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特開2016-222721アポトーシスシグナル調節キナーゼとしての置換されたピリジン−２−カルボキサミド化合物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】特開2016-222721(P2016-222721A)
(43)【公開日】2016年12月28日
(54)【発明の名称】アポトーシスシグナル調節キナーゼとしての置換されたピリジン−２−カルボキサミド化合物
(51)【国際特許分類】
C07D 417/14 20060101AFI20161205BHJP
A61K 31/4439 20060101ALI20161205BHJP
A61K 31/4545 20060101ALI20161205BHJP
A61K 31/496 20060101ALI20161205BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20161205BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20161205BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20161205BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20161205BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20161205BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20161205BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20161205BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20161205BHJP
A61P 9/04 20060101ALI20161205BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20161205BHJP
A61P 9/06 20060101ALI20161205BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20161205BHJP
【ＦＩ】
C07D417/14CSP
A61K31/4439
A61K31/4545
A61K31/496
A61P43/00 111
A61P37/02
A61P29/00
A61P9/00
A61P13/12
A61P3/10
A61P25/00
A61P11/00
A61P9/04
A61P9/10 103
A61P9/06
A61P1/16
【審査請求】未請求
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
【全頁数】53
(21)【出願番号】特願2016-191437(P2016-191437)
(22)【出願日】2016年9月29日
(62)【分割の表示】特願2015-549760(P2015-549760)の分割
【原出願日】2013年12月20日
(31)【優先権主張番号】61/740,777
(32)【優先日】2012年12月21日
(33)【優先権主張国】US
(71)【出願人】
【識別番号】500029420
【氏名又は名称】ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(72)【発明者】
【氏名】グレゴリー ノッテ
【テーマコード（参考）】
4C063
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C063AA03
4C063AA05
4C063BB09
4C063CC62
4C063DD12
4C063EE01
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BC82
4C086GA07
4C086GA08
4C086GA10
4C086GA12
4C086NA14
4C086ZA02
4C086ZA15
4C086ZA36
4C086ZA37
4C086ZA40
4C086ZA59
4C086ZA75
4C086ZA81
4C086ZB07
4C086ZB11
4C086ZC35
(57)【要約】
【課題】アポトーシスシグナル調節キナーゼ（「ＡＳＫ１」）阻害活性を有する化合物を提供すること【解決手段】
本発明は、変数が上記定義した通りである式（Ｉ）の化合物に関する。この化合物は、アポトーシスシグナル調節キナーゼ（「ＡＳＫ１」）阻害活性を有し、したがって、自己免疫障害、炎症性疾患、心血管疾患、糖尿病、糖尿病性腎症、腎臓疾患を含む心腎臓疾患、線維性疾患、呼吸器疾患、ＣＯＰＤ、特発性肺線維症、急性肺損傷、急性および慢性肝臓疾患、ならびに神経変性疾患を含めたＡＳＫ１が媒介する状態の処置のために有用である。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の分野本発明は、酵素阻害活性を有する新規化合物、ならびにＡＳＫ１が媒介する状態（自己免疫障害、慢性腎臓疾患を含む炎症性疾患、心血管疾患、および神経変性疾患など）の処置におけるその使用に関する。本発明は、そのような化合物の調製法、およびそのような化合物を含有する薬学的組成物にも関する。
【背景技術】
【0002】
背景分裂促進因子活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達カスケードは、細胞外および細胞内の多様なキュー（ｑｕｅｕｅ）を、細胞増殖、分化、炎症、およびアポトーシスを含む適切な細胞ストレス反応に結びつける（非特許文献１；非特許文献２）。ＭＡＰＫには、ＭＡＰ３Ｋ、ＭＡＰ２Ｋ、およびＭＡＰＫという３つのグループが存在し、これらは順次活性化されていく。ＭＡＰＫ３が、環境シグナルに直接反応してＭＡＰ２Ｋをリン酸化し、これが続いて特定のＭＡＰＫをリン酸化する。その後、ＭＡＰＫは、遺伝子発現を調節する転写因子を含む細胞基質をリン酸化することにより、適切な細胞反応を媒介する。
【0003】
アポトーシスシグナル調節キナーゼ１（ＡＳＫ１）は、分裂促進因子活性化プロテインキナーゼキナーゼキナーゼ（「ＭＡＰ３Ｋ」）ファミリーの一員であり、ｃ−Ｊｕｎ Ｎ末端プロテインキナーゼ（「ＪＮＫ」）およびｐ３８ＭＡＰキナーゼを活性化する（非特許文献３）。ＡＳＫ１は、酸化ストレス、活性酸素種（ＲＯＳ）、ＬＰＳ、ＴＮＦ−α、ＦａｓＬ、ＥＲストレス、および細胞内カルシウム濃度の上昇を含む様々な刺激因子により活性化される（非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６）。こうしたシグナルに反応して、ＡＳＫ１は、Ｔｈｒ８３８での自己リン酸化により活性化し、続いてＭＫＫ３／６およびＭＫＫ４／７などのＭＡＰ２Ｋをリン酸化し、次いでこれらのＭＡＰ２Ｋがｐ３８ ＭＡＰＫおよびＪＮＫ ＭＡＰＫをそれぞれリン酸化および活性化する。ＡＳＫ２は、ＡＳＫ１と４５％の配列相同性を共有する関連ＭＡＰ３Ｋである（非特許文献７）。ＡＳＫ２の組織分布は限られているものの、細胞の種類によっては、ＡＳＫ１とＡＳＫ２が相互作用し、タンパク質複合体において一緒に機能する場合もあることが報告されている（非特許文献８；非特許文献９）。ストレスのかからない条件では、ＡＳＫ１は、ＡＳＫ１リプレッサーであるチオレドキシン（Ｔｒｘ）との結合を通じて（非特許文献１０）、およびＡＫＴとの会合を通じて（非特許文献１１）不活性状態を保っている。
【0004】
ＡＳＫ１タンパク質のリン酸化は、細胞の種類に依存して、アポトーシスまたは他の細胞反応をもたらし得る。ＡＳＫ１の活性化およびシグナル伝達は、神経変性障害、心血管障害、炎症性障害、自己免疫障害、および代謝障害を含む広範囲の疾患において重要な役割を果たしていることが報告されている。また、ＡＳＫ１は、心臓、脳、および腎臓の虚血および再灌流に続く臓器損傷の媒介に関与している（非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４）。新たな証拠は、ＡＳＫ２も、単独でまたはＡＳＫ１との複合体としてのいずれかで、ヒト疾患で重要な役割を果たしている可能性を示唆している。したがって、ＡＳＫ１とＡＳＫ２のシグナル伝達複合体の阻害剤として機能する治療剤は、上記状態に罹患している患者の生活を修正または改善する可能性を有する。
【0005】
特許文献１は、心血管疾患の予防および／または処置に有用なＡＳＫ１阻害剤を同定するための方法、ならびに動物での心血管疾患を予防および／または処置するための方法を記載している。これらの方法は、動物に、ＡＳＫ１阻害剤、および必要に応じて、昇圧化合物を投与する工程を含む。
特許文献２は、心不全の予防および処置のうち少なくとも１つに対する、心筋細胞におけるＡＳＫ１タンパク質の機能発現を阻害する化合物を含有する薬物、ならびにその薬物をスクリーニングするための方法を報告している。
特許文献３は、トリアゾロピリジン化合物、その調製法、ならびに自己免疫障害、炎症性疾患、心血管疾患および神経変性疾患を処置するための方法を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【特許文献1】米国特許出願公開第２００７／０２７６０５０号明細書
【特許文献2】米国特許出願公開第２００７／０１６７３８６号明細書
【特許文献3】国際公開第２００９０２７２８３号
【非特許文献】
【0007】
【非特許文献1】Ｋｕｍａｒ，Ｓ．，Ｂｏｅｈｍ，Ｊ．，およびＬｅｅ．，Ｊ．Ｃ．（２００３）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓ．２：７１７−７２６
【非特許文献2】Ｐｉｍｉｅｎｔａ，Ｇ．，およびＰａｓｃｕａｌ，Ｊ．（２００７）Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ，６：２８２６−２６３２
【非特許文献3】Ｉｃｈｉｊｏ，Ｈ．，Ｎｉｓｈｉｄａ，Ｅ．，Ｉｒｉｅ，Ｋ．，Ｄｉｊｋｅ，Ｐ．Ｔ．，Ｓａｉｔｏｈ，Ｍ．，Ｍｏｒｉｇｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ｋ．，Ｍｉｙａｚｏｎｏ，Ｋ．，およびＧｏｔｏｈ，Ｙ．（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７５，９０−９４
【非特許文献4】Ｈａｔｔｏｒｉ，Ｋ．，Ｎａｇｕｒｏ，Ｉ．，Ｒｕｎｃｈｅｌ，Ｃ．，およびＩｃｈｉｊｏ，Ｈ．（２００９）Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍ．Ｓｉｇｎａｌ．７：１−１０
【非特許文献5】Ｔａｋｅｄａ，Ｋ．，Ｎｏｇｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｎａｇｕｒｏ，Ｉ．，およびＩｃｈｉｊｏ，Ｈ．（２００７）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．４８：１−８．２７
【非特許文献6】Ｎａｇａｉ，Ｈ．，Ｎｏｇｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｔａｋｅｄａ，Ｋ．，およびＩｃｈｉｊｏ，Ｉ．（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０：１−６
【非特許文献7】Ｗａｎｇ，Ｘ．Ｓ．，Ｄｉｅｎｅｒ，Ｋ．，Ｔａｎ，Ｔ−Ｈ．，およびＹａｏ，Ｚ．（１９９８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５３，３３−３７
【非特許文献8】Ｔａｋｅｄａ，Ｋ．，Ｓｈｉｍｏｚｏｎｏ，Ｒ．，Ｎｏｇｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｕｍｅｄａ，Ｔ．，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ，Ｙ．，Ｎａｇｕｒｏ，Ｉ．，Ｔｏｂｉｕｍｅ，Ｋ．，Ｓａｉｔｏｈ，Ｍ．，Ｍａｔｓｕｚａｗａ，Ａ．，およびＩｃｈｉｊｏ，Ｈ．（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：７５２２−７５３１
【非特許文献9】Ｉｒｉｙａｍａ，Ｔ．，ら（２００９）Ｅｍｂｏ Ｊ．２８：８４３−８５３
【非特許文献10】Ｓａｉｔｏｈ，Ｍ．，Ｎｉｓｈｉｔｏｈ，Ｈ．，Ｆｕｊｉ，Ｍ．，Ｔａｋｅｄａ，Ｋ．，Ｔｏｂｉｕｍｅ，Ｋ．，Ｓａｗａｄａ，Ｙ．，Ｋａｗａｂａｔａ，Ｍ．，Ｍｉｙａｚｏｎｏ，Ｋ．，およびＩｃｈｉｊｏ，Ｈ．（１９９８）Ｅｍｂｏ Ｊ．１７：２５９６−２６０６
【非特許文献11】Ｚｈａｎｇ，Ｌ．，Ｃｈｅｎ，Ｊ．およびＦｕ，Ｈ．（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ９６：８５１１−８５１５
【非特許文献12】Ｗａｔａｎａｂｅら（２００５）ＢＢＲＣ３３３，５６２−５６７
【非特許文献13】Ｚｈａｎｇら、（２００３）Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ７４−３７−４３
【非特許文献14】Ｔｅｒａｄａら（２００７）ＢＢＲＣ３６４：１０４３−４９
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0008】
発明の要旨本発明は、ＡＳＫ１阻害剤として機能する新規化合物と、前記新規化合物を使用する組成物および方法とを提供する。第１の態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【化1】
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルは、必要に応じて、１から３個のハロゲン原子で置換されており；
Ｒ２は、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、前記アルキルは必要に応じてハロで置換されており；
Ｒ３は、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｒ４は、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＯＲａ、または−ＮＨＲａであり；
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、前記シクロアルキルは、必要に応じて、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、または１もしくは２個のハロゲン原子で置換されており；
ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、またはＲａおよびＲｂは、それらが結合する窒素原子と合わされて、必要に応じて酸素または窒素原子を環内に含有する４から６員複素環を形成する）、
またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体に関する。
【0009】
第２の態様では、本発明は、ＡＳＫ１阻害剤による処置を受け入れることが可能な患者、好ましくはヒト患者の疾患または状態の処置において、式（Ｉ）の化合物を使用する方法に関する。そのような疾患には、自己免疫障害、炎症性疾患、心血管疾患（糖尿病、糖尿病性腎症、およびその他の糖尿病の合併症を含む）、腎臓疾患を含む心腎臓疾患、線維性疾患、呼吸器疾患（ＣＯＰＤ、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、および急性肺損傷を含む）、急性および慢性肝臓疾患、ならびに神経変性疾患が含まれる。
【0010】
第３の態様では、本発明は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物および少なくとも１種の薬学的に許容され得る賦形剤を含む、薬学的組成物に関する。
【0011】
第４の実施形態では、本発明は、慢性腎臓疾患を処置するのに有用な式（Ｉ）の化合物を提供する。
【0012】
第５の実施形態では、本発明は、腎臓線維症を処置するのに有用な式（Ｉ）の化合物を提供する。
【0013】
別の態様では、本開示は、療法で使用される式（Ｉ）の化合物を提供する。
【0014】
別の態様では、本開示は、自己免疫障害、炎症性疾患、心血管疾患（糖尿病、糖尿病性腎症、およびその他の糖尿病の合併症を含む）、腎臓疾患を含む心腎臓疾患、線維性疾患、呼吸器疾患（ＣＯＰＤ、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、および急性肺損傷を含む）、急性および慢性肝臓疾患、ならびに神経変性疾患を処置するための医薬を製造するための、式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【発明を実施するための形態】
【0015】
発明の詳細な説明定義および一般的パラメータ
本明細書で使用される、以下の単語および文言は、それらが使用されている文脈が他に指示する範囲を除き、一般に、以下に示す意味を有するものとする。
【0016】
「アルキル」という用語は、指示される炭素原子の数を有するモノラジカル分枝状または非分枝状飽和炭化水素鎖を指す。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、およびイソ−プロピルなどの基によって例示される。
【0017】
「置換アルキル」という用語は：１）指示された基から選択される１、２、または３個の置換基を有する、上記定義されたアルキル基を指す。
【0018】
「アルキレン」という用語は、典型的には１から６個の炭素原子（例えば、１、２、３、４、５、または６個の炭素原子）を有する、分枝状または非分枝状飽和炭化水素鎖のジラジカルを指す。この用語は、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、およびプロピレン異性体（例えば、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−および−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）などの基によって例示される。
【0019】
「アミノ」という用語は、基−ＮＨ２を指す。置換アミノという用語は、ＮＨＲａまたはＮＲａＲｂ基を指し、式中、ＲａおよびＲｂ（同じでも異なっていてもよい）は、置換基を表す。
【0020】
「シクロアルキル」という用語は、単環を有する３から６個の炭素原子の環式アルキル基を指す。そのようなシクロアルキル基には、例として、シクロプロピル、シクロブチル、およびシクロペンチルなどの単環構造が含まれる。
【0021】
「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、フルオロ、ブロモ、クロロ、およびヨードを指す。
【0022】
「ハロアルキル」という用語は、１、２、または３個のハロ原子により置換されたまたは化学的に容認され得る、１〜３個（または指示された通りの）炭素原子のアルキルを指す。ハロアルキル基の例には、トリフルオロメチル、１，１，１−トリフルロプロパニル、１，１，１−トリフルオロイソプロパニルが含まれる。
【0023】
「アシル」という用語は、基−Ｃ（Ｏ）Ｒを示し、式中、Ｒは水素、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアリール、および必要に応じて置換されたヘテロアリールである。
【0024】
「アシルハロゲン化物」という用語は、基−Ｃ（Ｏ）Ｘを指し、式中、Ｘはハロゲン原子であり、好ましくはクロロである。
【0025】
本明細書で使用されかつ他に定義されない限り、「ヘテロシクリル」、複素環式、および「複素環」という用語は同義であり、単環を有しかつ１から６個の炭素原子と窒素、硫黄、および／または酸素から選択される１から２個のヘテロ原子とを環内に有する、飽和または部分不飽和環式基を指す。本明細書で使用される複素環式基には、テトラヒドロフラニル、モルホリノ、ピペリジニル、ピペラジノ、およびジヒドロピリジノなどが含まれる。本明細書で使用される「４から６員複素環式」という用語は、上記定義された複素環式基を示唆し、環員の総数が４から６個であり、環内のヘテロ原子の数に基づいて炭素原子の数の調整が行われる。
【0026】
「必要に応じた」または「必要に応じて」は、この語に続いて記載される事象または状況が起こっても起こらなくてもよいことを意味し、その記載には上記事象または状況が起こる場合と起こらない場合とが含まれることを意味する。
【0027】
所定の式の化合物（例えば、「式（Ｉ）の化合物」）は、開示される本発明の化合物と、そのような化合物の薬学的に許容され得る塩、薬学的に許容され得るエステル、水和物、多形、およびプロドラッグを包含するものとする。
【0028】
本発明は、炭素原子に結合する１個以上の水素原子が重水素によって置き換えられた式Ｉの化合物も含む。そのような化合物は、高められた代謝抵抗性を示し、したがって、ほ乳類に投与された場合に任意の式Ｉの化合物の半減期を長くするのに有用である。例えば、Foster、「Ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ」、Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．５巻（１２号）：５２４〜５２７頁（１９８４年）を参照されたい。そのような化合物は、当技術分野で周知の手段によって、例えば１個以上の水素原子が重水素によって置き換えられた出発材料を用いることによって、合成される。
【0029】
「異性体」とは、分子式は同じである、異なる化合物である。
【0030】
「立体異性体」とは、原子の空間配置のみが異なる異性体である。
【0031】
「鏡像異性体」とは、互いに重ね合わせることができない鏡像である一対の立体異性体である。一対の鏡像異性体の１：１混合物は「ラセミ」混合物である。「（±）」という用語は、適宜ラセミ混合物を表すのに用いられる。
【0032】
「ジアステレオマー」とは、少なくとも２個の不斉原子を有するが、互いに鏡像ではない立体異性体である。
【0033】
式Ｉの化合物を含めた本明細書に示される任意の式または構造は、化合物の非標識形態ならびに同位体標識形態も表すものとする。
【0034】
「治療有効量」という用語は、そのような処置を必要とするほ乳類患者、好ましくはヒト患者に投与した場合、以下に定義するように、処置を行うのに十分な量を指す。治療有効量は、当業者が容易に決定することのできる、処置がなされる被験体および疾患状態、被験体の体重および年齢、疾患状態の重症度、および投与の手法などに応じて変わることになる。
【0035】
「処置」または「処置する」という用語は、（ｉ）疾患から保護すること、すなわち疾患の臨床症状が発症しないようにすること；
（ｉｉ）疾患を阻害すること、すなわち臨床症状の発症を抑止すること；および／または（ｉｉｉ）疾患を緩和すること、すなわち臨床症状を後退させること
を目的とした、本発明の化合物の任意の投与または本発明の方法の実施を意味する。
【0036】
多くの場合、本発明の化合物は、アミノおよび／またはカルボキシル基またはそれと同様な基の存在により、酸および／または塩基の塩を形成することができる。
【0037】
所定の化合物の「薬学的に許容され得る塩」という用語は、所定の化合物の生物学的有効性および特性を保持しており、生物学的にまたは別の方法で望ましくないものではない塩を意味する。薬学的に許容され得る塩基付加塩は、無機塩基および有機塩基から調製され得る。無機塩基から誘導される塩として、あくまでも例であるが、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、およびマグネシウム塩が挙げられる。有機塩基から誘導される塩として、第一級アミン、第二級アミン、および第三級アミン、例えばアルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、置換アルキルアミン、ジ（置換アルキル）アミン、トリ（置換アルキル）アミン、アルケニルアミン、ジアルケニルアミン、トリアルケニルアミン、置換アルケニルアミンの塩が挙げられるが、これらに限定されない。また、２個または３個の置換基がアミノ窒素と一緒になって複素環式基またはヘテロアリール基を形成するアミンも挙げられる。
【0038】
薬学的に許容され得る酸付加塩は、無機酸および有機酸から調製され得る。無機酸から誘導される塩として、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの塩が挙げられる。有機酸から誘導される塩として、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などの塩が挙げられる。
【0039】
本明細書中使用される場合、「薬学的に許容され得るキャリア」は、任意のおよび全ての溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌剤、抗真菌剤、等張剤、および吸収遅延剤などを含む。薬学的活性物質用のかかる媒体および作用物質の使用は、当該分野で周知である。どのような慣用的媒体および作用物質であっても、活性成分間と相容れないのでない限り、治療用組成物での使用が想定される。補助的な活性成分も組成物に組み込まれ得る。
【0040】
「冠動脈疾患」または「心血管疾患」は、例えば、心不全（うっ血性心不全、拡張期心不全、および収縮期心不全を含む）、急性心不全、虚血、反復性虚血、心筋梗塞、不整脈、狭心症（労作性狭心症（ｅｘｅｒｃｉｓｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎｇｉｎａ）、異型狭心症、安定狭心症、不安定狭心症を含む）、急性冠動脈症候群、糖尿病、および間欠性跛行などのいずれか１つまたはそれより多くから生じる心血管構造の疾患を指す。
【0041】
「間欠性跛行」は、末梢動脈疾患に随伴する疼痛を意味する。「末梢動脈疾患」またはＰＡＤは、閉塞性末梢血管疾患（ＰＶＤ）の１種である。ＰＡＤは、心臓および脳の外側の動脈を冒す。ＰＡＤで最も一般的な状態は、歩行のとき、階段を上るとき、または運動をしているときに、臀部、大腿、またはふくらはぎに生じる疼痛を伴うけいれんである。この疼痛を間欠性跛行と呼ぶ。間欠性跛行の状態が挙げられる場合、ＰＡＤとＰＶＤの両方を含むものとする。
【0042】
不整脈とは、何らかの心拍数異常を指す。徐脈は、異常に遅い心拍数を指し、頻脈は、異常に速い心拍数を指す。本明細書中使用される場合、不整脈の処置は、心房細動、心房粗動、房室結節性リエントリ性頻拍、心房頻拍などの上室性頻拍症、ならびに、特発性心室頻拍、心室細動、早期興奮症候群、およびトルサード・ド・ポワント（ＴｄＰ）を含む心室頻拍（ＶＴ）の処置を含むものとする。
【0043】
「薬学的に許容され得る」は、薬学的調製物での使用に適切であることを意味し、一般にかかる使用について安全であるとみなされており、かかる使用について中央政府または州政府の規制当局により正式に認可されているか、動物、特にヒトへの使用について、米国薬局方または他の一般に認知された薬局方に列挙されていることを意味する。
【0044】
「プロドラッグ」は、ｉｎ ｖｉｖｏで投与されると、１以上のステップまたはプロセスまたは別の方法により代謝されて、化合物の生物学的、薬学的、または治療活性形態に変換される化合物である。例えば、プロドラッグは、経口送達に対する生物学的障壁を克服した後に、親薬物（ｐａｒｔｅｎｔ ｄｒｕｇ）を効率的に遊離させるよう化学的に設計された化合物を意味する。プロドラッグを製造するためには、代謝プロセスにより薬学的活性化合物が再生されるように、その活性化合物を改変する。プロドラッグは、薬の代謝安定性または輸送特性を変更するように、副作用または毒性を遮蔽するように、薬の風味を改善するように、あるいは薬の他の特徴または特性を変更するように設計され得る。ｉｎ ｖｉｖｏでの薬力学的プロセスおよび薬代謝の知識により、当業者は、一旦、薬学的活性化合物が既知となれば、その化合物のプロドラッグを設計することができる（例えば、Ｎｏｇｒａｄｙ （１９８５） Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，３８８〜３９２頁を参照）。
【0045】
「多形体」は、化合物の分子が固体状態で少なくとも２種の異なる配置を取り得ることから生じる、化合物の異なる結晶形を指す。所定の化合物の多形形態は、結晶構造は異なるが、液体または気体状態では同一である。所定の物質の異なる多形体は、１種以上の物理特性（溶解性および解離、真密度、結晶の形状、圧縮挙動（ｃｏｍｐａｃｔｉｏｎ ｂｅｈａｖｉｏｒ）、流動性、および／または固体状態の安定性など）に関して互いに異なることがある。当業者なら、結晶質化合物の多形を生成させるためのプロセスを承知している。したがって、本発明の化合物の多形体は、本発明の範囲内にある。
【0046】
別の実施形態では、本発明は、Ｒ１が、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルが、必要に応じて、１から３個のハロゲン原子で置換されており；
Ｒ２が、水素であり；
Ｒ３が、水素であり；
Ｒ４およびＲ５が、共に水素であり；
Ｒ６が、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；
ＲａおよびＲｂが、独立して、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；またはＲａおよびＲｂが、それらが結合する窒素原子と合わされて、必要に応じて酸素または窒素原子を環内に含有する４から６員複素環式基を形成し；前記複素環式基がさらに、必要に応じて、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびヒドロキシルから独立して選択される１または２個の基で置換される
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体を提供する。
別の実施形態では、本発明は、
Ｒ１が、シクロプロピルであり；
Ｒ２が、水素であり；
Ｒ３が、水素であり；
Ｒ４およびＲ５が、共に水素であり；
Ｒ６が、シクロプロピルであり；
ＲａおよびＲｂが、共にＣ１〜Ｃ３アルキルであり、またはＲａおよびＲｂが、それらが結合する窒素原子と合わされて、必要に応じて酸素原子を環内に含有する４から６員複素環式基を形成し；前記複素環式基がさらに、必要に応じて、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびヒ
ドロキシルから選択される１または２個の基で置換される
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体を提供する。
【0047】
別の実施形態では、本発明は、Ｒ１が、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；
Ｒ２が、水素であり；
Ｒ３が、水素であり；
Ｒ４およびＲ５が、共に水素であり；
Ｒ６が、シクロプロピルであり；
ＲａおよびＲｂが、共にＣ１〜Ｃ３アルキルであり、またはＲａおよびＲｂが、それらが結合する窒素原子と合わされて、必要に応じて酸素原子を環内に含有する４から６員複素環式基を形成し；前記複素環式基がさらに、必要に応じて、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびヒドロキシルから選択される１または２個の基で置換される
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体を提供する。
【0048】
別の実施形態では、本発明は、Ｒ１が、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはシクロプロピルであり、前記アルキル基が３個のフルオロ原子で置換され；
Ｒ２が、水素であり；
Ｒ３が、水素であり；
Ｒ４およびＲ５が、共に水素であり；
Ｒ６が、シクロプロピルであり；
ＲａおよびＲｂが、共にＣ１〜Ｃ３アルキルであり、またはＲａおよびＲｂが、それらが結合する窒素原子と合わされて、必要に応じて酸素原子を環内に含有する４から６員複素環式基を形成し；前記複素環式基がさらに、必要に応じて、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびヒドロキシルから選択される１または２個の基で置換される
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体を提供する。
【0049】
別の態様では、本発明は、Ｒ１が、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはシクロプロピルであり、前記アルキル基が３個のフルオロ原子で置換され；
Ｒ２が、水素であり；
Ｒ３が、水素であり；
Ｒ４およびＲ５が、共に水素であり；
Ｒ６が、シクロプロピルであり；
ＲａおよびＲｂが、共にメチルであり、またはＲａおよびＲｂが、それらが結合する窒素原子と合わされてモルホリノ基またはアゼチジニル基を形成し、前記アゼチジニル基は、１個の炭素原子上でジアルキル化されておりまたは１個の炭素上でヒドロキシルおよびメチル基で置換されている
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体を提供する。
【0050】
別の実施形態では、本発明は、Ｒ１が、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはシクロプロピルであり、前記アルキル基が３個のフルオロ原子で置換され；
Ｒ２が、水素であり；
Ｒ３が、水素であり；
Ｒ４およびＲ５が、共に水素であり；
Ｒ６が、シクロプロピルであり；
ＲａおよびＲｂが、共にＣ１〜Ｃ３アルキルであり、またはＲａおよびＲｂが、それらが結合する窒素原子と合わされて、必要に応じて酸素原子を環内に含有する４から６員複素
環式基を形成し；前記複素環式基がさらに、必要に応じて、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびヒドロキシルから選択される１または２個の基で置換される
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体を提供する。
【0051】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｒ１が、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルが、必要に応じて、１から３個のフルオロ原子で置換され；
Ｒ２が、水素であり；
Ｒ３が、水素であり；
Ｒ４が、水素であり；
Ｒ５が、水素であり；
Ｒ６が、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、またはＣ１〜Ｃ３シクロアルキルであり、シクロアルキルは、必要に応じて、１から２個のフルオロ原子で置換され；
ＲａおよびＲｂが、それらが結合する窒素原子と合わされて、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニルからなる群から選択される複素環式基を形成し；前記複素環式基がさらに、必要に応じて、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびヒドロキシルから選択される１または２個の基で置換される
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体を提供する。
【0052】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、フルオロメチル、ジフルオロメチル（difluormethyl）、トリフルオロメチル、フルオロエチル、ジフルオロエチル、トリフルオロエチル、
フルオロプロピル、ジフルオロプロピル、トリフルオロプロピル、フルオロシクロプロピル、ジフルオロシクロプロピル、またはシクロプロピルであり；
Ｒ２が、水素であり；
Ｒ３が、水素であり；
Ｒ４が、水素であり；
Ｒ５が、水素であり；
Ｒ６が、メチル、エチル、プロピル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、フルオロエチル、ジフルオロエチル、トリフルオロエチル、フルオロプロピル、ジフルオロプロピル、トリフルオロプロピル、フルオロシクロプロピル、ジフルオロシクロプロピル、またはシクロプロピルであり；
ＲａおよびＲｂが、それらが結合する窒素原子と合わされて、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニルからなる群から選択される複素環式基を形成し；前記複素環式基がさらに、必要に応じて、メチル、エチル、プロピル、およびヒドロキシルから選択される１または２個の基で置換される
式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体を提供する。
【0053】
本発明の化合物には、以下に指名されるような化合物が含まれるが、これらに限定するものではない：【化2】
モルホリノピコリンアミド（化合物１）
【化3】
【化4】
【化5】
【化6】
【化7】
【化8】
【化9】
【化10】
【化11】
−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−１，３−チアゾール−４−イル］−５−（３−ヒドロキシピロリジン−１−イル）ピリジン−２−カルボキサミド（化合物１０）
【化12】
【化13】
【化14】
【化15】
【化16】
【化17】
【化18】
【0054】
一態様では、本出願は、ラセミ混合物、鏡像異性体過剰な（ｅ．ｅ．）一方の鏡像異性体を含有する混合物、またはジアステレオマー過剰な（ｄ．ｅ．）一方のジアステレオマーを含有する混合物を、使用するまたは含む化合物、方法、および組成物を提供する。式（Ｉ）の化合物は、所望のＡＳＫ−１活性を有する１種の立体異性体を、少なくとも１％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％含んでいてもよい。例として、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物３、４、５、７、８、１１、１３、１４、１６）の一般的な調製で使用される全てのキラルアミン出発材料（例えば、ＲａＲｂＮＨ）を、鏡像異性体の混合物として使用した。別の例では、式（Ｉ）の化合物の一般的な調製における中間体Ｅを、（Ｓ）−４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−フルオロ−Ｎ−（２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ピコリンアミドを主に含有する混合物として、調製し使用した。
【0055】
別の態様では、本出願は、式Ｉの化合物の光学異性体、ラセミ化合物、もしくこれらのその他の混合物、またはこれらの薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、もしく溶媒和物を、使用するまたは含む方法、組成物を提供する。単一の鏡像異性体またはジアステレオマー、すなわち、光学的に活性な形態は、不斉合成によってまたはラセミ化合物の分割によって得てもよい。ラセミ化合物の分割は、例えば、分割剤の存在下での結晶化、または例えばキラル高圧液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）カラムを使用したクロマトグラフィなどの公知の方法によって、達成されてもよい。例えば、炭素間２重結合を有する、化合物のＺおよびＥ型（またはシスおよびトランス型）、またはそれらの薬学的に許容され得る塩、プロドラッグ、もしくは溶媒和物がある。
【0056】
命名法本発明の化合物の名称は、ＣｈｅｍＢｉｏＤｒａｗ Ｕｌｔｒａ １１の命名システム、またはＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ ｏｆ Ｐｕｒｅ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （ＩＵＰＡＣ）に準拠したｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｔｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎａｍｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ Ｐｉｐｅｌｉｎｅ Ｐｉｌｏｔ ｖｅｒｓｉｏｎ ９．１．０を使用して、提供される。その他の化合物またはラジカルには、一般名または組織もしくは非組織名を付けてもよい。本発明の化合物の命名および位置番号を、式（Ｉ）の代表的な化合物
【化19】
【化20】
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎａｍｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ Ｐｉｐｅｌｉｎｅ Ｐｉｌｏｔ ｖｅｒｓｉｏｎ ９．１．０の命名システムを使用して４−（４−シクロプロピルイミダゾール−１−イル）−Ｎ−［２−（４−シクロプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−１，３−チアゾール−４−イル］−５−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−２−カルボキサミドと、またはＣｈｅｍＢｉｏＤｒａｗ Ｕｌｔｒａの命名システムを使用して４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−Ｎ−（２−（４−シクロプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）−５−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピコリンアミドと呼んでもよい。
【0057】
併用療法ＡＳＫ１阻害剤の投与により急性心血管疾患事象の処置をうけているヒト患者は、他の治療剤による処置が有益な疾患または状態を呈することが多い。そうした疾患または状態は、心血管性のものであり得るか、または肺障害、代謝障害、胃腸管障害などに関連したものであり得る。さらに、ＡＳＫ１阻害剤の投与により急性心血管疾患事象の処置をうけている冠動脈患者によっては、抗生物質、鎮痛薬、および／または抗鬱薬および抗不安薬といった治療剤での処置が有益となり得る状態を示すことがある。
【0058】
ＡＳＫ１阻害剤と他の治療剤との併用処置が有益となり得る心血管関連疾患または状態として、安定狭心症、不安定狭心症（ＵＡ）、労作性狭心症、異型狭心症を含む狭心症、不整脈、間欠性跛行、非ＳＴＥ心筋梗塞（ＮＳＴＥＭＩ）を含む心筋梗塞、およびうっ血性（または慢性）心不全、急性心不全、または反復性虚血を含む心不全が挙げられるが、これらに限定されない。
【0059】
心血管関連疾患または状態の処置に適した治療剤として、抗狭心症薬、心不全薬、抗血栓薬、抗不整脈薬、抗高血圧薬、および脂質低下薬が挙げられる。
【0060】
ＡＳＫ１阻害剤と心血管関連状態の処置に適した治療剤との共投与により、患者が現在受けている医療（ｃａｒｅ ｔｈｅｒａｐｙ）の標準が向上する。
【0061】
抗狭心症薬として、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、およびニトレート（ｎｉｔｒａｔｅ）が挙げられる。β遮断薬は、心臓の作業負荷を減少させることにより心臓が必要とする酸素を減らし、それにより心拍数を低下させるとともに心臓収縮を穏やかにするものである。β遮断薬の例として、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール／ヒドロクロロチアジド、ビソプロロール、カルテオロール、エスモロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、プロプラノロール、ソタロール（Ｂｅｔａｐａｃｅ）、およびチモロールが挙げられる。
【0062】
ニトレートは、動脈および静脈を拡張し、それにより冠動脈の血流を増大させるとともに血圧を低下させるものである。ニトレートの例として、ニトログリセリン、ニトレートパッチ、イソソルビドジニトレート、およびイソソルビド−５−モノニトレートが挙げられる。
【0063】
カルシウムチャネル遮断薬は、心臓および血管の細胞へのカルシウムの通常の流入を防いで血管を弛緩させ、それにより心臓への血液および酸素の供給を増加させるものである。カルシウムチャネル遮断薬の例として、アムロジピン、ベプリジル、ジルチアゼム、フェロジピン、ニフェジピン、ニモジピン（Ｎｉｍｏｔｏｐ）、ニソルジピン、ベラパミル、およびニカルジピンが挙げられる。
【0064】
心不全の処置に用いられる薬剤として、利尿薬、ＡＣＥ阻害剤、血管拡張薬、および強心配糖体が挙げられる。利尿薬は、組織および循環系中の余分な流体を除去することにより心不全の症状の多くを緩和する。利尿薬の例として、ヒドロクロロチアジド、メトラゾン、フロセミド、ブメタニド、スピロノラクトン、およびエプレレノンが挙げられる。
【0065】
アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤は、血管を拡張して血流抵抗を低下させることで心臓にかかる作業負荷を減らす。ＡＣＥ阻害剤の例として、ベナゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、ホシノプリル、リシノプリル、モエキシプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、およびトランドラプリルが挙げられる。
【0066】
血管拡張薬は、血管を弛緩させ拡張することにより、血管にかかる圧を下げる。血管拡張薬の例として、ヒドララジン、ジアゾキシド、プラゾシン、クロニジン、およびメチルドパが挙げられる。ＡＣＥ阻害剤、ニトレート、カリウムチャネルアクチベータ、およびカルシウムチャネル遮断薬も、血管拡張薬として作用する。
【0067】
強心配糖体は、心臓の収縮力を高める化合物である。こうした化合物は、心臓のポンプ作用能力を増強し、心拍の不規則性を改善する。強心配糖体の例として、ジギタリス、ジゴキシン、およびジギトキシンが挙げられる。
【0068】
抗血栓薬は、血液の凝固能力を阻害する。抗血栓薬には、主要な３つの種類−血小板抑制剤、抗凝固剤、および血栓溶解剤が存在する。
【0069】
血小板抑制剤は、血小板の凝固活性を阻害し、それにより動脈での凝固を減少させる。血小板抑制剤の例として、アセチルサリチル酸（アスピリン）、チクロピジン、クロピドグレル、ジピリダモール、シロスタゾール、ペルサンチン、スルフィンピラゾン、ジピリダモール、インドメタシン、ならびに糖タンパク質ｌｌｂ／ｌｌｌａ阻害剤（アブシキシマブ、チロフィバン、およびエプチフィバチドなど）が挙げられる。β遮断薬およびカルシウムチャネル遮断薬も、血小板抑制作用を有する。
【0070】
抗凝固剤は、血餅がさらに大きくなるのを防ぐとともに、新たなクロットの形成を防ぐ。抗凝固剤の例として、ビバリルジン、ワルファリン、未分画ヘパリン、低分子量ヘパリン、ダナパロイド、レピルジン、およびアルガトロバンが挙げられる。
【0071】
血栓溶解剤は、既存の血餅を分解するように作用する。血栓溶解剤の例として、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、およびテネクテプラーゼ、ならびに組織プラスミノーゲン活性化因子が挙げられる。
【0072】
抗不整脈薬は、心拍数および律動の障害を処置するのに用いられる。抗不整脈薬の例として、アミオダロン、プロカインアミド、リドカイン、およびプロパフェノンが挙げられる。強心配糖体およびβ遮断薬も、抗不整脈薬として用いられる。
【0073】
抗高血圧薬は、高血圧、すなわち血圧が定常的に正常より高い状態を処置するのに用いられる。高血圧は、うっ血性心不全、粥状動脈硬化、およびクロット形成などの多くの心血管疾患の態様と関連している。
【0074】
抗高血圧薬の例として、α１アドレナリン作用拮抗薬（プラゾシン（Ｍｉｎｉｐｒｅｓｓ）、ドキサゾシンメシレート（Ｃａｒｄｕｒａ）、プラゾシン塩酸塩（Ｍｉｎｉｐｒｅｓｓ）、プラゾシン、ポリチアジド（Ｍｉｎｉｚｉｄｅ）、およびテラゾシン塩酸塩（Ｈｙｔｒｉｎ）など）、βアドレナリン作用拮抗薬（プロプラノロール（Ｉｎｄｅｒａｌ）、ナドロール（Ｃｏｒｇａｒｄ）、チモロール（Ｂｌｏｃａｄｒｅｎ）、メトプロロール（Ｌｏｐｒｅｓｓｏｒ）、およびピンドロール（Ｖｉｓｋｅｎ）など）、中枢性αアドレナリン作動薬（クロニジン塩酸塩（Ｃａｔａｐｒｅｓ）、クロニジン塩酸塩とクロルタリドン（Ｃｌｏｒｐｒｅｓ、Ｃｏｍｂｉｐｒｅｓ）、グアナベンズアセテート（Ｗｙｔｅｎｓｉｎ）、グアンファシン塩酸塩（Ｔｅｎｅｘ）、メチルドパ（Ａｌｄｏｍｅｔ）、メチルドパとクロロチアジド（Ａｌｄｏｃｌｏｒ）、メチルドパとヒドロクロロチアジド（Ａｌｄｏｒｉｌ）など）、複合α／βアドレナリン作用拮抗薬（ラベタロール（Ｎｏｒｍｏｄｙｎｅ、Ｔｒａｎｄａｔｅ）、カルベジロール（Ｃｏｒｅｇ）など）、アドレナリン作用性ニューロン遮断薬（グアネチジン（Ｉｓｍｅｌｉｎ）およびレセルピン（Ｓｅｒｐａｓｉｌ）など）；中枢神経系作用性抗高血圧薬（クロニジン（Ｃａｔａｐｒｅｓ）、メチルドパ（Ａｌｄｏｍｅｔ）、グアナベンズ（Ｗｙｔｅｎｓｉｎ）など）、抗アンギオテンシンＩＩ剤、ＡＣＥ阻害剤（ペリンドプリル（Ａｃｅｏｎ）、カプトプリル（Ｃａｐｏｔｅｎ）、エナラプリル（Ｖａｓｏｔｅｃ）、およびリシノプリル（Ｐｒｉｎｉｖｉｌ、Ｚｅｓｔｒｉｌ）など）、アンギオテンシンＩＩ受容体拮抗薬（カンデサルタン（Ａｔａｃａｎｄ）、エプロサルタン（Ｔｅｖｅｔｅｎ）、イルベサルタン（Ａｖａｐｒｏ）、ロサルタン（Ｃｏｚａａｒ）、テルミサルタン（Ｍｉｃａｒｄｉｓ）、およびバルサルタン（Ｄｉｏｖａｎ）など）、カルシウムチャネル遮断薬（ベラパミル（Ｃａｌａｎ、Ｉｓｏｐｔｉｎ）、ジルチアゼム（Ｃａｒｄｉｚｅｍ）、およびニフェジピン（Ａｄａｌａｔ、Ｐｒｏｃａｒｄｉａ）など）、利尿薬、直接血管拡張薬（ニトロプルシド（Ｎｉｐｒｉｄｅ）、ジアゾキシド（Ｈｙｐｅｒｓｔａｔ ＩＶ）、ヒドララジン（Ａｐｒｅｓｏｌｉｎｅ）、ミノキシジル（Ｌｏｎｉｔｅｎ）、ベラパミルなど）、ならびにカリウムチャネルアクチベータ（アプリカリム、ビマカリム、クロマカリム、レマカリム（ｅｍａｋａｌｉｍ）、ニコランジル、およびピナシジルなど）が挙げられる。
【0075】
脂質低下薬は、血中のコレステロールまたは脂肪糖の量を低下させるのに用いられる。脂質低下薬の例として、ベザフィブラート（Ｂｅｚａｌｉｐ）、シプロフィブラート（Ｍｏｄａｌｉｍ）、およびスタチン類、例えばアトルバスタチン（Ｌｉｐｉｔｏｒ）、フルバスタチン（Ｌｅｓｃｏｌ）、ロバスタチン（Ｍｅｖａｃｏｒ、Ａｌｔｏｃｏｒ）、メバスタチン、ピタバスタチン（Ｌｉｖａｌｏ、Ｐｉｔａｖａ）、プラバスタチン（Ｌｉｐｏｓｔａｔ）、ロスバスタチン（Ｃｒｅｓｔｏｒ）、およびシンバスタチン（Ｚｏｃｏｒ）などが挙げられる。
【0076】
ＡＳＫ１阻害剤を必要としている患者は、代謝障害、肺障害、末梢血管障害、または胃腸管障害などの１種以上の二次的病状を患っていることが多い。そのような患者には、本発明の化合物に少なくとも１種の治療剤を組み合わせて投与することを含む併用療法による処置が有益となり得る。
【0077】
肺障害とは、肺に関連した疾患または状態を指す。肺障害の例として、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支炎、および気腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【0078】
肺障害の処置に用いられる治療剤の例として、β２作動薬および抗コリン作用薬などの気管支拡張薬、コルチコステロイド、ならびに電解質補助剤が挙げられる。肺障害の処置に用いられる治療剤の具体例として、エピネフリン、テルブタリン、アルブテロール、サルメテロール、セレベント（Ｓｅｒｅｖｅｎｔ）、テオフィリン、臭化イプラトロピウム、チオトロピウム、メチルプレドニゾロン、マグネシウム、およびカリウムが挙げられる。
【0079】
代謝障害の例として、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病などの糖尿病、代謝症候群、脂質代謝異常、肥満、グルコース不耐性、高血圧、血清コレステロールの上昇、ならびにトリグリセリド上昇が挙げられるが、これらに限定されない。
【0080】
代謝障害の処置に用いられる治療剤の例として、上記の「心血管剤の併用療法」の段落に記載された抗高血圧薬および脂質低下薬が挙げられる。代謝障害の処置に用いられる治療剤としてさらに、インシュリン、スルホニル尿素、ビグアナイド、αグルコシダーゼ阻害剤、およびインクレチン様剤が挙げられる。
【0081】
末梢血管障害とは、心臓および脳の外部に位置する血管（動脈および静脈）に関連した障害であり、例えば、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、すなわち血液を内蔵、腕部、および脚部に供給する動脈が、粥状動脈硬化の結果、完全にまたは部分間的に塞がれた場合に発現する状態が含まれる。
【0082】
胃腸管障害とは、胃腸管に関連する疾患および状態を指す。胃腸管障害の例として、胃食道逆流症（ＧＥＲＤ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、胃腸炎、胃炎および消化性潰瘍疾患、ならびに膵炎が挙げられる。
【0083】
胃腸管障害の処置に用いられる治療剤の例として、プロトンポンプ阻害剤（パントプラゾール（Ｐｒｏｔｏｎｉｘ）、ランソプラゾール（Ｐｒｅｖａｃｉｄ）、エソメプラゾール（Ｎｅｘｉｕｍ）、オメプラゾール（Ｐｒｉｌｏｓｅｃ）、およびラベプラゾールなど）、Ｈ２遮断薬（シメチジン（Ｔａｇａｍｅｔ）、ラニチジン（Ｚａｎｔａｃ）、ファモチジン（Ｐｅｐｃｉｄ）、およびニザチジン（Ａｘｉｄ）など）、プロスタグランジン（ミソプロストール（Ｃｙｔｏｔｅｃ）など）、スクラルファート、および制酸薬が挙げられる。
【0084】
鎮痛薬は、疼痛を緩和するのに用いられる治療剤である。鎮痛薬の例として、オピエートおよびモルヒネ様剤（ｍｏｒｐｈｉｎｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）（フェンタニルおよびモルヒネなど）、パラセタモール、ＮＳＡＩＤ、ならびにＣＯＸ−２阻害剤が挙げられる。
【0085】
薬学的組成物および投与本発明により提供される化合物は、通常、薬学的組成物の形態で投与される。したがって、本発明は、活性成分として、上記化合物、または薬学的に許容され得るその塩もしくはエステルのうち１種以上、および１種以上の薬学的に許容され得る賦形剤、キャリア（不活性固形希釈剤および充填剤を含む）、希釈剤（滅菌水溶液および様々な有機溶媒を含む）、浸透増強剤、可溶化剤、およびアジュバントを含有する薬学的組成物を提供する。薬学的組成物は、単独で投与されても他の治療剤と組み合わせて投与されてもよい。こうした組成物は、薬学分野で周知の様式で調製される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、フィラデルフィア、ペンシルベニア 第１７版（１９８５）；およびＭｏｄｅｒｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．第３版（Ｇ．Ｓ．Ｂａｎｋｅｒ ＆ Ｃ．Ｔ．Ｒｈｏｄｅｓ編を参照）。
【0086】
薬学的組成物は、例えば、参照として援用される特許および特許出願に記載されている、類似の有用性を有する薬剤の許容された投与方法のいずれかにより、単回の用量で投与されても複数回の用量で投与されてもよく、そのような方法として、直腸、口腔、鼻腔内および経皮経路による投与、動脈内注射による投与、静脈内投与、腹腔内投与、非経口投与、筋肉内投与、皮下投与、経口投与、局所投与、吸入薬としての投与、または含浸もしくは被覆デバイス（例えば、ステントまたは動脈挿入式円柱状重合体など）を介した投与が挙げられる。
【0087】
投与方法の１つは、非経口、特に注射によるものである。本発明の新規組成物を注射による投与用に組み入れることができる形態として、ゴマ油、コーン油、綿実油、もしくは落花生油、ならびにエリキシル、マンニトール、デキストロース、または滅菌水性溶液、および同様の薬学的ビヒクルを用いた、水性もしくは油性懸濁液、またはエマルジョンが挙げられる。注射には食塩水の水性溶液も慣用的に用いられているが、本発明の状況においてはあまり好適ではない。エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコールなど（およびそれらの適切な混合物）、シクロデキストリン誘導体、および植物油も用いることができる。適切な流動性は、例えば、被覆剤（レシチンなど）の使用により、分散液の場合は必要な粒子サイズを維持することにより、および界面活性剤の使用により、維持され得る。微生物の作用は、様々な抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン類、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、およびチメロサールなど）により防ぐことができる。
【0088】
滅菌注射用溶液は、本発明の化合物を必要量で、必要に応じて上記に列挙された様々な他の成分とともに適切な溶媒に組み込み、続いて滅菌濾過することにより調製される。一般に、分散液は、滅菌された様々な活性成分を滅菌ビヒクル（基礎分散媒体および上記に列挙されたもののうち必要な他の成分を含有する）に組み込むことにより調製される。滅菌注射用溶液調製用の滅菌粉末の場合、好ましい調製法は、真空乾燥技術および凍結乾燥技術であり、これらは、活性成分と任意の所望の追加成分の溶液をあらかじめ滅菌濾過しておき、その溶液からこれらの成分の粉末を生成する。
【0089】
経口投与は、本発明の化合物の別の投与経路である。投与は、カプセルまたは腸溶錠などによるものが可能である。本明細書に記載の少なくとも１種の化合物を含む薬学的組成物を作製する場合、活性成分は通常、賦形剤で希釈され、および／またはキャリア（これは、カプセル、サシェ、紙、または他の容器の形態のものが可能である）内に封入される。賦形剤が希釈剤として働く場合、賦形剤は、固体、半固体、または液体材料（上記）の形態のものが可能であり、活性成分用のビヒクル、キャリア、または媒体として働く。したがって、組成物は、錠剤、丸剤、散剤、ロゼンジ、サシェ、カシェ、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ、エアロゾル（固体として、または液体媒体において）、活性化合物を含有（例えば、上限１０重量％）する軟膏、軟および硬ゼラチンカプセル剤、滅菌注射用液剤、およびパッケージされた滅菌散剤の形態のものが可能である。
【0090】
適切な賦形剤のいくつかの例として、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、澱粉、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ、およびメチルセルロースが挙げられる。製剤はさらに、滑剤（タルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱物油など）、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、保存剤（メチルおよびプロピルヒドロキシ安息香酸）、甘味剤、ならびに香味剤を含むことができる。
【0091】
本発明の組成物は、当該分野で公知の手順を用いることにより、患者への投与後、活性成分が、迅速に、持続して、または遅延して放出されるように、製剤化され得る。経口投与用の放出制御薬物送達系として、浸透圧ポンプ系および重合体を被覆したリザーバーまたは薬物−重合体マトリックス製剤を含有する溶解系が挙げられる。放出制御系の例は、米国特許第３８４５７７０号、同第４３２６５２５号、同第４９０２５１４号、および同第５６１６３４５号に示される。本発明の方法で用いるための別の製剤は、経皮送達デバイス（「パッチ」）を用いる。そのような経皮パッチを用いることで、本発明の化合物を制御された量で連続または不連続注入することが可能になる。薬学的作用物質送達用経皮パッチの構成および使用は、当該分野で周知である。例えば、米国特許第５０２３２５２号、同第４９９２４４５号、および同第５００１１３９号を参照。そのようなパッチは、薬学的作用物質を、連続送達、拍動送達、または応需型送達するように構築され得る。
【0092】
本組成物は、好ましくは、単位剤形で製剤化される。「単位剤形」という用語は、ヒト被験体および他のほ乳類のための単位投薬量に適した物理的に分離した単位であって、単位ごとに、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性材料と適切な薬学的賦形剤が含有されているもの（例えば、錠剤、カプセル剤、およびアンプル剤）を指す。本化合物は、一般に、薬学的有効量で投与される。好ましくは、各投薬単位は、経口投与の場合、本明細書に記載の化合物を１ｍｇ〜２ｇ、非経口投与の場合、本明細書に記載の化合物を好ましくは０．１〜７００ｍｇ含有する。しかしながら、実際に投与される化合物の量は、通常、処置される状態、選択した投与経路、実際に投与される化合物とその相対活性、個々の患者の年齢、体重、および反応、患者の症状の重篤度などの関連性のある状況に照らして、医師により決定されることは理解される。
【0093】
錠剤などの固形組成物を調製する場合、主要な活性成分を薬学的賦形剤と混合して本発明の化合物の均一混合物を含有する固形の製剤化前組成物を形成する。こうした製剤化前組成物が均一であると言う場合、その表現は活性成分が組成物全体にくまなく一様に分散されているため、組成物が容易に等しく有効な単位剤形（錠剤、丸剤、およびカプセル剤など）に分割され得ることを意味する。
【0094】
本発明の錠剤または丸剤は、被覆されるか、または他の方法で調合されることで、長期作用という利点をもたらす剤形となるか、胃の酸性条件から保護される。例えば、錠剤または丸剤は、内側投薬成分と外側投薬成分から構成され、後者が前者を包み込む形であることが可能である。この２成分は、胃での消化に耐えて内側成分が無傷のまま十二指腸に進むことができるようにするか、放出を遅らせることを可能にする腸溶層によって分離され得る。このような腸溶層またはコーティングには様々な材料を用いることができ、そのような材料として、多くのポリマー酸ならびにポリマー酸とシェラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースなどの材料との混合物が挙げられる。
【0095】
吸入または吹送用組成物として、薬学的に許容され得る水性もしくは有機溶媒，またはそれらの混合物による液剤および懸濁剤、ならびに散剤が挙げられる。液体または固体組成物は、上記のとおり、適切な薬学的に許容され得る賦形剤を含有してもよい。好ましくは、組成物は、局所または全身に効果を及ぼすために経口または経鼻呼吸器経路で投与される。好ましい薬学的に許容され得る溶媒における組成物は、不活性気体を用いて噴霧されてもよい。噴霧された溶液は、噴霧デバイスから直接吸入されてもよいし、噴霧デバイスがフェイスマスクのテントまたは間欠陽圧呼吸装置に接続されていてもよい。溶液、懸濁液、および粉末組成物は、製剤を適切な方法で送達するデバイスから、好ましくは経口または経鼻経路により投与され得る。
【0096】
式（Ｉ）の化合物の合成本発明の化合物は、本明細書中に開示された方法および本明細書の開示を考慮すると明らかである常用的な修飾をその方法に施したもの、ならびに当該分野で周知である方法を用いて調製することができる。本明細書の教示に加えて、慣用的な周知の合成法を用いることもできる。本明細書に記載の典型的化合物、例えば式（Ｉ）の１つ以上で記載される構造を有する化合物の合成は、以下のスキームＡに記載のとおりに、およびまたは以下の実施例で提供されるように達成され得る。入手可能な場合は、試薬は、例えばＳｉｇｍａ
Ａｌｄｒｉｃｈまたは他の化学品供給元から商業的に購入してもよい。
【化21】
【0097】
４−ブロモチアゾールカルボン酸（１）を、塩化チオニルまたは塩化オキサリルなどのアシルハロゲン化物形成試薬を使用して塩化アシルに変換することにより、まずカルボヒドラジドに変換する。次いでアシルハロゲン化物をヒドラジンで処理して、カルボヒドラジド（２）を形成する。カルボヒドラジドを、ジメチルホルムアミドジメチルアセタールおよび適切に置換された第一級アミンの存在下で環化して、所望のＲ１置換基を有するトリアゾール（３）を得る。あるいは、アシルハロゲン化物を、適切に置換されたアミン（Ｒ１ＮＨ２）との反応によってアミンに変換して、対応する化合物（１）のアミドを形成する。アミドを、公知の条件を使用してまたは本明細書に記載するように、Ｌａｗｅｓｓｏｎ試薬との反応によってチオアミドに変換する。次いでチオアミドをヒドラジンと反応させて、トリアゾール（３）を得る。トリアゾール（３）を、ＤＭＦまたは当業者に公知のその他の溶媒中の酢酸銅および水酸化アンモニウムとの反応を介して、アミノ類似体（中間体Ａ）に変換する。
【0098】
中間体Ｃの調製を、化合物（４）と、所望のＲ６置換基を有する適切に置換されたイミダゾールとをカップリングすることによって開始する。得られた生成物（５）を、ブタノールなどのプロトン性溶媒中の一酸化炭素の存在下、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２などのパラジウム試薬を使用してカルボニル化する。得られた酸（６）を、中間体Ｃとして単離する。次いで中間体Ｃを中間体Ａと反応させて、アミド中間体Ｄを形成する。中間体Ｄを、ＳＮＡｒ反応に供し、式（Ｉ）の所望のアミン化合物に変換する。当業者は、上記の一般的なスキーム、本明細書で提供される特定の手順、またはそのような当業者に公知のその他の文献の出典に従って、本明細書の反応を行うことができる。
【0099】
一般的な合成：本発明による化合物の典型的な実施形態は、以下に記載する一般的な反応スキームを使用して合成されてもよい。本明細書の記載によれば、一般的なスキームは、出発材料を、相応に異なる生成物をもたらすよう類似の構造を有するその他の材料に置き換えることによって、変更してもよいことが明らかにされよう。対応する生成物を提供するのに出発材料をどのように変えてもよいかに関する数多くの実施例を提供するために、合成に関する記載を以下に示す。置換基が定義された所望の生成物の場合、必要な出発材料は、一般に検査によって決定されてもよい。出発材料は、典型的には、商用の供給元から得られまたは公開された方法を使用して合成される。本発明の実施形態である化合物を合成するために、合成されることになる化合物の構造の検査は、各置換基が特定される。最終生成物が特定されると、本明細書の実施例の場合、一般に、検査の簡単なプロセスによって、必要な出発材料が明白に特定される。
【0100】
合成反応パラメータ「溶媒」、「不活性有機溶媒」、または「不活性溶媒」という用語は、併せて記載される反応の条件下で不活性な溶媒を指す（例えば、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（「ＴＨＦ」）、ジメチルホルムアミド（「ＤＭＦ」）、クロロホルム、塩化メチレン（またはジクロロメタン）、ジエチルエーテル、メタノール、およびピリジンなどを含む）。そうでないことが明記されない限り、本発明の反応で使用される溶媒は不活性有機溶媒であり、反応は、不活性気体、好ましくは窒素下で実施される。
２−（４−シクロプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−アミン（中間体Ａ）の調製
【化22】
【0101】
ステップ１： ４−ブロモチアゾール−２−カルボヒドラジドの調製：ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の４−ブロモチアゾール−２−カルボン酸（２．０ｇ、９．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＳＯＣｌ２（７１０μＬ、９．８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を３時間還流させた。反応物を濃縮し、残留物をＥｔＯＨ（１０ｍＬ）に懸濁し、ヒドラジン水和物（２．４ｍＬ、４９ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を９０分間加熱還流した。反応物を濃縮し、ＣＨ３ＣＮに懸濁し、濾過し、固形分をＣＨ３ＣＮ、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、乾燥して、４−ブロモチアゾール−２−カルボヒドラジド１．７ｇ（７７％）が黄色固体として得られた。Ｍ＋１＝２２２．１
【0102】
ステップ２： ４−ブロモ−２−（４−シクロプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾールの調製：４−ブロモチアゾール−２−カルボヒドラジド（６２０ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）およびトルエン（９ｍＬ）を、密閉可能なバイアルに加え、ＤＭＦ・ＤＭＡ（９２０μＬ、６．９ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を５分間撹拌した。シクロプロピルアミン（７７０μＬ、１１ｍｍｏｌ）、およびＡｃＯＨ（１６０μＬ、２．８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を、１５０℃のマイクロ波反応器で３０分間加熱した。反応物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィにより精製して（１→７％ＭｅＯＨ、ＣＨ２Ｃｌ２中）、４−ブロモ−２−（４−シクロプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール（ＤＭＦ・ＤＭＡが混入、しかし次のステップで直接使用）７４０ｍｇが得られた。
【0103】
ステップ３： ２−（４−シクロプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−アミンの調製：マイクロ波バイアルに、上記合成されたブロモチアゾール（１．０ｇ、３．７ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（ａｃａｃ）２（９７ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、およびＣｓ２ＣＯ３（２．４ｇ、７．４ｍｍｏｌ）を添加し、フラスコにＮ２を充填した。ペンタジオン（１５０μＬ、１．５ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（８ｍＬ）、および水酸化アンモニウム（１．１ｍｌ、３００μＬ／ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を９０℃に加熱した。反応が、ＨＰＬＣ（約４時間）によって終了したと判断したら、混合物をＣｅｌｉｔｅに通して濾過し、ＣｅｌｉｔｅをＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、濾液を濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィ（６→１３％ＭｅＯＨ、ＣＨ２Ｃｌ２中）により精製して、２−（４−シクロプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−アミン４８０ｍｇ（２ステップで６３％）が油状物として得られた。Ｍ＋１＝２０８．２
【0104】
２−（４−シクロプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−アミン（中間体Ｂ）の調製【化23】
【0105】
ステップ１： ４−ブロモチアゾール−２−カルボン酸の調製：Ｅｔ２Ｏ（１０００ｍｌ）中の２，４−ジブロモチアゾール（５０ｇ、２０７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（９０ｍｌ、２．５Ｍ、１．１当量）を−７８℃で滴下して添加し、それを１時間撹拌した。反応溶液を、乾燥ＣＯ２に−７８℃で注ぎ、反応混合物を室温に温めた。ＴＬＣおよびＬＣＭＳは、反応が終了したことを示した。これを水（１００ｍｌ）でクエンチ処理した。Ｅｔ２Ｏ相を除去した。水相を、ｐＨ２〜３に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を乾燥し、濾過し、濃縮して、４−ブロモチアゾール−２−カルボン酸３５ｇ（収率８２％）が得られた。
1HNMR (400 MHz, DMSO): δ8.23(1H, s)
【0106】
ステップ２〜３： （Ｓ）−４−ブロモ−Ｎ−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）チアゾール−２−カルボキサミドの調製：ＳＯＣｌ２（３００ｍｌ）中の４−ブロモチアゾール−２−カルボン酸（８０ｇ、１．０当量）の混合物に、ＤＭＦ（１０滴）を添加した。これを５時間還流し、濃縮した。残留物をＤＣＭ（３００ｍｌ）に溶解し、（Ｓ）−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−アミン塩酸塩（６０．５ｇ、１．０５当量）の溶液にＥｔ３Ｎ（１１７ｇ、３．０当量）と共に０℃で添加した。これを一晩撹拌した。ＴＬＣおよびＬＣＭＳは、反応が終了したことを示した。これを水でクエンチ処理し、ＤＣＭで抽出した。有機相を乾燥し、濾過し、濃縮した。残留物を、カラムにより精製して、（Ｓ）−４−ブロモ−Ｎ−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）チアゾール−２−カルボキサミド６２ｇ（収率５３％）が得られた。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ7.47 (1H, s), 7.17 (1H, br s), 4.74-4.76 (1H, m), 1.39 (3H, d, J = 6.8 Hz).
【0107】
ステップ４： （Ｓ）−４−ブロモ−Ｎ−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）チアゾール−２−カルボチオアミドの調製トルエン（１０００ｍｌ）中の（Ｓ）−４−ブロモ−Ｎ−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）チアゾール−２−カルボキサミド（５０ｇ、１．０当量）の溶液に、Ｌａｗｅｓｓｏｎ試薬（１００ｇ、１．５当量）を添加した。これを一晩還流した。ＴＬＣおよびＬＣＭＳは、反応が終了したことを示した。これを濃縮し、残留物をカラムにより精製して、（Ｓ）−４−ブロモ−Ｎ−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）チアゾール−２−カルボチオアミド４６ｇ（収率８８％）が得られた。
【0108】
ステップ５： （Ｓ）−４−ブロモ−Ｎ−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）チアゾール−２−カルボヒドラゾンアミドの調製（Ｓ）−４−ブロモ−Ｎ−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）チアゾール−２−カルボチオアミド（４６ｇ、１．０当量）の溶液に、ヒドラジン水和物（１５ｇ、２．０当量）を添加した。これを一晩還流した。ＴＬＣおよびＬＣＭＳは、反応が終了したことを示した。これを濃縮し、残留物をフラッシュカラムにより精製して、（Ｓ）−４−ブロモ−Ｎ−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）チアゾール−２−カルボヒドラゾンアミド４８ｇ（収率１００％）が得られた。
【0109】
ステップ６： （Ｓ）−４−ブロモ−２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾールの調製トリエトキシメタン（５００ｍｌ）中の（Ｓ）−４−ブロモ−Ｎ−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）チアゾール−２−カルボヒドラゾンアミド（５５ｇ）を、９０℃で３時間、次いで１３０℃で一晩撹拌し、反応物を濃縮した。残留物をカラムにより精製して、（Ｓ）−４−ブロモ−２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール４４ｇ（収率７７％
）が得られた。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ8.46 (1H, s), 7.43 (1H, s), 6.48-6.52 (1H,
m), 1.83 (3H, d, J = 7.2 Hz).
【0110】
ステップ７： （Ｓ）−２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−アミン（中間体Ｂ）の調製ＤＭＦ（５００ｍｌ）中の（Ｓ）−４−ブロモ−２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール（５０ｇ、１２０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、Ｃｕ（ａｃａｃ）２（３．２ｇ、１２ｍｍｏｌ、０．１当量）、アセチルアセトン（１．２ｇ、０．１当量）、およびＮＨ４ＯＨ（５０ｍｌ、濃）を添加した。これを９０℃で一晩撹拌し、濃縮した。残留物をＭｅＯＨ（５００ｍｌ）に溶解し、これを濾過した。濾液を濃縮し、残留物をカラムにより精製して、中間体Ｂ ９．６ｇ（収率２４％）が得られた。
1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ8.38 (1H, s), 6.58-6.65 (1H, m), 6.14 (1H,
s), 4.20 (2H, br s), 1.77 (3H, d, J = 7.2 Hz);ＥＳＩ ＭＳ：２６４
（［Ｍ＋１］）。
【0111】
４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−フルオロピコリン酸（中間体Ｃ）の調製【化24】
【0112】
ブチロニトリル（５０ｍＬ）中の２−クロロ−５−フルオロ−４−ヨードピリジン（１．８ｇ、１．００ｍｍｏｌ）、４−シクロプロピルイミダゾール（９８２ｍｇ、９．１０ｍｍｏｌ）、Ｃｕ２Ｏ（１００ｍｇ、０．７００ｍｍｏｌ）、８−ヒドロキシキノリン（１５２ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（４．６０ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）、およびＰＥＧ−３３５０（１．４ｇ）の懸濁物を、６５℃で１６時間加熱した。反応混合物をＣｅｌｉｔｅに通して濾過し、濃縮し、残留物を、ジクロロメタンと水との間で分配した。層を分離し、水層をジクロロメタンで２回洗浄した。合わせた有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィ（１５→６０％ＥｔＯＡｃ、ヘキサン中）により精製して、２−クロロ−４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−フルオロピリジン（７０２ｍｇ、収率４２％）が得られた。
【0113】
ステップ２： ブチル４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−フルオロピコリネートの調製
２−クロロ−４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−フルオロピリジン（７３０ｍｇ、３．０７ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１１２ｍｇ、０．１５９ｍｍｏｌ）を、脱気したＢｕＯＨに懸濁し、反応容器を一酸化炭素でパージし、ＣＯのバルーンを反応容器に固定した。混合物を７０℃に９０分間加熱し、Ｃｅｌｉｔｅに通して濾過し、濃縮した。残留物を、シリカゲルの短いプラグに通して、ブチル４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−フルオロピコリネート（８６０ｍｇ、９３％）が得られた。
【0114】
ステップ３： ４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−フルオロピコリン酸の調製４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−フルオロピコリネート（６４０ｍｇ、２．１１ｍｍｏｌ）を、１Ｎ ＨＣｌ（５ｍＬ）に溶解し、反応物を、１００℃に一晩加熱した。溶媒を除去し、ＣＨ３ＣＮを添加し、溶媒を除去して、４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−フルオロピコリン酸が得られ、これを後続の反応で直接使用した（変換率１００％と想定）。
【0115】
アミドカップリング反応の代表的な手順：４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−Ｎ−（２−（４−シクロプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）−５−フルオロピコリンアミド（中間体Ｄ）の調製
【化25】
【0116】
中間体Ｅを、同じ手順により調製した：【化26】
【0117】
４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−Ｎ−（２−（４−シクロプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）−５−モルホリノピコリンアミドの調製【化27】
Ｃ２４Ｈ２５Ｎ９Ｏ２Ｓ。５０４．２。（Ｍ＋１）。1H NMR (DMSO) δ 10.99 (s,
1H), 9.57 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.99
(s, 2H), 4.05-4.09 (m, 1H), 3.61-3.64 (m, 4H), 2.90-3.05 (m, 4H), 2.04-2.08 (m, 1H), 1.03-1.09 (m, 6H), 0.85-0.90 (m, 2H).
【0118】
下記の化合物を、適切なアミンおよび指示された中間体を使用して、類似の手法で調製した。【化28】
【0119】
中間体Ｄを介して、４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−Ｎ−（２−（４−シクロプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）−５−（３−ヒドロキシ−３−メチルアゼチジン−１−イル）ピコリンアミドを調製した。Ｃ２４Ｈ２５Ｎ９Ｏ２Ｓ。５０４．２。（Ｍ＋１）。1H NMR (DMSO)δ 10.74 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.10
(s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 4.02-4.06 (m, 1H), 3.67 (dd,
J = 8.0, 20.4 Hz, 4H), 2.01-2.06 (m, 1H), 1.37 (s, 3H), 1.03-1.10
(m, 6H), 0.83-0.86 (m, 2H).
【化29】
【0120】
中間体Ｅを介して、（Ｓ）−４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−モルホリノ−Ｎ−（２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ピコリンアミドを調製した。Ｃ２４Ｈ２４Ｆ３Ｎ９Ｏ２Ｓ。５６０．２。（Ｍ＋１）。1H NMR (DMSO) δ 11.46 (s, 1H), 9.56 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 6.78-6.82 (m, 1H), 3.61-3.65
(m, 4H), 2.90-2.94 (m, 4H), 2.02-2.06 (m, 1H), 1.83 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.03-1.07 (m, 2H), 0.86-0.88 (m, 2H).
【化30】
【0121】
中間体Ｅを介して、（Ｓ）−４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（３−ヒドロキシ−３−メチルアゼチジン−１−イル）−Ｎ−（２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ピコリンアミドを調製した。Ｃ２４Ｈ２４Ｆ３Ｎ９Ｏ２Ｓ。５６０．１。（Ｍ＋１）。1H NMR (DMSO) δ 11.21 (s, 1H), 9.24 (br s,1H), 9.22 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.75
(s, 1H), 6.79 (pent, J = 7.2 Hz, 1H), 3.67 (dd, J = 8.0, 19.6 Hz, 4H), 2.68 (s, 1H), 2.02-2.05 (m, 1H), 1.82 (d, J = 7.2 Hz, 3H),
1.37 (s, 3H), 1.01-1.06 (m, 2H), 0.81-0.85 (m, 2H).
【化31】
【0122】
中間体Ｅを介して、（Ｓ）−４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（ジメチルアミノ）−Ｎ−（２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ピコリンアミドを調製した。Ｃ２２Ｈ２２Ｆ３Ｎ９ＯＳ。５１８．１。（Ｍ＋１）。1H NMR (DMSO) δ 11.32 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 6.80 (pent, J = 7.2 Hz, 1H), 2.73 (s, 6H), 2.02-2.06 (m, 1H), 1.83 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.01-1.06 (m, 2H), 0.84-0.88 (m, 2H).
【0123】
式（Ｉ）の化合物の、さらなる一般的調製【化32】
【0124】
２ｍＬの反応バイアルに、適切なアミン求核試薬（４．１当量）およびＫ２ＣＯ３（６．１当量）を入れた。ここに、ＮＭＰ（０．１５Ｍ）中の中間体ＤまたはＥ（１．０当量）の溶液を添加した。混合物を８０℃で１６時間加熱した。これを室温に冷却し、ここにＥｔＯＡｃを添加した。得られた上澄みを、別の収集チューブに移した。溶媒をＧｅｎｅｖａｃにより除去し、得られた固体を水で洗浄し、乾燥して、所望の生成物が得られた。生成物を、ＬＣＭＳ分析による検証により特定した。
【0125】
４−（４−シクロプロピルイミダゾール−１−イル）−Ｎ−［２−（４−シクロプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−１，３−チアゾール−４−イル］−５−（３−ヒドロキシピロリジン−１−イル）ピリジン−２−カルボキサミドの調製【化33】
【0126】
化合物６、９、１２、１５、および１７を、中間体Ｄを使用して、類似の手法で調製した。【化34】
【化35】
【化36】
【化37】
【化38】
【0127】
化合物７、８、１１、１３、１４、および１６を、中間体Ｅを使用して、類似の一般的な調製手順で調製した。【化39】
【化40】
【化41】
【化42】
【化43】
Ｃ２６Ｈ２８Ｆ３Ｎ９Ｏ２Ｓの計算値５８８．２、実測値：５８７．９
【化44】
【0128】
有用性、試験、および投与一般的有用性
式Ｉの化合物は、ＡＳＫ１阻害剤の投与に反応する状態を処置するのに有効と考えられ
る。特に、式Ｉの化合物は、広範な疾患、例えば自己免疫障害、炎症性疾患、心血管疾患（糖尿病、糖尿病性腎症、およびその他の糖尿病の合併症を含む）、腎臓疾患を含む心腎臓疾患、線維性疾患、呼吸器疾患（ＣＯＰＤ、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、および急性肺損傷を含む）、急性および慢性肝臓疾患、ならびに神経変性疾患を処置するのに有用である。
【0129】
試験活性試験を、下記の実施例に記載されるように、また、当業者に明らかな方法によって、実施する。
【0130】
下記の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含まれる。以下に続く実施例に開示される技術は、本発明の実施に際して十分機能することが本発明者（ら）により発見された技術を表し、したがってその実施のための好ましい態様を構成すると見なすことができることが、当業者に理解されよう。しかし当業者は、本開示に照らして、多くの変更を、開示された特定の実施形態に行うことができ、かつその変更は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく同様のまたは類似の結果を依然として得ることができることを理解すべきである。
【0131】
生物学的アッセイＡＳＫ１（アポトーシスシグナル調節キナーゼ１）キナーゼに対する本発明の化合物の阻害活性を評価するために、その活性を、ＡＴＰからペプチド基質に移送されたホスフェートの量を決定するＴＲ−ＦＲＥＴ ＡＳＫ１キナーゼアッセイを使用して検査した。
【0132】
材料および方法試薬
脱リン酸化組換えヒトＡＳＫ１キナーゼは、Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ製であった。小分子キナーゼ阻害剤スタウロスポリン（カタログ＃ Ｓ６９４２）およびジチオトレイトール（ＤＴＴ、カタログ＃ ４３８１５−５Ｇ）は、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から得た。ＡＴＰ（カタログ＃ ７７２４）は、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ（Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、ＣＡ）製であり、試験化合物は、Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ製であった。ＨＴＲＦ ＫｉｎＥＡＳＥ（商標）−ＳＴＫ Ｓ３キットを、Ｃｉｓｂｉｏ（Ｂｅｄｆｏｒｄ、Ｍａｓｓ）から得た。その他全ての試薬は、最高級の市販のものであった。
【0133】
アッセイアッセイは、ＨＴＲＦ検出を使用して（６．１）、ＡＳＫ１キナーゼによるビオチニル化ペプチド基質のリン酸化レベルを測定する。これは、ＣｉｓｂｉｏからのＨＴＲＦ（登録商標）ＫｉｎＥＡＳＥ（商標）−ＳＴＫマニュアルに基づいた（６．１）、競合的な時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ：ｔｉｍｅ−ｒｅｓｏｌｖｅｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ）免疫アッセイである。試験化合物、１μＭ ＳＴＫ３ペプチド基質、４ｎＭ ＡＳＫ１キナーゼを、１０ｍＭ 酢酸Ｍｇ、０．０２５％ＮＰ−４０、１ｍＭ ＤＴＴ、０．０５％ＢＳＡ、および１．５％グリセロールを含有する１０ｍＭ ＭＯＰ緩衝液（ｐＨ７．０）と共に３０分間インキュベートし、次いで１００μＭ ＡＴＰを添加してキナーゼ反応を開始させ、３時間インキュベートする。１０ｍＭ ＥＤＴＡおよび１２５ｎＭストレプトアビジンＸＬ６６５を含有する１×Ｅｕ３＋クリプテート緩衝液で標識されたペプチド抗体を添加して、反応を停止させ、リン酸化ペプチド基質を、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ製のＥｎｖｉｓｉｏｎ ２１０３マルチラベルリーダーを使用して検出する。蛍光を、６１５ｎｍ（クリプテート）および６６５ｎｍ（ＸＬ６６５）で測定し、６６５ｎｍ／６１５ｎｍの比を各ウェルごとに計算する。得られるＴＲ−ＦＲＥＴレベル（６６５ｎｍ／６１５ｎｍの比
）は、リン酸化レベルに比例する。これらのアッセイ条件下、ペプチド基質のリン酸化度は、時間および酵素の濃度に対して線形であった。アッセイシステムは、酵素のＫｍおよび特異的活性に関して一貫した結果をもたらした。阻害実験（ＩＣ５０値）では、活性は、一定濃度のＡＴＰ、ペプチド、およびいくつかの固定濃度の阻害剤で実現した。スタウロスポリン、非選択的キナーゼ阻害剤を、陽性対照として使用した。全ての酵素の活性データを、４連で測定した平均として報告する。
【0134】
データ解析ＩＣ５０値を、方程式：
ｙ＝範囲／｛１＋（ｘ／ＩＣ５０）ｓ｝＋バックグラウンド
に従い計算した。式中、ｘおよびｙは、それぞれ阻害剤の濃度および酵素活性を表す。酵素活性は、ＡＴＰから基質ペプチドに組み込まれたホスフェートの量として表す。範囲は、最大ｙ範囲（阻害剤なし、ＤＭＳＯ対照）であり、ｓはスロープ係数である（６．２）。
【0135】
結果上記方法に従って、以下に示すようにＡＳＫ１を阻害する式（Ｉ）の化合物について試験をした。
【表1】
【0136】
データは、試験がなされた式（Ｉ）の化合物が、ＡＳＫ−１受容体の強力な阻害剤であることを実証する。
【0137】
ＡＳＫ１（アポトーシスシグナル調節キナーゼ１）２９３細胞をベースにしたアッセイ（細胞ＥＣ５０）化合物の細胞効力を、ＡＰ−１：ルシフェラーゼレポーター構築物を安定に発現する細胞（２９３／ＡＰ１−Ｌｕｃ細胞−Ｐａｎｏｍｉｃｓ Ｉｎｃ．、６５１９ Ｄｕｍｂａｒｔｏｎ Ｃｉｒｃｌｅ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ）でアッセイした。細胞を、キナーゼ活性ＡＳＫ１を発現するアデノウイルスに感染させたが（ラットＡＳＫ１ ｃＤＮＡの６３１−１３８１）、これはＡＰ−１転写因子を活性化させ、ルシフェラーゼの発現を増大させるものである。ＡＳＫ１の阻害剤は、ＡＳＫ１の酵素活性を減少させ、したがってＡＰ−１転写因子の活性およびルシフェラーゼの発現を減少させることになる。
１．このプロトコールに必要な材料
【表2】
【0138】
２．参考文献１． Ｐａｎｏｍｉｃｓ ２９３／ＡＰ１−Ｌｕｃ安定細胞系プロダクトインサート。
２． Ｐｒｏｍｅｇａ Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステムプロダクトインサート。
【0139】
３．必要な培地３． 完全成長培地、「ＣＧＭ」
ａ． ＤＭＥＭ（ＭｅｄｉａＴｅｃｈ）
ｂ． １０％ ＦＢＳ
ｃ． １％ ＰＳＧ
ｄ． １００ｕｇ／ｍＬ ハイグロマイシンＢ
４． アッセイ培地、「ＡＭ」
ａ． ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）
ｂ． ２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ
ｃ． １ｍＭ ピルビン酸ナトリウム
ｄ． １％ ＰＳＧ
【0140】
４．方法メンテナンス：
１． ２９３／ＡＰ１−Ｌｕｃは、業者の取扱説明書により２９３／Ａ細胞を維持し；Ｔ１５０フラスコ内の約８０％のコンフルエンスで、下記の通り細胞を採取する：
ａ． 培地を吸引し、約１２ｍＬの滅菌Ｄ−ＰＢＳで穏やかに洗浄し、吸引する。
ｂ． ５ｍＬのトリプシン−ＥＤＴＡを添加し、穏やかに傾けてフラスコをコーティングし、約５分間３７℃でインキュベートする。
ｃ． フラスコを叩かない；５ｍＬのＣＧＭを添加し、細胞懸濁液で４回フラスコを洗浄し、５０ｍＬの円錐バイアルに移し、５分間１２００ｒｐｍで遠心分離する。
ｄ． 細胞ペレットから培地を吸引し、２０から３０ｍＬのＣＧＭを添加し、６回ピペッティングすることによってペレットを再懸濁し、細胞ストレイナーに通して凝集塊を分散させ（必要な場合）、血球計数器で細胞をカウントする。
アッセイ １日目：
２． 細胞ペレットを再懸濁する他は、上記の通り細胞を採取する。
細胞をカウントし、ｍＬ当たり１．５×１０５細胞に希釈し；細胞当たり５つの感染形成単位が存在するように、アデノウイルスを添加する。
３． Ｇｒｅｉｎｅｒポリ−Ｄ−リシンコーティング付き３８４ウェルプレートをプライム処理し（２０から３０ｍＬ）、ＢｉｏＴｅｋ ｕＦｉｌｌ（ウェル当たり８０ｕＬ）を使用して、ウェル当たり１．２×１０４細胞で細胞をプレーティングする。
４． 直後に、０．４ｕＬの化合物用量系列（１００％ＤＭＳＯ中）でプレートに投与し、加湿したインキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２）内で２４時間インキュベートする。
アッセイ ２日目：
５． プレートを、下記の通り加工する（製造業者の取扱説明書に従って）：
ａ． プレートを、層流フード内に設置し、室温で３０分間露出させて冷却する。
ｂ． アッセイウェルからＡＭ ６０ｕＬを除去する。
ｃ． Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏ Ｆｉｒｅｆｌｙ基質をウェル当たり２０ｕＬ添加し、室温で１０〜２０分間静置する。
ｄ． アッセイプレートの底部を白色バッキングテープで覆う。
ｅ． 蛍光プレート読取り器でデータを獲得する。
【0141】
１００％阻害陽性対照ウェルを、残基７０９でリシンからアルギンに変異する触媒的に不活性なＡＳＫ１変異体を発現するアデノウイルスを細胞に感染させることによって、生成した。
【0142】
結果【表3】
【0143】
上記データは、式（Ｉ）の化合物、特に試験がなされた化合物が、強力なｉｎ−ｖｉｔｒｏ効能を示すことを示唆する。
【0144】
ヒト全血ＣＸＣＬ１アッセイ試薬
ヘパリンナトリウムガラスバキュテナー管（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＃３６６４８０）に収集されたヒト血液を、Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、Ｃａ）から得た。赤血球塩化アンモニウム−−カリウム（Ａｍｍｏｎｉｕｍ−Ｃｈｌｏｒｉｄｅ−Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ；ＡＣＫ）溶解緩衝液を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ａ１０４９２−０１）から得た。リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、２１−０３１−ＣＶ）およびＲＰＭＩ６４０培地（１０−０４０−ＣＶ）をＣｅｌｌｇｒｏから購入した。５０ｍｌの円錐チューブは、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（３５２０７０）製であった。９６ウェルプレート（ＭＡＶＭ０９６０Ｒ）用の真空マニホールドと共に使用されるマルチスクリーンフィルタープレート（ＭＳＢＶＳ１２１０）は、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｉｎｃ．から購入した。全量ピペット（１３−７１１−２０）および血球計数器（０２６７１１０）は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。Ｂｅｃｋｍａｎｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ製Ａｌｌｅｇｒａ Ｘ１５Ｒを、ＰＢＭＣの単離において全ての遠心分離ステップで使用した。
【0145】
ＡＳＫ１阻害剤およびオーラノフィン（Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．ＢＭＬ−ＥＩ２０６−０１００）を、それぞれ１０ｍＭおよび１００ｍＭの濃度でジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ ｃａｔ＃４７２３０１）に溶解した。一定分量を、使用する時まで−２０℃で凍結保存し、再使用または再凍結はしなかった。ＡＳＫ１阻害剤の連続希釈を、食塩水（ｐＨ４．５〜７、Ｈｏｓｐｉｒａ Ｉｎｃ、ＲＬ−２０９９）で行った。細胞抽出緩衝液（ＦＮＮ００１１）およびＨａｌｔプロテアーゼ／ホスファターゼ阻害剤カクテル（７８４４２）を、それぞれＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．およびＴｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．から購入した。Ｂｏｅｋｅｌ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｏｃｋｅｒ ＩＩを使用して、処理の間でプレートを撹拌した。ＣＸＣＬ１タンパク質を、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅからのＥＬＩＳＡアッセイにより定量した。
【0146】
化合物処理およびオーラノフィン刺激１０ｍＭ ＡＳＫ１阻害剤ＤＭＳＯストックを食塩水で希釈して、１００μＭ（１０×）の希釈標準溶液を生成した。これを、食塩水による８点３倍連続希釈系列に供し、各濃度は、最終的に意図される濃度の１０×であった。各１０×希釈標準ストック（ｗｏｒｋｉｎｇ ｓｔｏｃｋ）１０ｕＬを、全血９０μｌを含む９６プレートの８個のウェルに添加し、用量範囲１０ｕＭから１．５ｎＭを生成したが（アッセイプレート構成を図１に示す）、濃度ごとに８個のレプリケートを用いた。試料を、３７℃および５％ＣＯ２のインキュベーター内で１時間インキュベートした。１００ｍＭのオーラノフィン原液を、ＲＰＭＩ培地中で１００μＭに希釈し、５ｕｌをアッセイプレートの各ウェルに添加して、最終濃度を約５μＭにした。Ａｓｋ１阻害剤またはオーラノフィンで処理しなかった対照試料では、最高濃度の試験化合物でインキュベートされたウェルと等量のＤＭＳＯ／食塩水を添加した（ＤＭＳＯ ０．１％最終濃度）。試料を、３７℃／５％ＣＯ２のインキュベーターで２４時間、穏やかに撹拌しながらインキュベートした。インキュベーション期間の終わりに、ＲＰＭＩ １６４０培地を１００μｌ、各ウェルに添加し、プレートを穏やかに混合し、次いで１０００×ｇで１０分間、４℃で遠心分離して、細胞をペレッティングした。各ウェルから得られた上澄み５０μｌを、新しい９６ウェルアッセイプレートに移し、ＣＸＣＬ１の量を、製造業者の取扱説明書に従いＰｒｏｃａｒｔａ免疫アッセイによって定量した。各化合物を、少なくとも２名の独立したドナーから得た血液中で試験した。
図１．最終アッセイプレート構成
【表4】
【0147】
データ解析データは、ＥＣ５０値を決定するために、様々な勾配に対する非線形回帰曲線の当てはめを使用したＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して解析した。少なくとも２名の独立したドナーからの平均ＥＣ５０を報告する。
結果：
【表5】
【0148】
データは、式（Ｉ）の化合物が、ＡＳＫ１のｉｎ ｖｉｖｏ阻害剤において強力であることを示唆する。化合物６〜１７の活性を、アッセイ尺度、すなわち上記のＣｉｓｂｉｏ（６．１）からのＨＴＲＦ（登録商標）ＫｉｎＥＡＳＥ（商標）−ＳＴＫマニュアルに基づく同じ競合ＴＲ−ＦＲＥＴ免疫アッセイを使用したＡＳＫ１キナーゼによるビオチニル化ペプチド基質のリン酸化レベルを使用して、検査した。試験をした化合物は、以下に示すようにＡＳＫ１を阻害した。【表6-1】
【表6-2】
【0149】
データは、試験された式（Ｉ）の化合物が、ＡＳＫ−１受容体の強力な阻害剤であることを実証する。
【0150】
本発明の好ましい実施形態によれば、例えば、以下が提供される。（項１）
式（Ｉ）の化合物：
【化45】
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルは、必要に応じて、１から３個のハロゲン原子で置換されており；
Ｒ２は、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、前記アルキルは必要に応じてハロで置換されており；
Ｒ３は、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｒ４は、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｒ５は、水素、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＯＲａ、または−ＮＨＲａであり；
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、またはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、前記シクロアルキルは、必要に応じて、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、または１もしくは２個のハロゲン原子で置換されており；
ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、またはＲａおよびＲｂは、それらが結合する窒素原子と合わされて、必要に応じて酸素または窒素原子を環内に含有する４から６員複素環を形成する）、
またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体。
（項２）
Ｒ１が、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルは、必要に応じて、１から３個のハロゲン原子で置換されており；
Ｒ２が、水素であり；
Ｒ３が、水素であり；
Ｒ４およびＲ５が、共に水素であり；
Ｒ６が、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；
ＲａおよびＲｂが、独立して、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；またはＲａおよびＲｂが、それらが結合する窒素原子と合わされて、必要に応じて酸素原子を環内に含有する４から６員複素環式基を形成し；前記複素環式基がさらに、必要に応じて、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびヒドロキシルから独立して選択される１または２個の基で置換されている、
上記項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体。
（項３）
Ｒ１が、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはシクロプロピルであり、前記アルキル基が３個のフルオロ原子で置換されており；
Ｒ２が、水素であり；
Ｒ３が、水素であり；
Ｒ４およびＲ５が、共に水素であり；
Ｒ６が、シクロプロピルであり；
ＲａおよびＲｂが、共にＣ１〜Ｃ３アルキルであり、またはＲａおよびＲｂが、それらが結合する窒素原子と合わされて、必要に応じて酸素原子を環内に含有する４から６員複素環式基を形成し；前記複素環式基がさらに、必要に応じて、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびヒドロキシルから選択される１または２個の基で置換されている、
上記項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体。
（項４）
【化46】
すなわち
４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−Ｎ−（２−（４−シクロプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）−５−モルホリノピコリンアミド；
【化47】
すなわち
４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−Ｎ−（２−（４−シクロプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）−５−（３−ヒドロキシ−３−メチルアゼチジン−１−イル）ピコリンアミド；
【化48】
すなわち
（Ｓ）−４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−モルホリノ−Ｎ−（２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ピコリンアミド；
【化49】
すなわち
（Ｓ）−４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（３−ヒドロキシ−３−メチルアゼチジン−１−イル）−Ｎ−（２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ピコリンアミド；および
【化50】
すなわち
（Ｓ）−４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（ジメチルアミノ）−Ｎ−（２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ピコリンアミドからなる群から選択される化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは鏡像異性体。
（項５）
【化51】
すなわち
（Ｓ）−４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（ジメチルアミノ）−Ｎ−（２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ピコリンアミド
である、上記項４に記載の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは鏡像異性体。
（項６）
【化52】
すなわち、
（Ｓ）−４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（３−ヒドロキシ−３−メチルアゼチジン−１−イル）−Ｎ−（２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ピコリンアミド
である、上記項４に記載の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは鏡像異性体。
（項７）
【化53】
すなわち、
４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−Ｎ−（２−（４−シクロプロピル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）−５−（３−ヒドロキシ−３−メチルアゼチジン−１−イル）ピコリンアミド
である、上記項４に記載の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは鏡像異性体。
（項８）
上記項１〜７および１４〜１６に記載の化合物と、少なくとも１種の薬学的に許容され得る賦形剤とを含む、薬学的組成物。
（項９）
上記項１〜７および１４〜１６に記載の化合物の治療量を投与する工程を含む、ヒト患者において、自己免疫障害、炎症性疾患、心血管疾患（糖尿病、糖尿病性腎症、およびその他の糖尿病の合併症を含む）、腎臓疾患を含む心腎臓疾患、線維性疾患、呼吸器疾患（ＣＯＰＤ、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、および急性肺損傷を含む）、急性および慢性肝臓疾患、ならびに神経変性疾患などの疾患を処置する方法。
（項１０）
上記項１〜７および１４〜１６に記載の化合物の治療有効量を投与する工程を含む、慢性腎臓疾患を処置する方法。
（項１１）
肺線維症または腎臓線維症を処置する方法であって、上記項１〜７および１４〜１６に記載の化合物の治療有効量を、前記処置の必要がある患者に投与する工程を含む、方法。
（項１２）
治療における使用のための、上記項１〜７および１４〜１６に記載の化合物。
（項１３）
自己免疫障害、炎症性疾患、心血管疾患（糖尿病、糖尿病性腎症、およびその他の糖尿病の合併症を含む）、腎臓疾患を含む心腎臓疾患、線維性疾患、呼吸器疾患（ＣＯＰＤ、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、および急性肺損傷を含む）、急性および慢性肝臓疾患、ならびに神経変性疾患を処置するための医薬を製造するための、上記項１〜７および１４〜１６に記載の化合物の使用。
（項１４）
Ｒ１が、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはシクロプロピルであり、アルキルまたはシクロプロピルが必要に応じて１から３個のフルオロ原子で置換されており；
Ｒ２が、水素であり；
Ｒ３が、水素であり；
Ｒ４およびＲ５が、共に水素であり；
Ｒ６が、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、またはシクロプロピルであり、シクロプロピルが、１から２個のフルオロ原子で置換されており；
ＲａおよびＲｂが、それらが結合する窒素原子と合わされて、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニルからなる群から選択される複素環式基を形成し；前記複素環式基がさらに、必要に応じて、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびヒドロキシルから選択される１または２個の基で置換されている、
上記項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体。
（項１５）
Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、フルオロエチル、ジフルオロエチル、トリフルオロエチル、フルオロプロピル、ジフルオロプロピル、トリフルオロプロピル、フルオロシクロプロピル、ジフルオロシクロプロピル、またはシクロプロピルであり；
Ｒ２が、水素であり；
Ｒ３が、水素であり；
Ｒ４およびＲ５が、共に水素であり；
Ｒ６が、メチル、エチル、プロピル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、フルオロエチル、ジフルオロエチル、トリフルオロエチル、フルオロプロピル、ジフルオロプロピル、トリフルオロプロピル、フルオロシクロプロピル、ジフルオロシクロプロピル、またはシクロプロピルであり；
ＲａおよびＲｂが、それらが結合する窒素原子と合わされて、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニルからなる群から選択される複素環式基を形成し；前記複素環式基がさらに、必要に応じて、メチル、エチル、プロピル、およびヒドロキシルから選択される１または２個の基で置換されている、
上記項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体。
（項１６）
【化54】
【化55】
【化56】
【化57】
【化58】
【化59】
【化60】
【化61】
【化62】
【化63】
４−（４−シクロプロピルイミダゾール−１−イル）−Ｎ−［２−（４−シクロプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−１，３−チアゾール−４−イル］−５−（４−ヒドロキシ−４−メチルピペリジン−１−イル）ピリジン−２−カルボキサミド；
【化64】
（Ｓ）−４−（４−シクロプロピル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−５−（４−メチルピペラジン−１−イル）−Ｎ−（２−（４−（１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）チアゾール−４−イル）ピコリンアミド；および
【化65】
４−（４−シクロプロピルイミダゾール−１−イル）−Ｎ−［２−（４−シクロプロピル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−１，３−チアゾール−４−イル］−５−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−２−カルボキサミド
からなる群から選択される化合物、またはその薬学的に許容され得る塩もしくは立体異性体。
【外国語明細書】