特開 2017-167475 模擬卵

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】特開2017-167475(P2017-167475A)

(43)【公開日】2017年9月21日

(54)【発明の名称】模擬卵

(51)【国際特許分類】

   G09B 23/28 20060101AFI20170825BHJP

   C12M 1/00 20060101ALI20170825BHJP

【ＦＩ】

   G09B23/28

   C12M1/00 Z

【審査請求】未請求

【請求項の数】11

【出願形態】ＯＬ

【全頁数】13

(21)【出願番号】特願2016-55252(P2016-55252)

(22)【出願日】2016年3月18日

(71)【出願人】

【識別番号】515264012

【氏名又は名称】福永 憲隆

(71)【出願人】

【識別番号】516083368

【氏名又は名称】野老 美紀子

(74)【代理人】

【識別番号】110000028

【氏名又は名称】特許業務法人明成国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】福永 憲隆

(72)【発明者】

【氏名】野老 美紀子

【テーマコード（参考）】

2C032

4B029

【Ｆターム（参考）】

2C032CA03

2C032CA06

4B029AA27

4B029BB11

(57)【要約】

【課題】人の卵子、胚の凍結、顕微授精等の技術を習熟する機会を増加させる。
【解決手段】 平均直径が１００〜２００μｍの球状を成し、ゲル状であり、人の卵子または胚を模擬した模擬卵を提供する。
【選択図】図２

【特許請求の範囲】

【請求項1】

平均直径が１００〜２００μｍの球状を成し、
ゲル状であり、
人の卵子または胚を模擬した模擬卵。

【請求項2】

請求項１に記載の模擬卵であって、
球状の本体部と、
前記本体部の全表面を覆う膜部と、
を備える、模擬卵。

【請求項3】

請求項１または請求項２に記載の模擬卵であって、
有色透明または有色半透明である、模擬卵。

【請求項4】

請求項２に記載の模擬卵であって、
前記本体部は、有色透明または有色半透明であり、
前記膜部は、無色透明である、模擬卵。

【請求項5】

請求項１から請求項３のいずれか一項に記載の模擬卵であって、
さらに、
内部に、平均直径が５〜３０μｍの球状の極体部を備える、模擬卵。

【請求項6】

請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の模擬卵であって、
平均直径は、１５０〜２００μｍである、模擬卵。

【請求項7】

請求項１から６のいずれか一項に記載の模擬卵であって、
アガロースを主成分とする、模擬卵。

【請求項8】

請求項２に記載の模擬卵であって、
前記本体部はアルギン酸カルシウムを主成分とし、
前記膜部はアガロースを主成分とする、模擬卵。

【請求項9】

請求項１から８のいずれか一項に記載の模擬卵であって、
管の先端の外径が約２μｍで、先端が平滑にカットされたピペットを穿刺する場合に、前記ピペットが前記模擬卵に侵入する前に、５μm以上弾性変形する、模擬卵。

【請求項10】

請求項１から９のいずれか一項に記載の模擬卵であって、
培養液以上の密度を有する、模擬卵。

【請求項11】

容器に、請求項１から１０のいずれか一項に記載の模擬卵を１個以上、前記模擬卵が不溶性の溶液と共に収容された模擬卵キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、模擬卵に関する。

【背景技術】

【0002】

妊娠を望む人が避妊なしで１〜２年以内に妊娠にいたることができない場合、不妊症と診断される。不妊症に対する治療（以下、不妊治療と称する）の１つに、体外受精（コンベンショナル体外受精、顕微授精）がある。

【0003】

体外受精では、受精卵を数日間（通常、１〜７日程度）培養した胚を凍結保存し、適時解凍して子宮に移植する場合がある。また、患者等の要望により、採卵された卵子（受精前）を凍結保存する場合もある。人の卵（卵子と胚を含む）を凍結保存する場合には、超急速ガラス化保存法により凍結すると、緩慢凍結法と比較して卵へのダメージが低い（ほとんどない）ことが知られている。超急速ガラス化保存法は、凍結専用シートに卵と微少量の凍結保護液をのせ、１つの卵が微少量の凍結保護液に内包された状態で、液体窒素で瞬時に凍結させる方法である。人の卵は、約１５０〜２００μｍと非常に小さいため、卵子や胚を凍結専用シートに載せる作業は、顕微鏡下で行われる。

【0004】

また、顕微授精（ICSI：intracytoplasmic sperm injection）では、顕微鏡を使用して卵子を見ながら細胞操作用マイクロマニピュレータを用いて卵子内へ精子を注入して受精させる（例えば、特許文献１参照）。

【0005】

このように、体外受精に伴う上記の作業は、顕微鏡やマニピュレータを用いて行われる精密な作業であるため、熟練を要する。従来、これらの技術の習得には、患者から採卵した未成熟卵子、未受精卵子等の胚移植に適さない卵子を用いている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】特開２００３−１２５７５０号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

しかしながら、患者から採取された卵子を用いると、患者数が少ない病院では、習練の機会が少なく、技術の向上が困難である。そのため、体外受精に成否に関わる重要な上記技術の習熟度に、患者数の多少によって病院間で差が生じるおそれがある。また、患者から採取された卵子を用いて習練を行うことに、倫理的な問題を感じる者もいる。超急速ガラス化保存法による卵凍結や顕微授精の技術の習熟度は、体外受精の成否に及ぼす影響が大きいため、それらの技術を習熟した人材の育成が望まれている。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明は、上述の課題の少なくとも一部を解決するためになされたものであり、以下の形態として実現することが可能である。

【0009】

（１）本発明の一形態によれば、平均直径が１００〜２００μｍの球状を成し、ゲル状であり、人の卵子または胚を模擬した模擬卵が提供される。

【0010】

この形態の模擬卵は、人の卵子または胚を模擬しているため、この模擬卵を用いて、顕微授精や超急速ガラス化保存法による凍結等、体外受精に関する作業のトレーニングを行うことができる。そのため、患者から採取された卵子を用いる場合と比較して、トレーニングの機会を容易に増やすことができ、顕微授精等の精密な技術の習得に寄与する。

【0011】

（２）上記形態の模擬卵は、球状の本体部と、前記本体部の全表面を覆う膜部と、を備えてもよい。人の卵子は、細胞質と、細胞質を被覆する透明帯と、を有する。この模擬卵では、本体部が細胞質、膜部が透明帯を模擬するため、より人の卵子に近い模擬卵を提供することができる。

【0012】

（３）上記形態の模擬卵は、有色透明または有色半透明でもよい。このようにすると、顕微鏡下で識別容易となる。そのため、例えば、顕微授精等の初学者のトレーニングに好適である。

【0013】

（４）上記形態の模擬卵の前記本体部は、有色透明または有色半透明であり、前記膜部は、無色透明でもよい。このようにすると、膜部と本体部の区別が容易となる。

【0014】

（５）上記形態の模擬卵は、さらに、内部に、平均直径が５〜３０μｍの球状の極体部を備えてもよい。人の卵子は、細胞質と、細胞質を被覆する透明帯と、細胞質と透明帯との間に第１極体と、を有する。顕微授精では、第１極体をインジェクションピペットの穿刺位置の指標に用いることがあるため、この模擬卵を用いると、極体部を指標に顕微授精のトレーニングを行うことができ、より実際の顕微授精に近い状態でトレーニングを行うことができる。

【0015】

（６）上記形態の模擬卵は、平均直径を、１５０〜２００μｍとしてもよい。体外受精において、完全胚盤胞、拡張胚盤胞まで発育した受精卵を凍結保存する場合がある。この模擬卵を用いると、完全胚盤胞、拡張胚盤胞の凍結のトレーニングを行うことができる。

【0016】

（７）上記形態の模擬卵は、アガロースを主成分としてもよい。このようにすると、容易に製造することができる。

【0017】

（８）上記形態の模擬卵の前記本体部はアルギン酸カルシウムを主成分とし、前記膜部はアガロースを主成分としてもよい。このようにすると、２層の模擬卵を容易に製造することができる。

【0018】

（９）上記形態の模擬卵は、管の先端の外径が約２μｍで、先端が平滑にカットされたピペットを穿刺する場合に、前記ピペットが前記模擬卵に侵入する前に、５μm以上弾性変形するようにしてもよい。このようにすると、人の卵子の弾性を模擬することができるため、より実際の顕微授精に近い状態でトレーニングを行うことができる。

【0019】

（１０）上記形態の模擬卵は、培養液以上の密度を有してもよい。このようにすると、培養液中に沈むため、顕微授精のトレーニングを容易に行うことができる。

【0020】

（１１）本発明の他の形態によれば、模擬卵キットが提供される。この模擬卵キットは、上記形態の模擬卵を１個以上、前記模擬卵が不溶性の溶液と共に収容されている。この模擬卵キットによれば、保管、流通が容易になる。

【0021】

上述した本発明の各形態の有する複数の構成要素はすべてが必須のものではなく、上述の課題の一部又は全部を解決するため、あるいは、本明細書に記載された効果の一部又は全部を達成するために、適宜、前記複数の構成要素の一部の構成要素について、その変更、削除、新たな他の構成要素との差し替え、限定内容の一部削除を行うことが可能である。また、上述の課題の一部又は全部を解決するため、あるいは、本明細書に記載された効果の一部又は全部を達成するために、上述した本発明の一形態に含まれる技術的特徴の一部又は全部を上述した本発明の他の形態に含まれる技術的特徴の一部又は全部と組み合わせて、本発明の独立した一形態とすることも可能である。

【0022】

例えば、模擬卵の製造方法や、以下の訓練装置の形態等で実現することができる。
顕微鏡と、細胞操作用のマニピュレータと、上記形態の模擬卵キットから取り出した１個以上の模擬卵を、前記顕微鏡の視野に配置する皿と、を備えた顕微授精の訓練装置。
顕微鏡と、人の卵を超急速ガラス化保存法により凍結するための凍結専用シートと、上記形態の模擬卵キットから取り出した１個以上の模擬卵を前記凍結専用シート上に滴下するピペットと、を備えた冷凍保存訓練装置。

【図面の簡単な説明】

【0023】

【図1】第１実施形態の模擬卵の顕微鏡写真である。

【図2】模擬卵の断面構成を模式的に示す説明図である。

【図3】模擬卵の製造方法を示す工程図である。

【図4】顕微授精のトレーニングの様子を示す説明図である。

【図5】顕微授精のトレーニングの要部を示す説明図である。

【図6】凍結保存のトレーニングの様子を示す説明図である。

【図7】模擬卵が載置された凍結デバイスを拡大して模式的に示す説明図である。

【図8】第２実施形態の模擬卵の顕微鏡写真である。

【図9】模擬卵を模式的に示す説明図である。

【図10】模擬卵の製造方法を示す工程図である。

【図11】第３実施形態の模擬卵を模式的に示す説明図である。

【図12】模擬卵の弾性の評価方法を示す模式図である。

【発明を実施するための形態】

【0024】

Ａ．第１実施形態：
図１は、第１実施形態の模擬卵１０の顕微鏡写真である。図２は、模擬卵１０の断面構成を模式的に示す説明図である。本明細書中において、卵とは、卵子（未受精）と胚（受精卵）を含む概念を表す。模擬卵１０は、人間の卵子を模擬した微粒子であり、平均直径Ｄ１が約１５０〜１６０μｍの球体である。図２に示すように、模擬卵１０は、平均直径Ｄ２が約１４５〜１５０μｍの球状を成す本体部１２と、本体部１２の表面全体を被覆する膜部１４と、を備える。本体部１２は、アルギン酸カルシウムを主成分とするゲル状の球体であり、膜部１４は、厚さが約５〜１０μｍのアガロースを主成分とする薄膜である。本実施形態において、本体部１２および膜部１４は、無色透明である。模擬卵１０は、少なくとも２０℃〜４０℃においてゲル状である。

【0025】

本実施形態において、模擬卵１０の平均直径Ｄ１，本体部１２の平均直径Ｄ２は、電子顕微鏡によるデジタル画像と、デジタル画像におけるサイズを計測するソフトウェアを用いて、コンピュータにて計測されている。なお、文献等では、人の卵子の平均直径は１２０±１０μｍ、胚盤胞の平均直径は２００〜２４０μｍとするものが多いが、発明者が上記の方法で人の卵子〜胚盤胞の各段階における直径を計測（計測個体数n＝３０）したところ、各段階における平均直径は約１５０μｍ〜２００μｍであったため、模擬卵１０の平均直径Ｄ１を約１５０〜１６０μｍとした。ここで、平均直径とは、卵（卵子または胚）１個において、中心を通る複数通りの径を計測した平均である。

【0026】

図３は、模擬卵１０の製造方法を示す工程図である。まず、１．０ｗ／ｖ％（重量体積パーセント）の塩化カルシウム水溶液８２中に、１．０ｗ／ｖ％のアルギン酸ナトリウム水溶液８３を、霧吹きにて噴霧する（工程Ｓ１２）。工程Ｓ１２において、アルギン酸カルシウムのゲルボールが形成される。但し、工程Ｓ１２では、アルギン酸カルシウムのゲルボールの直径は、不均一である。工程Ｓ１２にてゲルボールが形成された溶液を、マイクロメッシュフィルターを用いて濾過する（工程Ｓ１４）。詳しくは、ＪＩＳフルイの呼び寸法（フルイ目の開き）が１５０μｍのマイクロメッシュを用いて濾過した後、濾液をＪＩＳフルイの呼び寸法が１２５μｍのマイクロメッシュで濾過する。これにより、平均直径Ｄ１が１２５μｍ＜Ｄ１＜１５０μｍのゲルボール（本体部１２）を選別することができる。工程Ｓ１４にて選別されたゲルボール（本体部１２）を、１．０ｗ／ｖ％のアガロース水溶液８５中に入れ、（工程Ｓ１６）。オートクレーブによって約９５℃で約３０分加熱する（工程Ｓ１８）。工程Ｓ１８では、アガロースが溶け、本体部１２は溶けない。工程Ｓ１８の処理後のアガロース水溶液８８を、霧吹きにてオイル８７中に噴霧する（工程Ｓ２０）。工程Ｓ２０では、本体部１２がアガロースで被覆され、模擬卵１０が形成される。なお、工程Ｓ２０では、アガロース水溶液８８中に含まれる全ての本体部１２の内、１以上の本体部１２がアガロースで被覆される。工程Ｓ２０の後、模擬卵１０を含むオイル８７を、マイクロメッシュ（ＪＩＳフルイの呼び寸法：１５０μｍ）を用いて濾過する（工程Ｓ２２）ことにより、模擬卵１０を得ることができる。

【0027】

図４は、模擬卵１０を用いた顕微授精のトレーニングの様子を示す説明図である。図５は、顕微授精のトレーニングの要部を示す説明図である。図５の模擬卵１０において、膜部１４を明確に図示するために、膜厚を実際の比率より厚く表示している。顕微授精では、作業者Ｅ（例えば胚培養士）は、顕微授精装置２０を用いて、卵子に、インジェクションピペットを用いて、精子を注入する。顕微授精のトレーニングでは、実際に顕微授精を行う際に使用する顕微授精装置２０を用いて、模擬卵１０にインジェクションピペットを穿刺する。

【0028】

図４，５に示すように、顕微授精装置２０は、倒立顕微鏡２５と、１対の細胞操作用のマニピュレータ３１，３２と、１対のインジェクター４３（作業者Ｅの右手側のインジェクターは不図示）と、インジェクションピペット３４と、ホールド用マイクロピペット３６と、を備える。倒立顕微鏡２５は、接眼レンズ２１と、ステージ２２と、対物レンズと、を備える。ステージ２２の上方の左右両側には、左右一対のマニピュレータ３１，３２が配置されている。マニピュレータ３１には、ホルダー３３（図５）を介してインジェクションピペット３４が支持されている。マニピュレータ３２には、ホルダー３５を介してホールド用マイクロピペット３６が支持されている。マニピュレータ３１，３２（図４）は、作業者Ｅの操作に応じて、それぞれ、インジェクションピペット３４，ホールド用マイクロピペット３６を、前後、左右および上下に、精密に動かすことができる。ホルダー３３の他端には、可撓性のチューブ４１を介してインジェクター（不図示）が接続されており、ホルダー３５の他端には、可撓性のチューブ４２を介してインジェクター４３が接続されている。１対のインジェクターは、作業者Ｅの操作に応じて、チューブ４１，４２およびホルダー３３，３５内の圧力を調整する。

【0029】

顕微授精のトレーニングを行う際、作業者Ｅは、倒立顕微鏡２５のステージ２２上にシャーレ５０を載置する（図４）。このとき、シャーレ５０は、マニピュレータ３１とマニピュレータ３２との間に配置される。図５に示すように、シャーレ５０内に形成された培養液のドロップ５２はミネラルオイル５４に被覆され、培養液のドロップ５２内に模擬卵１０が配置されている。模擬卵１０の密度は、培養液の密度より大きいため、模擬卵１０は培養液のドロップ５２内で沈んでいる。作業者Ｅは、倒立顕微鏡２５（図４）の接眼レンズ２１を覗き、対物レンズを介してシャーレ５０内を観察しながら、マニピュレータ３１，３２を操作すると共に、インジェクター４３および図示せざるインジェクターを操作して、ホールド用マイクロピペット３６（図５）の先端に模擬卵１０を吸い付けて固定し、インジェクションピペット３４の先端を模擬卵１０に穿刺する。模擬卵１０にインジェクションピペット３４を穿刺するとき、インジェクションピペット３４が模擬卵１０に侵入する前に、約１０μｍ〜１５μｍ弾性変形する。本実施形態では、培養液として生理食塩水（塩化ナトリウムを０．９ｗ／ｖ％含有する食塩水）を用いているが、これに限定されない。顕微授精のトレーニングを行う際は、実際の顕微授精において用いられるのと同一の培養液を用いてもよいし、トレーニング用に安価な溶液を用いてもよい。模擬卵１０を倒立顕微鏡２５の視野に配置する皿として、シャーレ５０に代えて、パレットを用いてもよい。このようにすると、連続した訓練を容易に行うことができる。

【0030】

図６は、模擬卵１０を用いた卵の凍結保存のトレーニングの様子を示す説明図である。図６では、超急速ガラス化保存法による凍結保存のトレーニングを実施する作業者Ｅの手元を図示している。図７は、模擬卵１０が載置された凍結デバイス６１を拡大して模式的に示す説明図である。体外受精では、受精卵を数日間（通常、１〜７日程度）培養した胚を凍結保存し、適時解凍して子宮に移植する場合がある。また、採卵された卵子（受精前）を凍結保存する場合もある。卵（卵子、胚）を超急速ガラス化保存法により凍結保存する場合には、凍結専用シート（凍結デバイス６１）に卵と微少量の凍結保護液をのせ、１つの卵が微少量の凍結保護液に内包された状態で、液体窒素により瞬時に凍結させる。凍結デバイス６１に卵と微少量の凍結保護液をのせる作業は、顕微鏡下で行われる精密な作業であり、熟練を要する。本明細書では、凍結デバイス６１に卵と微少量の凍結保護液をのせる作業のトレーニングを、「凍結保存のトレーニング」と称する。

【0031】

模擬卵１０を用いた凍結保存のトレーニングでは、作業者Ｅは、顕微鏡（不図示）でピペット６２の先端と凍結デバイス６１を観察しつつ、凍結デバイス６１にピペット６２から微少量の凍結保護液を滴下する（図６）。ピペット６２には、凍結保護液７０と複数の模擬卵１０が入っているため、凍結デバイス６１上に滴下された凍結保護液７０のドロップに模擬卵１０が含まれる。凍結デバイス６１上では、１つの模擬卵１０が微少量の凍結保護液７０に内包された状態になる（図７）。図７では、凍結保護液７０と模擬卵１０とを明確に示すために、それぞれに異なるハッチングを付して図示している。なお、図７では、全ての凍結保護液７０のドロップ中に模擬卵１０が内包されているが、模擬卵１０が含まれないことや、１つのドロップ中に２つの模擬卵１０が内包されることもある。

【0032】

以上説明したように、本実施形態の模擬卵１０は、人の卵（卵子、胚）と同等の大きさであるため、模擬卵１０を用いて超急速ガラス化保存法による卵凍結および顕微授精のトレーニングを行うことができる。そのため、患者数が少ない病院等でもこれらの技術の習得の機会を容易に増やすことができる。また、患者を有さない病院外の施設等においてこれらのトレーニングを実施することもできる。これらのトレーニングに患者から採取した卵を使用することに対する倫理的な不安感も解消することができる。その結果、超急速ガラス化保存法による卵凍結および顕微授精等の技術を習熟した人材を増加させ、体外受精の成功率の向上に寄与することができる。

【0033】

Ｂ．第２実施形態：
図８は、第２実施形態の模擬卵１０Ａの顕微鏡写真である。図９は、模擬卵１０Ａを模式的に示す説明図である。第２実施形態の模擬卵１０Ａが第１実施形態の模擬卵１０と異なる点は、膜部１４を備えない点、すなわち、単層である点である。模擬卵１０Ａの平均直径Ｄ_Ａ１は、約１５０〜１６０μｍである。

【0034】

図１０は、模擬卵１０Ａの製造方法を示す工程図である。まず、所定の濃度のアガロース水溶液８５を調製する（工程Ｓ３２）。例えば、５０ｍＬのコニカルチューブに超純水４０ｍＬとアガロースを適量入れる。ここで、所定の濃度のアガロース水溶液を調製する際の必要アガロース量(超純水４０ｍＬに対して)は、例えば、０．３ｗ／ｖ％のとき０．１２ｇ、０．５ｗ／ｖ％の時０．２ｇ、１．０ｗ／ｖ％の時０．４ｇ、２．０ｗ／ｖ％の時０．８ｇ、３．０ｗ／ｖ％の時１．２ｇである。工程Ｓ３２で調製されたアガロース水溶液８５を加熱して（例えば、マイクロ波加熱器で加熱）、アガロースを溶解する（工程Ｓ３４）。工程Ｓ３４にてアガロースが溶解されたアガロース水溶液８６を、あらかじめ温めておいた霧吹きに入れて、冷やしたミネラルオイル８７中に、アガロース水溶液８６を噴霧する（工程Ｓ３６）。ここで、ミネラルオイルに代えて、流動パラフィンを用いてもよい。工程Ｓ３６により、アガロースのゲルボールが形成される。工程Ｓ３６では、アガロースのゲルボールの直径は、不均一である。工程Ｓ３６にて形成されたゲルボールを含むミネラルオイルを、マイクロメッシュフィルターを用いて濾過する（工程Ｓ３８）。これにより、模擬卵１０Ａを得ることができる。なお、工程Ｓ３８において、ガラスピペットにより、所望のサイズのアガロースゲルボールを選別してもよい。

【0035】

本実施形態の模擬卵１０Ａを用いて、凍結保存のトレーニングおよび顕微授精のトレーニングを実施することもできる。模擬卵１０Ａは、第１実施形態の模擬卵１０より容易に製造することができる。

【0036】

Ｃ．第３実施形態：
図１１は、第３実施形態の模擬卵１０Ｂの断面構成を模式的に示す説明図である。第３実施形態の模擬卵１０Ｂが第１実施形態の模擬卵１０と異なる点は、本体部１２より小さい球状の極体部１６を備える点である。極体部１６は、本体部１２と膜部１４との境界付近に配置されている。本実施形態において、極体部１６の平均直径Ｄ_Ｂ３は、約５〜１０μｍである。極体部１６の平均直径は、５〜３０μｍ程度が好ましい。

【0037】

模擬卵１０Ｂは、第１実施形態にて説明した製造方法にて製造された模擬卵１０に、予め作製された極体部１６を、穿刺して注入することにより製造することができる。なお、極体部１６は、第１実施形態の製造方法の工程Ｓ１２，Ｓ１４と同様の工程によって製造することができる。

【0038】

人の卵子は、細胞質と、細胞質を被覆する透明帯と、細胞質と透明帯との間に配置される第１極体と、を有する。顕微授精では、卵子の第１極体から遠い位置にインジェクションピペットを刺して細胞質内に精子を注入する。本実施形態の模擬卵１０Ｂは、人の卵子の細胞質を模擬した本体部１２と、透明帯を模擬した膜部１４と、第１極体を模擬した極体部１６と、を備えるため、顕微授精のトレーニングにおいて、より実際の顕微授精に近い状態でトレーニングを行うことができる。

【0039】

Ｄ．模擬卵の弾性：
第２実施形態の模擬卵１０Ａと同様の単層の模擬卵を用いて、模擬卵の弾性を評価した。サンプルとして、模擬卵を作製する際のアガロース水溶液のアガロース濃度（重量体積パーセント）を変更して、下記の３種類の模擬卵を作製した。
模擬卵１０Ａ１：アガロース濃度 ０．５ｗ／ｖ％
模擬卵１０Ａ２：アガロース濃度 １．０ｗ／ｖ％
模擬卵１０Ａ３：アガロース濃度 ２．０ｗ／ｖ％

【0040】

評価方法を以下に示す。以下の説明において、模擬卵１０Ａ１〜１０Ａ３を区別しない場合には、符号の末尾の数字を省略して、模擬卵１０Ａと称する。
図１２は、模擬卵の弾性の評価方法を示す模式図である。図１２は、図５に示すシャーレ５０を、図５の紙面下側から見た図に相当する。

【0041】

まず、第１実施形態における顕微授精のトレーニングの場合と同様に、シャーレ５０内に形成されたドロップ５２内に配置された模擬卵１０Ａを用意する。顕微授精装置２０を操作して、ホールド用マイクロピペット３６にて模擬卵１０Ａを固定し、計測用のインジェクションピペット３４Ａを模擬卵１０Ａに押し当てる。ここで、計測用のインジェクションピペットとして、直径（管の外径）２μｍで先を平滑にカットしたインジェクション用のガラスピペットを用いた。「平滑」とは、ガラスピペットの先端が尖っていない（斜めにカットされていない）ことをいい、円筒状の硝子ピペットの中心軸と先端面とが略垂直を成す。インジェクションピペット３４Ａが押し当てられることによって、模擬卵１０Ａは弾性変形した後、破れる（インジェクションピペット３４Ａが刺さる）。模擬卵１０Ａが破れる直前の変形量（距離（μｍ））を計測した。変形量として、インジェクションピペット３４Ａの先端と、模擬卵１０Ａの外表面との距離Ｌ（図１２）を用い、顕微鏡で撮像した画像と、画像におけるサイズを計測するソフトウェアを用いて、コンピュータにて計測した。

【0042】

表１は、模擬卵の弾性を評価した結果を示す表である。模擬卵１０Ａ１〜１０Ａ３それぞれ、１０個ずつを用いて上記評価（変形量の計測）を行った。模擬卵１０Ａ１〜１０Ａ３個々の平均直径は、約１５０〜１６０μｍである。

【0043】

【表1】

【0044】

上記評価試験の結果、模擬卵１０Ａ１〜１０Ａ３は、弾性を有する。人の卵子は弾性を有するため、これらの模擬卵を用いると、顕微授精のトレーニングの精度を高めることができる。また、上記評価試験の結果、模擬卵を作製する際のアガロース水溶液のアガロース濃度（ｗ／ｖ％）を調整することにより模擬卵の弾性を調整することができるといえる。そのため、アガロース水溶液のアガロース濃度を調整して、人の卵子の弾性に近い弾性を有する模擬卵を作製することにより、より顕微授精のトレーニングの精度を高めることができる。模擬卵の弾性としては、上記評価方法による変形量が５μｍ以上が好ましく、１５μｍ以上がさらに好ましい。変形量を１５μｍ以上とすると、より人の卵子の弾性に近づけることができる。

【0045】

Ｅ．変形例：
なお、この発明は上記の実施形態に限られるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において種々の態様において実施することが可能であり、例えば次のような変形も可能である。

【0046】

（１）上記実施形態において、無色透明の模擬卵１０，１０Ａ，１０Ｂを例示したが、有色透明、有色半透明にしてもよい。着色することにより、視認容易となり、例えば、初学者等のトレーニングに適した模擬卵とすることができる。また、本体部１２を有色透明、有色半透明とし、膜部１４を無色透明にしてもよい。

【0047】

（２）上記実施形態において、平均直径が約１５０〜１６０μｍの模擬卵１０，１０Ａ，１０Ｂを例示したが、平均直径は、上記実施形態に限定されない。平均直径を１５０〜２００μｍにすると、人の卵子、胚の大きさに相当するため、好ましい。平均直径を１５０〜２００μｍにすると、人の完全胚盤胞、拡張胚盤胞の大きさに相当するため、例えば、完全胚盤胞、拡張胚盤胞の凍結のトレーニングに適している。また、模擬卵の平均直径を、１００〜１５０μｍにしてもよい。上記実施形態に記載された方法により計測された人の卵子の実寸より小さいサイズの模擬卵を用いてトレーニングすることにより、より体外受精に関する技術の精度を高めることができる。

【0048】

（３）模擬卵を形成する材料は上記実施形態に限定されず、使用状態（例えば、２０℃〜４０℃）においてゲル状の材料であればよい。例えば、ゼラチン、シリコン等を用いることができる。トレーニングにおいて培養液、凍結保護液等として用いられる溶液より密度が大きいものが好ましい。トレーニングに際して、模擬卵より密度の小さい溶液を培養液等として選択してもよい。

【0049】

（４）上記実施形態において、極体部１６が本体部１２と膜部１４との境界付近に配置されている例を示したが、膜部１４内に配置されてもよいし、本体部１２と膜部１４との境界より中心よりに配置されてもよい。

【0050】

（５）模擬卵１０の製造方法は、上記実施形態に限定されず、例えば、公知の層流原理を利用して製造してもよい。

【0051】

（６）模擬卵１０は、模擬卵１０が不溶性の溶液と共に、容器に収容されてもよい。模擬卵１０が不溶性の溶液として、生理食塩水、ミネラルオイル、生理食塩水以外の培養液等を用いてもよい。模擬卵１０が不溶性の溶液であればよい。容器としては、例えば、使い捨てコンタクトレンズの容器のような密閉性の高い容器を用いることができる。このようにすると、保管、流通が容易になる。

【0052】

（７）上記第１実施形態において、アルギン酸カルシウムを主成分とする模擬卵１０を例示したが、アガロースを主成分としてもよい。本体部１２の主成分をアガロースとし、膜部１４の主成分を、アルギン酸カルシウムとしてもよいし、ゼラチン、シリコン等他のゲル状材料を用いてもよい。

【0053】

本発明は、上述の実施形態や実施例、変形例に限られるものではなく、その趣旨を逸脱しない範囲において種々の構成で実現することができる。例えば、発明の概要の欄に記載した各形態中の技術的特徴に対応する実施形態、実施例、変形例中の技術的特徴は、上述の課題の一部又は全部を解決するために、あるいは、上述の効果の一部又は全部を達成するために、適宜、差し替えや、組み合わせを行うことが可能である。また、その技術的特徴が本明細書中に必須なものとして説明されていなければ、適宜、削除することが可能である。

【符号の説明】

【0054】

１０，１０Ａ，１０Ｂ…模擬卵
１２，１２Ａ…本体部
１４…膜部
１６…極体部
２０…顕微授精装置
２１…接眼レンズ
２２…ステージ
２５…倒立顕微鏡
３１，３２…マニピュレータ
３３，３５…ホルダー
３４…インジェクションピペット
３６…ホールド用マイクロピペット
４１，４２…チューブ
４３…インジェクター
５０…シャーレ
５２…ドロップ
５４…ミネラルオイル
６１…凍結デバイス
６２…ピペット
７０…凍結保護液
８２…塩化カルシウム水溶液
８３…アルギン酸ナトリウム水溶液
８７…オイル
Ｅ…作業者

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】