特許6441080IP Force 特許公報全文掲載

技術分野

(関連出願の相互参照)
本出願は、2011年12月22日に出願された、米国特許仮出願第61/579,351号の利益を主張するものであり、当該出願を、本明細書にその全容において、かつあらゆる目的について援用するものである。 (発明の分野)
本発明は、細胞分化の分野にある。より具体的には、本発明は、段階的分化の各工程で定義された条件を用いて、多能性幹細胞から分化した単一ホルモンのインスリン産生細胞を提供する。その集団において分化したインスリン産生細胞の10%以上は、単一ホルモンの膵臓β細胞に特徴的なマーカーを発現する。

発明が解決しようとする課題[発明の詳細な説明]から抜粋

課題を解決するための手段[発明の詳細な説明]から抜粋

本発明は、多能性細胞の段階的分化によってインビトロで得られる膵臓内胚葉系統(pancreatic endoderm lineage)の細胞の集団を提供する。分化の各工程で使用する培地には、グルコースを追補する。いくつかの実施形態では、分化の各工程で、5mM〜20mMのグルコースを含む培地中で細胞を培養する。

この発明についての権利主張の範囲[特許請求の範囲]

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1A】実施例1に従って分化された細胞におけるアイソタイプコントロールのマーカーのS3の2日目のFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図1B】実施例1に従って分化された細胞におけるクロモグラニンのマーカーのS3の2日目のFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図1C】実施例1に従って分化された細胞におけるKI−67のマーカーのS3の2日目のFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図1D】実施例1に従って分化された細胞におけるNKX6.1のマーカーのS3の2日目のFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図1E】実施例1に従って分化された細胞におけるSOX2のマーカーのS3の2日目のFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図1F】実施例1に従って分化された細胞におけるCDX2のマーカーのS3の2日目のFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図1G】実施例1に従って分化された細胞におけるPDX−1のマーカーのS3の2日目のFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図2A】実施例1に従って分化され、S4の2日目に収穫した細胞におけるアイソタイプコントロールのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図2B】実施例1に従って分化され、S4の2日目に収穫した細胞におけるクロモグラニンのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図2C】実施例1に従って分化され、S4の2日目に収穫した細胞におけるKI−67のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図2D】実施例1に従って分化され、S4の2日目に収穫した細胞におけるNKX6.1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図2E】実施例1に従って分化され、S4の2日目に収穫した細胞におけるSOX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図2F】実施例1に従って分化され、S4の2日目に収穫した細胞におけるCDX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図2G】実施例1に従って分化され、S4の2日目に収穫した細胞におけるPDX−1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図3A】実施例1に従って分化され、S5の2日目に収穫した細胞におけるアイソタイプコントロールのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図3B】実施例1に従って分化され、S5の2日目に収穫した細胞におけるクロモグラニンのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図3C】実施例1に従って分化され、S5の2日目に収穫した細胞におけるKI−67のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図3D】実施例1に従って分化され、S5の2日目に収穫した細胞におけるNKX6.1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図3E】実施例1に従って分化され、S5の2日目に収穫した細胞におけるSOX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図3F】実施例1に従って分化され、S5の2日目に収穫した細胞におけるCDX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図3G】実施例1に従って分化され、S5の2日目に収穫した細胞におけるPDX−1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図4A】実施例1に従って分化され、S5の7日目に収穫した細胞のアイソタイプコントロールのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図4B】実施例1に従って分化され、S5の7日目に収穫した細胞のクロモグラニンのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図4C】実施例1に従って分化され、S5の7日目に収穫した細胞のKI−67のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図4D】実施例1に従って分化され、S5の7日目に収穫した細胞のNKX6.1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図4E】実施例1に従って分化され、S5の7日目に収穫した細胞のSOX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図4F】実施例1に従って分化され、S5の7日目に収穫した細胞のCDX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図4G】実施例1に従って分化され、S5の7日目に収穫した細胞のPDX−1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図5A】実施例1に従って分化され、S5の2日目に収穫した細胞のクロモグラニン(y軸)及びCDX2(x軸)のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各プロットの共発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図5B】実施例1に従って分化され、S5の2日目に収穫した細胞のクロモグラニン(y軸)及びSOX2(x軸)のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各プロットの共発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図5C】実施例1に従って分化され、S5の2日目に収穫した細胞のクロモグラニン(y軸)及びNKX6.1(x軸)のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各プロットの共発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図6A】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるCDX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6B】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるCD142の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6C】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるFOXE1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6D】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるHNF4−アルファの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6E】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNKX2.1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6F】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNKX2.2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6G】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNKX6.1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6H】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるOSR1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6I】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPDX−1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6J】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPROX1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6K】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPTF1aの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6L】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるSOX17の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6M】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるSOX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6N】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるイヌリンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6O】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるZIC1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6P】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるクロモグラニンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6Q】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるグルカゴンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6R】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNgn3の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6S】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNeuroDの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図6T】実施例1に従って分化し、S2、S3、S4及びS5で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるソマトスタチンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図7A】実施例2に従って分化し、S2、S3、又はS4の3日目に収穫したH1細胞株の細胞におけるNKX6.1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図7B】実施例2に従って分化し、S2、S3、又はS4の3日目に収穫したH1細胞株の細胞におけるPDX−1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図7C】実施例2に従って分化し、S2、S3、又はS4の3日目に収穫したH1細胞株の細胞におけるクロモグラニンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図7D】実施例2に従って分化し、S2、S3、又はS4の3日目に収穫したH1細胞株の細胞におけるNGN3の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図7E】実施例2に従って分化し、S2、S3、又はS4の3日目に収穫したH1細胞株の細胞におけるCDX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図7F】実施例2に従って分化し、S2、S3、又はS4の3日目に収穫したH1細胞株の細胞におけるアルブミンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図7G】実施例2に従って分化し、S2、S3、又はS4の3日目に収穫したH1細胞株の細胞におけるSOX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図8A】実施例3に従って分化し、S2、S3、S4、又はS5で収穫したH1細胞におけるNKX6.1のマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図8B】実施例3に従って分化し、S2、S3、S4、又はS5で収穫したH1細胞におけるPDX−1のマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図8C】実施例3に従って分化し、S2、S3、S4、又はS5で収穫したH1細胞におけるNGN3のマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図8D】実施例3に従って分化し、S2、S3、S4、又はS5で収穫したH1細胞におけるNeuroDのマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図8E】実施例3に従って分化し、S2、S3、S4、又はS5で収穫したH1細胞におけるクロモグラニンのマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図8F】実施例3に従って分化し、S2、S3、S4、又はS5で収穫したH1細胞におけるCDX2のマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図8G】実施例3に従って分化し、S2、S3、S4、又はS5で収穫したH1細胞におけるSOX2のマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図9A】実施例4に従って分化し、S3及びS4の4日目に収穫したH1細胞におけるNKX6.1のマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図9B】実施例4に従って分化し、S3及びS4の4日目に収穫したH1細胞におけるPDX−1のマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図9C】実施例4に従って分化し、S3及びS4の4日目に収穫したH1細胞におけるクロモグラニンのマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図9D】実施例4に従って分化し、S3及びS4の4日目に収穫したH1細胞におけるNGN3のマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図9E】実施例4に従って分化し、S3及びS4の4日目に収穫したH1細胞におけるNeuroDのマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図9F】実施例4に従って分化し、S3及びS4の4日目に収穫したH1細胞におけるCDX2のマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図9G】実施例4に従って分化し、S3及びS4の4日目に収穫したH1細胞におけるアルブミンのマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図9H】実施例4に従って分化し、S3及びS4の4日目に収穫したH1細胞におけるSOX2のマーカーの発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図10A】実施例5に従って分化し、第4段階で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNKX6.1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図10B】実施例5に従って分化し、第4段階で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPDX−1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図10C】実施例5に従って分化し、第4段階で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるクロモグラニンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図10D】実施例5に従って分化し、第4段階で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNGN3の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図10E】実施例5に従って分化し、第4段階で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNeuroDの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図10F】実施例5に従って分化し、第4段階で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるCDX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図10G】実施例5に従って分化し、第4段階で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるアルブミンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図10H】実施例5に従って分化し、第4段階で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるSOX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図11A】実施例6に従って分化し、S3又はS6の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNKX6.1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図11B】実施例6に従って分化し、S3又はS6の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPDX−1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図11C】実施例6に従って分化し、S3又はS6の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるクロモグラニンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図11D】実施例6に従って分化し、S3又はS6の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNGN3の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図11E】実施例6に従って分化し、S3又はS6の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNeuroDの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図11F】実施例6に従って分化し、S3又はS6の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるCDX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図11G】実施例6に従って分化し、S3又はS6の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるアルブミンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図11H】実施例6に従って分化し、S3又はS6の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるSOX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図12A】実施例7に従って分化し、S3、S4、又はS5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNKX6.1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図12B】実施例7に従って分化し、S3、S4、又はS5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPDX−1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図12C】実施例7に従って分化し、S3、S4、又はS5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるクロモグラニンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図12D】実施例7に従って分化し、S3、S4、又はS5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNGN3の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図12E】実施例7に従って分化し、S3、S4、又はS5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNeuroDの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図12F】実施例7に従って分化し、S3、S4、又はS5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるCDX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図12G】実施例7に従って分化し、S3、S4、又はS5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるSOX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図13A】実施例8に従って分化し、S3、S4、S5、又はS6で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNKX6.1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図13B】実施例8に従って分化し、S3、S4、S5、又はS6で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPDX−1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図13C】実施例8に従って分化し、S3、S4、S5、又はS6で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるクロモグラニンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図13D】実施例8に従って分化し、S3、S4、S5、又はS6で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNGN3の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図13E】実施例8に従って分化し、S3、S4、S5、又はS6で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNeuroDの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図13F】実施例8に従って分化し、S3、S4、S5、又はS6で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるCDX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図13G】実施例8に従って分化し、S3、S4、S5、又はS6で収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるSOX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図14A】実施例9に従って分化された細胞のS3の4日目のアイソタイプコントロールのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図14B】実施例9に従って分化された細胞のS3の4日目のクロモグラニンのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図14C】実施例9に従って分化された細胞のS3の4日目のKI−67のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図14D】実施例9に従って分化された細胞のS3の4日目のNKX6.1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図14E】実施例9に従って分化された細胞のS3の4日目のSOX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図14F】実施例9に従って分化された細胞のS3の4日目のHNF3BのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図14G】実施例9に従って分化された細胞のS3の4日目のCDX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図14H】実施例9に従って分化された細胞のS3の4日目のPDX−1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図15A】実施例9に従って分化された細胞のS4の2日目のアイソタイプコントロールのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図15B】実施例9に従って分化された細胞のS4の2日目のNKX6.1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図15C】実施例9に従って分化された細胞のS4の2日目のKI−67のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図15D】実施例9に従って分化された細胞のS4の2日目のクロモグラニンのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図15E】実施例9に従って分化された細胞のS4の2日目のSOX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図15F】実施例9に従って分化された細胞のS4の2日目のCDX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図15G】実施例9に従って分化された細胞のS4の2日目のPDX−1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図16A】実施例9に従って分化された細胞のS4の4日目のアイソタイプコントロールのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図16B】実施例9に従って分化された細胞のS4の4日目のNKX6.1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図16C】実施例9に従って分化された細胞のS4の4日目のクロモグラニンのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図16D】実施例9に従って分化された細胞のS4の4日目のSOX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図16E】実施例9に従って分化された細胞のS4の4日目のCDX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図16F】実施例9に従って分化された細胞のS4の4日目のPDX−1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図17A】実施例9に従って分化し、S1D3、S2D3、S3D4、S4D2、及びS4D4に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるCDX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図17B】実施例9に従って分化し、S1D3、S2D3、S3D4、S4D2、及びS4D4に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるHHexの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図17C】実施例9に従って分化し、S1D3、S2D3、S3D4、S4D2、及びS4D4に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるFOXE1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図17D】実施例9に従って分化し、S1D3、S2D3、S3D4、S4D2、及びS4D4に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるIPF1(PDX−1)の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図17E】実施例9に従って分化し、S1D3、S2D3、S3D4、S4D2、及びS4D4に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNKX2.1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図17F】実施例9に従って分化し、S1D3、S2D3、S3D4、S4D2、及びS4D4に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNKX2.2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図17G】実施例9に従って分化し、S1D3、S2D3、S3D4、S4D2、及びS4D4に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNKX6.1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図17H】実施例9に従って分化し、S1D3、S2D3、S3D4、S4D2、及びS4D4に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPROX1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図17I】実施例9に従って分化し、S1D3、S2D3、S3D4、S4D2、及びS4D4に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるSOX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図17J】実施例9に従って分化し、S1D3、S2D3、S3D4、S4D2、及びS4D4に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるSOX9の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図18A】実施例10に従って分化された細胞のS3の3日目のアイソタイプコントロールのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図18B】実施例10に従って分化された細胞のS3の3日目のNKX6.1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図18C】実施例10に従って分化された細胞のS3の3日目のクロモグラニンのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図18D】実施例10に従って分化された細胞のS3の3日目のSOX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図18E】実施例10に従って分化された細胞のS3の3日目のCDX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図18F】実施例10に従って分化された細胞のS3の3日目のKI−67のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図18G】実施例10に従って分化された細胞のS3の3日目のPDX−1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図19A】実施例10に従って分化された細胞のS4の5日目のアイソタイプコントロールのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図19B】実施例10に従って分化された細胞のS4の5日目のNKX6.1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図19C】実施例10に従って分化された細胞のS4の5日目のクロモグラニンのマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図19D】実施例10に従って分化された細胞のS4の5日目のSOX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図19E】実施例10に従って分化された細胞のS4の5日目のCDX2のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図19F】実施例10に従って分化された細胞のS4の5日目のKI−67のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図19G】実施例10に従って分化された細胞のS4の5日目のPDX−1のマーカーのFACSヒストグラム発現プロファイルを示す。各マーカーの発現百分率を各ヒストグラムに示す。

【図20A】実施例11に従って分化したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるソマトスタチンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図20B】実施例11に従って分化したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPDX1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図20C】実施例11に従って分化したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPax6の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図20D】実施例11に従って分化したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPax4の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図20E】実施例11に従って分化したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNKX6.1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図20F】実施例11に従って分化したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNGN3の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図20G】実施例11に従って分化したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるグルカゴンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図20H】実施例11に従って分化したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNeuroDの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図20I】実施例11に従って分化したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるインスリンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図20J】実施例11に従って分化したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるクロモグラニンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図21A】実施例12に従って分化し、S4の2日目、S5の2日目、及びS5の9日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるソマトスタチンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図21B】実施例12に従って分化し、S4の2日目、S5の2日目、及びS5の9日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPDX1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図21C】実施例12に従って分化し、S4の2日目、S5の2日目、及びS5の9日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPax6の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図21D】実施例12に従って分化し、S4の2日目、S5の2日目、及びS5の9日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPax4の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図21E】実施例12に従って分化し、S4の2日目、S5の2日目、及びS5の9日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNKX6.1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図21F】実施例12に従って分化し、S4の2日目、S5の2日目、及びS5の9日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNGN3の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図21G】実施例12に従って分化し、S4の2日目、S5の2日目、及びS5の9日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNeuroDの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図21H】実施例12に従って分化し、S4の2日目、S5の2日目、及びS5の9日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるインスリンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図21I】実施例12に従って分化し、S4の2日目、S5の2日目、及びS5の9日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるグルカゴンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図21J】実施例12に従って分化し、S4の2日目、S5の2日目、及びS5の9日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるクロモグラニンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図22A】実施例13に従って分化し、S5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPax4の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図22B】実施例13に従って分化し、S5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPax6の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図22C】実施例13に従って分化し、S5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPDX1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図22D】実施例13に従って分化し、S5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるPTF1aの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図22E】実施例13に従って分化し、S5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるグルカゴンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図22F】実施例13に従って分化し、S5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるインスリンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図22G】実施例13に従って分化し、S5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNeuroDの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図22H】実施例13に従って分化し、S5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるngn3の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図22I】実施例13に従って分化し、S5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるZic1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図22J】実施例13に従って分化し、S5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるCDX2の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図22K】実施例13に従って分化し、S5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるアルブミンの遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

【図22L】実施例13に従って分化し、S5の3日目に収穫したヒト胚性幹細胞株H1の細胞におけるNKX6.1の遺伝子の発現のリアルタイムPCR解析のデータを示す。

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