特表 2023-502998 ｐＨ応答性組成物、製剤、及び腫瘍画像化の方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-01-26

(54)【発明の名称】ｐＨ応答性組成物、製剤、及び腫瘍画像化の方法

(51)【国際特許分類】

   C08F 293/00 20060101AFI20230119BHJP

   A61K 49/00 20060101ALI20230119BHJP

   C08F 20/34 20060101ALI20230119BHJP

   C08F 283/06 20060101ALI20230119BHJP

   C08K 5/1545 20060101ALI20230119BHJP

   G01N 33/483 20060101ALI20230119BHJP

   A61B 10/00 20060101ALI20230119BHJP

   G01N 21/64 20060101ALI20230119BHJP

   C08L 53/00 20060101ALI20230119BHJP

【ＦＩ】

C08F293/00

A61K49/00

C08F20/34

C08F283/06

C08K5/1545

G01N33/483 C

A61B10/00 T

A61B10/00 E

G01N21/64 F

C08L53/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022528615

(86)(22)【出願日】2020-11-17

(85)【翻訳文提出日】2022-07-14

(86)【国際出願番号】 US2020060910

(87)【国際公開番号】W WO2021101905

(87)【国際公開日】2021-05-27

(31)【優先権主張番号】62/937,141

(32)【優先日】2019-11-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522176078

【氏名又は名称】オンコナノ・メディスン・インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ジャオ，ティアン

(72)【発明者】

【氏名】ジャヤラクシュミ，ヤリア

(72)【発明者】

【氏名】ホール，キース・エイ

(72)【発明者】

【氏名】マダジュースキ，ブライアン

(72)【発明者】

【氏名】カプラン，ハルギータ

【テーマコード（参考）】

2G043

2G045

4C085

4J002

4J026

4J100

【Ｆターム（参考）】

2G043AA03

2G043BA16

2G043CA07

2G043EA01

2G043EA03

2G043KA02

2G043LA03

2G045AA26

2G045CB02

2G045DB03

2G045FB12

2G045GC15

4C085HH11

4C085JJ03

4C085KA27

4C085KB56

4C085KB70

4C085KB74

4C085LL18

4J002BN181

4J002EL086

4J002GB04

4J002HA04

4J026AB20

4J026AC25

4J026AC36

4J026BA29

4J026BB01

4J026BB02

4J026BB03

4J026DA02

4J026DB02

4J026DB24

4J026EA09

4J100AL08P

4J100AL08Q

4J100AL08R

4J100BA31P

4J100BA32P

4J100BA34Q

4J100BA34R

4J100BA56Q

4J100BC65Q

4J100CA01

4J100CA04

4J100CA05

4J100FA03

4J100JA53

(57)【要約】

原発性及び転移性腫瘍組織の検出に対して有用な製剤、方法、及びｐＨ応答性組成物が本明細書に記載される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（ＩＩ）：

【化1】

（式中、
Ｘ^１はハロゲン、－ＯＨ、又は－（Ｏ）ＯＨであり、
ｎは９０～１４０であり、
ｘは５０～２００であり、
ｙは０～３であり、
ｚは０～３である）
の構造、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、若しくは同位体バリアントを有するブロックコポリマー。

【請求項2】

Ｘ^１がハロゲンである、請求項１に記載のブロックコポリマー。

【請求項3】

Ｘ^１が－Ｂｒである、請求項１又は２に記載のブロックコポリマー。

【請求項4】

ｎが１００～１２０である、請求項１～３のいずれか一項に記載のブロックコポリマー。

【請求項5】

ｎが１１３である、請求項１～４のいずれか一項に記載のブロックコポリマー。

【請求項6】

ｘが６０～１５０である、請求項１～５のいずれか一項に記載のブロックコポリマー。

【請求項7】

ｙが０．５～１．５である、請求項１～６のいずれか一項に記載のブロックコポリマー。

【請求項8】

ｙが０である、請求項１～６のいずれか一項に記載のブロックコポリマー。

【請求項9】

ｚが１．５～２．５である、請求項１～７のいずれか一項に記載のブロックコポリマー。

【請求項10】

ｚが０である、請求項１～８のいずれか一項に記載のブロックコポリマー。

【請求項11】

請求項１～１０のいずれか一項に記載の１種以上のブロックコポリマーを含む、組成物又はミセル。

【請求項12】

請求項１１に記載のミセルを含むｐＨ応答性組成物であって、ミセルがｐＨ遷移点及び発光スペクトルを有する、ｐＨ応答性組成物。

【請求項13】

ｐＨ遷移点が４．８～５．５の間である、請求項１２に記載のｐＨ応答性組成物。

【請求項14】

ｐＨ遷移点が約４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、又は５．５である、請求項１２に記載のｐＨ応答性組成物。

【請求項15】

発光スペクトルが７００～９００ｎｍの間である、請求項１２～１４のいずれか一項に記載のｐＨ応答性組成物。

【請求項16】

１ｐＨ単位未満のｐＨ遷移域（ΔｐＨ_{１０～９０％}）を有する、請求項１２～１５のいずれか一項に記載のｐＨ応答性組成物。

【請求項17】

ｐＨ遷移域が０．２５ｐＨ単位未満である、請求項１６に記載のｐＨ応答性組成物。

【請求項18】

ｐＨ遷移域が０．１５ｐＨ単位未満である、請求項１６に記載のｐＨ応答性組成物。

【請求項19】

２５より大きい蛍光活性化比を有する、請求項１２～１８のいずれか一項に記載のｐＨ応答性組成物。

【請求項20】

５０より大きい蛍光活性化比を有する、請求項１２～１８のいずれか一項に記載のｐＨ応答性組成物。

【請求項21】

請求項１～１０のいずれか一項に記載の１種以上のブロックコポリマーを含む造影剤。

【請求項22】

ポリ（エチレンオキシド）－ｂ－ポリ（ジブチルアミノエチルメタクリレート－ｒ－アミノエチルメチルアクリレート塩酸塩）コポリマーインドシアニングリーン及び酢酸コンジュゲートを含む、請求項２１に記載の造影剤。

【請求項23】

ミセルを含む医薬組成物であって、ミセルが、
１）式（ＩＩ）：

【化2】

（式中、
Ｘ^１はハロゲン、－ＯＨ、又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨであり、
ｎは９０～１４０であり、
ｘは５０～２００であり、
ｙは０～３であり、
ｚは０～３である）
の構造を有する１種以上のブロックコポリマー、又は薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物、及び
２）安定化剤
を含む、医薬組成物。

【請求項24】

安定化剤が凍結防止剤である、請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項25】

安定化剤が糖、糖誘導体、界面活性剤、又は塩である、請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項26】

安定化剤が糖誘導体である、請求項２５に記載の医薬組成物。

【請求項27】

安定化剤が、単糖、二糖、三糖、水溶性多糖、若しくは糖アルコール、ポリオール、又はこれらの組合せである、請求項２５又は請求項２６に記載の医薬組成物。

【請求項28】

安定化剤が、フルクトース、ガラクトース、グルコース、ラクトース、スクロース、トレハロース、マルトース、マンニトール、ソルビトール、リボース、デキストリン、シクロデキストリン、マルトデキストリン、ラフィノース、若しくはキシロース、又はこれらの組合せである、請求項２３～２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項29】

安定化剤がトレハロースである、請求項２３～２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項30】

約０．５％～約２５％ｗ／ｖ、約１％～約２０％ｗ／ｖ、約５％～約１５％ｗ／ｖ、約６％～約１３％ｗ／ｖ、約７％～約１２％ｗ／ｖ、又は約８％～約１１％ｗ／ｖの安定化剤を含む、請求項２３～２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項31】

約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１１％ｗ／ｖ、約１２％ｗ／ｖ、約１３％ｗ／ｖ、約１４％ｗ／ｖ、又は約１５％ｗ／ｖの安定化剤を含む、請求項２３～２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項32】

液体担体をさらに含む、請求項２３～３１のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項33】

液体担体が滅菌水、生理食塩水、２分の１生理食塩水、５％ブドウ糖水溶液（Ｄ５Ｗ）、乳酸リンゲル液、又はこれらの組合せである、請求項３１に記載の医薬組成物。

【請求項34】

液体担体が滅菌水である、請求項３２又は請求項３３に記載の医薬組成物。

【請求項35】

約１．０ｍｇ／ｍＬ～約５．０ｍｇ／ｍＬの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む、請求項２３～３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項36】

約１ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約３．５ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約４．５ｍｇ／ｍＬ、又は約５ｍｇ／ｍＬの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む、請求項２３～３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項37】

約０．１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ、約０．１～約１．２ｍｇ／ｋｇ、又は約０．５～約７ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む、請求項２３～３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項38】

約１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、又は約７ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む、請求項２３～３４のいずれかに記載の医薬組成物。

【請求項39】

約０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、又は３ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む、請求項２３～３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項40】

１）式（ＩＩ）：

【化3】

（式中、
Ｘ^１は－Ｂｒであり、
ｎは９０～１４０であり、
ｘは６０～１５０であり、
ｙは０～３であり、
ｚは０～３である）
の構造を有する、少なくとも約３ｍｇ／ｍＬのブロックコポリマー又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物、及び
２）水中約１０ｗ／ｖ％のトレハロース
を含む、医薬組成物。

【請求項41】

経口、筋肉内、皮下、腫瘍内、又は静脈内投与用に製剤化されている、請求項１～１０及び２３～４０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項42】

静脈内投与用に製剤化されている、請求項１～１０及び２３～４０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項43】

細胞内又は細胞外環境のｐＨを画像化する方法であって、
ａ）細胞内又は細胞外環境を、請求項１～１０のいずれか一項に記載のブロックコポリマー又は請求項２３～４１のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させるステップ、及び
ｂ）前記細胞内又は細胞外環境からの１種以上の光シグナルを検出するステップであって、検出された光シグナルは、式（ＩＩ）の１種以上のブロックコポリマーを含むミセルがそのｐＨ遷移点に到達し、分離したことを示す、ステップ
を含む、方法。

【請求項44】

細胞外環境が血管内又は血管外である、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

細胞内又は細胞外環境のｐＨの画像化が転移性疾患の画像化を含む、請求項４３に記載の方法。

【請求項46】

細胞内又は細胞外環境のｐＨの画像化が腫瘍環境のｐＨの画像化を含む、請求項４３に記載の方法。

【請求項47】

腫瘍環境のｐＨの画像化がリンパ節又は複数のリンパ節の画像化を含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

リンパ節又は複数のリンパ節の画像化が、腫瘍の外科的摘除又は腫瘍転移のステージングの情報を提供する、請求項４６に記載の方法。

【請求項49】

腫瘍環境のｐＨの画像化が、腫瘍サイズの決定を可能にする、請求項４６に記載の方法。

【請求項50】

腫瘍環境のｐＨの画像化が、腫瘍の縁の決定を可能にする、請求項４６に記載の方法。

【請求項51】

腫瘍環境のｐＨの画像化が、手術中の腫瘍のより正確な除去を可能にする、請求項４６に記載の方法。

【請求項52】

腫瘍環境のｐＨの画像化が、衛星腫瘍、多病巣性腫瘍、又は潜在性腫瘍の決定を可能にする、請求項４６に記載の方法。

【請求項53】

腫瘍環境のｐＨの画像化が、残留する転移性疾患の検出を可能にする、請求項４６に記載の方法。

【請求項54】

リンパ節又は節の画像化が、手術中のリンパ節又は複数のリンパ節のより正確な除去を可能にする、請求項４６に記載の方法。

【請求項55】

手術前に、必要とする患者に医薬組成物を投与するステップを含む、請求項４３～５４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

手術が腫瘍摘除である、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

腫瘍環境のｐＨの画像化が患者管理の情報を提供する、請求項４６に記載の方法。

【請求項58】

腫瘍の摘除を必要とする患者において腫瘍を摘除する方法であって、
ａ）請求項１～１０のいずれか一項に記載のブロックコポリマー又は請求項２３～４１のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効用量が投与された患者から得た腫瘍又はその試料から、１種以上の光シグナルを検出するステップであって、検出した光シグナルが腫瘍の存在を示す、ステップ、及び
ｂ）手術を介して前記腫瘍を摘除するステップ
を含む、方法。

【請求項59】

１種以上の光シグナルが蛍光シグナルである、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

腫瘍が少なくとも９０％摘除される、請求項５８に記載の方法。

【請求項61】

腫瘍が少なくとも９５％摘除される、請求項５８に記載の方法。

【請求項62】

腫瘍が少なくとも９９％摘除される、請求項５８に記載の方法。

【請求項63】

腫瘍が固形腫瘍である、請求項５８～６２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項64】

腫瘍が非固形腫瘍である、請求項５８～６２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

固形又は非固形腫瘍ががん由来である、請求項６３又は請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

がんが、乳がん、頭頸部扁平上皮癌（ＮＨＳＣＣ）、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、尿道がん、食道がん、脳がん、膵臓がん、皮膚がん、黒色腫、肉腫、胸膜転移、腎臓がん、リンパ節がん、子宮頸がん、又は直腸結腸がんである、請求項６５に記載の方法。

【請求項67】

がんが、乳がん、頭頸部扁平上皮癌（ＮＨＳＣＣ）、食道がん、卵巣がん、前立腺がん、又は直腸結腸がんである、請求項６５に記載の方法。

【請求項68】

医薬組成物が注射又は点滴として投与される、請求項５８～６７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項69】

医薬組成物が単回用量又は複数回用量として投与される、請求項５８～６８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項70】

医薬組成物が、手術の、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも４時間、少なくとも６時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１４時間、少なくとも１６時間、少なくとも１８時間、少なくとも２０時間、少なくとも２４時間、少なくとも２８時間、少なくとも３２時間、少なくとも８０時間、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも７日、少なくとも１週間、又は少なくとも２週間前に投与される、請求項５８～６９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項71】

医薬組成物が、手術の、約１時間～約３２時間、約２時間～約３２時間、１６時間～約３２時間、約２０時間～約２８時間、約１時間～約５時間、又は約３時間～約９時間前に投与される、請求項５８～６９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項72】

がんを治療する方法であって、
ａ）請求項１～１０のいずれか一項に記載のブロックコポリマー又は請求項２３～４１のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効用量が投与された、がんの治療を必要とするがん患者において、１種以上の光シグナルを検出するステップであって、検出された光シグナルががん性腫瘍の存在を示す、ステップ、及び
ｂ）前記がん性腫瘍を除去し、これによって前記がんを治療するステップ。
を含む、方法。

【請求項73】

がん患者の体腔を画像化するステップ、又はがん性腫瘍若しくはそのスライス若しくは試料（例えば新鮮な又はホルマリン固定）を画像化するステップをさらに含み、任意選択的に、患者からの除去後、バックテーブルでの蛍光誘導画像化によってなされる、請求項７２に記載の方法。

【請求項74】

がん性腫瘍を検出する方法であって、
ａ）請求項１～１０のいずれか一項に記載のブロックコポリマー又は請求項２３～４１のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効用量が投与された、がん性腫瘍の検出を必要とするがん患者において、１種以上の光シグナルを検出するステップであって、検出した光シグナルが前記がん性腫瘍の存在を示す、ステップ
を含む、方法。

【請求項75】

少なくとも５年間、がんの再発を最小限に抑える方法であって、
ａ）請求項１～１０のいずれか一項に記載のブロックコポリマー又は請求項２３～４１のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効用量が投与された、がんの再発を最小限に抑える必要のあるがん患者において、１種以上の光シグナルを検出するステップであって、検出した光シグナルががん性腫瘍の存在を示し、前記腫瘍の存在が前記がんの再発を示す、ステップ、及び
ｂ）前記１種以上の光シグナルが検出された場合、前記がんを治療治療して、前記再発を最小限に抑えるステップ
を含む方法。

【請求項76】

腫瘍を摘除することをさらに含む、請求項７５に記載の方法。

【請求項77】

がんが、乳がん、頭頸部扁平上皮癌（ＮＨＳＣＣ）、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、尿道がん、食道がん、脳がん、膵臓がん、皮膚がん、黒色腫、肉腫、胸膜転移、腎臓がん、リンパ節がん、子宮頸がん、又は直腸結腸がんである、請求項７２～７６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項78】

がんが、乳がん、頭頸部扁平上皮癌（ＮＨＳＣＣ）、食道がん、卵巣がん、前立腺がん、又は直腸結腸がんである、請求項７２～７６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項79】

医薬組成物が、患者の画像化の、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも４時間、少なくとも６時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１４時間、少なくとも１６時間、少なくとも１８時間、少なくとも２０時間、少なくとも２４時間、少なくとも２８時間、少なくとも３２時間、少なくとも８０時間、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも１週間、又は少なくとも２週間前に投与される、請求項７２～７８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項80】

医薬組成物が、患者の画像化の、約１時間～約３２時間、約２時間～約３２時間、１６時間～約３２時間、約２０時間～約２８時間、約１時間～約５時間、又は約３時間～約９時間前に投与される、請求項７２～７８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項81】

医薬組成物が注射又は点滴として投与される、請求項７２～８０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項82】

医薬組成物が単回用量又は複数回用量として投与される、請求項７２～８１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項83】

術中カメラ、近赤外線カメラ、又は内視鏡カメラを含む、がん患者の画像化をさらに含む、請求項７２～８２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項84】

必要とする患者がヒト患者である、請求項５８～８３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項85】

必要とする患者が、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ウサギ、又はブタの患者である、請求項５８～８４のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照
本出願は、その全体を参照により本明細書に組み込む、２０１９年１１月１８日に出願した米国仮出願第６２／９３７，１４１号の利益を主張する。

【0002】

連邦政府資金による研究に関する記述
本発明は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）によりＣＡ２１７５２８の下で授与された政府の支援を用いて作られた。政府は本発明においてある特定の権利を有する。

【背景技術】

【0003】

がんと診断された新規がん症例はおよそ１７０万件と予想され、２０１９年には、およそ６１万人のアメリカ人ががんで死亡すると予想されている。有効な造影剤が原発性及び転移性腫瘍組織の検出に必要とされる。

【0004】

すべてのステージの固形がんに対する治療ガイドラインは、原発性腫瘍、並びにリスクのある又は関与するリンパ節の外科的除去を顕著に含む。これら腫瘍の種類の間には生物学的及び解剖学的な差異があるにもかかわらず、術後の縁の状態は、局所的腫瘍制御の最も重要な予後因子の１つであり、したがって疾患の再発又は腫瘍転移が生じる機会である。

【0005】

固形腫瘍の外科的切除は、腫瘍学的有効性と、正常組織の摘除、よって機能的病的状態の最小化との間のバランス並びに美容術である。これはまた、診断用及び治療上の目的のために、多くの場合、原発性がんの除去と同時に実施されるリンパ節切除にも当てはまる。リンパ節転移の存在又は不在は、消化管がん、乳がん、及び多くの他の固形がんに対して生存の最も重要な決定因子である。ステージング用に使用される健康診断又は画像化様式は、拡大した又は異常な節を成功裏に検出し、外科治療プランの助けとなるが、高いパーセンテージの患者については、リンパ節転移は現行の方法で検出するには小さすぎるレベルで存在し、これがステージングの過小診断をもたらしている。潜在性リンパ節転移は一般的であるため、選択的局部的結節解離及び組織学的検査は、特に局所的に進行している場合、多くの固形がんに対する標準治療である。これは、治療に関係した病的状態が生じる有意な可能性と共に過剰な治療をもたらす。

【0006】

光学的画像化戦略は、細胞画像化、自然の自己蛍光及びラマン散乱に基づき、術中に組織を画像化するように急速に適合されている。光学的画像化は手術中のリアルタイムフィードバックに対する可能性を提供し、手術野の幅広い視野を提供する様々なカメラシステムが容易に入手可能である。発がん遺伝子型及び組織学的表現型の多様性により、手術中に遭遇する複雑性を克服する１つの戦略は、がんの至る所に存在する代謝脆弱性を標的とすることである。がん細胞がグルコースを優先的に取り込み、これを乳酸に変換するワールブルグ効果として公知の好気性解糖は、すべての固形がんに生じ、このような標的の１つに相当する。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

ある場合には、本明細書で提示された組成物は、固形がんに対する共通のバイオマーカーとしてｐＨを利用し、その場合、細胞により取り込まれた後、がん組織と正常組織との間の遍在的なｐＨの差異が高感度で特異的な蛍光応答を提供し、よって、腫瘍組織、腫瘍の縁、並びにリンパ節及び腹膜転移を含む転移性腫瘍の検出を可能にする。

【0008】

ある場合には、本明細書に記載される化合物は、原発性及び転移性腫瘍組織（リンパ節を含む）の検出に有用な造影剤である。手術中のリアルタイム蛍光画像化は、陰性の縁及び完全な腫瘍摘除を達成することをゴールとして、外科医が腫瘍組織対正常組織の線引きをすること、並びに転移性リンパ節を検出することを援助する。手術結果の改善から得られる臨床上の利益として、例えば、腫瘍再発及び再手術率の減少、不必要な手術の回避、機能の保存、美容術、及び患者治療プランの情報提供が挙げられる。

【0009】

ある特定の実施形態では、式（ＩＩ）：

【0010】

【化1】

（式中、ｎ＝９０～１４０であり、ｘは５０～２００であり、ｙは０～３であり、ｚは０～３であり、Ｘ^１はハロゲン、－ＯＨ、又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨである）
のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物が本明細書で提供される。

【0011】

一部の実施形態では、Ｘ^１はハロゲンである。一部の実施形態では、Ｘ^１は－Ｂｒである。一部の実施形態では、ｎは１００～１２０である。一部の実施形態では、ｎは１１３である。一部の実施形態では、ｘは６０～１５０である。一部の実施形態では、ｙは０．５～１．５である。一部の実施形態では、ｙは０である。一部の実施形態では、ｚは１．５～２．５である。一部の実施形態では、ｚは０である。

【0012】

ある特定の実施形態では、式（ＩＩ）の１種以上のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を含むミセルが本明細書に提供される。

【0013】

ある特定の実施形態では、ｐＨ遷移点及び発光スペクトルを含むｐＨ応答性組成物が本明細書に提供される。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は４．８～５．５の間である。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は約４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、又は５．５である。一部の実施形態では、発光スペクトルは７００～９００ｎｍの間である。一部の実施形態では、組成物は１ｐＨ単位未満のｐＨ遷移域（ΔｐＨ_{１０－９０％}）を有する。一部の実施形態では、ｐＨ遷移域は０．２５ｐＨ単位未満である。一部の実施形態では、ｐＨ遷移域は０．１５ｐＨ単位未満である。一部の実施形態では、組成物は２５より大きい蛍光活性化比を有する。一部の実施形態では、組成物は５０より大きい蛍光活性化比を有する。

【0014】

ある特定の実施形態では、式（ＩＩ）の構造を有する１種以上のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を含む造影剤が本明細書に提供される。一部の実施形態では、造影剤はポリ（エチレンオキシド）－ｂ－ポリ（ジブチルアミノエチルメタクリレート－ｒ－アミノエチルメチルアクリレート塩酸塩）コポリマーインドシアニングリーン及び酢酸コンジュゲートを含む。

【0015】

ある特定の実施形態では、ミセルを含む医薬組成物であって、ミセルが、１）式（ＩＩ）：

【0016】

【化2】

（式中、ｎは９０～１４０であり、ｘは５０～２００であり、ｙは０～３であり、ｚは０～３であり、Ｘ^１はハロゲン、－ＯＨ、又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨである）
の構造を有する１種以上のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物、及び２）安定化剤を含む、医薬組成物が本明細書に提供される。

【0017】

一部の実施形態では、安定化剤は凍結防止剤である。一部の実施形態では、安定化剤は糖、糖誘導体、界面活性剤又は塩である。一部の実施形態では、安定化剤は単糖、二糖、三糖、水溶性多糖、若しくは糖アルコール、又はこれらの組合せである。一部の実施形態では、安定化剤はフルクトース、ガラクトース、グルコース、ラクトース、スクロース、トレハロース、マルトース、マンニトール、ソルビトール、リボース、デキストリン、シクロデキストリン、マルトデキストリン、ラフィノース、若しくはキシロース、又はこれらの組合せである。一部の実施形態では、安定化剤はトレハロースである。

【0018】

一部の実施形態では、医薬組成物は、約０．５％～約２５％ｗ／ｖ、約１％～約２０％ｗ／ｖ、約５％～約１５％ｗ／ｖ、約６％～約１３％ｗ／ｖ、約７％～約１２％ｗ／ｖ、又は約８％～約１１％ｗ／ｖの安定化剤を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１１％ｗ／ｖ、約１２％ｗ／ｖ、約１３％ｗ／ｖ、約１４％ｗ／ｖ、又は約１５％ｗ／ｖの安定化剤を含む。

【0019】

一部の実施形態では、医薬組成物は液体又は水性担体をさらに含む。一部の実施形態では、液体担体は、滅菌水、生理食塩水、Ｄ５Ｗ、又は乳酸リンゲル液から選択される。

【0020】

一部の実施形態では、医薬組成物は、約１．０ｍｇ／ｍＬ～約５．０ｍｇ／ｍＬの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ又は約０．１～約１．２ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、又は約７ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、組成物は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、又は３ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。

【0021】

別の態様では、約３ｍｇ／ｍＬの式（ＩＩ）：

【0022】

【化3】

（式中、ｎは９０～１４０であり、ｘは６０～１５０であり、ｙは０～３であり、ｚは０～３であり、Ｘ^１はＢｒである）
の構造を有するブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物、及び水中約１０％ｗ／ｖトレハロースを含む医薬組成物が本明細書に提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、経口、筋肉内、皮下、腫瘍内、又は静脈内投与用に製剤化される。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、静脈内（Ｉ．Ｖ．）投与用に製剤化される。

【0023】

別の態様では、細胞内又は細胞外環境のｐＨを画像化する方法であって、（ａ）本開示の医薬組成物を環境と接触させるステップ、及び（ｂ）環境から１種以上の光シグナルを検出するステップであって、検出した光シグナルは、ミセルがそのｐＨ遷移点に到達し、分離したことを示す、ステップを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態では、光シグナルは蛍光シグナルである。一部の実施形態では、細胞内環境は画像化され、細胞は、ｐＨ応答性組成物の取り込みを引き起こすのに適切な条件下で、ｐＨ応答性組成物と接触させられる。一部の実施形態では、細胞内環境は細胞の一部である。一部の実施形態では、細胞外環境は腫瘍又は血管系細胞の環境である。一部の実施形態では、細胞外環境は血管内又は血管外である。一部の実施形態では、腫瘍は固形腫瘍である。一部の実施形態では、腫瘍はがん性のものであり、がんは、乳房、結腸直腸、膀胱、食道、頭頸部（ＨＮＳＳＣ）、肺、脳、前立腺、卵巣、又は皮膚（黒色腫及び肉腫を含む）のがんである。

【0024】

別の態様では、患者において腫瘍を摘除する方法であって、（ａ）本明細書に記載される医薬組成物の有効用量が投与された患者から得た腫瘍又はその試料から、１種以上の光シグナルを検出するステップであって、検出した光シグナルが腫瘍の存在を示す、ステップ、及び（ｂ）手術を介して前記腫瘍を摘除するステップを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態では、光シグナルは腫瘍の縁を示す。一部の実施形態では、腫瘍は少なくとも９０％、９５％、又は９９％摘除される。一部の実施形態では、がんは、乳がん、頭頸部扁平上皮癌（ＮＨＳＣＣ）、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、尿道がん、食道がん、脳がん、膵臓がん、皮膚がん、黒色腫、肉腫、胸膜転移、腎臓がん、リンパ節がん、子宮頸がん、又は直腸結腸がんである。一部の実施形態では、がんは、乳がん、頭頸部扁平上皮癌（ＮＨＳＣＣ）、食道がん、直腸結腸がん、卵巣がん、又は前立腺がんである。

【0025】

一部の実施形態では、本明細書で開示されている医薬組成物は手術前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は腫瘍又はリンパ節を画像化する前に投与される。一部の実施形態では、本明細書で開示されている医薬組成物は臨床成績についての患者管理前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、手術の、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも４時間、少なくとも６時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１４時間、少なくとも１６時間、少なくとも１８時間、少なくとも２０時間、少なくとも２４時間、少なくとも２８時間、少なくとも３２時間、少なくとも８０時間、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週間、又は少なくとも２週間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、手術の、約１時間～約３２時間、約２時間～約３２時間、１６時間～約３２時間、約２０時間～約２８時間、約１時間～約５時間、又は約３時間～約９時間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は注射又は点滴として投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は単回用量又は複数回用量として投与される。

【0026】

別の態様では、がんを治療する方法であって、（ａ）本明細書に記載される医薬組成物の有効用量が投与されたそれを必要とするがん患者において、１種以上の光シグナルを検出するステップであって、検出した光シグナルががん性腫瘍の存在を示す、ステップを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態では、本方法はがん患者の体腔を画像化するステップ、又はがん性腫瘍若しくはそのスライス若しくは試料（例えば、新鮮又はホルマリン固定された）を画像化するステップをさらに含み、任意選択的にこれは、患者からの除去後、バックテーブルの蛍光誘導画像化によってなされる。

【0027】

別の態様では、少なくとも５年間がんの再発を最小限に抑える方法であって、（ａ）本明細書で開示されている医薬組成物の有効用量が投与されたそれを必要とするがん患者において、１種以上の光シグナルを検出するステップであって、検出した光シグナルががん性腫瘍の存在を示し、腫瘍の存在ががんの再発を示す、ステップ、及び（ｂ）１種以上の光シグナルが検出された場合、がんを治療して、再発を最小限に抑えるステップを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態では、本方法は腫瘍を摘除することをさらに含む。一部の実施形態では、がんは、乳がん、頭頸部扁平上皮癌（ＮＨＳＣＣ）、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、尿道がん、食道がん、直腸結腸がん、脳がん、又は皮膚がんである。一部の実施形態では、がんは、乳がん、頭頸部扁平上皮癌（ＮＨＳＣＣ）、食道がん、胸膜転移、腎臓がん、リンパ節がん、子宮頸がん、膵臓がん、又は直腸結腸がんである。一部の実施形態では、医薬組成物は患者を画像化する少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも４時間、少なくとも６時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１４時間、少なくとも１６時間、少なくとも１８時間、少なくとも２０時間、少なくとも２４時間、少なくとも２８時間、少なくとも３２時間、少なくとも８０時間、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週間、又は少なくとも２週間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、患者を画像化する約１時間～約３２時間、約２時間～約３２時間、１６時間～約３２時間、約２０時間～約２８時間、約１時間～約５時間、又は約３時間～約９時間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は注射又は点滴として投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は単回用量又は複数回用量として投与される。一部の実施形態では、がん患者の画像化をさらに含む本方法は、術中カメラ又は内視鏡カメラを含む。一部の実施形態では、必要とする患者はヒト患者である。一部の実施形態では、必要とする患者はイヌ、ネコ、雌ウシ、ウマ、ブタ、又はウサギの患者である。

【0028】

本明細書に記載されるブロックコポリマー、方法及び組成物の他の目的、特徴及び利点は、以下の詳細な説明から明らかとなる。しかし、詳細な説明及び具体例は、特定の実施形態を示すものであり、これらは例示のみとして付与されており、本発明の開示の趣旨及び範囲内で様々な変更及び修正がこの詳細な説明から当業者に明らかとなることを理解されたい。

【0029】

参照による組込み
それぞれ個々の刊行物、特許、又は特許出願を参照により組み込むことが具体的及び個々に示されているかのように、本明細書に記述されているすべての刊行物、特許、及び特許出願を参照により本明細書に組み込む。

【0030】

本開示の様々な態様は、添付の特許請求の範囲において特殊性と共に記載される。本開示の原理が利用されている例示的実施形態を記載している以下の詳細な説明及び以下の添付の図を参照すれば、本開示の特徴及び利点のより良い理解が得られる。

【図面の簡単な説明】

【0031】

【図1A】０．１、０．３、０．５、０．８、又は１．２ｍｇ／ｋｇの化合物１を含む医薬組成物の単回静脈内投与後の第１ａ相の平均血漿濃度対時間を示す。平均血漿濃度（ＬＯＧ）対時間を示す。

【図1B】０．１、０．３、０．５、０．８、又は１．２ｍｇ／ｋｇの化合物１を含む医薬組成物の単回静脈内投与後の第１ａ相の平均血漿濃度対時間を示す。直線的平均血漿濃度対時間を示す。

【図2】化合物１に対する、１０分（Ｃ_１０ｍ）での医薬組成物の平均血漿濃度及び用量との間の相関関係を開示する。

【図3】化合物１に対する、平均ＡＵＣ_{０～２４ｈｒ}及び用量との間の相関関係を開示する。

【図4A】１．２ｍｇ／ｋｇの化合物１を含む医薬組成物の単回静脈内投与後の第１ｂ相の対象（患者）の血漿濃度対時間を示す。患者の血漿濃度（Ｌｏｇ）対時間に対する平均血漿濃度の用量を示す。

【図4B】１．２ｍｇ／ｋｇの化合物１を含む医薬組成物の単回静脈内投与後の第１ｂ相の対象（患者）の血漿濃度対時間を示す。患者の血漿濃度（直線）対時間を示す。

【図5A】０．１、０．３、０．５、０．８、又は１．２ｍｇ／ｋｇの化合物１を含む医薬組成物の単回静脈内投与後の第１ａ相及び第１ｂ相の平均血漿濃度対時間を示す。用量ごとの、第１ａ相及び第１ｂ相の平均血漿濃度（Ｌｏｇ）対時間を示す。

【図5B】０．１、０．３、０．５、０．８、又は１．２ｍｇ／ｋｇの化合物１を含む医薬組成物の単回静脈内投与後の第１ａ相及び第１ｂ相の平均血漿濃度対時間を示す。用量ごとの、第１ａ相及び第１ｂ相の平均血漿濃度（直線）対時間を示す。

【図6】第１ａ相及び第１ｂ相の１０分の時点での化合物１の（±ＳＤ）平均血漿濃度対用量を示す。

【図7】第１ａ相及び第１ｂ相の平均（±ＳＤ）ＡＵＣ_{０～２４ｈｒ}対用量を示す。

【図8A】腫瘍の種類による化合物１の平均血漿濃度を示す。腫瘍の種類による第１ａ相（１．２ｍｇ／ｋｇ）及び第１ｂ相の平均血漿濃度（Ｌｏｇ）対時間を示す。

【図8B】腫瘍の種類による化合物１の平均血漿濃度を示す。腫瘍の種類による第１ａ相（１．２ｍｇ／ｋｇ）及び第１ｂ相の平均血漿濃度（直線）対時間を示す。

【図8C】腫瘍の種類による化合物１の平均血漿濃度を示す。乳がんにおける第１ａ相（１．２ｍｇ／ｋｇ）及び第１ｂ相の患者の血漿濃度（Ｌｏｇ）対時間を示す。

【図8D】腫瘍の種類による化合物１の平均血漿濃度を示す。直腸結腸がん腫瘍における第１ａ相（１．２ｍｇ／ｋｇ）及び第１ｂ相の患者の血漿濃度（Ｌｏｇ）対時間を示す。

【図8E】腫瘍の種類による化合物１の平均血漿濃度を示す。食道がん腫瘍における第１ａ相（１．２ｍｇ／ｋｇ）及び第１ｂ相の患者の血漿濃度（Ｌｏｇ）対時間を示す。

【図8F】腫瘍の種類による化合物１の平均血漿濃度を示す。頭頸部（ＨＮＳＣＣ）腫瘍における第１ａ相（１．２ｍｇ／ｋｇ）及び第１ｂ相の個々の血漿濃度（Ｌｏｇ）対時間を示す。

【図8G】腫瘍の種類による化合物１の平均血漿濃度を示す。乳がん腫瘍における第１ａ相（１．２ｍｇ／ｋｇ）及び第１ｂ相の患者の血漿濃度（直線）対時間を示す。

【図8H】腫瘍の種類による化合物１の平均血漿濃度を示す。直腸結腸がん腫瘍における第１ａ相（１．２ｍｇ／ｋｇ）及び第１ｂ相の患者の血漿濃度（直線）対時間を示す。

【図8I】腫瘍の種類による化合物１の平均血漿濃度を示す。食道がん腫瘍における第１ａ相（１．２ｍｇ／ｋｇ）及び第１ｂ相の患者の血漿濃度（直線）対時間を示す。

【図8J】腫瘍の種類による化合物１の平均血漿濃度を示す。ＨＮＳＣＣ腫瘍における第１ａ相（１．２ｍｇ／ｋｇ）及び第１ｂ相の患者の血漿濃度（直線）対時間を示す。

【図9A】０．５ｍｇ／ｋｇの化合物１を投薬した３人の患者からの、ＮＯＶＡＤＡＱ ＳＰＹ Ｅｌｉｔｅカメラを使用して画像化した術中画像を示す。左列は白色光画像を示し、右列は蛍光画像を示す。

【図9B】１．２ｍｇ／ｋｇの化合物１を投薬した３人の患者からの、ＮＯＶＡＤＡＱ ＳＰＹ Ｅｌｉｔｅカメラを使用して画像化した術中画像を示す。左列は白色光画像を示し、右列は蛍光画像を示す。

【図10A】ＬＩ－ＣＯＲ Ｐｅａｒｌカメラを使用して、０．５ｍｇ／ｋｇの化合物１を投薬した３人の患者の術後試料を撮った画像を示す。

【図10B】ＬＩ－ＣＯＲ Ｐｅａｒｌカメラを使用して、１．２ｍｇ／ｋｇの化合物１を投薬した３人の患者の術後試料を撮った画像を示す。

【図11A】コントラスト対ノイズ（ＣＮＲ）の蛍光強度コントラスト比を示す。

【図11B】腫瘍対バックグランド（ＴＢＲ）の蛍光強度コントラスト比を示す。

【図12A】試料（ホルマリン固定（ＦＦ）又は新鮮）の組織像を確認した腫瘍及び正常組織の術後平均蛍光強度対用量を示す。

【図12B】試料（ホルマリン固定（ＦＦ）又は新鮮）の組織像を確認した腫瘍及び正常組織の術後平均蛍光強度対初期血漿濃度を示す。

【図13A】５つの用量レベルでの１５人のすべての患者に対して病理学者が選択したブレッドローフスライス（ホルマリン固定（ＦＦ）又は新鮮）の、組織像を確認した腫瘍領域及び正常領域から得た術後平均蛍光強度を使用して計算したＣＮＲ蛍光比を示す。

【図13B】５つの用量レベルでの１５人のすべての患者に対して病理学者が選択したブレッドローフスライス（ホルマリン固定（ＦＦ）又は新鮮）の、組織像を確認した腫瘍領域及び正常領域から得た術後平均蛍光強度を使用して計算したＴＢＲ蛍光比を示す。

【図14】試験設計を示す。化合物１の静脈内投与を手術の２４時間（±８時間）前に実施した。１０日間の安全性評価（試験室、ＰＫ、ＥＣＧ）がその後続き、有害事象を１７日目までモニターした（ａ）。手術中、術中画像を手術腔の切開前及び切除後に得た（ｂ）。切除の直後、試料は陽性の手術の縁の存在に対して画像化した（ｃ）。すべての標準的な病理検査プロセシングフェーズの間に、蛍光画像を得て（ｄ、ｅ）、Ｈ／Ｅスライスを標準的組織病理検査スライスと相関させた（ｆ～ｈ）。ＥＣＧ 心電図、Ｈ／Ｅ ヘマトキシリンエオシン、ＳＯＣ 標準治療。

【図15-1】異なる腫瘍組織スライスの蛍光画像を示す。舌の頭頸部扁平上皮細胞がん（ａ～ｆ）；乳がん（ｇ～ｌ）；食道がん（ｍ～ｒ）；直腸結腸がん（ｓ～ｘ）。腫瘍はＨ／Ｅスライスにおいて黒の実線で線引きされている（ｃ、ｉ、ｏ、ｕ）。腫瘍の種類ごとの腫瘍組織及び非腫瘍組織スライスの平均蛍光強度（ＭＦＩ）が示されている（ｙ）。ドットは１．２ｍｇ／ｋｇコホートからの単一組織スライス（対象１人当たり約３枚の薄片）のＭＦＩを表す。ＨＮＳＣＣ、７人の対象、Ｐ＜０．０００１；ＢＣ、５人の対象、Ｐ＝０．０００１；ＥＣ、３人の対象、Ｐ＝０．００１０；及びウィルコックステスト、両側性。ＣＲＣ、３人の対象。入手可能なデータ点が３つのみであったため、統計は実施されなかった。

【図15-2】異なる腫瘍組織スライスの蛍光画像を示す。舌の頭頸部扁平上皮細胞がん（ａ～ｆ）；乳がん（ｇ～ｌ）；食道がん（ｍ～ｒ）；直腸結腸がん（ｓ～ｘ）。腫瘍はＨ／Ｅスライスにおいて黒の実線で線引きされている（ｃ、ｉ、ｏ、ｕ）。腫瘍の種類ごとの腫瘍組織及び非腫瘍組織スライスの平均蛍光強度（ＭＦＩ）が示されている（ｙ）。ドットは１．２ｍｇ／ｋｇコホートからの単一組織スライス（対象１人当たり約３枚の薄片）のＭＦＩを表す。ＨＮＳＣＣ、７人の対象、Ｐ＜０．０００１；ＢＣ、５人の対象、Ｐ＝０．０００１；ＥＣ、３人の対象、Ｐ＝０．００１０；及びウィルコックステスト、両側性。ＣＲＣ、３人の対象。入手可能なデータ点が３つのみであったため、統計は実施されなかった。

【図15-3】異なる腫瘍組織スライスの蛍光画像を示す。舌の頭頸部扁平上皮細胞がん（ａ～ｆ）；乳がん（ｇ～ｌ）；食道がん（ｍ～ｒ）；直腸結腸がん（ｓ～ｘ）。腫瘍はＨ／Ｅスライスにおいて黒の実線で線引きされている（ｃ、ｉ、ｏ、ｕ）。腫瘍の種類ごとの腫瘍組織及び非腫瘍組織スライスの平均蛍光強度（ＭＦＩ）が示されている（ｙ）。ドットは１．２ｍｇ／ｋｇコホートからの単一組織スライス（対象１人当たり約３枚の薄片）のＭＦＩを表す。ＨＮＳＣＣ、７人の対象、Ｐ＜０．０００１；ＢＣ、５人の対象、Ｐ＝０．０００１；ＥＣ、３人の対象、Ｐ＝０．００１０；及びウィルコックステスト、両側性。ＣＲＣ、３人の対象。入手可能なデータ点が３つのみであったため、統計は実施されなかった。

【図16】異なる腫瘍の種類における術後組織試料を用いた化合物１の蛍光結果を示す。画像は、陰性手術の縁を有する対象からの舌の頭頸部扁平上皮癌の代表的な例を示している。腫瘍内の蛍光のインビボ及びエクスビボでの可視化（ａ、ｃ、ｇ、ｉ）を示し、手術腔内、又は外科的摘除箇所には蛍光シグナルは存在しない（ｂ、ｈ、ｄ、ｊ）。組織スライス上の蛍光シグナルと、腫瘍陰性の手術の縁６．４ｍｍを有する組織像（ｅ、ｋ、ｆ）との相関関係を示す。腫瘍陽性の手術の縁を有する乳がん手術（すなわち腫瘍摘出手術）の代表的な例（ｌ、ｍ、ｎ、ｏ）を示す。蛍光はインビボと、切除直後の両方の腹部の手術の縁で検出され（ｒ、ｓ、ｔ、ｕ）、これは組織スライス上の蛍光局在化（ｐ、ｖ）及び最終組織病理検査（ｑ）に対応している。腫瘍は、Ｈ／Ｅスライス上に黒の実線として線引きされている（ｆ、ｑ）。Ｈ／Ｅ ヘマトキシリンエオシン、ＳＯＣ 標準治療。

【図17-1】ＨＮＳＣＣ及びＢＣに対する臨床関連画像を示す。（ａ～ｃ）は術中に検出された腹膜転移（ＰＭ）を示す。（ｄ～ｆ）は、下顎の頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）摘除後に、手術腔内で検出された追加の腫瘍病変を示す。（ｇ～ｉ）は唾液腺組織からの偽陽性蛍光病変を示す。（ｊ～ｏ）は、原発性腫瘍病変の追加の衛星転移が２人のＢＣ対象において検出され、最終組織病理学的検査において確認されたことを示す。（ｐ～ｒ）は、手術前及び手術中には検出されなかったトリプルネガティブ乳がんを示す、ＢＣ対象からの新鮮な組織スライスに追加の原発性腫瘍病変が検出されたことを示す。（ｃ、ｆ、ｌ、ｏ、ｒ）は、腫瘍がＨ／Ｅスライドにおいて黒の実線として線引きされていることを示す。（ｉ）は、偽陽性が生存腫瘍組織を含有しなかったことを示す。

【図17-2】ＨＮＳＣＣ及びＢＣに対する臨床関連画像を示す。（ａ～ｃ）は術中に検出された腹膜転移（ＰＭ）を示す。（ｄ～ｆ）は、下顎の頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）摘除後に、手術腔内で検出された追加の腫瘍病変を示す。（ｇ～ｉ）は唾液腺組織からの偽陽性蛍光病変を示す。（ｊ～ｏ）は、原発性腫瘍病変の追加の衛星転移が２人のＢＣ対象において検出され、最終組織病理学的検査において確認されたことを示す。（ｐ～ｒ）は、手術前及び手術中には検出されなかったトリプルネガティブ乳がんを示す、ＢＣ対象からの新鮮な組織スライスに追加の原発性腫瘍病変が検出されたことを示す。（ｃ、ｆ、ｌ、ｏ、ｒ）は、腫瘍がＨ／Ｅスライドにおいて黒の実線として線引きされていることを示す。（ｉ）は、偽陽性が生存腫瘍組織を含有しなかったことを示す。

【図18A】化合物１の腫瘍特異的な活性化を確認するための蛍光顕微鏡法について記載している。切除直後に新たに凍結したＨＮＳＣＣ試料の組織切片上に化合物１をスプレーした後、エクスビボで実施した蛍光顕微鏡法を示す。ＤＡＰＩを核染色用に（ａ）及び蛍光可視化用（ｂ）に化合物１に塗布した。腫瘍と間質組織との間の蛍光のシャープな線引きが観察され（ｃ）、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した対応する組織病理学的組織切片（ｄ）と相関した。

【図18B】化合物１の腫瘍特異的な活性化を確認するための蛍光顕微鏡法について記載している。ヒト血漿における化合物１のｐＨ依存性活性化を示す。増加する量の化合物１をヒト血漿に加えても、いかなる蛍光の増加は示さなかった。プロトンを血漿に供給するために、ＨＣｌを用いて試験を繰り返した場合、増加する量のインタクトな化合物１を加えると蛍光が増加した。これはアシドーシスが化合物１を活性化させ、よって蛍光を用量依存性方式で活性化させることを示唆している。ＲＦＵ：相対蛍光単位。

【図19A】蛍光手術の縁の評価を最終組織病理学結果と相関させる。蛍光誘導手術中の手術の縁の術中評価は、バックテーブルでの手術腔の術中蛍光画像化又は切除した試料の蛍光画像化のいずれかにより行うことができる。最終組織病理学は、乳がん対象（ａ）及び頭頸部扁平上皮癌対象（ｂ）の蛍光画像と相関する。

【図19B】蛍光手術の縁の評価を最終組織病理学結果と相関させる。蛍光誘導手術中の手術の縁の術中評価は、バックテーブルでの手術腔の術中蛍光画像化又は切除した試料の蛍光画像化のいずれかにより行うことができる。最終組織病理学は、乳がん対象（ａ）及び頭頸部扁平上皮癌対象（ｂ）の蛍光画像と相関する。

【図20A】腫瘍組織と非腫瘍組織との間での用量非依存的平均蛍光強度の分離について記載している。１ｋｇ当たり０．１ｍｇのコホートから得た腫瘍及び非腫瘍組織の平均蛍光強度（ＭＦＩ）、Ｐ＝０．０００５、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ試験、両側性。ドットは単一組織スライスのＭＦＩを表す。

【図20B】腫瘍組織と非腫瘍組織との間での用量非依存的平均蛍光強度の分離について記載している。１ｋｇ当たり０．３ｍｇのコホートから得た腫瘍及び非腫瘍組織の平均蛍光強度（ＭＦＩ）、Ｐ＝０．００７８、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ試験、両側性。ドットは単一組織スライスのＭＦＩを表す。

【図20C】腫瘍組織と非腫瘍組織との間での用量非依存的平均蛍光強度の分離について記載している。１ｋｇ当たり０．５ｍｇのコホートから得た腫瘍及び非腫瘍組織の平均蛍光強度（ＭＦＩ）、Ｐ＝０．００２０、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ試験、両側性。ドットは単一組織スライスのＭＦＩを表す。

【図20D】腫瘍組織と非腫瘍組織との間での用量非依存的平均蛍光強度の分離について記載している。１ｋｇ当たり０．８ｍｇのコホートから得た腫瘍及び非腫瘍組織の平均蛍光強度（ＭＦＩ）、Ｐ＝０．００７８、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ試験、両側性。ドットは単一組織スライスのＭＦＩを表す。

【図20E】腫瘍組織と非腫瘍組織との間での用量非依存的平均蛍光強度の分離について記載している。１ｋｇ当たり１．２ｍｇのコホートから得た腫瘍及び非腫瘍組織の平均蛍光強度（ＭＦＩ）、Ｐ＜０．０００１、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ試験、両側性。ドットは単一組織スライスのＭＦＩを表す。

【図20F】レシーバーオペレーター特徴曲線は、１ｋｇ当たり１．２ｍｇの用量コホートから得た腫瘍及び正常組織のＭＦＩ計算値に基づく、Ｐ＜０．０００１；曲線下面積０．９８７５、ｎ＝５９、ウィルソン／ブラウン方法を使用した信頼区間９５％。ＲＯＣレシーバーオペレーター曲線、ＡＵＣ曲線下面積。＊＊Ｐ≦０．０１；＊＊＊Ｐ≦０．００１；＊＊＊＊Ｐ≦０．０００１。

【図21】化合物１の蛍光を使用したインビボ画像化を示す。化合物１蛍光を使用した、インビボ画像化データの代表的な例である。中心部の壊死性潰瘍を有する大きな舌癌を、化合物１を使用してインビボで視覚化した（ａ）。右下顎／口腔底に位置するがんを、化合物１を使用してインビボで視覚化した（ｂ）。中心部に壊死性潰瘍を有する大きな舌癌を、化合物１を使用して視覚化した（ｃ）。大規模な腹膜転移を有する結腸直腸癌を、化合物１を使用してインビボで視覚化した（ｄ）。

【図22】乳がん及びＨＮＳＣＣ腫瘍の、化合物１の投薬から３～９時間及び１～５時間後の蛍光画像化を示す。画像はＳＰＹ Ｅｌｉｔｅ及びＶｉｓｉｏｎＳｅｎｓｅカメラを用いて示されている。

【図23】最新版ソフトウエア及びハードウエアを用いたＤａ Ｖｉｎｃｉ Ｆｉｒｅｆｌｙカメラを使用して、薄い前立腺カプセル剤を介して前立腺がんにおいて化合物１が術中に蛍光を発したことを実証している。病理検査を介して確認した陰性の縁と一致して、手術による創傷床にはいかなる蛍光も検出されなかった。

【図24】ＶｉｓｉｏｎＳｅｎｓｅカメラを使用して、卵巣がん（子宮膣部で再発）における化合物１蛍光を実証している。３ｍｇ／ｋｇの化合物１の投薬から６±３時間後、切除前のインビボ画像化を実施した。

【図25】病理検査で確認した腫瘍領域に対応するブレッドローフスライド（ＢＬＳ）組織試料上の化合物１の蛍光を示す。

【図26】３～５時間の投薬スケジュールタイミングを用いて、ＳＰＹ Ｅｌｉｔｅカメラを使用して、すべての可視ＢＣ及びＨＮＳＣＣ腫瘍において化合物１の蛍光が検証されたことを示す。

【図27】イヌの患者から摘除した肥満細胞腫瘍を示す。化合物１の投与後、イヌ患者から摘除した肥満細胞腫瘍の代表的な白色光（左）及び蛍光画像（右）である。

【図28A】軟部組織肉腫からの代表的な画像を示す。肥満細胞腫瘍の白色光画像は（Ａ）において明らかである。

【図28B】軟部組織肉腫からの代表的な画像を示す。切除前に特注の上記ＮＩＲカメラを使用して、術中簡単に観察することもできる（Ｂ）。

【図28C】軟部組織肉腫からの代表的な画像を示す。組織の縁と共に摘除した腫瘍の白色光写真が示されている（Ｃ）。

【図28D】軟部組織肉腫からの代表的な画像を示す。ＬＩ－ＣＯＲ Ｐｅａｒｌで画像化した摘除した腫瘍の対応する蛍光画像は、白色光画像と重ねると、蛍光が白色光解剖学的構造と共局在化していることを示す（Ｄ）。摘除した組織の悪性腫瘍を組織病理検査により確認した。

【図29A】骨肉腫を有するイヌ患者からの代表的な画像を示す。切断した脚の病変の白色光写真を示す；緑色及び黒色の点線は正常組織及びがん組織の場所の断面をそれぞれ示す。

【図29B】骨肉腫を有するイヌ患者からの代表的な画像を示す。Ｈａｍａｍａｔｓｕ ＰＤＥ ＮＩＲカメラを使用して撮ったＮＩＲ腫瘍画像を示す。

【図29C】骨肉腫を有するイヌ患者からの代表的な画像を示す。（Ａ）に記載されるように、正常組織（左、小さな方）及びがん組織（右、大きな方）の断面の白色光写真を示す。

【図29D】骨肉腫を有するイヌ患者からの代表的な画像を示す。（Ｃ）に示されている、同じ正常組織（非蛍光）及びがん組織（蛍光組織）の断面のＮＩＲ画像を示す。

【図30】軟部組織肉腫を有するイヌ患者からの代表的な画像を示す。縁を有する、切除した軟部組織肉腫の白色光画像が左側の図に示されており、腫瘍組織の蛍光画像（白色光と重ねた）が右側の図に示されている。組織病理検査で、摘除した組織の悪性腫瘍が確認された。

【図31】原発性軟組織耳介肉腫を有するイヌ患者からの画像を示す。軟組織耳介肉腫の白色光画像が上段左及び下段左パネルに示されている。Ｈａｍａｍａｔｓｕ ＰＤＥを使用して、切断術後に撮った耳のＮＩＲ画像は、皮膚を介して蛍光を発する腫瘍を示す（下段中央のパネル）。耳はまた、コア針生検（それぞれ下段右及び挿入画像）を実施した後、ＬＩ－ＣＯＲシステムを使用して画像化し、残存する蛍光を示している。パンチ生検の組織病理学分析は組織の悪性腫瘍を確認した。

【図32】原発性軟部組織肉腫及び末端腫瘍に罹患したリンパ節を有するイヌ患者からの画像を示す。上段左パネルの白色光画像は原発性軟部組織肉腫を示す。この塊の外科的除去の間、膝窩リンパ節は拡大していることが認められ（上段右端パネル）、これを除去し、ＬＩ－ＣＯＲを使用して画像化した（真ん中のパネル）。蛍光画像は切断されたリンパ節が罹患していることを示し、これは組織病理検査により実証された。

【発明を実施するための形態】

【0032】

本明細書に提供されている一部の実施形態は、ミセルベースの、蛍光造影剤について記載している。一部の実施形態では、ミセルは、２－アミノエチルメタクリレート塩酸塩モノマー上のＮＨＳ化学反応を介してインドシアニングリーン（ＩＣＧ）に共有結合によりコンジュゲートしている、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びジブチルアミノ（ｄｉｂｕｔｈｙｌａｍｉｎｏ）置換ポリメタクリル酸メチル（ＰＭＭＡ）のジブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、ＰＥＧは、安定したミセルのシェル又は表面を含む。一部の実施形態では、ミセルのサイズは＜１００ｎｍである。

【0033】

Ｉ．化合物
一部の実施形態では、式（ＩＩ）：

【0034】

【化4】

（式中、
Ｘ^１はハロゲン、－ＯＨ、又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨであり、
ｎは９０～１４０であり、
ｘは５０～２００であり、
ｙは０～３であり、
ｚは０～３である）
の構造を有するブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物が本明細書に提供されている。

【0035】

一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは化合物である。一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマーはジブロックコポリマーである。一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは、親水性ポリマーセグメント及び疎水性ポリマーセグメントを含むブロックコポリマーである。

【0036】

親水性ポリマーセグメントはポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）を含む。一部の実施形態では、親水性ポリマーセグメントは約２ｋＤａ～約１０ｋＤａのサイズである。一部の実施形態では、親水性ポリマーセグメントは約２ｋＤａ～約５ｋＤａのサイズである。一部の実施形態では、親水性ポリマーセグメントは約３ｋＤａ～約８ｋＤａのサイズである。一部の実施形態では、親水性ポリマーセグメントは約４ｋＤａ～約６ｋＤａのサイズである。一部の実施形態では、親水性ポリマーセグメントは約５ｋＤａのサイズである。

【0037】

一部の実施形態では、ブロックコポリマーは疎水性ポリマーセグメントを含む。一部の実施形態では、疎水性ポリマーセグメントは第三級アミンを含む。一部の実施形態では、疎水性ポリマーセグメントは、

【0038】

【化5】

（式中、ｘは全部で約５０～２００である）
を含む。一部の実施形態では、ｘは約６０～１５０である。一部の実施形態では、ｘは約６０～約１５０の間の整数である。一部の実施形態では、親水性セグメントはジブチルアミンを含む。

【0039】

一部の実施形態では、ｎ回繰り返すポリエチレンオキシド繰返し単位が存在する。一部の実施形態では、ｎは９０～１４０である。一部の実施形態では、ｎは９５～１３０である。一部の実施形態では、ｎは１００～１２０である。一部の実施形態では、ｎは１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、又は１２０である。一部の実施形態では、ｎは１１４である。一部の実施形態では、ｎは１１３である。

【0040】

一部の実施形態では、ｙは０～３である。一部の実施形態では、ｙは０．５～２．５である。一部の実施形態では、ｙは１．５～２．５である。一部の実施形態では、ｙは０．５～１．５である。一部の実施形態では、ｙは０．５、１、１．５、２、２．５、又は３である。一部の実施形態では、ｙは１、２、又は３である。一部の実施形態では、ｙは０．５である。一部の実施形態では、ｙは１．５である。一部の実施形態では、ｙは０である。

【0041】

一部の実施形態では、ｚは０～３である。一部の実施形態では、ｚは１．５～２．５である。一部の実施形態では、ｚは１、１．５、２、２．５、又は３である。一部の実施形態では、ｚは１、２、又は３である。一部の実施形態では、ｚは１．５である。一部の実施形態では、ｚは０である。

【0042】

一部の実施形態では、コポリマーブロック単位（ｘ、ｙ、及びｚ）は、任意の並び又は立体配置で生じ得る。一部の実施形態では、ｘ、ｙ、及びｚは、式（ＩＩ）に記載されるように逐次的に生じる。

【0043】

ある特定の実施形態では、ブロックコポリマーはアミンを介してコンジュゲートした蛍光色素を含む。一部の実施形態では、蛍光色素はｐＨ非感受性染料である。一部の実施形態では、蛍光色素はシアニン染料又はその誘導体である。一部の実施形態では、蛍光色素はインドシアニングリーン（ＩＣＧ）である。インドシアニングリーン（ＩＣＧ）は医学的診断法に使用されている。

【0044】

一部の実施形態では、ブロックコポリマーは蛍光色素又はその誘導体にコンジュゲートしていない。一部の実施形態では、ブロックコポリマーはインドシアニングリーン（ＩＣＧ）にコンジュゲートしていない。

【0045】

一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）－ｂ－ポリ（ジブチルアミノエチルメタクリレート－ｒ－アミノエチルメチルアクリレート塩酸塩）コポリマーインドシアニングリーン及び酢酸コンジュゲートである。一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは、ＰＥＯ_{９０～１４０}－ｂ－Ｐ（ＤＢＡ_{６０～１５０}－ｒ－ＩＣＧ_０～３－ｒ－ＡＭＡ_０～３）、（化合物１）である。

【0046】

一部の実施形態では、Ｘ^１は末端基である。一部の実施形態では、末端封止基は原子移動ラジカル重合（ＡＴＲＰ）反応の生成物である。一部の実施形態では、Ｘ^１はハロゲンである。一部の実施形態では、Ｘ^１はＢｒである。一部の実施形態では、Ｘ^１は－ＯＨである。一部の実施形態では、Ｘ^１は酸である。一部の実施形態では、Ｘ^１は－Ｃ（Ｏ）ＯＨである。一部の実施形態では、Ｘ^１はＨである。

【0047】

「ｒ」という用語は、異なるブロックコポリマー単位／セグメント（例えば、ｘ、ｙ、及びｚで表される）の間の接続を表す。一部の実施形態では、各ｒは独立して、単位／セグメントの炭素原子、又はアルキル基－（ＣＨ_２）_ｎ－（式中、ｎは１～１０である）を結合している結合である。一部の実施形態では、コポリマーブロックセグメント／単位（例えば、ｘ、ｙ、及びｚで表される）は、任意の順序、並び、又は立体配置で生じ得る。一部の実施形態では、コポリマーブロック単位は、式（ＩＩ）に記載されるように逐次的に生じる。

【0048】

一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは、式（ＩＩ－ａ）：

【0049】

【化6】

の構造、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を有する。

【0050】

一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは、ミセル又はナノ粒子の形態である。ミセルのサイズは通常ナノメートル規模である（すなわち、直径約１ｎｍ～１μｍの間）。一部の実施形態では、ミセルは約１０～約２００ｎｍのサイズを有する。一部の実施形態では、ミセルは約２０～約１００ｎｍのサイズを有する。一部の実施形態では、ミセルは約３０～約５０ｎｍのサイズを有する。一部の実施形態では、ミセルは直径約１μｍ未満を有する。一部の実施形態では、ミセルは直径約１００ｎｍ未満を有する。一部の実施形態では、ミセルは直径約５０ｎｍ未満を有する。

【0051】

別の態様では、式（ＩＩ）の１種以上のブロックコポリマーを含むｐＨ応答性組成物が本明細書に提供されている。

【0052】

一部の実施形態では、ｐＨ応答性組成物はｐＨ遷移点及び発光スペクトルを有する。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は、４～８の間又は６～７．５の間である。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は４．８～５．５の間である。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は約４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、又は５．５である。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は４．８である。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は４．９である。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は５．０である。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は５．１である。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は５．２である。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は５．３である。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は５．４である。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は５．５である。

【0053】

一部の実施形態では、ｐＨ応答性の組成物は７００～９００ｎｍ間の発光スペクトルを有する。一部の実施形態では、ｐＨ応答性組成物は７５０～８００ｎｍの間の発光スペクトルを有する。一部の実施形態では、ｐＨ応答性組成物は７５０～８５０ｎｍの間の発光スペクトルを有する。

【0054】

一部の実施形態では、ｐＨ応答性組成物はｐＨ遷移域（ΔｐＨ_{１０～９０％}）を有する。一部の実施形態では、ｐＨ応答性組成物は１ｐＨ単位未満のｐＨ遷移域を有する。一部の実施形態では、ｐＨ応答性組成物は０．２５ｐＨ単位未満のｐＨ遷移域を有する。一部の実施形態では、ｐＨ応答性組成物は０．１５ｐＨ単位未満のｐＨ遷移域を有する。

【0055】

一部の実施形態では、組成物は蛍光活性化比を有する。蛍光活性化比とは、ｐＨ＜ｐＨ_ｔ（製剤のｐＨ転移）を有する緩衝液中製剤から得た正規化された蛍光強度の、ｐＨ＞ｐＨ_ｔを有する緩衝液中製剤から得た正規化された蛍光強度に対する比と定義される。一部の実施形態では、蛍光活性化比は２５より大きい。一部の実施形態では、蛍光活性化比は５０より大きい。

【0056】

ＩＩ．医薬組成物
本明細書で開示されている医薬組成物は、ブロックコポリマー及び蛍光色素インドシアニングリーンを含む１種以上のｐＨ応答性ミセル及び／又はナノ粒子を含む。ブロックコポリマーは、親水性ポリマーセグメント及び疎水性ポリマーセグメントを含み、疎水性ポリマーセグメントはｐＨ感度を付与するイオン化できるアミン基を含む。このｐＨ感度を利用して、画像化に対する診断ツールとして適切な医薬組成物を提供する（例えば、腫瘍摘除及びステージングを援助する）。

【0057】

一態様では、ミセルを含む医薬組成物が本明細書に提供され、ミセルは、
１）式（ＩＩ）：

【0058】

【化7】

（式中、
Ｘ^１はハロゲン、－ＯＨ、又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨであり、
ｎは９０～１４０であり、
ｘは５０～２００であり、
ｙは０～３であり、
ｚは０～３である）
の構造を有する１種以上のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物、及び
２）安定化剤を含む。

【0059】

一部の実施形態では、医薬組成物はミセルを含み、ミセルは、式（ＩＩ）の構造を有する１種以上のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を含む。一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物は、ミセルベースの蛍光造影剤である。一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）－ｂ－ポリ（ジブチルアミノエチルメタクリレート－ｒ－アミノエチルメチルアクリレート塩酸塩）コポリマーインドシアニングリーン及び酢酸コンジュゲートである。一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは、ＰＥＯ_{９０－１４０}－ｂ－Ｐ（ＤＢＡ_{６０－１５０}－ｒ－ＩＣＧ_０－３－ｒ－ＡＭＡ_０－３）、（化合物１）である。一部の実施形態では、ブロックコポリマーは、ミセル又はナノ粒子を形成することが可能なコポリマーである。

【0060】

一部の実施形態では、医薬組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬの式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約３．５ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約４．５ｍｇ／ｍＬ、又は約５ｍｇ／ｍＬの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。

【0061】

一部の実施形態では、医薬組成物は、約３．０ｍｇ／ｍＬの式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を含む。

【0062】

一部の実施形態では、医薬組成物は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約７ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約０．１～約１．２ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を含む。

【0063】

一部の実施形態では、医薬組成物は、は、約０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、又は７ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、又は３ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、又は１．２ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約０．１ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約０．３ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約０．５ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約０．８ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約１ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約１．２ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約１．４ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約１．６ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約１．８ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約２ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約２．５ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約３ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約３．５ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約４ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約５ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約６ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は約７ｍｇ／ｋｇの式（ＩＩ）のブロックコポリマーを含む。

【0064】

本明細書で開示されている医薬組成物の一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物は実質的に純粋である。本明細書で開示されている医薬組成物の一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物は不純物を実質的に含まない。本明細書で開示されている医薬組成物の一部の実施形態では、不純物を実質的に含まないとは、約１０％、約５％、約３％、約１％、約０．５％、約０．１％、又は約０．０５％未満の不純物含有量と定義される。本明細書で開示されている医薬組成物の一部の実施形態では、不純物を実質的に含まないとは、約１％未満の不純物含有量と定義される。本明細書で開示されている医薬組成物の一部の実施形態では、不純物を実質的に含まないとは、約０．５％未満の不純物含有量と定義される。本明細書で開示されている医薬組成物の一部の実施形態では、不純物を実質的に含まないとは、約０．１％未満の不純物含有量と定義される。

【0065】

本明細書で開示されている医薬組成物の一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物、は少なくとも約９０％、約９５％、約９８％、又は約９９％純粋である。

【0066】

本明細書で開示されている医薬組成物の一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物は、少なくとも約９９．１％、約９９．２％、約９９．３％、約９９．４％、約９９．５％、約９９．６％、約９９．７％、約９９．８％、約９９．９％、又は約１００％純粋である。

【0067】

「安定化剤」という用語は、生物活性のある材料に加えた場合、材料が安定化剤の不在下で貯蔵された場合と比較して、時間の経過による材料の生物学的活性の損失を防止又は遅延させる薬剤を意味することが意図される。これら添加剤の一部は、周辺温度で本質的に脱水した形態で貯蔵された場合、生物活性のある材料の貯蔵寿命を、数カ月又はそれよりも長く延長させることが判明した。さらに、凍結防止添加剤及び薬剤の変化形は、賦形剤として使用することによって、生物学的材料が乾燥又は凍結された場合、生物学的活性を助け、これを保存する。保護的物質は、水溶性糖類、例えば、単糖、二糖、三糖、水溶性多糖、糖アルコール、ポリオール、又はこれらの混合物である。単糖、二糖及び三糖の例として、これらに限定されないが、グルコース、マンノース、グリセルアルデヒド、キシロース、リキソース、タロース、ソルボース、リブロース、キシルロース、ガラクトース、フルクトース、スクロース、トレハロース、ラクトース、マルトース、及びラフィノースが挙げられる。中でも水溶性多糖として、ある特定の水溶性デンプン及びセルロースが挙げられる。糖アルコールの例はグリセロールである。安定化剤として機能する他の物質として、例えば、アミノ酸、例えば、アルギニン、及びタンパク質、例えば、アルブミンが挙げられる。

【0068】

一部の実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は凍結保護剤又は安定化剤である。一部の実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は安定化剤である。一部の実施形態では、安定化剤は糖、糖誘導体、界面活性剤、及び塩である。

【0069】

一部の実施形態では、安定化剤は、単糖、二糖、三糖、水溶性多糖、糖アルコール、若しくはポリオール、又はこれらの組合せである。一部の実施形態では、安定化剤は、フルクトース、ガラクトース、グルコース、ラクトース、スクロース、トレハロース、マルトース、マンニトール、ソルビトール、リボース、デキストリン、シクロデキストリン、マルトデキストリン、ラフィノース、若しくはキシロース、又はこれらの組合せである。一部の実施形態では、安定化剤はトレハロースである。一部の実施形態では、安定化剤はトレハロース二水和物（ｄｉｈｙｄｒｉｄｅ）である。

【0070】

一部の実施形態では、医薬組成物は、約０．５％ｗ／ｖ～約２５％ｗ／ｖ、約１％～約２０％ｗ／ｖ、約５％～約１５％ｗ／ｖ、約６％～約１３％ｗ／ｖ、約７％～約１２％ｗ／ｖ、又は約８％～約１１％ｗ／ｖの安定化剤を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約７％～約１２％ｗ／ｖの安定化剤を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約８％～約１１％ｗ／ｖの安定化剤を含む。

【0071】

一部の実施形態では、医薬組成物は、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、約１０％ｗ／ｖ、約１１％ｗ／ｖ、約１２％ｗ／ｖ、約１３％ｗ／ｖ、約１４％ｗ／ｖ、又は約１５％ｗ／ｖの安定化剤を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約９％ｗ／ｖの安定化剤を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約１０％ｗ／ｖの安定化剤を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約１１％ｗ／ｖの安定化剤を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約１２％ｗ／ｖの安定化剤を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約１３％ｗ／ｖの安定化剤を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約１４％ｗ／ｖの安定化剤を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、約１５％ｗ／ｖの安定化剤を含む。

【0072】

一部の実施形態では、医薬組成物は液体担体をさらに含む。一部の実施形態では、液体担体は水溶液である。一部の実施形態では、液体担体は、滅菌水、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、生理食塩水、２分の１生理食塩水、ブドウ糖（例えば、水性ブドウ糖；例えば、５％ブドウ糖水溶液、Ｄ５Ｗ）、若しくは乳酸リンゲル液（ＲＬ）又はこれらの中での組合せ（例えば、５０％ブドウ糖と５０％生理食塩水）から選択される。一部の実施形態では、液体担体は滅菌水から選択される。

【0073】

一部の実施形態では、医薬組成物は、式（ＩＩ）の構造：

【0074】

【化8】

（式中、
Ｘ^１はＢｒであり、
ｎは９０～１４０であり、
ｘは６０～１５０であり、
ｙは０～３であり、
ｚは０～３である）
を有する、少なくとも約３ｍｇ／ｍＬのブロックコポリマー又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物、及び
水中約１０％ｗ／ｖトレハロースを含む。

【0075】

本開示の医薬組成物は、意図した方法又は投与経路と適合するよう製剤化することができる。例示的な投与経路は本明細書に記載される。

【0076】

一部の実施形態では、本明細書で開示されている医薬組成物は、経口、静脈内（Ｉ．Ｖ．）、筋肉内、皮下、腫瘍内、又は皮内投与による投薬又は投与用の形態である。一部の実施形態では、医薬組成物は、経口、筋肉内、皮下、又は静脈内投与用に製剤化される。一部の実施形態では、医薬組成物は腫瘍内投与用に製剤化される。一部の実施形態では、医薬組成物は静脈内投与用に製剤化される。一部の実施形態では、医薬組成物は、静脈内（Ｉ．Ｖ．）投与用の水溶液又は懸濁液として製剤化される。一部の実施形態では、医薬組成物は単回用量として投与するために製剤化される。一部の実施形態では、医薬組成物は、複数回用量として投与するために製剤化される。一部の実施形態では、本明細書で開示されている医薬組成物は、Ｉ．Ｖによるボーラスとして投与するために製剤化される。

【0077】

形態がＩ．Ｖ．剤形である医薬組成物の一部の実施形態では、ｐＨは約３．５～約８．５である。一部の実施形態では、Ｉ．Ｖ．用量のｐＨは、約３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、又は８．５である。

【0078】

水性懸濁剤は、活性物質をその製造に対して適切な賦形剤と混合して含有する。このような賦形剤は、懸濁化剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシ－プロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニル－ピロリドン、トラガカントガム及びアラビアガム；分散剤又は湿潤剤、例えば、天然由来のホスファチド（例えば、レシチン）、又は酸化アルキレンの脂肪酸との縮合物（例えば、ポリオキシ－エチレンステアリン酸塩）、又は酸化エチレンの長鎖脂肪族アルコールとの縮合物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、又は酸化エチレンの脂肪酸及びヘキシトール由来の部分エステルとの縮合物（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）、又は酸化エチレンの脂肪酸及びヘキシトール無水物由来の部分エステルとの縮合物（例えば、ポリエチレンモノオレイン酸ソルビタン）であることができる。水性懸濁剤はまた１種以上の保存剤を含有することもできる。

【0079】

油性懸濁液は、活性成分を植物油、例えば、落花生油、オリーブ油、ゴマ油又はヤシ油、又は鉱油、例えば、流動パラフィン中に懸濁化することにより製剤化することができる。油性懸濁液は、増粘剤、例えば蜜ろう、固形パラフィン又はセチルアルコールを含有することができる。甘味剤、例えば、上に記載されるもの、及び香味剤を加えて、口当たりの良い経口調製物を得ることができる。

【0080】

水の添加による水性懸濁剤の調製に対して適切な分散性粉末及び顆粒は、分散剤又は湿潤剤、及び任意選択的に１種以上の懸濁化剤及び／又は保存剤と混合して、活性成分を提供する。適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤は本明細書で例示されている。

【0081】

本発明の医薬組成物はまた水中油型乳剤の形態であってもよい。油相は、植物油、例えば、オリーブ油又は落花生油、若しくは鉱油、例えば、流動パラフィン、又はこれらの混合物であってよい。適切な乳化剤は、自然発生のガム、例えば、アラビアゴム又はトラガカントガム；自然発生ホスファチド、例えば、ダイズマメ、レシチン、及び脂肪酸由来のエステル又は部分エステル；ヘキシトール無水物、例えば、モノオレイン酸ソルビタン；及び部分エステルの酸化エチレンとの縮合物、例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンであってよい。

【0082】

医薬組成物は通常、式（ＩＩ）のブロックコポリマー又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくは水和物、及び１種以上の薬学的に及び生理学的に許容される製剤薬剤の治療有効量を含む。適切な薬学的に許容される又は生理学的に許容される希釈剤、担体又は賦形剤として、これらに限定されないが、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸及び硫酸水素ナトリウム）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、メチルパラベン、エチル又はｎ－プロピル、ｐ－ヒドロキシベンゾエート）、乳化剤、懸濁化剤、分散剤、溶媒、充填剤、増量剤、界面活性剤、緩衝液、ビヒクル、希釈剤、及び／又はアジュバントが挙げられる。例えば、適切なビヒクルは、生理的食塩水溶液又はクエン酸塩－緩衝生理食塩水であり、おそらく非経口投与用の医薬組成物中に一般的に存在する他の材料が補充されていてもよい。血清アルブミンと混合した中性緩衝化生理食塩水又は生理食塩水はさらに例示的なビヒクルである。当業者であれば、医薬組成物及び剤形において使用することができる様々な緩衝液が本明細書で想定されることを容易に認識している。典型的な緩衝液として、これらに限定されないが、薬学的に許容される弱酸、弱塩基、又はこれらの混合物が挙げられる。例として、緩衝液の構成成分は、水溶性材料、例えば、リン酸、酒石酸、乳酸、コハク酸、クエン酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、及びこれらの塩であることができる。許容される緩衝剤として、例えば、トリス緩衝液；Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（２－エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）；２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）；２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）；３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）；及びＮ－トリス［ヒドロキシメチル］メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）が挙げられる。

【0083】

医薬組成物が製剤化された後、これを、滅菌バイアル中に、溶液、懸濁剤、ゲル剤、乳剤、固形、又は脱水した又は凍結乾燥した粉末として貯蔵することができる。このような製剤は、すぐに使える形態、使用前に再構成が必要な凍結乾燥形態、使用前に希釈が必要な液体形態、又は他の許容される形態で貯蔵することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、単回使用の容器（例えば、単回使用のバイアル、アンプル、シリンジ、又は自動注射器に入れて提供されるが、その一方で、他の実施形態では複数回使用容器（例えば、複数回使用バイアル）が提供される。

【0084】

製剤はまた、急速な分解又は身体からの排除から組成物を保護する担体、例えば、リポソーム、ヒドロゲル、プロドラッグ及びマイクロカプセル化送達システムを含む、制御放出性製剤を含むことができる。例えば、時間遅延材料例えば、モノステアリン酸グリセリル又はステアリン酸グリセリルを単独で、又はワックスと組み合わせて利用することもできる。式（ＩＩ）のブロックコポリマー、又は薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくはその水和物を送達するために、任意の薬物送達装置を使用することができ、この薬物送達装置には、インプラント（例えば、埋め込み型ポンプ）及びカテーテルシステム、低速注射ポンプ及びデバイスが含まれ、これらすべては当業者には周知である。

【0085】

医薬組成物は、滅菌の注射用水性又は油性懸濁液の形態であってもよい。この懸濁液は、本明細書中に記述されているような適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を使用して、公知の技術により製剤化することができる。滅菌注射用調製物はまた、無毒性非経口的に許容される希釈剤又は溶媒中の注射可能な滅菌溶液又は懸濁液、例えば、１，３－ブタンジオール中溶液であってもよい。利用することができる、許容される希釈剤、溶媒及び分散媒として、水、リンゲル液、等張性塩化ナトリウム溶液、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、Ｄ５Ｗ、及び適切なこれらの混合物が挙げられる。加えて、滅菌の不揮発性油が溶媒又は懸濁媒として慣例的に利用されている；この目的のために、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む、任意の無刺激性不揮発性油を利用することができる。さらに、脂肪酸、例えば、オレイン酸は、注射用調製物における使用が見出されている。特定の注射用製剤の長期にわたる吸収は、吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウム又はゼラチン）を含めることにより達成することができる。

【0086】

ＩＩＩ．使用の方法
一部の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物はｐＨ応答性組成物に使用される。一部の実施形態では、ｐＨ応答性組成物は、細胞内又は細胞外ｐＨ（例えば、がん性腫瘍の酸性ｐＨ）の変化に関与する生理学的及び／又は病理過程を画像化するために使用される。一部の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物ミセルは、原発性及び転移性腫瘍組織（腹膜転移及びリンパ節を含む）の検出に対して有用であり、腫瘍の再発及び再手術率の減少をもたらす。一部の実施形態では、ｐＨ感受性造影剤は、バックグランドの蛍光応答比に対する高い腫瘍コントラスト（ＣＮＲ及びＴＢＲ）により、周辺正常組織から腫瘍を検出することができる。

【0087】

がん細胞がグルコースを優先的に取り込み、これを乳酸又は他の酸に変換するワールブルグ効果として公知の好気性解糖は、すべての固形がんに生じる。乳酸又は他の酸はモノカルボキシレートトランスポーター又は他のトランスポーターにより細胞外空間に優先的に蓄積される。結果として生じる細胞外空間の酸性化は、さらなる腫瘍侵入及び転移のために細胞外マトリクスのリモデリングを促進する。

【0088】

手術中のリアルタイム蛍光画像化は、陰性の縁及び完全な腫瘍摘除を達成するという目的で及びステージングを援助するために、外科医が例えば罹患したリンパ節から腫瘍対正常組織又は転移性疾患を検出する又は線引きするのを助ける。これら改善された手術結果は、有意な臨床上の利益、例えば、腫瘍再発及び再手術率の減少、不必要な手術の回避、機能の保存及び美容術へと繋がる。

【0089】

がん手術の別の主要目的は、治療の決定のための病理学的ステージングを補助することである。潜在性リンパ節転移により、リンパ節状態は、がんステージングの主要な構成要素である。手術中の単純な節のサンプリングは節の転移を過小評価するため、選択的、包括的、局部的な結節解離は頭頸部がんに対する標準治療（ＳＯＣ）となっている。直腸結腸がんに関して、例えば、２５％までの「リンパ節転移陰性の」患者がぶり返し及び転移により死亡しており、これは、残留する潜在性疾患の存在及びリンパ節転移が、特にステージＩＩ結腸直腸患者に対して予後値を増大させていることを示す。これらの患者に対して節転移を正確に検出することにより、ステージを上げること及びアジュバント治療の強化、疾患に対する療法のより良いマッチングをもたらすことができる。

【0090】

よって、腫瘍の縁、潜在性腫瘍、及び腫瘍陽性リンパ節及び他の転移性疾患の術中可視化を選択的に及び正確に改善することができる技術は、固形腫瘍を有する患者に対する外科的摘除の完全性、補助療法選択の妥当性、病理学的ステージング及び腫瘍学的結果を潜在的に改善する。

【0091】

本明細書に提供されている一部の実施形態は、生理学的ｐＨ（７．３５～７．４５）でミセルを形成するブロックコポリマーについて記載している。一部の実施形態では、本明細書に記載されるブロックコポリマーはＩＣＧ染料にコンジュゲートしている。一部の実施形態では、ミセルは２×１０^７ダルトンより大きい分子量を有する。一部の実施形態では、ミセルは約２．７×１０^７ダルトンまでの分子量を有する。一部の実施形態では、ＩＣＧ染料は、蛍光クエンチをもたらす生理学的ｐＨ（７．３５～７．４５）（例えば、血液循環中）で、ミセルコア内で隔離されている。一部の実施形態では、ミセルが酸性環境（例えば、腫瘍組織）に遭遇した場合、ミセルは平均分子量約３．７×１０^４ダルトンを有する個々の化合物へと分離し、ＩＣＧ染料からの蛍光シグナルの活性化を可能にし、酸性環境（例えば腫瘍組織）に特異的に蛍光を発生させる。一部の実施形態では、ミセルは、ｐＨ遷移点未満のｐＨ（例えば腫瘍微小環境の酸性状態）で分離する。

【0092】

一部の実施形態では、蛍光応答は、予め定義した低いｐＨでの、疎水性駆動型ミセル自己組織化（非蛍光のオフ状態）と、これらミセルの共同解離（蛍光ＯＮ状態）との間で生じるシャープな相転移により非常に強い。

【0093】

一部の実施形態では、本明細書に記載されるミセルは、ｐＨ遷移点及び発光スペクトルを有する。一部の実施形態では、ｐＨ遷移点は４～８の間又は６～７．５の間である。他の実施形態では、ｐＨ遷移点は４．８～５．５の間である。ある特定の実施形態では、ｐＨ遷移点は約４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、又は５．５である。一部の実施形態では、発光スペクトルは７００～９００ｎｍの間である。一部の実施形態では、発光スペクトルは７５０～８５０ｎｍの間である。

【0094】

ある場合には、本明細書に記載されるｐＨ感受性ミセル組成物は狭いｐＨ遷移域を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるミセルは１ｐＨ単位未満のｐＨ遷移域（ΔｐＨ_{１０～９０％}）を有する。様々な実施形態では、ミセルは、約０．９ｐＨ単位未満、約０．８ｐＨ単位未満、約０．７ｐＨ単位未満、約０．６ｐＨ単位未満、約０．５ｐＨ単位未満、約０．４ｐＨ単位未満、約０．３ｐＨ単位未満、約０．２ｐＨ単位未満、約０．１ｐＨ単位未満のｐＨ遷移域を有する。一部の実施形態では、ミセルは約０．５ｐＨ単位未満のｐＨ遷移域を有する。一部の実施形態では、ｐＨ遷移域は０．２５ｐＨ単位未満である。一部の実施形態では、ｐＨ遷移域は０．１５ｐＨ単位未満である。

【0095】

一部の実施形態では、ｐＨ感受性組成物は蛍光活性化比を有する。一部の実施形態では、蛍光活性化比は２５より大きい。一部の実施形態では、蛍光活性化比は５０より大きい。

【0096】

一部の実施形態では、細胞内環境が画像化される場合、細胞は、ミセルの取り込みを引き起こすのに適切な条件下でミセルと接触させる。一部の実施形態では、細胞内環境は細胞の一部である。一部の実施形態では、細胞の一部はリソソーム又はエンドソームである。一部の実施形態では、細胞外環境は腫瘍又は血管系細胞の環境である。一部の実施形態では、細胞外環境は血管内又は血管外である。一部の実施形態では、細胞内又は細胞外環境のｐＨの画像化は転移性疾患の画像化を含む。一部の実施形態では、転移性疾患はがんである。一部の実施形態では、腫瘍は固形がん由来のものである。一部の実施形態では、腫瘍は非固形がん由来のものである。一部の実施形態では、腫瘍環境のｐＨの画像化はリンパ節又は節の画像化を含む。一部の実施形態では、腫瘍環境のｐＨの画像化は、手術中、腫瘍サイズ又は腫瘍の縁を決定することを可能にする。

【0097】

別の態様では、細胞間又は細胞外環境のｐＨを画像化する方法であり、本方法は
（ａ）細胞内又は細胞外環境を、本明細書で開示されているブロックコポリマー又は医薬組成物と接触させるステップ、及び
（ｂ）細胞内又は細胞外環境からの１種以上の光シグナルを検出するステップであって、検出した光シグナルは、式（ＩＩ）の１種以上のブロックコポリマーを含むミセルがそのｐＨ遷移点に到達し、分離したことを示す、ステップ
を含む。

【0098】

一部の実施形態では、光シグナルは蛍光シグナルである。

【0099】

一部の実施形態では、細胞外環境は腫瘍又は血管系細胞である。一部の実施形態では、細胞外環境は血管内又は血管外である。

【0100】

一部の実施形態では、細胞内又は細胞外環境のｐＨは、腫瘍環境のｐＨの画像化を含む。一部の実施形態では、腫瘍環境のｐＨの画像化はリンパ節又は節の画像化を含む。歩哨リンパ節は、がんを流出する最初のリンパ節又は節の群であり、腫瘍からの転移性がん細胞が到達する最初の器官である。一部の実施形態では、リンパ節又は節のｐＨの画像化はリンパ節の外科的摘除の情報を提供する。一部の実施形態では，リンパ節又は節のｐＨの画像化は、がん転移のステージングの情報を提供する。一部の実施形態では、リンパ節又は節のｐＨの画像化は患者管理を可能にする。

【0101】

一部の実施形態では、腫瘍環境のｐＨの画像化は、腫瘍サイズ又は腫瘍の縁の決定を可能にする。一部の実施形態では、腫瘍環境のｐＨの画像化は腫瘍ステージングを可能にする。一部の実施形態では、腫瘍環境のｐＨの画像化は患者結果の対応を可能にする。一部の実施形態では、腫瘍環境のｐＨの画像化は、手術中の腫瘍のより正確な除去を可能にする。一部の実施形態では、腫瘍環境のｐＨの画像化は、残留する転移性疾患の検出を可能にする。一部の実施形態では、腫瘍環境のｐＨの画像化は、衛星、多病巣性、又は潜在性腫瘍の決定の情報を提供する。

【0102】

一部の実施形態では、腫瘍環境のｐＨの画像化は、潜在性疾患の検出の情報を提供する。

【0103】

一部の実施形態では、医薬組成物は、腫瘍の画像化前にそれを必要とする患者に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、手術前、ステージングのための腫瘍の画像化前に、それを必要とする患者に投与される。

【0104】

一部の実施形態では、医薬組成物は、手術前に、それを必要とする患者に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、手術後に、それを必要とする患者に投与される。一部の実施形態では、手術は腫瘍摘除である。

【0105】

別の態様では、それを必要とする患者において腫瘍を摘除する方法であって、本方法は、
（ａ）本明細書で開示されているブロックコポリマー又は医薬組成物の有効用量が投与された患者から得た腫瘍又はその試料から、１種以上の光シグナルを検出するステップであって、検出した光シグナルが腫瘍の存在を示す、ステップであって、及び
（ｂ）手術介して腫瘍を摘除するステップ
を含む。

【0106】

一部の実施形態では、光シグナルは腫瘍の縁を示す。

【0107】

一部の実施形態では、光シグナルは蛍光シグナルである。

【0108】

一部の実施形態では、腫瘍は少なくとも９０％摘除される。

【0109】

一部の実施形態では、腫瘍は少なくとも９５％摘除される。

【0110】

一部の実施形態では、腫瘍は少なくとも９９％摘除される。

【0111】

一部の実施形態では、腫瘍は、きれいな縁と共に摘除される。一部の実施形態では、きれいな縁は蛍光を発しない組織である。一部の実施形態では、蛍光を発しない組織は非がん組織である。一部の実施形態では、摘除後の腫瘍又はリンパ節の除去後の創傷床内の蛍光の欠如は腫瘍の除去を示す。

【0112】

一部の実施形態では、腫瘍は固形腫瘍である。一部の実施形態では、腫瘍はｐａｎ腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍はがん由来のものである。一部の実施形態では、がんは乳がん、頭頸部扁平上皮癌（ＮＨＳＣＣ）、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、尿道がん、食道がん、直腸結腸がん、脳がん、又は皮膚がん（黒色腫及び肉腫を含む）である。一部の実施形態では、がんは乳がん、頭頸部扁平上皮癌（ＮＨＳＣＣ）、食道がん、又は直腸結腸がんである。一部の実施形態では、がんは乳がんである。一部の実施形態では、がんは頭頸部扁平上皮癌（ＮＨＳＣＣ）である。一部の実施形態では、がんは卵巣がんである。一部の実施形態では、がんは前立腺がんである。一部の実施形態では、がんは食道がんである。一部の実施形態では、がんは直腸結腸がんである。一部の実施形態では、がんは脳がんである。一部の実施形態では、がんはＭｏｈｓ手術で治療可能な皮膚がんである。

【0113】

別の態様では、がんを治療する方法であって、本方法は、
（ａ）本明細書で開示されているブロックコポリマー又は医薬組成物の有効用量が投与された、がんの治療を必要とするがん患者において、１種以上の光シグナルを検出するステップであって、検出した光シグナルががん性腫瘍の存在を示す、ステップ、及び
（ｂ）がん性腫瘍を除去し、これによってがんを治療するステップ
を含む。

【0114】

一部の実施形態では、本方法は、がん患者の体腔を画像化するステップ、又はがん性腫瘍若しくはそのスライス若しくは試料（例えば、新鮮な又はホルマリン固定）を画像化するステップをさらに含み、任意選択的にこれは、患者からの除去後、バックテーブルでの蛍光誘導画像化によってなされる。一部の実施形態では、がんを治療する方法は、きれいな境界線を確実にするため、除去後のがん性腫瘍を画像化することをさらに含む。一部の実施形態では、きれいな境界線は、創傷床内に腫瘍がないことにより示される。一部の実施形態では、試料内又は創傷床内にいかなる蛍光も検出されなかった場合、きれいな境界線が示される。一部の実施形態では、きれいな境界線は、がん性腫瘍全体が除去されたことを示す。一部の実施形態では、きれいな境界線はすべてのがんが除去されたことを示す。

【0115】

別の態様では、少なくとも５年間がんの再発を最小限に抑える方法であって、本方法は、
（ａ）本明細書で開示されているブロックコポリマー又は医薬組成物の有効用量が投与されたそれを必要とするがん患者において、１種以上の光シグナルを検出するステップであって、検出した光シグナルががん性腫瘍の存在を示す、ステップ、及び
（ｂ）１種以上の光シグナルが検出された場合、がんを治療して再発を最小限に抑えるステップ
を含む。

【0116】

別の態様では、がん性腫瘍を検出する方法であって、本方法は、
（ａ）本明細書で開示されているブロックコポリマー又は医薬組成物の有効用量が投与された、がんの治療を必要とするがん患者において、１種以上の光シグナルを検出するステップであって、腫瘍の存在ががんの再発を示す、ステップ、及び
（ｂ）がんの再発を治療するステップ
を含む。

【0117】

一部の実施形態では、腫瘍はがん由来のものである。一部の実施形態では、がんは、乳がん、頭頸部扁平上皮癌（ＮＨＳＣＣ）、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、膀胱がん、尿道がん、食道がん、直腸結腸がん、脳、皮膚（黒色腫及び肉腫を含む）である。一部の実施形態では、がんは乳がん、頭頸部扁平上皮癌（ＮＨＳＣＣ）、食道がん、又は直腸結腸がんである。一部の実施形態では、がんは卵巣がんである。一部の実施形態では、がんは前立腺がんである。

【0118】

一部の実施形態では、本方法は、術中カメラ又は内視鏡カメラを用いて腫瘍を画像化することをさらに含む。一部の実施形態では、術中カメラは近赤外線（ＮＩＲ）カメラである。本明細書で開示されている方法の一部の実施形態では、術中カメラ又は内視鏡カメラは、インドシアニングリーンと適合性のあるカメラである。

【0119】

投薬
一部の実施形態では、医薬組成物はそれを必要とする患者に投与される。一部の実施形態では、それを必要とする患者は哺乳動物である。一部の実施形態では、それを必要とする患者はヒトである。一部の実施形態では、哺乳動物はヒトではない。一部の実施形態では、哺乳動物はイヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ウサギ、又はウマである。一部の実施形態では、哺乳動物はイヌ又はネコである。一部の実施形態では、哺乳動物はネコである。一部の実施形態では、哺乳動物はウマである。一部の実施形態では、哺乳動物は雌ウシである。一部の実施形態では、哺乳動物はブタである。一部の実施形態では、哺乳動物はウサギである。一部の実施形態では、哺乳動物はイヌである。

【0120】

本開示の式（ＩＩ）のブロックコポリマー又はその水和物、溶媒和物、互変異性体、若しくは薬学的に許容される塩は、対象への投与に対して適切な組成物の形態であってよい。一般的に、このような組成物は、式（ＩＩ）のブロックコポリマー又はその水和物、溶媒和物、互変異性体、若しくは薬学的に許容される塩及び１種以上の薬学的に許容される又は生理学的に許容される希釈剤、担体又は賦形剤を含む「医薬組成物」である。ある特定の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマー又はその水和物、溶媒和物、互変異性体、若しくは薬学的に許容される塩は、治療上許容される量で存在する。医薬組成物は本発明の方法で使用することができる。よって、例えば、医薬組成物は、本明細書に記載される治療的及び予防的方法及び使用を実行するために、エクスビボ又はインビボで対象に投与することができる。

【0121】

一部の実施形態では、医薬組成物は、手術の約１～２週間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は手術の約２週間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は手術の約１週間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は手術の約１６時間～約８０時間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は手術の約２４時間～約３２時間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は手術の約１６時間～約３２時間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は手術の約１時間～約５時間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は手術の約３時間～約９時間前に投与される。

【0122】

一部の実施形態では、医薬組成物は、手術の、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１４時間、少なくとも１６時間、少なくとも１８時間、少なくとも２０時間、少なくとも２４時間、少なくとも２８時間、少なくとも３２時間、少なくとも８０時間、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも１週間、又は少なくとも２間前に投与される。

【0123】

一部の実施形態では、医薬組成物は、腫瘍の画像化の約１～２週間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は腫瘍の画像化の約２週間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は腫瘍の画像化の約１週間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は腫瘍の画像化の約１６時間～約８０時間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は腫瘍の画像化の約２４時間～約３２時間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は腫瘍の画像化の約１６時間～約３２時間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は腫瘍の画像化の約３時間～約９時間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は腫瘍の画像化の約１時間～約５時間前に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は腫瘍の画像化の約１時間～約３２時間、約２時間～約３２時間、１６時間～約３２時間、又は約２０時間～約２８時間前に投与される。

【0124】

一部の実施形態では、医薬組成物は、腫瘍の画像化の、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１４時間、少なくとも１６時間、少なくとも１８時間、少なくとも２０時間、少なくとも２４時間、少なくとも２８時間、少なくとも３２時間、少なくとも８０時間、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも１週間、又は少なくとも２週間前に投与される。

【0125】

一部の実施形態では、本明細書に記載される式（ＩＩ）のブロックコポリマー又はその水和物、溶媒和物、互変異性体、若しくは薬学的に許容される塩医薬組成物は、式（ＩＩ）のブロックコポリマーに対する最大耐用量（ＭＴＤ）で提供される。他の実施形態では、投与される式（ＩＩ）のブロックコポリマー又はその水和物、溶媒和物、互変異性体、若しくは薬学的に許容される塩医薬組成物の量は、最大耐用量（ＭＴＤ）の約１０％～約９０％、ＭＴＤの約２５％～約７５％、又はＭＴＤの約５０％である。一部の他の実施形態では、投与される式（ＩＩ）のブロックコポリマー又はその水和物、溶媒和物、互変異性体、若しくは薬学的に許容される塩医薬組成物の量は、式（ＩＩ）のブロックコポリマーに対するＭＴＤの約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、又はより高い、又はこの中から導くことができる任意の範囲である。

【0126】

定義
特に述べられていない限り、本出願において使用されている以下の用語は、以下に付与された定義を有する。「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」並びに他の形態、例えば「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」という用語の使用は限定的ではない。本明細書で使用されているセクション表題は整理目的に過ぎず、記載される主題を限定すると解釈されるものではない。

【0127】

「薬学的に許容される」は、本明細書で使用される場合、ブロックコポリマーの生物学的活性又は特性を無効にしない、比較的に非毒性の材料、例えば、担体又は希釈剤を指す、すなわち、この材料は、これが含有されている組成物の構成成分のいずれとも有害な方式で、有害な生物学的作用又は相互作用を引き起こすことなく個体に投与される。

【0128】

「薬学的に許容される塩」という用語は、適切なアニオンと組み合わせたカチオン形態の治療活性剤、又は代替の実施形態では、適切なカチオンと組み合わせたアニオン形態の治療活性剤からなる治療活性剤の形態を指す。Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ ｏｆ Ｐｕｒｅ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、２００２年、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ、Ｌ．Ｄ．Ｂｉｇｈｌｅｙ、Ｄ．Ｃ．Ｍｏｎｋｈｏｕｓｅ、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、１９７７年、６６巻、１～１９頁、Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ及びＣ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ編、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ／Ｚｕｉｃｈ：Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ／ＶＨＣＡ、２００２年。薬学的塩は通常、非イオン性種よりも胃液及び腸液中で溶解性が高く、速やかに溶解するので、固体剤形に有用である。さらに、これらの溶解度は多くの場合ｐＨの関数であるため、消化管のある部分又は別の部分での選択的溶解が可能であり、この能力は遅延放出及び持続放出挙動の１局面として操作することができる。また塩形成分子は中性形態と平衡状態であることができるので、生体膜を介した通路を調整することができる。

【0129】

一部の実施形態では、薬学的に許容される塩は、式（ＩＩ）のブロックコポリマーを酸と反応させることにより得られる。一部の実施形態では、式（Ａ）のブロックコポリマー（すなわち遊離塩基形態）は塩基性であり、有機酸又は無機酸と反応する。無機酸として、これらに限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、及びメタリン酸が挙げられる。有機酸として、これらに限定されないが、１－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸；２，２－ジクロロ酢酸；２－ヒドロキシエタンスルホン酸；２－オキソグルタル酸；４－アセトアミド安息香酸；４－アミノサリチル酸；酢酸；アジピン酸；アスコルビン酸（Ｌ）；アスパラギン酸（Ｌ）；ベンゼンスルホン酸；安息香酸；樟脳酸（＋）；カンファー－１０－スルホン酸（＋）；カプリン酸（デカン酸）；カプロン酸（ヘキサン酸）；カプリル酸（オクタン酸）；炭酸；ケイヒ酸；クエン酸；シクラミン酸；ドデシル硫酸；エタン－１，２－二スルホン酸；エタンスルホン酸；ギ酸；フマル酸；ガラクタル酸；ゲンチシン酸；グルコヘプトン酸（Ｄ）；グルコン酸（Ｄ）；グルクロン酸（Ｄ）；グルタミン酸；グルタル酸；グリセロリン酸；グリコール酸；馬尿酸；イソ酪酸；乳酸（ＤＬ）；ラクトビオン酸；ラウリン酸；マレイン酸；リンゴ酸（－Ｌ）；マロン酸；マンデル酸（ＤＬ）；メタンスルホン酸；ナフタレン－１，５－二スルホン酸；ナフタレン－２－スルホン酸；ニコチン酸；オレイン酸；シュウ酸；パルミチン酸；パモ酸；リン酸；プロピオン酸（ｐｒｏｐｒｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）；ピログルタミン酸（－Ｌ）；サリチル酸；セバシン酸酸性；ステアリン酸；コハク酸；硫酸；酒石酸（＋Ｌ）；チオシアン酸；トルエンスルホン酸（ｐ）；及びウンデシレン酸が挙げられる。

【0130】

一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは、塩化物塩、硫酸塩、臭化物塩、メシル酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩として調製される。

【0131】

一部の実施形態では、薬学的に許容される塩は、式（ＩＩ）のブロックコポリマーを塩基と反応させることにより得られる。一部の実施形態では、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは酸性であり、塩基と反応する。このような状況で、式（ＩＩ）のブロックコポリマーの酸性プロトンは、金属イオン、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、又はアルミニウムイオンで置き換えられる。ある場合には、本明細書に記載されるブロックコポリマーは、有機塩基、例えば、これらに限定されないが、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、メグルミン、Ｎ－メチルグルカミン、ジシクロヘキシルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミンに配位する。他の事例では、本明細書に記載されるブロックコポリマーは、アミノ酸、例えば、これらに限定されないが、アルギニン、リシンなどと共に塩を形成する。酸性プロトンを含むブロックコポリマーと塩を形成するために使用される，許容される無機塩基として、これらに限定されないが、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化リチウムなどが挙げられる。一部の実施形態では、本明細書に提供されているブロックコポリマーは、ナトリウム塩、カルシウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、メラミン塩、Ｎ－メチルグルカミン塩又はアンモニウム塩として調製される。

【0132】

薬学的に許容される塩についての言及は溶媒添加形態を含むと理解されるべきである。一部の実施形態では、溶媒和物は化学量論的又は非化学量論的量の溶媒を含有し、薬学的に許容される溶媒、例えば、水、エタノールなどとの結晶化プロセス中に形成される。溶媒が水の場合水和物が形成され、又は溶媒がアルコールの場合アルコレートが形成される。本明細書に記載される化合物の溶媒和物は、本明細書に記載されるプロセスの間に便利に調製され、又は形成される。加えて、本明細書に提供されている化合物は、非溶媒和形態並びに溶媒和形態で任意選択的に存在する。

【0133】

本明細書に記載される方法及び製剤は、式（ＩＩ）の構造を有するブロックコポリマーのＮ－オキシド（それが適当であれば）、又は薬学的に許容される塩並びに同じ種類の活性を有するこれら化合物の活性代謝物の使用を含む。

【0134】

別の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、同位体で（例えば、放射性同位体で）又はこれらに限定されないが、発色団又は蛍光部分、生物発光性標識、又は化学発光性標識の使用を含む別の他の手段で別の他の手段で標識される。

【0135】

本明細書に記載される化合物は、１個以上の原子が、普通自然界に見られる原子量又は質量数とは異なる原子量又は質量数を有する原子により置き換えられているという事実を除いて、本明細書で提示された様々な式及び構造において列挙されたものと同一である同位体標識された化合物を含む。本発明の化合物に組み込むことができる同位体の例として、水素、炭素、窒素、酸素、硫黄、フッ素塩素、ヨウ素、リンの同位体、例えば、例えば、^２Ｈ、^３Ｈ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１８Ｏ、^１７Ｏ、^３５Ｓ、^１８Ｆ、^３６Ｃｌ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３２Ｐ及び^３３Ｐが挙げられる。一態様では、本明細書に記載される同位体標識された化合物、例えば放射性同位体、例えば、^３Ｈ及び^１４Ｃが組み込まれたものは、薬物及び／又は基質組織分布アッセイにおいて有用である。一態様では、同位体、例えば重水素による置換は、より大きな代謝安定性から結果として生じるある特定の治療上の利点、例えば、インビボ半減期の増加又は必要用量の減少をもたらす。

【0136】

本明細書で使用される場合、「ｐＨ応答性システム」、「ｐＨ応答性組成物」、「ミセル」、「ｐＨｎ応答性ミセル」、「ｐＨ感受性ミセル」、「ｐＨ活性化可能なミセル」及びｐＨ活性化可能ミセル（ｐＨＡＭ）のナノ粒子」は、ｐＨに応じて（例えば、ある特定のｐＨの上又は下で）分離する１種以上の化合物を含むミセルを示すために、本明細書で交換可能なように使用される。非限定的例として、ある特定のｐＨにおいて式（ＩＩ）のブロックコポリマーは実質的にミセルの形態である。ｐＨが変化するにつれて（例えば、低減する）、ミセルは分離を開始し、ｐＨがさらに変化すると（例えば、さらに低減する）、式（ＩＩ）のブロックコポリマーは実質的に分離した（非ミセル）形態で存在する。

【0137】

本明細書で使用される場合、「ｐＨ転移範囲」とは、ミセルが分離する範囲にわたるｐＨを示している。

【0138】

本明細書で使用される場合、「ｐＨ転移値」（ｐＨ）は、２分の１のミセルが分離されるｐＨを示す。

【0139】

「ナノプローブ」は、画像化標識部分を含むｐＨ感受性ミセルが本明細書で使用されている。一部の実施形態では、標識部分は蛍光色素である。一部の実施形態では、蛍光色素はインドシアニングリーン染料である。

【0140】

「投与する」「投与すること」、「投与」などの用語は、本明細書で使用される場合、化合物又は組成物を生物学的作用の所望の部位に送達することを可能にするために使用することができる方法を指す。これらの方法として、これらに限定されないが経口経路、十二指腸内経路、非経口注射（静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、血管内、腫瘍内、又は点滴）、局所的及び直腸投与が挙げられる。当業者は、本明細書に記載される化合物及び方法と共に利用することができる投与技術に精通している。一部の実施形態では、本明細書に記載される化合物及び組成物は経口的に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は静脈内に投与される。

【0141】

「共投与」などの用語は、本明細書で使用される場合、選択された治療剤の単一の患者への投与を包含することが意図され、薬剤が同じ若しくは異なる投与経路で、又は同じ若しくは異なる時間に投与される治療レジメンを含むことが意図される。

【0142】

「有効量」又は「治療有効量」という用語は、本明細書で使用される場合、投与される薬剤又は化合物の十分な量を指し、この量は、治療を受けている疾患又は状態の１種以上の症状をある程度和らげる。結果は、疾患の徴候、症状、若しくは原因の減少及び／若しくは軽減、又は任意の他の生体系の所望の改変を含む。例えば、治療のための使用に対する「有効量」は、疾患症状の臨床的に有意な低減を得るのに必要とされる、本明細書で開示されている化合物を含む組成物の量である。任意の個々の事例における適当な「有効量」は、技術、例えば、用量漸増試験を使用して任意選択的に決定される。

【0143】

「増強する」又は「増強すること」という用語は、本明細書で使用される場合、所望の作用を、潜在能力又は期間のいずれかにおいて増加させる又は長引かせることを意味する。よって、治療剤の作用を増強することに関して、「増強する」という用語は、系に対する他の治療剤の作用を、潜在能力又は期間のいずれかにおいて増加させる又は長引かせる能力を指す。「増強する有効量」とは、本明細書で使用される場合、所望の系における別の治療剤の作用を増強するのに十分な量を指す。

【0144】

「対象」又は「患者」という用語は哺乳動物を包含する。哺乳動物の例として、これらに限定されないが、哺乳動物のクラスのいずれのメンバー：ヒト、ヒト以外の霊長類例えば、チンパンジー、及び他の類人猿及びサル種；飼育動物、例えば、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ；家畜例えば、ウサギ、イヌ、及びネコ；げっ歯類を含む試験動物、例えば、ラット、マウス及びモルモットなどが挙げられる。一態様では、哺乳動物はヒトである。

【0145】

「治療する」、「治療すること」又は「治療」という用語は、本明細書で使用される場合、疾患若しくは状態の少なくとも１種の症状を軽減する、弱める若しくは回復させること、追加の症状を予防すること、疾患若しくは状態を阻害する、例えば、疾患若しくは状態の発生を止めること、疾患若しくは状態を緩和すること、疾患又は状態の退縮を引き起こすこと、疾患若しくは状態により引き起こされた状態を緩和すること、又は疾患若しくは状態の症状を予防的に及び／若しくは治療的に停止することを含む。

【0146】

特許請求の範囲における「又は」という用語の使用は、本開示は代替のみ及び「及び／又は」を指すという定義を支持するが、代替のみを指すこと又は代替が相互に排他的であると明示的に示されていない限り、「及び／又は」を意味するように使用される。本出願全体を通して、「約」という用語は、値を決定するために利用されているデバイス又は方法に対する誤差の標準偏差を含む値、例えば、述べられている範囲に対して列挙された値に対して、述べられている数の約±１０％、又は下限より１０％下及び上限より１０％上を示すために使用される。長年にわたる特許法律に従い、「ａ」及び「ａｎ」という単語は、例えば、特許請求の範囲又は明細書の中で「含む」という単語と併せて使用された場合、具体的に指摘されてない限り、１つ以上を表す。

【実施例】

【0147】

実施例１．ブロックコポリマーの合成
本明細書に記載される式（ＩＩ）のブロックコポリマーは、標準的合成技術を使用して、又は当技術分野で公知の方法を使用して合成される。

【0148】

特に指摘されていない限り、質量分析、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、タンパク質化学反応、生化学、組換えＤＮＡ技法及び薬理の従来の方法が利用される。ブロックコポリマーは、標準的有機化学技術、例えば、Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第６版、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．に記載されているものなどを使用して調製される。

【0149】

本明細書で使用されている一部の略語は以下の通りである：
ＤＣＩＳ 非浸潤性乳管癌
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＡＰ：４－ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＦ－ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタール
ＥＤＣＩ：１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
ＩＣＧ－ＯＳｕ：インドシアニングリーンスクシンアミドエステル
ＭｅＯＨ：メタノール
ＰＭＤＥＴＡ：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－ペンタメチルジエチレントリアミン
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＡＵＣ 曲線下面積
ＡＵＣ_ａｌｌ 時間＝０から最終時間点までのＡＵＣ（濃度＝０を含む）
ＡＵＣ_ｌａｓｔ 時間＝報告可能な濃度を有する０から最終時間点までのＡＵＣ
ＡＵＣ_{０～２４ｈｒ} 時間０～２４時間までのＡＵＣ
ＢＣ 乳がん
ＢＬＳ ブレッドローフスライド
ＢＱＬ 定量限界未満
Ｃ_１０ｍ １０分における血漿濃度
Ｃ_ｍａｘ 最大血漿濃度
ＣＮＲ コントラスト対ノイズ比
ＣＲＣ 直腸結腸がん
ＥＣ 食道がん
ＦＦＰＥ又はＦＦ ホルマリン固定パラフィン包埋又はホルマリン固定
ＧＭＰ 医薬品の製造管理及び品質管理の基準ＧＬＰ 優良試験所規範
ＧＰＣ ゲル浸透クロマトグラフィー
ＨＮＳＣＣ 頭頸部扁平上皮癌
Ｈｒ 時間
ＩＳＲ 実試料の測定値における再現性評価
ＩＶ 静脈内
ｋｇ キログラム
ＬＬＯＱ アッセイ定量化の下限
ＭＦＩ 平均蛍光強度
ｍｇ ミリグラム
ｍＬ ミリリットル
μｇ マイクログラム
ＮＣ 計算されていない
ＮＲ 報告されていない
ＯＣ 卵巣がん
ＰＫ 薬物動態
ＰＰＶ 陽性適中率
ＰｒＣ 前立腺がん
ＲＯＩ 関心領域
ｒ^２ａｄｊ 試料サイズに対する調節済み決定係数
ＳＥＣ サイズ排除クロマトグラフィー
ＳＯＣ 標準治療
ＳＯＰ 標準的手術手順
ＴＢＲ 腫瘍とバックグランドの比
Ｔ_１／２ 半減期
Ｔ_ｍａｘ 最大濃度の時間

【0150】

５ステップのプロセスを使用して式（ＩＩ）のブロックコポリマーを合成した。ステップ１～４を制御された製造環境で実施した。中間体８（ポリジブチルアミン、ＰＤＢＡ）を、３（ＰＥＧ－Ｂｒ、マクロ開始剤）、７（（ジブチルアミノ）メタクリル酸エチル、ＤＢＡ－ＭＡ）、及び４（アミノエチルメチルアクリレート塩酸塩、ＡＭＡ－ＭＡ）の原子移動ラジカル重合（ＡＴＲＰ、ステップ４）により合成した。最終ステップは、８（ＰＤＢＡのジブロックコポリマー骨格）を９（ＩＣＧ蛍光体（ＩＣＧ－ＯＳｕ））に共有結合させることによる化合物１の調製を含んだ。ステップ５では、使用されるすべての原料、溶媒及び試薬は、ＧＭＰ製材料として供給された中間体９（ＩＣＧ－ＯＳｕ）を除いて、国民医薬品集（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ（ＮＦ））又は米国薬局方（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ（ＵＳＰ））のいずれかにより検証されたものである。予防策として、化合物１は－８０℃±１５℃で貯蔵し、光から保護した。

【0151】

スキーム１及び２は、プロセスフローチャート、これに続いて製造プロセスの詳細な説明を提供する。

【0152】

【化9】

【0153】

ステップ１
合成：ジクロロメタン（ＣＨ_２Ｃｌ_２）中のポリ（エチレングリコール）メチルエーテル（ＰＥＧ－ＯＨ）１ａ、トリメチルアミン、４－（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）を氷浴内で冷却した。次いで、フラスコを氷浴内に維持しながら、ジクロロメタン中α－ブロモイソブチリルブロミド１ｂをフラスコに滴下添加した。反応混合物を室温（ＲＴ）に温め、１６時間撹拌した。

【0154】

精製：次いで、反応混合物を撹拌下で、１０倍過剰の容量のジエチルエーテルを含有するビーカーにゆっくりと加えて、粗生成物３を沈殿させた。次いで粗生成物を濾過し、真空オーブン内で乾燥させた。乾燥させた、粗生成物３をエタノールから５回再結晶化し、真空オーブン内で乾燥させて、精製された３（ＰＥＧ－Ｂｒマクロ開始剤）を得た。典型的な収率は４０％～７０％であり、純度＞９３％である（高速液体クロマトグラフィー［ＨＰＬＣ］領域％）。

【0155】

ステップ２：
再結晶化：粗生成物２－アミノエチルメタクリレート塩酸塩（ＡＭＡ－ＭＡモノマー）、２－プロパノール４ａ及び酢酸エチルを合わせ、固体が溶解するまで７０℃に加熱した。溶液を、セライトを含有する予熱したブフナー漏斗を介して濾過した。濾過した溶液を室温まで冷却させ、次いで２～８℃にさらに冷却して、８～１６時間の期間にわたり結晶化した。生成した結晶性固体を室温まで温め、次いで濾過し、冷たい酢酸エチルで３回洗浄した。単離した結晶性生成物を真空下で乾燥させて、精製された４を得、これをステップ４で使用するために－８０℃で貯蔵した。典型的な収率は４０％～７０％であり、純度は使用試験における溶解度で示され、さらに１０２～２４℃の範囲のシャープな融点（≦３℃）で示される。

【0156】

ステップ３：
合成：２－（ジブチルアミノ）エタノール（ＤＢＡ－ＥｔＯＨ、５）、トリメチルアミン、塩化銅（Ｉ）（ＣｕＣｌ）及びジクロロメタンをフラスコ内で合わせ、氷浴内で冷却した。次いで、塩化メタクリロイル６をフラスコに滴下添加し、その間フラスコを氷浴内で維持した。反応混合物を室温に加温させ、１６時間撹拌した。次いで、反応混合物を氷浴内で冷却し、濾過した。濾液を分液漏斗に移し、有機相を炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ_３）の飽和水溶液で２回洗浄し、これに続いてＤＩ水で１回洗浄した。次いで、有機相を無水硫酸ナトリウム（Ｎａ_２ＳＯ_４）で乾燥させ、濾過し、回転式エバポレーターを使用して、溶媒を真空中で除去して、モノマー生成物７を液体として生成した。

【0157】

精製：追加のＣｕＣｌを安定剤として加え、生成物を真空蒸留により精製した。透明から黄色がかった蒸留物７（ＤＢＡ－ＭＡ）を琥珀色のバイアルに移し、ステップ４で使用するために－８０℃で貯蔵した。典型的な収率は３０％～６０％であり、純度＞９３％である（ＨＰＬＣ領域％）。

【0158】

【化10】

【0159】

ステップ４：
合成：中間体３をフラスコに加え、フラスコを穏やかに加熱することによって、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）と２－プロパノールの混合物に溶解した。フラスコの内容物を室温まで冷却させておき、４及び７（それぞれＡＭＡ－ＭＡモノマー及びＤＢＡ－ＭＡモノマー）を溶液に加え、これに続いてＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”－ペンタメチルジエチレントリアミン（ＰＭＤＥＴＡ）を加えた。反応混合物を撹拌し、次いで窒素下で冷凍－ポンプ－解凍サイクルに４回供して、空気（酸素）を除去した。さらに凍結しながら、反応混合物を銅（Ｉ）ブロミド（ＣｕＢｒ）で処理し、真空及び窒素によるフラッシュサイクルに３回供して、封じ込められた空気が確実に除去されるようにし、次いで反応物を油浴内で４０℃に温めた。反応混合物をさらに１６時間反応させた。反応完了時、混合物をテトラヒドロフランで希釈し、酸化アルミニウム（Ａｌ_２Ｏ_３）の床を介して濾過した。回転蒸発を使用して、溶媒を濾液から除去し、真空下で乾燥させた。

【0160】

精製：乾燥させた粗生成物をメタノールで溶解し、メタノールを有する１０ｋ ＭＷＣＯ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）２ Ｍｉｎｉ Ｆｉｌｔｅｒカセットを介して、接線流濾過により精製した。次いで、回転蒸発を使用して溶媒を除去した。精製した中間体８（ＰＥＯ_１１３－ｂ－（ＤＢＡ_{８０～１５０}－ｒ－ＡＭＡ_１～３）、ＰＤＢＡ）を真空下で乾燥させ、ステップ５で使用するために－８０℃で貯蔵した。典型的な収率は６０％～９０％であり、純度は＞９３％（ＨＰＬＣ領域％）である。ある場合には、生成物はコンジュゲートポリマーと非コンジュゲートポリマーの混合物である。

【0161】

ステップ５：
合成：超音波処理槽による助けを用いて、中間体８（ＰＤＢＡ）をメタノール（ＭｅＯＨ）に溶解した。次いで、メタノール溶液を９（ＩＣＧ－ＯＳｕ）に加えた。光から保護しながら、反応物を室温で１６時間撹拌した。反応の終わりに、６倍過剰の無水酢酸を反応混合物に加え、１～１．５時間混合させて、粗生成物化合物１を生成した。

【0162】

精製：メタノールを有する１０ｋ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）２ Ｍｉｎｉ Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎモジュールを介して、接線流濾過により粗生成物を精製した。濾過した溶液の溶媒を真空中で除去して、化合物１を生成し、これを光から保護し、－８０℃で貯蔵した。典型的な収率は＞７０％であり、純度はＮＬＴ９５％（ＳＥＣ）である。

【0163】

分析：屈折率（ＲＩ）検出及び２つのＡｇｉｌｅｎｔ ＰＬｇｅｌ Ｍｉｘｅｄ－Ｄ ３００×７．５ｍｍカラムを用いた、特注のゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）法を介して、相対的モル質量分布の分析を行う。試料クロマトグラムを、５８０～１，０７４，０００ｇ／モルのポリスチレン標準物質から構築された校正曲線と比較して、モル質量分布を計算した。

【0164】

実施例２．化合物１の貯蔵
注入用の化合物１の現在の提示は、－８０℃で貯蔵した３ｍｇ／ｍＬの緑色の水溶液である。バイアルを室温に解凍してから、フェーズ１に対して１５ｍｇ／分及びフェーズ２に対して３０ｍｇ／分の静脈内投与を行う。

【0165】

実施例３．化合物１の安定性
化合物１、３．０ｍｇ／ｍＬ注入は、－８０℃で、２４カ月まで（現時点での貯蔵期間）の長期貯蔵条件において安定していることを安定性データは示している。アッセイ又は関連物質及び不純物のレベルにおいて、又は貯蔵条件で試験した他の特質のいずれにおいても有意な変化は観察されなかった。最新の安定性結果が表１及び表２に提供されている。

【0166】

【表1】

【0167】

【表2】

【0168】

実施例４．ヒトに対するＰＫ作用
第１相試験の目的
第１相は、外科的切除を必要とする固形がんを有する患者における、化合物１の安全性、ＰＫプロファイル、及び画像化の実現可能性を評価するための単独の治験責任医師、非無作為抽出、非盲検、シングルアーム、横断研究である。この試験の主要目的は、腫瘍及び固形がんの転移性リンパ節を検出するための術中光学的造影剤としての化合物１の安全性、ＰＫ、及び実現可能性を調べることであった。試験は、ＩＣＧ適合カメラ及び画像化デバイスを使用して、及びエクスビボ試料を用いて、投薬後２４（±８）時間の時点で術中に得た蛍光の十分なＴＢＲ及びＣＮＲに対する化合物１の最適な用量範囲を調べることを意図した。

【0169】

第１相には固形がん（ＨＮＳＣＣ、乳がん、食道がん、又は直腸結腸がん）を有する３０人の患者を登録し、患者らはそれぞれの腫瘍の種類の診断を生検により確認しており、腫瘍の外科的摘除を受ける予定である。試験設計は、用量段階的増大部分（第１ａ相；Ｎ＝１８最大）に対する標準的３＋３設計、これに続く用量増大部分（第１ｂ相；Ｎ＝１５）を含んだ。すべての患者は単回Ｉ．Ｖ．用量の化合物１の投与を受け、これに続いて化合物１の点滴からおよそ２４時間後、所定の手術を受けた。

【0170】

第１ａ相は、それぞれ患者３人からなる５つのコホートで実施した用量認定試験であった。評価した用量レベルはこの順序で０．３、０．５、０．８、０．１、及び１．２ｍｇ／ｋｇであった。コホート間の用量の漸増は、その前のコホートの最後の患者が１０日目の安全性評価を完了した後で行った。安全性、ＰＫ、及び画像化実現可能性を試験の第１ａ相及び第１ｂ相の両方の部分で評価した。患者の安全性は、試験中及び投薬後１０日まで評価する。

【0171】

手術中、ＮＩＲカメラを使用して、化合物１蛍光の術中画像を、原発性腫瘍及び転移性リンパ節並びに正常な非がん組織を含む周辺組織から得た。これは摘除した試料のインビボ及び／又はエクスビボ画像化であってよい。外科医が安全と考えた場合、他の方法では臨床的に腫瘍とは疑われないような、化合物１蛍光を有する領域から最大１０個までの試験関連生検を採取した。複数のＮＩＲカメラを使用して、化合物１で腫瘍を画像化する実現可能性を評価した。

【0172】

臨床的がんケアに使用されている標準的病理検査の慣習に従い組織像に対して腫瘍試料を処理した。臨床的意思決定に必要な、選択された組織学的特徴である縁に対する診断が提供された。蛍光画像を腫瘍及びリンパ節試料及び試験に関連した生検から収集した。縁の幅及び陽性の縁の数を書き留め、縁内の蛍光の場所と相関させた。これから、化合物１の蛍光と組織病理検査との間の相関関係を計算した。

【0173】

傾向及び人口統計データ
すべての患者は、化合物１の単回用量を受け、試験を完了した。すべての患者が画像化、ＰＫ、及び安全性分析に含まれた。

【0174】

所定の手術が施される４種の異なる腫瘍の種類（ＨＮＳＣＣ、ｎ＝１３；ＢＣ、ｎ＝１１患者；ＣＲＣ、ｎ＝３；ＥＣ、ｎ＝３）を有する３０人の患者は、患者の計画された手術の２４（±８）時間前において、単回用量のＯＮＭ－１００を受けた（表３）。

【0175】

第１ａ相では、３４～８０才の間の年齢、及び１７．４～３７．１ｋｇ／ｍ２の間のボディマス指数を有する合計３人の男性及び１２人の女性患者が試験に参加した。すべての患者は白人（白色人種）であり、ヒスパニック又はラテン民族の患者はいなかった。合計８人の患者がＨＮＳＣＣの診断を受け、７人の患者がＢＣの診断を受けていた。

【0176】

第１ｂ相では、４５～８５才の間の年齢及び１８．９～３９．４ｋｇ／ｍ２の間のボディマス指数を有する合計５人の男性及び１０人の女性患者が試験に参加した。すべての患者は白人（白色人種）であり、ヒスパニック又はラテン民族の患者はいなかった。合計５人の患者がＨＮＳＣＣの診断を受け、４人の患者がＢＣの診断を受け、３人の患者がＣＲＣの診断を受け、３人の患者がＥＣの診断を受けていた。第１ｂ相の平均年齢（６８才）は第１ａ相（５８才）より高かった。

【0177】

【表3】

【0178】

薬物動態学的結果
試験デザイン：単一化合物１のＩＶ用量が１～５分間のＩＶ点滴として、第１ａ相では１コホート当たり３人の患者からなる５つのコホート（０．１、０．３、０．５、０．８、及び１．２ｍｇ／ｋｇ）の患者に、第１ｂ相では１５人の患者に１．２ｍｇ／ｋｇの用量が投与された。腫瘍の種類を含む患者の人口統計情報が第１ａ相に対しては表４及び５に、第１ｂ相に対しては表５に提示されている。Ｉｎｔｅｒｔｅｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）は、バリデーションされた直接蛍光リーダーアッセイを使用して．化合物１の血漿濃度を決定した。Ｐａｃｉｆｉｃ ＢｉｏＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（Ｄａｖｉｓ、ＣＡ）はＰＫ分析を実施した。

【0179】

試料収集：点滴前及び点滴後１０分及び０．５、１、３、８、２４、４８、７２、及び２４０時間の時点で血液試料を収集した。

【0180】

【表4】

【0181】

【表5】

【0182】

分析：血漿濃度対時間プロファイルを各患者に対して生成した。Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（バージョン８．０）を使用して、薬物動態学的パラメーターを予測した。ＳＯＰに従い、ＢＱＬとして報告された濃度を０に設定した。ただし、対象＃ＯＮ１１０２に対する０．５時間の試料は例外であり、この場合ＬＬＯＱ／２（５μｇ／ｍＬの値をパラメーター計算に使用）に設定し、２４及び４８時間の試料も同様である。

【0183】

予測パラメーターはＣ_ｍａｘ、Ｔ_ｍａｘ、Ｔ_１／２、ＡＵＣ_ｌａｓｔ、ＡＵＣ_ａｌｌ及びＡＵＣ_{０～２４ｈｒ}であった。曲線の末期においてデータ点が３つ未満であった場合、プログラムはＴ_１／２（ＮＣ）を計算しなかった。末端勾配評価を決定するための係数は０．８、Ｔ_１／２未満であり、報告されなかった（ＮＲ）。無限大に外挿されたＡＵＣは設定したいかなるデータに対しても報告されていない。これは全ての場合において、外挿されたＡＵＣ（％）は２０％を超え、よって、ＡＵＣ_ｉｎｆ予測値は信頼できるものではないからである。１０分間での濃度、すなわち１回目の測定ポイント（Ｃ１０ｍ）もまた各患者に対して報告された。

【0184】

投薬から最後の時間点までの血漿濃度対時間曲線下領域は、測定可能な濃度（ＡＵＣ_ｌａｓｔ）と共に、線形台形法により予測した。最後の３つ以上の時間点を使用して、排出速度定数（λｚ）を予測し、これを使用して、ゼロから無限大（ＡＵＣ_ＩＮＦ）までの末期半減期（Ｔ_１／２）及びＡＵＣを以下の方程式から予測した：
Ｔ_１／２＝ｌｎ（２）／λｚ
ＡＵＣ_ＩＮＦ＝ＡＵＣ_０～ｔ＋Ｃ_ｔ／λｚ
（式中、Ｃ_ｔは最後の測定可能な濃度である）。

【0185】

第１ａ相
第１ａ相に対する患者の人口統計データは表４に提示されている。個々の血漿濃度は表６に示されている。個々の薬物動態学的パラメーター予測値、及びグループの簡易統計は表６に提示されている。平均血漿濃度（ｌｏｇ及び直線）対時間のプロットは図１Ａ～１Ｂに提示されている。

【0186】

化合物１は、０．１ｍｇ／ｋｇの用量に従ったいかなる対象試料においても測定可能ではなかった。

【0187】

曝露は用量に関連した。Ｃ_ｍａｘ、ＡＵＣ_ｌａｓｔ、ＡＵＣ_ａｌｌ及びＡＵＣ_{０～２４ｈｒ}は、用量がより高いほど高かった。投薬から１０分後の濃度及びＡＵＣ_{０～２４ｈｒ}が用量と対比されて図２及び図３にそれぞれプロットされている。プロットは、パラメーター対用量データに対して実施された直線回帰の結果を示す。すべての血漿値がＢＱＬとして報告された、０．１ｍｇ／ｋｇ用量グループからのデータはこれらのプロットから除外されている。試験は、用量比例性に対する統計分析を実施するために強化されなかった。しかし、直線回帰は曝露と用量との間の強い相関関係を示している。

【0188】

平均Ｃ_１０値は、０．３、０．５、０．８、及び１．２ｍｇ／ｋｇ用量でそれぞれ１２．０、１７．３、１９．８及び３１．７μｇ／ｍＬであった。平均ＡＵＣ_{０～２４ｈｒ}は１９７、２８９、３８３，及び４９５μｇ－時間／ｍＬであった。平均末期半減期値は０．８及び１．２ｍｇ／ｋｇ用量グループのみ定量化可能であり、それぞれ７９．０及び３６．５時間であった。

【0189】

【表6】

【0190】

第１ｂ相
第１ｂ相に対する患者の人口統計データは表７に提示されている。患者に対する個々の血漿濃度は表８に示されている。個々の薬物動態学的パラメーター予測値、及びグループ簡易統計は表９に提示されている。個々の血漿濃度（ｌｏｇ及び直線）対時間のプロットは図４Ａ～４Ｂに提示されている。

【0191】

平均Ｃ_１０ｍは３３．２μｇ／ｍＬであり、平均ＡＵＣ_{０～２４ｈｒ}は６３８μｇ－時間／ｍＬであった。平均末期半減期は４６．４時間であった。

【0192】

【表7】

【0193】

【表8】

【0194】

【表9】

【0195】

第１ａ相及び第１ｂ相を合わせたデータ
平均血漿濃度を、第１ａ相及び第１ｂ相を合わせたすべての患者に対して、用量グループにより時間と対比させてプロットし、これが図５Ａ（ｌｏｇプロット）及び図５Ｂ（直線プロット）において提示されている。第１ａ相及び第１ｂ相のすべての患者に対する１０分間（Ｃ_１０ｍ）における平均濃度及びＡＵＣ_{０～２４ｈｒ}対用量のプロットが図６及び図７においてプロットされている。データは、曝露は用量に比例するという第１ａ相データに基づきなされた所見を支持している。

【0196】

１．２ｍｇ／ｋｇで治療した第１ａ相及び第１ｂ相のすべての患者に対して、腫瘍の種類により整理した個々の患者の薬物動態学的パラメーター及び簡易統計が表１０に提示されている。予測された薬物動態学的パラメーターの中で、腫瘍の種類に基づく明らかな差異はなかった。Ｃ_１０ｍ値は３１．２～３５．５μｇ／ｍＬの範囲であり、ＡＵＣ_{０～２４ｈｒ}値は５８５～６７７μｇ－時間／ｍＬの範囲であった。

【0197】

各腫瘍の種類に対する平均血漿濃度対時間のプロットが図８Ａ（ｌｏｇプロット）及び図８Ｂ（直線プロット）に示されている。これらのプロットは、試験した腫瘍の種類の中で化合物１薬物動態における明らかな差異はないことを例示している。各種類の腫瘍に対する個々の血漿濃度対時間プロットが図８Ｃ～８Ｆ（ｌｏｇプロット）及び図８Ｇ～８Ｊ（直線プロット）に提示されている。

【0198】

【表10】

【0199】

試験は用量比例性のための統計分析を実施するために強化されなかったが、Ｃ１０は、０．３～１．２ｍｇ／ｋｇにおいて用量比例であるように見え（図６）、ＡＵＣ_０～ｈｒは１．２ｍｇ／ｋｇに用量比例しているように見える（図７）。

【0200】

実施例５．蛍光画像取得及び画像処理
ＮＯＶＡＤＡＱ ＳＰＹ Ｅｌｉｔｅ又はＳｕｒｇＶｉｓｉｏｎ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ Ａｉｒのいずれかを使用して、「切開外科手術」の術中画像及びビデオを得た。腫瘍に対するカメラの距離は、マニュアルの指示に従い、Ｅｘｐｌｏｒｅｒ Ａｉｒに対しておよそ２０ｃｍであり、ＮＯＶＡＤＡＱ ＳＰＹに対して３０ｃｍであった。ＮＯＶＡＤＡＱ ＳＰＹカメラは蛍光ビデオのみを生成することができ、この蛍光ビデオを後処理中に画像に変換することができた。このカメラに対する生データ取得のための設定は固定されていた。Ｅｘｐｌｏｒｅｒ Ａｉｒについては、両方のシステムから得た画像間での直接の比較を可能にするために、各患者に対して同じ設定（曝露時間及びゲイン）を使用しようとする試みがなされた、しかし、手術中の可視蛍光の量に応じて、ある場合にはカメラシステムの飽和により、調節が必要とされた。一部の患者において、切開外科手術が実施されなかった場合には、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＮＩＲ 腹腔鏡及びＤａ Ｖｉｎｃｉ Ｆｉｒｅｆｌｙ カメラシステムが使用された。システムは製造業者マニュアルに従い使用した。

【0201】

最初に、腫瘍及び周辺領域の切除前蛍光画像及び／又は動画が作製された。外科的切除後、創傷床の画像を得た。蛍光領域が創傷床内に目視可能な場合には、可能であれば、生検を採取し、手術室のバックテーブル上ですべての側面に対して切除した試料を画像化した。適用可能であれば、インサイチュ及びバックテーブル上で可能な場合、リンパ節を画像化し、その後リンパ節切開の創傷床を再度画像化した。

【0202】

指定された画像化試験スタッフが蛍光画像化を実施した。標準的手術に対するあらゆる先入観を回避するために切除前画像は外科医には伏せられていたが、外科医は外科手術を実施しながら、白色光画像に対する第２のモニターを見ることができた。外科医は創傷床及びバックテーブルでの画像化による補助を受けた。画像化手順の間、蛍光画像化手順それ自体との起こり得る相互作用を防止するため、手術室内の周辺光のスイッチは切られた。

【0203】

Ｆｉｊｉ（ＩｍａｇｅＪ、バージョン２．０．０）を使用して画像を処理した。画像は、１ピクセル当たりの最大及び最小蛍光強度に基づき、患者ごとに拡大縮小した。

【0204】

術中のバックテーブルでの画像取得及び術後画像取得
組織処理のすべてのフェーズの間、試料は、造影剤の起こり得る光退色を防止するためできるだけ暗所で貯蔵した。

【0205】

切除直後、試料全体は、指定された術中カメラシステム並びにＬＩ－ＣＯＲ ＰＥＡＲＬ（登録商標）Ｔｒｉｌｏｇｙシステムの両方を、試料の外科的切除後最大６０分以内に使用して、６つのすべての摘除面（例えば、前面、背面、側面、中央、尾側及び頭側）を画像化した（術中バックテーブルでの画像化）。両方のデバイスを合わせた画像化の時間は最大５分であった。試料には青色インク及び黒色インクで摘除面に印を付けた。インク２色という使用制限は病理学者による組織処理のためのＳＯＣに影響を与えなかったが、第３のインクの色が必要とされた場合、目的とする追加の病理学的摘除の縁を定義するために緑色のインクを使用した。

【0206】

術後の組織スライス画像化のタイミングは、異なる腫瘍の種類の試料処理のためのＳＯＣにおける差異を受け入れるように適合されている。簡単に説明すると、ＢＣ試料は手術当日に新鮮なまま薄片化し、次いでホルマリン固定し、他の腫瘍の種類は、手術から１～３日後の全摘除試料のホルマリン固定後に薄片化した。一般的に、手術標本は±０．５ｃｍの厚さの組織スライスに連続的に薄片化する。方向づけの目的のため、薄片化中及び直後に白色光写真を作製した。薄片化後、各組織スライスの両側の蛍光画像化を光遮断環境内で実施した（ＬＩ－ＣＯＲ ＰＥＡＲＬ（登録商標）Ｔｒｉｌｏｇｙシステム）。したがって、ＢＣスライスは切除からおよそ１２０分後に画像化し、他の腫瘍の種類は、切除及びホルマリン固定後、後日薄片化し、画像化した。

【0207】

各ＢＬＳは、４％パラホルムアルデヒド／リン酸緩衝生理食塩水中で終夜ホルマリン固定が施された。次いで、病理学者は、ＳＯＣに従いさらなる分析のために、及び組織病理学的相関関係のため腫瘍組織を線引きするためのヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ／Ｅ）染色用の４μｍスライスの調製のために、ＢＬＳの部分を巨視的にサンプリングした（ＦＦＰＥ包埋）。追加のＦＦＰＥブロックは、病理学者の従来の巨視的目視検査によるＳＯＣ検査に加えて、ＢＬＳの蛍光画像化に基づき包埋することができた。最終の組織病理検査結果を、目的の組織スライスの記録された蛍光画像と相互相関するために、標準化したワークフローを実行した。７～１４日後、Ｏｄｙｓｓｅｙ Ｆｌａｔｂｅｄ Ｓｃａｎｎｅｒ（ＬＩ－ＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して、ＦＦＰＥブロックをスキャンした。

【0208】

実施例６．組織学的相関関係
ＳＯＣ病理学的手順を実施した後（第１ａ相に対しておよそ７～１０日間及び第１ｂ相に対して７～１４日間）、Ｈ／Ｅスライスを、それぞれの腫瘍の種類に対して専門の有資格病理学者と共に再調査し、議論した。

【0209】

実施例７．術後の蛍光測定
Ａｄｏｂｅ Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｏｒ及びＦｉｊｉ（ＩｍａｇｅＪ）を使用して、Ｈ／Ｅスライスと蛍光画像（すなわち、ブレッドローフスライス又はＢＬＳ）との間の相関関係を作成した。。組織病理学的結果に基づき、腫瘍及びバックグランドを含有する関心領域（ＲＯＩ）を正確に及び手作業で描いた後、各患者に対して、別個のＢＬＳの各ＬＩ－ＣＯＲ ＰＥＡＲＬ画像に対してＣＮＲを計算した。腫瘍を含有するすべての利用可能なＢＬＳに基づき中央値ＣＮＲを計算した。Ｆｉｊｉ（ＩｍａｇｅＪ）を使用して、以下に対して蛍光測定を実施した。
・平均蛍光強度（ＭＦＩ；１ピクセル当たりの蛍光強度）
・コントラスト（腫瘍組織のＭＦＩ）
・ノイズ腫瘍を含有しない組織のＭＦＩ（例えば、健康な筋肉、線維症、脂肪）
・ノイズの標準偏差
・ＣＮＲ（コントラスト対ノイズ比）：
ＣＮＲ＝（蛍光（腫瘍）－蛍光（正常組織））／標準偏差蛍光（正常組織）・ＴＢＲ（腫瘍対バックグランド蛍光比）：
ＴＢＲ＝蛍光（腫瘍）／蛍光（正常組織）

【0210】

術中蛍光測定
腫瘍領域の目視可能な白色光と対応する蛍光画像との間の巨視的な相関関係を作成した。巨視的な腫瘍を含有するＲＯＩ及びバックグランドを含有するＲＯＩを描いた後、腫瘍領域とバックグランド領域の両方のＭＦＩを計算した。上記に記載される計算の後、蛍光比（ＣＮＲ、ＴＢＲ）を患者ごとに計算した（患者一人当たり測定３回）。

【0211】

実施例８．統計的方法
固形腫瘍及びリンパ節転移の術中画像化に対する化合物１の実現可能性評価は、化合物１蛍光の蛍光シグナルＣＮＲ、感度、及び局在化パターンの定量化を含んだ。さらに、十分なＣＮＲに対応する安全な用量の範囲は、術中のインビボ及びエクスビボ蛍光シグナル（ＮＯＶＡＤＡＱ画像化システム）を、エクスビボ検査（例えば、組織学的検査、ＮＩＲフラットベッドスキャニング）と一緒に合わせた評価により計算した。

【0212】

実施例９．患者の人口統計データ及び試料特徴
化合物１を用いた腫瘍非依存的画像化の実現可能性を評価するため、４種の異なる腫瘍の種類（ＨＮＳＣＣ、ＢＣ、ＥＣ、又はＣＲＣ）を有する１５人の追加の患者に、第１ａ相から選択された最適な用量の化合物１（１．２ｍｇ／ｋｇ）を第１ｂ相において投薬した。第１ｂ相の患者はＨＮＳＣＣ（ｎ＝５）、ＢＣ（ｎ＝４）、ＥＣ（ｎ＝３）、及びＣＲＣ（ｎ＝３）を有した。試料の特徴は表１１に提示されている。

【0213】

【表11】

【0214】

実施例１０．蛍光画像化結果
第１ａ相
第１相試験の完了した第１ａ相用量－段階的増大部分に対する蛍光画像化結果は、１５人すべての患者；コホート１（０．３ｍｇ／ｋｇ）、コホート２（０．５ｍｇ／ｋｇ）、コホート３（０．８ｍｇ／ｋｇ）、コホート４（０．１ｍｇ／ｋｇ）、及びコホート５（１．２ｍｇ／ｋｇ）のそれぞれ３人の患者、並びに第１ｂ相、１．２ｍｇ．ｋｇの１５人を超える患者に対して利用可能である。

【0215】

蛍光画像
コホート２（０．５ｍｇ／ｋｇ）及びコホート５（１．２ｍｇ／ｋｇ）で投薬した３人の患者からの術中（図９Ａ）及び術後（図９Ｂ）の画像が提示されている。コホート２では、患者ＯＮ１１０４及びＯＮ１１０６はＨＮＳＣＣを有しており、患者ＯＮ１１０５は乳がん患者を有した。コホート５では、患者ＯＮ１１１３及びＯＮ１１１４はＨＮＳＣＣを有しており、患者ＯＮ１１１５は乳がん患者であった。

【0216】

術中画像化とは、手術の時間内に実施されるインビボ画像化と試料全体のバックテーブル画像化との組合せと定義される。術中に化合物１を用いて腫瘍を画像化する実現可能性は、０．１～１．２ｍｇ／ｋｇの間の化合物１の投与を受けた、ＨＮＳＣＣを有する患者８人すべてにおいて明確に実証された。７人のＢＣ患者の腫瘍のうち２つが化合物１で視覚化された。残りの５つのＢＣ腫瘍は深部にあり、正常組織に取り囲まれ、化合物１の蛍光画像化により術中に目視可能ではなかった。これはＮＩＲ画像化での組織浸透が限定されているため、驚くことではない。重要なことに、これら５つのＢＣ腫瘍のいずれも陽性の縁を有さなかった。これらの結果は、化合物１を用いたＨＮＳＣＣ及びＢＣにおける術中画像化に対する実現可能性を明確に実証している。

【0217】

術後の組織試料画像化は、すべての１５人の患者の腫瘍試料における化合物１画像化実現可能性を明確に示している。化合物１のこれらの画像は、明るい蛍光領域と暗色の領域との間でシャープな境界を示す（図１０Ａ、１５、及び１６）。壊死性である腫瘍のコアは蛍光を示さない。すべての患者に対して、蛍光領域は、関心領域に印を付けたＨ／Ｅ画像と対応した。高い腫瘍対バックグランド蛍光比（ＣＮＲ、ＴＢＲ）が、組織病理学的相関関係に基づき、腫瘍又は正常と特定された領域から見られる。それぞれ試験した用量レベルにおいて、第１ａ相のすべての１５人の患者に対して類似の画像が得られた。

【0218】

第１ａ相の平均蛍光強度－原発性腫瘍
術中画像化
第１ａ相において、すべての（８人のうち８人）ＨＮＳＣＣ患者の腫瘍及び７人のＢＣ患者腫瘍のうちの２つ（巨視的な腫瘍がインビボで目視可能な患者）が、化合物１蛍光をインビボで示した（用量範囲０．１～１．２ｍｇ／ｋｇ）。これらの患者すべてにおいて、腫瘍組織からのＭＦＩは周辺の正常組織からのＭＦＩより上だった。

【0219】

術中の蛍光強度は、それぞれの手術環境の独特な提示により患者又は用量レベルの間で標準化及び比較ができない。複数の変数、例えば、カメラ角度、カメラと組織の距離、腫瘍場所、及び他の組織又は脂肪による被覆が蛍光シグナルの絶対値に影響を与える。したがって、腫瘍及び非腫瘍組織からのインビボ蛍光の比を各患者に対して計算した。ＣＮＲに対して図１１Ａにおいて及びＴＢＲに対して図１１Ｂにおいて示されている通り、術中ＴＢＲ及びＣＮＲ値はすべての患者に対して高かった。これは、個々の手術に対して、腫瘍組織と正常組織との間の蛍光強度の明白な境界を示すもので、外科的切除中の腫瘍のリアルタイムでの可視化において外科医を潜在的に援助することができる主要因子である。これらの比は変数であり、用量と共にいかなる系統的な増加も、低減も示さなかった。

【0220】

術後の画像化
化合物１の蛍光を、腫瘍組織及び正常組織の組織病理学的な発見と相関させる目的のため、標準的病理検査の各ステップで調製した術後試料（ＢＬＳ試料）から化合物１の蛍光画像を取り込んだ。画像化及び蛍光定量化を標定する能力を有する試験用カメラ、ＬＩ ＣＯＲ ＰＥＡＲＬを使用して、複数の試料にわたり蛍光強度を比較した。

【0221】

図１２Ａは、５つの用量レベルで投薬した１５人の患者すべてに対して、標準的病理検査で選択された複数のＢＬＳに対する、組織像で確認した腫瘍及び正常組織領域のＭＦＩを示す（ＢＣ患者からは新鮮な試料及びＮＨＳＣＣ患者からはホルマリン固定（ＦＦ）試料）。腫瘍ＭＦＩは用量と共に増加した。正常組織のＭＦＩも用量と共に増加した。１０分の時点で各患者の血漿濃度に対してプロットした場合（図１２Ｂ）、組織像からのＭＦＩは、腫瘍及び正常組織の試料が、各患者（ｎ＝１５）に対して明白な境界（重複なし）を示すことを確認した。これは、外科医がバックグランド組織から腫瘍を線引きするのを援助する、リアルタイム画像で誘導される手術に対して重要な主要因子である。用量と同様に、ＭＦＩは初期の血漿濃度の増加と共に増加した。これらの数字はまた、ホルマリン固定組織（ＦＦ）対新鮮組織又はＨＮＳＣＣ対ＢＣ組織の間での蛍光シグナルにおける系統的な傾向が存在しないことを示している。

【0222】

術中画像化と同様に、組織像により確認した腫瘍及び正常な領域からの術後蛍光を使用して計算したＴＢＲ（図１３Ａ）及びＣＮＲ（図１３Ｂ）は高い可変性を示し、用量に対して比較的一定のままである。

【0223】

第１ａ相の要約
ＳＯＣ ＢＣ又はＨＮＳＣＣがん手術を受ける１５人の患者において、手術の２４＋８時間前に投与される化合物１の単回静脈内投与後、オープンフィールド及びクローズドフィールドＮＩＲカメラを使用して、術中及び術後の蛍光画像化を実施した。０．１～１．２ｍｇ／ｋｇの用量の間で５つの異なる用量レベルを評価した。これらのデータは、すべてのＨＮＳＣＣ及びＢＣ患者において、化合物１で腫瘍を画像化する実現可能性を実証している。化合物１画像化は、ＩＣＧを検出する複数のＮＩＲカメラを用いて可能であった。各患者に対して腫瘍組織と正常組織との間でＭＦＩは十分に画定された。腫瘍組織と正常組織との両方に対してＭＦＩは、評価した用量範囲でわずかに増加した。蛍光比（ＣＮＲ及びＴＢＲ）は可変であるが高く、腫瘍組織と正常組織との蛍光の間にシャープな境界をさらに例示する。ＣＮＲ及びＴＢＲは用量と共にいかなる系統的な増加又は低減も示さず、ＢＣ及びＨＮＳＣＣ腫瘍に対して非常に類似していた。

【0224】

試験の第１ｂ相部分では、化合物１の安全性、ＰＫ、及び画像化実現可能性のさらなる評価のために、第１相試験の第１ａ相部分から最も高い用量（１．２ｍｇ／ｋｇ）を選択した。試験の第１ｂ相部分では、４つの腫瘍の種類（ＢＣ、ＨＮＳＣＣ、ＣＲＣ、及びＥＣ）を有する１５人の追加の患者が、投薬後２４±８時間の手術／画像化時間において化合物１（１．２ｍｇ／ｋｇ）の投与を受けた。

【0225】

試験の第１ｂ相部分に対する化合物１の１．２ｍｇ／ｋｇ用量レベルの選択は、第１ａ相部分からの以下の結果に基づく。第１ａ相試験では、安全性プロファイルは試験したすべての用量レベルにおいて同等であり、より高い用量において、いかなる特定の安全性の懸念又は傾向をも上昇させることはなかった。化合物１の血漿曝露は用量と比例して増加した。平均蛍光強度は化合物１の血漿曝露と共に増加した。ＣＮＲ及びＴＢＲ値は可変であったが、高いままであり（２～５の範囲）、インビボ腫瘍と術後の試料蛍光の両方について用量と共に低減することはなかった。これらのデータは、より高い蛍光強度と共にできるだけ高い用量／曝露を使用して、追加の腫瘍の種類及び内視鏡カメラ、並びに他の潜在的に困難なシナリオ、例えば、正常組織で覆われた腫瘍、解剖学的難題を有する腫瘍場所、非浸潤性乳管癌、多病巣性腫瘍、及び小さなリンパ節転移などを用いて、画像化実現可能性を評価することを支持している。

【0226】

試験の第１ｂ相部分において、化合物１の安全性、ＰＫ、及び画像化実現可能性を評価するために、第１相試験の第１ａ相部分からの最も高い用量（１．２ｍｇ／ｋｇ）を選択した。試験の第１ｂ相部分では、４つの腫瘍の種類（ＢＣ、ＨＮＳＣＣ、ＣＲＣ、及びＥＣ）を有する１５人追加の患者が、投薬後２４±８時間の手術／画像化の時点において化合物１（１．２ｍｇ／ｋｇ）の投与を受けた。

【0227】

蛍光画像
化合物１は、１０人／１５人の患者の腫瘍において術中蛍光が発し、これには５人のＨＮＳＣＣのうちの５人、４人のＢＣのうちの３人、３人のＣＲＣのうちの２人が含まれていた。１人の深部直腸腫瘍及び１人の深部ＢＣ腫瘍は術中に視覚化することができなかったが、これは限定された浸透深さによるもので、ＮＩＲ画像化に対して驚くことではない。３人の腔内ＥＣ腫瘍は管腔外画像化で検出されなかった（１人のＥＣ患者は病理学的完全奏効を有した）。第１ａ相と同様に、化合物１の蛍光は、第１ｂ相のすべての陽性の縁ＢＣ及びＨＮＳＣＣ患者を検出した。腔内又は深部腫瘍のいずれも最終病理検査で陽性の縁を有さなかった。第１ａ相と同様に、術後に化合物１は、すべての患者及び腫瘍の種類からの組織スライスで蛍光を発した（生存腫瘍を有する３人のＥＣ患者のうちの２人を含む）。術後の画像は、明るい蛍光領域と青色／暗色領域との間にシャープな境界を明確に示す。

【0228】

第１ｂ相は、ＢＣ及びＨＮＳＣＣにおける画像化実現可能性を確認し（第１ａ相と同様）、腫瘍組織と正常組織との間に類似のシャープな境界を有する他の固形腫瘍において画像化実現可能性を実証している。

【0229】

第１ａ相及び第１ｂ相の平均蛍光強度－原発性腫瘍
術中画像化
以下の分析では、第１ａ相及び第１ｂ相において１．２ｍｇ／ｋｇを投薬したすべての患者からのデータを合わせた。ＨＮＳＣＣ（ｎ＝７）、ＢＣ（ｎ＝５）、ＥＣ（ｎ＝３）、及びＣＲＣ（ｎ＝３）を有する合計１８人の患者が第１ａ相及び第１ｂ相において１．２ｍｇ／ｋｇの化合物１の投与を受けた。

【0230】

術中のＭＦＩ、ＣＮＲ及びＴＢＲは、術中画像化が可能な患者の腫瘍に対して計算した（１８人のうち１１人の患者の腫瘍、表１５を参照されたい）。術中のＣＮＲ及びＴＢＲ値はすべての患者に対して高く、これは個々の手術に対して腫瘍組織と正常組織との間の蛍光強度の明白な境界を示している。これは、外科的切除中、外科医が、腫瘍をバックグランドからリアルタイムで線引きするのを潜在的に援助することができた重要な主要因子である。これらのＣＮＲ及びＴＢＲの結果はまた、第１ｂ相結果が第１ａ相結果の確証であることを示している。

【0231】

第１ｂ相結果の要約
第１ｂ相からのデータは、化合物１が、１．２ｍｇ／ｋｇの用量で十分に許容され、ＢＣ、ＨＮＳＣＣ、ＣＲＣ、腹膜転移、及びおそらくＥＣ（術後画像化により示されている通り）において術中と術後の両方で蛍光の腫瘍可視化を可能にし、固形の全腫瘍の画像化のための化合物１の腫瘍非依存的作用機序を支持していることを明確に示す。
・化合物１（ＮＯＶＡＤＡＱ及びＯｌｙｍｐｕｓ及びＰＥＡＲＬ）並びに管腔外ＣＲＣ（ＮＯＶＡＤＡＱ）を使用して２人の患者において腹膜転移を視覚化した。
・ＢＣを有する患者において非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）は、インビボとバックテーブルの両方において、化合物１により検出することができ、これは術中ガイダンス及び意思決定に対して良い方向であることを示している。
・ＢＣを有する患者において小葉癌（及び上皮内小葉癌）が化合物１で検出された。
・化合物１を使用した切除直後の試料に対する縁の評価は可能なようにみえる（試料全体とＢＬＳの両方に対して）。

【0232】

化合物１を使用した術中画像化ＥＣの値は、最小侵襲性カメラシステムの感度の欠如により術中にいかなる画像も収集することができなかったという事実により評価することができなかった。しかし、ＥＣ組織スライスは、ＬＩ－ＣＯＲ Ｐｅａｒｌカメラによる化合物１の画像化で視覚化された。画像化に対して化合物１投薬／スケジュールを最適化すること、並びにカメラ技術における改善により、この制限を克服することができる。

【0233】

第１相試験の第１ｂ相部分は、ＩＣＧを検出するように設計されている複数のＮＩＲカメラを用いた化合物１の画像化実現可能性をさらに確認した。

【0234】

化合物１を用いた術中の蛍光の画像化は、ＳｕｒｇＶｉｓｉｏｎ Ｏｐｅｎ ＡｉｒとＮＯＶＡＤＡＱ ＳＰＹ Ｅｌｉｔｅ蛍光カメラの両方に対して、１．２ｍｇ／ｋｇの用量で臨床的に可能である。

【0235】

Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｌａｐａｒｏｓｃｏｐｅ及びｆｉｒｅｆｌｙ ｃａｍｅｒａ付きＤａＶｉｎｃｉ Ｒｏｂｏｔを使用した、化合物１による腫瘍の術中可視化は、両方のカメラの感度がＳｕｒｇＶｉｓｉｏｎ及びＮＯＶＡＤＡＱ ＳＰＹと比較して低いことから困難であった。より高い用量が最適な画像化性能に対して必要とされ得る。

【0236】

実施例１１．リンパ節の画像化
リンパ節解離後、担当病理学者によりリンパ節が同定され、存在する場合収集された。収集後、ＰＥＡＲＬ画像化を使用して、さらなる処理前に単一のリンパ節を画像化した。ＩｍａｇｅＪ（ＦｉＪｉ）を使用して画像を処理した。蛍光画像は、蛍光が存在するかどうかについて、組織像を見ていない２人の別個の研究者により再調査された。蛍光画像を見ていない病理学者は、Ｈ／Ｅ染色に基づき、腫瘍侵入についてリンパ節が陽性であるかどうか又は単離した腫瘍細胞に対して評価した。

【0237】

患者ごとの結果が表１２に提示されている。４つの腫瘍の種類全域にわたり、リンパ節切除を受けた患者から得た４０３個の利用可能なリンパ節のうち、６４個が病理検査により確認された腫瘍を含有し（３５個が単一の患者からのもの）、このうち３０個のリンパ節において化合物１が蛍光を発した。化合物１は、３３９個の病理検査で陰性のリンパ節のうちの２９３個で正確に蛍光を発しなかった。

【0238】

【表12】

【0239】

全体的な性能特徴は表１３に提示されている。
化合物１の全体的感度＝（真の陽性）／（真の陽性＋偽陰性）＝３０／（３０＋３４）＝０．４７。
化合物１の全体的特異性＝（真の陰性）／（偽陽性＋真の陰性）＝２９３／（４６＋２９３）＝０．８６。

【0240】

【表13】

【0241】

転移性リンパ節の術中の正確な検出は極めて必要とされているが、未だに満たされておらず、技術的に困難である。画像化時間≧２４時間において、原発性腫瘍蛍光がリンパ節に流出することによりリンパ節内に恐らく非特異的な蛍光が存在すると仮定される。感度の低さは、原発性腫瘍と比較してリンパ節のサイズが小さい（すなわち、絶対的蛍光が少ない）ことにより、転移性リンパ節内の化合物１が比較的少量であることに起因し得る。よって、より早い画像化時間でのより高い用量により、原発性腫瘍及び転移性リンパ節の化合物１の蛍光画像化に対して改善された診断性能を提供することができる。

【0242】

実施例１２．化合物１の蛍光画像化－臨床的有用性
化合物１を用いた蛍光画像化は生存腫瘍を有するすべての患者（３０人のうち２９人の患者）及び評価した４つのすべての腫瘍の種類（ＨＮＳＣＣ、ＢＣ、ＣＲＣ、又はＥＣ）に対して可能であった、図１５及び１６。術中に（手術の１時間以内、インビボとバックテーブル画像化の組合せ）、１３人すべてのＨＮＳＣＣ腫瘍、１１人のうち５人の表在するＢＣ腫瘍、及び３人のうち２人のＣＲＣ腫瘍を化合物１の蛍光で視覚化することができた。１１人のうち６人の深在するＢＣ腫瘍、３人のうち２人の腔内ＥＣ（３人のうち１人のＥＣが病理学的完全奏効を有することが確認された）及び３人のうち１人のＣＲＣ（離れた直腸腫瘍）腫瘍は視覚化することができなかった。これらの設定の一部において術中蛍光が存在しないことは恐らく、腫瘍が正常組織で覆われている場合、ＮＩＲ浸透深さに限界がある、現在のロボット及び内視鏡カメラの感度が低い、ある特定の解剖学的位置に到達するための最適な用量／スケジュール及び物理的難題によるものである。特筆すべきは、これら腔内又は深部腫瘍のうちで最終組織病理検査において縁が陽性だったものはないことである。

【0243】

術後、腫瘍の種類又は用量に関係なくすべての腫瘍は標準的な、蛍光の、術後ワークフロー分析により蛍光性があり、その一方で健康な組織試料で蛍光性があったものはない。

【0244】

図１１Ａ～１１Ｂ、及び定量的蛍光データは、腫瘍蛍光がバックグランド蛍光からうまく画定されていることを明確に示す。複数の患者にわたって評価した４つの腫瘍の種類に対して、腫瘍を正常組織からのシャープな線引きにより視覚化することを助ける化合物１のこの能力は、固形がんにおける化合物１の画像誘導手術に対する腫瘍非依存的画像化実現可能性を確証する。

【0245】

腫瘍陽性の縁の蛍光検出
合計２４人の患者（ＨＮＳＣＣ：１３；ＢＣ：１１）の中で、９人の患者（ＨＮＳＣＣ：６；ＢＣ：３）が、ＳＯＣ手術中に検出されなかった、組織学的に確認された腫瘍陽性手術の縁を有した。蛍光誘導された縁の評価を患者ごとに実施した。化合物１の画像化は、これら手術の縁を患者のすべてで視覚化し、１００％の感度を生じた。すべての蛍光陰性手術の縁は、最終組織病理学的評価に相関した（偽陰性なし）。１５人のうち５人の偽陽性が存在し（６７％特異性）、このうち蛍光が検出された組織は、組織病理学的評価により腫瘍であることは確認されなかった。１４人のうち５人（３６％）の患者が腫瘍に対して陰性である蛍光組織を有した（ＰＰＶ：６４％）。

【0246】

腫瘍の種類により、陽性の縁患者を検出するための化合物１の感度及び特異性はＢＣに対してそれぞれ１００％及び７５％であり、ＨＮＳＣＣに対して１００％及び５７％であった。組織学的の縁状態が入手可能であり、陰性であった、３人のうちの２人のＥＣ患者及び３人のうちの１人のＣＲＣ患者において、化合物１蛍光は陰性であった。これら初期データは腫瘍非依存的診断性能を示唆し、化合物１の画像化を使用した手術中の腫瘍陽性の縁の正確な検出に対する実現可能性を実証している。

【0247】

表１４は、すべての４腫瘍の種類について、個々の患者に対する縁の状態に対する病理検査対蛍光相関関係を要約している。

【0248】

【表14】

【0249】

偽陽性蛍光の縁
３人のＨＮＳＣＣ患者（ＯＮ１１０８、ＯＮ１１１４、ＯＮ１１２１）及び２人のＢＣ患者（ＯＮ１１２３、及びＯＮ１１５１）において、偽陽性蛍光の縁を検出し、これらは最終組織病理検査で腫瘍を含有しなかった。ＨＮＳＣＣ患者では、偽陽性蛍光は１人の患者において神経組織、別の患者において唾液腺、及び第３の患者の試料の縁の上の蛍光スポットに対応した。２人のＢＣ患者では、偽陽性蛍光の縁は、胸筋筋肉の主要筋膜、及びＤＣＩＳ組織に対応し、これは陰性の縁と組織学的に分類された。

【0250】

化合物１蛍光は、術中に乳房切断術患者の皮膚において、並びに乳房切断術患者のエクスビボ試料に明確に検出された。乳房切断術患者において、化合物１蛍光は乳頭に観察された。

【0251】

実施例１３．潜在性疾患の化合物１検出
化合物１蛍光は、ＳＯＣ術前又は手術中又は術後病理検査では見落としていたであろう５つの追加の潜在性病変（ＨＮＳＣＣを有する１人の患者及びＢＣを有する４人の患者）を検出した。蛍光と組織病理検査の両方で陽性の手術の縁を有するＨＮＳＣＣを有する１人の患者（ＯＮ１１１３）において、標準治療による手術では見落としていたであろう衛星転移を、化合物１蛍光画像誘導手術による創傷床に検出した。

【0252】

１人のＢＣ患者（ＯＮ１１５１）は、創傷床とバックテーブルでの試料の縁の蛍光の両方が偽陽性結果と分類され（すなわち、外科腫瘍学会及び米国放射線治療学会ガイドライン（Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ）で定義されているような組織病理検査陰性の縁）、蛍光は小管壁内にがん細胞を有する実体であるＤＣＩＳに対応し、これは、国際ガイドラインによると追加の手術が必要とされることもあり、この病変を検出することの臨床的有用性を強調するものである。

【0253】

他の３人のＢＣ患者では、組織病理検査プロセシング中の蛍光画像化は、見落としていたであろう追加のがんを検出した。これらのうち、患者ＯＮ１１０１及びＯＮ１１２８は、化合物１により検出された組織スライス内にＢＣの追加の衛星転移があった。患者ＯＮ１１１５では、化合物１は第２の原発性腫瘍病変（トリプルネガティブＢＣ）を検出し、これは術前ワークアップ及び手術中に見落としたものであった。

【0254】

ＣＲＣを有する３人の患者のうち、外科医は、手術中及びＳＯＣ手順により、１人の患者（ＯＮ１１３０）に対して予期せぬ腹膜転移を検出した。第２のＣＲＣ患者は、腹膜転移の術前の臨床上の疑いをすでに提示していた（ＯＮ１１２０）。両方の患者において、腹膜転移は、蛍光の腫瘍陽性病変であり（図１７）、最終組織病理検査で悪性と確認された。

【0255】

同様の高い感度及び特異性で、腫瘍の種類全域にわたり、腫瘍陽性の縁及び潜在性疾患を検出する能力は、化合物１画像誘導手術が、手術患者及び術後患者管理に対する臨床的意思決定を援助する重大な可能性を強調する。

【0256】

化合物１の診断性能
この第１相試験では、術中及び術後画像化データを化合物１の診断性能の初期の分析に使用した。性能パラメーター、例えば、ＭＦＩ、ＣＮＲ、及びＴＢＲをインビボ及び組織スライスにおいて計算して、腫瘍組織をバックグランドから線引きする化合物１の能力を特徴付けた。隣接する正常組織から腫瘍組織を検出する感度及び特異性を組織試料蛍光を使用して評価し、ＲＯＣ曲線として提示した。病理検査で確認した腫瘍陽性の縁の検出における化合物１蛍光の感度、特異性、及びＰＰＶを患者レベルで得た。

【0257】

表１５は、インビボでの画像化が可能である、又は蛍光定量化を可能にする組織スライスが入手可能であるすべての腫瘍の種類及び患者に対するインビボ及びエクスビボのＣＮＲ及びＴＢＲ値を要約している。これらの比は可変であるが高く、腫瘍組織のＭＦＩがバックグランド組織のものよりも常に高く、蛍光誘導手術に対して重要な因子であることを示している。ＣＮＲ及びＴＢＲ値は、用量又は腫瘍の種類によるいかなる系統的変動も示さなかった。

【0258】

術中インビボのＣＮＲ及びＴＢＲ
１．２ｍｇ／ｋｇにおけるインビボのＣＮＲ及びＴＢＲ値は、インビボでの画像化が可能であったすべての患者に対して（１８人のうちの１１人の患者：ＨＮＳＣＣでは７人のうちの７人；ＢＣでは５人のうちの３人；ＥＣでは３人のうちの０人の；及びＣＲＣでは３人のうちの１人）、すべての腫瘍の種類の全域にわたり高かった。信頼できる評価が可能な表面に直接曝露された粘膜の腫瘍（ＨＮＳＣＣ）のみを使用すると、１．２ｍｇ／ｋｇでは、中央値ＣＮＲは５．６、四分位数範囲１７．６であり、中央値ＴＢＲは２．６、四分位数範囲１．４であった。これらの高いＣＮＲ及びＴＢＲ比は、各患者の手術に対してバックグランド組織からの腫瘍組織のシャープな線引き、すなわち正確な画像誘導手術に対する主要な必要条件を意味する。

【0259】

手術の縁の検出における術中診断性能
化合物１は、腫瘍陽性の手術縁を有する患者の検出において偽陰性なしで１００％の感度を示した。手術の縁を有する患者を検出するための化合物１の特異性及びＰＰＶはそれぞれ６７％及び６４％であった。腫瘍の種類ごとでは、手術の縁を有する患者を検出するための化合物１の感度及び特異性は、ＢＣに対してそれぞれ１００％及び７５％であり、ＨＮＳＣＣに対して１００％及び５７％であった。組織学的に縁の状態が入手可能であり陰性であった、３人のうち２人のＥＣ患者及び３人のうち１人のＣＲＣ患者において、化合物１蛍光は陰性であった。これら初期データは、腫瘍非依存的診断性能を示し、化合物１画像化を使用した手術中の腫瘍陽性の縁の正確な検出に対する実現可能性を実証している。

【0260】

【表15】

【0261】

術後のＭＦＩ、ＣＮＲ、ＴＢＲ、及びＲＯＣ曲線
術中蛍光強度は、各手術環境の独特な提示により、患者又は用量レベル間で標準化及び比較することができない。複数の変数、例えば、カメラ角度、カメラと組織の距離、腫瘍場所、及び他の組織又は脂肪による被覆が蛍光シグナルの絶対値に影響を与える。患者及び用量を横断したＭＦＩの直接比較を可能にするため、蛍光に対する標準的術後ワークフローを使用して、患者の組織スライスをＬＩ－ＣＯＲ Ｐｅａｒｌ、標準化クローズドフィールドカメラで画像化した。組織病理学的に証明された生存腫瘍組織を有するすべての患者において、腫瘍組織は、正常組織と比較して、用量及び腫瘍の種類に関係なく、組織スライス上のシャープな形態学的線引きと共により高い蛍光シグナル強度を示した。ＭＦＩは、試験した用量範囲において用量と共にわずかに増加したが、ＣＮＲ及びＴＢＲは可変であり、依然として高く、用量又は腫瘍の種類によっていかなる系統的変動を示さなかった。これら組織スライス上の測定レベルにおいて実施したＲＯＣ曲線分析は、０．９７２６の曲線下面積、Ｐ＜０．０００１を示し、優れた性能を示した。これらのデータは、化合物１の高感度な及び特定の及び腫瘍非依存的性能特徴を支持している。

【0262】

術中の発見をさらに検証するためのエクスビボワークフロー分析は、組織病理学的に証明された生存腫瘍組織を有するすべての対象の腫瘍組織は、正常組織と比較して、腫瘍の種類及び用量コホートに関係なく、組織スライス中のシャープな形態学的な線引きと共により高い蛍光シグナル強度を示したことを示した（図１６、パネルｙ）。腫瘍の平均蛍光強度（ＭＦＩ）は用量と共に増加した（図２０、パネルａ）。すべてのコホートにおいて、腫瘍ＭＦＩは非腫瘍組織のもよりかなり高かった。すべての組織スライスの中央値腫瘍対バックグラウンド比（ＴＢＲ）（ｎ＝９７、２６人の対象から）は、４．５であり、四分位数範囲（ＩＱＲ）３．１であった。第１ｂ相試験による腫瘍検出及び感度に対する最適な用量は１．２ｍｇ／ｋｇ（ＴＢＲ４．５、ＩＱＲ３．０）であり、用量グループの腫瘍組織のＭＦＩは、入手可能な組織スライスのそれぞれの正常組織と比較してかなり高かった。これら組織スライスの受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析は、０．９８７５のＡＵＣを示した（図２０、パネルｇ）。

【0263】

実施例１４．画像誘導がん手術に対する腫瘍アシドーシスに対するナノスケール巨大分子の協同作用応答
この人類初の蛍光画像誘導手術試験において、有力なインビボ及びエクスビボデータは、腫瘍アシドーシスから生成した低いｐＨを、ＨＮＳＣＣ、ＢＣ、ＥＣ、及びＣＲＣを含む様々な固形腫瘍を有する患者においてがんに対する腫瘍非依存的バイオマーカーとして利用することができることを示している。ＰＨ感受性蛍光造影剤である化合物１は、腫瘍アシドーシスにより特異的及び耐久的に活性化され、腫瘍を正常組織からシャープに線引きし、いくつかの事例では、ＳＯＣから得られない潜在性がんについての情報を提供した：ＨＮＳＣＣを有する患者におけるすべての陽性の縁（９人のうち９人）、ＤＣＩＳ、及び衛星がんの術中の検出並びに病理検査試料における３つの追加の衛星病巣及び２次原発のエクスビボでの検出。

【0264】

画像化のための腫瘍ｐＨの成功的臨床利用は、異なる患者及び腫瘍間での代謝及び表現型のばらつきを克服する化合物１の設計により可能である。化合物１蛍光画像化を使用してすべての組織学的に証明された腫瘍陽性手術の縁（９件のうち９件）を検出することが可能であった。最も重要なことに、いかなる所与の患者に対しても腫瘍とバックグランド蛍光との間に重複はなかった。バックグランド活性化の抑制並びにｐＨ応答性ユニマーの協力行動による閾値の酸性ｐＨにおける完全及び不可逆的な消光が記載される。この協同作用は、個々のユニマーの試験では予測されておらず、ミセルとして相互作用している複数の別個のポリマーから現れた現象であり、観察された臨床効果を起こしている。

【0265】

結論
腫瘍の場所について外科医は通常すでに大規模な情報を有するため、がんの位置の正確な、はっきりとした線引きが臨床的成功に必要とされる。手術結果を改善するための光学的画像化出力の能力は、術前画像化及び術中検査から外科医が持っていない情報を送達することが前提となる。ＳＯＣにより提供されない化合物１からの追加の情報は臨床的ケアにかなり影響を与える可能性がある。

【0266】

この人類で初めての第１相試験では：
・化合物１蛍光画像化は評価したすべての４腫瘍の種類（ＨＮＳＣＣ、ＢＣ、ＣＲＣ、又はＥＣ）で可能であり、その作用機序により予想される通り、化合物１を用いた腫瘍非依存的画像化に対する実現可能性を実証した。
・化合物１蛍光は、組織像で確認した腫瘍対正常組織の間のシャープな境界を、リアルタイム画像誘導手術に対する重大な因子である、高いＣＮＲ及びＴＢＲ値と共に示した。
・化合物１画像化は、切除１時間以内に、インビボ創傷床の画像化を、切除した試料のバックテーブルでの画像化と合わせて使用して、９種すべてにおいて腫瘍陽性の縁を有する患者を検出した。インビボの創傷床画像化は、所定の手術で見落とされており、標準的病理検査で確認された他の２つの潜在性腫瘍を検出し、臨床的意思決定及び患者管理における化合物１画像誘導手術の有意な値に対する可能性を実証した。
・化合物１蛍光は、試験で使用した複数のＮＩＲカメラ（ＮＯＶＡＤＡＱ ＳＰＹ Ｅｌｉｔｅ、ＳｕｒｇＶｉｓｉｏｎ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ Ａｉｒ、及びＬＩ－ＣＯＲ Ｐｅａｒｌ Ｉｍａｇｉｎｇシステム）で検出可能であった。

【0267】

したがって、化合物１、すなわち静脈内に投与される、ｐＨ活性化可能な、ＮＩＲ蛍光造影剤は、固形腫瘍（ＨＮＳＣＣ、ＢＣ、ＣＲＣ、及びＥＣ）の正常組織からの明白な線引きを伴う、インビボとバックテーブルでの蛍光可視化の両方を可能にする。結果は、他の方法では見落としていたであろう、すべての腫瘍陽性手術の縁及び潜在性疾患を、複数の患者において検出する化合物１の能力を実証し、すべての調査された腫瘍の種類で腫瘍の腫瘍非依存的蛍光可視化を示している。これらのデータは手術後の期間中、治療計画及び患者管理の臨床的意思決定における化合物１の有意な可能性を強調している。

【0268】

実施例１５．初期第２相試験による、複数のＮＩＲカメラシステムから及び複数の治験部位からの、投薬から３～６時間後の乳房、ＨＮＳＣＣ、前立腺、及び卵巣腫瘍の評価
第２相臨床研究の間、化合物１のＩ．Ｖ．注射から３～６時間後、腫瘍を画像化する能力が、乳がん、ＨＮＳＣＣ、前立腺がん、及び卵巣がんを有する患者に対して実証された（図２２～２６）。試験はまた、異なるＮＩＲカメラから、及び複数の部位から収集したデータを利用した。すべての患者は、単回Ｉ．Ｖ．用量の化合物１の投与を受け、これに続いて化合物１の点滴からおよそ３～６時間後、所定の手術を受けた。手術の６±３時間前化合物１（２ｍｇ／ｋｇ）を投薬した乳がん患者（１０１－００１；ＵＰｅｎｎ；ＶｉｓｉｏｎＳｅｎｓｅ ＮＩＲカメラ）及び手術の６±３時間前化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）を投薬したＨＮＳＣＣがん患者（１０２－００７；ＵＴＳＷ；ＮＯＶＡＤＡＱ ＳＰＹ Ｅｌｉｔｅ ＮＩＲカメラ）からの、切除前及び切除後の術中及びバックテーブルでの腫瘍の可視化が図２２に示されている。いずれの場合も、切除前又は切除後の腫瘍／試料の白色光画像は、観察された蛍光と白色光画像との重ね合わせと並置され、腫瘍の存在を示している。腫瘍切除の６±３時間前に化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）を投薬した２人の患者（１０２－００８及び１０２－００９；ＵＴＳＷ；Ｄａ Ｖｉｎｃｉ Ｆｉｒｅｆｌｙ ＮＩＲカメラ、最新版ソフトウエア／ハードウエア付）からの前立腺がんの術中／インビボ画像化及び腫瘍切除後の創傷床の画像化が図２３に示されている。いずれの場合も、切除前の腫瘍／試料及び手術創傷床の白色光画像化は、観察された蛍光の画像と並置されている。データは、摘除前腫瘍からの蛍光及び摘除後の手術創傷床内の蛍光の不在を示している。化合物１（３ｍｇ／ｋｇ、６±３時間）を投薬した卵巣がんを有する患者（１０１－００５）からの腫瘍を、図２４に示されている通り切除前にインビボで画像化した。白色光画像は、観察された蛍光と白色光画像の重ね合わせと並置されており、腫瘍の存在を示している。図２２～２６からのデータは、投薬から３～６時間後、化合物１が腫瘍を画像化する能力及びする複数の種類のＮＩＲカメラ並びに異なる臨床的部位の使用を実証している。

【0269】

実施例１６．固形新生物を有するイヌにおける腫瘍選択的造影剤の評価
材料及び方法：試験に対する評価及び動員後、イヌ患者には、（Ａ）可能な種類の病変を同定するための手術前分析を行い、（Ｂ）化合物１トレーサー０．５～２．０ｍｇ／ｋｇを手術の１８～７８時間前に投与した。術中、（Ｃ）腫瘍除去の前及び後（又は肢の切断後）、Ｈａｍａｍａｔｓｕ ＰＤＥ又は特注ＮＩＲカメラを使用して、手術中の画像化を実施した。摘除組織を（Ｄ）ＬＩ－ＣＯＲ Ｐｅａｒｌ Ｉｍａｇｉｎｇステーションで画像化し、腫瘍の正常組織に対する比を適宜計算した。次いで、摘除組織を（Ｅ）組織病理検証のために保存した。安全性は、有害作用という点から、健康診断、臨床試験及び点滴から退院までの有害事象の記録を介して別々に評価した。

【0270】

結果：試験のために集められた避妊手術又は不妊手術を受けたイヌ患者からのデータの要約を以下に示す（表１６）。年齢４～２才、体重２０．９～９．５ｋｇの範囲の異なる種類及び腫瘍の範囲を有する、合計７匹のイヌからの結果が提示されており、これは２種以上の腫瘍が存在する事例を含んだ。これまで試験した用量は０．５～２．０ｍｇ／ｋｇの範囲であった。ほとんど全ての事例において、一部の手術前試験、例えば、放射線撮影、骨生検、又は微細な針吸引及び細胞学を実施し、これが表の脚注に記されている。上記に記載される手順の通り、化合物１を動物に投与し（「用量」）及び２４又は７２時間後（「時間」）、腫瘍を除去する手術を開始した。摘除組織は病変の確認のため獣医学の病理学者に送られ、これは表において解剖学的位置と共に記述されている。急性有害作用も慢性有害作用も、注射の時間から動物の退院及び経過観察の予約時（縫合糸除去のため）までモニターされ、指摘された。

【0271】

【表16】

【0272】

表１６に記載される試験からの結果は、以下を実証した：（ｉ）化合物１の注射からリハビリテーション、手術後までの任意のステージにおいて、イヌのいずれに対しても有害作用は観察されなかった、（ｉｉ）手術前生検及び組織病理検査からのデータの組合せに基づき、罹患組織が広範囲の腫瘍にわたり観察されたが、これら罹患組織に対して予想された場所に蛍光シグナルが観察された、並びに（ｉｉｉ）ある事例では、原発性腫瘍の除去のための手術中、潜在性疾患が同定された。

【0273】

イヌ患者に対する結果は、白色光並びにＬＩ－ＣＯＲ Ｐｅａｒｌ ｉｍａｇｉｎｇステーションを使用したＮＩＲ蛍光画像と共に図２７～３２に示されている。図２７は肥満細胞腫瘍摘除を示している。左側の白色光画像は、摘除組織を示し、腫瘍組織はまた垂直切除を実施することにより曝露された。疑わしいがん組織は図の右側のＮＩＲ蛍光画像において明確に明らかであり、各図の右側の摘除した末端組織（矢印）と区別されている。図２８は、イヌ患者から肢の切断により摘除し、白色光で画像化した骨肉腫を示す。Ｈａｍａｍａｔｓｕ ＰＤＥ及びＬＩ－ＣＯＲ Ｐｅａｒｌを使用してエクスビボ画像化を実施した。図３２は、イヌ患者のリンパ節の末端軟部組織肉腫内の潜在性疾患の検出を示す。左中足骨領域に位置する原発性軟部組織肉腫のイヌ患者からの外科的除去の間、リンパ節は蛍光性があることが観察され、摘除され、手術中に白色光で画像化し、次いでＨａｍａｍａｔｓｕ ＰＤＥ ＮＩＲカメラをインビボで使用し、ＬＩ－ＣＯＲ Ｐｅａｒｌ ＮＩＲ Ｉｍａｇｉｎｇステーションをエクスビボで使用して画像化した。

【0274】

結論：骨肉腫、軟部組織肉腫、肥満細胞腫瘍、卵胞の嚢胞及び他の罹患した組織を有する合計７匹のイヌをイヌ患者試験で評価した。これまで得た結果は以下を実証した：（ｉ）化合物１の注射から退院まですべてのイヌに対して有害作用なし、（ｉｉ）化合物１により導かれたがんの組織の位置と、健康診断、試験したすべての悪性腫瘍に対する手術前生検、及び切除後の組織病理検査からのデータとの相関関係；並びに（ｉｉｉ）試験での１匹のイヌ患者における潜在性疾患の同定（転移性膝窩リンパ節）。さらに、蛍光画像化は、３台のカメラを用いて可能であり、これらのすべてがＩＣＧを検出し、これは画像化はＩＣＧ蛍光の検出が可能ないずれのカメラでも実施することができることを示唆するものである。これらの結果はこれらの発がん性遺伝子型が実質的に異なる広範囲な腫瘍全域での化合物１の安全性及びその有効性を支持し、用量レジメンにより、ヒト治験に臨床的に関連する。

【0275】

本発明の好ましい実施形態が本明細書に示されて、記載されるが、このような実施形態は単なる例示として提供されていることは当業者には明らかである。本発明から逸脱することなく、多くの変化形、変更、及び置換がここで当業者に生じる。本明細書に記載される本発明の実施形態に対する様々な代替形態が、本発明を実施するのに利用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲は、本発明の範囲を定義し、これら特許請求の範囲及びこれらの同等物の範囲内の方法及び構造は、本発明の範囲により網羅されることが意図されている。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図8E】

【図8F】

【図8G】

【図8H】

【図8I】

【図8J】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図13A】

【図13B】

【図14】

【図15-1】

【図15-2】

【図15-3】

【図16】

【図17-1】

【図17-2】

【図18A】

【図18B】

【図19A】

【図19B】

【図20A】

【図20B】

【図20C】

【図20D】

【図20E】

【図20F】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28A】

【図28B】

【図28C】

【図28D】

【図29A】

【図29B】

【図29C】

【図29D】

【図30】

【図31】

【図32】

【国際調査報告】