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特表2023-522053アフリカ豚熱病ワクチン組成物

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-05-26

(54)【発明の名称】アフリカ豚熱病ワクチン組成物

(51)【国際特許分類】

C12N 15/34 20060101AFI20230519BHJP

C12N 15/85 20060101ALI20230519BHJP

C07K 14/01 20060101ALI20230519BHJP

A61P 31/20 20060101ALI20230519BHJP

A61P 37/04 20060101ALI20230519BHJP

A61K 39/12 20060101ALI20230519BHJP

A61K 47/62 20170101ALI20230519BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20230519BHJP

A61K 48/00 20060101ALI20230519BHJP

A61K 39/385 20060101ALI20230519BHJP

【ＦＩ】

C12N15/34 ZNA

C12N15/85 Z

C07K14/01

A61P31/20

A61P37/04

A61K39/12

A61K47/62

A61P43/00 123

A61K48/00

A61K39/385

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022562972

(86)(22)【出願日】2021-04-14

(85)【翻訳文提出日】2022-12-14

(86)【国際出願番号】 KR2021004724

(87)【国際公開番号】W WO2021210924

(87)【国際公開日】2021-10-21

(31)【優先権主張番号】10-2020-0045271

(32)【優先日】2020-04-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522403767

【氏名又は名称】プラムライン・ライフ・サイエンシーズ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＰＬＵＭＢＬＩＮＥＬＩＦＥＳＣＩＥＮＣＥＳ，ＩＮＣ．

【住所又は居所原語表記】４Ｆ，１８，ＳＥＯＣＨＯ‐ＤＡＥＲＯ３４‐ＧＩＬ，ＳＥＯＣＨＯ‐ＧＵ，ＳＥＯＵＬ０６６６１，ＲＥＰＵＢＬＩＣＯＦＫＯＲＥＡ

(74)【代理人】

【識別番号】110001818

【氏名又は名称】弁理士法人Ｒ＆Ｃ

(72)【発明者】

【氏名】キム，ウン・ジン

(72)【発明者】

【氏名】ウム，テ‐ギ

(72)【発明者】

【氏名】ソン，キョン‐ジュ

(72)【発明者】

【氏名】キム，ミン‐ジ

(72)【発明者】

【氏名】ユク，グン‐ヨン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076BB34

4C076BB40

4C076CC07

4C076CC35

4C076CC41

4C076CC42

4C076EE59

4C084AA13

4C084MA65

4C084NA14

4C084NA15

4C084ZB021

4C084ZB051

4C084ZB091

4C084ZB331

4C084ZC611

4C085AA03

4C085BA51

4C085BB11

4C085BB35

4C085CC07

4C085CC08

4C085CC31

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG10

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA01

4H045DA86

4H045EA05

4H045EA31

(57)【要約】

【要約書】
本発明は、アフリカ豚熱病に対する免疫反応生成に関与するポリペプチド、ポリヌクレオチド、プラスミドおよびこれらを含有するワクチン組成物に関する。また、本発明は、個体からアフリカ豚熱病に対する免疫反応を生成する方法に関する。また、本発明は、アフリカ豚熱病に対する免疫反応生成に関与するポリペプチド、ポリヌクレオチド、プラスミドおよびこれらを含有するアフリカ豚熱病治療または予防用薬学組成物に関する。また、本発明は、個体からアフリカ豚熱病を予防または治療する方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アフリカ豚熱病ウイルスの遺伝子ｐ３０、ｐ５４、Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ、ＣＤ２ｖ、ｐ４９、ｐｐ６２、ＥＰ３６４Ｒ、Ｆ３１７Ｌ、Ａ１０４ＲおよびＫ２０５Ｒのうち１つ以上のアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。

【請求項2】

配列番号１ないし１０のアミノ酸配列、またはこれと９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列のうち１つ以上を含む、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項3】

Ｋｏｚａｋ配列、ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列およびフーリン切断部位（Ｆｕｒｉｎｃｌｅａｖａｇｅｓｉｔｅ）配列のうち１つ以上をさらに含む、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項4】

配列番号４１のアミノ酸配列をさらに含む、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項5】

配列番号４３のアミノ酸配列をさらに含む、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項6】

アフリカ豚熱病ウイルスの遺伝子ｐ３０、ｐ５４、Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ、ＣＤ２ｖ、ｐ４９、ｐｐ６２、ＥＰ３６４Ｒ、Ｆ３１７Ｌ、Ａ１０４ＲおよびＫ２０５Ｒのうち１つ以上の塩基配列を含む、ポリヌクレオチド。

【請求項7】

配列番号１ないし１０のアミノ酸配列、またはこれと９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列をコーディングする塩基配列、または配列番号１１ないし２０の塩基配列、またはこれと９０％以上の相同性を有する塩基配列を含む、請求項６に記載のポリヌクレオチド。

【請求項8】

Ｋｏｚａｋ配列、ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列および切断部位（ｃｌｅａｖａｇｅｓｉｔｅ）配列のうち１つ以上をさらに含む、請求項６に記載のポリヌクレオチド。

【請求項9】

配列番号４２の塩基配列をさらに含む、請求項６に記載のポリヌクレオチド。

【請求項10】

配列番号４４の塩基配列をさらに含む、請求項６に記載のポリヌクレオチド。

【請求項11】

請求項６に記載のポリヌクレオチドを含む、プラスミド。

【請求項12】

配列番号３１ないし４０、および配列番号５０ないし５４の塩基配列のうちいずれか１つを含む、請求項１１に記載のプラスミド。

【請求項13】

請求項１ないし請求項５のうちいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項６ないし請求項１０のうちいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、または請求項１１および請求項１２のうちいずれか１項に記載のプラスミドを含む、アフリカ豚熱病ワクチン組成物。

【請求項14】

請求項１３に記載のワクチン組成物をヒトを除いた動物に投与するステップを含む、前記動物からアフリカ豚熱病ウイルスに対する免疫反応を生成する方法。

【請求項15】

前記投与は、電気穿孔（ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ）による投与であることを特徴とする、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

請求項１３に記載のワクチン組成物をヒトを除いた動物に投与するステップを含む、アフリカ豚熱病を治療または予防する方法。

【請求項17】

前記投与は、電気穿孔（ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ）による投与であることを特徴とする、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

請求項１ないし請求項５のうちいずれか１項に記載のポリペプチド、請求項６ないし請求項１０のうちいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、または請求項１１および請求項１２のうちいずれか１項に記載のプラスミドを含む、アフリカ豚熱病治療または予防用薬学組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、アフリカ豚熱病に対する免疫反応生成に関与するポリペプチド、ポリヌクレオチド、プラスミドおよびこれらを含有するワクチン組成物に関する。また、本発明は、個体からアフリカ豚熱病に対する免疫反応を生成する方法に関する。また、本発明は、アフリカ豚熱病に対する免疫反応生成に関与するポリペプチド、ポリヌクレオチド、プラスミドおよびこれらを含有するアフリカ豚熱病治療または予防用薬学組成物に関する。また、本発明は、個体からアフリカ豚熱病を予防または治療する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

アフリカ豚熱病（ＡｆｒｉｃａｎＳｗｉｎｅＦｅｖｅｒ、ＡＳＦ）は、致命的なウイルス性出血性豚伝染病であって、一度発症すれば、伝染性が非常に高く、治療法がなく、感染した豚は、大部分へい死する致死率が非常に高いため、養豚産業に莫大な被害を与える疾病である。したがって、アフリカ豚熱病が発生すると、世界動物保健機構（ＯＩＥ）に発生事実を直ちに報告しなければならず、豚と関連した国際交易も直ちに中断される。アフリカ豚熱病は、世界動物保健機構（ＯＩＥ）で非常に重要な疾病として分類されており、韓国では、家畜伝染病予防法上、第１種法定伝染病として指定して管理している。

【0003】

アフリカ豚熱病ウイルス（ＡＳＦＶ）は、アスファウイルス科（Ａｓｆａｒｖｉｒｉｄａｅ）アスフィウイルス属（Ａｓｆｉｖｉｒｕｓ）に属する約２００ｎｍ程度のＤＮＡウイルスである。アフリカ豚熱病ウイルスは、ヒトや他の動物に感染せず、ブタ科（Ｓｕｉｄａｅ）に属する動物にのみ感染すると報告されている。

【0004】

感染した動物から出た唾液、呼吸器分泌物、尿、糞便などには、アフリカ豚熱病ウイルスが大量存在し、このような物質に接触した正常動物にアフリカ豚熱病が伝播される。豚が死んだ後にも、血液と組職にウイルスが存続する可能性があるため、感染した動物の組職を含んでいる熱処理していない残飯を豚に給与すれば、急速に伝播する可能性がある。または、豚同士に戦っている間に流した血、血液の混ざった下痢などによってウイルスが伝播する可能性もある。あるいは、Ｏｒｎｉｔｈｏｄｏｒｏｓｓｐｐ．に属するヒメダニ（ｓｏｆｔｔｉｃｋ）、蚊、噛む蠅のような吸血昆虫などがアフリカ豚熱病ウイルスを保菌している途中、豚を噛むか、または吸血する際に疾病を伝播する役目をする媒介体として作用することもある。

【0005】

アフリカ豚熱病は、すべての年齢の豚が感染し得る。罹病率は、感染したウイルスと露出経路によって異なり、自然感染の際に、潜伏期は４日から１９日まで多様である。へい死率は、高病原性ウイルスに感染した場合、ほぼ１００％へい死される。

【0006】

アフリカ豚熱病ウイルスは、病原性によって高病原性、中病原性および低病原性で分類されることができる。高病原性アフリカ豚熱病ウイルスは、通常、甚急性（感染１～４日後に豚が死ぬ）および急性型（感染３～８日後に豚が死ぬ）疾病を起こし、中病原性アフリカ豚熱病ウイルスは、急性（感染１１～１５日後に豚が死ぬ）および亜急性型（感染２０日後に豚が死ぬ）疾病を起こす。低病原性アフリカ豚熱病ウイルスは、風土病化された地域でのみ報告されており、準臨床型または慢性型疾病を起こす。

【0007】

アフリカ豚熱病は、発生初期に、特に、罹患された豚の数が少ないときには疾患の診断が容易でない。その理由は、アフリカ豚熱病の臨床症状は、肺血証性サルモネラ症（Ｓｅｐｔｉｃａｅｍｉｃｓａｌｍｏｎｅｌｌｏｓｉｓ）、豚皮膚炎腎症症候群（ｐｏｒｃｉｎｅｄｅｒｍａｔｉｔｉｓｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙｓｙｎｄｒｏｍｅ、ＰＤＮＳ）など他の出血性豚疾病と混同されるためである。血液および内部臓器からウイルスを検出する方法、感染豚の血清から抗体を検出する方法など、実験室的診断を通じてのみ正確な区別が可能であり、アフリカ豚熱病と診断される場合には、すでに疾病が広く伝染している場合が多い。例えば、中国では、２０１８年にアフリカ豚熱病が最初に確認された以来、９ヶ月が足らずの期間に中国の全行政区域でアフリカ豚熱病が発生するほどアフリカ豚熱病の伝染力は非常に高い。また、世界最大の養豚国家である中国でアフリカ豚熱病により２０１９年に約１億３千万匹の豚がへい死されるか殺処分され、これは、アフリカ豚熱病の発生前に４億３千匹の豚から約１／３ほどが減少されたことを意味する。

【0008】

アフリカ豚熱病ワクチンの研究は、１９６０年代以降、弛まず進行されている。弱毒化生ワクチン、不活化ワクチン、組換えタンパク質ワクチン、ウイルスベクターワクチンなど現在まで多様な試みがなされているが、商業的に適用できるほど効果の優れたワクチンは開発されていない実情である。最近、不活化ワクチン（ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｖａｃｃｉｎｅ）を接種して中和抗体が形成されても、実際の攻撃接種（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）の際には防御効果がないか、または微々たるものという研究結果が発表されたことがあり、これを通じて中和抗体を生成すること以外に細胞性免疫反応を誘導することがワクチンのウイルスに対する防御能を進めるのに重要なメカニズムであることが分かる（Ｔａｋａｍａｔｓｕｅｔａｌ．、ＶｉｒｕｓＲｅｓ．２０１３Ａｐｒ、１７３（１）：１１０－２１．）。

【0009】

また、豚に致命的なアフリカ豚熱病に効果的なワクチンを開発し難い理由のうち１つは、大きくて複雑なアフリカ豚熱病ウイルスの特性のためである。一般的なウイルスが１０～１２個のタンパク質を有していると、アフリカ豚熱病ウイルスは１５０個以上のタンパク質を有しており、ウイルス種類（２４種遺伝型）も多様である。したがって、専門家らは、今後、最小限１０年以内には、ワクチンの商用化が難しいと見なしていた。

【0010】

したがって、アフリカ豚熱病に対するワクチンまたは治療剤が切実に求められる。特に、アフリカ豚熱病は、安定的且つ効果的に予め予防することが重要であり、このための新規ワクチンの未充足需要が非常に大きい。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0011】

【非特許文献1】Ｔａｋａｍａｔｓｕｅｔａｌ．、ＶｉｒｕｓＲｅｓ．２０１３Ａｐｒ、１７３（１）：１１０－２１

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0012】

本発明の一の目的は、アフリカ豚熱病に対する免疫反応を生成することができるポリペプチドおよびこれをコーディングするポリヌクレオチドを提供することである。

【0013】

本発明の他の目的は、アフリカ豚熱病に対する免疫反応を生成することができるプラスミドを提供することである。

【0014】

本発明のまた他の目的は、アフリカ豚熱病に対するワクチン組成物を提供することである。

【0015】

本発明のまた他の目的は、個体からアフリカ豚熱病に対する免疫反応を生成する方法を提供することである。

【0016】

本発明のまた他の目的は、個体からアフリカ豚熱病治療または予防用薬学組成物を提供することである。

【0017】

本発明のまた他の目的は、個体からアフリカ豚熱病を治療または予防する方法を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0018】

前記目的を達成するために、本発明の一様態は、アフリカ豚熱病ウイルスの遺伝子ｐ３０、ｐ５４、Ｃ－タイプレクチン（Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ）、ＣＤ２ｖ、ｐ４９、ｐｐ６２、ＥＰ３６４Ｒ、Ｆ３１７Ｌ、Ａ１０４ＲおよびＫ２０５Ｒのうち１つ以上のアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。

【0019】

本発明のまた他の一様態は、配列番号１ないし１０のアミノ酸配列、またはこれと９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列のうち１つ以上を含むポリペプチドを提供する。

【0020】

本明細書において使用される「相同性」なる用語は、与えられたポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列と一致する程度を意味し、百分率で表示され得る。本明細書において、与えられたポリペプチド配列と同一または類似した活性を有する、その相同性配列が“％相同性”で表示される。前記相同性は、例えば、点数（ｓｃｏｒｅ）、同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）および類似度（ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ）などのパラメータ（ｐａｒａｍｅｔｅｒ）を計算する標準ソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ２．０を用いるか、または正義された厳格な条件下で使用した混成化実験によって配列を比較することで確認することができ、正義される適切な混成化条件は、当業者に周知の方法で決定されることができる。

【0021】

配列番号１ないし１０のアミノ酸配列は、順にそれぞれ、アフリカ豚熱病ウイルスの多様な菌株から遺伝子ｐ３０（ＣＰ２０４Ｌ）、ｐ５４（Ｅ１８３Ｌ）、Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ（ＥＰ１５３Ｒ）、ＣＤ２ｖ（ＥＰ４０２Ｒ）、ｐ４９（Ｂ４３８Ｌ）、ｐｐ６２（ＣＰ５３０Ｒ）、ＥＰ３６４Ｒ、Ｆ３１７Ｌ、Ａ１０４Ｒ、Ｋ２０５Ｒの配列相同性を比べて導き出したコンセンサス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）配列である。

【0022】

前記配列番号１ないし１０のアミノ酸配列、またはこれと９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列のうち１つ以上を含むポリペプチドは、アフリカ豚熱病に対する免疫反応を生成することができる抗原として効果的に作用することができる。

【0023】

前記ポリペプチドは、前記アミノ酸配列のうち１つを含んでもよく、２つ以上を含んでもよい。また、前記ポリペプチドは、コザック（Ｋｏｚａｋ）配列、ＩｇＥリーダ（ＩｇＥｌｅａｄｅｒ）配列、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列および／または切断部位（ｃｌｅａｖａｇｅｓｉｔｅ）配列をさらに含んでもよい。例えば、前記ポリペプチドは、Ｋｏｚａｋ配列－ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列－配列番号１のアミノ酸配列で構成されることができる。また別の例として、前記ポリペプチドは、Ｋｏｚａｋ配列－ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列－ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列－配列番号１のアミノ酸配列で構成されることができる。また別の例として、前記ポリペプチドは、Ｋｏｚａｋ配列－ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列－ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列－配列番号１のアミノ酸配列－切断部位（ｃｌｅａｖａｇｅｓｉｔｅ）配列－配列番号２のアミノ酸配列で構成されることができる。前記ユビキチン配列は、好ましくは、配列番号４１であってもよく、前記切断部位配列は、好ましくは、配列番号４３であってもよい。

【0024】

本発明の一様態は、アフリカ豚熱病ウイルスの遺伝子ｐ３０、ｐ５４、Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ、ＣＤ２ｖ、ｐ４９、ｐｐ６２、ＥＰ３６４Ｒ、Ｆ３１７Ｌ、Ａ１０４ＲおよびＫ２０５Ｒのうち１つ以上の塩基配列を含むポリヌクレオチドを提供する。

【0025】

本発明のまた他の一様態は、配列番号１１ないし２０の塩基配列、またはこれと９０％以上の相同性を有する塩基配列のうち１つ以上を含むポリヌクレオチドを提供する。

【0026】

または、本発明のまた他の様態は、配列番号１ないし１０のアミノ酸配列、またはこれと９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列のうち１つ以上をコーディングするポリヌクレオチドを提供する。前記配列番号１ないし１０のアミノ酸配列をコーディングするポリヌクレオチドは、それぞれ配列番号１１ないし２０の塩基配列であってもよい。

【0027】

配列番号１１ないし２０の塩基配列は、順にそれぞれ、アフリカ豚熱病ウイルスの多様な菌株から遺伝子ｐ３０（ＣＰ２０４Ｌ）、ｐ５４（Ｅ１８３Ｌ）、Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ（ＥＰ１５３Ｒ）、ＣＤ２ｖ（ＥＰ４０２Ｒ）、ｐ４９（Ｂ４３８Ｌ）、ｐｐ６２（ＣＰ５３０Ｒ）、ＥＰ３６４Ｒ、Ｆ３１７Ｌ、Ａ１０４Ｒ、Ｋ２０５Ｒの配列相同性を比較して導き出したコンセンサス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）配列である。

【0028】

また別には、前記ポリヌクレオチドは、配列番号１ないし１０のアミノ酸配列、または配列番号１１ないし２０の塩基配列が免疫反応を生成しようとする対象体に最適化されたコドンに変更されたものであり得る。前記対象体は、例えば、動物である。前記動物は、例えば、豚、牛、馬、羊、ヤギ、鹿、ヒトなどを含む哺乳類動物であってもよい。好ましくは、前記動物は、豚である。

【0029】

前記ポリヌクレオチドは、前記塩基配列のうち１つを含むこともでき、２つ以上を含んでもよい。また、前記ポリヌクレオチドは、Ｋｏｚａｋ配列、ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列および／または切断部位（ｃｌｅａｖａｇｅｓｉｔｅ）配列をさらに含んでもよい。例えば、前記ポリヌクレオチドは、Ｋｏｚａｋ配列－ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列－配列番号１１の塩基配列で構成されることができる。また別の例として、前記ポリヌクレオチドは、Ｋｏｚａｋ配列－ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列－ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列－配列番号１１の塩基配列で構成されることができる。また別の例として、前記ポリヌクレオチドは、Ｋｏｚａｋ配列－ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列－ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列－配列番号１１の塩基配列－切断部位（ｃｌｅａｖａｇｅｓｉｔｅ）配列－配列番号１２の塩基配列で構成されることができる。前記ユビキチン配列は、好ましくは、配列番号４２であってもよく、前記切断部位配列は、好ましくは、配列番号４４であってもよい。

【0030】

本発明の一様態は、アフリカ豚熱病ウイルスの遺伝子ｐ３０、ｐ５４、Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ、ＣＤ２ｖ、ｐ４９、ｐｐ６２、ＥＰ３６４Ｒ、Ｆ３１７Ｌ、Ａ１０４ＲおよびＫ２０５Ｒのうち１つ以上の塩基配列を含むポリヌクレオチドを含むプラスミドを提供する。

【0031】

本発明のまた他の一様態は、配列番号１１ないし２０の塩基配列、またはこれと９０％以上の相同性を有する塩基配列のうち１つ以上を含むポリヌクレオチドを含むプラスミドを提供する。

【0032】

本発明のまた他の様態は、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１の配列と９０％の相同性を有するアミノ酸配列のうち１つ以上をコーディングするポリヌクレオチドを含むプラスミドを提供する。

【0033】

本明細書において使用される「プラスミド」なる用語は、好適な宿主または対象体内でＤＮＡを発現させることができる好適な調節配列に作動可能に連結されたＤＮＡ配列を含有するＤＮＡ製造物を意味する。前記プラスミドは、ベクター、把持粒子、または簡単に、潜在的ゲノム挿入物であってもよい。本明細書において、プラスミドはベクター（またはウイルスベクター）と相互交換的に使用されることができる。

【0034】

前記プラスミドは、当業界に周知の通常の方法によって製造されることができる。例えば、遺伝子クローニングを通じて前記ポリヌクレオチドをプラスミドベクターに挿入して、本発明によるプラスミドを製造してＤＮＡワクチンとして使用することができる。

【0035】

前記プラスミドは、前記ポリヌクレオチドのうち１つを含んでもよく、２つ以上を含んでもよい。また、前記ポリヌクレオチドは、Ｋｏｚａｋ配列、ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列および／または切断部位（ｃｌｅａｖａｇｅｓｉｔｅ）配列をさらに含んでもよい。

【0036】

例えば、前記プラスミドは、配列番号３１の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号３１は、配列番号１１ないし２０の塩基配列が順に連結されたものである。また別の例として、前記プラスミドは、配列番号３６の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号３６は、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列と配列番号１１ないし２０の塩基配列が順に連結されたものである。また別の例を挙げると、前記プラスミドは、配列番号５０の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号５０は、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列と配列番号１１ないし２０の塩基配列が順に連結されたものであって、前記配列番号１１ないし２０の塩基配列それぞれは、切断部位（ｃｌｅａｖａｇｅｓｉｔｅ）配列で順に連結されたものである。

【0037】

前記ユビキチン配列は、好ましくは、配列番号４２の塩基配列であってもよい。ＣＤ８^＋Ｔ細胞は、サイトゾル（ｃｙｔｏｓｏｌ）に位置した腫瘍遺伝子生成物またはウイルス抗原のような内因性抗原（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓａｎｔｉｇｅｎ）から誘導されたＭＨＣクラスＩ関連ペプチド（ＭＨＣｃｌａｓｓＩ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ）を認識する。このようなＭＨＣクラスＩ分子が抗原提示（ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）する前に、抗原は、ユビキチン化（ｕｂｉｑｕｉｔｉｏｎａｔｉｏｎ）され、プロテアソーム（ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ）により抗原性ペプチドで処理される。したがって、ユビキチン融合タンパク質（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｆｕｓｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ）は、プロテアソーム依存性分解経路（ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙ）に入り、ＭＨＣクラスＩペプチド提示能力を向上して、細胞性免疫反応（ＣＴＬ、ＣｙｔｏｔｏｘｉｃＴＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅｒｅｓｐｏｎｓｅ）の誘導を増加させることができる。

【0038】

前記切断部位配列は、好ましくは、配列番号４４の塩基配列であってもよい。前記切断部位（ｃｌｅａｖａｇｅｓｉｔｅ）は、プロテアーゼ（ｐｒｏｔｅａｓｅ）によって認識されて切断するペプチドを意味する。本発明においては、前記ポリヌクレオチドを含むプラスミドから発現されたポリペプチドが分解酵素によって切断され得るようにし、これを通じて切断されたそれぞれのポリペプチドがアフリカ豚熱病に対する免疫反応を生成することができる抗原として効果的に作用することができるようにする。前記切断部位は、細胞内に存在する内因性酵素によって切断され得、具体的にフーリンプロテアーゼ（ｆｕｒｉｎｅｐｒｏｔｅａｓｅ）によって切断され得るが、ここに制限されるものではない。

【0039】

また別の例として、前記プラスミドは、配列番号３２の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号３２は、配列番号１１ないし１４の塩基配列が順に連結されたものである。または、前記プラスミドは、配列番号３７の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号３７は、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列と配列番号１１ないし１４の塩基配列が順に連結されたものである。

【0040】

また別の例として、前記プラスミドは、配列番号３３の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号３３は、配列番号１５ないし２０の塩基配列が順に連結されたものである。または、前記プラスミドは、配列番号３８の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号３８は、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列と配列番号１５ないし２０の塩基配列が順に連結されたものである。

【0041】

また別の例として、前記プラスミドは、配列番号３４の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号３４は、配列番号１１、１２、１６、１３および１４の塩基配列が順に連結されたものである。または、前記プラスミドは、配列番号３９の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号３９は、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列と配列番号１１、１２、１６、１３および１４の塩基配列が順に連結されたものである。

【0042】

また別の例として、前記プラスミドは、配列番号３５の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号３５は、配列番号１５、１７、１８、１９および２０の塩基配列が順に連結されたものである。または、前記プラスミドは、配列番号４０の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号４０は、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列と配列番号１５、１７、１８、１９および２０の塩基配列が順に連結されたものである。

【0043】

また別の例として、前記プラスミドは、配列番号５０の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号５０は、配列番号４２のユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列；および配列番号４４の切断部位配列を含む、配列番号１１、４４、１２、４４、１３、４４、１４、４４、１５、４４、１６、４４、１７、４４、１８、４４、１９、４４、２０の塩基配列が順に連結されたものである。

【0044】

また別の例として、前記プラスミドは、配列番号５１の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号５１は、配列番号４２のユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列；および配列番号４４の切断部位配列を含む、配列番号１１、４４、１２、４４、１３、４４、１４の塩基配列が順に連結されたものである。

【0045】

また別の例として、前記プラスミドは、配列番号５２の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号５２は、配列番号４２のユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列；および配列番号４４の切断部位配列を含む、配列番号１５、４４、１６、４４、１７、４４、１８、４４、１９、４４、２０の塩基配列が順に連結されたものである。

【0046】

また別の例として、前記プラスミドは、配列番号５３の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号５３は、配列番号４２のユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列；および配列番号４４の切断部位配列を含む、配列番号１１、４４、１２、４４、１６、４４、１３、４４、１４の塩基配列が順に連結されたものである。

【0047】

また別の例として、前記プラスミドは、配列番号５４の塩基配列を含んでもよく、ここで、配列番号５４は、配列番号４２のユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列；および配列番号４４の切断部位配列を含む、配列番号１５、４４、１７、４４、１８、４４、１９、４４、２０の塩基配列が順に連結されたものである。

【0048】

本発明のまた他の様態は、本発明のポリペプチド、本発明のポリヌクレオチド、または本発明のプラスミドを含むアフリカ豚熱病ワクチン組成物を提供する。

【0049】

前記アフリカ豚熱病ワクチン組成物で前記ポリペプチド、前記ポリヌクレオチド、前記プラスミドは、別に言及しない限り、上記のとおりである。

【0050】

「ワクチン」なる用語は、個体に免疫を与える抗原を含有した生物学的な製剤であって、疾患予防のためにヒトや動物に投与、例えば、注射するか経口投与することで免疫が生じるようにする免疫原性または抗原性物質を言う。

【0051】

前記ワクチンは、ＤＮＡワクチンであってもよい。「ＤＮＡワクチン」なる用語は、病源菌やウイルスなどの遺伝子のうち一部を人工的に複製した後、これを投与することで免疫反応を引き起こすワクチンを意味する。このようなＤＮＡワクチンは、既存のタンパク質ワクチンに比べて多様な長所を持つ：ｉ）純粋な標的病原体抗原の遺伝情報のみで合成作製が可能であるため危険な病原体を直接取り扱う必要がなく、ｉｉ）毒性誘発に必要な遺伝子らのうち一部のみを使用するので、投与体に投与されても別に毒性を表す恐れがなく、ｉｉｉ）プラスミドＤＮＡのみから構成される単純さのため急に発生する多様な感染病に対して速かに対応してワクチンを開発することが可能である。

【0052】

前記アフリカ豚熱病ワクチン組成物は、好ましくは、アフリカ豚熱病ウイルスに対する防御免疫能を有するものであってもよい。

【0053】

本発明のワクチン組成物は、獣医学的に許容可能な担体を含んでもよい。「獣医学的に許容可能な担体」なる用語は、任意のおよびすべての溶媒、分散媒質、コーティング剤、抗原補強剤、安定剤、希薄剤、保存剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張性作用剤、吸着遅延剤などを含む。ワクチン組成物に含まれ得る担体、賦形剤、希薄剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、マルチトール、澱粉、グリセリン、アカシアゴム、アルジネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、未晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレートおよび鉱物油が挙げられる。また、本発明のワクチン用組成物は、それぞれ通常の方法によって酸剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口型剤形および滅菌注射溶液の形態に剤形化して使用されてもよい。製剤化する場合には、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希薄剤または賦形剤を使用して調剤してもよい。好ましくは、Ｐｏｌｙ－Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｃａｃｉｄを使用して安定化に助けることができる。

【0054】

前記ワクチン組成物は、多様な形態で個体に注入されることができる。「注入」は、皮下注射、筋肉内注射、皮下内注射、腹膜内注射、鼻腔投与、口腔投与、経皮投与および経口投与から構成された群より選択されたいずれか１つの方法で遂行されることができる。

【0055】

前記ワクチン組成物は、免疫反応を改善または強化させるために、１つ以上の補助剤などを含んでもよい。適切な補助剤には、ペプチド、アルミニウムヒドロキシド、アルミニウムフォスフェート、アルミニウムオキサイドおよびＭａｒｃｏｌ５２のようなミネラルオイルまたは植物性オイルおよび１つ以上の乳化剤から構成された組成物またはリゾレシチン、多価陽イオン、多価陰イオンのような表面活性物質などが含まれる。

【0056】

本発明の一様態は、本発明のワクチン組成物を個体に投与するステップを含む、個体からアフリカ豚熱病ウイルスに対する免疫反応を生成する方法を提供する。

【0057】

前記免疫反応生成方法において、前記ワクチン組成物は、別に言及しない限り、上記のとおりである。

【0058】

本明細書において使用される「免疫反応」なる用語は、抗原の導入に対する反応への宿主の免疫系の活性化を意味する。免疫反応は、細胞反応または体液反応、あるいは両方の形態であってもよい。

【0059】

本明細書において使用される「個体」なる用語は、ヒトを含む動物を意味し、例えば、哺乳類、より具体的に、豚、牛、馬、羊、ヤギ、鹿、ヒトであってもよい。好ましくは、豚である。前記「個体」なる用語は、対象体または宿主と相互交換的に使用されることができる。

【0060】

前記免疫反応生成方法で、本発明のワクチン組成物は、効果量の有効成分、すなわち、全組換えポリペプチド、組換えポリヌクレオチド、またはこれを含むプラスミドを薬学的に許容可能な担体および補助剤とともに含んでもよい。「効果量」なる用語は、ワクチンの成分がワクチン接種される動物からアフリカ豚熱病ウイルスに対して特異的な免疫反応を誘導するのに十分な量であることを意味する。効果量は、当分野における熟練者によって容易に決定されることができ、例えば、動物における通常的な実験を通じて決定されることができる。

【0061】

前記投与は、ＤＮＡワクチンの投与に好適な任意の経路に投与されることができ、例えば、皮下、筋肉内、腹腔内または静脈内注射によって投与されることができる。

【0062】

本発明のまた別の一様態は、本発明のワクチン組成物、ポリペプチド、ポリヌクレオチドまたはプラスミドを個体に投与するステップを含む、個体からアフリカ豚熱病を治療または予防する方法を提供する。

【0063】

本発明のまた別の一様態は、本発明によるポリペプチド、ポリヌクレオチドまたはプラスミドを含むアフリカ豚熱病治療または予防用薬学組成物を提供する。

【0064】

本発明によるアフリカ豚熱病治療または予防方法とアフリカ豚熱病治療または予防用薬学組成物において、各用語は、特に言及しない限り、上記と同一の意味を有する。

【0065】

本発明において使用される「予防」なる用語は、本発明による組成物の投与によってアフリカ豚熱病が抑制または遅延されるすべての行為を意味する。また、本発明において使用される「治療」なる用語は、本発明による組成物の投与によってアフリカ豚熱病の症状好転、完治、改善、または一部治療されるすべての行為を意味する。

【発明の効果】

【0066】

本発明によるワクチン組成物は、ＤＮＡワクチンであって、アフリカ豚熱病ウイルスに対して優れた防御免疫能を有する。特に、本発明によるワクチン組成物は、アフリカ豚熱病に対して細胞性免疫反応を誘導する効果が非常に優れる。

【0067】

本発明のワクチン組成物を投与する場合、接種された個体からアフリカ豚熱病に対する抗体が顕著に高い水準で生産され、これによって、免疫反応が効果的に現れ、アフリカ豚熱病に対して優れた予防効果を有する。

【図面の簡単な説明】

【0068】

【図1】アフリカ豚熱病（ＡｆｒｉｃａｎＳｗｉｎｅＦｅｖｅｒ、ＡＳＦ）ウイルス遺伝子を含むベクターの開裂地図であり、Ｋｏｚａｋ配列、ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列およびフーリン切断部位（Ｆｕｒｉｎｃｌｅａｖａｇｅｓｉｔｅ）配列を含み、ＡＳＦウイルス遺伝子として、ｐ３０、ｐ５４、Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ、ＣＤ２ｖ、ｐ４９、ｐｐ６２、ＥＰ３６４Ｒ、Ｆ３１７Ｌ、Ａ１０４ＲおよびＫ２０５Ｒを含むベクターに関する。

【図2】ＡＳＦウイルス遺伝子を含むベクターの開裂地図であり、Ｋｏｚａｋ配列、ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列、ユビキチン配列およびフーリン切断部位配列を含み、ＡＳＦウイルス遺伝子として、ｐ３０、ｐ５４、Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎおよびＣＤ２ｖを含むベクターに関する。

【図3】ＡＳＦウイルス遺伝子を含むベクターの開裂地図であり、Ｋｏｚａｋ配列、ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列、ユビキチン配列およびフーリン切断部位配列を含み、ＡＳＦウイルス遺伝子として、ｐ４９、ｐｐ６２、ＥＰ３６４Ｒ、Ｆ３１７Ｌ、Ａ１０４ＲおよびＫ２０５Ｒを含むベクターに関する。

【図4】ＡＳＦウイルス遺伝子を含むベクターの開裂地図であり、Ｋｏｚａｋ配列、ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列、ユビキチン配列およびフーリン切断部位配列を含み、ＡＳＦウイルス遺伝子として、ｐ３０、ｐ５４、ｐｐ６２、Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎおよびＣＤ２ｖを含むベクターに関する。

【図5】ＡＳＦウイルス遺伝子を含むベクターの開裂地図であり、Ｋｏｚａｋ配列、ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列、ユビキチン配列およびフーリン切断部位配列を含み、ＡＳＦウイルス遺伝子として、ｐ４９、ＥＰ３６４Ｒ、Ｆ３１７Ｌ、Ａ１０４ＲおよびＫ２０５Ｒを含むベクターに関する。

【図6】ＡＳＦウイルス遺伝子を含むＤＮＡワクチン接種後、ＡＳＦウイルス抗原（ｐ３０、ｐ５４またはＣＤ２ｖ）によって生成された細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８^＋Ｔ細胞）の数を示すグラフであって、前記ＤＮＡワクチンによって誘導された細胞性免疫反応の水準を示す。‘Ｍｏｃｋ’は、ＡＳＦウイルス遺伝子が含まれていないＤＮＡワクチンが投与された対照群、‘ＡＳＦ＿４Ｇ’は、ＡＳＦウイルス遺伝子（ｐ３０、ｐ５４、ＣｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎおよびＣＤ２ｖ）を含み、ユビキチンを含まないＤＮＡワクチンが投与された実験群１、‘ＡＳＦ＿Ｕｂｉ＿４Ｇ’は、ＡＳＦウイルス遺伝子（ｐ３０、ｐ５４、ＣｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎおよびＣＤ２ｖ）を含み、ユビキチンを含むＤＮＡワクチンが投与された実験群２を意味する。

【図7】ＡＳＦウイルス遺伝子を含むＤＮＡワクチン接種後、ＡＳＦウイルスに感染した豚の生存率を示すグラフである。‘Ｍｏｃｋ’は、ＡＳＦウイルス遺伝子が含まれていないＤＮＡワクチンが投与された対照群、‘ＡＳＦ＿Ｕｂｉ＿１０Ｇ’は、ＡＳＦウイルス遺伝子（ｐ３０、ｐ５４、Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ、ＣＤ２ｖ、ｐ４９、ｐｐ６２、ＥＰ３６４Ｒ、Ｆ３１７Ｌ、Ａ１０４ＲおよびＫ２０５Ｒ）を含み、ユビキチンを含むＤＮＡワクチンが投与された実験群を意味する。

【発明を実施するための形態】

【0069】

以下、本発明を実施例によってさらに詳細に説明する。しかし、これら実施例は、本発明を例示的に説明するためのものであって、本発明の範囲がこれら実施例によって制限されるものではない。

【0070】

実施例１．アフリカ豚熱病ウイルス遺伝子
配列番号１のアミノ酸配列および配列番号１１の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルスの多様な菌株からｐ３０（ＣＰ２０４Ｌ）遺伝子の配列相同性を比較して導き出したコンセンサス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）配列である。具体的に、配列番号１のアミノ酸配列および配列番号１１の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルス菌株ＡＮＧ／７０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４２７１）、Ｍａｌａｗｉ／１９７８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７４４９９８）、ＮＡＭ／１／８０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７４５００５）、Ｄｅｄｚａ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７４５０２８）、ＢＵＲ／９０／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４２９９）、ＭＯＺ／９４／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４２６３）、ＤＥＤ９１／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ８６７５１３）、ＧＵＬ８８／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ８６７５１４）、ＫＡＣ９１／２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４３９）、ＫＡＮＡ８９／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４４０）、ＫｉｌｌｅａｎＩ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７６４８６０）、ＫｉｌｌｅａｎＩＩ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ８６７５２１）、ＫｉｌｌｅａｎＩＩＩ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７６４８６１）、ＫｉｍａｋｉａＩ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７６４９５４）、ＫｉｍａｋｉａＩＩ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ８６７５１５）、ＫＩＲＴ８９／２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７６４８５８）、ＫＩＲＴ８９／３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７６４８５６）、ＫＩＲＴ８９／４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７６４８５７）、ＫＬＩ８８／２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ８６７５１６）、ＬＩＬ８９／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ８６７５１７）、ＬＩＬ９０／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４３７）、ＬＩＶ５／４０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ８６７５１８）、ＬＩＶ９／３１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７６４９６６）、ＬＩＶ９／３５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７６４９６５）、ＬＩＶ１０／１１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ８６７５１９）、ＬＩＶ１２／１７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７６４９６７）、Ｍｃｈｉｎｊｉ０７５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７６４８８０）、ＭＯＺ２００１／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ８６７５２４）、ＭＰＯ８９／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ８６７５２０）、ＮＹＡ１／２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４３０２）、ＳＡＬ９２／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４４１）、ＴＥＮ８９／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４４２）、ＴＨＹ９０／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４３８）、Ｔｒｅｎｃｈ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＱ７６４８５９）、ＭＯＺ／１９６０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４３０９）、Ｌｉｌｌｉｅ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４３０６）、２４８２３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ８６７５００）、ＭＯＺ／１９７９（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４３１０）、ＳＰＥＣ／１５４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４２９１）、ＳＰＥＣ／２０５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４３０５）、ＳＰＥＣ／２０９（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４２９０）、ＳＰＥＣ／２５７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４２６５）、ＭＯＺ／９４／８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４２７６）、Ｅ７０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＦ４６２２７２）、ＺＡＭ／２０１７／Ｍｂａｌａ／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＣ３２２０１４）、ＣＮ２０１８０１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ７３５１４１）、ＤＢ／ＨＬＪ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８４）、Ｍ－７８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ２１１５０５）、ＢＡ７１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＰ０５５８１５）、ＢＡ７１Ｖ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．Ｕ１８４６６）、Ｅ７５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＮ５５７５２０）、ＯＵＲＴ８８／３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２４０）、Ｇｅｏｒｇｉａ２００７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＲ６８２４６８）、Ｋｅｎ０６．Ｂｕｓ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９５）、Ｅｓｔｏｎｉａ２０１４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＳ４７８１１３）、Ｂｅｎｉｎ９７／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２３９）、Ｉｔａｌｙ／２６５４４／ＯＧ１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１０２９７９）、Ｐｏｒｔｕｇａｌ／ＮＨＶ／１９６８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ２６２８４５）、Ｉｔａｌｙ／４７／ＳＳ／２００８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＸ３５４４５０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ３５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９２０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ２５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９１８）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ８／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９１６）、Ｐｏｌ１６＿２０１８６＿ｏ７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８３）、Ｐｏｌ１７＿０３０２９＿Ｃ２０１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８７）、Ｂｅｌｇｉｕｍ２０１８／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＲ５３６７２５）、Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ１２８９９５）、ＤＢ／ＬＮ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８１）、Ｐｉｇ／ＨＬＪ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８０）、ＡＳＦＶ－ＳＹ１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ７６６８９４）、Ｋｅｎ０５／Ｔｋ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９４）、Ｋｅｎ０５／Ｔｋ６（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＨＭ７４５３６３）、Ｋｅｎ０５．ＤＰｋ２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＨＭ７４５３６８）、Ｋｅｎ０８ＷＨ／４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＨＭ７４５３９０）、Ｋｅｎ０８Ｔｋ．２／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＨＭ７４５３８０）、Ｋｅｎ０９Ｔｋ．１３／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＨＭ７４５３８２）、Ｋｅｎ０９Ｔｋ．１９／２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＨＭ７４５３８６）、Ｋｅｎ０９Ｔｋ．１９／１１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＨＭ７４５３８８）からｐ３０（ＣＰ２０４Ｌ）遺伝子の配列相同性を比較して作製した。

【0071】

配列番号２のアミノ酸配列および配列番号１２の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルスの多様な菌株からｐ５４（Ｅ１８３Ｌ）遺伝子の配列相同性を比較して導き出したコンセンサス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）配列である。具体的に、配列番号２のアミノ酸配列および配列番号１２の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルス菌株Ｔｅｎｇａｎｉ／６０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ０１５８８６）、ＡＮＧ／７０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４３２７）、ＢＡ７１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＰ０５５８１５）、Ｍａｌａｗｉ／１９７８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ６６２３８０）、Ｂｒａｚｉｌ／７９（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ５３５５４９）、ＤｏｍＲｅｐ／７９（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＪ２３８５３４）、ＫＡＶ／８９／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ０１５９０２）、ＢＵＲ／９０／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４３６３）、ＭＯＺ／９４／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４３４２）、ＣＨＫ８９／２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ０１５９２１）、ＫＡＣ９１／２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４２１）、ＫＡＮＡ８９／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４２２）、ＫｉｌｌｅａｎＩＩＩ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４２３）、ＫｉｍａｋｉａＩ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ０１５９２４）、ＫＩＲＴ８９／４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４１４）、ＬＩＬ９０／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４１６）、ＬＩＶ９／３１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ０１５９２８）、ＭＡＮ８９／２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ０１５９４０）、ＭＯＺ２００１／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４２８）、ＭＰＯ８９／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４１８）、Ｔｒｅｎｃｈ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ７３６４２０）、ＭＯＺ／１９６０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４３７１）、Ｌｉｌｌｉｅ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４３４１）、Ｍａｄａｇａｓｃａｒ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ６６２３８７）、ＺＩＭ／９２／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４３４５）、ＳＰＥＣ／２０５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＥＵ８７４３２９）、Ｃｏ６２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＪ１７４３８７）、Ｅ７０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＪ１７４３８９）、Ｂａ７１Ｖ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．Ｕ１８４６６）、Ｅ７５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＮ５５７５２０）、Ｈｕ９０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＪ１７４３９９）、ＳＳ８１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＪ１７４４０３）、Ｏｒｉ９０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＪ１７４４０７）、Ｎｕ９８．８Ｂ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＪ１７４４１８）、ＯＵＲＴ８８／３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２４０）、Ａｌｍｏｄｏｖａｒ９９（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＤＱ０２８３１５）、Ａｌｍｏｄｏｖａｒ９９／ＮＥ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＤＱ０２８３１７）、Ｇｅｏｒｇｉａ２００７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＲ６８２４６８）、Ａｎｇｏｌａ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＪ１７４４２４）、Ｎｉｇ０１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＪ１７４４２６）、Ｕｇ０３Ｈ．１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＪ１７４４３１）、Ｕｇ６４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＪ１７４４３０）、Ｋｅｎ０５．ＤＰＵ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＨＭ７４５３５４）、Ｋｅｎ０８ＷＨ／４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＨＭ７４５３３３）、ｋｅｎ０９Ｔｋ．２０／５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＨＭ７４５３４４）、Ｃｏｎ０９／ＰＮ００３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＨＱ６４５９４９）、ＴＡＮ／０８／Ｍａｚｉｍｂｕ＊（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＧＱ４１０７６７）、ＴＡＮ／０８／Ｍａｂｉｂｏ＊（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＧＱ４１０７６８）、Ａｒｍ０７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＸ８５７４９４）、Ａｚ０８Ｄ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＸ８５７５０１）、Ｏｒｅｎ０８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＸ８５７４９８）、Ｒｏｓｔｏｖ０９（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＪＸ８５７５０４）、Ｔｖｅｒ０３１２／Ｎｏｖｏ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＪ６２７１９０）、Ｂｅｌ１３／Ｇｒｏｄｎｏ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＪ６２７１９２）、ＬＴ１４／１４９０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＪ６２７１９３）、ＥＴＨ／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＴ７９５３６６）、ＥＴ１３／１５０４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＵ２９１４５２）、ＥＴＨ／０１７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＴ７９５３６９）、Ｋｅｎ０６．Ｂｕｓ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９５）、Ｋｅｎ０７．Ｋｉａ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＪ１７４４３７）、ＣＯＮ０９／Ｂｚｚ０２０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＨＱ６４５９５０）、Ｋｅｎ１０／ＫａｋＦＡ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ１１２５６８）、Ｕｇ１０．Ｋｕｍｉ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ９９０８７６）、ＢＵＲ／９０／２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＦ０１５８９７）、Ｕｇ１２．Ｗａｋｉｓｏ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＣ９９０８８５）、Ｂｅｎｉｎ９７／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２３９）、Ｉｔａｌｙ／２６５４４／ＯＧ１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１０２９７９）、Ｐｏｒｔｕｇａｌ／ＮＨＶ／１９６８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ２６２８４５）、Ｉｔａｌｙ／４７／ＳＳ／２００８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＸ３５４４５０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ３５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９２０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ７／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９１７）、Ｐｏｌ１７＿０４４６１＿Ｃ２１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８８）、Ｂｅｌｇｉｕｍ２０１８／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＲ５３６７２５）、Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ１２８９９５）、ＤＢ／ＬＮ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８１）、Ｐｉｇ／ＨＬＪ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８０）、ＡＳＦＶ－ＳＹ１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ７６６８９４）、ＣＮ２０１８０１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ７３５１４０）、Ｅｓｔｏｎｉａ２０１４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＳ４７８１１３）、Ｎｉｇ６＿ＪＳ１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＴ９６１３４４）からｐ５４（Ｅ１８３Ｌ）遺伝子の配列相同性を比較して作製した。

【0072】

配列番号３のアミノ酸配列および配列番号１３の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルスの多様な菌株からＣ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ（ＥＰ１５３Ｒ）遺伝子の配列相同性を比較して導き出したコンセンサス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）配列である。具体的に、配列番号３のアミノ酸配列および配列番号１３の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルス菌株Ｋａｔａｎｇａ／６３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３４０）、Ｕｇａｎｄａ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３６１）、ＢＡ７１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＰ０５５８１５）、Ｄａｖｉｓ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３３６）、Ｂａ７１Ｖ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．Ｕ１８４６６）、Ｅ７５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＮ５５７５２０）、ＮＨ／Ｐ６８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＦ４８１８７５）、Ｍａｆｒａ８６（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＤＱ０２６２６９）、Ｃｏｉｍｂｒａ８７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＤＱ０２６２６８）、ＯＵＲＴ８８／３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２４０）、Ｐｏｒｔａｌｅｇｒｅ９０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＤＱ０２６２７０）、Ｂａｒｒａｎｃｏｓ９３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＤＱ０２６２６７）、Ａｌｍｏｄｏｖａｒ９９（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＤＱ０２６２６５）、Ａｌｍｏｄｏｖａｒ９９／ＮＥ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＤＱ０２６２６６）、Ｇｅｏｒｇｉａ２００７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＲ６８２４６８）、Ｋｅｎ０５／Ｔｋ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９４）、Ｋｅｎ０６．Ｂｕｓ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９５）、Ｅｓｔｏｎｉａ２０１４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＳ４７８１１３）、Ｂｅｎｉｎ９７／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２３９）、Ｉｔａｌｙ／２６５４４／ＯＧ１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１０２９７９）、Ｐｏｒｔｕｇａｌ／ＮＨＶ／１９６８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ２６２８４５）、Ｉｔａｌｙ／４７／ＳＳ／２００８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＸ３５４４５０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ３５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９２０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ２５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９１８）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ８／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９１６）、Ｐｏｌ１６＿２０１８６＿ｏ７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８３）、Ｐｏｌ１７＿０３０２９＿Ｃ２０１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８７）、Ｐｏｌ１７＿０４４６１＿Ｃ２１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８８）、Ｂｅｌｇｉｕｍ２０１８／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＲ５３６７２５）、Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ１２８９９５）、ＤＢ／ＬＮ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８１）、Ｐｉｇ／ＨＬＪ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８０）、ＡＳＦＶ－ＳＹ１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ７６６８９４）、ＵＧＡ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＦ０１７０３９）、ＰＲ５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＦ０１７０３７）、Ｍ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＦ０１７０３４）、Ｋ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＦ０１７０３３）、ＣＲ３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＦ０１７０２９）、ＣＲ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＦ０１７０２８）、ＬＣ－ＰＰ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３４５）、Ｍａｇａｄｉ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ｋＭ６０９３４８）、Ｂａｒｔｌｅｔｔ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３３５）、Ｖｏｌｇｏｇｒａｄ＿２０１２／ｗｂ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３６３）、Ｖｏｌｇｏｇｒａｄ＿２０１２／ｄｏｍ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３６２）、Ｔｖｅｒ＿２０１２／ｗｂ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３６０）、Ｒｈｏｄｅｓｉａ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３５４）、ＴＳＰ８０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３５９）、ＳＴＰ－１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３５５）、Ｏ－７７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３５０）、Ｆ－３２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３３７）、ＭＫ－２００（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３４７）、Ｓｐｅｎｃｅｒ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３５７）、Ｓｉｌｖａ－１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ｋＭ６０９３５６）、Ｎｄｊａｓｓｉ－７７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ｋＭ６０９３４９）、ＫＫ－２６２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３４１）、Ｋ－４９（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３３９）、Ｌ－５７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３４４）、Ｌ－５０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３４３）からＣ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ（ＥＰ１５３Ｒ）遺伝子の配列相同性を比較して作製した。

【0073】

配列番号４のアミノ酸配列および配列番号１４の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルスの多様な菌株からＣＤ２ｖ（ＥＰ４０２Ｒ）遺伝子の配列相同性を比較して導き出したコンセンサス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）配列である。具体的に、配列番号４のアミノ酸配列および配列番号１４の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルス菌株Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ１２８９９５）、ＤＢ／ＬＮ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８１）、Ｐｉｇ／ＨＬＪ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８０）、ＡＳＦＶ－ＳＹ１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ７６６８９４）、Ｂｅｌｇｉｕｍ２０１８／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＲ５３６７２５）、Ｐｏｌ１７＿０３０２９＿Ｃ２０１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８７）、Ｐｏｌ１６＿２０１８６＿ｏ７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８３）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ８／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９１６）、Ｕｇａｎｄａ／Ｎ１０／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９１９）、Ｅｓｔｏｎｉａ２０１４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＳ４７８１１３）、Ｄａｖｉｓ（１９５９＿Ｋｅｎｙａ）（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３３６）、ＫｉｌｌｅａｎＩＩ（１９５９＿Ｋｅｎｙａ）（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３７２）、ＫｉｍａｋｉａＩＩ（１９６１＿Ｋｅｎｙａ）（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３７４）、Ｂａ７１Ｖ（１９７１＿Ｓｐａｉｎ）（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．Ｕ１８４６６）、Ｅ７５（１９７５＿Ｓｐａｉｎ）（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＮ５５７５２０）、Ｃａ７８（Ｉｔａｌｙ＿１９７８）（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＴ７１８６６３）、Ｏｒｉ８５（Ｉｔａｌｙ＿１９８５）（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＴ７１８６６８）、Ｎｕ９１．５（Ｉｔａｌｙ＿１９９１）（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＴ７１８６７３）、ＮＨ／Ｐ６８（Ｐｏｒｔｕｇａｌ＿１９６８）（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＦ４８１８７５）、Ｍａｆｒａ８６（Ｐｏｒｔｕｇａｌ＿１９８６）（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＤＱ０２６２６９）、Ｃｏｉｍｂｒａ８７（Ｐｏｒｔｕｇａｌ＿１９８７）（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＤＱ０２６２６８）、Ｐｏｒｔａｌｅｇｒｅ９０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＤＱ０２６２７０）、Ｂａｒｒａｎｃｏｓ９３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＤＱ０２６２６７）、Ａｌｍｏｄｏｖａｒ９９／ＮＥ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＤＱ０２６２６６）、ＯＵＲＴ８８／３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２４０）、ＦＲ６８２４６８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．Ｇｅｏｒｇｉａ２００７）、Ｋｅｎ０５／Ｔｋ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９４）、Ｋｅｎ０６．Ｂｕｓ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９５）、Ｉｔａｌｙ／４７／ＳＳ／２００８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＸ３５４４５０）、Ｐｏｒｔｕｇａｌ／ＮＨＶ／１９６８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ２６２８４５）、Ｉｔａｌｙ／２６５４４／ＯＧ１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１０２９７９）、Ｂｅｎｉｎ９７／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２３９）、Ｂａｒｔｌｅｔｔ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３３５）、Ｚａｖｉｄｏｖｏ－２０１２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３９２）、Ｔｖｅｒ＿２０１２／ｗｂ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３６０）、Ｒｈｏｄｅｓｉａ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３５４）、Ｎａｎｙｕｋｉ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３８２）、Ｋｒａｓｎｏｄａｒ＿２０１２／ｄｏｍ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３４２）、ＴＳ－７／２７－２３０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３８８）、ＴＳＰ８０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３５９）、Ｋ－４９（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３３９）、ＫＫ－２６２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３４１）、Ｓｐｅｎｃｅｒ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３５７）、ＭＫ－２００（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３４７）、６９１／８８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３３４）、Ｆ－３２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３３７）、Ｏ－７７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３５０）、Ｐ－６０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３５１）、ＰＰＡ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３５２）、ＳＴＰ－１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３５５）、ＢＡ７１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＰ０５５８１５）、ＳＴＰ－１－７９（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３８４）、Ｍａｌｔａ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３８０）、Ｙａｍｂａ－７４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３９１）、ＴＫＦ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３８７）、Ｋｉｍｕｅｌｅ－６（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３７５）、Ｅ－７０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３６９）、Ｃｕｂａ－７１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３６６）、ＣＵ－８０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３６５）、Ｂｒａｚｉｌ－８０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３６４）、ＭＮＩ－８２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３７８）、Ｋ－７３（ＬｅＢｒａｙ）（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３７０）、Ｍａｄｅｉｒａ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３７９）、Ｄｉａｍａｎｇ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３６７）、Ｌ－５０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３４３）、Ｌ－５７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３４４）、Ｋｉｋａｓａ－７７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３７１）、ＶＬ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ６０９３９０）からＣＤ２ｖ（ＥＰ４０２Ｒ）遺伝子の配列相同性を比較して作製した。

【0074】

配列番号５のアミノ酸配列および配列番号１５の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルスの多様な菌株からｐ４９（Ｂ４３８Ｌ）遺伝子の配列相同性を比較して導き出したコンセンサス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）配列である。具体的に、配列番号５のアミノ酸配列および配列番号１５の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルス菌株ＢＡ７１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＰ０５５８１５）、Ｂａ７１Ｖ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．Ｕ１８４６６）、Ｅ７５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＮ５５７５２０）、ＯＵＲＴ８８／３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２４０）、Ｇｅｏｒｇｉａ２００７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＲ６８２４６８）、Ｋｅｎ０５／Ｔｋ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９４）、Ｋｅｎ０６．ＢＵＳ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９５）、Ｅｓｔｏｎｉａ２０１４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＳ４７８１１３）、Ｂｅｎｉｎ９７／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２３９）、Ｉｔａｌｙ／２６５４４／ＯＧ１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１０２９７９）、Ｐｏｒｔｕｇａｌ／ＮＨＶ／１９６８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ２６２８４５）、Ｉｔａｌｙ／４７／ＳＳ／２００８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＸ３５４４５０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ３５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９２０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｎ１０／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９１９）、Ｐｏｌ１６＿２０１８６＿ｏ７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８３）、Ｐｏｌ１７＿０４４６１＿Ｃ２１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８８）、Ｂｅｌｇｉｕｍ２０１８／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＲ５３６７２５）、Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ１２８９９５）、ＤＢ／ＬＮ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８１）、Ｐｉｇ／ＨＬＪ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８０）、ＡＳＦＶ－ＳＹ１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ７６６８９４）からｐ４９（Ｂ４３８Ｌ）遺伝子の配列相同性を比較して作製した。

【0075】

配列番号６のアミノ酸配列および配列番号１６の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルスの多様な菌株からｐｐ６２（ＣＰ５３０Ｒ）遺伝子の配列相同性を比較して導き出したコンセンサス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）配列である。具体的に、配列番号６のアミノ酸配列および配列番号１６の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルス菌株ＢＡ７１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＰ０５５８１５）、Ｂａ７１Ｖ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．Ｕ１８４６６）、Ｅ７５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＮ５５７５２０）、ＯＵＲＴ８８／３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２４０）、Ｇｅｏｒｇｉａ２００７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＲ６８２４６８）、Ｋｅｎ０５／Ｔｋ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９４）、Ｋｅｎ０６．ＢＵＳ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９５）、Ｅｓｔｏｎｉａ２０１４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＳ４７８１１３）、Ｂｅｎｉｎ９７／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２３９）、Ｉｔａｌｙ／２６５４４／ＯＧ１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１０２９７９）、Ｐｏｒｔｕｇａｌ／ＮＨＶ／１９６８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ２６２８４５）、Ｉｔａｌｙ／４７／ＳＳ／２００８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＸ３５４４５０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ３５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９２０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｎ１０／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９１９）、Ｐｏｌ１６＿２０１８６＿ｏ７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８３）、Ｐｏｌ１７＿０４４６１＿Ｃ２１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８８）、Ｂｅｌｇｉｕｍ２０１８／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＲ５３６７２５）、Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ１２８９９５）、ＤＢ／ＬＮ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８１）、Ｐｉｇ／ＨＬＪ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８０）、ＡＳＦＶ－ＳＹ１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ７６６８９４）、Ｋｒａｓｎｏｄａｒ（２０１２）（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＪ３８０９１１）からｐｐ６２（ＣＰ５３０Ｒ）遺伝子の配列相同性を比較して作製した。

【0076】

配列番号７のアミノ酸配列および配列番号１７の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルスの多様な菌株からＥＰ３６４Ｒ遺伝子の配列相同性を比較して導き出したコンセンサス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）配列である。具体的に、配列番号７のアミノ酸配列および配列番号１７の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルス菌株ＢＡ７１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＰ０５５８１５）、Ｂａ７１Ｖ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．Ｕ１８４６６）、Ｅ７５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＮ５５７５２０）、ＯＵＲＴ８８／３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２４０）、Ｇｅｏｒｇｉａ２００７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＲ６８２４６８）、Ｋｅｎ０５／Ｔｋ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９４）、Ｋｅｎ０６．ＢＵＳ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９５）、Ｅｓｔｏｎｉａ２０１４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＳ４７８１１３）、Ｂｅｎｉｎ９７／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２３９）、Ｉｔａｌｙ／２６５４４／ＯＧ１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１０２９７９）、Ｐｏｒｔｕｇａｌ／ＮＨＶ／１９６８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ２６２８４５）、Ｉｔａｌｙ／４７／ＳＳ／２００８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＸ３５４４５０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ３５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９２０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｎ１０／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９１９）、Ｐｏｌ１６＿２０１８６＿ｏ７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８３）、Ｐｏｌ１７＿０４４６１＿Ｃ２１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８８）、Ｂｅｌｇｉｕｍ２０１８／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＲ５３６７２５）、Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ１２８９９５）、ＤＢ／ＬＮ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８１）、Ｐｉｇ／ＨＬＪ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８０）、ＡＳＦＶ－ＳＹ１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ７６６８９４）からＥＰ３６４Ｒ遺伝子の配列相同性を比較して作製した。

【0077】

配列番号８のアミノ酸配列および配列番号１８の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルスの多様な菌株からＦ３１７Ｌ遺伝子の配列相同性を比較して導き出したコンセンサス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）配列である。具体的に、配列番号８のアミノ酸配列および配列番号１８の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルス菌株ＢＡ７１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＰ０５５８１５）、Ｂａ７１Ｖ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．Ｕ１８４６６）、Ｅ７５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＮ５５７５２０）、ＯＵＲＴ８８／３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２４０）、Ｇｅｏｒｇｉａ２００７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＲ６８２４６８）、Ｋｅｎ０５／Ｔｋ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９４）、Ｋｅｎ０６．ＢＵＳ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９５）、Ｅｓｔｏｎｉａ２０１４Ｆ３１７Ｌ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＳ４７８１１３）、Ｂｅｎｉｎ９７／１Ｆ３１７Ｌ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２３９）、Ｉｔａｌｙ／２６５４４／ＯＧ１０Ｆ３１７Ｌ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１０２９７９）、Ｐｏｒｔｕｇａｌ／ＮＨＶ／１９６８Ｆ３１７Ｌ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ２６２８４５）、Ｉｔａｌｙ／４７／ＳＳ／２００８Ｆ３１７Ｌ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＸ３５４４５０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ３５／２０１５Ｆ３１７Ｌ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９２０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｎ１０／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９１９）、Ｐｏｌ１６＿２０１８６＿ｏ７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８３）、Ｐｏｌ１７＿０４４６１＿Ｃ２１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８８）、Ｂｅｌｇｉｕｍ２０１８／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＲ５３６７２５）、Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ１２８９９５）、ＤＢ／ＬＮ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８１）、Ｐｉｇ／ＨＬＪ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８０）、ＡＳＦＶ－ＳＹ１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ７６６８９４）からＦ３１７Ｌ遺伝子の配列相同性を比較して作製した。

【0078】

配列番号９のアミノ酸配列および配列番号１９の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルスの多様な菌株からＡ１０４Ｒ遺伝子の配列相同性を比較して導き出したコンセンサス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）配列である。具体的に、配列番号９のアミノ酸配列および配列番号１９の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルス菌株ＢＡ７１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＰ０５５８１５）、Ｂａ７１Ｖ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．Ｕ１８４６６）、Ｅ７５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＮ５５７５２０）、ＯＵＲＴ８８／３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２４０）、Ｇｅｏｒｇｉａ２００７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＲ６８２４６８）、Ｋｅｎ０５／Ｔｋ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９４）、Ｋｅｎ０６．ＢＵＳ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９５）、Ｅｓｔｏｎｉａ２０１４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＳ４７８１１３）、Ｂｅｎｉｎ９７／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２３９）、Ｉｔａｌｙ／２６５４４／ＯＧ１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１０２９７９）、Ｐｏｒｔｕｇａｌ／ＮＨＶ／１９６８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ２６２８４５）、Ｉｔａｌｙ／４７／ＳＳ／２００８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＸ３５４４５０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ３５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９２０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｎ１０／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９１９）、Ｐｏｌ１６＿２０１８６＿ｏ７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８３）、Ｐｏｌ１７＿０４４６１＿Ｃ２１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８８）、Ｂｅｌｇｉｕｍ２０１８／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＲ５３６７２５）、Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ１２８９９５）、ＤＢ／ＬＮ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８１）、Ｐｉｇ／ＨＬＪ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８０）、ＡＳＦＶ－ＳＹ１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ７６６８９４）からＡ１０４Ｒ遺伝子の配列相同性を比較して作製した。

【0079】

配列番号１０のアミノ酸配列および配列番号２０の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルスの多様な菌株からＫ２０５Ｒ遺伝子の配列相同性を比較して導き出したコンセンサス（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）配列である。具体的に、配列番号１０のアミノ酸配列および配列番号２０の塩基配列は、アフリカ豚熱病ウイルス菌株ＢＡ７１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＰ０５５８１５）、Ｂａ７１Ｖ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．Ｕ１８４６６）、Ｅ７５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＮ５５７５２０）、ＯＵＲＴ８８／３（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２４０）、Ｇｅｏｒｇｉａ２００７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＦＲ６８２４６８）、Ｋｅｎ０５／Ｔｋ１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９４）、Ｋｅｎ０６．ＢＵＳ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１１１２９５）、Ｅｓｔｏｎｉａ２０１４（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＳ４７８１１３）、Ｂｅｎｉｎ９７／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＡＭ７１２２３９）、Ｉｔａｌｙ／２６５４４／ＯＧ１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ１０２９７９）、Ｐｏｒｔｕｇａｌ／ＮＨＶ／１９６８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＭ２６２８４５）、Ｉｔａｌｙ／４７／ＳＳ／２００８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＫＸ３５４４５０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｒ３５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９２０）、Ｕｇａｎｄａ／Ｎ１０／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ０２５９１９）、Ｐｏｌ１６＿２０１８６＿ｏ７（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８３）、Ｐｏｌ１７＿０４４６１＿Ｃ２１０（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＧ９３９５８８）、Ｂｅｌｇｉｕｍ２０１８／１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＬＲ５３６７２５）、Ｃｈｉｎａ／２０１８／ＡｎｈｕｉＸＣＧＱ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ１２８９９５）、ＤＢ／ＬＮ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８１）、Ｐｉｇ／ＨＬＪ／２０１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＫ３３３１８０）ＡＳＦＶ－ＳＹ１８（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＭＨ７６６８９４）からＫ２０５Ｒ遺伝子の配列相同性を比較して作製した。

【0080】

実施例２．アフリカ豚熱病ワクチン作製
前記実施例１のアフリカ豚熱病ウイルス遺伝子を使用してワクチンを製造した。

【0081】

具体的に、当業界に周知の一般的な方法で前記遺伝子、Ｋｏｚａｋ配列、ＩｇＥｌｅａｄｅｒ配列、ユビキチン（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）配列および／またはフーリン切断部位（Ｆｕｒｉｎｃｌｅａｖａｇｅｓｉｔｅ）配列を含むＤＮＡプラスミドを製造した。以後、前記ＤＮＡプラスミドを保有した大腸菌にＬＢ培地２．５Ｌに接種して３７℃、水中油滴型（ｏｉｌ－ｉｎ－ｗａｔｅｒ、Ｏ／Ｗ）培養を遂行した。培養された大腸菌からＥｎｄｏＦｒｅｅＰｌａｓｍｉｄＧｉｇａｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ、Ｃａｔ＃１２３９１）を利用してプラスミドを抽出し、抽出したプラスミドは、今後、ワクチンとして接種に使用した。

【0082】

前記製造したＤＮＡプラスミドの開裂地図は、図１ないし５に示した。

【0083】

実施例３．アフリカ豚熱病ワクチンの細胞性免疫反応誘導効果
前記実施例２において製造したＤＮＡワクチンのアフリカ豚熱病予防効果として、細胞性免疫反応（ＣＴＬ、ＣｙｔｏｔｏｘｉｃＴＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅｒｅｓｐｏｎｓｅ）誘導効果を確認した。

【0084】

Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８週齢、Ｆｅｍａｌｅ）１５匹をグループ当たり５匹ずつ計３グループに分けた後、２週間隔でワクチン接種を３回実施した。投与したＤＮＡワクチンの濃度は３０ｕｇ／匹であり、電気穿孔（ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ）器機（ｃｅｌｌｅｃｔｒａ２０００）を利用して投与および接種を実施した。このとき、各対照群および実験群に投与したＤＮＡワクチンの種類は、下記のように設定した。

【0085】

－対照群：アフリカ豚熱病ウイルス遺伝子が含まれていないＤＮＡワクチン（ＭｏｃｋＰｌａｓｍｉｄＤＮＡｖａｃｃｉｎｅ）
－実験群１：アフリカ豚熱病ウイルス遺伝子を含み、ユビキチンを含まないＤＮＡワクチン（ＡＳＦ＿４ＧＤＮＡｖａｃｃｉｎｅ；ｐ３０、ｐ５４、ＣｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎおよびＣＤ２ｖ）
－実験群２：アフリカ豚熱病ウイルス遺伝子を含み、ユビキチンを含むＤＮＡワクチン（ＡＳＦ＿Ｕｂｉ＿４ＧＤＮＡｖａｃｃｉｎｅ；ユビキチン、ｐ３０、ｐ５４、ＣｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎおよびＣＤ２ｖ）

【0086】

前記ＤＮＡワクチンを３回投与した後、一週間後にマウスから脾臓（ｓｐｌｅｅｎ）を摘出して脾臓細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅ）を分離し、分離した脾臓細胞に対してＩＦＮ－ｇａｍｍａＥＬＩＳｐｏｔＫＩＴ（ＣｅｌｌｕｌａｒＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＬｉｍｉｔｅｄ／米国）を使用してｍｏｕｓｅＩＦＮ－ｇａｍｍａＥＬＩＳｐｏｔ分析を遂行した。具体的に、各ワクチンが投与された前記脾臓細胞に各抗原遺伝子のポリペプチドを処理した後、ＩＦＮ－γを分泌する細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８^＋Ｔ細胞）の数を分析することで、ワクチン接種後にウイルス感染により誘導される細胞性免疫反応の程度を確認した。

【0087】

その結果、図６および下記表１から見られるように、アフリカ豚熱病ウイルス遺伝子を含むＤＮＡワクチンが投与された実験群１および２においては、各抗原遺伝子のポリペプチドが処理される場合、ＩＦＮ－γを分泌する細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８^＋Ｔ細胞）の数が顕著に増加することを確認した。

【0088】

【表1】

【0089】

特に、ユビキチンを含まないＤＮＡワクチン（実験群１）が投与された場合に比べて、ユビキチンを含むＤＮＡワクチンが投与された場合（実験群２）においては、ＩＦＮ－γを分泌する細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８^＋Ｔ細胞）の数が約１．６倍ないし２．２倍増加されることを確認した。また、ＤＮＡワクチンに含まれた多様な抗原遺伝子の中からもｐ５４またはＣＤ２ｖによってＩＦＮ－γを分泌する細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８^＋Ｔ細胞）の数が特に増加され、ｐ３０によっては、ユビキチンを含むワクチンが投与された場合（実験群２）にのみＩＦＮ－γを分泌する細胞毒性Ｔ細胞（ＣＤ８^＋Ｔ細胞）の数が増加することを確認した。

【0090】

前記結果を通じて、アフリカ豚熱病ウイルス遺伝子とユビキチンを含むＤＮＡワクチンを接種した場合、アフリカ豚熱病ウイルスに感染してもＩＦＮ－γを分泌する細胞毒性Ｔ細胞の数を顕著に増加させるなどの細胞性免疫反応を効率的に誘導することができるので、前記ＤＮＡワクチンは、アフリカ豚熱病予防のためのワクチン組成物として有用に活用され得ることが分かった。

【0091】

実施例４．アフリカ豚熱病ワクチンの生存率増加効果
前記実施例２において製造したワクチンのアフリカ豚熱病予防効果として、アフリカ豚熱病ウイルス感染以後の生存率増加効果を確認した。

【0092】

具体的に、仔豚に前記ＤＮＡワクチンを計３回（０週次、２週次、４週次）投与した。以後、７週次にアフリカ豚熱病ウイルスを攻撃接種（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）し、以後、２８日間の生存率を調査した。このとき、各対照群および実験群に投与したＤＮＡワクチンの種類は、下記のように設定した。

【0093】

－対照群：アフリカ豚熱病ウイルス遺伝子が含まれていないＤＮＡワクチン（Ｍｏｃｋ）
－実験群：アフリカ豚熱病ウイルス遺伝子を含み、ユビキチンを含むＤＮＡワクチン（ＡＳＦ＿Ｕｂｉ＿１０ＧＤＮＡｖａｃｃｉｎｅ；ユビキチン、ｐ３０、ｐ５４、Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ、ＣＤ２ｖ、ｐ４９、ｐｐ６２、ＥＰ３６４Ｒ、Ｆ３１７Ｌ、Ａ１０４ＲおよびＫ２０５Ｒ）

【0094】

その結果、図７から見られるように、対照群の場合、接種２８日目には、３匹のうち１匹の豚のみが生存して、約３３％の低い生存率を示すことを確認した。これに対し、アフリカ豚熱病ウイルス遺伝子を含むＤＮＡワクチンが投与された実験群の場合、接種２８日目には、６匹のうち４匹の豚が生存して約６６％の高い生存率を示し、対照群に比べて生存率が２倍以上増加することを確認した。

【0095】

前記結果を通じて、アフリカ豚熱病ウイルス遺伝子とユビキチンを含むＤＮＡワクチンを接種した場合、アフリカ豚熱病ウイルスに感染しても優れた生存能を示すので、前記ＤＮＡワクチンは、アフリカ豚熱病予防のためのワクチン組成物として有用に活用され得ることが分かった。

【図1】