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特表2022-547788抗体結合ＴＳＬＰ及びその使用

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-11-16

(54)【発明の名称】抗体結合ＴＳＬＰ及びその使用

(51)【国際特許分類】

C12N 15/13 20060101AFI20221109BHJP

C12N 15/63 20060101ALI20221109BHJP

C12N 1/15 20060101ALI20221109BHJP

C12N 1/19 20060101ALI20221109BHJP

C12N 1/21 20060101ALI20221109BHJP

C12N 5/10 20060101ALI20221109BHJP

C07K 16/24 20060101ALI20221109BHJP

A61P 11/06 20060101ALI20221109BHJP

A61P 1/04 20060101ALI20221109BHJP

A61P 37/08 20060101ALI20221109BHJP

A61P 17/00 20060101ALI20221109BHJP

A61P 17/06 20060101ALI20221109BHJP

A61K 39/395 20060101ALI20221109BHJP

C12P 21/08 20060101ALN20221109BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C07K16/24

A61P11/06

A61P1/04

A61P37/08

A61P17/00

A61P17/06

A61K39/395 N

C12P21/08

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022506382

(86)(22)【出願日】2020-09-03

(85)【翻訳文提出日】2022-03-22

(86)【国際出願番号】 CN2020113289

(87)【国際公開番号】W WO2021043221

(87)【国際公開日】2021-03-11

(31)【優先権主張番号】62/895,984

(32)【優先日】2019-09-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522040148

【氏名又は名称】ビオシオンインコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000877

【氏名又は名称】弁理士法人ＲＹＵＫＡ国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】チェン、ミンジウ

(72)【発明者】

【氏名】タン、ウェイ

(72)【発明者】

【氏名】ジョン、キャシーシャオヤン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン、ジェンピン

(72)【発明者】

【氏名】ゾウ、シャオファン

(72)【発明者】

【氏名】ソン、ウェイ

(72)【発明者】

【氏名】シュ、ホンジアン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064CE12

4B064DA01

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA88X

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C085AA14

4C085BB36

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG05

4C085GG06

4C085GG08

4H045AA11

4H045AA30

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

ヒトＴＳＬＰに特異的に結合する単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分が開示される。本抗体をコードする核酸分子、発現ベクター、宿主細胞及び抗体を発現するための方法も提供される。本開示はさらに、二重特異性分子、免疫抱合体、ＣＡＲ－免疫細胞、腫瘍溶解性ウイルス及び本抗体を含む医薬組成物、並びに本開示の抗ＴＳＬＰ抗体を用いた治療方法を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）に結合する単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分であって、
（ｉ）ＶＨＣＤＲ１領域、ＶＨＣＤＲ２領域及びＶＨＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域であって、前記ＶＨＣＤＲ１領域、前記ＶＨＣＤＲ２領域及び前記ＶＨＣＤＲ３領域が、（１）配列番号１、２及び３のアミノ酸配列をそれぞれ含み、（２）配列番号３７、３８、及び３９のアミノ酸配列をそれぞれ含み、又は（３）配列番号４７、４８、及び４９のそれぞれのアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び／又は
（ｉｉ）ＶＬＣＤＲ１領域、ＶＬＣＤＲ２領域及びＶＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域であって、前記ＶＬＣＤＲ１領域、前記ＶＬＣＤＲ２領域及び前記ＶＬＣＤＲ３領域が、（１）配列番号４、５及び６のアミノ酸配列をそれぞれ含み、（２）配列番号４０、４１及び４２のアミノ酸配列をそれぞれ含み、又は（３）配列番号５０、５１及び５２のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖可変領域
を含む、単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分。

【請求項2】

前記重鎖可変領域が、配列番号７、８、９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｒ；Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｖ；Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ；Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ；Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｖ）、４３又は５３に対する少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分。

【請求項3】

前記軽鎖可変領域が、配列番号１０、１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ；Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ；Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）、４４又は５４に対する少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分。

【請求項4】

前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、（１）配列番号７及び１０のそれぞれ；（２）配列番号８及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ）のそれぞれ；（３）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ）のそれぞれ；（４）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｖ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ）のそれぞれ；（５）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ）のそれぞれ；（６）配列番号９（Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ）のそれぞれ；（７）配列番号９（Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｖ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ）のそれぞれ；（８）配列番号８及び１１（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（９）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１０）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｖ）及び１１（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１１）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１２）配列番号９（Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１３）配列番号９（Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｖ）及び１１（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１４）配列番号８及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１５）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１６）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｖ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１７）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１８）配列番号９（Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１９）配列番号９（Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｖ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（２０）配列番号４３及び４４のそれぞれ；又は（２１）配列番号５３及び５４のそれぞれに対する少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分。

【請求項5】

前記重鎖可変領域に連結された、配列番号１２、１３又は５７のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域、及び前記軽鎖可変領域に連結された配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分。

【請求項6】

（ｉ）ヒトＴＳＬＰに結合し；（ｉｉ）サルＴＳＬＰに結合し；及び／又は（ｉｉｉ）ヒトＴＳＬＰ－ヒトＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ相互作用をブロックする、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分。

【請求項7】

マウス、キメラ又はヒト化抗体である、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分。

【請求項8】

ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４アイソタイプである、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分。

【請求項9】

請求項１～８のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分をコードするポリヌクレオチド。

【請求項10】

請求項９に記載のポリヌクレオチドを含有するベクター。

【請求項11】

請求項９に記載のポリヌクレオチドと一体化されるゲノムを有するか又は請求項１０に記載のベクターを含有する宿主細胞。

【請求項12】

治療有効量の、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。

【請求項13】

請求項１～８のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分を含む、ＴＳＬＰ過剰発現に関連する疾患を治療するための医薬組成物。

【請求項14】

前記疾患が、喘息、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎又は乾癬である、請求項１３に記載の使用するための医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願及び援用
本出願は、２０１９年９月４日に出願された米国仮特許出願第６２／８９５，９８４号に対する優先権を主張するものである。

【0002】

上記の出願、及びその中に又はその審査手続中に引用される全ての文献（「出願引用文献」）及び本明細書に引用又は参照される全ての文献（本明細書に引用される全ての文献、特許、公開特許出願を含むがこれらに限定されない）（「本明細書に引用される文献」）、及び本明細書に引用される文献に引用又は参照される全ての文献は、本明細書又は参照により本明細書に援用されるあらゆる文献に記載されるあらゆる製品についてのあらゆる製造業者の説明書、記載、製品仕様書、及び製品シートと一緒に、参照により本明細書に援用され、本発明の実施に用いられ得る。より詳細には、全ての参照される文献は、各個々の文献が、具体的に及び個別に、参照により援用されることが示されるのと同程度に、参照により援用される。本開示に記載されるあらゆるＧｅｎｂａｎｋ配列は、本開示の最先の有効出願日のものであるＧｅｎｂａｎｋ配列とともに、参照により援用される。

【0003】

本開示は、一般に、高い親和性及び機能性でヒトＴＳＬＰに特異的に結合する、単離モノクローナル抗体、特に、マウス、キメラ又はヒト化モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分に関する。抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸分子、発現ベクター、宿主細胞及び抗体又はその抗原結合部分を発現するための方法も提供される。本開示はさらに、免疫抱合体、二重特異性分子、キメラ抗原受容体、腫瘍溶解性ウイルス、及び抗体又はその抗原結合部分を含む医薬組成物、並びに本開示の抗ＴＳＬＰ抗体又はその抗原結合部分を用いた診断及び治療方法を提供する。

【背景技術】

【0004】

胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）は、上皮由来サイトカインである。それは、ＩＬ－７に密接に関連しており、ＩＬ－７受容体α鎖及びＴＳＬＰ受容体鎖のヘテロ二量体であるＴＳＬＰＲに結合する。ＴＳＬＰｍＲＮＡが、胸腺、肺、皮膚、腸及びへんとう腺における上皮細胞、並びに間質細胞及び肥満細胞によって主に発現される一方、ＴＳＬＰＲｍＲＮＡは、樹状細胞（ＤＣ）、Ｔ細胞、Ｂ細胞、肥満細胞、ＮＫ細胞及び単球を含む多くの免疫細胞型、並びに心臓、骨格筋、腎臓及び肝臓のような組織において見られる（ＲｕｉＨｅｅｔａｌ．，（２０１０）ＡｎｎａｌｓｏｆｔｈｅＮｅｗＹｏｕｋＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ１１８３：１３－２４；ＱｕｅｎｔｍｅｉｅｒＨｅｔａｌ．，（２００１）Ｌｅｕｋｅｍｉａ１５（８）：１２８６－１２９２；ＲｉｍｏｌｄｉＭｅｔａｌ．，（２００５）Ｎａｔｕｒｅｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ６（５）：５０７－５１４）。

【0005】

ＴＳＬＰによって引き起こされるシグナル伝達経路は、広く研究されている。ＴＳＬＰは、免疫応答の誘導期中にＴヘルパー（Ｔｈ）２細胞分化及びＴｈ２サイトカイン産生を駆動するようにＤＣ分極を誘導し、また、Ｔ細胞増殖を直接促進し、Ｔｈ２サイトカイン分泌を増大する。したがって、ＴＳＬＰは、Ｔｈ２駆動炎症の主調節因子であると考えられ、ＴＳＬＰの上方制御は、アトピー性皮膚炎、及び喘息などのＴｈ２関連疾患の発症に関連付けられる（ＲｕｉＨｅｅｔａｌ．，（２０１０）上記を参照；ＩｔｏＴｅｔａｌ．，（２００５）ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ２０２（９）：１２１３－１２２３；ＨｅＲｅｔａｌ．，（２００８）ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ１０５（３３）：１１８７５－１１８８０）。一方、ＴＳＬＰは、消化管及び胸腺におけるいくつかの免疫恒常性維持機能を媒介する。例えば、ＴＳＬＰは、株に依存して細菌刺激時に消化管上皮細胞株において上方制御され、それにより、Ｔｒｅｇ細胞分化を促進するように、形質転換成長因子－βと相乗作用する。ＴＳＬＰはまた、ＣＤ１０３＋ＤＣを寛容原性表現型へと調整するために、初代ヒト腸上皮細胞によって産生される（ＫａｔｅｒｉｎａＴｓｉｌｉｎｇｉｒｉｅｔａｌ．，（２０１７）ＣｅｌｌｕｌａｒａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙａｎｄＨｅｐａｔｏｌｏｇｙ３（２）：１７４－１８２；ＺｅｕｔｈｅｎＬＨｅｔａｌ．，（２００８）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１２３：１９７－２０８；ＩｌｉｅｖＩＤｅｔａｌ．，（２００９）Ｇｕｔ５８：１４８１－１４８９）。

【0006】

免疫系におけるＴＳＬＰの２つの役割は、長いアイソフォーム、及び長い方のアイソフォームの最後の６３アミノ酸残基から構成される短いアイソフォームという２つのアイソフォームの発見をもたらす。これら２つは、異なるプロモーター領域によって制御され、状況、組織及び刺激に応じて発現される（ＨａｒａｄａＭｅｔａｌ．，（２０１１）ＡｍｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＣｅｌｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ４４：７８７－７９３）。免疫原性の高い微生物株に応答して、ヒト腸上皮細胞において、長いアイソフォームの発現が上方制御された一方、短いアイソフォームの発現は下方制御されたが、逆の発現パターンが、片利共生大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株の接種後に観察された。さらに、健康なバリア表面におけるＴＳＬＰ発現は、短いアイソフォームに限られ、長いＴＳＬＰは、たばこ曝露後に口腔粘膜病変において上方制御されたにすぎない（ＫａｔｅｒｉｎａＴｓｉｌｉｎｇｉｒｉｅｔａｌ．，（２０１７）上記を参照）。アイソフォームの発現パターンはまた、いくつかのＴＳＬＰ関連疾患において調査されている。例えば、長いＴＳＬＰの過剰発現が、喘息、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎及び乾癬において観察され、長いＴＳＬＰの低下した発現が、セリアック病において見られた。また、短いＴＳＬＰの発現が、クローン病、セリアック病及びアトピー性皮膚炎において下方制御された（ＫａｔｅｒｉｎａＴｓｉｌｉｎｇｉｒｉｅｔａｌ．，（２０１７）上記を参照；ＦｏｒｎａｓａＧｅｔａｌ．，（２０１５）ＪＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ１３６：４１３－４２２）。

【0007】

ＴＳＬＰは、上述される疾患とのその関連性のため、臨床標的として浮上している。短いＴＳＬＰの発現の回復が、難治性セリアック病を治療するために提案された（ＢｉａｎｃｈｅｒｉＰｅｔａｌ．，（２０１５）Ｇｕｔ６５：１６７０－１６８０）。ヒトモノクローナル抗体テゼペルマブが、喘息及びアトピー性皮膚炎の治療のために設計され、プラセボと比較して第ＩＩ相試験において年間喘息増悪率を低下させることが証明された（ＪｏｎａｔｈａｎＣｏｒｒｅｎｅｔａｌ．，（２０１７）ＴｈｅＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ３７７（１０）：９３６－９４６）。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

改善された臨床転帰を有し、もたらし得る、短いアイソフォームとの最小限の相互作用で、長いＴＳＬＰのみに特異的な抗体を含む、より良好な薬学的特性を有するさらなる抗体が、より一層、望まれ、求められている。

【0009】

本出願におけるあらゆる文献の引用又は特定は、このような文献が本開示の先行技術として利用可能であることを認めるものではない。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本開示は、ＴＳＬＰ（例えば、ヒトＴＳＬＰ、及びサルＴＳＬＰ）に結合し、テゼペルマブなどの先行技術の抗ＴＳＬＰ抗体と比較して、より高くないとしても同等の、ＴＳＬＰへの結合親和性及びＴＳＬＰ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ相互作用に対する遮断活性を有する、単離モノクローナル抗体、例えば、マウス、ヒト、キメラ又はヒト化モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分を提供する。

【0011】

本開示の抗体又はその抗原結合部分は、ＴＳＬＰタンパク質の検出、並びに喘息、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎及び乾癬などのＴＳＬＰ関連疾患の治療及び予防を含む様々な用途に使用され得る。

【0012】

したがって、一態様において、本開示は、ＶＨ－ＣＤＲ１領域、ＶＨ－ＣＤＲ２領域及びＶＨ－ＣＤＲ３領域を含み得る重鎖可変領域を有する、ＴＳＬＰに結合する単離モノクローナル抗体（例えば、マウス、キメラ若しくはヒト化抗体）、又はその抗原結合部分に関し、ここで、ＶＨ－ＣＤＲ１領域、ＶＨ－ＣＤＲ２領域及びＣＤＲ３領域は、（１）配列番号１、２及び３のそれぞれ；（２）配列番号３７、３８、及び３９のそれぞれ；又は（３）配列番号４７、４８、及び４９のそれぞれに記載されるアミノ酸配列を含み得る。

【0013】

本開示の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分は、配列番号７、８、９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｒ；Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｖ；Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ；Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ；又はＸ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｖ）、４３又は５３に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み得、ここで、抗体又はその抗原結合部分は、ＴＳＬＰに結合する。配列番号７のアミノ酸配列は、配列番号１７又は１８のヌクレオチド配列によってコードされ得、配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｒ）、４３及び５３に記載されるアミノ酸配列は、配列番号１９、４５及び５５のそれぞれのヌクレオチド配列によってコードされ得る。

【0014】

ＴＳＬＰに結合する、本開示の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分は、ＶＬ－ＣＤＲ１領域、ＶＬ－ＣＤＲ２領域及びＶＬ－ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域を含み得、ここで、ＶＬ－ＣＤＲ１領域、ＶＬ－ＣＤＲ２領域、及びＶＬ－ＣＤＲ３領域は、（１）配列番号４、５及び６のそれぞれ；（２）配列番号４０、４１及び４２のそれぞれ；又は（３）配列番号５０、５１及び５２のそれぞれに記載されるアミノ酸配列を含み得る。

【0015】

本開示の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分は、配列番号１０、１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ；Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ；又はＸ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）、４４又は５４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得、ここで、抗体又はその抗原結合部分は、ＴＳＬＰに結合する。配列番号１０のアミノ酸配列は、配列番号２０又は２１のヌクレオチド配列によってコードされ得、配列番号１１（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ）、４４及び５４に記載されるアミノ酸配列は、配列番号２２、４６及び５６のそれぞれのヌクレオチド配列によってコードされ得る。

【0016】

本開示の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分において、ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、ＶＨ－ＣＤＲ３、ＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２及びＶＬ－ＣＤＲ３は、（１）配列番号１、２、３、４、５及び６のそれぞれ；（２）配列番号３７、３８、３９、４０、４１及び４２のそれぞれ；又は（３）配列番号４７、４８、４９、５０、５１及び５２のそれぞれに記載されるアミノ酸配列を含み得、ここで、抗体又はその抗原結合部分は、ＴＳＬＰに結合する。

【0017】

本開示の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分は、（１）配列番号７及び１０のそれぞれ；（２）配列番号８及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ）のそれぞれ；（３）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ）のそれぞれ；（４）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｖ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ）のそれぞれ；（５）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ）のそれぞれ；（６）配列番号９（Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ）のそれぞれ；（７）配列番号９（Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｖ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｖ）のそれぞれ；（８）配列番号８及び１１（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（９）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１０）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｖ）及び１１（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１１）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１２）配列番号９（Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１３）配列番号９（Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｖ）及び１１（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１４）配列番号８及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１５）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１６）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ｖ、Ｘ３＝Ｖ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１７）配列番号９（Ｘ１＝Ｒ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１８）配列番号９（Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｒ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（１９）配列番号９（Ｘ１＝Ｋ、Ｘ２＝Ａ、Ｘ３＝Ｖ）及び１１（Ｘ１＝Ｓ、Ｘ２＝Ｉ）のそれぞれ；（２０）配列番号４３及び４４のそれぞれ；又は（２１）配列番号５３及び５４のそれぞれに記載されるアミノ酸配列を含み得る、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み得、ここで、抗体又はその抗原結合部分は、ＴＳＬＰに結合する。

【0018】

本開示の単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分は、重鎖及び軽鎖を含み得、ここで、重鎖は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含み得、軽鎖は、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含み得る。重鎖定常領域は、配列番号１２若しくは５７に記載されるアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１定常領域、又は配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４定常領域、或いはそのフラグメントを含み得る。軽鎖定常領域は、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を有するヒトκ定常領域、又はそのフラグメントを含み得る。重鎖定常領域はまた、配列番号１５のアミノ酸配列を有するマウスＩｇＧ１定常領域であり得、軽鎖定常領域は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するマウスκ定常領域であり得る。配列番号１２～１６、及び５７のアミノ酸配列は、配列番号２３～２７、及び５８のそれぞれのヌクレオチド配列によってコードされ得る。

【0019】

本開示の抗体は、ジスルフィド結合によって連結される２つの重鎖及び２つの軽鎖を含むか又はそれからなり得、ここで、各重鎖は、上述される重鎖定常領域、重鎖可変領域又はＣＤＲ配列を含み、各軽鎖は、上述される軽鎖定常領域、軽鎖可変領域又はＣＤＲ配列を含み、ここで、重鎖可変領域のＣ末端は、重鎖定常領域のＮ末端に連結され、軽鎖可変領域のＣ末端は、軽鎖定常領域のＮ末端に連結される。本開示の抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４アイソタイプの完全長抗体であり得る。他の実施形態における本開示の抗体は、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）抗体、又はＦａｂ若しくはＦ（ａｂ'）_２フラグメントなどの抗体フラグメントであり得る。

【0020】

本開示の抗体、又はその抗原結合部分は、テゼペルマブなどの先行技術の抗ＴＳＬＰ抗体と比較して、同等か又はより高い、ＴＳＬＰへの結合親和性及びＴＳＬＰ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ相互作用に対する遮断活性を有する。

【0021】

本開示はまた、本抗体、又はその抗原結合部分と異なる結合特異性を有する第２の機能的部分（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｍｏｉｅｔｙ）（例えば、第２の抗体）に連結された、本開示の抗体、又はその抗原結合部分を含む二重特異性分子を提供する。二重特異性分子は、ＴＳＬＰ及びＩｇＥなどの別の疾患特異的タンパク質に結合し得る。本開示はまた、細胞毒素、細胞毒性薬などの治療剤に連結された、本発明の抗体又はその抗原結合部分を含む免疫抱合体を提供する。別の態様において、本発明の抗体又はその抗原結合部分は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の一部になり得、本開示はまた、ＣＡＲを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞に関する。本発明の抗体又はその抗原結合部分はまた、腫瘍溶解性ウイルスによってコードされるか又は腫瘍溶解性ウイルスとともに使用され得る。

【0022】

本発明の抗体、若しくはその抗原結合部分、又は免疫抱合体、二重特異性分子、ＣＡＲ－免疫細胞、又は腫瘍溶解性ウイルスと、薬学的に許容される担体とを含む組成物も提供される。

【0023】

本開示の抗体、又はその抗原結合部分をコードする核酸分子、並びにこのような核酸を含む発現ベクター及びこのような発現ベクターを含むか又は抗体若しくはその抗原結合部分をコードするポリヌクレオチドと一体化されたそのゲノムを有する宿主細胞も、本開示によって包含される。発現ベクターを含む宿主細胞を用いて、抗ＴＳＬＰ抗体又はその抗原結合部分を調製するための方法であって、（ｉ）宿主細胞において抗体又はその抗原結合部分を発現する工程及び（ｉｉ）宿主細胞又はその細胞培養物から抗体又はその抗原結合部分を単離する工程を含む方法も提供される。

【0024】

さらに別の態様において、本開示は、対象における喘息、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎又は乾癬を治療する方法であって、治療有効量の、本開示の抗体、又はその抗原結合部分を対象に投与することを含む方法を提供する。ある実施形態において、本方法は、本開示の組成物、二重特異性分子、免疫抱合体、ＣＡＲ－免疫細胞、又は抗体をコードする若しくは抗体を担持する腫瘍溶解性ウイルス、或いは対象においてそれらを発現することが可能な核酸分子を投与することを含む。二重特異性分子は、喘息治療において、ＴＳＬＰ及びＩｇＥ、ＩＬ４、ＩＬ１３又はＩＬ－５などの別の疾患特異的タンパク質に結合し得る。ある実施形態において、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ４抗体、抗ＩＬ４Ｒ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＩＬ１３Ｒ抗体、抗ＩＬ－５抗体、抗ＩＬ５Ｒ抗体、及び／又は抗ＴＳＬＰＲ抗体などの少なくとも１つのさらなる抗体が、本開示の抗体、又はその抗原結合部分とともに投与され得る。ある実施形態において、抗喘息薬、抗潰瘍性大腸炎薬、抗アトピー性皮膚炎薬、又は抗乾癬薬などの少なくとも１つのさらなる薬剤が、本開示の抗体、又はその抗原結合部分とともに投与され得る。

【0025】

本開示の他の特徴及び利点は、限定であると解釈されるべきではない以下の詳細な説明及び実施例から明らかになるであろう。本出願を通して引用される全ての参照文献、ＧｅｎＢａｎｋエントリ、特許及び公開特許出願の内容は、参照により本明細書に明示的に援用される。

【0026】

したがって、本発明の目的は、任意の既に公知の製品、その製品の作製方法、又はその製品の使用方法を本発明に包含することではなく、したがって、本出願人は、その権利を留保し、任意の既に公知の製品、プロセス、又は方法の放棄を本明細書に開示する。本発明は、ＵＳＰＴＯの書面による記載及び実施可能要件（米国特許法第１１２条、第１段落）又はＥＰＯ（欧州特許条約（ＥＰＣ）８３条）を満たさない任意の製品、プロセス、又はその製品の作製方法又はその製品の使用方法を本発明の範囲内に包含することを意図しないことがさらに留意され、したがって、本出願人は、その権利を留保し、任意の既に記載された製品、その製品の作製方法、又はその製品の使用方法の放棄を本明細書に開示する。本発明の実施において、５３条（ｃ）ＥＰＣ及び規則２８（ｂ）及び（ｃ）ＥＰＣに準拠していることが有利であり得る。本出願の系統又は任意の他の系統又は任意の第三者の任意の先行出願における出願人の任意の登録特許の主題である任意の実施形態を明確に放棄する全ての権利が、明確に留保される。本明細書に記載されるいずれも、保証として解釈されるべきではない。

【0027】

本開示、特に、特許請求の範囲及び／又は段落において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含まれる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの用語が、米国特許法による意味を有し得；例えば、それらは、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味し得ること；及び「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」及び「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」などの用語が、米国特許法による意味を有し、例えば、それらは、明示されていない要素を許容するが、先行技術において見出されるか又は本発明の基本的又は新規な特徴に影響を与える要素を除外することが留意される。

【0028】

例として示されるが、本発明を記載される特定の実施形態のみに限定することは意図されていない、以下の詳細な説明が、添付の図面と併せて最もよく理解され得る。

【図面の簡単な説明】

【0029】

【図1A】捕捉ＥＬＩＳＡにおける、ヒトＴＳＬＰに対するマウス抗体１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９（Ａ）、Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及びＤ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７（Ｂ）の結合能を示す。

【図1B】捕捉ＥＬＩＳＡにおける、ヒトＴＳＬＰに対するマウス抗体１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９（Ａ）、Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及びＤ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７（Ｂ）の結合能を示す。

【図2A】間接ＥＬＩＳＡにおける、カニクイザルＴＳＬＰに対するマウス抗体１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９（Ａ）、Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及びＤ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７（Ｂ）の結合能を示す。

【図2B】間接ＥＬＩＳＡにおける、カニクイザルＴＳＬＰに対するマウス抗体１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９（Ａ）、Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及びＤ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７（Ｂ）の結合能を示す。

【図3A】競合ＥＬＩＳＡにおける、ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７ＲへのヒトＴＳＬＰの結合に対するマウス抗体１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９（Ａ）、Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及びＤ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７（Ｂ）の遮断能力を示す。

【図3B】競合ＥＬＩＳＡにおける、ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７ＲへのヒトＴＳＬＰの結合に対するマウス抗体１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９（Ａ）、Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及びＤ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７（Ｂ）の遮断能力を示す。

【図4A】競合ＥＬＩＳＡにおける、ヒトＴＳＬＰへのベンチマークテゼペルマブ結合をブロックするマウス抗体１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９（Ａ）、Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及びＤ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７（Ｂ）の能力を示す。

【図4B】競合ＥＬＩＳＡにおける、ヒトＴＳＬＰへのベンチマークテゼペルマブ結合をブロックするマウス抗体１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９（Ａ）、Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及びＤ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７（Ｂ）の能力を示す。

【図5A】細胞ベースのリガンドブロッキングＦＡＣＳアッセイにおける、ヒトＴＳＬＰＲ及びＩＬ７Ｒを発現する操作されたＢＡＦ３細胞へのヒトＴＳＬＰの結合に対するマウス抗体１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９（Ａ）、Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及びＤ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７（Ｂ）の遮断能力を示す。

【図5B】細胞ベースのリガンドブロッキングＦＡＣＳアッセイにおける、ヒトＴＳＬＰＲ及びＩＬ７Ｒを発現する操作されたＢＡＦ３細胞へのヒトＴＳＬＰの結合に対するマウス抗体１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９（Ａ）、Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及びＤ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７（Ｂ）の遮断能力を示す。

【図6A】細胞ベースの機能アッセイにおける、ＢＡＦ３細胞生存及び増殖に対する１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９（Ａ）、Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及びＤ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７（Ｂ）の阻害効果を示す。

【図6B】細胞ベースの機能アッセイにおける、ＢＡＦ３細胞生存及び増殖に対する１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９（Ａ）、Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及びＤ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７（Ｂ）の阻害効果を示す。

【図7】捕捉ＥＬＩＳＡにおける、ヒトＴＳＬＰに対するキメラ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９抗体の結合能を示す。

【図8】細胞ベースのブロッキングＦＡＣＳアッセイにおける、ヒトＴＳＬＰＲ及びＩＬ７Ｒを発現する操作されたＢＡＦ３細胞へのヒトＴＳＬＰの結合に対するキメラ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９抗体の遮断能力を示す。

【図9】細胞ベースの機能アッセイにおける、ＢＡＦ３細胞生存及び増殖に対するキメラ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９抗体の阻害効果を示す。

【図10】捕捉ＥＬＩＳＡにおける、ヒトＴＳＬＰに対するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４の結合能を示す。

【図11】間接ＥＬＩＳＡにおける、カニクイザルＴＳＬＰに対するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４の結合能を示す。

【図12】競合ＥＬＩＳＡにおける、ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７ＲへのヒトＴＳＬＰの結合に対するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４の遮断能力を示す。

【図13】競合ＥＬＩＳＡにおける、ヒトＴＳＬＰへのベンチマークテゼペルマブ結合をブロックするヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４の能力を示す。

【図14】細胞ベースのリガンドブロッキングＦＡＣＳアッセイにおける、ヒトＴＳＬＰＲ及びＩＬ７Ｒを発現する操作されたＢＡＦ３細胞へのヒトＴＳＬＰの結合に対するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４の遮断能力を示す。

【図15A】細胞ベースの機能アッセイにおける、ＢＡＦ３細胞生存及び増殖に対するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（Ａ）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（Ｂ）の阻害効果を示す。

【図15B】細胞ベースの機能アッセイにおける、ＢＡＦ３細胞生存及び増殖に対するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（Ａ）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（Ｂ）の阻害効果を示す。

【図16】捕捉ＥＬＩＳＡ試験における、ヒトＴＳＬＰに対するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ１）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ４）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ４）の結合能を示す。

【図17】競合ＥＬＩＳＡにおける、ヒトＴＳＬＰ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ結合に対するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ１）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ４）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ４）の遮断能力を示す。

【図18】競合ＥＬＩＳＡにおける、ベンチマーク－ヒトＴＳＬＰ結合をブロックするヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ１）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ４）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ４）の能力を示す。

【図19】細胞ベースのリガンドブロッキングＦＡＣＳアッセイにおける、ヒトＴＳＬＰＲ及びＩＬ７Ｒを発現する操作されたＢＡＦ３細胞へのヒトＴＳＬＰの結合に対するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ１）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ４）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ４）の遮断能力を示す。

【図20A】細胞ベースの機能アッセイにおける、ＢＡＦ３細胞生存及び増殖に対するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ４）（Ａ）、及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ４）（Ｂ）の阻害効果を示す。

【図20B】細胞ベースの機能アッセイにおける、ＢＡＦ３細胞生存及び増殖に対するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ４）（Ａ）、及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ４）（Ｂ）の阻害効果を示す。

【図21A】細胞ベースのレポーターアッセイにおける、操作されたＨＥＫ２９３Ｔ細胞とのヒトＴＳＬＰの相互作用に対するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ４）（Ａ）、及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ４）（Ｂ）の遮断能力を示す。

【図21B】細胞ベースのレポーターアッセイにおける、操作されたＨＥＫ２９３Ｔ細胞とのヒトＴＳＬＰの相互作用に対するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ４）（Ａ）、及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ４）（Ｂ）の遮断能力を示す。

【図22】ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ１）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ４）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ１）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ４）抗体のプロテインサーマルシフト（ｐｒｏｔｅｉｎｔｈｅｒｍａｌｓｈｉｆｔ）アッセイの結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0030】

本開示がより容易に理解され得ることを確実にするために、いくつかの用語がまず定義される。さらなる定義は、詳細な説明を通して記載される。

【0031】

「ＴＳＬＰ」という用語は、胸腺間質性リンパ球新生因子を指す。「ＴＳＬＰ」という用語は、変異体、アイソフォーム、ホモログ、オルソログ及びパラログを含む。例えば、ヒトＴＳＬＰタンパク質に特異的な抗体は、ある場合において、サルなどの、ヒト以外の種に由来するＴＳＬＰタンパク質と交差反応し得る。他の実施形態において、ヒトＴＳＬＰタンパク質に特異的な抗体は、ヒトＴＳＬＰタンパク質に完全に特異的であり得、他の種に対する又は他のタイプの交差反応性を示さないことがあり、又は全ての他の種ではなく特定の他の種に由来するＴＳＬＰと交差反応し得る。

【0032】

「ヒトＴＳＬＰ」という用語は、ＮＰ＿１４９０２４．１のＧｅｎｂａｎｋ受託番号を有するヒトＴＳＬＰのアミノ酸配列などの、ヒトに由来するアミノ酸配列を有するＴＳＬＰタンパク質を指す。「サル又はアカゲザルＴＳＬＰ」及び「マウスＴＳＬＰ」という用語はそれぞれ、サル及びマウスＴＳＬＰ配列を指し、例えば、それぞれＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１１００５０３．１及びＮＰ＿０６７３４２．１を有するアミノ酸配列を有するものである。

【0033】

本明細書において言及される「抗体」という用語は、全抗体及びその任意の抗原結合フラグメント（すなわち、「抗原結合部分」）又は一本鎖を含む。全抗体は、ジスルフィド結合によって相互連結される２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶ_Ｈと略記される）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶ_Ｌと略記される）及び軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、Ｃ_Ｌから構成される。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存されている領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに分類され得る。各Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。

【0034】

本明細書において使用される際の、抗体の「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）という用語は、抗原（例えば、ＴＳＬＰタンパク質）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能が、完全長抗体のフラグメントによって行われ得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合フラグメントの例は、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｌ及びＣ_Ｈ１ドメインからなる一価フラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ'）_２フラグメント、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ及びＣ_Ｈ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶ_Ｌ及びＶ_ＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）Ｖ_ＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄｅｔａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４－５４６）；（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；並びに（ｖｉｉｉ）ナノボディ、単一可変ドメイン及び２つの定常ドメインを含有する重鎖可変領域を含む。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈは、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、それらをＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ領域が対合して一価分子を形成する単一のタンパク質鎖（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３－４２６；及びＨｕｓｔｏｎｅｔａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９－５８８３を参照されたい）として作製可能にする合成リンカーによる、組換え方法を用いて結合され得る。このような一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されることが意図される。これらの抗体フラグメントは、当業者に公知の従来の技術を用いて得られ、これらのフラグメントは、インタクトな抗体と同じように有用性についてスクリーニングされる。

【0035】

本明細書において使用される際の「単離抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、ＴＳＬＰタンパク質に特異的に結合する単離抗体は、ＴＳＬＰタンパク質以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、ヒトＴＳＬＰタンパク質に特異的に結合する単離抗体は、他の種に由来するＴＳＬＰタンパク質などの他の抗原に対する交差反応性を有し得る。さらに、単離抗体は、他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含まなくてもよい。本明細書において使用される際の「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一分子組成物の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示す。

【0036】

本明細書において使用される際の「マウス抗体」という用語は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方がマウス生殖細胞系列の免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことが意図される。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域はまた、マウス生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する。本開示のマウス抗体は、マウス生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダム若しくは部位特異的変異誘発又はインビボで体細胞変異によって導入される変異）を含み得る。しかしながら、本明細書において使用される際の「マウス抗体」という用語は、別の哺乳動物種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列がマウスフレームワーク配列にグラフトされている抗体を含むことは意図されていない。

【0037】

「キメラ抗体」という用語は、非ヒト源に由来する遺伝物質を、ヒトに由来する遺伝物質と組み合わせることによって作製される抗体を指す。又はより一般に、キメラ抗体は、特定の種に由来する遺伝物質を、別の種に由来する遺伝物質とともに有する抗体である。

【0038】

本明細書において使用される際の「ヒト化抗体」という用語は、タンパク質配列が、ヒトにおいて天然に産生される抗体形態との類似性を増大するように修飾された、非ヒト種に由来する抗体を指す。

【0039】

「アイソタイプ」という用語は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭ又はＩｇＧ１）を指す。

【0040】

「抗原を認識する抗体」及び「抗原に特異的な抗体」という語句は、本明細書において、「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と同義的に使用される。

【0041】

本明細書において使用される際、「ヒトＴＳＬＰに特異的に結合する」抗体は、ヒトＴＳＬＰタンパク質（場合により、１つ以上の非ヒトに由来するＴＳＬＰタンパク質）に結合するが、非ＴＳＬＰタンパク質に実質的に結合しない抗体を指すことが意図される。好ましくは、抗体は、「高い親和性」、すなわち、５．０×１０^－８Ｍ以下、より好ましくは、１．０×１０^－８Ｍ以下、より好ましくは、７．０×１０^－９Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＴＳＬＰタンパク質に結合する。

【0042】

本明細書において使用される際の、タンパク質又は細胞に「実質的に結合しない」という用語は、タンパク質又は細胞に結合しないか又は高い親和性で結合しない、すなわち、１．０×１０^－６Ｍ以上、より好ましくは、１．０×１０^－５Ｍ以上、より好ましくは、１．０×１０^－４Ｍ以上、より好ましくは、１．０×１０^－３Ｍ以上、さらにより好ましくは、１．０×１０^－２Ｍ以上のＫ_Ｄでタンパク質又は細胞に結合することを意味する。

【0043】

ＩｇＧ抗体に対する「高い親和性」という用語は、標的抗原に対して１．０×１０^－６Ｍ以下、より好ましくは、５．０×１０^－８Ｍ以下、さらにより好ましくは、１．０×１０^－８Ｍ以下、さらにより好ましくは、７．０×１０^－９Ｍ以下、さらにより好ましくは、１．０×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄを有する抗体を指す。しかしながら、「高い親和性」結合は、他の抗体アイソタイプに対して変化し得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプに対する「高い親和性」結合は、１０^－６Ｍ以下、より好ましくは、１０^－７Ｍ以下、さらにより好ましくは、１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄを有する抗体を指す。

【0044】

本明細書において使用される際の「Ｋ_{ａｓｓｏｃ}」又は「Ｋ_ａ」という用語が、特定の抗体－抗原相互作用の結合速度を指すことが意図される一方、本明細書において使用される際の「Ｋ_ｄｉｓ」又は「Ｋ_ｄ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度を指すことが意図される。本明細書において使用される際の「Ｋ_Ｄ」という用語は、解離定数を指すことが意図され、これは、Ｋ_ｄ対Ｋ_ａの比率（すなわち、Ｋ_ｄ／Ｋ_ａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される。抗体についてのＫ_Ｄ値は、当該技術分野において十分に確立された方法を用いて決定され得る。抗体のＫ_Ｄを決定するための好ましい方法は、表面プラズモン共鳴を用いる、好ましくは、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）システムなどのバイオセンサーシステムを用いることによる。

【0045】

最大半量の有効濃度としても知られている「ＥＣ_５０」という用語は、特定の曝露時間の後の、ベースラインと最大値との間の中間の応答を誘導する抗体の濃度を指す。

【0046】

半数阻害濃度としても知られている「ＩＣ_５０」という用語は、抗体の非存在と比べて５０％だけ特定の生物学的又は生化学的機能を阻害する抗体の濃度を指す。

【0047】

「対象」という用語は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語は、全ての脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ニワトリ、両生類、及びは虫類などの、哺乳動物及び非哺乳動物を含むが、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ及びウマなどの哺乳動物が好ましい。

【0048】

「治療有効量」という用語は、疾患若しくは病態（癌など）に関連する症状を予防若しくは改善し、及び／又は疾患若しくは病態の重症度を低下させるのに十分な、本開示の抗体の量を意味する。治療有効量は、治療される病態に関して理解され、実際の有効量は、当業者によって容易に理解される。

【0049】

本開示の様々な態様が、以下のサブセクションにさらに詳細に記載される。

【0050】

ヒトＴＳＬＰに対する増加した結合親和性及びＴＳＬＰ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ相互作用に対するより良好な遮断容量を有する抗ＴＳＬＰ抗体
本開示の例示的な抗体、又はその抗原結合部分は、テゼペルマブなどの既に記載される抗ＴＳＬＰ抗体と比較して、より良好でないとしても同等の、結合親和性を有するヒト又はカニクイザルＴＳＬＰに特異的に結合する。本開示の例示的な抗体、又はその抗原結合部分はまた、ヒトＴＳＬＰ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ相互作用をブロックし得、その遮断活性は、先行技術の抗ＴＳＬＰ抗体より良好である。

【0051】

本開示の好ましい抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である。それに加えて又はその代わりに、抗体は、例えば、キメラモノクローナル抗体であり得る。

【0052】

モノクローナル抗ＴＳＬＰ抗体
本開示の抗体又はその抗原結合部分は、以下に及び以下の実施例に記載されるように構造的に及び化学的に特徴付けられ得る。抗体の重鎖／軽鎖可変領域のアミノ酸配列ＩＤ番号が、以下の表１に要約され、いくつかの抗体は、同じＶ_Ｈ又はＶ_Ｌを共有する。抗体についての重鎖定常領域は、例えば、配列番号１２若しくは５７に記載されるアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、又は例えば、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域であり得、抗体についての軽鎖定常領域は、例えば、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を有するヒトκ定常領域であり得る。これらの抗体は、マウスＩｇＧ１又はＩｇＧ２重鎖定常領域、及び／又はマウスκ定常領域も含有し得る。抗体は、ジスルフィド結合によって連結される２つの重鎖及び２つの軽鎖からなり得、重鎖可変領域のＣ末端は、重鎖定常領域のＮ末端に連結され、軽鎖可変領域のＣ末端は、軽鎖定常領域のＮ末端に連結される。

【0053】

表１中の重鎖可変領域ＣＤＲ及び軽鎖可変領域ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによって定義されている。しかしながら、当該技術分野において周知であるように、ＣＤＲ領域はまた、重鎖／軽鎖可変領域配列に基づいて、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、ＡｂＭ、又はＣｏｎｔａｃｔ番号付けシステム／方法などの他のシステムによって決定され得る。

【0054】

ヒトＴＳＬＰに結合する他の抗ＴＳＬＰ抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列（又はＣＤＲ配列）は、本開示の抗ＴＳＬＰ抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列（又はＣＤＲ配列）と「混合及び適合させる」ことができる。好ましくは、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ鎖（又はこのような鎖内のＣＤＲ）が、混合及び適合される場合、特定のＶ_Ｈ／Ｖ_Ｌ対合からのＶ_Ｈ配列が、構造的に類似のＶ_Ｈ配列で置き換えられる。同様に、好ましくは、特定のＶ_Ｈ／Ｖ_Ｌ対合からのＶ_Ｌ配列が、構造的に類似のＶ_Ｌ配列で置き換えられる。

【0055】

したがって、一実施形態において、本開示の抗体、又はその抗原結合部分は、
（ａ）表１中で上に列挙されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び
（ｂ）表１中で上に列挙されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は別の抗ＴＳＬＰ抗体のＶ_Ｌを含み、ここで、抗体は、ヒトＴＳＬＰに特異的に結合する。

【0056】

【表1】

【0057】

別の実施形態において、本開示の抗体、又はその抗原結合部分は、
（ａ）表１中で上に列挙される重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域；及び
（ｂ）表１中で上に列挙される軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域又は別の抗ＴＳＬＰ抗体のＣＤＲを含み、ここで、抗体は、ヒトＴＳＬＰに特異的に結合する。

【0058】

さらに別の実施形態において、抗体、又はその抗原結合部分は、ヒトＴＳＬＰに結合する他の抗体のＣＤＲ、例えば、重鎖可変領域からのＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ３と組み合わされた抗ＴＳＬＰ抗体の重鎖可変ＣＤＲ２領域、並びに／或いは異なる抗ＴＳＬＰ抗体の軽鎖可変領域からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３を含む。

【0059】

さらに、ＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２ドメインから独立して、ＣＤＲ３ドメインは、単独で、同種抗原に対する抗体の結合特異性を決定することができること、及び複数の抗体が、予想通りに、共通のＣＤＲ３配列に基づいて、同じ結合特異性を有して生成され得ることが当該技術分野において周知である。例えば、Ｋｌｉｍｋａｅｔａｌ．，ＢｒｉｔｉｓｈＪ．ｏｆＣａｎｃｅｒ８３（２）：２５２－２６０（２０００）；Ｂｅｉｂｏｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：８３３－８４９（２０００）；Ｒａｄｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９５：８９１０－８９１５（１９９８）；Ｂａｒｂａｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６：２１６１－２１６２（１９９４）；Ｂａｒｂａｓｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９２：２５２９－２５３３（１９９５）；Ｄｉｔｚｅｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：７３９－７４９（１９９６）；Ｂｅｒｅｚｏｖｅｔａｌ．，ＢＩＡｊｏｕｒｎａｌ８：ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｖｉｅｗ８（２００１）；Ｉｇａｒａｓｈｉｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｔｏｋｙｏ）１１７：４５２－７（１９９５）；Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ７２：８０７－１０（１９９８）；Ｌｅｖｉｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：４３７４－８（１９９３）；ＰｏｌｙｍｅｎｉｓａｎｄＳｔｏｌｌｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５２１８－５３２９（１９９４）及びＸｕａｎｄＤａｖｉｓ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１３：３７－４５（２０００）を参照されたい。また、米国特許第６，９５１，６４６号明細書；同第６，９１４，１２８号明細書；同第６，０９０，３８２号明細書；同第６，８１８，２１６号明細書；同第６，１５６，３１３号明細書；同第６，８２７，９２５号明細書；同第５，８３３，９４３号明細書；同第５，７６２，９０５号明細書及び同第５，７６０，１８５号明細書を参照されたい。これらの参照文献はそれぞれ、全体が参照により本明細書に援用される。

【0060】

したがって、別の実施形態において、本開示の抗体は、抗ＴＳＬＰ抗体の重鎖可変領域のＣＤＲ２、並びに抗ＴＳＬＰ抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖可変領域の少なくともＣＤＲ３、又は別の抗ＴＳＬＰ抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含み、ここで、抗体は、ヒトＴＳＬＰに特異的に結合することが可能である。これらの抗体は、好ましくは、（ａ）ＴＳＬＰとの結合について競合し；（ｂ）機能的特性を保持し；（ｃ）同じエピトープに結合し；及び／又は（ｄ）本開示の抗ＴＳＬＰ抗体と同様の結合親和性を有する。さらに別の実施形態において、抗体は、抗ＴＳＬＰ抗体の軽鎖可変領域のＣＤＲ２、又は別の抗ＴＳＬＰ抗体の軽鎖可変領域のＣＤＲ２をさらに含み得、ここで、抗体は、ヒトＴＳＬＰに特異的に結合することが可能である。別の実施形態において、本開示の抗体は、抗ＴＳＬＰ抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖可変領域のＣＤＲ１、又は別の抗ＴＳＬＰ抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖可変領域のＣＤＲ１をさらに含み得、ここで、抗体は、ヒトＴＳＬＰに特異的に結合することが可能である。

【0061】

保存的修飾
別の実施形態において、本開示の抗体は、１つ以上の保存的修飾だけ、本開示の抗ＴＳＬＰ抗体のものと異なるＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列の重鎖及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。特定の保存的配列修飾が、抗原結合を除去せずに作製され得ることが、当該技術分野において理解される。例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌｅｔａｌ．，（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍ３２：１１８０－８；ｄｅＷｉｌｄｔｅｔａｌ．，（１９９７）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：８３５－４１；Ｋｏｍｉｓｓａｒｏｖｅｔａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：２６８６４－２６８７０；Ｈａｌｌｅｔａｌ．，（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：１６０５－１２；ＫｅｌｌｅｙａｎｄＯ'Ｃｏｎｎｅｌｌ（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：６８６２－３５；Ａｄｉｂ－Ｃｏｎｑｕｙｅｔａｌ．，（１９９８）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：３４１－６及びＢｅｅｒｓｅｔａｌ．，（２０００）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎ．Ｒｅｓ．６：２８３５－４３を参照されたい。

【0062】

したがって、一実施形態において、抗体は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域及び／又はＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで：
（ａ）重鎖可変領域ＣＤＲ１配列は、上記の表１に列挙される配列、及び／又はその保存的修飾を含み；及び／又は
（ｂ）重鎖可変領域ＣＤＲ２配列は、上記の表１に列挙される配列、及び／又はその保存的修飾を含み；及び／又は
（ｃ）重鎖可変領域ＣＤＲ３配列は、上記の表１に列挙される配列、及び／又はその保存的修飾を含み；及び／又は
（ｄ）軽鎖可変領域ＣＤＲ１、及び／又はＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３配列は、上記の表１に列挙される配列；及び／又はその保存的修飾を含み；
（ｅ）抗体は、ヒトＴＳＬＰに特異的に結合する。

【0063】

本開示の抗体は、ヒトＴＳＬＰへの高い親和性の結合などの、上述される以下の機能的特性の１つ以上を有する。

【0064】

様々な実施形態において、抗体は、例えば、マウス、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体であり得る。

【0065】

本明細書において使用される際、「保存的配列修飾」という用語は、アミノ酸配列を含む抗体の結合特性に実質的に影響を与えないか又は変化させないアミノ酸修飾を指すことが意図される。このような保存的修飾は、アミノ酸置換、付加及び欠失を含む。修飾は、部位特異的変異誘発及びＰＣＲ媒介変異誘発などの、当該技術分野において公知の標準的な技術によって、本開示の抗体に導入され得る。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が、同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されたものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β－分枝側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。したがって、本開示の抗体のＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーの他のアミノ酸残基で置換され得、改変された抗体が、本明細書に記載される機能アッセイを用いて、保持された機能（すなわち、上記の機能）について試験され得る。

【0066】

操作及び修飾された抗体
本開示の抗体は、修飾された抗体を操作するように、出発材料として本開示の抗ＴＳＬＰ抗体のＶ_Ｈ／Ｖ_Ｌ配列の１つ以上を有する抗体を用いて調製され得る。抗体は、１つ又は両方の可変領域（すなわち、Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌ）内、例えば、１つ以上のＣＤＲ領域内及び／又は１つ以上のフレームワーク領域内の１つ以上の残基を修飾することによって操作され得る。それに加えて又はその代わりに、抗体は、例えば抗体のエフェクター機能を改変するために、定常領域内の残基を修飾することによって操作され得る。

【0067】

特定の実施形態において、ＣＤＲグラフト法は、抗体の可変領域を操作するのに使用され得る。抗体は、主に、６つの重鎖及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）に位置するアミノ酸残基を介して、標的抗原と相互作用する。この理由のため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲの外部の配列より個々の抗体間でより異なっている。ＣＤＲ配列が、ほとんどの抗体－抗原相互作用に関与するため、異なる特性を有する異なる抗体からのフレームワーク配列にグラフトされた特定の天然抗体からのＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することによって、特定の天然抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることが可能である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３２７；Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．，（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２－５２５；Ｑｕｅｅｎｅｔａｌ．，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．を参照されたい。Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００２９－１００３３；米国特許第５，２２５，５３９号明細書；同第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書及び同第６，１８０，３７０号明細書も参照されたい）。

【0068】

したがって、本開示の別の実施形態は、上述される、本開示の配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、及び／又は上述される、本開示の配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離モノクローナル抗体、又はその抗原結合部分に関する。これらの抗体が、本開示のモノクローナル抗体のＶ_Ｈ及びＶ_ＬＣＤＲ配列を含む一方、それらは、異なるフレームワーク配列を含み得る。

【0069】

このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系列抗体遺伝子配列を含む公開ＤＮＡデータベース又は刊行されている参照文献から得られる。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系列の配列データベース（ｗｗｗ．ｍｒｃ－ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅで、インターネットで利用可能）、並びにＫａｂａｔｅｔａｌ．，（１９９１）（上記に引用される）；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎｅｔａｌ．，（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６－７９８；及びＣｏｘｅｔａｌ．，（１９９４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７－８３６（これらのそれぞれの内容が、参照により本明細書に明示的に援用される）において見出され得る。別の例として、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋデータベースにおいて見出され得る。例えば、ＨＣｏ７ＨｕＭＡｂマウスにおいて見出される以下の重鎖生殖細胞系列配列は、添付のＧｅｎｂａｎｋ受託番号１－６９（ＮＧ－－００１０１０９、ＮＴ－－０２４６３７及びＢＣ０７０３３３）、３－３３（ＮＧ－－００１０１０９及びＮＴ－－０２４６３７）並びに３－７（ＮＧ－－００１０１０９＆ＮＴ－－０２４６３７）において利用可能である。別の例として、ＨＣｏ１２ＨｕＭＡｂマウスにおいて見出される以下の重鎖生殖細胞系列配列は、添付のＧｅｎｂａｎｋ受託番号１－６９（ＮＧ－－００１０１０９、ＮＴ－－０２４６３７及びＢＣ０７０３３３）、５－５１（ＮＧ－－００１０１０９及びＮＴ－－０２４６３７）、４－３４（ＮＧ－－００１０１０９及びＮＴ－－０２４６３７）、３－３０．３（ＣＡＪ５５６６４４）並びに３－２３（ＡＪ４０６６７８）において利用可能である。

【0070】

抗体タンパク質配列は、当業者に周知の、ＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，（１９９７）、上記を参照）と呼ばれる配列類似性検索法の１つを用いて、コンパイルされたタンパク質配列データベースに対して比較される。

【0071】

本開示の抗体において使用するための好ましいフレームワーク配列は、本開示の抗体によって使用されるフレームワーク配列と構造的に類似のものである。Ｖ_ＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、フレームワーク配列が由来する生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子において見出されるものと同一の配列を有するフレームワーク領域にグラフトされ得、又はＣＤＲ配列は、生殖細胞系列配列と比較して１つ以上の変異を含むフレームワーク領域にグラフトされ得る。例えば、ある場合において、抗体の抗原結合能力を維持又は強化するために、フレームワーク領域内の残基を変異させることが有益であることが分かっている（例えば、米国特許第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書及び同第６，１８０，３７０号明細書を参照されたい）。

【0072】

別のタイプの可変領域修飾は、Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_ＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させることであり、それによって、対象とする抗体の１つ以上の結合特性（例えば、親和性）を改善する。部位特異的変異誘発又はＰＣＲ媒介変異誘発は、変異を導入するために行われ得、抗体結合に対する効果、又は対象とする他の機能的特性が、当該技術分野において公知のインビトロ又はインビボアッセイにおいて評価され得る。好ましくは、保存的修飾（当該技術分野において公知であるように）が導入される。変異は、アミノ酸置換、付加又は欠失であり得るが、好ましくは、置換である。さらに、典型的に、ＣＤＲ領域内の１、２、３、４又は５つ以下の残基が改変される。

【0073】

したがって、別の実施形態において、本開示は、（ａ）本開示の配列、又は１、２、３、４若しくは５つのアミノ酸置換、欠失若しくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ１領域；（ｂ）本開示の配列、又は１、２、３、４若しくは５つのアミノ酸置換、欠失若しくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ２領域；（ｃ）本開示の配列、又は１、２、３、４若しくは５つのアミノ酸置換、欠失若しくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ３領域；（ｄ）本開示の配列、又は１、２、３、４若しくは５つのアミノ酸置換、欠失若しくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ１領域；（ｅ）本開示の配列、又は１、２、３、４若しくは５つのアミノ酸置換、欠失若しくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ２領域；及び（ｆ）本開示の配列、又は１、２、３、４若しくは５つのアミノ酸置換、欠失若しくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体、又はその抗原結合部分を提供する。

【0074】

本開示の操作された抗体は、修飾が、例えば、抗体の特性を改善するために、Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌ内のフレームワーク残基に行われたものを含む。典型的に、このようなフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を低下させるために行われる。例えば、一手法は、１つ以上のフレームワーク残基を対応する生殖細胞系列配列へと「復帰変異（ｂａｃｋｍｕｔａｔｅ）」させることである。より詳細には、体細胞変異を起こした抗体は、抗体が由来する生殖細胞系列配列と異なるフレームワーク残基を含み得る。このような残基は、抗体フレームワーク配列を、抗体が由来する生殖細胞系列配列と比較することによって同定され得る。

【0075】

別のタイプのフレームワーク修飾は、Ｔ細胞エピトープを除去し、それによって、抗体の潜在的な免疫原性を低下させるために、フレームワーク領域内、或いは１つ以上のＣＤＲ領域内の１つ以上の残基を変異させることを含む。この手法は、「脱免疫化」とも呼ばれ、米国特許出願公開第２００３０１５３０４３号明細書にさらに詳細に記載されている。

【0076】

フレームワーク若しくはＣＤＲ領域内で行われる修飾に加えて、又はその代わりに、本開示の抗体は、典型的に、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、及び／又は抗原依存的細胞毒性などの、抗体の１つ以上の機能的特性を改変するために、Ｆｃ領域内に修飾を含むように操作され得る。さらに、本開示の抗体は、同様に抗体の１つ以上の機能的特性を改変するために化学修飾され得るか（例えば、１つ以上の化学部分が、抗体に結合され得る）又はそのグリコシル化を改変するために修飾され得る。

【0077】

一実施形態において、Ｃ_Ｈ１－ヒンジ領域は、ヒンジ領域におけるシステイン残基の数が変化される、例えば、増加又は減少されるように修飾される。この手法は、米国特許第５，６７７，４２５号明細書にさらに記載されている。Ｃ_Ｈ１－ヒンジ領域におけるシステイン残基の数は、例えば、軽鎖及び重鎖の組み立てを容易にするために、又は抗体の安定性を増大若しくは低下させるために変化される。

【0078】

別の実施形態において、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生体半減期を減少させるように変異される。より詳細には、１つ以上のアミノ酸変異は、抗体が、天然Ｆｃ－ヒンジ領域ＳｐＡ結合と比べて損なわれたブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ）プロテインＡ（ＳｐＡ）結合を有するように、Ｆｃ－ヒンジフラグメントのＣ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３ドメイン境界領域に導入される。この手法は、米国特許第６，１６５，７４５号明細書にさらに詳細に記載されている。

【0079】

さらに別の実施形態において、抗体のグリコシル化は、修飾される。例えば、非グリコシル化抗体が作製され得る（すなわち、抗体は、グリコシル化を欠いている）。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増大するために改変され得る。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の１つ以上の部位を改変することによって達成され得る。例えば、１つ以上のアミノ酸置換は、１つ以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位をなくし、それによって、その部位におけるグリコシル化をなくすように行われ得る。このような非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増大し得る。例えば、米国特許第５，７１４，３５０号明細書及び同第６，３５０，８６１号明細書を参照されたい。

【0080】

それに加えて又はその代わりに、改変されたタイプのグリコシル化を有する抗体、例えば、減少した量のフコシル残基を有する低フコシル化抗体又は増加したバイセクティングＧｌｃＮａｃ構造を有する抗体が作製され得る。このような改変されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増大することが実証されている。このような炭水化物修飾は、例えば、改変されたグリコシル化機構を有する宿主細胞において抗体を発現することによって達成され得る。改変されたグリコシル化機構を有する細胞は、当該技術分野において記載されており、本開示の組換え抗体を発現する宿主細胞として使用され、それによって、改変されたグリコシル化を有する抗体を産生することができる。例えば、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８（α（１，６）－フコシルトランスフェラーゼ）を欠いており、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９細胞株において発現される抗体が、それらの炭水化物においてフコースを欠くようになっている。Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９ＦＵＴ８－／－細胞株を、２つの置換ベクターを用いて、ＣＨＯ／ＤＧ４４細胞におけるＦＵＴ８遺伝子の標的化破壊によって生成した（米国特許出願公開第２００４０１１０７０４号明細書及びＹａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉｅｔａｌ．，（２００４）ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ８７：６１４－２２を参照されたい）。別の例として、欧州特許第１，１７６，１９５号明細書には、このような細胞株において発現される抗体が、α－１，６結合関連酵素を減少させるか又は除去することによって低フコシル化を示すように、フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子が機能的に破壊された細胞株が記載されている。また、欧州特許第１，１７６，１９５号明細書には、抗体のＦｃ領域に結合するか又は酵素活性を有さない、フコースのＮ－アセチルグルコサミンへの付加に対して低い酵素活性を有する細胞株、例えばラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣＣＲＬ１６６２）が記載されている。ＰＣＴ公報国際公開第０３／０３５８３５号パンフレットには、フコースをＡｓｎ（２９７）連結炭水化物に結合する能力を低下させ、その宿主細胞において発現される抗体の低フコシル化ももたらす変異ＣＨＯ細胞株であるＬｅｃ１３細胞が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓｅｔａｌ．，（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－２６７４０も参照）。修飾されたグリコシル化プロファイルを有する抗体はまた、ＰＣＴ公報国際公開第０６／０８９２３１号パンフレットに記載されるように、ニワトリ卵において産生され得る。或いは、修飾されたグリコシル化プロファイルを有する抗体は、アオウキクサ属（Ｌｅｍｎａ）などの植物細胞において産生され得る。植物系における抗体の産生のための方法は、２００６年８月１１日に出願されたＡｌｓｔｏｎ＆ＢｉｒｄＬＬＰ代理人整理番号０４０９８９／３１４９１１号に対応する米国特許出願に開示されている。ＰＣＴ公報国際公開第９９／５４３４２号パンフレットには、操作された細胞株において発現される抗体が、抗体の増加したＡＤＣＣ活性をもたらすバイセクティングＧｌｃＮａｃ構造を示すように、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞株が記載されている（Ｕｍａｎａｅｔａｌ．，（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０も参照）。或いは、抗体のフコース残基は、フコシダーゼ酵素を用いて切断され得；例えば、フコシダーゼα－Ｌ－フコシダーゼは、抗体からフコシル残基を除去する（Ｔａｒｅｎｔｉｎｏｅｔａｌ．，（１９７５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５１６－２３）。

【0081】

本開示によって想定される本明細書の抗体の別の修飾は、ペグ化である。抗体は、例えば、抗体の生体（例えば、血清）半減期を増加させるために、ペグ化され得る。抗体をペグ化するために、抗体、又はそのフラグメントは、典型的に、１つ以上のＰＥＧ基が抗体又は抗体フラグメントに結合される条件下で、ＰＥＧの反応性エステル又はアルデヒド誘導体などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応される。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（又は類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応又はアルキル化反応によって行われる。本明細書において使用される際、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルコキシ－又はアリールオキシ－ポリエチレングリコール又はポリエチレングリコール－マレイミドなどの他のタンパク質を誘導体化するのに使用されているＰＥＧの形態のいずれかを包含することが意図される。特定の実施形態において、ペグ化される抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化するための方法は、当該技術分野において公知であり、本開示の抗体に適用され得る。例えば、欧州特許第１５４３１６号明細書及び欧州特許第０４０１３８４号明細書を参照されたい。

【0082】

抗体の物理的特性
本開示の抗体は、その異なるクラスを検出及び／又は区別するために、それらの様々な物理的特性によって特徴付けられ得る。

【0083】

例えば、抗体は、軽鎖又は重鎖可変領域のいずれかにおける１つ以上のグリコシル化部位を含み得る。このようなグリコシル化部位は、抗体の増加した免疫原性又は改変された抗原結合による抗体のｐＫの改変をもたらし得る（Ｍａｒｓｈａｌｌｅｔａｌ（１９７２）ＡｎｎｕＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ４１：６７３－７０２；ＧａｌａａｎｄＭｏｒｒｉｓｏｎ（２００４）ＪＩｍｍｕｎｏｌ１７２：５４８９－９４；Ｗａｌｌｉｃｋｅｔａｌ（１９８８）ＪＥｘｐＭｅｄ１６８：１０９９－１０９；Ｓｐｉｒｏ（２００２）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ１２：４３Ｒ－５６Ｒ；Ｐａｒｅｋｈｅｔａｌ（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ３１６：４５２－７；Ｍｉｍｕｒａｅｔａｌ．，（２０００）ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ３７：６９７－７０６）。グリコシル化は、Ｎ－Ｘ－Ｓ／Ｔ配列を含むモチーフにおいて起こることが知られている。ある場合には、可変領域グリコシル化を含まない抗ＴＳＬＰ抗体を有することが好ましい。これは、可変領域にグリコシル化モチーフを含まない抗体を選択することによって、又はグリコシル化領域内の残基を変異させることによって、達成され得る。

【0084】

好ましい実施形態において、抗体は、アスパラギン異性部位を含まない。アスパラギンの脱アミド化は、Ｎ－Ｇ又はＤ－Ｇ配列において起こり得、結合をポリペプチド鎖に導入し、その安定性を低下させる（イソアスパラギン酸効果）イソアスパラギン酸残基の生成をもたらし得る。

【0085】

各抗体は、一般に６～９．５のｐＨ範囲内の特有の等電点（ｐＩ）を有する。ＩｇＧ１抗体のｐＩは、典型的に、７～９．５のｐＨ範囲内であり、ＩｇＧ４抗体のｐＩは、典型的に、６～８のｐＨ範囲内である。正常範囲外のｐＩを有する抗体が、インビボ条件下でいくらかのアンフォールディング及び不安定性を有し得ると推測されている。したがって、正常範囲内のｐＩ値を有する抗ＴＳＬＰ抗体を有することが好ましい。これは、正常範囲内のｐＩを有する抗体を選択することによって、又は荷電表面残基を変異させることによって達成され得る。

【0086】

本開示の抗体をコードする核酸分子
別の態様において、本開示は、本開示の抗体の重鎖及び／又は軽鎖可変領域、又はＣＤＲをコードする核酸分子を提供する。核酸は、全細胞で、細胞溶解物で、又は部分的に精製された若しくは実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、標準的な技術によって、他の細胞成分又は他の汚染物質、例えば、他の細胞核酸又はタンパク質から精製されたとき、「単離された」又は「実質的に純粋にされた」。本開示の核酸は、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡであり得、イントロン配列を含んでいても又は含まなくてもよい。好ましい実施形態において、核酸は、ｃＤＮＡ分子である。

【0087】

本開示の核酸は、標準的な分子生物学技術を用いて得ることができる。ハイブリドーマ（例えば、以下にさらに記載されるヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウスから調製されたハイブリドーマ）によって発現される抗体について、ハイブリドーマによって作製される抗体の軽鎖及び重鎖をコードするｃＤＮＡは、標準的なＰＣＲ増幅又はｃＤＮＡクローニング技術によって得られる。免疫グロブリン遺伝子ライブラリーから（例えば、ファージディスプレイ技術を用いて）得られる抗体について、このような抗体をコードする核酸が、遺伝子ライブラリーから回収され得る。

【0088】

本開示の好ましい核酸分子は、ＴＳＬＰモノクローナル抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列又はＣＤＲをコードするものを含む。Ｖ_Ｈ及びＶ_ＬセグメントをコードするＤＮＡフラグメントが得られたら、これらのＤＮＡフラグメントは、例えば、可変領域遺伝子を完全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂフラグメント遺伝子又はｓｃＦｖ遺伝子に変換するために、標準的な組換えＤＮＡ技術によってさらに操作され得る。これらの操作において、Ｖ_Ｌ－又はＶ_ＨをコードするＤＮＡフラグメントは、抗体定常領域又はフレキシブルリンカーなどの別のタンパク質をコードする別のＤＮＡフラグメントに作動可能に連結される。この文脈において使用される際の「作動可能に連結される」という用語は、２つのＤＮＡフラグメントによってコードされるアミノ酸配列がフレーム内に留まるように、２つのＤＮＡフラグメントが結合されることを意味することが意図される。

【0089】

Ｖ_Ｈ領域をコードする単離されたＤＮＡは、Ｖ_ＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域（Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３）をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長重鎖遺伝子に変換され得る。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において公知であり、これらの領域を含むＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅によって得られる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ定常領域であり得るが、最も好ましくは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４定常領域である。Ｆａｂフラグメント重鎖遺伝子について、Ｖ_ＨをコードするＤＮＡは、重鎖Ｃ_Ｈ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結され得る。

【0090】

Ｖ_Ｌ領域をコードする単離されたＤＮＡは、Ｖ_ＬをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域、Ｃ_Ｌをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長軽鎖遺伝子（並びにＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換され得る。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において公知であり、これらの領域を含むＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅によって得られる。好ましい実施形態において、軽鎖定常領域は、κ又はλ定常領域であり得る。

【0091】

ｓｃＦｖ遺伝子を生成するために、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列が、フレキシブルリンカーによって結合されたＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ領域を有する連続一本鎖タンパク質として発現され得るように、Ｖ_Ｈ－及びＶ_ＬをコードするＤＮＡフラグメントは、フレキシブルリンカーをコードする、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）３をコードする別のフラグメントに作動可能に連結される（例えば、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３－４２６；Ｈｕｓｔｏｎｅｔａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９－５８８３；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙｅｔａｌ．，（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ３４８：５５２－５５４を参照されたい）。

【0092】

本開示のモノクローナル抗体の産生
本開示のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、ＫｏｈｌｅｒａｎｄＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５の周知の体細胞ハイブリダイゼーション（ハイブリドーマ）技術を用いて産生され得る。モノクローナル抗体を産生するための他の実施形態は、Ｂリンパ球のウイルス又は発癌性形質転換及びファージディスプレイ技術を含む。キメラ又はヒト化抗体も、当該技術分野において周知である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書；同第５，２２５，５３９号明細書；同第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書及び同第６，１８０，３７０号明細書（これらの内容は、全体が参照により本明細書に具体的に援用される）を参照されたい。

【0093】

本開示のモノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマの生成
本開示の抗体はまた、例えば、当該技術分野において周知であるような、組換えＤＮＡ技術及び遺伝子トランスフェクション方法の組合せを用いて、宿主細胞トランスフェクトーマ中で産生され得る（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：１２０２）。一実施形態において、標準的な分子生物学技術によって得られる部分的又は完全長軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡは、遺伝子が転写及び翻訳調節配列に作動可能に連結されるように、１つ以上の発現ベクターに挿入される。これに関して、「作動可能に連結される」という用語は、ベクター内の転写及び翻訳調節配列が、抗体遺伝子の転写及び翻訳を調節する意図された機能を果たすように、抗体遺伝子が、ベクターにライゲートされることを意味することが意図される。

【0094】

「調節配列」という用語は、抗体遺伝子の転写又は翻訳を制御するプロモーター、エンハンサー及び他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことが意図される。このような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ（ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１８５，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０））に記載されている。哺乳動物宿主細胞発現のための好ましい調節配列は、哺乳動物細胞における高レベルのタンパク質発現を指向するウイルス要素、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルスに由来するプロモーター及び／又はエンハンサー、例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ）及びポリオーマを含む。或いは、ユビキチンプロモーター又はβ－グロビンプロモーターなどの非ウイルス調節配列が使用され得る。さらにまた、調節要素は、ＳＶ４０初期プロモーター及びヒトＴ細胞白血病ウイルス１型の長い末端反復配列からの配列を含む、ＳＲαプロモーター系などの異なる源に由来する配列から構成される（Ｔａｋｅｂｅｅｔａｌ．，（１９８８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：４６６－４７２）。発現ベクター及び発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合するように選択される。

【0095】

抗体軽鎖遺伝子及び抗体重鎖遺伝子は、同じ又は別個の発現ベクターに挿入され得る。好ましい実施形態において、可変領域は、Ｖ_Ｈセグメントが、ベクター内のＣ_Ｈセグメントに作動可能に連結され、Ｖ_Ｌセグメントが、ベクター内のＣ_Ｌセグメントに作動可能に連結されるように、所望のアイソタイプの重鎖定常及び軽鎖定常領域を既にコードする発現ベクターに可変領域を挿入することによって、任意の抗体アイソタイプの完全長抗体遺伝子を生成するために使用される。それに加えて又はその代わりに、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードし得る。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドが、抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレームで連結されるように、ベクターにクローニングされ得る。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチド又は異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質に由来するシグナルペプチド）であり得る。

【0096】

抗体鎖遺伝子及び調節配列に加えて、本開示の組換え発現ベクターは、さらなる配列、例えば、宿主細胞においてベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）及び選択可能マーカー遺伝子を有し得る。選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号明細書；同第４，６３４，６６５号明細書及び同第５，１７９，０１７号明細書を参照されたい）。例えば、典型的に、選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞において、Ｇ４１８、ハイグロマイシン又はメトトレキサートなどの薬剤に対する耐性を与える。好ましい選択可能マーカー遺伝子は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅とともにｄｈｆｒ－宿主細胞における使用のため）及びｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）を含む。

【0097】

軽鎖及び重鎖の発現のため、重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技術によって宿主細胞にトランスフェクトされる。「トランスフェクション」という用語の様々な形態が、外来性ＤＮＡを原核生物又は真核生物宿主細胞に導入するために一般的に使用される多種多様な技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションなどを包含することが意図される。原核生物又は真核生物宿主細胞のいずれにおいても本開示の抗体を発現させることが理論上可能であるが、真核細胞、特に哺乳動物細胞が、原核細胞より、適切に折り畳まれた免疫学的に活性な抗体を組み立て、分泌する可能性が高いため、このような真核細胞、最も好ましくは哺乳動物宿主細胞における抗体の発現が最も好ましい。

【0098】

本開示の組換え抗体を発現させるための好ましい哺乳動物宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｒ．Ｊ．ＫａｕｆｍａｎａｎｄＰ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１－６２１に記載されているような、ＤＨＦＲ選択可能マーカーとともに使用される、ＵｒｌａｕｂａｎｄＣｈａｓｉｎ，（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４２１６－４２２０に記載されている、ｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞を含む。特に、ＮＳＯ骨髄腫細胞との使用について、別の好ましい発現系は、国際公開第８７／０４４６２号パンフレット、国際公開第８９／０１０３６号パンフレット及び欧州特許第３３８，８４１号明細書に開示されるＧＳ遺伝子発現系である。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが、哺乳動物宿主細胞に導入されるとき、抗体は、宿主細胞における抗体の発現又は、より好ましくは、宿主細胞が増殖される培養培地中への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間にわたって、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製方法を用いて、培養培地から回収され得る。

【0099】

免疫抱合体
本開示の抗体は、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）などの免疫抱合体を形成するために、治療剤にコンジュゲートされ得る。好適な治療剤としては、細胞毒素、アルキル化剤、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡ挿入剤、ＤＮＡ架橋剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、核外輸送阻害剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼＩ又はＩＩ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗生物質、及び抗有糸分裂剤が挙げられる。ＡＤＣにおいて、抗体及び治療剤は、好ましくは、ペプチジル、ジスルフィド、又はヒドラゾンリンカーなどの切断可能なリンカーを介してコンジュゲートされる。より好ましくは、リンカーは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｓｎ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ、Ｃｉｔ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ｓｅｒ、又はＧｌｕなどのペプチジルリンカーである。ＡＤＣは、米国特許第７，０８７，６００号明細書；同第６，９８９，４５２号明細書；及び同第７，１２９，２６１号明細書；ＰＣＴ公報国際公開第０２／０９６９１０号パンフレット；国際公開第０７／０３８，６５８号パンフレット；国際公開第０７／０５１，０８１号パンフレット；国際公開第０７／０５９，４０４号パンフレット；国際公開第０８／０８３，３１２号パンフレット；及び国際公開第０８／１０３，６９３号パンフレット；米国特許出願公開第２００６００２４３１７号明細書；同第２００６０００４０８１号明細書；及び同第２００６０２４７２９５号明細書（これらの開示内容は、参照により本明細書に援用される）に記載されているように調製され得る。

【0100】

二重特異性分子
別の態様において、本開示は、少なくとも２つの異なる結合部位又は標的分子に結合する二重特異性分子を生成するために、少なくとも１つの他の機能分子、例えば、別のペプチド又はタンパク質（例えば、受容体に対する別の抗体又はリガンド）に連結された本開示の１つ以上の抗体を含む二重特異性分子を特徴とする。したがって、本明細書において使用される際、「二重特異性分子」は、３つ以上の特異性を有する分子を含む。

【0101】

一実施形態において、二重特異性分子は、抗Ｆｃ結合特異性及び抗ＴＳＬＰ結合特異性に加えて、第３の特異性を有する。第３の特異性は、喘息治療については、ＩｇＥ、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ１３、ＩＬ１３Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ５Ｒ又はＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒに対するものであり得る。

【0102】

二重特異性分子は、多くの異なるフォーマット及びサイズであり得る。サイズスペクトルの一方の側では、二重特異性分子は、同一の特異性の２つの結合アームを有する代わりに、それぞれ異なる特異性を有する２つの結合アームを有することを除いて、従来の抗体フォーマットを保持している。他方の側では、ペプチド鎖によって連結される２つの一本鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ'ｓ）、いわゆるＢｓ（ｓｃＦｖ）_２構築物からなる二重特異性分子である。中間サイズの二重特異性分子は、ペプチジルリンカーによって連結される２つの異なるＦ（ａｂ）フラグメントを含む。これらの及び他のフォーマットの二重特異性分子は、遺伝子組換え、体細胞ハイブリダイゼーション、又は化学的方法によって調製され得る。例えば、Ｋｕｆｅｒｅｔａｌ（上記に引用される）；ＣａｏａｎｄＳｕｒｅｓｈ，ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，９（６），６３５－６４４（１９９８）；及びｖａｎＳｐｒｉｅｌｅｔａｌ．，ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＴｏｄａｙ，２１（８），３９１－３９７（２０００）、並びにそれらの中に引用される参照文献を参照されたい。

【0103】

抗体をコードする又は抗体を担持する腫瘍溶解性ウイルス
腫瘍溶解性ウイルスは、優先的に、癌細胞を感染させ、死滅させる。本開示の抗体は、腫瘍溶解性ウイルスとともに使用され得る。或いは、本発明の抗体をコードする腫瘍溶解性ウイルスは、ヒトの身体に導入され得る。

【0104】

キメラ抗原受容体
抗ＴＳＬＰｓｃＦｖを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も、本明細書において提供され、この抗ＴＳＬＰｓｃＦｖは、本明細書に記載されるＣＤＲ及び重鎖／軽鎖可変領域を含む。

【0105】

抗ＴＳＬＰＣＡＲは、（ａ）抗ＴＳＬＰｓｃＦｖを含む細胞外抗原結合ドメイン；（ｂ）膜貫通ドメイン；及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。

【0106】

ＣＡＲは、新生受容体を小胞体に指向する、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端におけるシグナルペプチド、及び受容体を結合のためにより多く利用できるようにする、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端におけるヒンジペプチドを含有し得る。ＣＡＲは、好ましくは、細胞内シグナル伝達ドメインにおいて、主要な細胞内シグナル伝達ドメイン及び１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。主に使用される、最も有効な主要な細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭを含むＣＤ３－ζ細胞質ドメインであり、そのリン酸化が、Ｔ細胞活性化をもたらす。共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７及びＯＸ４０などの共刺激タンパク質に由来し得る。

【0107】

ＣＡＲは、Ｔ細胞増殖、持続性、及び抗腫瘍活性を促進する因子、例えば、サイトカイン、及び共刺激リガンドをさらに追加し得る。

【0108】

本明細書において提供されるＣＡＲを含む操作された免疫エフェクター細胞も提供される。ある実施形態において、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、造血幹細胞、多能性幹細胞、又は胚性幹細胞である。ある実施形態において、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。

【0109】

医薬組成物
別の態様において、本開示は、薬学的に許容される担体とともに製剤化される、本開示の１つ以上の抗体（又はその抗原結合部分、二重特異性体、免疫抱合体、ＣＡＲ－免疫細胞、抗体をコードする若しくは抗体を担持する腫瘍溶解性ウイルス、又は抗体をコードする核酸分子）を含む医薬組成物を提供する。抗体（又はその抗原結合部分、若しくは二重特異性体）は、組成物が、２つ以上の抗体（又はその抗原結合部分、若しくは二重特異性体）を含むとき、別々に投与され得る。組成物は、１つ以上のさらなる薬学的に有効な成分、例えば、別の抗体又は薬剤、例えば、抗喘息薬、抗潰瘍性大腸炎薬、抗アトピー性皮膚炎薬、又は抗乾癬薬を任意に含有し得る。

【0110】

医薬組成物は、あらゆる賦形剤を含み得る。使用され得る賦形剤は、担体、表面活性剤、増粘剤又は乳化剤、固体結合剤、分散若しくは懸濁補助剤、可溶化剤、着色剤、香味剤、コーティング、崩壊剤、滑沢剤、甘味料、防腐剤、等張剤、及びそれらの組合せを含む。好適な賦形剤の選択及び使用が、Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈＥｄ．（ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ２００３）（その開示内容は、参照により本明細書に援用される）に教示されている。

【0111】

好ましくは、医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄又は表皮投与（例えば、注射又は注入による）に好適である。投与経路に応じて、有効成分は、酸の作用及びそれを不活性にし得る他の天然条件からそれを保護するための材料でコーティングされ得る。本明細書において使用される際の「非経口投与」という語句は、経腸及び局所投与以外の、通常注射による投与方法を意味し、限定はされないが、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外並びに胸骨内注射及び注入を含む。或いは、本開示の抗体は、経口（ｎｏｎ－ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）経路によって、例えば、局所、表皮又は粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、経膣、直腸、舌下又は局所的に投与され得る。

【0112】

医薬組成物は、滅菌水溶液又は分散体の形態であり得る。それらはまた、マイクロエマルジョン、リポソーム、又は他の高い薬物濃度に好適な規則的な構造で製剤化され得る。

【0113】

単一剤形を製造するために担体材料と組み合わされ得る有効成分の量は、治療される対象及び特定の投与方法に応じて変化し、一般に、治療効果を生じる組成物の量である。一般に、１００％のうち、この量は、薬学的に許容される担体と組み合わせて、約０．０１％～約９９％の有効成分、好ましくは、約０．１％～約７０％、最も好ましくは、約１％～約３０％の有効成分の範囲である。

【0114】

投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するために調整される。例えば、単回ボーラスが投与されてもよく、経時的に数回の分割投与で投与されてもよく、又は用量は、治療状況の緊急性により示されるとき比例的に減少若しくは増加され得る。投与の容易性及び投与量の均一性のため、非経口組成物を投与単位形態で製剤化することが特に有利である。本明細書において使用される際の投与単位形態は、治療される対象に対する単位投与量として適した物理的に分離した単位を指し；各単位は、必要な医薬担体とともに、所望の治療効果を生じるように計算された所定の量の有効成分を含有する。或いは、抗体は、あまり頻繁でない投与が必要とされる場合、徐放性製剤として投与され得る。

【0115】

組成物の投与のため、投与量は、例えば、約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲であり得る。治療計画は、例えば、週１回の投与を含み得る。

【0116】

本開示の抗ＴＳＬＰ抗体、又はその抗原結合部分、又は二重特異性体、ＣＡＲ－免疫細胞、腫瘍溶解性ウイルス、免疫抱合体の「治療有効投与量」は、好ましくは、疾患の症状の重症度の低下、疾患の無症状期間の頻度及び持続時間の増加、又は疾患の苦痛に起因する障害若しくは身体障害の予防をもたらす。例えば、腫瘍を有する対象の治療について、「治療有効投与量」は、好ましくは、非治療対象と比べて、少なくとも約２０％、より好ましくは、少なくとも約４０％、さらにより好ましくは、少なくとも約６０％、さらにより好ましくは、少なくとも約８０％だけ腫瘍増殖を阻害する。治療有効量の治療用抗体は、腫瘍サイズを減少させるか、又は典型的にヒトであるか又は別の哺乳動物であり得る対象において症状を改善することができる。

【0117】

医薬組成物は、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤であり得る。生分解性、生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸が使用され得る。例えば、ＳｕｓｔａｉｎｅｄａｎｄＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９７８を参照されたい。

【0118】

治療用組成物は、医療デバイス、例えば、（１）無針皮下注射デバイス（例えば、米国特許第５，３９９，１６３号明細書；同第５，３８３，８５１号明細書；同第５，３１２，３３５号明細書；同第５，０６４，４１３号明細書；同第４，９４１，８８０号明細書；同第４，７９０，８２４号明細書；及び同第４，５９６，５５６号明細書）；（２）微小注入ポンプ（米国特許第４，４８７，６０３号明細書）；（３）経皮デバイス（米国特許第４，４８６，１９４号明細書）；（４）注入装置（米国特許第４，４４７，２３３号明細書及び同第４，４４７，２２４号明細書）；並びに（５）浸透デバイス（米国特許第４，４３９，１９６号明細書及び同第４，４７５，１９６号明細書）（これらの開示内容は、参照により本明細書に援用される）によって投与され得る。

【0119】

特定の実施形態において、本開示のモノクローナル抗体は、インビボで適切な分布を確実にするため製剤化され得る。例えば、本開示の治療用抗体が、血液脳関門を通過することを確実にするために、それらは、リポソーム中で製剤化され得、これらは、特定の細胞又は器官への選択的輸送を促進するための標的分子をさらに含み得る。例えば米国特許第４，５２２，８１１号明細書；同第５，３７４，５４８号明細書；同第５，４１６，０１６号明細書；及び同第５，３９９，３３１号明細書；Ｖ．Ｖ．Ｒａｎａｄｅ（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５；Ｕｍｅｚａｗａｅｔａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８；Ｂｌｏｅｍａｎｅｔａｌ．，（１９９５）ＦＥＢＳＬｅｔｔ．３５７：１４０；Ｍ．Ｏｗａｉｓｅｔａｌ．，（１９９５）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．ＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０；Ｂｒｉｓｃｏｅｅｔａｌ．，（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４；Ｓｃｈｒｅｉｅｒｅｔａｌ．，（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０；ＫｅｉｎａｎｅｎａｎｄＬａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）ＦＥＢＳＬｅｔｔ．３４６：１２３；及びＫｉｌｌｉｏｎａｎｄＦｉｄｌｅｒ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ４：２７３を参照されたい。

【0120】

本開示の使用及び方法
本開示の抗体又はその抗原結合部分、又は二重特異性分子、免疫抱合体、ＣＡＲ－免疫細胞、抗体をコードする若しくは抗体を担持する腫瘍溶解性ウイルス、又は抗体をコードする核酸分子を含む組成物は、例えば、喘息、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎又は乾癬の治療を含む、多くのインビトロ及びインビボでの有用性を有する。抗体は、例えば、インビボで、これらの疾患を軽減するために、ヒト対象に投与され得る。

【0121】

別の態様において、本開示は、本開示の抗ＴＳＬＰ抗体、若しくはその抗原結合部分、又は二重特異性体、免疫抱合体、ＣＡＲ－免疫細胞、抗体をコードする若しくは抗体を担持する腫瘍溶解性ウイルスが、対象における喘息、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎又は乾癬を軽減するのに有効な１つ以上のさらなる抗体と共投与される組合せ治療の方法を提供する。一実施形態において、本開示は、対象における喘息を治療するための方法であって、抗ＴＳＬＰ抗体（又はその抗原結合部分、特異的抗体、免疫抱合体、ＣＡＲ－免疫細胞、抗体をコードする若しくは抗体を担持する腫瘍溶解性ウイルス、又は抗体をコードする核酸分子）及び１つ以上のさらなる抗体、例えば、抗ＴＳＬＰＲ抗体、抗ＩＬ４抗体、抗ＩＬ４Ｒ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＩＬ１３Ｒ抗体、抗ＩＬ－５抗体、抗ＩＬ５Ｒ抗体、及び／又は抗ＩｇＥ抗体を対象に投与することを含む方法を提供する。特定の実施形態において、対象はヒトである。

【0122】

ＴＳＬＰシグナル伝達遮断はまた、喘息治療などの標準的な疾患治療とさらに組み合わされ得る。例えば、ＴＳＬＰシグナル伝達遮断は、喘息治療について上述される抗体の投与、及びアレルゲンへの曝露の減少又は回避と組み合わされ得る。

【0123】

本明細書において説明される治療剤の組合せは、薬学的に許容される担体中の単一の組成物と同時に、又は薬学的に許容される担体中の各薬剤を含む別個の組成物として同時に投与され得る。別の実施形態において、治療剤の組合せは、連続して投与され得る。

【0124】

さらに、組合せ治療の２つ以上の用量が、連続して投与される場合、連続投与の順序は、投与の各時点で逆になり得るか又は同じ順序に保持され得、連続投与は、同時投与と組み合わされ得、又はそれらの任意の組合せである。

【0125】

本開示は、以下の実施例によってさらに例示され、これは、さらなる限定として解釈されるべきではない。本出願を通して引用される全ての図及び全ての参照文献、Ｇｅｎｂａｎｋ配列、特許及び公開特許出願の内容は、参照により本明細書に明示的に援用される。

【実施例】

【0126】

実施例１ハイブリドーマ技術を用いたマウス抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の生成
免疫化
マウスを、ＥＨａｒｌｏｗ，Ｄ．Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９８に記載されている方法にしたがって免疫化した。Ｃ末端にヒトＩｇＧ１Ｆｃタグを有する組換えヒトＴＳＬＰタンパク質（ＢｉｏｓｉｏｎＩｎｃ．、ＵｎｉｐｒｏｔＮｏ．Ｑ９６９Ｄ９のアミノ酸残基２１～１５９）を、免疫原として使用した。ヒトＴＳＬＰ－ｈｉｓタンパク質（ＢｉｏｓｉｏｎＩｎｃ．、Ｃａｔ＃Ｐ１００２７３）を、抗血清力価を決定するため、及び抗原特異的抗体を分泌するハイブリドーマをスクリーニングするために使用した。免疫化投与量は、一次及び追加免疫の両方のために２５μｇのヒトＴＳＬＰ－Ｆｃタンパク質／マウス／注射を含んでいた。免疫応答を増加させるために、完全フロイントアジュバント及び不完全フロイントアジュバント（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．，ＵＳＡ）を、一次及び追加免疫のためにそれぞれ使用した。簡潔には、まず、ボルテックスを用いてバイアル中でアジュバントを穏やかに混合することによって、アジュバント－抗原混合物を調製した。所望の量のアジュバントを、加圧滅菌された１．５ｍＬの微小遠心分離管に移した。抗原を、０．２５～０．３４ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度を有するＰＢＳ又は生理食塩水中で調製した。次に、計算された量の抗原を、アジュバントとともに微小遠心分離管に加え、得られた混合物を、２分間にわたって穏やかにボルテックスすることによって混合して、油中水型エマルジョンを生成した。次に、アジュバント－抗原エマルジョンを、動物に注射するための適切なシリンジに吸い込ませた。合計で２５μｇの抗原を、１５０～２００μｌの体積で注射した。各動物を免疫化し、次に、抗血清力価に応じて３～４回追加接種した。良好な力価を有する動物に、融合前に腹腔内注射によって最終追加接種を与えた。

【0127】

ハイブリドーマ融合及びスクリーニング
マウス骨髄腫細胞株（ＳＰ２／０－Ａｇ１４、ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ－１５８１）の細胞を培養して、融合直前に対数期段階に到達させた。免疫化マウスに由来する脾臓細胞を、ＫｏｈｌｅｒＧ，ａｎｄＭｉｌｓｔｅｉｎＣ，"Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆｆｕｓｅｄｃｅｌｌｓｓｅｃｒｅｔｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｏｆｐｒｅｄｅｆｉｎｅｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ"，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５－４９７（１９７５）に記載される方法にしたがって、滅菌的に調製し、骨髄腫細胞と融合させた。続いて、融合された「ハイブリッド細胞」を、ＤＭＥＭ／２０％のＦＣＳ／ＨＡＴ培地中の９６ウェルプレート中に分配した。生存しているハイブリドーマコロニーが、融合の７～１０日後に顕微鏡で観察された。２週間後、各ウェルからの上清を、組換えヒトＴＳＬＰ－ｈｉｓタンパク質を用いて捕捉ＥＬＩＳＡに供した。高特異性ＴＳＬＰ結合活性を示した抗体を産生する陽性ハイブリドーマクローンを、細胞株のクローン性を確実にするために限られた希釈によってサブクローニングし、次に、生成されたモノクローナル抗体を精製した。簡潔に述べると、プロテインＡセファロースカラム（ｂｅｓｔｃｈｒｏｍ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製、Ｃａｔ＃ＡＡ０２７３）を、５～１０カラム体積中でＰＢＳ緩衝液を用いて洗浄した。細胞上清を、カラムに通過させ、次に、タンパク質の吸光度がベースラインに達するまで、カラムを、ＰＢＳ緩衝液を用いて洗浄した。カラムを、溶出緩衝液（０．１Ｍのグリシン－ＨＣｌ、ｐＨ２．７）で溶離し、直ちに中和緩衝液（１ＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ９．０）を含む１．５ｍｌ管に収集した。免疫グロブリンを含有する画分を、プールし、４℃で一晩、ＰＢＳ中で透析した。続いて、精製されたモノクローナル抗体のインビトロ機能活性を、以下のように特性決定した。

【0128】

実施例２ＢＩＡＣＯＲＥ表面プラズモン共鳴を用いた例示的なマウス抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の親和性決定
実施例１で生成された、精製抗ＴＳＬＰマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００システム（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ，ＵＳＡ）によって、結合親和性及び結合速度について特性決定した。

【0129】

簡潔に述べると、１０μｇ／ｍＬの濃度でＣＨ_３ＣＯＯＮａ緩衝液（Ｂｉｏｃｏｒｅによって提供される）中のＢｉｏｓｉｏｎの社内で合成された組換えヒトＴＳＬＰ－ｈｉｓ（配列番号２８）又はカニクイザルＴＳＬＰ－ｈｉｓタンパク質（配列番号２９）を、Ｂｉａｃｏｒｅ（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ，ＵＳＡ）によって提供される標準的なアミンカップリングキットを用いて、第一級アミンを介して、ＣＭ５チップ（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ＃ＢＲ１００５３０製のカルボキシメチルデキストラン被覆チップ）に共有結合した。バイオセンサー表面上の未反応部分を、エタノールアミンでブロックした。次に、連続希釈された精製抗ＴＳＬＰ抗体（１００ｎＭから出発して、ＨＢＳ－ＥＰ^＋緩衝液中の２倍連続希釈）及びベンチマークとしてのテゼペルマブ（ＴＳＬＰ－ＢＭとも呼ばれる、配列番号３５及び３６に記載される重鎖及び軽鎖アミノ酸を用いて社内で調製される、１００ｎＭから出発して、ＨＢＳ－ＥＰ^＋緩衝液中の２倍連続希釈）をそれぞれ、５０μＬ／分の流量でチップ上に流した。抗原－抗体結合速度を、４分間にわたって追跡し、解離速度を、１３分間にわたって追跡した。結合及び解離曲線を、ＢＩＡｃｏｒｅ評価ソフトウェアを用いて１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルに適合させ、Ｋ_Ｄ、Ｋ_ａ及びＫ_ｄ値を決定し、以下の表２に示した。

【0130】

【表2】

【0131】

全ての試験された抗ＴＳＬＰ抗体は、ヒトＴＳＬＰに特異的に結合し、ほとんどはベンチマークより高い結合親和性を有する。抗体Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１はまた、サルＴＳＬＰに対する結合親和性を示した。

【0132】

実施例３例示的なマウス抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の結合能
全てのマウス抗ＴＳＬＰ抗体の結合活性を、捕捉ＥＬＩＳＡ及び間接ＥＬＩＳＡによって決定した。

【0133】

捕捉ＥＬＩＳＡについて、９６ウェルマイクロプレートを、ＰＢＳ中の１００μｌの２μｇ／ｍｌのＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗マウスＩｇＧＦｃγフラグメント特異的な抗体（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ＃１１５－００５－００８）で被覆し、４℃で一晩インキュベートした。プレートを、洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０、ＰＢＳＴ）で４回洗浄し、次に、３７℃で２時間にわたって２００μｌ／ウェルのブロッキングバッファー（ＰＢＳＴ中５％ｗ／ｖの無脂肪乳）でブロックした。プレートを再度洗浄し、３７℃で４０分間にわたって、１００μｌの、本開示の連続希釈された抗ＴＳＬＰ抗体、テゼペルマブ又はｈＩｇＧ（ＨｕａｌａｎＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＩｎｃ．）、６６．７ｎＭから出発してＰＢＳＴ中２．５％の無脂肪乳中の５倍連続希釈とともにインキュベートし、次に、再度４回洗浄した。捕捉抗体を含有するプレートを、３７℃で４０分間にわたって、１００μｌのビオチン標識ヒトＴＳＬＰ－ｈｉｓタンパク質（配列番号２８、社内で調製された、ＰＢＳＴ中２．５％の無脂肪乳中０．２３ｎＭ）とともにインキュベートし、４回洗浄し、３７℃で４０分間にわたって、ストレプトアビジンコンジュゲートＨＲＰ（ＰＢＳＴ中１：１００００希釈、ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ＃０１６－０３０－０８４、１００μｌ／ウェル）とともにインキュベートした。最後の洗浄の後、プレートを、１００μｌ／ウェルＴＭＢ（Ｉｎｎｏｒｅａｇｅｎｔｓ）とともにインキュベートした。反応を、５０μｌ／ウェルの１ＭのＨ_２ＳＯ_４で、室温で１５分後に停止させ、各ウェルの吸光度を、ＴＭＢについて４５０ｎｍ及び基準波長として６３０ｎｍの二波長モードを用いて、マイクロプレートリーダーで読み取った。ＯＤ（４５０～６３０）値を、抗体濃度に対してプロットした。データを、ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて分析し、ＥＣ_５０値を報告した。いくつかの抗体の結果を、図１Ａ～１Ｂに示した。

【0134】

間接ＥＬＩＳＡについて、９６ウェルマイクロプレートを、４℃で一晩、炭酸塩／重炭酸塩緩衝液（ｐＨ９．６）中の１００μｌの２μｇ／ｍｌのカニクイザルＴＳＬＰ－ｈｉｓタンパク質（配列番号２９、社内で調製された）で被覆した。ＥＬＩＳＡプレートを、洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０、ＰＢＳＴ）で４回洗浄し、次に、３７℃で２時間にわたって２００μｌ／ウェルのブロッキングバッファー（ＰＢＳＴ中５％ｗ／ｖの無脂肪乳）でブロックした。プレートを再度洗浄し、３７℃で４０分間にわたって、１００μｌの、本開示の連続希釈された抗ＴＳＬＰ抗体、テゼペルマブ又はｈＩｇＧ（６６．７ｎＭから出発してＰＢＳＴ中２．５％の無脂肪乳中の５倍連続希釈）とともにインキュベートした。ＥＬＩＳＡプレートを、再度４回洗浄し、３７℃で４０分間にわたってＰｅｒｏｘｉｄａｓｅＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅＦ（ａｂ'）_２フラグメントヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｆｃγフラグメント特異的な抗体（ＰＢＳＴ緩衝液中１：５０００希釈、ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ＃１１５－０３６－０７１、１００μｌ／ウェル）とともにインキュベートした。最後の洗浄の後、プレートを、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ（Ｉｎｎｏｒｅａｇｅｎｔｓ）とともにインキュベートした。反応を、５０μｌ／ウェルの１ＭのＨ_２ＳＯ_４で、室温で１５分後に停止させ、各ウェルの吸光度を、ＴＭＢについて４５０ｎｍ及び基準波長として６３０ｎｍの二波長モードを用いて、マイクロプレートリーダーで読み取った。ＯＤ（４５０～６３０）値を、抗体濃度に対してプロットした。データを、ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて分析し、ＥＣ_５０値を報告した。いくつかの抗体の結果を、図２Ａ～２Ｂに示した。

【0135】

データは、本開示のほとんどの抗体が、ヒト及びサルＴＳＬＰに特異的に結合したことを示した。１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９、Ｄ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７及びＤ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１のＥｍａｘ（最大結合）及びＥＣ_５０は、図１Ａ～１Ｂに示されるように、ベンチマークのものと類似しており、ここで、Ｄ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７は、より低いＥＣ_５０を有し、これは、それがより効率的にヒトＴＳＬＰに結合したことを示唆している。１Ｃ５Ｆ１２Ｅが、ベンチマークと比較してサルＴＳＬＰ結合アッセイにおけるより高いＥｍａｘを示したことが、図２Ａ～２Ｂから分かる。

【0136】

実施例４抗ＴＳＬＰ抗体における機能アッセイ
４．１リガンドブロッキングＥＬＩＳＡ
ＴＳＬＰ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ結合をブロックする全ての抗ＴＳＬＰ抗体の能力を、競合ＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定した。簡潔に述べると、ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬで、１００μｌのヒトＴＳＬＰＲ－Ｆｃタンパク質（配列番号３０、社内で調製された）、及びＰＢＳ中１μｇ／ｍＬで、１００μｌのヒトＩＬ７Ｒａ－Ｆｃタンパク質（配列番号３１、社内で調製された）を、４℃で一晩、９６ウェルマイクロプレート上で被覆した。翌日、プレートを、洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０、ＰＢＳＴ）で洗浄し、３７℃で２時間にわたってＰＢＳＴ中５％ｗ／ｖの無脂肪乳でブロックした。次に、プレートを、洗浄緩衝液を用いて再度洗浄した。

【0137】

抗ＴＳＬＰ抗体又は対照を、３倍連続希釈で、６６．７ｎＭから出発してビオチン標識ヒトＴＳＬＰ－Ｆｃ（配列番号３２、社内で調製された、ＰＢＳＴ中２．５％の無脂肪乳中０．２９ｎＭ）で希釈し、室温で４０分間インキュベートした。次に、１００μｌの抗体／ＴＳＬＰ－Ｆｃ混合物を、ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ被覆プレートに加えた。４０分間にわたる３７℃でのインキュベーションの後、プレートを、洗浄緩衝液を用いて４回洗浄した。次に、ストレプトアビジンコンジュゲートＨＲＰを加え、３７℃で４０分間にわたってインキュベートして、ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒに結合されたビオチン標識ヒトＴＳＬＰ－Ｆｃを検出した。プレートを、洗浄緩衝液を用いて再度洗浄した。最後に、ＴＭＢを加え、反応を、１ＭのＨ_２ＳＯ_４を用いて停止させた。各ウェルの吸光度を、ＴＭＢについて４５０ｎｍ及び基準波長として６３０ｎｍでの二波長モードを用いて、マイクロプレートリーダーで読み取り、次に、ＯＤ（４５０～６３０）値を、抗体濃度に対してプロットした。データを、ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて分析し、ＩＣ_５０値を報告した。いくつかの抗体の結果を、図３Ａ～３Ｂに示した。

【0138】

４．２ベンチマークブロッキングＥＬＩＳＡ
ベンチマーク（テゼペルマブ）－ヒトＴＳＬＰ結合をブロックする抗ＴＳＬＰ抗体の能力を、競合ＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定した。簡潔に述べると、ＰＢＳ中の２μｇ／ｍＬのテゼペルマブを、９６ウェルマイクロプレート上で、１００μｌ／ウェルで被覆し、４℃で一晩インキュベートした。翌日、プレートを、洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０、ＰＢＳＴ）で洗浄し、３７℃で２時間にわたってＰＢＳＴ中５％ｗ／ｖの無脂肪乳でブロックした。

【0139】

一方、抗ＴＳＬＰ抗体又は対照を、４倍連続希釈で、４０ｎＭから出発してビオチン標識ヒトＴＳＬＰ－Ｆｃ（配列番号３２、ＰＢＳＴ中２．５％の無脂肪乳中０．０４７ｎＭ）で希釈し、室温で４０分間インキュベートした。次に、１００μｌの抗体／ＴＳＬＰ－Ｆｃ－ビオチン混合物を、ベンチマークで被覆したプレートに加えた。４０分間にわたる３７℃でのインキュベーションの後、プレートを、洗浄緩衝液を用いて４回洗浄した。次に、ストレプトアビジンコンジュゲートＨＲＰを加え、プレートを、３７℃で４０分間インキュベートして、ベンチマークに結合されたビオチン標識ヒトＴＳＬＰ－Ｆｃを検出した。プレートを、洗浄緩衝液を用いて最後に洗浄した。ＴＭＢを加え、反応を、１ＭのＨ_２ＳＯ_４を用いて停止させた。各ウェルの吸光度を、ＴＭＢについて４５０ｎｍ及び基準波長として６３０ｎｍでの二波長モードを用いて、マイクロプレートリーダーで読み取り、ＯＤ（４５０～６３０）値を、抗体濃度に対してプロットした。データを、ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて分析し、ＩＣ_５０値を報告した。いくつかの抗体の結果を、図４Ａ～４Ｂに示した。

【0140】

４．３細胞ベースのリガンドブロッキングＦＡＣＳ
細胞表面ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７ＲへのＴＳＬＰ－Ｆｃタンパク質の結合をブロックする抗ＴＳＬＰ抗体の活性を、細胞表面ヒトＴＳＬＰＲ（ｕｎｉｐｒｏｔＮｏ．Ｑ９ＨＣ７３．１のアミノ酸残基１～３７１、配列番号３３）及びヒトＩＬ７Ｒ（ｕｎｉｐｒｏｔＮｏ．Ｐ１６８７１．１のアミノ酸残基１～４５９、配列番号３４）を発現する細胞株ＢＡＦ３－３Ｅ６を用いて、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）アッセイにおいて評価した。ＢＡＦ３細胞（ｉＣｅｌｌＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅＩｎｃ．、Ｃａｔ＃ＭＩＭＣＬ－０２１）を、ＥｃｏＲＩとＸｂａｌ部位との間にＴＳＬＰＲコード配列が挿入されたｐＣＭＶ－Ｔ－Ｐプラスミド及びＨｉｎｄＩＩＩとＸｂａｌ部位との間にＩＬ７Ｒコード配列が挿入されたｐＣＭＶ３－ＳＰプラスミドでトランスフェクトすることによって、リポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）３０００トランスフェクション試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）の説明書にしたがって、ＢＡＦ３－３Ｅ６細胞株を調製した。

【0141】

簡潔に述べると、本開示の抗ＴＳＬＰ抗体、ベンチマーク又は陰性対照ｈＩｇＧ（静脈注射用のヒト免疫グロブリン（ｐＨ４）、ＨｕａｌａｎＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＩｎｃ．）を、３０ｎＭから出発して２倍連続希釈で、ヒトＴＳＬＰ－Ｆｃ溶液（配列番号３２、社内で調製された、ＦＡＣＳ緩衝液中０．３８ｎＭ）で希釈し、室温で４０分間インキュベートした。ＢＡＦ３－３Ｅ６細胞を、細胞培養フラスコから収集し、２回洗浄し、２％ｖ／ｖのウシ胎仔血清（ＦＡＣＳ緩衝液）を含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で再懸濁させた。９６ウェルプレート中で、ウェル当たり１×１０^５個の細胞を、４℃で４０分間にわたって１００μｌ／ウェルの抗体／ＴＳＬＰ－Ｆｃ－ビオチン混合物とともにインキュベートした。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次に加え、暗所で、４℃で４０分間にわたって、１００μｌ／ウェルのＲ－フィコエリトリンストレプトアビジン（ＦＡＣＳ緩衝液中１：１０００希釈、ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ＃０１６－１１０－０８４）とともにインキュベートした。細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中で再懸濁させた。蛍光を、ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ－ＨＴＳ機器を用いて測定した。データを、ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて分析し、ＩＣ_５０値を報告した。いくつかの抗体の結果を、図５Ａ～５Ｂに示した。

【0142】

４．４細胞ベースの機能アッセイ
ＢＡＦ３細胞増殖及び生存は、通常、ＩＬ－３に依存している。しかしながら、これらの細胞が、ヒトＴＳＬＰＲ及びヒトＩＬ７Ｒを発現するように操作され、細胞培養培地に、ＴＳＬＰが補充されるとき、それらは、ＩＬ－３なしで生存可能である。

【0143】

抗ＴＳＬＰ抗体を、細胞ベースの機能アッセイを用いることによって、ＴＳＬＰＲ（配列番号３３）／ＩＬ７Ｒ（配列番号３４）を発現するＢＡＦ３－３Ｅ６細胞の増殖を阻害するそれらの生物活性についてさらに試験した。簡潔に述べると、１０％のＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ＃１００９９－１４１）が補充された１００μＬのＲＰＭＩ１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ＃Ａ１０４９１－０１）中で、対数期段階における８×ｌ０^３個のＢＡＦ３－３Ｅ６細胞を、９６ウェルプレート上で平板培養した。次に、５０μＬのヒトＴＳＬＰ－ｈｉｓタンパク質（配列番号２８、社内で調製された、ＲＰＭＩ－１６４０中６．４ｎｇ／ｍＬのｐＭ）を、５０μＬの抗ＴＳＬＰ抗体又は対照（４０μｇ／ｍＬから出発する、培養培地中５倍連続希釈）と混合し、混合物を、室温で３０分間インキュベートした。次に、抗体／ＴＳＬＰ－ｈｉｓ混合物（１００μＬ）を、ＢＡＦ３－３Ｅ６細胞プレートに加え、３７℃で７２時間にわたってＣＯ_２培養器中でインキュベートした。その後、細胞プレートを、３７℃で１０分間にわたって、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）ＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔＣｅｌｌＶｉａｂｉｌｉｔｙＡｓｓａｙＫｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｃａｔ＃Ｇ７５７２、５０μｌ／ウェル）とともにインキュベートした。化学発光を、ＴｅｃａｎＩｎｆｉｎｉｔｅ（登録商標）２００Ｐｒｏ機器を用いて測定した。データを、ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて分析し、ＩＣ_５０値を報告した。いくつかの抗体の結果を、図６Ａ～６Ｂに示した。

【0144】

データは、全ての抗ＴＳＬＰ抗体が、ヒトＴＳＬＰＲ／ＩＬ７ＲへのヒトＴＳＬＰ結合をブロックすることが可能であり、ブロッキング活性が、ベンチマークのものと同等であるか又はそれよりやや良好であったことを示した。図３Ａ～３Ｂに示されるように、競合ＥＬＩＳＡにおいて、Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及び１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９のＩＣ_５０値は、ベンチマークのものより低く、これは、それらがＴＳＬＰＲ／ＩＬ７ＲへのＴＳＬＰ結合をより効率的に阻害したことを示す。細胞ベースのリガンドブロッキングアッセイにおいて、図５Ａ～５Ｂに示されるように、抗体Ｄ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７は、ＴＳＬＰ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ結合における部分的ブロッキングを示した一方、抗体Ｄ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１及び１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９は、ベンチマークと比較して同様のＩＣ_５０でＴＳＬＰ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ結合を完全に阻害した。

【0145】

図４Ａ～４Ｂは、抗ＴＳＬＰ抗体Ｄ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７が、ヒトＴＳＬＰへのベンチマーク結合をブロックすることができないことを示し、これは、それがベンチマークと比較して異なるエピトープに結合し得ることを示す。ベンチマーク－ＴＳＬＰ結合をブロックすることが可能であった残りの抗ＴＳＬＰ抗体は、ベンチマーク（テゼペルマブ）が結合したのと同じか又は同様のエピトープに結合し得る。

【0146】

さらに、３つの代表的な抗体のブロッキング曲線を示す図６Ａ～６Ｂに見られるように、全ての抗ＴＳＬＰ抗体は、ＴＳＬＰ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ相互作用をブロックすることができ、低い抗体濃度で、ＴＳＬＰ経路遮断及びＢＡＦ３－３Ｅ６細胞死を引き起こした一方、ベンチマークは、高い抗体レベルでＴＳＬＰ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ相互作用をブロックした。

【0147】

実施例５例示的なキメラ抗体の生成及び特性決定
上で試験される全ての抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を、シーケンシングした。意外にも、同じ細胞融合ライブラリーでスクリーニングしたＤ１Ｄ８Ｈ９Ｆ７及びＤ１Ｃ２Ｈ１Ｈ１以外の抗体が、同じ重鎖可変領域及び軽鎖可変領域配列を有することが分かった。本発明者らは、次に、同じ細胞融合ライブラリーを再スクリーニングし、良好な特性を示す、選別された抗体が、同じ重鎖／軽鎖可変領域を有することが分かった。理論に拘束されるのとを望むものではないが、本発明者らは、このような重鎖／軽鎖可変領域を有するｍＡｂが、優勢なものであったと考える。抗体１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９を、さらなる特性決定のための代表例として選別した。

【0148】

抗ＴＳＬＰマウスｍＡｂ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９の重鎖及び軽鎖可変領域をそれぞれ、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域（配列番号１２）及びヒトκ軽鎖定常領域（配列番号１４）に、インフレームでクローニングし、ここで、可変領域のＣ末端は、対応する定常領域のＮ末端に連結された。ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域に連結された重鎖可変領域をコードするヌクレオチドをそれぞれ含むベクター、及びヒトκ軽鎖定常領域に連結された軽鎖可変領域をコードするヌクレオチドをそれぞれ含むベクターを、１ｍｇ／ｍＬのＰＥＩで、１．１：１の軽鎖対重鎖構築物の比率で、５０ｍｌの２９３Ｆ懸濁細胞培養物中で一過性にトランスフェクトした。細胞上清を、振とうフラスコ中で６日後に収集し、沈降させて、細胞をペレット化し、次に、キメラ抗体を、細胞上清から精製した。上記の実施例及び後述される実施例におけるプロトコルにしたがって、捕捉ＥＬＩＳＡ、Ｏｃｔｅｔ親和性試験、細胞ベースのリガンドブロッキングＦＡＣＳ試験及び細胞ベースの機能アッセイにおいて、精製キメラ抗体を確認した。

【0149】

ヒトＴＳＬＰに対する精製キメラ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９抗体の結合親和性を、Ｏｃｔｅｔによって評価した。簡潔に述べると、ＡＰＳバイオセンサ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ製）を、１時間にわたってＰＢＳで予め浸漬し、次に、１８０秒間にわたってＰＢＳを含むウェル中で浸漬した。次に、センサーを、７６０秒間にわたって泳動用緩衝液中５μｇ／ｍＬで、ヒトＴＳＬＰ－ｈｉｓタンパク質（配列番号２８、社内で調製された）を含むウェル中で浸漬し、次に、６００秒間にわたってＰＢＳを含むウェル中で浸漬した。その後、センサーを、６００秒間にわたってＨＢＳ－ＥＰ^＋緩衝液（Ｂｉａｃｏｒｅによって提供される）を含むウェル中で浸漬した。最後に、センサーを、連続希釈されたマウス又はキメラ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９抗ＴＳＬＰ抗体（１６．６７ｎＭから出発して、ＨＢＳ－ＥＰ^＋緩衝液中の２倍希釈）を含むウェル中で浸漬した。抗原－抗体結合速度を、２分間にわたって追跡し、解離速度を、３分間にわたって追跡した。結合及び解離曲線を、ＦｏｒｔｅＢｉｏＤａｔａＡｎａｌｙｓｉｓ８．１評価ソフトウェアを用いて、１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルに適合させた。Ｋ_ａ、Ｋ_ｄ及びＫ_Ｄ値を決定し、以下の表３に要約した。キメラ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９抗体の結合親和性は、マウス抗体及びベンチマークのものと同様であった。

【0150】

他の３つのアッセイの結果を、図７～９に示した。キメラ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９抗体は、マウス１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９抗体と同様のＴＳＬＰ結合能、ＴＳＬＰ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ相互作用に対する遮断活性及びＢＡＦ３－３Ｅ６細胞生存に対する阻害効果を示したが、ベンチマークより良好であった。

【0151】

【表3】

【0152】

実施例６抗ＴＳＬＰマウスモノクローナル抗体のヒト化
マウス抗ＴＳＬＰ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９抗体を、ヒト化した。マウス抗体のヒト化を、以下に詳細に記載される十分に確立されたＣＤＲグラフト方法を用いて行った。

【0153】

マウス１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９抗体のヒト化のための受容体フレームワークを選択するために、抗体の軽鎖及び重鎖可変領域配列を、ヒト免疫グロブリン遺伝子データベースに対してブラストした。マウス抗体との最も高い相同性を有するヒト生殖細胞系列を、ヒト化のための受容体フレームワークとして選択した。マウス抗体重鎖／軽鎖可変領域ＣＤＲを、選択されたフレームワークに挿入し、フレームワーク中の残基を、より多い候補重鎖／軽鎖可変領域を得るようにさらに変異させた。合計で１８の例示的なヒト化１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９抗体、すなわち、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１～ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１８が得られ、その重鎖／軽鎖可変領域配列を表１に示した。

【0154】

ヒト化１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９重鎖可変領域並びにヒトＩｇＧ４重鎖（（配列番号１３）及びヒト化１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９軽鎖可変領域及びヒトκ軽鎖定常領域（配列番号１４）をコードするヌクレオチド配列を含むベクターを、１ｍｇ／ｍｌのＰＥＩで、６０％対４０％の軽鎖対重鎖構築物の比率で、５０ｍｌの２９３Ｆ懸濁細胞培養物中で一過性にトランスフェクトした。ヒト化抗体を含有する細胞上清を、振とうフラスコ中で６日後に収集し、沈降させて、細胞をペレット化し、次に、１８の抗体を、細胞上清から精製した。

【0155】

実施例７例示的なヒト化抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の特性決定
ヒトＴＳＬＰに対する例示的な精製ヒト化１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９抗体の結合親和性及び結合速度を、実施例２におけるプロトコルにしたがって、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００システム（ＧＥｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ，ＵＳＡ）によって評価した。

【0156】

【表4】

【0157】

Ｋ_ａ、Ｋ_ｄ及びＫ_Ｄ値を決定し、上記の表４に要約した。

【0158】

Ｂｉａｃｏｒｅによって測定されるＫ_ｄの下限は、１．００Ｅ－０５であり、１．００Ｅ－０５未満のＫ_ｄは、対応するセンサーグラム（ｓｅｎｓｏｒｇｒａｍ）から概算され得る。結果は、全てのヒト化１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９抗体が、テゼペルマブより高い、ヒトＴＳＬＰに対する結合親和性を有していたことを示した。

【0159】

実施例８ヒト化抗ＴＳＬＰ抗体ｈｕＣ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８及びｈｕＣ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４の特性決定
ヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８及びｈｕＣ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４を、さらなる特性決定のために選択した。特に、それらを、実施例２～４に記載されるプロトコルにしたがって、Ｂｉａｃｏｒｅ、捕捉ＥＬＩＳＡ、間接ＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ、細胞ベースのリガンドブロッキングＦＡＣＳ及び機能アッセイによって、ヒト及びカニクイザルＴＳＬＰに対する結合親和性／結合能及び他の機能について試験し、結果を、以下の表５並びに図１０～１４、及び１５Ａ～１５Ｂに示した。

【0160】

データは、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４が、親マウス及びキメラ抗体と同等のインビトロ活性を示したことを示した。

【0161】

ヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４が、ベンチマークと比較して、より高い、ヒトＴＳＬＰに対する結合親和性／結合活性、及びカニクイザルＴＳＬＰに対する同等の結合親和性／結合能を示したことが、表５、図１０及び図１１から分かる。

【0162】

図１２及び１４は、ヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４が、ヒトＴＳＬＰＲ／ＩＬ７ＲへのヒトＴＳＬＰ結合をブロックすることが可能であったことを示した。

【0163】

図１５Ａ～１５Ｂは、ヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４が、ＴＳＬＰ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ相互作用をブロックすることができ、低い抗体濃度で、ＴＳＬＰ経路遮断及びＢＡＦ３－３Ｅ６細胞の死亡を引き起こすことを示した一方、ベンチマークは、高い抗体レベルで、このような能力を示した。

【0164】

【表5】

【0165】

その後、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域（配列番号１２）及びヒトκ定常領域（配列番号１４）を有するヒト化抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４を、実施例２～４に記載されるプロトコル及び後述されるものにしたがって、Ｂｉａｃｏｒｅ、捕捉ＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ、細胞ベースのリガンドブロッキングＦＡＣＳ、細胞ベースの機能アッセイ、細胞ベースのレポーターアッセイ及びプロテインサーマルシフトアッセイによって、ヒト及びカニクイザルＴＳＬＰに対する結合親和性／結合能及び他の機能について、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域（配列番号１３）及びヒトκ定常領域（配列番号１４）を有するｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４と比較した。結果を、図１６～１９、２０Ａ～２０Ｂ、２１Ａ～２１Ｂ及び２２に示した。

【0166】

４つの抗ＴＳＬＰヒト化抗体の熱安定性を決定するために、プロテインサーマルシフトアッセイを用いて、ＧｌｏＭｅｌｔ（商標）ＴｈｅｒｍａｌＳｈｉｆｔＰｒｏｔｅｉｎＳｔａｂｉｌｉｔｙＫｉｔ（Ｂｉｏｔｉｕｍ、Ｃａｔ＃３３０２２－Ｔ）を用いて、Ｔｍ（溶融温度）を決定した。簡潔に述べると、ＧｌｏＭｅｌｔ（商標）色素を解凍し、室温に到達させた。色素を含むバイアルをボルテックスし、遠心分離した。次に、１０倍色素を、５μＬの２００倍色素を９５μＬのＰＢＳに加えることによって調製した。２μＬの１０倍色素及び１０μｇのヒト化抗体を加え、ＰＢＳを、２０μＬの総反応体積になるまで加えた。色素及び抗体を含む管を、短時間にわたって回転させ、表６中のパラメータを有する融解曲線プログラムを用いて設定されたリアルタイムＰＣＲサーモサイクラー（Ｒｏｃｈｅ、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ４８０ＩＩ）に入れた。

【0167】

【表6】

【0168】

細胞ベースのレポーターアッセイにおいて、細胞表面ヒトＴＳＬＰＲ（配列番号３３）及びヒトＩＬ７Ｒ（配列番号３４）を発現したレポーター細胞株ＨＥＫ２９３Ｔ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ／ＳＴＡＴ５－Ｌｕｃを使用した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１１２６８）を、ＥｃｏＲＩとＸｂａｌ部位との間にＴＳＬＰＲコード配列が挿入されたｐＣＭＶ－Ｔ－Ｐプラスミド、ＨｉｎｄＩＩＩとＸｂａｌ部位との間にＩＬ７Ｒコード配列が挿入されたｐＣＭＶ３－ＳＰプラスミド及びｐＧＬ４．５２［ｌｕｃ２Ｐ／ＳＴＡＴ５ＲＥ／Ｈｙｇｒｏ］（Ｐｒｏｍｅｇａ）でトランスフェクトすることによって、リポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）３０００トランスフェクション試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）の説明書にしたがって、ＨＥＫ２９３Ｔ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ／ＳＴＡＴ５－Ｌｕｃ細胞を、社内で調製した。

【0169】

簡潔に述べると、ＨＥＫ２９３Ｔ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ／ＳＴＡＴ５－Ｌｕｃ細胞を、細胞培養フラスコから収集した。次に、１０％のＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ＃１００９９－１４１）が補充された１００μＬのＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ＃１０５６６－０１６）中の５×１０^４個の細胞を、９６ウェル細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃａｔ＃３０２１８０２６）上で平板培養した。一方、５０μＬのヒトＴＳＬＰ－ｈｉｓ（配列番号２８、１０％のＦＢＳが補充されたＤＭＥＭ培地中の１６０ｎｇ／ｍＬ）を、５０μＬの連続希釈された抗ＴＳＬＰ抗体ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ１）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ４）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ１）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ４）、及びテゼペルマブ（２００μｇ／ｍＬから出発して、１０％のＦＢＳが補充されたＤＭＥＭ培地中の５倍希釈）とそれぞれ混合し、次に、室温で３０分間インキュベートした。次に、抗ＴＳＬＰ抗体／ＴＳＬＰ－ｈｉｓ混合物を、プレートに、１００μｌ／ウェルで加え、プレートを、３７℃で１６～１８時間にわたってＣＯ_２培養器中でインキュベートした。上清を、１００μｌ／ウェル廃棄し、次に、ルシフェラーゼ検出試薬（５０μＬ／ウェル、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｃａｔ＃Ｅ６１２０）を加えた。１０分後、プレートを、Ｔｅｃａｎｉｎｆｉｎｉｔｅ２００Ｐｒｏプレートリーダーによる分析に供した。発光シグナルのデータを、Ｇｒａｐｈｐａｄｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて分析し、ＩＣ_５０値を報告した。

【0170】

図１６、１７、１９、２０Ａ～２０Ｂ、及び２１Ａ～２１Ｂに示されるように、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ１）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ４）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ４）は、テゼペルマブと比較して、同等か又はやや良好なインビトロ活性を示した。特に、図２０Ａ～２０Ｂ及び図２１Ａ～２１Ｂ中のデータは、ヒト化抗体が、ベンチマークと比較してはるかに低い抗体濃度で、ＴＳＬＰ－ＴＳＬＰＲ／ＩＬ７Ｒ相互作用をブロックすることができ、ＴＳＬＰ経路遮断及びＢＡＦ３－３Ｅ６細胞の死亡を引き起こすことを示した。

【0171】

図２２に示されるように、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ１）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ８（ＩｇＧ４）、ｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ１）及びｈｕ１Ｃ５Ｆ１２Ｅ９－Ｖ１４（ＩｇＧ４）の溶融温度（Ｔ１及びＴ２）はそれぞれ、（６９．５℃、８０℃）、（６６．５℃、７６℃）、（６９．５℃、８０℃）、（６６．５℃、７６℃）であった。

【0172】

本開示は、１つ以上の実施形態とともに上述されているが、本開示が、それらの実施形態に限定されないことが理解されるべきであり、説明は、添付の特許請求の範囲の趣旨及び範囲内に含まれ得る際、全ての代替例、修飾、及び均等物を包含することが意図される。本明細書に引用される全ての参照文献は、全体が参照によりさらに援用される。

【0173】

本出願中の配列が、以下に要約される。

【0174】

【表7】