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特許 6013196出願番号 特願 2012-556130
多能性幹細胞から誘導した細胞を精製するための方法
出願人 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド（識別番号 509087759）
2026年 特許公開件数ランキング 409位 59件（※）
2026年 特許取得件数ランキング 653位 26件（※）
公報発行日 2016年10月25
公報URL https://ipforce.jp/patent-jp-B9-6013196 ログイン済みの方はこのURLへ
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※ 共同出願を含む
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技術分野
本願は、２０１０年３月１日出願の米国特許仮出願第６１／３０９，１９３号の優先権を主張する。 （発明の分野）
本発明は、多能性幹細胞を分化させる方法を目的とする。具体的には、本発明は、膵内分泌系に特徴的なマーカーを発現している細胞へと分化させた細胞を、特有の表面マーカーを利用して性質決定する方法を提供する。本発明は、膵内分泌系に特徴的なマーカーを発現している細胞を、濃縮又は選別する方法も提供する。本発明は、本発明の方法により形成される膵内分泌系に特徴的なマーカーを発現している細胞集団に混入する恐れのある細胞を枯渇させることで、移植後にインビボで形成される腫瘍の発生率を減少させる方法も提供する。
発明が解決しようとする課題[発明の詳細な説明]から抜粋
多能性幹細胞から得られた細胞により発現されているマーカーを同定することで、これらの細胞に対する理解を深めることができ、インビボ及びインビトロでのそれらの同定の一助となる場合があり、並びに研究及び使用に際しては、インビトロにおいて、それらの発現が陽性である細胞を濃縮することが可能になり得る。したがって、多能性幹細胞から誘導された細胞、具体的には、膵内分泌系に特徴的なマーカーを発現している細胞を、単離及び特徴付けするのに有用なツールが未だに必要とされている。課題を解決するための手段[発明の詳細な説明]から抜粋
この発明についての権利主張の範囲[特許請求の範囲]
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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋
【図1】細胞集団ＣＤ５６+ＣＤ１３-、ＣＤ５６-ＣＤ１３-及びＣＤ５６-ＣＤ１３+での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量（Fold expression）は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図1-1】細胞集団ＣＤ５６＋ＣＤ１３−、ＣＤ５６−ＣＤ１３−及びＣＤ５６−ＣＤ１３＋での、ＮＫＸ２．２（パネルｅ）及びＰＡＸ４（パネルｆ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量（Fold expression）は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図2】ＣＤ１３３に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図2-1】ＣＤ１３３に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＫＸ２．２（パネルｅ）及びＰＡＸ４（パネルｆ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図3】ＣＤ４９ｃに対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図4】ＣＤ５６及びＣＤ１５に対する抗体を用いて選別した細胞集団における、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図4-1】ＣＤ５６及びＣＤ１５に対する抗体を用いて選別した細胞集団における、インスリン（パネルｅ）及びグルカゴン（パネルｆ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図5】ＣＤ１５に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図5-1】ＣＤ１５に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＫＸ２．２（パネルｅ）、ＰＡＸ−４（パネルｆ）、グルカゴン（パネルｇ）及びインスリン（パネルｈ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図6】ＣＤ５６及びＣＤ５７に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図6-1】ＣＤ５６及びＣＤ５７に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＫＸ２．２（パネルｅ）、インスリン（パネルｆ）、及びグルカゴン（パネルｇ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図7】ＣＤ５６及びＣＤ１８４に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＺＩＣ１（パネルａ）、アルブミン（パネルｂ）、ＣＤＸ２（パネルｃ）、ＮＧＮ３（パネルｄ）、ＰＡＸ４（パネルｅ）、及びＮＥＵＲＯＤ（パネルｆ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図7-1】ＣＤ５６及びＣＤ１８４に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＫＸ６．１（パネルｇ）、ＰＴＦ１ α（パネルｈ）、及びＰＤＸ１（パネルｉ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図8】ＣＤ９８に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、インスリン（パネルｃ）、及びグルカゴン（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図9】ＣＤ４７に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）、の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図9-1】ＣＤ４７に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＫＸ２．２（パネルｅ）及びＰＡＸ４（パネルｆ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図10】ＣＤ４７に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＰＤＸ−１（パネルａ）、ＮＫＸ６．１（パネルｂ）、ＮＫＸ２．２（パネルｃ）、及びＰＡＸ−４（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図10-1】ＣＤ４７に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＰＴＦ１ａ（パネルｅ）、ＮＧＮ３（パネルｆ）、インスリン（パネルｇ）及びグルカゴン（パネルｈ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図11】ＬＩＦ受容体に対する抗体を用いて選別した細胞集団における、ＨＮＦ４ α（パネルａ）、及びＬＩＦ受容体（パネルｂ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、実施例１に概略される分化プロトコルの、ステージＩＩの２日目の選別されていない細胞と比較して示す。
【図12】ＳＳＥＡ４を発現している細胞を磁気ビーズを用い枯渇させた細胞集団での、ＯＣＴ４（パネルａ）、ＮＡＮＯＧ（パネルｂ）、ＳＯＸ２（パネルｃ）、及びグースコイド（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図13】ＳＳＥＡ４を発現している細胞をＦＡＣＳを用い枯渇させた細胞集団における、ＯＣＴ４（パネルａ）、ＮＡＮＯＧ（パネルｂ）、ＳＯＸ２（パネルｃ）、及びグースコイド（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
選択図 図1出願人が指定した本件の代表的な図
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