084ZB331
4C084ZB332
4C084ZC751
4C086AA01
4C086AA02
4C086BA02
4C086EA10
4C086EA17
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZB27
4C086ZC75
4C206AA01
4C206AA02
4C206JB16
4C206MA02
4C206MA04
4C206NA05
4C206NA14
4C206ZB26
4C206ZB27
4C206ZC75
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA57
4H045CA40
4H045DA15
4H045DA16
4H045DA17
4H045DA18
4H045DA76
4H045EA22
4H045EA28
4H045EA29
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、生物医学の分野に関するものである。特に、本発明は、疾患を治療するためのインターフェロンベースの方法であって、インターフェロンベースの治療剤を対象に間欠的投与することを含み、疾患は、例えば、ウイルス感染又は癌である、方法に関する。
【選択図】 なし
【選択図】 なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象の疾患を治療する方法であって、インターフェロンベースの治療剤を前記対象に複数の連続的な治療コースで間欠的に投与するステップを含む、方法。
【請求項2】
前記インターフェロンベースの治療剤が、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含むか、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体をコードする核酸分子を含むか、又は内在性インターフェロンの生成を促進する物質を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記インターフェロンが、Ｉ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型のインターフェロン、例えば、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ又はインターフェロンλ、好ましくはインターフェロンαである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記インターフェロンベースの治療剤が、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα１ｂ、インターフェロンλ、又はその変異体若しくは誘導体を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体がＰＥＧ化されている、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
前記インターフェロンベースの治療剤が、Ｐ１１０１、ペグベロン（Ｐｅｇｂｅｒｏｎ）、ペガシス（Ｐｅｇａｓｙｓ）、ペギントロン（Ｐｅｇｉｎｔｒｏｎ）、インファーゲン（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ）、ノバフェロン（Ｎｏｖａｆｅｒｏｎ）、イントロンＡ（ＩＮＴＲＯＮＡ）、ロフェロン（Ｒｏｆｅｒｏｎ）－Ａ、ハプゲン（Ｈａｐｇｅｎ）、ペギンファー（ＰＥＧＩＮＦＥＲ）及びペグインターフェロンλからなる群から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記インターフェロンベースの治療剤が、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧシグナル経路のアゴニストを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記インターフェロンベースの治療剤が、ＧＳ－９６２０、ＧＳ－９６８８、ＲＯ７０２０５３１、ＲＯ６８６４０１８、ＴＱ－Ａ３３３４、ＪＮＪ－４９６４、ＳＢ９２００、ＭＩＷ８１５、ＤＭＸＡＡ、ＭＫ－１４５４、及びｄｉＡＢＺＩからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
前記連続的な治療コースにおいて、実質的に全コースの間、対象におけるネオプテリンの濃度が、最初の投与前のネオプテリンの濃度よりも高くなるように、例えば、最初の投与前のネオプテリンの濃度の約１１０％、約１２０％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約２００％、約２５０％に又はそれより高くなるように、インターフェロンベースの治療剤が投与される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記連続的な治療コースの期間が、最初の投与から最後の投与までの期間、プラス治療剤のインビボ半減期の約５倍である、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
前記複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間が、約１週間～約２４週間、好ましくは約１週間～約１２週間、さらに好ましくは約１週間～約８週間、さらに好ましくは約２週間～約６週間である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記連続的な治療コースのそれぞれの期間が約１週間～約１２週間であり、連続的な治療コース間の間隔が約１週間～約１２週間である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記連続的な治療コース間の間隔が、約１週間～約２４週間、好ましくは約１週間～約１２週間、さらに好ましくは約１週間～約８週間、よりさらに好ましくは約２週間～約６週間である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記連続的な治療コースのそれぞれの期間が約１週間～約８週間であり、連続的な治療コース間の間隔が約１週間～約８週間である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記連続的な治療コースのそれぞれの期間が約２週間～約６週間であり、連続的な治療コース間の間隔が約２週間～約６週間である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記インターフェロンベースの治療剤を２～２５以上の連続的な治療コースで投与する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記連続的な複数の治療コースの期間が実質的に同じである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
連続的な治療コース間の間隔が実質的に同じである、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記疾患がウイルス感染症であり、例えば、Ｂ型肝炎ウイルス感染症、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、Ｄ型肝炎ウイルス感染症、ＨＩＶ感染症、ＥＢＶ感染症、ＨＰＶ感染症、ＣＭＶ感染症及びヘルペスウイルス感染症から選択されるウイルス感染症であり、好ましくはＢ型肝炎ウイルス感染症である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記疾患が癌であり、例えば、白血病（急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病、多毛性白血病等）、肝臓癌、肺癌、結腸直腸癌、皮膚癌、胃癌、乳癌、前立腺癌、非ホジキンリンパ腫、黒色腫、多発性骨髄腫、喉頭乳頭腫、濾胞性リンパ腫、ＡＩＤＳ関連のカポジ肉腫、及び腎細胞癌、好ましくは肝臓癌、肺癌、乳癌、結腸直腸癌、又は黒色腫である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
対象に追加の薬剤を投与することをさらに含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記インターフェロンベースの治療剤の投与が、追加の薬剤の投与と重複しない、請求項２１に記載の方法。
【請求項23】
前記追加の薬剤が、前記複数の連続的な治療コースの間に投与される、請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
前記インターフェロンベースの治療剤の投与が、追加の薬剤の投与と重複する、請求項２１に記載の方法。
【請求項25】
前記追加の薬剤が、複数の連続的な治療コースの間に投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項26】
前記追加の薬剤が従来のスキームに従って投与される、請求項２１～２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項27】
前記追加の薬剤が抗ウイルス剤である、請求項２１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記抗ウイルス剤が、アマンタジン、リマンタジン、エンフビルチド、マラビロ等の侵入・脱殻阻害剤；アシクロビル、ガンシクロビル、バラシクロビル、ファムシクロビル、ホスカルネット等のＤＮＡポリメラーゼ阻害剤；ラミブジン、ジドブジン、エムトリシタビン、テノホビル、アデホビルジピボキシル、ＴＡＦ、エンテカビル等のヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤、エファビレンツ、ネビラピン等の逆転写酵素阻害剤；サキナビルなどの蛋白質阻害剤；オセルタミビル、ザナミビル等のノイラミニダーゼ阻害剤；リバビリン等の広範囲抗ウイルス剤等である、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
前記インターフェロンベースの治療剤がペグベロンであり、抗ウイルス剤がエンテカビルである、請求項２１～２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
Ｂ型肝炎ウイルス感染症の治療に用いられ、前記インターフェロンベースの治療剤がペグベロンであり、連続的な治療コースのそれぞれの期間が約５週間～約２４週間であり、連続的な治療コース間の間隔が約２週間～８週間であり、抗ウイルス剤が毎日投与されるエンテカビルである、請求項２１～２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記追加の薬剤が抗癌剤である、請求項２１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記抗癌剤がｉ）化学療法剤、例えば、アルキル化剤、アルキル化剤；ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、グリシホスホラミド、セムスチン；代謝拮抗剤：デオキシフルオグアノシン、ドキシフルグアニジン、５－フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルグアノシン、テガフール、ゲムシタビン、カルモフール、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ＵＦＴ、アンシタビン、カペシタビン；抗腫瘍性抗生物質：アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ペロマイシン、ピンヤンマイシン、ピラルビシン；化学療法の抗腫瘍性動物及び植物成分：イリノテカン、ハリントニン、ヒドロキシカンプトテシン、ビノレルビン、パクリタキセル、アルブミンパクリタキセル、タキソテール、トポテカン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンデシン、ビンブラスチン、テニポシド、エトポシド、エレメン；抗腫瘍剤ホルモン：アタメスタン、アナストロゾール、アミノグルテチミド、レトロゾール、フォルメスタン、メタステロン、タモキシフェン；種々の化学療法剤：アスパラギナーゼ、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、オキサリプラチン、ロキサジン、エロキサチン、ミトキサントロン、プロカルバジン；又は
ｉｉ）ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４の阻害剤等の免疫チェックポイント阻害剤、例えば：ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブから選択される抗体；又は
ｉｉｉ）低分子標的薬、例えば、イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、レナリドミド、スニチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、バンデタニブ、クリゾチニブ、ベロフィニブ、ルキソリチニブ、アキシチニブ、ビスモデギブ、カルフィルゾミブ、レゴラフェニブ、ボスチニブ、トファシチニブ、カルボチニブ、パナチニブ、ポマリドマイド、トラメチニブ、ダブラフェニブ、アファチニブ、イコチニブ、イブルチニブ、セリチニブ、イデラリス、アパチニブ、パブチリブ、レバチニブ、アキシチニブ、イコチニブ、アパチニブ、ソニデギブ、コビメチニブ、オシメルチニブ、アレクチニブ、イキサゾミブ；又は
ｉｖ）リツキサン、ハーセプチン等の腫瘍関連抗原特異的抗体であり、
好ましくは、抗癌剤が、オキサリプラチン、エピルビシン、パクリタキセル及びゲムシタビンから選択され、より好ましくはゲムシタビンである、請求項３１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、生物医学の分野に関する。特に、本発明は、疾患を治療するためのインターフェロンベースの方法であって、インターフェロンベースの治療剤を対象に間欠的に投与することを含み、疾患が、例えば、ウイルス感染症又は癌である、方法に関する。
【背景技術】
【0002】
インターフェロン（ＩＦＮ）は、複数の機能を有する活性タンパク質であり、単球及びリンパ球から産生されるサイトカインである。広範囲抗ウイルス活性、細胞の増殖、分化への影響、及び免疫機能の調節等、種々の生物活性を有しており、インターフェロンは、現在、最も重要な抗ウイルス感染症及び抗腫瘍の生物学的製剤である。広範囲抗ウイルス物質としてのインターフェロンは、ウイルスを直接的に死滅又は抑制するものではない。代わりに、インターフェロンは、主に細胞表面の受容体に作用し、細胞が抗ウイルスタンパク質を生成することによって、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、マクロファージ、及びＴリンパ球の活性を増強しながら、ウイルスの複製を阻害し、これによってインターフェロンが免疫調節を行い、抗ウイルス能力を向上するようになっている。
【0003】
現在、インターフェロンはＩ型、ＩＩ型、及びＩＩＩ型インターフェロンに分類される。タイプＩインターフェロンは、ＩＦＮ－α、及びＩＦＮ－β等を含む。ＩＦＮ－αインターフェロンは、主に単球－マクロファージによって生成される。さらに、Ｂ細胞及び線維芽細胞もＩＦＮ－αインターフェロンを合成し得る。ＩＦＮ－βインターフェロンは、主に繊維芽細胞によって生成される。ＩＦＮ－αインターフェロン及びＩＦＮ－βインターフェロンは共に、例えば単球－マクロファージ、多形核白血球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、血小板、上皮細胞、内皮細胞、及び腫瘍細胞に広く分布する同じ受容体に結合する。ＩＦＮαには２３を超えるサブタイプがあることが知られている。ＩＦＮβには１つのサブタイプしかない。ＩＩ型インターフェロン、又はγインターフェロンは、主に活性化Ｔ細胞（Ｔｈ０、Ｔｈ１細胞、殆ど全てのＣＤ８＋Ｔ細胞を含む）及びＮＫ細胞によって生成され、いわゆるリンパカインに属する。ＩＦＮ－γは、細胞外マトリクスに結合した形で存在している場合もあり、バイスタンダー効果によって細胞の増殖を制御し得る。ＩＦＮ－γは、成熟した赤血球を除く殆ど全ての細胞の表面に分布し得る。ＩＦＮ－γには１つのサブタイプしかない。ＩＩＩ型インターフェロンは、主にインターフェロンλを指す。
【0004】
インターフェロン、インターフェロン変異体、及びインターフェロン誘導体は、種々の治療に広く使用することが承認されている。ヒトの臨床治療について承認されているインターフェロン及び変異体としては、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα１ｂ、化合物インターフェロン（インファーゲン（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ））、及びインターフェロン変異体（例えばノバフェロン（Ｎｏｖａｆｅｒｏｎ））、インターフェロンβ、及びインターフェロンγ（１ｂ）等が挙げられる。インターフェロン誘導体としては、ペグインターフェロンα２ａ、ペグインターフェロンα２ｂ、及び統合型インターフェロン等が挙げられる。
【0005】
また、近年、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧ等のシグナル経路の発見及び解明に伴い、上述のシグナル経路に作用してインターフェロンを生成する一連のアゴニストが発見及び解明され、その使用も今後のインターフェロンベースの治療の新たな方向性となっている。現在のところ、この種のアゴニストは、ＨＢＶ及び関連する腫瘍の治療に用いられている。
【0006】
しかし、インターフェロン物質及びそのアゴニストによって一定の治療効果が得られているものの、その応用効果はあまり満足できるものではない。Ｂ型慢性肝炎の治療を例にとると、ｅ抗原陽性のＢ型慢性肝炎患者においては、約３０％のみのｅ抗原の血清転換、及び１～３％のみのＳ抗原のクリアランス率しかもたらし得ないことが示されており（ペグベロン（Ｐｅｇｂｅｒｏｎ）のマニュアル参照）、そのため、臨床使用効果は低いものとなっている。多数の臨床試験によって、インターフェロン製剤を連続的に使用した場合、治療プロセス初期において表面抗原指標及びｅ抗原指標は、後期の指標よりも速く低下し、後期の変化は緩やかであることが示されている。ＨＢＶの複数の遺伝子型を対象とした研究の結果は類似しており、その作用機序は特定のＴ細胞の疲弊及び免疫抑制に関係し得ることが多くの研究で示されている。治療効果を改善するための方法は徐々に進行している。
【0007】
Ｉ型ＩＦＮは、癌の臨床治療のためにＦＤＡが承認した最初の免疫療法薬剤のバッチである。ＩＦＮは、血液系腫瘍に最も優れた治癒効果を示し、次いでリンパ系腫瘍にも効果があるが、悪性黒色腫、卵巣腫瘍、結腸直腸癌等の固形腫瘍については治癒効果が２０％以下と最悪の結果となる。また、インターフェロンと化学療法、放射線療法、免疫療法との併用適用は、現在のところインターフェロンを用いた一般的な抗腫瘍療法である。例えば、肝臓癌及び結腸直腸癌の治療に対するインターフェロンと５－フルオロウラシルとの併用適用、肺癌を治療するためのインターフェロンとシスプラチン、カルボプラチン等との併用適用がある。これらの研究は一定の成果を上げているが、全体的な効果はそれほど満足できるものではなく、予後は不良である。また、インターフェロンは一般的に臨床現場では大量に連続適用によって投与され、これにより、薬剤関連毒性、及び患者のコンプライアンス又は耐性が低いなどの問題が必然的に引き起こされる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
要約すると、インターフェロンの適用、又はインターフェロンと抗癌剤若しくは放射線療法及び他の治療方法との併用適用については、臨床応用がある程度進んでいるが、一般的には、そのような方法は、望ましくない効果をもたらし、予後が不良であり、毒性の副作用が大きい。
【0009】
したがって、当技術分野では、インターフェロンベースの治療法を改善し、より優れた治療効果を達成することが依然として望ましい。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【図1】ペガシス（Ｐｅｇａｓｙｓ）又はペグベロンを従来のレジメンで投与した場合のＢ型慢性肝炎の治療効果（表面抗原－時間曲線）を示す。
【図2】インターフェロンを間欠的に投与することで、治療後期におけるインターフェロンの有効性が改善し得ることを示す。
【図3】インターフェロンを間欠的に投与することで、繰り返して免疫クリアランスを開始し得ることを示す。
【図4】インターフェロンを間欠的に投与することで、患者の血清中のＢ型肝炎表面抗原が陰性化し得ることを示す。
【図5】ｍＩＦＮ－α４発酵上清のＳＰ セファロースファーストフロー（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ）の溶出プロファイルを示す。
【図6】ＳＰセファロースファーストフロー精製標的ｍＩＦＮ－α４の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１４％分離ゲル、銀染色）電気泳動の結果を示す。
【図7】グリコシルを除去したｍＩＦＮ－α４のＱ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ精製溶出プロファイルを示す。
【図8】グリコシルを除去したｍＩＦＮ－α４のＱ セファロースファーストフロー精製原液の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１４％分離ゲル、銀染色）電気泳動の結果を示す。
【図9】ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４のＳＰ セファロースファーストフロー精製溶出プロファイルを示す。
【図10】ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４原液の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（銀染色）電気泳動の結果を示す。
【図11】１μｇ／マウスのＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４をＢＡＬＢ／ｃマウスに単回皮下注射したときの血漿濃度時間曲線を示す。
【図12】マウスの移植肝癌Ｈ２２の治療におけるＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の連続投与及び間欠的投与の有効性に関する比較実験の生存曲線を示す。
【図13】マウスの肝臓癌Ｈ２２の治療におけるゲムシタビンの投与と組み合わせたインターフェロンの間欠的投与の腫瘍変化を示す。
【図14】マウスの肺癌ＬＬＣの治療におけるゲムシタビンの投与と組み合わせたインターフェロンの間欠的投与の腫瘍変化を示す。
【図15】結腸直腸癌ＣＴ２６の治療におけるゲムシタビンの投与と組み合わせたインターフェロンの間欠的投与の腫瘍変化を示す。
【図16】黒色腫Ｂ１６の治療におけるゲムシタビンの投与と組み合わせたインターフェロンの間欠的投与の腫瘍変化を示す。
【図17】マウスの移植肝癌Ｈ２２の治療におけるゲムシタビンの投与と組み合わせたＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与の有効性についての比較実験の生存曲線を示す。
【図18】マウスの移植肝癌Ｈ２２の治療における抗癌剤エピルビシンの投与と組み合わせたインターフェロンの間欠的投与の生存曲線を示す。
【図19】マウスの移植肝癌Ｈ２２の治療における抗癌剤オキサリプラチンの投与と組み合わせたインターフェロンの間欠的投与の生存曲線を示す。
【図20】マウスの移植肝癌Ｈ２２の治療における抗癌剤パクリタキセルの投与と組み合わせたインターフェロンの間欠的投与の生存曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【0011】
本発明者らは、インターフェロンを一定の治療コースで連続的に投与する場合と比較して、複数の治療コースでインターフェロンを間欠的に投与することにより、有意に優れた治療効果を達成し得ること、例えば、実質的に同じ用量で、実質的に同じ投与時間で、又は実質的に同じ治療期間で、有意に優れた治療効果を達成し得ることを予想外に見出した。
【0012】
理論に限定されるものではないが、インターフェロンを長期間連続的して投与すると、回復が困難な免疫細胞の消費が引き起こされ得ると考えられている。インターフェロンの有効性は、免疫系に依存している。そのため、インターフェロンベースの療法は、免疫細胞が未だ十分にある治療初期には、高いウイルスクリアランス又は腫瘍抑制等の良好な治療効果を達成し得る。しかし、治療後期には、インターフェロンの長期投与によって引き起こされる免疫細胞の欠乏により、治療効果が大幅に低下し、インターフェロンの投与を継続しても改善されないことがある。この問題は、インターフェロンを間欠的に投与することで回避し得る。例えば、一定の治療効果を達成するためにインターフェロンを一定期間投与した後、部分的な免疫抑制及び免疫細胞が疲弊する前に、インターフェロンの投与を一定期間停止し、免疫細胞ができるだけ速く回復することを可能にし、その後、インターフェロンの投与を再開した場合、良好な治療効果をなお達成し得る。
【0013】
したがって、一態様において、本発明は、インターフェロンベースの治療剤を複数の連続した治療コースで対象に間欠的に投与することを含む、対象の疾患を治療するための方法を提供する。
【0014】
「インターフェロン」は、ヒトインターフェロン、例えば、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ又はインターフェロンλ、好ましくはインターフェロンα等のＩ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型インターフェロンであってもよい。
【0015】
本明細書で使用する「インターフェロンベースの治療剤」は、天然のインターフェロンの効果の少なくとも一部を生成することができる治療剤を指す。
【0016】
例えば、「インターフェロンベースの治療剤」は、自然に単離されたインターフェロン、又は組換え生成されたインターフェロン、例えばＩ型インターフェロン、好ましくはインターフェロンαを含み得る。好適なインターフェロンαとしては、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ又はインターフェロンα１ｂが挙げられるが、これらに限定されない。
【0017】
また、「インターフェロンベースの治療剤」は、インファーゲン（組換え統合型インターフェロン）等のインターフェロン変異体を含み得る。
【0018】
また、「インターフェロンベースの治療剤」は、インターフェロン誘導体、例えば、ＰＥＧ化インターフェロン又はその変異体、アルブミン化インターフェロン又はその変異体、及び他のタンパク質及び有機修飾されたインターフェロン及びその変異体等を含み得る。ＰＥＧ化修飾インターフェロン又はその変異体の例としては、ペグインターフェロンα２ａ（例えば、ペガシス、４０Ｋｄ二分枝ＵＰＥＧ－ＮＨＳ修飾）、ペグインターフェロンα２ｂ（例えば、ペギントロン（Ｐｅｇｉｎｔｒｏｎ）、１２Ｋｄ直鎖ＰＥＧ－ＳＣ修飾）、ペグインターフェロンα２ｂ（例えば、ペグベロン、Ｙ型４０Ｋｄ ＰＥＧ修飾）、培養インターフェロンα－２（例えば、ペギンファー（ＰＥＧＩＮＦＥＲ））、ペグインターフェロンλ、及びＰ１１０１等が挙げられる。
【0019】
いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ＰＥＧ化インターフェロン又はその変異体等の長時間作用型インターフェロンを含む。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、短時間作用型インターフェロンを含む。
【0020】
いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、複数の種類のインターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含む。
【0021】
「インターフェロンベースの治療剤」という用語は、販売が承認されているインターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含む種々の治療剤を網羅する。いくつかの実施形態では、「インターフェロンベースの治療剤」は、ペグベロン（Ｙ型４０Ｋｄ ＰＥＧ修飾、ペグインターフェロンα２ｂ、アモイトプ（Ａｍｏｙｔｏｐ））である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ペガシス（ペグインターフェロンα２ａ、Ｒｏｃｈｅ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」はペギントロン（ペグインターフェロンα２ｂ注射薬、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」はインファーゲン（組換え統合型インターフェロン、Ａｍｇｅｎ、ＵＳＡ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、Ｉｎｔｒｏｎ Ａ（組換えヒトインターフェロンα２ｂ、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、Ｒｏｆｅｒｏｎ－Ａ（インターフェロンα２ａ、Ｒｏｃｈｅ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ハプゲン（Ｈａｐｇｅｎ）（組換えヒトインターフェロンα１ｂ、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｓａｎｙｕａｎ Ｊｉｙｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ＣＯ．，Ｌｔｄ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ＰＥＧＩＮＦＥＲ（ＰＥＧ化－統合型インターフェロンα－２注射薬、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｋａｗｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ペグインターフェロンλ（Ｎａｎｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｂｉｏｔｅｃｈｂｏｌｏｇｙ）である。
【0022】
いくつかの好ましい実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、インターフェロンα２ｂを含む。いくつかの好ましい実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、ポリエチレングリコール修飾インターフェロンα２ｂを含む。いくつかの好ましい実施形態において、インターフェロンベースの治療剤はペグベロンである。
【0023】
いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含み、ここで、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体は、配列番号１～５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、又は、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体は、配列番号１～５のいずれか１つに対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0024】
いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体をコードする核酸分子、例えば、組換え核酸発現ベクターも含む。適切な発現ベクター、特に治療用途に適した発現ベクターは、当技術分野の当業者によって容易に決定することができる。
【0025】
「インターフェロンベースの治療剤」には、また、内在性インターフェロンの生成を促進することができる物質、例えば、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧシグナル経路のアゴニスト等が含まれていてもよい。内在性インターフェロンの生成を促進することができる物質の例としては、ＧＳ－９６２０、ＧＳ－９６８８、ＲＯ７０２０５３１、ＲＯ６８６４０１８、ＴＱ－Ａ３３３４、ＪＮＪ－４９６４、ＳＢ９２００、ＭＩＷ８１５、ＤＭＸＡＡ、ＭＫ－１４５４、ｄｉＡＢＺＩ等が挙げられるが、これらに限定されない［１］－［３４］。
【0026】
本明細書において使用する用語「連続的な治療コース」は、治療コース中に治療剤を投与することにより、患者体内の（外因性又は内在性）インターフェロンのインビボ有効濃度（例えば、有効血中濃度）を連続的に維持すること、又は患者体内のインターフェロンの主要薬力学マーカーであるネオプテリン（ＮＰＴ）のインビボ濃度（例えば、血中濃度）を、治療剤を投与していない時の濃度（初期濃度又はベースライン濃度）よりも連続的に高く維持することが可能になることを意味する。インターフェロンの主要薬力学的マーカーであるネオプテリンとインターフェロンの投与との間には良好な相関関係があるため、ネオプテリンのインビボ濃度（血中濃度等）の変化を「連続的な治療コース」の指標として使用することが特に好ましい。例えば、「連続的な治療コース」は、インターフェロンベースの治療剤を１回又は複数回投与することにより、実質的に治療コース全体の間、対象のネオプテリン濃度を最初の投与前のネオプテリン濃度（ベースライン濃度）よりも高く、例えば、最初の投与前のネオプテリン濃度の約１１０％、約１２０％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約２００％、約２５０％又はそれより高く保つことができる治療コースと定義することができる。ネオプテリンのインビボ濃度は、当技術分野で知られている方法によって決定し得る。
【0027】
連続的な治療コースでは、インターフェロンベースの治療剤の投与スキームは、一般的には、インビボにおける半減期等、選択された治療剤の特性によって決定される。例えば、連続的治療コースにおいて、長時間作用型インターフェロン（インビボの半減期が概ね３０～１２０時間）は、１週間に１回程度、２週間に１回程度で投与しても、又は１ヶ月に１回程度若しくは投与量を増やす場合にはさらに長期間にわたって投与してもよく、短時間作用型インターフェロン（インビボの半減期が概ね２～５時間）は、１日１回、２日に１回、又は１週間に３回投与しても、又は投与量を増やす（例えば９～３６ＭＩＵ以上）の場合は１週間に１回投与しても、又は投与量を低下させる場合は１日に複数回投与してもよい。連続的な治療コースにおいて、インターフェロンベースの治療剤の投与回数は、上記の「連続的な治療コース」の定義を満たす限り、特に限定されるものではない。当技術分野の当業者であれば、インターフェロンベースの治療剤の、ネオプテリン等の薬力学的マーカーのインビボ濃度（血中濃度等）に基づいて連続的な治療コースを決定することができる。
【0028】
いくつかの実施形態において、「連続的な治療コース」で、「インターフェロンベースの治療剤」をその従来の投与スキームで投与してもよい。例えば、インファーゲン（組換え統合型インターフェロン）、インターフェロンα２ｂ（イントロンＡ等）、インターフェロンα２ａ（ロフェロン－Ａ等）、インターフェロンα１ｂ（ハプゲン等）は、３～１８ＭＩＵの用量範囲で、１日１回、又は２日に１回、又は１週間に３回、投与してもよい。ペグインターフェロンα２ａ（例えば、ペガシス）、ペグインターフェロンα２ｂ（例えば、ペギントロン又はペグベロン）、ＰＥＧ化統合型インターフェロンα－２（例えば、ペギンファー）又はペグインターフェロンλは、４５～２７０μｇの投与量範囲で週に１回投与し得る。Ｐ１１０１は、約４００μｇを２週間に１回投与してもよい。アルブミン化インターフェロンα２ｂは、約９００～約１８００μｇを２週間に１回、又は約１２００μｇを４週間に１回投与してもよい。
【0029】
複数の連続的なコースの各１つの期間は、治療剤が一定の治療効果を達成することを可能にするが、免疫細胞の過剰な消費は避けるべきである。治療コースにおける免疫細胞の消費は、通常、治療指標の変化によって特定される。例えば、関連する治療指標が治療剤の有効性の悪化を示す場合、免疫細胞の過剰な消費を示している可能性がある。例えば、Ｂ型慢性肝炎をインターフェロンで治療する標準的なスキーム（インターフェロン剤による１２ヶ月間の連続的治療）では、治療初期（例えば、最初の３ヶ月間や最初の６ヶ月間）の表面抗原の減少が、治療後期（例えば、後半の９ヶ月間又は後半の６ヶ月間）の表面抗原の減少に比べて有意に大きく、部分的な免疫抑制と免疫細胞の欠乏（例えば、３ヶ月間又は６ヶ月間の連続的投与後）を示す（実施例１参照）。
【0030】
いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、少なくとも約１週間である。
【0031】
いくつかの実施形態では、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、最大で約２４週間である。
【0032】
いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約２４週間であり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、又は約２４週間である。
【0033】
いくつかの好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約１２週間である。いくつかのさらに好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約８週間である。いくつかのさらに好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約２週間～約６週間である。いくつかのさらに好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約２週間である。
【0034】
いくつかの実施形態において、それぞれの連続的な治療コースの終点（すなわち、連続的な治療コース間の間隔の開始点）は、連続的な治療コースにおけるインターフェロンベースの治療剤の最後の投与の時点、プラス治療剤のインビボ半減期の約５倍であってもよい。すなわち、連続的な治療コースの期間は、最初の投与から最後の投与までの期間、プラス治療剤のインビボ半減期の約５倍である。半減期の５倍後では、治療剤は実質的な治療効果をもはや生じないようになると考えられている。
【0035】
本発明の方法では、複数の連続的な治療コース間の間隔は、免疫細胞の再生サイクルに依存し得る。間隔の期間は、治療によって減少した患者の免疫細胞が、治療を効果的に実施できるレベルまで回復するのを可能にすべきである。一般的に、免疫細胞が増殖するには約１～２週間かかると考えられている。したがって、複数の連続的な治療コースの最短の間隔は、約１週間とし得る。
【0036】
いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コース間の間隔は、少なくとも約１週間の間隔である。
【0037】
いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コース間の間隔は最大で約２４週間である。
【0038】
いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コース間の間隔は、約１週間から約２４週間であり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、又は約２４週間である。
【0039】
いくつかの好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コース間の間隔は、約１週間～約１２週間である。いくつかのより好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コース間の間隔は、約１週間～約８週間である。さらにいくつかの好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コース間の間隔は、約２週間～約６週間である。
【0040】
いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間から約２４週間であり、治療コース間の間隔は、約１週間から約２４週間である。
【0041】
いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は約１週間～約１２週間であり、治療コース間の間隔は約１週間～約１２週間である。
【0042】
いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約８週間であり、治療コース間の間隔は、約１週間～約８週間である。
【0043】
いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は約２週間～約６週間であり、治療コース間の間隔は約２週間～約６週間である。
【0044】
いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は約２週間であり、治療コース間の間隔は約２週間である。
【0045】
いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５の、又はそれより多い連続的な治療コースで投与される。
【0046】
いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コースの期間は実質的に同じである。
【0047】
いくつかの実施形態において、治療コースの時間間隔は実質的に同じである。
【0048】
いくつかの具体的な実施形態において、インターフェロンベースの治療剤はペグベロンであり、連続的な治療コースのそれぞれの期間は約５週間～約２４週間であり、連続的な治療コース間の間隔は約２週間～８週間である。
【0049】
いくつかの実施形態において、疾患は、ウイルス感染症である。ウイルス感染症としては、Ｂ型肝炎ウイルス感染症、Ｃ型肝炎ウイルス感染症、Ｄ型肝炎ウイルス感染症、ＨＩＶ感染症、ＥＢＶ感染症、ＨＰＶ感染症、ＣＭＶ感染症、及びヘルペスウイルス感染症等が挙げられるが、これらに限定されず、好ましくはＢ型肝炎ウイルス感染症である。
【0050】
いくつかの実施形態において、疾患は、癌である。癌としては、白血病（急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病、多毛性白血病等）、肝臓癌、肺癌、結腸直腸癌、皮膚癌、胃癌、乳癌、前立腺癌、非ホジキンリンパ腫、黒色腫、多発性骨髄腫、喉頭乳頭腫、濾胞性リンパ腫、ＡＩＤＳ関連カポジ肉腫、及び腎細胞癌等が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、疾患は骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）である。いくつかの好ましい実施形態において、疾患は、肝臓癌、肺癌、乳癌、結腸直腸癌又は黒色腫である。
【0051】
いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、追加の薬剤と併用して投与される。追加の薬剤は、抗ウイルス剤、及び抗癌剤等を含むが、これらに限定されない。
【0052】
いくつかの実施形態において、抗ウイルス剤は、侵入・脱殻阻害剤、例えば非限定的にはアマンタジン、リマンタジン、エンフビルチド、マラビロ；ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤、例えば非限定的にはアシクロビル、ガンシクロビル、バラシクロビル、ファムシクロビル、ホスカルネット；逆転写酵素阻害剤：ヌクレオシド：例えば非限定的にはラミブジン、ジドブジン、エムトリシタビン、テノホビル、アデホビルジピボキシル、ＴＡＦ、エンテカビル、非ヌクレオシド：例えば非限定的には、エファビレンツ、ネビラピン；タンパク質阻害剤：サキナビル；ノイラミニダーゼ阻害剤：例えば非限定的にはオセルタミビル、ザナミビル；広範囲抗ウイルス剤：例えば非限定的にはリバビリン等である。いくつかの好ましい実施形態において、抗ウイルス剤はエンテカビル、テノホビル、及びＴＡＦ等である。
【0053】
いくつかの実施形態において、抗ＨＩＶウイルス治療において、追加の薬剤は、エムトリシタビン、テノホビル、ラミブジン、サキナビル、インジナビル、リトナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、ロピナビル、アタザナビル、カレトラ、ネビラピン、デラビルジン、及びエファビレンツ等を含むが、これらに限定されない。
【0054】
いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤はペグベロンであり、抗ウイルス剤はエンテカビルである。
【0055】
いくつかの具体的な実施形態において、本方法は、Ｂ型肝炎ウイルス感染症を治療するために使用され、インターフェロンベースの治療剤はペグベロンであり、連続的な治療コースのそれぞれの期間は約５週間～約２４週間であり、連続的な治療コース間の間隔は約２週間～８週間であり、抗ウイルス剤はエンテカビルであり、毎日投与される。
【0056】
いくつかの実施形態において、抗癌剤は、化学療法剤であり、例えば、アルキル化剤：ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、グリシホスホラミド、セムスチン；例えば、化学療法的な代謝拮抗剤：デオキシフルオグアノシン、ドキシフルグアニジン、５－フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルグアノシン、テガフール、ゲムシタビン、カルモフール、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ＵＦＴ、アンシタビン、カペシタビン；例えば、化学療法的な抗腫瘍抗生物質：アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ペロマイシン、ピンヤンマイシン、ピラルビシン；例えば化学療法的な抗腫瘍性動物及び植物成分：イリノテカン、ハリントニン、ヒドロキシカンプトテシン、ビノレルビン、パクリタキセル、アルブミンパクリタキセル、タキソテール、トポテカン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンデシン、ビンブラスチン、テニポシド、エトポシド、エレメン；例えば、抗腫瘍剤のホルモン：アタメスタン、アナストロゾール、アミノグルテチミド、レトロゾール、フォルメスタン、メタステロン、タモキシフェン；種々の化学療法剤等：アスパラギナーゼ、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、オキサリプラチン、ロキサジン、エロキサチン、ミトキサントロン、又はプロカルバジンが挙げられるが、これらに限定されない。
【0057】
いくつかの実施形態において、追加の薬剤は小分子標的薬剤であり、イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、レナリドミド、スニチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、バンデタニブ、クリゾチニブ、ベロフィニブ、ルキソリチニブ、アキシチニブ、ビスモデギブ、カーフィルゾミブ、レゴラフェニブ、ボスチニブ、トファシチニブ、カルボチニブ、パナチニブ、ポマリドマイド、トラメチニブ、ダブラフェニブ、アファチニブ、イコチニブ、イブルチニブ。セリチニブ、イデラリス、アパチニブ、パブチリブ、レバチニブ、アキシチニブ、イコチニブ、アパチニブ、ソニデギブ、コビメチニブ、オシメルチニブ、アレクチニブ、イキサゾミブを含むがこれらに限定されない。
【0058】
いくつかの実施形態において、追加の薬剤は、リツキサン、及びハーセプチン等の腫瘍関連抗原特異的抗体である。
【0059】
また、追加の薬剤は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＴＬＡ４等の阻害剤等の免疫チェックポイント阻害剤であってもよく、例えば、特異的抗体等であってもよい。免疫チェックポイント阻害剤の例としては、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、及びアベルマブ等が挙げられるが、これらに限定されない。
【0060】
いくつかの特定の実施形態において、化学療法剤はオキサリプラチンである。いくつかの特定の実施形態において、化学療法剤は、エピルビシンである。いくつかの特定の実施形態において、化学療法剤はパクリタキセルである。
【0061】
いくつかの好ましい実施形態において、化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、及びアンシタビン等の抗代謝性化学療法剤である。いくつかの最も好ましい実施形態において、化学療法剤はゲムシタビンである。
【0062】
いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」の投与は、追加の薬剤の投与とは重複しない。
【0063】
いくつかの実施形態において、追加の薬剤は、複数の連続的な治療コースの間に投与される。例えば、追加の薬剤は、「インターフェロンベースの治療剤」の投与間隔の間の期間に投与されてもよく、前記期間は、前記間隔よりも短いか又は等しい。
【0064】
いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」の投与は、追加の薬剤の投与と重複している。
【0065】
いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コースの間に追加の薬剤が投与される、つまり、治療期間全体で追加の薬剤が投与される（完全に重複する）。
【0066】
抗ウイルス剤等の追加の薬剤を「インターフェロンベースの治療剤」の治療期間全体又は治療間隔内に投与することは、「インターフェロンベースの治療剤」の投与を中断している期間中のウイルスの再感染を抑制又は回避することができるため、Ｂ型肝炎ウイルス感染症等のウイルス感染症の治療に特に好ましい。いくつかの実施形態において、追加の薬剤は、従来のスキーム、例えば、治療される疾患に対するその従来の投与スキームに従って投与される。
【0067】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、対象者のウイルス負荷の低減、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％の低減をもたらす。好ましくは、本発明の方法により、対象のウイルスが実質的に除去され、例えば、従来の方法では検出できなくなる。好ましくは、本発明の方法により、ウイルス感染に関連する１つ又は複数の症候が緩和又は除去される。
【0068】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、腫瘍の退縮若しくは腫瘍体積の減少、又は対象の生存期間の延長をもたらす。特に、本発明の方法は：癌細胞数の減少、腫瘍体積の低下、末梢器官への癌細胞の浸潤の阻害（すなわち、遅延又は停止）、腫瘍転移の阻害（すなわち、遅延又は停止）、腫瘍成長の阻害、及び／又は癌に関連する１つ又は複数の症候の緩和をもたらす。
【0069】
一態様において、本発明は、本発明の方法による対象の疾患の治療に使用するための、インターフェロンベースの治療剤を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物はまた、追加の薬剤を含む。インターフェロンベースの治療剤及び化学療法剤は、上記で定義した通りである。
【0070】
一態様において、本発明は、本発明の方法によって対象の疾患を治療するための医薬組成物の調製における、インターフェロンベースの治療剤の使用を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物はまた、追加の薬剤を含む。インターフェロンベースの治療剤及び化学療法剤は、上記で定義した通りである。
【0071】
一態様において、本発明は、対象の疾患を治療するための医薬組成物の調製における、追加の薬剤と組み合わせたインターフェロンベースの治療剤の使用を提供する。インターフェロンベースの治療剤及び化学療法剤は、上記で定義した通りである。インターフェロンベースの治療剤及び／又は追加の薬剤は、本発明の方法に従って投与し得る。
【0072】
一態様において、本発明は、追加の薬剤の有効性を高めるための医薬組成物の調製におけるインターフェロンベースの治療剤の使用を提供する。インターフェロンベースの治療剤及び化学療法剤は、上記で定義した通りである。インターフェロンベースの治療剤及び／又は追加の薬剤は、本発明の方法に従って投与し得る。
【0073】
一態様において、本発明は、インターフェロンベースの治療剤及び使用説明書を含むキットを提供し、使用説明書は、インターフェロンベースの治療剤が本発明の方法に従ったものであってもよいこと、又は対象の疾患を治療するために本発明の方法に従って投与してもよいことの説明を提供する。いくつかの実施形態において、キットはまた、追加の薬剤を含む。インターフェロンベースの治療剤及び化学療法剤は、上記で定義した通りである。
【実施例】
【0074】
以下の実施例は、本発明をよりよく説明するために提示するに過ぎず、本発明をいかなる形でも限定することを意図するものではない。
【0075】
実施例１．従来のインターフェロンを用いたＢ型肝炎治療
本発明者らは、ペグインターフェロンα２ａ（ペガシス）及びペグインターフェロンα２ｂ（Ｙ型４０ｋＤペグベロン）で治療を受けたＢ型肝炎患者のＢ型肝炎表面ｅ抗原データを収集した。これらの患者は、薬剤の説明書に記載された治療スキームに従って連続的に治療を受けた。ペガシスの治療スキーム：ペガシスのみを１週間毎に１８０マイクログラムの投与量で４８週間連続的投与を行った。ペガロン（Ｐｅｇａｒｏｎ）の治療スキーム：ペガロンのみを１週間毎に１８０マイクログラムの投与量で４８週間連続的して投与した。
本発明者らは、ペグインターフェロンα２ａ（ペガシス）及びペグインターフェロンα２ｂ（Ｙ型４０ｋＤペグベロン）で治療を受けたＢ型肝炎患者のＢ型肝炎表面ｅ抗原データを収集した。これらの患者は、薬剤の説明書に記載された治療スキームに従って連続的に治療を受けた。ペガシスの治療スキーム：ペガシスのみを１週間毎に１８０マイクログラムの投与量で４８週間連続的投与を行った。ペガロン（Ｐｅｇａｒｏｎ）の治療スキーム：ペガロンのみを１週間毎に１８０マイクログラムの投与量で４８週間連続的して投与した。
【0076】
結果を図１に示す。ペグインターフェロンα２ａ（ペガシス）及びペグインターフェロンα２ｂ（Ｙ型４０ｋＤペグベロン）によるＢ型慢性肝炎の治療において、表面抗原の減少は、初期段階での減少が速く、後期段階での減少が遅いという特性に一致したものであった。ペグベロン及びペガシスを用いた対照治療におけるｅ抗原陽性の慢性Ｂ型肝炎表面抗原の減少量の平均データグラフにおいて、治療効果は最初の２４週間が最後の２４週間よりも優れており、最初の１２週間が最後の３６週間よりも優れていたことが示されている。インターフェロンを１２週間超又は２４週間超連続的して使用することにより、部分的な免疫抑制及び免疫細胞の疲弊が引き起こされる可能性があり、それにより追跡治療の効果が悪くなり得る。
【0077】
実施例２．インターフェロンベースの治療の改善
実施例１に示すように、連続的なインターフェロン治療の有効性は低い。本発明者らは驚くべきことに、インターフェロンを間欠的に投与することにより、有意に優れた治療効果が得られることを見出した。
実施例１に示すように、連続的なインターフェロン治療の有効性は低い。本発明者らは驚くべきことに、インターフェロンを間欠的に投与することにより、有意に優れた治療効果が得られることを見出した。
【0078】
Ｂ型慢性肝炎の患者において、ペグベロンを４８週間使用した後、ペグベロンの投与を中断し、ウイルスの複製を阻害するためにヌクレオチドアナログであるエンテカビル（ＥＴＶ）を定期的に投与した。ペグベロンの投与を５週間中断した後、再びペグベロンを８週間使用し、その後再び６週間中断した。このプロセスを次の段階で繰り返した。
【0079】
ペグベロンの投与：１週間毎に１８０マイクログラム：ヌクレオチドアナログＥＴＶは１日０．５ｍｇを経口投与した。
【0080】
具体的には、図２に示すように、０週目から４８週目までペグベロンを患者に投与し、４９週目からヌクレオチドアナログＥＴＶを投与した。４９週目から５２週目まではペグベロンの投与を中断し、５３週目～６１週目までは再開した。６２週目以降、ペグベロンは４週間超中断した。図から、８週間投与を実施し、４週間投与を中断した５３週目から６５週目の表面抗原の減少は、３６週目から４８週目の減少に比べて有意に速いことが分かり得る。投与を中断した５週間で、免疫クリアランス能力の回復が達成されていてもよいことが示されている。
【0081】
他のＢ型慢性肝炎患者の治療では、ペグベロンとＥＴＶの併用治療を８週間実施した後、ＥＴＶの使用を連続的しながらペグベロンの投与を５週間中断し、その後ペグベロンを５週間使用して２週間中断した。
【0082】
ペグベロンの投与：１週間に９０マイクログラム。ヌクレオチドアナログＥＴＶは１日０．５ｍｇを投与した。
【0083】
図３に示すように、インターフェロンの使用中、最初の４週間の期間後に、トランスアミナーゼの増加に伴って表面抗原が増加することが観察され、インターフェロンが関連する細胞クリアランス機構を活性化する可能性があることが示された。５週間投与を中断し、２週間投与を再開した後、トランスアミナーゼの増加及び表面抗原の増加のプロセスが観察された。インターフェロン治療後、一定期間の中断及び投与再開によって、免疫クリアランスが繰り返して開始し得ることが示唆された。投与中断によって、関連する免疫抑制が解除され得る。トランスアミナーゼの上昇は、感染した細胞が免疫によってクリアされたことを意味すると推測されている。破壊された肝細胞から関連する代謝酵素が放出される一方で、破壊された細胞からの表面抗原の放出が一時的に増加していた。
【0084】
他のＢ型慢性肝炎患者に対しては、ペグベロンを週に１８０マイクログラム投与し、ヌクレオチドアナログＥＴＶを１日０．５ｍｇ投与した。第４週から開始して２４週間、ペグベロンをＥＴＶと併用して投与した。２８週目～４０週目は、ペグベロンを中断し、ＥＴＶのみを投与した。４４週目～６８週週目は、ペグベロンをＥＴＶと併用して投与した。６８週目～７６週週目は、ペグベロンを中断し、ＥＴＶのみを投与した。７６～８０週目にペグベロンをＥＴＶと併用して投与した。
【0085】
図４に示すように、インターフェロンを使用している間、最初の２４週間の期間では、表面抗原が増加した後、トランスアミナーゼの増加とともに減少することが観察され、インターフェロンが関連する細胞クリアランス機構を活性化し得ることを示している。７６～８０週目の治療では、表面抗原が０．０５未満となり、Ｂ型肝炎の表面抗原が検出ラインよりも低くなり、それにより表面抗原が除去されていることが見出された。インターフェロン治療後、一定期間の中断と投与再開により、繰り返して免疫クリアランスが開始される可能性が示唆された。
【0086】
以上の結果から、サイクル化した投与によって、インターフェロン投与時には免疫クリアランス及び免疫細胞の消費を繰り返し、中断期間にはヌクレオチドアナログを用いてウイルスの再感染を防ぎながら、部分的な免疫回復及び免疫抑制の排除を行い、最終的にはＢ型肝炎ウイルスに感染した肝細胞を排除することで、Ｂ型慢性肝炎患者の血清中の表面抗原が陰性化し、臨床的治癒が達成されることが示唆された。
【0087】
実施例３．組換えマウスインターフェロンα４（ｍＩＦＮ－α４）の調製
インターフェロンは、癌治療にも広く用いられているが、その効果を改善する必要がある。そこで、インターフェロンの連続的投与によって、実際に部分的な免疫抑制及び免疫細胞の疲弊が起こり、その後の治療効果が悪くなるかどうかを検討するために、マウスにおいてインターフェロンの間欠的投与と連続的投与の効果を比較した。
インターフェロンは、癌治療にも広く用いられているが、その効果を改善する必要がある。そこで、インターフェロンの連続的投与によって、実際に部分的な免疫抑制及び免疫細胞の疲弊が起こり、その後の治療効果が悪くなるかどうかを検討するために、マウスにおいてインターフェロンの間欠的投与と連続的投与の効果を比較した。
【0088】
抗腫瘍効果に関する多くの研究は、ヌードマウス（正常な胸腺がない）を宿主として行われていた。ヌードマウスの免疫状態は正常なマウスに比べて弱いため、正常な状態での免疫反応を反映させることは困難である。正常マウスに基づいた抗腫瘍モデルでは、インターフェロンの免疫系への作用が部分的に実現されてもよく、これは、インターフェロンを投与する抗腫瘍療法の効果が反映されていると考えられる。機能実現の観点からは、インターフェロンがその抗ウイルス及び抗腫瘍効果を十分に発揮するためには、宿主の免疫系に依存する必要がある。インターフェロンには強い種特異性があるため、実施例で正常なマウスを研究対象として使用した場合、マウスのインターフェロン又はその誘導体を使用することで、その生理作用及び実施効果をよりよく反映させることができる。本発明のマウスを用いた研究モデルでは、インターフェロン治療薬剤及びその誘導体の代表として、ＰＥＧ化組換えマウスインターフェロンα４（ＰＥＧ－ｍＩＦＮα４）を用いた。
【0089】
ｍＩＦＮ－α４のアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ ＮＰ＿０３４６３４）に従い、ピキア・パストリスの好ましいコドンに合わせてｍＩＦＮ－α４のｃＤＮＡ配列を最適化して設計し、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．に委託してｃＤＮＡを合成した。ｍＩＦＮ－α４をコードするｃＤＮＡをｐＰＩＣ９Ｋプラスミドに組み換え、ＴＯＰ１０コンピテントセルに形質転換し、ＬＢ固体培地上にプレーティングし、３７℃で一晩培養した。単一のクローンを選んでＬＢ液体培地に接種し、次いでこれを３７℃で一晩培養した。プラスミドを抽出し、ＸｈｏＩ及びＮｏｔＩで二重消化を行った。陽性クローンは、核酸電気泳動で同定し、さらに核酸配列決定で確認した。陽性クローンのプラスミドをＳａｌＩで消化して線状化し、ピキア・パストリスＧＳ１１５に電気形質導入し、ＲＤプレートにプレーティングし、２８～３０℃で３日間培養した。陽性の形質転換体を選んでＹＰＤ液体培地に接種し、２８－３０℃で一晩培養し、ＯＤ６００ｎｍの最終濃度が約１になるようにＢＭＭＹ培地に移し、２８－３０℃で約２４時間インキュベートした。メタノールを最終濃度が約１％になるまで添加し、さらに２８～３０℃で約２４時間培養した。培養液を遠心分離して上清を回収し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動によりｍＩＦＮ－α４の発現を検出した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動の結果によって、より高い発現及び安定した発現を有する操作株を選択し、その後、発酵槽で発酵させた。
【0090】
発酵槽は３０Ｌであった。発酵培養及びメタノール誘導については「Ｐｉｃｈｉａ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ」を参照し、誘導時間は約３０ｈであった。発酵上清を遠心分離で回収し、５ｋＤの中空糸膜チューブで３～５回限外濾過して濃縮し、緩衝液系を２０ｍＭリン酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－５０ｍＭ塩化ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ６．５）に置き換えた。続いて、ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗクロマトグラフィーカラム（ＧＥヘルスケア、カラム床Φ３８ｍｍ×１６０ｍｍ）に装填した後、２０ｍＭリン酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩（ｐＨ６．５）（溶液Ａ）を用いて、カラムの約３容量を洗浄した。溶液Ａ及び２０ｍＭリン酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１Ｍ塩化ナトリウム溶液（ｐＨ６．５）（溶液Ｂ）を使用して、勾配溶出を行った。ｍＩＦＮ－α４標的サンプルを回収し、非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ用サンプル（分離ゲル濃度１４％、銀染色）を採取した。溶出プロファイルを図５に、電気泳動の結果を図６に示す。
【0091】
ｍＩＦＮ－α４ ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ精製サンプルを５Ｋ限外濾過膜パッケージを用いた限外濾過によって濃縮し、２０ｍＭリン酸緩衝液－５０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン－２０ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ７．０）に置換した後、その濃度を約１．０ｍｇ／ｍｌに調整した。ｍＩＦＮ－α４タンパク質と酵素の質量比が約２０：１になるようにグリコシダーゼを添加し、２５℃で約２０時間消化を行い、グリコシル基を除去した。消化したサンプルを５ｍＭホウ酸緩衝液－１０ｍＭアルギニン塩酸塩（ｐＨ９．０）で約６倍に希釈し、Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ クロマトグラフィーカラム（ＧＥヘルスケア、カラム床Φ５０ｍｍ×１５４ｍｍ）に装填した。２０ｍＭホウ酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン（ｐＨ９．０）（溶液Ｃ）を用いて、カラムの約３容量を洗浄した。溶液Ｃ及び２０ｍＭホウ酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭフォルマザンチオニン－０．３Ｍ塩化ナトリウム（ｐＨ９．０）（溶液Ｄ）を用いて勾配溶出を行った。目的の脱グリコシル化ｍＩＦＮ－α４サンプルを回収し、１０％酢酸でｐＨを約ｐＨ５．０に調整した。５Ｋ限外濾過膜を用いて限外濾過により濃縮し、緩衝液を５ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－５０ｍＭアルギニン塩酸塩－１００ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．０）に置換した。得られたサンプルは、脱グリコシル化ｍＩＦＮ－α４のストック溶液であった。サンプルは検査に出すために採取して送られ、残りのサンプルは後で使用するために－７０℃で凍結した。溶出プロファイルを図７に示し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動の結果を図８に示す。
【0092】
脱グリコシル化ｍＩＦＮ－α４ストック溶液の細菌性エンドトキシン含有量は、リムルス試薬法により６０ＥＵ／ｍｇ未満と決定した。特異的活性は、市販のｍＩＦＮ－α４（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号１２１１５－１）を標準として使用し、マウス線維芽細胞／脳心筋炎ウイルス（Ｌ９２９／ＥＭＣＶ）サイトパス阻害法を用いて５．４×１０８Ｕ／ｍｇと決定した。
【0093】
実施例４．ＰＥＧ化組換えマウスインターフェロン（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）の調製
この脱グリコシル化ｍＩＦＮ－α４ストック溶液を、５ｋＤ限外濾過膜パッケージを用いた５ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－５０ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．０）の緩衝液による限外濾過によって置換した。約３３３ｍｌのサンプル（脱グリコシル化ｍＩＦＮα４含量約５００ｍｇ）を採取し、約２２ｍｌの０．８Ｍホウ酸／水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．４）を添加し、よく撹拌した。タンパク質と４０ｋＤのＹ型ポリエチレングリコールスクシンイミドエステル（ＹＰＥＧ－ＮＨＳ）の質量比が約１：８になるようにＹＰＥＧ－ＮＨＳを添加した後、これを素早く撹拌し、室温で１０分間反応させた。その後、約２０ｍｌの０．２Ｍメチオニンを添加して反応を停止させ、１０％酢酸でｐＨを５．０に調整した。その後、５５０ｍｌの純水を添加した後、さらに６００ｍｌの２０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン（ｐＨ５．１）（溶液Ｅ）を添加し、よく混合した。その後、ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗクロマトグラフィーカラム（ＧＥヘルスケア、カラム床Φ５０ｍｍ×１９４ｍｍ）に装填し、溶液Ｅを用いてカラムの約５容量の洗浄を行った。その後、溶液Ｅ及び２０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン－６００ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．１）（溶液Ｆ）を用いて勾配溶出を行い、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４標的サンプルを回収した。５ｋＤ限外濾過膜パッケージを用いた限外濾過により緩衝液を２０ｍＭリン酸緩衝液－１２３ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ６．５）に置換した後、適当に濃縮し、０．５％のＴｗｅｅｎ８０をＴｗｅｅｎ８０の最終濃度が約０．００５％になるように添加した。得られたサンプルは、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４ストック溶液（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）であった。サンプルを採取してから検査に出し、残ったサンプルは後で使用するために凍結して－７０℃で保存した。溶出プロファイルを図９に示し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動の結果を図１０に示す。
この脱グリコシル化ｍＩＦＮ－α４ストック溶液を、５ｋＤ限外濾過膜パッケージを用いた５ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－５０ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．０）の緩衝液による限外濾過によって置換した。約３３３ｍｌのサンプル（脱グリコシル化ｍＩＦＮα４含量約５００ｍｇ）を採取し、約２２ｍｌの０．８Ｍホウ酸／水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．４）を添加し、よく撹拌した。タンパク質と４０ｋＤのＹ型ポリエチレングリコールスクシンイミドエステル（ＹＰＥＧ－ＮＨＳ）の質量比が約１：８になるようにＹＰＥＧ－ＮＨＳを添加した後、これを素早く撹拌し、室温で１０分間反応させた。その後、約２０ｍｌの０．２Ｍメチオニンを添加して反応を停止させ、１０％酢酸でｐＨを５．０に調整した。その後、５５０ｍｌの純水を添加した後、さらに６００ｍｌの２０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン（ｐＨ５．１）（溶液Ｅ）を添加し、よく混合した。その後、ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗクロマトグラフィーカラム（ＧＥヘルスケア、カラム床Φ５０ｍｍ×１９４ｍｍ）に装填し、溶液Ｅを用いてカラムの約５容量の洗浄を行った。その後、溶液Ｅ及び２０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン－６００ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．１）（溶液Ｆ）を用いて勾配溶出を行い、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４標的サンプルを回収した。５ｋＤ限外濾過膜パッケージを用いた限外濾過により緩衝液を２０ｍＭリン酸緩衝液－１２３ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ６．５）に置換した後、適当に濃縮し、０．５％のＴｗｅｅｎ８０をＴｗｅｅｎ８０の最終濃度が約０．００５％になるように添加した。得られたサンプルは、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４ストック溶液（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）であった。サンプルを採取してから検査に出し、残ったサンプルは後で使用するために凍結して－７０℃で保存した。溶出プロファイルを図９に示し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動の結果を図１０に示す。
【0094】
ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４ストック溶液の細菌性エンドトキシン含有量は、リムルス試薬法により１５ＥＵ／ｍｇ未満と決定した。特異的活性は、市販のｍＩＦＮ－α４（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号１２１１５－１）を標準として使用し、マウス線維芽細胞／脳筋心筋炎ウイルス（Ｌ９２９／ＥＭＣＶ）のサイトパス阻害法を用いて、６．１×１０６Ｕ／ｍｇと決定した。
【0095】
実施例５．健康なＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の皮下注射の薬物動態学的研究
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の血中濃度を二重抗体サンドイッチＥＬＩＳＡにより検出した。Ｍｏｕｓｅ ＩＦＮ ａｌｐｈａ Ｐｌａｔｉｎｕｍ ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＢＭＳ６０２７／ ＢＭＳ６０２７ＴＥＮ，Ｔｈｅｒｍｏ）の試験キットを使用したが、内在性ｍＩＦＮ－αの測定結果への干渉を避けるため、レポーター抗体を抗ＰＥＧ抗体３．３ビオチン（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ（ＩＢＭＳ），Ｔａｉｗａｎ）に変更した。
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の血中濃度を二重抗体サンドイッチＥＬＩＳＡにより検出した。Ｍｏｕｓｅ ＩＦＮ ａｌｐｈａ Ｐｌａｔｉｎｕｍ ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＢＭＳ６０２７／ ＢＭＳ６０２７ＴＥＮ，Ｔｈｅｒｍｏ）の試験キットを使用したが、内在性ｍＩＦＮ－αの測定結果への干渉を避けるため、レポーター抗体を抗ＰＥＧ抗体３．３ビオチン（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ（ＩＢＭＳ），Ｔａｉｗａｎ）に変更した。
【0096】
６～８週齢、ＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｎ＝６０、雌雄半々）に、１μｇ／マウスのＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を首後部の皮下に単回皮下注射した。注射前（０時間）と、注射後の１５時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間、１６８時間、２１６時間、２６４時間、３１２時間に血漿サンプルを回収し、血中濃度を決定した。薬物動態パラメータの算出にはＰｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ６．４ソフトウェアを使用した。
【0097】
血中濃度決定の結果を表１に、血中濃度－投与時間曲線を図１１に、及び薬物動態パラメータの結果を表２に示す。１μｇ／マウスのＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４をＢＡＬＢ／ｃマウスの首後部に単回皮下注射し、血漿濃度ピーク時間（Ｔｍａｘ）は２４時間、ピーク濃度時間（Ｔｍａｘ）は２６８ｎｇ／ｍｌ、排出半減期（Ｔ１／２）は２８．３時間であった。
【0098】
【表1】
【0099】
【表2】
【0100】
実施例６．マウスに移植された肝臓癌Ｈ２２に対するＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与（４８時間に１回投与、３回連続投与、１４４時間中断；４回連続）、及び連続的投与（４８時間に１回投与、２１回連続投与）の治療効果の比較試験
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、マウス肝臓癌Ｈ２２細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入した。
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、マウス肝臓癌Ｈ２２細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入した。
【0101】
６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、Ｈ２２細胞（０．５×１０６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍接種の日に無作為にグループ分けを行った。実験群は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続投与群（Ｎ＝１５、雄７匹、雌８匹）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群（Ｎ＝１５、雄７匹、雌８匹）、通常の生理食塩水対照群（Ｎ＝１０、雌５匹、雄５匹）等を含んでいた。
【0102】
ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は、動物１匹あたり１マイクログラムの投与量で、首後部に皮下注射により投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群は、４８時間に１回、３回投与した後、１４４時間休止し、これを４回繰り返した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群は、４８時間に１回、２１回の連続投与を行った。通常の生理食塩水対照群には、同体積の通常の生理食塩水を投与した。
【0103】
全ての群で生存率分析を行い、群間の差を比較した。統計解析にはＳＡＳ９．４及びｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用し、統計検定は全て両側検定とした。
【0104】
生存曲線を図１２に示し、統計的比較結果を表３に示す。腫瘍接種後４０日目、通常の生理食塩水対照群の生存期間の中央値は１９．５日であり、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群では３８日であった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群の生存率は９３．３％であったが、生存期間の中央値はまだ算出できない。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群と間欠的投与群の生存曲線は、通常の生理食塩水対照群と比較して有意に異なっていた。また、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群と間欠的投与群の差も有意であった（Ｐ＝０．００３５）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与群の生存期間は、連続的投与群よりも有意に長かった。マウスに移植された肝臓癌Ｈ２２の治療において、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与は連続的投与に比べて有意に優れた治癒効果を示す。
【0105】
【表3】
【0106】
実施例７．マウスの肝臓癌Ｈ２２を治療するためのゲムシタビンと併用したインターフェロンの間欠的投与
本発明者らは、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ化組換えマウスインターフェロンα（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）をマウス肝癌Ｈ２２に間欠的投与することによる抗腫瘍効果を検討し、インターフェロンとゲムシタビンの併用投与の有効性を探った。本発明者らは驚くべきことに、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与し、同時にゲムシタビンを投与することにより、ゲムシタビンを単独で投与する場合又はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を単独で間欠的投与する場合と比較して、Ｈ２２腫瘍の治療において有意に良好な結果が得られる可能性があることを見出した。
本発明者らは、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ化組換えマウスインターフェロンα（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）をマウス肝癌Ｈ２２に間欠的投与することによる抗腫瘍効果を検討し、インターフェロンとゲムシタビンの併用投与の有効性を探った。本発明者らは驚くべきことに、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与し、同時にゲムシタビンを投与することにより、ゲムシタビンを単独で投与する場合又はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を単独で間欠的投与する場合と比較して、Ｈ２２腫瘍の治療において有意に良好な結果が得られる可能性があることを見出した。
【0107】
本実施例において、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、Ｈ２２マウス肝臓癌細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入し、抗癌剤ゲムシタビンの製造者はＪｉａｎｇｓｕ Ｈａｎｓｏｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．であった。
【0108】
１２０匹の６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、肝臓細胞癌Ｈ２２腫瘍細胞（１×１０６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍を接種してから３日後に、通常の生理食塩水対照群、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独の群、ゲムシタビン単独の群、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンの併用群を含むいくつかの試験群に無作為に分けた。投与は群分けの翌日から週１回で開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は首後部に皮下注射し、ゲムシタビンは腹腔内に注射した。腫瘍の直径を測定し、Ｖ＝１／２ａｂ２（ａ、ｂはそれぞれ長さ、及び幅（ｍｍ）を表す）の式に基づいて各個体群の平均腫瘍体積を算出し、抗腫瘍効果を動的に観察した。
【0109】
統計解析には、ＳＡＳ ９．４、ｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用した。統計検定は全て両側検定とした。
【0110】
各群の腫瘍体積の変化を図１３に示す。腫瘍接種８日後、通常の生理食塩水対照群では、全てのマウスにおいて腫瘍が肉眼で確認できた。腫瘍接種から１８日後、投与群の平均腫瘍体積は生理食塩水投与群よりも低く、ゲムシタビン、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用は、いずれも一定の抗腫瘍効果を生み出していることが示された。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンの併用群の平均腫瘍体積は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独の群及びゲムシタビン単独の群より有意に低かった（Ｐ＜０．０００１）。
【0111】
結果により、マウスペグインターフェロンαをゲムシタビンと併用して間欠的投与した場合の抗癌活性は、ペグインターフェロンα４を単独で間欠的投与した場合又はゲムシタビンを単独で投与した場合に比べて有意に優れていることが示された。
【0112】
【表4】
【0113】
実施例８．マウスの肺癌ＬＬＣを治療するためのゲムシタビンと併用したインターフェロンの間欠的投与
本発明者らは、マウス肺癌ＬＬＣに対するゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与の抗腫瘍効果を調べ、インターフェロンとゲムシタビンの併用投与の有効性を探った。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与し、同時にゲムシタビンを投与することによって、ゲムシタビンを単独で投与した場合又はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を単独で間欠的投与した場合に比べて、肺癌ＬＬＣの治療においても有意に良好な結果が得られる可能性があることが実験により見出された。
本発明者らは、マウス肺癌ＬＬＣに対するゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与の抗腫瘍効果を調べ、インターフェロンとゲムシタビンの併用投与の有効性を探った。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与し、同時にゲムシタビンを投与することによって、ゲムシタビンを単独で投与した場合又はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を単独で間欠的投与した場合に比べて、肺癌ＬＬＣの治療においても有意に良好な結果が得られる可能性があることが実験により見出された。
【0114】
本実施例において、Ｃ５７ＢＬ／６ＮマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、ＬＬＣマウス肺癌細胞株はＣｅｌｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ，ＩＢＭＳから購入した。抗癌剤はゲムシタビン（Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈａｎｓｏｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｒｏｕｐ ＣＯ．，Ｌｔｄ）であった。
【0115】
１２０匹の６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＣ５７ＢＬ６／Ｎマウスに、肺癌ＬＬＣ腫瘍細胞（１×１０７細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍接種の３日後に、通常の生理食塩水対照群、ゲムシタビン単独の群、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンの併用群に無作為に分けた。投与は、群分けの翌日から週１回で開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は首後部に皮下注射し、ゲムシタビンは腹腔内に注射した。腫瘍の直径を測定し、Ｖ＝１／２ａｂ２（ａ、ｂはそれぞれ長さ、及び幅（ｍｍ）を表す）の式に基づいて各個体群の平均腫瘍体積を算出し、抗腫瘍効果を動的に観察した。
【0116】
統計解析には、ＳＡＳ ９．４、ｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用した。統計検定は全て両側検定とした。
【0117】
各群の腫瘍体積の変化を図１４に示す。腫瘍接種８日後、通常の生理食塩水対照群では、全てのマウスにおいて腫瘍が肉眼で確認できた。腫瘍接種から２４日後、投与群の平均腫瘍保有体積は生理食塩水投与群よりも低く、ゲムシタビン、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用が、いずれも一定の抗腫瘍効果を生み出していることが示された。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンの併用群の平均腫瘍体積は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独の群及びゲムシタビン単独の群より有意に低かった（Ｐ＜０．０００１）。
【0118】
結果より、ゲムシタビンと併用して間欠的投与したマウスペグインターフェロンαの抗肺癌活性は、ペグインターフェロンα４を単独で間欠的投与した場合又はゲムシタビンを単独で投与した場合に比べて、有意に優れていることが示された。
【0119】
【表5】
【0120】
実施例９．マウスの結腸直腸癌ＣＴ２６を治療するためのゲムシタビンと併用したインターフェロンの間欠的投与
本発明者らは、マウスの結腸直腸癌ＣＴ２６に対して、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与の抗腫瘍効果を調べ、インターフェロンとゲムシタビンの併用投与の有効性を探った。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与し、同時にゲムシタビンを投与することによって、ゲムシタビンを単独で投与した場合又はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を単独で間欠的投与した場合に比べて、結腸直腸癌ＣＴ２６の治療においても有意に良好な結果が得られる可能性があることが実験を通じて見出された。
本発明者らは、マウスの結腸直腸癌ＣＴ２６に対して、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与の抗腫瘍効果を調べ、インターフェロンとゲムシタビンの併用投与の有効性を探った。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与し、同時にゲムシタビンを投与することによって、ゲムシタビンを単独で投与した場合又はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を単独で間欠的投与した場合に比べて、結腸直腸癌ＣＴ２６の治療においても有意に良好な結果が得られる可能性があることが実験を通じて見出された。
【0121】
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、ＣＴ２６マウス結腸直腸癌細胞株はＣｅｌｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。抗癌剤はゲムシタビン（Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈａｎｓｏｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）であった。
【0122】
１２０匹の６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、結腸直腸癌ＣＴ２６腫瘍細胞（１×１０６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍を接種してから３日後に、通常の生理食塩水対照群、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独の群、ゲムシタビン単独の群、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンの併用群を含むいくつかの試験群に無作為に分けた。投与は群分けの翌日から、週１回で開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮαは首後部に皮下注射し、ゲムシタビンは腹腔内に注射した。腫瘍の直径を測定し、Ｖ＝１／２ａｂ２（ａ、ｂはそれぞれ長さ、及び幅（ｍｍ）を表す）の式に基づいて各個体群の平均腫瘍体積を算出し、抗腫瘍効果を動的に観察した。
【0123】
統計解析には、ＳＡＳ ９．４、ｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用した。統計検定は全て両側検定とした。
【0124】
各群の腫瘍体積の変化を図１５に示す。腫瘍接種８日後、通常の生理食塩水対照群の全てのマウスの腫瘍が肉眼で確認できた。４３日目までに、投与群の平均腫瘍保有体積は、通常の生理食塩水投与群よりも有意に低く（Ｐ＜０．０５）、投与群の平均腫瘍保有体積は、通常の生理食塩水投与群よりも有意に低く、ゲムシタビン、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用が一定の抗腫瘍効果を有することが示された。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンの併用群の平均腫瘍体積は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独の群（Ｐ＜０．０００１）及びゲムシタビン単独の群（Ｐ＝０．００５４）よりも有意に低かった。
【0125】
結果より、マウスペグインターフェロンαをゲムシタビンと併用して間欠的投与した場合の抗結腸直腸癌活性は、ペグインターフェロンα４を単独で間欠的投与した場合又はゲムシタビンを単独で投与した場合に比べて有意に優れていることが示された。
【0126】
【表6】
【0127】
実施例１０．マウスの黒色腫Ｂ１６を治療するためのゲムシタビンと併用したインターフェロンの間欠的投与
本発明者らは、マウスの黒色腫Ｂ１６に対するゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与の抗腫瘍効果を調べ、インターフェロンとゲムシタビンの併用投与の有効性を探った。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与し、同時にゲムシタビンを投与することによって、ゲムシタビンを単独で投与した場合又はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を単独で間欠的投与した場合と比較して、黒色腫Ｂ１６の治療においても有意に良好な結果が得られる可能性があることが、実験を通じて見出された。
本発明者らは、マウスの黒色腫Ｂ１６に対するゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与の抗腫瘍効果を調べ、インターフェロンとゲムシタビンの併用投与の有効性を探った。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与し、同時にゲムシタビンを投与することによって、ゲムシタビンを単独で投与した場合又はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を単独で間欠的投与した場合と比較して、黒色腫Ｂ１６の治療においても有意に良好な結果が得られる可能性があることが、実験を通じて見出された。
【0128】
本実施例において、Ｃ５７ＢＬ／６ＮマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、Ｂ１６マウス黒色腫細胞株はＡＴＣＣから購入した。抗癌剤はゲムシタビン（Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈａｎｓｏｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ ＣＯ．，Ｌｔｄ）であった。
【0129】
１２０匹の６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＣ５７ＢＬ／６Ｎマウスに、右前肢腋窩にＢ１６腫瘍細胞（１×１０７細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を皮下接種した。腫瘍を接種してから３日後に、通常の生理食塩水対照群、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独の群、ゲムシタビン単独の群、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンの併用群を含むいくつかの試験群に無作為に分けた。投与は群分けの翌日から週１回で開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は首後部に皮下注射し、ゲムシタビンは腹腔内に注射した。腫瘍の直径を測定し、Ｖ＝１／２ａｂ２（ａ、ｂはそれぞれ長さ、及び幅（ｍｍ）を表す）の式に基づいて各個体群の平均腫瘍体積を算出し、抗腫瘍効果を動的に観察した。
【0130】
統計解析には、ＳＡＳ ９．４、ｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用した。統計検定は全て両側検定とした。
【0131】
各群の腫瘍体積の変化を図１６に示す。腫瘍接種８日後、通常の生理食塩水対照群の全てのマウスの腫瘍が肉眼で確認できた。腫瘍接種から１４日後、投与群の平均腫瘍保有体積は生理食塩水投与群よりも低く、ゲムシタビン、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンの併用が、いずれも一定の抗黒色腫効果を生み出していることが示された。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンの併用群の平均腫瘍体積は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独の群（Ｐ＝０．０００２）及びゲムシタビン単独の群（Ｐ＜０．０００１）よりも有意に低かった。
【0132】
結果より、マウスペグインターフェロンαをゲムシタビンと併用して間欠的投与した場合の抗黒色腫活性は、ペグインターフェロンα４を単独で間欠的投与した場合又はゲムシタビンを単独で投与した場合に比べて有意に優れていることが示された。
【0133】
【表7】
【0134】
実施例１１．ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を抗癌剤ゲムシタビンと併用して間欠的投与（４８時間毎に１回、３回連続して投与した後、１４４時間で中断）した場合と、ゲムシタビンを単独で投与した場合の、マウスの移植肝臓癌Ｈ２２に対する有効性の比較試験
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、Ｈ２２マウス肝臓癌細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入し、抗癌剤ゲムシタビンの製造者は、Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈａｎｓｏｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．，Ｌｔｄであった。
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、Ｈ２２マウス肝臓癌細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入し、抗癌剤ゲムシタビンの製造者は、Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈａｎｓｏｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ．，Ｌｔｄであった。
【0135】
６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、肝臓癌Ｈ２２腫瘍細胞（１×１０６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍接種から３日後、無作為に群分けし、各群２６匹（雌雄半々）で、通常の生理食塩水対照群、ゲムシタビン群、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンの併用群が含まれていた。群に分けた後、対応する薬剤又は生理食塩水を投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は、マウス１匹あたり１マイクログラムの投与量で、首後部に皮下投与した。間欠的投与する場合は、４８時間毎に１回、３回連続して投与し、１４４時間後に中断した。ゲムシタビンは、体重１キログラム当たり６０ｍｇの用量で１週間に１回毎回腹腔内注射により投与した。通常の生理食塩水対照群には、同体積の通常の生理食塩水を投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンの併用群は、最初のＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の注射時にゲムシタビンを投与し、その後は週１回ゲムシタビンを投与した。
【0136】
全ての群で生存率分析を行い、群間の差を比較した。統計解析には、ＳＡＳ ９．４及びｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用し、統計検定は全て両側検定とした。
【0137】
４１日目までの死亡率は、通常の生理食塩水対照群が１００％（２６／２６）、ゲムシタビン群が７３．１％（１９／２６）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンの併用群が３．８％（１／２６）であった。生理食塩水対照群の生存期間中央値は１５．５日、ゲムシタビン群の生存期間中央値は２１．５日、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群の生存率は９６．２％であった。
【0138】
生存曲線を図１７に示し、統計的比較結果を表８に示す。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビン併用群の生存曲線は、生理食塩水対照群と有意に異なり（Ｐ＜０．０００１）、ゲムシタビン群とも有意に異なっていた（Ｐ＜０．０００１）。マウスに移植された肝臓癌Ｈ２２の治療には、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を正の薬剤であるゲムシタビンと併用して間欠的投与することで、正の対照薬剤であるゲムシタビンの投与よりも優れた効果が得られた。
【0139】
結果により、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与の抗癌作用は、ゲムシタビン単独投与よりも有意に優れていることが示された。
【0140】
【表8】
【0141】
実施例１２．インターフェロンと抗癌剤エピルビシンの間欠的投与によるマウスの移植肝臓癌Ｈ２２の治療に関する研究
本実施例で使用する抗癌剤は、化学療法剤の中でも抗腫瘍性抗生物質であるエピルビシンであり、マウスに移植された肝臓癌Ｈ２２の治療において、抗癌剤エピルビシンと併用したインターフェロンの間欠的投与の効果を調べた。
本実施例で使用する抗癌剤は、化学療法剤の中でも抗腫瘍性抗生物質であるエピルビシンであり、マウスに移植された肝臓癌Ｈ２２の治療において、抗癌剤エピルビシンと併用したインターフェロンの間欠的投与の効果を調べた。
【0142】
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、マウス肝癌Ｈ２２細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入した。エピルビシンの製造者はＢｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｆａｃｔｏｒｙであった。
【0143】
６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、肝臓癌Ｈ２２腫瘍細胞（１×１０６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍接種の３日後、無作為に群分けし、各群２８匹（雌雄半々）で、通常の生理食塩水対照群、エピルビシン単独の群、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とエピルビシンの併用群が含まれていた。
【0144】
群分けの翌日から週１回で投与を開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を首後部に皮下注射し、エピルビシンを腹腔内に、毎回３．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。通常の生理食塩水の対照群には、同体積の通常の生理食塩水を投与した。
【0145】
全ての群で生存曲線分析を行い、生存期間の中央値を比較した。統計解析には、ＳＡＳ ９．４及びｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用した。統計検定は全て両側検定とした。
【0146】
生存曲線を図１８に示し、生存時間の中央値を表９に示す。生理食塩水群の生存期間の中央値は１３．５日、エピルビシン群の生存期間の中央値は１５日、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とエピルビシンの併用群の観察期間中の生存率は５７．１％であった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とエピルビシンの併用群の生存曲線は、通常の生理食塩水群と比較して有意に異なっていた（Ｐ＜０．０００１）。エピルビシンと併用してＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与することによって、エピルビシン単独投与に比べて、腫瘍保有マウスの生存期間が有意に延長し得ることが示された（Ｐ＜０．０００１）。
【0147】
本実施例は、マウスに移植された肝臓癌Ｈ２２の治療において、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４をエピルビシンと併用して間欠的投与することで、エピルビシン単独投与に比べて有意に優れた効果が得られたことを示唆している。
【0148】
【表9】
【0149】
実施例１３．抗癌剤オキサリプラチンと併用したインターフェロンの間欠的投与によるマウスの移植肝臓癌Ｈ２２の治療に関する研究
本実施例で使用する抗癌剤は化学療法剤オキサリプラチンであり、マウスに移植された肝臓癌Ｈ２２の治療において、抗癌剤オキサリプラチンと併用したインターフェロンの間欠的投与の効果を調べた。
本実施例で使用する抗癌剤は化学療法剤オキサリプラチンであり、マウスに移植された肝臓癌Ｈ２２の治療において、抗癌剤オキサリプラチンと併用したインターフェロンの間欠的投与の効果を調べた。
【0150】
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、Ｈ２２マウス肝癌細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入した。オキサリプラチンの製造者は、Ｑｉｌｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（Ｈａｉｎａｎ）Ｃｏであった。
【0151】
６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、肝臓癌Ｈ２２腫瘍細胞（１×１０６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍接種の３日後、無作為に群分けし、各群２８匹（雌雄半々）で、通常の生理食塩水対照群、オキサリプラチン単独の群、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とオキサリプラチンの併用群が含まれていた。
【0152】
群分けの翌日から週１回で投与を開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は首後部に皮下注射し、オキサリプラチンは腹腔内に注射し、毎回１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。通常の生理食塩水対照群には、同体積の通常の生理食塩水を投与した。
【0153】
全ての群で生存曲線分析を行い、生存期間の中央値を比較した。統計解析には、ＳＡＳ ９．４及びｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用した。統計検定は全て両側検定とした。
【0154】
生存曲線を図１９に示し、生存期間の中央値を表１０に示す。通常の生理食塩水群の生存期間の中央値は１１日、オキサリプラチン群の生存期間の中央値は１２．５日、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とオキサリプラチンの併用群の生存期間の中央値は３１日であった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とオキサリプラチン併用群の生存曲線は、通常の生理食塩水群と比較して有意に異なり（Ｐ＝０．０００１）、オキサリプラチン単独群と比較しても有意に異なっていた（Ｐ＝０．００１４）。オキサリプラチンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的に投与することで、腫瘍保有マウスの生存期間を有意に延長し得る。
【0155】
本実施例は、マウスに移植された肝臓癌Ｈ２２の治療において、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４をオキサリプラチンと併用して間欠的投与することによって、オキサリプラチン単独に比べて有意に優れた効果が得られたことを示している。
【0156】
【表10】
【0157】
実施例１４．インターフェロンと抗癌剤パクリタキセルの間欠的投与によるマウスの移植肝臓癌Ｈ２２の治療に関する研究
本実施例で使用する抗癌剤は化学療法剤パクリタキセルであり、マウスに移植された肝臓癌Ｈ２２の治療における、抗癌剤パクリタキセルと併用したインターフェロンの間欠的投与の効果を調べた。
本実施例で使用する抗癌剤は化学療法剤パクリタキセルであり、マウスに移植された肝臓癌Ｈ２２の治療における、抗癌剤パクリタキセルと併用したインターフェロンの間欠的投与の効果を調べた。
【0158】
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、Ｈ２２マウス肝臓癌細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入した。パクリタキセルの製造者は、Ｑｉｌｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（Ｈａｉｎａｎ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．であった。
【0159】
６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、肝臓癌Ｈ２２腫瘍細胞（１×１０６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍接種から３日後、無作為に群分けし、各群２８匹（雌雄半々）で、通常の生理食塩水対照群、パクリタキセル単独の群、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とパクリタキセルの併用群が含まれていた。
【0160】
投与は群分けの翌日から週１回で開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は毎回１ｍｇ／マウスの用量を首後部に皮下注射し、オキサリプラチンは毎回１０ｍｇ／ｋｇの用量を腹腔内に注射した。
【0161】
全ての群で生存曲線分析を行い、生存期間の中央値を比較した。統計解析には、ＳＡＳ ９．４及びｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用した。統計検定は全て両側検定とした。
【0162】
生存曲線を図２０に示し、生存時間の中央値を表１１に示す。通常の生理食塩水群の生存期間の中央値は１５日であり、パクリタキセル群の生存期間の中央値は１７日であった。観察期間中、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とパクリタキセルの併用群の生存率は８２．１％であった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とパクリタキセルの併用群の生存曲線は、通常の生理食塩水群と有意に異なり（Ｐ＝０．０００１）、またパクリタキセル単独の群とも有意に異なった（Ｐ＜０．０００１）。パクリタキセルと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与により、腫瘍保有マウスの生存期間を有意に延長し得る。
【0163】
本実施例は、マウスに移植された肝臓癌Ｈ２２の治療において、パクリタキセルと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与の効果が、パクリタキセル単独の効果よりも有意に優れていたことを示している。
【0164】
【表11】
【0165】
本発明の上記結果は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４をゲムシタビン、パクリタキセル、オキサリプラチン、エピルビシン等の化学療法剤と併用して間欠的投与することで、化学療法剤を単独で投与するよりも格段に優れた癌治療効果を得ることができることを示唆している。
【0166】
Ｂ型肝炎や及び癌の治療における同様の結果により、インターフェロンを長期間連続的に投与すると、免疫抑制及び免疫細胞の欠乏が引き起こされ、回復が困難になることが示唆されている。インターフェロンの有効性は、免疫系に依存する。そのため、インターフェロンベースの治療は、免疫細胞が未だ十分である治療初期段階には、高いウイルスクリアランスや腫瘍抑制等の良好な治療効果を達成し得る。しかし、治療の後期段階になると、インターフェロンの長期投与による免疫細胞の減少欠乏又は免疫抑制により、治療効果が大幅に低下し、インターフェロンを投与し続けても高い有効性が維持できない場合がある。この問題は、インターフェロンを間欠的投与することによって回避することができる。例えば、一定の効果を得るためにインターフェロンを一定期間投与した後、部分的な免疫抑制及び免疫細胞の疲弊が起こる前に、インターフェロンの投与を一定期間中断して、免疫細胞をできるだけ速く回復させるようにし、その後、インターフェロンを再投与することで、やはりより優れた治療効果を達成し得る。また、インターフェロン治療剤を他の薬剤と合理的に併用して間欠的投与することにより、より優れた治療効果を達成し得る。
【0167】
配列及び説明
＞配列番号１は、インターフェロンα２ａ（例えば、ロフェロン－Ａ又はペガシス）のアミノ酸配列である。
ＣＤＬＰＱ ＴＨＳＬＧ ＳＲＲＴＬ ＭＬＬＡＱ ＭＲＫＩＳ ＬＦＳＣＬ ＫＤＲＨＤ ＦＧＦＰＱ ＥＥＦＧＮ ＱＦＱＫＡ ＥＴＩＰＶ ＬＨＥＭＩ ＱＱＩＦＮ ＬＦＳＴＫ ＤＳＳＡＡ ＷＤＥＴＬ ＬＤＫＦＹ ＴＥＬＹＱ ＱＬＮＤＬ ＥＡＣＶＩ ＱＧＶＧＶ ＴＥＰＬＭ ＫＥＤＳＩ ＬＡＶＲＫ ＹＦＱＲＩ ＴＬＹＬＫ ＥＫＫＹＳ ＰＣＡＷＥ ＶＶＲＡＥ ＩＭＲＳＦ ＳＬＳＴＮ ＬＱＥＳＬ ＲＳＫＥ
＞配列番号２は、インターフェロンα２ｂ（例えば、イントロンＡ又はペグ－イントロン又はペグベロン）のアミノ酸配列である。
ＣＤＬＰＱ ＴＨＳＬＧ ＳＲＲＴＬ ＭＬＬＡＱ ＭＲＲＩＳ ＬＦＳＣＬ ＫＤＲＨＤ ＦＧＦＰＱ ＥＥＦＧＮ ＱＦＱＫＡ ＥＴＩＰＶ ＬＨＥＭＩ ＱＱＩＦＮ ＬＦＳＴＫ ＤＳＳＡＡ ＷＤＥＴＬ ＬＤＫＦＹ ＴＥＬＹＱ ＱＬＮＤＬ ＥＡＣＶＩ ＱＧＶＧＶ ＴＥＴＰＬ ＭＫＥＤＳ ＩＬＡＶＲ ＫＹＦＱＲ ＩＴＬＹＬ ＫＥＫＫＹ ＳＰＣＡＷ ＥＶＶＲＡ ＥＩＭＲＳ ＦＳＬＳＴ ＮＬＱＥＳ ＬＲＳＫＥ
＞配列番号３は、組換え統合型インターフェロン（例えば、インファーゲン）のアミノ酸配列である。
ＭＣＤＬＰＱＴＨＳＬ ＧＮＲＲＡＬＩＬＬＡ ＱＭＲＲＩＳＰＦＳＣ ＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰ ＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱ ＫＡＱＡＩＳＶＬＨＥ ＭＩＱＱＴＦＮＬＦＳ ＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥ ＳＬＬＥＫＦＹＴＥＬ ＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣ ＶＩＱＥＶＧＶＥＥＴ ＰＬＭＮＶＤＳＩＬＡ ＶＫＫＹＦＱＲＩＴＬ ＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣ ＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭ ＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱ ＥＲＬＲＲＫＥ
＞配列番号４は、統合型インターフェロンα－２（例えば、ペギンファー）のアミノ酸配列である。
ＧＳＧＧＧＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＮＲＲＡＬＩＬＬＡＱＭＲＲＩＳＰＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＱＡＩＳＶＬＨＥＭＩＱＱＴＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＳＬＬＥＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＥＶＧＶＥＥＴＰＬＭＮＶＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲ ＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＤ
＞配列番号５は、インターフェロンλのアミノ酸配列である。
ＭＧＰＶＰ ＴＳＫＰＴ ＴＴＧＫＧ ＣＨＩＧＲ ＦＫＳＬＳ ＰＱＥＬＡ ＳＦＫＫＡ ＲＤＡＬＥ ＥＳＬＫＬ ＫＮＷＳＣ ＳＳＰＶＦ ＰＧＮＷＤ ＬＲＬＬＱ ＶＲＥＲＰ ＶＡＬＥＡ ＥＬＡＬＴ ＬＫＶＬＥ ＡＡＡＧＰ ＡＬＥＤＶ ＬＤＱＰＬ ＨＴＬＨＨ ＩＬＳＱＬ ＱＡＣＩＱ ＰＱＰＴＡ ＧＰＲＰＲ ＧＲＬＨＨ ＷＬＨＲＬ ＱＥＡＰＫ ＫＥＳＡＧ ＣＬＥＡＳ ＶＴＦＮＬ ＦＲＬＬＴ ＲＤＬＫＹ ＶＡＤＧＮ ＬＣＬＲＴ ＳＴＨＰＥ ＳＴ
＞配列番号６は、マウスペグインターフェロンα４のアミノ酸配列である。
ＣＤＬＰＨＴＹＮＬＧＮＫＲＡＬＴＶＬＥＥＭＲＲＬＰＰＬＳＣＬＫＤＲＫＤＦＧＦＰＬＥＫＶＤＮＱＱＩＱＫＡＱＡＩＬＶＬＲＤＬＴＱＱＩＬＮＬＦＴＳＫＤＬＳＡＴＷＮＡＴＬＬＤＳＦＣＮＤＬＨＱＱＬＮＤＬＫＡＣＶＭＱＥＰＰＬＴＱＥＤＳＬＬＡＶＲＴＹＦＨＲＩＴＶＹＬＲＫＫＫＨＳＬＣＡＷＥＶＩＲＡＥＶＷＲＡＬＳＳＳＴＮＬＬＡＲＬＳＥＥＫＥ
＞配列番号１は、インターフェロンα２ａ（例えば、ロフェロン－Ａ又はペガシス）のアミノ酸配列である。
ＣＤＬＰＱ ＴＨＳＬＧ ＳＲＲＴＬ ＭＬＬＡＱ ＭＲＫＩＳ ＬＦＳＣＬ ＫＤＲＨＤ ＦＧＦＰＱ ＥＥＦＧＮ ＱＦＱＫＡ ＥＴＩＰＶ ＬＨＥＭＩ ＱＱＩＦＮ ＬＦＳＴＫ ＤＳＳＡＡ ＷＤＥＴＬ ＬＤＫＦＹ ＴＥＬＹＱ ＱＬＮＤＬ ＥＡＣＶＩ ＱＧＶＧＶ ＴＥＰＬＭ ＫＥＤＳＩ ＬＡＶＲＫ ＹＦＱＲＩ ＴＬＹＬＫ ＥＫＫＹＳ ＰＣＡＷＥ ＶＶＲＡＥ ＩＭＲＳＦ ＳＬＳＴＮ ＬＱＥＳＬ ＲＳＫＥ
＞配列番号２は、インターフェロンα２ｂ（例えば、イントロンＡ又はペグ－イントロン又はペグベロン）のアミノ酸配列である。
ＣＤＬＰＱ ＴＨＳＬＧ ＳＲＲＴＬ ＭＬＬＡＱ ＭＲＲＩＳ ＬＦＳＣＬ ＫＤＲＨＤ ＦＧＦＰＱ ＥＥＦＧＮ ＱＦＱＫＡ ＥＴＩＰＶ ＬＨＥＭＩ ＱＱＩＦＮ ＬＦＳＴＫ ＤＳＳＡＡ ＷＤＥＴＬ ＬＤＫＦＹ ＴＥＬＹＱ ＱＬＮＤＬ ＥＡＣＶＩ ＱＧＶＧＶ ＴＥＴＰＬ ＭＫＥＤＳ ＩＬＡＶＲ ＫＹＦＱＲ ＩＴＬＹＬ ＫＥＫＫＹ ＳＰＣＡＷ ＥＶＶＲＡ ＥＩＭＲＳ ＦＳＬＳＴ ＮＬＱＥＳ ＬＲＳＫＥ
＞配列番号３は、組換え統合型インターフェロン（例えば、インファーゲン）のアミノ酸配列である。
ＭＣＤＬＰＱＴＨＳＬ ＧＮＲＲＡＬＩＬＬＡ ＱＭＲＲＩＳＰＦＳＣ ＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰ ＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱ ＫＡＱＡＩＳＶＬＨＥ ＭＩＱＱＴＦＮＬＦＳ ＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥ ＳＬＬＥＫＦＹＴＥＬ ＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣ ＶＩＱＥＶＧＶＥＥＴ ＰＬＭＮＶＤＳＩＬＡ ＶＫＫＹＦＱＲＩＴＬ ＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣ ＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭ ＲＳＦＳＬＳＴＮＬＱ ＥＲＬＲＲＫＥ
＞配列番号４は、統合型インターフェロンα－２（例えば、ペギンファー）のアミノ酸配列である。
ＧＳＧＧＧＣＤＬＰＱＴＨＳＬＧＮＲＲＡＬＩＬＬＡＱＭＲＲＩＳＰＦＳＣＬＫＤＲＨＤＦＧＦＰＱＥＥＦＤＧＮＱＦＱＫＡＱＡＩＳＶＬＨＥＭＩＱＱＴＦＮＬＦＳＴＫＤＳＳＡＡＷＤＥＳＬＬＥＫＦＹＴＥＬＹＱＱＬＮＤＬＥＡＣＶＩＱＥＶＧＶＥＥＴＰＬＭＮＶＤＳＩＬＡＶＲＫＹＦＱＲＩＴＬＹＬＴＥＫＫＹＳＰＣＡＷＥＶＶＲＡＥＩＭＲ ＳＦＳＬＳＴＮＬＱＥＲＬＲＲＫＤ
＞配列番号５は、インターフェロンλのアミノ酸配列である。
ＭＧＰＶＰ ＴＳＫＰＴ ＴＴＧＫＧ ＣＨＩＧＲ ＦＫＳＬＳ ＰＱＥＬＡ ＳＦＫＫＡ ＲＤＡＬＥ ＥＳＬＫＬ ＫＮＷＳＣ ＳＳＰＶＦ ＰＧＮＷＤ ＬＲＬＬＱ ＶＲＥＲＰ ＶＡＬＥＡ ＥＬＡＬＴ ＬＫＶＬＥ ＡＡＡＧＰ ＡＬＥＤＶ ＬＤＱＰＬ ＨＴＬＨＨ ＩＬＳＱＬ ＱＡＣＩＱ ＰＱＰＴＡ ＧＰＲＰＲ ＧＲＬＨＨ ＷＬＨＲＬ ＱＥＡＰＫ ＫＥＳＡＧ ＣＬＥＡＳ ＶＴＦＮＬ ＦＲＬＬＴ ＲＤＬＫＹ ＶＡＤＧＮ ＬＣＬＲＴ ＳＴＨＰＥ ＳＴ
＞配列番号６は、マウスペグインターフェロンα４のアミノ酸配列である。
ＣＤＬＰＨＴＹＮＬＧＮＫＲＡＬＴＶＬＥＥＭＲＲＬＰＰＬＳＣＬＫＤＲＫＤＦＧＦＰＬＥＫＶＤＮＱＱＩＱＫＡＱＡＩＬＶＬＲＤＬＴＱＱＩＬＮＬＦＴＳＫＤＬＳＡＴＷＮＡＴＬＬＤＳＦＣＮＤＬＨＱＱＬＮＤＬＫＡＣＶＭＱＥＰＰＬＴＱＥＤＳＬＬＡＶＲＴＹＦＨＲＩＴＶＹＬＲＫＫＫＨＳＬＣＡＷＥＶＩＲＡＥＶＷＲＡＬＳＳＳＴＮＬＬＡＲＬＳＥＥＫＥ
【0168】
参考文献
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［１６］ Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ＭＩＷ８１５ （ＡＤＵ－Ｓ１００） ＋／－ Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ａｄｖａｎｃｅｄ／Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ ｏｒ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ．
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｄｕｒｏ．ｃｏｍ／ｆｉｌｅ．ｃｆｍ／１３／ｄｏｃｓ／ＳＩＴＣ１８＿ＭＩＷ８１５Ｘ２１０１＿ＳＩＴＣ％２０Ｐｏｓｔｅｒ（ｅ＿ｖｅｒｓｉｏｎ）＿０８Ｎｏｖ２０１８．ｐｄｆ
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［１８］ Ｙｕｅｎ， Ｍ． Ｆ， ｅｔ． ａｌ． Ｄｏｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄａｉｌｙ， ｏｒａｌ ＲＩＧ－Ｉ ａｇｏｎｉｓｔ Ｉｎａｒｉｇｉｖｉｒ （ＳＢ ９２００） ｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｎａｉｖｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ： ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ２５ｍｇ ａｎｄ ５０ｍｇ ｃｏｈｏｒｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ＡＣＨＩＥＶＥ ｔｒｉａｌ． ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＨＥＰＡＴＯＬＯＧＹ． ２０１８ ＡＰＲ．６８（１）： Ｓ５０９－Ｓ５１０．ＤＯＩ： １０．１０１６／Ｓ０１６８－８２７８（１８）３１２６７－４
［１９］ Ｍａ Ｚ， ｅｔ． ａｌ． Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ Ｖｉｒｕｓ ａｎｄ Ｔｏｌｌ－Ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ： Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｆｏｒ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ． Ｖａｃｃｉｎｅｓ （Ｂａｓｅｌ）． ２０１８ Ｊａｎ １６；６（１）． ｐｉｉ： Ｅ６． ｄｏｉ： １０．３３９０／ｖａｃｃｉｎｅｓ６０１０００６．
［２０］ Ｗａｌｓｈ， Ｒ．， ｅｔ． ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＳＢ９２００ （Ｉｎａｒｉｇｉｖｉｒ） ｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ．ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＨＥＰＡＴＯＬＯＧＹ． ２０１８ ＡＰＲ．６８（１）： Ｓ８９－Ｓ８９． ＤＯＩ： １０．１０１６／Ｓ０１６８－８２７８（１８）３０３９６－９
［２１］ Ｎｉｕ Ｃ， ｅｔ． ａｌ． Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ７ ａｇｏｎｉｓｔ ＧＳ－９６２０ ｉｎｄｕｃｅｓ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＨＢＶ ｖｉａ ａ ｔｙｐｅ Ｉ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ． Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ． ２０１８ Ｍａｙ；６８（５）：９２２－９３１． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｊｈｅｐ．２０１７．１２．００７． Ｅｐｕｂ ２０１７ Ｄｅｃ １３．
［２２］ Ｙｕｅｎ， ＭＦ， ｅｔ． ａｌ． Ａｓｃｅｎｄｉｎｇ ｄｏｓｅ ｃｏｈｏｒｔ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｉｎａｒｉｇｉｖｉｒ － Ａ ｎｏｖｅｌ ＲＩＧ Ｉ ａｇｏｎｉｓｔ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ＨＢＶ ｐａｔｉｅｎｔｓ： Ｆｉｎａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＣＨＩＥＶＥ ｔｒｉａｌ． ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＨＥＰＡＴＯＬＯＧＹ． ２０１９ ＡＰＲ．７０（１）： Ｅ４７－Ｅ４８．ＤＯＩ： １０．１０１６／Ｓ０６１８－８２７８（１９）３００８４－２
［２３］ Ｂｏｕｒｑｕｉｎ Ｃ， ｅｔ． ａｌ． Ｈａｒｎｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ ｆｉｇｈｔ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ ＲＩＧ－Ｉ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ． ２０１９ Ｍａｒ ２． ｐｉｉ： Ｓ１０４３－６６１８（１８）３２０６６－８． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｐｈｒｓ．２０１９．０３．００１．
［２４］ Ｚｅｎｇ Ｙ， ｅｔ． ａｌ． Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ， ｌｏｎｇ ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡ ＮＥＡＴ１， ａｎｄ ＲＩＧ－Ｉ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＨＢｅＡｇ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｐｈａｓｅ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ａｎａｌ． ２０１９ Ｊｕｎ；３３（５）：ｅ２２８８６． ｄｏｉ： １０．１００２／ｊｃｌａ．２２８８６． Ｅｐｕｂ ２０１９ Ｍａｒ ２９．
［２５］ Ｗａｎｇ Ｊｉａｗｅｎ， ｅｔ ａｌ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２０１８， Ｖｏｌ． ４９， Ｎｏ． ４， ２８９－２９２．
［２６］ Ｔａｏ Ｚｅｙｕ， ｅｔ ａｌ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｄｒｕｇｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｖｏｌｕｍｅ， Ｊｕｌｙ ２０１８， Ｖｏｌ． ３９， Ｎｏ． ４： ３０８－３１９．
［２７］ Ｘｕ Ｑｕｎ， ｅｔ ａｌ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２０１６， ４０（１）： ４２－５５．
［２８］ Ｌｉｕ Ｑｉｕｍｉｎｇ， ｅｔ ａｌ． Ｎｅｗ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｎｔｉ－ＨＢＶ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ． Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１６， Ｖｏｌ． ３２， Ｉｓｓｕｅ ５： ６５０－６５８．
［２９］ Ｍｕ Ｎａ， ｅｔ ａｌ． Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｐａｔｔｅｒｎ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ＴＬＲ３， ＲＩＧ－Ｉ ａｎｄ ＭＤＡ５ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． ２０１６－０５：７１５－７１９．
［３０］ Ｈｅｉｎｚ Ｇｉｓｓｌｉｎｇｅｒ， ｅｔ． ａｌ． Ｒｏｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｆａ－２ｂ， ａ ｎｏｖｅｌ ＩＦＮα－２ｂ， ｉｎｄｕｃｅｓ ｈｉｇｈ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｒａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａ ｖｅｒａ．Ｂｌｏｏｄ． ２０１５ Ｏｃｔ ８； １２６（１５）： １７６２－１７６９．Ｐｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ ２０１５ Ａｕｇ １０．
［３１］ Ｍｏｎｋａｒｓｈ ＳＰ， ｅｔ． ａｌ． Ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ｉｓｏｍｅｒｓ ｏｆ ｍｏｎｏｐｅｇｙｌａｔｅｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ－２ａ： ｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ． １９９７ Ｍａｙ １；２４７（２）：４３４－４０．
［３２］ Ｇｒａｃｅ Ｍ， ｅｔ． ａｌ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｇｙｌａｔｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＩＦＮ－ａｌｐｈａ２ｂ． Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ． ２００１ Ｄｅｃ；２１（１２）：１１０３－１５．
［３３］ Ｆｏｓｅｒ Ｓ， ｅｔ． ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ， ａｎｄ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ｉｓｏｍｅｒｓ ｏｆ ｍｏｎｏｐｅｇｙｌａｔｅｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ－２ａ （ＰＥＧＡＳＹＳ）． Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ． ２００３ Ｊｕｌ；３０（１）：７８－８７．
［３４］ Ｎａｎｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｂｉｏｔｅｃｈｂｏｌｏｇｙ．ＰＥＧ－ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ ＬＡＭＢＤＡ １ ＣＯＮＪＵＧＡＴＥＳ．ＷＯ２０１３／０２８２３３ Ａ１． ２８．０２．２０１３．
［３５］ Ｎａｎｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｂｉｏｔｅｃｈｂｏｌｏｇｙ．ＰＥＧ－ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ ＬＡＭＢＤＡ １ ＣＯＮＪＵＧＡＴＥＳ．ＵＳ ８４５４９４７ Ｂ１．Ｊｕｎ．４．２０１３．
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ．ｅｓｐａｃｅｎｅｔ．ｃｏｍ／ｓｅａｒｃｈＲｅｓｕｌｔｓ？ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ＝ｔｒｕｅ＆ｌｏｃａｌｅ＝ｅｎ＿ＥＰ＆ＤＢ＝ＥＰＯＤＯＣ＆ＳＴ＝ａｄｖａｎｃｅｄ＆ＴＩ＝＆ＡＢ＝ｐｅｇ－ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ＋ｌａｍｂｄａ＆ＰＮ＝＆ＡＰ＝＆ＰＲ＝＆ＰＤ＝＆ＰＡ＝＆ＩＮ＝＆ＣＰＣ＝＆ＩＣ＝
［３６］ Ｗａｎｇ Ｊｕｎｚｈｉ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｄｒｕｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ． ２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ． Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｅｓｓ， ２００７： ５４０．
［３７］ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ－４ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ［Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ］．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／ＮＰ＿０３４６３４．
［３８］ Ｐｉｃｈｉａ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ， Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ／ｄｏｃｕｍｅｎｔ－ｃｏｎｎｅｃｔ／ｄｏｃｕｍｅｎｔ－ｃｏｎｎｅｃｔ．ｈｔｍｌ？ｕｒｌ＝ｈｔｔｐｓ％ ３Ａ％２Ｆ％２Ｆａｓｓｅｔｓ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ％２ＦＴＦＳ－Ａｓｓｅｔｓ％２ＦＬＳＧ％２Ｆｍａｎｕａｌｓ％２ Ｆｐｉｃｈｉａｆｅｒｍ＿ｐｒｏｔ．ｐｄｆ＆ｔｉｔｌｅ＝ＵＧｌｊａＧｌｈＩＥＺｌｃｍ１ｌｂｎＲｈｄＧｌｖｂｉＢＨｄＷｌｋＺＷｘｐｂｍＶｚ．
［１］ Ｇｉｓｓｌｉｎｇｅｒ Ｈ， ｅｔ． ａｌ． Ｒｏｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｆａ－２ｂ， ａ ｎｏｖｅｌ ＩＦＮα－２ｂ， ｉｎｄｕｃｅｓ ｈｉｇｈ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｒａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａ ｖｅｒａ． Ｂｌｏｏｄ． ２０１５ Ｏｃｔ ８；１２６（１５）：１７６２－９． ｄｏｉ： １０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１５－０４－６３７２８０． Ｅｐｕｂ ２０１５ Ａｕｇ １０．
［２］ Ｇａｎｅ ＥＪ， ｅｔ． ａｌ． Ｔｈｅ ｏｒａｌ ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－７ ａｇｏｎｉｓｔ ＧＳ－９６２０ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ． ２０１５ Ａｕｇ；６３（２）：３２０－８． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｊｈｅｐ．２０１５．０２．０３７． Ｅｐｕｂ ２０１５ Ｆｅｂ ２７．
［３］ Ｊａｎｓｓｅｎ ＨＬＡ， ｅｔ． ａｌ． Ｓａｆｅｔｙ， ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ｖｅｓａｔｏｌｉｍｏｄ （ＧＳ－９６２０） ｉｎ ｖｉｒａｌｌｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ． Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ． ２０１８ Ｍａｒ；６８（３）：４３１－４４０． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｊｈｅｐ．２０１７．１０．０２７． Ｅｐｕｂ ２０１７ Ｄｅｃ １１．
［４］ Ａｇａｒｗａｌ Ｋ， ｅｔ． ａｌ． Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｖｅｓａｔｏｌｉｍｏｄ （ＧＳ－９６２０） ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｗｈｏ ａｒｅ ｎｏｔ ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ ｏｎ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒａｌ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ［２０１８ Ａｕｇ， ２５（１１）：１３３１－１３４０．
［５］ Ｌｏｐａｔｉｎ Ｕ， ｅｔ． ａｌ． Ｓａｆｅｔｙ， ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ＧＳ－９６２０， ａｎ ｏｒａｌ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ７ ａｇｏｎｉｓｔ． Ａｎｔｉｖｉｒ Ｔｈｅｒ． ２０１３；１８（３）：４０９－１８． ｄｏｉ： １０．３８５１／ＩＭＰ２５４８． Ｅｐｕｂ ２０１３ Ｆｅｂ １５．
［６］ Ｅｄｗａｒｄ Ｊ． Ｇａｎｅ， ｅｔ． ａｌ． ＴＬＲ７ ａｇｏｎｉｓｔ ＲＯ７０２０５３１ ｔｒｉｇｇｅｒｓ ｉｍｍｕｎｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｏｓｅｓ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｂｙ Ｊｕｌｅｓ Ｌｅｖｉｎ． ＡＡＳＬＤ ２０１８ Ｎｏｖ ９－１３ ＳＦ
［７］ Ｅｂｒａｈｉｍ Ｍ， ｅｔ． ａｌ． Ａｒｅ ＲＩＧ－１ ａｎｄ ＭＤＡ５ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｃｈｒｏｎｉｃ ＨＢＶ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ？ Ｖｉｒａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１５ Ｎｏｖ；２８（９）：５０４－８． ｄｏｉ： １０．１０８９／ｖｉｍ．２０１５．００５６． Ｅｐｕｂ ２０１５ Ｏｃｔ ２０．
［８］ Ｍａ Ｚ， ｅｔ． ａｌ． Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｔｏ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｉｎｉｔｉａｔｉｎｇ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｉｎｎａｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｄａｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ． Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１５ Ｍａｙ；１２（３）：２７３－８２． ｄｏｉ： １０．１０３８／ｃｍｉ．２０１４．１１２． Ｅｐｕｂ ２０１４ Ｎｏｖ ２４．
［９］ Ｊｏｎｅｓ Ｍ， ｅｔ． ａｌ． ＳＢ ９２００， ａ ｎｏｖｅｌ ａｇｏｎｉｓｔ ｏｆ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ， ｓｈｏｗｓ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ＨＣＶ ｖａｒｉａｎｔｓ． Ｊ Ｍｅｄ Ｖｉｒｏｌ． ２０１７ Ｓｅｐ；８９（９）：１６２０－１６２８． ｄｏｉ： １０．１００２／ｊｍｖ．２４８０９． Ｅｐｕｂ ２０１７ Ｍａｙ ２３．
［１０］ Ｘｕ ＣＬ， ｅｔ． ａｌ． Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４ ｏｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＰＢＭＣｓ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ａｇｇｒａｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＢＶ－ｒｅｌａｔｅｄ ａｃｕｔｅ－ｏｎ－ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｉｖｅｒ ｆａｉｌｕｒｅ． Ｊ Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ｕｎｉｖ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ Ｍｅｄ Ｓｃｉ． ２０１５ Ｄｅｃ；３５（６）：９１０－９１５． ｄｏｉ： １０．１００７／ｓ１１５９６－０１５－１５２７－ｘ． Ｅｐｕｂ ２０１５ Ｄｅｃ １６．
［１１］ Ｋａｔｏ Ｈ， ｅｔ． ａｌ． ＲＩＧ－Ｉ－Ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｙｐｅ Ｉ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｏｐａｔｈｉｅｓ． Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ． ２０１７ Ｍａｙ；３７（５）：２０７－２１３． ｄｏｉ： １０．１０８９／ｊｉｒ．２０１６．００９５．
［１２］ Ｌｉ Ｌ， ｅｔ． ａｌ． Ａｎｔｉ－ＨＢＶ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ７ ａｇｏｎｉｓｔ ＧＳ－９６２０ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｂ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ． ２０１８ Ｍａｙ；６８（５）：９１２－９２１． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｊｈｅｐ．２０１７．１２．００８． Ｅｐｕｂ ２０１７ Ｄｅｃ １４．
［１３］ Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ， ｅｔ． ａｌ． ＬＢＡ１５Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ （ＦＩＨ） ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＭＫ－１４５４， ａｎ ａｇｏｎｉｓｔ ｏｆ ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇｅｎｅｓ （ＳＴＩＮＧ）， ａｓ ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｒ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ （ｐｅｍｂｒｏ） ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ ｏｒ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．２０１８ ＯＣＴ．２９（８）：７１２－７１２．Ｍｅｅｔｉｎｇ Ａｂｓｔｒａｃｔ．
［１４］ Ｃｅｍｅｒｓｋｉ， Ｓａｓｏ， ｅｔ． ａｌ． Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ＳＴＩＮＧ ａｇｏｎｉｓｔ， ＭＫ－１４５４． ＪＯＵＲＮＡＬ ＦＯＲ ＩＭＭＵＮＯＴＨＥＲＡＰＹ ＯＦ ＣＡＮＣＥＲ． ２０１７ ＮＯＶ．５（２）：１６．Ｍｅｅｔｉｎｇ Ａｂｓｔｒａｃｔ．
［１５］ Ｒａｍａｎｊｕｌｕ ＪＭ， ｅｔ． ａｌ． Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ａｍｉｄｏｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｅ ＳＴＩＮＧ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｗｉｔｈ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｎａｔｕｒｅ． ２０１８ Ｄｅｃ；５６４（７７３６）：４３９－４４３． ｄｏｉ： １０．１０３８／ｓ４１５８６－０１８－０７０５－ｙ． Ｅｐｕｂ ２０１８ Ｎｏｖ ７．
［１６］ Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ＭＩＷ８１５ （ＡＤＵ－Ｓ１００） ＋／－ Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ａｄｖａｎｃｅｄ／Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ ｏｒ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ．
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｄｕｒｏ．ｃｏｍ／ｆｉｌｅ．ｃｆｍ／１３／ｄｏｃｓ／ＳＩＴＣ１８＿ＭＩＷ８１５Ｘ２１０１＿ＳＩＴＣ％２０Ｐｏｓｔｅｒ（ｅ＿ｖｅｒｓｉｏｎ）＿０８Ｎｏｖ２０１８．ｐｄｆ
［１７］Ｌａｒａ ＰＮ Ｊｒ， ｅｔ． ａｌ． Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｐｈａｓｅ ＩＩＩ ｐｌａｃｅｂｏ－ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ ａｎｄ ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ ｖａｄｉｍｅｚａｎ （ＡＳＡ４０４） ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ． ２０１１ Ａｕｇ １；２９（２２）：２９６５－７１． ｄｏｉ： １０．１２００／ＪＣＯ．２０１１．３５．０６６０． Ｅｐｕｂ ２０１１ Ｊｕｎ ２７．
［１８］ Ｙｕｅｎ， Ｍ． Ｆ， ｅｔ． ａｌ． Ｄｏｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄａｉｌｙ， ｏｒａｌ ＲＩＧ－Ｉ ａｇｏｎｉｓｔ Ｉｎａｒｉｇｉｖｉｒ （ＳＢ ９２００） ｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｎａｉｖｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ： ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ２５ｍｇ ａｎｄ ５０ｍｇ ｃｏｈｏｒｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ＡＣＨＩＥＶＥ ｔｒｉａｌ． ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＨＥＰＡＴＯＬＯＧＹ． ２０１８ ＡＰＲ．６８（１）： Ｓ５０９－Ｓ５１０．ＤＯＩ： １０．１０１６／Ｓ０１６８－８２７８（１８）３１２６７－４
［１９］ Ｍａ Ｚ， ｅｔ． ａｌ． Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ Ｖｉｒｕｓ ａｎｄ Ｔｏｌｌ－Ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ： Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｆｏｒ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ． Ｖａｃｃｉｎｅｓ （Ｂａｓｅｌ）． ２０１８ Ｊａｎ １６；６（１）． ｐｉｉ： Ｅ６． ｄｏｉ： １０．３３９０／ｖａｃｃｉｎｅｓ６０１０００６．
［２０］ Ｗａｌｓｈ， Ｒ．， ｅｔ． ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＳＢ９２００ （Ｉｎａｒｉｇｉｖｉｒ） ｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ．ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＨＥＰＡＴＯＬＯＧＹ． ２０１８ ＡＰＲ．６８（１）： Ｓ８９－Ｓ８９． ＤＯＩ： １０．１０１６／Ｓ０１６８－８２７８（１８）３０３９６－９
［２１］ Ｎｉｕ Ｃ， ｅｔ． ａｌ． Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ７ ａｇｏｎｉｓｔ ＧＳ－９６２０ ｉｎｄｕｃｅｓ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＨＢＶ ｖｉａ ａ ｔｙｐｅ Ｉ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ． Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ． ２０１８ Ｍａｙ；６８（５）：９２２－９３１． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｊｈｅｐ．２０１７．１２．００７． Ｅｐｕｂ ２０１７ Ｄｅｃ １３．
［２２］ Ｙｕｅｎ， ＭＦ， ｅｔ． ａｌ． Ａｓｃｅｎｄｉｎｇ ｄｏｓｅ ｃｏｈｏｒｔ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｉｎａｒｉｇｉｖｉｒ － Ａ ｎｏｖｅｌ ＲＩＧ Ｉ ａｇｏｎｉｓｔ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ＨＢＶ ｐａｔｉｅｎｔｓ： Ｆｉｎａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＣＨＩＥＶＥ ｔｒｉａｌ． ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＨＥＰＡＴＯＬＯＧＹ． ２０１９ ＡＰＲ．７０（１）： Ｅ４７－Ｅ４８．ＤＯＩ： １０．１０１６／Ｓ０６１８－８２７８（１９）３００８４－２
［２３］ Ｂｏｕｒｑｕｉｎ Ｃ， ｅｔ． ａｌ． Ｈａｒｎｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ ｆｉｇｈｔ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ ＲＩＧ－Ｉ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ． ２０１９ Ｍａｒ ２． ｐｉｉ： Ｓ１０４３－６６１８（１８）３２０６６－８． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｐｈｒｓ．２０１９．０３．００１．
［２４］ Ｚｅｎｇ Ｙ， ｅｔ． ａｌ． Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ， ｌｏｎｇ ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡ ＮＥＡＴ１， ａｎｄ ＲＩＧ－Ｉ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＨＢｅＡｇ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｐｈａｓｅ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ａｎａｌ． ２０１９ Ｊｕｎ；３３（５）：ｅ２２８８６． ｄｏｉ： １０．１００２／ｊｃｌａ．２２８８６． Ｅｐｕｂ ２０１９ Ｍａｒ ２９．
［２５］ Ｗａｎｇ Ｊｉａｗｅｎ， ｅｔ ａｌ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２０１８， Ｖｏｌ． ４９， Ｎｏ． ４， ２８９－２９２．
［２６］ Ｔａｏ Ｚｅｙｕ， ｅｔ ａｌ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｄｒｕｇｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｖｏｌｕｍｅ， Ｊｕｌｙ ２０１８， Ｖｏｌ． ３９， Ｎｏ． ４： ３０８－３１９．
［２７］ Ｘｕ Ｑｕｎ， ｅｔ ａｌ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２０１６， ４０（１）： ４２－５５．
［２８］ Ｌｉｕ Ｑｉｕｍｉｎｇ， ｅｔ ａｌ． Ｎｅｗ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｎｔｉ－ＨＢＶ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ． Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１６， Ｖｏｌ． ３２， Ｉｓｓｕｅ ５： ６５０－６５８．
［２９］ Ｍｕ Ｎａ， ｅｔ ａｌ． Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｐａｔｔｅｒｎ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ＴＬＲ３， ＲＩＧ－Ｉ ａｎｄ ＭＤＡ５ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． ２０１６－０５：７１５－７１９．
［３０］ Ｈｅｉｎｚ Ｇｉｓｓｌｉｎｇｅｒ， ｅｔ． ａｌ． Ｒｏｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｆａ－２ｂ， ａ ｎｏｖｅｌ ＩＦＮα－２ｂ， ｉｎｄｕｃｅｓ ｈｉｇｈ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｒａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａ ｖｅｒａ．Ｂｌｏｏｄ． ２０１５ Ｏｃｔ ８； １２６（１５）： １７６２－１７６９．Ｐｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ ２０１５ Ａｕｇ １０．
［３１］ Ｍｏｎｋａｒｓｈ ＳＰ， ｅｔ． ａｌ． Ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ｉｓｏｍｅｒｓ ｏｆ ｍｏｎｏｐｅｇｙｌａｔｅｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ－２ａ： ｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ． １９９７ Ｍａｙ １；２４７（２）：４３４－４０．
［３２］ Ｇｒａｃｅ Ｍ， ｅｔ． ａｌ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｇｙｌａｔｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＩＦＮ－ａｌｐｈａ２ｂ． Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ． ２００１ Ｄｅｃ；２１（１２）：１１０３－１５．
［３３］ Ｆｏｓｅｒ Ｓ， ｅｔ． ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ， ａｎｄ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ｉｓｏｍｅｒｓ ｏｆ ｍｏｎｏｐｅｇｙｌａｔｅｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ－２ａ （ＰＥＧＡＳＹＳ）． Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ． ２００３ Ｊｕｌ；３０（１）：７８－８７．
［３４］ Ｎａｎｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｂｉｏｔｅｃｈｂｏｌｏｇｙ．ＰＥＧ－ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ ＬＡＭＢＤＡ １ ＣＯＮＪＵＧＡＴＥＳ．ＷＯ２０１３／０２８２３３ Ａ１． ２８．０２．２０１３．
［３５］ Ｎａｎｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｂｉｏｔｅｃｈｂｏｌｏｇｙ．ＰＥＧ－ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ ＬＡＭＢＤＡ １ ＣＯＮＪＵＧＡＴＥＳ．ＵＳ ８４５４９４７ Ｂ１．Ｊｕｎ．４．２０１３．
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ．ｅｓｐａｃｅｎｅｔ．ｃｏｍ／ｓｅａｒｃｈＲｅｓｕｌｔｓ？ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ＝ｔｒｕｅ＆ｌｏｃａｌｅ＝ｅｎ＿ＥＰ＆ＤＢ＝ＥＰＯＤＯＣ＆ＳＴ＝ａｄｖａｎｃｅｄ＆ＴＩ＝＆ＡＢ＝ｐｅｇ－ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ＋ｌａｍｂｄａ＆ＰＮ＝＆ＡＰ＝＆ＰＲ＝＆ＰＤ＝＆ＰＡ＝＆ＩＮ＝＆ＣＰＣ＝＆ＩＣ＝
［３６］ Ｗａｎｇ Ｊｕｎｚｈｉ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｄｒｕｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ． ２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ． Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｅｓｓ， ２００７： ５４０．
［３７］ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ－４ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ［Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ］．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／ＮＰ＿０３４６３４．
［３８］ Ｐｉｃｈｉａ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ， Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ／ｄｏｃｕｍｅｎｔ－ｃｏｎｎｅｃｔ／ｄｏｃｕｍｅｎｔ－ｃｏｎｎｅｃｔ．ｈｔｍｌ？ｕｒｌ＝ｈｔｔｐｓ％ ３Ａ％２Ｆ％２Ｆａｓｓｅｔｓ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ％２ＦＴＦＳ－Ａｓｓｅｔｓ％２ＦＬＳＧ％２Ｆｍａｎｕａｌｓ％２ Ｆｐｉｃｈｉａｆｅｒｍ＿ｐｒｏｔ．ｐｄｆ＆ｔｉｔｌｅ＝ＵＧｌｊａＧｌｈＩＥＺｌｃｍ１ｌｂｎＲｈｄＧｌｖｂｉＢＨｄＷｌｋＺＷｘｐｂｍＶｚ．
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【配列表】
【国際調査報告】