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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2025-02-06
(54)【発明の名称】抗ＢＴＬＡ抗体および癌治療におけるその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/30 20060101AFI20250130BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20250130BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20250130BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20250130BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20250130BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20250130BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20250130BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20250130BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20250130BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20250130BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20250130BHJP
G01N 33/531 20060101ALI20250130BHJP
【ＦＩ】
C07K16/30 ZNA
C12N15/13
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
A61K39/395 N
A61P35/00
G01N33/53 D
G01N33/531 A
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024544861
(86)(22)【出願日】2023-01-29
(85)【翻訳文提出日】2024-09-04
(86)【国際出願番号】 CN2023073700
(87)【国際公開番号】W WO2023143565
(87)【国際公開日】2023-08-03
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2022/075097
(32)【優先日】2022-01-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】524280429
【氏名又は名称】ハイファイバイオ， インク．
(74)【代理人】
【識別番号】100113376
【弁理士】
【氏名又は名称】南条 雅裕
(74)【代理人】
【識別番号】100179394
【弁理士】
【氏名又は名称】瀬田 あや子
(74)【代理人】
【識別番号】100185384
【弁理士】
【氏名又は名称】伊波 興一朗
(74)【代理人】
【識別番号】100137811
【弁理士】
【氏名又は名称】原 秀貢人
(72)【発明者】
【氏名】リー ジュイン
(72)【発明者】
【氏名】ジャン チェン
(72)【発明者】
【氏名】シェン ビンキン
(72)【発明者】
【氏名】エイドリアン フランシスコ
(72)【発明者】
【氏名】シュワイツァー リアン
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA10
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B064DA13
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA87X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065BC01
4B065BD14
4B065CA25
4B065CA44
4B065CA46
4C085AA14
4C085AA16
4C085BB11
4C085DD62
4C085EE01
4C085GG01
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA51
4H045FA74
(57)【要約】
抗ＢＴＬＡ抗体および抗原結合断片が、提供される。また、抗体をコードする核酸、抗体を含む組成物、および抗体を産生する方法、およびそれを必要とする対象において癌を治療または予防するために抗体を使用する方法も、提供される。
【選択図】 なし
【選択図】 なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有し：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５３、１０、１１、および１２；
または
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（Ｂ－ ａｎｄ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ）（ＢＴＬＡ）、好ましくはヒトＢＴＬＡと、特異的に結合し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、自然起源でなくてもよい、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項2】
請求項１に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号１５または１３と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、
または
配列番号１６または１４と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項3】
請求項１または２に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって：（１）配列番号１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
または
（２）配列番号１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
を含む、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項4】
請求項１～３のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体またはその抗原結合断片は、キメラ型のおよび／またはヒト型のまたはヒト化されたものである、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項5】
請求項４に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有する：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５０、１０、１１、および１２；
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
（３）それぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２；
（４）それぞれ、配列番号７、８、１４９、１０、１１、および１２；
（５）それぞれ、配列番号７、８、１５１、１０、１１、および１２；
または
（６）それぞれ、配列番号７、８、１５２、１０、１１、および１２；
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項6】
請求項５に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４１、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４３、１４５、または１４７と、少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、
または
配列番号１４２、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４４、１４６、または１４８と、少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項7】
請求項６に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（１）配列番号１４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２）配列番号１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３）配列番号１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４）配列番号２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５）配列番号２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６）配列番号２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（７）配列番号２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（８）配列番号２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（９）配列番号３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１０）配列番号３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１１）配列番号３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１２）配列番号３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１３）配列番号３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１４）配列番号４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１５）配列番号４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１６）配列番号４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１７）配列番号４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１８）配列番号４９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１９）配列番号５１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２０）配列番号５３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２１）配列番号５５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２２）配列番号５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２３）配列番号５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２４）配列番号６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２５）配列番号６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２６）配列番号６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２７）配列番号６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２８）配列番号６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２９）配列番号７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３０）配列番号７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３１）配列番号７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３２）配列番号７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３３）配列番号７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３４）配列番号８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３５）配列番号８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３６）配列番号８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３７）配列番号８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３８）配列番号８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３９）配列番号９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４０）配列番号９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４１）配列番号９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４２）配列番号９７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４３）配列番号９９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４４）配列番号１０１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４５）配列番号１０３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４６）配列番号１０５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４７）配列番号１０７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４８）配列番号１０９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４９）配列番号１１１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５０）配列番号１１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５１）配列番号１１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５２）配列番号１１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５３）配列番号１１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５４）配列番号１２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５５）配列番号１２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５６）配列番号１２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５７）配列番号１２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５８）配列番号１２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５９）配列番号１３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６０）配列番号１３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６１）配列番号１３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６２）配列番号１３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６３）配列番号１３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６４）配列番号１４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６５）配列番号１４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
または
（６６）配列番号１４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項8】
請求項１～７のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡに約２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、または０．５ｎＭ未満のＫＤで結合する、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項9】
請求項１～７のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡのアゴニストであり、およびＢＴＬＡに結合する際に、ＢＴＬＡからの下流シグナル伝達を活性化する、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項10】
請求項１～７のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ細胞増殖および／またはＴ細胞および／または形質細胞活性化を阻害することが可能である、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項11】
請求項１０に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記Ｔ細胞は、ＣＤ４ Ｔ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞、Ｔｈ１ Ｔ細胞、ＴＦＨ Ｔ細胞、αβＴ細胞、およびγδＴ細胞からなる群から選択される、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項12】
請求項１～７のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ｈｅｒｐｅｓ ｖｉｒｕｓ ｅｎｔｒｙ ｍｅｄｉａｔｏｒ）（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を、遮断または消失させることが可能である、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項13】
請求項１～７のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、炎症性サイトカイン産生を増加させること；複合化薬物の動員を媒介すること；および／または殺癌効果を有する別のｍＡｂまたはその抗原結合断片と二重特異性抗体を形成することが可能である、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項14】
請求項１３のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記炎症性サイトカインは、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド９（ＣＸＣＬ９）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）、インターロイキン１β（ＩＬ１β）、および／または腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）から選択される、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項15】
請求項１～１４のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、カニクイザルＢＴＬＡと特異的に結合する、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項16】
請求項１～１５のいずれか一項に記載されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む、二重特異性抗体またはその抗原結合断片。
【請求項17】
請求項１～１５のいずれか一項に記載されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離核酸。
【請求項18】
請求項１６に記載された二重特異性抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離核酸。
【請求項19】
請求項１７または１８に記載された単離核酸を含む、ベクター。
【請求項20】
請求項１９に記載されたベクターを含む、宿主細胞。
【請求項21】
請求項１～１５のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または請求項１６に記載された二重特異性抗体またはその抗原結合断片、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項22】
癌細胞表面上のＢＴＬＡを標的とする方法、および／またはそれを必要とする対象において癌を治療する方法であって、請求項２１に記載された医薬組成物を前記対象へ投与するステップを含む、
方法。
【請求項23】
請求項２２に記載された方法であって、前記癌は、固形腫瘍であり、好ましくは浸潤Ｔ細胞を有する固形腫瘍であり、より好ましくは浸潤エフェクターＴ細胞を有する固形腫瘍であり、より好ましくはＢＴＬＡを発現しているエフェクターＴ細胞を有する固形腫瘍であり、最も好ましくはＢＴＬＡを発現している浸潤エフェクターＴ細胞を有し腫瘍微小環境においてＢＴＬＡリガンドＨＶＥＭが高発現している固形腫瘍である、
方法。
【請求項24】
請求項２２または２３に記載された方法であって、前記癌は、黒色腫、肺癌、腎細胞癌、および肝臓癌からなる群から選択される、
方法。
【請求項25】
請求項２２～２４のいずれか一項に記載された方法であって、前記対象は、ＢＴＬＡ発現Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む、
方法。
【請求項26】
請求項２２～２５のいずれか一項に記載された方法であって、前記医薬組成物は、第２の抗癌剤をさらに含む、
方法。
【請求項27】
請求項２６に記載された方法であって、前記第２の抗癌剤は、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片である、
方法。
【請求項28】
請求項１～１５のいずれか一項に記載されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または請求項１６に記載された二重特異性抗体またはその抗原結合断片を産生する方法であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を産生する条件下で、培養するステップ、
および
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を、前記細胞または培養物から回収するステップ
を含む、
方法。
【請求項29】
請求項１～１５のいずれか一項に記載されたモノクローナル抗体または抗原結合断片、または請求項１６に記載された二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む、医薬組成物を産生する方法であって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を、薬学的に許容される担体と組み合わせて、前記医薬組成物を得るステップを含む、
方法。
【請求項30】
対象におけるＢＴＬＡのレベルを決定する方法であって、前記方法は：
ａ．前記対象から試料を得るステップ；
ｂ．前記試料を請求項１～１５のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片と接触させるステップ；
および
ｃ．前記対象におけるＢＴＬＡのレベルを決定するステップ；
を含む、
方法。
【請求項31】
請求項３０に記載された方法であって、前記試料は、組織試料または血液試料であり、
前記組織試料は、癌組織試料であってもよい、
方法。
【請求項32】
請求項３０に記載された方法であって、前記試料は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む、
方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
［関連出願への相互参照］
本出願は、２０２２年１月２９日に出願されたＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０２２／０７５０９７の優先権を主張し、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２２年１月２９日に出願されたＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＣＮ２０２２／０７５０９７の優先権を主張し、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
［技術分野］
本発明は、単離抗ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、抗体をコードする核酸および発現ベクター、ベクターを含む組換え細胞、および抗体を含む組成物に関連する。抗体を作る方法、および癌および／または関連する合併症を含む疾患を治療するために抗体を使用する方法もまた、提供される。
本発明は、単離抗ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、抗体をコードする核酸および発現ベクター、ベクターを含む組換え細胞、および抗体を含む組成物に関連する。抗体を作る方法、および癌および／または関連する合併症を含む疾患を治療するために抗体を使用する方法もまた、提供される。
【0003】
［電子的に提出される配列表への言及］
本出願は配列表を含み、それは電子的に提出される。電子配列表（065798.8WO2 Sequence Listing.xml；サイズ：１４８８１８バイト；作成日２０２３年１月１９日）の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は配列表を含み、それは電子的に提出される。電子配列表（065798.8WO2 Sequence Listing.xml；サイズ：１４８８１８バイト；作成日２０２３年１月１９日）の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0004】
ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（Ｂ－ ａｎｄ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ）（ＢＴＬＡ）は、ＣＤ２８免疫グロブリンスーパーファミリーに属する。それは共抑制免疫チェックポイント分子であり、ＰＤ－１およびＣＴＬＡ－４と構造的および機能的な類似性を共有する。ＢＴＬＡの発現は、免疫細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＤＣ、ＮＫ細胞など）に限られる。そのリガンドであるＨＶＥＭが結合する際に、ＢＴＬＡの細胞内ドメインは、２つのホスファターゼ（ＳＨＰ１およびＳＨＰ２）を通じてシグナル伝達し、Ｔ細胞およびＢ細胞における下流のＴＣＲおよびＢＣＲシグナル伝達を阻害する。ＢＴＬＡは、Ｔ細胞分化の間、他の阻害チェックポイントとは異なる発現プロファイルを有することから、複数の抑制性分子を同時にまたは逐次的に遮断することで、Ｔ細胞ベース療法を改善しうることが示唆される。従って、ＢＴＬＡは、ＢＴＬＡ陽性癌を治療し、治癒させる可能性のある、癌免疫療法の理想的な標的である。
【発明の概要】
【0005】
一般的な一態様において、本発明は、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）と特異的に結合する、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連する。
【0006】
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有し：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５３、１０、１１、および１２；または
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、好ましくはヒトＢＴＬＡと、特異的に結合し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、自然起源でなくてもよい、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が提供される。配列番号１５３は、アミノ酸配列ＣＡＲＥＤＧＹＰＹＹＴＬＤＸ１Ｗによって表され、ここでＸ１は、Ｃ、Ａ、Ｓ、Ｔ、またはＶから選択されるアミノ酸である。
重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有し：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５３、１０、１１、および１２；または
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、好ましくはヒトＢＴＬＡと、特異的に結合し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、自然起源でなくてもよい、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が提供される。配列番号１５３は、アミノ酸配列ＣＡＲＥＤＧＹＰＹＹＴＬＤＸ１Ｗによって表され、ここでＸ１は、Ｃ、Ａ、Ｓ、Ｔ、またはＶから選択されるアミノ酸である。
【0007】
ある実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有し：
（１）それぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２；または
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、好ましくはヒトＢＴＬＡと、特異的に結合し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、自然起源でなくてもよい。
これらは以下のポリペプチド配列を有し：
（１）それぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２；または
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、好ましくはヒトＢＴＬＡと、特異的に結合し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、自然起源でなくてもよい。
【0008】
ある実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、
配列番号１５または１３と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、または
配列番号１６または１４と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
配列番号１５または１３と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、または
配列番号１６または１４と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0009】
ある実施形態において、単離抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は：
（１）配列番号１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；または
（２）配列番号１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
（１）配列番号１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；または
（２）配列番号１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0010】
ある実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、キメラ型のまたはヒト型のまたはヒト化されたものである。
【0011】
ある実施形態において、ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有する：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５０、１０、１１、および１２；
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
（３）それぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２；
（４）それぞれ、配列番号７、８、１４９、１０、１１、および１２；
（５）それぞれ、配列番号７、８、１５１、１０、１１、および１２；または
（６）それぞれ、配列番号７、８、１５２、１０、１１、および１２。
これらは以下のポリペプチド配列を有する：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５０、１０、１１、および１２；
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
（３）それぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２；
（４）それぞれ、配列番号７、８、１４９、１０、１１、および１２；
（５）それぞれ、配列番号７、８、１５１、１０、１１、および１２；または
（６）それぞれ、配列番号７、８、１５２、１０、１１、および１２。
【0012】
ある実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、
配列番号１４１、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４３、１４５、または１４７と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、または
配列番号１４２、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４４、１４６、または１４８と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
配列番号１４１、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４３、１４５、または１４７と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、または
配列番号１４２、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４４、１４６、または１４８と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0013】
ある実施形態において、ヒト化単離抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（１）配列番号１４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２）配列番号１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３）配列番号１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４）配列番号２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５）配列番号２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６）配列番号２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（７）配列番号２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（８）配列番号２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（９）配列番号３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１０）配列番号３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１１）配列番号３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１２）配列番号３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１３）配列番号３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１４）配列番号４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１５）配列番号４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１６）配列番号４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１７）配列番号４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１８）配列番号４９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１９）配列番号５１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２０）配列番号５３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２１）配列番号５５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２２）配列番号５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２３）配列番号５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２４）配列番号６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２５）配列番号６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２６）配列番号６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２７）配列番号６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２８）配列番号６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２９）配列番号７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３０）配列番号７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３１）配列番号７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３２）配列番号７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３３）配列番号７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３４）配列番号８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３５）配列番号８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３６）配列番号８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３７）配列番号８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３８）配列番号８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３９）配列番号９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４０）配列番号９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４１）配列番号９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４２）配列番号９７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４３）配列番号９９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４４）配列番号１０１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４５）配列番号１０３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４６）配列番号１０５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４７）配列番号１０７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４８）配列番号１０９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４９）配列番号１１１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５０）配列番号１１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５１）配列番号１１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５２）配列番号１１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５３）配列番号１１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５４）配列番号１２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５５）配列番号１２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５６）配列番号１２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５７）配列番号１２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５８）配列番号１２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５９）配列番号１３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６０）配列番号１３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６１）配列番号１３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６２）配列番号１３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６３）配列番号１３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６４）配列番号１４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６５）配列番号１４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
または
（６６）配列番号１４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
（１）配列番号１４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２）配列番号１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３）配列番号１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４）配列番号２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５）配列番号２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６）配列番号２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（７）配列番号２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（８）配列番号２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（９）配列番号３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１０）配列番号３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１１）配列番号３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１２）配列番号３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１３）配列番号３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１４）配列番号４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１５）配列番号４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１６）配列番号４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１７）配列番号４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１８）配列番号４９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１９）配列番号５１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２０）配列番号５３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２１）配列番号５５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２２）配列番号５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２３）配列番号５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２４）配列番号６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２５）配列番号６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２６）配列番号６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２７）配列番号６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２８）配列番号６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２９）配列番号７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３０）配列番号７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３１）配列番号７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３２）配列番号７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３３）配列番号７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３４）配列番号８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３５）配列番号８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３６）配列番号８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３７）配列番号８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３８）配列番号８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３９）配列番号９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４０）配列番号９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４１）配列番号９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４２）配列番号９７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４３）配列番号９９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４４）配列番号１０１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４５）配列番号１０３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４６）配列番号１０５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４７）配列番号１０７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４８）配列番号１０９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４９）配列番号１１１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５０）配列番号１１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５１）配列番号１１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５２）配列番号１１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５３）配列番号１１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５４）配列番号１２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５５）配列番号１２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５６）配列番号１２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５７）配列番号１２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５８）配列番号１２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５９）配列番号１３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６０）配列番号１３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６１）配列番号１３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６２）配列番号１３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６３）配列番号１３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６４）配列番号１４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６５）配列番号１４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
または
（６６）配列番号１４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
【0014】
ある実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、カニクイザルＢＴＬＡと特異的に結合する。
【0015】
ある実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡに約２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、または０．５ｎＭ未満のＫＤで結合する。
【0016】
ある実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡのアゴニストであり、およびＢＴＬＡに結合する際に、ＢＴＬＡからの下流シグナル伝達を活性化する。
【0017】
ある実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ細胞増殖および／またはＴ細胞および／または形質細胞活性化を阻害することが可能である。Ｔ細胞は、例えばＣＤ４ Ｔ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞、Ｔｈ１ Ｔ細胞、ＴＦＨ Ｔ細胞、αβＴ細胞、およびγδＴ細胞からなる群から選択されうる。
【0018】
ある実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ｈｅｒｐｅｓ ｖｉｒｕｓ ｅｎｔｒｙ ｍｅｄｉａｔｏｒ）（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を、遮断または消失させることが可能である。
【0019】
ある実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＢＴＬＡと結合し、および、炎症性サイトカイン産生、例えば、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド９（ＣＸＣＬ９）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）、インターロイキン１β（ＩＬ１β）、および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）などを増加させること；複合化薬物の活性を媒介すること；および／または殺癌効果を有する別のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と二重特異性抗体を形成することが、可能である。
【0020】
また、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む、単離二重特異性抗体またはその抗原結合断片も、提供される。
【0021】
また、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離核酸も、提供される。
【0022】
また、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離核酸を含むベクターも、提供される。
【0023】
また、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離核酸を含むベクターを含む宿主細胞も、提供される。
【0024】
ある実施形態において、本発明の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または単離二重特異性抗体またはその抗原結合断片、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が、提供される。
【0025】
また、それを必要とする対象において癌細胞表面上のＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）を特異的に標的とする方法であって、本発明の医薬組成物を前記対象へ投与するステップを含む方法も、提供される。
【0026】
また、それを必要とする対象において癌を治療する方法であって、本発明の医薬組成物を前記対象へ投与するステップを含む方法も、提供される。ある実施形態において、前記癌は、固形腫瘍であり、好ましくは浸潤Ｔ細胞を有する固形腫瘍であり、より好ましくは浸潤エフェクターＴ細胞を有する固形腫瘍であり、より好ましくはＢＴＬＡを発現しているエフェクターＴ細胞を有する固形腫瘍であり、最も好ましくはＢＴＬＡを発現している浸潤エフェクターＴ細胞を有し腫瘍微小環境においてＢＴＬＡリガンドＨＶＥＭが高発現している固形腫瘍である。前記癌は、例えばＢＴＬＡ陽性癌でありうる。癌の例は、例えば黒色腫、肺癌、腎細胞癌、および肝臓癌から選択されうるが、これらに限定されない。
【0027】
ある実施形態において、医薬組成物は、第２の抗癌剤治療薬をさらに含む。第２の抗癌剤治療薬は、例えば抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片でありうる。
【0028】
また、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を産生する方法も、提供される。前記方法は、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を産生する条件下で、培養するステップ、および、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を、前記細胞または培養物から回収するステップを含む。
【0029】
また、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む、医薬組成物を産生する方法も、提供される。前記方法は、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を、薬学的に許容される担体と組み合わせて、前記医薬組成物を得るステップを含む。
【0030】
また、対象におけるＢＴＬＡのレベルを決定する方法も、提供される。前記方法は、（ａ）前記対象から試料を得るステップ；（ｂ）前記試料を本発明の抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と接触させるステップ；および（ｃ）前記対象におけるＢＴＬＡのレベルを決定するステップ、を含む。ある実施形態において、前記試料は組織試料である。前記組織試料は、例えば癌組織試料でありうる。ある実施形態において、前記試料は血液試料である。ある実施形態において、前記試料は、Ｔ細胞（例えばＣＤ４、ＣＤ８、Ｔｈ１、ＴＦＨ、αβ、γδ）、Ｂ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。
【0031】
［図面の簡単な説明］
前述の概要および本出願の好ましい実施形態の以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むことで、より理解されるであろう。しかしながら、本出願が図面に示された正確な実施形態に限定されないことを理解すべきである。
前述の概要および本出願の好ましい実施形態の以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むことで、より理解されるであろう。しかしながら、本出願が図面に示された正確な実施形態に限定されないことを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【0032】
【図1A-1B】ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ遮断レポーターアッセイを通じた、抗ＢＴＬＡ遮断抗体ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３の同定を示す、グラフを示す。
【図2A-2B】ＦＡＣＳ結合アッセイにおいて、ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３抗体が、ＨＥＫ２９３ヒトＢＴＬＡ（図２Ａ）およびＥｘｐｉ２９３カニクイザルＢＴＬＡ（図２Ｂ）で、ヒトおよびカニクイザルＢＴＬＡと結合できることを示す、グラフを示す。
【図3A-3B】細胞性ＢＴＬＡ／可溶性ＨＶＥＭ遮断アッセイ（図３Ａ）およびＢＴＬＡ－ＨＶＥＭ遮断Ｔ細胞レポーターアッセイ（図３Ｂ）において、ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３抗体が、抗ＢＴＬＡ遮断剤であることを示す、グラフを示す。
【図4A-4D】ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３抗体が、初代ＴおよびＢ細胞に結合することを示す、グラフを示す。
【図5】ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３抗体が、初代ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖に対するＨＶＥＭ媒介抑制を逆転させることを示す、グラフを示す。
【図6】混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいて、ＨＦＢ６－３がＩＦＮγ産生を増加させ、抗ＰＤ１抗体と相乗効果を発揮したことを示す、グラフを示す。
【図7A-7G】初代解離腫瘍培養（ｐｒｉｍａｒｙ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ｃｕｌｔｕｒｅｓ）において、ＨＦＢ６－３抗体が、単独でまたは抗ＰＤ１抗体と併用して、ＩＦＮγおよび炎症性サイトカイン産生を誘導したことを示す、グラフを示す。
【図8A-8B】野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスおよびｈＢＴＬＡノックインマウスにおける、ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３抗体の望ましいＰＫプロファイルを示す、グラフを示す。
【図9】ＥＬＩＳＡ結合アッセイおよびＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ遮断レポーターアッセイにおける、ＨＦＢ６－２ヒト化抗体の機能プロファイリングを示す、グラフを示す。
【図10A-10C】ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ遮断レポーターアッセイにおける、ヒト化ＨＦＢ６－３抗体（ヒト化ＨＦＢ６－３抗体のＨＣＤＲ３のシステイン変異体を含む）の結果を示す、グラフを示す。
【図11A-11B】ＦＡＣＳ結合アッセイにおいて、ヒト化ＨＦＢ６－３抗体バリアントが、ＨＥＫ２９３ＴヒトＢＴＬＡ発現細胞（図１１Ａ）およびＥｘｐｉ２９３カニクイザルＢＴＬＡ発現細胞（図１１Ｂ）で、ヒトおよびカニクイザルのＢＴＬＡと結合できることを示す、グラフを示す。
【図12A-12B】ＦＡＣＳ遮断アッセイ（図１２Ａ）において、およびＣＨＯ．ＴＣＲａ．ｈＨＶＥＭ／Ｊｕｒｋａｔ．ｈＢＴＬＡ．ＮＦＡＴ－ｌｕｃ遮断レポーターアッセイ（図１２Ｂ）において、ヒト化ＨＦＢ６－３抗体バリアントが、細胞性ＢＴＬＡと可溶性ＨＶＥＭとの相互作用を遮断できることを示す、グラフを示す。
【図13】システイン変異を有するヒト化ＨＦＢ６－３抗体バリアントが、初代ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖に対するＨＶＥＭ媒介抑制を逆転させることができたことを示す、グラフを示す。
【図14A-14C】初代解離腫瘍培養において、システイン変異を有するヒト化ＨＦＢ６－３抗体バリアントが、ＩＦＮγおよび炎症性サイトカイン産生を誘導したことを示す、グラフを示す。
【図15A-15C】初代解離腫瘍培養において、システイン変異を有するヒト化ＨＦＢ６－３抗体バリアントが、ＩＦＮγおよび炎症性サイトカイン産生を誘導したことを示す、グラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【0033】
様々な刊行物、論文、および特許が、背景においておよび明細書全体にわたって引用されまたは記載され；これらの参考文献の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。 本明細書に含まれている文書、行為、材料、装置、物品などの議論は、本発明の文脈を提供するためのものである。そのような議論は、これらの事項のいずれかまたは全てが、開示されまたは請求されるいずれかの発明に関して、従来技術の一部を形成することを認めるものではない。
【0034】
別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。 そうでない場合、本明細書において使用されるある用語は、本明細書に示される意味を有する。
【0035】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかにそうでない場合を除き、複数形も含むことに留意されたい。
【0036】
別段の記載がない限り、本明細書に記載される濃度または濃度範囲などの任意の数値は、全ての場合において「約（ａｂｏｕｔ）」という用語によって修飾されていると理解される。従って、数値は典型的には、記載された値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度は、０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％～１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は、０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書において使用される場合、数値範囲の使用は、文脈上明らかにそうでないことが示されない限り、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的に含み、そのような範囲内の整数およびその値の端数を含む。
【0037】
別段の指示がない限り、一連の要素に先行する「少なくとも（ａｔ ｌｅａｓｔ）」という用語は、その一連の各要素を指すと理解される。当業者であれば、本明細書に記載された本発明の具体的な実施形態に対する多くの等価物を、通常の実験のみを使用して、認識し、または確認することができるであろう。そのような等価物は、本発明に包含されることが意図される。
【0038】
本明細書において使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」または「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、またはそれらの他の変形は、記載された要素または要素の群を含むことを意味するが、他の要素または要素の群を排除せず、非排他的または開放的であることを意図すると理解される。例えば、要素のリストを含む組成物、混合物、工程、方法、物品、または器具は、必ずしもそれらの要素のみに限定されるものではなく、明示的に列挙されていない、またはそのような組成物、混合物、工程、方法、物品、または器具に内在していない、他の要素を含むことができる。さらに、明示的に反対の記載がない限り、「または（ｏｒ）」は包括的な「または」を指し、排他的な「または」は指さない。例えば、条件ＡまたはＢが満たされるのは、以下のいずれかの場合である：Ａが真（または存在する）かつＢが偽（または存在しない）、Ａが偽（または存在しない）かつＢが真（または存在する）、およびＡとＢの両方が真（または存在する）。
【0039】
本明細書において使用される場合、複数の記載された要素間の接続語「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」は、個々の選択肢と組み合わされた選択肢の両方を包含するものと理解される。例えば、２つの要素が「および／または」によって結ばれる場合、第１の選択肢は、第２の要素を伴わずに第１の要素の適用されうることを指す。第２の選択肢は、第１の要素を伴わずに第２の要素が適用されうることを指す。第３の選択肢は、第１の要素と第２の要素が共に適用されうることを指す。これらの選択肢のいずれかが、その意味に含まれ、従って本明細書において使用される「および／または」という用語の要件を満たすと理解される。選択肢のうちの複数が同時に適用されうることもまた、その意味に含まれ、従って「および／または」という用語の要件を満たすと理解される。
【0040】
本明細書において使用される場合、「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」という用語、または「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」または「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」などの変形は、本明細書および特許請求の範囲全体において、記載された任意の要素または要素の群が含まれるが、指定された方法、構造、または組成物に追加の要素または要素の群を加えることはできないことを示す。
【0041】
本明細書において使用される場合、「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語、または「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」などの変形は、本明細書および特許請求の範囲全体において、記載された任意の要素または要素の群が含まれ、かつ指定された方法、構造、または組成物の基本的または新規な特性を実質的に変更しない、任意の要素または要素の群が含まれる可能性があることを示す。Ｍ．Ｐ．Ｅ．Ｐ．§２１１１．０３参照。
【0042】
本明細書において使用される場合、「対象」とは、任意の動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。本明細書において使用される「哺乳動物」という用語は、任意の哺乳動物を包含する。哺乳動物の例には、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ヒトなどを含むが、これらに限定されず、最も好ましくはヒトである。
【0043】
「右（ｒｉｇｈｔ）」「左（ｌｅｆｔ）」「下（ｌｏｗｅｒ）」および「上（ｕｐｐｅｒ）」という語は、参照される図面における方向を示す。
【0044】
また、本明細書において好ましい発明の構成要素の寸法または特性について言及する際に使用される「約（ａｂｏｕｔ）」、「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」、「一般的に（ｇｅｎｅｒａｌｌｙ）」、「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」などの用語は、記載された寸法／特性が厳密な境界またはパラメータではなく、当業者であれば理解されるように、機能的に同一または類似であるそれからのわずかな変形を排除しないことを示すことを、理解されたい。最低限、数値パラメータを含むそのような参考文献は、当該技術分野で認められる数学的および工業的原則（例えば、丸め、測定誤差または他の系統誤差、製造公差など）を使用して、最小有効桁を変化させないような変動を含める。
【0045】
「同一の（ｉｄｅｎｔｉｃａｌ）」またはパーセント「同一の」という用語は、２以上の核酸またはポリペプチド配列（例えば、抗ＢＴＬＡ抗体およびそれらをコードするポリヌクレオチド、ＢＴＬＡポリペプチドおよびそれらをコードするＢＴＬＡポリヌクレオチド）の文脈において、最大限に対応するように比較およびアラインメントされ、以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用するか、または目視によって測定された場合に、同一であるか、または同一である特定の百分率のアミノ酸残基またはヌクレオチドを有する、２以上の配列または部分配列を指す。
【0046】
配列比較では、典型的には１つの配列が参照配列として機能し、それに対して試験配列が比較される。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験および参照配列がコンピュータに入力され、必要ならば部分配列座標が指定され、および配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。配列比較アルゴリズムはその後、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列（複数可）のパーセント配列同一性を計算する。
【0047】
配列の比較のための最適なアラインメントは、例えば以下によって行われうる：Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎの局所相同性アルゴリズム（ｔｈｅ ｌｏｃａｌ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）（Adv. Appl. Math. 1981; 2:482）、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈの相同性アラインメントアルゴリズム（ｔｈｅ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）（J. Mol. Biol. 1970; 48:443）、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎの類似性検索法（ｔｈｅ ｓｅａｒｃｈ ｆｏｒ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｍｅｔｈｏｄ）（Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 1988; 85:2444）、これらのアルゴリズムのコンピュータ実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ内のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．、マディソン（Ｍａｄｉｓｏｎ）、ウィスコンシン州）、または目視（一般に、Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. およびJohn Wiley & Sons, Inc., 1995 Supplement (Ausubel) 参照）。
【0048】
パーセント配列同一性および配列類似性を決定するのに適するアルゴリズムの例としては、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムがあり、それぞれAltschul et al., J. Mol. Biol. 1990; 215: 403-410およびAltschul et al., Nucleic Acids Res. 1997; 25: 3389-3402に記載されている。ＢＬＡＳＴ解析を行うためのソフトウェアは、米国国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を通じて公開されている。このアルゴリズムは、クエリ配列内の長さＷの短いワードを特定し、データベース配列内の同じ長さのワードとアラインメントされたときに、それが一致するか、またはある正の値の閾値スコアＴを満たすことによって、まず高スコア配列ペア（ＨＳＰ）を特定することを含む。Ｔは、近傍ワードスコア閾値（ｎｅｉｇｈｂｏｒｈｏｏｄ ｗｏｒｄ ｓｃｏｒｅ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）と称される（Altschul et al、前掲）。これらの最初の近傍ワードヒットは、それらを含むより長いＨＳＰを見つけるための探索を開始するための、シードとして機能する。ワードヒットはその後、累積アラインメントスコアが増加しうる限り、各配列に沿って両方向に延長される。
【0049】
累積スコアは、ヌクレオチド配列では、パラメータＭ（一致する残基のペアに対する得点；常に＞０）およびＮ（不一致の残基に対する減点；常に＜０）を使用して計算される。アミノ酸配列では、累積スコアを計算するために、スコアリングマトリックスが使用される。各方向のワードヒットの延長は、以下の場合に停止される：累積アラインメントスコアが、その達成された最大値から量Ｘだけ減少する；累積スコアが、１または複数の負のスコアの残基アラインメントの蓄積により、ゼロ以下に達する；または、いずれかの配列の末端に達する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、およびＸは、アラインメントの感度および速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、デフォルトとしてワード長（Ｗ）１１、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、および両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列では、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとしてワード長（Ｗ）３、期待値（Ｅ）１０、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスを使用する（Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989; 89:10915参照）。
【0050】
パーセント配列同一性を計算することに加え、ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計解析も行う（例えば、Karlin & Altschul, Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 1993; 90:5873-5787参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の尺度の一つは、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列の間の一致が偶然起こる確率の指標を与える。例えば、試験核酸を参照核酸と比較した最小合計確率が、約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満である場合、核酸は参照配列と類似すると考えられる。
【0051】
２つの核酸配列またはポリペプチドが実質的に同一であることを示すさらなる指標は、第１の核酸によってコードされるポリペプチドが、以下に説明するように、第２の核酸によってコードされるポリペプチドと、免疫学的に交差反応性があることである。従って、例えば２つのペプチドが保存的置換によってのみ異なる場合、ポリペプチドは典型的には、第２のポリペプチドと実質的に同一である。２つの核酸配列が実質的に同一であることを示す別の指標は、２つの分子がストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。
【0052】
本明細書において使用される場合、「単離（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」という用語は、生物学的成分（例えば、核酸、ペプチド、またはタンパク質）が、その成分が自然起源である生物の他の生物学的成分、すなわち他の染色体および非染色体ＤＮＡおよびＲＮＡ、およびタンパク質から、実質的に分離されているか、別個に生成されたか、または精製されていることを意味する。「単離」されている核酸、ペプチド、およびタンパク質は従って、標準的な精製方法によって精製された、核酸およびタンパク質を含む。「単離」核酸、ペプチド、およびタンパク質は、組成物が核酸、ペプチド、またはタンパク質の天然環境の一部でない場合、組成物の一部でありながら単離されている。この用語にはまた、宿主細胞内の組換え発現によって調製される核酸、ペプチド、およびタンパク質、および、化学合成された核酸も包含する。
【0053】
本明細書において使用される場合、「ポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）」という用語は、「核酸分子（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」、「ヌクレオチド（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ）」または「核酸（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ）」と同義であり、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドを指し、それは未修飾のＲＮＡまたはＤＮＡ、または修飾されたＲＮＡまたはＤＮＡでありうる。「ポリヌクレオチド」は、限定なく、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合であるＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、および一本鎖および二本鎖領域の混合であるＲＮＡ、ＤＮＡとＲＮＡとを含むハイブリッド分子（これらは一本鎖、またはより典型的には二本鎖、または一本鎖および二本鎖領域の混合でありうる）を含む。加えて、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡまたはＤＮＡ、またはＲＮＡとＤＮＡの両方を含む、三本鎖領域を指す。ポリヌクレオチドという用語はまた、１または複数の修飾された塩基を含むＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性のためまたは他の理由のため骨格が修飾されたＤＮＡまたはＲＮＡも含む。「修飾された（ｍｏｄｉｆｉｅｄ）」塩基は、例えば、トリチル化塩基およびイノシンなどの特殊な塩基を含む。ＤＮＡおよびＲＮＡには様々な修飾がなされうるため、「ポリヌクレオチド」は、自然界で典型的に見られる化学的、酵素的、または代謝的に修飾された形態のポリヌクレオチド、およびウイルスおよび細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、しばしばオリゴヌクレオチドと呼ばれる、相対的に短い核酸鎖も包含する。
【0054】
本明細書において使用される場合、「ベクター（ｖｅｃｔｏｒ）」という用語は、中に別の核酸セグメントが機能可能に挿入され、そのセグメントの複製または発現をもたらしうる、レプリコンである。
【0055】
本明細書において使用される場合、「宿主細胞（ｈｏｓｔ ｃｅｌｌ）」という用語は、本発明の核酸分子を含む細胞を指す。「宿主細胞」は、任意のタイプの細胞、例えば初代細胞、培養中の細胞、または細胞株からの細胞でありうる。一実施形態において、「宿主細胞」は、本発明の核酸分子を用いてトランスフェクトされた細胞である。別の実施形態において、「宿主細胞」は、そのようなトランスフェクトされた細胞の子孫または潜在的な子孫である。細胞の子孫は、例えば後続世代に起こりうる変異または環境影響、または核酸分子の宿主細胞ゲノム内への統合によって、親細胞と同一である場合もない場合もある。
【0056】
本明細書において使用される「発現（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）」という用語は、遺伝子産物の生合成を指す。この用語は、遺伝子のＲＮＡへの転写を包含する。この用語はまた、ＲＮＡの１または複数のポリペプチドへの翻訳を包含し、さらに全ての自然に起こる転写後および翻訳後修飾を包含する。発現された抗体は、宿主細胞の細胞質内に、細胞培養の増殖培地などの細胞外環境へ、または細胞膜に固定されて、存在しうる。
【0057】
本明細書において使用される場合、「ペプチド（ｐｅｐｔｉｄｅ）」、「ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」、または「タンパク質（ｐｒｏｔｅｉｎ）」という用語は、アミノ酸を含む分子を指し、当業者にタンパク質として認識されうる。アミノ酸残基のための従来の１文字または３文字コードが、本明細書において使用される。「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」という用語は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために、本明細書において互換的に使用されうる。ポリマーは、直鎖状でも分岐状でもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、および非アミノ酸により中断されてもよい。この用語はまた、天然にまたは介入によって修飾されているアミノ酸ポリマーをも包含し；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、またはその他の操作または修飾、例えば標識成分との複合化などである。また定義には、例えば、アミノ酸の１または複数のアナログ（例えば、非天然アミノ酸などを含む）を含むポリペプチド、および当該技術分野で公知の他の修飾も含まれる。
【0058】
本明細書に記載されるペプチド配列は、ペプチドのＮ末端領域が左側、Ｃ末端領域が右側という、通常の慣例に従って書かれている。アミノ酸の異性体が知られているが、別段の明示がない限り、表されるのはアミノ酸のＬ形である。
【0059】
［抗体］
本発明は一般に、単離ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗体をコードする核酸および発現ベクター、ベクターを含む組換え細胞、抗体を発現する組換え細胞、および抗体を含む組成物に関連する。抗体を作る方法、および癌などの疾患を治療するために抗体を使用する方法もまた、開示される。本発明の抗体は、以下を含むがこれらに限定されない、１または複数の望ましい機能特性を有する：ＢＴＬＡへの高い親和性結合、ＢＴＬＡに対する高い特異性、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）とＢＴＬＡの結合を遮断する能力、Ｂ細胞増殖および／またはＴ細胞および／または形質細胞活性化を阻害する能力、炎症性サイトカイン産生を増加させる能力、および、単独でまたは他の抗癌療法と併用して投与される場合に、対象および動物モデルにおける腫瘍成長を阻害する能力。炎症性サイトカインには、インターロイキン２（ＩＬ－２）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド９（ＣＸＣＬ９）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）、インターロイキン１β（ＩＬ１β）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、およびインターフェロンγを含みうるが、これらに限定されない。Ｔ細胞には、ＣＤ４ Ｔ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞、Ｔｈ１ Ｔ細胞、ＴＦＨ Ｔ細胞、αβＴ細胞、およびγδＴ細胞を含みうるが、これらに限定されない。
本発明は一般に、単離ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗体をコードする核酸および発現ベクター、ベクターを含む組換え細胞、抗体を発現する組換え細胞、および抗体を含む組成物に関連する。抗体を作る方法、および癌などの疾患を治療するために抗体を使用する方法もまた、開示される。本発明の抗体は、以下を含むがこれらに限定されない、１または複数の望ましい機能特性を有する：ＢＴＬＡへの高い親和性結合、ＢＴＬＡに対する高い特異性、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）とＢＴＬＡの結合を遮断する能力、Ｂ細胞増殖および／またはＴ細胞および／または形質細胞活性化を阻害する能力、炎症性サイトカイン産生を増加させる能力、および、単独でまたは他の抗癌療法と併用して投与される場合に、対象および動物モデルにおける腫瘍成長を阻害する能力。炎症性サイトカインには、インターロイキン２（ＩＬ－２）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド９（ＣＸＣＬ９）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）、インターロイキン１β（ＩＬ１β）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、およびインターフェロンγを含みうるが、これらに限定されない。Ｔ細胞には、ＣＤ４ Ｔ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞、Ｔｈ１ Ｔ細胞、ＴＦＨ Ｔ細胞、αβＴ細胞、およびγδＴ細胞を含みうるが、これらに限定されない。
【0060】
一般的な態様において、本発明は、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）と結合する、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連する。
【0061】
本明細書において使用される場合、「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は広い意味で使用され、ヒト抗体、ヒト化抗体、複合抗体およびキメラ抗体、およびモノクローナルまたはポリクローナルである抗体断片を含む、免疫グロブリンまたは抗体分子を含む。一般的に、抗体は、特定の抗原に対して結合特異性を示す、タンパク質またはペプチド鎖である。抗体の構造は、よく知られている。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、５つの主要なクラス（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ）に割り当てられうる。ＩｇＡおよびＩｇＧは、さらにアイソタイプＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４としてサブクラス分けされる。従って、本発明の抗体は、５つの主要なクラスまたは対応するサブクラスのいずれかでありうる。好ましくは、本発明の抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である。脊椎動物種の抗体軽鎖は、２つの明確に区別されるタイプ、すなわちカッパおよびラムダのいずれかに、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、割り当てられうる。従って、本発明の抗体は、カッパまたはラムダ軽鎖定常ドメインを含みうる。具体的な実施形態によれば、本発明の抗体は、ラットまたはヒト抗体からの重鎖および／または軽鎖定常領域を含む。重鎖および軽鎖定常ドメインに加えて、抗体は抗原結合領域を含み、これは軽鎖可変領域および重鎖可変領域から構成され、その各々が３つのドメイン（すなわち、相補性決定領域１～３；ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含む。軽鎖可変領域ドメインは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３とも称され、および重鎖可変領域ドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３とも称される。
【0062】
「相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ）」（ＣＤＲ）は、抗原と結合する抗体領域である。ＣＤＲは、以下のような様々な画定法を使用して定義されうる：Ｋａｂａｔ（Wu et al. J Exp Med 132: 211-50, 1970）（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991）、Ｃｈｏｔｈｉａ（Chothia et al. J Mol Biol 196: 901-17, 1987）、ＩＭＧＴ（Lefranc et al. Dev Comp Immunol 27: 55-77, 2003）、およびＡｂＭ（Martin and Thornton J Bmol Biol 263: 800-15, 1996）。様々な画定法と可変領域ナンバリングとの間の対応が、記載されている（例えば、Lefranc et al. Dev Comp Immunol 27: 55-77, 2003；Honegger and Pluckthun, J Mol Biol 309:657-70, 2001；国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース；Ｗｅｂリソース、http://www_imgt_org参照）。ＵＣＬ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ ＰＬＣによるａｂＹｓｉｓなどの利用可能なプログラムが、ＣＤＲを画定するために、使用されうる。本明細書において使用される「ＣＤＲ」、「ＨＣＤＲ１」、「ＨＣＤＲ２」、「ＨＣＤＲ３」、「ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」、および「ＬＣＤＲ３」という用語は、明細書に別段の明記がない限り、前述の方法、すなわちＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、またはＡｂＭのいずれかによって定義される、ＣＤＲを含む。例えばＫａｂａｔナンバリングおよびＩＭＧＴ独自ナンバリングシステムを含む、ナンバリングシステム間の対応は、当業者に周知である（例えば、Kabat；Chothia；Martin；Lefranc et al. 参照）。
【0063】
【0064】
本明細書で使用される場合、「単離抗体（ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、異なる抗原特異性を有する他の抗体が実質的に含まれない抗体を指す（例えば、ＢＴＬＡに特異的に結合する単離抗体は、ＢＴＬＡに結合しない抗体が実質的に含まれない）。加えて、単離抗体は、他の細胞性物質および／または化学物質が実質的に含まれない。
【0065】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、ごく少量存在する可能性のある自然発生的な変異を除いて、同一である。本発明のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ技術、単一リンパ球遺伝子クローニング技術によって、または組換えＤＮＡ法によって、作られうる。例えば、モノクローナル抗体は、ヒト重鎖トランスジーンおよび軽鎖トランスジーンを含むゲノムを有するトランスジェニックマウスまたはラットなどの、トランスジェニック非ヒト動物から得られるＢ細胞を含むハイブリドーマによって、産生されうる。
【0066】
本明細書で使用される場合、「抗原結合断片（ａｎｔｉｇｅｎ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｆｒａｇｍｅｎｔ）」という用語は、抗体断片を指し、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ′）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄａｂ）、ｓｃＦｖダイマー（２価ダイアボディ）、１または複数のＣＤＲを含む抗体の一部から形成される多重特異性抗体、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、２価ドメイン抗体、または抗原に結合するが完全な抗体構造を含まないその他の抗体断片などである。抗原結合断片は、親抗体または親抗体断片が結合するのと同じ抗原に結合することができる。具体的な実施形態によれば、抗原結合断片は、軽鎖可変領域、軽鎖定常領域、および重鎖のＦｄセグメントを含む。他の具体的な実施形態によれば、抗原結合断片は、ＦａｂおよびＦ（ａｂ′）を含む。
【0067】
本明細書で使用される場合、「単鎖抗体（ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、当該分野で従来知られる単鎖抗体を指し、約１５～約２０アミノ酸の短いペプチドにより連結された、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。
【0068】
本明細書で使用される場合、「単一ドメイン抗体（ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、当該分野で従来知られる単一ドメイン抗体を指し、重鎖可変領域および重鎖定常領域を含み、または重鎖可変領域のみを含む。
【0069】
本明細書で使用される場合、「ヒト抗体（ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、ヒトによって産生される抗体、または当該分野で知られる任意の技術を使用して作られた、ヒトによって産生される抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。この定義のヒト抗体には、完全抗体または全長抗体、その断片、および／または少なくとも１つのヒト重鎖および／または軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。
【0070】
本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」および／または「ヒト化抗原結合ドメイン（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ）」という用語は、ヒト抗体との配列相同性を増加させて、抗体の抗原結合特性を維持するが、ヒト体内でのその抗原性を減少させるように修飾される、非ヒト抗体を指す。
【0071】
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体（ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２以上の種に由来する抗体を指す。軽鎖と重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性、および能力を有する１種の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体の可変領域に、多くの場合対応し、一方定常領域は、別種の哺乳動物（例えば、ヒト）に由来する抗体の配列に対応し、その種において免疫反応を引き起こさないようにする。
【0072】
本明細書で使用される場合、「多重特異性抗体（ｍｕｌｔｉ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む抗体を指し、ここで複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列が、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列が、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。一実施形態において、第１および第２のエピトープは、同じ抗原、例えば同じタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上に存在する。一実施形態において、第１および第２のエピトープは、重なり合う、または実質的に重なり合う。一実施形態において、第１および第２のエピトープは、重なり合わず、または実質的に重なり合わない。一実施形態において、第１および第２のエピトープは、異なる抗原、例えば異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上に存在する。一実施形態において、多重特異性抗体は、第３、第４、または第５の免疫グロブリン可変ドメインを含む。一実施形態において、多重特異性抗体は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子、または四重特異性抗体分子である。
【0073】
本明細書で使用される場合、「二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、２つまでのエピトープまたは２つまでの抗原にしか結合しない、多重特異性抗体を指す。二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列とによって、特徴付けられる。一実施形態において、第１および第２のエピトープは、同じ抗原、例えば同じタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上に存在する。一実施形態において、第１および第２のエピトープは、重なり合う、または実質的に重なり合う。一実施形態において、第１および第２のエピトープは、異なる抗原、例えば異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上に存在する。一実施形態において、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列とを含む。一実施形態において、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体（またはその断片）と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体（またはその断片）とを含む。一実施形態において、二重特異性抗体は、第１のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ（またはその断片）と、第２のエピトープに対する結合特異性を有するｓｃＦｖ（またはその断片）とを含む。一実施形態において、第１のエピトープは、ＢＴＬＡ上に位置し、第２のエピトープは、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ－２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３、および／または他の腫瘍関連免疫抑制因子または表面抗原上に位置する。
【0074】
本明細書で使用される場合、「ＢＴＬＡに特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ ｔｏ ＢＴＬＡ）」抗体とは、ＢＴＬＡ（好ましくはヒトＢＴＬＡ）に結合し、ＫＤが１×１０－７Ｍ以下、好ましくは１×１０－８Ｍ以下、より好ましくは５×１０－９Ｍ以下、１×１０－９Ｍ以下、５×１０－１０Ｍ以下、または１×１０－１０Ｍ以下である、抗体および／または抗原結合ドメインを指す。ある実施形態において、抗体および／または抗原結合ドメインは、カニクイザルＢＴＬＡに結合する。「ＫＤ」という用語は、解離定数を指し、これはＫｄのＫａに対する比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される。抗体のＫＤ値は、本開示に照らして、当該分野の方法を使用して決定されうる。例えば、抗体のＫＤは、表面プラズモン共鳴を使用することにより、例えばバイオセンサーシステム、例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムを使用することにより、またはバイオレイヤー干渉技術、例えばＯｃｔｅｔ ＲＥＤ９６システムを使用することにより、決定されうる。
【0075】
抗体のＫＤ値が小さいほど、抗体が標的抗原に結合する親和性は高くなる。ある実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡに約２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、または０.５ｎＭ未満のＫＤで、結合する。
【0076】
本明細書で使用される場合、「ＩＣ５０」という用語は、本発明のモノクローナルまたは二重特異性抗体、またはその抗原結合断片の、半数最大阻害濃度を指す。ＩＣ５０は、本発明のモノクローナルまたは二重特異性抗体、またはその抗原結合断片の、ＨＶＥＭの結合を阻害するための、または細胞内でＢＴＬＡの機能を阻害するための、効力（ｐｏｔｅｎｃｙ）の尺度である。ある実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、約１０－７Ｍ未満、約１０－８Ｍ未満、約１０－９Ｍ未満、約１０－１０Ｍ未満、約１０－１１Ｍ未満、約１０－１２Ｍ未満、または約１０－１３Ｍ未満のＫＤを有する。
【0077】
本明細書で使用される場合、「ＥＣ５０」という用語は、本発明のモノクローナルまたは二重特異性抗体、またはその抗原結合断片の、半数最大効果濃度を指す。ＥＣ５０は、特定の曝露時間にわたって、ベースラインと最大値とのちょうど中間にある生物学的反応（すなわち細胞死）を誘導するための、モノクローナルまたは二重特異性抗体、またはその抗原結合断片の、濃度を指す。ある実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、約１μＭ未満、約１０００ｎＭ～約１００ｎＭ、約１００ｎＭ～約１０ｎＭ、約１０ｎＭ～約１ｎＭ、約１０００ｐＭ～約５００ｐＭ、約５００ｐＭ～約２００ｐＭ、約２００ｐＭ未満、約２００ｐＭ～約１５０ｐＭ、約２００ｐＭ～約１００ｐＭ、約１００ｐＭ～約１０ｐＭ、または約１０ｐＭ～約１ｐＭの、ＥＣ５０を有する。
【0078】
具体的な態様によれば、本発明は単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連し、
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片または抗原結合ドメインは、
重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有し：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５３、１０、１１、および１２；または
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片またはその抗原結合ドメインは、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、好ましくはヒトＢＴＬＡと、特異的に結合し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、自然起源でなくてもよい。配列番号１５３は、アミノ酸配列ＣＡＲＥＤＧＹＰＹＹＴＬＤＸ１Ｗによって表され、ここでＸ１は、Ｃ、Ａ、Ｓ、Ｔ、またはＶから選択されるアミノ酸である。
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片または抗原結合ドメインは、
重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有し：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５３、１０、１１、および１２；または
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片またはその抗原結合ドメインは、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、好ましくはヒトＢＴＬＡと、特異的に結合し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、自然起源でなくてもよい。配列番号１５３は、アミノ酸配列ＣＡＲＥＤＧＹＰＹＹＴＬＤＸ１Ｗによって表され、ここでＸ１は、Ｃ、Ａ、Ｓ、Ｔ、またはＶから選択されるアミノ酸である。
【0079】
ある実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有し：
（１）それぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２；または
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、好ましくはヒトＢＴＬＡと、特異的に結合し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、自然起源でなくてもよい。
これらは以下のポリペプチド配列を有し：
（１）それぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２；または
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、好ましくはヒトＢＴＬＡと、特異的に結合し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、自然起源でなくてもよい。
【0080】
別の具体的な態様によれば、本発明は、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１５または１３と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号１６または１４と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましい一実施形態によれば、本発明の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１３と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号１４と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましい一実施形態によれば、本発明の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１５と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号１６と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0081】
具体的な実施形態によれば、単離抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は：
（１）配列番号１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；または
（２）配列番号１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
（１）配列番号１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；または
（２）配列番号１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0082】
一実施形態において、本発明は、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、これらはそれぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６のポリペプチド配列を有する、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連する。別の実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号１４と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域；および配列番号１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0083】
一実施形態において、本発明は、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、これらはそれぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２のポリペプチド配列を有する、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連する。別の実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１５と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号１６と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域；および配列番号１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0084】
別の具体的な態様によれば、本発明は、本発明の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片に関連し、前記モノクローナルまたは二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、キメラ型である。
【0085】
別の具体的な態様によれば、本発明は、本発明の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片に関連し、前記モノクローナルまたは二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、ヒト型のまたはヒト化されたものである。
【0086】
別の具体的な態様によれば、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有する：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５０、１０、１１、および１２；
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
（３）それぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２；
（４）それぞれ、配列番号７、８、１４９、１０、１１、および１２；
（５）それぞれ、配列番号７、８、１５１、１０、１１、および１２；または
（６）それぞれ、配列番号７、８、１５２、１０、１１、および１２；
ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連する。
これらは以下のポリペプチド配列を有する：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５０、１０、１１、および１２；
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
（３）それぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２；
（４）それぞれ、配列番号７、８、１４９、１０、１１、および１２；
（５）それぞれ、配列番号７、８、１５１、１０、１１、および１２；または
（６）それぞれ、配列番号７、８、１５２、１０、１１、および１２；
ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連する。
【0087】
別の具体的な態様によれば、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、
配列番号１４１、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４３、１４５、または１４７と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、または
配列番号１４２、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４４、１４６、または１４８と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
配列番号１４１、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４３、１４５、または１４７と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、または
配列番号１４２、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４４、１４６、または１４８と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0088】
別の具体的な態様によれば、ヒト化抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（１）配列番号１４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２）配列番号１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３）配列番号１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４）配列番号２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５）配列番号２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６）配列番号２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（７）配列番号２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（８）配列番号２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（９）配列番号３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１０）配列番号３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１１）配列番号３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１２）配列番号３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１３）配列番号３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１４）配列番号４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１５）配列番号４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１６）配列番号４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１７）配列番号４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１８）配列番号４９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１９）配列番号５１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２０）配列番号５３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２１）配列番号５５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２２）配列番号５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２３）配列番号５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２４）配列番号６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２５）配列番号６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２６）配列番号６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２７）配列番号６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２８）配列番号６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２９）配列番号７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３０）配列番号７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３１）配列番号７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３２）配列番号７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３３）配列番号７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３４）配列番号８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３５）配列番号８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３６）配列番号８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３７）配列番号８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３８）配列番号８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３９）配列番号９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４０）配列番号９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４１）配列番号９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４２）配列番号９７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４３）配列番号９９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４４）配列番号１０１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４５）配列番号１０３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４６）配列番号１０５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４７）配列番号１０７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４８）配列番号１０９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４９）配列番号１１１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５０）配列番号１１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５１）配列番号１１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５２）配列番号１１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５３）配列番号１１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５４）配列番号１２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５５）配列番号１２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５６）配列番号１２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５７）配列番号１２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５８）配列番号１２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５９）配列番号１３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６０）配列番号１３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６１）配列番号１３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６２）配列番号１３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６３）配列番号１３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６４）配列番号１４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６５）配列番号１４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
または
（６６）配列番号１４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
（１）配列番号１４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２）配列番号１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３）配列番号１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４）配列番号２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５）配列番号２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６）配列番号２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（７）配列番号２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（８）配列番号２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（９）配列番号３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１０）配列番号３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１１）配列番号３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１２）配列番号３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１３）配列番号３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１４）配列番号４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１５）配列番号４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１６）配列番号４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１７）配列番号４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１８）配列番号４９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１９）配列番号５１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２０）配列番号５３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２１）配列番号５５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２２）配列番号５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２３）配列番号５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２４）配列番号６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２５）配列番号６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２６）配列番号６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２７）配列番号６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２８）配列番号６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２９）配列番号７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３０）配列番号７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３１）配列番号７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３２）配列番号７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３３）配列番号７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３４）配列番号８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３５）配列番号８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３６）配列番号８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３７）配列番号８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３８）配列番号８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３９）配列番号９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４０）配列番号９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４１）配列番号９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４２）配列番号９７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４３）配列番号９９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４４）配列番号１０１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４５）配列番号１０３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４６）配列番号１０５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４７）配列番号１０７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４８）配列番号１０９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４９）配列番号１１１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５０）配列番号１１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５１）配列番号１１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５２）配列番号１１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５３）配列番号１１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５４）配列番号１２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５５）配列番号１２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５６）配列番号１２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５７）配列番号１２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５８）配列番号１２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５９）配列番号１３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６０）配列番号１３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６１）配列番号１３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６２）配列番号１３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６３）配列番号１３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６４）配列番号１４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６５）配列番号１４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
または
（６６）配列番号１４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域。
【0089】
一実施形態において、本発明は、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、これらはそれぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６のポリペプチド配列を有する、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連する。別の実施形態において、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、または５７と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および、それぞれ、配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、または５８と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、または５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域；および、それぞれ、配列番号１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、または５８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0090】
一実施形態において、本発明は、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、これらはそれぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２のポリペプチド配列を有する、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連する。別の実施形態において、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、または９９と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および、それぞれ、配列番号６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、または１００と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、または９９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域；および、それぞれ、配列番号６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、または１００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0091】
一実施形態において、本発明は、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、これらはそれぞれ、配列番号７、８、１４９、１０、１１、および１２のポリペプチド配列を有する、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連する。別の実施形態において、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１０１、１０９、１１７、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、または１３５と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および、それぞれ、配列番号１０２、１１０、１１８、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、または１３６と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１０１、１０９、１１７、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、または１３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域；および、それぞれ、配列番号１０２、１１０、１１８、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、または１３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0092】
一実施形態において、本発明は、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、これらはそれぞれ、配列番号７、８、１５０、１０、１１、および１２のポリペプチド配列を有する、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連する。別の実施形態において、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１０３、１１１、１１９、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、または１４７と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および、それぞれ、配列番号１０４、１１２、１２０、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、または１４８と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１０３、１１１、１１９、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、または１４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域；および、それぞれ、配列番号１０４、１１２、１２０、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、または１４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0093】
一実施形態において、本発明は、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、これらはそれぞれ、配列番号７、８、１５１、１０、１１、および１２のポリペプチド配列を有する、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連する。別の実施形態において、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１０５、１１３、または１２１と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および、それぞれ、配列番号１０６、１１４、または１２２と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１０５、１１３、または１２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域；および、それぞれ、配列番号１０６、１１４、または１２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0094】
一実施形態において、本発明は、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、これらはそれぞれ、配列番号７、８、１５２、１０、１１、および１２のポリペプチド配列を有する、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片に関連する。別の実施形態において、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１０７、１１５、または１２３と、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および、それぞれ、配列番号１０８、１１６、ｏｒ １２４またはと、少なくとも８５％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。好ましくは、ヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、配列番号１０７、１１５、または１２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域；および、それぞれ、配列番号１０８、１１６、または１２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0095】
ある実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡのアゴニストであり、およびＢＴＬＡに結合する際に、ＢＴＬＡからの下流シグナル伝達を活性化する。
【0096】
ある実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ細胞増殖および／またはＴ細胞および／または形質細胞活性化を阻害することが可能である。Ｔ細胞は、例えばＣＤ４ Ｔ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞、Ｔｈ１ Ｔ細胞、ＴＦＨ Ｔ細胞、αβＴ細胞、およびγδＴ細胞からなる群から選択されうる。
【0097】
ある実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を、遮断または消失させることが可能である。
【0098】
ある実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ＢＴＬＡと結合し、および、炎症性サイトカイン産生、例えば、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド９（ＣＸＣＬ９）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）、インターロイキン１β（ＩＬ１β）、および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）などを、増加させることが可能である。ある実施形態において、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド９（ＣＸＣＬ９）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）、インターロイキン１β（ＩＬ１β）、および／または腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）産生を、対照抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合断片よりも多く、増加させることが可能である。本明細書において使用される対照抗ＢＴＬＡ抗体は、ＢＴＬＡと結合し、ＢＴＬＡのＨＶＥＭへの結合を遮断することが可能な抗体でありうる。本明細書において使用される対照抗体の例には、ＪＳ００４抗ＢＴＬＡ抗体を含みうるが、これらに限定されない。
【0099】
別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および／または二重特異性抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離核酸に関連する。当業者であれば、タンパク質のアミノ酸配列を変更せずに、タンパク質のコード配列が変更（例えば、置換、削除、挿入など）されうることが、理解されるであろう。従って、当業者であれば、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸配列は、タンパク質のアミノ酸配列を変更せずに、変更されうることが、理解されるであろう。
【0100】
別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および／または二重特異性抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離核酸を含むベクターに関連する。当業者に公知の任意のベクター、例えばプラスミド、コスミド、ファージベクター、またはウイルスベクターが、本開示に照らして、使用されうる。いくつかの実施形態において、ベクターは、プラスミドなどの組換え発現ベクターである。ベクターは、発現ベクターの従来の機能を確立するための任意の要素、例えば、プロモーター、リボソーム結合要素、ターミネーター、エンハンサー、選択マーカー、および複製起点を、含みうる。プロモーターは、構成的な、誘導可能な、または抑制可能なプロモーターでありうる。核酸を細胞へ送達することが可能な多数の発現ベクターが、当該技術分野で知られており、細胞内で抗体またはその抗原結合断片を産生するために、本明細書において使用されうる。本発明の実施形態に従って組換え発現ベクターを生成するために、従来のクローニング技術または人工遺伝子合成が使用されうる。
【0101】
別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および／または二重特異性抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離核酸を含む宿主細胞に関連する。当業者に公知の任意の宿主細胞が、本開示に照らして、本発明の抗体またはその抗原結合断片の組換え発現のために、使用されうる。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＧ１またはＢＬ２１細胞（例えばｓｃＦｖまたはＦａｂ抗体の発現のため）、ＣＨＯ－ＤＧ４４またはＣＨＯ－Ｋ１細胞、またはＨＥＫ２９３細胞（例えば全長ＩｇＧ抗体の発現のため）である。具体的な実施形態によれば、組換え発現ベクターは、化学的トランスフェクション、ヒートショック、または電気穿孔法などの従来の方法によって、宿主細胞に形質転換され、そこで宿主細胞ゲノム内に安定的に統合されることにより、組換え核酸が効果的に発現される。
【0102】
別の一般的な態様において、本発明は、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および／または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を、産生する方法に関連し、前記方法は、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を産生する条件下で、培養するステップ、および、前記モノクローナルおよび／または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を、前記細胞または細胞培養物から（例えば上清から）回収するステップを含む。発現モノクローナルおよび／または二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、細胞から収穫され、当該技術分野で知られ本明細書に記載される従来技術に従って、精製されうる。
【0103】
［医薬組成物］
別の一般的な態様において、本発明は、本発明の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、二重特異性抗体またはその抗原結合断片、単離ポリヌクレオチド、および／または単離ポリペプチド、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物に関連する。
別の一般的な態様において、本発明は、本発明の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、二重特異性抗体またはその抗原結合断片、単離ポリヌクレオチド、および／または単離ポリペプチド、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物に関連する。
【0104】
本明細書において使用される「医薬組成物（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」という用語は、本発明の単離ポリヌクレオチド、本発明の単離ポリペプチド、抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および／または本発明の二重特異性抗体を、薬学的に許容される担体と共に含む、産物を意味する。本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および／または二重特異性抗体、およびそれらを含む組成物はまた、本明細書に記載される治療用途のための医薬品の製造にも有用である。
【0105】
本明細書において使用される場合、「担体（ｃａｒｒｉｅｒ）」という用語は、医薬製剤において使用するために当該技術分野で広く知られる、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、微小球、リポソームカプセル化、または他の材料を指す。担体、賦形剤、または希釈剤の特性は、具体的な適用での投与の経路に依存することが、理解されるであろう。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容される担体（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ ｃａｒｒｉｅｒ）」という用語は、本発明による組成物の有効性または本発明による組成物の生物学的活性を妨げない、非毒性材料を指す。具体的な実施形態によれば、本開示に照らして、抗体医薬組成物における使用に適した任意の薬学的に許容される担体が、本発明において使用されうる。
【0106】
医薬品有効成分の薬学的に許容される担体との製剤は、当該技術分野で知られており、例えばRemington: The Science and Practice of Pharmacy（例えば第２１版（２００５年）、およびそれ以降の版））など。追加成分の非限定的な例には、緩衝剤、希釈剤、溶媒、浸透圧調整剤、防腐剤、安定剤、およびキレート剤を含む。１または複数の薬学的に許容される担体が、本発明の医薬組成物を製剤化する際に、使用されうる。
【0107】
本発明の一実施形態において、医薬組成物は液体製剤である。液体製剤の好ましい例は、水性製剤、すなわち水を含有する製剤である。液体製剤には、溶液、懸濁液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、ゲルなどを含みうる。水性製剤は典型的には、少なくとも５０％ｗ／ｗの水、または少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または少なくとも９５％ｗ／ｗの水を含む。
【0108】
一実施形態において、医薬組成物は、注入剤として製剤化されてもよく、例えば注入装置（例えば、シリンジまたは輸液ポンプ）を介して注入されうる。注入は、例えば皮下に、筋肉内に、腹腔内に、硝子体内に、または静脈内に、送達されうる。
【0109】
別の実施形態において、医薬組成物は、固体製剤、例えば凍結乾燥または噴霧乾燥された組成物であり、そのまま使用されてもよく、またはそこに医師または患者が、溶媒および／または希釈剤を使用前に加えてもよい。固体剤形には、圧縮錠剤および／またはコーティング錠などの錠剤、およびカプセル（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル）を含みうる。医薬組成物はまた、例えば小袋（ｓａｃｈｅｔｓ）、糖衣錠（ｄｒａｇｅｅｓ）、粉末、顆粒、トローチ、または再構成用の粉末の形態でありうる。
【0110】
剤形は、即時放出型であってもよく、その場合、それらは水溶性または分散性の担体を含むことができ、または、遅延放出型、持続放出型、または修飾放出型であってもよく、その場合、それらは胃腸管内または皮下での剤形の溶解速度を調節する水不溶性ポリマーを含むことができる。
【0111】
他の実施形態において、医薬組成物は、鼻腔内に、口腔内に（ｉｎｔｒａｂｕｃｃａｌｌｙ）、または舌下に、送達されうる。
【0112】
水性製剤のｐＨは、ｐＨ３～ｐＨ１０の間でありうる。本発明の一実施形態において、製剤のｐＨは約７．０～約９．５である。本発明の他の実施形態において、製剤のｐＨは約３．０～約７．０である。
【0113】
本発明の別の実施形態において、医薬組成物は緩衝剤を含む。緩衝剤の非限定的な例には、以下を含む：アルギニン、アスパラギン酸、ビシン、クエン酸、リン酸水素二ナトリウム、フマル酸、グリシン、グリシルグリシン、ヒスチジン、リジン、マレイン酸、リンゴ酸、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、コハク酸塩、酒石酸、トリシン、およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、およびそれらの混合物。緩衝剤は、個別にまたは全体として、約０．０１ｍｇ／ｍｌ～約５０ｍｇ／ｍｌ、例えば約０．１ｍｇ／ｍｌ～約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在しうる。これらの特定の緩衝剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【0114】
本発明の別の実施形態において、医薬組成物は防腐剤を含む。防腐剤の非限定的な例には、以下を含む：ベンゼトニウム塩化物、安息香酸、ベンジルアルコール、ブロノポール、ブチル４－ヒドロキシ安息香酸、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロヘキシジン、クロルフェネシン、ｏ－クレゾール、ｍ－クレゾール、ｐ－クレゾール、エチル４－ヒドロキシ安息香酸、イミド尿素（ｉｍｉｄｕｒｅａ）、メチル４－ヒドロキシ安息香酸、フェノール、２－フェノキシエタノール、２－フェニルエタノール、プロピル４－ヒドロキシ安息香酸、デヒドロ酢酸ナトリウム、チメロサール（ｔｈｉｏｍｅｒｏｓａｌ）、およびそれらの混合物。防腐剤は、個別にまたは全体として、約０．０１ｍｇ／ｍｌ～約５０ｍｇ／ｍｌ、例えば約０．１ｍｇ／ｍｌ～約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在しうる。これらの特定の防腐剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【0115】
本発明の別の実施形態において、医薬組成物は等張剤を含む。等張剤の非限定的な例には、以下を含む：塩（例えば塩化ナトリウム）、アミノ酸（例えばグリシン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、およびスレオニン）、アルジトール（例えばグリセロール、１，２－プロパンジオール（プロピレングリコール）、１，３－プロパンジオール、および１，３－ブタンジオール）、ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ４００）、およびそれらの混合物。等張剤の別の例には、糖を含む。糖の非限定的な例は、単糖、二糖、または多糖、または水溶性グルカンであってもよく、例えば果糖、ブドウ糖、マンノース、ソルボース、キシロース、麦芽糖、乳糖、ショ糖、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、α－およびβ－ＨＰＣＤ、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、およびカルボキシメチルセルロースナトリウムを含む。等張剤の別の例は、糖アルコールであり、ここで「糖アルコール（ｓｕｇａｒ ａｌｃｏｈｏｌ）」という用語は、少なくとも１つの－ＯＨ基を有するＣ（４－８）炭化水素として定義される。糖アルコールの非限定的な例には、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクトール、ズルシトール、キシリトール、およびアラビトールを含む。等張剤は、個別にまたは全体として、約０．０１ｍｇ／ｍｌ～約５０ｍｇ／ｍｌ、例えば約０．１ｍｇ／ｍｌ～約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在しうる。これらの特定の等張剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【0116】
本発明の別の実施形態において、医薬組成物はキレート剤を含む。キレート剤の非限定的な例には、クエン酸、アスパラギン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）の塩、およびそれらの混合物を含む。キレート剤は、個別にまたは全体として、約０．０１ｍｇ／ｍｌ～約５０ｍｇ／ｍｌ、例えば約０．１ｍｇ／ｍｌ～約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在しうる。これらの特定のキレート剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【0117】
本発明の別の実施形態において、医薬組成物は安定剤を含む。安定剤の非限定的な例には、１または複数の凝集阻害剤、１または複数の酸化阻害剤、１または複数の界面活性剤、および／または１または複数のプロテアーゼ阻害剤を含む。
【0118】
本発明の別の実施形態において、医薬組成物は安定剤を含み、前記安定剤は、カルボキシ／ヒドロキシセルロースおよびその誘導体（例えばＨＰＣ、ＨＰＣ－ＳＬ、ＨＰＣ－Ｌ、およびＨＰＭＣ）、シクロデキストリン、２－メチルチオエタノール、ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ ３３５０）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、塩（例えば塩化ナトリウム）、硫黄含有物質（例えばモノチオグリセロール）、またはチオグリコール酸である。安定剤は、個別にまたは全体として、約０．０１ｍｇ／ｍｌ～約５０ｍｇ／ｍｌ、例えば約０．１ｍｇ／ｍｌ～約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在しうる。これらの特定の安定剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【0119】
本発明のさらなる実施形態において、医薬組成物は、１または複数の界面活性剤、好ましくは１つの界面活性剤、少なくとも１つの界面活性剤、または２つの異なる界面活性剤を含む。「界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）」という用語は、水溶性（親水性）部分と脂溶性（親油性）部分を含む、任意の分子またはイオンを指す。界面活性剤は、例えばアニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、および／または双性イオン性界面活性剤からなる群から選択されうる。界面活性剤は、個別にまたは全体として、約０．１ｍｇ／ｍｌ～約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在しうる。これらの特定の界面活性剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【0120】
本発明のさらなる実施形態において、医薬組成物は、１または複数のプロテアーゼ阻害剤、例えばＥＤＴＡ、および／またはベンズアミジン塩酸塩（ＨＣｌ）などを含む。プロテアーゼ阻害剤は、個別にまたは全体として、約０．１ｍｇ／ｍｌ～約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在しうる。これらの特定のプロテアーゼ阻害剤の各々を含む医薬組成物は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【0121】
別の一般的な態様において、本発明は、医薬組成物を産生する方法に関連し、前記方法は、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および／または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含み、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および／または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を、薬学的に許容される担体と組み合わせて、前記医薬組成物を得るステップを含む。
【0122】
［使用方法］
別の一般的な態様において、本発明は、それを必要とする対象において癌を治療する方法に関連し、前記方法は、本発明の抗ＢＴＬＡモノクローナルおよび／または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を、前記対象へ投与するステップを含む。ある実施形態において、前記癌は、固形腫瘍であり、好ましくは浸潤Ｔ細胞を有する固形腫瘍であり、より好ましくは浸潤エフェクターＴ細胞を有する固形腫瘍であり、より好ましくはＢＴＬＡを発現しているエフェクターＴ細胞を有する固形腫瘍であり、最も好ましくはＢＴＬＡを発現している浸潤エフェクターＴ細胞を有し腫瘍微小環境においてＢＴＬＡリガンドＨＶＥＭが高発現している固形腫瘍である。前記癌は、例えば、黒色腫、肺癌、腎細胞癌、および肝臓癌から選択されうるが、これらに限定されない。
別の一般的な態様において、本発明は、それを必要とする対象において癌を治療する方法に関連し、前記方法は、本発明の抗ＢＴＬＡモノクローナルおよび／または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を、前記対象へ投与するステップを含む。ある実施形態において、前記癌は、固形腫瘍であり、好ましくは浸潤Ｔ細胞を有する固形腫瘍であり、より好ましくは浸潤エフェクターＴ細胞を有する固形腫瘍であり、より好ましくはＢＴＬＡを発現しているエフェクターＴ細胞を有する固形腫瘍であり、最も好ましくはＢＴＬＡを発現している浸潤エフェクターＴ細胞を有し腫瘍微小環境においてＢＴＬＡリガンドＨＶＥＭが高発現している固形腫瘍である。前記癌は、例えば、黒色腫、肺癌、腎細胞癌、および肝臓癌から選択されうるが、これらに限定されない。
【0123】
別の一般的な態様において、本発明は、対象において癌細胞表面上のＢＴＬＡを標的として細胞殺傷を達成する方法に関連し、前記方法は、ＢＴＬＡに特異的に結合する単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および／または二重特異性抗体またはその抗原結合断片、または本発明の単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および／または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を、前記対象へ投与するステップを含む。抗ＢＴＬＡモノクローナルまたは二重特異性抗体または抗原結合断片のＢＴＬＡへの結合は、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）のＢＴＬＡへの結合を遮断することができ；ＢＴＬＡに結合する際に、ＢＴＬＡからの下流シグナル伝達を活性化することができ；Ｂ細胞増殖および／またはＴ細胞および／または形質細胞活性化を阻害することができ；炎症性サイトカイン産生、例えば、ＩＬ－２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ１β、およびＴＮＦαなどを増加させることができる。モノクローナルまたは二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、例えば、複合化薬物を動員する役割を果たすことができ、および／または別のモノクローナル抗体と二重特異性抗体を形成して標的癌細胞の死を媒介することができる。
【0124】
抗ＢＴＬＡモノクローナルまたは二重特異性抗体または抗原結合断片のＢＴＬＡへの結合は、炎症性サイトカイン産生、例えば、ＩＬ－２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ１β、およびＴＮＦαなどを、対照抗ＢＴＬＡモノクローナルまたは二重特異性抗体またはその抗原結合断片よりも多く、増加させることが可能である。本明細書において使用される対照抗ＢＴＬＡ抗体は、ＢＴＬＡと結合し、ＢＴＬＡのＨＶＥＭへの結合を遮断することが可能な抗体でありうる。本明細書において使用される対照抗体の例には、ＪＳ００４抗ＢＴＬＡ抗体を含みうるが、これらに限定されない。
【0125】
ＢＴＬＡと結合する抗体およびその抗原結合断片の機能的活性は、当該技術分野で知られ本明細書に記載される方法により、特性評価されうる。ＢＴＬＡと結合する抗体およびその抗原結合断片を特性評価するための方法には、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、およびＯｃｔｅｔＲｅｄ分析を含む親和性および特異性アッセイ、および、ＦＡＣＳによる細胞（ＢＴＬＡでトランスフェクトされた細胞または自然にＢＴＬＡを発現する細胞）上の抗体および抗原結合断片のＢＴＬＡへの結合の検出を含むが、これらに限定されない。具体的な実施形態によれば、ＢＴＬＡと結合する抗体およびその抗原結合断片を特性評価するための方法には、以下に記載されるものを含む。
【0126】
別の一般的な態様において、本発明は、それを必要とする対象において癌を治療する方法に関連し、前記方法は、ＢＴＬＡに特異的に結合する単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、および／または二重特異性抗体またはその抗原結合断片、または本発明の医薬組成物を、前記対象へ投与するステップを含む。前記癌は、例えば、黒色腫、肺癌、腎細胞癌、および肝臓癌からなる群から選択されうる。
【0127】
本明細書において抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合断片に関連して使用される場合、治療上有効な量とは、それを必要とする対象において免疫応答を調節する量の、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合断片を意味する。また、本明細書において抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合断片に関連して使用される場合、治療上有効な量とは、疾患、障害、または状態の治療をもたらす量；疾患、障害、または状態の進行を予防または遅延させる量；または、疾患、障害、または状態に関連する症状を減少または完全に緩和する量の、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合断片を意味する。
【0128】
具体的な実施形態によれば、治療されるべき疾患、障害、または状態は、癌である。前記癌は、例えば、黒色腫、肺癌、腎細胞癌、および肝臓癌でありうる。
【0129】
具体的な実施形態によれば、治療上有効な量とは、以下の効果のうちの１つ、２つ、３つ、４つ以上を達成するのに十分な治療の量を指す：（ｉ）治療されるべき疾患、障害、または状態、またはそれに関連する症状の、重症度を減少または改善する、（ｉｉ）治療されるべき疾患、障害または状態、またはそれに関連する症状の、持続期間を減少させる、（ｉｉｉ）治療されるべき疾患、障害、または状態、またはそれに関連する症状の、進行を防ぐ、（ｉｖ）治療されるべき疾患、障害、または状態、またはそれに関連する症状の、退縮を引き起こす、（ｖ）治療されるべき疾患、障害、または状態、またはそれに関連する症状の、発症または開始を防ぐ、（ｖｉ）治療されるべき疾患、障害、または状態、またはそれに関連する症状の、再発を防ぐ、（ｖｉｉ）治療されるべき疾患、障害、または状態、またはそれに関連する症状を有する対象の、入院を減少させる、（ｖｉｉｉ）治療されるべき疾患、障害、または状態、またはそれに関連する症状を有する対象の、入院期間を減少させる、（ｉｘ）治療されるべき疾患、障害、または状態、またはそれに関連する症状を有する対象の、生存を延長する、（ｘｉ）患者における治療されるべき疾患、障害、または状態、またはそれに関連する症状を、阻害または減少させる、および／または（ｘｉｉ）別の療法の予防的または治療的効果（複数可）を、強化または改善する。
【0130】
治療上有効な量または投与量は、以下のような様々な要因によって変化しうる：治療されるべき疾患、障害、または状態、投与の手段、標的部位、対象の生理的状態（例えば、年齢、体重、健康状態を含む）、対象が人間か動物か、他の投与薬物、および治療が予防的か治療的か。治療投与量は、安全性および有効性を最適化するために、最適に用量設定される。
【0131】
具体的な実施形態によれば、本明細書に記載された組成物は、対象への意図される投与経路に適するように、製剤化される。例えば、本明細書に記載された組成物は、静脈内、皮下、または筋肉内投与に適するように、製剤化されうる。
【0132】
本明細書において使用される場合、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、および「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は全て、癌に関連する少なくとも１の測定可能な物理的パラメータの、改善または逆転を指すことを意図し、それは必ずしも対象にはっきりと認識できるわけではないが、対象において認識できる場合もある。「治療する」、「治療すること」、および「治療」という用語はまた、疾患、障害、または状態の、退縮を引き起こすこと、進行を防ぐこと、または少なくとも進行を遅らせることを指しうる。具体的な実施形態において、「治療する」、「治療すること」、および「治療」は、疾患、障害、または状態に関連する１または複数の症状、例えば腫瘍、またはより好ましくは癌の、緩和、発症または開始の予防、または持続期間の減少を指す。具体的な実施形態において、「治療する」、「治療すること」、および「治療」は、疾患、障害、または状態の、再発の予防を指す。具体的な実施形態において、「治療する」、「治療すること」、および「治療」は、疾患、障害、または状態を有する対象の、生存を延長することを指す。具体的な実施形態において、「治療する」、「治療すること」、および「治療」は、対象における疾患、障害、または状態の除去を指す。
【0133】
具体的な実施形態によれば、癌の治療に使用される組成物が提供される。癌療法のために、提供される組成物は、以下を含むがこれらに限定されない別の治療と併用して、使用されうる：化学療法、抗ＣＤ２０ ｍＡｂ、抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ、抗ＨＥＲ－２ ｍＡｂ、抗ＣＤ１９ ｍＡｂ、抗ＣＤ３３ ｍＡｂ、抗ＣＤ４７ ｍＡｂ、抗ＣＤ７３ ｍＡｂ、抗ＰＤ－１ ｍＡｂ、抗ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂ、抗ＣＴＬＡ ｍＡｂ、抗ＴＮＦＲ２ ｍＡｂ、抗ＯＸ４０ ｍＡｂ、他の免疫腫瘍薬、抗血管新生剤、放射線療法、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、標的療法、他の抗癌剤、および／またはＰＤ１およびＰＤ－Ｌ１を含むがこれらに限定されない免疫調節標的を標的とする治療。ＢＴＬＡに対する抗体は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＣＴＬＡ、ＴＮＦＲ２、ＯＸ４０、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ－２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ７３、ＣＤ４７、および／またはＣＤ３に対するパートナーｍＡｂと共に、二重特異性抗体を構築するために使用されうる。ＢＴＬＡ上の２つの異なるエピトープを認識する２つの抗体もまた、ＢＴＬＡを発現する癌／腫瘍を治療するための二重特異性抗体を構築するために、使用されうる。
【0134】
本明細書において使用される場合、「併用（ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」という用語は、対象に対する２以上の療法の投与の文脈において、複数の療法の使用を指す。「併用」という用語の使用は、対象に対する療法を投与する順序を制限しない。例えば、第１の療法（例えば、本明細書に記載された組成物）は、第２の療法を対象に対して投与する前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前）、投与と同時、または投与の後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間後）に、投与されうる。
【0135】
別の一般的な態様において、本発明は、対象におけるＢＴＬＡのレベルを決定する方法に関連する。前記方法は、（ａ）前記対象から試料を取得するステップ；（ｂ）前記試料を本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と接触させるステップ；および（ｃ）前記対象におけるＢＴＬＡのレベルを決定するステップ、を含む。
【0136】
本明細書において使用される場合、「試料（ｓａｍｐｌｅ）」とは、対象から単離された生物学的試料を指し、以下を含みうるがこれらに限定されない：全血、血清、血漿、血球、内皮細胞、組織生検（例えば、癌組織）、リンパ液、腹水、間質液、骨髄、脳脊髄液、唾液、粘液、痰、汗、尿、またはその他の分泌物、排泄物、または他の体液。「血液試料（ｂｌｏｏｄ ｓａｍｐｌｅ）」とは、全血またはその任意の分画を指し、血球、血清、および血漿を含む。試料は、例えばＴｒｅｇ細胞を含みうる。
【0137】
ある実施形態において、対象におけるＢＴＬＡのレベルは、ウェスタンブロットアッセイ、免疫組織化学（ＩＨＣ）、およびＥＬＩＳＡから選択されるがこれらに限定されないアッセイを利用して、決定されうる。相対的なタンパク質レベルは、ウェスタンブロット分析およびＩＨＣを利用することによって、決定することができ、絶対的なタンパク質レベルは、ＥＬＩＳＡを利用することによって、決定することができる。ＢＴＬＡの相対的なレベルを決定する場合、少なくとも２つの試料間で、例えば、異なる時間点での同一対象からの試料間で、同一対象における異なる組織からの試料間で、および／または異なる対象からの試料間で、ＢＴＬＡのレベルが決定されうる。あるいは、ＥＬＩＳＡなどによってＢＴＬＡの絶対的なレベルを決定する場合、試料を試験する前にＥＬＩＳＡ用の標準を作成することによって、試料中のＢＴＬＡの絶対的なレベルが決定されうる。当業者であれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片を利用して、対象からの試料中のＢＴＬＡのレベルを決定するために、どの分析技術を利用すべきかを理解するであろう。
【0138】
対象からの試料中のＢＴＬＡのレベルを決定する方法を利用することで、疾患における異常な（上昇、低下、または不十分な）ＢＴＬＡレベルの診断、および適切な治療上の決定を行うことにつながりうる。そのような疾患には、癌が含まれうる。さらに、対象におけるＢＴＬＡのレベルを監視することにより、上記のような疾患が発症するリスクは、特定の疾患におけるおよび／または特定の疾患の進行中のＢＴＬＡのレベルの知識に基づいて、決定されうる。
【0139】
［実施形態］
本発明は、以下の非限定的な実施形態をも提供する。
本発明は、以下の非限定的な実施形態をも提供する。
【0140】
実施形態１は、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有し：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５３、１０、１１、および１２；
または
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＢＴＬＡと特異的に結合し、好ましくはヒトＢＴＬＡと特異的に結合し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、自然起源でなくてもよい、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有し：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５３、１０、１１、および１２；
または
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＢＴＬＡと特異的に結合し、好ましくはヒトＢＴＬＡと特異的に結合し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、自然起源でなくてもよい、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0141】
実施形態２は、単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有し：
（１）それぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２；
または
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＢＴＬＡと特異的に結合し、好ましくはヒトＢＴＬＡと特異的に結合し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、自然起源でなくてもよい、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有し：
（１）それぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２；
または
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
ここで、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＢＴＬＡと特異的に結合し、好ましくはヒトＢＴＬＡと特異的に結合し、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、自然起源でなくてもよい、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0142】
実施形態３は、実施形態１または２に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
配列番号１５または１３と、少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、
または
配列番号１６または１４と、少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
配列番号１５または１３と、少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、
または
配列番号１６または１４と、少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0143】
実施形態４は、実施形態１～３のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって：
（１）配列番号１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
または
（２）配列番号１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
を含む、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
（１）配列番号１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
または
（２）配列番号１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
を含む、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0144】
実施形態５は、実施形態１～４のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記抗体またはその抗原結合断片は、キメラ型のおよび／またはヒト型のまたはヒト化されたものである、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
前記抗体またはその抗原結合断片は、キメラ型のおよび／またはヒト型のまたはヒト化されたものである、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0145】
実施形態６は、実施形態５に記載されたヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有する：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５０、１０、１１、および１２；
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
（３）それぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２；
（４）それぞれ、配列番号７、８、１４９、１０、１１、および１２；
（５）それぞれ、配列番号７、８、１５１、１０、１１、および１２；
または
（６）それぞれ、配列番号７、８、１５２、１０、１１、および１２；
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
前記単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、
これらは以下のポリペプチド配列を有する：
（１）それぞれ、配列番号７、８、１５０、１０、１１、および１２；
（２）それぞれ、配列番号１、２、３、４、５、および６；
（３）それぞれ、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２；
（４）それぞれ、配列番号７、８、１４９、１０、１１、および１２；
（５）それぞれ、配列番号７、８、１５１、１０、１１、および１２；
または
（６）それぞれ、配列番号７、８、１５２、１０、１１、および１２；
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0146】
実施形態７は、実施形態６に記載されたヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４１、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４３、１４５、または１４７と、少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、
または
配列番号１４２、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４４、１４６、または１４８と、少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
前記単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４１、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４３、１４５、または１４７と、少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、
または
配列番号１４２、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４４、１４６、または１４８と、少なくとも９５％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域
を含む、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0147】
実施形態８は、実施形態７に記載されたヒト化単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（１）配列番号１４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２）配列番号１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３）配列番号１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４）配列番号２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５）配列番号２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６）配列番号２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（７）配列番号２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（８）配列番号２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（９）配列番号３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１０）配列番号３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１１）配列番号３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１２）配列番号３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１３）配列番号３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１４）配列番号４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１５）配列番号４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１６）配列番号４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１７）配列番号４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１８）配列番号４９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１９）配列番号５１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２０）配列番号５３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２１）配列番号５５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２２）配列番号５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２３）配列番号５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２４）配列番号６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２５）配列番号６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２６）配列番号６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２７）配列番号６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２８）配列番号６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２９）配列番号７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３０）配列番号７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３１）配列番号７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３２）配列番号７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３３）配列番号７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３４）配列番号８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３５）配列番号８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３６）配列番号８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３７）配列番号８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３８）配列番号８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３９）配列番号９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４０）配列番号９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４１）配列番号９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４２）配列番号９７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４３）配列番号９９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４４）配列番号１０１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４５）配列番号１０３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４６）配列番号１０５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４７）配列番号１０７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４８）配列番号１０９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４９）配列番号１１１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５０）配列番号１１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５１）配列番号１１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５２）配列番号１１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５３）配列番号１１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５４）配列番号１２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５５）配列番号１２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５６）配列番号１２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５７）配列番号１２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５８）配列番号１２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５９）配列番号１３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６０）配列番号１３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６１）配列番号１３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６２）配列番号１３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６３）配列番号１３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６４）配列番号１４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６５）配列番号１４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
または
（６６）配列番号１４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
前記単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
（１）配列番号１４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２）配列番号１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３）配列番号１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４）配列番号２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５）配列番号２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６）配列番号２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（７）配列番号２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（８）配列番号２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（９）配列番号３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１０）配列番号３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１１）配列番号３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１２）配列番号３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１３）配列番号３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１４）配列番号４１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１５）配列番号４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１６）配列番号４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１７）配列番号４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１８）配列番号４９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（１９）配列番号５１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２０）配列番号５３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２１）配列番号５５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２２）配列番号５７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号５８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２３）配列番号５９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２４）配列番号６１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２５）配列番号６３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２６）配列番号６５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２７）配列番号６７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号６８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２８）配列番号６９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（２９）配列番号７１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３０）配列番号７３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３１）配列番号７５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３２）配列番号７７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号７８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３３）配列番号７９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３４）配列番号８１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３５）配列番号８３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３６）配列番号８５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３７）配列番号８７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号８８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３８）配列番号８９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（３９）配列番号９１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４０）配列番号９３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４１）配列番号９５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４２）配列番号９７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４３）配列番号９９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１００のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４４）配列番号１０１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４５）配列番号１０３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４６）配列番号１０５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４７）配列番号１０７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１０８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４８）配列番号１０９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（４９）配列番号１１１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５０）配列番号１１３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５１）配列番号１１５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５２）配列番号１１７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１１８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５３）配列番号１１９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５４）配列番号１２１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５５）配列番号１２３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５６）配列番号１２５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５７）配列番号１２７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１２８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５８）配列番号１２９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（５９）配列番号１３１のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３２のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６０）配列番号１３３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６１）配列番号１３５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６２）配列番号１３７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１３８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６３）配列番号１３９のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４０のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６４）配列番号１４３のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４４のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
（６５）配列番号１４５のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４６のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
または
（６６）配列番号１４７のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、および配列番号１４８のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域；
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0148】
実施形態９は、実施形態１～８のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡに約２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、または０．５ｎＭ未満のＫＤで結合する、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡに約２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、または０．５ｎＭ未満のＫＤで結合する、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0149】
実施形態１０は、実施形態１～８のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡのアゴニストであり、およびＢＴＬＡに結合する際に、ＢＴＬＡからの下流シグナル伝達を活性化する、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢＴＬＡのアゴニストであり、およびＢＴＬＡに結合する際に、ＢＴＬＡからの下流シグナル伝達を活性化する、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0150】
実施形態１１は、実施形態１～８のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ細胞増殖および／またはＴ細胞および／または形質細胞活性化を阻害することが可能である、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ細胞増殖および／またはＴ細胞および／または形質細胞活性化を阻害することが可能である、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0151】
実施形態１２は、実施形態１１に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記Ｔ細胞は、ＣＤ４ Ｔ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞、Ｔｈ１ Ｔ細胞、ＴＦＨ Ｔ細胞、αβＴ細胞、およびγδＴ細胞からなる群から選択される、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
前記Ｔ細胞は、ＣＤ４ Ｔ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞、Ｔｈ１ Ｔ細胞、ＴＦＨ Ｔ細胞、αβＴ細胞、およびγδＴ細胞からなる群から選択される、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0152】
実施形態１３は、実施形態１～８のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を、遮断または消失させることが可能である、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を、遮断または消失させることが可能である、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0153】
実施形態１４は、実施形態１～８のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、炎症性サイトカイン産生を増加させること；および／または複合化薬物の動員を媒介すること；および／または殺癌効果を有する別のｍＡｂまたはその抗原結合断片と二重特異性抗体を形成することが可能である、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、炎症性サイトカイン産生を増加させること；および／または複合化薬物の動員を媒介すること；および／または殺癌効果を有する別のｍＡｂまたはその抗原結合断片と二重特異性抗体を形成することが可能である、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0154】
実施形態１５は、実施形態１４に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記炎症性サイトカインは、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド９（ＣＸＣＬ９）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）、インターロイキン１β（ＩＬ１β）、および／または腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）から選択される、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
前記炎症性サイトカインは、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド９（ＣＸＣＬ９）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）、インターロイキン１β（ＩＬ１β）、および／または腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）から選択される、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0155】
実施形態１６は、実施形態１～１５のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、カニクイザルＢＴＬＡと特異的に結合する、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、カニクイザルＢＴＬＡと特異的に結合する、
単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。
【0156】
実施形態１７は、実施形態１～１６のいずれか一項に記載されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む、単離二重特異性抗体またはその抗原結合断片である。
【0157】
実施形態１８は、実施形態１～１６のいずれか一項に記載されたモノクローナル抗体または抗原結合断片をコードする、単離核酸である。
【0158】
実施形態１９は、実施形態１７に記載された二重特異性抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離核酸である。
【0159】
実施形態２０は、実施形態１８または１９に記載された単離核酸を含む、ベクターである。
【0160】
実施形態２１は、実施形態２０に記載されたベクターを含む、宿主細胞である。
【0161】
実施形態２２は、実施形態１～１６のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体または抗原結合断片、または実施形態１７に記載された二重特異性抗体またはその抗原結合断片、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物である。
【0162】
実施形態２３は、癌細胞表面上のＢＴＬＡを標的とする方法、および／またはそれを必要とする対象において癌を治療する方法であって、
実施形態２２に記載された医薬組成物を、それを必要とする前記対象へ投与するステップを含む、
方法である。
実施形態２２に記載された医薬組成物を、それを必要とする前記対象へ投与するステップを含む、
方法である。
【0163】
実施形態２４は、実施形態２３に記載された方法であって、
前記癌は、固形腫瘍であり、好ましくは浸潤Ｔ細胞を有する固形腫瘍であり、より好ましくは浸潤エフェクターＴ細胞を有する固形腫瘍であり、より好ましくはＢＴＬＡを発現しているエフェクターＴ細胞を有する固形腫瘍であり、最も好ましくはＢＴＬＡを発現している浸潤エフェクターＴ細胞を有し腫瘍微小環境においてＢＴＬＡリガンドＨＶＥＭが高発現している固形腫瘍である、
方法である。
前記癌は、固形腫瘍であり、好ましくは浸潤Ｔ細胞を有する固形腫瘍であり、より好ましくは浸潤エフェクターＴ細胞を有する固形腫瘍であり、より好ましくはＢＴＬＡを発現しているエフェクターＴ細胞を有する固形腫瘍であり、最も好ましくはＢＴＬＡを発現している浸潤エフェクターＴ細胞を有し腫瘍微小環境においてＢＴＬＡリガンドＨＶＥＭが高発現している固形腫瘍である、
方法である。
【0164】
実施形態２５は、実施形態２３または２４に記載された方法であって、
前記癌は、黒色腫、肺癌、腎細胞癌、および肝臓癌からなる群から選択される、
方法である。
前記癌は、黒色腫、肺癌、腎細胞癌、および肝臓癌からなる群から選択される、
方法である。
【0165】
実施形態２６は、実施形態２３～２５のいずれか一項に記載された方法であって、
前記対象は、ＢＴＬＡ発現Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む、
方法である。
前記対象は、ＢＴＬＡ発現Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む、
方法である。
【0166】
実施形態２７は、実施形態２３～２６のいずれか一項に記載された方法であって、
前記医薬組成物は、第２の抗癌剤をさらに含む、
方法である。
前記医薬組成物は、第２の抗癌剤をさらに含む、
方法である。
【0167】
実施形態２８は、実施形態２７に記載された方法であって、
前記第２の抗癌剤は、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片である、
方法である。
前記第２の抗癌剤は、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片である、
方法である。
【0168】
実施形態２９は、実施形態１～１６のいずれか一項に記載されたモノクローナル抗体または抗原結合断片、または実施形態１７に記載された二重特異性抗体またはその抗原結合断片を産生する方法であって、
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を産生する条件下で、培養するステップ、
および
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を、前記細胞または培養物から回収するステップ
を含む、
方法である。
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を産生する条件下で、培養するステップ、
および
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を、前記細胞または培養物から回収するステップ
を含む、
方法である。
【0169】
実施形態３０は、実施形態１～１６のいずれか一項に記載されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または実施形態１７に記載された二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む、医薬組成物を産生する方法であって、
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を、薬学的に許容される担体と組み合わせて、前記医薬組成物を得るステップを含む、
方法である。
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、または二重特異性抗体またはその抗原結合断片を、薬学的に許容される担体と組み合わせて、前記医薬組成物を得るステップを含む、
方法である。
【0170】
実施形態３１は、対象におけるＢＴＬＡのレベルを決定する方法であって、
前記方法は：
ａ．前記対象から試料を得るステップ；
ｂ．前記試料を実施形態１～１６のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片と接触させるステップ；
および
ｃ．前記対象におけるＢＴＬＡのレベルを決定するステップ；
を含む、
方法である。
前記方法は：
ａ．前記対象から試料を得るステップ；
ｂ．前記試料を実施形態１～１６のいずれか一項に記載された単離モノクローナル抗体またはその抗原結合断片と接触させるステップ；
および
ｃ．前記対象におけるＢＴＬＡのレベルを決定するステップ；
を含む、
方法である。
【0171】
実施形態３２は、実施形態３１に記載された方法であって、
前記試料は、組織試料または血液試料であり、
前記組織試料は、癌組織試料であってもよい、
方法である。
前記試料は、組織試料または血液試料であり、
前記組織試料は、癌組織試料であってもよい、
方法である。
【0172】
実施形態３３は、実施形態３１に記載された方法であって、
前記試料は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む、
方法である。
前記試料は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む、
方法である。
【実施例】
【0173】
［実施例１：カニクイザルＢＴＬＡと交差反応する、抗ヒトＢＴＬＡ遮断抗体の同定。］
この実施例は、２つのマウスリード抗体候補（ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３、配列は下記表２～５に記載）を、ＨＶＥＭ媒介Ｔ細胞抑制を逆転させるそれらの能力に基づいて、ベンチマーク抗ＢＴＬＡ遮断抗体（本明細書においてＪＳ００４と称される）と同程度に、同定したことを説明する。
この実施例は、２つのマウスリード抗体候補（ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３、配列は下記表２～５に記載）を、ＨＶＥＭ媒介Ｔ細胞抑制を逆転させるそれらの能力に基づいて、ベンチマーク抗ＢＴＬＡ遮断抗体（本明細書においてＪＳ００４と称される）と同程度に、同定したことを説明する。
【0174】
【0175】
【0176】
【0177】
【0178】
ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ遮断レポーターアッセイにおいて、ＴＣＲ活性化因子（ＴＣＲａ）とＨＶＥＭ（ＢＴＬＡのリガンド）とを発現するように設計されたＣＨＯ細胞株が、ＢＴＬＡとＮＦＡＴ結合プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーターとを発現したＪｕｒｋａｔレポーター細胞株と、共培養された。抗ＢＴＬＡ抗体候補のパネルは、ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ相互作用を除去し、ルシフェラーゼレポーターシグナルを回復させるそれらの能力に基づいて、スクリーニングされた（図１Ａ～１Ｂ）。ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３は、このレポーターアッセイにおいて、ベンチマークＪＳ００４と同程度に、ＴＣＲ活性化を回復させることができた。
【0179】
図２Ａ～２Ｂでは、ヒトＢＴＬＡを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞、およびカニクイザルＢＴＬＡを過剰発現するＥｘｐｉ２９３細胞が、異なる濃度の抗ＢＴＬＡ親抗体と共にインキュベートされた。抗ＢＴＬＡ抗体の標的細胞への結合は、ＡＦ６４７標識抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ ２次抗体を用いて、ＦＡＣＳにより定量された。ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３は、ヒトＢＴＬＡおよびカニクイザルＢＴＬＡに、一桁ｎＭおよびｎＭ未満のＥＣ５０で、結合することが示された（表６）。
【0180】
【0181】
［実施例２：ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３は、抗ＢＴＬＡ遮断剤である。］
この実施例は、ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３が、組換えＨＶＥＭ可溶性タンパク質と細胞性ＢＴＬＡとの相互作用を遮断し、Ｔ細胞におけるＨＶＥＭ媒介ＴＣＲ阻害を除去したことを示す。
この実施例は、ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３が、組換えＨＶＥＭ可溶性タンパク質と細胞性ＢＴＬＡとの相互作用を遮断し、Ｔ細胞におけるＨＶＥＭ媒介ＴＣＲ阻害を除去したことを示す。
【0182】
図３Ａでは、組換えＨＶＥＭ可溶性タンパク質は、ＤｙＬｉｇｈｔ ６５０（ＤＬ６５０）蛍光色素を用いて、標識された。ヒトＢＴＬＡを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＫ２９３．ＢＴＬＡ）は、ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３の濃度を増加させながら、４℃で３０分間、その後ＤＬ６５０標識ＨＶＥＭを用いて、さらに３０分間、予備インキュベートされた。洗浄後、ＨＥＫ２９３．ＢＴＬＡ細胞上のＢＴＬＡと結合したままの可溶性ＨＶＥＭが、ＦＡＣＳにより測定された。ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３は、可溶性ＨＶＥＭと細胞性ＢＴＬＡとの相互作用を、一桁ｎＭのＩＣ５０で遮断した。
【0183】
図３Ｂでは、ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３の機能的遮断剤活性が、ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ遮断レポーターアッセイで評価された。このアッセイにおいて、ＴＣＲ活性化因子（ＴＣＲａ）とＨＶＥＭ（ＢＴＬＡのリガンド）とを発現するように設計されたＣＨＯ細胞株が、ＢＴＬＡとＮＦＡＴ結合プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーターとを発現したＪｕｒｋａｔレポーター細胞株と、共培養された。ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３の適用により、ベンチマークＪＳ００４と同様に、用量依存的にルシフェラーゼレポーターシグナルが回復した。
【0184】
【0185】
［実施例３：ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３は、初代ＴおよびＢ細胞に結合する。］
この実施例は、ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３が、それぞれ一桁ｎＭのＥＣ５０およびｎＭ未満のＥＣ５０で、初代Ｔ細胞およびＢ細胞に結合することを示す。
この実施例は、ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３が、それぞれ一桁ｎＭのＥＣ５０およびｎＭ未満のＥＣ５０で、初代Ｔ細胞およびＢ細胞に結合することを示す。
【0186】
図４Ａ～４Ｄでは、初代Ｔ細胞およびＢ細胞は、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｈｕｍａｎ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ＫｉｔおよびＢ ｃｅｌｌ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｋｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；バンクーバー（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ）、カナダ）を用いて、ヒトＰＢＭＣから単離された。単離されたＴ細胞またはＢ細胞は、異なる濃度の抗ＢＴＬＡ親抗体と共に、インキュベートされた。抗ＢＴＬＡ抗体の標的細胞への結合は、ＡＦ６４７標識抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ ２次抗体を用いて、ＦＡＣＳにより定量された。
【0187】
［実施例４：ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３は、初代ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖に対するＨＶＥＭ媒介抑制を逆転させる。］
図５Ａ～５Ｂでは、細胞培養プレートは、抗ＣＤ３抗体を組換えＨＶＥＭ－Ｆｃ融合タンパク質または対照Ｆｃタンパク質（対照Ｆｃ）と共に用いて、４℃で一晩コートされた。初代ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｈｕｍａｎ ＣＤ４＋ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、ヒトＰＢＭＣから単離され、ＣＦＳＥを用いて標識された。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、抗ＣＤ３およびＨＶＥＭ－Ｆｃコートされたプレート上に加えられ、抗ＣＤ２８および抗ＢＴＬＡ遮断抗体およびアイソタイプ一致対照抗体（ＭＧＯ５３）と共に、インキュベートされた。４日後、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、非刺激性ＣＤ４＋Ｔ細胞に関連するＣＦＳＥ希釈（％ＣＦＳＥ低）により、定量された。ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３は、初代ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖に対するＨＶＥＭ媒介抑制を逆転させた。
図５Ａ～５Ｂでは、細胞培養プレートは、抗ＣＤ３抗体を組換えＨＶＥＭ－Ｆｃ融合タンパク質または対照Ｆｃタンパク質（対照Ｆｃ）と共に用いて、４℃で一晩コートされた。初代ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｈｕｍａｎ ＣＤ４＋ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、ヒトＰＢＭＣから単離され、ＣＦＳＥを用いて標識された。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、抗ＣＤ３およびＨＶＥＭ－Ｆｃコートされたプレート上に加えられ、抗ＣＤ２８および抗ＢＴＬＡ遮断抗体およびアイソタイプ一致対照抗体（ＭＧＯ５３）と共に、インキュベートされた。４日後、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、非刺激性ＣＤ４＋Ｔ細胞に関連するＣＦＳＥ希釈（％ＣＦＳＥ低）により、定量された。ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３は、初代ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖に対するＨＶＥＭ媒介抑制を逆転させた。
【0188】
［実施例５：ＨＦＢ６－３は、ＩＦＮγ産生を増加させ、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいて、抗ＰＤ１抗体と相乗効果を発揮した。］
図６のＭＬＲアッセイでは、ＣＤ１４＋単球が、１人のＰＢＭＣドナーから、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用して単離され、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４を用いて５日間、未熟樹状細胞に分化され、その後ＬＰＳを用いてさらに２日間、成熟樹状細胞（ｍｏＤＣ）に分化された。その後、ｍｏＤＣは、第２のドナーからの初代Ｔ細胞と、抗ＢＴＬＡ抗体および／または抗ＰＤ１抗体の存在下で、１対１０の比率で混合された。５日後、上清中のＩＦＮγが、ＡｌｐｈａＬＩＳＡにより測定された。試験された両方のｍｏＤＣ：Ｔ細胞ペアにおいて、ＨＦＢ６－３が単独で、アイソタイプ対照（ＭＧＯ５３）と比較して、ＩＦＮγ産生を増強した。ＨＦＢ６－３は、抗ＰＤ１と併用して、ＩＦＮγ産生をさらに増強した。
図６のＭＬＲアッセイでは、ＣＤ１４＋単球が、１人のＰＢＭＣドナーから、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用して単離され、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４を用いて５日間、未熟樹状細胞に分化され、その後ＬＰＳを用いてさらに２日間、成熟樹状細胞（ｍｏＤＣ）に分化された。その後、ｍｏＤＣは、第２のドナーからの初代Ｔ細胞と、抗ＢＴＬＡ抗体および／または抗ＰＤ１抗体の存在下で、１対１０の比率で混合された。５日後、上清中のＩＦＮγが、ＡｌｐｈａＬＩＳＡにより測定された。試験された両方のｍｏＤＣ：Ｔ細胞ペアにおいて、ＨＦＢ６－３が単独で、アイソタイプ対照（ＭＧＯ５３）と比較して、ＩＦＮγ産生を増強した。ＨＦＢ６－３は、抗ＰＤ１と併用して、ＩＦＮγ産生をさらに増強した。
【0189】
［実施例６：ＨＦＢ６－３が、単独でまたは抗ＰＤ１と併用して、初代解離腫瘍培養において、ＩＦＮγおよび炎症性サイトカイン産生を誘導した。］
肺癌および黒色腫患者からの初代腫瘍組織は、ヒトＴｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ；ベルギッシュ・グラートバッハ（Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ）、ドイツ）を用いて、単一細胞懸濁液内に解離された。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）上のＢＴＬＡおよびＰＤ１発現は、ＦＡＣＳにより測定された。１×１０５の解離された腫瘍細胞が、抗ＣＤ３（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、ＨＦＢ６－３および／または抗ＰＤ１（１０μｇ／ｍｌ）と共に、培養された。処理後３日目に上清が収集され、Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ４８－Ｐｌｅｘ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ａｓｓａｙ（登録商標）（ＨＤ４８）（Ｅｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；カルガリー（Ｃａｌｇａｒｙ）、カナダ）を用いて、分析された。また、処理後７日目にも上清が収集され、ＩＦＮγ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；ミネアポリス（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ）、ミネソタ州）を用いて、分析された。ＨＦＢ６－３は、単剤効果を示し、さらに抗ＰＤ１と共に相乗効果を示し、複数の肺および黒色腫の初代腫瘍培養において、複数の炎症性サイトカインの発現を増加させた。
肺癌および黒色腫患者からの初代腫瘍組織は、ヒトＴｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ；ベルギッシュ・グラートバッハ（Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ）、ドイツ）を用いて、単一細胞懸濁液内に解離された。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）上のＢＴＬＡおよびＰＤ１発現は、ＦＡＣＳにより測定された。１×１０５の解離された腫瘍細胞が、抗ＣＤ３（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、ＨＦＢ６－３および／または抗ＰＤ１（１０μｇ／ｍｌ）と共に、培養された。処理後３日目に上清が収集され、Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ４８－Ｐｌｅｘ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ａｓｓａｙ（登録商標）（ＨＤ４８）（Ｅｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；カルガリー（Ｃａｌｇａｒｙ）、カナダ）を用いて、分析された。また、処理後７日目にも上清が収集され、ＩＦＮγ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；ミネアポリス（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ）、ミネソタ州）を用いて、分析された。ＨＦＢ６－３は、単剤効果を示し、さらに抗ＰＤ１と共に相乗効果を示し、複数の肺および黒色腫の初代腫瘍培養において、複数の炎症性サイトカインの発現を増加させた。
【0190】
図７Ａ～７Ｇでは、肺患者ＴＩＬ３２０からの解離された腫瘍組織は、ＴＩＬ６１９よりも高い％のＢＴＬＡ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞を有する。ＴＩＬ３２０において、ＨＦＢ６－３の単独処理が、ＩＬ－２、ＣＸＣＬ９、ＩＬ１β、およびＩＦＮγ産生を増加させた。ＨＦＢ６－３と抗ＰＤ１との併用は、ＩＬ－２、ＣＸＣＬ１０、ＴＮＦα、およびＩＦＮγ産生を、いずれかの単剤処理と比較してさらに増強した（図７Ｂ、７Ｄ、７Ｅ、および７Ｇ）。ＴＩＬ６１９において、ＨＦＢ６－３は単剤効果を示さなかった。しかしながら、ＨＦＢ６－３は、抗ＰＤ１と併用して、ＩＬ－２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＴＮＦα、およびＩＦＮγ産生を、抗ＰＤ１単独処理と比較してさらに増強した（図７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、および７Ｇ）。
【0191】
［実施例７：野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスおよびヒトＢＴＬＡノックインマウスにおける、ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３の望ましいＰＫプロファイル。］
この実験（図８Ａおよび８Ｂ）では、単回投与（１０ｍｇ／ｋｇ）のＨＦＢ６－２、ＨＦＢ６－３、およびベンチマークＪＳ００４が、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（静脈内経路、図８Ａ）、およびヒトＢＴＬＡノックインマウス（腹腔内経路、ｈＢＴＬＡ ＫＩ、図８Ｂ）内に、注入された。１時間、２４時間、および７２時間後に、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスでは、血液が採取された。０．５時間、６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、および１６８時間後に、ｈＢＴＬＡ ＫＩマウスから血液が採取された。選択された抗体の血漿中濃度は、ＥＬＩＳＡにより測定された。
この実験（図８Ａおよび８Ｂ）では、単回投与（１０ｍｇ／ｋｇ）のＨＦＢ６－２、ＨＦＢ６－３、およびベンチマークＪＳ００４が、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（静脈内経路、図８Ａ）、およびヒトＢＴＬＡノックインマウス（腹腔内経路、ｈＢＴＬＡ ＫＩ、図８Ｂ）内に、注入された。１時間、２４時間、および７２時間後に、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスでは、血液が採取された。０．５時間、６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、および１６８時間後に、ｈＢＴＬＡ ＫＩマウスから血液が採取された。選択された抗体の血漿中濃度は、ＥＬＩＳＡにより測定された。
【0192】
ＨＦＢ６－２またはＨＦＢ６－３（１０ｍｇ／ｋｇ）を野生型Ｃ５７ＢＬ／６またはｈＢＴＬＡ ＫＩマウスへ単回静脈内または腹腔内投与した結果、血漿中濃度は少なくとも７２時間、＞４０μｇ／ｍｌであった（図８Ａおよび８Ｂ）；これは、効果評価のために３日毎以下の頻度での投与を支持する。
【0193】
［実施例８：ＨＦＢ６－２およびＨＦＢ６－３ヒト化抗体の機能プロファイリング］
ＨＦＢ６－２の２１のヒト化バリアント（例えば、ＨＦＢ６－２ｈｚ１～ｈｚ２１）が、標準的なヒト化プロトコルに基づいて作製され、得られたヒト化バリアントは、親のＨＦＢ６－２の遮断活性を維持しつつ、高親和性結合するものを同定するために試験された。
ＨＦＢ６－２の２１のヒト化バリアント（例えば、ＨＦＢ６－２ｈｚ１～ｈｚ２１）が、標準的なヒト化プロトコルに基づいて作製され、得られたヒト化バリアントは、親のＨＦＢ６－２の遮断活性を維持しつつ、高親和性結合するものを同定するために試験された。
【0194】
図９では、ヒト化ＨＦＢ６－２バリアントの組換えヒトＢＴＬＡへの結合が、ＥＬＩＳＡ結合アッセイで評価された。試験されたＨＦＢ６－２ヒト化バリアントは全て、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、親のＨＦＢ６－２の抗体結合親和性を維持した。その中でも、ＨＦＢ６－２ｈｚ１６、ＨＦＢ６－２ｈｚ１８、およびＨＦＢ６－２ｈｚ２０は、ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ遮断レポーターアッセイにおいて、親のＨＦＢ６－２に最も近い機能的遮断活性を示した（図９および表８）。
【0195】
【0196】
ＨＣＤＲ３上のシステイン変異を含むＨＦＢ６－３の４５のヒト化バリアント（例えば、ＨＦＢ６－３ｈｚ１－ｈＧ４ＰからＨＦＢ６－３ｈｚ２１－ｈＧ４Ｐ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２０－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ／Ｓ／Ｔ／Ｖ）が、標準的なヒト化プロトコルに基づいて作製された。ＨＦＢ６－３のＨＣＤＲ３上には非ペアのシステインが存在するため、いくつかのヒト化バリアント上のＣ１０９が、Ａ／Ｓ／Ｔ／Ｖに変異させられた。ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ遮断レポーターアッセイ（図１０Ａ～１０Ｃ）において、以下を含むがこれらに限定されない複数のヒト化ＨＦＢ６－３バリアント：ＨＦＢ６－３ｈｚ６－ｈＧ４Ｐ、ＨＦＢ６－３ｈｚ１３－ｈＧ４Ｐ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２０－ｈＧ４Ｐ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２０－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓが、親のＨＦＢ６－３のレベルに近いＴＣＲ活性化を回復した。
【0197】
ヒト化抗体配列は、以下の表９～１２に与えられる。
【0198】
【0199】
【0200】
【0201】
【0202】
［実施例９：システイン変異を有するＨＦＢ６－３ヒト化バリアントの、結合および交差反応性。］
図１１Ａおよび１１Ｂでは、ヒトＢＴＬＡを過剰発現するＨＥＫ２９３（図１１Ａ）、およびカニクイザルＢＴＬＡを過剰発現するＥｘｐｉ２９３細胞（図１１Ｂ）は、異なる濃度の選択されたシステイン変異を有するＨＦＢ６－３ヒト化バリアントを用いて、インキュベートされた。抗ＢＴＬＡ抗体の標的細胞への結合は、ＡＦ６４７標識抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ ２次抗体を用いて、ＦＡＣＳにより定量された。ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓ、およびＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓは、親のＨＦＢ６－３と同様に、ヒトＢＴＬＡおよびカニクイザルＢＴＬＡに、一桁ｎＭおよびｎＭ未満のＥＣ５０で結合した（図１１Ａおよび１１Ｂおよび表１３）。
図１１Ａおよび１１Ｂでは、ヒトＢＴＬＡを過剰発現するＨＥＫ２９３（図１１Ａ）、およびカニクイザルＢＴＬＡを過剰発現するＥｘｐｉ２９３細胞（図１１Ｂ）は、異なる濃度の選択されたシステイン変異を有するＨＦＢ６－３ヒト化バリアントを用いて、インキュベートされた。抗ＢＴＬＡ抗体の標的細胞への結合は、ＡＦ６４７標識抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ ２次抗体を用いて、ＦＡＣＳにより定量された。ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓ、およびＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓは、親のＨＦＢ６－３と同様に、ヒトＢＴＬＡおよびカニクイザルＢＴＬＡに、一桁ｎＭおよびｎＭ未満のＥＣ５０で結合した（図１１Ａおよび１１Ｂおよび表１３）。
【0203】
【0204】
［実施例１０：システイン変異を有するＨＦＢ６－３ヒト化バリアントの遮断活性。］
この実施例は、選択されたシステイン変異を有するＨＦＢ６－３ヒト化バリアントが、親のＨＦＢ６－３抗体と同等に、組換えＨＶＥＭ可溶性タンパク質と細胞性ＢＴＬＡとの相互作用を遮断し、Ｔ細胞におけるＨＶＥＭ媒介ＴＣＲ阻害を除去したことを示す。
この実施例は、選択されたシステイン変異を有するＨＦＢ６－３ヒト化バリアントが、親のＨＦＢ６－３抗体と同等に、組換えＨＶＥＭ可溶性タンパク質と細胞性ＢＴＬＡとの相互作用を遮断し、Ｔ細胞におけるＨＶＥＭ媒介ＴＣＲ阻害を除去したことを示す。
【0205】
図１２Ａでは、組換えＨＶＥＭ可溶性タンパク質は、ＤｙＬｉｇｈｔ ６５０（ＤＬ６５０）蛍光色素を用いて、標識された。ヒトＢＴＬＡを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＫ２９３．ＢＴＬＡ）は、選択されたシステイン変異を有するＨＦＢ６－３ヒト化バリアントまたは親のＨＦＢ６－３の濃度を増加させながら、４℃で３０分間、その後ＤＬ６５０標識ＨＶＥＭを用いて、さらに３０分間、予備インキュベートされた。洗浄後、ＨＥＫ２９３．ＢＴＬＡ細胞上のＢＴＬＡと結合したままの可溶性ＨＶＥＭが、ＦＡＣＳにより測定された。ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓ、およびＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓは、親のＨＦＢ６－３と同等に、可溶性ＨＶＥＭと細胞性ＢＴＬＡとの相互作用を、一桁ｎＭのＩＣ５０で遮断した（図１２Ａおよび表１４）。
【0206】
【0207】
図１２Ｂでは、選択されたシステイン変異を有するＨＦＢ６－３ヒト化バリアントの機能的遮断活性が、ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ遮断レポーターアッセイで評価された。このアッセイにおいて、ＴＣＲ活性化因子（ＴＣＲａ）とＨＶＥＭ（ＢＴＬＡのリガンド）とを発現するように設計されたＣＨＯ細胞株が、ＢＴＬＡとＮＦＡＴ結合プロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーターとを発現するＪｕｒｋａｔレポーター細胞株と、共培養された。ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓ、およびＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓの適用により、親のＨＦＢ６－３と同様に、用量依存的にルシフェラーゼレポーターシグナルが回復した（図１２Ｂおよび表１５）。
【0208】
【0209】
［実施例１１：システイン変異を有するＨＦＢ６－３ヒト化バリアントは、初代ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖に対する媒介抑制を逆転させる。］
図１３では、選択されたシステイン変異を有するＨＦＢ６－３ヒト化バリアントが、実施例４と同じアッセイで評価された。ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓ、およびＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓは、親のＨＦＢ６－３抗体と同様に、初代ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖に対するＨＶＥＭ媒介抑制を逆転させた。
図１３では、選択されたシステイン変異を有するＨＦＢ６－３ヒト化バリアントが、実施例４と同じアッセイで評価された。ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ａ、ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓ、およびＨＦＢ６－３ｈｚ２５－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓは、親のＨＦＢ６－３抗体と同様に、初代ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖に対するＨＶＥＭ媒介抑制を逆転させた。
【0210】
［実施例１２：システイン変異を有するＨＦＢ６－３ヒト化バリアントは、初代解離腫瘍培養において、ＩＦＮγおよび炎症性サイトカイン産生を誘導した。］
図１４Ａ～１４Ｃおよび図１５Ａ～１５Ｃでは、アッセイは実施例６と同じである。ＴＩＬ ＦおよびＴＩＬ Ｏは、肺癌患者からの解離された腫瘍試料である。図１４Ａ～１４Ｃでは、ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓの抗ＰＤ１と併用した治療は、ＴＩＬ Ｆにおいて、単剤治療のみと比較して、ＣＸＣＬ９、ＩＬ２、ＩＬ１β、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＩＬ－１７Ａ産生を増強した。図１５Ａ～１５Ｃでは、ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓの単剤治療は、ＴＩＬ Ｏにおいて、抗ＰＤ１またはベンチマークＪＳ００４と比較して、ＩＬ１β、ＴＮＦα、およびＩＦＮγ産生をより強く増強した。
図１４Ａ～１４Ｃおよび図１５Ａ～１５Ｃでは、アッセイは実施例６と同じである。ＴＩＬ ＦおよびＴＩＬ Ｏは、肺癌患者からの解離された腫瘍試料である。図１４Ａ～１４Ｃでは、ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓの抗ＰＤ１と併用した治療は、ＴＩＬ Ｆにおいて、単剤治療のみと比較して、ＣＸＣＬ９、ＩＬ２、ＩＬ１β、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＩＬ－１７Ａ産生を増強した。図１５Ａ～１５Ｃでは、ＨＦＢ６－３ｈｚ２４－ｈＧ４Ｐ－Ｃ１０９Ｓの単剤治療は、ＴＩＬ Ｏにおいて、抗ＰＤ１またはベンチマークＪＳ００４と比較して、ＩＬ１β、ＴＮＦα、およびＩＦＮγ産生をより強く増強した。
【0211】
当業者であれば、その広範な発明概念から逸脱することなく、上記の実施形態に変更がなされうることが理解されるであろう。従って本発明は、開示された特定の実施形態に限定されず、本明細書により定義された本発明の範囲内での修正を包含することが意図されると理解される。
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図5】
【図6-1】
【図6-2】
【図7A-1】
【図7A-2】
【図7B-1】
【図7B-2】
【図7C-1】
【図7C-2】
【図7D-1】
【図7D-2】
【図7E-1】
【図7E-2】
【図7F-1】
【図7F-2】
【図7G-1】
【図7G-2】
【図8A】
【図8B】
【図9】
【図10A】
【図10B】
【図10C】
【図11A】
【図11B】
【図12A】
【図12B】
【図13】
【図14A】
【図14B】
【図14C】
【図15A】
【図15B】
【図15C】
【配列表】
【国際調査報告】