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公報発行日 2018年8月29
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【図1A】IH−3(図1A)、IH−1(図1B)、IH−6(図1C)、及びmTeSR(登録商標)1(図1D)における3継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を示す。
【図1B】IH−3(図1A)、IH−1(図1B)、IH−6(図1C)、及びmTeSR(登録商標)1(図1D)における3継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を示す。
【図1C】IH−3(図1A)、IH−1(図1B)、IH−6(図1C)、及びmTeSR(登録商標)1(図1D)における3継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を示す。
【図1D】IH−3(図1A)、IH−1(図1B)、IH−6(図1C)、及びmTeSR(登録商標)1(図1D)における3継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を示す。
【図2A】H−3(図2A)、IH−1(図2B)、及びmTeSR(登録商標)1(図2C)培地における10継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を示す。
【図2B】H−3(図2A)、IH−1(図2B)、及びmTeSR(登録商標)1(図2C)培地における10継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を示す。
【図2C】H−3(図2A)、IH−1(図2B)、及びmTeSR(登録商標)1(図2C)培地における10継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を示す。
【図3A】IH−3(図3A)、IH−1(図3B)、及びmTeSR(登録商標)1(図3C)培地における18継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を示す。
【図3B】IH−3(図3A)、IH−1(図3B)、及びmTeSR(登録商標)1(図3C)培地における18継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を示す。
【図3C】IH−3(図3A)、IH−1(図3B)、及びmTeSR(登録商標)1(図3C)培地における18継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を示す。
【図4A】実施例1にて記述した培地中で培養し、1〜5継代(P1〜P5)にて回収したヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。ZFP42(図4A)、SOX2(図4B)、POU5F1(OCT4)(図4C)、Nanog(図4D)、FOXA2(図4E)、及びAFP(図4F)。
【図4B】実施例1にて記述した培地中で培養し、1〜5継代(P1〜P5)にて回収したヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。ZFP42(図4A)、SOX2(図4B)、POU5F1(OCT4)(図4C)、Nanog(図4D)、FOXA2(図4E)、及びAFP(図4F)。
【図4C】実施例1にて記述した培地中で培養し、1〜5継代(P1〜P5)にて回収したヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。ZFP42(図4A)、SOX2(図4B)、POU5F1(OCT4)(図4C)、Nanog(図4D)、FOXA2(図4E)、及びAFP(図4F)。
【図4D】実施例1にて記述した培地中で培養し、1〜5継代(P1〜P5)にて回収したヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。ZFP42(図4A)、SOX2(図4B)、POU5F1(OCT4)(図4C)、Nanog(図4D)、FOXA2(図4E)、及びAFP(図4F)。
【図4E】実施例1にて記述した培地中で培養し、1〜5継代(P1〜P5)にて回収したヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。ZFP42(図4A)、SOX2(図4B)、POU5F1(OCT4)(図4C)、Nanog(図4D)、FOXA2(図4E)、及びAFP(図4F)。
【図4F】実施例1にて記述した培地中で培養し、1〜5継代(P1〜P5)にて回収したヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。ZFP42(図4A)、SOX2(図4B)、POU5F1(OCT4)(図4C)、Nanog(図4D)、FOXA2(図4E)、及びAFP(図4F)。
【図5A】実施例1にて記述した培地中で培養し、10継代にて回収したヒト胚性幹細胞株H1中の、Nanog、POU5F1(OCT4)、SOX2、及びZFP42(図5A)、並びにAFP及びFOXA2(図5B)の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。
【図5B】実施例1にて記述した培地中で培養し、10継代にて回収したヒト胚性幹細胞株H1中の、Nanog、POU5F1(OCT4)、SOX2、及びZFP42(図5A)、並びにAFP及びFOXA2(図5B)の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。
【図6A】実施例1にて記述した培地中で培養し、18継代にて回収したヒト胚幹細胞株H1中の、ZFP42、SOX2、POU5F1(OCT4)、及びNanog(図6A)、並びにAFP及びFOXA2(図6B)の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。
【図6B】実施例1にて記述した培地中で培養し、18継代にて回収したヒト胚幹細胞株H1中の、ZFP42、SOX2、POU5F1(OCT4)、及びNanog(図6A)、並びにAFP及びFOXA2(図6B)の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。
【図7A】実施例1にて記述したIH−3培地中で、18継代培養した細胞内の以下のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。イソタイプ対照(図7)、KI−67(図7B)、OCT4(図7C)、SOX17(図7D)、FOXA2(図7E)、及びSOX2(図7F)。それぞれのマーカーに対するパーセント発現が、それぞれのヒストグラム上に示される。
【図7B】実施例1にて記述したIH−3培地中で、18継代培養した細胞内の以下のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。イソタイプ対照(図7)、KI−67(図7B)、OCT4(図7C)、SOX17(図7D)、FOXA2(図7E)、及びSOX2(図7F)。それぞれのマーカーに対するパーセント発現が、それぞれのヒストグラム上に示される。
【図7C】実施例1にて記述したIH−3培地中で、18継代培養した細胞内の以下のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。イソタイプ対照(図7)、KI−67(図7B)、OCT4(図7C)、SOX17(図7D)、FOXA2(図7E)、及びSOX2(図7F)。それぞれのマーカーに対するパーセント発現が、それぞれのヒストグラム上に示される。
【図7D】実施例1にて記述したIH−3培地中で、18継代培養した細胞内の以下のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。イソタイプ対照(図7)、KI−67(図7B)、OCT4(図7C)、SOX17(図7D)、FOXA2(図7E)、及びSOX2(図7F)。それぞれのマーカーに対するパーセント発現が、それぞれのヒストグラム上に示される。
【図7E】実施例1にて記述したIH−3培地中で、18継代培養した細胞内の以下のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。イソタイプ対照(図7)、KI−67(図7B)、OCT4(図7C)、SOX17(図7D)、FOXA2(図7E)、及びSOX2(図7F)。それぞれのマーカーに対するパーセント発現が、それぞれのヒストグラム上に示される。
【図7F】実施例1にて記述したIH−3培地中で、18継代培養した細胞内の以下のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。イソタイプ対照(図7)、KI−67(図7B)、OCT4(図7C)、SOX17(図7D)、FOXA2(図7E)、及びSOX2(図7F)。それぞれのマーカーに対するパーセント発現が、それぞれのヒストグラム上に示される。
【図8A】実施例1にて記述したIH−3培地中、18継代培養し、OCT−4、FOXA2、SOX2に対して免疫染色し、DAPIを用いてDNAを蛍光標識する、細胞の画像を示す。OCT4(図8A)、FOXA2(図8B)、及びDAPI−染色DNA(図8C)に対して得た画像は、同一の光学視野からであるが、異なるフィルターにて得た。同様に、SOX2(図8D)、FOXA2(図8E)、及びDAPI染色DNA(図8F)に対する画像は、同一の光学視野からであるが、異なるフィルターにて得た。
【図8B】実施例1にて記述したIH−3培地中、18継代培養し、OCT−4、FOXA2、SOX2に対して免疫染色し、DAPIを用いてDNAを蛍光標識する、細胞の画像を示す。OCT4(図8A)、FOXA2(図8B)、及びDAPI−染色DNA(図8C)に対して得た画像は、同一の光学視野からであるが、異なるフィルターにて得た。同様に、SOX2(図8D)、FOXA2(図8E)、及びDAPI染色DNA(図8F)に対する画像は、同一の光学視野からであるが、異なるフィルターにて得た。
【図8C】実施例1にて記述したIH−3培地中、18継代培養し、OCT−4、FOXA2、SOX2に対して免疫染色し、DAPIを用いてDNAを蛍光標識する、細胞の画像を示す。OCT4(図8A)、FOXA2(図8B)、及びDAPI−染色DNA(図8C)に対して得た画像は、同一の光学視野からであるが、異なるフィルターにて得た。同様に、SOX2(図8D)、FOXA2(図8E)、及びDAPI染色DNA(図8F)に対する画像は、同一の光学視野からであるが、異なるフィルターにて得た。
【図8D】実施例1にて記述したIH−3培地中、18継代培養し、OCT−4、FOXA2、SOX2に対して免疫染色し、DAPIを用いてDNAを蛍光標識する、細胞の画像を示す。OCT4(図8A)、FOXA2(図8B)、及びDAPI−染色DNA(図8C)に対して得た画像は、同一の光学視野からであるが、異なるフィルターにて得た。同様に、SOX2(図8D)、FOXA2(図8E)、及びDAPI染色DNA(図8F)に対する画像は、同一の光学視野からであるが、異なるフィルターにて得た。
【図8E】実施例1にて記述したIH−3培地中、18継代培養し、OCT−4、FOXA2、SOX2に対して免疫染色し、DAPIを用いてDNAを蛍光標識する、細胞の画像を示す。OCT4(図8A)、FOXA2(図8B)、及びDAPI−染色DNA(図8C)に対して得た画像は、同一の光学視野からであるが、異なるフィルターにて得た。同様に、SOX2(図8D)、FOXA2(図8E)、及びDAPI染色DNA(図8F)に対する画像は、同一の光学視野からであるが、異なるフィルターにて得た。
【図8F】実施例1にて記述したIH−3培地中、18継代培養し、OCT−4、FOXA2、SOX2に対して免疫染色し、DAPIを用いてDNAを蛍光標識する、細胞の画像を示す。OCT4(図8A)、FOXA2(図8B)、及びDAPI−染色DNA(図8C)に対して得た画像は、同一の光学視野からであるが、異なるフィルターにて得た。同様に、SOX2(図8D)、FOXA2(図8E)、及びDAPI染色DNA(図8F)に対する画像は、同一の光学視野からであるが、異なるフィルターにて得た。
【図9A】mTeSR(登録商標)1培地(図9A)中、及び実施例2にて記述したIH−3(図9B)、IH−3−1(図9C)、IH−3−2(図9D)、IH−3−3(図9E)、及びIH−3−4(図9F)処方中、5継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図9B】mTeSR(登録商標)1培地(図9A)中、及び実施例2にて記述したIH−3(図9B)、IH−3−1(図9C)、IH−3−2(図9D)、IH−3−3(図9E)、及びIH−3−4(図9F)処方中、5継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図9C】mTeSR(登録商標)1培地(図9A)中、及び実施例2にて記述したIH−3(図9B)、IH−3−1(図9C)、IH−3−2(図9D)、IH−3−3(図9E)、及びIH−3−4(図9F)処方中、5継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図9D】mTeSR(登録商標)1培地(図9A)中、及び実施例2にて記述したIH−3(図9B)、IH−3−1(図9C)、IH−3−2(図9D)、IH−3−3(図9E)、及びIH−3−4(図9F)処方中、5継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図9E】mTeSR(登録商標)1培地(図9A)中、及び実施例2にて記述したIH−3(図9B)、IH−3−1(図9C)、IH−3−2(図9D)、IH−3−3(図9E)、及びIH−3−4(図9F)処方中、5継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図9F】mTeSR(登録商標)1培地(図9A)中、及び実施例2にて記述したIH−3(図9B)、IH−3−1(図9C)、IH−3−2(図9D)、IH−3−3(図9E)、及びIH−3−4(図9F)処方中、5継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図10A】実施例2にて記述した培地中で培養し、5継代にて回収した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。ZFP42(図10A)、SOX2(図10B)、FOXA2(図10C)、Nanog(図10D)、及びPOU5F1(OCT4)(図10E)。
【図10B】実施例2にて記述した培地中で培養し、5継代にて回収した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。ZFP42(図10A)、SOX2(図10B)、FOXA2(図10C)、Nanog(図10D)、及びPOU5F1(OCT4)(図10E)。
【図10C】実施例2にて記述した培地中で培養し、5継代にて回収した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。ZFP42(図10A)、SOX2(図10B)、FOXA2(図10C)、Nanog(図10D)、及びPOU5F1(OCT4)(図10E)。
【図10D】実施例2にて記述した培地中で培養し、5継代にて回収した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。ZFP42(図10A)、SOX2(図10B)、FOXA2(図10C)、Nanog(図10D)、及びPOU5F1(OCT4)(図10E)。
【図10E】実施例2にて記述した培地中で培養し、5継代にて回収した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。ZFP42(図10A)、SOX2(図10B)、FOXA2(図10C)、Nanog(図10D)、及びPOU5F1(OCT4)(図10E)。
【図11A】実施例3にて記述したmTeSR(登録商標)1培地(図1A)、IH−3(図11B)、IH−1(図11C)、及びIH−3RT(図11D)培地処方中、20継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図11B】実施例3にて記述したmTeSR(登録商標)1培地(図1A)、IH−3(図11B)、IH−1(図11C)、及びIH−3RT(図11D)培地処方中、20継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図11C】実施例3にて記述したmTeSR(登録商標)1培地(図1A)、IH−3(図11B)、IH−1(図11C)、及びIH−3RT(図11D)培地処方中、20継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図11D】実施例3にて記述したmTeSR(登録商標)1培地(図1A)、IH−3(図11B)、IH−1(図11C)、及びIH−3RT(図11D)培地処方中、20継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図12A】実施例3にて記述した培地中、15継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP(図12A)、FOXA2(図12B)、SOX2(図12C)、Nanog(図12D)、POU5F1(OCT4)(図12E)、及びZFP42(図12F)。
【図12B】実施例3にて記述した培地中、15継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP(図12A)、FOXA2(図12B)、SOX2(図12C)、Nanog(図12D)、POU5F1(OCT4)(図12E)、及びZFP42(図12F)。
【図12C】実施例3にて記述した培地中、15継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP(図12A)、FOXA2(図12B)、SOX2(図12C)、Nanog(図12D)、POU5F1(OCT4)(図12E)、及びZFP42(図12F)。
【図12D】実施例3にて記述した培地中、15継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP(図12A)、FOXA2(図12B)、SOX2(図12C)、Nanog(図12D)、POU5F1(OCT4)(図12E)、及びZFP42(図12F)。
【図12E】実施例3にて記述した培地中、15継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP(図12A)、FOXA2(図12B)、SOX2(図12C)、Nanog(図12D)、POU5F1(OCT4)(図12E)、及びZFP42(図12F)。
【図12F】実施例3にて記述した培地中、15継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP(図12A)、FOXA2(図12B)、SOX2(図12C)、Nanog(図12D)、POU5F1(OCT4)(図12E)、及びZFP42(図12F)。
【図13A】mTeSR(登録商標)1培地、及び実施例3にて記述したIH−1及びIH−3培地中、20継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP図13A)、FOXA2(図13B)、NANOG(図13C)、POU5F1(OCT4)(図13D)、SOX2(図13E)、及びZFP42(図13F)。
【図13B】mTeSR(登録商標)1培地、及び実施例3にて記述したIH−1及びIH−3培地中、20継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP図13A)、FOXA2(図13B)、NANOG(図13C)、POU5F1(OCT4)(図13D)、SOX2(図13E)、及びZFP42(図13F)。
【図13C】mTeSR(登録商標)1培地、及び実施例3にて記述したIH−1及びIH−3培地中、20継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP図13A)、FOXA2(図13B)、NANOG(図13C)、POU5F1(OCT4)(図13D)、SOX2(図13E)、及びZFP42(図13F)。
【図13D】mTeSR(登録商標)1培地、及び実施例3にて記述したIH−1及びIH−3培地中、20継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP図13A)、FOXA2(図13B)、NANOG(図13C)、POU5F1(OCT4)(図13D)、SOX2(図13E)、及びZFP42(図13F)。
【図13E】mTeSR(登録商標)1培地、及び実施例3にて記述したIH−1及びIH−3培地中、20継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP図13A)、FOXA2(図13B)、NANOG(図13C)、POU5F1(OCT4)(図13D)、SOX2(図13E)、及びZFP42(図13F)。
【図13F】mTeSR(登録商標)1培地、及び実施例3にて記述したIH−1及びIH−3培地中、20継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP図13A)、FOXA2(図13B)、NANOG(図13C)、POU5F1(OCT4)(図13D)、SOX2(図13E)、及びZFP42(図13F)。
【図14A】Sigma BSAを含む(図14A)、又は脂肪酸を含まないBSAを含む(図14B)、実施例5にて記述した培地処方中、4日間培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図14B】Sigma BSAを含む(図14A)、又は脂肪酸を含まないBSAを含む(図14B)、実施例5にて記述した培地処方中、4日間培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図15A】Sigma BSAを含む(図15A)、又は脂肪酸を含まないBSAを含む(図15B)、実施例5にて記述した培地処方中、3継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図15B】Sigma BSAを含む(図15A)、又は脂肪酸を含まないBSAを含む(図15B)、実施例5にて記述した培地処方中、3継代培養したH1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図16A】Sigma BSA又は脂肪酸を含まないBSAを含む、実施例5にて記述した培地処方中、3継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP(図16A)、MIXL1(図16B)、及びT(BRY)(図16C)。
【図16B】Sigma BSA又は脂肪酸を含まないBSAを含む、実施例5にて記述した培地処方中、3継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP(図16A)、MIXL1(図16B)、及びT(BRY)(図16C)。
【図16C】Sigma BSA又は脂肪酸を含まないBSAを含む、実施例5にて記述した培地処方中、3継代培養した、ヒト胚性幹細胞株H1の細胞中の、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。AFP(図16A)、MIXL1(図16B)、及びT(BRY)(図16C)。
【図17A】実施例6にて記述した培地処方中、10継代培養した、ヒト胚幹細胞株H1の細胞中、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。SOX2(図17A)、POU5F1(図17B)、NANOG(図17C)、及びFOXA2(図17C)。
【図17B】実施例6にて記述した培地処方中、10継代培養した、ヒト胚幹細胞株H1の細胞中、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。SOX2(図17A)、POU5F1(図17B)、NANOG(図17C)、及びFOXA2(図17C)。
【図17C】実施例6にて記述した培地処方中、10継代培養した、ヒト胚幹細胞株H1の細胞中、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。SOX2(図17A)、POU5F1(図17B)、NANOG(図17C)、及びFOXA2(図17C)。
【図17D】実施例6にて記述した培地処方中、10継代培養した、ヒト胚幹細胞株H1の細胞中、以下の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析からのデータを示す。SOX2(図17A)、POU5F1(図17B)、NANOG(図17C)、及びFOXA2(図17C)。
【図18A】実施例6にて記述した、IH−3(図18A)、IH−3P−2(図18B)、IH−3P−3(図18C)、IH−3P−4(図18D)、及びIH−3P−5(図18E)培地処方中、10継代培養した、H1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図18B】実施例6にて記述した、IH−3(図18A)、IH−3P−2(図18B)、IH−3P−3(図18C)、IH−3P−4(図18D)、及びIH−3P−5(図18E)培地処方中、10継代培養した、H1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図18C】実施例6にて記述した、IH−3(図18A)、IH−3P−2(図18B)、IH−3P−3(図18C)、IH−3P−4(図18D)、及びIH−3P−5(図18E)培地処方中、10継代培養した、H1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図18D】実施例6にて記述した、IH−3(図18A)、IH−3P−2(図18B)、IH−3P−3(図18C)、IH−3P−4(図18D)、及びIH−3P−5(図18E)培地処方中、10継代培養した、H1細胞の位相コントラスト画像を表す。
【図18E】実施例6にて記述した、IH−3(図18A)、IH−3P−2(図18B)、IH−3P−3(図18C)、IH−3P−4(図18D)、及びIH−3P−5(図18E)培地処方中、10継代培養した、H1細胞の位相コントラスト画像を表す。
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