特許7818525IP Force 特許公報全文掲載

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コロナヌクレオカプシド特異的アミノ酸配列を含むコロナ抗原、それを含む組成物及び試薬キット、並びにそれを産生する方法に関する。該コロナ抗原を使用してサンプル中の抗コロナ抗体を検出する方法、及び天然コロナ感染症又はコロナに対するワクチン接種による患者の免疫応答の鑑別診断の方法も包含される。

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1】 以下のＵｎｉＰｒｏｔ番号、Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ番号及びそれぞれの配列番号による既知のコロナウイルスのヌクレオカプシド配列のアラインメント： 重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２ Ｎ（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、β－ＣｏＶ：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ０ＤＴＣ９；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ．：ＭＮ９０８９４７；配列番号１６ 重症急性呼吸器症候群コロナウイルスＮ（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、β－ＣｏＶ：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ５９５９５；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ．：ＡＹ２７８７４１；配列番号１７ 中東呼吸器症候群関連コロナウイルスＮ（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、β－ＣｏＶ：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｔ２ＢＢＫ０；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ．：ＫＦ６００６３２；配列番号１８ ヒトコロナウイルスＮＬ６３ Ｎ（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）、α－ＣｏＶ：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｑ６Ｑ１Ｒ８；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ：ＡＹ５６７４８７；配列番号１９ ヒトコロナウイルス２２９Ｅ Ｎ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、α－ＣｏＶ：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１５１３０；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ：Ｘ５１３２５；配列番号２０ ヒトコロナウイルスＯＣ４３ Ｎ（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、β－ＣｏＶ：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ３３４６９；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ．：ＡＹ５８５２２８；配列番号２１ ヒトコロナウイルスＨＫＵ１ Ｎ（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、β－ＣｏＶ：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｑ５ＭＱＣ６；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ．：ＡＹ５９７０１１；配列番号２２
【図2】 配列比較（Ａ）異なるコロナウイルスのヌクレオカプシド配列に対するＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドアミノ酸配列の配列同一性の程度（％）；（Ｂ）異なるコロナウイルスのヌクレオカプシド配列に対するＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドアミノ酸配列の配列相同性の程度（％）。
【図3】 ＥｃＳｌｙＤ－ＥｃＳｌｙＤ－ＣｏＶ－２ Ｎ（１－４１９）抗原のグラフ表示
【図4A】 コロナＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ Ｓ－、Ｅ－及びＭ－タンパク質由来の抗原の免疫学的反応性の比較
【図4B】 ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質由来の異なる抗原の比較
【図5】 ０個、１個、又は２個のＳｌｙＤ－シャペロンに融合した全長ヌクレオカプシドの免疫学的反応性の比較
【図6】 アッセイ性能に対する（製造プロセスにおける追加のワークフローとしての）ルテニウムコンジュゲートのビーズ前処理の影響
【図7】 ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２アッセイの感度；Ａ）１２９人の確認されたＳＡＲＳ ＣｏＶ－２患者のサンプルから得られた最初の結果；及びＢ）合計２１４名の確認されたＳＡＲＳ ＣｏＶ－２患者を含む更なる結果；Ｃ）更に２９２人の確認されたＳＡＲＳ ＣｏＶ－２患者の更なる結果
【図8】 ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２アッセイの特異性；Ａ）５１９２人の患者及び８０個の潜在的交差反応性サンプルからの測定サンプルの第１のセットの結果；Ｂ）５２６１人の患者からの測定サンプルの第２のセットの結果；及びＣ）全患者からの結果（合計１０４５３）。風邪及びコロナウイルスの交差反応性サンプルはルーチン診断ではないか、又は供血者ではないため、これらは全特異性の計算から除外される。
【図9】 静脈血清サンプル、対、毛細管血サンプルで得られたアッセイ性能の相関
【図10】 ２つのＳｌｙＤ－又は２つのＳｌｐＡ－シャペロンに融合したＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドの配列を含む抗原の免疫反応性の比較
【図11A】 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＯＣ４３、ＮＬ６３、２２９Ｅ及びＨＫＵ１由来のヌクレオカプシドタンパク質のＮ末端ドメインの反応性。測定は、ｃｏｂａｓ ｅ４１１自動分析装置でＤＡＧＳ形式で行った。ビオチンコンジュゲート（Ｒ１）及びルテニウムコンジュゲート（Ｒ２）の濃度はそれぞれ１００ｎｇ／ｍｌであった。シグナルの読み出し（カウント）をそれぞれの負の値の平均に対して正規化して、シグナルの動態（ｓ／ｎ）を得た。
【図11B】 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＯＣ４３、ＮＬ６３、２２９Ｅ及びＨＫＵ１由来のヌクレオカプシドタンパク質のＮ末端ドメインの反応性。測定は、ｃｏｂａｓ ｅ４１１自動分析装置でＤＡＧＳ形式で行った。ビオチンコンジュゲート（Ｒ１）及びルテニウムコンジュゲート（Ｒ２）の濃度はそれぞれ１００ｎｇ／ｍｌであった。シグナルの読み出し（カウント）をそれぞれの負の値の平均に対して正規化して、シグナルの動態（ｓ／ｎ）を得た。
【図12】 ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド抗原の４つの単一点突然変異バリアントの概略図
【図13】 ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド抗原のＷＴ対３ＭＵＴ又は８ＭＵＴ単一点突然変異バリアントのシグナル回復
配列リスト 配列番号１：コロナウイルスＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドのアミノ酸配列 配列番号２：１つのＳｌｙＤシャペロンに融合したコロナウイルスＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドのアミノ酸配列 配列番号３：２つのＳｌｙＤシャペロンに融合したコロナウイルスＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドのアミノ酸配列 配列番号４：コロナウイルスＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドのヌクレオチド配列 配列番号５：１つのＳｌｙＤシャペロンに融合したコロナウイルスＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドのヌクレオチド配列 配列番号６：２つのＳｌｙＤシャペロンに融合したコロナウイルスＳＡＲＳ ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドのヌクレオチド配列 配列番号７：リンカーペプチド 配列番号８：ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２－Ｎ ３ ＭＵＴバリアントのアミノ酸配列 配列番号９：ＥｃＳｌｙＤ－ＥｃＳｌｙＤ－ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２－Ｎ ３ ＭＵＴバリアントのアミノ酸配列 配列番号１０：ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２－Ｎ ８ ＭＵＴバリアントのアミノ酸配列 配列番号１１：ＥｃＳｌｙＤ－ＥｃＳｌｙＤ－ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２－Ｎ ８ ＭＵＴバリアントのアミノ酸配列 配列番号１２：ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２－Ｎ １２ ＭＵＴバリアントのアミノ酸配列 配列番号１３：ＥｃＳｌｙＤ－ＥｃＳｌｙＤ－ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２－Ｎ １２ ＭＵＴバリアントのアミノ酸配列 配列番号１４：ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２－Ｎ １５ ＭＵＴバリアントのアミノ酸配列 配列番号１５：ＥｃＳｌｙＤ－ＥｃＳｌｙＤ－ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２－Ｎ １５ ＭＵＴバリアントのアミノ酸配列 配列番号１６：重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２）、β－ＣｏＶのアミノ酸配列：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ０ＤＴＣ９；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ．：ＭＮ９０８９４７ 配列番号１７：重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ ＣｏＶ）、β－ＣｏＶのアミノ酸配列：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ５９５９５；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ．：ＡＹ２７８７４１ 配列番号１８：中東呼吸器症候群関連コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、β－ＣｏＶのアミノ酸配列：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｔ２ＢＢＫ０；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ．：ＫＦ６００６３２ 配列番号１９：ヒトコロナウイルスＮＬ６３（ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）、α－ＣｏＶのアミノ酸配列：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｑ６Ｑ１Ｒ８；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ：ＡＹ５６７４８７ 配列番号２０：ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ－２２９Ｅ）、α－ＣｏＶのアミノ酸配列：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１５１３０；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ：Ｘ５１３２５ 配列番号２１：ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３）、β－ＣｏＶのアミノ酸配列：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ３３４６９；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ．：ＡＹ５８５２２８ 配列番号２２：ヒトコロナウイルスＨＫＵ１（ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１）、β－ＣｏＶのアミノ酸配列：ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｑ５ＭＱＣ６；Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ Ａｃｃ．：ＡＹ５９７０１１

代表図 図1本件の代表的な図

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