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細胞懸濁液に含まれる細胞に外来物質を電気穿孔にて導入可能な電気穿孔装置及び外来物質が導入された外来物質導入細胞の製造方法

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1】 電気穿孔装置１の概念図である。
【図2】 電気穿孔装置１の回路の一例を示す図である。
【図3】 電気穿孔装置１の回路の一例を示す図である。
【図4】 電気穿孔装置１０の概念図である。
【図5】 電気穿孔装置１０の回路の一例を示す図である。
【図6】 電気穿孔装置１０の回路の一例を示す図である。
【図7】 電気穿孔装置１０の回路の一例を示す図である。
【図8】 電気穿孔装置１０の回路の一例を示す図である。
【図9】 実施例１の電気穿孔装置１の保持部２、放電発生部３、及び導電部４の模式図である。
【図10】 組み立て前の実施例１の電気穿孔装置１の保持部２、放電発生部３、及び導電部４との写真である。
【図11】 組み立て後の実施例１の電気穿孔装置１の保持部２及び放電発生部３の写真である。
【図12】 組み立て後の実施例１の電気穿孔装置１の写真である。
【図13】 実施例１の電気穿孔装置１により、条件１～３で蛍光蛋白コード遺伝子を導入した７日後の観察画像であって、明視野における顕微鏡観察画像（観察倍率、対物レンズ２０倍）、蛍光視野における蛍光画像（観察倍率２０倍）、及び明視野の画像と蛍光視野の蛍光画像とを重ね合わせた重ね合わせ画像を示す図である。
【図14】 実施例２の電気穿孔装置１の保持部２、放電発生部３、及び導電部４の模式図である。
【図15】 組み立て後の実施例２の電気穿孔装置１の保持部２及び放電発生部３の写真である。
【図16】 実施例２の電気穿孔装置１を用いて遺伝子導入操作された標的細胞（条件４）の導入操作の翌日の蛍光観察結果と、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００試薬を用いてリポフェクション法により遺伝子導入操作された標的細胞（ポジティブコントロール）の蛍光観察結果とを示す図である。
【図17】 変形例の電気穿孔装置１の保持部２、放電発生部３、及び導電部４の模式図である。
【図18】 変形例の電気穿孔装置１の保持部２、放電発生部３７、及び導電部４の模式図である。
【図19】 組み立て後の実施例３の電気穿孔装置１０の写真である。
【図20】 実施例３の電気穿孔装置１０により、条件６～８の各々で蛍光蛋白コード遺伝子を導入した操作から４日後の観察画像であって、明視野における顕微鏡観察画像（観察倍率２０倍）、及び蛍光視野における蛍光画像（観察倍率２０倍）を示す図である。
【図21】 実施例３の電気穿孔装置１０により、条件９～１１の各々で蛍光蛋白コード遺伝子を導入した操作から９日後の観察画像であって、明視野における顕微鏡観察画像（観察倍率２０倍）、及び蛍光視野における蛍光画像（観察倍率２０倍）を示す図である。
【図22】 組み立て後の実施例４の電気穿孔装置１０の写真である。
【図23】 実施例４の電気穿孔装置１０の保持部２の模式図である。
【図24】 実施例４の電気穿孔装置１０により、条件１２、１３の各々で蛍光蛋白コード遺伝子を導入した操作から１日後、３日後、１３日後の観察画像であって、明視野における顕微鏡観察画像（観察倍率２０倍）、及び蛍光視野における蛍光画像（観察倍率２０倍）を示す図である。
【図25】 比較例と実施例５の電気穿孔装置１０との各々で蛍光蛋白コード遺伝子を導入した操作から２日後の観察画像であって、明視野における顕微鏡観察画像（観察倍率２０倍）、及び蛍光視野における蛍光画像（観察倍率２０倍）を示す図である。
【図26】 比較例と、実施例５の電気穿孔装置１０と、ネガティブコントロールとの各々で蛍光蛋白コード遺伝子を導入した操作から２日後の観察画像であって、明視野における顕微鏡観察画像に基づき、全細胞に対する死んでいる細胞の数である細胞の死亡率を比較した結果を示すグラフである。
【図27】 実施例６の電気穿孔装置１０により、ネガティブコントロール、条件１４、１５の各々で、血液のリンパＴ細胞に、山中因子遺伝子、及び山中因子遺伝子が細胞に導入され、未分化になると蛍光シグナル増強改良型緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）が発現するＥＯＳ－ＥＧＦＰベクターを導入した操作から１６日後の観察画像であって、明視野における顕微鏡観察画像（観察倍率２０倍）、及び蛍光視野における蛍光画像（観察倍率２０倍）を示す図である。
【図28】 実施例７の電気穿孔装置１０により、条件１６～１８の各々で蛍光蛋白コード遺伝子を導入した操作から２日後の観察画像から作成した画像であって、明視野における顕微鏡観察画像（観察倍率２０倍）と、ＧＦＰ及びＲＦＰ（赤色蛍光タンパク質）の蛍光視野における蛍光画像（観察倍率２０倍）を重ね合わせた重ね合わせ画像である。
【図29】 実施例８の電気穿孔装置１０により、条件１９及び条件２０の各々で蛍光蛋白コード遺伝子を導入した操作から１日後及び５日後の、明視野における顕微鏡観察画像（観察倍率２０倍）と、ＧＦＰの蛍光視野における蛍光画像（観察倍率２０倍）である。
【図30】 組み立て後の変形例の電気穿孔装置１０の写真である。
【図31】 変形例の電気穿孔装置１０の保持部２の模式図である。
【図32】 組み立て後の変形例の電気穿孔装置１０の写真である。
【図33】 変形例の電気穿孔装置１０を模式図である。
【図34】 外来物質導入細胞の製造工程のフローチャートである。

代表図 図1本件の代表的な図

１、１０：電気穿孔装置 ２：保持部 ３、３７：放電発生部 ４：導電部 ５：電力量制御部 ６：電源部 ８：絶縁性樹脂板 ９：周期調整部 ２１、２２、３１、３２、３５、３６：電極 ２３：容器 ２７：油槽 ３９：電線 ５１、６０：コンデンサ ５２：暗流制御部 ５４：ダイオード

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