特表 2023-548217 ラクタム修飾アデノ随伴ウイルスベクター

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-11-15

(54)【発明の名称】ラクタム修飾アデノ随伴ウイルスベクター

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/864 20060101AFI20231108BHJP

   C12N 7/00 20060101ALI20231108BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20231108BHJP

   C07H 15/08 20060101ALI20231108BHJP

【ＦＩ】

C12N15/864 100Z

C12N7/00 ZNA

A61K48/00

C07H15/08 CSP

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023527273

(86)(22)【出願日】2021-11-05

(85)【翻訳文提出日】2023-07-06

(86)【国際出願番号】 EP2021080832

(87)【国際公開番号】W WO2022096681

(87)【国際公開日】2022-05-12

(31)【優先権主張番号】PCT/EP2020/081396

(32)【優先日】2020-11-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】63/187,648

(32)【優先日】2021-05-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】21305633.6

(32)【優先日】2021-05-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．プルロニック

３．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522181566

【氏名又は名称】コエヴェ セラピューティクス

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】ルフェーブル，ガエル

(72)【発明者】

【氏名】ブロエカート，ウィレム

(72)【発明者】

【氏名】フェリー，ニコラス

(72)【発明者】

【氏名】グロソップ，メラニー

(72)【発明者】

【氏名】ギブソン，カール

【テーマコード（参考）】

4B065

4C057

4C084

【Ｆターム（参考）】

4B065AA95X

4B065BA30

4B065CA44

4C057AA17

4C057AA18

4C057BB02

4C057CC03

4C057DD01

4C057JJ08

4C084AA13

4C084MA65

4C084NA13

(57)【要約】

本発明は、ＡＡＶベクターのカプシドのアミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ基への、ラクタム部分（例えばβ－ラクタム）を含む少なくとも１つの化合物の共有結合カップリングにより修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに関する。ＡＡＶベクターは、特に遺伝子治療のために、細胞への形質導入において有用である。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（ＩＩ）：

【化1】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｎ^＊は、ＡＡＶのベクターのカプシドのアミノ酸残基のアミノ基の窒素原子であり；

【化2】

は、前記ＡＡＶベクターのカプシドへの付着点を表し；
Ｚは、細胞タイプ特異的なリガンド、標識剤、立体遮蔽剤、薬物部分若しくはそれらの組み合わせを含む機能的部分であり；
Ｌは、好ましくは最大１０００個の炭素原子を含み、好ましくは任意選択的にヘテロ原子及び／若しくは環状部分を含む化学鎖の形態であるリンカーであり；
Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン若しくは任意選択的に置換されるＣ_１－６アルキルであるか；又は
Ｒ^１及びＲ^１’若しくはＲ^２及びＲ^２’は、それらの介在する原子とともに、一体になって任意選択的に置換されるスピロ縮合環を形成してもよく；又は
Ｒ^１及びＲ^２は、それらの介在する原子とともに、窒素、酸素、若しくは硫黄から独立して選択される０～２個のヘテロ原子を有する任意選択的に置換される３～７員の飽和、部分的不飽和、若しくはアリール、若しくはヘテロアリール環を形成してもよく；好ましくはＲ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’は水素である）を含む、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。

【請求項2】

少なくとも１個のＮ^＊が、前記ＡＡＶベクターのカプシドのリジン残基のアミノ基の窒素原子である、請求項１に記載のＡＡＶベクター。

【請求項3】

Ｚが、糖、ホルモン、ペプチド、タンパク質又はその機能的活性断片、膜受容体又はその機能的活性断片、抗体又はその機能的活性断片、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ、核酸又はペプチドアプタマー、ビタミン及び薬物からなる群から選択される細胞タイプ特異的なリガンドを含むか又はそれからなる、請求項１又は請求項２に記載のＡＡＶベクター。

【請求項4】

Ｚが、単糖、オリゴ糖、多糖及びそれらの誘導体からなる群から選択される糖である、請求項１～３の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項5】

Ｚが、マンノース、ガラクトース、フコース、デソサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、Ｓ６－ガラクトース、Ｓ６－Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルクロン酸、Ｐ６－ガラクトース及びＰ１－ガラクトースからなる群から選択される、請求項１～４の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項6】

Ｚが、ポリエチレングリコール、ｐＨＰＭＡ及び多糖からなる群から選択される立体遮蔽剤を含むか又はそれからなる、請求項１又は請求項２に記載のＡＡＶベクター。

【請求項7】

Ｌが、飽和又は不飽和、直鎖状又は分枝状Ｃ_２～Ｃ_４０炭化水素鎖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ｐＨＰＭＡ、ＰＬＧＡ、アルキレンジアミンのポリマー及びそれらの組み合わせを含む任意選択的に置換される基を含む、請求項１～６の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項8】

Ｌが、２～４０個のエチレングリコール単量体を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、請求項１～７の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項9】

Ｌが、１個以上のアリール又はヘテロアリール基をさらに含む、請求項８に記載のＡＡＶベクター。

【請求項10】

Ｌが、フェニルをさらに含む、請求項８に記載のＡＡＶベクター。

【請求項11】

Ｌが、１，２，３－トリアゾリルをさらに含む、請求項８又は請求項１０に記載のＡＡＶベクター。

【請求項12】

式（ＩＩａ）

【化3】

に記載の部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｌ^１は、任意選択的に置換されるアリール又はヘテロアリール基であり；
Ｌ^２は、任意選択的に置換されるヘテロアリール基であり；
Ｌ^３は、好ましくは最大１０００個の炭素原子を含み、好ましくは任意選択的にヘテロ原子及び／又は環状部分を含む化学鎖の形態であるリンカーである）を含む、請求項１～６の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項13】

Ｌ^１が、任意選択的に置換されるフェニルである、請求項１２に記載のＡＡＶベクター。

【請求項14】

Ｌ^２が、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子を含む任意選択的に置換される５員ヘテロアリールアリール基である、請求項１２又は請求項１３に記載のＡＡＶベクター。

【請求項15】

Ｌ^２がトリアゾリルである、請求項１２～１４の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項16】

式（ＩＩｃ）：

【化4】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４及びＲ^４’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、－ＯＲ、－ＮＲ_２、－ＣＮ、－ＳＲ、又はＣ_１－６アルキル、若しくは、窒素、酸素若しくは硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する３～７員の飽和、部分的不飽和、アリール若しくはヘテロアリール環から選択される任意選択的に置換される基であり；好ましくはＲ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４及びＲ^４は、水素であるか；又は
Ｒ^３及びＲ^４若しくはＲ^３’及びＲ^４’は、それらの介在する原子とともに、窒素、酸素若しくは硫黄から独立して選択される０～２個のヘテロ原子を有する任意選択的に置換される３～７員の飽和、部分的不飽和、若しくはアリール、若しくはヘテロアリール環を形成してもよく；
各Ｒは、水素又はＣ_１－６アルキルから独立して選択され；
各

【化5】

は、独立して単結合又は二重結合である）を含む、請求項１～６の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項17】

Ｌ^３が、飽和又は不飽和、直鎖状又は分枝状Ｃ_２～Ｃ_４０炭化水素鎖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ｐＨＰＭＡ、ＰＬＧＡ、アルキルジアミンのポリマー及びそれらの組み合わせからなる群から選択される任意選択的に置換される基であり；好ましくはＬ^３がポリエチレングリコールである、請求項１２～１６の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項18】

Ｌ^３が、２～４０個のエチレングリコール単量体を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項１２～１７の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項19】

Ｌ^３が、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４又はＰＥＧ５である、請求項１２～１８の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項20】

式（ＩＩｅ）

【化6】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、
ｎは、１～２０の範囲の整数であり；好ましくはｎは、３～５の範囲であり；より好ましくはｎは３である）を含む、請求項１～６の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項21】

【化7】

又はその薬学的に許容可能な塩を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクター。

【請求項22】

ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、シュードタイプ、キメラ及びそれらの変異体からなる群から選択され；好ましくは、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ８及びＡＡＶ９からなる群から選択される、請求項１～２１の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項23】

少なくとも１つの導入遺伝子を含み、前記導入遺伝子が任意選択的にプロモーターの制御下にある、請求項１～２２の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項24】

ＧＢＡ遺伝子の、好ましくはヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む少なくとも１つの導入遺伝子を含み、前記導入遺伝子が任意選択的にプロモーターの制御下にある、請求項１～２３の何れか１項に記載のＡＡＶベクター。

【請求項25】

請求項１～２４の何れか１項に記載のＡＡＶベクターと、少なくとも１つの薬学的に許容可能なビヒクルと、を含む医薬組成物。

【請求項26】

好ましくは遺伝子治療における、診断剤及び／又は薬物としての使用のための、請求項１～２４の何れか１項に記載のＡＡＶベクター又は請求項２５に記載の医薬組成物。

【請求項27】

式（Ｉ）

【化8】

の化合物又はその塩とともにＡＡＶを、請求項１～２４の何れか１項に記載のＡＡＶベクターを得るために適切な条件下でインキュベートする段階を含む、請求項１～２４の何れか１項に記載のＡＡＶベクターの製造の方法。

【請求項28】

式（Ｉａ）

【化9】

の化合物又はその塩（式中、
Ｚは、細胞タイプ特異的なリガンド、標識剤、立体遮蔽剤、薬物部分若しくはそれらの組み合わせを含む機能的部分であり；
Ｌ^１は、任意選択的に置換されるアリール若しくはヘテロアリール基であり；
Ｌ^２は、任意選択的に置換されるヘテロアリール基であり；
Ｌ^３は、好ましくは最大１０００個の炭素原子を含み、好ましくは任意選択的にヘテロ原子及び／若しくは環状部分を含む化学鎖の形態であるリンカーであり；
Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、若しくは任意選択的に置換されるＣ_１－６アルキルであるか；又は
Ｒ^１及びＲ^１’若しくはＲ^２及びＲ^２’は、それらの介在する原子とともに、一体になって任意選択的に置換されるスピロ縮合環を形成してもよく；又は
Ｒ^１及びＲ^２は、それらの介在する原子とともに、窒素、酸素若しくは硫黄から独立して選択される０～２個のヘテロ原子を有する任意選択的に置換される３～７員の飽和、部分的不飽和、若しくはアリール、若しくはヘテロアリール環を形成してもよく；
好ましくは、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’は、水素である）。

【請求項29】

Ｌ^１が任意選択的に置換されるフェニルである、請求項２８に記載の化合物。

【請求項30】

Ｌ^２が、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子を含む任意選択的に置換される５員ヘテロアリールアリール基である、請求項２８又は請求項２９に記載の化合物。

【請求項31】

式（Ｉｃ）

【化10】

の請求項２８に記載の化合物又はその塩（式中、
Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４及びＲ^４’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、－ＯＲ、－ＮＲ_２、－ＣＮ、－ＳＲ、又はＣ_１－６アルキル、若しくは、窒素、酸素若しくは硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する３～７員の飽和、部分的不飽和、アリール、又はヘテロアリール環から選択される任意選択的に置換される基であり；好ましくはＲ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４及びＲ^４’は水素であり；
各

【化11】

は、独立して単結合又は二重結合である）。

【請求項32】

Ｌ^３が、飽和又は不飽和、直鎖状又は分枝状Ｃ_２～Ｃ_４０炭化水素鎖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ｐＨＰＭＡ、ＰＬＧＡ、アルキルジアミンのポリマー及びそれらの組み合わせからなる群から選択される任意選択的に置換される基であり；好ましくはＬ^３がポリエチレングリコールである、請求項２８～３１の何れか１項に記載の化合物。

【請求項33】

Ｌ^３が、２～４０個のエチレングリコール単量体を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項２８～３２の何れか１項に記載の化合物。

【請求項34】

Ｌ^３が、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４又はＰＥＧ５である、請求項２８～３３の何れか１項に記載の化合物。

【請求項35】

式（ＩＩｅ）

【化12】

又はその塩（式中、
ｎは、１～２０の範囲の整数であり；好ましくはｎは、３～５の範囲であり；より好ましくはｎは３である）である、請求項２８に記載の化合物。

【請求項36】

Ｚが、糖、ホルモン、ペプチド、タンパク質又はその機能的活性断片、膜受容体又はその機能的活性断片、アプタマー、抗体又はその機能的活性断片、ＳｃＦｖ、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ、ペプチドアプタマー、ビタミン及び薬物からなる群から選択される細胞タイプ特異的なリガンドを含むか又はそれからなる、請求項２８～３５の何れか１項に記載の化合物。

【請求項37】

Ｚが、単糖、オリゴ糖、多糖及びその誘導体からなる群から選択される糖である、請求項２８～３６の何れか１項に記載の化合物。

【請求項38】

Ｚが、マンノース、ガラクトース、フコース、デソサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、Ｓ６－ガラクトース、Ｓ６－Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルクロン酸、Ｐ６－ガラクトース及びＰ１－ガラクトースからなる群から選択される、請求項２８～３７の何れか１項に記載の化合物。

【請求項39】

改変されたＡＡＶベクターを製造するための、請求項２８～３８の何れか１項に記載の化合物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＡＡＶベクターのカプシドのアミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ基への、ラクタム（例えばβ－ラクタム）を含む少なくとも１つの化合物の共有結合カップリングにより修飾されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに関する。いくつかの実施形態では、提供されるＡＡＶベクターは、特に遺伝子治療のために、細胞への形質導入において有用である。

【背景技術】

【0002】

遺伝子治療は、患者の細胞への核酸の送達により治療効果を生じる細胞の遺伝子改変に基づく。実際に、時に、遺伝子全体又は遺伝子の一部は、出生時から欠損しているか若しくは失われているか、又は遺伝子が生きているうちに変化し得るか若しくは突然変異し得る。これらの変異の何れも、タンパク質が合成される方法を妨害することがあり、これは健康問題又は疾患に寄与し得る。遺伝子治療によって、医学的問題を引き起こす欠損遺伝子又は遺伝子配列を、医学的問題を引き起こさない健康なものに置き換えることができ；身体が立ち向かう能力を助けるか若しくは疾患を処置するために遺伝子（又は配列）を付加することもでき；又は問題を引き起こしている遺伝子（若しくは配列）をノックダウン若しくはノックアウトすることができる。それによって、遺伝子治療を使用して、遺伝性又は後天性疾患を処置することができる。

【0003】

細胞への新規遺伝子（又は配列）の送達は、関心対象の配列（例えば遺伝子）を送達するために遺伝子操作されたベクターを使用することなどの様々な方法により行われ得る。ウイルスベクター、特にアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを、その目的のために使用することができる。ＡＡＶベクターは、関心対象の導入遺伝子を様々な組織に送達するための、信頼でき、効率的で、多用途で安全なツールであることが証明されている。特に野生型ＡＡＶは何れのヒト疾患とも関連しないことから、ＡＡＶベクターは、指向性が比較的広く、形質導入効率が高く、エピソーム発現が持続的であり、安全性プロファイルが高いという長所を示す。

【0004】

ＡＡＶベクターを用いた遺伝子治療の臨床治験が、いくつかのタイプの疾患に対して行われたか又は現在行われている。それにもかかわらず、ある特定の治験は、免疫原性、非選択的分布及び治療指数の低下を含む、これらのＡＡＶベクターのいくつかの制限を示した。

【0005】

特に、最近、ある特定のＡＡＶ血清型、特に血清型２のＡＡＶに対して液性免疫が既に存在し得ることが明らかになった。従って、既存の抗ＡＡＶ中和抗体は、標的とされる組織における形質導入を妨害し、その結果、特に全身投与時の有効性の欠如をもたらし得る。さらに、処置を完了するためにＡＡＶベクターを再投与することが必要である場合、初回投与後の中和抗体の出現によりそれが妨害され得る。結果的に、免疫検出を回避することが可能なＡＡＶベクターが非常に望ましい。

【0006】

ＡＡＶベクターの別の制限は、その広い指向性に関係する。実際に、ＡＡＶベクターの広い分布は、標的組織以外の組織での導入遺伝子発現をもたらし、従って特異性が欠如する。これは、治療指数の低下をもたらし得る。実際に、所定の組織では治療有効性を達成するために高用量のベクターが必要であり得る。このような高用量によって、ベクターの産生に関する問題のみならず、免疫反応のリスク上昇による問題も提起される。それ故に、細胞特異的形質導入を確実にすることが可能なＡＡＶベクターが非常に望ましい。

【0007】

特にベクターのカプシドタンパク質を改変することによって、免疫系を回避し、細胞形質導入及び細胞特異性を増強するために、ＡＡＶベクターを改善するための様々な戦略が模索されている。カプシドタンパク質のこのような改変は、ＡＡＶベクターのカプシドの表面に露出したアミノ酸残基に突然変異を導入することによって達成され得る。或いは又はさらに、カプシド上で特異的リガンドを付加するために又はある特定の露出したアミノ酸を隠すために、ウイルスカプシドの化学的修飾が提案されている。このような化学的修飾は、例えば反応性官能基を含む非天然アミノ酸残基をカプシドタンパク質に導入し、次に前記反応性官能基と直交性反応によってリガンドを選択的にカップリングすることによって得られ得る。別の戦略は、カプシドタンパク質を事前に変異させることなく、ウイルスカプシド上で直接的な化学的修飾を行うことである。例えば、国際公開第２０１７／２１２０１９号パンフレットは、ある特定のイソチオシアネート基を保有するリガンドを、ＡＡＶのカプシドタンパク質のアミノ酸残基に存在するアミノ基に共有結合カップリングすることにより得られる表面修飾ＡＡＶベクターを提供し、これは特定の細胞への遺伝子移入の改善をもたらす。ＡＡＶカプシドのチロシン残基の修飾は、国際公開第２０２１／００５２１０号パンフレットで報告されており、これは、ＡＡＶベクターの免疫原性を改変するためにＡＡＶカプシドのチロシン残基を化学的に修飾する方法を提供する。

【0008】

しかし、特に遺伝子治療に対して、効率的な遺伝子形質導を達成するためにＡＡＶベクターの特性を改変するための新しい方法が依然として求められている。

【発明の概要】

【0009】

とりわけ、本発明は、ラクタム（例えばβ－ラクタム）を含む化合物と、ＡＡＶベクターのカプシド内に存在するアミノ基（例えばリジン側鎖のアミノ基）との反応から生じる部分を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに関する。

【0010】

いくつかの態様では、本発明は、提供されるＡＡＶを製造するための技術及び／又はその製造方法に関する。

【0011】

いくつかの態様では、本発明は、式（ＩＩ）：

【化1】

に記載の部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｎ^＊、

【化2】

、Ｚ、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’は、以下及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義及び記載されるとおりである）を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供する。

【0012】

いくつかの態様では、少なくとも１つのＮ^＊は、ＡＡＶベクターのカプシドのリジン残基のアミノ基の窒素原子である。

【0013】

いくつかの態様では、Ｚは、糖、ホルモン、ペプチド、タンパク質又はその機能的活性断片、膜受容体又はその機能的活性断片、抗体又はその機能的活性断片、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ、核酸又はペプチドアプタマー、ビタミン及び薬物からなる群から選択される細胞タイプ特異的リガンドを含むか又はそれからなる。

【0014】

いくつかの態様では、Ｚは、単糖、オリゴ糖、多糖及びそれらの誘導体からなる群から選択される糖である。

【0015】

いくつかの態様では、Ｚは、マンノース、ガラクトース、フコース、デソサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、Ｓ６－ガラクトース、Ｓ６－Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルクロン酸、Ｐ６－ガラクトース及びＰ１－ガラクトースからなる群から選択される。

【0016】

いくつかの態様では、Ｚは、ポリエチレングリコール、ｐＨＰＭＡ及び多糖からなる群から選択される立体遮蔽剤を含むか又はそれからなる。

【0017】

いくつかの態様では、Ｌは、飽和又は不飽和、直鎖状又は分枝状Ｃ_２～Ｃ_４０炭化水素鎖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ｐＨＰＭＡ、ＰＬＧＡ、アルキレンジアミンのポリマー及びそれらの組み合わせを含む任意選択的に置換される基を含む。

【0018】

いくつかの態様では、Ｌは、２～４０個のエチレングリコール単量体を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。

【0019】

いくつかの態様では、Ｌは、１個以上のアリール又はヘテロアリール基をさらに含む。

【0020】

いくつかの態様では、Ｌは、フェニルをさらに含む。

【0021】

いくつかの態様では、Ｌは、１，２，３－トリアゾリルをさらに含む。

【0022】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、式（ＩＩａ）

【化3】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｎ^＊、

【化4】

、Ｚ、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｌ^３、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’は、以下及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義及び記載されるとおりである）を含む。

【0023】

いくつかの態様では、Ｌ^１は、任意選択的に置換されるフェニルである。

【0024】

いくつかの態様では、Ｌ^２は、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子を含む任意選択的に置換される５員ヘテロアリールアリール基である。

【0025】

いくつかの態様では、Ｌ^２は、トリアゾリルである。

【0026】

いくつかの態様では、ＡＡＶは、式（ＩＩｃ）：

【化5】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｎ^＊、

【化6】

、Ｚ、Ｌ^３、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４及びＲ^４’は以下及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義及び記載されるとおりである）を含む。

【0027】

いくつかの態様では、Ｌ^３は、飽和又は不飽和、直鎖状又は分枝状Ｃ_２～Ｃ_４０炭化水素鎖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ｐＨＰＭＡ、ＰＬＧＡ、アルキルジアミンのポリマー及びそれらの組み合わせからなる群から選択される任意選択的に置換される基であり；好ましくは、Ｌ^３は、ポリエチレングリコールである。

【0028】

いくつかの態様では、Ｌ^３は、２～４０個のエチレングリコール単量体を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。

【0029】

いくつかの態様では、Ｌ^３は、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４又はＰＥＧ５である。

【0030】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、式（ＩＩｅ）

【化7】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｎ^＊、

【化8】

、ｎ、Ｚ、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４及びＲ^４’は、以下及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義及び記載されるとおりである）を含む。

【0031】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、本明細書中の以後の表１の部分から選択される部分を含む。

【0032】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、シュードタイプ、キメラ及びそれらの変異体からなる群から選択され；好ましくはＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ８及びＡＡＶ９からなる群から選択される。

【0033】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、少なくとも１つの導入遺伝子を含み、導入遺伝子は任意選択的にプロモーターの制御下にある。

【0034】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＧＢＡ遺伝子、好ましくはヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む少なくとも１つの導入遺伝子を含み、導入遺伝子は、任意選択的にプロモーターの制御下にある。

【0035】

いくつかの態様では、本発明は、本発明によるＡＡＶベクターと、少なくとも１つの薬学的に許容可能なビヒクルと、を含む医薬組成物も提供する。

【0036】

いくつかの態様では、本発明は、好ましくは遺伝子治療における、診断剤及び／又は医薬としての使用のための、本発明によるＡＡＶベクター又は本発明による医薬組成物にも関する。

【0037】

いくつかの態様では、本発明は、本発明によるＡＡＶベクターを得るために適切な条件下で、ＡＡＶを式（Ｉ）

【化9】

の化合物又はその塩とともにインキュベートする段階を含む、本発明によるＡＡＶベクターを製造する方法も提供する。

【0038】

いくつかの態様では、本発明は、式（Ｉａ）：

【化10】

の化合物又はその塩（式中、Ｚ、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｌ^３、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’は、以下及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義及び記載されるとおりである）をさらに提供する。

【0039】

いくつかの態様では、Ｌ^１は、任意選択的に置換されるフェニルである。

【0040】

いくつかの態様では、Ｌ^２は、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子を含む任意選択的に置換される５員ヘテロアリールアリール基である。

【0041】

いくつかの態様では、本化合物は、式（Ｉｃ）

【化11】

の化合物又はその塩（式中、Ｚ、Ｌ^３、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４及びＲ^４’は、以下及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義及び記載されるとおりである）である。

【0042】

いくつかの態様では、Ｌ^３は、飽和又は不飽和、直鎖状又は分枝状Ｃ_２－Ｃ_４０炭化水素鎖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ｐＨＰＭＡ、ＰＬＧＡ、アルキルジアミンのポリマー及びそれらの組み合わせからなる群から選択される任意選択的に置換される基であり；好ましくはＬ^３はポリエチレングリコールである。

【0043】

いくつかの態様では、Ｌ^３は、２～４０個のエチレングリコール単量体を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。

【0044】

いくつかの態様では、いくつかの態様では（Ｉｎ ｓｏｍｅ ａｓｐｅｃｔｓ， Ｉｎ ｓｏｍｅ ａｓｐｅｃｔｓ）、Ｌ^３は、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４又はＰＥＧ５である。

【0045】

いくつかの態様では、本化合物は、式（ＩＩｅ）

【化12】

の化合物又はその塩（式中、ｎ、Ｚ、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４及びＲ^４’は、以下及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義及び記載されるとおりである）である。

【0046】

いくつかの態様では、Ｚは、糖、ホルモン、ペプチド、タンパク質又はその機能的活性断片、膜受容体又はその機能的活性断片、アプタマー、抗体又はその機能的活性断片、ＳｃＦｖ、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ、ペプチドアプタマー、ビタミン及び薬物からなる群から選択される細胞タイプ特異的リガンドを含むか又はそれからなる。

【0047】

いくつかの態様では、Ｚは、単糖、オリゴ糖、多糖及びその誘導体からなる群から選択される糖である。

【0048】

いくつかの態様では、Ｚは、マンノース、ガラクトース、フコース、デソサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、Ｓ６－ガラクトース、Ｓ６－Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルクロン酸、Ｐ６－ガラクトース及びＰ１－ガラクトースからなる群から選択される。

【0049】

いくつかの態様では、本発明は、改変されたＡＡＶベクターを製造するための本発明による化合物の使用も提供する。

【発明を実施するための形態】

【0050】

ある特定の実施形態の詳細な説明
アミノ基（例えばリジン又はアルギニン側鎖の）を通じてコンジュゲートする様々なカップリング化学が記載されている。しかし、このようなカップリング化学の全てが、特定の条件下で及び／又は特定の基質と適合する及び／又は有効であるわけではない。

【0051】

本開示は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）のアミノ酸にコンジュゲートするカップリングに関する。本開示は、必ずしも全てのカップリング化学がこのようなコンジュゲートに対して有効というわけではないことを認識する。例えば、ある特定のカップリング化学は、ＡＡＶの１つ以上の構造又は機能特性を破壊し得る（例えばＡＡＶの完全性を保存しない）条件を必要とするか、又は典型的にそのような条件下で行われる。或いは又はさらに、様々なカップリング化学は、適切な条件が、ＡＡＶとのカップリングではなく、別のリガンド分子との自己カップリング（分子間及び／又は分子内カップリング）に好都合であり得るために、ある特定の生化学的リガンド、例えば糖及び／又は（ポリ）ペプチドなどと適合性ではない条件を必要とするか又は典型的にそのような条件下で行われる。例えば、ある特定の状況では、ある特定のイソチオシアネート基を含むカップリング化学はしばしば反応性が高過ぎ、従って有意な自己カップリング反応を起こし易いことが観察されている。

【0052】

いくつかのカップリング戦略は、２段階カップリング反応を含む。特定の理論に縛られることを望むものではないが、本開示は、ＡＡＶへのカップリングのための様々なこのような２段階カップリング反応を伴う問題の原因を同定する。例えば、本開示は、第１のカップリング反応のみが起こり、第２の反応が起こらないある特定の条件では、例えばカプシド表面を修飾する非天然化学構造によりＡＡＶが免疫原性となり得ることを認識する。

【0053】

１段階カップリング化学は、例えば、ある特定の環境において適合性であることが示されているある特定のイソチオシアネート基を使用する国際公開第２０１７／２１２０１９号パンフレットに記載されている。しかし、特定の理論に縛られることを望むものではないが、本開示は、ＡＡＶへのカップリングのための、このようなイソチオシアネート基の使用を伴う潜在的な問題の原因を同定する。例えば、本開示は、このような反応が、免疫原性ハプテンを形成し得る脂溶性リンカーをもたらすことを観察する（スキーム１参照）。

【化13】

【0054】

スキーム１
スキーム１で示されるように、ＡＡＶへのカップリングの際のある特定のイソチオシアネート基の使用（例えば国際公開第２０１７／２１２０１９号パンフレットで開示されるもの）は、ｌｏｇＰ値が１．７８である結合をもたらし、これは、カップリング後にＡＡＶに対する免疫原性を引き起こす可能性がより高い。より低いｌｏｇＰ値での結合を想定してもよく、従って免疫原性を引き起こすリスクはより低くなるが（例えばスキーム１参照）、しかし、ＡＡＶへのカップリングとのそれらの適合性は不明である。

【0055】

従って、本開示は、ｉ）多様なＡＡＶ血清型の完全性と適合し、これを維持する、ｉｉ）１段階である、ｉｉｉ）リガンドの自己カップリングを最小化する、及び／又はｉｖ）免疫原性リンカーを生じない、適切なカップリング化学を提供するための特定の依然として残るニーズを認識する。いくつかの実施形態では、提供される技術は、脂溶性リンカーを生じないカップリング化学を提供する。

【0056】

いくつかの態様では、本発明は、ラクタム（例えばβ－ラクタム）を含む化合物とＡＡＶベクターのカプシド内に存在するアミノ基（例えばリジン側鎖のアミノ基）との反応から生じる部分を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、例えばこのような反応の結果としての改変ＡＡＶに関する。

【0057】

例えば、いくつかの実施形態では、本発明は、式（ＩＩ）：

【化14】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、

【化15】

、Ｎ^＊、Ｚ、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’は、本明細書中でクラス及びサブクラス内で定義され、記載されるとおりである）を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供する。

【0058】

いくつかの態様では、本発明は、ＡＡＶベクターを改変する、特にＡＡＶのカプシドの少なくとも１つのアミノ酸残基の修飾によって改変する方法に関する。いくつかの実施形態では、本発明は、カプシドのアミノ酸残基のアミノ基、好ましくは表面に露出するアミノ酸残基のアミノ基を修飾する方法を提供する。本明細書中に記載のように、ＡＡＶベクターの改変は、反応性部分としてラクタム基（例えばβ－ラクタム）を含むリンカーを共有結合カップリングすることによって達成に成功した。

【0059】

概念の証明として、ＡＡＶベクターのカプシドのアミノ酸残基のアミノ基を修飾するための官能基として糖部分を保有するラクタム（例えばβ－ラクタム）を含むいくつかのリンカーを調製した。ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ８及びＡＡＶ９を含むいくつかのＡＡＶ血清型のカプシドタンパク質を、ＡＡＶ粒子の完全性を維持しながら効率的に改変することができることが証明された。これらの改変ＡＡＶは、例えばＵ８７－ＭＧ神経膠芽腫細胞株において、なおも感染性であることがさらに示された。非改変ＡＡＶとの比較において脳全体を考慮して、組織分布及び導入遺伝子発現レベルの両方に関して、これらの改変ＡＡＶがより良好な形質導入特性を示すことがさらに示された。

【0060】

ラクタム修飾ＡＡＶベクター
いくつかの態様では、本発明は、ラクタム（例えばβ－ラクタム）を含む化合物と、ＡＡＶベクターのカプシド内に存在するアミノ基（例えばリジン側鎖のアミノ基）との反応から得られる部分を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターに関する。

【0061】

いくつかの実施形態では、本発明は、カプシドのアミノ酸残基の少なくとも１つの修飾されたアミノ基を有するアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供する。より具体的には、いくつかの実施形態では、本発明は、関心対象の機能的部分を有利に含むリンカーのラクタム（例えばβ－ラクタム）基の共有結合カップリングにより修飾されたカプシドのアミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ基を有するＡＡＶベクターに関する。

【0062】

いくつかの実施形態では、本発明は、ラクタム部分を含む化合物とＡＡＶベクターのカプシド内に存在するアミノ基との反応から得られる部分を含む、改変ＡＡＶベクターを提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、β－ラクタム部分を含む化合物とＡＡＶベクターのカプシド内に存在するアミノ基の反応から得られる部分を含む、改変ＡＡＶベクターを提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、β－ラクタム部分を含む化合物とＡＡＶベクターのカプシドのアミノ酸残基のアミノ基の反応から得られる部分を含む、改変ＡＡＶベクターを提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、β－ラクタム部分を含む化合物とＡＡＶベクターのカプシド内に存在するリジン側鎖のアミノ基との反応から得られる部分を含む、改変ＡＡＶベクターを提供する。

【0063】

ＡＡＶベクター
本発明において適切なＡＡＶベクターは、何れかの天然又は組み換えＡＡＶ血清型を含み得るか又は何れかの天然又は組み換えＡＡＶ血清型に由来し得る。

【0064】

「血清型」は、別のウイルスと比較した場合の、あるウイルスに対する抗体との間の交差反応性の欠如に基づいて伝統的に定義されている。このような交差反応性の相違は通常、カプシドタンパク質配列／抗原性決定基の相違による（例えば、ＡＡＶ血清型のＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３配列の相違による）ものである。本明細書中で使用される場合、ＡＡＶは、様々な天然及び合成の血清型を含む。

【0065】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、天然の血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１及びＡＡＶ１２；又はシュードタイプ、キメラ及びそれらの変異体から選択される。

【0066】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ系統分枝群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ又はＦである（例えば、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌａｄｅ ｏｆ Ａｄｅｎｏ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｖｉｒｕｓｅｓ Ａｒｅ Ｗｉｄｅｌｙ Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．２００４）。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ系統分枝群ＥのＡＡＶベクターである。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ系統分枝群ＤのＡＡＶベクターである。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ系統分枝群ＦのＡＡＶベクターである。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ系統分枝群ＡのＡＡＶベクターである。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ系統分枝群ＣのＡＡＶベクターである。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ系統分枝群ＢのＡＡＶベクターである。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、古典的な系統分枝群に属さないＡＡＶである。

【0067】

本明細書中で使用される場合、「シュードタイプ」という用語は、ＡＡＶベクター又は「シュードタイプＡＡＶベクター」に言及する場合、別のＡＡＶ血清型のカプシドにパッケージングされた１つのＡＡＶ血清型のＡＡＶゲノムの部分、特に末端逆位配列（ＩＴＲ）を含むＡＡＶベクターを指す。これらのシュードタイプは、スラッシュ又はハイフンを使用して示され、「ＡＡＶ２／５」又は「ＡＡＶ２－５」は、血清型５カプシドにパッケージングされた、血清型２ゲノムを含むＡＡＶベクターを示す。

【0068】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、トランスカプシド化される（ｔｒａｎｓｃａｐｓｉｄａｔｅｄ）。いくつかの実施形態では、トランスカプシド化（ｔｒａｎｓｃａｐｓｉｄａｔｉｏｎ）アプローチは、モザイク組み換えＡＡＶカプシドを作製するためのＡＡＶ血清型ヘルパープラスミドの組み合わせのトランスフェクションを含む（例えば、Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．（２００４），Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７８：４４２１－４４３２を参照）。いくつかの実施形態では、倍数体（２つより多くの親ＡＡＶヘルパーを利用する場合）又は半数体（２つのみを使用する場合）アプローチが利用される。いくつかの実施形態では、例えば、ＡＡＶカプシドは、１つの血清型のＶＰ１／ＶＰ２及び一意的血清型から供与されるＶＰ３又はそれらの組み合わせから作製され得る。いくつかの実施形態では、半数体ＡＡＶは、親ＡＡＶの構造の長所を一意的に組み合わせる可能性を有する。いくつかの実施形態では、半数体ＡＡＶは、１）形質導入における相乗効果、２）予想外の新しい指向性及び３）Ｎａｂから逃避する能力を実証した（例えば、Ｃｈａｉ ｅｔ． ａｌ．（２０１９），Ｖｉｒｕｓｅｓ １１：１１３８を参照）。

【0069】

例えば、いくつかの実施形態では、シュードタイプＡＡＶベクターとしては、ＡＡＶ２／１、ＡＡＶ２／２、ＡＡＶ２／３、ＡＡＶ２／４、ＡＡＶ２／５、ＡＡＶ２／６、ＡＡＶ２／７、ＡＡＶ２／８及びＡＡＶ２／９が挙げられるがこれらに限定されない。

【0070】

本明細書中で使用される場合、「キメラ」という用語は、ＡＡＶベクター又は「キメラＡＡＶベクター」に言及する場合、少なくとも２つの異なるＡＡＶ血清型からのＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３タンパク質を含有するカプシドを含むか；又は或いは、ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３タンパク質を含み、そのうち少なくとも１つが別のＡＡＶ血清型からの少なくとも一部を含む、ＡＡＶベクターを指す。

【0071】

キメラＡＡＶベクターの例としては、ＡＡＶ－ＤＪ、ＡＡＶ２Ｇ９、ＡＡＶ２ｉ８、ＡＡＶ２ｉ８Ｇ９、ＡＡＶ８Ｇ９及びＡＡＶ９ｉ１が挙げられるがこれらに限定されない。

【0072】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１０６．１／ｈｕ．３７、ＡＡＶ１１４．３／ｈｕ．４０、ＡＡＶ１２７．２／ｈｕ．４１、ＡＡＶ１２７．５／ｈｕ．４２、ＡＡＶ１２８．１／ｈｕ．４３、ＡＡＶ１２８．３／ｈｕ．４４、ＡＡＶ１３０．４／ｈｕ．４８、ＡＡＶ１４５．１／ｈｕ．５３、ＡＡＶ１４５．５／ｈｕ．５４、ＡＡＶ１４５．６／ｈｕ．５５、ＡＡＶ１６．１２／ｈｕ．１１、ＡＡＶ１６．３、ＡＡＶ１６．８／ｈｕ．１０、ＡＡＶ１６１．１０／ｈｕ．６０、ＡＡＶ１６１．６／ｈｕ．６１、ＡＡＶ１－７／ｒｈ．４８、ＡＡＶ１－８／ｒｈ．４９、ＡＡＶ２ｉ８、ＡＡＶ２ｉ８Ｇ９、ＡＡＶ２－１５／ｒｈ．６２、ＡＡＶ２２３．１、ＡＡＶ２２３．２、ＡＡＶ２２３．４、ＡＡＶ２２３．５、ＡＡＶ２２３．６、ＡＡＶ２２３．７、ＡＡＶ２－３／ｒｈ．６１、ＡＡＶ２４．１、ＡＡＶ２－４／ｒｈ．５０、ＡＡＶ２－５／ｒｈ．５１、ＡＡＶ２．５Ｔ、ＡＡＶ２７．３、ＡＡＶ２９．３／ｂｂ．１、ＡＡＶ２９．５／ｂｂ．２、ＡＡＶ２Ｇ９、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ３．１／ｈｕ．６、ＡＡＶ３．１／ｈｕ．９、ＡＡＶ３－１１／ｒｈ．５３、ＡＡＶ３－３、ＡＡＶ３３．１２／ｈｕ．１７、ＡＡＶ３３．４／ｈｕ．１５、ＡＡＶ３３．８／ｈｕ．１６、ＡＡＶ３－９／ｒｈ．５２、ＡＡＶ３ａ、ＡＡＶ３ｂ、ＡＡＶ４－１９／ｒｈ．５５、ＡＡＶ４２．１２、ＡＡＶ４２－１０、ＡＡＶ４２－１１、ＡＡＶ４２－１２、ＡＡＶ４２－１３、ＡＡＶ４２－１５、ＡＡＶ４２－１ｂ、ＡＡＶ４２－２、ＡＡＶ４２－３ａ、ＡＡＶ４２－３ｂ、ＡＡＶ４２－４、ＡＡＶ４２－５ａ、ＡＡＶ４２－５ｂ、ＡＡＶ４２－６ｂ、ＡＡＶ４２－８、ＡＡＶ４２－ａａ、ＡＡＶ４３－１、ＡＡＶ４３－１２、ＡＡＶ４３－２０、ＡＡＶ４３－２１、ＡＡＶ４３－２３、ＡＡＶ４３－２５、ＡＡＶ４３－５、ＡＡＶ４－４、ＡＡＶ４４．１、ＡＡＶ４４．２、ＡＡＶ４４．５、ＡＡＶ４６．２／ｈｕ．２８、ＡＡＶ４６．６／ｈｕ．２９、ＡＡＶ４－８／ｒｈ．６４、ＡＡＶ４－９／ｒｈ．５４、ＡＡＶ５２．１／ｈｕ．２０、ＡＡＶ５２／ｈｕ．１９、ＡＡＶ５－２２／ｒｈ．５８、ＡＡＶ５－３／ｒｈ．５７、ＡＡＶ５４．１／ｈｕ．２１、ＡＡＶ５４．２／ｈｕ．２２、ＡＡＶ５４．４Ｒ／ｈｕ．２７、ＡＡＶ５４．５／ｈｕ．２３、ＡＡＶ５４．７／ｈｕ．２４、ＡＡＶ５８．２／ｈｕ．２５、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．１．２、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７ｍ８、ＡＡＶ７．２、ＡＡＶ７．３／ｈｕ．７、ＡＡＶ－８ｂ、ＡＡＶ８Ｇ９、ＡＡＶ－８ｈ、ＡＡＶ９ｉ１、ＡＡＶ９．１１、ＡＡＶ９．１３、ＡＡＶ９．１６、ＡＡＶ９．２４、ＡＡＶ９．４５、ＡＡＶ９．４７、ＡＡＶ９．６１、ＡＡＶ９．６８、ＡＡＶ９．８４、ＡＡＶ９．９、ＡＡＶｃｙ．２、ＡＡＶｃｙ．３、ＡＡＶｃｙ．４、ＡＡＶｃｙ．５、ＡＡＶｃｙ．５Ｒ１、ＡＡＶｃｙ．５Ｒ２、ＡＡＶｃｙ．５Ｒ３、ＡＡＶｃｙ．５Ｒ４、ＡＡＶｃｙ．６、ＡＡＶｈｕ．１、ＡＡＶｈｕ．２、ＡＡＶｈｕ．３、ＡＡＶｈｕ．４、ＡＡＶｈｕ．５、ＡＡＶｈｕ．６、ＡＡＶｈｕ．７、ＡＡＶｈｕ．８、ＡＡＶｈｕ．９、ＡＡＶｈｕ．１０、ＡＡＶｈｕ．１１、ＡＡＶｈｕ．１２、ＡＡＶｈｕ．１３、ＡＡＶｈｕ．１４／９、ＡＡＶｈｕ．１５、ＡＡＶｈｕ．１６、ＡＡＶｈｕ．１７、ＡＡＶｈｕ．１８、ＡＡＶｈｕ．１９、ＡＡＶｈｕ．２０、ＡＡＶｈｕ．２１、ＡＡＶｈｕ．２２、ＡＡＶｈｕ．２３．２、ＡＡＶｈｕ．２４、ＡＡＶｈｕ．２５、ＡＡＶｈｕ．２７、ＡＡＶｈｕ．２８、ＡＡＶｈｕ．２９、ＡＡＶｈｕ．２９Ｒ、ＡＡＶｈｕ．３１、ＡＡＶｈｕ．３２、ＡＡＶｈｕ．３４、ＡＡＶｈｕ．３５、ＡＡＶｈｕ．３７、ＡＡＶｈｕ．３９、ＡＡＶｈｕ．４０、ＡＡＶｈｕ．４１、ＡＡＶｈｕ．４２、ＡＡＶｈｕ．４３、ＡＡＶｈｕ．４４、ＡＡＶｈｕ．４４Ｒ１、ＡＡＶｈｕ．４４Ｒ２、ＡＡＶｈｕ．４４Ｒ３、ＡＡＶｈｕ．４５、ＡＡＶｈｕ．４６、ＡＡＶｈｕ．４７、ＡＡＶｈｕ．４８、ＡＡＶｈｕ．４８Ｒ１、ＡＡＶｈｕ．４８Ｒ２、ＡＡＶｈｕ．４８Ｒ３、ＡＡＶｈｕ．４９、ＡＡＶｈｕ．５１、ＡＡＶｈｕ．５２、ＡＡＶｈｕ．５３、ＡＡＶｈｕ．５４、ＡＡＶｈｕ．５５、ＡＡＶｈｕ．５６、ＡＡＶｈｕ．５７、ＡＡＶｈｕ．５８、ＡＡＶｈｕ．６０、ＡＡＶｈｕ．６１、ＡＡＶｈｕ．６３、ＡＡＶｈｕ．６４、ＡＡＶｈｕ．６６、ＡＡＶｈｕ．６７、ＡＡＶｐｉ．１、ＡＡＶｐｉ．２、ＡＡＶｐｉ．３、ＡＡＶｒｈ．２、ＡＡＶｒｈ．２Ｒ、ＡＡＶｒｈ．８、ＡＡＶｒｈ．８Ｒ、ＡＡＶｒｈ８Ｒ Ｒ５３３Ａ突然変異体、ＡＡＶｒｈ８Ｒ Ａ５８６Ｒ突然変異体、ＡＡＶｒｈ．１０、ＡＡＶｒｈ．１２、ＡＡＶｒｈ．１３、ＡＡＶｒｈ．１３Ｒ、ＡＡＶｒｈ．１４、ＡＡＶｒｈ．１７、ＡＡＶｒｈ．１８、ＡＡＶｒｈ．１９、ＡＡＶｒｈ．２０、ＡＡＶｒｈ．２１、ＡＡＶｒｈ．２２、ＡＡＶｒｈ．２３、ＡＡＶｒｈ．２４、ＡＡＶｒｈ．２５、ＡＡＶｒｈ．３１、ＡＡＶｒｈ．３２、ＡＡＶｒｈ．３３、ＡＡＶｒｈ．３４、ＡＡＶｒｈ．３５、ＡＡＶｒｈ．３６、ＡＡＶｒｈ．３７、ＡＡＶｒｈ．３７Ｒ２、ＡＡＶｒｈ．３８、ＡＡＶｒｈ．３９、ＡＡＶｒｈ．４０、ＡＡＶｒｈ．４３、ＡＡＶｒｈ．４４、ＡＡＶｒｈ．４５、ＡＡＶｒｈ．４６、ＡＡＶｒｈ．４７、ＡＡＶｒｈ．４８、ＡＡＶｒｈ．４８．１、ＡＡＶｒｈ．４８．１．２、ＡＡＶｒｈ．４８．２、ＡＡＶｒｈ．４９、ＡＡＶｒｈ．５０、ＡＡＶｒｈ．５１、ＡＡＶｒｈ．５２、ＡＡＶｒｈ．５３、ＡＡＶｒｈ．５４、ＡＡＶｒｈ．５５、ＡＡＶｒｈ．５６、ＡＡＶｒｈ．５７、ＡＡＶｒｈ．５８、ＡＡＶｒｈ．５９、ＡＡＶｒｈ．６０、ＡＡＶｒｈ．６１、ＡＡＶｒｈ．６２、ＡＡＶｒｈ．６４、ＡＡＶｒｈ．６４Ｒ１、ＡＡＶｒｈ．６４Ｒ２、ＡＡＶｒｈ．６５、ＡＡＶｒｈ．６７、ＡＡＶｒｈ．６８、ＡＡＶｒｈ．６９、ＡＡＶｒｈ．７０、ＡＡＶｒｈ．７２、ＡＡＶｒｈ．７３、ＡＡＶｒｈ．７４、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ａ、ＡＡＶ－Ｇ２Ｂ－２６、ＡＡＶ－Ｇ２Ｂ－１３、ＡＡＶ－ＴＨ１．１－３２、ＡＡＶ－ＴＨ１．１－３５、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ２、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ３、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｎ／ＰＨＰ．Ｂ－ＤＧＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＥＳＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＧＧＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＡＴＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＡＴＴ－Ｔ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＤＧＴ－Ｔ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＧＧＴ－Ｔ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＳＧＳ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＡＱＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＱＱＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＳＮＰ（３）、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＳＮＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＱＧＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＮＱＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＥＧＳ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＳＧＮ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＥＧＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＤＳＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＤＳＴ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＳＴＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＰＱＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＳＱＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＱＬＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＴＭＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ－ＴＴＰ、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｓ／Ｇ２Ａ１２、ＡＡＶ－Ｇ２Ａ１５／Ｇ２Ａ３、ＡＡＶ－Ｇ２Ｂ４、ＡＡＶ－Ｇ２Ｂ５、ＰＨＰ．Ｓ、ＡＡＡＶ、ＡＡＶ Ａ３．３、ＡＡＶ Ａ３．４、ＡＡＶ Ａ３．５、ＡＡＶ Ａ３．７、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．３、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．１、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．１０、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．２、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．４、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．５、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．７、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．８、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｂ７．３、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｂ７．４、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ１、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ２、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ３、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ４、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ５、ＡＡＶ ＣＢｒ－ｅ５、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ６、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ７、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ８、ＡＡＶ ＣＨｔ－１、ＡＡＶ ＣＨｔ－２、ＡＡＶ ＣＨｔ－３、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．１、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．１０、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．５、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．６、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．７、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．８、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ１、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ２、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ５、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ６、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ８、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ９、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｎ４、ＡＡＶ ＣＫｄ－１、ＡＡＶ ＣＫｄ－１０、ＡＡＶ ＣＫｄ－２、ＡＡＶ ＣＫｄ－３、ＡＡＶ ＣＫｄ－４、ＡＡＶ ＣＫｄ－６、ＡＡＶ ＣＫｄ－７、ＡＡＶ ＣＫｄ－８、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ１、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ２、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ３、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ４、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ５、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ６、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ７、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ８、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ１、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ２、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ３、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ４、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ５、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ６、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｎ３、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｎ９、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ１、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ２、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ３、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ４、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ５、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ６、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ７、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ９、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－１、ＡＡＶ ＣＬｖ１－１、ＡＡＶ ＣＬｖ１－１０、ＡＡＶ ＣＬｖ１－２、ＡＡＶ ＣＬｖ－１２、ＡＡＶ ＣＬｖ１－３、ＡＡＶ ＣＬｖ－１３、ＡＡＶ ＣＬｖ１－４、ＡＡＶ ＣＬｖ１－７、ＡＡＶ ＣＬｖ１－８、ＡＡＶ ＣＬｖ１－９、ＡＡＶ ＣＬｖ－２、ＡＡＶ ＣＬｖ－３、ＡＡＶ ＣＬｖ－４、ＡＡＶ ＣＬｖ－６、ＡＡＶ ＣＬｖ－８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ２、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ３、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ４、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ５、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ７、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｅ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｋ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｋ３、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｋ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｌ４、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｌ５、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｌ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ１１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ２、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ５、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ７、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ２、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ３、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ４、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ５、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ７、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ９、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．１０、ＡＡＶ ＣＳｐ－１、ＡＡＶ ＣＳｐ－１０、ＡＡＶ ＣＳｐ－１１、ＡＡＶ ＣＳｐ－２、ＡＡＶ ＣＳｐ－３、ＡＡＶ ＣＳｐ－４、ＡＡＶ ＣＳｐ－６、ＡＡＶ ＣＳｐ－７、ＡＡＶ ＣＳｐ－８、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．２、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．４、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．５、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．６、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．７、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．８、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．９、ＡＡＶ ＣＳｐ－９、ＡＡＶ－ＬＫ０８、ＡＡＶ－ＬＫ１５、ＡＡＶシャッフル１００－１、ＡＡＶシャッフル１００－２、ＡＡＶシャッフル１００－３、ＡＡＶシャッフル１００－７、ＡＡＶシャッフル１０－２、ＡＡＶシャッフル１０－６、ＡＡＶシャッフル１０－８、ＡＡＶ ＳＭ １００－１０、ＡＡＶ ＳＭ １００－３、ＡＡＶ ＳＭ １０－１、ＡＡＶ ＳＭ １０－２、ＡＡＶ ＳＭ １０－８、ＡＡＶ．ＶＲ－３５５、ＡＡＶ－ｂ、ＡＡＶＣ１、ＡＡＶＣ２、ＡＡＶＣ５、ＡＡＶＣｈ．５、ＡＡＶＣｈ．５Ｒ１、ＡＡＶ－ＤＪ、ＡＡＶ－ＤＪ８、ＡＡＶＦ１／ＨＳＣ１、ＡＡＶＦ１１／ＨＳＣ１１、ＡＡＶＦ１２／ＨＳＣ１２、ＡＡＶＦ１３／ＨＳＣ１３、ＡＡＶＦ１４／ＨＳＣ１４、ＡＡＶＦ１５／ＨＳＣ１５、ＡＡＶＦ１６／ＨＳＣ１６、ＡＡＶＦ１７／ＨＳＣ１７、ＡＡＶＦ２／ＨＳＣ２、ＡＡＶＦ３、ＡＡＶＦ３／ＨＳＣ３、ＡＡＶＦ４／ＨＳＣ４、ＡＡＶＦ５、ＡＡＶＦ５／ＨＳＣ５、ＡＡＶＦ６／ＨＳＣ６、ＡＡＶＦ７／ＨＳＣ７、ＡＡＶＦ８／ＨＳＣ８、ＡＡＶＦ９／ＨＳＣ９、ＡＡＶ－ｈ、ＡＡＶＨ－１／ｈｕ．１、ＡＡＶＨ２、ＡＡＶＨ－５／ｈｕ．３、ＡＡＶＨ６、ＡＡＶｈＥ１．１、ＡＡＶｈＥｒ１．１４、ＡＡＶｈＥｒ１．１６、ＡＡＶｈＥｒ１．１８、ＡＡＶｈＥＲ１．２３、ＡＡＶｈＥｒ１．３５、ＡＡＶｈ
Ｅｒ１．３６、ＡＡＶｈＥｒ１．５、ＡＡＶｈＥｒ１．７、ＡＡＶｈＥｒ１．８、ＡＡＶｈＥｒ２．１６、ＡＡＶｈＥｒ２．２９、ＡＡＶｈＥｒ２．３０、ＡＡＶｈＥｒ２．３１、ＡＡＶｈＥｒ２．３６、ＡＡＶｈＥｒ２．４、ＡＡＶｈＥｒ３．１、ＡＡＶＬＧ－１０／ｒｈ．４０、ＡＡＶＬＧ－４／ｒｈ．３８、ＡＡＶＬＧ－９／ｈｕ．３９、ＡＡＶＬＧ－９／ｈｕ．３９、ＡＡＶ－ＬＫ０１、ＡＡＶ－ＬＫ０２、ＡＡＶ－ＬＫ０３、ＡＡＶ－ＬＫ０３、ＡＡＶ－ＬＫ０４、ＡＡＶ－ＬＫ０５、ＡＡＶ－ＬＫ０６、ＡＡＶ－ＬＫ０７、ＡＡＶ－ＬＫ０９、ＡＡＶ－ＬＫ１０、ＡＡＶ－ＬＫ１１、ＡＡＶ－ＬＫ１２、ＡＡＶ－ＬＫ１３、ＡＡＶ－ＬＫ１４、ＡＡＶ－ＬＫ１６、ＡＡＶ－ＬＫ１７、ＡＡＶ－ＬＫ１８、ＡＡＶ－ＬＫ１９、ＡＡＶＮ７２１－８／ｒｈ．４３、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ １２、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ１１、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ２、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ４、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ６、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ７、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ８、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、Ａｎｃ８１、Ａｎｃ８２、Ａｎｃ８３、Ａｎｃ８４、Ａｎｃ９４、Ａｎｃ１１０、Ａｎｃ１１３、Ａｎｃ１２６、Ａｎｃ１２７、ＢＡＡＶ，ＢＮＰ６１ ＡＡＶ、ＢＮＰ６２ ＡＡＶ、ＢＮＰ６３ ＡＡＶ、ウシＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、日本人ＡＡＶ１０血清型、ＵＰＥＮＮ ＡＡＶ１０、ＶＯＹ１０１及びＶＯＹ２０１を含むか又はそれらからなる群から選択される。

【0073】

いくつかの実施形態では、「ＡＡＶベクター変異体」は、例えば、カプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３のうち１つ以上における１つ又はいくつかのアミノ酸残基の置換、欠失又は付加によって遺伝子改変されたベクターを含む。このような変異体の例としては、それらのＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質の何れか１つ又はいくつかにおける少なくとも１つのＹからＦ、ＫからＲ、ＴからＡ、ＳからＡ及び／又はＴからＶの突然変異を含むＡＡＶベクターが挙げられるがこれらに限定されない。

【0074】

このような変異体のさらなる例としては、Ｙ７３１Ｆ突然変異（又は他のＡＡＶ血清型における対応する部位）を有するＡＡＶ１；Ｙ２７２Ｆ、Ｙ４４４Ｆ、Ｔ４９１Ｖ、Ｙ５００Ｆ、Ｓ６６２Ｖ及び／又はＹ７３０Ｆ突然変異（又は他のＡＡＶ血清型における対応する部位）のうち１つ以上を有するＡＡＶ２、例えばＹ４４４Ｆ突然変異を有するＡＡＶ２、Ｙ４４４Ｆ＋Ｙ５００Ｆ＋Ｙ７３０Ｆ突然変異を有するＡＡＶ２、Ｙ２７２Ｆ＋Ｙ４４４Ｆ＋Ｙ５００Ｆ＋Ｙ７３０Ｆ突然変異を有するＡＡＶ２、Ｙ４４４Ｆ＋Ｙ５００Ｆ＋Ｙ７３０Ｆ＋Ｔ４９１Ｖ突然変異を有するＡＡＶ２及びＹ２７２Ｆ＋Ｙ４４４Ｆ＋Ｙ５００Ｆ＋Ｙ７３０Ｆ＋Ｔ４９１Ｖ突然変異を有するＡＡＶ２など；Ｙ７０５Ｆ、Ｙ７３１Ｆ及び／又はＴ４９２Ｖ突然変異（又は他のＡＡＶ血清型における対応する部位）のうち１つ以上を有するＡＡＶ３；Ｙ２６３Ｆ及び／又はＹ７１９Ｆ突然変異（又は他のＡＡＶ血清型における対応する部位）のうち１つ以上を有するＡＡＶ５；Ｙ４４５Ｆ、Ｔ４９２Ｖ、Ｓ６６３Ｖ、Ｙ７０５Ｆ及び／又はＹ７３１Ｆ突然変異（又は他のＡＡＶ血清型における対応する部位）のうち１つ以上を有するＡＡＶ６、例えばＹ４４５Ｆ突然変異を有するＡＡＶ６、Ｙ７０５Ｆ＋Ｙ７３１Ｆ突然変異を有するＡＡＶ６、Ｔ４９２Ｖ突然変異を有するＡＡＶ６、Ｙ７０５Ｆ＋Ｙ７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ突然変異を有するＡＡＶ６、Ｓ６６３Ｖ突然変異を有するＡＡＶ６及びＳ６６３Ｖ＋Ｔ４９２Ｖ突然変異を有するＡＡＶ６；及びＹ４４７Ｆ、Ｔ４９４Ｖ及び／又はＹ７３３Ｆ突然変異（又は他のＡＡＶ血清型における対応する部位）のうち１つ以上を有するＡＡＶ８が挙げられるがこれらに限定されない。

【0075】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ８及びＡＡＶ９からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２である。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ５である。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ８である。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ９である。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２／２である。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２／５である。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２／８である。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２／９である。

【0076】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、血清型２、５、８及び９からなる群から選択されるＡＡＶ血清型のカプシドを有する。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型２のカプシドを有する。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型５のカプシドを有する。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型８のカプシドを有する。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型９のカプシドを有する。

【0077】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、多岐にわたる細胞、組織及び臓器を標的とし得る。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターにより標的とされる細胞の例には、肝細胞；網膜の細胞；即ち光受容体、網膜色素上皮（ＲＰＥ）、ミュラー細胞；筋細胞、即ち筋芽細胞、サテライト細胞；中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞、即ちニューロン、グリア細胞；心臓の細胞；末梢神経系（ＰＮＳ）の細胞；骨芽細胞；腫瘍細胞；血液細胞、例えばリンパ球、単球、好塩基球、好酸球、好中球、肥満細胞；造血幹細胞を含む造血細胞；内耳の細胞（例えば内有毛細胞及び／又は外有毛細胞、ヘンゼン細胞、ダイテルス細胞、柱細胞、内指節細胞、境界細胞など）；人工多能性幹細胞（ｉＰＳ）などが包含されるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＡＡＶにより標的とされ得る組織及び／又は臓器の例としては、眼、網膜、肝臓、骨格筋、心筋、平滑筋、耳、脳、脊椎、骨、結合組織、心臓、腎臓、肺、リンパ節、乳腺、ミエリン、前立腺、精巣、胸腺、甲状腺、気管などが挙げられる。いくつかの実施形態では、好ましい細胞タイプは、肝細胞、網膜細胞、筋細胞、ＣＮＳの細胞、ＰＮＳの細胞及び造血系の細胞である。いくつかの実施形態では、好ましい組織及び／又は臓器は、肝臓、筋肉、心臓、眼及び脳である。

【0078】

ＡＡＶの指向性は、それらの血清型に応じて変動し得る。いくつかの実施形態では、例えばＡＡＶ２を使用して、中枢神経系（ＣＮＳ）、腎臓及び光受容体細胞に形質導入することができ、一方で、いくつかの実施形態では、例えばＡＡＶ８は、ＣＮＳ、心臓、肝臓、光受容体細胞、網膜色素上皮（ＲＰＥ）及び骨格筋に形質導入するために有効である。

【0079】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、関心対象の細胞株における、例えば実施例の節に記載のような、ＨＥＫ２９３細胞における一過性のトランスフェクションなどの当技術分野で公知の何れかの方法によって作製され得る。

【0080】

組み換えＡＡＶベクター
いくつかの実施形態では、本発明により改変されるＡＡＶベクターは、組み換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターであり得る。一般に、野生型（ＷＴ）ＡＡＶは、２つの末端逆位配列（ＩＴＲ）が隣接する２つの大きなオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する１本鎖直鎖状ＤＮＡゲノム約５ｋｂ長を有する。５’及び３’ＯＲＦは、複製及びカプシドタンパク質をそれぞれコードする。一般に、ＩＴＲは、１４５個のヌクレオチドを含有し、ＡＡＶゲノム複製開始点及びパッケージングシグナルとして働く。組み換えＡＡＶにおいて、ウイルスＯＲＦは、外因性遺伝子発現カセットにより置き換えられ、一方で複製及びカプシドタンパク質は、トランスで提供される。いくつかの実施形態では、本発明による改変ＡＡＶベクターは、２本鎖の自己相補的ＤＮＡゲノム（ｓｃＡＡＶ）を含み得る（例えば、Ｂｕｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｌｆ－ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ＡＡＶ Ｖｉｒｕｓ（ｓｃＡＡＶ）Ｓａｆｅ ａｎｄ Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ Ｍｅｓｈｗｏｒｋ ｏｆ Ｌｉｖｉｎｇ Ｒａｔｓ ａｎｄ Ｍｏｎｋｅｙｓ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２０１０を参照）。

【0081】

従って、「組み換えＡＡＶベクター」又は「ｒＡＡＶ」は、本明細書中で、外因性核酸配列（例えばペイロード、例えば導入遺伝子）がウイルスゲノムに導入されているＡＡＶを指す。前記外因性核酸配列は、何れのタイプの配列であってもよく、ＡＡＶベクターの意図される使用に関して選択される。例えば、前記核酸は、何れのＲＮＡ又はＤＮＡ配列を含んでもよく、及び／又は何れのＲＮＡ又はＤＮＡ配列を鋳型としてもよい。いくつかの実施形態では、核酸は、好ましくはＤＮＡ配列を含み得る。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、インビボ又はインビトロでの適用のために遺伝子ベクターとして使用され得る。

【0082】

例示のために、本発明により改変される代表的なｒＡＡＶベクターは、ウイルスＯＲＦを置き換え、２つのＩＴＲの間に配置される外因性遺伝子発現カセットを含み得る。いくつかの実施形態では、外因性遺伝子発現カセットは、プロモーター配列、関心対象の遺伝子をコードする配列及び転写終結配列を含み得る。いくつかの実施形態では、プロモーター及び関心対象の遺伝子は、標的の組織及び／又は臓器及び既知の適応に応じて、例えば疾患状態の処置及び／又は予防のために選択される。

【0083】

さらなる又は代替的な例として、いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｒＡＡＶベクターは、細胞における相同組み換えのためのＤＮＡ鋳型を含み得る。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶは、インビボ、インビトロ及び／又はエクスビボで標的化される細胞における相同組み換えを促進するために遺伝子編集ツールと組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態では、遺伝子編集ツールは、何れかのタイプであり得、ＣＲＩＳＰＲ及びその関連する系（Ｃａｓタンパク質、ガイドＲＮＡ）、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ並びに前記タンパク質をコードするＲＮＡ及び／又はＤＮＡを包含するがこれらに限定されない。

【0084】

いくつかの実施形態では、本発明により改変されるＡＡＶベクターは、ＡＡＶベクターの意図される使用に関して選択される少なくとも１つの導入遺伝子を含む。

【0085】

「導入遺伝子」という用語は、本明細書中で使用される場合、細胞に導入され、ＲＮＡに転写され、任意選択的に適切な条件下で翻訳され及び／又は発現されることが可能であるポリヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、それが導入された細胞に所望の特性を付与するか、又はそうでなければ所望の治療転帰又は予防転帰をもたらす。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、適切な手段の存在下で、例えば、ＣＲＩＳＰＲに基づく方法、ＴＡＬＥＮに基づく方法、ＺＦＮに基づく方法などを使用した修正的遺伝子編集などを介して、宿主細胞のゲノムに全体的又は部分的に組み込まれ得る。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｐｉＲＮＡなど、ＲＮＡ干渉（即ち遺伝子サイレンシング）を媒介する分子に転写され得る。

【0086】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの導入遺伝子は、タンパク質又はその断片をコードするｃＤＮＡを含む。

【0087】

本明細書中で使用される場合、「ｃＤＮＡ」という用語は、相補的ＤＮＡを指し、通常は逆転写酵素により触媒される反応において１本鎖ＲＮＡ（例えば、メッセンジャーＲＮＡ［ｍＲＮＡ］又はマイクロＲＮＡ［ｍｉＲＮＡ］）鋳型から合成されるＤＮＡ分子に対応する。特に、ｃＤＮＡがｍＲＮＡの逆転写から得られる場合、これは、タンパク質からのコード遺伝子全体を含まず、前記タンパク質のコード配列のみ（即ちイントロンがないエクソン）を含む。

【0088】

いくつかの実施形態では、ｃＤＮＡの断片は、タンパク質のＮ末端部分又はＣ末端部分をコードする前記ｃＤＮＡの一部を含み得る。いくつかの実施形態では、例えば、このような断片は、単一のＡＡＶベクターでは容易に保持することができず、従って１つより多いのベクター、例えば二重ＡＡＶベクターの使用を必要とする大きいｃＤＮＡの場合に有用であり得る。

【0089】

いくつかの実施形態では、ｃＤＮＡの断片は、タンパク質の機能的及び／又は構造部分をコードする前記ｃＤＮＡの一部を含み得る。

【0090】

いくつかの実施形態では、ｃＤＮＡの断片は、ＲＮＡ分子の機能的及び／又は構造部分をコードする配列を含み得る。いくつかの実施形態では、このようなＲＮＡ分子は、リボソームＲＮＡ、転移ＲＮＡ、核内低分子ＲＮＡ、核小体低分子ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、長い非コードＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ、ガイドＲＮＡ及び／又は何らかの機能的ＲＮＡ種であり得る。

【0091】

いくつかの実施形態では、ｃＤＮＡは、ＡＢＣＡ４、ＡＤＡＭ９、ＡＧＢＬ５、ＡＨＲ、ＡＩＰＬ１、ＡＰＯＥ、ＡＲＨＧＥＦ１８、ＡＲＬ２ＢＰ、ＡＲＬ３、ＡＲＬ６、ＢＢＳ２、ＢＥＳＴ１、Ｃ２ＯＲＦ７１、Ｃ８ｏｒｆ３７、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＡＰＮ５、ＣＤＨＲ１、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ７８、ＣＥＲＫＬ、ＣＦＨ、ＣＨＭ、ＣＬＣＣ１、ＣＬＲＮ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＢ１、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＲＢ１、ＣＲＢ２、ＣＲＸ、ＣＴＮＮＢ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＤＨＤＤＳ、ＤＨＸ３８、ＥＦＥＭＰ１、ＥＬＯＶＬ４、ＥＹＳ、ＦＡＭ１６１Ａ、ＦＢＮ２、ＦＳＣＮ２、ＦＺＤ４、ＧＤＦ６、ＧＵＣＡ１Ａ、ＧＵＣＡ１Ｂ、ＧＵＣＹ２Ｄ、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＫ１、ＨＭＣＮ１、ＨＲＧ４、ＨＴＲＡ１、ＩＤＨ３Ａ、ＩＤＨ３Ｂ、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ１７２、ＩＦＴ４３、ＩＭＰＤＨ１、ＩＭＰＧ２、ＫＣＮＪ１３、ＫＩＡＡ１５４９、ＫＩＦ３Ｂ、ＫＩＺ、ＫＬＨＬ７、ＬＣＡ５、ＬＲＡＴ、ＬＲＰ５、ＭＡＫ、ＭＥＲＴＫ、ＭＹＯ７Ａ、ＮＤＰ、ＮＥＫ２、ＮＭＮＡＴ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲＬ、ＰＤＥ６Ａ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｇ、ＰＩＴＰＮＭ３、ＰＯＭＧＴ１、ＰＲＣＤ、ＰＲＯＭ１、ＰＲＰＦ３、ＰＲＰＦ４、ＰＲＰＦ６、ＰＲＰＦ８、ＰＲＰＦ３１、ＰＲＰＨ２、ＲＡＸＬ１、ＲＢＰ３、ＲＢＰ４、ＲＤ３、ＲＤＨ１２、ＲＤＨ５、ＲＥＥＰ６、ＲＧＲ、ＲＨＯ、ＲＩＭＳ１、ＲＬＢＰ１、ＲＰ１、ＲＰ１Ｌ１、ＲＰ２、ＲＰ４、ＲＰ７、ＲＰ９、ＲＰ１０、ＲＰ１１、ＲＰ１２、ＲＰ１３、ＲＰ１４、ＲＰ１７、ＲＰ１８、ＲＰ１９、ＲＰ２０、ＲＰ２５、ＲＰ２６、ＲＰ２７、ＲＰ２８、ＲＰ３０、ＲＰ３１、ＲＰ３２、ＲＰ３３、ＲＰ３５、ＲＰ３６、ＲＰ３７、ＲＰ３８、ＲＰ３９、ＲＰ４０、ＲＰ４１、ＲＰ４２、ＲＰ４３、ＲＰ４４、ＲＰ４５、ＲＰ４６、ＲＰ４７、ＲＰ４８、ＲＰ４９、ＲＰ５０、ＲＰ５１、ＲＰ５３、ＲＰ５４、ＲＰ５５、ＲＰ５６、ＲＰ５７、ＲＰ５８、ＲＰ５９、ＲＰ６０、ＲＰ６１、ＲＰ６２、ＲＰ６４、ＲＰ６５、ＲＰ６６、ＲＰ６７、ＲＰ６８、ＲＰ６９、ＲＰ７０、ＲＰ７１、ＲＰ７２、ＲＰ７３、ＲＰ７４、ＲＰ７５、ＲＰ７６、ＲＰ７７、ＲＰ７８、ＲＰ７９、ＲＰ８０、ＲＰ８１、ＲＰ８２、ＲＰ８３、ＲＰ８４、ＲＰ８５、ＲＰ８６、ＲＰ８７、ＲＰ８８、ＲＰ８９、ＲＰ９０、ＲＰＥ６５、ＲＰＥ８７、ＲＰＧＲ、ＲＰＧＲＩＰ１、ＳＡＧ、ＳＥＭＡ４Ａ、ＳＬＣ７Ａ１４、ＳＮＲＮＰ２００、ＳＰＡＴＡ７、ＴＯＰＯＲＳ、ＴＳＰＡＮ１２、ＴＴＣ８、ＴＵＬＰ１、ＵＳＨ２Ａ、ＶＣＡＮ、ＺＮＦ４０８及びＺＮＦ５１３を含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子由来である。

【0092】

いくつかの実施形態では、ｃＤＮＡは、Ｃｒｕｍｂｓ Ｃｅｌｌ Ｐｏｌａｒｉｔｙ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ２（ＣＲＢ２）遺伝子由来である。いくつかの実施形態では、ｃＤＮＡは、ホスホジエステラーゼ６Ｂ（ＰＤＥ６Ｂ）遺伝子由来である。いくつかの実施形態では、ｃＤＮＡは、レチンアルデヒド結合タンパク質１（ＲＬＢＰ１）遺伝子由来である。いくつかの実施形態では、ｃＤＮＡは、レチノイドイソメロヒドロラーゼ（ＲＰＥ６５）遺伝子由来である。いくつかの実施形態では、ｃＤＮＡは、ＲＰＧＲ相互作用タンパク質１（ＲＰＧＲＩＰ１）遺伝子由来である。いくつかの実施形態では、ｃＤＮＡは、ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＡメンバー４（ＡＢＣＡ４）遺伝子由来である。いくつかの実施形態では、ｃＤＮＡは、ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＡメンバー４（ＡＢＣＡ４）遺伝子由来のＮ又はＣ末端コード領域である。

【0093】

いくつかの実施形態では、ｃＤＮＡは、３Ｒタウ、４Ｒタウ、ＡＡＲＳ、ＡＢＣＤ１、ＡＣＯＸ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＧＡ、ＡＧＥＲ、ＡＬＤＨ７Ａ１、ＡＬＧ１３、ＡＬＳ２、ＡＮＧ、ＡＮＸＡ１１、ＡＰＰ、ＡＲＨＧＥＦ９、ＡＲＳＡ、ＡＲＳＢ、ＡＲＶ１、ＡＳＡＨ１、ＡＳＰＡ、ＡＴＮ１、ＡＴＰ１０Ａ、ＡＴＰ１３Ａ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＢＡＸ、ＢＣＬ－２、ＢＤＮＦ、ＢＩＣＤ２、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＳＲ、ＣＣＮＦ、ＣＤＫＬ５、ＣＥＲＳ１、ＣＦＡＰ４１０、ＣＨＣＨＤ１０、ＣＨＤ２、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＢ２、ＣＬＣＮ２ａ、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、ＣＮＴＮ２、ＣＰＡ６、ＣＳＴＢ、ＣＴＮＳ、ＣＴＳＡ、ＣＴＳＤ、ＤＡＯ、ＤＣＴＮ１、ＤＥＰＤＣ５、ＤＭＤ、ＤＮＡＪＢ２、ＤＮＭ１、ＤＯＣＫ７、ＤＲＤ２、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＦＨＣ１、ＥＧＬＮ１、ＥＰＨＡ４、ＥＰＭ２Ａ、ＥＲＢＢ４、ＦＧＦ１２、ＦＩＧ４、ＦＲＲＳ１Ｌ、ＦＴＬ、ＦＵＣＡ１、ＦＵＳ、ＦＸＮ、ＧＡＡ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＬ、ＧＡＬＣ、ＧＡＬＮＳ、ＧＢＡ、ＧＦＡＰ、ＧＬＡ、ＧＬＢ１、ＧＬＥ１、ＧＬＴ８Ｄ１、ＧＮＡＯ１、ＧＮＳ、ＧＯＳＲ２、ＧＰＲ９８、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＳＴＭ１、ＧＵＦ１、ＧＵＳＢ、ＨＣＮ１、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＴＴ、ＨＹＡＬ１、ＩＤＳ、ＩＤＵＡ、ＩＧＨＭＢＰ２、ＩＬ－１、ＩＴ１５、ＩＴＰＡ、ＪＰＨ３、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＴ１、ＫＣＴＤ７、ＬＡＬ、ＬＡＭＰ２、ＬＧＩ１、ＬＭＮＢ２、ＬＲＲＫ２、ＭＡＮ２Ｂ１、ＭＡＮ２Ｂ２、ＭＡＮ２Ｃ１、ＭＡＮＢＡ、ＭＡＴＲ３、ＭＢＤ５、ＭＦＳＤ８、ＮＡＧＡ、ＮＡＧＬＵ、ＮＥＣＡＰ１、ＮＥＦＨ、ＮＥＫ１、ＮＥＵ１、ＮＨＬＲＣ１、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、ＮＲ４Ａ２、ＮＴＲＫ２、ＯＣＡ２、ＯＰＴＮ、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＣＤＨ１９、ＰＥＸ１、ＰＥＸ２、ＰＥＸ３、ＰＥＸ５、ＰＥＸ６、ＰＥＸ１０、ＰＥＸ１１Ｂ、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ１４、ＰＥＸ１６、ＰＥＸ１９、ＰＥＸ２６、ＰＦＮ１、ＰＩＮＫ１、ＰＬＣＢ１、ＰＮＰＯ、ＰＯＮ１、ＰＯＮ２、ＰＯＮ３、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＲＤＭ８、ＰＲＩＣＫＬＥ１、ＰＲＫＮ、ＰＲＮＰ、ＰＲＰＨ、ＰＲＲＴ２、ＰＳＡＰ、Ｓ１０６β、ＳＣＡＲＢ２、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ９Ａｂ、ＳＥＴＸ、ＳＧＳＨ、ＳＩＧＭＡＲ１、ＳＩＫ１、ＳＫＰ１、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣＡ１７Ａ５、ＳＭＮ１、ＳＭＰＤ１、ＳＮＣＡ、ＳＮＲＰＮ、ＳＯＤ１、ＳＰＧ１１、ＳＰＴＡＮ１、ＳＱＳＴＭ１、ＳＴ３ＧＡＬ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＳＴＸ１Ｂ、ＳＴＸＢＰ１、ＳＹＰ、ＳＹＴ１、ＳＺＴ２、ＴＡＦ１５、ＴＡＲＤＢＰ、ＴＢＣ１Ｄ２４、ＴＢＣＥ、ＴＢＫ１、ＴＢＰ、ＴＩＴＦ－１、ＴＲＥＭ２、ＵＢＡ５、ＵＢＥ１、ＵＢＥ３Ａ、ＵＢＱＬＮ２、ＵＣＨ－Ｌ１、ＵＮＣ１３Ａ、ＶＡＰＢ、ＶＣＰ、ＶＰＳ３５、ＷＷＯＸ及びＸＢＰ１を含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子由来である。

【0094】

いくつかの特定の実施形態では、ｃＤＮＡは、ＧＢＡ遺伝子由来、好ましくはヒトＧＢＡ遺伝子由来である。

【0095】

ヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡの例示的な核酸配列は、配列番号１、又は配列番号１と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％以上の配列同一性を有する核酸配列を含むか又はそれからなる。

【0096】

一実施形態では、ヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡの核酸配列は、配列番号２、又は配列番号２と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか又はそれからなるアミノ酸配列をコードする。

【0097】

配列番号１
ａｔｇｇａｇｔｔｔｔｃａａｇｔｃｃｔｔｃｃａｇａｇａｇｇａａｔｇｔｃｃｃａａｇｃｃｔｔｔｇａｇｔａｇｇｇｔａａｇｃａｔｃａｔｇｇｃｔｇｇｃａｇｃｃｔｃａｃａｇｇａｔｔｇｃｔｔｃｔａｃｔｔｃａｇｇｃａｇｔｇｔｃｇｔｇｇｇｃａｔｃａｇｇｔｇｃｃｃｇｃｃｃｃｔｇｃａｔｃｃｃｔａａａａｇｃｔｔｃｇｇｃｔａｃａｇｃｔｃｇｇｔｇｇｔｇｔｇｔｇｔｃｔｇｃａａｔｇｃｃａｃａｔａｃｔｇｔｇａｃｔｃｃｔｔｔｇａｃｃｃｃｃｃｇａｃｃｔｔｔｃｃｔｇｃｃｃｔｔｇｇｔａｃｃｔｔｃａｇｃｃｇｃｔａｔｇａｇａｇｔａｃａｃｇｃａｇｔｇｇｇｃｇａｃｇｇａｔｇｇａｇｃｔｇａｇｔａｔｇｇｇｇｃｃｃａｔｃｃａｇｇｃｔａａｔｃａｃａｃｇｇｇｃａｃａｇｇｃｃｔｇｃｔａｃｔｇａｃｃｃｔｇｃａｇｃｃａｇａａｃａｇａａｇｔｔｃｃａｇａａａｇｔｇａａｇｇｇａｔｔｔｇｇａｇｇｇｇｃｃａｔｇａｃａｇａｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｃｔｃａａｃａｔｃｃｔｔｇｃｃｃｔｇｔｃａｃｃｃｃｃｔｇｃｃｃａａａａｔｔｔｇｃｔａｃｔｔａａａｔｃｇｔａｃｔｔｃｔｃｔｇａａｇａａｇｇａａｔｃｇｇａｔａｔａａｃａｔｃａｔｃｃｇｇｇｔａｃｃｃａｔｇｇｃｃａｇｃｔｇｔｇａｃｔｔｃｔｃｃａｔｃｃｇｃａｃｃｔａｃａｃｃｔａｔｇｃａｇａｃａｃｃｃｃｔｇａｔｇａｔｔｔｃｃａｇｔｔｇｃａｃａａｃｔｔｃａｇｃｃｔｃｃｃａｇａｇｇａａｇａｔａｃｃａａｇｃｔｃａａｇａｔａｃｃｃｃｔｇａｔｔｃａｃｃｇａｇｃｃｃｔｇｃａｇｔｔｇｇｃｃｃａｇｃｇｔｃｃｃｇｔｔｔｃａｃｔｃｃｔｔｇｃｃａｇｃｃｃｃｔｇｇａｃａｔｃａｃｃｃａｃｔｔｇｇｃｔｃａａｇａｃｃａａｔｇｇａｇｃｇｇｔｇａａｔｇｇｇａａｇｇｇｇｔｃａｃｔｃａａｇｇｇａｃａｇｃｃｃｇｇａｇａｃａｔｃｔａｃｃａｃｃａｇａｃｃｔｇｇｇｃｃａｇａｔａｃｔｔｔｇｔｇａａｇｔｔｃｃｔｇｇａｔｇｃｃｔａｔｇｃｔｇａｇｃａｃａａｇｔｔａｃａｇｔｔｃｔｇｇｇｃａｇｔｇａｃａｇｃｔｇａａａａｔｇａｇｃｃｔｔｃｔｇｃｔｇｇｇｃｔｇｔｔｇａｇｔｇｇａｔａｃｃｃｃｔｔｃｃａｇｔｇｃｃｔｇｇｇｃｔｔｃａｃｃｃｃｔｇａａｃａｔｃａｇｃｇａｇａｃｔｔｃａｔｔｇｃｃｃｇｔｇａｃｃｔａｇｇｔｃｃｔａｃｃｃｔｃｇｃｃａａｃａｇｔａｃｔｃａｃｃａｃａａｔｇｔｃｃｇｃｃｔａｃｔｃａｔｇｃｔｇｇａｔｇａｃｃａａｃｇｃｔｔｇｃｔｇｃｔｇｃｃｃｃａｃｔｇｇｇｃａａａｇｇｔｇｇｔａｃｔｇａｃａｇａｃｃｃａｇａａｇｃａｇｃｔａａａｔａｔｇｔｔｃａｔｇｇｃａｔｔｇｃｔｇｔａｃａｔｔｇｇｔａｃｃｔｇｇａｃｔｔｔｃｔｇｇｃｔｃｃａｇｃｃａａａｇｃｃａｃｃｃｔａｇｇｇｇａｇａｃａｃａｃｃｇｃｃｔｇｔｔｃｃｃｃａａｃａｃｃａｔｇｃｔｃｔｔｔｇｃｃｔｃａｇａｇｇｃｃｔｇｔｇｔｇｇｇｃｔｃｃａａｇｔｔｃｔｇｇｇａｇｃａｇａｇｔｇｔｇｃｇｇｃｔａｇｇｃｔｃｃｔｇｇｇａｔｃｇａｇｇｇａｔｇｃａｇｔａｃａｇｃｃａｃａｇｃａｔｃａｔｃａｃｇａａｃｃｔｃｃｔｇｔａｃｃａｔｇｔｇｇｔｃｇｇｃｔｇｇａｃｃｇａｃｔｇｇａａｃｃｔｔｇｃｃｃｔｇａａｃｃｃｃｇａａｇｇａｇｇａｃｃｃａａｔｔｇｇｇｔｇｃｇｔａａｃｔｔｔｇｔｃｇａｃａｇｔｃｃｃａｔｃａｔｔｇｔａｇａｃａｔｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｇｔｔｔｔａｃａａａｃａｇｃｃｃａｔｇｔｔｃｔａｃｃａｃｃｔｔｇｇｃｃａｃｔｔｃａｇｃａａｇｔｔｃａｔｔｃｃｔｇａｇｇｇｃｔｃｃｃａｇａｇａｇｔｇｇｇｇｃｔｇｇｔｔｇｃｃａｇｔｃａｇａａｇａａｃｇａｃｃｔｇｇａｃｇｃａｇｔｇｇｃａｃｔｇａｔｇｃａｔｃｃｃｇａｔｇｇｃｔｃｔｇｃｔｇｔｔｇｔｇｇｔｃｇｔｇｃｔａａａｃｃｇｃｔｃｃｔｃｔａａｇｇａｔｇｔｇｃｃｔｃｔｔａｃｃａｔｃａａｇｇａｔｃｃｔｇｃｔｇｔｇｇｇｃｔｔｃｃｔｇｇａｇａｃａａｔｃｔｃａｃｃｔｇｇｃｔａｃｔｃｃａｔｔｃａｃａｃｃｔａｃｃｔｇｔｇｇｃｇｔｃｇｃｃａｇｔｇａ

【0098】

配列番号２
ＭＥＦＳＳＰＳＲＥＥＣＰＫＰＬＳＲＶＳＩＭＡＧＳＬＴＧＬＬＬＬＱＡＶＳＷＡＳＧＡＲＰＣＩＰＫＳＦＧＹＳＳＶＶＣＶＣＮＡＴＹＣＤＳＦＤＰＰＴＦＰＡＬＧＴＦＳＲＹＥＳＴＲＳＧＲＲＭＥＬＳＭＧＰＩＱＡＮＨＴＧＴＧＬＬＬＴＬＱＰＥＱＫＦＱＫＶＫＧＦＧＧＡＭＴＤＡＡＡＬＮＩＬＡＬＳＰＰＡＱＮＬＬＬＫＳＹＦＳＥＥＧＩＧＹＮＩＩＲＶＰＭＡＳＣＤＦＳＩＲＴＹＴＹＡＤＴＰＤＤＦＱＬＨＮＦＳＬＰＥＥＤＴＫＬＫＩＰＬＩＨＲＡＬＱＬＡＱＲＰＶＳＬＬＡＳＰＷＴＳＰＴＷＬＫＴＮＧＡＶＮＧＫＧＳＬＫＧＱＰＧＤＩＹＨＱＴＷＡＲＹＦＶＫＦＬＤＡＹＡＥＨＫＬＱＦＷＡＶＴＡＥＮＥＰＳＡＧＬＬＳＧＹＰＦＱＣＬＧＦＴＰＥＨＱＲＤＦＩＡＲＤＬＧＰＴＬＡＮＳＴＨＨＮＶＲＬＬＭＬＤＤＱＲＬＬＬＰＨＷＡＫＶＶＬＴＤＰＥＡＡＫＹＶＨＧＩＡＶＨＷＹＬＤＦＬＡＰＡＫＡＴＬＧＥＴＨＲＬＦＰＮＴＭＬＦＡＳＥＡＣＶＧＳＫＦＷＥＱＳＶＲＬＧＳＷＤＲＧＭＱＹＳＨＳＩＩＴＮＬＬＹＨＶＶＧＷＴＤＷＮＬＡＬＮＰＥＧＧＰＮＷＶＲＮＦＶＤＳＰＩＩＶＤＩＴＫＤＴＦＹＫＱＰＭＦＹＨＬＧＨＦＳＫＦＩＰＥＧＳＱＲＶＧＬＶＡＳＱＫＮＤＬＤＡＶＡＬＭＨＰＤＧＳＡＶＶＶＶＬＮＲＳＳＫＤＶＰＬＴＩＫＤＰＡＶＧＦＬＥＴＩＳＰＧＹＳＩＨＴＹＬＷＲＲＱ

【0099】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの導入遺伝子は、導入遺伝子標的特異性及び／又は発現を増強する少なくとも１つのエレメントの制御下にある。いくつかの実施形態では、導入遺伝子標的特異性及び／又は発現を増強するエレメントの例としては、プロモーター、転写後調節エレメント（ＰＲＥ）、ポリアデニル化（ポリＡ）シグナル配列、翻訳調節エレメント、内因性ＲＮＡプロセシング経路による制御のための標的、上流エンハンサー（ＵＳＥ）、ＣＭＶエンハンサー及びイントロンが挙げられるがこれらに限定されない。

【0100】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの導入遺伝子は、少なくとも１つのプロモーターの制御下にある。

【0101】

当業者は、標的細胞における導入遺伝子の発現が、種特異的、誘導性、組織特異的、一過性に特異的、細胞特異的及び／又は細胞周期特異的であるプロモーターが挙げられるがこれらに限定されない特異的なプロモーターを必要とし得ることを認識し得る。

【0102】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、標的とされる細胞に対する指向性を有するプロモーター、即ち細胞特異的プロモーターである。

【0103】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、標的とされる組織においてある期間にわたり導入遺伝子の発現を駆動する。プロモーターにより駆動される発現は、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、２週間、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、３週間、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１年、１３カ月、１４カ月、１５カ月、１６カ月、１７カ月、１８カ月、１９カ月、２０カ月、２１カ月、２２カ月、２３カ月、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間又は１０年超の期間であり得る。

【0104】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、導入遺伝子の持続的発現のための弱いプロモーターである。

【0105】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、天然に存在してもよく又は天然に存在しなくてもよい。いくつかの実施形態では、プロモーターの例としては、ウイルスプロモーター、植物プロモーター及び動物プロモーター（例えば哺乳動物プロモーター）が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ヒトプロモーターであり得る。

【0106】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、参照物と比較して切断されていてもよい。いくつかの実施形態では、プロモーターは、参照物と比較して変異していてもよい。

【0107】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、複数の組織において発現を駆動するものであり得る。いくつかの実施形態では、複数の組織において発現を駆動又は促進するこのようなプロモーターとしては、ヒト伸長因子１ａ－サブユニット（ＥＦ１ａ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期エンハンサー及び／又はプロモーター、ニワトリβ－アクチン（ＣＢＡ）及びその誘導体ＣＡＧ、β－グルクロニダーゼ（ＧＵＳＢ）及びユビキチンＣ（ＵＢＣ）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0108】

いくつかの実施形態では、組織又は細胞特異的発現エレメントを使用して、導入遺伝子の発現をある特定の細胞タイプに制限することができる。

【0109】

いくつかの実施形態では、組織及び／又は細胞特異的なプロモーターは、ニューロン特異的プロモーターであり得る。ニューロンに対する組織又は細胞特異的発現エレメントの適切な例としては、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）プロモーター、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）プロモーター、血小板由来増殖因子Ｂ鎖（ＰＤＧＦ－β）プロモーター、シナプシン（Ｓｙｎ）プロモーター、メチル－ＣｐＧ結合タンパク質２（ＭｅＣＰ２）プロモーター、Ｃａ^２＋／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）プロモーター、代謝調節型グルタミン酸受容体２（ｍＧｌｕＲ２）プロモーター、神経フィラメント軽鎖（ＮＦＬ）プロモーター、神経フィラメント重鎖（ＮＦＨ）プロモーター、β－グロビンミニ遺伝子ηβ２プロモーター、プレプロエンケファリン（ＰＰＥ）プロモーター、エンケファリン（Ｅｎｋ）プロモーター及び興奮性アミノ酸輸送体２（ＥＡＡＴ２）プロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。

【0110】

いくつかの実施形態では、組織及び／又は細胞特異的プロモーターは、アストロサイト特異的プロモーターであり得る。アストロサイトに対する組織又は細胞特異的発現エレメントの適切な例としては、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター及びＥＡＡＴ２プロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。

【0111】

いくつかの実施形態では、組織及び／又は細胞特異的なプロモーターは、オリゴデンドロサイト特異的プロモーターであり得る。オリゴデンドロサイトに対する組織又は細胞特異的発現エレメントの適切な例としては、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）プロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。

【0112】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、ユビキタスプロモーターである。いくつかの実施形態では、このようなユビキタスプロモーターとしては、ＣＭＶ、ＣＢＡ（その誘導体ＣＡＧ、ＣＢｈなどを含む）、ＥＦ－１ａ、ＰＧＫ、ＵＢＣ、ＧＵＳＢ（ｈＧＢｐ）及びＵＣＯＥが挙げられ得るがこれらに限定されない。

【0113】

いくつかの実施形態では、プロモーターは組織又は細胞特異的ではない。

【0114】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、操作されたプロモーターである。

【0115】

いくつかの実施形態では、プロモーターは、天然に発現されるタンパク質由来のプロモーターである。

【0116】

いくつかの好ましい実施形態では、プロモーターは、ＣＡＧプロモーターである（例えば、ＣＭＶ前初期エンハンサー及びニワトリβアクチンプロモーターを含む）。

【0117】

ＡＡＶベクターにおけるカップリングの部位
本発明のいくつかの実施形態では、提供されるＡＡＶベクターは、ＡＡＶカプシドの少なくとも１つのアミノ酸への（例えばＡＡＶベクターの少なくとも１つのカプシドタンパク質への）少なくとも１つのラクタム（例えばβ－ラクタム）リンカーの共有結合カップリングによって修飾されたＡＡＶベクターである。典型的なＡＡＶカプシドは、ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３と呼ばれる３つのカプシドタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのラクタム（例えばβ－ラクタム）リンカーは、ＡＡＶベクターの少なくとも１つのＶＰ１タンパク質に共有結合する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのラクタム（例えばβ－ラクタム）リンカーは、ＡＡＶベクターの少なくとも１つのＶＰ２タンパク質に共有結合する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのラクタム（例えばβ－ラクタム）リンカーは、ＡＡＶベクターの少なくとも１つのＶＰ３タンパク質に共有結合する。

【0118】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶベクターの少なくとも１つのカプシドタンパク質の少なくとも１つの表面露出アミノ酸残基への少なくとも１つのラクタム（例えばβ－ラクタム）リンカーの共有結合カップリングにより修飾される。

【0119】

本明細書中で使用される場合、「表面に露出する」という用語は、ＡＡＶベクターの外部表面で少なくとも一部露出する側鎖を伴うアミノ酸残基を指す。

【0120】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つのラクタム（例えばβ－ラクタム）リンカーは、ＡＡＶベクターのカプシドの表面露出アミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ基に共有結合する。「アミノ基」は、本明細書中で、一級アミン基（－ＮＨ_２）又は二級アミン基（－ＮＨ－）又はその塩を指し；好ましくは、アミノ基は一級アミノ基である。いくつかの実施形態では、アミノ基は、リジン及びアルギニンから選択されるアミノ酸残基由来である。いくつかの好ましい実施形態では、アミノ基は、リジン残基由来、好ましくはＡＡＶベクターのカプシドの表面露出リジン残基由来である。

【0121】

本明細書中で使用される場合、「カプシドのアミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ基」は、アミノ酸残基の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００個以上のアミノ基を包含する。

【0122】

いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、そのカプシドに複数の（例えばいくつかの）修飾されたアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、同じカプシドタンパク質の複数の（例えばいくつかの）アミノ酸残基が修飾される。いくつかの実施形態では、異なるカプシドタンパク質に存在する複数の（例えばいくつかの）アミノ酸残基が修飾される。

【0123】

いくつかの実施形態では、本発明は、式（ＩＩ）：

【化16】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｎ^＊は、ＡＡＶベクターのカプシドのアミノ酸残基のアミノ基の窒素原子であり；

【化17】

は、ＡＡＶベクターのカプシドに対する付着点を表し；
Ｚは、いくつかの実施形態ではＡＡＶベクターの特定の機能的改変を付与又は達成するその能力を特徴とし得るか及び／又はその能力に基づいて選択され得る機能的部分であり；
Ｌはリンカーであり；並びに
Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン若しくは任意選択的に置換されるＣ_１－６アルキルであるか；又は
Ｒ^１及びＲ^１’若しくはＲ^２及びＲ^２’は、それらの介在する原子とともに、一体となって任意選択的に置換されるスピロ縮合環を形成してもよく；又は
Ｒ^１及びＲ^２は、それらの介在する原子とともに、窒素、酸素若しくは硫黄から独立して選択される０～２個のヘテロ原子を有する任意選択的に置換される３～７員の飽和、部分的不飽和、若しくはアリール、若しくはヘテロアリール環を形成してもよく；
好ましくはＲ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’は水素である）を含むＡＡＶベクターに関する。

【0124】

一般的な説明及び定義
「アリール基」は、本明細書中で、一般的には５～１２個の原子を含有する；好ましくは６～１０個を含有する、単環（即ちフェニル）又はともに縮合される（例えばナフチル）か若しくは共有結合される複数の芳香環を有する、多価不飽和、芳香族ヒドロカルビル基を指し、ここで少なくとも１つの環が芳香環である。アリール基の非限定例はフェニルである。

【0125】

「ヘテロアリール基」は、本明細書中で、一般的には各環に５～６個の原子を含有する、ともに縮合されるか又は共有結合される１～２個の環を含有する５～１２個の炭素原子の芳香環又は環系を指し；環のうち少なくとも１個が芳香環であり、これらの環のうち１個以上における１個以上の炭素原子が酸素、窒素又は硫黄原子により置換され、ここで、窒素及び硫黄ヘテロ原子が任意選択的に酸化されてもよく、窒素ヘテロ原子が任意選択的に四級化されてもよい。このような環は、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール又はヘテロシクリル環に縮合され得る。このようなヘテロアリール基の非限定例としては、トリアゾリル、ピロリル、フラニル、チオフェニル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、オキサトリアゾリル、チアトリアゾリル、ピリジニル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、オキサジニル、ジオキシニル、チアジニル、トリアジニル、イミダゾ［２，１－ｂ］［１，３］チアゾリル、チエノ［３，２－ｂ］フラニル、チエノ［３，２－ｂ］チオフェニル、チエノ［２，３－ｄ］［１，３］チアゾリル、チエノ［２，３－ｄ］イミダゾリル、テトラゾロ［１，５－ａ］ピリジニル、インドリル、インドリジニル、イソインドリル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、イソベンゾチオフェニル、インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、１，３－ベンゾオキサゾリル、１，２－ベンゾイソオキサゾリル、２，１－ベンゾイソオキサゾリル、１，３－ベンゾチアゾリル、１，２－ベンゾイソチアゾリル、２，１－ベンゾイソチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、１，２，３－ベンゾオキサジアゾリル、２，１，３－ベンゾオキサジアゾリル、１，２，３－ベンゾチアジアゾリル、２，１，３－ベンゾチアジアゾリル、チエノピリジニル、プリニル、イミダゾ［１，２－ａ］ピリジニル、６－オキソ－ピリダジン－１（６Ｈ）－イル、２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル、６－オキソ－ピリダジン（ｐｙｒｕｄａｚｉｎ）－１（６Ｈ）－イル、２－オキソピリジン－１（２Ｈ）－イル、１，３－ベンゾジオキソリル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニルが挙げられる。本明細書中で使用される好ましいヘテロアリール基はトリアゾリルである。

【0126】

「ヘテロ原子」という用語は、酸素、硫黄、窒素、リン、セレン又はケイ素のうち１つ以上を意味する（窒素、硫黄、リン、セレン又はケイ素の何れかの酸化形態；何れかの塩基性窒素の四級化形態又は；複素環の置換可能な窒素、例えばＮ（３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピロリルの場合）、ＮＨ（ピロリジニル中の場合）又はＮＲ^＋（Ｎ－置換ピロリジニルの場合）を含む）。

【0127】

「不飽和」という用語は、本明細書中で使用される場合、ある部分が不飽和の１以上の単位を有することを意味する。

【0128】

「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩを意味する。

【0129】

本明細書中に記載のように、化合物は、「任意選択的に置換される」部分を含有してもよい。一般に、「置換される」という用語は、「任意選択的に」という用語が前にあっても又はなくても、化合物の指定される部分の１個以上の水素が適切な置換基で置換されることを意味する。「置換される」は、構造から明らかであるか又は暗示される１個以上の水素に当てはまる（例えば、

【化18】

は、少なくとも

【化19】

を指し;

【化20】

は、少なくとも

【化21】

を指す)。別段の指示がない限り、「任意選択的に置換される」基は、基の各置換可能な位置で適切な置換基を有し得、何れかのある一定の構造における複数の位置が指定される基から選択される複数の置換基で置換され得る場合、置換基は、全ての位置で同じであってもよいし又は異なっていてもよい。この開示により想起される置換基の組み合わせは、好ましくは安定な又は化学的に実現可能な化合物の形成を生じさせるものである。「安定な」という用語は、本明細書中で使用される場合、本明細書中で開示される目的の１つ以上のために、それらの産生、検出及び、特定の実施形態では、それらの回収、精製及び使用を可能にするための条件に供されるときに、実質的に改変されない化合物を指す。

【0130】

「任意選択的に置換される」基の置換可能な炭素原子上の適切な１価置換基は独立に、ハロゲン；－（ＣＨ_２）_０－４Ｒ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４ＯＲ^ｏ；－Ｏ（ＣＨ_２）_０－４Ｒ^ｏ、－Ｏ－（ＣＨ_２）_０－４Ｃ（Ｏ）ＯＲ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４ＣＨ（ＯＲ^ｏ）_２；－（ＣＨ_２）_０－４ＳＲ^ｏ；Ｒ^ｏで置換され得る－（ＣＨ_２）_０－４Ｐｈ；Ｒ^ｏで置換され得る－（ＣＨ_２）_０－４Ｏ（ＣＨ_２）_０－１Ｐｈ；Ｒ^ｏで置換され得る－ＣＨ＝ＣＨＰｈ；Ｒ^ｏで置換され得る－（ＣＨ_２）_０－４Ｏ（ＣＨ_２）_０－１－ピリジル；－ＮＯ_２；－ＣＮ；－Ｎ_３；－（ＣＨ_２）_０－４Ｎ（Ｒ^ｏ）_２；－（ＣＨ_２）_０－４Ｎ（Ｒ^ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ^ｏ；－Ｎ（Ｒ^ｏ）Ｃ（Ｓ）Ｒ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４Ｎ（Ｒ^ｏ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ^ｏ _２；－Ｎ（Ｒ^ｏ）Ｃ（Ｓ）ＮＲ^ｏ _２；－（ＣＨ_２）_０－４Ｎ（Ｒ^ｏ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^ｏ；－Ｎ（Ｒ^ｏ）Ｎ（Ｒ^ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ^ｏ；－Ｎ（Ｒ^ｏ）Ｎ（Ｒ^ｏ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ^ｏ _２；－Ｎ（Ｒ^ｏ）Ｎ（Ｒ^ｏ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４Ｃ（Ｏ）Ｒ^ｏ；－Ｃ（Ｓ）Ｒ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４Ｃ（Ｏ）ＯＲ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４Ｃ（Ｏ）ＳＲ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲ^ｏ _３；－（ＣＨ_２）_０－４ＯＣ（Ｏ）Ｒ^ｏ；－ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_０－４ＳＲ^ｏ、ＳＣ（Ｓ）ＳＲ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４ＳＣ（Ｏ）Ｒ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４Ｃ（Ｏ）ＮＲ^ｏ _２；－Ｃ（Ｓ）ＮＲ^ｏ _２；－Ｃ（Ｓ）ＳＲ^ｏ；－ＳＣ（Ｓ）ＳＲ^ｏ、－（ＣＨ_２）_０－４ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ｏ _２；－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ^ｏ）Ｒ^ｏ；－Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ^ｏ；－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒ^ｏ；－Ｃ（ＮＯＲ^ｏ）Ｒ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４ＳＳＲ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４Ｓ（Ｏ）_２ＯＲ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４ＯＳ（Ｏ）_２Ｒ^ｏ；－Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ_２ ^ｏ；－（ＣＨ_２）_０－４Ｓ（Ｏ）Ｒ^ｏ；－Ｎ（Ｒ^ｏ）Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ^ｏ _２；－Ｎ（Ｒ^ｏ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^ｏ；－Ｎ（ＯＲ^ｏ）Ｒ^ｏ；－Ｃ（ＮＨ）ＮＲ^ｏ _２；－Ｐ（Ｏ）_２Ｒ^ｏ；－Ｐ（Ｏ）Ｒ^ｏ _２；－ＯＰ（Ｏ）Ｒ^ｏ _２；－ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ^ｏ）_２；ＳｉＲ^ｏ _３；－（Ｃ_１－４直鎖又は分枝状アルキレン）Ｏ－Ｎ（Ｒ^ｏ）_２；又は－（Ｃ_１－４直鎖又は分枝状アルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｎ（Ｒ^ｏ）_２であり、ここで各Ｒ^ｏは、以下で定義されるように置換され得、独立に水素、Ｃ_１－６脂肪族、－ＣＨ_２Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ_２）_０－１Ｐｈ、－ＣＨ_２－（５－～６員ヘテロアリール環）又は、窒素、酸素若しくは硫黄から独立に選択される０～４個のヘテロ原子を有する５～６員飽和、部分的不飽和若しくはアリール環であるか、又は、上記の定義にもかかわらず、Ｒ^ｏの２個の独立した出現が、それらの介在原子と一緒になって、以下で定義されるように置換され得る、窒素、酸素又は硫黄から独立に選択される０～４個のヘテロ原子を有する３～１２員の飽和、部分的不飽和又はアリール単環又は二環式環を形成する。

【0131】

Ｒ^ｏ上（又はそれらの介在原子と一緒にＲ^ｏの２つの独立な出現をとることによって形成される環上）の適切な１価置換基は独立に、ハロゲン、－（ＣＨ_２）_０－２Ｒ^●、－（ハロＲ^●）、－（ＣＨ_２）_０－２ＯＨ、－（ＣＨ_２）_０－２ＯＲ^●、－（ＣＨ_２）_０－２ＣＨ（ＯＲ^●）_２；－Ｏ（ハロＲ^●）、－ＣＮ、－Ｎ_３、－（ＣＨ_２）_０－２Ｃ（Ｏ）Ｒ^●、－（ＣＨ_２）_０－２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－（ＣＨ_２）_０－２Ｃ（Ｏ）ＯＲ^●、－（ＣＨ_２）_０－２ＳＲ^●、－（ＣＨ_２）_０－２ＳＨ、－（ＣＨ_２）_０－２ＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_０－２ＮＨＲ^●、－（ＣＨ_２）_０－２ＮＲ^● _２、－ＮＯ_２、－ＳｉＲ^● _３、－ＯＳｉＲ^● _３、－Ｃ（Ｏ）ＳＲ^●、－（Ｃ_１－４直鎖又は分枝状アルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^●又は－ＳＳＲ^●（式中、各Ｒ^●は、未置換であるか又は前に「ハロ」が付く場合は１個以上のハロゲンでのみ置換され、Ｃ_１－４脂肪族、－ＣＨ_２Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ_２）_０－１Ｐｈ又は、窒素、酸素若しくは硫黄から独立に選択される０～４個のヘテロ原子を有する５～６員の飽和、部分的不飽和若しくはアリール環から独立に選択される）である。Ｒ^ｏの飽和炭素原子上の適切な２価置換基は、＝Ｏ及び＝Ｓを含む。

【0132】

「任意選択的に置換される」基の飽和炭素原子上の適切な２価置換基は、次のものを含む：＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＲ^＊ _２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ^＊、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ^＊、＝ＮＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^＊、＝ＮＲ^＊、＝ＮＯＲ^＊、－Ｏ（Ｃ（Ｒ^＊ _２））_２－３Ｏ－又は－Ｓ（Ｃ（Ｒ^＊ _２））_２－３Ｓ－（式中、Ｒ^＊の各独立した出現は、水素、以下で定義されるように置換され得るＣ_１－６脂肪族又は、窒素、酸素若しくは硫黄から独立に選択される０～４個のヘテロ原子を有する未置換５～６員飽和、部分的不飽和若しくはアリール環から選択される）。式ＩＩの化合物及びその亜属の群の「任意選択的に置換される」基の隣接している置換可能な炭素に結合される適切な２価置換基は、－Ｏ（ＣＲ^＊ _２）_２－３Ｏ－（式中、Ｒ^＊の各独立した出現は、水素、以下で定義されるように置換され得るＣ_１－６脂肪族、又は窒素、酸素若しくは硫黄から独立に選択される０～４個のヘテロ原子を有する未置換５～６員飽和、部分的不飽和若しくはアリール環から選択される）を含む。

【0133】

Ｒ^＊の脂肪族基上の適切な置換基は、ハロゲン、－Ｒ^●、－（ハロＲ^●）、－ＯＨ、－ＯＲ^●、－Ｏ（ハロＲ^●）、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^●、－ＮＨ_２、－ＮＨＲ^●、－ＮＲ^● _２又は－ＮＯ_２を含み、式中、各Ｒ^●は、未置換であるか又は「ハロ」が前につく場合は１個以上のハロゲンでのみ置換され、独立にＣ_１－４脂肪族、－ＣＨ_２Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ_２）_０－１Ｐｈ又は、窒素、酸素若しくは硫黄から独立に選択される０～４個のヘテロ原子を有する５～６員の飽和、部分的不飽和若しくはアリール環である。

【0134】

「任意選択的に置換される」基の置換可能な窒素上の適切な置換基は、－Ｒ^†、－ＮＲ^† _２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^†、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^†、－Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ^†、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒ^†、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^†、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ^† _２、－Ｃ（Ｓ）ＮＲ^† _２、－Ｃ（ＮＨ）ＮＲ^† _２又は－Ｎ（Ｒ^†）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^†を含み；式中、各Ｒ^†は独立に、水素、以下で定義されるように置換され得るＣ_１－６脂肪族、未置換－ＯＰｈ又は、窒素、酸素若しくは硫黄から独立に選択される０～４個のヘテロ原子を有する未置換５～６員飽和、部分的不飽和若しくはアリール環であるか、又は、上記の定義にもかかわらず、Ｒ^†の２つの独立した出現が、それらの介在原子と一緒になって、窒素、酸素若しくは硫黄から独立に選択される０～４個のヘテロ原子を有する未置換３～１２員飽和、部分的不飽和若しくはアリール単環若しくは二環式環を形成する。

【0135】

Ｒ^†の脂肪族基上の適切な置換基は独立に、ハロゲン、－Ｒ^●、－（ハロＲ^●）、－ＯＨ、－ＯＲ^●、－Ｏ（ハロＲ^●）、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^●、－ＮＨ_２、－ＮＨＲ^●、－ＮＲ^● _２又は－ＮＯ_２であり、式中、各Ｒ^●は、未置換又は、「ハロ」が前につく場合は１個以上のハロゲンでのみ置換され、独立にＣ_１－４脂肪族、－ＣＨ_２Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ_２）_０－１Ｐｈ又は、窒素、酸素若しくは硫黄から独立に独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する５～６員の飽和、部分的不飽和若しくはアリール環である。

【0136】

本明細書中で使用される場合、「薬学的に許容可能な塩」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、不適切な毒性、刺激、アレルギー反応などなく、ヒト及び下等動物の組織と接触させて使用するのに適切で、妥当なベネフィット／リスク比で釣り合っている塩を指す。薬学的に許容可能な塩は当技術分野で周知である。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．は、参照により本明細書中に組み込まれるＪ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６，１－１９において詳細に薬学的に許容可能な塩を記載する。薬学的に許容可能な塩としては、適切な無機及び有機酸及び塩基由来の塩が挙げられる。薬学的に許容可能な無毒性の酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸及び過塩素酸などの無機酸によって、又は酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸若しくはマロン酸などの有機酸によって、又はイオン交換などの当技術分野で使用される他の方法を使用することにより、形成されるアミノ基の塩である。さらなる又は代替的な薬学的に許容可能な塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコへプタン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシル－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。

【0137】

適切な塩基由来の塩としては、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム及びＮ^＋（Ｃ_１－４アルキル）_４塩が挙げられる。代表的なアルカリ又はアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。さらなる薬学的に許容可能な塩としては、適切である場合、無毒性アンモニウム、四級アンモニウム、及びハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩及びアリールスルホン酸塩などの対イオンを使用して形成されるアミン陽イオンが挙げられる。

【0138】

別段の断りがない限り、本明細書中で示される構造は、構造の全ての異性体（例えばエナンチオマー、ジアステレオマー及び幾何異性体（又は配座異性体））の形態；例えば、各不斉中心に対するＲ及びＳ立体配置、Ｚ及びＥ二重結合異性体、並びにＺ及びＥ配座異性体を含むことも意味する。従って、本化合物の単一の立体化学異性体並びにエナンチオマー、ジアステレオマー及び幾何異性体（又は配座異性体）混合物は本開示の範囲内にある。別段の断りがない限り、全ての互変異性形態が本開示の範囲内にある。さらに、別段の断りがない限り、本開示は、１つ以上の同位体濃縮原子の存在のみが異なる化合物も含む。例えば、重水素若しくはトリチウムによる水素の置換又は^１３Ｃ－又は^１４Ｃ濃縮炭素による炭素の置換を含む本構造を有する化合物は、本開示の範囲内である。このような化合物は、例えば分析ツールとして、生物学的アッセイにおけるプローブとして、又は本開示による治療剤として有用である。いくつかの実施形態では、本開示の化合物は、１つ以上の重水素原子を含む。

【0139】

本開示により想定される置換基及び可変要素の組み合わせは、安定な化合物の形成をもたらす組み合わせのみである。「安定な」という用語は、本明細書中で使用される場合、製造を可能にするために十分な安定性を保持する、及び本明細書中で詳述される目的に対して有用であるために十分な時間にわたり化合物の完全性を維持する化合物を指す（例えば対象への治療的又は予防的投与）。

【0140】

機能的部分Ｚ
機能的部分Ｚは、何れのタイプの部分であってもよく、典型的にはＡＡＶベクターのカプシドを化学的に修飾する際に求められる生物学的効果に応じて選択される。

【0141】

いくつかの実施形態では、Ｚは、細胞タイプ特異的なリガンド、標識剤、立体遮蔽剤、薬物部分、又はそれらの組み合わせを含むか又はそれらからなる機能的部分である。いくつかの実施形態では、機能的部分Ｚは、磁性（ナノ）粒子及び量子ドットを含む（ナノ）粒子でもあり得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ｚは、鉄、染料、ケイ素、金又は炭素（ナノ）粒子であり得る。

【0142】

いくつかの実施形態では、Ｚは、標識剤、例えば蛍光色素、例えばフルオレセイン、ローダミン、ボロン－ジピロメテン（Ｂｏｄｉｐｙ（登録商標））色素及びＡｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ（登録商標）又は放射性核種などを含むか又はそれらからなる機能的部分である。

【0143】

いくつかの実施形態では、Ｚは、立体遮蔽剤、例えばカプシドのある特定のエピトープを隠すことが可能であり、それにより中和抗体の結合を回避する薬剤を含むか又はそれからなる機能的部分である。例えば、いくつかの実施形態では、Ｚは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ｐＨＰＭＡ又は多糖であり得る。いくつかの実施形態では、Ｚは、１～４０個のエチレングリコール単量体、例えば１～１０個のエチレングリコール単量体、例えば－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）－（本明細書中で、「ＰＥＧ１」と呼ぶ）、－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_２－（本明細書中で「ＰＥＧ２」と呼ぶ）、－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_３－（本明細書中で「ＰＥＧ３」と呼ぶ）、－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_４－（本明細書中で、「ＰＥＧ４」と呼ぶ）又は－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_５－（本明細書中で「ＰＥＧ５」と呼ぶ）を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。

【0144】

いくつかの実施形態では、Ｚは、細胞タイプ特異的リガンド、即ち特定の型の細胞の標的化を可能にするリガンドを含むか又はそれからなる機能的部分である。いくつかの実施形態では、このようなリガンドは、ＡＡＶベクターの指向性、即ち所定の細胞株、組織及び／又は臓器に選択的に感染及び／又は形質導入する能力、の改変を可能にし得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ｚは、標的化される細胞の膜の生物学的部分（例えば膜受容体）に特異的に結合するリガンドであり得る。いくつかの実施形態では、このようなリガンドは、例えば糖、ステロイドホルモンを含むホルモン、ペプチド、例えばＲＧＤペプチドなど、Ａｎｇｉｏｐｅｐ－２又は筋肉を標的とするペプチド、タンパク質又は機能的に活性のあるそれらの断片、膜受容体又はその機能的に活性な断片、ＣＢ１及びＣＢ２リガンド、重鎖抗体を含む抗体、又はＦａｂ、Ｆａｂ’及びＶＨＨ、ＳｃＦｖなどのその機能的に活性な断片、ダイアボディ、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ、核酸アプタマー及びペプチドアプタマーを含むアプタマー、標的化された生物学的部分に結合することが知られる低分子化学分子など、例えばビタミン及び薬物及び／又は何らかの適切なそれらの組み合わせなどであり得る。

【0145】

「機能的に活性な断片」は、その全長の対応物の機能的活性を保持する、例えばタンパク質、膜受容体又は抗体の断片を意味する。

【0146】

いくつかの実施形態では、Ｚは、糖由来の細胞タイプ特異的リガンドを含むか又はそれからなる。糖に対する詳細は本明細書中で以後提供する。

【0147】

いくつかの実施形態では、Ｚは、トランスフェリン、上皮成長因子（ＥＧＦ）及び塩基性線維芽細胞増殖因子ＦＧＦなどのタンパク質由来の細胞タイプ特異的リガンドを含むか又はそれからなる。

【0148】

いくつかの実施形態では、Ｚは、葉酸などのビタミン由来の細胞タイプ特異的リガンドを含むか又はそれからなる。

【0149】

いくつかの実施形態では、Ｚは、筋肉を標的とするペプチド（ＭＴＰ）由来の細胞タイプ特異的リガンドを含むか又はそれからなる。ある特定の実施形態では、Ｚは、癌細胞を標的とするペプチドであり、環状ＲＧＤを含む、ＲＧＤなどのペプチドを含む。

【0150】

いくつかの実施形態では、Ｚは、ナプロキセン、イブプロフェン、コレステロール、プロゲステロン又はエストラジオールなどの低分子又はホルモン由来の細胞タイプ特異的リガンドを含むか又はそれからなる。

【0151】

いくつかの実施形態では、Ｚは、抗体又はその抗原結合部分を含む。いくつかのこのような実施形態では、抗体は、例えば、単鎖抗体又は可変ドメイン、例えばラクダ抗体、重鎖抗体、ナノボディ、サメ抗体などであり得るか又はそれらを含み得る。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ＶＨＨ、ＳｃＦｖ、ダイアボディなどであり得るか又はそれらを含み得る。いくつかの特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合部分は、特定の細胞特異的タンパク質、膜タンパク質及び／又は膜タンパク質受容体に対して特異的親和性を有することを特徴とし得る。

【0152】

いくつかの実施形態では、Ｚは、糖、ホルモン、ペプチド、タンパク質又はその断片、膜受容体又はその断片、抗体又はその断片、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ、核酸又はペプチドアプタマー、ビタミン及び薬物からなる群から選択される細胞タイプ特異的リガンドを含むか又はそれからなる。特定の実施形態では、Ｚは、単糖、オリゴ糖及び多糖からなる群から選択される糖であり；好ましくはＺは、マンノース、グルコース、ガラクトース、フコース、デソサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、Ｓ６－ガラクトース、Ｓ６－Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルクロン酸、Ｐ６－ガラクトース及びＰ１－ガラクトースからなる群から選択される。特定の実施形態では、Ｚは、単糖、オリゴ糖及び多糖からなる群から選択される糖であり；好ましくはＺは、マンノース、ガラクトース、フコース、デソサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン及びＮ－アセチルガラクトサミンからなる群から選択される。

【0153】

いくつかの実施形態では、Ｚは、糖を含むか又はそれからなる。

【0154】

いくつかの実施形態では、糖の適切な例としては、単糖、オリゴ糖、多糖及びそれらの誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。

【0155】

本明細書中で使用される場合、「誘導体」という用語は、単糖、オリゴ糖又は多糖に言及する場合、１個以上の非ヒドロキシル基を含有する糖を包含することを意味する。このような非ヒドロキシル基の例としては、水素、アルキル、アミノ基（例えばＮＨ_２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノなど）、Ｎ－アセチルアミノ基及び／又はチオール基が挙げられるがこれらに限定されない。

【0156】

いくつかの実施形態では、非ヒドロキシル基は、リン酸基、ホスホン酸基、硫酸基、スルホン酸基、カルボキシル基などの負に荷電している基である。

【0157】

「単糖（ｓｉｍｐｌｅ ｓｕｇａｒ）」とも呼ばれる「単糖」は、糖の最も単純な形態及び炭水化物の最も基本的な単位である。単糖は、それらが含有する炭素原子の数により分類することができ、例えば、３（トリオース）、４（テトロース）、５（ペントース）、６（ヘキソース）、７（ヘプトース）などである。

【0158】

単糖の例としては、グリコールアルデヒド、グリセルアルデヒド、ジヒドロキシアセトン、エリスロース、トレオース、エリスルロース、アラビノース、リキソース、リボース、キシロース、リブロース、キシルロース、アロース、アルトロース、ガラクトース、グルコース、グロース、イドース、マンノース、タロース、フルクトース、プシコース、ソルボース、タガトース、マンノヘプツロース及びセドヘプツロースが挙げられるがこれらに限定されない。

【0159】

デオキシ単糖は、本発明に包含される単糖の一般的な誘導体、即ちヒドロキシル基が水素原子で置き換えられた単糖である。

【0160】

デオキシ単糖の例としては、デオキシリボース、フコース、フクロース、ラムノース、キノボース、ニューモース（ｐｎｅｕｍｏｓｅ）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0161】

２－アミノ－２－デオキシ単糖もまた、本発明に包含される単糖の一般的な誘導体、即ちヒドロキシル基がアミノ基で置換された単糖である。

【0162】

２－アミノ－２－デオキシ単糖の例としては、Ｎ－アセチルグルコサミン及びＮ－アセチルガラクトサミンを含むがこれらに限定されない、グルコサミン、ガラクトサミン及びダウノサミン、並びにそれらのアセチル化形態が挙げられるがこれらに限定されない。

【0163】

いくつかの実施形態では、単糖は、リン酸基、硫酸基又はカルボキシル基などの負に荷電した基を含有する。

【0164】

リン酸基を含有する単糖の例としては、ガラクトース－１－リン酸（Ｐ１－ガラクトース）及びガラクトース－６－リン酸（Ｐ６－ガラクトース）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0165】

硫酸基を含有する単糖の例としては、ガラクトース－６－硫酸（Ｓ６－ガラクトース）、Ｎ－アセチルガラクトサミン－６－硫酸（Ｓ６－Ｎ－アセチルガラクトサミン）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0166】

カルボキシル基を含有する単糖の例としては、グルクロン酸が挙げられるがこれらに限定されない。

【0167】

本明細書中で言及される単糖及びその誘導体は、非環式（鎖式）形態及び環状形態も包含することが理解されるべきである。

【0168】

本明細書中で言及される単糖及びその誘導体は、Ｄ－立体異性体及びＬ－立体異性体、並びにＤ－及びＬ－立体異性体の混合物（例えばラセミ混合物）も包含することも理解されるべきである。

【0169】

本明細書中で言及される単糖類及びその誘導体が、α－アノマー及びβ－アノマー、並びにα－及びβ－アノマーのラセミ混合物も包含することも理解されるべきである。

【0170】

「オリゴ糖」は、少数の（一般的には２～１０個）の単糖を含む糖ポリマーである。

【0171】

いくつかの実施形態では、本発明によるオリゴ糖は、その誘導体を含め、例えば本明細書中の上記で開示される単糖から選択される、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の単糖を含む。

【0172】

いくつかの実施形態では、このようなオリゴ糖は、ホモオリゴ糖（即ち、その誘導体を含む、同じ単糖の単位から構成される）又はヘテロオリゴ糖（即ち、その誘導体を含む、少なくとも２つの異なる単糖類の単位から構成される）であり得る。

【0173】

いくつかの実施形態では、オリゴ糖の例としては、二糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖、八糖、九糖及び十糖が挙げられるがこれらに限定されない。

【0174】

いくつかの実施形態では、二糖の具体例としては、セロビオース、キトビオース、ゲンチオビオース、ゲンチオビウロース（ｇｅｎｔｉｏｂｉｕｌｏｓｅ）、イソマルトース、コジビオース、ラクトース、ラクツロース、ラミナリビオース、マルトース、マルツロース、マンノビオース、メリビオース、メリビウロース、ニゲロース、パラチノース、ルチノース、ルチヌロース（ｒｕｔｉｎｕｌｏｓｅ）、ソホロース、スクロース、トレハロース、ツラノース及びキシロビオースが挙げられるがこれらに限定されない。

【0175】

いくつかの実施形態では、三糖の具体例としては、ケストース、マルトトリオース、マルトトリウロース、メレジトース、ニゲロトリオース及びラフィノースが挙げられるがこれらに限定されない。

【0176】

いくつかの実施形態では、四糖の具体例としては、リクノース、マルトテトラオース、ニゲロテトラオース、ニストース、セサモース及びスタキオースが挙げられるがこれらに限定されない。

【0177】

いくつかの実施形態では、オリゴ糖の具体例としては、アカルボース、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖及びマルトデキストリンが挙げられるがこれらに限定されない。

【0178】

いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、それによって、オリゴ糖中の一部又は全ての単糖がＯ－グリコシド結合を通じて互いに連結されないが、分枝状リンカー構造により連結される多分岐状構造であってもよい。多分岐状の糖の例は、三分岐状Ｎ－アセチルガラクトサミンであり、これは、アシアロ糖タンパク質受容体ＡＳＧＰＲに対するリガンドである（例えば、Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｒｉａｎｔｅｎｎａｒｙ Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｓ Ｄｅｇｒａｄｅｒｓ ｆｏｒ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ；ＡＣＳ Ｃｅｎｔ．Ｓｃｉ．２０２１を参照）。

【0179】

「多糖」は、多数（一般的には１０個より多くの）の単糖を含む糖ポリマーである。これらは直鎖状から高度分枝状の範囲の構造である。

【0180】

いくつかの実施形態では、多糖は、例えば、その誘導体を含む、本明細書中の上記で開示される単糖から選択される、１０個より多くの単糖（例えば、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個又はそれより多いなど）を含む。オリゴ糖に関する上記と同様に、多糖は、ホモ多糖又はヘテロ多糖であり得る。

【0181】

いくつかの実施形態では、多糖の例としては、ベータ－グルカン、レンチナン、シゾフィラン、ザイモサン、セルロース、ヘミセルロース、キチン、キトサン、デキストリン、デキストラン、フルクタン、イヌリン、ガラクタン、グルカン、グリコーゲン、レバンβ２→６、リグニン、マナン、ペクチン、デンプン、アミロペクチン、アミロース及びキサンタンガムが挙げられるがこれらに限定されない。

【0182】

いくつかの実施形態では、本発明による糖又はその誘導体は、単糖、好ましくはヘキソースである。いくつかの実施形態では、本発明による優先的な糖又はその誘導体は、マンノース、グルコース、ガラクトース、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、Ｓ６－ガラクトース、Ｓ６－Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルクロン酸、Ｐ６－ガラクトース又はＰ１－ガラクトースである。いくつかの実施形態では、本発明による優先的な糖又はその誘導体は、マンノース、ガラクトース、Ｎ－アセチルグルコサミン又はＮ－アセチルガラクトサミンである。

【0183】

いくつかの実施形態では、糖又はその誘導体はマンノースである。いくつかの実施形態では、糖又はその誘導体はガラクトースである。いくつかの実施形態では、糖又はその誘導体は、Ｎ－アセチルグルコサミンである。いくつかの実施形態では、糖又はその誘導体は、Ｎ－アセチルガラクトサミンである。

【0184】

いくつかの実施形態では、本発明による糖又はその誘導体は、デオキシ単糖である。いくつかの好ましい実施形態では、デオキシ単糖は好ましくはフコースである。

【0185】

いくつかの実施形態では、糖又はその誘導体は、ジアルキルアミノ基である非ヒドロキシル基を含有する糖である。いくつかの好ましい実施形態では、ジアルキルアミノ基である非ヒドロキシル基を含有する糖はデソサミンである。

【0186】

いくつかの実施形態では、糖又はその誘導体は、硫酸基である非ヒドロキシル基を含有する糖である。いくつかの好ましい実施形態では、硫酸基である非ヒドロキシル基を含有する糖は、Ｓ６－ガラクトース又はＳ６－Ｎ－アセチルガラクトサミンである。

【0187】

いくつかの実施形態では、糖又はその誘導体は、リン酸基である非ヒドロキシル基を含有する糖である。いくつかの好ましい実施形態では、リン酸基である非ヒドロキシル基を含有する糖類は、Ｐ６－ガラクトース又はＰ１－ガラクトースである。

【0188】

いくつかの実施形態では、糖又はその誘導体は、カルボキシル基である非ヒドロキシル基を含有する糖である。いくつかの好ましい実施形態では、カルボキシル基である非ヒドロキシル基を含有する糖はグルクロン酸である。

【0189】

いくつかの実施形態では、Ｚは、マンノース、グルコース、ガラクトース、フコース、デソサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、Ｓ６－ガラクトース、Ｓ６－Ｎ－アセチルガラクトサミン、グルクロン酸、Ｐ６－ガラクトース及びＰ１－ガラクトースを含むか又はそれらからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｚは、マンノース、ガラクトース、フコース、デソサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン及びＮ－アセチルガラクトサミンを含むか又はそれらからなる群から選択される。

【0190】

リンカーＬ
いくつかの実施形態では、リンカーＬは、ＡＡＶベクターのカプシドのアミノ酸残基のアミノ基によりラクタム（例えばβ－ラクタム）基の開環から生じるカルボニル部分に機能的部分Ｚを連結するために存在する。

【0191】

いくつかの実施形態では、Ｌは、ヘテロ原子並びにアリール及び／又はヘテロアリール基などの環状部分を含み得る何れかの化学鎖であり得る。

【0192】

いくつかの実施形態では、Ｌは、最大１０００個の炭素原子及びさらに多数を含み得る。Ｌの長さ及び化学的性質は、ＡＡＶベクターにカップリングされることが意図される機能的部分Ｚ及び求める生物学的効果に応じて最適化され得る。

【0193】

いくつかの実施形態では、Ｌは、２～１０００個の炭素原子、好ましくは２～５００個の炭素原子、２～３００個の炭素原子、例えば２～１００個の炭素原子、２～４０個の炭素原子、４～３０個の炭素原子又は４～２０個の炭素原子を含む化学鎖基である。

【0194】

いくつかの実施形態では、Ｌは、機能的部分Ｚをカルボニル部分に連結し、好ましくは最大１０００個の炭素原子を含み、好ましくは任意選択的にヘテロ原子（例えば、Ｏ、ＮＨ、Ｓ、Ｓｅ又はＰ）並びに／又はアリール及び／若しくはヘテロアリール基などの環状部分を含む化学鎖の形態である。

【0195】

いくつかの実施形態では、Ｌは、アルキル（例えば、Ｃ_１－２０、Ｃ_１－１２、Ｃ_１－６アルキル）、エーテル、ポリエーテル、ポリエステル、アルキルアミド又はそれらの組み合わせから選択され得る。本明細書中で使用される場合、「組み合わせ」は、Ｌが、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－、－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ－、－Ｏ－ＣＯ－、－ＮＨ－（ＣＳ）－ＮＨ－、－ＮＨ－ＣＳ－ホスホジエステル又はホスホロチオエート基などの何らかの適切な基により連結されるいくつかの炭化水素鎖、オリゴマー鎖又はポリマー鎖（例えば２、３、４、５又は６個）を含み得ることを意味する。－（ＣＨ_２）_ｎ－（式中、「ｎ」は約２～約２０又はそれより多い）を含むがこれらに限定されない様々なアルキルの使用が企図される。いくつかの実施形態では、Ｌは、Ｃ_２－２０直鎖又は分枝状アルキル鎖を含む。いくつかの実施形態では、Ｌは、ポリエーテル（例えば、ポリエチレン又はポリプロピレングリコール）である。様々なエーテル及びポリエーテルの使用は、－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ－（式中、「ｎ」は約１～約２０又はそれより多くの整数である）を含むがこれらに限定されない様々なエーテル及びポリエーテルの使用が企図される。いくつかの実施形態では、Ｌは、式－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ－のポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）（式中、「ｎ」は、１～１０の整数、１～６の整数及び３～６の整数及び３～５の整数又は１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０から選択される整数である）である。いくつかの実施形態では、Ｌは、例えば式－（ＯＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎ－（式中、「ｎ」は、１～１０の整数、１～６の整数及び３～６の整数及び３～５整数又は１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０から選択される整数である）のポリプロピレングリコールである。いくつかの実施形態では、Ｌはアルキルアミドである。－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｐ－及び－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｐ－（式中、「ｍ」及び「ｐ」は、同じであってもよいし又は異なっていてもよく、「ｍ」及び「ｐ」は、約１～約２０又はそれより多い）を含むがこれらに限定されない様々なアルキルアミドの使用が企図される。いくつかの実施形態では、Ｌは、式－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｐ－又は－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｐ－のアルキルアミドである（式中、「ｍ」及び「ｐ」は、それぞれ独立して、１～１０の整数、１～６の整数及び３～６の整数及び３～５の整数から選択されるか、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０から独立して選択される整数である）。－Ｒ_５－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－Ｒ_６－（式中、「Ｒ_５」及び「Ｒ_６」は、それぞれ独立して、アルキル（例えば、Ｃ_１－２０、Ｃ_１－１２、Ｃ_１－６アルキル）、エーテル又はポリエーテル（例えば約２００～２，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するＰＥＧ）から選択される）を含むがこれらに限定されないアルキル又はエーテル結合の連結単位を有する様々なアミドの使用が企図される。

【0196】

いくつかの実施形態では、Ｌは、アルキレンジアミン、例えば、－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－（式中、「ｒ」は、２～２０、例えば２～１０の整数又は２、３、４若しくは５から選択される整数である）も含み得る。いくつかの実施形態では、Ｌは、アルキレンジアミンのポリマー（ポリアミンとしても知られる）、例えば式－ＮＨ－［（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ］_ｔ－の化合物（式中、「ｒ」は、上記及び本明細書中で定義されるとおりであり、ｔは、少なくとも２、例えば少なくとも３、４、５、１０又はそれより多くの整数である）である。関心対象のアルキルジアミンのポリマーは、例えば、スペルミジン及びスペルミンである。

【0197】

いくつかの実施形態では、Ｌは、ポリ（Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）（ｐＨＰＭＡ）、（例えば、ｐＨＰＭＡの分子量は、約２００～約５０００ｇ／ｍｏｌである）などのポリアミドも含み得る。

【0198】

いくつかの実施形態では、Ｌは、ポリカプロラクトン（例えば分子量が約２００～約５０００ｇ／ｍｏｌのポリカプロラクトン）又はポリ（Ｄ，Ｌ－乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）（例えば分子量が約２００～約５０００ｇ／ｍｏｌであるＰＬＧＡ）などのポリエステルも含み得る。

【0199】

いくつかの実施形態では、Ｌは、飽和又は不飽和、直鎖状又は分枝状Ｃ_２～Ｃ_４０炭化水素鎖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ｐＨＰＭＡ、ＰＬＧＡ、アルキレンジアミンのポリマー及びそれらの組み合わせを含むか又はそれらからなる任意選択的に置換される基から選択され得る。

【0200】

いくつかの実施形態では、Ｌは、２～４０個のエチレングリコール単量体、例えば２～１０個を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えば－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_２－（本明細書中で「ＰＥＧ２」と呼ぶ）、－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_３－（本明細書中で、「ＰＥＧ３」と呼ぶ）、－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_３－（本明細書中で「ＰＥＧ３」と呼ぶ）、－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_４－（本明細書中で「ＰＥＧ４」と呼ぶ）又は－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_５－（本明細書中で「ＰＥＧ５」と呼ぶ）などである。

【0201】

いくつかの実施形態では、Ｌは、アリール基及び／又はヘテロアリール基などの１個以上の芳香族基を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ｌは、任意選択的に置換されるフェニル部分を含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｌは、トリアゾリル部分、好ましくは１，２，３－トリアゾリル部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｌは、フェニル及び１，２，３－トリアゾリル部分の両方を含む。

【0202】

いくつかの実施形態では、Ｌは、アルキル、エーテル、ポリエーテル、アルキルアミド、アリール基、ヘテロアリール基又はそれらの組み合わせを含み得る。特定の実施形態では、Ｌは、ポリエーテル、アリール基、ヘテロアリール基又はそれらの組み合わせを含む。

【0203】

特定の実施形態では、Ｌは、アリール基及び／又はヘテロアリール基などの１個以上の芳香族基を含むＰＥＧである。特定の実施形態では、Ｌは、アリール基及びヘテロアリール基、好ましくはフェニル基及びトリアゾリル基を含むＰＥＧである。

【0204】

Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’
いくつかの実施形態では、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン又は任意選択的に置換されるＣ_１－６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’のそれぞれが水素である。

【0205】

いくつかの実施形態では、Ｒ^１はハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ^１は、フッ素である。いくつかの実施形態では、Ｒ^１は、任意選択的に置換されるＣ_１－６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^１’はハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ^１’はフッ素である。いくつかの実施形態では、Ｒ^１’は、任意選択的に置換されるＣ_１－６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^２はハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ^２はフッ素である。いくつかの実施形態では、Ｒ^２は、任意選択的に置換されるＣ_１－６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^２’はハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ^２’はフッ素である。いくつかの実施形態では、Ｒ^２’は、任意選択的に置換されるＣ_１－６アルキルである。

【0206】

いくつかの実施形態では、Ｒ^１及びＲ^１’又はＲ^２及びＲ^２’は、それらの介在する原子とともに、一体となって任意選択的に置換されるスピロ縮合環を形成する。いくつかの実施形態では、Ｒ^１及びＲ^１’又はＲ^２及びＲ^２’は、それらの介在する原子とともに、一体となって、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する、任意選択的に置換される６～１１員スピロ縮合環を形成する。

【0207】

いくつかの実施形態では、Ｒ^１及びＲ^２は、それらの介在する原子とともに、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される０～２個のヘテロ原子を有する、任意選択的に置換される３～７員の飽和、部分的不飽和又はアリール環を形成する。

【0208】

ＡＡＶベクターの式
いくつかの実施形態では、本発明は、式（ＩＩ）：

【化22】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｎ^＊、

【化23】

、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’ Ｌ及びＺは、上記及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義され、記載されるとおりである）を含むＡＡＶベクターを指す。

【0209】

いくつかの実施形態では、本発明は、式（ＩＩａ）：

【化24】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｎ^＊、

【化25】

、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’及びＺは、上記及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義され、記載されるとおりであり；
Ｌ^１は、任意選択的に置換されるアリール又はヘテロアリール基であり；
Ｌ^２は、任意選択的に置換されるヘテロアリール基であり；
Ｌ^３は、好ましくは最大１０００個の炭素原子を含む、及び好ましくは任意選択的にヘテロ原子及び／又は環状部分を含む化学鎖の形態である、リンカーである）を含むＡＡＶベクターに関する。

【0210】

いくつかの実施形態では、Ｌ^１は、任意選択的に置換されるアリール基である。いくつかの実施形態では、Ｌ^１は、任意選択的に置換されるフェニルである。いくつかの実施形態では、Ｌ^１はフェニルである。いくつかの実施形態では、Ｌ^１は、任意選択的に置換されるヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、Ｌ^１は、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子を含む、任意選択的に置換される６員ヘテロアリール基である。いくつかの実施形態では、Ｌ^１は、任意選択的に置換されるピラジニル、ピリジニル、ピリミジニル又はトリアジニルである。いくつかの実施形態では、Ｌ^１は、ピラジニル、ピリジニル、ピリミジニル又はトリアジニルである。

【0211】

いくつかの実施形態では、Ｌ^２は、任意選択的に置換されるヘテロアリール基である。いくつかの実施形態では、Ｌ^２は、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子を含む任意選択的に置換される５員ヘテロアリール基である。いくつかの実施形態では、Ｌ^２は、任意選択的に置換されるピラゾリル、イミダゾリル又はトリアゾリルである。いくつかの実施形態では、Ｌ^２は、任意選択的に置換されるトリアゾリルである。いくつかの実施形態では、Ｌ^２は、ピラゾリル、イミダゾリル又はトリアゾリルである。いくつかの実施形態では、Ｌ^２はトリアゾリルである。

【0212】

いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、飽和又は不飽和、直鎖状又は分枝状Ｃ_２－Ｃ_４０炭化水素鎖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ｐＨＰＭＡ、ＰＬＧＡ、アルキルジアミンのポリマー及びそれらの組み合わせからなる群から選択される任意選択的に置換される基であり；好ましくはＬ^３は、ポリエチレングリコールである。

【0213】

いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、アルキル（例えばＣ_１－２０、Ｃ_１－１２、Ｃ_１－６アルキル）、エーテル、ポリエーテル、ポリエステル、アルキルアミド又はそれらの組み合わせから選択され得る。本明細書中で使用される場合、「組み合わせ」は、Ｌ^３が、いくつかの炭化水素鎖、何れかの適切な基、例えば－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－、－ＮＨ－ＣＯ－ＮＨ－、－Ｏ－ＣＯ－、－ＮＨ－（ＣＳ）－ＮＨ－、－ＮＨ－ＣＳ－ホスホジエステル又はホスホロチオエート基などにより連結されるオリゴマー鎖又はポリマー鎖（例えば２、３、４、５又は６個）を含み得ることを意味する。－（ＣＨ_２）_ｎ－（式中、「ｎ」は、約２～約２０又はそれより多い）を含むがこれらに限定されない様々なアルキルの使用が企図される。いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、Ｃ_２－２０直鎖又は分枝状アルキル鎖を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、ポリエーテル（例えば、ポリエチレン又はポリプロピレングリコール）である。－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ－（式中、「ｎ」は約１～約２０又はそれより多い）を含むがこれらに限定されない様々なエーテル及びポリエーテルの使用が企図される。いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、式－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎ－（式中、「ｎ」は、１～１０の整数、１～６の整数及び３～６の整数及び３～５の整数から選択されるか又は１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０から選択される整数である）のポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）である。いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、例えば式－（ＯＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｎ－（式中、「ｎ」は、１～１０の整数、１～６の整数及び３～６の整数及び３～５の整数であるか又は１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０から選択される整数である）のポリプロピレングリコールである。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では（Ｉｎ ｓｏｍｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔｓ，Ｉｎ ｓｏｍｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔｓ）、Ｌ^３はアルキルアミドである。－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｐ－及び－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｐ－（式中、「ｍ」及び「ｐ」は、同じであってもよいし又は異なっていてもよく、「ｍ」及び「ｐ」は、約１～約２０又はそれより多い）を含むがこれらに限定されない様々なアルキルアミドの使用が企図される。いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、式－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｐ－又は－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｐ－（式中、「ｍ」及び「ｐ」は、それぞれ独立して、１～１０の整数、１～６の整数及び３～６の整数及び３～５の整数から選択されるか又は１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０から独立して選択される整数である）のアルキルアミドである。－Ｒ_５－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－Ｒ_６－（式中、「Ｒ_５」及び「Ｒ_６」は、それぞれ独立してアルキル（例えば、Ｃ_１－２０、Ｃ_１－１２、Ｃ_１－６アルキル）、エーテル又はポリエーテルから選択される）を含むがこれらに限定されないアルキル又はエーテル結合の連結単位を有する様々なアミドの使用が企図される。

【0214】

いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、アルキレンジアミン、例えば－ＮＨ－（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ－（式中、「ｒ」は、２～２０、例えば２～１０の整数又は２、３、４若しくは５から選択される整数である）も含み得る。いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、アルキレンジアミンのポリマー（ポリアミンとしても知られる）、例えば式－ＮＨ－［（ＣＨ_２）_ｒ－ＮＨ］_ｔ－の化合物（式中、「ｒ」は上記及び本明細書中で定義されるとおりであり、ｔは、少なくとも２、例えば少なくとも３、４、５、１０又はそれより多くの整数である）である。関心対象のアルキルジアミンのポリマーは、例えば、スペルミジン及びスペルミンである。

【0215】

いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、ポリ（Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）（ｐＨＰＭＡ）、（例えば分子量が約２００～約５０００ｇ／ｍｏｌであるｐＨＰＭＡ）などのポリアミドも含み得る。

【0216】

いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、ポリカプロラクトン（例えば分子量が約２００～約５０００ｇ／ｍｏｌであるポリカプロラクトン）又はポリ（Ｄ，Ｌ－乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）（例えば分子量が約２００～約５０００ｇ／ｍｏｌであるＰＬＧＡ）などのポリエステルも含み得る。

【0217】

いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、飽和又は不飽和、直鎖状又は分枝状Ｃ_２－Ｃ_４０炭化水素鎖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ｐＨＰＭＡ、ＰＬＧＡ、アルキレンジアミンのポリマー及びそれらの組み合わせを含むか又はそれらからなる任意選択的に置換される基から選択され得る。

【0218】

いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、例えば－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_２－（本明細書中で「ＰＥＧ２」と呼ぶ）、－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_３－（本明細書中で「ＰＥＧ３」と呼ぶ）、－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_３－（本明細書中で「ＰＥＧ３」と呼ぶ）、－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_４－（本明細書中で「ＰＥＧ４」と呼ぶ）又は－（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_５－（本明細書中で「ＰＥＧ５」と呼ぶ）などの、２～４０個、例えば２～１０個のエチレングリコール単量体を含むポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。

【0219】

いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、アリール基及び／又はヘテロアリール基などの１個以上の芳香族基を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ｌは、任意選択的に置換されるフェニル部分を含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｌは、トリアゾリル部分、好ましくは１，２，３－トリアゾリル部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、フェニル及び１，２，３－トリアゾリル部分の両方を含む。

【0220】

いくつかの実施形態では、Ｌ^３は、アルキル、エーテル、ポリエーテル、アルキルアミド、アリール基、ヘテロアリール基又はそれらの組み合わせを含み得る。特定の実施形態では、Ｌ^３は、ポリエーテル、アリール基、ヘテロアリール基又はそれらの組み合わせを含む。

【0221】

特定の実施形態では、Ｌ^３は、アリール基及び／又はヘテロアリール基などの１個以上の芳香族基を含むＰＥＧである。特定の実施形態では、Ｌ^３は、アリール基及びヘテロアリール基、好ましくはフェニル基及びトリアゾリル基を含むＰＥＧである。

【0222】

いくつかの実施形態では、本発明は、式（ＩＩｂ）：

【化26】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、

【化27】

、Ｎ^＊、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｌ^２、Ｌ^３及びＺは、上記及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義され、記載されているとおりであり；
Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４及びＲ^４’は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、－ＯＲ、－ＮＲ_２、－ＣＮ、－ＳＲ、若しくはＣ_１－６アルキル、若しくは、窒素、酸素若しくは硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を有する３～７員の飽和、部分的不飽和、アリール若しくはヘテロアリール環から選択される任意選択的に置換される基であるか；又は
Ｒ^３及びＲ^４若しくはＲ^３’及びＲ^４’は、それらの介在する原子とともに、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される０～２個のヘテロ原子を有する任意選択的に置換される３～７員の飽和、部分的不飽和、若しくはアリール、若しくはヘテロアリール環を形成してもよく；
好ましくはＲ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４及びＲ^４’は水素原子であり；
各Ｒは、水素又はＣ_１－６アルキルから独立して選択される）を含むＡＡＶベクターに関する。

【0223】

いくつかの実施形態では、Ｒ^３は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ^３はハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ^３はフッ素である。いくつかの実施形態では、Ｒ^３は、Ｃ_１－６アルキルから選択される、任意選択的に置換される基である。いくつかの実施形態では、Ｒ^３は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル又はヘキシルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^３は、任意選択的に置換されるフェニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^３は、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を含む任意選択的に置換される飽和又は部分的不飽和環である。いくつかの実施形態では、Ｒ^３は、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子（ｈｅｔｅｏｒａｔｏｍｓ）を有する任意選択的に置換される５～６員ヘテロアリール環である。

【0224】

いくつかの実施形態では、Ｒ^３’は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ^３’はハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ^３’はフッ素である。いくつかの実施形態では、Ｒ^３’は、Ｃ_１－６アルキルから選択される任意選択的に置換される基である。いくつかの実施形態では、Ｒ^３’は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル又はヘキシルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^３’は、任意選択的に置換されるフェニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^３’は、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を含む任意選択的に置換される飽和又は部分的不飽和環である。いくつかの実施形態では、Ｒ^３’は、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子（ｈｅｔｅｏｒａｔｏｍｓ）を有する任意選択的に置換される５～６員ヘテロアリール環である。

【0225】

いくつかの実施形態では、Ｒ^４は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ^４はハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ^４はフッ素である。いくつかの実施形態では、Ｒ^４は、Ｃ_１－６アルキルから選択される、任意選択的に置換される基である。いくつかの実施形態では、Ｒ^４は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル又はヘキシルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^４は、任意選択的に置換されるフェニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^４は、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を含む任意選択的に置換される飽和又は部分的不飽和環である。いくつかの実施形態では、Ｒ^４は、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子（ｈｅｔｅｏｒａｔｏｍｓ）を有する任意選択的に置換される５～６員ヘテロアリール環である。

【0226】

いくつかの実施形態では、Ｒ^４’は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ^４’はハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ^４’はフッ素である。いくつかの実施形態では、Ｒ^４’は、Ｃ_１－６アルキルから選択される任意選択的に置換される基である。いくつかの実施形態では、Ｒ^４’は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル又はヘキシルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^４’は、任意選択的に置換されるフェニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^４’は、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される０～３個のヘテロ原子を含む任意選択的に置換される飽和又は部分的不飽和環である。いくつかの実施形態では、Ｒ^４’は、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子（ｈｅｔｅｏｒａｔｏｍｓ）を有する任意選択的に置換される５～６員ヘテロアリール環である。

【0227】

いくつかの実施形態では、Ｒ^３及びＲ^４又はＲ^３’及びＲ^４’は、それらの介在する原子とともに、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される０～２個のヘテロ原子を有する任意選択的に置換される３～７員の飽和、部分的不飽和又はアリール又はヘテロアリール環を形成してもよい。

【0228】

いくつかの実施形態では、Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４及びＲ^４’のそれぞれは水素である。

【0229】

いくつかの実施形態では、本発明は、式（ＩＩｃ）：

【化28】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、

【化29】

、Ｎ^＊、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｌ^３及びＺは、上記及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義され、記載されているとおりであり；
各

【化30】

は、独立して単結合又は二重結合である）を含むＡＡＶベクターを指す。

【0230】

いくつかの実施形態では、各

【化31】

は、独立して単結合又は二重結合であり、得られる環がトリアゾリルとなる。

【0231】

いくつかの実施形態では、本発明は、式（ＩＩｄ）：

【化32】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、

【化33】

、Ｎ^＊、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｌ^３及びＺは、上記及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義され、記載されているとおりである）を含むＡＡＶベクターに関する。

【0232】

いくつかの実施形態では、本発明は、式（ＩＩｅ）：

【化34】

による部分又はその薬学的に許容可能な塩（式中、

【化35】

、Ｎ^＊、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４、Ｒ^４’及びＺは、上記及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義され、記載されているとおりであり、
ｎは、１～２０の範囲の整数であり；好ましくはｎは３～５の範囲；より好ましくはｎは３である）を含むＡＡＶベクターに関する。

【0233】

Ｌ（又はＬ^３）が、機能的部分Ｚに直接連結されるＰＥＧ基を含む例、Ｚの側面に存在するＰＥＧ基の末端酸素原子はＺの一部であり得ると認識される。これは、例えばＺが、アノマー炭素がＰＥＧリンカーを保有する糖である例に当てはまる。この例は、本明細書中で後に詳述され、以下で挙げられるように実装されるリンカー（１）～（４）によって例示される。

【0234】

例示的な実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、次のもの：

【表1】

【0235】

例示的な実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、次のもの：

【表2】

【0236】

いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、（１）－ＡＡＶ２、（２）－ＡＡＶ２、（３）－ＡＡＶ２、（４）－ＡＡＶ２、（７）－ＡＡＶ２、（８）－ＡＡＶ２、（９）－ＡＡＶ２、（１）－ＡＡＶ５、（１）－ＡＡＶ８、（３）－ＡＡＶ８及び（１）－ＡＡＶ９から選択される。いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、（１）－ＡＡＶ２、（２）－ＡＡＶ２、（３）－ＡＡＶ２、（４）－ＡＡＶ２、（１）－ＡＡＶ５、（１）－ＡＡＶ８、（３）－ＡＡＶ８及び（１）－ＡＡＶ９から選択される。本明細書中で使用される命名法、例えば「（１）－ＡＡＶ２」は、部分（１）で修飾され、その結果（１）－ＡＡＶ２を生じる血清型ＡＡＶ２のＡＡＶベクターを指す。他のＡＡＶ血清型及び修飾する基に対して同じ命名法が使用される。

【0237】

いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、ＧＢＡ遺伝子、好ましくはヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む少なくとも１つの導入遺伝子を含む（１）－ＡＡＶ２であり、任意選択的に導入遺伝子は、少なくとも１つの調節エレメント、好ましくは上で定義されるようなプロモーター、より好ましくはＣＡＧプロモーターの制御下にある。

【0238】

ヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡの代表的な核酸配列は、配列番号１、又は配列番号１と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％以上の配列同一性を有する核酸配列を含むか又はそれからなる。

【0239】

一実施形態では、ヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡの核酸配列は、配列番号２、又は配列番号２と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか又はそれからなるアミノ酸配列をコードする。

【0240】

いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、（１）－ＡＡＶをもたらす、部分（１）を含むＡＡＶベクターではない。

【0241】

ラクタム修飾ＡＡＶベクターを調製するための方法
いくつかの実施形態では、本発明は、本発明によるＡＡＶベクターを製造する方法にさらに関する。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ラクタム（例えばβ－ラクタム）を開環して共有結合を形成するようにラクタム（例えばβ－ラクタム）基をＡＡＶベクターのカプシドのアミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ基と反応させるのに適切な条件下で、ＡＡＶベクターを、ラクタム（例えばβ－ラクタム）基を含む化合物とインキュベートすることを含む。

【0242】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターを製造する方法は、ＡＡＶを、式（Ｉ）

【化36】

の化合物又はその塩
（式中、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｌ及びＺは、本明細書中で定義され、本明細書中のクラス及びサブクラスで記載されるとおりである）と；
式（ＩＩ）：

【化37】

の少なくとも１つの部分（式中、

【化38】

、Ｎ^＊、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｌ及びＺは、上記で定義される通りであり、本明細書中のクラス及びサブクラスで記載されるとおりである）を得るために適切な条件下で、インキュベートする段階を含む。

【0243】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の少なくとも１つの部分を得るために適切な条件は、ＡＡＶベクターのカプシドのアミノ酸残基のアミンとβ－ラクタムを反応させるために適切な条件を含む。

【0244】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、前記ＡＡＶの構造完全性を損なうことなくＡＡＶベクターのカプシドのアミノ酸残基のアミノ基と前記ラクタム（例えばβ－ラクタム）基との間の共有結合の形成を促進するために適切な条件でラクタム（例えばβ－ラクタム）基を含む化合物（例えば式（Ｉ）の化合物）とインキュベートされる。

【0245】

いくつかの実施形態では、インキュベーションは、ｐＨの範囲が５．５～１０、好ましくは７～１０、例えば９～１０、例えば９．３などである水性緩衝液中で行われ得る。いくつかの好ましい実施形態では、ｐＨは９．３である。

【0246】

いくつかの実施形態では、インキュベーション緩衝液は、トリス緩衝液、ホウ酸緩衝液、Ｈｅｐｅｓ緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液例えばＰＢＳ又はダルベッコリン酸緩衝食塩水（ｄＰＢＳ）から選択され得る。いくつかの好ましい実施形態では、緩衝液はトリス緩衝液である。

【0247】

いくつかの実施形態では、インキュベーションは、数分間～数時間、例えば５分～６時間、例えば３～５時間続き得る。いくつかの好ましい実施形態では、インキュベーションは約４時間である。いくつかの実施形態では、インキュベーションは、カップリングの十分な収率が達成された時に終了する。

【0248】

いくつかの実施形態では、インキュベーションの温度は一般的に４℃～５０℃である。いくつかの好ましい実施形態では、インキュベーションは、室温で、即ち１８℃～３０℃の温度、例えば２０℃前後で行われる。いくつかの実施形態では、インキュベーション溶液を撹拌してもよい。

【0249】

いくつかの実施形態では、ラクタム（例えばβ－ラクタム）基を含む化合物のＡＡＶベクターに対するモル比は、１．１０^５～１．１０^７、例えば１．１０^６～５．１０^６であり得る。いくつかの好ましい実施形態では、ラクタム（例えばβ－ラクタム）は、３．１０^６当量モル過剰量で存在する。

【0250】

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、上記のインキュベーション段階の前又は後に１つ又はいくつかのさらなる段階を含み得る。

【0251】

例えば、いくつかの実施形態では、本発明の方法は、改変しようとするＡＡＶベクターを提供するか又は生成する予備的な段階を含み得る。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ラクタム（例えばβ－ラクタム）基を含む化合物（例えば式（Ｉ）の化合物）を提供又は調製する予備的な段階も含み得る。

【0252】

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、インキュベーション段階後に、以下のような１つ又はいくつかのさらなる段階も含み得る：
－例えば透析又はタンジェンシャルフローろ過によって、インキュベーション段階の終了時にラクタム（例えばβ－ラクタム）基を含む未反応化合物（例えば式（Ｉ）の化合物）を除去する段階及び／又は
－化学的に修飾されたＡＡＶ粒子を収集する段階、及び／又は
－ＡＡＶベクターを精製する段階、及び／又は
－ＡＡＶベクターを回収する段階、及び／又は
－ＡＡＶベクターを調合する及び／又はパッケージングする段階。

【0253】

ラクタム基を含む化合物
いくつかの実施形態では、本発明は、本発明のＡＡＶベクターを得るために使用されるラクタム（例えばβ－ラクタム）基を含む化合物にさらに関する。

【0254】

いくつかの実施形態では、本発明は、式（Ｉ）：

【化39】

の化合物又はその塩（式中、
Ｚ、Ｌ、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’は、上記及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義され、記載されるとおりである）を提供する。

【0255】

いくつかの実施形態では、提供される化合物は、式（Ｉａ）：

【化40】

の化合物又はその塩（式中、
Ｚ、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｌ^３、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２及びＲ^２’は、上記及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義され、記載されるとおりである）である。

【0256】

いくつかの実施形態では、提供される化合物は、式（Ｉｂ）：

【化41】

の化合物又はその塩（式中、
Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｌ^２、Ｌ^３及びＺは、上記及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義され、記載されるとおりである）である。

【0257】

いくつかの実施形態では、提供される化合物は、式（Ｉｃ）：

【化42】

の化合物又はその塩（式中、
Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｌ^３、Ｚ及び

【化43】

は、上記及び本明細書中のクラス及びサブクラスで定義され、記載されるとおりである）である。

【0258】

いくつかの実施形態では、提供される化合物は、式（Ｉｄ）：

【化44】

の化合物又はその塩
（式中、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４、Ｒ^４’、Ｌ^３及びＺは、上記及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義され、記載されるとおりである）である。

【0259】

いくつかの実施形態では、提供される化合物は、式（Ｉｅ）：

【化45】

の化合物又はその塩（式中、Ｒ^１、Ｒ^１’、Ｒ^２、Ｒ^２’、Ｒ^３、Ｒ^３’、Ｒ^４、Ｒ^４’及びＺは、上記及び本明細書中のクラス及びサブクラスにおいて定義され、記載されるとおりであり；
ｎは、１～２０の範囲の整数であり；好ましくはｎは３～５の範囲であり；より好ましくはｎは３である）である。

【0260】

いくつかの実施形態では、化合物は、表２の化合物又はその塩から選択される。

【表3】

【0261】

いくつかの実施形態では、本発明は、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）又は（Ｉｅ）の化合物又はその塩を提供し、ただし、本化合物は化合物（１）ではない。

【0262】

式（Ｉ）の化合物が当業者に公知の方法によって製造され得ることが認識される。

【0263】

トリアゾールを含む式（Ｉ）の化合物の場合、クリック化学の段階を使用して、本化合物を提供することができる。例として、実施例の節に記載のラクタムリンカー（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）及び（９）の合成を指すことができる。

【0264】

提供されるＡＡＶベクターの使用
いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、研究ツールとして使用することができる。いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、例えばＤＮＡ又はＲＮＡなどの治療用核酸の送達のためのベクターとして遺伝子治療における医薬として使用され得る。いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、例えばイメージング剤として診断手段において使用することができる。いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、治療及び診断ツールの両方の組み合わせとして、例えば治療用途として使用することができる。

【0265】

ＡＡＶベクターの生物学的機能性及び／又は特性の改変
いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターのカプシドの化学修飾は、その生物学的機能性及び／又は特性のうちの１つ又はいくつかを改変し得る。いくつかの実施形態では、生物学的機能性及び／又は特性は、本発明においてＡＡＶベクターを改変するために導入される機能的部分Ｚの性質に依存し得る。いくつかの実施形態では、改変ＡＡＶベクターの１つ以上の生物学的特性は、以下のように、非改変ＡＡＶベクターと比較して変更することができる：
－特定の臓器、組織及び／又は細胞タイプに対するＡＡＶベクターの選択性の改変（例えば選択性の増加又はある組織／臓器／細胞から別の組織／臓器／細胞への選択性のシフト）；及び／又は
－ＡＡＶベクターの免疫学的反応性の改変、例えばＡＡＶベクターの免疫原性の低下及び／又は中和抗体に対する親和性の低下及び／又はインビボで投与される場合に前記ＡＡＶベクターが変更された液性応答の変化を誘発し、例えばＡＡＶに対する中和抗体を生成しない；及び／又は
－ＡＡＶベクターの感染効率の上昇；及び／又は
－特定の細胞、組織及び／又は臓器に対するＡＡＶベクターの形質導入効率の上昇；及び／又は
－培養中の細胞に形質導入する場合の細胞毒性の低下；及び／又は
－癌細胞の誘導された細胞標的化死；及び／又は
－インビボ投与時又はインビトロでの細胞改変時のＡＡＶベクターの可視化／モニタリングを可能にすること；及び／又は
－セラグノスティックな適用；例えば治療剤及び診断剤を組み合わせること、を可能にすること。

【0266】

いくつかの実施形態では、医薬として、例えば遺伝子治療のための遺伝子ベクターとしてＡＡＶベクターが使用される場合、このような改変された特性の結果、ＡＡＶベクターの治療指数が改善され得る。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの治療指数の改善は、求められる治療効果を達成するために対象に投与されるＡＡＶの相対用量を低下させることによって起こり得、このような投与量の減少は、ＡＡＶ治療レジメンの相対的毒性を減少させ得る。

【0267】

いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、肝臓、心臓、脳、関節、網膜及び／又は骨格筋から選択される臓器又は細胞に対する優先的な指向性を示す。いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、肝細胞、心筋細胞、筋細胞、ニューロン、運動ニューロン、網膜色素細胞、光受容体、軟骨細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）及び／又は人工多能性幹細胞（ｉＰＳ）から選択されるがこれらに限定されない培養された細胞に対する優先的な指向性を示す。

【0268】

細胞を形質導入するための使用及び方法
いくつかの実施形態では、本発明は、対象の細胞への形質導入に使用するための、本発明によるＡＡＶベクターに関する。

【0269】

「細胞に形質導入する」とは、本明細書中で細胞への核酸の送達を指す。形質導入された関心対象の核酸は、あらゆるタイプであり得、求められる効果に応じて選択される。いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターを細胞に形質導入するために使用する場合、これは導入遺伝子を含む。

【0270】

いくつかの実施形態では、例えば、ＡＡＶベクターは、外因性遺伝子発現カセットを含み得る。いくつかの実施形態では、前記カセットは、プロモーター、関心対象の遺伝子及びターミネーターを含み得る。いくつかの実施形態では、さらなる又は代替的な例として、本発明のＡＡＶベクターは、細胞における相同組み換えのためのＤＮＡ鋳型を含み得る。いくつかの実施形態では、このようなＡＡＶベクターは、標的化される細胞における相同組み換えを促進するための遺伝子編集ツールと組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態では、遺伝子編集ツールは、何れのタイプであってもよく、ＣＲＩＳＰＲ及びその関連する系（Ｃａｓタンパク質、例えばＣａｓ９タンパク質又はその融合タンパク質、ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡを含むがこれらに限定されず、後者の２つは個別であるか又は単一のｇＲＮＡにともに連結されている）、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ並びに前記遺伝子編集タンパク質をコードするＲＮＡ及びＤＮＡ及びそれらの関連する系を包含するがこれらに限定されない。

【0271】

いくつかの実施形態では、本発明は、対象の細胞に形質導入するための本発明によるＡＡＶベクターの使用にも関する。

【0272】

いくつかの実施形態では、本発明は、本発明によるＡＡＶベクターを前記対象に投与することを含む、対象の細胞に形質導入するための方法にも関する。

【0273】

いくつかの実施形態では、本発明は、細胞に導入遺伝子を送達する方法であって、細胞を、本発明によるＡＡＶベクター、即ちβ－ラクタム部分を含む化合物とアミノ基の反応から得られる部分を介してＡＡＶベクターのカプシドのアミノ基に共有結合された機能的部分と、接触させた細胞において発現される導入遺伝子とを含むＡＡＶベクターと接触させることを含む方法にも関する。

【0274】

いくつかの実施形態では、本発明は、対象に導入遺伝子を含む本発明によるＡＡＶベクターを投与することを含む、対象の細胞に導入遺伝子を送達するための方法にも関する。

【0275】

いくつかの実施形態では、本発明は、細胞を本発明によるＡＡＶベクターと接触させることを含む、細胞に形質導入するためのインビトロ又はエクスビボの方法にさらに関する。いくつかの実施形態では、細胞は対象（例えば患者）由来であり得る。いくつかの実施形態では、形質導入後、細胞は、それを必要とする対象（例えば患者及び／又は別の対象）に移植され得る。

【0276】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、インビボ、エクスビボ又はインビトロで細胞に投与することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ、マウス、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ラットなど）由来であり得る。いくつかの実施形態では、細胞はヒト由来であり得る。いくつかの実施形態では、細胞は、肝細胞、心筋細胞、筋細胞、ニューロン、運動ニューロン、網膜色素細胞、光受容体、軟骨細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）又は人工多能性幹細胞（ｉＰＳ）であり得るがこれらに限定されない。

【0277】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、次の細胞の何れか又はいくつかに特異的に形質導入する：ニューロン（例えば、錐体ニューロン、プルキンエニューロン、紡錘ニューロン、中型有棘ニューロン及び／又は介在ニューロン［例えば、ゴルジ細胞、ルガロ細胞、バスケット細胞、星細胞、カンデラブルム細胞、単極刷毛細胞、顆粒細胞、レンショウ細胞、１ａ抑制性ニューロン、１ｂ抑制性ニューロン、パルブアルブミン発現介在ニューロン、ＣＣＫ発現介在ニューロン、ＶＩＰ発現介在ニューロン、ＳＯＭ発現介在ニューロン、コリン作動性介在ニューロン、チロシンヒドロキシラーゼ発現介在ニューロン、カルレチニン発現介在ニューロン又は一酸化窒素シンターゼ発現介在ニューロン］など）、オリゴデンドロサイト、アストロサイト、ミクログリア細胞、上衣細胞、放射状グリア細胞及び／又は下垂体細胞。

【0278】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、次の細胞の何れか又はいくつかに特異的に形質導入する：ニューロン（例えば、錐体ニューロン、プルキンエニューロン、紡錘ニューロン、中型有棘ニューロン及び／又は介在ニューロン［例えばゴルジ細胞、ルガロ細胞、バスケット細胞、星細胞、カンデラブルム細胞、単極刷毛細胞、顆粒細胞、レンショウ細胞、１ａ抑制性ニューロン、１ｂ抑制性ニューロン、パルブアルブミン発現介在ニューロン、ＣＣＫ発現介在ニューロン、ＶＩＰ発現介在ニューロン、ＳＯＭ発現介在ニューロン、コリン作動性介在ニューロン、チロシンヒドロキシラーゼ発現介在ニューロン、カルレチニン発現介在ニューロン又は一酸化窒素シンターゼ発現介在ニューロン］など）。

【0279】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＶベクターは、以下の細胞の１つ以上（又は全て）に特異的に形質導入しない：オリゴデンドロサイト、アストロサイト、ミクログリア細胞、上衣細胞、放射状グリア細胞及び／又は下垂体細胞。

【0280】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、処置及び／又は予防的介入のために多岐にわたる細胞、組織及び／又は臓器を標的とし得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクター標的は、肝細胞；網膜の細胞；即ち光受容体、網膜色素上皮（ＲＰＥ）、ミュラー細胞；内耳の細胞（例えば内有毛細胞及び／又は外有毛細胞、ヘンゼン細胞、ダイテルス細胞、柱細胞、内指節細胞、境界細胞など）；筋肉細胞、即ち筋芽細胞、サテライト細胞；中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞、即ちニューロン、グリア細胞；心臓の細胞；末梢神経系（ＰＮＳ）の細胞；骨芽細胞；腫瘍細胞；血液細胞、例えばリンパ球、単球、好塩基球、好酸球、好中球、肥満細胞など；造血幹細胞を含む造血系の細胞；人工多能性幹細胞（ｉＰＳ）などを包含するがこれらに限定されない。ＡＡＶにより標的とされ得る組織及び臓器の例としては、眼、網膜、耳、肝臓、骨格筋、心筋、平滑筋、脳、脊椎、骨、結合組織、心臓、腎臓、肺、リンパ節、乳腺、ミエリン、前立腺、精巣、胸腺、甲状腺、気管などが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、好ましい細胞タイプは、肝細胞、網膜細胞、筋肉細胞、ＣＮＳの細胞、ＰＮＳの細胞及び／又は造血系細胞である。いくつかの実施形態では、好ましい組織及び／又は臓器は、肝臓、筋肉、心臓、眼及び／又は脳である。

【0281】

いくつかの実施形態では、網膜細胞を含む１つ以上の細胞タイプを標的とする場合、本明細書中に記載のＡＡＶは、ＣＮＳの細胞を標的とすると考えられる。いくつかの実施形態では、網膜細胞を標的とすることは、ＣＮＳ標的化を表すとみなされない。

【0282】

遺伝子治療での使用
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のＡＡＶベクターは、例えば対象に関心対象の治療用核酸を送達するために、遺伝子治療において特に有用であり得る。

【0283】

従って、いくつかの実施形態では、本発明は、遺伝子治療での使用のための本発明によるＡＡＶベクターにも関する。

【0284】

いくつかの実施形態では、本発明は、本発明によるＡＡＶベクターを前記対象に投与することを含む、遺伝子治療を必要とする対象における遺伝子治療の方法にも関する。

【0285】

いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶは、対象への何れかの適切な経路により送達され得る。いくつかの実施形態では、適切な投与経路は、吸入、局所、組織内（例えば筋肉内、心臓内、肝内、腎臓内）、結膜（例えば網膜内、網膜下）、粘膜（例えば口腔、鼻腔）、関節内、硝子体内、頭蓋内、血管内（例えば静脈内）、脳室内、大槽内、腹腔内及びリンパ内経路を包含するがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、投与経路は、標的とされる組織及び／又は臓器に応じて、即ち形質導入が求められる組織及び／又は臓器に応じて選択される。

【0286】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、脊髄内及び／又は脳内投与によって投与されるものである。

【0287】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、脊髄内投与されるものである。いくつかの実施形態では、脊髄内投与は、くも膜下腔内及び硬膜外投与を含むか又はそれからなる。いくつかの実施形態では、脊髄内投与は、くも膜下腔内投与を含むか又はそれからなる。

【0288】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、脳内に投与されるものである。

【0289】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、脳内に投与されるものであり、脳内投与は、線条体（例えば、被殻、尾状核、側坐核、嗅結節、淡蒼球外節及び／又は淡蒼球内節など）、視床、視床下部、視床上部、腹側視床、実質、大脳、髄質、深部小脳核（例えば、黒質、歯状核、栓状核、球状核及び／又は室頂核）、脳脊髄液（ＣＳＦ）、髄膜、硬膜、くも膜、軟膜、くも膜下槽（例えば、大槽、橋槽、脚間槽、交差槽、大脳外側窩の槽、上槽及び／又は終板槽など）、くも膜下腔、皮質、中隔、脳橋及び／又は小脳を含むか又はそれらからなる群から選択される部位での投与である。

【0290】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、線条体内（即ち線条体において、例えば被殻、尾状核、側坐核、嗅結節、淡蒼球外節及び／又は淡蒼球内節においてなど）、視床内（即ち視床において）、大槽内（即ち、くも膜下槽において、例えば大槽、橋槽、脚間槽、交差槽、大脳外側窩の槽、上槽及び／又は終板槽においてなど；好ましくは大槽において）に投与されるものである。

【0291】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、実質内に投与されるものである。

【0292】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、線条体内に、視床内に、大槽内に又はくも膜下腔内に投与されるものである。

【0293】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、線条体内に又は視床内に投与されるものである。

【0294】

いくつかの実施形態では、本発明によるＡＡＶベクターは、例えばその全体において参照により本明細書中に組み込まれる国際公開第２０２１／０８９８５６号パンフレットに記載のように脳室内に投与されない。

【0295】

いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターの投与によって処置される状態は、何れのタイプの状態であってもよい。例えば、いくつかの実施形態では、処置される状態は、伝染性疾患及び遺伝性並びに後天性の遺伝的障害から選択され得る。いくつかの実施形態では、関心対象の遺伝的障害は、遺伝的筋肉障害、例えばデュシェンヌ型筋ジストロフィー、白質ジストロフィー、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、血友病、鎌形赤血球症及び遺伝性網膜ジストロフィーを包含するがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、癌、関節炎、関節症、先天性及び後天性心臓疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病及び感染性疾患（例えばＣ型肝炎など）などであるがこれらに限定されない障害の処置のためにも使用され得る。

【0296】

いくつかの好ましい実施形態では、本明細書中に記載のＡＡＶベクターは、眼疾患を予防する及び／又は処置するために特に有用であり得る。従って、いくつかの実施形態では、本発明は、眼疾患の予防及び／又は処置での使用のための本発明によるＡＡＶベクターにも関する。いくつかの実施形態では、本発明は、眼疾患の予防及び／又は処置のための医薬を製造するための本発明によるＡＡＶベクターの使用にさらに関する。いくつかの実施形態では、本発明は、それを必要とする対象において眼疾患を予防及び／又は処置する方法であって、本発明によるＡＡＶベクターを前記対象に投与することを含む方法にも関する。

【0297】

いくつかの好ましい実施形態では、本明細書中に記載のＡＡＶベクターは、ＣＮＳ疾患を予防及び／又は処置するためにも特に有用であり得る。「中枢神経系」又は「ＣＮＳ」は、脳及び脊髄の両方を指し、脳及び脊髄を除く「末梢神経系」又は「ＰＮＳ」と対比をなす。いくつかの実施形態では、眼及び特に網膜は、ＣＮＳの一部とはみなされない。いくつかの実施形態では、眼及び特に網膜は、ＰＮＳの一部とみなされ得る。従って、いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＮＳ疾患の予防又は処置での使用のための本発明による改変ＡＡＶベクターにも関する。いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＮＳ疾患の予防又は処置用の薬剤の製造のための、本発明による改変ＡＡＶベクターの使用にさらに関する。いくつかの実施形態では、本発明は、それを必要とする対象においてＣＮＳ疾患を予防及び／又は処置する方法であって、本発明による改変ＡＡＶベクターを前記対象に投与することを含む方法にも関する。

【0298】

いくつかの実施形態では、脳組織は、線条体、視床、黒質、頭頂葉皮質、海馬及び／又は淡蒼球であり得るか又はそれらを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ部位は、線条体中であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ部位は、視床中であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ部位は、大槽中であり得る。

【0299】

本明細書中で使用される場合、「防止する」、「防止すること」及び「防止」という用語は、その目的が、対象が所定の疾患を所定の期間にわたって発症する確率を低下させることである、予防的及び防止的手段を指す。このような低下は、例えば対象において疾患の少なくとも１つの症状の発生を遅延させることにおいて反映され得る。

【0300】

本明細書中で使用される場合、「処置する」又は「処置」又は「軽減」という用語は、その目的が、所定の疾患を緩徐化する（和らげる）ことである、予防的及び防止的手段を除く治療的処置を指す。処置を必要とする者は、既に疾患を有する者並びに疾患を有すると疑われる者を含む。対象は、本発明によるＡＡＶベクターの治療的な量を投与された後、前記対象が以下のうちの１つ以上の観察可能及び／又は測定可能な軽減又はその非存在を示す場合、所定の疾患に対する処置に成功している：疾患に関連する症状の１つ以上；罹患率及び死亡率の低下；並びに／又はクオリティーオブライフ問題の改善。成功した処置及び標的化された疾患の改善を評価するための上記パラメーターは、医師が精通している通常の手順によって容易に測定可能である。

【0301】

本明細書中で使用される場合、「対象」という用語は、哺乳動物、好ましくはヒトを指す。いくつかの実施形態では、対象は、医療を受けるために待機しているか又は受けている、又は医学的手順の目的であった／目的である／目的であろう、又は疾患の進行についてモニターされている、「患者」、即ち温血動物、より好ましくはヒトであり得る。「哺乳動物」は、本明細書で、ヒト、非ヒト霊長類、家畜及び畜産動物及び動物園、競技用又は愛玩動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどを含む何れかの哺乳動物を指す。好ましくは、哺乳動物は、霊長類、より好ましくはヒトである。

【0302】

組成物
いくつかの実施形態では、本発明は、本発明によるＡＡＶベクターを含む組成物にさらに関する。いくつかの実施形態では、本発明による組成物中のＡＡＶベクターは、少なくとも１つの導入遺伝子を含む。

【0303】

いくつかの実施形態では、本組成物は、本発明によるＡＡＶベクターと、少なくとも１つの薬学的に許容可能なビヒクルと、を含む医薬組成物である。

【0304】

「薬学的に許容可能な」という用語は、ビヒクル、賦形剤、担体及び／又は保存剤を指す場合、対象、好ましくはヒトに投与されるときに、アレルギー性又は同様の望ましくない反応を生じない分子部分及び組成物を定義することを意味する。ヒトへの投与の場合、医薬組成物は、例えばＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ又はＥＭＡなどの規制官庁により必要とされる無菌、発熱性及び全般的安全性及び純度の基準に合致すべきである。

【0305】

いくつかの実施形態では、これらの組成物中で使用され得る薬学的に許容可能なビヒクル、賦形剤、担体及び保存剤としては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、タンパク質（例えば血清アルブミン、ゼラチン、免疫グロブリンなど）、緩衝物質（例えばリン酸塩、クエン酸塩又は他の有機酸など）、アミノ酸（例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、リジンなど）、抗酸化剤（例えばアスコルビン酸など）、キレート剤（例えばＥＤＴＡなど）、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩又は電解質（例えば、プロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウムなど）、親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン、ポリエチレン－ポリオキシプロピレンブロックポリマーなど）、セルロース系の物質（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリアクリレート、ワックス、非イオン性界面活性剤（例えばＴｗｅｅｎ、プルロニック、ポリエチレングリコールなど）、羊毛脂及び適切なそれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。

【0306】

いくつかの実施形態では、本発明による医薬組成物は、対象に注射することが意図される製剤に関して薬学的に許容可能であるビヒクルを含む。いくつかの実施形態では、これらは、特に、等張で無菌の塩類溶液（リン酸一ナトリウム又はリン酸二ナトリウム、塩化ナトリウム、カリウム、カルシウム又はマグネシウムなど又はこのような塩の混合物）、又は場合に応じて滅菌水又は生理食塩水を添加することによって注射可能な溶液を構成することができる、乾燥、特に凍結乾燥組成物であり得る。

【0307】

いくつかの実施形態では、本発明による医薬組成物は、例えば天然及び／又は合成ポリマー、例えばポロキサマー、キトサン、シクロデキストリン、デンドリマー、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）ポリマーなど、哺乳動物細胞への本明細書中に記載のＡＡＶベクターの進入を促進する１つ以上の薬剤を含む。

【0308】

いくつかの実施形態では、本発明による少なくとも１つの導入遺伝子を含むＡＡＶベクターは、医薬の一部として含まれる。従って、いくつかの実施形態では、本発明は、本発明による少なくとも１つの導入遺伝子を含むＡＡＶベクターを含む医薬に関する。

【0309】

導入遺伝子／疾患の組み合わせ
上記のように、本発明によるＡＡＶベクターは、ＡＡＶベクターの意図される使用に関して選択される少なくとも１つの導入遺伝子を含み得る。眼疾患又はＣＮＳ疾患の処置に有用であり得る導入遺伝子の例を、本明細書中で以後提供する。いくつかの実施形態では、眼は、「ＣＮＳ」部位であるとみなされない。いくつかの実施形態では、眼は、「ＰＮＳ」部位であるとみなされ得る。

【0310】

いくつかの実施形態では、眼疾患は遺伝性網膜疾患を含む。いくつかの実施形態では、遺伝性網膜疾患としては、レーバー先天性黒内障、網膜色素変性症、白点状網膜炎、全脈絡膜萎縮、シュタルガルト病、黄色斑眼底、白点状眼底、網膜ジストロフィー、脈絡膜ジストロフィー、錐体ジストロフィー、錐体杆体ジストロフィー、杆体錐体ジストロフィー、黄斑ジストロフィー、黄斑変性、基底膜ドルーゼン（ｂａｓａｌ ｌａｍｉｎａｒ ｄｒｕｓｅｎ）、夜盲症、オーランド島眼病（Ａｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ ｅｙｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、バルデ・ビードル症候群、ニューファンドランド杆体錐体ジストロフィー、オグシ病（Ｏｇｕｓｈｉ ｄｉｓｅａｓｅ）、硝子体網膜症、硝子体網膜脈絡膜症、ベストロフィン症、ワーグナー症候群、ノリエ病及び小眼球症が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、眼疾患は、伝染性疾患、例えば感染性疾患（例えば、ウイルス、細菌、真菌など）を含む。いくつかの実施形態では、眼疾患は損傷を含む。いくつかの実施形態では、眼疾患は、自己免疫疾患を含む。いくつかの実施形態では、眼疾患は癌を含む。

【0311】

いくつかの実施形態では、遺伝性網膜疾患と関与する遺伝子としては、ＡＢＣＡ４、ＡＤＡＭ９、ＡＧＢＬ５、ＡＨＲ、ＡＩＰＬ１、ＡＰＯＥ、ＡＲＨＧＥＦ１８、ＡＲＬ２ＢＰ、ＡＲＬ３、ＡＲＬ６、ＢＢＳ２、ＢＥＳＴ１、Ｃ２ＯＲＦ７１、Ｃ８ｏｒｆ３７、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＡＰＮ５、ＣＤＨＲ１、ＣＥＰ２９０、ＣＥＰ７８、ＣＥＲＫＬ、ＣＦＨ、ＣＨＭ、ＣＬＣＣ１、ＣＬＲＮ１、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＢ１、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＲＢ１、ＣＲＢ２、ＣＲＸ、ＣＴＮＮＢ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＤＨＤＤＳ、ＤＨＸ３８、ＥＦＥＭＰ１、ＥＬＯＶＬ４、ＥＹＳ、ＦＡＭ１６１Ａ、ＦＢＮ２、ＦＳＣＮ２、ＦＺＤ４、ＧＤＦ６、ＧＵＣＡ１Ａ、ＧＵＣＡ１Ｂ、ＧＵＣＹ２Ｄ、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＫ１、ＨＭＣＮ１、ＨＲＧ４、ＨＴＲＡ１、ＩＤＨ３Ａ、ＩＤＨ３Ｂ、ＩＦＴ１４０、ＩＦＴ１７２、ＩＦＴ４３、ＩＭＰＤＨ１、ＩＭＰＧ２、ＫＣＮＪ１３、ＫＩＡＡ１５４９、ＫＩＦ３Ｂ、ＫＩＺ、ＫＬＨＬ７、ＬＣＡ５、ＬＲＡＴ、ＬＲＰ５、ＭＡＫ、ＭＥＲＴＫ、ＭＹＯ７Ａ、ＮＤＰ、ＮＥＫ２、ＮＭＮＡＴ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲＬ、ＰＤＥ６Ａ、ＰＤＥ６Ｂ、ＰＤＥ６Ｇ、ＰＩＴＰＮＭ３、ＰＯＭＧＴ１、ＰＲＣＤ、ＰＲＯＭ１、ＰＲＰＦ３、ＰＲＰＦ４、ＰＲＰＦ６、ＰＲＰＦ８、ＰＲＰＦ３１、ＰＲＰＨ２、ＲＡＸＬ１、ＲＢＰ３、ＲＢＰ４、ＲＤ３、ＲＤＨ１２、ＲＤＨ５、ＲＥＥＰ６、ＲＧＲ、ＲＨＯ、ＲＩＭＳ１、ＲＬＢＰ１、ＲＰ１、ＲＰ１Ｌ１、ＲＰ２、ＲＰ４、ＲＰ７、ＲＰ９、ＲＰ１０、ＲＰ１１、ＲＰ１２、ＲＰ１３、ＲＰ１４、ＲＰ１７、ＲＰ１８、ＲＰ１９、ＲＰ２０、ＲＰ２５、ＲＰ２６、ＲＰ２７、ＲＰ２８、ＲＰ３０、ＲＰ３１、ＲＰ３２、ＲＰ３３、ＲＰ３５、ＲＰ３６、ＲＰ３７、ＲＰ３８、ＲＰ３９、ＲＰ４０、ＲＰ４１、ＲＰ４２、ＲＰ４３、ＲＰ４４、ＲＰ４５、ＲＰ４６、ＲＰ４７、ＲＰ４８、ＲＰ４９、ＲＰ５０、ＲＰ５１、ＲＰ５３、ＲＰ５４、ＲＰ５５、ＲＰ５６、ＲＰ５７、ＲＰ５８、ＲＰ５９、ＲＰ６０、ＲＰ６１、ＲＰ６２、ＲＰ６４、ＲＰ６５、ＲＰ６６、ＲＰ６７、ＲＰ６８、ＲＰ６９、ＲＰ７０、ＲＰ７１、ＲＰ７２、ＲＰ７３、ＲＰ７４、ＲＰ７５、ＲＰ７６、ＲＰ７７、ＲＰ７８、ＲＰ７９、ＲＰ８０、ＲＰ８１、ＲＰ８２、ＲＰ８３、ＲＰ８４、ＲＰ８５、ＲＰ８６、ＲＰ８７、ＲＰ８８、ＲＰ８９、ＲＰ９０、ＲＰＥ６５、ＲＰＥ８７、ＲＰＧＲ、ＲＰＧＲＩＰ１、ＳＡＧ、ＳＥＭＡ４Ａ、ＳＬＣ７Ａ１４、ＳＮＲＮＰ２００、ＳＰＡＴＡ７、ＴＯＰＯＲＳ、ＴＳＰＡＮ１２、ＴＴＣ８、ＴＵＬＰ１、ＵＳＨ２Ａ、ＶＣＡＮ、ＺＮＦ４０８及びＺＮＦ５１３が挙げられるがこれらに限定されない。

【0312】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患は、ＣＮＳ感染性疾患、ＣＮＳ変性疾患、ＣＮＳ自己免疫疾患、ＣＮＳ腫瘍疾患、脳血管疾患、ＣＮＳ損傷又はＣＮＳ構造異常である。

【0313】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患としては、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、フリードライヒ運動失調症、カナバン病、筋ジストロフィー、脊髄性筋萎縮症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルファマンノース症、アスパルチルグルコサミン尿症、バッテン病、ベータマンノース症、シスチン症、ダノン病、ファブリー病、ファーバー病、フコシドーシス、ガラクトシアリドーシス、ゴーシェ病、クラッベ病、異染性白質ジストロフィー、ムコ多糖症（ハーラー症候群、ハーラー－シャイエ症候群、シャイエ症候群、ハンター症候群、サンフィリポ症候群Ａ、Ｂ、Ｃ又はＤ、モルキオ症候群Ｂ、マロトー・ラミー症候群、スライ症候群又はナトウィクズ症候群（Ｎａｔｏｗｉｃｚ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）の何れかなど）、脊髄小脳失調、副腎白質ジストロフィー、アンジェルマン症候群又はてんかんが挙げられるがこれらに限定されない。

【0314】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患は、酸性リパーゼ疾患、酸性マルターゼ欠損症、酸蓄積病、後天性てんかん性失語、急性播種性脳脊髄炎、注意欠陥多動性障害障害（ＡＤＨＤ）、アディー瞳孔（Ａｄｉｅ’ｓ ｐｕｐｉｌ）、アディー症候群、副腎白質ジストロフィー、失認、アイカルディ症候群、アイカルディ・グティエール症候群障害、アレキサンダー病、アルパース病、交代性片麻痺、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、無脳症、動脈瘤、アンジェルマン症候群、血管腫症、無酸素症、抗リン脂質抗体症候群、失語症、失行症、くも膜炎、アーノルド－キアリ奇形、芳香族Ｌ－アミノ酸デカルボキシラーゼ欠損症（ＡＡＤＣ欠損症）、アスパルチルグルコサミン尿症、アスペルガー症候群、運動失調症、毛細血管拡張性運動失調症（ルイ－バー症候群）、運動失調及び小脳又は脊髄小脳変性症、注意欠陥多動性障害、自閉症、自律神経機能異常、バース症候群、バッテン病、ベッカー型ミオトニー、ベーチェット病、ベル麻痺、ベルンハルト－ロート症候群、ビンスワンゲル病、ブロッホ－サルズバーガー症候群、ブラッドベリー－エグルストン症候群、ブラウン－セカール症候群、球脊髄性筋萎縮症、ＣＡＤＡＳＩＬ、カナバン病、灼熱痛、海綿腫（ｃａｖｅｒｎｏｍａｓ）、海綿状血管腫、中心性頸髄症候群、脊髄中心症候群、橋中心髄鞘崩壊症、セラミダーゼ欠損症、小脳変性症、小脳低形成、脳性脚気、脳性巨人症、脳性麻痺、脳－眼－顔－骨格症候群（ＣＯＦＳ）、コレステロールエステル貯蔵病、舞踏病、舞踏病有棘赤血球症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性起立不耐症、慢性疼痛、コケイン症候群ＩＩ型、コフィン－ローリー症候群、コルポセファリー、先天性筋無力症、大脳皮質基底核変性症、頭蓋動脈炎、クリー脳炎、クロイツフェルト－ヤコブ病、クッシング症候群、シスチン症、巨細胞封入体症、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、ダンディー－ウォーカー症候群、ダノン病、ドーソン病、ドモルシア症候群、ドゥジュリーヌ－クルンプケ麻痺、認知症、歯状核小脳性運動失調症（ｄｅｎｔａｔｅ ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ ａｔａｘｉａ）、歯状核赤核萎縮症、皮膚筋炎、発達性統合運動障害、デビック症候群、びまん性硬化症、自律神経異常症、書字障害、難読症、嚥下困難、統合運動障害、ミオクローヌス性小脳性共同運動障害、進行性小脳性共同運動障害、てんかん（例えば、アーミッシュ乳児てんかん症候群［ＡＩＥＳ］、良性家族性乳幼児痙攣［ＢＦＩＳ］、良性家族性新生児痙攣［ＢＦＮＳ］、小児欠神てんかん［ＣＡＥ］、小児期発症てんかん性脳症［ＣＯＥＥ］、ドラベ症候群［ＤＳ］、早期乳児てんかん性脳症［ＥＩＥＥ］、成人型家族性ミオクローヌスてんかん［ＦＡＭＥ］、家族性熱性痙攣［ＦＦＳ］、多様な焦点を示す家族性焦点性てんかん［ＦＦＥＶＦ］、家族性小児ミオクローヌスてんかん［ＦＩＭＥ］、家族性側頭葉てんかん［ＦＴＬＥ］、精神遅滞を伴うか又は伴わない焦点性てんかん及び言語障害［ＦＥＳＤ］、全般性てんかん及び発作性ジスキネジア［ＧＥＰＤ］、熱性けいれんプラスを伴う全般性てんかん［ＧＥＦＳ＋］、特発性全般性てんかん［ＩＧＥ］、若年性欠神てんかん［ＪＡＥ］、若年性ミオクローヌスてんかん［ＪＭＥ］、ミオクロニー脱力発作てんかん［ＭＡＥ］、夜間前頭葉てんかん［ＮＦＬＥ］、進行性ミオクローヌスてんかん［ＰＭＥ］、ピリドキサミン５’－ホスフェートオキシダーゼ欠乏［ＰＮＰＯＤ］、ピリドキシン依存性てんかん［ＥＰＤ］及び乳児重症ミオクロニーてんかん［ＳＭＥＩ］）、ファブリー病、ファール症候群、家族性自律神経障害、家族性血管腫、家族性特発性基底核石灰化症、家族性周期性四肢麻痺、家族性痙性麻痺、ファーバー病、線維筋性形成異常、フィッシャー症候群、筋緊張低下児症候群、フリードライヒ運動失調症、前頭側頭型認知症、フコシド症、ガラクトシアリドーシス、ゴーシェ病、全身性ガングリオシドーシス、ゲルストマン症候群、ゲルストマン1－ストロイスラー－シャインカー病、巨大軸索ニューロパチー、巨細胞性動脈炎、巨細胞性封入体病、グロボイド細胞性白質ジストロフィー、舌咽神経痛、糖原病、ＧＭ１ガングリオシドーシス、ＧＭ２ガングリオシドーシス（テイ－サックス病）、ギラン－バレー症候群、ハレルフォルデン－スパッツ病、持続性片側頭痛、交代性片麻痺（ｈｅｍｉｐｌｅｇｉａ ａｌｔｅｒａｎｓ）、遺伝性痙性対麻痺、遺伝性多発神経炎性失調症、ホルムズ－アーディー症候群、全前脳症、ヒューズ症候群、ハンチントン病、水頭性無脳症、水脊髄症、コルチゾン過剰症、免疫介在性脳脊髄炎、封入体筋炎、色素失調症、乳児筋緊張低下、乳児神経軸索性ジストロフィー、後頭孔脳脱出症、アイザクス症候群、ジュベール症候群、カーンズ－セイヤ症候群、ケネディー病、キンズボーン症候群、クライネ－レビン症候群、クリッペル－フェイル症候群、クリッペル－トレノーネイ症候群（ＫＴＳ）、クリューバー－ビューシー症候群、コルサコフ健忘症候群、クラッベ病、クーゲルバーグ－ヴェランダー病、ランバート－イートン筋無力症候群、ランドウ－クレフナー症候群、外側大腿皮神経絞扼、外側髄症候群、リー病、レノックス－ガストー症候群、レッシュ－ナイハン症候群、レバイン－クリッチュリー症候群、レビー小体認知症、類脂質タンパク症、脳回欠損、閉じ込め症候群、ルー－ゲーリッグ病、狼瘡、ライム病、マシャド－ジョゼフ病、大脳症、アルファマンノース症、ベータマンノース症、メルカーソン－ローゼンタール症候群、メンケス病、異常感覚性大腿痛、異染性白質ジストロフィー、小頭症、ミラー－フィッシャー症候群、メビウス症候群、ムコ多糖症Ｉ－Ｈ型（ハーラー症候群）、ムコ多糖症Ｉ－Ｈ／Ｓ型（ハーラー－シャイエ症候群）、ムコ多糖症ＩＳ型（シャイエ症候群）、ムコ多糖症ＩＩ型（ハンター症候群）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ａ型（サンフィリポ症候群Ａ）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ｂ型（サンフィリポ症候群Ｂ）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ｃ型（サンフィリポ症候群Ｃ）、ムコ多糖症ＩＩＩ－Ｄ型（サンフィリポ症候群Ｄ）、ムコ多糖症ＩＶ－Ｂ型（モルキオ症候群Ｂ）、ムコ多糖症ＶＩ型（マロトー・ラミー症候群）、ムコ多糖症ＶＩＩ型（スライ症候群）、ムコ多糖症ＩＸ型（ナトウィクズ症候群（Ｎａｔｏｗｉｃｚ ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、多発性硬化症、筋ジストロフィー、重症筋無力症、ミエリン破壊性びまん性硬化症（ｍｙｅｌｉｎｏｃｌａｓｔｉｃ ｄｉｆｆｕｓｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、ナルコレプシー、神経有棘赤血球症、神経線維腫症、神経弛緩薬悪性症候群、神経サルコイドーシス、ニーマン－ピック病、大田原症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、眼球クローヌスミオクローヌス、オサリバン－マクレオド症候群（Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ－ＭｃＬｅｏｄ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、パントテン酸キナーゼ関連神経変性、腫瘍随伴症候群、感覚異常、パーキンソン病、発作性舞踏病アテトーゼ、発作性片側頭痛、パリー－ロンベルグ症候群、ペリツェウス－メルツバッハー病、ペナーショッカーＩＩ症候群、脳室周囲白質軟化症、フィタン酸蓄積疾患、ピック病、梨状筋症候群、多発性筋炎、ポンペ病、ポリオ後症候群、後部皮質萎縮症、原発性歯状核萎縮症（ｐｒｉｍａｒｙ ｄｅｎｔａｔｕｍ ａｔｒｏｐｈｙ）、原発性側索硬化症、原発性進行性失語症、プリオン病、進行性顔面片側萎縮症、進行性歩行運動失調症、進行性多巣性白質脳症、進行性硬化性ポリオジストロフィー、進行性核上まひ、顔貌失認、ラムゼイハント症候群Ｉ、ラムゼイハント症候群ＩＩ、ラスムッセン脳炎、レフサム病、レット症候群、ライエ症候群、ライリー－デイ症候群、サンドホフ病、シルダー病、ザイテルベルガー病、シャイ－ドレーガー症候群、シェーグレン症候群、痙攣、二分脊椎、脊髄性筋萎縮症、脊髄小脳失調、脊髄小脳萎縮症、脊髄小脳変性症、スティール－リチャードソン－オルスゼフスキー症候群、線条体黒質変性症、スタージ－ウェーバー症候群、遅発性ジスキネジア、タウオパチー、テイ－サックス病、胸郭出口症候群、甲状腺中毒性ミオパチー、三叉神経痛、トッド麻痺、三叉神経痛、熱帯性痙性対麻痺、トロイアー症候群、血管認知症、フォン－エコーノモ病、フォンヒッペル－リンダウ病（ＶＨＬ）、フォンレックリングハウゼン病、ワレンベルグ症候群、ウェルドニッヒ・ホフマン病、ウェルニッケ－コルサコフ症候群、ウエスト症候群、ウィップル病、ウィリアムズ症候群、ウィルソン病、ウォールマン病、Ｘ連鎖球脊髄性筋萎縮症、ツェルウェガー症候群、多発性硬化性萎縮症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ａｔｒｏｐｈｙ）、レビー小体認知症（ＬＢＤ）及びアンジェルマン症候群を含むか又はそれらからなる群から選択される。

【0315】

いくつかの特定の実施形態では、ＣＮＳ疾患は、パーキンソン病又はゴーシェ病である。いくつかの特定の実施形態では、ＣＮＳ疾患は、パーキンソン病である。いくつかの特定の実施形態では、ＣＮＳ疾患は、ゴーシェ病である。

【0316】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患に関与する遺伝子としては、３Ｒタウ、４Ｒタウ、ＡＡＲＳ、ＡＢＣＤ１、ＡＣＯＸ１、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＧＡ、ＡＧＥＲ、ＡＬＤＨ７Ａ１、ＡＬＧ１３、ＡＬＳ２、ＡＮＧ、ＡＮＸＡ１１、ＡＰＰ、ＡＲＨＧＥＦ９、ＡＲＳＡ、ＡＲＳＢ、ＡＲＶ１、ＡＳＡＨ１、ＡＳＰＡ、ＡＴＮ１、ＡＴＰ１０Ａ、ＡＴＰ１３Ａ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＢＡＸ、ＢＣＬ－２、ＢＤＮＦ、ＢＩＣＤ２、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＳＲ、ＣＣＮＦ、ＣＤＫＬ５、ＣＥＲＳ１、ＣＦＡＰ４１０、ＣＨＣＨＤ１０、ＣＨＤ２、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＢ２、ＣＬＣＮ２ａ、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、ＣＮＴＮ２、ＣＰＡ６、ＣＳＴＢ、ＣＴＮＳ、ＣＴＳＡ、ＣＴＳＤ、ＤＡＯ、ＤＣＴＮ１、ＤＥＰＤＣ５、ＤＭＤ、ＤＮＡＪＢ２、ＤＮＭ１、ＤＯＣＫ７、ＤＲＤ２、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＦＨＣ１、ＥＧＬＮ１、ＥＰＨＡ４、ＥＰＭ２Ａ、ＥＲＢＢ４、ＦＧＦ１２、ＦＩＧ４、ＦＲＲＳ１Ｌ、ＦＴＬ、ＦＵＣＡ１、ＦＵＳ、ＦＸＮ、ＧＡＡ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＬ、ＧＡＬＣ、ＧＡＬＮＳ、ＧＢＡ、ＧＦＡＰ、ＧＬＡ、ＧＬＢ１、ＧＬＥ１、ＧＬＴ８Ｄ１、ＧＮＡＯ１、ＧＮＳ、ＧＯＳＲ２、ＧＰＲ９８、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＳＴＭ１、ＧＵＦ１、ＧＵＳＢ、ＨＣＮ１、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＮＲＮＰＡ１、ＨＴＴ、ＨＹＡＬ１、ＩＤＳ、ＩＤＵＡ、ＩＧＨＭＢＰ２、ＩＬ－１、ＩＴ１５、ＩＴＰＡ、ＪＰＨ３、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＴ１、ＫＣＴＤ７、ＬＡＬ、ＬＡＭＰ２、ＬＧＩ１、ＬＭＮＢ２、ＬＲＲＫ２、ＭＡＮ２Ｂ１、ＭＡＮ２Ｂ２、ＭＡＮ２Ｃ１、ＭＡＮＢＡ、ＭＡＴＲ３、ＭＢＤ５、ＭＦＳＤ８、ＮＡＧＡ、ＮＡＧＬＵ、ＮＥＣＡＰ１、ＮＥＦＨ、ＮＥＫ１、ＮＥＵ１、ＮＨＬＲＣ１、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、ＮＲ４Ａ２、ＮＴＲＫ２、ＯＣＡ２、ＯＰＴＮ、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＣＤＨ１９、ＰＥＸ１、ＰＥＸ２、ＰＥＸ３、ＰＥＸ５、ＰＥＸ６、ＰＥＸ１０、ＰＥＸ１１Ｂ、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ１４、ＰＥＸ１６、ＰＥＸ１９、ＰＥＸ２６、ＰＦＮ１、ＰＩＮＫ１、ＰＬＣＢ１、ＰＮＰＯ、ＰＯＮ１、ＰＯＮ２、ＰＯＮ３、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＲＤＭ８、ＰＲＩＣＫＬＥ１、ＰＲＫＮ、ＰＲＮＰ、ＰＲＰＨ、ＰＲＲＴ２、ＰＳＡＰ、Ｓ１０６β、ＳＣＡＲＢ２、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ９Ａｂ、ＳＥＴＸ、ＳＧＳＨ、ＳＩＧＭＡＲ１、ＳＩＫ１、ＳＫＰ１、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣＡ１７Ａ５、ＳＭＮ１、ＳＭＰＤ１、ＳＮＣＡ、ＳＮＲＰＮ、ＳＯＤ１、ＳＰＧ１１、ＳＰＴＡＮ１、ＳＱＳＴＭ１、ＳＴ３ＧＡＬ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＳＴＸ１Ｂ、ＳＴＸＢＰ１、ＳＹＰ、ＳＹＴ１、ＳＺＴ２、ＴＡＦ１５、ＴＡＲＤＢＰ、ＴＢＣ１Ｄ２４、ＴＢＣＥ、ＴＢＫ１、ＴＢＰ、ＴＩＴＦ－１、ＴＲＥＭ２、ＵＢＡ５、ＵＢＥ１、ＵＢＥ３Ａ、ＵＢＱＬＮ２、ＵＣＨ－Ｌ１、ＵＮＣ１３Ａ、ＶＡＰＢ、ＶＣＰ、ＶＰＳ３５、ＷＷＯＸ及びＸＢＰ１が挙げられるがこれらに限定されない。

【0317】

いくつかの特定の実施形態では、ＣＮＳ疾患に関与する遺伝子は、ＧＢＡ遺伝子、好ましくはヒトＧＢＡ遺伝子である。

【0318】

ヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡの代表的な核酸配列は、配列番号１、又は配列番号と１少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％以上の配列同一性を有する核酸配列を含むか又はそれからなる。

【0319】

一実施形態では、ヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡの核酸配列は、配列番号２、又は配列番号２と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか又はそれからなるアミノ酸配列をコードする。

【0320】

いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、線条体、視床、黒質、頭頂葉皮質、海馬及び／又は淡蒼球を含む、脳のある特定の領域に効果的に形質導入可能である。従って、いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、線条体、視床、黒質、頭頂葉皮質、海馬及び淡蒼球を標的とすることに関して、並びに／又は線条体、視床、黒質、頭頂葉皮質、海馬及び淡蒼球に影響を及ぼす疾患の処置に関して非常に重要である。

【0321】

いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、線条体、黒質、視床、黒質、淡蒼球、頭頂葉皮質及び／又は海馬の疾患を処置することに特に適しており、このような疾患としては、ハンチントン病、パーキンソン病、多発性硬化性萎縮症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ａｔｒｏｐｈｙ）、レビー小体認知症（ＬＢＤ）、進行性核上まひ及びアンジェルマン症候群が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患は、ハンチントン病、パーキンソン病、多発性硬化性萎縮症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ａｔｒｏｐｈｙ）、レビー小体認知症（ＬＢＤ）、進行性核上まひ、前頭側頭型認知症及びアンジェルマン症候群からなる群から選択される。

【0322】

いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、ニューロンに効果的に形質導入することが可能である。従って、いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患は、神経学的疾患又はニューロンに影響を及ぼす疾患である。

【0323】

いくつかの実施形態では、本発明のＡＡＶベクターは、運動機能の制御に関与するニューロンに効果的に形質導入することが可能である。従って、いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患は、運動機能に影響を及ぼす疾患である。運動機能に影響を及ぼす疾患の非限定例としては、パーキンソン病及びハンチントン病が挙げられるがこれらに限定されない。

【0324】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はアルツハイマー病であり、本発明のＡＡＶベクターは、３Ｒタウ、４Ｒタウ、ＡＧＥＲ、ＡＰＰ、ＢＡＸ、ＢＣＬ－２、ＣＨＲＮＡ７、ＤＲＤ２、ＧＦＡＰ、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＮ１、ＩＬ－１、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＹＰ及びＳＹＴ１を含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0325】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はパーキンソン病であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＡＴＰ１３Ａ２、ＢＤＮＦ、ＥＧＬＮ１、ＧＢＡ、ＧＳＴＭ１、ＬＲＲＫ２、ＮＲ４Ａ２、ＮＴＲＫ２、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ＰＩＮＫ１、ＰＲＫＮ、Ｓ１０６β、ＳＫＰ１、ＳＮＣＡ、ＶＰＳ３５及びＵＣＨ－Ｌ１を含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0326】

いくつかの特定の実施形態では、ＣＮＳ疾患は、パーキンソン病であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＧＢＡ遺伝子からの、好ましくはヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0327】

ヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡの代表的な核酸配列は、配列番号１、又は配列番号１と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％以上の配列同一性を有する核酸配列を含むか又はそれからなる

【0328】

一実施形態では、ヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡの核酸配列は、配列番号２、又は配列番号２と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか又はそれからなるアミノ酸配列をコードする。

【0329】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はハンチントン病であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＡＴＮ１、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＦＴＬ、ＨＴＴ、ＩＴ１５、ＪＰＨ３、ＰＲＮＰ、ＳＬＣ２Ａ３、ＴＢＰ、ＴＩＴＦ－１及びＸＢＰ１を含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0330】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はフリードライヒ運動失調症であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＦＸＮ遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0331】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はカナバン病であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＡＳＰＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0332】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患は筋ジストロフィーであり、本発明のＡＡＶベクターは、ＤＭＤ遺伝子を含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0333】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患は脊髄性筋萎縮症であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＢＩＣＤ２、ＣＨＣＨＤ１０、ＤＮＡＪＢ２、ＤＹＮＣ１Ｈ１、ＩＧＨＭＢＰ２、ＳＩＧＭＡＲ１、ＳＭＮ１、ＴＢＣＥ、ＶＡＰＢ及びＵＢＥ１を含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0334】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患は筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＡＬＳ２、ＡＮＧ、ＡＮＸＡ１１、ＡＴＸＮ２、Ｃ９ｏｒｆ７２、ＣＨＭＰ２Ｂ、ＣＦＡＰ４１０、ＣＨＣＨＤ１０、ＣＣＮＦ、ＤＡＯ、ＤＣＴＮ１、ＥＰＨＡ４、ＥＲＢＢ４、ＦＩＧ４、ＦＵＳ、ＧＬＥ１、ＧＬＴ８Ｄ１、ＨＮＲＮＰＡ１、ＭＡＴＲ３、ＮＥＦＨ、ＮＥＫ１、ＯＰＴＮ、ＰＦＮ１、ＰＯＮ１、ＰＯＮ２、ＰＯＮ３、ＰＰＡＲＧＣ１Ａ、ＰＲＰＨ、ＳＥＴＸ、ＳＩＧＭＡＲ１、ＳＭＮ１、ＳＯＤ１、ＳＰＧ１１、ＳＱＳＴＭ１、ＴＡＦ１５、ＴＡＲＤＢＰ、ＴＢＫ１、ＴＲＥＭ２、ＵＢＱＬＮ２、ＵＮＣ１３Ａ、ＶＡＰＢ及びＶＣＰを含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0335】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はアルファマンノース症であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＭＡＮ２Ｂ１、ＭＡＮ２Ｂ２及びＭＡＮ２Ｃ１を含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0336】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はアスパルチルグルコサミン尿症であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＡＧＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0337】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はバッテン病であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＣＬＮ１、ＣＬＮ２、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、ＣＴＳＤ及びＭＦＳＤ８を含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0338】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はベータマンノース症であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＭＡＮＢＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0339】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はシスチン症であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＣＴＮＳ遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0340】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はダノン病であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＬＡＭＰ２遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0341】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はファブリー病であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＧＬＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0342】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はファーバー病であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＡＳＡＨ１遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0343】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はフコシドーシスであり、本発明のＡＡＶベクターは、ＦＵＣＡ１遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0344】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はガラクトシアリドーシスであり、本発明のＡＡＶベクターは、ＣＴＳＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0345】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はゴーシェ病であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0346】

いくつかの特定の実施形態では、ＣＮＳ疾患はゴーシェ病であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＧＢＡ遺伝子から、好ましくはヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0347】

ヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡの代表的な核酸配列は、配列番号１、又は配列番号１と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％以上の配列同一性を有する核酸配列を含むか又はそれからなる。

【0348】

一実施形態では、ヒトＧＢＡ遺伝子のｃＤＮＡの核酸配列は、配列番号２、又は配列番号２と少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか又はそれからなるアミノ酸配列をコードする。

【0349】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はクラッベ病であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＧＡＬＣ及びＰＳＡＰを含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0350】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患は異染性白質ジストロフィーであり、本発明のＡＡＶベクターは、ＡＲＳＡ遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0351】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患は、ムコ多糖症（ハーラー症候群、ハーラーーシャイエ症候群、シャイエ症候群、ハンター症候群、サンフィリポ症候群Ａ、Ｂ、Ｃ又はＤ、モルキオ症候群Ｂ、マロトー・ラミー症候群、スライ症候群又はナトウィクズ症候群（Ｎａｔｏｗｉｃｚ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）の何れかなど）であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＡＲＳＢ、ＧＡＡ、ＧＡＬＮＳ、ＧＬＢ１、ＧＮＳ、ＧＵＳＢ、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＹＡＬ１、ＩＤＳ、ＩＤＵＡ、ＬＡＬ、ＮＡＧＡ、ＮＡＧＬＵ、ＮＥＵ１、ＮＰＣ１、ＮＰＣ２、ＳＧＳＨ、ＳＬＣＡ１７Ａ５及びＳＭＰＤ１を含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0352】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患は脊髄小脳失調であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２及びＡＴＸＮ３を含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0353】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患は副腎白質ジストロフィーであり、本発明のＡＡＶベクターは、ＡＢＣＤ１、ＡＣＯＸ１、ＰＥＸ１、ＰＥＸ２、ＰＥＸ３、ＰＥＸ５、ＰＥＸ６、ＰＥＸ１０、ＰＥＸ１１Ｂ、ＰＥＸ１２、ＰＥＸ１３、ＰＥＸ１４、ＰＥＸ１６、ＰＥＸ１９及びＰＥＸ２６を含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0354】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はアンジェルマン症候群であり、本発明のＡＡＶベクターは、ＡＴＰ１０Ａ、ＭＢＤ５、ＯＣＡ２、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＮＲＰＮ及びＵＢＥ３Ａを含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0355】

いくつかの実施形態では、ＣＮＳ疾患はてんかんであり、本発明のＡＡＶベクターは、ＡＡＲＳ、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＬＤＨ７Ａ１、ＡＬＧ１３、ＡＲＨＧＥＦ９、ＡＲＶ１、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＳＲ、ＣＤＫＬ５、ＣＥＲＳ１、ＣＨＤ２、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＢ２、ＣＬＣＮ２ａ、ＣＮＴＮ２、ＣＰＡ６、ＣＳＴＢ、ＤＥＰＤＣ５、ＤＮＭ１、ＤＯＣＫ７、ＥＥＦ１Ａ２、ＥＦＨＣ１、ＥＰＭ２Ａ、ＦＧＦ１２、ＦＲＲＳ１Ｌ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＬ、ＧＮＡＯ１、ＧＯＳＲ２、ＧＰＲ９８、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＵＦ１、ＨＣＮ１、ＩＴＰＡ、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＴ１、ＫＣＴＤ７、ＬＧＩ１、ＬＭＮＢ２、ＮＥＣＡＰ１、ＮＨＬＲＣ１、ＰＣＤＨ１９、ＰＬＣＢ１、ＰＮＰＯ、ＰＲＤＭ８、ＰＲＩＣＫＬＥ１、ＰＲＲＴ２、ＳＣＡＲＢ２、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ９Ａｂ、ＳＩＫ１、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＰＴＡＮ１、ＳＴ３ＧＡＬ３、ＳＴ３ＧＡＬ５、ＳＴＸ１Ｂ、ＳＴＸＢＰ１、ＳＺＴ２、ＴＢＣ１Ｄ２４、ＵＢＡ５及びＷＷＯＸを含むか又はそれらからなる群から選択される遺伝子のｃＤＮＡを含む、少なくとも１つの導入遺伝子を有する。

【0356】

当業者は、遺伝子が複数の転写及び／又は翻訳アイソフォームを有し得ること、並びに本明細書中に記載の遺伝子のｃＤＮＡを含む導入遺伝子が、標的遺伝子の転写変異体及び／又はスプライシング変異体の潜在的使用を包含することを認識する。

【0357】

治療計画
いくつかの実施形態では、本発明による改変ＡＡＶベクターは、治療的有効量でそれを必要とする対象に投与されるものである。

【0358】

いくつかの実施形態では、本発明による改変ＡＡＶベクターは、約１０^８ウイルスゲノム（ｖｇ）～約１０^１５ｖｇ、例えば約１０^８ｖｇ～約１０^１４ｖｇ、約１０^８ｖｇ～約１０^１３ｖｇ、約１０^８ｖｇ～約１０^１２ｖｇ、約１０^８ｖｇ～約１０^１１ｖｇ、約１０^８ｖｇ～約１０^１０ｖｇ、約１０^８ｖｇ～約１０^９ｖｇ、約１０^９ｖｇ～約１０^１５ｖｇ、約１０^９ｖｇ～約１０^１４ｖｇ、約１０^９ｖｇ～約１０^１３ｖｇ、約１０^９ｖｇ～約１０^１２ｖｇ、約１０^９ｖｇ～約１０^１１ｖｇ、約１０^９ｖｇ～約１０^１０ｖｇ、約１０^１０ｖｇ～約１０^１５ｖｇ、約１０^１０ｖｇ～約１０^１４ｖｇ、約１０^１０ｖｇ～約１０^１３ｖｇ、約１０^１０ｖｇ～約１０^１２ｖｇ、約１０^１０ｖｇ～約１０^１１ｖｇ、約１０^１１ｖｇ～約１０^１５ｖｇ、約１０^１１ｖｇ～約１０^１４ｖｇ、約１０^１１ｖｇ～約１０^１３ｖｇ、約１０^１１ｖｇ～約１０^１２ｖｇ、約１０^１２ｖｇ～約１０^１５ｖｇ、約１０^１２ｖｇ～約１０^１４ｖｇ、約１０^１２ｖｇ～約１０^１３ｖｇ又は約１０^１３ｖｇ～約１０^１５ｖｇなどの範囲の用量で投与されるものである。

【0359】

「ベクターゲノム」という用語は、「ｖｇ」と略され、ベクター、例えばウイルスベクターのポリヌクレオチド配列のセットを含む１つ以上のポリヌクレオチドを指す。ベクターゲノムは、ウイルス粒子中に封入され得る。特定のウイルスベクターに応じて、ベクターゲノムは、１本鎖ＤＮＡ、２本鎖ＤＮＡ又は１本鎖ＲＮＡ又は２本鎖ＲＮＡを含み得る。ベクターゲノムは、特定のウイルスベクター及び／又は組み換え技術を通じて特定のウイルスベクターに挿入される何れかの異種配列（例えば導入遺伝子）と関連する内在性配列を含み得る。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターの核酸力価は、ｖｇ／ｍＬに関して測定され得る。この力価を測定するために適切な方法は、当技術分野で公知であり、例えば定量的ＰＣＲを含む。

【0360】

本明細書中で使用される場合、「約」という用語は、数値の前に設定される場合、前記数値が近似であり、小さな変動が、開示される実施形態の実践に有意な影響を与えないことを意味する。このような小さな変動は、例えば±１％、±２％、±３％、±４％、±５％、±６％、±７％、±８％、±９％、±１０％又はそれより大きい。

【0361】

いくつかの実施形態では、本発明による改変ＡＡＶベクターは、約１×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約２×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約２．７５×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約３×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約４×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約５×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約６×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約７×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約８×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約９×１０^８ｖｇ±０．５×１０^８、約１×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約２×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約３×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約４×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約５×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約６×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約７×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約８×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約９×１０^９ｖｇ±０．５×１０^９、約１×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約２×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約３×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約４×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約５×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約６×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約７×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約８×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約９×１０^１０ｖｇ±０．５×１０^１０、約１×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約２×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約３×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約４×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約５×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約６×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約７×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約８×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約９×１０^１１ｖｇ±０．５×１０^１１、約１×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約２×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約３×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約４×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約５×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約６×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約７×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約８×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約９×１０^１２ｖｇ±０．５×１０^１２、約１×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約２×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約３×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約４×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約５×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約６×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約７×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約８×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約９×１０^１３ｖｇ±０．５×１０^１３、約１×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約２×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約３×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約４×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約５×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約６×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約７×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約８×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約９×１０^１４ｖｇ±０．５×１０^１４、約１×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約２×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約３×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約４×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約５×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約６×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約７×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５、約８×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５又は約９×１０^１５ｖｇ±０．５×１０^１５の用量で投与されるものである。

【0362】

いくつかの実施形態では、本発明による改変ＡＡＶベクターは、約１×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約２×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約３×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約４×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約５×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約６×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約７×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約８×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約９×１０^６ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^６、約１×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約２×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約３×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約４×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約５×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約６×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約７×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約８×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約９×１０^７ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^７、約１×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約２×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約３×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約４×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約５×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約６×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約７×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約８×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約９×１０^８ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^８、約１×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約２×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約３×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約４×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約５×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約６×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約７×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約８×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約９×１０^９ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^９、約１×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約２×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約３×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約４×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約５×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約６×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約７×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約８×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約９×１０^１０ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１０、約１×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約２×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約３×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約４×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約５×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約６×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約７×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約８×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約９×１０^１１ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１１、約１×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約２×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約３×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約４×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約５×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約６×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約７×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約８×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約９×１０^１２ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１２、約１×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約２×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約３×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約４×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約５×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約６×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約７×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約８×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３、約９×１０^１３ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１３又は約１×１０^１４ｖｇ／ｋｇ±０．５×１０^１４の用量で投与されるものである。

【0363】

いくつかの実施形態では、所望の効果又は治療効果を達成するために必要とされる改変ＡＡＶベクターの用量は、具体的な投与経路、治療効果達成するために必要とされる、遺伝子、ＲＮＡ又はタンパク質発現のレベル、処置される特定の疾患、並びに遺伝子、ＲＮＡ、及び／又はタンパク質産物の安定性を含むがこれらに限定されないいくつかの要因に基づき変動する。当業者は、上述の要因並びに当技術分野で周知の他の要因に基づいて、特定の対象及び／又は特定の疾患を処置するための投薬を調整し、及び／又は用量範囲を決定し得る。

【0364】

いくつかの実施形態では、対象に投与される改変ＡＡＶベクターの体積は、とりわけ、対象のサイズ、治療効果を得るために必要とされるＡＡＶベクターの用量、ＡＡＶベクターの濃度及び提案される投与経路にも依存する。

【0365】

いくつかの実施形態では、対象に送達されるＡＡＶベクターの投与速度は、とりわけ、対象の体格、治療効果を得るために必要とされるＡＡＶベクターの用量、ＡＡＶベクターの濃度、ＡＡＶベクター溶液の体積及び提案される投与経路にも依存する。例えば、いくつかの実施形態では、脳内投与のために、約０．１μＬ／分～約１μＬ／分又は約１μＬ／分～約５μＬ／分又は約５μＬ／分～約１０μＬ／分の範囲の投与速度を使用することができる。

【0366】

いくつかの実施形態では、対象に投与されるＡＡＶベクターの投与速度は、約０．１μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．２μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．３μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．４μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．５μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．６μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．７μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．８μＬ／分±０．０５μＬ／分、約０．９μＬ／分±０．０５μＬ／分、１μＬ／分±０．５μＬ／分、約２μＬ／分±０．５μＬ／分、約３μＬ／分±０．５μＬ／分、約４μＬ／分±０．５μＬ／分、約５μＬ／分±０．５μＬ／分、約６μＬ／分±０．５μＬ／分、約７μＬ／分±０．５μＬ／分、約８μＬ／分±０．５μＬ／分、約９μＬ／分±０．５μＬ／分又は約１０μＬ／分±０．５μＬ／分である。

【0367】

いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターの総用量又は総体積は、連続的に（即ち、改変ＡＡＶベクターの総用量又は総体積が単回ショット又は点滴で注入される）；又は断続的に投与され得る（即ち、ＡＡＶベクターの総用量又は総体積の一部が、各ショット間の間欠的な時間で、好ましくは、各ショット又は点滴の間、１５秒、３０秒、４５秒、１分、２分、３分、４分又は５分の時間などの短い間欠的時間で注入される）。

【0368】

キット
本発明は、
－対象の細胞に形質導入する；及び／又は
－対象に導入遺伝子を送達する；及び／又は
－対象において疾患を予防及び／又は処置する
ためのキット及びキットオブパーツにも関する。

【0369】

いくつかの実施形態では、本キット又はキットオブパーツは、１つ以上のＡＡＶベクター及び／又は本発明による組成物を含む。

【0370】

いくつかの実施形態では、本キット又はキットオブパーツは、１つ以上のＡＡＶベクター及び／又は本発明による組成物の送達のための装置をさらに含む。

【0371】

いくつかの実施形態では、本キットは、１つ以上のＡＡＶベクター及び／又は本発明による組成物の送達のための説明書をさらに含む。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書中に記載の組成物及び／又は方法を使用して、標的とされる疾患を予防及び／又は処置するための説明書を含む。

【0372】

いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のキットは、緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ及び／又は本明細書中に記載の何れかの方法を行うための説明がある添付文書を含め、市販及び使用者の観点から所望される他の材料をさらに含み得る。

【図面の簡単な説明】

【0373】

【図1】図１は、本発明によるラクタム（例えばβ－ラクタム）を含む化合物とＡＡＶ表面に露出している一級アミンとの間のカップリングを例示する略図である。

【図2A】図２Ａ、３Ａ、４Ａ、５、６Ａ、７、８、９Ａ、１０Ａ、１１、１２及び１３は、銀染色を用いたＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルであり、ＡＡＶカプシドの完全性を示す。ＴＢＳ緩衝液（ｐＨ９．３）中のラクタムリンカー（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（７）、（８）又は（９）（３Ｅ６ｅｑ）の溶液に１０１２ｖｇのＡＡＶ２－ｅＧＦＰ、ＡＡＶ５－ｅＧＦＰ、ＡＡＶ８－ｅＧＦＰ又はＡＡＶ９－ｅＧＦＰを添加し、２０℃で４時間インキュベートした。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及び銀染色によって１０１０ｖｇの各カップリングを分析した。ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３は、ＡＡＶカプシドを構成する３つのタンパク質である。カプシドタンパク質分子量を、タンパク質ラダーに従い画像の右に示す。図２Ａ：リンカー（１）とともにインキュベートしたＡＡＶ２。

【図2B】図２Ｂ、３Ｂ、４Ｂ、６Ｂ、９Ｂ及び１０Ｂは、ウエスタンブロット分析である。ＴＢＳ緩衝液（ｐＨ９．３）中のラクタムリンカー（１）、（２）又は（３）（３Ｅ６ｅｑ）の溶液に１０^１２ｖｇのＡＡＶ２－ｅＧＦＰ、ＡＡＶ５－ｅＧＦＰ、ＡＡＶ８－ｅＧＦＰ又はＡＡＶ９－ｅＧＦＰを添加し、２０℃で４時間インキュベートした。コンカナバリン－ＨＲＰ（ＣｏｎＡ）又はビオチン化レクチンＲＣＡ１及びＵＥＡ１を使用して、ウエスタンブロットによって１０^１０ｖｇの各カップリングを分析し、それらのリンカーにカップリングされるＶＰタンパク質を検出した。図２Ｂ：リンカー（１）とともにインキュベートしたＡＡＶ２、ＣｏｎＡ染色。

【図3A】リンカー（２）とともにインキュベートしたＡＡＶ２。

【図3B】リンカー（２）とともにインキュベートしたＡＡＶ２、ＲＣＡ１染色。

【図4A】リンカー（３）とともにインキュベートしたＡＡＶ２。

【図4B】リンカー（３）とともにインキュベートしたＡＡＶ２、ＵＥＡ１染色。

【図5】リンカー（４）とともにインキュベートしたＡＡＶ２。

【図6A】リンカー（１）とともにインキュベートしたＡＡＶ８。

【図6B】リンカー（１）とともにインキュベートしたＡＡＶ８、ＣｏｎＡ染色。

【図7】リンカー（３）とともにインキュベートしたＡＡＶ８。

【図8】リンカー（５）とともにインキュベートしたＡＡＶ２。

【図9A】リンカー（１）とともにインキュベートしたＡＡＶ５。

【図9B】リンカー（１）とともにインキュベートしたＡＡＶ５、ＣｏｎＡ染色。

【図10A】リンカー（１）とともにインキュベートしたＡＡＶ９。

【図10B】リンカー（１）とともにインキュベートしたＡＡＶ９、ＣｏｎＡ染色。

【図11】リンカー（７）とともにインキュベートしたＡＡＶ２。

【図12】リンカー（８）とともにインキュベートしたＡＡＶ２。

【図13】リンカー（９）とともにインキュベートしたＡＡＶ２。

【図14】図１４は、５．５Ｅ８ｖｇのＡＡＶ２、（１）－ＡＡＶ２又は（７）－ＡＡＶ２ベクターの何れかの単回、一側性線条体内注射の４８日後に、ＧＦＰに対して陽性であるマウス右脳半球における線条体及び黒質体積の定量分析を示すグラフである。バーは、群平均を表し；丸、三角及び四角のドットは、個々の動物の値を表す。図１４Ａ：ＧＦＰを発現する線条体のパーセント体積。図１４Ｂ：ＧＦＰを発現する黒質のパーセント体積。

【図15】図１５は、右線条体でのＡＡＶ２又は（１）－ＡＡＶ２の単回注入から４８日後の、線条体、視床及び黒質レベルでのマウス脳スライスのＧＦＰ染色を示す２枚の免疫組織化学写真である。

【図15A】線条体レベルでのマウス脳スライスの免疫組織化学写真。

【図15B】視床レベルでのマウス脳スライスの免疫組織化学写真。

【図15C】黒質レベルでのマウス脳スライスの免疫組織化学写真。

【図16】図１６は、ＡＡＶ２．ＧＢＡ１、（１）－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１又はＭａｎ－ＮＣＳ－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１の何れかをＨＥＫ２９３細胞に形質導入後のグルコセレブロシダーゼ（ＧＣアーゼ）酵素活性の蛍光定量的決定を示すグラフである。

【0374】

実施例
本発明を、次の実施例によりさらに例示する。

【0375】

次の略語を使用する：
ＡＣＮ：アセトニトリル；
ＡｇＯＴｆ：トリフルオロメタンスルホン酸銀（Ｉ）；
ＤＢＵ：１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク－７－エン；
ＤＣＭ：ジクロロメタン；
ＤＩＡＤ：アゾジカルボン酸ジイソプロピル；
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；
ＤＰＢＳ：ダルベッコリン酸緩衝食塩水；
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；
ＥｔＯＨ：エタノール；
ＭｅＯＨ：メタノール；
ｎ－ＢｕＬｉ：ｎ－ブチルリチウム；
ＴＢＳ：トリス緩衝食塩水；
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；
ＴＭＳＯＴｆ：トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル。

【0376】

Ｉ．式（Ｉ）の化合物の合成
Ｉ．１．材料及び分析方法
材料
溶媒、試薬及び出発物質を購入し、別段の指示がない限り、販売元から受け取った状態のままで使用した。

【0377】

以下に記載の中間体及び化合物は、ＣｈｅｍＢｉｏＤｒａｗ（登録商標）Ｕｌｔｒａ ｖｅｒｓｉｏｎ １２．０（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して命名した。

【0378】

分析方法
ＨＰＬＣ
装置：ＤＡＤ検出器を備えたＨＰＬＣ－Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｎｅｘｅｒａ－ｉ ＬＣ－２０４０Ｃ ３Ｄ；
カラム：Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ３μＣ１８（４．６×５０ｍｍ）、１１０Å、カラム番号ＯＯＢ－４４５３－ＥＯ；
ＨＰＬＣ－１条件：
波長：２００．０ｎｍ±４．０ｎｍ；２８３．０ｎｍ±４．０ｎｍ；流速：０．５ｍｌ／分；カラム温度：３０℃；注入体積：１．０μＬ；
溶出：移動相Ａ、水及び移動相Ｂ、アセトニトリルでの勾配。

【表4】

試料調製：ＡＣＮ中で試料を溶解し、最終濃度０．５ｍｇ／ｍｌを得る。
ＨＰＬＣ－２条件：
波長：２００．０ｎｍ±４．０ｎｍ；２８３．０ｎｍ±４．０ｎｍ；流速：０．５ｍｌ／分；カラム温度：４５℃；注入体積：１．５μＬ；
溶出：移動相Ａ、０．１％ギ酸を含む水及び移動相Ｂ、０．１％ギ酸を含むアセトニトリルによる勾配

【表5】

試料調製：ＡＣＮ中で試料を溶解し、最終濃度０．５ｍｇ／ｍｌを得る。
ＨＰＬＣ－３条件：
波長：２０５．０ｎｍ±４．０ｎｍ；２８３．０ｎｍ±４．０ｎｍ；流速：０．５ｍＬ／分；カラム温度：３０℃；注入体積：１．０μＬ；
溶出：移動相Ａ、水及び移動相Ｂ、アセトニトリルによる勾配

【表6】

試料調製：Ｈ_２Ｏ／ＡＣＮ（１：１）中で試料を溶解し、最終濃度０．２５ｍｇ／ｍｌを得る。

【0379】

ＬＣ／ＭＳ
装置：Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣＭＳ－２０２０シングル四重極型液体クロマトグラフ質量分析計；
カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ １．８μｍ Ｃ１８（２．１×５０ｍｍ）、１００Å、カラム番号１８６００３５３２；
ＵＨＰＬＣ条件：波長：２２０．０ｎｍ±４．０ｎｍ；２５４．０ｎｍ±４．０ｎｍ；流速：０．５ｍｌ／分；カラム温度：２５℃；オートサンプラー温度：２０℃；注入体積：１μＬ；
溶出：移動相Ａ、０．１％ギ酸を含む水及び移動相Ｂ、０．１％ギ酸を含むアセトニトリルを伴う勾配。

【表7】

ＭＳ条件：質量範囲：１００～１５００ｍ／ｚ；イオン化：交互；スキャン速度：１５０００ｕ／ｓｅｃ。
試料調製：ＡＣＮ中で試料を溶解させて、最終濃度０．２５ｍｇ／ｍｌを得る。

【0380】

フラッシュクロマトグラフィー
条件－１：
装置：Ｐｕｒｅ Ｃ－８５０ ＦｌａｓｈＰｒｅｐ、ＢＵＣＨＩ；
カラム：ＰＦ－１５－Ｃ１８－Ｆ００８０、Ｐｕｒｉｆｌａｓｈ、１５μｍ；
条件：波長：２００ｎｍ；２５４ｎｍ及びＥＬＳＤ検出器；流速：３０ｍｌ／分；
溶出：移動相Ａ、水及び移動相Ｂ、アセトニトリルによる勾配。

【表8】

試料調製：粗製物質をＨ_２Ｏ／ＡＣＮ中で溶解した。
条件－２：
装置：Ｐｕｒｉｆｌａｓｈ ＸＳ ４２０、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ；
カラム：ＰＦ－ＲＰ－ＨＰ－Ｆ００４０、Ｐｕｒｉｆｌａｓｈ、１５μｍ；
条件：波長：２２０ｎｍ；２５４ｎｍ；流速：３０ｍｌ／分；
溶出：移動相Ａ、水及び移動相Ｂ、アセトニトリルによる勾配。

【表9】

試料調製：粗製物質をＨ_２Ｏ／ＡＣＮ（１：１）中で溶解した。

【0381】

Ｉ．２．構築ブロックの合成
構築ブロック１（ＢＢ１）：２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エタン－１－オール

【化46】

無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の２－［２－（２－クロロエトキシ）エトキシ］エタノール（１当量、５．０ｇ）及びアジ化ナトリウム（１当量、１．９ｇ）の混合物を９０℃で一晩撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、ＴＨＦ（１０ｍＬ）で希釈し、１５分間撹拌した。得られた懸濁液をろ過し、ケークをＴＨＦで洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮し、黄色油状物質（５．１ｇ、収率９８％）として生成物を与えた。ＬＣ／ＭＳ（６分）：ＲＴ＝１．７９ｍｉｎ、実測［Ｍ＋Ｈ］^＋１７６．００；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ３．７３－３．６０（ｍ，８Ｈ），３．５７（ｄｄ，Ｊ＝５．５，３．７Ｈｚ，２Ｈ），３．３６（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７８（ｓ，１Ｈ）。

【0382】

構築ブロック３（ＢＢ３）：１－（４－エチニルベンゾイル）アゼチジン－２－オン

【化47】

４－エチニル安息香酸（１当量、１．０ｇ）及びＳＯＣｌ_２（３当量、１２．２ｇ／７．４ｍＬ）の混合物を還流下で一晩維持し、次に真空下で濃縮して、橙色の固体を得た。２－アゼチジノン（１当量、０．４３ｇ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）中で溶解し、溶液を－７８℃まで冷却し、ヘキサン中のｎＢｕＬｉの２Ｍ溶液（１当量、３．０４ｍＬ）を滴下して添加した。得られた懸濁液を－７８℃で１５分間撹拌し、次にＴＨＦ（５ｍＬ）中の４－エチニルベンゾイルクロリドの溶液を滴下して処理した。反応混合物を室温で一晩撹拌させ、水性ＮＨ_４Ｃｌ溶液でクエンチした。生成物をＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で蒸発乾固させた。溶出液としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１００：０－＞８０：２０－＞５０：５０）を使用して粗製物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、黄色固体として生成物０．４５ｇ（収率：３７％）を与えた。ＬＣ／ＭＳ（６ｍｉｎ）：ＲＴ＝２．７６分、実測［Ｍ＋Ｈ］^＋１９９．７０；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ７．８５（ｄ，２Ｈ），７．６０（ｄ，２Ｈ），４．４６（ｓ，１Ｈ），３．６６（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．１１（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ）。

【0383】

Ｉ．３．式（Ｉ）の化合物の調製
化合物（１）：１－（４－（１－（２－（２－（２－（（（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）－３，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）ベンゾイル）アゼチジン－２－オン

【化48】

段階１：［３，４，５，６－テトラキス（アセチルオキシ）オキサン－２－イル］メチルアセテート（１当量、５．０ｇ）をアルゴン雰囲気下にて無水ＤＣＭ（５０ｍＬ）中で溶解し、モルホリン（４当量、１．６ｇ）を添加し、溶液を室温で一晩撹拌した。次に反応混合物を２Ｍ ＨＣｌ（２×５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）で２回洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。得られた黄色油状物質アルゴン雰囲気下で無水ＤＣＭ（５０ｍＬ）中で溶解し、溶液を０℃まで冷却し、トリクロロアセトニトリル（１０当量、１６．７ｇ／１１．６ｍＬ）で処理した。０℃で１時間撹拌した後、ＤＢＵ（０．２当量、０．３５ｇ／０．３５／ｍＬ）を添加し、反応混合物を０℃で１時間撹拌し、次に室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、溶出液としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：１）を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって褐色の油状の残渣を精製し、帯黄色の油状物質として生成物（４．３ｇ、収率６８．８％）を与えた。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１０．１５（ｓ，１Ｈ），６．２２（ｓ，１Ｈ），５．３３－５．１６（ｍ，３Ｈ），４．２６－３．９６（ｍ，３Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ），２．１２－１．８６（ｍ，９Ｈ）。

【0384】

段階２：アルゴン雰囲気下での無水ＤＣＭ（４０ｍＬ）中の［３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［（２，２，２－トリクロロエタンイミドイル）オキシ］オキサン－２－イル］メチルアセテート（１当量、４．３４ｇ）及び分子ふるい４Å（反応混合物を無水に保つため）の懸濁液に室温でＢＢ１（１．５当量、０．５３ｇ）を添加した。混合物を－２５℃まで冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（１．１当量、２．１５ｈ／１．７５ｍＬ）を添加した。反応混合物を－２５℃で１時間撹拌し、次いで室温で一晩撹拌させた。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（６０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（１００ｍＬ）を添加し、相を分離し、有機相を水（１００ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。得られた懸濁液をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、溶出液としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：１）を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製し、無色油状物質として１．８ｇの生成物（収率５９％）を与えた。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ５．８２－５．６４（ｍ，３Ｈ）、５．２８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７８－４．６４（ｍ，１Ｈ），４．５５－４．４２（ｍ，２Ｈ），４．２５－４．１６（ｍ，１Ｈ），４．０８（ｄｄ，Ｊ＝５．１，２．２Ｈｚ，９Ｈ），３．８５－３．７５（ｍ，２Ｈ），２．４８（ｄｄｄ，Ｊ＝３４．４，１５．５，１．６Ｈｚ，１２Ｈ）。

【0385】

段階３：［３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝オキサン－２－イル］メチルアセテート（１当量、０．３ｇ）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の７Ｎ ＮＨ_３中で溶解し、室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去して乾固させ、粗製生成物をさらに精製せずに次の段階に対して使用した（２００ｍｇ、収率定量）。

【0386】

段階４：ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（３ｍＬ／１ｍＬ）中の２－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝－６－（ヒドロキシメチル）オキサン－３，４，５－トリオール（１当量、０．２ｇ）の溶液にＢＢ３（１．１当量、０．１３０ｇ）、酢酸銅（Ｉ）（０．２５当量、０．０１８ｇ）及びＬ－アスコルビン酸（１．１当量、０．１２６ｇ）を添加した。反応混合物を６０℃で１時間撹拌した。次に、溶媒を減圧下で除去し、逆相フラッシュカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製し（カラム ＦＰ－ＩＤ－Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ：ＡＣＮ、Ｈ_２Ｏ１００％から開始してＡＣＮ１００％まで）、白色の固形泡状物質として９４．２ｍｇ（収率：２７．８％）の生成物（１）を与えた。ＬＣ／ＭＳ（６分）：ＲＴ＝２．１１分、実測［Ｍ＋Ｈ］^＋５３７．１５；ＬＣ／ＭＳ（１２分）：ＲＴ＝４．５９分、実測［Ｍ＋Ｈ］^＋５３７．３；ＨＰＬＣ－１純度：９９．１４％（２００ｎｍ），９９．２５％（２８３ｎｍ）；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．７０（ｓ，１Ｈ），８．０５－７．９１（ｍ，４Ｈ），４．７４（ｄｄ，Ｊ＝８．９，４．５Ｈｚ，２Ｈ），４．６０（ｄｄ，Ｊ＝６．６，３．４Ｈｚ，４Ｈ），４．４５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），３．７３－３．３８（ｍ，１５Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）．

【0387】

化合物（２）：１－（４－（１－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）ベンゾイル）アゼチジン－２－オン

【化49】

段階１：アルゴン雰囲気下の無水ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の［３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－ブロモオキサン－２－イル］メチルアセテート（１当量、５．０ｇ）及び分子ふるい４Å（反応混合物を無水に保つため）の懸濁液に室温でＢＢ１（１．５当量、３．１ｇ）及びＡｇＯＴｆ（１．４当量、１．７５ｇ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。得られた懸濁液をＣｅｌｉｔｅのパッドに通してろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、溶出液としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：１）を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製し、黄色油状物質として２．５ｇの生成物（収率４０％）を与えた。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ５．２５（ｄｄ，Ｊ＝３．５，１．１Ｈｚ，１Ｈ），５．１４（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，３．５Ｈｚ，１Ｈ），４．９３（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２２－４．１３（ｍ，１Ｈ），４．０４（ｄｄ，Ｊ＝６．３，１．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８６－３．７４（ｍ，１Ｈ），３．６７－３．４７（ｍ，９Ｈ），３．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．６、４．２Ｈｚ，２Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ），２．００（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，６Ｈ），１．９１（ｓ，３Ｈ）．

【0388】

段階２：［３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝オキサン－２－イル］メチルアセテート（１当量、２．０ｇ）をＭｅＯＨ中の７Ｎ ＮＨ_３（１５ｍＬ）中で溶解し、室温で７２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して乾固させ、粗製生成物をさらに精製せずに次の段階のために使用した（１．３３ｇ、定量的収率）。

【0389】

段階３：ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（３ｍＬ／１ｍＬ）中の２－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝－６－（ヒドロキシメチル）オキサン－３，４，５－トリオール（１当量、０．３４４ｇ）の溶液にＢＢ３（１．１当量、０．２１７ｇ）、酢酸銅（Ｉ）（０．０５当量、０．００６ｇ）及びＬ－アスコルビン酸（１．１当量、０．１９２ｇ）を添加した。反応混合物を６０℃で１時間撹拌した。次に、溶媒を減圧下で除去し、残渣を逆相フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し（カラム ＦＰ－ＩＤ－Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ：ＡＣＮ、Ｈ_２Ｏ １００％から開始してＡＣＮ１００％まで）、白色固体泡状物質として２９ｍｇ（Ｙ：５．５％）の生成物を与えた。ＬＣ／ＭＳ（６分）：ＲＴ＝２．０６分、実測［Ｍ＋Ｈ］＋５３７．２５；ＬＣ／ＭＳ（１２分）：ＲＴ＝３．１２３分、実測［Ｍ＋Ｈ］^＋５３７．３；ＨＰＬＣ－１ 純度：９８．５１％（２００ｎｍ）、９８．８０％（２８３ｎｍ）；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．７１（ｓ，１Ｈ），８．０１－７．９３（ｍ，４Ｈ）、４．８５（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ），４．７２（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５８（ｄｔ，Ｊ＝１１．１，５．４Ｈｚ，３Ｈ），４．３７（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），３．６８（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６１（ｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），３．５０（ｐｄ，Ｊ＝７．８、６．５，４．２Ｈｚ，９Ｈ），３．２７（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，２Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）．

【0390】

化合物（３）：１－（４－（１－（２－（２－（２－（（（３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）－３，４，５－トリヒドロキシ－６－メチルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）ベンゾイル）アゼチジン－２－オン

【化50】

段階１：無水酢酸ナトリウム（１当量、２．５ｇ）及び無水酢酸（６０ｍＬ）の懸濁液を５分間還流させ、次にＬ－（－）－フコース（１当量、５．０ｇ）を添加し、反応混合物を一晩還流させた。熱溶液を氷水上に注ぎ、混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で抽出した。有機相を水（３００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮し、褐色油状物質として生成物を与えた（８．５ｇ、収率８３．７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ５．６２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），５．２７（ｄｄ，Ｊ＝２．８，１．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２３－５．１９（ｍ，１Ｈ），５．０１（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，３．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｄｄ，Ｊ＝６．４，１．２Ｈｚ，１Ｈ），２．１５－１．９１（ｍ，２０Ｈ），１．１６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）．

【0391】

段階２：アルゴン雰囲気下で２，３，５－トリス（アセチルオキシ）－６－メチルオキサン－４－イルアセテート（１当量、８．５ｇ）を無水ＤＣＭ（９０ｍＬ）中で溶解し、モルホリン（４当量、８．９ｇ）を添加し、溶液を室温で一晩撹拌した。次に、反応混合物を２Ｍ ＨＣｌ（２×９０ｍＬ）、水（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。得られた黄色油状物質をアルゴン雰囲気下にて無水ＤＣＭ（６０ｍＬ）中で溶解し、溶液を０℃まで冷却し、トリクロロアセトニトリル（１０当量、２４．４ｇ／１６．９ｍＬ）で処理した。０℃で１時間撹拌した後、ＤＢＵ（０．２当量、０．５１ｇ／０．５１ｍＬ）を添加し、反応混合物を０℃で１時間撹拌し、次に室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、溶出液としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：１）を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって褐色の油状の残渣を精製し、帯黄色の油状物質として生成物を与えた（５．４２ｇ、収率６５．２％）。

【0392】

段階３：アルゴン雰囲気下の無水ＤＣＭ（６０ｍＬ）中の３，５－ビス（アセチルオキシ）－２－メチル－６－［（２，２，２－トリクロロエタンイミドイル）オキシ］オキサン－４－イルアセテート（１当量、５．４２ｇ）及び分子ふるい４Å（反応混合物を無水に保つため）の懸濁液に室温でＢＢ１（１．５当量、３．２８ｇ）を添加した。混合物を－２５℃まで冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（１．１当量、３．０５ｇ／２．４８ｍＬ）を添加した。反応混合物を－２５℃で１時間撹拌し、次に室温で一晩撹拌させた。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（８０ｍＬ）でクエンチし、次にＤＣＭ（１００ｍＬ）を添加し、相を分離し、有機相を水（１００ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。溶液をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、溶出液としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：１）を使用して、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製し、無色油状物質として０．８７ｇの生成物（収率１５．０％）を与えた。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ５．２７－５．１５（ｍ，２Ｈ），５．０９－４．９８（ｍ，１Ｈ），４．５３（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．０３－３．９４（ｍ，１Ｈ），３．８２－３．７４（ｍ，１Ｈ），３．７４－３．６２（ｍ，９Ｈ），３．４１（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），２．１８（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ），１．９９（ｓ，３Ｈ），１．２３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）．

【0393】

段階４：３，５－ビス（アセチルオキシ）－２－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝－６－メチルオキサン－４－イルアセテート（１当量、０．８７ｇ）をＭｅＯＨ中の７Ｎ ＮＨ_３（１２ｍＬ）中で溶解させ、室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去して乾固させ、粗製生成物をさらに精製せずに次の段階に対して使用した（７００ｍｇ、収率定量）。

【0394】

段階５：ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（３ｍＬ／１ｍＬ）中の２－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝－６－メチルオキサン－３，４，５－トリオール（１当量、０．２００ｇ）の溶液にＢＢ３（１．１当量、０．１３６ｇ）、酢酸銅（Ｉ）（０．０５当量、０．００４ｇ）及びＬ－アスコルビン酸（１．１当量、０．１２１ｇ）を添加した。反応混合物を６０℃で１時間撹拌した。次に、溶媒を減圧下で除去し、残渣を逆相フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し（カラム ＦＰ－ＩＤ－Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ：ＡＣＮ、Ｈ_２Ｏ１００％から開始してＡＣＮ１００％まで）、白色固体泡状物質として５１ｍｇ（Ｙ：１５．７％）の生成物を与えた。ＬＣ／ＭＳ（６分）：ＲＴ＝２．１６分、実測［Ｍ＋Ｈ］^＋５２１．２５；ＬＣ／ＭＳ（１２分）：ＲＴ ３．２７１分、実測［Ｍ＋Ｈ］^＋５２１．４；ＨＰＬＣ－１純度：９９．０８％（２００ｎｍ）、９９．０１％（２８３ｎｍ）；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．７１（ｓ，１Ｈ），８．０１－７．９２（ｍ，４Ｈ），４．６３－４．５６（ｍ，３Ｈ），４．５２－４．４８（ｍ，１Ｈ），４．４２－４．３８（ｍ，１Ｈ），３．８８（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），３．７７（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６４－３．３８（ｍ，１２Ｈ），３．１３（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），１．０４（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）。

【0395】

化合物（４）：１－（４－（１－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｓ，６Ｒ）－４－（ジメチルアミノ）－３－ヒドロキシ－６－メチルテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）ベンゾイル）アゼチジン－２－オン

【化51】

段階１：ＥｔＯＨ（２５００ｍＬ）－６Ｎ ＨＣｌ（１６ｖｏｌ、７４０ｍＬ）中のエリスロマイシン（１当量、４６ｇ）の溶液を４時間還流させた。反応混合物を室温まで冷却し、濃い色の不溶物質から液体をデカントした。溶液をクロロホルム（６×２０００ｍＬ）で洗浄した。水性エタノール層を減圧下で濃縮して、エチルアルコールを除去した。１－ブタノール（１０００ｍＬ）を添加し、次いで水（５００ｍＬ）を添加した。相を分離し、水層を１－ブタノール（４×１０００ｍＬ）で洗浄し、合わせた有機層を水（１０００ｍＬ）で洗浄した。全ての水性の層を合わせ、減圧下で濃縮して乾固させた。油状の残渣をＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中で溶解させ、ジエチルエーテルを添加して（２００ｍＬ）沈殿物を形成させた。固体をろ過し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させて、白色固体としてデソサミン塩酸塩（６．６ｇ、Ｙ＝６０％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（６分）：ＵＶ吸収は検出されず（発色団の欠如）、ポジティブイオン化時に質量が検出された、ＲＴ＝０．４５分、実測［Ｍ＋Ｈ］^＋１７５．７５（遊離塩基）；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．７３（ｄ，Ｊ＝４１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｓ，０．５Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，０．５Ｈ），６．０１（ｓ，０．５Ｈ），５．６２（ｓ，０．５Ｈ），５．００（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，０．５Ｈ），４．３８（ｄｄ，Ｊ＝７．３，３．０Ｈｚ，０．５Ｈ），４．０４（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．４，６．２，２．２Ｈｚ，０．５Ｈ），３．６０（ｑｄ，Ｊ＝６．０，１．９Ｈｚ，１Ｈ），３．２３（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，０．５Ｈ），２．７７－２．６４（ｍ，６Ｈ），２．０５－１．９３（ｍ，１Ｈ），１．４０（ｑｄ，Ｊ＝１１．９，８．０Ｈｚ，１Ｈ），１．１５（ｄｄ，Ｊ＝１７．０、６．２Ｈｚ，３Ｈ）．

【0396】

段階２：－３０℃のトルエン（２０ｖｏｌ．、１５０ｍＬ）中のＢｕ_３Ｐ（１当量、８．２ｍＬ）の溶液にアルゴン雰囲気下でＤＩＡＤ（１当量、６．７ｇ）を滴下して添加した。得られた溶液を２０分間撹拌し、デソサミン塩酸塩（１当量、７．０ｇ）を添加した。混合物を－３０℃で４５分間撹拌し、次に２－メルカプトピリジン（１当量、３．７ｇ）を添加し、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。Ｃｅｌｉｔｅのパッドに通して反応物をろ過し、パッドをＤＣＭで洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮して乾固させた。残渣をトルエン（１００ｍＬ）で処理し、混合物を室温で２０分間撹拌し、固体をろ別し、トルエン（３×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、橙色固体として生成物（４．２９ｇ、収率＝４８％）を与えた。ＬＣ／ＭＳ（６分）：ＲＴ＝１．４８分、実測［Ｍ＋Ｈ］^＋２６９．６５；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ ８．６１（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），７．２０（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），５．６１（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８７－３．７５（ｍ，１Ｈ），３．６６（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１５（ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ），２．６１（ｓ，６Ｈ），２．００（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ），１．５１（ｑ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ），１．２５（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ）．

【0397】

段階３：無水酢酸（１２ｖｏｌ．、３２ｍＬ）中の無水酢酸ナトリウム（１当量、０．８２ｇ）の懸濁液を５分間還流した。この懸濁液に４－（ジメチルアミノ）－６－メチル－２－（ピリミジン－２－イルスルファニル）オキサン－３－オール（１当量、２．６９ｇ）を添加し、反応物を１時間、還流下で維持した。熱溶液を氷水（１００ｍＬ）上に注ぎ、固体ＮａＨＣＯ_３で塩基性化し、生成物をＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して乾固させた。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、０～１０％ＭｅＯＨ）によって残渣を精製して、黄色固体として生成物を得た（１．２１ｇ、収率＝３９％）。ＬＣ／ＭＳ（６分）：ＲＴ＝１．８４分、実測［Ｍ＋Ｈ］^＋３１２．００；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．６６（ｄｄ，Ｊ＝８．１，４．９Ｈｚ，２Ｈ），７．２７（ｄｔ，Ｊ＝６．３，４．９Ｈｚ，１Ｈ），６．５５（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，０．３５Ｈ），５．６２（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，０．６５Ｈ），５．０６（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，５．２Ｈｚ，０．３５Ｈ），４．８３（ｔ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，０．６５Ｈ），４．００（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，０．３５Ｈ），３．７７－３．６５（ｍ，０．６５Ｈ），３．０１－２．８４（ｍ，１Ｈ），２．２０（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，６Ｈ），１．９２（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，３Ｈ），１．８２（ｄｄ，Ｊ＝１３．５，４．１Ｈｚ，１Ｈ），１．３６（ｑ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），１．１３（ｄｄ，Ｊ＝６．１、４．７Ｈｚ，３Ｈ）．

【0398】

段階４：無水ＤＣＭ中のトリフルオロメタンスルホン酸銀（３当量、２．６０ｇ）及び分子ふるい（４Å、０．１６ｇ）の懸濁液を暗所（アルミ箔で包む）で０℃に冷却した。無水ＤＣＭ中の４－（ジメチルアミノ）－６－メチル－２－（ピリミジン－２－イルスルファニル）オキサン－３－イルアセテート（１当量、１．０５ｇ）及びＢＢ１（２当量、１．１８ｇ）の溶液を次に添加した（総ＤＣＭ：４０ｖｏｌ．、４２ｍＬ）。反応混合物を０℃で２時間撹拌し、次に室温で一晩撹拌させた。ｐＨ８まで飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（５０ｍＬ）でクエンチし、混合物をＣｅｌｉｔｅのパッドに通してろ過し、相を分離した。水層をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して乾固させた。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、０～５％ＭｅＯＨ）によって残渣を精製し、黄色固体として生成物を得た（４９８ｍｇ、収率＝３３％）。ＬＣ／ＭＳ（６分）：ＵＶ吸収は検出されず（発色団の欠如）、ポジティブイオン化において質量が検出された、ＲＴ＝１．７４分、実測［Ｍ＋Ｈ］^＋３３３．１０；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ４．２４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９０－３．７９（ｍ，１Ｈ），３．６９－３．５０（ｍ，１０Ｈ），３．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．６，４．１Ｈｚ，２Ｈ），３．１６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），２．５８（ｓ，６Ｈ），１．８６（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），１．３６（ｑ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ）．

【0399】

段階５：ＴＨＦ／ＤＭＦ（６ｍＬ／１ｍＬ）中の２－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝－４－（ジメチルアミノ）－６－メチルオキサン－３－オール（１当量、０．１７０ｇ）の溶液にＢＢ３（１．１当量、０．１１２ｇ）、Ｌ－アスコルビン酸（１．１当量、０．１０９ｇ）及び酢酸銅（Ｉ）（０．２５当量、０．０１６ｇ）を添加した。反応混合物を６０℃で１時間撹拌した。次に、溶媒を減圧下で蒸発させ、逆相カラムクロマトグラフィー（カラムＦＰ－ＩＤ－Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ：ＡＣＮ、Ｈ_２Ｏ１００％から開始してＡＣＮ１００％まで）によって残渣を精製し、白色固体泡状物質として生成物（５３ｍｇ、収率＝１９．５％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（６分）：ＲＴ＝１．８９及び２．０８分（２つのピーク）、実測［Ｍ＋Ｈ］＋５３２．４０；ＬＣ／ＭＳ（１２分）：ＲＴ＝３．１５分、実測［Ｍ＋Ｈ］＋５３２．４；ＨＰＬＣ－２純度：８９．５２％（２００ｎｍ），９３．０２％（２８３ｎｍ）；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．３１（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｓ，４Ｈ），４．６３－４．５８（ｍ，２Ｈ），４．２３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），３．９３（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８９－３．８３（ｍ，１Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．５８（ｄｄｔ，Ｊ＝１１．８，６．１，２．９Ｈｚ，８Ｈ），３．４１－３．３４（ｍ，１Ｈ），３．３２－３．２３（ｍ，１Ｈ），３．０９（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７７（ｓ，６Ｈ），１．４６（ｑ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，２Ｈ），１．２３（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ）。

【0400】

化合物（５）：

【化52】

段階１：ＴＨＦ／ＤＭＦ（４．４ｍＬ／０．６ｍＬ）中のＢＢ１（１当量、０．１２５ｇ）の溶液にＢＢ３（１．１当量、０．１５６ｇ）、Ｌ－アスコルビン酸（１．１当量、０．１５２ｇ）及び酢酸銅（Ｉ）（０．２５当量、０．０２２ｇ）を添加した。反応混合物を６０℃で２時間撹拌した。次に、溶媒を減圧下で蒸発させ、逆相カラムクロマトグラフィー（カラムＰＦ－ＲＰ－ＨＰ－Ｆ００４０、Ｈ２Ｏ：ＡＣＮ、ＡＣＮ５％から開始して１００％まで）によって残渣を精製して、白色固体泡状物質として生成物を得た（１４１ｍｇ、Ｙ：５３％）。ＬＣ／ＭＳ（６分）：ＲＴ＝２．２５、実測［Ｍ＋Ｈ］＋３７４．７５；ＬＣ／ＭＳ（１２分）：ＲＴ＝３．３３分、実測［Ｍ＋Ｈ］^＋３７５．２；ＨＰＬＣ－３純度：９７．９３％（２０５ｎｍ）、９８．９１％（２８３ｎｍ）；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，アセトニトリル－ｄ３）δ ８．３１（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｓ，４Ｈ），４．５９（ｄｄ，Ｊ＝５．６，４．６Ｈｚ，２Ｈ），３．９２（ｄｄ，Ｊ＝５．６，４．６Ｈｚ，２Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．６４－３．５３（ｍ，６Ｈ），３．５０－３．４４（ｍ，２Ｈ），３．０９（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６３（ｓ，１Ｈ）．

【0401】

化合物（６）：Ｎ－［４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－２－｛２－［２－（２－｛４－［４－（２－オキソアゼチジン－１－カルボニル）フェニル］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル｝エトキシ）エトキシ］エトキシ｝オキサン－３－イル］アセトアミド

【化53】

段階１：β－Ｄ－グルコサミンペンタアセテート（１０ｇ、１．０当量）をＤＣＥ（７５ｖｏｌ、７５０ｍＬ）中で室温にて溶解した。ＴＭＳＯＴｆ（４．６ｍＬ、１．０当量）を添加し、混合物を５０℃で３０分間撹拌し、冷却し、トリエチルアミン（２．７当量、９．７ｍＬ）で処理した。得られた溶液を室温で１５分間撹拌し、次いでシリカゲルショートカラムを通じてろ過し、酢酸エチルで洗浄した。溶出液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００：０－＞９０：１０）を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗製物質を精製して、無色油状物質として５ｇの生成物を与えた（収率：５９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ５．９４（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２２（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），４．８９（ｄｄｄ，Ｊ＝９．２，２．１，１．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２０－４．０８（ｍ，３Ｈ），３．５７（ｄｔ，Ｊ＝８．９，４．３Ｈｚ，１Ｈ），２．０８（ｓ，３Ｈ），２．０７－２．０２（ｍ，９Ｈ）．

【0402】

段階２：アルゴン雰囲気下の無水ＤＣＭ中の［６，７－ビス（アセチルオキシ）－２－メチル－３ａＨ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，７ａＨ－ピラノ［３，２－ｄ］［１，３］オキサゾール－５－イル］メチルアセテート（４．０ｇ、１．０当量）及び分子ふるい４Å（反応混合物を無水に保つため）の懸濁液に室温でＢＢ１（６．４ｇ、１．５当量）を添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、次いでＨ_２ＳＯ_４（４滴、１．０当量）を滴下して添加し、溶液を室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で反応をクエンチし、ＤＣＭ（５０ｍＬ）を添加し、相を分離し、有機相を水（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。溶液をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、溶出液としてＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ（１：１）を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、黄色固体として３ｇの生成物を与えた（収率：６２％）。ＬＣ／ＭＳ（６分）ＲＴ＝２．５５分、実測［Ｍ＋Ｈ］^＋５０５．１５；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ ７．９１（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），５．０８（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，９．４Ｈｚ，１Ｈ），４．８２（ｔ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０９－３．９８（ｍ，１Ｈ），３．８８－３．６２（ｍ，３Ｈ），３．５３（ｄｔ，Ｊ＝４．３，２．２Ｈｚ，８Ｈ），３．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．６，４．２Ｈｚ，２Ｈ），２．０２（ｓ，３Ｈ），１．９７（ｓ，３Ｈ），１．９１（ｓ，３Ｈ），１．７６（ｓ，３Ｈ）。

【0403】

段階３：［３，４－ビス（アセチルオキシ）－６－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝－５－アセトアミドオキサン－２－イル］メチルアセテート（２．５ｇ、１．０当量）をＭｅＯＨ中の７Ｎ ＮＨ_３（３３ｍＬ、１５ｖｏｌ．）中で溶解させ、室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去して乾固させ、粗製生成物をさらに精製せずに次の段階に対して使用した（１．６ｇ、収率：９５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ７．６５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８５－３．７５（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｄｄ，Ｊ＝５．７，４．３Ｈｚ，２Ｈ），３．５６－３．４５（ｍ，８Ｈ），３．４４－３．３５（ｍ，４Ｈ），３．０９－３．０３（ｍ，２Ｈ），１．７５（ｓ，３Ｈ）。

【0404】

段階４：ＭｅＯＨ（２ｍＬ）／ＴＨＦ（６ｍＬ）中のＮ－（２－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）オキサン－３－イル）アセトアミド（０．５９２ｇ、１．０当量）の溶液にＢＢ３（０．３４３ｇ、１．０当量）、Ｌ－アスコルビン酸（０．３３３ｇ、１．１ｇ）及び酢酸銅（Ｉ）（０．０２４ｇ、０．２５ｇ）を添加した。反応混合物を６０℃で３時間撹拌した。次いで、溶媒を減圧下で蒸発させ、逆相カラムクロマトグラフィー（カラムＰＦ－１５－Ｃ１８－Ｆ００８０、Ｈ２Ｏ：ＡＣＮ、Ｈ_２Ｏ１００％から開始してＡＣＮ１００％まで）によって残渣を精製して、白色固体泡状物質として４５０ｍｇの生成物を得た（収率：４４％）。ＬＣ／ＭＳ（６分）ＲＴ＝２．０４分、実測［Ｍ＋Ｈ］＋５７８．３０；ＲＴ＝２．０４分、実測［Ｍ＋Ｈ］＋５７８．３０；ＨＰＬＣ－１ 純度：９８．７６％（２００ｎｍ）、９８．７１％（２８４ｎｍ）．ＲＴ＝６．３７分、実測［Ｍ＋Ｈ］＋５７８．２；^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ８．６９（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，４Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），４．５３（ｓ，１Ｈ），４．３０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７７（ｄｔ，Ｊ＝９．６，３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｑ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，３Ｈ），３．５６－３．４０（ｍ，９Ｈ），３．２７（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．１，８．１，５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．０６（ｑ，Ｊ＝４．８，３．５Ｈｚ，２Ｈ），１．７７（ｓ，３Ｈ）．

【0405】

化合物（７）：ナトリウム（３，４，５－トリヒドロキシ－６－｛２－［２－（２－｛４－［４－（２－オキソアゼチジン－１－カルボニル）フェニル］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル｝エトキシ）エトキシ］エトキシ｝オキサン－２－イル）メチルサルフェート

【化54】

段階１及び２：化合物（２）に対して記載のとおり。

【0406】

段階３：ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（３ｍＬ／１ｍＬ）中の２－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝－６－（ヒドロキシメチル）オキサン－３，４，５－トリオール（１当量、０．３０９ｇ）の溶液にＢＢ３（１．１当量、０．１８２ｇ）、酢酸銅（Ｉ）（０．０５当量、０．００６ｇ）及びＬ－アスコルビン酸（１．１当量、０．１６１ｇ）を添加した。反応混合物を６０℃で１時間撹拌した。次いで、溶媒を減圧下で除去し、残渣を逆相フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し（カラムＦＰ－ＩＤ－Ｃ１８、Ｈ_２Ｏ：ＡＣＮ、Ｈ_２Ｏ１００％から開始してＡＣＮ１００％まで）、白色固体泡状物質として生成物２８３ｍｇ（Ｙ：５７．５％）を与えた。ＬＣ／ＭＳ（６分）ＲＴ＝１．９９分、実測［Ｍ＋Ｈ］＋５３７．３５。

【0407】

段階４：無水ＤＭＦ中の１－［４－（１－｛２－［２－（２－｛［３，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）オキサン－２－イル］オキシ｝エトキシ）－エトキシ］エチル｝－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）ベンゾイル］アゼチジン－２－オン（１当量、０．２８３ｇ）の溶液にＳＯ３Ｐｙ（０．０９７ｇ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。次に、溶媒を減圧下で除去し、ｐｒｅｐ－ＨＰＬＣ（Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ５μｍ Ｃ１８、Ｈ２Ｏ：ＡＣＮ：ＴＦＡ、Ｈ２Ｏ ８５％から開始してＡＣＮ９５％まで）によって残渣を精製した。適切な分画を合わせ、ＴＥＡにより中和し、減圧下で蒸発させ、水中で溶解させ、Ｄｏｗｅｘ ５０ＷＸ４ Ｎａ＋形態を通過させて、白色固体泡状物質として５０ｍｇ（Ｙ：１４％）の生成物を与えた；ＬＣ／ＭＳ（６分）ＲＴ＝１．９４分、実測［Ｍ－Ｎａ］－６１５．３０；ＬＣ／ＭＳ（１２分）ＲＴ＝２．８０３ｍｉｎ、実測［Ｍ－Ｎａ］－６１５．３；ＨＰＬＣ 純度：９３．５４％（２００ｎｍ），９４．５６％（２８３ｎｍ）；１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．７２（ｓ，１Ｈ），８．０４－７．９０（ｍ，４Ｈ），４．８３（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６９（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），３．８９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８５－３．７３（ｍ，３Ｈ），３．６８（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６２－３．４６（ｍ，９Ｈ），３．２５（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，２Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）。

【0408】

化合物（８）：［（５－アセトアミド－３，４－ジヒドロキシ－６－｛２－［２－（２－｛４－［４－（２－オキソアゼチジン－１－カルボニル）フェニル］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル｝エトキシ）エトキシ］エトキシ｝オキサン－２－イル）メトキシ］スルホン酸

【化55】

段階１：［３，４，６－トリス（アセチルオキシ）－５－アセトアミドオキサン－２－イル］メチルアセテート（１当量、１０ｇ）を室温にてＤＣＥ（７５ｖｏｌ．、７５０ｍＬ）中で溶解させた。次に、ＴＭＳＯＴｆ（１当量、４．６ｍＬ）を添加し、混合物を５０℃で３０分間撹拌し、冷却し、トリエチルアミン（２．７当量、９．７ｍＬ）で処理した。得られた溶液を室温で１５分間撹拌し、次にシリカゲルの短いプラグを通じてろ過し、酢酸エチルで洗浄した。溶出液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００：０－＞９０：１０）を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗製物質を精製して、無色油状物質として２．６ｇの生成物を与えた（収率３１％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）δ ５．９９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．４６（ｔ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｄｄ，Ｊ＝７．５，３．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２８－４．１５（ｍ，２Ｈ），４．１０（ｄｄ，Ｊ＝１０．７，５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．０３－３．９６（ｍ，１Ｈ），２．１２（ｓ，３Ｈ）、２．０６（ｄｄ，Ｊ＝５．５、１．１Ｈｚ，９Ｈ）。

【0409】

段階２：アルゴン雰囲気下の無水ＤＣＭ中の［６，７－ビス（アセチルオキシ）－２－メチル－３ａＨ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，７ａＨ－ピラノ［３，２－ｄ］［１，３］オキサゾール－５－イル］メチルアセテート（１当量、２．６ｇ）及び分子ふるい４Å（反応混合物を無水に保つため）の懸濁液に室温でＢＢ１（１．５当量、２．１ｇ）を添加した。反応混合物を３０分間撹拌し、次にＨ２ＳＯ４を滴下して添加し、溶液を室温で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液でクエンチし、ＤＣＭ（５０ｍＬ）を添加し、相を分離し、有機相を水（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。溶液をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、溶出液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００：０－＞９５：５）を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、黄色固体として２．２ｇの生成物を与えた（収率５５％）。ＬＣ／ＭＳ（６分）質量はポジティブイオン化で検出された、ＲＴ＝２．５分、実測［Ｍ＋Ｈ］＋５０５．２５；１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ７．７９（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），５．２１（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９７（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．５Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｓ，３Ｈ），３．９４－３．７４（ｍ，２Ｈ），３．６３－３．５０（ｍ，８Ｈ），３．４０（ｄｄ，Ｊ＝５．６，４．２Ｈｚ，２Ｈ），２．１０（ｓ，３Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），１．８９（ｓ，３Ｈ），１．７７（ｓ，３Ｈ）．

【0410】

段階３：［３，４－ビス（アセチルオキシ）－６－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝－５－アセトアミドオキサン－２－イル］メチルアセテート（１当量、２．２ｇ）をＭｅＯＨ中の７Ｎ ＮＨ３（１５ｖｏｌ．、３３ｍＬ）中で溶解させ、室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去して乾固させ、１．６２ｇの粗製生成物をさらに精製せずに次の段階に対して使用した（収率：９８％）。ＬＣ／ＭＳ ６分）質量はポジティブイオン化で検出された、ＲＴ＝１．５４分、実測［Ｍ＋Ｈ］＋３７８．７０、［Ｍ－Ｈ］－３７６．５０。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ７．６０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６０－４．５３（ｍ，２Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８３－３．６７（ｍ，２Ｈ），３．６５－３．５５（ｍ，４Ｈ），３．５１－３．３６（ｍ，６Ｈ），３．３１（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，３Ｈ），１．８０（ｓ，３Ｈ）。

【0411】

段階４：ＴＨＦ（３５ｖｏｌ．、０．５ｍＬ）／ＤＭＦ（５ｖｏｌ．、１．５ｍＬ）中のＮ－（２－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）オキサン－３－イル）アセトアミド（１当量、０．３００ｇ）の溶液にＢＢ３（１当量、０．１７４ｇ）、Ｌ－アスコルビン酸（１．１当量、０．１６９ｇ）及び酢酸銅（Ｉ）（０．２５当量、０．０２４ｇ）を添加した。反応混合物を６０℃で２時間撹拌した。次に、溶媒を減圧下で蒸発させ、逆相カラムクロマトグラフィー（カラムＦＰ－ＩＤ－Ｃ１８、Ｈ２Ｏ：ＡＣＮ、Ｈ_２Ｏ１００％から開始してＡＣＮ１００％まで）によって残渣を精製して、白色固体泡状物質として３４２ｍｇの生成物を得た（収率：７４％）。ＬＣ／ＭＳ（６分）ＲＴ＝２．０分、実測［Ｍ＋Ｈ］＋５７８．３５．１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．７１（ｓ，１Ｈ），８．０３－７．８８（ｍ，４Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｄｄ，Ｊ＝５．９，３．８Ｈｚ，４Ｈ），４．５１（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８０－３．６１（ｍ，５Ｈ），３．５７－３．３７（ｍ，１０Ｈ），３．２８（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），１．７６（ｓ，３Ｈ）．

【0412】

段階５：無水ＤＭＦ中のＮ－［４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－２－｛２－［２－（２－｛４－［４－（２－オキソアゼチジン－１－カルボニル）フェニル］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１ｙｌ｝エトキシ）エトキシ］エトキシ｝オキサン－３－イル］アセトアミド（１当量、０．３４０ｇ）の溶液に室温でＳＯ３Ｐｙ（１．１５Ｅｑ、０，１０８ｇ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、溶媒を減圧下で除去し、ｐｒｅｐ－ＨＰＬＣ（ＰＦ－ＲＰ－ＡＱ－Ｆ０１２０、Ｈ２Ｏ：ＡＣＮ、Ｈ２Ｏ ９５％から開始してＡＣＮ１００％まで）によって残渣を精製した。適切な分画を合わせ、減圧下で蒸発させ、水中で溶解させ、Ｄｏｗｅｘ ５０ＷＸ４ Ｎａ＋型に通過させて、白色固体泡状物質として生成物２３ｍｇを与えた（収率６％）。ＬＣ／ＭＳ（６分）ＲＴ＝１．８８、実測［Ｍ＋Ｈ］＋６５７．５０、［Ｍ－Ｈ］－６５５．４５．ＬＣ／ＭＳ（１２分）ＲＴ＝２．８５分、実測［Ｍ－Ｈ］－６５６．５．ＨＰＬＣ純度－１：９６．９１％（２００ｎｍ），９７．４６％（２８３ｎｍ）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．７２（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），８．０６－７．８７（ｍ，４Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６９－４．４６（ｍ，４Ｈ），４．２５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．９４－３．６５（ｍ，８Ｈ），３．６４－３．４０（ｍ，１０Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），１．７６（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，３Ｈ）．

【0413】

化合物（９）：ナトリウム３，４，５－トリヒドロキシ－６－｛２－［２－（２－｛４－［４－（２－オキソアゼチジン－１－カルボニル）フェニル］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル｝エトキシ）エトキシ］エトキシ｝オキサン－２－カルボキシレート

【化56】

段階１：アルゴン雰囲気下の無水ＤＣＭ中のメチル３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－ブロモオキサン－２－カルボキシレート（１当量、４．０ｇ）及び分子ふるい４Å（反応混合物を無水に保つため）の懸濁液にＢＢ１（１．５当量、２．６５ｇ）及びＡｇＯＴｆ（１．４Ｅｑ、３．６２ｇ）を室温で添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。得られた懸濁液をＣｅｌｉｔｅのパッドに通してろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、溶出液としてヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１／１）を使用してシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、黄色油状物質として２．０ｇの生成物を与えた（収率４０．４％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ５．３４（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．０１－４．８６（ｍ，２Ｈ），４．７９（ｄｄ，Ｊ＝９．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ），３．８６－３．７４（ｍ，１Ｈ），３．６４－３．４８（ｍ，１２Ｈ），３．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．６，４．２Ｈｚ，２Ｈ），２．００－１．９５（ｍ，９Ｈ）．

【0414】

段階２：ＭｅＯＨ（１５ｍｌ）中の３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝オキサン－２－イル］メチルアセテート（１当量、１．０ｇ）の溶液に約２Ｍ ＮａＯＨ溶液（１０ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去して乾固させ、残渣をＨ２Ｏ中で溶解させ、１Ｎ ＨＣｌ溶液でｐＨ＝４まで酸性化した。水を減圧下で除去し、粗製生成物をさらに精製せずに次の段階に対して使用した（アジドにおいて計算：７００ｍｇ、収率定量）。

【0415】

段階３：ＴＨＦ（９ｍＬ）／ＭｅＯＨ（３ｍＬ）中の６－｛２－［２－（２－アジドエトキシ）エトキシ］エトキシ｝－３，４，５トリヒドロキシオキサン－２－カルボン酸（１当量、０．９２１ｇ）の溶液にＢＢ３、酢酸銅（Ｉ）（０．８当量、０．２６２ｇ）及びＬ－アスコルビン酸（１．７当量、０．８０４ｇ）を添加した。反応混合物を６０℃で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、ｐｒｅｐ－ＨＰＬＣ（Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ５μｍ Ｃ１８、Ｈ２Ｏ：ＡＣＮ：ＴＦＡ、ＡＣＮ１５％から開始してＡＣＮ９５％まで）によって残渣を精製した。適切な分画を合わせ、ＴＥＡで中和し、減圧下で蒸発させ、水中で溶解させ、Ｄｏｗｅｘ ５０ＷＸ４ Ｎａ＋型に通過させて、白色固体泡状物質として４５ｍｇの生成物を与えた（収率３．１％）。ＬＣ／ＭＳ（６分）ＲＴ＝１．７８分、実測［Ｍ＋Ｈ］＋５５１．３０（遊離酸）。ＬＣ／ＭＳ（１２分）ＲＴ＝３．１２３分、実測［Ｍ＋Ｈ］＋５５１．４（遊離酸）。ＨＰＬＣ純度：９６．５１％（２００ｎｍ）、９７．３２％（２８３ｎｍ）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．７３（ｓ，１Ｈ），８．０４－７．８８（ｍ，４Ｈ），４．９８－４．８７（ｍ，２Ｈ），４．６１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），４．１４（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｄｔ，Ｊ＝２５．８，５．２Ｈｚ，４Ｈ），３．６８（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．５４（ｄｔ，Ｊ＝９．１，５．３Ｈｚ，９Ｈ），３．１３（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，３Ｈ），２．９５（ｓ，１Ｈ）。

【0416】

ＩＩ．ＡＡＶの合成
図１で図式的に表されるように、本発明のラクタムリンカーを少なくとも１つのＡＡＶの表面に露出した一級アミンにカップリングすることによってＡＡＶを作製した。

【0417】

ＩＩ．１．ＡＡＶの産生及び精製
産生及び精製
ＡＡＶを作製し、当技術分野で周知の技術に従い精製した。

【0418】

品質管理
滴定（ＲｏｃｈｅからのＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０を使用したｑＰＣＲ、Ｂｉｏ－ＲａｄからのＱＸ２００を使用したｄｄＰＣＲ及びＥＬＩＳＡ）によって、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ８及びＡＡＶ９バッチの品質を評価した。

【0419】

銀染色を用いて１０％ＳＤＳ ＰＡＧＥゲル上で純度チェックを行った：１：１：１０の妥当な化学量論でのＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３タンパク質のみが検出可能であり、ＡＡＶ調製物の純度が９５％より高いことが示される。

【0420】

ゲルレッドで染色した０．８％アガロースゲル上でパッケージングされたベクターゲノムの完全性も評価した：単一のシャープなバンド約３．２ｋｂのみが見られ、これは、パッケージングされたベクターゲノムのサイズに対応し、ゆえにＡＡＶ粒子でのその完全性を実証している。

【0421】

Ｅｎｄｏｓａｆｅ（登録商標）－ｎｅｘｇｅｎ－ＰＴＳ（商標）分光計（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して、最終産物中の内毒素レベルを決定した。検出閾値０．５ＥＵ／ｍＬで全ての試料が試験に合格した。

【0422】

最終的に、ＭＯＩ １０００、１００００及び１０００００でＡＡＶベクター（ＡＡＶ２－ｅＧＦＰ；ＡＡＶ５－ｅＧＦＰ；ＡＡＶ８－ｅＧＦＰ；ＡＡＶ９－ｅＧＦＰ）を形質導入したＵ８７－ＭＧ細胞において機能試験を行った。総ｇＤＮＡを各ウェルから単離し、ベクターコピー（ｖｇ）／細胞の直接的な目安としてのＣｐ値を、ｅＧＦＰ－特異的なＰＣＲプライマーを使用してｑＰＣＲによって決定した。

【0423】

ＩＩ．２．ＡＡＶへのβ－ラクタムを含む化合物のカップリング
材料
化合物（１）～（５）、（７）～（９）は、実施例Ｉ．３で上記で詳述されるように得た。

【0424】

実施例ＩＩ．１で詳述されるように得られた次のＡＡＶを使用した：
－ＡＡＶ２－ｅＧＦＰ：ｐＨ７．４のＤＰＢＳ＋Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、０．００１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８中１．０×１０^１３ｖｇ／ｍＬ；
－ＡＡＶ５－ｅＧＦＰ：ｐＨ７．４のＤＰＢＳ＋Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、０．００１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８中１．０×１０^１３ｖｇ／ｍＬ；
－ＡＡＶ８－ｅＧＦＰ：ｐＨ７．４のＤＰＢＳ＋Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋、０．００１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８中１．０×１０^１３ｖｇ／ｍＬ；
－ＡＡＶ９－ｅＧＦＰ：ｐＨ７．４のＤＰＢＳ＋Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋中の１．０×１０^１３ｖｇ／ｍＬ。

【表10】

【0425】

方法
１ｍＬの総反応体積で３．０Ｅ６倍モル過剰のリンカーを用いて、ＡＡＶカプシド上のラクタムリンカーのカップリングを行った。ＡＡＶの最終濃度は１．０Ｅ１２ｖｇ／ｍＬであった。

【0426】

１．５ｍＬ反応チューブに測り取る前にラクタム化合物を室温にして、適切な体積のｐＨ９．３の緩衝液ＴＢＳ中で溶解した。

【0427】

カップリング反応を設定する前に２０℃で１時間、ＡＡＶを凍結融解した。

【0428】

２．０ｍＬポリプロピレン反応チューブ中でカップリング反応を設定した。２０℃にて４時間、水平状態のオービタルシェーカー上で反応チューブを穏やかに振盪させた。

【0429】

調合／ろ過：遊離リンカーの除去。各カップリング混合物に対して、１つのＰＤ ＭｉｄｉＴｒａｐ Ｇ－２５カラムが必要である。４ｍｌの調合緩衝液（ＤＰＢＳ、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、０．００１％Ｆ６８）を用いて５回、カラムを平衡化する。カップリング反応混合物をカラムに載せ、試料をベッドに入るようにする。ｒＡＡＶの溶出は１．５ｍｌの調合緩衝液で行う。１．５ｍｌ ＰＰチューブ中で滴下して０．３ｍｌで５分画を回収する。分画２～５をプールし、プールした各分画に関するｑＰＣＲ力価を決定する。次に、Ａｃｒｏｄｉｓｃ ＰＰ、ＰＥＳ、０．２μＭ １ｃｍ^２を使用して、プールした分画をろ過滅菌する。５０μＬのアリコートで、ろ過した分画を－８０℃で凍結した。

【0430】

ＩＩ．３．ＡＡＶの特徴評価
ＩＩ．３．ベクターゲノム（Ｇｅｎｏｎｅｓ）（ｖｇ）の滴定
全てのカップリング反応に対して、調合／ろ過段階後に採取された試料に対してＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０（Ｒｏｃｈｅ）を使用して、定量的リアルタイムＰＣＴ（ｑＰＣＲ）タイターを決定した、表８参照。表８の最後のカラムにおける％投入量の値が高いことは、カップリング中に損失が殆どない状態が維持されたことを示す。

【表11】

【0431】

ＩＩ．３．ｂ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びレクチンＷＢによるカップリングの分析
目的
ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルの銀染色によって、得られたＡＡＶベクターの純度及び完全性を評価した。個々のカップリングされた糖に選択的に結合する様々なレクチン染色を使用するウエスタンブロット分析によって、ＡＡＶ上の糖部分のカップリングの有効性をさらに試験した。

【0432】

方法
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１０％ＰＡＡゲル）及びその後の銀染色により、カップリング後の１．０×１０^１０ｖｇのｒＡＡＶに対応するＶＰタンパク質を、陰性対照としての元のＡＡＶのＶＰタンパク質と比較した。ゲル上でＭＷ３２ｋＤａまで移動した。

【0433】

レクチン染色を使用するウエスタンブロッティング（ＷＢ）及びその後のＶＰタンパク質にカップリングされたリンカーの検出のためにさらなる同一のゲルを使用した：コンカナバリン－ＨＲＰ（ＣｏｎＡ）又はビオチン化レクチンＲＣＡ１及びＵＥＡ１。

【0434】

凍結試料において銀染色及びＷＢによるカップリングの分析を行った。

【0435】

カップリングが成功すれば、ＶＰタンパク質のより高い分子量へのシフト及び特異的なレクチン染色（適用可能な場合）が起こるはずである。

【0436】

結果
結果を図２～１３に示し、下の表９に要約する。

【表12】

【0437】

結論
全ての改変ＡＡＶに対して、移動度シフト及び／又は特異的なレクチン染色を観察し、ＡＡＶ上のラクタム化合物が有効にカップリングされたことを証明した。

【0438】

ＩＩ．３．ｃ．感染性アッセイ（Ｕ８７－ＭＧ神経膠芽腫細胞）
ＳＤＳ－ＰＡＧＥがＶＰタンパク質の予想された移動度シフトを示す場合、ＡＡＶの感染性を観察することができるか否かを試験した。この目的のために、Ｕ８７－ＭＧ細胞にＭＯＩ１０．０００及び１００．０００で形質導入した。蛍光顕微鏡による形質導入（ｅＧＦＰ陽性）細胞集団及び非形質導入細胞集団のモニタリングを介して、形質導入後７２時間で、形質導入細胞を分析した。

【0439】

形質導入細胞から代表的な明るい視野及び蛍光画像を撮影し、全てのＡＡＶによりＵ８７－ＭＧ細胞に対して効率的に形質導入されたことを示した（データは示さない）。

【0440】

ＩＩＩ．ＡＡＶのインビボ評価
ＩＩＩ．１ マウス脳における３つのＡＡＶベクターの形質導入特性の評価
試験の目的は、単回片側線条体内注入後のマウス脳においてＧＦＰ（ＡＡＶ２、（１）－ＡＡＶ２及び（７）－ＡＡＶ２）を発現する３つの組み換えＡＡＶ２ベクターの形質導入特性を調べることである。

【0441】

材料
動物
Ｊａｎｖｉｅｒ Ｌａｂｓから購入した８匹の成体雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（マス・マスカルス（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ））。

【0442】

試験項目
「ＡＡＶ２」は、非改変カプシドを含み、ＣＡＧ－ｅＧＦＰ発現カセットを保持する組み換えＡＡＶ２ベクターである。

【0443】

「（１）－ＡＡＶ２」は、表面結合マンノースリンカーを持つ改変されたカプシドを含み、ＣＡＧ－ｅＧＦＰ発現カセットを保持する組み換えＡＡＶ２ベクターである。

【0444】

「（７）－ＡＡＶ２」は、表面結合６－Ｏ－硫酸化ガラクトースリンカーを持つ改変されたカプシドを含み、ＣＡＧ－ｅＧＦＰ発現カセットを保持する組み換えＡＡＶ２ベクターである。

【0445】

方法
試験品
上の節ＩＩに記載のように（１）－ＡＡＶ２及び（７）－ＡＡＶ２を作製した。簡潔に述べると、２０℃でｐＨ９．３のトリス緩衝液中でのＡＡＶ２ベクターとのリンカーの４時間の同時インキュベート及びＡＡＶカプシドに結合しなかった遊離分子を除去するための緩衝食塩滅菌溶液（ＢＳＳＳ）＋０．００１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８に対する混合物の透析後、マンノース及び６－Ｏ－硫酸化ガラクトースリンカーをＡＡＶ２カプシドの表面に露出するリジン残基の一級アミンに共有結合させた。

【0446】

試験計画
８匹のマウスに定位脳手術を行い、以下表１０に従い、右線条体へ試験品をランダムに注入した。

【表13】

【0447】

手術の手順
手術の前後に鎮痛剤としてブプレノルフィン（０．１ｍｇ／ｋｇ；１０ｍＬ／ｋｇ、ｓ．ｃ．）を与えた。酸素の連続流（１．５Ｌ／分）及び３％イソフルランが供給された麻酔チャンバーに動物を個々に入れ、意識が消失したら、イヤーバーの位置に頭部を固定して定位固定フレームで安定化させた（Ｋｏｐｆ）。頭蓋の皮膚を切開して、表１１に記載の座標でガラスピペットを使用して試験品のうち１つを片側注入できるようにした。マウス脳のアトラスについては、Ｐａｘｉｎｏｓ ＆ Ｆｒａｎｋｌｉｎ，２０１９．Ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｂｒａｉｎ ｉｎ ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ（５^ｔｈ ｅｄ．）．Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ Ｉｎｃ．を参照されたい。

【表14】

【0448】

動物を４８時間回復させた後、安楽死を行った。

【0449】

エクスビボ分析
安楽死及び組織処理
インビボ相の終了時に、動物を安楽死させ、組織を収集した。Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎの指針に従い、安楽死を行った。

【0450】

終了時に、各動物の脳を速やかに取り出し、パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ；４％）中で固定した。３日後、２０％スクロース溶液（０．１Ｍ ＰＢＳ中）中で４℃にて一晩、組織を凍結保護し、次に、クライオスタットを使用して５０μｍの厚さの冠状切片に薄切するために凍結した。自由に浮遊する切片をＰＢＳアジド中に置き、４℃で保管した。

【0451】

ＧＦＰ免疫組織化学
ＧＦＰ免疫組織化学に基づき、関心対象の領域における形質導入された脳の体積のパーセンテージの定義を行った。４枚の切片ごとに１枚を免疫組織化学のために使用した。

【0452】

冷蔵庫から組織切片を取り出し、室温に順応させた。ＰＢＳでの完全なリンス後、それぞれペルオキシダーゼブロッキング溶液（Ｄａｋｏ、Ｓ２０２３）中で１０分間インキュベートし、続いてＰＢＳ、２％ＢＳＡ、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００及び０．０１％チメロサール中で３０分間インキュベートすることによって、内因性ペルオキシダーゼ活性及び抗原性部位をブロッキング処理した。

【0453】

次に、切片を最初に０．２％ＢＳＡ、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００及び０．０１％チメロサールを含有するＰＢＳ中で１：１０００希釈したポリクローナル抗ＧＦＰ抗体（Ａｂ３０８０、Ｍｅｒｃｋ）に曝露し、次に、同じ緩衝液中で希釈したＥｎｖｉｓｉｏｎ＋抗ウサギＨＲＰタグ付加二次抗体（Ｄａｋｏ、Ｋ４０１１）に曝露した。ＰＢＳで十分にすすいだ後、およそ３０秒間、ＤＡＢ＋基質（Ｄａｋｏ）とＨＲＰを反応させた。ＰＢＳでの数回の洗浄によって、発色反応を停止させた。

【0454】

次に、切片をスライド上に載せ、Ｎｉｓｓｌ染色で対比染色した。５層焦点が自動的に取得され、次いで平板化される拡張モードで、×２０の倍率でＰａｎｎｏｒａｍｉｃＳｃａｎ ＩＩ（３ＤＨＩＳＴＥＣＨ、Ｈｕｎｇａｒｙ）を使用して、スライドをデジタル化した。

【0455】

それぞれ１０及び６枚の切片上で、ＭＥＲＣＡＴＯＲソフトウェア（Ｍｅｒｃａｔｏｒ，Ｅｘｐｌｏｒａ Ｎｏｖａ，Ｌａ Ｒｏｃｈｅｌｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）を使用して、線条体及び黒質に対応する右半球の領域をデジタル的に描出した。

【0456】

これらの２つの脳構造の総体積及びＧＦＰ陽性体積を、式
Ｖ＝ΣＳｔｄ
（式中、「ΣＳ」は、表面積の合計であり；「ｔ」は、平均の切片の厚さであり；「ｄ」は、測定された２つの連続物分析切片の間のスライス数である）を使用して、閾値検出方法に基づいて決定した。

【0457】

次に、関心対象の各領域における形質導入された脳の体積のパーセンテージを計算した。

【0458】

結果
Ｇ１及びＧ２群の免疫組織化学染色した脳スライスを図１４で示す。陽性ＧＦＰ染色がある右線条体及び右黒質体積のパーセンテージを以下表１２で及び図１４Ａ及び１４Ｂで各ベクターに対して提供する。

【表15】

【0459】

結論
試験の目的は、右半球での単回側方線条体内注入後にマウス脳においてＧＦＰを発現する３つの組み換えＡＡＶ２ベクター（ＡＡＶ２、（１）－ＡＡＶ２及び（７）－ＡＡＶ２）の形質導入特性を調べることであった。

【0460】

３つ全てのＡＡＶベクターがＧＦＰの発現を駆動し、特定の脳構造におけるＧＦＰ染色の程度（体積）を、各ベクターが脳細胞に形質導入する能力の指標として使用した。

【0461】

（１）－ＡＡＶ２及び（７）－ＡＡＶ２ベクターは何れも、実質（線条体）に送達した場合、右半球の線条体及び黒質において、ＡＡＶ２ベクターよりも優れており、ＡＡＶ２が同じ領域のわずか３９％を形質導入したのに対し、それぞれ右線条体の７０％及び５６％、及び右黒質の５２％及び４８％をカバーした。（１）－ＡＡＶ２は、線条体及び黒質構造の両方（線条体：（１）－ＡＡＶ２の場合７０％対（７）－ＡＡＶ２の場合５６％対ＡＡＶ２の場合３９％；黒質：（１）－ＡＡＶ２の場合５２％対（７）－ＡＡＶ２の場合４８％対ＡＡＶ２の場合３９％）の最大のカバレッジを達成した。

【0462】

線条体及び黒質領域での測定に加えて、脳全体を考えると、（１）－ＡＡＶ２ベクターは、分布及び導入遺伝子発現レベルの両方に関して最良の形質導入特性を示した。右線条体における単回投与後、ＡＡＶ２ベクターにより形質導入されなかったか又はあまり形質導入されなかった右半球及び左半球両方の多くの脳構造は、（１）－ＡＡＶ２により駆動されるＧＦＰ発現に対して陽性シグナルを示した。特に、皮質及び海馬の大部分が強く染色された（図１５）。

【0463】

ＩＶ．試験候補体：ＡＡＶ２－ＧＢＡ１のインビトロ評価
この試験の目的は、ＧＢＡ１遺伝子を発現する組み換えＡＡＶ２ベクター（ＡＡＶ２．ＧＢＡ１、（１）－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１又はＭａｎ－ＮＣＳ－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１）を形質導入したＨＥＫ２９３細胞において、グルコセレブロシダーゼ（ＧＣアーゼ）活性を決定することであった。

【0464】

ＧＢＡ１は、ＧＣアーゼ、グルコシルセラミドをグルコース及びセラミドに変換するリソソーム酵素をコードする。ＧＢＡ１遺伝子における突然変異は、パーキンソン病及びゴーシェ病に対する最も一般的な遺伝学的リスク因子である。

【0465】

材料
試験品
「ＡＡＶ２．ＧＢＡ１」（図１６で「ＡＡＶ２」とも呼ばれる）は、非改変カプシドを含み、ＣＡＧ－ＧＢＡ発現カセットを保持する組み換えＡＡＶ２ベクターである。

【0466】

「（１）－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１」（図１６で「（１）－ＡＡＶ２」とも呼ばれる）は、表面結合マンノースベータ－ラクタムリンカーを伴う（より具体的には表１又は２に記載のような化合物（１）を伴う）改変されたカプシドを含み、ＣＡＧ－ＧＢＡ発現カセットを保持する組み換えＡＡＶ２ベクターである。

【0467】

「Ｍａｎ－ＮＣＳ－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１」（図１６で「Ｍａｎ－ＮＣＳ－ＡＡＶ２」とも呼ばれる）は、マンノースイソチオシアネートリンカーを伴う改変されたカプシドを含み、ＣＡＧ－ＧＢＡ発現カセットを保持する組み換えＡＡＶ２ベクターである。

【0468】

方法
試験品
節「ＩＩ．ＡＡＶの合成」で上記のように又は国際公開第２０１７／２１２０１９号パンフレットに記載のように、ＡＡＶ２．ＧＢＡ１、（１）－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１及びＭａｎ－ＮＣＳ－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１を作製した。

【0469】

簡潔に述べると、リンカーとＡＡＶ２．ＧＢＡ１ベクターとをｐＨ９．３のトリス緩衝液中、２０℃で４時間同時インキュベートした後、ベータ－ラクタム又はイソチオシアネートリンカーの何れかを有するマンノースをＡＡＶ２．ＧＢＡ１カプシドの表面に露出したリジン残基の一級アミンに共有結合させた。カップリングされたベクター（１）－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１及びＭａｎ－ＮＣＳ－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１を、、緩衝食塩滅菌溶液（ＢＳＳＳ）＋０．００１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８中で調合し、ＰＤ ＭｉｄｉＴｒａｐ Ｇ－２５脱塩カラムを使用して、ＡＡＶカプシドに結合しなかった遊離分子を除去した。Ｄ－ＰＢＳ＋Ｃａ^２＋＋Ｍｇ^２＋＋０．００１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８中でＡＡＶ２．ＧＢＡ１を調合した。

【0470】

ＧＣアーゼ活性アッセイ
ＨＥＫ２９３細胞を播種した。２日目に、１０^６（１ウェル／条件）のＭＯＩで、ＧＢＡ１遺伝子を保持するベクター（ＡＡＶ２．ＧＢＡ１、（１）－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１又はＭａｎ－ＮＣＳ－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１）を細胞に形質導入した。形質導入から９６時間後に、各ウェルに関して上清を回収し（１ｍＬ）、乾燥細胞ペレットを調製した。ＧＣアーゼ活性アッセイを行うまで両方を－８０℃で保管した。

【0471】

ＮａＣｌ ０．９％中で乾燥細胞ペレットをホモジナイズし、超音波処理した。次に、細胞ペレット及び上清中でＰｉｅｒｃｅ ＢＣＡタンパク質アッセイを使用して、タンパク質濃度を決定した。４－メチルウンベリフェリル（４－ＭＵ）を標準物質とし、停止液（グリシン緩衝液、ｐＨ１０．５）中である範囲の希釈液を調製した。３７℃で３０分間、タウロコール酸ナトリウム水和物を添加したリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）中の４－メチルウンベリフェリルβ－Ｄ－グルコピラノシド基質を使用して、試料中でＧＣアーゼ活性を測定した。停止液を添加することによって反応を停止させ、蛍光光度計（Ｍｉｔｈｒａｓ ＬＢ９４０ＢＥＲＴＨＯＬＤ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて基質蛍光を測定した（励起波長＝３５５ｎｍ；発光波長＝４６０ｎｍ）。全ての試料及び標準物質を三連で行った。

【0472】

結果
各ウェルに関して、上清（分泌型ＧＣアーゼ）中及び細胞ペレット（非分泌型ＧＣアーゼ）中のＧＣアーゼ活性を測定した。上清及びペレットの両方における活性の合計である総ＧＣアーゼ活性／条件も報告する。総ＧＣアーゼ活性は、それぞれ（１）－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１、ＡＡＶ２．ＧＢＡ１及びＭａｎ－ＮＣＳ－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１ベクターに関して、６２４．３ｎｍｏｌ／ｈ／ウェル対３８４．６ｎｍｏｌ／ｈ／ウェル対２７６．１ｎｍｏｌ／ｈ／ウェルであった。上清中では、それぞれ３種類のベクターに関する酵素活性は、５１７．４ｎｍｏｌ／ｈ／ウェル対３１５．５ｎｍｏｌ／ｈ／ウェル対２１８．１ｎｍｏｌ／ｈ／ウェルであり；ペレット中では、酵素活性は、１０６．９ｎｍｏｌ／ｈ／ウェル対６９．１ｎｍｏｌ／ｈ／ウェル対５８．０ｎｍｏｌ／ｈ／ウェルであった。

【0473】

結論
（１）－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１は、ＡＡＶ２．ＧＢＡ１及びＭａｎ－ＮＣＳ－ＡＡＶ２．ＧＢＡ１ベクターよりも優れており、上清及びペレットの両方においてより高いＧＣアーゼが測定された。

【0474】

これらの結果は有望であり、ラクタム連結部分を含むＡＡＶベクターの予想外の優位性を実証する。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【手続補正書】

【提出日】2023-09-21

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2023548217000001.app

【国際調査報告】