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特開2017-195826セサミノールの製造方法

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】特開2017-195826(P2017-195826A)

(43)【公開日】2017年11月2日

(54)【発明の名称】セサミノールの製造方法

(51)【国際特許分類】

C12P 17/18 20060101AFI20171006BHJP

C12N 1/20 20060101ALI20171006BHJP

C12R 1/245 20060101ALN20171006BHJP

【ＦＩ】

C12P17/18 D

C12N1/20 A

C12P17/18 D

C12R1:245

C12N1/20 A

C12R1:245

【審査請求】未請求

【請求項の数】13

【出願形態】ＯＬ

【全頁数】33

(21)【出願番号】特願2016-89912(P2016-89912)

(22)【出願日】2016年4月27日

(71)【出願人】

【識別番号】000214272

【氏名又は名称】長瀬産業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100091096

【弁理士】

【氏名又は名称】平木祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100118773

【弁理士】

【氏名又は名称】藤田節

(74)【代理人】

【識別番号】100130443

【弁理士】

【氏名又は名称】遠藤真治

(72)【発明者】

【氏名】下条洋輔

(72)【発明者】

【氏名】位上健太郎

(72)【発明者】

【氏名】宮崎寿次

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

【Ｆターム（参考）】

4B064AE59

4B064CA02

4B064CB07

4B064CD08

4B064CD24

4B064CD30

4B064CE17

4B064DA01

4B064DA10

4B065AA30X

4B065AC14

4B065BA22

4B065BB22

4B065BD11

4B065CA18

4B065CA42

4B065CA44

(57)【要約】

【課題】本発明は、乳酸菌を用いてセサミノール配糖体を含有する原料からセサミノールを生成する新たな手段を提供することを課題とする。
【解決手段】本発明は、セサミノール配糖体を含有する原料を、ラクトバチルスに属する１以上の乳酸菌と共存させることにより、前記セサミノール配糖体からセサミノールを生成するセサミノール生成工程を含む、セサミノールの製造方法に関する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

セサミノール配糖体を含有する原料を、ラクトバチルス属に属する１以上の乳酸菌と共存させることにより、前記セサミノール配糖体からセサミノールを生成するセサミノール生成工程を含む、セサミノールの製造方法。

【請求項2】

前記乳酸菌が、ＤＮＢＬ１８２６株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２５）、ＤＮＢＬ１８３２株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２９）、ＤＮＢＬ１８２９株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２６）、ＤＮＢＬ１８３０株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７）、ＤＮＢＬ１８３１株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８）、及び、ラクトバチルス・カゼイ・ハセガワ菌株（受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３）から選択される１以上である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記乳酸菌が、ラクトバチルス属に属する２以上の乳酸菌の組み合わせである、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記乳酸菌が下記の（１）及び（２）：
（１）ラクトバチルス・パラカゼイに属し、セサミノールトリグルコシドをセサミノールジグルコシドに変換する能力を有する、１以上の乳酸菌、
（２）ラクトバチルス・パラカゼイに属し、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力を有する１以上の他の乳酸菌、ラクトバチルス・ペントーサスに属し、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力を有する１以上の乳酸菌、及び、ラクトバチルス・プランタラムに属し、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力を有する１以上の乳酸菌からなる群から選択される１以上の乳酸菌
の組み合わせである、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記（１）の乳酸菌が、ＤＮＢＬ１８２６株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２５）及びＤＮＢＬ１８３２株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２９）から選択される１以上であり、
前記（２）の乳酸菌が、ＤＮＢＬ１８２９株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２６）、ＤＮＢＬ１８３０株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７）、ＤＮＢＬ１８３１株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８）、及び、ラクトバチルス・カゼイ・ハセガワ菌株（受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３）から選択される１以上である、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

ＤＮＢＬ１８２６株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２５）。

【請求項7】

ＤＮＢＬ１８３２株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２９）。

【請求項8】

ＤＮＢＬ１８２９株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２６）。

【請求項9】

ＤＮＢＬ１８３０株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７）。

【請求項10】

ＤＮＢＬ１８３１株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８）。

【請求項11】

セサミノール配糖体を含有する原料の、ラクトバチルス属に属する１以上の乳酸菌による発酵物。

【請求項12】

前記乳酸菌が、ＤＮＢＬ１８２６株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２５）、ＤＮＢＬ１８３２株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２９）、ＤＮＢＬ１８２９株（受託番号
：ＮＩＴＥＰ−０２２２６）、ＤＮＢＬ１８３０株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７）、ＤＮＢＬ１８３１株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８）、及び、ラクトバチルス・カゼイ・ハセガワ菌株（受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３）から選択される１以上である、請求項１１に記載の発酵物。

【請求項13】

セサミン、及び、
乾燥重量基準で１００ｇあたり１００ｍｇ以上のセサミノール
を含み、
セサミノール：セサミンの重量比が１：０．１〜１：２０の範囲内である、セサミノール含有組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、セサミノールの製造方法に関する。本発明はまた、セサミノール配糖体からセサミノールを生成する能力を有する新規乳酸菌に関する。本発明はまた、セサミノール配糖体含有原料の乳酸菌による発酵物に関する。本発明はまた、セサミノールを含有する新規組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

ゴマ（ＳｅｓａｍｕｍｉｎｄｉｃｕｍＬ．）の種子（以下、単に「ゴマ」という場合がある）は、リグナン類を含有している。ゴマリグナン類の約８０％はセサミン又はセサモリンであり、残りの約２０％がリグナンフェノール類である。ゴマに含まれるリグナンフェノール類の１つにセサミノールがある。ゴマにおいてリグナンフェノール類は大部分が配糖体として存在しており、アグリコン（遊離体）として存在しているものは僅かである（非特許文献１）。

【0003】

セサミノールは、セサミンとは異なり、それ自体が抗酸化活性を有することが知られており、健康食品、医薬等の分野での今後の応用が期待されている。

【0004】

上記の通りゴマ等の天然物中においてセサミノールは配糖体として存在する。セサミノール配糖体は、セサミノールが有するフェノール水酸基に糖鎖が結合した構造を有する。フェノール水酸基はセサミノールの抗酸化活性の活性基と考えられ、セサミノール配糖体の形態では活性が発揮されないと考えられる。なお、セサミノール配糖体は親水性を有するため、親油性のセサミンとは異なり、ゴマ油の搾油時に副産物として生じる圧搾粕に大量に含まれる。

【0005】

これまでに、セサミノール配糖体からセサミノールを遊離させて生成する技術として以下の技術が開示されている。

【0006】

特許文献１では、パニエバチルス属の微生物が産生する酵素が、セサミノール配糖体の糖鎖を切断する活性を有することが開示されている。

【0007】

特許文献２では、全粒生胡麻の粉砕物をリゾプス・オリゴスポラス粗酵素で分解し、イソロイシンが生成しないうちに、乳酸発酵させて、抗酸化力のある発酵胡麻を製造することが開示されている。乳酸菌としては具体的にはラクトバチルス・ブルガリクスとストレプトコッカス・サーモフィラスが挙げられている。特許文献２によればこの発酵胡麻がセサミノールを含むことが記載されているが、どの段階でどういった機構によりセサミノールが生じるのかは開示されていない。

【0008】

特許文献３では、セサミノールトリグルコシド等のリグナン又はそれを含む基質材料を、バチルス属細菌及びエンテロコッカス属細菌の共存下でインキュベーションすることを含むセサミノールの製造法が開示されている。

【0009】

特許文献４では、ゴマリグナン配糖体及びアグリコンゴマリグナンを含むゴマ発酵物を製造するために、ゴマ等の原料をアスペルギルス属菌株又はバチルス属菌株を用いて発酵させることが開示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0010】

【特許文献1】特許第４８３９２３１号公報

【特許文献2】特許第３２６１０７５号公報

【特許文献3】特開２００６−６１１１５公報

【特許文献4】特開２００７−３１９１５７公報

【非特許文献】

【0011】

【非特許文献1】石山ら，日本食品科学工学会誌，第５３巻，第１号，２００６年１月

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0012】

上記の通り、微生物によりゴマを発酵させてセサミノールを生成し抗酸化活性を高める技術がこれまでに開発されている。

【0013】

しかし特許文献１〜４で用いる微生物又は酵素は一般に食用されているものではないため、生産されたセサミノールの安全性が懸念される。

【0014】

そこで本発明は、乳酸菌を用いてセサミノール配糖体を含有する原料からセサミノールを生成する新たな手段を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0015】

本発明者らは、驚くべきことに、乳酸菌のなかでもラクトバチルス属に属する乳酸菌が、セサミノール配糖体を加水分解してセサミノールを生成する能力を有していることを見出した。そこで本発明者らは以下の発明を提供する。
（１）セサミノール配糖体を含有する原料を、ラクトバチルス属に属する１以上の乳酸菌と共存させることにより、前記セサミノール配糖体からセサミノールを生成するセサミノール生成工程を含む、セサミノールの製造方法。
（２）前記乳酸菌が、ＤＮＢＬ１８２６株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２５）、ＤＮＢＬ１８３２株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２９）、ＤＮＢＬ１８２９株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２６）、ＤＮＢＬ１８３０株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７）、ＤＮＢＬ１８３１株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８）、及び、ラクトバチルス・カゼイ・ハセガワ菌株（受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３）から選択される１以上である、（１）に記載の方法。
（３）前記乳酸菌が、ラクトバチルス属に属する２以上の乳酸菌の組み合わせである、（１）に記載の方法。
（４）前記乳酸菌が下記の（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）ラクトバチルス・パラカゼイに属し、セサミノールトリグルコシドをセサミノールジグルコシドに変換する能力を有する、１以上の乳酸菌、
（Ｂ）ラクトバチルス・パラカゼイに属し、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力を有する１以上の他の乳酸菌、ラクトバチルス・ペントーサスに属し、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力を有する１以上の乳酸菌、及び、ラクトバチルス・プランタラムに属し、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力を有する１以上の乳酸菌からなる群から選択される１以上の乳酸菌
の組み合わせである、（３）に記載の方法。
（５）前記（Ａ）の乳酸菌が、ＤＮＢＬ１８２６株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２５）及びＤＮＢＬ１８３２株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２９）から選択される１以上であり、
前記（Ｂ）の乳酸菌が、ＤＮＢＬ１８２９株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２６）、ＤＮＢＬ１８３０株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７）、ＤＮＢＬ１８３１株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８）、及び、ラクトバチルス・カゼイ・ハセガワ菌株（受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３）から選択される１以上である、（４）に記載の方法。
（６）ＤＮＢＬ１８２６株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２５）。
（７）ＤＮＢＬ１８３２株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２９）。
（８）ＤＮＢＬ１８２９株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２６）。
（９）ＤＮＢＬ１８３０株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７）。
（１０）ＤＮＢＬ１８３１株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８）。
（１１）セサミノール配糖体を含有する原料の、ラクトバチルス属に属する１以上の乳酸菌による発酵物。
（１２）前記乳酸菌が、ＤＮＢＬ１８２６株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２５）、ＤＮＢＬ１８３２株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２９）、ＤＮＢＬ１８２９株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２６）、ＤＮＢＬ１８３０株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７）、ＤＮＢＬ１８３１株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８）、及び、ラクトバチルス・カゼイ・ハセガワ菌株（受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３）から選択される１以上である、（１１）に記載の発酵物。
（１３）セサミン、及び、
乾燥重量基準で１００ｇあたり１００ｍｇ以上のセサミノール
を含み、
セサミノール：セサミンの重量比が１：０．１〜１：２０の範囲内である、セサミノール含有組成物。

【発明の効果】

【0016】

本発明のセサミノールの製造方法によれば、ラクトバチルス属乳酸菌を用いてセサミノールを製造することができる。
本発明の乳酸菌は、セサミノールの製造に利用可能である。
本発明のセサミノール含有組成物はセサミノールを豊富に含み、特有の、セサミノール：セサミンの重量比を有する。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】図１は、実験１においてすりゴマ熱水抽出物を基質として乳酸菌発酵させたときの、発酵途中の生成物の薄層クロマトグラフィーでの確認結果を示す。図１ＡはＤＮＢＬ１８２６株を単独又は他の乳酸菌と併用して発酵を行った場合の薄層クロマトグラフィーを示す。図１ＢはＤＮＢＬ１８３２株を単独又は他の乳酸菌と併用して発酵を行った場合の薄層クロマトグラフィーを示す。

【図2】図２は、実験１においてゴマ圧搾粕熱水抽出物を基質として乳酸菌発酵させたときの、発酵途中の生成物の薄層クロマトグラフィーでの確認結果を示す。図２ＡはＤＮＢＬ１８２６株を単独又は他の乳酸菌と併用して発酵を行った場合の薄層クロマトグラフィーを示す。図２ＢはＤＮＢＬ１８３２株を単独又は他の乳酸菌と併用して発酵を行った場合の薄層クロマトグラフィーを示す。

【図3】図３は、実験１においてすりゴマ熱水抽出物を基質とし、ＤＮＢＬ１８２６株とＡ２２１株との組み合わせ、又は、ＤＮＢＬ１８３２株とＡ２２１株との組み合わせを用いて乳酸菌発酵させたときの、発酵途中の生成物の薄層クロマトグラフィーでの確認結果を示す。

【図4】図４は、実験１においてＤＮＢＬ１８２６株とＡ２２１株との組み合わせ、又は、ＤＮＢＬ１８３２株とＡ２２１株との組み合わせを用い、基質として市販のすりゴマの熱水抽出物を用いた試験における発酵第５日の生成物のＨＰＬＣチャートを示す。図４ａはＳＴＧの標準品、図４ｂはβ１，２ＳＤＧの標準品、図４ｃはβ１，６ＳＤＧの標準品、図４ｄはＳＭＮの標準品の、同条件によるＨＰＬＣでの保持時間を示すチャートである。図４ｅは乳酸菌未処理の試験区のＨＰＬＣチャートを示し、図４ｆはＤＮＢＬ１８２６株とＡ２２１株とを併用した試験区のＨＰＣＬチャートを示し、図４ｇはＤＮＢＬ１８３２株とＡ２２１株とを併用した試験区のＨＰＣＬチャートを示す。

【図5】図５は、実験１において乳酸菌としてＤＮＢＬ１８３２株のみ、又は、ＤＮＢＬ１８３２株とＡ２２１株との組み合わせを用い、基質として市販のゴマ圧搾粕の熱水抽出物を用いた試験における、発酵処理第４日の薄層クロマトグラフィーの結果を示す。

【図6】図６は実験２における乳酸菌による発酵後のすりゴマ懸濁液のＨＰＬＣによる分析結果を示す。図６Ａは乳酸菌未処理の試験区のＨＰＬＣチャートを示す。図６ＢはＤＮＢＬ１８２６株のみを用いた試験区のＨＰＬＣチャートを示す。図６ＣはＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせを用いた試験区のＨＰＬＣチャートを示す。

【図7】図７は実験３における発酵後の凍結乾燥組成物（基質はすりゴマ懸濁液）のＨＰＬＣによる分析結果を示す。図７Ａは乳酸菌未処理の試験区のＨＰＬＣチャートを示す。図７ＢはＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせを用いた試験区のＨＰＬＣチャートを示す。

【図8】図８は実験４における発酵後の凍結乾燥組成物（基質はゴマ圧搾粕懸濁液）のＨＰＬＣによる分析結果を示す。図８Ａは乳酸菌未処理の試験区のＨＰＬＣチャートを示す。図８ＢはＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせを用いた試験区のＨＰＬＣチャートを示す。

【図9】図９は、実験５においてすりゴマ熱水抽出物を基質として乳酸菌発酵させたときの、発酵第２日での生成物の薄層クロマトグラフィーでの確認結果を示す。

【図10】図１０は、実験５においてすりゴマ熱水抽出物を基質として乳酸菌発酵させたときの、発酵第７日での生成物の薄層クロマトグラフィーでの確認結果を示す。

【図11】図１１は、実験６においてゴマ圧搾粕熱水抽出物を基質として乳酸菌発酵させたときの、発酵第２日での生成物の薄層クロマトグラフィーでの確認結果を示す。

【図12】図１２は、実験６においてゴマ圧搾粕熱水抽出物を基質として乳酸菌発酵させたときの、発酵第７日での生成物の薄層クロマトグラフィーでの確認結果を示す。

【図13】図１３は、実験７においてすりゴマ熱水抽出物を基質として乳酸菌発酵させたときの、発酵第７日での生成物の薄層クロマトグラフィーでの確認結果を示す。

【図14】図１４は、実験８においてゴマ圧搾粕熱水抽出物を基質として乳酸菌発酵させたときの、発酵第７日での生成物の薄層クロマトグラフィーでの確認結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0018】

＜セサミノール及びセサミノール配糖体＞
本発明において単に「セサミノール」という場合、特に明示の無い場合は、糖鎖を有していないアグリコンの形態を指す。

【0019】

セサミノールは平面構造が同じであるが立体配置の異なる４種の化合物、すなわち、（＋）−セサミノール、２−ｅｐｉ−セサミノール、６−ｅｐｉ−セサミノール、及び、ジアセサミノールが知られている。本発明において「セサミノール」という用語は、これらのセサミノールのうち１種以上を指し、複数種の混合物であってもよい。典型的には、セサミノールは少なくとも（＋）−セサミノールを含む。セサミノールの量は、セサミノールとして複数の化合物を含む場合は、それらの合計量を指す。

【0020】

セサミノール配糖体としては、セサミノールトリグルコシド、セサミノールジグルコシド及びセサミノールモノグルコシドからなる群から選択される１種以上が知られており、複数種の混合物であってもよい。典型的には、セサミノール配糖体は少なくともセサミノールトリグルコシドを含む。なおゴマにおいて最も多く含まれるセサミノール配糖体はセサミノールトリグルコシドである。

【0021】

従来知られているセサミノールトリグルコシド（ＳＴＧ）の構造を次式に示す。

【化1】

【0022】

糖鎖は３つのグルコースが結合したものであり、中央のグルコースに、β１，６−グリコシド結合とβ１，２−結合とを介してそれぞれ１つのグルコースが結合されており、中央のグルコースが、（＋）−セサミノールのフェノール水酸基にＯ−グリコシド結合により結合している。

【0023】

＜原料＞
本発明において用いる「セサミノール配糖体を含有する原料」は、セサミノール配糖体を含んでいればよく、セサミノール配糖体のみからなってもよいし、他の成分とともにセサミノール配糖体を含有する組成物であってもよい。セサミノール配糖体を含有する組成物としては、より好ましくは、ゴマに由来する原料である。ゴマに由来する原料としては、ゴマの種子、ゴマの種子の粉砕物、及び、ゴマの種子の脱脂粕、並びに溶媒によるこれらからの抽出物から選択される１種以上が例示できる。ゴマの種子の粉砕物としては、「すりゴマ」として食用に用いられるものも使用することができる。ゴマの種子の脱脂粕は、ゴマ油製造の副産物として副生されるものを使用することができる。この副産物としてはゴマ圧搾粕が例示できる。ゴマの品種は特に限定されない。白ゴマを生産する品種、黒ゴマを生産する品種、他の品種のいずれのゴマでもよい。ゴマに由来する原料は更に他の成分と配合されてもよい。前記溶媒はセサミノール配糖体を溶出可能な溶媒であればよく、水又は水を含む親水性溶媒が挙げられ、特に水が好ましい。

【0024】

＜セサミノールの製造方法＞
本発明のセサミノールの製造方法は、セサミノール配糖体を含有する原料を、ラクトバチルス属に属する１以上の乳酸菌と共存させることにより、前記セサミノール配糖体からセサミノールを生成するセサミノール生成工程を含む。
本発明では、ラクトバチルス属に属する乳酸菌として、セサミノール配糖体からセサミノールを生成する能力を有する、ラクトバチルス属に属する乳酸菌を用いる。

【0025】

ラクトバチルス属に属する乳酸菌は食経験のある乳酸菌であるため、製造されるセサミノールの安全性が高い。ラクトバチルス属に属する乳酸菌のなかでも特にラクトバチルス・パラカゼイに属する乳酸菌、ラクトバチルス・ペントーサスに属する乳酸菌、及び、ラクトバチルス・プランタラムに属する乳酸菌からなる群から選択される１以上が好ましい。

【0026】

セサミノール配糖体からセサミノールを生成する能力を有する、ラクトバチルス・パラカゼイに属する乳酸菌としては、特に、ＤＮＢＬ１８２６株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２５）、ＤＮＢＬ１８３２株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２９）、及び、ラ
クトバチルス・カゼイ・ハセガワ菌株（受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３）からなる群から選択される１以上が好ましい。なお、ラクトバチルス・カゼイ・ハセガワ菌株（受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３）は、当初はラクトバチルス・カゼイとして分類されたが、現在ではラクトバチルス・パラカゼイに分類されており、本明細書ではラクトバチルス・パラカゼイに属する乳酸菌として扱う。ラクトバチルス・カゼイ・ハセガワ菌株は、本明細書中では「Ａ２２１株」という場合がある。

【0027】

セサミノール配糖体からセサミノールを生成する能力を有する、ラクトバチルス・プランタラムに属する乳酸菌としては、ＤＮＢＬ１８２９株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２６）、及び、ＤＮＢＬ１８３１株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８）からなる群から選択される１以上が好ましい。

【0028】

セサミノール配糖体からセサミノールを生成する能力を有する、ラクトバチルス・ペントーサスに属する乳酸菌としては、ＤＮＢＬ１８３０株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７）が好ましい。

【0029】

本発明において、上記の６種の特定の乳酸菌株は、その変異株も包含する概念である。変異株は、セサミノール配糖体からセサミノールを生成する能力を有している変異株であればよく、人工的な変異処理により生じる変異株であってもよいし、自然変異株であってもよい。

【0030】

本発明では、セサミノール配糖体からセサミノールを生成する能力を有する、ラクトバチルス属に属する乳酸菌として、特に、ＤＮＢＬ１８２９株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２６）、ＤＮＢＬ１８３０株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７）、ＤＮＢＬ１８３１株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８）及びラクトバチルス・カゼイ・ハセガワ菌株（受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３）からなる群から選択される１以上を用いることが好ましい。これらの乳酸菌は、セサミノールジグルコシドからセサミノールを生成する能力が特に高いため、セサミノール配糖体としてセサミノールジグルコシドを含む原料を用いる場合に好適である。

【0031】

本発明では、セサミノール配糖体からセサミノールを生成する能力を有する、ラクトバチルス属に属する乳酸菌として、特に、ラクトバチルス・カゼイ・ハセガワ菌株（受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３）を用いることが好ましい。この乳酸菌は、セサミノールトリグルコシドからセサミノールジグルコシドを生成する能力と、セサミノールジグルコシドからセサミノールを生成する能力がどちらも特に高く、効率的にセサミノールを生成することができる。

【0032】

本発明者らは驚くべきことに、前記セサミノール生成工程において、乳酸菌として、ラクトバチルス属に属する２以上の乳酸菌の組み合わせを用いる場合に、セサミノールの生成が顕著に促進されることを見出した。

【0033】

前記組み合わせとしては、
ラクトバチルス属に属し、セサミノールトリグルコシドをセサミノールジグルコシドに変換する能力を有する１以上の乳酸菌と、
ラクトバチルス属に属し、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力を有する１以上の他の乳酸菌と
の組み合わせが好ましく、特に、下記の（１）及び（２）：
（１）ラクトバチルス・パラカゼイに属し、セサミノールトリグルコシドをセサミノールジグルコシドに変換する能力を有する、１以上の乳酸菌、
（２）ラクトバチルス・パラカゼイに属し、セサミノールジグルコシドをセサミノール
に変換する能力を有する１以上の他の乳酸菌、ラクトバチルス・ペントーサスに属し、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力を有する１以上の乳酸菌、及び、ラクトバチルス・プランタラムに属し、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力を有する１以上の乳酸菌からなる群から選択される１以上の乳酸菌
の組み合わせが好ましい。

【0034】

乳酸菌の組み合わせによりセサミノール生成が促進される機構は必ずしも明らかではないが、実施例に示す試験結果から以下の機構が推定される。

【0035】

セサミノール配糖体がセサミノールに変換される反応は、セサミノールトリグルコシドから、セサミノールジグルコシドに変換される反応と、セサミノールジグルコシドがセサミノールモノグルコシドを経てセサミノールに変換される反応を含んでいると推定される。ラクトバチルス属に属する乳酸菌のなかには、セサミノールトリグルコシドをセサミノールジグルコシドに変換する能力が特に高いものと、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力が特に高いものがあるため、ラクトバチルス属に属する乳酸菌を２以上併用することにより、セサミノールを効率的に生成することができるものと推定する。ここで中間体として生じるセサミノールジグルコシドは主に、β１，６結合により結合した糖鎖を有するセサミノールジグルコシド（β１，６ＳＤＧ）と推定されるが、β１，２結合により結合した糖鎖を有するセサミノールジグルコシド（β１，２ＳＤＧ）である可能性もある。このため、本明細書に記載の「セサミノールトリグルコシドをセサミノールジグルコシドに変換する能力」及び「セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力」における「セサミノールジグルコシド」は主にβ１，６
ＳＤＧを指すが、これには限定されず、β１，２ＳＤＧであってもよい。

【0036】

前記（１）の乳酸菌としては、セサミノールトリグルコシドをセサミノールジグルコシドに変換する能力を有するものを用いる。このような乳酸菌としては、ＤＮＢＬ１８２６株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２５）及びＤＮＢＬ１８３２株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２９）から選択される１以上を用いることが好ましい。前記（１）の乳酸菌として用いるこれらの特定の菌株の範囲には、既述のとおり、その変異株も包含される。変異株としては、セサミノールトリグルコシドをセサミノールジグルコシドに変換する能力を有する変異株である限り、人工変異株であってもよいし、自然変異株であってもよい。

【0037】

前記（２）の乳酸菌としては、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力を有するものを用いる。このような乳酸菌としては、ＤＮＢＬ１８２９株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２６）、ＤＮＢＬ１８３０株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７）、ＤＮＢＬ１８３１株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８）、及び、ラクトバチルス・カゼイ・ハセガワ菌株（受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３）から選択される１以上を用いることが特に好ましい。前記（２）の乳酸菌として用いるこれらの特定の菌株の範囲には、既述のとおり、その変異株も包含される。変異株としては、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力を有する変異株である限り、人工変異株であってもよいし、自然変異株であってもよい。

【0038】

以下の説明において「乳酸菌」とは、特に明示しない限り、１種の乳酸菌と、２種以上の乳酸菌の組み合わせのどちらも包含する。
前記原料を前記乳酸菌と共存させる条件は、前記乳酸菌の作用により前記原料中のセサミノール配糖体における糖鎖が切断されセサミノールが生成される条件であれば特に限定されない。

【0039】

前記原料を前記乳酸菌と共存させた反応混合物は、前記原料と前記乳酸菌とを効率よく
接触させるために適当な液体媒体を更に含むことが好ましい。前記液体媒体としてば水が挙げられる。ここで水は、適当な緩衝成分を溶解した緩衝水溶液であってもよいし、後述するような栄養成分を配合した液体培地であってもよい。

【0040】

セサミノールを生成する反応は前記乳酸菌による発酵の１種であることから、前記反応混合物は、前記乳酸菌が生育に必要な栄養成分を含むことが好ましい。前記原料として、セサミノール配糖体に加えて前記栄養成分を含む原料を用いる場合には、前記反応混合物に更なる成分を添加する必要はない。例えば既述のようなゴマに由来する原料は、一般的には、セサミノール配糖体に加えて前記乳酸菌の生育に必要な成分を含む。前記原料が、前記乳酸菌の生育に必要な成分を一部又は全部含まないものである場合、不足する成分を、前記反応混合物に適宜配合すればよい。

【0041】

セサミノール生成工程では、前記反応混合物を、前記乳酸菌が、生育しセサミノール配糖体からセサミノールを生成することが可能な条件においてインキュベートする。このときインキュベートの条件は特に限定されず、温度、時間、振とうの有無、雰囲気の組成等の各種条件は適宜選択できる。具体的には、インキュベートの際の温度は２０〜４０℃が例示できる。インキュベートの際の時間は２４〜３３６時間が例示できる。前記反応混合物の振とうは行わなくてもよいし、連続的又は断続的に行ってもよい。インキュベートの際に反応混合物が接する雰囲気としては空気が例示できる。

【0042】

前記セサミノール生成工程で生成するセサミノールは、前記セサミノール生成工程の後に、単離又は精製して回収することもできるし、セサミノールを含むセサミノール含有組成物として得ることもできる。

【0043】

セサミノール含有組成物は、前記原料と前記乳酸菌とを含む前記反応混合物から、前記セサミノール生成工程後に、セサミノール含有組成物を調製するセサミノール含有組成物調製工程により調製することができる。セサミノール含有組成物はセサミノールに加えて、前記原料に由来する他の成分も含むことが好ましい。前記セサミノール含有組成物調製工程では、前記反応混合物を、乾燥、濃縮、抽出、セサミノール含有画分の分離、殺菌等の手段を１以上組み合わせて処理し、セサミノール含有組成物を得る。

【0044】

前記原料がゴマに由来する原料である場合、前記セサミノール含有組成物調製工程では、好ましくは、前記セサミノール生成工程後に、前記反応混合物を乾燥し殺菌してセサミノール含有組成物を調製する。この実施形態で調製されたセサミノール含有組成物は、セサミノールと、ゴマに由来する成分とを含み、経口摂取するのに適している。この実施形態で調製されたセサミノール含有組成物は、より好ましくは下記の、本発明の他の好ましい実施形態の組成物である。

【0045】

＜乳酸菌＞
本発明はまた新規乳酸菌：ＤＮＢＬ１８２６株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２５）、ＤＮＢＬ１８３２株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２９）、ＤＮＢＬ１８２９株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２６）、ＤＮＢＬ１８３０株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７）、ＤＮＢＬ１８３１株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８）に関する。

【0046】

これらの特定乳酸菌は、その変異株も包含する概念である。変異株は、セサミノール配糖体からセサミノールを生成する能力を有している変異株であればよく、人工的な変異処理により生じる変異株であってもよいし、自然変異株であってもよい。

【0047】

ＤＮＢＬ１８２６株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２５）及びＤＮＢＬ１８３２株
（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２９）は、セサミノールトリグルコシドをセサミノールジグルコシドに変換する能力が特に高いため有用である。これらの変異株は、セサミノールトリグルコシドをセサミノールジグルコシドに変換する能力を有する変異株であることが好ましい。

【0048】

一方、ＤＮＢＬ１８２９株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２６）、ＤＮＢＬ１８３０株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７）、及び、ＤＮＢＬ１８３１株（受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８）は、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力が特に高いため有用である。これらの変異株は、セサミノールジグルコシドをセサミノールに変換する能力を有する変異株であることが好ましい。

【0049】

＜発酵物＞
本発明はまた、セサミノール配糖体を含有する原料の、ラクトバチルス属に属する１以上の乳酸菌による発酵物に関する。
本発明のこの態様において、セサミノール配糖体を含有する原料の範囲は上記のとおりであり、好ましくはゴマに由来する原料である。

【0050】

ラクトバチルス属に属する１以上の乳酸菌は、セサミノール生成工程に用いるものとしてあげた乳酸菌と同様のものが使用できる。ラクトバチルス属に属する２以上の乳酸菌の組み合わせであってもよく、好ましい組み合わせは既述の通りである。

【0051】

「セサミノール配糖体を含有する原料の、ラクトバチルス属に属する１以上の乳酸菌による発酵物」とは、前記原料を、前記乳酸菌により発酵して得られる生成物を指し、前記原料と前記乳酸菌とを混合して発酵させた、液状、ペースト状又は固形状の発酵反応物そのままの状態のものであってもよいし、前記発酵反応物を固液分離した一方の分離物（例えば上澄み液、沈殿）、その処理物等の、前記発酵反応物の処理物であってもよい。発酵反応物は殺菌処理されたものであってもよい、固液分離は、遠心分離、ろ過等の手段により行うことができる。前記発酵反応物の処理物としては、前記発酵物又は固液分離した分離物の濃縮物、希釈物、乾燥物、精製物（粗精製物も包含する）等が挙げられる。精製物は、例えば、発酵反応物からセサミノールを精製又は粗精製したものが例示できる。
発酵処理の好適な条件は、セサミノール生成工程において説明したのと同様の条件であることができる。

【0052】

本発明の発酵物には、ラクトバチルス属に属する１以上の乳酸菌が、生存した状態で含まれてもよいし、殺菌処理され死滅した状態で含まれていてもよいし、除去され含まれていなくてもよい。

【0053】

本発明の発酵物は、セサミノールを含んでいることが好ましい。
本発明の発酵物は、好ましくは経口摂取用組成物である。このような発酵物は、健康に有用な機能を訴求した健康食品や栄養補助食品に使用することができる。

【0054】

＜セサミノール含有組成物＞
本発明の他の好ましい実施形態は、セサミン、及び、乾燥重量基準で１００ｇあたり１００ｍｇ以上のセサミノールを含み、セサミノール：セサミンの重量比が１：０．１〜１：２０の範囲内である、セサミノール含有組成物に関する。
前記セサミノール含有組成物においてセサミノールの含有量の上限は特に限定されないが、乾燥重量基準で１００ｇあたり、通常は５００ｍｇ以下、例えば２５０ｍｇ以下である。

【0055】

セサミノール：セサミンの重量比はより好ましくは１：０．１〜１：１５、より好まし
くは１：０．１〜１：１０、より好ましくは１：０．５〜１：５、より好ましくは１：０．５〜１：２である。
得られたセサミノール含有組成物は抗酸化作用を有する食品又は医薬品として経口摂取するのに適している。

【実施例】

【0056】

以下の実施例において単に「セサミノール」という場合、糖鎖を有していないアグリコンを指す。

【0057】

＜乳酸菌株＞
後述する実験１〜３では乳酸菌株として「ＤＮＢＬ１８２６株」、「ＤＮＢＬ１８３２株」、「ＤＮＢＬ１８２９株」、「ＤＮＢＬ１８３０株」、「ＤＮＢＬ１８３１株」、「Ａ２２１株」を使用した。

【0058】

ＤＮＢＬ１８２６株は、本発明者らが発酵食品から単離した乳酸菌であり、１６ｓｒＤＮＡ配列解析に基づきラクトバシルス・パラカゼイに分類されている。ＤＮＢＬ１８２６株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（郵便番号２９２−０８１８日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に寄託され、受託番号：ＮＩＴＥ
Ｐ−０２２２５が付与されている（受託日：平成２８年（２０１６年）３月２３日）。

【0059】

ＤＮＢＬ１８３２株は、本発明者らが発酵食品から単離した乳酸菌であり、１６ｓｒＤＮＡ配列解析に基づきラクトバシルス・パラカゼイに分類されている。ＤＮＢＬ１８３２株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託され、受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２９が付与されている（受託日：平成２８年（２０１６年）３月２３日）。

【0060】

ＤＮＢＬ１８２９株は、本発明者らが発酵食品から単離した乳酸菌であり、１６ｓｒＤＮＡ配列解析に基づきラクトバシルス・プランタラムに分類されている。ＤＮＢＬ１８２９株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託され、受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２６が付与されている（受託日：平成２８年（２０１６年）３月２３日）。

【0061】

ＤＮＢＬ１８３０株は、本発明者らが発酵食品から単離した乳酸菌であり、１６ｓｒＤＮＡ配列解析に基づきラクトバシルス・ペントーサスに分類されている。ＤＮＢＬ１８３０株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託され、受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２７が付与されている（受託日：平成２８年（２０１６年）３月２３日）。

【0062】

ＤＮＢＬ１８３１株は、本発明者らが発酵食品から単離した乳酸菌であり、１６ｓｒＤＮＡ配列解析に基づきラクトバシルス・プランタラムに分類されている。ＤＮＢＬ１８３１株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託され、受託番号：ＮＩＴＥＰ−０２２２８が付与されている（受託日：平成２８年（２０１６年）３月２３日）。

【0063】

Ａ２２１株は、本出願人による特開２０１５−１５６８３２号公報に開示されているラクトバチルス・カゼイ・ハセガワ菌株を指し、ラクトバチルス属に属する。Ａ２２１株は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（郵便番号３０５−８５６６日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６）に寄託され、受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３が付与されている（受託日：平成１５年（２００３年）８月１１日、受託番号：ＦＥＲＭＢＰ−１０１２３）。

【0064】

＜乳酸菌ペレット、乳酸菌懸濁液の調整＞
これらの乳酸菌株のペレット，あるいは懸濁液を次の手順で調製した。

【0065】

＜実験１＞及び＜実験５＞〜＜実験８＞においては先ず、各菌株を予めＭＲＳプレートにストリークして得られたコロニーを一白金耳分釣菌し、１５ｍｌ遠沈管（ＩＷＡＫＩ社製）へ分注した一般乳酸菌培地（日水）４ｍｌへ植菌した。３７℃にて静置培養し３日後、３５００ｒｐｍにて遠心し、培地を破棄した後、滅菌精製水２ｍｌにて洗浄を行った。よく懸濁して菌株懸濁液とし、１．５ｍｌマイクロチューブ（エッペンドルフ社製）へ５００μｌずつ分注し、再度３５００ｒｐｍにて遠心した。異なる菌株の混合ペレットの調製では各菌株懸濁液５００μｌを１．５ｍｌマイクロチューブへ混合する形で分注し、遠心を行った。上清を破棄し、得られた乳酸菌株のペレットを試験に供した。

【0066】

＜実験２＞においては実験１と同様に、プレートよりコロニー一白金耳分釣菌し、一般乳酸菌培地４ｍｌへ植菌した。３７℃にて３日間静置培養を行い、その後１ｍｌを１．５ｍｌマイクロチューブへ取り、３５００ｒｐｍにて遠心を行った。培地を破棄した後、滅菌精製水１ｍｌへ菌体ペレットを懸濁し、洗浄を行った。再び３５００ｒｐｍにて遠心し、上清を捨てた後、再度滅菌精製水１ｍｌに懸濁し、当該乳酸菌懸濁液を試験に供した。

【0067】

＜実験３＞及び＜実験４＞においては先の実験１及び２と同様にプレートよりコロニー一白金耳分釣菌し、一般乳酸菌培地４ｍｌへと植菌した。３７℃にて３日間静置培養を行い、その後、４５ｍｌの一般乳酸菌培地へ全量を投入した。引き続き３７℃にて３日間静置培養を実施し、その後１４ｍｌを１５ｍｌ遠沈管へ取った。３５００ｒｐｍにて遠心し、培地を捨て、滅菌精製水１０ｍｌで洗浄を行った。その後、再度３５００ｒｐｍの遠心に供して沈殿物として菌体ペレットを得た。上清を破棄し滅菌精製水１０ｍｌに再懸濁し、試験へ供した。

【0068】

＜試薬＞
以下の試験の説明ではセサミノール関連物質を以下の略号で表す場合がある。
ＳＭＮ：セサミノール
ＳＥＭ：セサミン
ＳＴＧ：セサミノールトリグルコシド
ＳＤＧ：セサミノールジグルコシド
β１，２ＳＤＧ：β１，２結合により結合した糖鎖を有するＳＤＧ
β１，６ＳＤＧ：β１，６結合により結合した糖鎖を有するＳＤＧ

【0069】

以下の試験では、それぞれの標準品として以下の市販されている試薬を用いた。
ＳＭＮ標準品：（＋）Ｓｅｓａｍｉｎｏｌ（長良サイエンス社製：製品番号ＮＳ１８２１０２）
ＳＥＭ標準品：（＋）Ｓｅｓａｍｉｎ（長良サイエンス社製：製品番号ＮＳ１８０１０３）
ＳＴＧ標準品：ＳｅｓａｍｉｎｏｌＴｒｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ（長良サイエンス社製：製品番号ＮＳ１８５１０２）
β１，２ＳＤＧ標準品：Ｓｅｓａｍｉｎｏｌ（１→２）Ｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ（長良サイエンス社製：製品番号ＮＳ１８５２０１）
β１，６ＳＤＧ標準品：Ｓｅｓａｍｉｎｏｌ（１→６）Ｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ（長良サイエンス社製：製品番号ＮＳ１８５３０１）

【0070】

＜実験１：セサミノールの生成試験＞
市販のすりゴマ（白）、又は、市販のゴマ圧搾粕を原料として用い、その熱水抽出物を
基質として乳酸菌による発酵を行ってセサミノールの生成を試みた。
使用した乳酸菌株は結果の欄に示す通りである。

【0071】

（実験１／手順）
原料１０ｇと精製水１００ｍｌとを３００ｍｌ三角フラスコ容器に入れ、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理した。
オートクレーブ処理後の懸濁液をＮｏ．２ろ紙（アドバンテック社製）でろ過し、ろ液を再滅菌した。当該再滅菌して得られたろ液を熱水抽出液として、使用した。

【0072】

その後、＜乳酸菌ペレット、乳酸菌懸濁液の調整＞の項で述べた方法で１．５ｍｌマイクロチューブ内に用意した乳酸菌ペレットに上記熱水抽出液を１ｍＬずつ加え、懸濁した。

【0073】

撹拌せず静置したまま３７℃でインキュベートして乳酸菌による発酵を行った。発酵を開始した初日を第０日とし、第７日まで発酵を続けた。
ネガティブコントロールとして、前記原料の熱水抽出液を、乳酸菌を添加しない以外は同様の手順で処理した。この試験区を「乳酸菌未処理」の試験区とした。

【0074】

発酵処理の第２日（下記結果１の場合）、第５日（下記結果２の場合）、又は第４日（下記結果３の場合）に、前記各マイクロチューブから乳酸菌懸濁液を微量サンプリングして薄層クロマトグラフィーにより展開した。比較のために、セサミノール標準品の水溶液と、乳酸菌未処理の試験区のサンプルについても同様に薄層クロマトグラフィーにより展開した。薄層クロマトグラフィーの展開は、展開溶媒として酢酸エチル：メタノール：水をそれぞれ１４：５：４の比率で混合したものを用いた。展開後の発色液としては硫酸１０％（ｖ／ｖ）水溶液を用い、噴霧して加熱することで検出した。

【0075】

発酵処理の第７日（下記結果１、３の場合）又は第５日（下記結果２の場合）に、前記各マイクロチューブからの乳酸菌懸濁液とエタノールとを、エタノール濃度が５０％（ｖ／ｖ）となるように混合した。その後遠心分離して上清液を０．４５μｍフィルター（アドバンテック社製）に通して得たサンプルを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分析した。ＨＰＬＣ（島津製作所社製）では分離カラムにμＢｏｎｄａｓｐｈｅｒｅ（Ｉ．Ｄ. １５０×３．９ｍｍ、Ｃ１８５μｍ；ウォーターズ社製）を用いた逆相系
を使用し、移動相としてアセトニトリル及び２％酢酸を用いたグラジエント条件下で分析を行った。カラムオーブンを３０℃に設定したまま５％アセトニトリル溶液から開始し、０分から１０分までに２０％まで、さらに１０分から２５分までに、８０％まで濃度を上げ、その後１００％アセトニトリルによる洗浄工程を経る条件を用いた。なお流速１ｍＬ／分で２９０ｎｍでの検出を行った。また、サンプル注入量は２０μｌとした。

【0076】

（実験１／結果１）
乳酸菌として
ＤＮＢＬ１８２６株のみ、
ＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８３０株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８３１株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８３２株のみ、
ＤＮＢＬ１８３２株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８３２株とＤＮＢＬ１８３０株との組み合わせ、又は
ＤＮＢＬ１８３２株とＤＮＢＬ１８３１株との組み合わせ、
を用い、基質として市販のすりゴマの熱水抽出物、又は、市販のゴマ圧搾粕の熱水抽出物を用いた試験における、発酵処理第２日の薄層クロマトグラフィーの結果を図１、２に、
発酵処理第７日のＨＰＬＣの結果を下記表１、２に示す。

【0077】

図１Ａ及び図２Ａに示される通りＤＮＢＬ１８２６株には、どちらの原料を用いた場合にもセサミノールを生産する能力が僅かに認められた。ＤＮＢＬ１８２６株にＤＮＢＬ１８２９〜ＤＮＢＬ１８３１株のいずれかを併用した場合に、セサミノールの生産が著しく促進された。

【0078】

同様に、図１Ｂ及び図２Ｂに示される通りＤＮＢＬ１８３２株には、どちらの原料を用いた場合にもセサミノールを生産する能力が僅かに認められた。ＤＮＢＬ１８３２株にＤＮＢＬ１８２９〜ＤＮＢＬ１８３１株のいずれかを併用した場合に、セサミノールの生産が著しく促進された。

【0079】

【表1】

【0080】

【表2】

【0081】

表１、２においてＮＤはＮｏｔＤｅｔｅｃｔｅｄ（検出されず）を意味する。他の表においても同様である。
各成分の原料粉末１００ｇあたりの含有量は、抽出効率が１００％であると仮定して算出している。他の実験においても同様である。

【0082】

ＤＮＢＬ１８２６株には、どちらの原料を用いた場合にもセサミノールを生産する能力が僅かに認められた。ＤＮＢＬ１８２６株にＤＮＢＬ１８２９〜ＤＮＢＬ１８３１株のいずれかを併用した場合に、セサミノールの生産が著しく促進された。

【0083】

同様に、ＤＮＢＬ１８３２株には、どちらの原料を用いた場合にもセサミノールを生産する能力が僅かに認められた。ＤＮＢＬ１８３２株にＤＮＢＬ１８２９〜ＤＮＢＬ１８３１株のいずれかを併用した場合に、セサミノールの生産が著しく促進された。

【0084】

（実験１／結果２）
乳酸菌として
ＤＮＢＬ１８２６株とＡ２２１株との組み合わせ、又は
ＤＮＢＬ１８３２株とＡ２２１株との組み合わせ
を用い、基質として市販のすりゴマの熱水抽出物を用いた試験における、発酵処理第５日の薄層クロマトグラフィーの結果を図３に、発酵処理第５日のＨＰＬＣのチャートを図４ｆ、ｇに、発酵処理第５日のＨＰＬＣの分析結果を下記の表３にそれぞれ示す。

【0085】

なお、図４ａはＳＴＧの標準品、図４ｂはβ１，２ＳＤＧの標準品、図４ｃはβ１，６ＳＤＧの標準品、図４ｄはＳＭＮの標準品の、同条件によるＨＰＬＣでの保持時間を示すチャートである。図４ｅは乳酸菌未処理の試験区のＨＰＬＣチャートを示し、図４ｆはＤＮＢＬ１８２６株とＡ２２１株とを併用した試験区のＨＰＣＬチャートを示し、図４ｇはＤＮＢＬ１８３２株とＡ２２１株とを併用した試験区のＨＰＣＬチャートを示す。

【0086】

図３及び図４ｆ、ｇに示される通りＤＮＢＬ１８２６株及びＤＮＢＬ１８３２株はどちらもＡ２２１株を併用したとき、基質としてすりゴマ熱水抽出物を用いた場合にセサミノールが多く生成された。また、セサミノールの生成に伴って、セサミノールトリグルコシ
ドが減少した。

【0087】

【表3】

【0088】

ＤＮＢＬ１８２６株及びＤＮＢＬ１８３２株はどちらもＡ２２１株を併用したとき、基質としてすりゴマ熱水抽出物を用いた場合にセサミノールが多く生成されたことは表３の分析結果によっても示される。

【0089】

（実験１／結果３）
乳酸菌として
ＤＮＢＬ１８３２株のみ、又は
ＤＮＢＬ１８３２株とＡ２２１株との組み合わせ
を用い、基質として市販のゴマ圧搾粕の熱水抽出物を用いた試験における、発酵処理第４日の薄層クロマトグラフィーの結果を図５に、発酵処理第７日のＨＰＬＣの分析結果を下記の表４にそれぞれ示す。
図５に示される通りＤＮＢＬ１８３２株は単独でも少量のセサミノールを生成することができ、Ａ２２１株を併用したときにセサミノールの生産能が顕著に高い。

【0090】

【表4】

【0091】

ＤＮＢＬ１８３２株はＡ２２１株と併用したとき、基質としてゴマ圧搾粕熱水抽出物を用いた場合にセサミノールが多く生成されたことは表４の分析結果によっても示される。

【0092】

＜実験２：セサミノール含有組成物製造例１＞
市販のすりゴマ（白）を原料として用い、その懸濁液を基質として乳酸菌による発酵を行ってセサミノール含有組成物の製造を試みた。
使用した乳酸菌株は結果の欄に示す通りである。

【0093】

（実験２／手順）
後述する試験区ごとに、原料１ｇと精製水２０ｍＬとを５０ｍｌ遠沈管に入れて懸濁液を調製し、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理した。

【0094】

オートクレーブ処理後の懸濁液を含む前記各容器に、＜乳酸菌ペレット、乳酸菌懸濁液の調整＞の項で記載した方法で予め調整した乳酸菌懸濁液を５００μｌ加え、よく混合した。２種類の乳酸菌を併用する場合はそれぞれ別に用意した乳酸菌懸濁液を５００μｌずつ同一の５０ｍl遠沈管に加え、よく混合した。

【0095】

３７℃でインキュベートして乳酸菌による発酵を行った。発酵を開始した初日を第０日とし、第７日まで発酵を続けた。培養開始後、３日に一回手で振り、発酵液を混和する処置を行った以外は、撹拌せず静置したまま発酵を行った。

【0096】

ネガティブコントロールとして、前記原料の懸濁液を、乳酸菌懸濁液の代わりに滅菌精製水を添加した以外は同様の手順で処理した。この試験区を「乳酸菌未処理」の試験区とした。

【0097】

発酵処理の第７日に、前記容器中の乳酸菌懸濁液に等量（２０ｍｌ）のエタノールを、エタノール濃度が５０％（ｖ／ｖ）となるように混合し、遠心分離した。上清液を０．４５μｍのフィルターへ通して高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分析した。ＨＰＬＣ分析は＜実験１＞と同じ条件を適用した。

【0098】

（実験２／結果）
乳酸菌として
ＤＮＢＬ１８２６株のみ、
ＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８３１株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８３２株のみ、
ＤＮＢＬ１８３２株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせ、又は
ＤＮＢＬ１８３２株とＤＮＢＬ１８３１株との組み合わせ
を用い、基質として市販のすりゴマの懸濁液を用いた試験における発酵処理第７日のＨＰＬＣの分析結果を下記の表５に示す。

【0099】

【表5】

【0100】

ＤＮＢＬ１８２６株及びＤＮＢＬ１８３２株はどちらもＤＮＢＬ１８２９株又はＤＮＢＬ１８３１株と併用したとき、基質としてすりゴマ懸濁液を用いた場合のセサミノールの生産能が高かった。
また、セサミン（ＳＥＭ）の量は乳酸菌発酵によっては変動しなかった。

【0101】

今回の試験では、ＤＮＢＬ１８２６株又はＤＮＢＬ１８３２株を単独で用いた場合の発酵生成物中ではセサミノール：セサミンの重量比は１：２．８４〜１：２６．５であった。一方、ＤＮＢＬ１８２９株又はＤＮＢＬ１８３１株と併用した場合の発酵生成物中ではセサミノール：セサミンの重量比は１：１．４５〜１：１．６７であった。

【0102】

図６Ａには乳酸菌未処理の試験区のＨＰＬＣチャートを、図６ＢにはＤＮＢＬ１８２６株のみを用いた試験区のＨＰＬＣチャートを、図６ＣにはＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせを用いた試験区のＨＰＬＣチャートを示す。図６Ｂで示される通りＤＮＢＬ１８２６株は単独でもセサミノールを生産する能力を有していた。一方、図６Ｃに示される通り、ＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株を併用した場合にセサミノールの生産能が著しく向上した。乳酸菌による発酵はセサミン量にほとんど影響を与えず、発酵生成物中ではセサミノールとセサミンとは共存した。

【0103】

＜実験３：セサミノール含有組成物製造例２＞
市販のすりゴマ（白）を原料として用い、その懸濁液を基質として乳酸菌による発酵を行ってセサミノール含有組成物の製造を試みた。
乳酸菌株としてＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせを用いた。

【0104】

（実験３／手順）
原料２０ｇと精製水１００ｍＬとを３００ｍｌの三角フラスコに入れて懸濁液を調製し、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理した。

【0105】

オートクレーブ処理後の懸濁液を含む前記各容器に、＜乳酸菌ペレット、乳酸菌懸濁液の調整＞の項で記載した通りの方法で予め用意したＤＮＢＬ１８２６株の乳酸菌懸濁液とＤＮＢＬ１８２９株の乳酸菌懸濁液をそれぞれ５ｍｌ添加した。

【0106】

【0107】

ネガティブコントロールとして、前記原料の懸濁液を、乳酸菌懸濁液の代わりに滅菌精製水を添加した以外は同様の手順で処理した。この試験区を「乳酸菌未処理」の試験区とした。
発酵処理の第７日に、前記容器中の乳酸菌懸濁液をオートクレーブ処理により滅菌し、凍結乾燥して、凍結乾燥組成物を得た。

【0108】

前記凍結乾燥組成物２５０ｍｇを秤とり、９９．５％エタノール５ｍＬにより２日間抽出した後、遠心分離して上清液を取り、０．４５μｍのフィルターを通して得た試料を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分析した。ＨＰＬＣ分析は＜実験１＞と同じ条件を適用した。

【0109】

（実験３／結果）
ＤＮＢＬ１８２６株及びＤＮＢＬ１８２９株により発酵させた試験区で得られた凍結乾燥組成物と、乳酸菌未処理の試験区で得られた凍結乾燥組成物のＨＰＬＣの分析結果を下記の表６に示す。

【0110】

【表6】

【0111】

図７Ａには乳酸菌未処理の試験区のＨＰＬＣチャートを、図７ＢにはＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせを用いた試験区のＨＰＬＣチャートを示す。ＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株を併用した場合に多量のセサミノールが生成された。乳酸菌による発酵はセサミン量にほとんど影響を与えず、発酵生成物中ではセサミノールとセサミンとは共存した。
なお、９９．５％エタノールではＳＴＧは効率良く抽出されない。

【0112】

＜実験４：セサミノール含有組成物製造例３＞
市販のゴマ圧搾粕を原料として用い、その懸濁液を基質として乳酸菌による発酵を行ってセサミノール含有組成物の製造を試みた。
乳酸菌株としてＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせを用いた。

【0113】

（実験４／手順）
原料２０ｇと精製水１００ｍＬとを３００ｍｌの三角フラスコに入れて懸濁液を調製し、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理した。

【0114】

【0115】

３７℃でインキュベートして乳酸菌による発酵を行った。発酵を開始した初日を第１日とし、第７日まで発酵を続けた。培養開始後、３日に一回手で振り、発酵液を混和する処置を行った以外は、撹拌せず静置したまま発酵を行った。

【0116】

【0117】

発酵処理の第７日に、前記容器中の乳酸菌懸濁液をオートクレーブ処理により滅菌し、凍結乾燥して、凍結乾燥組成物を得た。

【0118】

前記組成物２５０ｍｇを秤とり、９９．５％エタノール５ｍＬにより２日間抽出した後、遠心分離して上清液を取り、０．４５μｍのフィルターを通して得た試料を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分析した。ＨＰＬＣ分析は＜実験１＞と同じ条件を適用した。

【0119】

（実験４／結果）
ＤＮＢＬ１８２６株及びＤＮＢＬ１８２９株により発酵させた試験区で得られた凍結乾燥組成物と、乳酸菌未処理の試験区で得られた凍結乾燥組成物のＨＰＬＣの分析結果を下記の表７に示す。

【0120】

【表7】

【0121】

図８Ａには乳酸菌未処理の試験区のＨＰＬＣチャートを、図８ＢにはＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせを用いた試験区のＨＰＬＣチャートを示す。ＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株を併用した場合にセサミノールが生産された。乳酸菌による発酵はセサミン量にほとんど影響を与えず、発酵生成物中ではセサミノールとセサミンとは共存した。
なお、９９．５％エタノールではＳＴＧは効率良く抽出されない。

【0122】

＜実験５：すりゴマ熱水抽出物からのセサミノールの生成試験＞
市販のすりゴマ（白）を原料として用い、その熱水抽出物を基質として乳酸菌による発酵を行ってセサミノールの生成を試みた。
使用した乳酸菌株は結果の欄に示す通りである。

【0123】

（実験５／手順）
原料１０ｇと精製水１００ｍＬとを３００ｍｌ三角フラスコ容器に入れ、１２１℃で１５分間オートクレーブ処理した。
オートクレーブ処理後の懸濁液をＮｏ．２ろ紙（アドバンテック社製）でろ過し、ろ液を再滅菌した。当該再滅菌して得られたろ液を熱水抽出液として、使用した。

【0124】

【0125】

【0126】

発酵処理の第２日、及び第７日に、前記各マイクロチューブから乳酸菌懸濁液を微量サンプリングして薄層クロマトグラフィーにより展開した。比較のために、セサミノール標準品の水溶液と、乳酸菌未処理の試験区のサンプルについても同様に薄層クロマトグラフィーにより展開した。薄層クロマトグラフィーの展開は、展開溶媒として酢酸エチル：メタノール：水をそれぞれ１４：５：４の比率で混合したものを用いた。展開後の発色液としては硫酸１０％（ｖ／ｖ）水溶液を用い、噴霧して加熱することで検出した。

【0127】

発酵処理の第７日に、前記各マイクロチューブからの乳酸菌懸濁液とエタノールとを、エタノール濃度が５０％（ｖ／ｖ）となるように混合した。その後遠心分離して上清液を０．４５μｍフィルター（アドバンテック社製）に通して得たサンプルを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分析した。ＨＰＬＣによる分析条件は実験１と同じとした。

【0128】

（実験５／結果）
乳酸菌として
ＤＮＢＬ１８２６株のみ、
ＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８３０株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８２６株とＤＮＢＬ１８３１株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８２６株とＡ２２１株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８３２株のみ、
ＤＮＢＬ１８３２株とＤＮＢＬ１８２９株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８３２株とＤＮＢＬ１８３０株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８３２株とＤＮＢＬ１８３１株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８３２株とＡ２２１株との組み合わせ、
ＤＮＢＬ１８２９株のみ、
ＤＮＢＬ１８３０株のみ、
ＤＮＢＬ１８３１株のみ、又は、
Ａ２２１株のみ
を用い、基質として市販のすりゴマの熱水抽出物を用いた試験における、発酵処理第２日
の薄層クロマトグラフィーの結果を図９に、発酵処理第７日の薄層クロマトグラフィーの結果を図１０に示す。また、発酵処理第２日及び第７日でのＨＰＬＣ分析の結果をそれぞれ下記表８及び９に示す。

【0129】

【表8】

【0130】

【表9】

【0131】

表８、９に示す結果から、すりゴマ熱水抽出物を基質とした発酵において、ＤＮＢＬ１８２６株、ＤＮＢＬ１８３２株、ＤＮＢＬ１８２９株、ＤＮＢＬ１８３０株、ＤＮＢＬ１８３１株をそれぞれ単独で用いた場合と比較して、ＤＮＢＬ１８２６株又はＤＮＢＬ１８３２株と、ＤＮＢＬ１８２９株、ＤＮＢＬ１８３０株及びＤＮＢＬ１８３１株のうち１種とを併用した場合にセサミノール生成量が顕著に高まることが確認された。

【0132】

また、Ａ２２１株は単独でもセサミノール生成能を有することが確認された。
図９、１０に示すＴＬＣによる分析結果から、ＤＮＢＬ１８２９株、ＤＮＢＬ１８３０株及びＤＮＢＬ１８３１株はセサミノールトリグルコシド（ＳＴＧ）をセサミノールジグルコシド（ＳＤＧ）に変換する能力は低いが、セサミノールジグルコシド（ＳＤＧ）をセサミノール（ＳＭＮ）に変換する能力が高いことが示唆された。

【0133】

一方、ＤＮＢＬ１８２６株及びＤＮＢＬ１８３２株は、セサミノールトリグルコシド（ＳＴＧ）をセサミノールジグルコシド（ＳＤＧ）に変換する能力が高いが、セサミノールジグルコシド（ＳＤＧ）をセサミノール（ＳＭＮ）に変換する能力は低いことが示唆された。

【0134】

Ａ２２１株はセサミノールトリグルコシド（ＳＴＧ）をセサミノールジグルコシド（ＳＤＧ）に変換する能力が高く、セサミノールジグルコシド（ＳＤＧ）をセサミノール（ＳＭＮ）に変換する能力も有することが示唆された。

【0135】

＜実験６：ゴマ圧搾粕熱水抽出物からのセサミノールの生成試験＞
市販のゴマ圧搾粕を原料として用い、その熱水抽出物を基質として乳酸菌による発酵を
行ってセサミノールの生成を試みた。

【0136】

（実験６／手順）
実験５において、原料として市販のすりゴマ（白）に代えて、市販のゴマ圧搾粕を用いた以外は実験５と同様の手順により、ゴマ圧搾粕の熱水抽出物による乳酸発酵を７日間行った。乳酸菌も実験５と同じものを用いた。

【0137】

発酵処理の第２日、及び第７日に、前記各マイクロチューブから乳酸菌懸濁液を微量サンプリングして薄層クロマトグラフィーにより展開した。
発酵処理の第７日に、実験５と同様の手順でＨＰＬＣ分析を行った。

【0138】

（実験６／結果）
発酵処理第２日の薄層クロマトグラフィーの結果を図１１に、発酵処理第７日の薄層クロマトグラフィーの結果を図１２に示す。また、発酵処理第２日及び第７日でのＨＰＬＣ分析の結果をそれぞれ下記表１０及び１１に示す。

【0139】

【表10】

【0140】

【表11】

【0141】

表１０、１１に示す結果から、ゴマ圧搾粕熱水抽出物を基質とした発酵において、ＤＮＢＬ１８２６株、ＤＮＢＬ１８３２株、ＤＮＢＬ１８２９株、ＤＮＢＬ１８３０株、ＤＮＢＬ１８３１株をそれぞれ単独で用いた場合と比較して、ＤＮＢＬ１８２６株又はＤＮＢＬ１８３２株と、ＤＮＢＬ１８２９株、ＤＮＢＬ１８３０株及びＤＮＢＬ１８３１株のうち１種とを併用した場合にセサミノール生成量が顕著に高まることが確認された。
また、Ａ２２１株は単独でもセサミノール生成能を有することが確認された。

【0142】

図１１、１２に示すＴＬＣによる分析結果から、ＤＮＢＬ１８２９株、ＤＮＢＬ１８３０株及びＤＮＢＬ１８３１株はセサミノールトリグルコシド（ＳＴＧ）をセサミノールジグルコシド（ＳＤＧ）に変換する能力は低いが、セサミノールジグルコシド（ＳＤＧ）をセサミノール（ＳＭＮ）に変換する能力が高いことが示唆された。

【0143】

【0144】

Ａ２２１株はセサミノールトリグルコシド（ＳＴＧ）をセサミノールジグルコシド（ＳＤＧ）に変換する能力と、セサミノールジグルコシド（ＳＤＧ）をセサミノール（ＳＭＮ）に変換する能力が共に高いことが示唆された。

【0145】

＜実験７：すりゴマ熱水抽出物からのセサミノールの生成試験＞
市販のすりゴマ（白）を原料として用い、その熱水抽出物を基質として乳酸菌による発酵を行ってセサミノールの生成を試みた。

【0146】

（実験７／手順）
実験５と同様の手順により、すりゴマの熱水抽出物による乳酸発酵を７日間行った。各乳酸菌を単独で用いた。

【0147】

発酵処理の第７日に、前記各マイクロチューブから乳酸菌懸濁液を微量サンプリングして薄層クロマトグラフィーにより展開した。
発酵処理の第７日に、実験５と同様の手順でHPLC分析を行った。

【0148】