特表 2023-515735 修飾されたアデノ随伴ウイルスベクターおよび中枢神経系へのその送達

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-04-14

(54)【発明の名称】修飾されたアデノ随伴ウイルスベクターおよび中枢神経系へのその送達

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/864 20060101AFI20230407BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20230407BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20230407BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20230407BHJP

   A61K 47/61 20170101ALI20230407BHJP

   A61P 25/14 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 25/08 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 21/02 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 25/24 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 25/02 20060101ALI20230407BHJP

   A61P 21/04 20060101ALI20230407BHJP

【ＦＩ】

C12N15/864 100Z

A61K35/76

A61P25/00

A61P35/00

A61P9/00

A61K47/54

A61K47/61

A61P25/14

A61P25/16

A61P25/28

A61P31/00

A61P37/02

A61P25/08

A61P21/02

A61P25/24

A61P27/02

A61P25/04

A61P29/00

A61P25/02 103

A61P21/04

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022526840

(86)(22)【出願日】2020-11-06

(85)【翻訳文提出日】2022-07-07

(86)【国際出願番号】 EP2020081396

(87)【国際公開番号】W WO2021089856

(87)【国際公開日】2021-05-14

(31)【優先権主張番号】19306450.8

(32)【優先日】2019-11-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．プルロニック

３．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522181566

【氏名又は名称】コエヴェ セラピューティクス

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】ムリエ，フィリップ

(72)【発明者】

【氏名】ブロエカート，ウィレム

【テーマコード（参考）】

4C076

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076BB21

4C076BB40

4C076CC01

4C076CC04

4C076CC07

4C076CC10

4C076CC11

4C076CC32

4C076CC41

4C076DD67

4C076EE30

4C076EE59

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087MA56

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZA01

4C087ZA02

4C087ZA06

4C087ZA08

4C087ZA12

4C087ZA15

4C087ZA16

4C087ZA23

4C087ZA24

4C087ZA33

4C087ZA36

4C087ZA94

4C087ZB07

4C087ZB11

4C087ZB21

4C087ZB26

4C087ZB32

4C087ZC54

(57)【要約】

本発明は、対象の中枢神経系（ＣＮＳ）への細胞の形質導入に使用するため、およびＣＮＳ疾患の予防または処置に使用するための修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに関する。特に、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、ＣＮＳに直接投与されるが、脳室内に投与されない。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

中枢神経系（ＣＮＳ）疾患の予防または処置に使用するための修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
ＣＮＳに直接投与され、
脳室内に投与されない、
修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【請求項2】

前記ＣＮＳ疾患が、ＣＮＳ感染性疾患、ＣＮＳ変性疾患、ＣＮＳ自己免疫疾患、ＣＮＳ腫瘍疾患、脳血管疾患、ＣＮＳ損傷、またはＣＮＳ構造欠陥である、請求項１に記載の使用のための修飾されたＡＡＶベクター。

【請求項3】

前記修飾されたＡＡＶベクターが、線条体内、視床内、または大槽内に投与される、請求項１または２に記載の使用のための修飾されたＡＡＶベクター。

【請求項4】

前記修飾されたＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、およびＡＡＶ１２；またはそれらのシュードタイプ、キメラ、およびバリアントから選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用のための修飾されたＡＡＶベクター。

【請求項5】

ＡＡＶ２ベクターである、請求項１～４のいずれか１項に記載の使用のための修飾されたＡＡＶベクター。

【請求項6】

前記表面に結合した糖類が、単糖類、オリゴ糖、および多糖類を含む群から選択される、請求項１～５のいずれか１項に記載の使用のための修飾されたＡＡＶベクター。

【請求項7】

前記表面に結合した糖類が、ヘキソース、好ましくはマンノース、ガラクトース、またはＮ－アセチルグルコサミンである、請求項１～６のいずれか１項に記載の使用のための修飾されたＡＡＶベクター。

【請求項8】

前記表面に結合した糖類が、ＡＡＶベクターの少なくとも１つのカプシドタンパク質、好ましくはＡＡＶベクターの少なくとも１つのカプシドタンパク質の少なくとも１つの表面に曝露したアミノ酸残基に共有結合している、請求項１～７のいずれか１項に記載の使用のための修飾されたＡＡＶベクター。

【請求項9】

前記表面に結合した糖類が、リンカーを介して共有結合している、請求項１～８のいずれか１項に記載の使用のための修飾されたＡＡＶベクター。

【請求項10】

前記修飾されたＡＡＶベクターが、少なくとも１つの導入遺伝子を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の使用のための修飾されたＡＡＶベクター。

【請求項11】

前記少なくとも１つの導入遺伝子が、３Ｒ ｔａｕ、４Ｒ ｔａｕ、ＡＡＲＳ、ＡＢＣＤ１、ＡＣＯＸ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＧＡ、ＡＧＥＲ、ＡＬＤＨ７Ａ１、ＡＬＧ１３、ＡＬＳ２、ＡＮＧ、ＡＮＸＡ１１、ＡＰＰ、ＡＲＨＧＥＦ９、ＡＲＳＡ、ＡＲＳＢ、ＡＲＶ１、ＡＳＡＨ１、ＡＳＰＡ、ＡＴＮ１、ＡＴＰ１０Ａ、ＡＴＰ１３Ａ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＢＡＸ、ＢＣＬ－２、ＢＤＮＦ、ＢＩＣＤ２、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＳＲ、ＣＣＮＦ、ＣＤＫＬ５、ＣＥＲＳ１、ＣＦＡＰ４１０、ＣＨＣＨＤ１０、ＣＨＤ２、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＢ２、ＣＬＣＮ２ａ、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、ＣＮＴＮ２、ＣＰＡ６、ＣＳＴＢ、ＣＴＮＳ、ＣＴＳＡ、ＣＴＳＤ、ＤＡＯ、ＤＣＴＮ１、ＤＥＰＤＣ５、ＤＭＤ、ＤＮＡＪＢ２、ＤＮＭ１、ＤＯＣＫ７、ＤＲＤ２、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＦＨＣ１、ＥＧＬＮ１、ＥＰＨＡ４、ＥＰＭ２Ａ、ＥＲＢＢ４、ＦＧＦ１２、ＦＩＧ４、ＦＲＲＳ１Ｌ、ＦＴＬ、ＦＵＣＡ１、ＦＵＳ、ＦＸＮ、ＧＡＡ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＬ、ＧＡＬＣ、ＧＡＬＮＳ、ＧＢＡ、ＧＦＡＰ、ＧＬＡ、ＧＬＢ１、ＧＬＥ１、ＧＬＴ８Ｄ１、ＧＮＡＯ１、ＧＮＳ、ＧＯＳＲ２、ＧＰＲ９８、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＳＴＭ１、ＧＵＦ１、ＧＵＳＢ、ＨＣＮ１、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＴＴ、ＨＹＡＬ１、ＩＤＳ、ＩＤＵＡ、ＩＧＨＭＢＰ２、ＩＬ－１、ＩＴ１５、ＩＴＰＡ、ＪＰＨ３、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＴ１、ＫＣＴＤ７、ＬＡＬ、ＬＡＭＰ２、ＬＧＩ１、ＬＭＮＢ２、ＬＲＲＫ２、ＭＡＮ２Ｂ１、ＭＡＮ２Ｂ２、ＭＡＮ２Ｃ１、ＭＡＮＢＡ、ＭＡＴＲ３、ＭＢＤ５、ＭＦＳＤ８、ＮＡＧＡ、ＮＡＧＬＵ、ＮＥＣＡＰ１、ＮＥＦＨ、ＮＥＫ１、ＮＥＵ１、ＮＨＬＲＣ１、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、ＮＲ４Ａ２、ＮＴＲＫ２、ＯＣＡ２、ＯＰＴＮ、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＣＤＨ１９、ＰＥＸ１、ＰＥＸ２、ＰＥＸ３、ＰＥＸ５、ＰＥＸ６、ＰＥＸ１０、ＰＥＸ１１Ｂ、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ１４、ＰＥＸ１６、ＰＥＸ１９、ＰＥＸ２６、ＰＦＮ１、ＰＩＮＫ１、ＰＬＣＢ１、ＰＮＰＯ、ＰＯＮ１、ＰＯＮ２、ＰＯＮ３、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＲＤＭ８、ＰＲＩＣＫＬＥ１、ＰＲＫＮ、ＰＲＮＰ、ＰＲＰＨ、ＰＲＲＴ２、ＰＳＡＰ、Ｓ１０６β、ＳＣＡＲＢ２、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ９Ａｂ、ＳＥＴＸ、ＳＧＳＨ、ＳＩＧＭＡＲ１、ＳＩＫ１、ＳＫＰ１、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣＡ１７Ａ５、ＳＭＮ１、ＳＭＰＤ１、ＳＮＣＡ、ＳＮＲＰＮ、ＳＯＤ１、ＳＰＧ１１、ＳＰＴＡＮ１、ＳＱＳＴＭ１、ＳＴ３ＧＡＬ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＳＴＸ１Ｂ、ＳＴＸＢＰ１、ＳＹＰ、ＳＹＴ１、ＳＺＴ２、ＴＡＦ１５、ＴＡＲＤＢＰ、ＴＢＣ１Ｄ２４、ＴＢＣＥ、ＴＢＫ１、ＴＢＰ、ＴＩＴＦ－１、ＴＲＥＭ２、ＵＢＡ５、ＵＢＥ１、ＵＢＥ３Ａ、ＵＢＱＬＮ２、ＵＣＨ－Ｌ１、ＵＮＣ１３Ａ、ＶＡＰＢ、ＶＣＰ、ＶＰＳ３５、ＷＷＯＸ、およびＸＢＰ１を含む群から選択される遺伝子由来のｃＤＮＡまたはそのフラグメントを含む、請求項１０に記載の使用のための修飾されたＡＡＶベクター。

【請求項12】

前記ＣＮＳ疾患が、ハンチントン病、パーキンソン病、多発性硬化萎縮症、Ｌｅｗｉｓ ｂｏｄｙ認知症（ＬＢＤ）、進行性核上性麻痺、前頭側頭型認知症、およびアンジェルマン症候群を含む群から選択される、請求項２～１１のいずれか１項に記載の使用のための修飾されたＡＡＶベクター。

【請求項13】

前記導入遺伝子が、ＣＡＧプロモーターの制御下にある、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の使用のための修飾されたＡＡＶベクター。

【請求項14】

対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞に形質導入するための方法であって、修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを前記対象に投与するステップを含み、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
前記修飾されたＡＡＶベクターは、ＣＮＳに直接投与され、
前記修飾されたＡＡＶベクターは、脳室内に投与されない、
方法。

【請求項15】

少なくとも１つの導入遺伝子を含む修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記修飾されたＡＡＶが、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、前記導入遺伝子が、３Ｒ ｔａｕ、４Ｒ ｔａｕ、ＡＡＲＳ、ＡＢＣＤ１、ＡＣＯＸ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＧＡ、ＡＧＥＲ、ＡＬＤＨ７Ａ１、ＡＬＧ１３、ＡＬＳ２、ＡＮＧ、ＡＮＸＡ１１、ＡＰＰ、ＡＲＨＧＥＦ９、ＡＲＳＡ、ＡＲＳＢ、ＡＲＶ１、ＡＳＡＨ１、ＡＳＰＡ、ＡＴＮ１、ＡＴＰ１０Ａ、ＡＴＰ１３Ａ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＢＡＸ、ＢＣＬ－２、ＢＤＮＦ、ＢＩＣＤ２、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＳＲ、ＣＣＮＦ、ＣＤＫＬ５、ＣＥＲＳ１、ＣＦＡＰ４１０、ＣＨＣＨＤ１０、ＣＨＤ２、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＢ２、ＣＬＣＮ２ａ、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、ＣＮＴＮ２、ＣＰＡ６、ＣＳＴＢ、ＣＴＮＳ、ＣＴＳＡ、ＣＴＳＤ、ＤＡＯ、ＤＣＴＮ１、ＤＥＰＤＣ５、ＤＭＤ、ＤＮＡＪＢ２、ＤＮＭ１、ＤＯＣＫ７、ＤＲＤ２、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＦＨＣ１、ＥＧＬＮ１、ＥＰＨＡ４、ＥＰＭ２Ａ、ＥＲＢＢ４、ＦＧＦ１２、ＦＩＧ４、ＦＲＲＳ１Ｌ、ＦＴＬ、ＦＵＣＡ１、ＦＵＳ、ＦＸＮ、ＧＡＡ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＬ、ＧＡＬＣ、ＧＡＬＮＳ、ＧＢＡ、ＧＦＡＰ、ＧＬＡ、ＧＬＢ１、ＧＬＥ１、ＧＬＴ８Ｄ１、ＧＮＡＯ１、ＧＮＳ、ＧＯＳＲ２、ＧＰＲ９８、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＳＴＭ１、ＧＵＦ１、ＧＵＳＢ、ＨＣＮ１、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＴＴ、ＨＹＡＬ１、ＩＤＳ、ＩＤＵＡ、ＩＧＨＭＢＰ２、ＩＬ－１、ＩＴ１５、ＩＴＰＡ、ＪＰＨ３、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＴ１、ＫＣＴＤ７、ＬＡＬ、ＬＡＭＰ２、ＬＧＩ１、ＬＭＮＢ２、ＬＲＲＫ２、ＭＡＮ２Ｂ１、ＭＡＮ２Ｂ２、ＭＡＮ２Ｃ１、ＭＡＮＢＡ、ＭＡＴＲ３、ＭＢＤ５、ＭＦＳＤ８、ＮＡＧＡ、ＮＡＧＬＵ、ＮＥＣＡＰ１、ＮＥＦＨ、ＮＥＫ１、ＮＥＵ１、ＮＨＬＲＣ１、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、ＮＲ４Ａ２、ＮＴＲＫ２、ＯＣＡ２、ＯＰＴＮ、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＣＤＨ１９、ＰＥＸ１、ＰＥＸ２、ＰＥＸ３、ＰＥＸ５、ＰＥＸ６、ＰＥＸ１０、ＰＥＸ１１Ｂ、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ１４、ＰＥＸ１６、ＰＥＸ１９、ＰＥＸ２６、ＰＦＮ１、ＰＩＮＫ１、ＰＬＣＢ１、ＰＮＰＯ、ＰＯＮ１、ＰＯＮ２、ＰＯＮ３、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＲＤＭ８、ＰＲＩＣＫＬＥ１、ＰＲＫＮ、ＰＲＮＰ、ＰＲＰＨ、ＰＲＲＴ２、ＰＳＡＰ、Ｓ１０６β、ＳＣＡＲＢ２、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ９Ａｂ、ＳＥＴＸ、ＳＧＳＨ、ＳＩＧＭＡＲ１、ＳＩＫ１、ＳＫＰ１、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣＡ１７Ａ５、ＳＭＮ１、ＳＭＰＤ１、ＳＮＣＡ、ＳＮＲＰＮ、ＳＯＤ１、ＳＰＧ１１、ＳＰＴＡＮ１、ＳＱＳＴＭ１、ＳＴ３ＧＡＬ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＳＴＸ１Ｂ、ＳＴＸＢＰ１、ＳＹＰ、ＳＹＴ１、ＳＺＴ２、ＴＡＦ１５、ＴＡＲＤＢＰ、ＴＢＣ１Ｄ２４、ＴＢＣＥ、ＴＢＫ１、ＴＢＰ、ＴＩＴＦ－１、ＴＲＥＭ２、ＵＢＡ５、ＵＢＥ１、ＵＢＥ３Ａ、ＵＢＱＬＮ２、ＵＣＨ－Ｌ１、ＵＮＣ１３Ａ、ＶＡＰＢ、ＶＣＰ、ＶＰＳ３５、ＷＷＯＸ、およびＸＢＰを含む群から選択される遺伝子由来のｃＤＮＡまたはそのフラグメントを含み、好ましくはプロモーターの制御下にある、修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【請求項16】

対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞への形質導入、および／または
対象の中枢神経系（ＣＮＳ）への導入遺伝子の送達、および／または
対象の中枢神経系（ＣＮＳ）疾患の予防および／または処置
に適したキットまたはキットオブパーツであって、
前記キットは、
（ａ）請求項１５に記載の修飾されたＡＡＶベクターと、
（ｂ）前記修飾されたＡＡＶベクターのＣＮＳ送達のための装置と、
（ｃ）任意選択で、前記修飾されたＡＡＶベクターのＣＮＳ送達のための説明書と
を含む、
キットまたはキットオブパーツ。

【請求項17】

ＣＮＳ疾患を処置する方法であって、
少なくとも１つの表面にコンジュゲートされた糖を含む点で修飾されたＡＡＶベクターであるＡＡＶベクターを、脳室内注射以外により、ＣＮＳ部位に直接投与するステップを含む、方法。

【請求項18】

ＡＡＶベクターをＣＮＳに投与する方法における、
少なくとも１つの表面にコンジュゲートされた糖を含む点で修飾されたＡＡＶベクターであるＡＡＶベクターを投与するステップと、
脳室内注射以外により修飾されたＡＡＶベクターを投与するステップと
を含む改善。

【請求項19】

導入遺伝子をＣＮＳに送達する方法における、
少なくとも１つの表面にコンジュゲートされた糖を含む点で修飾されたＡＡＶベクターであるＡＡＶベクターに導入遺伝子を含めるステップと、
脳室内注射以外により修飾されたＡＡＶベクターを投与するステップと
を含む改善。

【請求項20】

前記投与するステップが、ＣＮＳ部位に直接投与するステップを含む、請求項１８または１９に記載の改善。

【請求項21】

前記投与するステップが、ＣＮＳ部位に注射するステップを含む、請求項１７に記載の方法または請求項２０に記載の改善。

【請求項22】

前記投与するステップが、１つのＣＮＳ部位のみに直接投与するステップを含む、請求項２１に記載の方法または改善。

【請求項23】

前記投与するステップが、単回注射により投与するステップを含む、請求項２１または２２に記載の方法または改善。

【請求項24】

前記糖が、リンカーを介して前記表面にコンジュゲートされている、請求項１７に記載の方法または請求項１８もしくは１９に記載の改善。

【請求項25】

前記投与するステップが、ヒト対象へ投与するステップを含む、請求項１７～２４のいずれか１項に記載の方法または改善。

【請求項26】

前記投与するステップが、ＣＮＳ感染性疾患、ＣＮＳ変性疾患、ＣＮＳ自己免疫疾患、ＣＮＳ腫瘍疾患、脳血管疾患、ＣＮＳ損傷、ＣＮＳ構造欠陥、およびそれらの組み合わせから選択されるＣＮＳ疾患を罹患している対象に投与するステップを含む、請求項１７～２５のいずれか１項に記載の方法または改善。

【請求項27】

前記投与するステップが、酸性リパーゼ疾患、酸性マルターゼ欠乏症、酸蓄積症、後天性てんかん様失語症、急性散在性脳脊髄炎、注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）、アディー瞳孔、アディー症候群、副腎白質ジストロフィー、失認、アイカルディ症候群、エカルディ‐グティエール症候群障害、アレキサンダー病、アルパース病、交代性片麻痺、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、無脳症、動脈瘤、アンジェルマン症候群、血管腫症、無酸素症、抗リン脂質抗体症候群、失語症、失行症、くも膜炎、アーノルド・キアリ奇形、芳香族Ｌ－アミノ酸脱炭酸酵素欠損症（ＡＡＤＣ欠損症）、アスパルチルグルコサミン尿症、アスペルガー症候群、運動失調、毛細血管拡張性運動失調症（Ｌｏｕｉｓ－Ｂａｒ症候群）、小脳変性症運動失調および小脳変性症または脊髄小脳変性症、注意欠陥多動障害、自閉症、自律神経障害、バース症候群、バッテン病、Ｂｅｃｋｅｒ病の筋強直、ベーチェット病、ベル麻痺、Ｂｅｒｎｈａｒｄｔ－Ｒｏｔｈ症候群、ビンスワンガー病、ブロッホ・ズルツベルガー症候群、Ｂｒａｄｂｕｒｙ－Ｅｇｇｌｅｓｔｏｎ症候群、ブラウン・セカール症候群、球脊髄性筋萎縮症、ＣＡＤＡＳＩＬ、カナバン病、カウザルギー、海面状血管腫（ｃａｖｅｒｎｏｍａｓ、ｃａｖｅｒｎｏｕｓ ａｎｇｉｏｍａ）、中央頸髄症候群、脊髄中心症候群、橋中心髄鞘崩壊症、セラミダーゼ欠乏症、小脳変性症、小脳低形成、脳性脚気、脳性巨人症、脳性麻痺、脳・眼・顔・骨格症候群（ＣＯＦＳ）、コレステロールエステル蓄積症、舞踏病、有棘赤血球舞踏病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、慢性起立性調節障害、慢性疼痛、コケイン症候群ＩＩ型、コフィン・ローリー症候群、脳梁欠損、先天性筋無力症、大脳皮質基底核変性症、頭部動脈炎、クリー脳炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、クッシング症候群、シスチン症、巨大細胞性封入体症（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｉｃ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｙ ｄｉｓｅａｓｅ：ＣＩＢＤ）、ダンシングアイズ・ダンシングフィート症候群（ｄａｎｃｉｎｇ ｅｙｅｓ－ｄａｎｃｉｎｇ ｆｅｅｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ダンディ・ウォーカー症候群、ダノン病、Ｄａｗｓｏｎ病、ドモルシア（Ｄｅ Ｍｏｒｓｉｅｒ）症候群、Ｄｅｊｅｒｉｎｅ－Ｋｌｕｍｐｋｅ麻痺、認知症、小脳歯状核失調、歯状核赤核萎縮症、皮膚筋炎、発達性統合運動障害、Ｄｅｖｉｃ症候群、びまん性硬化症、自律神経障害、書字障害、失読症、嚥下障害、統合運動障害、ミオクローヌス性小脳性共同運動障害、進行性小脳性共同運動障害、てんかん（アーミッシュ小児てんかん症候群［ＡＩＥＳ］、良性家族性乳児けいれん［ＢＦＩＳ］、良性家族性新生児けいれん［ＢＦＮＳ］、小児欠神てんかん［ＣＡＥ］、小児期発症てんかん性脳症［ＣＯＥＥ］、ドラベ症候群［ＤＳ］、早期乳児てんかん性脳症［ＥＩＥＥ］、家族性成人型ミオクローヌスてんかん［ＦＡＭＥ］、家族性熱性けいれん［ＦＦＳ］、多様な焦点を示す家族性焦点てんかん［ＦＦＥＶＦ］、家族性乳児型ミオクローヌスてんかん［ＦＩＭＥ］、家族性側頭葉てんかん［ＦＴＬＥ］、精神遅滞を伴うまたは伴わない焦点性てんかんおよび発話障害［ＦＥＳＤ］、全般てんかんおよび発作性ジスキネジア［ＧＥＰＤ］、全般てんかん熱性けいれんプラス［ＧＥＦＳ＋］、特発性全般てんかん［ＩＧＥ］、若年性欠神てんかん［ＪＡＥ］、若年性ミオクローヌスてんかん［ＪＭＥ］、ミオクローヌス－弛緩性てんかん［ＭＡＥ］、夜間前頭葉てんかん［ＮＦＬＥ］、進行性ミオクローヌスてんかん［ＰＭＥ］、ピリドキサミン５’－リン酸シンターゼ欠乏症［ＰＮＰＯＤ］、ピリドキシン－依存性てんかん［ＥＰＤ］、および乳児重症ミオクローヌスてんかん［ＳＭＥＩ］を含む）、ファブリー病、ファール病、家族性自律神経障害、家族性血管腫、家族性突発性大脳基底核石灰化、家族性周期性麻痺、家族性痙性麻痺、ファーバー（Ｆａｒｂｅｒ）病、線維筋性異形成、フィッシャー症候群、ｆｌｏｐｐｙ ｉｎｆａｎｔ症候群、フリードライヒ運動失調症、前頭側頭型認知症、フコシドーシス、ガラクトシアリドーシス、ゴーシェ病、全般性ガングリオシドーシス、ゲルストマン症候群、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、巨大軸索ニューロパチー、巨細胞性動脈炎、巨細胞性封入体病、グロボイド細胞白質ジストロフィー、舌咽神経痛、糖原病、ＧＭ１ガングリオシドーシス、ＧＭ２ガングリオシドーシス（テイ・サックス病）、ギラン・バレー症候群、ハラーホルデン・スパッツ症候群、持続性片側頭痛、交代性片麻痺（ｈｅｍｉｐｌｅｇｉａ ａｌｔｅｒａｎｓ）、遺伝性痙性対麻痺、多発神経炎型遺伝性失調症、Ｈｏｌｍｅｓ－Ａｄｉｅ症候群、全前脳症、Ｈｕｇｈｅｓ症候群、Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ病、水無脳症、水脊髄症、副腎皮質ホルモン過剰症、免疫介在性脳脊髄炎、封入体筋炎、色素失調症、乳児筋緊張低下、乳児神経軸索ジストロフィー、後頭孔脳脱出症、Ｉｓａａｃ症候群、ジュベール症候群、Ｋｅａｒｎｓ－Ｓａｙｒｅ症候群（Ｋｅａｍｓ－Ｓａｙｒｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、Ｋｅｎｎｅｄｙ病、Ｋｉｎｓｂｏｕｒｎｅ症候群、クライン・レビン症候群、クリッペル・ファイル症候群、Ｋｌｉｐｐｅｌ－Ｔｒｅｎａｕｎａｙ症候群（ＫＴＳ）、クリューバー・ビューシー症候群、コルサコフ（Ｋｏｒｓａｋｏｆｆ）健紡症候群、クラッベ病、クーゲルベルク・ヴェランダー病、ランバート・イートン筋無力症症候群、Ｌａｎｄａｕ－Ｋｌｅｆｆｎｅｒ症候群、外側大腿皮神経絞扼（ｌａｔｅｒａｌ ｆｅｍｏｒａｌ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｎｅｒｖｅ ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ）、髄質延髄外側症候群、リー症候群、レノックス・ガストー症候群、レッシュ・ナイハン症候群、Ｌｅｖｉｎｅ－Ｃｒｉｔｃｈｌｅｙ症候群、レビー小体認知症、リポイドタンパク症、脳回欠損、閉じ込め症候群、ルー・ゲーリック病、ループス、ライム病、マシャド・ジョセフ病、大脳症、α－マンノシドーシス、β－マンノシドーシス、メルカーソン・ローゼンタール症候群、メンケス病、異常感覚性大腿痛、異染性白質ジストロフィー、小頭症、ミラー・フィッシャー症候群、メビウス症候群、ムコ多糖症Ｉ－Ｈ型（ハーラー症候群）、ムコ多糖症Ｉ－Ｈ／Ｓ型（Ｈｕｒｌｅｒ－Ｓｃｈｅｉｅ症候群）、ムコ多糖症ＩＳ型（Ｓｃｈｅｉｅ症候群）、ムコ多糖症ＩＩ型（Ｈｕｎｔｅｒ症候群）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ａ型（サンフィリポ症候群Ａ）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ｂ型（サンフィリポ症候群Ｂ）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ｃ型（サンフィリポ症候群Ｃ）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ｄ型（サンフィリポ症候群Ｄ）、ムコ多糖症ＩＶ－Ｂ型（モルキオ症候群Ｂ）、ムコ多糖症ＶＩ型（マロトー・ラミー症候群）、ムコ多糖症ＶＩＩ型（スライ症候群）、ムコ多糖症ＩＸ型（Ｎａｔｏｗｉｃｚ症候群）、多発性硬化症、筋ジストロフィー、重症筋無力症、アルパーズ症候群（Ｍｙｅｌｉｎｏｃｌａｓｔｉｃ Ｄｉｆｆｕｓｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、ナルコレプシー、神経有棘赤血球症、神経線維腫症、悪性症候群、神経サルコイドーシス、ニーマン・ピック病、大田原症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、眼球クローヌス・ミオクローヌス、Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ－ＭｃＬｅｏｄ症候群、パントテン酸キナーゼ関連神経変性症、腫瘍随伴症候群、錯感覚、パーキンソン病、発作性舞踏病アテトーゼ、発作性片側頭痛、Ｐａｒｒｙ－Ｒｏｍｂｅｒｇ症候群、ペリツェウス・メルツバッハ病、Ｐｅｎａ－Ｓｈｏｋｅｉｒ症候群ＩＩ型、脳室周囲白質軟化症、フィタン酸蓄積症、ピック病、梨状筋症候群、多発性筋炎、ポンペ病、ポリオ後症候群、ＰＣＡ（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｃｏｒｔｉｃａｌ ａｔｒｏｐｈｙ）、原発性歯状核萎縮症（Ｐｒｉｍａｒｙ Ｄｅｎｔａｔｕｍ Ａｔｒｏｐｈｙ）、原発性側索硬化症、原発性進行性失語症、プリオン病、進行性片側顔面萎縮症、進行性歩行運動失調、進行性多発性白質脳症、進行性硬化性灰白異栄養症、進行性核上性麻痺、顔貌失認、ラムゼイ・ハント症候群Ｉ、ラムゼイ・ハント症候群ＩＩ、ラスムッセン脳炎、レフサム病、レット症候群、Ｒｅｙｅ症候群、ライリー・デイ症候群、サンドホフ病、シルダー病、Ｓｅｉｔｅｌｂｅｒｇｅｒ病、シャイ・ドレーガー症候群、シェーグレン症候群、痙縮、二分脊椎、脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症、脊髄小脳萎縮症、脊髄小脳変性症、スティール・リチャードソン・オルゼウスキー症候群、線条体黒質変性症、スタージ・ウェーバー症候群、遅発性ジスキネジア、タウオパチー、テイ・サックス病、胸郭出口症候群、甲状腺中毒性ミオパチー、三叉神経痛、トッド麻痺、三叉神経痛、熱帯性痙性不全対麻痺症、トロイアー症候群、血管性認知症、フォン‐エコーノモ病、フォンヒッペル・リンダウ病（ＶＨＬ）、フォンレックリングハウゼン病、ワレンベルグ症候群、ウェルドニッヒ・ホフマン病、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウエスト症候群、ウィップル病、ウィリアムズ症候群、ウィルソン病、ウォルマン病、Ｘ連鎖球脊髄性筋萎縮症、およびツェルウェーガー症候群を含む群から選択されるＣＮＳ疾患を罹患している対象に投与するステップを含む、請求項１７～２６のいずれか１項に記載の方法または改善。

【請求項28】

ＡＡＶが、導入遺伝子を含む、請求項１７～２６のいずれか１項に記載の方法または改善。

【請求項29】

前記導入遺伝子が、３Ｒ ｔａｕ、４Ｒ ｔａｕ、ＡＡＲＳ、ＡＢＣＤ１、ＡＣＯＸ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＧＡ、ＡＧＥＲ、ＡＬＤＨ７Ａ１、ＡＬＧ１３、ＡＬＳ２、ＡＮＧ、ＡＮＸＡ１１、ＡＰＰ、ＡＲＨＧＥＦ９、ＡＲＳＡ、ＡＲＳＢ、ＡＲＶ１、ＡＳＡＨ１、ＡＳＰＡ、ＡＴＮ１、ＡＴＰ１０Ａ、ＡＴＰ１３Ａ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＢＡＸ、ＢＣＬ－２、ＢＤＮＦ、ＢＩＣＤ２、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＳＲ、ＣＣＮＦ、ＣＤＫＬ５、ＣＥＲＳ１、ＣＦＡＰ４１０、ＣＨＣＨＤ１０、ＣＨＤ２、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＢ２、ＣＬＣＮ２ａ、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、ＣＮＴＮ２、ＣＰＡ６、ＣＳＴＢ、ＣＴＮＳ、ＣＴＳＡ、ＣＴＳＤ、ＤＡＯ、ＤＣＴＮ１、ＤＥＰＤＣ５、ＤＭＤ、ＤＮＡＪＢ２、ＤＮＭ１、ＤＯＣＫ７、ＤＲＤ２、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＦＨＣ１、ＥＧＬＮ１、ＥＰＨＡ４、ＥＰＭ２Ａ、ＥＲＢＢ４、ＦＧＦ１２、ＦＩＧ４、ＦＲＲＳ１Ｌ、ＦＴＬ、ＦＵＣＡ１、ＦＵＳ、ＦＸＮ、ＧＡＡ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＬ、ＧＡＬＣ、ＧＡＬＮＳ、ＧＢＡ、ＧＦＡＰ、ＧＬＡ、ＧＬＢ１、ＧＬＥ１、ＧＬＴ８Ｄ１、ＧＮＡＯ１、ＧＮＳ、ＧＯＳＲ２、ＧＰＲ９８、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＳＴＭ１、ＧＵＦ１、ＧＵＳＢ、ＨＣＮ１、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＴＴ、ＨＹＡＬ１、ＩＤＳ、ＩＤＵＡ、ＩＧＨＭＢＰ２、ＩＬ－１、ＩＴ１５、ＩＴＰＡ、ＪＰＨ３、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＴ１、ＫＣＴＤ７、ＬＡＬ、ＬＡＭＰ２、ＬＧＩ１、ＬＭＮＢ２、ＬＲＲＫ２、ＭＡＮ２Ｂ１、ＭＡＮ２Ｂ２、ＭＡＮ２Ｃ１、ＭＡＮＢＡ、ＭＡＴＲ３、ＭＢＤ５、ＭＦＳＤ８、ＮＡＧＡ、ＮＡＧＬＵ、ＮＥＣＡＰ１、ＮＥＦＨ、ＮＥＫ１、ＮＥＵ１、ＮＨＬＲＣ１、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、ＮＲ４Ａ２、ＮＴＲＫ２、ＯＣＡ２、ＯＰＴＮ、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＣＤＨ１９、ＰＥＸ１、ＰＥＸ２、ＰＥＸ３、ＰＥＸ５、ＰＥＸ６、ＰＥＸ１０、ＰＥＸ１１Ｂ、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ１４、ＰＥＸ１６、ＰＥＸ１９、ＰＥＸ２６、ＰＦＮ１、ＰＩＮＫ１、ＰＬＣＢ１、ＰＮＰＯ、ＰＯＮ１、ＰＯＮ２、ＰＯＮ３、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＲＤＭ８、ＰＲＩＣＫＬＥ１、ＰＲＫＮ、ＰＲＮＰ、ＰＲＰＨ、ＰＲＲＴ２、ＰＳＡＰ、Ｓ１０６β、ＳＣＡＲＢ２、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ９Ａｂ、ＳＥＴＸ、ＳＧＳＨ、ＳＩＧＭＡＲ１、ＳＩＫ１、ＳＫＰ１、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣＡ１７Ａ５、ＳＭＮ１、ＳＭＰＤ１、ＳＮＣＡ、ＳＮＲＰＮ、ＳＯＤ１、ＳＰＧ１１、ＳＰＴＡＮ１、ＳＱＳＴＭ１、ＳＴ３ＧＡＬ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＳＴＸ１Ｂ、ＳＴＸＢＰ１、ＳＹＰ、ＳＹＴ１、ＳＺＴ２、ＴＡＦ１５、ＴＡＲＤＢＰ、ＴＢＣ１Ｄ２４、ＴＢＣＥ、ＴＢＫ１、ＴＢＰ、ＴＩＴＦ－１、ＴＲＥＭ２、ＵＢＡ５、ＵＢＥ１、ＵＢＥ３Ａ、ＵＢＱＬＮ２、ＵＣＨ－Ｌ１、ＵＮＣ１３Ａ、ＶＡＰＢ、ＶＣＰ、ＶＰＳ３５、ＷＷＯＸ、およびＸＢＰ１を含む群から選択される遺伝子由来のｃＤＮＡまたはそのフラグメントを含む、請求項２８に記載の方法または改善。

【請求項30】

前記ＣＮＳ部位が、線条体である、請求項１７または２０～２９のいずれか１項に記載の方法または改善。

【請求項31】

前記ＣＮＳ部位が、視床である、請求項１７または２０～２９のいずれか１項に記載の方法または改善。

【請求項32】

前記ＣＮＳ部位が、大槽である、請求項１７または２０～２９のいずれか１項に記載の方法または改善。

【請求項33】

前記ＣＮＳ部位が、線条体、視床、大槽、またはそれらの組み合わせである、請求項１７または２０～２９のいずれか１項に記載の方法または改善。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞への形質導入に使用するための、およびＣＮＳ疾患の予防または処置に使用するための、修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに関する。特に、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、ＣＮＳに直接投与されるが、脳室内に投与されない。

【背景技術】

【0002】

中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を与える疾患は、特に低い血液脳関門の浸透能および高いオフターゲット効果のため、従来の薬物で処置することが特に困難であった。

【0003】

遺伝子療法の出現は、後期患者の進行疾患を遅延または停止させ、かつ早期の無症状の個体の臨床症状の出現を予防する形質転換による治療に関して将来性を提供する（Ｌｙｋｋｅｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１８． Ｊ Ｎｅｕｒｏｄｅｖ Ｄｉｓｏｒｄ． １０（１）：１６）。

【0004】

レンチウイルスベクターおよび統合されていないアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む複数のベクターが現在入手可能である。過去数十年にわたり、ＡＡＶは、目的の導入遺伝子を、特にＣＮＳ組織を含む様々な組織へ単回投与にて送達する上で、確実であり、効率的であり、多用途であり、かつ安全なツールであることが証明されている。

【0005】

ＣＮＳを対象とする遺伝子療法の研究は、主に４つのＡＡＶ血清型：ＡＡＶ２， ＡＡＶ５， ＡＡＶ８ ａｎｄ ＡＡＶ９に焦点を当てている（Ｂｕｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００４． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． １０（２）：３０２－１７；Ｃｅａｒｌｅｙ ＆ Ｗｏｌｆｅ， ２００６． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． １３（３）：５２８－３７； Ｔａｙｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．， ２００７． Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． １８（３）：１９５－２０６； Ｃｅａｒｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， ２００８． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． １６（１０）：１７１０－８； Ｆｏｕｓｔ ｅｔ ａｌ．， ２００９． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２７（１）：５９－６５； Ａｓｃｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２０１３． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ． ８（９）：ｅ７６３１０；Ｗａｔａｋａｂｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１５． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ． ９３：１４４－５７）。

【0006】

一般的にＡＡＶ９以外の全てのＡＡＶの血清型は血液脳関門を通らず、よってＣＮＣの標的細胞へ到達するために血管系を介して非侵襲的に投与できないため、ＣＮＳを対象とするＡＡＶ送達は、通常、脳および／または脊髄へ局所的に行われている。（Ｍｉｙａｋｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１１． Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．１３８９：１９－２６）。特にＡＡＶ９は、脳内またはくも膜下腔内投与後のＣＮＳのニューロンおよびアストロサイトの形質導入に最も効率的であることが示されている（Ｃｅａｒｌｅｙ ＆ Ｗｏｌｆｅ， ２００６． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． １３（３）：５２８－３７； Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１３． Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ２０（４）：４５０－９）。さらに、特にはＣＮＳ全体に散乱される細胞に関与する疾患に対処するために、より広い形質導入特性を有するＡＡＶベクターが、依然として必要とされている。

【0007】

送達部位からのＡＡＶ拡散の限定を補うため、およびより広域の組織範囲を提供するために、ＣＮＳの複数の部位への注射が行われている。しかしながら、前臨床動物モデルに対してはこのような戦略の適用は成功し得る場合であっても（Ｖｉｔｅ ｅｔ ａｌ．， ２００５． Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ． ５７（３）：３５５－６４；）、ヒトへの転換は、このような侵襲的な手法のスケールアップにより阻まれている。これに関連して、ＣＮＳにおける単回または非常に少ない局所的な投与ポイントから幅広い形質導入を達成できるＡＡＶベクターが、好適である。

【0008】

ＡＡＶベクターを使用する血管内送達は、ＣＮＳにおいて非侵襲的な幅広い形質導入を達成するための別の手法として提案されている（Ｂｅｖａｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１１． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． １９（１１）：１９７１－８０）。しかしながら、この投与経路は、マウスにおいては非常に有効ではあるが、より大きな動物のＣＮＳでの形質導入は、より著しく限定されている（Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１１． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． １９（６）：１０５８－６９； Ｓａｍａｒａｎｃｈ ｅｔ ａｌ．， ２０１２． Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ２３（４）：３８２－９）。この手法は、脳で形質導入を達成するために必要とされるかなり大量の用量および結果得られる末梢臓器の高いオフターゲットの形質導入により、さらに限定される（Ｂｅｖａｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１１． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． １９（１１）：１９７１－８０； Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１１． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． １９（６）：１０５８－６９）。最後に、中和抗体がウイルス粒子をＣＮＳに達し得る前に系の外側へ除去することが示されているため、野生型ウイルスへの早期の曝露によるＡＡＶ９に対する既存の免疫は、４３％ものヒトの成年で血管内経路の使用を妨げている（Ｂｏｕｔｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１０． Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ２１（６）：７０４－１２； Ｆｕ ｅｔ ａｌ．， ２０１７． Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ Ｃｌｉｎ Ｄｅｖ． ２８：１８７－９６）。

【0009】

全体的にみて、ＡＡＶへの免疫応答は、投与様式に関わらず、依然として治療効果に対し解決されていない課題である。適応免疫応答および自然細胞性免疫応答は、ＣＮＳなどの免疫特権を有する臓器であっても、ＡＡＶの形質導入の効率を妨げ得る（ＭａｃＰｈｅｅ ｅｔ ａｌ． ２００６． Ｊ Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ． ８：５７７－８８； Ｓａｍａｒａｎｃｈ ｅｔ ａｌ． ２０１４． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． ２２（２）：３２９－３７）。よって、ＣＮＳにおいて細胞に特異的かつ広範囲の形質導入を確保しつつ、免疫検出を回避できるＡＡＶベクターが、著しく望まれている。

【0010】

長年にわたる試みは、免疫系を回避するためならびにＡＡＶ細胞の形質導入および導入遺伝子の発現特性を高めるためにそれらのカプシドまたはそれらの発現カセットの修飾を介したＡＡＶの改善に焦点を当てている。

【0011】

カプシドを修飾したＡＡＶベクターの開発に関する現在の戦略は、３つの異なる手法：（ｉ）ＡＡＶベクターのトロピズムを再度方向付けるための細胞受容体へのＡＡＶカプシドの結合の知識に特に基づく合理的な設計手法（Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， １９９９． Ｖｉｒｏｌｏｇｙ． ２６５（２）：２７４－８５； Ｇｉｒｏｄ ｅｔ ａｌ．， １９９９． Ｎａｔ Ｍｅｄ． ５（１２）：１４３８； Ａｓｏｋａｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１０． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２８（１）：７９－８２； Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１３． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２８８（４０）：２８８１４－２３； Ａｌｂｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．， ２０１７． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． ２６（２）：５１０－５２３；Ｔｓｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１７． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． １１４（２４）：Ｅ４８１２－Ｅ４８２１）；（ｉｉ）ランダム変異誘発、カプシドのシャッフリング、およびランダムペプチド挿入に基づく、指向性進化の手法（Ｓｃｈａｆｆｅｒ ＆ Ｍａｈｅｓｈｒｉ， ２００４． Ｃｏｎｆ Ｐｒｏｃ ＩＥＥＥ Ｅｎｇ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ Ｓｏｃ． ５：３５２０－３； Ｋｏｅｒｂｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００６． Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ． １（２）：７０１－６； Ｍａｈｅｓｈｒｉ ｅｔ ａｌ．， ２００６． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２４（２）：１９８－２０４； Ｐｅｒａｂｏ ｅｔ ａｌ．， ２００８． Ｃｏｍｂ Ｃｈｅｍ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎ． １１（２）：１１８－２６； Ｋｗｏｎ ＆ Ｓｃｈａｆｆｅｒ， ２００８． Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ． ２５（３）：４８９－９９； Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１０． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． １８（３）：５７０－８； Ｂａｒｔｅｌ ｅｔ ａｌ．， ２０１２． Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． １９（６）：６９４－７００； Ｍａｒｓｉｃ ＆ Ｚｏｌｏｔｕｋｈｉｎ， ２０１６． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ． １３８２：１５１－７３）；および（ｉｉｉ）ＡＡＶの表面への化学基の係留に基づく化学的なカプシド修飾の手法（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．， ２００５． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ． ９２：２４－３４； Ｍａｇｕｉｒｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１２． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． ２０：９６０－７１； Ｈｕｒｄｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１６． Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ２３：３８０－９２； Ｋａｔｒｅｋａｒ ｅｔ ａｌ．， ２０１８． Ｓｃｉ Ｒｅｐ． ８）に基づく。

【0012】

発現カセットが標的細胞において一度遺伝子発現を促進および加速させるように修飾されている自己相補的なＡＡＶ（ｓｃＡＡＶ）は、ＣＮＳのｓｃＡＡＶ９で例証されているように、様々な組織において導入遺伝子発現のより速い開始およびより高いレベルを駆動することが示されている（Ｆｏｕｓｔ ｅｔ ａｌ．， ２００８． Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２７：５６－６５； Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１１． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ． １９（６）：１０５８－６９）。しかしながら、従来の一本鎖ＡＡＶを超えるこれらベクターのパッケージング能の低下（２．１ｋｂｖｓ４．６ｋｂ）は、ＣＮＳの徴候の処置に関するこれらの有用性を限定している。

【0013】

国際特許公開公報第２０１７２１２０１９号は、特定の細胞種へのウイルス介在遺伝子の導入が改善した、特定の表面が修飾されたＡＡＶ由来のベクターを記載している。国際特許公開公報第２０１７２１２０１９号は、これらの表面が修飾されたＡＡＶベクターのＣＮＳ送達を具体的に対処していない。

【0014】

ここで、驚くべきことに、本発明者らは、表面に結合した糖類を含むＡＡＶベクターが、ＣＮＳに細胞を形質導入し得ることを示した。興味深いことに、本発明者らは、ＣＮＳ細胞の形質導入は、ＡＡＶカプシドの修飾にのみ基づくのではなく、投与経路にも依存することを示した。

【0015】

これら２つの基準を組み合わせることで、本発明者らは、これら修飾したＡＡＶベクターのＣＮＳへ直接的な脳室内注射ではない単回注射を用いて、広範囲の脳の半球の形質導入を示すことができた。よって、特に本開示は、本明細書中記載される糖がコンジュゲートしたＡＡＶ（すなわち表面に結合した糖類を有するＡＡＶ）を投与するために利用される際に、単回投与（たとえば注射）からであっても、有効かつ広範囲のＣＮＳ送達を達成できる特定の経路および／または手法を提供する。

【0016】

これら結果は、特にＣＮＳに影響する疾患の処置のための遺伝子療法に将来的に有望な見通しを提供する。

【発明の概要】

【0017】

本発明は、対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞への形質導入に使用するための修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
ＣＮＳに直接投与され、
脳室内に投与されない、
修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに関する。

【0018】

本発明はまた、対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞に形質導入するための方法であって、前記対象に修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを投与するステップを含み、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、ＣＮＳに直接投与され、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、脳室内に投与されない、
方法に関する。

【0019】

また本発明は、中枢神経系（ＣＮＳ）疾患の予防または処置に使用するための修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
ＣＮＳに直接投与され、
脳室内に投与されない、
修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに関する。

【0020】

また本発明は、たとえば、少なくとも１つの表面にコンジュゲートされた糖を含む点で修飾されたＡＡＶベクターであるＡＡＶベクターを脳室内注射以外によりＣＮＳ部位に直接投与することにより、ＣＮＳ疾患を処置する方法を含む。

【0021】

さらに、本発明は、少なくとも１つの表面にコンジュゲートされた糖を含む点で修飾されたＡＡＶベクターであるＡＡＶベクターを利用し、脳室内注射以外により修飾されたＡＡＶベクターを投与することを含む、ＣＮＳにＡＡＶベクターを投与するための改善を提供する。また本開示は、たとえば、少なくとも１つの表面にコンジュゲートされた糖を含む点で修飾されたＡＡＶベクターであるＡＡＶベクターに導入遺伝子を含め、修飾されたＡＡＶベクターを脳室内注射以外により投与することによる、ＣＮＳへ導入遺伝子を送達するための改善を提供する。

【0022】

一実施形態では、上記ＣＮＳ疾患は、ＣＮＳ感染性疾患、ＣＮＳ変性疾患、ＣＮＳ自己免疫疾患、ＣＮＳ腫瘍疾患、脳血管疾患、ＣＮＳ損傷、またはＣＮＳ構造欠陥である。

【0023】

一実施形態では、上記修飾されたＡＡＶベクターは、線条体内、視床内、または大槽内へ投与される。

【0024】

一実施形態では、上記修飾されたＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、およびＡＡＶ１２；またはそれらのシュードタイプ、キメラ、およびバリアントから選択される。

【0025】

一実施形態では、上記修飾されたＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２ベクターである。

【0026】

一実施形態では、表面に結合した糖類は、単糖類、オリゴ糖、および多糖類を含む群から選択される。

【0027】

一実施形態では、表面に結合した糖類は、ヘキソース、好ましくはマンノース、ガラクトース、またはＮ－アセチルグルコサミンである。

【0028】

上述されるように、国際特許公開公報第２０１７２１２０１９号は、特定の細胞種へのウイルスが介在する遺伝子の伝達が改善した特定の表面が修飾されたＡＡＶ由来のベクター、具体的には、特定の糖部分で修飾された表面であるＡＡＶを記載している。特に、本開示は、ある範囲の糖類で有効な送達を実証し、さらには（特に脳室内以外で投与される場合の）本明細書中記載されるＣＮＳ送達の特定の有用性を確立し、投与部位から離れているか、かつ／または単回のみの投与（たとえば注射）後であっても、様々な組織への送達を含むことにより、これら教示を拡張している。
一実施形態では、表面に結合した糖類は、ＡＡＶベクターの少なくとも１つのカプシドタンパク質、好ましくはＡＡＶベクターの少なくとも１つのカプシドタンパク質の少なくとも１つの表面に曝露したアミノ酸残基に共有結合している。

【0029】

一実施形態では、表面に結合した糖類は、リンカーを介して共有結合している。

【0030】

一実施形態では、上記修飾されたＡＡＶベクターは、少なくとも１つの導入遺伝子を含む。

【0031】

一実施形態では、上記導入遺伝子は、３Ｒ ｔａｕ、４Ｒ ｔａｕ、ＡＡＲＳ、ＡＢＣＤ１、ＡＣＯＸ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＧＡ、ＡＧＥＲ、ＡＬＤＨ７Ａ１、ＡＬＧ１３、ＡＬＳ２、ＡＮＧ、ＡＮＸＡ１１、ＡＰＰ、ＡＲＨＧＥＦ９、ＡＲＳＡ、ＡＲＳＢ、ＡＲＶ１、ＡＳＡＨ１、ＡＳＰＡ、ＡＴＮ１、ＡＴＰ１０Ａ、ＡＴＰ１３Ａ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＢＡＸ、ＢＣＬ－２、ＢＤＮＦ、ＢＩＣＤ２、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＳＲ、ＣＣＮＦ、ＣＤＫＬ５、ＣＥＲＳ１、ＣＦＡＰ４１０、ＣＨＣＨＤ１０、ＣＨＤ２、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＢ２、ＣＬＣＮ２ａ、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、ＣＮＴＮ２、ＣＰＡ６、ＣＳＴＢ、ＣＴＮＳ、ＣＴＳＡ、ＣＴＳＤ、ＤＡＯ、ＤＣＴＮ１、ＤＥＰＤＣ５、ＤＭＤ、ＤＮＡＪＢ２、ＤＮＭ１、ＤＯＣＫ７、ＤＲＤ２、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＦＨＣ１、ＥＧＬＮ１、ＥＰＨＡ４、ＥＰＭ２Ａ、ＥＲＢＢ４、ＦＧＦ１２、ＦＩＧ４、ＦＲＲＳ１Ｌ、ＦＴＬ、ＦＵＣＡ１、ＦＵＳ、ＦＸＮ、ＧＡＡ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＬ、ＧＡＬＣ、ＧＡＬＮＳ、ＧＢＡ、ＧＦＡＰ、ＧＬＡ、ＧＬＢ１、ＧＬＥ１、ＧＬＴ８Ｄ１、ＧＮＡＯ１、ＧＮＳ、ＧＯＳＲ２、ＧＰＲ９８、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＳＴＭ１、ＧＵＦ１、ＧＵＳＢ、ＨＣＮ１、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＴＴ、ＨＹＡＬ１、ＩＤＳ、ＩＤＵＡ、ＩＧＨＭＢＰ２、ＩＬ－１、ＩＴ１５、ＩＴＰＡ、ＪＰＨ３、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＴ１、ＫＣＴＤ７、ＬＡＬ、ＬＡＭＰ２、ＬＧＩ１、ＬＭＮＢ２、ＬＲＲＫ２、ＭＡＮ２Ｂ１、ＭＡＮ２Ｂ２、ＭＡＮ２Ｃ１、ＭＡＮＢＡ、ＭＡＴＲ３、ＭＢＤ５、ＭＦＳＤ８、ＮＡＧＡ、ＮＡＧＬＵ、ＮＥＣＡＰ１、ＮＥＦＨ、ＮＥＫ１、ＮＥＵ１、ＮＨＬＲＣ１、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、ＮＲ４Ａ２、ＮＴＲＫ２、ＯＣＡ２、ＯＰＴＮ、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＣＤＨ１９、ＰＥＸ１、ＰＥＸ２、ＰＥＸ３、ＰＥＸ５、ＰＥＸ６、ＰＥＸ１０、ＰＥＸ１１Ｂ、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ１４、ＰＥＸ１６、ＰＥＸ１９、ＰＥＸ２６、ＰＦＮ１、ＰＩＮＫ１、ＰＬＣＢ１、ＰＮＰＯ、ＰＯＮ１、ＰＯＮ２、ＰＯＮ３、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＲＤＭ８、ＰＲＩＣＫＬＥ１、ＰＲＫＮ、ＰＲＮＰ、ＰＲＰＨ、ＰＲＲＴ２、ＰＳＡＰ、Ｓ１０６β、ＳＣＡＲＢ２、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ９Ａｂ、ＳＥＴＸ、ＳＧＳＨ、ＳＩＧＭＡＲ１、ＳＩＫ１、ＳＫＰ１、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣＡ１７Ａ５、ＳＭＮ１、ＳＭＰＤ１、ＳＮＣＡ、ＳＮＲＰＮ、ＳＯＤ１、ＳＰＧ１１、ＳＰＴＡＮ１、ＳＱＳＴＭ１、ＳＴ３ＧＡＬ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＳＴＸ１Ｂ、ＳＴＸＢＰ１、ＳＹＰ、ＳＹＴ１、ＳＺＴ２、ＴＡＦ１５、ＴＡＲＤＢＰ、ＴＢＣ１Ｄ２４、ＴＢＣＥ、ＴＢＫ１、ＴＢＰ、ＴＩＴＦ－１、ＴＲＥＭ２、ＵＢＡ５、ＵＢＥ１、ＵＢＥ３Ａ、ＵＢＱＬＮ２、ＵＣＨ－Ｌ１、ＵＮＣ１３Ａ、ＶＡＰＢ、ＶＣＰ、ＶＰＳ３５、ＷＷＯＸ、およびＸＢＰ１を含む群から選択される遺伝子由来のｃＤＮＡまたはそのフラグメントを含む。

【0032】

一実施形態では、上記ＣＮＳ疾患は、酸性リパーゼ疾患、酸性マルターゼ欠乏症、酸蓄積症、後天性てんかん様失語症、急性散在性脳脊髄炎、注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）、アディー瞳孔、アディー症候群、副腎白質ジストロフィー、失認、アイカルディ症候群、エカルディ‐グティエール症候群障害、アレキサンダー病、アルパース病、交代性片麻痺、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、無脳症、動脈瘤、アンジェルマン症候群、血管腫症、無酸素症、抗リン脂質抗体症候群、失語症、失行症、くも膜炎、アーノルド・キアリ奇形、芳香族Ｌ－アミノ酸脱炭酸酵素欠損症（ＡＡＤＣ欠損症）、アスパルチルグルコサミン尿症、アスペルガー症候群、運動失調、毛細血管拡張性運動失調症（Ｌｏｕｉｓ－Ｂａｒ症候群）、小脳変性症運動失調および小脳変性症または脊髄小脳変性症、注意欠陥多動障害、自閉症、自律神経障害、バース症候群、バッテン病、Ｂｅｃｋｅｒ病の筋強直、ベーチェット病、ベル麻痺、Ｂｅｒｎｈａｒｄｔ－Ｒｏｔｈ症候群、ビンスワンガー病、ブロッホ・ズルツベルガー症候群、Ｂｒａｄｂｕｒｙ－Ｅｇｇｌｅｓｔｏｎ症候群、ブラウン・セカール症候群、球脊髄性筋萎縮症、ＣＡＤＡＳＩＬ、カナバン病、カウザルギー、海面状血管腫（ｃａｖｅｒｎｏｍａｓ、ｃａｖｅｒｎｏｕｓ ａｎｇｉｏｍａ）、中央頸髄症候群、脊髄中心症候群、橋中心髄鞘崩壊症、セラミダーゼ欠乏症、小脳変性症、小脳低形成、脳性脚気、脳性巨人症、脳性麻痺、脳・眼・顔・骨格症候群（ＣＯＦＳ）、コレステロールエステル蓄積症、舞踏病、有棘赤血球舞踏病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、慢性起立性調節障害、慢性疼痛、コケイン症候群ＩＩ型、コフィン・ローリー症候群、脳梁欠損、先天性筋無力症、大脳皮質基底核変性症、頭部動脈炎、クリー脳炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、クッシング症候群、シスチン症、巨大細胞性封入体症（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｉｃ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｙ ｄｉｓｅａｓｅ：ＣＩＢＤ）、ダンシングアイズ・ダンシングフィート症候群（ｄａｎｃｉｎｇ ｅｙｅｓ－ｄａｎｃｉｎｇ ｆｅｅｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ダンディ・ウォーカー症候群、ダノン病、Ｄａｗｓｏｎ病、ドモルシア（Ｄｅ Ｍｏｒｓｉｅｒ）症候群、Ｄｅｊｅｒｉｎｅ－Ｋｌｕｍｐｋｅ麻痺、認知症、小脳歯状核失調、歯状核赤核萎縮症、皮膚筋炎、発達性統合運動障害、Ｄｅｖｉｃ症候群、びまん性硬化症、自律神経障害、書字障害、失読症、嚥下障害、統合運動障害、ミオクローヌス性小脳性共同運動障害、進行性小脳性共同運動障害、てんかん（アーミッシュ小児てんかん症候群［ＡＩＥＳ］、良性家族性乳児けいれん［ＢＦＩＳ］、良性家族性新生児けいれん［ＢＦＮＳ］、小児欠神てんかん［ＣＡＥ］、小児期発症てんかん性脳症［ＣＯＥＥ］、ドラベ症候群［ＤＳ］、早期乳児てんかん性脳症［ＥＩＥＥ］、家族性成人型ミオクローヌスてんかん［ＦＡＭＥ］、家族性熱性けいれん［ＦＦＳ］、多様な焦点を示す家族性焦点てんかん［ＦＦＥＶＦ］、家族性乳児型ミオクローヌスてんかん［ＦＩＭＥ］、家族性側頭葉てんかん［ＦＴＬＥ］、精神遅滞を伴うまたは伴わない焦点性てんかんおよび発話障害［ＦＥＳＤ］、全般てんかんおよび発作性ジスキネジア［ＧＥＰＤ］、全般てんかん熱性けいれんプラス［ＧＥＦＳ＋］、特発性全般てんかん［ＩＧＥ］、若年性欠神てんかん［ＪＡＥ］、若年性ミオクローヌスてんかん［ＪＭＥ］、ミオクローヌス－弛緩性てんかん［ＭＡＥ］、夜間前頭葉てんかん［ＮＦＬＥ］、進行性ミオクローヌスてんかん［ＰＭＥ］、ピリドキサミン５’－リン酸シンターゼ欠乏症［ＰＮＰＯＤ］、ピリドキシン－依存性てんかん［ＥＰＤ］、および乳児重症ミオクローヌスてんかん［ＳＭＥＩ］を含む）、ファブリー病、ファール病、家族性自律神経障害、家族性血管腫、家族性突発性大脳基底核石灰化、家族性周期性麻痺、家族性痙性麻痺、ファーバー（Ｆａｒｂｅｒ）病、線維筋性異形成、フィッシャー症候群、ｆｌｏｐｐｙ ｉｎｆａｎｔ症候群、フリードライヒ運動失調症、前頭側頭型認知症、フコシドーシス、ガラクトシアリドーシス、ゴーシェ病、全般性ガングリオシドーシス、ゲルストマン症候群、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、巨大軸索ニューロパチー、巨細胞性動脈炎、巨細胞性封入体病、グロボイド細胞白質ジストロフィー、舌咽神経痛、糖原病、ＧＭ１ガングリオシドーシス、ＧＭ２ガングリオシドーシス（テイ・サックス病）、ギラン・バレー症候群、ハラーホルデン・スパッツ症候群、持続性片側頭痛、交代性片麻痺（ｈｅｍｉｐｌｅｇｉａ ａｌｔｅｒａｎｓ）、遺伝性痙性対麻痺、多発神経炎型遺伝性失調症、Ｈｏｌｍｅｓ－Ａｄｉｅ症候群、全前脳症、Ｈｕｇｈｅｓ症候群、ハンチントン病、水無脳症、水脊髄症、副腎皮質ホルモン過剰症、免疫介在性脳脊髄炎、封入体筋炎、色素失調症、乳児筋緊張低下、乳児神経軸索ジストロフィー、後頭孔脳脱出症、Ｉｓａａｃ症候群、ジュベール症候群、Ｋｅａｒｎｓ－Ｓａｙｒｅ症候群（Ｋｅａｍｓ－Ｓａｙｒｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、Ｋｅｎｎｅｄｙ病、Ｋｉｎｓｂｏｕｒｎｅ症候群、クライン・レビン症候群、クリッペル・ファイル症候群、Ｋｌｉｐｐｅｌ－Ｔｒｅｎａｕｎａｙ症候群（ＫＴＳ）、クリュバー・ビューシー症候群、コルサコフ（Ｋｏｒｓａｋｏｆｆ）健紡症候群、クラッベ病、クーゲルベルク・ヴェランダー病、ランバート・イートン筋無力症症候群、Ｌａｎｄａｕ－Ｋｌｅｆｆｎｅｒ症候群、外側大腿皮神経絞扼（ｌａｔｅｒａｌ ｆｅｍｏｒａｌ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｎｅｒｖｅ ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ）、髄質延髄外側症候群、リー症候群、レノックス・ガストー症候群、レッシュ・ナイハン症候群、Ｌｅｖｉｎｅ－Ｃｒｉｔｃｈｌｅｙ症候群、レビー小体認知症、リポイドタンパク症、脳回欠損、閉じ込め症候群、ルー・ゲーリック病、ループス、ライム病、マシャド・ジョセフ病、大脳症、α－マンノシドーシス、β－マンノシドーシス、メルカーソン・ローゼンタール症候群、メンケス病、異常感覚性大腿痛、異染性白質ジストロフィー、小頭症、ミラー・フィッシャー症候群、メビウス症候群、ムコ多糖症Ｉ－Ｈ型（ハーラー症候群）、ムコ多糖症Ｉ－Ｈ／Ｓ型（Ｈｕｒｌｅｒ－Ｓｃｈｅｉｅ症候群）、ムコ多糖症ＩＳ型（Ｓｃｈｅｉｅ症候群）、ムコ多糖症ＩＩ型（Ｈｕｎｔｅｒ症候群）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ａ型（サンフィリポ症候群Ａ）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ｂ型（サンフィリポ症候群Ｂ）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ｃ型（サンフィリポ症候群Ｃ）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ｄ型（サンフィリポ症候群Ｄ）、ムコ多糖症ＩＶ－Ｂ型（モルキオ症候群Ｂ）、ムコ多糖症ＶＩ型（マロトー・ラミー症候群）、ムコ多糖症ＶＩＩ型（スライ症候群）、ムコ多糖症ＩＸ型（Ｎａｔｏｗｉｃｚ症候群）、多発性硬化症、筋ジストロフィー、重症筋無力症、アルパーズ症候群（Ｍｙｅｌｉｎｏｃｌａｓｔｉｃ Ｄｉｆｆｕｓｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、ナルコレプシー、神経有棘赤血球症、神経線維腫症、悪性症候群、神経サルコイドーシス、ニーマン・ピック病、大田原症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、眼球クローヌス・ミオクローヌス、Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ－ＭｃＬｅｏｄ症候群、パントテン酸キナーゼ関連神経変性症、腫瘍随伴症候群、錯感覚、パーキンソン病、発作性舞踏病アテトーゼ、発作性片側頭痛、Ｐａｒｒｙ－Ｒｏｍｂｅｒｇ症候群、ペリツェウス・メルツバッハ病、Ｐｅｎａ－Ｓｈｏｋｅｉｒ症候群ＩＩ型、脳室周囲白質軟化症、フィタン酸蓄積症、ピック病、梨状筋症候群、多発性筋炎、ポンペ病、ポリオ後症候群、ＰＣＡ（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｃｏｒｔｉｃａｌ ａｔｒｏｐｈｙ）、原発性歯状核萎縮症（Ｐｒｉｍａｒｙ Ｄｅｎｔａｔｕｍ Ａｔｒｏｐｈｙ）、原発性側索硬化症、原発性進行性失語症、プリオン病、進行性片側顔面萎縮症、進行性歩行運動失調、進行性多発性白質脳症、進行性硬化性灰白異栄養症、進行性核上性麻痺、顔貌失認、ラムゼイ・ハント症候群Ｉ、ラムゼイ・ハント症候群ＩＩ、ラスムッセン脳炎、レフサム病、レット症候群、Ｒｅｙｅ症候群、ライリー・デイ症候群、サンドホフ病、シルダー病、Ｓｅｉｔｅｌｂｅｒｇｅｒ病、シャイ・ドレーガー症候群、シェーグレン症候群、痙縮、二分脊椎、脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症、脊髄小脳萎縮症、脊髄小脳変性症、スティール・リチャードソン・オルゼウスキー症候群、線条体黒質変性症、スタージ・ウェーバー症候群、遅発性ジスキネジア、タウオパチー、テイ・サックス病、胸郭出口症候群、甲状腺中毒性ミオパチー、三叉神経痛、トッド麻痺、三叉神経痛、熱帯性痙性不全対麻痺症、トロイアー症候群、血管性認知症、フォン‐エコーノモ病、フォンヒッペル・リンダウ病（ＶＨＬ）、フォンレックリングハウゼン病、ワレンベルグ症候群、ウェルドニッヒ・ホフマン病、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウエスト症候群、ウィップル病、ウィリアムズ症候群、ウィルソン病、ウォルマン病、Ｘ連鎖球脊髄性筋萎縮症、およびツェルウェーガー症候群を含む群から選択される。

【0033】

一実施形態では、上記導入遺伝子は、ＣＡＧプロモーターの制御下にある。

【0034】

本発明は、少なくとも１つの導入遺伝子を含む修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、
上記修飾されたＡＡＶベクターが、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
上記導入遺伝子が、３Ｒ ｔａｕ、４Ｒ ｔａｕ、ＡＡＲＳ、ＡＢＣＤ１、ＡＣＯＸ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＧＡ、ＡＧＥＲ、ＡＬＤＨ７Ａ１、ＡＬＧ１３、ＡＬＳ２、ＡＮＧ、ＡＮＸＡ１１、ＡＰＰ、ＡＲＨＧＥＦ９、ＡＲＳＡ、ＡＲＳＢ、ＡＲＶ１、ＡＳＡＨ１、ＡＳＰＡ、ＡＴＮ１、ＡＴＰ１０Ａ、ＡＴＰ１３Ａ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＢＡＸ、ＢＣＬ－２、ＢＤＮＦ、ＢＩＣＤ２、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＳＲ、ＣＣＮＦ、ＣＤＫＬ５、ＣＥＲＳ１、ＣＦＡＰ４１０、ＣＨＣＨＤ１０、ＣＨＤ２、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＢ２、ＣＬＣＮ２ａ、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、ＣＮＴＮ２、ＣＰＡ６、ＣＳＴＢ、ＣＴＮＳ、ＣＴＳＡ、ＣＴＳＤ、ＤＡＯ、ＤＣＴＮ１、ＤＥＰＤＣ５、ＤＭＤ、ＤＮＡＪＢ２、ＤＮＭ１、ＤＯＣＫ７、ＤＲＤ２、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＦＨＣ１、ＥＧＬＮ１、ＥＰＨＡ４、ＥＰＭ２Ａ、ＥＲＢＢ４、ＦＧＦ１２、ＦＩＧ４、ＦＲＲＳ１Ｌ、ＦＴＬ、ＦＵＣＡ１、ＦＵＳ、ＦＸＮ、ＧＡＡ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＬ、ＧＡＬＣ、ＧＡＬＮＳ、ＧＢＡ、ＧＦＡＰ、ＧＬＡ、ＧＬＢ１、ＧＬＥ１、ＧＬＴ８Ｄ１、ＧＮＡＯ１、ＧＮＳ、ＧＯＳＲ２、ＧＰＲ９８、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＳＴＭ１、ＧＵＦ１、ＧＵＳＢ、ＨＣＮ１、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＴＴ、ＨＹＡＬ１、ＩＤＳ、ＩＤＵＡ、ＩＧＨＭＢＰ２、ＩＬ－１、ＩＴ１５、ＩＴＰＡ、ＪＰＨ３、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＴ１、ＫＣＴＤ７、ＬＡＬ、ＬＡＭＰ２、ＬＧＩ１、ＬＭＮＢ２、ＬＲＲＫ２、ＭＡＮ２Ｂ１、ＭＡＮ２Ｂ２、ＭＡＮ２Ｃ１、ＭＡＮＢＡ、ＭＡＴＲ３、ＭＢＤ５、ＭＦＳＤ８、ＮＡＧＡ、ＮＡＧＬＵ、ＮＥＣＡＰ１、ＮＥＦＨ、ＮＥＫ１、ＮＥＵ１、ＮＨＬＲＣ１、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、ＮＲ４Ａ２、ＮＴＲＫ２、ＯＣＡ２、ＯＰＴＮ、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＣＤＨ１９、ＰＥＸ１、ＰＥＸ２、ＰＥＸ３、ＰＥＸ５、ＰＥＸ６、ＰＥＸ１０、ＰＥＸ１１Ｂ、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ１４、ＰＥＸ１６、ＰＥＸ１９、ＰＥＸ２６、ＰＦＮ１、ＰＩＮＫ１、ＰＬＣＢ１、ＰＮＰＯ、ＰＯＮ１、ＰＯＮ２、ＰＯＮ３、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＲＤＭ８、ＰＲＩＣＫＬＥ１、ＰＲＫＮ、ＰＲＮＰ、ＰＲＰＨ、ＰＲＲＴ２、ＰＳＡＰ、Ｓ１０６β、ＳＣＡＲＢ２、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ９Ａｂ、ＳＥＴＸ、ＳＧＳＨ、ＳＩＧＭＡＲ１、ＳＩＫ１、ＳＫＰ１、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣＡ１７Ａ５、ＳＭＮ１、ＳＭＰＤ１、ＳＮＣＡ、ＳＮＲＰＮ、ＳＯＤ１、ＳＰＧ１１、ＳＰＴＡＮ１、ＳＱＳＴＭ１、ＳＴ３ＧＡＬ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＳＴＸ１Ｂ、ＳＴＸＢＰ１、ＳＹＰ、ＳＹＴ１、ＳＺＴ２、ＴＡＦ１５、ＴＡＲＤＢＰ、ＴＢＣ１Ｄ２４、ＴＢＣＥ、ＴＢＫ１、ＴＢＰ、ＴＩＴＦ－１、ＴＲＥＭ２、ＵＢＡ５、ＵＢＥ１、ＵＢＥ３Ａ、ＵＢＱＬＮ２、ＵＣＨ－Ｌ１、ＵＮＣ１３Ａ、ＶＡＰＢ、ＶＣＰ、ＶＰＳ３５、ＷＷＯＸ、およびＸＢＰ１を含む群から選択される遺伝子由来のｃＤＮＡまたはそのフラグメントを含み、好ましくはＣＡＧプロモーターの制御下にある、
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに関する。

【0035】

本発明は、
対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞への形質導入、および／または
対象の中枢神経系（ＣＮＳ）への導入遺伝子の送達、および／または
対象の中枢神経系（ＣＮＳ）疾患の予防および／または処置
に適したキットまたはキットオブパーツであって、
上記キットが、
（ａ）本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターと、
（ｂ）前記修飾されたＡＡＶベクターのＣＮＳ送達のための装置と、
（ｃ）任意選択で、前記修飾されたＡＡＶベクターのＣＮＳ送達のための説明書と
を含む、
キットまたはキットオブパーツに関する。

【発明を実施するための形態】

【0036】

詳細な説明
特に、本開示は、幅広い形質導入の特性を有するＡＡＶ系の開発が特に有用であり得、特にはＣＮＳ全体に散乱される細胞に関与し得るＣＮＳ疾患の状況において、現存するＡＡＶ戦略に伴う問題の源に対処し得るとの知見を提供する。

【0037】

特に、本開示は、ＣＮＳにおける単回または非常に少ない局所的な投与ポイントから、幅広い形質導入を達成できるＡＡＶベクターが好適であり、たとえばＣＮＳの複数の部位への注射を必要とし得るかまたは通常含み得る特定の既存のＡＡＶ戦略に伴う問題の源を解決し得るとの知見を提供する。

【0038】

特に、本開示は、ＣＮＳにおける細胞特異的かつ幅広い形質導入を確実にしつつ、免疫検出を回避できるＡＡＶベクターが有利であり、免疫応答を誘発する特定の既存のＡＡＶ戦略に伴う問題の源を解決し得るとの知見を提供する。

【0039】

本発明は、対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞への形質導入に使用するための修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、
少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
ＣＮＳに直接投与され、
脳室内に投与されない、
修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに関する。

【0040】

また本発明は、対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞に形質導入するための修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの使用であって、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、ＣＮＳに直接投与され、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、脳室内に投与されない、
使用に関する。

【0041】

また本発明は、対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の複数の脳組織へ修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを投与する方法であって、
前記導入遺伝子を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを前記対象へ投与するステップを含み、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、ＣＮＳ部位に直接投与され、複数の脳組織のうちの少なくとも１つが前記ＣＮＳ部位とは離れており、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、脳室内に投与されない、
方法に関する。

【0042】

一部の実施形態では、脳組織は、線条体、視床、黒質、頭頂皮質、海馬、および／または淡蒼球であり得るかまたはこれらを含み得る。一部の実施形態では、ＣＮＳ部位は、線条体にあり得る。一部の実施形態では、ＣＮＳ部位は、視床にあり得る。一部の実施形態では、ＣＮＳ部位は、大槽にあり得る。一部の実施形態では、投与は、単一のＣＮＳ部位に対してであり得る。一部の実施形態では、線条体および視床およびそれらの組み合わせからなる群から、または線条体および視床および大槽およびそれらの組み合わせからなる群から選択される複数のＣＮＳ部位に対してであり得る。一部の実施形態では、投与は、単回注射によるものであり得る。

【0043】

また本発明は、対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞に形質導入するための方法であって、修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを前記対象へ投与するステップを含み、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、ＣＮＳ部位に直接投与され、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、脳室内に投与されない、
方法に関する。

【0044】

また本発明は、対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞に導入遺伝子を送達するための方法であって、前記導入遺伝子を含む修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを前記対象へ投与するステップを含み、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、ＣＮＳ部位に直接投与され、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、脳室内に投与されない、
方法に関する。

【0045】

また本発明は、対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の複数の脳組織に導入遺伝子を送達するための方法であって、前記導入遺伝子を含む修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを前記対象へ投与するステップを含み、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、ＣＮＳ部位に直接投与され、複数の脳組織のうちの少なくとも１つがＣＮＳ部位から離れており、
前記修飾されたＡＡＶベクターが、脳室内に投与されない、
方法に関する。

【0046】

一部の実施形態では、脳組織は、線条体、視床、黒質、頭頂皮質、海馬、および／または淡蒼球であり得るか、またはこれらを含み得る。一部の実施形態では、ＣＮＳ部位は、線条体にあり得る。一部の実施形態では、ＣＮＳ部位は、視床にあり得る。一部の実施形態では、ＣＮＳ部位は、大槽にあり得る。一部の実施形態では、投与は、単一のＣＮＳ部位に対してであり得る。一部の実施形態では、線条体および視床およびそれらの組み合わせからなる群から、または線条体および視床および大槽およびそれらの組み合わせからなる群から選択される複数のＣＮＳ部位に対してであり得る。一部の実施形態では、投与は、単回注射によるものであり得る。

【0047】

さらに本発明は、神経細胞に形質導入するためのｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法であって、上記神経細胞を、修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターと接触させるステップを含み、前記修飾されたＡＡＶベクターが、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含む、方法に関する。

【0048】

本明細書中使用される場合、「中枢神経系」または「ＣＮＳ」は、脳および脊髄の両方を表し、脳および脊髄を除く「末梢神経系」または「ＰＮＳ」とは対照的である。

【0049】

本明細書中使用される場合、用語「対象」は、哺乳類、好ましくはヒトを表す。一実施形態では、対象は、「患者」、すなわち医療の受診を待機しているか、または医療を受診しているか、または過去／現在／将来医療処置の対象であった／ある／となり得るか、または疾患の発症に関してモニタリングされている温血動物、より好ましくはヒトであり得る。

【0050】

用語「哺乳類」は、ここでは、ヒト、家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃおよびｆａｒｍ ａｎｉｍａｌｓ）、動物園用動物、スポーツ用動物、またはペット用動物、たとえば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどを含むいずれかの動物を表す。好ましくは、哺乳類は、霊長類、より好ましくはヒトである。

【0051】

本発明に適切なＡＡＶベクターは、いずれかの天然または組み換えのＡＡＶ血清型を含み得るか、またはこれに由来し得る。

【0052】

一実施形態では、本発明に係るＡＡＶベクターは、天然の血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、およびＡＡＶ１２；またはそれらのシュードタイプ、キメラ、およびバリアントから選択される。

【0053】

本明細書中使用される場合、ＡＡＶベクターを表す場合の用語「シュードタイプ」または「シュードタイプ化ＡＡＶベクター」は、別のＡＡＶ血清型のカプシドにパッケージングされた１つのＡＡＶ血清型のゲノムを含むＡＡＶベクターを表す。これらのシュードタイプは、スラッシュまたはハイフンを使用して記載され、よって、「ＡＡＶ２／５」または「ＡＡＶ２－５」は、血清型５のカプシドにパッケージングされた血清型２のゲノムを含むＡＡＶベクターを表す。

【0054】

シュードタイプ化ＡＡＶベクターの例として、限定するものではないが、ＡＡＶ２／１、ＡＡＶ２／２、ＡＡＶ２／３、ＡＡＶ２／４、ＡＡＶ２／５、ＡＡＶ２／６、ＡＡＶ２／７、ＡＡＶ２／８、およびＡＡＶ２／９が挙げられる。

【0055】

本明細書中使用される場合、ＡＡＶベクターを表す場合の用語「キメラ」または「キメラＡＡＶベクター」は、少なくとも２つの異なるＡＡＶ血清型に由来するＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３タンパク質を含むカプシドを含むＡＡＶベクター、またはあるいは、少なくとも一つが別のＡＡＶ血清型由来の少なくとも一部を含む、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３タンパク質を含むＡＡＶベクターを表す。

【0056】

キメラＡＡＶベクターの例として、限定するものではないが、ＡＡＶ－ＤＪ、ＡＡＶ２Ｇ９、ＡＡＶ２ｉ８、ＡＡＶ２ｉ８Ｇ９、ＡＡＶ８Ｇ９、およびＡＡＶ９ｉ１が挙げられる。

【0057】

一実施形態では、本発明に係るＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＶ１０６．１／ｈｕ．３７、ＡＡＶ１１４．３／ｈｕ．４０、ＡＡＶ１２７．２／ｈｕ．４１、ＡＡＶ１２７．５／ｈｕ．４２、ＡＡＶ１２８．１／ｈｕ．４３、ＡＡＶ１２８．３／ｈｕ．４４，ＡＡＶ１３０．４／ｈｕ．４８、ＡＡＶ１４５．１／ｈｕ．５３、ＡＡＶ１４５．５／ｈｕ．５４、ＡＡＶ１４５．６／ｈｕ．５５、ＡＡＶ１６．１２／ｈｕ．１１、ＡＡＶ１６．３、ＡＡＶ１６．８／ｈｕ．１０、ＡＡＶ１６１．１０／ｈｕ．６０、ＡＡＶ１６１．６／ｈｕ．６１，ＡＡＶ１－７／ｒｈ．４８、ＡＡＶ１－８／ｒｈ．４９、ＡＡＶ２ｉ８、ＡＡＶ２ｉ８Ｇ９、ＡＡＶ２－１５／ｒｈ．６２、ＡＡＶ２２３．１、ＡＡＶ２２３．２、ＡＡＶ２２３．４、ＡＡＶ２２３．５、ＡＡＶ２２３．６、ＡＡＶ２２３．７、ＡＡＶ２－３／ｒｈ．６１、ＡＡＶ２４．１，ＡＡＶ２－４／ｒｈ．５０、ＡＡＶ２－５／ｒｈ．５１、ＡＡＶ２．５Ｔ、ＡＡＶ２７．３、ＡＡＶ２９．３／ｂｂ．１、ＡＡＶ２９．５／ｂｂ．２、ＡＡＶ２Ｇ９、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ３．１／ｈｕ．６、ＡＡＶ３．１／ｈｕ．９、ＡＡＶ３－１１／ｒｈ．５３、ＡＡＶ３－３、ＡＡＶ３３．１２／ｈｕ．１７、ＡＡＶ３３．４／ｈｕ．１５、ＡＡＶ３３．８／ｈｕ．１６、ＡＡＶ３－９／ｒｈ．５２、ＡＡＶ３ａ、ＡＡＶ３ｂ、ＡＡＶ４－１９／ｒｈ．５５、ＡＡＶ４２．１２、ＡＡＶ４２－１０、ＡＡＶ４２－１１、ＡＡＶ４２－１２、ＡＡＶ４２－１３、ＡＡＶ４２－１５、ＡＡＶ４２－１ｂ、ＡＡＶ４２－２、ＡＡＶ４２－３ａ、ＡＡＶ４２－３ｂ、ＡＡＶ４２－４、ＡＡＶ４２－５ａ、ＡＡＶ４２－５ｂ、ＡＡＶ４２－６ｂ、ＡＡＶ４２－８、ＡＡＶ４２－ａａ、ＡＡＶ４３－１、ＡＡＶ４３－１２、ＡＡＶ４３－２０、ＡＡＶ４３－２１、ＡＡＶ４３－２３、ＡＡＶ４３－２５、ＡＡＶ４３－５、ＡＡＶ４－４、ＡＡＶ４４．１、ＡＡＶ４４．２、ＡＡＶ４４．５、ＡＡＶ４６．２／ｈｕ．２８、ＡＡＶ４６．６／ｈｕ．２９、ＡＡＶ４－８／ｒｈ．６４、ＡＡＶ４－９／ｒｈ．５４、ＡＡＶ５２．１／ｈｕ．２０、ＡＡＶ５２／ｈｕ．１９、ＡＡＶ５－２２／ｒｈ．５８、ＡＡＶ５－３／ｒｈ．５７、ＡＡＶ５４．１／ｈｕ．２１、ＡＡＶ５４．２／ｈｕ．２２、ＡＡＶ５４．４Ｒ／ｈｕ．２７、ＡＡＶ５４．５／ｈｕ．２３、ＡＡＶ５４．７／ｈｕ．２４、ＡＡＶ５８．２／ｈｕ．２５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．１．２、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７ｍ８、ＡＡＶ７．２、ＡＡＶ７．３／ｈｕ．７、ＡＡＶ－８ｂ、ＡＡＶ８Ｇ９、ＡＡＶ－８ｈ、ＡＡＶ９ｉ１、ＡＡＶ９．１１、ＡＡＶ９．１３、ＡＡＶ９．１６、ＡＡＶ９．２４、ＡＡＶ９．４５、ＡＡＶ９．４７，ＡＡＶ９．６１、ＡＡＶ９．６８、ＡＡＶ９．８４、ＡＡＶ９．９、ＡＡＶｃｙ．２、ＡＡＶｃｙ．３、ＡＡＶｃｙ．４、ＡＡＶｃｙ．５、ＡＡＶｃｙ．５Ｒ１、ＡＡＶｃｙ．５Ｒ２、ＡＡＶｃｙ．５Ｒ３、ＡＡＶｃｙ．５Ｒ４、ＡＡＶｃｙ．６、ＡＡＶｈｕ．１、ＡＡＶｈｕ．２、ＡＡＶｈｕ．３、ＡＡＶｈｕ．４、ＡＡＶｈｕ．５、ＡＡＶｈｕ．６、ＡＡＶｈｕ．７、ＡＡＶｈｕ．８、ＡＡＶｈｕ．９、ＡＡＶｈｕ．１０、ＡＡＶｈｕ．１１、ＡＡＶｈｕ．１２、ＡＡＶｈｕ．１３、ＡＡＶｈｕ．１４／９、ＡＡＶｈｕ．１５、ＡＡＶｈｕ．１６、ＡＡＶｈｕ．１７、ＡＡＶｈｕ．１８、ＡＡＶｈｕ．１９、ＡＡＶｈｕ．２０、ＡＡＶｈｕ．２１、ＡＡＶｈｕ．２２、ＡＡＶｈｕ．２３．２、ＡＡＶｈｕ．２４、ＡＡＶｈｕ．２５、ＡＡＶｈｕ．２７、ＡＡＶｈｕ．２８、ＡＡＶｈｕ．２９、ＡＡＶｈｕ．２９Ｒ、ＡＡＶｈｕ．３１、ＡＡＶｈｕ．３２、ＡＡＶｈｕ．３４、ＡＡＶｈｕ．３５、ＡＡＶｈｕ．３７、ＡＡＶｈｕ．３９、ＡＡＶｈｕ．４０、ＡＡＶｈｕ．４１、ＡＡＶｈｕ．４２、ＡＡＶｈｕ．４３、ＡＡＶｈｕ．４４、ＡＡＶｈｕ．４４Ｒ１、ＡＡＶｈｕ．４４Ｒ２、ＡＡＶｈｕ．４４Ｒ３、ＡＡＶｈｕ．４５、ＡＡＶｈｕ．４６、ＡＡＶｈｕ．４７、ＡＡＶｈｕ．４８、ＡＡＶｈｕ．４８Ｒ１、ＡＡＶｈｕ．４８Ｒ２、ＡＡＶｈｕ．４８Ｒ３、ＡＡＶｈｕ．４９、ＡＡＶｈｕ．５１、ＡＡＶｈｕ．５２、ＡＡＶｈｕ．５３、ＡＡＶｈｕ．５４、ＡＡＶｈｕ．５５、ＡＡＶｈｕ．５６、ＡＡＶｈｕ．５７、ＡＡＶｈｕ．５８、ＡＡＶｈｕ．６０、ＡＡＶｈｕ．６１、ＡＡＶｈｕ．６３、ＡＡＶｈｕ．６４、ＡＡＶｈｕ．６６、ＡＡＶｈｕ．６７、ＡＡＶｐｉ．１、ＡＡＶｐｉ．２、ＡＡＶｐｉ．３、ＡＡＶｒｈ．２、ＡＡＶｒｈ．２Ｒ、ＡＡＶｒｈ．８、ＡＡＶｒｈ．８Ｒ、ＡＡＶｒｈ８Ｒ Ｒ５３３Ａ変異体、ＡＡＶｒｈ８Ｒ Ａ５８６Ｒ変異体、ＡＡＶｒｈ．１０、ＡＡＶｒｈ．１２、ＡＡＶｒｈ．１３、ＡＡＶｒｈ． １３Ｒ、ＡＡＶｒｈ．１４、ＡＡＶｒｈ．１７、ＡＡＶｒｈ．１８、ＡＡＶｒｈ．１９、ＡＡＶｒｈ．２０、ＡＡＶｒｈ．２１、ＡＡＶｒｈ．２２、ＡＡＶｒｈ．２３、ＡＡＶｒｈ．２４、ＡＡＶｒｈ．２５、ＡＡＶｒｈ．３１、ＡＡＶｒｈ．３２、ＡＡＶｒｈ．３３、ＡＡＶｒｈ．３４、ＡＡＶｒｈ．３５、ＡＡＶｒｈ．３６、ＡＡＶｒｈ．３７、ＡＡＶｒｈ．３７Ｒ２、ＡＡＶｒｈ．３８、ＡＡＶｒｈ．３９、ＡＡＶｒｈ．４０、ＡＡＶｒｈ．４３、ＡＡＶｒｈ．４４、ＡＡＶｒｈ．４５、ＡＡＶｒｈ．４６、ＡＡＶｒｈ．４７、ＡＡＶｒｈ．４８、ＡＡＶｒｈ．４８．１、ＡＡＶｒｈ．４８．１．２、ＡＡＶｒｈ．４８．２、ＡＡＶｒｈ．４９、ＡＡＶｒｈ．５０、ＡＡＶｒｈ．５１、ＡＡＶｒｈ．５２、ＡＡＶｒｈ．５３、ＡＡＶｒｈ．５４、ＡＡＶｒｈ．５５、ＡＡＶｒｈ．５６、ＡＡＶｒｈ．５７、ＡＡＶｒｈ．５８、ＡＡＶｒｈ．５９、ＡＡＶｒｈ．６０、ＡＡＶｒｈ．６１、ＡＡＶｒｈ．６２、ＡＡＶｒｈ．６４、ＡＡＶｒｈ．６４Ｒ１、ＡＡＶｒｈ．６４Ｒ２、ＡＡＶｒｈ．６５、ＡＡＶｒｈ．６７、ＡＡＶｒｈ．６８、ＡＡＶｒｈ．６９、ＡＡＶｒｈ．７０、ＡＡＶｒｈ．７２、ＡＡＶｒｈ．７３、ＡＡＶｒｈ．７４、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ａ、ＡＡＶ－Ｇ２Ｂ－２６、ＡＡＶ－Ｇ２Ｂ－１３、ＡＡＶ－ＴＨ１．１－３２、ＡＡＶ－ＴＨ１．１－３５、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ２、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ３、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｎ／ＰＨＰ．Ｂ－ＤＧＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＥＳＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＧＧＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＡＴＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＡＴＴ－Ｔ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＤＧＴ－Ｔ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＧＧＴ－Ｔ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＳＧＳ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＡＱＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＱＱＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＳＮＰ（３）、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＳＮＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＱＧＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＮＱＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＥＧＳ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＳＧＮ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＥＧＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＤＳＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＤＳＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＳＴＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＰＱＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＳＱＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＱＬＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＴＭＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＴＴＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｓ／Ｇ２Ａ１２、ＡＡＶ－Ｇ２Ａ１５／Ｇ２Ａ３、ＡＡＶ－Ｇ２Ｂ４、ＡＡＶ－Ｇ２Ｂ５、ＰＨＰ．Ｓ、ＡＡＡＶ、ＡＡＶ Ａ３．３、ＡＡＶ Ａ３．４、ＡＡＶ Ａ３．５、ＡＡＶ Ａ３．７、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．３、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．１、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．１０、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．２、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．４、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．５、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．７、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．８、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｂ７．３、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｂ７．４、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ１、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ２、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ３、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ４、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ５、ＡＡＶ ＣＢｒ－ｅ５、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ６、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ７、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ８、ＡＡＶ ＣＨｔ－１、ＡＡＶ ＣＨｔ－２、ＡＡＶ ＣＨｔ－３、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．１、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．１０、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．５、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．６、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．７、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．８、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ１、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ２、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ５、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ６、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ８、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ９、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｎ４、ＡＡＶ ＣＫｄ－１、ＡＡＶ ＣＫｄ－１０、ＡＡＶ ＣＫｄ－２、ＡＡＶ ＣＫｄ－３、ＡＡＶ ＣＫｄ－４、ＡＡＶ ＣＫｄ－６、ＡＡＶ ＣＫｄ－７、ＡＡＶ ＣＫｄ－８、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ１、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ２、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ３、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ４、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ５、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ６、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ７、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ８、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ１、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ２、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ３、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ４、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ５、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ６、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｎ３、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｎ９、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ１、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ２、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ３、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ４、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ５、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ６、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ７、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ９、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－１、ＡＡＶ ＣＬｖ１－１、ＡＡＶ ＣＬｖ１－１０、ＡＡＶ ＣＬｖ１－２、ＡＡＶ ＣＬｖ－１２、ＡＡＶ ＣＬｖ１－３、ＡＡＶ ＣＬｖ－１３、ＡＡＶ ＣＬｖ１－４、ＡＡＶ ＣＬｖ１－７、ＡＡＶ ＣＬｖ１－８、ＡＡＶ ＣＬｖ１－９、ＡＡＶ ＣＬｖ－２、ＡＡＶ ＣＬｖ－３、ＡＡＶ ＣＬｖ－４、ＡＡＶ ＣＬｖ－６、ＡＡＶ ＣＬｖ－８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ２、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ３、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ４、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ５、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ７、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｅ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｋ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｋ３、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｋ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｌ４、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｌ５、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｌ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ１１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ２、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ５、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ７、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ２、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ３、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ４、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ５、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ７、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ９、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．１０、ＡＡＶ ＣＳｐ－１、ＡＡＶ ＣＳｐ－１０、ＡＡＶ ＣＳｐ－１１、ＡＡＶ ＣＳｐ－２、ＡＡＶ ＣＳｐ－３、ＡＡＶ ＣＳｐ－４、ＡＡＶ ＣＳｐ－６、ＡＡＶ ＣＳｐ－７、ＡＡＶ ＣＳｐ－８、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．２、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．４、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．５、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．６、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．７、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．８、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．９、ＡＡＶ ＣＳｐ－９、ＡＡＶ－ＬＫ０８、ＡＡＶ－ＬＫ１５、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １００－１、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １００－２、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １００－３、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １００－７、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １０－２、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １０－６、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １０－８、ＡＡＶ ＳＭ １００－１０、ＡＡＶ ＳＭ １００－３、ＡＡＶ ＳＭ １０－１、ＡＡＶ ＳＭ １０－２、ＡＡＶ ＳＭ １０－８、ＡＡＶ．ＶＲ－３５５、ＡＡＶ－ｂ、ＡＡＶＣ１、ＡＡＶＣ２、ＡＡＶＣ５、ＡＡＶＣｈ．５、ＡＡＶＣｈ．５Ｒ１、ＡＡＶ－ＤＪ、ＡＡＶ－ＤＪ８、ＡＡＶＦ１／ＨＳＣ１、ＡＡＶＦ１１／ＨＳＣ１１、ＡＡＶＦ１２／ＨＳＣ１２、ＡＡＶＦ１３／ＨＳＣ１３、ＡＡＶＦ１４／ＨＳＣ１４、ＡＡＶＦ１５／ＨＳＣ１５、ＡＡＶＦ１６／ＨＳＣ１６、ＡＡＶＦ１７／ＨＳＣ１７、ＡＡＶＦ２／ＨＳＣ２、ＡＡＶＦ３、ＡＡＶＦ３／ＨＳＣ３、ＡＡＶＦ４／ＨＳＣ４、ＡＡＶＦ５、ＡＡＶＦ５／ＨＳＣ５、ＡＡＶＦ６／ＨＳＣ６、ＡＡＶＦ７／ＨＳＣ７、ＡＡＶＦ８／ＨＳＣ８、ＡＡＶＦ９／ＨＳＣ９、ＡＡＶ－ｈ、ＡＡＶＨ－１／ｈｕ．１、ＡＡＶＨ２、ＡＡＶＨ－５／ｈｕ．３、ＡＡＶＨ６、ＡＡＶｈＥ１．１、ＡＡＶｈＥｒ１．１４、ＡＡＶｈＥｒ１．１６、ＡＡＶｈＥｒ１．１８、ＡＡＶｈＥＲ
１．２３、ＡＡＶｈＥｒ１．３５、ＡＡＶｈＥｒ１．３６、ＡＡＶｈＥｒ１．５、ＡＡＶｈＥｒ１．７、ＡＡＶｈＥｒ１．８、ＡＡＶｈＥｒ２．１６、ＡＡＶｈＥｒ２．２９、ＡＡＶｈＥｒ２．３０、ＡＡＶｈＥｒ２．３１、ＡＡＶｈＥｒ２．３６、ＡＡＶｈＥｒ２．４、ＡＡＶｈＥｒ３．１、ＡＡＶＬＧ－１０／ｒｈ．４０、ＡＡＶＬＧ－４／ｒｈ．３８、ＡＡＶＬＧ－９／ｈｕ．３９、ＡＡＶＬＧ－９／ｈｕ．３９、ＡＡＶ－ＬＫ０１、ＡＡＶ－ＬＫ０２、ＡＡＶ－ＬＫ０３、ＡＡＶ－ＬＫ０３、ＡＡＶ－ＬＫ０４、ＡＡＶ－ＬＫ０５、ＡＡＶ－ＬＫ０６、ＡＡＶ－ＬＫ０７、ＡＡＶ－ＬＫ０９、ＡＡＶ－ＬＫ１０、ＡＡＶ－ＬＫ１１、ＡＡＶ－ＬＫ１２、ＡＡＶ－ＬＫ１３、ＡＡＶ－ＬＫ１４、ＡＡＶ－ＬＫ１６、ＡＡＶ－ＬＫ１７、ＡＡＶ－ＬＫ１８、ＡＡＶ－ＬＫ１９、ＡＡＶＮ７２１－８／ｒｈ．４３、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ １２、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ１１、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ２、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ４、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ６、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ７、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ８、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、Ａｎｃ８１、Ａｎｃ８２、Ａｎｃ８３、Ａｎｃ８４、Ａｎｃ９４、Ａｎｃ１１０、Ａｎｃ１１３、Ａｎｃ１２６、Ａｎｃ１２７、ＢＡＡＶ、ＢＮＰ６１ ＡＡＶ、ＢＮＰ６２ ＡＡＶ、ＢＮＰ６３ ＡＡＶ、ウシＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、日本ＡＡＶ １０血清型、ＵＰＥＮＮ ＡＡＶ１０、ＶＯＹ１０１、およびＶＯＹ２０１を含むかまたはからなる群から選択される。

【0058】

一実施形態では、ＡＡＶバリアントは、たとえばカプシドタンパク質の１つへの１つまたは数個のアミノ酸残基の置換、欠失、または付加により、遺伝子的に修飾されているベクターを含む。このようなバリアントの例として、限定するものではないが、Ｙ４４４Ｆ、Ｙ５００Ｆ、Ｙ７３０Ｆ、および／またはＳ６６２Ｖの変異のうちのいずれかまたはいくつかを伴うＡＡＶ２；Ｙ７０５Ｆ、Ｙ７３１Ｆおよび／またはＴ４９２Ｖの変異のうちのいずれかまたはいくつかを伴うＡＡＶ３；Ｓ６６３Ｖおよび／またはＴ４９２Ｖの変異のうちのいずれかまたはいくつかを伴うＡＡＶ６が挙げられる。

【0059】

一実施形態では、本発明に係るＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２である。

【0060】

一実施形態では、本発明に係るＡＡＶベクターは、ＡＡＶ５である。

【0061】

一実施形態では、本発明に係るＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６である。

【0062】

一実施形態では、本発明に係るＡＡＶベクターは、ＡＡＶ８である。

【0063】

一実施形態では、本発明に係るＡＡＶベクターは、ＡＡＶ９である。

【0064】

一実施形態では、本発明に係るＡＡＶベクターは、ＡＡＶｒｈ．１０である。

【0065】

一実施形態では、本発明に係るＡＡＶベクターは、Ａｎｃ８０Ｌ６５である。

【0066】

本発明では、修飾されたＡＡＶベクターは、少なくとも１つの表面に結合した糖類またはその誘導体を含む。

【0067】

本明細書中使用される場合、少なくとも１つの糖類を表す場合の用語「表面に結合した」は、上記少なくとも１つの糖類が、ＡＡＶベクターの外面に結合しているかまたは外面に曝露していることを意味する。

【0068】

糖類の適切な例として、限定するものではないが、単糖類、オリゴ糖、多糖類、およびそれらの誘導体が挙げられる。

【0069】

本明細書中使用される場合、用語「誘導体」は、単糖類、オリゴ糖、または多糖類を表す場合、１つ以上の非ヒドロキシル基を含む糖類を包有することを意味する。このような非ヒドロキシル基の例として、限定するものではないが、水素、アルキル、アミノ基（たとえばＮＨ２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノなど）、Ｎ－アセチルアミノ基、および／またはチオール基が挙げられる。

【0070】

単糖類（Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄ）は、「単糖（ｓｉｍｐｌｅ ｓｕｇａｒ）」とも呼ばれており、糖の最も単純な形態であり、炭水化物の最も基本的な単位である。単糖類は、含む炭素原子の数ｘにより、３（トリオース）、４（テトロース）、５（ペントース）、６（ヘキソースｓ）、７（ヘプトース）などから分類され得る。

【0071】

単糖類の例として、限定するものではないが、グリコールアルデヒド、グリセルアルデヒド、ジヒドロキシアセトン、エリトロース、トレオース、エリトルロース、アラビノース、リキソース、リボース、キシロース、リブロース、キシルロース、アロース、アルトース、ガラクトース、グルコース、グロース、イドース、マンノース、タロース、フルクトース、プシコース、ソルボース、タガトース、マンノヘプツロース、およびセドヘプツロースが挙げられる。

【0072】

デオキシモノサッカリドは、本発明に包有される単糖類の一般的な誘導体、すなわち、ヒドロキシル基が水素原子で置き換えられた単糖類である。

【0073】

デオキシモノサッカリドの例として、限定するものではないが、デオキシリボース、フコース、フルクトース（ｆｕｃｕｌｏｓｅ）、ラムノース、キノボース、ニューモース（ｐｎｅｕｍｏｓｅ）が挙げられる。

【0074】

また、２－アミノ－２－デオキシモノサッカリドも、本発明に包有される単糖類の一般的な誘導体、すなわちヒドロキシル基がアミノ基で置き換えられた単糖類である。

【0075】

２－アミノ－２－デオキシモノサッカリドの例として、限定するものではないが、グルコサミン、ガラクトサミン、およびダウノサミン、ならびに限定するものではないがＮ－アセチルグルコサミンおよびＮ－アセチルガラクトサミンを含むそれらのアセチル化形態が挙げられる。

【0076】

本明細書中記載される単糖類およびそれらの誘導体は、非環式（鎖式）形態および環式形態を包有することを理解されたい。

【0077】

また、本明細書中記載される単糖類およびそれらの誘導体は、Ｄ－立体異性体およびＬ－立体異性体、ならびにＤ－立体異性体およびＬ－立体異性体のラセミ混合物をも包有することを理解されたい。

【0078】

また、本明細書中記載される単糖類およびそれらの誘導体は、α－アノマーおよびβ－アノマー、ならびにα－アノマーおよびβ－アノマーのラセミ混合物をも包有することを理解されたい。

【0079】

オリゴ糖は、少数（通常２～１０個）の単糖類を含む糖の重合体である。

【0080】

一実施形態では、本発明に係るオリゴ糖は、それらの誘導体を含む本明細書中上記で開示される単糖類から選択される少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の単糖類を含む。このようなオリゴ糖は、ホモオリゴ糖（すなわち同じ単糖類（それらの誘導体を含む）の単位から構成されている）、またはヘテロオリゴ糖（すなわち少なくとも２つの異なる単糖類（それらの誘導体を含む）から構成されている）であり得る。

【0081】

オリゴ糖の例として、限定するものではないが、二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、八糖、九糖、および十糖が挙げられる。

【0082】

二糖の具体的な例として、限定するものではないが、セロビオース、キトビオース、ゲンチオビオース、ゲンチオビオース（ｇｅｎｔｉｏｂｉｕｌｏｓｅ）、イソマルトース、コージビオース、ラクトース、ラクツロース、ラミナリビオース、マルトース、マルツロース、マンノビオース、メリビオース、メリビウロース、ニゲロース、パラチノース、ルチノース、ルチヌロース（ｒｕｔｉｎｕｌｏｓｅ）、ソホロース、スクロース、トレハロース、ツラノース、およびキシロビオースが挙げられる。

【0083】

三糖の具体的な例として、限定するものではないが、ケストース、マルトトリオース、マルトトリオース（ｍａｌｔｏｔｒｉｕｌｏｓｅ）、メレジトース、ニゲロトリオース（ｎｉｇｅｒｏｔｒｉｏｓｅ）、およびラフィノースが挙げられる。

【0084】

四糖の具体的な例として、限定するものではないが、リクノース、マルトテトラオース、ニゲロトレハロース（ｎｉｇｅｒｏｔｅｔｒａｏｓｅ）、ニストース、セサモース（ｓｅｓａｍｏｓｅ）、およびスタキオースが挙げられる。

【0085】

オリゴ糖の他の具体的な例として、限定するものではないが、アカルボース、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、およびマルトデキストリンが挙げられる。

【0086】

多糖類は、多数（通常１０個超）の単糖類を含む糖類の重合体である。これらは、直鎖状の構造から著しく分岐した構造の範囲にある。

【0087】

一実施形態では、本発明に係る多糖類は、それらの誘導体を含む本明細書中上記に開示された単糖類から選択される１０個超の単糖類（たとえば１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上）を含む。オリゴ糖で上述されるものと同様に、多糖類は、ホモ多糖類またはヘテロ多糖類であり得る。

【0088】

多糖類の例として、限定するものではないが、ベータグルカン、レンチナン、シゾフィラン、ザイモサン、セルロース、ヘミセルロース、キチン、キトサン、デキストリン、デキストラン、フルクタン、イヌリン、ガラクタン、グルカン、グリコーゲン、レバンβ２→６、リグニン、マンナン、ペクチン、デンプン、アミロペクチン、アミロース、およびキサンタンガムが挙げられる。

【0089】

一実施形態では、本発明に係る糖類またはそれらの誘導体は、単糖類、好ましくはヘキソースである。より好ましくは、本発明に係る糖類またはその誘導体は、マンノース、ガラクトース、またはＮ－アセチルグルコサミンである。

【0090】

一実施形態では、糖類またはその誘導体は、マンノースである。一実施形態では、糖類またはその誘導体は、ガラクトースである。一実施形態では、糖類またはその誘導体は、Ｎ－アセチルグルコサミンである。

【0091】

一実施形態では、本発明に係る糖類またはそれらの誘導体は、デオキシモノサッカリド、好ましくはフコースである。

【0092】

他の実施形態では、糖類またはその誘導体は、ジアルキルアミノ基である非ヒドロキシル基を含む糖類、好ましくはデソサミンである。

【0093】

一実施形態では、少なくとも１つの表面に結合した糖類またはその誘導体は、ＡＡＶベクターに共有結合している。一実施形態では、少なくとも１つの表面に結合した糖類またはその誘導体は、ＡＡＶベクターに共有結合していない。

【0094】

一実施形態では、少なくとも１つの表面に結合した糖類またはその誘導体は、リンカーまたはスペーサーを介してＡＡＶベクターに共有結合している。一実施形態では、少なくとも１つの表面に結合した糖類またはその誘導体は、リンカーまたはスペーサーを介してＡＡＶベクターに共有結合していない。

【0095】

本発明は、いずれの特定のリンカーまたはスペーサーにも限定されない。限定するものではないが、アルキル、エーテル、ポリエーテル、アルキルアミド、またはそれらの組み合わせを含む様々なリンカーまたはスペーサーの使用が企図されている。限定するものではないが、－（ＣＨ_２）_ｎ－（式中、「ｎ」は、約２～約２０以上である）を含む様々なアルキルの使用が企図されている。限定するものではないが、－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ－（式中、「ｎ」は、約２～約２０以上である）を含む様々なエーテルおよびポリエーテルの使用が企図されている。限定するものではないが、－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｎ－および－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ－（式中「ｍ」および「ｎ」は、同じまたは異なるものであり得、「ｍ」および「ｎ」は、約１～約２０以上である）を含む様々なアルキルアミドの使用が企図されている。限定するものではないが、－Ｒ_１－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－Ｒ_２－（式中、「Ｒ_１」および「Ｒ_２」は、アルキル、エーテル、またはポリエーテルである）を含むアルキルまたはエーテル結合の結合単位を有する様々なアミドの使用が企図されている。

【0096】

適切なリンカーまたはスペーサーの特定の例は、国際特許公開公報第２０１７２１２０１９号に記載されている。

【0097】

一実施形態では、リンカーは、ポリ－エチレングリコール（ＰＥＧ）ベースのリンカー、たとえば式－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_３－のＰＥＧ３スペーサーを含むリンカー、または式－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_５－のＰＥＧ５スペーサーを含むリンカーなどである。

【0098】

一部の実施形態では、リンカーは、たとえばフェニルなどの１つ以上の芳香族基をさらに含む。一実施形態では、少なくとも１つの表面に結合した糖類またはその誘導体は、ＡＡＶベクターの少なくとも１つのカプシドタンパク質に共有結合している。

【0099】

ＡＡＶベクターは、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３と称される３つのカプシドタンパク質の混合物から構成される。

【0100】

一実施形態では、少なくとも１つの表面に結合した糖類またはその誘導体は、ＡＡＶベクターの少なくとも１つのＶＰ１タンパク質に共有結合している。一実施形態では、少なくとも１つの表面に結合した糖類またはその誘導体は、ＡＡＶベクターの少なくとも１つのＶＰ２タンパク質に共有結合している。一実施形態では、少なくとも１つの表面に結合した糖類またはその誘導体は、ＡＡＶベクターの少なくとも１つのＶＰ３タンパク質に共有結合している。

【0101】

一実施形態では、少なくとも１つの表面に結合した糖類またはその誘導体は、ＡＡＶベクターの少なくとも１つのカプシドタンパク質の少なくとも１つの表面に曝露したアミノ酸残基に共有結合している。

【0102】

本明細書中使用される場合、用語「表面に曝露した」は、ＡＡＶベクターの外面に少なくとも部分的に曝露している側鎖を有するアミノ酸残基を表す。

【0103】

一実施形態では、少なくとも１つの表面に結合した糖類またはその誘導体は、ＡＡＶベクターの少なくとも１つのカプシドタンパク質の官能基を含む少なくとも１つの表面に曝露したアミノ酸残基に共有結合している。

【0104】

本明細書中使用される場合、用語「官能基を含むアミノ酸残基」は、アミン基、チオール基、アミド基、ヒドロキシル基などを含むアミノ酸残基を表す。

【0105】

一実施形態では、官能基を含むアミノ酸残基は、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン、リジン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびそれらの混合物のうちのいずれか１つである。

【0106】

好ましい実施形態では、少なくとも１つの表面に結合した糖類またはその誘導体は、ＡＡＶベクターの少なくとも１つのカプシドタンパク質の少なくとも１つの表面に曝露したリジン残基に共有結合している。

【0107】

糖類を、ＡＡＶベクター、たとえばＡＡＶベクターのカプシドタンパク質の表面に曝露したアミノ酸残基に共有結合するための手段および方法は、当該分野でよく知られている。このような方法として、たとえば活性化エステル、スルホニルクロリド、またはイソチオシアネートとのコンジュゲーション；還元アルキル化；アザ－マイケル付加；アゼチジノンによる化学処理；ベンゾイルフルオリドベースのｐｌｕｇ－ａｎｄ－ｐｌａｙによる化学処理；またはクリックケミストリーが挙げられる。例として、たとえばＳｌｅｔｔｅｎ ＆ Ｂｅｒｔｏｚｚｉ， ２００９． Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ． ４８（３８）：６９７４－９８が提供される。

【0108】

カップリング反応の非限定的な例が、図１７Ａに示されている。上記カップリング反応を良好に示すために、糖類部分（たとえば本明細書中糖類部分の非限定的な例として取られているマンノースなど）とＡＡＶの表面に曝露した一級アミン（たとえばＮＨ２など）との間のカップリング反応の非限定的な例が、図１７Ｂに示されている。

【0109】

本発明では、修飾されたＡＡＶベクターは、ＣＮＳに直接投与される。

【0110】

「ＣＮＳに直接投与される」は、脊髄内または脳内に投与されることを意味する。

【0111】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、脊髄内および／または脳内投与により投与され得る。

【0112】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、脊髄内に投与される。

【0113】

一実施形態では、脊髄内投与は、くも膜下腔内投与および硬膜外投与を含むかまたはからなる。

【0114】

一実施形態では、脊髄内投与は、くも膜下腔内投与を含むかまたはからなる。

【0115】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、脳内投与される。

【0116】

一実施形態では、脳内投与は、線条体（たとえば被殻、尾状核、側坐核、嗅結節、淡蒼球外節および／または淡蒼球内節）、視床、視床下部、視床上部、腹側視床、実質、大脳、髄質、深部小脳核（たとえば黒質、歯状、栓状核、球状核、および／または室頂核）、脳脊髄液（ＣＳＦ）、髄膜、硬膜、くも膜、軟膜、クモ膜下槽（たとえば大槽、橋槽（Ｐｏｎｔｉｎｅ ｃｉｓｔｅｒｎ）、脚間槽、交叉槽、大脳外側窩槽、上槽、および／または終板槽）、くも膜下腔、皮質、中隔、橋、および小脳を含むかまたはからなる群から選択される部位での投与である。

【0117】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、線条体内（すなわち線条体、たとえば被殻、尾状核、側坐核、嗅結節、淡蒼球外節、および／または淡蒼球内節）、視床内（すなわち視床）、大槽内（すなわちクモ膜下槽、たとえば大槽、橋槽（Ｐｏｎｔｉｎｅ ｃｉｓｔｅｒｎ）、脚間槽、交叉槽、大脳外側窩槽、上槽、および／または終板槽；好ましくは大槽）に投与される。

【0118】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、実質内に投与される。

【0119】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、線条体内、視床内、大槽内、またはくも膜下腔内に投与される。

【0120】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、線条体内または視床内に投与される。

【0121】

本発明では、修飾されたＡＡＶベクターは、脳室内（すなわち脳室系、たとえば右側脳室、左側脳室、第三脳室、および／または第四脳室）に投与されない。

【0122】

用語「投与」または「投与される」は、本明細書中使用される場合、注射および注入、ならびに当業者に知られている他のいずれかの投与手段を包有することを意味する。

【0123】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、以下の細胞：ニューロン（たとえば錐体神経細胞、プルキンエ神経細胞、紡錘体神経細胞、ｍｓニューロン（ｍｅｄｉｕｍ ｓｐｉｎｙ ｎｅｕｒｏｎｓ）、および／または介在ニューロン［たとえばゴルジ細胞、ルガロ細胞、バスケット細胞、星状細胞、ｃａｎｄｅｌａｂｒｕｍ細胞、単極刷毛細胞、顆粒細胞、レンショウ細胞、１ａ 抑制性ニューロン、１ｂ 抑制性ニューロン、パルブアルブミン発現介在ニューロン、ＣＣＫ発現介在ニューロン、ＶＩＰ発現介在ニューロン、ＳＯＭ発現介在ニューロン、コリン作動性介在ニューロン、チロシンヒドロキシラーゼ発現介在ニューロン、カルレチニン発現介在ニューロン、またはＮＯ合成酵素発現介在ニューロン］）、オリゴデンドロサイト、アストロサイト、ミクログリア細胞、上衣細胞、放射状グリア細胞、および／または下垂体細胞のうちのいずれかまたはいくつかを特異的に形質導入する。

【0124】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、以下の細胞：ニューロン（たとえば錐体神経細胞、プルキンエ神経細胞、紡錘体神経細胞、ｍｓニューロン（ｍｅｄｉｕｍ ｓｐｉｎｙ ｎｅｕｒｏｎｓ）、および／または介在ニューロン［たとえばゴルジ細胞、ルガロ細胞、バスケット細胞、星状細胞、ｃａｎｄｅｌａｂｒｕｍ細胞、単極刷毛細胞、顆粒細胞、レンショウ細胞、１ａ 抑制性ニューロン、１ｂ 抑制性ニューロン、パルブアルブミン発現介在ニューロン、ＣＣＫ発現介在ニューロン、ＶＩＰ発現介在ニューロン、ＳＯＭ発現介在ニューロン、コリン作動性介在ニューロン、チロシンヒドロキシラーゼ発現介在ニューロン、カルレチニン発現介在ニューロン、またはＮＯ合成酵素発現介在ニューロン］）のうちのいずれかまたはいくつかを特異的に形質導入する。

【0125】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、以下の細胞：オリゴデンドロサイト、アストロサイト、ミクログリア細胞、上衣細胞、放射状グリア細胞、および／または下垂体細胞のうちのいずれかまたはいくつかを特異的に形質導入しない。

【0126】

本明細書中記載される修飾されたＡＡＶベクターは、遺伝子療法に特に有用であり得る。

【0127】

よってまた、本発明は、遺伝子療法に使用するための本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターであって、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、脳内に投与され、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、脳室内に投与されない、
修飾されたＡＡＶベクターに関する。

【0128】

また本発明は、それを必要とする対象の遺伝子療法の方法であって、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターを上記対象に投与するステップを含み、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、脳内に投与され、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、脳室内に投与されない、
方法に関する。

【0129】

特に、本明細書中記載の修飾されたＡＡＶベクターは、ＣＮＳ疾患の予防および／または処置に特に有用であり得る。

【0130】

よってまた、本発明は、ＣＮＳ疾患の予防または処置に使用するための本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターであって、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、脳内に投与され、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、脳室内に投与されない、
修飾されたＡＡＶベクターに関する。

【0131】

さらに本発明は、ＣＮＳ疾患の予防または処置用の医薬の製造のための本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターの使用であって、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、脳内に投与され、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、脳室内に投与されない、
使用に関する。

【0132】

また本発明は、それを必要とする対象のＣＮＳ疾患を予防および／または処置する方法であって、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターを上記対象に投与するステップを含み、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、少なくとも１つの表面に結合した糖類を含み、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、脳内に投与され、
上記修飾されたＡＡＶベクターは、脳室内に投与されない、
方法に関する。

【0133】

本明細書中使用される場合、用語「～を予防する」、「～を予防すること」、および「予防」は、防止的かつ予防的な手段であり、その目的は、所定の期間にわたり対象が所定の疾患を発症する可能性を下げることである。このような低下は、たとえば対象のＣＮＳ疾患の少なくとも１つの症状の発症の遅延に、反映され得る。

【0134】

本明細書中使用される場合、用語「～を処置すること」または「処置」または「軽減」は、防止的または予防的な手段を除く治療上の処置を表し；目的は所定の疾患を遅延（弱める）ことである。処置を必要とするものは、すでに疾患を有するものおよび疾患を有する疑いのあるものを含む。対象は、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターの治療量を投与した後に、上記対象が、以下：ＣＮＳ疾患に関連する症状の１つ以上の観察可能かつ／もしくは測定可能な低下または不存在；罹患率および死亡率の低下、ならびに／またはクオリティオブライフの問題の改善のうちの１つ以上を示す場合、所定の疾患に関する「処置」は成功している。ＣＮＳ疾患における処置の成功および改善を評価するための上記パラメータは、医師によく知られている規定の手法により容易に測定可能である。

【0135】

これら実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、少なくとも１つの導入遺伝子を含む。

【0136】

用語「導入遺伝子」は、本明細書中使用される場合、細胞に導入され、ＲＮＡに転写でき、任意選択で適切な条件下で翻訳かつ／または発現できるポリヌクレオチドを表す。一態様では、これは、導入した細胞に望ましい特性を提供するか、または望ましい治療上もしくは防止的なアウトカムをもたらす。別の態様では、導入遺伝子は、たとえば、適切な手段の存在下で、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの方法、ＴＡＬＥＮベースの方法、ＺＦＮベースの方法などを使用し補正遺伝子を介するなどして、宿主細胞のゲノムに全体的または部分的に組み込まれ得る。さらなる別の態様では、これは、ＲＮＡ干渉（すなわち遺伝子サイレンシング）を媒介する分子、たとえばｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｐｉＲＮＡなどに転写され得る。

【0137】

一実施形態では、少なくとも１つの導入遺伝子は、タンパク質またはそのフラグメントをコードするｃＤＮＡを含む。

【0138】

本明細書中使用される場合、用語「ｃＤＮＡ」は、相補的ＤＮＡを表し、逆転写酵素が触媒する反応において、一本鎖ＲＮＡ（たとえばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）のテンプレートなど）から通常合成されるＤＮＡ分子に対応する。特に、ｃＤＮＡがｍＲＮＡの逆転写から得られる場合、これは、タンパク質由来の全ての遺伝子コードを含まず、上記タンパク質のコード配列（すなわちイントロンを伴わないエキソン）のみを含む。

【0139】

特に、ｃＤＮＡのフラグメントは、タンパク質のＮ末端部またはＣ末端部をコードする上記ｃＤＮＡの一部を含み得る。このようなフラグメントは、たとえば単一のＡＡＶベクターにより担持できず、よってたとえば二重ＡＡＶベクターの使用を必要とする大きなｃＤＮＡの場合、有用であり得る。

【0140】

あるいは、ｃＤＮＡのフラグメントは、タンパク質の機能的かつ／または構造上の一部をコードする上記ｃＤＮＡの一部を含み得る。

【0141】

一部の実施形態では、ｃＤＮＡのフラグメントは、ＲＮＡ分子の機能的かつ／または構造上の部分をコードする配列を含み得る。一部の実施形態では、このようなＲＮＡ分子は、リボソームＲＮＡ、転移ＲＮＡ、核内低分子ＲＮＡ、核小体低分子ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、長鎖ノンコーディングＲＮＡ、短鎖干渉ＲＮＡ、ガイドＲＮＡ、および／またはいずれかの機能的なＲＮＡ種であり得る。

【0142】

一実施形態では、ｃＤＮＡは、３Ｒ ｔａｕ、４Ｒ ｔａｕ、ＡＡＲＳ、ＡＢＣＤ１、ＡＣＯＸ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＧＡ、ＡＧＥＲ、ＡＬＤＨ７Ａ１、ＡＬＧ１３、ＡＬＳ２、ＡＮＧ、ＡＮＸＡ１１、ＡＰＰ、ＡＲＨＧＥＦ９、ＡＲＳＡ、ＡＲＳＢ、ＡＲＶ１、ＡＳＡＨ１、ＡＳＰＡ、ＡＴＮ１、ＡＴＰ１０Ａ、ＡＴＰ１３Ａ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＢＡＸ、ＢＣＬ－２、ＢＤＮＦ、ＢＩＣＤ２、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＳＲ、ＣＣＮＦ、ＣＤＫＬ５、ＣＥＲＳ１、ＣＦＡＰ４１０、ＣＨＣＨＤ１０、ＣＨＤ２、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＢ２、ＣＬＣＮ２ａ、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、ＣＮＴＮ２、ＣＰＡ６、ＣＳＴＢ、ＣＴＮＳ、ＣＴＳＡ、ＣＴＳＤ、ＤＡＯ、ＤＣＴＮ１、ＤＥＰＤＣ５、ＤＭＤ、ＤＮＡＪＢ２、ＤＮＭ１、ＤＯＣＫ７、ＤＲＤ２、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＦＨＣ１、ＥＧＬＮ１、ＥＰＨＡ４、ＥＰＭ２Ａ、ＥＲＢＢ４、ＦＧＦ１２、ＦＩＧ４、ＦＲＲＳ１Ｌ、ＦＴＬ、ＦＵＣＡ１、ＦＵＳ、ＦＸＮ、ＧＡＡ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＬ、ＧＡＬＣ、ＧＡＬＮＳ、ＧＢＡ、ＧＦＡＰ、ＧＬＡ、ＧＬＢ１、ＧＬＥ１、ＧＬＴ８Ｄ１、ＧＮＡＯ１、ＧＮＳ、ＧＯＳＲ２、ＧＰＲ９８、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＳＴＭ１、ＧＵＦ１、ＧＵＳＢ、ＨＣＮ１、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＴＴ、ＨＹＡＬ１、ＩＤＳ、ＩＤＵＡ、ＩＧＨＭＢＰ２、ＩＬ－１、ＩＴ１５、ＩＴＰＡ、ＪＰＨ３、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＴ１、ＫＣＴＤ７、ＬＡＬ、ＬＡＭＰ２、ＬＧＩ１、ＬＭＮＢ２、ＬＲＲＫ２、ＭＡＮ２Ｂ１、ＭＡＮ２Ｂ２、ＭＡＮ２Ｃ１、ＭＡＮＢＡ、ＭＡＴＲ３、ＭＢＤ５、ＭＦＳＤ８、ＮＡＧＡ、ＮＡＧＬＵ、ＮＥＣＡＰ１、ＮＥＦＨ、ＮＥＫ１、ＮＥＵ１、ＮＨＬＲＣ１、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、ＮＲ４Ａ２、ＮＴＲＫ２、ＯＣＡ２、ＯＰＴＮ、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＣＤＨ１９、ＰＥＸ１、ＰＥＸ２、ＰＥＸ３、ＰＥＸ５、ＰＥＸ６、ＰＥＸ１０、ＰＥＸ１１Ｂ、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ１４、ＰＥＸ１６、ＰＥＸ１９、ＰＥＸ２６、ＰＦＮ１、ＰＩＮＫ１、ＰＬＣＢ１、ＰＮＰＯ、ＰＯＮ１、ＰＯＮ２、ＰＯＮ３、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＲＤＭ８、ＰＲＩＣＫＬＥ１、ＰＲＫＮ、ＰＲＮＰ、ＰＲＰＨ、ＰＲＲＴ２、ＰＳＡＰ、Ｓ１０６β、ＳＣＡＲＢ２、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ９Ａｂ、ＳＥＴＸ、ＳＧＳＨ、ＳＩＧＭＡＲ１、ＳＩＫ１、ＳＫＰ１、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣＡ１７Ａ５、ＳＭＮ１、ＳＭＰＤ１、ＳＮＣＡ、ＳＮＲＰＮ、ＳＯＤ１、ＳＰＧ１１、ＳＰＴＡＮ１、ＳＱＳＴＭ１、ＳＴ３ＧＡＬ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＳＴＸ１Ｂ、ＳＴＸＢＰ１、ＳＹＰ、ＳＹＴ１、ＳＺＴ２、ＴＡＦ１５、ＴＡＲＤＢＰ、ＴＢＣ１Ｄ２４、ＴＢＣＥ、ＴＢＫ１、ＴＢＰ、ＴＩＴＦ－１、ＴＲＥＭ２、ＵＢＡ５、ＵＢＥ１、ＵＢＥ３Ａ、ＵＢＱＬＮ２、ＵＣＨ－Ｌ１、ＵＮＣ１３Ａ、ＶＡＰＢ、ＶＣＰ、ＶＰＳ３５、ＷＷＯＸ、およびＸＢＰ１を含むかまたはからなる群から選択される遺伝子に由来する。

【0143】

一実施形態では、少なくとも１つの導入遺伝子は、導入遺伝子の標的の特異性および／または発現を高める少なくとも１つのエレメントの制御下にある。

【0144】

導入遺伝子の標的の特異性および／または発現を高めるエレメントの例として、限定するものではないが、プロモーター、転写後調節エレメント（ＰＲＥ）、ポリアデニル化（ｐｏｌｙ Ａ）シグナル配列および上流エンハーサー（ＵＳＥ）、ＣＭＶエンハーサーおよびイントロンが挙げられる。

【0145】

一実施形態では、少なくとも１つの導入遺伝子は、少なくとも１つのプロモーターの制御下にある。

【0146】

当業者は、標的細胞における導入遺伝子の発現が、限定するものではないが、種に特異的、誘導性、組織特異的、または細胞周期に特異的であるプロモーターを含む特定のプロモーターを必要とし得ることを理解し得る。

【0147】

一実施形態では、プロモーターは、標的とされる細胞に対する指向性を有するプロモーターである。

【0148】

一実施形態では、プロモーターは、標的の組織において一定期間導入遺伝子の発現を駆動する。

【0149】

プロモーターにより駆動される発現は、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、３週間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、２８日間、２９日間、３０日間、３１日間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、１３カ月間、１４カ月間、１５カ月間、１６カ月間、１７カ月間、１８カ月間、１９カ月間、２０カ月間、２１カ月間、２２カ月間、２３カ月間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、または１０年超の期間であり得る。

【0150】

一実施形態では、プロモーターは、導入遺伝子の持続的な発現のため弱いプロモーターである。

【0151】

プロモーターは、天然に存在し得るかまたは天然に存在しないものであってもよい。プロモーターの非限定的な例として、限定するものではないが、ウイルスプロモーター、植物プロモーター、および哺乳類のプロモーターが挙げられる。一実施形態では、プロモーターは、ヒトプロモーターであり得る。一実施形態では、プロモーターは、トランケートされていてもよく、または変異していてもよい。

【0152】

大部分の組織で発現を駆動または促進するプロモーターとして、限定するものではないが、ヒト伸長因子１ａ－サブユニット（ＥＦ１ａ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ｉｍｍｅｄｉａｔｅ－ｅａｒｌｙエンハーサーおよび／またはプロモーター、ニワトリβアクチン（ＣＢＡ）およびその誘導体ＣＡＧ、β－グルクロニダーゼ（ＧＵＳＢ）、ならびにユビキチンＣ（ＵＢＣ）が挙げられる。

【0153】

特定の細胞種に対する発現を制限するための組織または細胞に特異的な発現エレメント、たとえばニューロン、ニューロンのサブタイプ、または、アストロサイトもしくはオリゴデンドロサイトなどのグリア細胞に対する発現を制限するために使用され得るＣＮＳプロモーターなどが、使用され得る。

【0154】

ニューロンに関する組織または細胞に特異的な発現エレメントの適切な例として、限定するものではないが、神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）プロモーター、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）プロモーター、血小板由来増殖因子Ｂ鎖（ＰＤＧＦ－β）プロモーター、シナプシン（Ｓｙｎ）プロモーター、メチル－ＣｐＧ結合タンパク質２（ＭｅＣＰ２）プロモーター、Ｃａ^２＋／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）プロモーター、代謝型グルタミン酸受容体２（ｍＧｌｕＲ２）プロモーター、ニューロフィラメントＬ（ＮＦＬ）プロモーター、ニューロフィラメントＨ（ＮＦＨ）プロモーター、Βグロビンミニ遺伝子ηβ２プロモーター、プレプロエンケファリン（ＰＰＥ）プロモーター、エンケファリン（Ｅｎｋ）プロモーター、および興奮性アミノ酸トランスポーター２（ＥＡＡＴ２）プロモーターが挙げられる。

【0155】

アストロサイトに関する組織または細胞に特異的な発現エレメントの適切な例として、限定するものではないが、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターおよびＥＡＡＴ２プロモーターが挙げられる。

【0156】

オリゴデンドロサイトに関する組織または細胞に特異的な発現エレメントの適切な例として、限定するものではないが、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）プロモーターが挙げられる。

【0157】

一実施形態では、プロモーターは、ユビキタスなプロモーターである。

【0158】

ユビキタスなプロモーターの適切な例として、限定するものではないが、ＣＭＶ、ＣＢＡ（その誘導体ＣＡＧ、ＣＢｈなどを含む）、ＥＦ－１ａ、ＰＧＫ、ＵＢＣ、ＧＵＳＢ（ｈＧＢｐ）、およびＵＣＯＥが挙げられる

【0159】

一実施形態では、プロモーターは、組織または細胞に特異的ではない。

【0160】

一実施形態では、プロモーターは、操作されたプロモーターである。

【0161】

一実施形態では、プロモーターは、天然に発現したタンパク質由来のプロモーターである。

【0162】

好ましい実施形態では、プロモーターは、ＣＡＧプロモーター（ＣＭＶ ｉｍｍｅｄｉａｔｅ ｅａｒｌｙエンハーサーおよびニワトリβアクチンプロモーター）である。

【0163】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、ＣＮＳ感染性疾患、ＣＮＳ変性疾患、ＣＮＳ自己免疫疾患、ＣＮＳ腫瘍疾患、脳血管疾患、ＣＮＳ損傷、またはＣＮＳ構造欠陥である。

【0164】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、酸性リパーゼ疾患、酸性マルターゼ欠乏症、酸蓄積症、後天性てんかん様失語症、急性散在性脳脊髄炎、注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）、アディー瞳孔、アディー症候群、副腎白質ジストロフィー、失認、アイカルディ症候群、エカルディ‐グティエール症候群障害、アレキサンダー病、アルパーズ病、交代性片麻痺、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、無脳症、動脈瘤、アンジェルマン症候群、血管腫症、無酸素症、抗リン脂質抗体症候群、失語症、失行症、くも膜炎、アーノルド・キアリ奇形、芳香族Ｌ－アミノ酸脱炭酸酵素欠損症（ＡＡＤＣ欠損症）、アスパルチルグルコサミン尿症、アスペルガー症候群、運動失調、毛細血管拡張性運動失調症（Ｌｏｕｉｓ－Ｂａｒ症候群）、小脳変性症運動失調および小脳変性症または脊髄小脳変性症、注意欠陥多動障害、自閉症、自律神経障害、バース症候群、バッテン病、Ｂｅｃｋｅｒ病の筋強直、ベーチェット病、ベル麻痺、Ｂｅｒｎｈａｒｄｔ－Ｒｏｔｈ症候群、ビンスワンガー病、ブロッホ・ズルツベルガー症候群、Ｂｒａｄｂｕｒｙ－Ｅｇｇｌｅｓｔｏｎ症候群、ブラウン・セカール症候群、球脊髄性筋萎縮症、ＣＡＤＡＳＩＬ、カナバン病、カウザルギー、海面状血管腫（ｃａｖｅｒｎｏｍａｓ、ｃａｖｅｒｎｏｕｓ ａｎｇｉｏｍａ）、中央頸髄症候群、脊髄中心症候群、橋中心髄鞘崩壊症、セラミダーゼ欠乏症、小脳変性症、小脳低形成、脳性脚気、脳性巨人症、脳性麻痺、脳・眼・顔・骨格症候群（ＣＯＦＳ）、コレステロールエステル蓄積症、舞踏病、有棘赤血球舞踏病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、慢性起立性調節障害、慢性疼痛、コケイン症候群ＩＩ型、コフィン・ローリー症候群、脳梁欠損、先天性筋無力症、大脳皮質基底核変性症、頭部動脈炎、クリー脳炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、クッシング症候群、シスチン症、巨大細胞性封入体症（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｉｃ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｙ ｄｉｓｅａｓｅ：ＣＩＢＤ）、ダンシングアイズ・ダンシングフィート症候群（ｄａｎｃｉｎｇ ｅｙｅｓ－ｄａｎｃｉｎｇ ｆｅｅｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ダンディ・ウォーカー症候群、ダノン病、Ｄａｗｓｏｎ病、ドモルシア（Ｄｅ Ｍｏｒｓｉｅｒ）症候群、Ｄｅｊｅｒｉｎｅ－Ｋｌｕｍｐｋｅ麻痺、認知症、小脳歯状核失調、歯状核赤核萎縮症、皮膚筋炎、発達性統合運動障害、Ｄｅｖｉｃ症候群、びまん性硬化症、自律神経障害、書字障害、失読症、嚥下障害、統合運動障害、ミオクローヌス性小脳性共同運動障害、進行性小脳性共同運動障害、てんかん（たとえばアーミッシュ小児てんかん症候群［ＡＩＥＳ］、良性家族性乳児けいれん［ＢＦＩＳ］、良性家族性新生児けいれん［ＢＦＮＳ］、小児欠神てんかん［ＣＡＥ］、小児期発症てんかん性脳症［ＣＯＥＥ］、ドラベ症候群［ＤＳ］、早期乳児てんかん性脳症［ＥＩＥＥ］、家族性成人型ミオクローヌスてんかん［ＦＡＭＥ］、家族性熱性けいれん［ＦＦＳ］、多様な焦点を示す家族性焦点てんかん［ＦＦＥＶＦ］、家族性乳児型ミオクローヌスてんかん［ＦＩＭＥ］、家族性側頭葉てんかん［ＦＴＬＥ］、精神遅滞を伴うまたは伴わない焦点性てんかんおよび発話障害［ＦＥＳＤ］、全般てんかんおよび発作性ジスキネジア［ＧＥＰＤ］、全般てんかん熱性けいれんプラス［ＧＥＦＳ＋］、特発性全般てんかん［ＩＧＥ］、若年性欠神てんかん［ＪＡＥ］、若年性ミオクローヌスてんかん［ＪＭＥ］、ミオクローヌス－弛緩性てんかん［ＭＡＥ］、夜間前頭葉てんかん［ＮＦＬＥ］、進行性ミオクローヌスてんかん ［ＰＭＥ］、ピリドキサミン５’－リン酸シンターゼ欠乏症［ＰＮＰＯＤ］、ピリドキシン－依存性てんかん［ＥＰＤ］および乳児重症ミオクローヌスてんかん［ＳＭＥＩ］など）、ファブリー病、ファール病、家族性自律神経障害、家族性血管腫、家族性突発性大脳基底核石灰化、家族性周期性麻痺、家族性痙性麻痺、ファーバー（Ｆａｒｂｅｒ）病、線維筋性異形成、フィッシャー症候群、ｆｌｏｐｐｙ ｉｎｆａｎｔ症候群、フリードライヒ運動失調症、前頭側頭型認知症、フコシドーシス、ガラクトシアリドーシス、ゴーシェ病、全般性ガングリオシドーシス、ゲルストマン症候群、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、巨大軸索ニューロパチー、巨細胞性動脈炎、巨細胞性封入体病、グロボイド細胞白質ジストロフィー、舌咽神経痛、糖原病、ＧＭ１ガングリオシドーシス、ＧＭ２ガングリオシドーシス（テイ・サックス病）、ギラン・バレー症候群、ハラーホルデン・スパッツ症候群、持続性片側頭痛、交代性片麻痺（ｈｅｍｉｐｌｅｇｉａ ａｌｔｅｒａｎｓ）、遺伝性痙性対麻痺、多発神経炎型遺伝性失調症、Ｈｏｌｍｅｓ－Ａｄｉｅ症候群、全前脳症、Ｈｕｇｈｅｓ症候群、ハンチントン病、水無脳症、水脊髄症、副腎皮質ホルモン過剰症、免疫介在性脳脊髄炎、封入体筋炎、色素失調症、乳児筋緊張低下、乳児神経軸索ジストロフィー、後頭孔脳脱出症、Ｉｓａａｃ症候群、ジュベール症候群、Ｋｅａｒｎｓ－Ｓａｙｒｅ症候群（Ｋｅａｍｓ－Ｓａｙｒｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、Ｋｅｎｎｅｄｙ病、Ｋｉｎｓｂｏｕｒｎｅ症候群、クライン・レビン症候群、クリッペル・ファイル症候群、Ｋｌｉｐｐｅｌ－Ｔｒｅｎａｕｎａｙ症候群（ＫＴＳ）、クリュバー・ビューシー症候群、Ｋｏｒｓａｋｏｆｆ健忘性症候群、クラッベ病、クーゲルベルク・ヴェランダー病、ランバート・イートン筋無力症症候群、Ｌａｎｄａｕ－Ｋｌｅｆｆｎｅｒ症候群、外側大腿皮神経絞扼（ｌａｔｅｒａｌ ｆｅｍｏｒａｌ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｎｅｒｖｅ ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ）、髄質延髄外側症候群、リー症候群、レノックス・ガストー症候群、レッシュ・ナイハン症候群、Ｌｅｖｉｎｅ－Ｃｒｉｔｃｈｌｅｙ症候群、レビー小体認知症、リポイドタンパク症、脳回欠損、閉じ込め症候群、Ｌｏｕ Ｇｅｈｒｉｇ病、ループス、ライム病、マシャド・ジョセフ病、大脳症、α－マンノシドーシス、β－マンノシドーシス、メルカーソン・ローゼンタール症候群、メンケス病、異常感覚性大腿痛、異染性白質ジストロフィー、小頭症、ミラー・フィッシャー症候群、メビウス症候群、ムコ多糖症Ｉ－Ｈ型（ハーラー症候群）、ムコ多糖症Ｉ－Ｈ／Ｓ型（Ｈｕｒｌｅｒ－Ｓｃｈｅｉｅ症候群）、ムコ多糖症ＩＳ型（Ｓｃｈｅｉｅ症候群）、ムコ多糖症ＩＩ型（Ｈｕｎｔｅｒ症候群）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ａ型（サンフィリポ症候群Ａ）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ｂ型（サンフィリポ症候群Ｂ）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ｃ型（サンフィリポ症候群Ｃ）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ｄ型（サンフィリポ症候群Ｄ）、ムコ多糖症ＩＶ－Ｂ型（モルキオ症候群Ｂ）、ムコ多糖症ＶＩ型（マロトー・ラミー症候群）、ムコ多糖症ＶＩＩ型（スライ症候群）、ムコ多糖症ＩＸ型（Ｎａｔｏｗｉｃｚ症候群）、多発性硬化症、筋ジストロフィー、重症筋無力症、アルパーズ症候群（Ｍｙｅｌｉｎｏｃｌａｓｔｉｃ Ｄｉｆｆｕｓｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、ナルコレプシー、神経有棘赤血球症、神経線維腫症、悪性症候群、神経サルコイドーシス、ニーマン・ピック病、大田原症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、眼球クローヌス・ミオクローヌス、Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ－ＭｃＬｅｏｄ症候群、パントテン酸キナーゼ関連神経変性症、腫瘍随伴症候群、錯感覚、パーキンソン病、発作性舞踏病アテトーゼ、発作性片側頭痛、Ｐａｒｒｙ－Ｒｏｍｂｅｒｇ症候群、ペリツェウス・メルツバッハ病、Ｐｅｎａ－Ｓｈｏｋｅｉｒ症候群ＩＩ型、脳室周囲白質軟化症、フィタン酸蓄積症、ピック病、梨状筋症候群、多発性筋炎、ポンペ病、ポリオ後症候群、ＰＣＡ（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｃｏｒｔｉｃａｌ ａｔｒｏｐｈｙ）、原発性歯状核萎縮症（Ｐｒｉｍａｒｙ Ｄｅｎｔａｔｕｍ Ａｔｒｏｐｈｙ）、原発性側索硬化症、原発性進行性失語症、プリオン病、進行性片側顔面萎縮症、進行性歩行運動失調、進行性多発性白質脳症、進行性硬化性灰白異栄養症、進行性核上性麻痺、顔貌失認、ラムゼイ・ハント症候群Ｉ、ラムゼイ・ハント症候群ＩＩ、ラスムッセン脳炎、レフサム病、レット症候群、Ｒｅｙｅ症候群、ライリー・デイ症候群、サンドホフ病、シルダー病、Ｓｅｉｔｅｌｂｅｒｇｅｒ病、シャイ・ドレーガー症候群、シェーグレン症候群、痙縮、二分脊椎、脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調症、脊髄小脳萎縮症、脊髄小脳変性症、スティール・リチャードソン・オルゼウスキー症候群、線条体黒質変性症、スタージ・ウェーバー症候群、遅発性ジスキネジア、タウオパチー、テイ・サックス病、胸郭出口症候群、甲状腺中毒性ミオパチー、三叉神経痛、トッド麻痺、三叉神経痛、熱帯性痙性不全対麻痺症、トロイアー症候群、血管性認知症、フォン‐エコーノモ病、フォンヒッペル・リンダウ病（ＶＨＬ）、フォンレックリングハウゼン病、ワレンベルグ症候群、ウェルドニッヒ・ホフマン病、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウエスト症候群、ウィップル病、ウィリアムズ症候群、ウィルソン病、ウォルマン病、Ｘ連鎖球脊髄性筋萎縮症、ツェルウェーガー症候群、多発性硬化萎縮症、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、およびアンジェルマン症候群を含むかまたはからなる群から選択される。

【0165】

実施例に示されるように、本発明者らは、本発明の修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターが、線条体、視床、黒質、頭頂皮質、海馬、および／または淡蒼球を含む脳の特定の領域に有効に形質導入できることを示している。よって、本発明の修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターは、線条体、視床、黒質、頭頂皮質、海馬、および淡蒼球を標的化するため、ならびに／または線条体、視床、黒質、頭頂皮質、海馬、および淡蒼球に影響する疾患を処置するために非常に興味深いものである。

【0166】

たとえば、線条体、黒質、視床、黒質、淡蒼球、頭頂皮質、および／または海馬に影響する疾患として、限定するものではないが、ハンチントン病、パーキンソン病、多発性硬化萎縮症、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、進行性核上性麻痺、およびアンジェルマン症候群が挙げられる。一部の実施形態では、ＣＮＳ疾患は、ハンチントン病、パーキンソン病、多発性硬化萎縮症、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、進行性核上性麻痺、前頭側頭型認知症、およびアンジェルマン症候群からなる群から選択される。

【0167】

本発明者らは、本発明の修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターがニューロンに有効に形質導入できることを示している。

【0168】

よって、一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、神経性疾患またはニューロンに影響する疾患である。

【0169】

また本発明者らは、本発明の修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターが、運動機能の制御に関与するニューロンに効果的に形質導入できることを示している。よって、一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、運動ニューロンの疾患または症候群である。

【0170】

運動ニューロンの疾患または症候群の非限定的な例として、運動障害、たとえば運動低下性運動障害および多動性運動障害が挙げられる。

【0171】

運動低下性運動障害の非限定的な例として、限定するものではないが、パーキンソン病（原発性または特発性パーキンソン症）、続発性パーキンソン症、パーキンソンプラス症候群、Ｈａｌｌｅｖｏｒｄｅｎ－Ｓｐａｔｚ病、進行性核上性眼筋まひ、および線条体黒質変性症（ｓｔｒｉａｔｏｎｉｇｒａｌ ｄｅｎｅｎｅｒａｔｉｏｎ）が挙げられる。

【0172】

多動性運動障害の非限定的な例として、限定するものではないが、ジストニア、薬物誘発性ジストニア、特発性家族性ジストニア、特発性非家族性ジストニア、痙性斜頸、突発性口腔顔面ジストニア、眼瞼けいれん、錐体外路運動障害、振戦、本態性振戦、薬物誘発性振戦、ミオクローヌス、眼球クローヌス、舞踏病、薬物誘発性舞踏病、リウマチ性舞踏病（シデナム舞踏病）、ハンチントン舞踏病、バリズム、片側バリズム、アテトーシス、ジスキネジア、遅発性ジスキネジア、チック症、トゥレット症候群、薬物誘発性チック症、および有機物由来のチック症（ｔｉｃｓ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｃ ｏｒｉｇｉｎ）、常同性運動障害、発作性夜行性肢運動、ＰＬＭＴ（ｐａｉｎｆｕｌ ｌｅｇｓ （ｏｒ ａｒｍｓ）、ｍｏｖｉｎｇ ｔｏｅｓ （ｏｒ ｆｉｎｇｅｒｓ） ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、散発性むずむず脚症候群、家族性むずむず脚症候群、全身硬直症候群、異常性頭部運動（ａｂｎｏｒｍａｌ ｈｅａｄ ｍｏｖｅｍｅｎｔｓ）、筋痙攣、攣縮、および線維束性収縮が挙げられる。

【0173】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、アルツハイマー病であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、３Ｒ ｔａｕ、４Ｒ ｔａｕ、ＡＧＥＲ、ＡＰＰ、ＢＡＸ、ＢＣＬ－２、ＣＨＲＮＡ７、ＤＲＤ２、ＧＦＡＰ、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＮ１、ＩＬ－１、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＹＰ、およびＳＹＴ１を含むかまたはからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0174】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、パーキンソン病であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＡＴＰ１３Ａ２、ＢＤＮＦ、ＥＧＬＮ１、ＧＢＡ、ＧＳＴＭ１、ＬＲＲＫ２、ＮＲ４Ａ２、ＮＴＲＫ２、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＩＮＫ１、ＰＲＫＮ、Ｓ１０６β、ＳＫＰ１、ＳＮＣＡ、ＶＰＳ３５、およびＵＣＨ－Ｌ１を含むかまたはからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0175】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、ハンチントン病であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＡＴＮ１、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＦＴＬ、ＨＴＴ、ＩＴ１５、ＪＰＨ３、ＰＲＮＰ、ＳＬＣ２Ａ３、ＴＢＰ、ＴＩＴＦ－１、およびＸＢＰ１を含むかまたはからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0176】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、フリードライヒ運動失調であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＦＸＮ遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0177】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、カナバン病であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＡＳＰＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0178】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、筋ジストロフィーであり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＤＭＤ遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0179】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、脊髄性筋萎縮症であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＢＩＣＤ２、ＣＨＣＨＤ１０、ＤＮＡＪＢ２、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＩＧＨＭＢＰ２、ＳＩＧＭＡＲ１、ＳＭＮ１、ＴＢＣＥ、ＶＡＰＢ、およびＵＢＥ１を含むかまたはからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0180】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＡＬＳ２、ＡＮＧ、ＡＮＸＡ１１、ＡＴＸＮ２、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＣＦＡＰ４１０、ＣＨＣＨＤ１０、ＣＣＮＦ、ＤＡＯ、ＤＣＴＮ１、ＥＰＨＡ４、ＥＲＢＢ４、ＦＩＧ４、ＦＵＳ、ＧＬＥ１、ＧＬＴ８Ｄ１、ＨＮＲＮＰＡ１、ＭＡＴＲ３、ＮＥＦＨ、ＮＥＫ１、ＯＰＴＮ、ＰＦＮ１、ＰＯＮ１、ＰＯＮ２、ＰＯＮ３、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＲＰＨ、ＳＥＴＸ、ＳＩＧＭＡＲ１、ＳＭＮ１、ＳＯＤ１、ＳＰＧ１１、ＳＱＳＴＭ１、ＴＡＦ１５、ＴＡＲＤＢＰ、ＴＢＫ１、ＴＲＥＭ２、ＵＢＱＬＮ２、ＵＮＣ１３Ａ、ＶＡＰＢ、およびＶＣＰを含むかまたはからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0181】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、α－マンノシドーシスであり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＭＡＮ２Ｂ１、ＭＡＮ２Ｂ２、およびＭＡＮ２Ｃ１を含むかまたはからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0182】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、アスパルチルグルコサミン尿症であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＡＧＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0183】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、バッテン病であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、ＣＴＳＤ、およびＭＦＳＤ８を含むかまたはからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0184】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、β－マンノシドーシスであり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＭＡＮＢＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0185】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、シスチン症であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＣＴＮＳ遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0186】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、ダノン病であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＬＡＭＰ２遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0187】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、ファブリー病であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＧＬＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0188】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、Ｆａｒｂｅｒ病であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＡＳＡＨ１遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0189】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、フコシドーシスであり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＦＵＣＡ１遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0190】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、ガラクトシアリドーシスであり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＣＴＳＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0191】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、ゴーシェ病であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0192】

一実施形態では、ｃＤＮＡ疾患は、クラッベ病であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＧＡＬＣおよびＰＳＡＰを含むかまたはからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0193】

一実施形態では、ｃＤＮＡ疾患は、白質ジストロフィーであり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＡＲＳＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0194】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、ムコ多糖症（たとえばハーラー症候群、Ｈｕｒｌｅｒ－Ｓｃｈｅｉｅ症候群、Ｓｃｈｅｉｅ症候群、Ｈｕｎｔｅｒ症候群、サンフィリポ症候群Ａ、Ｂ、Ｃ、またはＤ、モルキオ症候群Ｂ、マロトー・ラミー症候群、スライ症候群、またはＮａｔｏｗｉｃｚ症候群のいずれか）であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＡＲＳＢ、ＧＡＡ、ＧＡＬＮＳ、ＧＬＢ１、ＧＮＳ、ＧＵＳＢ、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＹＡＬ１、ＩＤＳ、ＩＤＵＡ、ＬＡＬ、ＮＡＧＡ、ＮＡＧＬＵ、ＮＥＵ１、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、ＳＧＳＨ、ＳＬＣＡ１７Ａ５、およびＳＭＰＤ１を含むかまたはからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0195】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、脊髄小脳失調症であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３を含むかまたはからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0196】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、副腎白質ジストロフィーであり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＡＢＣＤ１、ＡＣＯＸ１、ＰＥＸ１、ＰＥＸ２、ＰＥＸ３、ＰＥＸ５、ＰＥＸ６、ＰＥＸ１０、ＰＥＸ１１Ｂ、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ１４、ＰＥＸ１６、ＰＥＸ１９、およびＰＥＸ２６を含むかまたはからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0197】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、アンジェルマン症候群であり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＡＴＰ１０Ａ、ＭＢＤ５、ＯＣＡ２、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＮＲＰＮ、およびＵＢＥ３Ａを含むかまたはからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0198】

一実施形態では、ＣＮＳ疾患は、てんかんであり、少なくとも１つの導入遺伝子は、ＡＡＲＳ、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＬＤＨ７Ａ１、ＡＬＧ１３、ＡＲＨＧＥＦ９、ＡＲＶ１、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＳＲ、ＣＤＫＬ５、ＣＥＲＳ１、ＣＨＤ２、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＢ２、ＣＬＣＮ２ａ、ＣＮＴＮ２、ＣＰＡ６、ＣＳＴＢ、ＤＥＰＤＣ５、ＤＮＭ１、ＤＯＣＫ７、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＦＨＣ１、ＥＰＭ２Ａ、ＦＧＦ１２、ＦＲＲＳ１Ｌ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＬ、ＧＮＡＯ１、ＧＯＳＲ２、ＧＰＲ９８、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＵＦ１、ＨＣＮ１、ＩＴＰＡ、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＴ１、ＫＣＴＤ７、ＬＧＩ１、ＬＭＮＢ２、ＮＥＣＡＰ１、ＮＨＬＲＣ１、ＰＣＤＨ１９、ＰＬＣＢ１、ＰＮＰＯ、ＰＲＤＭ８、ＰＲＩＣＫＬＥ１、ＰＲＲＴ２、ＳＣＡＲＢ２、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ９Ａｂ、ＳＩＫ１、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＰＴＡＮ１、ＳＴ３ＧＡＬ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＳＴＸ１Ｂ、ＳＴＸＢＰ１、ＳＺＴ２、ＴＢＣ１Ｄ２４、ＵＢＡ５、およびＷＷＯＸを含むかまたはからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む。

【0199】

当業者は、遺伝子が、複数の転写上および／または翻訳上のアイソフォームを有し得ること、および本明細書中記載の遺伝子のｃＤＮＡを含む導入遺伝子が、標的遺伝子の転写上のバリアントおよび／またはスプライスバリアントの潜在的な使用を包有することを認識している。

【0200】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、ＣＮＳに直接投与される。

【0201】

「ＣＮＳに直接投与される」は、脊髄内または脳内に投与されることを意味する。

【0202】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、脊髄内および／または脳内投与により投与され得る。

【0203】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、脊髄内投与される。

【0204】

一実施形態では、脊髄内投与は、くも膜下腔内および硬膜外投与を含むかまたはからなる。

【0205】

一実施形態では、脊髄内投与は、くも膜下腔内投与を含むかまたはからなる。

【0206】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、脳内に投与される。

【0207】

一実施形態では、脳内投与は、線条体（たとえば被殻、尾状核、側坐核、嗅結節、淡蒼球外節、および／または淡蒼球内節など）、視床、視床下部、視床上部、腹側視床、実質、大脳、髄質、深部小脳核（たとえば黒質、歯状、栓状核、球状核、および／または室頂核など）、脳脊髄液（ＣＳＦ）、髄膜、硬膜、くも膜、軟膜、クモ膜下槽（たとえば大槽、橋槽（Ｐｏｎｔｉｎｅ ｃｉｓｔｅｒｎ）、脚間槽、交叉槽、大脳外側窩槽、上槽、および／または終板槽など）、くも膜下腔、皮質、中隔、橋、ならびに小脳を含むかまたはからなる群から選択される部位での投与である。

【0208】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、線条体内（すなわち線条体、たとえば被殻、尾状核、側坐核、嗅結節、淡蒼球外節および／または淡蒼球内節）、視床内（すなわち視床）、大槽内（すなわちクモ膜下槽、たとえば大槽、橋槽（Ｐｏｎｔｉｎｅ ｃｉｓｔｅｒｎ）、脚間槽、交叉槽、大脳外側窩槽、上槽、および／または終板槽；好ましくは大槽）に投与される。

【0209】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、実質内に投与される。

【0210】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、線条体内、視床内、大槽内、またはくも膜下腔内に投与される。

【0211】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、線条体内または視床内に投与される。

【0212】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、脳室内に投与されない（すなわち、脳室系、たとえば右側脳室、左側脳室、第三脳室、および／または第四脳室に投与されない）。

【0213】

「投与」または「投与される」は、本明細書中使用される場合、注射、注入、および当業者により知られている他のいずれかの投与手段を包有することを意味する。

【0214】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、治療上有効量でそれを必要とする対象に投与される。

【0215】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、約１０^８ウイルスゲノム（ｖｇ）～約１０^１５ｖｇ、たとえば約１０^８ｖｇ～約１０^１４ｖｇ、約１０^８ｖｇ～約１０^１３ｖｇ、約１０^８ｖｇ～約１０^１２ｖｇ、約１０^８ｖｇ～約１０^１１ｖｇ、約１０^８ｖｇ～約１０^１０ｖｇ、約１０^８ｖｇ～約１０^９ｖｇ、約１０^９ｖｇ～約１０^１５ｖｇ、約１０^９ｖｇ～約１０^１４ｖｇ、約１０^９ｖｇ～約１０^１３ｖｇ、約１０^９ｖｇ～約１０^１２ｖｇ、約１０^９ｖｇ～約１０^１１ｖｇ、約１０^９ｖｇ～約１０^１０ｖｇ、約１０^１０ｖｇ～約１０^１５ｖｇ、約１０^１０ｖｇ～約１０^１４ｖｇ、約１０^１０ｖｇ～約１０^１３ｖｇ、約１０^１０ｖｇ～約１０^１２ｖｇ、約１０^１０ｖｇ～約１０^１１ｖｇ、約１０^１１ｖｇ～約１０^１５ｖｇ、約１０^１１ｖｇ～約１０^１４ｖｇ、約１０^１１ｖｇ～約１０^１３ｖｇ、約１０^１１ｖｇ～約１０^１２ｖｇ、約１０^１２ｖｇ～約１０^１５ｖｇ、約１０^１２ｖｇ～約１０^１４ｖｇ、約１０^１２ｖｇ～約１０^１３ｖｇ、約１０^１３ｖｇ～約１０^１５ｖｇの範囲の用量で投与される。

【0216】

用語「ベクターゲノム」は、「ｖｇ」と略され、ベクター、たとえばウイルスベクターのポリヌクレオチド配列のセットを含む１つ以上のポリヌクレオチドを表す。ベクターゲノムは、ウイルス粒子にキャプシド形成され得る。特定のウイルスベクターに応じて、ベクターゲノムは、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、または一本鎖ＲＮＡ、または二本鎖ＲＮＡを含み得る。ベクターゲノムは、特定のウイルスベクターに結合した内因性配列および／または組み換え技術（たとえば導入遺伝子）を介して特定のウイルスベクターに挿入された異種性配列を含み得る。一部の実施形態では、ウイルスベクターの核酸の力価は、ｖｇ／ｍｌの観点で測定され得る。この力価の測定に適した方法は、当該分野で知られており、たとえば定量的ＰＣＲが挙げられる。

【0217】

本明細書中使用される場合、用語「約」は、数値の前に設定される場合、上記数値が近似値であり、小さな変動が、開示される実施形態の実務に有意に影響しないことを意味する。このような小さな変動は、たとえば±１％、±２％、±３％、±４％、±５％、±６％、±７％、±８％、±９％、±１０％、またはそれ以上である。

【0218】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、約１×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約２×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約２．７５×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約３×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約４×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約５×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約６×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約７×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約８×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約９×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約１×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約２×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約３×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約４×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約５×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約６×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約７×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約８×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約９×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約１×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約２×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約３×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約４×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約５×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約６×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約７×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約８×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約９×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約１×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約２×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約３×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約４×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約５×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約６×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約７×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約８×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約９×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約１×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約２×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約３×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約４×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約５×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約６×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約７×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約８×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約９×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約１×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約２×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約３×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約４×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約５×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約６×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約７×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約８×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約９×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約１×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約２×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約３×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約４×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約５×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約６×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約７×１０^１４ｖ、ｇ±０．５×１０^１４、約８×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約９×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約１×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約２×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約３×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約４×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約５×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約６×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約７×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約８×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約９×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５の用量で投与される。

【0219】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、約１×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約２×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約３×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約４×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約５×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約６×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約７×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約８×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約９×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約１×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約２×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約３×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約４×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約５×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約６×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約７×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約８×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約９×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約１×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約２×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約３×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約４×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約５×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約６×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約７×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約８×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約９×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約１×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約２×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約３×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約４×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約５×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約６×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約７×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約８×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約９×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約１×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約２×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約３×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約４×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約５×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約６×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約７×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約８×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約９×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約１×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約２×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約３×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約４×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約５×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約６×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約７×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約８×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約９×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約１×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約２×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約３×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約４×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約５×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約６×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約７×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約８×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約９×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約１×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約２×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約３×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約４×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約５×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約６×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約７×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約８×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約９×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約１×１０^１４ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１４の用量で投与される。

【0220】

望ましい効果または治療効果を達成するために必要とされる修飾されたＡＡＶベクターの用量は、限定するものではないが、特定の投与経路、治療効果を達成するために必要とされる遺伝子、ＲＮＡ、またはタンパク質の発現のレベル、処置される特定の疾患、および遺伝子、ＲＮＡ、またはタンパク質の産物の安定性を含むいくつかの要因に基づき変動する。当業者は、上述の要因および当該分野でよく知られている他の要因に基づき特定の疾患を有する対象を処置するための用量の範囲を容易に決定し得る。

【0221】

また、対象に投与される修飾されたＡＡＶベクターの容量は、特に、対象の大きさ、修飾されたＡＡＶベクターの用量、および投与経路に基づき変動する。たとえば、脳内投与では、約１μＬ～約１０μＬまたは約１０μＬ～約１００μＬまたは約１００μＬ～約１０００μＬまたは約１ｍＬ～約１０ｍＬの範囲の容量が使用され得る。

【0222】

一実施形態では、対象に投与される修飾されたＡＡＶベクターの容量は、約１μＬ±０．５μＬ、約２μＬ±０．５μＬ、約３μＬ±０．５μＬ、約４μＬ±０．５μＬ、約５μＬ±０．５μＬ、約６μＬ±０．５μＬ、約７μＬ±０．５μＬ、約８μＬ±０．５μＬ、約９μＬ±０．５μＬ、約１０μＬ±０．５μＬ、約１５μＬ±５μＬ、約２０μＬ±５μＬ、約２５μＬ±５μＬ、約３０μＬ±５μＬ、約３５μＬ±５μＬ、約４０μＬ±５μＬ、約４５μＬ±５μＬ、約５０μＬ±５μＬ、約５５μＬ±５μＬ、約６０μＬ±５μＬ、約６５μＬ±５μＬ、約７０μＬ±５μＬ、約７５μＬ±５μＬ、約８０μＬ±５μＬ、約８５μＬ±５μＬ、約９０μＬ±５μＬ、約９５μＬ±５μＬ、約１００μＬ±５μＬ、約１５０μＬ±５０μＬ、約２００μＬ±５０μＬ、約２５０μＬ±５０μＬ、約３００μＬ±５０μＬ、約３５０μＬ±５０μＬ、約４００μＬ±５０μＬ、約４５０μＬ±５０μＬ、約５００μＬ±５０μＬ、約５５０μＬ±５０μＬ、約６００μＬ±５０μＬ、約６５０μＬ±５０μＬ、約７００μＬ±５０μＬ、約７５０μＬ±５０μＬ、約８００μＬ±５０μＬ、約８５０μＬ±５０μＬ、約９００μＬ±５０μＬ、約９５０μＬ±５０μＬ、約１０００μＬ±５０μＬ、約１．５ｍＬ±２５０μＬ、約２ｍＬ±２５０μＬ、約２．５ｍＬ±２５０μＬ、約３ｍＬ±２５０μＬ、約３．５ｍＬ±２５０μＬ、約４ｍＬ±２５０μＬ、約４．５ｍＬ±２５０μＬ、約５ｍＬ±２５０μＬ、約５．５ｍＬ±２５０μＬ、約６ｍＬ±２５０μＬ、約６．５ｍＬ±２５０μＬ、約７ｍＬ±２５０μＬ、約７．５ｍＬ±２５０μＬ、約８ｍＬ±２５０μＬ、約８．５ｍＬ±２５０μＬ、約９ｍＬ±２５０μＬ、約９．５ｍＬ±２５０μＬ、約１０ｍＬ±２５０μＬである。

【0223】

また、対象に投与される修飾されたＡＡＶベクターの投与の速度は、特に、対象の大きさ、修飾されたＡＡＶベクターの用量、修飾されたＡＡＶベクターの容量、および投与経路に応じて変動する。たとえば、脳内投与では、約０．１μＬ／分～約１μＬ／分、または約１μＬ／分～約５μＬ／分、または約５μＬ／分～約１０μＬ／分の範囲の投与の速度が使用され得る。

【0224】

一実施形態では、対象に投与される修飾されたＡＡＶベクターの投与の速度は、約０．１μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．２μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．３μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．４μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．５μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．６μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．７μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．８μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．９μＬ／分±０．０５μＬ／分、１μＬ／分±０．５μＬ／分、約２μＬ／分±０．５μＬ／分、約３μＬ／分±０．５μＬ／分、約４μＬ／分±０．５μＬ／分、約５μＬ／分±０．５μＬ／分、約６μＬ／分±０．５μＬ／分、約７μＬ／分±０．５μＬ／分、約８μＬ／分±０．５μＬ／分、約９μＬ／分±０．５μＬ／分、約１０μＬ／分±０．５μＬ／分である。

【0225】

一実施形態では、修飾されたＡＡＶベクターの総用量または総容量は、連続的に投与され得る（たとえば修飾されたＡＡＶベクターの総用量または総容量が単一のショットまたは注入で注射される）か、または不連続に投与され得る（すなわち修飾されたＡＡＶベクターの総用量または総容量のフラクションが、各ショット間に間欠的な期間を伴い、好ましくは各ショットまたは注入の間に１５秒、３０秒、４５秒、１分、２分、３分、４分、または５分の期間などの短い間欠的な期間を伴い、注射される）

【0226】

また本発明は、少なくとも１つの導入遺伝子を含む修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに関する。

【0227】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、本明細書中上述される少なくとも１つの表面に結合した糖類またはその誘導体を含む。

【0228】

一実施形態では、少なくとも１つの導入遺伝子は、タンパク質をコードするｃＤＮＡまたはそのフラグメントを含む。

【0229】

特に、ｃＤＮＡのフラグメントは、タンパク質のＮ末端部またはＣ末端部をコードする上記ｃＤＮＡの一部を含み得る。このようなフラグメントは、たとえば単一のＡＡＶベクターにより担持できず、よって二重ＡＡＶベクターの使用を必要とする大きなｃＤＮＡの場合に、有用であり得る。

【0230】

あるいは、ｃＤＮＡのフラグメントは、タンパク質の機能的かつ／または構造上の一部をコードする上記ｃＤＮＡの一部を含み得る。

【0231】

一実施形態では、ｃＤＮＡは、３Ｒ ｔａｕ、４Ｒ ｔａｕ、ＡＡＲＳ、ＡＢＣＤ１、ＡＣＯＸ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＧＡ、ＡＧＥＲ、ＡＬＤＨ７Ａ１、ＡＬＧ１３、ＡＬＳ２、ＡＮＧ、ＡＮＸＡ１１、ＡＰＰ、ＡＲＨＧＥＦ９、ＡＲＳＡ、ＡＲＳＢ、ＡＲＶ１、ＡＳＡＨ１、ＡＳＰＡ、ＡＴＮ１、ＡＴＰ１０Ａ、ＡＴＰ１３Ａ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＢＡＸ、ＢＣＬ－２、ＢＤＮＦ、ＢＩＣＤ２、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＳＲ、ＣＣＮＦ、ＣＤＫＬ５、ＣＥＲＳ１、ＣＦＡＰ４１０、ＣＨＣＨＤ１０、ＣＨＤ２、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＢ２、ＣＬＣＮ２ａ、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、ＣＮＴＮ２、ＣＰＡ６、ＣＳＴＢ、ＣＴＮＳ、ＣＴＳＡ、ＣＴＳＤ、ＤＡＯ、ＤＣＴＮ１、ＤＥＰＤＣ５、ＤＭＤ、ＤＮＡＪＢ２、ＤＮＭ１、ＤＯＣＫ７、ＤＲＤ２、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＦＨＣ１、ＥＧＬＮ１、ＥＰＨＡ４、ＥＰＭ２Ａ、ＥＲＢＢ４、ＦＧＦ１２、ＦＩＧ４、ＦＲＲＳ１Ｌ、ＦＴＬ、ＦＵＣＡ１、ＦＵＳ、ＦＸＮ、ＧＡＡ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＬ、ＧＡＬＣ、ＧＡＬＮＳ、ＧＢＡ、ＧＦＡＰ、ＧＬＡ、ＧＬＢ１、ＧＬＥ１、ＧＬＴ８Ｄ１、ＧＮＡＯ１、ＧＮＳ、ＧＯＳＲ２、ＧＰＲ９８、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＳＴＭ１、ＧＵＦ１、ＧＵＳＢ、ＨＣＮ１、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＴＴ、ＨＹＡＬ１、ＩＤＳ、ＩＤＵＡ、ＩＧＨＭＢＰ２、ＩＬ－１、ＩＴ１５、ＩＴＰＡ、ＪＰＨ３、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＴ１、ＫＣＴＤ７、ＬＡＬ、ＬＡＭＰ２、ＬＧＩ１、ＬＭＮＢ２、ＬＲＲＫ２、ＭＡＮ２Ｂ１、ＭＡＮ２Ｂ２、ＭＡＮ２Ｃ１、ＭＡＮＢＡ、ＭＡＴＲ３、ＭＢＤ５、ＭＦＳＤ８、ＮＡＧＡ、ＮＡＧＬＵ、ＮＥＣＡＰ１、ＮＥＦＨ、ＮＥＫ１、ＮＥＵ１、ＮＨＬＲＣ１、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、ＮＲ４Ａ２、ＮＴＲＫ２、ＯＣＡ２、ＯＰＴＮ、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＣＤＨ１９、ＰＥＸ１、ＰＥＸ２、ＰＥＸ３、ＰＥＸ５、ＰＥＸ６、ＰＥＸ１０、ＰＥＸ１１Ｂ、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ１４、ＰＥＸ１６、ＰＥＸ１９、ＰＥＸ２６、ＰＦＮ１、ＰＩＮＫ１、ＰＬＣＢ１、ＰＮＰＯ、ＰＯＮ１、ＰＯＮ２、ＰＯＮ３、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＲＤＭ８、ＰＲＩＣＫＬＥ１、ＰＲＫＮ、ＰＲＮＰ、ＰＲＰＨ、ＰＲＲＴ２、ＰＳＡＰ、Ｓ１０６β、ＳＣＡＲＢ２、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ９Ａｂ、ＳＥＴＸ、ＳＧＳＨ、ＳＩＧＭＡＲ１、ＳＩＫ１、ＳＫＰ１、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣＡ１７Ａ５、ＳＭＮ１、ＳＭＰＤ１、ＳＮＣＡ、ＳＮＲＰＮ、ＳＯＤ１、ＳＰＧ１１、ＳＰＴＡＮ１、ＳＱＳＴＭ１、ＳＴ３ＧＡＬ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＳＴＸ１Ｂ、ＳＴＸＢＰ１、ＳＹＰ、ＳＹＴ１、ＳＺＴ２、ＴＡＦ１５、ＴＡＲＤＢＰ、ＴＢＣ１Ｄ２４、ＴＢＣＥ、ＴＢＫ１、ＴＢＰ、ＴＩＴＦ－１、ＴＲＥＭ２、ＵＢＡ５、ＵＢＥ１、ＵＢＥ３Ａ、ＵＢＱＬＮ２、ＵＣＨ－Ｌ１、ＵＮＣ１３Ａ、ＶＡＰＢ、ＶＣＰ、ＶＰＳ３５、ＷＷＯＸ、およびＸＢＰ１を含むかまたはからなる群から選択される遺伝子に由来する。

【0232】

一実施形態では、少なくとも１つの導入遺伝子は、導入遺伝子の標的の特異性および／または発現を高める少なくとも１つのエレメントの制御下にある。

【0233】

このような導入遺伝子の標的の特異性および／または発現を高めるエレメントの例は、本明細書中上述されており、ｍｕｔａｔｉｓ ｍｕｔａｎｄｉｓにて適用される。

【0234】

一実施形態では、本発明に係る少なくとも１つの導入遺伝子を含む修飾されたＡＡＶベクターは、組成物の一部である。よって本発明は、本発明に係る導入遺伝子を含む修飾されたＡＡＶベクターを含む組成物に関する。

【0235】

一実施形態では、本発明に係る少なくとも１つの導入遺伝子を含む修飾されたＡＡＶベクターは、医薬の一部である。よって本発明は、本発明に係る少なくとも１つの導入遺伝子を含む修飾されたＡＡＶベクターを含む医薬に関する。

【0236】

一実施形態では、本組成物は、医薬組成物であり、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤、担体、および／または保存剤をさらに含む。よって本発明は、本発明に係る少なくとも１つの導入遺伝子を含む修飾されたＡＡＶベクターと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤、担体、および／または保存剤とを含む医薬組成物に関する。

【0237】

用語「薬学的に許容される」は、賦形剤、担体、および／または保存剤を表す場合、対象、好ましくはヒトに投与される際にアレルギー反応または同様の望ましくない反応をもたらさない分子実体および組成物を定義することを意味する。ヒトへの投与では、医薬組成物は、たとえばＦＤＡ局またはＥＭＡなどの規制局が要求する無菌性、発熱性、および全般的な安全性、および純度の基準と一致しなければならない。

【0238】

これら組成物で使用され得る薬学的に許容される賦形剤、担体、および保存剤として、限定するものではないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、タンパク質（たとえば血清アルブミン、ゼラチン、イムノグロブリンなど）、バッファー物質（たとえばリン酸塩、クエン酸塩、または他の有機酸など）、アミノ酸（たとえばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、リジンなど）、抗酸化剤（たとえばアスコルビン酸など）、キレート剤（たとえばＥＤＴＡなど）、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和型植物性脂肪酸の部分的なグリセリド、水、塩、または電解質（たとえば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウムなど）、親水性ポリマー（たとえばポリビニルピロリドン、ポリエチレン－ポリオキシプロピレンブロックポリマーなど）、セルロースベースの物質（たとえばカルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリアクリレート、ワックス、非イオン性界面活性剤（たとえばＴｗｅｅｎ、プルロニック、ポリエチレングリコールなど）、および羊毛脂が挙げられる。

【0239】

一実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、対象に注射できる製剤に関して薬学的に許容されるビヒクルを含む。これらは、特に等張性、無菌性の生理食塩水（リン酸一ナトリウムまたは二ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、または塩化マグネシウムなど、または当該塩の混合物）中にあり得るか、または、場合に応じて、無菌水もしくは生理食塩水の添加後に、注射可能な液剤の構成を可能にする乾燥した、特には凍結乾燥した組成物中にあり得る。

【0240】

一実施形態では、本発明に係る医薬組成物は、哺乳類細胞内に本明細書中記載の修飾されたＡＡＶベクターの進入を促進させる１つ以上の作用物質、たとえば天然および／または合成のポリマー、たとえばポロクサマー、キトサン、シクロデキストリン、デンドリマー、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）ポリマーを含み得る。

【0241】

また本発明は、対象の中枢神経系（ＣＮＳ）への細胞の形質導入、および／または
対象の中枢神経系（ＣＮＳ）への導入遺伝子の送達、および／または
対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の予防および／または処置
のためのキットおよびキットオブパーツに関する。

【0242】

一実施形態では、本キットまたはキットオブパーツは、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターまたは組成物を含む。

【0243】

一実施形態では、本キットまたはキットオブパーツは、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターまたは組成物のＣＮＳ送達のための装置を含む。

【0244】

ＣＮＳ送達のための装置は、当該分野で知られており、ポンプ（たとえば後述の浸透圧ポンプおよび／または注入ポンプ）、ならびに／または注射装置（たとえばカテーテル、カニューレ、ニードル、シリンジなど）を使用し得る。

【0245】

任意選択で、注射装置を導くためおよび／または組成物の送達をモニタリングするために、イメージング技術が使用され得る。ＣＮＳ送達は、定位的注射による送達またはＣＥＤ（ｃｏｎｖｅｃｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）による送達を含み得る。注射装置は、対象のＣＮＳ組織に挿入され得る。当業者は、標的のＣＮＳ組織に注射装置を配置するための適切な座標を決定することができる。一実施形態では、配置は、たとえば標的のＣＮＳ組織へ注射装置を導くため対象の脳のＣＴおよび／またはＭＲＩイメージングにより得られる解剖マップを介して達成される。

【0246】

一実施形態では、術中磁気共鳴画像法（ｉＭＲＩ）および／または送達のリアルタイムのイメージングが行われ得る。一実施形態では、装置は、本明細書中記載の修飾されたＡＡＶベクターを投与するために使用される。ｉＭＲＩは、外科手術中の対象のＭＲＩベースのイメージングの技術として当該分野で知られており、（たとえばＣＮＳに修飾されたＡＡＶベクターを送達するための）外科的手法の成功の確認を支援し、組織の他の部分の損傷のリスクを低減する。一実施形態では、トレーシング剤（たとえばＭＲＩ造影亢進剤など）が、ベクターの組織部分布のリアルタイムでのモニタリングを提供するために、修飾されたＡＡＶベクターと同時送達され得る。トレーシング剤の使用は、送達の休止を通知し得る。当該分野で知られている他のトレーシングおよびイメージングの手段もまた、修飾されたＡＡＶベクターの分布を経過観察するために使用され得る。

【0247】

一実施形態では、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターは、ＡＡＶベクターの送達のための当該分野で知られている装置および方法を使用して標準的な定位的注射により投与され得る。全般的に、これら方法は、注射装置、一連の座標（たとえば側部（ｌａｔｅｒｏ－ｌａｔｅｒａｌ）、背腹側、および吻側尾側の軸に沿ったパラメータ）への送達のため標的化された組織の領域を翻訳するためのプランニングシステム、およびプランニングされた座標による定位的な局在化のための装置（たとえば任意選択で、座標システムとアライメントした位置に頭部を固定するためのプローブおよび構造を含む、定位装置）を使用し得る。ＭＲＩにより誘導される外科手術および／または定位的注射に有用であり得るシステムの非限定的な例は、ＣｌｅａｒＰｏｉｎｔ（登録商標）システム（ＭＲＩ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ， Ｍｅｍｐｈｉｓ， ＴＮ）である。

【0248】

本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターをＣＮＳへ送達するための別の例示的かつ非原敵的な方法は、ＣＥＤ（対流亢進送達（ｃｏｎｖｅｃｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ））である。本明細書中使用される場合、用語「対流亢進送達」または「ＣＥＤ」は、流体静力学的な圧力が対流分布をもたらす速度での注入による治療用作用物質のＣＮＳへの送達を表し得る。頭蓋内圧力が脳組織を損傷しないように適切なレベルで維持されるように、任意の適切な流速が使用され得る。ＣＥＤは、たとえば、カニューレの先端の標的のＣＮＳ組織に少なくとも近接した配置を介して適切なカテーテルまたはカニューレ（たとえば段階的な設計の灌流フリーのカニューレ）を使用することにより、達成され得る。カニューレは配置された後、標的ＣＮＳ組織にカニューレを介して治療用作用物質を送達するポンプに接続される。カニューレの先端からの圧力勾配は、注入の間維持され得る。一実施形態では、注入は、術中ＭＲＩ（ｉＭＲＩ）などのイメージング法または別のリアルタイムのＭＲＩ技術により検出可能なトレーシング剤によりモニタリングされ得る。

【0249】

ＣＥＤは、注入液（たとえば本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターを含む組成物）を、間質液の静水圧が上回る圧力下でＣＮＳに投入することに基づく。これは、注入液を、ＣＮＳの血管周囲と接触させ、伝達を介して注入液を分布しその送達の度合いを高めるポンプのように利用される。

【0250】

一実施形態では、本キットは、本発明に係る修飾されたＡＡＶベクターまたは組成物のＣＮＳ送達のための説明書をさらに含む。一実施形態では、本キットは、本明細書中記載の使用および方法を使用して本明細書中記載のＣＮＳ疾患を予防および／または処置するための説明書を含む。

【0251】

本明細書中記載のキットは、本明細書中記載のいずれかの方法を行うための説明書と共に、バッファー、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および添付文書を含む、商業的および使用者の観点から望ましい他の物質をさらに含み得る。

【図面の簡単な説明】

【0252】

【図1】図１は、マンノシル化ｒＡＡＶ２ベクターを合成するための１つの適切な方法の概略図である。（Ｈ_２Ｎ）－は、マンノース部分をカップリングするためにイソチオシアネート（Ｎ＝Ｃ＝Ｓ）反応基と反応する表面に曝露した一級アミンを表す。この例示のため、２つのマンノース残基のみがＡＡＶカプシドに結合していることが示されている。黒色の矢印は、他のマンノース部分を模式的に表す。

【図2】図２は、線条体内注射から４８日後のＧ１［ビヒクル］、Ｇ２［ＡＡＶ２－ＧＦＰ］、およびＧ３［マンノースＡＡＶ２－ＧＦＰ］のグループに由来するマウスの脳の切片のＧＦＰ染色を示す、３つの免疫組織化学的検査の写真のセット（色）である。図２Ａ：Ｇ１グループに由来するマウスの脳の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図２Ｂ：Ｇ２グループに由来するマウスの脳の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図２Ｃ：Ｇ３グループに由来するマウスの脳の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図3】図３は、線条体内注射から４８日後のＧ１［ビヒクル］、Ｇ２［ｗｔ ＡＡＶ２］、およびＧ３［ｍａｎ ＡＡＶ２］のグループからのマウスの脳の線条体（注射部位）および黒質におけるＧＦＰの形質導入の容量の統計分析を示す２つのグラフのセットである。バーは、グループの平均値を表し、ドットは、個別の動物の値を表す。データは、１元ＡＮＯＶＡ、次いでＴｕｋｅｙの多重比較を行うことにより分析した。＊＊＊ｐ＜０．００１， ＊＊＊＊ｐ＜０．０００１ ｃｆ． グループＧ１；および＃＃ｐ＜０．０１， ＃＃＃＃ｐ＜０．０００１ ｃｆ．グループＧ２．図３Ａ：線条体におけるＧＦＰ形質導入の容量の統計分析。図３Ｂ：黒質におけるＧＦＰ形質導入の容量の統計分析。

【図4】図４は、視床内注射から４８日後の、Ｇ４［ビヒクル］、Ｇ５［ＡＡＶ２－ＧＦＰ］、およびＧ６［マンノース ＡＡＶ２－ＧＦＰ］のグループに由来するマウスの脳の切片のＧＦＰ染色を示す、３つの免疫組織化学的検査の写真（色）のセットである。図４Ａ：Ｇ４のグループに由来するマウスの脳の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図４Ｂ：Ｇ５のグループに由来するマウスの脳の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図４Ｃ：Ｇ６のグループに由来するマウスの脳の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図5】図５は、視床内注射から４８日後の、Ｇ４［ビヒクル］、Ｇ５［ｗｔ ＡＡＶ２］、およびＧ６［ｍａｎ ＡＡＶ２］のグループに由来するマウスの脳の視床（注射部位）および黒質へのＧＦＰ形質導入の容量の統計分析を示す２つのグラフのセットである。バーは、グループの平均値を表し、ドットは、個別の動物の値を表す。データは、１元ＡＮＯＶＡ、次いでＴｕｋｅｙの多重比較を行うことにより分析した。＊＊ｐ＜０．０１， ＊＊＊＊ｐ＜０．０００１ ｃｆ． グループＧ４；および＃＃＃＃ｐ＜０．０００１ ｃｆ． グループＧ５．図５Ａ：視床におけるＧＦＰ形質導入の容量の統計解析。図５Ｂ：黒質におけるＧＦＰ形質導入の容量の統計解析。

【図6】図６は、脳室内注射から４８日後の、Ｇ７［ビヒクル］、Ｇ８［ＡＡＶ２－ＧＦＰ］、およびＧ９［マンノース ＡＡＶ２－ＧＦＰ］のグループに由来するマウスの脳の切片のＧＦＰ染色を示す、３つの免疫組織化学的検査の写真（色）のセットである。図６Ａ：Ｇ７のグループに由来するマウスの脳の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図６Ｂ：Ｇ８のグループに由来するマウスの脳の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図６Ｃ：Ｇ９のグループに由来するマウスの脳の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図7】図７は、脳室内注射から４８日後の、Ｇ７［ビヒクル］、Ｇ８［ＡＡＶ２－ＧＦＰ］、およびＧ９［マンノース ＡＡＶ２－ＧＦＰ］のグループに由来するマウスの脳の黒質（脳室に注射）へのＧＦＰ形質導入の容量の統計分析を示すグラフである。バーは、グループの平均値を表し、ドットは、個別の動物の値を表す。データは、１元ＡＮＯＶＡで分析した。

【図8】図８Ａ～Ｃ図８Ａ：Ｇ１［ビヒクル］グループに由来するマウスの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図８Ｂ：Ｇ２［マンノース ＡＡＶ２］グループに由来するマウスの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図８Ｃ：Ｇ３［ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマウスの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図9】図９Ａ～Ｃ図９Ａ：Ｇ１［ビヒクル］グループに由来するマウスの視床の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図９Ｂ：Ｇ２［マンノース ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマウスの視床の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図９Ｃ：Ｇ３［ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマウスの視床の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図10】図１０Ａ～Ｃ図１０Ａ：Ｇ１［ビヒクル］グループに由来するマウスの黒質の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１０Ｂ：Ｇ２［マンノースＡＡＶ２－ＧＦＰ］のグループに由来するマウスの黒質の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１０Ｃ：Ｇ３［ＡＡＶ２－ＧＦＰ］のグループのマウスに由来する黒質の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図11-1】図１１Ａ～Ｂ図１１Ａ：Ｇ１［ビヒクル］グループに由来するマウスの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１１Ｂ：Ｇ２［ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマウスの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図11-2】図１１Ｃ～Ｅ図１１Ｃ：Ｇ３［マンノース ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマウスの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１１Ｄ：Ｇ４［ガラクトース ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマウスの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１１Ｅ：Ｇ５［Ｎ－アセチルグルコサミン ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマウスの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図12-1】図１２Ａ～Ｂ図１２Ａ：Ｇ１［ビヒクル］グループに由来するマウスの視床の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１２Ｂ：Ｇ２［ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマウスの視床の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図12-2】図１２Ｃ～Ｅ図１２Ｃ：Ｇ３［マンノース ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマウスの視床の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１２Ｄ：Ｇ４［ガラクトース ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマウスの視床の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１２Ｅ：Ｇ５［Ｎアセチルグルコサミン ＡＡＶ２］グループに由来するマウスの視床の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図13-1】図１３Ａ～Ｂ図１３Ａ：Ｇ１［ビヒクル］グループに由来するマウスの黒質の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１３Ｂ：Ｇ２［ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマウスの黒質の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図13-2】図１３Ｃ～Ｅ図１３Ｃ：Ｇ３［マンノース ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマウスの黒質の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１３Ｄ：Ｇ４［ガラクトース ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマウスの黒質の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１３Ｅ：Ｇ５［Ｎアセチルグルコサミン ＡＡＶ２］グループに由来するマウスの黒質の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図14】図１４Ａ～Ｃ図１４Ａ：Ｇ２［ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマカクの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１４Ｂ：Ｇ３［ＡＡＶ５－ＧＦＰ］グループに由来するマカクの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１４Ｃ：Ｇ４［マンノース ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマカクの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図15】図１５Ａ～Ｃ図１５Ａ：Ｇ２［ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマカクの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１５Ｂ：Ｇ３［ＡＡＶ５－ＧＦＰ］グループに由来するマカクの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。図１５Ｃ：Ｇ４［マンノース ＡＡＶ２－ＧＦＰ］グループに由来するマカクの線条体の切片の免疫組織化学的検査の写真（色）。

【図16】図１６Ａ～Ｂ図１６Ａ：線条体におけるＧＦＰ形質導入のパーセンテージ。バーは、グループの平均値を表し、ドットは、個別の動物の値を表す。図１６Ｂ：黒質におけるＧＦＰ形質導入のパーセンテージ。バーは、グループの平均値を表し、ドットは、個別の動物の値を表す。

【図17-1】図１７：糖類部分とＡＡＶの表面に曝露した一級アミンとの間のカップリング反応を示す概略図（図１７Ａ：一般的な事例；図１７Ｂ：マンノース部分を伴う例を表す）。

【図17-2】同上。

【実施例】

【0253】

実施例１：マウスの脳における２つのＡＡＶベクターの形質導入能の評価
この試験の目的は、マウスの大脳領域に形質導入する２つの組み換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクター（「修飾されていないｒＡＡＶ２」および「マンノシル化ｒＡＡＶ２」の潜在性を調査することであった。

【0254】

方法
動物
２４匹の雄性のＣ５７ ＢＬ／６マウス（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）を、Ｊａｎｖｉｅｒ Ｌａｂｓから購入した。

【0255】

試験項目
「修飾されていないｒＡＡＶ２」：ＣＡＧプロモーターの制御下でｅＧＦＰ ｃＤＮＡを担持する修飾されていないカプシドを含む組み換えＡＡＶ。

【0256】

「マンノシル化ｒＡＡＶ２」：表面に結合したマンノース残基で修飾されたカプシドを含み、ＣＡＧプロモーターの制御下でｅＧＦＰ ｃＤＮＡを含む組み換えＡＡＶ２ベクター。マンノース残基は、ＡＡＶ２カプシドの表面に曝露したリジン残基の一級アミンに共有結合していた。図１は、マンノシル化ｒＡＡＶ２の視覚的な表示を提供する。

【0257】

「ビヒクル」：陰性対照としての乳酸加リンゲル液（ＬＲＳ）。

【0258】

方法
試験項目
マンノシル化ｒＡＡＶ２を、国際特許公開公報第２０１７２１２０１９号に以前に記載かつ図１に示されるように、作製した。簡潔に述べると、修飾されていないｒＡＡＶ２を、イソチオシアネート－リンカー－マンノース分子とトリスバッファー（ｐＨ９．３）にて混合し、２０℃で４時間インキュベートした。次に、この混合物を、緩衝滅菌生理食塩水（ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ ｓｔｅｒｉｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ：ＢＳＳＳ）＋０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８に対して透析して、ＡＡＶカプシドに結合しない遊離分子を除去した。

【0259】

試験設計
２４匹のマウスに定位的な外科手術を行い、試験項目を用いて右線条体、右視床、または右側脳室へと片側に注射した。

【0260】

動物を、表１のように、名称Ｇ１～Ｇ９の９つのグループに割り当てた。

【0261】

【表1】

【0262】

外科的な手法
ブプレノルフィン（０．１ｍｇ／ｋｇ；１０ｍＬ／ｋｇ，ｓ．ｃ．）を、鎮痛剤として外科手術の前後に提供した。動物を、酸素の連続流（１．５Ｌ／分）および３％のイソフルランを伴う麻酔チャンバーに置いた。意識を失わせた後、動物を定位フレーム（Ｋｏｐｆ）に置き、ｅａｒ ｂａｒを使用して所定の位置に固定した。頭蓋の皮膚を切開した。

【0263】

各マウスに、ガラスのピペットを使用して、試験項目のうちの１つの片側注射を、表２に記載の座標に投与した（線条体では２か所、視床では２か所、脳室では１か所）。マウスの脳のアトラスに関しては、Ｐａｘｉｎｏｓ ＆ Ｆｒａｎｋｌｉｎ， ２０１９． Ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｂｒａｉｎ ｉｎ ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ （５ｔｈ ｅｄ．）． Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ： Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ Ｉｎｃ．を参照されたい。

【0264】

【表2】

【0265】

安楽死を行う４８日前に動物を回収した。

【0266】

Ｅｘ Ｖｉｖｏでの解析
安楽死および組織の処理
ｉｎ ｖｉｖｏ期の終了時に、動物を安楽死させ、組織を回収した。安楽死は、認可されたＥｕｒｏｐｅａｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎのガイドラインにしたがい行った。

【0267】

終了時に、各動物の脳を迅速に取り出し、パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ；４％）に固定した。３日後に、組織を２０％のスクロース溶液（０．１ＭのＰＢＳ中）に４℃で一晩凍結保護し、その後凍結した。

【0268】

脳全体を、クリオスタットを使用して５０μｍ厚の冠状切片に切断した。浮遊性の切片を、ＰＢＳアザイドに置き、４℃に保存した。

【0269】

ＧＦＰ免疫組織化学的検査
目的の領域で形質導入された脳の体積のパーセンテージの定義は、ＧＦＰ免疫組織化学的検査に基づきなされた。４つ全ての切片のうちの１つを免疫組織化学的検査に使用した。

【0270】

組織切片を、冷蔵庫から出し、室温に調節した。ＰＢＳですすいだ後、内因性ペルオキシダーゼを、ペルオキシダーゼブロッキング溶液（Ｄａｋｏ， Ｓ２０２３）で１０分間阻害した。

【0271】

ＰＢＳですすいだ後、非特異的な標識を、２％のＢＳＡ、０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００および０．０１％のチメロサールを含むＰＢＳで抗原部位を３０分間ブロッキングすることにより妨げた。

【0272】

切片を、０．２％のＢＳＡ、０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００および０．０１％のチメロサールを含むＰＢＳで１／１０００に希釈した一次抗体（ウサギ抗ＧＦＰ、ポリクローナル抗体、Ａｂ３０８０， Ｍｅｒｃｋ）において一晩インキュベートした。

【0273】

ＰＢＳですすいだ後、切片を、Ｄａｋｏ Ｅｎｖｉｓｉｏｎで標識したポリマーＨＲＰ抗ウサギ（Ｄａｋｏ， Ｋ４０１１）と共に３０分間インキュベートした。

【0274】

ＰＢＳですすいだ後、顕色を、Ｄａｋｏ ＤＡＢを用いて得た。約３０秒後、顕色を、いくつかのＰＢＳウォッシュで停止させた。

【0275】

次に、切片を、スライドに載置し、ニッスル染色を用いて対比染色した。スライドを、ＰａｎｎｏｒａｍｉｃＳｃａｎ ＩＩ（３ＤＨＩＳＴＥＣＨ， Ｈｕｎｇａｒｙ）を、５層の焦点を自動的に入手しその後平坦化する伸長モードにて２０倍の倍率で使用することによりデジタル化した。

【0276】

線条体、視床、および黒質を、それぞれ１０、１０、および６つの切片でＭＥＲＣＡＴＯＲソフトウェア（Ｍｅｒｃａｔｏｒ， Ｅｘｐｌｏｒａ Ｎｏｖａ， Ｌａ Ｒｏｃｈｅｌｌｅ， Ｆｒａｎｃｅ）を使用して描画した。

【0277】

全ての形質導入された領域（アーティファクトは除外）を使用して、ＧＦＰ染色の表面を、閾値検出法を使用して得た。この体積を、式
Ｖ＝ΣＳｔｄ
（式中、「ΣＳ」は、表面積の合計であり、「ｔ」は、切片の平均厚であり、「ｄ」は、測定した２つの連続した分析された切片の間のスライス数である）
を使用して計算した。

【0278】

次に、目的の領域における形質導入した脳の体積のパーセンテージを計算した。

【0279】

データ分析
一元ＡＮＯＶＡを行い、処置グループ間の差異を評価し、次に、Ｔｕｋｅｙの多重比較（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖｅｒｓｉｏｎ ８．０．２）を行った。

【0280】

結果
線条体への注射
Ｇ１、Ｇ２、およびＧ３のグループに由来するマウスの免疫組織化学的に染色した脳の切片を、それぞれ図２Ａ、２Ｂ、および２Ｃに示す。ＧＦＰ染色領域のパーセンテージは、表３に提供する。

【0281】

【表3】

【0282】

線条体内注射から４８日後の線条体（図３Ａ）および黒質（図３Ｂ）におけるＧＦＰ形質導入の統計解析は表４にまとめられている。

【0283】

【表4】

【0284】

線条体におけるＧＦＰ形質導入の％に関するＴｕｋｅｙの多重比較検定による処置間の有意差は、表５にまとめられている。

【0285】

【表5】

【0286】

黒質におけるＧＦＰ形質導入の％に関するＴｕｋｅｙの多重比較検定による処置間の有意差は、表６にまとめられている。

【0287】

【表6】

【0288】

視床への注射
Ｇ４、Ｇ５、およびＧ６のグループに由来するマウスの免疫組織化学的に染色した脳の切片を、それぞれ図４Ａ、図４Ｂ、および図４Ｃに示す。ＧＦＰ染色領域のパーセンテージは、表７に提供されている。

【0289】

【表7】

【0290】

視床内注射から４８日後の視床（図５Ａ）および黒質（図５Ｂ）におけるＧＦＰ形質導入の統計解析は、表８にまとめられている。

【0291】

【表8】

【0292】

視床におけるＧＦＰ形質導入の％に関するＴｕｋｅｙの多重比較検定による処置間の有意差は、表９にまとめられている。

【0293】

【表9】

【0294】

脳室への注射
Ｇ７、Ｇ８、およびＧ９のグループに由来するマウスの免疫組織化学的に染色した脳の切片を、それぞれ図６Ａ、図６Ｂ、および図６Ｃに示す。ＧＦＰ染色領域のパーセンテージは、表１０に提供されている。

【0295】

【表10】

【0296】

脳室注射から４８日後の黒質（図７）におけるＧＦＰ形質導入の統計解析は、表１１にまとめられている。

【0297】

【表11】

【0298】

ＧＦＰ形質導入の％において処置グループ間で有意差は観察されなかった。

【0299】

結論
この試験の目的は、マウスの大脳領域へ形質導入する２つのＡＡＶベクター（「修飾されていないｒＡＡＶ２」および「マンノシル化ｒＡＡＶ２」の潜在性を調査することであった

【0300】

両ＡＡＶベクターは、ＧＦＰの発現を駆動し、特定の脳の領域におけるＧＦＰ染色の表面を使用して、脳細胞に形質導入する各ベクターの特性を評価した。

【0301】

注射が線条体でなされた場合、線条体におけるＧＦＰ染色のパーセンテージは、修飾されていないｒＡＡＶ２では１２．９０％であり、マンノシル化ｒＡＡＶ２では４５．４４％であり；黒質では、これは、修飾されていないｒＡＡＶ２では９．９８％であり、マンノシル化ｒＡＡＶ２では５０．２１％であった。

【0302】

注射が視床でなされた場合、視床におけるＧＦＰのパーセンテージは、修飾されていないｒＡＡＶ２では８．６７％であり、マンノシル化ｒＡＡＶ２では３７．８５％であり；黒質では、これは、修飾されていないｒＡＡＶ２では０％であり、マンノシル化ｒＡＡＶ２では１．６７％であった。

【0303】

注射が脳室でなされた場合、黒質におけるＧＦＰのパーセンテージは、修飾されていないｒＡＡＶ２では０．０１％であり、マンノシル化ｒＡＡＶ２では０．２２％であった。

【0304】

マンノシル化ｒＡＡＶ２は、脳の実質（線条体または視床）に投与した場合、修飾されていないｒＡＡＶ２よりも大きな範囲の発現を達成した。マンノシル化ｒＡＡＶ２の順行性および逆行性の運搬が観察された。

【0305】

脳の実質（線条体または視床）への単回投与は半球全体への形質導入をもたらすため、
特化した脳領域での実際の測定に加え、全般的な態様は、マンノシル化ｒＡＡＶ２を明らかに支持している。特に、免疫組織化学的分析は、ＧＦＰ発現が線条体内注射および視床内注射後に皮質にも局在していることを示した。

【0306】

実施例２：マウスの大槽における２つのＡＡＶベクターの形質導入能の評価
この試験の目的は、マウスにおいて大槽経路を介した修飾された組み換えＡＡＶ２－ＧＦＰ（マンノースＡＡＶ２－ＧＦＰとも呼ばれる）ｖｓ修飾されていないＡＡＶ２－ＧＦＰの注射によるＧＦＰの脳の分布を比較することであった。形質導入の領域の代わりとしての標識の度合いは、動物の全てのグループの線条体、視床、黒質（ＳＮ）の切片の１つのシリーズ上でのＧＦＰ染色により行った。

【0307】

材料
動物
８匹のＣ５７ ＢＬ／６マウス（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）を、Ｊａｎｖｉｅｒ Ｌａｂｓから購入した。

【0308】

試験項目
「マンノースＡＡＶ２－ＧＦ」は、表面に結合したマンノース残基で修飾されたカプシドを含み、ＣＡＧプロモーターの制御下でｅＧＦＰ ｃＤＮＡを担持する組み換えＡＡＶ２ベクターである。マンノース残基は、実施例１に記載のように、ＡＡＶ２カプシドの表面に曝露したリジン残基の一級アミンに共有結合した。

【0309】

「ビヒクル」は、陰性対照としての緩衝滅菌生理食塩水（ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ ｓｔｅｒｉｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ：ＢＳＳＳ）＋０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８である。

【0310】

方法
試験項目
マンノシル化ｒＡＡＶ２を、国際特許公報第２０１７２１２０１９号に以前に記載されており、図１に例示されているように作製した。簡潔に述べると、修飾されていないｒＡＡＶ２を、イソチオシアネート－リンカー－マンノース分子とトリスバッファー（ｐＨ９．３）にて混合し、２０℃で４時間インキュベートした。次に、この混合物を、緩衝滅菌生理食塩水（ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ ｓｔｅｒｉｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ：ＢＳＳＳ）＋０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８に対して透析して、ＡＡＶカプシドに結合しない遊離分子を除去した。

【0311】

試験設計
８匹のマウスに定位的な外科手術を行い、試験項目を用いて大槽へ片側に注射した。

【0312】

これら動物を、表１２のように、名称Ｇ１～Ｇ３の３つのグループに無作為に割り当てた。

【0313】

【表12】

【0314】

外科的手法
ブプレノルフィン（０．１ｍｇ／ｋｇ；１０ｍＬ／ｋｇ， ｓ．ｃ．）を、鎮痛剤として外科手術の前後に提供した。動物を、酸素の連続流（１．５Ｌ／分）および３％のイソフルランを伴う麻酔チャンバーに置いた。意識を失わせた後、動物を定位フレーム（Ｋｏｐｆ）に置き、ｅａｒ ｂａｒを使用して所定の位置に固定した。頭蓋の皮膚を切開した。

【0315】

各マウスに、１．３ １０Ｅ９ｖｇ／脳（またはビヒクル）の大槽注射を行った。

【0316】

ｅｘ ｖｉｖｏでの解析
安楽死および組織の処置
ｉｎ ｖｉｖｏ期の終了時（注射から４２日後）に、実施例１に記載のように動物を安楽死させ、組織を回収した。

【0317】

ＧＦＰ免疫組織化学的検査
ＧＦＰ免疫組織化学的検査を、実施例１に記載のように行った。

【0318】

結果
線条体におけるＧＦＰ染色 Ｇ１、Ｇ２、およびＧ３のグループに由来するマウスの代表的な免疫組織化学的に染色した線条体の切片は、それぞれ図８Ａ、図８Ｂ、および図８Ｃに示されている。

【0319】

視床におけるＧＦＰ染色
Ｇ１、Ｇ２、およびＧ３のグループに由来するマウスの代表的な免疫組織化学的に染色した視床の切片は、それぞれ図９Ａ、図９Ｂ、および図９Ｃに示されている。

【0320】

黒質におけるＧＦＰ染色
Ｇ１、Ｇ２、およびＧ３のグループに由来するマウスの代表的な免疫組織化学的に染色した黒質の切片は、それぞれ図１０Ａ、図１０Ｂ、および図１０Ｃに示されている。

【0321】

結論
この試験の目的は、マウスの大脳領域に形質導入する２つのＡＡＶベクター（「修飾されていないＡＡＶ２－ＧＦＰ」および「マンノースＡＡＶ２－ＧＦＰ」）の潜在性を調査することであった。

【0322】

線条体も海馬も、両ＡＡＶ２ベクターの大槽注射後に形質導入されたようには見えない。

【0323】

対照的に、各ＡＡＶベクターは、視床および黒質において、異なる度合いではあるが、ＧＦＰの発現を駆動した。

【0324】

しかしながら、マンノシル化ｒＡＡＶ２は、視床および黒質において修飾されていないｒＡＡＶ２よりも強いＧＦＰ発現を誘導すると思われる。さらに、マンノシル化ｒＡＡＶ２は、大槽を介して投与される場合に、修飾されていないＡＶＶ２よりも大きな両側性の範囲の、視床核および黒質の発現を達成した。よって、大槽へのマンノシル化ｒＡＡＶ２の単回投与は、両側性の視床および黒質への形質導入をもたらした。

【0325】

実施例３：マウスの右線条体への３つの修飾されたＡＡＶベクターの形質導入能の評価
この試験の目的は、マウスでの線条体内経路を介した、３つの修飾されたｒＡＡＶ２－ＧＦＰ（マンノースＡＡＶ２－ＧＦＰ、ガラクトースＡＡＶ２－ＧＦＰ、Ｎ－アセチルグルコサミン－ＡＡＶ２－ＧＦＰ）ｖｓ．修飾されていないＡＡＶ２－ＧＦＰの注射によるＧＦＰの脳の分布を比較することであった。形質導入の領域の代わりとしての、標識化の度合いは、動物の全てのグループの線条体、視床、黒質（ＳＮ）の切片の１つのシリーズ上でのＧＦＰ染色により行った。

【0326】

材料
動物
１４匹の雄性のＣ５７ ＢＬ／６マウス（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）を、Ｊａｎｖｉｅｒ Ｌａｂｓから購入した。

【0327】

試験項目
「修飾されたｒＡＡＶ２－ＧＦＰ」は、表面に結合した糖類の残基（マンノース、ガラクトース、またはＮ－アセチルグルコサミン）で修飾されたカプシドを含み、ＣＡＧプロモーターの制御下でｅＧＦＰ ｃＤＮＡを担持する組み換えＡＡＶ２ベクターである。マンノース、ガラクトース、およびＮ－アセチルグルコサミンの残基は、実施例１に記載のように、ＡＡＶ２カプシドの表面に曝露したリジン残基の一級アミンに共有結合していた。

【0328】

「ビヒクル」は、陰性対照として、ＤＰＢＳ Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８であった。

【0329】

方法
試験項目
修飾されたｒＡＡＶ２を、国際特許公報第２０１７２１２０１９号に以前に記載されており、図１に例示されているように作製した。簡潔に述べると、修飾されていないｒＡＡＶ２を、イソチオシアネート－リンカー－マンノース分子とトリスバッファー（ｐＨ９．３）にて混合し、２０℃で４時間インキュベートした。次に、この混合物を、０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８を補充したＤＰＢＳ、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋に対しバッファー交換し、ＡＡＶカプシドに結合しない遊離分子を除去した。

【0330】

試験設計
１４匹のマウスに定位的な外科手術を行い、試験項目を用いて右線条体へ片側に注射した。

【0331】

これら動物を、表１３のように、名称Ｇ１～Ｇ５の５つのグループに無作為に割り当てた。

【0332】

【表13】

【0333】

外科的な手法
ブプレノルフィン（０．１ｍｇ／ｋｇ；１０ｍＬ／ｋｇ，ｓ．ｃ．）を、鎮痛剤として外科手術の前後に提供した。動物を、酸素の連続流（１．５Ｌ／分）および３％のイソフルランを伴う麻酔チャンバーに置いた。意識を失わせた後、動物を定位フレーム（Ｋｏｐｆ）に置き、ｅａｒ ｂａｒを使用して所定の位置に固定した。頭蓋の皮膚を切開した。

【0334】

各マウスに、総用量５．５ １０Ｅ８ｖｇ／脳の試験項目に対応する、試験項目（またはビヒクル）を右線条体に２回片側に注射した。これは、表１４の座標にて、ｐｉｃｏｓｐｒｉｚｅｒにカップリングしたガラスのピペットを使用して行った。

【0335】

【表14】

【0336】

ｅｘ ｖｉｖｏでの分析
安楽死および組織の処理
ｉｎ ｖｉｖｏ期の終了時（注射から６週間後）に、実施例１に記載のように動物を安楽死させ、組織を回収した。

【0337】

ＧＦＰの免疫組織化学的検査
ＧＦＰの免疫組織化学的検査を、実施例１に記載のように行った。

【0338】

結果
右線条体におけるＧＦＰ染色
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、およびＧ５のグループに由来するマウスの代表的な免疫組織化学的に染色した線条体の切片を、それぞれ図１１Ａ、図１１Ｂ、図１１Ｃ、図１１Ｄ、および図１１Ｅに示す。

【0339】

視床におけるＧＦＰ染色
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、およびＧ５のグループに由来するマウスの代表的な免疫組織化学的に染色した視床の切片を、それぞれ図１２Ａ、図１２Ｂ、図１２Ｃ、図１２Ｄ、および図１２Ｅに示す。

【0340】

黒質におけるＧＦＰ染色
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、およびＧ５のグループに由来するマウスの代表的な免疫組織化学的に染色した黒質の切片を、それぞれ図１３Ａ、図１３Ｂ、図１３Ｃ、図１３Ｄ、および図１３Ｅに示す。

【0341】

結論
この試験の目的は、マウスの大脳に形質導入する、修飾されていないＡＡＶ２ベクターと比較した３つの修飾されたＡＡＶベクターの潜在性を調査することであった：
修飾されていないＡＡＶ２－ＧＦＰ
マンノースＡＡＶ２－ＧＦＰ
ガラクトースＡＡＶ２－ＧＦＰ
Ｎ－アセチル－グルコサミン－ＡＡＶ２－ＧＦＰ。
全てのＡＡＶベクターは、ＧＦＰの発現を駆動した。

【0342】

線条体に注射した動物を、連続した比較（ｂａｃｋ ｔｏ ｂａｃｋ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ）のため染色した。親のＡＡＶ２－ＧＦＰは、線条体、視床、および黒質に同側ＧＦＰ染色をもたらす。

【0343】

他の３つの修飾されたベクターは、線条体、視床、および黒質において同様の免疫染色のパターンを提示した。

【0344】

頭頂皮質および海馬は、３つの修飾されたｒＡＡＶ２で広く形質導入されたように思われた。

【0345】

大部分は頭頂部である一部の皮質領域は、ベクター間で差異を提示し得るが、動物に注射したマンノースＡＡＶ２－ＧＦＰおよびＮ－アセチルグルコサミン－ＡＡＶ２－ＧＦＰは両方とも、同側（ｉｓｐｉｓｌａｔｅｒａｌ）および対側の海馬において強力な免疫染色を呈した。Ｎ－アセチルグルコサミン－ＡＡＶ２－ＧＦＰの注射は、マンノースＡＡＶ２－ＧＦＰ注射と比較して歯状回において強いＧＦＰ染色を誘導した。

【0346】

実施例４：マカクザルの線条体でのいくつかのＡＡＶベクターのトランスフェクション能の評価
この提案の目的は、修飾されていないＡＡＶ２－ＧＦＰ、修飾されていないＡＡＶ５－ＧＦＰ、および修飾された組み換えＡＡＶ２－ＧＦＰ（マンノースＡＡＶ２－ＧＦＰとも呼ばれる）という３つのウイルスベクターの、マカクザルの大脳領域をトランスフェクトする潜在能力を調査することであった。

【0347】

材料
動物
７匹の雄性カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）を、フランスのＢｉｏＰｒｉｍから購入した。

【0348】

試験項目
「修飾されたｒＡＡＶ２－ＧＦＰ」は、表面に結合したマンノース残基（上記残基は、ＡＡＶ２カプシドの表面に曝露したリジン残基の一級アミンに共有結合していた）で修飾されたカプシドを含み、ＣＡＧプロモーターの制御下でｅＧＦＰ ｃＤＮＡを担持する組み換えＡＡＶ２ベクターである。

【0349】

「ビヒクル」は、陰性対照としての緩衝滅菌生理食塩水（ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ ｓｔｅｒｉｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ：ＢＳＳＳ）＋０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８である。

【0350】

方法
試験項目
マンノシル化ｒＡＡＶ２を、国際特許公報第２０１７２１２０１９号に以前に記載されており、図１に例示されているように作製した。簡潔に述べると、修飾されていないｒＡＡＶ２を、イソチオシアネート－リンカー－マンノース分子とトリスバッファー（ｐＨ９．３）にて混合し、２０℃で４時間インキュベートした。次に、この混合物を、緩衝滅菌生理食塩水（ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ ｓｔｅｒｉｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ：ＢＳＳＳ）＋０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８に対して透析して、ＡＡＶカプシドに結合しない遊離分子を除去した。

【0351】

試験設計
７匹のマカクに定位的外科手術を行い、定位的外科手術により右線条体に片側注射を行った。

【0352】

これら動物を、表１５のように名称１～４の４つのグループに無作為に割り当てた。

【0353】

【表15】

【0354】

術前の手法
麻酔および抗生剤および鎮痛剤療法
外科手術の前日に、感染予防のため動物にＤｕｐｈａｍｏｘを１５ｍｇ／ｋｇで皮下（ｓ．ｃ．）に提供した。

【0355】

外科手術日に、外科手術の準備の前に、各動物に、アトロピンＳＯ４を０．０４ｍｇ／ｋｇにて、筋肉内（ｉ．ｍ．）に提供した。次に、非ステロイド系抗炎症剤のＫｅｔｏｐｈｅｎを、２ｍｇ／ｋｇにて皮下（ｓ．ｃ．）に提供した。少なくとも１０分後に、最初に、各動物にケタミンＨＣｌを１０ｍｇ／ｋｇにてｉ．ｍ．で麻酔をかけた。

【0356】

次に、キシロカインクリームを麻酔性滑剤として局所的に塗布した。次に、動物に挿管し、容量を調節する人工呼吸器を介して送達されるイソフルラン吸入麻酔剤で麻酔を維持した。心拍数および酸素飽和度を、外科手術の間少なくとも３０分の間隔でモニタリングおよび記録した。外科手術の間少なくとも３０分の間隔で中核体温のモニタリングを可能にするため、温度プローブを、直腸に載置した。動物の中核体温の低下が示される際に必要な場合、動物の上部に配置される第２のパットを用いて、動物を加熱パッド上に載置した。

【0357】

外科的な準備
眼軟膏を各眼に投与した（Ｌｉｐｏｓｉｃ ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｇｅｌ）。体毛は、頭蓋、ならびに頸部および側部の頭蓋背部分から刈り取った。

【0358】

各動物は、外科手術のため定位装置に配置した。

【0359】

無菌の外科手術のため、７０％のイソプロピルアルコールのスクラブに浸したスポンジで外科的部位の領域を最初に拭き、乾燥させ、次にＤｕｒａＰｒｅｐＴＭ（または類似の溶液）を適用し、同様に乾燥させることにより、外科的部位を調製した。厳密な無菌の外科手術のため、動物に適宜布をかけた。

【0360】

外科的な手法
注射部位の位置
個々のマカクは、特定の脳内部位に関して著しく異なっているため、標準的なＨｏｒｓｌｅｙ－Ｃｌａｒｋｅの定位的な技術は、第三脳室の境界ならびに前交連および後交連の端を正確に特定するために、矢状および前頭の室造影を使用することにより改善されている。

【0361】

硬膜に損傷を与えることなく小さな開頭術を行った後、ガラスのシリンジ上に載置した室造影用のカニューレを、側脳室の前角に導入し、造影剤（Ｏｍｎｉｐａｑｕｅ， Ｎｙｃｏｍｅｄ， Ｎｏｒｗａｙ）を注射した。

【0362】

定位アトラスを、正確に調節するため頭蓋に挿入する前に使用した。前交連の正確な位置は、室造影から決定した。左および右の被殻の実際の位置は、前交連の室造影により定義される位置および基底核の定位的な集合に基づく歴史的なアトラスを組み合わせることにより定義した。次に、試験項目の送達のための注入カニューレの配置を、本明細書中以下に記載するように行った。

【0363】

試験項目の投与
開頭術の領域を、無菌性生理食塩水で清澄化した。次に、各動物に、総用量７．７ １０Ｅ１０ｖｇ／脳の試験項目に対応する、試験項目の片側注射を行った。

【0364】

注射は、前交連（ＡＣ）の被殻の中の３つのトラック：ＡＣ＋１、ＡＣ－２およびＡＣ－５ｍｍに沿って２つの異なる深度で行った。

【0365】

注射は、３μｌ／分の速度、９０μｌの動物あたりの総容量で、Ｍｉｃｒｏ－４制御器に結合した自動注射器ＵＭＰ－３（ＷＰＩ）にカップリングしたＨａｍｉｌｔｏｎ １７０１Ｎシリンジ（１００μｌ， ３０Ｇａ／５１ｍｍ／ＰＳＴ３）を使用してなされた。

【0366】

針は、各トラックの最も深い埋め込み後１分間および各トラックの第２の埋め込み後５分間所定の位置に置き、その後脳からゆっくりと引き抜いた。全ての注射が完了した後、創傷を、吸収可能な縫合材料の連続的なパターンを伴う層で閉鎖した。皮膚を適切な大きさの吸収可能な縫合材料で閉鎖し、表皮下のパターンに配置した。次に、動物を麻酔から回復させた。

【0367】

術後のモニタリング
動物の状態の確認を、１日２回（午前および午後）行った。観察者は、特に肢の運動に焦点を当て、肢の運動のクオリティの適切な評価を可能にするため果実および菓子の小片を動物に提供した。

【0368】

感染症の徴候、炎症、および全般的な完全性に関して、外科的な切開を、少なくとも１日に１回（切開が治癒するまで）観察した。

【0369】

動物を、確立されたｈｕｍａｎｅ ｅｎｄｐｏｉｎｔ ｃｒｉｔｅｒｉａにより毎日評価した。必要に応じて、適切な獣医学的支援を提供した。重篤な疼痛または苦痛の兆候を示し、恐らくは耐えている全ての動物は、適切に安楽死させた。

【0370】

ｅｘ ｖｉｖｏでの分析
安楽死および組織の処理
注射から５６日後に、動物を、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎのガイドラインにしたがいバルビツール酸の過剰投与により人道的に安楽死させ、ヘパリンを含む生理食塩水、次いで４％のパラホルムアルデヒド溶液で灌流適用した。

【0371】

包括的な剖検を行い、以下の臓器を取り出した；脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、腸間膜リンパ節、脾臓、脊髄（後根神経節に焦点を当てている）。各個体の剖検の記録を行った。

【0372】

脳を、パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ：４％）への浸漬により固定した。次に、組織を、２０％のスクロース溶液（０．１ＭのＰＢＳ中）に４℃で凍結保護し、次に凍結した。５０μｍの切片を（脳の１つ半球の冠状方向にて）、クリオスタットを使用して切断した。遊離性の切片を、凍結保護溶液に入れ、－２０℃で保存した。

【0373】

ＧＦＰ免疫組織化学的検査
ＧＦＰ免疫組織化学的検査を、実施例１に記載のように行った。

【0374】

ＧＦＡＰ－ＮｅｕＮ－ＧＦＰの二重蛍光染色
線条体、黒質、および淡蒼球の細胞のトロピズムを、ＧＦＰおよびニューロンマーカー（ＮｅｕＮ）、アストログリアのマーカー（ＧＦＡＰ／Ｓ１００）、オリゴデンドログリアのマーカー（Ｏｌｉｇ２）、またはミクログリア（Ｉｂａ１）のマーカーでの二重免疫染色を使用して定義した。

【0375】

ＧＦＰおよびＮｅｕＮ／ＧＦＡＰ／Ｏｌｉｇ２／Ｉｂａ１の免疫組織化学的検査を、動物あたり目的の構造あたり１つの切片上でまとめて行った。

【0376】

ＰＢＳで徹底的にすすいだ後、非特異的な標識を、２％のＢＳＡ、０．３％のｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、および０．０１％のチメロサールを含むＰＢＳで抗原部位を３０分間ブロッキングすることにより妨げた。

【0377】

次に、切片を、０．２％のＢＳＡ、０．３％のｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、および０．０１％のチメロサールを含むＰＢＳにおいて一次抗体混合物（抗－Ｉｂａ１ Ａｂｃａｍ ａｂ５０７６ １／１０００；抗－ＧＦＡＰ－Ｓ１０ Ｄａｋｏ Ｚ０３３４－Ｚ０３１１、１／１０００および１／２０００；抗－Ｏｌｉｇ２ ＥＰＲ２６７６ Ａｂｃａｍ， １／１００；抗－ＮｅｕＮ ＭＡＢ３７７ Ｍｅｒｃｋ， １／５００）にて、室温で一晩インキュベートした。

【0378】

翌日、切片をＰＢＳですすぎ、ＰＢＳで１：５００に希釈したＤｙｌｉｇｈｔ（登録商標）４８８フルオロフォアとコンジュゲートした抗体と、３０分間インキュベートした。

【0379】

各ステップの間にＰＢＳで徹底的にすすいだ後、１つの抗体を、ポリマー－ＨＲＰ－抗ウサギ（Ｄａｋｏ ＥｎＶｉｓｉｏｎ＋（商標）Ｋｉｔ， Ｋ４０１１）で３０分間顕色させ、次に、ＰＢＳで１：１０００に希釈したＤｙｌｉｇｈｔ（登録商標）５４９フルオロフォアとコンジュゲートした抗ＨＲＰ抗体と３０分間インキュベートした。

【0380】

ＰＢＳで徹底的にすすいだ後、核のＨｏｅｃｈｓｔ染色を、切片上で３０秒間行い（１：５０００に希釈したＨｏｅｃｈｓｔ溶液）、いくつかのＰＢＳウォッシュで停止させた。

【0381】

次に、切片を、ゼラチンでコーティングしたスライド上に置き、水系のＦｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ（商標）封入剤でカバーを覆い、分析まで４℃で保存した。

【0382】

ＣＣＤカメラ（Ｈａｍａｍａｔｓｕ ＯＲＣＡ Ｆｌａｓｈ ４．０ＬＴ）とカップリングしたオリンパスの落射蛍光顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ ＢＸ６３）上にて、全ての切片の中の同じ曝露パラメータでの両染色に関する蛍光画像を得た。３つの視野を、各領域および切片で４０倍の倍率で獲得した。１６バイトのイメージファイルを保存し、ＩｍａｇｅＪソフトウェアで処理した。

【0383】

病理組織診断
脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、腸間膜リンパ節、脾臓、脊髄（後根神経節に焦点を当てている）の顕微鏡分析に加え、これら組織を病理組織診断分析に供した。臓器／組織をサンプリングし、パラフィン包埋のためカセットに置いた。臓器あたり３つのブロックを調製し、ブロックあたり少なくとも４つの切片を試験した。

【0384】

結果
線条体におけるＧＦＰ染色
Ｇ２、Ｇ３、およびＧ４のグループに由来するマカクの代表的な免疫組織化学的に染色した線条体切片を、それぞれ図１４Ａ、図１４Ｂ、および図１４Ｃに示す。

【0385】

黒質におけるＧＦＰ染色
Ｇ２、Ｇ３、およびＧ４のグループに由来するマカクの代表的な免疫組織化学的に染色した黒質の切片を、それぞれ図１５Ａ、図１５Ｂ、および図１５Ｃに示す。

【0386】

線条体内注射から５６日後の線条体および黒質におけるＧＦＰ形質導入のパーセンテージを、それぞれ図１６Ａおよび図１６Ｂに示す。

【0387】

細胞のトロピズム
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、およびＧ４のグループに由来するマカクの淡蒼球外節（ＧＰｅ）および淡蒼球内節（ＧＰｉ）の切片を、
Ｉｂａ１およびＧＦＰ
ＧＦＡＰ／Ｓ１００およびＧＦＰ
Ｏｌｉｇ２およびＧＦＰ
ＮｅｕＮおよびＧＦＰ
で免疫蛍光にて同時染色した。

【0388】

Ｉｂａｌ１抗体は、ミクログリアの染色を可能にし、ＮｅｕＮ抗体は神経細胞の染色を可能にし、ＧＦＡＰ／Ｓ１００抗体は、アストログリア細胞の染色を可能にし、Ｏｌｉｇ２抗体は、オリゴデンドログリア細胞の染色を可能にする。

【0389】

結論
７匹のマカクザルをこの試験に使用し、４つのグループに割り当てた。ベクターまたはビヒクルを、線条体の被殻部分の中に投与した。ベクターマンノースＡＡＶ２－ＧＦＰは、線条体の８０％超および黒質の６０％超に形質導入し、修飾されていないＡＡＶ２－ＧＦＰおよびＡＡＶ５－ＧＦＰの両方のみが、線条体の５０％および黒質の４０％未満を達成した。

【0390】

病理組織診断は、後根神経節（ＤＲＧ）を含む主要な臓器においていずれの毒性の徴候も示さなかった。

【0391】

二重蛍光染色を、一方の（形質導入の指標）上のＧＦＰならびに表現型の細胞マーカー（ニューロンではＮｅｕＮ、アストロサイトではＧＦＡＰ－Ｓ１００、オリゴデンドロサイトではＯｌｉｇ２、およびミクログリア細胞ではＩｂａ１）で行った。

【0392】

線条体では、３つ全てのベクターがｍｓニューロンで発現したが、明らかなＧＦＰ発現は、アストロサイト、オリゴデンドロサイト、またはミクログリア細胞で検出されなかった（データ不図示）。

【0393】

黒質では、３つ全てのベクターが明確な繊維状のパターンを伴い末端で発現したが、ＧＦＰの細胞体発現を示さず（データ不図示）、すなわち明確なＧＦＰ発現は、黒質のニューロン、アストロサイト、オリゴデンドロサイト、またはミクログリア細胞で検出されなかった。黒質の中に存在するこれら線維は、十中八九、線条体から黒質へ突出するｍｓニューロンのＧＡＢＡ作動性の突起である（黒質の線条体、線維のニューロンの細胞質染色）。

【0394】

淡蒼球複合体は、ＧＰｅおよびＧＰｉに分けられ得る。ＧＰｅは、（細胞の種類が何であっても）細胞同時染色を伴わず巨大なＧＦＰ陽性線維ネットワークにより交差するように見えるが、ＧＰｉは、線条体ニューロンと一致する美しい線維ネットワークに加えて、３つのベクターによる何らかのニューロンの形質導入を提示し得る。

【0395】

まとめると、これら結果は、マンノースＡＡＶ２－ＧＦＰが他の２つのベクターより著しく優れた高い効率で線条体のｍｓニューロンに形質導入したことを示している。分析した脳領域における細胞のトロピズムは、３つのベクター間で比較可能であった。

【0396】

観察された形質導入パターンは、マンノース－ＡＡＶ２－ＧＦＰが、線条体および黒質を標的とする遺伝子療法にとって最も関心のある治療用プロファイルを保持していることを示唆している。

【0397】

今日まで、ヒトで試験した神経障害に関する全ての遺伝子療法の手法は、主に、標的部位および／または罹患レベルでの固体の発現の欠如により、臨床的に有意性に達してはいない。

【0398】

驚くべきことに本発明者らは、これらの修飾されたＡＡＶベクターが、線条体、視床、黒質、頭頂皮質、海馬、および淡蒼球を含む脳の特定の領域に有効に形質導入できることを示している。よって、これら修飾されたＡＡＶベクターは、これら領域の標的化、および／またはこれら領域に影響する疾患の処置にとって、非常に興味がもたれている。

【図1】

【図2A-2B】

【図2C】

【図3】

【図4A-4B】

【図4C】

【図5】

【図6A-6B】

【図6C】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11-1】

【図11-2】

【図12-1】

【図12-2】

【図13-1】

【図13-2】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17-1】

【図17-2】

【国際調査報告】