特許7830449IP Force 特許公報全文掲載

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本明細書では、新規ＤＮＡ構築物及びそれを使用する方法が報告される。本発明による新規ＤＮＡ構築物では、部位特異的リコンビナーゼ技術を使用して少なくとも２つの遺伝子の転写を同時に活性化することができる。本発明は、ＤＮＡ分子のコード鎖及び鋳型鎖上のプロモーター及び遺伝子エレメントの意図的な不活性配置を使用し、部位特異的リコンビナーゼとの相互作用によってそれらの活性形態に変換される。また、本明細書には、プロモーターが交換され、ＬｏｘＰ部位が組み込まれた新規なＶＡ ＲＮＡエレメントも報告されている。

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1】 ＲＭＣＩの前（左の略図）及び後（右の略図）の本発明によるＤＮＡエレメントのスキーム。
【図2】 本発明による２つのＤＮＡエレメントを含む本発明によるＤＮＡのスキーム
【図3】 ＲＭＣＩの前（上の略図）及び後（下の略図）の本発明によるＤＮＡのスキーム。
【図4】 本発明によるＤＮＡにおける逐次転写活性化のスキーム。
【図5】 Ｅ１Ａ、Ｅ１Ｂ、Ｅ２Ａ及びＥ４（ＯＲＦ６）に対する４つのオープンリーディングフレームの同時転写活性化のための本発明によるＤＮＡの例示的な使用。
【図6】 Ｅ２Ａ及びＥ４（ＯＲＦ６）に対する２つのオープンリーディングフレームの同時転写活性化のための本発明によるＤＮＡエレメントの例示的な使用。
【図7】 ｒｅｐとｃａｐ（左）、ｒｅｐ７８とｒｅｐ５２／４０（中央）、及び、ｒｅｐ７８とｒｅｐ５２（右）の２つのオープンリーディングフレームの同時転写活性化のための本発明によるＤＮＡエレメントの例示的な使用。
【図8】 ＶＡ ＲＮＡ遺伝子に対する１つのオープンリーディングフレームの転写活性化のための本発明によるＤＮＡエレメントの例示的な使用。
【図9】 ＲＭＣＩの前のＥ１Ａ及びＥ１Ｂに対するオープンリーディングフレームの同時転写活性のための本発明によるＤＮＡエレメントの例示的な略図。クローニングの制限部位を示す。
【図10】 ＲＭＣＩ後のＥ１Ａ及びＥ１Ｂに対する転写的に活性なオープンリーディングフレームを有する本発明による反転ＤＮＡエレメントの例示的な略図。クローニングの制限部位を示す。
【図11】 ＲＭＣＩの前のＥ２Ａ及びＥ４ｏｒｆ６に対するオープンリーディングフレームの同時転写活性のための本発明によるＤＮＡエレメントの例示的な略図。クローニングの制限部位を示す。
【図12】 ＲＭＣＩ後のＥ２Ａ及びＥ４ｏｒｆ６に対する転写的に活性なオープンリーディングフレームを有する本発明による反転ＤＮＡエレメントの例示的な略図。クローニングの制限部位を示す。
【図13】 ＲＭＣＩの前のＲｅｐ７８及びＲｅｐ５２／４０に対するオープンリーディングフレームの同時転写活性のための本発明によるＤＮＡエレメントの例示的な略図。クローニングの制限部位を示す。
【図14】 ＲＭＣＩ後のＲｅｐ７８及びＲｅｐ５２／４０に対する転写的に活性なオープンリーディングフレームを有する本発明による反転ＤＮＡエレメントの例示的な略図。クローニングの制限部位を示す。
【図15】 ＶＡ ＲＮＡ及びＶＡ ＲＮＡ Ｇ５８Ｔ／Ｇ５９Ｔ／Ｃ６８Ａバリアントのアラインメント。
【図16】 ＲＭＣＩ前の本発明によるＶＡ ＲＮＡ。
【図17】 ＲＭＣＩ後の本発明によるＶＡ ＲＮＡ。
【図18】 ＲＭＣＩ前のｍＣｈｅｒｒｙ及びＥＧＦＰに対するオープンリーディングフレームの同時転写活性化のための本発明による例示的な転写不活性ＤＮＡエレメントの略図。クローニングの制限部位を示す。
【図19】 ＲＭＣＩ後のｍＣｈｅｒｒｙ及びＥＧＦＰに対する転写的に活性なオープンリーディングフレームを有する図１８の本発明による反転ＤＮＡエレメントの略図。クローニングの制限部位を示す。
【図20】 一過性トランスフェクトＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＲＭＣＩのサイトメトリー分析。ＧＦＰ及びｍＣｈｅｒｒｙ発現細胞の平均パーセンテージを標準偏差（エラーバー）と共に示す。各条件を生物学的に三連で試験した。表５によるナンバリング。

代表図 図1本件の代表的な図

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