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特表2023-550347血管漏出障害および内皮バリア障害を処置することにおける使用のためのＭＫ２活性化化合物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2023-12-01
(54)【発明の名称】血管漏出障害および内皮バリア障害を処置することにおける使用のためのＭＫ２活性化化合物
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20231124BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20231124BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20231124BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20231124BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20231124BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20231124BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20231124BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20231124BHJP
A61P 9/12 20060101ALI20231124BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20231124BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20231124BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20231124BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20231124BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/42 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/496 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/4468 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/4168 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/501 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/4178 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/5415 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/495 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/415 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/502 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/506 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/397 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/343 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/4245 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/403 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/422 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/423 20060101ALI20231124BHJP
A61K 31/4439 20060101ALI20231124BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00 ZNA
A61P1/04
A61P29/00
A61P37/06
A61P25/00
A61P11/00
A61P31/14
A61P9/10
A61P9/12
A61P17/02
A61P13/12
A61P1/16
A61P1/00
A61P9/00
A61K31/42
A61K31/496
A61K31/519
A61K31/4468
A61K31/4168
A61K31/501
A61K31/4178
A61K31/5415
A61K31/495
A61K31/415
A61K31/502
A61K31/506
A61K31/397
A61K31/343
A61K31/4245
A61K31/403
A61K31/422
A61K31/423
A61K31/4439
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023528678
(86)(22)【出願日】2021-11-12
(85)【翻訳文提出日】2023-07-06
(86)【国際出願番号】 US2021059191
(87)【国際公開番号】W WO2022104097
(87)【国際公開日】2022-05-19
(31)【優先権主張番号】63/112,878
(32)【優先日】2020-11-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】523176543
【氏名又は名称】アクティーヴァ セラピューティクス， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ツァイウン， カーチャ
(72)【発明者】
【氏名】カイヤーリ， ウサマ
(72)【発明者】
【氏名】ヴィユートレ， ブリュノ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA17
4C084MA52
4C084MA55
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZA011
4C084ZA012
4C084ZA361
4C084ZA362
4C084ZA421
4C084ZA422
4C084ZA451
4C084ZA452
4C084ZA591
4C084ZA592
4C084ZA661
4C084ZA662
4C084ZA681
4C084ZA682
4C084ZA751
4C084ZA752
4C084ZA811
4C084ZA812
4C084ZA891
4C084ZA892
4C084ZB081
4C084ZB082
4C084ZB111
4C084ZB112
4C084ZB331
4C084ZB332
4C084ZC411
4C084ZC412
4C086AA01
4C086AA02
4C086BA06
4C086BC03
4C086BC10
4C086BC21
4C086BC36
4C086BC37
4C086BC38
4C086BC41
4C086BC50
4C086BC60
4C086BC67
4C086BC69
4C086BC70
4C086BC71
4C086BC80
4C086BC84
4C086BC89
4C086CB06
4C086CB09
4C086GA02
4C086GA07
4C086GA08
4C086GA09
4C086GA10
4C086GA12
4C086GA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA52
4C086MA55
4C086MA66
4C086NA14
4C086ZA01
4C086ZA36
4C086ZA42
4C086ZA45
4C086ZA59
4C086ZA66
4C086ZA68
4C086ZA75
4C086ZA81
4C086ZA89
4C086ZB08
4C086ZB11
4C086ZB33
4C086ZC41
(57)【要約】
必要性のある患者における血管障害または内皮バリア障害の処置のための、ＭＫ２アクチベーター、およびＭＫ２アクチベーターを含む組成物が、本明細書で提供される（上記ＭＫ２アクチベーターは、１０００Ｄａ未満の分子量を有し、上記ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットに結合する）。患者にＭＫ２アクチベーターを投与することによって、患者において血管障害または内皮バリア障害を処置する方法がまた、提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
必要性のある患者において血管障害または内皮バリア障害を処置するためのＭＫ２アクチベーターであって、前記ＭＫ２アクチベーターは、１０００Ｄａ未満の分子量を有し；前記ＭＫ２アクチベーターは、ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置した結合ポケットに結合する、ＭＫ２アクチベーター。
【請求項2】
ＭＫ２の前記Ｃローブドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項3】
ＭＫ２の前Ｃ末端調節ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項4】
ＭＫ２の前記ＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置した前記結合ポケットは、アミノ酸残基Ｍ２７５、Ｋ２７６、Ｉ２７９、Ｖ３５２、Ｅ３５４、Ｅ３５５、Ｓ３５８、Ａ３５９、およびＴ３６２を含む、請求項１～３に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項5】
ＭＫ２の前記ＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置した前記結合ポケットは、アミノ酸残基Ｙ２６０、Ｙ２６４、Ｓ２６５、Ｎ２６６、Ｈ２６７、Ｅ２８５、Ｆ２８６、Ｐ２８７、Ｎ２８８、Ｐ２８９、Ｅ２９０、およびＶ３４１を含む、請求項１～３に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項6】
ＭＫ２の前記ＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置した前記結合ポケットは、アミノ酸残基Ｙ２６０、Ｙ２６４、Ｓ２６５、Ｎ２６６、Ｈ２６７、Ａ２７０、Ｉ２７１、Ｓ２７２、Ｐ２７３、Ｇ２７４、Ｍ２７５、Ｋ２７６、Ｒ２７８、Ｉ２７９、Ｅ２８５、Ｆ２８６、Ｐ２８７、Ｎ２８８、Ｐ２８９、Ｅ２９０、Ｖ３４１、Ｅ３４７、Ｒ３４８、Ｅ３５０、Ｄ３５１、Ｖ３５２、Ｅ３５４、Ｅ３５５、Ｓ３５８、Ａ３５９、およびＴ３６２を含む、請求項１～３に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項7】
前記結合ポケットは、アミノ酸残基Ｙ２６０とＴ３６２との間に位置する、請求項１に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項8】
前記結合ポケットは、アミノ酸残基Ｅ２９０とＤ３５１との間に位置する、請求項１に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項9】
前記ＭＫ２アクチベーターは、約－５ｋｃａｌまたはこれより低い結合親和性を有する前記結合ポケットに結合する、請求項１～８のいずれか１項に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項10】
前記ＭＫ２アクチベーターは、他のキナーゼよりＭＫ２に対して選択的である、請求項１～９のいずれか１項に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項11】
前記ＭＫ２アクチベーターは、セピモスタット、ビフェプラミド、カペセロド、ビフェプロフェン、ロルシナドール、スルファマゾン、アルタピゾン、ザルダリド、ネツピタント、カソピタント、ピパマジン、サペルコナゾール、バルマスチン、Ｂｇｔ－２２６、イミドカルブ、エロピプラゾール、オキサフルマジン、フルペンチキソール、クロカプラミン、パリペリドン、チオスピロン、セルチンドール、ペロスピロン、ジプラシドン、ピクロキシジン、Ａｍｇ－５４８、Ｃｅｐ－３２４９６、Ｇｓｋ－１０７０９１６、Ｇｓｋ－４６１３６４、Ｌｙ－２５８４７０２、フルドキソポン、クロドキソポン、Ａｍｇ－９００、Ｍｋ－６５９２、Ｍｋ－８０３３、Ａｚｄ－１７７５、ムブリチニブ、モセチノスタット、Ｐｆ－３７５８３０９、Ｒ４２８、ラルチトレキセド、ＸＬ２２８、Ａｚｄ３５１４、エリノグレル、Ｔａｋ－９０１、Ｃｈｉｒ－２６５、バフェチニブ、Ａｃ－４８０、Ｃｃ－４０１、ニロチニブ、ラドチニブ、ゴルバチニブ、アベキシノスタット、Ａｓｔ－４８７、Ｅｎｍｄ－２０７６、Ｂｍｓ－８３３９２３、ドラフラジン、テゾセンタン、ロメトレキソール、シヌペロン、マレイン酸イコペジル、エルバニジン、グリシンダマイド、カミシナル、テゴブビル、フルメリドン、ロミタピド、マゾカリム、ロスラジン、ペラキンシン、レフルノミド、アファシフェナシン、Ａｇ－１３９５８、ロルピプラゾール、シポニモド、メスピペロン、ＸＬ０１９、ベンチピミン、ゾスキダル、ファシチバント、Ａｍｇ－５１７、Ｃｉ－９８８、ボキシジン、グリカラミド、ニアプラジン、イソメタミジウム、メトフェナザート、トレニジン、フロトレニジン、ジフルアニン、ラマトロバン、ソネピプラゾール、タファミジス、ベルルカスト、ロピジン、ロトリフェン、ミオフラジン、タロトレキシン、チフラミゾール、トレフェンタニル、アサピプラント、リドフラジン、ルザドラン、プレラデナント、メディバジン、デラビルジン、ピフルチキソール、エベルコナゾール、テネリグリプチン、ダルトロバン、デラコキシブ、レレノプリド、アバガセスタット、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１～１０のいずれか１項に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項12】
前記ＭＫ２アクチベーターは、セピモスタット、ビフェプラミド、カペセロド、ビフェプロフェン、ロルシナドール、スルファマゾン、アルタピゾン、ザルダリド、ネツピタント、カソピタント、ピパマジン、サペルコナゾール、バルマスチン、Ｂｇｔ－２２６、イミドカルブ、エロピプラゾール、オキサフルマジン、フルペンチキソール、クロカプラミン、パリペリドン、チオスピロン、セルチンドール、ペロスピロン、ジプラシドン、ピクロキシジン、Ｌｙ－２５８４７０２、フルドキソポン、クロドキソポン、ムブリチニブ、モセチノスタット、Ｐｆ－３７５８３０９、ラルチトレキセド、Ａｚｄ３５１４、エリノグレル、Ａｃ－４８０、アベキシノスタット、Ｂｍｓ－８３３９２３、ドラフラジン、テゾセンタン、ロメトレキソール、シヌペロン、マレイン酸イコペジル、エルバニジン、グリシンダマイド、カミシナル、テゴブビル、フルメリドン、ロミタピド、マゾカリム、ロスラジン、ペラキンシン、アファシフェナシン、Ａｇ－１３９５８、ロルピプラゾール、シポニモド、メスピペロン、ベンチピミン、ゾスキダル、ファシチバント、Ａｍｇ－５１７、Ｃｉ－９８８、ボキシジン、グリカラミド、ニアプラジン、イソメタミジウム、メトフェナザート、フロトレニジン、ジフルアニン、ラマトロバン、ソネピプラゾール、タファミジス、ベルルカスト、ロピジン、ロトリフェン、ミオフラジン、タロトレキシン、チフラミゾール、トレフェンタニル、アサピプラント、リドフラジン、ルザドラン、プレラデナント、メディバジン、デラビルジン、ピフルチキソール、エベルコナゾール、テネリグリプチン、ダルトロバン、デラコキシブ、レレノプリド、アバガセスタット、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１～１０のいずれか１項に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項13】
前記ＭＫ２アクチベーターは、アベキシノスタット（ＰＣＩ－２４７８１）、Ａｃ－４８０（ＢＭＳ－５９９６２６）、アダボセルチブ（ＭＫ－１７７５）、Ａｇ－１３９５８、Ａｍｇ－５１７、Ａｍｇ－９００、アサピプラント、Ａｓｔ－４８７（ＮＶＰ－ＡＳＴ４８７）、アバガセスタット（ＢＭＳ－７０８１６３）、Ａｚｄ３５１４、ＢＡＦ３１２（シポニモド）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ－４０６）、ベムセンチニブ（Ｒ４２８）、Ｂｇｔ－２２６（ＮＶＰ－ＢＧＴ２２６）、Ｂｍｓ－８３３９２３、Ｃｃ－４０１塩酸塩、Ｃｅｐ－３２４９６、デラビルジン（メシル酸塩）、デラコキシブ、ドロプロピジン、Ｅｎｍｄ－２０７６、フルペンチキソール二塩酸塩、ゴルバチニブ、Ｇｓｋ－１０７０９１６、Ｇｓｋ－４６１３６４、イミドカルブジプロピオン酸塩、レフルノミド、レボドロプロピジン、ロミタピド、Ｌｙ－２５８４７０２、ＭＫ２－ＡＰ（バッチ＃２）、モセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）、ムブリチニブ（ＴＡＫ １６５）、ナファモスタットメシル酸塩、ネツピタント、ニロチニブ（ＡＭＮ－１０７）、パリペリドン、ペロスピロン塩酸塩、Ｐｆ－３７５８３０９、プレラデナント、ラドチニブ、ＲＡＦ２６５（Ｃｈｉｒ－２６５）、ラルチトレキセド、ラマトロバン、タファミジス、Ｔａｋ－９０１、テゴブビル、テネリグリプチン臭化水素酸塩、ＸＬ０１９、ＸＬ２２８、ジプラシドンＨＣｌ、ゾスキダル（ＬＹ３３５９７９） ３ＨＣｌ、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１～１０のいずれか１項に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項14】
前記ＭＫ２アクチベーターは、ロミタピド、ペロスピロン、アベキシノスタット、ＡＧ－１３９５８、レボドロプロピジン、ニロチニブ、ＡＭＧ－９００、ＡＭＧ－５１７、デラビルジン、Ｂｇｔ－２２６、モセチノスタット、タファミジス、ＸＬ０１９、ラドチニブ、ジプラシドン、ムブリチニブ、ラマトロバン、デラコキシブ、ラルチトレキセド、ＧＳＫ４６１３６４、アダボセルチブ、テゴブビル、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１～１０のいずれか１項に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項15】
前記ＭＫ２アクチベーターは、レフルノミド、ネツピタント、パリペリドン、ロミタピド、ペロスピロン塩酸塩、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１～１０のいずれか１項に記載のＭＫ２アクチベーター。
【請求項16】
治療上有効な量の請求項１～１５のいずれか１項に記載のＭＫ２アクチベーターを含む、血管障害または内皮バリア障害の処置のための組成物。
【請求項17】
治療上有効な量の請求項１～１５のいずれか１項に記載のＭＫ２アクチベーターおよび薬学的に受容可能な賦形剤を含む、血管障害または内皮バリア障害の処置のための薬学的組成物。
【請求項18】
治療上有効な量の請求項１～１５のいずれか１項に記載のＭＫ２アクチベーターを含む、血管障害または内皮バリア障害の処置のための単位投与形態。
【請求項19】
必要性のある患者において血管障害または内皮バリア障害を処置する方法であって、前記方法は、前記患者に、治療上有効な量の請求項１～１５のいずれか１項に記載のＭＫ２アクチベーターを投与する工程を包含する方法。
【請求項20】
前記血管障害は、血管漏出障害である、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
前記内皮バリア障害は、微小血管バリア漏出障害である、請求項１９に記載の方法。
【請求項22】
前記微小血管バリア漏出障害は、炎症性腸疾患、脳浮腫、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、および肺浮腫からなる群より選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項23】
前記急性呼吸窮迫症候群は、ＣＯＶＩＤ－１９と関連する、請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
前記急性呼吸窮迫症候群は、内皮バリアの過剰透過性と関連する、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項25】
前記急性呼吸窮迫症候群は、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、および肺炎からなる群より選択される感染性疾患と関連する、請求項２２に記載の方法。
【請求項26】
前記急性肺傷害は、ＣＯＶＩＤ－１９と関連する、請求項２２に記載の方法。
【請求項27】
前記急性肺傷害は、内皮バリアの過剰透過性と関連する、請求項２２または２６に記載の方法。
【請求項28】
前記急性肺傷害は、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、および肺炎からなる群より選択される感染性疾患と関連する、請求項２２に記載の方法。
【請求項29】
前記内皮バリア障害は、血管バリア漏出障害である、請求項１９に記載の方法。
【請求項30】
前記血管バリア漏出障害は、アテローム性動脈硬化症、高血圧症、妊娠高血圧腎症、および川崎病からなる群より選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項31】
前記内皮バリア障害は、線維芽細胞関連障害である、請求項１９に記載の方法。
【請求項32】
前記線維芽細胞関連障害は、創傷治癒、肺線維症、肝線維症、血管線維症、腎線維症、および組織リモデリングからなる群より選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記血管障害は、血管バリア障害である、請求項１９に記載の方法。
【請求項34】
前記血管バリア障害は、消化管障害である、請求項３３に記載の方法。
【請求項35】
前記消化管障害は、ＣＯＶＩＤ－１９と関連する、請求項３４に記載の方法。
【請求項36】
前記消化管障害は、内皮バリアの過剰透過性と関連する、請求項３４に記載の方法。
【請求項37】
必要性のある患者において急性呼吸窮迫症候群を処置する方法であって、前記方法は、治療上有効な量の請求項１～１５のいずれか１項に記載のＭＫ２アクチベーターを前記患者に投与する工程を包含する方法。
【請求項38】
前記急性呼吸窮迫症候群は、ＣＯＶＩＤ－１９と関連する、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
必要性のある患者において急性肺傷害を処置する方法であって、前記方法は、治療上有効な量の請求項１～１５のいずれか１項に記載のＭＫ２アクチベーターを前記患者に投与する工程を包含する方法。
【請求項40】
前記急性肺傷害は、ＣＯＶＩＤ－１９と関連する、請求項３９に記載の方法。
【請求項41】
前記ＭＫ２アクチベーターは、前記患者に静脈内投与される、請求項１９～４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項42】
前記ＭＫ２アクチベーターは、前記患者に経口投与される、請求項１９～４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項43】
前記ＭＫ２アクチベーターは、前記患者に非経口投与される、請求項１９～４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項44】
前記患者は、ヒトである、請求項１９～４３のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１１月１２日出願の米国仮出願第６３／１１２，８７８号（その内容は、その全体において本明細書に参考として援用される）の利益および優先権を主張する。
本出願は、２０２０年１１月１２日出願の米国仮出願第６３／１１２，８７８号（その内容は、その全体において本明細書に参考として援用される）の利益および優先権を主張する。
【0002】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子提出された配列表を含み、その全体において本明細書に参考として援用される。上記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２１年１１月１２日に作成され、ファイル名、ＡＫＹ－００１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔであり、サイズは７，７６９バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子提出された配列表を含み、その全体において本明細書に参考として援用される。上記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２１年１１月１２日に作成され、ファイル名、ＡＫＹ－００１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔであり、サイズは７，７６９バイトである。
【背景技術】
【0003】
背景
血管内皮は、血中の循環する流体および炎症性の細胞を周囲の組織から分離する。血管漏出（ｖａｓｃｕｌａｒ ｌｅａｋ）は、代表的には、広範に拡がった炎症プロセスへの応答において起こり、これは、慢性疾患への応答において、ならびに急性の状況において、ウイルス、細菌または直接的な毒素曝露への応答において生じ得る。血管漏出によって引き起こされる６０を超える医学的状態が存在し、これらとしては、とりわけ、浮腫および急性腎障害が上げられる。例えば、眼では、血管漏出は、糖尿病網膜症のような黄斑変性をもたらし得る；肺では、血管漏出は、敗血症、急性肺傷害（ＡＬＩ）および急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）をもたらし得る。ＡＲＤＳは、生命を脅かす障害であり、この障害では、肺における肺胞毛細管透過性バリアが漏れやすくなり、肺が流体で溢れ、必須の器官に酸素を提供するために、肺がその主要な機能を果たす能力を減少させる。このことは、肺胞の洪水、低酸素血症および呼吸不全をもたらす。呼吸に関するウイルス（例えば、インフルエンザ、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ）が肺に達する場合、それらは、肺胞における内皮膜を間接的に混乱させ、疾患の最も重篤な発現では、ＡＲＤＳをもたらす。重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は、２０１９年後半に出現し、「新型コロナウイルス感染症（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ ２０１９）」（ＣＯＶＩＤ－１９）と称される急性呼吸器疾患のパンデミックを引き起こした感染性の高い、かつ病原性のコロナウイルスであり、これは、同じようにして活動する。ＣＯＶＩＤ－１９より前ですら、ＡＬＩ／ＡＲＤＳは集中治療室における死亡率の主要原因であるが、その根底にある内皮細胞バリア機能を回復させる医学療法は存在しない。人工呼吸は、ＡＲＤＳの間に適切なガス交換を維持するための標準治療であるが、それは、炎症プロセスの加速をもたらし得、肺損傷を増大させ得る。従って、ＡＲＤＳを処置して、呼吸器感染の最も重篤な発現と戦うための新規な治療ストラテジーを開発し、そして患者における他の血管漏出障害を処置するための未だ満たされていないニーズが存在する。
血管内皮は、血中の循環する流体および炎症性の細胞を周囲の組織から分離する。血管漏出（ｖａｓｃｕｌａｒ ｌｅａｋ）は、代表的には、広範に拡がった炎症プロセスへの応答において起こり、これは、慢性疾患への応答において、ならびに急性の状況において、ウイルス、細菌または直接的な毒素曝露への応答において生じ得る。血管漏出によって引き起こされる６０を超える医学的状態が存在し、これらとしては、とりわけ、浮腫および急性腎障害が上げられる。例えば、眼では、血管漏出は、糖尿病網膜症のような黄斑変性をもたらし得る；肺では、血管漏出は、敗血症、急性肺傷害（ＡＬＩ）および急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）をもたらし得る。ＡＲＤＳは、生命を脅かす障害であり、この障害では、肺における肺胞毛細管透過性バリアが漏れやすくなり、肺が流体で溢れ、必須の器官に酸素を提供するために、肺がその主要な機能を果たす能力を減少させる。このことは、肺胞の洪水、低酸素血症および呼吸不全をもたらす。呼吸に関するウイルス（例えば、インフルエンザ、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ）が肺に達する場合、それらは、肺胞における内皮膜を間接的に混乱させ、疾患の最も重篤な発現では、ＡＲＤＳをもたらす。重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は、２０１９年後半に出現し、「新型コロナウイルス感染症（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ ２０１９）」（ＣＯＶＩＤ－１９）と称される急性呼吸器疾患のパンデミックを引き起こした感染性の高い、かつ病原性のコロナウイルスであり、これは、同じようにして活動する。ＣＯＶＩＤ－１９より前ですら、ＡＬＩ／ＡＲＤＳは集中治療室における死亡率の主要原因であるが、その根底にある内皮細胞バリア機能を回復させる医学療法は存在しない。人工呼吸は、ＡＲＤＳの間に適切なガス交換を維持するための標準治療であるが、それは、炎症プロセスの加速をもたらし得、肺損傷を増大させ得る。従って、ＡＲＤＳを処置して、呼吸器感染の最も重篤な発現と戦うための新規な治療ストラテジーを開発し、そして患者における他の血管漏出障害を処置するための未だ満たされていないニーズが存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0004】
要旨
１つの局面において、必要性のある患者において血管障害または内皮バリア障害を処置するためのＭＫ２アクチベーターであって、ここで上記ＭＫ２アクチベーターは、１０００Ｄａ未満の分子量を有し；上記ＭＫ２アクチベーターは、ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットに結合するＭＫ２アクチベーターが、本明細書で提供される。
１つの局面において、必要性のある患者において血管障害または内皮バリア障害を処置するためのＭＫ２アクチベーターであって、ここで上記ＭＫ２アクチベーターは、１０００Ｄａ未満の分子量を有し；上記ＭＫ２アクチベーターは、ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットに結合するＭＫ２アクチベーターが、本明細書で提供される。
【0005】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣローブドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣ末端調節ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。
【0006】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットは、アミノ酸残基Ｍ２７５、Ｋ２７６、Ｉ２７９、Ｖ３５２、Ｅ３５４、Ｅ３５５、Ｓ３５８、Ａ３５９、およびＴ３６２を含む。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットは、アミノ酸残基Ｙ２６０、Ｙ２６４、Ｓ２６５、Ｎ２６６、Ｈ２６７、Ｅ２８５、Ｆ２８６、Ｐ２８７、Ｎ２８８、Ｐ２８９、Ｅ２９０、およびＶ３４１を含む。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットは、アミノ酸残基Ｙ２６０、Ｙ２６４、Ｓ２６５、Ｎ２６６、Ｈ２６７、Ａ２７０、Ｉ２７１、Ｓ２７２、Ｐ２７３、Ｇ２７４、Ｍ２７５、Ｋ２７６、Ｒ２７８、Ｉ２７９、Ｅ２８５、Ｆ２８６、Ｐ２８７、Ｎ２８８、Ｐ２８９、Ｅ２９０、Ｖ３４１、Ｅ３４７、Ｒ３４８、Ｅ３５０、Ｄ３５１、Ｖ３５２、Ｅ３５４、Ｅ３５５、Ｓ３５８、Ａ３５９、およびＴ３６２を含む。
【0007】
ある特定の実施形態において、上記結合ポケットは、アミノ酸残基Ｙ２６０とＴ３６２との間に位置する。ある特定の実施形態において、上記結合ポケットは、アミノ酸残基Ｅ２９０とＤ３５１との間に位置する。
【0008】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、約－５ｋｃａｌまたはこれより低い結合親和性で上記結合ポケットに結合する。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、他のキナーゼよりＭＫ２に対して選択的である。
【0009】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、セピモスタット、ビフェプラミド、カペセロド、ビフェプロフェン、ロルシナドール、スルファマゾン、アルタピゾン、ザルダリド、ネツピタント、カソピタント、ピパマジン、サペルコナゾール、バルマスチン、Ｂｇｔ－２２６、イミドカルブ、エロピプラゾール、オキサフルマジン、フルペンチキソール、クロカプラミン、パリペリドン、チオスピロン、セルチンドール、ペロスピロン、ジプラシドン、ピクロキシジン、Ａｍｇ－５４８、Ｃｅｐ－３２４９６、Ｇｓｋ－１０７０９１６、Ｇｓｋ－４６１３６４、Ｌｙ－２５８４７０２、フルドキソポン、クロドキソポン、Ａｍｇ－９００、Ｍｋ－６５９２、Ｍｋ－ ８０３３、Ａｚｄ－１７７５、ムブリチニブ、モセチノスタット、Ｐｆ－３７５８３０９、Ｒ４２８、ラルチトレキセド、ＸＬ２２８、Ａｚｄ３５１４、エリノグレル、Ｔａｋ－９０１、Ｃｈｉｒ－２６５、バフェチニブ、Ａｃ－４８０、Ｃｃ－４０１、ニロチニブ、ラドチニブ、ゴルバチニブ、アベキシノスタット、Ａｓｔ－４８７、Ｅｎｍｄ－２０７６、Ｂｍｓ－８３３９２３、ドラフラジン、テゾセンタン、ロメトレキソール、シヌペロン、マレイン酸イコペジル、エルバニジン、グリシンダマイド、カミシナル、テゴブビル、フルメリドン、ロミタピド、マゾカリム、ロスラジン、ペラキンシン、レフルノミド、アファシフェナシン、Ａｇ－１３９５８、ロルピプラゾール、シポニモド、メスピペロン、ＸＬ０１９、ベンチピミン、ゾスキダル、ファシチバント、Ａｍｇ－５１７、Ｃｉ－９８８、ボキシジン、グリカラミド、ニアプラジン、イソメタミジウム、メトフェナザート、トレニジン、フロトレニジン、ジフルアニン、ラマトロバン、ソネピプラゾール、タファミジス、ベルルカスト、ロピジン、ロトリフェン、ミオフラジン、タロトレキシン、チフラミゾール、トレフェンタニル、アサピプラント、リドフラジン、ルザドラン、プレラデナント、メディバジン、デラビルジン、ピフルチキソール、エベルコナゾール、テネリグリプチン、ダルトロバン、デラコキシブ、レレノプリド、アバガセスタット、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【0010】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、セピモスタット、ビフェプラミド、カペセロド、ビフェプロフェン、ロルシナドール、スルファマゾン、アルタピゾン、ザルダリド、ネツピタント、カソピタント、ピパマジン、サペルコナゾール、バルマスチン、Ｂｇｔ－２２６、イミドカルブ、エロピプラゾール、オキサフルマジン、フルペンチキソール、クロカプラミン、パリペリドン、チオスピロン、セルチンドール、ペロスピロン、ジプラシドン、ピクロキシジン、Ｌｙ－２５８４７０２、フルドキソポン、クロドキソポン、ムブリチニブ、モセチノスタット、Ｐｆ－３７５８３０９、ラルチトレキセド、Ａｚｄ３５１４、エリノグレル、Ａｃ－４８０、アベキシノスタット、Ｂｍｓ－８３３９２３、ドラフラジン、テゾセンタン、ロメトレキソール、シヌペロン、マレイン酸イコペジル、エルバニジン、グリシンダマイド、カミシナル、テゴブビル、フルメリドン、ロミタピド、マゾカリム、ロスラジン、ペラキンシン、アファシフェナシン、Ａｇ－１３９５８、ロルピプラゾール、シポニモド、メスピペロン、ベンチピミン、ゾスキダル、ファシチバント、Ａｍｇ－５１７、Ｃｉ－９８８、ボキシジン、グリカラミド、ニアプラジン、イソメタミジウム、メトフェナザート、フロトレニジン、ジフルアニン、ラマトロバン、ソネピプラゾール、タファミジス、ベルルカスト、ロピジン、ロトリフェン、ミオフラジン、タロトレキシン、チフラミゾール、トレフェンタニル、アサピプラント、リドフラジン、ルザドラン、プレラデナント、メディバジン、デラビルジン、ピフルチキソール、エベルコナゾール、テネリグリプチン、ダルトロバン、デラコキシブ、レレノプリド、アバガセスタット、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【0011】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、アベキシノスタット（ＰＣＩ－２４７８１）、Ａｃ－４８０（ＢＭＳ－５９９６２６）、アダボセルチブ（ＭＫ－１７７５）、Ａｇ－１３９５８、Ａｍｇ－５１７、Ａｍｇ－９００、アサピプラント、Ａｓｔ－４８７（ＮＶＰ－ＡＳＴ４８７）、アバガセスタット（ＢＭＳ－７０８１６３）、Ａｚｄ３５１４、ＢＡＦ３１２（シポニモド）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ－４０６）、ベムセンチニブ（Ｒ４２８）、Ｂｇｔ－２２６（ＮＶＰ－ＢＧＴ２２６）、Ｂｍｓ－８３３９２３、Ｃｃ－４０１塩酸塩、Ｃｅｐ－３２４９６、デラビルジン（メシル酸塩）、デラコキシブ、ドロプロピジン、Ｅｎｍｄ－２０７６、フルペンチキソール二塩酸塩、ゴルバチニブ、Ｇｓｋ－１０７０９１６、Ｇｓｋ－４６１３６４、イミドカルブジプロピオン酸塩、レフルノミド、レボドロプロピジン、ロミタピド、Ｌｙ－２５８４７０２、ＭＫ２－ＡＰ（バッチ＃２）、モセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）、ムブリチニブ（ＴＡＫ １６５）、ナファモスタットメシル酸塩、ネツピタント、ニロチニブ（ＡＭＮ－１０７）、パリペリドン、ペロスピロン塩酸塩、Ｐｆ－３７５８３０９、プレラデナント、ラドチニブ、ＲＡＦ２６５（Ｃｈｉｒ－２６５）、ラルチトレキセド、ラマトロバン、タファミジス、Ｔａｋ－９０１、テゴブビル、テネリグリプチン臭化水素酸塩、ＸＬ０１９、ＸＬ２２８、ジプラシドンＨＣｌ、ゾスキダル（ＬＹ３３５９７９） ３ＨＣｌ、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【0012】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、ロミタピド、ペロスピロン、アベキシノスタット、ＡＧ－１３９５８、レボドロプロピジン、ニロチニブ、ＡＭＧ－９００、ＡＭＧ－５１７、デラビルジン、Ｂｇｔ－２２６、モセチノスタット、タファミジス、ＸＬ０１９、ラドチニブ、ジプラシドン、ムブリチニブ、ラマトロバン、デラコキシブ、ラルチトレキセド、ＧＳＫ４６１３６４、アダボセルチブ、テゴブビル、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【0013】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、レフルノミド、ネツピタント、パリペリドン、ロミタピド、ペロスピロン塩酸塩、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【0014】
別の局面において、治療上有効な量の本明細書で記載されるＭＫ２アクチベータを含む、血管障害または内皮バリア障害を処置するための組成物が、本明細書で提供される。
【0015】
別の局面において、治療上有効な量の本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターおよび薬学的に受容可能な賦形剤を含む、血管障害または内皮バリア障害の処置のための薬学的組成物が、本明細書で提供される。
【0016】
別の局面において、治療上有効な量の本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターを含む、血管障害または内皮バリア障害の処置のための単位投与形態が、本明細書で提供される。
【0017】
別の局面において、必要性のある患者において血管障害または内皮バリア障害を処置するための方法であって、上記方法は、一般に、治療上有効な量の本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターを上記患者に投与する工程を包含する方法が、本明細書で提供される。
【0018】
ある特定の実施形態において、上記血管障害は、血管漏出障害である。
【0019】
ある特定の実施形態において、上記内皮バリア障害は、微小血管バリア漏出障害である。ある特定の実施形態において、上記微小血管バリア漏出障害は、炎症性腸疾患、脳浮腫、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、および肺浮腫からなる群より選択される。
【0020】
ある特定の実施形態において、上記急性呼吸窮迫症候群は、ＣＯＶＩＤ－１９と関連する。ある特定の実施形態において、上記急性呼吸窮迫症候群は、内皮バリアの過剰透過性と関連する。ある特定の実施形態において、上記急性呼吸窮迫症候群は、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、および肺炎からなる群より選択される感染性疾患と関連する。
【0021】
ある特定の実施形態において、上記急性肺傷害は、ＣＯＶＩＤ－１９と関連する。ある特定の実施形態において、上記急性肺傷害は、内皮バリアの過剰透過性と関連する。ある特定の実施形態において、上記急性肺傷害は、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、および肺炎からなる群より選択される感染性疾患と関連する。
【0022】
ある特定の実施形態において、上記内皮バリア障害は、血管バリア漏出障害である。ある特定の実施形態において、上記血管バリア漏出障害は、アテローム性動脈硬化症、高血圧症、妊娠高血圧腎症、および川崎病からなる群より選択される。
【0023】
ある特定の実施形態において、上記内皮バリア障害は、線維芽細胞関連障害である。ある特定の実施形態において、上記線維芽細胞関連障害は、創傷治癒、肺線維症、肝線維症、血管線維症、腎線維症、および組織リモデリングからなる群より選択される。
【0024】
ある特定の実施形態において、上記血管障害は、血管バリア障害である。ある特定の実施形態において、上記血管バリア障害は、消化管障害である。ある特定の実施形態において、上記消化管障害は、ＣＯＶＩＤ－１９と関連する。ある特定の実施形態において、上記消化管障害は、内皮バリアの過剰透過性と関連する。
【0025】
別の局面において、必要性のある患者において急性呼吸窮迫症候群を処置する方法であって、上記方法は、一般に、治療上有効な量の本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターを上記患者に投与する工程を包含する方法が提供される。ある特定の実施形態において、上記急性呼吸窮迫症候群は、ＣＯＶＩＤ－１９と関連する。
【0026】
別の局面において、必要性のある患者において急性肺傷害を処置する方法であって、上記方法は、一般に、治療上有効な量の本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターを上記患者に投与する工程を包含する方法が提供される。ある特定の実施形態において、上記急性肺傷害は、ＣＯＶＩＤ－１９と関連する。
【0027】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、上記患者に静脈内投与される。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、上記患者に経口投与される。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、上記患者に非経口投与される。ある特定の実施形態において、上記患者は、ヒトである。
図面の簡単な説明
図面の簡単な説明
【図面の簡単な説明】
【0028】
【0029】
【0030】
【発明を実施するための形態】
【0031】
詳細な説明
本明細書で一般的に記載されるように、本開示は、必要性のある患者において本明細書で記載される障害、例えば、血管障害または内皮バリア障害を、ＭＫ２アクチベーターを使用して処置する方法を提供する。治療上有効な量のＭＫ２アクチベーターまたはその薬学的に受容可能な塩を含む組成物および薬学的組成物がまた、本明細書で提供される。
本明細書で一般的に記載されるように、本開示は、必要性のある患者において本明細書で記載される障害、例えば、血管障害または内皮バリア障害を、ＭＫ２アクチベーターを使用して処置する方法を提供する。治療上有効な量のＭＫ２アクチベーターまたはその薬学的に受容可能な塩を含む組成物および薬学的組成物がまた、本明細書で提供される。
【0032】
ＭＫ２アクチベーター
マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ－活性化タンパク質キナーゼ２（ＭＫ２またはＭＡＰＫＡＰＫ２）、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ４９１３７は、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ－活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫＡＰＫ）ファミリー（マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達によって活性化されるキナーゼの群）に属するキナーゼである。ＭＫ２は、ｐ３８αによって活性化され、炎症性サイトカインの生成を調節する。このキナーゼは、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼの直接的リン酸化を介して調節される。ｐ３８ ＭＡＰキナーゼとともに、このキナーゼは、ストレスおよび炎症応答、核エクスポート、遺伝子発現調節および細胞増殖を含む多くの細胞プロセスに関与することが公知である。
マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ－活性化タンパク質キナーゼ２（ＭＫ２またはＭＡＰＫＡＰＫ２）、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ４９１３７は、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ－活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫＡＰＫ）ファミリー（マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達によって活性化されるキナーゼの群）に属するキナーゼである。ＭＫ２は、ｐ３８αによって活性化され、炎症性サイトカインの生成を調節する。このキナーゼは、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼの直接的リン酸化を介して調節される。ｐ３８ ＭＡＰキナーゼとともに、このキナーゼは、ストレスおよび炎症応答、核エクスポート、遺伝子発現調節および細胞増殖を含む多くの細胞プロセスに関与することが公知である。
【0033】
いくつかの実施形態において、上記ＭＫ２タンパク質は、全長タンパク質またはその機能的フラグメントである。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２タンパク質は、表１に列挙されるように、配列番号１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２タンパク質は、配列番号１のアミノ酸配列の機能的フラグメント（例えば、触媒ドメイン）を含む。ある特定の実施形態において、ＭＫ２タンパク質またはその機能的フラグメントは、配列番号１と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含むアミノ酸を含む。
【0034】
本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターは、本明細書で記載される障害の処置、予防またはリスクの低減において有用であり得る。例えば、本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターは、必要性のある患者において血管障害または内皮バリア障害を処置するにあたって有用であり得る。ある特定の実施形態において、血管障害の処置のためのＭＫ２アクチベーターが本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、内皮バリア障害の処置のためのＭＫ２アクチベーターが本明細書で提供される。
【0035】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、５００Ｄａ、５５０Ｄａ、６００Ｄａ、６５０Ｄａ、７００Ｄａ、７５０Ｄａ、８００Ｄａ、８５０Ｄａ、９００Ｄａ、９５０Ｄａ、１０００Ｄａ、１０５０Ｄａ、１１００Ｄａ、１１５０Ｄａ、１２００Ｄａ、１２５０Ｄａ、１３００Ｄａ、１３５０Ｄａ、１４００Ｄａ、１４５０Ｄａ、または１５００Ｄａ未満の分子量を有する。いくつかの実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、１０００Ｄａ未満の分子量を有する。
【0036】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、ＭＫ２のＣローブドメインに位置する結合ポケットに結合する。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣローブドメインは、表１に列挙されるように、配列番号２のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣローブドメインは、配列番号２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。
【0037】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、ＭＫ２のＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットに結合する。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣ末端調節ドメインは、表１に列挙されるように、配列番号３のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣ末端調節ドメインは、配列番号３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。
【0038】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットに結合する。
【0039】
種々の実施形態において、必要性のある患者において血管障害または内皮バリア障害を処置するためのＭＫ２アクチベーターであって、ここで上記ＭＫ２アクチベーターは、１０００Ｄａ未満の分子量を有し；上記ＭＫ２アクチベーターは、上記ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットに結合するＭＫ２アクチベーターが、本明細書で提供される。
【0040】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットは、Ｍ２７５、Ｋ２７６、Ｉ２７９、Ｖ３５２、Ｅ３５４、Ｅ３５５、Ｓ３５８、Ａ３５９、およびＴ３６２からなる群より選択される配列番号１の１個またはこれより多くのアミノ酸残基（例えば、１個のアミノ酸、２個のアミノ酸、３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、５個のアミノ酸、６個のアミノ酸、７個のアミノ酸、８個のアミノ酸、または９個のアミノ酸）を含む。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットは、配列番号１のアミノ酸残基Ｍ２７５、Ｋ２７６、Ｉ２７９、Ｖ３５２、Ｅ３５４、Ｅ３５５、Ｓ３５８、Ａ３５９、およびＴ３６２を含む。
【0041】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットは、配列番号１のＹ２６０、Ｙ２６４、Ｓ２６５、Ｎ２６６、Ｈ２６７、Ｅ２８５、Ｆ２８６、Ｐ２８７、Ｎ２８８、Ｐ２８９、Ｅ２９０、およびＶ３４１からなる群より選択される配列番号１の１個またはこれより多くのアミノ酸残基（例えば、１個のアミノ酸、２個のアミノ酸、３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、５個のアミノ酸、６個のアミノ酸、７個のアミノ酸、８個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１０個のアミノ酸またはこれより多く）を含む。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットは、アミノ酸残基Ｙ２６０、Ｙ２６４、Ｓ２６５、Ｎ２６６、Ｈ２６７、Ｅ２８５、Ｆ２８６、Ｐ２８７、Ｎ２８８、Ｐ２８９、Ｅ２９０、およびＶ３４１を含む。
【0042】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットは、配列番号１のＹ２６０、Ｙ２６４、Ｓ２６５、Ｎ２６６、Ｈ２６７、Ａ２７０、Ｉ２７１、Ｓ２７２、Ｐ２７３、Ｇ２７４、Ｍ２７５、Ｋ２７６、Ｒ２７８、Ｉ２７９、Ｅ２８５、Ｆ２８６、Ｐ２８７、Ｎ２８８、Ｐ２８９、Ｅ２９０、Ｖ３４１、Ｅ３４７、Ｒ３４８、Ｅ３５０、Ｄ３５１、Ｖ３５２、Ｅ３５４、Ｅ３５５、Ｓ３５８、Ａ３５９、およびＴ３６２からなる群より選択される配列番号１の１個またはこれより多くのアミノ酸残基（例えば、１個のアミノ酸、２個のアミノ酸、３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、５個のアミノ酸、６個のアミノ酸、７個のアミノ酸、８個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１０個のアミノ酸またはこれより多く）を含む。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２のＣローブドメインおよびＣ末端調節ドメインに位置する結合ポケットは、アミノ酸残基Ｙ２６０、Ｙ２６４、Ｓ２６５、Ｎ２６６、Ｈ２６７、Ａ２７０、Ｉ２７１、Ｓ２７２、Ｐ２７３、Ｇ２７４、Ｍ２７５、Ｋ２７６、Ｒ２７８、Ｉ２７９、Ｅ２８５、Ｆ２８６、Ｐ２８７、Ｎ２８８、Ｐ２８９、Ｅ２９０、Ｖ３４１、Ｅ３４７、Ｒ３４８、Ｅ３５０、Ｄ３５１、Ｖ３５２、Ｅ３５４、Ｅ３５５、Ｓ３５８、Ａ３５９、およびＴ３６２を含む。
【0043】
ある特定の実施形態において、上記結合ポケットは、配列番号１のアミノ酸残基Ｙ２６０とＴ３６２との間に位置する。ある特定の実施形態において、上記結合ポケットは、配列番号１のアミノ酸残基Ｅ２９０とＤ３５１との間に位置する。
表１．
表１．
【表1】
【0044】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、約－１ｋｃａｌもしくはこれより小さい、約－１．５ｋｃａｌもしくはこれより小さい、約－２ｋｃａｌもしくはこれより小さい、約－２．５ｋｃａｌもしくはこれより小さい、約－３ｋｃａｌもしくはこれより小さい、約－３．５ｋｃａｌもしくはこれより小さい、約－４ｋｃａｌもしくはこれより小さい、約－４．５ｋｃａｌもしくはこれより小さい、約－５ｋｃａｌまたはこれより低い， 約－５．５ｋｃａｌもしくはこれより小さい、約－６ｋｃａｌもしくはこれより小さい、約－６．５ｋｃａｌもしくはこれより小さい、約－７ｋｃａｌもしくはこれより小さい、約－７．５ｋｃａｌもしくはこれより小さい、または約－８ｋｃａｌもしくはこれより小さい結合親和性を有する結合ポケットに結合する。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、約－５ｋｃａｌまたはこれより低い結合親和性を有する結合ポケットに結合する。
【0045】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、他のキナーゼよりＭＫ２に対して選択的である。
【0046】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、表２に示される任意の化合物またはその薬学的に受容可能な塩から選択されるＭＫ２アクチベーターである。
【0047】
ＭＫ２アクチベーターの例としては、フルメリドン、ザルダリド、メトフェナザート、Ｃｉ－９８８、Ａｃ－４８０、カミシナル、ネツピタント、カソピタント、エリノグレル、シヌペロン、シポニモド、ファシチバント、バルマスチン、モセチノスタット、アベキシノスタット、Ｂｍｓ－８３３９２３、グリカラミド、アファシフェナシン、マゾカリム、Ａｍｇ－５１７、Ｐｆ－０３７５８３０９、ロミタピド、スルファマゾン、ラルチトレキセド、ムブリチニブ、ゾスキダル、エロピプラゾール、クロカプラミン、カペセロド、オキサフルマジン、フルペンチキソール、パリペリドン、チオスピロン、セルチンドール、ペロスピロン、ジプラシドン、マレイン酸イコペジル、ロスラジン、ロルピプラゾール、メスピペロン、ニアプラジン、ビフェプラミド、ペラキンシン、ベンチピミン、グリシンダマイド、ドラフラジン、Ｂｇｔ－２２６、ロメトレキソール、イソメタミジウム、テゴブビル、セピモスタット、サペルコナゾール、ピクロキシジン、Ａｚｄ３５１４、ボキシジン、アルタピゾン、フロトレニジン、ジフルアニン、ビフェプロフェン、ロルシナドール、ピパマジン、イミドカルブ、Ｌｙ－２５８４７０２、フルドキソポン、クロドキソポン、エルバニジン、テゾセンタン、Ａｇ－１３９５８、ゲムシタビン、ラマトロバン、ソネピプラゾール、タファミジス、ベルルカスト、ロピジン、ロトリフェン、ミオフラジン、タロトレキシン、チフラミゾール、トレフェンタニル、アサピプラント、リドフラジン、ルザドラン、プレラデナント、メディバジン、デラビルジン、ピフルチキソール、エベルコナゾール、テネリグリプチン、ダルトロバン、デラコキシブ、レレノプリド、およびアバガセスタットが挙げられるが、これらに限定されない。ＭＫ２アクチベーターの他の例としては、Ａｍｇ－５４８、Ｃｅｐ－３２４９６（アゲラフェニブ）、Ｇｓｋ－１０７０９１６、Ｇｓｋ－４６１３６４、Ａｍｇ－ ９００、Ｍｋ－６５９２、Ｍｋ－８０３３、Ａｚｄ－１７７５（アダボセルチブ）、Ｒ４２８（ベムセンチニブ）、Ｘｌ－２２８、Ｔａｋ－９０１、Ｃｈｉｒ－２６５、バフェチニブ、Ｃｃ－４０１、ニロチニブ、ラドチニブ、ゴルバチニブ、Ａｓｔ－４８７、Ｅｎｍｄ－２０７６、レフルノミド、Ｘｌ－０１９、およびトレニジンが挙げられるが、これらに限定されない。
【0048】
本発明のＭＫ２アクチベーターの他の例は、例えば、Ｌａｇａｒｄｅら， Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．， ２０１８， ９（６４）， ３２３４６－３２３６１； Ｗｉｓｈａｒｔら， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， ２０１８， ４６（Ｄ１）， Ｄ１０７４－Ｄ１０８２； Ｕｒｓｕら， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２０１９， ４７（Ｄ１）， Ｄ９６３－Ｄ９７０； Ｓｉｒａｍｓｈｅｔｔｙら， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， ２０１８， ４６（Ｄ１）， Ｄ１１３７－Ｄ１１４３；およびＭｅｎｄｅｚら， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， ２０１９， ４７（Ｄ１）， Ｄ９３０－Ｄ９４０（これらの各々は、それらの全体において本明細書に参考として援用される）において見出され得る。
【0049】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、セピモスタット、ビフェプラミド、カペセロド、ビフェプロフェン、ロルシナドール、スルファマゾン、アルタピゾン、ザルダリド、ネツピタント、カソピタント、ピパマジン、サペルコナゾール、バルマスチン、Ｂｇｔ－２２６、イミドカルブ、エロピプラゾール、オキサフルマジン、フルペンチキソール、クロカプラミン、パリペリドン、チオスピロン、セルチンドール、ペロスピロン、ジプラシドン、ピクロキシジン、Ａｍｇ－５４８、Ｃｅｐ－３２４９６、Ｇｓｋ－１０７０９１６、Ｇｓｋ－４６１３６４、Ｌｙ－２５８４７０２、フルドキソポン、クロドキソポン、Ａｍｇ－９００、Ｍｋ－６５９２、Ｍｋ－８０３３、Ａｚｄ－１７７５、ムブリチニブ、モセチノスタット、Ｐｆ－３７５８３０９、Ｒ４２８、ラルチトレキセド、ＸＬ２２８、Ａｚｄ３５１４、エリノグレル、Ｔａｋ－９０１、Ｃｈｉｒ－２６５、バフェチニブ、Ａｃ－４８０、Ｃｃ－４０１、ニロチニブ、ラドチニブ、ゴルバチニブ、アベキシノスタット、Ａｓｔ－４８７、Ｅｎｍｄ－２０７６、Ｂｍｓ－８３３９２３、ドラフラジン、テゾセンタン、ロメトレキソール、シヌペロン、イコペジル、エルバニジン、グリシンダマイド、カミシナル、テゴブビル、フルメリドン、ロミタピド、マゾカリム、ロスラジン、ペラキンシン、レフルノミド、アファシフェナシン、Ａｇ－１３９５８、ロルピプラゾール、シポニモド、メスピペロン、ＸＬ０１９、ベンチピミン、ゾスキダル、ファシチバント、Ａｍｇ－５１７、Ｃｉ－９８８、ボキシジン、グリカラミド、ニアプラジン、イソメタミジウム、メトフェナザート、トレニジン、フロトレニジン、ジフルアニン、ラマトロバン、ソネピプラゾール、タファミジス、ベルルカスト、ロピジン、ロトリフェン、ミオフラジン、タロトレキシン、チフラミゾール、トレフェンタニル、アサピプラント、リドフラジン、ルザドラン、プレラデナント、メディバジン、デラビルジン、ピフルチキソール、エベルコナゾール、テネリグリプチン、ダルトロバン、デラコキシブ、レレノプリド、アバガセスタット、ドロプロピジン、レボドロプロピジン、ＭＫ２－ＡＰ、ナファモスタット、およびこれらの薬学的に受容可能な塩からなる群より選択される。
【0050】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、セピモスタット、ビフェプラミド、カペセロド、ビフェプロフェン、ロルシナドール、スルファマゾン、アルタピゾン、ザルダリド、ネツピタント、カソピタント、ピパマジン、サペルコナゾール、バルマスチン、Ｂｇｔ－２２６、イミドカルブ、エロピプラゾール、オキサフルマジン、フルペンチキソール、クロカプラミン、パリペリドン、チオスピロン、セルチンドール、ペロスピロン、ジプラシドン、ピクロキシジン、Ａｍｇ－５４８、Ｃｅｐ－３２４９６、Ｇｓｋ－１０７０９１６、Ｇｓｋ－４６１３６４、Ｌｙ－２５８４７０２、フルドキソポン、クロドキソポン、Ａｍｇ－９００、Ｍｋ－６５９２、Ｍｋ－８０３３、Ａｚｄ－１７７５、ムブリチニブ、モセチノスタット、Ｐｆ－３７５８３０９、Ｒ４２８、ラルチトレキセド、ＸＬ２２８、Ａｚｄ３５１４、エリノグレル、Ｔａｋ－９０１、Ｃｈｉｒ－２６５、バフェチニブ、Ａｃ－４８０、Ｃｃ－４０１、ニロチニブ、ラドチニブ、ゴルバチニブ、アベキシノスタット、Ａｓｔ－４８７、Ｅｎｍｄ－２０７６、Ｂｍｓ－８３３９２３、ドラフラジン、テゾセンタン、ロメトレキソール、シヌペロン、マレイン酸イコペジル、エルバニジン、グリシンダマイド、カミシナル、テゴブビル、フルメリドン、ロミタピド、マゾカリム、ロスラジン、ペラキンシン、レフルノミド、アファシフェナシン、Ａｇ－１３９５８、ロルピプラゾール、シポニモド、メスピペロン、ＸＬ０１９、ベンチピミン、ゾスキダル、ファシチバント、Ａｍｇ－５１７、Ｃｉ－９８８、ボキシジン、グリカラミド、ニアプラジン、イソメタミジウム、メトフェナザート、トレニジン、フロトレニジン、ジフルアニン、ラマトロバン、ソネピプラゾール、タファミジス、ベルルカスト、ロピジン、ロトリフェン、ミオフラジン、タロトレキシン、チフラミゾール、トレフェンタニル、アサピプラント、リドフラジン、ルザドラン、プレラデナント、メディバジン、デラビルジン、ピフルチキソール、エベルコナゾール、テネリグリプチン、ダルトロバン、デラコキシブ、レレノプリド、アバガセスタット、ドロプロピジン、レボドロプロピジン、ＭＫ２－ＡＰ、ナファモスタットメシル酸塩、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【0051】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、セピモスタット、ビフェプラミド、カペセロド、ビフェプロフェン、ロルシナドール、スルファマゾン、アルタピゾン、ザルダリド、ネツピタント、カソピタント、ピパマジン、サペルコナゾール、バルマスチン、Ｂｇｔ－２２６、イミドカルブ、エロピプラゾール、オキサフルマジン、フルペンチキソール、クロカプラミン、パリペリドン、チオスピロン、セルチンドール、ペロスピロン、ジプラシドン、ピクロキシジン、Ａｍｇ－５４８、Ｃｅｐ－３２４９６、Ｇｓｋ－１０７０９１６、Ｇｓｋ－４６１３６４、Ｌｙ－２５８４７０２、フルドキソポン、クロドキソポン、Ａｍｇ－９００、Ｍｋ－６５９２、Ｍｋ－８０３３、Ａｚｄ－１７７５、ムブリチニブ、モセチノスタット、Ｐｆ－３７５８３０９、Ｒ４２８、ラルチトレキセド、ＸＬ２２８、Ａｚｄ３５１４、エリノグレル、Ｔａｋ－９０１、Ｃｈｉｒ－２６５、バフェチニブ、Ａｃ－４８０、Ｃｃ－４０１、ニロチニブ、ラドチニブ、ゴルバチニブ、アベキシノスタット、Ａｓｔ－４８７、Ｅｎｍｄ－２０７６、Ｂｍｓ－８３３９２３、ドラフラジン、テゾセンタン、ロメトレキソール、シヌペロン、イコペジル、エルバニジン、グリシンダマイド、カミシナル、テゴブビル、フルメリドン、ロミタピド、マゾカリム、ロスラジン、ペラキンシン、レフルノミド、アファシフェナシン、Ａｇ－１３９５８、ロルピプラゾール、シポニモド、メスピペロン、ＸＬ０１９、ベンチピミン、ゾスキダル、ファシチバント、Ａｍｇ－５１７、Ｃｉ－９８８、ボキシジン、グリカラミド、ニアプラジン、イソメタミジウム、メトフェナザート、トレニジン、フロトレニジン、ジフルアニン、ラマトロバン、ソネピプラゾール、タファミジス、ベルルカスト、ロピジン、ロトリフェン、ミオフラジン、タロトレキシン、チフラミゾール、トレフェンタニル、アサピプラント、リドフラジン、ルザドラン、プレラデナント、メディバジン、デラビルジン、ピフルチキソール、エベルコナゾール、テネリグリプチン、ダルトロバン、デラコキシブ、レレノプリド、アバガセスタット、およびこれらの薬学的に受容可能な塩からなる群より選択される。
【0052】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、セピモスタット、ビフェプラミド、カペセロド、ビフェプロフェン、ロルシナドール、スルファマゾン、アルタピゾン、ザルダリド、ネツピタント、カソピタント、ピパマジン、サペルコナゾール、バルマスチン、Ｂｇｔ－２２６、イミドカルブ、エロピプラゾール、オキサフルマジン、フルペンチキソール、クロカプラミン、パリペリドン、チオスピロン、セルチンドール、ペロスピロン、ジプラシドン、ピクロキシジン、Ａｍｇ－５４８、Ｃｅｐ－３２４９６、Ｇｓｋ－１０７０９１６、Ｇｓｋ－４６１３６４、Ｌｙ－２５８４７０２、フルドキソポン、クロドキソポン、Ａｍｇ－９００、Ｍｋ－６５９２、Ｍｋ－８０３３、Ａｚｄ－１７７５、ムブリチニブ、モセチノスタット、Ｐｆ－３７５８３０９、Ｒ４２８、ラルチトレキセド、ＸＬ２２８、Ａｚｄ３５１４、エリノグレル、Ｔａｋ－９０１、Ｃｈｉｒ－２６５、バフェチニブ、Ａｃ－４８０、Ｃｃ－４０１、ニロチニブ、ラドチニブ、ゴルバチニブ、アベキシノスタット、Ａｓｔ－４８７、Ｅｎｍｄ－２０７６、Ｂｍｓ－８３３９２３、ドラフラジン、テゾセンタン、ロメトレキソール、シヌペロン、マレイン酸イコペジル、エルバニジン、グリシンダマイド、カミシナル、テゴブビル、フルメリドン、ロミタピド、マゾカリム、ロスラジン、ペラキンシン、レフルノミド、アファシフェナシン、Ａｇ－１３９５８、ロルピプラゾール、シポニモド、メスピペロン、ＸＬ０１９、ベンチピミン、ゾスキダル、ファシチバント、Ａｍｇ－５１７、Ｃｉ－９８８、ボキシジン、グリカラミド、ニアプラジン、イソメタミジウム、メトフェナザート、トレニジン、フロトレニジン、ジフルアニン、ラマトロバン、ソネピプラゾール、タファミジス、ベルルカスト、ロピジン、ロトリフェン、ミオフラジン、タロトレキシン、チフラミゾール、トレフェンタニル、アサピプラント、リドフラジン、ルザドラン、プレラデナント、メディバジン、デラビルジン、ピフルチキソール、エベルコナゾール、テネリグリプチン、ダルトロバン、デラコキシブ、レレノプリド、アバガセスタット、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【0053】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、セピモスタット、ビフェプラミド、カペセロド、ビフェプロフェン、ロルシナドール、スルファマゾン、アルタピゾン、ザルダリド、ネツピタント、カソピタント、ピパマジン、サペルコナゾール、バルマスチン、Ｂｇｔ－２２６、イミドカルブ、エロピプラゾール、オキサフルマジン、フルペンチキソール、クロカプラミン、パリペリドン、チオスピロン、セルチンドール、ペロスピロン、ジプラシドン、ピクロキシジン、Ｌｙ－２５８４７０２、フルドキソポン、クロドキソポン、ムブリチニブ、モセチノスタット、Ｐｆ－３７５８３０９、ラルチトレキセド、Ａｚｄ３５１４、エリノグレル、Ａｃ－４８０、アベキシノスタット、Ｂｍｓ－８３３９２３、ドラフラジン、テゾセンタン、ロメトレキソール、シヌペロン、マレイン酸イコペジル、エルバニジン、グリシンダマイド、カミシナル、テゴブビル、フルメリドン、ロミタピド、マゾカリム、ロスラジン、ペラキンシン、アファシフェナシン、Ａｇ－１３９５８、ロルピプラゾール、シポニモド、メスピペロン、ベンチピミン、ゾスキダル、ファシチバント、Ａｍｇ－５１７、Ｃｉ－９８８、ボキシジン、グリカラミド、ニアプラジン、イソメタミジウム、メトフェナザート、フロトレニジン、ジフルアニン、ラマトロバン、ソネピプラゾール、タファミジス、ベルルカスト、ロピジン、ロトリフェン、ミオフラジン、タロトレキシン、チフラミゾール、トレフェンタニル、アサピプラント、リドフラジン、ルザドラン、プレラデナント、メディバジン、デラビルジン、ピフルチキソール、エベルコナゾール、テネリグリプチン、ダルトロバン、デラコキシブ、レレノプリド、アバガセスタット、およびこれらの薬学的に受容可能な塩からなる群より選択される。
【0054】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、セピモスタット、ビフェプラミド、カペセロド、ビフェプロフェン、ロルシナドール、スルファマゾン、アルタピゾン、ザルダリド、ネツピタント、カソピタント、ピパマジン、サペルコナゾール、バルマスチン、Ｂｇｔ－２２６、イミドカルブ、エロピプラゾール、オキサフルマジン、フルペンチキソール、クロカプラミン、パリペリドン、チオスピロン、セルチンドール、ペロスピロン、ジプラシドン、ピクロキシジン、Ｌｙ－２５８４７０２、フルドキソポン、クロドキソポン、ムブリチニブ、モセチノスタット、Ｐｆ－３７５８３０９、ラルチトレキセド、Ａｚｄ３５１４、エリノグレル、Ａｃ－４８０、アベキシノスタット、Ｂｍｓ－８３３９２３、ドラフラジン、テゾセンタン、ロメトレキソール、シヌペロン、マレイン酸イコペジル、エルバニジン、グリシンダマイド、カミシナル、テゴブビル、フルメリドン、ロミタピド、マゾカリム、ロスラジン、ペラキンシン、アファシフェナシン、Ａｇ－１３９５８、ロルピプラゾール、シポニモド、メスピペロン、ベンチピミン、ゾスキダル、ファシチバント、Ａｍｇ－５１７、Ｃｉ－９８８、ボキシジン、グリカラミド、ニアプラジン、イソメタミジウム、メトフェナザート、フロトレニジン、ジフルアニン、ラマトロバン、ソネピプラゾール、タファミジス、ベルルカスト、ロピジン、ロトリフェン、ミオフラジン、タロトレキシン、チフラミゾール、トレフェンタニル、アサピプラント、リドフラジン、ルザドラン、プレラデナント、メディバジン、デラビルジン、ピフルチキソール、エベルコナゾール、テネリグリプチン、ダルトロバン、デラコキシブ、レレノプリド、アバガセスタット、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【0055】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、アベキシノスタット（ＰＣＩ－２４７８１）、Ａｃ－４８０（ＢＭＳ－５９９６２６）、アダボセルチブ（ＭＫ－１７７５）、Ａｇ－１３９５８、Ａｍｇ－５１７、Ａｍｇ－９００、アサピプラント、Ａｓｔ－４８７（ＮＶＰ－ＡＳＴ４８７）、アバガセスタット（ＢＭＳ－７０８１６３）、Ａｚｄ３５１４、ＢＡＦ３１２（シポニモド）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ－４０６）、ベムセンチニブ（Ｒ４２８）、Ｂｇｔ－２２６（ＮＶＰ－ＢＧＴ２２６）、Ｂｍｓ－８３３９２３、Ｃｃ－４０１、Ｃｅｐ－３２４９６、デラビルジン、デラコキシブ、ドロプロピジン、Ｅｎｍｄ－２０７６、フルペンチキソール、ゴルバチニブ、Ｇｓｋ－１０７０９１６、Ｇｓｋ－４６１３６４、イミドカルブ、レフルノミド、レボドロプロピジン、ロミタピド、Ｌｙ－２５８４７０２、ＭＫ２－ＡＰ、モセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）、ムブリチニブ（ＴＡＫ １６５）、ナファモスタットメシル酸塩、ネツピタント、ニロチニブ（ＡＭＮ－１０７）、パリペリドン、ペロスピロン、Ｐｆ－３７５８３０９、プレラデナント、ラドチニブ、ＲＡＦ２６５（Ｃｈｉｒ－２６５）、ラルチトレキセド、ラマトロバン、タファミジス、Ｔａｋ－９０１、テゴブビル、テネリグリプチン、ＸＬ０１９、ＸＬ２２８、ジプラシドン、ゾスキダル（ＬＹ３３５９７９）、およびこれらの薬学的に受容可能な塩からなる群より選択される。
【0056】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、アベキシノスタット（ＰＣＩ－２４７８１）、Ａｃ－４８０（ＢＭＳ－５９９６２６）、アダボセルチブ（ＭＫ－１７７５）、Ａｇ－１３９５８、Ａｍｇ－５１７、Ａｍｇ－９００、アサピプラント、Ａｓｔ－４８７（ＮＶＰ－ＡＳＴ４８７）、アバガセスタット（ＢＭＳ－７０８１６３）、Ａｚｄ３５１４、ＢＡＦ３１２（シポニモド）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ－４０６）、ベムセンチニブ（Ｒ４２８）、Ｂｇｔ－２２６（ＮＶＰ－ＢＧＴ２２６）、Ｂｍｓ－８３３９２３、Ｃｃ－４０１塩酸塩、Ｃｅｐ－３２４９６、デラビルジン（ｍｅｓｙｌａｔｅ）、デラコキシブ、ドロプロピジン、Ｅｎｍｄ－２０７６、フルペンチキソール二塩酸塩、ゴルバチニブ、Ｇｓｋ－１０７０９１６、Ｇｓｋ－４６１３６４、イミドカルブジプロピオン酸塩、レフルノミド、レボドロプロピジン、ロミタピド、Ｌｙ－２５８４７０２、ＭＫ２－ＡＰ（バッチ＃２）、モセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）、ムブリチニブ（ＴＡＫ １６５）、ナファモスタットメシル酸塩、ネツピタント、ニロチニブ（ＡＭＮ－１０７）、パリペリドン、ペロスピロン塩酸塩、Ｐｆ－３７５８３０９、プレラデナント、ラドチニブ、ＲＡＦ２６５（Ｃｈｉｒ－２６５）、ラルチトレキセド、ラマトロバン、タファミジス、Ｔａｋ－９０１、テゴブビル、テネリグリプチン臭化水素酸塩、ＸＬ０１９、ＸＬ２２８、ジプラシドンＨＣｌ、ゾスキダル（ＬＹ３３５９７９） ３ＨＣｌ、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【0057】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、ロミタピド、ペロスピロン、アベキシノスタット、ＡＧ－１３９５８、レボドロプロピジン、ニロチニブ、ＡＭＧ－９００、ＡＭＧ－５１７、デラビルジン、Ｂｇｔ－２２６、モセチノスタット、タファミジス、ＸＬ０１９、ラドチニブ、ジプラシドン、ムブリチニブ、ラマトロバン、デラコキシブ、ラルチトレキセド、ＧＳＫ４６１３６４、アダボセルチブ、テゴブビル、およびこれらの薬学的に受容可能な塩からなる群より選択される。
【0058】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、ロミタピド、ペロスピロン、アベキシノスタット、ＡＧ－１３９５８、レボドロプロピジン、ニロチニブ、ＡＭＧ－９００、ＡＭＧ－５１７、デラビルジン、Ｂｇｔ－２２６、モセチノスタット、タファミジス、ＸＬ０１９、ラドチニブ、ジプラシドン、ムブリチニブ、ラマトロバン、デラコキシブ、ラルチトレキセド、ＧＳＫ４６１３６４、アダボセルチブ、テゴブビル、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。
【0059】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、レフルノミド、ネツピタント、パリペリドン、ロミタピド、ペロスピロン、およびこれらの薬学的に受容可能な塩からなる群より選択される。
【0060】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、レフルノミド、ネツピタント、パリペリドン、ロミタピド、ペロスピロン塩酸塩、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される。
表２． ＭＫ２アクチベーター化合物のリスト
表２． ＭＫ２アクチベーター化合物のリスト
【表2-1】
【表2-2】
【表2-3】
【表2-4】
【0061】
別の局面において、ＭＫ２アクチベーターまたはその薬学的に受容可能な塩を含む組成物が、本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターまたはその薬学的に受容可能な塩（例えば、表２に示される任意の化合物から選択されるＭＫ２アクチベーター）である。
【0062】
種々の実施形態において、本明細書で記載される組成物は、血管障害または内皮バリア障害の処置、予防およびリスクの低減のために有用であり得る。
【0063】
本開示の組成物は、必要性のある患者において本明細書で記載される障害（例えば、血管障害、内皮バリア障害）の１またはこれより多くの症状を改善するために十分な量において投与され得る。
【0064】
種々の実施形態において、治療上有効な量の本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターを含む、血管障害または内皮バリア障害の処置のための組成物が、本明細書で提供される。
【0065】
さらに、本明細書で提供される組成物は、種々の経路（経口（経腸）投与、非経口（注射による）投与、直腸投与、経皮投与、皮内投与、髄腔内投与、皮下（ＳＣ）投与、静脈内（ＩＶ）投与、筋肉内（ＩＭ）投与、吸入、噴霧化、および鼻内投与が挙げられるが、これらに限定されない）によって投与され得る。
【0066】
ある特定の実施形態において、上記組成物は、静脈内に、経口的に、皮下に、または筋肉内に投与される。ある特定の実施形態において、上記組成物は、静脈内投与される。ある特定の実施形態において、上記組成物は、経口投与される。ある特定の実施形態において、上記組成物は、非経口投与される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、長期的に投与される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、連続的に（例えば、連続静脈内注入によって）投与される。
【0067】
さらに、本明細書で提供される組成物は、正確な投与を容易にするために単位投与形態において提示され得る。用語「単位投与形態」とは、ヒト被験体および他の哺乳動物のために単位投与量として適切な物理的に不連続の単位であって、各々の単位は、適切な薬学的賦形剤と会合した状態で、所望の治療効果を生じるために計算された活性物質の所定の量を含むものに言及する。
【0068】
別の局面において、治療上有効な量の本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターを含む、血管障害または内皮バリア障害の処置のための単位投与形態が、本明細書で提供される。
【0069】
薬学的組成物
１つの局面において、ＭＫ２アクチベーターまたはその薬学的に受容可能な塩、および薬学的に受容可能な賦形剤を含む薬学的組成物が、本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターまたはその薬学的に受容可能な塩（例えば、表２に示される任意の化合物から選択されるＭＫ２アクチベーター）である。
１つの局面において、ＭＫ２アクチベーターまたはその薬学的に受容可能な塩、および薬学的に受容可能な賦形剤を含む薬学的組成物が、本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターまたはその薬学的に受容可能な塩（例えば、表２に示される任意の化合物から選択されるＭＫ２アクチベーター）である。
【0070】
種々の実施形態において、本明細書で記載される薬学的組成物は、血管障害または内皮バリア障害の処置、予防およびリスクの低減のために有用であり得る。
【0071】
本開示の薬学的組成物は、必要性のある患者において本明細書で記載される障害（例えば、血管障害、内皮バリア障害）の１またはこれより多くの症状を改善するために十分な量において投与され得る。
【0072】
ある特定の実施形態において、本開示のＭＫ２アクチベーターは、上記薬学的組成物において有効量で提供される。ある特定の実施形態において、本開示のＭＫ２アクチベーターは、治療上有効な量で提供される。
【0073】
種々の実施形態において、治療上有効な量の本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターを含む、血管障害または内皮バリア障害の処置のための薬学的組成物が、本明細書で提供される。
【0074】
本明細書で提供される薬学的組成物は、種々の経路（経口（経腸）投与、非経口（注射による）投与、直腸投与、経皮投与、皮内投与、髄腔内投与、皮下（ＳＣ）投与、静脈内（ＩＶ）投与、筋肉内（ＩＭ）投与、吸入、噴霧化、および鼻内投与が挙げられるが、これらに限定されない）によって投与され得る。
【0075】
別の局面において、本開示は、本開示の組成物および薬学的に受容可能な賦形剤を含む薬学的組成物（例えば、静脈内（ＩＶ）投与のような注射に適した組成物）を提供する。
【0076】
ある特定の実施形態において、上記薬学的組成物は、静脈内に、経口的に、皮下に、または筋肉内に投与される。ある特定の実施形態において、上記薬学的組成物は、静脈内投与される。ある特定の実施形態において、上記薬学的組成物は、経口投与される。ある特定の実施形態において、上記薬学的組成物は、非経口投与される。いくつかの実施形態において、上記薬学的組成物は、長期的に投与される。いくつかの実施形態において、上記薬学的組成物は、連続的に（例えば、連続静脈内注入によって）投与される。
【0077】
さらに、本明細書で記載される薬学的組成物は、正確な投与を容易にするために単位投与形態において提示され得る。
【0078】
本明細書で提供される薬学的組成物の記載は、ヒトへの投与に適した薬学的組成物に主に関するが、このような組成物が、全ての種類の動物への投与に概して適していることは、当業者によって理解される。種々の動物への投与に適した組成物にするためのヒトへの投与に適した薬学的組成物の改変は、十分に理解され、通常の技術を持った獣医薬理学者は、通常の実験でこのような改変を設計および／または実施し得る。薬学的組成物の製剤化および／または製造における一般的な考慮事項は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ 第２１版， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， ２００５に見出され得る。
【0079】
使用および処置の方法
本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターは、本明細書で記載される障害に罹患している患者を処置するにあたって有用であり得る。例えば、本開示の方法は、内皮バリアを増強するために、低分子ヒートショックタンパク質ＨＳＰ－２７のリン酸化の活性化に有用であり得る。よって、本開示の方法は、例えば、血管障害または内皮バリア障害（例えば、急性呼吸窮迫症候群）に罹患している患者を処置するために有用であり得る。処置され得る障害の例は、以下に記載される。
本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーターは、本明細書で記載される障害に罹患している患者を処置するにあたって有用であり得る。例えば、本開示の方法は、内皮バリアを増強するために、低分子ヒートショックタンパク質ＨＳＰ－２７のリン酸化の活性化に有用であり得る。よって、本開示の方法は、例えば、血管障害または内皮バリア障害（例えば、急性呼吸窮迫症候群）に罹患している患者を処置するために有用であり得る。処置され得る障害の例は、以下に記載される。
【0080】
種々の実施形態において、本明細書で記載される障害に罹患している患者を処置する方法であって、上記方法は、治療上有効な量の本明細書で記載されるＭＫ２アクチベーター（例えば、表２に示される任意の化合物から選択されるＭＫ２アクチベーター）を上記患者に投与する工程を包含する方法が、本明細書で提供される。
【0081】
本開示の一局面は、血管障害、例えば、血管炎、血管漏出障害、腹部大動脈瘤、アテローム性動脈硬化症、頚動脈疾患／頚動脈狭窄、慢性静脈不全、間欠性跛行、深部静脈血栓症、末梢血管疾患、肺塞栓症、肺高血圧症、脳虚血、脳卒中、レイノー現象、腎血管疾患、胸部大動脈瘤、心臓発作、および拡張蛇行静脈に罹患している患者を処置する方法を提供する。特に、ある特定の実施形態において、本開示は、治療上有効な量のＭＫ２アクチベーターを必要性のある患者に投与する工程を包含する、以下の医学的適応症を処置する方法を提供する。
【0082】
ある特定の実施形態において、上記血管障害は、血管漏出障害である。
【0083】
種々の実施形態において、上記血管障害は、内皮と関連する。ある特定の実施形態において、上記血管障害は、内皮バリア障害である。ある特定の実施形態において、上記内皮バリア障害は、微小血管バリア漏出障害である。
【0084】
ある特定の実施形態において、上記血管障害は、血管炎である。いくつかの実施形態において、上記血管炎は、大血管炎、中血管炎、および小血管炎からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記大血管炎は、高安動脈炎および側頭動脈炎から選択される。いくつかの実施形態において、上記中血管炎は、バージャー病、川崎病、および結節性多発動脈炎からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記小血管炎は、ベーチェット症候群、多発血管炎を伴う好酸球性肉芽腫症（チャーグ－ストラウス症候群としても公知）、皮膚血管炎、多発血管炎を伴う肉芽腫症、ヘノッホシェーライン紫斑病、および顕微鏡的多発血管炎からなる群より選択される。ある特定の実施形態において、上記好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（チャーグ－ストラウス症候群としても公知）は、急性呼吸窮迫症候群と関連する。ある特定の実施形態において、上記多発血管炎性肉芽腫症は、肺炎と関連する。
【0085】
いくつかの実施形態において、上記血管障害は、ウイルスと関連する（例えば、ウイルスによって誘導される）。ある特定の実施形態において、上記血管障害は、ＲＮＡウイルス、ＤＮＡウイルス、コロナウイルス、パピローマウイルス、ニューモウイルス、インフルエンザウイルス、アデノ随伴ウイルス、アデノウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、アルファウイルス、ブンヤウイルス（例えば、ハンタウイルス）、フィロウイルス（例えば、エボラウイルス）、およびアルボウイルス（例えば、黄熱ウイルス、デングウイルス）からなる群より選択されるウイルスと関連する（例えば、ウイルスによって誘導される）。ある特定の実施形態において、上記血管障害は、コロナウイルスと関連する（例えば、コロナウイルスによって誘導される）。いくつかの実施形態において、上記血管障害と関連するコロナウイルスは、２２９Ｅアルファコロナウイルス、ＮＬ６３アルファコロナウイルス、ＯＣ４３ベータコロナウイルス、ＨＫＵ１ベータコロナウイルス、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、および新型コロナウイルス感染症２０１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはＣＯＶＩＤ－１９）からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記血管障害と関連するコロナウイルスは、ＣＯＶＩＤ－１９である。
【0086】
他の実施形態において、上記ウイルスは、カナリア痘ウイルス、ウシ伝染性鼻腔気管炎ウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス、パラインフルエンザ３ウイルス、ウシＲＳウイルス、ネコカリシウイルス、クラミジアウイルス、イヌコロナウイルス、汎血球減少症ウイルス、ネコ白血病ウイルス、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、およびＣ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ－１）および２型（ＨＩＶ－２）、サイトメガロウイルス、ヒトＴリンパ向性ウイルスＩ型（ＨＴＬＶ－Ｉ）およびＩＩ型（ＨＴＬＶ－ＩＩ）、脳炎ウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＲＳウイルス、ロタウイルス、天然痘ウイルス、腸チフスワクチンウイルス、水痘ウイルス、ならびに黄熱ワクチンウイルスからなる群より選択される。
【0087】
実施形態において、上記血管障害は、細菌と関連する（例えば、細菌によって誘導される）。ある特定の実施形態において、上記細菌は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、嫌気性菌、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ（炭疽）、およびグラム陰性生物からなる群より選択される。
【0088】
本開示の別の局面は、内皮バリア障害、例えば、微小血管バリア漏出障害、血管バリア漏出障害、血管バリア障害、および消化管障害に罹患している患者を処置する方法を提供する。ある特定の実施形態において、上記微小血管バリア漏出障害は、炎症性腸疾患、脳浮腫、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、および肺浮腫からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記血管バリア漏出障害は、アテローム性動脈硬化症、高血圧症、妊娠高血圧腎症、および川崎病からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記内皮バリア障害は、血管バリア障害である。いくつかの実施形態において、上記血管バリア障害は、線維芽細胞関連障害である。いくつかの実施形態において、上記線維芽細胞関連障害は、創傷治癒、肺線維症、肺線維症、肝線維症、血管線維症、腎線維症、および組織リモデリングからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記消化管障害は、セリアック病、便秘、クローン病、下痢、憩室症、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、痔核および裂肛、過敏性腸症候群、乳糖不耐症、吸収不良症候群、ポリープおよび大腸がん、消化性潰瘍疾患（ＰＵＤ）、潰瘍性大腸炎、および嘔吐からなる群より選択される。特に、ある特定の実施形態において、本開示は、治療上有効な量のＭＫ２アクチベーターを必要性のある患者に投与する工程を包含する、以下の医学的適応症を処置する方法を提供する。
【0089】
種々の実施形態において、上記内皮バリア障害は、内皮バリアの過剰透過性と関連する。いくつかの実施形態において、上記内皮バリアの過剰透過性は、ＣＯＶＩＤ－１９と関連する（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９によって誘導される）。いくつかの実施形態において、上記内皮バリアの過剰透過性は、急性呼吸窮迫症候群と関連する。いくつかの実施形態において、上記過剰透過性内皮バリアは、急性肺傷害と関連する。
【0090】
いくつかの実施形態において、上記内皮バリア障害は、ウイルスと関連する（例えば、ウイルスによって誘導される）。ある特定の実施形態において、上記過剰透過性内皮バリアは、ウイルスと関連する（例えば、ウイルスによって誘導される）。例えば、上記ウイルスは、ＲＮＡウイルス、ＤＮＡウイルス、コロナウイルス、パピローマウイルス、ニューモウイルス、インフルエンザウイルス、アデノ随伴ウイルス、アデノウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、アルファウイルス、ブンヤウイルス（例えば、ハンタウイルス）、フィロウイルス（例えば、エボラウイルス）、およびアルボウイルス（例えば、黄熱ウイルス、デングウイルス）からなる群より選択される。ある特定の実施形態において、上記内皮バリア障害は、コロナウイルスと関連する。いくつかの実施形態において、上記内皮バリア障害と関連するコロナウイルスは、２２９Ｅアルファコロナウイルス、ＮＬ６３アルファコロナウイルス、ＯＣ４３ベータコロナウイルス、ＨＫＵ１ベータコロナウイルス、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、および新型コロナウイルス感染症２０１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはＣＯＶＩＤ－１９）からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記内皮バリア障害と関連するコロナウイルスは、ＣＯＶＩＤ－１９である。
【0091】
他の実施形態において、上記ウイルスは、カナリア痘ウイルス、ウシ伝染性鼻腔気管炎ウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス、パラインフルエンザ３ウイルス、ウシＲＳウイルス、ネコカリシウイルス、クラミジアウイルス、イヌコロナウイルス、汎血球減少症ウイルス、ネコ白血病ウイルス、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、およびＣ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ－１）および２型（ＨＩＶ－２）、サイトメガロウイルス、ヒトＴリンパ向性ウイルスＩ型（ＨＴＬＶ－Ｉ）およびＩＩ型（ＨＴＬＶ－ＩＩ）、脳炎ウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＲＳウイルス、ロタウイルス、天然痘ウイルス、腸チフスワクチンウイルス、水痘ウイルス、ならびに黄熱ワクチンウイルスからなる群より選択される。
【0092】
実施形態において、上記内皮バリア障害は、細菌と関連する（例えば、細菌によって誘導される）。ある特定の実施形態において、上記過剰透過性内皮バリアは、細菌と関連する（例えば、細菌によって誘導される）。ある特定の実施形態において、上記細菌は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、嫌気性菌、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ（炭疽）、およびグラム陰性生物からなる群より選択される。
【0093】
種々の実施形態において、急性呼吸窮迫症候群に罹患している患者を処置する方法が、本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、治療上有効な量のＭＫ２アクチベーターを上記患者に投与する工程を包含する、急性呼吸窮迫症候群に罹患している患者を処置する方法が、本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、上記急性呼吸窮迫症候群は、ウイルスと関連する（例えば、ウイルスによって誘導される）。いくつかの実施形態において、上記急性呼吸窮迫症候群は、ＲＮＡウイルス、ＤＮＡウイルス、コロナウイルス、パピローマウイルス、ニューモウイルス、インフルエンザウイルス、アデノ随伴ウイルス、アデノウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス、レンチウイルスおよびアルファウイルスからなる群より選択されるウイルスと関連する（例えば、ウイルスによって誘導される）。いくつかの実施形態において、上記急性呼吸窮迫症候群と関連するコロナウイルスは、２２９Ｅアルファコロナウイルス、ＮＬ６３アルファコロナウイルス、ＯＣ４３ベータコロナウイルス、ＨＫＵ１ベータコロナウイルス、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、および新型コロナウイルス感染症２０１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはＣＯＶＩＤ－１９）からなる群より選択される。ある特定の実施形態において、上記急性呼吸窮迫症候群は、ＣＯＶＩＤ－１９と関連する（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９によって誘導される）。
【0094】
種々の実施形態において、急性肺傷害に罹患している患者を処置する方法が、本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、治療上有効な量のＭＫ２アクチベーターを上記患者に投与する工程を包含する、急性肺傷害に罹患している患者を処置する方法が、本明細書で提供される。ある特定の実施形態において、上記急性肺傷害は、ウイルスと関連する（例えば、ウイルスによって誘導される）。いくつかの実施形態において、上記急性肺傷害は、ＲＮＡウイルス、ＤＮＡウイルス、コロナウイルス、パピローマウイルス、ニューモウイルス、インフルエンザウイルス、アデノ随伴ウイルス、アデノウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、およびアルファウイルスからなる群より選択されるウイルスと関連する（例えば、ウイルスによって誘導される）。いくつかの実施形態において、上記急性肺傷害と関連するコロナウイルスは、２２９Ｅアルファコロナウイルス、ＮＬ６３アルファコロナウイルス、ＯＣ４３ベータコロナウイルス、ＨＫＵ１ベータコロナウイルス、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、および新型コロナウイルス感染症２０１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはＣＯＶＩＤ－１９）からなる群より選択される。ある特定の実施形態において、上記急性肺傷害は、ＣＯＶＩＤ－１９と関連する（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９によって誘導される）。
【0095】
ある特定の実施形態において、上記方法は、本明細書で記載されるとおりの組成物を、血管障害または内皮バリア障害の１またはこれより多くの症状を改善するために十分な量において上記患者に投与する工程を包含する。
【0096】
ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、上記患者に静脈内投与される。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、上記患者に経口投与される。ある特定の実施形態において、上記ＭＫ２アクチベーターは、上記患者に非経口的に投与される。
【0097】
ある特定の実施形態において、上記患者は、ヒトである。
【0098】
定義
本発明の理解を容易にするために、多くの用語および語句が、以下で定義される。
本発明の理解を容易にするために、多くの用語および語句が、以下で定義される。
【0099】
別段定義されなければ、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で使用される略語は、化学分野および生物学分野内のそれらの従来の意味を有する。本明細書で示される化学構造および式は、化学分野において公知の化学価の標準的規則に従って構築される。
【0100】
本出願において、要素または構成要素は、記載される要素もしくは構成要素のリスト中に含まれるおよび／またはリストから選択されるといわれ、上記要素もしくは構成要素が、上記記載される要素もしくは構成要素のうちのいずれか１つであり得るか、または上記要素もしくは構成要素が、上記記載される要素もしくは構成要素のうちの２またはこれより多くのものからなる群より選択され得ることは、理解されるべきである。
【0101】
さらに、本明細書で記載される組成物または方法の要素および／または特徴が、本明細書で明示的であろうが暗示的であろうが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の方法において組み合わされ得ることは、理解されるべきである。例えば、特定の化合物に言及がなされる場合、その化合物は、文脈から別段理解されなければ、本発明の組成物および／または本発明の方法の種々の実施形態において使用され得る。言い換えると、本出願内では、実施形態は、明確かつ簡潔な出願が書面で書かれ、描かれることを可能にする方法で記載されかつ示されているが、実施形態が本教示および本発明から分かれることなく、種々に組み合わされ得るかまたは分離され得ることが、意図されかつ認識される。例えば、本明細書で記載され、示される全ての特徴が、本明細書で記載され、示される発明の全ての局面に適用可能であり得ることは、認識される。
【0102】
用語「１つの、ある（ａ）」および「１つの、ある（ａｎ）」は、本明細書で使用される場合、「１またはこれより多い（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」を意味し、文脈が不適切でなければ、複数を含む。
【0103】
表現「のうちの少なくとも１つ（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ ｏｆ）」が、その文脈および使用から別段理解されなければ、上記表現に関するその記載される対象の各個々およびその記載される対象のうちの２またはこれより多くのものの種々の組み合わせを含むことは、理解されるべきである。３またはこれより多くの記載される対象に関連する表現「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」とは、文脈から別段理解されなければ、同じ意味を有すると理解されるべきである。
【0104】
用語「約（ａｂｏｕｔ）」の使用は、定量的値の前である場合、本発明はまた、別段具体的に述べられなければ、その具体的な定量的値自体を含む。本明細書で使用される場合、用語「約」とは、別段示されるかまたは文脈から暗示されなければ、公称値から±１０％の変動に言及する。
【0105】
本明細書で使用される場合、用語「障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」「疾患（ｄｉｓｅａｓｅ）」および「状態（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）」は、交換可能に使用される。
【0106】
本明細書で使用される場合、用語「有効（な）量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」とは、有益なまたは所望の結果をもたらすために十分な組成物（例えば、本発明の液体の薬学的製剤）の量に言及する。有効量は、１回またはこれより多くの投与、適用または投与量において投与され得、特定の製剤または投与経路に限定されるとは意図されない。
【0107】
用語「包含する、含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「包含する、含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む、包含する（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む、含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含む、含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、または「含む、含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、その文法上の等価物を含め、オープンエンドの（ｏｐｅｎ－ｅｎｄｅｄ）および非限定的、例えば、別段具体的に述べられなければまたは文脈から理解されなければ、さらなる記載されていない要素または工程を排除しないとして、概して理解されるべきである。
【0108】
任意のおよび全ての例、または本明細書中の例示的な文言、例えば、「のような、例えば（ｓｕｃｈ ａｓ）」または「が挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の使用は、本発明をよりよく例証することが意図されるに過ぎず、特許請求されなければ、本発明の範囲に対する限定を課さない。本明細書中のいかなる文言も、任意の特許請求されていない要素を本発明の実施に必須であると示されるとは解釈されるべきでない。
【0109】
本明細書で使用される場合、「薬学的に受容可能な（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）」とは、毒性学観点から薬学的適用における使用に関して受容可能であり、活性成分と有害に相互作用しない物質に言及する。よって、薬学的に受容可能なキャリアは、製剤中の他の成分と適合性であり、生物学的に受容可能なものである。ある特定の実施形態において、補助的な活性成分はまた、上記薬学的組成物へと組み込まれ得る。
【0110】
本明細書で使用される場合、「薬学的に受容可能な賦形剤（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）」とは、被験体への活性薬剤の投与および被験体による吸収を助け、患者に対して顕著で有害な毒性効果を引き起こすことなく本発明の組成物中に含まれ得る物質に言及する。薬学的に受容可能な賦形剤の非限定的な例としては、水、ＮａＣｌ、通常生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水、エマルジョン（例えば、油／水または水／油エマルジョンのような）、乳酸添加リンゲル液、通常のスクロース、通常のグルコース、結合剤、充填剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング、甘味料、フレーバー、塩類溶液（例えば、リンゲル液）、アルコール、油、ゼラチン、炭水化物（例えば、ラクトース、アミロースまたはデンプン）、脂肪酸エステル、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、および着色料などが挙げられる。このような調製物は、滅菌され得、所望であれば、本発明の化合物と有害に反応しない補助物質（例えば、滑沢剤、保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼすための塩類、緩衝液、着色物質、および／または芳香性の物質などと混合され得る。賦形剤およびキャリアの例に関しては、Ｍａｒｔｉｎ， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， 第１５版， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌ． Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡ（１９７５）を参照のこと。
【0111】
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に受容可能なキャリア（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ ｃａｒｒｉｅｒ）」とは、標準的な薬学的キャリア（例えば、リン酸緩衝化生理食塩水、水、エマルジョン（例えば、油／水または水／油エマルジョンのような）、および種々のタイプの湿潤剤のうちのいずれかに言及する。上記組成物はまた、安定化剤および保存剤を含み得る。キャリア、安定化剤およびアジュバントの例に関しては、Ｍａｒｔｉｎ， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， 第１５版， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌ． Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡ ［１９７５］を参照のこと。
【0112】
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に受容可能な塩（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ ｓａｌｔ）」とは、被験体への投与の際に、本発明の化合物またはその活性な代謝産物もしくは残留物を提供し得る、本発明の化合物の任意の薬学的に受容可能な塩（例えば、酸または塩基）に言及する。当業者に公知であるように、本発明の化合物の「塩（ｓａｌｔ）」は、無機酸もしくは有機酸または無機塩基もしくは有機塩基から得られ得る。酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン－ｐ－スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などが挙げられるが、これらに限定されない。他の酸（例えば、シュウ酸）は、それ自体では薬学的に受容可能でないが、本発明の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な酸付加塩を得るにあたって、中間体として有用な塩の調製において使用され得る。
【0113】
本明細書で使用される場合、用語「被験体（ｓｕｂｊｅｃｔ）」および患者（ｐａｔｉｅｎｔ）」とは、本明細書で記載される方法および／または組成物によって処置されるべき生物に言及する。このような生物は、好ましくは、哺乳動物（例えば、マウス、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）、およびより好ましくはヒトである。
【0114】
本明細書で使用される場合、用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、および「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、状態、疾患、障害などの改善を生じるか、またはその症状を改善する任意の効果（例えば、減少させる、低減する、調節する、改善するまたは排除する）を含む。
【0115】
語句「治療上有効な量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ－ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」とは、本明細書で使用される場合、被験体においてある所望の治療効果を生じるために有効な組成物（例えば、本発明の液体の薬学的製剤）のその量を意味する。
【実施例】
【0116】
実施例
本明細書で記載される開示が、より十分に理解され得るために、以下の実施例が示される。本出願において記載される実施例は、本明細書で提供される化合物、薬学的組成物、および方法を例証するために提供され、それらの範囲を限定するとは決して解釈されるべきではない。
本明細書で記載される開示が、より十分に理解され得るために、以下の実施例が示される。本出願において記載される実施例は、本明細書で提供される化合物、薬学的組成物、および方法を例証するために提供され、それらの範囲を限定するとは決して解釈されるべきではない。
【0117】
実施例１： ＭＫ２ループ構築法
小さな触媒部位インヒビターと共結晶化したＭＫ２キナーゼの結晶構造（ＰＤＢ ＩＤ： ３ＫＡ０）（ＰＭＩＤ １９９１９８９６）における３つの欠損ループ - 残基１５３～１５８（ＲＧＤＱＡＦ（配列番号４））、２１５～２３８（ＴＳＨＮＳＬＴＴＰＣＹＴＰＹＹＶＡＰＥＶＬＧＰＥ（配列番号５））、および２６５～２７３（ＳＮＨＧＬＡＩＳＰ（配列番号６）） － を、双方向Ｓｕｐｅｒｌｏｏｐｅｒ２ウェブサーバー（参照： ｐｕｂｍｅｄ ｉｄ： ＰＭＩＤ： ２７１０５８４７）を使用して構築した。
小さな触媒部位インヒビターと共結晶化したＭＫ２キナーゼの結晶構造（ＰＤＢ ＩＤ： ３ＫＡ０）（ＰＭＩＤ １９９１９８９６）における３つの欠損ループ - 残基１５３～１５８（ＲＧＤＱＡＦ（配列番号４））、２１５～２３８（ＴＳＨＮＳＬＴＴＰＣＹＴＰＹＹＶＡＰＥＶＬＧＰＥ（配列番号５））、および２６５～２７３（ＳＮＨＧＬＡＩＳＰ（配列番号６）） － を、双方向Ｓｕｐｅｒｌｏｏｐｅｒ２ウェブサーバー（参照： ｐｕｂｍｅｄ ｉｄ： ＰＭＩＤ： ２７１０５８４７）を使用して構築した。
【0118】
次いで、移植したループは、ＧＲＯＭＡＣＳ ｖ５．１．３ 独立型パッケージ（参照： Ａｂｒａｈａｍ Ｍ．Ｊ．， Ｍｕｒｔｏｌａ Ｔ．， Ｓｃｈｕｌｚ Ｒ．， Ｐaｌｌ Ｓ．， Ｓｍｉｔｈ Ｊ．Ｃ．， Ｈｅｓｓ Ｂ．， Ｌｉｎｄａｈｌ Ｅ． ＧＲＯＭＡＣＳ： Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｍｕｌｔｉ－ｌｅｖｅｌ ｐａｒａｌｌｅｌｉｓｍ ｆｒｏｍ ｌａｐｔｏｐｓ ｔｏ ｓｕｐｅｒｃｏｍｐｕｔｅｒｓ． ＳｏｆｔｗａｒｅＸ． ２０１５；１：１９－２５． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｓｏｆｔｘ．２０１５．０６．００１．）で最急降下法アルゴリズム（ｔｈｅ ｓｔｅｅｐｅｓｔ ｄｅｓｃｅｎｔ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）を用いて真空中で最初にエネルギー最小化されたが、残りのタンパク質原子は、固定されたままであった。
【0119】
実施例２： ＭＫ２ループ改良法
次いで、初期モデル構造を、（追加される対イオンの正確な数で）溶媒和化し、実行の異なる開始点を得るために、一連の８回のＭＤシミュレーション（Ｎ，物質量、Ｖ，容積、Ｔ，温度カノニカルアンサンブル）を通じてＧＲＯＭＡＣＳにおいてさらに平衡化した（各１回は、５００ピコ秒の継続時間にわたり、異なる初期パラメーター（温度、サーモスタット、および／または相互作用カットオフ半径（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｃｕｔｏｆｆ ｒａｄｉｕｓ））を用いる）。次いで、上記ループ構造の各１つに対してＮＰＴ実行（等温－等圧アンサンブル、Ｐは圧力）を行い、続いて、４回のナノ秒シミュレーションを、同じパラメーターを使用して行った。次いで、その得られた構造を全て、システムの最終的なエネルギーおよび構造安定性に対するＲａｍａｃｈａｎｄｒａｎプロットに関して評価した。本研究においてモデル化を必要とした上記３つのループ（ＲＧＤＱＡＦ（配列番号４）、ＴＳＨＮＳＬＴＴＰＣＹＴＰＹＹＶＡＰＥＶＬＧＰＥ（配列番号５）、およびＳＮＨＧＬＡＩＳＰ（配列番号６））に関する都合の良いＲａｍａｃｈａｎｄｒａｎプロットを有する最低エネルギー構造を、最終モデルのために選択した。
次いで、初期モデル構造を、（追加される対イオンの正確な数で）溶媒和化し、実行の異なる開始点を得るために、一連の８回のＭＤシミュレーション（Ｎ，物質量、Ｖ，容積、Ｔ，温度カノニカルアンサンブル）を通じてＧＲＯＭＡＣＳにおいてさらに平衡化した（各１回は、５００ピコ秒の継続時間にわたり、異なる初期パラメーター（温度、サーモスタット、および／または相互作用カットオフ半径（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｃｕｔｏｆｆ ｒａｄｉｕｓ））を用いる）。次いで、上記ループ構造の各１つに対してＮＰＴ実行（等温－等圧アンサンブル、Ｐは圧力）を行い、続いて、４回のナノ秒シミュレーションを、同じパラメーターを使用して行った。次いで、その得られた構造を全て、システムの最終的なエネルギーおよび構造安定性に対するＲａｍａｃｈａｎｄｒａｎプロットに関して評価した。本研究においてモデル化を必要とした上記３つのループ（ＲＧＤＱＡＦ（配列番号４）、ＴＳＨＮＳＬＴＴＰＣＹＴＰＹＹＶＡＰＥＶＬＧＰＥ（配列番号５）、およびＳＮＨＧＬＡＩＳＰ（配列番号６））に関する都合の良いＲａｍａｃｈａｎｄｒａｎプロットを有する最低エネルギー構造を、最終モデルのために選択した。
【0120】
実施例３： ＭＫ２活性化ペプチドドッキング法
ＣＡＢＳ－ドック独立型パッケージ（ＰＭＩＤ： ３１６８２３０１； ＰＭＩＤ： ３０８６５２５８）およびＭＤｏｃｋＰｅＰサーバーを使用して、正に荷電した活性化ペプチド、ＹＡＲＡＡＡＲＱＡＲＡＨＰＲＮＰＡＲＲＴＰＧＴＲＲＧＡＰＡＡ（配列番号７）（ＰＭＩＤ： ２６０６６８２７）をＭＫ２モデル構造の表面にドッキングした。
ＣＡＢＳ－ドック独立型パッケージ（ＰＭＩＤ： ３１６８２３０１； ＰＭＩＤ： ３０８６５２５８）およびＭＤｏｃｋＰｅＰサーバーを使用して、正に荷電した活性化ペプチド、ＹＡＲＡＡＡＲＱＡＲＡＨＰＲＮＰＡＲＲＴＰＧＴＲＲＧＡＰＡＡ（配列番号７）（ＰＭＩＤ： ２６０６６８２７）をＭＫ２モデル構造の表面にドッキングした。
【0121】
１． ＣＡＢＳドック独立型アプリケーションでのペプチドドッキング
ドッキングプロトコールは、４つの工程からなった： 第１に、ＭＫ２レセプター構造を、ＣＡＢＳ粗視化表現（ｃｏａｒｓｅ－ｇｒａｉｎｅｄ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）に変換した（単一のアミノ酸が４個までの原子またはシュード原子（ｐｓｅｕｄｏ－ａｔｏｍ）によって提示される）。次に、無作為のペプチド構造を、包括的なペプチドコンホメーションのライブラリーから無作為に選択し（粗視化表現の同じタイプをまた、そのペプチドのために使用し）、レセプター表面から２０Åの適切な距離においてＭＫ２レセプターの周りの無作為の位置に配置した。そのＭＫ２ ３Ｄ構造および上記ペプチドを、シミュレーションの間にフレキシブルと見做す。第２に、ドッキングしたペプチドのフィルタリングは、その計算されたＣＡＢＳ ＭＫ２－ペプチド相互作用エネルギー値に基づいた（１００００の低エネルギーモデルを、ドッキングシミュレーションの間に生成した１０００のコンホメーションから選択した）。第３に、最終的なモデルのグラスター化およびスコア付け（上位１００個のスコアのモデルを、１０００の低エネルギーモデルから選択した）。第４に、全原子表示への１０の最終的な最良のＭＫ２－ペプチドモデルの再構築を行った。その得られたＭＫ２－ペプチド構造を、ＭａｅｓｔｒｏおよびＰｙＭｏｌにおいて視覚的に調べた。
ドッキングプロトコールは、４つの工程からなった： 第１に、ＭＫ２レセプター構造を、ＣＡＢＳ粗視化表現（ｃｏａｒｓｅ－ｇｒａｉｎｅｄ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）に変換した（単一のアミノ酸が４個までの原子またはシュード原子（ｐｓｅｕｄｏ－ａｔｏｍ）によって提示される）。次に、無作為のペプチド構造を、包括的なペプチドコンホメーションのライブラリーから無作為に選択し（粗視化表現の同じタイプをまた、そのペプチドのために使用し）、レセプター表面から２０Åの適切な距離においてＭＫ２レセプターの周りの無作為の位置に配置した。そのＭＫ２ ３Ｄ構造および上記ペプチドを、シミュレーションの間にフレキシブルと見做す。第２に、ドッキングしたペプチドのフィルタリングは、その計算されたＣＡＢＳ ＭＫ２－ペプチド相互作用エネルギー値に基づいた（１００００の低エネルギーモデルを、ドッキングシミュレーションの間に生成した１０００のコンホメーションから選択した）。第３に、最終的なモデルのグラスター化およびスコア付け（上位１００個のスコアのモデルを、１０００の低エネルギーモデルから選択した）。第４に、全原子表示への１０の最終的な最良のＭＫ２－ペプチドモデルの再構築を行った。その得られたＭＫ２－ペプチド構造を、ＭａｅｓｔｒｏおよびＰｙＭｏｌにおいて視覚的に調べた。
【0122】
２． ＭＤｏｃｋＰｅＰサーバーでのペプチドドッキング
結合ドッキング実験を、ＭＤｏｃｋＰｅＰ ａｂ－ｉｎｉｔｉｏタンパク質－ペプチドドッキングサーバー（ＭＤｏｃｋＰｅＰ ａｂ－ｉｎｉｔｉｏ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｅｐｔｉｄｅ ｄｏｃｋｉｎｇ ｓｅｒｖｅｒ）（ＰＭＩＤ： ３０３６８８４９）で行った。第１に、ＭＤｏｃｋＰｅＰサーバーは、モノマータンパク質からの類似配列フラグメントに基づいて、本発明者らの入力ペプチドに関して３個までの非冗長配座（ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ ｃｏｎｆｏｒｍｅｒ）をモデル化した。次に、そのモデル化したペプチド配座を、ＡｕｔｏＤｏｃｋＶｉｎａパッケージ（ＰＭＩＤ： １９４９９５７６）の改変バージョンを使用して、全体のＭＫ２タンパク質へと独立してドッキングした。その検索のグリッドボックスを、三次元においてタンパク質構造の座標の最小および最大両方へ２０Å拡げることによって定義した。次いで、上記ペプチド配座を、グリッドボックス内に１０５の並進および回転の外形を無作為に生成することによって、全体のタンパク質に厳密にドッキングする。これらの予備モデルを、Ｖｉｎａスコア付け機能を使用して、最初にランク付けした。次いで、フレキシブルサンプリングを、最良のＶｉｎａドッキングスコアを有するドッキングしたペプチドモデルのために行った。ペプチド中の全ての回転可能な結合を、サンプリングの間にフレキシブルとして処理した。この段階で、異なる初期ペプチド配座から生成した全てのこれらの初期結合モードを、組み合わせ、次いで、ＩＴＳｃｏｒｅＰｅＰ（ＰＭＩＤ： ２７６４２１６０）（タンパク質－ペプチドドッキングのために具体的に開発した統計ポテンシャルベースのスコア付け機能）で計算したエネルギースコアに従って再ランク付けした。タンパク質とペプチドとの間の両方の相互作用からの寄与（スコア間（ｉｎｔｅｒ－ｓｃｏｒｅ））およびペプチド内の非隣接残基間の相互作用（スコア内（ｉｎｔｒａ－ｓｃｏｒｅ））を、スコア付け機能において考慮する。次いで、上位１００個の結合モードを、ＰｙＭｏｌ分子グラフィクスパッケージで双方向に分析した。
結合ドッキング実験を、ＭＤｏｃｋＰｅＰ ａｂ－ｉｎｉｔｉｏタンパク質－ペプチドドッキングサーバー（ＭＤｏｃｋＰｅＰ ａｂ－ｉｎｉｔｉｏ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｅｐｔｉｄｅ ｄｏｃｋｉｎｇ ｓｅｒｖｅｒ）（ＰＭＩＤ： ３０３６８８４９）で行った。第１に、ＭＤｏｃｋＰｅＰサーバーは、モノマータンパク質からの類似配列フラグメントに基づいて、本発明者らの入力ペプチドに関して３個までの非冗長配座（ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ ｃｏｎｆｏｒｍｅｒ）をモデル化した。次に、そのモデル化したペプチド配座を、ＡｕｔｏＤｏｃｋＶｉｎａパッケージ（ＰＭＩＤ： １９４９９５７６）の改変バージョンを使用して、全体のＭＫ２タンパク質へと独立してドッキングした。その検索のグリッドボックスを、三次元においてタンパク質構造の座標の最小および最大両方へ２０Å拡げることによって定義した。次いで、上記ペプチド配座を、グリッドボックス内に１０５の並進および回転の外形を無作為に生成することによって、全体のタンパク質に厳密にドッキングする。これらの予備モデルを、Ｖｉｎａスコア付け機能を使用して、最初にランク付けした。次いで、フレキシブルサンプリングを、最良のＶｉｎａドッキングスコアを有するドッキングしたペプチドモデルのために行った。ペプチド中の全ての回転可能な結合を、サンプリングの間にフレキシブルとして処理した。この段階で、異なる初期ペプチド配座から生成した全てのこれらの初期結合モードを、組み合わせ、次いで、ＩＴＳｃｏｒｅＰｅＰ（ＰＭＩＤ： ２７６４２１６０）（タンパク質－ペプチドドッキングのために具体的に開発した統計ポテンシャルベースのスコア付け機能）で計算したエネルギースコアに従って再ランク付けした。タンパク質とペプチドとの間の両方の相互作用からの寄与（スコア間（ｉｎｔｅｒ－ｓｃｏｒｅ））およびペプチド内の非隣接残基間の相互作用（スコア内（ｉｎｔｒａ－ｓｃｏｒｅ））を、スコア付け機能において考慮する。次いで、上位１００個の結合モードを、ＰｙＭｏｌ分子グラフィクスパッケージで双方向に分析した。
【0123】
実施例４： ＭＫ２分子表面分析および結合ポケット推定法
静電エネルギー計算（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ）を、正に荷電したペプチドとの相互作用に関して重要であり得る推定の強い電気陰性結合溝を検索するために、Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｐｏｉｓｓｏｎ－Ｂｏｌｔｚｍａｎｎ Ｓｏｌｖｅｒ（ＡＰＢＳ）（ＰＭＩＤ： ２８８３６３５７）で計算した。低分子に関するありそうな結合ポケットの推定を、Ｐ２Ｒａｎｋ（ＰＭＩＤ： ３０１０９４３５）（推定リガンド結合部位を提案するための機械学習ベースのツール）で行った。ＭＫ２ ３Ｄ構造を入力として使用し、上位５個の推定ポケットを、静電エネルギー計算結果（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎｓ）および上記で言及した全表面ペプチドドッキング実験に鑑みて、双方向に調査した。
静電エネルギー計算（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ）を、正に荷電したペプチドとの相互作用に関して重要であり得る推定の強い電気陰性結合溝を検索するために、Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｐｏｉｓｓｏｎ－Ｂｏｌｔｚｍａｎｎ Ｓｏｌｖｅｒ（ＡＰＢＳ）（ＰＭＩＤ： ２８８３６３５７）で計算した。低分子に関するありそうな結合ポケットの推定を、Ｐ２Ｒａｎｋ（ＰＭＩＤ： ３０１０９４３５）（推定リガンド結合部位を提案するための機械学習ベースのツール）で行った。ＭＫ２ ３Ｄ構造を入力として使用し、上位５個の推定ポケットを、静電エネルギー計算結果（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎｓ）および上記で言及した全表面ペプチドドッキング実験に鑑みて、双方向に調査した。
【0124】
実施例５： 構造ベースの計算結果での薬物スクリーニングアッセイ
ＭＴｉＯｐｅｎＳｃｒｅｅｎウェブサーバーとＤｒｕｇｓ－ｌｉｂコレクション（ＰＭＩＤ： ３０１９０７９１ ＰＭＩＤ： ２５８５５８１２）とを使用し、ドッキングを、推定される最もありそうなＭＫ２ペプチド結合ポケットに対して行った。このサーバーは、構造ベースの仮想スクリーニングおよびスコア付けツール（ＰＭＩＤ： ２７０７７３３２）のためにＡｕｔｏＤｏｃｋ Ｖｉｎａを実行する。約２２，０００の承認薬および試験薬のリストを、ＤｒｕｇＢａｎｋ［ＰＭＩＤ： ２９１２６１３６］、ＤｒｕｇＣｅｎｔｒａｌ［ＰＭＩＤ： ３０３７１８９２］、ＳｕｐｅｒＤｒｕｇ２［ＰＭＩＤ： ２９１４０４６９］、およびＣｈＥＭＢＬ［ＰＭＩＤ： ３０３９８６４３］から得た。化合物のリストはまた、Ｄｒｕｇｓ－ｌｉｂコレクション［ＰＭＩＤ：３０１９０７９１］においても見出され得る。
ＭＴｉＯｐｅｎＳｃｒｅｅｎウェブサーバーとＤｒｕｇｓ－ｌｉｂコレクション（ＰＭＩＤ： ３０１９０７９１ ＰＭＩＤ： ２５８５５８１２）とを使用し、ドッキングを、推定される最もありそうなＭＫ２ペプチド結合ポケットに対して行った。このサーバーは、構造ベースの仮想スクリーニングおよびスコア付けツール（ＰＭＩＤ： ２７０７７３３２）のためにＡｕｔｏＤｏｃｋ Ｖｉｎａを実行する。約２２，０００の承認薬および試験薬のリストを、ＤｒｕｇＢａｎｋ［ＰＭＩＤ： ２９１２６１３６］、ＤｒｕｇＣｅｎｔｒａｌ［ＰＭＩＤ： ３０３７１８９２］、ＳｕｐｅｒＤｒｕｇ２［ＰＭＩＤ： ２９１４０４６９］、およびＣｈＥＭＢＬ［ＰＭＩＤ： ３０３９８６４３］から得た。化合物のリストはまた、Ｄｒｕｇｓ－ｌｉｂコレクション［ＰＭＩＤ：３０１９０７９１］においても見出され得る。
【0125】
分子を精選し、重複を除去し、フィルタリングを行って、ＦＡＦ－Ｄｒｕｇ４［ＰＭＩＤ： ２８９６１７８８］を使用して、記録された強い毒性因子（ｔｏｘｉｃｏｐｈｏｒｅ）を有する化合物を却下し、２０個未満の回転可能な結合および１０００Ｄａ未満のＭＷを有する分子を、試験のために同定した。Ｄｒｕｇｓ－ｌｉｂコレクションから、化学物質販売業者のカタログにおいて入手可能な分子を、試験のために同定し、これを、約４６００個の分子へとまとめた。上記化合物の滴定可能な基のプロトン化状態を、ＣｈｅｍＡｘｏｎ（ｈｔｔｐｓ：／／ｃｈｅｍａｘｏｎ．ｃｏｍ／）を使用して推定し、その３Ｄ構造をＣｏｒｉｎａ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｍｎ－ａｍ．ｃｏｍ／）を使用して構築した。次いで、上位１５００個の最良のドッキングスコアを考慮し、双方向に分析して、分子の選択をガイドした。
【0126】
実施例６：ＭＫ２アクチベーター薬物候補の同定
静電エネルギー計算結果は、アミノ酸３４５～３９０（配列番号８）と配列同一性を有する自己阻害ドメインの直ぐ下の触媒部位から離れて、ＭＫ２のＣローブドメインにある強い電気陰性溝を強調した。この領域は、本質的に、Ｅ２９０とＤ３５１との間に位置し、ＭＫ２－ｐ３８複合体の結晶構造（ＰＭＩＤ １７３９５７１４）において認められるように、ｐ３８αの結合境界面の近くにある。結合ポケット推定を行ったところ、上位３個の結合ポケットのうちの２つ（ポケット１および３）が、電気陰性であると推定された。ポケット１は、配列番号１のアミノ酸残基Ｍ２７５、Ｋ２７６、Ｉ２７９、Ｖ３５２、Ｅ３５４、Ｅ３５５、Ｓ３５８、Ａ３５９、およびＴ３６２を含む。ポケット３は、アミノ酸残基Ｙ２６０、Ｙ２６４、Ｓ２６５、Ｎ２６６、Ｈ２６７、Ｅ２８５、Ｆ２８６、Ｐ２８７、Ｎ２８８、Ｐ２８９、Ｅ２９０、およびＶ３４１を含む。２位にランク付けされた結合ポケットは、触媒部位に相当する。２つの完全表面ペプチドドッキングアルゴリズムを使用して、ＭＫ２表面にその活性化ペプチドを位置付けたところ、両方の方法が、最もあり得る結合部位が電気陰性溝の中にあると推定し、推定されたポケット１および３と並んだ。まとめると、これらの結果は、ポケット１および３の領域が、構造ベースの薬物再利用計算結果に使用され得ることを示唆した。ポケット１および３を、１個の検索ゾーンへと併合し、構造ベースの仮想スクリーニングをこの領域に対して実行した。この全体的なポケットに存在する配列番号１の残基は、Ｙ２６０、Ｙ２６４、Ｓ２６５、Ｎ２６６、Ｈ２６７、Ａ２７０、Ｉ２７１、Ｓ２７２、Ｐ２７３、Ｇ２７４、Ｍ２７５、Ｋ２７６、Ｒ２７８、Ｉ２７９、Ｅ２８５、Ｆ２８６、Ｐ２８７、Ｎ２８８、Ｐ２８９、Ｅ２９０、Ｖ３４１、Ｅ３４７、Ｒ３４８、Ｅ３５０、Ｄ３５１、Ｖ３５２、Ｅ３５４、Ｅ３５５、Ｓ３５８、Ａ３５９、およびＴ３６２を含む。上位１５００個のスコアを、コンピュータースクリーン上で双方向に分析し、その腔へと十分にフィットした上位１１５個の化合物および都合の良いドッキングスコアを有するものを、同定した（表３）。より良好なスコアを有するいくつかの化合物を無視した。なぜならそれらの結合姿勢およびＭＫ２アミノ酸との相互作用パターンが、ＰｙＭｏｌにおける３Ｄ可視化後にありそうにないことが見出されたからである。
表３．
静電エネルギー計算結果は、アミノ酸３４５～３９０（配列番号８）と配列同一性を有する自己阻害ドメインの直ぐ下の触媒部位から離れて、ＭＫ２のＣローブドメインにある強い電気陰性溝を強調した。この領域は、本質的に、Ｅ２９０とＤ３５１との間に位置し、ＭＫ２－ｐ３８複合体の結晶構造（ＰＭＩＤ １７３９５７１４）において認められるように、ｐ３８αの結合境界面の近くにある。結合ポケット推定を行ったところ、上位３個の結合ポケットのうちの２つ（ポケット１および３）が、電気陰性であると推定された。ポケット１は、配列番号１のアミノ酸残基Ｍ２７５、Ｋ２７６、Ｉ２７９、Ｖ３５２、Ｅ３５４、Ｅ３５５、Ｓ３５８、Ａ３５９、およびＴ３６２を含む。ポケット３は、アミノ酸残基Ｙ２６０、Ｙ２６４、Ｓ２６５、Ｎ２６６、Ｈ２６７、Ｅ２８５、Ｆ２８６、Ｐ２８７、Ｎ２８８、Ｐ２８９、Ｅ２９０、およびＶ３４１を含む。２位にランク付けされた結合ポケットは、触媒部位に相当する。２つの完全表面ペプチドドッキングアルゴリズムを使用して、ＭＫ２表面にその活性化ペプチドを位置付けたところ、両方の方法が、最もあり得る結合部位が電気陰性溝の中にあると推定し、推定されたポケット１および３と並んだ。まとめると、これらの結果は、ポケット１および３の領域が、構造ベースの薬物再利用計算結果に使用され得ることを示唆した。ポケット１および３を、１個の検索ゾーンへと併合し、構造ベースの仮想スクリーニングをこの領域に対して実行した。この全体的なポケットに存在する配列番号１の残基は、Ｙ２６０、Ｙ２６４、Ｓ２６５、Ｎ２６６、Ｈ２６７、Ａ２７０、Ｉ２７１、Ｓ２７２、Ｐ２７３、Ｇ２７４、Ｍ２７５、Ｋ２７６、Ｒ２７８、Ｉ２７９、Ｅ２８５、Ｆ２８６、Ｐ２８７、Ｎ２８８、Ｐ２８９、Ｅ２９０、Ｖ３４１、Ｅ３４７、Ｒ３４８、Ｅ３５０、Ｄ３５１、Ｖ３５２、Ｅ３５４、Ｅ３５５、Ｓ３５８、Ａ３５９、およびＴ３６２を含む。上位１５００個のスコアを、コンピュータースクリーン上で双方向に分析し、その腔へと十分にフィットした上位１１５個の化合物および都合の良いドッキングスコアを有するものを、同定した（表３）。より良好なスコアを有するいくつかの化合物を無視した。なぜならそれらの結合姿勢およびＭＫ２アミノ酸との相互作用パターンが、ＰｙＭｏｌにおける３Ｄ可視化後にありそうにないことが見出されたからである。
表３．
【表3-1】
【表3-2】
【表3-3】
【表3-4】
【0127】
実施例７： ウェスタンブロット分析によるＭＫ２結合アクチベーターの機能的活性の評価
推定ＭＫ２結合アクチベーターの機能的活性を評価するために、一連のこれらの化合物（すなわち、レフルノミド、ネツピタント、パリペリドン、ロミタピド、およびペロスピロン）を、ウェスタンブロット分析によって分析した。ラット微小血管内皮細胞を、３５ｍｍ組織培養ディッシュの中でコンフルエントになるまで増殖させた。上記細胞を、２０μＭ 濃度の推定ＭＫ２結合アクチベーターありまたはなしで、３０分間、３７℃において処理した。陽性コントロールとして、細胞ディッシュのうちの１つを、ＵＶ光に約１０分間曝した。次いで、上記細胞を、種々の抗タンパク質溶解薬剤を含む１％ ｔｒｉｔｏｎ溶液で溶解し、得られた溶解物を、４－１２％ アクリルアミド（Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ）ゲル上に載せ、電気泳動した。その分離したタンパク質バンドを、ＰＶＤＦ膜上に電気的に転写した。その膜を、先ず、５％ 脱脂粉乳中でブロッキングし、次いで、ウサギ抗ラットｐｈｏｓｐｈｏ－ＨＳＰ－２７または抗ラットＨＳＰ－２７（正規化コントロールとして）のいずれかでプローブし、続いて、検出用の二次抗ウサギＨＲＰ結合体でプローブした。その膜を洗浄し、化学発光基質で処理し、デジタル画像化し、続いて、デンシトメトリーによって定量化した。検出されたシグナルの強度は、試験した化合物のＭＫ２活性化効力に比例した。
推定ＭＫ２結合アクチベーターの機能的活性を評価するために、一連のこれらの化合物（すなわち、レフルノミド、ネツピタント、パリペリドン、ロミタピド、およびペロスピロン）を、ウェスタンブロット分析によって分析した。ラット微小血管内皮細胞を、３５ｍｍ組織培養ディッシュの中でコンフルエントになるまで増殖させた。上記細胞を、２０μＭ 濃度の推定ＭＫ２結合アクチベーターありまたはなしで、３０分間、３７℃において処理した。陽性コントロールとして、細胞ディッシュのうちの１つを、ＵＶ光に約１０分間曝した。次いで、上記細胞を、種々の抗タンパク質溶解薬剤を含む１％ ｔｒｉｔｏｎ溶液で溶解し、得られた溶解物を、４－１２％ アクリルアミド（Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ）ゲル上に載せ、電気泳動した。その分離したタンパク質バンドを、ＰＶＤＦ膜上に電気的に転写した。その膜を、先ず、５％ 脱脂粉乳中でブロッキングし、次いで、ウサギ抗ラットｐｈｏｓｐｈｏ－ＨＳＰ－２７または抗ラットＨＳＰ－２７（正規化コントロールとして）のいずれかでプローブし、続いて、検出用の二次抗ウサギＨＲＰ結合体でプローブした。その膜を洗浄し、化学発光基質で処理し、デジタル画像化し、続いて、デンシトメトリーによって定量化した。検出されたシグナルの強度は、試験した化合物のＭＫ２活性化効力に比例した。
【0128】
【0129】
図１の左にあるブロット画像（すなわち、Ｐｈｏｓｐｈｏ ＨＳＰ－２７と表示されたブロット画像）は、リン酸化ＨＳＰ－２７と関連したバンドを示すが、図１の右側のブロット（すなわち、ＨＳＰ－２７と表示されたブロット画像）は、リン酸化されていないＨＳＰ－２７に特異的なバンドを示す。上記ブロットの各レーンにおいて認められるその２つのバンドは、リン酸化ＨＳＰ－２７およびリン酸化されていないＨＳＰ－２７の両方のモノマー形態およびダイマー形態を表す。そのバンドの強度を、デンシトメトリーによって定量化し、次いで、各生の読み取りを、種々の処理条件にわたる溶解物負荷の任意の差を補正するために、リン酸化されていないＨＳＰ－２７のシグナル強度によって正規化した。これらの正規化した結果を、図２に示す。
【0130】
図２にプロットした結果は、ＵＶ照射によって細胞にストレスを与えた場合のコントロール（陽性コントロールとして使用）を超えて、リン酸化の＞３× 増大を明らかに示す。さらに、試験した５種の化合物のうち、ロミタピドは、ＨＳＰ－２７リン酸化の最強の増大を誘発した。
【0131】
実施例８： ＥＬＩＳＡ ＭＫ２細胞ベースの活性アッセイ
上記ＭＫ２アクチベーター候補（人工知能（ＡＩ）支援ドッキングアプローチを使用して同定）を、ＭＫ２標的に対するリード選択のために活性アッセイにおいて試験した。ＭＫ２活性化を、（ａ）ラット微小血管内皮細胞（ＲＭＶＥＣ）および（ｂ）ヒトがん皮膚線維芽細胞（Ｍａｌｍｅ－３Ｍ）を使用する細胞ベースのアッセイを使用して評価した。両方のアッセイにおいて、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）技術を試用して、（ＨＳＰ－２７）リン酸化（ＤＹＣ２３１４－２， Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を測定した。両方の細胞株を、９６ウェル組織培養プレートの中でコンフルエントになるまで増殖させ、３７℃において３０分間、２０μＭの濃度の試験化合物で処理した。その後、上記細胞を、０．５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００および抗タンパク質分解薬剤を含む溶解緩衝液で溶解した。次いで、その得られた溶解物を、抗ラットｐｈｏｓｐｈｏ－ＨＳＰ２７でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートに載せた。インキュベーションおよび洗浄の後、そのプレートを、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合体化抗ｐｈｏｓｐｈｏ－ＨＳＰ２７二次抗体で処理し、次いで、化学発光に関して測定した。ＭＫ２に対して作用する化合物の活性が高いほど、ＥＬＩＳＡによって測定されるように、ＨＳＰ－２７リン酸化のより高いレベルが誘導された。
上記ＭＫ２アクチベーター候補（人工知能（ＡＩ）支援ドッキングアプローチを使用して同定）を、ＭＫ２標的に対するリード選択のために活性アッセイにおいて試験した。ＭＫ２活性化を、（ａ）ラット微小血管内皮細胞（ＲＭＶＥＣ）および（ｂ）ヒトがん皮膚線維芽細胞（Ｍａｌｍｅ－３Ｍ）を使用する細胞ベースのアッセイを使用して評価した。両方のアッセイにおいて、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）技術を試用して、（ＨＳＰ－２７）リン酸化（ＤＹＣ２３１４－２， Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を測定した。両方の細胞株を、９６ウェル組織培養プレートの中でコンフルエントになるまで増殖させ、３７℃において３０分間、２０μＭの濃度の試験化合物で処理した。その後、上記細胞を、０．５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００および抗タンパク質分解薬剤を含む溶解緩衝液で溶解した。次いで、その得られた溶解物を、抗ラットｐｈｏｓｐｈｏ－ＨＳＰ２７でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートに載せた。インキュベーションおよび洗浄の後、そのプレートを、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合体化抗ｐｈｏｓｐｈｏ－ＨＳＰ２７二次抗体で処理し、次いで、化学発光に関して測定した。ＭＫ２に対して作用する化合物の活性が高いほど、ＥＬＩＳＡによって測定されるように、ＨＳＰ－２７リン酸化のより高いレベルが誘導された。
【0132】
上記ＥＬＩＳＡのｐｈｏｓｐｈｏ－ＨＳＰ２７標準曲線（２００ｐｇ／ｍＬまでの標準ｐｈｏｓｐｈｏ－ＨＳＰ２７を載せることによって作成）を、図３に示す。
【0133】
ＡＩ推定ＭＫ２アクチベーターのうちのいくつかの分析からの結果を、表４および表５に示す。
表４． ＲＭＶＥＣ細胞を使用する推定ＭＫ２アクチベーターの下位集団の分析のデータ
（ｔ） ＝ ３種の別個のかつ独立したアッセイにおいて分析した化合物
（ｄ） ＝ ２種の別個のかつ独立したアッセイにおいて分析した化合物
表４． ＲＭＶＥＣ細胞を使用する推定ＭＫ２アクチベーターの下位集団の分析のデータ
【表4-1】
【表4-2】
（ｄ） ＝ ２種の別個のかつ独立したアッセイにおいて分析した化合物
【0134】
多数のアッセイからの結果を有する化合物に関しては、平均応答を表４に示している。
表５． Ｍａｌｍｅ－３Ｍ細胞を使用する推定ＭＫ２アクチベーターの分析のデータ
表５． Ｍａｌｍｅ－３Ｍ細胞を使用する推定ＭＫ２アクチベーターの分析のデータ
【表5】
【0135】
ラット内皮細胞との比較において、ヒト皮膚線維芽細胞株で実質的により強い応答が観察された。全体的に、試験した化合物のうち、最も強い応答を示したものとしては、ロミタピド、ペロスピロン、アベキシノスタットおよびレボドロプロピジンが挙げられた。
【0136】
援用の表示
本出願は、種々の発行された特許、公開された特許出願、雑誌記事、および他の刊行物（その全てが本明細書に参考として援用される）に言及する。援用される参考文献のうちのいずれかと本明細書との間で矛盾が存在する場合には、本明細書が優先するものとする。さらに、先行技術内に入る本開示の任意の特定の実施形態は、特許請求の範囲のうちのいずれか１またはこれより多くのものから明示的に排除され得る。このような実施形態は、当業者に高地であると見做されることから、それらは、本明細書中で排除が明示的に示されないとしても、排除され得る。本開示の任意の特定の実施形態は、先行技術の存在に関連しようがしまいが、任意の理由から、任意の請求項から排除され得る。
本出願は、種々の発行された特許、公開された特許出願、雑誌記事、および他の刊行物（その全てが本明細書に参考として援用される）に言及する。援用される参考文献のうちのいずれかと本明細書との間で矛盾が存在する場合には、本明細書が優先するものとする。さらに、先行技術内に入る本開示の任意の特定の実施形態は、特許請求の範囲のうちのいずれか１またはこれより多くのものから明示的に排除され得る。このような実施形態は、当業者に高地であると見做されることから、それらは、本明細書中で排除が明示的に示されないとしても、排除され得る。本開示の任意の特定の実施形態は、先行技術の存在に関連しようがしまいが、任意の理由から、任意の請求項から排除され得る。
【0137】
均等物
本発明は、その趣旨または本質的な特徴から逸脱することなく、他の具体的形態において具現化され得る。従って、前述の実施形態は、本明細書に記載される発明ではなく、全ての点において例証と見做されるべきである。従って、本発明の範囲は、前述の説明によってではなく、添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の均等の意味および範囲内に入る全ての変更が、その中で具現化されることが意図される。
本発明は、その趣旨または本質的な特徴から逸脱することなく、他の具体的形態において具現化され得る。従って、前述の実施形態は、本明細書に記載される発明ではなく、全ての点において例証と見做されるべきである。従って、本発明の範囲は、前述の説明によってではなく、添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の均等の意味および範囲内に入る全ての変更が、その中で具現化されることが意図される。
【図1】
【図2】
【図3】
【配列表】
【国際調査報告】