【図1】 蒸発なし（単純希釈）、完全蒸発、および一部蒸発ワークフローを使用した分析物テストステロンについての分析物シグナル（Ａ）および回収率（Ｂ）の比較。６０％ ＭｅＯＨ中に６０ｐｇ／ｍＬのテストステロンを含むサンプルを、４０μＬアリコートの３つの試験群に分配した。最初の試験群では、サンプルを４０μＬのＨ２Ｏで希釈して８０μＬの総最終体積とし、対照試験群（１００％の回収率）とした。第２および第３の試験群では、サンプルを蒸発させて完全に乾燥させ（完全蒸発）、次いで４０μＬの３０％ ＭｅＯＨで再構成するか、または１０μＬの体積まで蒸発させ（一部蒸発）、次いで３０μＬの３０％ ＭｅＯＨで希釈して総最終体積を４０μＬにした。全てのサンプルは同じ量の分析物を含み、最終的な有機物含有量は３０％ ＭｅＯＨであった。

【図2】 検出感度およびクロマトグラフィー性能を最大化するように最適化された標準希釈ワークフロー（上）ならびに完全および一部蒸発ワークフロー（下）の概略図。図１（中央）で使用される完全蒸発ワークフローも示す。全てのワークフローは、１５０μＬのサンプルおよび内部標準を混合し、結合タンパク質から分析物を解除するための前処理に加え、抗体被覆磁気ビーズで分析物を濃縮し、水で２回洗浄することによって未結合マトリックス成分を最小化することによって進行する。６０μＬまたは１５０μＬの８０％ ＭｅＯＨ溶出緩衝液を使用して分析物を放出し、続いて標準および蒸発ワークフローのためにそれぞれ４０μＬまたは１３０μＬの溶出液を新しい反応容器に移した。通常のワークフローでは、４０μＬの溶出液を６７μＬの水で希釈し、蒸発ワークフローでは、サンプルを蒸発させて完全に乾燥させるか（完全蒸発）、または２０～４０μＬまで蒸発させ（一部蒸発）、サンプルを場合により水で希釈して４０μＬの最終体積を得る。全てのワークフローについて、ＬＣ－ＭＳ分析のために２０μＬが注入される。

【図3】 標準的なワークフロー（図３）および最適化された一部蒸発ワークフロー（図４）とを比較する、ＵｎｉＤｉｌでスパイクされた２ｐｇ／ｍＬエストラジオールの抽出イオンクロマトグラム。分析物クロマトグラフィーピークは、蒸発アッセイを使用して明確に検出し得たが、標準アッセイでは検出し得なかった。

【図4】 標準的なワークフロー（図３）および最適化された一部蒸発ワークフロー（図４）とを比較する、ＵｎｉＤｉｌでスパイクされた２ｐｇ／ｍＬエストラジオールの抽出イオンクロマトグラム。分析物クロマトグラフィーピークは、蒸発アッセイを使用して明確に検出し得たが、標準アッセイでは検出し得なかった。

【図5】 分析物／ＩＳＴＤピーク面積比は、標準的なワークフローおよび最適化された蒸発ワークフローについて同じであり（Ａ）、分析物ピーク面積および分析物濃度の線形適合は、蒸発ワークフローがＵｎｉＤｉｌに添加されたエストラジオール（図５）およびＧｏｌｄｅｎＷｅｓｔＳｅｒｕｍに添加されたテストステロン（図６）について勾配の傾きが大きい（Ｂ）ことを実証した。

【図6】 分析物／ＩＳＴＤピーク面積比は、標準的なワークフローおよび最適化された蒸発ワークフローについて同じであり（Ａ）、分析物ピーク面積および分析物濃度の線形適合は、蒸発ワークフローがＵｎｉＤｉｌに添加されたエストラジオール（図５）およびＧｏｌｄｅｎＷｅｓｔＳｅｒｕｍに添加されたテストステロン（図６）について勾配の傾きが大きい（Ｂ）ことを実証した。