特表 2025-503648 β－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患の処置のための化合物及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-02-04

(54)【発明の名称】β－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患の処置のための化合物及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07D 303/48 20060101AFI20250128BHJP

   A61K 31/336 20060101ALI20250128BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250128BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20250128BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20250128BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20250128BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20250128BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20250128BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20250128BHJP

【ＦＩ】

C07D303/48 CSP

A61K31/336

A61P43/00 111

A61P25/00

A61P25/28

A61P17/02

A61P21/00

A61P3/00

A61K45/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024541224

(86)(22)【出願日】2022-12-23

(85)【翻訳文提出日】2024-08-30

(86)【国際出願番号】 IB2022062740

(87)【国際公開番号】W WO2023135480

(87)【国際公開日】2023-07-20

(31)【優先権主張番号】22151412.8

(32)【優先日】2022-01-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】524258509

【氏名又は名称】ドルファン エスエー

(74)【代理人】

【識別番号】100120891

【弁理士】

【氏名又は名称】林 一好

(74)【代理人】

【識別番号】100165157

【弁理士】

【氏名又は名称】芝 哲央

(74)【代理人】

【識別番号】100205659

【弁理士】

【氏名又は名称】齋藤 拓也

(74)【代理人】

【識別番号】100126000

【弁理士】

【氏名又は名称】岩池 満

(74)【代理人】

【識別番号】100185269

【弁理士】

【氏名又は名称】小菅 一弘

(72)【発明者】

【氏名】ロシャ ヴィルジニー

(72)【発明者】

【氏名】マルティ ロジェ

(72)【発明者】

【氏名】デスクロー メラニー

(72)【発明者】

【氏名】デモッツ ステファーヌ

(72)【発明者】

【氏名】ムテル ヴァンサン

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA011

4C084ZA012

4C084ZA161

4C084ZA162

4C084ZA941

4C084ZA942

4C084ZC202

4C084ZC211

4C084ZC212

4C084ZC411

4C084ZC412

4C084ZC75

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086BA02

4C086GA16

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZA01

4C086ZA16

4C086ZA94

4C086ZC20

4C086ZC21

4C086ZC41

(57)【要約】

本発明は、治療、特にβ－ガラクトシダーゼの活性の低下に関連する疾患、例えば、ＧＭ－１ガングリオシドーシス、モルキオ症候群Ｂ型、チェディアック－東症候群、ガラクトシアリドーシス、異染性白質ジストロフィー、ゴーシェ病、アルツハイマー病及び外傷性脳損傷の処置に有効な新規カテプシンＢ阻害剤に関する。本発明の化合物は、ａ）患者への投与後、化合物が全身の血流に到達することを可能にする、良好な吸収、ｂ）処置されるべき異なる組織／臓器への良好な分布、ｃ）化合物の活性を維持し、有害な代謝産物を生成しないように化合物が体内で代謝される、適切な代謝、及び／又はｄ）化合物及びその代謝産物の適切な排泄といった有利な特性によって特徴付けられる。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉ又は式ＩＩの化合物であって、

【化1】

【化2】

式中、
Ｒ_１が、３－メチルブチル、２－メトキシエチル、２－フルオロフェニルメチル、３－（ピペリジン－１－イル）プロピル及び２－（ピリジン－２－イル）エチルから選択され、
Ｒ_２が、水素及びメチルから選択され、
Ｒ_３が、２－メチルプロピル及び２，２，２－トリフルオロエチルから選択され、
Ｒ_４が、水素であり、
前記化合物が、Ｒ_１が３－メチルブチルである場合、
ｉ．Ｒ_３は２－メチルプロピルではないか、又は
ｉｉ．Ｒ_３は２－メチルプロピルであり、Ｒ_２はメチルであることを特徴とし、
前記化合物が、Ｒ_３が２，２，２－トリフルオロエチルである場合、Ｒ_２は水素であることをさらに特徴とする、化合物。

【請求項2】

Ｒ_１が、３－メチルブチル、３－（ピペリジン－１－イル）プロピル及び２－（ピリジン－２－イル）エチルから選択される、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｒ_１が、３－（ピペリジン－１－イル）プロピル又は２－（ピリジン－２－イル）エチルであり、Ｒ_３が、２－メチルプロピルであるか、又はＲ_１が、３－メチルブチルであり、Ｒ_３が、２，２，２－トリフルオロエチルである、請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

前記式Ｉの化合物が、エチル（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－１－（イソペンチル（メチル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボキシレート、エチル（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４－メチル－１－オキソ－１－（（２－（ピリジン－２－イル）エチル）アミノ）ペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボキシレート、エチル（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４－メチル－１－オキソ－１－（（３－（ピペリジン－１－イル）プロピル）アミノ）ペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボキシレート、エチル（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－１－（（２－２－メトキシエチル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボキシレート、エチル（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－１－（（２－フルオロベンジル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボキシレート、エチル（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４，４，４－トリフルオロ－１－（イソペンチルアミノ）－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボキシレート及びエチル（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４，４，４－トリフルオロ－１－（（２－フルオロベンジル）アミノ）－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボキシレートからなる群から選択され、好ましくは、エチル（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４－メチル－１－オキソ－１－（（２－（ピリジン－２－イル）エチル）アミノ）ペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボキシレート、エチル（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４－メチル－１－オキソ－１－（（３－（ピペリジン－１－イル）プロピル）アミノ）ペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボキシレート及びエチル（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４，４，４－トリフルオロ－１－（イソペンチルアミノ）－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボキシレートからなる群から選択されるか、
又は前記式ＩＩの化合物が、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－１－（イソペンチル（メチル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４－メチル－１－オキソ－１－（（２－（ピリジン－２－イル）エチル）アミノ）ペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４－メチル－１－オキソ－１－（（３－（ピペリジン－１－イル）プロピル）アミノ）ペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－１－（（２－２－メトキシエチル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－１－（（２－フルオロベンジル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４，４，４－トリフルオロ－１－（イソペンチルアミノ）－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸及び（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４，４，４－トリフルオロ－１－（（２－フルオロベンジル）アミノ）－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸からなる群から選択され、好ましくは、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４－メチル－１－オキソ－１－（（２－（ピリジン－２－イル）エチル）アミノ）ペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４－メチル－１－オキソ－１－（（３－（ピペリジン－１－イル）プロピル）アミノ）ペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸及び（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４，４，４－トリフルオロ－１－（イソペンチルアミノ）－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。

【請求項5】

請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物であって、治療における使用のための化合物。

【請求項6】

β－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患を処置する方法における使用のための式Ｉ又は式ＩＩの化合物であって、

【化3】

【化4】

式中、
Ｒ_１が、３－メチルブチル、２－メトキシエチル、３－メトキシプロピル、２－フルオロフェニルメチル、３－（ピペリジン－１－イル）プロピル及び２－（ピリジン－２－イル）エチルから選択され、
Ｒ_２が、水素及びメチルから選択され、
Ｒ_３が、２－メチルプロピル及び２，２，２－トリフルオロエチルから選択され、
Ｒ_４が、水素であり、
前記化合物が、Ｒ_１が３－メチルブチルである場合、
ｉ．Ｒ_３は２－メチルプロピルではないか、又は
ｉｉ．Ｒ_３は２－メチルプロピルであり、Ｒ_２はメチルであることを特徴とし、
前記化合物が、Ｒ_３が２，２，２－トリフルオロエチルである場合、Ｒ_２は水素であることをさらに特徴とする、使用のための化合物。

【請求項7】

前記式Ｉ又は式ＩＩの化合物が、請求項２～４のいずれか一項に定義されている通りであるか、又は前記式Ｉの化合物が、エチル（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－１－（（３－３－メトキシプロピル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボキシレートであり、前記式ＩＩの化合物が、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－１－（（３－３－メトキシプロピル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸である、請求項６に記載の使用のための化合物。

【請求項8】

前記β－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患が、ＧＭ－１ガングリオシドーシス、モルキオ症候群Ｂ型、チェディアック－東症候群、ガラクトシアリドーシス、異染性白質ジストロフィー、ゴーシェ病、アルツハイマー病及び外傷性脳損傷から選択される、請求項６又は７に記載の使用のための化合物。

【請求項9】

前記β－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患が、ＧＭ－１ガングリオシドーシス、モルキオ症候群Ｂ型、チェディアック－東症候群、ガラクトシアリドーシス、異染性白質ジストロフィー及びゴーシェ病から選択される、請求項８に記載の使用のための化合物。

【請求項10】

前記化合物が、カテプシンＢの活性の阻害によって、β－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患を処置する方法における使用のためである、請求項６～９のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項11】

前記化合物が式Ｉの化合物であり、前記化合物がそれを必要とする患者に経腸投与される、請求項５～１０のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項12】

前記化合物が式ＩＩの化合物であり、前記化合物が、経腸投与ではない投与経路によって、それを必要とする患者に投与される、請求項５～１０のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項13】

前記式Ｉの化合物又は式ＩＩの化合物が、それを必要とする患者に、β－ガラクトシダーゼの薬理学的シャペロン、グルコセレブロシダーゼの薬理学的シャペロン、カルシウムチャネル遮断薬、グルコシルセラミド合成酵素阻害剤及びそれらの混合物から選択される少なくとも１つの追加の化合物と組み合わせて、投与される、請求項５～１２のいずれか一項に記載の使用のための化合物。

【請求項14】

前記少なくとも１つの追加の化合物が、Ｎ－置換５－アミノ－１－ヒドロキシメチル－シクロペンタントリオール、Ｎ－オクチル－４－エピ－β－バリエナミン（ＮＯＥＶ）、アンブロキソール、シス－（＋）－［２－（２－ジメチルアミノエチル）－５－（４－メトキシフェニル）－３－オキソ－６－チア－２－アザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７，９，１１－トリエン－４－イル］エタノエート（ジルチアゼム）、［（３Ｓ）－１－アザビシクロ［２．２．２］オクタン－３－イル］Ｎ－［２－［２－（４－フルオロフェニル）－１，３－チアゾール－４－イル］プロパン－２－イル］カルバメート（ベングルスタット）、イミノ糖及びそれらの混合物からなる群から選択され、このようなイミノ糖が、好ましくは、Ｎ－ブチル－デオキシガラクトノジリマイシン（ミガーラスタット）、４－エピ－イソファゴミン、５ａ－Ｃ－ペンチル４－エピ－イソファゴミン、５ａ－Ｃ－メチル４－エピ－イソファゴミン、１，５－ジデオキシ－１，５－イミノ－（Ｌ）－リビトール（ＤＩＲ）、５－Ｃ－アルキル－イミノ－Ｌ－リビトール、Ｎ－（ダンシルアミノ）ヘキシルアミノカルボニルペンチル－１，５－ジデオキシ－１，５－イミノ－Ｄ－ガラクチトール、５Ｎ，６Ｓ－（Ｎ’－ブチルイミノメチリデン）－６－チオ－１－デオキシガラクトノジリマイシン（６Ｓ－ＮＢＩ－ＤＧＪ）、Ｎ－ノニル－デオキシガラクトノジリマイシン、Ｎ－ブチルデオキシノジリマイシン（ミグルスタット）、イソファゴミン（アフェゴスタット）、ＡＺ－３１０２及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１３に記載の使用のための化合物。

【請求項15】

請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物を生成するためのプロセスであって、
ａ）式ＩＩの化合物

【化5】

を、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）などの塩基で脱プロトン化するするステップと、
ｂ）ステップａ）で得られた脱プロトン化した化合物を、塩基性媒体中で１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロ－ホスフェート（ＨＡＴＵ）と反応させるステップと、
ｃ）ステップｂ）で得られた化合物を、塩基性媒体中でテトラメチル尿素（ＴＭＵ）と反応させるステップと、
ｄ）ステップｃ）で得られた化合物を、塩基性媒体中で式ＩＩＩのアミン

【化6】

と反応させて、例えば式ＩＶのジペプチド

【化7】

を形成するステップと、
ｅ）式ＩＶのような化合物を、酸性媒体中でトリフルオロ酢酸と反応させることによって式ＩＶの化合物からＢｏｃ基を除去して、式Ｖの化合物

【化8】

を得るステップと、
ｆ）前記式Ｖの化合物を、ＤＩＰＥＡなどの塩基で脱プロトン化するステップと、
ｇ）ステップｆ）で得られた脱プロトン化した化合物を、塩基性媒体中でＨＡＴＵと反応させるステップと、
ｈ）ステップｇ）で得られた化合物を、塩基性媒体中でＴＭＵと反応させるステップと、
ｉ）ステップｈ）で得られた化合物を、式ＶＩの化合物

【化9】

と反応させて、例えば式Ｉの化合物を得るステップと、
ｊ）任意選択で、前記式Ｉの化合物のエステル部分を加水分解して、例えば式ＩＩの化合物を得るステップと
を含む、プロセス。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、治療、特にβ－ガラクトシダーゼの活性の低下に関連する疾患、例えば、ＧＭ－１ガングリオシドーシス、モルキオ症候群Ｂ型、チェディアック－東症候群、ガラクトシアリドーシス、異染性白質ジストロフィー、ゴーシェ病、アルツハイマー病及び外傷性脳損傷の処置に有効な新規カテプシンＢ阻害剤に関する。

【背景技術】

【0002】

ヒトβ－ガラクトシダーゼ（ＥＣ ３．２．１．２３、ラクターゼとも呼ばれる）は、グリコシドヒドロラーゼファミリーのメンバーとして分類されるリソソーム酵素であり、動物及び植物の両方にも、多くの微生物にも存在する。その機能は、加水分解によりラクトース、オリゴ糖、糖脂質及び糖タンパク質を含む様々な基質から、末端β－Ｄ－ガラクトース残基の加水分解を触媒することである。この酵素は、ラクトースをグルコース及びガラクトースに加水分解するその能力について特に知られている。

【0003】

β－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患としては、ＧＭ１－ガングリオシドーシス及びムコ多糖症（ＭＰＳ）ＩＶＢ型（モルキオ症候群Ｂ型としても知られている）の２つのリソソーム蓄積症が挙げられ得る。より具体的には、β－ｇａｌはスフィンゴ糖脂質のＧＭ１－ガングリオシド及びムコ多糖体のケラタン硫酸を分解することが知られている。この酵素をコードする遺伝子上での病原性変異は以下を引き起こし得る。
（ｉ）触媒部位の強い変形により、不活性酵素が生じる。
（ｉｉ）触媒部位又はその近傍内の構造のわずかな障害により、酵素活性の減少が生じる。
（ｉｉｉ）ポリペプチドの適切なフォールディングを妨げる構造変化により、酵素の早期分解が生じる。

【0004】

これらのいずれもが、細胞内の機能的β－ｇａｌの量を低下させ、したがって生体内の基質の蓄積を引き起こす。ＧＭ１の貯蔵はＧＭ１－ガングリオシドーシスを引き起こすが、ケラタン硫酸の蓄積はモルキオ症候群Ｂ型に関連する。

【0005】

ＧＭ１－ガングリオシドーシスの特定の場合、β－ｇａｌの活性が低下したことにより、ＧＭ１の分解が阻害される。これにより、リソソーム内に基質の蓄積が生じ、その機能性の破壊を受ける。最も高い濃度のＧＭ１はＣＮＳに存在するため、ＧＭ１の過剰な蓄積が神経細胞の死滅を引き起こし、その結果、神経変性が進行する。ＧＭ１－ガングリオシドーシスが中枢神経系に及ぼす壊滅的な影響により、血液脳関門を通過することができる治療アプローチを見つけることが不可欠である。β－ｇａｌはβ－ガラクトシル残基を加水分解するために使用されるので、その欠乏は、糖脂質ＧＡ１、糖タンパク質由来のオリゴ糖、及びグリコサミノグリカンのような他の基質の貯蔵を引き起こす。これらの基質が産生される臓器に応じて、β－ｇａｌ欠損は、顔面形成異常、骨の発達障害（骨形成不全として知られている）、又は脾臓及び肝臓の両方の腫大（腹部腫脹を示す肝脾腫大症と呼ばれる状態）などのいくつかの非神経学的症状も引き起こす。

【0006】

ＧＭ１－ガングリオシドーシスを処置するために、いくつかの治療戦略が実施されてきた。しかしながら、従来の治療法は中枢神経系における症状の処置を達成できず、したがって神経変性の軽減という点では効果が得られない。造血幹細胞治療（ＨＳＣＴ）は、乳児型である患者において試みられたが失敗に終わった（非特許文献１）。組換え酵素も使用されているが、血液脳関門を通過することはできない。蓄積した基質の生合成を部分的に阻害する小分子の投与からなる基質抑制療法（ＳＲＴ）が、ＩＩ型及びＩＩＩ型のＧＭ１ガングリオシドーシスを有する３人に患者で試みられた。特に、ミグルスタットの投与により、変性進行を遅らせること、又はそれを逆行させることさえ可能となった（非特許文献２）。遺伝子治療は、操作されたアデノ随伴ウイルス／ＧＬＢ１ベクターの脳室内注射により、マウス（非特許文献３）及びネコ（非特許文献４）の両方のモデルにおいて確証的であった。これまで多くのシャペロンが開発され、ミガーラスタットが最初に試験されている。ＧＭ１－ガングリオシドーシスに対する特異性が十分でなかったため、他のイミノ糖が開発され、特にＮ－オクチル－４－エピ－β－バリエナミン（ＮＯＥＶ）及び５Ｎ，６Ｓ－（Ｎ’－ブチルイミノメチリデン）－６－チオ－１－デオキシガラクトノジリマイシン（６Ｓ－ＮＢＩ－ＤＧＪ）がマウスモデルにおいて有望な結果を示した（非特許文献５及び非特許文献６）。残念なことに、シャペロン療法はミスフォールドしたβ－ｇａｌの残存活性に基づき、その結果として、酵素が全く不活性な場合には、このような処置は全く効果がない。

【0007】

したがって、中枢神経系に到達することができ、β－ｇａｌが全く不活性である場合でさえも適用可能である、ＧＭ１－ガングリオシドーシスを標的とする治療戦略をさらに開発する必要がある。

【0008】

モルキオ症候群Ｂ型（ムコ多糖症ＩＶＢ型、ＭＰＳ ＩＶＢとしても知られている）は、いくつかのムコ多糖の分解を触媒する、β－ｇａｌをコードするＧＬＢ１遺伝子におけるいくつかの特異的変異によって引き起こされる。この欠陥の結果として、ケラタン硫酸が蓄積し、主に骨格形成異常及び頻繁な呼吸器感染症を引き起こす。患者は神経認知機能の正常な発達を示すが、疾患のいくらか進行した段階では、骨格変形のために脊髄圧迫が起こり、中枢神経系の障害を引き起こす可能性がある。骨の問題だけでなく、ＭＰＳ ＩＶＢは、角膜混濁、網膜症又は緑内障などのいくつかの眼症状、及び心肺疾患を特徴とする。

【0009】

現在、ＭＰＳ ＩＶＢに対して承認された治療がないだけではなく、この状態の極度の希少性と関連して、疾患及びその臨床症状に関する知識も不足しており、いくつかの分子が医薬シャペロンとして有望な結果を示したとしても、十分に設計された臨床試験の可能性が制限されている。ＧＭ１ガングリオシドーシスに関しては、今のところ利用可能な唯一の治療法は対症療法である。したがって、根治的な治療戦略を開発する緊急の必要性が存在している。

【0010】

チェディアック－東症候群（Ｃｈｅｄｉａｋ－Ｈｉｇａｓｈｉ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ガラクトシアリドーシス、異染性白質ジストロフィー、ゴーシェ病、アルツハイマー病及び外傷性脳損傷などの他の疾患は、β－ガラクトシダーゼの活性の低下に関連していることが示されている。

【0011】

多くのこのような疾患によって影響を受ける重要な系の１つは中枢神経系である。これは、脳が、その限られた再生能力及び神経細胞の感受性に起因して、すなわちＬＳＤ、特にＧＭ１－ガングリオシドーシスに対して非常に脆弱であるという事実に由来する可能性がある。中枢神経系への損傷は、アルツハイマー病及び外傷性脳損傷の場合にも顕著である。中枢神経系のこの感受性は、脳への侵入が血液脳関門によって高度に保護されているため、小さな分子しか通過できず、例えば血流を介して脳内に酵素を送達することが不可能なため、処置に関して大きな問題を引き起こす。したがって、神経症状を引き起こす疾患の処置は重要な課題である。

【0012】

β－ガラクトシダーゼの活性に関連する刊行物の中で、カテプシンＢ（ｃａｔＢ）がβ－ガラクトシダーゼの成熟及び分解において調節的な役割を有することが記載されている（非特許文献７）。これらの著者らは、カテプシンＢの阻害がβ－ガラクトシダーゼの活性を促進することを明らかにした。β－ガラクトシダーゼの活性の減少又はβ－ガラクトシダーゼの活性の欠如を伴う疾患に対する新しい治療法を開発する観点から、カテプシンＢの新しい阻害剤を特定することが望まれる。薬物としての使用に適した特性を示すこのような阻害剤、すなわち、良好な化学安定性、細胞膜透過性、溶解性、代謝安定性、血漿安定性及び／又はトランスポーター親和性を示す阻害剤を提供することがさらに有益であろう。

【0013】

最初に特定されたｃａｔＢ阻害剤の１つは、アスペルギルス・ジャポニカス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）に見出された天然のエポキシスクシニルジペプチドであるオキシランＥ６４であり、これは不可逆的かつ非選択的にカテプシンを阻害する（非特許文献８）。Ｅ６４の化学構造を表１に示す。

【0014】

Ｅ６４の発見以来、多くの類似物が開発されてきた。このクラスの化合物の最も有名な代表例は以下の表１に示されており、以下の刊行物に開示されている：非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２、非特許文献１３、及び非特許文献１４。

【0015】

【表1】

【0016】

現在、良好な吸収、分布、代謝及び排泄を示しながら、ｃａｔＢ阻害特性を示した唯一の分子は、ロキシスタチンとして知られているＥ６４ｄである。この化合物はＥ６４ｃのエステルプロドラッグであり、筋ジストロフィーの治療として日本において臨床研究の対象であった。不明確な有効性のために研究が中止されたにもかかわらず、この３年間の試験（小児患者を含む）では、広範な薬物動態学（ＰＫ）及び薬力学（ＰＤ）のデータが得られ、同時にヒトに対する無毒性も実証された（非特許文献１５、非特許文献１６及び非特許文献１７）。

【0017】

残念なことに、この化合物は血液脳関門の低い透過性を示し、中枢神経系（ＣＮＳ）における治療標的に到達する可能性が著しく減少する。このため、この化合物は、ＧＭ－１ガングリオシドーシス、アルツハイマー病及び外傷性脳損傷のような、脳内のｃａｔＢの存在に関連する病理に対する関連性が低くなる。

【0018】

したがって、ｃａｔＢを不可逆的に阻害することができる新規化合物を開発する必要がある。さらに、血液脳関門を透過することにより中枢神経系に到達することができる、そのような化合物を特定するさらなる必要性が存在する。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0019】

【非特許文献1】Ｎ．Ｂｒｕｎｅｔｔｉ－Ｐｉｅｒｒｉ ａｎｄ Ｆ．Ｓｃａｇｌｉａ，ＧＭ１ ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｏｓｉｓ：Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｓｐｅｃｔｓ，Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．Ｍｅｔａｂ．，２００８，９４（４），３９１－３９６

【非特許文献2】Ｆ．Ｄｅｏｄａｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｊｕｖｅｎｉｌｅ／ａｄｕｌｔ ＧＭ１－ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｏｓｉｓ ｗｉｔｈ Ｍｉｇｌｕｓｔａｔ ｍａｙ ｒｅｖｅｒｓｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，Ｍｅｔａｂ．Ｂｒａｉｎ Ｄｉｓ．，２０１７，３２（５），１５２９－１５３６

【非特許文献3】Ｒ．Ｃ．Ｂａｅｋ ｅｔ ａｌ．，ＡＡＶ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎ Ａｄｕｌｔ ＧＭ１－Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｏｓｉｓ Ｍｉｃｅ Ｃｏｒｒｅｃｔｓ Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ Ｓｔｏｒａｇｅ ｉｎ ＣＮＳ ａｎｄ Ｉｍｐｒｏｖｅｓ Ｓｕｒｖｉｖａｌ，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１０，５（１０），ｅ１３４６８

【非特許文献4】Ｖ．Ｊ．ＭｃＣｕｒｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ａｆｔｅｒ ｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ａ ｆｅｌｉｎｅ ｍｏｄｅｌ，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．，２０１４，６（２３１），２３１－２７９

【非特許文献5】Ｙ．Ｓｕｚｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｃｈａｐｅｒｏｎｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｎ－Ｏｃｔｙｌ ４－Ｅｐｉ－β－ｖａｌｉｅｎａｍｉｎｅ ｏｎ ｍｕｒｉｎｅ ＧＭ１－ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｏｓｉｓ，Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．Ｍｅｔａｂ．，２０１２，１０６（１），９２－９８

【非特許文献6】Ｔ．Ｔａｋａｉ ｅｔ ａｌ．，Ａ Ｂｉｃｙｃｌｉｃ １－Ｄｅｏｘｙｇａｌａｃｔｏｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ ａｓ ａ Ｎｏｖｅｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈａｐｅｒｏｎｅ ｆｏｒ ＧＭ１ Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｏｓｉｓ，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２０１３，２１（３），５２６－５３２

【非特許文献7】Ｙ．Ｏｋａｍｕｒａ－Ｏｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ β－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐｏｓｔ－Ｇｏｌｇｉ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ ａｒｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｂ ａｎｄ ａ ｎｏｎ－ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１９９７，４１９（２－３），２３１－２３４

【非特許文献8】Ｋ．Ｈａｎａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅ－６４，ａ Ｎｅｗ Ｔｈｉｏｌ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９７８，４２（３），５２３－５２８

【非特許文献9】Ｔ．Ｏｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，ＷＦ１４８６５Ａ ａｎｄ Ｂ，ｎｅｗ ｃａｔｈｅｐｓｉｎｓ Ｂ ａｎｄ Ｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ａｐｈａｎｏａｓｃｕｓ ｆｕｌｖｅｓｃｅｎｓ．Ｉ．Ｔａｘｏｎｏｍｙ，ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．（Ｔｏｋｙｏ）．，２０００，５３（５），４４９－４５８

【非特許文献10】Ａ．Ｊ．Ｂａｒｒｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｌ－ｔｒａｎｓ－Ｅｐｏｘｙｓｕｃｃｉｎｙｌ－ｌｅｕｃｙｌａｍｉｄｏ（４－ｇｕａｎｉｄｉｎｏ）ｂｕｔａｎｅ（Ｅ－６４） ａｎｄ ｉｔｓ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｃａｔｈｅｐｓｉｎｓ Ｂ，Ｈ ａｎｄ Ｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１９８２，２０１（１），１８９－１９８

【非特許文献11】Ｍ．Ｍｕｒａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｏｖｅｌ ｅｐｏｘｙｓｕｃｃｉｎｙｌ ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｂ，ｉｎ ｖｉｔｒｏ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１９９１，２８０（２），３０７－３１０

【非特許文献12】Ｄ．Ｊ．Ｂｕｔｔｌｅ ａｎｄ Ｊ．Ｓａｋｌａｔｖａｌａ，Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅｓ ｍｅｄｉａｔｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１９９２，２８７（２），６５７－６６１

【非特許文献13】Ｄ．Ｊ．Ｂｕｔｔｌｅ ｅｔ ａｌ．，ＣＡ０７４ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ：ａ ｐｒｏｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｏｒ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｂ，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，１９９２，２９９（２），３７７－３８０

【非特許文献14】Ｎ．Ｓｃｈａｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ／ｐｒｏｐｅｐｔｉｄｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｅｎｄｏ－ｅｐｏｘｙｓｕｃｃｉｎｙｌ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｓ ｈｉｇｈｌｙ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｂ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１９９８，４２１（１），８０－８２

【非特許文献15】Ｅ．Ｓａｔｏｙｏｓｈｉ，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔｒｉａｌｓ ｏｎ Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ Ｍｕｓｃｕｌａｒ Ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．，１９９２，３１（７），８４１－８４６

【非特許文献16】Ｇ．Ｈｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｂ ｉｓ ａ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ Ｔｒａｕｍａｔｉｃ Ｂｒａｉｎ Ｉｎｊｕｒｙ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ Ｅ６４ｄ ａｓ ａ Ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ Ｌｅａｄ Ｄｒｕｇ Ｃａｎｄｉｄａｔｅ，Ｆｒｏｎｔ．Ｎｅｕｒｏｌ．，２０１５，６，１７８

【非特許文献17】Ｔ．Ｍｉｙａｈａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｓｅ Ｉ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＥＳＴ，ａ ｎｅｗ ｔｈｉｏｌ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ．Ｔｈｅ １ｓｔ ｒｅｐｏｒｔ：Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｔ ｓｉｎｇｌｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｒｉｎｓｈｏ ｙａｋｕｒｉ／Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，１９８５，１６（２），３５７－３６５

【発明の概要】

【0020】

第一の態様では、本発明は、式Ｉ又は式ＩＩの化合物であって、

【化1】

【化2】

式中、
Ｒ_１が、３－メチルブチル、２－メトキシエチル、２－フルオロフェニルメチル、３－（ピペリジン－１－イル）プロピル及び２－（ピリジン－２－イル）エチルから選択され、
Ｒ_２が、水素及びメチルから選択され、
Ｒ_３が、２－メチルプロピル及び２，２，２－トリフルオロエチルから選択され、
Ｒ_４が、水素であり、
前記化合物が、Ｒ_１が３－メチルブチルである場合、
ｉ．Ｒ_３は２－メチルプロピルではないか、又は
ｉｉ．Ｒ_３は２－メチルプロピルであり、Ｒ_２はメチルであることを特徴とし、
前記化合物が、Ｒ_３が２，２，２－トリフルオロエチルである場合、Ｒ_２は水素であることをさらに特徴とする、化合物を提供する。

【0021】

第二の態様では、本発明は、治療における使用のため、特にβ－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患の処置のための本発明の化合物を提供する。

【0022】

第三の態様では、本発明は、β－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患を処置する方法における使用のための式Ｉ又は式ＩＩの化合物であって、

【化3】

【化4】

式中、
Ｒ_１が、３－メチルブチル、２－メトキシエチル、３－メトキシプロピル、２－フルオロフェニルメチル、３－（ピペリジン－１－イル）プロピル及び２－（ピリジン－２－イル）エチルから選択され、
Ｒ_２が、水素及びメチルから選択され、
Ｒ_３が、２－メチルプロピル及び２，２，２－トリフルオロエチルから選択され、
Ｒ_４が、水素であり、
前記化合物が、Ｒ_１が３－メチルブチルである場合、
ｉ．Ｒ_３は２－メチルプロピルではないか、又は
ｉｉ．Ｒ_３は２－メチルプロピルであり、Ｒ_２はメチルであることを特徴とし、
前記化合物が、Ｒ_３が２，２，２－トリフルオロエチルである場合、Ｒ_２は水素であることをさらに特徴とする、使用のための化合物を提供する。

【0023】

第四の態様では、本発明は、本発明による化合物を生成するためのプロセスであって、
ａ）式ＩＩＩの化合物

【化5】

を、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）などの塩基で脱プロトン化するするステップと、
ｂ）ステップａ）で得られた脱プロトン化した化合物を、塩基性媒体中で１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロ－ホスフェート（ＨＡＴＵ）と反応させるステップと、
ｃ）ステップｂ）で得られた化合物を、塩基性媒体中でテトラメチル尿素（ＴＭＵ）と反応させるステップと、
ｄ）ステップｃ）で得られた化合物を、塩基性媒体中で式ＩＶのアミン

【化6】

と反応させて、例えば式Ｖのジペプチド

【化7】

を形成するステップと、
ｅ）式Ｖのような化合物を、酸性媒体中でトリフルオロ酢酸と反応させることによって式Ｖの化合物からＢｏｃ基を除去して、式ＶＩの化合物

【化8】

を得るステップと、
ｆ）式ＶＩの化合物を、ＤＩＰＥＡなどの塩基で脱プロトン化するステップと、
ｇ）ステップｆ）で得られた脱プロトン化した化合物を、塩基性媒体中でＨＡＴＵと反応させるステップと、
ｈ）ステップｇ）で得られた化合物を、塩基性媒体中でＴＭＵと反応させるステップと、
ｉ）ステップｈ）で得られた化合物を、式ＶＩＩの化合物

【化9】

と反応させて、例えば式Ｉの化合物を得るステップと、
ｊ）任意選択で、式Ｉの化合物のエステル部分を加水分解して、例えば式ＩＩの化合物を得るステップと
を含む、プロセスを提供する。

【図面の簡単な説明】

【0024】

【図1】ＶＲＯ００６－ハイドロール、ＶＲＯ０５２－ハイドロール、ＶＲＯ０５９＿ハイドロール、ＶＲＯ０４２＿ハイドロール、ＶＲＯ０４７＿ハイドロール、ＶＲＯ０７３＿ハイドロール、ＶＲＯ１０９＿ハイドロール及びＶＲＯ２４４＿ハイドロール（好適な阻害活性（ＩＣ５０≦１００ｎＭ）を有する化合物）についてのブタ肝臓ホモジネートにおけるカテプシンＢ（ｃａｔＢ）活性の阻害を表すグラフである。

【図2】ＶＲＯ００１＿ハイドロール、ＶＲＯ０３５＿ハイドロール、ＶＲＯ０８２＿ハイドロール、ＶＲＯ１１９＿ハイドロール、ＶＲＯ２４３＿ハイドロール、ＶＲＯ０７３＿ハイドロール、ＶＲＯ１０９＿ハイドロール及びＶＲＯ２４４＿ハイドロール（好適ではない阻害活性（ＩＣ５０＞１００ｎＭ）を有する化合物）についてのブタ肝臓ホモジネートにおけるカテプシンＢ（ｃａｔＢ）活性の阻害を表すグラフである。

【図3】全細胞アッセイにおけるＥ６４ｃ、ＶＲＯ０５２－ハイドロール及びＶＲＯ０５９－ハイドロールによるヒトカテプシンＢの阻害を表すグラフである。

【図4】本発明のプロセスのステップａ）～ｄ）におけるジペプチドの形成のメカニズムを表す。

【発明を実施するための形態】

【0025】

本発明者らは、カテプシンＢの阻害剤として活性であり、したがってβ－ガラクトシダーゼ（β－ｇａｌ）活性の低下に関連する疾患の処置に有益である新規化合物を有利に開発した。さらに、特定された化合物は、医薬としての使用に特に適した特性を有する。特に、そのような化合物は、以下の有利な特性のうちの１つ以上によって特徴付けられる。
ａ）患者への投与後、化合物が全身の血流に到達することを可能にする、良好な吸収、
ｂ）処置されるべき異なる組織／臓器への良好な分布、
ｃ）化合物の活性を維持し、有害な代謝産物を生成しないように化合物が体内で代謝される、適切な代謝、及び／又は
ｄ）化合物及びその代謝産物の適切な排泄。

【0026】

本発明の化合物は、血液脳関門を通過するのに適しており、中枢神経系に影響を及ぼす疾患を処置することを可能にするという点でさらに有利である。これは、先行技術の化合物であるＥ６４ｄよりも大きな改善を表す。さらに、本発明の化合物は、カテプシンファミリーの他の酵素よりもｃａｔＢの阻害に対して良好な選択性を示す。

【0027】

本発明の化合物は、式Ｉ又は式ＩＩの化合物であり、

【化10】

【化11】

式中、
Ｒ_１が、３－メチルブチル、２－メトキシエチル、２－フルオロフェニルメチル、３－（ピペリジン－１－イル）プロピル及び２－（ピリジン－２－イル）エチルから選択され、
Ｒ_２が、水素及びメチルから選択され、
Ｒ_３が、２－メチルプロピル及び２，２，２－トリフルオロエチルから選択され、
Ｒ_４が、水素であり、
前記化合物が、Ｒ_１が３－メチルブチルである場合、
ｉ．Ｒ_３は２－メチルプロピルではないか、又は
ｉｉ．Ｒ_３は２－メチルプロピルであり、Ｒ_２はメチルであることを特徴とし、
前記化合物が、Ｒ_３が２，２，２－トリフルオロエチルである場合、Ｒ_２は水素であることをさらに特徴とする。

【0028】

本発明の化合物の構造は、窒素原子とラジカルＲ_１、Ｒ_２及びＲ_４との両方を含むジペプチド構造を有する２つのブロックからなり、前記ジペプチド構造はエポキシ頭部（ｅｐｏｘｙ ｗａｒｈｅａｄ）に連結されている。先行技術のＥ６４ｄの場合のように、本発明の式Ｉの化合物はプロドラッグであり、これは経腸投与により消化管内で加水分解される。エポキシ頭部の最末端のエステル部分が切断されて、遊離酸が放出される。化合物が治療活性であるのは、この切断された形態である。したがって、式Ｉの化合物は有利にはプロドラッグとしての使用のためであり、一方、式ＩＩの化合物は有利には治療剤としての使用のためである。

【0029】

本発明による化合物の例は以下の表２に提供される：

【0030】

【表2(1)】

【表2(2)】

【0031】

本発明による式ＩＩの化合物の例は、遊離酸の形態で表２に提供される化合物の対応物である。そのような化合物としては、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－１－（（２－２－メトキシエチル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸（ＶＲＯ０４７＿ハイドロール）、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－１－（イソペンチル（メチル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸（ＶＲＯ００６＿ハイドロール）、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－１－（（２－フルオロベンジル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸（ＶＲＯ０７３＿ハイドロール）、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４－メチル－１－オキソ－１－（（３－（ピペリジン－１－イル）プロピル）アミノ）ペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸（ＶＲＯ０５９＿ハイドロール）、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４－メチル－１－オキソ－１－（（２－（ピリジン－２－イル）エチル）アミノ）ペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸（ＶＲＯ０５２＿ハイドロール）、（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４，４，４－トリフルオロ－１－（イソペンチルアミノ）－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸（ＶＲＯ１０９＿ハイドロール）及び（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－４，４，４－トリフルオロ－１－（（２－フルオロベンジル）アミノ）－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸（ＶＲＯ２４４＿ハイドロール）が挙げられる。

【0032】

本発明の化合物は、有利には治療における使用のためである。

【0033】

本発明の化合物はまた、β－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患の処置における使用にも有利である。上記に列挙した本発明による化合物に加えて、Ｒ_１が３－メトキシプロピルであり、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４が上記の通りである、式Ｉ又は式ＩＩの化合物も、β－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患の処置における使用のためである。好ましくは、低下したβ－ガラクトシダーゼ活性に関連する疾患の処置における使用のための式Ｉのそのような化合物は、エチル（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－１－（（３－３－メトキシプロピル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボキシレート（ＶＲＯ０４２）であり、以下に提供される構造を有し、低下したβ－ガラクトシダーゼ活性に関連する疾患の処置における使用のための式ＩＩのそのような化合物は、遊離酸対応物である（２Ｓ，３Ｓ）－３－（（（Ｓ）－１－（（３－３－メトキシプロピル）アミノ）－４－メチル－１－オキソペンタン－２－イル）カルバモイル）オキシラン－２－カルボン酸（ＶＲＯ０４２＿ハイドロール）である。

【0034】

【化12】

【0035】

式ＩＩの化合物の多様な特性により、それらがＥ６４ｂ及びその公知の誘導体などの先行技術のｃａｔＢ阻害剤よりも血液脳関門を通過することをより好適にする。特に、本発明の化合物は、有利には以下の特徴がある。
ａ）血液脳関門の良好な受動的透過をもたらす、例えばｃＬｏｇＰとして表される、より高い親油性、
ｂ）水素結合ドナー原子及び／又は水素結合アクセプター原子の数の減少の結果として、及び／又は分子内水素結合の形成の結果として、それにより、改善された透過性及び血漿糖タンパク質に対する親和性の減少がもたらされる、他の化合物と水素結合を形成する低下した能力、
ｃ）改善された代謝安定性及び／又はｃａｔＢのＳ２ポケットの良好な占有によるｃａｔＢに対する増強した親和性をもたらす、よりペプチド模倣的な構造。

【0036】

本発明者らによって実証されるように、上記の特定のラジカルＲ_１、Ｒ_２及びＲ_３は、ｃａｔＢの阻害剤として活性でありながら、Ｅ６４ｃと比較して式ＩＩの化合物の薬物類似性及び血液脳関門を通過する能力を改善するという点で有利である。Ｒ_４が水素原子であることが必須であることも示されている。理論によって拘束されることを望むものではないが、この水素原子はタンパク質との水素結合に関与していると考えられる。

【0037】

Ｒ_４位の水素とは異なり、Ｒ_２位の水素は、図１で実証されているように、化合物の阻害活性を害することなくメチルで置き換えることができ、Ｒ_２位にメチルを有するＶＲ００６＿ハイドロールの、単離されたｃａｔＢを阻害する能力は、Ｅ６４ｃの能力と同様であることを理解することができる。この先行技術の構造の修飾は、水素原子のメチルによる置換により、ＶＲＯ００６＿ハイドロールがＥ６４ｃよりも親油性になり（ｃＬｏｇＰは約２）、分子内の水素供与体を１つ取り除き、分子のトポロジカル極性表面積（ＴＰＳＡ）を９０Å^２以下に減少させるという点でさらに有利である。これらの違いにより、ＶＲＯ００６＿ハイドロールはより薬物のような性質を示し、細胞膜を通して細胞内に侵入するのにより適しており、血液脳関門を通過するのにＥ６４ｃよりも適している。

【0038】

本発明者らはまた、化合物とｃａｔＢのＳ３ポケットとの間の相互作用を害することなく、本明細書に列挙されているようなＲ_１位に、より嵩高いラジカルを有利に使用することができることを特定した（図１を参照のこと）。この結果、ｃａｔＢの効率的な阻害を維持しながら、先行技術のＥ６４ｃよりも薬物類似性が改善され、血液脳関門を通過する能力が改善される。これは、Ｒ_１が２－メトキシエチル（ＶＲＯ０４７＿ハイドロール）の場合、及びＲ_１が３－メトキシプロピル（ＶＲＯ０４２＿ハイドロール）の場合であった。同様のことが、Ｒ_１が２－（ピリジン－２－イル）エチル（ＶＲＯ０５２＿ハイドロール）又は３－（ピペリジン－１－イル）プロピル（ＶＲＯ０５９＿ハイドロール）でも観察された。なぜなら、これらの化合物の両方は、単離されたｃａｔＢに対してＥ６４ｃとほぼ同様の阻害活性を示したからである。Ｒ_１位の嵩高いラジカル２－（２－フルオロフェニル）エチル（ＶＲＯ０７３＿ハイドロール）でさえ、単離されたｃａｔＢに対する阻害活性を維持することができ、この化合物はＥ６４ｃと比較してｃａｔＢ阻害活性をわずかに減少させているだけであった。酵素の阻害のこのような最小限の減少は、薬物類似性に関する利点、及び細胞膜を通して細胞内部に到達し、血液脳関門を通過する能力に関する利点によって補われる。

【0039】

しかしながら、全ての嵩高い置換基が、ｃａｔＢの十分な阻害を維持するのに適しているわけではなく、例えば、本発明者らは、嵩高く、高度に電気陰性である３，３，３－トリフルオロエチルが、単離されたｃａｔＢに対する酵素アッセイにおいて、ＶＲＯ０３５＿ハイドロールの効率を著しく減少させることを実証した（図２を参照のこと）。

【0040】

Ｒ_１位に特に好ましいラジカルは、２－（ピリジン－２－イル）エチル及び３－（ピリジン－１－イル）プロピルである。実際に、これらのラジカルがＲ_１位に存在する化合物ＶＲＯ０５２＿ハイドロール及びＶＲＯ０５９＿ハイドロールは、全細胞アッセイにおいてｃａｔＢに対する阻害活性を著しく改善したことを示した。理論によって拘束されることを望むものではないが、これはこれらの化合物の親油性が増加し、細胞膜をより容易に通過するようになったためであると考えられる。したがって、これらのラジカルをＲ_１位に有する化合物のインビボでの効率は、Ｅ６４ｃの効率よりも高いと予想される。

【0041】

ｃａｔＢのＳ２ポケットと相互作用するＲ_３に関して、本発明者らはまた、Ｅ６４ｄに存在する３－メチルブチルを多様なラジカルで置換することにより、化合物の薬物類似性を改善することを達成した。ほとんどの嵩高いラジカルは、図２により実証されているように、例えばピリジニル部分（ＶＲＯ１１９＿ハイドロール）のように、化合物の阻害活性にマイナスの影響を与える。しかしながら、Ｒ_３位の３－メチルブチルを２，２，２－トリフルオロエチルで置換すると、予想外に、図１に示されるように、ｃａｔＢに対するＶＲＯ１０９＿ハイドロールの阻害活性の著しい増加が生じた。このトリフルオロエチル部分は、他の分子と水素結合を生成し得るという望ましくない性質を有する酸素原子又は窒素原子を含まないという点でも、Ｅ６４ｃと比較してＶＲＯ１０９＿ハイドロールの親油性及び薬物類似性を著しく増加させるという点でも、さらに有利である。

【0042】

Ｒ_１位の好適なラジカルをＲ_３位の好適なラジカルと組み合わせると、図２に示されるように、化合物が依然として好適な阻害活性を示し、化合物ＶＲＯ２４４＿ハイドロールは、先行技術のＥ６４ｃよりもわずかに低い阻害活性しか示さないが、親油性が増加し、細胞内に侵入し、血液脳関門を通過する能力が増加するという特徴があり、このため、ＶＲＯ２４４＿ハイドロールがＥ６４ｃよりも薬物として適していることになる。

【0043】

しかしながら、Ｒ３位の嵩高い２，２，２－トリフルオロエチルをＲ２位のメチルと組み合わせないことが重要である。なぜなら、この特有の組み合わせは、単離された酵素に対する阻害活性をＶＲＯ２４３＿ハイドロールから奪うためである（図２を参照のこと）。

【0044】

上記で特定した式ＩＩの化合物の利点により、対応する式Ｉの化合物の有利なプロドラッグとなる。

【0045】

ｃａｔＢを阻害するそれらの能力により、上記のような式Ｉ及び式ＩＩの化合物は、β－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患の処置に有利に使用することができる。これは、背景技術のセクションで詳細に説明したように、β－ガラクトシダーゼの成熟及び分解におけるｃａｔＢの調節的役割が以前に実証されていることによる。

【0046】

β－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患の例としては、ＧＭ－１ガングリオシドーシス、モルキオ症候群Ｂ型、チェディアック－東症候群、ガラクトシアリドーシス、異染性白質ジストロフィー、ゴーシェ病、アルツハイマー病及び外傷性脳損傷が挙げられる。好ましくは、本発明の化合物は、ＧＭ－１ガングリオシドーシス、モルキオ症候群Ｂ型、チェディアック－東症候群、ガラクトシアリドーシス、異染性白質ジストロフィー及びゴーシェ病から選択される疾患、より好ましくはＧＭ－１ガングリオシドーシス及びモルキオ症候群Ｂ型、最も好ましくはＧＭ－１ガングリオシドーシスの処置における使用のためである。

【0047】

換言すれば、本発明は医薬の製造のための本発明の化合物の使用に関する。好ましくは、本発明は、β－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患の処置のための医薬、好ましくは、ＧＭ－１ガングリオシドーシス、モルキオ症候群Ｂ型、チェディアック－東症候群、ガラクトシアリドーシス、異染性白質ジストロフィー、ゴーシェ病、アルツハイマー病及び外傷性脳損傷から選択される疾患、より好ましくは、ＧＭ－１ガングリオシドーシス、モルキオ症候群Ｂ型、チェディアック－東症候群、ガラクトシアリドーシス、異染性白質ジストロフィー及びゴーシェ病から選択される疾患、さらにより好ましくは、ＧＭ－１ガングリオシドーシス及びモルキオ症候群Ｂ型から選択される疾患、最も好ましくは、ＧＭ－１ガングリオシドーシスの処置のための医薬の製造のための、上記のような式Ｉ又は式ＩＩの化合物の使用に関する。

【0048】

さらに換言すれば、本発明は、疾患の処置を必要とする患者における疾患を処置する方法であって、そのような患者に本発明の化合物を投与することを含む、方法に関する。本発明はまた、疾患の処置を必要とする患者におけるβ－ガラクトシダーゼ活性の低下に関連する疾患を処置する方法であって、そのような患者に上記のような式Ｉ又は式ＩＩの化合物を投与することを含む、方法に関する。より好ましくは、そのような疾患は、ＧＭ－１ガングリオシドーシス、モルキオ症候群Ｂ型、チェディアック－東症候群、ガラクトシアリドーシス、異染性白質ジストロフィー、ゴーシェ病、アルツハイマー病及び外傷性脳損傷から選択され、より好ましくは、そのような疾患は、ＧＭ－１ガングリオシドーシス、モルキオ症候群Ｂ型、チェディアック－東症候群、ガラクトシアリドーシス、異染性白質ジストロフィー及びゴーシェ病から選択され、さらにより好ましくは、そのような疾患は、ＧＭ－１ガングリオシドーシス及びモルキオ症候群Ｂ型から選択され、最も好ましくはＧＭ－１ガングリオシドーシスである。

【0049】

特定の態様では、式Ｉ又は式ＩＩの化合物は、ｃａｔＢを阻害する方法における使用のためである。換言すれば、本発明は、ｃａｔＢを阻害するための式Ｉ又は式ＩＩの化合物の使用に関する。さらに換言すれば、本発明は、対象においてｃａｔＢを阻害する方法であって、そのような化合物を対象に投与することを含む、方法に関する。

【0050】

別の特定の態様では、式Ｉ又は式ＩＩの化合物は、それを必要とする患者に、上述したβ－ガラクトシダーゼの低下に関連する疾患の１つを処置するために活性である少なくとも１つの追加の化合物と組み合わせて、投与される。好ましい態様では、そのような追加の化合物は、β－ガラクトシダーゼの薬理学的シャペロン、グルコセレブロシダーゼの薬理学的シャペロン、カルシウムチャネル遮断薬及び／又はグルコシルセラミド合成酵素阻害剤、及びそれらの混合物から選択される。別の好ましい態様では、そのような追加の化合物は、Ｎ－置換５－アミノ－１－ヒドロキシメチル－シクロペンタントリオール、Ｎ－オクチル－４－エピ－β－バリエナミン（ＮＯＥＶ）、アンブロキソール、シス－（＋）－［２－（２－ジメチルアミノエチル）－５－（４－メトキシフェニル）－３－オキソ－６－チア－２－アザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７，９，１１－トリエン－４－イル］エタノエート（ジルチアゼム）、［（３Ｓ）－１－アザビシクロ［２．２．２］オクタン－３－イル］Ｎ－［２－［２－（４－フルオロフェニル）－１，３－チアゾール－４－イル］プロパン－２－イル］カルバメート（ベングルスタット）、イミノ糖及びそれらの混合物からなる群から選択される。より好ましくは、そのようなイミノ糖は、好ましくは、Ｎ－ブチル－デオキシガラクトノジリマイシン（ミガーラスタット）、４－エピ－イソファゴミン、５ａ－Ｃ－ペンチル４－エピ－イソファゴミン、５ａ－Ｃ－メチル４－エピ－イソファゴミン、１，５－ジデオキシ－１，５－イミノ－（Ｌ）－リビトール（ＤＩＲ）、５－Ｃ－アルキル－イミノ－Ｌ－リビトール、Ｎ－（ダンシルアミノ）ヘキシルアミノカルボニルペンチル－１，５－ジデオキシ－１，５－イミノ－Ｄ－ガラクチトール、５Ｎ，６Ｓ－（Ｎ’－ブチルイミノメチリデン）－６－チオ－１－デオキシガラクトノジリマイシン（６Ｓ－ＮＢＩ－ＤＧＪ）、Ｎ－ノニル－デオキシガラクトノジリマイシン、Ｎ－ブチルデオキシノジリマイシン（ミグルスタット）、イソファゴミン（アフェゴスタット）、ＡＺ－３１０２及びそれらの混合物からなる群から選択される。

【0051】

本発明の式Ｉの化合物は、好ましくは、経腸投与により投与される。経腸投与とは、式Ｉの化合物が消化管に運搬される任意の投与手段を意図する。式Ｉの化合物の経腸投与は、そのような化合物が消化管内で遊離酸に加水分解されるので有利である。本発明の式ＩＩの化合物は、任意の経路によって投与され得、好ましくは、経腸投与ではない投与経路によって投与される。

【0052】

好ましい態様では、式Ｉ又は式ＩＩの化合物は、好ましくは、薬学的に許容される担体、希釈剤及び／又は賦形剤を含む医薬組成物の形態で投与される。

【0053】

「担体」という用語は、適用を容易にし、増強し、又は可能にするために活性成分が配合される、天然又は合成の性質の有機又は無機の成分を指す。本発明によれば、「担体」という用語は、患者への投与に適した１つ以上の適合性のある固体又は液体の充填剤、希釈剤又はカプセル化物質も含む。

【0054】

非経口投与のための可能な担体物質は、例えば、滅菌水、リンゲル、乳酸リンゲル、滅菌塩化ナトリウム溶液、ポリアルキレングリコール、水素化ナフタレン、特に、生体適合性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー又はポリオキシエチレン／ポリオキシ－プロピレンコポリマーである。

【0055】

本明細書で使用される場合、「賦形剤」という用語は、本明細書に記載される組成物中に存在し得、例えば、担体、結合剤、滑沢剤、増粘剤、表面活性剤、保存剤、乳化剤、緩衝剤、香味剤、又は着色剤などの有効成分ではない全ての物質を示すことを意図する。

【0056】

組成物の賦形剤は、特定の細胞又は組織を標的とすることができる特定の担体を含む、任意の薬学的に許容される賦形剤であり得る。先に述べたように、可能な医薬組成物は、経口、直腸、局所、経皮、頬、舌下、又は非経口（皮下、筋肉内、静脈内及び皮内を含む）投与に適したものを含む。これらの製剤には、当業者に周知の技術に従って従来の賦形剤を使用することができる。非経口投与用の組成物は、一般に、生理学的に適合性のある滅菌溶液又は懸濁液であり、任意選択で、固体又は凍結乾燥形態から使用直前に調製することができる。経口投与の場合、組成物は、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、並びにシロップ剤、エリキシル剤、及び濃縮点滴剤などの液体製剤などの従来の経口剤形に製剤化することができる。無毒性の固体担体又は希釈剤を使用することができ、これらには、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカン、セルロース、グルコース、スクロース、マグネシウム、炭酸塩などが含まれる。圧縮錠剤には、粉末材料に凝集性を付与する薬剤である結合剤も必要である。例えば、デンプン、ゼラチン、ラクトース又はブドウ糖などの糖類、及び天然又は合成のガムを結合剤として使用することができる。錠剤の崩壊を促進するために、錠剤には崩壊剤も必要である。崩壊剤には、デンプン、クレイ、セルロース、アルギン、ガム及び架橋ポリマーが含まれる。さらに、製造プロセスにおける錠剤材料の表面への付着を防止し、製造中の粉末材料の流動特性を改善するために、錠剤には滑沢剤及び流動促進剤も含まれる。コロイド状二酸化ケイ素が流動促進剤として最も一般的に使用され、タルク又はステアリン酸などの化合物が滑沢剤として最も一般的に使用される。経皮投与の場合、組成物は軟膏、クリーム又はゲルの形態に製剤化することができ、浸透を促進するために適切な浸透剤又は洗浄剤、例えばジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド及びジメチルホルムアミドを使用することができる。経粘膜投与の場合、点鼻薬、直腸坐薬、又は膣坐薬を使用することができる。活性化合物を、当該技術分野で公知の方法により、公知の坐薬基剤のいずれかに組み込むことができる。このような基剤の例としては、ココアバター、ポリエチレングリコール（カルボワックス）、ポリエチレンソルビタンモノステアレート、及び融点又は溶解速度を変更するための他の適合材料とのこれらの混合物が挙げられる。

【0057】

医薬組成物は、投与時に直ちに、あるいは投与後の任意の所定の時間又は一定の期間に活性薬物を実質的に放出するように製剤化され得る。

【0058】

式Ｉ又は式ＩＩの化合物は有効量で投与される。「有効量」という用語は、生理学的効果を得るのに必要な量を指す。生理学的効果は、１回の適用用量によって達成されてもよいか、又は反復適用によって達成されてもよい。投与される投薬量は、当然、特定の組成物の生理学的特性；対象の年齢、健康及び体重；症状の性質及び程度；同時処置の種類；処置の頻度；並びに所望の効果などの既知の要因に応じて変化し得、当業者によって調整され得る。特定の実施形態では、医薬組成物は、式Ｉ又は式ＩＩの化合物を０．１ｍｇ～５ｇの量、好ましくは１ｍｇ～２ｇの量、より好ましくは１０ｍｇ～１ｇの量で含む。別の特定の実施形態では、式Ｉ又は式ＩＩの化合物は、１日当たり０．１ｍｇ～５ｇの量、好ましくは１ｍｇ～２ｇの量、より好ましくは１０ｍｇ～１ｇの量で投与される。

【0059】

本発明の化合物は、２つのアミノ酸間にアミド結合を形成してジペプチド構造を生成し、形成されたジペプチドをエポキシ頭部とカップリングすることを含むプロセスによって生成することができる。

【0060】

したがって、本発明は、本発明の化合物を生成するためのプロセスに関し、そのプロセスは、
ａ）式ＩＩの化合物

【化13】

を、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）などの塩基で脱プロトン化するするステップと、
ｂ）ステップａ）で得られた脱プロトン化した化合物を、塩基性媒体中で１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロ－ホスフェート（ＨＡＴＵ）と反応させるステップと、
ｃ）ステップｂ）で得られた化合物を、塩基性媒体中でテトラメチル尿素（ＴＭＵ）と反応させるステップと、
ｄ）ステップｃ）で得られた化合物を、塩基性媒体中で式ＩＩＩのアミン

【化14】

と反応させて、例えば式ＩＶのジペプチド

【化15】

を形成するステップと、
ｅ）式ＩＶのような化合物を、酸性媒体中でトリフルオロ酢酸と反応させることによって式ＩＶの化合物からＢｏｃ基を除去して、式Ｖの化合物

【化16】

を得るステップと、
ｆ）式Ｖの化合物を、ＤＩＰＥＡなどの塩基で脱プロトン化するステップと、
ｇ）ステップｆ）で得られた脱プロトン化した化合物を、塩基性媒体中でＨＡＴＵと反応させるステップと、
ｈ）ステップｇ）で得られた化合物を、塩基性媒体中でＴＭＵと反応させるステップと、
ｉ）ステップｈ）で得られた化合物を、式ＶＩの化合物

【化17】

と反応させるステップと
を含む。

【0061】

ステップａ）からｄ）は、本発明の化合物の合成の第一段階のサブステップであり、構造のジペプチド部分が形成される。これは酸と塩基との間のアミド結合の形成を含み、一般にペプチドカップリングと呼ばれる。多くのカップリング試薬を使用することができ、当業者に周知である。しかしながら、ＨＡＴＵは、異なるタイプのカップリング出発物質に対して比較的寛容であるため、特に好適である。好ましくは、このようなステップは塩基性媒体中で実施され、より好ましくは０℃で実施される。ＨＡＴＵによって媒介されるアミド結合形成のメカニズムは図４に示される。それは、好ましくはＤＩＰＥＡである塩基による酸の脱プロトン化によって開始する。次いで形成されたカルボキシレートがＨＡＴＵからの電子不足炭素を攻撃し、それにより、不安定なＯ－アシル（テトラメチル）イソウロニウム塩を形成し、７－アザベンゾトリアゾール（ＯＡｔ）を放出する。後者は直ちにイソウロニウム塩を攻撃して、テトラメチル尿素（ＴＭＵ）及びＯＡｔ活性化エステルを形成する。式ＩＩＩのアミンによる求核付加を受けるのはこの活性種である。次いで、決定的なアミド結合が形成されて、式ＩＶの化合物が生成する。理論によって拘束されることを望むものではないが、このメカニズムはおそらく、アミド結合が形成される間、アミンを安定化させる可能性のある７員の環状遷移状態の形成を介して行われる。

【0062】

ステップｅ）では、好ましくはＤＣＭ中の２５％ＴＦＡを含む酸性媒体中でＢｏｃ保護基が除去される。このメカニズムは、ｔ－ブチルカルバメートのプロトン化によって開始する。これにより、ｔ－ブチルカチオンの喪失、及びカルバミン酸の形成が生じる。次いでＴＦＡからのカルボキシレートがカルバミン酸を脱プロトン化し、それにより、遊離アミンを放出し、１当量の二酸化炭素を形成する。ワークアップ中、第一の酸性抽出により、いくつかの有機不純物を除去することができるが、アミンはＴＦＡ塩として水層に留まる。遊離アミンは塩基性化により有機層に回収され得る。

【0063】

ステップｆ）～ｉ）では、エポキシ頭部を脱保護されたジペプチド構造に結合させる。これもアミド結合形成を伴うので、ジペプチド構造の形成と同様の方法で行われる。式Ｉの化合物が得られる。ここでも、当業者に周知の様々なカップリング剤を使用することができる。このようなカップリング剤としては、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）又はＨＡＴＵが挙げられる。しかしながら、ＤＣＣはアレルギーを起こすと記載されているため、ＨＡＴＵを使用することが好ましい。ＨＡＴＵはＤＣＣと同じ能力を示し、ＤＣＣよりも優れた収率さえ示した。

【0064】

式ＩＩの化合物を形成することが所望される場合には、このプロセスは、式Ｉの化合物のエステル部分を加水分解して、式ＩＩの遊離酸を放出する１つのさらなるステップを含む。このような加水分解に適した条件は当業者に周知である。例えば、式Ｉの化合物は塩基性媒体中で得ることができる。

【実施例】

【0065】

＜分析方法＞
^１Ｈ及び^１３Ｃ ＮＭＲ並びに２Ｄ－ＮＭＲ（ＣＯＳＹ、ＨＳＱＣ及びＨＭＢＣ）は、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｓｃｅｎｄ ３００ＭＨｚスペクトロメーターで得た。測定は全て室温で行った。化学シフト（δ、ｐｐｍで表される）は溶媒ピークを基準にした。全ての合成は、ＵＶ検出器を備え、ＳＱＤ２に結合したＷａｔｅｒｓ製のＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣシステムを使用してＵＰＬＣ－ＭＳにより追跡した。カラムはＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８（５０×２．１ｍｍ、１．７μｍ）であり、検出は２１４ｎｍで行い、分析は４０℃、０．５ｍＬ／分の流速で行い、溶出は溶離液Ａとして水中の０．０６％ギ酸、及び溶離液Ｂとしてアセトニトリル中の０．０６％ギ酸を使用した。勾配は５分間でＢを５％から１００％にし、Ｂを１００％で２分間維持し、次いで５％に３０秒間再平衡化した。

【0066】

ＴＬＣ分析は全て、Ｍｅｒｃｋ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ Ｆ２５４プレートで行い、２５４ｎｍ及び３６６ｎｍの両方の下で明らかにし、次いでハネシアン染色を使用した。

【0067】

＜実施例１：ＶＲＯ００６の合成＞
まず、ジペプチドを形成した。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、５００ｍｇのＢｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ（２．１６２ｍｍｏｌ、１．０当量）及び１０ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた無色の溶液を室温で５分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。１．０５１ｇのＨＡＴＵ（３．２４３ｍｍｏｌ、１．５当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで３１２ｍｇのＮ，３－ジメチルブタン－１－アミン塩酸塩（２．２７０ｍｍｏｌ、１．０５当量）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、１．１ｍＬのＤＩＰＥＡ（６．４８５ｍｍｏｌ、３．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。濁ったわずかに黄色の混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0068】

透明な黄色がかった溶液である反応混合物を、１０ｍＬのＤＣＭを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＣｌ ２．６％で洗浄し、次いでＡＰを１０ｍＬのＤＣＭで１回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＣｌ ２．６％で洗浄し、次いでＡＰを１０ｍＬのＤＣＭで１回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＨＣｌ ０．２５Ｍで１回、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３ １０％で１回、及び最後に５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％で洗浄した。ＯＰをＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）（４０℃、８５０～７０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、７６６ｍｇ（生の収率（ｒａｗ ｙｉｅｌｄ）：１１２．７％）のオレンジ色のペースト状の物質を３６２－ＶＲＯ００６－０１－００１粗製物１＃１として得た。

【0069】

粗物質を、４０ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１３．５ｃｍのカラム）を使用したＣＣによって精製し、続いて溶離液としてヘプタン－ＥｔＯＡｃ（７：３）を使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒｆ＝０．４４。純粋なヘプタンからヘプタン－ＥｔＯＡｃ（６：４）への勾配で生成物を溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、２００～５０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で１時間乾燥させて、６１０ｍｇ（生の収率：８９．７％）のほぼ無色の油状物を３６２－ＶＲＯ００６－０１－００１ ＣＣ１＃１として得た。

【0070】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝５．３７－５．１１（ｍ，１Ｈ，４），４．７３－４．５４（ｍ，１Ｈ，５），３．５０－３．２３（ｍ，２Ｈ，１１），３．０３（ｓ，２Ｈ，１０），２．９２（ｓ，１Ｈ，１０），１．５５（ｂｒ．ｍ，４Ｈ，６，７，１３），１．４２（ｓ，９Ｈ，１，２，３），１．４０－１．３０（ｍ，２Ｈ，１２），０．９８（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，６．４，６Ｈ，８，９，１４，１５），０．９２（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．５，６Ｈ，８，９，１４，１５）。

【0071】

^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝４８．７２（５），４８．２６（５），４６．５０（１１），４３．３３（１２），４２．７０（１２），３７．２８（６），３５．７３（６），３４．８３（１０），３３．６１（１０），２８．２９（１，２，３），２６．１２（７，１３），２５．９２（７，１３），２４．５６（７，１３），２３．４６（８，９，１４，１５），２３．４１（８，９，１４，１５），２２．５１（８，９，１４，１５），２２．４７（８，９，１４，１５），２２．４３（８，９，１４，１５），２２．４０（８，９，１４，１５），２１．７５（８，９，１４，１５），２１．７１（８，９，１４，１５）。

【0072】

次いでＢｏｃ保護基を以下のように除去した。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、６０１ｍｇの３６２－ＶＲＯ００６－０１－００１ ＣＣ１＃１（１．９１１ｍｍｏｌ、１．０当量）及び２．１ｍＬのＥｔＯＡｃ中の１０％ＨＣｌ溶液を導入し、得られた無色の溶液を室温で３時間３０分間撹拌した。反応混合物を２５ｍＬのＥｔＯＡｃを使用して分液漏斗に移し、２５ｍＬの水で洗浄した。ＡＰを６ｍＬのＮａＯＨ ２５％を使用してｐＨ＞１０になるように塩基性化し、次いで２５ｍＬのＥｔＯＡｃで３回抽出した。ＯＰを合わせ、２５ｍＬのＮａＣｌ １１．６％を使用して洗浄した。ＯＰをＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２５０～７０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で１時間乾燥させて、３７１ｍｇ（生の収率：９０．６％）のほぼ無色の油状物を３６２－ＶＲＯ００６－０２－００１粗製物１＃１として得た。この物質を次のステップにおいてさらに精製することなく「そのまま」使用した。

【0073】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝３．８８－３．５７（ｍ，１Ｈ，２），３．３３（ｂｒ．ｍ，２Ｈ，８），２．９９（ｓ，１Ｈ，７），２．９３（ｓ，１Ｈ，７），２．０１（ｂｒ．ｓ，Ｊ＝１８．９，２Ｈ，１），１．９５－１．７７（ｍ，１Ｈ，３’），１．４２（ｂｒ．ｍ，５Ｈ，３’’，４，９，１０），１．０９－０．７９（ｍ，１２Ｈ，５，６，１１，１２）。

【0074】

最後に、ジペプチドをエポキシ頭部にカップリングさせた。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、２８２ｍｇの３６２－ＢＢ０１－０３－００１粗製物１＃１（１．７５９ｍｍｏｌ、当量）及び５ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた白色の懸濁液を５分間室温で撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。８１４ｍｇのＨＡＴＵ（２．５１２ｍｍｏｌ、１．５当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで５ｍＬのＤＣＭ中の溶液中の３５９ｍｇの３６２－ＶＲＯ００６－０２－００１粗製物１＃１（１．６７５ｍｍｏｌ、１．０当量）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、８７５μＬのＤＩＰＥＡ（５．０２４ｍｍｏｌ、３．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。得られた黄色の混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0075】

透明な黄色の溶液である反応混合物を、１０ｍＬのＤＣＭを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＣｌ ２．６％で洗浄し、次いでＡＰを１０ｍＬのＤＣＭで１回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＣｌ ２．６％で１回洗浄し、次いでＡＰを１０ｍＬのＤＣＭで１回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＨＣｌ ０．２５Ｍで１回、５０ｍＬのＮａＨＣＯ_３ １０％で１回、及び５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％で１回洗浄した。ＯＰをＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２２０～３０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、７０１ｍｇ（生の収率：１１７．４％）の淡黄色がかった油状物を３６２－ＶＲＯ００６－０３－００１粗製物１＃１として得た。

【0076】

粗物質を、４０ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１３．５ｃｍのカラム）を使用したＣＣにより精製し、続いて溶離液としてヘプタン－ＥｔＯＡｃ（１：１）を使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒ_ｆ＝０．５３。生成物をヘプタン－ＥｔＯＡｃ（９：１）からヘプタン－ＥｔＯＡｃ（１：１）への勾配で溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、２００～５０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間３０分乾燥させて、３３４ｍｇ（生の収率：５５．９％）の無色の油状物を３６２－ＶＲＯ００６－０３－００１ ＣＣ１＃１として得た。

【0077】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝６．８４（ｄｄ，Ｊ＝１６．２，８．８，１Ｈ，５），５．０２－４．８７（ｍ，１Ｈ，６），４．３７－４．１７（ｍ，２Ｈ，２），３．６５（ｄｄ，Ｊ＝１．８，０．８，１Ｈ，４），３．４６（ｄｄ，Ｊ＝１．８，０．９，１Ｈ，３），３．３４（ｂｒ．ｍ，２Ｈ，１２），３．０４（ｓ，２Ｈ，１１），２．９２（ｓ，１Ｈ，１１），１．４８（ｂｒ．ｍ，６Ｈ，７，８，１３，１４），１．３１（ｔ，Ｊ＝７．１，３Ｈ，１），１．０５－０．８６（ｍ，１２Ｈ，９，１０，１５，１６）。

【0078】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝６２．２０（２），５３．８８（４），５２．８１（３），４８．２８（１２），４７．０６（６），４６．７２（６），４６．６４（１２），４２．８１（７），４２．３２（７），３７．２７（１３），３５．６７（１３），３４．８６（１１），３３．７０（１１），２６．０７（８，１４），２５．９４（８，１４），２４．７２（９，１０，１５，１６），２３．４４（９，１０，１５，１６），２３．４１（９，１０，１５，１６），２２．５０（９，１０，１５，１６），２２．４５（９，１０，１５，１６），２２．３８（９，１０，１５，１６），２２．３６（９，１０，１５，１６），２１．６９（９，１０，１５，１６），２１．６０（９，１０，１５，１６），１４．００（１）。

【0079】

＜実施例２：ＶＲＯ０４７の合成＞
まず、ジペプチドを形成した。マグネチックスターラーを備えた５０ｍＬの丸底フラスコに、３．２３２ｇのＢｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ（１３．９７５ｍｍｏｌ、１．０５当量）及び３５ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた濁った溶液を室温で５分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。６．４７１ｇのＨＡＴＵ（１９．９４６ｍｍｏｌ、１．５当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで１１５７μＬの２－２－メトキシエチルアミン（１３．３０９ｍｍｏｌ、１．０当量）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、４．６ｍＬのＤＩＰＥＡ（２６．６１８ｍｍｏｌ、２．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。得られた濁った黄色がかった溶液を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0080】

透明な黄色の溶液である反応混合物を、１０ｍＬのＤＣＭを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＣｌ ２．６％で洗浄し、次いでＡＰを１０ｍＬのＤＣＭで１回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＨＣｌ ０．５Ｍで１回、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３ １０％で１回、及び最後に５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％で洗浄した。ＯＰをＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、８５０～７０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間４０分乾燥させて、６．９８６ｇ（生の収率：１８２．０％）の淡黄色の油状物を３６２－ＶＲＯ０４７－０１－００１粗製物１＃１として得た。

【0081】

粗物質を、３５ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１１．８ｃｍのカラム）を使用したＣＣにより精製し、続いて溶離液としてヘプタン－ＥｔＯＡｃ（１：１）を使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒｆ＝０．４６。純粋なヘプタンからヘプタン－ＥｔＯＡｃ（１：１）への勾配で生成物を溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、２２０～５０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で１時間乾燥させて、１．２６７ｇ（生の収率：３３．０）の白色の粘着性のある泡状物を３６２－ＶＲＯ０４７－０１－００１ ＣＣ１＃１として得た。

【0082】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝６．３７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，１０），４．８８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，４），４．２４－３．８９（ｍ，１Ｈ，５），３．５０－３．３８（ｍ，４Ｈ，１１，１２），３．３５（ｓ，３Ｈ，１３），１．７６－１．５６（ｍ，２Ｈ，６’’，７），１．５６－１．３５（ｍ，１Ｈ，６’），１．４４（ｓ，９Ｈ，１，２，３），０．９３（ｄｄ，Ｊ＝６．２，１．１，６Ｈ，８，９）。

【0083】

次いでＢｏｃ保護基を以下のように除去した。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、１．２６７ｇの３６２－ＶＲＯ０４７－０１－００１ ＣＣ１＃１（４．３９３ｍｍｏｌ、当量）及び４．４ｍＬのＥｔＯＡｃ中の１０％ＨＣｌ溶液を導入し、得られた無色の溶液を室温で３時間撹拌した。反応混合物を２５ｍＬのＥｔＯＡｃを使用して分液漏斗に移し、２５ｍＬの水で洗浄した。ＡＰを、４．５ｍＬのＮａＯＨ ２５％を使用してｐＨ＞１０になるように塩基性化し、次いで２５ｍＬのＥｔＯＡｃで３回抽出した。ＯＰを合わせ、２５ｍＬのＮａＣｌ １１．６％を使用して洗浄した。ＯＰをＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２５０～７０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で３時間乾燥させて、３３７ｍｇ（生の収率：４０．７％）の淡黄色の油状物を３６２－ＶＲＯ０４７－０２－００１粗製物１＃１として得た。この物質を次のステップにおいてさらに精製することなく「そのまま」使用した。

【0084】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝７．４９（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，７），３．５７－３．３７（ｍ，５Ｈ，２，８，９），３．３６（ｓ，３Ｈ，１０），１．８３－１．５７（ｍ，４Ｈ，１，３’’，４），１．４７－１．２８（ｍ，１Ｈ，３’），０．９５（ｄｄ，Ｊ＝８．４，６．２，６Ｈ，５，６）。

【0085】

最後に、ジペプチドをエポキシ頭部にカップリングさせた。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、２９０ｍｇの３６２－ＢＢ０１－０３－００１粗製物１＃１（１．８１３ｍｍｏｌ、１．０５当量）及び５ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた白色の懸濁液を５分間室温で撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。８３９ｍｇのＨＡＴＵ（２．５８９ｍｍｏｌ、１．５当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで５ｍＬのＤＣＭ中の溶液中の３２５ｍｇの３６２－ＶＲＯ０４７－０２－００１粗製物１＃１（１．７２６ｍｍｏｌ、１．０当量）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、６０１μＬのＤＩＰＥＡ（３．４５２ｍｍｏｌ、２．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。得られた混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0086】

透明な黄色の溶液である反応混合物を、１０ｍＬのＤＣＭを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＣｌ ５．８％で洗浄し、次いでＡＰを１０ｍＬのＤＣＭで１回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＣｌ ５．８％で１回洗浄し、次いでＡＰを１０ｍＬのＤＣＭで１回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＨＣｌ ０．２５Ｍで１回、５０ｍＬのＮａＨＣＯ_３ １０％で１回、及び５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％で１回洗浄した。ＯＰをＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２２０～３０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、５６０ｍｇ（生の収率：９８．２％）の黄色がかった粘性のある固体を３６２－ＶＲＯ０４７－０３－００１粗製物１＃１として得た。

【0087】

粗物質を、４５ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１５．２ｃｍのカラム）を使用したＣＣにより精製し、続いて溶離液としてヘプタン－ＥｔＯＡｃ（３：７）を使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒ_ｆ＝０．４１。生成物をヘプタン－ＥｔＯＡｃ（７：３）からヘプタン－ＥｔＯＡｃ（２：８）への勾配で溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、２００～４０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、２２０ｍｇ（生の収率：３８．６％）のわずかに淡黄色の固体を３６２－ＶＲＯ０４７－０３－００１ ＣＣ１＃１として得た。

【0088】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝６．５８（ｄ，Ｊ＝８．６，１Ｈ，５），６．２３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，１１），４．４１（ｔｄ，Ｊ＝８．５，５．６，１Ｈ，６），４．２６（ｑｑ，Ｊ＝７．１，３．６，２Ｈ，２），３．６９（ｄ，Ｊ＝１．８，１Ｈ，４），３．５１－３．３９（ｍ，５Ｈ，３，１２，１３），３．３６（ｓ，３Ｈ，１４），１．５６（ｂｒ．ｍ，Ｊ＝２３．２，１３．４，９．５，５．２，３Ｈ，７，８），１．３１（ｔ，Ｊ＝７．１，３Ｈ，１），０．９３（ｄｄ，Ｊ＝６．１，２．９，６Ｈ，９，１０）。

【0089】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝７０．７５（１３），６２．３０（２），５８．７６（１４），５３．７７（４），５２．８８（３），５１．１６（６），４１．５１（７），３９．２６（１２），２４．７６（８），２２．７８（９，１０），２２．０５（９，１０），１３．９９（１）。

【0090】

＜実施例３：ＶＲＯ０５２の合成＞
まず、ジペプチドを形成した。マグネチックスターラーを備えた５０ｍＬの丸底フラスコに、２．２３５ｇのＢｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ（９．６６１ｍｍｏｌ、１．１当量）及び２５ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた懸濁液を室温で５分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。８．５４０ｇのＨＡＴＵ（２６．３４８ｍｍｏｌ、３．０当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで１．１ｍＬの２－（２－アミノエチル）ピリジン（８．７８３ｍｍｏｌ、１．０当量）及び１０ｍＬのＤＣＭ（ＨＡＴＵの量のために懸濁液が濃すぎた）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、７．６ｍＬのＤＩＰＥＡ（４３．９１４ｍｍｏｌ、５．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。得られた強い黄色の混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0091】

白色の固体を含む褐色がかったオレンジ色の溶液である反応混合物を、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過して塩を除去した。濾液を５ｍＬのＤＣＭを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＣｌ ５．８％で洗浄し、次いでＡＰを１０ｍＬのＤＣＭで１回抽出した。この操作をさらに２回繰り返し、次いでＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３ １０％で１回洗浄し、最後に５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％で洗浄した。ＯＰをＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、８５０～７０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間３０分乾燥させて、８．４６２ｇ（生の収率：２８７．２％）の褐色がかったオレンジ色の油状物質を３６２－ＶＲＯ０５２－０１－００１粗製物１＃１として得た。

【0092】

ＣＣによる精製の最初の試みを、５０ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１６．９ｃｍのカラム）を使用して行い、続いて溶離液として１％Ｅｔ３Ｎを含むＤＣＭを使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒｆ＝０．５１。生成物を、１％Ｅｔ３Ｎを含むＤＣＭから０．５％のＭｅＯＨ及び１％Ｅｔ３Ｎを含むＤＣＭへの勾配で溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、８００～５０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で３時間乾燥させて、６．６６６ｇ（生の収率：２２６．３％）の黄色がかった油状物質を３６２－ＶＲＯ０５２－０１－００１ ＣＣ１＃１として得た。

【0093】

ＣＣによりＴＭＵを除去するための精製の２回目の試みを、５５ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１６．９ｃｍのカラム）を使用して行い、続いて溶離液としてヘプタン－ＥｔＯＡｃ（２：８）及び１％Ｅｔ３Ｎを使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒｆ＝０．４５。生成物を、１％Ｅｔ３Ｎを含むヘプタン－ＥｔＯＡｃ（７：３）から１％Ｅｔ３Ｎを含むヘプタン－ＥｔＯＡｃ（１：９）への勾配で溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、２２０～５０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、３．２２８ｇ（生の収率：１０９．６％）の黄色がかった油状物質を３６２－ＶＲＯ０５２－０１－００１ ＣＣ２＃１として得た。

【0094】

ＴＭＵを除去するために、２回目のＣＣから回収した物質を再抽出した。この物質を１５ｍＬのＥｔＯＡｃを使用して分液漏斗に移し、次いで５０ｍＬのＮａＨＣＯ３ １０％で４回洗浄した。ＯＰをＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２２０～４０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で３時間乾燥させて、２．４１６ｇ（生の収率：８２．０％）の黄色がかった油状物質を３６２－ＶＲＯ０５２－０１－００１粗製物２＃１として得た。

【0095】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．５２（ｄｔ，Ｊ＝４．８，１．５，１Ｈ，１６），７．６４（ｔｄ，Ｊ＝７．７，１．９，１Ｈ，１４），７．２３－７．１２（ｍ，２Ｈ，１３，１５），７．０２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，１０），５．０９－４．７７（ｍ，１Ｈ，４），４．１８－３．９２（ｍ，１Ｈ，５），３．７８－３．５６（ｍ，２Ｈ，１１），３．１１－２．９１（ｍ，２Ｈ，１２），１．６１（ｄｄ，Ｊ＝１６．０，５．９，２Ｈ，６’’，７），１．４５（ｄ，Ｊ＝７．４，１Ｈ，６’），１．４０（ｓ，９Ｈ，１，２，３），０．９０（ｄ，Ｊ＝６．１，６Ｈ，８，９）。

【0096】

^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１４８．６１（１６），１３７．０４（１４），１２３．６５（１３，１５），１２１．６８（１３，１５），５３．１１（５），４１．７７（６），３８．５０（１１），３６．４４（１２），２８．２５（１，２，３），２４．７０（７），２２．７９（８，９），２１．９９（８，９）。

【0097】

次いでＢｏｃ保護基を以下のように除去した。マグネチックスターラーを備えた５０ｍＬの丸底フラスコに、２．４１６ｇの３６２－ＶＲＯ０５２－０１－００１ ＣＣ１＃１（７．２０２ｍｍｏｌ、当量）及び１８．１ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた無色の溶液を室温で１５分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。６．０ｍＬのＴＦＡ（７８．８７５ｍｍｏｌ、１０．９５当量）を０～５℃で滴下して添加した。反応混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を５ｍＬのＤＣＭを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬの水で洗浄した。ＡＰを２０ｍＬのＮａＯＨ ２５％を使用してｐＨ＞１０になるように塩基性化し、次いで２０ｍＬのＤＣＭで３回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％を使用して洗浄した。ＯＰをＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、８００～７０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で６時間乾燥させて、１．４７０ｇ（生の収率：８６．７％）の淡黄色の固体を３６２－ＶＲＯ０５２－０２－００１粗製物１＃１として得た。この物質を次のステップにおいてさらに精製することなく「そのまま」使用した。

【0098】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．５４（ｄ，Ｊ＝４．５，１Ｈ，１３），７．７０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，７），７．６０（ｔｄ，Ｊ＝７．７，１．８，１Ｈ，１１），７．２１－７．０８（ｍ，２Ｈ，１０，１２），３．６６（ｑ，Ｊ＝６．４，２Ｈ，８），３．３８（ｄ，Ｊ＝６．１，１Ｈ，２），３．００（ｔ，Ｊ＝６．６，２Ｈ，９），１．７４（ｂｒ．ｓ，２Ｈ，１），１．７６－１．５１（ｍ，２Ｈ，３’’，４），１．４２－１．２２（ｍ，１Ｈ，３’），０．９１（ｄｄ，Ｊ＝８．５，６．２，６Ｈ，５，６）。

【0099】

最後に、ジペプチドをエポキシ頭部にカップリングさせた。マグネチックスターラーを備えた１００ｍＬの丸底フラスコに、９７０ｍｇの３６２－ＢＢ０１－０３－００４粗製物１＃１（６．０５５ｍｍｏｌ、１．０５当量）及び１５ｍＬのＤＭＦを導入し、得られた溶液を室温で５分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。５．６０７ｇのＨＡＴＵ（１７．２９９ｍｍｏｌ、３．０当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで１５ｍＬのＤＭＦ中の溶液中の１．３５７ｇの３６２－ＶＲＯ０５２－０２－００１粗製物１＃１（５．７６６ｍｍｏｌ、１．０当量）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、５．０ｍＬのＤＩＰＥＡ（２８．８３２ｍｍｏｌ、５．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。得られた黄褐色がかった混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0100】

透明な暗褐色溶液である反応混合物を、３０ｍＬのＥｔＯＡｃを使用して分液漏斗に移し、１００ｍＬのＮａＣｌ ５．８％で洗浄し、次いでＡＰを３０ｍＬのＥｔＯＡｃで４回抽出した。ＯＰを合わせ、１００ｍＬのＮａＨＣＯ_３ ５％で１回洗浄し、次いでＡＰを２０ｍＬのＥｔＯＡｃで１回抽出した。ＯＰを合わせ、１００ｍＬのＮａＨＣＯ_３ １０％で１回洗浄し、次いでＡＰを２０ｍＬのＥｔＯＡｃで１回抽出した。ＯＰを合わせ、最後の操作をもう１回繰り返した。ＯＰをＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２２０～３０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で１時間３０分乾燥させて、２．２９６ｇ（生の収率：１０５．５％）の暗褐色の粘着性のある泡状物を３６２－ＶＲＯ０５２－０３－００２粗製物１＃１として得た。

【0101】

粗物質をまず、２０ｍＬのＥｔＯＡｃを使用してスラリーを通して精製した。懸濁液を約３０分間室温で撹拌し、次いで０～５℃に冷却し、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過した。濾過ケーキを６ｍＬの冷ＥｔＯＡｃで２回洗浄し、次いで高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、１．１１４ｇ（生の収率：５１．２％）のわずかにベージュ色の粉末を３６２－ＶＲＯ０５２－０３－００２スラリー１＃１として得た。

【0102】

この物質を、５０ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１６．９ｃｍのカラム）を使用したＣＣにより再精製し、続いて溶離液として１％Ｅｔ_３Ｎを含む純粋なＥｔＯＡｃを使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒ_ｆ＝０．５２。生成物をヘプタン－ＥｔＯＡｃ（１：１）から常に１％Ｅｔ_３Ｎを含む純粋なＥｔＯＡｃへの勾配で溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、２４０～５０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で３時間乾燥させて、９６６ｍｇ（生の収率：４４．４％）の白色の固体を３６２－ＶＲＯ０５２－０３－００２ ＣＣ１＃１として得た。

【0103】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．５５（ｄ，Ｊ＝４．９，１Ｈ，１７），７．６９（ｔ，Ｊ＝７．６，１Ｈ，１６），７．２５－７．１２（ｍ，３Ｈ，１１，１４，１５），６．６０（ｄ，Ｊ＝８．５，１Ｈ，５），４．４５－４．３３（ｍ，１Ｈ，６），４．２７（ｑｄ，Ｊ＝７．２，３．２，２Ｈ，２），３．７０（ｔ，Ｊ＝６．３，２Ｈ，１２），３．６６（ｄ，Ｊ＝１．９，１Ｈ，４），３．４６（ｄ，Ｊ＝１．９，１Ｈ，３），３．０３（ｔ，Ｊ＝６．１，２Ｈ，１３），１．５３（ｂｒ．ｍ，３Ｈ，７，８），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．１，３Ｈ，１），０．８９（ｄ，Ｊ＝５．８，６Ｈ，９，１０）。

【0104】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１４７．３９（１７），１３８．４０（１５），１２４．３３（１４，１６），１２２．２７（１４，１６），６２．２６（２），５３．８６（４），５２．８８（３），５１．３８（６），４１．５７（７），３８．５６（１２），３５．４９（１３），２４．８２（８），２２．７４（９，１０），２２．０１（９，１０），１４．００（１）。

【0105】

＜実施例４：ＶＲＯ０５９の合成＞
まず、ジペプチドを形成した。マグネチックスターラーを備えた５０ｍＬの丸底フラスコに、１．３２０ｇのＢｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ（５．７０７ｍｍｏｌ、１．１当量）及び２５ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた濁った溶液を室温で５分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。５．０４５ｇのＨＡＴＵ（１５．５６５ｍｍｏｌ、３．０当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで８２５μＬの３－（ピペリジニル）プロパンアミン（５．１８８ｍｍｏｌ、１．０当量）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、４．５ｍＬのＤＩＰＥＡ（２５．９４１ｍｍｏｌ、５．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。得られた黄色がかった混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0106】

懸濁液中に白色の固体を含む褐色がかった赤色の溶液である反応混合物を、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過して塩を除去した。濾液を５ｍＬのＤＣＭを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＣｌ ５．８％で洗浄し、次いでＡＰを１０ｍＬのＤＣＭで１回抽出した。ＯＰを合わせ、以前の洗浄を２回繰り返した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３ １０％で１回洗浄し、最後に５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％で洗浄した。ＯＰをＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、８５０～７０ｍｂａｒ）内に乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間３０分乾燥させて、４．１１３ｇ（生の収率：２２３．０％）の褐色がかった赤色の油状物質を３６２－ＶＲＯ０５９－０１－００２粗製物１＃１として得た。

【0107】

粗物質を、５０ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１６．９ｃｍのカラム）を使用したＣＣにより精製し、続いて溶離液として１．５％のＭｅＯＨ及び１％のＥｔ３Ｎを含むＤＣＭを使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒｆ＝０．５６。生成物を、純粋なＤＣＭから常に１％のＥｔ３Ｎを含む２％のＭｅＯＨを含むＤＣＭへの勾配で溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、７５０～６０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、１．５５７ｇ（生の収率：８４．４％）の黄色がかった油状物を３６２－ＶＲＯ０５９－０１－００２ ＣＣ１＃１として得た。

【0108】

ＴＭＵを除去するために、ＣＣから回収した物質を再抽出した。この物質を１０ｍＬのＥｔＯＡｃを使用して分液漏斗に移し、次いで５０ｍＬのＮａＨＣＯ３ １０％で２回洗浄した。ＯＰをＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２２０～４０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で３時間乾燥させて、１．１８１ｇ（生の収率：６４．０％）の黄色がかった粘性のある物質を３６２－ＶＲＯ０５９－０１－００１粗製物２＃１として得た。

【0109】

再抽出した物質を、５０ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１６．９ｃｍのカラム）を使用した２回目のＣＣにより精製し、続いて溶離液として１％のＥｔ３Ｎを含む純粋なＥｔＯＡｃを使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒｆ＝０．４７。生成物をヘプタン－ＥｔＯＡｃ（１：１）から純粋なＥｔＯＡｃへの勾配で溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、２２０～６０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、１．０３８ｇ（生の収率：５６．３％）の淡黄色がかった固体を３６２－ＶＲＯ０５９－０１－００２ ＣＣ２＃１として得た。

【0110】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝７．６３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，１０），４．９８（ｄ，Ｊ＝７．７，１Ｈ，４），４．１０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，５），３．４６－３．２１（ｍ，２Ｈ，１１），２．７１－２．１３（ｍ，６Ｈ，１３，１４，１５），１．７９－１．５５（ｍ，８Ｈ，６’’，７，１２，１６，１７），１．５４－１．３５（ｍ，３Ｈ，６’，１８），１．４３（ｓ，９Ｈ，１，２，３），０．９４（ｄｄ，Ｊ＝６．２，３．５，６Ｈ，８，９）。

【0111】

^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝５８．１５（１３），５４．５６（１４，１５），５３．１５（５），４２．３２（６），３９．６２（１１），２８．２７（１，２，３），２５．８４（１２，１６，１７），２４．６６（７），２４．６１（１２，１６，１７），２４．１１（１８），２３．０５（８，９），２１．９７（８，９）。

【0112】

次いでＢｏｃ保護基を以下のように除去した。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、１．０２４ｇの３６２－ＶＲＯ０５９－０１－００１ ＣＣ２＃１（２．８８０ｍｍｏｌ、当量）及び７．７ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた無色の溶液を室温で１０分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。２．６ｍＬのＴＦＡ（３３．４３０ｍｍｏｌ、１１．６１当量）を０～５℃で滴下して添加した。反応混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を５ｍＬのＤＣＭを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬの水で洗浄した。ＡＰを８ｍＬのＮａＯＨ ２５％を使用してｐＨ＞１０になるように塩基性化し、次いで２０ｍＬのＤＣＭで３回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％で洗浄した。ＯＰをＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、８００～７０ｍｂａｒ）内に乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で６時間乾燥させて、６５４ｍｇ（生の収率：８８．９％）の淡黄色がかった油状物を３６２－ＶＲＯ０５９－０２－００２粗製物１＃１として得た。この物質を次のステップにおいてさらに精製することなく「そのまま」使用した。

【0113】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．９０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，７），３．４４－３．２１（ｍ，３Ｈ，２，８），２．６１－２．２６（ｍ，６Ｈ，１０，１１，１２），１．６６（ｂｒ．ｍ，１０Ｈ，１，３’，４，９’，９’’，１３，１４），１．５１－１．４１（ｍ，２Ｈ，１５），１．４０－１．２７（ｍ，１Ｈ，３’’），０．９４（ｄｄ，Ｊ＝８．０，６．５，６Ｈ，５，６）。

【0114】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝５７．７８（１０），５４．５８（１１，１２），５３．７４（２），４４．３２（３），３８．６４（８），２５．７５（９，１３，１４），２５．５９（９，１３，１４），２４．８０（４），２４．１８（１５），２３．３９（５，６），２１．３７（５，６）。

【0115】

最後に、ジペプチドをエポキシ頭部にカップリングさせた。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、３５６ｍｇの３６２－ＢＢ０１－０３－００４粗製物１＃１（２．２４１ｍｍｏｌ、１．０５当量）及び７．５ｍＬのＤＭＦを導入し、得られた溶液を室温で５分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。２．０７５ｇのＨＡＴＵ（６．４０２ｍｍｏｌ、３．０当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで７．５ｍＬのＤＭＦ中の溶液中の５４５ｍｇの３６２－ＶＲＯ０５９－０２－００２粗製物１＃１（２．１３４ｍｍｏｌ、１．０当量）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、１．９ｍＬのＤＩＰＥＡ（１０．６９９ｍｍｏｌ、５．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。得られた黄褐色がかった混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0116】

透明な暗褐色の溶液である反応混合物を、１５ｍＬのＥｔＯＡｃを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＣｌ ５．８％で洗浄し、次いでＡＰを１５ｍＬのＥｔＯＡｃで４回抽出する。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＨＣＯ_３ １０％で４回洗浄する。ＯＰをＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２２０～３０ｍｂａｒ）内に乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で１時間３０分乾燥させて、１．０６３ｇ（生の収率：１２５．３％）の暗褐色の粘着性のある固体を３６２－ＶＲＯ０５９－０３－００３粗製物１＃１として得た。

【0117】

粗物質を、５０ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１６．９ｃｍのカラム）を使用したＣＣにより精製し、続いて溶離液として１％ＭｅＯＨ及び１％Ｅｔ_３Ｎを含むＤＣＭを使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒ_ｆ＝０．３６。生成物を、純粋なＤＣＭから常に１％Ｅｔ_３Ｎを含む１％ＭｅＯＨを含むＤＣＭへの勾配で溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、８００～５０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、３９７ｍｇ（生の収率：４６．８％）の粘性のある褐色がかったオレンジ色の固体を３６２－ＶＲＯ０５９－０３－００３ ＣＣ１＃１として得た。

【0118】

この物質を、５０ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１６．９ｃｍのカラム）を使用したＣＣにより再精製し、続いて溶離液として１％Ｅｔ_３Ｎを含むヘプタン－アセトン（３：７）を使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒ_ｆ＝０．５７。生成物をヘプタン－アセトン（８：２）から常に１％Ｅｔ_３Ｎを含むヘプタン－アセトン（３：７）への勾配で溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、３２０～５０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で１時間乾燥させて、１１６ｍｇ（生の収率：１７．４％）の褐色がかったベージュ色の固体を３６２－ＶＲＯ０５９－０３－００３ ＣＣ２＃１として得た。この物質を再抽出した。これを２０ｍＬのＥｔＯＡｃ及び２０ｍＬの水を使用して分液漏斗に移し、次いでＨＣｌ １Ｍを添加してｐＨを１にした。ＡＰをｐＨ９に塩基性化し、２０ｍＬのＥｔＯＡｃで３回抽出した。ＯＰを合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２２０～３０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で３時間乾燥させて、１１１ｍｇ（生の収率：１３．７％）の粘性のあるオレンジ色がかった黄色の固体を３６２－ＶＲＯ０５９－０３－００３抽出物１＃１として得た。

【0119】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．１７（ｔ，Ｊ＝５．０，１Ｈ，１１），６．６９（ｄ，Ｊ＝８．５，１Ｈ，５），４．４３－４．３１（ｍ，１Ｈ，６），４．２５（ｑｑ，Ｊ＝７．１，３．６，２Ｈ，２），３．６７（ｄ，Ｊ＝１．９，１Ｈ，４），３．４６（ｄ，Ｊ＝１．９，１Ｈ，３），３．４４－３．２３（ｍ，２Ｈ，１２），２．７３－２．３０（ｍ，６Ｈ，１４，１５，１６），１．６３（ｂｒ．ｍ，１１Ｈ，７，８，１３，１７，１８，１９），１．３０（ｔ，Ｊ＝７．１，３Ｈ，１），０．９３（ｄ，Ｊ＝５．３，６Ｈ，９，１０）。

【0120】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝６２．２０（２），５８．２５（１４），５４．４７（１５，１６），５３．８９（４），５２．８４（３），５１．４３（６），４２．０９（７），４０．０１（１２），２５．７９（１３，１７，１８，１９），２４．７６（８），２３．９８（１３，１７，１８，１９），２３．８７（１３，１７，１８，１９），２２．９５（９，１０），２２．０２（９，１０），１３．９９（１）。

【0121】

＜実施例５：ＶＲＯ０７３の合成＞
まず、ジペプチドを形成した。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、９７０ｍｇのＢｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ（４．１９５ｍｍｏｌ、１．０５当量）及び１０ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた濁った溶液を室温で５分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。１．９４３ｇのＨＡＴＵ（５．９９３ｍｍｏｌ、１．５当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで４５７μＬの２－フルオロベンジルアミン（３．９９５ｍｍｏｌ、１．０当量）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、１．４ｍＬのＤＩＰＥＡ（７．９９１ｍｍｏｌ、２．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。得られた濁った強い黄色の溶液を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0122】

わずかに濁った黄色の溶液である反応混合物を、１０ｍＬのＤＣＭを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＣｌ ５．８％で洗浄し、次いでＡＰを１０ｍＬのＤＣＭで１回抽出した。この操作をさらに２回繰り返し、次いでＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３ １０％で１回洗浄し、最後に５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％で洗浄した。ＯＰをＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、８５０～７０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で３時間乾燥させて、１．８４１ｇ（生の収率：１３６．２％）のベージュ色がかった黄色の粘性のある固体を３６２－ＶＲＯ０７３－０１－００１粗製物１＃１として得た。

【0123】

粗物質を、４５ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１５．２ｃｍのカラム）を使用したＣＣにより精製し、続いて溶離液としてヘプタン－ＥｔＯＡｃ（７：３）を使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒｆ＝０．４９。生成物を純粋なヘプタンからヘプタン－ＥｔＯＡｃ（６：４）への勾配で溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、２２０～５０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、１．２６１ｇ（生の収率：９３．３％）の白色の泡状物を３６２－ＶＲＯ０７３－０１－００１ ＣＣ１＃１として得た。

【0124】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝７．３１（ｔｄ，Ｊ＝７．８，１．６，１Ｈ，１４），７．２７－７．１８（ｍ，１Ｈ，１２），７．１４－６．９６（ｍ，２Ｈ，１３，１５），６．５４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，１０），４．８５（ｓ，１Ｈ，４），４．８５（ｂｒ．ｓ，Ｊ＝６．８，１Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝４．６，２Ｈ，１１），４．１０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，５），１．７７－１．５７（ｍ，２Ｈ，６’，７），１．５５－１．４５（ｍ，１Ｈ，６’’），１．４１（ｓ，９Ｈ，１，２，３），０．９２（ｄｄ，Ｊ＝６．３，２．９，６Ｈ，８，９）。

【0125】

^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１２９．９５（１２，１４），１２９．２３（１２，１４），１２９．１２（１２，１４），１２４．２４（１３），１２４．１９（１３），１１５．４１（１５），１１５．１３（１５），５３．０４（５），４０．９０（６），３７．４０（１１），３７．３４（１１），２８．１８（１，２，３），２４．６８（７），２２．８５（８，９），２１．９２（８，９）。

【0126】

次いでＢｏｃ保護基を以下のように除去した。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、１．２４９ｇの３６２－ＶＲＯ０７３－０１－００１ ＣＣ１＃１（３．６９１ｍｍｏｌ、１．０当量）及び９．４ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた無色の溶液を室温で１０分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。３．１ｍＬのＴＦＡ（４０．４８ｍｍｏｌ、１０．９７当量）を０～５℃で滴下して添加した。反応混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で２時間３０分撹拌した。反応混合物を２５ｍＬのＤＣＭを使用して分液漏斗に移し、２５ｍＬの水で洗浄した。ＡＰを３ｍＬのＮａＯＨ ２５％を使用してｐＨ＞１０になるように塩基性化し、次いで２５ｍＬのＤＣＭで３回抽出した。ＯＰを合わせ、２５ｍＬのＮａＣｌ １１．６％を使用して洗浄した。ＯＰをＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、８００～７０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で１時間乾燥させて、４６５ｍｇ（生の収率：５２．９％）のほぼ無色の油状物を３６２－ＶＲＯ０７３－０２－００１粗製物１＃１として得た。この物質を次のステップにおいてさらに精製することなく「そのまま」使用した。

【0127】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．６７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，７），７．３２（ｔｄ，Ｊ＝７．７，１．７，１Ｈ，１１），７．２９－７．１８（ｍ，１Ｈ，９），７．１５－６．９８（ｍ，２Ｈ，１０，１２），４．４９（ｄ，Ｊ＝６．１，２Ｈ，８），３．４２（ｄｄ，Ｊ＝９．９，３．４，１Ｈ，２），１．８３－１．６２（ｍ，２Ｈ，３’’，４），１．５７－１．２１（ｍ，３Ｈ，１，３’），０．９４（ｄｄ，Ｊ＝８．７，６．０，６Ｈ，５，６）。

【0128】

最後に、ジペプチドをエポキシ頭部にカップリングさせた。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、３２０ｍｇの３６２－ＢＢ０１－０３－００１粗製物１＃１（１．９９６ｍｍｏｌ、１．０５当量）及び５ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた白色の懸濁液を５分間室温で撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。９２４ｍｇのＨＡＴＵ（２．８５１ｍｍｏｌ、１．５当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで５ｍＬのＤＣＭ中の溶液中の４５３ｍｇの３６２－ＶＲＯ０７３－０２－００１粗製物１＃１（１．９０１ｍｍｏｌ、１．０当量）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、９９３μＬのＤＩＰＥＡ（５．７０３ｍｍｏｌ、３．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。得られた黄色がかった混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0129】

黄色がかったオレンジ色の溶液である反応混合物を、１０ｍＬのＤＣＭを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＣｌ ２．６％で洗浄し、次いでＡＰを１０ｍＬのＤＣＭで１回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＣｌ ２．６％で１回洗浄し、次いでＡＰを１０ｍＬのＤＣＭで１回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＣｌ ５．８％及び５ｍＬのＨＣｌ １Ｍで洗浄した結果、セライトで濾過する必要があるエマルジョンが生じた。濾液を１０ｍＬのＤＣＭを使用して再び分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＨＣＯ_３ １０％で１回、及び５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％で１回洗浄した。ＯＰをＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２２０～３０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、８３５ｍｇ（生の収率：１１５．５％）のペースト状のオレンジ色の固体を３６２－ＶＲＯ０７３－０３－００１粗製物１＃１として得た。

【0130】

粗物質を、４５ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１５．２ｃｍのカラム）を使用したＣＣにより精製し、続いて溶離液としてヘプタン－ＥｔＯＡｃ（１：１）を使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒ_ｆ＝０．５０。生成物を純粋なヘプタンからヘプタン－ＥｔＯＡｃ（２：８）への勾配で溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、２００～５０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で３時間乾燥させて、１１０ｍｇ（生の収率：１５．２％）の白色の固体を３６２－ＶＲＯ０７３－０３－００１ ＣＣ１＃１として得た。

【0131】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ＝７．３６－７．２１（ｍ，２Ｈ，１３，１５），７．１７－６．９９（ｍ，２Ｈ，１４，１６），６．５１（ｄ，Ｊ＝８．６，１Ｈ，５），６．３５（ｔ，Ｊ＝５．５，１Ｈ，１１），４．４８（ｄｄ，Ｊ＝５．８，２．５，２Ｈ，１２），４．４１（ｔｄ，Ｊ＝８．５，５．８，１Ｈ，６），４．２７（ｑｑ，Ｊ＝６．９，３．６，２Ｈ，２），３．６６（ｄ，Ｊ＝１．９，１Ｈ，４），３．４４（ｄ，Ｊ＝１．９，１Ｈ，３），１．７５－１．６０（ｍ，１Ｈ，７’’），１．６０－１．４４（ｍ，２Ｈ，７’，８），１．３１（ｔ，Ｊ＝７．１，３Ｈ，１），０．９０（ｄｄ，Ｊ＝６．２，４．５，６Ｈ，９，１０）。

【0132】

＜実施例６：ＶＲＯ１０９の合成＞
まず、ジペプチドを形成した。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、１９０ｍｇの（Ｓ）－Ｂｏｃ－２－アミノ－４，４，４－トリフルオロ－酪酸（０．７３９ｍｍｏｌ、１．０当量）及び１０ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた混合物を室温で５分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。３５９ｍｇのＨＡＴＵ（１．１０８ｍｍｏｌ、１．５当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで９４μＬのＩＡＡ（０．８１３ｍｍｏｌ、１．１当量）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、２５７μＬのＤＩＰＥＡ（１．４７７ｍｍｏｌ、２．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。得られたわずかに淡黄色の混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0133】

黄色がかったオレンジ色の溶液である反応混合物を、ロタベーパー（４０℃、７５０～４００ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。残渣を２０ｍＬのＥｔＯＡｃを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３ ５％で洗浄し、次いでＡＰを１５ｍＬのＥｔＯＡｃで２回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３ ５％で２回、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３ １０％で１回、及び５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％で１回洗浄した。ＯＰをＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２２０～３０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で６時間乾燥させて、２２４ｍｇ（生の収率：９２．９％）のオフホワイトの結晶化固体を３６２－ＶＲＯ１０９－０１－００１粗製物１＃１として得た。

【0134】

粗物質を、５０ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１６．９ｃｍのカラム）を使用したＣＣにより精製し、続いて溶離液としてヘプタン－ＥｔＯＡｃ（７：３）を使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒｆ＝０．４６。純粋なヘプタンからヘプタン－ＥｔＯＡｃ（６：４）への勾配で生成物を溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、２２０～５０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で４時間乾燥させて、２０４ｍｇ（生の収率：８４．６％）の白色の泡状物を３６２－１０９－０１－００１ ＣＣ１＃１として得た。

【0135】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝６．２６（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，７），４．９７（ｄ，Ｊ＝６．６，１Ｈ，４），４．４９－４．２６（ｍ，１Ｈ，５），３．３９－３．１６（ｍ，２Ｈ，８），２．９３－２．６９（ｍ，１Ｈ，６’），２．６２－２．３７（ｍ，１Ｈ，６’’），１．６９－１．５１（ｍ，１Ｈ，１０），１．４５（ｓ，９Ｈ，１，２，３），１．３９（ｑ，Ｊ＝７．３，２Ｈ，９），０．９１（ｄ，Ｊ＝６．６，６Ｈ，１１，１２）。

【0136】

^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝４９．４８（５），３８．１２（９），３８．００（８），２８．１５（１，２，３），２５．６７（１０），２２．３２（１１，１２）。

【0137】

次いでＢｏｃ保護基を以下のように除去した。マグネチックスターラーを備えた１０ｍＬの丸底フラスコに、２０１ｍｇの３６２－ＶＲＯ１０９－０１－００１ ＣＣ１＃１（０．６１６ｍｍｏｌ、当量）及び５ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた無色の溶液を室温で１０分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。１．７ｍＬのＴＦＡ（２２．２００ｍｍｏｌ、３６．０４５当量）を０～５℃で滴下して添加した。反応混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を２５ｍＬのＤＣＭを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬの水で洗浄した。ＡＰを４ｍＬのＮａＯＨ ２５％を使用してｐＨ＞１０になるように塩基性化し、次いで１５ｍＬのＤＣＭで３回抽出した。ＯＰを合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、７５０～４００ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で６時間乾燥させて、２５６ｍｇ（生の収率：９６．６％）のほぼ無色の油状物を３６２－ＶＲＯ１０９－０２－００１粗製物１＃１として得た。この物質を次のステップにおいてさらに精製することなく「そのまま」使用した。

【0138】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６－ｄ６）δ＝８．０７（ｔ，Ｊ＝５．３，１Ｈ，４），３．４８（ｄｄ，Ｊ＝７．５，５．４，１Ｈ，２），３．１９－２．９７（ｍ，２Ｈ，５），２．７８－２．５３（ｍ，１Ｈ，３’’），２．４９－２．２４（ｍ，１Ｈ，３’），１．５６（ｈｅｐｔ，Ｊ＝６．７，１Ｈ，７），１．３０（ｑ，Ｊ＝７．２，２Ｈ，６），０．８６（ｄｄ，Ｊ＝６．６，０．６，６Ｈ，８，９）。

【0139】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ＝４９．２０（２），４９．１６（２），３７．６２（６），３７．４６（３），３７．１１（３），３６．５７（５），２４．７８（７），２２．０７（８，９），２２．０５（８，９）。

【0140】

最後に、ジペプチドをエポキシ頭部にカップリングさせた。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、１１５ｍｇの３６２－ＢＢ０１－０３－００４粗製物１＃１（０．７２０ｍｍｏｌ、当量）及び５ｍＬのＤＭＦを導入し、得られた溶液を室温で５分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。３１８ｍｇのＨＡＴＵ（０．９８１ｍｍｏｌ、１．５当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで５ｍＬのＤＭＦ中の溶液中の１４８ｍｇの３６２－ＶＲＯ１０９－０２－００１粗製物１＃１（０．６５４ｍｍｏｌ、１．０当量）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、２２８μＬのＤＩＰＥＡ（１．３０８ｍｍｏｌ、２．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。得られた黄色の混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0141】

オレンジ色の溶液である反応混合物を、２０ｍＬのＥｔＯＡｃを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＨＣＯ_３ ５％で洗浄し、次いでＡＰを１５ｍＬのＥｔＯＡｃで２回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＨＣＯ_３ ５％で３回、及び５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％で１回洗浄した。ＯＰをＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２２０～１４０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で６時間乾燥させて、２３７ｍｇ（生の収率：１０２．５％）の非常に淡いオレンジ色の固体を３６２－ＶＲＯ１０９－０３－００１粗製物１＃１として得た。

【0142】

粗物質を、５ｍＬのＥｔＯＡｃ－ヘプタン（１：１）を使用したスラリーを通して精製した。懸濁液を室温で２０分間撹拌し、次いで０～５℃に冷却し、１５分間撹拌した。懸濁液を、ナイロン膜（０．４５μｍ）を備えた限外濾過装置で濾過し、濾過ケーキを冷ＥｔＯＡｃ－ヘプタン（１：９）で３回洗浄し、次いで高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で３時間乾燥させて、１７５ｍｇ（生の収率：７２．６％）の白色の粉末を３６２－ＶＲＯ１０９－０３－００１スラリー１＃１として得た。

【0143】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝６．５９（ｄ，Ｊ＝８．６，１Ｈ，５），６．１８（ｓ，１Ｈ，８），４．７０（ｔｄ，Ｊ＝８．９，４．８，１Ｈ，６），４．２８（ｑｄ，Ｊ＝７．１，２．５，２Ｈ，２），３．７２（ｄ，Ｊ＝１．９，１Ｈ，４），３．４５（ｄ，Ｊ＝１．８，１Ｈ，３），３．２７（ｔｄｄ，Ｊ＝７．４，５．８，４．７，２Ｈ，９），２．７４（ｄｄｔ，Ｊ＝１６．４，１０．７，５．３，１Ｈ，７’），２．６５－２．４０（ｍ，１Ｈ，７’’），１．６０（ｄｔ，Ｊ＝１３．４，７．０，２Ｈ，１１），１．４０（ｑ，Ｊ＝７．２，２Ｈ，１０），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．２，３Ｈ，１），１．２５（ｄ，Ｊ＝１．８，０Ｈ），０．９１（ｄ，Ｊ＝６．６，６Ｈ，１２，１３）。

【0144】

＜実施例７：ＶＲＯ２４４の合成＞
まず、ジペプチドを形成した。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、１９０ｍｇのＢｏｃ－（Ｓ）－２－アミノ－４，４，４－酪酸（０．７３９ｍｍｏｌ、１．０当量）及び１０ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた混合物を室温で５分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。３５９ｍｇのＨＡＴＵ（１．１０８ｍｍｏｌ、１．５当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで９３μＬの２－フルオロベンジルアミン（０．８１３ｍｍｏｌ、１．１当量）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、２５７μＬのＤＩＰＥＡ（１．４７７ｍｍｏｌ、２．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。得られたわずかに淡い黄色の混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0145】

透明な黄色の溶液である反応混合物を、ロタベーパー（４０℃、７５０～４００ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。残渣を２０ｍＬのＥｔＯＡｃを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３ ５％で洗浄し、次いでＡＰを１５ｍＬのＥｔＯＡｃで２回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３ ５％で２回、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３ １０％で１回、及び５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％で１回洗浄した。ＯＰをＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２２０～１４０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で６時間乾燥させて、２７９ｍｇ（生の収率：１０３．７％）のオレンジ色の固体を３６２－ＶＲＯ２４４－０１－００１粗製物１＃１として得た。

【0146】

粗物質を、５０ｇのシリカゲル（φ＝３．２ｃｍ及びｈ＝１６．９ｃｍのカラム）を使用したＣＣにより精製し、続いて溶離液としてヘプタン－アセトン（７：３）を使用したＴＬＣを使用して溶出した；Ｒｆ＝０．４５。生成物を純粋なヘプタンからヘプタン－アセトン（６：４）への勾配で溶出し、所望の生成物を含有する画分を合わせ、ロタベーパー（４０℃、３５０～５０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、２５９ｍｇ（生の収率：９６．２％）のわずかに淡い黄色の固体を３６２－ＶＲＯ２４３－０１－００１ ＣＣ１＃１として得た。

【0147】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝７．３６－７．２０（ｍ，２Ｈ，９，１１），７．１４－７．０６（ｍ，１Ｈ，１０），７．０９－６．９８（ｍ，１Ｈ，１２），６．７３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，７），４．９５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，４），４．６１－４．３１（ｍ，３Ｈ，５，８），２．９６－２．７２（ｍ，１Ｈ，６’），２．６５－２．３８（ｍ，１Ｈ，６’’），１．４２（ｓ，９Ｈ，１，２，３）。

【0148】

^１３Ｃ ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝１３０．０１（９，１１），１２９．５３（９，１１），１２９．４１（９，１１），１２４．３３，（１０），１２４．２８（１０），１１５．５４（１２），１１５．２６（１２），４９．５６（５），３７．８１（６，８），３７．７６（６，８），２８．１０（１，２，３）。

【0149】

次いでＢｏｃ保護基を以下のように除去した。マグネチックスターラーを備えた１０ｍＬの丸底フラスコに、２５２ｍｇの３６２－ＶＲＯ２４４－０１－００１ ＣＣ１＃１（０．６９２ｍｍｏｌ、１．０当量）及び５ｍＬのＤＣＭを導入し、得られた無色の溶液を室温で１０分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。１．７ｍＬのＴＦＡ（２２．２００ｍｍｏｌ、３２．１０当量）を０～５℃で滴下して添加した。反応混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を２５ｍＬのＤＣＭを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬの水で洗浄した。ＡＰを４ｍＬのＮａＯＨ ２５％を使用してｐＨ＞１０になるように塩基性化し、次いで１５ｍＬのＤＣＭで３回抽出した。ＯＰを合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、７５０～４００ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で４時間乾燥させて、１７２ｍｇ（生の収率：９４．１％）のほぼ無色の油状物を３６２－ＶＲＯ２４４－０２－００１粗製物１＃１として得た。この物質を次のステップにおいてさらに精製することなく「そのまま」使用した。

【0150】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ＝８．６２（ｔ，Ｊ＝４．７，１Ｈ，４），７．３９－７．２３（ｍ，２Ｈ，６，８），７．２２－７．０５（ｍ，２Ｈ，７，９），４．３４（ｄ，Ｊ＝５．９，２Ｈ，５），３．５８（ｄｄ，Ｊ＝７．８，５．１，１Ｈ，２），３．０３（ｓ，２Ｈ，１），２．８２－２．５８（ｍ，１Ｈ，３’’），２．４８－２．３０（ｍ，１Ｈ，３’）。

【0151】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ＝１２９．２６（８），１２９．２１（８），１２８．６９（６），１２８．５８（６），１２４．００（７），１２３．９５（７），１１４．８６（９），１１４．５８（９），４９．２９（２），４９．２５（２），３７．７８（３），３７．４３（３），３７．０８（３），３６．７３（３），３５．８５（５），３５．７９（５）。

【0152】

最後に、ジペプチドをエポキシ頭部にカップリングさせた。マグネチックスターラーを備えた２５ｍＬの丸底フラスコに、１１１ｍｇの３６２－ＢＢ０１－０３－００５粗製物１＃１（０．６９５ｍｍｏｌ、当量）及び５ｍＬのＤＭＦを導入し、得られたＤＭＦを室温で５分間撹拌し、次いで氷浴を使用して０～５℃に冷却した。３０７ｍｇのＨＡＴＵ（０．９４８ｍｍｏｌ、１．５当量）を０～５℃で添加し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。次いで５ｍＬのＤＭＦ中の溶液中の１６７ｍｇの３６２－ＶＲＯ２４４－０２－００１粗製物１＃１（０．６３２ｍｍｏｌ、１．０当量）を０～５℃で導入し、反応混合物をこの温度で５分間撹拌した。最後に、２２０μＬのＤＩＰＥＡ（１．２６４ｍｍｏｌ、２．０当量）を０～５℃で滴下して添加した。得られた黄色の混合物を０～５℃で５分間撹拌し、次いで氷浴を除去し、混合物を室温で一晩撹拌した。

【0153】

オレンジ色の溶液である反応混合物を、２０ｍＬのＥｔＯＡｃを使用して分液漏斗に移し、５０ｍＬのＮａＨＣＯ_３ ５％で洗浄し、次いでＡＰを１５ｍＬのＥｔＯＡｃで２回抽出した。ＯＰを合わせ、５０ｍＬのＮａＨＣＯ_３ ５％で３回、及び５０ｍＬのＮａＣｌ １１．６％で１回洗浄した。ＯＰをＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、Ｐ３焼結ガラスフィルター上で濾過し、ロタベーパー（４０℃、２２０～３０ｍｂａｒ）内で乾燥するまで濃縮した。この物質を高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、２７４ｍｇ（生の収率：１０６．７％）の褐色がかったオレンジ色の固体を３６２－ＶＲＯ２４４－０３－００１粗製物１＃１として得た。

【0154】

粗物質を３ｍＬのＥｔＯＡｃ－ヘプタン（２：１）を使用してスラリーを通して精製した。粒状懸濁液を４０℃で１０分間撹拌し、次いで室温で１５分間撹拌し、最後に氷浴を使用して０～５℃に冷却した後、濾過した。懸濁液を、ナイロン膜（０．４５μｍ）を備えた限外濾過装置で濾過し、濾過ケーキを洗浄し、１ｍＬの冷ＥｔＯＡｃ－ヘプタン（１：１）で５回粉砕し、次いで高真空下（室温、１０～３ｍｂａｒ）で２時間乾燥させて、１３１ｍｇ（生の収率：５１．０％）のオフホワイトの顆粒を３６２－ＶＲＯ２４４－０３－００１スラリー１＃１として得た。

【0155】

^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ＝８．８９（ｄ，Ｊ＝８．６，１Ｈ，５），８．７６（ｔ，Ｊ＝５．８，１Ｈ，８），７．３８－７．２４（ｍ，２Ｈ，１０，１２），７．２４－７．１１（ｍ，２Ｈ，１１，１３），４．７０（ｔｄ，Ｊ＝９．０，４．０，１Ｈ，６），４．３３（ｄ，Ｊ＝５．８，２Ｈ，９），４．２７－４．１０（ｍ，２Ｈ，２），３．６９（ｄ，Ｊ＝１．８，１Ｈ，４），３．５７（ｄ，Ｊ＝１．８，１Ｈ，３），２．９１－２．５５（ｂｒ．ｍ，２Ｈ，７），１．２３（ｔ，Ｊ＝７．１，３Ｈ，１）。

【0156】

^１３Ｃ－ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ＝１２９．０８（１０，１２），１２９．０２（１０，１２），１２８．７６（１０，１２），１２８．６５（１０，１２），１２４．０２（１１），１１４．９２（１３），１１４．６４（１３），６１．３７（２），５２．８７（４），５１．０９（３），４６．８３（６），３５．９９（９），３５．９３（９），３４．３９（７），３４．０５（７），１３．６３（１）。

【0157】

＜実施例８：単離された酵素に対するインビトロ酵素活性アッセイ＞
単離されたカテプシンＢを阻害する、化合物ＶＲＯ００６＿ハイドロール、ＶＲＯ０４７＿ハイドロール、ＶＲＯ０５２＿ハイドロール、ＶＲＯ０５９＿ハイドロール、ＶＲＯ０７３＿ハイドロール、ＶＲＯ１０９＿ハイドロール、ＶＲＯ２４４＿ハイドロール、ＶＲＯ００１＿ハイドロール、ＶＲＯ０８２＿ハイドロール、ＶＲＯ０３５＿ハイドロール、ＶＲＯ１１９＿ハイドロール、及びＶＲＯ２４３＿ハイドロールの能力を、酵素アッセイにおいて評価し、先行技術のＥ６４ｃの阻害活性と比較した。このアッセイにおいて、化合物ＶＲＯ００６、ＶＲＯ０４２、ＶＲＯ０４７、ＶＲＯ０５２、ＶＲＯ０５９、ＶＲＯ０７３、ＶＲＯ１０９、ＶＲＯ２４４、ＶＲＯ００１、ＶＲＯ０８２、ＶＲＯ０３５、ＶＲＯ１１９、及びＶＲＯ２４３を使用し、消化管内で起こるエステル切断を模倣し、プロドラッグ（対応するＶＲＯｘｘｘ化合物）から遊離酸（ＶＲＯｘｘｘ＿ハイドロール化合物）を放出させるために、アッセイをＮａＯＨの存在下で行った。化合物ＶＲＯ００６、ＶＲＯ０４２、ＶＲＯ０４７、ＶＲＯ０５２、ＶＲＯ０５９、ＶＲＯ０７３、ＶＲＯ１０９及びＶＲＯ２４４の化学構造及びそれらの化学名を上記の表２に示す。ＶＲＯ００１、ＶＲＯ０８２、ＶＲＯ０３５、ＶＲＯ１１９及びＶＲＯ２４３の構造は以下の表３に示す。カテプシンＢはブタ肝臓ホモジネート由来であった。

【0158】

【表3】

【0159】

酵素アッセイを以下のように行った。ホモジナイズしたブタ肝臓の試料（１つの試料当たり７５ｍｇの新鮮な組織）を、２．５ｍＭのＥＤＴＡ、２．５ｍＭのＤＴＴ及び０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、並びに段階的濃度の試験物質（０．１ｎＭ～５０ｍＭ）を補足した、１Ｍの酢酸ナトリウム（ｐＨ６）中で５０ｍＭにてＺ－ＦＲ－ＡＭＣ（ベンジルオキシカルボニル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－アルギニン－４－メチルクマリル－７－アミド）と３７℃で１時間インキュベートした。試験物質のストック溶液はＤＭＳＯ中で２０ｍＭであった。蛍光は３６５ｎｍを励起波長として使用して４４５ｎｍで測定した。

【0160】

本発明の化合物であるＶＲＯ００６＿ハイドロール、ＶＲＯ０４７＿ハイドロール、ＶＲＯ０５２＿ハイドロール、ＶＲＯ０５９＿ハイドロール、ＶＲＯ０７３＿ハイドロール、ＶＲＯ１０９＿ハイドロール及びＶＲＯ２４４＿ハイドロールは、約１００ｎＭ以下のＩＣ５０で好適な阻害活性を示したが（図１を参照のこと）、比較化合物であるＶＲＯ００１＿ハイドロール、ＶＲＯ０８２＿ハイドロール、ＶＲＯ０３５＿ハイドロール、ＶＲＯ１１９＿ハイドロール及びＶＲＯ２４３＿ハイドロールは、図２から理解できるように、１００超のＩＣ５０でｃａｔＢを効果的に阻害しなかった。

【0161】

このアッセイにより、分子の中心にあるアミドからの水素が酵素親和性にとって重要であり、おそらくタンパク質とのＨ結合に関与していることが実証された。実際に、ＶＲＯ００１＿ハイドロールはｃａｔＢを阻害できないことが証明された。他方で、ＶＲＯ００６からの活性はＥ６４ｃの活性とかなり似ているので、イソアミルアミン部分の隣のアミド上の水素は結合には関与していない。

【0162】

Ｒ_１で行った修飾は全て良好な耐容性を示した。メトキシ化合物ＶＲＯ０４７＿ハイドロールは、Ｅ６４ｃとほぼ同じ活性を示した。ＶＲＯ０５２＿ハイドロール及びＶＲＯ０５９＿ハイドロール、並びにＶＲＯ０７３＿ハイドロールも同様である。ＶＲＯ０５２＿ハイドロール及びＶＲＯ０７３＿ハイドロールのように嵩高い芳香族部分を用いても、活性はわずかに減少するだけである。しかしながら、ｃａｔＢのＳ３ポケットの耐容性には限界がある。実際に、ＶＲＯ０３５＿ハイドロールに存在する嵩高く、高度に電気陰性である、－ＣＦ_３部分は受け入れられず、この化合物の阻害活性は喪失した。

【0163】

ｃａｔＢのＳ２ポケットに結合するＲ_３に関して、耐容性はかなり低かった。ＶＲＯ０８２＿ハイドロールへのエーテルの導入のようなわずかな変化でさえ、阻害活性を維持することはできなかった。ＶＲＯ１１９＿ハイドロールに追加されたピリジニル部分からの嵩高さも許容されなかった。しかしながら、特にＲ_３位の他の部分で得られた結果を考慮すると、ある候補が驚きをもたらした。ＶＲＯ１０９＿ハイドロールは、Ｅ６４ｃに存在するロイシンの代わりにトリフルオロ部分を含む。Ｒ_１位にこのようなトリフルオロ部分を加えると、阻害活性が喪失したが、他のいくつかの部分、及びさらには嵩高い部分はこのような活性を何とか維持した。ここで、驚くべきことに、ＶＲＯ１０９＿ハイドロールはＥ６４ｃと比較して増加した阻害活性を示すことが実証された。本明細書で試験した全ての候補の中で、先行技術のＥ６４ｃと比較して、わずかではあるが有意な阻害活性の増加を示したものはＶＲＯ１０９＿ハイドロールだけである。トリフルオロ部分は、水素結合を生成しにくく、Ｅ６４ｃと比較して化合物の親油性を著しく増加させるため、特に有利である。

【0164】

ＶＲＯ２４４＿ハイドロールを用いて行ったアッセイは、Ｒ３位のトリフルオロ部分がＲ_１位の嵩高い部分（この場合、２－フルオロフェニルメチル）と適合するという証拠をもたらす。

【0165】

個々に、ロイシンのトリフルオロ部分による置換、及びイソアミルアミン部分に近いアミドのメチル化は、上記で説明したように、活性及び薬物類似性の両方に関して有望な結果を示した。しかしながら、ＶＲＯ２４３＿ハイドロールにおけるこれらの組み合わせは活性の大幅な喪失を示した。これは確かに、酵素の触媒部位の３Ｄ立体構造、及びトリフルオロ部分がそこにどのように配置されているかに起因する。この特殊な３Ｄレイアウトは、おそらく窒素がメチル化されたときに得られるものとは不適合である。

【0166】

＜実施例１０：インビトロでの全細胞酵素活性アッセイ＞
単離されたｃａｔＢで得られた結果（実施例９を参照のこと）を確認するために、ｃａｔＢに対する本発明の化合物の阻害活性を全細胞アッセイにおいて評価した。この場合、本発明の化合物の遊離酸（加水分解された）形態を使用した。

【0167】

様々な濃度（５０、１０、２、０．４、０．０８、０．０１６、０．００３２、及び０ｍＭ）の試験物質を９６ウェルプレートに入れ、５０’０００個のＨＥＫ２９３Ｔ細胞を各ウェルに加えた。次いでプレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートを２０００ｒｐｍで７分間遠心分離し、上清を除去した。１００ｍｌの新しく調製したＺ－ＦＲ－ＡＭＣ基質は、１Ｍの酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）、２．５ｍＭのＥＤＴＡ、２．５ｍＭのＤＴＴ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００及びＺ－ＦＲ－ＡＭＣ ２０ｍＭを含む。１時間のインキュベーション後、励起波長として３６５ｎｍを使用して４４５ｎｍで蛍光を測定した。

【0168】

図３に示すように、ＶＲＯ０５２＿ハイドロール及びＶＲＯ０５９＿ハイドロールの阻害活性を全細胞アッセイにおいて確認した。このような活性は、単離された酵素でのアッセイよりもさらにＥ６４ｃの活性に近かった。ＶＲＯ０５２＿ハイドロール及びＶＲＯ０５９＿ハイドロールの活性は、単離酵素を用いたアッセイではＥ６４ｃの活性よりもわずかに低かったが、これらの化合物は全細胞アッセイにおいてＥ６４ｃの活性と同様の阻害活性を示す。ＶＲＯ０５２＿ハイドロール及びＶＲＯ０５９＿ハイドロールの相対的阻害活性のこの改善は、本発明の化合物がより親油性であるため、先行技術の化合物よりも細胞膜を通過することによって容易に細胞内に侵入するという事実のためであると考えられる。したがって、この試験により、単離された酵素での阻害活性のわずかな減少を、改善された親油性が補っていることが確認される。これらの知見に基づくと、ＶＲＯ０５２＿ハイドロール及びＶＲＯ０５９＿ハイドロールは、インビボにおいてＥ６４ｄと同様の阻害活性を示すことが予想される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【国際調査報告】