【図1A-B】 図１Ａ－１Ｇは、野生型レベルに近いコネキシン４３タンパク質レベルの回復がＡＲＶＣ－プラコフィリン２変異体（ＰＫＰ２ｍｕｔ）ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞での生理学的異常をレスキューできることを表す。図１Ａ－１Ｂは、基礎レベル（図１Ａ）及びイソプロテレノール（ＩＳＯ）（図１Ｂ）刺激（これはストレス／運動に関連する条件を模倣する）下での、緑色蛍光タンパク質を持つアデノウイルス（Ａｄ－ＧＦＰ）又はコネキシン４３を持つアデノウイルス（Ａｄ４３）に４８時間にわたり感染させた、非ＡＲＶＣ－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞及びＡＲＶＣ－ＰＫＰ２ｍｕｔ（ＡＲＶＣ－構造的（Ｓ）とも呼ぶ）－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞についての、代表的な電場電位トレースを表す（トレース内のスパイクの周波数及びパターンに注目されたい）。スケールバーで、縦向きのものは電場電位の振幅（μＶ）、横向きのものは時間（１ｓ）を表す。

【図1C-D】 図１Ｃ－１Ｄは、基礎レベル（図１Ｃ）及びＩＳＯ刺激下（図１Ｄ）での、Ａｄ－ＧＦＰ又はＡｄ４３による４８時間の感染をともなう、非ＡＲＶＣ－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞及びＡＲＶＣ－ＰＫＰ２ｍｕｔ（ＡＲＶＣ－Ｓ）－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞についての、代表的なインピーダンス（収縮性）トレースを表す（トレース内のスパイクの周波数及び形状に注目されたい）。スケールバーで、縦方向のものは細胞指数（ｃｅｌｌ ｉｎｄｅｘ）、横向きのものは時間（１ｓ）を表す。

【図1E】 図１Ｅは、Ａｄ－ＧＦＰ又はＡｄ４３による感染をともなう、非ＡＲＶＣ－ｉＰＳＣ由来心筋細胞及びＡＲＶＣ－ＰＫＰ２ｍｕｔ－ｉＰＳＣ由来心筋細胞の基礎レベルでの発火不規則性指数の定量結果を表す。標準誤差を伴う平均値を表し、＊＊はｐ＜０．０１を表し、ｎ＝６（非ＡＲＶＣ）、ｎ＝７（ＡＲＶＣ－ＰＫＰ２ｍｕｔ）であり、２標本ｔ検定を行った。

【図1F】 図１Ｆは、Ａｄ－ＧＦＰ又はＡｄ４３による感染をともなう、非ＡＲＶＣ及びＡＲＶＣ－ＰＫＰ２ｍｕｔ（ＡＲＶＣ－Ｓ）のＩＳＯ刺激下での発火不規則性指数の定量結果を表す。標準誤差を伴う平均値を表し、＊＊＊はｐ＜０．００１を表し、ｎ＝６（非ＡＲＶＣ）、ｎ＝７（ＡＲＶＣ－ＰＫＰ２ｍｕｔ）であり、２標本ｔ検定を行った。

【図1G】 図１Ｇは、Ａｄ－ＧＦＰ又はＡｄ４３による４８時間の感染をともなう、非ＡＲＶＣ、ＡＲＶＣ－ＰＫＰ２ｍｕｔ（ＡＲＶＣ－Ｓ）、及びＡＲＶＣ－デスモグレイン２変異体（ＤＳＧ２ｍｕｔ（ＡＲＶＣ－電気的（Ｅ）とも呼ぶ））のｈｉＰＳＣ由来心筋細胞における、コネキシン４３（Ｃｘ４３）、デスモプラキン（ＤＰＳ）、デスモグレイン２（ＤＳＧ２）、プラコグロビン（ＪＵＰ）、及びプラコフィリン２（ＰＫＰ２）の発現レベル、並びに、αミオシン重鎖（α－ＭＨＣ）（心筋細胞ローディング対照）及びグリセルアルデヒド－３－リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）（ローディング対照）の発現レベルを表す。

【図2A-B】 図２Ａ－２Ｂは、ＡＲＶＣ－Ｓ心筋細胞での生理学的異常がＣｘ４３過剰発現により用量依存的にレスキューされ得ることを表す。用量依存的Ａｄ４３感染後の非ＡＲＶＣ－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞（図２Ａ）及びＡＲＶＣ－ＰＫＰ２ｍｕｔ－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞（図２Ｂ）からの代表的な電場電位を表す。ＡＲＶＣ－ＰＫＰ２ｍｕｔ－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞でのスパイクの不規則な周波数及びパターンが、Ｃｘ４３の用量が増加するにつれて（ＭＯＩ５、ＭＯＩ１０、及びＭＯＩ２０）、スパイクの周波数が徐々により規則的になることに注意されたい。スケールバーで、縦向きのものは電場電位の振幅（μＶ）、横向きのものは時間（１ｓ）を表す。ＭＯＩは感染多重度である。

【図3A-B】 図３Ａ－３Ｆは、ストレス／運動条件を模倣するためのカテコラミン（ＩＳＯ）刺激下で、コネキシン４３タンパク質レベルの回復がＡＲＶＣ－ＤＳＧ２ｍｕｔ（ＡＲＶＣ－Ｅ）ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞での生理学的異常をレスキューできることを表す。図３Ａ－３Ｂは、基礎レベル（図３Ａ）及びＩＳＯ刺激下（図３Ｂ）での、Ａｄ－ＧＦＰ又はＡｄ４３による４８時間の感染をともなう、非ＡＲＶＣ－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞及びＡＲＶＣ－ＤＳＧ２ｍｕｔ－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞についての、代表的な電場電位トレースを表す。スケールバーで、縦向きのものは電場電位の振幅（μＶ）、横向きのものは時間（１ｓ）を表す。

【図3C-D】 図３Ｃ－３Ｄは、基礎レベル（図３Ｃ）及びＩＳＯ刺激下（図３Ｄ）での、Ａｄ－ＧＦＰ又はＡｄ４３による４８時間の感染をともなう、非ＡＲＶＣ－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞及びＡＲＶＣ－ＤＳＧ２ｍｕｔ－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞についての、代表的なインピーダンス（収縮性）トレースを表す。スケールバーで、縦方向のものは細胞指数、横向きのものは時間（１ｓ）を表す。

【図3E】 図３Ｅは、Ａｄ－ＧＦＰ又はＡｄ４３による感染をともなう、非ＡＲＶＣ－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞及びＡＲＶＣ－ＤＳＧ２ｍｕｔ－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞の基礎レベルでの発火不規則性指数の定量結果を表す。標準誤差を伴う平均値を表し、ｎ＝６（非ＡＲＶＣ）、ｎ＝６（ＡＲＶＣ－ＤＳＧ２ｍｕｔ）であり、２標本ｔ検定を行った。

【図3F】 図３Ｆは、Ａｄ－ＧＦＰ又はＡｄ４３による感染をともなう、非ＡＲＶＣ及びＡＲＶＣ－ＤＳＧ２ｍｕｔ（ＡＲＶＣ－Ｅ）のＩＳＯ刺激下での発火不規則性指数の定量結果を表す。標準誤差を伴う平均値を表し、＊はｐ＜０．０５を表し、ｎ＝６（非ＡＲＶＣ）、ｎ＝６（ＡＲＶＣ－ＤＳＧ２ｍｕｔ）であり、２標本ｔ検定を行った。図３Ａ－３Ｆにおいて、ＡＲＶＣ－ＤＳＧ２ｍｕｔ－ｈｉＰＳＣ由来心筋細胞におけるスパイクの不規則な周波数及びパターンがＩＳＯ条件でのみ観察され、Ｃｘ４３の回復がスパイクの周波数及びパターンをより規則的なものにし得ることに注目されたい。

【図4A】 図４Ａ－４Ｇは、コネキシン４３タンパク質レベルの回復がＡＲＶＣマウスモデル（心臓特異的デスモプラキンノックアウトモデル（ＤＳＰ－ｃＫＯ））において心臓リズム及び機能を改善できることを表す。図４Ａは、緑色蛍光タンパク質でタグ付けされたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ－ＧＦＰ）／コネキシン４３を持ち且つＧＦＰでタグ付けされたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ－Ｃｘ４３）の注射及び電気生理学的心機能分析についての実験戦略を表す。

【図4B】 図４Ｂは、６週のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）注射前の、対照及びＤＳＰ－ｃＫＯマウス（ＤＳＰ－Ｆｌｏｘマウス、Ｃｒｅ陽性）の超音波心臓検査が、対照（ＤＳＰ－Ｆｌｏｘマウス、Ｃｒｅ陰性）に比べてＤＳＰ－ｃＫＯマウスでの左心室内径短縮率（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ ｓｈｏｒｔｅｎｉｎｇ、％ＦＳ）の有意な減少を示したことを表す。

【図4C】 図４Ｃは、ＡＡＶ注射後４週（１０週齢）及び５週（１１週齢）の対照及びＤＳＰ－ｃＫＯマウスの超音波心臓検査が、ＡＡＶ－Ｃｘ４３を注射されたＤＳＰ－ｃＫＯマウスでの％ＦＳの（６％から１５％への）改善を明らかにしたことを表す。ＡＡＶ－Ｃｘ４３を注射された対照マウスでは％ＦＳの有意な変化は観察できなかった。対照群及びＤＳＰ－ｃＫＯマウス群の間で心拍数の有意な差異はみられなかった。

【図4D】 図４Ｄは、ＡＡＶ－Ｃｘ４３注射後４週（１０週齢）及び５週（１１週齢）の対照及びＤＳＰ－ｃＫＯマウスの代表的表面ＥＣＧトレースを表す。ＤＳＰ－ｃＫＯマウスは、ＡＡＶ－Ｃｘ４３注射後４週に、重症の不整脈（心室性期外収縮（ＰＶＣ＝規則的なパターンと一致しない追加の鼓動）、脚ブロックを示す一連のＱＲＳ複合波逆転（スパイクが上向きではなく下向きを指す））を示した。一方、ＡＡＶ－Ｃｘ４３注射後５週に、ＤＳＰ－ｃＫＯは、心臓リズムの改善（１．５分の一のＰＶＣ、限られたＱＲＳ複合波逆転（前週（１０週）では１０個が連なっているが、次週（１１週）では２個のみ））及び正常洞リズムの見た目（規則的周波数及び律動的鼓動）を示す。

【図4E】 図４Ｅは、ＡＡＶ－Ｃｘ４３注射後４週（１０週齢）及び５週（１１週齢）のＤＳＰ－ｃＫＯマウスでのＰＶＣの定量結果を表し、ＡＡＶ－Ｃｘ４３注射後５週でＰＶＣの数の１．５倍の減少を明らかにしたものである。

【図4F】 図４Ｆ－４Ｈは、生存率（図４Ｈ）、ウエスタンブロット解析（図４Ｆ）、及びＧＦＰ免疫染色解析（図４Ｇ）が、ＡＡＶ－Ｃｘ４３注射後５週の生存したＤＳＰ－ｃＫＯマウスでのＣｘ４３タンパク質の回復（ＤＳＰ－ｃＫＯ２－ＡＡＶ－Ｃｘ４３、緑）を明らかにしたことを表す。対照的に、死亡したＤＳＰ－ｃＫＯマウスではＡＡＶ－Ｃｘ４３注射後３週にＣｘ４３タンパク質の回復は観察されなかった（ＤＳＰ－ｃＫＯ１－ＡＡＶ－Ｃｘ４３、赤）。

【図4G】 図４Ｆの説明を参照されたい。

【図4H】 図４Ｆの説明を参照されたい。

【図5】 図５は、Ａｄ４３（配列番号７）のベクターマップを表す。

【図6】 図６は、ＡＡＶ－Ｃｘ４３（配列番号８）のベクターマップを表す。