特表 2023-540098 可溶性アルカリホスファターゼ構築物及び可溶性アルカリホスファターゼ構築物をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-09-21

(54)【発明の名称】可溶性アルカリホスファターゼ構築物及び可溶性アルカリホスファターゼ構築物をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20230913BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230913BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20230913BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230913BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20230913BHJP

   C12N 7/01 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 19/08 20060101ALI20230913BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230913BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20230913BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20230913BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20230913BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230913BHJP

   C12N 15/55 20060101ALN20230913BHJP

   C12N 9/16 20060101ALN20230913BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C07K19/00 ZNA

C12N15/867 Z

C12N5/10

C12N15/864 100Z

C12N7/01

A61P19/08

A61P43/00 111

A61K48/00

A61K38/16

A61K35/12

A61K39/395 D

C12N15/55

C12N9/16 B

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023514458

(86)(22)【出願日】2021-09-02

(85)【翻訳文提出日】2023-04-24

(86)【国際出願番号】 US2021048943

(87)【国際公開番号】W WO2022051555

(87)【国際公開日】2022-03-10

(31)【優先権主張番号】63/074,418

(32)【優先日】2020-09-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】515160758

【氏名又は名称】チェン アーヴィン エス．ワイ．

(71)【出願人】

【識別番号】523069739

【氏名又は名称】ランパート バイオサイエンス，インコーポレイテッド

(71)【出願人】

【識別番号】306000186

【氏名又は名称】ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァーシティー オブ カリフォルニア

(74)【代理人】

【識別番号】110000659

【氏名又は名称】弁理士法人広江アソシエイツ特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】チェン，アーヴィン エス．ワイ．

(72)【発明者】

【氏名】バートレット，ジェフリー エス．

(72)【発明者】

【氏名】ブレトン，ルイス ランダル

(72)【発明者】

【氏名】ヤン，ミン

(72)【発明者】

【氏名】ズン，アンジー

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AA97X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA27

4B065CA44

4C084AA02

4C084AA07

4C084AA13

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA22

4C084BA23

4C084CA53

4C084MA23

4C084MA28

4C084MA35

4C084MA37

4C084MA52

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA961

4C084ZA962

4C084ZC021

4C084ZC022

4C085AA13

4C085BB42

4C085CC22

4C085DD62

4C085EE01

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB65

4C087CA12

4C087NA14

4C087ZA96

4C087ZC02

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA89

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、アルカリホスファターゼ及び骨標的化部分を含むポリペプチドなどのポリペプチドに関する。また、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、レンチウイルス発現ベクターなどの発現ベクターも開示される。また、開示されたポリペプチド又は開示されたポリペプチドのうちのいずれかを発現するように形質導入された宿主細胞を、低ホスファターゼ血症の治療を必要とする対象に投与することによって、低ホスファターゼ血症を治療するか、又は低ホスファターゼ血症の１つ以上の症状を治療するか、緩和するか、若しくは予防する方法も開示される。
【選択図】図５

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（ＩＡ）を含むポリペプチドであって、
［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_w－［Ｒ］_q－（［Ｄ］_x－［Ｅ］_y）_z、 （ＩＡ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、配列番号１１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍ_o（Ｆｃ）Ｎ_p）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）_tＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ただし、式（ＩＡ）の前記ポリペプチドが、配列番号１の前記アミノ酸配列を含まないか、又は配列番号１０７のヌクレオチド配列によってコードされた前記アミノ酸配列を含まない、ポリペプチド。

【請求項2】

Ｂが、配列番号１１に対して少なくとも９９％の配列同一性を含む、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項3】

Ｂが、配列番号１１を含む、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項4】

［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_wが、配列番号１０に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項5】

［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_wが、配列番号１０を含む、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項6】

Ａが、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項7】

Ａが、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項8】

Ｒが、配列番号９のものに対して少なくとも９９％の同一性を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項9】

Ｒが、配列番号９を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項10】

ｏ、ｐ、及びｑが、各々、１である、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項11】

Ｍが、２個のアミノ酸を含み、Ｎが、２個のアミノ酸を含み、Ｍ及びＮが、異なる、請求項１０に記載のポリペプチド。

【請求項12】

Ｍが、－Ｌ－Ｋ－である、請求項１０又は１１に記載のポリペプチド。

【請求項13】

Ｎが、－Ｄ－Ｉ－である、請求項１０～１２のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項14】

Ｅが、２～４個のアミノ酸を含む、請求項１０～１３のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項15】

Ｅが、３個のアミノ酸を含む、請求項１０～１３のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項16】

前記３個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸が、同じである、請求項１５に記載のポリペプチド。

【請求項17】

Ｅが、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－を含む、請求項１０～１３のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項18】

ｑが、０である、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項19】

ｑが、１である、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項20】

ｘが、０である、請求項１９に記載のポリペプチド。

【請求項21】

ｚが、１である、請求項１９又は２０に記載のポリペプチド。

【請求項22】

ｙが、４～８の範囲である、請求項１９～２１のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項23】

ｙが、６である、請求項１９～２２のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項24】

［Ｅ］_yが、［－Ｄ－Ｓ－Ｓ－］₆である、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項25】

ｑが、０である、請求項２４に記載のポリペプチド。

【請求項26】

ｘが、０である、請求項２５に記載のポリペプチド。

【請求項27】

ｑが、１である、請求項２４に記載のポリペプチド。

【請求項28】

ｘが、０である、請求項２７に記載のポリペプチド。

【請求項29】

Ｆｃが、配列番号１３０を含む、請求項２７又は２８に記載のポリペプチド。

【請求項30】

［Ｄ］_xが、［－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｓ－］₂である、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項31】

［Ｅ］_yが、［Ｄ］₁₀である、請求項３０に記載のポリペプチド。

【請求項32】

［Ｅ］_yが、［ＤＳＳ］₆である、請求項３０に記載のポリペプチド。

【請求項33】

［Ｒ］が、－［Ｌ－Ｋ］－Ｆｃ－［Ｄ－Ｉ］－であり、式中、Ｆｃが、配列番号１３０に対して少なくとも９９％の同一性を含む、請求項３０～３２のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項34】

前記ポリペプチドが、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項35】

前記ポリペプチドが、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項36】

前記ポリペプチドが、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項37】

前記ポリペプチドが、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項38】

前記ポリペプチドが、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項39】

前記ポリペプチドが、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項40】

前記ポリペプチドが、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列によってコードされる、請求項１に記載のポリペプチド。

【請求項41】

前記ポリペプチドが、骨内のヒドロキシアパタイト結晶の形成を触媒によって可能にする能力がある、請求項１～４０のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項42】

式（ＶＢ）を含むポリペプチドであって、
［Ａ］－［Ｂ］－［Ｒ］_q－（［Ｅ］_y） （ＶＢ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｒが、－（Ｍ_o（Ｆｃ）Ｎ_p）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
ｑが、０又は１であり、
Ｅが、２～４個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｙが、１～１６の範囲の整数であり、
ただし、ｑが、１であり、［Ｅ］が、アスパラギン酸のみを含む場合、式（ＶＢ）の前記ポリペプチドが、１０～１６個の連続するアスパラギン酸残基を有するアミノ酸配列を含まない、ポリペプチド。

【請求項43】

ｙが、４～８の範囲の整数である、請求項４２に記載のポリペプチド。

【請求項44】

ｙが、６である、請求項４２に記載のポリペプチド。

【請求項45】

ｑが、０である、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項46】

ｑが、１である、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項47】

Ｍが、２個のアミノ酸を含み、Ｎが、２個のアミノ酸を含み、Ｍ及びＮが、異なる、請求項４６に記載のポリペプチド。

【請求項48】

Ｍが、－Ｌ－Ｋ－である、請求項４７に記載のポリペプチド。

【請求項49】

Ｎが、－Ｄ－Ｉ－である、請求項４７に記載のポリペプチド。

【請求項50】

Ｅが、２～４個のアミノ酸を含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項51】

Ｅが、３個のアミノ酸を含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項52】

前記３個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸が、同じである、請求項５１に記載のポリペプチド。

【請求項53】

Ｅが、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－を含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項54】

Ｂが、配列番号１１に対して少なくとも９７％の配列同一性を含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項55】

Ｂが、配列番号１１に対して少なくとも９９％の配列同一性を含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項56】

Ｂが、配列番号１１を含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項57】

Ａが、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項58】

Ａが、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項59】

Ａが、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項60】

Ｆｃが、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の同一性を含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項61】

Ｒが、配列番号９を含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項62】

前記ポリペプチドが、配列番号５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４２に記載のポリペプチド。

【請求項63】

前記ポリペプチドが、配列番号５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４２に記載のポリペプチド。

【請求項64】

前記ポリペプチドが、配列番号５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４２に記載のポリペプチド。

【請求項65】

前記ポリペプチドが、配列番号５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４２に記載のポリペプチド。

【請求項66】

前記ポリペプチドが、配列番号５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、請求項４２に記載のポリペプチド。

【請求項67】

前記ポリペプチドが、配列番号１１１、１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる、請求項４２に記載のポリペプチド。

【請求項68】

前記ポリペプチドが、配列番号１１１、１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる、請求項４２に記載のポリペプチド。

【請求項69】

前記ポリペプチドが、配列番号１１１、１１５、及び１３１のうちのいずれか１つを含むヌクレオチド配列によってコードされる、請求項４２に記載のポリペプチド。

【請求項70】

前記ポリペプチドが、骨内のヒドロキシアパタイト結晶の形成を触媒によって可能にする能力がある、請求項４２～６９のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項71】

請求項１～７０のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする核酸配列を含む、レンチウイルスベクター。

【請求項72】

前記ポリペプチドをコードする前記核酸配列が、プロモーターに作動可能に連結される、請求項７１に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項73】

前記プロモーターが、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８Ｌｐ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣからなる群から選択される、請求項７１又は７２に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項74】

ＵＣＯＥプロモーターエレメントを更に含む、請求項７１又は７２に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項75】

インスレーターを更に含む、請求項７１又は７２に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項76】

１つ以上の足場／マトリックス付着領域を更に含む、請求項７１又は７２に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項77】

ＷＰＲＥエレメントを更に含む、請求項７１又は７２に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項78】

前記レンチウイルスベクターが、ＷＰＲＥエレメントをコードするヌクレオチド配列を含まない、請求項７１又は７２に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項79】

前記レンチウイルスベクターが、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項７１に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項80】

前記レンチウイルスベクターが、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項７１に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項81】

前記レンチウイルスベクターが、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項７１に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項82】

前記レンチウイルスベクターが、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項７１に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項83】

前記レンチウイルスベクターが、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列を含む、請求項７１に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項84】

第１の核酸配列に作動可能に連結された第１の発現制御配列を含み、前記第１の核酸配列が、請求項１～７０のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする、発現ベクター。

【請求項85】

前記第１の発現制御配列が、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８Ｌｐ、ＥＦＳ、及びＵｂＣからなる群から選択される、請求項８４に記載の発現ベクター。

【請求項86】

前記第１の発現制御配列が、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項８４に記載の発現ベクター。

【請求項87】

前記第１の発現制御配列が、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項８４に記載の発現ベクター。

【請求項88】

前記第１の発現制御配列が、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列を含む、請求項８４に記載の発現ベクター。

【請求項89】

請求項７１～８３のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター、又は請求項８４～８８のいずれか一項に記載の発現ベクターで形質導入された、宿主細胞の集団。

【請求項90】

前記宿主細胞が、自己由来である、請求項８９に記載の宿主細胞の集団。

【請求項91】

前記宿主細胞が、同種異系である、請求項８９に記載のホース細胞の集団。

【請求項92】

宿主細胞の集団を形質導入する方法であって、宿主細胞の集団を得ることと、前記得られた宿主細胞の集団を、追加の実施形態７１～８３のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター、又は請求項８４～８８のいずれか一項に記載の発現ベクターと接触させることと、を含む、方法。

【請求項93】

前記形質導入が、エクスビボ又はインビボで生じる、請求項９２に記載の方法。

【請求項94】

請求項８９～９１のいずれか一項に記載の形質導入された宿主細胞、及び薬学的に許容される賦形剤又は担体を含む、医薬組成物。

【請求項95】

請求項１～７０のいずれか一項に記載のポリペプチド、及び薬学的に許容される賦形剤又は担体を含む、医薬組成物。

【請求項96】

請求項７１～８３のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター、又は請求項８４～８８のいずれか一項に記載の発現ベクター、及び薬学的に許容される賦形剤若しくは担体を含む、医薬組成物。

【請求項97】

哺乳動物対象を治療する方法であって、治療有効量の、請求項８９～９１のいずれか一項に記載の形質導入された宿主細胞、又は請求項９４～９６のいずれか一項に記載の医薬組成物を、その治療を必要とする前記哺乳動物対象に投与することを含む、方法。

【請求項98】

哺乳動物において低ホスファターゼ血症を治療する方法であって、治療有効量の、請求項８９～９１のいずれか一項に記載の形質導入された宿主細胞、又は請求項９４～９６のいずれか一項に記載の医薬組成物を、その治療を必要とする前記哺乳動物対象に投与することを含む、方法。

【請求項99】

哺乳動物において低ホスファターゼ血症の症状を治療するか、緩和するか、又は予防する方法であって、治療有効量の、請求項８９～９１のいずれか一項に記載の形質導入された宿主細胞、又は請求項９４～９６のいずれか一項に記載の医薬組成物を、その治療を必要とする前記哺乳動物対象に投与することを含む、方法。

【請求項100】

機能性アルカリホスファターゼの欠如又は不十分な量を特徴とする骨欠損に関連する状態又は疾患を治療する方法であって、治療有効量の、請求項８９～９１のいずれか一項に記載の形質導入された宿主細胞、又は請求項９４～９６のいずれか一項に記載の医薬組成物を、その治療を必要とする前記哺乳動物対象に投与することを含む、方法。

【請求項101】

式（ＩＢ）を含むポリペプチドであって、
［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_w－［Ｒ］_q－（［Ｄ］_x－［Ｅ］_y）_z、 （ＩＢ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、配列番号１１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍ_o（Ｆｃ）Ｎ_p）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）_tＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ただし、ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが、１であり、ｏが、１であり、ｐが、１であり、Ｎが、ジアミノ酸－Ｄ－Ｉ－であり、Ｍが、ジアミノ酸－Ｌ－Ｋ－であり、［Ｂ］が、配列番号１１を含み、Ｆｃが、配列番号１３０を含み、ｘが、０である場合、［Ｅ］_yが、１０～１６個の連続するアスパラギン酸残基を有するアミノ酸配列ではない、ポリペプチド。

【請求項102】

Ｅが、２～４個のアミノ酸を含む、請求項１０１に記載のポリペプチド。

【請求項103】

Ｅが、３個のアミノ酸を含む、請求項１０１又は１０２に記載のポリペプチド。

【請求項104】

前記３個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸が、同じである、請求項１０３に記載のポリペプチド。

【請求項105】

Ｅが、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－を含む、請求項１０１に記載のポリペプチド。

【請求項106】

ｑが、０である、請求項１０５に記載のポリペプチド。

【請求項107】

ｑが、１である、請求項１０５に記載のポリペプチド。

【請求項108】

ｘが、０である、請求項１０６又は１０７に記載のポリペプチド。

【請求項109】

ｚが、１である、請求項１０８に記載のポリペプチド。

【請求項110】

ｙが、４～８の範囲である、請求項１０５に記載のポリペプチド。

【請求項111】

ｙが、６である、請求項１０５に記載のポリペプチド。

【請求項112】

ｘが、０であり、［Ｅ］_yが、［－Ｄ－Ｓ－Ｓ－］₆である、請求項１０１に記載のポリペプチド。

【請求項113】

ｑが、１であり、Ｒが、配列番号９を含む、請求項１１２に記載のポリペプチド。

【請求項114】

ｑが、０であり、［Ｅ］_yが、［－Ｄ－Ｓ－Ｓ－］₆である、請求項１１３に記載のポリペプチド。

【請求項115】

ｑが、１である、請求項１０１に記載のポリペプチド。

【請求項116】

［Ｒ］が、－［Ｌ－Ｋ］－Ｆｃ－［Ｄ－Ｉ］－であり、式中、Ｆｃが、配列番号１３０に対して少なくとも９９％の同一性を含む、請求項１１５に記載のポリペプチド。

【請求項117】

［Ｒ］が、配列番号９を含む、請求項１１５に記載のポリペプチド。

【請求項118】

［Ｄ］_xが、［－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｓ－］₂である、請求項１０１に記載のポリペプチド。

【請求項119】

［Ｅ］_yが、［Ｄ］₁₀である、請求項１１８に記載のポリペプチド。

【請求項120】

［Ｅ］_yが、［ＤＳＳ］₆である、請求項１１８に記載のポリペプチド。

【請求項121】

［Ｒ］が、－［Ｌ－Ｋ］－Ｆｃ－［Ｄ－Ｉ］－であり、式中、Ｆｃが、配列番号１３０に対して少なくとも９９％の同一性を含む、請求項１１８～１２０のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項122】

２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、発現ベクター。

【請求項123】

前記ポリペプチドが、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する、請求項１２２に記載の発現ベクター。

【請求項124】

前記ポリペプチドが、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有する、請求項１２２に記載の発現ベクター。

【請求項125】

前記ポリペプチドが、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する、請求項１２２に記載の発現ベクター。

【請求項126】

前記発現ベクターが、レトロウイルスベクターである、請求項１２２～１２５のいずれか一項に記載の発現ベクター。

【請求項127】

前記レトロウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、請求項１２６に記載の発現ベクター。

【請求項128】

前記発現ベクターが、ＡＡＶベクターである、請求項１２２～１２５のいずれか一項に記載の発現ベクター。

【請求項129】

前記ヌクレオチド配列が、プロモーターに作動可能に連結される、請求項１２２～１２５のいずれか一項に記載の発現ベクター。

【請求項130】

前記プロモーターが、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８Ｌｐ、ＥＦＳ、及びＵｂＣからなる群から選択される、請求項１２９に記載の発現ベクター。

【請求項131】

配列番号１１１、１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を含む、単離されたヌクレオチド配列。

【請求項132】

前記単離されたヌクレオチド配列が、配列番号１１１、１１５、及び１３１のものに対して少なくとも９５％の同一性を含む、請求項１３１に記載の単離されたヌクレオチド配列。

【請求項133】

前記単離されたヌクレオチド配列が、配列番号１１１、１１５、及び１３１のものに対して少なくとも９７％の同一性を含む、請求項１３１に記載の単離されたヌクレオチド配列。

【請求項134】

前記単離されたヌクレオチド配列が、配列番号１１１、１１５、及び１３１のものに対して少なくとも９９％の同一性を含む、請求項１３１に記載の単離されたヌクレオチド配列。

【請求項135】

前記単離されたヌクレオチド配列が、配列番号１１１、１１５、及び１３１を含む、請求項１３１に記載の単離されたヌクレオチド配列。

【請求項136】

少なくとも第１及び第２のヌクレオチド配列を含む、単離されたヌクレオチド配列であって、前記第１のヌクレオチド配列が、配列番号１１５のものに対して少なくとも９０％の同一性を有し、前記第２のヌクレオチド配列が、シグナルペプチドをコードする、単離されたヌクレオチド配列。

【請求項137】

前記第１のヌクレオチド配列が、配列番号１１５のものに対して少なくとも９５％の同一性を含む、請求項１３６に記載の単離されたヌクレオチド配列。

【請求項138】

前記第１のヌクレオチド配列が、配列番号１１５のものに対して少なくとも９７％の同一性を含む、請求項１３６に記載の単離されたヌクレオチド配列。

【請求項139】

前記第１のヌクレオチド配列が、配列番号１１５のものに対して少なくとも９９％の同一性を含む、請求項１３６に記載の単離されたヌクレオチド配列。

【請求項140】

前記第１のヌクレオチド配列が、配列番号１１５を含む、請求項１３６に記載の単離されたヌクレオチド配列。

【請求項141】

前記シグナルペプチドが、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１３６～１４０のいずれか一項に記載の単離されたヌクレオチド配列。

【請求項142】

前記シグナルペプチドが、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、請求項１３６～１４０のいずれか一項に記載の単離されたヌクレオチド配列。

【請求項143】

請求項１３１～１４２のいずれか一項に記載のヌクレオチド配列を含む、レンチウイルスベクター。

【請求項144】

前記ヌクレオチド配列が、プロモーターに作動可能に連結される、請求項１４３に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項145】

前記プロモーターが、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８Ｌｐ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣからなる群から選択される、請求項１４４に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項146】

請求項１４３～１４５のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクターで形質導入された、宿主細胞。

【請求項147】

配列番号７５に対して少なくとも９０％の同一性を有する、アミノ酸配列。

【請求項148】

前記アミノ酸配列が、配列番号７５に対して少なくとも９５％の同一性を有する、請求項１４７に記載のアミノ酸配列。

【請求項149】

少なくとも第１及び第２の部分を含むポリペプチドであって、前記第１の部分が、配列番号４～８及び４４～５４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記第２の部分が、Ｆｃドメインをコードするアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。

【請求項150】

前記Ｆｃドメインをコードする前記アミノ酸配列が、配列番号１３０に対して少なくとも９８％の同一性を含む、請求項１４９に記載のポリペプチド。

【請求項151】

前記Ｆｃドメインをコードする前記アミノ酸配列が、配列番号４～８及び４４～５４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を含む、請求項１４９又は１５０に記載のポリペプチド。

【請求項152】

前記第１の部分の前記アミノ酸配列が、配列番号４～８及び４４～５４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を含む、請求項１４９又は１５０に記載のポリペプチド。

【請求項153】

前記第１の部分の前記アミノ酸配列が、配列番号４～８及び４４～５４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を含み、前記Ｆｃドメインをコードする前記アミノ酸配列が、配列番号１３０に対して少なくとも９９％の同一性を含む、請求項１４９に記載のポリペプチド。

【請求項154】

配列番号７２に対して少なくとも９５％の同一性を含む、単離されたヌクレオチド配列。

【請求項155】

前記単離されたヌクレオチド配列が、配列番号７２に対して少なくとも９７％の同一性を含む、請求項１５４に記載の単離されたヌクレオチド配列。

【請求項156】

前記単離されたヌクレオチド配列が、配列番号７２に対して少なくとも９９％の同一性を含む、請求項１５４に記載の単離されたヌクレオチド配列。

【請求項157】

配列番号７２を含む、単離されたヌクレオチド配列。

【請求項158】

骨標的化部分に結合したアルカリホスファターゼを含む、ポリペプチドであって、前記骨標的化部分のヌクレオチド配列が、配列番号７２に対して少なくとも９５％の同一性を有する、ポリペプチド。

【請求項159】

前記骨標的化部分の前記ヌクレオチド配列が、配列番号７２に対して少なくとも９７％の同一性を有する、請求項１５８に記載のポリペプチド。

【請求項160】

前記アルカリホスファターゼが、配列番号１１に対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５８又は１５９に記載のポリペプチド。

【請求項161】

前記アルカリホスファターゼが、配列番号１１を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５８又は１５９に記載のポリペプチド。

【請求項162】

前記アルカリホスファターゼが、ペプチドリンカーを介して前記骨標的化部分に結合される、請求項１５８又は１５９に記載のポリペプチド。

【請求項163】

前記ペプチドリンカーが、（ＧＧＧＧＳ）_nを含み、式中、ｎが、１～１０の範囲である、請求項１６２に記載のポリペプチド。

【請求項164】

前記ポリペプチドが、Ｆｃドメインを更に含む、請求項１５８又は１５９に記載のポリペプチド。

【請求項165】

請求項１５８～１６４のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする第１のヌクレオチド配列を含む、レンチウイルスベクターであって、前記第１のヌクレオチドが、プロモーターに作動可能に連結される、レンチウイルスベクター。

【請求項166】

前記プロモーターが、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８Ｌｐ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣからなる群から選択される、請求項１６５に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項167】

請求項１６５又は１６６に記載のレンチウイルスベクターで形質導入された、宿主細胞。

【請求項168】

請求項１５９～１６４のいずれか一項に記載のポリペプチド又は前記宿主細胞請求項１６７を含む、医薬組成物。

【請求項169】

哺乳動物において低ホスファターゼ血症を治療する方法であって、治療有効量の、請求項１６７に記載の形質導入された宿主細胞又は請求項１６８に記載の医薬組成物を、その治療を必要とする前記哺乳動物対象に投与することを含む、方法。

【請求項170】

哺乳動物において低ホスファターゼ血症の症状を治療するか、緩和するか、又は予防する方法であって、治療有効量の、請求項１６７に記載の形質導入された宿主細胞又は請求項１６８に記載の医薬組成物を、その治療を必要とする前記哺乳動物対象に投与することを含む、方法。

【請求項171】

式（Ｉ）を含むポリペプチドであって、
［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_w－［Ｒ］_q－（［Ｄ］_x－［Ｅ］_y）_z、 （Ｉ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、配列番号１１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍ_o（Ｆｃ）Ｎ_p）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）_tＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数である、ポリペプチド。

【請求項172】

ｑが、０である、請求項１７１に記載のポリペプチド。

【請求項173】

Ｂが、配列番号１１に対して少なくとも９９％の配列同一性を含む、請求項１７２に記載のポリペプチド。

【請求項174】

Ｂが、配列番号１１を含む、請求項１７２に記載のポリペプチド。

【請求項175】

［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_wが、配列番号１０を含む、請求項１７２に記載のポリペプチド。

【請求項176】

Ａが、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、請求項１７２に記載のポリペプチド。

【請求項177】

Ｒが、配列番号９のものに対して少なくとも９７％の同一性を含む、請求項１７１に記載のポリペプチド。

【請求項178】

Ｒが、配列番号９のものに対して少なくとも９９％の同一性を含む、請求項１７１に記載のポリペプチド。

【請求項179】

Ｒが、配列番号９を含む、請求項１７１に記載のポリペプチド。

【請求項180】

ｏ、ｐ、及びｑが、各々、１である、請求項１７１に記載のポリペプチド。

【請求項181】

Ｍが、２個のアミノ酸を含み、Ｎが、２個のアミノ酸を含み、Ｍ及びＮが、異なる、請求項１８０に記載のポリペプチド。

【請求項182】

Ｍが、－Ｌ－Ｋ－である、請求項１８０に記載のポリペプチド。

【請求項183】

Ｎが、－Ｄ－Ｉ－である、請求項１８０に記載のポリペプチド。

【請求項184】

Ｅが、２～４個のアミノ酸を含む、請求項１８０に記載のポリペプチド。

【請求項185】

Ｅが、３個のアミノ酸を含む、請求項１８０に記載のポリペプチド。

【請求項186】

前記３個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸が、同じである、請求項１８５に記載のポリペプチド。

【請求項187】

Ｅが、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－を含む、請求項１７１に記載のポリペプチド。

【請求項188】

ｑが、０である、請求項１８７に記載のポリペプチド。

【請求項189】

ｘが、０である、請求項１８８に記載のポリペプチド。

【請求項190】

ｑが、１である、請求項１８７に記載のポリペプチド。

【請求項191】

ｘが、０である、請求項１９０に記載のポリペプチド。

【請求項192】

ｚが、１である、請求項１８７～１９１のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項193】

ｙが、４～８の範囲である、請求項１８７～１９１のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項194】

ｙが、６である、請求項１８７～１９１のいずれか一項に記載のポリペプチド。

【請求項195】

［Ｅ］_yが、［－Ｄ－Ｓ－Ｓ－］₆である、請求項１７１に記載のポリペプチド。

【請求項196】

［Ｄ］_xが、［－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｓ－］₂である、請求項１７１に記載のポリペプチド。

【請求項197】

［Ｅ］_yが、［Ｄ］₁₀である、請求項１９６に記載のポリペプチド。

【請求項198】

［Ｅ］_yが、［ＤＳＳ］₆である、請求項１９６に記載のポリペプチド。

【請求項199】

請求項１７１～１９８のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする第１のヌクレオチド配列、及び前記第１のヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む、レンチウイルスベクター。

【請求項200】

前記プロモーターが、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８Ｌｐ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣからなる群から選択される、請求項１９９に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項201】

前記プロモーターが、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する、請求項１９９に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項202】

前記プロモーターが、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有する、請求項１９９に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項203】

前記プロモーターが、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有する、請求項１９９に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項204】

前記プロモーターが、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有する、請求項１９９に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項205】

前記プロモーターが、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する、請求項１９９に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項206】

前記プロモーターが、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つを含む、請求項１９９に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項207】

ＵＣＯＥプロモーターエレメントを更に含む、請求項１９９～２０６のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項208】

インスレーターを更に含む、請求項１９９～２０６のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項209】

１つ以上の足場／マトリックス付着領域を更に含む、請求項１９９～２０６のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項210】

ＷＰＲＥエレメントを更に含む、請求項１９９～２０６のいずれか一項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項211】

配列番号１１に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１の部分と、Ｆｃドメインをコードするアミノ酸配列を含む第２の部分と、骨標的化部分を含む第３の部分と、を含む、ポリペプチドであって、前記骨標的化部分のヌクレオチド配列が、配列番号７２に対して少なくとも９５％の同一性を有する、ポリペプチド。

【請求項212】

前記Ｆｃドメインをコードする前記アミノ酸配列が、配列番号１３０に対して少なくとも９８％の同一性を含む、請求項２１１に記載のポリペプチド。

【請求項213】

前記骨標的化部分の前記ヌクレオチド配列が、配列番号７２に対して少なくとも９７％の同一性を有する、請求項２１１に記載のポリペプチド。

【請求項214】

前記骨標的化部分の前記ヌクレオチド配列が、配列番号７２に対して少なくとも９８％の同一性を有する、請求項２１１に記載のポリペプチド。

【請求項215】

前記骨標的化部分の前記ヌクレオチド配列が、配列番号７２に対して少なくとも９９％の同一性を有する、請求項２１１に記載のポリペプチド。

【請求項216】

前記骨標的化部分の前記ヌクレオチド配列が、配列番号７２を含む、請求項２１１に記載のポリペプチド。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年９月３日に出願された米国仮特許出願第６３／０７４，４１８号の出願日の利益を主張し、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

本開示は、ポリペプチド、具体的には、骨組織を標的とするポリペプチドに関する。ポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む、レンチウイルス発現ベクターなどの発現ベクターも開示される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、低ホスファターゼ血症の治療を必要とする対象において、低ホスファターゼ血症を治療するか、又は低ホスファターゼ血症の１つ以上の症状を治療するか、緩和するか、若しくは予防するのに有用である。

【背景技術】

【0003】

石灰化及び骨化のレベルの異常は、乳児の全身性動脈石灰化（ＧＡＣＩ）、特発性乳児動脈石灰化（ＩＩＡＣ）、弾性線維性仮性黄色腫（ＰＸＥ）、後縦靱帯骨化症（ＯＰＬＬ）、内壁血管石灰化（ＭＷＶＣ）、常染色体劣性低リン血症性くる病２型（ＡＲＨＲ２）、末期状態腎疾患（ＥＳＲＤ）、慢性腎疾患－骨／ミネラル障害（ＣＫＤ－ＭＢＤ）、Ｘ連鎖性低リン血症（ＸＬＨ）、加齢性骨減少症、石灰性尿毒症性細動脈症（ＣＵＡ）及び低リン血症性くる病などの様々な疾患を引き起こす。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

低ホスファターゼ血症（ＨＰＰ）は、最も重症型の疾患では、１００，０００人の出生ごとに１人の発生率を伴う、稀な遺伝性骨格疾患である。この障害は、組織非特異的アルカリホスファターゼ（ＴＮＳＡＬＰ）をコードする遺伝子における機能喪失変異から生じる。ＨＰＰ患者は、歯の喪失又は骨軟化症（くる病）から子宮内の骨石灰化のほぼ完全な欠如まで、顕著な範囲の症状を呈する。ＨＰＰを有する多くの患者は、骨格変形、低身長、筋肉及び骨の痛み、運動障害、並びに歯の早期喪失の特徴を呈する。周産期発症又は小児発症ＨＰＰは、くる病性胸部奇形、ビタミンＢ６依存性発作、及び成長障害の存在によっても特徴付けられ得る。特に、生後６ヶ月未満でＨＰＰを呈することは、呼吸不全のためにしばしば致命的であり、１歳での生存率は低い。

【課題を解決するための手段】

【0005】

本開示の第１の態様は、式（Ｉ）を含むポリペプチドであって、
［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗ－［Ｒ］ｑ－（［Ｄ］ｘ－［Ｅ］ｙ）ｚ、 （Ｉ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）ｔＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数である、ポリペプチドである。

【0006】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、骨内などのヒドロキシアパタイト結晶の形成を触媒によって可能にする能力がある。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、無機ピロリン酸の切断を触媒することができる。

【0007】

いくつかの実施形態では、ｑは、ゼロである。いくつかの実施形態では、ｑは、ゼロであり、ｘは、１以上である。

【0008】

いくつかの実施形態では、Ｂは、配列番号１１に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｂは、配列番号１１に対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｂは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。

【0009】

いくつかの実施形態では、基［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、基［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、基［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、基［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、基［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、基［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０を有するアミノ酸配列を含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、Ａは、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ａは、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０である。いくつかの実施形態では、ｚは、０である。いくつかの実施形態では、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２のいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２を含む。

【0011】

いくつかの実施形態では、Ｅは、最大でも２個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸を含み、ｙは、８～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸を含み、ｙは、８～１２の範囲であり、ｖは、１であり、ｗは、０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸を含み、ｙは、８～１２の範囲であり、ｖは、０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸を含み、ｙは、８～１２の範囲であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３を含む。

【0012】

いくつかの実施形態では、Ｄは、最大でも５個のアミノ酸を含む（例えば、Ｄは、本明細書に記載されるように、－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｓ－であり得る）。いくつかの実施形態では、最大で５個のアミノ酸のうちの少なくとも３個の連続するアミノ酸は、同じである。いくつかの実施形態では、少なくとも３個の連続するアミノ酸は、各々、グリシンである。いくつかの実施形態では、少なくとも３個の連続するアミノ酸は、各々、グリシンであり、ｘは、１～３の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、少なくとも３個の連続するアミノ酸は、各々、グリシンであり、ｘは、２である。いくつかの実施形態では、少なくとも３個の連続するアミノ酸は、各々、グリシンであり、ｙは、４～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、少なくとも３個の連続するアミノ酸は、各々、グリシンであり、ｙは、５～７である。いくつかの実施形態では、ｙは、６である。

【0013】

いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、３個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸は、同じである。いくつかの実施形態では、３個のアミノ酸のうちの２個の連続するアミノ酸は、各々、セリンである。いくつかの実施形態では、Ｅは、－ａｓｐ－ｓｅｒ－ｓｅｒ－を含む。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号６を含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、Ｅは、１個又は２個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、単一のアスパラギン酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、８～１２である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号４に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号４を含む。

【0015】

いくつかの実施形態では、Ｅは、２～８個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、２～６個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、２～４個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、基Ｅの３個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸は、同じである。いくつかの実施形態では、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、ｙは、５～７の範囲である。いくつかの実施形態では、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－ａｓｐ－ｓｅｒ－ｓｅｒ－を含む。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０である。

【0016】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号５を含む。

【0017】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号４４～５４、６８、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号４４～５４、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号４４～５４、６８、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号４４～５４、６８、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号４４～５４、６８、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号配列番号４４～５４、６８、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号４４～５４、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号配列番号４４～５４、６８、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号配列番号４４～５４、６８、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列は、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列は、配列番号１４を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号８に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号８に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８を含む。

【0019】

いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、１であり、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列は、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、１であり、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列は、配列番号１３に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、１であり、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列は、配列番号１３に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、１であり、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列は、配列番号１４を有する。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、１であり、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、１であり、式（Ｉ）のポリペプチドは、配列番号７を含む。

【0020】

本開示の第２の態様は、式（Ｉ）を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含むレンチウイルスベクターであって、
［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗ－［Ｒ］ｑ－（［Ｄ］ｘ－［Ｅ］ｙ）ｚ、 （Ｉ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）ｔＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数である、レンチウイルスベクターである。

【0021】

式（Ｉ）を有するポリペプチドの具体例は、本明細書に列挙され、本開示の第１の態様に関して上述されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含まないか、又は配列番号１０７のヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含まない。

【0022】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードする核酸配列は、プロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８ＬＰＰ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＵＣＯＥプロモーターエレメントを更に含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、インスレーターを更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、１つ以上のマトリックス付着領域を更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＷＰＲＥエレメントを更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＷＰＲＥエレメントを含まない。

【0023】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列を含む。

【0024】

本開示の第３の態様は、発現ベクターで形質導入された宿主細胞の集団であって、発現ベクターが、式（Ｉ）を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含み、
［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗ－［Ｒ］ｑ－（［Ｄ］ｘ－［Ｅ］ｙ）ｚ、 （Ｉ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）ｔＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数である、宿主細胞の集団である。

【0025】

式（Ｉ）を有するポリペプチドの具体例は、本明細書に列挙され、本開示の第１の態様に関して上述されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含まないか、又は配列番号１０７のヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含まない。

【0026】

いくつかの実施形態では、発現ベクターは、レトロウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、レンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列を含む。

【0027】

いくつかの実施形態では、宿主細胞は、造血幹細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、間葉系細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、骨髄細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、肝細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、内皮細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、エクスビボで形質導入される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、インビボで形質導入される。

【0028】

いくつかの実施形態では、形質導入された宿主細胞は、式（Ｉ）を有するポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、形質導入された宿主細胞は、その治療を必要とする哺乳動物対象に投与され得る。

【0029】

本開示の第４の態様は、宿主細胞の集団を形質導入する方法であって、宿主細胞の集団を得ることと、得られた宿主細胞の集団を、式（Ｉ）を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む発現ベクターと接触させることと、を含み、
［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗ－［Ｒ］ｑ－（［Ｄ］ｘ－［Ｅ］ｙ）ｚ、 （Ｉ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）ｔＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数である、方法である。

【0030】

いくつかの実施形態では、形質導入は、エクスビボで生じる。

【0031】

いくつかの実施形態では、形質導入は、インビボで生じる。

【0032】

式（Ｉ）を有するポリペプチドの具体例は、本明細書に列挙され、本開示の第１の態様に関して上述されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含まないか、又は配列番号１０７のヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含まない。

【0033】

いくつかの実施形態では、発現ベクターは、レトロウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、レンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列を含む。

【0034】

本開示の第５の態様は、修飾された宿主細胞の集団を含む医薬組成物であって、修飾された宿主細胞の集団が、式（Ｉ）を有するポリペプチドを発現し、
［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗ－［Ｒ］ｑ－（［Ｄ］ｘ－［Ｅ］ｙ）ｚ、 （Ｉ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）ｔＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数である、医薬組成物である。

【0035】

式（Ｉ）を有するポリペプチドの具体例は、本明細書に列挙され、本開示の第１の態様に関して上述されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含まないか、又は配列番号１０７のヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含まない。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、エクスビボで形質導入される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、インビボで形質導入される。

【0036】

本開示の第６の態様は、哺乳動物対象を治療する方法であって、薬学的に有効な量の修飾された宿主細胞の集団を、哺乳動物対象に投与することを含み、修飾された宿主細胞の集団が、式（Ｉ）を有するポリペプチドを発現し、
［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗ－［Ｒ］ｑ－（［Ｄ］ｘ－［Ｅ］ｙ）ｚ、 （Ｉ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）ｔＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数である、方法である。

【0037】

式（Ｉ）を有するポリペプチドの具体例は、本明細書に列挙され、本開示の第１の態様に関して上述されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含まないか、又は配列番号１０７のヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含まない。

【0038】

いくつかの実施形態では、哺乳動物対象は、配列番号１を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドで以前に治療されたか、治療されることになるか、又は同時に治療されている。

【0039】

いくつかの実施形態では、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、ｑは、０であり、Ｅは、２～４個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、０であり、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、０であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、０であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－を含み、ｘは、０である。

【0040】

いくつかの実施形態では、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、Ｅは、２～４個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－を含み、ｘは、０である。

【0041】

いくつかの実施形態では、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、ｑは、０であり、［Ｄ］ｘは、［－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｓ－］２である。いくつかの実施形態では、ｑは、０であり、［Ｄ］ｘは、［－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｓ－］２であり、［Ｅ］ｙは、［Ｄ］１０である。いくつかの実施形態では、ｑは、０であり、［Ｄ］ｘは、［－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｓ－］２であり、［Ｅ］ｙは、［Ｄ］６である。

【0042】

いくつかの実施形態では、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、［Ｄ］ｘは、［－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｓ－］２である。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、［Ｄ］ｘは、［－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｓ－］２であり、［Ｅ］ｙは、［Ｄ］１０である。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、［Ｄ］ｘは、［－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｓ－］２であり、［Ｅ］ｙは、［Ｄ］６である。

【0043】

本開示の第７の態様は、式（ＩＡ）を含むポリペプチドであって、
［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗ－［Ｒ］ｑ－（［Ｄ］ｘ－［Ｅ］ｙ）ｚ、 （ＩＡ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）ｔＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ただし、式（ＩＡ）のポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列を有しないか、又は配列番号１０７のヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含まない、ポリペプチドである。

【0044】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、骨内などのヒドロキシアパタイト結晶の形成を触媒によって可能にする能力がある。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、無機ピロリン酸の切断を触媒することができる。

【0045】

いくつかの実施形態では、Ｂは、配列番号１１に対して少なくとも９９％の配列同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｂは、配列番号１１を含む。

【0046】

いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０を含む。

【0047】

いくつかの実施形態では、Ａは、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ａは、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。

【0048】

いくつかの実施形態では、Ｒは、配列番号９のものに対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｒは、配列番号９を含む。

【0049】

いくつかの実施形態では、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、２個のアミノ酸を含み、Ｎは、２個のアミノ酸を含み、Ｍ及びＮは、異なる。いくつかの実施形態では、Ｍは、－Ｌ－Ｋ－である。いくつかの実施形態では、Ｎは、－Ｄ－Ｉ－である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２～４個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、３個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸は、同じである。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－を含む。

【0050】

いくつかの実施形態では、ｑは、０である。

【0051】

いくつかの実施形態では、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、ｚは、１である。いくつかの実施形態では、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、ｙは、６である。

【0052】

いくつかの実施形態では、［Ｅ］ｙは、［－Ｄ－Ｓ－Ｓ－］６である。

【0053】

いくつかの実施形態では、［Ｅ］ｙは、［－Ｄ－Ｓ－Ｓ－］６であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、［Ｅ］ｙは、［－Ｄ－Ｓ－Ｓ－］６であり、ｑは、０であり、ｘは、０である。

【0054】

いくつかの実施形態では、［Ｅ］ｙは、［－Ｄ－Ｓ－Ｓ－］６であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、［Ｅ］ｙは、［－Ｄ－Ｓ－Ｓ－］６であり、ｑは、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、［Ｅ］ｙは、［－Ｄ－Ｓ－Ｓ－］６であり、ｑは、１であり、Ｆｃは、配列番号１３０に対して少なくとも９７％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、［Ｅ］ｙは、［－Ｄ－Ｓ－Ｓ－］６であり、ｑは、１であり、Ｆｃは、配列番号１３０に対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、［Ｅ］ｙは、［－Ｄ－Ｓ－Ｓ－］６であり、ｑは、１であり、Ｆｃは、配列番号１３０を含む。

【0055】

いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、Ｒは、配列番号９に対して少なくとも９７％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、Ｒは、配列番号９に対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、Ｒは、配列番号９を含む。

【0056】

いくつかの実施形態では、［Ｄ］ｘは、［－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｓ－］２である。いくつかの実施形態では、［Ｅ］ｙは、［Ｄ］１０である。いくつかの実施形態では、［Ｅ］ｙは、［Ｄ］６である。いくつかの実施形態では、［Ｒ］は、－［Ｌ－Ｋ］－Ｆｃ－［Ｄ－Ｉ］－であり、Ｆｃは、配列番号１３０に対して少なくとも９７％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、［Ｒ］は、－［Ｌ－Ｋ］－Ｆｃ－［Ｄ－Ｉ］－であり、Ｆｃは、配列番号１３０に対して少なくとも９８％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、［Ｒ］は、－［Ｌ－Ｋ］－Ｆｃ－［Ｄ－Ｉ］－であり、Ｆｃは、配列番号１３０に対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｒは、配列番号９を含む。

【0057】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。

【0058】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0059】

本開示の第８の態様は、式（ＩＡ）を有するポリペプチド（本明細書に記載の式（ＩＡ）を有するポリペプチドのいずれかなど）をコードするヌクレオチド配列を含む、レンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、プロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８ＬＰ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣから選択される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つを含む。

【0060】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＵＣＯＥプロモーターエレメントを更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、インスレーターを更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、１つ以上の足場／マトリックス付着領域を更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＷＰＲＥエレメントを更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＷＰＲＥエレメントをコードするヌクレオチド配列を含まない。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列を含む。

【0061】

本開示の第９の態様は、式（ＩＡ）を有するポリペプチドをコードする発現ベクター、例えば、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどで形質導入された宿主細胞の集団である。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、プロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、形質導入された宿主細胞の集団は、式（ＩＡ）を有するポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８Ｌｐ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣから選択される。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＵＣＯＥプロモーターエレメントを更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、インスレーターを更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、１つ以上の足場／マトリックス付着領域を更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＷＰＲＥエレメントを更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＷＰＲＥエレメントをコードするヌクレオチド配列を含まない。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、自己由来である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、同種異系である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、エクスビボで形質導入される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、インビボで形質導入される。

【0062】

本開示の第１０の態様は、哺乳動物対象、例えば、ヒト対象を治療する方法であって、形質導入された宿主細胞の集団を、哺乳動物対象に投与することを含み、形質導入された宿主細胞の集団が、式（ＩＡ）を有するポリペプチドを発現する、方法である。式（ＩＡ）を有するポリペプチドの例は、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0063】

いくつかの実施形態では、宿主細胞は、自己由来である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、同種異系である。いくつかの実施形態では、哺乳動物対象は、配列番号１を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドで以前に治療されたか、治療されることになるか、又は同時に治療されている。

【0064】

本開示の第１１の態様は、哺乳動物対象において低ホスファターゼ血症を治療する方法であって、治療有効量の形質導入された宿主細胞の集団を哺乳動物対象に投与すること、式（ＩＡ）を有するポリペプチドを発現する形質導入された宿主細胞の集団を哺乳動物対象に投与することを含む、方法である。式（ＩＡ）を有するポリペプチドの例は、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0065】

いくつかの実施形態では、宿主細胞は、自己由来である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、同種異系である。いくつかの実施形態では、哺乳動物対象は、配列番号１を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドで以前に治療されたか、治療されることになるか、又は同時に治療されている。

【0066】

本開示の第１２の態様は、哺乳動物対象において低ホスファターゼ血症の症状を治療するか、緩和するか、又は予防する方法であって、治療有効量の形質導入された宿主細胞の集団を哺乳動物対象に投与すること、式（ＩＡ）を有するポリペプチドを発現する形質導入された宿主細胞の集団を哺乳動物対象に投与することを含む、方法である。式（ＩＡ）を有するポリペプチドの例は、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0067】

いくつかの実施形態では、宿主細胞は、自己由来である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、同種異系である。いくつかの実施形態では、哺乳動物対象は、配列番号１を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドで以前に治療されたか、治療されることになるか、又は同時に治療されている。

【0068】

本開示の第１３の態様は、式（ＶＢ）を含むポリペプチドであって、
（［Ａ］－［Ｂ］）－［Ｒ］ｑ－（［Ｅ］ｙ） （ＶＢ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
ｑが、０又は１であり、
Ｅが、２～４個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｙが、１～１６の範囲の整数であり、
ただし、ｑが、１であり、［Ｅ］が、アスパラギン酸のみを含む場合、式（ＶＢ）のポリペプチドが、１０～１６個の連続するアスパラギン酸残基を有するアミノ酸配列で終結しない、ポリペプチドである。

【0069】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、骨内などのヒドロキシアパタイト結晶の形成を触媒によって可能にする能力がある。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、無機ピロリン酸の切断を触媒することができる。

【0070】

いくつかの実施形態では、ｙは、４～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、ｙは、６である。

【0071】

いくつかの実施形態では、ｑは、０である。

【0072】

いくつかの実施形態では、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、２個のアミノ酸を含み、Ｎは、２個のアミノ酸を含み、Ｍ及びＮは、異なる。いくつかの実施形態では、Ｍは、－Ｌ－Ｋ－である。いくつかの実施形態では、Ｎは、－Ｄ－Ｉ－である。

【0073】

いくつかの実施形態では、Ｅは、２～４個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、３個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸は、同じである。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－を含む。

【0074】

いくつかの実施形態では、Ｂは、配列番号１１に対して少なくとも９９％の配列同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｂは、配列番号１１を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０を含む。

【0075】

いくつかの実施形態では、Ａは、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ａは、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。

【0076】

いくつかの実施形態では、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃは、配列番号１３０を含む。いくつかの実施形態では、Ｒは、配列番号９に対して少なくとも９７％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｒは、配列番号９に対して少なくとも９８％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｒは、配列番号９に対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｒは、配列番号９を含む。

【0077】

本開示の第１４の態様は、式（ＶＢ）を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むレンチウイルスベクターである。式（ＶＢ）を有するポリペプチドの例は、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。

【0078】

いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）を有するポリペプチドは、配列番号１１１、１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）を有するポリペプチドは、配列番号１１１、１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）を有するポリペプチドは、配列番号１１１、１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）を有するポリペプチドは、配列番号１１１、１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）を有するポリペプチドは、配列番号１１１、１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）を有するポリペプチドは、配列番号１１１、１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）を有するポリペプチドは、配列番号１１１、１１５、及び１３１のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0079】

いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、プロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８Ｌｐ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣから選択される。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＵＣＯＥプロモーターエレメントを更に含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つを含む。

【0080】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、インスレーターを更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、１つ以上の足場／マトリックス付着領域を更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＷＰＲＥエレメントを更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＷＰＲＥエレメントを更に含む。

【0081】

本開示の第１５の態様は、哺乳動物対象、例えば、ヒト対象を治療する方法であって、形質導入された宿主細胞の集団を哺乳動物対象に投与することを含み、形質導入された宿主細胞の集団が、式（ＶＢ）を有するポリペプチドを発現する、方法である。式（ＶＢ）を有するポリペプチドの例は、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、自己由来である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、同種異系である。いくつかの実施形態では、哺乳動物対象は、配列番号１を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドで以前に治療されたか、治療されることになるか、又は同時に治療されている。

【0082】

本開示の第１６の態様は、哺乳動物対象において低ホスファターゼ血症を治療する方法であって、治療有効量の形質導入された宿主細胞の集団を哺乳動物対象に投与すること、式（ＶＢ）を有するポリペプチドを発現する形質導入された宿主細胞の集団を哺乳動物対象に投与することを含む、方法である。式（ＶＢ）を有するポリペプチドの例は、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、自己由来である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、同種異系である。いくつかの実施形態では、哺乳動物対象は、配列番号１を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドで以前に治療されたか、治療されることになるか、又は同時に治療されている。

【0083】

本開示の第１７の態様は、哺乳動物対象において低ホスファターゼ血症の症状を治療するか、緩和するか、又は予防する方法であって、治療有効量の形質導入された宿主細胞の集団を哺乳動物対象に投与すること、式（ＶＢ）を有するポリペプチドを発現する形質導入された宿主細胞の集団を哺乳動物対象に投与することを含む、方法である。式（ＶＢ）を有するポリペプチドの例は、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＶＢ）のポリペプチドは、５、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、自己由来である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、同種異系である。いくつかの実施形態では、哺乳動物対象は、配列番号１を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドで以前に治療されたか、治療されることになるか、又は同時に治療されている。

【0084】

本開示の第１８の態様は、機能性アルカリホスファターゼの欠如又は不十分な量を特徴とする骨欠損に関連する状態又は疾患を治療する方法であって、治療有効量の、（本明細書に記載のような）式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（ＶＡ）、及び（ＶＢ）のうちのいずれか１つを有するポリペプチドを発現する形質導入された宿主細胞を投与することを含む、方法である。いくつかの実施形態では、発現したポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、発現したポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、発現したポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、発現したポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、発現したポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、発現したポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、発現したポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0085】

いくつかの実施形態では、宿主細胞は、発現ベクター、例えば、レトロウイルス発現ベクター、又はレンチウイルス発現ベクターで形質導入され、発現ベクターは、（本明細書に記載のような）式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（ＶＡ）、及び（ＶＢ）のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードするヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（ＶＡ）、及び（ＶＢ）のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、プロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８Ｌｐ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣから選択される。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＵＣＯＥプロモーターエレメントを更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、インスレーターを更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、１つ以上の足場／マトリックス付着領域を更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＷＰＲＥエレメントを更に含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＷＰＲＥエレメントを更に含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞の形質導入は、エクスビボで生じる。いくつかの実施形態では、宿主細胞の形質導入は、インビボで生じる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、自己由来である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、同種異系である。いくつかの実施形態では、哺乳動物対象は、配列番号１を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドで以前に治療されたか、治療されることになるか、又は同時に治療されている。

【0086】

本開示の第１９の態様は、式（Ｉ）を含むポリペプチドであって、
［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗ－［Ｒ］ｑ－（［Ｄ］ｘ－［Ｅ］ｙ）ｚ、 （ＩＢ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）ｔＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ただし、ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが、１であり、ｏが、１であり、ｐが、１であり、Ｎが、ジアミノ酸－Ｄ－Ｉ－であり、Ｍが、ジアミノ酸－Ｌ－Ｋ－であり、［Ｂ］が、配列番号１１を含み、Ｆｃが、配列番号１３０を含み、ｘが、０である場合、［Ｅ］ｙが、１０～１６個の連続するアスパラギン酸残基を含まない、ポリペプチドである。

【0087】

いくつかの実施形態では、Ｅは、２～４個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、３個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸は、同じである。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－を含む。

【0088】

いくつかの実施形態では、ｑは、０である。

【0089】

いくつかの実施形態では、ｑは、１である。

【0090】

いくつかの実施形態では、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、ｚは、１である。いくつかの実施形態では、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、ｙは、６である。

【0091】

いくつかの実施形態では、［Ｅ］ｙは、［－Ｄ－Ｓ－Ｓ－］６である。

【0092】

いくつかの実施形態では、ｑは、０であり、ｘは、０である。

【0093】

いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、［Ｒ］は、－［Ｌ－Ｋ］－Ｆｃ－［Ｄ－Ｉ］－であり、式中、Ｆｃは、配列番号１３０に対して少なくとも９７％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、［Ｒ］は、－［Ｌ－Ｋ］－Ｆｃ－［Ｄ－Ｉ］－であり、式中、Ｆｃは、配列番号１３０に対して少なくとも９８％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、［Ｒ］は、－［Ｌ－Ｋ］－Ｆｃ－［Ｄ－Ｉ］－であり、式中、Ｆｃは、配列番号１３０に対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、［Ｒ］は、配列番号９を含む。

【0094】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。

【0095】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0096】

本開示の第２０の態様は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む発現ベクターである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９１％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９２％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９３％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９４％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有する。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、レトロウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、レトロウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、ＡＡＶベクターである。

【0097】

本開示の第２１の態様は、配列番号１１１、１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９１％の同一性、９２％の同一性、９３％の同一性、９４％の同一性、９５％の同一性、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を有する、単離されたヌクレオチド配列である。

【0098】

本開示の第２２の態様は、少なくとも第１及び第２のヌクレオチド配列を含む、単離されたヌクレオチド配列であり、第１のヌクレオチド配列が、配列番号１１５に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９１％の同一性、９２％の同一性、９３％の同一性、９４％の同一性、９５％の同一性、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を含み、第２のヌクレオチド配列が、シグナルペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性（例えば、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を有する。

【0099】

本開示の第２３の態様は、（ｉ）配列番号１１５に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９５％の同一性、９７％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を有する第１のヌクレオチド配列と、（ｉｉ）シグナルペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列と、を含む、レンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性（例えば、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、第１のヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターなどの、プロモーターをコードする第３のヌクレオチド配列を更に含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８Ｌｐ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つを含む。

【0100】

本開示の第２４の態様は、レンチウイルスベクターで形質導入された宿主細胞の集団であり、レンチウイルスベクターが、配列番号１１５に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９５％の同一性、９７％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を有する第１のヌクレオチド配列と、シグナルペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列と、を含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性（例えば、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、プロモーターをコードする第３のヌクレオチド配列を更に含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８Ｌｐ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、エクスビボで形質導入される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、インビボで形質導入される。

【0101】

本開示の第２５の態様は、配列番号１１１のものに対して少なくとも９７％の同一性（例えば、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を含む、単離されたヌクレオチド配列である。

【0102】

本開示の第２６の態様は、配列番号７５に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、９０％の同一性、９５％の同一性、９７％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を有するアミノ酸配列である。

【0103】

本開示の第２７の態様は、少なくとも第１及び第２の部分を含むポリペプチドであり、第１の部分が、配列番号４～８及び４４～５４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性（例えば、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含み、第２の部分が、Ｆｃドメインをコードするアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインをコードするアミノ酸配列は、配列番号１３０に対して少なくとも９５％の同一性（例えば、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を含む。

【0104】

本開示の第２８の態様は、配列番号７２に対して少なくとも９０％の同一性を含む、単離されたヌクレオチド配列である。いくつかの実施形態では、単離されたヌクレオチド配列は、配列番号７２に対して少なくとも９５％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、単離されたヌクレオチド配列は、配列番号７２に対して少なくとも９６％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、単離されたヌクレオチド配列は、配列番号７２に対して少なくとも９７％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、単離されたヌクレオチド配列は、配列番号７２に対して少なくとも９８％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、単離されたヌクレオチド配列は、配列番号７２に対して少なくとも９９％の同一性を含む。

【0105】

本開示の第２９の態様は、配列番号７２を含む、単離されたヌクレオチド配列である。

【0106】

本開示の第３０の態様は、骨標的化部分に結合したアルカリホスファターゼを含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、骨標的化部分のヌクレオチド配列は、配列番号７２に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９１％の同一性、９２％の同一性、９３％の同一性、９４％の同一性、９５５の同一性、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼは、配列番号１１に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９１％の同一性、９２％の同一性、９３％の同一性、９４％の同一性、９５５の同一性、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼは、ペプチドリンカーを介して骨標的化配列に結合される。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎを含み、式中、ｎは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、２～８の範囲である。いくつかの実施形態では、ｎは、２である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｆｃドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０に対して少なくとも９５％の同一性（例えば、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を含む。

【0107】

本開示の第３１の態様は、骨標的化部分に結合したアルカリホスファターゼをコードする第１のヌクレオチド配列を含むレンチウイルスベクターであり、第１のヌクレオチド配列が、プロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、骨標的化部分のヌクレオチド配列は、配列番号７２に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９１％の同一性、９２％の同一性、９３％の同一性、９４％の同一性、９５５の同一性、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼは、配列番号１１に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９１％の同一性、９２％の同一性、９３％の同一性、９４％の同一性、９５５の同一性、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８Ｌｐ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つを含む。

【0108】

本開示の第３２の態様は、骨標的化部分に結合したアルカリホスファターゼをコードする第１のヌクレオチド配列を含むレンチウイルスベクターで形質導入された宿主細胞であり、第１のヌクレオチド配列が、プロモーターに作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、骨標的化部分のヌクレオチド配列は、配列番号７２に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９１％の同一性、９２％の同一性、９３％の同一性、９４％の同一性、９５５の同一性、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼは、配列番号１１に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９１％の同一性、９２％の同一性、９３％の同一性、９４％の同一性、９５５の同一性、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８Ｌｐ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、エクスビボで形質導入される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、インビボで形質導入される。

【0109】

本開示の第３３の態様は、ポリペプチドを含む医薬組成物であり、ポリペプチドが、骨標的化部分に結合したアルカリホスファターゼを含む。いくつかの実施形態では、骨標的化部分のヌクレオチド配列は、配列番号７２に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９１％の同一性、９２％の同一性、９３％の同一性、９４％の同一性、９５５の同一性、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼは、配列番号１１に対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９１％の同一性、９２％の同一性、９３％の同一性、９４％の同一性、９５５の同一性、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、１００％の同一性）を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、低ホスファターゼ血症の治療を必要とする哺乳動物において低ホスファターゼ血症を治療するために使用される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、低ホスファターゼ血症の治療を必要とする哺乳動物において低ホスファターゼ血症の症状を緩和するか、又は予防するために使用される。

【図面の簡単な説明】

【0110】

本開示の特徴の一般的な理解のために、図面を参照する。図面では、同様の参照番号が、同一の要素を識別するために全体を通して使用されている。

【0111】

【図1】ポリペプチドが、分泌シグナルペプチドを含むが、ＧＰＩアンカーを含まない、アルカリホスファターゼをコードする核酸配列を含むレンチウイルスベクターのベクターマップを示す。ポリペプチドは、いくつかの実施形態では、リンカー、Ｆｃドメイン、及び１０個のアスパラギン酸残基を有するペプチドを更に含む。

【図2】ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号２）を含むレンチウイルスベクターのベクターマップを示す。

【図3】ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号３）を含むレンチウイルスベクターのベクターマップを示す。

【図4】ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号４）を含むレンチウイルスベクターのベクターマップを示す。

【図5】ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号５）を含むレンチウイルスベクターのベクターマップを示す。

【図6】ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号６）を含むレンチウイルスベクターのベクターマップを示す。

【図7】ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号７）を含むレンチウイルスベクターのベクターマップを示す。

【図8】ポリペプチドをコードする核酸配列（配列番号８）を含むレンチウイルスベクターのベクターマップを示す。

【図9】組織非特異的アルカリホスファターゼを含むポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドが分泌シグナルペプチド及びＧＰＩアンカーを含む、レンチウイルスベクターのベクターマップを示す。

【図10】生存細胞へのＭＴＴ（３－（４，５－ジメチル－２－チアゾリル）－２，５－ジフェニル－２Ｈ－テトラゾリウムブロミド）の取り込みを分析することによって、様々な濃度のｓＴＮＳＡＬＰ－（ＤＳＳ）６ ＲＭＰ００５化合物の存在下での細胞増殖及び生存能を示すデータを提供する。簡潔に述べると、プレーティングした細胞を、約０．２５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ溶液とともに、約３７℃で約３時間インキュベートした。インキュベーション後、沈殿物をＤＭＳＯ中に溶解した。マイクロプレートリーダーで５６０ｎｍの波長を使用して分光光度測定を行った。データは、最高濃度（１０Ｕ／ｍｌ）であっても、細胞に対するＲＭＰ００５の毒性効果を示さない。

【図11】ｓＴＮＳＡＬＰ－（ＤＳＳ）６（ＲＭＰ－００５）のによって誘導される石灰化の視覚化を提供する（右パネル）。潜在的な石灰化阻害／救出を記録するために、細胞培養を、分化培地（アスコルビン酸（ＡＡ）及びリン酸源（β－グリセロホスフェート；βＧＰ）を含む）中で開始した。４日目に、様々な濃度のｓＴＮＳＡＬＰ－（ＤＳＳ）６（ＲＭＰ－００５）、０．１、０．５、及び１．０単位／ｍｌを、培養期間（１０日間）の残りの間、約２．５μＭの濃度で石灰化阻害剤ピロリン酸ナトリウム四塩基性（ＰＰｉ）を含む、又は含まない培養培地に添加した。ミネラルは、ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色によって可視化した。石灰化の定量化を左パネルに提供し、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に沈着した不溶性カルシウムを、市販のカルシウムアッセイキットを使用して、最初に約０．５ＭのＨＣｌで溶解し、上清（波長約５９５ｎｍ）中で、分光光度法で定量化した。ＲＭＰ００５化合物は、最も低い濃度（約０．１Ｕ／ｍｌ）であっても、ＰＰｉ誘導による細胞の石灰化の阻害を救出した。約１．０Ｕ／ｍＬでの石灰化の完全な救出を示す、沈着したカルシウム濃度に対する用量範囲効果。

【図12】化合物「ＲＭＰ－００２」（配列番号２）及びＲＭＰ－００５（配列番号５）に対するインビトロでのヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合を比較する。タグ付けされていないｓＴＮＳＡＬＰ（ＲＭＰ－００２）及びタグ付けされたｓＴＮＳＡＬＰ－（ＤＳＳ）６（「ＲＭＰ００５」）を、以下のようにプルダウンアッセイ（ミネラル（ＨＡ）による上清枯渇）に供した。ヒドロキシアパタイト結晶溶液（Ｂｅｒｋｅｌｅｙ、５μＭ）（ＨＡ）を、２０ｍＭのトリス（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ中で調製し、穏やかに撹拌しながら室温で一晩平衡化させた。翌日、「ＲＭＰ００２」及び「ＲＭＰ００５」を、０．３ｍｇのＨＡとともに、又はそれを含まずに、異なる濃度である０．５、１．０、５．０、１０．０、及び１５．０μｇ／ｍｌでインキュベートし、シェーカー上で、室温で１時間結合させた。チューブを、約１０，０００×ｇで約５分間スピンダウンさせ、上清を使用して、各試料についてのアルカリホスファターゼレベルを測定した。標準的な比色法では、アルカリホスファターゼを標準物として使用し、ｐ－ニトロフェニルホスフェートをホスファターゼ基質として使用し、アルカリホスファターゼにより脱リン酸化すると黄色に変わり、４０５ｎｍの波長で測定した。結果は、タグ付けされていない対応物（「ＲＭＰ００２」）よりもタグ付けされた「ＲＭＰ－００５」の強力な優先的な結合を示す。

【図13】野生型及びＩｇＧ２Ｇ分泌シグナルペプチドでＤＮＡ構築物をトランスフェクトした２９３細胞の上清における分泌ＴＮＡＬＰ活性を示す。図１３は、ＩｇＧ２Ｈの分泌シグナルペプチドを有する構築物が、ＥＦ１ａプロモーター及びＭＮＤプロモーターを含む元の分泌シグナルペプチド（配列番号１２を参照されたい）を有する２つの構築物と比較して、６倍を超える分泌ＴＮＡＬＰ活性を有することを示す。

【図14】μｇ／ｍＬで表される被験物質の全て（配列番号１～８）についての薬物動態データを示す。

【図15】各々本明細書に記載される、ＲＭＰ－００１、ＲＭＰ－００５、ＲＭＰ－００６、及びＲＭＰ－００８（それぞれ、配列番号１、５、６、及び８に対応する）についてのＰＫ曲線の比較を提供する。

【図16】各々本明細書に記載される、ＲＭＰ－００１、ＲＭＰ－００４、及びＲＭＰ－００７（それぞれ、配列番号１、４、及び７に対応する）についてのＰＫ曲線の比較を提供する。

【図17】被験物質の各々（配列番号１～８）についてのＣｍａｘ値（Ｔｍａｘ＝５分）を提供する。

【図18】全ての被験物質（配列番号１～８）についての無限大に外挿されたＡＵＣを示す。

【図19】様々な被験物質（配列番号１～８）の排出半減期を示す。

【図20A】ＲＭＰ－１００（ＦＧ１２ｗ．ＭＮＤ．ｋｚ．ＩｇＫＶＩＩＩ．ＴＮＡＬＰｃｏ（ｍｕｔ－ｍｉＲ３６２ａ）．Ｆｃ．（ＤＳＳ）６．ＷＰＲＥ）（配列番号７４）のベクターマップを示す。具体的には、このベクターは、（１）インスレーターを含まないレンチウイルスベクター骨格（ＨＩＶ－１配列）、（２）ＴＮＡＬＰ ｍＲＮＡ発現を駆動するプロモーター／エンハンサーエレメント、（３）ｍＲＮＡの安定性及び効率的な翻訳を促進する５つのＵＴＲ配列及び翻訳開始配列、（４）ＴＮＡＬＰの効率的なプロセシング、及び分泌を促進するヒトＩｇカッパ軽鎖Ｖ－ＩＩＩ領域シグナルペプチド及びそのリンカー、（５）効率的な翻訳、安定性及び酵素活性のためのコドン最適化されたＴＮＡＬＰコード配列、（６）血漿中の分泌タンパク質を保持するためのＩｇＧ１ Ｆｃ融合パートナー及びそのリンカー、（７）骨への酵素活性を効果的に標的化するための骨タグ、並びに（８）ｍＲＮＡの安定性のための３’ＵＴＲ配列から構成される。

【図20B】自己不活性化レンチウイルスベクター構築物ＬＶＶ－ＲＭＰ１００（ロット番号ｖｌ０２６で使用した）の概略図を提供する。ＦＧ１２ｗ．ＭＮＤ．ｋｚ．ＩｇＫＶＩＩＩ－ｓＴＮＡＬＰｃｏ（ｍｕｔ－ｍｉＲ３６２ａ）．Ｆｃ．（ＤＳＳ）６．ＷＰＲＥ（配列番号７４）。歴史的に決定された通り。ＲＲＥ：Ｒｅｖ応答エレメント；ｃＰＰＴ／ＣＴＳ：中央ポリプリントレース；ｈＩｇＫＶＩＩＩ：ヒトＩｇカッパ軽鎖Ｖ－ＩＩＩ領域シグナルペプチド；ｓＴＮＡＬＰｃｏ（ｍｕｔ－ｍｉＲ３６２ａ）：組織非特異的アルカリホスファターゼ含有ｍｉＲ３６２Ｔ ｍｕｔ－ＡのＧＰＩ－アンカーレス分泌形態；Ｆｃ：）血漿中の分泌タンパク質を保持するためのＩｇＧ１ Ｆｃ融合パートナー及びそのリンカー；（ＤＳＳ）６：骨表面結合ペプチド；ＷＰＲＥ：ウッドチャック転写後調節エレメント；ｂＧＨ－ポリ（Ａ）シグナル：ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル。

【図21A-B】一連の異なるベクター（すなわち、ＥＦ１ａ－ＲＭＰ５（配列番号１９）、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号５５）、ＥＦ１ａ－ＳＥＡＰ－ＲＭＰ５（配列番号６５）、ＥＦ１ａ－ａＬＡ－ＲＭＰ５（配列番号６４）、ＥＦ１ａ－ｈＣＤ３３－ＲＭＰ５（配列番号５８）、ＥＦ１ａ－Ｓｅｃｒｅｃｏｎ－ＲＭＰ５（配列番号６０）、ＥＦ１ａ－Ｓｅｃｒｅｃｏｎ－ＡＡ－ＲＭＰ５（配列番号６１）、ＥＦ１ａ－ｍＩｇＫＶＩＩＩ－ＡＡ－ＲＭＰ５（配列番号６２）、及びＥＦ１ａ－ｈＩｇＫＶＩＩＩ－ＡＡ－ＲＭＰ５（配列番号５７））からの分泌ＴＮＡＬＰの活性を示す。

【図22A】２９３Ｔ細胞について、ベクターコピー数（ＶＣＮ）当たりの分泌されたＴＮＡＬＰ活性を示す（ＴＮＡＬＰは、ＥＦ１ａ－ＲＭＰ５（配列番号１９）又はＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号５５）のいずれかで形質導入された細胞から分泌された）。

【図22A】Ｊｕｒｋａｔ細胞について、ＶＣＮ当たりの分泌されたＴＮＡＬＰ活性を示す（ＴＮＡＬＰは、ＥＦ１ａ－ＲＭＰ５（配列番号１９）又はＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号５５）のいずれかで形質導入された細胞から分泌された）。

【図23A】ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号５５）、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ３６２－Ａ（配列番号８１）、及びＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ３６２－Ｂ（配列番号８２）の間のアラインメントを示す。

【図23B】ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号５５）、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ３６２－Ａ（配列番号８１）及びＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ３６２－Ｂ（配列番号８２）を有するベクターでトランスフェクトした２９３Ｔ細胞から分泌したＴＮＡＬＰ活性を示す。

【図23C】ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号５５）又はＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ３６２－Ａ（配列番号８１）でトランスフェクトした２９３Ｔ細胞から分泌したＴＮＡＬＰ活性。

【図24】ＦＧ１２－ＳＤ４００ｉ－ＭＮＤ－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＡＡ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ３６２Ａ－Ｆｃ－（ＤＳＳ）６（配列番号８４）から分泌したＴＮＡＬＰレベルを、ＦＧ１２－ＳＤ４００ｉ－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＡＡ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ３６２Ａ－Ｆｃ－（ＤＳＳ）６（配列番号８５）のレベルと比較する。

【図25A】ＥＦ１ａ－ＲＭＰ５（配列番号１９）、ＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号５５）、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ－Ａ（配列番号７９）、Ｉ４００－ＭＮＤ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号８６）、ＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ（配列番号８７）、及びＥＦ１ａ－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（配列番号５７）を含む、一連のベクターについての測定したベクター力価を比較する。

【図25B】ＨＥＫ２９３細胞株におけるＥＦ１ａ－ＲＭＰ５（配列番号１９）、ＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号５５）、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ－Ａ（配列番号７９）、Ｉ４００－ＭＮＤ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号８６）、ＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ（配列番号８７）、及びＥＦ１ａ－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（配列番号５７）を含む、一連のベクターについてのＶＣＮ当たりの測定したＡＬＰ活性を比較する。

【図25C-D】それぞれ、Ｊｕｒｋａｔ及びＫ５６２細胞株におけるＥＦ１ａ－ＲＭＰ５（配列番号１９）、ＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号５５）、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ－Ａ（配列番号７９）、Ｉ４００－ＭＮＤ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号８６）、ＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ（配列番号８７）、及びＥＦ１ａ－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（配列番号５７）を含む、一連のベクターについてのＶＣＮ当たりの測定したＴＮＡＬＰ活性を比較する。

【図25A-D】（ｉ）ＩｇＧ２Ｈが、形質導入したＪｕｒｋａｔ及びＫ５６２細胞におけるＴＮＡＬＰ野生型分泌シグナルよりも優れていること、（ｉｉ）４００ｂｐｓのインスレーター（Ｉ４００－ＭＮＤ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－配列番号８６）を有するＭＮＤプロモーターが、図２５Ｃ及び図２５Ｄに示す造血細胞株の両方においてＥＦ１ａプロモーター（ＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－配列番号５５）を上回ること、（ｉｉｉ）Ｆｃ融合パートナーの付加が、図２５ＢのＡＬＰ分泌について、（ＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－配列番号５５）と（ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ－配列番号８７）との間に有意な差がないため、３つの異なる種類の細胞株におけるＴＮＡＬＰ分泌に対して最小限の影響を及ぼすこと、（ｉｖ）ｍｉＲ３６２－Ａ変異ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ－Ａ－配列番号７９）が、図２５Ｃ及び図２５Ｄに示す両方の骨髄細胞株において元の構築物ＥＦ１ａ－ＲＭＰ５－配列番号１９）よりも良好に機能すること、並びに（ｖ）ＩｇＫＶＩＩＩ（ＥＦ１ａ－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５－配列番号５７）からのＴＮＡＬＰ分泌が、図２５Ｂ、図２５Ｃ及び図２５Ｄに示す３つ全ての異なる種類の細胞株においてＩｇＧ２Ｈ（ＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－配列番号５５）よりも優れていることを示す。

【図26A】ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号５５）、ＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ（配列番号８７）、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ｓＴＮＡＬＰｗｔ－ＤＳＳ６（配列番号８８）、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ｓＴＮＡＬＰｗｔ－Ｆｃ－ＤＳＳ６（配列番号８９）、Ｉ４００－ＭＮＤ－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６（配列番号８４）、及びＩ４００－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６（配列番号８５）を含む、一連のベクターについての測定した力価を比較する。４００ｂｐｓのインスレーター、ＭＮＤプロモーター、コザックエレメント、ＩｇＫＶＩＩＩ分泌シグナルペプチド、ｍｉＲ３６２変異、及びＦｃドメイン（Ｉ４００－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６配列番号８５）を含む、組み合わせ構築物は、残りのベクター（配列番号５５、８７、８８、８４、８９）と同等の力価を有する。

【図26B】ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号５５）、ＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ（配列番号８７）、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ｓＴＮＡＬＰｗｔ－ＤＳＳ６（配列番号８８）、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ｓＴＮＡＬＰｗｔ－Ｆｃ－ＤＳＳ６（配列番号８９）、Ｉ４００－ＭＮＤ－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６（配列番号８４）、及びＩ４００－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６（配列番号８５）を含む、一連のベクターについてのＶＣＮ当たりの測定したＡＬＰを比較する。４００ｂｐｓのインスレーター、ＭＮＤプロモーター、コザックエレメント、ＩｇＫＶＩＩＩ分泌シグナルペプチド、ｍｉＲ３６２変異、及びＦｃドメイン（Ｉ４００－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６配列番号８５）を含む、組み合わせ構築物は、比較した全てのベクター（配列番号５５、８７、８８、８４、８９）の中で、最も高いＶＣＮ当たりのＡＬＰ分泌を有し、ＶＣＮ当たりのＡＬＰ分泌に基づいて、ベクターＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ（配列番号８７）よりもほぼ３０倍強力である。

【図27】ＶＣＮ当たりのＴＮＡＬＰ分泌を示す。結果は、４００ｂｐｓのインスレーター、ＭＮＤプロモーター、コザックエレメント、ＩｇＫＶＩＩＩ分泌シグナルペプチド、ｍｉＲ３６２変異、及びＦｃドメイン（Ｉ４００－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６配列番号８５）を含む、組み合わせ構築物が、２９３ｔ細胞及び成人動員末梢血ＣＤ３４＋造血幹細胞において、Ｉ４００－ＭＮＤ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ構築物（配列番号８７）と比較して分泌が比較的増加したことを示す。

【図28】３つの細胞株－Ｊｕｒｋａｔ、ＨＬ６０、及びＴＨＰ－１における、３つの異なるベクター、すなわち、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ（配列番号８７）、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ｓＴＮＡＬＰｗｔ－Ｆｃ（配列番号８８）、及びｉ４００－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６（配列番号８５）についてのＶＣＮ当たりの測定したＴＮＡＬＰ分泌を比較する。

【図29】４つの異なるベクター及びモック、すなわち、１．ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ（配列番号８７）、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ｓＴＮＡＬＰｗｔ－Ｆｃ（配列番号８８）についてのＶＣＮ当たりの測定したＡＬＰ活性を比較し、図２８は、３つの異なるベクター、すなわち、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ（配列番号８７）、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ｓＴＮＡＬＰｗｔ－Ｆｃ（配列番号８８）、Ｉ４００－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６（配列番号８７）、及びＥＦ１ａ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６（配列番号９０）についてのＶＣＮ当たりの測定したＴＮＡＬＰを比較する。

【図30A】３つの異なるベクター、すなわち、ＬＶＶ－ＲＭＰ１００ ｖ０１（ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ（配列番号８７）と称される、ＬＶＶ－ＲＭＰ２００ ｖ０２（ＦＧ１２－ＳＤ４００ｉ－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＡＡ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ３６２－Ａ－Ｆｃ－（ＤＳＳ）６（配列番号８５）と称される、及びＬＶＶ－ＲＭＰ１００ ｖ０３（ＥＦ１ａ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６、配列番号９０と称される）についてのＨＥＫ２９３におけるＶＣＮ当たりの測定したＡＬＰ活性を示す。結果は、ＦＧ１２－ＳＤ４００ｉ－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＡＡ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ３６２－Ａ－Ｆｃ－（ＤＳＳ）６（配列番号８５）の効力が、ＨＥＫ２９３において、それぞれ、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ（配列番号８７の約２７倍、及びＥＦ１ａ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６、配列番号９０）の１０倍超であることを示す。図３０Ｂ及び図３０Ｃは、それぞれ、３つの異なるベクター、すなわち、ＥＦ１ａ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ３６２－Ａ－Ｆｃ－Ｄｓｓ６（配列番号９０）、ＦＧ１２－ＳＤ４００ｉ－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＡＡ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ３６２－Ａ－Ｆｃ－（ＤＳＳ）６（配列番号８５）、及びＭＮＤ－ＲＭＰ１００（ＬＶＶ－ＲＭＰ１００又はＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６、配列番号７４と称される）についての１つの健康なドナー由来のＨＳＣにおけるＶＣＮ及びＶＣＮ当たりの測定したＡＬＰ活性を示す。図３０Ｂは、ＦＧ１２－ＳＤ４００ｉ－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ３６２－Ａ－Ｆｃ－（ＤＳＳ）６（配列番号８５）の効力が、ＨＳＣにおいて、それぞれ、ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６、配列番号７４の約２倍、及びＥＦ１ａ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６、（配列番号９０）の約８倍であることを示す。図３０Ｃは、形質導入したＨＳＣが、これらの３つのベクターについての形質導入のこのバッチにおいて、４～１０の同様のＶＣＮを有することを示した。

【図31A-B】異なるベクター、すなわち、（ｉ）Ｉ４００－ＭＮＤ－ＲＭＰ１００（ｉ４００－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６、配列番号８５と称される）、（ｉｉ）ＭＮＤ－ＲＭＰ１００（ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６、配列番号７４と称される）、及び（ｉｉｉ）ＥＦ１ａ－ＲＭＰ１００（ＥＦ１ａ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６、配列番号９０と称される）で形質導入したＨＳＣのコロニー形成を示す。ＣＦＵデータは、５～２０のＭＯＩでＭＮＤ－４００ｉｎ－ＲＭＰ１００、ＥＦ１ａ－ＲＭＰ１００及びＭＮＤ－ＲＭＰ１００で形質導入した形質導入ＨＳＣが、モックＨＳＣと比較して類似したコロニー形成能力を有することを示唆した。

【図32A-D】図３２Ａ、図３２Ｂ、図３３Ｃ、及び図３３Ｄは、異なるベクター、すなわち、（ｉ）Ｉ４００－ＭＮＤ－ＲＭＰ１００（ｉ４００－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６、配列番号８５と称される）、（ｉｉ）ＭＮＤ－ＲＭＰ１００（ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６、配列番号７４と称される）、及び（ｉｉｉ）ＥＦ１ａ－ＲＭＰ１００（ＥＦ１ａ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６、配列番号９０と称される）で形質導入した様々な細胞株（３２Ａ－ＴＨＰ－１、３２Ｂ－Ｊｕｒｋａｔ、３２Ｃ－ＨＬ－６０、及び３３Ｄ－Ｊｕｒｋａｔ）の安定性を示す。全ての構築物は、形質導入細胞株ＴＨＰ－１、ＨＬ－６０及びＪｕｒｋａｔにおいてロバストな安定性を示した。

【図33】ＦＧ１２－ＣＤ１１ｂ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５－ｍｉＲ３６２－Ａ－Ｆｃ－Ｄｓｓ６（配列番号９１）のベクターマップを提供する。

【発明を実施するための形態】

【0112】

また、明確に反対が示されない限り、２つ以上のステップ又は行動を含む本明細書で特許請求されるいかなる方法においても、方法のステップ又は行為の順序は、必ずしも方法のステップ又は行為が列挙される順序に限定されないことも理解されるべきである。

【0113】

明細書中の「一実施形態」、「実施形態」、「例示的な実施形態」などへの言及は、説明された実施形態が、特定の特徴、構造、又は特性を含み得ることを示しているが、全ての実施形態が、その特定の特徴、構造、又は特性を含んでもよいか、又は必ずしも含まなくてもよい。更に、そのような句は、必ずしも同じ実施形態を指すものではない。更に、特定の特徴、構造、又は特性が、実施形態に関連して説明される場合、明示的に記載されているか否かにかかわらず、他の実施形態に関連してそのような特徴、構造、又は特性に影響を与えることは、当業者の知識の範囲内であることが示されている。

【0114】

本明細書で使用される場合、単数形の用語「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り、複数の指示対象を含む。同様に、「又は」という単語は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り、「及び」を含むことが意図される。「含む」という用語は、「Ａ又はＢを含む」が、Ａ、Ｂ、又はＡ及びＢを含むことを意味するように、包括的に定義される。

【0115】

本明細書及び特許請求の範囲において本明細書で使用される場合、「又は」は、上記に定義される「及び／又は」と同じ意味を有すると理解されるべきである。例えば、リスト内の項目を分離する場合、「又は」又は「及び／又は」は、包括的であると解釈されるべきであり、例えば、要素の数又はリストのうちの少なくとも１つを含むが、１つより多くも含み、任意選択で、追加の非リスト項目を含む。「のうちの１つのみ」若しくは「のうちの１つだけ」、又は特許請求の範囲で使用される場合、「からなる」などの反対に明確に示されている用語のみが、要素の数又はリストの１つのみの要素の包含を指す。一般に、本明細書で使用される場合、「又は」という用語は、「いずれか」、「のうちの１つ」、「のうちの１つのみ」、又は「のうちの１つだけ」などの排他性の用語が後に続く場合、排他的な選択肢（例えば、「一方又は他方であるが、両方ではない」）を示すものとしてのみ解釈されるものとする。特許請求の範囲内で使用される場合、「本質的にからなる」は、特許法の分野で使用されるような通常の意味を有するものとする。

【0116】

本明細書で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」などの用語は、互換的に使用され、同じ意味を有する。同様に、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｓ）」などは、互換的に使用され、同じ意味を有する。具体的には、用語の各々は、「含む」の一般的な米国特許法の定義と一致して定義され、したがって、「少なくとも以下」を意味する開放用語であると解釈され、追加の特徴、制限、態様などを除外しないようにも解釈される。したがって、例えば、「コンポーネントａ、ｂ、及びｃを有するデバイス」は、デバイスが少なくともコンポーネントａ、ｂ、及びｃを含むことを意味する。同様に、語句：「ステップａ、ｂ、及びｃを含む方法」とは、方法が、少なくともステップａ、ｂ、及びｃを含むことを意味する。更に、ステップ及びプロセスは、特定の順序で本明細書に概説され得るが、当業者は、順序付けステップ及びプロセスが変化し得ることを認識するであろう。

【0117】

本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、１つ以上の要素のリストに関して「少なくとも１つ」という語句は、要素のリスト内の要素のいずれか１つ以上から選択される少なくとも１つの要素を意味するが、要素のリスト内に具体的に列挙されたありとあらゆる要素のうちの少なくとも１つを必ずしも含まなくてもよく、要素のリスト内の要素のあらゆる組み合わせを除外しないと理解されるべきである。この定義はまた、「少なくとも１つ」という語句が指す要素のリスト内の特異的に特定される要素以外の要素が、特異的に特定されるそれらの要素に関連するか、又は関連しないかにかかわらず、任意選択で存在し得ることも許容する。したがって、非限定的な例として、「Ａ及びＢのうちの少なくとも１つ」（又は、同等に、「Ａ又はＢのうちの少なくとも１つ」、又は、同等に、「Ａ及び／又はＢのうちの少なくとも１つ」）は、一実施形態では、少なくとも１つの、任意選択で複数を含む、Ａを指すことができ、Ｂが存在せず（及び任意選択で、Ｂ以外の要素を含む）、別の実施形態では、少なくとも１つの、任意選択で複数を含む、Ｂを指すことができ、Ａが存在せず（及び任意選択で、Ａ以外の要素を含む）、なお別の実施形態では、少なくとも１つの、任意選択で複数を含む、Ａ、及び少なくとも１つの、任意選択で複数を含む、Ｂを指すことができる（及び任意選択で他の要素を含む）などである。

【0118】

本明細書で使用される場合、「ドメイン」という用語は、疎水性、極性、球状、及びらせん状のドメイン又は特性などの共通の物理化学的特徴を共有する分子又は構造の一部を指すが、これらに限定されない。結合ドメインの具体的な例としては、ＤＮＡ結合ドメイン及びＡＴＰ結合ドメインが挙げられるが、これらに限定されない。

【0119】

本明細書で使用される場合、「Ｆｃ」という用語は、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインを指す。ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４などのＩｇＧのサブタイプは全て、Ｆｃドメインとしての使用が企図されている。本明細書で使用される場合、「断片」という用語は、核酸に適用される場合、より大きな核酸の部分配列を指す。核酸の「断片」は、少なくとも約１５ヌクレオチド長であり得、例えば、少なくとも約ＳＯヌクレオチド～約１００ヌクレオチド、少なくとも約１００～約５００ヌクレオチド、少なくとも約５００～約１０００ヌクレオチド、少なくとも約１０００ヌクレオチド～約１５００ヌクレオチド、約１５００ヌクレオチド～約２５００ヌクレオチド、又は約２５００ヌクレオチド（及びそれらの間の任意の整数値）であり得る。本明細書で使用される場合、「断片」という用語は、タンパク質又はペプチドに適用される場合、より大きなタンパク質又はペプチドの部分配列を指す。タンパク質又はペプチドの「断片」は、少なくとも約２０個のアミノ酸の長さ、例えば、少なくとも約５０個のアミノ酸の長さ、少なくとも約１００個のアミノ酸の長さ、少なくとも約２００個のアミノ酸の長さ、少なくとも約３００個のアミノ酸の長さ、又は少なくとも約４００個のアミノ酸の長さ（及びそれらの間の任意の整数値）であり得る。

【0120】

本明細書で使用される場合、「造血細胞」又は「造血幹細胞」という用語は、血液及び／又はリンパに見出される細胞種類を指す。これらの細胞種類には、骨髄細胞（赤血球、血小板、顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）単球及びマクロファージ、肥満細胞）、並びにリンパ系細胞（Ｂ細胞、様々な種類のＴ細胞、ＮＫ細胞）が含まれる。これらの細胞は、典型的には、骨髄中の造血幹細胞から生じる。ある特定の造血細胞、例えば、マクロファージが、血管系又はリンパ系の外側の組織に存在し得ることは理解されるであろう。白血球（例えば、顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、肥満細胞、及びリンパ系細胞）は、造血細胞のサブセットである。

【0121】

本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、本開示のポリヌクレオチドを含む核酸構築物又は発現ベクターを用いて形質転換、トランスフェクション、形質導入などを受けやすい任意の細胞種類を指す。いくつかの実施形態では、「宿主細胞」という用語は、複製中に生じる変異のために、親細胞と同一ではない親細胞の任意の子孫を包含する。宿主細胞は、パッケージング細胞、産生細胞、及びウイルスベクターに感染した細胞を含み得る。特定の実施形態では、本開示のウイルスベクターに感染した宿主細胞は、治療を必要とする対象に投与される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、エクスビボで形質導入される。他の実施形態では、宿主細胞は、インビボで形質導入される。

【0122】

本明細書で使用される場合、「低ホスファターゼ血症」及び「ＨＰＰ」という用語は、組織非特異的アルカリホスファターゼ（ＴＮＳＡＬＰ）をコードする、ＡＬＰＬ（アルカリホスファターゼ、肝臓／骨／腎臓）遺伝子における１つ以上の機能喪失変異によって引き起こされる、稀な、遺伝性骨格障害を指す。ＨＰＰは、例えば、乳児ＨＰＰ又は周産期ＨＰＰ（例えば、良性周産期ＨＰＰ又は致死性周産期ＨＰＰ）として更に特徴付けることができる。例えば、「乳児ＨＰＰ」は、約３歳以下のＨＰＰを有する患者を表し、一方、「周産期ＨＰＰ」は、出生直前又は出生直後（例えば、出生後１～４週間）にＨＰＰを有する患者を表す。対象がＨＰＰの症状を示す場合のようなＨＰＰの発症年齢は、例えば、周産期発症ＨＰＰ及び乳児発症ＨＰＰとしても分類することができる。ＨＰＰを有する患者は、骨格変形、低血圧、運動障害、歩行障害、骨変形、関節痛、骨痛、骨折、筋力低下、筋肉痛、くる病（例えば、成長板軟骨の欠損）、乳歯の早期喪失、不完全な骨石灰化、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）、ＰＰｉ、ピリドキサール５’－ホスフェート（ＰＬＰ）の血中及び／若しくは尿中レベルの上昇、無機質減少症、くる病肋骨（ｒａｃｈｉｔｉｃ ｒｉｂｓ）、高カルシウム尿症、低身長、ＨＰＰ関連発作、不十分な体重増加、頭蓋骨癒合症、並びに／又は例えば、軟骨石灰化症及び早期死亡をもたらす関節におけるピロリン酸カルシウム二水和物結晶沈着症（ＣＰＰＤ）を含むが、これらに限定されないＨＰＰの症状を示し得る。ＨＰＰの症状には、ＴＢＭ及びＴＢＭの症状、例えば、心肺停止、気管切開、心停止、呼吸困難、痰貯留、喘鳴、咳、無酸素発作、チアノーゼ、徐脈、頻拍性不整脈、頸部の自発的な過伸展、呼気期の延長、成長障害、胸骨陥没、胸骨下退縮、肋間陥入、断続的若しくは連続的な呼吸困難、及び反復性気管支炎又は肺炎も含まれ得る。

【0123】

本明細書で使用される場合、「レンチウイルスベクター」という用語は、シス作用レンチウイルスＲＮＡ又はＤＮＡ配列を含み、トランスで提供されるレンチウイルスタンパク質（例えば、Ｇａｇ、Ｐｏｌ、及び／又はＥｎｖ）を必要とする導入遺伝子を用いた宿主細胞の形質導入のための非複製ベクターを指す。レンチウイルスベクターは、機能的Ｇａｇ、Ｐｏｌ、及びＥｎｖタンパク質の発現を欠く。レンチウイルスベクターは、当該レトロウイルスベクターの産生又は開発の段階に応じて、ＲＮＡ又はＤＮＡ分子の形態で存在してもよい。

【0124】

本明細書で使用される場合、「核酸」という用語は、ＤＮＡ又はＲＮＡなどのポリヌクレオチドを指す。核酸は、一本鎖、部分的又は完全に二本鎖であってもよく、場合によっては、部分的又は完全に三本鎖であってもよい。核酸には、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡなどが含まれる。核酸は、天然源から精製され、組換え発現系を使用して産生され、任意選択で精製され、化学的に合成されるなどであり得る。適切な場合、例えば、化学的に合成された分子の場合、核酸は、化学的に修飾された塩基又は糖、骨格修飾などを有する類似体などのヌクレオシド類似体を含むことができる。本明細書で使用される場合、「核酸配列」という用語は、核酸物質自体を指すことができ、特定の核酸、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子を生化学的に特徴付ける配列情報（すなわち、５つの塩基文字Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ、又はＵから選択される文字の連続）に限定されない。核酸配列は、特に断らない限り、５’から３’の方向に提示される。「核酸セグメント」という用語は、長い核酸配列の一部である核酸配列を指すために本明細書で使用される。

【0125】

本明細書で使用される場合、「作動可能に連結された」又は「作動可能に会合した」という用語は、２つの核酸間の機能的関係を指し、配列のうちの１つの発現、活性、局在化などは、他の核酸によって制御され、指示され、調節され、変調されるなどである。２つの核酸は、作動可能に連結されているか、又は作動可能に会合しているか、又は作動可能な会合と言われる。「作動可能に連結された」又は「作動可能に会合した」はまた、２つのポリペプチド間の関係を指すことができ、ポリペプチドのうちの１つの発現は、他のポリペプチドによって制御され、指示され、調節され、変調されるなどである。例えば、核酸の転写は、作動可能に連結されたプロモーターによって指示され、核酸の転写後のプロセシングは、作動可能に連結されたプロセシング配列によって指示され、核酸の翻訳は、翻訳開始配列などの作動可能に連結された翻訳調節配列によって指示され、核酸又はポリペプチドの輸送、安定性、又は局在化は、分泌シグナル配列などの作動可能に連結された輸送又は局在化配列によって指示され、ポリペプチドの翻訳後のプロセシングは、作動可能に連結されたプロセシング配列によって指示される。典型的には、第２の核酸配列に作動可能に連結された第１の核酸配列、又は第２のポリペプチドに作動可能に連結された第１のポリペプチドは、そのような配列に直接的又は間接的に共有結合されるが、任意の有効な三次元会合は許容される。当業者であれば、複数の核酸、又は複数のポリペプチドが、互いに作動可能に連結され得るか、又は会合し得ることを理解するであろう。

【0126】

本明細書で使用される場合、「パッケージングシグナル」、「パッケージング配列」、又は「ｐｓｉ配列」という用語は、その配列が、パッケージングシグナルをレトロウイルス粒子に含む、核酸のパッケージングを指示するのに十分な任意の核酸配列を指す。この用語は、天然に存在するパッケージング配列、及びまた、その操作されたバリアントも含む。レンチウイルスを含む、いくつかの異なるレトロウイルスのパッケージングシグナルは、当該技術分野で既知である。

【0127】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される賦形剤」、「担体」、又は「希釈剤」という用語は、それが一緒に投与される活性剤の治療特性を変更しない医薬成分を指す。１つの例示的な薬学的に許容される担体物質は、生理食塩水である。例えば、薬学的に許容される担体は、塩化ナトリウム（例えば、１５０ｍＭの塩化ナトリウム）及びリン酸ナトリウム（例えば、２５ｍＭのリン酸ナトリウム）を含むことができる。他の生理学的に許容される賦形剤、担体、及び希釈剤、並びにそれらの製剤は、当業者に既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（２２ｎｄ Ｅｄ），Ａｌｌｅｎ（２０１２）に記載されている。例えば、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤は、二塩基性リン酸ナトリウム、七水和物、一塩基性リン酸ナトリウム、一水和物、及び塩化ナトリウムを、７．２～７．６のｐＨで含むことができる。

【0128】

本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤で製剤化された、本明細書に記載の活性剤を含有する組成物を意味する。医薬組成物は、患者（例えば、周産期発症型ＨＰＰを有する乳児、若しくは幼児発症型ＨＰＰを有する乳児、若しくは若年性発症型ＨＰＰを有する乳児、又は小児発症型ＨＰＰを有する患者などのＨＰＰを有する乳児）の疾患又は事象の治療又は予防のための治療レジメンの一部として、政府規制機関の承認を得て製造又は販売することができる。医薬組成物は、例えば、皮下投与、静脈内投与（例えば、粒子状塞栓を含まない滅菌溶液として、静脈内使用に好適な溶媒系中で）、経口投与（例えば、錠剤、カプセル、カプレット、ゲルキャップ、又はシロップ）、又は本明細書に記載の任意の他の製剤、例えば、単位剤形で製剤化することができる。

【0129】

本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」又は「核酸」という用語は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＲＮＡ、ゲノムＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、プラス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（＋））、マイナス鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（－））、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、又はＤＮＡを指す。ポリヌクレオチドには、一本鎖及び二本鎖ポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の参照配列（例えば、配列表を参照されたい）のうちのいずれかに対して約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチド又はバリアントを含み、典型的には、バリアントが、参照配列のうちの少なくとも１つの生物学的活性を維持する。様々な例示的な実施形態では、本開示は、部分的に、ウイルスベクター及び転移プラスミドポリヌクレオチド配列並びにそれらを含む組成物を企図する。特定の実施形態では、本開示は、治療ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。

【0130】

本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」、「ポリペプチド断片」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、反対に指定しない限り、従来の意味、すなわち、アミノ酸の配列として、交換可能に使用される。ポリペプチドは、特定の長さに限定されず、例えば、完全長タンパク質配列又は完全長タンパク質の断片を含んでもよく、ポリペプチドの翻訳後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化など、並びに天然及び非天然の両方の当該技術分野で知られている他の修飾を含んでもよい。様々な実施形態では、本明細書で企図されるポリペプチドは、タンパク質のＮ末端にシグナル（又はリーダー）配列を含み、これは、共翻訳又は翻訳後にタンパク質の転移を指示する。ポリペプチドは、様々な周知の組換え及び／又は合成技術のいずれかを使用して調製することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に企図されるポリペプチドは、本明細書に開示されるように、ＣＡＲの１つ以上のアミノ酸からの欠失、それへの付加、及び／又は置換を有するアルカリホスファターゼ、又は配列を包含する。

【0131】

ポリペプチドは、「ポリペプチドバリアント」を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドバリアントは、１つ以上の置換、欠失、付加、及び／又は挿入において、天然に存在するポリペプチドとは異なっていてもよい。そのようなバリアントは、天然に存在し得るか、又は例えば、上記のポリペプチド配列のうちの１つ以上を修飾することによって、合成的に生成され得る。例えば、特定の実施形態では、１つ以上の置換、欠失、付加及び／又は挿入を導入することによって、本明細書に開示されるポリペプチド、例えば、アルカリホスファターゼポリペプチドの結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、それに対して少なくとも約６５％、７０％、７５％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。

【0132】

本明細書で使用される場合、「予防する」、及び「予防される」、「予防すること」などの同様の単語は、疾患又は状態の発生又は再発の可能性を予防、阻害、又は低減するためのアプローチを示す。それはまた、疾患若しくは状態の発症若しくは再発を遅延させること、又は疾患若しくは状態の症状の発生若しくは再発を遅延させることを指す。本明細書で使用される場合、「予防」及び同様の単語はまた、疾患又は状態の発症又は再発前の疾患又は状態の強度、効果、症状及び／又は負担を低減させることを含む。

【0133】

本明細書で使用される場合、「プロモーター」という用語は、本明細書で使用される場合、ＲＮＡポリメラーゼについての転写開始部位を決定するＤＮＡ配列を指す。プロモーター配列は、ポリペプチド、すなわち転写因子によって認識及び結合されるモチーフを含む。当該転写因子は、結合時に、リクルートＲＮＡポリメラーゼＩＩ、好ましくは、ＲＮＡポリメラーゼＩ、ＩＩ又はＩＩＩ、より好ましくは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ又はＩＩＩ、最も好ましくは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩとなる。それにより、転写制御配列に作動可能に連結された核酸の発現が開始される。発現される核酸の種類に応じて、本明細書で意図される発現は、ＲＮＡポリヌクレオチドへのＤＮＡ配列の転写（例えば、アンチセンスアプローチ、ＲＮＡｉアプローチ、若しくはリボザイムアプローチに好適である）を含んでもよいか、又はＲＮＡポリヌクレオチドへのＤＮＡ配列の転写、続いて当該ＲＮＡポリヌクレオチドのポリペプチドへの翻訳（例えば、遺伝子発現及び組換えポリペプチド産生アプローチに好適である）を含んでもよいことを理解されたい。核酸配列の発現を管理するために、転写制御配列は、発現される核酸のすぐ隣に位置してもよく、すなわち、その５’末端で当該核酸に物理的に連結されていてもよい。代替的に、それは物理的に近接して配置され得る。しかしながら、後者の場合、配列は、発現される核酸との機能的相互作用を可能にするように配置されなければならない。

【0134】

本明細書で使用される場合、「調節配列」又は「調節エレメント」という用語は、作動可能に連結された核酸配列の発現における１つ以上のステップ（特に、転写であるが、場合によってはスプライシング又は他のプロセシングなどの他の事象）を調節する核酸配列を指す。この用語は、作動可能に連結された核酸の転写を指示又は増強するプロモーター、エンハンサー、及び他の転写制御エレメントを含む。調節配列は、構成的発現（例えば、培養物中若しくは生物中の典型的な生理学的条件下でのほとんど若しくは全ての細胞種類における発現）、細胞種類特異的、系統特異的、若しくは組織特異的発現、及び／又は調節可能な（誘導可能若しくは抑制可能な）発現を指示し得る。例えば、発現は、ホルモン又は他の小分子などの誘導剤の存在又は添加、温度の上昇などによって誘導又は抑制され得る。哺乳動物細胞における使用に適した細胞種類、系統、又は組織特異的プロモーターの非限定的な例としては、リンパ系特異的プロモーター（例えば、Ｃａｌａｍｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３：２３５，１９８８を参照されたい）、例えば、Ｔ細胞受容体のプロモーター（例えば、Ｗｉｎｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．８：７２９，１９８９を参照されたい）、及び免疫グロブリン（例えば、Ｂａｎｅｒｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ３３：７２９，１９８３、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ３３：７４１，１９８３を参照されたい）、並びにニューロン特異的プロモーター（例えば、ニューロフィラメントプロモーター、Ｂｙｒｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：５４７３，１９８９）が挙げられる。発生的に調節されたプロモーターとしては、ｈｏｘプロモーター（例えば、Ｋｅｓｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３７４，１９９０を参照されたい）、及びα－フェトプロテインプロモーター（Ｃａｍｐｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．３：５３７，１９８９）が挙げられる。いくつかの調節エレメントは、作動可能に連結された核酸の発現を阻害又は減少させ得る。そのような調節エレメントは、「負の調節エレメント」と称され得る。誘導剤若しくは抑制剤への曝露によって、及び／又は環境条件を変更することによって、その活性を誘導又は抑制することができる調節エレメントは、本明細書では「調節可能な」エレメントと称される。

【0135】

本明細書で使用される場合、「ｓＡＬＰ」及び「可溶性アルカリホスファターゼ」という用語は、可溶性の非膜結合ＡＬＰ、又は可溶性の非膜結合ＡＬＰのドメイン若しくは生物学的に活性な断片を指す。

【0136】

本明細書で使用される場合、「シグナルペプチド」という用語は、ポリペプチドを分泌経路（例えば、細胞外空間）に向けるポリペプチドのＮ末端にある短いペプチド（約５～約３０アミノ酸長）を指す。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、典型的には、ポリペプチドの分泌中に切断される。いくつかの実施形態では、シグナル配列は、ポリペプチドを細胞内コンパートメント又はオルガネラに誘導してもよい。いくつかの実施形態では、シグナル配列は、細胞の特定の領域にポリペプチドを標的化する既知の機能を有するペプチドに対する相同性、又は生物学的活性によって識別され得る。

【0137】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、実験動物（例えば、霊長類、ラット、マウス）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、シチメンチョウ、ニワトリ）、家庭用ペット（例えば、イヌ、ネコ、げっ歯類など）、及びヒトを含む、任意の動物対象を指す。

【0138】

本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、ウイルス又は形質導入治療細胞を指し、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに幹細胞及び前駆細胞が個体において所望の応答を誘発する能力などの要因に応じて変化し得る。いくつかの実施形態では、治療有効量はまた、ウイルス又は形質導入治療細胞のあらゆる毒性又は有害作用を、治療上有益な効果によって上回る量である。いくつかの実施形態では、「治療有効量」という用語は、対象（例えば、患者）を「治療する」のに有効な量を含む。

【0139】

本明細書で使用される場合、「治療」又は「治療する」という用語は、疾患又は病態の症状又は病状に対するあらゆる有益又は望ましい効果を指し、治療される疾患又は状態の１つ以上の測定可能なマーカーの最小限の減少さえも含み得る。いくつかの実施形態では、治療は、任意選択で、疾患若しくは状態の症状の軽減若しくは改善、又は疾患若しくは状態の進行の遅延のいずれかを伴うことができる。「治療」は、必ずしも、疾患若しくは状態、又はその関連症状の完全な根絶若しくは治癒を示すものではない。

【0140】

本明細書で使用される場合、「複数のバリアント」又は「バリアント」という用語は、参照核酸又はポリペプチドとは異なるが、その本質的な特性を保持する核酸又はポリペプチドを指す。一般に、バリアントは、全体的に密接に類似しており、多くの領域において、参照核酸又はポリペプチドと同じである。したがって、転写因子の「バリアント」形態は、全体的に密接に類似しており、ＤＮＡに結合し、遺伝子転写を活性化することができる。

【0141】

本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、別の核酸分子を移入又は輸送することができる核酸分子を指す。いくつかの実施形態では、移入した核酸は、概して、ベクター核酸分子に連結され、例えば、その中に挿入される。いくつかの実施形態では、ベクターは、細胞内での自律複製を指示する配列を含んでもよいか、又は宿主細胞ＤＮＡへの組み込みを可能にするのに十分な配列を含んでもよい。有用なベクターとしては、例えば、プラスミド（典型的には、ＤＮＡプラスミドであるが、ＲＮＡプラスミドもまた有用である）、コスミド、及びウイルスベクターが挙げられる。当業者には明らかであるように、「ウイルスベクター」という用語は、典型的には、核酸分子の移入若しくは細胞のゲノムへの組み込みを促進するウイルス由来核酸エレメントを含む核酸分子（例えば、プラスミド）、又は核酸移入を媒介するウイルス粒子のいずれかを指して広く使用される。いくつかの実施形態では、ウイルス粒子は、典型的には、核酸に加えて、様々なウイルス成分、及び時にはまた、宿主細胞成分を含む。特に、「レンチウイルスベクター」、「レンチウイルス発現ベクター」などの用語は、本明細書に記載の本開示のレンチウイルストランスファープラスミド及び／又はレンチウイルス粒子を指すために使用され得る。

【0142】

ポリペプチド
いくつかの実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有するポリペプチドであって、
［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗ－［Ｒ］ｑ－（［Ｄ］ｘ－［Ｅ］ｙ）ｚ、 （Ｉ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）ｔＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数である、ポリペプチドを提供する。

【0143】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、デキストランにコンジュゲートされない。

【0144】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のポリペプチドは、骨内のヒドロキシアパタイト結晶の形成を触媒によって可能にする能力がある。

【0145】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼ（「［Ｂ］」）をコードするアミノ酸は、組織非特異的アルカリホスファターゼである。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約８５％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９１％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９２％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９３％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９４％の同一性を有する。

【0146】

なお他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有する。更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有する。一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｑは、０である。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｑは、１である。

【0147】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｑは、１である。

【0148】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１のバリアント、例えば、１つ以上のアミノ酸置換を含むバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、単一のアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換を含んでもよい。別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ｅ４３４Ｇ置換を含んでもよい。なお別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ａ３２１Ｈ置換を含んでもよい。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、２つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換、Ｅ４３４Ｇ置換、又はＡ３２１Ｈ置換のうちのいずれか２つ、例えば、Ａ３２１Ｈ置換及びＥ４３４Ｇ置換の両方を含んでもよい。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、３つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、４つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、５つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、６つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。

【0149】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含む。

【0150】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0151】

いくつかの実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。更に他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３を含む。

【0152】

いくつかの実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。更に他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４を含む。

【0153】

いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有する。他の実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有する。更なる実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有する。一層更なる実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有する。他の実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含む。

【0154】

いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２である。

【0155】

いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。

【0156】

いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１である。

【0157】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、式中、ｘ及びｙは、両方とも少なくとも１である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、式中、ｘ及びｙは、両方とも少なくとも１である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、式中、ｘ及びｙは、両方とも少なくとも１である。。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、式中、ｘ及びｙは、両方とも少なくとも１であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、式中、ｘ及びｙは、両方とも少なくとも１であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、式中、ｘ及びｙは、両方とも少なくとも１であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。

【0158】

いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。

【0159】

いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝４～８である。

【0160】

いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝４～８であり、ｑは、０である。

【0161】

いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝４～８であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝４～８であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝５～７であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0162】

いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、ｑは、１であり、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、ｑは、１であり、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、ｑは、１であり、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0163】

いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０を含むアミノ酸配列を含む。

【0164】

いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含む。

【0165】

いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０を含み、ｙは、４～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０を含み、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６である。いくつかの実施形態では、Ｒは、配列番号９を含み、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６である。

【0166】

いくつかの実施形態では、Ｍは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択される１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｍは、２個のアミノ酸を含む。例えば、Ｍは、ロイシン及びリジンを含み得る。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンである。別の例として、Ｍは、２個のアラニンのアミノ酸を含み得る。他の実施形態では、Ｍは、３個のアミノ酸を含む。

【0167】

いくつかの実施形態では、Ｎは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択される１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｎは、２個のアミノ酸（すなわち、ジアミノ酸）を含む。例えば、Ｎは、アスパラギン酸及びイソロイシンを含み得る。別の例として、Ｎは、２個のアラニンのアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンである。他の実施形態では、Ｎは、３個のアミノ酸を含む。

【0168】

いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンである。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含む。

【0169】

いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0170】

いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0171】

いくつかの実施形態では、［Ｒ］は、配列番号９に対して少なくとも９０％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、［Ｒ］は、配列番号９に対して少なくとも９５％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、［Ｒ］は、配列番号９に対して少なくとも９６％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、［Ｒ］は、配列番号９に対して少なくとも９７％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、［Ｒ］は、配列番号９に対して少なくとも９８％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、［Ｒ］は、配列番号９に対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、［Ｒ］は、配列番号９を含む。

【0172】

いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含むアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、４個のアミノ酸の各々は、同じである。他の実施形態では、４個のアミノ酸のうちの３個は、同じである。なお他の実施形態では、４個のアミノ酸のうちの２個は、同じである。いくつかの実施形態では、４個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸は、同じである。他の実施形態では、４個のアミノ酸のうちの少なくとも３個の連続するアミノ酸は、同じである。いくつかの実施形態では、４個のアミノ酸は、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１～４の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１又は２であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、２であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、１である。

【0173】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳである。他の実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＳである。なお他の実施形態では、Ｄは、ＧＳＳＳである。更なる実施形態では、Ｄは、ＧＳＧＳである。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１～４の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１～４の範囲の整数であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、１～８の範囲の整数であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、１～８の範囲の整数であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、１～８の範囲の整数であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、２であり、ｙは、１～８の範囲の整数であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｚは、１であり、ｘは、２であり、ｙは、１～８の範囲の整数であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。

【0174】

いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含むアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、５個のアミノ酸の各々は、同じである。いくつかの実施形態では、５個のアミノ酸のうちの４個は、同じである。他の実施形態では、５個のアミノ酸のうちの３個は、同じである。他の実施形態では、５個のアミノ酸のうちの２個は、同じである。いくつかの実施形態では、５個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸は、同じである。他の実施形態では、５個のアミノ酸のうちの少なくとも３個の連続するアミノ酸は、同じである。なお他の実施形態では、５個のアミノ酸のうちの４個の連続するアミノ酸は、同じである。いくつかの実施形態では、５個のアミノ酸は、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１～４の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。

【0175】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳである。他の実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳＳである。なお他の実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＳＳである。更なる実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＧＳである。一層更なる実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＧＳである。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～４の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～４の範囲の整数であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。

【0176】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、８～１２の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、４～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、８～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。

【0177】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＥＡＡＡＫである。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＥＡＡＡＫであり、ｘは、２～５の範囲の整数である。他の実施形態では、Ｄは、ＥＡＡＡＫであり、ｘは、１～４の範囲の整数である。なお他の実施形態では、Ｄは、ＥＡＡＡＫであり、ｘは、１～３の範囲の整数である。更なる実施形態では、Ｄは、ＥＡＡＡＫであり、ｘは、１又は２である。

【0178】

いくつかの実施形態では、Ｄは、Ｆ（Ｇ）ｔＦであり、式中、各Ｆは、同じアミノ酸であり、Ｇは、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔは、２～５の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、各Ｆは、アラニンである。いくつかの実施形態では、Ｇは、ＥＡＡＡＫである。いくつかの実施形態では、各Ｆは、アラニンであり、Ｇは、ＥＡＡＡＫであり、ｔは、２又は３である。いくつかの実施形態では、各Ｆは、アラニンであり、Ｇは、ＥＡＡＡＫであり、ｔは、２又は２であり、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含むアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、６個のアミノ酸の各々は、同じである。いくつかの実施形態では、６個のアミノ酸のうちの５個は、同じである。いくつかの実施形態では、６個のアミノ酸のうちの４個は、同じである。他の実施形態では、６個のアミノ酸のうちの３個は、同じである。なお他の実施形態では、６個のアミノ酸のうちの２個は、同じである。いくつかの実施形態では、６個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸は、同じである。他の実施形態では、６個のアミノ酸のうちの少なくとも３個の連続するアミノ酸は、同じである。なお他の実施形態では、６個のアミノ酸のうちの４個の連続するアミノ酸は、同じである。なお更なる実施形態では、６個のアミノ酸のうちの５個の連続するアミノ酸は、同じである。いくつかの実施形態では、６個のアミノ酸は、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１～４の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１又は２であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。

【0179】

いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、１個のアミノ酸は、アスパラギン酸、セリン、リジン、スレオニン、チロシン、アラニン、メチオニン、バリン、トリプトファン、プロリン、アルギニン、グルタミンから選択される。他の実施形態では、１個のアミノ酸は、アスパラギン酸及びセリンから選択される。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、４～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、１０である。

【0180】

いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１０であり、ｑは、１である。

【0181】

いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、２個のアミノ酸は、アスパラギン酸、セリン、リジン、スレオニン、チロシン、アラニン、メチオニン、バリン、トリプトファン、プロリン、アルギニン、グルタミンから選択される。他の実施形態では、２個のアミノ酸は、アスパラギン酸及びセリンから選択される。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１～４の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲であり、ｑは、０である。

【0182】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～８の範囲であり、ｚは、１である。

【0183】

いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、３個のアミノ酸は、アスパラギン酸、セリン、リジン、スレオニン、チロシン、アラニン、メチオニン、バリン、トリプトファン、プロリン、アルギニン、グルタミンから選択される。他の実施形態では、３個のアミノ酸は、アスパラギン酸及びセリンから選択される。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｄである。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－である。

【0184】

いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、３～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、３～６の範囲であり、ｑは、０である。

【0185】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、すなわち、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、０である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１であり、ｑは、０である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１であり、ｑは、０であり、ｘは、０である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１であり、ｑは、０であり、ｘは、２である。

【0186】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、１である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１であり、ｑは、１である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１であり、ｘは、０であり、ｑは、１である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１であり、ｘは、２であり、ｑは、１である。

【0187】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有し、［Ｂ］は、配列番号１１のものに対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有し、［Ｂ］は、配列番号１１を含む。

【0188】

いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、４個のアミノ酸は、アスパラギン酸、セリン、リジン、スレオニン、チロシン、アラニン、メチオニン、バリン、トリプトファン、プロリン、アルギニン、グルタミンから選択される。他の実施形態では、４個のアミノ酸は、アスパラギン酸及びセリンから選択される。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｄ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｄ－Ｄ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１～４の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲であり、ｑは、１である。

【0189】

いくつかの実施形態では、Ｅは、５個以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、５個以上のアミノ酸は、アスパラギン酸、セリン、リジン、スレオニン、チロシン、アラニン、メチオニン、バリン、トリプトファン、プロリン、アルギニン、グルタミンから選択される。他の実施形態では、５個以上のアミノ酸は、アスパラギン酸及びセリンから選択される。他の実施形態では、Ｅは、５個のアミノ酸を含む。例えば、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－Ｄ－であり得る。他の実施形態では、Ｅは、６個のアミノ酸を含む。例えば、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－Ｄ－Ｄ－であり得る。他の実施形態では、Ｅは、７個のアミノ酸を含む。例えば、Ｅは、－Ｓ－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－Ｄ－Ｄ－であり得る。別の例として、Ｅは、ＫＲＲＴＰＶＲであり得る。なお別の例として、Ｅは、ＫＮＦＱＳＲＳであり得る。更なる例として、Ｅは、ＫＴＹＡＳＭＱであり得る。他の実施形態では、Ｅは、８個のアミノ酸を含む。例えば、Ｅは、－Ｓ－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－Ｄ－Ｄ－Ｓ－であり得る。別の例として、Ｅは、ＫＲＲＴＰＶＲＥであり得る。なお別の例として、Ｅは、ＫＮＦＱＳＲＳＨであり得る。更なる例として、Ｅは、ＫＴＹＡＳＭＱＷであり得る。

【0190】

いくつかの実施形態では、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、ｑは、０であり、ｘは、少なくとも１である。他の実施形態では、ｑは、０であり、ｙは、少なくとも４である。他の実施形態では、ｑは、０であり、ｙは、６である。

【0191】

いくつかの実施形態では、ｚは、１～６の範囲の整数である。他の実施形態では、ｚは、１～４の範囲の整数である。なお他の実施形態では、ｚは、１～３の範囲の整数である。更なる実施形態では、ｚは、１又は２である。一層更なる実施形態では、ｚは、１である。一層更なる実施形態では、ｚは、１であり、ｑは、０であり、ｙは、６である。一層更なる実施形態では、ｚは、１であり、ｑは、１であり、ｙは、６である。

【0192】

いくつかの実施形態では、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、ｑは、０であり、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６である。

【0193】

いくつかの実施形態では、本開示は、式（ＩＡ）を有するポリペプチドであって、
［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗ－［Ｒ］ｑ－（［Ｄ］ｘ－［Ｅ］ｙ）ｚ、 （ＩＡ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）ｔＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ただし、式（ＩＡ）のポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列を有しないか、若しくは配列番号１０７のヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含まないか、又はただし、式（ＩＡ）のポリペプチドが、Ｓｔｒｅｎｓｉｑ（登録商標）若しくはアスホターゼアルファではない、ポリペプチドを提供する。

【0194】

例えば、いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１と比較して９９％以下の同一性を有するアミノ酸配列を有する。別の例として、いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１と比較して９８％以下の同一性を有するアミノ酸配列を有する。なお別の例として、いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１と比較して９７％以下の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１と比較して９６％以下の同一性を有するアミノ酸配列を有する。他の実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１と比較して９５％以下の同一性を有するアミノ酸配列を有する。

【0195】

いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０７に対して９９％未満の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０７に対して９８％未満の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０７に対して９７％未満の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０７に対して９６％未満の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、配列番号１０７に対して９５％未満の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0196】

いくつかの実施形態では、ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが、１であり、ｏが、１であり、ｐが、１であり、Ｎが、ジアミノ酸－Ｄ－Ｉ－であり、Ｍが、ジアミノ酸－Ｌ－Ｋ－であり、［Ｂ］が、配列番号１１を含み、Ｆｃが、配列番号１３０を含み、ｘが、０である場合、［Ｅ］ｙは、Ｄ１０－Ｄ１６ではない。いくつかの実施形態では、ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが、１であり、ｏが、１であり、ｐが、１であり、Ｎが、ジアミノ酸－Ｄ－Ｉ－であり、Ｍが、ジアミノ酸－Ｌ－Ｋ－であり、［Ｂ］が、配列番号１１を含み、Ｆｃが、配列番号１３０を含み、ｘが、０である場合、［Ｅ］ｙは、１０～１６個の連続するアスパラギン酸残基を含まない。

【0197】

いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、デキストランにコンジュゲートされない。

【0198】

いくつかの実施形態では、式（ＩＡ）のポリペプチドは、骨内のヒドロキシアパタイト結晶の形成を触媒によって可能にする能力がある。

【0199】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼ（「［Ｂ］」）をコードするアミノ酸は、組織非特異的アルカリホスファターゼである。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約８５％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９１％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９２％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９３％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９４％の同一性を有する。

【0200】

なお他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有する。更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有する。一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｑは、０である。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｑは、１である。

【0201】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｑは、１である。

【0202】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１のバリアント、例えば、１つ以上のアミノ酸置換を含むバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、単一のアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換を含んでもよい。別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ｅ４３４Ｇ置換を含んでもよい。なお別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ａ３２１Ｈ置換を含んでもよい。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、２つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換、Ｅ４３４Ｇ置換、又はＡ３２１Ｈ置換のうちのいずれか２つ、例えば、Ａ３２１Ｈ置換及びＥ４３４Ｇ置換の両方を含んでもよい。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、３つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、４つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、５つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、６つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。

【0203】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含む。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含み、［Ｄ］ｘは、［－ＧＧＧＧＳ－］２である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは、０である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは１である。

【0204】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含む。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは、０である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは、１である。

【0205】

いくつかの実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。更に他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３を含む。なお更に他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。なお更に他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは、０である。なお更に他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは、１である。

【0206】

いくつかの実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。更に他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４を含む。なお更に他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。なお更に他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは、０である。なお更に他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１４を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは、１である。

【0207】

いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有する。他の実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有する。更なる実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有する。一層更なる実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有する。他の実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含む。

【0208】

いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、ｑは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、ｑは、０であり、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含む。

【0209】

いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、ｑは、１であり、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、ｑは、１であり、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、ｑは、１であり、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0210】

いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２である。

【0211】

いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１である。

【0212】

いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。

【0213】

いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１である。

【0214】

いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、０である。

【0215】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、式中、ｘ及びｙは、両方とも少なくとも１である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、式中、ｘ及びｙは、両方とも少なくとも１である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、式中、ｘ及びｙは、両方とも少なくとも１である。。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、式中、ｘ及びｙは、両方とも少なくとも１であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、式中、ｘ及びｙは、両方とも少なくとも１であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、式中、ｘ及びｙは、両方とも少なくとも１であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。

【0216】

いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。

【0217】

いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝４～８である。

【0218】

いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝４～８であり、ｑは、０である。

【0219】

いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝４～８であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝４～８であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝５～７であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｖは、１であり、ｗは、０であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0220】

いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０に対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０を含むアミノ酸配列を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。

【0221】

いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含む。

【0222】

いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、４～８である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、４～８である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、４～８である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、４～８である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、４～８である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、４～８である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、４～８である。

【0223】

いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、４～８であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、４～８であり、ｑは、０であり、ｚは、１である。

【0224】

いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、４～８であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、４～８であり、ｑは、１であり、ｚは、１である。

【0225】

いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。

【0226】

いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、８～１２である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、８～１２である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、８～１２である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、８～１２である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、８～１２である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、８～１２である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、８～１２である。

【0227】

いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、８～１２であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、８～１２であり、ｑは、０であり、ｚは、１である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、８～１２であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、８～１２であり、ｑは、１であり、ｚは、１である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、８～１２であり、ｑは、１であり、ｚは、１であり、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。いくつかの実施形態では、［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗは、配列番号１０及び２７～３２のうちのいずれか１つを含むアミノ酸配列を含み、ｘ＋ｙは、８～１２であり、ｑは、１であり、ｚは、１であり、［Ｅ］ｙは、［－Ｄ－］１０である。

【0228】

いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０を含み、ｙは、４～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０を含み、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６である。いくつかの実施形態では、Ｒは、配列番号９を含み、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６である。

【0229】

いくつかの実施形態では、Ｍは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択される１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｍは、２個のアミノ酸を含む。例えば、Ｍは、ロイシン及びリジンを含み得る。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンである。別の例として、Ｍは、２個のアラニンのアミノ酸を含み得る 他の実施形態では、Ｍは、３個のアミノ酸を含む。

【0230】

いくつかの実施形態では、Ｎは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択される１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｎは、２個のアミノ酸（すなわち、ジアミノ酸）を含む。例えば、Ｎは、アスパラギン酸及びイソロイシンを含み得る。別の例として、Ｎは、２個のアラニンのアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンである。他の実施形態では、Ｎは、３個のアミノ酸を含む。

【0231】

いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンである。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含む。

【0232】

いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0233】

いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0234】

いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、４～８である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは４～８である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは４～８である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは４～８である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは４～８である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは４～８である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは４～８である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは４～８である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは４～８である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは４～８である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは４～８である。

【0235】

いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、４～８である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、４～８であり、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、４～８であり、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、４～８であり、ｖ又はｗのうちの少なくとも１つは、０であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0236】

いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含む。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、ｑ、及びｚは、各々、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６であり、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１と比較して、１つ又は２つのアミノ酸置換を含む。

【0237】

いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含むアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、４個のアミノ酸の各々は、同じである。他の実施形態では、４個のアミノ酸のうちの３個は、同じである。なお他の実施形態では、４個のアミノ酸のうちの２個は、同じである。いくつかの実施形態では、４個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸は、同じである。他の実施形態では、４個のアミノ酸のうちの少なくとも３個の連続するアミノ酸は、同じである。いくつかの実施形態では、４個のアミノ酸は、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１～４の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１又は２であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、２であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、４個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、１である。

【0238】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳである。他の実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＳである。なお他の実施形態では、Ｄは、ＧＳＳＳである。更なる実施形態では、Ｄは、ＧＳＧＳである。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１～４の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１～４の範囲の整数であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、１～８の範囲の整数であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、１～８の範囲の整数であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、１～８の範囲の整数であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、２であり、ｙは、１～８の範囲の整数であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｚは、１であり、ｘは、２であり、ｙは、１～８の範囲の整数であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。

【0239】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳ又はＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳ又はＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳ又はＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、８～１２の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳ又はＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳ又はＧＧＳＳであり、ｘは、２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、４～１６の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、４～１２の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳであり、ｘは、２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。

【0240】

いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含むアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、５個のアミノ酸の各々は、同じである。いくつかの実施形態では、５個のアミノ酸のうちの４個は、同じである。他の実施形態では、５個のアミノ酸のうちの３個は、同じである。他の実施形態では、５個のアミノ酸のうちの２個は、同じである。いくつかの実施形態では、５個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸は、同じである。他の実施形態では、５個のアミノ酸のうちの少なくとも３個の連続するアミノ酸は、同じである。なお他の実施形態では、５個のアミノ酸のうちの４個の連続するアミノ酸は、同じである。いくつかの実施形態では、５個のアミノ酸は、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１～４の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、５個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。

【0241】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳである。他の実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳＳである。なお他の実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＳＳである。更なる実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＧＳである。一層更なる実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＧＳである。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～４の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～４の範囲の整数であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。

【0242】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、８～１２の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、４～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、８～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。

【0243】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＥＡＡＡＫである。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＥＡＡＡＫであり、ｘは、２～５の範囲の整数である。他の実施形態では、Ｄは、ＥＡＡＡＫであり、ｘは、１～４の範囲の整数である。なお他の実施形態では、Ｄは、ＥＡＡＡＫであり、ｘは、１～３の範囲の整数である。更なる実施形態では、Ｄは、ＥＡＡＡＫであり、ｘは、１又は２である。

【0244】

いくつかの実施形態では、Ｄは、Ｆ（Ｇ）ｔＦであり、式中、各Ｆは、同じアミノ酸であり、Ｇは、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔは、２～５の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、各Ｆは、アラニンである。いくつかの実施形態では、Ｇは、ＥＡＡＡＫである。いくつかの実施形態では、各Ｆは、アラニンであり、Ｇは、ＥＡＡＡＫであり、ｔは、２又は３である。いくつかの実施形態では、各Ｆは、アラニンであり、Ｇは、ＥＡＡＡＫであり、ｔは、２又は２であり、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含むアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、６個のアミノ酸の各々は、同じである。いくつかの実施形態では、６個のアミノ酸のうちの５個は、同じである。いくつかの実施形態では、６個のアミノ酸のうちの４個は、同じである。他の実施形態では、６個のアミノ酸のうちの３個は、同じである。なお他の実施形態では、６個のアミノ酸のうちの２個は、同じである。いくつかの実施形態では、６個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸は、同じである。他の実施形態では、６個のアミノ酸のうちの少なくとも３個の連続するアミノ酸は、同じである。なお他の実施形態では、６個のアミノ酸のうちの４個の連続するアミノ酸は、同じである。なお更なる実施形態では、６個のアミノ酸のうちの５個の連続するアミノ酸は、同じである。いくつかの実施形態では、６個のアミノ酸は、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１～４の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１又は２であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｄは、６個のアミノ酸を含み、ｘは、１であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。

【0245】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＧＳである。他の実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳＳである。なお他の実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳＳＳである。更なる実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳＧＳである。一層更なる実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＧＧＳである。なお一層更なる実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳＧＳである。

【0246】

いくつかの実施形態では、Ｄは、Ｒ－ＧＧＧＧＳ又はＲ－ＧＧＧＳＳであり、Ｒは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択されるアミノ酸であり、ｘは、１～４の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、Ｒは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択されるアミノ酸であり、ｘは、１～３の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、Ｒは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択されるアミノ酸であり、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、Ｒは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択されるアミノ酸であり、ｘは、１～４の範囲の整数であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、Ｒは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択されるアミノ酸であり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、Ｒは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択されるアミノ酸であり、ｘは、１又は２であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。

【0247】

いくつかの実施形態では、Ｄは、Ｒ－ＧＧＧＧＳ又はＲ－ＧＧＧＳＳであり、Ｒは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択されるアミノ酸であり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、Ｒは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択されるアミノ酸であり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、Ｒは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択されるアミノ酸であり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、８～１２の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、Ｒは、グリシン、セリン、スレオニン、アラニン、リジン、及びグルタミン酸から選択されるアミノ酸であり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。

【0248】

いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、１個のアミノ酸は、アスパラギン酸、セリン、リジン、スレオニン、チロシン、アラニン、メチオニン、バリン、トリプトファン、プロリン、アルギニン、グルタミンから選択される。他の実施形態では、１個のアミノ酸は、アスパラギン酸及びセリンから選択される。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、４～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、１０である。

【0249】

いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１０であり、ｑは、１である。

【0250】

いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１０であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１６より大きく、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１０未満であり、ｑは、１である。

【0251】

いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、２個のアミノ酸は、アスパラギン酸、セリン、リジン、スレオニン、チロシン、アラニン、メチオニン、バリン、トリプトファン、プロリン、アルギニン、グルタミンから選択される。他の実施形態では、２個のアミノ酸は、アスパラギン酸及びセリンから選択される。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１～４の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、２個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲であり、ｑは、０である。

【0252】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～８の範囲であり、ｚは、１である。

【0253】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～８の範囲であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～８の範囲であり、ｑは、０であり、ｚは、１である。

【0254】

いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、３個のアミノ酸は、アスパラギン酸、セリン、リジン、スレオニン、チロシン、アラニン、メチオニン、バリン、トリプトファン、プロリン、アルギニン、グルタミンから選択される。他の実施形態では、３個のアミノ酸は、アスパラギン酸及びセリンから選択される。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｄである。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－である。

【0255】

いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、３～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、３～６の範囲であり、ｑは、０である。

【0256】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、すなわち、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、０である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１であり、ｑは、０である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１であり、ｑは、０であり、ｘは、０である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１であり、ｑは、０であり、ｘは、２である。

【0257】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、１である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１であり、ｑは、１である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１であり、ｘは、０であり、ｑは、１である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｚは、１であり、ｘは、２であり、ｑは、１である。

【0258】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有し、［Ｂ］は、配列番号１１のものに対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有し、［Ｂ］は、配列番号１１を含む。

【0259】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、６であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、デキストランにコンジュゲートされない。

【0260】

いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、４個のアミノ酸は、アスパラギン酸、セリン、リジン、スレオニン、チロシン、アラニン、メチオニン、バリン、トリプトファン、プロリン、アルギニン、グルタミンから選択される。他の実施形態では、４個のアミノ酸は、アスパラギン酸及びセリンから選択される。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｄ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｄ－Ｄ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－Ｓ－である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１～４の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、２～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、４個のアミノ酸を含み、ｙは、２～８の範囲であり、ｑは、１である。

【0261】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～８の範囲であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｖ＋ｗは、１であり、ｘは、０であり、ｙは、１～８の範囲であり、ｑは、１である。

【0262】

いくつかの実施形態では、Ｅは、５個以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、５個以上のアミノ酸は、アスパラギン酸、セリン、リジン、スレオニン、チロシン、アラニン、メチオニン、バリン、トリプトファン、プロリン、アルギニン、グルタミンから選択される。他の実施形態では、５個以上のアミノ酸は、アスパラギン酸及びセリンから選択される。他の実施形態では、Ｅは、５個のアミノ酸を含む。例えば、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－Ｄ－又は－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－Ｄ－であり得る。他の実施形態では、Ｅは、６個のアミノ酸を含む。例えば、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－Ｄ－Ｄ－であり得る。他の実施形態では、Ｅは、７個のアミノ酸を含む。例えば、Ｅは、－Ｓ－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－Ｄ－Ｄ－であり得る。別の例として、Ｅは、ＫＲＲＴＰＶＲであり得る。なお別の例として、Ｅは、ＫＮＦＱＳＲＳであり得る。更なる例として、Ｅは、ＫＴＹＡＳＭＱであり得る。他の実施形態では、Ｅは、８個のアミノ酸を含む。例えば、Ｅは、－Ｓ－Ｄ－Ｄ－Ｓ－Ｓ－Ｄ－Ｄ－Ｓ－であり得る。別の例として、Ｅは、ＫＲＲＴＰＶＲＥであり得る。なお別の例として、Ｅは、ＫＮＦＱＳＲＳＨであり得る。更なる例として、Ｅは、ＫＴＹＡＳＭＱＷであり得る。

【0263】

いくつかの実施形態では、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、ｑは、０であり、ｘは、少なくとも１である。他の実施形態では、ｑは、０であり、ｙは、少なくとも４である。他の実施形態では、ｑは、０であり、ｙは、６である。

【0264】

なお他の実施形態では、ｑは、１であり、ｙは、少なくとも４である。なお他の実施形態では、ｑは、１であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、ｙは、６であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、ｙは、６であり、ｗは、０であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、ｙは、６であり、ｗは、０であり、ｘは、０であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、ｚは、１であり、ｙは、６であり、ｗは、０であり、ｘは、０であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、ｚは、１であり、ｙは、６であり、ｗは、０であり、ｘは、０であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、Ｆｃは、配列番号１１のものに対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、ｚは、１であり、ｙは、６であり、ｗは、０であり、ｘは、０であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、Ｆｃは、配列番号１１のものと比較して１つのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、ｚは、１であり、ｙは、６であり、ｗは、０であり、ｘは、０であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、Ｆｃは、配列番号１１を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、ｚは、１であり、ｙは、６であり、ｗは、０であり、ｘは、０であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、Ｆｃは、配列番号１１を含み、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、ｚは、１であり、ｙは、６であり、ｗは、０であり、ｘは、０であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、Ｆｃは、配列番号１１を含み、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１に対して９９％未満の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＦ ＮＯ：１に対して９８％未満の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、デキストランにコンジュゲートされない。

【0265】

いくつかの実施形態では、ｚは、１～６の範囲の整数である。他の実施形態では、ｚは、１～４の範囲の整数である。なお他の実施形態では、ｚは、１～３の範囲の整数である。更なる実施形態では、ｚは、１又は２である。一層更なる実施形態では、ｚは、１である。一層更なる実施形態では、ｚは、１であり、ｑは、０であり、ｙは、６である。一層更なる実施形態では、ｚは、１であり、ｑは、１であり、ｙは、６である。

【0266】

いくつかの実施形態では、本開示は、式（ＩＢ）を有するポリペプチドであって、
［Ａ］ｖ－［Ｂ］－［Ｃ］ｗ－［Ｒ］ｑ－（［Ｄ］ｘ－［Ｅ］ｙ）ｚ、 （ＩＢ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）ｔＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ただし、ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが、１であり、ｏが、１であり、ｐが、１であり、Ｎが、ジアミノ酸－Ｄ－Ｉ－であり、Ｍが、ジアミノ酸－Ｌ－Ｋ－であり、［Ｂ］が、配列番号１１を含み、Ｆｃが、配列番号１３０を含み、ｘが、０である場合、［Ｅ］ｙが、１０～１６個の連続するアスパラギン酸残基を含まない、ポリペプチドを提供する。

【0267】

いくつかの実施形態では、式（ＩＢ）のポリペプチドは、デキストランにコンジュゲートされない。

【0268】

いくつかの実施形態では、式（ＩＢ）のポリペプチドは、骨内のヒドロキシアパタイト結晶の形成を触媒によって可能にする能力がある。

【0269】

いくつかの実施形態では、本開示は、式（ＩＩ）を有するポリペプチドであって、
［Ａ］－［Ｂ］－［Ｃ］－［Ｒ］ｑ－（［Ｄ］ｘ－［Ｅ］ｙ）、 （ＩＩ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数である、ポリペプチドを提供する。

【0270】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）のポリペプチドは、骨内のヒドロキシアパタイト結晶の形成を触媒によって可能にする能力がある。

【0271】

いくつかの実施形態では、Ｅは、２～４個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、少なくとも２個の異なるアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、少なくとも２個の異なるアミノ酸を含み、ｙは、４～８の範囲である。

【0272】

いくつかの実施形態では、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、ｘは、少なくとも１である。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、ｙは、少なくとも１である。いくつかの実施形態では、ｑは、１であり、ｘ及び１の両方は、少なくとも１である。

【0273】

いくつかの実施形態では、アルカリ性ホスフェートをコードするアミノ酸は、組織非特異的アルカリホスファターゼである。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約８５％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有する。なお他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有する。更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有する。一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含む。

【0274】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、１つ以上のアミノ酸置換を含む配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、単一のアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換を含んでもよい。別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ｅ４３４Ｇ置換を含んでもよい。なお別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ａ３２１Ｈ置換を含んでもよい。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、２つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換、Ｅ４３４Ｇ置換、又はＡ３２１Ｈ置換のうちのいずれか２つ、例えば、Ａ３２１Ｈ置換及びＥ４３４Ｇ置換の両方を含んでもよい。

【0275】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含む。

【0276】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0277】

いくつかの実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３及び１４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３及び１４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３及び１４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３及び１４に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３及び１４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３及び１４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸は、配列番号１３及び１４のうちのいずれか１つを含む。

【0278】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２である。

【0279】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは１である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２であり、ｑは、１であり、Ｒは、（－［ＬＫ］－Ｆｃ－［ＤＩ］－）であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。

【0280】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝４～８である。

【0281】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳである。他の実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳＳである。なお他の実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＳＳである。更なる実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＧＳである。一層更なる実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＧＳである。

【0282】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～４の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、２であり、ｑは、０である。

【0283】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～４の範囲の整数であり、ｙは、４～１２の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、ｙは、４～１２の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、４～１２の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、４～１２の範囲の整数であり、ｑは、０である。

【0284】

いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、１個のアミノ酸は、アスパラギン酸及びセリンから選択される。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、４～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、６～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、８～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、１０であり、ｑは、０である。

【0285】

いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、４～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、６～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０であり、ｑは、０である。

【0286】

いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、３個のアミノ酸は、アスパラギン酸及びセリンから選択される。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｄ－である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、６であり、ｑは、０である。

【0287】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、０である。

【0288】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、４～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６であり、ｑは、０である。

【0289】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、８～１２の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０であり、ｑは、０である。

【0290】

いくつかの実施形態では、Ｅは、ＫＲＲＴＰＶＲＥである。他の実施形態では、Ｅは、ＫＮＦＱＳＲＳＨである。なお他の実施形態では、Ｅは、ＫＴＹＡＳＭＱＷである。

【0291】

いくつかの実施形態では、本開示は、式（ＩＩＩ）を有するポリペプチドであって、
（［Ａ］－［Ｂ］）－（［Ｄ］ｘ－［Ｅ］ｙ）ｚ、 （ＩＩＩ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、１～６の範囲の整数である、ポリペプチドを提供する。

【0292】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩＩ）のポリペプチドは、骨内のヒドロキシアパタイト結晶の形成を触媒によって可能にする能力がある。

【0293】

いくつかの実施形態では、Ｅは、２～４個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、少なくとも２個の異なるアミノ酸を含む。

【0294】

いくつかの実施形態では、ｘ＋ｙは、少なくとも２であり、［Ｄ］及び［Ｅ］は、異なるアミノ酸配列を含む。

【0295】

他の実施形態では、ｘは、０であり、［Ｅ］は、少なくとも３個のアミノ酸を含む。他の実施形態では、ｘは、０であり、［Ｅ］は、３個のアミノ酸を含む。他の実施形態では、ｘは、０であり、［Ｅ］は、３個のアミノ酸を含み、ｙは、４～８の範囲である。他の実施形態では、ｘは、０であり、［Ｅ］は、３個のアミノ酸を含み、ｙは、６である。

【0296】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有する。なお他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有する。更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有する。一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含む。

【0297】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、１つ以上のアミノ酸置換を含む配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、単一のアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換を含んでもよい。別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ｅ４３４Ｇ置換を含んでもよい。なお別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ａ３２１Ｈ置換を含んでもよい。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、２つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換、Ｅ４３４Ｇ置換、又はＡ３２１Ｈ置換のうちのいずれか２つ、例えば、Ａ３２１Ｈ置換及びＥ４３４Ｇ置換の両方を含んでもよい。

【0298】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含む。

【0299】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0300】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝８～１２である。

【0301】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｘ＋ｙ＝４～８である。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含み、ｘ＋ｙ＝４～８である。

【0302】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳである。他の実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＳＳである。なお他の実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＳＳである。更なる実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＧＳである。一層更なる実施形態では、Ｄは、ＧＧＳＧＳである。

【0303】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～４の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、２である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、２である。

【0304】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～４の範囲の整数であり、ｙは、４～１２の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、ｙは、４～１２の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、４～１２の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、ｙは、１０である。

【0305】

いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、４～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、６～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、８～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、１０である。

【0306】

いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、４～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、６～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、８～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。

【0307】

いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、６である。

【0308】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－である。なお他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｄ－である。

【0309】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６である。

【0310】

いくつかの実施形態では、Ｅは、ＫＲＲＴＰＶＲＥである。他の実施形態では、Ｅは、ＫＮＦＱＳＲＳＨである。なお他の実施形態では、Ｅは、ＫＴＹＡＳＭＱＷである。

【0311】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、４～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６である。

【0312】

いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１～３の範囲の整数であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、８～１２の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、１又は２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳ又はＧＧＧＳＳであり、ｘは、２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。いくつかの実施形態では、Ｄは、ＧＧＧＧＳであり、ｘは、２であり、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。

【0313】

いくつかの実施形態では、本開示は、式（ＩＶ）を有するポリペプチドであって、
（［Ａ］－［Ｂ］）－（［Ｅ］ｙ）、 （ＩＶ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数である、ポリペプチドを提供する。

【0314】

いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）のポリペプチドは、骨内のヒドロキシアパタイト結晶の形成を触媒によって可能にする能力がある。

【0315】

いくつかの実施形態では、Ｅは、２～４個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、少なくとも２個の異なるアミノ酸を含む。

【0316】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有する。なお他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有する。更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有する。一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１を含む。

【0317】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、１つ以上のアミノ酸置換を含む配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、単一のアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換を含んでもよい。別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ｅ４３４Ｇ置換を含んでもよい。なお別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ａ３２１Ｈ置換を含んでもよい。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、２つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換、Ｅ４３４Ｇ置換、又はＡ３２１Ｈ置換のうちのいずれか２つ、例えば、Ａ３２１Ｈ置換及びＥ４３４Ｇ置換の両方を含んでもよい。

【0318】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含む。

【0319】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0320】

いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、４～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、６～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、８～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、１個のアミノ酸を含み、ｙは、１０である。

【0321】

いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、４～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、４～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、６～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、８～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１０である。

【0322】

いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、６である。

【0323】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｄ－である。

【0324】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６である。

【0325】

いくつかの実施形態では、Ｅは、ＫＲＲＴＰＶＲＥを含む。他の実施形態では、Ｅは、ＫＮＦＱＳＲＳＨを含む。なお他の実施形態では、Ｅは、ＫＴＹＡＳＭＱＷを含む。

【0326】

いくつかの実施形態では、本開示は、式（ＶＡ）を有するポリペプチドであって、
［Ａ］－［Ｂ］－［Ｒ］ｑ－（［Ｅ］ｙ） （ＶＡ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
ｑが、０又は１であり、
Ｅが、２～４個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｙが、１～１６の範囲の整数である、ポリペプチドを提供する。

【0327】

いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）のポリペプチドは、骨内のヒドロキシアパタイト結晶の形成を触媒によって可能にする能力がある。

【0328】

いくつかの実施形態では、ｙは、４～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、ｙは、４～８の範囲の整数であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、ｙは、６であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、ｙは、４～８の範囲の整数であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、ｙは、６であり、ｑは、１である。

【0329】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼ（「［Ｂ］」）をコードするアミノ酸は、組織非特異的アルカリホスファターゼである。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約８５％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９１％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９２％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９３％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９４％の同一性を有する。

【0330】

なお他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有する。更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有する。一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｑは、０である。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｑは、１である。

【0331】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１のバリアント、例えば、１つ以上のアミノ酸置換を含むバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、単一のアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換を含んでもよい。別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ｅ４３４Ｇ置換を含んでもよい。なお別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ａ３２１Ｈ置換を含んでもよい。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、２つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換、Ｅ４３４Ｇ置換、又はＡ３２１Ｈ置換のうちのいずれか２つ、例えば、Ａ３２１Ｈ置換及びＥ４３４Ｇ置換の両方を含んでもよい。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、３つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、４つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、５つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、６つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。

【0332】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含む。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含み、［Ｄ］ｘは、［－ＧＧＧＧＳ－］２である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは０である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは１である。

【0333】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含む。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは、０である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは、１である。

【0334】

いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０を含み、ｙは、４～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０を含み、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６である。いくつかの実施形態では、Ｒは、配列番号９を含み、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６である。

【0335】

いくつかの実施形態では、Ｍは、２個のアミノ酸を含む。例えば、Ｍは、ロイシン及びリジンを含み得る。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンである。別の例として、Ｍは、２個のアラニンのアミノ酸を含み得る 他の実施形態では、Ｍは、３個のアミノ酸を含む。

【0336】

いくつかの実施形態では、Ｎは、２個のアミノ酸（すなわち、ジアミノ酸）を含む。例えば、Ｎは、アスパラギン酸及びイソロイシンを含み得る。別の例として、Ｎは、２個のアラニンのアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンである。他の実施形態では、Ｎは、３個のアミノ酸を含む。

【0337】

いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンである。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含む。

【0338】

いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは含み、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0339】

いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、６である。

【0340】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－である。

【0341】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６である。

【0342】

いくつかの実施形態では、本開示は、式（ＶＢ）を有するポリペプチドであって、
［Ａ］－［Ｂ］－［Ｒ］ｑ－（［Ｅ］ｙ） （ＶＢ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
ｑが、０又は１であり、
Ｅが、２～４個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｙが、１～１６の範囲の整数であり、
ただし、ｑが、１である場合、及び［Ｅ］が、アスパラギン酸のみを含む場合、式（Ｖ）のポリペプチドは、１０～１６個の連続するアスパラギン酸残基を有するアミノ酸配列を含まないか、又はただし、式（Ｖ）のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を有しないか、若しくは配列番号１０７のヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を含まないか、又はただし、式（Ｖ）のポリペプチドは、Ｓｔｒｅｎｓｉｑ（登録商標）若しくはアスホターゼアルファではない、ポリペプチドを提供する。

【0343】

いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）のポリペプチドは、骨内のヒドロキシアパタイト結晶の形成を触媒によって可能にする能力がある。

【0344】

いくつかの実施形態では、ｙは、４～８の範囲の整数である。いくつかの実施形態では、ｙは、６である。いくつかの実施形態では、ｙは、４～８の範囲の整数であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、ｙは、６であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、ｙは、４～８の範囲の整数であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、ｙは、６であり、ｑは、１である。

【0345】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼ（「［Ｂ］」）をコードするアミノ酸は、組織非特異的アルカリホスファターゼである。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約８５％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９１％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９２％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９３％の同一性を有する。他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９４％の同一性を有する。

【0346】

なお他の実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の同一性を有する。更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の同一性を有する。一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｑは、０である。なお一層更なる実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の同一性を有し、ｑは、１である。

【0347】

いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、配列番号１１のバリアント、例えば、１つ以上のアミノ酸置換を含むバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、単一のアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換を含んでもよい。別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ｅ４３４Ｇ置換を含んでもよい。なお別の例として、配列番号１１のバリアントは、Ａ３２１Ｈ置換を含んでもよい。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、２つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。例えば、配列番号１１のバリアントは、Ｃ１０２Ｓ置換、Ｅ４３４Ｇ置換、又はＡ３２１Ｈ置換のうちのいずれか２つ、例えば、Ａ３２１Ｈ置換及びＥ４３４Ｇ置換の両方を含んでもよい。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、３つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、４つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、５つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼをコードするアミノ酸は、６つのアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントを含む。

【0348】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含む。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含み、［Ｄ］ｘは、［－ＧＧＧＧＳ－］２である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは、０である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号１２を含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは、１である。

【0349】

いくつかの実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。なお他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。なお更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。なお一層更なる実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含む。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは、０である。なお更に他の実施形態では、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸は、配列番号３３～４３のうちのいずれか１つを含み、［Ｅ］ｙは、［－ＤＳＳ－］６であり、ｑは、１である。

【0350】

いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０を含み、ｙは、４～６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１３０を含み、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６である。いくつかの実施形態では、Ｒは、配列番号９を含み、［Ｅ］ｙは、［ＤＳＳ］６である。

【0351】

いくつかの実施形態では、Ｍは、２個のアミノ酸を含む。例えば、Ｍは、ロイシン及びリジンを含み得る。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンである。別の例として、Ｍは、２個のアラニンのアミノ酸を含み得る 他の実施形態では、Ｍは、３個のアミノ酸を含む。

【0352】

いくつかの実施形態では、Ｎは、２個のアミノ酸（すなわち、ジアミノ酸）を含む。例えば、Ｎは、アスパラギン酸及びイソロイシンを含み得る。別の例として、Ｎは、２個のアラニンのアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンである。他の実施形態では、Ｎは、３個のアミノ酸を含む。

【0353】

いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンである。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含む。

【0354】

いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０のものに対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１である。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは、配列番号１３０を含み、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｍは、ロイシン－リジンであり、Ｎは、アスパラギン酸－イソロイシンであり、Ｆｃは含み、ｏ、ｐ、及びｑは、各々、１であり、［Ａ］は、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを含む。

【0355】

いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、３個のアミノ酸を含み、ｙは、６である。

【0356】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－である。他の実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｄ－Ｓ－である。

【0357】

いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１６の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１２の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、１～１０の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、４～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、アスパラギン酸であり、ｙは、１～８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｅは、－Ｄ－Ｓ－Ｓ－であり、ｙは、６である。

【0358】

式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（ＶＡ）及び（ＶＢ）（以下、「式（Ｉ）～（Ｖ）」）のうちのいずれか１つを有するポリペプチドの例
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２に対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２に対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２を含む。

【0359】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３に対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３に対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３を含む。

【0360】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４に対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４に対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４を含む。

【0361】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号５を含む。

【0362】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６に対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６に対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６を含む。

【0363】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７に対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７に対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７を含む。

【0364】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８に対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８に対して少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８に対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８を含む。

【0365】

いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを含む。

【0366】

いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９１％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９２％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９３％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９４％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列によってコードされる。

【0367】

送達プラットフォーム
本開示の別の態様では、送達プラットフォーム、例えば、非ウイルスベクター及びウイルスベクターがある。いくつかの実施形態では、非ウイルスベクターは、細菌プラスミド、ミニサークルＤＮＡ、ミニベクターＤＮＡ、直鎖ＤＮＡ、粒子、ナノ粒子などを含む。いくつかの実施形態では、非ウイルス粒子は、特に、ヘテロ小胞性（ｈｅｔｅｒｏｖｅｓｉｃｕｌａｒ）リポソーム粒子を含む、例えば、米国特許第５，４２２，１２０号、並びにＰＣＴ公開第ＷＯ９５／１３７９６号、同第ＷＯ９４／２３６９７号、及び同第ＷＯ９１／１４４４５号に開示されているものなどのリポソームを含み、それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、非ウイルスベクターは、注射、エレクトロポレーション、遺伝子銃、ソノポレーション、マグネトフェクション、流体力学的送達、又は他の物理的若しくは化学的方法を含むが、これらに限定されない、様々な方法に従って、細胞又は対象に送達されてもよい。いくつかの実施形態では、治療遺伝子は、プラスミドに直接挿入することができ、次いで、この組換えプラスミドは、様々な方式で細胞に導入することができる。例えば、それは、裸のＤＮＡとして標的化組織に直接注入され得る。非ウイルス送達ビヒクルの他の非限定的な例は、ＰＣＴ公開第ＷＯ／２００５／１２３１４２号。同第ＷＯ／２０１２／０１７１１９号、同第ＷＯ／１９９５／０２１１９５号、同第ＷＯ／２０１２／０１７１１８号、同第ＷＯ／２０１６／０１６３５８号、同第ＷＯ／２００６／１２２５４２号、及び同第ＷＯ／２０１４／０７２９２９号に記載されており、それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

【0368】

いくつかの実施形態では、送達プラットフォームは、発現のためのアルカリホスファターゼ又はそのバリアントをコードする核酸配列を含むポリペプチドなどのポリペプチドをコードするウイルス発現ベクターである。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ＡＡＶベクターなどであり得る。

【0369】

いくつかの実施形態では、発現ベクターは、レンチウイルスベクターである。レンチウイルスは、レトロウイルスのサブクラスである。レンチウイルスは、標的細胞ゲノムに安定的に組み込まれ、目的の遺伝子の持続的な発現をもたらすそれらの能力において、γ－レトロウイルス（γ－ＲＶ）に類似している。しかしながら、γレトロウイルスとは対照的に、レンチウイルスはまた、非分裂細胞を形質導入することができ、それらを遺伝子移入ベクターとして広く使用することにつながっている。いくつかの実施形態では、レンチウイルスゲノムは、５’キャップ及び３’ポリ－Ａ尾部を有する、９．７５ｋｂの単部分、直鎖、二量体、プラス鎖一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ（＋）’’）である。いくつかの実施形態では、レンチウイルスゲノムは、プロモーター／エンハンサー活性を有し、全長レンチウイルスベクター転写産物の正確な発現に不可欠である’及び３’の長い末端反復（ＬＴＲ）配列に隣接する。いくつかの実施形態では、ＬＴＲはまた、ベクターの逆転写及び標的細胞ゲノムへの組み込みにおいて重要な役割を有する。いくつかの実施形態では、ウイルスが細胞に侵入すると、ＲＮＡゲノムが二本鎖ＤＮＡに逆転写され、次いで、ウイルスインテグラーゼ酵素によってランダムな位置でゲノムに挿入される。いくつかの実施形態では、現在はプロウイルスと呼ばれる、レンチウイルスは、ゲノムに残り、分裂するときに細胞の子孫に受け継がれる。

【0370】

レンチウイルスの種の例としては、例えば、ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ－１）、ヒト免疫不全ウイルス２（ＨＩＶ－２）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、及びネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示のレンチウイルスベクターは、任意のレンチウイルス種に基づくことができる。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、ＨＩＶ－１又はＨＩＶ－２）、最も好ましくはＨＩＶ－１に基づく。

【0371】

レンチウイルスベクターは、典型的には、ベクターゲノムを含有するプラスミド並びにレンチウイルスアセンブリ及び機能に不可欠なタンパク質のみをコードするパッケージング構築物と共トランスフェクトされるパッケージング細胞におけるトランス相補性によって生成される。いくつかの実施形態では、自己不活性化（ＳＩＮ）レンチウイルスベクターは、ベクター組み込み部位に隣接して位置する細胞コード配列の異常発現の可能性を低減する、ＨＩＶ－１ ＬＴＲの内在性プロモーター／エンハンサー活性を無効にすることによって生成することができる（例えば、Ｖｉｇｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ．，２：３０８－３１６（２０００）、Ｎａｌｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７２：２６３－２６７（１９９６）、及びＭａｔｒａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，１８（３）：４７７－４９０（２０１０）を参照されたい）。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターを生成するための最も一般的な手順は、レンチウイルスベクタープラスミド並びにウイルスＧａｇ－Ｐｏｌ、Ｒｅｖ－Ｔａｔ、及びエンベロープ（Ｅｎｖ）タンパク質をコードする３つのパッケージング構築物を用いて細胞株（例えば、２９３Ｔヒト胚性腎細胞）を共トランスフェクトすることである。

【0372】

レンチウイルスベクターを生成するための方法は、当該技術分野で周知であり、本開示のレンチウイルスベクターは、任意の好適なそのような方法を使用して構築され得る。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、典型的には、いくつかの異なるプラスミド構築物を有する２９３Ｔヒト胚性腎細胞を共トランスフェクトすることによって産生され、これは、別々に、ウイルス粒子の産生、感染、及び組み込みに必要なレンチウイルスシス作用配列及びトランス作用因子を含有する。レンチウイルスベクター産生系は、典型的には、４個のプラスミドを含む。いくつかの実施形態では、移入ベクターは、ゲノムＲＮＡ産生及びパッケージングに必要なシス作用配列の全てを含有するレンチウイルス骨格内に送達される導入遺伝子を含有する。３つの追加の要素、すなわち、Ｇａｇ－Ｐｏｌ、Ｒｅｖ－Ｔａｔ、及びエンベロープタンパク質ＶＳＶＧは、それぞれ、パッケージングに必要なトランス作用因子を提供する。これら４つのプラスミドを、２９３Ｔヒト胚性腎細胞にトランスフェクトすると、上清にウイルス粒子が蓄積し、超遠心分離によりウイルス生成物を濃縮することができる。レンチウイルス産生プロトコルは、例えば、Ｔｉｓｃｏｒｎｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，１：２４１－２４５（２００６）、Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ，Ｍ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２６１：１－３０（２００２）、Ｃｒｏｎｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，５：３８７－３９８（２００５）、Ｓａｎｄｒｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２８１：１３７－１７８（２００３）、Ｚｕｆｆｅｒｅｙ，Ｒ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２６１：１０７－１２１（２００２）、Ｓｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，１２：１０８９－１０９８（２００５）、及びＳａｅｎｚ，Ｄ．Ｔ．ａｎｄ Ｐｏｅｓｃｈｌａ，Ｅ．Ｍ．，Ｊ．Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ．，６：Ｓ９５－Ｓ１０４（２００４）に更に記載されている。レンチウイルスベクターを産生するための他の方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、米国特許出願公開第２００８／０２５４００８号及び同第２０１０／０００３７４６号、並びにＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２３（２）：７３－８３（２０１２）に記載されている。

【0373】

いくつかの実施形態では、本開示は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）のポリペプチドのうちのいずれか１つ、又はそれらのバリアント若しくは断片をコードするヌクレオチド配列を含むレンチウイルスベクターを提供する。

【0374】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９１％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９２％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９３％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９４％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、配列番号１～８、４４～５４、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドは、配列番号１～８、４４～５４、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む。

【0375】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９１％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９２％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９３％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９４％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ポリペプチドをコードする核酸配列を含み、ポリペプチドをコードする核酸配列は、配列番号１０６、１０８～１１５、及び１３１のうちのいずれか１つを含む。

【0376】

いくつかの実施形態では、レンチウイルス発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルス発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも８５％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルス発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルス発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９１％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルス発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９２％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルス発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９３％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルス発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９４％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルス発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルス発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルス発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルス発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルス発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルス発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つを有する核酸配列を含む。

【0377】

プロモーター
当該技術分野で利用される任意のプロモーターを利用して、本明細書に記載の発現ベクター内の１つ又は核酸配列の発現、例えば、ポリペプチドをコードする核酸配列の発現を駆動することができる。いくつかの実施形態では、プロモーターは、哺乳動物細胞において機能的なものである。高レベルの構成的プロモーターは、本開示によるベクターでの使用に好ましい。そのようなプロモーターの例としては、限定されないが、レトロウイルスラウス肉腫ウイルス（ＲＳＮ）ＬＴＲプロモーター（任意選択でＲＳＶエンハンサーを伴う）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（任意選択でＣＭＶエンハンサーを伴う）［例えば、Ｂｏｓｈａｒｔ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ，４１：５２１－５３０（１９８５）を参照されたい］、ＳＮ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸還元酵素プロモーター、ベータ－アクチンプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＮ）最初期（ＩＥ）プロモーターに由来するエンハンサーに連結したベータ活性プロモーター、ホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、及びＥＦｌａプロモーター［Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ］が挙げられる。誘導性プロモーターは、亜鉛誘導性ヒツジメタロチオニン（ＭＴ）プロモーター、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）誘導性マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、Ｔ７ポリメラーゼプロモーター系［ＷＯ９８／１００８８］、エクジゾン昆虫プロモーター［Ｎｏ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：３３４６－３３５１（１９９６）］、テトラサイクリン抑制性系［Ｇｏｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：５５４７－５５５１（１９９２）］、テトラサイクリン誘導系［Ｇｏｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６８：１７６６－１７６９（１９９５）、Ｈａｒｖｅｙ ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ，２：５１２－５１８（１９９８）も参照されたい］、ＲＵ４８６誘導系［Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１５：２３９－２４３（１９９７）及びＷａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，４：４３２－４４１（１９９７）］、及びラパマイシン誘導系［Ｍａｇａｒｉ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１００：２８６５－２８７２（１９９７）］を含む、外部から供給された化合物によって調節される。本開示において有用であり得る他の種類の誘導性プロモーターは、特定の生理学的状態、例えば、温度、急性期、細胞の特定の分化状態によって、又は細胞のみの複製において調節されるものである。

【0378】

特定の実施形態での使用に好適な例示的なユビキタス発現制御配列には、限定されないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、ウイルス性シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、初期又は後期）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）ＬＴＲプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーター、Ｈ５、Ｐ７．５、及びワクシニアウイルス由来のＰ１１プロモーター、短い伸長因子１－アルファ（ＥＦ１α－ショート）プロモーター、長い伸長因子１－アルファ（ＥＦ１ａ－ロング）プロモーター、初期成長応答１（ＥＧＲ１）、フェリチンＨ（ＦｅｒＨ）、フェリチンＬ（ＦｅｒＬ）、グリセロアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）、真核生物翻訳開始因子４Ａ１（ＥＩＦ４Ａ１）、熱ショック７０ｋＤａタンパク質５（ＨＳＰＡ５）、熱ショックタンパク質９０ｋＤａベータ、メンバー１（ＨＳＰ９０Ｂ１）、熱ショックタンパク質７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）、β－キネシン（（３－ＫＩＮ）、ヒトＲＯＳＡ２６遺伝子座 Ｏｒｉｏｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２５，１４７７－１４８２（２００７））、ユビキチンＣプロモーター（ＵＢＣ）、ホスホグリセリン酸キナーゼ－１（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／鶏β－アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、β－アクチンプロモーター及び骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、陰性対照領域欠失、ｄ１５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）プロモーター（Ｃｈａｌｌｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．６９（２）：７４８－５５（１９９５））が含まれる。

【0379】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、例えば、Ｇｏｓｓｅｎ ａｎｄ Ｂｕｊａｒｄ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９２，８９：５５４７－５５５１）に記載されているように、ヒトＣＭＶ（ｈＣＭＶ）最初期プロモーター由来最小プロモーターなどの、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最小プロモーターから、より好ましくは、ｈＣＭＶから選択され得る。天然プロモーターの挿入及び欠失変異、並びにそれらの組み合わせ又は置換を含む、修飾プロモーターも利用されてもよい。修飾プロモーターの一例は、Ｇｏｓｓｅｎ ａｎｄ Ｂｕｊａｒｄ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９２，８９：５５４７－５５５１）に記載されている「最小ＣＭＶプロモーター」である。いずれにせよ、あらゆるプロモーターは、本明細書に記載の最小ＣＭＶプロモーターの置換によって、本明細書に記載のテトラサイクリン応答性発現系におけるその有効性について容易に試験することができる。

【0380】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＭＮＤプロモーターである。いくつかの実施形態では、ＭＮＤプロモーターは、配列番号６６のものに対して少なくとも９０％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＭＮＤプロモーターは、配列番号６６のものに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＭＮＤプロモーターは、配列番号６６のものに対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＭＮＤプロモーターは、配列番号６６のものに対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＭＮＤプロモーターは、配列番号６６のものに対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＭＮＤプロモーターは、配列番号６６のものに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＭＮＤプロモーターは、配列番号６６を含む。

【0381】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１Ａプロモーターである。いくつかの実施形態では、ＥＦ１Ａプロモーターは、配列番号６７及び１００のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＥＦ１Ａプロモーターは、配列番号６７及び１００のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＥＦ１Ａプロモーターは、配列番号６７及び１００のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＥＦ１Ａプロモーターは、配列番号６７及び１００のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＥＦ１Ａプロモーターは、配列番号６７及び１００のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＥＦ１Ａプロモーターは、配列番号６７及び１００のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＥＦ１Ａプロモーターは、配列番号６７を含む。いくつかの実施形態では、ＥＦ１Ａプロモーターは、配列番号１００を含む。

【0382】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＣＤ１１ｂタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１ｂプロモーターは、配列番号９６に対して少なくとも９０％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１ｂプロモーターは、配列番号９６に対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１ｂプロモーターは、配列番号９６に対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１ｂプロモーターは、配列番号９６に対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１ｂプロモーターは、配列番号９６に対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１ｂプロモーターは、配列番号９６に対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１１ｂプロモーターは、配列番号９６を有する。

【0383】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦＳプロモーターである。いくつかの実施形態では、ＥＦＳプロモーターは、配列番号９９に対して少なくとも９０％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＥＦＳプロモーターは、配列番号９９に対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＥＦＳプロモーターは、配列番号９９に対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＥＦＳプロモーターは、配列番号９９に対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＥＦＳプロモーターは、配列番号９９に対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＥＦＳプロモーターは、配列番号９９に対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＥＦＳプロモーターは、配列番号９９を有する。

【0384】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、Ｕｂｃプロモーターである。いくつかの実施形態では、Ｕｂｃプロモーターは、配列番号１０１に対して少なくとも９０％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｕｂｃプロモーターは、配列番号１０１に対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｕｂｃプロモーターは、配列番号１０１に対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｕｂｃプロモーターは、配列番号１０１に対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｕｂｃプロモーターは、配列番号１０１に対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｕｂｃプロモーターは、配列番号１０１に対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｕｂｃプロモーターは、配列番号１０１を有する。

【0385】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＣＤ６８ＬＰｐタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターは、配列番号１２６に対して少なくとも９０％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターは、配列番号１２６に対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターは、配列番号１２６に対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターは、配列番号１２６に対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターは、配列番号１２６に対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターは、配列番号１２６に対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターは、配列番号９９を有する。

【0386】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、組織特異的プロモーターであり、組織特異的プロモーターは、所望のポリヌクレオチド配列の細胞種類特異的、系統特異的、又は組織特異的発現を達成するために（例えば、細胞種類若しくは組織のサブセットのみ、又は特定の発達段階中にポリペプチドをコードする特定の核酸を発現するために）使用される。組織特異的プロモーターの例示的な例としては、限定されないが、Ｂ２９プロモーター（Ｂ細胞発現）、ｒｕｎｔ転写因子（ＣＢＦａ２）プロモーター（幹細胞特異的発現）、ＣＤ１４プロモーター（単球細胞発現）、ＣＤ４３プロモーター（白血球及び血小板発現）、ＣＤ４５プロモーター（造血細胞発現）、ＣＤ６８プロモーター（マクロファージ発現）、ＣＹＰ４５０ ３Ａ４プロモーター（肝細胞発現）、デスミンプロモーター（筋肉発現）、エラスターゼ１プロモーター（膵臓腺房細胞発現、エンドグリンプロモーター（内皮細胞発現）、線維芽細胞特異的タンパク質１プロモーター（ＦＳＰ１）プロモーター（線維芽細胞発現）、フィブロネクチンプロモーター（線維芽細胞発現）、ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ１（ＦＬＴ１）プロモーター（内皮細胞発現）、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター（星状膠細胞発現）、インスリンプロモーター（膵臓ベータ細胞発現）、インテグリン、アルファ２ｂ（ＩＴＧＡ２Ｂ）プロモーター（巨核球）、細胞内接着分子２（ＩＣＡＭ－２）プロモーター（内皮細胞）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ－β）プロモーター（造血細胞）、ケラチン５プロモーター（ケラチノサイト発現）、ミオグロビン（ＭＢ）プロモーター（筋肉発現）、筋肉分化１（ＭＹＯＤ１）プロモーター（筋肉発現）、ネフリンプロモーター（有足細胞発現）、骨ガンマ－カルボキシグルタミン酸タンパク質２（ＯＧ－２）プロモーター（骨芽細胞発現）、３－オキソ酸ＣｏＡトランスフェラーゼ２Ｂ（Ｏｘｃｔ２Ｂ）プロモーター、（半数体－精子細胞発現）、界面活性剤タンパク質Ｂ（ＳＰ－Ｂ）プロモーター（肺発現）、シナプシンプロモーター（ニューロン発現）、ウィスコット・アルドリッチ症候群タンパク質（ＷＡＳＰ）プロモーター（造血細胞発現）が挙げられる。

【0387】

いくつかの実施形態では、導入遺伝子についての天然プロモーターが利用される。いくつかの実施形態では、遺伝子の発現が、天然発現を模倣すべきであることが所望される場合、天然プロモーターが好ましい場合がある。いくつかの実施形態では、天然プロモーターは、遺伝子の発現が、一時的若しくは発生的に、又は組織特異的な様式で、又は特定の転写刺激に応答して調節されなければならないときに使用されてもよい。いくつかの実施形態では、エンハンサーエレメント、ポリアデニル化部位、又はコザックコンセンサス配列などの他の天然発現制御エレメントもまた、天然発現を模倣するために使用されてもよい。いくつかの実施形態では、発現される導入遺伝子産物又は他の所望の産物は、組織特異的プロモーターに作動可能に連結される。例えば、骨格筋での発現が所望される場合、筋肉中で活性なプロモーターを使用すべきである。これらには、骨格α－アクチン、ミオシン軽鎖２Ａ、ジストロフィン、筋肉クレアチンキナーゼをコードする遺伝子由来のプロモーター、及び天然に存在するプロモーターよりも高い活性を有する合成筋肉プロモーターが含まれる［Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ，１７：２４１－２４５（１９９９）を参照されたい］。組織特異的であるプロモーターの例は、とりわけ、肝臓［アルブミン、Ｍｉｙａｔａｋｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，７１：５１２４－３２（１９９７）、Ｂ型肝炎ウイルスコアプロモーター、Ｓａｎｄｉｇ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，３：１００２－９（１９９６）、及びアルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ａｒｂｕｔｈｎｏｔ ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ，７：１５０３－１４（１９９６）］、骨［オステオカルシン、Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐ．，２４：１８５－９６（１９９７）、及び骨シアロタンパク質、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．，１１：６５４－６４（１９９６）］、リンパ球［ＣＤ２、Ｈａｎｓａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６１：１０６３－８（１９９８）、免疫グロブリン重鎖、Ｔ細胞受容体鎖］、ニューロン［ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）プロモーター、Ａｎｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ，１３：５０３－１５（１９９３）、ニューロフィラメント軽鎖遺伝子、Ｐｉｃｃｉｏｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：５６１１－５（１９９１）、及びニューロン特異的ｖｇｆ遺伝子、Ｐｉｃｃｉｏｌｉ ｅｔ ａｌ，Ｎｅｕｒｏｎ １５：３７３－８４（１９９５）］について知られている。

【0388】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦ１Ａプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、式（Ｉ）～（Ｖ）のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードする。

【0389】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦ１Ａプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦ１Ａプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９１％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦ１Ａプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９２％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦ１Ａプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９３％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦ１Ａプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９４％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦ１Ａプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦ１Ａプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦ１Ａプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦ１Ａプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦ１Ａプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦ１Ａプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードする。

【0390】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＭＮＤプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、式（Ｉ）～（Ｖ）のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードする。

【0391】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＭＮＤプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＭＮＤプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９１％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＭＮＤプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９２％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＭＮＤプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９３％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＭＮＤプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９４％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＭＮＤプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＭＮＤプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＭＮＤプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＭＮＤプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＭＮＤプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＭＮＤプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードする。

【0392】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ１１ｂプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、式（Ｉ）～（Ｖ）のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードする。

【0393】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ１１ｂプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ１１ｂプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９１％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ１１ｂプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９２％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ１１ｂプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９３％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ１１ｂプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９４％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ１１ｂプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ１１ｂプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ１１ｂプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ１１ｂプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ１１ｂプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ１１ｂプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードする。

【0394】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦＳプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、式（Ｉ）～（Ｖ）のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードする。

【0395】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦＳプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦＳプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９１％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦＳプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９２％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦＳプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９３％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦＳプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９４％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦＳプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦＳプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦＳプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦＳプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦＳプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＥＦＳプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードする。

【0396】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｕｂｃプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、式（Ｉ）～（Ｖ）のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードする。

【0397】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｕｂｃプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｕｂｃプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９１％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｕｂｃプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９２％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｕｂｃプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９３％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｕｂｃプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９４％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｕｂｃプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｕｂｃプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｕｂｃプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｕｂｃプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｕｂｃプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｕｂｃプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードする。

【0398】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、式（Ｉ）～（Ｖ）のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードする。

【0399】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９１％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９２％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９３％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９４％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＤ６８ＬＰｐプロモーターに作動可能に連結された第１の核酸配列を含み、第１の核酸配列は、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するポリペプチドをコードする。

【0400】

転写は、エンハンサー配列をベクターに挿入することによって増加し得る。エンハンサーは、典型的には、ＤＮＡのシス作用エレメントであり、通常、長さは約１０～３００ｂｐであり、プロモーターに作用してその転写を増加させる。多くのエンハンサー配列は、現在、哺乳動物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、及びインスリン）及び真核細胞ウイルスから知られている。例としては、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ１００～２７０）、サイトメガロウイルス早期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。エンハンサーは、抗原特異的ポリヌクレオチド配列に５’又は３’位でベクターにスプライシングされてもよいが、好ましくは、プロモーターから５’部位に位置する。

【0401】

いくつかの実施形態では、本開示のベクターは、インスレーターエレメント、例えば、ｃＨＳインスレーターを含む。いくつかの実施形態では、インスレーターは、配列番号１２７～１２９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列決定を有する。いくつかの実施形態では、インスレーターは、配列番号１２７～１２９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有するヌクレオチド配列決定を有する。いくつかの実施形態では、インスレーターは、配列番号１２７～１２９のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列決定を有する。いくつかの実施形態では、インスレーターは、配列番号１２７～１２９のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列決定を有する。

【0402】

ウイルス粒子の産生
当該技術分野で既に知られている様々な方法のいずれかを使用して、そのゲノムがウイルスベクターゲノムのＲＮＡコピーを含む感染性レンチウイルス粒子を産生することができる。１つの方法では、ウイルスベクターゲノムを、ウイルスベクターゲノムから転写されたウイルスゲノムＲＮＡを、ウイルス粒子にパッケージングするために必要な全ての成分を含有するパッケージング細胞株に導入する。代替的に、ウイルスベクターゲノムは、目的の１つ以上の配列に加えて、ウイルス成分をコードする１つ以上の遺伝子を含み得る。しかしながら、標的細胞におけるゲノムの複製を防止するために、複製に必要な内因性ウイルス遺伝子は、通常、除去され、パッケージング細胞株内で別個に提供される。

【0403】

一般に、レンチウイルスベクター粒子は、粒子を生成するために必要な成分を含有する１つ以上のプラスミドベクターでトランスフェクトされる細胞株によって産生される。これらのレンチウイルスベクター粒子は、典型的には、複製能がない、すなわち、それらは、感染の単一のラウンドのみが可能である。ほとんどの場合、複数のプラスミドベクターを利用して、レンチウイルスベクター粒子を生成する様々な遺伝子成分を分離し、主に、そうでなければ複製能のあるウイルスを生成し得る組換え事象の機会が低下する。しかしながら、所望の場合、レンチウイルス成分の全てを有する単一のプラスミドベクターを使用することができる。複数のプラスミドベクターを使用する系の一例として、細胞株は、ＬＴＲ、シス作用パッケージング配列、及び目的の配列を含む、ウイルスベクターゲノム（すなわち、ベクターゲノムプラスミド）を含有する少なくとも１つのプラスミドでトランスフェクトされ、これらは、多くの場合、異種プロモーター、ウイルス酵素及び構造成分をコードする少なくとも１つのプラスミド（すなわち、Ｇａｇ及びＰｏｌなどの成分をコードするパッケージングプラスミド）、並びにアルボウイルスエンベロープ糖タンパク質をコードする少なくとも１つのエンベローププラスミドに作動可能に連結される。追加のプラスミドを使用して、本明細書に記載され、当該技術分野で知られているように、レトロウイルス粒子産生、例えば、Ｒｅｖ発現プラスミドを増強することができる。ウイルス粒子は、細胞膜を通って出芽し、目的の配列を含有するゲノム、及び樹状細胞を標的とするアルボウイルスエンベロープ糖タンパク質を含む、コアを含む。アルボウイルス糖タンパク質が、シンドビスウイルスＥ２糖タンパク質である場合、糖タンパク質は、参照株ＨＲと比較して、ヘパラン硫酸への結合が低下しているように操作される。

【0404】

プラスミドベクターによるパッケージング細胞のトランスフェクションは、周知の方法によって達成することができ、使用される方法は、決して限定されない。例えば、エレクトロポレーション、リポソームを含む脂質ベースの送達系、「裸の」ＤＮＡの送達、及びポリシクロデキストリン化合物を使用した送達、例えば、Ｓｃｈａｔｚｌｅｉｎ Ａ．Ｇ．（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２００１，Ｎｏｎ－Ｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｅｓ． Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ）に記載されているものを含む、いくつかの非ウイルス送達系が当該技術分野で既知である。カチオン性脂質又は塩処理法が、典型的には、利用され、例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．（１９７３，Ｖｉｒｏｌ．５２：４５６、Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．、１９７９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７６：１３７３－７６）を参照されたく、前述の各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。リン酸カルシウム沈殿法が最も頻繁に使用される。しかしながら、核マイクロインジェクション及び細菌プロトプラスト融合を含む、ベクターを細胞に導入するための他の方法も使用されてもよい。

【0405】

パッケージング細胞株は、ウイルスゲノムＲＮＡをレンチウイルスベクター粒子にパッケージングするためにトランスで必要とされる、ウイルス調節タンパク質及び構造タンパク質を含む、成分を提供する。パッケージング細胞株は、レンチウイルスタンパク質を発現し、機能的レンチウイルスベクター粒子を産生することができる任意の細胞株であってもよい。いくつかの好適なパッケージング細胞株には、２９３（ＡＴＣＣ ＣＣＬ Ｘ）、２９３Ｔ、ＨｅＬａ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、Ｄ１７（ＡＴＣＣ ＣＣＬ １８３）、ＭＤＣＫ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、ＢＨＫ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－１０）、及びＣｆ２Ｔｈ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４３０）細胞が含まれる。パッケージング細胞株は、必要なウイルスタンパク質を安定的に発現することができる。このようなパッケージング細胞株は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第６，２１８，１８１号に記載されている。代替的に、パッケージング細胞株は、ウイルスベクターゲノムとともに、１つ以上の必要なウイルスタンパク質をコードする核酸分子で一過性にトランスフェクトされ得る。得られたウイルス粒子を回収し、標的細胞を感染させるために使用する。エンベロープ糖タンパク質をコードする遺伝子は、通常、ｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ ＵＳＡ）などの発現ベクターにクローニングされる。真核細胞発現ベクターは、当該技術分野で周知であり、多数の市販の供給源から入手可能である。次いで、２９３Ｔ細胞などのパッケージング細胞を、目的の配列をコードするウイルスベクターゲノム（典型的には、抗原をコードする）、ウイルスパッキング成分をコードする少なくとも１つのプラスミド、及び標的化分子の発現のためのベクターと共トランスフェクトする。エンベロープは、パッケージング細胞の膜上に発現され、ウイルスベクターに組み込まれる。

【0406】

ポリヌクレオチドを含む組成物
本開示の別の態様は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、又はそれらのバリアント若しくは断片のうちのいずれか１つを有するポリヌクレオチドのうちの１つ以上を含む組成物に関する。例えば、組成物は、配列番号２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９１％の同一性、９２％の同一性、９３％の同一性、９４％の同一性、９５％の同一性、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性）を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、組成物は、配列番号２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含んでもよい。

【0407】

いくつかの実施形態では、組成物は、生理学的に許容される担体、賦形剤、又は安定剤を更に含む。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａを参照されたい。許容される担体、賦形剤、又は安定剤は、対象にとって無毒であるものを含むことができる。いくつかの実施形態では、組成物又は組成物の１つ以上の成分は、滅菌される。滅菌成分は、例えば、濾過によって（例えば、滅菌濾過膜によって）、又は照射によって（例えば、ガンマ照射によって）調製され得る。

【0408】

好適な組成物には、抗酸化剤、緩衝剤、及び静菌剤を含有し得る水性及び非水性等張滅菌溶液、並びに懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び防腐剤を含み得る水性及び非水性滅菌懸濁液が含まれる。組成物は、アンプル及びバイアルなどの単位用量又は複数回用量密封容器で提示することができ、使用直前に、滅菌液体担体、例えば、水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存することができる。即時溶液及び懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、及び錠剤から調製することができる。好ましくは、担体は、緩衝生理食塩水である。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、投与前にレンチウイルスベクターを損傷から保護するために製剤化された組成物の一部である。例えば、組成物は、ガラス器具、注射器、又は針などのレンチウイルスベクターを調製、保存、又は投与するために使用されるデバイス上のレンチウイルスベクターの損失を低減するように製剤化され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、レンチウイルスベクターの光感受性及び／又は温度感受性を低下させるように製剤化され得る。この目的のために、組成物は、好ましくは、例えば、上記のものなどの薬学的に許容される液体担体、並びにポリソルベート８０、Ｌ－アルギニン、ポリビニルピロリドン、トレハロース、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される安定化剤を含む。このような組成物の使用は、レンチウイルスベクターの貯蔵寿命を延ばし、その投与を容易にする。レンチウイルス含有組成物の製剤は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔ．，１０（２）：３２－４３（２０１２）、米国特許第７，５７５，９２４号、及び国際特許出願公開第２０１３／１３９３００号に更に記載されている。

【0409】

式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、及び（Ｖ）のうちのいずれか１つの１つ以上のポリペプチドを含む組成物は、それらが、局所的、経口的、静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、皮内、髄腔内、皮下、眼内、吸入を介して、又は座薬を介してなどの、様々な様式で有効である組織に対して、ヒト又は他の動物に投与されてもよい。一例では、化合物は、対象に皮下投与される。別の例では、化合物は、対象に静脈内で投与される。

【0410】

発現ベクターを含む組成物
本開示の別の態様は、１つ以上の発現ベクター、例えば、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する発現ベクターを含む組成物に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載される発現ベクター、及びそのための担体（例えば、薬学的に許容される担体）のうちの１つ以上を含む組成物を提供する。組成物は、望ましくは、担体、例えば、生理学的に（例えば、薬学的に）許容される担体、及びレンチウイルスベクターを含む、生理学的に許容される（例えば、薬学的に許容される）組成物である。任意の好適な担体を本開示の文脈内で使用することができ、そのような担体は、上記のもののいずれかを含む、当該技術分野で周知である。

【0411】

宿主細胞
本開示はまた、本明細書に記載の単離された宿主細胞を培養し、組換えポリペプチドを宿主細胞から単離することを含む、組換えポリペプチドを産生する方法に関する。培養宿主細胞からポリペプチドを単離するための技術は、発現のために選択された宿主細胞からポリペプチドを単離するときに使用されるか、又は日常的に修飾されることが知られている任意の技術であってもよく、通常、当業者には明らかであろう。好適な宿主細胞は、外因性ＤＮＡで形質転換又はトランスフェクトし、培養物中で増殖することができる細胞種類であり、細菌、真菌細胞、及び培養された高等真核細胞（多細胞生物の培養細胞を含む）、特に培養された哺乳動物細胞を含む。クローンＤＮＡ分子を操作し、外因性ＤＮＡを様々な宿主細胞に導入するための技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２００１）、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（４ｔｈ ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９９）に開示されている。例えば、本開示の組換えポリペプチドは、細菌のＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ細胞から発現され得る。

【0412】

培養哺乳動物細胞は、本開示内で使用するための組換えポリペプチドの産生に好適な宿主であり得る。哺乳動物宿主細胞へ外因性ＤＮＡを導入するための方法には、リン酸カルシウム媒介性トランスフェクション（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １４：７２５，１９７８、Ｃｏｒｓａｒｏ ａｎｄ Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：６０３，１９８１：Ｇｒａｈａｍ ａｎｄ Ｖａｎ ｄｅｒ Ｅｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ５２：４５６，１９７３）、エレクトロポレーション（Ｎｅｕｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１：８４１－８４５，１９８２）、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介性トランスフェクション（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．、上記）、及びリポソーム媒介性トランスフェクション（Ｈａｗｌｅｙ－Ｎｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｆｏｃｕｓ １５：７３，１９９３、Ｃｉｃｃａｒｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｆｏｃｕｓ １５：８０，１９９３）が含まれる。培養哺乳動物細胞における組換えポリペプチドの産生は、例えば、Ｌｅｖｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、米国特許第４，７１３，３３９号、Ｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．、米国特許第４，７８４，９５０号、Ｐａｌｍｉｔｅｒ ｅｔ ａｌ．、米国特許第４，５７９，８２１号、及びＲｉｎｇｏｌｄ、米国特許第４，６５６，１３４号に開示されている。好適な哺乳動物宿主細胞の例としては、アフリカミドリザル腎細胞（Ｖｅｒｏ；ＡＴＣＣ ＣＲＬ １５８７）、ヒト胚性腎細胞（２９３－ＨＥＫ；ＡＴＣＣ ＣＲＬ １５７３）、ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ－２１、ＢＨＫ－５７０；ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８５４４、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １０３１４）、イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ；ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ－Ｋ１；ＡＴＣＣ ＣＣＬ６１；ＣＨＯ ＤＧ４４；ＣＨＯ ＤＸＢ１１（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ，Ｕｔａｈ）も挙げられ、例えば、Ｃｈａｓｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｏｍ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎｅｔ．１２：５５５，１９８６））、ラット下垂体細胞（ＧＨ１；ＡＴＣＣ ＣＣＬ８２）、ＨｅＬａ Ｓ３細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ２．２）、ラット肝がん細胞（Ｈ－４－ＩＩ－Ｅ；ＡＴＣＣ ＣＲＬ １５４８）ＳＶ４０形質転換サル腎細胞（ＣＯＳ－１；ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５０）、及びマウス胚細胞（ＮＩＨ－３Ｔ３；ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５８）も参照されたい。追加の好適な細胞株は、当該技術分野で既知であり、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａなどの公的寄託機関から入手可能である。ＳＶ－４０又はサイトメガロウイルス由来のプロモーターなどの強い転写プロモーターを使用することができる。例えば、米国特許第４，９５６，２８８号を参照のこと。他の好適なプロモーターには、メタロチオネイン遺伝子由来のもの（米国特許第４，５７９，８２１号及び同第４，６０１，９７８号）、及びアデノウイルス主要後期プロモーターが含まれる。

【0413】

本開示はまた、発現ベクター（例えば、レンチウイルス発現ベクター）又は本明細書に記載の発現ベクターのうちのいずれか１つを含む組成物のうちのいずれか１つで形質導入された宿主細胞（又は宿主細胞の集団）を提供する。例えば、宿主細胞は、本明細書に記載の実施形態のいずれかによる発現ベクター、例えば、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する発現ベクターで形質導入され得る。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、発現ベクターで形質導入されて、本明細書に記載のポリペプチドのうちのいずれか１つ、例えば、ＳＥＱ ＩＦ ＮＯＳ：２～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９１％の同一性、９２％の同一性、９３％の同一性、９４％の同一性、９５％の同一性、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性）を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを発現する。

【0414】

いくつかの実施形態では、宿主細胞は、本開示のレンチウイルスベクターを用いて容易かつ確実に増殖することができ、合理的に速い増殖速度を有し、十分に特徴付けられた発現系を有し、容易かつ効率的に形質転換、トランスフェクト、又は形質導入することができる宿主細胞である。宿主細胞は、例えば、酵母細胞、昆虫細胞、及び哺乳動物細胞を含む、当該技術分野で既知の任意の好適な真核細胞であり得る。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞が、本開示で利用される。一実施形態では、宿主細胞は、例えば、２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－３２１６）及びＨＴ１０８０細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－１２１）を含む、レンチウイルスベクター粒子を産生するために使用されるパッケージング細胞である。

【0415】

いくつかの実施形態では、宿主細胞は、造血幹細胞、又はそれから産生されるか、若しくは派生される前駆細胞（顆粒球／好中球、リンパ球、赤血球、巨核球／血小板、及び単球／マクロファージなどの血液中の細胞；樹状細胞、クッパー細胞、ミクログリア、及び破骨細胞などのＨＳＰＣ由来の組織常在細胞を含むが、これらに限定されない）である。造血幹細胞（ＨＳＣ）は、中胚葉性血管芽細胞から発生する多能性の自己更新前駆細胞である。全ての分化した血液細胞（すなわち、骨髄球、リンパ球、赤血球、及び血小板）は、ＨＳＣから生じる。ＨＳＣは、成人骨髄、末梢血、及び臍帯血中に見出され得る。別の実施形態では、宿主細胞は、「ＣＤ３４＋」細胞とも称される、ＣＤ３４タンパク質を発現する細胞である。ＣＤ３４は、細胞表面糖タンパク質であり、細胞間接着因子として機能し、また、骨髄細胞外マトリックスへの、又は直接的に間質細胞への幹細胞の結合を媒介し得る。ＣＤ３４は、原始的な血液及び骨髄由来の前駆細胞、特に、ＨＳＣについてのマーカーである。

【0416】

いくつかの実施形態では、宿主細胞は、間葉系幹細胞である。間葉系幹細胞は、臍帯、骨髄、及び脂肪組織を含む、複数の組織に存在する多能性成体幹細胞である。間葉系幹細胞は、分裂することによって自己更新することができ、骨、軟骨、筋肉及び脂肪細胞、並びに結合組織を含む、複数の組織に分化することができる。

【0417】

いくつかの実施形態では、宿主細胞は、骨髄細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、肝細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、内皮細胞である。

【0418】

本開示の方法は、遺伝子治療アプローチ、遺伝性疾患又は後天性疾患のいずれかの治療において使用され得る。遺伝子治療の一般的なアプローチは、導入された遺伝物質によってコードされた１つ以上の遺伝子産物が細胞内で産生され、機能的活性を回復又は増強するように、核酸を細胞内に導入することを含む。遺伝子治療アプローチに関するレビューについては、Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｗ．Ｆ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：８０８－８１３、Ｍｉｌｌｅｒ，Ａ．Ｄ．（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ ３５７：４５５－４６０、Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ，Ｔ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２７５－１２８１、及びＣｏｕｒｎｏｙｅｒ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１：１９６－２０８を参照されたい）。遺伝子治療の目的で修飾され得る細胞種類には、造血幹細胞、筋芽細胞、肝細胞、リンパ球、皮膚上皮及び気道上皮が含まれる。遺伝子治療のための細胞種類、遺伝子及び方法の更なる説明については、例えば、Ｗｉｌｓｏｎ，Ｊ．Ｍ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：３０１４－３０１８、Ａｒｍｅｎｔａｎｏ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６１４１－６１４５、Ｗｏｌｆｆ，Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１４６５－１４６８、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｊ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１８０２－１８０５、Ｆｅｒｒｙ，Ｎ．ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８３７７－８３８１、Ｗｉｌｓｏｎ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２６７：９６３－９６７、Ｑｕａｎｔｉｎ，Ｂ．ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：２５８１－２５８４、Ｄａｉ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０８９２－１０８９５、ｖａｎ Ｂｅｕｓｅｃｈｅｍ，Ｖ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７６４０－７６４４、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ，Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｃｅｌｌ ６８：１４３－１５５、Ｋａｙ，Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：６４１－６４７、Ｃｒｉｓｔｉａｎｏ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２１２２－２１２６、Ｈｗｕ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：４１０４－４１１５、及びＨｅｒｚ，Ｊ．ａｎｄ Ｇｅｒａｒｄ，Ｒ．Ｄ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２８１２－２８１６を参照されたい。

【0419】

治療方法
本開示の別の態様は、低ホスファターゼ血症の治療を必要とする哺乳動物、例えば、ヒトにおいて低ホスファターゼ血症を治療する方法に関する。本開示の別の態様は、哺乳動物、例えば、ヒトにおいて低ホスファターゼ血症の症状を治療するか、緩和するか、又は予防する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、機能性アルカリホスファターゼの欠乏又は不十分な量を特徴とする骨欠損に関連する状態又は疾患の治療に関する。

【0420】

いくつかの実施形態では、方法は、（ａ）哺乳動物から造血幹細胞を採取すること、（ｂ）造血スタイン（ｓｔｅｉｎ）細胞を発現ベクター（例えば、レンチウイルス発現ベクター）又は発現ベクターを含む組成物で形質導入すること、及び（ｃ）形質導入した造血幹細胞を哺乳動物内に移植することを含む。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、及び（Ｖ）を有するポリペプチドのいずれかなどのポリペプチド、例えば、配列番号１～８、４４～５４、６８、７５、１０５、及び１１６～１２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の同一性（例えば、９１％の同一性、９２％の同一性、９３％の同一性、９４％の同一性、９５％の同一性、９６％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性）を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む。

【0421】

造血幹細胞は、例えば、Ｗｏｇｎｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ Ｍｅｄ Ｒｅｓ．，３４（６）：４６１－７５（２００３）、Ｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，５０６：１３－２１（２００９）、Ｗｅｉｓｓｍａｎ ａｎｄ Ｓｈｉｚｕｒｕ，Ｂｌｏｏｄ，１１２（９）：３５４３－３５５３（２００８）、Ｆｒｉｓｃｈ ａｎｄ Ｃａｌｖｉ，Ｓｋｅｌｅｔａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｒｅｐａｉｒ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１１３０：３１５－３２４（２０１４）、及び米国特許第８，３８３，４０４号に記載されているものなどの、当該技術分野で既知の方法を使用して、哺乳動物（例えば、ヒト）の骨髄、末梢血、又は臍帯血から採取され得る。例えば、ＨＳＣは、針及び注射器を使用して、腸骨稜で骨盤から採取され得る。代替的に、ＨＳＣは、細胞が骨髄から出て、血管内を循環するように誘導する、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）などのサイトカインを、哺乳動物（又は同種異系ドナー）に注射することによって循環末梢血から単離することができる。

【0422】

いくつかの実施形態では、採取されたＨＳＣは、「自己」又は「同種異系」であり得る。いくつかの実施形態では、自己ＨＳＣは、哺乳動物から除去され、保存され（及び任意選択で修飾され）、同じ哺乳動物に戻される。いくつかの実施形態では、同種異系ＨＳＣは、哺乳動物から除去され、保存され（及び任意選択で修飾され）、遺伝的に類似しているが、同一ではないレシピエントに移植される。いくつかの実施形態では、細胞は、哺乳動物に対して自己性である。

【0423】

本開示の発現ベクターを含む発現ベクター又は組成物は、「トランスフェクション」、「形質転換」、又は「形質導入」によって造血細胞に導入され得る。本明細書で使用される場合、「トランスフェクション」、「形質転換」、又は「形質導入」という用語は、物理的又は化学的方法を使用することによって、１つ以上の外因性ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入することを指す。多くのトランスフェクション技術は、当該技術分野で既知であり、例えば、リン酸カルシウムＤＮＡ共沈（例えば、Ｍｕｒｒａｙ Ｅ．Ｊ．（ｅｄ．），Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（１９９１）を参照されたい）、ＤＥＡＥ－デキストラン、エレクトロポレーション、カチオン性リポソーム媒介性トランスフェクション、タングステン粒子促進微粒子衝突（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３４６：７７６－７７７（１９９０））、及びリン酸ストロンチウムＤＮＡ共沈（Ｂｒａｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，７：２０３１－２０３４（１９８７））が含まれる。レンチウイルスベクターは、典型的には、好適なパッケージング細胞内での感染性粒子の増殖後に宿主細胞に導入される。

【0424】

ＨＳＣは、最終的な適用に応じて、エクスビボ、インビボ、又はインビトロで発現ベクターを用いて形質導入され得る。いくつかの実施形態では、ＨＳＣは、発現ベクター又は発現ベクターを含む組成物を用いてインビトロで形質導入され、続いて、形質導入された幹細胞を哺乳動物に注入する。この実施形態では、ヒト幹細胞は、当該技術分野で周知の方法を使用してヒト患者から除去され、上記のように形質導入され得る。いくつかの実施形態では、形質導入されたＨＳＣは、次いで、同じ（自己）又は異なる哺乳動物（同種異系）に再導入される。いくつかの実施形態では、ＨＳＣは、エクスビボで形質導入される。

【0425】

いくつかの実施形態では、本開示の方法は、ＨＳＣを、それを必要とする哺乳動物に移植することを含む。造血後部（ｓｔｅｒｎ）細胞移植（ＨＳＣＴ）は、造血系の特定の先天性若しくは後天性障害を有する、又は化学感受性、放射線感受性、若しくは免疫感受性の悪性腫瘍を有する多くの患者にとっての標準治療となっている（例えば、Ｇｒａｔｗｏｈｌ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ，３０３（１６）：１６１７－１６２４（２０１０）、及びＣｏｐｅｌａｎ，Ｅ．Ａ．，ＮＥＪＭ，３５４：１８１３－１８２６（２００６）を参照されたい）。幹細胞を対象から単離し、それらを治療遺伝子（例えば、抗鎌状ヒトβ－グロビン遺伝子）で形質導入し、修飾幹細胞を対象に戻す方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｐａｗｌｉｕｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９４（５５５０）：２３６８－２３７１ （２００１）、Ｔｙｎｄａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，２４（７）：７２９－３４（１９９９）、及びＢｕｒｔ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ，２９９（８）：９２５－３６（２００８）を参照されたい）。ＨＳＣを、それを必要とする対象に移植するための、本明細書に記載の方法で使用することができる他の方法には、例えば、骨髄移植又は末梢血後部細胞移植のために使用される方法が含まれる。

【0426】

いくつかの実施形態では、造血幹細胞は、それを必要とする哺乳動物に、レンチウイルスベクター及びそのための担体（例えば、薬学的に許容される担体）を含む前述の組成物を直接注入することによって、インビボで、発現ベクターで形質導入することができる。いくつかの実施形態では、発現ベクターを含む組成物は、標準的な投与技法（例えば、非経口投与）を使用して哺乳動物に投与することができる。本明細書で使用される場合、「非経口」という用語には、静脈内、筋肉内、皮下、直腸、膣、及び腹腔内投与が含まれる。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内、腹腔内、又は皮下注射によって末梢全身送達を使用して哺乳動物に投与される。

【0427】

いくつかの実施形態では、本開示の方法は、哺乳動物における低ホスファターゼ血症の治療を提供する。本明細書で使用される場合、「治療」、「治療すること」などの用語は、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることを指す。いくつかの実施形態では、効果は治療的であり、すなわち、効果は、疾患及び／又は疾患に起因する有害症状を部分的又は完全に治癒する。いくつかの実施形態では、形質導入されたＨＳＣ又は発現ベクターを含む組成物の「治療有効量」が、その治療を必要とする対象に投与される。「治療有効量」とは、所望の治療結果を達成するのに必要な用量及び期間で有効な量を指す。

【0428】

いくつかの実施形態では、治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発する、形質導入されたＨＳＣ及びコードされたタンパク質又はそれらのバリアントの能力などの要因に応じて変化し得る。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の形質導入されたＨＳＣの治療有効量は、ヒトにおいて低ホスファターゼ血症を改善又は逆転させるレベルで、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、若しくは（Ｖ）のうちのいずれか１つを有するポリペプチド、又はそれらのバリアント若しくは断片の発現をもたらす量である。

【0429】

インビトロ法又はインビボ法のいずれかによって、造血幹細胞に送達されるレンチウイルスベクターの用量は、典型的には、例えば、１～１００の範囲の感染の多重度（ＭＯＩ）（例えば、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００ＭＯＩ、又は前述の値のうちのいずれか２つによって定義される範囲）であり得るが、この例示的な範囲を下回る又は上回る用量も、本開示の範囲内である。

【0430】

いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクター粒子は、１×１０６ＴＵ、２×１０６ＴＵ、３×１０６ＴＵ、４×１０６ＴＵ、５×１０６ＴＵ、６×１０６ＴＵ、７×１０６ＴＵ、８×１０６ＴＵ、９×１０６、１×１０７ＴＵ、２×１０７ＴＵ、３×１０７ＴＵ、４×１０７ＴＵ、５×１０７ＴＵ、６×１０７ＴＵ、７’１０７ＴＵ、８×１０７ＴＵ、９×１０７ＴＵ、１×１０８ＴＵ、２×１０８ＴＵ、３×１０８ＴＵ、４×１０８ＴＵ、５×１０８ＴＵ、６×１０８ＴＵ、７×１０８ＴＵ、８×１０８ＴＵ、９×１０８ＴＵ、又は１×１０９ＴＵの用量にある。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクター粒子は、１×１０６ＴＵ～５×１０６ＴＵ、５×１０６ＴＵ～１×１０７ＴＵ、１×１０７ＴＵ～５×１０７ＴＵ、５×１０７ＴＵ～１×１０８ＴＵ、１×１０８ＴＵ～５×１０８ＴＵ、又は５×１０８ＴＵ～１×１０９ＴＵの用量にある。

【0431】

いくつかの実施形態では、薬理学的及び／又は生理学的効果は、予防的であってもよく、すなわち、効果は、疾患又はその症状を完全に又は部分的に予防する。これに関して、本開示は、形質導入されたＨＳＣ又は本明細書に記載の発現ベクターのうちの１つ以上を含む組成物の「予防的有効量」を投与することを含む、治療方法を提供する。「予防的有効量」とは、所望の予防的結果（例えば、疾患の発症の予防）を達成するのに必要な用量及び期間で有効な量を指す。

【0432】

治療又は予防の有効性は、治療された患者の定期的な評価によって監視することができる。数日以上にわたる繰り返し投与の場合、状態に応じて、疾患症状の所望の抑制が生じるまで治療を繰り返すことができる。いくつかの実施形態では、所望の用量は、組成物の単回ボーラス投与によって、又は組成物の複数回ボーラス投与によって送達され得る。

【0433】

いくつかの実施形態では、形質導入されたＨＳＣ又は本明細書に記載の発現ベクターのうちの１つ以上を含む組成物は、哺乳動物に単独で、又は他の薬物と組み合わせて（例えば、アジュバントとして）提供されてもよい。例えば、形質導入されたＨＳＣ又は発現ベクターを含む組成物は、低ホスファターゼ血症の治療又は予防のために、他の薬剤と組み合わせて投与され得る。例えば、形質導入されたＨＳＣは、治療を必要とする対象に提供されてもよく、対象は、Ａｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃから入手可能な組換えアルカリホスファターゼ、例えば、アスホターゼアルファで同時に治療されている。代替的に、形質導入されたＨＳＣは、治療を必要とする対象に提供されてもよく、対象は、組換えアルカリホスファターゼで以前に治療されていたか、又はＡｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃから入手可能なアルカリホスファターゼ、例えば、アスホターゼアルファで将来的に治療されるであろう。

【0434】

代替的に、形質導入されたＨＳＣは、ＨＳＣ移植と関連する１つ以上の合併症を軽減又は予防する他の薬剤と組み合わせて投与されてもよい。このような合併症には、例えば、感染症、敗血症、粘膜炎、及び移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）が含まれる。これに関して、形質導入されたＨＳＣは、抗ウイルス剤、抗凝固剤（例えば、デフィブロチド）、ウルソデオキシコール酸、及び／又はコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）．ｓｏｍｅと組み合わせて使用することができる

【0435】

特定の実施形態では、患者は、約１×１０⁵細胞／ｋｇ、約５×１０⁵細胞／ｋｇ、約１×１０⁶細胞／ｋｇ、約２×１０⁶細胞／ｋｇ、約３×１０⁶細胞／ｋｇ、約４×１０⁶細胞／ｋｇ、約５×１０⁶細胞／ｋｇ、約６×１０⁶細胞／ｋｇ、約７×１０⁶細胞／ｋｇ、約８×１０⁶細胞／ｋｇ、約９×１０⁶細胞／ｋｇ、約１×１０⁷細胞／ｋｇ、約５×１０⁷細胞／ｋｇ、約１×１０⁸細胞／ｋｇ、又はそれ超の形質導入された造血幹細胞の用量を、１回の静脈内用量で受ける。ある特定の実施形態では、患者は、約１×１０⁵細胞／ｋｇ～約１×１０⁸細胞／ｋｇ、約１×１０⁶細胞／ｋｇ～約１×１０⁸細胞／ｋｇ、約１×１０⁶細胞／ｋｇ～約９×１０⁶細胞／ｋｇ、約２×１０⁶細胞／ｋｇ～約８×１０⁶細胞／ｋｇ、約２×１０⁶細胞／ｋｇ～約８×１０⁶細胞／ｋｇ、約２×１０⁶細胞／ｋｇ～約５×１０⁶細胞／ｋｇ、約３×１０⁶細胞／ｋｇ～約５×１０⁶細胞／ｋｇ、約３×１０⁶細胞／ｋｇ～約４×１０⁸細胞／ｋｇの形質導入された造血幹細胞の用量、又はいずれかの中間用量の細胞／ｋｇを受ける。

【0436】

形質導入された細胞は、当該技術分野における既存の方法を使用して、拡大のためにサイトカインで刺激され得る。様々な実施形態では、対象は、治療を維持又は増加させるために必要に応じて、数日、数ヶ月、又は数年にわたって１、２、３、４、５回以上の用量を投与される。

【実施例】

【0437】

実施例１－配列番号５を有するポリペプチドについての細胞石灰化阻害／救出実験
細胞培養－これらの実験には、インビボでの骨と同様に、細胞外マトリックス産生及び組み立てと関連する堅牢な石灰化を示すため、マウスの頭蓋冠前骨芽細胞ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細胞（サブクローン１４）を使用した。他の多くの骨芽細胞培養システムは、細胞外マトリックスを適切に精緻化及び組み立てることなく、ジストロフィー的に石灰化する。

【0438】

培養物を維持し、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１％のペニシリン－ストレプトマイシン、及び２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）を補充した最小必須培地（ＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ）中で、３７℃、５％のＣＯ₂の加湿雰囲気中で培養した。細胞を１ｃｍ²当たり５０，０００個の細胞でプレーティングし、接着の２４時間後（０日目）、コラーゲン分泌及び集合を促進するために５０μｇ／ｍｌのアスコルビン酸（ＡＡ）（Ｓｉｇｍａ）、及び有機リン酸塩源を提供する際の石灰化を促進するために１０ｍＭのβ－グリセロホスフェート（βＧＰ）（Ｓｉｇｍａ）を添加することによって、成熟骨芽細胞への分化を誘導した。分化培地を４８時間ごとに交換した。

【0439】

細胞増殖（ＭＴＴ）－生存細胞へのＭＴＴ（３－（４，５－ジメチル－２－チアゾリル）－２，５－ジフェニル－２Ｈ－テトラゾリウムブロミド）（Ｓｉｇｍａ）の取り込みを分析することによって、配列番号５を有する様々な濃度のポリペプチドの存在下で細胞増殖及び生存能を試験した。簡潔に述べると、９６ウェルプレート中のプレーティングした細胞を、０．２５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ溶液で、３７℃で３時間インキュベートした。インキュベーション後、沈殿物をＤＭＳＯ中に溶解した。マイクロプレートリーダーで５６２ｎｍの波長を使用して分光光度測定を行った。

【0440】

ＭＴＴアッセイによって測定したように、最高濃度（１０Ｕ／ｍｌ）であっても、配列番号５を有するポリペプチドの細胞に対する毒性作用はなかった。

【0441】

潜在的な石灰化阻害／救出を記録するために、細胞培養を、分化培地（ＡＡ及びβＧＰを含む）中で開始した。４日目に、配列番号５を有する様々な濃度のポリペプチド、すなわち、０．１、０．３、及び１．０単位／ｍｌを、培養期間（１０日間）の残りの間、２．５μＭの濃度で石灰化阻害剤ピロリン酸ナトリウム四塩基性（ＰＰｉ）を含む、又は含まない培養培地に対して試験した（図１０を参照されたい）

【0442】

ミネラルは、１０日目に、ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色によって可視化した。細胞を、９５％エタノールで、３７℃で１０分間固定した。ｄ．Ｈ２Ｏで細胞を水和させた後、細胞を、５％硝酸銀溶液（Ｓｉｇｍａ）で、３７℃で１時間インキュベートした。細胞を、明るい光に曝露したｄ．Ｈ２Ｏで、室温で１時間洗浄した。

【0443】

細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に沈着した不溶性カルシウムを、最初に４℃で１時間、０．５ＭのＨＣｌ中に穏やかに振盪しながら溶解した。上清中のカルシウム濃度を、１０日目にカルシウムアッセイキット（Ｓｅｋｉｓｕｉ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して比色分析により（波長５９５ｎｍ）決定した（図１１を参照されたい）。

【0444】

配列番号５を有するポリペプチドは、最も低い濃度（０．１Ｕ／ｍｌ）であっても、細胞石灰化のＰＰｉ誘導阻害を救出した。１．０Ｕ／ｍＬで最大の効果を示す、沈着したカルシウム濃度に対する用量範囲効果。

【0445】

コラーゲンマトリックス沈着を、ピクロシリウスレッド染色（Ｄｉｒｅｃｔ Ｒｅｄ ８０、Ｓｉｇｍａ）によって定量化し、続いて、０．１ＮのＮａＯＨ（Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して染料を溶解した。ラット尾部からのコラーゲン１型（Ｓｉｇｍａ）を、標準曲線を生成するための標準物として使用した。５６２ｎｍの波長を使用して分光光度測定を行った。

【0446】

実施例２－配列番号２及び５を有するポリペプチドについてのインビトロでのヒドロキシアパタイト結合アッセイ
配列番号２を有するタグ付けされていないポリペプチド及び配列番号５を有するタグ付けされたポリペプチドを、以下のようにプルダウンアッセイ（ミネラルによる上清枯渇）に供した。ヒドロキシアパタイト結晶溶液（Ｂｅｒｋｅｌｅｙ、５μＭ）（ＨＡ）を、２０ｍＭのトリス（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ中で調製し、穏やかに撹拌しながら室温で一晩平衡化させた。翌日、配列番号２を有するタグ付けされていないポリペプチド、及び配列番号５を有するタグ付けされたポリペプチドを、０．３ｍｇのＨＡとともに、又はそれを含まずに、異なる濃度である０．５、１．０、５．０、１０．０、及び１５．０μｇ／ｍｌでインキュベートし、シェーカー上で、室温で１時間結合させた。チューブを、１０，０００×ｇで５分間スピンダウンさせ、上清を使用して、各試料についてのアルカリホスファターゼレベルを測定した。標準的な比色法では、アルカリホスファターゼを標準物（Ｓｉｇｍａ）として使用し、ｐ－ニトロフェニルホスフェート（Ｓｉｇｍａ）をホスファターゼ基質として使用し、アルカリホスファターゼにより脱リン酸化すると黄色に変わり、４０５ｎｍの波長で測定した。図１２の結果は、配列番号５を有するタグ付けされたポリペプチドが、そのタグ付けされていない対応物よりも強い優先的な結合を示す。

【0447】

実施例３－配列番号１９及び５５を有するＤＮＡ構築物についての分泌ＴＮＡＬＰ活性）
細胞培養－２９３Ｔ細胞を維持し、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ）、１％のペニシリン－ストレプトマイシン、及び２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）を補充したダルベッコ最小必須培地（ＤＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ）中で、３７℃、５％のＣＯ₂の加湿雰囲気中で培養した。トランスフェクションの前日に、４ｅ６の２９３Ｔ細胞を、５０ｍｍの細胞培養皿にプレーティングした。

【0448】

リン酸カルシウムによるトランスフェクション－リン酸カルシウムキット（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ）を使用して、配列番号１９、２５及び５５を有するＤＮＡ構築物を、培養した２９３細胞に導入した。異なる構築物由来の０．５μｇのプラスミドＤＮＡを２Ｍのカルシウム溶液と混合した後、それを、同じ体積のＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（ＨＢＳ）とともにボルテックスした。１０分間インキュベートした後、トランスフェクション溶液を細胞培養物に加えた。

【0449】

分泌ＴＮＡＬＰ活性アッセイ－トランスフェクトされた２９３細胞からの１～１０ｕＬの上清を取り出し、９６ウェルプレートに入れた。標準的な比色法では、アルカリホスファターゼを標準物（Ａｂｃａｍ）として使用し、ｐ－ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）（Ａｂｃａｍ）をホスファターゼ基質として使用し、アルカリホスファターゼにより脱リン酸化すると黄色に変わり、マイクロプレートリーダーで、３７℃で２０分間、４０５ｎｍの波長で測定した。試験試料中のＴＮＡＬＰ活性（Ｕ／Ｌ）は、ｐＨ９．６及び２５℃（グリシン緩衝液）での１分当たり１マイクロモルのｐＮＰＰの加水分解に基づいて計算した。

【0450】

配列番号１９を有するＥＦ１ａ－プロモーター駆動型ＴＮＡＬＰ ＤＮＡ構築物、及び配列番号５５を有するＩｇＧ２Ｈ分泌シグナルペプチドを有するＥＦ１ａプロモーター駆動型ＴＮＡＬＰ ＤＮＡ構築物を、２９３ｔ細胞にトランスフェクトした後、細胞培養物の上清を、分泌ＴＮＡＬＰアッセイに供した。図１３の結果は、ＩｇＧ２Ｈの分泌シグナルペプチドを有する構築物が、ＥＦ１ａプロモーター及びＭＮＤプロモーターを有する元の分泌シグナルペプチドを有する２つの構築物と比較して、６倍を超える分泌ＴＮＡＬＰ活性を有することを示す。

【0451】

実施例４－薬物動態研究
導入
本研究の目的は、ＣＤ１マウスへの単回静脈内注射後に、組織非特異的アルカリホスファターゼ（配列番号１～８に対応するＲＭＰ－００１～ＲＭＰ－００８）の８つの可溶性組換え型（又は構築物）のプロファイルを決定し、比較することであった。構築物は、潜在的な新規遺伝子治療として、組換えレンチウイルスベクターを、低ホスファターゼ血症（ＨＰＰ）患者に注射した後、形質導入細胞によって分泌されることを意味する。それらの治療活性を達成するために、構築物は、十分な全身的安全性プロファイルを維持しながら、形質導入細胞から分泌され、標的組織有効性と適合するレベルで骨及び様々な他の臓器に分配されなければならない。全身曝露及び骨分布は、周産期／幼児及び若年期発症ＨＰＰの治療のために現在承認されている酵素補充療法であるアスホターゼアルファの皮下注射を反復した後に見出されるものと同様であるはずであると仮定されている。したがって、この薬物動態研究で確立されるべき重要なパラメータは、構築物の各々の全身曝露（曲線下面積によって測定される）及び半減期であり、両方のパラメータは、それらのアスホターゼアルファと比較される。迅速に除去されるあらゆる構築物は、将来の開発計画から不適格とみなされる。したがって、この薬物動態研究は、第１のスクリーニングステップとして機能し、その後、化合物の各々について、ボンヌ（ｂｏｎｎｅ）組織への侵入に対する有効性が評価される生体内分布研究が続くべきである。

【0452】

研究計画
試験項目及び対照項目は、以下の表に記載されているように、ゆっくりとしたボーラス静脈内注射（３０～６０秒以上）によって単発でマウス群に投与されることが計画された。

【表1】

【0453】

一連の血液試料を、投与量に対して以下の時点で採取した：５、１５、及び３０分、並びに２、１２、２４、４８、及び７２時間（投与後）。血清を採取し、ＡＬＰ濃度及びその後の薬物動態パラメータの計算について分析した。血液試料の採取後、各動物を安楽死させ、更なる検査なしに廃棄した。

【0454】

用量レベルは、低ホスファターゼ血症マウスモデルにおいて骨欠損を予防するために良好な耐容性であり、完全に有効であることが以前に示された１日用量に近かったため、選択した（Ｍｉｌｌａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒａｌ Ｒｅｓ．２００８，２３：７７７－７８７．）。

【0455】

以前の薬物動態研究では、雄のＣＤ－１マウスにおける１０ｍｇ／ｋｇの用量でのＲＭＰ－００１の単回静脈内投与が、良好な耐容性であり、明白な毒性の徴候をもたらさなかった。この研究では、最も高い血清アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）濃度は、投与後５分で一般に注目されるであろう。

【0456】

試験項目情報
試験項目及び対照項目の特徴付け

【数1】

【0457】

試験項目フォームは、使用又は希釈の準備ができており、２つのバッチで受け取られた事前製剤化溶液として提供された。

【表2】

【0458】

投与日に、試験項目の第１のバッチを冷凍庫から取り出し、室温で解凍し、試験項目の第２のバッチを希釈又は使用のために保存（２～８℃）から取り出した。対照項目を保存（２～８℃）から取り出し、適切な試験項目の希釈のために使用した。

【0459】

保存からの完全な解凍又は取り出しの後：
試験項目３は、群４の動物の投与のために２ｍｇ／ｍＬの濃度で与えられたように使用した。

【0460】

試験項目１、２、４、５、６、７、及び８は、適切な体積の対照項目（ＰＢＳ）を加えることによって希釈し、各投与群について２ｍｇ／ｍＬの最終濃度に達した。

【0461】

使用していない残りの試験項目は、２～８℃で冷蔵保存した。

【0462】

群２～９を対象とする投与製剤を、完全な解凍及び／又は希釈後３～４時間以内に投与した。

【0463】

試験項目製剤の分析
達成濃度の分析
製剤中の試験項目の濃度（２ｍｇ／ｍＬに希釈）を検証するために、１日目の投与を対象とした各濃度の中央から代表的な試料（２連で０．５ｍＬを採取した（希釈がなかったため、群３の製剤を除く）。

【0464】

不十分な体積のため、受け取った未希釈の試験項目の第２のバッチ（ＲＭＰ－００１、ＲＭＰ－００２、ＲＭＰ－００３、ＲＭＰ－００４、ＲＭＰ－００５、ＲＭＰ－００６、ＲＭＰ－００７、ＲＭＰ－００８）（それぞれ、配列番号１～８に対応する）は、分析しなかった。

【0465】

試料を、ＩＴＲ免疫学部門に移送するまで凍結保存（≦－６０℃）した。製剤試料の分析は、分析的ＵＶ Ａ２８０法を使用してＩＴＲによって実施した。

【0466】

以下の表に示すように、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法によって測定した元のＲＭＰ－００２、ＲＭＰ－００３、ＲＭＰ－００４、ＲＭＰ－００５、ＲＭＰ－００６、ＲＭＰ－００７及びＲＭＰ－００８の濃度は、ＵＶ吸光度によって測定した濃度より平均してほぼ２倍高かった。

【表3】

【0467】

全ての試験物質の酵素活性を、臨床試料に使用したものと同じ条件を使用して、Ｈｉｔａｃｈｉ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ ｃ３１１で測定した。活性は、国際単位（ＩＵ）で測定される。ＵＶ吸光度を測定することによって得られた濃度に基づいて、次いで、ＩＵ／ｍｇで比活性を計算した。結果を以下の表４に示す。

【表4】

【0468】

均質性の分析
受け取った２つのＲＭＰ－００１試料を、プロテイン－Ａ捕捉、続いて、分取サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって粗ＣＨＯ上清培養物から精製し、ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって天然条件で分析した。それらは、凝集体からの汚染を伴わずに、９８％超の純度であることが示された。ＲＭＰ－００２～ＲＭＰ－００８試験項目は、Ｃ末端にＨｉｓタグ伸長を含有し、これにより、ＵＣＬＡコアラボによるＮｉ－セファロースカラム上での精製が可能になった。それらを、還元条件及び非還元条件におけるＳＤＳ－ＰＡＧＥ条件によって分析したが、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析に提出しなかった。ＳＤＳ－ＰＡＧＥについての条件は、粗製の使用済み培養上清に存在するあらゆる凝集体の可溶化をもたらした可能性があるため、ＵＣＬＡコアラボから受け取った試験項目が凝集体によって汚染されている可能性があるかどうかは現在のところ不明である。組換え可溶性組織非特異的ＡＬＰが、凝集体を形成する傾向を有することは、実際に知られている。

【0469】

安定性の分析
投与期間をカバーするのに十分な室温安定性を含む、研究における使用及び／又は保存条件下での製剤の安定性、並びに研究で使用される濃度は、この種の酵素に関する以前の経験から推定された。安定性試験へのより厳格なアプローチは、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ又はネフェロメトリーなどの技術を使用して、全ての試験項目の比活性及び天然条件における凝集体又は断片の存在を定期的に測定することによって実施されるべきであった。

【0470】

試験項目及び対照項目の投与
試験項目及び対照項目は、注射器に取り付けられた皮下注射針を用いて、ゆっくりとしたボーラス静脈内注射（３０～６０秒以上）によって尾静脈に１回投与した。各投与群についての用量体積は、対照を含めて２．５ｍＬ／ｋｇであった。各マウスに投与された実際の体積を計算し、各動物の最新の実用的な体重に基づいて調整した。

【0471】

群２～９についての投与製剤を、完全な解凍及び／又は希釈後３～４時間以内に、全てのそれぞれの動物に投与した。

【0472】

各投与後の残りの試験項目及び対照項目製剤は廃棄した。

【0473】

生存中の観察
臨床観察
全ての動物について、ケージ側の臨床徴候（健康障害、行動変化など）を、詳細な臨床検査（ＤＣＥ）日を除き、研究の全ての段階中、少なくとも１日１回記録し、ケージ側の臨床徴候は、ＤＣＥに置き換えられた。

【0474】

各マウスのＤＣＥを、健康状態評価の一環として到着時に、及び－１日目に１回実施した。

【0475】

体重
体重は、健康状態セクションごとに全ての動物について記録し、その後、群の割り当ての前に少なくとも１回記録した。また、－１日目に全ての動物についての体重も記録した。

【0476】

薬物動態
試料採取、処理及び生物分析
一連の血液試料（約０．５ｍＬ）を、以下の表５に示されるように、投与後１日目に３匹のマウス／時点から採取した（群１を除き、血液試料を１つの時点で採取した）。

【表5】

【0477】

この目的のために、各動物をイソフルランで麻酔して、血液試料の採取を可能にし、心臓穿刺により出血させた。

【0478】

最後の血液サンプリングの後、各動物を瀉血によって安楽死させ、更に検査することなく廃棄した。

【0479】

採取後、血清用の血液試料を室温で約３０分間放置して凝固させ、次いで試料を遠心分離し（約４℃で１０分間２５００ｒｐｍ）、得られた血清を回収し、適切にラベル付けされたチューブに凍結（≦－６０℃）保存した。血清試料を、ＩＴＲ研究番号５２０８６で認定されたアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）酵素アッセイを使用して、ＩＴＲで分析した。

【0480】

この研究では、薬物動態の時点の逸脱は認められなかった。採血の場所を生データに記載した。

【0481】

較正範囲に好適な濃度での生体マトリックス中の試験項目の安定性は、生体分析報告書で確認すべきである。これには、試料採取から試料分析の完了までの期間、及び研究で使用される保存条件が含まれるべきである。

【0482】

ノンコンパートメント分析
薬物動態パラメータをＩＴＲで計算した。

【0483】

１日目に得られた血清データセットにおけるＡＬＰ濃度のノンコンパートメント分析は、Ｐｈｏｅｎｉｘ（登録商標）ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）ソフトウェアを使用することによって実施した。

【0484】

以下の構成を、デフォルトによる分析に使用した。
サンプリング方法：スパース
ＡＵＣの計算方法：線形補間を用いた線形台形。
ラムダＺ（λｚ）法：λｚ、対数回帰に最適に適合
重み付け（λｚ計算）：均一

【0485】

薬物動態パラメータ（各パラメータについての略語及び説明を含む）は、以下の表に記載されている。

【数2】

【0486】

結果
投与製剤分析
対照（群１）製剤から採取した試料のいずれにおいても、ＡＬＰは検出されなかった。

【0487】

不十分な体積のために、４群－ＲＭＰ－００３から投与製剤試料を採取しなかった。

【0488】

群２－ＲＭＰ－００１（２ｍｇ／ｍＬ）から採取した投与製剤試料の分析では、ＡＬＰ濃度が公称濃度の９３．７％であることが判定され、したがって、（公称濃度の９０～１１０％という許容された基準内で）研究での使用が許容されると考えられた。

【0489】

群３～７－ＲＭＰ－００２ ＲＭＰ－００４、ＲＭＰ－００５、ＲＭＰ－００６、ＲＭＰ－００７、及びＲＭＰ－００８－（全て２ｍｇ／ｍＬ）から採取した投与製剤試料の分析では、ＡＬＰ濃度は、公称濃度の４４．３～５９．８％の範囲であり、予想外に公称濃度の９０～１１０％という許容された基準を下回っていることが判定された）。

【0490】

関連する生データのレビューでは、これらの予想外の結果及び血清ＡＬＰ濃度は、ＵＣＬＡコアラボでのＲＭＰ－００２～ＲＭＰ－００８の濃度の初期推定と、ＩＴＲでのＵＶ吸光度読み取りによって測定された試験物質の濃度との間の不一致によるものであることが示された。したがって、動物に、以下の表６に要約されるような様々な用量の試験項目を投与した。ＵＶ吸光度測定のために十分な物質が残っていなかったため、ＲＭＰ－００３についての実際の用量は、確立することができなかった。

【表6】

【0491】

死亡率
この研究の過程中、死亡はなかった。

【0492】

臨床徴候
５ｍｇ／ｋｇの公称用量レベルでの８つの試験項目の形態の静脈内投与に起因する可能性のある臨床徴候はなかった。

【0493】

体重
一般的な健康状態評価のために治療前の期間中及び用量体積の計算のために－１日目に体重を記録した。治療前の期間中に記録された体重は、正常な生物学的範囲内であり、動物が研究を通して使用するのに好適であることを示唆した。

【0494】

ＰＫ曲線
投与後７２時間にわたる８つの試験項目全ての濃度の変化に関連する曲線を図１４に示す。

【0495】

各時点及び各試験項目についての値は、各試験項目の比活性に対して補正された実際の濃度を表す。それらは、以下のように計算した。各血液試料中の活性の決定によって生成された生データ（Ｖｍａｘとして表される）を、まず、比活性が知られている参照標準ＲＭＰ－００１＊（３１５．３ＩＵ／ｍｇ）について得られた較正曲線（Ｖｍａｘ対濃度）を使用して、濃度（μｇ／ｍＬ）に変換した。次に、各濃度値を、各試験項目についてＲＭＰ－００１＊／ＲＭＰ－００Ｘ比を使用して、比活性について補正した（表４を参照されたい）。結果は、ＰＫ曲線のほとんど（ＲＭＰ－００４～ＲＭＰ－００８）が互いに非常に近く、ＲＭＰ－００１についての曲線のかなり下に位置していることを示す。これは、ＲＭＰ－００１がＦｃ融合構築物であり、クリアランス速度が低いために全身曝露が高いことを特徴とするため、予想された。注目すべきことに、ＲＭＰ－００２及びＲＭＰ－００３は、一連のデータの中で明らかに外れ値である。ＲＭＰ－００２は、２つの異なる研究所によって共有され、おそらくその低い比活性を説明することができる準最適な保存及び出荷条件に出された化合物である。ＲＭＰ－００３の量は低く、ＵＶ Ａ２８０を測定することによってその真の濃度を決定することを可能にするには不十分であった。したがって、この化合物については補正が行われなかった。他の全ての試験項目と同様に、ＲＭＰ－００３の濃度も２の係数で過大評価された場合、ＲＭＰ－００３に対するＰＫ曲線ｒｅｔａｔｅｄｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｙｔｉｍｅｓ．ｃｏｍ／２０２０／０８／２０／ｈｅａｌｔｈ／ｃｏｖｉｄ－ｏｌｅａｎｄｒｉｎ－ｔｒｕｍｐ－ｍｙｐｉｌｌｏｗ．ｈｔｍｌも、Ｆｃドメインを有しない化合物の主な群と同様である。

【0496】

図１５に見られるように、（ＤＳＳ）６タグ化化合物（ＲＭＰ－００５、ＲＭＰ－００６、及びＲＭＰ－００８）に関連する全てのＰＫ曲線は、非常に類似している。更に、ＲＭＰ－００５への（ＧＧＧＧＳ）２リンカーの導入（ＲＭＰ－００６で行われたように）は、ＰＫプロファイルにほとんど影響を及ぼさない。

【0497】

ＲＭＰ－００４及びＲＭＰ－００７についても同じ結論を得ることができ、どちらもＤ１０タグを担持している（図１６を参照されたい）。

【0498】

Ｃｍａｘ／Ｔｍａｘ
Ｃｍａｘ値もまた、上記のＰＫデータから容易に抽出することができ、Ｔｍａｘは、最も早い血液試料時間（投与後５分）と一致する。注射された化合物が、中央コンパートメント（血液）から他の身体コンパートメントへの分布を介して急速に除去されたときに、投与後わずか５分で離脱を行わなければならないため、同じ群間でこれらの値にはかなりのばらつきがある。全身的に注射された薬物の場合、これらの値はあまり意味がない。しかしながら、それらは図１７に示される。

【0499】

曲線下面積（無限大に外挿）
血漿薬物濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、薬物の用量の投与後の薬物への実際の全身曝露を反映し、ｍｇ＊時／Ｌで表される。この曲線下面積は、体内からの薬物の排出速度及び投与量に依存する。身体によって排出された薬物の総量は、時間ゼロ（薬物の投与時間）から無限時間までの各時間間隔で排出された量を加算又は積分することによって評価される。この総量は、全身循環に到達する投与された用量の割合に対応する。ＡＵＣは、薬物のクリアランスに反比例する。

【0500】

ＩＴＲによって計算された元のＡＵＣｉｎｆ値は、各試験項目の比活性を考慮して補正され、図１８（青いバー）に示されている。更に、５ｍｇ／Ｋｇ投与量（緑色のバー）についての全てのＡＵＣデータを正規化するために、別の補正ステップを導入した。この補正は、ＡＵＣが、一般に用量に比例するために必要であった。各群に投与された用量の元の誤った推定による不一致を最小限に抑えるべきである。各試験項目のＡＵＣには単一の値がある。

【0501】

データ収集のためにスパースサンプリング法を使用したため、ＳＥ又は信頼区間は計算することができなかった。

【0502】

ＲＭＰ－００２及びＲＭＰ－００３を投与された群に関連するデータは、前述の理由から、これらの化合物が全体的なＰＫ研究で外れ値として作用したため、注意して解釈する必要がある。興味深いことに、試験項目ＲＭＰ－００４～ＲＭＰ－００８は、全てのＡＵＣ値が、ＲＭＰ－００１のおよそ２０％～４０％である。

【0503】

試験項目クリアランス
Ｔｍａｘ後、試験項目の血清濃度は、６．１１時間（ＲＭＰ－００４）～３４．６時間（ＲＭＰ－００１）の範囲の推定ｔ１／２で低下した。図１９のデータを参照されたい。試験項目のほとんど（ＲＭＰ－００２～ＲＭＰ－００８）は、１５～２０時間の範囲である。ＲＭＰ－００４がそのように低い半減期を有する理由は不明である。

【0504】

試験項目は、２３．６ｍＬ／時／ｋｇ（ＲＭＰ－００２）まで３．３７ｍＬ／時／ｋｇ（ＲＭＰ－００１）の平均速度で消失した（Ｃｌ）。平均分布容積（Ｖｚ）は、１６８ｍＬ／ｋｇ（ＲＭＰ－００１）～５１５ｍＬ／ｋｇ（ＲＭＰ－００２）の範囲であり、全ての試験項目が、組織間に最小限に分布していたことを示唆している。これらの評価は濃度値に依存しないため、上記の全てのクリアランスパラメータについて補正は必要なかった。

【0505】

結論
この研究の目的は、様々な形態の骨標的化ＴＮＳＡＬＰのＰＫパラメータを、アスホターゼアルファ（ＲＭＰ－００１）のものと比較することであった。ＰＫデータの良好な収束は、試験項目のＦｃ以外のバージョンが、予想されるように、アスホターゼアルファよりも速く血流から消失されることを示す。しかしながら、半減期及び全身曝露は、有効な骨標的化薬物送達戦略と適合する範囲に残る。この戦略では、より小さな分子は、より大きなＦｃ融合と比較して、骨の石灰化部分へのアクセスを増加させるべきである。なぜなら、それらは、毛細管ネットワークから骨の石灰化表面へより容易に血管外遊出することが予想されるからである。しかしながら、これは、生体内分布研究において実験的に検証されるに留まっている。

【0506】

実施例５－リード候補の選択
リード候補「ＦＧ１２ｗ．ＭＮＤ．ｋｚ．ＩｇＫＶＩＩＩ．ＴＮＡＬＰｃｏ（ｍｕｔ－ｍｉＲ３６２ａ）．Ｆｃ．（ＤＳＳ）６．ＷＰＲＥ」（配列番号７４）の選択を、本明細書に記載する。

【0507】

分泌シグナルペプチドのスクリーニング
当初、様々なベクターを、分泌されたＴＮＡＬＰ活性に基づいてスクリーニングした。ベクタースクリーニングには以下を含んだ。ＥＦ１ａ－ＲＭＰ５、ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号５５）、ＥＦ１ａ－ＳＥＡＰ－ＲＭＰ５（配列番号６５）、ＥＦ１ａ－ａＬＡ－ＲＭＰ５（配列番号６４）、ＥＦ１ａ－ｈＣＤ３３－ＲＭＰ５（配列番号５８）、ＥＦ１ａ－Ｓｅｃｒｅｃｏｎ－ＲＭＰ５（配列番号６０）、ＥＦ１ａ－Ｓｅｃｒｅｃｏｎ－ＡＡ－ＲＭＰ５（配列番号６１）、ＥＦ１ａ－ｍＩｇＫＶＩＩＩ－ＡＡ－ＲＭＰ５（配列番号６２）、及びＥＦ１ａ－ｈＩｇＫＶＩＩＩ－ＡＡ－ＲＭＰ５（配列番号５７）。

【0508】

ウェル当たり１ｅ５の２９３Ｔ細胞を、ｄ０でリン酸カルシウム法を使用して構築物（配列番号１９、５５、６５、６４及び６６）でトランスフェクトした。ＡＬＰ活性は、ｄ２で測定した。結果は、２９３トランスフェクションにおいて、ＩｇＧ２Ｈ（ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ）（配列番号３３）が、内因性ＴＮＡＬＰシグナルペプチドと比較して２倍を超える分泌ＡＬＰ活性を媒介することによって際立っていたことを示した。第２ラウンドスクリーニングでは、ウェル当たり１ｅ５の２９３Ｔ細胞を、ｄ０でリン酸カルシウム法を使用して構築物（配列番号１９、５５、６５、６０、６１、６２及び５７）でトランスフェクトした。ＡＬＰ活性を２日目に測定した。ｈＩｇＫＶＩＩＩ（ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣＡＡ）（ＳＷＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）は、ＩｇＧ２Ｈに対するＡＬＰ分泌の約４６％の増加及びｍＩｇＫＶＩＩＩと比較して比較的低い免疫原性リスクのために、リード分泌シグナル候補として選択した。結果は、操作したシグナルペプチドが、開示されたレンチベクター構築物のＴＮＡＬＰの分泌を大幅に改善することができることを実証した。結果を図２１Ａ及び図２１Ｂに示す。

【0509】

続いて、配列番号１９を有するＥＦ１ａプロモーター駆動型ＴＮＡＬＰ ＤＮＡ構築物、及び配列番号５５を有するＩｇＧ２Ｈ分泌シグナルペプチドを有するＥＦ１ａプロモーター駆動型ＴＮＡＬＰ ＤＮＡ構築物を使用して、２９３Ｔヒト胚性腎細胞を他の３つのプラスミドと共トランスフェクトすることによって、ＶＳＶＧ偽型レンチベクターを生成した。レンチウイルス上清を採取して、それぞれ、希釈係数４、１６、及び６４で、２９３及びＪｕｒｋａｔ細胞を形質導入した。上清を、ＡＬＰ活性アッセイのために回収し、１４日目に細胞ペレットを、ｄｄＰＣＲでのＶＣＮ分析のために回収した。結果は、ＩｇＧ２Ｈシグナルペプチドが、２９３Ｔ細胞において、５９．９Ｕ／Ｌ～１３６．４Ｕ／ＬへのＡＬＰ分泌のわずかな２倍の増加を媒介したが（図２２Ａ）、Ｊｕｒｋａｔ細胞において、０．０６９Ｕ／Ｌ～０．７８２Ｕ／Ｌへの１０倍を超える分泌の有意な増加を示した（図２２Ｂ）。

【0510】

これらの結果は、野生型ＴＮＡＬＰシグナルペプチドを、操作したシグナルペプチドＩｇＧ２Ｈに置き換えると、ヒト胚性腎細胞だけでなく、ＨＳＣ由来系統を代表する造血Ｔ細胞株においても、ＴＮＡＬＰの分泌を増加させることができることを実証した。

【0511】

感受性骨髄系統ｍｉＲＮＡ結合部位の除去
次に、ＲＭＰ５からの感受性骨髄系統ｍｉＲＮＡ結合部位を除去した。７６２～７９２ｂｐのＲＭＰ５（本明細書に記載される）の配列は、ｍｉＲＮＡ３６２－５ｐによって標的化されやすいと考えられたが、Ｙａｎｇらは、ＭｉＲ－３６２－５ｐが、造血リンパ系及び骨髄系統において高度に発現されることを示した（Ｙａｎｇ，Ｐ．，Ｎｉ，Ｆ．，Ｄｅｎｇ，Ｒｑ．ｅｔ ａｌ．ＭｉＲ－３６２－５ｐ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｈｅ ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉａ ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＧＡＤＤ４５α．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ １４，１９０（２０１５））。造血リンパ系及び骨髄系統における潜在的なｍｉＲ－３６２－５ｐサイレンシングを排除するために、ＲＭＰ５中のコドン使用を７６９～７９２ｂｐの間で切り替えることによって、２つの変異（ｍｉＲＮＡ３６２－Ａ及びｍｉＲＮＡ３６２－Ｂ）を作製した。リン酸カルシウムを使用して、２９３Ｔ細胞を、３つのプラスミド（それぞれ、配列番号１９、８１及び８２）でトランスフェクトした。トランスフェクション後３日目に、ＡＬＰ活性アッセイのために上清を回収した（図２３Ａを参照されたい）。変異体Ａは、２９３細胞トランスフェクションにおいて親構築物と同等のＴＮＡＬＰ分泌を示すが、ｍｉＲ３６２－Ｂは、ＴＮＡＬＰ分泌が劇的に低下したために廃棄した（図２３Ｂ）。構築物（配列番号８１）を更に使用して、レンチベクターを生成した。

【0512】

レンチウイルス上清を回収して、それぞれ、Ｊｕｒｋａｔ及びＫ５６２細胞を、希釈係数４、１６、及び６４で形質導入した。上清を、ＡＬＰ活性アッセイのために回収し、１４日目に細胞ペレットを、ｄｄＰＣＲでのＶＣＮ分析のために回収した。この構築物（配列番号８１）は、約６０％を超えるｍｉＲ－３６２－５ｐの高発現を有する２つの骨髄細胞株において、元の構築物（配列番号１９）よりも優れていた。これらの結果は、１つ以上の感受性骨髄系統ｍｉＲＮＡ結合部位を除去することによって、開示された構築物の効力を改善するための試みを反映している。

【0513】

ＲＭＰ５ ｍＲＮＡの効率的な翻訳を促進するための翻訳開始配列の付加
次に、ウェル当たり１ｅ５の２９３Ｔ細胞を、ｄ０でリン酸カルシウム法を使用して構築物（配列番号８４及び８５）でトランスフェクトし、ＡＬＰ活性をｄ２で測定した。結果は、コザック配列の付加が、ＴＮＡＬＰ分泌を約３６％増加させたことを示した。これは、翻訳開始配列の付加が、ＲＭＰ５ ｍＲＮＡの効率的な翻訳を促進する可能性があることを示唆した。

【0514】

リード候補の選択及び適格性
次いで、最適化されたベクター設計に基づいてリード候補を選択した。異なるプロモーターＭＮＤ／ＥＦ１ａ並びにシグナルペプチド野生型、Ｇｉｇｈａ及びＩｇＫＶＩＩＩ（配列番号１９、５５、５７、７９、８６及び８７）を有する６つのＴＮＡＬＰ ＬＶＶ構築物を使用して、２９３Ｔヒト胚性腎細胞を他の３つのプラスミドと共トランスフェクトすることによって、ＶＳＶＧ偽型レンチベクターを生成した。レンチウイルス上清を回収して、それぞれ、希釈係数４、１６、及び６４で、２９３、Ｋ５６２、及びＪｕｒｋａｔ細胞を形質導入した。次いで、上清を、ＡＬＰ活性アッセイのために回収し、１４日目に細胞ペレットを、ｄｄＰＣＲでのＶＣＮ分析のために回収した。これらのレンチベクターは、５ｅ＋６～１ｅ＋７ＩＵ／ｍＬの間で類似の力価を有した（図２５Ａ）。データ（図２５Ｂ～図２５Ｄ）は、形質導入されたＪｕｒｋａｔ及びＫ５６２において、ＩｇＧ２Ｈが、ＴＮＡＬＰ野生型分泌シグナルよりも良好であり、４００ｂｐのインスレーターを有するＭＮＤプロモーターが、両方の造血細胞株においてＥＦ１ａプロモーターより優れていたことを示す。Ｆｃ融合パートナーの付加は、３つの細胞株におけるＴＮＡＬＰ分泌に最小限の影響を及ぼすと考えられた。また、ｍｉＲ３６２－Ａ変異は、両方の骨髄細胞株において元の構築物よりも良好に機能し、ＩｇＫＶＩＩＩからのＴＮＡＬＰ分泌は、３つの細胞株全てにおいてＩｇＧ２Ｈよりも優れていたことが見出された。この実験から、ＭＮＤプロモーター、ＩｇＫＶＩＩＩ、ｍｉＲ３６２変異、及びＦｃの組み合わせ構築物が、リード構築物であることが示唆された。

【0515】

２つの異なるプロモーター（ＭＮＤ又はＥＦ１ａ）、２つの異なるシグナルペプチド（ＩｇＧＨ又はＩｇＫＶＩＩＩ）、非Ｆｃ融合又はＦｃ融合ＲＭＰ５構築物（配列番号５５、８４、８５、８７、８８及び８９）を有する６つのＴＮＡＬＰ ＬＶＶ構築物を使用して、２９３Ｔヒト胚性腎細胞を他の３つのプラスミドと共トランスフェクトすることによって、ＶＳＶＧ偽型レンチベクターを生成した。レンチウイルス上清を回収して、それぞれ、４、１６、及び６４の希釈係数で２９３細胞を形質導入した。次いで、上清を、ＡＬＰ活性アッセイのために回収し、１４日目に細胞ペレットを、ｄｄＰＣＲでのＶＣＮ分析のために回収した。これらのレンチベクターは、５ｅ＋６～１ｅ＋７ＩＵ／ｍＬの間で類似の力価を有した（図２６Ａ）。図２６Ｂは、Ｆｃ融合構築物－ＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ（配列番号８７）の有効性（ＶＣＮ当たりのＡＬＰ）が、非Ｆｃ融合構築物－ＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５（配列番号５５）よりも約２０％低いだけであることを示した。Ｆｃ融合バージョンについてのマウスモデルにおいて毒性が観察されなかったことを考慮し、更に、Ｆｃ融合バージョンの循環時間が、非Ｆｃ融合バージョンの２倍超であることを考慮すると（６．１対１５～２０時間）、Ｆｃをリード候補に含める価値があると考えられた。データは、コドン最適化された非Ｆｃ融合／Ｆｃ融合構築物（配列番号５５及び８７））の有効性が、ｃＤＮＡ非Ｆｃ融合／Ｆｃ融合構築物（配列番号８８及び８９）よりも優れていないにせよ、類似していたことを示唆した。データに基づいて、コザックの付加は、約２倍有効性を増加させると考えられた。全体として、４００ｂｐのインスレーター、ＭＮＤプロモーター、コザックエレメント、ＩｇＫＶＩＩＩ、ｍｉＲ３６２変異、及びＦｃ（Ｉ４００－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６（配列番号８５）の最終的な組み合わせ構築物は、２９３Ｔ細胞において、候補構築物ＥＦ１－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ（配列番号８７）と比較して、約３０倍高い有効性を示した。これは、優れた有効性を達成するために、複数の操作アプローチを組み合わせる必要があることを示唆した。

【0516】

２つのＴＮＡＬＰ ＬＶＶ構築物（Ｉ４００－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６配列番号８５及びＥＦ１ａ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃ配列番号８７）を使用して、２９３Ｔヒト胚性腎細胞を他の３つのプラスミドと共トランスフェクトすることによって、ＶＳＶＧ偽型レンチベクターを生成した。レンチウイルス上清を回収し、ＴＦＦを通して濃縮した。ヒト成人動員末梢血ＣＤ３４＋造血幹細胞を解凍し、ＳＣＦ、Ｉｌ３、ＴＰＯ、及びＦｌｔ３で一晩前もって刺激した。次いで、形質導入エンハンサーｄｍＰＧＥ２及びＦ１０８の存在下で、ベクターを細胞に付加することによって形質導入を実施した。形質導入細胞の培地を、ＩＬ３及びＧ－ＣＳＦを補充したＳＦＥＭＩＩに７日間リフレッシュし、８日目～１４日目までＧ－ＣＳＦ含有ＳＦＥＭＩＩに変更した。続いて、上清を、４日目、８日目、及び１４日目にＡＬＰ分析のために取り出した。ＶＣＮ分析は、１４日目に細胞ペレット上で実施した。結果は、４００ｉｎＭＮＤ－ＲＭＰ１００の有効性が、Ｉ４００－ＭＮＤ－ＩｇＧ２Ｈ－ＲＭＰ５－Ｆｃと比較して、４日目に４．９倍超、８日目に８．５倍超、１４日目に１０倍超であることを示す（図２７を参照されたい）。結果は、２９３Ｔにおける所見を確認し、４００ｂｐのインスレーター、ＭＮＤプロモーター、コザックエレメント、ＩｇＫＶＩＩＩ、ｍｉＲ３６２変異及びＦｃ（Ｉ４００－ＭＮＤ－コザック－ＩｇＫＶＩＩＩ－ＲＭＰ５（ｍｉＲ－Ａ）－Ｆｃ－ＤＳＳ６配列番号８５）の組み合わせ構築物は、２９３ｔだけでなく、より重要なことに、本発明者らの標的細胞－成人動員末梢血ＣＤ３４＋造血幹細胞においてＡＬＰ分泌を有意に増加させた。

【0517】

２つの異なるプロモーター（ＭＮＤ又はＥＦ１ａ）、２つの異なるシグナルペプチド（ＩｇＧＨ又はＩｇＫＶＩＩＩ）（配列番号５５、８８、８５、７４及び８９）を有する５つのＴＮＡＬＰ ＬＶＶ構築物を使用して、２９３Ｔヒト胚性腎細胞を他の３つのプラスミドと共トランスフェクトすることによって、ＶＳＶＧ偽型レンチベクターを生成した。ウイルス上清を使用して、約４、約１６、及び約６４の希釈係数で、Ｊｕｒｋａｔ、ＨＬ－６０、及びＴＨＰ－１細胞を形質導入した。上清を、ＡＬＰ活性アッセイのために回収し、１４日目に細胞ペレットを、ｄｄＰＣＲでのＶＣＮ分析のために回収した。結果（図２８及び図２９）は、ＭＮＤプロモーターが、Ｊｕｒｋａｔ及びＨＬ－６０細胞において、ＥＦ１ａプロモーターと比較して、ＴＮＦＡＭＰ活性（ＶＣＮ当たり）の増加した発現をもたらしたことを示した。

【0518】

４つのＴＮＡＬＰ ＬＶＶ構築物（配列番号５５、８５、７４及び９０）を使用して、２９３Ｔヒト胚性腎細胞を他の３つのプラスミドと共トランスフェクトすることによって、ＶＳＶＧ偽型レンチベクターを生成した。レンチウイルス上清を回収し、ＴＦＦ［０３０１］を介して濃縮した。ウイルス上清を使用して、ＭＯＩ＝０．１、０．２、０．５、１、２、５、及び１０で２９３Ｔ細胞を形質導入し、ＭＯＩ＝２０でヒト成人ＣＤ３４＋造血幹細胞を形質導入した。ヒト成人動員末梢血ＣＤ３４＋造血幹細胞を解凍し、ＳＣＦ、Ｉｌ３、ＴＰＯ、Ｆｌｔ３、ＵＭ１７１及びＳＲ１を一晩補充したＳＧＳＭ無血清培地で予め刺激した。次いで、形質導入エンハンサーｄｍＰＧＥ２及びＦ１０８の存在下で、ベクターを細胞に添加することによって、異なるＭＯＩで形質導入を行った。形質導入細胞の培地を、ＳＣＦ、Ｉｌ３、ＴＰＯ、Ｆｌｔ３、ＵＭ１７１及びＳＲ１を補充したＳＦＥＭＩＩに１４日間リフレッシュした。上清を、８日目にＡＬＰ分析のために除去し、１４日目に細胞ペレット上でＶＣＮ分析を行った。結果は、ＨＳＣにおいて、４００ｉｎＭＮＤ－ＲＭＰ１００の有効性が、それぞれ、ＭＮＤ－ＲＭＰ１００の約２倍及びＥＦ１ａ－ＲＭＰ１００の約８倍であったことを示す（図３０Ａ～図３０Ｃを参照されたい）。

【0519】

３つのＴＮＡＬＰ ＬＶＶ構築物（配列番号８５、７４及び９０）を使用して、２９３Ｔヒト胚性腎細胞を他の３つのプラスミドと共トランスフェクトすることによって、ＶＳＶＧ偽型レンチベクターを生成した。レンチウイルス上清を回収し、ＴＦＦを通して濃縮した。ヒト成人動員末梢血ＣＤ３４＋造血幹細胞を解凍し、ＳＣＦ、Ｉｌ３、ＴＰＯ、及びＦｌｔ３で一晩前もって刺激した。次いで、形質導入エンハンサーｄｍＰＧＥ２及びＦ１０８の存在下で、ベクターを細胞に添加することによって、異なるＭＯＩで形質導入を行った。形質導入されたＨＳＣを、コロニーのリードアウトの前に、Ｍｅｔｈｏｃｕｌｔセルロースに１４日間播種した。ＣＦＵデータは、５～２０のＭＯＩでＭＮＤ－４００ｉｎ－ＲＭＰ１００、ＥＦ１ａ－ＲＭＰ１００及びＭＮＤ－ＲＭＰ１００で形質導入した形質導入ＨＳＣが、モックＨＳＣと比較して類似したコロニー形成能力を有することを示唆した。ＨＳＣにおける全ての構築物について毒性は全く観察されなかった（図３１Ａ及び図３１Ｂを参照されたい）。

【0520】

３つのＴＮＡＬＰ ＬＶＶ構築物（配列番号８５、７４及び９０）を使用して、２９３Ｔヒト胚性腎細胞を他の３つのプラスミドと共トランスフェクトすることによって、ＶＳＶＧ偽型レンチベクターを生成した。レンチウイルス上清を回収し、使用して、ＴＨＰ－１、Ｊｕｒｋａｔ及びＨＬＰ－６０を、希釈係数４、１６及び６４で形質導入した。形質導入後、形質導入細胞を最大５６日間培養し、細胞ペレットを、それぞれ、１４日目、２８日目、４２日目、及び５６日目に、ＶＣＮ分析のために収集した。全ての構築物は、形質導入細胞株ＴＨＰ－１、ＨＬ＿６０及びＪｕｒｋａｔにおいてロバストな安定性を示した（図３２Ａ～図３２Ｄを参照されたい）。

【0521】

本明細書で言及される、及び／又は出願データシートに列挙される米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、及び非特許刊行物の全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。実施形態の態様は、必要に応じて、なお更なる実施形態を提供するために、様々な特許、出願、及び刊行物の概念を採用するように修正することができる。

【0522】

本明細書には、ある特定の追加の実施形態の代替物を含む、本開示の追加の実施形態が開示される。追加の実施形態が、１つ以上の代替案を含む参照される追加の実施形態に従属する場合、その従属する追加の実施形態は、参照される追加の実施形態及びその説明される代替案のいずれかを本明細書で参照する。

【0523】

本開示は、いくつかの例示的な実施形態を参照して説明されてきたが、多くの他の修正及び実施形態が、本開示の原理の趣旨及び範囲内に入るであろう当業者によって考案され得ることを理解されたい。より具体的には、本開示の趣旨から逸脱することなく、前述の開示、図面、及び添付の特許請求の範囲の範囲内で、主題の組み合わせの配置の構成要素部分及び／又は配置において合理的な変形及び修正が可能である。構成要素部分及び／又は配置の変形及び修正に加えて、代替的な使用も、当業者には明らかであろう。

【0524】

追加の実施形態１．式（Ｉ）を含むポリペプチドであって、
［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_w－［Ｒ］_q－（［Ｄ］_x－［Ｅ］_y）_z、 （Ｉ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、配列番号１１に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の配列同一性、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の配列同一性、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の配列同一性、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の配列同一性、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の配列同一性、又は配列番号１１に対して１００％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍ_o（Ｆｃ）Ｎ_p）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）_tＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数である、ポリペプチド。
追加の実施形態２．［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_wが、配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態３．［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_wが、配列番号１０を有するアミノ酸配列を含む、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態４．Ａが、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態５．Ａが、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態６．ｖが、１であり、ｗが、０である、いずれかの追加の実施形態１に記載のポリペプチド。代替的に、ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが、０である、いずれかの追加の実施形態１に記載のポリペプチド。代替的に、ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが、０であり、ｚが、１である、いずれかの追加の実施形態１に記載のポリペプチド。代替的に、ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが、１である、いずれかの追加の実施形態１に記載のポリペプチド。代替的に、ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが、１であり、ｚが、１である、いずれかの追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態７．ｚが、０である、追加の実施形態１及び４～５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態８．ｘが、０である、追加の実施形態１及び４～６のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態９．ポリペプチドが、配列番号２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１０．ポリペプチドが、配列番号２を含む、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１１．Ｅが、最大でも２個のアミノ酸を含む、追加の実施形態１、４、及び５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１２．Ｅが、１個のアミノ酸を含む、追加の実施形態１、４、及び５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１３．Ｅが、アスパラギン酸を含む、追加の実施形態１１又は１２に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１４．ｙが、８～１２の範囲である、追加の実施形態１１～１３のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、ｙが、８～１２の範囲であり、ｑが、０である、追加の実施形態１１～１３のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、ｙが、８～１２の範囲であり、ｑが、０であり、ｚが、１である、追加の実施形態１１～１３のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、ｙが、８～１２の範囲であり、ｑが、１である、追加の実施形態１１～１３のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、ｙが、８～１２の範囲であり、ｑが、１であり、ｚが、１である、追加の実施形態１１～１３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１５．ｖが、１であり、ｗが、０である、追加の実施形態１１～１４のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが、０である、追加の実施形態１１～１４のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが０であり、ｚが、１である、追加の実施形態１１～１４のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが、１である、追加の実施形態１１～１４のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが、１であり、ｚが、１である、追加の実施形態１１～１４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１６．ｘが、０である、追加の実施形態１１～１５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１７．ｙが、１０である、追加の実施形態１１～１６のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、ｙが、１０であり、ｑが、０である、追加の実施形態１１～１６のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、ｙが、１０であり、ｑが、０であり、ｚが、１である、追加の実施形態１１～１６のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、ｙが、１０であり、ｑが、１である、追加の実施形態１１～１６のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、ｙが、１０であり、ｑが、１であり、ｚが、１である、追加の実施形態１１～１６のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１８．ポリペプチドが、配列番号３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１９．ポリペプチドが、配列番号３を含む、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態２０．Ｄが、最大でも５個のアミノ酸を含む、追加の実施形態１、４、及び５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態２１．最大でも５個のアミノ酸のうちの少なくとも３個の連続するアミノ酸が、同じである、追加の実施形態２０に記載のポリペプチド。代替的に、最大でも５個のアミノ酸のうちの少なくとも４個の連続するアミノ酸が、同じである、追加の実施形態２０に記載のポリペプチド。
追加の実施形態２２．少なくとも３個の連続するアミノ酸が、各々、グリシンである、追加の実施形態２１に記載のポリペプチド。代替的に、少なくとも３個の連続するアミノ酸が、各々、グリシンであり、ｑが、０である、追加の実施形態２１に記載のポリペプチド。代替的に、少なくとも３個の連続するアミノ酸が、各々、グリシンであり、ｑが、１である、追加の実施形態２１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態２３．ｘが、１～３の範囲の整数である、追加の実施形態２０～２２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態２４．ｘが、２である、追加の実施形態２０～２２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態２５．ｙが、４～８の範囲の整数である、追加の実施形態２０～２４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態２６．ｙが、５～７である、追加の実施形態２５に記載のポリペプチド。
追加の実施形態２７．ｙが、６である、追加の実施形態２５又は２６に記載のポリペプチド。
追加の実施形態２８．Ｅが、３個のアミノ酸を含む、追加の実施形態２０～２７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態２９．３つのアミノ酸のうちの少なくとも２つの連続するアミノ酸が、同じである、追加の実施形態２８に記載のポリペプチド。
追加の実施形態３０．Ｅが、－ａｓｐ－ｓｅｒ－ｓｅｒ－を含む、追加の実施形態２０～２９のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態３１．ポリペプチドが、配列番号６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態３２．ポリペプチドが、配列番号６を含む、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態３３．ｙが、８～１２である、追加の実施形態２０～２４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態３４．ｙが、１０である、追加の実施形態２０～２４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態３５．Ｅが、１個又は２個のアミノ酸を含む、追加の実施形態２０～２４及び３３～３４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態３６．Ｅが、１個のアミノ酸を含む、追加の実施形態２０～２４及び３３～３５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態３７．Ｅが、アスパラギン酸のアミノ酸のみを含む、追加の実施形態２０～２４及び３３～３６のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態３８．ポリペプチドが、配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態３９．ポリペプチドが、配列番号４を含む、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態４０．Ｅが、２～４個のアミノ酸を含む、追加の実施形態１、４、及び５のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、Ｅが、２～４個のアミノ酸を含み、ｑが、０である、追加の実施形態１、４、及び５のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、Ｅが、２～４個のアミノ酸を含み、ｑが、０であり、ｚが、１である、追加の実施形態１、４、及び５のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、Ｅが、２～４個のアミノ酸を含み、ｑが、１である、追加の実施形態１、４、及び５のいずれか１つに記載のポリペプチド。代替的に、Ｅが、２～４個のアミノ酸を含み、ｑが、１であり、ｚが、１である、追加の実施形態１、４、及び５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態４１．Ｅが、３個のアミノ酸を含む、追加の実施形態４０に記載のポリペプチド。
追加の実施形態４２．３個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸が、同じである、追加の実施形態４０又は４１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態４３．ｙが、３～８の範囲であり、好ましくは、ｙが、４～８の範囲である、追加の実施形態４０～４２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態４４．ｙが、５～７の範囲である、追加の実施形態４０～４２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態４５．ｙが、６である、追加の実施形態４０～４２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態４６．Ｅが、－ａｓｐ－ｓｅｒ－ｓｅｒ－を含む、追加の実施形態４０～４５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態４７．ｖが、１であり、ｗが、０である、追加の実施形態４０～４６のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態４８．ポリペプチドが、配列番号５及び４４～５４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態４９．ポリペプチドが、配列番号５及び４４～５４のうちのいずれか１つを含む、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態５０．ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列が、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列同一性（例えば、配列番号１３に対して少なくとも９６％の配列同一性、配列番号１３に対して少なくとも９７％の配列同一性、配列番号１３に対して少なくとも９８％の配列同一性、配列番号１３に対して少なくとも９９％の配列同一性、又はＧＰＩアンカーが、配列番号１３を含む）を有する、追加の実施形態４０～４７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態５１．ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列が、配列番号１４（例えば、配列番号１４に対して少なくとも９６％の配列同一性、配列番号１４に対して少なくとも９７％の配列同一性、配列番号１４に対して少なくとも９８％の配列同一性、配列番号１４に対して少なくとも９９％の配列同一性、又はＧＰＩアンカーが、配列番号１４を含む）を有する、追加の実施形態４０～４７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態５２．ポリペプチドが、配列番号８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態５３．ポリペプチドが、配列番号８を含む、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態５４．ｖが、１であり、ｗが、１である、追加の実施形態１１～１７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態５５．ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列が、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列同一性（例えば、配列番号１３に対して少なくとも９６％の配列同一性、配列番号１３に対して少なくとも９７％の配列同一性、配列番号１３に対して少なくとも９８％の配列同一性、配列番号１３に対して少なくとも９９％の配列同一性、又はＧＰＩアンカーが、配列番号１３を含む）を有する、追加の実施形態５４に記載のポリペプチド。
追加の実施形態５６．ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列が、配列番号１４（例えば、配列番号１４に対して少なくとも９６％の配列同一性、配列番号１４に対して少なくとも９７％の配列同一性、配列番号１４に対して少なくとも９８％の配列同一性、配列番号１４に対して少なくとも９９％の配列同一性、又はＧＰＩアンカーが、配列番号１４を含む）を有する、追加の実施形態５４に記載のポリペプチド。
追加の実施形態５７．ポリペプチドが、配列番号７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態５８．ポリペプチドが、配列番号７を含む、追加の実施形態１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態５９．追加の実施形態１～５８のいずれか１つに記載のポリペプチドをコードする核酸配列を含む、レンチウイルスベクター。
追加の実施形態６０．ポリペプチドをコードする核酸配列が、プロモーターに作動可能に連結される、追加の実施形態５９に記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態６１．プロモーターが、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８ＬＰｐ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣからなる群から選択される、追加の実施形態５９又は６０に記載のレンチウイルスベクター。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つを含む。
追加の実施形態６２．ＵＣＯＥプロモーターエレメントを更に含む、追加の実施形態５９～６１のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態６３．ｃＨＳ ４００ｂｐインスレーター、操作された変異体ｃＨＳ ４００ｂｐインスレーター－ｍ３ＳＤ４００ｉｎ及びｍ６ＳＤ４００ｉｎ．＋－からなる群から選択されるインスレーターを更に含む、追加の実施形態５９～６２のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態６４．１つ以上の足場／マトリックス付着領域を更に含む、追加の実施形態５９～６３のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態６５．ＷＰＲＥエレメントを更に含む、追加の実施形態５９～６４のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。代替的に、ＷＰＲＥエレメントを更に含み、ＲＲＥ、ｃＰＰＴ／ＣＴＳ、及びｂＧＨ－ポリ（Ａ）シグナルを更に含む、追加の実施形態５９～６４のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態６６．レンチウイルスベクターが、ＷＰＲＥエレメントを含まない、追加の実施形態５９～６４のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。代替的に、レンチウイルスベクターが、ＷＰＲＥエレメントを含まないが、ＲＲＥ、ｃＰＰＴ／ＣＴＳ、及びｂＧＨ－ポリ（Ａ）シグナルを含む、追加の実施形態５９～６４のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態６７．レンチウイルスベクターが、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、追加の実施形態５９に記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態６８．レンチウイルスベクターが、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性（例えば、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性；配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７のうちのいずれか１つに対して９７％の配列同一性）を有するヌクレオチド配列を含む、追加の実施形態５９に記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態６９．レンチウイルスベクターが、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、追加の実施形態５９に記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態７０．レンチウイルスベクターが、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、追加の実施形態５９に記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態７１．レンチウイルスのウイルスベクターが、配列番号１６～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つを有するヌクレオチド配列を含む、追加の実施形態５９に記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態７２．配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、レンチウイルスベクター。
追加の実施形態７３．ヌクレオチド配列が、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態７２に記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態７４．ヌクレオチド配列が、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の配列同一性を有する、追加の実施形態７２に記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態７５．ヌクレオチド配列が、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の配列同一性を有する、追加の実施形態７２に記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態７６．ヌクレオチド配列が、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の配列同一性を有する、追加の実施形態７２に記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態７７．ヌクレオチド配列が、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の配列同一性を有する、追加の実施形態７２に記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態７８．ヌクレオチド配列が、配列番号１５～２６、５５～６５、７４、８１、８２、８４～９５、９７、及び９８のうちのいずれか１つを含む、追加の実施形態７２に記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態７９．追加の実施形態５９～７８のいずれか１つに記載の任意のレンチウイルスベクターで形質導入された宿主細胞の集団。
追加の実施形態８０．宿主細胞の集団を形質導入する方法であって、宿主細胞の集団を得ることと、得られた宿主細胞の集団を、追加の実施形態５９～７８のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクターと接触させることと、を含む、方法。
追加の実施形態８１．形質導入が、エクスビボで生じる、追加の実施形態８０に記載の方法。
追加の実施形態８２．追加の実施形態７９に記載の形質導入された宿主細胞、及び薬学的に許容される賦形剤又は担体を含む、医薬組成物。
追加の実施形態８３．哺乳動物対象を治療する方法であって、治療有効量の、追加の実施形態７９に記載の形質導入された宿主細胞、又は追加の実施形態８２に記載の医薬組成物を、哺乳動物対象に投与することを含む、方法。
追加の実施形態８４．式（Ｉ）のポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列若しくは配列番号１０７のヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列を有しないか、又は式（Ｉ）のポリペプチドが、Ｓｔｒｅｎｓｉｑ（登録商標）若しくはアスホターゼアルファではないことを条件とする、追加の実施形態１～８３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態８５．ｖが、１であり、ｗが、０であり、ｑが、１であり、ｏが、１であり、ｐが、１であり、Ｎが、ジアミノ酸－Ｄ－Ｉ－であり、Ｍが、ジアミノ酸－Ｌ－Ｋ－であり、［Ｂ］が、配列番号１１を含み、Ｆｃが、含み、ｘが、０である場合、［Ｅ］_yが、Ｄ₁₀－Ｄ₁₆ではない、追加の実施形態１～８３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態８６．式（Ｉ）を含むポリペプチドであって、
［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_w－［Ｒ］_q－（［Ｄ］_x－［Ｅ］_y）_z、 （Ｉ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、配列番号１１に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の配列同一性、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の配列同一性、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の配列同一性、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の配列同一性、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の配列同一性、又は配列番号１１に対して１００％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍ_o（Ｆｃ）Ｎ_p）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）_tＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ただし、式（Ｉ）のポリペプチドが、デキストランなどの糖分子にコンジュゲートされていない、ポリペプチド。
追加の実施形態８７．式（Ｉ）を含むポリペプチドであって、
［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_w－［Ｒ］_q－（［Ｄ］_x－［Ｅ］_y）_z、 （Ｉ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、配列番号１１に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、配列番号１１に対して少なくとも約９５％の配列同一性、配列番号１１に対して少なくとも約９６％の配列同一性、配列番号１１に対して少なくとも約９７％の配列同一性、配列番号１１に対して少なくとも約９８％の配列同一性、配列番号１１に対して少なくとも約９９％の配列同一性、又は配列番号１１に対して１００％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍ_o（Ｆｃ）Ｎ_p）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）_tＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ただし、式（Ｉ）を有するポリペプチドが、配列番号１を含まないか、又は式（Ｉ）を有するポリペプチドが、配列番号１のものに対して１００％未満の配列同一性、好ましくは、配列番号１のものに対して９９％未満の配列同一性、より好ましくは、配列番号１のものに対して９８％未満の配列同一性を有する、ポリペプチド。
追加の実施形態８８．追加の実施形態８４～８７のいずれか１つに記載のポリペプチドをコードする核酸配列を含む、レンチウイルスベクター。
追加の実施形態８９．ポリペプチドをコードする核酸配列が、プロモーターに作動可能に連結される、追加の実施形態８８に記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態９０．プロモーターが、ＥＦ１Ａ、ＭＮＤ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６８ＬＰ、ＥＦ１ａ１、ＥＦＳ、及びＵｂＣからなる群から選択される、追加の実施形態８８又は８９に記載のレンチウイルスベクター。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９６％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９７％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つに対して少なくとも９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号６６、６７、９６、９９、１００、１０１、及び１２６のうちのいずれか１つを含む。
追加の実施形態９１．ＵＣＯＥプロモーターエレメントを更に含む、追加の実施形態８８～９０のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態９２．インスレーターを更に含む、追加の実施形態８８～９１のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態９３．１つ以上の足場／マトリックス付着領域を更に含む、追加の実施形態８８～９２のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態９４．ＷＰＲＥエレメントを更に含む、追加の実施形態８８～９３のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。代替的に、ＷＰＲＥエレメントを更に含み、ＲＲＥ、ｃＰＰＴ／ＣＴＳ、及びｂＧＨ－ポリ（Ａ）シグナルを更に含む、追加の実施形態５９～６４のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態９５．レンチウイルスベクターが、ＷＰＲＥエレメントを含まない、追加の実施形態８８～９４のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。代替的に、レンチウイルスベクターが、ＷＰＲＥエレメントを含まないが、ＲＲＥ、ｃＰＰＴ／ＣＴＳ、及びｂＧＨ－ポリ（Ａ）シグナルを含む、追加の実施形態８８～９４のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクター。
追加の実施形態９６．追加の実施形態８８～９５のいずれか１つに記載の任意のレンチウイルスベクターで形質導入された宿主細胞の集団。
追加の実施形態９７．宿主細胞の集団を形質導入する方法であって、宿主細胞の集団を得ることと、得られた宿主細胞の集団を、追加の実施形態８８～９４のいずれか１つに記載のレンチウイルスベクターと接触させることと、を含む、方法。
追加の実施形態９８．形質導入が、エクスビボで生じる、追加の実施形態９７に記載の方法。
追加の実施形態９９．追加の実施形態９７に記載の形質導入された宿主細胞、及び薬学的に許容される賦形剤又は担体を含む、医薬組成物。
追加の実施形態１００．哺乳動物対象を治療する方法であって、治療有効量の、追加の実施形態９７に記載の形質導入された宿主細胞、又は追加の実施形態９９に記載の医薬組成物を、哺乳動物対象に投与することを含む、方法。
追加の実施形態１０１．式（Ｉ）を含むポリペプチドであって、
［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_w－［Ｒ］_q－（［Ｄ］_x－［Ｅ］_y）_z、 （Ｉ）
式中、
Ａが、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｂが、配列番号１１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
Ｃが、ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列を含み、
Ｒが、－（Ｍｏ（Ｆｃ）Ｎｐ）－であり、Ｍ及びＮが、各々独立して、１～６個のアミノ酸を含み、Ｆｃが、Ｆｃドメインであり、ｏ及びｐが、各々独立して、０、１、又は２であり、
Ｄが、４～６個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むか、又はＦ（Ｇ）_tＦであり、各Ｆが、同じアミノ酸であり、Ｇが、３、４、又は５個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、ｔが、２～５の範囲の整数であり、
Ｅが、１～８個のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含み、
ｑが、０又は１であり、
ｖが、０又は１であり、
ｗが、０又は１であり、
ｘが、０又は１～６の範囲の整数であり、
ｙが、０又は１～１６の範囲の整数であり、
ｚが、０又は１～６の範囲の整数である、ポリペプチド。
追加の実施形態１０２．［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_wが、配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１０３．［Ａ］_v－［Ｂ］－［Ｃ］_wが、配列番号１０を有するアミノ酸配列を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１０４．Ａが、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１０５．Ａが、配列番号１２及び３３～４３のうちのいずれか１つを有するアミノ酸配列を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１０６．ｖが、１であり、ｗが、０である、追加の実施形態１０４又は１０５に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１０７．ｚが、０である、追加の実施形態１０４～１０６のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１０８．ｘが、０である、追加の実施形態１０４～１０６のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１０９．ポリペプチドが、配列番号２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１１０．ポリペプチドが、配列番号２を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１１１．Ｅが、最大でも２個のアミノ酸を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１１２．Ｅが、１個のアミノ酸を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１１３．Ｅが、アスパラギン酸を含む、追加の実施形態１１１又は１１２に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１１４．ｙが、８～１２の範囲である、追加の実施形態１１１～１１３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１１５．ｖが、１であり、ｗが、０である、追加の実施形態１１１～１１３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１１６．ｘが、０である、追加の実施形態１１１～１１５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１１７．ｙが、１０である、追加の実施形態１１１～１１３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１１８．ポリペプチドが、配列番号３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１１９．ポリペプチドが、配列番号３を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１２０．Ｄが、最大でも５個のアミノ酸を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１２１．最大でも５個のアミノ酸のうちの少なくとも３個の連続するアミノ酸が、同じである、追加の実施形態１２０に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１２２．少なくとも３個の連続するアミノ酸が、各々、グリシンである、追加の実施形態１２１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１２３．ｘが、１～３の範囲の整数である、追加の実施形態１２０～１２２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１２４．ｘが、２である、追加の実施形態１２０～１２２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１２５．ｙが、４～８の範囲の整数である、追加の実施形態１２０～１２４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１２６．ｙが、５～７である、追加の実施形態１２０～１２４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１２７．ｙが、６である、追加の実施形態１２１～１２４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１２８．Ｅが、３個のアミノ酸を含む、追加の実施形態１２０～１２７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１２９．３個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸が、同じである、追加の実施形態１２８に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１３０．Ｅが、－ａｓｐ－ｓｅｒ－ｓｅｒ－を含む、追加の実施形態１２０～１２９のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１３１．ポリペプチドが、配列番号６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１３２．ポリペプチドが、配列番号６を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１３３．ｙが、８～１２である、追加の実施形態１２０～１２４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１３４．ｙが、１０である、追加の実施形態１２０～１２４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１３５．Ｅが、１個又は２個のアミノ酸を含む、追加の実施形態１２０～１２４及び１３３又は１３４に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１３６．Ｅが、１個のアミノ酸を含む、追加の実施形態１２０～１２４及び１３３～１３５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１３７．Ｅが、単一のアスパラギン酸のアミノ酸を含む、追加の実施形態１２０～１２４及び１３３～１３６のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１３８．ポリペプチドが、配列番号４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１３９．ポリペプチドが、配列番号４を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１４０．Ｅが、２～４個のアミノ酸を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１４１．Ｅが、３個のアミノ酸を含む、追加の実施形態１４０に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１４２．３個のアミノ酸のうちの少なくとも２個の連続するアミノ酸が、同じである、追加の実施形態１４０又は１４１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１４３．ｙが、４～８の範囲である、追加の実施形態１４０～１４２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１４４．ｙが、５～７の範囲である、追加の実施形態１４０～１４３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１４５．ｙが、６である、追加の実施形態１４０～１４４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１４６．Ｅが、－ａｓｐ－ｓｅｒ－ｓｅｒ－を含む、追加の実施形態１４０～１４５のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１４７．ｖが、１であり、ｗが、０である、追加の実施形態１４０～１４６のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１４８．ポリペプチドが、配列番号５及び４４～５４のうちのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１４９．ポリペプチドが、配列番号５及び４４～５４のうちのいずれか１つを含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１５０．ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列が、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１４０～１４７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１５１．ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列が、配列番号１４を有する、追加の実施形態１４０～１４７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１５２．ポリペプチドが、配列番号８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１５３．ポリペプチドが、配列番号８を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１５４．ｖが、１であり、ｗが、１である、追加の実施形態１１１～１１４のいずれか１つに記載のポリペプチド。
追加の実施形態１５５．ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列が、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１５４に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１５６．ＧＰＩアンカーをコードするアミノ酸配列が、配列番号１４を有する、追加の実施形態１５４に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１５７．ポリペプチドが、配列番号７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１５８．ポリペプチドが、配列番号７を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１５９．Ｒが、配列番号９のものに対して少なくとも９９％の同一性を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１６０．Ｒが、配列番号９を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１６１．ｏ、ｐ、及びｑが、各々、１である、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１６２．Ｍが、２個のアミノ酸を含み、Ｎが、２個のアミノ酸を含み、Ｍ及びＮが、異なる、追加の実施形態１６１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１６３．Ｍが、－Ｌ－Ｋ－である、追加の実施形態１６２に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１６４．Ｎが、－Ｄ－Ｉ－である、追加の実施形態１６２に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１６５．［Ｒ］が、－［Ｌ－Ｋ］－Ｆｃ－［Ｄ－Ｉ］－であり、式中、Ｆｃが、配列番号１３０に対して少なくとも９９％の同一性を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１６６．ポリペプチドが、末端ポリ－Ａｓｐを含まない、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１６７．ポリペプチドが、１０～１６個の連続するアスパラギン酸残基を含まない、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１６８．ポリペプチドが、１０～１６個の連続するアスパラギン酸残基を有する末端ポリ－Ａｓｐを含まない、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１６９．ポリペプチドが、ＧＰＩシグナルペプチドではない、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１７０．ポリペプチドが、１７個以上の連続するアスパラギン酸残基を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１７１．ポリペプチドが、１７個以上の連続するアスパラギン酸残基を有する末端ポリ－Ａｓｐ、及び任意選択で、Ｆｃドメインを含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１７２．ポリペプチドが、１０～１６個の連続する負荷電アミノ酸を含み、負荷電アミノ酸が、アスパラギン酸以外である、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１７３．ポリペプチドが、１０～１６個の連続するグルタミン酸残基を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１７４．［Ｅ］が、少なくとも２個の異なるアミノ酸を含む、追加の実施形態１０１に記載のポリペプチド。
追加の実施形態１７５．追加の実施形態１０１～１７５のいずれか１つに記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、発現ベクター。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20A】

【図20B】

【図21A】

【図21B】

【図22A】

【図22B】

【図23A】

【図23B】

【図23C】

【図24】

【図25A】

【図25B】

【図25C】

【図25D】

【図26A】

【図26B】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30A】

【図30B】

【図30C】

【図31A】

【図31B】

【図32A】

【図32B】

【図32C】

【図32D】

【図33】

【配列表】

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【国際調査報告】