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特表 2022-513388出願番号 特願 2021-547925
持続性活性を有するテトラサイクリン複合体
出願人 フラウンホーファー−ゲゼルシャフト・ツール・フェルデルング・デル・アンゲヴァンテン・フォルシュング・アインゲトラーゲネル・フェライン（識別番号 500341779）
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公報発行日 2022年2月7
公報URL https://ipforce.jp/patent-jp-P_P1-2022-513388 ログイン済みの方はこのURLへ
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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】
(54)【発明の名称】持続性活性を有するテトラサイクリン複合体
(51)【国際特許分類】
【ＦＩ】
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】
(86)(22)【出願日】
(85)【翻訳文提出日】
(86)【国際出願番号】
(87)【国際公開番号】
(87)【国際公開日】
(31)【優先権主張番号】18203133.6
(32)【優先日】
(33)【優先権主張国・地域又は機関】
(31)【優先権主張番号】19193328.2
(32)【優先日】
(33)【優先権主張国・地域又は機関】
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．テフロン
(71)【出願人】
【識別番号】500341779
【氏名又は名称】フラウンホーファー－ゲゼルシャフト・ツール・フェルデルング・デル・アンゲヴァンテン・フォルシュング・アインゲトラーゲネル・フェライン
(74)【代理人】
【識別番号】100107766
【弁理士】
【氏名又は名称】伊東 忠重
(74)【代理人】
【識別番号】100070150
【弁理士】
【氏名又は名称】伊東 忠彦
(74)【代理人】
【識別番号】100135079
【弁理士】
【氏名又は名称】宮崎 修
(72)【発明者】
【氏名】キーゾフ，アンドレアス
(72)【発明者】
【氏名】ブッフホルツ，ミルコ
(72)【発明者】
【氏名】サレンベ，サンドラ
(72)【発明者】
【氏名】メーデル，カルステン
(72)【発明者】
【氏名】キルヒベルク，マルティン
(72)【発明者】
【氏名】アイック，シグルン
【テーマコード（参考）】
【Ｆターム（参考）】
4C076CC09
4C076CC32
4C076DD41M
4C076FF31
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086DA29
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA12
4C086ZA67
4C086ZB35
4H006AA03
4H006AB20
4H006AC90
4H006BB14
4H006BJ30
4H006BN20
4H006BR70
4H006BS70
4H006BU44
4H048AA03
4H048AB20
4H048VA60
4H048VB10
(57)【要約】
本発明は、一般に、テトラサイクリン抗生物質の制御放出に関する。特に、本発明は、テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又はその製薬上許容される塩、水和物若しくは溶媒和物、及び二価金属カルボキシレートを含む複合体；当該複合体を含む医薬製剤、当該複合体及び当該医薬製剤を製造する方法、並びにヒト若しくは動物の体の治療方法、具体的には、細菌感染の治療及び／若しくは予防、で用いられる複合体又は医薬製剤；並びに／又は、ここで、抗生物質活性は長期間にわたり持続され；並びに／又は急性、慢性又は再発性歯周疾患の治療及び／又は予防のための複合体又は医薬製剤
【特許請求の範囲】
【請求項】
テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又は製薬上許容されるその塩、水和物若しくは溶媒和物、及び二価金属カルボキシレート（ＭＡ２）から形成される複合体、であって、ここで：前記ＴＣ及び前記ＭＡ２のモル比ＴＣ：ＭＡ２は、１：０．８～３．０の範囲であり；
前記二価金属のカチオンＭは、土類アルカリ金属カチオンであり；かつ、
前記Ａは、Ｃ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンであり、
ここで、
前記テトラサイクリン化合物（ＴＣ）は、ミノサイクリン、ドキシサイクリン、クロルテトラサイクリン、ロリテトラサイクリン、チゲサイクリン、デメクロサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、オマダサイクリン、サレサイクリン、エラバサイクリン、クロモサイクリン、９－（Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシルアミド）－６－デメチル－６－デオキシテトラサイクリン及び９－（Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシルアミド）－ミノサイクリンから選択される、複合体。
【請求項】
前記ＴＣ：ＭＡ２の比は、１：２であり；又は前記Ｍは、Ｍｇ２＋及びＣａ２＋から選択され；又は
前記Ａは、アラキジン酸（Ｃ２０）、ステアリン酸（Ｃ１８）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ミリスチン酸（Ｃ１４）、ラウリン酸（Ｃ１２）、カプリル酸（Ｃ１０）、カプリル酸（Ｃ８）、ヒドロキシステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸及びリシノール酸から選択されるカルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである；
請求項１に記載の複合体。
【請求項】
前記ＴＣ：ＭＡ２の比は、１：２であり；かつ前記Ｍは、Ｍｇ２＋及びＣａ２＋から選択され；かつ
前記Ａは、アラキジン酸（Ｃ２０）、ステアリン酸（Ｃ１８）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ミリスチン酸（Ｃ１４）、ラウリン酸（Ｃ１２）、カプリル酸（Ｃ１０）、カプリル酸（Ｃ８）、ヒドロキシステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸及びリシノール酸から選択されるカルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである；
請求項１又は２に記載の複合体。
【請求項】
式［（ＴＣ）・２（ＭｇＡ２）］（式中、前記テトラサイクリン化合物（ＴＣ）は、ミノサイクリン又はその製薬上許容される塩、水和物若しくは溶媒和物である）を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の複合体。
【請求項】
請求項１～４のいずれか一項に記載の複合体、及び場合によっては、１又はそれ以上の製薬上許容される賦形剤を含む、医薬製剤。
【請求項】
局所投与用に配置され、及び／又は押出物、粒子、顆粒、粉末、フィルム、ストリップ、コンパクト、チップ、ペースト、クリーム、ゲル、乳液、懸濁液、塗布剤、軟膏、バーム、ローション、点眼液、スプレー、局所エアロゾル、局所溶液、局所懸濁液、皮膚パッチ及び不織布からなる群より選択される、請求項５に記載の医薬製剤。
【請求項】
さらに、賦形剤として、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（乳酸コグリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリヒドロキシ酪酸（ＰＨＢ）若しくはポリカプロラクトン（ＰＣＬ）等の生分解性ポリエステル；ＰＬＡ－ＰＣＬ及びＰＬＧＡ－ＰＣＬ等の混合生分解性ポリエステル；、ＰＥＧ－ＰＬＡ、ＰＥＧ－ＰＬＧＡ、ＰＥＧ－ＰＣＬ及びＰＥＧ－ＰＣＬ－ＰＬＧＡ等の生分解性ＰＥＧ化ジブロック（ＡＢ）若しくはトリブロック（ＡＢＡ又はＢＡＢ）コポリマー；並びにペクチン；から選択される１若しくはそれ以上の生分解性ポリマーを含み、かつ／又は、ここで、前記テトラサイクリン化合物（ＴＣ）の総含有量が５～２０質量％の範囲である、請求項５又は６に記載の医薬製剤。
【請求項】
前記生分解性ポリマーは、質量平均分子量範囲は４～２５０ｋＤａであり；ガラス転移温度は４２～４８℃であり；固有粘度［ｄｌ／ｇ］（クロロホルム中０．１％、２５℃）は０．０３～１．７０であり；及び／又はＬ／Ｇ比が５／９５～９５／５であるＰＬＧＡコポリマー（ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－グリコリド））である、請求項７に記載の医薬製剤。
【請求項】
前記生分解性ポリマーは、Ｌ／Ｇ比が２５／７５～７５／２５であるＰＬＧＡコポリマーであり；質量平均分子量範囲（ｋＤａ）は５～９０であり；固有粘度［ｄｌ／ｇ］（クロロホルム中０．１％、２５℃）は０．１４～０．８２であり；及び／又は末端がエステル、アルキルエステル又はＰＥＧ基である、請求項７又は８に記載の医薬製剤。
【請求項】
前記生分解性ポリマーは、質量平均分子量範囲が７，０００～３８，０００及び／又は固有粘度［ｄｌ／ｇ］（クロロホルム中０．１％、２５℃）が０．１６～０．４４である、ＰＬＡ／ＰＧＡ比が５０：５０であるポリ（ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－グリコリド）、又は、質量平均分子量範囲が３０～８５ｋＤａ及び／又は固有粘度［ｄｌ／ｇ］（クロロホルム中０．１％、２５℃）が０．４５～０．８０である、ＰＬＡ／ＰＧＡ比が５０：５０及びＰＥＧ末端基（ＰＬＧＡ－ＰＥＧ）であるポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－グリコリド）、である、請求項７～９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項】
らせん状押出物の形態である、請求項５～１０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項】
断面が、本質的に円形又は本質的に楕円形であり、及び／又は最大断面直径が、０．１～１０ｍｍ、０．２～５ｍｍ、０．３～１ｍｍ、０．４～０．８ｍｍ、０．３～０．６ｍｍ、０．２～５ｍｍ、０．３～１ｍｍ、０．６～０．９ｍｍ、０．４～０．８ｍｍ、０．３～０．６ｍｍ、０．３ｍｍ、０．４ｍｍ、０．５ｍｍ又は０．６ｍｍである、請求項１１に記載の医薬製剤。
【請求項】
請求項１～４のいずれか一項に記載の複合体の製造方法であって、以下の：（ａ）テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又はその製薬上許容される塩、水和物若しくは溶媒和物、及び２価金属カルボキシレート（ＭＡ２）を１：０．８～３．０のモル比で有機溶媒と混合して分散物を得る工程であって、ここで、前記２価金属カチオンＭは、土類アルカリ金属カチオンであり、前記ＡはＣ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである；
（ｂ）前記分散物を加熱して複合体を形成する工程；
（ｃ）前記溶媒を除去して複合体を得る工程；
を含む、方法。
【請求項】
以下の：（ｄ）請求項１～４のいずれか一項に記載の複合体、及び存在する場合には、１又はそれ以上の製薬上許容される賦形剤、を粉砕して押出成形前駆体を得る工程；
（ｅ）前記押出前駆体を室温より高い温度で押出する工程；
（ｆ）工程（ｅ）の生成物を冷却して、らせん状押出物の形態の医薬製剤を得る工程；
を含む、請求項１１に記載の医薬製剤の製造方法。
【請求項】
ヒト又は動物体の処置方法で用いられる、請求項１～４のいずれか一項に記載の複合体、又は請求項５～１２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項】
（ｉ）細菌感染；又は（ｉｉ）Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ及びＰａｒｖｉｍｏｎａｓ ｍｉｃｒａからなる群から選択される１又はそれ以上の細菌により生じる細菌感染；の治療及び／又は予防の方法で用いられる、請求項１～４のいずれか一項に記載の複合体又は請求項５～１２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項】
抗生物質活性が、少なくとも２１日間にわたり持続する、請求項１～４のいずれか一項に記載の複合体又は請求項５～１２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項】
急性、慢性又は再発性の歯周疾患の治療及び／又は予防の方法で用いられる、請求項１～４のいずれか一項に記載の複合体、又は請求項５～１２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項】
前記歯周疾患は、歯垢誘発性歯肉疾患、歯周炎、慢性歯周炎、侵襲性歯周炎、全身性疾患の症状としての歯周炎、壊死性歯周疾患、歯周組織膿瘍、歯内病変に関連する歯周炎、インプラント周囲粘膜炎、インプラント周囲炎及び歯内感染症から選択される、請求項１８に記載の方法で用いられる、請求項１～４のいずれか一項に記載の複合体又は請求項５～１２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項】
請求項１に記載の複合体又は請求項５に記載の医薬製剤の治療有効量を、それが必要な被験体に投与することを含む、ヒト又は動物体を治療する方法。
【請求項】
（ｉ）細菌感染；又は（ｉｉ）Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ及びＰａｒｖｉｍｏｎａｓ ｍｉｃｒａからなる群から選択される１又はそれ以上の細菌により生じる細菌感染；の治療用及び／又は予防用である、請求項２０に記載の方法。
【請求項】
抗生物質活性が、少なくとも２１日間にわたり持続する、請求項２１に記載の方法。
【請求項】
急性、慢性又は再発性歯周疾患の治療用及び／又は予防用である、請求項２０に記載の方法。
【請求項】
前記歯周疾患は、歯垢誘発性歯肉疾患、歯周炎、慢性歯周炎、侵襲性歯周炎、全身性疾患の症状としての歯周炎、壊死性歯周疾患、歯周組織膿瘍、歯内病変に関連する歯周炎、インプラント周囲粘膜炎、インプラント周囲炎及び歯内感染症から選択される、請求項２３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【】
本発明は、一般に、テトラサイクリン抗生物質の制御放出に関する。特に、本発明は、テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又はその製薬上許容される塩、水和物若しくは溶媒和物、及び二価金属カルボキシレートを含む複合体；当該複合体を含む医薬製剤、当該複合体及び当該医薬製剤を製造する方法、並びにヒト若しくは動物の体の治療方法、具体的には、細菌感染の治療及び／若しくは予防、で用いられる複合体又は医薬製剤；並びに／又は、ここで、抗生物質活性は長期間にわたり持続され；並びに／又は急性、慢性又は再発性歯周疾患の治療及び／又は予防のための複合体又は医薬製剤
【背景技術】
【】
テトラサイクリン化合物は、リボソーム受容体（Ａ）部位へのアミノアシルｔＲＮＡの結合を阻害することにより、タンパク質合成を阻害する抗生物質の一種である。当該テトラサイクリン系は広域スペクトル薬剤であり、広範囲のグラム陽性菌及びグラム陰性菌、クラミジア、マイコプラズマ、リケッチア等の非定型微生物、原虫寄生虫に対して活性を示す。当該薬剤は抗菌活性が好ましく、かつ、重大な副作用がないため、広範なヒト及び動物の感染症、例えば歯周病の治療に用いられてきた（非特許文献１）。テトラサイクリン分子は、様々な官能基が結合した直鎖状の縮合四環核（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄと命名された環）を含む。検出可能な抗菌活性を示す最も単純なテトラサイクリンは６－デオキシ－６－デメチルテトラサイクリンであり、以下の構造：
【】
【化】
【】
臨床で広く用いられているテトラサイクリン系抗生物質としては、ドキシサイクリン（doxycycline）、ミノサイクリン及びテトラサイクリンがあげられる。最も一般的に用いられるテトラサイクリン系抗生物質の概要は以下のとおりである：
【】
【化】
【】
歯周病は著しく蔓延している。世界の人口の約３０％が罹患している。これは、個人や社会に大きな影響を与え、治療にも費用がかかる。歯科医療費は、全ての疾患の中で４番目に高く、全ての医療資源の５～１０％を占めている（非特許文献３）。代表的な集団研究では、歯周疾患は広範に分布し、その有病率は１９９７年以降増加していることが示される（非特許文献４）。ドイツの成人集団のうち、５２．７％が中等度の重度の歯周炎に罹患し、２０．５％が重度の歯周炎に罹患していた。ドイツにおける歯周炎直接治療のための医療保険支出は約１１億ユーロであるが（非特許文献５）、これには二次疾患による費用は含まれない。
【】
歯周炎は，多細菌性誘発が原因の歯周組織の炎症状態をいう一般的な用語であり，心血管疾患，関節リウマチ，慢性閉塞性肺疾患，アルツハイマー病等の様々な全身性疾患と密接に関連する。
現在確立される歯周炎の治療は、ドイツ歯科口腔内科学会の勧告により、一般に、口腔バイオフィルム全体を崩壊させ、潜在的病原体による再定着の機会を阻止する消毒剤（口腔洗浄剤による毎日の消毒）の適用と共に、手動の上顎及び歯肉下デブリドマン（細菌プラークの除去）によって行われる（非特許文献６）。さらに、アジュバント全身性広域スペクトル抗生物質療法は、持続性又は再発性の限局性深在性部位等の進行性疾患系に適用される（非特許文献７）。後者ではまた、バイオフィルムの非選択的破壊がおこり、かつ、特定の作用部位、すなわち歯肉ポケットで十分な治療レベルに達するには、高用量で長期間にわたる投与が必要である。歯周炎の標準的なアジュバント療法としては、例えば、ドキシサイクリン（１回あたり１×２００ｍｇ／日）を１日間全身投与し、かつ、さらに１８日間２×１００ｍｇ／日を全身投与することがあげられる（非特許文献８）。その結果、経口病原体における耐性発現が観察される。さらに、患者の腸内のマイクロバイオームが破壊されて、代謝支持体及び免疫調節が喪失され、潜在的な病原体による再定着が可能になる。限定標的療法は、歯周炎の治療及び歯周病関連病態の有意な改善をいう。一の系統的レビューにおいて、テトラサイクリン製剤が歯周プローブ深さの軽減に有意な効果があることが示された（非特許文献９）。
歯周病原性細菌の存在は、歯周炎患者によって異なる。それにもかかわらず、歯肉下プラークにおけるある種の細菌種の発生は、歯周疾患の病因と密接に関連していることが見出されている（非特許文献１０）。歯周炎発症の第一段階は、細菌「黄色複合体」、「緑色複合体」及び「紫色複合体」の健常歯周部位におけるコロニー形成である。放線菌種は「黄色複合体」（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、「緑色複合体」（Ｅｉｋｅｎｅｌｌａ ｃｏｒｒｏｄｅｎｓ、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ ｓｐｕｔｉｇｅｎａ）及び「紫色複合体」（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ ｐａｒｖｕｌａ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｄｏｎｔｏｌｙｔｉｃｕｓ）のメンバーに近縁である。当該複合体には、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ／ｐｅｒｏｎｔｉｃｕｍ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｎｉｇｒｅｓｃｅｎｓ、Ｐａｒｖｉｍｏｎａｓ ｍｉｃｒａ （以前はＰｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓとして知られていた）を含む、いわゆる「オレンジ複合体」である細菌のメンバーによるコロニーが形成される。当該「オレンジ複合体」メンバーによる健常な歯周部位のコロニー形成は、歯肉炎の発生と相関することが見いだされている。当該「オレンジ複合体」の細菌はさらに、いわゆる「赤色複合体」の細菌によるコロニー形成を促進し、それらはその後深度ポケットや慢性歯周炎に関連する。Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ及びＴｒｅｐｏｎｅｍａ ｄｅｎｔｉｃｏｌａの密接に関連したグループからなる当該「赤色複合体」は、歯周疾患の臨床的尺度、特に、ポケットの深さ及びプロービング時の出血と強く関連する。さらに、非特許文献１１及び１２では、Ｓ． ｇｏｒｄｏｎｉｉがＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓのコロニー形成に関連することが示された。
現在確立される歯周炎の治療は、ドイツ歯科口腔内科学会の勧告により、一般に、口腔バイオフィルム全体を崩壊させ、潜在的病原体による再定着の機会を阻止する消毒剤（口腔洗浄剤による毎日の消毒）の適用と共に、手動の上顎及び歯肉下デブリドマン（細菌プラークの除去）によって行われる（非特許文献６）。さらに、アジュバント全身性広域スペクトル抗生物質療法は、持続性又は再発性の限局性深在性部位等の進行性疾患系に適用される（非特許文献７）。後者ではまた、バイオフィルムの非選択的破壊がおこり、かつ、特定の作用部位、すなわち歯肉ポケットで十分な治療レベルに達するには、高用量で長期間にわたる投与が必要である。歯周炎の標準的なアジュバント療法としては、例えば、ドキシサイクリン（１回あたり１×２００ｍｇ／日）を１日間全身投与し、かつ、さらに１８日間２×１００ｍｇ／日を全身投与することがあげられる（非特許文献８）。その結果、経口病原体における耐性発現が観察される。さらに、患者の腸内のマイクロバイオームが破壊されて、代謝支持体及び免疫調節が喪失され、潜在的な病原体による再定着が可能になる。限定標的療法は、歯周炎の治療及び歯周病関連病態の有意な改善をいう。一の系統的レビューにおいて、テトラサイクリン製剤が歯周プローブ深さの軽減に有意な効果があることが示された（非特許文献９）。
歯周病原性細菌の存在は、歯周炎患者によって異なる。それにもかかわらず、歯肉下プラークにおけるある種の細菌種の発生は、歯周疾患の病因と密接に関連していることが見出されている（非特許文献１０）。歯周炎発症の第一段階は、細菌「黄色複合体」、「緑色複合体」及び「紫色複合体」の健常歯周部位におけるコロニー形成である。放線菌種は「黄色複合体」（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、「緑色複合体」（Ｅｉｋｅｎｅｌｌａ ｃｏｒｒｏｄｅｎｓ、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ ｓｐｕｔｉｇｅｎａ）及び「紫色複合体」（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ ｐａｒｖｕｌａ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｄｏｎｔｏｌｙｔｉｃｕｓ）のメンバーに近縁である。当該複合体には、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ／ｐｅｒｏｎｔｉｃｕｍ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｎｉｇｒｅｓｃｅｎｓ、Ｐａｒｖｉｍｏｎａｓ ｍｉｃｒａ （以前はＰｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓとして知られていた）を含む、いわゆる「オレンジ複合体」である細菌のメンバーによるコロニーが形成される。当該「オレンジ複合体」メンバーによる健常な歯周部位のコロニー形成は、歯肉炎の発生と相関することが見いだされている。当該「オレンジ複合体」の細菌はさらに、いわゆる「赤色複合体」の細菌によるコロニー形成を促進し、それらはその後深度ポケットや慢性歯周炎に関連する。Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ及びＴｒｅｐｏｎｅｍａ ｄｅｎｔｉｃｏｌａの密接に関連したグループからなる当該「赤色複合体」は、歯周疾患の臨床的尺度、特に、ポケットの深さ及びプロービング時の出血と強く関連する。さらに、非特許文献１１及び１２では、Ｓ． ｇｏｒｄｏｎｉｉがＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓのコロニー形成に関連することが示された。
【】
局所適用粘着性徐放性投与形態における抗生物質又は消毒剤の適用は技術的に困難である。口腔粘膜は液体膜で覆われ、部分的に細菌が定着する。また、会話、嚥下、咀嚼による機械的ストレスを受けやすい。当該ストレス源は、歯周ポケット自体には存在しないが、溝液体の存在（歯周炎の場合、その流速は著しく高まる）により、活性物質がポケットから洗浄されやすい。
【】
この困難な開始状況により、満足のいく方法で既存の問題を解決しうる既存の製品や局所抗生物質や消毒薬治療はなかった。例えば、アクチザイト（登録商標）は、歯周ポケット埋込用繊維を含有するテトラサイクリンであるが、専門の歯科医が歯周ポケットへ複雑な塗布をしなければならず、１０日後の抜去にさらなる介入が必要である。当該製品はもはやドイツでは販売されていない。メトロニダゾール含有ゲルであるＥｌｙｚｏｌ（登録商標）は、ゲルの接着性が十分でなく、２日以後は有効成分の放出の期待値に合致しない。当該製品はもはやドイツでは販売されていない。また、ドキシサイクリン含有２シリンジ混合システムで構成される徐放性製剤「アトリドックス（登録商標）」もまた、ドイツ市場から撤退した。
【】
ドキシサイクリンを含有適用システムであるリゴサン（登録商標）とクロルヘキシジン含有生分解性チップであるペリオチップ（登録商標）は、現在でも市販される唯一の局所投与用製品である。
リゴサン（登録商標）は、歯周ポケットに適用する生分解性ゲルマトリックス中にドキシサイクリンの１４％を含む適用システムで、１２日間継続放出され、特殊な位置決めシステムを用いた適用で歯周ポケットを改善する。しかし、ゲルの取り扱い及び管理が複雑であり、特に側歯領域に直接目に見えない歯間隙が考えられる場合、ポケットの全ての部分に適当量を適用するのは困難である。当該ゲルは特殊な適用システムで挿入する必要がある。さらに、その深部歯周ポケットの細菌に対する効果は証明されるが、完全治療には適さず、古典的治療法に代替しえない（非特許文献１３）。また、歯科医に対する費用がかかるが、歯科医にとってのインセンティブは低く、この治療法の全般的な適用は難しいようだ（非特許文献１４参照）。ペリオチップ（登録商標）には、ピンセットで歯周ポケットに挿入できる生分解性ゼラチンチップにクロルヘキシジンを２．５ｍｇ含有する。当該チップは７～１０日間ポケットに残存し、薬物は経時的に継続放出される。しかしながら、局所抗生物質ほど細菌組成に有効ではないことが見いだされた。また、医療費は支払われない（非特許文献１５参照）。要約すると、歯周炎パラメータ（ポケットの深さ及び炎症パラメータ）は当該システムである程度改善されたが、適用は複雑であり、さらに、患者に請求される膨大な費用はドイツの公的医療保険会社では払い戻しされない。
リゴサン（登録商標）は、歯周ポケットに適用する生分解性ゲルマトリックス中にドキシサイクリンの１４％を含む適用システムで、１２日間継続放出され、特殊な位置決めシステムを用いた適用で歯周ポケットを改善する。しかし、ゲルの取り扱い及び管理が複雑であり、特に側歯領域に直接目に見えない歯間隙が考えられる場合、ポケットの全ての部分に適当量を適用するのは困難である。当該ゲルは特殊な適用システムで挿入する必要がある。さらに、その深部歯周ポケットの細菌に対する効果は証明されるが、完全治療には適さず、古典的治療法に代替しえない（非特許文献１３）。また、歯科医に対する費用がかかるが、歯科医にとってのインセンティブは低く、この治療法の全般的な適用は難しいようだ（非特許文献１４参照）。ペリオチップ（登録商標）には、ピンセットで歯周ポケットに挿入できる生分解性ゼラチンチップにクロルヘキシジンを２．５ｍｇ含有する。当該チップは７～１０日間ポケットに残存し、薬物は経時的に継続放出される。しかしながら、局所抗生物質ほど細菌組成に有効ではないことが見いだされた。また、医療費は支払われない（非特許文献１５参照）。要約すると、歯周炎パラメータ（ポケットの深さ及び炎症パラメータ）は当該システムである程度改善されたが、適用は複雑であり、さらに、患者に請求される膨大な費用はドイツの公的医療保険会社では払い戻しされない。
【】
長期治療として低用量ドキシサイクリン（ペリオスタット（登録商標））の全身投与も適用される。しかしながら、予想される薬理学的効果は必ずしも臨床結果の成功と相関しない。例えば、喫煙者に対する治療は効果が低下するようだ。さらに、患者側に高レベルのコンプライアンスが必要であり、臨床的改善がみられるかに関する科学的研究の結果には議論の余地がある。したがって、この治療法は一般には推奨しえない（非特許文献１６及び１７）。
【】
最後に、アレスチン（登録商標）は歯周ポケットへの歯肉縁下投与用生体吸収性ポリマー、ポリ（グリコリド‐コ‐ｄｌ‐ラクチド）又はＰＧＬＡに組み込まれた抗生物質塩酸ミノサイクリンを含む微小球で構成される歯肉縁下徐放性製品である。各単位用量カートリッジは、ミノサイクリン遊離塩基１ｍｇに相当するミノサイクリン塩酸塩を送達する。薬物放出の持続性は１４日間と記載される。しかしながら、ドイツではもはや販売されていない（非特許文献１８参照）。材料（微小球）の一貫性のため、特殊カートリッジを用いた適用が必要であり、そのため、取り扱い及び歯周ポケットへの配置が困難となり、信頼性が極めて低い。
【】
のように、有効な治療法の選択肢はいくつかあるが、いずれも改善の余地がある。従って、活性を維持したテトラサイクリン抗生物質の投与、特に歯周炎及び関連疾患の治療の新規の改良型開発に対する高い需要がある。歯周炎治療の理想的な薬物送達システムは、単純な製造、容易な適用、無溶媒、及び生物活性の高度に長期間制御される放出を組み合わせるべきである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【】
【非特許文献】Ｃｈｏｐｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｒｅｖ． ２００１， Ｊｕｎｅ ６５（２）：２３２－６０
【非特許文献】Ｍｉｔｓｃｈｅｒ， Ｌ． Ａ． １９７８． Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｔｈｅ ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ． Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ
【非特許文献】Ｂａｔｃｈｅｌｏｒ， Ｐ． Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｄｅｎｔａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ２０１４， ２１７， ４０５－４０９
【非特許文献】Ｍｉｃｈｅｅｌｉｓ， Ｗ． ｅｔ ａｌ． Ｖｉｅｒｔｅ Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｍｕｎｄｇｅｓｕｎｄｈｅｉｔｓｓｔｕｄｉｅ （ＤＭＳ ＩＶ）， Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ Ａｅｒｚｔｅ－Ｖｅｒｌａｇ， Ｋоｅｌｎ， ２００６
【非特許文献】Ｓｔａｔｉｓｔｉｓｃｈｅｓ Ｂｕｎｄｅｓａｍｔ， ２００８
【非特許文献】Ｓａｎｚ， Ｉ． ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｖｉｄ Ｂａｓｅｄ Ｄｅｎｔ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ２０１２， １２（３）， ７６－８６
【非特許文献】Ｊｅｐｓｅｎ， Ｋ． ｅｔ ａｌ． Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ ２０００ ２０１６， ７１（１）， ８１２－１１２
【非特許文献】Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅ Ｓｔｅｌｌｕｎｇｎａｈｍｅ： Ａｄｊｕｖａｎｔｅ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｋａ ｉｎ ｄｅｒ Ｐａｒｏｄｏｎｔｉｔｉｓｔｈｅｒａｐｉｅ， Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｆｕｅｒ Ｚａｈｎ－ Ｍｕｎｄ－ ｕｎｄ Ｋｉｅｆｅｒｈｅｉｌｋｕｎｄｅ， ＤＺＺ ２００
【非特許文献】Ｍａｔｅｓａｎｚ－Ｐｅｒｅｚ， Ｐ． ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ ２０１３， ４０（３）， ２２７－２４１
【非特許文献】Ｓｏｃｒａｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ， １９９８， ２５， １３４－１４４
【非特許文献】Ｌａｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ２００２， １４８， １６２７－１６３６．
【非特許文献】Ｄａｅｐ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｆｅｃｔ． Ｉｍｍｕｎ． ２００６， ７４， ５７５６－５７６２
【非特許文献】Ｅｉｃｋｈｏｌｚ， Ｐ ｅｔ ａｌ．； Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ ２００２； １０８－１１７； Ｒａｔｋａ－Ｋｒｕｅｇｅｒ， Ｐ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ． ２００５／１，７６： ６６－７４
【非特許文献】ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｐａｒｏｄｏｎｔｉｔｉｓ．ｃｏｍ／ｌｉｇｏｓａｎ－ｓｌｏｗ－ｒｅｌｅａｓｅＲ－ｚｕｒ－ｂｅｈａｎｄｌｕｎｇ－ｖｏｎ－ｚａｈｎｆｌｅｉｓｃｈｔａｓｃｈｅｎ．ｈｔｍｌ
【非特許文献】ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｐａｒｏｄｏｎｔｉｔｉｓ．ｃｏｍ／ｌｏｋａｌｅ－ｂｅｈａｎｄｌｕｎｇ－ｄｅｒ－ｚａｈｎｆｌｅｉｓｃｈｔａｓｃｈｅｎ－ｍｉｔ－ｐｅｒｉｏｃｈｉｐ－ｅｃ４０－ｃｈｘｈｔｍｌ．ｈｔｍｌ
【非特許文献】Ｇ． Ｇｒｅｅｎｓｔｅｉｎ， Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｓｕｂｍｉｃｒｏｂｉａｌ－ｄｏｓｅ ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ： ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ， Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｃｓ ＆ Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ Ｄｅｎｔｉｓｔｒｙ， ２００４， ２４（６）：５２８－５４３
【非特許文献】Ｉ． Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ－ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｌｏｗ－ｄｏｓｅ ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ ｆｏｒ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ ｉｎ ｓｍｏｋｅｒｓ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ， ２００７， ３４（４）：３２５－３３３
【非特許文献】ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｐａｒｏｄｏｎｔｉｔｉｓ．ｃｏｍ／ｖｏｍ－ｍａｒｋｔ－ｇｅｎｏｍｍｅｎ－ａｔｒｉｄｏｘＲ－ａｃｔｉｓｉｔｅＲ－ａｒｅｓｔｉｎＲ－ｕｎｄ－ｅｌｙｚｏｌＲ．ｈｔｍｌ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【】
を考慮して、本発明は、安定性が高く、；及び／又は活性が持続し；及び／又は、より単純で、より容易で、及び／又は、より適用や取り扱いの信頼性が高い、テトラサイクリン化合物の投与形態の提供を目的とする。特に、本発明は、歯科医にとって簡便であり、信頼性があり、なるべく無痛の方法で抗生物質を適用しうる局所適用形態の提供を目的とする。さらに、必要な活性レベルが長期間（すなわち、１４日を超える期間）にわたり持続するように、有意に長期間の均一放出を目標とする。最後に、当該新規投与形態は、好ましくは、安全で、信頼性があり、公的健康保険により払い戻される程度に十分に安価であることが望ましい。
【】
本発明のさらなる他の目的は、当該投与形態を製造する方法の提供；ヒト又は動物の体の処置方法、及び／又は当該方法で用いる化合物若しくは医薬製剤の提供；細菌感染の治療方法若しくは予防方法、及び／又は当該方法で用いる化合物若しくは医薬製剤の提供；急性、慢性又は再発性歯周疾患の処置方法若しくは予防方法、及び／又は当該方法で用いる化合物化合物若しくは医薬製剤化合物の提供である。
【課題を解決するための手段】
【】
本発明は、テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又は製薬上許容されるその塩、及び、二価金属カルボキシレート（ＭＡ２）から形成される複合体を提供し、ここで、モル比ＴＣ：ＭＡ２は、１：０．８～３．０の範囲であり；前記二価金属のカチオンＭは、土類アルカリ金属カチオンであり；かつ、前記Ａは、Ｃ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである。
【】
本発明は、さらに、態様１～４のいずれか１つの複合体及び場合によっては、１又はそれ以上の製薬上許容される賦形剤を含む医薬製剤を、好ましくは、らせん状押出物の形態で、提供する。
【】
本発明は、さらに、（ａ）テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又はその製薬上許容される塩、及び２価金属カルボキシレート（ＭＡ２）を１：０．８～３．０のモル比で有機溶媒と混合して分散物を得る工程であって、ここで、前記２価金属カチオンＭは、土類アルカリ金属カチオンであり、ＡはＣ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである；（ｂ）前記分散物を加熱して複合体を形成する工程；（ｃ）前記溶媒を除去して複合体を得る工程；を含む。本発明は、さらに、らせん状押出物の形態の医薬製剤を製造する方法を提供し、当該方法は、（ｄ）前記複合体、及び存在する場合には、１又はそれ以上の製薬上許容される賦形剤、を粉砕して押出成形前駆体を得る工程；（ｅ）前記押出前駆体を室温より高い温度で押出する工程；（ｆ）工程（ｅ）の生成物を冷却して、らせん状押出物の形態の医薬製剤を得る工程；を含む。
【】
本発明は、さらに、ヒト又は動物の身体の処置方法で用いる；及び／又は細菌感染、好ましくは、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ及びＰａｒｖｉｍｏｎａｓ ｍｉｃｒａからなる群から選択される１又はそれ以上の細菌により生じる細菌感染の処置及び／又は予防の方法で用いる；及び／又は抗生物質活性を少なくとも２１日間にわたり持続させるために用いる；並びに／又は急性、慢性又は再発性の歯周病の処置及び／又は予防の方法で用いる、で定義された複合体及び／又はで定義された医薬製剤を提供する。
【発明の効果】
【】
本発明者らは、本発明によるテトラサイクリン化合物の複合体が、対応するテトラサイクリン化合物よりも水性環境でより緩慢に分解することを見出した。さらに、当該複合体は水への溶解度が低く、対応するテトラサイクリン化合物やアレスチン（登録商標）等の徐放性系に比べて、その放出がより遅延性及び持続性であることがわかった。マグネシウム又はカルシウムイオンとの１：０．５の比によるテトラサイクリン化合物のキレート複合体が既に報告されるが、本複合体はその化学量論の点で異なる。本発明による複合体形成は、化合物の化学的特性を改変する。具体的には、溶解度、光度挙動及び反応性は好ましい方法で影響を受ける。当該活性物質は長期間にわたり生物学的活性を維持し、水への溶解度が低く、水溶液中での分解に対する安定性が高まり、カルボキシレートアニオンの親油性が高いため、遅延放出される。さらに、当該複合体形成により、テトラサイクリン化合物がより活性の低いエピマーへ変換するのを妨げ、つまり、活性物質の生物学的活性の長期維持に寄与するようだ。当該効果は、本発明による複合体を単独投与するか、又は医薬製剤、例えば局所投与用調製物中の１又はそれ以上の医薬賦形剤と併用投与する場合に持続しうる。
【】
さらに、複合体が、押出物等の医薬製剤（純物質として、又は賦形剤、例えば、生分解性ポリマーとともに）中で提供される場合、より長い放出及び活性が達成されうる。当該押出物は、（例えば、歯周ポケットに挿入されるには）形成及び取り扱いが容易であり、さらに、薬物放出の遅延性が高まる。最後に、口腔粘膜への接着性が良好であり、適用信頼性に優れる。
【】
本明細書に記載された製造方法は、治療上望ましい驚くほど顕著な薬物の持続的放出を伴う新規なテトラサイクリン化合物複合体の形成をもたらす。さらに、本発明の製造方法により得られた複合体は、有機溶媒への溶解度が高く、水溶解度が低い。本発明による複合体及び製剤の製造方法は、簡便、多様であり、有毒な有機溶媒を用いず、かつ、十分に確立され、信頼性があり、安全な医薬成分のみを用いることに基づきうる。さらに、本発明による複合体は、容易に成形可能であり、単独で、又は１又はそれ以上の賦形剤とともに押出して、適当な所望の幾何学的形状の押出し物に変換でき、例えば、歯周ポケットへの容易な配置に適する。
【】
当該複合体及び製剤は、放出挙動及び持続的抗菌活性、特に歯周炎の発生及び進行に関連する経口病原体に対して優れていることが示された。これにより、非外科的歯周炎治療の有効性が高まり、その結果、必要な外科的治療量が低減され、コスト削減も著しい。さらに、全身投与された抗生物質による治療により生じる患者の負担は、局所適用の有効な治療形態に置換することにより低減されうる。
【図面の簡単な説明】
【】
【図】異なるモル比の乾燥ミノサイクリン／ステアリン酸マグネシウム複合体があるガラス試験管の写真である。左から右へ：ミノサイクリン塩酸塩／ステアリン酸マグネシウムのモル比は１：１、１：２、ミノサイクリン遊離塩基／ステアリン酸マグネシウムのモル比は１：１及び１：２（各々実施例４、３、２及び１に相当）。
【図】ミノサイクリン／ステアリン酸マグネシウムのモル比が１：１（左、実施例２）及び１：２（右、実施例１）である乾燥ミノサイクリン／ステアリン酸マグネシウムの顕微鏡写真である。
【図】ドキシサイクリン／ステアリン酸マグネシウムのモル比が１：１（左、実施例６）及び１：２（右、実施例５）である乾燥ドキシサイクリン－ステアリン酸マグネシウムの顕微鏡写真を示す。
【図】ｐＨ７．１（上）及び２．３（下）の緩衝液中、３７℃で所定の時間（０日目は常に上の曲線）でインキュベーションされたミノサイクリン（左）及び実施例１（右）による複合体のクロマトグラムのグラフである。
【図】実施例１に関するミノサイクリン及びミノサイクリン複合体の塩酸添加前（左）及び添加後（右）のエタノール中のＵＶ／Ｖｉｓ吸収スペクトルを示すグラフである。
【図】６８０～４０００ｃｍ－１の領域におけるミノサイクリン、ステアリン酸マグネシウム及び実施例１による複合体のＦＴＩＲ－ＡＴＲスペクトルを示すグラフである。
【図】純粋なミノサイクリン／ステアリン酸マグネシウム複合体１：２、並びに押出時の様々なＰＬＧＡポリマー（実施例１０～１３）からなる実施例９の押出物の放出曲線を示すグラフである。
【図】ナイフエッジブレードを取り付けたテクスチャアナライザにおける押出物の変形時の力－変位図を示すグラフである。
【図】１１．５％のミノサイクリンを含有するレゾマ（Resomer）５０２ ＲＧ（上）及びレゾマ５０３ ＲＧ（下）を含む本発明より得られた押出物の写真である。両方の押出物を６００μｍの押出装置で押出した。５０３ ＲＧ押出物の直径がより大きいことは、ポリマーの粘弾性特性を示す。
【図】粘膜（Ａ）への接着力及び当該測定物（Ｂ）に特異的に用いられる流路の形状を評価する実験アセンブリを示す写真である。
【図】溶出液（希釈液）対Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ ＡＴＣＣ １０５５８及びＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ ＡＴＣＣ ３３２７７（最長４２日間）の最小発育阻止濃度を示すグラフである。
【図】バイオフィルム形成に対する２４時間、２日、７日、１４日及び２８日後に得られた溶出液の阻害効果を示すグラフである。
【図】マグネシウム－及びステアリン酸カルシウムと対になったドキシサイクリン及びそれらの複合体のＨＣｌの添加後のミノサイクリン及びドキシサイクリンのＵＶ／ＶＩＳスペクトル（２３０～４５０ｎｍ）を示すグラフである。比はモル比を表す。
【図】ミノサイクリン、マグネシウム及びステアリン酸カルシウム並びにその複合体の６８０～４０００ｃｍ－１のＦＴＩＲ－ＡＴＲ－スペクトルを示すグラフである。ミノサイクリン：ａ－υ Ｏ－Ｈ；ｂ－υ Ｎ－Ｈ；ｃ－υ Ｃ－Ｈ；ｄ－υ ＣＯＮＨ２；ｅ－υ Ｃ＝Ｃ（芳香族）；ｆ－υ Ｃ－Nステアリン酸マグネシウム／ステアリン酸カルシウム：ｇ－υ Ｃ－Ｈ；ｈ－υas ＣＯＯ－；ｉ－δ Ｃ－Ｈ；ｊ－ＣＨ２の揺動振動である。
【図】ドキシサイクリン、マグネシウム及びステアリン酸カルシウム並びにその複合体の、６８０～４０００ｃｍ－１のＦＴＩＲ－ＡＴＲ－スペクトルを示すグラフである。ドキシサイクリン：ａ－υ Ｏ－Ｈ ／υ Ｎ－Ｈ；ｂ－υ Ｃ－Ｈ；ｃ－υ ＣＯＮＨ２；ｄ－υ Ｃ＝Ｃ（芳香族）；ｆ－υ Ｃ－Nステアリン酸マグネシウム／ステアリン酸カルシウム：ｅ－υ Ｃ－Ｈ；ｆ－υas ＣＯＯ－；ｇ－δ Ｃ－Ｈ；ｈ－ＣＨ２の揺動振動である。
【図】Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＡＴＣＣ ２９２１３とインキュベートした寒天プレートを示す写真である。左プレート：エタノールを充填したディスク、中プレート：エタノール性ミノサイクリン複合体溶液を充填したディスク、右プレート：エタノール性ミノサイクリン溶液を充填したディスク。
【図】３７℃におけるＰＢＳ ｐＨ７．０中のいくつかのミノサイクリン複合体ＰＬＧＡ組成物の放出プロファイルを示すグラフである。
【図】３７℃におけるｐＨ７．０及びｐＨ２．３におけるミノサイクリン及びミノサイクリン複合体のクロマトグラムを示すグラフである。
【図】ミノサイクリン塩酸塩（左）の５質量％懸濁液及びリン酸二ナトリウム（右）の５質量％溶液を示す写真である。
【図】混合ミノサイクリンＨＣｌ及びリン酸二ナトリウム溶液（２．５質量％ ｔ ミノサイクリンＨＣｌ、２．５質量％リン酸二ナトリウム）を示す写真である。
【図】ミノサイクリン塩酸塩の１質量％溶液（左）及びリン酸二ナトリウムの１質量％溶液（右）を示す写真である。
【図】ミノサイクリンＨＣｌ及びリン酸二ナトリウム溶液（０．５質量％ ｔ ミノサイクリンＨＣｌ、０．５質量％リン酸二ナトリウム）の混合物を示す写真である。
【図】ミノサイクリンＨＣｌとリン酸二ナトリウム溶液の混合物（０．５質量％ ｔ ミノサイクリン ＨＣｌ、０．５質量％リン酸二ナトリウム、ただし、４００μｌの０．１Ｍ ＨＣｌを添加した場合）を示す。
【発明を実施するための形態】
【】
〔複合体〕
本発明は、テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又は製薬上許容されるその塩、水和物若しくは溶媒和物、及び二価金属カルボキシレート（ＭＡ２）を含む複合体を提供し、ここで、ＴＣ：ＭＡ２のモル比は１：０．８～３．０の範囲であり；前記二価金属のカチオンＭは、土類アルカリ金属カチオンであり；かつ、前記Ａは、Ｃ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである。
本発明は、テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又は製薬上許容されるその塩、水和物若しくは溶媒和物、及び二価金属カルボキシレート（ＭＡ２）を含む複合体を提供し、ここで、ＴＣ：ＭＡ２のモル比は１：０．８～３．０の範囲であり；前記二価金属のカチオンＭは、土類アルカリ金属カチオンであり；かつ、前記Ａは、Ｃ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである。
【】
テトラサイクリン類の制御放出は、水中での化学的不安定性が主要な問題である。例えば、ミノサイクリンは活性損失を伴うエピマー化反応を示す。また、ドキシサイクリンは水中で分解される。つまり、薬物の分解前の放出は避けるべきである。本発明者らは、脂溶性複合体の形成が薬物の安定性を高め、放出時間を延長しうるという仮説を確立した。
【】
〔テトラサイクリン化合物〕
本明細書中で用いられる用語「テトラサイクリン化合物」（ＴＣ）は、テトラサイクリン抗生物質のファミリーに属する、すなわち、以下の、６－デオキシ－６－デメチルテトラサイクリン最小ファーマコフォア構造：
本明細書中で用いられる用語「テトラサイクリン化合物」（ＴＣ）は、テトラサイクリン抗生物質のファミリーに属する、すなわち、以下の、６－デオキシ－６－デメチルテトラサイクリン最小ファーマコフォア構造：
【】
【化】
【】
好ましくは、テトラサイクリン化合物（ＴＣ）は、ミノサイクリン、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、クロルテトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、ロリテトラサイクリン、チゲサイクリン、デメクロサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、オマダサイクリン、サレサイクリン及びエラバサイクリンから選択される。好ましいテトラサイクリン化合物はまた、非引用文献１の表２に詳しく記載されるように、７－クロルテトラサイクリン、５－ヒドロキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、６－デメチル－７－クロルテトラサイクリン、２－Ｎ－ピロリジノメチルテトラサイクリン、２－Ｎ－リシノメチルテトラサイクリン、Ｎ－メチロール－７－クロルテトラサイクリン、６－メチレン－５－ヒドロキシテトラサイクリン（メタサイクリン）、６－デオキシ－５－ヒドロキシテトラサイクリン（ドキシサイクリン）、７－ジメチルアミノ－６－デメチル－６－デオキシテトラサイクリン（ミノサイクリン）、９－（Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシルアミド）－６－デメチル－６－デオキシテトラサイクリン、９－（Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシルアミド）－ミノサイクリン、９－（ｔ－ブチルグリシルアミド）－ミノサイクリン（チゲサイクリン）からなる群から選択される。さらに好ましいテトラサイクリン化合物としては、クロモサイクリン（Ｎ－メチロール－７－クロルテトラサイクリン）、９－（Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシルアミド）－６－デメチル－６－デオキシテトラサイクリン及び９－（Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシルアミド）－ミノサイクリンがあげられる。
【】
本明細書中で用いられる用語「テトラサイクリン化合物」又は「ＴＣ」は、化合物の一般クラス、すなわちテトラサイクリン抗生物質のファミリーに属する化合物をいい、一方、用語「テトラサイクリン」は、特定の好ましい化合物（４Ｓ，４ａＳ，５ａＳ，１２ａＳ）－４－（ジメチルアミノ）－１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ－オクタヒドロ－３，６，１０，１２，１２ａ－ペンタヒドロキシ－６－メチル－１，１１－ジオキソ－２－ナフタセンカルボキサミド）：
【】
【化】
【】
好ましくは、当該テトラサイクリン化合物（ＴＣ）は、ミノサイクリン、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、クロルテトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、ロリテトラサイクリン、チゲサイクリン、デメクロサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、オマダサイクリン、サレサイクリン、エラバサイクリン、クロモサイクリン、９－（Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシルアミド）－６－デメチル－６－デオキテトラサイクリン及び９－（Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシルアミド）－ミノサイクリンから選択される。当該抗生物質には、安全であり、臨床的に確立されており、よって信頼性があり、本明細書に記載される様々な治療用途に適しうるという利点がある。
【】
最も好ましくは、当該テトラサイクリン化合物は、ミノサイクリン（７－ジメチルアミノ－６－デメチル－６－デオキシテトラサイクリン）
【】
【化】
【】
【化】
【】
当該抗生物質には、歯周疾患の治療において、それらの適用性が臨床的に確立されるという付加的な利点がある。
【】
〔モル比〕
モル比ＴＣ：ＭＡ２は、好ましくは１：０．８～３．０の範囲である。本発明者らは、本発明による複合体の調製で得られる主な種は、ＴＣ：ＭＡ２が１：１又は１：２であることを見出した。したがって、モル比ＴＣ：ＭＡ２が１：１～１：２の間である混合物もまた、本発明の範囲内であることが意図される。例えば、ＴＣ：ＭＡ２＝１：０．８の微量過剰のＴＣもまた、本発明の範囲内である。同様に、例えば、ＴＣ：ＭＡ２の比が１：２又は１：３を超える過剰のＭＡ２も、過剰の金属カチオンがＴＣに配位しているかによらず、本発明の範囲内であると考えられる。従って、ＴＣ：ＭＡ２の比率が特定された複合体と、ある程度の過剰量である成分とを含む当該混合物もまた、本発明による複合体の定義に包含されることが意図される。好ましくは、ＴＣ：ＭＡ２は１：１又は１：２であり、より好ましくはＴＣ：ＭＡ２は１：２である。モル比ＴＣ：ＭＡ２のさらなる好ましい範囲は、例えば、１：０．７－１：１．２、１：０．７～１：１．１、１：０．８～１：１．１、１：０．９～１：１．２、１：０．９～１：１．１、１：１．１～１：２．９、１：１．４～２．５、及び１：１．８～１：２．２、より好ましくは１：０．９～１：１．１及び／又は１：１．９～１：２．１である。
モル比ＴＣ：ＭＡ２は、好ましくは１：０．８～３．０の範囲である。本発明者らは、本発明による複合体の調製で得られる主な種は、ＴＣ：ＭＡ２が１：１又は１：２であることを見出した。したがって、モル比ＴＣ：ＭＡ２が１：１～１：２の間である混合物もまた、本発明の範囲内であることが意図される。例えば、ＴＣ：ＭＡ２＝１：０．８の微量過剰のＴＣもまた、本発明の範囲内である。同様に、例えば、ＴＣ：ＭＡ２の比が１：２又は１：３を超える過剰のＭＡ２も、過剰の金属カチオンがＴＣに配位しているかによらず、本発明の範囲内であると考えられる。従って、ＴＣ：ＭＡ２の比率が特定された複合体と、ある程度の過剰量である成分とを含む当該混合物もまた、本発明による複合体の定義に包含されることが意図される。好ましくは、ＴＣ：ＭＡ２は１：１又は１：２であり、より好ましくはＴＣ：ＭＡ２は１：２である。モル比ＴＣ：ＭＡ２のさらなる好ましい範囲は、例えば、１：０．７－１：１．２、１：０．７～１：１．１、１：０．８～１：１．１、１：０．９～１：１．２、１：０．９～１：１．１、１：１．１～１：２．９、１：１．４～２．５、及び１：１．８～１：２．２、より好ましくは１：０．９～１：１．１及び／又は１：１．９～１：２．１である。
【】
〔カルボキシレートアニオン〕
Ａは、Ｃ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである。カルボキシレートアニオンの親油性は、本発明による複合体及び調製物からのテトラサイクリン抗生物質の持続的放出の改善に寄与する。
Ａは、Ｃ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである。カルボキシレートアニオンの親油性は、本発明による複合体及び調製物からのテトラサイクリン抗生物質の持続的放出の改善に寄与する。
【】
カルボン酸は飽和又は不飽和でありうる。好ましくは、Ａは、アラキジン酸（Ｃ２０）、ステアリン酸（Ｃ１８）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ミリスチン酸（Ｃ１４）、ラウリン酸（Ｃ１２）、カプリル酸（Ｃ１０）、カプリル酸（Ｃ８）、ヒドロキシステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸及びリシノール酸から選択されるカルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである。ヒドロキシステアリン酸は、好ましくは１０－ヒドロキシステアリン酸又は１２－ヒドロキシステアリン酸でありうる。最も好ましくは、カルボキシレートアニオンはステアリン酸塩（Ｃ１８）である。
【】
〔製薬上許容される塩、水和物及び溶媒和物〕
本明細書中で用いられる用語「製薬上許容される」は、ヒト及び獣医学的使用をともに含む。例えば、用語「製薬上許容される」は、獣医学的に許容される化合物又はヒトの医薬及び医療で許容される化合物を包含する。当該テトラサイクリン化合物の塩、水和物及び溶媒和物は、対イオン又は関連する溶媒が製薬上許容される。しかしながら、製薬上許容されない対イオン又は関連溶媒を有する塩、水和物及び溶媒和物は、例えば、他の化合物及びそれらの製薬上許容される塩、水和物及び溶媒和物の調製における中間体として用いるため、本発明の範囲内にある。好適な塩としては、有機酸及び無機酸又は塩基のいずれかと共に形成されるものがあげられる。製薬上許容される酸付加塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、クエン酸、酒石酸、リン酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリフェニル酢酸、スルファミン、スルファニル酸、コハク酸、シュウ酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、オキサロ酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、アリールスルホン酸（例えば、ｐ－トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸又はナフタレンジスルホン酸）、サリチル酸、グルタール酸、グルコン酸、トリカルバリル酸、ケイ皮酸、置換ケイ皮酸（例えば、４－メトキシケイ皮酸及び４－メトキシケイ皮酸を含む、フェニル、メチル、メトキシ、又はハロで置換されたケイ皮酸）、アスコルビン酸、オレイン酸、ナフトエ酸、ヒドロキシナフトエ酸（例えば、１－又は３－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸）、ナフタレンアクリル酸、安息香酸、４－メトキシ安息香酸、２－又は４－ヒドロキシ安息香酸、４－クロロ安息香酸、４－フェニル安息香酸、ベンゼンアクリル酸（例えば、１，４－ベンゼンジアクリル酸）、イセチオン酸、過塩素酸、プロピオン酸、グリコール酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、パモ酸、シクロヘキサンスルファミン酸、サリチル酸、サッカリン酸、及びトリフルオロ酢酸から形成されるものが含まれる、特に好ましい酸付加塩は、塩酸塩、ヒクラート（塩酸ヘミエタノレート半水和物、・ＨＣｌ・１／２ＥｔＯＨ・１／２Ｈ２Ｏ）、及びマレイン酸又はシュウ酸から形成される酸付加塩である。製薬上許容される塩基塩には、アンモニウム塩、ナトリウム及びカリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム及びマグネシウム等のアルカリ土類金属塩、並びにジシクロヘキシルアミン及びＮ－メチル－Ｄ－グルカミン等の有機塩基との塩が含まれる。本発明の化合物の全ての製薬上許容される酸付加塩形態は、本発明の範囲に包含されることが意図される。
本明細書中で用いられる用語「製薬上許容される」は、ヒト及び獣医学的使用をともに含む。例えば、用語「製薬上許容される」は、獣医学的に許容される化合物又はヒトの医薬及び医療で許容される化合物を包含する。当該テトラサイクリン化合物の塩、水和物及び溶媒和物は、対イオン又は関連する溶媒が製薬上許容される。しかしながら、製薬上許容されない対イオン又は関連溶媒を有する塩、水和物及び溶媒和物は、例えば、他の化合物及びそれらの製薬上許容される塩、水和物及び溶媒和物の調製における中間体として用いるため、本発明の範囲内にある。好適な塩としては、有機酸及び無機酸又は塩基のいずれかと共に形成されるものがあげられる。製薬上許容される酸付加塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、クエン酸、酒石酸、リン酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、トリフェニル酢酸、スルファミン、スルファニル酸、コハク酸、シュウ酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、オキサロ酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、アリールスルホン酸（例えば、ｐ－トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸又はナフタレンジスルホン酸）、サリチル酸、グルタール酸、グルコン酸、トリカルバリル酸、ケイ皮酸、置換ケイ皮酸（例えば、４－メトキシケイ皮酸及び４－メトキシケイ皮酸を含む、フェニル、メチル、メトキシ、又はハロで置換されたケイ皮酸）、アスコルビン酸、オレイン酸、ナフトエ酸、ヒドロキシナフトエ酸（例えば、１－又は３－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸）、ナフタレンアクリル酸、安息香酸、４－メトキシ安息香酸、２－又は４－ヒドロキシ安息香酸、４－クロロ安息香酸、４－フェニル安息香酸、ベンゼンアクリル酸（例えば、１，４－ベンゼンジアクリル酸）、イセチオン酸、過塩素酸、プロピオン酸、グリコール酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、パモ酸、シクロヘキサンスルファミン酸、サリチル酸、サッカリン酸、及びトリフルオロ酢酸から形成されるものが含まれる、特に好ましい酸付加塩は、塩酸塩、ヒクラート（塩酸ヘミエタノレート半水和物、・ＨＣｌ・１／２ＥｔＯＨ・１／２Ｈ２Ｏ）、及びマレイン酸又はシュウ酸から形成される酸付加塩である。製薬上許容される塩基塩には、アンモニウム塩、ナトリウム及びカリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム及びマグネシウム等のアルカリ土類金属塩、並びにジシクロヘキシルアミン及びＮ－メチル－Ｄ－グルカミン等の有機塩基との塩が含まれる。本発明の化合物の全ての製薬上許容される酸付加塩形態は、本発明の範囲に包含されることが意図される。
【】
〔医薬製剤〕
本発明は、等の複合体、及び、場合によっては、１又はそれ以上の製薬上許容される賦形剤を含む医薬製剤を提供する。
本明細書中で用いられる用語「医薬製剤」は、本発明に関する化合物を治療有効量で含む製品、及び本発明に関する化合物の組合せから直接的又は間接的に生じるいかなる製品を包含することを意図する。
本発明は、等の複合体、及び、場合によっては、１又はそれ以上の製薬上許容される賦形剤を含む医薬製剤を提供する。
本明細書中で用いられる用語「医薬製剤」は、本発明に関する化合物を治療有効量で含む製品、及び本発明に関する化合物の組合せから直接的又は間接的に生じるいかなる製品を包含することを意図する。
【】
本発明による医薬製剤では、テトラサイクリン化合物（ＴＣ）の全含量（total content）は、好ましくは５～３０質量％、３０～５０質量％、より好ましくは８～２８質量％、３２～４８質量％、さらに好ましくは１０～２０質量％、さらに好ましくは１１～１５質量％、さらに好ましくは１１．５±５質量％、さらに好ましくは２７．９質量％±５質量％、１１．５±２質量％、２７．９質量％±２質量％、１１．７～１４．７５質量％、１５．２５～１９．７５質量％、最も好ましくは１１．５質量％又は２７．９質量％の範囲である。さらに当該医薬製剤中のテトラサイクリン複合体（好ましくは式［（ＴＣ）・２（ＭｇＡ２）］を有する複合体）の総含有量(overall content)は、５～９５質量％、より好ましくは、１０～８０質量％、さらに好ましくは１５～７５質量％、よりさらに好ましくは２０～６０質量％、なおさらに好ましくは３０～５０質量％、最も好ましくは４１．２質量％である。
【】
〔賦形剤〕
本明細書中で用いられる用語「賦形剤」とは、担体、結合剤、崩壊剤、及び／又はガレニック製剤用のさらなる適当な添加剤、例えば、押出物、クリーム、ゲル、乳液、懸濁液、塗布剤、軟膏、粉末、ペースト、バーム、ローション、点眼剤、スプレー、局所エアロゾル、局所溶液、局所懸濁液、皮膚パッチ及び不織布をいう。当該混合物に添加しうる担体としては、必要かつ不活性な薬学的賦形剤があげられ、これには、適当な放出遅延剤、懸濁剤、滑剤、フレーバー剤、甘味剤、保存剤、コーティング剤、造粒剤、染料、及び着色剤が含まれるが、これらに限定されない。
特に好ましいクラスの賦形剤は、生分解性ポリマーであり、以下で、より詳細に説明される。
本明細書中で用いられる用語「賦形剤」とは、担体、結合剤、崩壊剤、及び／又はガレニック製剤用のさらなる適当な添加剤、例えば、押出物、クリーム、ゲル、乳液、懸濁液、塗布剤、軟膏、粉末、ペースト、バーム、ローション、点眼剤、スプレー、局所エアロゾル、局所溶液、局所懸濁液、皮膚パッチ及び不織布をいう。当該混合物に添加しうる担体としては、必要かつ不活性な薬学的賦形剤があげられ、これには、適当な放出遅延剤、懸濁剤、滑剤、フレーバー剤、甘味剤、保存剤、コーティング剤、造粒剤、染料、及び着色剤が含まれるが、これらに限定されない。
特に好ましいクラスの賦形剤は、生分解性ポリマーであり、以下で、より詳細に説明される。
【】
さらに好ましいタイプの賦形剤は、グリセロールモノステアレート等の乳化剤であり、好ましくは５～１５質量％、より好ましくは８～１２質量％、最も好ましくは１０質量％の量で存在しうる。当該賦形剤を添加することで、当該製剤、特に押出物の放出挙動を調節（例えば、促進）しうる。
【】
さらに好ましいタイプの賦形剤は、好ましくは５～１５質量％、より好ましくは８～１２質量％、最も好ましくは１０質量％の量で存在しうるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の可塑剤である。好ましいタイプの可塑剤はＰＥＧ １５００である。当該賦形剤を添加することで、当該製剤の機械的挙動、特に押出物の機械的挙動を調節（例えば、脆性及び／又は経時変化に伴う硬化傾向の低減）しうる。
【】
〔投与経路及び製剤の種類〕
好ましくは、本発明の医薬製剤は、局所投与用に調整される。局所投与とは、疾患治療のための皮膚又は粘膜等の体表面への、クリーム、フォーム、ゲル、ローション、及び軟膏を含む広範囲のクラスを介した適用をいう。多くの局所（外用）薬は皮膚上で、皮膚に直接塗布されることをいう。局所薬はまた、喘息薬等の吸入薬であってよく、又は結膜に適用される点眼薬等の皮膚以外の組織の表面に適用されてよく、又は耳に適用される点耳薬、又は歯、歯肉若しくは歯周ポケットの表面に適用される薬剤であってよい。
好ましくは、本発明の医薬製剤は、局所投与用に調整される。局所投与とは、疾患治療のための皮膚又は粘膜等の体表面への、クリーム、フォーム、ゲル、ローション、及び軟膏を含む広範囲のクラスを介した適用をいう。多くの局所（外用）薬は皮膚上で、皮膚に直接塗布されることをいう。局所薬はまた、喘息薬等の吸入薬であってよく、又は結膜に適用される点眼薬等の皮膚以外の組織の表面に適用されてよく、又は耳に適用される点耳薬、又は歯、歯肉若しくは歯周ポケットの表面に適用される薬剤であってよい。
【】
さらに好ましくは、医薬製剤は、押出物、粒子、顆粒、粉末、フィルム、ストリップ、コンパクト、チップ、ペースト、クリーム、ゲル、乳液、懸濁液、塗布剤、軟膏、バーム、ローション、点眼液、スプレー、局所エアロゾル、局所溶液、局所懸濁液、皮膚パッチ及び不織布からなる群より選択される。
さらに好ましくは、医薬製剤は、歯周ポケットへの適用のために調整される。
さらに好ましくは、医薬製剤は、歯周ポケットへの適用のために調整される。
【】
〔押出物〕
発明者らは、歯周炎治療の理想的な薬物送達システムが、単純な製造、容易な適用、溶媒不使用、及び生物活性の高い長期制御放出を組み合わせるべきとの理想を模倣するホットメルト押出物の開発を目指した。ホットメルト押出物は、製薬産業では連続的で十分に確立されたプロセスであり、好ましい技術である。サイズ及び形状は、押出成形パラメータにより適合させうる。加えて、柔軟性及び膨潤挙動は、賦形剤の適当な選択により修正しうる。押出物は適当な長さに切断しうる。押出物の挿入は容易かつ迅速なプロセスである。微粒子及び高粘度ゲルの適用とは対照的に、特殊な装置が必要ない。
発明者らは、歯周炎治療の理想的な薬物送達システムが、単純な製造、容易な適用、溶媒不使用、及び生物活性の高い長期制御放出を組み合わせるべきとの理想を模倣するホットメルト押出物の開発を目指した。ホットメルト押出物は、製薬産業では連続的で十分に確立されたプロセスであり、好ましい技術である。サイズ及び形状は、押出成形パラメータにより適合させうる。加えて、柔軟性及び膨潤挙動は、賦形剤の適当な選択により修正しうる。押出物は適当な長さに切断しうる。押出物の挿入は容易かつ迅速なプロセスである。微粒子及び高粘度ゲルの適用とは対照的に、特殊な装置が必要ない。
【】
本明細書中で用いられる用語「押出物」は、ダイを通して押出されるいかなる材料をもいう。特に、押出物とは、断片に切断されうるロッドに前駆体を押出して成形することにより得られる投薬形態、又は、例えば、局所投与又は異なる投与経路用の徐放性投薬形態として用いうるものをいう。好ましくは、医薬製剤は、例えば、図９に示すように、らせん状押出物の形態である。らせん形状の押出物は、好ましくは、本質的に円形又は本質的に楕円形の断面、及び／又は最大断面直径が、０．１～１０ｍｍ、０．２～５ｍｍ、０．３～１ｍｍ、０．４～０．８ｍｍ、０．３～０．６ｍｍ、より好ましくは０．２～５ｍｍ、さらに好ましくは０．３～１ｍｍ、よりさらに好ましくは０．４～０．８ｍｍ、最も好ましくは０．３～０．６ｍｍ、０．３、０．４、０．５又は０．６ｍｍの範囲である。適当な直径により、所定のサイズの歯周ポケットへの容易、無痛、かつ信頼しうる配置が可能となる。
【】
〔生分解性ポリマー〕
本発明による医薬製剤は、好ましくは、可能な賦形剤として、１又はそれ以上の生分解性ポリマーを含む。これらは、生分解性ポリエステル、例えば、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリヒドロキシ酪酸（ＰＨＢ）又はポリカプロラクトン（ＰＣＬ）；混合生分解性ポリエステル、例えば、ＰＬＡ－ＰＣＬ及びＰＬＧＡ－ＰＣＬ；生分解性ＰＥＧ化ジブロック（ＡＢ）又はトリブロック（ＡＢＡ又はＢＡＢ）コポリマー、例えば、ＰＥＧ－ＰＬＡ、ＰＥＧ－ＰＬＧＡ、ＰＥＧ－ＰＣＬ及びＰＥＧ－ＰＣＬ－ＰＬＧＡ；並びにペクチンから選択されうる。
本発明による医薬製剤は、好ましくは、可能な賦形剤として、１又はそれ以上の生分解性ポリマーを含む。これらは、生分解性ポリエステル、例えば、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリヒドロキシ酪酸（ＰＨＢ）又はポリカプロラクトン（ＰＣＬ）；混合生分解性ポリエステル、例えば、ＰＬＡ－ＰＣＬ及びＰＬＧＡ－ＰＣＬ；生分解性ＰＥＧ化ジブロック（ＡＢ）又はトリブロック（ＡＢＡ又はＢＡＢ）コポリマー、例えば、ＰＥＧ－ＰＬＡ、ＰＥＧ－ＰＬＧＡ、ＰＥＧ－ＰＣＬ及びＰＥＧ－ＰＣＬ－ＰＬＧＡ；並びにペクチンから選択されうる。
【】
ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）及びそれらの共重合体は、本発明の使用に適する生分解性ポリエステルである。それらは、エステル骨格の単純な加水分解により、体内で分解し、無害で無毒性の化合物になる。分解産物は腎臓によって排泄されるか、又はよく知られた生化学的経路によって二酸化炭素と水として排泄される。ＰＬＡ／ＰＧＡポリマーは、事実上すべての先進国の規制当局によって安全、無毒性、かつ生体適合性があると考えられており、当該材料の追加的用途は、生体適合性が未確認の新規ポリマーを利用するものよりも早く市場に出され、費用効率が高い。本発明における使用に適したＰＬＡ／ＰＧＡポリマーの例としては、例えば、以下の表１に示すエボニックレームファーマＧｍｂＨにより製造されたレゾマポリマー（ＲＥＳＯＭＥＲ（登録商標）生分解性ポリマー、医療機器応用研究、レゾマ（登録商標）材料、エボニックレームＧｍｂＨ、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｓｉｇｍａａｌｄｒｉｃｈ．ｃｏｍ／ｔｅｃｈｎｉｃａｌ－ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ｍａｔｅｒｉａｌｓ－ｓｃｉｅｎｃｅ／ｐｏｌｙｍｅｒ－ｓｃｉｅｎｃｅ／ｒｅｓｏｍｅｒ．ｈｔｍｌ、２０１８年１０月２５日）である。
［ポリグリコール酸（ＰＧＡ）］
ＰＧＡは、高融点（２２５－２３０℃）で、有機溶媒への溶解度が様々で、一般に低く、ポリマー分子量に依存する高結晶性物質である。ポリマー骨格のエステル結合のため、加水分解を受けやすい。溶解度が低いにもかかわらず、当該ポリマーは様々な形態及び構造に加工される。ＰＧＡ系構造の開発に用いられる技術としては、押出成形、射出成形及び圧縮成形、並びに微粒子浸出及び溶媒鋳造があげられる。ＰＧＡの繊維は、強度及び係数が高く、特に剛性が高い。
［ポリグリコール酸（ＰＧＡ）］
ＰＧＡは、高融点（２２５－２３０℃）で、有機溶媒への溶解度が様々で、一般に低く、ポリマー分子量に依存する高結晶性物質である。ポリマー骨格のエステル結合のため、加水分解を受けやすい。溶解度が低いにもかかわらず、当該ポリマーは様々な形態及び構造に加工される。ＰＧＡ系構造の開発に用いられる技術としては、押出成形、射出成形及び圧縮成形、並びに微粒子浸出及び溶媒鋳造があげられる。ＰＧＡの繊維は、強度及び係数が高く、特に剛性が高い。
【】
［ポリ乳酸（ＰＬＡ）］
グリコリドとは異なり、ラクチドはキラル分子であり、Ｌ－ラクチドとＤ－ラクチドという２つの異なる光学活性型として存在する。当該モノマーが各々重合すると、得られるポリマーは半結晶性である。Ｌ－及びＤ－ラクチドのラセミ混合物の重合により、ポリ‐Ｄ、Ｌ－ラクチド（ＰＤＬＬＡ）が生成され、これは非晶質であり、ガラス転移温度は５５～６０℃である。結晶化度は、ポリマー内のＤ対Ｌのエナンチオマーの比を変化させて調整しうる。ＰＬＡの立体化学の選択は、ポリマーの性質、加工性及び生分解性に大きな影響を及ぼしうる。ポリ（Ｌ－ラクチド）又はＰＬＬＡは、天然に存在する立体異性体であるＬ（＋）－乳酸単位に分解され、つまり、最小限の毒性で排泄されるため、鋳造／押出生物医学装置用に選択されるポリマーであることが多い。
グリコリドとは異なり、ラクチドはキラル分子であり、Ｌ－ラクチドとＤ－ラクチドという２つの異なる光学活性型として存在する。当該モノマーが各々重合すると、得られるポリマーは半結晶性である。Ｌ－及びＤ－ラクチドのラセミ混合物の重合により、ポリ‐Ｄ、Ｌ－ラクチド（ＰＤＬＬＡ）が生成され、これは非晶質であり、ガラス転移温度は５５～６０℃である。結晶化度は、ポリマー内のＤ対Ｌのエナンチオマーの比を変化させて調整しうる。ＰＬＡの立体化学の選択は、ポリマーの性質、加工性及び生分解性に大きな影響を及ぼしうる。ポリ（Ｌ－ラクチド）又はＰＬＬＡは、天然に存在する立体異性体であるＬ（＋）－乳酸単位に分解され、つまり、最小限の毒性で排泄されるため、鋳造／押出生物医学装置用に選択されるポリマーであることが多い。
【】
［ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）共重合体（ＰＬＧＡ）］
Ｌ－及びＤＬ－ラクチドは共重合に用いられる。異なる組成のラクチドに対するグリコリドの比率により、ポリマーの結晶度を制御しうる。結晶性ＰＧＡをＰＬＡと共重合すると、結晶化度が低下し、その結果、水和速度と加水分解速度が高まる。従って、共重合体の分解時間は合成に用いられるモノマーの比に関係すると結論できる。一般に、グリコリドの含有量が多いほど、分解速度は速い。しかし、この規則の例外は、ＰＧＡ：ＰＬＡの５０：５０の比であり、これは最も速い分解を示す。
Ｌ－及びＤＬ－ラクチドは共重合に用いられる。異なる組成のラクチドに対するグリコリドの比率により、ポリマーの結晶度を制御しうる。結晶性ＰＧＡをＰＬＡと共重合すると、結晶化度が低下し、その結果、水和速度と加水分解速度が高まる。従って、共重合体の分解時間は合成に用いられるモノマーの比に関係すると結論できる。一般に、グリコリドの含有量が多いほど、分解速度は速い。しかし、この規則の例外は、ＰＧＡ：ＰＬＡの５０：５０の比であり、これは最も速い分解を示す。
【】
末端基としては、３種類の末端基官能基、すなわち、（ｉ）遊離カルボン酸基、（ｉｉ）エステル末端基、（ｉｉｉ）アルキルエステル基が好ましい。エステル末端を有するポリマー及びアルキルエステル基でキャップされたポリマーは、通常、遊離カルボン酸類似体よりも分解寿命が長い。
【】
【表】
【】
【表】
【】
本発明において用いられる生分解性ポリマーは、好ましくは、ＰＬＧＡコポリマー（ポリ（ラクチド－コ－グリコリド））であり、Ｌ／Ｇ比が、５／９５～９５／５、１０／９０～９０／１０、１５／８５～８５／１５、２５／７５～７５／２５、３５／６５～６５／３５、４５／５５～５５／４５、４５／５５～５０／５０、５０／５０～５５／４５、５５／４５～６５／３５、６５／３５～７５／２５、７５／２５～８５／１５、８５／１５～９０／１０、９０／１０～９５／５、より好ましくは２５／７５、４５／５５、５０／５０、５５／４５、６５／３５、７５／２５、７５／２５、８５／１５、９０／１０、９５／５、９５／５、最も好ましくは、５０／５０である。
【】
好ましい生分解性ポリマーは、ＰＬＧＡコポリマーであり、Ｌ／Ｇ比が、２５／７５～７５／２５、好ましくは３５／６５～６５／３５、より好ましくは４５／５５～５５／４５、最も好ましくは５０／５０の；質量平均分子量（ｋＤａ）が５～９０、好ましくは７～８５、より好ましくは７～１７、２４～３８、３０～６０、６０～８５、さらに好ましくは８～１８、２５～３７、３１～５９、６１～８４；固有（固有；inherent,intrinsic）粘度［ｄｌ／ｇ］（クロロホルム中０．１％、２５℃）が、０．１４～０．８２、好ましくは０．１６～０．８０、より好ましくは０．１６～０．２４、０．３２～０．４４、０．４５～０．６５、０．６５～０．８５、さらに好ましくは０．１７～０．２３、０．３２３～０．４３、０．４６～０．６４、０．６６～０．８４；及び、エステル、アルキルエステル及び／又はＰＥＧ基で末端化され；場合によっては、ガラス転移温度が、４２～４８℃、好ましくは４２～４６又は４４～４８℃、さらに好ましくは４３～４５又は４５～４７℃である。
【】
好ましい生分解性ポリマーは、ＰＬＡ／ＰＧＡ比が５０：５０のポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－グリコリドであり；好ましくは質量平均分子量の範囲が、７，０００～３８，０００、より好ましくは７，０００～１７，０００又は２４，０００～３８，０００；及び／又は固有粘度が０．１６～０．４４、より好ましくは０．１６～０．２４又は０．３２～０．４４；及び／又はガラス転移温度が４２～４８℃、より好ましくは４２～４６又は４４～４８℃である。さらに好ましくは、生分解性ポリマーは、レゾマ（登録商標）ＲＧ５０２（「レゾマ５０２」）、レゾマ（登録商標）ＲＧ５０３（「レゾマ５０３」）又はそれらの混合物から選択される。
【】
好ましい生分解性ポリマーはまた、ＰＬＡ／ＰＧＡ比が５０：５０及び及び末端がＰＥＧ末端基（ＰＬＧＡ－ＰＥＧ）であるポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－グリコリド；好ましくは質量平均分子量の範囲が、３０～８５ｋＤａ、より好ましくは３０～６０ｋＤａ；及び／又は好ましくは固有粘度が０．４５～０．８０、より好ましくは０．４５～０．６５である。さらに好ましくは、当該生分解性ポリマーは、ＥＸＰＡＮＳＯＲＢ（登録商標）ＤＬＧ ５０－６Ｐである。
【】
〔製造方法〕
本発明は、さらに、の複合体の製造方法を提供し、当該方法は、（ａ）テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又はその製薬上許容される塩、水和物若しくは溶媒和物、及び２価金属カルボキシレート（ＭＡ２）を１：０．８～３．０のモル比で有機溶媒と混合して分散物を得る工程であって、ここで、前記２価金属カチオンＭは、土類アルカリ金属カチオンであり、前記ＡはＣ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである；（ｂ）前記分散物を加熱して複合体を形成する工程；（ｃ）前記溶媒を除去して複合体を得る工程；を含む。好ましいテトラサイクリン化合物、モル比、カルボキシレートアニオン、製薬上許容される塩、水和物及び溶媒和物は、の「複合体」の記載のとおりである。好ましい実施形態では、本発明による複合体は、本明細書に記載の製造方法により得られる。
本発明は、さらに、の複合体の製造方法を提供し、当該方法は、（ａ）テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又はその製薬上許容される塩、水和物若しくは溶媒和物、及び２価金属カルボキシレート（ＭＡ２）を１：０．８～３．０のモル比で有機溶媒と混合して分散物を得る工程であって、ここで、前記２価金属カチオンＭは、土類アルカリ金属カチオンであり、前記ＡはＣ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである；（ｂ）前記分散物を加熱して複合体を形成する工程；（ｃ）前記溶媒を除去して複合体を得る工程；を含む。好ましいテトラサイクリン化合物、モル比、カルボキシレートアニオン、製薬上許容される塩、水和物及び溶媒和物は、の「複合体」の記載のとおりである。好ましい実施形態では、本発明による複合体は、本明細書に記載の製造方法により得られる。
【】
混合工程（ａ）では、好ましい溶媒は、例えば、水の存在下又は非存在下におけるメタノール、エタノール又はそれらの混合物等のアルコールである。好ましくは、溶媒に対するＴＣの質量／体積比が１：１００～１：３００、好ましくは１：２００であるものを用いてよい。
【】
分散物の加熱工程（ｂ）では、好ましくは５０℃以上、より好ましくは６０℃以上、最も好ましくは７０℃以上の温度で、かつ溶媒の沸点まで複合体の形成が促進される。選択した溶媒、温度及び溶媒に対するＴＣの質量／体積比に応じて、工程（ｂ）の間に完全な溶解が起こり、複合体の溶液が得られる。
【】
工程（ｃ）では、当該溶媒を、当技術分野で公知の適当な方法で除去しうる。好ましくは、当該溶媒は、室温又は高温で、及び／又は振盪機、オーブン中で、又はフィルム上／中で、及び／又は大気圧下又は好ましくは減圧下で蒸発させうる。
【】
本発明による医薬製剤は、特段の規定がない限り、当技術分野で公知の適当な方法により調製しうる。しかしながら、医薬製剤がらせん状押出物の形態である場合、後者は、好ましくは、以下の工程：（ｄ）当該複合体、及び存在する場合には、１又はそれ以上の製薬上許容される賦形剤、を粉砕して押出成形前駆体を得る工程；（ｅ）前記押出前駆体を室温より高い温度で押出する工程；（ｆ）工程（ｅ）の生成物を冷却して、らせん状押出物の形態の医薬製剤を得る工程；を含む方法により調製される。好ましい賦形剤、投与経路及び製剤の種類、押出物、及び生分解性ポリマーは、の「医薬製剤」で記載のとおりである。好ましい実施形態では、本発明による医薬製剤は、本明細書に記載の製造方法によって得られる。
【】
粉砕工程（ｄ）では、複合体を、（のように、及び存在する場合には）１又はそれ以上の製薬上許容される賦形剤と共に混合し、粉砕し、ホモジナイズして、押出し前駆体を得る。好ましくは、１又はそれ以上の生分解性ポリマー、乳化剤、及び／又はの可塑剤を賦形剤として添加してよい。さらに好ましくは、添加されるテトラサイクリン化合物（ＴＣ）の含有量は、混合される成分の総量に対して５～３０質量％、より好ましくは８～２８質量％、さらに好ましくは１０～２０質量％、さらに好ましくは１１～１５質量％、最も好ましくは１１．５質量％又は２７．９質量％の範囲である。粉砕は、好ましくはミル又はグラインダーで、より好ましくは低温、例えば－１９６℃のクライオミルで粉砕又は粉砕して、実施される。クライオミルが用いられる場合、押出し前駆体を得るには、６回、好ましくは５回のミリングサイクルを３０Ｈｚの周波数で１５０秒間実施し、中間冷却（３０秒）はサイクル間の５Ｈｚの周波数で実施することが、特に好ましい。
【】
押出工程（ｅ）は、押出前駆体を、ダイを通して押出すことにより、行われる。好ましくは、ツインスクリーエクストルーダを用いうる。押出成形は、押出成形前駆体材料の塑性変形性を確保するのに十分な室温以上の適当な温度で行われる。前駆体の組成に応じて、好ましくは、軟化点（ポリマー成分を含まない純粋な複合体の場合）とほぼ等しいか、又はそれ以上の温度、又はガラス転移温度（生分解性ポリマー等のポリマー成分が存在する場合）と等しいか、又はそれ以上の温度である。通常、押出温度は、好ましくは４８～５６℃、より好ましくは４９～５５℃、さらに好ましくは４９℃、５２℃、５３℃及び５５℃から選択される。
【】
押出物の断面形状は、主として押出機の出口のダイによって決定され、これは、好ましくは、本質的に円形又は本質的に楕円形の断面及び／又は最大断面直径が、０．１～１０ｍｍ、より好ましくは０．２～５ｍｍ、さらに好ましくは０．３～１ｍｍ、さらに好ましくは０．４～０．８ｍｍ、最も好ましくは０．６ｍｍの範囲であってよい。Ｇｒｅｅｎｓｔｅｉｎ及びＴｏｎｅｔｔｉ（Ｇｒｅｅｎｓｔｅｉｎ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ ２０００，７６，１２３７－１２４７）は、彼らの研究で、標的適用部位としての歯溝の困難性を実証した。炎症が起きた歯のポケットは、深さが少なくとも約５ｍｍ、幅が３ｍｍ、厚さが１ｍｍである。１５μｌの溝体積は、１時間に約４０回更新される。当該体積の制限により、局所的に高濃度のＡＰＩが可能となる。従って、直径の長さが１ｍｍ未満及び／又は５ｍｍ未満、好ましくは３ｍｍ未満が、快適な適用に好ましい。好ましい押出物の直径は、例えば、１２５～９７５μｍ、４２５～５７５μｍ、６２５～７７５μｍである。好ましくは、押出工程により、直径６００～９００μｍ、例えば６２０～８８０μｍの均一な押出物が生成される。ポケットサイズに適合した異なる直径の使用及び異なる直径の同時適用（例えば、３００μｍで囲まれた６００μｍ）は極めて有望であると考えられる。押出物の直径及び形状は調整しうる。例えば、押出機のダイは、直径又は幾何学的形状が異なるプレートにより、必要に応じて交換されうる。
【】
工程（ｅ）の押出生成物を冷却すると、例えば図９に示すように、らせん状押出物の形態の医薬製剤が得られる。このようにして得られたらせん形状は、例えば、さらに小さな破片に切断され、又は所望に応じて変形され、一定のサイズ又は形状の歯周ポケットへの配置に採用されうる。
【】
〔処置適用〕
本発明は、さらに、ヒト又は動物の体の処置方法に用いる、で定義された複合体及び／又は医薬製剤を提供する。本開示はまた、ヒト又は動物の体を処置する方法を提供し、この方法は、治療有効量の複合体及び／又はに定義した医薬製剤を、それが必要な被験体に投与することを含む。
本発明は、さらに、ヒト又は動物の体の処置方法に用いる、で定義された複合体及び／又は医薬製剤を提供する。本開示はまた、ヒト又は動物の体を処置する方法を提供し、この方法は、治療有効量の複合体及び／又はに定義した医薬製剤を、それが必要な被験体に投与することを含む。
【】
本発明は、さらに、細菌感染、好ましくはＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｔａｎｎｅｌｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ及びＰａｒｖｉｍｏｎａｓ ｍｉｃｒａからなる群から選択される１又はそれ以上の細菌が原因となる、処置及び／又は予防の方法；及び／又は抗生物質活性が少なくとも２１日間、好ましくは少なくとも２５日間、より好ましくは少なくとも２８日間、さらに好ましくは少なくとも３５日間、最も好ましくは４２日間にわたり維持される；及び／又は急性、慢性又は再発性歯周疾患の処置及び／又は予防の方法で用いる、に定義された複合体及び／又は薬学的製剤を提供する。本開示はさらに、細菌感染、好ましくはＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｔａｎｎｅｌｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ及びＰａｒｖｉｍｏｎａｓ ｍｉｃｒａからなる群から選択される１又はそれ以上の細菌が原因となる、処置及び／又は予防の方法；及び／又は抗生物質活性が少なくとも２１日間、好ましくは少なくとも２５日間、より好ましくは少なくとも２８日間、さらに好ましくは少なくとも３５日間、最も好ましくは４２日間にわたり維持され；及び／又は急性、慢性又は再発性歯周病の処置及び／又は予防の方法を提供し、当該方法は各々、治療有効量の複合体及び／又は医薬製剤を各々、それが必要な被験体に投与することを含む。
【】
現在、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｐ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｔ．ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｆ．ｎｕｃｌｅａｔｕｍ及びＰ．ｍｉｃｒｏｓは、特に歯周炎に関連する病原体であると考えられる。さらに、いわゆる「早期コロニー形成」に属するＡ．ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ及びＳ．ｇｏｒｄｏｎｉｉは、バイオフィルム（例えば、口腔病原性バイオフィルム）の形成に必須と考えられ、歯周疾患の症例にも存在する。
【】
歯周疾患及び歯周状態の主なカテゴリーは、歯垢誘発性歯肉疾患、慢性歯周炎、侵襲性歯周炎、全身性疾患の徴候としての歯周炎、壊死性歯周疾患、歯周膿瘍、歯内病変に関連する歯周炎、インプラント周囲粘膜炎、インプラント周囲炎、及び歯内感染のグループに分類される。本発明において、急性、慢性又は再発性の歯周疾患は、好ましくは、歯垢誘発性歯肉疾患、歯周炎、慢性歯周炎、侵襲性歯周炎、全身性疾患の症状としての歯周炎、壊死性歯周疾患、歯周の膿瘍、歯内病変に関連する歯周炎、インプラント周囲粘膜炎、インプラント周囲炎及び歯内感染からなる群から選択される。本開示はまた、歯垢誘発性歯肉疾患、歯周炎、慢性歯周炎、侵襲性歯周炎、全身性疾患の発現としての歯周炎、壊死性歯周疾患、歯周の膿瘍、歯内病変に関連する歯周炎、インプラント周囲粘膜炎、インプラント周囲炎及び歯内感染からなる群から好ましくは選択される急性、慢性又は再発性歯周疾患の処置又は予防の方法を提供し、当該方法は、治療有効量の複合体及び／又は医薬製剤を、それが必要な被験体に投与することを含む。さらに、急性、慢性又は再発性の歯周疾患は、例えば、Ａｒｍｉｔａｇｅ， Ａｎｎ Ｐｅｒｉｏｄｏｔｏｌ １９９９，４，１－６に記載される。
【】
本明細書中で用いられる用語「被験体」は、治療、治療、予防、観察又は実験の対象であるか又は対象であった動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトをいう。
【】
本明細書中で用いられる用語「治療有効量」は、研究者、獣医師、医師又は他の臨床医が探索する、組織系、動物又はヒトにおいて生物学的又は医学的応答を誘発する活性化合物又は薬剤の量をいい、治療される疾患又は障害の症状の緩和を含む。
【】
〔実施例〕
複合体の形成と特性
複合体の形成と特性
【実施例】
【】
ミノサイクリン（遊離塩基）とステアリン酸マグネシウムの１：２複合体の生成
ミノサイクリン（遊離塩基）を、ステアリン酸マグネシウムと共に丸底フラスコ中で、モル比１：２で秤量した。具体的には、ミノサイクリン（１０ｍｇ、Ｍ＝４５７．４８ｇ／モル、２１８．８μモル）をステアリン酸マグネシウム（２５．８４８ｍｇ、Ｍ＝５９１．２４ｇ／モル、４３．７１７μモル）と混合した。両成分をハンドシェーカーで短時間混合した。混合物を未変性エタノール（９６％ ｖ／ｖ，２ｍＬ）に懸濁し、淡黄色の非半透明懸濁液を得た。密閉フラスコを穏やかに旋回させて水浴中に置いた。約５０℃から複合体の生成と溶解が始まった。約６０～７０℃で、透明なオレンジ色の溶液が形成され、これは室温に冷却すると透明なままであった。溶媒を強化シェーカー中で除去した。図１に乾燥製品の入ったバイアルを示す。
ミノサイクリン（遊離塩基）を、ステアリン酸マグネシウムと共に丸底フラスコ中で、モル比１：２で秤量した。具体的には、ミノサイクリン（１０ｍｇ、Ｍ＝４５７．４８ｇ／モル、２１８．８μモル）をステアリン酸マグネシウム（２５．８４８ｍｇ、Ｍ＝５９１．２４ｇ／モル、４３．７１７μモル）と混合した。両成分をハンドシェーカーで短時間混合した。混合物を未変性エタノール（９６％ ｖ／ｖ，２ｍＬ）に懸濁し、淡黄色の非半透明懸濁液を得た。密閉フラスコを穏やかに旋回させて水浴中に置いた。約５０℃から複合体の生成と溶解が始まった。約６０～７０℃で、透明なオレンジ色の溶液が形成され、これは室温に冷却すると透明なままであった。溶媒を強化シェーカー中で除去した。図１に乾燥製品の入ったバイアルを示す。
【実施例】
【】
ミノサイクリン（遊離塩基）とステアリン酸マグネシウムの１：１複合体の生成
適当に調整された量のミノサイクリン（遊離塩基）を用いて、実施例１に記載の類似の方法で、モル比が１：１の複合体を調製した。
適当に調整された量のミノサイクリン（遊離塩基）を用いて、実施例１に記載の類似の方法で、モル比が１：１の複合体を調製した。
【実施例】
【】
塩酸ミノサイクリンとステアリン酸マグネシウムの１：２複合体の生成
モル比が１：２のミノサイクリン塩酸塩とステアリン酸マグネシウムの複合体を、実施例１と同様の方法で調製し、適量のミノサイクリン塩酸塩を用いて、ミノサイクリンとステアリン酸マグネシウムのモル比を１：２にした。
モル比が１：２のミノサイクリン塩酸塩とステアリン酸マグネシウムの複合体を、実施例１と同様の方法で調製し、適量のミノサイクリン塩酸塩を用いて、ミノサイクリンとステアリン酸マグネシウムのモル比を１：２にした。
【実施例】
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塩酸ミノサイクリンとステアリン酸マグネシウムの１：１複合体の生成
モル比が１：１のミノサイクリン塩酸塩とステアリン酸マグネシウムとの複合体を、実施例１と同様の方法で調製し、適量のミノサイクリン塩酸塩を用いて、ミノサイクリンとステアリン酸マグネシウムのモル比を１：１とした。
モル比が１：１のミノサイクリン塩酸塩とステアリン酸マグネシウムとの複合体を、実施例１と同様の方法で調製し、適量のミノサイクリン塩酸塩を用いて、ミノサイクリンとステアリン酸マグネシウムのモル比を１：１とした。
【実施例】
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ドキシサイクリン（遊離塩基）とステアリン酸マグネシウムの１：２複合体の生成
ミノサイクリンの代わりにドキシサイクリンを用いた、モル比が１：２のドキシサイクリン（遊離塩基）とステアリン酸マグネシウムとの複合体を、実施例１と同様の方法で調製した。
ミノサイクリンの代わりにドキシサイクリンを用いた、モル比が１：２のドキシサイクリン（遊離塩基）とステアリン酸マグネシウムとの複合体を、実施例１と同様の方法で調製した。
【実施例】
【】
ドキシサイクリン（遊離塩基）とステアリン酸マグネシウムの１：１複合体の生成
ミノサイクリンの代わりにドキシサイクリン遊離塩基を用いて、モル比が１：１となるように適量のドキシサイクリンを用いて、モル比が１：１のドキシサイクリン（遊離塩基）とステアリン酸マグネシウムとの複合体を、実施例１と同様の方法で調製した。
の実施例による生成物は各々、テトラサイクリン化合物（ミノサイクリン、ミノサイクリン塩酸塩及びドキシサイクリン）と比較して特性が異なり、別個の新しい複合体の生成が示された。
複合体の溶解度は各々、テトラサイクリン化合物（例えば、純粋なミノサイクリン）と比較して低下する。ミノサイクリンは、水、ジメチルスルホキシド、エタノール、メタノール及びＮ－メチルピロリドン等のほとんどの極性溶媒に可溶である。これに対して、当該複合体は水にはやや溶けにくいが、クロロホルムにはよく溶ける。ステアリン酸塩対イオンは修飾溶解度特性に寄与すると考えられる。溶解度を調整するために、対イオンの変化を考慮してよい。
テトラサイクリン化合物とステアリン酸マグネシウムのモル比が１：１の生成物は乾燥すると結晶化するが、モル比が１：２の生成物は固化してガラス状の固体となる（図１）。当該固体から試料を採取し、顕微鏡下で調べた。モル比が１：１の固体では不均一な組成が観察されたが（図２、左）、モル比が１：２の試料では外観は均一であった（図２、右）。同様に、ドキシサイクリンとステアリン酸マグネシウムから１：１の比で得られた固体は不均一な凝集体となったが（図３、左）、へらによる１：２のモル比（図３、右）抽出の場合にはガラス状構造が形成された。
ミノサイクリンの代わりにドキシサイクリン遊離塩基を用いて、モル比が１：１となるように適量のドキシサイクリンを用いて、モル比が１：１のドキシサイクリン（遊離塩基）とステアリン酸マグネシウムとの複合体を、実施例１と同様の方法で調製した。
の実施例による生成物は各々、テトラサイクリン化合物（ミノサイクリン、ミノサイクリン塩酸塩及びドキシサイクリン）と比較して特性が異なり、別個の新しい複合体の生成が示された。
複合体の溶解度は各々、テトラサイクリン化合物（例えば、純粋なミノサイクリン）と比較して低下する。ミノサイクリンは、水、ジメチルスルホキシド、エタノール、メタノール及びＮ－メチルピロリドン等のほとんどの極性溶媒に可溶である。これに対して、当該複合体は水にはやや溶けにくいが、クロロホルムにはよく溶ける。ステアリン酸塩対イオンは修飾溶解度特性に寄与すると考えられる。溶解度を調整するために、対イオンの変化を考慮してよい。
テトラサイクリン化合物とステアリン酸マグネシウムのモル比が１：１の生成物は乾燥すると結晶化するが、モル比が１：２の生成物は固化してガラス状の固体となる（図１）。当該固体から試料を採取し、顕微鏡下で調べた。モル比が１：１の固体では不均一な組成が観察されたが（図２、左）、モル比が１：２の試料では外観は均一であった（図２、右）。同様に、ドキシサイクリンとステアリン酸マグネシウムから１：１の比で得られた固体は不均一な凝集体となったが（図３、左）、へらによる１：２のモル比（図３、右）抽出の場合にはガラス状構造が形成された。
【実施例】
【】
水環境中での安定性
ミノサイクリン（１０ｍｇ；図４、左手）及び実施例１の複合体（２０ｍｇ；図４、右手）を別々のバイアルに入れ、ほぼ等量のミノサイクリンを得た。各試料をｐＨ７．１（図４上段）又はｐＨ２．３（図４下段）の各緩衝液（ＰＢＳ）４ｍＬに分散させた。複合体を有する試料は複合体の溶解度が低いために懸濁液となった。試料を３７℃で数日間インキュベートし、波長３５５ｎｍのＵＶ検出器付きＨＰＬＣで分離したスペクトルを記録した。保持時間４．７５分の主ピークはミノサイクリンに相当する。３７℃の中性ｐＨ域では、純粋なミノサイクリンの場合、３日後に完全な分解が観察される（図４、左上）。酸性条件下では分解は遅いが、ミノサイクリンはある程度まで継続的に分解する。この複合体は親油性のために溶解性が低く、溶媒との反応性が低く、分解されにくい（図４、右側）。インキュベーションの間に、複合体のさらなる画分が溶解し、その後でのみ分解されると考えられる。活性物質の崩壊も観察されるが、複合体の場合、特に中性条件下（図４、右上）では極めて遅い。従って、複合体形成により、水性環境中における組成物に安定性がもたらされると考えられる。
ミノサイクリン（１０ｍｇ；図４、左手）及び実施例１の複合体（２０ｍｇ；図４、右手）を別々のバイアルに入れ、ほぼ等量のミノサイクリンを得た。各試料をｐＨ７．１（図４上段）又はｐＨ２．３（図４下段）の各緩衝液（ＰＢＳ）４ｍＬに分散させた。複合体を有する試料は複合体の溶解度が低いために懸濁液となった。試料を３７℃で数日間インキュベートし、波長３５５ｎｍのＵＶ検出器付きＨＰＬＣで分離したスペクトルを記録した。保持時間４．７５分の主ピークはミノサイクリンに相当する。３７℃の中性ｐＨ域では、純粋なミノサイクリンの場合、３日後に完全な分解が観察される（図４、左上）。酸性条件下では分解は遅いが、ミノサイクリンはある程度まで継続的に分解する。この複合体は親油性のために溶解性が低く、溶媒との反応性が低く、分解されにくい（図４、右側）。インキュベーションの間に、複合体のさらなる画分が溶解し、その後でのみ分解されると考えられる。活性物質の崩壊も観察されるが、複合体の場合、特に中性条件下（図４、右上）では極めて遅い。従って、複合体形成により、水性環境中における組成物に安定性がもたらされると考えられる。
【実施例】
【】
分光特性
ａ）ＵＶ／Ｖｉｓ吸収スペクトル
また、吸収スペクトルの変化が認められた（図５）。新たに調製したミノサイクリンと実施例１の複合体のエタノール溶液を、ミノサイクリン５ｍｇ／ｍＬの濃度で調製した。当該原液から１０μＬを採取し、エタノール（３ｍＬ）で希釈し、最終濃度１６．６μｇ／ｍＬのミノサイクリンを得た。島津ＵＶ－１８００分光光度計で測定したスペクトルである。ミノサイクリンは２５５及び３４４ｎｍに吸収極大を示す。複合体形成の際、第一極大は２４４ｎｍにヒプソクロミカルにシフトし、他の極大は３８５ｎｍに深色シフトする。少量の塩酸を加えると、両方の最大値が２６４及び３５５ｎｍにシフトする。
ａ）ＵＶ／Ｖｉｓ吸収スペクトル
また、吸収スペクトルの変化が認められた（図５）。新たに調製したミノサイクリンと実施例１の複合体のエタノール溶液を、ミノサイクリン５ｍｇ／ｍＬの濃度で調製した。当該原液から１０μＬを採取し、エタノール（３ｍＬ）で希釈し、最終濃度１６．６μｇ／ｍＬのミノサイクリンを得た。島津ＵＶ－１８００分光光度計で測定したスペクトルである。ミノサイクリンは２５５及び３４４ｎｍに吸収極大を示す。複合体形成の際、第一極大は２４４ｎｍにヒプソクロミカルにシフトし、他の極大は３８５ｎｍに深色シフトする。少量の塩酸を加えると、両方の最大値が２６４及び３５５ｎｍにシフトする。
【】
ｂ）赤外吸収スペクトル
ＦＴＩＲ－ＡＴＲスペクトルは、４０００～４００ｃｍ－１の領域にSensirATRユニットを装備したBrukerIFS28装置を用いて臭化カリウムペレット中で測定した。また、ＩＲスペクトルは複合体形成の指標となる（図６；ミノサイクリン：ａ－υ Ｏ－Ｈ；ｂ－υ Ｎ－Ｈ；ｃ－υ Ｃ－Ｈ；ｄ－υ ＣＯＮＨ２；ｅ－υ Ｃ＝Ｃ（芳香族）；ｆ－υ Ｃ－Nステアリン酸マグネシウム／ステアリン酸カルシウム：ｇ－υ Ｃ－Ｈ；ｈ－υas ＣＯＯ－；ｉ－δ Ｃ－Ｈ；ｊ－ＣＨ２の揺動振動）。純粋なミノサイクリンの３４７８ｃｍ－１におけるピークは、分子内水素結合を形成するヒドロキシ基の振動に起因する。対照的に、複合体は同じ位置で広いピークを示す。この基がキレートを形成する配位部位の一部を形成する事実により、ヒドロキシ基の自由振動の阻害、従ってピークの平滑化が錯化の際に観察される。さらに、ミノサイクリンのＣ－Ｈ振動は、ステアリン酸マグネシウムの強いＣ－Ｈ振動によって影が薄い。１５７０ｃｍ－１のカルボキシレートのピークは、認識可能なままである。１７００ｃｍ－１で新たに生じるピークは、官能基に直接帰属しえない。指紋領域もまた、重なり合った振動のために修正される。
ＦＴＩＲ－ＡＴＲスペクトルは、４０００～４００ｃｍ－１の領域にSensirATRユニットを装備したBrukerIFS28装置を用いて臭化カリウムペレット中で測定した。また、ＩＲスペクトルは複合体形成の指標となる（図６；ミノサイクリン：ａ－υ Ｏ－Ｈ；ｂ－υ Ｎ－Ｈ；ｃ－υ Ｃ－Ｈ；ｄ－υ ＣＯＮＨ２；ｅ－υ Ｃ＝Ｃ（芳香族）；ｆ－υ Ｃ－Nステアリン酸マグネシウム／ステアリン酸カルシウム：ｇ－υ Ｃ－Ｈ；ｈ－υas ＣＯＯ－；ｉ－δ Ｃ－Ｈ；ｊ－ＣＨ２の揺動振動）。純粋なミノサイクリンの３４７８ｃｍ－１におけるピークは、分子内水素結合を形成するヒドロキシ基の振動に起因する。対照的に、複合体は同じ位置で広いピークを示す。この基がキレートを形成する配位部位の一部を形成する事実により、ヒドロキシ基の自由振動の阻害、従ってピークの平滑化が錯化の際に観察される。さらに、ミノサイクリンのＣ－Ｈ振動は、ステアリン酸マグネシウムの強いＣ－Ｈ振動によって影が薄い。１５７０ｃｍ－１のカルボキシレートのピークは、認識可能なままである。１７００ｃｍ－１で新たに生じるピークは、官能基に直接帰属しえない。指紋領域もまた、重なり合った振動のために修正される。
【】
〔製剤（押出物）の組成及び特性〕
【実施例】
【】
ミノサイクリン（遊離塩基）とステアリン酸マグネシウムの１：２複合体の押出
ａ） 複合体の調製
押出には、通常、より大量の複合体が必要である（例えば、１００ｍｇ又はそれ以上の相当量のミノサイクリン）。当該成分を秤量し、実施例１で記載のように処理した。続いて、複合体溶液をテフロンフィルムで被覆した複数のペトリ皿上に広げ、穿孔アルミニウム箔で被覆した。ペトリ皿を真空染色オーブンで、室温で少なくとも８時間（又は一晩）乾燥させた。黄色の粉末が得られ、それをカードシートによってテフロンフィルムから除去した。
ａ） 複合体の調製
押出には、通常、より大量の複合体が必要である（例えば、１００ｍｇ又はそれ以上の相当量のミノサイクリン）。当該成分を秤量し、実施例１で記載のように処理した。続いて、複合体溶液をテフロンフィルムで被覆した複数のペトリ皿上に広げ、穿孔アルミニウム箔で被覆した。ペトリ皿を真空染色オーブンで、室温で少なくとも８時間（又は一晩）乾燥させた。黄色の粉末が得られ、それをカードシートによってテフロンフィルムから除去した。
【】
ｂ） 押出前駆体の調製
次に、Ｒｅｔｓｃｈ ＣｒｙｏＭｉｌｌを用いて粉砕と均質化を行った。複合体粉末（１．００ｇ、純粋なミノサイクリン２８９ｍｇに相当）を、クライオミルジャー中で１ｃｍサイズの２つの粉砕ボールと共にクライオミルジャー中で秤量した。ジャーをクライオミルに適合させ、以下のパラメータを調整した：自動予冷相では、各々１５０秒間、３０Ｈｚの周波数で６回のミリングサイクルを実施した；個々のミリングサイクルの間に、５Ｈｚの周波数で中間冷却（３０秒）を実施した。
次に、Ｒｅｔｓｃｈ ＣｒｙｏＭｉｌｌを用いて粉砕と均質化を行った。複合体粉末（１．００ｇ、純粋なミノサイクリン２８９ｍｇに相当）を、クライオミルジャー中で１ｃｍサイズの２つの粉砕ボールと共にクライオミルジャー中で秤量した。ジャーをクライオミルに適合させ、以下のパラメータを調整した：自動予冷相では、各々１５０秒間、３０Ｈｚの周波数で６回のミリングサイクルを実施した；個々のミリングサイクルの間に、５Ｈｚの周波数で中間冷却（３０秒）を実施した。
【】
ｃ） 押出
押出に、二軸スクリュー押出機の３つの加熱ゾーンを、Ｈ１＝４９℃、Ｈ２＝５２℃及びＨ３＝５５℃で予熱した。二軸押出機の制御ユニットは８００ｒｐｍに設定され、これはスクリューの実際の回転数（推定１５０回転／分）に相当する。押出前駆体を、手で、そして小さな部分で、押出機に注意深く添加した。充分に充填し、必要な時間の経過後、材料は軟化点に達し、塑性変形できた。複合体は、連続らせんとして０．６ｍｍ幅のダイプレートを通して押出機から出て、テフロンフィルム被覆表面上に捕獲され、そこで、最終押出物を得るために室温まで冷却された。
押出に、二軸スクリュー押出機の３つの加熱ゾーンを、Ｈ１＝４９℃、Ｈ２＝５２℃及びＨ３＝５５℃で予熱した。二軸押出機の制御ユニットは８００ｒｐｍに設定され、これはスクリューの実際の回転数（推定１５０回転／分）に相当する。押出前駆体を、手で、そして小さな部分で、押出機に注意深く添加した。充分に充填し、必要な時間の経過後、材料は軟化点に達し、塑性変形できた。複合体は、連続らせんとして０．６ｍｍ幅のダイプレートを通して押出機から出て、テフロンフィルム被覆表面上に捕獲され、そこで、最終押出物を得るために室温まで冷却された。
【実施例】
【】
ミノサイクリン（遊離塩基）とステアリン酸マグネシウムの１：２複合体とレゾマ５０２との押出
ａ） 複合体の調製
複合体生成用成分を秤量し、実施例１で記載のように処理した。続いて、複合体溶液をテフロンフィルムで被覆した複数のペトリ皿上に広げ、穿孔アルミニウム箔で被覆した。ペトリ皿を真空染色オーブンで、室温で少なくとも８時間（又は一晩）乾燥させた。黄色の粉末が得られ、それをカードシートによってテフロンフィルムから除去した。
ａ） 複合体の調製
複合体生成用成分を秤量し、実施例１で記載のように処理した。続いて、複合体溶液をテフロンフィルムで被覆した複数のペトリ皿上に広げ、穿孔アルミニウム箔で被覆した。ペトリ皿を真空染色オーブンで、室温で少なくとも８時間（又は一晩）乾燥させた。黄色の粉末が得られ、それをカードシートによってテフロンフィルムから除去した。
【】
ｂ） 押出前駆体の調製
次に、Ｒｅｔｓｃｈ ＣｒｙｏＭｉｌｌを用いて粉砕と均質化を行った。複合体粉末（４１２．３ｍｇ、純粋なミノサイクリン１１５ｍｇに相当）を、所望の生分解性ポリマー（レゾマ５０２）５８７．７ｍｇと１ｃｍサイズの２つの粉砕ボールと共にクライオミルジャー内で秤量した。ジャーをクライオミルに適合させ、以下のパラメータを調整した：自動予冷相では、各々１５０秒間、３０Ｈｚの周波数で６回のミリングサイクルを実施した；個々のミリングサイクルの間に、５Ｈｚの周波数で中間冷却（３０秒）を実施した。室温までの解凍では、押出前駆体（１ｇ、１１．５質量％の純粋なミノサイクリンを含有する）を得た。
次に、Ｒｅｔｓｃｈ ＣｒｙｏＭｉｌｌを用いて粉砕と均質化を行った。複合体粉末（４１２．３ｍｇ、純粋なミノサイクリン１１５ｍｇに相当）を、所望の生分解性ポリマー（レゾマ５０２）５８７．７ｍｇと１ｃｍサイズの２つの粉砕ボールと共にクライオミルジャー内で秤量した。ジャーをクライオミルに適合させ、以下のパラメータを調整した：自動予冷相では、各々１５０秒間、３０Ｈｚの周波数で６回のミリングサイクルを実施した；個々のミリングサイクルの間に、５Ｈｚの周波数で中間冷却（３０秒）を実施した。室温までの解凍では、押出前駆体（１ｇ、１１．５質量％の純粋なミノサイクリンを含有する）を得た。
【】
ｃ） 押出
押出に、二軸スクリュー押出機の３つの加熱ゾーンを、Ｈ１＝４９℃、Ｈ２＝４９℃及びＨ３＝５３℃で予熱した。二軸押出機の制御ユニットは８００ｒｐｍに設定され、これはスクリューの実際の回転数（推定１５０回転／分）に相当する。押出前駆体を、手で、そして小さな部分で、注意深く添加された。十分に充填し、必要な時間の経過後、材料はガラス転移温度に達し、可塑変形できた。混合物は、連続らせんとして０．６ｍｍ幅のダイプレートを通して押出機から出て、テフロンフィルム被覆表面上に捕獲され、そこで、最終押出物を得るために室温まで冷却された。得られた押出物を図９（上）に示す。
押出に、二軸スクリュー押出機の３つの加熱ゾーンを、Ｈ１＝４９℃、Ｈ２＝４９℃及びＨ３＝５３℃で予熱した。二軸押出機の制御ユニットは８００ｒｐｍに設定され、これはスクリューの実際の回転数（推定１５０回転／分）に相当する。押出前駆体を、手で、そして小さな部分で、注意深く添加された。十分に充填し、必要な時間の経過後、材料はガラス転移温度に達し、可塑変形できた。混合物は、連続らせんとして０．６ｍｍ幅のダイプレートを通して押出機から出て、テフロンフィルム被覆表面上に捕獲され、そこで、最終押出物を得るために室温まで冷却された。得られた押出物を図９（上）に示す。
【実施例】
【】
ミノサイクリン（遊離塩基）とステアリン酸マグネシウムの１：２複合体とレゾマ５０３との押出
実施例１からのミノサイクリン（遊離塩基）及びステアリン酸マグネシウムの１：２複合体を、実施例１０に記載のように、レゾマ５０３と共に含む押出物を調製したが、レゾマ５０３を、レゾマ５０２の代わりに用いた。得られた押出物を図９（下）に示す。
実施例１からのミノサイクリン（遊離塩基）及びステアリン酸マグネシウムの１：２複合体を、実施例１０に記載のように、レゾマ５０３と共に含む押出物を調製したが、レゾマ５０３を、レゾマ５０２の代わりに用いた。得られた押出物を図９（下）に示す。
【実施例】
【】
ミノサイクリン（遊離塩基）とステアリン酸マグネシウムの１：２複合体と、レゾマ５０２／５０３（１：１）及び１０％グリセロールモノステアレート（ＧＭＳ）との押出
さらにグリセロールモノステアレート（混合物の全質量を基準として１０質量％）を用い、レゾマ５０２とレゾマ５０３の混合物（１：１質量／質量）を、最大１００質量％添加したレゾマ５０２の代わりに用いた実施例１０に記載の類似の方法で押出物を調製した。
さらにグリセロールモノステアレート（混合物の全質量を基準として１０質量％）を用い、レゾマ５０２とレゾマ５０３の混合物（１：１質量／質量）を、最大１００質量％添加したレゾマ５０２の代わりに用いた実施例１０に記載の類似の方法で押出物を調製した。
【実施例】
【】
ミノサイクリン（遊離塩基）とステアリン酸マグネシウムとの１：２複合体をＰＥＧ－ＰＬＧＡ（Ｅｘｐａｎｓｏｒｂ ＤＬＧ ５０－６Ｐ）及び１０％ ＰＥＧ １５００と共に押出した
実施例１及び９で説明したように調製した複合体粉末（４１２．３ｍｇ、純粋なミノサイクリン１１５ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２９７．３ｍｇに相当）を、所望の生分解性ポリマー（Ｅｘｐａｎｓｏｒｂ ＤＬＧ ５０－６Ｐ、４８７．７ｍｇ）、可塑剤（ＰＥＧ １５００、１００ｍｇ）及び１ｃｍサイズの２つの粉砕ボールと共にＲｅｔｓｃｈ ＣｒｙｏＭｉｌｌチャンバー中で秤量した。その後、粉砕と均質化を行った。容器をクライオミルに適合させ、以下のパラメータを調整した：自動予冷相では、各々１５０秒間、３０Ｈｚの周波数で５回のミリングサイクルを実施した；個々のミリングサイクルの間に、５Ｈｚの周波数で中間冷却（３０秒）を実施した。室温まで解凍すると、押出前駆体（１ｇ、１１．５質量％の純粋なミノサイクリンを含有する）が得られた。
押出は、実施例１０に記載のものに類似する方法で行った。
実施例１及び９で説明したように調製した複合体粉末（４１２．３ｍｇ、純粋なミノサイクリン１１５ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２９７．３ｍｇに相当）を、所望の生分解性ポリマー（Ｅｘｐａｎｓｏｒｂ ＤＬＧ ５０－６Ｐ、４８７．７ｍｇ）、可塑剤（ＰＥＧ １５００、１００ｍｇ）及び１ｃｍサイズの２つの粉砕ボールと共にＲｅｔｓｃｈ ＣｒｙｏＭｉｌｌチャンバー中で秤量した。その後、粉砕と均質化を行った。容器をクライオミルに適合させ、以下のパラメータを調整した：自動予冷相では、各々１５０秒間、３０Ｈｚの周波数で５回のミリングサイクルを実施した；個々のミリングサイクルの間に、５Ｈｚの周波数で中間冷却（３０秒）を実施した。室温まで解凍すると、押出前駆体（１ｇ、１１．５質量％の純粋なミノサイクリンを含有する）が得られた。
押出は、実施例１０に記載のものに類似する方法で行った。
【実施例】
【】
押出物の放出特性
図７は、ミノサイクリンの遅延放出に対する本発明による複合体の寄与を明確に示す。実施例９－１３に記載の溶融押出しにより得られた押出し物を４ｍｍ長の小片に切断し、１ｍＬの緩衝液中でｐＨ７．０及び３７℃でインキュベートした。実施例１１－１３の押出物のミノサイクリン含有量は１１．５％であり、実施例９の純粋な複合押出物のミノサイクリン含有量は２７．８９％である。インキュベーション溶液から試料を採取するたびに、緩衝液全体を交換し、古い緩衝液中のミノサイクリン含有量を、ＨＰＬＣを用いて測定した。図７から分かるように、実施例９の純粋な複合押出物は、ほぼ３週間の遅延放出を示す。実験の最後に、実施例９の押出物中に残っているミノサイクリン残留物の量を分析し、活性物質がもはや存在しないことを示した。残りの４０％は経時的に分解したと考えられる。
図７は、ミノサイクリンの遅延放出に対する本発明による複合体の寄与を明確に示す。実施例９－１３に記載の溶融押出しにより得られた押出し物を４ｍｍ長の小片に切断し、１ｍＬの緩衝液中でｐＨ７．０及び３７℃でインキュベートした。実施例１１－１３の押出物のミノサイクリン含有量は１１．５％であり、実施例９の純粋な複合押出物のミノサイクリン含有量は２７．８９％である。インキュベーション溶液から試料を採取するたびに、緩衝液全体を交換し、古い緩衝液中のミノサイクリン含有量を、ＨＰＬＣを用いて測定した。図７から分かるように、実施例９の純粋な複合押出物は、ほぼ３週間の遅延放出を示す。実験の最後に、実施例９の押出物中に残っているミノサイクリン残留物の量を分析し、活性物質がもはや存在しないことを示した。残りの４０％は経時的に分解したと考えられる。
【】
実施例１０－１２の曲線から分かるように、ＰＬＧＡポリマーを添加すると、さらなる放出遅延がおこる。この場合、残りのミノサイクリンの約１０－１３％は、実験終了時にもなお存在していた。これは、図４に示されるように、ＰＬＧＡポリマー中の酸性微小環境及び酸性媒体中のわずかに良好な安定性に部分的に起因する可能性がある。
【】
さらに、グリセロールモノステアレート等の賦形剤の添加（実施例１２）は、所望であれば、放出を促進しうる。
【】
最後に、可塑剤としてＥｘｐａｎｓｏｒｂ ＤＬＧ５０－６Ｐ及び１０％のＰＥＧ １５００を含有する実施例１３のＰＥＧ－ＰＬＧＡベースの押出物も有利な徐放特性を示す。さらに、この押出物は、柔軟性及び機械的成形性が最適化されている。
【実施例】
【】
押出物のさらなる特性
ａ） 機械的特性
図８は、ナイフ刃形状に嵌合した押出物の変形時の力－変位図である。当該実験のため、ナイフエッジブレードユニットを備えたブルックフィールドＣＴ３テクスチャアナライザ上のスライド上に押出し物を取り付け、０．０２ｍｍ／秒の速度で０．５ｍｍの所定の貫通深さに必要な重力を加えて、決定した。上の図は、レゾマ５０２、５０３及び当該混合物を含む脆性特性又は押出物、並びにグリセロールモノステアレート含有及び非含有の混合物を示す。異なるＥｘｐａｎｓｏｒｂｓを有するＰＥＧ－ＰＬＧＡ押出物（下図）は、侵入深さと必要な力との間にほぼ直線的な関係を示す。力が低下しないことは、塑性と考えられる不可逆的な変形を示す。肉眼的には、押出物は優れた柔軟性を示す。１０％ ＰＥＧ １５００を含む組成物（実施例１３）は、冷蔵庫で長期間保存しても機械的性質に関して変化を示さない。対照的に、５％ ＰＥＧを有する組成物は、保存中に部分的に硬化し、ＰＥＧを添加せずに対応する押出物のように挙動する。
ａ） 機械的特性
図８は、ナイフ刃形状に嵌合した押出物の変形時の力－変位図である。当該実験のため、ナイフエッジブレードユニットを備えたブルックフィールドＣＴ３テクスチャアナライザ上のスライド上に押出し物を取り付け、０．０２ｍｍ／秒の速度で０．５ｍｍの所定の貫通深さに必要な重力を加えて、決定した。上の図は、レゾマ５０２、５０３及び当該混合物を含む脆性特性又は押出物、並びにグリセロールモノステアレート含有及び非含有の混合物を示す。異なるＥｘｐａｎｓｏｒｂｓを有するＰＥＧ－ＰＬＧＡ押出物（下図）は、侵入深さと必要な力との間にほぼ直線的な関係を示す。力が低下しないことは、塑性と考えられる不可逆的な変形を示す。肉眼的には、押出物は優れた柔軟性を示す。１０％ ＰＥＧ １５００を含む組成物（実施例１３）は、冷蔵庫で長期間保存しても機械的性質に関して変化を示さない。対照的に、５％ ＰＥＧを有する組成物は、保存中に部分的に硬化し、ＰＥＧを添加せずに対応する押出物のように挙動する。
【】
ｂ） 粘膜接着性
押出物調製物の保持能力を、図１０Ａに示すように保持分析実験セットアップで試験した。Ｔｏｎｎｉｅｓ Ｌｅｂｅｎｓｍｉｔｔｅｌ ＧｍｂＨ＆Ｃｏ．ＫＧ（洗浄、分割、包装、凍結又は直ちに使用）から得られた豚腸粘膜を、図１０Ｂに示すチャネルに固定したモデル表面として用いた。所定の洗浄速度（好ましくは３００μＬ／分）で、所定の時間にわたり脱イオン水を連続的に流した後、非特許文献３で提案された方法と同様の方法で、試験表面（粘膜）に保持された被験製剤の画分を測定した。本発明による調製物は良好な生体接着性を示すことが分かった。
押出物調製物の保持能力を、図１０Ａに示すように保持分析実験セットアップで試験した。Ｔｏｎｎｉｅｓ Ｌｅｂｅｎｓｍｉｔｔｅｌ ＧｍｂＨ＆Ｃｏ．ＫＧ（洗浄、分割、包装、凍結又は直ちに使用）から得られた豚腸粘膜を、図１０Ｂに示すチャネルに固定したモデル表面として用いた。所定の洗浄速度（好ましくは３００μＬ／分）で、所定の時間にわたり脱イオン水を連続的に流した後、非特許文献３で提案された方法と同様の方法で、試験表面（粘膜）に保持された被験製剤の画分を測定した。本発明による調製物は良好な生体接着性を示すことが分かった。
【】
〔放出動態と抗菌活性〕
【実施例】
【】
放出動態と抗菌活性（ミノサイクリン製剤）
活性物質の放出動態及び生物活性を評価するために、口腔内の条件、すなわち歯肉溝液中の溝の流量（ターンオーバー）及び組成（Ｇｏｏｄｓｏｎ，ＪＭ（２００３），Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ ２０００ ３１：４３－５４；Ｔｅｗ，ＪＧ ｅｔ ａｌ．（１９８５），Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ ４９：４８７－９３に記載されるように）を考慮してアプローチを選択した。
活性物質の放出動態及び生物活性を評価するために、口腔内の条件、すなわち歯肉溝液中の溝の流量（ターンオーバー）及び組成（Ｇｏｏｄｓｏｎ，ＪＭ（２００３），Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ ２０００ ３１：４３－５４；Ｔｅｗ，ＪＧ ｅｔ ａｌ．（１９８５），Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ ４９：４８７－９３に記載されるように）を考慮してアプローチを選択した。
【】
ａ） 放出速度論
具体的には、以下の物質の試料を試験した。各物質には、ミノサイクリン１ｍｇに相当する量の活性物質が含まれていた（溶媒の押出物を除く）：
・塩酸ミノサイクリン散（ＳＩＧＭＡ製品番号Ｍ９５１１－２５ＭＧより購入。図１１／１２：「ミノサイクリン」）
・ミノサイクリン／ＰＬＧＡ微小球（Ｏｒａｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．Ｅｕｒｏｐｅ，ＰＺＮ １２９５１１５由来のアレスチン（登録商標）；１カプセル＝１ｍｇミノサイクリン；図１１／１２：「アレスチン」）
・実施例１１（図１１／１２：「押出物５０３」）
・実施例１０（図１１／１２：「押出物５０２」）
・テトラサイクリン化合物を含まない生分解性ポリマーで構成される対照（図１１／１２：「賦形剤押出物」）
試料を暗い試験管に入れ、血清アルブミンを含む適量の緩衝生理食塩水（１５ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ含有リン酸緩衝生理食塩水）を添加した。所定の時間間隔で、試料を遠心分離し、所定量の緩衝液を除去し、保存し（溶出液）、次いで、緩衝液の新鮮な部分を添加した。表４に示すように、７週間にわたり溶出液を回収し、以下に記載する方法（最小発育阻止濃度測定及びバイオフィルム形成阻害）を用いて、それらの抗微生物活性に関して試験した。
表４．放出速度論的評価のために作成した溶出液試料のピペッティングチャート＊は、当該時点で溶出した溶出液をＭＩＣ測定に用いて、＃は、当該時点で溶出した溶出液をバイオフィルム形成阻害に用いたことを示す。
具体的には、以下の物質の試料を試験した。各物質には、ミノサイクリン１ｍｇに相当する量の活性物質が含まれていた（溶媒の押出物を除く）：
・塩酸ミノサイクリン散（ＳＩＧＭＡ製品番号Ｍ９５１１－２５ＭＧより購入。図１１／１２：「ミノサイクリン」）
・ミノサイクリン／ＰＬＧＡ微小球（Ｏｒａｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．Ｅｕｒｏｐｅ，ＰＺＮ １２９５１１５由来のアレスチン（登録商標）；１カプセル＝１ｍｇミノサイクリン；図１１／１２：「アレスチン」）
・実施例１１（図１１／１２：「押出物５０３」）
・実施例１０（図１１／１２：「押出物５０２」）
・テトラサイクリン化合物を含まない生分解性ポリマーで構成される対照（図１１／１２：「賦形剤押出物」）
試料を暗い試験管に入れ、血清アルブミンを含む適量の緩衝生理食塩水（１５ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ含有リン酸緩衝生理食塩水）を添加した。所定の時間間隔で、試料を遠心分離し、所定量の緩衝液を除去し、保存し（溶出液）、次いで、緩衝液の新鮮な部分を添加した。表４に示すように、７週間にわたり溶出液を回収し、以下に記載する方法（最小発育阻止濃度測定及びバイオフィルム形成阻害）を用いて、それらの抗微生物活性に関して試験した。
表４．放出速度論的評価のために作成した溶出液試料のピペッティングチャート＊は、当該時点で溶出した溶出液をＭＩＣ測定に用いて、＃は、当該時点で溶出した溶出液をバイオフィルム形成阻害に用いたことを示す。
【】
【表】
【】
【表】
２つの指標菌株（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ ＡＴＣＣ ３３２７７、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ ＡＴＣＣ １０５５８）の増殖が依然として阻害される希釈物を測定した（最小発育阻止濃度、ＭＩＣ）。この目的のために、試料を栄養培地及び各細菌株と混合し、好気性条件下で３７℃で１８時間インキュベートした。用いた方法及び培地は、欧州委員会の抗菌薬感受性試験－ＥＵＣＡＳＴの勧告に従った。各測定は２回実施し、成長コントロールは各１穴で実施した。
【】
図１１は、希釈度成長阻害が依然として観察可能であることを示す（すなわち、溶出液（希釈）対Ｓ．ｇｏｒｄｏｎｉｉ ＡＴＣＣ １０５５８及びＰ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ ＡＴＣＣ ３３２７７の最小発育阻止濃度）。純粋なミノサイクリン及び市販製品（アレスチン）の活性は２１日まで存在したが、押出物調製物５０２及び５０３は観察終了（４２日）まで活性を示した。
【】
表５では、２株（Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ ＡＴＣＣ ３３２７７：０．２５μｇ／ｍＬ、Ｓ．ｇｏｒｄｏｎｉｉ ＡＴＣＣ １０５５８：０．５μｇ／ｍＬ）に対するミノサイクリンのＭＩＣに基づき、活性物質の有効濃度を算出した。当該データはまた、長期の溶出液の活性を強調する。
【】
ｃ） バイオフィルム形成阻害
９６穴プレートの表面を１０μＬの溶出液で被覆した。歯周炎関連細菌の６種混合物を添加すると、６時間以上かけてバイオフィルムが形成された（例えば、Ｊｕｒｃｚｙｋ Ｋ．，Ｎｉｅｔｚｓｃｈｅ Ｓ．，Ｅｎｄｅｒ Ｃ．，Ｓｃｕｌｅａｎ Ａ．，Ｅｉｃｋ Ｓ．Ｉｎ－ｖｉｔｒｏ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｏｄｉｕｍ－ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ ｇｅｌ ｏｎ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ．Ｃｌｉｎ Ｏｒａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．２０１６ Ｎｏｖ；２０（８）：２１６５－２１７３）。その後、バイオフィルム中の生残菌数（コロニー形成単位＝ｃｆｕ）を測定した。
９６穴プレートの表面を１０μＬの溶出液で被覆した。歯周炎関連細菌の６種混合物を添加すると、６時間以上かけてバイオフィルムが形成された（例えば、Ｊｕｒｃｚｙｋ Ｋ．，Ｎｉｅｔｚｓｃｈｅ Ｓ．，Ｅｎｄｅｒ Ｃ．，Ｓｃｕｌｅａｎ Ａ．，Ｅｉｃｋ Ｓ．Ｉｎ－ｖｉｔｒｏ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｏｄｉｕｍ－ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ ｇｅｌ ｏｎ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ．Ｃｌｉｎ Ｏｒａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．２０１６ Ｎｏｖ；２０（８）：２１６５－２１７３）。その後、バイオフィルム中の生残菌数（コロニー形成単位＝ｃｆｕ）を測定した。
【】
図１２は、２４時間後、２日後、７日後、１４日後及び２８日後に得られた溶出液のバイオフィルム形成に対する阻害活性を示す。一方、バイオフィルム形成阻害は、抗菌活性、及びバイオフィルム形成の段階（微生物の表面への付着、又は既に付着している微生物への付着（共凝集）、マトリックス形成）の阻害に起因する可能性がある。ここで、ビヒクル由来溶出液は、いくつかの抗バイオフィルム特性も示すようだ。２４時間培養後、被験物質間に差は認められなかった。しかし、その後、本発明の全ての調製物は、純粋なミノサイクリンよりも良好な活性を示す。２８日後、Ｅｘｔｒｕｄａｔｅ ５０３（－１．９ｌｏｇ１０ｃｆｕ）による有意な阻害が依然として存在した。
【実施例】
【】
放出動態と抗菌活性（ドキシサイクリン製剤）
ドキシサイクリン製剤の放出及び動態並びに生物学的活性を評価するため、類似のアプローチを選択した。具体的には、ドキシサイクリン１ｍｇ相当量の活性物質（ビヒクル押出物を除く）を含有する以下の物質の試料を試験した：
・ドキシサイクリンヒクラート（ドキシサイクリンヒクラート１．１５ｍｇ＝ドキシサイクリン１ｍｇ）
・ドキシサイクリンゲル（リゴサン（登録商標）、１カートリッジ＝２６０ｍｇ、１４％ドキシサイクリン）
・ドキシサイクリン押出物（１１．５％ドキシサイクリンに相当し、実施例１３に記載のように類似の方法で製造される）
・ビヒクル押出物
試験は、実施例１６に記載の類似の方法で実施された。参照試料に対する本発明による調製物の放出動態及び抗菌活性は、ミノサイクリン調製物について得られた結果と同等であることが分かった。
〔他の実施例〕
潜在的な錯化剤として、ステアリン酸マグネシウムとステアリン酸カルシウムを選択したが、その理由は、それらの高い理論的可能性、低毒性、生分解性、及び薬物送達用途でのそれらの広範な使用のためである。薬物複合体形成の後、ＵＶ／ＶＩＳ‐及びＩＲ‐分光法を行った。さらに、放出速度と機械的性質を修正するため、グリセロール‐モノステアリン酸塩の影響を研究した。
複合体の形成は薬物活性にも負の影響を与える可能性がある。そこで、生物活性測定を行った。最後に、インビトロ放出試験を行い、放出動力学に及ぼす製剤への影響を評価した。
ドキシサイクリン製剤の放出及び動態並びに生物学的活性を評価するため、類似のアプローチを選択した。具体的には、ドキシサイクリン１ｍｇ相当量の活性物質（ビヒクル押出物を除く）を含有する以下の物質の試料を試験した：
・ドキシサイクリンヒクラート（ドキシサイクリンヒクラート１．１５ｍｇ＝ドキシサイクリン１ｍｇ）
・ドキシサイクリンゲル（リゴサン（登録商標）、１カートリッジ＝２６０ｍｇ、１４％ドキシサイクリン）
・ドキシサイクリン押出物（１１．５％ドキシサイクリンに相当し、実施例１３に記載のように類似の方法で製造される）
・ビヒクル押出物
試験は、実施例１６に記載の類似の方法で実施された。参照試料に対する本発明による調製物の放出動態及び抗菌活性は、ミノサイクリン調製物について得られた結果と同等であることが分かった。
〔他の実施例〕
潜在的な錯化剤として、ステアリン酸マグネシウムとステアリン酸カルシウムを選択したが、その理由は、それらの高い理論的可能性、低毒性、生分解性、及び薬物送達用途でのそれらの広範な使用のためである。薬物複合体形成の後、ＵＶ／ＶＩＳ‐及びＩＲ‐分光法を行った。さらに、放出速度と機械的性質を修正するため、グリセロール‐モノステアリン酸塩の影響を研究した。
複合体の形成は薬物活性にも負の影響を与える可能性がある。そこで、生物活性測定を行った。最後に、インビトロ放出試験を行い、放出動力学に及ぼす製剤への影響を評価した。
【】
〔A．材料及び方法〕
ミノサイクリン及びドキシサイクリンは、オンタリオ・ケミカルズ社（オンタリオ州、カナダ）から購入した。ステアリン酸マグネシウム及びステアリン酸カルシウムは、マグネシアドイツ（ムルヘルム、ドイツ）のご好意により提供された。ＰＬＧＡポリマー及びＴｅｇｉｎ（登録商標）４１００ペレット（グリセロールモノステアレートはＧＭＳと略記）は、エボニック（ダルムシュタット、ドイツ）から贈与された。ナイルレッドは、シグマアルドリッチ（ドイツ、ミュンヘン）から取得した。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ＡＴＣＣ ２９２１３を抗菌活性のスクリーニングに用いた。用いた溶媒は全てシグマアルドリッチ及び少なくともＰｕｒｉｓｓｉｍｕｍグレードから入手した。
ミノサイクリン及びドキシサイクリンは、オンタリオ・ケミカルズ社（オンタリオ州、カナダ）から購入した。ステアリン酸マグネシウム及びステアリン酸カルシウムは、マグネシアドイツ（ムルヘルム、ドイツ）のご好意により提供された。ＰＬＧＡポリマー及びＴｅｇｉｎ（登録商標）４１００ペレット（グリセロールモノステアレートはＧＭＳと略記）は、エボニック（ダルムシュタット、ドイツ）から贈与された。ナイルレッドは、シグマアルドリッチ（ドイツ、ミュンヘン）から取得した。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ＡＴＣＣ ２９２１３を抗菌活性のスクリーニングに用いた。用いた溶媒は全てシグマアルドリッチ及び少なくともＰｕｒｉｓｓｉｍｕｍグレードから入手した。
【】
Ｉ．テトラサイクリン誘導体のキレート化
薬物安定性を高め、放出時間を延長させる潜在的な方法として、親油性薬物複合体の形成を提案した。このため、抗生物質及びステアリン酸マグネシウム‐又はステアリン酸カルシウムの各々異なるモル組成を調べた。複合体形成のため、テトラサイクリン類及びステアリン酸塩を、モル比１：１、１：２及び２：１でフラスコに計量した。例えば、ミノサイクリン１０ｍｇをステアリン酸マグネシウム２５．４８ｍｇ（モル比１：２）と対にし、エタノール２ｍｌを各フラスコに加え、黄色の懸濁液を得た。フラスコを水浴中で７０℃、２分間加熱した。
薬物安定性を高め、放出時間を延長させる潜在的な方法として、親油性薬物複合体の形成を提案した。このため、抗生物質及びステアリン酸マグネシウム‐又はステアリン酸カルシウムの各々異なるモル組成を調べた。複合体形成のため、テトラサイクリン類及びステアリン酸塩を、モル比１：１、１：２及び２：１でフラスコに計量した。例えば、ミノサイクリン１０ｍｇをステアリン酸マグネシウム２５．４８ｍｇ（モル比１：２）と対にし、エタノール２ｍｌを各フラスコに加え、黄色の懸濁液を得た。フラスコを水浴中で７０℃、２分間加熱した。
【】
ＩＩ．複雑な特徴付けに用いる方法
ミノサイクリン複合体の存在を証明するためにキレートの研究が必要であった。そこで、純粋なテトラサイクリン誘導体とその複合体溶液の吸収スペクトルを、島津ＵＶ‐１８００分光光度計（島津、ドイツ、デュースブルグ）を用いて調べた。あらかじめ、新たに調製した５ｍｇ／ｍｌストック溶液１０μｌをエタノール３ｍｌで希釈し、２５０～４５０ｎｍの範囲の吸収スペクトルを石英キュベット中で採取した。赤外（ＩＲ）スペクトルの記録のため、ＡＰＩとセレン化亜鉛の均一な複合体を作製した。その後、この複合体を、４０００～６８０ｃｍ－１で動作するSensirATRユニット（Bruker,Billerica米国）を装備したBrukerIFS28で調査した。さらに、溶液を回転蒸発器で乾燥し、残渣をフラスコから掻き取った。当該遺体は顕微鏡（カールツァイス顕微鏡、イエナ、ドイツ）で調査した。当該残留物は、異なる溶媒にも曝露して、溶解度の変化を明らかにした。
ミノサイクリン複合体の存在を証明するためにキレートの研究が必要であった。そこで、純粋なテトラサイクリン誘導体とその複合体溶液の吸収スペクトルを、島津ＵＶ‐１８００分光光度計（島津、ドイツ、デュースブルグ）を用いて調べた。あらかじめ、新たに調製した５ｍｇ／ｍｌストック溶液１０μｌをエタノール３ｍｌで希釈し、２５０～４５０ｎｍの範囲の吸収スペクトルを石英キュベット中で採取した。赤外（ＩＲ）スペクトルの記録のため、ＡＰＩとセレン化亜鉛の均一な複合体を作製した。その後、この複合体を、４０００～６８０ｃｍ－１で動作するSensirATRユニット（Bruker,Billerica米国）を装備したBrukerIFS28で調査した。さらに、溶液を回転蒸発器で乾燥し、残渣をフラスコから掻き取った。当該遺体は顕微鏡（カールツァイス顕微鏡、イエナ、ドイツ）で調査した。当該残留物は、異なる溶媒にも曝露して、溶解度の変化を明らかにした。
【】
ＩＩＩ．ディスク拡散検査
好適活性成分としてミノサイクリンを決定した後、寒天ディスク拡散試験を行い、複合体形成後の抗菌活性を検討した。この手順は、ＥＵＣＡＳＴによって設定された勧告に従った。被験物質はミノサイクリン１０ｍｇ／ｍｌを含むミノサイクリン複合体であり、対照はミノサイクリンをエタノール（１０ｍｇ／ｍｌ）及び純粋なエタノールに溶解した。溶液をエタノールで３：７に希釈し、直後に各１０μｌを直径６ｍｍの無負荷抗生物質試験ディスク（ＢＤ、Allschwil、スイス）にピペットで注入し、従って各ディスク（エタノール対照を除く）は３０μｇのミノサイクリンを含有した。Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＡＴＣＣ ２９２１３の一晩培養物をＭｃＦａｒｌａｎｄ０．５に懸濁し、各１００μｌをＭｕｅｌｌｅｒ－Ｈｉｎｔｏｎ－ａｇａｒプレート（Oxoid Basingstoke、ＧＢ）上に広げた。溶媒を蒸発させた後、試験ディスクをプレート上に置いた。３５℃で１８時間インキュベートした後、阻止帯の直径を測定した。
好適活性成分としてミノサイクリンを決定した後、寒天ディスク拡散試験を行い、複合体形成後の抗菌活性を検討した。この手順は、ＥＵＣＡＳＴによって設定された勧告に従った。被験物質はミノサイクリン１０ｍｇ／ｍｌを含むミノサイクリン複合体であり、対照はミノサイクリンをエタノール（１０ｍｇ／ｍｌ）及び純粋なエタノールに溶解した。溶液をエタノールで３：７に希釈し、直後に各１０μｌを直径６ｍｍの無負荷抗生物質試験ディスク（ＢＤ、Allschwil、スイス）にピペットで注入し、従って各ディスク（エタノール対照を除く）は３０μｇのミノサイクリンを含有した。Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＡＴＣＣ ２９２１３の一晩培養物をＭｃＦａｒｌａｎｄ０．５に懸濁し、各１００μｌをＭｕｅｌｌｅｒ－Ｈｉｎｔｏｎ－ａｇａｒプレート（Oxoid Basingstoke、ＧＢ）上に広げた。溶媒を蒸発させた後、試験ディスクをプレート上に置いた。３５℃で１８時間インキュベートした後、阻止帯の直径を測定した。
【】
ＩＶ．クライオミリング及びホットメルト押出による押出前駆体の製造
低温化の前に、エタノール性ミノサイクリン複合体溶液を、液滴の薄層中のテフロン箔で覆ったペトリ皿上に広げた。ペトリ皿を真空乾燥オーブン中２５℃で少なくとも１２時間保存した。次に、乾燥したミノサイクリン複合体粉末をテフロン箔から回収した。
押出チャンバーの充填を十分に行うには、バッチサイズを１ｇ程度にする必要がある。従って、低温化のため、４１２．３ｍｇのミノサイクリン複合体粉末（１１５ｍｇのミノサイクリンを含む）及び５８７．７ｍｇの所望のＰＬＧＡポリマーを、２つの１０ｍｍスチール球と共に粉砕チャンバーに挿入した。すなわち、１０％ＧＭＳ含有押出物は、４８７．７ｍｇのＰＬＧＡポリマーのみを封入した。RetschCryoMill（Retsch,Haan,Germany）で適当に調整した後、混合物を自動予冷相にかけ、その後、３０Ｈｚで１５０秒間５回のミリングサイクルを行った。各ミリングサイクルの後、３０秒長い冷却相により、５Ｈｚで適当なプロセス温度が保証された。
次いで、混合物を押出の準備に調整した。そこで、一体型ＳＫ ５００ Ｅ周波数コンバータを有する二軸押出機ＺＥ ５ Ｅｃｏ（スイス、セオン、３テック）を用いた。直径６００μｍのダイとＬ／Ｄ比２１．２５のスクリューを用いた。押出温度はポリマーと意図した直径に依存した。第１加熱ゾーンで４９℃から開始し、第３加熱ゾーンでは、レゾマ５０２、５０３及びそれらの混合物の温度を５３℃まで徐々に上昇させた。ＧＭＳ１０％含有押出物は、５５℃を最後の加熱ゾーンに適用した。ミノサイクリン－ＰＬＧＡ粉末を、周波数変換器に従って８００ｒｐｍで開口する押出機にゆっくりと手動で充填した。出現した連続高分子ストリングをテフロン箔被覆表面上に捕獲した。最終生成物をメスで所望の長さに切断した。
低温化の前に、エタノール性ミノサイクリン複合体溶液を、液滴の薄層中のテフロン箔で覆ったペトリ皿上に広げた。ペトリ皿を真空乾燥オーブン中２５℃で少なくとも１２時間保存した。次に、乾燥したミノサイクリン複合体粉末をテフロン箔から回収した。
押出チャンバーの充填を十分に行うには、バッチサイズを１ｇ程度にする必要がある。従って、低温化のため、４１２．３ｍｇのミノサイクリン複合体粉末（１１５ｍｇのミノサイクリンを含む）及び５８７．７ｍｇの所望のＰＬＧＡポリマーを、２つの１０ｍｍスチール球と共に粉砕チャンバーに挿入した。すなわち、１０％ＧＭＳ含有押出物は、４８７．７ｍｇのＰＬＧＡポリマーのみを封入した。RetschCryoMill（Retsch,Haan,Germany）で適当に調整した後、混合物を自動予冷相にかけ、その後、３０Ｈｚで１５０秒間５回のミリングサイクルを行った。各ミリングサイクルの後、３０秒長い冷却相により、５Ｈｚで適当なプロセス温度が保証された。
次いで、混合物を押出の準備に調整した。そこで、一体型ＳＫ ５００ Ｅ周波数コンバータを有する二軸押出機ＺＥ ５ Ｅｃｏ（スイス、セオン、３テック）を用いた。直径６００μｍのダイとＬ／Ｄ比２１．２５のスクリューを用いた。押出温度はポリマーと意図した直径に依存した。第１加熱ゾーンで４９℃から開始し、第３加熱ゾーンでは、レゾマ５０２、５０３及びそれらの混合物の温度を５３℃まで徐々に上昇させた。ＧＭＳ１０％含有押出物は、５５℃を最後の加熱ゾーンに適用した。ミノサイクリン－ＰＬＧＡ粉末を、周波数変換器に従って８００ｒｐｍで開口する押出機にゆっくりと手動で充填した。出現した連続高分子ストリングをテフロン箔被覆表面上に捕獲した。最終生成物をメスで所望の長さに切断した。
【】
Ｖ．薬物含有量の測定
押出物から薬物を抽出した後、ＨＰＬＣ法で押出物のミノサイクリン含有量を定量した。抽出には、Ａ．Ｈｏｌｍｋｖｉｓｔら２０１６ （２４）に着想を得た方法を用いた。秤量後、押出物を１５ｍｌ遠心チューブに移し、０．１％トリフルオロ酸（ＴＦＡ）を含むアセトニトリル２ｍｌを加えてポリマーを溶解した。１分間、ＩＫＲ－ＶＩＢＲＯ－ＦＩＸ－シェーカーで振盪した後、４ｍｌのメタノールを添加して、ミノサイクリンを溶解し、ポリマーを沈殿させた。その後、チューブを１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、０．４５μｍテフロンフィルターで滅菌濾過した。ＨＰＬＣは、ＸＴｅｒｒａ ＲＰ１８ ５μｍ ３，９×１５０カラム（Ｗａｔｅｒｓ）を用いてＷａｔｅｒｓ ６００ Ｅシステム上で実施した。２０μｌの試料体積を１．０ｍｌ／分の流速で注入した。勾配プログラムを移動相に対して選択した。２５ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４＋０．０６％ Ｈ３ＰＯ４（Ａ）から開始し、１０分間で６０％ アセトニトリル（Ｂ）にシフトする。５分後、移動相を１分以内に徐々にＡに戻した。保持時間は９．５分であり、ＵＶ／ＶＩＳ検出器を用いて３５５ｎｍで薬物を検出した。直線検量線（ｒ２＞０．９９９）は２～５０μｇ／ｍｌの範囲で得られた。回収率９６％を達成した。
安定性調査には、ＸＴｅｒｒａ ＲＰ１８ ５μｍ ３．９×１５０カラム（Ｗａｔｅｒｓ）を有するＡｇｉｌｅｎｔ １２００シリーズシステムを用いた。１０μｌの試料体積を１．０ｍｌ／分の流速で注入した。この方法にはグラジエントプログラムも適用した。移動相は水／メタノール（９５／５＋０．１％ＴＦＡ）（Ａ）の組成で開始し、７分間かけて純粋なメタノール（０．１％ＴＦＡ）（Ｂ）にシフトした。３分後、移動相は１分以内に溶媒Ａに戻った。保持時間は４．８分であった。クロマトグラムの評価及び抽出にはＣｈｅｍ３２ソフトウェアを用いた。
押出物から薬物を抽出した後、ＨＰＬＣ法で押出物のミノサイクリン含有量を定量した。抽出には、Ａ．Ｈｏｌｍｋｖｉｓｔら２０１６ （２４）に着想を得た方法を用いた。秤量後、押出物を１５ｍｌ遠心チューブに移し、０．１％トリフルオロ酸（ＴＦＡ）を含むアセトニトリル２ｍｌを加えてポリマーを溶解した。１分間、ＩＫＲ－ＶＩＢＲＯ－ＦＩＸ－シェーカーで振盪した後、４ｍｌのメタノールを添加して、ミノサイクリンを溶解し、ポリマーを沈殿させた。その後、チューブを１０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、０．４５μｍテフロンフィルターで滅菌濾過した。ＨＰＬＣは、ＸＴｅｒｒａ ＲＰ１８ ５μｍ ３，９×１５０カラム（Ｗａｔｅｒｓ）を用いてＷａｔｅｒｓ ６００ Ｅシステム上で実施した。２０μｌの試料体積を１．０ｍｌ／分の流速で注入した。勾配プログラムを移動相に対して選択した。２５ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４＋０．０６％ Ｈ３ＰＯ４（Ａ）から開始し、１０分間で６０％ アセトニトリル（Ｂ）にシフトする。５分後、移動相を１分以内に徐々にＡに戻した。保持時間は９．５分であり、ＵＶ／ＶＩＳ検出器を用いて３５５ｎｍで薬物を検出した。直線検量線（ｒ２＞０．９９９）は２～５０μｇ／ｍｌの範囲で得られた。回収率９６％を達成した。
安定性調査には、ＸＴｅｒｒａ ＲＰ１８ ５μｍ ３．９×１５０カラム（Ｗａｔｅｒｓ）を有するＡｇｉｌｅｎｔ １２００シリーズシステムを用いた。１０μｌの試料体積を１．０ｍｌ／分の流速で注入した。この方法にはグラジエントプログラムも適用した。移動相は水／メタノール（９５／５＋０．１％ＴＦＡ）（Ａ）の組成で開始し、７分間かけて純粋なメタノール（０．１％ＴＦＡ）（Ｂ）にシフトした。３分後、移動相は１分以内に溶媒Ａに戻った。保持時間は４．８分であった。クロマトグラムの評価及び抽出にはＣｈｅｍ３２ソフトウェアを用いた。
【】
ＶＩ．放出試験及び安定性試験
押出物を長さ４ｍｍ＋／１００μｍの小片に切断した。各ポリマータイプについて、５つの押出物（長さ４ｍｍ）を秤量し、２ｍｌのガラスバイアル中の１ｍｌのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７．０に曝露した。バイアルを、３７℃の遮光水浴中でインキュベートした。２日毎に３週間試料を採取した。２２日目から、試料採取間隔を４日間に延長した。試料採取は緩衝液の完全な置換を含んだ。ＨＰＬＣ法で薬物含有量を評価するまで、試料を２～８℃の冷蔵庫で保存した。放出プロファイルを４２日間調べた。この時間の後、残りのミノサイクリン含有量を定量するため、当該ＨＰＬＣ法で押出物の残留物も調べた。
安定性調査のため、ミノサイクリンについては１０ｍｇの試料、複合体については２０ｍｇの試料を４ｍｌのガラスバイアルに秤量した。各バイアルの１つを４ｍｌのＰＢＳ ｐＨ７．０中でインキュベートし、もう１つのバイアルを４ｍｌの酸性溶液にｐＨ２．３で曝露し、塩酸で調整した。９日目までは、採取した検体は毎日採取したが、除去量は交換しなかった。そこから間隔を３～４日に延ばした。
押出物を長さ４ｍｍ＋／１００μｍの小片に切断した。各ポリマータイプについて、５つの押出物（長さ４ｍｍ）を秤量し、２ｍｌのガラスバイアル中の１ｍｌのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７．０に曝露した。バイアルを、３７℃の遮光水浴中でインキュベートした。２日毎に３週間試料を採取した。２２日目から、試料採取間隔を４日間に延長した。試料採取は緩衝液の完全な置換を含んだ。ＨＰＬＣ法で薬物含有量を評価するまで、試料を２～８℃の冷蔵庫で保存した。放出プロファイルを４２日間調べた。この時間の後、残りのミノサイクリン含有量を定量するため、当該ＨＰＬＣ法で押出物の残留物も調べた。
安定性調査のため、ミノサイクリンについては１０ｍｇの試料、複合体については２０ｍｇの試料を４ｍｌのガラスバイアルに秤量した。各バイアルの１つを４ｍｌのＰＢＳ ｐＨ７．０中でインキュベートし、もう１つのバイアルを４ｍｌの酸性溶液にｐＨ２．３で曝露し、塩酸で調整した。９日目までは、採取した検体は毎日採取したが、除去量は交換しなかった。そこから間隔を３～４日に延ばした。
【】
〔Ｂ．結果〕
Ｉ．複合体の形成
モル比
２：１、１：１及び１：２のモル比（テトラサイクリン誘導体：脂肪酸塩）を、可能性のあるキレート複合体として試験した。ミノサイクリンとステアリン酸マグネシウムの組合せは、全ての比率に対して黄色溶液を生じた。対照的に、ミノサイクリンをステアリン酸カルシウムと対にすると、１：２比の懸濁液が得られた。したがって、この比率は今後の調査から除外した。ドキシサイクリンはステアリン酸マグネシウム複合体に関してミノサイクリンと類似した。透明な溶液は、それほど強くない黄色で出現した。ドキシサイクリンとステアリン酸カルシウムの対合により、１：１及び１：２の比について溶液がわずかに濁ったことが明らかになった。
Ｉ．複合体の形成
モル比
２：１、１：１及び１：２のモル比（テトラサイクリン誘導体：脂肪酸塩）を、可能性のあるキレート複合体として試験した。ミノサイクリンとステアリン酸マグネシウムの組合せは、全ての比率に対して黄色溶液を生じた。対照的に、ミノサイクリンをステアリン酸カルシウムと対にすると、１：２比の懸濁液が得られた。したがって、この比率は今後の調査から除外した。ドキシサイクリンはステアリン酸マグネシウム複合体に関してミノサイクリンと類似した。透明な溶液は、それほど強くない黄色で出現した。ドキシサイクリンとステアリン酸カルシウムの対合により、１：１及び１：２の比について溶液がわずかに濁ったことが明らかになった。
【】
ＩＩ．複雑な特性評価
１．紫外・可視分光法
キレート化の成功を示す顕著な徴候は、吸収スペクトルの変化である。ミノサイクリンの吸収極大はエタノール中で２５５及び３４４ｎｍである（図１３）。ステアリン酸マグネシウムとの対合後、スペクトルはステアリン酸マグネシウム濃度の関数として変化した。１：１及び１：２比のスペクトルはほぼ同一の形状を示し、それらの吸収極大の位置は類似する。複合体形成は、第一極大が２４４ｎｍへの浅色シフトに至るのに対して、第二極大は３８５ｎｍへの深色シフトに遭遇する。２：１の比は、ミノサイクリンのスペクトルと部分的に発達した複合体が重複しているため、明確な最大値を示さない。結論として、スペクトルは１：１～１：２のモル比のキレート化に成功したことを示した。
ミノサイクリンの吸収スペクトルは、ステアリン酸カルシウムと併用すると、同等の変化を示す。１：１の比は、短波最大では短色シフト、長波最大では深色シフトを導くが、１：２の比はすでに除外される。同様に、２：１の比は、純粋な原薬及び複合体の重複するスペクトルに類似する。両者とも、少量の塩酸（ＨＣｌ）を添加した後、ミノサイクリンと複合体の吸収極大は２６４ｎｍと約３５５ｎｍにシフトする（図１３）。これは、複合体の崩壊を示し、これはＨＰＬＣ分析中のその後の検出に有用である。
ドキシサイクリンについては、構造的に類似するため、結果はミノサイクリンに極めて近いと予想される。しかし、両方のドキシサイクリン吸収極大がキレートイオンとは独立に深色シフトしていることは注目に値する（図１３）。ステアリン酸マグネシウムは、脂肪酸塩の量に依存して吸収極大の位置にわずかな差異を示す。興味深いことに、２：１及び１：１の比のスペクトルは、ステアリン酸カルシウムについてほぼ同じである。したがって、キレート化は、１：２の比に達するまでは不完全であると思われる。ＨＣｌを加えると、ミノサイクリンに近いスペクトルと極大をもつ複合体も崩壊する。
結論として、この実験は、全ての２：１比、及びドキシサイクリンとステアリン酸カルシウムの１：１比を、不十分な複合体形成のために除外した。
１．紫外・可視分光法
キレート化の成功を示す顕著な徴候は、吸収スペクトルの変化である。ミノサイクリンの吸収極大はエタノール中で２５５及び３４４ｎｍである（図１３）。ステアリン酸マグネシウムとの対合後、スペクトルはステアリン酸マグネシウム濃度の関数として変化した。１：１及び１：２比のスペクトルはほぼ同一の形状を示し、それらの吸収極大の位置は類似する。複合体形成は、第一極大が２４４ｎｍへの浅色シフトに至るのに対して、第二極大は３８５ｎｍへの深色シフトに遭遇する。２：１の比は、ミノサイクリンのスペクトルと部分的に発達した複合体が重複しているため、明確な最大値を示さない。結論として、スペクトルは１：１～１：２のモル比のキレート化に成功したことを示した。
ミノサイクリンの吸収スペクトルは、ステアリン酸カルシウムと併用すると、同等の変化を示す。１：１の比は、短波最大では短色シフト、長波最大では深色シフトを導くが、１：２の比はすでに除外される。同様に、２：１の比は、純粋な原薬及び複合体の重複するスペクトルに類似する。両者とも、少量の塩酸（ＨＣｌ）を添加した後、ミノサイクリンと複合体の吸収極大は２６４ｎｍと約３５５ｎｍにシフトする（図１３）。これは、複合体の崩壊を示し、これはＨＰＬＣ分析中のその後の検出に有用である。
ドキシサイクリンについては、構造的に類似するため、結果はミノサイクリンに極めて近いと予想される。しかし、両方のドキシサイクリン吸収極大がキレートイオンとは独立に深色シフトしていることは注目に値する（図１３）。ステアリン酸マグネシウムは、脂肪酸塩の量に依存して吸収極大の位置にわずかな差異を示す。興味深いことに、２：１及び１：１の比のスペクトルは、ステアリン酸カルシウムについてほぼ同じである。したがって、キレート化は、１：２の比に達するまでは不完全であると思われる。ＨＣｌを加えると、ミノサイクリンに近いスペクトルと極大をもつ複合体も崩壊する。
結論として、この実験は、全ての２：１比、及びドキシサイクリンとステアリン酸カルシウムの１：１比を、不十分な複合体形成のために除外した。
【】
２．赤外分光法
ＩＲスペクトルからもキレート化の証拠が得られる（図１４）。純粋なミノサイクリンスペクトルにおける３４７８ｃｍ－１（ａ）のピークは、分子内Ｈ結合に関与する水酸化物振動に帰属できる。この複合体は、代わりに幅広いピークを与える。これは、マグネシウム又はカルシウムイオンの存在による結合部位の自由振動に対する障害を示す。ミノサイクリンのＣ－Ｈ振動（ｃ）は、マグネシウムとステアリン酸カルシウムのより顕著なＣ－Ｈピーク（ｇ）に現れる。１５７０ｃｍ－１（ｈ）のカルボキシレートピークは、明瞭に認識可能なままである。１７００ｃｍ－１には新しいピークが現れるが、特定の官能基に明確に割り当てることはできない。また、指紋領域も振動の重複により変化したが、それ以上の証拠は得られなかった。
しかし、ドキシサイクリンについては、ＩＲスペクトルは約３３００ｃｍ－１（ａ）に広いピークを露出し、これはＯ－ＨとＮ－Ｈ振動を区別することができない。それにもかかわらず、このピークはまた、二価陽イオンの存在下で広がり、滑らかになる（図１５）。
ＩＲスペクトルからもキレート化の証拠が得られる（図１４）。純粋なミノサイクリンスペクトルにおける３４７８ｃｍ－１（ａ）のピークは、分子内Ｈ結合に関与する水酸化物振動に帰属できる。この複合体は、代わりに幅広いピークを与える。これは、マグネシウム又はカルシウムイオンの存在による結合部位の自由振動に対する障害を示す。ミノサイクリンのＣ－Ｈ振動（ｃ）は、マグネシウムとステアリン酸カルシウムのより顕著なＣ－Ｈピーク（ｇ）に現れる。１５７０ｃｍ－１（ｈ）のカルボキシレートピークは、明瞭に認識可能なままである。１７００ｃｍ－１には新しいピークが現れるが、特定の官能基に明確に割り当てることはできない。また、指紋領域も振動の重複により変化したが、それ以上の証拠は得られなかった。
しかし、ドキシサイクリンについては、ＩＲスペクトルは約３３００ｃｍ－１（ａ）に広いピークを露出し、これはＯ－ＨとＮ－Ｈ振動を区別することができない。それにもかかわらず、このピークはまた、二価陽イオンの存在下で広がり、滑らかになる（図１５）。
【】
３．複雑な乾燥と顕微鏡観察
さらなる処理のために、複合体を粉末形態に移す必要があった。従って、複雑な溶液をゆっくりと乾燥させ、それらの残留物をより密接に調べた。乾燥したミノサイクリン及びドキシサイクリン‐ステアリン酸マグネシウム複合体は、いずれもモル比が１：２のガラス状の非晶質構造として現れた。図２は、ミノサイクリンの場合の１：１比の不均一な外観と同様、この均一な構造を示す。残念ながら、ステアリン酸カルシウム複合体は、いずれの抗生物質についても結果は均一でなかった。残りのモル比は他の形態の加工に適しているかもしれないが、モル比１：２は意図した用途により有望な特性を示した。
溶解度の変化も観察された。ミノサイクリン複合体は親薬物と比較して水溶解度が低下した。その代わり、有機溶媒、特にクロロホルムへの溶解度が改善された。当該変化はキレート複合体の形成も意味する。
この時点で、ドキシサイクリンステアリン酸マグネシウム複合体が均等に適しているように見えたが、ミノサイクリンをさらなる実験のために選択した。その理由は、活性のスペクトルが広く、組織浸透能に優れたからである（Ｃｕｎｈａ，ＢＡ．ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２０１８，３７（１），１５－２０）。そこで、以下の段落では、ミノサイクリンステアリン酸マグネシウム複合体を１：２の比率で取り上げる。
さらなる処理のために、複合体を粉末形態に移す必要があった。従って、複雑な溶液をゆっくりと乾燥させ、それらの残留物をより密接に調べた。乾燥したミノサイクリン及びドキシサイクリン‐ステアリン酸マグネシウム複合体は、いずれもモル比が１：２のガラス状の非晶質構造として現れた。図２は、ミノサイクリンの場合の１：１比の不均一な外観と同様、この均一な構造を示す。残念ながら、ステアリン酸カルシウム複合体は、いずれの抗生物質についても結果は均一でなかった。残りのモル比は他の形態の加工に適しているかもしれないが、モル比１：２は意図した用途により有望な特性を示した。
溶解度の変化も観察された。ミノサイクリン複合体は親薬物と比較して水溶解度が低下した。その代わり、有機溶媒、特にクロロホルムへの溶解度が改善された。当該変化はキレート複合体の形成も意味する。
この時点で、ドキシサイクリンステアリン酸マグネシウム複合体が均等に適しているように見えたが、ミノサイクリンをさらなる実験のために選択した。その理由は、活性のスペクトルが広く、組織浸透能に優れたからである（Ｃｕｎｈａ，ＢＡ．ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２０１８，３７（１），１５－２０）。そこで、以下の段落では、ミノサイクリンステアリン酸マグネシウム複合体を１：２の比率で取り上げる。
【】
ＩＩＩ．ディスク拡散検査
多価カチオンは、テトラサイクリン抗生物質の抗生物質としての可能性に負の影響を与えうることは周知である（Naz, S. et al. Arzneimittelforschung 1996, 46(7), 701-704）。そのため、ディスク拡散試験を行い、複合体形成後のミノサイクリンの抗生物質活性を検討した。阻害ゾーンの直径は抗生物質活性を決定する（図１６：Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＡＴＣＣ ２９２１３とインキュベートした寒天プレート、左プレート：エタノールを添加した円板、中プレート：エタノールミノサイクリン複合体溶液を添加した円板、右プレート：エタノールミノサイクリン溶液を添加した円板）。エタノールを充填した対照ディスクは、試験菌の増殖を防げえなかった。純粋なミノサイクリンは２６ｍｍの直径を達成し、複合体は２４ｍｍを達成した。複合体の阻止領域はわずかに小さいが、複合体は微生物学的脅威に対して活性を維持する。
多価カチオンは、テトラサイクリン抗生物質の抗生物質としての可能性に負の影響を与えうることは周知である（Naz, S. et al. Arzneimittelforschung 1996, 46(7), 701-704）。そのため、ディスク拡散試験を行い、複合体形成後のミノサイクリンの抗生物質活性を検討した。阻害ゾーンの直径は抗生物質活性を決定する（図１６：Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＡＴＣＣ ２９２１３とインキュベートした寒天プレート、左プレート：エタノールを添加した円板、中プレート：エタノールミノサイクリン複合体溶液を添加した円板、右プレート：エタノールミノサイクリン溶液を添加した円板）。エタノールを充填した対照ディスクは、試験菌の増殖を防げえなかった。純粋なミノサイクリンは２６ｍｍの直径を達成し、複合体は２４ｍｍを達成した。複合体の阻止領域はわずかに小さいが、複合体は微生物学的脅威に対して活性を維持する。
【】
ＩＶ．ホットメルト押出
押出プロセスの前の低温処理は、熱応力を最小限に維持しつつ、押出前駆体を確実に均一にする。
レゾマ５０２ＲＧ及び５０３ＲＧ押出物は、６００～８００μｍのサイズ範囲で達成された（図９）。レゾマ５０３が粘弾性を有し、押出直後に広がることが注目される。対照的に、レゾマ５０２は、一定の再現性のある６００μｍの押出物を生成する。同じ長さの押出物を用いると、直径が大きいほど、利用可能な薬物の量が異なる。図９は、サイズの違いを示す。その後、レゾマ５０２、５０３の組成を調査した。当該ブレンドは、製品直径に影響を及ぼさなかった。ＧＭＳを添加しても押出物の直径は変化しなかったが、脆性が減少した。
それにもかかわらず、当該押出物は依然として所望のサイズ範囲内であった。さらに、純粋なミノサイクリン複合体粉末の押出を行った。このアプローチから押出物を獲得しえたが、それらは脆く、機械的弾性は脆弱であった。したがって、当該押出物は、インビトロ放出試験の参考としてのみ役立った。
押出プロセスの前の低温処理は、熱応力を最小限に維持しつつ、押出前駆体を確実に均一にする。
レゾマ５０２ＲＧ及び５０３ＲＧ押出物は、６００～８００μｍのサイズ範囲で達成された（図９）。レゾマ５０３が粘弾性を有し、押出直後に広がることが注目される。対照的に、レゾマ５０２は、一定の再現性のある６００μｍの押出物を生成する。同じ長さの押出物を用いると、直径が大きいほど、利用可能な薬物の量が異なる。図９は、サイズの違いを示す。その後、レゾマ５０２、５０３の組成を調査した。当該ブレンドは、製品直径に影響を及ぼさなかった。ＧＭＳを添加しても押出物の直径は変化しなかったが、脆性が減少した。
それにもかかわらず、当該押出物は依然として所望のサイズ範囲内であった。さらに、純粋なミノサイクリン複合体粉末の押出を行った。このアプローチから押出物を獲得しえたが、それらは脆く、機械的弾性は脆弱であった。したがって、当該押出物は、インビトロ放出試験の参考としてのみ役立った。
【】
Ｖ．インビトロ放出
インビトロ放出プロファイル（図１７）は、すべての組成物について、初期放出速度が速く、徐々に低下することを示す。純粋なミノサイクリン複合体押出物は最も放出が速く、破裂も示さなかった。
ＰＬＧＡポリマーの添加は、放出速度を所望のレベルに修正しうる。予想されるように、レゾマ５０２は、低分子量のため、レゾマ５０３と比較して放出がより速い。この相違は、放出速度が一致し始めるまで、特に最初の２週間で調査しうる。顕著なのは、レゾマ５０２の標準偏差がより高いことである。レゾマ５０２と５０３の１：１組成物については、単一ポリマーの曲線間の放出が予想された。当該期待は、ポリマーブレンドが遅れた７日目まで満たされた。４２日後、ポリマーブレンドは、レゾマ５０３の放出レベルにほぼ達する。したがって、対照的に、ＧＭＳの影響はさらに大きいように思われる。当初、ＧＭＳは押出物の軟化剤として用いられたが、全体的な安定性は向上したものの、その効果は比較的小さかった。より大きな利点は、放出率の有意な増加であった。１０日以内に、ＧＭＳを用いないバッチと比較して、倍量が放出された。１０日目以降、それらの放出速度もアラインされ、それ以上の差はない。
インビトロ放出試験は、４２日間にわたる制御された放出を実証する。
インビトロ放出プロファイル（図１７）は、すべての組成物について、初期放出速度が速く、徐々に低下することを示す。純粋なミノサイクリン複合体押出物は最も放出が速く、破裂も示さなかった。
ＰＬＧＡポリマーの添加は、放出速度を所望のレベルに修正しうる。予想されるように、レゾマ５０２は、低分子量のため、レゾマ５０３と比較して放出がより速い。この相違は、放出速度が一致し始めるまで、特に最初の２週間で調査しうる。顕著なのは、レゾマ５０２の標準偏差がより高いことである。レゾマ５０２と５０３の１：１組成物については、単一ポリマーの曲線間の放出が予想された。当該期待は、ポリマーブレンドが遅れた７日目まで満たされた。４２日後、ポリマーブレンドは、レゾマ５０３の放出レベルにほぼ達する。したがって、対照的に、ＧＭＳの影響はさらに大きいように思われる。当初、ＧＭＳは押出物の軟化剤として用いられたが、全体的な安定性は向上したものの、その効果は比較的小さかった。より大きな利点は、放出率の有意な増加であった。１０日以内に、ＧＭＳを用いないバッチと比較して、倍量が放出された。１０日目以降、それらの放出速度もアラインされ、それ以上の差はない。
インビトロ放出試験は、４２日間にわたる制御された放出を実証する。
【】
ＶＩ．安定性試験
本研究は、未検出のミノサイクリンの少なくとも４０％の展望を明らかにするために実施した。図１８は、培地のｐＨに依存するミノサイクリン及び複合体の進行中の崩壊を示す。ミノサイクリンは中性のｐＨ値では分解が認められる。３日以内に、ミノサイクリンのピークは４．８分で消失するが、分解生成物は顕著になる。また、色が黄色から純黒に変わるため、巨大なレベルでの分解も間違いなく起きている。しかし、この複合体はミノサイクリンをある程度まで保護しうる。３週間後、ミノサイクリンのピークはまだ見えるが、もちろん分解生成物のピークは徐々に成長する。水への溶解度が低下すると、わずかに崩壊しやすくなる。それにもかかわらず、潜伏期間が進行するにつれて、複合体のより多くの部分が溶解し、検出可能となる。このことは、ミノサイクリンピークの上昇が観察される２日目のクロマトグラムでも認められる。崩壊の主題であり未解決のミノサイクリン複合体である溶解ミノサイクリン間の化学平衡の開始が可能である。
酸性環境により、ＡＰＩの寿命が延びる。ミノサイクリンについては、中性ｐＨ条件と比較して、より中等度の減衰が観察される。同じことが複合体にもいえるが、ここではさらに経時的な解決が見られた。この時点から、ミノサイクリンと複合体は同じように分解される。のように、ミノサイクリンは酸性条件で複合体から放出される。そのため、似たようなクロマトグラムと分解速度が観察される。
本研究は、未検出のミノサイクリンの少なくとも４０％の展望を明らかにするために実施した。図１８は、培地のｐＨに依存するミノサイクリン及び複合体の進行中の崩壊を示す。ミノサイクリンは中性のｐＨ値では分解が認められる。３日以内に、ミノサイクリンのピークは４．８分で消失するが、分解生成物は顕著になる。また、色が黄色から純黒に変わるため、巨大なレベルでの分解も間違いなく起きている。しかし、この複合体はミノサイクリンをある程度まで保護しうる。３週間後、ミノサイクリンのピークはまだ見えるが、もちろん分解生成物のピークは徐々に成長する。水への溶解度が低下すると、わずかに崩壊しやすくなる。それにもかかわらず、潜伏期間が進行するにつれて、複合体のより多くの部分が溶解し、検出可能となる。このことは、ミノサイクリンピークの上昇が観察される２日目のクロマトグラムでも認められる。崩壊の主題であり未解決のミノサイクリン複合体である溶解ミノサイクリン間の化学平衡の開始が可能である。
酸性環境により、ＡＰＩの寿命が延びる。ミノサイクリンについては、中性ｐＨ条件と比較して、より中等度の減衰が観察される。同じことが複合体にもいえるが、ここではさらに経時的な解決が見られた。この時点から、ミノサイクリンと複合体は同じように分解される。のように、ミノサイクリンは酸性条件で複合体から放出される。そのため、似たようなクロマトグラムと分解速度が観察される。
【】
〔考察〕
テトラサイクリン系は広範囲の抗菌活性を有し、歯周治療における局所抗菌薬として証明される。すべてのテトラサイクリン類の問題は、水中での安定性が限定されることである。ミノサイクリンはドキシサイクリンよりも速く分解し、水性媒体及びいくつかの有機溶媒、特にＮ‐メチルピロリドン（ＮＭＰ）中でエピマー化される傾向がある。当該エピマーは、最初の抗生物質活性の５％のみを提供する
ミノサイクリンが予めキレート化されていれば、当該プロセスの遅延が達成されうる。当該複合体のうち、マグネシウム複合体は、おそらく高い電荷密度のために、カルシウム複合体よりも安定であることが証明された。電荷密度の当該影響は、本明細書に記載のキレート化プロセスの間に顕著であった。マグネシウムカルシウムはともに二価のカチオンであるが、原子直径が小さい（Ｍｇ：１４５ｐｍ、Ｃａ：１９４ｐｍ）ため、マグネシウムの電荷密度が高いほど、キレート化部位と相互作用しやすくなる。これにより、ドキシサイクリンとミノサイクリンの１：２の比の懸濁液の場合の濁液の生成が説明される。さらに、第二化合物としてマグネシウム及びカルシウム脂肪酸塩を選択することにより、水の回避及び原薬の物理的性質の変化を達成しうる。
ＵＶ／Ｖｉｓ‐及びＩＲ‐分光法による研究により、複合体形成及びさらなる処理への適合性に関する証拠が与えられた。カチオンの濃度に依存する吸収極大のシフトとＯＨ‐振動ピークの平滑化と広がりはキレート化の間の相互作用を示した。そこで、ミノサイクリンとドキシサイクリンは、複合体形成過程に対して同等の相溶性を示した。また、両抗生物質は、歯周炎等の炎症性疾患の治療に有益な抗炎症特性を示す。しかし、のように、ミノサイクリンは、より親油性が高く、活性スペクトルが優れていることから、さらなる開発のために選択された。
ＡＰＩと多価カチオンとの相互作用を阻害する可能性があるため、この活性の耐久性を明らかにする必要があった。幸いなことに、ディスク拡散試験では、高い活性が示された。直径がわずかに小さくなったのは、ステアリン酸マグネシウム分子との相互作用により、ミノサイクリン分子が寒天マトリックスを通過する拡散が減少し、より大きな疎水性分子ができるためと考えられる。それにもかかわらず、当該結果により、次の開発段階、すなわち押出成形へ進みえた。
製造プロセス自体は、比較可能な高速で簡単である。前駆体の調製にはほとんど手間がかからず、有毒な溶媒が存在せず、製造中のリスクが軽減され、互換性のある製品が製造され、原薬の安定性が確保される。実験室スケールの生産の限界は、手動の押出機の充填であり、その結果、不連続な前駆体流が生じる。
予め形成された挿入物としての最終生成物は、意図された用途に関していくつかの有利な特性を示す。また、当該用途に特殊な設備は不要であり、ピンセットで十分である。押出物の直径は固定されないが、適合させうる。ポケットサイズに合わせた異なる直径の使用、及び異なる直径の同時適用（例えば、３００μｍで囲まれた６００μｍ）は極めて有望であると思われる。
達成された１１．５％の薬物負荷は、ステアリン酸マグネシウムとの複合体組成のため、合理的な限界に近い。押出物中の複合体の全体的なシェアは４１．２％であり、放出制御ポリマーについては５８．８％であった。ステアリン酸マグネシウムの量が多いことが押出物のわずかに柔軟な形質に寄与している。１つの溝に複数の押出物を同時に配置することで、様々な投与法の選択肢が想像できる。また、放出速度は、ポリマー及び追加の賦形剤の選択により調節可能である。
４２日間のインビトロ放出期間は、市販のシステムと比較してこれまでのところ例外的である。予想されたように、低分子量のレゾマ５０２は、レゾマ５０３と比較して、放出速度がより速い。顕著なのは、レゾマ５０２のより高い標準偏差であり、これは、より低い分子量と、それゆえより速い自己触媒及び分解と結びつけることもできる（Ｆｒｅｄｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ ２０１１，４１５，３４－５２）。しかしながら、コポリマーのブレンドは驚くほど予期せぬ挙動を示した。その放出速度の急激な低下は、状況を明らかにする上で困難である。可能な説明としては、バッチ変動、分析上の問題又はポリマー－ポリマー相互作用のバッチであり、原薬の崩壊を促進する微小環境を作り出すか、又はミノサイクリンの放出を妨げるかのいずれかである。
すべての試料について、１つの観察結果が顕著であり、原薬のより高い割合が検出されないままである。そこで，安定性実験を予定した。水性媒体中のミノサイクリンの既知の脆弱性は、放出試験の期間にわたり最初の崩壊の仮定を導く。３７℃の高温は、当該プロセスを促進する。より深い洞察を得るため、ミノサイクリンと複合体をｐＨ７．０とｐＨ２．３で調べた。中性ｐＨは生理的ｐＨに類似するが、酸性ｐＨは劣化しているＰＬＧＡポリマーの内部で起こりうる条件をシミュレートする。安定性調査により、中性ｐＨ値で複合体の保護機能が明らかとなった。それにもかかわらず、ＡＰＩの一部は減衰する。放出試験の終了時に実施した残留分析では、ＡＰＩの１０～１５％が押出物内に残留することが明らかだった。まとめると、当該結果は、損なわれる原薬の運命を大部分に向けて啓発する。
テトラサイクリン系は広範囲の抗菌活性を有し、歯周治療における局所抗菌薬として証明される。すべてのテトラサイクリン類の問題は、水中での安定性が限定されることである。ミノサイクリンはドキシサイクリンよりも速く分解し、水性媒体及びいくつかの有機溶媒、特にＮ‐メチルピロリドン（ＮＭＰ）中でエピマー化される傾向がある。当該エピマーは、最初の抗生物質活性の５％のみを提供する
ミノサイクリンが予めキレート化されていれば、当該プロセスの遅延が達成されうる。当該複合体のうち、マグネシウム複合体は、おそらく高い電荷密度のために、カルシウム複合体よりも安定であることが証明された。電荷密度の当該影響は、本明細書に記載のキレート化プロセスの間に顕著であった。マグネシウムカルシウムはともに二価のカチオンであるが、原子直径が小さい（Ｍｇ：１４５ｐｍ、Ｃａ：１９４ｐｍ）ため、マグネシウムの電荷密度が高いほど、キレート化部位と相互作用しやすくなる。これにより、ドキシサイクリンとミノサイクリンの１：２の比の懸濁液の場合の濁液の生成が説明される。さらに、第二化合物としてマグネシウム及びカルシウム脂肪酸塩を選択することにより、水の回避及び原薬の物理的性質の変化を達成しうる。
ＵＶ／Ｖｉｓ‐及びＩＲ‐分光法による研究により、複合体形成及びさらなる処理への適合性に関する証拠が与えられた。カチオンの濃度に依存する吸収極大のシフトとＯＨ‐振動ピークの平滑化と広がりはキレート化の間の相互作用を示した。そこで、ミノサイクリンとドキシサイクリンは、複合体形成過程に対して同等の相溶性を示した。また、両抗生物質は、歯周炎等の炎症性疾患の治療に有益な抗炎症特性を示す。しかし、のように、ミノサイクリンは、より親油性が高く、活性スペクトルが優れていることから、さらなる開発のために選択された。
ＡＰＩと多価カチオンとの相互作用を阻害する可能性があるため、この活性の耐久性を明らかにする必要があった。幸いなことに、ディスク拡散試験では、高い活性が示された。直径がわずかに小さくなったのは、ステアリン酸マグネシウム分子との相互作用により、ミノサイクリン分子が寒天マトリックスを通過する拡散が減少し、より大きな疎水性分子ができるためと考えられる。それにもかかわらず、当該結果により、次の開発段階、すなわち押出成形へ進みえた。
製造プロセス自体は、比較可能な高速で簡単である。前駆体の調製にはほとんど手間がかからず、有毒な溶媒が存在せず、製造中のリスクが軽減され、互換性のある製品が製造され、原薬の安定性が確保される。実験室スケールの生産の限界は、手動の押出機の充填であり、その結果、不連続な前駆体流が生じる。
予め形成された挿入物としての最終生成物は、意図された用途に関していくつかの有利な特性を示す。また、当該用途に特殊な設備は不要であり、ピンセットで十分である。押出物の直径は固定されないが、適合させうる。ポケットサイズに合わせた異なる直径の使用、及び異なる直径の同時適用（例えば、３００μｍで囲まれた６００μｍ）は極めて有望であると思われる。
達成された１１．５％の薬物負荷は、ステアリン酸マグネシウムとの複合体組成のため、合理的な限界に近い。押出物中の複合体の全体的なシェアは４１．２％であり、放出制御ポリマーについては５８．８％であった。ステアリン酸マグネシウムの量が多いことが押出物のわずかに柔軟な形質に寄与している。１つの溝に複数の押出物を同時に配置することで、様々な投与法の選択肢が想像できる。また、放出速度は、ポリマー及び追加の賦形剤の選択により調節可能である。
４２日間のインビトロ放出期間は、市販のシステムと比較してこれまでのところ例外的である。予想されたように、低分子量のレゾマ５０２は、レゾマ５０３と比較して、放出速度がより速い。顕著なのは、レゾマ５０２のより高い標準偏差であり、これは、より低い分子量と、それゆえより速い自己触媒及び分解と結びつけることもできる（Ｆｒｅｄｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ ２０１１，４１５，３４－５２）。しかしながら、コポリマーのブレンドは驚くほど予期せぬ挙動を示した。その放出速度の急激な低下は、状況を明らかにする上で困難である。可能な説明としては、バッチ変動、分析上の問題又はポリマー－ポリマー相互作用のバッチであり、原薬の崩壊を促進する微小環境を作り出すか、又はミノサイクリンの放出を妨げるかのいずれかである。
すべての試料について、１つの観察結果が顕著であり、原薬のより高い割合が検出されないままである。そこで，安定性実験を予定した。水性媒体中のミノサイクリンの既知の脆弱性は、放出試験の期間にわたり最初の崩壊の仮定を導く。３７℃の高温は、当該プロセスを促進する。より深い洞察を得るため、ミノサイクリンと複合体をｐＨ７．０とｐＨ２．３で調べた。中性ｐＨは生理的ｐＨに類似するが、酸性ｐＨは劣化しているＰＬＧＡポリマーの内部で起こりうる条件をシミュレートする。安定性調査により、中性ｐＨ値で複合体の保護機能が明らかとなった。それにもかかわらず、ＡＰＩの一部は減衰する。放出試験の終了時に実施した残留分析では、ＡＰＩの１０～１５％が押出物内に残留することが明らかだった。まとめると、当該結果は、損なわれる原薬の運命を大部分に向けて啓発する。
【】
〔要約と結論〕
本研究の目的は、歯周炎の局所抗菌薬治療用の代替制御放出装置の開発であった。炎症性及び細菌性疾患として、歯周炎は局所抗生物質又は消毒剤で治療できる。当該製剤に含まれうる抗生物質の１つのクラスが、テトラサイクリン系抗生物質である。本研究の目的は、薬物安定性を高め、適用を容易にし、数週間にわたり制御放出を可能にする予備成形挿入物の提供であった。従って、テトラサイクリン抗生物質と脂肪酸塩からなるキレート複合体を提案した。この場合、ミノサイクリン及びドキシサイクリンは、異なるモル比で、マグネシウム－及びステアリン酸カルシウムと対になった。当該キレート複合体は、活性な医薬成分を安定化し、ホットメルト押出により、ＰＬＧＡポリマーマトリクスへ組み込みが可能となる。キレート複合体をＵＶ／Ｖｉｓ‐及びＩＲ‐分光法により特徴付けすることにより、ミノサイクリン‐マグネシウム複合体の有利性が導かれた。複合体の抗生物質活性の再評価のため，ディスク拡散試験を行った。この複合体を異なるＰＬＧＡポリマーと混合し、押出前にクライオミルした。ホットメルト押出により、直径６００～９００μｍの均一な押出物が得られた。ミノサイクリンを１１．５％含有し、長さを調節でき、取り扱いが簡便である。インビトロ放出試験では、薬物の４２日間の制御放出が明らかになった。
歯周病患者用の新規適用に対する発明者らのアプローチにはいくつかの利点がある。ミノサイクリンの安定性は、適用前後の提案した複合体形成によって高まる。製造プロセスは、毒性溶媒を全く含まず、スケールアップのしやすさを提供し、固形の予備成形挿入物を提供する汎用性がある。この予め形成された挿入物は、特別な装置がなくても容易に適用でき、調節可能で、４２日間持続する長期制御放出を特徴とするが、これは他の製剤では未だ達成されていない。簡潔には、当該押出物は、特に歯周治療の分野において、価値ある治療選択肢として進展する可能性が有望である。
本研究の目的は、歯周炎の局所抗菌薬治療用の代替制御放出装置の開発であった。炎症性及び細菌性疾患として、歯周炎は局所抗生物質又は消毒剤で治療できる。当該製剤に含まれうる抗生物質の１つのクラスが、テトラサイクリン系抗生物質である。本研究の目的は、薬物安定性を高め、適用を容易にし、数週間にわたり制御放出を可能にする予備成形挿入物の提供であった。従って、テトラサイクリン抗生物質と脂肪酸塩からなるキレート複合体を提案した。この場合、ミノサイクリン及びドキシサイクリンは、異なるモル比で、マグネシウム－及びステアリン酸カルシウムと対になった。当該キレート複合体は、活性な医薬成分を安定化し、ホットメルト押出により、ＰＬＧＡポリマーマトリクスへ組み込みが可能となる。キレート複合体をＵＶ／Ｖｉｓ‐及びＩＲ‐分光法により特徴付けすることにより、ミノサイクリン‐マグネシウム複合体の有利性が導かれた。複合体の抗生物質活性の再評価のため，ディスク拡散試験を行った。この複合体を異なるＰＬＧＡポリマーと混合し、押出前にクライオミルした。ホットメルト押出により、直径６００～９００μｍの均一な押出物が得られた。ミノサイクリンを１１．５％含有し、長さを調節でき、取り扱いが簡便である。インビトロ放出試験では、薬物の４２日間の制御放出が明らかになった。
歯周病患者用の新規適用に対する発明者らのアプローチにはいくつかの利点がある。ミノサイクリンの安定性は、適用前後の提案した複合体形成によって高まる。製造プロセスは、毒性溶媒を全く含まず、スケールアップのしやすさを提供し、固形の予備成形挿入物を提供する汎用性がある。この予め形成された挿入物は、特別な装置がなくても容易に適用でき、調節可能で、４２日間持続する長期制御放出を特徴とするが、これは他の製剤では未だ達成されていない。簡潔には、当該押出物は、特に歯周治療の分野において、価値ある治療選択肢として進展する可能性が有望である。
【】
〔比較例〕
比較例１８：Ｎａ ２ ＨＰＯ ４ による処理
公開された国際出願２０１２／１２８４１７は、実施例１で、５質量％テトラサイクリン塩酸塩水溶液と５質量％のＮａ２ＨＰＯ４水溶液との１：１体積比の混合による「イオン複合体」の形成を記載する。ミノサイクリン・ＨＣｌイオン複合体も国際出願２０１２／１２８４１７により主張される。従って、同様の反応を行って、ミノサイクリンリン酸塩と発明者らのミノサイクリンキレート複合体を比較した。
最初の試みでは、３７５ｍｇのミノサイクリン・ＨＣｌとＮａ２ＨＰＯ４を各々１５ｍｌのファルコンチューブに秤量した。その後、各粉末に再蒸留水７．１２５ｍｌを添加した。ミノサイクリン・ＨＣｌは当該高濃度では溶解せず、黄色の懸濁液となった。Ｎａ２ＨＰＯ４は、容易に可溶であった（図１９）。これら２つの溶液を混合した結果、オレンジ色の溶液が得られた（図２０）。国際出願２０１２／１２８４１７とは対照的に、沈殿は観察されず、溶解度は高められた。溶液を４０００ｒｐｍで４分間遠心分離したが、沈殿は追跡できなかった。
実験を、１質量％のミノサイクリンＨＣｌ及び１質量％のＮａ２ＨＰＯ４溶液を用いて繰り返した。つまり、各化合物７５ｍｇを各々１５ｍｌのファルコンチューブに秤量し、７，４２５ｍｌの再蒸留水を添加した。この濃度では、ミノサイクリン・ＨＣｌは可溶性で、黄色の溶液を生成した（図２１）。両方の成分を混合すると、黄色の溶液になる（図２２）。沈殿は観察されず、４０００ｒｐｍで４分間の遠心分離でも溶液条件は変わらなかった。最終溶液のｐＨ値は７．１であり、これはカチオンとしてのミノサイクリンの存在を示す。それにもかかわらず、両溶液の混合前にミノサイクリン類のカチオン状態を確実にするため、０．１Ｍ ＨＣｌと７．４２５ｍｌの再蒸留水４００μｌを交換して実験を繰り返した。また、ｐＨ変化は沈降をもたらさなかった（図２３）。
したがって、ミノサイクリン・ＨＣｌでは、リン酸二ナトリウムを陰イオンとして用いても、低溶解性イオン複合体の沈殿は観察されなかった。
比較例１８：Ｎａ ２ ＨＰＯ ４ による処理
公開された国際出願２０１２／１２８４１７は、実施例１で、５質量％テトラサイクリン塩酸塩水溶液と５質量％のＮａ２ＨＰＯ４水溶液との１：１体積比の混合による「イオン複合体」の形成を記載する。ミノサイクリン・ＨＣｌイオン複合体も国際出願２０１２／１２８４１７により主張される。従って、同様の反応を行って、ミノサイクリンリン酸塩と発明者らのミノサイクリンキレート複合体を比較した。
最初の試みでは、３７５ｍｇのミノサイクリン・ＨＣｌとＮａ２ＨＰＯ４を各々１５ｍｌのファルコンチューブに秤量した。その後、各粉末に再蒸留水７．１２５ｍｌを添加した。ミノサイクリン・ＨＣｌは当該高濃度では溶解せず、黄色の懸濁液となった。Ｎａ２ＨＰＯ４は、容易に可溶であった（図１９）。これら２つの溶液を混合した結果、オレンジ色の溶液が得られた（図２０）。国際出願２０１２／１２８４１７とは対照的に、沈殿は観察されず、溶解度は高められた。溶液を４０００ｒｐｍで４分間遠心分離したが、沈殿は追跡できなかった。
実験を、１質量％のミノサイクリンＨＣｌ及び１質量％のＮａ２ＨＰＯ４溶液を用いて繰り返した。つまり、各化合物７５ｍｇを各々１５ｍｌのファルコンチューブに秤量し、７，４２５ｍｌの再蒸留水を添加した。この濃度では、ミノサイクリン・ＨＣｌは可溶性で、黄色の溶液を生成した（図２１）。両方の成分を混合すると、黄色の溶液になる（図２２）。沈殿は観察されず、４０００ｒｐｍで４分間の遠心分離でも溶液条件は変わらなかった。最終溶液のｐＨ値は７．１であり、これはカチオンとしてのミノサイクリンの存在を示す。それにもかかわらず、両溶液の混合前にミノサイクリン類のカチオン状態を確実にするため、０．１Ｍ ＨＣｌと７．４２５ｍｌの再蒸留水４００μｌを交換して実験を繰り返した。また、ｐＨ変化は沈降をもたらさなかった（図２３）。
したがって、ミノサイクリン・ＨＣｌでは、リン酸二ナトリウムを陰イオンとして用いても、低溶解性イオン複合体の沈殿は観察されなかった。
【】
さらに、以下の態様を含む。
［１］ テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又は製薬上許容されるその塩、水和物若しくは溶媒和物、及び二価金属カルボキシレート（ＭＡ２）を含む複合体であって、モル比ＴＣ：ＭＡ２は、１：０．８～３．０の範囲であり；前記二価金属のカチオンＭは、土類アルカリ金属カチオンであり；かつ、前記Ａは、Ｃ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである、複合体。［２］前記テトラサイクリン化合物（ＴＣ）は、ミノサイクリン、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、クロルテトラサイクリン、ロリテトラサイクリン、チゲサイクリン、デメクロサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、オマダサイクリン、サレサイクリン、エラバサイクリン、クロモサイクリン、９－（Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシルアミド）－６－デメチル－６－デオキシテトラサイクリン及び９－（Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシルアミド）－ミノサイクリンから選択される、［１］に記載の複合体。［３］前記ＴＣ：ＭＡ２の比は、１：２であり、及び／又はＭは、Ｍｇ２＋及びＣａ２＋から選択され、及び／又は、Ａは、アラキジン酸（Ｃ２０）、ステアリン酸（Ｃ１８）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ミリスチン酸（Ｃ１４）、ラウリン酸（Ｃ１２）、カプリル酸（Ｃ１０）、カプリル酸（Ｃ８）、ヒドロキシステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸及びリシノール酸から選択されるカルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである、［１］又は［２］に記載の複合体。［４］式［（ＴＣ）・２（ＭｇＡ２）］（式中、前記テトラサイクリン化合物（ＴＣ）は、ミノサイクリン又はその製薬上許容される塩、水和物若しくは溶媒和物である）を有する、［１］～［３］のいずれか一項に記載の複合体。［５］態様［１］～［４］のいずれか一項に記載の複合体、及び場合によっては、１又はそれ以上の製薬上許容される賦形剤を含む、医薬製剤。［６］局所投与用に配置され、及び／又は押出物、粒子、顆粒、粉末、フィルム、ストリップ、コンパクト、チップ、ペースト、クリーム、ゲル、乳液、懸濁液、塗布剤、軟膏、バーム、ローション、点眼液、スプレー、局所エアロゾル、局所溶液、局所懸濁液、皮膚パッチ及び不織布からなる群より選択される、態様［５］に記載の医薬製剤。［７］さらに、賦形剤として、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（乳酸コグリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリヒドロキシ酪酸（ＰＨＢ）若しくはポリカプロラクトン（ＰＣＬ）等の生分解性ポリエステル；ＰＬＡ－ＰＣＬ及びＰＬＧＡ－ＰＣＬ等の混合生分解性ポリエステル；、ＰＥＧ－ＰＬＡ、ＰＥＧ－ＰＬＧＡ、ＰＥＧ－ＰＣＬ及びＰＥＧ－ＰＣＬ－ＰＬＧＡ等の生分解性ＰＥＧ化ジブロック（ＡＢ）若しくはトリブロック（ＡＢＡ又はＢＡＢ）コポリマー；並びにペクチン；から選択される１若しくはそれ以上の生分解性ポリマーを含み、かつ／又は、ここで、前記テトラサイクリン化合物（ＴＣ）の総含有量が５～２０質量％の範囲である、態様［５］～［７］のいずれか一項に記載の医薬製剤。［８］好ましくは本質的に円形又は本質的に楕円形の断面及び／又は最大断面直径が０．１～１０ｍｍの範囲である、らせん状の押出物の形態である、態様［５］～［７］のいずれか一項に記載の医薬製剤。［９］態様［１］～［４］のいずれか一項に記載の複合体の製造方法であって、以下の：（ａ）テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又はその製薬上許容される塩、水和物若しくは溶媒和物、及び２価金属カルボキシレート（ＭＡ２）を１：０．８～３．０のモル比で有機溶媒と混合して分散物を得る工程であって、ここで、前記２価金属カチオンＭは、土類アルカリ金属カチオンであり、前記ＡはＣ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである；（ｂ）前記分散物を加熱して複合体を形成する工程；（ｃ）前記溶媒を除去して複合体を得る工程；を含む、方法。［１０］態様［８］による医薬製剤の製造方法であって、以下の：（ｄ）請求項１～４のいずれか一項に記載の複合体、及び存在する場合には、１又はそれ以上の製薬上許容される賦形剤、を粉砕して押出成形前駆体を得る工程；（ｅ）前記押出前駆体を室温より高い温度で押出する工程；（ｆ）工程（ｅ）の生成物を冷却して、らせん状押出物の形態の医薬製剤を得る工程；を含む、方法。［１１］ヒト又は動物体の処置方法で用いられる、態様［１］～［４］のいずれか一項に記載の複合体、又は態様［５］～［８］のいずれか一項に記載の医薬製剤。［１２］（ｉ）細菌感染；又は（ｉｉ）Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ及びＰａｒｖｉｍｏｎａｓ ｍｉｃｒａからなる群から選択される１又はそれ以上の細菌により生じる細菌感染；の治療及び／又は予防の方法で用いられる、態様［１］～［４］のいずれか一項に記載の複合体、又は態様［５］～［８］のいずれか一項に記載の医薬製剤。［１３］抗生物質活性が、少なくとも２１日間にわたり持続する、態様［１］～［４］のいずれか一項に記載の複合体、又は態様［５］～［８］のいずれか一項に記載の医薬製剤。［１４］急性、慢性又は再発性の歯周疾患の治療及び／又は予防の方法で用いられる、態様［１］～［４］のいずれか一項に記載の複合体、又は態様［５］～［８］のいずれか一項に記載の医薬製剤。［１５］前記歯周疾患は、歯垢誘発性歯肉疾患、歯周炎、慢性歯周炎、侵襲性歯周炎、全身性疾患の症状としての歯周炎、壊死性歯周疾患、歯周組織膿瘍、歯内病変に関連する歯周炎、インプラント周囲粘膜炎、インプラント周囲炎及び歯内感染症から選択される、態様［１４］による方法において用いる態様［５］～［８］のいずれか一項に記載の複合体。
［１］ テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又は製薬上許容されるその塩、水和物若しくは溶媒和物、及び二価金属カルボキシレート（ＭＡ２）を含む複合体であって、モル比ＴＣ：ＭＡ２は、１：０．８～３．０の範囲であり；前記二価金属のカチオンＭは、土類アルカリ金属カチオンであり；かつ、前記Ａは、Ｃ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである、複合体。［２］前記テトラサイクリン化合物（ＴＣ）は、ミノサイクリン、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、クロルテトラサイクリン、ロリテトラサイクリン、チゲサイクリン、デメクロサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、オマダサイクリン、サレサイクリン、エラバサイクリン、クロモサイクリン、９－（Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシルアミド）－６－デメチル－６－デオキシテトラサイクリン及び９－（Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシルアミド）－ミノサイクリンから選択される、［１］に記載の複合体。［３］前記ＴＣ：ＭＡ２の比は、１：２であり、及び／又はＭは、Ｍｇ２＋及びＣａ２＋から選択され、及び／又は、Ａは、アラキジン酸（Ｃ２０）、ステアリン酸（Ｃ１８）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ミリスチン酸（Ｃ１４）、ラウリン酸（Ｃ１２）、カプリル酸（Ｃ１０）、カプリル酸（Ｃ８）、ヒドロキシステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸及びリシノール酸から選択されるカルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである、［１］又は［２］に記載の複合体。［４］式［（ＴＣ）・２（ＭｇＡ２）］（式中、前記テトラサイクリン化合物（ＴＣ）は、ミノサイクリン又はその製薬上許容される塩、水和物若しくは溶媒和物である）を有する、［１］～［３］のいずれか一項に記載の複合体。［５］態様［１］～［４］のいずれか一項に記載の複合体、及び場合によっては、１又はそれ以上の製薬上許容される賦形剤を含む、医薬製剤。［６］局所投与用に配置され、及び／又は押出物、粒子、顆粒、粉末、フィルム、ストリップ、コンパクト、チップ、ペースト、クリーム、ゲル、乳液、懸濁液、塗布剤、軟膏、バーム、ローション、点眼液、スプレー、局所エアロゾル、局所溶液、局所懸濁液、皮膚パッチ及び不織布からなる群より選択される、態様［５］に記載の医薬製剤。［７］さらに、賦形剤として、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（乳酸コグリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリヒドロキシ酪酸（ＰＨＢ）若しくはポリカプロラクトン（ＰＣＬ）等の生分解性ポリエステル；ＰＬＡ－ＰＣＬ及びＰＬＧＡ－ＰＣＬ等の混合生分解性ポリエステル；、ＰＥＧ－ＰＬＡ、ＰＥＧ－ＰＬＧＡ、ＰＥＧ－ＰＣＬ及びＰＥＧ－ＰＣＬ－ＰＬＧＡ等の生分解性ＰＥＧ化ジブロック（ＡＢ）若しくはトリブロック（ＡＢＡ又はＢＡＢ）コポリマー；並びにペクチン；から選択される１若しくはそれ以上の生分解性ポリマーを含み、かつ／又は、ここで、前記テトラサイクリン化合物（ＴＣ）の総含有量が５～２０質量％の範囲である、態様［５］～［７］のいずれか一項に記載の医薬製剤。［８］好ましくは本質的に円形又は本質的に楕円形の断面及び／又は最大断面直径が０．１～１０ｍｍの範囲である、らせん状の押出物の形態である、態様［５］～［７］のいずれか一項に記載の医薬製剤。［９］態様［１］～［４］のいずれか一項に記載の複合体の製造方法であって、以下の：（ａ）テトラサイクリン化合物（ＴＣ）又はその製薬上許容される塩、水和物若しくは溶媒和物、及び２価金属カルボキシレート（ＭＡ２）を１：０．８～３．０のモル比で有機溶媒と混合して分散物を得る工程であって、ここで、前記２価金属カチオンＭは、土類アルカリ金属カチオンであり、前記ＡはＣ８～Ｃ２４カルボン酸由来のカルボキシレートアニオンである；（ｂ）前記分散物を加熱して複合体を形成する工程；（ｃ）前記溶媒を除去して複合体を得る工程；を含む、方法。［１０］態様［８］による医薬製剤の製造方法であって、以下の：（ｄ）請求項１～４のいずれか一項に記載の複合体、及び存在する場合には、１又はそれ以上の製薬上許容される賦形剤、を粉砕して押出成形前駆体を得る工程；（ｅ）前記押出前駆体を室温より高い温度で押出する工程；（ｆ）工程（ｅ）の生成物を冷却して、らせん状押出物の形態の医薬製剤を得る工程；を含む、方法。［１１］ヒト又は動物体の処置方法で用いられる、態様［１］～［４］のいずれか一項に記載の複合体、又は態様［５］～［８］のいずれか一項に記載の医薬製剤。［１２］（ｉ）細菌感染；又は（ｉｉ）Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ ｆｏｒｓｙｔｈｉａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ及びＰａｒｖｉｍｏｎａｓ ｍｉｃｒａからなる群から選択される１又はそれ以上の細菌により生じる細菌感染；の治療及び／又は予防の方法で用いられる、態様［１］～［４］のいずれか一項に記載の複合体、又は態様［５］～［８］のいずれか一項に記載の医薬製剤。［１３］抗生物質活性が、少なくとも２１日間にわたり持続する、態様［１］～［４］のいずれか一項に記載の複合体、又は態様［５］～［８］のいずれか一項に記載の医薬製剤。［１４］急性、慢性又は再発性の歯周疾患の治療及び／又は予防の方法で用いられる、態様［１］～［４］のいずれか一項に記載の複合体、又は態様［５］～［８］のいずれか一項に記載の医薬製剤。［１５］前記歯周疾患は、歯垢誘発性歯肉疾患、歯周炎、慢性歯周炎、侵襲性歯周炎、全身性疾患の症状としての歯周炎、壊死性歯周疾患、歯周組織膿瘍、歯内病変に関連する歯周炎、インプラント周囲粘膜炎、インプラント周囲炎及び歯内感染症から選択される、態様［１４］による方法において用いる態様［５］～［８］のいずれか一項に記載の複合体。
【図】
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【国際調査報告】
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