特表 2025-504500 抗ＡＬＫ１抗体およびその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-02-12

(54)【発明の名称】抗ＡＬＫ１抗体およびその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20250204BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20250204BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20250204BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20250204BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28

A61K39/395 N ZNA

A61P9/10 101

C12N15/13

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024543374

(86)(22)【出願日】2023-01-23

(85)【翻訳文提出日】2024-08-20

(86)【国際出願番号】 US2023011339

(87)【国際公開番号】W WO2023141327

(87)【国際公開日】2023-07-27

(31)【優先権主張番号】63/302,408

(32)【優先日】2022-01-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/335,444

(32)【優先日】2022-04-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】524273535

【氏名又は名称】ジェノバック・アンチボディ・ディスカバリー・エルエルシー

(71)【出願人】

【識別番号】593152720

【氏名又は名称】イェール ユニバーシティー

【氏名又は名称原語表記】Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ

【住所又は居所原語表記】２ Ｗｈｉｔｎｅｙ Ａｖｅｎｕｅ， Ｎｅｗ Ｈａｖｅｎ， ＣＴ ０６５１０， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ

(74)【代理人】

【識別番号】100133927

【弁理士】

【氏名又は名称】四本 能尚

(74)【代理人】

【識別番号】100174447

【弁理士】

【氏名又は名称】龍田 美幸

(74)【代理人】

【識別番号】100185960

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 理愛

(72)【発明者】

【氏名】ヒュベルトゥス シュレーア

(72)【発明者】

【氏名】ウィリアム セッサ

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA14

4C085BB11

4C085CC23

4C085EE01

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

(57)【要約】

アクチビンＡ受容体様１型（ＡＬＫ１）に結合する抗体が提供される。そのような抗体を投与することを含む治療および使用も提供される。
【図１】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ａ．配列番号２の重鎖可変配列および配列番号３の軽鎖可変配列；
ｂ．配列番号４の重鎖可変配列および配列番号５の軽鎖可変配列；
ｃ．配列番号６の重鎖可変配列および配列番号７の軽鎖可変配列；
ｄ．配列番号１０の重鎖可変配列および配列番号１１の軽鎖可変配列；ならびに
ｅ．配列番号１２の重鎖可変配列および配列番号１３の軽鎖可変配列
から選択される重鎖可変配列および軽鎖可変配列の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗ＡＬＫ１抗体。

【請求項2】

ａ．配列番号２の重鎖可変配列および配列番号３の軽鎖可変配列；
ｂ．配列番号４の重鎖可変配列および配列番号５の軽鎖可変配列；
ｃ．配列番号６の重鎖可変配列および配列番号７の軽鎖可変配列；
ｄ．配列番号１０の重鎖可変配列および配列番号１１の軽鎖可変配列；ならびに
ｅ．配列番号１２の重鎖可変配列および配列番号１３の軽鎖可変配列
から選択される可変重鎖配列および可変軽鎖配列をさらに含む、請求項１に記載の抗ＡＬＫ１抗体。

【請求項3】

前記重鎖可変配列が、配列番号２、４、６、１０、または１２に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を含み、前記軽鎖可変配列が、配列番号３、５、７、１１、または１３に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を含む、請求項１に記載の抗ＡＬＫ１抗体。

【請求項4】

重鎖可変配列が、配列番号２、４、６、１０、または１２において１～１０個のアミノ酸の置換、挿入または欠失を含み、軽鎖可変配列が、配列番号３、５、７、１１、または１３において１～１０個のアミノ酸の置換、挿入または欠失を含む、請求項１に記載の抗ＡＬＫ１抗体。

【請求項5】

ＳＳＹＷＮ（配列番号２６）を含むＣＤＲＨ１、ＥＶＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号２７）を含むＣＤＲＨ２、およびＳＰＲＳＧＲＩＶＧＡＶＦＤＹ（配列番号２８）を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖；ならびにＧＧＮＮＩＧＰＫＳＶＨ（配列番号２９）を含むＣＤＲＬ１、ＤＤＳＤＲＰＳ（配列番号３０）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＶＷＤＳＳＮＤＨＶＶ（配列番号３１）を含むＣＤＲＬ２を含む軽鎖
を含む抗ＡＬＫ１抗体。

【請求項6】

ＳＲＳＹＹＷＧ（配列番号３２）を含むＣＤＲＨ１、ＮＩＹＹＳＧＳＡＦＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号３３）を含むＣＤＲＨ２、およびＷＤＮＷＤＶＧＡＦＤＩ（配列番号３４）を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖；ならびにＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号３５）を含むＣＤＲＬ１、ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号３６）を含むＣＤＲＬ２、およびＴＳＦＡＧＳＮＮＷＶ（配列番号３７）を含むＣＤＲＬ２を含む軽鎖
を含む抗ＡＬＫ１抗体。

【請求項7】

ＡＬＫ１に関連する疾患または障害を治療または予防する方法であって、ＡＬＫ１に関連する疾患または障害を有する対象に、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体を投与するステップを含む、方法。

【請求項8】

疾患が、アテローム性動脈硬化症である、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

対象が、ヒトである、請求項７または８に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願との相互参照
本出願は、これにより開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０２２年１月２４日に出願された米国仮特許出願第６３／３０２，４０８号、および２０２２年４月２７日に出願された米国仮特許出願第６３／３３５，４４４号の優先権を主張するものである。

【0002】

アクチビンＡ受容体様１型（ＡＬＫ１）に結合する抗体が提供される。そのような抗体を投与することを含む治療および使用も提供される。

【背景技術】

【0003】

以下の考察は、読者が本開示を理解することを補助するために提示するものであり、先行技術を記載または構成するものと認められるものではない。

【0004】

アクチビン受容体様キナーゼ－１またはＡＬＫ１は、トランスフォーミング増殖因子－β（ＴＧＦ－β）ファミリーのタンパク質のＩ型細胞表面受容体である。内皮細胞生物学における、および血管新生におけるＡＬＫ１の役割は徹底的に研究されている。しかし、心血管恒常性におけるＡＬＫ１の可能性のある役割が最近示唆された。実際に、ＡＬＫ１の、細胞増殖および遊走を調節する能力、ならびにいくつかの細胞型における細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質発現をモジュレートする能力に起因して、ＡＬＫ１が心血管リモデリングにおいて重要な役割を果たすことが現在実証されている。

【0005】

ＡＬＫ１は、内皮細胞において発現されるだけでなく、平滑筋細胞、筋線維芽細胞、肝星細胞、軟骨細胞、単球、筋芽細胞、マクロファージまたは線維芽細胞においても発現されるが、これらの細胞におけるその役割は深く分析されていない。これらの細胞におけるＡＬＫ１の機能に起因して、この受容体は、アテローム性動脈硬化症などのいくつかの心血管疾患において役割を果たす。一般に心血管疾患、特にアテローム性動脈硬化症は世界的に死亡の主な原因となっている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

したがって、アテローム性動脈硬化症ならびに他の疾患および障害を治療するための、ＡＬＫ１を標的とする治療法、例えば、ＡＬＫ１に結合する抗体が依然として必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本開示は、ＡＬＫ１に結合する抗体、ならびに、種々の状態（例えば、アテローム性動脈硬化症）を治療するための方法／本開示の抗体の使用を提供する。

【0008】

一態様では、本開示は、配列番号２の重鎖可変配列および配列番号３の軽鎖可変配列；配列番号４の重鎖可変配列および配列番号５の軽鎖可変配列；配列番号６の重鎖可変配列および配列番号７の軽鎖可変配列；配列番号１０の重鎖可変配列および配列番号１１の軽鎖可変配列；ならびに配列番号１２の重鎖可変配列および配列番号１３の軽鎖可変配列から選択される重鎖可変配列および軽鎖可変配列の相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ）（ＣＤＲ）を含む抗ＡＬＫ１抗体を提供する。

【0009】

本抗体は、配列番号２の重鎖可変配列および配列番号３の軽鎖可変配列；配列番号４の重鎖可変配列および配列番号５の軽鎖可変配列；配列番号６の重鎖可変配列および配列番号７の軽鎖可変配列；配列番号１０の重鎖可変配列および配列番号１１の軽鎖可変配列；ならびに配列番号１２の重鎖可変配列および配列番号１３の軽鎖可変配列から選択される可変重鎖配列および可変軽鎖配列をさらに含んでよい。

【0010】

一部の実施形態では、重鎖可変配列は、配列番号２、４、６、１０、または１２に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を含み、軽鎖可変配列は、配列番号３、５、７、１１、または１３に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を含む。

【0011】

一部の実施形態では、重鎖可変配列は、配列番号２、４、６、１０、または１２において１～１０個のアミノ酸の置換、挿入または欠失を含み、軽鎖可変配列は、配列番号３、５、７、１１、または１３において１～１０個のアミノ酸の置換、挿入または欠失を含む。

【0012】

別の態様では、本開示は、ＳＳＹＷＮ（配列番号２６）を含むＣＤＲＨ１、ＥＶＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号２７）を含むＣＤＲＨ２、およびＳＰＲＳＧＲＩＶＧＡＶＦＤＹ（配列番号２８）を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖；ならびにＧＧＮＮＩＧＰＫＳＶＨ（配列番号２９）を含むＣＤＲＬ１、ＤＤＳＤＲＰＳ（配列番号３０）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＶＷＤＳＳＮＤＨＶＶ（配列番号３１）を含むＣＤＲＬ２を含む軽鎖を含む抗ＡＬＫ１抗体を提供する。

【0013】

別の態様では、本開示は、ＳＲＳＹＹＷＧ（配列番号３２）を含むＣＤＲＨ１、ＮＩＹＹＳＧＳＡＦＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号３３）を含むＣＤＲＨ２、およびＷＤＮＷＤＶＧＡＦＤＩ（配列番号３４）を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖；ならびにＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号３５）を含むＣＤＲＬ１、ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号３６）を含むＣＤＲＬ２、およびＴＳＦＡＧＳＮＮＷＶ（配列番号３７）を含むＣＤＲＬ２を含む軽鎖を含む抗ＡＬＫ１抗体を提供する。

【0014】

一部の実施形態では、本開示の抗体は、ヒトＡＬＫ１、マウスＡＬＫ１、カニクイザルＡＬＫ１、またはこれらの組合せに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗体は、ＡＬＫ５には結合しない。一部の実施形態では、本開示の抗体は、ＢＭＰ９シグナル伝達を遮断しない。

【0015】

本開示は、前述の態様または実施形態のいずれか１つによる抗ＡＬＫ１抗体と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物も提供する。一部の実施形態では、医薬組成物は、注射または注入用に製剤化されたものであってよい。

【0016】

別の態様では、本開示は、ＡＬＫ１に関連する疾患または障害を治療または予防する方法であって、ＡＬＫ１に関連する疾患または障害を有する対象に、前述の態様または実施形態のいずれか１つによる抗体または医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。

【0017】

一部の実施形態では、疾患は、アテローム性動脈硬化症である。一部の実施形態では、アテローム性動脈硬化症を発症するリスクが低減し、対象は、動脈硬化巣をまだ発症していない。一部の実施形態では、さらなる動脈硬化巣形成が低減または阻害される。一部の実施形態では、既存の動脈硬化巣が破壊される。一部の実施形態では、既存の動脈硬化巣のサイズまたは数が低減する。

【0018】

一部の実施形態では、抗ＡＬＫ１抗体または医薬組成物を静脈内、皮下、筋肉内、または腹腔内に投与する。

【0019】

一部の実施形態では、対象は、ヒトである。

【0020】

別の態様では、本開示は、ＡＬＫ１と低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の相互作用を遮断する方法であって、対象に、前述の態様または実施形態のいずれか１つによる抗体または医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、対象は、アテローム性動脈硬化症を有する、またはアテローム性動脈硬化症を発症するリスクがある。一部の実施形態では、ＢＭＰ９シグナル伝達は阻害されない。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。

【0021】

別の態様では、本開示は、ＡＬＫ１に関連する疾患、例えばアテローム性動脈硬化症などを治療するための医薬の製造のための、本明細書に開示される抗体のいずれかの使用を提供する。

【0022】

別の態様では、本開示は、ＡＬＫ１と低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の相互作用を遮断するための医薬の製造のための、本明細書に開示される抗体のいずれかの使用を提供する。

【0023】

別の態様では、本開示は、ＡＬＫ１に関連する疾患、例えばアテローム性動脈硬化症などの治療に使用するための、抗ＡＬＫ１抗体を提供する。

【0024】

別の態様では、本開示は、ＡＬＫ１と低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の相互作用の遮断に使用するための抗ＡＬＫ１抗体を提供する。

【0025】

前述の一般的な説明および以下の詳細な説明は例示的、説明的なものであり、特許請求された本開示のさらなる説明を提供することを意図したものである。本開示の他の目的、利点、態様および反復を以下により詳細に提示する。

【図面の簡単な説明】

【0026】

【図1】開示される抗体のＡＬＫ１の種々の哺乳動物オルソログへの結合を確認するためのＡＬＫ１結合アッセイの結果を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0027】

アクチビンＡ受容体様１型（ＡＬＫ１）に結合する抗体が提供される。ＡＬＫ１に結合する抗体を形成することが可能な抗体重鎖および軽鎖も提供される。さらに、１つまたは複数の特定の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体、重鎖、および軽鎖が提供される。ＡＬＫ１に結合する抗体をコードするポリヌクレオチドが提供される。抗体重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドも提供される。ＡＬＫ１に対する抗体を作製および／または精製する方法が提供される。本抗体を使用した治療が提供される。そのような方法としては、これだけに限定されないが、アテローム性動脈硬化症を治療する方法が挙げられる。

【0028】

Ｉ．定義
本明細書において使用される用語法は、特定の実施形態を説明するためだけのものであり、限定的なものではないことが理解されるべきである。

【0029】

本明細書で使用される科学技術用語は、特に定義されていなければ、当業者に一般に理解されている意味を有する。別段の指定がない限り、本明細書に提示されている手引きに基づいて、本明細書に記載の方法の実施において当業者に公知の材料および／または方法体系を利用することができる。

【0030】

本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」という単数の用語は、文脈により明確に別段の規定がなされない限り、複数の指示対象を包含する。単数の目的語への言及は、そうであることが明示されていない限り「ただ１つの（ｏｎｅ ａｎｄ ｏｎｌｙ ｏｎｅ）」を意味するものではなく、「１つまたは複数の（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」を意味する。

【0031】

本明細書で使用される場合、「約」が数値と共に使用される場合、明示された数値だけでなく、その数値のプラス１０％またはマイナス１０％も意味する。例えば、「約１０」は、「１０」および「９～１１」の両方と理解されるべきである。

【0032】

同じく本明細書で使用される場合、「および／または」は、二者択一（「または（ｏｒ）」）と解釈される場合に組合せの欠如を指し、それらを包含するだけでなく、関連する列挙された項目の１つまたは複数のありとあらゆる可能性のある組合せも指し、それらを包含する。

【0033】

本明細書で使用される場合、「Ａ／Ｂ」の形態または「Ａおよび／またはＢ」の形態の句は、（Ａ）、（Ｂ）、または（ＡおよびＢ）を意味し、「Ａ、Ｂ、およびＣのうちの少なくとも１つ」の形態の句は、（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（ＡおよびＢ）、（ＡおよびＣ）、（ＢおよびＣ）、または（Ａ、Ｂ、およびＣ）を意味する。

【0034】

本明細書で使用される場合、抗ＡＬＫ１抗体に関して「治療有効量」という句は、薬物がそのような治療を必要とする対象に投与されるところの特定の薬理学的効果をもたらす、その抗体の用量を意味する。例えば、治療有効量は、腫の蓄積またはアテローム性動脈硬化症の徴候および症状を低減させる、好転させる、または排除するために有効なものであり得る。抗ＡＬＫ１抗体の治療有効量は、そのような用量が当業者によって治療有効量であると考えられているとしても、必ずしも個々の対象１例１例の疾患または状態（例えば、アテローム性動脈硬化症）の治療に有効であるとは限らないことが強調される。当業者は、特定の対象を治療するために必要に応じて、標準的な実施に従い、考えられる治療有効量を調整することができる。治療有効量は、例えば、対象の年齢および体重、ならびに／または対象の全体的な健康、ならびに／または対象の疾患もしくは状態（例えば、アテローム性動脈硬化症）の重症度に応じて変動し得る。

【0035】

「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、ＡＬＫ１に関連する疾患または障害（例えば、アテローム性動脈硬化症）に関して本明細書で使用される場合、対象における疾患もしくは状態（例えば、アテローム性動脈硬化症における粥腫形成）の病態生理学的特色を低減させる、好転させる、もしくは排除すること、疾患もしくは障害の徴候もしくは症状を低減させる、好転させる、もしくは排除すること、ならびに／または他の点で生活の質を改善することを指す。例えば、アテローム性動脈硬化症の場合では、治療には、血流を改善すること、血圧を低下させること、血管内皮の内層内／上へのコレステロール粥腫の沈着を阻害すること、既存の粥腫を破壊すること、または前述のいずれかまたは全ての組合せが必要となる。

【0036】

「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」または「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」という用語は、ＡＬＫ１に関連する疾患または障害（例えば、アテローム性動脈硬化症）に関して本明細書で使用される場合、疾患または障害の発症を妨げるまたはそのリスクを低減させることを指す。例えば、アテローム性動脈硬化症の予防には、粥腫形成の素因がある個体における粥腫の形成を予防することまたはそのような個体における粥腫形成のリスクを低減させることが必要となる。

【0037】

「個体」、「対象」、および「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用され、任意の個々の哺乳動物対象、例えば、ウシ、イヌ、ネコ、ウマ、またはヒトを指す。特定の実施形態では、対象、個体、または患者は、ヒトである。

【0038】

抗原またはエピトープに「特異的に結合する」という用語は、当技術分野においてよく理解されている用語であり、そのような特異的な結合を決定するための方法も当技術分野で周知である。分子は、特定の細胞または物質に対して、代替の細胞または物質に対するよりも頻繁に、急速に、長い持続時間で、および／または、高い親和性で反応または会合する場合、「特異的な結合」または「優先的な結合」を示すといえる。抗体が、標的に、他の物質に結合するよりも、高い親和性、結合力で、容易に、および／または長い持続時間で結合する場合、その抗体はその標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば、ＡＬＫ１エピトープに特異的にまたは優先的に結合する抗体は、このエピトープに、他のＡＬＫ１エピトープまたは非ＡＬＫ１エピトープに結合するよりも、高い親和性、結合力で、容易に、および／または長い持続時間で結合する抗体である。例えば、第１の標的に特異的にまたは優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）は、第２の標的に特異的にまたは優先的に結合してもしなくてもよいことも、この定義を読むことによって理解される。したがって、「特異的な結合」または「優先的な結合」は、必ずしも排他的な結合を求めるものではない（しかしそれを含み得る）。必ずしもではないが、一般に、結合への言及は優先的な結合を意味する。「特異性」は、結合性タンパク質の、抗原に選択的に結合する能力を指す。

【0039】

「抗体」という用語は、本明細書では最も広範な意味で使用され、これだけに限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性（例えば、二重特異性Ｔ細胞誘導抗体）および三重特異性抗体など）を含めた種々の抗体構造、ならびに、所望の抗原結合活性を示す限りは抗体断片、を包含する。

【0040】

「ＣＤＲ」という用語は、当業者に知られている少なくとも１つの同定様式によって定義される相補性決定領域を示す。

【0041】

「重鎖可変領域」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも３つの重鎖ＣＤＲを含む領域を指す。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、３つのＣＤＲ、ならびに少なくともＦＲ２およびＦＲ３を含む。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、少なくとも重鎖ＨＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＨＣＤＲ２、ＦＲ３、およびＨＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、ＦＲ１の少なくとも一部分および／またはＦＲ４の少なくとも一部分も含む。

【0042】

「重鎖定常領域」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも３つの重鎖定常ドメイン、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、およびＣ_Ｈ３を含む領域を指す。当然、特に別の指定がなければ、ドメイン内の非機能変更型（ｎｏｎ－ｆｕｎｃｔｉｏｎ－ａｌｔｅｒｉｎｇ）欠失および変更は「重鎖定常領域」という用語の範囲内に包含される。非限定的な例示的な重鎖定常領域として、γ、δ、およびαが挙げられる。非限定的な例示的な重鎖定常領域としては、εおよびμも挙げられる。各重鎖定常領域が抗体のアイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体はＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体はＩｇＤ抗体である。α常領域を含む抗体はＩｇＡ抗体である。さらに、μ定常領域を含む抗体はＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体はＩｇＥ抗体である。ある特定のアイソタイプは、サブクラスにさらに細分することができる。例えば、ＩｇＧ抗体は、これだけに限定されないが、ＩｇＧ１（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３（γ３定常領域を含む）、およびＩｇＧ４（γ４定常領域を含む）抗体を包含し、ＩｇＡ抗体は、これだけに限定されないが、ＩｇＡ１（α１定常領域を含む）およびＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体を包含し、ＩｇＭ抗体は、これだけに限定されないが、ＩｇＭ１およびＩｇＭ２を包含する。

【0043】

「重鎖」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも重鎖可変領域を含み、リーダー配列を伴うまたは伴わない、ポリペプチドを指す。一部の実施形態では、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部分を含む。「全長重鎖」という用語は、本明細書で使用される場合、重鎖可変領域および重鎖定常領域を含み、リーダー配列を伴うまたは伴わない、ポリペプチドを指す。

【0044】

「軽鎖可変領域」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲを含む領域を指す。一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、３つのＣＤＲ、ならびに少なくともＦＲ２およびＦＲ３を含む。一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、少なくとも軽鎖ＬＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＬＣＤＲ２、ＦＲ３、およびＬＣＤＲ３を含む。例えば、軽鎖可変領域は、軽鎖ＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、およびＣＤＲ３を含み得る。一部の実施形態では、軽鎖可変領域は、ＦＲ１の少なくとも一部分および／またはＦＲ４の少なくとも一部分も含む。

【0045】

「軽鎖定常領域」という用語は、本明細書で使用される場合、軽鎖定常ドメイン、ＣＬを含む領域を指す。非限定的な例示的な軽鎖定常領域は、λおよびκを含む。当然、特に別の指定がなければ、ドメイン内の非機能変更型欠失および変更は「軽鎖定常領域」という用語の範囲内に包含される。

【0046】

「軽鎖」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも軽鎖可変領域を含み、リーダー配列を伴うまたは伴わない、ポリペプチドを指す。一部の実施形態では、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部分を含む。「全長軽鎖」という用語は、本明細書で使用される場合、軽鎖可変領域および軽鎖定常領域を含み、リーダー配列を伴うまたは伴わない、ポリペプチドを指す。

【0047】

「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合性部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の総計の強度を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表すことができる。親和性は、当技術分野で公知の一般的な方法（例えば、本明細書に記載のものを含めた、ＥＬＩＳＡ Ｋ_Ｄ、ＫｉｎＥｘＡ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、および／または表面プラズモン共鳴デバイス（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）デバイス）など）によって測定することができる。

【0048】

「Ｋ_Ｄ」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指す。

【0049】

「キメラ抗体」は、本明細書で使用される場合、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の供給源または種に由来し、重鎖および／または軽鎖の残部の少なくとも一部が異なる供給源または種に由来する抗体を指す。一部の実施形態では、キメラ抗体は、第１の種（例えば、マウス、ラット、カニクイザルなど）由来の少なくとも１つの可変領域および第２の種（例えば、ヒト、カニクイザルなど）由来の少なくとも１つの定常領域を含む抗体を指す。一部の実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域および少なくとも１つのヒト定常領域を含む。一部の実施形態では、キメラ抗体は、少なくとも１つのカニクイザル可変領域および少なくとも１つのヒト定常領域を含む。一部の実施形態では、キメラ抗体の可変領域の全てが第１の種由来であり、キメラ抗体の定常領域の全てが第２の種由来である。キメラ構築物は、上記の通り機能的断片であってもよい。

【0050】

「ヒト化抗体」は、本明細書で使用される場合、非ヒト可変領域のフレームワーク領域内の少なくとも１つのアミノ酸がヒト可変領域由来の対応するアミノ酸によって置き換えられた抗体を指す。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域またはその断片を含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、抗体断片、例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）_２などである。ヒト化という用語は、非ヒト（例えば、マウス）抗体の、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖形態、または、非ヒト免疫グロブリンの最小の配列を含有するその断片（例えば、抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２もしくは他の抗原結合性部分配列）も示す。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ）（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基によって置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を包含し得る。一部の場合では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体においても移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列においても見いだされないが、抗体の性能をさらに改良し、最適化するために含められる残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、および一般には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み得、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。一部の実施形態では、ヒト化抗体はまた、一般にはヒト免疫グロブリンのものである、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部分も含み得る。ヒト化抗体の他の形態は、元の抗体に対して変更された１つまたは複数のＣＤＲ（ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３、ＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、および／またはＣＤＲ Ｈ３）を有し、これらは、元の抗体の１つまたは複数のＣＤＲに「由来する」１つまたは複数のＣＤＲとも称される。理解される通り、ヒト化配列は、その一次配列によって同定することができ、必ずしも抗体が創出されたプロセスを示すものではない。

【0051】

「ＣＤＲグラフト抗体」は、本明細書で使用される場合、第１の（非ヒト）種の１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）が第２の（ヒト）種のフレームワーク領域（ＦＲ）にグラフトされたヒト化抗体を指す。

【0052】

「ヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、ヒトにおいて産生された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物、例えばＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）マウスにおいて産生された抗体、および、抗体レパートリーがヒト免疫グロブリン配列に基づくファージディスプレイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける方法を使用して選択された抗体（Ｖａｕｇｈａｎら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：３０９～３１４；Ｓｈｅｅｔｓら、１９９８、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６１５７～６１６２；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、１９９１、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１；Ｍａｒｋｓら、１９９１、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１）を包含する。「ヒト抗体」という用語は、ヒト配列である配列の属を示す。したがって、この用語は、抗体が創出されたプロセスを指定するものではなく、関連性のある配列の属を指定するものである。

【0053】

アミノ酸置換は、これだけに限定されないが、ポリペプチド内の１つのアミノ酸の別のアミノ酸による置換えを含み得る。例示的な保存的置換を表１に示す。アミノ酸置換を目的の抗体に導入することができ、産物を所望の活性、例えば、抗原への結合の保持／改善、免疫原性の低減、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの改善についてスクリーニングすることができる。

【0054】

【表1】

【0055】

アミノ酸は、共通する側鎖特性に応じて群分けすることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の方向性に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0056】

非保存的置換には、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することが伴う。

【0057】

「ベクター」という用語は、宿主細胞において増やすことができるクローニングされたポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含有するように工学的に操作することができるポリヌクレオチドを記載するために使用される。ベクターは、以下のエレメントの１つまたは複数を含み得る：複製開始点、目的のポリペプチドの発現を調節する１つもしくは複数の調節配列（例えば、プロモーターおよび／もしくはエンハンサーなど）、ならびに／または１つもしくは複数の選択マーカー遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子、および比色定量アッセイに使用することができる遺伝子、例えば、β－ガラクトシダーゼなど）。「発現ベクター」という用語は、目的のポリペプチドを宿主細胞において発現させるために使用するベクターを指す。

【0058】

「宿主細胞」は、ベクターまたは単離されたポリヌクレオチドのレシピエントになり得るまたはレシピエントになった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞であっても真核細胞であってもよい。例示的な真核細胞としては、哺乳動物細胞、例えば、霊長類または非霊長類動物細胞；真菌細胞、例えば酵母；植物細胞；および昆虫細胞が挙げられる。非限定的な例示的な哺乳動物細胞としては、これだけに限定されないが、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、ならびに２９３およびＣＨＯ細胞およびそれらの誘導体、例えば、それぞれ２９３－６Ｅ細胞およびＤＧ４４細胞が挙げられる。

【0059】

「医薬製剤」および「医薬組成物」という用語は、活性成分（１つまたは複数）の生物活性が有効になるような形態にあり、製剤が投与される対象に対して許容できない毒性をもつ追加的な構成成分を含有しない、調製物を指す。そのような製剤は無菌性であり得る。

【0060】

「薬学的に許容できる担体」は、一緒になって対象への投与のための「医薬組成物」を構成する治療剤との使用に関して当技術分野において従来のものである、無毒性の固体、半固体、または液体の充填剤、希釈剤、封入材料、製剤化補助剤、または担体を指す。薬学的に許容できる担体は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに対して無毒性であり、製剤の他の成分に対して適合性である。薬学的に許容できる担体は、使用される製剤に適したものである。

【0061】

「無菌」製剤は、無菌性である、または生きている微生物およびそれらの胞子を本質的に含まない。

【0062】

ＩＩ．ＡＬＫ１およびＡＬＫ１関連疾患
アクチビンＡ受容体様１型（ＡＬＫ１；Ｅｎｔｒｅｚ：９４、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１３９５６７、ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ３７０２３）は、内皮細胞において発現される、トランスフォーミング増殖因子－ベータ受容体ファミリーの膜貫通型セリン／トレオニン受容体キナーゼである。トランスフォーミング増殖因子－β（ＴＧＦβ）スーパーファミリーに入るリガンドは、膜貫通型受容体複合体を介してシグナル伝達を行い、胚軸パターン形成、心臓および血管発生、上皮間葉転換、ならびに線維症を含めた、発生ならびに疾患において重要な無数のプロセスを制御する。シグナル伝達受容体の中で、アクチビンＡ受容体様１型（ＡＣＶＲＬ１、ＡＬＫ１をコードする）は、高度の細胞型特異性を有し、動脈性内皮細胞（ＥＣ）において主に発現される。ヒトＡＬＫ１のアミノ酸配列は、
ＭＴＬＧＳＰＲＫＧＬＬＭＬＬＭＡＬＶＴＱＧＤＰＶＫＰＳＲＧＰＬＶＴＣＴＣＥＳＰＨＣＫＧＰＴＣＲＧＡＷＣＴＶＶＬＶＲＥＥＧＲＨＰＱＥＨＲＧＣＧＮＬＨＲＥＬＣＲＧＲＰＴＥＦＶＮＨＹＣＣＤＳＨＬＣＮＨＮＶＳＬＶＬＥＡＴＱＰＰＳＥＱＰＧＴＤＧＱＬＡＬＩＬＧＰＶＬＡＬＬＡＬＶＡＬＧＶＬＧＬＷＨＶＲＲＲＱＥＫＱＲＧＬＨＳＥＬＧＥＳＳＬＩＬＫＡＳＥＱＧＤＳＭＬＧＤＬＬＤＳＤＣＴＴＧＳＧＳＧＬＰＦＬＶＱＲＴＶＡＲＱＶＡＬＶＥＣＶＧＫＧＲＹＧＥＶＷＲＧＬＷＨＧＥＳＶＡＶＫＩＦＳＳＲＤＥＱＳＷＦＲＥＴＥＩＹＮＴＶＬＬＲＨＤＮＩＬＧＦＩＡＳＤＭＴＳＲＮＳＳＴＱＬＷＬＩＴＨＹＨＥＨＧＳＬＹＤＦＬＱＲＱＴＬＥＰＨＬＡＬＲＬＡＶＳＡＡＣＧＬＡＨＬＨＶＥＩＦＧＴＱＧＫＰＡＩＡＨＲＤＦＫＳＲＮＶＬＶＫＳＮＬＱＣＣＩＡＤＬＧＬＡＶＭＨＳＱＧＳＤＹＬＤＩＧＮＮＰＲＶＧＴＫＲＹＭＡＰＥＶＬＤＥＱＩＲＴＤＣＦＥＳＹＫＷＴＤＩＷＡＦＧＬＶＬＷＥＩＡＲＲＴＩＶＮＧＩＶＥＤＹＲＰＰＦＹＤＶＶＰＮＤＰＳＦＥＤＭＫＫＶＶＣＶＤＱＱＴＰＴＩＰＮＲＬＡＡＤＰＶＬＳＧＬＡＱＭＭＲＥＣＷＹＰＮＰＳＡＲＬＴＡＬＲＩＫＫＴＬＱＫＩＳＮＳＰＥＫＰＫＶＩＱ（配列番号１）である。

【0063】

ＡＬＫ１シグナル伝達の欠陥により、動脈と静脈の直接接続、または動静脈奇形（ＡＶＭ）を特徴とする常染色体優性血管障害である遺伝性出血性末梢血管拡張症（ＨＨＴ）が引き起こされるおそれがある。さらに、ＡＬＫ１シグナル伝達が、肺動脈性肺高血圧症、がん、およびアテローム性動脈硬化症などの他の血管関連疾患においても役割を果たし得ることが現在理解されている。さらに、ＡＬＫ１は、先端／柄細胞選択、遊走、および増殖を含めた発芽性血管新生の種々の側面に関係づけられており、また、最近の研究から、開存性の灌流血管内の定方向内皮細胞遊走を支配する流れに基づくシグナルの伝達におけるＡＬＫ１の役割が示唆されている。

【0064】

マウスにおける試験により、アテローム性動脈硬化症が生じやすい、流れが妨げられる部位である動脈の湾曲部および分岐部における強力なＡｌｋ１発現が実証されている。ヒト冠状動脈アテローム硬化病変の内皮、新生内膜、および中膜におけるＡＬＫ１発現の増大も実証されている。ＡＬＫ１が、ＨＨＴにおけるその役割とは見たところ無関係の機構によってアテローム性動脈硬化症に直接関係づけられることが現在理解されている。

【0065】

簡単に述べると、ＡＬＫ１の頂端に局在する細胞外ドメインが、循環しているＡｐｏＢ１００含有低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）に比較的低い親和性で結合し得、ＬＤＬの内皮下腔へのトランスサイトーシスを媒介し、アテローム硬化病変が開始される。この活性にはＢＭＰ９／ＢＭＰ１０、エンドグリン、ＢＭＰＲＩＩ、またはＡＬＫ１キナーゼ活性は必要なく、ＢＭＰ９／ＢＭＰ１０はＬＤＬ結合に競合することができず、これらのリガンドが異なるＡＬＫ１残基に結合することが示唆される。したがって、ＬＤＬ／ＡＬＫ１相互作用を標的とすることは、アテローム性動脈硬化症を予防するための新しい薬物を開発するための、実現可能な手法であり得る。

【0066】

下により詳細に提示する通り、本開示の抗体は、ＡＬＫ１に関連する疾患および障害、例えばアテローム性動脈硬化症、ならびに本明細書に含まれる他の疾患または障害（例えば、ＨＨＴ、ＡＶＭ、肺動脈性肺高血圧症、がんなど）のいずれかを治療するために使用することができる。

【0067】

ＩＩＩ．抗ＡＬＫ１抗体
本開示は、ＡＬＫ１に結合する抗体（すなわち、「抗ＡＬＫ１抗体」）を提供する。本開示の抗体は、ＡＬＫ１に選択的に結合することができ、これだけに限定されないが、アテローム性動脈硬化症、ＨＨＴ、ＡＶＭ、肺動脈性肺高血圧症、およびがんを含めた、ＡＬＫ１に関連する疾患または障害を治療するために使用することができる。

【0068】

ＡＬＫ１は、血管におけるＬＤＬコレステロールの蓄積において重要な役割を果たし得る。本開示の抗体（例えば、ＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７－Ａ１０およびＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３）は、血液から組織内へのＬＤＬの輸送（ＬＤＬトランスサイトーシスとも称される）を容易にする血管壁における「ＬＤＬ－ＡＬＫ１経路」を妨害することにより、ＬＤＬ集積を遮断することができる。これが今度は、心疾患に至る動脈の詰まりの予防または緩徐化を補助する。本明細書に開示されるコンフォメーション選択的ＡＬＫ１結合性モノクローナル抗体（例えば、ＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７－Ａ１０およびＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３）は、内皮へのＬＤＬトランスサイトーシスを効率的に遮断するが、ＢＭＰ９シグナル伝達は遮断せず、その結果、粥腫形成の劇的な減少がもたらされる。本開示の抗ＡＬＫ１抗体は、ヒトＡＬＫ１、マウスＡＬＫ１、カニクイザルＡＬＫ１、またはこれらの組合せに結合し得る。

【0069】

本明細書に記載の抗ＡＬＫ１抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ供給源（例えば、ハイブリドーマまたは組換えにより抗体を産生する細胞株）およびｉｎ ｖｉｖｏ供給源（例えば、齧歯類、ウサギ、ヒトなど）を含めた任意の手段によって得ることができる。本開示の抗体は、ヒト、ヒト化（部分的または完全）、またはキメラであってよい。ヒト抗体、部分的ヒト化抗体、完全ヒト化抗体、およびキメラ抗体は、例えば、１つまたは複数の内在性免疫グロブリン遺伝子が１つまたは複数のヒト免疫グロブリン遺伝子によって置き換えられたトランスジェニック動物（例えば、マウス）の使用など、当技術分野で公知の方法によって作出することができる。内在性抗体遺伝子がヒト抗体遺伝子によって有効に置き換えられたトランスジェニックマウスの例としては、これだけに限定されないが、ＨＵＭＡＢ－ＭＯＵＳＥ（商標）、Ｋｉｒｉｎ ＴＣ ＭＯＵＳＥ（商標）、およびＫＭ－ＭＯＵＳＥ（商標）が挙げられる（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２３（９）：１１１７～２５（２００５）、およびＬｏｎｂｅｒｇ、Ｈａｎｄｂ． Ｅｘｐ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１８１： ６９～９７（２００８）を参照されたい）。

【0070】

本明細書に開示される抗Ａｌｋ１抗体は、一般に、モノクローナル、組換え、またはその両方である。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、当技術分野で公知の方法によって、例えば、抗体産生細胞を不死化細胞と融合して、ハイブリドーマを得ることによって、ならびに／または、コンビナトリアル抗体ライブラリー技術を使用して免疫化された動物の骨髄、Ｂ細胞、および／もしくは脾臓細胞から抽出されたｍＲＮＡからｍＡｂを生成することによって、ならびに／または、ＡＬＫ１抗原を用いて免疫化された対象由来の血清からモノクローナル抗体を単離することによって、得ることができる。組換え抗体は、当技術分野で公知の方法によって、例えば、ファージディスプレイ技術、酵母表面ディスプレイ技術（Ｃｈａｏら、Ｎａｔ． Ｐｒｏｔｏｃ．、１（２）： ７５５～６８（２００６））、哺乳動物細胞表面ディスプレイ技術（Ｂｅｅｒｌｉら、ＰＮＡＳ、１０５（３８）： １４３３６～４１（２００８）を使用すること、ならびに／または、抗体ポリペプチドを発現もしくは共発現させることによって、得ることができる。抗体を作出するための他の技法が当技術分野で公知であり、それらを本明細書に記載の方法において使用される抗体を得るために使用することができる。

【0071】

一般には、抗体は、４つポリペプチド：重（Ｈ）鎖ポリペプチドの２つの同一コピーおよび軽（Ｌ）鎖ポリペプチドの２つのコピーからなる。一般には、各重鎖は、１つのＮ末端可変（Ｖ_Ｈ）領域および３つのＣ末端定常（Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３）領域を含有し、各軽鎖は、１つのＮ末端可変（Ｖ_Ｌ）領域および１つのＣ末端定常（Ｃ_Ｌ）領域を含有する。軽鎖および重鎖の各対の可変領域が抗体の抗原結合性部位を形成する。

【0072】

「抗体断片」という用語は、本明細書で使用される場合、ＡＬＫ１に結合する能力を示す、ＡＬＫ１結合性抗体の１つまたは複数の部分を指す。結合性断片の例として、（ｉ）Ｆａｂ断片（Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_ＬおよびＣ_Ｈ１ドメインからなる一価断片）；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２断片（ヒンジ領域におけるジスルフィド橋によって連結した２つのＦａｂ断片で構成される二価断片）；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片（Ｖ_ＨおよびＣ_Ｈ１ドメインで構成される）；（ｉｖ）Ｆｖ断片（抗体の単一の腕のＶ_ＬおよびＶ_Ｈドメインで構成される）、（ｖ）ｄＡｂ断片（Ｖ_Ｈドメイン）；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、例えば、Ｖ_ＨＣＤＲ３が挙げられる。他の例として、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）構築物が挙げられる。例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３～２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８５：５８７９～８３（１９８８）を参照されたい。他の例として、（ｉ）ＡＬＫ１結合性ドメインポリペプチド（例えば、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、またはリンカーペプチドを介して融合した重鎖可変領域と軽鎖可変領域など）と免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドの融合物、（ｉｉ）免疫グロブリン重鎖Ｃ_Ｈ２定常領域とヒンジ領域の融合物、および（ｉｉｉ）免疫グロブリン重鎖Ｃ_Ｈ３定常領域とＣ_Ｈ２定常領域の融合物を含むＡＬＫ１結合性ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質が挙げられ、ここで、二量体形成を防止するために、ヒンジ領域が、１つまたは複数のシステイン残基が例えばセリン残基によって置き換えられることによって改変されていてよい。

【0073】

本開示の抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、およびＩｇＤから選択される抗体のクラスに属するものであってよい。より詳細には、本開示の抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４であってよい。一部の実施形態では、本開示の抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、またはＩｇＤ抗体の定常領域、フレームワーク領域の全部または一部、またはそれらの組合せを含み得る。例えば、開示される抗体は、ＩｇＧ１構造が、別のＩｇＧクラスの免疫グロブリン、またはＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、またはＩｇＤ免疫グロブリンの対応する構造に置き換わる（またはそれと「切り換わる」）ように改変されていてよい、ＩｇＧ１免疫グロブリン構造を含み得る。この型の改変または切り換えを、ペプチドの中和機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体結合（ＣＤＣ）を強化するために実施することができる。一部の実施形態では、抗ＡＬＫ１抗体は、哺乳動物抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体であってよい。

【0074】

一部の実施形態では、本開示の抗ＡＬＫ１抗体は、抗体を治療的状況により適したものにする１つまたは複数の変異を含み得る。そのような変異、変更、または改変は、例えば、ペプチドの、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存的細胞媒介性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）、および／または補体結合（ＣＤＣ）のような細胞傷害性機能を媒介する能力を増大させるための、Ｆｃ領域の変化を含み得る。Ｆｃ受容体への結合を増強するＦｃドメインの多数の変異、例えば、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｆ２４３Ｌ、およびＧ２３６Ａが報告されている。それに加えて、またはその代わりに、循環半減期を増大させるＦｃ領域の変異を構造に組み入れることができる。例えば、ＦｃドメインとＦｃＲｎのｐＨ依存性相互作用を、ｐＨ６．０における親和性が増大する一方でｐＨ７．４における最小の結合が保持されるように工学的に操作するための変異により、生理的条件下での半減期を増大させ、有効性を改善することができる。一部の実施形態では、本開示の抗体をポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および／またはアルブミンとコンジュゲートすることができ、それにより、抗体の半減期を増大させ、潜在的な免疫原性を低減させることができる。

【0075】

例示的な抗ＡＬＫ１抗体の重鎖可変および軽鎖可変アミノ酸配列を以下の表２に開示する。表２の重鎖可変および軽鎖可変配列をコードする核酸配列を表３に示す。

【0076】

【表2】

【0077】

【表3-1】

【0078】

【表3-2】

【0079】

【表3-3】

【0080】

本開示は、表２に開示されている配列の１つまたは複数と同じＣＤＲ配列および／または同じフレームワーク領域配列および／または同じ可変領域配列を含む抗体を提供する。例えば、一部の実施形態では、本開示の抗ＡＬＫ１抗体は、配列番号２のＣＤＲを含む重鎖可変領域および配列番号３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含み得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＡＬＫ１抗体は、配列番号４のＣＤＲを含む重鎖可変領域および配列番号５のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含み得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＡＬＫ１抗体は、配列番号６のＣＤＲを含む重鎖可変領域および配列番号７のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含み得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＡＬＫ１抗体は、配列番号１０のＣＤＲを含む重鎖可変領域および配列番号１１のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含み得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＡＬＫ１抗体は、配列番号１２のＣＤＲを含む重鎖可変領域および配列番号１３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含み得る。

【0081】

一部の実施形態では、抗ＡＬＫ１抗体は、ＳＳＹＷＮ（配列番号２６）を含むＣＤＲＨ１、ＥＶＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号２７）を含むＣＤＲＨ２、およびＳＰＲＳＧＲＩＶＧＡＶＦＤＹ（配列番号２８）を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖；ならびにＧＧＮＮＩＧＰＫＳＶＨ（配列番号２９）を含むＣＤＲＬ１、ＤＤＳＤＲＰＳ（配列番号３０）を含むＣＤＲＬ２、およびＱＶＷＤＳＳＮＤＨＶＶ（配列番号３１）を含むＣＤＲＬ２を含む軽鎖を含み得る。一部の実施形態では、抗ＡＬＫ１抗体は、ＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７－Ａ１０である。

【0082】

一部の実施形態では、抗ＡＬＫ１抗体は、ＳＲＳＹＹＷＧ（配列番号３２）を含むＣＤＲＨ１、ＮＩＹＹＳＧＳＡＦＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号３３）を含むＣＤＲＨ２、およびＷＤＮＷＤＶＧＡＦＤＩ（配列番号３４）を含むＣＤＲＨ３を含む重鎖；ならびにＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号３５）を含むＣＤＲＬ１、ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号３６）を含むＣＤＲＬ２、およびＴＳＦＡＧＳＮＮＷＶ（配列番号３７）を含むＣＤＲＬ２を含む軽鎖を含み得る。一部の実施形態では、抗ＡＬＫ１抗体は、ＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３である。

【0083】

一部の実施形態では、抗ＡＬＫ１抗体は、配列番号２、４、６、１０、または１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＡＬＫ１抗体は、ＡＬＫ１に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号２、４、６、１０、または１２における合計で１～１０アミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸）が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）に存在する。抗ＡＬＫ１抗体は、配列番号２、４、６、１０、または１２のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含め、含んでもよい。

【0084】

一部の実施形態では、抗ＡＬＫ１抗体は、配列番号３、５、７、１１、または１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＡＬＫ１抗体は、ＡＬＫ１に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号３、５、７、１１、または１３の合計で１～１０アミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸）が置換されている、挿入されている、および／または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）に存在する。抗ＡＬＫ１抗体は、配列番号３、５、７、１１、または１３のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含め、含んでもよい。

【0085】

上記の通り、本開示の抗体は、ヒト、マウス、およびカニクイザルを含めた種々の哺乳動物ＡＬＫ１タンパク質に結合し得る。例えば、ＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３は、ヒト、マウス、およびカニクイザルＡＬＫ１に結合し、ＢＶＯ－Ａ－９Ｅ７－Ａ１０は、ヒトおよびカニクイザルＡＬＫ１に結合する。対照的に、ＢＶＮ－Ｂ－２Ｆ１１－Ｅ４（対照）は、ヒトＡＬＫ１に対して弱い結合しか示さない。

【0086】

ＡＬＫ１に結合することに加えて、本開示の抗体は、他の有益な特性も有し得る。例えば、本開示の抗体は、ＢＭＰ９（骨形成タンパク質－９）シグナル伝達を遮断することはできず、ＳＭＡＤ１／５のリン酸化が可能である。ＢＭＰ９は、胎児前脳基底部コリン作動性ニューロン（ＢＦＣＮ）の、アセチルコリンと称される神経伝達物質に応答する能力の誘導および維持において役割を果たし、また、ＳＭＡＤシグナル伝達経路を介した間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の骨芽細胞系列への分化を誘導する。本開示の目的に関して注目すべきことに、ＢＭＰ９は、ＡＬＫ１のリガンドである。ＴＧＦ－β受容体複合体を形成するＩ型膜糖タンパク質であるエンドグリンは、ＡＬＫ１のＧＤＦ２／ＢＭＰ－９結合のための補助受容体である。したがって、ある特定の開示される抗体の、ＢＭＰ９シグナル伝達を遮断することなくＡＬＫ１に結合する能力は独特のものである。一部の実施形態では、本開示の抗体は、ＡＬＫ１に結合し、ＢＭＰ９シグナル伝達を遮断しない。

【0087】

ある特定の開示される抗体の別の特色は、ＡＬＫ５に対する交差反応性をほとんどまたは全く伴わずに、ＡＬＫ１に結合する能力である。ＡＬＫ５は、ＡＬＫ１と同様にＴＧＦ－β受容体であり、これらの受容体はどちらも同様の構造および配列を共有する。したがって、ＡＬＫ５に対する交差反応性を伴わないＡＬＫ１への選択的結合は、抗体のオフターゲット作用の可能性を最小限にするので、本開示の抗体の望ましい特色である。一部の実施形態では、本開示の抗体は、ＡＬＫ５には結合しない、またはそれと交差反応しない。ＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３もＢＶＯ－Ａ－９Ｅ７－Ａ１０もＡＬＫ５には結合しない。

【0088】

本明細書に開示される抗体のいずれも、ＡＬＫ１に関連する疾患および障害、例えばアテローム性動脈硬化症を治療および／または予防するために使用することができる。最適な用量および投与経路は、例えば、投与経路および剤形、対象の年齢および体重、ならびに／または、疾患の型および重症度を含めた対象の状態に基づいて変動し得、当業者が決定することができる。以下により詳細に考察する通り、本抗体は、任意の意図された投与経路によって対象に投与するために適した医薬組成物に製剤化することができる。

【0089】

ＩＶ．医薬組成物
アテローム性動脈硬化症を含めた、ＡＬＫ１に関連する疾患および障害の治療または予防における使用のための医薬組成物が提供される。医薬組成物は、本明細書に記載の抗ＡＬＫ１抗体を活性成分として含む。

【0090】

本開示の抗ＡＬＫ１抗体の医薬組成物は、標準的な方法に従って、製剤として調製することができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｍａｒｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＵＳＡを参照されたい）。医薬組成物は、一般に、抗体に加えて、担体および／または添加剤を含む。例えば、一部の実施形態では、医薬組成物は、１つまたは複数の界面活性物質（例えば、ＰＥＧおよびＴｗｅｅｎ）、賦形剤、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸）、着色料、香味剤、保存剤、安定剤、緩衝剤（例えば、リン酸、クエン酸、および他の有機酸）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、懸濁化剤、等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｚｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯正剤、軽質無水ケイ酸、ラクトース、結晶セルロース、マンニトール、デンプン、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアセタルジエチルアミノアセテート、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、中鎖脂肪酸トリグリセリド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、スクロース、カルボキシメチルセルロース、トウモロコシデンプン、および無機塩を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、１つまたは複数の他の低分子量ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、および免疫グロブリンなどのタンパク質、ならびにグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、およびリシンなどのアミノ酸を含む。

【0091】

抗ＡＬＫ１抗体は、注射用の水溶液として調製することができ、その場合、抗ＡＬＫ１抗体を、例えば生理食塩水、デキストロース、または他の賦形剤またはトニファイヤー（ｔｏｎｉｆｉｅｒ）（すなわち、等張化剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｇｅｎｔ））を含有する等張性溶液に溶解させることができる。トニファイヤーとしては、例えば、Ｄ－ソルビトール、Ｄ－マンノース、Ｄ－マンニトール、および塩化ナトリウムを挙げることができる。さらに、適当な可溶化剤、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコールおよびＰＥＧ）、ならびに非イオン性界面活性剤（ポリソルベート８０およびＨＣＯ－５０）を同時に使用することができる。

【0092】

本開示の医薬組成物は、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、筋肉内投与、または経口投与を含めた任意の適切な投与経路用に製剤化することができる。典型的な実施形態では、抗ＡＬＫ１抗体を、例えば、液剤、懸濁剤、乳剤、リポソーム製剤など、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、または筋肉内投与用に製剤化する。より詳細には、本開示の抗ＡＬＫ１抗体を静脈内投与、皮下投与、または筋肉内投与用に製剤化することができる。

【0093】

種々の剤形および投与経路のための薬学的に許容できる担体は当技術分野で公知である。例えば、液体調製物のための溶媒、可溶化剤、懸濁化剤、等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｇｅｎｔ）、緩衝液、および緩和剤が公知である。一部の実施形態では、医薬組成物は、１つまたは複数の追加的な構成成分、例えば、１つまたは複数の保存剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤／香味剤、吸着剤、湿潤剤などを含む。

【0094】

本開示は、対象におけるＡＬＫ１に関連する疾患および障害、例えばアテローム性動脈硬化症の治療または予防における使用のための医薬組成物であって、本明細書に開示される抗ＡＬＫ１抗体を活性成分として含む、医薬組成物を提供する。

【0095】

本明細書に開示される医薬組成物のいずれも、ＡＬＫ１に関連する疾患および障害、例えばアテローム性動脈硬化症を治療および／または予防するために使用することができる。最適な用量および投与経路は変動し得る。

【0096】

Ｖ．治療および予防
本開示は、ＡＬＫ１に関連する疾患および障害、例えばアテローム性動脈硬化症を治療または予防する方法を提供する。さらに、本開示は、ＡＬＫ１と低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の相互作用を遮断する方法を提供する。さらに、本開示は、ＡＬＫ１のＬＤＬへの結合を遮断する方法を提供する。さらに、本開示は、ＡＬＫ１に関連する疾患および障害、例えばアテローム性動脈硬化症を治療または予防するための、本開示の抗ＡＬＫ１抗体の使用を提供する。さらに、本開示は、ＡＬＫ１と低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の相互作用を遮断するための、本開示の抗ＡＬＫ１抗体の使用を提供する。さらに、本開示は、ＡＬＫ１のＬＤＬへの結合を遮断するための、本開示の抗ＡＬＫ１抗体の使用を提供する。

【0097】

上記の通り、ＡＬＫ１は、血管におけるＬＤＬコレステロールの蓄積において重要な役割を果たし得る。本開示の抗体（例えば、ＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７－Ａ１０およびＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３）は、血液から組織内へのＬＤＬの輸送（ＬＤＬトランスサイトーシスとも称される）を容易にする血管壁における
「ＬＤＬ－ＡＬＫ１経路」を妨害することにより、ＬＤＬ集積を遮断することができる。これが今度は、心疾患に至る動脈の詰まりの予防または緩徐化を補助する。本明細書に開示されるコンフォメーション選択的ＡＬＫ１結合性モノクローナル抗体（例えば、ＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７－Ａ１０およびＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３）は、内皮へのＬＤＬトランスサイトーシスを効率的に遮断するが、ＢＭＰ９シグナル伝達は遮断せず、その結果、粥腫形成の劇的な減少がもたらされる。したがって、本開示の抗体は、アテローム性動脈硬化症の治療および／または予防のために特によく適するものである。

【0098】

アテローム性動脈硬化症は、動脈壁への脂肪、コレステロールおよび他の物質の蓄積である。この蓄積は粥腫と称される。粥腫は、動脈を狭め、それにより血流が遮断されるおそれがある。粥腫はまた、破裂し、血餅をもたらすおそれがある。アテローム性動脈硬化症は、心臓の問題であるとみなされることも多いが、身体のあらゆる場所の動脈にも影響を及ぼし得る。軽度のアテローム性動脈硬化症では通常いかなる症状もないが、中等度～重度のアテローム性動脈硬化症では、粥腫形成の場所に応じて、胸痛または胸部圧迫感（狭心症）、高血圧、および腎不全が引き起こされるおそれがある。アテローム性動脈硬化症はまた、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、脳卒中、末梢動脈疾患、および心不全などの共存症の発症ももたらし得る。

【0099】

一般に、本明細書に開示される治療は、対象に治療有効量の抗ＡＬＫ１抗体（例えば、ＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７－Ａ１０またはＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３）を投与することを含む。特に、本開示は、アテローム性動脈硬化症を治療または予防する方法であって、アテローム性動脈硬化症を有する対象に、本明細書に開示される抗ＡＬＫ１抗体（例えば、ＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７－Ａ１０またはＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３）を投与するステップを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、抗体により、粥腫がまだ発生していない対象におけるアテローム性動脈硬化症を発症するリスクを低減させることができる。一部の実施形態では、抗体により、さらなる粥腫形成を阻害するまたは低減させることができる。一部の実施形態では、抗体により、既存の粥腫を破壊するまたは既存の粥腫のサイズもしくは数を低減させることができる。

【0100】

有効量の開示される抗ＡＬＫ１抗体を、１回または複数回の投与、適用または投薬量で投与することができる。そのような送達は、個々の投薬量単位を使用する期間、治療剤のバイオアベイラビリティ、投与経路などを含めた多数の変数に依存する。しかし、任意の特定の対象に対する本開示の抗ＡＬＫ１抗体の特定の用量レベルは、使用される特定の化合物の活性、対象の年齢、体重、全体的な健康、性別、および食事、投与時間、排出速度、薬物の組合せ、ならびに処置される特定の障害の重症度および投与形態を含めた種々の因子に依存し得ることが理解される。治療および予防投薬量は、一般に、安全性および有効性が最適化されるように用量設定される。投薬量は、医師が決定し、必要に応じて、観察された治療効果に適するように調整することができる。一般には、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏ試験からの投薬量と効果の関連性から、患者への投与の適正な用量に関する有用な手引きを最初にもたらすことができる。一般に、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて有効であることが見いだされた濃度と釣り合う血清中レベルを実現するために有効な量の化合物を投与することが望まれる。

【0101】

抗ＡＬＫ１抗体（例えば、ＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７－Ａ１０またはＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３）の投与は、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、皮内投与、または腹腔内投与であり得る。一般に、最も一般的な投与経路は抗体の注射または注入である。投与は、単回投薬、またはある治療期間にわたる反復投薬を含み得る。

【0102】

本開示の方法および使用の一部の実施形態では、抗ＡＬＫ１抗体を、毎日、２日に１回、１週間に２回、１週間に３回、１週間に４回、１週間に５回、１週間に６回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、１１週間に１回、１２週間に１回、１年に２回、１年に１回、および／または必要に応じて投与する。

【0103】

本開示の方法および使用の一部の実施形態では、治療または予防の持続時間は、約１日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２４週間、約３０週間、約３６週間、約４０週間、約４８週間、約５０週間、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、または必要に応じてである。

【0104】

本開示は、ＡＬＫ１に関連する疾患および障害、例えばアテローム性動脈硬化症の治療または予防のための医薬の製造における抗ＡＬＫ１抗体の使用を提供する。

【実施例】

【0105】

以下に考察する実施例は、本発明を純粋に例示することを意図したものであり、本発明をいかようにも限定するものと解釈されるべきではない。実施例は、以下の実験が実施した全ての実験または唯一の実験であることを表すものではない。

【0106】

（実施例１）
ＡＬＫ１結合性抗体の単離
ＯｍｎｉＲａｔを、遺伝子銃（Ｇｅｎｅ Ｇｕｎ）法を使用して免疫化した、すなわち、金粒子にＤＮＡをローディングし、Ｇｅｎｅ Ｇｕｎ（Ｈｅｌｉｏｓ）を使用して動物の皮膚内に投与した。言い換えると、免疫化のために、ＡＬＫ１をトランスフェクトした／発現する細胞を注射したのではなく、プラスミドＤＮＡを直接使用し、それによりＯｍｎｉラットの皮膚細胞／ＤＣにおけるＡＬＫ１の発現を誘導した。

【0107】

免疫化した動物のポリクローナル血清を活性について試験した。目的のＢ細胞を単離し、ハイブリドーマを作出した。ハイブリドーマを単離し、サブクローニングした後、上清を使用して、モノクローナル抗体を再評価した。

【0108】

（実施例２）
ＡＬＫ１結合評価
種々の単離された抗体を、マウス（ｍｏｕｓｅ）（マウス（ｍｕｒｉｎｅ））、ヒト、およびカニクイサル由来のＡＬＫ１に結合する能力について評価した。フローサイトメトリーを使用して、特定の細胞結合型ＡＬＫ１分子に結合する一次抗ＡＬＫ１抗体を検出する蛍光標識した二次抗体によって生じる蛍光強度を測定した。より正確に述べると、一次抗体を含有するハイブリドーマ上清を、ヒト、カニクイサルおよびマウスＡＬＫ１を発現する一過性にトランスフェクトされた細胞への結合についてフローサイトメトリーによって試験した。ＰＥ標識したヤギ抗ラット二次抗体を使用することによってシグナルを生じさせた。陰性対照として、トランスフェクトしていない細胞の上清を試験することに加えて、ヒト、カニクイサルおよびマウスのＡＬＫ１をトランスフェクトした細胞を二次抗体のみ（上清を伴わない）と共にインキュベートした。例示的な結果が図（図１）に示されている。

【0109】

図（図１）に見ることができる通り、ＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７－Ａ１０およびＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３は、ヒトおよびカニクイザルＡＬＫ１に対しては強力な結合を示したが、マウスオルソログに対する交差反応性は低かった。

【0110】

マウスＡＬＫ１の発現はカニクイザルＡＬＫおよびヒトＡＬＫと比較してはるかに弱いと思われることに留意するべきである。さらに、これは抗タグ抗体のＮ末端タグへの結合によって行ったので、多くの場合、得られたシグナルは必ずしも、ある特定のタンパク質の「実際の」細胞表面発現レベルを反映するものではないことが見いだされた。多くの場合、「実際の」発現は、タグから得られたシグナルによって示されるものよりも高く、これは、おそらく、タグ配列に抗タグ抗体が完全に近づけず、その結果、シグナルが低くなったことに起因する。例えば、この現象は、使用されるタグの型（ｍｙｃ、ＦＬＡＧまたはＨｉｓなど）にさえ左右され、同じ抗原を用いても、一部では他のものよりも低い／高い発現レベルが示唆されることが分かっており、これは、特異的な（抗標的）抗体を用いた並行試験で確認することができない。図（図１）に示されている通り、特異的な抗ＡＬＫ１抗体では、抗タグ抗体を用いて生成される発現対照よりもはるかに高いシグナルがもたらされる。

【0111】

とはいえ、マウスＡＬＫ１に関する低シグナルから、問題の抗体が非常に低い抗マウス交差反応性しか有さないと推定することはできない。低シグナルは、はるかに低い発現対照によって示される、マウスＡＬＫ１の細胞表面発現がカニクイザルおよびヒトと比較してはるかに低いことによってもたらされる可能性がある。

【0112】

いずれにしても、本開示の抗体、特にＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７－Ａ１０およびＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３は、複数の哺乳動物ＡＬＫ１オルソログに対して強力かつ特異的な結合親和性を示した。

【0113】

（実施例３）
ＡＬＫ５結合評価
フローサイトメトリーを使用して、特定の細胞結合型ＡＬＫ５分子に結合する抗ＡＬＫ１一次抗体を検出する蛍光標識した二次抗体から生じる蛍光強度を測定した。より正確に述べると、一次抗体を含有するハイブリドーマ上清を、ヒトおよびマウスＡＬＫ５を発現する一過性にトランスフェクトされた細胞への結合についてフローサイトメトリーによって試験した。ＰＥ標識したヤギ抗ラット二次抗体を使用することによってシグナルを生じさせた。陰性対照として、トランスフェクトしていない細胞の上清を試験することに加えて、ヒトおよびマウスのＡＬＫ５をトランスフェクトした細胞を二次抗体のみ（上清を伴わない）と共にインキュベートした。

【0114】

（実施例４）
ＢＭＰ９シグナル伝達評価
８９種の抗ＡＬＫ１抗体を評価して、抗体がＢＭＰ９結合およびＳＭＡＤ１／５シグナル伝達を阻害するかどうかを決定した。評価した８９種の抗体のうち、合計１２種がＢＭＰ９シグナル伝達を遮断しなかった。

【0115】

【表4】

【0116】

上記の表に、上記のアッセイによって評価した抗体を示す。これらの抗体のうち、ＢＶＮ－Ａ－２Ｂ２、ＢＶＮ－Ａ－２Ｃ７、ＢＶＮ－Ａ－２Ｄ１０、ＢＶＮ－Ｂ－２Ｆ１１、ＢＶＮ－Ｂ－５Ｂ５、ＢＶＯ－Ａ－１Ｄ５、ＢＶＯ－Ａ－９Ｃ４、ＢＶＯ－Ａ－９Ｃ５、ＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７、ＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７、ＢＶＯ－Ｂ－５Ｄ２、およびＢＷＧ－３Ｂ３はＢＭＰ９シグナル伝達を遮断しなかった。

【0117】

（実施例５）
アテローム性動脈硬化症実験
ＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７－Ａ１０は、培養したヒトおよびマウス内皮細胞において、ＬＤＬ取り込みを遮断するが、ＢＭＰ９シグナル伝達は遮断しないことが示されている。さらに、予備実験において、マウスを抗ＡＬＫ抗体で処置して一晩置くことにより、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて血管壁へのＬＤＬ取り込みが低減した。ＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３でも同様の結果がもたらされることが予想される。

【0118】

以下の、予言的試験の目的は、マウスモデルにおいてＡＬＫ１抗体を用いた長期にわたる処置によりアテローム性動脈硬化症が低減するかどうかを調査することである。

【0119】

実験計画：
ＬＤＬ受容体を欠く８～１０週齢のマウスに、コレステロールが豊富な高脂肪食（ＨＦＤ）を１４週間にわたって給餌して、実験的アテローム性動脈硬化症を誘導する。

【0120】

マウスを対照または抗ＡＬＫ抗体（例えば、ＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７－Ａ１０またはＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３；マウス当たり４００～５００マイクログラム×１週間に３回）を用いて１４週間の持続時間にわたって処置する。

【0121】

１４週間の時点で、以下の分析を実施する：
１．ＦＡＣによる血漿中脂質（コレステロール、ＴＧ）および炎症細胞集団
２．抗体レベルに関して血漿採取（ＰＫ評価）
３．３カ所の解剖学的位置におけるアテローム性動脈硬化症の程度の評価：１．大動脈（中性脂質集積の正面イメージング）、２．大動脈根の横断面、および３．腕頭動脈
４．ＡｐｏＢ １００免疫化学、マクロファージ（Ｆ４／８０またはＣＤ６８染色）、病変壊死および線維性被膜（Ｈ＆Ｅ切片から）を含めた病変組成の分析。

【0122】

結果から、本開示の抗体（例えば、ＢＶＯ－Ａ－９Ｆ７－Ａ１０およびＢＶＯ－Ｂ－１Ｈ７－Ｅ３）がアテローム性動脈硬化症の治療または予防に適したものであることが示される。

【0123】

本明細書で言及されている特許および刊行物は全て、本開示が関する分野の当業者のレベルを示すものである。特許および刊行物は全て、個々の刊行物について具体的にかつ個別に参照により組み込まれることが示されたものと同じく、参照により本明細書に組み込まれる。

【0124】

さらに、本開示が、目的を遂行し、言及された目標および利点ならびにそれに固有のものを得るために十分に適合されていることが当業者には容易に理解される。当業者は改変および他の使用を想起されよう。これらの改変は、本開示非限定的な実施形態が記載されている、本開示および特許請求の範囲によって定義される主旨に包含される。

【0125】

本開示は、主旨またはそれに必須の特徴から逸脱することなく、他の特定の形態に具体化することができる。したがって、前述の実施形態は、あらゆる点で、本開示を限定するものではなく、例示的なものであるとみなされるべきである。したがって、本開示の範囲は、前述の説明によってではなく、添付の特許請求の範囲によって示され、したがって、特許請求の範囲と同等の意味および範囲の中に入る変化は全て、その範囲内に包含されるものとする。

【図1】

【配列表】

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【国際調査報告】