特表2026-533809IP Force 特許公報全文掲載

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】
(54)【発明の名称】生物工学による免疫調節性融合タンパク質組成物
(51)【国際特許分類】
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
   
【ＦＩ】
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】
(86)(22)【出願日】
(85)【翻訳文提出日】
(86)【国際出願番号】
(87)【国際公開番号】
(87)【国際公開日】
(31)【優先権主張番号】63/579,643
(32)【優先日】
(33)【優先権主張国・地域又は機関】
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
２．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】509087759
【氏名又は名称】ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100093676
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 純子
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100196966
【弁理士】
【氏名又は名称】植田 渉
(72)【発明者】
【氏名】タモット，ニンカ
(72)【発明者】
【氏名】ハーヴィラ，ポール バイロン
【テーマコード（参考）】
【Ｆターム（参考）】
4B063QA20
4B063QQ06
4B063QQ07
4B063QQ08
4B063QR48
4B063QR75
4B063QR76
4B063QR77
4B065AA01X
4B065AA01Y
4B065AA57X
4B065AA57Y
4B065AA72X
4B065AA72Y
4B065AA83X
4B065AA83Y
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA44
4B065CA46
4C076AA95
4C076CC27
4C076EE41
4C076EE59
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA09
4H045BA41
4H045CA40
4H045EA20
4H045EA50
4H045FA74
(57)【要約】
本明細書で提供されるのは、特に、免疫応答の調節、並びにそれを必要とする対象の例えばワクチンに対する応答の改善、又はがん若しくは病原体感染などの疾患若しくは障害を治療するための、生物工学による免疫調節性融合タンパク質及びその使用である。
【選択図】図１Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項】
単鎖三量体ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）融合タンパク質を含むポリペプチドであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ペプチドリンカーによって互いに共有結合した３つのＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）及び三量体化モチーフを含み、任意選択で、前記ＣＤ４０Ｌサブユニットは、前記ＣＤ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、ポリペプチド。
【請求項】
前記ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２２若しくは４５、又はその断片を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記ペプチドリンカーの少なくとも１つは、（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなり、任意選択で、前記ペプチドリンカーの少なくとも２つが、同じ配列を有する、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ペプチドテザーに融合され、前記ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）及び（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）から選択される、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフを含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記三量体化モチーフは、配列番号４１を含む、請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記ポリペプチドは、配列番号４４又は４７を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記ポリペプチドは、シグナルペプチドを更に含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記シグナルペプチドは、配列番号４２のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記ポリペプチドは、配列番号４３又は４６を含む、請求項９に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、Ｆｃ単量体ペプチドに融合されている、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記Ｆｃ単量体ペプチドは、ヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、又はＩｇＥ Ｆｃ配列由来のＦｃ配列を含み、任意選択で、ＩｇＧ配列は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択され、任意選択で、ＩｇＧ１配列は、配列番号３０若しくは３１、又はその断片を含むか、又はＩｇＧ２配列は、配列番号２９を含む、請求項１１に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ペプチドテザーを介して前記Ｆｃ単量体ペプチドに融合され、前記ペプチドテザーは、１～２０個のアミノ酸を含み、任意選択で、前記ペプチドテザーは、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、請求項１１に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記ＣＤ４０Ｌ三量体は、
ａ）前記ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号４３、４４、４６、及び５７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、Ｆｃ単量体ペプチドのＮ末端、又は
ｂ）前記ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１３～１９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、前記Ｆｃ単量体ペプチドのＣ末端、
に融合されている、請求項１１に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、
（ａ）野生型ＣＤ４０Ｌと比較してＣＤ４０ポリペプチドの活性化を増強し、任意選択で、前記ＣＤ４０ポリペプチドの前記活性化は、
（ｉ）Ｔ細胞及び／若しくはＢ細胞の増強された免疫刺激機能、
（ｉｉ）野生型ＣＤ４０Ｌと比較して、増強されたＢ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、単球、顆粒球、好酸球、及び／若しくは好中球の活性化、並びに／又は
（ｉｉｉ）前記ＣＤ４０ポリペプチドの増加した発現を含み、
（ｂ）野生型ＣＤ４０Ｌと比較して抗腫瘍活性を増強し、
（ｃ）野生型ＣＤ４０Ｌと比較して炎症促進性活性を増強し、
（ｄ）野生型ＣＤ４０Ｌと比較して感染性病原体のクリアランスを増強し、
（ｅ）Ｂ細胞集団による抗体産生を、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２５０％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％、若しくは約１０００％増加させ、
（ｆ）Ｔ細胞集団による炎症促進性サイトカインの分泌を少なくとも約１０％増加させ、任意選択で、前記炎症促進性サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－ｇ、又はそれらの任意の組み合わせであり、前記サイトカインの産生を、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２５０％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％、又は約１０００％増加させ、
（ｇ）マクロファージ集団中の貪食性マクロファージの最小パーセンテージを、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、若しくは約９９％に増加させ、かつ／又は
（ｈ）樹状細胞集団中の抗原提示樹状細胞の最小パーセンテージを、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、若しくは約９９％に増加させる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記ポリペプチドは、薬剤にコンジュゲートされており、前記薬剤が、放射性同位体、金属キレート剤、酵素、蛍光化合物、生物発光化合物、又は化学発光化合物からなる群から選択される、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項】
前記ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、請求項１～１６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項】
請求項１～１６のいずれか一項に記載の前記ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項】
前記ポリヌクレオチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、請求項１８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項】
請求項１８に記載の前記ポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項】
前記ベクターは、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、請求項２０に記載のベクター。
【請求項】
請求項２０に記載の前記ベクターを含む宿主細胞。
【請求項】
請求項１～１６のいずれか一項に記載の前記ポリペプチドと、薬学的に許容される担体とを含む、組成物。
【請求項】
前記組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、請求項２３に記載の組成物。
【請求項】
ＣＤ４０ポリペプチド又は標的細胞を活性化する方法であって、前記ＣＤ４０ポリペプチド又は前記標的細胞を、請求項１～１６のいずれか一項に記載の前記ポリペプチドと接触させることを含み、請求項１～１６のいずれか一項に記載の前記ポリペプチドの前記ＣＤ４０ポリペプチド又は前記標的細胞への結合が、前記ＣＤ４０ポリペプチド又は前記標的細胞を活性化する、方法。
【請求項】
前記標的細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、顆粒球、好酸球、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される抗原提示細胞（ＡＰＣ）からなる群より選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項】
活性化の際に、前記標的細胞が第２の細胞を活性化し、前記第２の細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項】
前記標的細胞の活性化は、
（ａ）前記標的細胞の増殖若しくは成熟の増加として測定され、
任意選択で、前記標的細胞の増殖若しくは成熟は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２５０％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％、若しくは約１０００％増加し、又は
（ｂ）前記標的細胞の生存期間の延長として測定され、
任意選択で、前記標的細胞の生存期間は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２５０％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％、若しくは約１０００％増加する、
請求項２５に記載の方法。
【請求項】
対象のがんを処置する方法であって、治療有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載のポリペプチドを前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項】
前記ポリペプチドの前記治療有効量は、医薬組成物中で投与され、前記医薬組成物が、薬学的に許容される担体を更に含み、
任意選択で、前記投与は、先天性抗腫瘍免疫応答を増強する、請求項２９に記載の方法。
【請求項】
前記組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、請求項３０に記載の方法。
【請求項】
前記がんは、黒色腫、中皮腫、進行性固形腫瘍、及びリンパ腫からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項】
Ｂ細胞集団における抗体産生を促進する方法であって、前記Ｂ細胞集団を、請求項１～１６のいずれか一項に記載のポリペプチドと接触させることを含み、前記ポリペプチドの結合が、結合時に前記Ｂ細胞を活性化し、
任意選択で、前記抗体産生は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２５０％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％、又は約１０００％増加する、方法。
【請求項】
前記ポリペプチドは、前記Ｂ細胞集団に、抗原の存在下で接触し、前記Ｂ細胞によって産生された前記抗体は、前記抗原に特異的に結合し、
任意選択で、前記方法は、前記抗原に応答して前記抗体を産生することができるメモリーＢ細胞の形成を更に促進する、請求項３３に記載の方法。
【請求項】
前記ポリペプチドは、ワクチン組成物又はアジュバント組成物中にある、請求項３３に記載の方法。
【請求項】
前記ワクチン又は前記アジュバント組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、請求項３５に記載の方法。
【請求項】
前記抗原は、ワクチン組成物中にある、請求項３４に記載の方法。
【請求項】
前記抗原は、感染性病原体、感染性病原体に感染した細胞、罹患細胞を起源とするか、又はそれらに由来し、
任意選択で、前記感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、若しくはそれらの組み合わせであり、又は前記罹患細胞は、がん細胞である、請求項３４に記載の方法。
【請求項】
前記抗原は、抗原提示細胞によって提示され、前記抗原がＭＨＣクラスＩ又はＭＨＣクラスＩＩ複合体と会合し、
任意選択で、前記抗原提示細胞は、樹状細胞である、請求項３４に記載の方法。
【請求項】
樹状細胞集団による抗原提示を増加させる方法であって、前記抗原の存在下で、前記樹状細胞を、有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載の前記ポリペプチドと接触させること、を含み、
任意選択で、前記樹状細胞集団中の前記抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約９９％増加する、方法。
【請求項】
前記樹状細胞による前記抗原提示は、第１の蛍光色素で標識された樹状細胞と、第２の蛍光色素で標識された前記抗原とを共培養することによって測定され、ここで、前記第１の蛍光色素と前記第２の蛍光色素が異なり、
任意選択で、前記抗原を提示する樹状細胞のパーセンテージは、前記樹状細胞集団中の前記抗原と共局在化する樹状細胞のパーセンテージを決定することによって測定される、請求項４０に記載の方法。
【請求項】
前記ポリペプチドは、ワクチン組成物又はアジュバント組成物中にある、請求項４０に記載の方法。
【請求項】
前記ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、請求項４２に記載の方法。
【請求項】
前記抗原は、ワクチン組成物中にある、請求項４０に記載の方法。
【請求項】
前記ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、請求項４４に記載の方法。
【請求項】
前記抗原は、感染性病原体又は罹患細胞を起源とするか又はそれに由来し、
前記罹患細胞は、がん細胞又は前記感染性病原体に感染した細胞であり、
任意選択で、前記感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、若しくはそれらの組み合わせである、請求項４０に記載の方法。
【請求項】
前記抗原は、抗原提示細胞によって提示され、前記抗原がＭＨＣクラスＩ又はＭＨＣクラスＩＩ複合体と会合し、
任意選択で、前記抗原提示細胞は、樹状細胞である、請求項４０に記載の方法。
【請求項】
免疫細胞の集団による炎症促進性サイトカインの分泌を増加させる方法であって、請求項１～１６のいずれか一項に記載の前記ポリペプチドの存在下で、前記免疫細胞の集団を抗原提示細胞の集団と接触させることを含み、
前記単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、結合時に前記抗原提示細胞を活性化し、かつ
活性化時に、前記抗原提示細胞は、前記免疫細胞集団を活性化し、
任意選択で、前記サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－ａ、ＩＦＮ－ｇ、又はそれらの任意の組み合わせである、方法。
【請求項】
前記サイトカイン産生は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２５０％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％、又は約１０００％増加する、請求項４８に記載の方法。
【請求項】
前記抗原提示細胞の活性化の際に、前記免疫細胞の集団に抗原を提示する前記抗原提示細胞の集団が増加し、前記抗原提示細胞の集団中の前記抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージが、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約９９％増加する、請求項４８に記載の方法。
【請求項】
前記抗原提示細胞は、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、又はそれらの組み合わせを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項】
前記免疫細胞集団は、Ｔ細胞、好中球、又はそれらの組み合わせを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項】
前記ポリペプチドは、ワクチン組成物又はアジュバント組成物中にある、請求項４８に記載の方法。
【請求項】
前記ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、請求項５３に記載の方法。
【請求項】
前記抗原は、ワクチン組成物中にある、請求項４８に記載の方法。
【請求項】
前記ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、請求項５５に記載の方法。
【請求項】
前記抗原は、感染性病原体又は罹患細胞を起源とするか又はそれに由来し、
前記罹患細胞は、がん細胞又は前記感染性病原体に感染した細胞であり、
任意選択で、前記感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、若しくはそれらの組み合わせである、請求項４８に記載の方法。
【請求項】
前記抗原は、抗原提示細胞によって提示され、前記抗原がＭＨＣクラスＩ又はＭＨＣクラスＩＩ複合体と会合し、
任意選択で、前記抗原提示細胞は、樹状細胞である、請求項４８に記載の方法。
【請求項】
マクロファージ集団による罹患細胞の貪食作用を増加させる方法であって、前記罹患細胞、前記マクロファージ、又は前記疾患細胞及び前記マクロファージ集団の両方を、有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載の前記ポリペプチドと接触させることを含み、前記マクロファージ集団中の貪食作用性マクロファージの最小パーセンテージは、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約９９％増加する、方法。
【請求項】
前記ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、請求項５９に記載の方法。
【請求項】
マクロファージによる前記貪食作用は、第１の蛍光色素で標識されたマクロファージと、前記第１の蛍光色素と異なる第２の蛍光色素で標識された罹患細胞とを共培養することによって測定される、請求項５９に記載の方法。
【請求項】
貪食性マクロファージのパーセンテージは、前記罹患細胞を含むマクロファージのパーセンテージを決定することによって測定され、
前記罹患細胞は、がん細胞又は感染性病原体に感染した細胞であり、
任意選択で、前記感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、若しくはそれらの組み合わせである、請求項５９に記載の方法。
【請求項】
標的細胞によるＣＤ４０ポリペプチドの発現を増加させる方法であって、前記標的細胞を、有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載の前記ポリペプチドと接触させることを含む、方法。
【請求項】
前記ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、請求項６３に記載の方法。
【請求項】
前記標的細胞は、
（ａ）罹患細胞であり、前記罹患細胞は、がん細胞又は感染性病原体に感染した細胞であり、
任意選択で、前記感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、若しくはそれらの組み合わせであり、又は
（ｂ）Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、顆粒球、好酸球、好中球、若しくはそれらの組み合わせであり、
任意選択で、前記罹患細胞集団は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約９９％減少する、請求項６３に記載の方法。
【請求項】
疾患細胞の集団を取り囲む組織において炎症促進性環境を形成する方法であって、前記組織を、有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載の前記ポリペプチドと接触させることと、
任意選択で、
（ａ）活性化Ｂ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、単球、顆粒球、好酸球、及び／若しくは好中球の組織中での浸潤が増加し、
（ｂ）炎症促進性サイトカインの濃度が前記組織中で増加し、
任意選択で、前記炎症促進性サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－ａ、ＩＦＮ－ｇ、若しくはそれらの任意の組み合わせであり、
（ｃ）抗原提示細胞による前記罹患細胞を起源とする若しくはそれに由来する抗原の提示が前記組織中で増加し、
（ｄ）前記罹患細胞の貪食作用は前記組織中で増加し、
（ｅ）細胞媒介性細胞傷害性によって誘導される前記罹患細胞のアポトーシスは、前記組織中で増加し、
（ｆ）抗体依存性細胞傷害性によって誘導される前記罹患細胞のアポトーシスは、前記組織中で増加し、かつ／又は
（ｇ）前記罹患細胞集団は、前記組織中で減少し、
任意選択で、前記罹患細胞集団は、前記組織中で約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、若しくは約９９％減少する、方法。
【請求項】
前記ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、請求項６６に記載の方法。
【請求項】
対象における疾患細胞を除去する方法であって、有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載のポリペプチドを、前記対象に投与することを含み、前記罹患細胞が、がん細胞又は感染性病原体に感染した細胞であり、
任意選択で、前記感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、若しくはそれらの組み合わせである、方法。
【請求項】
前記ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、請求項６８に記載の方法。
【請求項】
がんの治療を必要とする対象において前記治療を行う方法であって、有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載のポリペプチドを、前記対象に投与することを含み、
任意選択で、
（ａ）前記治療は、先天性、体液性、又は細胞媒介性抗腫瘍免疫応答を増強し、
（ｂ）前記方法は、第２の療法の共投与を更に含み、かつ／又は
（ｃ）前記がんは、黒色腫、中皮腫、進行性固形腫瘍、及びリンパ腫からなる群から選択される、方法。
【請求項】
前記ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、請求項７０に記載の方法。
【請求項】
感染症の治療を必要とする対象において前記治療を行う方法であって、有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載のポリペプチドを、前記対象に投与することを含み、
任意選択で、
（ａ）前記治療は、先天性、体液性、又は細胞媒介性抗感染免疫応答を増強し、かつ／又は
（ｂ）前記感染症を予防するためのワクチン組成物は、前記対象に同時投与され、
任意選択で、前記ワクチン組成物は、同時に又は連続して共投与される、方法。
【請求項】
前記ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、請求項７２に記載の方法。
【請求項】
前記ワクチンは、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、請求項７２に記載の方法。
【請求項】
抗原に対する応答を、それを必要とする対象において増大させる方法であって、有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載の前記ポリペプチドを、前記対象に投与することを含み、
任意選択で、前記抗原は、がん、腫瘍、病原体、又はアレルゲンの抗原である、方法。
【請求項】
前記ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、請求項７５に記載の方法。
【請求項】
ワクチンに対する応答を、それを必要とする対象において増大させる方法であって、前記ワクチン及び有効量の請求項１～１６のいずれか一項に記載の前記ポリペプチドを、前記対象に投与することを含み、
任意選択で、
（ａ）前記ワクチンは、腫瘍、がん、病原体、又はアレルゲンに対するワクチンであり、かつ／又は
（ｂ）前記ペプチドは、前記ワクチンと共製剤化される、方法。
【請求項】
前記ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、請求項７７に記載の方法。
【請求項】
前記ワクチンは、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、請求項７７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【】
（関連出願の相互参照）
本出願は、その全体が参照により本明細書に援用される、２０２４年８月３０日に出願された米国特許仮出願第６３／５７９，６４３号の優先権を主張するものである。
【】
（ＸＭＬファイルとして提出された配列表の参照）
本出願は、２０２４年８月１９日の作成日及び６４，８９７バイトのファイルサイズを有する、ＸＭＬ形式の「ＪＢＩ６８１４ＷＯＰＣＴ１＿ＳＬ．ｘｍｌ」と命名された配列表ファイルの全内容を、参照により本明細書に組み入れる。
【】
（発明の分野）
本明細書で提供されるのは、特に、例えば、免疫応答及び／又は免疫関連状態を検出、調節するための生物工学による免疫調節性融合タンパク質の材料、方法、及びシステム、並びにその使用、並びに、例えば病原体若しくはワクチンに対する、それを必要とする対象の応答をスクリーニングし、診断し、影響を及ぼし、改善するための、又は新生物、過形成、がん若しくは病原体感染などの疾患若しくは障害を治療するための材料及び方法である。
【背景技術】
【】
免疫は、種々の分子が関与する多面的な宿主応答である。Ｍａｎｚｏｏｒ Ａｈｍａｄ Ｍｉｒ，Ｃｈａｐｔｅｒ １－Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，Ｅｄｉｔｏｒ（ｓ）：Ｍａｎｚｏｏｒ Ａｈｍａｄ Ｍｉｒ，Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，２０１５，Ｐａｇｅｓ １－４３，ＩＳＢＮ ９７８０１２８０２５８５７。免疫応答に関与するそのような分子の１つは、様々な細胞及び組織型に存在し、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で高度に発現され、ＣＤ４０受容体ポリペプチドと相互作用して共刺激シグナル伝達を増強する腫瘍壊死因子（Tumor Necrosis Factor、ＴＮＦ）スーパーファミリーメンバーであるＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）（ＣＤ１５４）である。ＣＤ４０受容体ポリペプチドは、樹状細胞及びＢ細胞を含む種々の自然細胞及び適応細胞上で発現される。Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１９，１５；１４１：９２－１０３；Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２００９ Ｍａｙ；２２９（１）。ＣＤ４０アゴニズムは、抗原提示を増強することができ、モノクローナル抗体適用（例えば、診断、予後診断及び治療）のための適切な標的である。Ｃａｎｃｅｒｓ（Ｂａｓｅｌ）．２０２１ Ｍａｒ １５；１３（６）：１３０２．
【発明の概要】
【】
本発明の発明者らは、とりわけＣＤ４０アゴニストモノクローナル抗体が、Ｆｃ架橋の非存在下では不十分にしか機能せず、ほとんど臨床的利益を示さず、更に、ＣＤ４０アゴニスト抗体の全身投与が、有害事象及び肝毒性と関連し、免疫応答の調節、並びにワクチンに対する対象の応答の改善、又は例えば、がん若しくは病原体感染（例えば、ウイルス感染）などの疾患若しくは障害の治療のための操作されたＣＤ４０アゴニストの新規で改善された構築物に対する当技術分野において特定されており、対処されている満たされていないニーズがあることを理解している。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。したがって、一態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）融合タンパク質を含むポリペプチドであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカー（ＣＤ４０Ｌ三量体）によって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む。
【】
ポリペプチドのいくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２２又は４５から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む。ポリペプチドのいくつかの実施形態では、ペプチドリンカーの少なくとも１つは、（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）を含む。いくつかのペプチドリンカーのうちの少なくとも２つは、同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ＣＤ４０Ｌに由来しないペプチド又はポリペプチドと融合されている。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ペプチドテザーに融合されている。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）及び（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＮ末端又は単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣ末端に融合されている。
【】
ポリペプチドのいくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、三量体化モチーフに融合されている。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフを含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、配列番号４１を含む。
【】
ポリペプチドのいくつかの実施形態では、ポリペプチドは、シグナルペプチドを更に含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号４２のアミノ酸配列を含む。
【】
別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質であって、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０リガンドＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ単量体ペプチドは、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、約０～２０個のアミノ酸を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０リガンドサブユニットは、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０リガンドサブユニットは、配列番号２２及び４５から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０リガンドサブユニットは、配列番号２２又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０リガンドサブユニットは、配列番号４５又はその断片を含む。
【】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ単量体ペプチドは、ヒトＦｃ配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃ配列は、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥから選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃ配列は、ＩｇＧ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ配列は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ配列は、ＩｇＧ１配列である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１配列は、配列番号３０若しくは３１、又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ配列は、ＩｇＧ２配列である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２配列は、配列番号２９、又はその断片を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）又は（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）を含む。
【】
いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較してＣＤ４０ポリペプチドの活性化を増強する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０ポリペプチドの活性化は、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０ポリペプチドの活性化は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０ポリペプチドの活性化は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して抗腫瘍活性を増強する。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号２５に記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質に作動可能に連結された三量体化モチーフを更に含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフである。いくつかの実施形態では、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフを単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質に接続するペプチドテザーは、グリシン及び／又はセリン残基を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、シグナルペプチド配列を更に含む。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターである。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ペプチドテザーによって三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質に作動可能に連結された三量体化モチーフを更に含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフである。いくつかの実施形態では、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフを単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質に接続するペプチドテザーは、グリシン及び／又はセリン残基を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、シグナルペプチド配列を更に含む。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む宿主細胞である。いくつかの実施形態では、ベクターは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む宿主細胞である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ペプチドテザーによって三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質に作動可能に連結された三量体化モチーフを更に含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフである。いくつかの実施形態では、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフを単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質に接続するペプチドテザーは、グリシン及び／又はセリン残基を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、シグナルペプチド配列を更に含む。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞である。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ペプチドテザーによって三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質に作動可能に連結された三量体化モチーフを更に含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフである。いくつかの実施形態では、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフを単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質に接続するペプチドテザーは、グリシン及び／又はセリン残基を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、シグナルペプチドを更に含む。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、医薬的に許容される担体と、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット、及び（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドを含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質と、を含む医薬組成物である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、医薬的に許容される担体と、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質と、を含む医薬組成物である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ペプチドテザーによって三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質に作動可能に連結された三量体化モチーフを更に含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフである。いくつかの実施形態では、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフを単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質に接続するペプチドテザーは、グリシン及び／又はセリン残基を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、シグナルペプチドを更に含む。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むキットである。いくつかの実施形態では、キットは、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むキットである。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ペプチドテザーによって三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質に作動可能に連結された三量体化モチーフを更に含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフである。いくつかの実施形態では、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフを単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質に接続するペプチドテザーは、グリシン及び／又はセリン残基を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、３つの単鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインのそれぞれに作動可能に連結されたシグナルペプチド配列を更に含む。
【】
一態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を提供するための手段を含むシステムである。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。別の態様では、本明細書に提供されるのは、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を提供するための手段を含むシステムである。
【】
一態様では、本明細書に提供されるのは、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を提供するための手段を含むシステムである。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ペプチドテザーによって三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質に作動可能に連結された三量体化モチーフを更に含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフである。いくつかの実施形態では、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフを単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質に接続するペプチドテザーは、グリシン及び／又はセリン残基を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、３つの単鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインのそれぞれに作動可能に連結されたシグナルペプチド配列を更に含む。
【】
一態様では、本明細書に提供されるのは、ＣＤ４０ポリペプチドを活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを本明細書に開示される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が結合時にＣＤ４０ポリペプチドを活性化する、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。別の態様では、本明細書に提供されるのは、ＣＤ４０ポリペプチドを活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを本明細書に開示される２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の二量体が結合時にＣＤ４０ポリペプチドを活性化する、方法である。別の態様では、本明細書に提供されるのは、ＣＤ４０ポリペプチドを活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを本明細書に開示される３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含む三量体と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質三量体が結合時にＣＤ４０ポリペプチドを活性化する、方法である。更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、Ｔ細胞を活性化する方法であって、本明細書に開示される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の存在下で、Ｔ細胞を抗原提示細胞と接触させることを含み、抗原提示細胞がＣＤ４０ポリペプチドを発現し、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、ＣＤ４０ポリペプチドへの結合時にＴ細胞を活性化する、方法である。更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、Ｔ細胞を活性化する方法であって、本明細書に開示される２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体の存在下で、Ｔ細胞を抗原提示細胞と接触させることを含み、抗原提示細胞がＣＤ４０ポリペプチドを発現し、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の二量体が、ＣＤ４０ポリペプチドへの結合時にＴ細胞を活性化する、方法である。更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、Ｔ細胞を活性化する方法であって、本明細書に開示される３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含む三量体の存在下で、Ｔ細胞を抗原提示細胞と接触させることを含み、抗原提示細胞がＣＤ４０ポリペプチドを発現し、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質の二量体が、ＣＤ４０ポリペプチドへの結合時にＴ細胞を活性化する、方法である。いくつかの実施形態では、当該抗原提示細胞は、Ｔ細胞に抗原を提示する。更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、樹状細胞を活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを本明細書に開示される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、ＣＤ４０ポリペプチドへの結合時に樹状細胞を活性化する、方法である。更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、樹状細胞を活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを本明細書に開示される２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の二量体が、ＣＤ４０ポリペプチドへの結合時に樹状細胞を活性化する、方法である。更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、樹状細胞を活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを本明細書に開示される３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含む三量体と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質の二量体が、ＣＤ４０ポリペプチドへの結合時に樹状細胞を活性化する、方法である。
【】
いくつかの実施形態では、この方法は、インビトロで行われる。いくつかの実施形態では、この方法は、インビボで行われる。いくつかの実施形態では、接触させることは、医薬的に許容される担体及び単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、接触させることは、先天性抗腫瘍免疫応答を増強する。
【】
一態様では、本明細書に提供されるのは、対象におけるがんを治療する方法であって、治療有効量の、本明細書に開示される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を対象に投与することを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。別の態様では、本明細書に提供されるのは、対象におけるがんを治療する方法であって、治療有効量の、本明細書に開示される２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を対象に投与することを含む、方法である。別の態様では、本明細書に提供されるのは、対象におけるがんを治療する方法であって、治療有効量の、本明細書に開示される３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含む三量体を対象に投与することを含む、方法である。
【】
いくつかの実施形態では、本方法は、医薬的に許容される担体と、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質と、を含む医薬組成物を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、治療は、先天性抗腫瘍免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、本方法は、第２の療法の共投与を更に含む。いくつかの実施形態では、当該がんは、黒色腫、中皮腫、進行性固形腫瘍、及びリンパ腫からなる群から選択される。
【】
一態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を産生するための方法であって、（ａ）宿主細胞に、本明細書に開示される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを導入することと、（ｂ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を産生する条件下で宿主細胞を培養することと、（ｃ）細胞又は培養物から単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を回収することと、を含む、方法。別の態様では、本明細書に提供されるのは、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を産生する方法であって、各々が（ａ）宿主細胞に、本明細書に開示される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを導入することと、（ｂ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を産生する条件下で宿主細胞を培養することと、（ｃ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を細胞又は培養物から回収することと、（ｄ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を、二量体化を好む条件下で組み合わせることと、を含む、方法。別の態様では、本明細書に提供されるのは、３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含む三量体を産生する方法であって、各々が（ａ）宿主細胞に、本明細書に開示される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを導入することと、（ｂ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質又はその断片を産生する条件下で宿主細胞を培養することと、（ｃ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質又はその断片を細胞又は培養物から回収することと、（ｄ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質又はその断片を、三量体化を好む条件下で組み合わせることと、を含む、方法。別の態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片の医薬組成物を産生する方法であって、本明細書中に開示される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法である。
【】
一態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２０～２２から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２２又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号４５又はその断片を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーのうちの少なくとも１つは、（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーのうちの少なくとも２つは、（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）を含む。いくつかのペプチドリンカーのうちの少なくとも２つは、同じ配列を有する。
【】
いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号４３、４４、４６、又は４７から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む。
【】
別の態様では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ペプチドテザーに融合されている。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）及び（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＮ末端に融合されている。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣ末端に融合されている。
【】
別の態様では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、Ｆｃ単量体ペプチドに融合されている。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、Ｆｃ単量体ペプチドは、ヒトＦｃ配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃ配列は、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥから選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃ配列は、ＩｇＧ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ配列は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ配列は、ＩｇＧ１配列である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１配列は、配列番号３０若しくは３１、又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ配列は、ＩｇＧ２配列である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２配列は、配列番号２９、又はその断片を含む。
【】
いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ペプチドテザーを介して三量体化モチーフに融合されている。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフである。いくつかの実施形態では、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフを単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ ＦＣ融合タンパク質に接続するペプチドテザーは、グリシン及び／又はセリン残基を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ三量体は、Ｆｃ単量体ペプチドのＮ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１～１２から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ三量体は、Ｆｃ単量体ペプチドのＣ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１３～１９から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む。
【】
別の態様では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較してＣＤ４０ポリペプチドの活性化を増強する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０ポリペプチドの活性化は、Ｔ細胞及び／又はＢ細胞の免疫刺激機能を増強する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０ポリペプチドの活性化は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＢ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、単球、顆粒球、好酸球、及び／又は好中球の活性化を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０ポリペプチドの活性化は、ＣＤ４０ポリペプチドの発現を増加させることを含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して抗腫瘍活性を増強する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して炎症促進性活性を増強する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して感染性病原体のクリアランスを増強する。
【】
別の態様では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、Ｂ細胞集団による抗体産生を約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２５０％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％、又は約１０００％増加させる。
【】
別の態様では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、Ｔ細胞集団による炎症促進性サイトカインの分泌を増加させる。いくつかの実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、又はそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、サイトカイン産生は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２５０％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％又は約１０００％増加する。
【】
別の態様では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、マクロファージ集団中の貪食性マクロファージの最小パーセンテージを約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約９９％に増加させる。
【】
いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、樹状細胞集団中の抗原提示樹状細胞の最小パーセンテージを約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約９９％に増加させる。
【】
別の態様では、ポリペプチドは、薬剤にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、薬剤にコンジュゲートされたポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、薬剤は、放射性同位体、金属キレート剤、酵素、蛍光化合物、生物発光化合物、及び化学発光化合物からなる群から選択される。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、ポリヌクレオチドである。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、ベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む宿主細胞であって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、宿主細胞である。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞であって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、宿主細胞である。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、医薬的に許容される担体と、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドと、を含む医薬組成物であって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、医薬組成物である。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドを含むキットであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、キットである。いくつかの実施形態では、キットは、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドを提供するための手段を含むシステムであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、システムである。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、ＣＤ４０ポリペプチドを発現する標的細胞を活性化するための方法であって、標的細胞を、有効量の、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、ポリペプチド、又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ＣＤ４０ポリペプチドへの結合時に標的細胞を活性化する、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
いくつかの実施形態では、標的細胞の活性化は、標的細胞の増殖若しくは成熟の増加として測定される。いくつかの実施形態では、標的細胞の増殖若しくは成熟は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２５０％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％又は約１０００％増加する。
【】
いくつかの実施形態では、標的細胞の活性化は、標的細胞の生存期間の延長として測定される。いくつかの実施形態では、標的細胞の生存期間は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２５０％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％又は約１０００％増加する。
【】
いくつかの実施形態では、標的細胞は、抗原提示細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、顆粒球、好酸球、好中球、又はそれらの組み合わせである。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、Ｂ細胞集団による抗体産生を促進するための方法であって、Ｂ細胞を、有効量の、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含むポリペプチド、又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２５０％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％又は約１０００％増加する。
【】
別の態様では、Ｂ細胞は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含むポリペプチド、又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと、抗原又は抗原をコードするポリヌクレオチドの存在下で接触させられ、Ｂ細胞によって産生された抗体が、抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態、本方法は、抗原に応答して抗体を産生することができるメモリーＢ細胞の形成を更に促進する。
【】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド又はポリヌクレオチドは、ワクチン組成物又はアジュバント組成物中にある。いくつかの実施形態では、抗原又は抗原をコードするポリヌクレオチドは、ワクチン組成物中にある。いくつかの実施形態では、抗原は、感染性病原体を起源とするか又はそれに由来する。いくつかの実施形態では、感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、又はそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。いくつかの実施形態では、抗原は、罹患細胞を起源とするか又はそれに由来する。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、がん細胞である。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、感染性病原体に感染した細胞である。いくつかの実施形態では、感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、又はそれらの組み合わせである。
【】
いくつかの実施形態では、抗原は、抗原提示細胞によって提示される。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞である。いくつかの実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ又はＭＨＣクラスＩＩ複合体と会合している。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、Ｔ細胞集団による炎症促進性サイトカインの分泌を増加させる方法であって、Ｔ細胞集団を、有効量の、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチド、又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの存在下で、抗原提示細胞集団と接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、又はそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、サイトカイン産生は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％、約１７５％、約２００％、約２５０％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、約７００％、約８００％、約９００％又は約１０００％増加する。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、マクロファージ集団による罹患細胞の貪食作用を増加させる方法であって、罹患細胞、マクロファージ、又は罹患細胞及びマクロファージの両方を、有効量の、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチド、又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
いくつかの実施形態では、マクロファージ集団中の貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約９９％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージによる貪食作用は、第１の蛍光色素で標識されたマクロファージと、第２の蛍光色素で標識された罹患細胞とを共培養することによって測定され、ここで、第１の蛍光色素と第２の蛍光色素は異なる。いくつかの実施形態では、貪食性マクロファージのパーセンテージは、罹患細胞を含むマクロファージのパーセンテージを決定することによって測定される。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、がん細胞又は感染性病原体に感染した細胞である。いくつかの実施形態では、感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、又はそれらの組み合わせである。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、樹状細胞集団による抗原提示を増加させる方法であって、樹状細胞を、抗原の存在下で、有効量の、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、ポリペプチド、又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約９９％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞による抗原提示は、第１の蛍光色素で標識されたマクロファージと、第２の蛍光色素で標識された罹患細胞とを共培養することによって測定され、ここで、第１の蛍光色素と第２の蛍光色素は異なる。いくつかの実施形態では、抗原を提示する樹状細胞のパーセンテージは、樹状細胞集団中の抗原と共局在化する樹状細胞のパーセンテージを決定することによって測定される。
【】
いくつかの実施形態では、抗原は、感染性病原体を起源とするか又はそれに由来する。いくつかの実施形態では、感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、又はそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、抗原は、罹患細胞を起源とするか又はそれに由来する。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、がん細胞である。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、感染性病原体に感染した細胞である。いくつかの実施形態では、感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、又はそれらの組み合わせである。
【】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド又はポリヌクレオチドは、ワクチン組成物又はアジュバント組成物中にある。いくつかの実施形態では、抗原又は抗原をコードするポリヌクレオチドは、ワクチン組成物中にある。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、標的細胞によるＣＤ４０ポリペプチドの発現を増加させる方法であって、標的細胞を、有効量の、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、ポリペプチド、又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
いくつかの実施形態では、標的細胞は、罹患細胞である。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、がん細胞である。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、感染性病原体に感染した細胞である。いくつかの実施形態では、感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、又はそれらの組み合わせである。
【】
いくつかの実施形態では、標的細胞は、免疫細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、抗原提示細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、顆粒球、好酸球、好中球、又はそれらの組み合わせである。
【】
いくつかの実施形態では、罹患細胞集団は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約９９％減少する。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、罹患細胞集団を取り囲む組織に炎症促進性環境を形成する方法であって、組織を、有効量の、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、ポリペプチド、又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
いくつかの実施形態では、活性化Ｂ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、単球、顆粒球、好酸球、及び／又は好中球の組織中での浸潤が増加する。
【】
いくつかの実施形態では、炎症促進性サイトカインの濃度が組織中で増加する。いくつかの実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、又はそれらの任意の組み合わせである。
【】
いくつかの実施形態では、抗原提示細胞による罹患細胞を起源とするか又はそれに由来する抗原の提示が組織中で増加する。
【】
いくつかの実施形態では、罹患細胞の貪食作用が組織中で増加する。
【】
いくつかの実施形態では、細胞媒介性細胞傷害性によって誘導される罹患細胞のアポトーシスが組織中で増加する。いくつかの実施形態では、抗体依存性細胞傷害性によって誘導される罹患細胞のアポトーシスが組織中で増加する。
【】
いくつかの実施形態では、罹患細胞集団は、組織中で減少する。いくつかの実施形態では、罹患細胞集団は、組織中で約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約９９％減少する。
【】
いくつかの実施形態では、この方法は、インビトロ又はインビボで行われる。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、対象における罹患細胞を排除する方法であって、有効量の、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、ポリペプチド、又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
いくつかの実施形態では、樹状細胞は、ＣＤ４０ポリペプチドを発現しない。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、ＣＤ４０ポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、がん細胞である。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、感染性病原体に感染した細胞である。いくつかの実施形態では、感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、又はそれらの組み合わせである。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療する方法であって、有効量の、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、ポリペプチド、又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、治療は、先天性、体液性又は細胞媒介性抗腫瘍免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、本方法は、第２の療法の共投与を更に含む。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、中皮腫、進行性固形腫瘍、及びリンパ腫からなる群から選択される。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、感染症の治療を必要とする対象における感染症を治療する方法であって、有効量の、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドであって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む、ポリペプチド、又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを投与することを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質又は当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、治療は、先天性、体液性又は細胞媒介性抗感染免疫応答を増強する。
【】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド又はポリヌクレオチドは、対象における感染症を予防するためのワクチン組成物と共投与される。いくつかの実施形態では、ポリペプチド又はポリヌクレオチドは、ワクチン組成物と同時的又は逐次的に共投与される。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【図面の簡単な説明】
【】
前述の「発明の概要」、並びに以下の、本出願の特定の実施形態の「発明を実施するための形態」は、添付図面と共に読んだときにより深く理解されるであろう。しかしながら、本出願は、図面に示される実施形態そのものに限定されないことを理解するべきである。
【図】三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の例の概略図を示す。図１Ａは、テザー長、リンカー長、及び融合の配向に対処するように分子が設計された、ＣＤ４０Ｌ三量体設計最適化の図を示す。図１Ｂは、Ｆｃ単量体ペプチドに融合されたＣＤ４０Ｌ三量体（丸で囲んだ）を含有する単鎖融合タンパク質である「Ｍｏｎｏ Ｆｃ」分子の図を示し、ここで、Ｆｃは、この分子の二量体形成を排除する変異をそのＣＨ３ドメインに含有する。図１Ａについて、Ａ＝リンカー長、Ｂ＝テザー長である。
【図】三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の例の概略図を示す。図１Ａは、テザー長、リンカー長、及び融合の配向に対処するように分子が設計された、ＣＤ４０Ｌ三量体設計最適化の図を示す。図１Ｂは、Ｆｃ単量体ペプチドに融合されたＣＤ４０Ｌ三量体（丸で囲んだ）を含有する単鎖融合タンパク質である「Ｍｏｎｏ Ｆｃ」分子の図を示し、ここで、Ｆｃは、この分子の二量体形成を排除する変異をそのＣＨ３ドメインに含有する。図１Ａについて、Ａ＝リンカー長、Ｂ＝テザー長である。
【図】プロテインＡ精製後のＦｃ上のＣＤ４０Ｌ三量体の単分散性を示す。図２Ａは、ＴＰＰ０００１６１２２２のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル（左パネル）及びＳＥＣクロマトグラム（右パネル）を示し、図２Ｂは、ＴＰＰ０００１８２９８３のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル及びＳＥＣクロマトグラムを示す。
【図】プロテインＡ精製後のＦｃ上のＣＤ４０Ｌ三量体の単分散性を示す。図２Ａは、ＴＰＰ０００１６１２２２のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル（左パネル）及びＳＥＣクロマトグラム（右パネル）を示し、図２Ｂは、ＴＰＰ０００１８２９８３のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル及びＳＥＣクロマトグラムを示す。
【図】分析用超遠心分離（analytical ultra-centrifugation、ＡＵＣ）によって測定されたサイズ排除クロマトグラフィー後のＴＰＰ０００１８２９８３の単分散性を示す。全てのサンプルは２連でアッセイした（ｎ＝２）。タンパク質は主に約７秒で流れ、主要な種の群は９８％である。＜１％の低分子量種（ＬＭＷＳ）、＜２％の二量体、及び＜１％の高分子量種（high molecular weight species、ＨＭＷＳ）も存在する。
【図】ＣＤ４０アゴニストのＣＤ４０への結合を示す。図４Ａは、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）生物発光アッセイを用いて測定されたＣＤ４０Ｌ三量体のＣＤ４０Ｒへの結合を示す。図４Ｂは、表面プラズモン共鳴（surface plasmon resonance、ＳＰＲ）を用いて測定されたＴＰＰ０００１８２９８３のＣＤ４０Ｒへの結合を示す。図４Ｃは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて測定されたＴＰＰ０００１６１２２２のＣＤ４０Ｒへの結合を示す。
【図】ＣＤ４０アゴニストのＣＤ４０への結合を示す。図４Ａは、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）生物発光アッセイを用いて測定されたＣＤ４０Ｌ三量体のＣＤ４０Ｒへの結合を示す。図４Ｂは、表面プラズモン共鳴（surface plasmon resonance、ＳＰＲ）を用いて測定されたＴＰＰ０００１８２９８３のＣＤ４０Ｒへの結合を示す。図４Ｃは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて測定されたＴＰＰ０００１６１２２２のＣＤ４０Ｒへの結合を示す。
【図】ＣＤ４０アゴニストのＣＤ４０への結合を示す。図４Ａは、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）生物発光アッセイを用いて測定されたＣＤ４０Ｌ三量体のＣＤ４０Ｒへの結合を示す。図４Ｂは、表面プラズモン共鳴（surface plasmon resonance、ＳＰＲ）を用いて測定されたＴＰＰ０００１８２９８３のＣＤ４０Ｒへの結合を示す。図４Ｃは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて測定されたＴＰＰ０００１６１２２２のＣＤ４０Ｒへの結合を示す。
【図】図５Ａにおいては、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅレポーターアッセイを用いて試験したＣＤ４０Ｌ三量体の機能的活性の評価、図５Ｂにおいては、ＣＤ８６活性化マーカ－を用いた単球由来樹状細胞活性化アッセイで試験したＣＤ４０Ｌ三量体の機能的活性の評価、及び図５Ｃにおいては、架橋抗体処理を伴わない成熟樹状細胞活性化アッセイを用いて試験したＣＤ４０Ｌ三量体の機能的活性の評価をそれぞれ示す。
【図】図５Ａにおいては、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅレポーターアッセイを用いて試験したＣＤ４０Ｌ三量体の機能的活性の評価、図５Ｂにおいては、ＣＤ８６活性化マーカ－を用いた単球由来樹状細胞活性化アッセイで試験したＣＤ４０Ｌ三量体の機能的活性の評価、及び図５Ｃにおいては、架橋抗体処理を伴わない成熟樹状細胞活性化アッセイを用いて試験したＣＤ４０Ｌ三量体の機能的活性の評価をそれぞれ示す。
【図】図５Ａにおいては、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅレポーターアッセイを用いて試験したＣＤ４０Ｌ三量体の機能的活性の評価、図５Ｂにおいては、ＣＤ８６活性化マーカ－を用いた単球由来樹状細胞活性化アッセイで試験したＣＤ４０Ｌ三量体の機能的活性の評価、及び図５Ｃにおいては、架橋抗体処理を伴わない成熟樹状細胞活性化アッセイを用いて試験したＣＤ４０Ｌ三量体の機能的活性の評価をそれぞれ示す。
【図】ＣＤ４０Ｌ三量体Ｆｃの機能的活性評価であって、ＣＤ４０活性化マーカー（図６Ａ）、ＣＤ８３活性化マーカー（図６Ｂ）、ＨＬＡ－ＤＲ活性化マーカー（図６Ｃ）、ＰＤＬ１活性化マーカー（図６Ｄ）、をそれぞれ用いた評価を示す。
【図】ＣＤ４０Ｌ三量体Ｆｃの機能的活性評価であって、ＣＤ４０活性化マーカー（図６Ａ）、ＣＤ８３活性化マーカー（図６Ｂ）、ＨＬＡ－ＤＲ活性化マーカー（図６Ｃ）、ＰＤＬ１活性化マーカー（図６Ｄ）、をそれぞれ用いた評価を示す。
【図】ＣＤ４０Ｌ三量体Ｆｃの機能的活性評価であって、ＣＤ４０活性化マーカー（図６Ａ）、ＣＤ８３活性化マーカー（図６Ｂ）、ＨＬＡ－ＤＲ活性化マーカー（図６Ｃ）、ＰＤＬ１活性化マーカー（図６Ｄ）、をそれぞれ用いた評価を示す。
【図】ＣＤ４０Ｌ三量体Ｆｃの機能的活性評価であって、ＣＤ４０活性化マーカー（図６Ａ）、ＣＤ８３活性化マーカー（図６Ｂ）、ＨＬＡ－ＤＲ活性化マーカー（図６Ｃ）、ＰＤＬ１活性化マーカー（図６Ｄ）、をそれぞれ用いた評価を示す。
【図】ＣＤ８＋Ｔ細胞（図７Ａ）及びＣＤ４＋Ｔ細胞（図７Ｂ）に対する、ＣＤ４０アゴニスト及びＣＥＦペプチドの存在下でｍｏＤＣから生じたＴ細胞応答を示す。
【図】ＣＤ８＋Ｔ細胞（図７Ａ）及びＣＤ４＋Ｔ細胞（図７Ｂ）に対する、ＣＤ４０アゴニスト及びＣＥＦペプチドの存在下でｍｏＤＣから生じたＴ細胞応答を示す。
【図】マウス代用ＣＤ４０Ｌ三量体化ペプチドを示す。図８Ａは、マウスＣＤ４０Ｌエクトドメイン（配列番号４８）の三量体束からなる三量体化Ｃ末端融合タンパク質である、マウス代用ＣＤ４０アゴニストペイロードの図である。Ａ：Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフ、Ｂ：（Ｇ４Ｓ）２グリシンセリンテザー、Ｃ：（Ｇ３Ｓ）３グリシンセリンリンカー、Ｄ：マウスＣＤ４０Ｌエクトドメイン。この分子は、グリシン／セリンテザーとＮ末端ＣＤ４０Ｌエクトドメイン束と融合したＴ４ファージのフィブリチンタンパク質由来の２７アミノ酸三量体化モチーフを特徴とする。ＣＤ４０Ｌエクトドメイン三量体束は、単一のポリペプチド三量体束を形成するために、１つのプロトマーのＣ末端から後続のプロトマーのＮ末端までグリシン／セリンリンカーによって互いに融合された個々のＣＤ４０Ｌプロトマーからなる。Ｎｉ－ＮＴＡ樹脂による組換えタンパク質の精製を助けるために、６量体ポリヒスチジン（６ｘ－Ｈｉｓタグ（配列番号５０））配列を最終ＣＤ４０ＬプロトマーのＣ末端に付加した。図８Ｂは、融合タンパク質（配列番号４８）の設計
【図】マウス代用ＣＤ４０Ｌ三量体化ペプチドを示す。図８Ａは、マウスＣＤ４０Ｌエクトドメイン（配列番号４８）の三量体束からなる三量体化Ｃ末端融合タンパク質である、マウス代用ＣＤ４０アゴニストペイロードの図である。Ａ：Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフ、Ｂ：（Ｇ４Ｓ）２グリシンセリンテザー、Ｃ：（Ｇ３Ｓ）３グリシンセリンリンカー、Ｄ：マウスＣＤ４０Ｌエクトドメイン。この分子は、グリシン／セリンテザーとＮ末端ＣＤ４０Ｌエクトドメイン束と融合したＴ４ファージのフィブリチンタンパク質由来の２７アミノ酸三量体化モチーフを特徴とする。ＣＤ４０Ｌエクトドメイン三量体束は、単一のポリペプチド三量体束を形成するために、１つのプロトマーのＣ末端から後続のプロトマーのＮ末端までグリシン／セリンリンカーによって互いに融合された個々のＣＤ４０Ｌプロトマーからなる。Ｎｉ－ＮＴＡ樹脂による組換えタンパク質の精製を助けるために、６量体ポリヒスチジン（６ｘ－Ｈｉｓタグ（配列番号５０））配列を最終ＣＤ４０ＬプロトマーのＣ末端に付加した。図８Ｂは、融合タンパク質（配列番号４８）の設計
【図】ヒトＣＤ４０Ｌ三量体化ペプチドを示す。図９Ａは、選択されたＣＤ４０アゴニストペイロード（配列番号４４）の設計を示す。ＣＤ４０アゴニストは、ＣＤ４０受容体タンパク質に結合するヒトＣＤ４０Ｌエクトドメインの三量体束を含有する三量体化Ｃ末端融合タンパク質である。このＣＤ４０アゴニストは、グリシン／セリンテザーとＮ末端ＣＤ４０Ｌエクトドメイン三量体束と融合したＴ４ファージのフィブリチンタンパク質由来の２７アミノ酸三量体化モチーフを有する。ＣＤ４０Ｌエクトドメイン三量体束は、単一のポリペプチド三量体束を形成するために、１つのペプチドのＣ末端から後続のペプチドのＮ末端までグリシン／セリンリンカーによって一緒に融合された個々のＣＤ４０Ｌペプチドからなる。図９Ａに示すように、Ａ：Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフ、Ｂ：（Ｇ４Ｓ）ｎグリシンセリンテザー（太い黒線）、Ｃ：（Ｇ３Ｓ）３グリシンセリンリンカー（細いループとして示される）、Ｄ：ヒトＣＤ４０Ｌエクトドメインである。Ｃ末端に、ｈｉｓタグが付加され得るが、図９Ａには示されていない。図９Ｂは、融合タンパク質の設計
【図】ヒトＣＤ４０Ｌ三量体化ペプチドを示す。図９Ａは、選択されたＣＤ４０アゴニストペイロード（配列番号４４）の設計を示す。ＣＤ４０アゴニストは、ＣＤ４０受容体タンパク質に結合するヒトＣＤ４０Ｌエクトドメインの三量体束を含有する三量体化Ｃ末端融合タンパク質である。このＣＤ４０アゴニストは、グリシン／セリンテザーとＮ末端ＣＤ４０Ｌエクトドメイン三量体束と融合したＴ４ファージのフィブリチンタンパク質由来の２７アミノ酸三量体化モチーフを有する。ＣＤ４０Ｌエクトドメイン三量体束は、単一のポリペプチド三量体束を形成するために、１つのペプチドのＣ末端から後続のペプチドのＮ末端までグリシン／セリンリンカーによって一緒に融合された個々のＣＤ４０Ｌペプチドからなる。図９Ａに示すように、Ａ：Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフ、Ｂ：（Ｇ４Ｓ）ｎグリシンセリンテザー（太い黒線）、Ｃ：（Ｇ３Ｓ）３グリシンセリンリンカー（細いループとして示される）、Ｄ：ヒトＣＤ４０Ｌエクトドメインである。Ｃ末端に、ｈｉｓタグが付加され得るが、図９Ａには示されていない。図９Ｂは、融合タンパク質の設計
【図】マウス代用ＣＤ４０アゴニストペイロード（図８に示す）がヒトＣＤ４０アゴニストペイロード（図９に示す）と同等の生物活性を有したことを示す。精製ｈＣＤ４０ａｇ（ヒト）及びｍＣＤ４０ａｇ（マウス）の生物活性を、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅレポーターアッセイを用いて評価した。ＣＤ４０アゴニスト活性は、６５５ｎｍでの光学密度（ＯＤ６５５）によって評価される比色読み取り値の生成をもたらす。組換えＷＴマウスＣＤ４０Ｌ（ｒｍＣＤ４０Ｌ）及び組換えＷＴヒトＣＤ４０Ｌ（ｒｈＣＤ４０Ｌ）を対照として含めた。
【図】操作されたＣＤ４０Ｌ（マウス）で刺激されたマウス脾臓細胞によるＢ２２０発現及びＣＤ１３８のフローサイトメトリー免疫表現型分析を示す。５日目に、細胞をフローサイトメトリーによって分析した。
【図】操作されたＣＤ４０アゴニスト（マウス）を用いた細胞の増殖を示す。
【図】操作されたＣＤ４０アゴニスト（マウス）を用いた細胞の増殖を示す。
【図】ｈＣＤ４０ａｇと呼ばれるＦｃレスＣＤ４０アゴニストがインビトロで生物活性であることを示す。図１３Ａは、ＣＤ４０経路の活性化後にシグナルを放出するレポーター細胞株を使用した、ＣＤ４０経路活性に対するＣＤ４０アゴニストの効果を示す。試験したＣＤ４０アゴニストは、ｈＣＤ４０ａｇ（ＣＤ４０Ｌ三量体束のＦｃレス三量体）及びｈＣＤ４０ａｇ２（Ｆｃに連結された二価ＣＤ４０Ｌ三量体束を含む）であった。２つの陽性対照（陽性対照１及び２）、並びに培地のみの陰性対照を試験した。ＣＤ４０経路の活性化は、ｘ軸（ｎｇ／ｍＬ）上に示される濃度のＣＤ４０アゴニストを使用した６５０ｎｍ（ｙ軸）での光学密度（ＯＤ）として表される。図１３Ｂは、フローサイトメトリーを使用してＣＤ８６発現によって評価した、樹状細胞（ＤＣ）活性化に対する示されたＣＤ４０アゴニストの効果を示す。試験したＣＤ４０アゴニストには、ｈＣＤ４０ａｇ、並びにいくつかの対照：陽性対照１及び２、野生型ＣＤ４０アゴニスト（可溶性モノマー）、並びにＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体が含まれた。各ＣＤ４０アゴニスト又は対照を、ｘ軸上に示される濃度、ｇＭＦＩ、幾何平均蛍光強度で使用した。
【図】ｈＣＤ４０ａｇと呼ばれるＦｃレスＣＤ４０アゴニストがインビトロで生物活性であることを示す。図１３Ａは、ＣＤ４０経路の活性化後にシグナルを放出するレポーター細胞株を使用した、ＣＤ４０経路活性に対するＣＤ４０アゴニストの効果を示す。試験したＣＤ４０アゴニストは、ｈＣＤ４０ａｇ（ＣＤ４０Ｌ三量体束のＦｃレス三量体）及びｈＣＤ４０ａｇ２（Ｆｃに連結された二価ＣＤ４０Ｌ三量体束を含む）であった。２つの陽性対照（陽性対照１及び２）、並びに培地のみの陰性対照を試験した。ＣＤ４０経路の活性化は、ｘ軸（ｎｇ／ｍＬ）上に示される濃度のＣＤ４０アゴニストを使用した６５０ｎｍ（ｙ軸）での光学密度（ＯＤ）として表される。図１３Ｂは、フローサイトメトリーを使用してＣＤ８６発現によって評価した、樹状細胞（ＤＣ）活性化に対する示されたＣＤ４０アゴニストの効果を示す。試験したＣＤ４０アゴニストには、ｈＣＤ４０ａｇ、並びにいくつかの対照：陽性対照１及び２、野生型ＣＤ４０アゴニスト（可溶性モノマー）、並びにＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体が含まれた。各ＣＤ４０アゴニスト又は対照を、ｘ軸上に示される濃度、ｇＭＦＩ、幾何平均蛍光強度で使用した。
【図】ヒトＣＤ４０ノックインマウスにおいてＭＣ３８－５ＡＧ腫瘍を使用したインビボでのいくつかのＣＤ４０アゴニストの抗腫瘍効果を示す。図１４Ａに示されるＣＤ４０アゴニストを、１日目、４日目、及び７日目にＩＴ注射し、腫瘍体積（ｍｍ３）を示された日に、処置後に測定した。試験したアゴニストは、ｈＣＤ４０ａｇ（すなわち、ＣＤ４０Ｌ三量体束のＦｃレス三量体）、ｈＣＤ４０ａｇ２（すなわち、Ｆｃに結合した二価ＣＤ４０Ｌ三量体束）及びＷＴ ＣＤ４０アゴニスト（ＣＤ４０Ｌ）モノマーであった。アイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１ ｍＡｂ）も試験した。信頼区間（ＣＩ）値は、腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）値の９５％ ＣＩの下限及び上限であり、アイソタイプ対照と比較したｐ値を、ＩｎＶｉｖｏＬＤＡバージョン４．８によって試験した各構築物について計算した。図１４Ｂは、ｈＣＤ４０ａｇ抗体又はアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１ ｍＡｂ）により処置されるマウスにおいて測定される平均腫瘍体積の比較を提供する。図１４Ｂ中の矢印は、マウスをｈＣＤ４０ａｇ又はアイソタイプ対照抗体で処置した日を示す。
【図】ヒトＣＤ４０ノックインマウスにおいてＭＣ３８－５ＡＧ腫瘍を使用したインビボでのいくつかのＣＤ４０アゴニストの抗腫瘍効果を示す。図１４Ａに示されるＣＤ４０アゴニストを、１日目、４日目、及び７日目にＩＴ注射し、腫瘍体積（ｍｍ３）を示された日に、処置後に測定した。試験したアゴニストは、ｈＣＤ４０ａｇ（すなわち、ＣＤ４０Ｌ三量体束のＦｃレス三量体）、ｈＣＤ４０ａｇ２（すなわち、Ｆｃに結合した二価ＣＤ４０Ｌ三量体束）及びＷＴ ＣＤ４０アゴニスト（ＣＤ４０Ｌ）モノマーであった。アイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１ ｍＡｂ）も試験した。信頼区間（ＣＩ）値は、腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）値の９５％ ＣＩの下限及び上限であり、アイソタイプ対照と比較したｐ値を、ＩｎＶｉｖｏＬＤＡバージョン４．８によって試験した各構築物について計算した。図１４Ｂは、ｈＣＤ４０ａｇ抗体又はアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１ ｍＡｂ）により処置されるマウスにおいて測定される平均腫瘍体積の比較を提供する。図１４Ｂ中の矢印は、マウスをｈＣＤ４０ａｇ又はアイソタイプ対照抗体で処置した日を示す。
【発明を実施するための形態】
【】
一部には、Ｔ細胞及び樹状細胞活性化の増強をもたらす、好ましい生物物理学的特性及び増強されたＣＤ４０活性化を有する単一ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の驚くべき発見に基づく。したがって、本発明の組成物及び方法は、ＣＤ４０－ＣＤ４０Ｌ経路を標的とする新規かつ改善された治療ストラテジのための道を提供する。
【】
背景技術において、また、本明細書全体を通じて、各種刊行物、論文及び特許が引用又は記載され、これらの参照文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれる文書、行為、材料、デバイス、物品などの考察は、本発明に文脈を与えるためのものである。このような考察は、これらの事物のいずれか又は全てが、開示又は特許請求されるいずれかの発明に対する先行技術の一部を形成することを容認するものではない。
【】
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。そうでない場合に、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書に記載の意味を有する。
【】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に文脈上明らかでない限り、複数の指示被検体物を含むことに、留意するべきである。
【】
別途記載されない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲などのあらゆる数値は、全ての場合において、用語「約」によって修飾されているものとして理解されるべきである。したがって、数値は、典型的には、記載された値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度は０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％～１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用される場合、数値範囲の使用は、文脈上別途明確に示されない限り、その範囲内の整数及び値の分数を含む、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的に含む。
【】
別途記載のない限り、一連の要素に先行する「少なくとも」という用語は、一連の全ての要素を指すと理解されるべきである。
【】
当業者であれば、単なる通常の実験手順を使用するだけで、本明細書に記載された本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、又は確認することができよう。そのような均等物は、本発明によって包含されることが意図される。
【】
本明細書で使用される場合、「含む（comprises）、「含む（comprising）」、「含む（includes）」、「含む（including）」、「有する（has）」、「有する（having）」、「含有する（contains）」、若しくは「含有する（containing）」という用語、又はこれらの任意の他の変形は、述べられている要素又は要素群を含むことが意図されるが、これら以外の他の要素又は要素群を除外するものではなく、非排他的又は非制限的であることが意図されることが理解されよう。例えば、一連の要素を含む組成物、混合物、プロセス、方法、物品、又は装置は、必ずしもそれらの要素のみに限定されるものではなく、明示的に列挙されない、又はそのような組成物、混合物、プロセス、方法、物品、若しくは装置に固有である他の要素を含んでもよい。更に、明示的に反対に明記されない限り、「又は」は包括的な「又は」を指すものであり、排他的な「又は」を指すものではない。例えば、条件Ａ又はＢは、Ａが真であり（又は存在する）かつＢが偽である（又は存在しない）場合、Ａが偽であり（又は存在しない）かつＢが真である（又は存在する）場合、並びにＡ及びＢの両方が真である（又は存在する）場合、のいずれか１つによって満たされる。
【】
本明細書で使用される場合、複数の列挙された要素間の「及び／又は」という接続的な用語は、個々の及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものとして理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」によって接続される場合、第１の選択肢は、第２の要素なしに第１の要素が適用可能であることを指す。第２の選択肢は、第１の要素なしに第２の要素が適用可能であることを指す。第３の選択肢は、第１の要素及び第２の要素が一緒に適用可能であることを指す。これらの選択肢のうちのいずれか１つが、意味に含まれ、したがって、本明細書で使用される場合、「及び／又は」という用語の要件を満たすことが理解される。選択肢のうちの２つ以上の同時適用可能性もまた、意味に含まれ、したがって、「及び／又は」という用語の要件を満たすことが理解される。
【】
本明細書で使用される場合、「からなる（consists of）」という用語、又は「からなる（consist of）」若しくは「からなる（consisting of）」などの変形は、明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用されるとき、任意の列挙された要素又は要素群を包含するが、追加の要素又は要素群が、指定の方法、構造、又は組成物に追加されないことを示す。
【】
本明細書で使用されるとき、用語「から本質的になる（consists essentially of）」、又は「から本質的になる（consist essentially of）」若しくは「から本質的になる（consisting essentially of）」などの変形は、明細書及び特許請求の範囲全体にわたって使用されるとき、任意の列挙された要素又は要素群を包含し、任意選択で、指定の方法、構造、又は組成物の基本的又は新規の特性を実質的に変化させない任意の列挙された要素又は要素群も包含することを示す。Ｍ．Ｐ．Ｅ．Ｐ．§２１１１．０３を参照されたい。
【】
本明細書で使用するとき、「対象」は、任意の動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。本明細書において使用される「哺乳動物」という用語は、あらゆる哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ヒトなどが挙げられるが、これらに限定されない。具体的な実施形態では、対象は、ヒトである。ある特定の実施形態では、対象は、それを必要とする対象である。
【】
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」、又は「治療すること」という用語は、特定の疾患、障害、及び／又は状態の１つ若しくは２つ以上の症状又は特徴を部分的に又は完全に緩和する、改善する、軽減する、阻害する、予防する、その発症を遅延させる、その重症度を減少する、及び／又はその発生率を減少するために使用される任意の方法を指す。治療は、疾患に関連する病状を発症するリスクを減少させる目的で、疾患の徴候を示さない、及び／又は疾患の初期徴候のみを示す対象に投与され得る。
【】
好ましい本発明の構成要素の寸法又は特徴を指すときに本明細書で使用される「約」、「およそ」、「概ね」、「実質的に」などの用語は、当業者には理解されるように、記載の寸法／特徴が厳密な境界又はパラメータではなく、機能的に同じ又は類似する、それらからのわずかな相違を除外するものではないことを示すことも理解すべきである。最小値では、数値パラメータを含むこのような参照は、当該技術分野において受け入れられている数学的及び工業的原理（例えば、四捨五入、測定、又は他の系統誤差、製作公差など）を使用すると、最下位の桁は変化しない変形形態を含むであろう。
【】
２つ以上の核酸又はポリペプチド配列の文脈における「同一である」又はパーセント「同一性」という用語は、以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用して又は目視検査によって測定したとき、一致が最大になるように比較及び位置合わせさせた場合に同じである、又は特定のパーセント分の同じであるアミノ酸残基若しくはヌクレオチドを有する、２つ以上の配列又はサブ配列を指す。
【】
配列比較のために、典型的には１つの配列は、試験配列がそれに対して比較される参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列がコンピュータに入力され、必要に応じて、サブ配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。
【】
比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）のローカルホモロジアルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）のホモロジアラインメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）、又は目視検査（全般的には、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ａ ｊｏｉｎｔ ｖｅｎｔｕｒｅ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，（１９９５ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）（Ａｕｓｕｂｅｌ）を参照されたい）によって行うことができる。
【】
配列同一性パーセント及び配列類似性を求めるのに好適なアルゴリズムの例は、それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２に記載されているＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、国立生物工学情報センター（National Center for Biotechnology Information）を通じて公的に入手可能である。このアルゴリズムは、最初に、データベース配列における同じ長さのワードとアラインメントしたときにマッチするか、又はいくつかの正の値の閾値スコアＴを満たすかのいずれかの、クエリ配列における長さＷの短いワードを特定することによって、高スコア配列対（high scoring sequence pair、ＨＳＰ）を特定することを伴う。Ｔは、隣接ワードスコア閾値（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．、）と称される。これらの初期隣接ワードヒットは、それを含有するより長いＨＳＰを見つけるために検索を開始するためのシードとして機能する。次いで、累積アライメントスコアを増加させることができる限り、各配列に沿ってワードヒットを両方向に延長する。
【】
ヌクレオチド配列については、パラメータＭ（マッチする残基の対についてのリワードスコア、常に０より大きい）及びパラメータＮ（不一致の残基についてのペナルティスコア、常に０より小さい）を使用して累積スコアを計算する。アミノ酸配列については、スコアリングマトリックスを使用して累積スコアを計算する。累積アライメントスコアがその最大獲得値から量Ｘだけ低下したとき、１つ以上の負のスコアリング残基のアラインメントの蓄積により、累積スコアがゼロ以下になったとき、又はいずれかの配列の末端に達したときに、各方向におけるワードヒットの延長が停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ、及びＸが、アラインメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、３のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、及びＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスを使用する（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ＆Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５（１９８９）を参照されたい）。
【】
配列同一性パーセントを計算することに加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計解析も行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５７８７（１９９３）を参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド配列間又は２つのアミノ酸配列間のマッチが偶然に生じる確率の指標を提供する。例えば、核酸は、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が、約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満である場合、参照配列に類似しているとみなされる。
【】
２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同一であることの更なる指標は、以下に記載されるように、第１の核酸によりコード化されるポリペプチドが、第２の核酸によりコード化されるポリペプチドと免疫学的に交差反応性であることである。したがって、ポリペプチドは、典型的には、第２のポリペプチドと実質的に同一であり、例えば、２つのペプチドは保存的置換によってのみ異なる。２つの核酸配列が実質的に同一である別の指標は、２つの分子が厳格な条件下で互いにハイブリダイズすることである。
【】
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、同義的に「核酸分子」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」とも称され、非修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡであってもよい、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを指す。「ポリヌクレオチド」としては、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖若しくはより典型的には二本鎖、又は一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であってもよいＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。ポリヌクレオチドという用語には、１つ以上の修飾された塩基を含有するＤＮＡ又はＲＮＡ、及び安定性又は他の理由により修飾された骨格を有するＤＮＡ又はＲＮＡも含まれる。「修飾された」塩基は、例えば、トリチル化塩基及び異常な塩基、例えば、イノシンを含む。様々な修飾をＤＮＡ及びＲＮＡに行うことができる。したがって、「ポリヌクレオチド」は、典型的には天然に認められるポリヌクレオチドの化学的、酵素的又は代謝的に修飾された形態、並びにウイルス及び細胞のＤＮＡ及びＲＮＡの特徴を有する化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、比較的短い核酸鎖（多くの場合、オリゴヌクレオチドと称される）も包含する。
【】
「コード（すること）」という用語は、ヌクレオチドの特定された配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）又はアミノ酸の特定された配列のいずれかを有する、生物学的プロセスにおける他のポリマー及び巨大分子の合成のためのテンプレートとして機能する、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特異的配列の固有の特性、並びにそれから生じる生物学的特性を指す。したがって、細胞又は他の生物系において、遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳がタンパク質を産生する場合、その遺伝子、ｃＤＮＡ、又はＲＮＡは、タンパク質をコードする。ヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、配列表に通常提供されるコード鎖と、遺伝子又はｃＤＮＡの転写のテンプレートとして使用される非コード鎖とはいずれも、その遺伝子又はｃＤＮＡのタンパク質又は他の産物をコードするとして言及することができる。
【】
別途記載のない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」（又は同等な句）は、互いの縮重型であるヌクレオチド配列、及び同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列全てを包含する。タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という語句はまた、いくつかのバージョンにおいてそのタンパク質をコードするヌクレオチド配列がイントロンを含有し得る程度にイントロンを含み得る。
【】
本明細書で使用するとき、用語「ベクター」は、別の核酸セグメントを機能的に挿入することによってそのセグメントの複製又は発現を行うことができるレプリコンのことである。
【】
本明細書で使用するとき、用語「宿主細胞」は、本発明の核酸分子を含む細胞を指す。「宿主細胞」は、例えば、初代細胞、培養中の細胞、又は細胞株由来の細胞のいずれのタイプの細胞であってもよい。一実施形態では、「宿主細胞」は、本明細書に開示される核酸分子をトランスフェクトした細胞である。別の実施形態では、「宿主細胞」は、かかるトランスフェクトされた細胞の子孫又は潜在的な子孫である。細胞の後代は、例えば、後続の世代で生じる可能性のある変異若しくは環境の影響、又は宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みによって、親細胞と同一である場合もあり、同一ではない場合もある。
【】
本明細書で使用される場合、「発現」という用語は、遺伝子産物の生合成を指す。この用語は、遺伝子のＲＮＡへの転写を包含する。この用語はまた、ＲＮＡの１つ以上のポリペプチドへの翻訳も包含し、全ての天然に存在する、転写後及び翻訳後修飾も更に包含する。発現される分子は、宿主細胞の細胞質内、細胞培養の増殖培地などの細胞外環境中に存在し得るか、又は細胞膜に固定され得る。
【】
本明細書で使用される場合、「ペプチド」、「ポリペプチド」、又は「タンパク質」という用語は、アミノ酸から構成される分子を指すことができ、当業者によってタンパク質として認識され得る。本明細書では、アミノ酸残基の従来の１文字又は３文字コードが使用される。「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために、本明細書において互換的に使用することができる。ポリマーは、直鎖又は分岐鎖であってもよく、修飾されたアミノ酸を含むことができ、かつ非アミノ酸により中断されてもよい。この用語はまた、天然に修飾されているか、又は介入によって修飾されているアミノ酸ポリマー、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は任意の他の操作若しくは修飾、例えば、標識成分とのコンジュゲートを包含する。また、例えば、アミノ酸の１つ又は２つ以上の類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む）を含有するポリペプチド、並びに当該技術分野において既知である他の修飾も定義内に含まれる。
【】
本明細書に記載のペプチド配列は、通常の慣習に従って記載され、ペプチドのＮ末端領域は左側にあり、Ｃ末端領域は右側にある。アミノ酸の異性体形態は既知であるが、別途明示的に示されない限り、示されるのはアミノ酸のＬ型である。
【】
本明細書で使用するとき、「抗体」又は「免疫グロブリン」という用語は、広義で使用され、かつヒト、ヒト化、複合、及びキメラ抗体、並びにモノクローナル又はポリクローナルである抗体断片を含む。一般に、抗体は、特定の抗原に対する結合特異性を示すタンパク質又はペプチド鎖である。天然に存在する抗体は、定常ドメイン及び可変ドメインに折り畳まれた２つの重鎖及び２つの軽鎖からなるＹ型分子である。重鎖及び軽鎖並びに重鎖及び軽鎖のそれぞれの中の定常領域及び可変領域を含む抗体構造は周知である。すなわち、重鎖及び軽鎖定常ドメインに加えて、抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）で構成される抗原結合領域を含有し、これらの領域の各々が、３つのドメイン（すなわち、相補性決定領域１（complementarity determining region 1、ＣＤＲ１）、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含有する。「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン（Ｉｇ又は抗体）ＶＨ β－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域のうちの１つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、若しくはＨＣＤＲ３）、又は抗体ＶＬ β－シートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域のうちの１つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、若しくはＬＣＤＲ３）を指す。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて５つの主なクラス（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ）に割り当てることができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。
【】
用語「定常領域」又は「定常ドメイン」は、抗原に対する抗体の結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示す軽鎖及び重鎖のカルボキシ末端部分を指す。この用語は、抗原結合部位を含有する可変領域である免疫グロブリンの他の部分と比較してより保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常領域は、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３領域、並びに軽鎖のＣＬ領域を含有してもよい。
【】
「Ｆｃ領域」という用語は、抗体の定常領域のカルボキシ末端部分を指し、重鎖のＣＨ２及びＣＨ３領域を包含する。２つのＣＨ３ドメインは互いに相互作用してホモ二量体を形成し、Ｆｃの二量体化をもたらす。
【】
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ単量体」又は「ｍＦｃ」又は「Ｆｃ単量体ペプチド」という用語は、重鎖のＣＨ２及びＣＨ３領域、又はその一部からなる単量体Ｆｃ領域のカルボキシ末端部分を含む分子を指す。いくつかの実施形態では、Ｆｃ単量体ペプチドは、ヒトＦｃ配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃ配列は、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥから選択される配列を含む。一実施形態では、ヒトＦｃ配列は、ＩｇＧ配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ配列は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ配列は、ＩｇＧ１配列である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１配列は、配列番号３０若しくは３１、又はその断片を含む。一実施形態では、ＩｇＧ１配列は、配列番号３０、又はその断片を含む。別の実施形態では、ＩｇＧ１配列は、配列番号３１、又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ配列は、ＩｇＧ２配列である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２配列は、配列番号２９、又はその断片を含む。
【】
本明細書に提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、５つの主要なクラス又は対応するサブクラスのいずれかのＦｃ単量体ペプチドを含むことができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。具体的な実施形態では、本明細書に提供されるＦｃ単量体ペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である。更なる実施形態では、本明細書に提供されるＦｃ単量体ペプチドは、ヒトＩｇＧ１及びヒトＩｇＧ２アイソタイプである。更なる実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ単量体ペプチド成分は、サイレンシングされたエフェクター機能を有する。
【】
したがって、本明細書に提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、カッパ又はラムダ軽鎖定常ドメインに対応するＦｃ単量体ペプチドを含有することができる。特定の実施形態によれば、本明細書に開示される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ラット又はヒト抗体由来の重鎖及び／又は軽鎖定常領域を有するＦｃ単量体を含む。
【】
本明細書で使用するとき、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量に存在し得る自然発生変異を除いて同一である。本明細書に開示されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ技術、単一リンパ球遺伝子クローニング技術、又は組換えＤＮＡ法によって作製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウス又はラットから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマによって生成され得、ヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する。したがって、本明細書において提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、モノクローナル抗体由来のＦｃ単量体を含むことができる。
【】
本明細書で使用される場合、「単鎖抗体（single-chain antibody）」という用語は、約１５個～約２０個のアミノ酸の短いペプチドによって接続される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、本分野において従来周知の単鎖抗体を指す。したがって、本明細書に提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、単鎖抗体由来のＦｃ単量体を含むことができる。
【】
本明細書で使用するとき、用語「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体、又は当該技術分野において既知である任意の技術を使用して作製される、ヒトによって産生される抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。ヒト抗体のこの定義は、インタクトな若しくは完全長の抗体、その断片、並びに／又は少なくとも１つのヒト重鎖及び／若しくは軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。したがって、本明細書に提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト抗体由来のＦｃ単量体を含むことができる。
【】
本明細書で使用するとき、用語「ヒト化抗体」とは、抗体の抗原結合特性が保持されるが、人体における抗原の抗原性が低下するように、修飾により配列相同性をヒト抗体のものに増加させた非ヒト抗体を意味する。したがって、本明細書において提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト化抗体由来のＦｃ単量体を含むことができる。
【】
本明細書で使用するとき、「ＣＤ４０リガンド」又は「ＣＤ４０Ｌ」という用語は、腫瘍壊死因子受容体（tumor necrosis factor receptor、ＴＮＦＲ）スーパーファミリーの共刺激メンバーであるＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５に対するリガンドとして機能するタンパク質、又はタンパク質の断片を指す。特定のＣＤ４０Ｌ配列は、ＵｎｉＰｒｏｔなどの公的にアクセス可能なデータベースから、例えばＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ２９９６５で得ることができる。ＣＤ４０Ｌは、細胞外ドメイン、ストーク領域、膜貫通ヘリックス、及び短い細胞質ドメインからなる。ＣＤ４０Ｌの活性は、βシート、αヘリックスループ、及びβシートから構成されるサンドイッチ構造を特徴とする２１５アミノ酸の細胞外ドメインに位置する。この構造は、ＣＤ４０Ｌの三量体化を可能にする。ＣＤ４０Ｌという用語は更に、少なくとも約５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも９８又は少なくとも９９％の配列同一性及びＣＤ４０に対するリガンドとして機能する能力を有する少なくとも約を有するポリペプチド又はその任意の断片を包含する。ＣＤ４０Ｌという用語は、完全長ＣＤ４０Ｌ及びその任意の断片、例えば、ＣＤ４０Ｌの細胞外ドメイン部分を包含する。この用語は更に、可溶性ＣＤ４０Ｌ（ｓＣＤ４０Ｌ）を包含し、これは異なる疾患状況において報告されており、単量体及び多量体形態で存在し得る。本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質又は単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の文脈において、個々のＣＤ４０Ｌ成分は、「ＣＤ４０Ｌサブユニット」と呼ばれる。一緒に融合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットからなる融合タンパク質の部分はまた、「ＣＤ４０Ｌ三量体」と称され得る。
【】
本明細書中で使用される場合、用語「融合タンパク質」は、同じ天然に存在するポリペプチド中に存在しない配列を作製するために一緒に連結された２つ又は３つ以上のペプチドセグメントを含むタンパク質又はポリペプチドを指す。
【】
本明細書中で使用される場合、用語「単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質」は、本明細書中に記載され、図１に示されるように、３つのＣＤ４０Ｌサブユニットに一般的に連結される（必要に応じて、本明細書中に記載されるようなペプチドテザーを介して）単量体Ｆｃ領域（ｍＦｃ）を含むタンパク質を指す。特に、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃ単量体ペプチドのＮ末端又はＣ末端のいずれかにペプチドテザーで連結された直鎖状ＣＤ４０Ｌ三量体を形成するために、柔軟なペプチドリンカーで互いに連結された３つのＣＤ４０Ｌ細胞外ドメイン（extracellular domain、ＥＣＤ）又はその断片からなる。したがって、異なる実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＤ４０Ｌ三量体のＣ末端又はＮ末端Ｆｃ融合物のいずれかであり得る。
【】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ三量体は、Ｆｃ単量体ペプチドのＮ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１～１２から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む。
【】
一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号２を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号３を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号４を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号５を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号６を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号７を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号９を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１１を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１２を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号２の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号３の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号４の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号５の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号６の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号７の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号９の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１１の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１２の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号４３の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号４４の断片を含む。
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いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ三量体は、Ｆｃ単量体ペプチドのＣ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１３～１９から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６又はその断片を含む。
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いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ三量体は、三量体化モチーフのＣ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４３及び４４並びにそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む。
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一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１３を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１４を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１５を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１７を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１８を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１９を含む。
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一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１３の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１４の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１５の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１７の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１８の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１９の断片を含む。
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いくつかの実施形態では、ＣＤ４０リガンドサブユニットは、ＣＤ４０Ｌ細胞外配列の一部を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２０～２２から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２２若しくは配列番号４５、又はその断片を含む。
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一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２０の断片を含む。別の実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２１の断片を含む。別の実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２２の断片を含む。別の実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号４５の断片を含む。
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一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２０を含む。別の実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２１を含む。別の実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２２を含む。別の実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号４５の断片を含む。
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いくつかの場合では、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質又はヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を形成することができ、後者が好ましい。いくつかの実施形態では、二量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。一実施形態では、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質を形成する。一実施形態では、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を形成する。いくつかの場合では、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一方の単量体は、Ｆｃ単量体ペプチド又はその断片のみを含み、他方の単量体は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、参照又は野生型Ｆｃ単量体と比較して、１つ又は２つ以上のアミノ酸置換を有するバリアントＦｃ単量体を含み得る。いくつかの場合では、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一方の単量体は、Ｆｃ単量体ペプチド又はその断片、及び受容体、リガンド又は他の結合パートナーなどのＣＤ４０Ｌ以外のタンパク質ドメインである。したがって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、二重特異性分子であるヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の成分であり得る。
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いくつかの例において、３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ホモ三量体融合タンパク質複合体を形成することができる。
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用語「二重特異性分子」は、各々が標的タンパク質、リガンド又はそれらの断片を特異的に結合することができる２つの結合ドメインを有する分子を指す。したがって、二重特異性分子は、別のタンパク質に特異的に結合することができる非抗体タンパク質、リガンド及びその断片（組換え抗原を含む）である結合ドメインを含むことができる。一実施形態では、二重特異性分子は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又は単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むことができる。
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本明細書で使用される「アゴナイズする」は、受容体の活性化に関連する生物学的応答を誘導するための受容体シグナル伝達の活性化を指す。「アゴニスト」は、受容体に結合し、受容体を活性化して生物学的応答を生じる分子を指す。受容体は、内因性アゴニスト又は外因性アゴニストのいずれかによって活性化され得る。
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ＣＤ４０アゴニスト
分化抗原群４０（ＣＤ４０）は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）から上皮細胞まで、多数の細胞型上に発現される共刺激ポリペプチドである。それは更に、様々な癌細胞上に存在する。「ＣＤ４０アゴニスト」は、分化抗原群１５４（ＣＤ１５４）としても公知であり、２６１アミノ酸を含み、活性化Ｔ細胞の表面上に発現されるＩＩ型膜糖ペプチドである。天然ＣＤ４０アゴニストはＢ細胞成熟を促進する。ＣＤ４０アゴニストの欠如は高ＩｇＭ症候群に関連するので、免疫グロブリンクラススイッチングには更に不可欠である。ＣＤ４０アゴニストは、細胞外ドメインがホモ三量体を形成する膜結合型、及び生物学的に活性であることが示されているタンパク質分解的に切断された可溶性形態として存在する。
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いくつかの実施形態では、ポリペプチドＣＤ４０アゴニストが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、コードするポリヌクレオチド、又は本明細書に別に記載されるか若しくは公知の発現カセットは、ＣＤ４０アゴニストをコードするポリヌクレオチドを含むポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストはＣＤ４０リガンドである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、ＣＤ４０リガンドエクトドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、３つの一本鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインの三量体である。いくつかの実施形態では、３つの一本鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインのそれぞれは、例えば、３つの一本鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインの三量体の形成を指示するために、三量体化モチーフに融合される。いくつかの実施形態では、３つの一本鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインのそれぞれは、例えば、３つの一本鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインの三量体の形成を指示するために、Ｆｃ領域に融合される。いくつかの実施形態では、当該Ｆｃ領域は、ＩｇＧ Ｆｃ領域、例えばヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、当該Ｆｃ領域は、別のＦｃ領域、例えばＩｇＧ Ｆｃ領域、例えばヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域への当該Ｆｃ領域の結合を嫌う１つ以上のアミノ酸置換、挿入又は欠失を含む。いくつかの実施形態では、当該Ｆｃ領域は、ＩｇＧ相互作用ドメインとＩｇＡ相互作用ドメインとの置換を含む。いくつかの実施形態では、３つの一本鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインのそれぞれが二価である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストはアゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
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いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、ヒトＣＤ４０リガンドエクトドメインを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４０リガンドエクトドメインは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列、又は配列番号２２に示されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４０リガンドエクトドメインは、配列番号４５に示されるアミノ酸配列、又は配列番号４５に示されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、３つの一本鎖三量体ヒトＣＤ４０リガンドエクトドメインの三量体である。いくつかの実施形態では、一本鎖三量体ヒトＣＤ４０リガンドエクトドメインは、ペプチドリンカーによって連結された３つのヒトＣＤ４０リガンドエクトドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、一本鎖三量体ヒトＣＤ４０リガンドエクトドメインポリペプチドは、ペプチドリンカーによって第３のヒトＣＤ４０リガンドエクトドメインに接続されている第２のヒトＣＤ４０リガンドエクトドメインに接続されている第１のヒトＣＤ４０リガンドエクトドメインを含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーはグリシン残基及びセリン残基を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号３９に示されるアミノ酸配列、又は配列番号３９に示されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号２５に示されるアミノ酸配列（ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ）、又は配列番号２５に示されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、３つの一本鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインのそれぞれに作動可能に連結された三量体化モチーフを含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフである。いくつかの実施形態では、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１に示されるアミノ酸配列（ＧＹＩＰＥＡＰＲＤＧＱＡＹＶＲＫＤＧＥＷＶＬＬＳＴＦＬ）、又は配列番号４１に示されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、ペプチドテザーによって３つの単鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインのそれぞれに連結される。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフを３つの単鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインのそれぞれに接続するペプチドテザーは、グリシン及び／又はセリン残基を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２４のアミノ酸配列、又は配列番号２４に示されるアミノ酸配列と約少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２６のアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）、又は配列番号２６に示されるアミノ酸配列と約少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、３つの一本鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインのそれぞれに作動可能に連結されたシグナルペプチド配列を更に含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチド配列は、配列番号４２のアミノ酸配列（ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、配列番号４３のアミノ酸配列（ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＧＹＩＰＥＡＰＲＤＧＱＡＹＶＲＫＤＧＥＷＶＬＬＳＴＦＬＧＧＧＧＳＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ）、又は配列番号４３に示されるアミノ酸配列と約少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、配列番号４４のアミノ酸配列（ＧＹＩＰＥＡＰＲＤＧＱＡＹＶＲＫＤＧＥＷＶＬＬＳＴＦＬＧＧＧＧＳＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ）、又は配列番号４４に示されるアミノ酸配列と約少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、配列番号４３のアミノ酸配列、又は配列番号４３に示されるアミノ酸配列と約少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む３つのポリペプチドを含む三量体を形成する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、配列番号４４のアミノ酸配列、又は配列番号４４に示されるアミノ酸配列と約少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む３つのポリペプチドを含む三量体を形成する。
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いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、マウスＣＤ４０リガンドエクトドメインを含む。いくつかの実施形態では、マウスＣＤ４０リガンドエクトドメインは、配列番号４５に示されるアミノ酸配列（ＤＰＱＩＡＡＨＶＶＳＥＡＮＳＮＡＡＳＶＬＱＷＡＫＫＧＹＹＴＭＫＳＮＬＶＭＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＥＧＬＹＹＶＹＴＱＶＴＦＣＳＮＲＥＰＳＳＱＲＰＦＩＶＧＬＷＬＫＰＳＳＧＳＥＲＩＬＬＫＡＡＮＴＨＳＳＳＱＬＣＥＱＱＳＶＨＬＧＧＶＦＥＬＱＡＧＡＳＶＦＶＮＶＴＥＡＳＱＶＩＨＲＶＧＦＳＳＦＧＬＬＫＬ）、又は配列番号４５に示されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、３つの一本鎖三量体マウスＣＤ４０リガンドエクトドメインの三量体である。いくつかの実施形態では、一本鎖三量体マウスＣＤ４０リガンドエクトドメインは、ペプチドリンカーによって連結された３つのマウスＣＤ４０リガンドエクトドメインを含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、一本鎖三量体マウスＣＤ４０リガンドエクトドメインポリペプチドは、ペプチドリンカーによって第３のマウスＣＤ４０リガンドエクトドメインに接続されている第２のマウスＣＤ４０リガンドエクトドメインに接続されている第１のマウスＣＤ４０リガンドエクトドメインを含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーはグリシン残基及びセリン残基を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号２５に示されるアミノ酸配列、又は配列番号２５に示されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、３つの一本鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインのそれぞれに作動可能に連結された三量体化モチーフを含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフである。いくつかの実施形態では、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１に示されるアミノ酸配列、又は配列番号４１に示されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、ペプチドテザーによって３つの単鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインのそれぞれに連結される。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフを３つの単鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインのそれぞれに接続するペプチドテザーは、ロイシン、グリシン及び／又はセリン残基を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、当該ポリペプチドテザーは、配列番号２４のアミノ酸配列、又は配列番号２４に示されるアミノ酸配列と約少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、当該ポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列、又は配列番号２６に示されるアミノ酸配列と約少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、３つの一本鎖三量体ＣＤ４０リガンドエクトドメインのそれぞれに作動可能に連結されたシグナルペプチド配列を更に含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチド配列は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、配列番号４６のアミノ酸配列（ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＧＹＩＰＥＡＰＲＤＧＱＡＹＶＲＫＤＧＥＷＶＬＬＳＴＦＬＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＰＱＩＡＡＨＶＶＳＥＡＮＳＮＡＡＳＶＬＱＷＡＫＫＧＹＹＴＭＫＳＮＬＶＭＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＥＧＬＹＹＶＹＴＱＶＴＦＣＳＮＲＥＰＳＳＱＲＰＦＩＶＧＬＷＬＫＰＳＳＧＳＥＲＩＬＬＫＡＡＮＴＨＳＳＳＱＬＣＥＱＱＳＶＨＬＧＧＶＦＥＬＱＡＧＡＳＶＦＶＮＶＴＥＡＳＱＶＩＨＲＶＧＦＳＳＦＧＬＬＫＬＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＤＰＱＩＡＡＨＶＶＳＥＡＮＳＮＡＡＳＶＬＱＷＡＫＫＧＹＹＴＭＫＳＮＬＶＭＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＥＧＬＹＹＶＹＴＱＶＴＦＣＳＮＲＥＰＳＳＱＲＰＦＩＶＧＬＷＬＫＰＳＳＧＳＥＲＩＬＬＫＡＡＮＴＨＳＳＳＱＬＣＥＱＱＳＶＨＬＧＧＶＦＥＬＱＡＧＡＳＶＦＶＮＶＴＥＡＳＱＶＩＨＲＶＧＦＳＳＦＧＬＬＫＬＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＤＰＱＩＡＡＨＶＶＳＥＡＮＳＮＡＡＳＶＬＱＷＡＫＫＧＹＹＴＭＫＳＮＬＶＭＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＥＧＬＹＹＶＹＴＱＶＴＦＣＳＮＲＥＰＳＳＱＲＰＦＩＶＧＬＷＬＫＰＳＳＧＳＥＲＩＬＬＫＡＡＮＴＨＳＳＳＱＬＣＥＱＱＳＶＨＬＧＧＶＦＥＬＱＡＧＡＳＶＦＶＮＶＴＥＡＳＱＶＩＨＲＶＧＦＳＳＦＧＬＬＫＬ）、又は配列番号４６に示されるアミノ酸配列と約少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、配列番号４７のアミノ酸配列（ＧＹＩＰＥＡＰＲＤＧＱＡＹＶＲＫＤＧＥＷＶＬＬＳＴＦＬＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＰＱＩＡＡＨＶＶＳＥＡＮＳＮＡＡＳＶＬＱＷＡＫＫＧＹＹＴＭＫＳＮＬＶＭＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＥＧＬＹＹＶＹＴＱＶＴＦＣＳＮＲＥＰＳＳＱＲＰＦＩＶＧＬＷＬＫＰＳＳＧＳＥＲＩＬＬＫＡＡＮＴＨＳＳＳＱＬＣＥＱＱＳＶＨＬＧＧＶＦＥＬＱＡＧＡＳＶＦＶＮＶＴＥＡＳＱＶＩＨＲＶＧＦＳＳＦＧＬＬＫＬＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＤＰＱＩＡＡＨＶＶＳＥＡＮＳＮＡＡＳＶＬＱＷＡＫＫＧＹＹＴＭＫＳＮＬＶＭＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＥＧＬＹＹＶＹＴＱＶＴＦＣＳＮＲＥＰＳＳＱＲＰＦＩＶＧＬＷＬＫＰＳＳＧＳＥＲＩＬＬＫＡＡＮＴＨＳＳＳＱＬＣＥＱＱＳＶＨＬＧＧＶＦＥＬＱＡＧＡＳＶＦＶＮＶＴＥＡＳＱＶＩＨＲＶＧＦＳＳＦＧＬＬＫＬＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＤＰＱＩＡＡＨＶＶＳＥＡＮＳＮＡＡＳＶＬＱＷＡＫＫＧＹＹＴＭＫＳＮＬＶＭＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＥＧＬＹＹＶＹＴＱＶＴＦＣＳＮＲＥＰＳＳＱＲＰＦＩＶＧＬＷＬＫＰＳＳＧＳＥＲＩＬＬＫＡＡＮＴＨＳＳＳＱＬＣＥＱＱＳＶＨＬＧＧＶＦＥＬＱＡＧＡＳＶＦＶＮＶＴＥＡＳＱＶＩＨＲＶＧＦＳＳＦＧＬＬＫＬ）、又は配列番号４７に示されるアミノ酸配列と約少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、配列番号４６のアミノ酸配列、又は配列番号４６に示されるアミノ酸配列と約少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む３つのポリペプチドを含む三量体を形成する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０アゴニストは、配列番号４７のアミノ酸配列、又は配列番号４７に示されるアミノ酸配列と約少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％のいずれかの同一性を有するアミノ酸配列を含む３つのポリペプチドを含む三量体を形成する。
【】
特定の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、表１に示される配列から選択されるいずれか１つの配列を含む。
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【表】
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【表】
【】
「結合（bind）」又は「結合すること（binding）」という用語は、例えば、複合体を形成することを含む分子間の相互作用を指す。用語「結合ドメイン」は、別の分子又はリガンドとの特異的結合相互作用に関与する分子の一部分を指す。相互作用は、例えば、水素結合、イオン結合、疎水性相互作用、及び／又はファンデルワールス相互作用を含む非共有相互作用とすることができる。複合体には、共有結合若しくは非共有結合、相互作用、又は力によって一緒に保持された２つ以上の分子の結合も含むことができる。抗体の単一の抗原結合部位と、抗原などの標的分子の単一のエピトープとの間の非共有相互作用全体の強さが、そのエピトープに対する抗体又は機能的断片の親和性である。一価の抗原に対する結合分子（例えば、抗体）の解離速度（ｋｏｆｆ）と会合速度（ｋｏｎ）との比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）は、解離定数ＫＤであり、親和性とは逆の関係にある。ＫＤ値が低いほど、結合分子の親和性は高くなる。ＫＤの値は、結合分子及びそれらのリガンド（すなわち、抗体及び抗原）の異なる複合体によって様々であり、ｋｏｎ及びｋｏｆｆの両方に依存する。１×１０－７Ｍ以下、例えば、１×１０－８Ｍ以下、５×１０－９Ｍ以下、１×１０－９Ｍ以下、５×１０－１０Ｍ以下、又は１×１０－１０Ｍ以下のＫＤで標的に特異的に結合することができる結合ドメイン。本明細書において提供される結合分子の解離定数ＫＤは、本明細書で提供されている任意の方法、又は当業者に周知である任意の他の方法を使用して決定することができる。１つの結合部位での親和性は、必ずしも結合分子とその結合パートナーとの間の相互作用の真の強さを反映するものではない。
【】
本明細書に記載されている結合分子に関連して、「に結合する（bind to）」、「に特異的に結合する（that specifically bind to）」などの用語、及び類似の用語も本明細書では互換的に使用され、ポリペプチドなどの抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインの結合分子を指す。抗原に結合する、又は抗原に特異的に結合する結合分子又は抗原結合ドメインは、関連する抗原と交差反応することがある。特定の実施形態では、抗原に結合する、又は抗原に特異的に結合する結合分子又は抗原結合ドメインは、他の抗原と交差反応しない。抗原に結合するか、又は抗原に特異的に結合する結合分子又は抗原結合ドメインは、例えば、イムノアッセイ、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）、又は当業者に既知のその他の技術によって同定され得る。いくつかの実施形態では、結合分子又は抗原結合ドメインは、ラジオイムノアッセイ（radioimmunoassay、ＲＩＡ）及び酵素結合免疫吸着アッセイ（enzyme linked immunosorbent assay、ＥＬＩＳＡ）などの実験技術を用いて決定された任意の交差反応性抗原よりも高い親和性で抗原に結合する場合、抗原に結合する又は抗原に特異的に結合する。典型的には、特異的又は選択的な反応は、バックグラウンドのシグナル又はノイズの少なくとも２倍であり、バックグラウンドの１０倍を超える場合がある。結合特異性に関する考察については、例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３３２－３６（Ｐａｕｌ ｅｄ．，２ｄ ｅｄ．１９８９年）を参照のこと。ある特定の実施形態では、「非標的」タンパク質に対する結合分子又は抗原結合ドメインの結合の程度は、例えば、蛍光活性化細胞選別（fluorescence activated cell sorting、ＦＡＣＳ）分析又はＲＩＡによって決定されたとき、その特定の標的抗原に対する結合分子又は抗原結合ドメインの結合の約１０％未満である。「特異的結合」、「に特異的に結合する」、又は「に特異的な」などの用語は、非特異的な相互作用とは測定可能なほど異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、概ね結合活性を有していない類似構造体の分子である対照分子の結合と比較して、分子の結合を決定することによって測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似した対照分子、例えば、過剰な非標識標的との競合によって決定することができる。この場合、標識標的のプローブへの結合が、過剰な非標識標的によって競合的に阻害される場合、特異的結合が示される。抗原に結合する結合分子又は抗原結合ドメインには、その結合分子が、例えば、抗原を標的とした診断薬として有用であるように、十分な親和性で抗原に結合可能なものが含まれる。特定の実施形態では、抗原に結合する結合分子又は抗原結合ドメインは、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５５０ｎＭ、５００ｎＭ、３００ｎＭ、２５０ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、又は０．１ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）を有する。特定の実施形態では、結合分子又は抗原結合ドメインは、異なる種に由来する抗原間（例えば、ヒトとオナガザル（cyno）種との間）で保存されている抗原のエピトープに結合する。
【】
「結合親和性」とは、概して、分子の単一の結合部位（例えば、ＣＤ４０Ｌなどの結合タンパク質）と、その結合パートナー（例えば、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５）との間の非共有相互作用の総和の強さを指す。別段の記載がない限り、本明細書で使用するとき、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体及び抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。結合分子Ｘのその結合パートナーＹに対する親和性は、概ね平衡解離定数（ＫＤ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載されているものを含む、当該技術分野において既知である一般的な方法で測定することができる。低親和性抗体は、概ね抗原とゆっくり結合し、容易に解離する傾向があるが、高親和性抗体は、概ね抗原とより速く結合し、より長く結合を維持する傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当該技術分野において既知であり、そのいずれもが本開示の目的のために使用することができる。具体的な例示的実施形態としては、以下のものが挙げられる。一実施形態では、「ＫＤ」又は「ＫＤ値」は、当該技術分野において既知であるアッセイによって、例えば、結合アッセイによって測定することができる。ＫＤは、例えば、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて行われるＲＩＡで測定され得る（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９３：８６５－８１）。また、バイオレイヤー干渉法（biolayer interferometry、ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）を用いて、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）（Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６系など）又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００やＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００など）で、ＫＤ又はＫＤ値を測定することができる。また、「オンレート」又は「会合の速度」又は「会合速度」又は「ｋｏｎ」は、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００のシステムを用いて、上述したバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又は表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）という同じ手法で測定することができる。
【】
ある特定の実施形態では、結合分子又は抗原結合ドメインは、ネイティブＣＤＲ残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するラクダ、マウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類など非ヒト種（例えば、ドナー抗体）の対応するＣＤＲからの残基に置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（例えば、レシピエント抗体）からの配列を含む非ヒト（例えば、ラクダ科、ネズミ科、非人霊長類）抗体の「ヒト化」形態の一部分を含み得る。いくつかの場合では、ヒト免疫グロブリン配列の１つ以上のＦＲ領域残基が、対応する非ヒト残基に置き換えられる。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体で見出されない残基を含むことができる。これらの改変は、抗体の性能を更に改良するために行われる。ヒト化抗体の重鎖又は軽鎖は、少なくとも１つ以上の可変領域の実質的に全てを含むことができ、その場合、ＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分を含む。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２９、Ｐｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－９６、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５－８９、米国特許第６，８００，７３８号、同第６，７１９，９７１号；同第６，６３９，０５５号；同第６，４０７，２１３号、及び同第６，０５４，２９７号を参照のこと。
【】
本明細書に記載又は参照されている技術及び手順には、当業者が概ねよく理解しているもの、及び／又は当業者が従来の手法を用いて通常採用しているもの、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（３ｄ ｅｄ．２００１）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，２００３）、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ Ｂｅｎｃｈ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃ（Ａｎ ｅｄ．２００９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ａｌｂｉｔａｒ ｅｄ．２０１０）；及びＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｌｓ １ ａｎｄ ２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．２０１０年）に記載されている広く利用されている手法などが含まれる。
【】
本明細書で特に定義されていない限り、本明細書で使用されている技術的用語及び科学的用語は、当業者によって通常理解される意味を有する。この明細書を解釈するために、以下の用語の説明が適用され、必要に応じて、単数形で使用される用語は複数形も含まれ、その逆もまた同様である。記載された用語のいずれかの説明が、参照により本明細書に組み込まれるいずれかの文書と矛盾する場合、以下に記載された用語の説明が優先されるものとする。
【】
一態様では、本明細書で提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、柔軟なペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、３つのＣＤ４０Ｌ ＥＣＤドメイン、又はその断片を含む。特定の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質の各ＣＤ４０Ｌサブユニットは、表２から選択されるいずれか１つの配列を含む。
【】
【表】
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一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２０又はその断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２１又はその断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２２又はその断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号４５又はその断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号３３又はその断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号３４又はその断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２０を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２１を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２２を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号４５又はその断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号３３を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号３４を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２０の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２１の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２２の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号３３の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号３４の断片を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質のＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号４５又はその断片を含む。
【】
一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤ４０Ｌサブユニットを含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤ４０Ｌサブユニットを含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤ４０Ｌサブユニットを含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号４５のアミノ酸配列又はその断片を含むＣＤ４０Ｌサブユニットを含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤ４０Ｌサブユニットを含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＣＤ４０Ｌサブユニットを含む。
【】
一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号４５のアミノ酸配列又はその断片を含むＣＤ４０Ｌサブユニットを含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。
【】
一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。
【】
一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。
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一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。
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一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。
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一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。
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一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。
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一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２０のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３３のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第１のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第２のＣＤ４０Ｌサブユニットと、配列番号３４のアミノ酸配列を有する第３のＣＤ４０Ｌサブユニットと、を含む。
【】
いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、直鎖状ＣＤ４０Ｌ三量体を形成するために、柔軟なペプチドリンカーによって互いに連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。特定の実施形態では、融合タンパク質中のＣＤ４０Ｌサブユニットを連結する柔軟なペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）からなる群から選択されるいずれか１つの配列を含み、式中、ｎは１～２０の整数である。いくつかの実施形態では、整数は１である。いくつかの実施形態では、整数は２である。いくつかの実施形態では、整数は３である。いくつかの実施形態では、整数は４である。いくつかの実施形態では、整数は５である。いくつかの実施形態では、整数は６である。いくつかの実施形態では、整数は７である。いくつかの実施形態では、整数は８である。いくつかの実施形態では、整数は９である。いくつかの実施形態では、整数は１０である。いくつかの実施形態では、整数は１１である。いくつかの実施形態では、整数は１２である。いくつかの実施形態では、整数は１３である。いくつかの実施形態では、整数は１４である。いくつかの実施形態では、整数は１５である。いくつかの実施形態では、整数は１６である。いくつかの実施形態では、整数は１７である。いくつかの実施形態では、整数は１８である。いくつかの実施形態では、整数は１９である。いくつかの実施形態では、整数は２０である。
【】
一実施形態では、柔軟なリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）を含む。一実施形態可撓性リンカーは、（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号２３を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号２５を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも５０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも５５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）を含むか、又は配列（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも５０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも５５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【】
特定の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、以下の表に示される配列から選択されるいずれか１つの配列を含み、ここで、下線部分は表３のリンカー配列に対応する。
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【表】
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一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３５を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３６を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３７を含む。別の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、配列番号３８を含む。
【】
いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質はまた、より大きな融合タンパク質を生成するために、異種ペプチド又はポリペプチド（又はその断片、例えば、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、又は約１００個のアミノ酸のポリペプチドに）に組換え的に融合され得る。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、ＣＤ４０Ｌに由来しない異種ペプチド又はポリペプチド（本出願において時には「非ＣＤ４０Ｌ」ペプチド又はポリペプチドと称される）に融合されたＣＤ４０Ｌ三量体を含むポリペプチドである。ＣＤ４０Ｌ三量体と非ＣＤ４０Ｌペプチド又はポリペプチドとの間の連結は、直接であってもよいし、柔軟なペプチドテザーを介してもよい。いくつかの実施形態では、非ＣＤ４０Ｌペプチド又はポリペプチドは、ＣＤ４０Ｌ三量体のＮ末端に融合されている。いくつかの実施形態では、非ＣＤ４０Ｌペプチド又はポリペプチドは、ＣＤ４０Ｌ三量体のＣ末端に融合されている。
【】
したがって、一態様では、本明細書で提供されるのは、非ＣＤ４０Ｌペプチド又はポリペプチドに、直接又は柔軟なペプチドテザーを介して融合されたＣＤ４０Ｌ三量体を含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、融合タンパク質の非ＣＤ４０Ｌ部分は、Ｆｃ単量体ペプチドを含む。
【】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ三量体は、Ｆｃ単量体ペプチドに連結されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ三量体は、ｓｃＦｖに、又はｓｃＦｖを含む構築物に連結される。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖを安定化するための柔軟なリンカーを含み、リンカーは、リンカー点とｓｃＦｖ内のアンカー点との間のジスルフィド結合でｓｃＦｖに対して安定化される。ステープル技術を用いたｓｃＦｖの安定化は、国際公開第２０２３／０８９５８７号に記載されており、その全体が参照により組み込まれる。いくつかの実施形態では、図１Ａに示されるタンパク質は、サブユニット内リンカー、テザー、Ｆｃ付着点、及びｓｃＦｖ付着点を用いて設計される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ三量体は、細胞膜に結合するための付着部位を含む。
【】
本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
本明細書で提供されるとき、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩｇＧ抗体由来のＦｃ領域を含むことができる。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体由来のＦｃ領域を含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩｇＧ１抗体由来のＦｃ領域を含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩｇＧ２抗体由来のＦｃ領域を含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩｇＧ３抗体由来のＦｃ領域を含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ＩｇＧ４抗体由来のＦｃ領域を含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃ受容体の結合を無効にし、かつ抗体依存性細胞傷害（antibody directed cellular cytotoxicity、ＡＤＣＣ）エフェクター機能を無効にする重要な変異を有する遺伝子操作を受けたＦｃドメインを有するサイレントＦｃ領域又は修飾Ｆｃ領域であるＦｃ単量体を含み得る。
【】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質の三量体ＣＤ４０Ｌ部分は、Ｆｃ領域のＣ末端に遺伝的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、融合タンパク質の三量体ＣＤ４０Ｌ部分は、Ｆｃ領域のＮ末端に遺伝的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている。
【】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ単量体ペプチドは、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている。
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いくつかの実施形態では、融合タンパク質の非ＣＤ４０Ｌ部分は、三量体化モチーフを含む。
【】
本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。
【】
本明細書で提供されるように、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、生物学的ペプチド及び合成ペプチドを含む任意の起源の三量体化モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、合成三量体化モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、生物学的起源の三量体化モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化タンパク質は、ウイルス、細菌、原生生物、植物、真菌、又は動物タンパク質由来の三量体化モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化タンパク質は、動物タンパク質由来の三量体化モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ ４０Ｌ三量体化タンパク質は、真菌タンパク質由来の三量体化モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化タンパク質は、植物タンパク質由来の三量体化モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化タンパク質は、原生生物タンパク質由来の三量体化モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化タンパク質は、細菌タンパク質由来の三量体化モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化タンパク質は、ウイルスタンパク質由来の三量体化モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、Ｔ４ファージタンパク質由来の三量体化モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４１を含む三量体化モチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、腫瘍壊死因子受容体関連因子（ＴＲＡＦ）三量体化モチーフである。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、イソロイシンジッパー（isoleucine-zipper、ＩＬＺ）三量体化モチーフである。
【】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質の三量体ＣＤ４０Ｌ部分は、三量体化モチーフのＣ末端に遺伝的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、融合タンパク質の三量体ＣＤ４０Ｌ部分は、三量体化モチーフのＮ末端に遺伝的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている。
【】
いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている。
【】
本明細書で使用される場合、「テザー」又は「ペプチドテザー」という用語は、融合タンパク質の三量体ＣＤ４０Ｌ部分をＦｃ単量体ペプチド又は三量体化モチーフに連結するアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、０～２０個のアミノ酸（両端の値を含む）を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、約０～１個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、約０～５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、約０～１０個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、約０～１５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、約５～１０個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、約５～１５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、約５～２０個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、約１０～１５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、約１０～２０個のアミノ酸を含む。対照的に、「リンカー」又は「ペプチドリンカー」という用語は、ＣＤ４０Ｌサブユニットを互いに連結して三量体を形成するアミノ酸配列を指す。
【】
一実施形態では、融合タンパク質の三量体ＣＤ４０Ｌ部分をＦｃ単量体ペプチド又は三量体化モチーフに連結するペプチドテザーは、配列（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）を有し、式中、ｎは１～２０の整数である。いくつかの実施形態では、整数は１である。いくつかの実施形態では、整数は２である。いくつかの実施形態では、整数は３である。いくつかの実施形態では、整数は４である。いくつかの実施形態では、整数は５である。いくつかの実施形態では、整数は６である。いくつかの実施形態では、整数は７である。いくつかの実施形態では、整数は８である。いくつかの実施形態では、整数は９である。いくつかの実施形態では、整数は１０である。いくつかの実施形態では、整数は１１である。いくつかの実施形態では、整数は１２である。いくつかの実施形態では、整数は１３である。いくつかの実施形態では、整数は１４である。いくつかの実施形態では、整数は１５である。いくつかの実施形態では、整数は１６である。いくつかの実施形態では、整数は１７である。いくつかの実施形態では、整数は１８である。いくつかの実施形態では、整数は１９である。いくつかの実施形態では、整数は２０である。
【】
一実施形態では、柔軟なテザーは、（Ｇ４Ｓ）（配列番号２８）モチーフを含まない。一実施形態では、柔軟なテザーは、（Ｇ４Ｓ）１（配列番号２８）を含む。一実施形態では、柔軟なテザーは、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）を含む。一実施形態では、柔軟なテザーは、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）を含む。一実施形態では、柔軟なリンカーは、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２６を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２７を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、配列番号２８を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ペプチドテザーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）を含むか、又は（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と少なくとも５０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と少なくとも５５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号４０）と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【】
一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットを互いに連結させて融合タンパク質の三量体ＣＤ４０Ｌ部分を形成するペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）からなる群から選択される配列を含む柔軟なリンカーであり得、式中、ｎは１～２０の整数である。いくつかの実施形態では、整数は１である。いくつかの実施形態では、整数は２である。いくつかの実施形態では、整数は３である。いくつかの実施形態では、整数は４である。いくつかの実施形態では、整数は５である。いくつかの実施形態では、整数は６である。いくつかの実施形態では、整数は７である。いくつかの実施形態では、整数は８である。いくつかの実施形態では、整数は９である。いくつかの実施形態では、整数は１０である。いくつかの実施形態では、整数は１１である。いくつかの実施形態では、整数は１２である。いくつかの実施形態では、整数は１３である。いくつかの実施形態では、整数は１４である。いくつかの実施形態では、整数は１５である。いくつかの実施形態では、整数は１６である。いくつかの実施形態では、整数は１７である。いくつかの実施形態では、整数は１８である。いくつかの実施形態では、整数は１９である。いくつかの実施形態では、整数は２０である。一実施形態では、柔軟なリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）を含む。一実施形態では、柔軟なリンカーは、（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号２３を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号２５を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）を含むか、又はＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも５０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも５５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）を含むか、又は（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも９８、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも５０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも５５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも６５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇ３Ｓ）ｎ（配列番号３９）と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【】
特定の実施形態では、本開示による融合タンパク質中のＦｃ単量体は、表４から選択されるいずれか１つの配列を含む。
【】
【表】
【】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ三量体は、Ｆｃ単量体ペプチドのＮ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１～１２から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む。
【】
一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号２を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号３を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号４を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号５を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号６を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号７を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号９を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１１を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１２を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号２の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号３の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号４の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号５の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号６の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号７の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号８の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号９の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１０の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１１の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１２の断片を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ三量体は、Ｆｃ単量体ペプチドのＣ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１３～１９から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６又はその断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１３を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１４を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１５を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１７を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１８を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１９を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１３の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１４の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１５の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１６の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１７の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１８の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号１９の断片を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０リガンドサブユニットは、ＣＤ４０Ｌ細胞外配列の一部を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２０～２２から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２０を含む。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２１を含む。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２２を含む。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２０の断片を含む。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２１の断片を含む。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２２の断片を含む。
【】
いくつかの場合では、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質又はヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を形成することができ、後者が好ましい。一実施形態では、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ホモ二量体Ｆｃ融合タンパク質を形成する。一実施形態では、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を形成する。いくつかの場合では、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一方の単量体は、Ｆｃ単量体ペプチド又はその断片のみを含み、他方の単量体は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。一実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一方の単量体は、Ｆｃ単量体ペプチドのみを含み、他方の単量体は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。一実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一方の単量体は、Ｆｃ単量体ペプチドの断片のみを含み、他方の単量体は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、参照又は野生型Ｆｃ単量体と比較して、１つ又は２つ以上のアミノ酸置換を有するバリアントＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一方の単量体は、Ｆｃ単量体ペプチド又はその断片、及び受容体、リガンド又は他の結合パートナーなどのＣＤ４０Ｌ以外のタンパク質ドメインを含む。一実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一方の単量体は、Ｆｃ単量体ペプチド及びＣＤ４０Ｌ以外のタンパク質ドメインを含む。一実施形態では、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一方の単量体は、Ｆｃ単量体ペプチドの断片及びＣＤ４０Ｌ以外のタンパク質ドメインを含む。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌ以外のタンパク質ドメインは、受容体である。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌ以外のタンパク質ドメインは、リガンドである。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌ以外のタンパク質ドメインは、別の結合パートナーである。したがって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、二重特異性分子であるヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の成分であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、提供されるのは、本明細書に提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二重特異性分子である。
【】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ三量体は、三量体化モチーフのＣ末端に連結されている。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４３、４４、４６、及び４７、並びにそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む。図８Ａは、マウスサロゲートＣＤ４０アゴニストペイロードを示す概略図を示し、図９Ａは、ヒトＣＤ４０アゴニストペイロード示す概略図を示し、これらのペイロードは、ＣＤ４０Ｌエクトドメインの三量体バンドルからなる三量体化Ｃ末端融合タンパク質である。
【】
一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４３を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４４を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４６を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４７を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４３の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４４の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４６の断片を含む。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４７の断片を含む。
【】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ三量体は、三量体化モチーフのＮ末端に連結されている。
【】
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０リガンドサブユニットは、ＣＤ４０Ｌ細胞外配列の一部を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２０～２２及びそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２０を含む。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２１を含む。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２２を含む。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２０の断片を含む。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２１の断片を含む。一実施形態では、ＣＤ４０Ｌサブユニットは、配列番号２２の断片を含む。
【】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＣＤ４０Ｌ三量体は、標的抗原に組換え的に融合されているか、又は化学的にコンジュゲートされている（共有結合又は非共有結合コンジュゲーション）。一実施形態では、本明細書に提供されるＣＤ４０Ｌ三量体は、標的抗原に組換えにより融合されている。一実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ４０Ｌ三量体は、標的抗原に化学的にコンジュゲートされている。一実施形態では、化学的コンジュゲーションは共有結合コンジュゲーションである。一実施形態では、化学的コンジュゲーションは、非共有結合コンジュゲーションである。いくつかの実施形態では、標的抗原は、ＣＤ４０Ｌ三量体のＣ末端に組換え的に融合されている。他の実施形態では、標的抗原は、ＣＤ４０Ｌ三量体のＮ末端に組換え的に融合されている。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ三量体及び標的抗原は、ペプチドテザーを介して共有結合している。
【】
具体的な実施形態では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）標的抗原と、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ－標的抗原融合タンパク質である。
【】
いくつかの実施形態では、標的抗原は、免疫応答を誘発するためのものである。いくつかの実施形態では、標的抗原は、病原体又は罹患細胞を起源とするか又はそれに由来する。本明細書中で使用される場合、病原体又は罹患細胞を「起源とする」標的抗原は、天然に存在するか又は人工的に作製された条件下で病原体又は罹患細胞によって産生されるネイティブ抗原を指す。病原体又は罹患細胞を起源とする抗原の例としては、インビボ又はインビトロで病原体又は罹患細胞によって発現されるネイティブタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、病原体又は罹患細胞に「由来する」標的抗原とは、それを起源とするネイティブ抗原のバリアントを指す。例えば、タンパク質又はペプチドバリアントは、そのようなタンパク質又はペプチドのネイティブ若しくは未修飾配列のアミノ酸配列に対する１つ又は２つ以上（例えば、約１～約２５個、約１～約２０個、約１～約１５個、約１～約１０個、又は約１～約５個）の変化から生じ得る。ネイティブタンパク質のバリアントは、天然に存在し得る（例えば、対立遺伝子バリアント若しくはスプライスバリアント、又は免疫細胞によって断片化若しくはプロセシングされ得る）か、又は人工的に構築され得る。いくつかの実施形態では、標的抗原は、病原体を起源とする。いくつかの実施形態では、標的抗原は、罹患細胞を起源とする。いくつかの実施形態では、標的抗原は、病原体に由来する。いくつかの実施形態では、標的抗原は、罹患細胞に由来する。
【】
いくつかの実施形態では、標的抗原は、感染性病原体、例えばウイルス、細菌、真菌又は寄生虫によって発現されるタンパク質を起源とするか又はそれに由来する。一実施形態では、標的抗原は、感染性病原体によって発現されるタンパク質を起源とする。一実施形態では、標的抗原は、感染性病原体によって発現されるタンパク質に由来する。一実施形態では、病原体は、ウイルスである。別の実施形態では、病原体は、細菌である。一実施形態では、病原体は、真菌である。別の実施形態では、病原体は、寄生虫である。
【】
いくつかの実施形態では、標的抗原は、感染性病原体に感染した罹患宿主細胞によって発現されるタンパク質を起源とするか又はそれに由来する。一実施形態では、標的抗原は、罹患宿主細胞によって発現されるタンパク質を起源とする。一実施形態では、標的抗原は、罹患宿主細胞によって発現されるタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、罹患宿主細胞は、感染性病原体に感染している。一実施形態では、病原体は、ウイルスである。別の実施形態では、病原体は、細菌である。一実施形態では、病原体は、真菌である。別の実施形態では、病原体は、寄生虫である。
【】
いくつかの実施形態では、標的抗原は、感染性病原体によって産生されるタンパク質を起源とするか又はそれに由来する。いくつかの実施形態では、標的抗原は、感染性病原体によって産生されるタンパク質を起源とする。いくつかの実施形態では、標的抗原は、感染性病原体によって産生されるタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、感染性病原体は、病原体による宿主侵入を媒介する。一実施形態では、病原体は、ウイルスである。別の実施形態では、病原体は、細菌である。一実施形態では、病原体は、真菌である。別の実施形態では、病原体は、寄生虫である。
【】
いくつかの実施形態では、標的抗原は、がん細胞又は腫瘍間質細胞によって産生されるタンパク質を起源とするか又はそれに由来する。いくつかの実施形態では、標的抗原は、がん細胞によって産生されるタンパク質を起源とする。いくつかの実施形態では、標的抗原は、腫瘍間質細胞によって産生されるタンパク質を起源とする。いくつかの実施形態では、標的抗原は、がん細胞によって産生されるタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、標的抗原は、腫瘍間質細胞によって産生されるタンパク質に由来する。
【】
具体的な実施形態では、標的抗原は、腫瘍関連抗原（tumor associated antigen、ＴＡＡ）、又はその抗原断片である。一実施形態では、標的細胞は、ＴＡＡである。一実施形態では、標的抗原は、ＴＡＡの抗原断片である。
【】
いくつかの実施形態では、標的抗原は、対象の先天性免疫系によって認識される。いくつかの実施形態では、標的抗原は、抗原提示細胞によってプロセシングされ、提示される。いくつかの実施形態では、標的抗原は、インビトロで抗原提示細胞によってプロセシングされ、提示される。いくつかの実施形態では、標的抗原は、インビボで抗原提示細胞によってプロセシングされ、提示される。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、単球、顆粒球、好酸球、好中球、又はそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞である。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞である。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞は、マクロファージである。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞は、ナチュラルキラー細胞である。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞は、単球である。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞は、顆粒球である。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞は、好酸球である。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞は、好中球である。
【】
いくつかの実施形態では、標的抗原は、細胞の表面上に発現されるタンパク質に由来し、この発現は、細胞をアポトーシスについてマークする（例えば、細胞媒介性細胞傷害性又は抗体依存性細胞傷害性を介して）。
【】
いくつかの実施形態では、標的抗原は、細胞の表面上で発現されるタンパク質に由来する。ある特定の実施形態では、細胞の表面上にマークされるタンパク質は、アポトーシスについて細胞をマークする。いくつかの実施形態では、アポトーシスは、細胞媒介性細胞傷害を介する。他の実施形態では、アポトーシスは、抗体依存性細胞毒性を介する。
【】
いくつかの実施形態では、標的抗原は、細胞の表面上に発現されるタンパク質に由来し、この発現は、細胞を貪食作用についてマークする。いくつかの実施形態では、標的抗原は、対象における循環抗体によって特異的に認識されるタンパク質に由来する。
【】
いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質はまた、例えば、診断薬又は検出可能な薬剤に化学的にコンジュゲートされ得る（共有結合又は非共有結合コンジュゲーション）か、又は組換え的に融合され得る。いくつかの実施形態では、診断剤又は検出可能な薬剤にコンジュゲート又は融合されたＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、別の分子に化学的にコンジュゲートされる。一実施形態では、コンジュゲーションは、共有結合コンジュゲーションである。別の実施形態では、コンジュゲーションは、非共有結合コンジュゲーションである。一実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、別の分子に組換え的に融合される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、他の分子は、診断薬である。いくつかの実施形態では、他の分子は、検出可能な薬剤である。特定の実施形態では、本開示の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼなどの様々な酵素；補欠分子族、例えば、限定されないが、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチン、蛍光物質、例えば、限定されないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、又はフィコエリスリン、発光物質、例えば、限定されないが、ルミノール、生体発光物質、例えば、限定されないが、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、又はエクオリン、化学発光物質、例えば、限定されないが、アクリジニウムベースの化合物又はＨＡＬＯＴＡＧ、放射性物質、例えば、限定されないが、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、及び１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ及び６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、又は１１７Ｓｎ；種々の陽電子放出断層撮影を使用する陽電子放出金属；及び非放射性常磁性金属イオンが含まれる。
【】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される融合タンパク質は、精製を容易にするために、ペプチドなどのマーカー又は「タグ」配列と融合させることができる。特定の実施形態では、マーカー又はタグのアミノ酸配列は、とりわけｐＱＥベクター（例えば、ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．を参照）に提供されているタグなどのヘキサヒスチジンペプチド（配列番号５０）であり、その多くが市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１－２４に記載されているように、ヘキサヒスチジン（配列番号５０）は、融合タンパク質の便利な精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグとしては、インフルエンザ血球凝集素タンパク質に由来するエピトープに対応する血球凝集素（「ＨＡ」）タグ（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３７：７６７－７８）、及び「ＦＬＡＧ」タグが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【】
部分（ポリペプチドを含む）を融合又はコンジュゲートさせる方法が既知である（例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２４３－５６（Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ６２３－５３（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．１９８７）、Ｔｈｏｒｐｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ４７５－５０６（Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）、Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ３０３－１６（Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）、Ｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９－５８、米国特許第５，３３６，６０３号、同第５，６２２，９２９号、同第５，３５９，０４６号、同第５，３４９，０５３号、同第５，４４７，８５１号、同第５，７２３，１２５号、同第５，７８３，１８１号、同第５，９０８，６２６号、同第５，８４４，０９５号、及び同第５，１１２，９４６号、欧州特許第３０７，４３４号、同第３６７，１６６号、同第３９４，８２７号、国際公開第９１／０６５７０号、同第９６／０４３８８号、同第９６／２２０２４号、同第９７／３４６３１号、及び同第９９／０４８１３号、Ａｓｈｋｅｎａｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：１０５３５－３９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４－８６、Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０－６００、並びにＶｉｌ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：１１３３７－４１を参照）。
【】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドは、ＣＤ４０への結合時にＣＤ４０を調節することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドは、ＣＤ４０への結合時にＣＤ４０を活性化することができる。
【】
一態様では、ＣＤ４０は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質との結合時に活性化される。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＣＤ４０を活性化する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＣＤ４０を活性化する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＣＤ４０を活性化する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＣＤ４０を活性化する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＣＤ４０を活性化する。
【】
一態様では、ＣＤ４０は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質との結合時に活性化される。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、約４ｎＭ未満のＥＣ５０でＣＤ４０を活性化する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、約３ｎＭ未満のＥＣ５０でＣＤ４０を活性化する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、約１ｎＭ未満のＥＣ５０でＣＤ４０を活性化する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、約５００ｐＭ未満のＥＣ５０でＣＤ４０を活性化する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、約１００ｐＭ未満のＥＣ５０でＣＤ４０を活性化する。
【】
特定の実施形態では、ＥＣ５０は、約１ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．９ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．８ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．７ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．６ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．５ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．４ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．３００ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．２ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１９ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１８ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１７ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１６ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１５ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１４ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１３ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１２ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１１ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０９ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０８ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０７ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０６ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０５ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０４ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０３ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０２ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０１ｎＭ未満である。特定の実施形態において。一実施形態では、ＥＣ５０は、ＥＣ５０は、約１ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．９ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．８ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．７ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．６ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．５ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．４ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．３００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．２ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１９ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１８ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１７ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１６ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１５ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１４ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１３ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１２ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１１ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．１ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０９ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０８ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０７ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０６ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０５ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０４ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０３ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０２ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約０．０１ｐＭ未満である。特定の実施形態において。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１０００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約９００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約８００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約７００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約６００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約５００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約４００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約３００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約２００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１９０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１８０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１７０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１６０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１５０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１４０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１３０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１２０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１１０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約９０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約８０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約７０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約６０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約５０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約４０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約３０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約２０ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、約１０ｐＭ未満である。
【】
また本明細書に提供されるのは、ＣＤ４０ポリペプチドを調節する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、本明細書中に提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドと接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。また本明細書に提供されるのは、ＣＤ４０ポリペプチドを活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、本明細書中に提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドと接触させることを含む、方法である。
【】
また提供されるのは、ＣＤ４０ポリペプチドを活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が結合時にＣＤ４０ポリペプチドを活性化する、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
また提供されるのは、ＣＤ４０ポリペプチドを活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質が結合時にＣＤ４０ポリペプチドを活性化する、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
また提供されるのは、ＣＤ４０ポリペプチドを発現する標的細胞を活性化する方法であって、標的細胞を、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドと接触させ、それによって活性化された標的細胞を産生することを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。具体的な実施形態では、標的細胞と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質であり、ポリペプチドは、ＣＤ４０への結合時に標的細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、標的細胞と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質であり、ポリペプチドは、ＣＤ４０への結合時に標的細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、活性化された標的細胞は、次に別の細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、活性化された標的細胞は、Ｔ細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、活性化された標的細胞は、Ｔ細胞集団を活性化する。
【】
いくつかの実施形態では、標的細胞は、抗原提示細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、免疫細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、顆粒球、好酸球、好中球、又はそれらの組み合わせである。一実施形態では、標的細胞は、樹状細胞である。一実施形態では、標的細胞は、マクロファージである。一実施形態では、標的細胞は、ナチュラルキラー細胞である。一実施形態では、標的細胞は、単球である。一実施形態では、標的細胞は、顆粒球である。一実施形態では、標的細胞は、好酸球である。一実施形態では、標的細胞は、顆粒球である。一実施形態では、標的細胞は、好中球である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ランゲルハンス細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、前立腺細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ナイーブＢ細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、メモリーＢ細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、基底呼吸細胞である。
【】
いくつかの実施形態では、活性化された標的細胞は、別の細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、活性化された標的細胞は、ＣＤ４０ポリペプチドを発現しない別の細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、活性化された標的細胞は、免疫細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、活性化された標的細胞は、Ｔ細胞を活性化する。いくつかの実施形態では、活性化された標的細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＭＡＩＴ、ナチュラルキラー細胞、好中球、又はそれらの組み合わせを活性化する。一実施形態では、活性化された標的細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する。一実施形態では、活性化された標的細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化する。一実施形態では、活性化された標的細胞は、ＭＡＩＴを活性化する。一実施形態では、活性化された標的細胞は、ナチュラルキラー細胞を活性化する。一実施形態では、活性化された標的細胞は、好中球を活性化する。
【】
いくつかの実施形態では、標的細胞の活性化は、標的細胞の増殖若しくは成熟の増加として測定される。一実施形態では、標的細胞の活性化は、標的細胞の増殖の増加として測定される。一実施形態では、標的細胞の活性化は、標的細胞の成熟の増加として測定される。特定の実施形態では、標的細胞の増殖若しくは成熟は、約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％又は１０００％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約１０～１００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の増殖は、約１００～２００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の増殖は、約２００～３００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の増殖は、約３００～４００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の増殖は、約４００～５００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の増殖は、約５００～６００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の増殖は、約６００～７００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の増殖は、約７００～８００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の増殖は、約８００～９００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の増殖は、約９００～１０００％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約１０％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約２０％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約３０％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約４０％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約４５％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約５０％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約５５％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約６０％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約６５％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約７０％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約７５％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約８０％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約８５％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約９０％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約９５％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約１００％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約１２５％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約１５０％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約１７５％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約２００％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約２５０％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約３００％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約４００％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約５００％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約６００％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約７００％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約８００％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約９００％増加する。一実施形態では、標的細胞の増殖は、約１０００％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約１０～１００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の成熟は、約１００～２００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の成熟は、約２００～３００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の成熟は、約３００～４００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の成熟は、約４００～５００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の成熟は、約５００～６００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の成熟は、約６００～７００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の成熟は、約７００～８００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の成熟は、約８００～９００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の成熟は、約９００～１０００％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約１０％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約２０％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約３０％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約４０％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約４５％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約５０％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約５５％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約６０％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約６５％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約７０％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約７５％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約８０％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約８５％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約９０％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約９５％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約１００％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約１２５％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約１５０％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約１７５％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約２００％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約２５０％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約３００％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約４００％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約５００％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約６００％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約７００％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約８００％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約９００％増加する。一実施形態では、標的細胞の成熟は、約１０００％増加する。
【】
いくつかの実施形態では、標的細胞の活性化は、標的細胞の生存期間の延長として測定される。特定の実施形態では、標的細胞の生存期間は、約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％又は１０００％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約１０～１００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の生存期間は、約１００～２００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の生存期間は、約２００～３００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の生存期間は、約３００～４００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の生存期間は、約４００～５００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の生存期間は、約５００～６００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の生存期間は、約６００～７００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の生存期間は、約７００～８００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の生存期間は、約８００～９００％増加する。別の実施形態では、標的細胞の生存期間は、約９００～１０００％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約１０％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約２０％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約３０％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約４０％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約４５％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約５０％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約５５％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約６０％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約６５％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約７０％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約７５％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約８０％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約８５％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約９０％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約９５％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約１００％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約１２５％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約１５０％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約１７５％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約２００％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約２５０％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約３００％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約４００％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約５００％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約６００％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約７００％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約８００％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約９００％増加する。一実施形態では、標的細胞の生存期間は、約１０００％増加する。
【】
また提供されるのは、Ｔ細胞を活性化する方法であって、Ｔ細胞を、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の存在下で、抗原提示細胞と接触させることを含み、抗原提示細胞がＣＤ４０ポリペプチドを発現し、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、ＣＤ４０ポリペプチドへの結合時にＴ細胞を活性化する、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。更に提供されるのは、Ｔ細胞を活性化する方法であって、Ｔ細胞を、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質の存在下で、抗原提示細胞と接触させることを含み、抗原提示細胞がＣＤ４０ポリペプチドを発現し、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質が、ＣＤ４０ポリペプチドの結合時にＴ細胞を活性化する、方法である。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞は、Ｔ細胞に抗原を提示する。
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いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団の活性化は、Ｔ細胞による炎症促進性サイトカインの分泌の増加によって測定される。いくつかの実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、又はそれらの任意の組み合わせから選択される。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－１である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－６である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－１２である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－１７である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２２である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２３である。一実施形態において、サイトカインは、ＧＭ－ＣＳＦである。一実施形態において、サイトカインは、ＴＮＦ－αである。一実施形態において、サイトカインは、ＩＦＮ－γである。
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いくつかの実施形態では、抗原提示細胞は、Ｔ細胞に抗原を提示する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質による抗原提示細胞の活性化時に、抗原提示細胞によるＴ細胞への抗原の提示が増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、単球、顆粒球、好酸球、好中球、又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、Ｂ細胞を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、マクロファージを含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、樹状細胞を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、ナチュラルキラー細胞を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、単球を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、顆粒細胞を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、好酸球を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、好中球を含む。
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いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質による抗原提示細胞の活性化時に、抗原提示細胞によるＴ細胞への抗原の提示が増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、単球、顆粒球、好酸球、好中球、又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、Ｂ細胞を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、マクロファージを含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、樹状細胞を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、ナチュラルキラー細胞を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、単球を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、顆粒細胞を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、好酸球を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、好中球を含む。
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また提供されるのは、樹状細胞を活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、ＣＤ４０の結合時に樹状細胞ポリペプチドを活性化する、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。更に提供されるのは、樹状細胞を活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質が、ＣＤ４０の結合時に樹状細胞ポリペプチドを活性化する、方法である。
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いくつかの実施形態では、方法は、ＣＤ４０ポリペプチドを、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、二量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、方法は、ＣＤ４０ポリペプチドを、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体と接触させることを含む。
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いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｂ細胞集団による抗体産生を促進するための方法であって、Ｂ細胞を、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含む有効量のポリペプチドと接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。具体的な実施形態では、Ｂ細胞集団と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。具体的な実施形態では、Ｂ細胞集団と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。
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いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、標的抗原の存在下で単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドと接触させられ、Ｂ細胞によって産生された抗体が、抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、標的抗原は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質に化学的にコンジュゲートされるか、又は組換え的に融合されている。いくつかの実施形態では、標的抗原は、抗原提示細胞によって提示される。いくつかの実施形態では、標的抗原は、ＭＨＣクラスＩ複合体と会合している。いくつかの実施形態では、標的抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ複合体と会合している。いくつかの実施形態では、標的抗原は、感染性病原体を起源とするか又はそれに由来する。いくつかの実施形態では、標的抗原は、罹患細胞を起源とするか又はそれに由来する。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、がん細胞である。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、感染性病原体に感染した細胞である。いくつかの実施形態では、感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌又は寄生虫である。
【】
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞集団によって産生される抗体は、約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％又は１０００％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約１０～１００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約１００～２００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約２００～３００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約３００～４００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約４００～５００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約５００～６００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約６００～７００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約７００～８００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約８００～９００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約９００～１０００％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約１０％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約２０％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約３０％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約４０％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約４５％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約５０％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約５５％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約６０％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約６５％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約７０％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約７５％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約８０％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約８５％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約９０％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約９５％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約１００％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約１２５％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約１５０％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約１７５％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約２００％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約２５０％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約３００％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約４００％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約５００％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約６００％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約７００％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約８００％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約９００％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約１０００％増加する。一実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約１０～１００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約１００～２００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約２００～３００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約３００～４００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約４００～５００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約５００～６００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約６００～７００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約７００～８００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約８００～９００％増加する。別の実施形態では、Ｂ細胞集団による抗体産生は、約９００～１０００％増加する。いくつかの実施形態、本方法は、抗原に応答して抗体を産生することができるメモリーＢ細胞の形成を更に促進する。
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いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、免疫細胞集団による炎症促進性サイトカインの分泌を増加させる方法であって、免疫細胞集団を、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドの存在下で、抗原提示細胞集団と接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。具体的な実施形態では、抗原提示細胞集団と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、免疫細胞集団に抗原を提示する。いくつかの実施形態では、免疫細胞集団は、Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞集団は、Ｔ細胞集団である。具体的な実施形態では、抗原提示細胞の活性化時に、抗原提示細胞集団による抗原の免疫細胞集団への提示が増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％増加する。一実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約１０～２０％増加する。別の実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約２０～３０％増加する。別の実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約３０～４０％増加する。別の実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約４０～５０％増加する。別の実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約５０～６０％増加する。別の実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約６０～７０％増加する。別の実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約７０～８０％増加する。別の実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約８０～９０％増加する。別の実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約９０～９９％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約１０％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約２０％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約３０％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約４０％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約４５％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約５０％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約５５％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約６０％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約６５％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約７０％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約７５％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約８０％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約８５％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約９０％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは、約９５％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団中の抗原を提示する抗原提示細胞の最小パーセンテージは約又は９９％増加する。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、単球、顆粒球、好酸球、好中球、又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、Ｂ細胞を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、マクロファージを含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、樹状細胞を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、ナチュラルキラー細胞を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、単球を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、顆粒細胞を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、好酸球を含む。いくつかの実施形態では、抗原提示細胞集団は、好中球を含む。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、又はそれらの任意の組み合わせである。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－１である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－６である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－１２である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－１７である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２２である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２３である。一実施形態において、サイトカインは、ＧＭ－ＣＳＦである。一実施形態において、サイトカインは、ＴＮＦ－αである。一実施形態において、サイトカインは、ＩＦＮ－γである。いくつかの実施形態では、サイトカイン産生は、約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２５０％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％又は１０００％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約１０～１００％増加する。別の実施形態では、サイトカイン産生は、約１００～２００％増加する。別の実施形態では、サイトカイン産生は、約２００～３００％増加する。別の実施形態では、サイトカイン産生は、約３００～４００％増加する。別の実施形態では、サイトカイン産生は、約４００～５００％増加する。別の実施形態では、サイトカイン産生は、約５００～６００％増加する。別の実施形態では、サイトカイン産生は、約６００～７００％増加する。別の実施形態では、サイトカイン産生は、約７００～８００％増加する。別の実施形態では、サイトカイン産生は、約８００～９００％増加する。別の実施形態では、サイトカイン産生は、約９００～１０００％増加する。別の実施形態では、サイトカイン産生は、約１０～１０００％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約２０％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約３０％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約４０％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約４５％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約５０％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約５５％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約６０％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約６５％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約７０％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約７５％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約８０％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約８５％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約９０％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約９５％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約１００％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約１２５％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約１５０％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約１７５％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約２００％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約２５０％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約３００％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約４００％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約５００％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約６００％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約７００％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約８００％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約９００％増加する。一実施形態では、サイトカイン産生は、約１０００％増加する。
【】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、マクロファージ集団による罹患細胞の貪食作用を増加させるための方法であって、罹患細胞、マクロファージ、又は罹患細胞及びマクロファージの両方を、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドと接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。具体的な実施形態では、マクロファージ集団と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。具体的な実施形態では、マクロファージ集団と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。
【】
いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％増加する。一実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約１０～２０％増加する。別の実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約２０～３０％増加する。別の実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約３０～４０％増加する。別の実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約４０～５０％増加する。別の実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約５０～６０％増加する。別の実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約６０～７０％増加する。別の実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約７０～８０％増加する。別の実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約８０～９０％増加する。別の実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約９０～９９％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約１０％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約２０％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約３０％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約４０％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約４５％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約５０％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約５５％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約６０％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約６５％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約７０％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約７５％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約８０％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約８５％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約９０％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団における貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約９５％増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージ集団中の貪食性マクロファージの最小パーセンテージは、約９９％又は９９％増加する。
【】
いくつかの実施形態では、マクロファージによる貪食作用は、第１の蛍光色素で標識されたマクロファージと、第２の蛍光色素で標識された罹患細胞とを共培養することによって測定され、ここで、第１の蛍光色素と第２の蛍光色素は異なる。いくつかの実施形態では、貪食性マクロファージのパーセンテージは、罹患細胞を含むマクロファージのパーセンテージを決定することによって測定される。具体的な実施形態では、罹患細胞は、がん細胞である。具体的な実施形態では、罹患細胞は、感染性病原体に感染した細胞である。いくつかの実施形態では、感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌又は寄生虫である。
【】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、樹状細胞集団による抗原提示を増加させるための方法であって、樹状細胞を、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドと接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。具体的な実施形態では、樹状細胞集団と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、抗原は、感染性病原体を起源とするか又はそれに由来する。いくつかの実施形態では、抗原は、罹患細胞を起源とするか又はそれに由来する。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、がん細胞である。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、感染性病原体に感染した細胞である。いくつかの実施形態では、感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、又はそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、抗原は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドに化学的にコンジュゲートされるか、又は組換え的に融合されている。
【】
いくつかの実施形態では、樹状細胞による抗原提示は、第１の蛍光色素で標識されたマクロファージと、第２の蛍光色素で標識された罹患細胞とを共培養することによって測定され、ここで、第１の蛍光色素と第２の蛍光色素は異なる。いくつかの実施形態では、抗原を提示する樹状細胞のパーセンテージは、樹状細胞集団中の抗原と共局在化する樹状細胞のパーセンテージを決定することによって測定される。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％増加する。一実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約１０～２０％増加する。別の実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約２０～３０％増加する。別の実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約３０～４０％増加する。別の実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約４０～５０％増加する。別の実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約５０～６０％増加する。別の実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約６０～７０％増加する。別の実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約７０～８０％増加する。別の実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約８０～９０％増加する。別の実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約９０～９９％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約１０％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約２０％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約３０％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約４０％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約４５％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約５０％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約５５％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約６０％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約６５％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約７０％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約７５％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約８０％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約８５％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約９０％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約９５％増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞集団中の抗原を提示する樹状細胞の最小パーセンテージは、約９９％又は９９％増加する。
【】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、標的細胞によるＣＤ４０ポリペプチドの発現を増加させるための方法であって、標的細胞を、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドと接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。具体的な実施形態では、標的細胞と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、標的細胞と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。
【】
いくつかの実施形態では、標的細胞は、罹患細胞である。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、がん細胞である。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、感染性病原体に感染した細胞である。いくつかの実施形態では、感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、又はそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、標的細胞は、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、顆粒球、好酸球、好中球、又はそれらの組み合わせから選択される免疫細胞である。
【】
いくつかの実施形態では、罹患細胞集団は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約９９％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約１０～２０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約２０～３０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約３０～４０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約４０～５０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約５０～６０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約６０～７０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約７０～８０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約８０～９０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約９０～９９％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約１０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約２０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約３０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約４０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約４５％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約５０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約５５％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約６０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約６５％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約７０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約７５％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約８０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約８５％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約９０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約９５％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約９９％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約１００％減少する。
【】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、罹患細胞集団を取り囲む組織に炎症促進性環境を形成するための方法であって、組織を、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドと接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。具体的な実施形態では、組織と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、組織と接触するポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。
【】
いくつかの実施形態では、活性化Ｂ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＭＡＩＴ、樹状細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、単球、顆粒球、好酸球、及び／又は好中球の組織中での浸潤が増加する。いくつかの実施形態では、活性化Ｂ細胞の浸潤が増加する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞の浸潤が増加する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞の浸潤が増加する。いくつかの実施形態では、樹状細胞の浸潤が増加する。いくつかの実施形態では、マクロファージの浸潤が増加する。いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー細胞の浸潤が増加する。いくつかの実施形態では、単球の浸潤が増加する。いくつかの実施形態では、顆粒球の浸潤が増加する。いくつかの実施形態では、好酸球の浸潤が増加する。いくつかの実施形態では、好中球の浸潤が増加する。
【】
いくつかの実施形態では、炎症促進性サイトカインの濃度が組織中で増加する。いくつかの実施形態では、炎症促進性サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、又はそれらの任意の組み合わせである。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－１である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－６である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－１２である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－１７である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２２である。一実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－２３である。一実施形態において、サイトカインは、ＧＭ－ＣＳＦである。一実施形態において、サイトカインは、ＴＮＦ－αである。一実施形態において、サイトカインは、ＩＦＮ－γである。
【】
いくつかの実施形態では、抗原提示細胞による罹患細胞を起源とするか又はそれに由来する抗原の提示が組織中で増加する。いくつかの実施形態では、罹患細胞の貪食作用が組織中で増加する。いくつかの実施形態では、細胞媒介性細胞傷害性によって誘導される罹患細胞のアポトーシスが組織中で増加する。いくつかの実施形態では、抗体依存性細胞傷害性によって誘導される罹患細胞のアポトーシスが組織中で増加する。いくつかの実施形態では、罹患細胞集団は、組織中で減少する。いくつかの実施形態では、罹患細胞集団は、組織中で約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約１０～２０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約２０～３０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約３０～４０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約４０～５０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約５０～６０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約６０～７０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約７０～８０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約８０～９０％減少する。別の実施形態では、罹患細胞集団は、約９０～９９％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約１０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約２０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約３０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約４０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約４５％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約５０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約５５％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約６０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約６５％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約７０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約７５％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約８０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約８５％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約９０％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約９５％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約９９％減少する。一実施形態では、罹患細胞集団は、約１００％減少する。
【】
使用方法
ある特定の実施形態によれば、記載される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又は単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、保存又は使用のための緩衝組成物中に提供され得る。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又は単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。記載される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又は単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質の保存に好適な緩衝液は、薬学的使用に許容されながら、融合タンパク質の安定性を維持するのに役立つであろう。いくつかの実施形態では、組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
一態様では、本明細書に提供されるのは、疾患を治療する方法である。
【】
また本明細書に提供されるのは、療法において使用するための、本明細書に記載の単鎖三量体型ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質及び単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又は単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。そのような療法には、本明細書で定義される治療方法及び治療的使用並びにその全ての実施形態によるものが含まれる。
【】
また本明細書に提供されるのは、疾患又は障害の治療で使用するための、本明細書に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質及び単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又は単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。そのような療法には、本明細書で定義される疾患又は障害の治療方法及びその全ての実施形態によるものが含まれる。
【】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、対象における罹患細胞を排除するための方法であって、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含む有効量のポリペプチドを対象に投与することを含む、方法である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。具体的な実施形態では、対象に投与されるポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、対象に投与されるポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、樹状細胞は、ＣＤ４０ポリペプチドを発現しない。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、ＣＤ４０ポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、がん細胞である。いくつかの実施形態では、罹患細胞は、感染性病原体に感染した細胞である。いくつかの実施形態では、感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、又はそれらの組み合わせである。
【】
また本明細書に提供されるのは、対象における罹患細胞の排除で使用するための本明細書に記載される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。更に本明細書に提供されるのは、対象における罹患細胞の排除で使用するための、本明細書に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。ある特定の実施形態では、罹患細胞は、がん細胞である。他の実施形態では、罹患細胞は、病原体に感染した細胞である。
【】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、がんの治療を必要とする対象におけるがんを治療するための方法であって、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含む有効量のポリペプチドを対象に投与することを含む、方法である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。具体的な実施形態では、対象に投与されるポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、対象に投与されるポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。
【】
また提供されるのは、対象におけるがんを治療する方法であって、対象に、治療有効量の、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を投与することを含む、方法である。いくつかの実施形態では、二量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、本方法は、ホモ二量体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ホモ二量体を投与することを含む。
【】
また提供されるのは、対象におけるがんを治療する方法であって、対象に、治療有効量の、３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体を投与することであって、各々の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質が、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化ドメインと、を含む、方法である。いくつかの実施形態では、三量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、方法は、ホモ三量体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ヘテロ三量体を投与することを含む。
【】
また本明細書に提供されるのは、がんの治療で使用するための本明細書に記載される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドである。そのような治療には、本明細書で定義されるがんを治療する方法及びその全ての実施形態によるものが含まれる。具体的な実施形態では、がんの治療で使用するためのポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、がんの治療で使用するためのポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。
【】
また本明細書に提供されるのは、がんの治療で使用するための本明細書に記載される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。そのような治療には、本明細書で定義されるがんを治療する方法及びその全ての実施形態によるものが含まれる。
【】
また本明細書に提供されるのは、がんの治療で使用するための本明細書に記載される２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体である。そのような治療には、本明細書で定義されるがんを治療する方法及びその全ての実施形態によるものが含まれる。
【】
また本明細書に提供されるのは、がんの治療で使用するための、本明細書に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。そのような治療には、本明細書で定義されるがんを治療する方法及びその全ての実施形態によるものが含まれる。
【】
また本明細書に提供されるのは、がんの治療で使用するための本明細書に記載の３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体である。そのような治療には、本明細書で定義されるがんを治療する方法及びその全ての実施形態によるものが含まれる。
【】
いくつかの実施形態では、がんは、固形がんである。いくつかの実施形態では、がんは、液性がんである。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、中皮腫、進行性固形腫瘍、及びリンパ腫からなる群から選択される。一実施形態では、がんは、黒色腫である。一実施形態では、がんは、中皮腫である。一実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍である。一実施形態では、がんは、リンパ腫である。
【】
いくつかの実施形態では、方法は、医薬的に許容される担体と、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット、及び（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドを含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質と、を含む医薬組成物である。いくつかの実施形態では、組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。いくつかの実施形態では、本方法は、ホモ二量体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ヘテロ二量体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
いくつかの実施形態では、方法は、医薬的に許容される担体と、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット、及び（ｂ）三量体化モチーフを含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質と、を含む医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。いくつかの実施形態では、本方法は、ホモ三量体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ヘテロ三量体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
いくつかの実施形態では、がんを治療する方法は、先天性抗腫瘍免疫応答を増強する。本明細書で使用される「抗腫瘍免疫応答」は、特定の腫瘍標的に対する免疫応答を開始するために動員され、プライミングされ、かつ／又は活性化される個体の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、又は他の抗原提示細胞（例えば、樹状細胞（dendritic cell、ＤＣ））を指す。いくつかの実施形態では、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドによって活性化された抗原提示細胞は、次に、Ｔ細胞などの更なる細胞型を活性化することができる。あるいは、抗腫瘍免疫応答は、腫瘍負荷の軽減を含む。この用語はまた、免疫活性化を増幅し、かつ／又はプライミングされた細胞のリンパ節への遊走を誘導するための、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（granulocyte macrophage colony stimulating factor、ＧＭ－ＣＳＦ）などのサイトカインの動員を包含する。
【】
一実施形態では、疾患は、がんである。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、中皮腫、進行性固形腫瘍、及びリンパ腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、癌は、固形腫瘍癌である。他の実施形態では、がんは、血液がんである。
【】
いくつかの実施形態では、がんは、副腎がん、肛門がん、虫垂がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、結腸直腸がん、食道がん、胆嚢がん、妊娠性絨毛性、頭頸部がん、ホジキンリンパ腫、腸がん、腎臓がん、白血病、肝臓がん、肺がん、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、洞がん、皮膚がん、軟部組織肉腫脊髄がん、胃がん、精巣がん、咽頭がん、甲状腺がん、子宮がん、子宮内膜がん、膣がん、又は外陰部がんである。
【】
いくつかの実施形態では、副腎癌は、副腎皮質性癌腫（ＡＣＣ）、副腎皮質癌、褐色細胞腫、又は神経芽細胞腫である。いくつかの実施形態では、肛門癌は、扁平上皮細胞癌腫、総排泄腔癌腫、腺癌腫、基底細胞癌腫、又は黒色腫である。いくつかの実施形態では、虫垂癌は、神経内分泌腫瘍（ＮＥＴ）、粘液性腺癌腫、杯細胞カルチノイド、腸型腺癌腫、又は印環細胞腺癌腫である。いくつかの実施形態では、胆管癌は、肝外胆管癌、腺癌腫、肝門部胆管癌、肝門部領域胆管癌、遠位胆管癌、又は肝内胆管癌である。いくつかの実施形態では、膀胱癌は、移行細胞癌腫（ＴＣＣ）、乳頭状癌腫、扁平癌腫、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、小細胞癌腫、又は肉腫である。いくつかの実施形態では、骨癌は、原発性骨癌、肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、肉腫、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、骨の巨細胞腫瘍、脊索腫、又は転移性骨癌である。いくつかの実施形態では、脳癌は、星状細胞腫、脳幹神経膠腫、神経膠芽腫、髄膜腫、上衣腫、乏突起膠腫、混合神経膠腫、下垂体癌、下垂体腺腫、頭蓋咽頭腫、胚細胞腫瘍、松果体部腫瘍、髄芽腫、又は原発性ＣＮＳリンパ腫である。いくつかの実施形態では、乳癌は、乳腺癌腫、侵襲性乳癌、非侵襲性乳癌、乳肉腫、化生性癌腫、腺嚢癌腫、葉状腫瘍、血管肉腫、ＨＥＲ２陽性乳癌、トリプルネガティブ乳癌、又は炎症性乳癌である。いくつかの実施形態では、子宮頸癌は、扁平上皮細胞癌腫又は腺癌腫である。いくつかの実施形態では、結腸直腸癌は、結腸直腸腺癌腫、原発性結腸直腸リンパ腫、消化管間質腫瘍、平滑筋肉腫、カルチノイド腫瘍、粘液性腺癌腫、印環細胞腺癌腫、消化管カルチノイド腫瘍、又は黒色腫である。いくつかの実施形態では、食道癌は、腺癌腫又は扁平上皮細胞癌腫である。いくつかの実施形態では、胆嚢癌は、腺癌腫、乳頭状腺癌腫、腺扁平上皮癌腫、扁平上皮細胞癌腫、小細胞癌腫、又は肉腫である。いくつかの実施形態では、妊娠性絨毛性疾患（ＧＴＤ）は、胞状奇胎、妊娠性絨毛性新生物（ＧＴＮ）、絨毛癌腫、胎盤部トロホブラスト腫瘍（ＰＳＴＴ）、又は類上皮性トロホブラスト腫瘍（ＥＴＴ）である。いくつかの実施形態では、頭頸部癌は、喉頭癌、鼻咽頭癌、下咽頭癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、唾液腺癌、口腔癌、中咽頭癌、又は扁桃癌である。いくつかの実施形態では、ホジキンリンパ腫は、古典的ホジキンリンパ腫、結節硬化型、混合細胞型、リンパ球豊富型、リンパ球減少型、又は結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫（ＮＬＰＨＬ）である。いくつかの実施形態では、腸癌は、小腸癌（small intestine cancer）、小腸癌（small bowel cancer）、腺癌腫、肉腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍、又はリンパ腫である。いくつかの実施形態では、腎臓癌は、腎細胞癌（ＲＣＣ）、明細胞ＲＣＣ、乳頭状ＲＣＣ、嫌色素性ＲＣＣ、集合管ＲＣＣ、未分類ＲＣＣ、移行細胞癌、尿路上皮癌、腎盂癌腫、又は腎肉腫である。いくつかの実施形態では、白血病は、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリーセル白血病（ＨＣＬ）、又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。特定の実施形態では、白血病は、ＡＭＬである。いくつかの実施形態では、肝臓癌は、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）、線維層板型ＨＣＣ、胆管細胞癌腫、血管肉腫、又は肝転移である。いくつかの実施形態では、肺癌は、小細胞肺癌、小細胞癌腫、複合型小細胞癌腫、非小細胞肺癌、肺腺癌腫、扁平上皮細胞肺癌、大細胞未分化型癌腫、肺結節、転移性肺癌、腺扁平上皮癌腫、大細胞神経内分泌癌腫、唾液腺型肺癌腫、肺カルチノイド、中皮腫、肺の肉腫様癌腫、又は悪性顆粒細胞肺腫瘍である。いくつかの実施形態では、黒色腫は、表在拡大型黒色腫、結節性黒色腫、末端黒子型黒色腫、悪性黒子由来黒色腫、無色素性黒色腫、線維形成性黒色腫、眼黒色腫、又は転移性黒色腫である。いくつかの実施形態では、中皮腫は、胸膜中皮腫、腹膜中皮腫、心膜中皮腫、又は精巣中皮腫である。いくつかの実施形態では、多発性骨髄腫は、活動型又はくすぶり型の多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、神経内分泌腫瘍は、消化管神経内分泌腫瘍、膵神経内分泌腫瘍、又は肺神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、未分化大細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、前駆Ｔリンパ芽球性白血病／リンパ腫、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（ＡＴＬＬ）、ヘアリーセル白血病、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、結節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、ナチュラルキラー細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アリベール－バザン症候群、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、全身性ＡＬＣＬ、腸症型Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ）、又は肝脾ガンマ／デルタＴ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、口腔癌は、扁平上皮細胞癌腫、疣状癌腫、小唾液腺癌腫、リンパ腫、良性口腔腫瘍、好酸球性肉芽腫、線維腫、顆粒細胞腫瘍、角化棘細胞腫、平滑筋腫、骨軟骨腫、脂肪腫、シュワン細胞腫、神経線維腫、乳頭腫、尖圭コンジローマ、疣贅型黄色腫、化膿性肉芽腫、横紋筋腫、歯原性腫瘍、白板症、紅板症、扁平上皮細胞口唇癌、基底細胞口唇癌、口癌、歯肉癌、又は舌癌である。いくつかの実施形態では、卵巣癌は、卵巣上皮癌、粘液性上皮卵巣癌、子宮内膜上皮卵巣癌、明細胞上皮卵巣癌、未分化型上皮卵巣癌、卵巣低悪性度腫瘍、原発性腹膜癌、卵管癌、胚細胞腫瘍、奇形腫、未分化卵巣胚細胞癌、内胚葉洞腫瘍、性索間質性腫瘍、性索性腺間質腫瘍、卵巣間質腫瘍、顆粒膜細胞腫瘍、顆粒膜卵胞膜腫瘍、セルトリ－ライディッヒ腫瘍、卵巣肉腫、卵巣癌肉腫、卵巣腺肉腫、卵巣平滑筋肉腫、卵巣線維肉腫、クルケンベルグ腫瘍、又は卵巣嚢胞である。いくつかの実施形態では、膵臓癌は、膵外分泌腺癌、膵内分泌腺癌、又は膵腺癌腫、膵島細胞腫瘍、又は神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態では、前立腺癌は、前立腺腺癌腫、前立腺肉腫、移行細胞癌腫、小細胞癌腫、又は神経内分泌腫瘍である。いくつかの実施形態では、洞癌は、扁平上皮細胞癌腫、粘膜細胞癌腫、腺様嚢胞細胞癌腫、腺房細胞癌腫、副鼻腔未分化癌腫、鼻腔癌、副鼻腔癌、上顎洞癌、篩骨洞癌、又は鼻咽頭癌である。いくつかの実施形態では、皮膚癌は、基底細胞癌、扁平上皮癌腫、黒色腫、メルケル細胞癌腫、カポジ肉腫（ＫＳ）、日光角化症、皮膚リンパ腫、又は角化棘細胞腫である。いくつかの実施形態では、軟部組織癌は、血管肉腫、皮膚線維肉腫、上皮性肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、脱分化型脂肪肉腫（ＤＬ）、粘液性／円形細胞脂肪肉腫（ＭＲＣＬ）、高分化型脂肪肉腫（ＷＤＬ）、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫（ＲＭＳ）、又は滑膜肉腫である。いくつかの実施形態では、脊髄癌は、脊髄転移性腫瘍である。いくつかの実施形態では、胃癌は、胃腺癌腫、胃リンパ腫、消化管間質腫瘍、カルチノイド腫瘍、胃カルチノイド腫瘍、Ｉ型ＥＣＬ細胞カルチノイド、ＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイド、又はＩＩＩ型ＥＣＬ細胞カルチノイドである。いくつかの実施形態では、精巣癌は、セミノーマ、非セミノーマ、胚性癌腫、卵黄嚢癌腫、絨毛癌腫、奇形腫、性腺間質腫瘍、ライディッヒ細胞腫瘍、又はセルトリ細胞腫瘍である。いくつかの実施形態では、咽頭癌は、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、肉腫、喉頭癌、咽頭癌、鼻咽頭癌、中咽頭癌、下咽頭癌、喉頭癌、喉頭扁平上皮細胞癌、喉頭腺癌腫、リンパ上皮腫、紡錘細胞癌腫、疣状癌、未分化癌腫、又はリンパ節癌である。いくつかの実施形態では、甲状腺癌は、乳頭状癌腫、濾胞状癌腫、ハースル細胞癌腫、甲状腺髄様癌腫、又は未分化癌腫である。いくつかの実施形態では、子宮癌は、子宮内膜癌、子宮内膜腺癌腫、類子宮内膜癌腫、漿液性腺癌腫、腺扁平上皮癌腫、子宮癌肉腫、子宮肉腫、子宮平滑筋肉腫、子宮内膜間質肉腫、又は未分化肉腫である。いくつかの実施形態では、膣癌は、扁平上皮細胞癌腫、腺癌腫、黒色腫、又は肉腫である。いくつかの実施形態では、外陰部癌は、扁平上皮細胞癌腫又は腺癌腫である。
【】
一態様では、対象は、その治療を必要としている対象である。別の態様では、対象は、ヒトである。
【】
本明細書で使用するとき、「有効量」又は「治療有効量」という用語は、対象に所望の生物学的又は薬理的応答を惹起する活性成分又は構成成分の量を指す。この用語は、疾患、障害、及び／又は状態に罹患しているか、又は罹患しやすい対象に投与された場合に、疾患、障害、及び／又は状態の症状を治療、診断、予防、及び／又はその発症を遅延させるのに十分な量を指す。治療有効量は、典型的には、少なくとも１つの単位用量を含む投与レジメンを介して投与されることが当業者によって理解されよう。
【】
特定の実施形態によれば、治療有効量は、以下の効果のうちの１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、又は５つ以上を達成するのに十分な治療の量を指す：（ｉ）治療される疾患、障害若しくは状態又はそれに関連する症状の重症度を軽減又は改善すること、（ｉｉ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状の期間を短縮すること、（ｉｉｉ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状の進行を抑制すること、（ｉｖ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状の退縮を生じさせること、（ｖ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状の進行又は発症を抑制すること、（ｖｉ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状の再発を抑制すること、（ｖｉｉ）治療される疾患、障害、若しくは状態、又はそれと関連する症状を有する対象の入院を減少させること、（ｖｉｉｉ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状を有する対象の入院期間を短縮させること、（ｉｘ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状を有する対象の生存率を高めること、（ｘｉ）治療される対象の疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状を阻害又は軽減すること、及び／あるいは（ｘｉｉ）別の療法の予防又は治療効果を強化又は改善すること。
【】
治療有効量又は投薬量は、治療される疾患、障害、又は病態、投与手段、標的部位、対象の生理学的状態（例えば、年齢、体重、健康状態を含む）、対象がヒトであるか動物であるか、投与される他の医薬、及び治療が予防的なものであるか治療的なものであるか、などの様々な要因に従って異なり得る。治療投薬量は、安全性及び有効性を最適化するために最適に漸増される。
【】
特定の実施形態によれば、本明細書に記載される組成物は、対象への想定される投与経路に好適であるように、製剤化される。例えば、本明細書に記載される組成物は、静脈内投与、皮下投与、又は筋肉内投与に好適であるように製剤化することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
本明細書で使用するとき、用語「治療する（treat）」、「治療すること（treating）」、及び「治療（treatment）」は全て、がんに関連する少なくとも１つの測定可能な身体的パラメータの改善又は回復を指し、これは対象において必ずしも認識されるとは限らないが、対象において認識可能な場合もある。「治療する」、「治療すること」、及び「治療」という用語はまた、疾患、障害、又は病態を退縮させる、その進行を予防する、又は少なくともその進行を遅らせることを指す可能性もある。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、腫瘍若しくはより好ましくはがんなどの疾患、障害、若しくは病態と関連する１つ以上の症状の緩和、進行若しくは発症の予防、又はその期間の短縮を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態の再発の防止を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態を有する対象の生存率の向上を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、対象における疾患、障害、又は病態の消失を指す。
【】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片は、第２の療法と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、第２の療法は、手術、放射線療法、化学療法、免疫療法、標的療法、ホルモン療法、骨髄移植、冷凍アブレーション、及び高周波アブレーションからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の療法は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
いくつかの実施形態では、第２の療法は、免疫療法である。いくつかの実施形態では、免疫療法は、モノクローナル抗体、チェックポイント阻害剤などの臓器横断的治療（tumor-agnostic treatments）、キメラ抗原受容体（chimeric antigen receptor、ＣＡＲ）Ｔ細胞療法などのＴ細胞療法、又はがんワクチンを包含する。
【】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片は、第２の療法と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、第２の療法は、手術、放射線療法、化学療法、免疫療法、標的療法、ホルモン療法、骨髄移植、冷凍アブレーション、及び高周波アブレーションからなる群から選択される。
【】
いくつかの実施形態では、第２の療法は、免疫療法である。いくつかの実施形態では、免疫療法は、モノクローナル抗体、チェックポイント阻害剤などの臓器横断的治療（tumor-agnostic treatments）、キメラ抗原受容体（chimeric antigen receptor、ＣＡＲ）Ｔ細胞療法などのＴ細胞療法、又はがんワクチンを包含する。
【】
いくつかの実施形態では、本開示による操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、アジュバントとしてワクチンと共投与された場合に、ワクチンに対する免疫応答を効果的に増強する。いくつかの実施形態では、ワクチンは、インフルエンザワクチン、がんワクチン、水痘ワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、及び百日咳（ＤＴａＰ）ワクチン、Ａ型肝炎（ＨｅｐＡ）ワクチン、インフルエンザｂ型（Ｈｉｂ）ワクチン、Ｂ型肝炎（ＨｅｐＢ）ワクチン、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ワクチン、新型コロナワクチン、エボラワクチン、又は麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎ワクチン、及び風疹（ＭＭＲ）ワクチンを含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。いくつかの実施形態では、操作された三量体ＣＤ４０Ｌタンパク質は、ワクチン製剤内に含まれる。いくつかの実施形態では、本開示による操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ＬＰＳと同時投与され、ＬＰＳは、ＣＤ４０発現を刺激する。
【】
別の態様では、本開示による操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ワクチンと共にアジュバントとしてＴＬＲアゴニストと共投与される。いくつかの実施形態では、本開示による操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ワクチンと共にアジュバントとしてＴＬＲ７アゴニストと同時投与され、ＴＬＲ７アゴニストは、ＣＤ４０発現を刺激する。ＴＬＲアゴニスト及びＣＤ４０発現を過剰刺激する方法は、以前に記載されている（Ａｈｏｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．１９９，Ｎｏ．６，ｐｐ．７７５－７８４；Ｂｕｌｌｏｃｋ ｅｔ ａｌ．，２０２１，Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１９，ｐｐ．１４－２２；それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【】
いくつかの実施形態では、細胞中のＣＤ４０を上方制御する方法であって、細胞を操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質と接触させることを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、抗原提示細胞の存在下で免疫応答を活性化する。いくつかの実施形態では、操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ＣＡＲ Ｔ細胞での処置の前に免疫応答を活性化する。
【】
本明細書で使用するとき、対象への２つ以上の療法の投与の文脈における用語「組み合わせで」は、２つ以上の療法の使用を指す。用語「組み合わせで」の使用は、療法を対象に投与する順序について限定しない。例えば、第１の療法（例えば、本明細書に記載される組成物）は、対象に第２の療法を投与する前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間前）に、同時に、又は後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間後）に投与してもよい。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、感染症の治療を必要とする対象における感染症を治療するための方法であって、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含む有効量のポリペプチドを対象に投与することを含む、方法である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。具体的な実施形態では、対象に投与されるポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、対象に投与されるポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、治療は、先天性、体液性又は細胞媒介性抗感染免疫応答を増強する。一実施形態では、治療は、先天性抗感染性免疫応答を増強する。一実施形態では、治療は、体液性抗感染免疫応答を増強する。一実施形態では、治療は、細胞媒介性抗感染免疫応答を増強する。
【】
また本明細書に提供されるのは、感染症の治療で使用するための本明細書に記載される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドである。そのような治療には、本明細書で定義される感染症を治療する方法及びその全ての実施形態によるものが含まれる。具体的な実施形態では、感染症の治療で使用するためのポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、感染症の治療で使用するためのポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。
【】
また本明細書に提供されるのは、感染症の治療で使用するための本明細書に記載される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。そのような治療には、本明細書で定義される感染症を治療するための方法及びその全ての実施形態によるものが含まれる。
【】
また本明細書に提供されるのは、感染症の治療で使用するための本明細書に記載される２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体である。そのような治療には、本明細書で定義される感染症を治療する方法及びその全ての実施形態によるものが含まれる。
【】
また本明細書に提供されるのは、感染症の治療で使用するための、本明細書に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。そのような治療には、本明細書で定義される感染症を治療するための方法及びその全ての実施形態によるものが含まれる。
【】
また本明細書に提供されるのは、感染症の治療で使用するための本明細書に記載の３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体である。そのような治療には、本明細書で定義される感染症を治療する方法及びその全ての実施形態によるものが含まれる。
【】
いくつかの実施形態では、感染症は、ウイルス、細菌、真菌又は寄生虫などの感染性病原体によって引き起こされる。一実施形態では、病原体は、ウイルスである。別の実施形態では、病原体は、細菌である。一実施形態では、病原体は、真菌である。別の実施形態では、病原体は、寄生虫である。いくつかの実施形態では、ポリペプチド又は、対象における感染症を予防するためのワクチン組成物と共投与される。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ワクチン組成物と同時的又は逐次的に共投与される。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、ワクチンに対する対象の応答を改善するための方法であって、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含む有効量のポリペプチドを対象に投与することを含む、方法である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。具体的な実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、ワクチンと同時に又は逐次的に対象に投与される。具体的な実施形態では、対象に投与されるポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、対象に投与されるポリペプチドは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質である。いくつかの治療は、ワクチンに対する先天性、体液性、又は細胞媒介性免疫応答を増強する。一実施形態では、治療は、ワクチンに対する先天性免疫応答を増強する。一実施形態では、治療は、ワクチンに対する体液性免疫応答を増強する。一実施形態では、治療は、ワクチンに対する細胞媒介性免疫応答を増強する。
【】
いくつかの実施形態では、ワクチンは、ウイルス、細菌、真菌又は寄生虫などの感染性病原体に対するものである。一実施形態では、病原体は、ウイルスである。別の実施形態では、病原体は、細菌である。一実施形態では、病原体は、真菌である。別の実施形態では、病原体は、寄生虫である。別の実施形態では、ワクチンは、がんに対するものである。別の実施形態では、ワクチンは、腫瘍に対するものである。別の実施形態では、ワクチンは、アレルゲンに対するものである。他のタイプのワクチンも企図される。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチド又は、対象におけるワクチンに対する免疫応答を増強するためのワクチン組成物と共投与される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ワクチンのアジュバントとして機能する。
【】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、それを必要とする対象に投与される。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。更に他の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、経口送達、口腔送達、経鼻送達、又は吸入送達を介して対象に投与される。
【】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、それを必要とする対象に投与される。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。更に他の実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、経口送達、口腔送達、経鼻送達、又は吸入送達を介して対象に投与される。
【】
更に他の実施形態では、本明細書で提供されるのは、対象における疾患又は障害を治療するための、本明細書で提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の使用である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。他の実施形態では、本明細書で提供されるのは、対象における疾患又は障害を治療するための、本明細書で提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質の使用である。いくつかの実施形態では、治療用分子は、経口送達を介して対象に投与される。いくつかの実施形態では、治療用分子は、口腔送達を介して対象に投与される。いくつかの実施形態では、治療用分子は、経鼻送達を介して対象に投与される。いくつかの実施形態では、治療用分子は、吸入送達を介して対象に投与される。
【】
また提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を提供するための手段を含むシステムである。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
また提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を提供するための手段を含むシステムである。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を提供するための手段を含むシステムである。いくつかの実施形態では、二量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体を提供するための手段を含むシステムである。いくつかの実施形態では、三量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供するための手段を含むシステムである。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供するための手段を含むシステムである。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
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一態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを提供するための手段を含むシステムである。いくつかの実施形態では、ベクターは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
一態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを提供するための手段を含むシステムである。いくつかの実施形態では、ベクターは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
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別の態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む宿主細胞を含むシステムである。
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別の態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む宿主細胞を含むシステムである。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、医薬的に許容される担体と、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット、及び（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドを含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質と、を含む医薬組成物を提供するための手段を提供するシステムである。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、医薬的に許容される担体と、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット、と（ｂ）三量体化モチーフ、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質と、を含む医薬組成物を提供するための手段を提供するシステムである。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
一態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含むキットを提供するためのシステムである。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
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一態様では、本明細書に提供されるのは、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含むキットを提供するためのシステムである。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
【】
また提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸分子、並びに本明細書に記載される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の成分をコードする核酸分子である。また、ベクターと、そのためのパッケージと、を含む、キットも提供される。また、提供されるのは、本明細書に記載される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸分子を含有するベクターを含む宿主細胞である。いくつかの実施形態では、ベクターは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない。
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また提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質をコードする核酸分子と、本明細書に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質の成分をコードする核酸分子と、である。また、ベクターと、そのためのパッケージと、を含む、キットも提供される。また提供されるのは、本明細書に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質をコードする核酸分子を含有するベクターを含む宿主細胞である。
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また提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を作製するためのプロセスである。
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また提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を作製するためのプロセスである。
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一態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を産生するための方法であって、（ａ）宿主細胞に、（ｉ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｉｉ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを導入することと、（ｂ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を産生する条件下で宿主細胞を培養することと、（ｃ）細胞又は培養物から単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を回収することと、を含む、方法。
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一態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を産生するための方法であって、（ａ）宿主細胞に、（ｉ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｉｉ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを導入することと、（ｂ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を産生する条件下で宿主細胞を培養することと、（ｃ）細胞又は培養物から単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を回収することと、を含む、方法。
【】
別の態様では、本明細書に提供されるのは、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を産生する方法であって、（ａ）宿主細胞に、（ｉ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｉｉ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを導入することと、（ｂ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を産生する条件下で宿主細胞を培養することと、（ｃ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を細胞又は培養物から回収することと、（ｄ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を、二量体化を好む条件下で組み合わせることと、を含む、方法。
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別の態様では、本明細書に提供されるのは、３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体を産生する方法であって、（ａ）宿主細胞に、（ｉ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｉｉ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを導入することと、（ｂ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を産生する条件下で宿主細胞を培養することと、（ｃ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を細胞又は培養物から回収することと、（ｄ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を、三量体化を好む条件下で組み合わせることと、を含む、方法。
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更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片の医薬組成物を産生する方法であって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片の医薬組成物を産生する方法であって、単鎖三量体Ｆｃ三量体化融合タンパク質又はその断片を医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を含むワクチン組成物を産生する方法であって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片をワクチン抗原と組み合わせて、ワクチン組成物を得ることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
更に別の態様では、本明細書に提供されるのは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を含むワクチン組成物を産生する方法であって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片をワクチン抗原と組み合わせて、ワクチン組成物を得ることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片は、ヘテロ二量体化を促進する相補性ＣＨ３ドメインを有するＩｇＧ様分子を含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片は、組換えＩｇＧ様二重標的化分子を含み、分子の２つの側面は各々、少なくとも２つの異なる抗体のＦａｂ断片又はＦａｂ断片の一部を含有する。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片は、ＩｇＧ融合分子を含み、完全長ＩｇＧ抗体は、余分のＦａｂ断片又はＦａｂ断片の一部に融合されている。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片は、Ｆｃ融合分子を含み、単鎖Ｆｖ分子又は安定化されたダイアボディが、重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域、又はその一部に融合されている。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片は、異なるＦａｂ断片が一緒に融合されているＦａｂ融合分子を含む。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片は、ｓｃＦｖ及びダイアボディベース及び重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）を含み、異なる単鎖Ｆｖ分子又は異なるダイアボディ又は異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）が互いに融合されているか、又は別のタンパク質若しくは担体分子に融合されている。
【】
いくつかの実施形態では、相補性ＣＨ３ドメイン分子を有するＩｇＧ様分子には、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的に調整されたもの（Ａｍｇｅｎ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ストランドを交換し操作したドメインボディ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、Ａｚｙｍｅｔｒｉｃ（商標）プラットフォーム（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）、並びにＤｕｏＢｏｄｙ（Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ）が挙げられる。
【】
いくつかの実施形態では、組換えＩｇＧ様二重標的化分子としては、Ｄｕａｌ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、Ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｄ ｍＡｂｓ（Ｋａｒｍａｎｏｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ）、及びＣｏｖＸ－ｂｏｄｙ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられる。
【】
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ融合分子としては、Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ（Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ、ＤＶＤ）－Ｉｇ（Ａｂｂｏｔｔ）、ＩｇＧ－ｌｉｋｅ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（ＩｎｎＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、並びにＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。
【】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合分子としては、ＳｃＦｖ／Ｆｃ融合体（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、二重親和性再標的化技術（Ｆｃ－ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、及び二重（ＳｃＦｖ）２－Ｆａｂ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ－－Ｃｈｉｎａ）が挙げられ得る。
【】
いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片は、ヘテロ二量体化を促進する三量体化モチーフを含む。
【】
本明細書で使用される「ホモ二量体化」は、２つの同一の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ単量体ペプチド間の相互作用を指す。本明細書で使用される「ホモ二量体」は、同一の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を有する分子を指す。
【】
本明細書で使用される「ヘテロ二量体化」は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ単量体ペプチドと非同一Ｆｃ融合ペプチドとの間の相互作用を指す。本明細書で使用される、「ヘテロ二量体」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を指す。
【】
「ノブインホール」ストラテジ（例えば、国際公開第２００６／０２８９３６号を参照されたい）を使用して、完全長の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を生成することができる。簡潔には、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸を、ヘテロ二量体化を促進するようにＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置で変異させることができる。小さい側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入され、大きい側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホール（hole）」を有する重鎖と「ノブ（knob）」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換の対は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変された位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変された位置として表現）。
【】
その他の戦略、例えば、１つのＣＨ３表面における正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面における負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を使用する重鎖ヘテロ二量体形成の促進が、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、同第２００９／０１８２１２７号、同第２０１０／０２８６３７号、又は同第２０１１／０１２３５３２号に記載されるように使用され得る。その他の戦略では、ヘテロ二量体形成は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は米国特許出願公開第２０１３／０１９５８４９号に記載されるように、下記置換：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５ＡＹ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ Ｋ４０９Ｆ Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）により促進され得る。
【】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、約１ｐＭ未満、約０．９ｐＭ未満、約０．８ｐＭ未満、約０．７ｐＭ未満、約０．６ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．４ｐＭ未満、約０．３００ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１９ｐＭ未満、約０．１８ｐＭ未満、約０．１７ｐＭ未満、約０．１６ｐＭ未満、約０．１５ｐＭ未満、約０．１４ｐＭ未満、約０．１３ｐＭ未満、約０．１２ｐＭ未満、約０．１１ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、約０．０９ｐＭ未満、約０．０８ｐＭ未満、約０．０７ｐＭ未満、約０．０６ｐＭ未満、約０．０５ｐＭ未満、約０．０４ｐＭ未満、約０．０３ｐＭ未満、約０．０２ｐＭ未満、又は約０．０１ｐＭ未満のＥＣ５０でＣＤ４０を活性化する。ある特定の実施形態では、ＥＣ５０は、約１０００ｐＭ未満、約９００ｐＭ未満、約８００ｐＭ未満、約７００ｐＭ未満、約６００ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１９０ｐＭ未満、約１８０ｐＭ未満、約１７０ｐＭ未満、約１６０ｐＭ未満、約１５０ｐＭ未満、約１４０ｐＭ未満、約１３０ｐＭ未満、約１２０ｐＭ未満、約１１０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、又は約１０ｐＭ未満である。
【】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、約１ｐＭ未満、約０．９ｐＭ未満、約０．８ｐＭ未満、約０．７ｐＭ未満、約０．６ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．４ｐＭ未満、約０．３００ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１９ｐＭ未満、約０．１８ｐＭ未満、約０．１７ｐＭ未満、約０．１６ｐＭ未満、約０．１５ｐＭ未満、約０．１４ｐＭ未満、約０．１３ｐＭ未満、約０．１２ｐＭ未満、約０．１１ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満、約０．０９ｐＭ未満、約０．０８ｐＭ未満、約０．０７ｐＭ未満、約０．０６ｐＭ未満、約０．０５ｐＭ未満、約０．０４ｐＭ未満、約０．０３ｐＭ未満、約０．０２ｐＭ未満、又は約０．０１ｐＭ未満のＥＣ５０でＣＤ４０を活性化する。ある特定の実施形態では、ＥＣ５０は、約１０００ｐＭ未満、約９００ｐＭ未満、約８００ｐＭ未満、約７００ｐＭ未満、約６００ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１９０ｐＭ未満、約１８０ｐＭ未満、約１７０ｐＭ未満、約１６０ｐＭ未満、約１５０ｐＭ未満、約１４０ｐＭ未満、約１３０ｐＭ未満、約１２０ｐＭ未満、約１１０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、又は約１０ｐＭ未満である。
【】
ある実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、約０．０００００５ｎｇ／ｍＬ、約０．００００５ｎｇ／ｍＬ、約０．０００５、約０．００５ｎｇ／ｍＬ、約０．０１ｎｇ／ｍＬ、約０．０２ｎｇ／ｍＬ、約０．０３ｎｇ／ｍＬ、約０．０４ｎｇ／ｍＬ、約０．０５ｎｇ／ｍＬ、約０．０６ｎｇ／ｍＬ、約０．０７ｎｇ／ｍＬ、約０．０８ｎｇ／ｍＬ、約０．０９ｎｇ／ｍＬ、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１．０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ約、約３０ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、又は約１０００ｎｇ／ｍＬである。
【】
ある実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質の濃度は、約０．０００００５ｎｇ／ｍＬ、約０．００００５ｎｇ／ｍＬ、約０．０００５、約０．００５ｎｇ／ｍＬ、約０．０１ｎｇ／ｍＬ、約０．０２ｎｇ／ｍＬ、約０．０３ｎｇ／ｍＬ、約０．０４ｎｇ／ｍＬ、約０．０５ｎｇ／ｍＬ、約０．０６ｎｇ／ｍＬ、約０．０７ｎｇ／ｍＬ、約０．０８ｎｇ／ｍＬ、約０．０９ｎｇ／ｍＬ、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１．０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ約、約３０ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、又は約１０００ｎｇ／ｍＬである。
【】
いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の１つ以上の成分は、ヒト成分である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の１つ以上の成分は、ヒト化成分である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質の１つ以上の成分は、ヒト成分である。いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質の１つ以上の成分は、ヒト化成分である。
【】
いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ単量体ペプチドは、ＩｇＧ抗体に由来する。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ２抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ３抗体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ４抗体である。
【】
いくつかの実施形態では、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質の三量体化モチーフは、ウイルスタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、Ｔ４ファージタンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチンタンパク質に由来する。
【】
別の一般的な態様では、本発明は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含むベクターに関する。別の態様では、本発明は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含むベクターに関する。本開示を考慮して、プラスミド、コスミド、ファージベクター、又はウイルスベクターなど、当業者に既知である任意のベクターを使用することができる。いくつかの実施形態では、ベクターは、プラスミドなどの組換え発現ベクターである。ベクターは、例えば、プロモータ、リボソーム結合エレメント、ターミネータ、エンハンサー、選択マーカー、及び複製起点といった、発現ベクターの従来の機能を確立するための任意のエレメントを含むことができる。プロモータは、構成型、誘導型、又は抑制型のプロモータであり得る。細胞に核酸を送達することができる多数の発現ベクターが当該技術分野において公知であり、細胞内で抗体又はその抗原結合断片を産生するために、本明細書で使用することができる。従来のクローニング技術又は人工遺伝子合成を使用して、本明細書に提供される実施形態による組換え発現ベクターを生成することができる。このような技法は、本開示の観点から、当業者に周知である。
【】
別の一般的な態様では、本発明は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む宿主細胞に関する。別の一般的な態様では、本発明は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞に関する。本開示の観点から、当業者に既知である任意の宿主細胞を、本明細書に提供される抗体又はその抗原結合断片の組換え発現に使用することができる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＧ１若しくはＢＬ２１細胞（例えば、Ｆｃ単量体ペプチドの発現の場合）、ＣＨＯ－ＤＧ４４若しくはＣＨＯ－Ｋ１細胞、又はＨＥＫ２９３細胞（例えば、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の発現の場合）である。特定の実施形態によれば、組換え発現ベクターは、組換え核酸が効果的に発現するように宿主細胞ゲノムに安定的に組み込まれる、化学的トランスフェクション、熱ショック、又はエレクトロポレーションなどの従来の方法によって宿主細胞に形質転換される。
【】
別の一般的な態様では、本発明は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む宿主細胞に関する。別の一般的な態様では、本発明は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞に関する。本開示の観点から、当業者に既知である任意の宿主細胞を、本明細書に提供される抗体又はその抗原結合断片の組換え発現に使用することができる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、大腸菌ＴＧ１又はＢＬ２１細胞、ＣＨＯ－ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、又はＨＥＫ２９３細胞である。特定の実施形態によれば、組換え発現ベクターは、組換え核酸が効果的に発現するように宿主細胞ゲノムに安定的に組み込まれる、化学的トランスフェクション、熱ショック、又はエレクトロポレーションなどの従来の方法によって宿主細胞に形質転換される。
【】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又は単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化タンパク質と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又は単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を送達するための手段と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
また提供されるのは、医薬組成物を製造する方法であって、本明細書に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法である。本明細書で使用される「医薬組成物」という用語は、医薬的に許容される担体と一緒に本明細書で提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む製造物を意味する。したがって、医薬組成物は、本明細書に提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含むことができ、それらを含む組成物はまた、本明細書において言及される治療用途のための医薬の製造において有用である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
また提供されるのは、医薬組成物を製造する方法であって、本明細書に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法である。本明細書で使用される「医薬組成物」という用語は、医薬的に許容される担体と一緒に本明細書で提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む製造物を意味する。したがって、医薬組成物は、本明細書に提供される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含むことができ、それらを含む組成物はまた、本明細書において言及される治療用途のための医薬の製造において有用である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
本明細書で使用される場合、「キャリア（carrier）」という用語は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、ミクロスフェア、リポソーム封入体、又は医薬製剤で使用するための当該技術分野において周知であるその他の材料を指す。担体、賦形剤又は希釈剤の特性は、特定の用途の投与経路によって決まる点が、理解されよう。本明細書で使用するとき、用語「医薬的に許容される担体」は、本発明による組成物の効果にも本明細書で提供される組成物の生物活性にも干渉しない無毒性材料を指す。特定の実施形態によれば、本開示を考慮して、融合タンパク質を活性成分として有する医薬組成物での使用に好適ないずれの医薬的に許容される担体も、本明細書で使用され得る。
【】
医薬的に許容される担体を有する医薬活性成分の製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（例えば２１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）及びそれ以降の任意の改訂版）にあるように、当該技術分野において既知である。追加成分の非限定的な例としては、緩衝剤、希釈剤、溶媒、張度調節剤、防腐剤、安定剤、及びキレート剤が挙げられる。１つ又は２つ以上の医薬的に許容される担体が、本明細書に提供される医薬組成物の製剤化において使用され得る。
【】
本発明の一実施形態では、医薬組成物は液体製剤である。液体製剤の好ましい例は、水性製剤、すなわち、水を含む製剤である。液体製剤は、溶液、懸濁液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、ゲルなどを含んでいてもよい。水性製剤は、典型的には、少なくとも５０％ｗ／ｗの水、又は少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は少なくとも９５％ｗ／ｗの水を含む。
【】
一実施形態では、医薬組成物は、例えば、注射デバイス（例えば、シリンジ又は注入ポンプ）を介して注射することができる注射液として製剤化され得る。注射は、例えば、皮下に、筋肉内に、腹腔内に、硝子体内に、又は静脈内に送達され得る。
【】
別の実施形態では、医薬組成物は、そのまま使用することができるか、又は医師若しくは患者が使用前に溶媒及び／若しくは希釈剤を加える固体製剤、例えば、凍結乾燥又は噴霧乾燥組成物である。固体剤形としては、圧縮錠及び／又はコーティング錠などの錠剤、並びにカプセル（例えば、硬又は軟ゼラチンカプセル）を挙げることができる。医薬組成物はまた、例えば、サッシェ、糖衣錠、粉末、顆粒、トローチ、又は再構成用の粉末の形態であってもよい。
【】
剤形は即時放出であってもよく、その場合、水溶性若しくは水分散性担体を含んでいてもよく、又は剤形は遅延放出、持続放出、若しくは調節放出であってもよく、その場合、胃腸管若しくは皮下における剤形の溶解速度を制御する非水溶性ポリマーを含んでいてもよい。
【】
他の実施形態では、医薬組成物は、鼻腔内に、口腔内に、又は舌下に送達され得る。
【】
水性製剤のｐＨは、ｐＨ３～ｐＨ１０であり得る。本明細書で提供される一実施形態では、製剤のｐＨは、約７．０～約９．５である。本明細書で提供される別の実施形態では、製剤のｐＨは、約３．０～約７．０である。
【】
本明細書で提供される別の実施形態では、医薬組成物は、緩衝剤を含む。緩衝剤の非限定的な例としては、アルギニン、アスパラギン酸、ビシン、シトレート、リン酸一水素二ナトリウム、フマル酸、グリシン、グリシルグリシン、ヒスチジン、リジン、マレイン酸、リンゴ酸、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、コハク酸塩、酒石酸、トリシン、及びトリス（ヒドロキシメチル）－アミノメタン、及びこれらの混合物が挙げられる。緩衝剤は、個々に又は全体として、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これら特定の緩衝剤の各１つを含む医薬組成物は、本明細書で提供される代替実施形態を構成する。
【】
本明細書で提供される別の実施形態では、医薬組成物は、防腐剤を含む。防腐剤の非限定的な例としては、塩化ベンゼトニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、ブロノポール、ブチル４－ヒドロキシベンゾエート、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロヘキシジン、クロルフェネシン、ｏ－クレゾール、ｍ－クレゾール、ｐ－クレゾール、エチル４－ヒドロキシベンゾエート、イミド尿素、メチル４－ヒドロキシベンゾエート、フェノール、２－フェノキシエタノール、２－フェニルエタノール、プロピル４－ヒドロキシベンゾエート、デヒドロ酢酸ナトリウム、チオメロサール、及びこれらの混合物が挙げられる。防腐剤は、個々に又は全体として、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これら特定の防腐剤の各１つを含む医薬組成物は、本明細書で提供される代替実施形態を構成する。
【】
本明細書で提供される別の実施形態では、医薬組成物は、等張剤を含む。等張剤の非限定的な例としては、塩（塩化ナトリウムなど）、アミノ酸（グリシン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、及びスレオニンなど）、アルジトール（グリセロール、１，２－プロパンジオールプロピレングリコールなど）、１，３－プロパンジオール、及び１，３－ブタンジオール）、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）、並びにこれらの混合物が挙げられる。等張剤の別の例としては、糖が挙げられる。糖の非限定的な例は、例えば、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、アルファ及びベータ－ＨＰＣＤ、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、並びにカルボキシメチルセルロースナトリウムを含む、単糖類、二糖類、若しくは多糖類、又は水溶性グルカンを含み得る。等張剤の別の例は、糖アルコールであり、用語「糖アルコール」は、少なくとも１つの－ＯＨ基を有するＣ（４～８）炭化水素として定義される。糖アルコールの非限定的な例としては、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ズルシトール、キシリトール、及びアラビトールが挙げられる。等張剤は、個々に又は全体として、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これら特定の等張剤の各１つを含む医薬組成物は、本明細書で提供される代替を構成する。
【】
本明細書で提供される別の実施形態では、医薬組成物は、キレート剤を含む。キレート剤の非限定的な例としては、クエン酸、アスパラギン酸、エチレンジアミン四酢酸（ethylenediaminetetraacetic acid、ＥＤＴＡ）の塩、及びこれらの混合物が挙げられる。キレート剤は、個々に又は全体として、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これらの具体的なキレート剤の各１つを含む医薬組成物は、本発明の代替実施形態を構成する。
【】
本明細書で提供される別の実施形態では、医薬組成物は、安定剤を含む。安定剤の非限定的な例としては、１つ若しくは２つ以上の凝集阻害剤、１つ若しくは２つ以上の酸化阻害剤、１つ若しくは２つ以上の界面活性剤、及び／又は、１つ若しくは２つ以上のプロテアーゼ阻害剤が挙げられる。
【】
本明細書で提供される別の実施形態では、医薬組成物は、安定剤を含み、安定剤は、カルボキシ／ヒドロキシセルロース及びその誘導体（ＨＰＣ、ＨＰＣ－ＳＬ、ＨＰＣ－Ｌ、及びＨＰＭＣなど）、シクロデキストリン、２－メチルチオエタノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ３３５０など）、ポリビニルアルコール（polyvinyl alcohol、ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、塩（塩化ナトリウムなど）、硫黄含有物質（例えばモノチオグリセロール）、又はチオグリコール酸である。安定剤は、個々に又は全体として、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これら特定の安定剤の各１つを含む医薬組成物は、本明細書で提供される代替実施形態を構成する。
【】
本明細書で提供される更なる実施形態では、医薬組成物は、１つ若しくは２つ以上の界面活性剤、好ましくは１つの界面活性剤、少なくとも１つの界面活性剤、又は２つの異なる界面活性剤を含む。用語「界面活性剤」は、水溶性（親水性）部及び脂溶性（親油性）部から構成される任意の分子又はイオンを指す。界面活性剤は、例えば、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、双性界面活性剤、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。界面活性剤は、個々に又は全体として、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これら特定の界面活性剤の各１つを含む医薬組成物は、本明細書で提供される代替実施形態を構成する。
【】
本明細書で提供される更なる実施形態では、医薬組成物は、１つ又は２つ以上のプロテアーゼ阻害剤、例えば、ＥＤＴＡ、及び／又はベンズアミジン塩酸（ＨＣｌ）などを含む。プロテアーゼ阻害剤は、個々に又は全体として、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し得る。これら特定のプロテアーゼ阻害剤の各１つを含む医薬組成物は、本明細書で提供される代替実施形態を構成する。
【】
別の一般的な態様では、本発明は、本明細書に開示される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を含む医薬組成物を産生する方法であって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を含むを医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法に関する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
別の一般的な態様では、本発明は、本明細書に開示される単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を含む医薬組成物を産生する方法であって、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法に関する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない。
【】
５．実施形態
本発明は、以下の非限定的な実施形態を提供する。
【】
１つのセットの実施形態（実施形態セットＡ）では、以下が提供される。
Ａ１． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質であって、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ２． Ｆｃ単量体ペプチドが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ａ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ３． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ａ２に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ４． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ａ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ５． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＮ末端に連結されている、実施形態Ａ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１～１２、４６、若しくは４７から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む、実施形態Ａ５に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ７． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ａ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ８． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１３～１９から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む、実施形態Ａ７に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ９． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１６、又はその断片を含む、実施形態Ａ８に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ１０． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２、若しくは４５から選択される配列のうちのいずれか１つ、又はその断片を含む、実施形態Ａ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ１１． Ｆｃ単量体ペプチドが、ヒトＦｃ配列を含む、実施形態Ａ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ１２． ヒトＦｃ配列が、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥから選択される配列を含む、実施形態Ａ１１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ１３． ヒトＦｃ配列が、ＩｇＧ配列を含む、実施形態Ａ１２に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ１４． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される、実施形態Ａ１３に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ１５． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１配列を含む、実施形態Ａ１４に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ１６． ＩｇＧ１配列が、配列番号３０若しくは３１、又はその断片を含む、実施形態Ａ１５に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ１７． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ２配列を含む、実施形態Ａ１４に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ１８． ＩｇＧ２配列が、配列番号２９、又はその断片を含む、実施形態Ａ１７に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ１９． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）を含む群から選択される、実施形態Ａ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ２０． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ａ２に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ２１． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較してＣＤ４０ポリペプチドの活性化を増強する、実施形態Ａ１～Ａ２０のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ２２． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ａ２１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ２３． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を含む、実施形態Ａ２２に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ２４． ＣＤ４０Ｌポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を含む、実施形態Ａ２３に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ２５． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して抗腫瘍活性を増強する、実施形態Ａ１～Ａ２４のいずれかに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ２６． 実施形態Ａ１～Ａ２５のいずれか１つに記載の２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む、二量体。
Ａ２７． 二量体が、ホモ二量体である、実施形態Ａ２６に記載の二量体。
Ａ２８． 二量体が、Ｆｃ単量体ペプチドの会合によって形成される、実施形態Ａ２６に記載の二量体。
Ａ２９． 実施形態Ａ１～Ａ２５のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
Ａ３０． 実施形態Ａ２９に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
Ａ３１． 実施形態Ａ３０に記載のベクターを含む宿主細胞。
Ａ３２． 実施形態Ａ２９に記載のポリヌクレオチドを含む、宿主細胞。
Ａ３３． 医薬的に許容される担体と、実施形態Ａ１～Ａ２５のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質とを含む、医薬組成物。
Ａ３４． 薬学的組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ａ３３に記載の医薬組成物。
Ａ３５． 実施形態Ａ１～Ａ２５のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む、キット。
Ａ３６． 療法において使用するための、実施形態Ａ１～Ａ２５のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質、又は実施形態Ａ２６～Ａ２８のいずれか１つに記載の二量体。
Ａ３７． 疾患又は障害の治療で使用するための、実施形態Ａ１～Ａ２５のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質、又は実施形態Ａ２６～Ａ２８のいずれか１つに記載の二量体。
Ａ３８． 対象における罹患細胞の排除で使用するための、実施形態Ａ１～Ａ２５のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質、又は実施形態Ａ２６～Ｓ２８のいずれか１つに記載の二量体。
Ａ３９． 罹患細胞が、がん細胞又は病原体に感染した細胞である、実施形態Ａ３８に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ４０． がんの治療で使用するための、実施形態Ａ１～Ａ２５のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質、又は実施形態Ｓ２６～Ｓ２８のいずれか１つに記載の二量体。
Ａ４１． がんが、固形がん又は液性がんである、実施形態Ａ４０に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ４２． がんは、黒色腫、中皮腫、進行性固形腫瘍、及びリンパ腫からなる群から選択される、実施形態Ａ４０に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ４３． 感染症の治療で使用するための、実施形態Ａ１～Ａ２５に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質、又は実施形態Ａ２６ Ａ２８のいずれか１つに記載の二量体。
Ａ４４． 感染性病原体が、ウイルス、細菌、真菌又は寄生虫である、実施形態Ａ４３に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ４５． ワクチン組成物の投与において使用するための、実施形態Ａ１～Ａ２５に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質、又は実施形態Ａ２６～Ａ２８のいずれか１つに記載の二量体。
Ａ４６． ワクチン組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ａ４５に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ４７． ワクチンは、がん、感染性病原体、又はアレルゲンに対するワクチンである、実施形態Ａ４５又はＡ４６に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ａ４８． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ａ１～Ａ４７のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
【】
別のセットの実施形態（実施形態セットＢ）では、以下が提供される：
Ｂ１． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質であって、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）サブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ２． 三量体化モチーフが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ｂ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ３． ペプチドテザーは、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｂ２に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ４． ＣＤ４０リガンドサブユニットは、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｂ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ５． ＣＤ４０Ｌ三量体は、三量体化モチーフのＮ末端に連結されている、実施形態Ｂ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ６． ＣＤ４０Ｌ三量体は、三量体化モチーフのＣ末端に連結されている、実施形態Ｂ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ７． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号４３、４４、４６、及び４７、並びにそれらの断片からなる群から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｂ６に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ８． ＣＤ４０リガンドサブユニットは、配列番号２０～２２、４５からなる群から選択される配列のうちのいずれか１つ、又はその断片を含む、実施形態Ｂ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ９． 三量体化モチーフは、ウイルス三量体化モチーフを含む、実施形態Ｂ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ１０． ウイルス三量体化モチーフは、Ｔ４ファージ三量体化モチーフである、実施形態Ｂ９に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ１１． Ｔ４ファージ三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフである、実施形態Ｂ１０に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ１２． Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１、又はその断片を含む、実施形態Ｂ１１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ１３． ペプチドリンカーは、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）を含む群から選択される、実施形態Ｂ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ１４． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｂ２に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ｂ１５． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、シグナルペプチドを含む、実施形態Ｂ１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ１６． ＣＤ４０Ｌ三量体が、シグナルペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｂ１５に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ１７． シグナルペプチドは、配列番号４２を含む、実施形態Ｂ１６に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ１８． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較してＣＤ４０ポリペプチドの活性化を増強する、実施形態Ｂ１～Ｂ１７のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ１９． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球、及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ａ１８に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ２０． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を含む、実施形態Ｂ１９に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ２１． ＣＤ４０Ｌポリペプチドの活性化は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を含む、実施形態Ｂ２０に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ２２． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して抗腫瘍活性を増強する、実施形態Ｂ１～Ｂ２１のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ２３． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｂ１～Ｂ２２のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ２４． 実施形態Ｂ１～Ｂ２３のいずれか１つに記載の３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む、三量体。
Ｂ２５． 三量体は、ホモ三量体である、実施形態Ｂ２４に記載の三量体。
Ｂ２６． 三量体は、三量体化モチーフの会合によって形成される、実施形態Ｂ２５に記載の三量体。
Ｂ２７． 三量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスにコンジュゲートもしていない、実施形態Ｂ２４～Ｂ２６のいずれか１つに記載の三量体。
Ｂ２８． 実施形態Ｂ１～Ｂ２３のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
Ｂ２９． 実施形態Ｂ２８に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
Ｂ３０． 実施形態Ｂ２９に記載のベクターを含む宿主細胞。
Ｂ３１． 実施形態Ｂ２８に記載のポリヌクレオチドを含む、宿主細胞。
Ｂ３２． 医薬的に許容される担体と、実施形態Ｂ１～Ｂ２３のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質と、を含む医薬組成物。
Ｂ３３． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｂ３１に記載の医薬組成物。
Ｂ３４． 実施形態Ｂ１～Ｂ２３のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む、キット。
Ｂ３５． 療法において使用するための、実施形態Ｂ１～Ｂ２３のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質、又は実施形態Ｂ２４～Ｂ２７のいずれか１つに記載の三量体。
Ｂ３６． 疾患又は障害の治療で使用するための、実施形態Ｂ１～Ｂ２３のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質、又は実施形態Ｂ２４～Ｂ２７のいずれか１つに記載の三量体。
Ｂ３７． 対象における罹患細胞の排除で使用するための、実施形態Ｂ１～Ｂ２３のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質、又は実施形態Ｂ２４～Ｂ２７のいずれか１つに記載の三量体。
Ｂ３８． 罹患細胞は、がん細胞又は病原体に感染した細胞である、実施形態Ｂ３７に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ３９． がんの治療で使用するための、実施形態Ｂ１～Ｂ２３のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質、又は実施形態Ｂ２４～Ｂ２７のいずれか１つに記載の三量体。
Ｂ４０． がんは、固形がん又は液性がんである、実施形態Ｂ３９に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ４１． がんは、黒色腫、中皮腫、進行性固形腫瘍、及びリンパ腫からなる群から選択される、実施形態Ｂ３９に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ４２． 感染症の治療で使用するための、実施形態Ｂ１～Ｂ２３に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質、又は実施形態Ｂ２４～Ｂ２７のいずれか１つに記載の三量体。
Ｂ４３． 感染性病原体は、ウイルス、細菌、真菌、又は寄生虫である、実施形態Ｂ４１に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ４４． ワクチン組成物の投与において使用するための、実施形態Ｂ１～Ｂ２３に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質、又は実施形態Ｂ２４～Ｂ２７のいずれか１つに記載の三量体。
Ｂ４５． ワクチンは、がん、感染性病原体、又はアレルゲンに対するワクチンである、実施形態Ｂ４４に記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
Ｂ４６． 単鎖三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｂ３５～Ｂ４５のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質。
【】
別のセットの実施形態（実施形態セットＣ）では、以下が提供される：
Ｃ１． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を提供するための手段を含むシステムであって、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ｃ２． Ｆｃ単量体ペプチドが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ｃ１に記載のシステム。
Ｃ３． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｃ２に記載のシステム。
Ｃ４． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｃ１に記載のシステム。
Ｃ５． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＮ末端に連結されている、実施形態Ｃ１に記載のシステム。
Ｃ６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１～１２から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む、実施形態Ｃ５に記載のシステム。
Ｃ７． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｃ１に記載のシステム。
Ｃ８． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１３～１９から選択されるいずれか１つの配列、又はその断片を含む、実施形態Ｃ７に記載のシステム。
Ｃ９． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１６又はその断片を含む、実施形態Ｃ８に記載のシステム。
Ｃ１０． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２、及び４５から選択される配列のうちのいずれか１つ、又はその断片を含む、実施形態Ｃ１に記載のシステム。
Ｃ１１． Ｆｃ単量体ペプチドが、ヒトＦｃ配列を含む、実施形態Ｃ１に記載のシステム。
Ｃ１２． ヒトＦｃ配列が、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥから選択される配列を含む、実施形態Ｃ１１に記載のシステム。
Ｃ１３． ヒトＦｃ配列が、ＩｇＧ配列を含む、実施形態Ｃ１２に記載のシステム。
Ｃ１４． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される、実施形態Ｃ１３に記載のシステム。
Ｃ１５． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１配列である、実施形態Ｃ１４に記載のシステム。
Ｃ１６． ＩｇＧ１配列が、配列番号３０若しくは３１、又はその断片を含む、実施形態Ｃ１５に記載のシステム。
Ｃ１７． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ２配列を含む、実施形態Ｃ１４に記載のシステム。
Ｃ１８． ＩｇＧ２配列が、配列番号２９又はその断片を含む、実施形態Ｃ１７に記載のシステム。
Ｃ１９． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｃ１に記載のシステム。
Ｃ２０． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｃ２に記載のシステム。
Ｃ２１． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較してＣＤ４０ポリペプチドの活性化を増強する、実施形態Ｃ１～Ｃ２０のいずれか１つに記載のシステム。
Ｃ２２． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｃ２１に記載のシステム。
Ｃ２３． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を含む、実施形態Ｃ２２に記載のシステム。
Ｃ２４． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を含む、実施形態Ｃ２２に記載のシステム。
Ｃ２５． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｃ１～Ｃ２４のいずれか１つに記載のシステム。
Ｃ２６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｃ１～Ｃ２５のいずれか１つに記載のシステム。
Ｃ２７． 各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を提供するための手段を含む、システム。
Ｃ２８． 二量体が、ホモ二量体である、実施形態Ｃ２７に記載のシステム。
Ｃ２９． 二量体が、Ｆｃ単量体ペプチドの会合によって形成される、実施形態Ｃ２７に記載のシステム。
Ｃ３０． ダイマーは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｃ２７～Ｃ２９のいずれか１つに記載のシステム。
Ｃ３１． 実施形態Ｃ１～Ｃ２６のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供するための手段を含む、システム。
Ｃ３２． 実施形態Ｃ３１に記載のポリヌクレオチドを含むベクターを提供するための手段を含む、システム。
Ｃ３３． 実施形態Ｃ３２に記載のベクターを含む宿主細胞を提供するための手段を含む、システム。
Ｃ３４． 実施形態Ｃ３１に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供するための手段を含む、システム。
Ｃ３５． 医薬的に許容される担体と、実施形態Ｃ１～Ｃ２６のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質と、を含む医薬組成物を提供するための手段を含む、システム。
Ｃ３６． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｃ３５に記載のシステム。
Ｃ３７． 実施形態Ｃ１～Ｃ２６のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含むキットを提供するための手段を含む、システム。
【】
別のセットの実施形態（実施形態セットＤ）では、以下が提供される。
Ｄ１． （ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を提供するための手段を含むシステム。
Ｄ２． 三量体化モチーフが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ｄ１に記載のシステム。
Ｄ３． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｄ２に記載のシステム。
Ｄ４． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｄ１に記載のシステム。
Ｄ５． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｎ－に連結されている、実施形態Ｄ１に記載のシステム。
Ｄ６． ＣＤ４０Ｌ三量体が、三量体化単量体ペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｄ１に記載のシステム。
Ｄ７． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４３、４４、４６、及び４７、並びにそれらの断片からなる群から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｄ６に記載のシステム。
Ｄ８． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２、及び４５、並びにそれらの断片からなる群から選択される配列のうちのいずれか１つ、又はその断片を含む、実施形態Ｄ１に記載のシステム。
Ｄ９． 三量体化モチーフは、ウイルス三量体化モチーフを含む、実施形態Ｄ１に記載のシステム。
Ｄ１０． ウイルス三量体化モチーフは、Ｔ４ファージ三量体化モチーフである、実施形態Ｄ９に記載のシステム。
Ｄ１１． Ｔ４ファージ三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフである、実施形態Ｄ１０に記載のシステム。
Ｄ１２． Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１又はその断片を含む、実施形態Ｄ１１に記載のシステム。
Ｄ１３． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｄ１に記載のシステム。
Ｄ１４． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｄ２に記載のシステム。
Ｄ１５． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、シグナルペプチドを含む、実施形態Ｄ１に記載のシステム。
Ｄ１６． ＣＤ４０Ｌ三量体が、シグナルペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｄ１５に記載のシステム。
Ｄ１７． シグナルペプチドは、配列番号４２を含む、実施形態Ｄ１６に記載のシステム。
Ｄ１８． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較してＣＤ４０ポリペプチドの活性化を増強する、実施形態Ｄ１～Ｄ１７のいずれか１つに記載のシステム。
Ｄ１９． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｄ１８に記載のシステム。
Ｄ２０． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を含む、実施形態Ｄ１９に記載のシステム。
Ｄ２１． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を含む、実施形態Ｄ１９に記載のシステム。
Ｄ２２． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｄ１～Ｄ２１のいずれか１つに記載のシステム。
Ｄ２３． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスにコンジュゲートもしていない、実施形態Ｄ１～Ｄ２２のいずれか１つに記載のシステム。
Ｄ２４． 各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体を提供するための手段を含む、システム。
Ｄ２５． 三量体が、ホモ三量体である、実施形態Ｄ２４に記載のシステム。
Ｄ２６． 三量体は、三量体化モチーフの会合によって形成される、実施形態Ｄ２４に記載のシステム。
Ｄ２７． 三量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｄ２４～Ｄ２７のいずれか１つに記載のシステム。
Ｄ２７． 実施形態Ｄ１～Ｄ２３のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供するための手段を含む、システム。
Ｄ２８． 実施形態Ｄ２７に記載のポリヌクレオチドを含むベクターを提供するための手段を含む、システム。
Ｄ２９． 実施形態Ｄ２８に記載のベクターを含む宿主細胞を提供するための手段を含む、システム。
Ｄ３０． 実施形態Ｄ２８に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供するための手段を含む、システム。
Ｄ３１． 医薬的に許容される担体と、実施形態Ｄ１～Ｄ２３のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質と、を含む医薬組成物を提供するための手段を含む、システム。
Ｄ３２． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｄ３１に記載のシステム。
Ｄ３３． 実施形態Ｄ１～Ｄ２３のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含むキットを提供するための手段を含む、システム。
【】
別のセットの実施形態（実施形態セットＥ）では、以下が提供される。
Ｅ１． ＣＤ４０ポリペプチドを活性する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が結合時にＣＤ４０ポリペプチドを活性化する、方法。
Ｅ２． Ｆｃ単量体ペプチドが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ｅ１に記載の方法。
Ｅ３． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｅ２に記載の方法。
Ｅ４． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｅ１に記載の方法。
Ｅ５． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＮ末端に連結されている、実施形態Ｅ１に記載の方法。
Ｅ６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１～１２及びそれらの断片からなる群から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｅ５に記載の方法。
Ｅ７． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｅ１に記載の方法。
Ｅ８． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１３～１９及びそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｅ７に記載の方法。
Ｅ９． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１６又はその断片を含む、実施形態Ｅ８に記載の方法。
Ｅ１０． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２及びそれらの断片から選択される配列のうちのいずれか１つを含む、実施形態Ｅ１に記載の方法。
Ｅ１１． Ｆｃ単量体ペプチドが、ヒトＦｃ配列を含む、実施形態Ｅ１に記載の方法。
Ｅ１２． ヒトＦｃ配列が、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥから選択される配列を含む、実施形態Ｅ１１に記載の方法。
Ｅ１３． ヒトＦｃ配列が、ＩｇＧ配列を含む、実施形態Ｅ１２に記載の方法。
Ｅ１４． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される、実施形態Ｅ１３に記載の方法。
Ｅ１５． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１配列である、実施形態Ｅ１４に記載の方法。
Ｅ１６． ＩｇＧ１配列が、配列番号３０若しくは３１、又はその断片を含む、実施形態Ｅ１５に記載の方法。
Ｅ１７． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ２配列を含む、実施形態Ｅ１４に記載の方法。
Ｅ１８． ＩｇＧ２配列が、配列番号２９又はその断片を含む、実施形態Ｅ１７に記載の方法。
Ｅ１９． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｅ１に記載の方法。
Ｅ２０． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｅ２に記載の方法。
Ｅ２１． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＣＤ４０ポリペプチドの活性化を含む、実施形態Ｅ１～Ｅ２０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｅ２１に記載の方法。
Ｅ２３． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を含む、実施形態Ｅ２１に記載の方法。
Ｅ２４． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を含む、実施形態Ｅ２１に記載の方法。
Ｅ２５． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｅ１～Ｅ２４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｅ１～Ｅ２５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２７． ＣＤ４０ポリペプチドを活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、各々が、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質二量体が結合時にＣＤ４０ポリペプチドを活性化する、方法。
Ｅ２８． ホモ二量体を投与することを更に含む、実施形態Ｅ２６に記載の方法。
Ｅ２９． 二量体が、Ｆｃ単量体ペプチドの会合によって形成される、実施形態Ｅ２６に記載の方法。
Ｅ３０． 方法が、インビトロで行われる、実施形態Ｅ１～Ｅ２９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３１． 当該方法が、インビボで行われる、実施形態Ｅ１～Ｅ２９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３２． 更に、当該接触させることが、医薬的に許容される担体及び単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを含む、実施形態Ｅ３１に記載の方法。
Ｅ３３． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｅ３２に記載の方法。
Ｅ３４． 当該接触させることが、先天性抗腫瘍免疫応答を増強する、実施形態Ｅ３２に記載の方法。
Ｅ３５． ダイマーは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｅ２６～Ｅ３４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３６． Ｔ細胞を活性化する方法であって、Ｔ細胞を、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質の存在下で、抗原提示細胞と接触させることを含み、当該抗原提示細胞がＣＤ４０ポリペプチドを発現し、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、ＣＤ４０ポリペプチドとの結合時にＴ細胞を活性化する、方法。
Ｅ３７． Ｆｃ単量体ペプチドが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ｅ３６に記載の方法。
Ｅ３８． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｅ３７に記載の方法。
Ｅ３９． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｅ３６に記載の方法。
Ｅ４０． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＮ末端に連結されている、実施形態Ｅ３６に記載の方法。
Ｅ４１． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１～１２及びそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｅ４０に記載の方法。
Ｅ４２． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｅ３９に記載の方法。
Ｅ４３． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１３～１９及びそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｅ４２に記載の方法。
Ｅ４４． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１６又はその断片を含む、実施形態Ｅ４３に記載の方法。
Ｅ４５． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２及びそれらの断片から選択される配列のうちのいずれか１つを含む、実施形態Ｅ３６に記載の方法。
Ｅ４６． Ｆｃ単量体ペプチドが、ヒトＦｃ配列を含む、実施形態Ｅ３６に記載の方法。
Ｅ４７． ヒトＦｃ配列が、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥから選択される配列を含む、実施形態Ｅ４６に記載の方法。
Ｅ４８． ヒトＦｃ配列が、ＩｇＧ配列を含む、実施形態Ｅ４７に記載の方法。
Ｅ４９． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される、実施形態Ｅ４８に記載の方法。
Ｅ５０． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１配列である、実施形態Ｅ４９に記載の方法。
Ｅ５１． ＩｇＧ１配列が、配列番号３０若しくは３１、又はその断片を含む、実施形態Ｅ５０に記載の方法。
Ｅ５２． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ２配列を含む、実施形態Ｅ４９に記載の方法。
Ｅ５３． ＩｇＧ２配列が、配列番号２９又はその断片を含む、実施形態Ｅ５２に記載の方法。
Ｅ５４． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｅ３６に記載の方法。
Ｅ５５． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｅ３６に記載の方法。
Ｅ５６． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＣＤ４０ポリペプチドの活性化を更に含む、実施形態Ｅ３６～Ｅ５５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５７． ＣＤ４０ポリペプチドの増強した活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｅ５６に記載の方法。
Ｅ５８． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を更に含む、実施形態Ｅ５６に記載の方法。
Ｅ５９． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を更に含む、実施形態Ｅ５６に記載の方法。
Ｅ６０． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｅ３６～Ｅ５９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６１． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｅ３６～Ｅ６０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６２． Ｔ細胞を活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、各々が、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体の存在下で、抗原提示細胞と接触させることを含み、当該抗原提示細胞がＣＤ４０ポリペプチドを発現し、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質二量体が、ＣＤ４０の結合時にＴ細胞を活性化する、方法。
Ｅ６３． ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｅ６２に記載の方法。
Ｅ６４． ホモ二量体を投与することを更に含む、実施形態Ｅ６２又はＥ６３に記載の方法。
Ｅ６５． 二量体が、Ｆｃ単量体ペプチドの会合によって形成される、実施形態Ｅ６２又はＥ６３に記載の方法。
Ｅ６６． 方法が、インビトロで行われる、実施形態Ｅ３６～Ｅ６５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６７． 当該方法が、インビボで行われる、実施形態Ｅ３６～Ｅ６５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６８． 更に、当該接触させることが、医薬的に許容される担体及び単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを含む、実施形態Ｅ６７に記載の方法。
Ｅ６９． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｅ６８に記載の方法。
Ｅ７０． 当該接触させることが、先天性抗腫瘍免疫応答を増強する、実施形態Ｅ６８に記載の方法。
Ｅ７１． 樹状細胞を活性する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、ＣＤ４０ポリペプチドの結合時に樹状細胞を活性化する、方法。
Ｅ７２． Ｆｃ単量体ペプチドが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ｅ７１に記載の方法。
Ｅ７３． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｅ７２に記載の方法。
Ｅ７４． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｅ７１に記載の方法。
Ｅ７５． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＮ末端に連結されている、実施形態Ｅ７１に記載の方法。
Ｅ７６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１～１２及びそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｅ７５に記載の方法。
Ｅ７７． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｅ７１に記載の方法。
Ｅ７８． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１３～１９及びそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｅ７７に記載の方法。
Ｅ７９． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１６又はその断片を含む、実施形態Ｅ７８に記載の方法。
Ｅ８０． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２及びそれらの断片から選択される配列のうちのいずれか１つを含む、実施形態Ｅ７１に記載の方法。
Ｅ８１． Ｆｃ単量体ペプチドが、ヒトＦｃ配列を含む、実施形態Ｅ７１に記載の方法。
Ｅ８２． ヒトＦｃ配列が、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥから選択される配列を含む、実施形態Ｅ８１に記載の方法。
Ｅ８３． ヒトＦｃ配列が、ＩｇＧ配列を含む、実施形態Ｅ８２に記載の方法。
Ｅ８４． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される、実施形態Ｅ８３に記載の方法。
Ｅ８５． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１配列である、実施形態Ｅ８４に記載の方法。
Ｅ８６． ＩｇＧ１配列が、配列番号３０若しくは３１、又はその断片を含む、実施形態Ｅ８３に記載の方法。
Ｅ８７． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ２配列を含む、実施形態Ｅ８４に記載の方法。
Ｅ８８． ＩｇＧ２配列が、配列番号２９又はその断片を含む、実施形態Ｅ８７に記載の方法。
Ｅ８９． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｅ７１に記載の方法。
Ｅ９０． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｅ７１に記載の方法。
Ｅ９１． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＣＤ４０ポリペプチドの活性化を含む、実施形態Ｅ７１～Ｅ９０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９２． ＣＤ４０ポリペプチドの増強した活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｅ９１に記載の方法。
Ｅ９３． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を更に含む、実施形態Ｅ９１に記載の方法。
Ｅ９４． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を更に含む、実施形態Ｅ９１に記載の方法。
Ｅ９５． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｅ７１～Ｅ９４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｅ７１～Ｅ９５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９７． 樹状細胞を活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、各々が、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質二量体が、ＣＤ４０ポリペプチドの結合時に樹状細胞を活性化する、方法。
Ｅ９８． ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｅ９７に記載の方法。
Ｅ９９． ホモ二量体を投与することを更に含む、実施形態Ｅ９７又はＥ９８に記載の方法。
Ｅ１００． 二量体が、Ｆｃ単量体ペプチドの会合によって形成される、実施形態Ｅ９７又は９８に記載の方法。
Ｅ１０１． 方法が、インビトロで行われる、実施形態Ｅ９７～Ｅ１００のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０２． 当該方法が、インビボで行われる、実施形態Ｅ９７～Ｅ１００のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０３． 更に、当該接触させることが、医薬的に許容される担体及び単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを含む、実施形態Ｅ１－Ｅ１０２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０４． 組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｅ１０３に記載の方法。
Ｅ１０５． 当該接触させることが、先天性抗腫瘍免疫応答を増強する、実施形態Ｅ１０３又はＥ１０４に記載の方法。
【】
別のセットの実施形態（実施形態セットＦ）では、以下が提供される。
Ｆ１． ＣＤ４０ポリペプチドを活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質が結合時にＣＤ４０ポリペプチドを活性化する、方法。
Ｆ２． 三量体化モチーフが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ｆ１に記載の方法。
Ｆ３． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｆ２に記載の方法。
Ｆ４． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｆ１に記載の方法。
Ｆ５． ＣＤ４０Ｌ三量体が、三量体化モチーフのＣ末端に連結されている、実施形態Ｆ１に記載の方法。
Ｆ６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４３、４４、４６、及び４７、並びにそれらの断片からなる群から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｆ５に記載の方法。
Ｆ７． ＣＤ４０Ｌ三量体が、三量体化モチーフのＮ末端に連結されている、実施形態Ｆ１に記載の方法。
Ｆ８． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２及びそれらの断片からなる群から選択される配列のうちのいずれか１つを含む、実施形態Ｆ１に記載の方法。
Ｆ９． 三量体化モチーフは、ウイルス三量体化モチーフを含む、実施形態Ｆ１に記載の方法。
Ｆ１０． ウイルス三量体化モチーフは、Ｔ４ファージ三量体化モチーフを含む、実施形態Ｆ９に記載の方法。
Ｆ１１． ウイルス三量体化モチーフは、Ｔ４ファージフィブリチン三量体化モチーフを含む、実施形態Ｆ１０に記載の方法。
Ｆ１２． Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１又はその断片を含む、実施形態Ｆ１１に記載の方法。
Ｆ１３． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｆ１に記載の方法。
Ｆ１４． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｆ２に記載の方法。
Ｆ１５． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、シグナルペプチドを含む、実施形態Ｆ１に記載の方法。
Ｆ１６． ＣＤ４０Ｌ三量体が、シグナルペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｆ１５に記載の方法。
Ｆ１７． シグナルペプチドが、配列番号４２を含む、実施形態Ｆ１６に記載の方法。
Ｆ１８． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＣＤ４０ポリペプチドの活性化を含む、実施形態Ｆ１～Ｆ１７のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ１９． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｆ１８に記載の方法。
Ｆ２０． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を含む、実施形態Ｆ１９に記載の方法。
Ｆ２１． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を含む、実施形態Ｆ１９に記載の方法。
Ｆ２２． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｆ１～Ｆ２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ２３． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｆ１～Ｆ２２のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ２４． ＣＤ４０ポリペプチドを活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、各々が、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む３つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質三量体が結合時にＣＤ４０ポリペプチドを活性化する、方法。
Ｆ２５． ポリペプチドは、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｆ２３に記載の方法。
Ｆ２６． ホモ三量体を投与することを更に含む、実施形態Ｆ２４又はＦ２５に記載の方法。
Ｆ２７． 三量体が、三量体化モチーフの会合によって形成される、実施形態Ｆ２４又はＦ２５に記載の方法。
Ｆ２８． 方法が、インビトロで行われる、実施形態Ｆ１～Ｆ２７のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ２９． 当該方法がインビボで行われる、実施形態Ｆ１～Ｆ２７のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ３０． 更に、接触させることが、医薬的に許容される担体及び単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを含む、実施形態Ｆ２９に記載の方法。
Ｆ３１． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｆ３０に記載の方法。
Ｆ３２． 当該接触させることが、先天性抗腫瘍免疫応答を増強する、実施形態Ｆ３０又はＦ３１に記載の方法。
Ｆ３３． Ｔ細胞を活性化する方法であって、Ｔ細胞を、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質の存在下で、抗原提示細胞と接触させることを含み、抗原提示細胞がＣＤ４０ポリペプチドを発現し、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質が、ＣＤ４０ポリペプチドの結合時にＴ細胞を活性化する、方法。
Ｆ３４． 三量体化モチーフが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ｆ３３に記載の方法。
Ｆ３５． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｆ３４に記載の方法。
Ｆ３６． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｆ３３に記載の方法。
Ｆ３７． ＣＤ４０Ｌ三量体が、三量体化モチーフのＣ末端に連結されている、実施形態Ｆ３３に記載の方法。
Ｆ３８． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４３、４４、４６、及び４７、並びにそれらの断片からなる群から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｆ３７に記載の方法。
Ｆ３９． ＣＤ４０Ｌ三量体が、三量体化モチーフのＮ末端に連結されている、実施形態Ｆ３３に記載の方法。
Ｆ４０． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２及びそれらの断片からなる群から選択される配列のうちのいずれか１つを含む、実施形態Ｆ３３に記載の方法。
Ｆ４１． 三量体化モチーフは、ウイルス三量体化モチーフを含む、実施形態Ｆ３３に記載の方法。
Ｆ４２． ウイルス三量体化モチーフは、Ｔ４ファージ三量体化モチーフを含む、実施形態Ｆ４１に記載の方法。
Ｆ４３． Ｔ４三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフを含む、実施形態Ｆ４２に記載の方法。
Ｆ４４． Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１又はその断片を含む、実施形態Ｆ４３に記載の方法。
Ｆ４５． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｆ３４に記載の方法。
Ｆ４６． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｆ３４に記載の方法。
Ｆ４７． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、シグナルペプチドを含む、実施形態Ｆ４２に記載の方法。
Ｆ４８． ＣＤ４０Ｌ三量体が、シグナルペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｆ４７に記載の方法。
Ｆ４９． シグナルペプチドが、配列番号４２を含む、実施形態Ｆ４８に記載の方法。
Ｆ５０． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＣＤ４０ポリペプチドの活性化を更に含む、実施形態Ｆ３３～Ｆ４９のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ５１． ＣＤ４０ポリペプチドの増強した活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｆ５０に記載の方法。
Ｆ５２． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を更に含む、実施形態Ｆ５０に記載の方法。
Ｆ５３． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を更に含む、実施形態Ｆ５０に記載の方法。
Ｆ５４． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｆ３３～Ｆ５３のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ５５． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｆ３３～Ｆ５４のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ５６． Ｔ細胞を活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、各々が、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体の存在下で、抗原提示細胞と接触させることを含み、当該抗原提示細胞がＣＤ４０ポリペプチドを発現し、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質三量体が、ＣＤ４０の結合時にＴ細胞を活性化する、方法。
Ｆ５７． 三量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｆ５６に記載の方法。
Ｆ５８． ホモ三量体を投与することを更に含む、実施形態Ｆ５６又はＦ５７に記載の方法。
Ｆ５９． 三量体は、三量体化モチーフの会合によって形成される、実施形態Ｆ５６～Ｆ５８のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ６０． 方法が、インビトロで行われる、実施形態Ｆ３３～Ｆ５９のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ６１． 当該方法が、インビボで行われる、実施形態Ｆ３３～Ｆ５９のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ６２． 更に、接触させることが、医薬的に許容される担体及び単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを含む、実施形態Ｆ６１に記載の方法。
Ｆ６３． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｆ６２に記載の方法。
Ｆ６４． 当該接触させることが、先天性抗腫瘍免疫応答を増強する、実施形態Ｆ６２又はＦ６３に記載の方法。
Ｆ６５． 樹状細胞を活性する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質が、ＣＤ４０ポリペプチドの結合時に樹状細胞を活性化する、方法。
Ｆ６６． 三量体化モチーフが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ｆ６５に記載の方法。
Ｆ６７． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｆ６６に記載の方法。
Ｆ６８． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｆ６５に記載の方法。
Ｆ６９． ＣＤ４０Ｌ三量体が、三量体化モチーフのＣ末端に連結されている、実施形態Ｆ６５に記載の方法。
Ｆ７０． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４３、４４、４６、及び４７、並びにそれらの断片からなる群から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｆ６９に記載の方法。
Ｆ７１． ＣＤ４０Ｌ三量体が、三量体化モチーフのＮ末端に連結されている、実施形態Ｆ６５に記載の方法。
Ｆ７２． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２及びそれらの断片からなる群から選択される配列のうちのいずれか１つを含む、実施形態Ｆ６５に記載の方法。
Ｆ７３． 三量体化モチーフは、ウイルス三量体化モチーフを含む、実施形態Ｆ６５に記載の方法。
Ｆ７４． ウイルス三量体化モチーフは、Ｔ４ファージ三量体化モチーフを含む、実施形態Ｆ７３に記載の方法。
Ｆ７５． Ｔ４ファージ三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフを含む、実施形態Ｆ７４に記載の方法。
Ｆ７６． Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１又はその断片を含む、実施形態Ｆ７５に記載の方法。
Ｆ７７． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｆ６５に記載の方法。
Ｆ７８． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｆ６６に記載の方法。
Ｆ７９． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、シグナルペプチドを含む、実施形態Ｆ６５に記載の方法。
Ｆ８０． ＣＤ４０Ｌ三量体が、シグナルペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｆ７９に記載の方法。
Ｆ８１． シグナルペプチドが、配列番号４２を含む、実施形態Ｆ８０に記載の方法。
Ｆ８２． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＣＤ４０ポリペプチドの活性化を含む、実施形態Ｆ６５～Ｆ８１のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ８３． ＣＤ４０ポリペプチドの増強した活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｆ８１に記載の方法。
Ｆ８４． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を更に含む、実施形態Ｆ８２に記載の方法。
Ｆ８５． 野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を更に含む、実施形態Ｆ８２に記載の方法。
Ｆ８６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｆ６５～Ｆ８５のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ８７． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｆ６５～Ｆ８６のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ８８． 樹状細胞を活性化する方法であって、ＣＤ４０ポリペプチドを、各々が、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体と接触させることを含み、当該単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質三量体が、ＣＤ４０ポリペプチドの結合時に樹状細胞を活性化する、方法。
Ｆ８９． 三量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｆ８８に記載の方法。
Ｆ９０． ホモ三量体を投与することを更に含む、実施形態Ｆ８８又はＦ８９に記載の方法。
Ｆ９１． 三量体が、三量体化モチーフの会合によって形成される、実施形態Ｆ８８又はＦ８９に記載の方法。
Ｆ９２． 方法が、インビトロで行われる、実施形態Ｆ６５～Ｆ８９のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ９３． 当該方法が、インビボで行われる、実施形態Ｆ６５～Ｆ８９のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ９４． 更に、当該接触させることが、医薬的に許容される担体及び単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを含む、実施形態Ｆ１－Ｆ９３のいずれか１つに記載の方法。
Ｆ９５． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｆ９４に記載の方法。
Ｆ９６． 当該接触させることが、先天性抗腫瘍免疫応答を増強する、実施形態Ｆ９４又はＦ９５に記載の方法。
【】
別のセットの実施形態（実施形態セットＧ）では、以下が提供される：
Ｇ１． 対象におけるがんを治療する方法であって、対象に、治療有効量の、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質。
Ｇ２． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｇ１に記載の方法。
Ｇ３． Ｆｃ単量体ペプチドが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ｇ１又はＧ２に記載の方法。
Ｇ４． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｇ３に記載の方法。
Ｇ５． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｇ１又はＧ２に記載の方法。
Ｇ６． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＮ末端に連結されている、実施形態Ｇ１又はＧ２に記載の方法。
Ｇ７． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１～１２及びそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｇ６に記載の方法。
Ｇ８． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｇ１又はＧ２に記載の方法。
Ｇ９． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１３～１９及びそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｇ８に記載の方法。
Ｇ１０． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１６又はその断片を含む、実施形態Ｇ９に記載の方法。
Ｇ１１． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２及びそれらの断片から選択される配列のうちのいずれか１つを含む、実施形態Ｇ１又はＧ２に記載の方法。
Ｇ１２． Ｆｃ単量体ペプチドが、ヒトＦｃ配列を含む、実施形態Ｇ１又はＧ２に記載の方法。
Ｇ１３． ヒトＦｃ配列が、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥから選択される配列を含む、実施形態Ｇ１２に記載の方法。
Ｇ１４． ヒトＦｃ配列が、ＩｇＧ配列を含む、実施形態Ｇ１３に記載の方法。
Ｇ１５． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される、実施形態Ｇ１４に記載の方法。
Ｇ１６． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１配列である、実施形態Ｇ１５に記載の方法。
Ｇ１７． ＩｇＧ１配列が、配列番号３０若しくは３１、又はその断片を含む、実施形態Ｇ１６に記載の方法。
Ｇ１８． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ２配列を含む、実施形態Ｇ１５に記載の方法。
Ｇ１９． ＩｇＧ２配列が、配列番号２９又はその断片を含む、実施形態Ｇ１８に記載の方法。
Ｇ２０． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｇ１～Ｇ３のいずれか１つに記載の方法。
Ｇ２１． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｇ３に記載の方法。
Ｇ２２． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＣＤ４０ポリペプチドの活性化を含む、実施形態Ｇ１～Ｇ２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｇ２３． ＣＤ４０ポリペプチドの増強した活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｇ２２に記載の方法。
Ｇ２４． ＣＤ４０ポリペプチドの増強された活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を含む、実施形態Ｇ２３に記載の方法。
Ｇ２５． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を含む、実施形態Ｇ２３に記載の方法。
Ｇ２６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｇ１～Ｇ２５のいずれか１つに記載の方法。
Ｇ２７． 対象におけるがんを治療する方法であって、対象に、治療有効量の、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を投与することを含む、方法。
Ｇ２８． 二量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｇ２７に記載の方法。
Ｇ２９． ホモ二量体を投与することを更に含む、実施形態Ｇ２７又はＧ２８に記載の方法。
Ｇ３０． 二量体が、Ｆｃ単量体ペプチドの会合によって形成される、実施形態Ｇ２７～Ｇ２９のいずれか１つに記載の方法。
Ｇ３１． 医薬的に許容される担体及び単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを更に含む、実施形態Ｇ１～Ｇ３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｇ３２． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｇ３１に記載の方法。
Ｇ３３． 治療が、先天性抗腫瘍免疫応答を増強する、実施形態Ｇ１～Ｇ３２のいずれか１つに記載の方法。
Ｇ３４． 第２の療法を共投与することを更に含む、実施形態Ｇ１～Ｇ３３のいずれか１つに記載の方法。
Ｇ３５． 第２の療法は、腫瘍溶解性ウイルスではない、実施形態Ｇ３４に記載の方法。
Ｇ３６． 当該がんが、黒色腫、中皮腫、進行性固形腫瘍、及びリンパ腫からなる群から選択される、実施形態Ｇ１～Ｇ３５のいずれか１つに記載の方法。
【】
別のセットの実施形態（実施形態セットＨ）では、以下が提供される：
Ｈ１． 対象におけるがんを治療する方法であって、対象に、治療有効量の、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を投与することを含む、方法。
Ｈ２． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｈ１に記載の方法。
Ｈ３． 三量体化モチーフが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ｈ１又はＨ２に記載の方法。
Ｈ４． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｈ３に記載の方法。
Ｈ５． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｈ１又はＨ２に記載の方法。
Ｈ６． ＣＤ４０Ｌ三量体が、三量体化モチーフのＣ末端に連結されている、実施形態Ｈ１又はＨ２に記載の方法。
Ｈ７． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４３、４４、４６、及び４７、並びにそれらの断片からなる群から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｈ６に記載の方法。
Ｈ８． ＣＤ４０Ｌ三量体が、三量体化モチーフのＮ末端に連結されている、実施形態Ｈ１又はＨ２に記載の方法。
Ｈ９． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２及びそれらの断片からなる群から選択される配列のうちのいずれか１つを含む、実施形態Ｈ１又はＨ２に記載の方法。
Ｈ１０． 三量体化モチーフは、ウイルス三量体化モチーフを含む、実施形態Ｈ１又はＨ２に記載の方法。
Ｈ１１． ウイルス三量体化モチーフは、Ｔ４ファージ三量体化モチーフを含む、実施形態Ｈ１０に記載の方法。
Ｈ１２． Ｔ４三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフを含む、実施形態Ｈ１１に記載の方法。
Ｈ１３． Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１又はその断片を含む、実施形態Ｈ１２に記載の方法。
Ｈ１４． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｈ１又はＨ２に記載の方法。
Ｈ１５． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｈ３に記載の方法。
Ｈ１６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、シグナルペプチドを含む、実施形態Ｈ１又はＨ２に記載の方法。
Ｈ１７． ＣＤ４０Ｌ三量体が、シグナルペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｈ１６に記載の方法。
Ｈ１８． シグナルペプチドが、配列番号４２を含む、実施形態Ｈ１７に記載の方法。
Ｈ１９． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＣＤ４０ポリペプチドの活性化を含む、実施形態Ｈ１～Ｈ１５のいずれか１つに記載の方法。
Ｈ２０． ＣＤ４０ポリペプチドの増強した活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｈ１９に記載の方法。
Ｈ２１． ＣＤ４０ポリペプチドの増強された活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を含む、実施形態Ｈ２０に記載の方法。
Ｈ２２． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌ．２と比較して増強された樹状細胞活性化を含む、実施形態Ｈ２０に記載の方法。
Ｈ２３． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｈ１～Ｈ２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｈ２４． 対象におけるがんを治療する方法であって、対象に、治療有効量の、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体を投与することを含む、方法。
Ｈ２５． 三量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｈ２４に記載の方法。
Ｈ２６． ホモ三量体を投与することを更に含む、実施形態Ｈ２４又はＨ２５に記載の方法。
Ｈ２７． 三量体が、三量体化モチーフの会合によって形成される、実施形態Ｈ２４又はＨ２５に記載の方法。
Ｈ２８． 医薬的に許容される担体及び単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを更に含む、実施形態Ｈ１～Ｈ２７のいずれか１つに記載の方法。
Ｈ２９． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｈ２８に記載の方法。
Ｈ３０． 治療が、先天性抗腫瘍免疫応答を増強する、実施形態Ｈ１～Ｈ２９のいずれか１つに記載の方法。
Ｈ３１． 第２の療法を共投与することを更に含む、実施形態Ｈ１～Ｈ３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｈ３２． 第２の療法は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｈ３１に記載の方法。
Ｈ３３． 当該がんが、黒色腫、中皮腫、進行性固形腫瘍、及びリンパ腫からなる群から選択される、実施形態Ｈ１～Ｈ３３のいずれか１つに記載の方法。
【】
別のセットの実施形態（実施形態セットＩ）では、以下が提供される：
Ｉ１． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を産生するための方法であって、（ａ）宿主細胞に、（ｉ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｉｉ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを導入することと、（ｂ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を産生する条件下で宿主細胞を培養することと、（ｃ）細胞又は培養物から単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を回収することと、を含む、方法。
Ｉ２． Ｆｃ単量体ペプチドが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ｉ１に記載の方法。
Ｉ３． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｉ２に記載の方法。
Ｉ４． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｉ１に記載の方法。
Ｉ５． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＮ末端に連結されている、実施形態Ｉ１に記載の方法。
Ｉ６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１～１２及びそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｉ５に記載の方法。
Ｉ７． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｉ１に記載の方法。
Ｉ８． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１３～１９及びそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｉ７に記載の方法。
Ｉ９． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１６又はその断片を含む、実施形態Ｉ８に記載の方法。
Ｉ１０． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２及びそれらの断片から選択される配列のうちのいずれか１つを含む、実施形態Ｉ１に記載の方法。
Ｉ１１． Ｆｃ単量体ペプチドが、ヒトＦｃ配列を含む、実施形態Ｉ１に記載の方法。
Ｉ１２． ヒトＦｃ配列が、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥから選択される配列を含む、実施形態Ｉ１１に記載の方法。
Ｉ１３． ヒトＦｃ配列が、ＩｇＧ配列を含む、実施形態Ｉ１２に記載の方法。
Ｉ１４． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される、実施形態Ｉ１３に記載の方法。
Ｉ１５． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１配列である、実施形態Ｉ１４に記載の方法。
Ｉ１６． ＩｇＧ１配列が、配列番号３０若しくは３１、又はその断片を含む、実施形態Ｉ１５に記載の方法。
Ｉ１７． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ２配列を含む、実施形態Ｉ１４に記載の方法。
Ｉ１８． ＩｇＧ２配列が、配列番号２９又はその断片を含む、実施形態Ｉ１７に記載の方法。
Ｉ１９． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｉ１に記載の方法。
Ｉ２０． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｉ２に記載の方法。
Ｉ２１． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較してＣＤ４０ポリペプチドの活性化を増強する、実施形態Ｉ１～Ｉ２０のいずれか１つに記載の方法。
Ｉ２２． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｉ２１に記載の方法。
Ｉ２３． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を含む、実施形態Ｉ２２に記載の方法。
Ｉ２４． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を含む、実施形態Ｉ２３に記載の方法。
Ｉ２５． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｉ１に記載の方法。
Ｉ２６． ２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を産生する方法であって、各々が、（ａ）宿主細胞に、（ｉ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｉｉ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを導入することと、（ｂ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を産生する条件下で宿主細胞を培養することと、（ｃ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を細胞又は培養物から回収することと、（ｄ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質又はその断片を、二量体化を好む条件下で組み合わせることと、を含む、方法。
Ｉ２７． 二量体が、ホモ二量体である、実施形態Ｉ２６に記載の方法。
Ｉ２８． 二量体が、Ｆｃ単量体ペプチドの会合によって形成される、実施形態Ｉ２６に記載の方法。
Ｉ２９． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質若しくはその断片の医薬組成物を産生する方法であって、実施形態Ｉ１～Ｉ２５のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質若しくはその断片を、医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法。
Ｉ３０． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｉ２９に記載の方法。
【】
別のセットの実施形態（実施形態セットＪ）では、以下が提供される：
Ｊ１． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を産生するための方法であって、（ａ）宿主細胞に、（ｉ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニット（ＣＤ４０Ｌ三量体）と、（ｉｉ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを導入することと、（ｂ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を産生する条件下で宿主細胞を培養することと、（ｃ）細胞又は培養物から単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を回収することと、を含む、方法。
Ｊ２． 三量体化モチーフが、ペプチドテザーによってＣＤ４０Ｌ三量体に共有結合されている、実施形態Ｊ１に記載の方法。
Ｊ３． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｊ２に記載の方法。
Ｊ４． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｊ１に記載の方法。
Ｊ５． ＣＤ４０Ｌ三量体が、三量体化モチーフのＣ末端に連結されている、実施形態Ｊ１に記載の方法。
Ｊ６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４３、４４、４６、及び４７、並びにそれらの断片からなる群から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｊ５に記載の方法。
Ｊ７． ＣＤ４０Ｌ三量体が、三量体化モチーフのＮ末端に連結されている、実施形態Ｊ１に記載の方法。
Ｊ８． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２及びそれらの断片からなる群から選択される配列のうちのいずれか１つを含む、実施形態Ｊ１に記載の方法。
Ｊ９． 三量体化モチーフは、ウイルス三量体化配列を含む、実施形態Ｊ１に記載の方法。
Ｊ１０． ウイルス三量体化モチーフは、Ｔ４ファージ三量体化モチーフを含む、実施形態Ｊ９に記載の方法。
Ｊ１１． Ｔ４三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフを含む、実施形態Ｊ１０に記載の方法。
Ｊ１２． Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１又はその断片を含む、実施形態Ｊ１１に記載の方法。
Ｊ１３． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｊ１に記載の方法。
Ｊ１４． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｊ２に記載の方法。
Ｊ１５． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、シグナルペプチドを含む、実施形態Ｊ１に記載の方法。
Ｊ１６． ＣＤ４０Ｌ三量体が、シグナルペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｊ１５に記載の方法。
Ｊ１７． シグナルペプチドが、配列番号４２を含む、実施形態Ｊ１６に記載の方法。
Ｊ１８． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較してＣＤ４０ポリペプチドの活性化を増強する、実施形態Ｊ１～Ｊ１７のいずれか１つに記載の方法。
Ｊ１９． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｊ１８に記載の方法。
Ｊ２０． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を含む、実施形態Ｊ１９に記載の方法。
Ｊ２１． ＣＤ４０ポリペプチドの活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を含む、実施形態Ｊ２０に記載の方法。
Ｊ２２． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｊ１に記載の方法。
Ｊ２３． ２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体を産生する方法であって、各々が、（ａ）宿主細胞に、（ｉ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｉｉ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを導入することと、（ｂ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を産生する条件下で宿主細胞を培養することと、（ｃ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を細胞又は培養物から回収することと、（ｄ）単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を、三量体化を好む条件下で組み合わせることと、を含む、方法。
Ｊ２４． 三量体が、ホモ三量体を含む、実施形態Ｊ２３に記載の方法。
Ｊ２５． 三量体は、三量体化モチーフの会合によって形成される、実施形態Ｊ２３に記載のシステム。
Ｊ２６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片の医薬組成物を産生する方法であって、実施形態Ｊ１～Ｊ２２のいずれか１つに記載の単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質又はその断片を、医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法。
Ｊ２７． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｊ２６に記載の方法。
【】
別のセットの実施形態（実施形態セットＫ）では、以下が提供される：
Ｋ１． 対象における免疫応答を増加させる方法であって、対象に、治療有効量の、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）ペプチドテザーによってＣＤ４０ＬサブユニットにコンジュゲートされているＦｃ単量体ペプチドと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む、方法。
Ｋ２． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｋ１に記載の方法。
Ｋ３． がんを有する対象におけるがん抗原に対する免疫応答を増加させる方法であって、対象に、治療有効量の、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む、方法。
Ｋ４． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｋ３に記載の方法。
Ｋ５． 病原体に感染した対象における病原体に対する免疫応答を増加させる方法であって、対象に、治療有効量の（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む、方法。
Ｋ６． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｋ５に記載の方法。
Ｋ７． ワクチンが投与される対象におけるワクチン抗原に対する免疫応答を増加させる方法であって、方法が、対象に、治療有効量の、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を投与することを更に含む、方法。
Ｋ８． ワクチンは、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｋ７に記載の方法。
Ｋ９． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｋ１～Ｋ８のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ１０． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｋ１～Ｋ９のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ１１． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＮ末端に連結されている、実施形態Ｋ１～Ｋ１０のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ１２． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１～１２及びそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｋ１～Ｋ１１のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ１３． ＣＤ４０Ｌ三量体が、Ｆｃ単量体ペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｋ１～Ｋ１２のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ１４． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１３～１９及びそれらの断片から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｋ１～Ｋ１３のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ１５． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号１６又はその断片を含む、実施形態Ｋ１～Ｋ１４のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ１６． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２及びそれらの断片から選択される配列のうちのいずれか１つを含む、実施形態Ｋ１～Ｋ１５のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ１７． Ｆｃ単量体ペプチドが、ヒトＦｃ配列を含む、実施形態Ｋ１～Ｋ１６のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ１８． ヒトＦｃ配列が、免疫グロブリンＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥから選択される配列を含む、実施形態Ｋ１７に記載の方法。
Ｋ１９． ヒトＦｃ配列が、ＩｇＧ配列を含む、実施形態Ｋ１８に記載の方法。
Ｋ２０． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択される、実施形態Ｋ１９に記載の方法。
Ｋ２１． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ１配列である、実施形態Ｋ２０に記載の方法。
Ｋ２２． ＩｇＧ１配列が、配列番号３０若しくは３１、又はその断片を含む、実施形態Ｋ２１に記載の方法。
Ｋ２３． ＩｇＧ配列が、ＩｇＧ２配列を含む、実施形態Ｋ２０に記載の方法。
Ｋ２４． ＩｇＧ２配列が、配列番号２９又はその断片を含む、実施形態Ｋ２３に記載の方法。
Ｋ２５． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｋ１～Ｋ２４のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ２６． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｋ１～Ｋ２５のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ２７． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＣＤ４０ポリペプチドの活性化を含む、実施形態Ｋ１～Ｋ２４のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ２８． ＣＤ４０ポリペプチドの増強した活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｋ２７に記載の方法。
Ｋ２９． ＣＤ４０ポリペプチドの増強された活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を含む、実施形態Ｋ２８に記載の方法。
Ｋ３０． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を含む、実施形態Ｋ２６に記載の方法。
Ｋ３１． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｋ１～Ｋ３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ３２． 対象における免疫応答を増加させる方法であって、対象に、治療有効量の、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を投与することを含む、方法。
Ｋ３３． がんを有する対象におけるがん抗原に対する免疫応答を増加させる方法であって、対象に、治療有効量の、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を投与することを含む、方法。
Ｋ３４． 病原体に感染した対象における病原体に対する免疫応答を増加させる方法であって、対象に、治療有効量の、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を投与することを含む、方法。
Ｋ３５． ワクチンが投与される対象におけるワクチン抗原に対する免疫応答を増加させる方法であって、方法が、対象に、治療有効量の、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）Ｆｃ単量体ペプチドと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を投与することを更に含む、方法。
Ｋ３６． 二量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｋ３２～Ｋ３５のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ３７． ホモ二量体を投与することを更に含む、実施形態Ｋ３２～Ｋ３９のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ３８． 二量体が、Ｆｃ単量体ペプチドの会合によって形成される、実施形態Ｋ３２～Ｋ３５のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ３９． 医薬的に許容される担体及び単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを更に含む、実施形態Ｋ３２～Ｋ３６のいずれか１つに記載の方法。
Ｋ４０． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｋ３９に記載の方法。
【】
別のセットの実施形態（実施形態セットＬ）では、以下が提供される：
Ｌ１． 対象における免疫応答を増加させる方法であって、対象に、治療有効量の、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を投与することを含む、方法。
Ｌ２． がんを有する対象におけるがん抗原に対する免疫応答を増加させる方法であって、対象に、治療有効量の、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を投与することを含む、方法。
Ｌ３． 病原体に感染した対象における病原体に対する免疫応答を増加させる方法であって、対象に、治療有効量の（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を投与することを含む、方法。
Ｌ４． ワクチンが投与される対象におけるワクチン抗原に対する免疫応答を増加させる方法であって、対象に、治療有効量の、（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を投与することを更に含む、方法。
Ｌ５． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｌ１～Ｌ４のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ６． ペプチドテザーが、０～２０個のアミノ酸を含む、実施形態Ｌ１～Ｌ５のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ７． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインの一部を含む、実施形態Ｌ１～Ｌ６のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ８． ＣＤ４０Ｌ三量体が、三量体化モチーフのＣ末端に連結されている、実施形態Ｌ１～Ｌ７のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ９． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、配列番号４３、４４、４６、及び４７、並びにそれらの断片からなる群から選択されるいずれか１つの配列を含む、実施形態Ｌ１～Ｌ８のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ１０． ＣＤ４０Ｌ三量体がは、三量体化モチーフのＮ末端に連結されている、実施形態Ｌ１～Ｌ９のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ１１． ＣＤ４０リガンドサブユニットが、配列番号２０～２２及びそれらの断片からなる群から選択される配列のうちのいずれか１つを含む、実施形態Ｌ１～Ｌ１０のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ１２． 三量体化モチーフは、ウイルス三量体化モチーフを含む、実施形態Ｌ１～Ｌ１１のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ１３． ウイルス三量体化モチーフは、Ｔ４ファージ三量体化モチーフを含む、実施形態Ｌ１２に記載の方法。
Ｌ１４． Ｔ４ファージ三量体化モチーフは、Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフを含む、実施形態Ｌ１３に記載の方法。
Ｌ１５． Ｔ４フィブリチン三量体化モチーフは、配列番号４１又はその断片を含む、実施形態Ｌ１４に記載の方法。
Ｌ１６． ペプチドリンカーが、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳ（配列番号２３）及び（Ｇ３Ｓ）３（配列番号２５）からなる群から選択される、実施形態Ｌ１～Ｌ１５のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ１７． ペプチドテザーが、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号２４）、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号２６）、（Ｇ４Ｓ）４（配列番号２７）、及びＧ４Ｓ（配列番号２８）からなる群から選択される、実施形態Ｌ１～Ｌ１６のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ１８． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、シグナルペプチドを含む、実施形態Ｌ１～Ｌ５のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ１９． ＣＤ４０Ｌ三量体が、シグナルペプチドのＣ末端に連結されている、実施形態Ｌ１８に記載の方法。
Ｌ２０． シグナルペプチドが、配列番号４２を含む、実施形態Ｌ１９に記載の方法。
Ｌ２１． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＣＤ４０ポリペプチドの活性化を含む、実施形態Ｌ１～Ｌ２０のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ２２． ＣＤ４０ポリペプチドの増強した活性化が、樹状細胞、Ｂ細胞、単球及びマクロファージの免疫刺激機能を増強する、実施形態Ｌ２１に記載の方法。
Ｌ２３． ＣＤ４０ポリペプチドの増強された活性化が、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強されたＴ細胞活性化を含む、実施形態Ｌ２２に記載の方法。
Ｌ２４． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された樹状細胞活性化を含む、実施形態Ｌ２２に記載の方法。
Ｌ２５． 単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質は、野生型ＣＤ４０Ｌと比較して増強された抗腫瘍活性を含む、実施形態Ｌ１～Ｌ２４のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ２６． 対象における免疫応答を増加させる方法であって、対象に、治療有効量の、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体を投与することを含む、方法。
Ｌ２７． がんを有する対象におけるがん抗原に対する免疫応答を増加させる方法であって、対象に、治療有効量の、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体を投与することを含む、方法。
Ｌ２８． 病原体に感染した対象における病原体に対する免疫応答を増加させる方法であって、対象に、治療有効量の、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体を投与することを含む、方法。
Ｌ２９． 三量体は、腫瘍溶解性ウイルス中に存在せず、腫瘍溶解性ウイルスに付着しておらず、腫瘍溶解性ウイルスと会合してもいない、実施形態Ｌ２６～Ｌ２８のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ３０． ワクチンが投与される対象におけるワクチン抗原に対する免疫応答を増加させる方法であって、方法が、対象に、治療有効量の、各々が（ａ）ペプチドリンカーによって互いに共有結合的に連結された３つのＣＤ４０Ｌサブユニットと、（ｂ）三量体化モチーフと、を含む、２つの単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む三量体を投与することを更に含む、方法。
Ｌ３１． ワクチン用量は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｌ３０に記載の方法。
Ｌ３２． ホモ三量体を投与することを更に含む、実施形態Ｌ２６～Ｌ３１のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ３３． 三量体は、三量体化モチーフの会合によって形成される、実施形態Ｌ２６～Ｌ３２のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ３４． 医薬的に許容される担体及び単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ三量体化融合タンパク質を含む医薬組成物を投与することを更に含む、実施形態Ｌ２６～Ｌ３３のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ３５． 医薬組成物は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｌ３４に記載の方法。
Ｌ３６． 第２の療法を共投与することを更に含む、実施形態Ｌ２６～Ｌ３５のいずれか１つに記載の方法。
Ｌ３７． 第２の療法は、腫瘍溶解性ウイルスを含まない、実施形態Ｌ３６に記載の方法。
【】
本発明の特定の実施形態が本明細書に記載される。前述の説明を読むと、開示された実施形態の変形形態は、当業者に明らかになり得、必要に応じてそのような変形形態を採用し得ることが予想される。したがって、本発明が、本明細書に具体的に記載されるもの以外の方法で実施されること、並びに本発明が、適用法によって許可されるように、本明細書に添付の特許請求の範囲に列挙される主題の全ての修正物及び均等物を含むことが意図される。更に、全ての可能性のあるこれらの変形形態における要素の任意の組み合わせは、本明細書において別途記載のない限り、又は文脈が明らかに矛盾しない限り、本明細書に包含される。本発明の多くの実施形態が説明されてきた。しかしながら、様々な修正が、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく実行され得ることが、理解されるであろう。したがって、実施例のセクションにおける説明は、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するのではなく、例示することを意図するものである。
【実施例】
【】
実施例１：方法及び材料
可溶性三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合構築物の設計：ＣＤ４０Ｌは、細胞外ドメイン、ストーク領域、膜貫通ヘリックス、及び短い細胞質ドメインからなる膜タンパク質である。ＣＤ４０Ｌの活性は細胞外ドメインに位置し、このドメインをＦｃ融合構築物生成のために選択した。ＣＤ４０Ｌ ＥＣＤ（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２９９６５）を柔軟なリンカー及びテザーとともに融合させて、エフェクター機能がサイレンシングされたヒトＩｇＧ１及びヒトＩｇＧ２アイソタイプを有するＮ末端融合体を形成した。ＣＤ４０Ｌサブユニット間のリンカーは、９個又は１２個のいずれかのアミノ酸であり、柔軟性のために選択したが、他の長さは試験しなかった。最後のＣＤ４０ＬサブユニットとＦｃとの間のテザーは、柔軟性を促進するように選択され、０～２０個のアミノ酸の範囲であった。更に、ＣＤ４０ＬのＣ末端Ｆｃ融合物を生成した。５～２０個のアミノ酸の範囲の柔軟なテザーを、ＦｃのＣ末端と第１のＣＤ４０ＬサブユニットのＮ末端との間に配置した。９又は１２個のアミノ酸のいずれかの柔軟なリンカーを、ＣＤ４０Ｌサブユニット間で使用した。Ｃ末端三量体ＣＤ４０Ｌ Ｆｃ融合物を、エフェクターサイレンシングしたヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ２Ａアイソタイプ上に構築した。ｈｕＩｇＧ分子に融合されたＣＤ４０Ｌ三量体バンドルを有するアゴニストＣＤ４０Ｌを設計する最初の試みは、プロテインＡ精製後に高分子量種（ＨＭＷＳ）をもたらし、更なる開発に適していなかった。タンパク質の生物物理学的及び機能的特性を、構造に基づく原理を用いてタンパク質を再設計することによって最適化した。タンパク質は、様々なサブユニット内リンカー、テザー及びＦｃ結合点を用いて設計した（図１Ａ）。
【】
更に、ＣＤ４０Ｌ三量体融合タンパク質がそれ自体で活性を有するという仮説（すなわち、それらのＦｃ部分間の相互作用を介してＣＤ４０Ｌ三量体融合タンパク質の２つのコピーの二量体を形成することなく）を試験するために、二量体形成を排除したＣＨ３ドメインにおける変異を有するＦｃ単量体ペプチドに融合されたＣＤ４０Ｌ三量体を含有する分子も設計し、構築した（「Ｍｏｎｏ Ｆｃ」分子、例えば、図１Ｂを参照されたい）。
【】
実施例２：発現及び精製方法
Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞を無血清Ｅｘｐｉ２９３（商標）発現培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で増殖させた。細胞を、オービタルシェーカー上で、８％のＣＯ２を用いて３７℃で三角フラスコ中で維持した。細胞を３．０×１０６細胞／ｍＬでトランスフェクトした。プラスミドＤＮＡをＯｐｔｉ－ＭＥＭ Ｉで希釈した。Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２９３をＯｐｔｉ－ＭＥＭ Ｉで希釈し、室温で５分間インキュベートした。ＤＮＡ混合物をＥｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２９３とインキュベートし、室温で２０～３０分間インキュベートした。ＤＮＡ／Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２９３複合体を細胞培養に加え、インキュベーターに戻した。トランスフェクションから１６～１８時間後、適切な体積のエンハンサを細胞培養物に添加した。細胞培養上清を６日目に回収し、３０００ｇで１０分間遠心分離して細胞をペレット化することによって回収した。上清は、精製するまでの間、４℃で保存した。
【】
Ｔｅｃａｎ液体ハンドラーを備えたＲｏｂｏＣｏｌｕｍｎ Ｅｓｈｍｕｎｏ Ａ、０．６ｍＬ（ＭＥＲＣＫ ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ、カタログ番号１．２５１６３．０００１）カラムを使用してタンパク質を精製した。上清を、最大捕捉のために０．６ｍＬ／分の流量で、カラムに適用した。紫外線Ａ２８０によってモニターしながら、８カラム分の体積のＰＢＳを使用して、クリーンなベースラインが得られるまでカラムを洗浄した。５０ｍＭのクエン酸塩（ｐＨ３．０）を用いてタンパク質をカラムから溶出させ、１ＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ９．０）で中和した。Ｚｅｂｒａ Ｓｐｉｎ脱塩カラムを使用して、タンパク質を最終緩衝液としてのｄＰＢＳ中に脱塩した。非変性及び変性ＳＤＳ ＰＡＧＥゲルを用いて、画分を、組換えタンパク質の存在について検査し、プールした。精製されたタンパク質は、ＳＤＳ ＰＡＧＥ及び分析的サイズ交換カラム（analytical size exchange column、ａＳＥＣ）によって＞８０％純粋であるとみなされた。第２段階のクロマトグラフィーによる最終精製は、ＰＢＳ移動相を使用してＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ゲル濾過クロマトグラフィーによって行った。約１５０ｋＤａに対応する画分をプールし、使用するまでー８０℃で保存した。
【】
新たに設計された三量体は、ＨＰＬＣ（ａＳＥＣ）（以下の表５）及びＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル図２Ａ～図２Ｂを使用して単分散Ｆｃホモ二量体のレベルによって決定されるように、純度の大幅な改善を示した。
【】
【表】
【】
元の分子は、ａＳＥＣによって決定されるプロテインＡ精製後の３８％の純度を有し（ＴＰＰ０００１６１２２２）、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルにおいて顕著な高分子量種バンドを示した（図２Ａ～図２Ｂ）。対照的に、新たに設計された三量体は、ａＳＥＣによって決定されるように６５～８１％の範囲の純度を示した（表１）。サイズ排除クロマトグラフィーを使用して三量体を更に最終精製したところ、ＴＰＰ０００１６１２２２は、分析用超遠心分離（ＡＵＣ）によって測定した場合に９８％の単分散性を示し、高分子量種及び低分子量種を含む望ましくない種は２％未満であった（図３）。
【】
構築物の配列：
フォントスキーム：ＣＤ４０Ｌ－リンカー－ＣＤ４０Ｌ－リンカー－ＣＤ４０Ｌ－テザー－ヒトＩｇＧ Ｆｃ
【】
ＴＰＰ０００１８３３１１｜ＯＶＴＳＢ１０｜重＿鎖｜ｈｓｃｔＣＤ４０ＬＧ２＿ＥＫＷｖ２ＮＰＱ（配列番号１）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８３３１０｜ＯＶＴＳＢ９｜重＿鎖｜ｈｓｃｔＣＤ４０ＬＧ２＿ＥＫＷｖ２ＮＰＱ＿Ｇ４Ｓ３（配列番号２）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９９７｜Ｃ４ＬＷ３０｜成熟＿タンパク質｜ＮＰＱ＿Ｇ３Ｓ３＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ＿Ｇ４Ｓ２＿ＩｇＧ１＿ＡＡＳ（配列番号３）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９９６｜Ｃ４ＬＷ２９｜成熟＿タンパク質｜ＮＰＱ＿Ｇ３Ｓ３＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ＿Ｇ４Ｓ３＿ＩｇＧ１＿ＡＡＳ（配列番号４）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９９５｜Ｃ４ＬＷ２８｜成熟＿タンパク質｜ＮＰＱ＿Ｇ３Ｓ３＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ＿Ｇ４Ｓ４＿ＩｇＧ１＿ＡＡＳ（配列番号５）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９９４｜Ｃ４ＬＷ２７｜成熟＿タンパク質｜ＮＰＱ＿Ｇ３Ｓ３＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ＿Ｇ４Ｓ＿ＩｇＧ１＿ＡＡＳ（配列番号６）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９９３｜Ｃ４ＬＷ２６｜成熟＿タンパク質｜ＮＰＱ＿Ｇ３Ｓ３＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ＿ＩｇＧ１＿ＡＡＳ（配列番号７）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９９２｜Ｃ４ＬＷ２５｜成熟＿タンパク質｜ＮＰＱ＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ＿Ｇ４Ｓ２＿ＩｇＧ１＿ＡＡＳ（配列番号８）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９９１｜Ｃ４ＬＷ２４｜成熟＿タンパク質｜ＮＰＱ＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ＿Ｇ４Ｓ３＿ＩｇＧ１＿ＡＡＳ（配列番号９）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９９０｜Ｃ４ＬＷ２３｜成熟＿タンパク質｜ＮＰＱ＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ＿Ｇ４Ｓ４＿ＩｇＧ１＿ＡＡＳ（配列番号１０）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９８９｜Ｃ４ＬＷ２２｜成熟＿タンパク質｜ＮＰＱ＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ＿Ｇ４Ｓ＿ＩｇＧ１＿ＡＡＳ（配列番号１１）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９８８｜Ｃ４ＬＷ２１｜成熟＿タンパク質｜ＮＰＱ＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ＿ＩｇＧ１＿ＡＡＳ（配列番号１２）
【】
【表】
【】
フォントスキーム：ヒトＩｇＧ Ｆｃ－テザーＣＤ４０Ｌ－リンカー－ＣＤ４０Ｌ－リンカー－ＣＤ４０Ｌ
＞ＴＰＰ０００１８２９８６｜Ｃ４ＬＷ１９｜成熟＿タンパク質｜ＩｇＧ１＿ＡＡＳ＿Ｇ４Ｓ２＿ＮＰＱ＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ（配列番号１３）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９８５｜Ｃ４ＬＷ１８｜成熟＿タンパク質｜ＩｇＧ１＿ＡＡＳ＿Ｇ４Ｓ３＿ＮＰＱ＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ（配列番号１４）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９８４｜Ｃ４ＬＷ１７｜成熟＿タンパク質｜ＩｇＧ１＿ＡＡＳ＿Ｇ４Ｓ４＿ＮＰＱ＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ（配列番号１５）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９８３｜Ｃ４ＬＷ１６｜成熟＿タンパク質｜ＩｇＧ１＿ＡＡＳ＿Ｇ４Ｓ＿ＮＰＱ＿Ｇ３Ｓ３＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ（配列番号１６）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９８２｜Ｃ４ＬＷ１５｜成熟＿タンパク質｜ＩｇＧ１＿ＡＡＳ＿Ｇ４Ｓ２＿ＮＰＱ＿Ｇ３Ｓ３＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ（配列番号１７）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９８１｜Ｃ４ＬＷ１４｜成熟＿タンパク質｜ＩｇＧ１＿ＡＡＳ＿Ｇ４Ｓ３＿ＮＰＱ＿Ｇ３Ｓ３＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ（配列番号１８）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１８２９８０｜Ｃ４ＬＷ１３｜成熟＿タンパク質｜ＩｇＧ１＿ＡＡＳ＿Ｇ４Ｓ４＿ＮＰＱ＿Ｇ３Ｓ３＿ｓｔｈＣＤ４０Ｌ（配列番号１９）
【】
【表】
【】
＞ＴＰＰ０００１６１２２２｜Ｃ４０Ｗ３３｜成熟＿タンパク質｜ＪＮＪ７５３４７４１５（配列番号３２）
【】
【表】
【】
実施例３：ＨＥＫ－ＢＬＵＥアッセイ
分子が機能的に活性なＣＤ４０アゴニストであることを確実にするために、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅレポーター細胞株（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を使用して天然ＣＤ４０受容体を活性化する三量体融合タンパク質の能力をアッセイした。
【】
ＩｎｖｉｖｏｇｅｎからのＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＣＤ４０Ｌ細胞を、ＤＭＥＭ、２ｍＭのＧｌｕｔａＭＡＸ、１０％の熱不活性化ＦＢＳ、１００μｇ／ｍＬのＮｏｒｍｏｃｉｎ及び１００μｇ／ｍＬのＰｅｎ－Ｓｔｒｅｐを含有する増殖培地中で培養した。細胞を、アッセイ設定のために試験培地（ＤＭＥＭ＋１０％の熱不活性化ＦＢＳ＋１００μｇ／ｍＬのＰｅｎＳｔｒｅｐ）中２．８×１０５細胞／ｍＬで調製した。１８０μＬの細胞懸濁液を９６ウェルプレートに添加して、最終密度を５×１０４細胞／ウェルとした。２０μＬの被験物質を各ウェルに添加して、ウェル当たり２００μＬの総体積とした。プレートをＣＯ２インキュベーター中３７℃で２０～２４時間インキュベートした。ＩｎｖｉｖｏｇｅｎからのＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ溶液を製造業者のプロトコルに従って調製し、１８０μＬの溶液を９６ウェル平底プレートの各ウェルに添加した。２０μＬの誘導ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＣＤ４０Ｌ細胞上清をアッセイプレートに添加し、３７℃でインキュベートした。分光光度計（６３５ｎｍ）を用いてＳＥＡＰレベルを決定した。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅレポーターアッセイを用いて試験したＣＤ４０Ｌ三量体の機能的活性を、図５Ａに示す。単球由来樹状細胞活性化アッセイの結果を、図５Ｂに示す。架橋抗体処理を伴わない成熟樹状細胞活性化アッセイの結果を、図５Ｃに示す。
【】
ＴＰＰ０００１８２９８３は、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅレポーターアッセイを使用して、元の分子ＴＰＰ０００１６１２２２と比較した場合、活性の１００倍の増加を示した（図５Ａ）。
【】
実施例４：ＭＳＤ電気化学発光検出アッセイ
組換えＣＤ４０受容体への融合タンパク質の結合を測定するために、メソスケールディスカバリー生物発光アッセイ（ＭＳＤ）アッセイを使用して、操作された分子の結合特性を比較した。
【】
ストレプトアビジンセンサープレートを１０μｇ／ｍＬのビオチン化ＣＤ４０で４℃で一晩コーティングした。各プレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）で３回洗浄した。被験物質の３倍希釈系列を、０．２％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳ中で調製し、５０μＬを、振盪しながら室温で１時間プレートに適用した。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、最終濃度２μｇ／ｍＬの抗ヒトＦｃ検出試薬を、振盪しながら室温で１時間適用した。各プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、１５０μＬの１×読み取り緩衝液を各プレートに添加し、データをＭＳＤ機器で収集した。データをＧＲＡＰＨＰＡＤ Ｐｒｉｓｍ ８ソフトウェアにインポートし、分析し、３つの別個の実験の結果に基づいてプロットした。
【】
新たに設計された三量体は、ＭＳＤ及びＳＰＲの両方を使用して、元の設計された三量体と比較して増加した結合を示した（実施例４及び５に記載されている）（図４Ａ～図４Ｃ）。
【】
実施例５：ＣＤ４０Ｌについての表面プラズモン共鳴分析
組換えＣＤ４０受容体への融合タンパク質の結合を測定するために、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを使用して、操作された分子の結合特性を比較した。
【】
Ｂｉａｃｏｒｅの技術による表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）は、１つの相互作用物質がセンサー表面上に固定化又は捕捉されることを必要とする。他の相互作用物質は、改変されたセンサー表面上を流れる。センサー表面上で起こる２つのタンパク質の相互作用は、機器応答の変化を測定することによってリアルタイムでモニターされる。ＣＤ４０ＬについてのＳＰＲ実験を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ光学バイオセンサー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して行った。０．０５％のＰ２０を含有するＨＢＳ緩衝液中でサンプルを調製し、Ｃ１センサーチップを使用して２５℃で実験を行った。チップを１００ｍＭのＧｌｙ ｐＨ１２－０．３％Ｔｒｉｔｏｎで前処理し、これに続いてヤギ抗ヒトＦｃ抗体の共有結合固定化を行った。ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγ断片特異的抗体を１０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ４．５で希釈し、約６００応答単位（response unit、ＲＵ）を、アミンカップリング化学を用いてＣ１チップのカルボキシメチル化デキストラン表面にカップリングさせた。表面上に残留する反応基を、エタノールアミンＨＣｌを使用して不活化した。結合実験を行うために、＞５０応答単位（ＲＵ）のＣＤ４０Ｌ－Ｆｃ融合構築物を捕捉し、続いて４．７ｎＭ～３００ｎＭの濃度のｈｕ ＣＤ４０を５０μＬ／分で注入した。会合相を３分間モニターし、解離相を１０分間モニターした。センサーチップ表面を、０．８５％のＨ３ＰＯ４の注入によって再生した。ＣＤ４０Ｌ構築物を含まないフローセルを参照として使用した。Ｉｎｓｉｇｈｔソフトウェア、バージョン２（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してデータを処理した。データのダブルレファレンスサブトラクション（double reference subtraction）を実施して、シグナル及び機器のノイズに対するバッファの寄与を補正した。
【】
興味深いことに、新たに設計された三量体は、ＭＳＤ及びＳＰＲの両方を使用して、元の設計された三量体と比較して増加した結合を示した（図４Ａ～図４Ｃ）。
【】
実施例６：ＣＤｃ＋樹状細胞活性化アッセイ
ヒト由来免疫細胞を活性化する三量体融合物の能力を評価するために、ＣＭＶリコールアッセイ（以下の実施例７）及び樹状細胞交差提示アッセイを用いた。
【】
予め選別されたＣＤ１ｃ＋樹状細胞を解凍し、次いで、８０ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ及び８０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ）を含有する完全ＲＰＭＩ １６４０（１０％ＦＢＳ、Ｌ－グルタミン、非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、及びｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ）中、２×１０６細胞／ｍＬで、３７℃のインキュベーターにおいて一晩インキュベートした。翌日、細胞を完全ＲＰＭＩで洗浄し、９６ウェル丸底プレートに１×１０５細胞／ウェルで播種した。樹状細胞を滴定濃度の選択されたＣＤ４０アゴニスト分子で活性化し、３７℃で２４時間インキュベートした。細胞を洗浄し、細胞外樹状細胞活性化マーカーについてフローサイトメトリー分析を行った。
【】
細胞表面マーカー、主にＣＤ８０及びＣＤ８６の相対的シフトを、三量体融合タンパク質の存在下及び非存在下で測定した。驚くべきことに、ＴＰＰ０００１８２９８３は、他の既知のＣＤ４０Ｌアゴニスト三量体と比較した場合、ＤＣ活性化及びＴ細胞活性化の増加を示した（実施例７、下記）（図５Ｂ、図６Ａ～図６Ｄ及び図７Ａ～図７Ｂ）。
【】
ＣＤ４０Ｌ三量体融合タンパク質がそれ自体で活性を有するという仮説（すなわち、それらのＦｃ部分間の相互作用を介してＣＤ４０Ｌ三量体融合タンパク質の２つのコピーの二量体を形成することなく）を試験するために、二量体形成を排除したＣＨ３ドメインにおける変異を有するＦｃ単量体ペプチドに融合されたＣＤ４０Ｌ三量体を含有する分子を設計し、構築した（「Ｍｏｎｏ Ｆｃ」分子、例えば、図１Ｂを参照されたい）。これらのＭｏｎｏ－Ｆｃ分子を、２人の別々のドナーを用いて、２４時間のヒトＤＣ活性化アッセイにおいて試験した。ＡＰＣ活性化のマーカーであるＣＤ８６の上方制御は、野生型ＣＤ４０Ｌと同様のレベルで観察され（データは示さず）、ＣＤ４０Ｌ三量体の単独が活性であることを示した。
【】
実施例７：単球由来樹状細胞を用いたＴ細胞活性化アッセイ
予め選別された単球を解凍し、次いで、８０ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ及び８０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ）を含有する完全ＲＰＭＩ １６４０（１０％ＦＢＳ、Ｌ－グルタミン、非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、及びｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ）中、２×１０６細胞／ｍＬで、３７℃のインキュベーターにおいて５日間、単球由来樹状細胞に分化させた。３日目に、１６０ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ及び１６０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４を含有する等容量の完全ＲＰＭＩを添加した。５日目に、細胞を完全ＲＰＭＩで洗浄し、９６ウェル丸底プレートに３×１０４細胞／ウェルで播種した。単球由来ＤＣを使用してＴ細胞活性化を評価するために、滴定量の選択されたＣＤ４０アゴニスト分子、３×１０５個の適合したドナーＴ細胞、ＣＥＦペプチド（サイトメガロウイルス、エプスタイン－バーウイルス、及びインフルエンザウイルスペプチド；ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ）を１μｇ／ｍＬの最終濃度で、及びＩＬ－１５を１０μｇ／ｍＬの最終濃度で（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ）添加した。２日目に、培地の半分を、２０μｇ／ｍＬのＩＬ－１５及び２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有する完全ＲＰＭＩと交換した。５日目に、培地の半分を、２０μｇ／ｍＬのＩＬ－１５、２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、最終濃度１μｇ／ｍＬのＣＥＦペプチド、最終濃度１：２００のＣＤ１０７ａ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及び１×タンパク質輸送阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を含有する完全ＲＰＭＩと交換した。続いて、細胞を３７℃のインキュベーター中で一晩インキュベートし、次いで、細胞内エフェクターサイトカインの産生についてフローサイトメトリー分析に進んだ。
【】
まとめると、実施例は、新たに最適化されたＣＤ４０Ｌ三量体であるＴＰＰ０００１８２９８３が、安定で機能的に優れたＣＤ４０アゴニストであることを示している。
【】
実施例８：分析用超遠心分離。
１．２ｃｍのＢｅｃｋｍａｎセンターピース（５０Ｋｒｐｍの速度に設定）及び石英窓を備える遠心セルにサンプルをロードした。細胞を集め、１３０ｌｂまでトルクを与える。遠心セルを、Ａｎ－５０（８穴）又はＡｎ－６０（４穴）ローターに入れ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｏｐｔｉｍａ ＡＵＣチャンバ内に配置した。実行を開始する前に、チャンバ内のローターで少なくとも１時間、ＡＵＣの温度を２０．５℃に平衡化した。スキャンカウント（２５０スキャン）、スキャン収集の頻度（９０秒）、データ分解能（１０μＭ）で、ｍＡｂサンプルについて４０Ｋｒｐｍでランを実行した。吸光度データを２８０ｎｍで収集した。最初に、メニスカス位置を決定し、沈降分布プロファイルを観察するために、ソフトウェアプログラムＤＣＤＴ（Ｐｈｉｌｏ ２００６）を使用してデータを分析した。次いで、データを、直接境界適合ソフトウェア（Ｓｔａｆｆｏｒｄ ａｎｄ Ｓｈｅｒｗｏｏｄ，Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｃｈｅｍ １０８（１－３）：２３１－２４３（２００４））を使用して分析した。メニスカス位置をＤＣＤＴ＋によって決定し、ベースラインを７．２に設定し、適合範囲を手動で選択した。２つの種の非相互作用モデルを使用して、単量体に対応する第１の種及び二量体に対応する第２の種とデータを適合させた。
【】
実施例９：抗体の抗腫瘍活性
操作された分子のインビボ抗腫瘍活性を評価するために、結腸腺がん腫瘍増殖を、操作された分子ＴＰＰ０００１８２９８３（Ｃ４ＬＷ１６）で処置したヒトＣＤ４０ノックインマウスモデルにおいて評価した。ＴＰＰ０００１８２９８３の投薬量及びレジメンは、遺伝子送達プラットフォームからのコードされたタンパク質の発現を模倣するように選択され（例えば、ｍＲＮＡ、又はアデノ随伴ウイルスなどによってコードされた形態など）、組換えタンパク質療法と比較して最適以下であると考えられる。
【】
ヒトＣＤ４０ノックインマウスに、５×１０５個のＭＣ３８ ５ＡＧ細胞を移植した。腫瘍体積が約１００ｍｍ３に達したとき、マウスを処置群及び対照群に無作為に分けた。次いで、マウスに２０μｇのＴＰＰ０００１８２９８３又は陰性対照アイソタイプ抗体のいずれかを、無作為化後１日目、４日目、及び６日目に静脈内投与し、腫瘍増殖を経時的に測定した。
【】
処置期間中、ＴＰＰ０００１８２９８３は、アイソタイプ対照と比較して４９．９９％の腫瘍増殖阻害及び０．０３６のｐ値を有する強い抗腫瘍活性を示した（データは示さず）。
【】
これらの結果は、操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、最適以下の低投薬量であっても腫瘍増殖を効果的に阻害することができることを示している。
【】
実施例１０：ウイルスクリアランス
操作された分子がウイルスクリアランスを増強する能力を、ヒトＣＤ４０ノックインマウスモデルにおいて評価する。６～１２週齢の雌マウスの群に、尾静脈を介して１×１０７ｐｆｕのインフルエンザウイルスを静脈内注射する。接種したマウスを無作為に処置群と対照群に分ける。次いで、処置群のマウスに、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドを静脈内注入する。対照群のマウスに、ＰＢＳ又は陰性対照アイソタイプ抗体を注入する。マウスにおけるウイルス力価を経時的に測定する。
【】
処置期間中、操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を投与されたマウスは、陰性対照アイソタイプ抗体又はＰＢＳを投与されたマウスよりも低いウイルス力価及び速いウイルスクリアランスを有する。
【】
これらの結果は、本開示による操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、インフルエンザウイルスのクリアランスを効果的に増強することを示すものである。
【】
実施例１１：ワクチンアジュバント
操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を、ヒトＣＤ４０ノックインマウスにおいてワクチン組成物に対する免疫応答を増強するそれらの能力について評価する。
【】
ヒトＣＤ４０ノックインマウスを無作為に群に分け、標的ウイルス抗原を含むワクチン組成物を投与する。本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドを、ワクチン組成物と同時に又は連続してマウス（処置群）に投与する。対照群では、操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質の代わりにＰＢＳをマウスに投与する。処置群及び対照群におけるウイルス抗原に対するマウスの免疫応答を経時的にモニターする。結果は、処置群のマウスが、対照群のマウスと比較して、ウイルス抗原に対して有意に高い免疫応答を発揮したことを示す。特に、標的ウイルス抗原に特異的に結合する抗体の力価は有意に高く、処置群のマウスにおける抗体産生形質細胞の濃度は、対照と比較して処置群のマウスにおいて有意に高い。
【】
処置群及び対照群のマウスを観察期間の終わりに殺処分し、ウイルスに感染していることが分かっている解剖組織（例えば、肺）を単離し、更なる分析のために調製する。インサイチュ免疫組織化学研究において、樹状細胞についての細胞特異的マーカーは、Ａｌｅｘａ（商標）Ｆｌｕｏｒ ４８８を使用して染色され、これにより、蛍光顕微鏡下で緑色のドットとして組織サンプル中の樹状細胞を可視化する。ワクチン組成物に使用される標的ウイルス抗原は、Ａｌｅｘａ（商標）Ｆｌｕｏｒ ５６８で染色され、抗原分子を赤色ドットとして可視化する。ウイルス抗原を提示する樹状細胞は、２つの蛍光シグナルの共局在化として可視化される。組織サンプル中の樹状細胞の総数及びウイルス抗原を提示する樹状細胞のパーセンテージは、蛍光顕微鏡を用いて測定される。結果は、ワクチン組成物のみを受けたマウス（対照群）と比較して、操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質と一緒にワクチン組成物を受けたマウス（処置群）において、ウイルス抗原を提示する成熟樹状細胞のパーセンテージの有意な増加を示す。
【】
抗原提示細胞によるウイルス抗原の提示に対する操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質の効果を更に評価するために、免疫沈降研究を行って、ウイルス抗原とＭＨＣ複合体との間の会合を測定する。殺処分したマウスから切除した肺組織のホモジネートを、標準プロトコルに従って調製する。ホモジネートを、クラスＩ ＭＨＣ又はクラスＩＩ ＭＨＣ ＩＩ分子に特異的に結合するモノクローナル抗体でコーティングされたビーズとともに、抗体とその標的タンパク質及び組織サンプル中のタンパク質複合体との会合を可能にする適切な条件下でインキュベートする。次いで、遠心分離によってビーズを組織から分離し、タンパク質及びコーティングされた抗体と会合したタンパク質複合体を一緒にプルダウンする。次いで、プルダウンされたタンパク質サンプルを、ウェスタンブロットによってその内容物を分析するために処理する。標的ウイルス抗原に特異的なモノクローナル抗体が使用される。結果は、ワクチン組成物のみを受けたマウス（対照群）と比較して、操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質と一緒にワクチン組成物を受けたマウス（処置群）から単離されたサンプルからのＭＨＣ分子（本研究で試験したクラスＩ及びクラスＩＩ分子の両方）で免疫沈降されたウイルス抗原の量の有意な増加を示す。
【】
これらの結果は、本開示による操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、アジュバントとしてワクチンと共投与された場合に、ワクチンに対する免疫応答を効果的に増強することを示すものである。免疫応答の増加は、少なくとも、免疫された動物における抗原提示細胞（樹状細胞など）によるウイルス抗原の提示の増加に起因し得る。
【】
長期免疫記憶に対する操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質の効果をモニターするために、０日目に、本開示による三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を含むポリペプチドと組み合わせて初回用量のワクチン組成物をマウスに投与する（処置群）。次に、マウスを第１群の追加免疫マウスと第２群の非追加免疫マウスに分け、追加免疫マウスには７日目にワクチン組成物の２回目の投与を行い、非追加免疫マウスには７日目にＰＢＳを投与する。対照群では、マウスにワクチン組成物のみを０日目に投与し、追加免疫群及び非追加免疫群に分けて、それぞれワクチン組成物又はＰＢＳの第２の用量を７日目に投与する。処置群及び対照群におけるウイルス抗原に対するマウスの免疫応答を経時的にモニターする。
【】
結果は、処置群及び対照群の両方のマウスが、ワクチン組成物の初回用量を受けた後に、標的ウイルス抗原に特異的に結合する抗体を産生することを示す。処置群のマウスでは、１４日目及び２８日目に、追加免疫されていないマウスの抗体力価は高いままであり、追加免疫されたマウスの抗体力価に匹敵する。対照群のマウスでは、非追加免疫マウスにおける抗体力価は、２８日目に追加免疫マウスよりも有意に低い。２８日目にマウスを殺処分し、対照群のマウスがメモリーＢ細胞を生じさせることが観察されるが、対照群マウス（追加免疫又は非追加免疫）からはメモリーＢ細胞形成は観察されない。
【】
これらの結果は、本開示による操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質が、ウイルス抗原を標的とする体液性免疫応答及び抗体産生を効果的に増強し、ウイルスに対する免疫記憶のより速い形成を促進することを示すものである。本開示による操作された三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質は、対象における標的ウイルス感染の予防のために特別に調整されたワクチン組成物のアジュバントとして使用することができる。
【】
実施例１２：Ｆｃ単量体ペプチド活性
Ｆｃ単量体ペプチドは、Ｆｃ単量体が活性を有するという仮説を試験するために設計される。Ｆｃ単量体を、２人の別々のドナーを用いて、２４時間のヒトＤＣ活性化アッセイにおいて試験する。ＷＴ ＣＤ４０Ｌ活性と同様に、ＣＤ８６は上方制御され、これはＡＰＣ活性化のマーカーであり、Ｆｃ単量体が活性であることを示す。
【】
実施例１３：治療の適合性を決定するための予後診断方法
本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質による治療から利益を得るがん又は固形腫瘍を有する患者の個体又は亜集団は、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質の投与の際に予後診断マーカーの存在若しくは非存在、又はレベルの上昇若しくは低下を探す予後診断アッセイを使用して特定することができる。したがって、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質による治療に反応性であると特定された対象を治療することができる。あるいは、それらは、例えば、がん又は固形腫瘍が、本開示による単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質の投与を含む治療に対してより応答性であるかどうかを特定するために、エクスビボ予後診断アッセイを使用して、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質からの潜在的な利益について更にスクリーニングされ得る。
【】
エクスビボ予後診断アッセイは、候補対象由来の試験生体サンプル及び対照生体サンプルを提供することであって、これらの生体サンプルは、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質でインビボ又はエクスビボのいずれかで刺激されたＣＤ４０発現抗原提示細胞を含む、提供することと、試験生体サンプル内の少なくとも１つのバイオマーカーの発現レベルを検出することと、バイオマーカーの発現レベルを、単鎖三量体ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質と接触させていない対照生体サンプルにおいて検出された対応する発現レベルと比較することと、を含む。これらのエクスビボ予後診断アッセイにおいて使用するためのバイオマーカーには、その発現レベルが治療介入に対する応答性の予後診断指標であるタンパク質及び／又は遺伝子が含まれる。
【】
実施例１４：精製ｍＣＤ４０ａｇ（マウス）と比較した精製ｈＣＤ４０ａｇ（ヒト）の生物活性
精製ｈＣＤ４０ａｇ（Ｃ４ＬＷ８４；配列番号４４））の生物活性を精製ｍＣＤ４０ａｇ（Ｃ４ＬＬＷ１４１；配列番号４７）と、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅレポーターアッセイにおいて比較した。このアッセイは、ヒトＣＤ４０遺伝子及びＮＦκＢ誘導性分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）構築物で安定にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞からなる。レポーター細胞は、比色読み出しの生成によってＣＤ４０アゴニスト結合に応答する。このアッセイでは、マウス及びヒトＣＤ４０アゴニストの生物活性を、安定に発現されたヒトＣＤ４０受容体への結合後に測定する。マウスＣＤ４０Ｌはこのアッセイにおいて交差反応性であり、組換えマウスＣＤ４０Ｌ及びヒトＣＤ４０Ｌは同様の生物活性を示した。図１０に示すように、ｈＣＤ４０ａｇ及びｍＣＤ４０ａｇペイロードは、ほぼ同一の生物活性を示し、代用ウイルスにおける代用ＣＤ４０アゴニストペイロードとしてのｍＣＤ４０ａｇの選択を裏付けた。
【】
実施例１５：操作されたＣＤ４０Ｌによるマウス脾細胞の刺激
２４ウェルプレートにおいて、２×１０６個のマウス脾細胞を、１０％ＦＣＳ、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ．及びβ－メルカプトエタノールを補充したＲＰＭＩの総容量２．３ ｍＬ中で、操作されたｍＣＤ４０Ｌ（Ｃ４ＬＷ１４１；配列番号４７）で刺激した。操作されたＣＤ４０Ｌタンパク質を、０ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、及び５０ｎｇ／ｍＬの最終濃度で細胞に添加した。プレートを３７℃及び５％ＣＯ２で５日間インキュベートした。次いで、精製した細胞を抗Ｂ２２０抗体及び抗ＣＤ１３８抗体で共染色し、マーカーの発現をフローサイトメトリーでの分析によって５日目に決定した（図１１）。
【】
増殖におけるＣＤ４０アゴニストの評価も行った。図１２Ａ～図１２Ｂに示すように、細胞は、ＣＤ４０アゴニスト（マウス；図８Ａ～図８Ｂ）の濃度を増加させると２倍に増殖した。
【】
実施例１６：ＣＤ４０アゴニストＣ４ＬＷ８４
抗ＣＴＬＡ－４アンタゴニストペイロードは機能的Ｆｃ領域を必要とすることが発見された。したがって、抗ＣＴＬＡ－４アンタゴニストとヘテロ二量体化しないＣＤ４０アゴニスト構築物を操作し、評価した。
【】
２つの代替ＣＤ４０アゴニスト構築物を設計した：ｈＣＤ４０ａｇ（Ｃ４ＬＷ８４；配列番号４４）（これは、ＣＤ４０Ｌ三量体束のＦｃ欠損三量体である）、及びｈＣＤ４０ａｇ２（Ｃ４ＬＷ１６；配列番号１６）（これは、ｈｕＩｇＧ１とのヘテロ二量体化を嫌うように設計されたＦｃ領域に連結された二価ＣＤ４０Ｌ三量体束を含む）。
【】
ｈＣＤ４０ａｇ及びｈＣＤ４０ａｇ２を、ＣＤ４０経路の活性化時にシグナルを放出するレポーター細胞を使用して、ＣＤ４０シグナル伝達を誘導するそれらの能力について最初に試験した。手短に言えば、ＣＤ４０レポーター細胞を、Ｆｃ含有Ｆｃ構築物及び代替Ｆｃ構築物の両方の漸増濃度でインキュベートした。図１３Ａに示されるように、ｈＣＤ４０ａｇ及びｈＣＤ４０ａｇ２の両方が、２つの陽性対照と同様に、ＣＤ４０アゴニスト活性を有していた。
【】
ｈＣＤ４０ａｇ及びｈＣＤ４０ａｇ２を、ＤＣを活性化するそれらの能力について更に試験し、ＣＤ８６活性化マーカーのレベルによって評価した。手短に言えば、一次ＤＣを、Ｆｃ含有Ｆｃ構築物及び代替Ｆｃ構築物の濃度を増加させながら一晩インキュベートした。インキュベーション後、細胞を、フローサイトメトリーによってＣＤ８６ ＤＣ活性化マーカー発現の増加について評価した。図１３Ｂに示されるように、Ｆｃ欠損ｈＣＤ４０ａｇ ＣＤ４０アゴニストは、ＤＣを活性化して、より高レベルのＣＤ８６活性化マーカーを用量依存的様式で発現させた。
【】
次に、ＣＤ４０アゴニスト構築物を、ヒトＣＤ４０ノックインマウスにおいてＭＣ３８－５ＡＧ腫瘍を使用してインビボで抗腫瘍活性について試験した。簡潔には、ヒトＣＤ４０ノックインマウスに５×１０５個のＭＣ３８－５ＡＧ細胞を移植し、腫瘍が約１００ｍｍ３になったときに無作為化した。２０μｇの陰性対照アイソタイプ抗体、ｈＣＤ４０ａｇ、ｈＣＤ４０ａｇ２、又はモル当量のＣＤ４０アゴニスト（ＣＤ４０Ｌ）ＷＴモノマーを、３回の処置のために４日毎に腫瘍内（ＩＴ）注射した。腫瘍成長阻害及び統計分析をＩｎＶｉｖｏＬＤＡバージョン４．８によって行った。図１４Ａ～図１４Ｂに示すように、アイソタイプ対照と比較して、ｈＣＤ４０ａｇ、ｈＣＤ４０ａｇ２及びＷＴ ＣＤ４０アゴニスト（ＣＤ４０Ｌ）モノマーは、それぞれ４６．１２％、２７．１２％及び４０．９１％の腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を示した。Ｆｃレス構築物ｈＣＤ４０ａｇによる処置期間中に強い抗腫瘍活性が観察され、統計的有意性は０．０５１のｐ値に達した。インビトロ活性とインビボ活性を組み合わせると、ＣＤ４０アゴニストペイロードとしてｈＣＤ４０ａｇが選択された。
＊＊＊＊＊
【】
当業者は、広い発明概念から逸脱することなく、上で説明される実施形態に変更を行うことができることを理解するであろう。したがって、本発明は、開示された特定の実施形態に制限されず、本明細書によって定義されるように本発明の趣旨及び範囲内の修正を包含することを意図するものと理解される。
【図】
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【国際調査報告】

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