特開 2016-138097 安定な水性抗体製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】特開2016-138097(P2016-138097A)

(43)【公開日】2016年8月4日

(54)【発明の名称】安定な水性抗体製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20160708BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20160708BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20160708BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20160708BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20160708BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20160708BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20160708BHJP

   A61K 47/34 20060101ALI20160708BHJP

   A61K 47/18 20060101ALI20160708BHJP

   C07K 16/24 20060101ALN20160708BHJP

【ＦＩ】

   A61K39/395 D

   A61K39/395 N

   A61P35/00

   A61K9/08

   A61K47/10

   A61K47/12

   A61K47/22

   A61K47/26

   A61K47/34

   A61K47/18

   C07K16/24ZNA

【審査請求】未請求

【請求項の数】24

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

【全頁数】42

(21)【出願番号】特願2016-12202(P2016-12202)

(22)【出願日】2016年1月26日

(31)【優先権主張番号】62/108, 811

(32)【優先日】2015年1月28日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】62/265, 514

(32)【優先日】2015年12月10日

(33)【優先権主張国】US

(71)【出願人】

【識別番号】593141953

【氏名又は名称】ファイザー・インク

(74)【代理人】

【識別番号】100133927

【弁理士】

【氏名又は名称】四本 能尚

(74)【代理人】

【識別番号】100137040

【弁理士】

【氏名又は名称】宮澤 純子

(74)【代理人】

【識別番号】100147186

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 眞紀

(74)【代理人】

【識別番号】100174447

【弁理士】

【氏名又は名称】龍田 美幸

(72)【発明者】

【氏名】レベッカ リー イングラム

(72)【発明者】

【氏名】サラ エリザベス ウィサー

【テーマコード（参考）】

4C076

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA12

4C076BB13

4C076BB16

4C076CC27

4C076DD01F

4C076DD09F

4C076DD42Z

4C076DD49Q

4C076DD60Z

4C076DD67

4C076EE23F

4C076FF63

4C085AA13

4C085BB11

4C085EE01

4C085EE05

4C085EE07

4C085GG02

4C085GG04

4H045AA11

4H045AA30

4H045DA76

4H045EA28

(57)【要約】

【課題】抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体を含む、長い有効期間を有する安定な水性医薬製剤を提供すること。
【解決手段】本発明は、抗体の医薬製剤の分野に関する。具体的には、本発明は、安定な液体抗体製剤ならびにその薬学的な調製および使用に関する。本発明は、例えば、抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体の水性製剤である。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

約２５ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体；
緩衝液；
ポリオール；
界面活性剤；
キレート化剤
を含み、
約５．０〜約６．０のｐＨを有する
水性製剤。

【請求項2】

緩衝液がコハク酸緩衝液またはヒスチジン緩衝液である、請求項１に記載の水性製剤。

【請求項3】

緩衝液の濃度が、約１ｍＭ〜約１００ｍＭである、請求項１または２に記載の水性製剤。

【請求項4】

ポリオールがスクロースである、請求項１から３のいずれか一項に記載の水性製剤。

【請求項5】

ポリオールの濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬである、請求項１から４のいずれか一項に記載の水性製剤。

【請求項6】

界面活性剤がポリソルベートである、請求項１から５のいずれか一項に記載の水性製剤。

【請求項7】

ポリソルベートがポリソルベート８０（ＰＳ８０）である、請求項６に記載の水性製剤。

【請求項8】

界面活性剤の濃度が、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌである、請求項１から７のいずれか一項に記載の水性製剤。

【請求項9】

キレート化剤がＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）である、請求項１から８のいずれか一項に記載の水性製剤。

【請求項10】

キレート化剤の濃度が、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌである、請求項１から９のいずれか一項に記載の水性製剤。

【請求項11】

抗体が、配列番号１に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）；配列番号２に示すアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；配列番号３に示すアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３；さらに、配列番号４に示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１；配列番号５に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに配列番号６に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の水性製剤。

【請求項12】

抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨ領域が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＶＬ領域が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の水性製剤。

【請求項13】

少なくとも約３６カ月の有効期間を有する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の水性製剤。

【請求項14】

約１５ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌの抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体；
約１ｍＭ〜約１００ｍＭの緩衝液；
約１ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬのポリオール；
約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの界面活性剤；
約０．００１ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌのキレート化剤
を含み、
約５．０〜約６．０のｐＨを有する
水性製剤。

【請求項15】

約１５ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体；
約１ｍＭ〜約１００ｍＭの緩衝液；
約１ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬのポリオール；
約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの界面活性剤；
約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌのキレート化剤
を含み、
約５．０〜約６．０のｐＨを有する水性製剤であって、
抗体が、配列番号１に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）；配列番号２に示すアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；配列番号３に示すアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３；さらに、配列番号４に示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１；配列番号５に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに配列番号６に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む
水性製剤。

【請求項16】

抗体の濃度が、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約２２．５ｍｇ／ｍＬ〜約２７．５ｍｇ／ｍＬ、または約９０ｍｇ／ｍＬ〜約１６０ｍｇ／ｍＬである、請求項１から１５のいずれか一項に記載の水性製剤。

【請求項17】

２５ｍｇ／ｍｌの抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体；
約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液またはコハク酸緩衝液；
約８５ｍｇ／ｍＬのスクロース；
約０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０；
約０．０５ｍｇ／ｍｌのＥＤＴＡ
を含み、
約５．５または５．８のｐＨを有する水性製剤であって、
抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む
水性製剤。

【請求項18】

少なくとも約３６カ月の有効期間を有する、請求項１から１７のいずれか一項に記載の水性製剤。

【請求項19】

癌を、その治療または阻害を必要とする対象において治療または阻害するための方法であって、治療有効量の請求項１から１８のいずれか一項に記載の水性製剤を対象に投与するステップを含む方法。

【請求項20】

癌が、結腸直腸癌、直腸癌、非扁平上皮性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、転移性腎細胞癌（ｍＲＣＣ）、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭頚部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫、神経膠芽腫、子宮頚癌、乳癌および多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

製剤が、対象に皮下または静脈内投与される、請求項１９または２０に記載の方法。

【請求項22】

対象がヒトである、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

対象の癌を治療するための医薬を製造するための、請求項１から１８のいずれか一項に記載の水性製剤の使用。

【請求項24】

癌が、結腸直腸癌、直腸癌、非扁平上皮性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、転移性腎細胞癌（ｍＲＣＣ）、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭頚部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫、神経膠芽腫、子宮頚癌、乳癌および多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項２３に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗体の医薬製剤の分野に関する。具体的には、本発明は、安定な液体抗体製剤ならびにその薬学的な調製および使用に関する。

【背景技術】

【0002】

治療または予防のために使用することを意図する抗体調製物は、保存および輸送の間の一定期間中に変性、酸化または凝集の作用によりタンパク質の活性または構造的完全性が喪失するのを使用されるまで阻止するための安定化剤を必要とする。これらの問題は、治療のための投与にしばしば所望される、抗体の高い濃度において増悪する。

【0003】

抗体製剤の開発に際して主として目指すところは、抗体、溶解性、安定性およびその抗原に結合する効力を維持することである。溶液中の凝集体および粒子を回避するのが特に望ましく、こうした凝集体および粒子があれば、静脈内または皮下への注射のために使用前の無菌ろ過が必要となったり、投与経路が制限されたりするであろう。抗体調製物の製剤化においては、タンパク質の変性および抗原結合活性の喪失を回避するために、とりわけこれらの要因を慎重に選択することが必要になる。したがって、生理活性を示す抗体の高い濃度を溶液中で安定に支援し、静脈内、眼内、硝子体内、動脈内、くも膜下腔内、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、小孔内、腹腔内、皮内または皮下への注射を含めた、非経口投与に適切である安定な水性抗体製剤が必要である。

【0004】

さらに、抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体についても、そのような安定な水性製剤を提供する必要がある。ＶＥＧＦ抗体は、腫瘍を含めた、病的な血管形成を含む状態または疾患の治療に有用であることが示されている。癌に罹患している患者の医学的必要性を満たすための抗ＶＥＧＦ抗体の安定な水性抗体調製物が必要である。

【0005】

本明細書に引用する全ての刊行物、特許および特許出願はここではそれらの全体が、全ての目的のために、個々の刊行物、特許および特許出願がそれぞれ具体的かつ個々に参照により組み込まれていることを意味するのと同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれている。組み込まれている文献および類似の材料の１つまたは複数が、これらに限定されないが、定義する用語、用語の使用法、記載する技法等を含めて、本出願とは異なるまたはそれと矛盾する場合には、本出願に従う。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】米国特許第４，８１６，５６７号

【特許文献2】ＷＯ９９／５８５７２

【特許文献3】米国特許第５，８０７，７１５号

【特許文献4】米国特許第５，８６６，６９２号

【特許文献5】米国特許第６，３３１，４１５号

【特許文献6】米国特許第５，５３０，１０１号

【特許文献7】米国特許第５，６９３，７６１号

【特許文献8】米国特許第５，６９３，７６２号

【特許文献9】米国特許第５，５８５，０８９号

【特許文献10】米国特許第６，１８０，３７０号

【特許文献11】欧州特許公報第０５１９５９６号

【特許文献12】英国特許出願第９８０９９５１．８号

【特許文献13】米国特許第６，１８０，３７７号

【特許文献14】米国特許第６，０５４，２９７号

【特許文献15】米国特許第５，９９７，８６７号

【特許文献16】米国特許第６，２１０，６７１号

【特許文献17】米国特許第６，３５０，８６１号

【特許文献18】ＷＯ０１／２７１６０

【特許文献19】米国特許第６，０９０，３８２号

【特許文献20】米国特許第６，２５８，５６２号

【特許文献21】米国特許第８，２１６，５８３号

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ

【非特許文献2】Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）

【非特許文献3】Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ

【非特許文献4】Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ

【非特許文献5】Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）

【非特許文献6】Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ

【非特許文献7】Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．ＧｒｉｆｆｉｔｈｓおよびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３〜１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ

【非特許文献8】Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）

【非特許文献9】Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）

【非特許文献10】Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）

【非特許文献11】Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）

【非特許文献12】ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）

【非特許文献13】Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）

【非特許文献14】Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）

【非特許文献15】Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）

【非特許文献16】Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）

【非特許文献17】Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８〜１９８９）

【非特許文献18】Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）

【非特許文献19】Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）

【非特許文献20】Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）

【非特許文献21】ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６（４）：９０１〜９１７、１９８７

【非特許文献22】ＪｏｈｎｓｏｎおよびＷｕ、２０００、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２８：２１４〜８

【非特許文献23】Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１〜１７

【非特許文献24】Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７〜８３

【非特許文献25】Ｍａｒｔｉｎら、１９８９、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ（ＵＳＡ）、８６：９２６８〜９２７２

【非特許文献26】「ＡｂＭＴＭ，Ａ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｐｒｏｇｒａｍ ｆｏｒ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ；Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｌｔｄ．

【非特許文献27】Ｓａｍｕｄｒａｌａら、１９９９、「Ａｂ Ｉｎｉｔｉｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」、ＰＲＯＴＥＩＮＳ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｕｐｐｌ．、３：１９４〜１９８

【非特許文献28】ＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、５：７３２〜４５

【非特許文献29】Ｍａｋａｂｅら、２００８、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８３：１１５６〜１１６６

【非特許文献30】ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５

【非特許文献31】ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、１９９０、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２〜５５４

【非特許文献32】Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９：２９３〜２９９（１９９１）

【非特許文献33】Ｌｏｂｕｇｌｉｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：４２２０〜４２２４（１９８９）

【非特許文献34】Ｓｈａｗら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：４５３４〜４５３８（１９８７）

【非特許文献35】Ｂｒｏｗｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４７：３５７７〜３５８３（１９８７）

【非特許文献36】Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３〜３２７（１９８８）

【非特許文献37】Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４〜１５３６（１９８８）

【非特許文献38】Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２〜５２５（１９８６）

【非特許文献39】Ｄａｕｇｈｅｒｔｙら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：２４７１〜２４７６（１９９１）

【非特許文献40】Ｌｅｕｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４６：１３０６（１９８９）

【非特許文献41】Ｈｏｕｃｋら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．、５：１８０６（１９９１）

【非特許文献42】Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ、１９９０

【非特許文献43】Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ．、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００

【非特許文献44】Ｓａｌｔｚら（１９９９）Ｐｒｏｃ ＡＳＣＯ １８：２３３ａ

【非特許文献45】Ｄｏｕｉｌｌａｒｄら（２０００）Ｌａｎｃｅｔ ３５５：１０４１〜７

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体を含む、長い有効期間を有する安定な水性医薬製剤を提供する。高い抗体濃度を有する本発明の水性医薬製剤は、安定であり（例えば、％ＨＭＭＳ（高分子質量の種）、％ＬＭＭＳ（低分子質量の種）、％断片および酸化の低いレベルを示す）、非経口投与に適切であることが示されている。

【課題を解決するための手段】

【0009】

一態様では、約１５ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌの抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体；緩衝液；ポリオール；界面活性剤；キレート化剤を含み、約５．０〜約６．０のｐＨを有する水性製剤を提供する。

【0010】

いくつかの実施形態では、緩衝液は、コハク酸緩衝液である。いくつかの実施形態では、緩衝液は、ヒスチジン緩衝液である。いくつかの実施形態では、緩衝液の濃度は、約１ｍＭ〜約４０ｍＭである。

【0011】

いくつかの実施形態では、ポリオールは、スクロースである。いくつかの実施形態では、ポリオールの濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍｌである。

【0012】

いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート、例として、ポリソルベート２０または８０である。いくつかの実施形態では、界面活性剤の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌである。

【0013】

いくつかの実施形態では、キレート化剤は、ＥＤＴＡ（エデト酸）である。いくつかの実施形態では、キレート化剤の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌである。

【0014】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）；配列番号２に示すアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；配列番号３に示すアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３；配列番号４に示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１；配列番号５に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに配列番号６に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨ領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＶＬ領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体、例として、抗ＶＥＧＦ抗体（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）またはｒｈｕＭＡＢ ＶＥＧＦ）である。いくつかの実施形態では、抗体の濃度は、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、または約１６０ｍｇ／ｍＬである。

【0015】

別の態様では、約２５ｍｇ／ｍｌの抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）タンパク質；約２０ｍＭのコハク酸緩衝液またはヒスチジン緩衝液；約８５ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０；約０．０５ｍｇ／ｍｌのＥＤＴＡを含む水性製剤を提供し、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、この製剤は、約５．５または５．８のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、抗体は、抗ＶＥＧＦ抗体（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）またはｒｈｕＭＡＢ ＶＥＧＦ）である。

【0016】

別の態様では、癌を、その治療または阻害を必要とする対象において治療または阻害するための方法であって、治療有効量の本明細書に記載する製剤を対象に投与するステップを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、この製剤を、対象の皮下または静脈内に投与する。

【0017】

別の態様では、対象の癌を治療するための医薬を製造するための本明細書に記載する製剤の使用を提供する。

【0018】

いくつかの実施形態では、癌は、結腸直腸癌、直腸癌、非扁平上皮性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、転移性腎細胞癌（ｍＲＣＣ）、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭頚部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫、神経膠芽腫、子宮頚癌、乳癌および多発性骨髄腫からなる群から選択される。

【0019】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載する製剤は、少なくとも約３６カ月の有効期間を有する。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】２５℃におけるＳＳＥＰまたは市販処方（リン酸）中の抗ＶＥＧＦ抗体について、ＳＥ−ＨＰＬＣ（分子ふるい−高速液体クロマトグラフィー）による高分子質量の種の量（％ＨＭＭＳ）を要約したグラフである。

【図2】研究対象の製剤（ＳＳＥＰ）中にあるか、高いレベルの賦形剤または低いレベルの賦形剤のいずれかの中にあり、５℃および３０℃において保存した抗ＶＥＧＦ抗体薬物製品について、高分子質量の種の量（％ＨＭＭＳ）を要約したグラフである。

【図3】４０℃におけるヒスチジン製剤、コハク酸製剤またはリン酸製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体について、ＳＥ−ＨＰＬＣによる高分子質量の種の量（％ＨＭＭＳ）を要約したグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0021】

本明細書は、抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体を含む、長い有効期間を有する安定な水性医薬製剤を開示する。本発明の水性医薬製剤は、抗体の高い濃度を安定に支援し（例えば、少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬの抗体濃度において、％ＨＭＭＳ（高分子質量の種）の低いレベルを示す）、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内または皮内への注射を含めた、非経口投与に適切であることが示されている。したがって、一態様では、約１５ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌの抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体またはその抗原結合性断片；緩衝液；ポリオール；界面活性剤；キレート化剤を含み、約５．０〜約６．０のｐＨを有する水性製剤を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、約１５ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌの抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体）；約１ｍＭ〜約４０ｍＭの緩衝液（例えば、コハク酸緩衝液）；約１ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬのポリオール（例えば、スクロース）；約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０）；約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌのキレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ（またはエデト酸））を含み、約５．０〜約６．０のｐＨを有する水性製剤を提供する。いくつかの実施形態では、抗体濃度は、約２２．５ｍｇ／ｍＬ〜約２７．５ｍｇ／ｍＬである。その他の実施形態では、抗体濃度は、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬである。

【0022】

一般的な技法
本発明の実行には、別段の記載がない限り、分子生物学（組換えの技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来の技法を利用し、これらは当技術の技能に属する。そのような技法は、文献、例として、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．ＧｒｉｆｆｉｔｈｓおよびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３〜１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８〜１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）に十分な説明がある。

【0023】

定義
以下の用語は、別段の記載がない限り、以下の意味を有すると理解するものとする：用語「単離分子」（分子が、例えば、ポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは抗体である場合）は、その起源または由来源に関して、（１）その自然のままの状態において当該分子に伴う天然では付随する成分が付随しない分子、（２）同じ種に由来するその他の分子を実質的に含有しない分子、（３）異なる種に由来する細胞により発現させた分子、または（４）自然界において存在しない分子である。したがって、化学的に合成した分子または当該分子の天然の起源である細胞とは異なる細胞系中で発現させた分子は、当該分子に天然では付随する成分から「単離されている」ことになる。また、当技術分野で周知である精製の技法を使用して単離することによって、分子を、天然では付随する成分を実質的に含有しない状態になすこともできる。分子の純度または均一性を、当技術分野で周知であるいくつかの手段によりアッセイすることができる。例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、および当技術分野で周知の技法を使用する、ポリペプチドを可視化するためのゲル染色を使用して、ポリペプチド試料の純度をアッセイすることができる。特定の目的では、より高い分解能を、ＨＰＬＣまたは精製のための当技術分野で周知であるその他の手段を使用することによって得ることができる。

【0024】

本明細書で使用する場合、用語「製剤」により、抗体に関する場合には、少なくとも１つの緩衝液、少なくとも１つの界面活性剤、少なくとも１つのキレート化剤を含む薬学的に許容できる賦形剤と組み合わせた、ｐＨが定義に従う抗体を記載することを意図する。

【0025】

用語「医薬組成物」または「医薬製剤」は、活性成分の生物学的活性が効果を示すのを可能にするような形態をとる調製物を指す。

【0026】

「薬学的に許容できる賦形剤」（ビヒクル、添加剤）は、対象に安全に投与して、利用する活性成分の効果を示す用量をもたらすことができる賦形剤である。用語「賦形剤」または「担体」は、本明細書で使用する場合、薬物のための希釈剤、ビヒクル、保存剤、結合剤または安定化剤として通常使用される不活性な材料を指す。本明細書で使用する場合、用語「希釈剤」は、薬学的に許容できる（ヒトに投与するのに安全かつ無毒性である）溶媒を指し、本明細書の水性製剤を調製するのに有用である。例示的な希釈剤として、これらに限定されないが、滅菌水および注射用静菌水（ＢＷＦＩ）が挙げられる。

【0027】

「抗体」は、標的、例として、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチド等に、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を通して特異的に結合することが可能な免疫グロブリン分子である。本明細書で使用する場合、この用語は、未変化のポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のみならずまた、別段の特定がない限り、未変化の抗体と特異的な結合について競合するそれらの任意の抗原結合部分、抗原結合部分を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意のその他の改変された立体配置も包含する。抗原結合部分として、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ、例えば、サメおよびラクダ科の抗体）、相補性決定領域（ＣＤＲ）、単鎖可変部断片型抗体（ｓｃＦｖ）、マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）、ミニボディ（ｍｉｎｏｂｏｄｙ）、イントラボディ（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ｖ−ＮＡＲおよびビス−ｓｃＦｖを含めた断片、ならびにポリペプチドであって、特異的な抗原結合を当該ポリペプチドに付与するのに十分である免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドが挙げられる。抗体には、いずれかのクラス、例として、ＩｇＧ、ＩｇＡもしくはＩｇＭ（またはそれらのサブクラス）の抗体が含まれ、抗体は、いずれかの特定のクラスである必要はない。抗体の重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを異なるクラスに帰属させることができる。免疫グロブリンの５つの主要なクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかを、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖の定常領域はそれぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元立体配置が周知である。

【0028】

抗体の「可変領域」は、単独のまたは組み合わせた、抗体の軽鎖の可変領域または抗体の重鎖の可変領域を指す。当技術分野では公知であるが、重鎖および軽鎖の可変領域はそれぞれ、超可変領域としてもまた公知である、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）により接続される４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。対象とする可変領域のバリアント、特に、ＣＤＲの外部（すなわち、フレームワーク領域中）のアミノ酸残基における置換を有するバリアントを所望する場合、適切なアミノ酸の置換、好ましくは、保存的アミノ酸の置換を、対象とする可変領域をその他の抗体の可変領域と比較することによって同定することができ、この場合のその他の抗体の可変領域は、対象とする可変領域と同じ定められたクラスに属するＣＤＲ１配列およびＣＤＲ２配列を含有する（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６（４）：９０１〜９１７、１９８７）。

【0029】

特定の実施形態では、ＣＤＲの最終的な描写および抗体の結合部位を含む残基の同定を、抗体の構造を解くことおよび／または抗体−リガンドの複合体の構造を解くことによって達成する。特定の実施形態では、それは、当業者に公知である多様な技法のいずれか、例として、Ｘ線結晶構造解析により達成することができる。特定の実施形態では、種々の解析方法を利用して、ＣＤＲ領域を同定し、または見積もることができる。特定の実施形態では、種々の解析方法を利用して、ＣＤＲ領域を同定し、または見積もることができる。そのような方法の例として、これらに限定されないが、Ｋａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、ＡｂＭの定義、接触の定義、および立体構造による定義が挙げられる。

【0030】

Ｋａｂａｔの定義は、抗体中の残基の番号付けを行うための標準であり、典型的には、ＣＤＲ領域を同定するために使用する。例えば、ＪｏｈｎｓｏｎおよびＷｕ、２０００、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２８：２１４〜８を参照されたい。Ｃｈｏｔｈｉａの定義は、Ｋａｂａｔの定義に類似するが、これは、特定の構造のループの領域の位置を考慮に入れる。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１〜１７；Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７〜８３を参照されたい。ＡｂＭの定義は、抗体の構造をモデル化する、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐにより作られたコンピュータプログラムの統合パッケージソフトを使用する。例えば、Ｍａｒｔｉｎら、１９８９、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ（ＵＳＡ）、８６：９２６８〜９２７２；「ＡｂＭ^ＴＭ，Ａ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｐｒｏｇｒａｍ ｆｏｒ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ；Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｌｔｄ．を参照されたい。ＡｂＭの定義は、知識データベースとａｂ ｉｎｉｔｉｏ法との組合せ、例として、Ｓａｍｕｄｒａｌａら、１９９９、「Ａｂ Ｉｎｉｔｉｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」、ＰＲＯＴＥＩＮＳ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｕｐｐｌ．、３：１９４〜１９８により記載されているものを使用して、一次配列から抗体の三次構造をモデル化する。接触の定義は、入手可能な複合体の結晶構造の解析に基づく。例えば、ＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、５：７３２〜４５を参照されたい。別のアプローチでは、本明細書ではＣＤＲの「立体構造による定義」と呼ぶが、ＣＤＲの位置を、抗原結合にエンタルピーの点で寄与する残基として同定することができる。例えば、 Ｍａｋａｂｅら、２００８、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８３：１１５６〜１１６６を参照されたい。さらなるその他のＣＤＲ境界の定義は、上記のアプローチのいずれにも厳格には従わなくてよいが、にもかかわらず、ＫａｂａｔのＣＤＲの少なくとも一部と重複するが、特定の残基または一連の残基が抗原結合に顕著には影響しないという予測的または実験的知見に照らして、ＣＤＲを短縮させ、または伸ばすことができる。本明細書で使用する場合、ＣＤＲは、アプローチの組合せを含めた、当技術分野で公知の任意のアプローチにより定義されるＣＤＲを指すことができる。本明細書で使用する方法は、これらのアプローチのいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用することができる。２つ以上のＣＤＲを含有する所与の実施形態の場合はいずれも、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、拡張された定義、ＡｂＭの定義、接触の定義、および／または立体構造による定義のいずれかに従って定義することができる。

【0031】

当技術分野では公知であるが、抗体の「定常領域」は、単独のまたは組み合わせた、抗体の軽鎖の定常領域または抗体の重鎖の定常領域を指す。

【0032】

本明細書で使用する場合、「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体が、微量で存在する場合がある天然に存在する可能性がある突然変異を除き同一である。モノクローナル抗体は、極めて特異的であり、単一の抗原部位に対して作られている。さらに、ポリクローナル抗体の調製物は典型的には、異なる決定基（エピトープ）に対して作られた異なる抗体を含むが、それらとは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して作られる。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるという抗体の特徴を意味し、いずれかの特定の方法により抗体を生成する必要があると解釈してはならない。例えば、本発明に従って使用しようとするモノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５により最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製することができ、または組換えＤＮＡ法、例として、米国特許第４，８１６，５６７号に記載の方法によって作製することができる。モノクローナル抗体はまた、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、１９９０、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２〜５５４に記載の技法を使用して生成するファージライブラリーから単離することもできる。本明細書で使用する場合、「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有する、キメラの免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらの断片（例として、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体のその他の抗原結合サブ配列）である非ヒト（例えば、マウスの）抗体の形態を指す。好ましくは、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、その中で、レシピエントのＣＤＲに由来する残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒトの種（ドナー抗体）、例として、マウス、ラットまたはウサギのＣＤＲに由来する残基により置き換えられている。ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にも移入したＣＤＲまたはフレームワーク配列中にも存在しないが、抗体の性能をさらに精緻化および最適化するために含める残基を含むことができる。

【0033】

「ヒト抗体」は、ヒトが生成する抗体および／または本明細書の開示に従うヒト抗体を作製するための技法のいずれかを使用して作製するに至った抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を保有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。

【0034】

本明細書で使用する場合、用語「ヒト抗体」には、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含めることを意図する。ヒト抗体のこの定義は、少なくとも１つのヒト重鎖ポリペプチドまたは少なくとも１つのヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。本発明のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲ、特に、ＣＤＲ３中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発またはｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞突然変異により導入される突然変異）を含むことができる。しかし、用語「ヒト抗体」に、本明細書で使用する場合、別の哺乳動物種、例として、マウスの生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトのフレームワーク配列上にグラフトされている抗体を含める意図はない。

【0035】

用語「キメラ抗体」により、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例として、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を指すことを意図する。

【0036】

本明細書で使用する場合、「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有する、キメラの免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらの断片（例として、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体のその他の抗原結合サブ配列）である非ヒト（例えば、マウスの）抗体の形態を指す。好ましくは、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、その中で、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒトの種（ドナー抗体）、例として、マウス、ラットまたはウサギのＣＤＲに由来する残基により置き換えられている。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）の残基が、対応する非ヒト残基により置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にも移入したＣＤＲまたはフレームワーク配列中にも存在しないが、抗体の性能をさらに精緻化および最適化するために含める残基を含むことができる。一般に、ヒト化抗体は、実質的に全て、または少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインを含み、その中で、全てまたは実質的に全てのＣＤＲ領域が、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、全てまたは実質的に全てのＦＲ領域が、ヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列のＦＲ領域である。また最適には、ヒト化抗体は、免疫グロブリンの定常領域またはドメイン（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部も含む。ＷＯ９９／５８５７２の記載に従って改変されたＦｃ領域を有する抗体が好ましい。ヒト化抗体のその他の形態は、元々の抗体に比して変化させた１つまたは複数のＣＤＲ（ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３、ＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、またはＣＤＲ Ｈ３）を有し、またこれらは、元々の抗体に生じる１つまたは複数のＣＤＲ「に由来する」１つまたは複数のＣＤＲとも呼ばれる。

【0037】

モノクローナル抗体をヒト化するための４つの一般なステップがある。これらは、（１）抗体の軽鎖および重鎖の可変ドメインの開始配列について、ヌクレオチドを決定し、アミノ酸配列を予測するステップ、（２）ヒト化抗体を設計する、すなわち、ヒト化処理に際して使用するための抗体のフレームワーク領域を決定するステップ、（３）ヒト化の方法／技法を実際に行うステップ、ならびに（４）トランスフェクションおよびヒト化抗体の発現を行うステップである。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；第５，８０７，７１５号；第５，８６６，６９２号；第６，３３１，４１５号；第５，５３０，１０１号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；第５，５８５，０８９号；および第６，１８０，３７０号を参照されたい。

【0038】

ヒトの定常ドメインに融合させた、げっ歯類または改変されたげっ歯類のＶ領域およびそれらに関連する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有するキメラ抗体を含めて、非ヒト免疫グロブリンに由来する抗原結合部位を含むいくつかの「ヒト化」抗体分子が記載されている。例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９：２９３〜２９９（１９９１）、Ｌｏｂｕｇｌｉｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：４２２０〜４２２４（１９８９）、Ｓｈａｗら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：４５３４〜４５３８（１９８７）、およびＢｒｏｗｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４７：３５７７〜３５８３（１９８７）を参照されたい。その他の参考文献は、適切なヒトの抗体定常ドメインと融合させる前に、ヒトの支持的なフレームワーク領域（ＦＲ）中にグラフトさせたげっ歯類のＣＤＲ記載している。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３〜３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４〜１５３６（１９８８）、およびＪｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２〜５２５（１９８６）を参照されたい。別の参考文献は、組換えにより重ねたげっ歯類のフレームワーク領域によって支持されるげっ歯類のＣＤＲを記載している。例えば、欧州特許公報第０５１９５９６号を参照されたい。これらの「ヒト化」分子は、げっ歯類の抗ヒト抗体分子に対する望まれない免疫学的応答を最小限に留めるように設計し、ヒトのレシピエント中にげっ歯類の部分があると、こうした応答により、治療的適用の持続期間および有効性が制限される。例えば、抗体の定常領域を免疫学的に不活性となる（例えば、補体の溶解を引き起こさない）ように工学的に作製することができる。例えば、ＰＣＴ公報番号ＷＯ９９／５８５７２；英国特許出願第９８０９９５１．８号を参照されたい。また、利用することができる抗体をヒト化するその他の方法が、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：２４７１〜２４７６（１９９１）、ならびに米国特許第６，１８０，３７７号；第６，０５４，２９７号；第５，９９７，８６７号；第５，８６６，６９２号；第６，２１０，６７１号；および第６，３５０，８６１号；ならびにＰＣＴ公報番号ＷＯ０１／２７１６０によっても開示されている。

【0039】

本明細書で使用する場合、用語「組換え抗体」には、組換えの手段により調製し、発現させ、作り出し、または単離する全ての抗体、例えば、宿主細胞中にトランスフェクトした組換え発現ベクターを使用して発現させた抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離した抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離または調製した抗体を含めることを意図し、そのような組換えヒト抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの突然変異誘発に付すことができる。

【0040】

用語「エピトープ」は、抗体が認識し、抗体の抗原結合領域の１つまたは複数において抗体が結合することが可能な分子の部分を指す。エピトープはしばしば、アミノ酸または糖側鎖等の表面の一連の分子からなり、特異的な三次元構造の特徴および特異的な電荷の特徴を有する。いくつかの実施形態では、エピトープは、タンパク質エピトープであり得る。タンパク質エピトープは、直線である場合または立体構造をとる場合がある。直線的なエピトープの場合、タンパク質と相互作用する分子（抗体等）との間の相互作用の点の全てが、タンパク質の一次のアミノ酸配列に沿って直線的に存在する。「非直線的なエピトープ」または「立体構造的なエピトープ」は、エピトープに特異的な抗体が結合する抗原性タンパク質内に、近接しないポリペプチド（またはアミノ酸）を含む。用語「抗原性エピトープ」を、本明細書で使用する場合、当技術分野で周知である任意の方法、例えば、従来のイムノアッセイにより決定する場合に、抗体が特異的に結合することができる抗原の一部と定義する。抗原上の所望のエピトープを決定したら、そのエピトープに対する抗体を、例えば、本明細書に記載の技法を使用して生成することが可能になる。あるいは、発見プロセスの間に、抗体の生成および特徴付けにより、望ましいエピトープについての情報も解明され得る。次いで、この情報から、抗体を同じエピトープに対する結合について競合的にスクリーニングすることが可能になる。これを達成するためのアプローチでは、競合および交差競合研究を実施して、ＶＥＧＦに対する結合について相互に競合または交差競合する抗体、例えば、抗原に対する結合について競合する抗体を見出す。

【0041】

本明細書で使用する場合、用語「単離抗体」または「精製抗体」は、その起源または由来源に関して、以下：（１）その自然のままの状態において当該抗体に伴う天然では付随する成分が付随しないこと、（２）同じ種に由来するその他のタンパク質を含有しないこと、（３）異なる種に由来する細胞により発現させたこと、または（４）自然界において存在しないことのうちの１〜４つを有する抗体を指す。

【0042】

用語「アンタゴニスト抗体」は、標的に結合し、その標的の生物学的作用を阻止し、または低下させる抗体を指す。いくつかの実施形態では、この用語は、標的、例えば、ＶＥＧＦに結合すると、標的が生物学的に機能するのを阻止する抗体を意味することができる。

【0043】

エピトープに「選択的に結合する」または「特異的に結合する」（これらの用語は、本明細書では交換可能に使用する）抗体は、当技術分野で十分に理解されている用語であり、そのような特異的または選択的な結合を決定するための方法もまた、当技術分野で周知である。分子が、特定の細胞または物質と、それに代わる細胞または物質と比して、より頻繁に、より迅速に、より長い持続期間で、および／またはより高い親和性で反応または結合する場合、この分子は「特異的な結合」または「選択的な結合」を示すといわれる。抗体が標的に、その他の物質に結合するのに比して、より高い親和性、アビディティーで、より容易に、および／またはより長い持続期間で結合する場合、抗体は標的に「特異的に結合する」または「選択的に結合する」。例えば、ＶＥＧＦのエピトープに特異的または選択的に結合する抗体は、このエピトープ配列に、その他の配列に結合するのに比して、より高い親和性、アビディティーで、より容易に、および／またはより長い持続期間で結合する抗体である。また、この定義を読み取ることによって、例えば、第１の標的に特異的または選択的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）は、第２の標的に特異的または選択的に結合する場合または結合しない場合があることも理解される。したがって、「特異的な結合」または「選択的な結合」は必ずしも排他的な結合である必要はない（しかし、それを含んでもよい）。必ずではないが、一般に、結合について言及する場合には、選択的な結合を意味する。

【0044】

本明細書で使用する場合、抗体の「免疫特異的」結合は、抗体の抗原につながる部位とその抗体が認識する特異的な抗原との間で生じる、抗原に特異的な結合の相互作用を指す（すなわち、抗体は、ＥＬＩＳＡまたはその他のイムノアッセイ中でタンパク質と反応し、関連のないタンパク質とは検出可能に反応しない）。

【0045】

用語「競合」は、抗体に関して本明細書で使用する場合、第１の抗体またはその抗原結合部分が、エピトープに、第２の抗体またはその抗原結合部分が結合するのと十分に類似する様式で結合し、したがって、第１の抗体のそのコグネイトのエピトープとの結合の結果が、第２の抗体の存在下では、第２の抗体の不在下での第１の抗体の結合と比較して検出可能に減少することを意味する。代わって、第２の抗体のそのエピトープに対する結合もまた、第１の抗体の存在下で検出可能に減少する場合もあるが、必ずしもそうである必要はない。すなわち、第１の抗体が、第２の抗体のそのエピトープに対する結合を阻害することができ、第２の抗体は、第１の抗体のその個別のエピトープに対する結合を阻害しない。しかし、各抗体が、その他の抗体のそのコグネイトのエピトープまたはリガンドとの結合を検出可能に阻害する場合、阻害の程度が、同じ、より高いまたはより低いのいずれであっても、抗体はそれらの個別のエピトープ（複数可）の結合について相互に「交差競合する」といわれる。本発明は、抗体が競合する場合および交差競合する場合の両方を包含する。そのような競合または交差競合が生じる機構（例えば、立体障害、立体構造変化、または共通のエピトープもしくはその一部に対する結合）にかかわらず、当業者であれば、本明細書に提供する教示に基づいて、そのような抗体の競合および／または交差競合は、包含され、本明細書に開示する方法にとって有用であり得ることを理解するであろう。

【0046】

本明細書で使用する場合、用語「ヒトＶＥＧＦ」は、Ｌｅｕｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４６：１３０６（１９８９）、およびＨｏｕｃｋら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．、５：１８０６（１９９１）の記載に従う１６５個のアミノ酸からなる血管内皮細胞増殖因子、ならびに関連の１２１個、１８９個および２０６個のアミノ酸からなる血管内皮細胞増殖因子、さらに、それらの天然に存在する対立遺伝子の形態およびプロセシングされた形態を指す。用語「ＶＥＧＦ」はまた、１６５個のアミノ酸からなるヒト血管内皮細胞増殖因子のうちの８番〜１０９番または１番〜１０９番のアミノ酸を含む切断型の形態のポリペプチドを指すためにも使用する。ＶＥＧＦのそのような形態のいずれについての言及であるかを、本出願では、例えば、「ＶＥＧＦ（８〜１０９）」、「ＶＥＧＦ（１〜１０９）」または「ＶＥＧＦ_１６５」により特定することができる。未変性ＶＥＧＦの「切断型」についてのアミノ酸の位置は、未変性ＶＥＧＦの配列中の表示に従って番号を付ける。例えば、未変性ＶＥＧＦの切断型中の１７番のアミノ酸（メチオニン）はまた、未変性ＶＥＧＦ中でも１７番（メチオニン）である。未変性ＶＥＧＦの切断型は、ＫＤＲ受容体およびＦｌｔ−１受容体に対して、未変性ＶＥＧＦと同等の結合親和性を有する。

【0047】

「治療有効量」は、必要とする投与量で、必要とする期間にわたり効果を示して、所望の治療結果を達成する量を指し、所望の治療結果は、抗ＶＥＧＦ抗体の文脈では、標的とする病的状態、例えば、癌の治療または予防的回避を含む。投与量の値は、軽減させようとする状態の重症度により変化させ得ることに注目されたい。いずれの特定の対象についても、特定の投与レジメンを、個々の必要性および組成物を投与するまたは組成物の投与を監督する人の専門的判断に従って経時的に加減すべきであること、ならびに本明細書に記載する投与量の範囲は、例示でしかなく、請求項に記載する組成物の範囲および実行を制限するものではないことをさら理解されたい。同様に、抗体または抗体の一部の治療有効量も、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、抗体または抗体の一部の、個体において所望の応答を惹起する能力、ならびに抗体製剤の所望の投与経路等の要因に従って変化させ得る。また、治療有効量は、治療に有益な作用が、抗体または抗体の一部のいずれの毒性のまたは有害な作用にも勝る量である。

【0048】

本明細書で使用する場合、用語「治療」は、治療処置および予防または回避の方策の両方を指し、目的は、標的とする病的状態（例えば、抗体を用いる治療から利益が得られるであろう任意の状態。これには、問題の障害に対する素因を哺乳動物にもたらす病的な状態を含めた、慢性および急性の障害または疾患が含まれる。本明細書において治療しようとする障害の非限定的な例として、良性および悪性の腫瘍；白血病およびリンパ系悪性腫瘍；神経細胞障害、グリア障害、星状膠細胞障害、視床下部障害およびその他の腺の障害、マクロファージ障害、上皮障害、間質障害および割腔障害；ならびに炎症性障害、血管新生障害および免疫学的障害が挙げられる。）を予防し、または緩慢にする（低減させる）ことである。治療を必要とするものには、状態をすでに有しているもの、および状態を有しやすいものまたは状態を予防しようとするものが含まれる。本明細書で使用する場合、「治療」は、これらに限定されないが、以下のうちの１つまたは複数を含めた、有益なまたは所望の臨床結果を得るためのアプローチである：病的状態に関連する１つまたは複数の症状の重症度の低減、そうした症状の軽減。

【0049】

薬物、製剤、化合物または医薬組成物の「有効量」は、標的とする病的状態の軽減または低下等の臨床結果を含めた、有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量である。有効量は、１回でまたは複数回にわたって投与することができる。本発明の目的では、薬物、化合物または医薬組成物の有効量は、標的とする病的状態を治療し、回復させ、またはその強度を低下させるのに十分な量である。臨床状況で理解されているように、薬物、化合物または医薬組成物の有効量をもたらすのに、別の薬物、化合物または医薬組成物を併用する場合または併用しない場合がある。したがって、「有効量」は、１つまたは複数の治療剤を投与する状況で検討することができ、１つまたは複数のその他の薬剤と併用して、望ましい結果が達成され得るまたは達成されるならば、単一の薬剤が有効量で投与されるとみなすことができる。

【0050】

本明細書で使用する場合、治療の目的では、用語「対象」は、任意の対象を含み、好ましくは、標的とする病的状態（例えば、癌）の治療を必要とする対象である。予防の目的では、対象は、任意の対象であり、好ましくは、標的とする病的状態を発症するリスクがあるまたは素因がある対象である。用語「対象」には、生きている生物、例えば、原核生物および真核生物を含めることを意図する。対象の例として、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット、およびトランスジェニック非ヒト動物が挙げられる。本発明の特定の実施形態では、対象はヒトである。

【0051】

本明細書で使用する場合、用語「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、本明細書では交換可能に使用し、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれかのヌクレオチドの高分子の形態、またはいずれかのタイプのヌクレオチドの改変形態を意味し、一本鎖および二本鎖の形態であり得る。「ポリヌクレオチド」または「核酸」の配列は、別段の特定がない限り、その相補体を包含する。本明細書で使用する場合、用語「単離ポリヌクレオチド」または「単離核酸」は、ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成起源またはそれらの何らかの組合せのポリヌクレオチドを意味し、その起源または由来源に関して、単離ポリヌクレオチドは、以下：（１）自然界においては「単離ポリヌクレオチド」と共に見出されるポリヌクレオチドの全てもしくは一部が付随しないこと、（２）「単離ポリヌクレオチド」が自然界においては連結していないポリヌクレオチドに作動可能に連結していること、または（３）自然界においてより大きな配列の一部としては存在しないことのうちの１〜３つを示す。

【0052】

本明細書で使用する場合、「薬学的に許容できる担体」は、活性成分と組み合わせた場合、その成分が生物学的活性を保持するのを可能にし、対象の免疫系とは反応しない任意の物質を含む。例として、これらに限定されないが、標準的な薬学的担体のいずれか、具体的には、リン酸緩衝溶液、水、油／水のエマルジョン等のエマルジョン、および種々のタイプの湿潤剤が挙げられる。エアロゾルまたは非経口投与に好ましい希釈剤は、リン酸緩衝溶液、通常（０．９％）生理食塩水、または５％デキストロースである。そのような担体を含む組成物は、周知の従来法により製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ、１９９０；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ．、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００を参照されたい）。

【0053】

用語「Ｋ_ｏｆｆ」は、本明細書で使用する場合、抗体／抗原の複合体からの抗体の解離についてのｏｆｆ速度定数を指すことを意図する。

【0054】

用語「Ｋ_ｄ」は、本明細書で使用する場合、抗体−抗原の相互作用の解離定数を指すことを意図する。抗体のヒトＶＥＧＦに対するＫｄまたは結合親和性を決定する１つの方法は、抗体の単官能性のＦａｂ断片の結合親和性の測定による方法である。単官能性のＦａｂ断片を得るために、抗体（例えば、ＩｇＧ）を、パパインを用いて切断することまたは組換えにより発現させることができる。抗体の抗ＶＥＧＦ Ｆａｂ断片の親和性を、表面プラズモン共鳴（ＢｌＡｃｏｒＣ１ＧＭ０００（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、ＢＩＡｃｏｒｅ，ＩＮＣ、Ｐｉｓｃａｗａｙ ＮＪ）により決定することができる。ＣＭ５チップを、供給元の使用説明に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシサクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化することができる。

【0055】

「罹患状態の抑制」は、重症度を低下させる何らかの行為を意味する（これには、こうした状態のために一般に使用されるその他の薬物および／または療法に対する（例えば、それらへの暴露の）必要性、および／またはそれらの量を低下させることを含めることができる）。当業者が理解しているように、個体により、治療に対する応答は変化する場合があり、したがって、例えば、「罹患状態の抑制の方法」は、そのような投与がその特定の個体において罹患状態のそのような抑制をもたらす可能性が高いと合理的に予想することに基づいて、ヒトＶＥＧＦアンタゴニスト抗体を投与することを示す。

【0056】

「回復」は、ＶＥＧＦアンタゴニスト抗体を投与しない場合と比較して、１つまたは複数の症状が低減または改善することを意味する。「回復」はまた、症状の持続期間の短縮または低下も含む。

【0057】

本明細書において「約」ある値またはパラメータという場合、その値またはパラメータ自体を示す実施形態を含む（かつそれを記載する）。例えば、「約Ｘ」という記載は、「Ｘ」の記載を含む。数値の範囲は、その範囲を定義する数を含む。

【0058】

本発明の態様または実施形態を、マーカッシュ群またはその他の代替の群により記載する場合、本発明は、列挙する群全体をまとめて包含するのみならず、群の各メンバーも個別に含み、主要な群の全ての可能な亜群も含み、また、群のメンバーうちの１つまたは複数を欠く主要な群も包含する。本発明はまた、請求項に記載する発明中の群のメンバーのいずれかの１つまたは複数の明確な排除も想定する。

【0059】

本発明またはその好ましい実施形態の要素を紹介する場合、冠詞「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」および「前記（ｓａｉｄ）」は、その要素の１つまたは複数があることを意味するものとする。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」は、包括的であり、列挙した要素以外の追加の要素があり得ることを意味するものとする。本明細書で実施形態を、言葉遣い「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を用いて記載する場合は必ず、これら以外の、用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」および／または「から本質的になる（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」により記載される類似の実施形態もまた提供していることを理解されたい。

【0060】

別段の定義がない限り、本明細書で使用する科学技術用語は全て、本発明が属する当技術分野の通常の技能を有する者により通常理解される意味と同じ意味を有する。矛盾が生じる場合には、定義を含めた、本明細書に従うものとする。本明細書および特許請求の範囲の全体を通して、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または変化形、例として、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、記述する整数または一連の整数が含まれることを示唆しているのであって、その他の整数および一連の整数が排除されることを示唆しているのではないことを理解されたい。そうでないことが文脈により必要にならない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。

【0061】

例示的な方法および物質を本明細書に記載するが、本明細書に記載するものに類似のまたは均等な方法および物質もまた、本発明の実行または試験に際して使用することができる。物質、方法および例は例示に過ぎず、それらに制限する意図はない。

【0062】

抗ＶＥＧＦ抗体製剤
一態様では、約１５ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌの抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体またはその抗原結合性断片；緩衝液；ポリオール；界面活性剤；キレート化剤を含み、約５．０〜約６．０のｐＨを有する安定な水性製剤を提供する。本明細書に記載する製剤は、長い有効期間、好ましくは、（例えば、約５℃において）少なくとも約３６カ月または約３６カ月超の有効期間を有する。

【0063】

いくつかの実施形態では、製剤は、少なくとも１つの抗ＶＥＧＦ抗体を含む。例えば、抗ＶＥＧＦ抗体は、ヒト抗体（例えば、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）またはｒｈｕＭＡＢ ＶＥＧＦ）、ヒト化抗体、またはキメラ抗体（例えば、インフリキシマブもしくはＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、２つ以上の抗体が存在し得る。少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または６つ以上の異なる抗体が存在し得る。一般に、それらの２つ以上の異なる抗体が相補的活性を有し、それらの活性は相互に有害な影響を及ぼさない。また、１つまたは複数の抗体は、抗体の有効性を増強するおよび／または補足するように働くその他の薬剤と併用して使用することもできる。

【0064】

いくつかの実施形態では、本発明の製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体は、ヒトＶＥＧＦから、１×１０^−８Ｍ以下のＫ_ｄおよび１×１０^−３／秒以下のＫ_ｏｆｆ速度定数で解離し（両方の値は、表面プラズモン共鳴により決定した）、ヒトＶＥＧＦの細胞傷害性を、標準的なｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｌ９２９アッセイにおいて、１×１０^−７Ｍ以下のＩＣ_５０で中和する抗体である。いくつかの実施形態では、本発明の製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体は、ヒトＶＥＧＦから、５×１０^−４／秒以下のＫ_ｏｆｆ速度定数または１×１０^−４／秒以下のＫ_ｏｆｆ速度定数で解離する抗体である。いくつかの実施形態では、本発明の製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体は、ヒトＶＥＧＦの細胞傷害性を、標準的なｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｌ９２９アッセイにおいて、１×１０^−７Ｍ以下のＩＣ_５０、１×１０^−８Ｍ以下のＩＣ_５０、１×１０^−９Ｍ以下のＩＣ_５０、または１×１０^−１０Ｍ以下のＩＣ_５０で中和する抗体である。いくつかの実施形態では、本発明の製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体はまた、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）上でＶＥＧＦが誘発するＥＬＡＭ−１の発現について標準的なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを使用して評価する場合、ＶＥＧＦが誘発する細胞の活性化を中和する。例えば、それぞれが参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，０９０，３８２号、第６，２５８，５６２号および第８，２１６，５８３号を参照されたい。

【0065】

いくつかの実施形態では、本発明の製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号１に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）；配列番号２に示すアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；配列番号３に示すアミノ酸配列、または配列番号３のバリアントを有するＶＨ ＣＤＲ３；配列番号４に示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１；配列番号５に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに配列番号６に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む。

【0066】

【表1】

【0067】

いくつかの実施形態では、本発明の製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨ領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＶＬ領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明の製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体は、ＩｇＧ１重鎖定常領域もしくはＩｇＧ４重鎖定常領域を有する、またはＦａｂ断片もしくは単鎖Ｆｖ断片である。

【0068】

いくつかの実施形態では、本発明の製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体は、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（抗ＶＥＧＦ抗体またはｒｈｕＭＡｂ ＶＥＧＦ）である。

【0069】

抗体は、製剤中に、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ〜２００ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ〜約１７５ｍｇ／ｍｌ、または約２５ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの範囲に及ぶ濃度で存在し得る。例えば、いくつかの実施形態では抗体の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約２．５ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約３．５ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約４．５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約５．５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約６．５ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約７．５ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約８．５ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、約９．５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１１ｍｇ／ｍｌ、約１２ｍｇ／ｍｌ、約１３ｍｇ／ｍｌ、約１４ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約１６ｍｇ／ｍｌ、約１７ｍｇ／ｍｌ、約１８ｍｇ／ｍｌ、約１９ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２１ｍｇ／ｍｌ、約２２ｍｇ／ｍｌ、約２３ｍｇ／ｍｌ、約２４ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約２６ｍｇ／ｍｌ、約２７ｍｇ／ｍｌ、約２８ｍｇ／ｍｌ、約２９ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約３１ｍｇ／ｍｌ、約３２ｍｇ／ｍｌ、約３３ｍｇ／ｍｌ、約３４ｍｇ／ｍｌ、約３５ｍｇ／ｍｌ、約３６ｍｇ／ｍｌ、約３７ｍｇ／ｍｌ、約３８ｍｇ／ｍｌ、約３９ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約４１ｍｇ／ｍｌ、約４２ｍｇ／ｍｌ、約４３ｍｇ／ｍｌ、約４４ｍｇ／ｍｌ、約４５ｍｇ／ｍｌ、約４６ｍｇ／ｍｌ、約４７ｍｇ／ｍｌ、約４８ｍｇ／ｍｌ、約４９ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約５１ｍｇ／ｍｌ、約５２ｍｇ／ｍｌ、約５３ｍｇ／ｍｌ、約５４ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ、約５６ｍｇ／ｍｌ、約５７ｍｇ／ｍｌ、約５８ｍｇ／ｍｌ、約５９ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１０１ｍｇ／ｍｌ、約１０２ｍｇ／ｍｌ、約１０２．５ｍｇ／ｍｌ、約１０３ｍｇ／ｍｌ、約１０３．５ｍｇ／ｍｌ、約１０４ｍｇ／ｍｌ、約１０４．５ｍｇ／ｍｌ、約１０５ｍｇ／ｍｌ、約１０５．５ｍｇ／ｍｌ、約１０６ｍｇ／ｍｌ、約１０６．５ｍｇ／ｍｌ、約１０７ｍｇ／ｍｌ、約１０７．５ｍｇ／ｍｌ、約１０８ｍｇ／ｍｌ、約１０８．５ｍｇ／ｍｌ、約１０９ｍｇ／ｍｌ、約１０９．５ｍｇ／ｍｌ、約１１０ｍｇ／ｍｌ、約１１１ｍｇ／ｍｌ、約１１２ｍｇ／ｍｌ、約１１３ｍｇ／ｍｌ、約１１４ｍｇ／ｍｌ、約１１５ｍｇ／ｍｌ、約１１６ｍｇ／ｍｌ、約１１７ｍｇ／ｍｌ、約１１８ｍｇ／ｍｌ、約１１９ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１２１ｍｇ／ｍｌ、約１２２ｍｇ／ｍｌ、約１２３ｍｇ／ｍｌ、約１２４ｍｇ／ｍｌ、約１２５ｍｇ／ｍｌ、約１２６ｍｇ／ｍｌ、約１２７ｍｇ／ｍｌ、約１２８ｍｇ／ｍｌ、約１２９ｍｇ／ｍｌ、約１３０ｍｇ／ｍｌ、約１３１ｍｇ／ｍｌ、約１３２ｍｇ／ｍｌ、約１３３ｍｇ／ｍｌ、約１３４ｍｇ／ｍｌ、約１３５ｍｇ／ｍｌ、約１３６ｍｇ／ｍｌ、約１３７ｍｇ／ｍｌ、約１３８ｍｇ／ｍｌ、約１３９ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、約１４１ｍｇ／ｍｌ、約１４２ｍｇ／ｍｌ、約１４３ｍｇ／ｍｌ、約１４４ｍｇ／ｍｌ、約１４５ｍｇ／ｍｌ、約１４６ｍｇ／ｍｌ、約１４７ｍｇ／ｍｌ、約１４８ｍｇ／ｍｌ、約１４９ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１５１ｍｇ／ｍｌ、約１５２ｍｇ／ｍｌ、約１５３ｍｇ／ｍｌ、約１５４ｍｇ／ｍｌ、約１５５ｍｇ／ｍｌ、約１５６ｍｇ／ｍｌ、約１５７ｍｇ／ｍｌ、約１５８ｍｇ／ｍｌ、約１５９ｍｇ／ｍｌ、約１６０ｍｇ／ｍｌ、約１７０ｍｇ／ｍｌ、約１８０ｍｇ／ｍｌ、約１９０ｍｇ／ｍｌ、または約２００ｍｇ／ｍｌである。

【0070】

本発明によれば、緩衝液（例えば、コハク酸緩衝液）は、製剤に生理的ｐＨに近いｐＨをもたらして、注射時の疼痛またはアナフィラキシー様の副作用のリスクを低下させ、また、抗体の安定性ならびに凝集、酸化および断片化に対する抵抗性も増強する。

【0071】

緩衝液は、例えば、非限定的に、酢酸塩、コハク酸塩（例えば、コハク酸二ナトリウム六水和物）、グルコン酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、酢酸、リン酸塩、リン酸、アスコルビン酸塩、酒石酸、マレイン酸、グリシン、乳酸塩、乳酸、アスコルビン酸、イミダゾール、炭酸水素塩および炭酸、コハク酸、安息香酸ナトリウム、安息香酸、グルコン酸塩、エデト酸塩、酢酸塩、リンゴ酸塩、イミダゾール、トリス、リン酸塩、ならびにそれらの混合物であり得る。好ましくは、緩衝剤はコハク酸であり、コハク酸は、コハク酸二ナトリウム六水和物（塩基性の形態）および／もしくはコハク酸またはそれらの混合物を含むことができる。

【0072】

緩衝液の濃度は、約０．１ミリモル（ｍＭ）〜約１００ｍＭの範囲に及ぶことができる。好ましくは、緩衝液の濃度は、約０．５ｍＭ〜約５０ｍＭ、さらに好ましくは約１ｍＭ〜約３０ｍＭ、より好ましくは約１ｍＭ〜約２５ｍＭである。好ましくは、緩衝液の濃度は、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、または約１００ｍＭである。いくつかの実施形態では、緩衝液は、約２０ｍＭの濃度のコハク酸緩衝液である。

【0073】

緩衝剤の濃度はまた、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、または約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約４ｍｇ／ｍｌの範囲に及び得る。例えば、緩衝剤の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０２ｍｇ／ｍｌ、０．０３ｍｇ／ｍｌ、約０．０４ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌ、約０．０６ｍｇ／ｍｌ、約０．０７ｍｇ／ｍｌ、０．０８ｍｇ／ｍｌ、０．０９ｍｇ／ｍｌ、約０．１０ｍｇ／ｍｌ、０．１１ｍｇ／ｍｌ、０．１２ｍｇ／ｍｌ、０．１３ｍｇ／ｍｌ、約０．１４ｍｇ／ｍｌ、約０．１５ｍｇ／ｍｌ、約０．１６ｍｇ／ｍｌ、約０．１７ｍｇ／ｍｌ、０．１８ｍｇ／ｍｌ、０．１９ｍｇ／ｍｌ、約０．２０ｍｇ／ｍｌ、約０．２５ｍｇ／ｍｌ、約０．３ｍｇ／ｍｌ、約０．４ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．６ｍｇ／ｍｌ、約０．７ｍｇ／ｍｌ、約０．８ｍｇ／ｍｌ、約０．９ｍｇ／ｍｌ、約１．０ｍｇ／ｍｌ、約２．０ｍｇ／ｍｌ、約３．０ｍｇ／ｍｌ、約４．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌ、約６．０ｍｇ／ｍｌ、約７．０ｍｇ／ｍｌ、約８．０ｍｇ／ｍｌ、約９．０ｍｇ／ｍｌ、約１０．０ｍｇ／ｍｌ、約１１．０ｍｇ／ｍｌ、約１２．０ｍｇ／ｍｌ、約１３．０ｍｇ／ｍｌ、約１４．０ｍｇ／ｍｌ、約１５．０ｍｇ／ｍｌ、約１６．０ｍｇ／ｍｌ、約１７．０ｍｇ／ｍｌ、約１８．０ｍｇ／ｍｌ、約１９．０ｍｇ／ｍｌ、約２０．０ｍｇ／ｍｌ、約２１．０ｍｇ／ｍｌ、約２２．０ｍｇ／ｍｌ、約２３．０ｍｇ／ｍｌ、約２４．０ｍｇ／ｍｌ、約２５．０ｍｇ／ｍｌ、約２６．０ｍｇ／ｍｌ、約２７．０ｍｇ／ｍｌ、約２８．０ｍｇ／ｍｌ、約２９．０ｍｇ／ｍｌ、または３０．０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、緩衝液は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５．０ｍｇ／ｍＬのコハク酸二ナトリウム六水和物および約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１．０ｍｇ／ｍＬのコハク酸を含むコハク酸緩衝液である。いくつかの実施形態では、緩衝液は、約４．０８ｍｇ／ｍＬのコハク酸二ナトリウム六水和物および約０．５８ｍｇ／ｍＬのコハク酸を含むコハク酸緩衝液である。いくつかの実施形態では、緩衝液は、約２．３６２ｍｇ／ｍＬのコハク酸を含むコハク酸緩衝液である。

【0074】

いくつかの実施形態では、ポリオールは、例えば、非限定的に、約６００ｋＤ未満（例えば、約１２０〜約４００ｋＤの範囲）である分子量を有し得、複数のヒドロキシル基を含み、ポリオールには、糖（例えば、還元糖および非還元糖もしくはそれらの混合物、サッカライド、または炭水化物）、糖アルコール、糖酸、またはそれらの塩もしくは混合物が含まれる。非還元糖の例として、これらに限定されないが、スクロース、トレハロースおよびそれらの混合物が挙げられる。いくつかの実施形態では、ポリオールは、マンニトール、トレハロース、ソルビトール、エリスリトール、イソマルトース、ラクチトール、マルチトール、キシリトール、グリセロール、ラクチトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、イノシトール、またはそれらの混合物であり得る。他の実施形態では、ポリオールは、例えば、非限定的に、単糖、二糖もしくは多糖、または上記のうちのいずれかの混合物であり得る。サッカライドまたは炭水化物は、例えば、非限定的に、フルクトース、グルコース、マンノース、スクロース、ソルボース、キシロース、ラクトース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、水溶性グルカン、またはそれらの混合物であり得る。

【0075】

製剤中のポリオールの濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約３００ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌ、または約１ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの範囲に及ぶ。好ましくは、製剤中のポリオールの濃度は、約５０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ〜約１１０ｍｇ／ｍｌ、または約８０ｍｇ／ｍｌ〜約９０ｍｇ／ｍｌである。例えば、製剤中のポリオールの濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約２．５ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約３．５ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約４．５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約５．５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約６．５ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約７．５ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約８．５ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、約９．５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１１ｍｇ／ｍｌ、約１２ｍｇ／ｍｌ、約１３ｍｇ／ｍｌ、約１４ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約１６ｍｇ／ｍｌ、約１７ｍｇ／ｍｌ、約１８ｍｇ／ｍｌ、約１９ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２１ｍｇ／ｍｌ、約２２ｍｇ／ｍｌ、約２３ｍｇ／ｍｌ、約２４ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約２６ｍｇ／ｍｌ、約２７ｍｇ／ｍｌ、約２８ｍｇ／ｍｌ、約２９ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約３１ｍｇ／ｍｌ、約３２ｍｇ／ｍｌ、約３３ｍｇ／ｍｌ、約３４ｍｇ／ｍｌ、約３５ｍｇ／ｍｌ、約３６ｍｇ／ｍｌ、約３７ｍｇ／ｍｌ、約３８ｍｇ／ｍｌ、約３９ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約４１ｍｇ／ｍｌ、約４２ｍｇ／ｍｌ、約４３ｍｇ／ｍｌ、約４４ｍｇ／ｍｌ、約４５ｍｇ／ｍｌ、約４６ｍｇ／ｍｌ、約４７ｍｇ／ｍｌ、約４８ｍｇ／ｍｌ、約４９ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約５１ｍｇ／ｍｌ、約５２ｍｇ／ｍｌ、約５３ｍｇ／ｍｌ、約５４ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ、約５６ｍｇ／ｍｌ、約５７ｍｇ／ｍｌ、約５８ｍｇ／ｍｌ、約５９ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ、約６５ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約７５ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約８１ｍｇ／ｍｌ、約８２ｍｇ／ｍｌ、約８３ｍｇ／ｍｌ、約８４ｍｇ／ｍｌ、約８５ｍｇ／ｍｌ、約８６ｍｇ／ｍｌ、約８７ｍｇ／ｍｌ、約８８ｍｇ／ｍｌ、約８９ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約９１ｍｇ／ｍｌ、約９２ｍｇ／ｍｌ、約９３ｍｇ／ｍｌ、約９４ｍｇ／ｍｌ、約９５ｍｇ／ｍｌ、約９６ｍｇ／ｍｌ、約９７ｍｇ／ｍｌ、約９８ｍｇ／ｍｌ、約９９ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１０１ｍｇ／ｍｌ、約１０２ｍｇ／ｍｌ、約１０３ｍｇ／ｍｌ、約１０４ｍｇ／ｍｌ、約１０５ｍｇ／ｍｌ、約１０６ｍｇ／ｍｌ、約１０７ｍｇ／ｍｌ、約１０８ｍｇ／ｍｌ、約１０９ｍｇ／ｍｌ、約１１０ｍｇ／ｍｌ、約１１１ｍｇ／ｍｌ、約１１２ｍｇ／ｍｌ、約１１３ｍｇ／ｍｌ、約１１４ｍｇ／ｍｌ、約１１５ｍｇ／ｍｌ、約１１６ｍｇ／ｍｌ、約１１７ｍｇ／ｍｌ、約１１８ｍｇ／ｍｌ、約１１９ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１２１ｍｇ／ｍｌ、約１２２ｍｇ／ｍｌ、約１２３ｍｇ／ｍｌ、約１２４ｍｇ／ｍｌ、約１２５ｍｇ／ｍｌ、約１２６ｍｇ／ｍｌ、約１２７ｍｇ／ｍｌ、約１２８ｍｇ／ｍｌ、約１２９ｍｇ／ｍｌ、約１３０ｍｇ／ｍｌ、約１３１ｍｇ／ｍｌ、約１３２ｍｇ／ｍｌ、約１３３ｍｇ／ｍｌ、約１３４ｍｇ／ｍｌ、約１３５ｍｇ／ｍｌ、約１３６ｍｇ／ｍｌ、約１３７ｍｇ／ｍｌ、約１３８ｍｇ／ｍｌ、約１３９ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、約１４１ｍｇ／ｍｌ、約１４２ｍｇ／ｍｌ、約１４３ｍｇ／ｍｌ、約１４４ｍｇ／ｍｌ、約１４５ｍｇ／ｍｌ、約１４６ｍｇ／ｍｌ、約１４７ｍｇ／ｍｌ、約１４８ｍｇ／ｍｌ、約１４９ｍｇ／ｍｌ、または約１５０ｍｇ／ｍｌである。

【0076】

いくつかの実施形態では、ポリオールは、約１ｍｇ／ｍｌ〜約３００ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌ、または約１ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの濃度のスクロースである。好ましくは、製剤中のスクロースの濃度は、約５０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ〜約１１０ｍｇ／ｍｌ、または約８０ｍｇ／ｍｌ〜約９０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、製剤中のスクロースの濃度は、約８５ｍｇ／ｍｌである。

【0077】

界面活性剤は、本発明において使用する場合、液体抗体製剤の表面張力を変化させることができる。特定の実施形態では、界面活性剤は、液体抗体製剤の表面張力を低下させる。さらなるその他の実施形態では、界面活性剤は、製剤中の任意の抗体の安定性の改善に寄与することができる。界面活性剤はまた、（例えば、輸送および保存の間の）製剤化された抗体の凝集を低下させること、ならびに／または製剤中の粒子の形成を最小限に留めることができ、かつ／または吸着（例えば、容器への吸着）を低下させる。例えば、界面活性剤はまた、凍結／解凍のサイクルの間および後の抗体の安定性を改善することもできる。界面活性剤は、例えば、非限定的に、ポリソルベート、ポロキサマー、トリトン、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、オクチルグリコシドナトリウム、ラウリル−スルホベタイン、ミリスチル−スルホベタイン、リノレイル−スルホベタイン、ステアリル−スルホベタイン、ラウリル−サルコシン、ミリスチル−サルコシン、リノレイル−サルコシン、ステアリル−サルコシン、リノレイル−ベタイン、ミリスチル−ベタイン、セチル−ベタイン、ラウロアミドプロピル−ベタイン、コカミドプロピル−ベタイン、リノレアミドプロピル−ベタイン、ミリストアミドプロピル−ベタイン、パームアミドプロピル−ベタイン、イソステアラミドプロピル−ベタイン、ミリストアミドプロピル−ジメチルアミン、パームアミドプロピル−ジメチルアミン、イソステアラミドプロピル−ジメチルアミン、メチルココイルタウリン酸ナトリウム、メチルオレイルタウリン酸二ナトリウム、ジヒドロキシプロピルＰＥＧ５リノレアンモニウムクロリド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、およびそれらの混合物であり得る。界面活性剤は、例えば、非限定的に、ポリソルベート２０、ポリソルベート２１、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６１、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８１、ポリソルベート８５、ＰＥＧ３３５０、およびそれらの混合物であり得る。

【0078】

界面活性剤の濃度は一般に、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約５．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約２．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１．５ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．４ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．３ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．２ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．１５ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．１ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約０．０５ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌ、または約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約０．３ｍｇ／ｍｌの範囲に及ぶ。さらに好ましくは、界面活性剤の濃度は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ、約０．０６ｍｇ／ｍｌ、約０．０７ｍｇ／ｍｌ、約０．０８ｍｇ／ｍｌ、約０．０９ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ、約０．１５ｍｇ／ｍｌ、約０．２ｍｇ／ｍｌ、約０．３ｍｇ／ｍｌ、約０．４ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．６ｍｇ／ｍｌ、約０．７ｍｇ／ｍｌ、約０．８ｍｇ／ｍｌ、約０．９ｍｇ／ｍｌ、または約１ｍｇ／ｍｌである。

【0079】

いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約０．３ｍｇ／ｍｌの範囲に及ぶ、例えば、０．２ｍｇ／ｍｌの濃度のポリソルベート８０である。

【0080】

キレート化剤は、本発明において使用する場合、本発明の製剤中で、還元型酸素種の形成を減らし、酸性種（例えば、脱アミド化）の形成を低下させ、抗体の凝集を低下させ、かつ／または抗体の断片化を低下させ、かつ／または抗体の酸化を低下させる。例えば、キレート化剤は、金属イオンと少なくとも１つの結合（例えば、共有性、イオン性またはその他の結合）を形成し、安定化剤として作用して、安定化剤がない場合には不安定性を促進する種と錯体を形成する多座配位性の配位子であり得る。

【0081】

いくつかの実施形態では、キレート化剤は、アミノポリカルボン酸、ヒドロキシアミノカルボン酸、Ｎ−置換グリシン、２−（２−アミノ−２−オキソエチル）アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、デフェロキサミン（ＤＥＦ）、クエン酸、ナイアシンアミドおよびデスオキシコール酸塩、ならびにそれらの混合物からなる群から選択することができる。いくつかの実施形態では、キレート化剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸５（ＤＴＰＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、Ｎ−２−アセトアミド−２−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、ビス（アミノエチル）グリコールエーテル、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、トランス−ジアミノシクロヘキサン四酢酸（ＤＣＴＡ）、グルタミン酸およびアスパラギン酸、Ｎ−ヒドロキシエチルイミノ二酢酸（ＨＩＭＤＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス−ヒドロキシエチルグリシン（ビシン）およびＮ−（トリスヒドロキシメチルメチル）１０グリシン（トリシン）、グルシルグリシン、デスオキシコール酸ナトリウム、エチレンジアミン、プロピレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラアミン（トリエン）、エデト酸二ナトリウム二水和物（またはＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物もしくはＥＤＴＡ二ナトリウム塩）、ＥＤＴＡカルシウム、シュウ酸、リンゴ酸塩、クエン酸、クエン酸一水和物およびクエン酸三ナトリウム−二水和物、８−ヒドロキシキノレート、アミノ酸、ヒスチジン、システイン、メチオニン、ペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質、ならびにそれらの混合物からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、キレート化剤は、エデト酸二カリウム、エデト酸二ナトリウム、エデト酸カルシウム二ナトリウム、エデト酸ナトリウム、エデト酸三ナトリウムおよびエデト酸カリウムを含めた、ＥＤＴＡの塩からなる群から選択され；デフェロキサミン（ＤＥＦ）の適切な塩は、メシル酸デフェロキサミン（ＤＦＭ）またはそれらの混合物である。本発明で使用するキレート化剤は可能であれば、化合物の遊離酸もしくは遊離塩基の形態または塩の形態として存在し得、また、化合物または対応する塩の無水、溶媒和または水和の形態としても存在し得る。

【0082】

好ましい実施形態では、キレート化剤は、ＥＤＴＡ（またはエデト酸）である。

【0083】

キレート化剤の濃度は一般に、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１０．０ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約１５．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、約０．０２ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌ、または約０．０２５ｍｇ／ｍｌ〜約０．０７５ｍｇ／ｍｌの範囲に及ぶ。さらに好ましくは、キレート化剤の濃度は一般に、約０．０１ｍＭ〜約２．０ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約１．５ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．５ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．４ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．３ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．２ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．１５ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．１ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０９ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０８ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０７ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０６ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０５ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０４ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０３ｍＭ、約０．０１ｍＭ〜約０．０２ｍＭ、約０．０２〜、または約０．０５ｍＭ〜約０．０１ｍＭの範囲に及ぶ。好ましくは、キレート化剤の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ、約０．０２ｍｇ／ｍｌ、約０．０２５ｍｇ／ｍｌ、約０．０３ｍｇ／ｍｌ、約０．０４ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌ、約０．０６ｍｇ／ｍｌ、約０．０７ｍｇ／ｍｌ、約０．０７５ｍｇ／ｍｌ、約０．０８ｍｇ／ｍｌ、約０．０９ｍｇ／ｍｌ、約０．１０ｍｇ／ｍｌ、または約０．２０ｍｇ／ｍｌであり得る。さらに好ましくは、キレート化剤の濃度は、約０．０２５ｍｇ／ｍｌ、約０．０３ｍｇ／ｍｌ、約０．０３５ｍｇ／ｍｌ、約０．０４ｍｇ／ｍｌ、約０．０４５ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌ、約０．０５５ｍｇ／ｍｌ、約０．０６ｍｇ／ｍｌ、約０．０６５ｍｇ／ｍｌ、約０．０７ｍｇ／ｍｌ、または約０．０７５ｍｇ／ｍｌである。最も好ましくは、キレート化剤の濃度は、約０．０５ｍｇ／ｍｌである。

【0084】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ｐＨは、約５．０〜約６．６、好ましくは、約５．０〜約６．５または約５．０〜約６．０、最も好ましくは、５．２〜５．８の範囲であり得る。例えば、５．２〜５．８のｐＨの範囲の本発明の製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体は、ｐＨ５．０またはｐＨ６．５と比較して、高分子質量の種の形成が低下した。したがって、いくつかの実施形態では、ｐＨは、本発明の製剤の場合、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５または約５．６のいずれか１つから、約６．５、約６．４、約６．３、約６．２、約６．１、約６．０、約５．９、約５．８または約５．７のいずれか１つまでの範囲から選択される範囲であり得る。いくつかの実施形態では、ｐＨは、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４または約７．５のいずれかのｐＨの値から選択することができる。好ましくは、ｐＨは、ｐＨ５．５±０．５であり、最も好ましくは、ｐＨは、ｐＨ５．５±０．３である。

【0085】

いくつかの実施形態では、製剤は、保存剤を含むことができる。好ましくは、保存のための薬剤は、フェノール、ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゾトニウム、フェノキシエタノールおよびメチルパラベンから選択される。

【0086】

保存剤の濃度は一般に、約０．００１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．００５ｍｇ／ｍｌ〜約１５．０ｍｇ／ｍｌ、約０．００８ｍｇ／ｍｌ〜約１２．０ｍｇ／ｍｌ、または約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０．０ｍｇ／ｍｌの範囲に及ぶ。好ましくは、保存剤の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、約０．４ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．６ｍｇ／ｍｌ、約０．７ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、約１．０ｍｇ／ｍｌ、２．０ｍｇ／ｍｌ、３．０ｍｇ／ｍｌ、約４．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌ、約６．０ｍｇ／ｍｌ、約７．０ｍｇ／ｍｌ、８．０ｍｇ／ｍｌ、９．０ｍｇ／ｍｌ、約９．１ｍｇ／ｍｌ、約９．２ｍｇ／ｍｌ、９．３ｍｇ／ｍｌ、９．４ｍｇ／ｍｌ、９．５ｍｇ／ｍｌ、９．６ｍｇ／ｍｌ、９．７ｍｇ／ｍｌ、９．８ｍｇ／ｍｌ、９．９ｍｇ／ｍｌ、１０．０ｍｇ／ｍｌであり得る。最も好ましくは、保存剤の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍｌまたは９．０ｍｇ／ｍＬである。

【0087】

いくつかの実施形態では、製剤は、保存剤を含有しない。

【0088】

いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体の断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃ、ＳｃＦｖ等）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、それらの突然変異体、抗体の一部（例えば、ドメイン抗体）を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、ヒト抗体、および必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意のその他の改変された立体配置からなる群を含む群から選択することができ、これらの抗体には、抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、および共有結合性に改変された抗体が含まれる。抗体は、マウス、ラット、ヒトの抗体または任意のその他の起源（キメラ抗体またはヒト化抗体を含む）であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体であり得るが、より好ましくは、ヒト化抗体である。抗体は、好ましくは単離抗体であり、さらに好ましくは実質的に純粋である。抗体が抗体の断片である場合、これは好ましくは、元々の抗体の機能的特徴、すなわち、リガンド結合性および／またはアンタゴニストもしくはアゴニストの活性を保持する。

【0089】

いくつかの実施形態では、抗体の重鎖の定常領域は、任意のタイプの定常領域、例として、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥ；ならびに任意のアイソタイプ、例として、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４に由来し得る。好ましくは、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。

【0090】

本発明のさらなる態様に従って、約１５ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌの抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体またはその抗原結合性断片；約１ｍＭ〜約１００ｍＭの緩衝液；約１ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬのポリオール；約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの界面活性剤；約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌのキレート化剤を含むまたはそれらからなり、約５．０〜約６．０のｐＨを有する水性製剤を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１；配列番号２に示すアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；配列番号３に示すアミノ酸配列、または配列番号３のバリアントを有するＶＨ ＣＤＲ３；さらに、配列番号４に示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１；配列番号５に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに配列番号６に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ領域および配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（抗ＶＥＧＦ抗体またはｒｈｕＭＡｂ ＶＥＧＦ）である。いくつかの実施形態では、緩衝液はコハク酸緩衝液であり、ポリオールはスクロースであり、界面活性剤はポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０）であり、かつ／またはキレート化剤はＥＤＴＡ（もしくはエデト酸）である。

【0091】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示する抗ＶＥＧＦ抗体を原薬とする水性製剤は、エチレン酢酸ビニルモノマテリアル（ＥＶＡＭ）製品接触表面を有する滅菌エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡ）バッグ中に保存することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する抗ＶＥＧＦ抗体を原薬とする水性製剤は、ステンレス鋼製容器中に保存することができる。

【0092】

本発明のさらなる態様に従って、約１５ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約３５ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約４５ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約５５ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１１０ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１３０ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ、または約１６０ｍｇ／ｍｌの抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体（例えば、ヒト抗ＶＥＧＦ抗体）；約１ｍＭ〜約１００ｍＭの緩衝液；約１ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬのポリオール；約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの界面活性剤；約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌのキレート化剤を含むまたはそれらからなり、約５．０〜約６．０のｐＨを有する水性製剤を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１；配列番号２に示すアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；配列番号３に示すアミノ酸配列、または配列番号３のバリアントを有するＶＨ ＣＤＲ３；ならびに配列番号４に示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１；配列番号５に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；および配列番号６に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、抗ＶＥＧＦ抗体（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）またはｒｈｕＭＡＢ ＶＥＧＦ）である。

【0093】

いくつかの実施形態では、製剤中の抗体の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１４５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約８０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約１３５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１３０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ〜約１２０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ〜約１１５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ〜約１１０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ〜約１０５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ〜約９５ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ〜約９０ｍｇ／ｍＬ、約６５ｍｇ／ｍＬ〜約８５ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ〜約８０ｍｇ／ｍＬ、または約７５ｍｇ／ｍＬである。例えば、いくつかの実施形態では、製剤中の抗体の濃度は、約５ｍｇ／ｍＬ以下、約６ｍｇ／ｍＬ以下、約７ｍｇ／ｍＬ以下、約８ｍｇ／ｍＬ以下、約９ｍｇ／ｍＬ以下、約１０ｍｇ／ｍＬ以下、約１１ｍｇ／ｍＬ以下、約１２ｍｇ／ｍＬ以下、約１３ｍｇ／ｍＬ以下、約１４ｍｇ／ｍＬ以下、約１５ｍｇ／ｍＬ以下、約１６ｍｇ／ｍＬ以下、約１７ｍｇ／ｍＬ以下、約１８ｍｇ／ｍＬ以下、約１９ｍｇ／ｍＬ以下、約２０ｍｇ／ｍＬ以下、約２１ｍｇ／ｍＬ以下、約２２ｍｇ／ｍＬ以下、約２３ｍｇ／ｍＬ以下、約２４ｍｇ／ｍＬ以下、約２５ｍｇ／ｍＬ以下、約２６ｍｇ／ｍＬ以下、約２７ｍｇ／ｍＬ以下、約２８ｍｇ／ｍＬ以下、約２９ｍｇ／ｍＬ以下、約３０ｍｇ／ｍＬ以下、約３１ｍｇ／ｍＬ以下、約３２ｍｇ／ｍＬ以下、約３３ｍｇ／ｍＬ以下、約３４ｍｇ／ｍＬ以下、約３５ｍｇ／ｍＬ以下、約３６ｍｇ／ｍＬ以下、約３７ｍｇ／ｍＬ以下、約３８ｍｇ／ｍＬ以下、約３９ｍｇ／ｍＬ以下、約４０ｍｇ／ｍＬ以下、約４１ｍｇ／ｍＬ以下、約４２ｍｇ／ｍＬ以下、約４３ｍｇ／ｍＬ以下、約４４ｍｇ／ｍＬ以下、約４５ｍｇ／ｍＬ以下、約４６ｍｇ／ｍＬ以下、約４７ｍｇ／ｍＬ以下、約４８ｍｇ／ｍＬ以下、約４９ｍｇ／ｍＬ以下、約５０ｍｇ／ｍＬ以下、約５１ｍｇ／ｍＬ以下、約５２ｍｇ／ｍＬ以下、約５３ｍｇ／ｍＬ以下、約５４ｍｇ／ｍＬ以下、約５５ｍｇ／ｍＬ以下、約５６ｍｇ／ｍＬ以下、約５７ｍｇ／ｍＬ以下、約５８ｍｇ／ｍＬ以下、約５９ｍｇ／ｍＬ以下、約６０ｍｇ／ｍＬ以下、約７０ｍｇ／ｍＬ以下、約７５ｍｇ／ｍＬ以下、約８０ｍｇ／ｍＬ以下、約９０ｍｇ／ｍＬ以下、約１００ｍｇ／ｍＬ以下、約１１０ｍｇ／ｍＬ以下、約１２０ｍｇ／ｍＬ以下、約１３０ｍｇ／ｍＬ以下、約１４０ｍｇ／ｍＬ以下、または１５０ｍｇ／ｍＬ以下である。いくつかの実施形態では、抗体は、約２５ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）またはｒｈｕＭＡＢ ＶＥＧＦ）である。

【0094】

本発明のさらなる態様に従って、約２５ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体またはその抗原結合性断片；約２０ｍＭの緩衝液；約１ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬのポリオール；約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約０．３ｍｇ／ｍｌの界面活性剤；約０．０２５ｍｇ／ｍｌ〜約０．０７５ｍｇ／ｍｌのキレート化剤を含むまたはそれらからなり、約５．０〜約６．０のｐＨを有する水性製剤を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１；配列番号２に示すアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；配列番号３に示すアミノ酸配列、または配列番号３のバリアントを有するＶＨ ＣＤＲ３；さらに、配列番号４に示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１；配列番号５に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；ならびに配列番号６に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ領域および配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、抗ＶＥＧＦ抗体（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）またはｒｈｕＭＡＢ ＶＥＧＦ）である。いくつかの実施形態では、緩衝液はコハク酸緩衝液であり、ポリオールはスクロースであり、キレート化剤はＥＤＴＡ（もしくはエデト酸）であり、かつ／または界面活性剤はポリソルベート８０である。

【0095】

いくつかの実施形態では、約２５ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌの、ヒト血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）抗体に特異的に結合する抗体；約２０ｍＭのコハク酸緩衝液；約８５ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０；約０．０２５ｍｇ／ｍｌ〜約０．０５ｍｇ／ｍｌのＥＤＴＡ（またはエデト酸）を含むまたはそれらからなり、約５．５のｐＨを有する水性製剤を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１；配列番号２に示すアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２；配列番号３に示すアミノ酸配列、または配列番号３のバリアントを有するＶＨ ＣＤＲ３；ならびに配列番号４に示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１；配列番号５に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２；および配列番号６に示すアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）またはｒｈｕＭＡＢ ＶＥＧＦである。

【0096】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載する製剤は、（例えば、５℃、２５℃または４０℃において）少なくとも約６カ月、少なくとも約１２カ月、少なくとも約１８カ月、少なくとも約２４カ月、少なくとも約３０カ月、少なくとも約３６カ月、少なくとも約４２カ月もしくは少なくとも約４８カ月、または約６カ月超、約１２カ月超、約１８カ月超、約２４カ月超、約３０カ月超、約３６カ月超、約４２カ月超もしくは約４８カ月超の有効期間を有する。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の製剤は、（例えば、５℃、２５℃または４０℃において）少なくとも約６カ月、少なくとも約７カ月、少なくとも約８カ月、少なくとも約９カ月、少なくとも約１０カ月、少なくとも約１１カ月、少なくとも約１２カ月、少なくとも約１３カ月、少なくとも約１４カ月、少なくとも約１５カ月、少なくとも約１６カ月、少なくとも約１７カ月、少なくとも約１８カ月、少なくとも約１９カ月、少なくとも約２０カ月、少なくとも約２１カ月、少なくとも約２２カ月、少なくとも約２３カ月、少なくとも約２４カ月、少なくとも約２５カ月、少なくとも約２６カ月、少なくとも約２７カ月、少なくとも約２８カ月、少なくとも約２９カ月、少なくとも約３０カ月、少なくとも約３１カ月、少なくとも約３２カ月、少なくとも約３３カ月、少なくとも約３４カ月、少なくとも約３５カ月、少なくとも約３６カ月、少なくとも約３７カ月、少なくとも約３８カ月、少なくとも約３９カ月、少なくとも約４０カ月、少なくとも約４１カ月、少なくとも約４２カ月、少なくとも約４３カ月、少なくとも約４４カ月、少なくとも約４５カ月、少なくとも約４６カ月、少なくとも約４７カ月、少なくとも約４８カ月、少なくとも約４９カ月、少なくとも約５０カ月、少なくとも約５１カ月、少なくとも約５２カ月、少なくとも約５３カ月、少なくとも約５４カ月、少なくとも約５５カ月、少なくとも約５６カ月、少なくとも約５７カ月、少なくとも約５８カ月、少なくとも約５９カ月または少なくとも約６０カ月の有効期間を有する。

【0097】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載する製剤は、（例えば、分子ふるいＨＰＬＣにより測定する場合）４０℃において、最長１カ月、最長２カ月、最長３カ月、最長４カ月、最長５カ月または最長６カ月にわたり、約５％未満のＨＭＭＳを示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する製剤は、（例えば、分子ふるいＨＰＬＣにより測定する場合）２〜８℃において、最長３６カ月にわたり、約５％未満のＨＭＭＳを示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する製剤は、（例えば、分子ふるいＨＰＬＣにより測定する場合）４０℃において、最長１カ月、最長２カ月、最長３カ月、最長４カ月、最長５カ月または最長６カ月にわたり、約１％未満のＨＭＭＳを示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する製剤は、（例えば、還元下キャピラリーゲル電気泳動により測定する場合）２〜８℃において、最長３６カ月にわたり、約５％未満の断片を示す。

【0098】

別段の記載がない限り、本明細書に列挙する濃度は、周囲条件、すなわち、２５℃および大気圧における濃度である。

【0099】

抗ＶＥＧＦ抗体製剤を使用する方法
本発明の製剤は、これらに限定されないが、治療処置の方法を含めた、種々の適用例において有用である。

【0100】

一態様では、本発明は、疾患および病的な状態を治療するための方法を提供する。特に、本発明は、癌を治療するのに有効なアプローチを提供する。したがって、いくつかの実施形態では、癌を、その治療または阻害を必要とする対象において治療または阻害する方法であって、治療有効量の本明細書に記載する製剤を対象に投与するステップを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象の癌を治療するための医薬を製造するための本発明の製剤の使用を提供する。

【0101】

本発明により治療することが可能な癌として、例えば、非限定的に、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病またはリンパ系悪性腫瘍が挙げられる。そのような癌のより詳細な例として、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌腫を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｎｃｅｒ）、胃癌（胃腸癌を含む）、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮の癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝臓癌腫および種々のタイプの頭頚部癌、ならびにＢ細胞リンパ腫（低いグレード／濾胞性の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中間グレード／濾胞性のＮＨＬ；中間グレードのびまん性ＮＨＬ；高いグレードの免疫芽細胞性ＮＨＬ；高いグレードのリンパ芽球性ＮＨＬ；高いグレードの小型非分割細胞ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンシュトレームマクログロブリン血症を含む）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；有毛細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、さらに、母斑症と関連がある異常な血管増殖、浮腫（例として、脳腫瘍と関連がある浮腫）およびメグズ症候群が挙げられる。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭頚部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫および多発性骨髄腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、癌は、結腸直腸癌である。本発明の治療が可能な癌性状態には、転移性癌が含まれる。本発明の方法は、血管を有する腫瘍を治療するのに特に適切である。

【0102】

抗癌活性を示す任意の化学療法剤を本発明に従って使用することができる。好ましくは、化学療法剤は、アルキル化剤、抗代謝剤、葉酸アナログ、ピリミジンアナログ、プリンアナログおよび関連の阻害剤、ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシン、抗生物質、Ｌ−アスパラギナーゼ、トポイソメラーゼ阻害剤、インターフェロン、白金配位錯体、アントラセンジオン置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、副腎皮質ステロイド、プロゲスチン、エストロゲン、抗エストロゲン剤、アンドロゲン、抗アンドロゲン剤、ならびに性腺刺激ホルモン放出ホルモンアナログからなる群から選択される。より好ましくは、化学療法剤は、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン（ＬＶ）、イリノテカン、オキサリプラチン、カペシタビン、パクリタキセルおよびドセタキセルからなる群から選択される。２つ以上の化学療法剤を、抗ＶＥＧＦ抗体の投与と組み合わせて投与するためのカクテルとして使用することができる。化学療法の好ましい組合せの１つが、フルオロウラシルに基づく組合せであり、これは、５−ＦＵおよび１つまたは複数のその他の化学療法剤を含む。組合せ化学療法の適切な投与レジメンが、当技術分野で公知であり、例えば、Ｓａｌｔｚら（１９９９）Ｐｒｏｃ ＡＳＣＯ １８：２３３ａ、およびＤｏｕｉｌｌａｒｄら（２０００）Ｌａｎｃｅｔ ３５５：１０４１〜７に記載されている。

【0103】

したがって、いくつかの実施形態では、癌を、その治療または阻害を必要とする対象において治療または阻害する方法であって、治療有効量の本明細書に記載する製剤を対象に投与するステップを含み、癌が、結腸直腸癌、直腸癌、非扁平上皮性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、転移性腎細胞癌（ｍＲＣＣ）、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭頚部癌、メラノーマ、卵巣癌、中皮腫、神経膠芽腫、子宮頚癌、乳癌および多発性骨髄腫からなる群から選択される方法を提供する。いくつかの実施形態では、子宮頚癌は、持続性、再発性または転移性の子宮頚癌である。いくつかの実施形態では、結腸直腸癌は、転移性結腸直腸癌（ＭＣＲＣ）である。

【0104】

いくつかの実施形態では、本発明の製剤を、対象の血流内、筋肉内、組織内、脂肪内または内臓内に直接投与することができる。非経口投与に適切な手段は、静脈内、眼内、硝子体内、動脈内、腹腔内、くも膜下腔内、側脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、小孔内、皮内および皮下を含む。非経口投与に適切なデバイスは、（マイクロニードル、マイクロプロジェクション、可溶性針およびその他の微細孔形成技法を含めた）針を利用する注射器、無針注射器、および注入技法を含む。いくつかの実施形態では、本発明の製剤を、対象の静脈内または皮下に投与する。

【0105】

いくつかの実施形態では、本発明の製剤の投与パターンは、製剤の１用量の、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、１５週間に１回、２０週間に１回、２５週間に１回、または２６週間に１回の投与を含む。いくつかの実施形態では、本発明の製剤を、１カ月に１回、２カ月に１回、３カ月に１回、４カ月に１回、５カ月に１回、または６カ月に１回投与する。

【0106】

投与レジメンは、熟練家が達成するのを望む薬物動態学的崩壊のパターンによって異なり得る。例えば、いくつかの実施形態では、週１〜４回の投与を企図する。投与頻繁をさらに減らして、使用することもできる。いくつかの実施形態では、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、１５週間に１回、２０週間に１回、２５週間に１回、またはより低頻度で、用量を投与する。いくつかの実施形態では、１カ月に１回、２カ月に１回、３カ月に１回、４カ月に１回、５カ月に１回、６カ月に１回、またはより低頻度で、用量を投与する。この療法の進行は、従来の技法およびアッセイにより容易にモニターされる。投与形態は、経時的に変化させることができる。

【0107】

いくつかの実施形態では、本発明の製剤の用量として、５ｍｇ／ｋｇ ＩＶの用量を２週間に１回投与する。いくつかの実施形態では、本発明の製剤の用量として、１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶの用量を２週間に１回投与する。いくつかの実施形態では、本発明の製剤の用量として、７．５ｍｇ／ｋｇ ＩＶの用量を３週間に１回投与する。いくつかの実施形態では、第一選択のＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）含有レジメンにおいて進行が認められた後に、フルオロピリミジン−イリノテカンまたはフルオロピリミジン−オキサリプラチンに基づく化学療法と共に、本発明の製剤の用量として、７．５ｍｇ／ｋｇ ＩＶの用量を３週間に１回投与する。いくつかの実施形態では、本発明の製剤の用量として、１５ｍｇ／ｋｇ ＩＶの用量を３週間に１回投与する。

【0108】

本発明の目的では、医薬の適切な投与量は、利用する抗体、薬剤を投与する目的が予防または治療のいずれであっても、治療しようとする障害のタイプおよび重症度、以前の療法、患者の病歴および薬剤に対する応答、ならびに主治医の裁量によって異なる。典型的には臨床医は、この医薬を、投与量が所望の結果の達成をもたらすまで投与する。投与量は、実験的に決定することができる。

【0109】

用量および／または頻度は、治療コースにわたり変化させることができる。抗体の半減期等の実験的考察は一般に、投与量の決定に寄与する。投与頻度を決定し、療法のコースにわたり加減することができ、投与頻度は一般に、自己免疫疾患の１つまたは複数の症状の治療および／または抑制および／または回復および／または遅延に基づくが、必ずしもそうであるとは限らない。個体によっては、２用量またはそれ以上が必要になる場合がある。投与頻度を決定し、療法のコースにわたり加減することができる。例えば、これに限定されないが、数日以上にわたり反復投与する場合、疾患およびその重症度に応じて、症状の所望の抑制が生じるまで、または十分な治療レベルが達成されて、血中グルコースレベルが低下するまで、治療を維持する。

【0110】

本発明の製剤の投与は、例えば、投与の目的が治療または予防のいずれであっても、レシピエントの生理的学的状態、および熟練家に既知のその他の要因に応じて、連続的または間欠的であり得る。本発明の製剤の投与は、あらかじめ選択された期間にわたり本質的に連続的であり得るか、または間隔を開けた一連の投与であってもよい。

【0111】

好ましくは、用量の投与は、非経口投与であり、好ましくは、静脈内、眼内、硝子体内、動脈内、腹腔内、くも膜下腔内、側脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、小孔内、皮内および皮下から選択される。好ましくは、製剤は、非経口投与のための、無菌の単位投与量の形態をとる（例えば、静脈内投与）。

【0112】

以下の実施例は、例示のために限って提供し、いかなる場合であっても、実施例により本発明の範囲を制限する意図はない。実際に、本明細書に示し、記載するものに加えて、本発明の種々の改変形態が上記の記載から当業者に明らかになり、これらは添付の特許請求の範囲に属する。

【実施例】

【0113】

（実施例１）
抗ＶＥＧＦ抗体を含有するコハク酸−スクロース−ＥＤＴＡ−ポリソルベート８０（ＳＳＥＰ）抗体製剤の製剤開発のための安定性の研究
最適な抗ＶＥＧＦ抗体製剤を評価するために、ＳＳＥＰ製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体（表２Ａ）および市販処方中の抗ＶＥＧＦ抗体（表２Ｂ）を含めた安定性の研究を実施した。開発バッチから得られた抗ＶＥＧＦ抗体の原薬を製剤化して、ＳＳＥＰ製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体および市販処方中の抗ＶＥＧＦ抗体を調製した。また、データを抗ＶＥＧＦ抗体の許諾製品（“ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））の代表的なロットに対する安定性の研究から得られたデータと比較して、製剤の予備評価も行った。この実施例では、使用した抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する。

【0114】

【表2】

【0115】

ｐＨ緩衝液のスクリーニングを実施して、緩衝系および５．２〜６．０の範囲のｐＨの、分子に対する影響を、その他の安定化賦形剤の非存在下で評価した。薬物製品の最適な安定性を得るために、開発製剤の安定性の研究を実施して、市販処方（リン酸、ｐＨ６．２）中の抗ＶＥＧＦ抗体を、より低いｐＨ値（ｐＨ５．５および５．８）の緩衝系と比較した。次いで、製品の分解をモニターするために一般に使用する品質に関する属性、例として、分子ふるいＨＰＬＣ（ＳＥ−ＨＰＬＣ）により測定される属性について、試料を分析した。抗ＶＥＧＦ抗体を２５ｍｇ／ｍＬに希釈し、市販処方またはＳＳＥＰ製剤のいずれかとして製剤化し、ガラス製バイアル中に充填し、フルオロポリマーコート栓を用いて密封し、アルミニウム製シールを用いて封鎖し、５℃および２５℃において２２週間にわたりまたは４０℃において１２週間にわたり直立状態で保存した。

【0116】

２５℃における保存についてのＳＥ−ＨＰＬＣの結果を、表３および図１に示す。表３および図１に見られるように、抗ＶＥＧＦ抗体を４、８、１２および２２週間保存した後に、市販処方と比較して、ＳＳＥＰ製剤中では顕著により少ない分解が観察された。これらの結果から、リアルタイム安定性条件および加速安定性条件の両方において、ＳＳＥＰ製剤（ｐＨ５．５）中の抗ＶＥＧＦ抗体は、市販処方（ｐＨ６．２）中の抗ＶＥＧＦ抗体よりも安定であることが示されている。

【0117】

【表3】

【0118】

（実施例２）
抗ＶＥＧＦ抗体を含有するコハク酸−スクロース−ＥＤＴＡ−ポリソルベート８０（ＳＳＥＰ）抗体製剤に関する製剤のロバスト性についての安定性の研究
製剤のロバスト性についての安定性の研究において、ＳＳＥＰ製剤（研究対象の賦形剤）中の抗ＶＥＧＦ抗体、および賦形剤の高いレベルまたは低いレベルのいずれかを用いて調製した抗ＶＥＧＦ抗体（コハク酸、スクロースおよびＥＤＴＡについては±２５％の範囲を、ポリソルベート−８０については±５０％の範囲を評価した）をそれぞれ、５℃および３０℃において１２カ月間および６カ月間にわたり保存した。次いで、生化学的安定性をモニターするために選択した分析方法を使用して、試料を分析した。この実施例では、使用した抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する。安定性を示す最良の方法（ＳＥ−ＨＰＬＣ）から得られた結果を、下記の表４および図２に示す。

【0119】

【表4】

【0120】

表４および図２に示すデータから、リアルタイム安定性条件および加速安定性条件の両方において、抗ＶＥＧＦ抗体はＳＳＥＰ製剤中で安定であることが示されている。さらに、高いレベルの賦形剤を含有する試料も低いレベルの賦形剤を含有する試料も、賦形剤を研究対象のレベルで含有する試料（対照の製剤）と同等であり、このことから、製剤のロバスト性が示されている。

【0121】

（実施例３）
コハク酸−スクロース−ＥＤＴＡ−ポリソルベート８０（ＳＳＥＰ）抗体製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体と市販の抗体製剤とを、強制的に分解させて比較する安定性の研究
続いて、製剤開発のための安定性の研究では、ＳＳＥＰ製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体（５ロット）、および市販処方中に調製した抗ＶＥＧＦ抗体（１ロット、リン酸ナトリウム−トレハロース−ポリソルベート２０、ｐＨ６．２中）を、４０℃において１２週間にわたり評価した。次いで、製品の分解をモニターするために一般に使用する品質に関する属性について、ＳＥ−ＨＰＬＣ、ｉＣＥおよびｒＣＧＥを使用して、試料を分析した。この実施例では、使用した抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する。結果を、下記の表５〜８に要約する。

【0122】

【表5】

【0123】

４、６、８および１２週間保存した後に、市販処方と比較して、ＳＳＥＰ製剤中では顕著により少ない分解（％ＨＭＭＳにより測定した場合）が観察された（表５）。

【0124】

【表6】

【0125】

４、６、８および１２週間保存した後に、市販処方と比較して、ＳＳＥＰ製剤中ではより少ない分解（％断片により測定した場合）が観察された（表６）。

【0126】

下記の表７および８に、４０℃において１カ月間保存した後の抗ＶＥＧＦ ｍＡｂ−ＳＳＥＰ（ＳＳＥＰ製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体）および抗ＶＥＧＦ ｍＡｂ−市販（市販処方中の抗ＶＥＧＦ抗体）についての安定性データを要約する。安定性の表は、Ｔ＝０からの変化を示す。表７および８中、ａ＝ＳＳＥＰ製剤に起因して、抗ＶＥＧＦ ｍＡｂ−ロット中で観察されたより少ない量のＨＭＭＳ；ｂ＝細胞ベースのアッセイについて計算したパーセント差。ＣＧＥ＝キャピラリーゲル電気泳動、ｉＣＥ＝画像化キャピラリー電気泳動、ＨＭＭＳ＝高分子質量の種。この実施例では、使用した抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する。

【0127】

【表7】

【0128】

【表8】

【0129】

これらの結果から、ＳＳＥＰ製剤が、市販処方と比較して、より良好な抗ＶＥＧＦ抗体薬物製品安定性をもたらすことが示されている。データは、抗ＶＥＧＦ抗体製品（抗ＶＥＧＦ ｍＡｂ−）が、高温において保存した際にＨＭＭＳおよび断片の形成がより少なかったという点で、市販処方と比較して、ＳＳＥＰ製剤中ではより安定であることを示している。

【0130】

（実施例４）
原薬および薬物製品の有効期間を確立するための、抗ＶＥＧＦ抗体を含有するコハク酸−スクロース−ＥＤＴＡ−ポリソルベート８０（ＳＳＥＰ）抗体製剤の長期安定性の研究
続いて、原薬および薬物製品の有効期間を確立するために、ＳＳＥＰ製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体の安定性の研究を研究室スケールで設定した。

【0131】

エチレン酢酸ビニルモノマテリアル（ＥＶＡＭ）製品接触表面を有する滅菌エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡ）バッグ中に、抗ＶＥＧＦ抗体の原薬（ロット００７０６２５３−００７）を１２０ｍｇ／ｍＬで、−２０℃（推奨保存温度）および−４０℃（参考データ／代替の温度）において３６カ月間、ならびに５℃において３カ月間保存した。以下の分析方法：外観（清澄性、着色、目視による検査）、ｐＨ、ＵＶ分光法、ｉＣＥ、ＳＥ−ＨＰＬＣ、ＣＧＥ（非還元下）および細胞ベースのアッセイにより、試料を評価した。−２０℃および−４０℃において保存した試料についての、安定性を裏付けるデータは、最長３６カ月にわたり、初期のデータと比較して、顕著な差を示していない。３カ月の時点で、５℃において保存した開発試料は、初期のデータと比較して、顕著な差を示していない。この実施例では、使用した抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する。安定性を示す最良の方法（ＳＥ−ＨＰＬＣ）から得られた結果を、下記の表９に示す。

【0132】

【表9】

【0133】

２５ｍｇ／ｍＬの抗ＶＥＧＦ抗体薬物製品（ロット００７０６５９６−００３）を、フルオロポリマーコート栓を用いて密封し、アルミニウム製シールを用いて封鎖したガラス製バイアル中で、反転させて、５℃において３６カ月間および２５℃において１２カ月間保存した。原薬について使用した方法と同じ分析方法により、試料を評価し、加えて、目には見えない粒子物質について、低体積ＨＩＡＣ法による分析も行った。５℃において保存した試料についての、安定性を裏付けるデータは、最長３６カ月にわたり、初期のデータと比較して、顕著な差を示していない。３カ月の時点で、２５℃において保存した開発試料は、初期のデータと比較して、顕著な差を示していない。安定性を示す最良の方法（ＳＥ−ＨＰＬＣ）から得られた結果を、下記の表１０に示す。

【0134】

【表10】

【0135】

ＳＳＥＰ製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体のこの研究から得られた結果を使用して、有効期間は、原薬については１２０ｍｇ／ｍＬで、−２０℃または−４０℃において少なくとも３６カ月であり、２５ｍｇ／ｍＬの薬物製品については、５℃において少なくとも３６カ月であることを確立するに至った。

【0136】

（実施例５）
抗ＶＥＧＦ抗体を含有するヒスチジン−スクロース−ＥＤＴＡ−ポリソルベート８０（ＨＳＥＰ）水性製剤の安定性の研究
この実施例により、ＨＳＥＰ製剤中の抗ＶＥＧＦ抗体薬物製品の安定性を例証する。

【0137】

ＨＳＥＰ水性製剤を、およそ２５ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＶＥＧＦ抗体について設計した。具体的には、この実施例で使用したＨＳＥＰ製剤は、２０ｍＭヒスチジン、ｐＨ５．５中に、８．５％のスクロース、０．０５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、０．０２％のポリソルベート８０を含んだ。（抗ＶＥＧＦ抗体について）タンパク質濃度を、２５ｍｇ／ｍＬおよび１００ｍｇ／ｍＬで評価した。

【0138】

抗ＶＥＧＦ抗体を、２０ｍＭヒスチジン（ｐＨ５．５および５．８）ならびに２０ｍＭコハク酸（ｐＨ５．５および５．８）中に、８．５％のスクロース、０．０５ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、０．０２％のポリソルベート８０の一定量を加えて調製し、市販処方中の抗ＶＥＧＦ抗体（リン酸、トレハロース、ポリソルベート２０、ｐＨ６．２）と比較した。原薬（１００ｍｇ／ｍＬ）を、ＥＶＡバッグ中で、−４０℃、−２０℃および５℃において８週間保存し、薬物製品（２５ｍｇ／ｍＬ）を、タイプＩガラス製バイアル中で、２〜８℃および２５℃において２２週間ならびに４０℃において１２週間保存した。この実施例では、使用した抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する。抗ＶＥＧＦ抗体薬物製品（２５ｍｇ／ｍＬ）を４０℃において保存した後の％ＨＭＭＳについてのＳＥ−ＨＰＬＣデータを、下記の表１１に要約する。

【0139】

【表11】

【0140】

データは、市販処方（リン酸、ｐＨ６．２）中の抗ＶＥＧＦ抗体についての％ＨＭＭＳの顕著な増加を示している（表１１および図３）。コハク酸に基づく製剤およびヒスチジンに基づく製剤が、はるかにより少ない率のＨＭＭＳの形成を示し、コハク酸−ｐＨ５．５が最適な製剤であり、これに、ヒスチジン−ｐＨ５．５、コハク酸−ｐＨ５．８およびヒスチジン−ｐＨ５．８がそれぞれ続く。

【0141】

これらの結果から、抗ＶＥＧＦ抗体は、ｐＨ５．５または５．８を有するコハク酸に基づく製剤およびヒスチジンに基づく製剤中では、市販処方中よりも顕著に安定であることが示されている。

【図1】

【図2】

【図3】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]

【外国語明細書】

2016138097000001.pdf