特許7857356IP Force 特許公報全文掲載

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本出願は、米国仮出願第６１／３６１，８３０号（２０１０年７月６日出願）、および同第６１／３７８，８３７号（２０１０年８月３１日出願）の利益を主張し、両方の米国仮出願の全容は、全ての目的のために、参考として本明細書に援用される。

課題を解決するための手段[発明の詳細な説明]から抜粋

（発明の開示） 本発明によれば、免疫原をコードするＲＮＡは、免疫の目的で、リポソーム中で送達される。リポソームは、５．０～７．６の範囲のｐＫａを有する脂質を含む。理想的には、この範囲のｐＫａを有する脂質は、三級アミンを有する；このような脂質は、四級アミン基を有する脂質（例えば、ＤＯＴＡＰもしくはＤＣ－Ｃｈｏｌ）とは異なって挙動する。生理学的ｐＨにおいて、５．０～７．６の範囲のｐＫａを・・・　続きを知財ポータルサイト IP Force にログインして見る

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1】 図１は、染色されたＲＮＡを有するゲルを示す。レーンは、（１）マーカー、（２）裸のレプリコン、（３）ＲＮａｓｅ処理後のレプリコン、（４）リポソームに封入されたレプリコン、（５）ＲＮａｓｅ処理後のリポソーム、（６）ＲＮａｓｅで処理し、次いで、フェノール／クロロホルム抽出に供したリポソーム、を示す。
【図2】 図２は、リポソームの電子顕微鏡写真である。
【図3】 図３は、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｅｎＤＭＡおよびＤＯＤＭＡの構造を示す。
【図4】 図４は、染色されたＲＮＡを有するゲルを示す。レーンは、（１）マーカー、（２）裸のレプリコン、（３）リポソームに封入されたレプリコン、（４）ＲＮａｓｅで処理し、次いで、フェノール／クロロホルム抽出に供したリポソームを示す。
【図5】 図５は、ビリオンパッケージングされたレプリコン（四角）として、裸のＲＮＡ（菱形）として、もしくはリポソーム中（＋＝０．１μｇ、×＝１μｇ）においてＲＮＡを送達した後、１日目、３日目および６日目でのタンパク質発現を示す。
【図6】 図６は、リポソーム封入ＲＮＡの４種の異なる用量を送達した後、１日目、３日目および６日目でのタンパク質発現を示す。
【図7】 図７は、ビリオンパッケージングされたレプリコン（ＶＲＰもしくはＶＳＲＰ）、１μｇ 裸のＲＮＡ、および１μｇ リポソーム封入ＲＮＡを与えられた動物における抗Ｆ ＩｇＧ力価を示す。
【図8】 図８は、ＶＲＰ、１μｇ 裸のＲＮＡ、および０．１ｇもしくは１μｇのリポソーム封入ＲＮＡを与えられた動物における抗Ｆ ＩｇＧ力価を示す。
【図9】 図９は、ＶＲＰ、または０．１ｇもしくは１μｇのリポソーム封入ＲＮＡのいずれかを与えられた動物における中和抗体力価を示す。
【図10】 図１０は、裸のＲＮＡ（丸）、リポソーム封入ＲＮＡ（三角および四角）、またはリポプレックス（ｌｉｐｏｐｌｅｘ）（逆三角）としてレプリコンを送達した後の発現レベルを示す。
【図11】 図１１は、レプリコンを裸のＲＮＡとして（０．０１～１μｇ）、リポソーム封入ＲＮＡとして（０．０１～１０μｇ）、またはビリオンとしてパッケージングされたものとして（ＶＲＰ、１０６ 感染単位もしくはＩＵ）、送達した後のＦ特異的ＩｇＧ力価（２回目の用量後２週間）を示す。
【図12】 図１２は、レプリコンを裸のＲＮＡとして（１μｇ）、リポソーム封入ＲＮＡとして（０．１もしくは１μｇ）、またはビリオンとしてパッケージングされたものとして（ＶＲＰ、１０６ ＩＵ）、送達した後のＦ特異的ＩｇＧ力価（丸）およびＰＲＮＴ力価（四角）を示す。ナイーブマウスの力価もまた、示す。実線は、幾何平均を示す。
【図13】 図１３は、２回目の用量の４週間後、Ｆタンパク質中の主要なエピトープを表す合成ペプチドで再刺激した後の細胞内サイトカイン生成を示す。ｙ軸は、ＣＤ８＋ＣＤ４－の％サイトカイン＋を示す。
【図14A】 図１４は、仔ウシの免疫後６３日間（図１４Ａ）および２１０日間（図１４Ｂ）にわたるＦ特異的ＩｇＧ力価（平均ｌｏｇ１０力価±標準偏差）を示す。その３つの線は、６３日目において容易に区別され、下から上へ：ＰＢＳ陰性コントロール；リポソーム送達ＲＮＡ；および「Ｔｒｉａｎｇｌｅ ４」製品である。
【図14B】 図１４は、仔ウシの免疫後６３日間（図１４Ａ）および２１０日間（図１４Ｂ）にわたるＦ特異的ＩｇＧ力価（平均ｌｏｇ１０力価±標準偏差）を示す。その３つの線は、６３日目において容易に区別され、下から上へ：ＰＢＳ陰性コントロール；リポソーム送達ＲＮＡ；および「Ｔｒｉａｎｇｌｅ ４」製品である。
【図15】 図１５は、リポソームにおいて使用される脂質のｐＫａに対する６日目のＳＥＡＰ発現（相対強度）を示す。丸は、ＤＳＰＣを有するリポソームについてのレベルを示し、四角は、ＤＳＰＣなしのリポソームについてのレベルを示す；ときおり、四角と丸は重なっており、四角だけが所定のｐＫａについて見えるようにしている。
【図16】 図１６は、Ｆタンパク質をコードするレプリコンの第１の投与の２週間後の、抗Ｆ力価の発現（ＲＶ０１，１００％に対して）を示す。力価は、図１５におけるのと同じようにしてｐＫａに対してプロットされている。星印は、他の脂質より高いｐＫａを有するカチオン性脂質を使用したＲＶ０２を示す。三角は、ＤＳＰＣを欠いているリポソームについてのデータを示す；丸は、ＤＳＰＣを含んだリポソームについてのデータである。
【図17】 図１７は、左から右に、ＲＶ０１、ＲＶ１６、ＲＶ１７、ＲＶ１８もしくはＲＶ１９を使用するリポソームにおけるレプリコン送達後の、総ＩｇＧ力価を示す。バーは、平均値を示す。各場合における上側のバーは、２ｗｐ２（すなわち、第２の投与の２週間後）であるのに対して、下側のバーは、２ｗｐ１である。
【図18】 図１８は、１３のマウス群におけるＩｇＧ力価を示す。各々の丸は、個々のマウスであり、実線は、幾何平均を示す。水平な破線は、アッセイの検出限界である。１３の群は、左から右に、以下に示されるようにＡからＭである。
【図19】 図１９は、ｐＤＣによって放出された（Ａ）ＩＬ－６および（Ｂ）ＩＦＮα（ｐｇ／ｍｌ）を示す。４対のバーがあり、左から右に：コントロール；ＲＮＡ＋ＤＯＴＡＰで免疫；ＲＮＡ＋リポフェクタミンで免疫；およびリポソーム中のＲＮＡで免疫である。各対において、その黒いバーは、野生型マウスであり、灰色は、ｒｓｑ１変異体である。

代表図 図1本件の代表的な図

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