特表2023-532155線維症の診断および／またはモニタリングに使用するための化合物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-07-26
(54)【発明の名称】線維症の診断および／またはモニタリングに使用するための化合物
(51)【国際特許分類】
C07K 7/06 20060101AFI20230719BHJP
A61K 49/14 20060101ALI20230719BHJP
A61K 51/08 20060101ALI20230719BHJP
A61B 5/055 20060101ALI20230719BHJP
G01T 1/161 20060101ALI20230719BHJP
【ＦＩ】
C07K7/06 ZNA
A61K49/14
A61K51/08 200
A61B5/055 383
G01T1/161 A
G01T1/161 B
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023523671
(86)(22)【出願日】2021-06-28
(85)【翻訳文提出日】2023-02-13
(86)【国際出願番号】 EP2021067653
(87)【国際公開番号】W WO2022002834
(87)【国際公開日】2022-01-06
(31)【優先権主張番号】2050786-9
(32)【優先日】2020-06-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】SE
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523001005
【氏名又は名称】アンタロス・トレイサー・アクチエボラーグ
(74)【代理人】
【識別番号】100127926
【弁理士】
【氏名又は名称】結田 純次
(74)【代理人】
【識別番号】100140132
【弁理士】
【氏名又は名称】竹林 則幸
(72)【発明者】
【氏名】オロフ・エリクソン
(72)【発明者】
【氏名】オロフ・コシュグレン
(72)【発明者】
【氏名】クリステル・ヴェステルンド
(72)【発明者】
【氏名】ミーケル・ワーグナー
【テーマコード（参考）】
4C085
4C096
4C188
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C085GG01
4C085HH03
4C085HH07
4C085KA09
4C085KA29
4C085KB82
4C085LL20
4C096AA11
4C096AD19
4C096FC14
4C188EE02
4C188EE25
4C188FF04
4C188FF07
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA15
4H045BA50
4H045BA51
4H045BA71
4H045EA20
4H045EA50
4H045EA61
4H045FA10
4H045FA33
4H045GA25
(57)【要約】
（ｉ）式Ｉの化合物：（Ｉ）、もしくはその薬学的に許容される塩、および（ｉｉ）核種Ｍ、または式Ｉの化合物および／もしくは核種Ｍの薬学的に許容される塩を含む組成物であって、Ｃは、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－１，４，８，１１－四酢酸（ＴＥＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、デスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－酢酸（ＮＯＴＡＧＡ）、２－［４，７，１０－トリス（カルボキシメチル）－１，４，７，１０－テトラアザ－１－シクロドデシル］グルタル酸（ＤＯＴＡＧＡ）からなる群から選択されるキレート剤、および前記キレート剤のいずれか１つの誘導体であり；Ｌ（式Ｌ）は、リンカー（Ｌ）；（式中、ｍは、１～２０の範囲内の整数であり、ＸはＮＨまたはＣ（Ｏ）であり、キレート剤のＣ（Ｏ）またはＮＨ部分とアミド結合、すなわちＣ（Ｏ）ＮＨを形成する）であり、ｐは０または１であり、Ｑは配列番号１のペプチド、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一性を有する配列番号１のペプチドアナログ、および／またはＣ末端のＣＯＯＨがＣＯＮＨ２で置き換えられた配列番号１のペプチド、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一性を有する配列番号１のペプチドアナログであり、Ｃ末端のＣＯＯＨがＣＯＮＨ２で置き換えられており、Ｍは、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、４４Ｓｃ、８９Ｚｒ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、Ｍｎ、Ｇｄ、１７７Ｌｕおよび８６／９０Ｙからなる群から選択される、組成物が提供される。該組成物は、線維症の診断および／またはモニタリングにおいて使用してもよい。
【化１】
【選択図】図８
【化１】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ｉ）式Ｉの化合物：【化1】
および
（ｉｉ）核種Ｍ、またはその薬学的に許容される塩を含む組成物であって、
Ｃは：
【化2-1】
【化2-2】
および前記キレート剤のいずれか１つの誘導体であり、
Ｌはリンカー：
【化3】
ｍは、１～２０の範囲内の整数であり、
ＸはＮＨまたはＣ（Ｏ）であり、キレート剤のＣ（Ｏ）またはＮＨ部分とアミド結合、すなわちＣ（Ｏ）ＮＨを形成する）
であり、
ｐは０または１であり、
Ｑは配列番号１のペプチド、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一性を有する配列番号１のペプチドアナログ、および／または
Ｃ末端のＣＯＯＨがＣＯＮＨ２で置き換えられた配列番号１のペプチド、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一性を有する配列番号１のペプチドアナログであり、
Ｍは、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、４４Ｓｃ、８９Ｚｒ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕ、８６／９０Ｙ、ＭｎおよびＧｄからなる群から選択される、組成物。
【請求項2】
前記組成物は、式ＩＩの化合物：【化4】
前記式ＩＩの化合物は、
（ｉ）請求項１に定義される式Ｉの化合物、および
（ｉｉ）請求項１に定義される核種Ｍの組み合わせであり、
ここで、（ｉ）および（ｉｉ）は、１に等しい（ｉ）／（ｉｉ）比で提供される、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
式Ｉの化合物は、式Ｉａ、式Ｉｂ、式Ｉｃ、式Ｉｄ、式Ｉｅ、式Ｉｆまたは式Ｉｇ【化5-1】
【化5-2】
【化5-3】
もしくは前述の化合物のいずれか１つの誘導体、
または前述の化合物のいずれか１つもしくは前述の化合物のいずれか１つの誘導体の薬学的に許容される塩から選択される、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項4】
式Ｉの化合物は、化合物１：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、
化合物２：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ａ－Ｎ－ＯＨ、
化合物３：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＮＨ２、
化合物４：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－ｎ－ＯＨ、
化合物５：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ａ－Ｎ－ＮＨ２、
化合物６：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｖ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、
化合物７：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｉ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、
化合物８：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、
化合物９：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｈ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、
化合物１０：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－Ｋ－ＯＨ、
化合物１１：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、
化合物１２：ＤＯＴＡ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、
化合物１３：Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－ＮＨ２、
化合物１４：Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、
化合物１５：Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、および
化合物１６：ＮＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
からなる群から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項5】
式Ｉの化合物は、化合物１：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、
化合物３：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＮＨ２、
化合物４：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－ｎ－ＯＨ、
化合物５：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ａ－Ｎ－ＮＨ２、
化合物６：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｖ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、
化合物１１：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、
化合物１２：ＤＯＴＡ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、
化合物１３：Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－ＮＨ２、および
化合物１６：ＮＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
からなる群から選択される、請求項４に記載の組成物。
【請求項6】
式Ｉの化合物は、化合物１：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ、
化合物２：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ａ－Ｎ－ＯＨ、
化合物３：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＮＨ２、
化合物５：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ａ－Ｎ－ＮＨ２、および
化合物１６：ＮＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
からなる群から選択される、請求項４に記載の組成物。
【請求項7】
式Ｉの化合物は、化合物１：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨである、請求項４に記載の組成物。
【請求項8】
Ｍは、（ｉ）６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、１１１Ｉｎ、９９ｍＴｃ、Ｇｄ、１７７Ｌｕおよび８６／９０Ｙ
（ｉｉ）６８Ｇａ、または
（ｉｉｉ）１８Ｆ
である、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項9】
前記組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤および／または希釈剤をさらに含む医薬組成物である、請求項１～８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項10】
線維症の診断および／またはモニタリングに使用するための、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項11】
線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者における線維症の程度の診断および／またはモニタリングに使用するための、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項12】
線維症は、以下：肝線維症、腎線維症、心臓線維症、膵線維症、脳線維症、特発性肺線維症のような肺線維症のうちの１つまたはそれ以上である、請求項１０または１１に記載の使用のための組成物。
【請求項13】
線維症の診断および／またはモニタリングは、線維症の程度の診断および／またはモニタリングを伴う、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項14】
診断および／またはモニタリングは、－ ｅｘ ｖｉｖｏ、および／または
－ 患者体内などのｉｎ ｖｉｖｏ
で行われる陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）のようなイメージングを伴う、請求項１０～１３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項15】
線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者における線維症の程度の診断および／またはモニタリングのような、線維症の診断および／またはモニタリングのための、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項16】
線維症は、肝線維症、腎線維症、心臓線維症、膵線維症、脳線維症、特発性肺線維症のような肺線維症のうちの１つまたはそれ以上である、請求項１５に記載の使用。
【請求項17】
診断および／またはモニタリングは、－ ｅｘ ｖｉｖｏ、および／または
－ 患者体内などのｉｎ ｖｉｖｏ
で行われる陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）のようなイメージングを伴う、請求項１５または１６に記載の使用。
【請求項18】
請求項１、および３～７に定義される式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項19】
請求項２～８に定義される式ＩＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項20】
イメージング剤として使用するための、請求項１９に記載の化合物。
【請求項21】
線維症の診断および／またはモニタリングに使用するための、請求項１９または２０に記載の化合物。
【請求項22】
線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者における線維症の程度の診断および／またはモニタリングに使用するための、請求項２１に記載の化合物。
【請求項23】
線維症は、肝線維症、腎線維症、心臓線維症、膵線維症、脳線維症、特発性肺線維症のような肺線維症のうちの１つまたはそれ以上である、請求項２２に記載の使用のための化合物。
【請求項24】
診断および／またはモニタリングは、－ ｅｘ ｖｉｖｏ、および／または
－ 患者体内などのｉｎ ｖｉｖｏ
で行われる陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）のようなイメージングを伴う、請求項２１～２３のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項25】
線維症の診断および／またはモニタリングのための方法であって：ａ）以下：請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物、または
請求項１９に記載の化合物、
のうちの１つまたはそれ以上から選択されるイメージング剤を、線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者に投与する工程；
ｂ）陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）イメージングのような医用イメージング技術を患者に施し、工程ａ）において投与されたイメージング剤からの信号を記録する工程；
ｃ）患者が線維症に罹患しているかどうかを判断および／またはモニタリングする工程、ならびに
ｄ）場合により、線維症の程度を判断する工程
を含む、方法。
【請求項26】
線維症は、肝線維症、腎線維症、心臓線維症、膵線維症、脳線維症および／または特発性肺線維症のような肺線維症などの固形臓器の線維症である、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
患者は、以下：コルチコステロイド、抗ウイルス薬、糖尿病治療薬、血圧調節薬、アンジオテンシン受容体遮断薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、ベータ遮断薬、アルドステロン拮抗薬、血管内皮細胞増殖因子阻害薬のうちの１つまたはそれ以上を伴う治療のような線維症の治療を受ける、請求項２５または２６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、非環状ペプチド、リンカー、キレート剤、および放射性核種のような核種を含む新規化合物に関する。該化合物は、患者の肝臓、腎臓、心臓、脳、膵臓、および肺に生じる線維症のような線維症の診断および／またはモニタリングに使用するための放射性トレーサーのようなトレーサーとして使用することができる。本開示はさらに、該化合物を製造する方法、前述の方法における中間体として使用することができる化合物、ならびに患者における線維症の診断および／またはモニタリングのための方法に関する。
【背景技術】
【0002】
線維化は、傷害に対する反応として正常な生理機能で起こり得る結合組織の形成であり、これは瘢痕化として知られている。しかし、病理学的な線維化形成を構成する結合組織の過剰な形成および沈着は、疾患にある多くの異なる組織、例えば、肝臓、腎臓、心臓、脳、膵臓、肺において重要な特徴である。病理学的な線維化形成は、コラーゲン、特にＩ型コラーゲンの産生および沈着の増加によるもので、その結果、組織の弾性が失われ、臓器の機能が徐々に失われる。肝臓、腎臓、心臓、脳、膵臓、肺のような臓器に関わる、多くの蔓延する重症疾患に線維化が関与していることが見出されている。
【0003】
線維化疾患、すなわち線維症に対する現在の治療は、主に炎症カスケードを標的としているが、新規治療の開発努力は非常に困難であることが判明している。治療の目的は、線維化過程を遅らせることである。現在までのところ、残念ながら線維症を回復に向かわせることができる利用可能な薬物は存在しない。炎症系を標的とした薬物の開発という課題に加え、線維化疾患には信頼できるバイオマーカーがないことが多い。いくつかの前臨床疾患モデルが開発されているが、多くの場合、マウスからヒトへの「トランスレータビリティ」に問題がある。線維化疾患の診断は、採取可能な場合、生検サンプルから判断することができる。しかし、薬物開発に求められるように、線維化過程の変化を正確に、かつ繰り返し測定する方法はほとんどない。肝線維化疾患では、磁気共鳴エラストグラフィー（ＭＲＥ）が肝硬度の非侵襲的バイオマーカーとして使用されているが、ほとんどの線維化疾患ではそのような非侵襲的方法はまだ利用可能ではない。当然ながら、非侵襲的な方法は、生検のような侵襲的な方法よりも便利で、繰り返し実施することができ、患者を傷つけるリスクが低いので、より望ましい方法である。したがって、線維症を検出するためのさらなる非侵襲的診断方法が提案されている。
【0004】
非特許文献１は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）による線維症のイメージングおよび定量化のための６８Ｇａ標識コラゲリンアナログの合成および前臨床評価を開示している。コラーゲンは、線維化組織の直接的な特定をもたらす線維症の分子イメージングにおいて標的とすることができるバイオマーカーであるため、該アナログは、線維化組織において過剰発現したコラーゲンに結合することを目的として製造された。トレーサーは、腎臓および膀胱を除くほとんどの臓器から顕著なウォッシュアウトパターンを示したことが開示されている。
【0005】
非特許文献２は、前臨床モデルにおける肺線維症の検出および病期分類のためのＩ型コラーゲン標的ＰＥＴプローブを開示している。使用されたプローブは、Ｉ型コラーゲンに特異性を有することが見出された６８Ｇａ－ＣＢＰ８である。６８Ｇａ－ＣＢＰ８は、線維症マウスの肺で対照マウスと比較して著しく増強されたＰＥＴ信号をもたらしたこと、周辺組織での非特異的集積は線維症マウス、対照マウスとも同様で低いが、腎臓で高いオフターゲット蓄積を示したことが記載されている。
【0006】
特許文献１は、軟組織の状態に苦しむ対象の治療において有用性を有するポリマーコンジュゲートを開示している。ポリマーコンジュゲートは、配列ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ（ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ命名法）を有するペプチドのようなコラーゲン結合剤で置換された硫酸化グリコサミノグリカン鎖を含む。
【0007】
このように、コラーゲン、特にＩ型コラーゲンは、線維症のバイオマーカーとして公知である。さらに、腎臓を除く全ての臓器において、上記の放射性トレーサーの環状ペプチドは、低いバックグラウンド結合を示しながら、コラーゲンに親和性を有することが見出されている。
【0008】
重要なことには、線維症の正確なイメージングを可能にするため、放射性トレーサーのようなトレーサーは、正常組織への非特異的結合が少なく、血液クリアランス、および健常な臓器からのウォッシュアウトが速いべきである。したがって、Ｉ型コラーゲンのようなコラーゲンの沈着物を欠く組織への結合は少ないか、全くないべきである。言い換えれば、放射性トレーサーの生体内分布は、主に線維化組織を伴う臓器に結合が起こるように選択的であるべきである。
【0009】
放射性トレーサーは、多くの異なる理由で組織内での滞留を示すことがある。コラーゲン標的放射性トレーサーは、例えば、細胞成分への非特異的結合、または受容体のような分子実体の意図的でない特異的標的化によって組織内で滞留することがある。放射性標識ペプチドは、さらに、尿中排泄の際に腎尿細管で再吸収を示し、その後、腎皮質で放射性核種が細胞内にトラップされることがある。このような組織での滞留は、その原因に関わらず、該組織における線維化病変の存在および／または進行の測定および診断の妨げとなる。
【0010】
さらに、線維症の存在を検出するためには、臓器全体の線維化を確実に調査するために、放射性トレーサーが臓器に十分に浸透可能であることが重要である。肝臓、腎臓、心臓、脳、膵臓、肺のような固形臓器では、非固形臓器と比較して、十分な浸透がより困難な場合がある。
【0011】
腎臓に対する好適な生体内分布のように、全ての臓器またはほとんどの臓器に好適な生体内分布を有する線維症用放射性トレーサーのようなトレーサーが必要である。さらに、線維症を調査している臓器全体に浸透可能な線維症用トレーサーが必要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0012】
【特許文献1】ＷＯ２０１８／０５３２７６
【非特許文献】
【0013】
【非特許文献1】Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４１（２０１４）７２８～７３６頁
【非特許文献2】Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓ．Ｍｅｄ．９，２０１７，１～１１頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0014】
本開示の目的は、上述した問題のうちの少なくとも１つまたはそれ以上を緩和することである。さらに、本開示の目的は、これまで知られている技術によって提供されない利点および／または態様を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0015】
上記の目的は、請求項１もしくは２に記載の組成物、または請求項１９に記載の化合物により、および請求項２５に記載の方法を使用することにより達成することができる。さらなる実施形態は、従属請求項、明細書および図面に記載されている。
【0016】
本開示は：
（ｉ）式Ｉの化合物：
またはその薬学的に許容される塩、
および
（ｉ）式Ｉの化合物：
【化1】
および
【0017】
（ｉｉ）核種Ｍ、またはその薬学的に許容される塩を含む組成物であって、
Ｃは：
からなる群から選択されるキレート剤、
および前記キレート剤のいずれか１つの誘導体であり、
Ｃは：
【化2-1】
【化2-2】
および前記キレート剤のいずれか１つの誘導体であり、
【0018】
Ｌはリンカー：
（式中、
ｍは、１～２０の範囲内の整数であり、
ＸはＮＨまたはＣ（Ｏ）であり、キレート剤のＣ（Ｏ）またはＮＨ部分とアミド結合、すなわちＣ（Ｏ）ＮＨを形成する）
であり、
ｐは０または１であり、
Ｑは、
配列番号１のペプチド、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一性を有する配列番号１のペプチドアナログ、および／または
Ｃ末端のＣＯＯＨがＣＯＮＨ２で置き換えられた配列番号１のペプチド、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一性を有する配列番号１のペプチドアナログであり、
Ｍは、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、４４Ｓｃ、８９Ｚｒ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、Ｍｎ、Ｇｄ、１７７Ｌｕおよび８６／９０Ｙからなる群から選択される、組成物を提供する。
【化3】
ｍは、１～２０の範囲内の整数であり、
ＸはＮＨまたはＣ（Ｏ）であり、キレート剤のＣ（Ｏ）またはＮＨ部分とアミド結合、すなわちＣ（Ｏ）ＮＨを形成する）
であり、
ｐは０または１であり、
Ｑは、
配列番号１のペプチド、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一性を有する配列番号１のペプチドアナログ、および／または
Ｃ末端のＣＯＯＨがＣＯＮＨ２で置き換えられた配列番号１のペプチド、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一性を有する配列番号１のペプチドアナログであり、
Ｍは、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、４４Ｓｃ、８９Ｚｒ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、Ｍｎ、Ｇｄ、１７７Ｌｕおよび８６／９０Ｙからなる群から選択される、組成物を提供する。
【0019】
本開示はまた、本明細書に記載される式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0020】
さらに、本開示は、式ＩＩの化合物：
またはその薬学的に許容される塩であって、
前記式ＩＩの化合物は、
（ｉ）請求項１に定義される式Ｉの化合物、および
（ｉｉ）請求項１に定義される核種Ｍの組み合わせ
であり、
ここで、（ｉ）および（ｉｉ）は、１に等しい（ｉ）／（ｉｉ）比で提供される、化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【化4】
前記式ＩＩの化合物は、
（ｉ）請求項１に定義される式Ｉの化合物、および
（ｉｉ）請求項１に定義される核種Ｍの組み合わせ
であり、
ここで、（ｉ）および（ｉｉ）は、１に等しい（ｉ）／（ｉｉ）比で提供される、化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0021】
また、
線維症の診断および／またはモニタリングに使用するための、
本明細書に記載される組成物、
または、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物、もしくはその薬学的に許容される塩が提供される。
線維症の診断および／またはモニタリングに使用するための、
本明細書に記載される組成物、
または、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物、もしくはその薬学的に許容される塩が提供される。
【0022】
また、
線維症の診断および／またはモニタリング用製剤を製造するための、
本明細書に記載される組成物、
または、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物、もしくはその薬学的に許容される塩が提供される。
線維症の診断および／またはモニタリング用製剤を製造するための、
本明細書に記載される組成物、
または、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物、もしくはその薬学的に許容される塩が提供される。
【0023】
また、
線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者における線維症の診断および／またはモニタリングのような、線維症の診断および／またはモニタリングのための、
本明細書に記載される組成物、
または、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物、もしくはその薬学的に許容される塩の使用も提供される。
線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者における線維症の診断および／またはモニタリングのような、線維症の診断および／またはモニタリングのための、
本明細書に記載される組成物、
または、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物、もしくはその薬学的に許容される塩の使用も提供される。
【0024】
さらに、線維症の診断および／またはモニタリングのための方法であって：
ａ）以下：
本明細書に記載される組成物、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物の薬学的に許容される塩、のうちの１つまたはそれ以上から選択されるイメージング剤を、
線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者に投与する工程；
ｂ）陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）イメージングのような医用イメージング技術を患者に施し、工程ａ）において投与されたイメージング剤からの信号を記録する工程；
ｃ）患者が線維症に罹患しているかどうかを判断および／またはモニタリングする工程、ならびに
ｄ）場合により、線維症の程度を判断する工程を含む、方法が提供される。
ａ）以下：
本明細書に記載される組成物、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物の薬学的に許容される塩、のうちの１つまたはそれ以上から選択されるイメージング剤を、
線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者に投与する工程；
ｂ）陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）イメージングのような医用イメージング技術を患者に施し、工程ａ）において投与されたイメージング剤からの信号を記録する工程；
ｃ）患者が線維症に罹患しているかどうかを判断および／またはモニタリングする工程、ならびに
ｄ）場合により、線維症の程度を判断する工程を含む、方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【0025】
【図1】ＤＯＴＡ、すなわち１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸の化学構造を示す図である。
【図2】ＮＯＴＡ、すなわち１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸の化学構造を示す図である。
【図3】ＴＥＴＡ、すなわち１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－１，４，８，１１－四酢酸の化学構造を示す図である。
【図4】ＤＴＰＡ、すなわち、ジエチレントリアミン五酢酸の化学構造を示す図である。
【図5】ＤＦＯ、すなわち、デスフェリオキサミンＢの化学構造を示す図である。
【図6】ＮＯＴＡＧＡの化学構造を示す図である。
【図7】ＤＯＴＡＧＡの化学構造を示す図である。
【図8】化合物１の化学構造を示す図である。
【図9】化合物１４の化学構造を示す図である。
【図10】図１０ａは、線維化誘発肝組織に対する［６８Ｇａ］Ｇａ－ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨの結合全体および非特異的結合を、非線維化肝臓と比較して示す図である。図１０ｂは、［６８Ｇａ］Ｇａ－ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨの肝組織への結合強度、および結合強度と線維症の程度との相関を示す図である。
【図11】ラットにおける［６８Ｇａ］Ｇａ－ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨの生体内分布を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0026】
本開示は：
（ｉ）式Ｉの化合物：
もしくはその薬学的に許容される塩、
および
（ｉ）式Ｉの化合物：
【化5】
および
【0027】
（ｉｉ）核種Ｍ、もしくはその薬学的に許容される塩を含む組成物、または（ｉ）および（ｉｉ）からなる組成物であって、
Ｃは：
からなる群から選択されるキレート剤、
および前記キレート剤のいずれか１つの誘導体であり、
Ｃは：
【化6-1】
【化6-2】
および前記キレート剤のいずれか１つの誘導体であり、
【0028】
Ｌはリンカー：
（式中、
ｍは、１～２０の範囲内の整数であり、
ＸはＮＨまたはＣ（Ｏ）であり、キレート剤のＣ（Ｏ）またはＮＨ部分とアミド結合、すなわちＣ（Ｏ）ＮＨを形成する）
であり、
ｐは０または１であり、
Ｑは配列番号１のペプチド、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一性を有する配列番号１のペプチドアナログ、および／または
Ｃ末端のＣＯＯＨがＣＯＮＨ２で置き換えられた配列番号１のペプチド、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一性を有する配列番号１のペプチドアナログであり、
Ｍは、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、４４Ｓｃ、８９Ｚｒ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、Ｍｎ、Ｇｄ、１７７Ｌｕおよび８６／９０Ｙからなる群から選択される、組成物を提供する。
【化7】
ｍは、１～２０の範囲内の整数であり、
ＸはＮＨまたはＣ（Ｏ）であり、キレート剤のＣ（Ｏ）またはＮＨ部分とアミド結合、すなわちＣ（Ｏ）ＮＨを形成する）
であり、
ｐは０または１であり、
Ｑは配列番号１のペプチド、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一性を有する配列番号１のペプチドアナログ、および／または
Ｃ末端のＣＯＯＨがＣＯＮＨ２で置き換えられた配列番号１のペプチド、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一性を有する配列番号１のペプチドアナログであり、
Ｍは、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、４４Ｓｃ、８９Ｚｒ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、Ｍｎ、Ｇｄ、１７７Ｌｕおよび８６／９０Ｙからなる群から選択される、組成物を提供する。
【0029】
本明細書に記載の組成物は、式ＩＩの化合物：
またはその薬学的に許容される塩であって、
前記化合物は、
（ｉ）本明細書に記載される式Ｉの化合物、および
（ｉｉ）本明細書に記載される核種Ｍの組み合わせ
である、化合物またはその薬学的に許容される塩を含んでもよい。
【化8】
前記化合物は、
（ｉ）本明細書に記載される式Ｉの化合物、および
（ｉｉ）本明細書に記載される核種Ｍの組み合わせ
である、化合物またはその薬学的に許容される塩を含んでもよい。
【0030】
式Ｉの化合物と、式ＩＩの化合物における核種Ｍとの比、すなわち（ｉ）／（ｉｉ）は、１に等しくてもよい。したがって、式Ｉの化合物と、式ＩＩの化合物における核種Ｍとの比、すなわち（ｉ）／（ｉｉ）が１に等しい、本明細書に記載される組成物が提供される。しかしながら、化学量論比を制御することが常に可能であるとは限らず、したがって、式Ｉの化合物と核種Ｍとは、不等モル量のような不等量で組み合わせ、その結果、追加量の式Ｉの化合物および／または核種Ｍと合わせて、式Ｉの化合物と核種との比が１である前述の式ＩＩの化合物を含む組成物を得てもよい。
【0031】
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、式Ｉの化合物または式ＩＩの化合物のような本明細書に記載される化合物は、コラーゲンＩに結合することにより作用すると考えられる。その結果、前述の化合物または前述の化合物を含む組成物は、本明細書に記載される線維症のような線維症のイメージング剤として使用することができる。
【0032】
本明細書に記載される化合物は：１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－１，４，８，１１－四酢酸（ＴＥＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、デスフェリオキサミンＢ（ＤＦＯ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－酢酸（ＮＯＴＡＧＡ）、２－［４，７，１０－トリス（カルボキシメチル）－１，４，７，１０－テトラアザ－１－シクロドデシル］グルタル酸（ＤＯＴＡＧＡ）、およびこれらの誘導体からなる群から選択されるキレート剤を含んでもよく、該キレート剤からなってもよい。誘導体は、１種またはそれ以上のカルボン酸の、アミドまたはエステルへの交換を含んでもよい。さらなる例では、ＤＯＴＡＧＡをＤＯＴＡの代わりに使用してもよい。本明細書に記載される化合物のキレート剤がＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、ＴＥＴＡ、ＤＴＰＡ、ＮＯＴＡＧＡまたはＤＯＴＡＧＡをベースとする場合、カルボン酸の１つのヒドロキシル基がＮＨと交換され、ＮＨを介してリンカーへの結合が行われる。本明細書に記載される化合物のキレート剤がＤＦＯである場合、ＤＦＯはその末端アミノ基を介してリンカーのカルボニル基に結合する。本明細書で使用される場合、カルボニル基はＣＯまたはＣ（Ｏ）と表すことがある。
【0033】
本明細書に開示される化合物の整数ｍの値は、上記の範囲内、すなわち１～２０の整数であり得ることが理解されよう。一例では、ｍは１、２または３である。
【0034】
本明細書に記載されるように、リンカーＬは、キレート剤のＣ（Ｏ）またはＮＨ部分とアミド結合、すなわちＣ（Ｏ）ＮＨを形成するＮＨまたはＣ（Ｏ）であり得るＸを含む。したがって、ＸがＮＨである場合、Ｘはキレート剤のＣ（Ｏ）部分、すなわち、カルボニル基に結合する。さらに、ＸがＣ（Ｏ）である場合、Ｘはキレート剤のＮＨ部分に結合する。
【0035】
さらに、本明細書に記載されるように、リンカーＬは：
である。
【化9】
【0036】
したがって、リンカーＬは、－Ｘ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－として設計してもよい。このことから、式Ｉの化合物は、キレート剤－［Ｘ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）］ｐ－Ｑとして設計してもよい。例えば、キレート剤ＣがＤＯＴＡ、ＸがＮＨ、ｍが２、ｐが１、ＱがＬＲＥＬＨＬＮＮＮの場合、式Ｉの化合物はＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨと設計してもよい。
【0037】
本明細書に記載される化合物のペプチドＱは、Ｃ末端のＣＯＯＨがＣＯＮＨ２に置き換えられた配列番号１（ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ）または配列番号１のアナログによるペプチド（すなわちアミノ酸配列）を含んでもよく、またはそれからなってもよい。Ｃ末端のＣＯＯＨがＣＯＮＨ２で置き換えられている場合、配列は例えば－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＮＨ２と書かれる。あるいは、本明細書に記載される化合物のペプチドＱは、Ｃ末端のＣＯＯＨがＣＯＮＨ２で置き換えられた、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一性を有するペプチド、もしくは配列番号１のアナログに対して少なくとも８８．８％の同一性を有する配列を有するペプチドを含んでもよく、またはそれからなってもよい。本明細書の文脈において、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８８．８％の同一性を有するアミノ酸配列を有するペプチドによって、配列番号１のアミノ酸配列が１つのアミノ酸変化を含み得ることを除き、配列番号１と同一であるペプチドが意図される。この１つのアミノ酸変化は、天然アミノ酸、すなわちＬアミノ酸、またはＤアミノ酸を伴ってもよい。言い換えれば、配列番号１に対して少なくとも８８．８％の同一であるアミノ酸配列を有するペプチドを得るために、配列番号１中の１つのアミノ酸を欠失、伸長、もしくは他のアミノ酸で置換してもよく、または１つのアミノ酸を配列番号１に挿入してもよい。置換、伸長または挿入に使用されるアミノ酸は、天然アミノ酸であってもよく、Ｄアミノ酸であってもよい。配列番号１のこれらのアミノ酸変化は、アミノまたはカルボキシ末端位置のいずれか、または配列番号１のアミノ酸の間に個別に散在するそれらの末端位置の間のどこでも起こり得る。
【0038】
ペプチドＬＲＥＬＨＬＮＮＮ中の文字は、各アミノ酸の立体配置がＬ、すなわち天然アミノ酸である通常のアミノ酸の文字である。したがって、ＬＲＥＬＨＬＮＮＮは、全てのアミノ酸が天然アミノ酸であるＬｅｕ－Ａｒｇ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｈｉｓ－Ｌｅｕ－Ａｓｎ－Ａｓｎ－Ａｓｎの配列を意図している。本明細書では、Ｌｅｕはロイシン、Ａｒｇはアルギニン、Ｇｌｕはグルタミン酸、Ｈｉｓはヒスチジン、Ａｓｎはアスパラギンを表している。ペプチドＱは非環状ペプチドである。
【0039】
２つのアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列の間の同一性パーセントは、一致した数を、同定された配列に示される長さで割った後、得られた値に１００を乗じることによって決定される。本明細書の全体にわたって使用される「同一性％」、「同一％」のような用語は、例えば、以下のように算出することができる：クエリ配列は、ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗアルゴリズム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、（１９９４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２２：４６７３～４６８０頁）を使用して標的配列にアライメントされる。比較は、アライメントされた配列のうち最も短い配列に対応するウィンドウで行われる。アライメントされた配列のうち最も短い配列が標的配列である場合もある。その他の場合、クエリ配列がアライメントされた配列のうち最も短い配列を構成することもある。各位置のアミノ酸残基を比較し、クエリ配列の中で標的配列と同一である対応位置の割合を、同一性％として報告する。
【0040】
ペプチドＱのアミノ酸は、立体配置がＬ、すなわち、天然アミノ酸（大文字で表記）、または立体配置がＤのいずれかであり得る。立体配置がＤのアミノ酸は、小文字で表記される。本明細書に記載される式Ｉの化合物におけるペプチドＱのさらなる例は、以下の表Ｉに列挙されている。
【0041】
Ｑのアミノ酸は、ＱをＬＲＥＬＨＬＮＮＮとして記載してもよいように、当該技術分野において公知の１文字コードで記載してもよい。本明細書に記載される化合物には、Ｎ末端が左側にあり、Ｃ末端が右側にあるように設計された直鎖（すなわち、非環状）ペプチドがあることが理解されよう。
【0042】
リンカーＬは、Ｑのアミノ酸のうちの１つにおける任意のアミノ基と結合することができる。Ｎ末端アミノ基の水素のいずれか１つがリンカーＬへの結合で置き換えられてもよく、あるいは、リンカーＬは、側鎖アミノ基、例えば、Ｑの任意の位置にあるリジンにおける水素のうちの１つを置き換えることによって結合を形成してもよい。
【0043】
また、式Ｉの化合物が、式Ｉａ、式Ｉｂ、式Ｉｃ、式Ｉｄ、式Ｉｅ、式Ｉｆまたは式Ｉｇ
の化合物からなる群、
もしくは前述の化合物のいずれか１つの誘導体、
または前述の化合物のいずれか１つもしくは前述の化合物のいずれか１つの誘導体の薬学的に許容される塩から選択される、本明細書に記載される組成物も提供される。
【化10-1】
【化10-2】
【化10-3】
もしくは前述の化合物のいずれか１つの誘導体、
または前述の化合物のいずれか１つもしくは前述の化合物のいずれか１つの誘導体の薬学的に許容される塩から選択される、本明細書に記載される組成物も提供される。
【0044】
本開示はまた、本明細書に記載される式Ｉの化合物を提供する。したがって、式Ｉの化合物：
（式中、Ｃ、Ｌ、ｐ、およびＱは、本明細書に記載される通りである）
またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【化11】
またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【0045】
例えば、ｐが０である場合、式Ｉの化合物の構造はＣ－Ｑであり、すなわち、リンカーは存在しない。ｐが１である場合、式Ｉの化合物の構造はＣ－Ｌ－Ｑである。
【0046】
【0047】
化合物２
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ａ－Ｎ－ＯＨ
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ａ－Ｎ－ＯＨ
【0048】
化合物３
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＮＨ２
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＮＨ２
【0049】
化合物４
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－ｎ－ＯＨ
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－ｎ－ＯＨ
【0050】
化合物５
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ａ－Ｎ－ＮＨ２
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ａ－Ｎ－ＮＨ２
【0051】
化合物６
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｖ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｖ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
【0052】
化合物７
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｉ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｉ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
【0053】
化合物８
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
【0054】
化合物９
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｈ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｈ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
【0055】
化合物１０
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－Ｋ－ＯＨ
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－Ｋ－ＯＨ
【0056】
化合物１１
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
【0057】
化合物１２
ＤＯＴＡ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
ＤＯＴＡ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
【0058】
化合物１３
Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－ＮＨ２
Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－ＮＨ２
【0059】
化合物１４
Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ（図９参照）
Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ（図９参照）
【0060】
化合物１５
Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
【0061】
化合物１６
ＮＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
を有してもよい。
ＮＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
を有してもよい。
【0062】
化合物１～１６のキレート剤、リンカー、ペプチドおよびペプチドＣ末端は、以下の表Ｉにまとめられている：
【0063】
【表1】
【0064】
化合物１３、１４および１５において、リンカーはペプチドのＮ末端ではなく、代わりにペプチド中の異なる位置にあるリジンのアミノ側鎖に結合している。結合部分には、互いに結合しているリンカーおよびリジンの両方に＊を表記している。太字で表記した部分は、表Ｉ中の化合物番号１と比較した、式Ｉの化合物の変化（すなわち、配列番号におけるキレート剤（Ｃ）、リンカー（Ｌ）またはペプチド配列（Ｑ）の変化）を表す。
【0065】
また、本明細書に記載される式ＩＩの化合物が提供される。したがって、式ＩＩの化合物：
（式中、Ｃ、Ｌ、ｐ、ＱおよびＭは、本明細書に記載される通りである）
またはその薬学的に許容される塩であって、
前記式ＩＩの化合物は、
（ｉ）本明細書に記載される式Ｉの化合物、および
（ｉｉ）本明細書に記載される核種Ｍの組み合わせ
である、化合物またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【化12】
またはその薬学的に許容される塩であって、
前記式ＩＩの化合物は、
（ｉ）本明細書に記載される式Ｉの化合物、および
（ｉｉ）本明細書に記載される核種Ｍの組み合わせ
である、化合物またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【0066】
式ＩＩの化合物において、式Ｉの化合物および核種Ｍは、１に等しい比、すなわち１／１で提供してもよい。さらに、式ＩＩの化合物は、追加量の式Ｉの化合物および核種Ｍと混和して提供してもよい。
【0067】
式ＩＩの化合物の核種Ｍは、キレート剤における１つもしくはそれ以上の窒素原子、および／またはキレート剤におけるカルボン酸基の１つもしくはそれ以上の酸素に配位すると考えられる。例えば、キレート剤がＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、ＴＥＴＡ、ＤＴＰＡ、ＮＯＴＡＧＡまたはＤＯＴＡＧＡをベースとする場合、核種Ｍは環状構造の１つもしくはそれ以上の窒素原子、および／または１つもしくはそれ以上のカルボン酸基に配位することがある。
【0068】
核種Ｍは、本明細書に記載される通りであり得る。Ｍが放射性核種である場合、以下：６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、４４Ｓｃ、８９Ｚｒ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕ、８６／９０Ｙのうちのいずれか１つであり得る。さらに、核種Ｍは、以下の群：
（ｉ）６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、１１１Ｉｎ、９９ｍＴｃ、Ｇｄ、１７７Ｌｕおよび８６／９０Ｙ
（ｉｉ）６８Ｇａ、または
（ｉｉｉ）１８Ｆ
から選択してもよい。
（ｉ）６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、１１１Ｉｎ、９９ｍＴｃ、Ｇｄ、１７７Ｌｕおよび８６／９０Ｙ
（ｉｉ）６８Ｇａ、または
（ｉｉｉ）１８Ｆ
から選択してもよい。
【0069】
本明細書に記載される核種Ｍは、誘導体および／または錯体として提供してもよいことが理解されよう。例えば、１８Ｆは、フッ化アルミニウム－１８（Ａｌ１８Ｆ）として提供してもよい。
【0070】
核種Ｍの選択は、式Ｉの化合物中のキレート剤Ｃに依存し得る。例えば、本明細書に記載される化合物であって：
キレート剤ＣがＤＯＴＡ、核種Ｍが６８Ｇａ、６４Ｃｕ、１１１Ｉｎ、ＭｎもしくはＧｄ、または１７７Ｌｕである、
キレート剤ＣがＮＯＴＡ、核種Ｍが６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕまたは１１１Ｉｎである、
キレート剤ＣがＴＥＴＡ、核種Ｍが６４Ｃｕである、
キレート剤ＣがＤＦＯ、核種Ｍが８９Ｚｒである、
キレート剤ＣがＤＴＰＡ、核種Ｍが１１１Ｉｎまたは９９ｍＴｃである、
キレート剤ＣがＮＯＴＡＧＡ、核種Ｍが６８Ｇａ、６４Ｃｕまたは１１１Ｉｎである、および
キレート剤ＣがＤＯＴＡＧＡ、核種Ｍが１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、８６／９０Ｙである、
化合物が提供される。
キレート剤ＣがＤＯＴＡ、核種Ｍが６８Ｇａ、６４Ｃｕ、１１１Ｉｎ、ＭｎもしくはＧｄ、または１７７Ｌｕである、
キレート剤ＣがＮＯＴＡ、核種Ｍが６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕまたは１１１Ｉｎである、
キレート剤ＣがＴＥＴＡ、核種Ｍが６４Ｃｕである、
キレート剤ＣがＤＦＯ、核種Ｍが８９Ｚｒである、
キレート剤ＣがＤＴＰＡ、核種Ｍが１１１Ｉｎまたは９９ｍＴｃである、
キレート剤ＣがＮＯＴＡＧＡ、核種Ｍが６８Ｇａ、６４Ｃｕまたは１１１Ｉｎである、および
キレート剤ＣがＤＯＴＡＧＡ、核種Ｍが１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、８６／９０Ｙである、
化合物が提供される。
【0071】
本明細書に記載される式ＩＩの化合物における核種Ｍの存在により、線維症の診断および／またはモニタリングが可能になる。したがって、式ＩＩの化合物はトレーサーと考えることができる。核種が放射性核種である場合、すなわち電離放射線の形態などで過剰なエネルギーを放出し得る不安定な原子である場合、式ＩＩの化合物は、放射性トレーサーと考えることができる。放射性核種のような核種により、式ＩＩの化合物がコラーゲンＩを含む線維化組織に結合した際に追跡することが可能になる。トレーサーが放射性トレーサーである場合、その放射性崩壊を追跡に使用することができる。
【0072】
本明細書に記載されるトレーサーは、イメージング剤と考えることができる。したがって、式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩は、イメージング剤であり得る。さらに、本明細書に記載される組成物は、イメージング剤であり得る。
【0073】
本明細書に記載される組成物は、場合により、薬学的に許容される担体、賦形剤および／または希釈剤をさらに含む医薬組成物であり得る。
【0074】
また、
線維症の診断および／またはモニタリングに使用するための、
本明細書に記載される組成物、
または
本明細書に記載される式ＩＩの化合物もしくはその薬学的に許容される塩も提供される。診断および／またはモニタリングは、線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者において行ってもよい。
線維症の診断および／またはモニタリングに使用するための、
本明細書に記載される組成物、
または
本明細書に記載される式ＩＩの化合物もしくはその薬学的に許容される塩も提供される。診断および／またはモニタリングは、線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者において行ってもよい。
【0075】
また、
線維症の診断および／またはモニタリング用製剤を製造するための、
本明細書に記載される組成物、
または、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物もしくはその薬学的に許容される塩も提供される。
線維症の診断および／またはモニタリング用製剤を製造するための、
本明細書に記載される組成物、
または、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物もしくはその薬学的に許容される塩も提供される。
【0076】
また、
線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者における線維症の診断および／またはモニタリングのような、線維症の診断および／またはモニタリングのための、
本明細書に記載される組成物、
または、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物もしくはその薬学的に許容される塩の使用も提供される。
線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者における線維症の診断および／またはモニタリングのような、線維症の診断および／またはモニタリングのための、
本明細書に記載される組成物、
または、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物もしくはその薬学的に許容される塩の使用も提供される。
【0077】
予想外に、本明細書に記載される組成物および化合物により、線維症の診断および／またはモニタリングが可能になることが見出されている。診断および／またはモニタリングは、イメージングを伴ってもよい。例えば、イメージング方法は、以下：
陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）
単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、または
磁気共鳴画像（ＭＲＩ）、のうちの１つまたはそれ以上であり得る。
イメージングは、ｅｘ ｖｉｖｏで行ってもよく、患者体内などのｉｎ ｖｉｖｏで行ってもよい。
陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）
単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、または
磁気共鳴画像（ＭＲＩ）、のうちの１つまたはそれ以上であり得る。
イメージングは、ｅｘ ｖｉｖｏで行ってもよく、患者体内などのｉｎ ｖｉｖｏで行ってもよい。
【0078】
さらに、驚くべきことに、本明細書に記載される組成物および化合物は、線維症の影響を受けた臓器に対して良好な生体内分布をもたらすことが見出されている。良好な生体内分布は、特に、腎線維症について見出されている。
【0079】
イメージング方法の選択は、本明細書に記載される式ＩＩの化合物においてどの核種Ｍが使用されるかに影響を与えるであろう。例えば、イメージング方法としてＰＥＴを使用する場合、核種は６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、４４Ｓｃ、８９Ｚｒおよび８６Ｙであり得る。さらなる例では、イメージング方法としてＳＰＥＣＴを使用する場合、核種Ｍは１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、９０Ｙおよび１７７Ｌｕであり得る。さらなる例では、イメージング方法としてＭＲＩを使用する場合、核種ＭはＭｎまたはＧｄであり得る。
【0080】
本明細書に記載される線維症は、以下：肝線維症、腎線維症、心臓線維症、膵線維症、脳線維症、肺線維症のうちの１つまたはそれ以上であり得る。例えば、線維症は、以下：肝線維症、腎線維症、心臓線維症、膵線維症、脳線維症、特発性肺線維症のような肺線維症のうちの１つまたはそれ以上であり得る。一例において、線維症は、腎線維症であり得る。特に、本明細書に記載される線維症は、脳、心臓、腎臓、肝臓、肺および膵臓のような固形臓器で生じている線維症であり得る。本明細書で使用される場合、固形臓器は、安定した組織の硬さを有し、中空でも液体でもない臓器である。また、本明細書で言及される線維症は、眼における線維症、すなわち眼線維症であり得ることも理解される。
【0081】
さらに、線維症の診断および／またはモニタリングは、線維症の程度の診断および／またはモニタリングを伴ってもよい。例えば、線維症の診断および／またはモニタリングは、患者における線維症の治療とともに行ってもよい。このようにして、治療方法の有用性および／または線維症の程度を評価することができる。
【0082】
さらに、線維症の診断および／またはモニタリングのための方法であって：
ａ）以下：
本明細書に記載される組成物、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物の薬学的に許容される塩
のうちの１つまたはそれ以上から選択されるイメージング剤を、
線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者に投与する工程；
ｂ）陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）イメージングのような医用イメージング技術を患者に施し、工程ａ）において投与されたイメージング剤からの信号を記録する工程；
ｃ）患者が線維症に罹患しているかどうかを判断および／またはモニタリングする工程、ならびに
ｄ）場合により、線維症の程度を判断する工程を含む
方法が提供される。
ａ）以下：
本明細書に記載される組成物、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物、
本明細書に記載される式ＩＩの化合物の薬学的に許容される塩
のうちの１つまたはそれ以上から選択されるイメージング剤を、
線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者に投与する工程；
ｂ）陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）イメージングのような医用イメージング技術を患者に施し、工程ａ）において投与されたイメージング剤からの信号を記録する工程；
ｃ）患者が線維症に罹患しているかどうかを判断および／またはモニタリングする工程、ならびに
ｄ）場合により、線維症の程度を判断する工程を含む
方法が提供される。
【0083】
本明細書に記載されるモニタリングは、線維化がどの程度生じているかのモニタリングを伴ってもよいことが理解されよう。このようにして、線維症の進行をモニタリングしてもよく、および／または、異なる患者において生じている線維症の程度をモニタリングしてもよい。
【0084】
追加としてまたは代替として、線維症の診断および／またはモニタリングのための方法であって：
ａ）線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者であって、化合物ＩＩのような本明細書に記載される化合物を含む患者に、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）イメージングのような医用イメージング技術を施し、放射性核種からの信号を記録する工程；
ならびに
ｂ）患者が線維症に罹患しているかどうかを判断および／またはモニタリングする工程
を含む、方法が提供される。
ａ）線維症に罹患している、罹患していると疑われる、および／または線維症の治療を受けている患者であって、化合物ＩＩのような本明細書に記載される化合物を含む患者に、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）イメージングのような医用イメージング技術を施し、放射性核種からの信号を記録する工程；
ならびに
ｂ）患者が線維症に罹患しているかどうかを判断および／またはモニタリングする工程
を含む、方法が提供される。
【0085】
本明細書に記載される線維症の診断および／またはモニタリングのための方法において言及される線維症は、本明細書に記載されるような線維症であり得る。
【0086】
線維症の治療方法
本明細書に記載される線維症の診断および／またはモニタリングは、本明細書に記載される治療のような線維症の治療方法とともに使用することができる。次いで、線維症の治療を受けている患者における線維症の程度は、本明細書に記載される組成物および／または化合物を使用してモニタリングすることができる。
本明細書に記載される線維症の診断および／またはモニタリングは、本明細書に記載される治療のような線維症の治療方法とともに使用することができる。次いで、線維症の治療を受けている患者における線維症の程度は、本明細書に記載される組成物および／または化合物を使用してモニタリングすることができる。
【0087】
以下は、線維症によって影響を受ける主要な臓器の一部と、現在利用可能な治療選択肢のリストである。
【0088】
間質性肺疾患（ＩＬＤ）－肺の炎症および線維化が病理の最終的な共通経路である、広範囲の異なる障害を含む。特発性肺線維症は、ＩＬＤの最も一般的なタイプである。ＩＬＤは通常、最初はコルチコステロイド（例：プレドニゾン）で、時には免疫系を抑制する薬剤と組み合わせて治療される。
【0089】
肝硬変－ウイルス性肝炎、住血吸虫症、慢性アルコール中毒が世界的に主な原因であるが、脂肪肝（ＮＡＦＬＤ（非アルコール性脂肪肝）およびＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪性肝炎））の状態から肝硬変を発症することもある。治療は、主に肝硬変の原因を抑制すること（抗ウイルス剤、食事、運動、糖尿病のコントロール改善）に重点を置いている。重症の場合は、肝移植が必要となることもある。
【0090】
慢性腎臓病（ＣＫＤ）－よく見られる糖尿病の合併症であり、腎機能低下の進行につながる。また、未治療の高血圧性疾患も原因となることがある。該疾患は、ＧＦＲおよびアルブミン尿の測定によってモニタリングされることがほとんどである。臨床管理は、血圧管理、ＡＲＢ（アンジオテンシン受容体遮断薬）またはＡＣＥ－Ｉ（アンジオテンシン変換酵素阻害薬）、ナトリウム摂取量の低減、良好な糖尿病コントロール、禁煙などを伴う。
【0091】
心疾患－心筋の線維化は拡張機能障害や不全の主要な決定要因である。生検で診断できる場合もあるが、不可能であることがほとんどである。現在の非侵襲的な検出方法は、心臓の磁気共鳴画像および血清マーカーに依存している。承認された治療薬としては、ベータ遮断薬、ＡＣＥ阻害薬、アルドステロン拮抗薬が挙げられる。コラーゲン合成および架橋を標的とした新しい治療薬の開発努力も続けられている。
【0092】
眼の疾患－黄斑変性症および網膜・硝子体網膜症。新しい治療選択肢としては、眼の新生血管を阻害するＶＥＧＦ阻害薬（すなわち、血管内皮細胞増殖因子の阻害薬）が挙げられる。
【0093】
本開示は、主に線維化疾患の診断および／または程度の決定を改善することを目的としているが、治療用アイソトープによる放射性標識は、現在利用可能な治療よりも臨床的な利益をもたらす可能性がある。
【0094】
本開示はまた、本明細書に記載される線維症の診断および／またはモニタリングのための方法であって、患者が、以下：コルチコステロイド、抗ウイルス薬、糖尿病治療薬、血圧調節薬、アンジオテンシン受容体遮断薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、ベータ遮断薬、アルドステロン拮抗薬、血管内皮細胞増殖因子阻害薬のうちの１つまたはそれ以上を伴う治療のような線維症の治療を受ける、方法も提供する。
【0095】
薬学的に許容される塩
本開示の化合物は、意図された投与に好適な任意の形態で提供してもよい。好適な形態としては、本明細書に開示される化合物の薬学的に（すなわち、生理学的に）許容される塩が挙げられる。本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」としては、そのような塩が使用可能である場合、薬学的に許容される非毒性酸から製造される塩、すなわち薬学的に許容される酸付加塩、または塩基から製造される塩、すなわち薬学的に許容される塩基付加塩が挙げられる。
本開示の化合物は、意図された投与に好適な任意の形態で提供してもよい。好適な形態としては、本明細書に開示される化合物の薬学的に（すなわち、生理学的に）許容される塩が挙げられる。本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」としては、そのような塩が使用可能である場合、薬学的に許容される非毒性酸から製造される塩、すなわち薬学的に許容される酸付加塩、または塩基から製造される塩、すなわち薬学的に許容される塩基付加塩が挙げられる。
【0096】
薬学的に許容される塩の例としては、非毒性の無機および有機酸付加塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ホウ酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、アコニット酸塩、アスコルビン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、桂皮酸塩、クエン酸塩、エンボン酸塩、エナント酸塩、フマル酸塩、グルタミン酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、フタル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、ソルビン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、などが挙げられるが、これらに限定されない。また、酸のヘミ塩、例えば、ヘミ硫酸塩を形成してもよい。このような塩は、当該技術分野でよく知られ、記載されている手順によって形成してもよい。
【0097】
シュウ酸およびトリフルオロ酢酸のような、薬学的に許容されないと考えられる他の酸は、本開示の化合物およびその薬学的に許容される酸付加塩を得る際の中間体として有用な塩の製造に有用であり得る。式Ｉのペプチドのほとんどは、トリフルオロ酢酸塩として入手可能である。式Ｉの前駆体は、核種とともに加熱され、その後、ＨＣｌ溶液によりカラムから溶出される。トレーサーの線量は、対象に投与される場合、かなり低いため、トレーサー組成物中に残存するトリフルオロ酢酸塩は有害ではなく、許容される。
【0098】
さらに、薬学的に許容される塩は、塩基付加塩であり得る。塩基付加塩は、式Ｉの化合物、およびアルカリ金属またはアルカリ土類金属のような金属から形成してもよい。金属は、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、またはＣａ２＋のような金属イオンであり得る。あるいは、塩は、式Ｉの化合物、および有機アミンのようなアミンから形成してもよい。アミンは、アンモニア、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミンまたはプロカインであり得る。
【0099】
異性体
本明細書に開示される化合物は、エナンチオマーまたはジアステレオ異性体の形態のような立体異性体の形態で存在し得ることが当業者には理解されよう。本開示の化合物は、全てのそのようなエナンチオマー、そのラセミ混合物、および別々のエナンチオマーの異なる割合における混合物を含む。例えば、（－）－エナンチオマーの形態または（＋）－エナンチオマーの形態で、本明細書に開示される化合物が提供される。
本明細書に開示される化合物は、エナンチオマーまたはジアステレオ異性体の形態のような立体異性体の形態で存在し得ることが当業者には理解されよう。本開示の化合物は、全てのそのようなエナンチオマー、そのラセミ混合物、および別々のエナンチオマーの異なる割合における混合物を含む。例えば、（－）－エナンチオマーの形態または（＋）－エナンチオマーの形態で、本明細書に開示される化合物が提供される。
【0100】
誘導体
本開示はまた、本明細書に開示される化合物の誘導体を提供する。誘導体は、キレート剤が変性されている、本明細書に開示される化合物であり得る。例えば、キレート剤の１つまたはそれ以上のカルボン酸基を、例えば、エステル基またはアミド基に変換してもよい。
本開示はまた、本明細書に開示される化合物の誘導体を提供する。誘導体は、キレート剤が変性されている、本明細書に開示される化合物であり得る。例えば、キレート剤の１つまたはそれ以上のカルボン酸基を、例えば、エステル基またはアミド基に変換してもよい。
【0101】
製造方法
本明細書に記載される式Ｉの化合物は、以下のように製造することができる。
標準的なペプチド固相合成法（ＳＰＰＳ）を使用して、ペプチドＱを製造してもよい。得られたペプチドＱは、Ｆｍｏｃ、Ｔｒｔ、Ｐｂｆのような１つまたはそれ以上の保護基を含有してもよい。これらの保護基は適宜除去してもよい。例えば、ペプチドＱのＮ末端アミノ基を、例えば、Ｆｍｏｃ基で保護してもよく、後述のキレート剤ＣまたはリンカーＬと反応させる前に除去してもよい。
本明細書に記載される式Ｉの化合物は、以下のように製造することができる。
標準的なペプチド固相合成法（ＳＰＰＳ）を使用して、ペプチドＱを製造してもよい。得られたペプチドＱは、Ｆｍｏｃ、Ｔｒｔ、Ｐｂｆのような１つまたはそれ以上の保護基を含有してもよい。これらの保護基は適宜除去してもよい。例えば、ペプチドＱのＮ末端アミノ基を、例えば、Ｆｍｏｃ基で保護してもよく、後述のキレート剤ＣまたはリンカーＬと反応させる前に除去してもよい。
【0102】
ペプチドＱのＮ末端アミノ基を、ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵ、Ｏｘｙｍａのようなカップリング試薬を使用してキレート剤Ｃにカップリングさせ、化合物Ｃ－Ｑを得てもよい。
【0103】
あるいは、ペプチドＱのＮ末端基を介してリンカーＬにカップリングさせて化合物Ｌ－Ｑとし、続いて、さらにＬ－Ｑをキレート剤Ｃに結合させて化合物Ｃ－Ｌ－Ｑを提供してもよい。カップリング反応は、ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵ、Ｏｘｙｍａのようなカップリング試薬の使用を伴ってもよい。
【0104】
化合物Ｃ－ＱまたはＣ－Ｌ－Ｑは、その後、ペプチドＱ中の１つまたはそれ以上のアミノ酸に結合した保護基のような、存在する任意の保護基を除去可能な条件にさらしてもよい。
【0105】
式ＩＩの化合物は、式Ｉの化合物を本明細書に記載される核種Ｍまたはその塩と組み合わせることによって得ることができる。その場合、式Ｉの化合物は、式ＩＩの化合物の形成における中間体として機能することがある。
【0106】
したがって、本明細書に記載される式ＩＩの化合物を製造する方法であって：
ａ）本明細書に記載される式Ｉの化合物を製造する工程、および
ｂ）式Ｉの化合物を本明細書に記載される核種Ｍと組み合わせ、それによって式ＩＩの化合物を提供する工程を含む
方法が提供される。
ａ）本明細書に記載される式Ｉの化合物を製造する工程、および
ｂ）式Ｉの化合物を本明細書に記載される核種Ｍと組み合わせ、それによって式ＩＩの化合物を提供する工程を含む
方法が提供される。
【0107】
式Ｉの化合物と核種Ｍとを等モル量で組み合わせて、式Ｉの化合物と核種Ｍとの比が１に等しい、すなわち１／１である式ＩＩの化合物を提供することができる。しかしながら、化学量論比を制御することが常に可能であるとは限らず、したがって、式Ｉの化合物と核種Ｍとは、不等モル量のような不等量で組み合わせ、その結果、追加量の式Ｉの化合物および／または核種Ｍと合わせて、式Ｉの化合物と核種との比が１である前述の式ＩＩの化合物を含む組成物を得てもよい。
【0108】
核種Ｍは、当該技術分野で公知であるように、放射性核種ジェネレータまたはサイクロトロンを使用して生成された放射性核種であり得ることが理解されよう。
【0109】
略語
ＡＣＥ－Ｉ アンジオテンシン変換酵素阻害薬
ＡＲＢ アンジオテンシン受容体遮断薬
ＢＡＬＢ／ｃ ＢＡＬＢ／ｃは、ハツカネズミのアルビノ、実験室飼育系統である
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
Ｂｑ ベクレル
ＣＢＰ８ コラーゲン結合ペプチド８
ｃｃ 立法センチメートル
ＣＫＤ 慢性腎臓病
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＦＯ デスフェリオキサミンＢ
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＩＥＡ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＯＴＡ １，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸
ＤＯＴＡＧＡ ２－［４，７，１０－トリス（カルボキシメチル）－１，４，７，１０－テトラアザ－１－シクロドデシル］グルタル酸
ＤＴＰＡ ジエチレントリアミン五酢酸
Ｅ グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＳＩ エレクトロスプレーイオン化
Ｆｍｏｃ フルオレニルメチルオキシカルボニル保護基
ｇ グラム
ＧＦＲ 糸球体濾過量
Ｈ ヒスチジン（Ｈｉｓ）
ＨＢＴＵ （２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＩＬＤ 間質性肺疾患
ｉｖＤｄｅ ４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキス－１－イリデン）イソバレリル
Ｌ ロイシン（Ｌｅｕ）
ＭＢｑ メガベクレル
ｍｉｎ． 分
ＭＲＥ 磁気共鳴エラストグラフィー
ＭＲＩ 磁気共鳴画像
ＭＳ 質量分析
Ｎ アスパラギン（Ａｓｎ）
ＮＡＦＬＤ 非アルコール性脂肪性肝疾患
ＮＡＳＨ 非アルコール性脂肪性肝炎
ＮＮＭ Ｎ－メチルモルフォリン
ＮＯＴＡＧＡ １，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－酢酸
ＮＯＴＡ １，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸
ｎＭ ナノモーラー
Ｐｂｆ ２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
ＰＥＴ 陽電子放出断層撮影
ｐ．ｉ． 注射後
ＰｙＢＯＰ ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
Ｒ アルギニン（Ａｒｇ）
ＲＯＩ 関心領域
ＲＰ－ＨＰＬＣ 逆相高速液体クロマトグラフィー
ＳＰＥＣＴ 単一光子放射型コンピュータ断層撮影
ＳＰＰＳ ペプチド固相合成法
ＳＰＲ 表面プラズモン共鳴
ＳＵＶ 標準摂取率
ｔ－Ｂｕ ｔｅｒｔ－ブチル
ＴＥＳ トリエチルシラン
ＴＥＴＡ １，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－１，４，８，１１－四酢酸
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
Ｔｒｔ トリチル
ＵＶ 紫外線
ＶＥＧＦ 血管内皮細胞増殖因子
ＡＣＥ－Ｉ アンジオテンシン変換酵素阻害薬
ＡＲＢ アンジオテンシン受容体遮断薬
ＢＡＬＢ／ｃ ＢＡＬＢ／ｃは、ハツカネズミのアルビノ、実験室飼育系統である
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
Ｂｑ ベクレル
ＣＢＰ８ コラーゲン結合ペプチド８
ｃｃ 立法センチメートル
ＣＫＤ 慢性腎臓病
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＦＯ デスフェリオキサミンＢ
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＩＥＡ Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＯＴＡ １，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸
ＤＯＴＡＧＡ ２－［４，７，１０－トリス（カルボキシメチル）－１，４，７，１０－テトラアザ－１－シクロドデシル］グルタル酸
ＤＴＰＡ ジエチレントリアミン五酢酸
Ｅ グルタミン酸（Ｇｌｕ）
ＥＳＩ エレクトロスプレーイオン化
Ｆｍｏｃ フルオレニルメチルオキシカルボニル保護基
ｇ グラム
ＧＦＲ 糸球体濾過量
Ｈ ヒスチジン（Ｈｉｓ）
ＨＢＴＵ （２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＩＬＤ 間質性肺疾患
ｉｖＤｄｅ ４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキス－１－イリデン）イソバレリル
Ｌ ロイシン（Ｌｅｕ）
ＭＢｑ メガベクレル
ｍｉｎ． 分
ＭＲＥ 磁気共鳴エラストグラフィー
ＭＲＩ 磁気共鳴画像
ＭＳ 質量分析
Ｎ アスパラギン（Ａｓｎ）
ＮＡＦＬＤ 非アルコール性脂肪性肝疾患
ＮＡＳＨ 非アルコール性脂肪性肝炎
ＮＮＭ Ｎ－メチルモルフォリン
ＮＯＴＡＧＡ １，４，７－トリアザシクロノナン－１－グルタル酸－４，７－酢酸
ＮＯＴＡ １，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸
ｎＭ ナノモーラー
Ｐｂｆ ２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
ＰＥＴ 陽電子放出断層撮影
ｐ．ｉ． 注射後
ＰｙＢＯＰ ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
Ｒ アルギニン（Ａｒｇ）
ＲＯＩ 関心領域
ＲＰ－ＨＰＬＣ 逆相高速液体クロマトグラフィー
ＳＰＥＣＴ 単一光子放射型コンピュータ断層撮影
ＳＰＰＳ ペプチド固相合成法
ＳＰＲ 表面プラズモン共鳴
ＳＵＶ 標準摂取率
ｔ－Ｂｕ ｔｅｒｔ－ブチル
ＴＥＳ トリエチルシラン
ＴＥＴＡ １，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－１，４，８，１１－四酢酸
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
Ｔｒｔ トリチル
ＵＶ 紫外線
ＶＥＧＦ 血管内皮細胞増殖因子
【0110】
材料および方法
材料
購入した化学物質は、さらに精製することなく使用した：アミノ酸（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、スイス；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、スウェーデン；Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ、ドイツ）、ＰｙＢＯＰ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、スイス）、２ＣＴＣ樹脂（Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ、ドイツ）、Ｆｍｏｃ－Ｏ２Ｏｃ－ＯＨ（Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ、ドイツ）、ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３－ＯＨおよびＮＯＴＡ（ｔＢｕ）２－ＯＨ（ＣｈｅＭａｔｅｃｈ、フランス）、ピペリジン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、スウェーデン）、ＤＭＦ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、英国）、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．６、３１０４８、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、スウェーデン ストックホルム）、３０％ＨＣｌ（超高純度、１．００３１８．０２５０、Ｍｅｒｃｋ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、Ｍｅｒｃｋ、ドイツ ダルムシュタット）。一部の化合物は、外部ラボ（Ｖｉｖｉｔｉｄｅ／ＮＥＰ）で製造した。
材料
購入した化学物質は、さらに精製することなく使用した：アミノ酸（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、スイス；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、スウェーデン；Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ、ドイツ）、ＰｙＢＯＰ（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、スイス）、２ＣＴＣ樹脂（Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ、ドイツ）、Ｆｍｏｃ－Ｏ２Ｏｃ－ＯＨ（Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ、ドイツ）、ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３－ＯＨおよびＮＯＴＡ（ｔＢｕ）２－ＯＨ（ＣｈｅＭａｔｅｃｈ、フランス）、ピペリジン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、スウェーデン）、ＤＭＦ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、英国）、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．６、３１０４８、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、スウェーデン ストックホルム）、３０％ＨＣｌ（超高純度、１．００３１８．０２５０、Ｍｅｒｃｋ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、Ｍｅｒｃｋ、ドイツ ダルムシュタット）。一部の化合物は、外部ラボ（Ｖｉｖｉｔｉｄｅ／ＮＥＰ）で製造した。
【0111】
ペプチド合成およびリンカー・キレート剤のカップリング（方法Ａ）
ここでは、本方法を、以下の化合物１および１６の合成について例示する。標準的なペプチド固相合成法（ＳＰＰＳ）を使用して、２－（４，７，１０－トリス（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１－イル）酢酸（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３）または、２－（４，７，１０－トリス（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸（ＮＯＴＡ（ｔＢｕ）３）を、リンカー（－Ｘ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－）を介してペプチド配列ＬＲＥＬＨＬＮＮＮに接合させることによって前駆体ペプチドを合成した。反応は特に断りのない限り、全て室温で実施した。
ここでは、本方法を、以下の化合物１および１６の合成について例示する。標準的なペプチド固相合成法（ＳＰＰＳ）を使用して、２－（４，７，１０－トリス（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１－イル）酢酸（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３）または、２－（４，７，１０－トリス（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸（ＮＯＴＡ（ｔＢｕ）３）を、リンカー（－Ｘ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－）を介してペプチド配列ＬＲＥＬＨＬＮＮＮに接合させることによって前駆体ペプチドを合成した。反応は特に断りのない限り、全て室温で実施した。
【0112】
Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ（２３８．７ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）および乾燥ジクロロメタン（ＤＣＭ）６．０ｍＬ中ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を、２－クロロトリチル樹脂（３７５ｍｇ、ローディング量１．６ｍｍｏｌ／ｇ）に添加した。２時間後、ＭｅＯＨ ０．３０ｍＬを添加し、１５分間反応させた。樹脂をＤＭＦ（２×５ｍＬ）およびＤＣＭ（２×５ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥させて、Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）結合樹脂５８４．５ｍｇを得た。新規ローディング量は０．６４ｍｍｏｌ／ｇと算出され、側鎖保護ペプチドＬＲＥＬＨＬＮＮＮは、多孔質ポリエチレンフィルタを装着した４ｍＬ使い捨て注射器で、ＳＰＰＳおよびＦｍｏｃ／ｔｅｒｔ－ブチル（ｔＢｕ）保護を使用して３７４μｍｏｌスケールで合成された。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸の場合、側鎖の保護は以下の通り：Ａｓｎ（Ｔｒｔ）、Ａｒｇ（Ｐｂｆ）、Ｇｌｕ（Ｏｔ－Ｂｕ）、Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）であった。ＤＭＦ中２０％ピペリジン（４×２ｍＬ）を使用して各カップリング工程後にＦｍｏｃ基を除去し、ＤＩＥＡ（８００μｍｏｌ）存在下、ＤＭＦ（２ｍＬ）中ＰｙＢＯＰ（５４０μｍｏｌ）を使用してアミノ酸を一晩カップリングさせた。カップリング工程の完了後、樹脂上の部分的に保護されたペプチドをＤＭＦ、ＤＣＭおよびＭｅＯＨで数回洗浄し、真空中で乾燥させた。
【0113】
樹脂上のペプチド部分（約３０μｍｏｌ）を、多孔質ポリエチレンフィルタを装着した２ｍＬ使い捨て注射器に移し、Ｆｍｏｃ基の脱保護後、ＤＭＦ ０．５ｍＬ中ＰｙＢＯＰ（２当量）およびＤＩＥＡ（３当量）を使用して、Ｆｍｏｃ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＯＨ、２当量）と２１時間カップリングを行った。Ｆｍｏｃ基は、ＤＭＦ中２０％ピペリジン（２ｍＬ １分＋３×２ｍＬ １０分）での処理によって除去された。樹脂の洗浄後、ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３－ＯＨ（２当量）またはＮＯＴＡ（ｔＢｕ）３－ＯＨ（２当量）をＰｙＢＯＰ、およびＤＩＥＡ ＤＭＦを使用して２０時間カップリングさせた。次いで、樹脂をＤＭＦおよびＤＣＭで広範囲に洗浄し、真空中で乾燥させた。
【0114】
樹脂を遠心管に移し、トリエチルシラン（ＴＥＳ）および９５％ＴＦＡ溶液で処理し、混合物を２時間回転させた。樹脂を濾過により除去し、ＴＦＡで洗浄した。濾液を窒素流下で一部蒸発させ、粗生成物をジエチルエーテルの添加により沈殿させた。沈殿物を遠心分離によって集め、ジエチルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥させた。
【0115】
粗製脱保護生成物を水中１０％アセトニトリルに溶解させ、分取逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）で精製した。使用した分取カラムはＮｕｃｌｅｏｄｕｒ Ｃ１８ ＨＴｅｃ（２１×１２５ｍｍ、粒子径５μｍ）、溶離液は０．１％ＴＦＡを含むＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏグラジエントを１０ｍＬ／分の流量であり、２２０ｎｍのＵＶ検出を使用した。純粋なフラクションを凍結乾燥し、ＨＰＬＣ分析における２１４ｎｍトレースにより決定された９８％超の純度で２種の生成物を得た。
【0116】
分析用ＲＰ－ＨＰＬＣは、Ｐｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８カラム（５０×３．０ｍｍ、粒子径２．６μｍ、細孔径１００Å）を使用してＤｉｏｎｅｘ ＵｌｔｉＭａｔｅ ３０００ ＨＰＬＣシステムで実施した。溶離液としてＨ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ／０．０５％ＨＣＯＯＨのグラジエントを流量１．５ｍＬ／分で使用した。検出には、ＵＶおよびエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）ＭＳでのＢｒｕｋｅｒ ａｍａｚｏｎ ＳＬイオントラップ質量分析計をポジティブモードスキャンで使用した。質量分析の結果、化合物１のＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨについて、［Ｍ＋２Ｈ］２＋でｍ／ｚ＝８２７．５、［Ｍ＋３Ｈ］３＋で５５１．８、［Ｍ＋４Ｈ］４＋でｍ／ｚ＝４１４．４を検出し、再構成分子量は１６５２．８５となった。また、化合物１６のＮＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨについて、［Ｍ＋２Ｈ］２＋でｍ／ｚ＝７７６．８、［Ｍ＋３Ｈ］３＋で５１８．３を検出し、再構成分子量は１５５１．８となった。
【0117】
ペプチド合成およびリンカー・キレート剤のカップリングのための代替手順（方法Ｂ）：
本発明のペプチドは、樹脂上のＦＭＯＣ保護アミノ酸を用いた標準的な固相ペプチド化学を使用し、自動合成装置（例えばＡＭＳ ４２２ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒまたはＣＥＭ Ｌｉｂｅｒｔｙ Ｂｌｕｅ）を使用して合成することができる。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸は、上に示した供給元から市販されている。Ｃ末端アミドには、ＲＩＮＫ樹脂、例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＡＭ樹脂（２００～４００ｍｅｓｈ）、ローディング量０．６４ｍｍｌ／ｇを使用した。一方、Ｃ末端酸には、プレロードＷａｎｇ樹脂（１００～２００ｍｅｓｈ）、ローディング量０．５０ｍｍｏｌ／ｇを使用した。アミノ酸の活性化およびカップリングは、ＨＢＴＵ（通常６当量）およびＮＭＭ（Ｎ－メチルモルホリン、通常１２当量）を用いて行う。ＦＭＯＣ基は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用して除去される。リンカー－キレート剤がＮ末端に結合している場合、リンカーＦｍｏｃ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＯＨ（２当量）は、ペプチド配列の最後のアミノ酸（例えば、ロイシン）のＦｍｏｃ基を除去した後に、４０℃で３時間、標準的な活性化手順（活性化剤／塩基としてＨＢＴＵ／２Ｍ ＤＩＥＡ）を使用して手動でカップリングさせる。完全なカップリングを確実にするため、この工程を繰り返す。完全なカップリングは、カイザーテストを適用することによってモニタリングすることができる。リンカーのＦｍｏｃ基は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用して除去する。最後に、２－（４，７，１０－トリス（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１－イル）酢酸（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３）を、標準的なアミノ酸活性化手順（ダブルカップリング、２当量の（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３、活性化剤および塩基としてＨＢＴＵ／２Ｍ ＤＩＥＡ、４０℃、３時間）で遊離Ｎ末端アミノ基にカップリングさせる。その後、ＴＦＡ／水／チオアニソール／エチルメチルスルフィド／エタンジチオールのカクテル（２０ｍｌ：１ｍｌ：１ｍｌ：１ｍｌ：１ｍ）を使用して樹脂結合配列を切断する。
本発明のペプチドは、樹脂上のＦＭＯＣ保護アミノ酸を用いた標準的な固相ペプチド化学を使用し、自動合成装置（例えばＡＭＳ ４２２ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒまたはＣＥＭ Ｌｉｂｅｒｔｙ Ｂｌｕｅ）を使用して合成することができる。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸は、上に示した供給元から市販されている。Ｃ末端アミドには、ＲＩＮＫ樹脂、例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＡＭ樹脂（２００～４００ｍｅｓｈ）、ローディング量０．６４ｍｍｌ／ｇを使用した。一方、Ｃ末端酸には、プレロードＷａｎｇ樹脂（１００～２００ｍｅｓｈ）、ローディング量０．５０ｍｍｏｌ／ｇを使用した。アミノ酸の活性化およびカップリングは、ＨＢＴＵ（通常６当量）およびＮＭＭ（Ｎ－メチルモルホリン、通常１２当量）を用いて行う。ＦＭＯＣ基は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用して除去される。リンカー－キレート剤がＮ末端に結合している場合、リンカーＦｍｏｃ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＯＨ（２当量）は、ペプチド配列の最後のアミノ酸（例えば、ロイシン）のＦｍｏｃ基を除去した後に、４０℃で３時間、標準的な活性化手順（活性化剤／塩基としてＨＢＴＵ／２Ｍ ＤＩＥＡ）を使用して手動でカップリングさせる。完全なカップリングを確実にするため、この工程を繰り返す。完全なカップリングは、カイザーテストを適用することによってモニタリングすることができる。リンカーのＦｍｏｃ基は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用して除去する。最後に、２－（４，７，１０－トリス（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１－イル）酢酸（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３）を、標準的なアミノ酸活性化手順（ダブルカップリング、２当量の（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３、活性化剤および塩基としてＨＢＴＵ／２Ｍ ＤＩＥＡ、４０℃、３時間）で遊離Ｎ末端アミノ基にカップリングさせる。その後、ＴＦＡ／水／チオアニソール／エチルメチルスルフィド／エタンジチオールのカクテル（２０ｍｌ：１ｍｌ：１ｍｌ：１ｍｌ：１ｍ）を使用して樹脂結合配列を切断する。
【0118】
ペプチドをエーテル／ヘキサン中で沈殿させ、次いで遠心分離により単離する。乾燥させたペプチドペレットを水・アセトニトリル混合物中で再構成し、凍結乾燥させる。凍結乾燥させた粗生成物を、０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル－水緩衝液を溶離液として用いて分取逆相ＨＰＬＣ（１０μｍ Ｃ１８カラム、２５×２５０ｍｍ）で精製する。ペプチド含有フラクションを分析し、純粋なフラクションをプールし、凍結乾燥する。分析用ＨＰＬＣデータは、２．６μｍ Ｃ１８分析用カラムで、溶離液として０．１％ＴＦＡを含有する水－アセトニトリルグラジエントを用いて得られる。分子量は、Ｂｒｕｋｅｒ ａｍａＺｏｎ ＳＬ装置を使用したＭＳ分析により確認する。下記実施例２の化合物２～６、１１、１２は、方法Ｂに従って合成した。
【0119】
アミノ酸側鎖中のアミノ官能基にリンカーおよびキレート剤がカップリングしている場合に使用される、ペプチド合成のための代替手順（方法Ｃ）：
この場合、本発明のペプチドは、方法Ｂに非常に類似しているが、アミノ酸側鎖のアミノ官能基への選択的カップリングが可能な、特別な保護アミノ酸を使用するプロトコルを使用して合成することができる。ペプチド構築は、樹脂上のＦＭＯＣ保護アミノ酸を用いた標準的な固相ペプチド化学により、自動合成装置（例えばＡＭＳ ４２２ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒまたはＣＥＭ Ｌｉｂｅｒｔｙ Ｂｌｕｅ）を使用して行われる。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸は、上に示した供給元から市販されている。側鎖修飾のために、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸が使用され、この場合、側鎖、例えばリジンは、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）－ＯＨのような直交切断可能な保護基により保護される。Ｃ末端アミドには、ＲＩＮＫ樹脂、例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＡＭ樹脂（２００～４００ｍｅｓｈ）が使用された。アミノ酸の活性化およびカップリングは、ＨＢＴＵ（通常６当量）およびＮＭＭ（Ｎ－メチルモルホリン、通常１２当量）を用いて行う。ＦＭＯＣ基は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用して除去される。ペプチドを固相にて構築後、Ｎ末端のＦｍｏｃ基を、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用して除去し、Ｂｏｃ－無水物を使用してＮ末端を保護する。その後、ＤＭＦ中２％ヒドラジン（２×３０分）を使用して、官能化するアミノ酸におけるｉｖＤｄｅ保護基を除去することができる。テスト切断により、ｉｖＤｄｅの除去が確認される。リンカー、例えばＦｍｏｃ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＯＨ（２当量）は、標準的な活性化手順（活性化剤／塩基としてＨＢＴＵ／２Ｍ ＤＩＥＡ、４０℃、３時間）を使用して手動でカップリングさせる。完全なカップリングを確実にするために、この工程を繰り返す。完全なカップリングは、カイザーテストを適用することによってモニタリングすることができる。リンカーのＦｍｏｃ基は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用して除去する。最後に、２－（４，７，１０－トリス（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１－イル）酢酸（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３）を、標準的なアミノ酸活性化手順（ダブルカップリング、２当量の（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３、活性化剤および塩基としてＨＢＴＵ／２Ｍ ＤＩＥＡ、４０℃、３時間）で遊離アミノ基にカップリングさせる。その後、ＴＦＡ／水／チオアニソール／エチルメチルスルフィド／エタンジチオールのカクテル（２０ｍｌ：１ｍｌ：１ｍｌ：１ｍｌ：１ｍｌ）を使用して樹脂結合配列を切断する。ペプチドをエーテル／ヘキサンで沈殿させ、次いで遠心分離により単離する。乾燥させたペプチドペレットを水・アセトニトリル混合物中で再構成し、凍結乾燥する。凍結乾燥させた粗生成物を、０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル－水緩衝液を溶離液として用いる分取逆相ＨＰＬＣ（１０μｍ Ｃ１８カラム、２５×２５０ｍｍ）で精製する。ペプチド含有フラクションを分析し、純粋なフラクションをプールし、凍結乾燥する。分析用ＨＰＬＣデータは、２．６μｍ Ｃ１８分析用カラムで、溶離液として０．１％ＴＦＡを含有する水－アセトニトリルグラジエントを用いて得られる。分子量は、Ｂｒｕｋｅｒ ａｍａＺｏｎ ＳＬ装置を使用したＭＳ分析により確認する。例えば、下記実施例２の化合物１３は、方法Ｃに従って合成した。
この場合、本発明のペプチドは、方法Ｂに非常に類似しているが、アミノ酸側鎖のアミノ官能基への選択的カップリングが可能な、特別な保護アミノ酸を使用するプロトコルを使用して合成することができる。ペプチド構築は、樹脂上のＦＭＯＣ保護アミノ酸を用いた標準的な固相ペプチド化学により、自動合成装置（例えばＡＭＳ ４２２ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒまたはＣＥＭ Ｌｉｂｅｒｔｙ Ｂｌｕｅ）を使用して行われる。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸は、上に示した供給元から市販されている。側鎖修飾のために、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸が使用され、この場合、側鎖、例えばリジンは、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）－ＯＨのような直交切断可能な保護基により保護される。Ｃ末端アミドには、ＲＩＮＫ樹脂、例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＡＭ樹脂（２００～４００ｍｅｓｈ）が使用された。アミノ酸の活性化およびカップリングは、ＨＢＴＵ（通常６当量）およびＮＭＭ（Ｎ－メチルモルホリン、通常１２当量）を用いて行う。ＦＭＯＣ基は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用して除去される。ペプチドを固相にて構築後、Ｎ末端のＦｍｏｃ基を、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用して除去し、Ｂｏｃ－無水物を使用してＮ末端を保護する。その後、ＤＭＦ中２％ヒドラジン（２×３０分）を使用して、官能化するアミノ酸におけるｉｖＤｄｅ保護基を除去することができる。テスト切断により、ｉｖＤｄｅの除去が確認される。リンカー、例えばＦｍｏｃ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＯＨ（２当量）は、標準的な活性化手順（活性化剤／塩基としてＨＢＴＵ／２Ｍ ＤＩＥＡ、４０℃、３時間）を使用して手動でカップリングさせる。完全なカップリングを確実にするために、この工程を繰り返す。完全なカップリングは、カイザーテストを適用することによってモニタリングすることができる。リンカーのＦｍｏｃ基は、ＤＭＦ中２０％ピペリジンを使用して除去する。最後に、２－（４，７，１０－トリス（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１－イル）酢酸（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３）を、標準的なアミノ酸活性化手順（ダブルカップリング、２当量の（ＤＯＴＡ（ｔＢｕ）３、活性化剤および塩基としてＨＢＴＵ／２Ｍ ＤＩＥＡ、４０℃、３時間）で遊離アミノ基にカップリングさせる。その後、ＴＦＡ／水／チオアニソール／エチルメチルスルフィド／エタンジチオールのカクテル（２０ｍｌ：１ｍｌ：１ｍｌ：１ｍｌ：１ｍｌ）を使用して樹脂結合配列を切断する。ペプチドをエーテル／ヘキサンで沈殿させ、次いで遠心分離により単離する。乾燥させたペプチドペレットを水・アセトニトリル混合物中で再構成し、凍結乾燥する。凍結乾燥させた粗生成物を、０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル－水緩衝液を溶離液として用いる分取逆相ＨＰＬＣ（１０μｍ Ｃ１８カラム、２５×２５０ｍｍ）で精製する。ペプチド含有フラクションを分析し、純粋なフラクションをプールし、凍結乾燥する。分析用ＨＰＬＣデータは、２．６μｍ Ｃ１８分析用カラムで、溶離液として０．１％ＴＦＡを含有する水－アセトニトリルグラジエントを用いて得られる。分子量は、Ｂｒｕｋｅｒ ａｍａＺｏｎ ＳＬ装置を使用したＭＳ分析により確認する。例えば、下記実施例２の化合物１３は、方法Ｃに従って合成した。
【0120】
放射化学
ガリウム－６８放射化学
６８Ｇａ（ｔ１／２＝６８分、β＋＝８９％、ＥＣ＝１１％）を得るために、二酸化チタンを充填したカラムに６８Ｇｅを付着させた６８Ｇｅ／６８Ｇａジェネレータシステム（１８５０ＭＢｑ、Ｅｃｋｅｒｔ ＆ Ｚｉｅｇｌｅｒ，Ｅｕｒｏｔｏｐｅ ＧｍｂＨ）を０．１Ｍ ＨＣｌによって溶出した。ジェネレータ放射能の７０～８０％を含有する１ｍｌの第２のフラクションを酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７）１００μｌで緩衝し、ｐＨ４．２～４．６を確保した。ｐＨを制御した後、脱イオン水に溶解した２０ナノモル（１ｍＭ）の化合物１または化合物５を添加し、混合物を７５℃の加熱ブロック中で１５分間インキュベートした。インキュベートに続いて、粗生成物を２分間放置して冷却し、固相抽出カートリッジ（ＨＬＢ、Ｏａｓｉｓ）で精製し、５０％エタノール中の純生成物を得た。さらに、生成物をＨＰＬＣ－ＵＶ－ラジオシステム（ＶＷＲ Ｈｉｔａｃｈｉ Ｃｈｒｏｍａｓｔｅｒポンプ５１１０、リモートＵＶフローセルを備えたＫｎａｕｅｒ ＵＶ検出器４０Ｄ、Ｅｃｋｅｒｔ ＆ Ｚｉｅｇｌｅｒ拡張レンジモジュールＭｏｄｅｌ １０６およびＢｉｏｓｃａｎ Ｂ－ＦＣ－３３００放射性プローブを備えたＢｉｏｓｃａｎフローカウント、ならびにＶＷＲ Ｈｉｔａｃｈｉ Ｃｈｒｏｍａｓｔｅｒ Ａ／Ｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ ｂｏｘ）により分析した。分析用カラム（Ｈｉｃｈｒｏｍ Ｖｙｄａｃ ２１４ＭＳ、５μｍ Ｃ４、５０×４．６ｍｍ）を使用して分析種の分離を行った。条件は以下の通りであった：Ａ＝Ｈ２Ｏ中０．１％ＴＦＡ；Ｂ＝７０％ＣＨ３ＣＮ中０．１％ＴＦＡ、２２０ｎｍでのＵＶ検出；１５分にわたるリニアグラジエント、１５分にわたる５～７０％の溶媒Ｂリニアグラジエント、流量１．０ｍＬ／分。データ取得および処理は、Ａｇｉｌｅｎｔ ＯｐｅｎＬＡＢ Ｃｈｒｏｍａｓｔｅｒ ＥＺＣｈｒｏｍｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ ｖｅｒｓｉｏｎ Ａ．０４．０５を使用して実施した。
ガリウム－６８放射化学
６８Ｇａ（ｔ１／２＝６８分、β＋＝８９％、ＥＣ＝１１％）を得るために、二酸化チタンを充填したカラムに６８Ｇｅを付着させた６８Ｇｅ／６８Ｇａジェネレータシステム（１８５０ＭＢｑ、Ｅｃｋｅｒｔ ＆ Ｚｉｅｇｌｅｒ，Ｅｕｒｏｔｏｐｅ ＧｍｂＨ）を０．１Ｍ ＨＣｌによって溶出した。ジェネレータ放射能の７０～８０％を含有する１ｍｌの第２のフラクションを酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７）１００μｌで緩衝し、ｐＨ４．２～４．６を確保した。ｐＨを制御した後、脱イオン水に溶解した２０ナノモル（１ｍＭ）の化合物１または化合物５を添加し、混合物を７５℃の加熱ブロック中で１５分間インキュベートした。インキュベートに続いて、粗生成物を２分間放置して冷却し、固相抽出カートリッジ（ＨＬＢ、Ｏａｓｉｓ）で精製し、５０％エタノール中の純生成物を得た。さらに、生成物をＨＰＬＣ－ＵＶ－ラジオシステム（ＶＷＲ Ｈｉｔａｃｈｉ Ｃｈｒｏｍａｓｔｅｒポンプ５１１０、リモートＵＶフローセルを備えたＫｎａｕｅｒ ＵＶ検出器４０Ｄ、Ｅｃｋｅｒｔ ＆ Ｚｉｅｇｌｅｒ拡張レンジモジュールＭｏｄｅｌ １０６およびＢｉｏｓｃａｎ Ｂ－ＦＣ－３３００放射性プローブを備えたＢｉｏｓｃａｎフローカウント、ならびにＶＷＲ Ｈｉｔａｃｈｉ Ｃｈｒｏｍａｓｔｅｒ Ａ／Ｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ ｂｏｘ）により分析した。分析用カラム（Ｈｉｃｈｒｏｍ Ｖｙｄａｃ ２１４ＭＳ、５μｍ Ｃ４、５０×４．６ｍｍ）を使用して分析種の分離を行った。条件は以下の通りであった：Ａ＝Ｈ２Ｏ中０．１％ＴＦＡ；Ｂ＝７０％ＣＨ３ＣＮ中０．１％ＴＦＡ、２２０ｎｍでのＵＶ検出；１５分にわたるリニアグラジエント、１５分にわたる５～７０％の溶媒Ｂリニアグラジエント、流量１．０ｍＬ／分。データ取得および処理は、Ａｇｉｌｅｎｔ ＯｐｅｎＬＡＢ Ｃｈｒｏｍａｓｔｅｒ ＥＺＣｈｒｏｍｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ ｖｅｒｓｉｏｎ Ａ．０４．０５を使用して実施した。
【0121】
フッ化アルミニウム－１８放射化学
１８Ｆは、Ｓｃａｎｄｉｔｒｏｎｉｘ ＭＣ－１７サイクロトロンで１８Ｏ濃縮水（＞９７％）への陽子線照射により生成された。典型的には、３～５ＧＢｑの放射能が生成された。放射性物質をホットセルに移し、フッ素１８を保持するためにＱＭＡ ＳＰＥカートリッジに通した。カートリッジを水（１ｍＬ）で洗浄し、次いで放射性物質をＮａＣｌ溶液（０．９％）２００μＬで洗浄した。１．５ｍＬバイアルに、化合物１６（４０ｎｍｏｌ、ｐＨ４．６ ＮａＯＡｃ中２ｍＭ溶液）２０μＬ、ＡｌＣｌ３（ｐＨ４．６ ＮａＯＡｃ中２ｍＭ）１０μＬ、ＮａＯＡｃ（ｐＨ４．６）５０μＬおよびＥｔＯＨ（９９％）１００μＬを添加した。１８Ｆ含有生理食塩水５０μＬをバイアルに添加した後、１００℃まで１５分間加熱した。反応混合物を水（３ｍＬ）で希釈し、ＨＬＢ ＳＰＥカートリッジに添加し、次いで水（３×１ｍＬ）で洗浄した。生成物をＥｔＯＨ（９９％）４００μＬで溶出し、さらにＰＢＳ ３．６ｍＬで希釈した。品質管理は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＬＵＮＡ Ｃ１８を使用し、５０ｍＭギ酸アンモニウム（ＡＭＦ、ｐＨ３．５）中１０～９０％ＣＨ３ＣＮグラジエントを使用して８分にわたって行い、６８Ｇａと同じ方法で実施した。活性収量は０．３～０．８ＧＢｑ（１０～２０％、非減衰補正）であった。
１８Ｆは、Ｓｃａｎｄｉｔｒｏｎｉｘ ＭＣ－１７サイクロトロンで１８Ｏ濃縮水（＞９７％）への陽子線照射により生成された。典型的には、３～５ＧＢｑの放射能が生成された。放射性物質をホットセルに移し、フッ素１８を保持するためにＱＭＡ ＳＰＥカートリッジに通した。カートリッジを水（１ｍＬ）で洗浄し、次いで放射性物質をＮａＣｌ溶液（０．９％）２００μＬで洗浄した。１．５ｍＬバイアルに、化合物１６（４０ｎｍｏｌ、ｐＨ４．６ ＮａＯＡｃ中２ｍＭ溶液）２０μＬ、ＡｌＣｌ３（ｐＨ４．６ ＮａＯＡｃ中２ｍＭ）１０μＬ、ＮａＯＡｃ（ｐＨ４．６）５０μＬおよびＥｔＯＨ（９９％）１００μＬを添加した。１８Ｆ含有生理食塩水５０μＬをバイアルに添加した後、１００℃まで１５分間加熱した。反応混合物を水（３ｍＬ）で希釈し、ＨＬＢ ＳＰＥカートリッジに添加し、次いで水（３×１ｍＬ）で洗浄した。生成物をＥｔＯＨ（９９％）４００μＬで溶出し、さらにＰＢＳ ３．６ｍＬで希釈した。品質管理は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＬＵＮＡ Ｃ１８を使用し、５０ｍＭギ酸アンモニウム（ＡＭＦ、ｐＨ３．５）中１０～９０％ＣＨ３ＣＮグラジエントを使用して８分にわたって行い、６８Ｇａと同じ方法で実施した。活性収量は０．３～０．８ＧＢｑ（１０～２０％、非減衰補正）であった。
【0122】
本開示は、以下の非限定的な実施例によってさらに説明される。
【0123】
実施例１
化合物１および１６は、上記の方法Ａに従って合成した。
化合物１および１６は、上記の方法Ａに従って合成した。
【0124】
化合物１：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨ
純度：９５％；検出質量 ［Ｍ＋２Ｈ］２＋でｍ／ｚ＝８２７．５、［Ｍ＋３Ｈ］３＋で５５１．８、［Ｍ＋４Ｈ］４＋でｍ／ｚ＝４１４．４、ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨの再構成分子量１６５２．８５。
純度：９５％；検出質量 ［Ｍ＋２Ｈ］２＋でｍ／ｚ＝８２７．５、［Ｍ＋３Ｈ］３＋で５５１．８、［Ｍ＋４Ｈ］４＋でｍ／ｚ＝４１４．４、ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨの再構成分子量１６５２．８５。
【0125】
化合物１６：ＮＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨ
純度：９５％；検出質量 ［Ｍ＋２Ｈ］２＋でｍ／ｚ＝７７６．８、［Ｍ＋３Ｈ］３＋で５１８．３、ＮＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨの再構成分子量１５５１．８。
純度：９５％；検出質量 ［Ｍ＋２Ｈ］２＋でｍ／ｚ＝７７６．８、［Ｍ＋３Ｈ］３＋で５１８．３、ＮＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨの再構成分子量１５５１．８。
【0126】
実施例２
化合物２～６、１１および１２は、方法Ｂまたはその変形に従って合成した。化合物１３は方法Ｃに従って合成した。
化合物２～６、１１および１２は、方法Ｂまたはその変形に従って合成した。化合物１３は方法Ｃに従って合成した。
【0127】
化合物２：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ａ－Ｎ－ＯＨ
純度：９８．１％；検出質量 ｍ／ｚ＝１６１０．８３（Ｍ＋２で７０５．９２）、（Ｍ＋３で５３７．６２）理論分子量：１６１０．８
純度：９８．１％；検出質量 ｍ／ｚ＝１６１０．８３（Ｍ＋２で７０５．９２）、（Ｍ＋３で５３７．６２）理論分子量：１６１０．８
【0128】
化合物３：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＮＨ２
純度：９９．１％；検出質量 ｍ／ｚ＝１６５３．０１（Ｍ＋２で８２７．０２）、（Ｍ＋３で５５１．９６）理論分子量：１６５２．８０
純度：９９．１％；検出質量 ｍ／ｚ＝１６５３．０１（Ｍ＋２で８２７．０２）、（Ｍ＋３で５５１．９６）理論分子量：１６５２．８０
【0129】
化合物４：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－ｎ－ＯＨ
純度：８９．３％；検出質量 ｍ／ｚ＝１６５４．５８（Ｍ＋２で８２７．３４）、（Ｍ＋３で５５１．９０）、理論分子量：１６５４．８
純度：８９．３％；検出質量 ｍ／ｚ＝１６５４．５８（Ｍ＋２で８２７．３４）、（Ｍ＋３で５５１．９０）、理論分子量：１６５４．８
【0130】
化合物５：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ａ－Ｎ－ＮＨ２
純度：１００％；検出質量 ｍ／ｚ＝１６０９．８（Ｍ＋２で８０５．４５）、（Ｍ＋３で５３７．２５）、理論分子量：１６０９．８
純度：１００％；検出質量 ｍ／ｚ＝１６０９．８（Ｍ＋２で８０５．４５）、（Ｍ＋３で５３７．２５）、理論分子量：１６０９．８
【0131】
化合物６：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｖ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
純度：９８．７％；検出質量 ｍ／ｚ＝１６４０．７６（Ｍ＋２で８２０．４１）、（Ｍ＋３で５４７．２８）理論分子量：１６４１．００
純度：９８．７％；検出質量 ｍ／ｚ＝１６４０．７６（Ｍ＋２で８２０．４１）、（Ｍ＋３で５４７．２８）理論分子量：１６４１．００
【0132】
化合物１１：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
純度：９８．７％；検出質量 ｍ／ｚ＝１６９８．７７（Ｍ＋２で８４９．４３）、（Ｍ＋３で５６６．６１）理論分子量：１６９９．０
純度：９８．７％；検出質量 ｍ／ｚ＝１６９８．７７（Ｍ＋２で８４９．４３）、（Ｍ＋３で５６６．６１）理論分子量：１６９９．０
【0133】
化合物１２：ＤＯＴＡ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ：
Ｆｍｏｃ Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｗａｎｇ樹脂（１００～２００ｍｅｓｈ）で開始し、ローディング量０．５０ｍｍｏｌ／ｇ。
純度：９９．３％；検出質量 ｍ／ｚ＝１５０８．７（Ｍ＋２で７５４．８８）、（Ｍ＋３で５０３．５８）理論分子量：１５０８．４
Ｆｍｏｃ Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－Ｗａｎｇ樹脂（１００～２００ｍｅｓｈ）で開始し、ローディング量０．５０ｍｍｏｌ／ｇ。
純度：９９．３％；検出質量 ｍ／ｚ＝１５０８．７（Ｍ＋２で７５４．８８）、（Ｍ＋３で５０３．５８）理論分子量：１５０８．４
【0134】
化合物１３：Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－ＮＨ２は、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ｉｖｄＤｅ）－ＯＨおよびＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ Ｒｉｎｋ ａｍｉｄｅ ＡＭ樹脂ＬＬ（１００～２００ｍｅｓｈ）（ローディング量０．２９ｍｍｏｌ／ｇ）を使用し、方法Ｃに従って合成した。標準的なアミノ酸カップリングは、この場合、５当量のＤＩＣ／Ｏｘｙｍａで実施した。
純度：９５．１％；検出質量 ｍ／ｚ＝１７８１．９（Ｍ＋２で８９０．９７）、（Ｍ＋３で５９４．３５）
理論分子量：１７８２．２
純度：９５．１％；検出質量 ｍ／ｚ＝１７８１．９（Ｍ＋２で８９０．９７）、（Ｍ＋３で５９４．３５）
理論分子量：１７８２．２
【0135】
同様に、方法Ｂまたは方法Ｃを使用して、以下のペプチドを製造することができる：
化合物７：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｉ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
化合物８：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
化合物９：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｈ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
化合物１０：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－Ｋ－ＯＨ
化合物１４：Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
化合物１５：Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
化合物７：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｉ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
化合物８：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
化合物９：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｈ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
化合物１０：ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－Ｋ－ＯＨ
化合物１４：Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－Ｈ－Ｌ－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
化合物１５：Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｒ－Ｅ－Ｌ－Ｈ－Ｋ（ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ））－Ｎ－Ｎ－Ｎ－ＯＨ
【0136】
実施例３
ペプチドの安定性試験
分析用高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、Ｂｒｕｋｅｒ ａｍａｚｏｎ ＳＬイオントラップ質量分析計およびＵＶ（ダイオードアレイ検出器、２１４、２５４、２８０ｎｍ）およびエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）ＭＳによる検出を備えたＤｉｏｎｅｘ ＵｌｔｉＭａｔｅ ３０００ ＨＰＬＣシステムで、Ｐｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８カラム（５０×３．０ｍｍ、粒子径２．６μｍ、細孔径１００Å）、およびＰｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｂｉｐｈｅｎｙｌカラム（５０×４．６ｍｍ、粒子径２．６μｍ、細孔径１００Å）を使用して実施した。Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ／０．０５％ＨＣＯＯＨのグラジエントを流量１．５ｍＬ／分で使用した。
ペプチドの安定性試験
分析用高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、Ｂｒｕｋｅｒ ａｍａｚｏｎ ＳＬイオントラップ質量分析計およびＵＶ（ダイオードアレイ検出器、２１４、２５４、２８０ｎｍ）およびエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）ＭＳによる検出を備えたＤｉｏｎｅｘ ＵｌｔｉＭａｔｅ ３０００ ＨＰＬＣシステムで、Ｐｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８カラム（５０×３．０ｍｍ、粒子径２．６μｍ、細孔径１００Å）、およびＰｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｂｉｐｈｅｎｙｌカラム（５０×４．６ｍｍ、粒子径２．６μｍ、細孔径１００Å）を使用して実施した。Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ／０．０５％ＨＣＯＯＨのグラジエントを流量１．５ｍＬ／分で使用した。
【0137】
方法Ａ：２１４ｎｍでの検出
カラム：Ｐｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８（５０×３．０ｍｍ、粒子径２．６μｍ、細孔径１００Å）
溶媒：Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ：ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ（流量１．５ｍｌ／分）
グラジエント：０～１００％ ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ（５分）
容量：１μｌ
質量分析器：Ｂｒｕｋｅｒ ａｍａＺｏｎ ＳＬイオントラップ質量分析計、エレクトロスプレーポジティブイオンモード
カラム：Ｐｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８（５０×３．０ｍｍ、粒子径２．６μｍ、細孔径１００Å）
溶媒：Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ：ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ（流量１．５ｍｌ／分）
グラジエント：０～１００％ ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ（５分）
容量：１μｌ
質量分析器：Ｂｒｕｋｅｒ ａｍａＺｏｎ ＳＬイオントラップ質量分析計、エレクトロスプレーポジティブイオンモード
【0138】
方法Ｂ：２１４ｎｍでの検出
カラム：Ｐｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｂｉｐｈｅｎｙｌカラム（５０×４．６ｍｍ、粒子径２．６μｍ、細孔径１００Å）
溶媒：Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ：ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ（流量１．５ｍｌ／分）
グラジエント：０～１００％ ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ（５分）
容量：１μｌ
質量分析器：Ｂｒｕｋｅｒ ａｍａＺｏｎ ＳＬイオントラップ質量分析計、エレクトロスプレーポジティブイオンモード
カラム：Ｐｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｂｉｐｈｅｎｙｌカラム（５０×４．６ｍｍ、粒子径２．６μｍ、細孔径１００Å）
溶媒：Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ：ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ（流量１．５ｍｌ／分）
グラジエント：０～１００％ ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ＨＣＯＯＨ（５分）
容量：１μｌ
質量分析器：Ｂｒｕｋｅｒ ａｍａＺｏｎ ＳＬイオントラップ質量分析計、エレクトロスプレーポジティブイオンモード
【0139】
安定性試験のため、純粋な化合物５００μｍｏｌをＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）１ｍＬ、または酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５、１００ｍＭ）１ｍＬに溶解させた。ＰＢＳ中で保存したペプチドについては、溶液を４℃および２３℃で１４日間保存した。０時間、１日、７日、１４日目に、溶液をＨＰＬＣで分析した（分析用ＨＰＬＣ方法Ａおよび方法Ｂ）。
酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５、１００ｍＭ）中で保存したペプチドについては、４℃および２３℃で０時間および１日インキュベート後の溶液をＨＰＬＣで分析した（分析用ＨＰＬＣ方法Ｂ）。
酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５、１００ｍＭ）中で保存したペプチドについては、４℃および２３℃で０時間および１日インキュベート後の溶液をＨＰＬＣで分析した（分析用ＨＰＬＣ方法Ｂ）。
【0140】
各時点における「純度％」は、ｔ０時点の相対純度％に対する、時点「ｎ」（ｎ＝ｐＨ７．４ ＰＢＳで１日、７日、１４日、ｐＨ４．５ ＮａＡｃで１日）での相対純度％で定義され、次式に従って算出した：
ｔｎでの純度％＝［（相対純度ｔｎ％）×１００）］／相対純度ｔ０％
ｔｎでの純度％＝［（相対純度ｔｎ％）×１００）］／相対純度ｔ０％
【0141】
ｔ０における相対純度は、ｔ０におけるペプチドのピーク面積をｔ０における全ピーク面積の合計で割ることにより、次式に従って算出した：
相対純度ｔ０％＝［（ピーク面積ｔ０）×１００］／全ピーク面積ｔ０の合計
相対純度ｔ０％＝［（ピーク面積ｔ０）×１００］／全ピーク面積ｔ０の合計
【0142】
同様に、相対純度ｔｎは、ｔｎにおけるペプチドのピーク面積をｔｎにおける全ピーク面積の合計で割ることにより、次式に従って算出した：
相対純度ｔｎ％＝［（ピーク面積ｔｎ）×１００］／全ピーク面積ｔｎの合計
相対純度ｔｎ％＝［（ピーク面積ｔｎ）×１００］／全ピーク面積ｔｎの合計
【0143】
本発明の化合物の安定性試験結果を、以下の表ＩＩ、表ＩＩＩおよび表ＩＶに示す。
【0144】
表ＩＩは、ｐＨ７．４でインキュベートした後のペプチドの化学的安定性を示す。サンプルは２３℃および４℃において最大で１４日間インキュベートし、ＨＰＬＣ方法Ａを使用して分析した。
【0145】
【表2】
【0146】
表ＩＩＩは、ｐＨ７．４でインキュベートした後のペプチドの化学的安定性を示す。サンプルは２３℃および４℃において最大で１４日間インキュベートし、ＨＰＬＣ方法Ｂを使用して分析した。
【0147】
【表3】
【0148】
表ＩＶは、ｐＨ４．５でインキュベートした後のペプチドの化学的安定性を示す。サンプルは２３℃および４℃において１日間インキュベートし、ＨＰＬＣ方法Ｂを使用して分析した。
【0149】
【表4】
【0150】
実施例４
放射性標識
化合物１を６８Ｇａ（ｎ＝７）で標識し、固相抽出カートリッジを使用して精製した結果、放射化学的純度は９７％超であった。
化合物１６をＡｌ１８Ｆ（ｎ＝５）で標識し、固相抽出カートリッジを使用して精製した結果、放射化学的純度は９９％超であった。
化合物５を６８Ｇａ（ｎ＝３）で標識し、固相抽出カートリッジを使用して精製した結果、放射化学的純度は９９％超であった。
放射性標識
化合物１を６８Ｇａ（ｎ＝７）で標識し、固相抽出カートリッジを使用して精製した結果、放射化学的純度は９７％超であった。
化合物１６をＡｌ１８Ｆ（ｎ＝５）で標識し、固相抽出カートリッジを使用して精製した結果、放射化学的純度は９９％超であった。
化合物５を６８Ｇａ（ｎ＝３）で標識し、固相抽出カートリッジを使用して精製した結果、放射化学的純度は９９％超であった。
【0151】
実施例５
組織切片におけるｉｎ ｖｉｔｒｏオートラジオグラフィー結合アッセイ
さまざまなグレードの線維症を有するマウス（雌、Ｂａｌｂ／ｃ、Ｔａｃｏｎｉｃ）の凍結肝臓（ＣＣｌ４ ０．５ｍｇ／体重１ｇ ｉ．ｐ．３回／週にて３週間処理）、および対照肝臓（雌、Ｂａｌｂ／ｃ、Ｔａｃｏｎｉｃ）を、クライオスタットミクロトーム（Ｍｉｃｒｏｎ ＨＭ５６０、ドイツ）で２０μｍの切片に切出し、Ｍｅｎｚｅｌ Ｓｕｐｅｒ Ｆｒｏｓｔ ｐｌｕｓスライドガラスに取り付け、室温（ＲＴ）で乾燥させて研究に使用するまで－２０℃で保存した。切片は、１％ＢＳＡ含有ＰＢＳ緩衝液中で、室温で１０分間プレインキュベートした（ガラス表面へのトレーサーの結合を低減させるため）。さらに、トレーサーの全結合を決定するために、２００ｎＭ（予想Ｋｄ約１７０ｎＭ）の［６８Ｇａ］Ｇａ－ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨ（［６８Ｇａ］Ｇａ－１）濃度で室温において切片を４０分間インキュベートした。トレーサーの非特異的結合を決定するために、切片の複製を非接合ペプチド（ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ）６０μＭの存在下でインキュベートした。トレーサーとのインキュベート後、切片を１％ＢＳＡ含有氷冷ＰＢＳで１分間、および氷冷ＰＢＳで２回、１分間ずつ洗浄した。さらに、切片を温風（３７℃）で１０分間乾燥させた。参照として、インキュベーション溶液２０μｌを濾紙に塗布した。この切片および参照をともに蛍光体イメージングプレートに２．５時間露光し、Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒ ｓｙｓｔｅｍ（Ｃｙｃｌｏｎｅ Ｐｌｕｓ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）でスキャンした。切片はソフトウェアＩｍａｇｅＪ（ＩｍａｇｅＪ １．４５Ｓ、ＮＩＨ、米国ベセスダ）を使用して可視化および分析された。画像中の肝組織に関心領域（ＲＯＩ）を描き、組織ＲＯＩの平均値をバックグラウンド集積について補正した。特異的結合は全結合と受容体結合との差として定義され、特異的結合の割合は、特異的結合と全結合との比に１００を掛けたものとして定義された。同じ生検からの別の切片をシリウスレッドで染色し、線維症のグレードを評価した。
組織切片におけるｉｎ ｖｉｔｒｏオートラジオグラフィー結合アッセイ
さまざまなグレードの線維症を有するマウス（雌、Ｂａｌｂ／ｃ、Ｔａｃｏｎｉｃ）の凍結肝臓（ＣＣｌ４ ０．５ｍｇ／体重１ｇ ｉ．ｐ．３回／週にて３週間処理）、および対照肝臓（雌、Ｂａｌｂ／ｃ、Ｔａｃｏｎｉｃ）を、クライオスタットミクロトーム（Ｍｉｃｒｏｎ ＨＭ５６０、ドイツ）で２０μｍの切片に切出し、Ｍｅｎｚｅｌ Ｓｕｐｅｒ Ｆｒｏｓｔ ｐｌｕｓスライドガラスに取り付け、室温（ＲＴ）で乾燥させて研究に使用するまで－２０℃で保存した。切片は、１％ＢＳＡ含有ＰＢＳ緩衝液中で、室温で１０分間プレインキュベートした（ガラス表面へのトレーサーの結合を低減させるため）。さらに、トレーサーの全結合を決定するために、２００ｎＭ（予想Ｋｄ約１７０ｎＭ）の［６８Ｇａ］Ｇａ－ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨ（［６８Ｇａ］Ｇａ－１）濃度で室温において切片を４０分間インキュベートした。トレーサーの非特異的結合を決定するために、切片の複製を非接合ペプチド（ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ）６０μＭの存在下でインキュベートした。トレーサーとのインキュベート後、切片を１％ＢＳＡ含有氷冷ＰＢＳで１分間、および氷冷ＰＢＳで２回、１分間ずつ洗浄した。さらに、切片を温風（３７℃）で１０分間乾燥させた。参照として、インキュベーション溶液２０μｌを濾紙に塗布した。この切片および参照をともに蛍光体イメージングプレートに２．５時間露光し、Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒ ｓｙｓｔｅｍ（Ｃｙｃｌｏｎｅ Ｐｌｕｓ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）でスキャンした。切片はソフトウェアＩｍａｇｅＪ（ＩｍａｇｅＪ １．４５Ｓ、ＮＩＨ、米国ベセスダ）を使用して可視化および分析された。画像中の肝組織に関心領域（ＲＯＩ）を描き、組織ＲＯＩの平均値をバックグラウンド集積について補正した。特異的結合は全結合と受容体結合との差として定義され、特異的結合の割合は、特異的結合と全結合との比に１００を掛けたものとして定義された。同じ生検からの別の切片をシリウスレッドで染色し、線維症のグレードを評価した。
【0152】
［６８Ｇａ］Ｇａ－１の線維化マウス肝臓凍結切片への集積は、非接合ＬＲＥＬＨＬＮＮＮペプチド６０μＭにより阻害された（図１０ａ）。線維症を伴わない健常な対照では、予想通り検出可能な阻害効果は認められなかった。［６８Ｇａ］Ｇａ－１は、グレード０－３の線維化肝組織（ｎ＝１０）に対する結合（１～８０ｆｍｏｌ／ｍｍ３の範囲）において、相関係数０．４で有意な相関（ｐ＜０．０５）を示した（図１０ｂ）。健常な肝組織の対照（ｎ＝２）に対する結合は、２～２２ｆｍｏｌ／ｍｍ３の範囲であった。
【0153】
実施例６
表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、１型コラーゲンとの相互作用を測定した。
表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、１型コラーゲンとの相互作用を測定した。
【0154】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）結合分析は、Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００装置（Ｃｙｔｉｖａ）を用いて実施した。ｐＨ４．２ １０ｍＭ酢酸ナトリウム中０．３ｇ／Ｌ Ｐｕｒｅｃｏｌ ｂｏｖｉｎｅ Ｉ型コラーゲンをＮＨＳ／ＥＤＣ活性化ＣＭ５センサー表面（Ｃｙｔｉｖａ）に注入し、ほぼ１００００ＲＵの応答を得た。並行して、ＮＨＳ／ＥＤＣで活性化することでブランク表面を製造した。両表面は、ｐＨ８．５ １Ｍエタノールアミンを使用して不動態化された。
【0155】
１Ｘ ＨＢＳ－ＥＰ（Ｃｙｔｉｖａ）で希釈した１００μＭ～１２．５μＭのＱ－ペプチドの段階希釈液を、各サンプルについて１分間の結合および解離時間を置いて、異なるペプチドごとに緩衝液の空注入を行い、表面に順次注入した。
【0156】
実施例７
リガンド－トレーサー技術を使用して、１型コラーゲンとの相互作用を測定した
トレーサーの１型コラーゲンへの結合、および１型コラーゲンからの解離の動態は、Ｌｉｇａｎｄ－Ｔｒａｃｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ装置（Ｒｉｄｇｅｖｉｅｗ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＡＢ）を使用して、室温にてリアルタイムに測定することも可能である。ＣｏｒｎｉｎｇのＣｅｌｌＢＩＮＤ細胞培養ディッシュ（１００ｍｍ）にコラーゲン（０．０２Ｍ酢酸中５００μｇ／ｍＬ）を部分的にコーティングしておく。ディッシュを３７℃で一晩インキュベートした後、過剰なコラーゲンを除去し、表面を１％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液１０ｍＬで洗浄する。６８Ｇａ標識ペプチドの濃度を上げながら集積曲線を測定し、次いで、解離を追跡するために培地を新しい培地に交換する。結合率、解離率、平衡解離定数は、ＴｒａｃｅＤｒａｗｅｒソフトウェア（Ｒｉｄｇｅｖｉｅｗ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＡＢ）を使用して算出する。
リガンド－トレーサー技術を使用して、１型コラーゲンとの相互作用を測定した
トレーサーの１型コラーゲンへの結合、および１型コラーゲンからの解離の動態は、Ｌｉｇａｎｄ－Ｔｒａｃｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ装置（Ｒｉｄｇｅｖｉｅｗ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＡＢ）を使用して、室温にてリアルタイムに測定することも可能である。ＣｏｒｎｉｎｇのＣｅｌｌＢＩＮＤ細胞培養ディッシュ（１００ｍｍ）にコラーゲン（０．０２Ｍ酢酸中５００μｇ／ｍＬ）を部分的にコーティングしておく。ディッシュを３７℃で一晩インキュベートした後、過剰なコラーゲンを除去し、表面を１％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液１０ｍＬで洗浄する。６８Ｇａ標識ペプチドの濃度を上げながら集積曲線を測定し、次いで、解離を追跡するために培地を新しい培地に交換する。結合率、解離率、平衡解離定数は、ＴｒａｃｅＤｒａｗｅｒソフトウェア（Ｒｉｄｇｅｖｉｅｗ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＡＢ）を使用して算出する。
【0157】
実施例８
健常ラットにおけるＥｘ ｖｉｖｏ臓器分布
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（Ｔａｃｏｎｉｃより入手、ｎ＝２２、雄、健常、体重２８７±２５ｇ）を使用して、生体内分布および線量測定のｅｘ ｖｉｖｏ臓器分布評価を実施した。
健常ラットにおけるＥｘ ｖｉｖｏ臓器分布
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（Ｔａｃｏｎｉｃより入手、ｎ＝２２、雄、健常、体重２８７±２５ｇ）を使用して、生体内分布および線量測定のｅｘ ｖｉｖｏ臓器分布評価を実施した。
【0158】
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中５ＭＢｑ（５～１０μｇに相当）［６８Ｇａ］Ｇａ－１（ｎ＝１０）をボーラス投与として意識あるラットに静脈内注射した。動物は、注射後１０、２０、４０、６０、１２０分後にＣＯ２－Ｏ２混合ガスで安楽死させた。摘出した臓器の放射能をガンマカウンターで測定した。血液、心臓、肺、肝臓、脾臓、副腎、腎臓、（含有物がある、またはない）腸、筋肉、精巣、骨、脳、膵臓、尿のう、および骨髄からサンプルを採取した。また、放射能の排出および回収をモニタリングするために、残りの死骸も測定した。放射能測定値は注入時間に対し減衰補正され、その結果は標準摂取率（ＳＵＶ）として表された。
【0159】
実験９：
ＰＥＴ／ＭＲＩイメージングによる健常ラットのｉｎ ｖｉｖｏ生体内分布
小動物用ＰＥＴ－ＭＲＩシステム（ｎａｎｏＰＥＴ／ＭＲＩ、３Ｔ ｍａｇｎｅｔ、Ｍｅｄｉｓｏ、ハンガリー）を使用して、追加ラットのＰＥＴ／ＭＲＩイメージングにより生体内分布を測定した。麻酔下の動物に尾静脈から［６８Ｇａ］Ｇａ－１（ｎ＝５）または［６８Ｇａ］Ｇａ－５（ｎ＝３） ５ＭＢｑを投与した。複数回の全身掃引（１通過３ベッド；２×５分、２×１０分、４×３０分）により最大で１５０分のダイナミック全身ＰＥＴスキャンを実施した。解剖学的アキシャルおよびコロナルＭＲ画像を、Ｔ１強調（Ｔ１Ｗ）スピンエコーシーケンスで測定した。ＰＥＴ画像を、Ｍａｘｉｍｕｍ Ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ Ｍａｘｉｍｉｚｅｄ（ＭＬＥＭ）アルゴリズムを使用して再構成した（１０回繰り返し）。最大値投影法（ＭＩＰ）画像を、Ｃａｒｉｍａｓ ２．９（Ｔｕｒｋｕ ＰＥＴ Ｃｅｎｔｅｒ、フィンランド トゥルク）で作成し、全身の放射性トレーサー集積分布を定量的に可視化することができるようにした。
ＰＥＴ／ＭＲＩイメージングによる健常ラットのｉｎ ｖｉｖｏ生体内分布
小動物用ＰＥＴ－ＭＲＩシステム（ｎａｎｏＰＥＴ／ＭＲＩ、３Ｔ ｍａｇｎｅｔ、Ｍｅｄｉｓｏ、ハンガリー）を使用して、追加ラットのＰＥＴ／ＭＲＩイメージングにより生体内分布を測定した。麻酔下の動物に尾静脈から［６８Ｇａ］Ｇａ－１（ｎ＝５）または［６８Ｇａ］Ｇａ－５（ｎ＝３） ５ＭＢｑを投与した。複数回の全身掃引（１通過３ベッド；２×５分、２×１０分、４×３０分）により最大で１５０分のダイナミック全身ＰＥＴスキャンを実施した。解剖学的アキシャルおよびコロナルＭＲ画像を、Ｔ１強調（Ｔ１Ｗ）スピンエコーシーケンスで測定した。ＰＥＴ画像を、Ｍａｘｉｍｕｍ Ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ Ｍａｘｉｍｉｚｅｄ（ＭＬＥＭ）アルゴリズムを使用して再構成した（１０回繰り返し）。最大値投影法（ＭＩＰ）画像を、Ｃａｒｉｍａｓ ２．９（Ｔｕｒｋｕ ＰＥＴ Ｃｅｎｔｅｒ、フィンランド トゥルク）で作成し、全身の放射性トレーサー集積分布を定量的に可視化することができるようにした。
【0160】
実施例１０
ラットの生体内分布データによるヒトの線量推定値の外挿
健常ラットのダイナミック生体内分布データを使用して、ヒトの線量推定値を算出した。滞留時間は、臓器集積値（非減衰補正）を台形モデルで近似し、ヒト組織重量のモデルに外挿することにより算出した。線量評価には、ＯＬＩＮＤＡ／ＥＸＭ１．１ソフトウェアを使用し、男性ファントムのさまざまな臓器におけるヒトの吸収線量を計算した。
ラットの生体内分布データによるヒトの線量推定値の外挿
健常ラットのダイナミック生体内分布データを使用して、ヒトの線量推定値を算出した。滞留時間は、臓器集積値（非減衰補正）を台形モデルで近似し、ヒト組織重量のモデルに外挿することにより算出した。線量評価には、ＯＬＩＮＤＡ／ＥＸＭ１．１ソフトウェアを使用し、男性ファントムのさまざまな臓器におけるヒトの吸収線量を計算した。
【0161】
実施例１１
生体内分布および線量算出の結果
１９臓器のｅｘ ｖｉｖｏ臓器分布データを、減衰補正したＳＵＶ値として提示した。［６８Ｇａ］Ｇａ－１は、ほとんどの臓器から、ＳＵＶ値が１以下の速い血液クリアランスおよびウォッシュアウトを示した（図１１）。腎臓のＳＵＶは注射１０分後時点で４のレベルとなり、１２０分後にはＳＵＶ≒１まで減少しており、腎排泄が速く、腎臓へのトラップが少ないことが示された。生体内分布のパターンは、ダイナミックＰＥＴで評価したものと同じであった（ｎ＝３）。赤色骨髄が０．０３３ｍＳｖ／ＭＢｑと最も高い臓器吸収線量を示し、したがって決定臓器であった。［６８Ｇａ］Ｇａ－１の総実効線量は１３μＳｖ／ＭＢｑであった。この実効線量では、ヒトに年間最大で７７０ＭＢｑ投与できる。これは、２００ＭＢｑのＰＥＴスキャンを少なくとも３回行うことに相当する。
生体内分布および線量算出の結果
１９臓器のｅｘ ｖｉｖｏ臓器分布データを、減衰補正したＳＵＶ値として提示した。［６８Ｇａ］Ｇａ－１は、ほとんどの臓器から、ＳＵＶ値が１以下の速い血液クリアランスおよびウォッシュアウトを示した（図１１）。腎臓のＳＵＶは注射１０分後時点で４のレベルとなり、１２０分後にはＳＵＶ≒１まで減少しており、腎排泄が速く、腎臓へのトラップが少ないことが示された。生体内分布のパターンは、ダイナミックＰＥＴで評価したものと同じであった（ｎ＝３）。赤色骨髄が０．０３３ｍＳｖ／ＭＢｑと最も高い臓器吸収線量を示し、したがって決定臓器であった。［６８Ｇａ］Ｇａ－１の総実効線量は１３μＳｖ／ＭＢｑであった。この実効線量では、ヒトに年間最大で７７０ＭＢｑ投与できる。これは、２００ＭＢｑのＰＥＴスキャンを少なくとも３回行うことに相当する。
【0162】
実施例１２
ラットにおけるブレオマイシン投与による肺線維症の誘発
ブレオマイシンを、軽く鎮静させたラットに気管内投与した（生理食塩水２００μ中１５００単位）。動物の健康状態を最大で２週間追跡し、その際にＰＥＴ検査を実施した。
ラットにおけるブレオマイシン投与による肺線維症の誘発
ブレオマイシンを、軽く鎮静させたラットに気管内投与した（生理食塩水２００μ中１５００単位）。動物の健康状態を最大で２週間追跡し、その際にＰＥＴ検査を実施した。
【0163】
実施例１３
ブレオマイシン誘発肺線維症モデルでのｉｎ ｖｉｖｏ結合
ガリウム－６８で標識した化合物１または化合物５を、ブレオマイシンにより肺線維症を誘発したラットまたは線維症を誘発していない対照ラットに投与した。動物は、ｉｎ ｖｉｖｏ ＰＥＴスキャンおよび／またはｅｘ ｖｉｖｏ臓器分布とガンマカウンターでの測定により、肺および他の組織での結合について検査した。ガンマカウンター測定後、肺組織は直ちに凍結され、ＯＣＴ培地に包埋された。包埋した組織を凍結切片化し、切片を蛍光体イメージングプレートに露光し、組織結合分布を可視化した。
ブレオマイシン誘発肺線維症モデルでのｉｎ ｖｉｖｏ結合
ガリウム－６８で標識した化合物１または化合物５を、ブレオマイシンにより肺線維症を誘発したラットまたは線維症を誘発していない対照ラットに投与した。動物は、ｉｎ ｖｉｖｏ ＰＥＴスキャンおよび／またはｅｘ ｖｉｖｏ臓器分布とガンマカウンターでの測定により、肺および他の組織での結合について検査した。ガンマカウンター測定後、肺組織は直ちに凍結され、ＯＣＴ培地に包埋された。包埋した組織を凍結切片化し、切片を蛍光体イメージングプレートに露光し、組織結合分布を可視化した。
【0164】
これとは別に、同じ動物から死後ホルマリン組織生検を採取し、パラフィンに包埋した。パラフィン組織ブロックを切片化し、形態およびコラーゲン沈着の存在のために染色した。
【0165】
実施例１４
公知のトレーサー化合物との比較
［６８Ｇａ］Ｇａ－１（［６８Ｇａ］Ｇａ－ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨ）について、文献に報告されている以下のトレーサー化合物との比較を行った：［６８Ｇａ］Ｇａ－ＣＢＰ８（非特許文献２）、［６８Ｇａ］Ｇａ－ＮＯＴＡ－コラゲリン（非特許文献１）、［６８Ｇａ］Ｇａ－ＮＯＤＡＧＡ－コラゲリン（非特許文献１）。
公知のトレーサー化合物との比較
［６８Ｇａ］Ｇａ－１（［６８Ｇａ］Ｇａ－ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨ）について、文献に報告されている以下のトレーサー化合物との比較を行った：［６８Ｇａ］Ｇａ－ＣＢＰ８（非特許文献２）、［６８Ｇａ］Ｇａ－ＮＯＴＡ－コラゲリン（非特許文献１）、［６８Ｇａ］Ｇａ－ＮＯＤＡＧＡ－コラゲリン（非特許文献１）。
【0166】
［６８Ｇａ］Ｇａ－１（［６８Ｇａ］Ｇａ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨ）は、上の実施例４に通り製造した。
【0167】
推定Ｉ型コラーゲン結合ペプチド［６８Ｇａ］Ｇａ－ＤＯＴＡ－ＣＢＰ８、［６８Ｇａ］Ｇａ－ＮＯＴＡ－コラゲリン、［６８Ｇａ］Ｇａ－ＮＯＤＡＧＡ－コラゲリンの生体内分布は、公開文献（文献１～２）から入手したものである。
【0168】
［６８Ｇａ］Ｇａ－１（［６８Ｇａ］Ｇａ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨ）の生体内分布は上記と同様に実施した。
【0169】
腎臓および肝臓のそれぞれにおける注射６０分後の試験化合物について得られたＳＵＶ値を以下の表Ｖに示す。
【0170】
【表5】
【0171】
図１１に見られるように、［６８Ｇａ］Ｇａ－ＤＯＴＡ－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－ＬＲＥＬＨＬＮＮＮ－ＯＨ（［６８Ｇａ］Ｇａ－１）はほとんどの組織から速やかなクリアランス（６０分後のＳＵＶ＜１）を示した。［６８Ｇａ］Ｇａ－１は腎排泄を示したが、腎皮質への再吸収も非常に少なかったことが重要である。ほぼ全ての放射性標識ペプチドが循環から尿中に排出された。したがって、腎臓のバックグラウンド信号は投与２時間後において低かった（ＳＵＶ≒１）。表Ｖ中の［６８Ｇａ］Ｇａ－１と比較用トレーサー２との比較は、環状ペプチドＣＢＰ８を直鎖状ペプチドＬＲＥＬＨＬＮＮＮに置き換えることにより、腎臓でのＳＵＶ値が１０から１．７と低くなったことを示し、これは非特異的腎滞留が少なくなったことを示している。さらに、比較用トレーサー３、４のコラゲリントレーサーは、腎臓でのＳＵＶ値が［６８Ｇａ］Ｇａ－１トレーサーよりも大幅に高い値であった。肝臓については、［６８Ｇａ］Ｇａ－１トレーサー１は、ＳＵＶ値が比較用トレーサー１～３と実質的に等しい値または幾分高い値であった。上記の表Ｖの［６８Ｇａ］Ｇａ－１トレーサーの化合物のような本開示の化合物は、一般に線維症を追跡するのに有用であると結論付けられた。特に、本開示の化合物は、腎臓の線維症を追跡するために有用であることが見出された。
【0172】
References
1． Nuclear Medicine and Biology, 41 (2014) 728-736.
2． Sci. Trans. Med. 9, 2017, 1-11
3． WO 2018/053276
1． Nuclear Medicine and Biology, 41 (2014) 728-736.
2． Sci. Trans. Med. 9, 2017, 1-11
3． WO 2018/053276
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【国際調査報告】