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特許 6527487出願番号 特願 2016-110884
多能性幹細胞から誘導した細胞を精製するための方法
出願人 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド（識別番号 509087759）
2026年 特許公開件数ランキング 411位 58件（※）
2026年 特許取得件数ランキング 642位 26件（※）
公報発行日 2019年6月5
公報URL https://ipforce.jp/patent-jp-B9-6527487 ログイン済みの方はこのURLへ
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※ 共同出願を含む
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技術分野
本願は、２０１０年３月１日出願の米国特許仮出願第６１／３０９，１９３号の優先権
を主張する。 （発明の分野）
本発明は、多能性幹細胞を分化させる方法を目的とする。具体的には、本発明は、膵内
分泌系に特徴的なマーカーを発現している細胞へと分化させた細胞を、特有の表面マーカ
ーを利用して性質決定する方法を提供する。本発明は、膵内分泌系に特徴的なマーカーを
発現している細胞を、濃縮又は選別する方法も提供する。本発明は、本発明の方法により
形成される膵内分泌系に特徴的なマーカーを発現している細胞集団に混入する恐れのある
細胞を枯渇させることで、移植後にインビボで形成される腫瘍の発生率を減少させる方法
も提供する。
発明が解決しようとする課題[発明の詳細な説明]から抜粋
多能性幹細胞から得られた細胞により発現されているマーカーを同定することで、これらの細胞に対する理解を深めることができ、インビボ及びインビトロでのそれらの同定の
一助となる場合があり、並びに研究及び使用に際しては、インビトロにおいて、それらの
発現が陽性である細胞を濃縮することが可能になり得る。したがって、多能性幹細胞から
誘導された細胞、具体的には、膵内分泌系に特徴的なマーカーを発現している細胞を、単
離及び特徴付けするのに有用なツールが未だに必要とされている。
課題を解決するための手段[発明の詳細な説明]から抜粋
この発明についての権利主張の範囲[特許請求の範囲]
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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋
【図1】細胞集団ＣＤ５６+ＣＤ１３-、ＣＤ５６-ＣＤ１３-及びＣＤ５６-ＣＤ１３+での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量（Fold expression）は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図1-1】細胞集団ＣＤ５６＋ＣＤ１３−、ＣＤ５６−ＣＤ１３−及びＣＤ５６−ＣＤ１３＋での、ＮＫＸ２．２（パネルｅ）及びＰＡＸ４（パネルｆ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量（Fold expression）は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図2】ＣＤ１３３に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図2-1】ＣＤ１３３に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＫＸ２．２（パネルｅ）及びＰＡＸ４（パネルｆ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図3】ＣＤ４９ｃに対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図4】ＣＤ５６及びＣＤ１５に対する抗体を用いて選別した細胞集団における、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図4-1】ＣＤ５６及びＣＤ１５に対する抗体を用いて選別した細胞集団における、インスリン（パネルｅ）及びグルカゴン（パネルｆ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図5】ＣＤ１５に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図5-1】ＣＤ１５に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＫＸ２．２（パネルｅ）、ＰＡＸ−４（パネルｆ）、グルカゴン（パネルｇ）及びインスリン（パネルｈ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図6】ＣＤ５６及びＣＤ５７に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図6-1】ＣＤ５６及びＣＤ５７に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＫＸ２．２（パネルｅ）、インスリン（パネルｆ）、及びグルカゴン（パネルｇ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図7】ＣＤ５６及びＣＤ１８４に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＺＩＣ１（パネルａ）、アルブミン（パネルｂ）、ＣＤＸ２（パネルｃ）、ＮＧＮ３（パネルｄ）、ＰＡＸ４（パネルｅ）、及びＮＥＵＲＯＤ（パネルｆ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図7-1】ＣＤ５６及びＣＤ１８４に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＫＸ６．１（パネルｇ）、ＰＴＦ１ α（パネルｈ）、及びＰＤＸ１（パネルｉ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図8】ＣＤ９８に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、インスリン（パネルｃ）、及びグルカゴン（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図9】ＣＤ４７に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＥＵＲＯＤ（パネルａ）、ＮＧＮ３（パネルｂ）、ＰＤＸ１（パネルｃ）、及びＮＫＸ６．１（パネルｄ）、の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図9-1】ＣＤ４７に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＮＫＸ２．２（パネルｅ）及びＰＡＸ４（パネルｆ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図10】ＣＤ４７に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＰＤＸ−１（パネルａ）、ＮＫＸ６．１（パネルｂ）、ＮＫＸ２．２（パネルｃ）、及びＰＡＸ−４（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図10-1】ＣＤ４７に対する抗体を用いて選別した細胞集団での、ＰＴＦ１ａ（パネルｅ）、ＮＧＮ３（パネルｆ）、インスリン（パネルｇ）及びグルカゴン（パネルｈ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図11】ＬＩＦ受容体に対する抗体を用いて選別した細胞集団における、ＨＮＦ４ α（パネルａ）、及びＬＩＦ受容体（パネルｂ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、実施例１に概略される分化プロトコルの、ステージＩＩの２日目の選別されていない細胞と比較して示す。
【図12】ＳＳＥＡ４を発現している細胞を磁気ビーズを用い枯渇させた細胞集団での、ＯＣＴ４（パネルａ）、ＮＡＮＯＧ（パネルｂ）、ＳＯＸ２（パネルｃ）、及びグースコイド（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
【図13】ＳＳＥＡ４を発現している細胞をＦＡＣＳを用い枯渇させた細胞集団における、ＯＣＴ４（パネルａ）、ＮＡＮＯＧ（パネルｂ）、ＳＯＸ２（パネルｃ）、及びグースコイド（パネルｄ）の発現を、リアルタイムＰＣＲによる検出結果として示す。発現量は、未分化のＨ１胚性幹細胞と比較して示す。
選択図 図1出願人が指定した本件の代表的な図
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