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ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのヌクレオカプシドタンパク質に結合するモノクローナル抗体、当該抗体をコードする核酸、当該抗体を産生する宿主細胞、当該抗体を含む組成物及びキット、並びに当該抗体を使用することを含む試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを検出する方法

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

図面一覧
【図1A】 抗体／Ｎ相互作用の例示的な速度論的シグネチャを用いた速度論的スクリーニング。（Ａ）スクリーニング後に選択解除。
【図1B】 抗体／Ｎ相互作用の例示的な速度論的シグネチャを用いた速度論的スクリーニング。スクリーニング後に更に推奨。
【図2】 クローン５Ｂ６、１Ｇ９及び１．１．３２の結合定数。
【図3A】 ラングミュア１：１結合モデル（灰色）を重ねた、１．２ｎＭ、３ｎＭ、１１ｎＭ、３３ｎＭ及び１００ｎＭのヌクレオカプシドタンパク質（ＮＣＰ）との抗体相互作用（黒色）。複雑な抗体Ｎ結合挙動にもかかわらず、ＲＭＡＸ ｇｌｏｂａｌを用いた二元ラングミュアモデルを使用することによって、速度論的定量化が十分に高い精度で促進された。複合体結合挙動は、おそらくＮタンパク質の塩基電荷によって誘導される。ｋｄ ２．０Ｅ－０５ｓ－１（図２を参照されたい）の非常に安定なＮ／Ｍ－１．１．３２抗体／抗原複合体は、長期の解離相モニタリングをもたらした。
【図3B】 ラングミュア１：１結合モデル（灰色）を重ねた、１．２ｎＭ、３ｎＭ、１１ｎＭ、３３ｎＭ及び１００ｎＭのヌクレオカプシドタンパク質（ＮＣＰ）との抗体相互作用（黒色）。複雑な抗体Ｎ結合挙動にもかかわらず、ＲＭＡＸ ｇｌｏｂａｌを用いた二元ラングミュアモデルを使用することによって、速度論的定量化が十分に高い精度で促進された。複合体結合挙動は、おそらくＮタンパク質の塩基電荷によって誘導される。ｋｄ ２．０Ｅ－０５ｓ－１（図２を参照されたい）の非常に安定なＮ／Ｍ－１．１．３２抗体／抗原複合体は、長期の解離相モニタリングをもたらした。
【図3C】 ラングミュア１：１結合モデル（灰色）を重ねた、１．２ｎＭ、３ｎＭ、１１ｎＭ、３３ｎＭ及び１００ｎＭのヌクレオカプシドタンパク質（ＮＣＰ）との抗体相互作用（黒色）。複雑な抗体Ｎ結合挙動にもかかわらず、ＲＭＡＸ ｇｌｏｂａｌを用いた二元ラングミュアモデルを使用することによって、速度論的定量化が十分に高い精度で促進された。複合体結合挙動は、おそらくＮタンパク質の塩基電荷によって誘導される。ｋｄ ２．０Ｅ－０５ｓ－１（図２を参照されたい）の非常に安定なＮ／Ｍ－１．１．３２抗体／抗原複合体は、長期の解離相モニタリングをもたらした。
【図4A】 Ｎと抗体対の複合体形成に関するエピトープビニング実験のための例示的なセンサーグラムオーバーレイ。灰色の矢印は、注入の開始及び停止を示す。１）一次抗体、２）ブロッキング混合物、３）Ｎタンパク質、４）一次抗体、５）二次抗体、６）再生。Ａ）一次抗体として１Ｇ９及び二次抗体として５Ｂ６を示す３つのセンサーグラムオーバーレイは、ＮＣＰと免疫複合体を形成する。１Ｇ９を一次抗体及び二次抗体として、第２の１Ｇ９を一次抗体及び二次抗体の代わりに緩衝液として用いた２つの陰性対照。明らかに、陽性反応は、時間セクション５の両方の陰性対照の実行において検出できない。Ｂ）２つのセンサーグラムオーバーレイは、驚くべきことに、１Ｇ９及び５Ｂ６がいわゆる双方向サンドイッチを形成し、２つの明確に分離された自由にアクセス可能なエピトープ領域２及び４を示すことを実証している（表２を参照）。Ｂ）一次抗体として５Ｂ６を使用し、二次抗体として１Ｇ９を使用した。対照として、時間セクション５で応答を示さない二次抗体の代わりに緩衝液を使用した。
【図4B】 Ｎと抗体対の複合体形成に関するエピトープビニング実験のための例示的なセンサーグラムオーバーレイ。灰色の矢印は、注入の開始及び停止を示す。１）一次抗体、２）ブロッキング混合物、３）Ｎタンパク質、４）一次抗体、５）二次抗体、６）再生。Ａ）一次抗体として１Ｇ９及び二次抗体として５Ｂ６を示す３つのセンサーグラムオーバーレイは、ＮＣＰと免疫複合体を形成する。１Ｇ９を一次抗体及び二次抗体として、第２の１Ｇ９を一次抗体及び二次抗体の代わりに緩衝液として用いた２つの陰性対照。明らかに、陽性反応は、時間セクション５の両方の陰性対照の実行において検出できない。Ｂ）２つのセンサーグラムオーバーレイは、驚くべきことに、１Ｇ９及び５Ｂ６がいわゆる双方向サンドイッチを形成し、２つの明確に分離された自由にアクセス可能なエピトープ領域２及び４を示すことを実証している（表２を参照）。Ｂ）一次抗体として５Ｂ６を使用し、二次抗体として１Ｇ９を使用した。対照として、時間セクション５で応答を示さない二次抗体の代わりに緩衝液を使用した。
【図5】 異なる速度論的特性を有する１４個の抗体は、４つの異なるＮエピトープ領域をカバーする。「エピトープ領域」の列の数字は、それぞれのモノクローナル抗体のエピトープビンを示す。
【図6】 エピトープビニング。抗体５Ｂ６は、１４個の試験抗体からなるエピトープビニングマトリックス中の代表的な抗体として示されている。ここでは、１９６の抗体対合の組み合わせを分析した。
【図7】 相対感度（ｒｅｌＳｅｎｓ）及び相対特異度（ｒｅｌＳｐｅｃ）の定義は、２つの比較された方法（ここでは、本発明者らの抗ヌクレオカプシド抗体を用いたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＰＣＲ対Ｅｌｅｃｓｙｓ抗原試験）間の陽性パーセント一致として与えられる。２つの抗体（Ａ）１．１．３２＋５Ｂ６）と３つの抗体（Ｂ）１．１．３２＋５Ｂ６＋１Ｇ９）との比較を示すと、３つの抗体を使用した場合の感度が高いことが実証されている。相対特異度（ｒｅｌＳｐｅｃ）は、両方のシナリオで１００％のままである。
配列表 配列番号１ 抗体１．１．３２：ＣＤＲ－Ｈ１：ＴＹＶＭＨ 配列番号２ 抗体１．１．３２：ＣＤＲ－Ｈ２：ＹＳＤＰＹＮＧＤＳＫＤＮＥＮＦＫＧ 配列番号３ 抗体１．１．３２：ＣＤＲ－Ｈ３：ＧＦＧＮＹＬＦＹＦＤＹ 配列番号４ 抗体１．１．３２：ＣＤＲ－Ｌ１：ＳＡＳＱＤＩＲＤＹＬＮ 配列番号５ 抗体１．１．３２：ＣＤＲ－Ｌ２：ＹＴＳＮＬＨＳ 配列番号６ 抗体１．１．３２：ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＹＳＫＬＰＹＴ 配列番号７ 抗体１．１．３２：ＦＲ－Ｈ１：ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ 配列番号８ 抗体１．１．３２：ＦＲ－Ｈ２：ＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧ 配列番号９ 抗体１．１．３２：ＦＲ－Ｈ３：ＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲ 配列番号１０ 抗体１．１．３２：ＦＲ－Ｈ４：ＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ 配列番号１１ 抗体１．１．３２：ＦＲ－Ｌ１：ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣ 配列番号１２ 抗体１．１．３２：ＦＲ－Ｌ２：ＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹ 配列番号１３ 抗体１．１．３２：ＦＲ－Ｌ３：ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＰＥＤＩＡＴＹＦＣ 配列番号１４ 抗体１．１．３２：ＦＲ－Ｌ４：ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号１５ 抗体１．１．３２：重鎖可変ドメイン：ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＶＭＨＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＳＤＰＹＮＧＤＳＫＤＮＥＮＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＦＧＮＹＬＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ 配列番号１６ 抗体１．１．３２：軽鎖可変ドメイン：ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＳＡＳＱＤＩＲＤＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＹＴＳＮＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＰＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＹＳＫＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号１７ 抗体５Ｂ６：ＣＤＲ－Ｈ１：ＳＹＹＭＳ 配列番号１８ 抗体５Ｂ６：ＣＤＲ－Ｈ２：ＶＭＴＡＧＧＳＴＦＹＡＳＷＡＫＧ 配列番号１９ 抗体５Ｂ６：ＣＤＲ－Ｈ３：ＳＩＤＴＮＹＧＳＳＩ 配列番号２０ 抗体５Ｂ６：ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＡＳＥＤＩＹＴＹＬＳ 配列番号２１ 抗体５Ｂ６：ＣＤＲ－Ｌ２：ＡＡＳＮＬＡＳ 配列番号２２ 抗体５Ｂ６：ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＧＤＹＹＧＳＮＹＧＬＧＴ 配列番号２３ 抗体５Ｂ６：ＦＲ－Ｈ１：ＳＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳ 配列番号２４ 抗体５Ｂ６：ＦＲ－Ｈ２：ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ 配列番号２５ 抗体５Ｂ６：ＦＲ－Ｈ３：ＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲ 配列番号２６ 抗体５Ｂ６：ＦＲ－Ｈ４：ＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬ 配列番号２７ 抗体５Ｂ６：ＦＲ－Ｌ１：ＤＶＶＭＴＱＴＰＡＳＭＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＫＣ 配列番号２８ 抗体５Ｂ６：ＦＲ－Ｌ２：ＷＹＱＱＱＳＧＱＰＰＫＶＬＩＹ 配列番号２９ 抗体５Ｂ６：ＦＲ－Ｌ３：ＧＶＳＳＲＦＫＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣ 配列番号３０ 抗体５Ｂ６：ＦＲ－Ｌ４：ＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ 配列番号３１ 抗体５Ｂ６：重鎖可変ドメイン：ＳＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＳＹＹＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＭＴＡＧＧＳＴＦＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＳＩＤＴＮＹＧＳＳＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬ 配列番号３２ 抗体５Ｂ６：軽鎖可変ドメイン：ＤＶＶＭＴＱＴＰＡＳＭＳＥＰＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＥＤＩＹＴＹＬＳＷＹＱＱＱＳＧＱＰＰＫＶＬＩＹＡＡＳＮＬＡＳＧＶＳＳＲＦＫＧＳＲＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＧＤＹＹＧＳＮＹＧＬＧＴＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ 配列番号３３ 抗体１Ｇ９：ＣＤＲ－Ｈ１：ＴＹＡＶＮ 配列番号３４ 抗体１Ｇ９：ＣＤＲ－Ｈ２：ＶＩＤＧＳＧＳＴＹＹＡＮＷＡＫＧ 配列番号３５ 抗体１Ｇ９：ＣＤＲ－Ｈ３：ＧＡＧＴＤＮＦＧＮＬＮＬ 配列番号３６ 抗体１Ｇ９：ＣＤＲ－Ｌ１：ＱＡＳＥＳＩＳＳＷＬＡ 配列番号３７ 抗体１Ｇ９：ＣＤＲ－Ｌ２：ＲＡＳＴＬＡＳ 配列番号３８ 抗体１Ｇ９：ＣＤＲ－Ｌ３：ＱＱＤＹＳＴＳＮＩＤＮＴ 配列番号３９ 抗体１Ｇ９：ＦＲ－Ｈ１：ＳＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳ 配列番号４０ 抗体１Ｇ９：ＦＲ－Ｈ２：ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧ 配列番号４１ 抗体１Ｇ９：ＦＲ－Ｈ３：ＲＦＴＩＳＫＡＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲ 配列番号４２ 抗体１Ｇ９：ＦＲ－Ｈ４：ＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ 配列番号４３ 抗体１Ｇ９：ＦＲ－Ｌ１：ＤＶＶＭＴＱＴＰＡＳＶＥＶＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣ 配列番号４４ 抗体１Ｇ９：ＦＲ－Ｌ２：ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹ 配列番号４５ 抗体１Ｇ９：ＦＲ－Ｌ３：ＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＧＶＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣ 配列番号４６ 抗体１Ｇ９：ＦＲ－Ｌ４：ＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ 配列番号４７ 抗体１Ｇ９：重鎖可変ドメイン：ＳＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＳＴＹＡＶＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＤＧＳＧＳＴＹＹＡＮＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＡＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＡＧＴＤＮＦＧＮＬＮＬＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ 配列番号４８ 抗体１Ｇ９：軽鎖可変ドメイン：ＤＶＶＭＴＱＴＰＡＳＶＥＶＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＥＳＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＲＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＧＶＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＱＤＹＳＴＳＮＩＤＮＴＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ 配列番号４９ ＥｃＳｌｙＤ－ＥｃＳｌｙＤ－ＣｏＶ－２－Ｎ（１－４１９）：ＭＫＶＡＫＤＬＶＶＳＬＡＹＱＶＲＴＥＤＧＶＬＶＤＥＳＰＶＳＡＰＬＤＹＬＨＧＨＧＳＬＩＳＧＬＥＴＡＬＥＧＨＥＶＧＤＫＦＤＶＡＶＧＡＮＤＡＹＧＱＹＤＥＮＬＶＱＲＶＰＫＤＶＦＭＧＶＤＥＬＱＶＧＭＲＦＬＡＥＴＤＱＧＰＶＰＶＥＩＴＡＶＥＤＤＨＶＶＶＤＧＮＨＭＬＡＧＱＮＬＫＦＮＶＥＶＶＡＩＲＥＡＴＥＥＥＬＡＨＧＨＶＨＧＡＨＤＨＨＨＤＨＤＨＤＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＫＶＡＫＤＬＶＶＳＬＡＹＱＶＲＴＥＤＧＶＬＶＤＥＳＰＶＳＡＰＬＤＹＬＨＧＨＧＳＬＩＳＧＬＥＴＡＬＥＧＨＥＶＧＤＫＦＤＶＡＶＧＡＮＤＡＹＧＱＹＤＥＮＬＶＱＲＶＰＫＤＶＦＭＧＶＤＥＬＱＶＧＭＲＦＬＡＥＴＤＱＧＰＶＰＶＥＩＴＡＶＥＤＤＨＶＶＶＤＧＮＨＭＬＡＧＱＮＬＫＦＮＶＥＶＶＡＩＲＥＡＴＥＥＥＬＡＨＧＨＶＨＧＡＨＤＨＨＨＤＨＤＨＤＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＭＳＤＮＧＰＱＮＱＲＮＡＰＲＩＴＦＧＧＰＳＤＳＴＧＳＮＱＮＧＥＲＳＧＡＲＳＫＱＲＲＰＱＧＬＰＮＮＴＡＳＷＦＴＡＬＴＱＨＧＫＥＤＬＫＦＰＲＧＱＧＶＰＩＮＴＮＳＳＰＤＤＱＩＧＹＹＲＲＡＴＲＲＩＲＧＧＤＧＫＭＫＤＬＳＰＲＷＹＦＹＹＬＧＴＧＰＥＡＧＬＰＹＧＡＮＫＤＧＩＩＷＶＡＴＥＧＡＬＮＴＰＫＤＨＩＧＴＲＮＰＡＮＮＡＡＩＶＬＱＬＰＱＧＴＴＬＰＫＧＦＹＡＥＧＳＲＧＧＳＱＡＳＳＲＳＳＳＲＳＲＮＳＳＲＮＳＴＰＧＳＳＲＧＴＳＰＡＲＭＡＧＮＧＧＤＡＡＬＡＬＬＬＬＤＲＬＮＱＬＥＳＫＭＳＧＫＧＱＱＱＱＧＱＴＶＴＫＫＳＡＡＥＡＳＫＫＰＲＱＫＲＴＡＴＫＡＹＮＶＴＱＡＦＧＲＲＧＰＥＱＴＱＧＮＦＧＤＱＥＬＩＲＱＧＴＤＹＫＨＷＰＱＩＡＱＦＡＰＳＡＳＡＦＦＧＭＳＲＩＧＭＥＶＴＰＳＧＴＷＬＴＹＴＧＡＩＫＬＤＤＫＤＰＮＦＫＤＱＶＩＬＬＮＫＨＩＤＡＹＫＴＦＰＰＴＥＰＫＫＤＫＫＫＫＡＤＥＴＱＡＬＰＱＲＱＫＫＱＱＴＶＴＬＬＰＡＡＤＬＤＤＦＳＫＱＬＱＱＳＭＳＳＡＤＳＴＱＡ

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