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特表2024-542447脊髄性筋萎縮症の治療に使用する、ＳＭＮ発現を回復させるための有効成分と組み合わせたフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソン誘導体
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-11-15
(54)【発明の名称】脊髄性筋萎縮症の治療に使用する、ＳＭＮ発現を回復させるための有効成分と組み合わせたフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソン誘導体
(51)【国際特許分類】
A61K 45/06 20060101AFI20241108BHJP
C12N 15/113 20100101ALI20241108BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20241108BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241108BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20241108BHJP
A61K 31/7125 20060101ALI20241108BHJP
A61K 31/712 20060101ALI20241108BHJP
A61K 31/7115 20060101ALI20241108BHJP
A61K 31/57 20060101ALI20241108BHJP
【ＦＩ】
A61K45/06
C12N15/113 Z ZNA
A61P21/00
A61P43/00 121
A61K31/7088
A61K31/7125
A61K31/712
A61K31/7115
A61K31/57
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024528525
(86)(22)【出願日】2022-11-04
(85)【翻訳文提出日】2024-07-10
(86)【国際出願番号】 EP2022080839
(87)【国際公開番号】W WO2023083718
(87)【国際公開日】2023-05-19
(31)【優先権主張番号】2111920
(32)【優先日】2021-11-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】FR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】513285907
【氏名又は名称】ビオフィティス
(71)【出願人】
【識別番号】507416908
【氏名又は名称】ソルボンヌ・ユニヴェルシテ
(71)【出願人】
【識別番号】520053762
【氏名又は名称】ユニヴェルシテ・パリ・シテ
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥ ＰＡＲＩＳ ＣＩＴＥ
(71)【出願人】
【識別番号】524180266
【氏名又は名称】アンスティテュー・ナシオナル・ドゥ・ラ・サンテ・エ・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・メディカル
(74)【代理人】
【識別番号】100098394
【弁理士】
【氏名又は名称】山川 茂樹
(72)【発明者】
【氏名】ラティル，マチルド
(72)【発明者】
【氏名】ベジエール，シンシア
(72)【発明者】
【氏名】ディルダ，ピエール
(72)【発明者】
【氏名】ラフォン，ルネ
(72)【発明者】
【氏名】ヴェイエ，スタニスラス
(72)【発明者】
【氏名】シャルボニエ，フレデリック
(72)【発明者】
【氏名】ビオンディ，オリヴィエ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA20
4C084MA02
4C084NA14
4C084ZA94
4C084ZC751
4C086AA01
4C086AA02
4C086DA10
4C086EA16
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA94
4C086ZC75
(57)【要約】
本発明は、哺乳動物における脊髄性筋萎縮症を治療する際に併用療法で使用するための、少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分に関する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
哺乳動物における脊髄性筋萎縮症の治療に使用するための、少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的運動ニューロン生存（ＳＭＮ）タンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項2】
脊髄性筋萎縮症の原因となる運動ニューロン疾患の治療に使用するために請求項１に従って使用するための、請求項１に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項3】
前記運動ニューロン疾患は運動ニューロンの機能的変化又はその変性であり、請求項２に従って使用するための、請求項２に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項4】
前記有効成分は遺伝子療法又は遺伝子の治療により機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加させる能力を有し、請求項１～３のいずれか１項に従って使用するための、請求項１～３のいずれか１項に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項5】
前記有効成分は、ＳＭＮ１遺伝子を提供することにより、又はＳＭＮ２遺伝子の成熟に作用することにより、機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加させる能力を有し、請求項１～３のいずれか１項に従って使用するための、請求項１～３のいずれか１項に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項6】
機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる前記有効成分はアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、請求項１～３のいずれか１項に従って使用するための、請求項１～３のいずれか１項に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項7】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは１０～３０個のヌクレオチドを含み、請求項６に従って使用するための、請求項６に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項8】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＳＭＮ２遺伝子のプレｍＲＮＡをコードする核酸配列と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、好ましくは１００％相補的であり、請求項６又は７に従って使用するための、請求項６又は７に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項9】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＳＭＮ２遺伝子のプレｍＲＮＡをコードする核酸のイントロン６、イントロン７、又はエクソン７に属する配列と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは９８％、好ましくは１００％相補的であり、請求項６～８のいずれか１項に従って使用するための、請求項６～８のいずれか１項に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項10】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは配列番号：１と少なくとも５０％一致又は類似し、好ましくは少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％一致又は類似しており、好ましくは１００％一致又は類似している配列であり、請求項６～９のいずれか１項に従って使用するための、請求項６～９のいずれか１項に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項11】
前記ＡＳＯは、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８、配列番号：２９から選択される配列であり、請求項６～９のいずれか１項に従って使用するための、請求項６～９のいずれか１項に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項12】
前記ＡＳＯは以下から選択される少なくとも１つの修飾：‐ ホスホロチオエート、メチルホスファネート、又はホスホロアミダートなどのリン酸基における修飾、
‐ ２’Ｏ‐メチル（２’ＯＭｅ）、２’Ｏ‐メトキシエチル（２’ＭＯＥ）、又は２’フルオロ（２’Ｆ）などの、リボースの２’位の化学修飾、
‐ ５’メチルシトシン、５‐メチルウリジン／リボチミジン、又は「Ｇ‐クランプ」型ピリミジンのメチル化などの、核酸塩基の少なくとも１つの修飾、
‐ モルホリノ、ペプチド核酸、又は拘束型オリゴヌクレオチドなどの、種々の分子を生成する糖構造の少なくとも１つの実質的な変化
を含み、請求項６～１１のいずれか１項に従って使用するための、請求項６～１１のいずれか１項に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項13】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは配列番号：２３と、少なくとも５０％一致又は類似し、好ましくは少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％一致又は類似し、特に１００％一致又は類似している配列であり、請求項６～９のいずれか１項に従って使用するための、請求項６～９のいずれか１項に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項14】
前記少なくとも１種のフィトエクジソンは２０‐ヒドロキシエクジソンであり、請求項１～１３のいずれか１項に従って使用するための、請求項１～１３のいずれか１項に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項15】
前記２０‐ヒドロキシエクジソンは植物抽出物又は植物の一部の形態であり、前記抽出物は少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％の２０‐ヒドロキシエクジソンを含み、請求項１４に従って使用するための、請求項１４に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項16】
２０‐ヒドロキシエクジソンの前記少なくとも１種の半合成誘導体は：‐ 一般式（Ｉ）の化合物：
【化1】
Ｒ１は：（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ａ基（Ａは、ＯＨ、ＯＭｅ、（Ｃ１‐Ｃ６）、Ｎ（Ｃ１‐Ｃ６）、ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）型の基で任意に置換された複素環を表す）；及びＣＨ２Ｂｒ基から選択され；
Ｗは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはＯであり、より好ましくはＳである；並びに
‐ 式（ＩＩ）を有する化合物
【化2】
【請求項17】
一般式（Ｉ）中：Ｒ１は：（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ａ基（Ａは、ＯＨ、ＯＭｅ、（Ｃ１‐Ｃ６）、Ｎ（Ｃ１‐Ｃ６）、ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）型の基で任意に置換された複素環を表す）から選択され；
Ｗは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはＯであり、より好ましくはＳであり、請求項１６に従って使用するための、請求項１６に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項18】
一般式（Ｉ）の少なくとも１種の化合物は：Ｎｏ．１：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐１７‐（２‐モルホリノアセチル）‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎ）‐６‐オン；
Ｎｏ．２：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（３‐ヒドロキシピロリジン‐１‐イル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．３：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（４‐ヒドロキシ‐１‐ピペリジル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．４：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐［４‐（２‐ヒドロキシエチル）‐１‐ピペリジル］アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．５：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐１７‐［２‐（３‐ジメチルアミノプロピル（メチル）アミノ）アセチル］‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．６：２‐［２‐オキソ‐２‐［（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐６‐オキソ‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐１７‐イル］エチル］エチルスルファニルアセテート；
Ｎｏ．７：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐１７‐（２‐エチルスルファニルアセチル）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．８：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（２‐ヒドロキシエチルスルファニル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン
から選択され、請求項１６又は１７に従って使用するための、請求項１６又は１７に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項19】
哺乳動物における脊髄性筋萎縮症の治療に使用するための、‐ 少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体；
‐ 機能性ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分
を含むことを特徴とする組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、脊髄性筋萎縮症を治療するための、運動ニューロン生存（ＳＭＮ）タンパク質の発現を回復させることを目的とする有効成分と組み合わせたフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの半合成誘導体の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
神経筋疾患は、運動ニューロン、神経筋接合部、及び骨格筋から成る運動単位の機能が変化することを特徴とする。疾患の起源に関わらず、即ち、脊髄性筋萎縮症や筋萎縮性側索硬化症のような神経性であっても、又は筋性であっても、それら疾患は全て患者の運動機能を変化させ、生命維持に重要な筋肉が冒された場合、障害から早世にまで至らしめる可能性がある。
【0003】
これらの神経筋疾患のうち、運動ニューロンを特に影響を及ぼす疾患として２種の疾患：小児期に症状が現れる小児脊髄性筋萎縮症（又はＳＭＡ）、及び成人期に症状が現れる筋萎縮性側索硬化症（又はＡＬＳ）が挙げられる。これら２つの神経変性疾患は、原因も臨床症状も異なるが、筋萎縮の要因となる進行性の筋脱神経が共通している（Ａｌ‐Ｃｈａｌａｂｉ及びＨａｒｄｉｍａｎ、２０１３年；Ｃｒａｗｆｏｒｄ及びＰａｒｄｏ、１９９６年）。
【0004】
脊髄性筋萎縮症は、遺伝子由来の乳児死亡の最も多い原因であり、有病率は、出生数に対して１／６，０００～１／１０，０００である（Ｃｒａｗｆｏｒｄ及びＰａｒｄｏ、１９９６年）。症状の発現年齢や臨床的障害の進行度により重症度には主に３タイプあり、最も重篤な１型から平均余命が４０歳を超え得る３型まである。ＳＭＡ患者では、孤立しているか又は線維束にまとまっている筋線維の萎縮により骨格筋が左右対称に障害を受ける。ほぼ全てのＳＭＡは、主に体幹及びその近傍の筋肉に影響を及ぼすと言われている近位性である。運動欠陥は徐々に拡大し、初めに下肢の筋肉に、次に上肢の筋肉に、特に伸筋に影響を及ぼす。ＳＭＡの要因となる遺伝子は１９９５年に第５染色体上で同定され、「運動ニューロンの生存」を意味するＳＭＮと命名された（Ｌｅｆｅｂｖｒｅら、１９９５年）。
【0005】
臨床的に多様性が大きいが、遺伝子解析から、ＳＭＡの全形態はＳＭＮ１（運動ニューロンの生存）テロメア遺伝子の同種接合変化により引き起こされ、Ｓｍｎタンパク質の生成を妨げ、運動ニューロンの変性、筋萎縮、及び脱力を誘導することが実証できている。ヒトゲノムでは、この遺伝子の逆セントロメアコピーであるＳＭＮ２遺伝子が存在し、この遺伝子のコピーは数種あるが（Ｌｏｒｓｏｎら、１９９８年）、ＳＭＮ１遺伝子の機能喪失を部分的に補うことしかできない。実際、ＳＭＮ２はＳＭＮ１と異なるヌクレオチドを５つ有し、そのうちの１つはエクソン７にあり、ＳＭＮ２遺伝子が生成するｍＲＮＡの９０％においてスプライシングによりそのヌクレオチドは切除される傾向にある。この代替的スプライシングにより、切断された不安定なＳＭＮΔ７タンパク質が生成される。従って、ＳＭＮ２遺伝子に生成されたタンパク質のうち、完全かつ機能的なものは１０％しかない（Ｌｅｆｅｂｖｒｅら、１９９７年；Ｖｉｔｔｅら、２００７年）。ＳＭＮ２遺伝子のコピー数、その発現レベル、及び疾患の重症度の間に関連性があることは実証されている。
【0006】
ＳＭＮ１に関連する近位型脊髄性筋萎縮症では、異なる開発段階において、治療戦略がいくつか検討されている。ＳＭＮ２メッセンジャーＲＮＡの成熟を修飾し、欠損したエクソン７を再統合することにより（ヌシネルセン、リスジプラム、ブラナプラム）、又は遺伝子療法でＳＭＮ１遺伝子を導入することにより（ＺＯＬＯＧＥＮＳＭＡ（登録商標））、機能的ＳＭＮタンパク質の量を増加することを目的とした研究戦略もある。
【0007】
その他に、運動ニューロンを保護することにより、又は神経筋接合部の機能（サルブタモール、ピリドスチグミン）もしくは筋肉の性能（ＳＲＫ‐０１５、身体訓練）を改善することにより、疾患の進行を遅らせることを目的とする戦略もある。それにも関わらず、ＳＭＡで試験した治療アプローチの大部分は、中枢神経系で局所的に、及び／又はより一般的には他の器官で末梢的に、ＳＭＮタンパク質の発現レベルを増加させることを目的としている。
【0008】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを用いてＳＭＮ１遺伝子を送達する遺伝子療法により、マウスにおける前臨床試験やヒトにおける臨床試験において有意な有益効果が示されている（Ｍｅｎｄｅｌｌら、２０１７年；Ｐａｓｓｉｎｉら、２０１０年；Ｌｏｗｅｓら、２０１８年）。ＳＭＮ２スプライシングの調節に焦点を当てた他のアプローチも、その有効性を証明している（Ｎａｒｙｓｈｋｉｎら、２０１４年；Ｐａｌａｃｉｎｏら、２０１５年；Ｆｉｎｋｅｌら、２０１６年；Ｆｉｎｋｅｌら、２０１７年）。これらの非常に肯定的な結果により、規制当局による認可が特定の分子について可能になった。
【0009】
現在、ＳＭＡでは３種の治療法が利用可能である：
‐ ＳＭＡについて認可された最初の治療薬はＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）（ヌシネルセン）である。この治療薬は、米国では２０１６年１２月に、欧州では２０１７年６月に販売承認（ＭＡ）を取得した。これは、ＳＭＮ２遺伝子の成熟（スプライシング）に作用することにより、機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加させることを目的として開発されたアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは血液脳関門を通過しないため、ヌシネルセンは定期的に髄腔内投与する必要がある。そうすることで、運動ニューロンにおいてＳＭＮタンパク質が再発現し、現実的な臨床利益が得られるが、その再発現はＳＭＡのタイプ及び治療開始年齢により重要性が変わる。ＳＭＮ２遺伝子のスプライシングを修飾できるアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列は、国際公開第２００７／００２３９０号及び国際公開第２０１８／０１４０４１号の出願に示されている。
‐ 近年では、ウイルスベクター（ＡＡＶ）を用いてＳＭＮ１遺伝子を送達することを目的とした遺伝子治療製品であるＺＯＬＧＥＮＳＭＡ（登録商標）（オナセムノゲンアベパルボベク又はＡＶＸＳ‐１０１）が認可された（米国では２０１９年５月にＭＡ、欧州では２０２０年５月に条件付きＭＡ）。静脈内投与であるため、単独投与が容易である。
‐ 最後に、ＥＶＲＹＳＤＩ（登録商標）（リスジプラム又はＲＯ７０３４０６７）が更に最近認可された（米国では２０２０年８月、欧州では２０２１年３月にＭＡ）。ＥＶＲＹＳＤＩはＳＭＮ２遺伝子の成熟に作用する小分子であり、経口又は栄養管で毎日投与する。
‐ ＳＭＡについて認可された最初の治療薬はＳＰＩＮＲＡＺＡ（登録商標）（ヌシネルセン）である。この治療薬は、米国では２０１６年１２月に、欧州では２０１７年６月に販売承認（ＭＡ）を取得した。これは、ＳＭＮ２遺伝子の成熟（スプライシング）に作用することにより、機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加させることを目的として開発されたアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは血液脳関門を通過しないため、ヌシネルセンは定期的に髄腔内投与する必要がある。そうすることで、運動ニューロンにおいてＳＭＮタンパク質が再発現し、現実的な臨床利益が得られるが、その再発現はＳＭＡのタイプ及び治療開始年齢により重要性が変わる。ＳＭＮ２遺伝子のスプライシングを修飾できるアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列は、国際公開第２００７／００２３９０号及び国際公開第２０１８／０１４０４１号の出願に示されている。
‐ 近年では、ウイルスベクター（ＡＡＶ）を用いてＳＭＮ１遺伝子を送達することを目的とした遺伝子治療製品であるＺＯＬＧＥＮＳＭＡ（登録商標）（オナセムノゲンアベパルボベク又はＡＶＸＳ‐１０１）が認可された（米国では２０１９年５月にＭＡ、欧州では２０２０年５月に条件付きＭＡ）。静脈内投与であるため、単独投与が容易である。
‐ 最後に、ＥＶＲＹＳＤＩ（登録商標）（リスジプラム又はＲＯ７０３４０６７）が更に最近認可された（米国では２０２０年８月、欧州では２０２１年３月にＭＡ）。ＥＶＲＹＳＤＩはＳＭＮ２遺伝子の成熟に作用する小分子であり、経口又は栄養管で毎日投与する。
【0010】
ＳＭＮ遺伝子の回復により患者の機能的評価や運動機能はこれまでにない程に改善されたが、ＳＭＡ患者は、治療後に、しかも介入が早期であっても、著しい欠陥が持続する（Ｍｅｒｃｕｒｉら、２０１８年；Ｆｉｎｋｅｌら、２０１７年；Ｂａｒａｎｅｌｌｏら、２０１８年）。
【0011】
前臨床研究から、これらの治療後欠陥がＳＭＡマウスモデルにおいて認められ、治療した動物は健康な動物と比較して平均余命が短く、体重、筋肉量、及び機能が低下することが分かった（Ｐａｓｓｉｎｉら、２０１０年；Ｈｕａら、２０１０年、２０１１年；Ｆｅｎｇら、２０１６年）。
【0012】
また、これらの治療に関する他の制限や重大な懸念が依然として存在する。例えば、ヌシネルセンは、侵襲性の高い髄腔内注射で年に数回投与しなければならない。この投与方法は、脊柱側弯症の手術を受けた患者にとっては非常に困難であり、時には不可能な場合もあるため、これらの患者ではヌシネルセンは治療の選択肢から除外される。また、髄腔内投与では中枢神経系に特異的に分布し、このことは全ての症状を完全にカバーできるわけではないことを意味する。この最後の点で、オナセムノゲンは静脈内投与であり、全身への分布が可能であることから利点がある。それにも関わらず、ＡＡＶ９血清型の生物学的利用能の問題は、長期的な導入遺伝子発現がニューロンなどの有糸分裂後細胞に限定されるべきであるということと共に、まだ未解決である（Ｃｈａｙｔｏｗら、２０２１年）。オナセムノゲンは単回の注射だけで済む療法として宣伝されているが、治療が患者の生涯に渡って持続するかどうか、あるいは追加免疫が必要になるかどうかは不明のままである。
【0013】
リスジプラムとしては、全身療法であり、毎日経口投与するために低侵襲性である。しかし、リスジプラムがスプライシング機構を標的とする程に、リスジプラムは他の転写産物にも影響を及ぼし、未知で制御不能な非標的副作用を引き起こす可能性がある。実際、リスジプラムは高濃度で細胞分裂の制御因子に影響を及ぼすようであると報告されており、発癌性の副作用が懸念されている（Ｒａｔｎｉら、２０１８年）。
【0014】
フィトエクジソンは、ポリヒドロキシル化ステロールの重要なファミリーである。これらの分子は、様々な種の植物（シダ植物、裸子植物、被子植物）により生成され、害虫に対する防御に関与する。植物界におけるフィトエクジソンの大部分は２０‐ヒドロキシエクジソンである。
【0015】
仏国特許出願公開第３０２１３１８号明細書は、フィトエクジソン、より具体的には２０‐ヒドロキシエクジソン（２０Ｅ）が多くの薬理学的研究の対象であることを開示している。これらの研究は、この分子の抗糖尿病特性及び同化作用特性を強調している。筋肉内のタンパク質合成に対する刺激効果がインビボではラットで観察され（Ｓｙｒｏｖら、２０００年；Ｔoｔｈら、２００８年；Ｌａｗｒｅｎｃｅら、２０１２年）、インビトロではＣ２Ｃ１２マウス筋管で観察された（Ｇｏｒｅｌｉｃｋ‐Ｆｅｌｄｍａｎら、２００８年）。動物モデルで上述した効果のいくつかは臨床研究で認められているが、まだ数は少ない。従って、２０Ｅは若い運動選手の筋肉量増加を促進する（Ｓｉｍａｋｉｎら、１９８８年）。
【0016】
最後に、仏国特許出願公開第１９０２７２６号明細書は、神経筋疾患、特に小児脊髄性筋萎縮症及び筋萎縮性側索硬化症を治療するためのフィトエクジソン及びその半合成誘導体の使用を更に報告している（Ｌａｔｉｌら、２０２０年）。
【0017】
上記の要素から、ＳＭＮタンパク質発現を増加させる治療法は疾患の進行及び患者の生活の質に有意な効果をもたらす可能性があるが、既に認可されている治療薬の投与量、又はその投与回数を低減し、又は最終的に機能的利益を改善して疾患の負担を更に軽減する補足的な治療アプローチを見出すことが依然として有用であることが分かる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0018】
【特許文献1】国際公開第２００７／００２３９０号
【特許文献2】国際公開第２０１８／０１４０４１号
【特許文献3】仏国特許出願公開第３０２１３１８号明細書
【非特許文献】
【0019】
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【非特許文献3】Lefebvre, S., Burglen, L., Reboullet, S., Clermont, O., Burlet, P., Viollet, L., Benichou, B., Cruaud, C., Millasseau, P. & Zeviani, M. (1995).
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【非特許文献23】Gorelick-Feldman, J., Maclean, D., Ilic, N., Poulev, A., Lila, M. A., Cheng, D. & Raskin, I. (2008). Phytoecdysteroids increase protein synthesis in skeletal muscle cells. Journal of agricultural and food chemistry, 56(10), 3532-3537.
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【非特許文献25】Latil, M., Dilda, P., Lafont, R. & Veillet, S. (2019). Phytoecdysones and their derivatives for use in the treatment of neuromuscular diseases. Patent Application WO2020187678.
【発明の概要】
【0020】
本発明は、既存の治療薬と比較して改善されている脊髄性筋萎縮症治療薬を提供することを目的とする。
【0021】
本発明者らは、脊髄性筋萎縮症に罹患した哺乳動物において、機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる有効成分との併用療法に利用する場合に、フィトエクジソン（特に２０Ｅ及びその半合成誘導体）が有益かつ相乗的な効果を示すことを予期せず発見した。実際、フィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体と、機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる有効成分を用いた治療薬とを組み合わせて使用すると、これらの要素の相乗効果により脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）に罹患した動物の運動性能及び機能的性能、並びに生存率及び体重が改善される。
【0022】
この目標を達成するために、本発明は、脊髄性筋萎縮症の治療において併用療法で使用するための、少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分を目的とする。
【0023】
本発明の特定の実施形態では、本発明は、ＳＭＡに関与する運動ニューロン疾患の治療において併用療法で使用するための、少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は少なくとも１種の２０‐ヒドロキシエクジソンの半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分に関する。
【0024】
本出願の文脈では、用語「併用療法」とは、少なくとも２種の生物学的に活性な薬剤の同時投与を指す。本発明の場合、第１活性剤は、フィトエクジソン又は２０‐ヒドロキシエクジソンの半合成誘導体から選択するか、又は少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は少なくとも１種の２０‐ヒドロキシエクジソンの半合成誘導体を含む組成物であり、第２活性剤は、機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる有効成分である。併用療法は、単一の製剤又は数種の製剤を含んでよい。同時投与は、同時に、又は連続的に行うことが可能である。同時投与は同じ投与経路又は異なる投与経路で行ってもよい。被験体において２種（又は２種以上）の薬剤の効果が重なり、付加的、相加的、又は相乗的な臨床効果が得られる限り、その療法は併用療法と見なす。
【0025】
特定の実施形態では、本発明は更に以下の特徴を満たす。これら特徴は別個に、又は技術的に操作可能にそれぞれ組み合わせて実施する。
【0026】
特定の実施形態では、前記少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの前記少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる前記少なくとも１種の有効成分を同時投与する。
【0027】
特定の実施形態では、前記少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの前記少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる前記少なくとも１種の有効成分を同じ組成物内で同時投与する。
【0028】
特定の実施形態では、前記少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの前記少なくとも１種の半合成誘導体を哺乳動物に経口投与又は全身投与し、機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる前記少なくとも１種の有効成分を哺乳動物に経口投与及び／又は髄腔内投与及び／又は静脈内投与する。
【0029】
経口投与の場合、前記少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの前記少なくとも１種の半合成誘導体及び／又は機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる有効成分を、経口投与可能な薬学的に許容される製剤に組み込むことが好ましい。
【0030】
遺伝子療法又は遺伝子の治療により、ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる。遺伝子治療の１実施態様によれば、ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる有効成分はＳＭＮ１遺伝子を提供することを目的とする。遺伝子療法の１実施態様によれば、ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる有効成分は、ＳＭＮ２遺伝子の成熟に作用する小分子、又はＳＭＮ２遺伝子のスプライシング（成熟）に作用することで機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加させることを目的として開発されたアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）のいずれかである。後者の場合、ＡＳＯはＳＭＮ２のスプライシングを調節する。これにより、ＳＭＮ２のｍＲＮＡへのエクソン７の取り込みが増加し、従って、エクソン７に対応し、ひいては機能的ＳＭＮタンパク質に対応するアミノ酸を有するＳＭＮタンパク質の生成数が増加する。
【0031】
従って、本発明の特定の実施形態では、有効成分は、遺伝子療法又は遺伝子の治療により機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加させる能力を有する。
【0032】
本発明の特定の実施形態では、有効成分は、ＳＭＮ１遺伝子を提供することにより機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加させる能力を有する。
【0033】
本発明の特定の実施形態では、有効成分は、ＳＭＮ２遺伝子の成熟に作用することにより機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加させる能力を有する。
【0034】
特定の実施形態では、機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる有効成分はアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。このＡＳＯは、好ましくは１０～３０ヌクレオチド、より好ましくは１２～３０ヌクレオチド、好ましくは１２～２５ヌクレオチド、更に好ましくは１５～２０ヌクレオチドの配列を有する。本発明の好ましい実施形態によれば、ＡＳＯは１８ヌクレオチドの配列を有する。
【0035】
本発明の特定の実施形態では、ＡＳＯはエクソン７をＳＭＮ２遺伝子の配列中に誘導する能力を有する。
【0036】
本発明の特定の実施形態では、ＡＳＯは、ヒトＳＭＮ２遺伝子のプレｍＲＮＡをコードする核酸配列と少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは９８％、好ましくは１００％相補的である。
【0037】
本発明の特定の実施形態では、ＡＳＯは、ヒトＳＭＮ２遺伝子のプレｍＲＮＡをコードする核酸の、イントロン６、イントロン７、又はエクソン７の一部、及びエクソン７に隣接するイントロンの一部に属する配列と少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは９８％、好ましくは１００％相補的である。このように、エクソン７はＳＭＮ２のｍＲＮＡに含まれており、これにより機能的ＳＭＮタンパク質を得ることが可能となる。
【0038】
ヒトＳＭＮ２遺伝子のプレｍＲＮＡをコードする核酸の配列は、Ｇｅｎｂａｎｋから、参照番号ＮＧ＿００８７２８、バージョンＮＧ＿００８７２８．１で入手可能である。
【0039】
特定の実施形態では、ＡＳＯは、本出願に添付した配列リストにある配列番号：１（５’‐ＴＣＡＣＴＴＴＣＡＴＡＡＴＧＣＴＧＧ‐３’）と少なくとも５０％一致又は類似した配列であり、好ましくは少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％一致又は類似し、また好ましくは１００％一致又は類似した配列である。配列番号：１は、ＳＭＮ２遺伝子のイントロン７の１８塩基（塩基１０～２７）と相補的である。
【0040】
特定の実施形態では、ＡＳＯは、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８、配列番号：２９から選択された配列を有する。これらの配列により、ＡＳＯはＳＭＮ２遺伝子のイントロン７を標的とする。
【0041】
ＡＳＯ配列と上記で収載した配列の１つとの同一性又は類似性の割合が１００％未満である場合、ＡＳＯ配列は、この参照配列が挿入、欠失、及び／又は置換された配列であると言える。
【0042】
２つのＡＳＯ配列間の同一性の割合は、最適に位置合わせした２つの配列を比較ウインドウを通して比較することにより決定する。従って、比較ウインドウ内のＡＳＯの配列の一部は参照配列の付加又は欠失を含み、２つの配列間で最適に位置合わせができる。
【0043】
一致の割合は、２つの比較した配列において核酸塩基が一致している位置の数を決定し、次にこの位置の数を比較ウインドウ内の位置の総数で除算し、得られた数を１００倍することにより計算する。
【0044】
ＡＳＯはホスホジエステル骨格から成ることが好ましい。ＡＳＯは、その安定性及び／又はＲＮＡに対する親和性を増加させるために、また／あるいは薬物動態の点で大幅に有利にするために、その骨格及び／又はその化学構造を様々に修飾してもよい。
【0045】
特定の実施形態では、ＡＳＯは、以下から選択される少なくとも１つの修飾を含む：
‐ ホスホロチオエート、メチルホスファネート（ｍｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈａｎａｔｅ）、又はホスホロアミダートなどのリン酸基における修飾、
‐ ２’Ｏ‐メチル（２’ＯＭｅ）、２’Ｏ‐メトキシエチル（２’ＭＯＥ）、又は２’フルオロ（２’Ｆ）などの、リボースの２’位の化学修飾、
‐ ５’メチルシトシン、５‐メチルウリジン／リボチミジン、又は「Ｇ‐クランプ」型ピリミジンのメチル化などの、核酸塩基の少なくとも１つの修飾、
‐ モルホリノ（「ホスホロアミダートモルホリノオリゴマー」（ＰＭＯ））、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、又は拘束型オリゴヌクレオチド（「ロックド核酸」（ＬＮＡ）、「２’‐４’‐拘束型エチル」（ｃＥｔ）、又はトリシクロ‐ＤＮＡ（ｔｃ‐ＤＮＡ））などの、種々の分子を生成する糖構造の少なくとも１つの実質的な変化。
‐ ホスホロチオエート、メチルホスファネート（ｍｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈａｎａｔｅ）、又はホスホロアミダートなどのリン酸基における修飾、
‐ ２’Ｏ‐メチル（２’ＯＭｅ）、２’Ｏ‐メトキシエチル（２’ＭＯＥ）、又は２’フルオロ（２’Ｆ）などの、リボースの２’位の化学修飾、
‐ ５’メチルシトシン、５‐メチルウリジン／リボチミジン、又は「Ｇ‐クランプ」型ピリミジンのメチル化などの、核酸塩基の少なくとも１つの修飾、
‐ モルホリノ（「ホスホロアミダートモルホリノオリゴマー」（ＰＭＯ））、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、又は拘束型オリゴヌクレオチド（「ロックド核酸」（ＬＮＡ）、「２’‐４’‐拘束型エチル」（ｃＥｔ）、又はトリシクロ‐ＤＮＡ（ｔｃ‐ＤＮＡ））などの、種々の分子を生成する糖構造の少なくとも１つの実質的な変化。
【0046】
特定の実施形態では、ＡＳＯは、配列番号：２３と少なくとも５０％一致又は類似しており、好ましくは少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％一致又は類似しており、また好ましくは１００％一致又は類似している配列である。配列番号：２３は、各塩基でデオキシリボースの２’炭素原子上に２’‐Ｏ‐メトキシエチルを有し、更にホスホロチオエート骨格、及びシトシンの代わりに５‐メチルシトシンを有する配列番号：１に対応する。ホスホロチオエート骨格は有利にもＡＳＯの安定性を改善し、５‐メチルシトシンは有利にもヌクレアーゼに対するＡＳＯの感受性を低減し、デオキシリボースの２’炭素原子上の２’‐Ｏ‐メトキシエチルは有利にもＡＳＯの投与により誘導された免疫応答を低減する。
【0047】
本発明の特定の実施形態では、ＡＳＯは、ヒト１ｋｇ当たり０．０１～１０ｍｇの用量で投与する。この用量は１日又は１週間に１回投与することが好ましい。
【0048】
フィトエクジソン及び２０‐ヒドロキシエクジソンの半合成誘導体は、本発明において使用するために医薬グレードまで精製することが有利である。
【0049】
本発明に従って使用可能なフィトエクジソンは、例えば２０‐ヒドロキシエクジソンである。
【0050】
この目的のために、本発明の特定の実施形態によれば、前記少なくとも１種のフィトエクジソンは２０‐ヒドロキシエクジソンである。
【0051】
２０‐ヒドロキシエクジソン及びその半合成誘導体は医薬グレードまで精製することが有利である。
【0052】
使用する２０‐ヒドロキシエクジソンは、活性剤として２０‐ヒドロキシエクジソンに富む植物抽出物、又は２０‐ヒドロキシエクジソンを含む組成物の形態であることが好ましい。２０‐ヒドロキシエクジソンに富む植物抽出物は、例えばステマカンサ・カルタモイデス（Ｓｔｅｍｍａｃａｎｔｈａ ｃａｒｔｈａｍｏｉｄｅｓ）（別名ルージァ・カルタモイデス（Ｌｅｕｚｅａ ｃａｒｔｈａｍｏｉｄｅｓ））、シアノチス・アラクノイデア（Ｃｙａｎｏｔｉｓ ａｒａｃｈｎｏｉｄｅａ）、及びシアノチス・ヴァガ（Ｃｙａｎｏｔｉｓ ｖａｇａ）の抽出物である。
【0053】
得られた抽出物は医薬グレードまで精製することが好ましい。
【0054】
１実施形態では、２０‐ヒドロキシエクジソンは植物抽出物又は植物の一部の形態であり、前記抽出物は少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％の２０‐ヒドロキシエクジソンを含む。前記植物は、前記植物の乾燥重量で少なくとも０．５％の２０‐ヒドロキシエクジソンを含有する植物から選択することが好ましい。前記抽出物は医薬グレードまで精製することが好ましい。
【0055】
その後の前記抽出物をＢＩＯ１０１と呼ぶ。ＢＩＯ１０１は、抽出物中乾燥重量で０～０．５％の不純物、例えば、前記抽出物の医薬用途の安全性、入手可能性、又は有効性に影響を及ぼす可能性のある微量化合物を含むことが顕著である。
【0056】
ＢＩＯ１０１を生成する植物は、ステマカンサ・カルタモイデス、シアノチス・アラクノイデア、及びシアノチス・ヴァガから選択することが好ましい。
【0057】
２０‐ヒドロキシエクジソンの半合成誘導体は半合成により得られ、特に、欧州特許出願公開第１５７３２７８５．９号明細書に記載されている方法で得ることが可能である。
【0058】
特定の実施形態では、フィトエクジソンは１日にヒト１キログラム当たり３～１５ミリグラムの用量で投与する。本明細書では、用語「フィトエクジソン」は、一般に両方のフィトエクジソン、２０‐ヒドロキシエクジソン（特に抽出物の形態）及びその半合成誘導体を意味する。
【0059】
好ましくは、フィトエクジソンは、ヒト成人では、２００～１０００ｍｇ／日の用量を１回で又は複数回に分けて、またヒト小児又は乳児では、５～３５０ｍｇ／日の用量を１回で又は複数回に分けて投与する。本明細書では、用語「フィトエクジソン」は、一般に両方のフィトエクジソン、２０‐ヒドロキシエクジソン（特に抽出物の形態）及びその半合成誘導体を意味する。
【0060】
本発明の特定の実施形態では、２０‐ヒドロキシエクジソンの前記少なくとも１種の半合成誘導体は以下から選択される：
‐ 一般式（Ｉ）の化合物：
‐ 一般式（Ｉ）の化合物：
【0061】
【化1】
【0062】
式中：
Ｒ１は：（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ａ基（Ａは、ＯＨ、ＯＭｅ、（Ｃ１‐Ｃ６）、Ｎ（Ｃ１‐Ｃ６）、ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）型の基で任意に置換された複素環を表す）；及びＣＨ２Ｂｒ基から選択され；
Ｗは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはＯであり、より好ましくはＳ°である；並びに
‐ 式（ＩＩ）を有する化合物。
Ｒ１は：（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ａ基（Ａは、ＯＨ、ＯＭｅ、（Ｃ１‐Ｃ６）、Ｎ（Ｃ１‐Ｃ６）、ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）型の基で任意に置換された複素環を表す）；及びＣＨ２Ｂｒ基から選択され；
Ｗは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはＯであり、より好ましくはＳ°である；並びに
‐ 式（ＩＩ）を有する化合物。
【0063】
【化2】
【0064】
本発明の範囲内で、用語「（Ｃ１‐Ｃ６）」は、１～６個の直鎖又は分枝炭素原子の任意のアルキル基、特にメチル、エチル、ｎ‐プロピル、イソ‐プロピル、ｎ‐ブチル、イソ‐ブチル、ｓｅｃ‐ブチル、ｔ‐ブチル、ｎ‐ペンチル、ｎ‐ヘキシルを意味する。メチル基、エチル基、イソ‐プロピル基、又はｔ‐ブチル基、特にメチル基又はエチル基、より具体的にはメチル基であることが有利である。
【0065】
本発明の範囲内で、用語「複素環」は、好ましくは、５個又は６個の原子が１個又は２個のヘテロ原子（Ｏ、Ｓ、又はＮ）を含み、残りの原子が炭素原子である環を意味する。
【0066】
本発明の好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）において：Ｒ１は：（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）基；及び（Ｃ１‐Ｃ６）Ａ基（ＡはＯＨ、ＯＭｅ、（Ｃ１‐Ｃ６）、Ｎ（Ｃ１‐Ｃ６）、ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）型の基で任意に置換された複素環を表す）から選択され；
Ｗは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはＯであり、より好ましくはＳである。
Ｗは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはＯであり、より好ましくはＳである。
【0067】
本発明の特定の実施形態では、２０‐ヒドロキシエクジソンの前記少なくとも１種の半合成誘導体は、以下の化合物から選択される化合物である：
Ｎｏ．１：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐１７‐（２‐モルホリノアセチル）‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎ）‐６‐オン；
Ｎｏ．２：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（３‐ヒドロキシピロリドン‐１‐イル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．３：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（４‐ヒドロキシ‐１‐ピペリジル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．４：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐［４‐（２‐ヒドロキシエチル）‐１‐ピペリジル］アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．５：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐１７‐［２‐（３‐ジメチルアミノプロピル（メチル）アミノ）アセチル］‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．６：２‐［２‐オキソ‐２‐［（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐６‐オキソ‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐１７‐イル］エチル］エチルスルファニルアセテート；
Ｎｏ．７：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐１７‐（２‐エチルスルファニルアセチル）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．８：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（２‐ヒドロキシエチルスルファニル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈシクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン。
Ｎｏ．１：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐１７‐（２‐モルホリノアセチル）‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎ）‐６‐オン；
Ｎｏ．２：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（３‐ヒドロキシピロリドン‐１‐イル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．３：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（４‐ヒドロキシ‐１‐ピペリジル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．４：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐［４‐（２‐ヒドロキシエチル）‐１‐ピペリジル］アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．５：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐１７‐［２‐（３‐ジメチルアミノプロピル（メチル）アミノ）アセチル］‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．６：２‐［２‐オキソ‐２‐［（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐６‐オキソ‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐１７‐イル］エチル］エチルスルファニルアセテート；
Ｎｏ．７：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐１７‐（２‐エチルスルファニルアセチル）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．８：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（２‐ヒドロキシエチルスルファニル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈシクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン。
【0068】
別の態様によれば、本発明は、以下：
‐ 少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、
‐ 機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分
を含み、哺乳動物における神経筋疾患、特に脊髄性筋萎縮症の治療おいて使用するための組成物を目的とする。
‐ 少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、
‐ 機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分
を含み、哺乳動物における神経筋疾患、特に脊髄性筋萎縮症の治療おいて使用するための組成物を目的とする。
【0069】
前記組成物のこのような使用は、併用療法における、前記少なくとも１種のフィトエクジゾン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジゾンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる前記少なくとも１種の有効成分の使用を参照して上述した特徴の１つ以上を満たす可能性がある。
【0070】
実施形態では、組成物は、経口投与、髄腔内投与、又は全身投与が可能な薬学的に許容される製剤に組み込む。
【0071】
本発明の範囲内において、用語「薬学的に許容される」とは、医薬組成物の調製に有用であり、一般に安全であり、毒性がなく、ヒト医薬用途だけでなく獣医学的用途にも許容されることを意味する。
【0072】
本発明は、非限定的な例として、以下を表す図を参照して説明する以下の記述を読み取ることで、より深く理解されるであろう。
各図について、結果は平均値±ＳＥＭで示し、＊はｐ＜０．０５を表し、＊＊はｐ＜０．０１を表し、＊＊＊はｐ＜０．００１を表し、＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を表す。
他の説明としては、ｎは試料サイズに対応し、ｐは結果の統計的有意性を定量化するために使用する「ｐ値」に対応する。また、ｐ＝ｎｓはｐ値が有意でないことを示す。
各図について、結果は平均値±ＳＥＭで示し、＊はｐ＜０．０５を表し、＊＊はｐ＜０．０１を表し、＊＊＊はｐ＜０．００１を表し、＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を表す。
他の説明としては、ｎは試料サイズに対応し、ｐは結果の統計的有意性を定量化するために使用する「ｐ値」に対応する。また、ｐ＝ｎｓはｐ値が有意でないことを示す。
【図面の簡単な説明】
【0073】
【図1】ＢＩＯ１０１単独もしくはミスマッチＡＳＯもしくはＡＳＯ１０‐２７単独もしくはＡＳＯ１０‐２７とＢＩＯ１０１との併用で処置したＳＭＡマウス（ＳｍｎΔ７／Δ７；ｈｕＳＭＮ２＋／－）の、マウス出生（Ｐ０）から死亡までの体重推移の曲線である。本明細書、及び他の説明では、Ｐは出生後（生後）の日数に対応する。
【図2】ＢＩＯ１０１単独もしくはミスマッチＡＳＯもしくはＡＳＯ１０‐２７単独もしくはＡＳＯ１０‐２７とＢＩＯ１０１との併用で処置したＳＭＡマウス（ＳｍｎΔ７／Δ７；ｈｕＳＭＮ２＋／－）の、出生（Ｐ０）からの生存率曲線のカプランマイヤー表示である。
【図3】ＢＩＯ１０１単独もしくはミスマッチＡＳＯもしくはＡＳＯ１０‐２７単独もしくはＡＳＯ１０‐２７とＢＩＯ１０１との併用で処置したＳＭＡマウス（ＳｍｎΔ７／Δ７；ｈｕＳＭＮ２＋／－）について、出生時（Ｐ０）からオープンフィールド試験により評価した運動性能（運動能力）を示す。
【図4】ＢＩＯ１０１単独もしくはミスマッチＡＳＯもしくはＡＳＯ１０‐２７単独もしくはＡＳＯ１０‐２７とＢＩＯ１０１との併用で処置したＳＭＡマウス（ＳｍｎΔ７／Δ７；ｈｕＳＭＮ２＋／－）について、出生時（Ｐ０）から握力試験により評価した運動性能（筋肉疲労）を示す。
【発明を実施するための形態】
【0074】
本発明を、その好ましい非限定的な１適用分野の特定の文脈において以下に説明する。
【0075】
１．アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の説明及び注射
ＩＳＩＳ‐ＳＭＮＲｘの名でも知られ、他の説明としてＡＳＯ１０‐２７とも呼ばれ、各塩基でデオキシリボースの２’炭素原子上に修飾ヌクレオチド２’‐Ｏ‐メトキシエチルを有するＳＭＮ２遺伝子のイントロン７の１８塩基（塩基１０～２７）に相補的である（ＳＭＮ２遺伝子のプレメッセンジャーＲＮＡ（プレｍＲＮＡ）のエクソン７の取り込みを抑制するＩＳＳ‐Ｎ１と呼ばれる、イントロン７内のある部位を標的とする）参照番号ＩＳＩＳ３９６４４３の配列番号：２３（５’‐ＴＣＡＣＴＴＴＣＡＴＡＡＴＧＣＴＧＧ‐３’）のアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、配列番号：２４（５’‐ＴＴＡＧＴＴＴＡＡＴＣＡＣＧＣＴＣＧ‐３’）のホスホロチオエート骨格及び５‐メチルシトシン及び制御ＡＳＯ（ミスマッチを意味する）と共に（Ｓｉｎｇｈら、２００６年；Ｗｉｌｌｉａｍｓら、２００９年）、先行論文（Ｂａｋｅｒら、１９９７年；Ｈｕａら、２００８年；Ｐａｓｓｉｎｉら、２０１１年）と同様に合成及び精製した。オリゴヌクレオチドを、０．９％ＮａＣｌ中に８μｇ／μＬの濃度で再懸濁し、－２０℃で保存する。
ＩＳＩＳ‐ＳＭＮＲｘの名でも知られ、他の説明としてＡＳＯ１０‐２７とも呼ばれ、各塩基でデオキシリボースの２’炭素原子上に修飾ヌクレオチド２’‐Ｏ‐メトキシエチルを有するＳＭＮ２遺伝子のイントロン７の１８塩基（塩基１０～２７）に相補的である（ＳＭＮ２遺伝子のプレメッセンジャーＲＮＡ（プレｍＲＮＡ）のエクソン７の取り込みを抑制するＩＳＳ‐Ｎ１と呼ばれる、イントロン７内のある部位を標的とする）参照番号ＩＳＩＳ３９６４４３の配列番号：２３（５’‐ＴＣＡＣＴＴＴＣＡＴＡＡＴＧＣＴＧＧ‐３’）のアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、配列番号：２４（５’‐ＴＴＡＧＴＴＴＡＡＴＣＡＣＧＣＴＣＧ‐３’）のホスホロチオエート骨格及び５‐メチルシトシン及び制御ＡＳＯ（ミスマッチを意味する）と共に（Ｓｉｎｇｈら、２００６年；Ｗｉｌｌｉａｍｓら、２００９年）、先行論文（Ｂａｋｅｒら、１９９７年；Ｈｕａら、２００８年；Ｐａｓｓｉｎｉら、２０１１年）と同様に合成及び精製した。オリゴヌクレオチドを、０．９％ＮａＣｌ中に８μｇ／μＬの濃度で再懸濁し、－２０℃で保存する。
【0076】
注射当日、ＡＳＯ原液を０．９％ＮａＣｌで２μｇ／μＬの濃度に希釈する。注射対照としてメチレンブルー０．０４％を溶液に添加する。生後１日目（Ｐ０）の新生仔ＳＭＡマウスに、８μｇのＡＳＯ１０‐２７又はＡＳＯミスマッチを、ハミルトン注射器及び３２Ｇ注射針を用いて片側脳室内注射で単回投与する。Ｐ０では、注射部位はブレグマとラムダとの間で矢状縫合から１ｍｍの位置にある。注射針は、皮膚表面の注射部位に垂直に配置し、約３ｍｍの深さまで刺入し、側脳室に到達させる。
【0077】
２．ＢＩＯ１０１の同時投与
シクロデキストリンと複合体化した補足的治療薬ＢＩＯ１０１を、出生後１日目（Ｐ０）からマウスに５０ｍｇ／ｋｇの用量でピペットを用いて毎日経口投与する。
シクロデキストリンと複合体化した補足的治療薬ＢＩＯ１０１を、出生後１日目（Ｐ０）からマウスに５０ｍｇ／ｋｇの用量でピペットを用いて毎日経口投与する。
【0078】
３．ＡＳＯと組み合わせたＢＩＯ１０１の生物学的活性
ａ．体重及び生存率に対する併用治療薬ＡＳＯ１０‐２７＋ＢＩＯ１０１の効果の分析
マウスＳｍｎ遺伝子のエクソン７を無効化し、ヒトＳＭＮ２導入遺伝子（ＳｍｎΔ７／Δ７；ｈｕＳＭＮ２－／＋）のコピーを２つ発現することを特徴とするフレンド白血病ウイルスＢ／ＮＯＤ・Ｒａｇ‐２・Ｊａｋ３欠損（ＦＶＢ／ＮＲｊ）遺伝的背景で重症ＳＭＡマウスモデルを使用した（Ｈｓｉｅｈら、２０００年）。遺伝子型「ＦＶＢ／ＮＲｊ‐ＳｍｎΔ７／Δ７ｈｕＳＭＮ２－／＋の２つのコピー」を有するこれらの交雑から得られたマウスを「ＳＭＡ」と記述する（Ｈｓｉｅｈら、２０００年）。ＳＭＡマウスは、Ｐ０からＢＩＯ１０１単独もしくはミスマッチＡＳＯ、又はＡＳＯ１０‐２７単独もしくはＡＳＯ１０‐２７とＢＩＯ１０１との併用治療のいずれかで処置した。マウスの生存率（図１）及び体重（図２）を毎日分析した。
ａ．体重及び生存率に対する併用治療薬ＡＳＯ１０‐２７＋ＢＩＯ１０１の効果の分析
マウスＳｍｎ遺伝子のエクソン７を無効化し、ヒトＳＭＮ２導入遺伝子（ＳｍｎΔ７／Δ７；ｈｕＳＭＮ２－／＋）のコピーを２つ発現することを特徴とするフレンド白血病ウイルスＢ／ＮＯＤ・Ｒａｇ‐２・Ｊａｋ３欠損（ＦＶＢ／ＮＲｊ）遺伝的背景で重症ＳＭＡマウスモデルを使用した（Ｈｓｉｅｈら、２０００年）。遺伝子型「ＦＶＢ／ＮＲｊ‐ＳｍｎΔ７／Δ７ｈｕＳＭＮ２－／＋の２つのコピー」を有するこれらの交雑から得られたマウスを「ＳＭＡ」と記述する（Ｈｓｉｅｈら、２０００年）。ＳＭＡマウスは、Ｐ０からＢＩＯ１０１単独もしくはミスマッチＡＳＯ、又はＡＳＯ１０‐２７単独もしくはＡＳＯ１０‐２７とＢＩＯ１０１との併用治療のいずれかで処置した。マウスの生存率（図１）及び体重（図２）を毎日分析した。
【0079】
ＢＩＯ１０１単独で処置した仔マウス（図１）の平均寿命（１１日）は、ミスマッチＡＳＯで処置した仔マウスの平均寿命（１３日）とほぼ同一である。２０１１年にＰａｓｓｉｎｉらが報告しているように、用量８μｇのＡＳＯ１０‐２７単独治療は、ＳＭＡ仔マウスの平均寿命を有意に延長し、生存期間の中央値は１８日（動物の生存率が３８％改善）であったのに対し、ミスマッチＡＳＯ対照群の生存期間の中央値は１３日である。ＢＩＯ１０１治療薬をＡＳＯ１０‐２７と組み合わせて投与すると、生存期間の中央値は２２．５日に増加し、即ち動物生存率が７３％改善している。
【0080】
ＢＩＯ１０１単独で処置した仔マウスの体重（図２）は、その生涯を通じて、ミスマッチＡＳＯで処置した仔マウスの体重と同等である。
【0081】
Ｐ７において、ＡＳＯ１０‐２７単独で治療すると、ミスマッチＡＳＯによる対照治療と比較してＳＭＡマウスの平均体重は増加していないが、Ｐ８では９．９％、Ｐ９では１３．９％有意に増加している。ＡＳＯ１０‐２７とＢＩＯ１０１とを併用すると、ＳＭＡ仔マウスの体重に相乗効果が誘導され、Ｐ７で１１．３％、Ｐ８で１６．５％、Ｐ９で２４．９％有意に増加している。
【0082】
Ｐ１０において、ＡＳＯ１０‐２７単独で治療すると、ミスマッチＡＳＯによる対照治療と比較してＳＭＡ仔マウスの平均体重は有意に増加している（＋１６％）。ＡＳＯ１０‐２７との併用ではＢＩＯ１０１はＳＭＡ仔マウスの体重に相乗効果を誘導し、体重はＰ１０で＋３０．９％有意に増加しており（ｐ＜０．０５）、即ちＡＳＯ１０‐２７単独で観察された体重のほぼ２倍高い増加率である。
【0083】
ＡＳＯ１０‐２７＋ＢＩＯ１０１で処置した仔マウスの体重がＡＳＯ１０‐２７単独で処置した仔マウスの体重より増加したことは死亡まで続いており、特に、Ｐ１５で３３％（ｐ＜０．０５）、Ｐ２０で４９．４％（ｐ＜０．０５）、Ｐ２５で５７．６％（ｐ＜０．０１）と有意な増加を示している。
【0084】
ｂ．ＡＳＯ１０‐２７＋ＢＩＯ１０１併用治療の機能的効果の分析
ＢＩＯ１０１単独もしくはミスマッチＡＳＯ、又はＡＳＯ１０‐２７単独もしくはＡＳＯ１０‐２７とＢＩＯ１０１との併用治療で処置した重症ＳＭＡ２型のマウスについて、Ｐ０で表現型分析を行った。マウスの運動能力について水平方向にモニタリングした。一方、先行論文（Ｂｉｏｎｄｉら、２００８年；Ｂｒａｎｃｈｕら、２０１３年；Ｃｈａｌｉら、２０１６年）と同様に、オープンフィールド試験（図３）により運動能力を評価し、グリップ試験（図４）により筋肉疲労を評価した。
ＢＩＯ１０１単独もしくはミスマッチＡＳＯ、又はＡＳＯ１０‐２７単独もしくはＡＳＯ１０‐２７とＢＩＯ１０１との併用治療で処置した重症ＳＭＡ２型のマウスについて、Ｐ０で表現型分析を行った。マウスの運動能力について水平方向にモニタリングした。一方、先行論文（Ｂｉｏｎｄｉら、２００８年；Ｂｒａｎｃｈｕら、２０１３年；Ｃｈａｌｉら、２０１６年）と同様に、オープンフィールド試験（図３）により運動能力を評価し、グリップ試験（図４）により筋肉疲労を評価した。
【0085】
オープンフィールド試験に使用した装置は、７ｃｍ×７ｃｍの１６タイルに分割されたフィールド格子を備えたサイズ２８×２８×５ｃｍのプラスチックボックスから構成されている。マウスらを個別に試験し、各処置後に評価装置を洗浄した。最初は、フィールドの中央に置かれた各マウスは、１５秒ごとに尾をつまむ刺激を与えられながら、５分間自由に動くことができた。この５分間の間に実験者は行動測定値を記録し、通ったタイルの総数を記録した。
【0086】
ＢＩＯ１０１処置は単独投与、又はＡＳＯ１０‐２７との併用投与のいずれであっても、歩行を促進している。これは、Ｐ１５で、ＡＳＯ１０‐２７単独で処置した仔マウス（７０±２０タイル）より、マウスの移動を増加させる傾向にある（ＢＩＯ１０１単独治療では１１０±１８タイル又は＋５８％、ＡＳＯ１０‐２７＋ＢＩＯ１０１治療では１００±１９タイル又は＋４４％）。
【0087】
Ｐ２３から、ＡＳＯ１０‐２７＋ＢＩＯ１０１で処置した仔マウスの運動能力は、ＡＳＯ１０‐２７単独で処置した仔マウスの運動能力（＋５１．３％、ｐ＝ｎｓ）より増加する傾向があり、Ｐ２５で（＋３８．４％、ｐ＜０．０５）、又はＰ２７でさえ（＋４４．９％、ｐ＜０．０１）有意に増加している（図３）。
【0088】
筋肉疲労を評価するために、マウスの前肢の握力を試験した。空中に水平に吊るされた細い金属棒から、前肢によりマウスがぶら下がる。ぶら下がっている時間を記録する。各マウスは２回のテスト間に１分間休憩させ、５回連続して試験した。筋機能の評価には、最良の試験結果のみを残す。
【0089】
Ｐ７では、ＡＳＯ１０‐２７単独で処置した仔マウスの疲労に対する耐性は、ミスマッチＡＳＯで処置した仔マウスの疲労耐性と比較して改善はされなかった。ＢＩＯ１０１単独で処置したマウスの疲労耐性自体は１９．３％改善した。Ｐ１５において、ＡＳＯ１０‐２７単独及びＢＩＯ１０１単独で処置したマウスの疲労耐性は両方とも、ミスマッチＡＳＯで処置した仔マウスの疲労耐性より高かった（＋７．７％）。驚くべきことに、そして有利にも、ＢＩＯ１０１とＡＳＯ１０‐２７との相乗効果が併用治療中に働き、治療したＳＭＡ動物の疲労耐性は、Ｐ７で２６．３％、Ｐ１５で２１．２％増加している。
【0090】
Ｐ１９から、ＡＳＯ１０‐２７＋ＢＩＯ１０１で処置した仔マウスの疲労耐性は、ＡＳＯ１０‐２７単独で処置したマウスの疲労耐性より増加傾向にある。この差はＰ２１から明らかになり（ＡＳＯ１０‐２７単独と比較してＡＳＯ１０‐２７＋ＢＩＯ１０１併用で処置した群では＋５４％、ｐ＝ｎｓ）、その後Ｐ２３で（＋１５９．２％、ｐ＜０．０５）、Ｐ２５で（＋３３７．７％、ｐ＜０．０５）、又はＰ２７でさえ（＋２９６．７％、ｐ＝０．０７）増加している。これらの有意差はＰ３５まで維持される。Ｐ３９からは、これらの差は顕著ではなくなるが、それでもＡＳＯ１０‐２７＋ＢＩＯ１０１の併用で処置したマウス群は、ＡＳＯ１０‐２７単独で処置した群で観察されたものより高い疲労耐性を維持している（図４）。
【0091】
４．結論
特にＳＭＮタンパク質の発現を回復させる効果を有するＡＳＯを使用する治療アプローチにより、これらの結果は、ＳＭＮタンパク質の発現を回復させることを目的とする有効成分と併用するＢＩＯ１０１治療薬の重要性を実証している。
特にＳＭＮタンパク質の発現を回復させる効果を有するＡＳＯを使用する治療アプローチにより、これらの結果は、ＳＭＮタンパク質の発現を回復させることを目的とする有効成分と併用するＢＩＯ１０１治療薬の重要性を実証している。
【0092】
実際、この併用療法は、ＳＭＡのマウスモデルにおいて、特に動物の体重の点で、更に顕著には、動物の運動能力又は疲労耐性いずれかのこれらの動物の身体的性能の点で、有意な有益効果を示す。
【0093】
ＡＳＯ１０‐２７＋ＢＩＯ１０１治療の併用は、単独療法としてのＡＳＯ１０‐２７の治療により得られる性能改善以上に、間違いなく相乗効果を有する。
【0094】
より一般的には、上記で考察した本発明の実施態様及び実施形態は非限定的な実施例により説明しており、従って他の変形が可能であることに留意されたい。
【0095】
特に、本発明は、主に配列番号：２３のＡＳＯ１０‐２７を考察することで説明してきた。しかし、他のタイプの実施形態では、ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる他の有効成分、例えばＳＭＮタンパク質の生成を増加できる他のＡＳＯを考察することを排除してはいない。このようなＡＳＯは、例えば、以下から選択される配列のＡＳＯである：配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８、配列番号：２９。
【0096】
これらの配列を特に以下の表１に示す：
【0097】
【表1】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-07-11
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
哺乳動物における脊髄性筋萎縮症の治療に使用するための、少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的運動ニューロン生存（ＳＭＮ）タンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項2】
脊髄性筋萎縮症の原因となる運動ニューロン疾患の治療に使用するために請求項１に従って使用するための、請求項１に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項3】
前記運動ニューロン疾患は運動ニューロンの機能的変化又はその変性であり、請求項２に従って使用するための、請求項２に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項4】
前記有効成分は遺伝子療法又は遺伝子の治療により機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加させる能力を有し、請求項１～３のいずれか１項に従って使用するための、請求項１～３のいずれか１項に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項5】
前記有効成分は、ＳＭＮ１遺伝子を提供することにより、又はＳＭＮ２遺伝子の成熟に作用することにより、機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加させる能力を有し、請求項１～３のいずれか１項に従って使用するための、請求項１～３のいずれか１項に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項6】
機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる前記有効成分はアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、請求項１～３のいずれか１項に従って使用するための、請求項１～３のいずれか１項に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項7】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは１０～３０個のヌクレオチドを含み、請求項６に従って使用するための、請求項６に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項8】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＳＭＮ２遺伝子のプレｍＲＮＡをコードする核酸配列と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、好ましくは１００％相補的であり、請求項６に従って使用するための、請求項６に記載の１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項9】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＳＭＮ２遺伝子のプレｍＲＮＡをコードする核酸のイントロン６、イントロン７、又はエクソン７に属する配列と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは９８％、好ましくは１００％相補的であり、請求項６に従って使用するための、請求項６に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項10】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは配列番号：１と少なくとも５０％一致又は類似し、好ましくは少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％一致又は類似しており、好ましくは１００％一致又は類似している配列であり、請求項６に従って使用するための、請求項６に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項11】
前記ＡＳＯは、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８、配列番号：２９から選択される配列であり、請求項６に従って使用するための、請求項６に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項12】
前記ＡＳＯは以下から選択される少なくとも１つの修飾：‐ ホスホロチオエート、メチルホスファネート、又はホスホロアミダートなどのリン酸基における修飾、
‐ ２’Ｏ‐メチル（２’ＯＭｅ）、２’Ｏ‐メトキシエチル（２’ＭＯＥ）、又は２’フルオロ（２’Ｆ）などの、リボースの２’位の化学修飾、
‐ ５’メチルシトシン、５‐メチルウリジン／リボチミジン、又は「Ｇ‐クランプ」型ピリミジンのメチル化などの、核酸塩基の少なくとも１つの修飾、
‐ モルホリノ、ペプチド核酸、又は拘束型オリゴヌクレオチドなどの、種々の分子を生成する糖構造の少なくとも１つの実質的な変化
を含み、請求項６に従って使用するための、請求項６に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項13】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは配列番号：２３と、少なくとも５０％一致又は類似し、好ましくは少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％一致又は類似し、特に１００％一致又は類似している配列であり、請求項６に従って使用するための、請求項６に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項14】
前記少なくとも１種のフィトエクジソンは２０‐ヒドロキシエクジソンであり、請求項１に従って使用するための、請求項１に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項15】
前記２０‐ヒドロキシエクジソンは植物抽出物又は植物の一部の形態であり、前記抽出物は少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％の２０‐ヒドロキシエクジソンを含み、請求項１４に従って使用するための、請求項１４に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項16】
２０‐ヒドロキシエクジソンの前記少なくとも１種の半合成誘導体は：‐ 一般式（Ｉ）の化合物：
【化1】
Ｒ１は：（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ａ基（Ａは、ＯＨ、ＯＭｅ、（Ｃ１‐Ｃ６）、Ｎ（Ｃ１‐Ｃ６）、ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）型の基で任意に置換された複素環を表す）；及びＣＨ２Ｂｒ基から選択され；
Ｗは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはＯであり、より好ましくはＳである；並びに
‐ 式（ＩＩ）を有する化合物
【化2】
【請求項17】
一般式（Ｉ）中：Ｒ１は：（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ｗ（Ｃ１‐Ｃ６）ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）基；（Ｃ１‐Ｃ６）Ａ基（Ａは、ＯＨ、ＯＭｅ、（Ｃ１‐Ｃ６）、Ｎ（Ｃ１‐Ｃ６）、ＣＯ２（Ｃ１‐Ｃ６）型の基で任意に置換された複素環を表す）から選択され；
Ｗは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択されるヘテロ原子であり、好ましくはＯであり、より好ましくはＳであり、請求項１６に従って使用するための、請求項１６に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項18】
一般式（Ｉ）の少なくとも１種の化合物は：Ｎｏ．１：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐１７‐（２‐モルホリノアセチル）‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎ）‐６‐オン；
Ｎｏ．２：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（３‐ヒドロキシピロリジン‐１‐イル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．３：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（４‐ヒドロキシ‐１‐ピペリジル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．４：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐［４‐（２‐ヒドロキシエチル）‐１‐ピペリジル］アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．５：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐１７‐［２‐（３‐ジメチルアミノプロピル（メチル）アミノ）アセチル］‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．６：２‐［２‐オキソ‐２‐［（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐６‐オキソ‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐１７‐イル］エチル］エチルスルファニルアセテート；
Ｎｏ．７：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐１７‐（２‐エチルスルファニルアセチル）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン；
Ｎｏ．８：（２Ｓ，３Ｒ，５Ｒ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）‐２，３，１４‐トリヒドロキシ‐１７‐［２‐（２‐ヒドロキシエチルスルファニル）アセチル］‐１０，１３‐ジメチル‐２，３，４，５，９，１１，１２，１５，１６，１７‐デカヒドロ‐１Ｈ‐シクロペンタ［ａ］フェナントレン‐６‐オン
から選択され、請求項１６又は１７に従って使用するための、請求項１６又は１７に記載の少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体、並びに機能的ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分。
【請求項19】
哺乳動物における脊髄性筋萎縮症の治療に使用するための、‐ 少なくとも１種のフィトエクジソン及び／又は２０‐ヒドロキシエクジソンの少なくとも１種の半合成誘導体；
‐ 機能性ＳＭＮタンパク質の生成を増加できる少なくとも１種の有効成分
を含むことを特徴とする組成物。
【国際調査報告】