【図1】ヒト神経癌幹細胞（ｈｕｍａｎ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ：以下同じ）Ｘ０１ＧＢＳにおけるネスチン、ビメンチン、ＣＤ１３３、及びβＩＩＩチューブリン（Ｔｕｊ１）の発現を細胞免疫染色により確認した結果を示す。図中の各写真において、左上はＤＡＰＩを示す青色色素を示し、右上はそれぞれネスチン、ビメンチン、ＣＤ１３３、及びβＩＩＩチューブリンの存在を示す緑色色素を示す。また、左下は顕微鏡観察写真を示し、右下は他の３枚の写真の全てを合成した写真を示す。

【図2】ヒト神経癌幹細胞Ｘ０１ＧＢＳ、大腸癌細胞（Ｃａｃｏ−２）及びヒトｉＰＳ細胞におけるＣＤ１３３の発現をウエスタンブロッティングにより確認した結果を示す。「１２０ｋＤａ ＣＤ１３３」はＣＤ１３３を示し、「４２ｋＤａ β−ａｃｔｉｎ」はコントロールとしてのβ−アクチンを示す。

【図3】ヒト神経癌幹細胞Ｘ０１ＧＢＳにおけるＣＤ１３３（＋）細胞含量をフローサイトメトリにより測定した結果を示す。左図はフローサイトメトリに流す全細胞集団を示し、同図において、横軸（ＦＳ Ｌｉｎ）は、前方散乱光（Ｆｏｒｗａｒｄ Ｓｃａｔｔｅｒ：ＦＳ）で細胞の大きさを反映し、縦軸（ＳＳ Ｌｉｎ）は側方散乱光（Ｓｉｄｅ Ｓｃａｔｔｅｒ：ＳＳ）で細胞の形態や核、顆粒などの細胞内部構造を反映する。また、左図中の数値（％）は、Ｒ１で示す楕円中細胞集団に含まれる細胞数の全細胞数に対する割合を示す。また、右図はＲ１細胞集団にＣＤ１３３（＋）細胞含量を示す。同図において、横軸（ＰＥ Ｌｏｇ）はＣＤ１３３（＋）細胞含量を示し、縦軸（ＦＩＴＣ Ｌｏｇ）は、特に意味なし。右図中の数値（ＣＤ１３３（＋） ２０．１８％）は、Ｒ１細胞集団にＣＤ１３３（＋）細胞の割合を示す。

【図4】ＣＤ１３３陰性の細胞である正常細胞のＷＩ−３８（線維芽細胞）、ＣＤ１３３発現の陽性細胞株であるＣａｃｏ−２（大腸がん）、Ｘ０１ＧＢＳ、Ｘ０１ＧＢＤにおけるＣＤ１３３の発現をフローサイトメトリで測定した結果を示す。上段は、陰性コントロールとしてＩｇＧ抗体を用いた結果を示し、下段は抗ＣＤ１３３抗体を用いた結果を示す。縦軸（Ｓｉｄｅ Ｓｃａｔｔｅｒ）は、側方散乱光によるデータを示し、細胞の形態や核、顆粒などの細胞内部構造を反映するものである。図中の数値（％）は、四角で囲まれた細胞集団に含まれる細胞数の全細胞数に対する割合を示す。

【図5】ＣＤ１３３陰性の細胞である正常細胞のＷＩ−３８（線維芽細胞）、ＣＤ１３３発現の陽性細胞株であるＣａｃｏ−２（大腸がん）、Ｘ０１ＧＢＳ、Ｘ０１ＧＢＤにおけるＣＤ１３３のｍＲＮＡの発現レベルを示す。写真は、ＲＴ−ＰＣＲ法を行った後に電気泳動の結果を示し、グラフは定量的ＲＴ−ＰＣＲの結果を示す。「ＨＰＲＴ」は、コントロール遺伝子として用いたハウスキーピング遺伝子ＨＰＲＴを示す。グラフの縦軸は、ＨＰＲＴのｍＲＮＡの発現量に対するＣＤ１３３のｍＲＮＡの発現量の比を示す。

【図6】ヒト神経癌幹細胞の濃縮分画であるＸ０１ＧＢＳ細胞からセルソーターにてＣＤ１３３発現の陽性細胞と陰性細胞を分取し、それぞれの分画においてＣＤ１３３ ｍＲＮＡ発現レベルを、ＲＴ−ＰＣＲならびに定量的ＲＴ−ＰＣＲ法で調べた結果を示す。左上図は、セルソーターでの分取したそれぞれの分画を示す。「ＣＤ１３３（−）」はＣＤ１３３発現陰性細胞の分画を示し、「ＣＤ１３３（＋）」はＣＤ１３３発現陽性細胞の分画を示す。左下写真は、ＲＴ−ＰＣＲ法を行った後に電気泳動の結果を示す。右下のグラフは定量的ＲＴ−ＰＣＲの結果を示す。「ＨＰＲＴ」は、コントロール遺伝子として用いたハウスキーピング遺伝子ＨＰＲＴを示す。グラフの縦軸は、ＨＰＲＴのｍＲＮＡの発現量に対するＣＤ１３３のｍＲＮＡの発現量の比を示す。

【図7】ＣＤ１３３の各プロモーターの活性を測定するためのレポータアッセイ用アデノウイルスベクターの概略図と名称を示す。ＣＤ１３３の各プロモーターの下流にＬａｃＺを連結し、Ｅ１領域欠損する（ΔＥ１）アデノウイルスベクター（ｐＡｄＨＭ４）に組み込んだ。

【図8】ヒト神経癌幹細胞Ｘ０１ＧＢＳにおける、ＣＤ１３３の各プロモーターの活性を示す。図中の縦軸はβ−ガラクトシダーゼ活性（プロモータ活性）を示し、横軸は、ＬａｃＺの発現に使用した各プロモーターを組み込んだアデノウイルスの種類を示す。横軸において、ｐｒ１、ｐｒ２、ｐｒ３、ｐｒ４及びｐｒ５は、それぞれ順にＣＤ１３３プロモーター１、プロモーター２、プロモーター３、プロモーター４、及びプロモーター５を示す（以下の図において同じ）。

【図9】ヒト神経癌幹細胞Ｘ０１ＧＢＳ細胞における、ＣＤ１３３の各プロモーターの活性を示す。図中の縦軸はβ−ガラクトシダーゼ活性（プロモータ活性）を示し、横軸は、ＬａｃＺの発現に使用した各プロモーターを組み込んだアデノウイルスの種類を示す。

【図10】ヒト神経癌幹細胞から分化した癌細胞を濃縮した分画のＸ０１ＧＢＤ細胞における、ＣＤ１３３の各プロモーターの活性を示す。図中の縦軸はβ−ガラクトシダーゼ活性（プロモータ活性）を示し、横軸は、ＬａｃＺの発現に使用した各プロモーターを組み込んだアデノウイルスの種類を示す。

【図11】ヒト神経癌幹細胞Ｘ０１ＧＢＳにおけるＣＤ１３３の各プロモーターと対照用非特異的ＲＳＶプロモーターの活性とＣＤ１３３（＋）細胞との相関をフローサイトメトリで確認した結果を示す。図中、横軸はＬａｃＺ活性（ＣＤ１３３各プロモーター活性）を、縦軸はＰＥで標識した抗ＣＤ１３３抗体でＣＤ１３３（＋）細胞を示す。図６に示す数値（％）は、右上の領域Ｒ７内に相関する細胞の割合を示す。

【図12】ヒト神経癌幹細胞Ｘ０１ＧＢＳ細胞におけるＣＤ１３３の各プロモーター活性と対照用非特異的ＲＳＶプロモーターの活性を比較した図を示す。図中、横軸はＬａｃＺ活性（ＣＤ１３３プロモータ活性）を、縦軸は側方散乱光（Ｓｉｄｅ Ｓｃａｔｔｅｒ：ＳＳ）を示す。図１２に示す数値（％）は、四角で囲った領域に含まれるＬａｃＺ発現細胞の全細胞数に対する割合を示す。

【図13】ヒト神経癌幹細胞Ｘ０１ＧＢＳ細胞、及びヒト神経癌幹細胞から分化した癌細胞を濃縮した分画のＸ０１ＧＢＤ細胞におけるＣＤ１３３の各プロモーター活性を比較した図を示す。図中、横軸はＬａｃＺ活性（ＣＤ１３３プロモータ活性）を、縦軸は側方散乱光（Ｓｉｄｅ Ｓｃａｔｔｅｒ：ＳＳ）を示す。図１３に示す数値（％）は、四角で囲った領域に含まれるＬａｃＺ発現細胞の全細胞数に対する割合を示す。

【図14】癌幹細胞に特異的増殖型アデノウイルスベクター（ＣＤ１３３反応性ｍ−ＣＲＡ「Ａｄ．ｈＣＤ１３３ｐｒ５−ｍ−ＣＲＡ」で表記、以下においても同じ）の構造を示す。図中、ＣＤ１３３ｐｒ１〜５は、ＣＤ１３３プロモーター１〜５のいずれかを意味する。

【図15】ヒト神経癌幹細胞Ｘ０１ＧＢＳ細胞におけるアデノウイルスの導入効率を示す。非増殖型アデノウイルスベクター（Ａｄ．ＣＡ−ＥＧＦＰ）をＸ０１ＧＢＳ細胞へ感染してから２４時間後の写真で示す。図中、上から順に「ＥＧＦＰ」はＥＧＦＰの発現を検出した写真を、「Ｐｈａｓｅ」は顕微鏡写真を、「Ｍｅｒｇｅ」は先の２種類の写真を合成した写真でＥＧＦＰの細胞内発現を示す（図１６においても同じ）。また、図の上部の数値は観察した倍率を示す。

【図16】ヒト神経癌幹細胞Ｘ０１ＧＢＳ細胞におけるｈＣＤ１３３ｐｒ５−ｍ−ＣＲＡの細胞殺傷効果を細胞形態で示す。Ａｄ．ｈＣＤ１３３ｐｒ５−ｍ−ＣＲＡをＭＯＩ １でＸ０１ＧＢＳに感染させ、感染から１，２，３，４及び５日後に２００倍の顕微鏡で観察した結果を示す。図の上部の数値（Ｄａｙ）は感染からの経過日数を示す。図の下部の「ＣＰＥ」は細胞変性効果（ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ ｅｆｆｅｃｔ）を示し、「Ｓｐｈｅｒｅ」は細胞塊形成の程度を意味する。

【図17】ヒト神経癌幹細胞Ｘ０１ＧＢＳ細胞におけるＡｄ．ｈＣＤ１３３ｐｒ５−ｍ−ＣＲＡの細胞殺傷効果を生存細胞数で示すグラフである。Ａｄ．ｈＣＤ１３３ｐｒ５−ｍ−ＣＲＡ、Ａｄ．ＣＡ−ＥＧＦＰ及びＡｄ．ＲＳＶ−ｄＥ１．３をＭＯＩ １、３、及び１０でヒト神経癌幹細胞Ｘ０１ＧＢＳに感染後、５日目に生存細胞数を測定した結果を示す。図中縦軸は非処理群と比較した場合の生細胞数の割合（％）を示し、横軸はウイルスの感染条件（ＭＯＩ）を示す。

【図18】ヒト神経癌幹細胞Ｘ０１ＧＢＳ細胞、及びヒト神経癌幹細胞から分化した癌細胞を濃縮した分画のＸ０１ＧＢＤにおけるＡｄ．ｈＣＤ１３３ｐｒ５−ｍ−ＣＲＡの細胞殺傷効果を生存細胞数で示すグラフである。図中縦軸は非処理群と比較した場合の生細胞数の割合（％）を示し、横軸はウイルスの感染条件（ＭＯＩ）を示す。

【図19】１×１０^６と１×１０^５のＸ０１ＧＢＳ細胞をＮＯＤ／ＳＣＩＤ免疫不全マウスの４ヶ所に、１×１０^６の分化Ｘ０１ＧＢＤ細胞をＮＯＤ／ＳＣＩＤ免疫不全マウスの３ヶ所に皮下移植し、１０週間後、肉眼的に認識できる腫瘍結節の形成の割合を評価した結果を示す。グラフの縦軸は腫瘍体積（ｍｍ^３）を示し、横軸は移植した細胞の種類及び数を示す。３種類の写真は、いずれも１×１０^６細胞（右）と１×１０^５細胞（左）のＸ０１ＧＢＳ細胞を移植したＮＯＤ／ＳＣＩＤ免疫不全マウスの結果を示す。下の写真は各マウスから採取された腫瘍塊である。