特許7901069IP Force 特許公報全文掲載

ホーム > 特許ランキング > エフ．ホフマン−ラ　ロシュ　アーゲー > 特許7901069

技術分野

１．発明の分野 本発明は、α－１，６－コア－フコシル化前立腺特異抗原（ＰＳＡ）及びα－１，６－コア－フコース残基を含むその部分配列に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片に関する。抗体及び抗原結合断片は、コア－フコシル化ＰＳＡ又はコア－フコシル化ＰＳＡ部分配列と、コア－フコース残基を欠くアグリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）ＰＳＡを含む他のグリコシル化ＰＳＡ種及びその部分配列、他の状況ではコア－フコシル化グリカンとを有意に識別する。本発明はさらに、本発明の抗体の軽鎖可変領域又は重鎖可変領域をコードする核酸分子、並びに前記核酸分子を含むベクターに関する。本発明はまた、本発明のベクターを含む宿主細胞、並びに本発明の宿主細胞を適切な条件下で培養すること及び産生された抗体を単離することを含む、本発明の抗体又は抗原結合断片を産生するための方法に関する。さらに、本発明は、本発明の方法によって得ることができる抗体に関し、本発明の抗体若しくは抗原結合断片の少なくとも１つ、本発明の核酸分子、本発明のベクター、本発明の宿主細胞又は本発明の方法によって産生される抗体を含む組成物に関する。本発明はまた、生物学的試料中のコア－フコシル化ＰＳＡ又はそのコア－フコシル化部分配列を検出及び識別するための、本発明の抗体又は抗原結合断片の使用

この特許の権利範囲[特許請求の範囲]

知財ポータルサイト IP Force にログインして確認する (無料)

この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1】 α－１，６－コア－フコシル化を強調する、Ａｓｎ－６９（Ｎ６９）におけるＰＳＡのＮ－グリカン構造を示す概略図である。
【図2】 ｆｕｃＰＳＡ特異的抗体の免疫化及びスクリーニングに使用される糖ペプチド。図２Ａは、免疫化及び陽性スクリーニングに使用されるＰＳＡ糖ペプチドのフコシル化部分配列を示す（ＰＳＡ（６７－７９）－Ｇ０Ｆ、すなわち配列番号１８の配列を有する式Ｉの糖ペプチド）。図２Ｂは、ネガティブ選択に使用される、α－１，６－コア－フコースを欠くＰＳＡ糖ペプチドのグリコシル化部分配列を示す（同様に配列番号１８の配列を有するＰＳＡ（６７－７９）－Ｇ２、すなわち式ＩＩの糖ペプチド）。図２Ｃは、ネガティブ選択に使用される、単離されたコア－フコシル化グリカン、すなわち式ＩＩＩのグリコシル化アスパラギンを示す。図２Ａ～図２Ｃで使用される記号は、図１で使用されるものと同じであり、すなわち、図１の凡例で定義されるものと同じ分子を表す。図２Ａ及び図２Ｂの糖ペプチドのアミノ酸配列を配列番号１８に示す。
【図3A】 α－１，６－コア－フコシル化ＰＳＡ糖ペプチド（ＰＳＡ（６７－７９）－Ｇ０Ｆ／図中「Ｇ０Ｆ」として示される式（Ｉ）の糖ペプチド）及び非フコシル化ＰＳＡ糖ペプチド（ＰＳＡ（６７－７９）－Ｇ２／「Ｇ２」として示される式（ＩＩ）の糖ペプチド）への結合についての、６つの選択された抗体及び２つの選択されない抗体のＳＲＰ Ｂｉａｃｏｒｅ動態学的データ。図は、Ｂｉａｃｏｒｅ ｓｅｎｓｏｒｇｒａｍ重ね合わせプロットを示す。黒い実線は生データであり、灰色の点線はラングミュアフィッティング曲線である：Ａ～Ｂ（１３Ｃ５）、Ｃ～Ｄ（２Ｃ１１）、Ｅ～Ｆ（２Ｈ９）、Ｇ～Ｈ（２Ｅ９）、Ｉ～Ｊ（３Ｈ６）、Ｋ～Ｌ（３Ｂ１０）、Ｍ～Ｎ（１３Ｅ１２）及びＯ～Ｐ（１５Ｆ１０）。ＰＳＡ（６７～７９）－Ｇ０Ｆへの結合、０～９００ｎＭ注入；ラングミュア１：１にフィッティング。ＰＳＡ（６７～７９）－Ｇ２への結合、９００ｎＭ注入；ラングミュア１：１にフィッティング。
【図3B】 図３Ａの説明を参照。
【図3C】 図３Ａの説明を参照。
【図3D】 図３Ａの説明を参照。
【図3E】 図３Ａの説明を参照。
【図3F】 図３Ａの説明を参照。
【図3G】 図３Ａの説明を参照。
【図3H】 図３Ａの説明を参照。
【図3I】 図３Ａの説明を参照。
【図3J】 図３Ａの説明を参照。
【図3K】 図３Ａの説明を参照。
【図3L】 図３Ａの説明を参照。
【図3M】 図３Ａの説明を参照。
【図3N】 図３Ａの説明を参照。
【図3O】 図３Ａの説明を参照。
【図3P】 図３Ａの説明を参照。
【図4】 抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体２Ｈ９による精液から単離された天然ＰＳＡの例示的なウエスタンブロット分析。図４Ａ：レーン１～４は、それぞれ５μｇ、２．５μｇ、１μｇ及び０．５μｇの低下する天然ＰＳＡ濃度を含む。図４Ｂ：５μｇの天然ＰＳＡ（約８０％フコシル化ＰＳＡを含む試料；レーン１）に対する、又は５μｇの脱グリコシル化天然ＰＳＡ（レーン２）に対する２Ｈ９の反応性。
【図5】 市販の抗ＰＳＡマウスモノクローナル抗体（ＥＲ－ＰＲ８、Ｒｏｃｈｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号：７６０－４２７１）を使用して検出される、前立腺腺癌のホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）生検における全ＰＳＡ、又は本発明の抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体（２Ｅ９、３Ｂ１０、３Ｈ６、１３Ｃ５、２Ｈ９及び２Ｃ１１を使用して検出されるコア－フコシル化ＰＳＡの免疫組織化学的染色の代表的な画像。
【図6】 本発明の抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体の、ＦＦＰＥ前立腺腺癌試料中の抗原への結合の阻害について試験した糖ペプチド。（Ａ）α－１，６－コアフコースを有する二糖を含有するフコシル化ＰＳＡ糖ペプチド、「ＤＰ」；（Ｂ）α－１，６－コアフコースを欠く九糖（ノナサッカリド）を含有する非フコシル化ＰＳＡ糖ペプチド、ＰＳＡ（６７－７９）－Ｇ２／式（ＩＩ）の糖ペプチド；（Ｃ）アグリコシル化ＰＳＡ断片（配列番号１８）；（Ｄ）ＰＳＡと同じグリカン構造（特に、ＰＳＡ（６７－７９）－Ｇ０Ｆ／式（Ｉ）の糖ペプチドと同じグリカン）を含有するフコシル化非ＰＳＡ糖ペプチド（「ＡＦＰ」と称されるアルファフェトプロテイン）。図６Ａ～図６Ｄで使用される記号は、図１で使用されるものと同じであり、すなわち、図１の凡例で定義されるものと同じ分子を表す。図６Ａ～図６Ｃの糖ペプチド及び／又はペプチドのアミノ酸配列を配列番号１８に示す。
【図7A】 前立腺腺癌試料のＦＦＰＥ試料のＩＨＣ分析における、ＰＳＡ（６７－７９）－Ｇ０Ｆ／式（Ｉ）の糖ペプチド（図中で「Ｇ０Ｆペプチド」と呼ばれる）による例示的な抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体結合の阻害。上から下の列に向かって、例示的な抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体、Ａ：２Ｅ９、３Ｂ１０、及び３Ｈ６、それぞれ２．５μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ、及び２．５μｇ／ｍｌ；Ｂ：１３Ｃ５、２Ｈ９及び２Ｃ１１、それぞれ３μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ及び１μｇ／ｍｌ。Ａ及びＢについては、抗体は、左列から右列へ向かって、ＰＢＳ緩衝液（対照）、又は５×１０－９Ｍ、５×１０－８Ｍ、５×１０－７Ｍ、５×１０－６Ｍ、若しくは５×１０－５ＭのＰＳＡ（６７－７９）－Ｇ０Ｆと共にプレインキュベートされた。
【図7B】 図７Ａの説明を参照。
【図8A】 前立腺腺癌試料のＦＦＰＥ試料のＩＨＣ分析におけるフコシル化ＰＳＡ二糖ペプチド（ＤＰ）による抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体結合の阻害。上から下の列に向かって、例示的な抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体、Ａ：２Ｅ９、３Ｂ１０、及び３Ｈ６、それぞれ２．５μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ、及び２．５μｇ／ｍｌ；Ｂ：１３Ｃ５、２Ｈ９及び２Ｃ１１、それぞれ３μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ及び１μｇ／ｍｌ。Ａ及びＢについては、抗体は、左列から右列へ向かって、ＰＢＳ緩衝液（対照）、又は５×１０－９Ｍ、５×１０－８Ｍ、５×１０－７Ｍ、５×１０－６Ｍ、若しくは５×１０－５ＭのＤＰ共にプレインキュベートされた。
【図8B】 図８Ａの説明を参照。
【図9A】 前立腺腺癌試料のＦＦＰＥ試料のＩＨＣ分析において、例示的な抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体結合は非フコシル化ＰＳＡ糖ペプチド（ＰＳＡ（６７－７９）－Ｇ２／式（ＩＩ）の糖ペプチド、「Ｇ２」ペプチドと呼ばれる）により阻害されない。上から下の列に向かって、例示的な抗－１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体、Ａ：２Ｅ９、３Ｂ１０、及び３Ｈ６、それぞれ２．５μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ；Ｂ：１３Ｃ５、２Ｈ９及び２Ｃ１１、それぞれ３μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ及び１μｇ／ｍｌ。Ａ及びＢについては、抗体は、左列から右列へ向かって、ＰＢＳ緩衝液（対照）、又は５×１０－９Ｍ、５×１０－８Ｍ、５×１０－７Ｍ、５×１０－６Ｍ、又は５×１０－５ＭのＧ２共にプレインキュベートされた。
【図9B】 図９Ａの説明を参照。
【図10A】 アグリコシル化ＰＳＡ断片（ａａ６７－７９）；配列番号１８によって例示的抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体結合は阻害されない。上から下の列に向かって、例示的な抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体、Ａ：２Ｅ９、３Ｂ１０、及び３Ｈ６、それぞれ２．５μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ、及び２．５μｇ／ｍｌ；Ｂ：１３Ｃ５、２Ｈ９及び２Ｃ１１、それぞれ３μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ及び１μｇ／ｍｌ。Ａ及びＢについては、抗体は、左列から右列へ向かって、ＰＢＳ緩衝液（対照）、又は５×１０－９Ｍ、５×１０－８Ｍ、５×１０－７Ｍ、５×１０－６Ｍ、又は５×１０－５Ｍのアグリコシル化ＰＳＡ断片共にプレインキュベートされた。
【図10B】 図１０Ａの説明を参照。
【図11A】 ＰＳＡ（６７－７９）－Ｇ０Ｆ（「ＡＦＰ」ペプチドと称される）と同じグリカン構造を含有するコア－フコシル化無関係ペプチドによって例示的抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体結合は阻害されない。例示的な抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体、Ａ：２Ｅ９、３Ｂ１０、及び３Ｈ６、それぞれ２．５μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ、及び２．５μｇ／ｍｌ；Ｂ：１３Ｃ５、２Ｈ９及び２Ｃ１１、それぞれ３μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ及び１μｇ／ｍｌ。Ａ及びＢについては、抗体は、左列から右列へ向かって、ＰＢＳ緩衝液（対照）、又は５×１０－９Ｍ、５×１０－８Ｍ、５×１０－７Ｍ、５×１０－６Ｍ、又は５×１０－５ＭのＡＦＰ共にプレインキュベートされた。
【図11B】 図１１Ａの説明を参照。
【図12A】 抗全ＰＳＡ抗体Ｋ－５４７９４（捕捉抗体）又は６つの例示的抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体２Ｅ９、３Ｂ１０、３Ｈ６、１３Ｃ５、２Ｈ９、及び２Ｃ１１（検出抗体）のうちの１つを、天然（菱形）及び脱グリコシル化（四角）ＰＳＡ抗原と共に使用した、人工血清マトリックス中にスパイクした後のサンドイッチＥＬＩＳＡの反応性。
【図12B】 図１２Ａの説明を参照。
【図12C】 図１２Ａの説明を参照。
【図12D】 図１２Ａの説明を参照。
【図12E】 図１２Ａの説明を参照。
【図12F】 図１２Ａの説明を参照。
【図13A】 抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体の重鎖可変ドメインのコンセンサス配列（配列番号１９）並びに例示的抗体２Ｅ９、２Ｃ１１、２Ｈ９、３Ｂ１０、３Ｈ６及び１３Ｃ５の重鎖可変ドメイン（それぞれ配列番号５５、５９、６５、６１、６３及び５７）とのアラインメント。
【図13B】 抗１，６ｆｕｃＰＳＡ抗体の軽鎖可変ドメインのコンセンサス配列（配列番号２０）並びに例示的抗体２Ｅ９、２Ｃ１１、２Ｈ９、３Ｂ１０、３Ｈ６及び１３Ｃ５の軽鎖可変ドメイン（それぞれ配列番号５６、６０、６６、６２、６４及び５８）とのアラインメント。

代表図 図1本件の代表的な図

全ての図面はログインすると無料で閲覧できます。ログイン・ユーザー登録

［広告欄］

ログインすれば広告は減ります

ログインすれば広告は減ります

Copyright © Science Impact Inc. All Rights Reserved.