特開 2017-8001 網膜保護組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】特開2017-8001(P2017-8001A)

(43)【公開日】2017年1月12日

(54)【発明の名称】網膜保護組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/015 20060101AFI20161216BHJP

   A61K 31/198 20060101ALI20161216BHJP

   A61K 31/055 20060101ALI20161216BHJP

   A61K 31/216 20060101ALI20161216BHJP

   A61K 31/4415 20060101ALI20161216BHJP

   A61K 31/59 20060101ALI20161216BHJP

   A61K 31/4188 20060101ALI20161216BHJP

   A61K 33/32 20060101ALI20161216BHJP

   A61K 33/06 20060101ALI20161216BHJP

   A61K 33/26 20060101ALI20161216BHJP

   A61K 33/28 20060101ALI20161216BHJP

   A61K 33/24 20060101ALI20161216BHJP

   A61K 36/89 20060101ALI20161216BHJP

   A61K 36/488 20060101ALI20161216BHJP

   A61K 36/899 20060101ALI20161216BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20161216BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/015

   A61K31/198

   A61K31/055

   A61K31/216

   A61K31/4415

   A61K31/59

   A61K31/4188

   A61K33/32

   A61K33/06

   A61K33/26

   A61K33/28

   A61K33/24

   A61K36/89

   A61K36/488

   A61K36/899

   A61P27/02

【審査請求】未請求

【請求項の数】6

【出願形態】ＯＬ

【全頁数】13

(21)【出願番号】特願2015-127861(P2015-127861)

(22)【出願日】2015年6月25日

(71)【出願人】

【識別番号】398028503

【氏名又は名称】株式会社東洋新薬

(74)【代理人】

【識別番号】100120086

【弁理士】

【氏名又は名称】▲高▼津 一也

(72)【発明者】

【氏名】長崎 歩

(72)【発明者】

【氏名】鍔田 仁人

(72)【発明者】

【氏名】山口 和也

(72)【発明者】

【氏名】高垣 欣也

【テーマコード（参考）】

4C086

4C088

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC18

4C086CB28

4C086DA14

4C086HA03

4C086HA04

4C086HA08

4C086HA09

4C086HA11

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA16

4C086MA35

4C086MA37

4C086MA41

4C086MA43

4C086MA52

4C086MA58

4C086NA05

4C086ZA33

4C088AB59

4C088AB74

4C088AB83

4C088MA02

4C088MA16

4C088MA35

4C088MA37

4C088MA41

4C088MA43

4C088MA52

4C088MA58

4C088NA05

4C088ZA33

4C206AA01

4C206AA02

4C206BA04

4C206CA19

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4C206DB56

4C206FA53

4C206KA01

4C206MA02

4C206MA04

4C206MA10

4C206MA30

4C206MA36

4C206MA55

4C206MA57

4C206MA61

4C206MA63

4C206MA72

4C206MA78

4C206NA05

4C206NA14

4C206ZA33

(57)【要約】

【課題】 網膜色素上皮細胞を活性酸素のダメージからより有効に保護し、網膜障害を抑制することが可能な網膜保護組成物を提供すること。
【解決手段】 ルテインと、葛、稲、及びココヤシから選ばれる少なくとも１種の植物素材などの特定の成分とを有効成分として含有することを特徴とする網膜保護組成物である。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ルテインと、下記（ａ）〜（ｄ）からなる群より選ばれる少なくとも１種の成分とを有効成分として含有することを特徴とする網膜保護組成物。
（ａ）葛、稲、及びココヤシから選ばれる少なくとも１種の植物素材
（ｂ）アルギニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、トリプトファン、及びチロシンから選ばれる少なくとも１種のアミノ酸
（ｃ）没食子酸、及びクロロゲン酸から選ばれる少なくとも１種のポリフェノール
（ｄ）ビタミンＢ１、ビタミンＤ３、ビオチン、ビタミンＫ、カルシウム、マンガン、亜鉛、鉄、モリブデン、及びクロムから選ばれる少なくとも１種のビタミン・ミネラル類

【請求項2】

網膜保護作用を有する眼機能維持剤であることを特徴とする請求項１記載の網膜保護組成物。

【請求項3】

ルテインと（ａ）〜（ｄ）からなる群より選ばれる少なくとも１種の成分とからなる有効成分を添加して得たことを特徴とする請求項１又は２記載の網膜保護組成物。

【請求項4】

経口用であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか記載の網膜保護組成物。

【請求項5】

錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、又は液剤であることを特徴とする請求項４記載の網膜保護組成物。

【請求項6】

請求項１〜５のいずれか記載の網膜保護組成物を摂取させることを特徴とする眼機能維持方法（ただし、医療行為を除く）。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、網膜保護組成物に係り、詳しくは、ルテイン及び特定の他の成分を有効成分とする網膜保護組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

視細胞の修復や再生に関与している網膜色素上皮の機能は、加齢とともに低下していくことが知られている。若い頃は、体内に、細胞内に発生した活性酸素を分解するＳＯＤ酵素が十分にあり、活性酸素による悪影響を防いでいるが、加齢とともにＳＯＤ酵素の働きが低下し、網膜色素上皮の機能も低下することになる。

【0003】

一方、ルテインは、網膜の黄斑部や水晶体にゼアキサンチンと共に存在し、ＳＯＤ様作用を有し、眼の中に生成した活性酸素を除去するといわれており、眼の機能維持や、白内障、加齢黄斑変性等の予防・治療に効果があることが知られている（例えば、特許文献１〜２参照）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特開２００３−２３８４４２号公報

【特許文献2】特開２００５−２８７３７６号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明の課題は、網膜色素上皮細胞を活性酸素のダメージから有効に保護し、網膜障害を抑制することが可能な網膜保護組成物を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明者らは、網膜において重要な役割を果たす網膜色素上皮細胞の活性酸素からの保護について鋭意調査・研究した結果、ルテインと特定の他の成分とを組み合わせることにより、高い網膜色素上皮細胞保護効果が得られることを見いだし、本発明を完成するに至った。すなわち、ルテインと、網膜色素上皮細胞保護能がほとんどないか、その能力が小さい特定の他の成分を組み合わせることにより、網膜色素上皮細胞の活性酸素によるダメージをより有効に抑制することができることを見いだした。

【0007】

すなわち、本発明は、ルテインと、下記（ａ）〜（ｄ）からなる群より選ばれる少なくとも１種の成分とを有効成分として含有することを特徴とする網膜保護組成物に関する。
（ａ）葛、稲、及びココヤシから選ばれる少なくとも１種の植物素材
（ｂ）アルギニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、トリプトファン、及びチロシンから選ばれる少なくとも１種のアミノ酸
（ｃ）没食子酸、及びクロロゲン酸から選ばれる少なくとも１種のポリフェノール
（ｄ）ビタミンＢ１、ビタミンＤ３、ビオチン、ビタミンＫ、カルシウム、マンガン、亜鉛、鉄、モリブデン、及びクロムから選ばれる少なくとも１種のビタミン・ミネラル類

【0008】

本発明の網膜保護組成物は、網膜保護作用を有する眼機能維持剤として用いることができる。

【0009】

本発明の網膜保護組成物は、ルテインと（ａ）〜（ｄ）からなる群より選ばれる少なくとも１種の成分とからなる有効成分を添加して得たものであってもよい。

【0010】

また、本発明の網膜保護組成物は、経口用であることが好ましく、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、又は液剤であることが好ましい。

【0011】

また、本発明は、上記本発明の網膜保護組成物を摂取させることを特徴とする眼機能維持方法（ただし、医療行為を除く）に関する。

【発明の効果】

【0012】

本発明の網膜保護組成物によれば、網膜色素上皮細胞を活性酸素のダメージから有効に保護し、網膜障害を抑制することができる。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】本発明の網膜保護組成物（ルテイン＋植物素材）をヒト網膜色素上皮細胞（ＡＲＰＥ−１９）に適用した場合の酸化ストレスマーカーであるＴＧＦβ１の発現量を示す図であり、左上図が植物素材として葛を用いたものを示し、右上図が植物素材として稲（米ぬか）を用いたものを示し、左下図が植物素材としてココヤシ（ココナッツ）を用いたものを示す。

【図2】本発明の網膜保護組成物（ルテイン＋アミノ酸）をヒト網膜色素上皮細胞（ＡＲＰＥ−１９）に適用した場合の酸化ストレスマーカーであるＴＧＦβ１の発現量を示す図であり、左上図がアミノ酸としてアルギニンを用いたものを示し、右上図がアミノ酸としてフェニルアラニンを用いたものを示し、左下図がアミノ酸としてセリンを用いたものを示し、右下図がアミノ酸としてトレオニンを用いたものを示す。

【図3】本発明の網膜保護組成物（ルテイン＋アミノ酸）をヒト網膜色素上皮細胞（ＡＲＰＥ−１９）に適用した場合の酸化ストレスマーカーであるＴＧＦβ１の発現量を示す図であり、左図がアミノ酸としてトリプトファンを用いたものを示し、右図がアミノ酸としてチロシンを用いたものを示す。

【図4】本発明の網膜保護組成物（ルテイン＋ポリフェノール）をヒト網膜色素上皮細胞（ＡＲＰＥ−１９）に適用した場合の酸化ストレスマーカーであるＴＧＦβ１の発現量を示す図であり、左図がポリフェノールとして没食子酸を用いたものを示し、右図がポリフェノールとしてクロロゲン酸を用いたものを示す。

【図5】本発明の網膜保護組成物（ルテイン＋ビタミン類）をヒト網膜色素上皮細胞（ＡＲＰＥ−１９）に適用した場合の酸化ストレスマーカーであるＴＧＦβ１の発現量を示す図であり、左上図がビタミン類としてビタミンＢ１を用いたものを示し、右上図がビタミン類としてビタミンＤ３を用いたものを示し、左下図がビタミン類としてビオチンを用いたものを示し、右下図がビタミン類としてビタミンＫを用いたものを示す。

【図6】本発明の網膜保護組成物（ルテイン＋ミネラル類）をヒト網膜色素上皮細胞（ＡＲＰＥ−１９）に適用した場合の酸化ストレスマーカーであるＴＧＦβ１の発現量を示す図であり、左上図がミネラル類としてカルシウムを用いたものを示し、右上図がミネラル類としてマンガンを用いたものを示し、左下図がミネラル類として亜鉛を用いたものを示し、右下図がミネラル類として鉄を用いたものを示す。

【図7】本発明の網膜保護組成物（ルテイン＋ミネラル類）をヒト網膜色素上皮細胞（ＡＲＰＥ−１９）に適用した場合の酸化ストレスマーカーであるＴＧＦβ１の発現量を示す図であり、左図がミネラル類としてモリブデンを用いたものを示し、右図がミネラル類としてクロムを用いたものを示す。

【発明を実施するための形態】

【0014】

本発明の網膜保護組成物は、ルテインと、下記（ａ）〜（ｄ）からなる群より選ばれる少なくとも１種の成分（以下、他成分ということがある）とを有効成分として含有することを特徴とする。ルテインと共に用いられる下記（ａ）〜（ｄ）の成分は、１種単独（例えば（ａ）成分）で用いてもよいし、２種以上組み合わせて用いてもよい。他成分を２種以上組み合せて用いる場合、ルテインと相乗効果の高い他成分同士を組み合わせることが好ましい。

【0015】

本発明の網膜保護組成物は、網膜色素上皮細胞を活性酸素のダメージからより有効に保護し、網膜障害を抑制することができ、眼の加齢を遅延させ、眼の機能維持を図ることができる。また、加齢黄斑変性、網膜色素変性症、中心性網脈絡膜症、黄斑部網膜上皮形成症、黄斑円孔等の網膜疾患の発生を抑制することができる。したがって、本発明の網膜保護組成物は、眼機能維持剤、網膜保護剤、網膜障害抑制剤、網膜疾患予防剤等として用いることができる。

【0016】

［ルテイン］
本発明に用いられるルテインは、植物の葉、花、果実等に存在するカロテノイドの一種であり、植物由来のものを用いることができる。例えば、ルテインを多く含むマリーゴールド由来のものを使用することができる。また、合成により製造されたものを用いることもできる。

【0017】

［他成分］
（ａ）植物素材
本発明の網膜保護組成物においては、ルテインと共に、有効成分として、葛、稲、及びココヤシから選ばれる少なくとも１種の植物素材を用いることが好ましい。

【0018】

これらの植物素材は、葉、茎、根、花、実、幹、枝等、植物のいずれの部位であってもよく、植物素材そのもの（乾燥物を含む）の他、その粉砕物、搾汁、抽出物等の植物素材処理物を用いることができる。粉砕物としては、粉末、顆粒等が挙げられる。絞汁や抽出物は、液状であってもよいが、ペースト状や乾燥粉末として用いることもできる。抽出物は、適当な溶媒を用いて抽出することに得ることができ、溶媒としては、例えば、水（熱水）、エタノール、含水エタノールを用いることができる。これらの植物素材は、市販されているものを使用することができる。

【0019】

葛は、マメ科クズ属のつる性の多年草植物である。本発明の植物素材として用いる部位としては、花、根が好ましく、花が特に好ましい。葛花としては、蕾から全開した花までのいずれの過程で採取したものを用いてもよく、各過程で採取したものを混合して用いることもできる。葛の種類としては、特に制限はないが、プエラリア・トムソニイ（Pueraria thomsonii）、プエラリア・ロバータ（Pueraria lobata）、プエラリア・スンバーギアナ（Pueraria thunbergiana）等を例示することができる。

【0020】

稲は、イネ科イネ属の植物である。本発明の植物素材として用いる部位としては、玄米の外皮や胚が好ましく、具体的には、玄米を精白する際に副産物として得られる米ぬかを用いることが好ましい。稲の種類としては、特に制限はなく、ジャポニカ種、インディカ種等を挙げることができる。

【0021】

ココヤシは、ヤシ科の植物であり、本発明の植物素材として用いる部位としては、果実（胚乳）が好ましい。

【0022】

（ｂ）アミノ酸
本発明の網膜保護組成物においては、ルテインと共に、有効成分として、アルギニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、トリプトファン、及びチロシンから選ばれる少なくとも１種のアミノ酸（塩を含む）を用いることが好ましい。塩としては、例えば、ナトリウム塩、塩酸塩等を挙げることができる。

【0023】

（ｃ）ポリフェノール
本発明の網膜保護組成物においては、ルテインと共に、有効成分として、没食子酸、及びクロロゲン酸から選ばれる少なくとも１種のポリフェノールを用いることが好ましい。

【0024】

（ｄ）ビタミン・ミネラル類
本発明の網膜保護組成物においては、ルテインと共に、有効成分として、ビタミンＢ１、ビタミンＤ３、ビオチン、ビタミンＫ、カルシウム、マンガン、亜鉛、鉄、モリブデン、及びクロムから選ばれる少なくとも１種のビタミン・ミネラル類を用いることが好ましい。なお、本発明のミネラル類としてのカルシウム、マンガン、亜鉛、鉄、モリブデン、及びクロムは、これらの金属を含む化合物の形態を含む。

【0025】

本発明の網膜保護組成物は、網膜保護作用を有する眼機能維持剤として用いることができ、かかる眼機能維持剤は、ルテイン及び所定の他成分を含有し、眼機能維持に用いられる点において、製品として他の製品と区別することができるものであれば特に制限されるものではない。例えば、本発明に係る製品の本体、包装、説明書、宣伝物のいずれかに網膜保護効果、網膜障害抑制効果、網膜疾患予防効果等の眼の機能維持効果の機能がある旨を表示したものが本発明の範囲に含まれる。例えば、医薬品（医薬部外品を含む）や、化粧品や、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品等の所定機関より効能の表示が認められた機能性食品などのいわゆる健康食品等を挙げることができる。いわゆる健康食品においては、「眼（目）の黄斑部の色素量を維持する」、「加齢による眼（目）の悩みに」、「光の刺激から眼（目）を保護する」、「ブルーライト対策に」、「液晶ライト対策に」、「読書、パソコン、スマホに疲れたら」、「ぼんやりが気になる方に」、「コントラスト感度の改善に」、「疲れ眼（目）に」、「眼（目）の調子を整える」、「眼（目）の疲れを取る」等を表示したものを例示することができる。本発明の網膜保護組成物は、上記の効果が気になる人であれば性別や年齢に関係なく摂取することができるが、本発明の網膜保護組成物の効果をより有効に享受することができることから、疾病者を除く健常者が摂取することが望ましい。また、眼を長時間酷使する作業を行う者が摂取することが望ましく、特にパソコンなどで長時間作業を行うデスクワーク者が摂取することが望ましい。

【0026】

また、本発明の網膜保護組成物の形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、液剤、粒状剤、棒状剤、板状剤、ブロック状剤、固形状剤、丸状剤、ペースト状剤、クリーム状剤、カプレット状剤、ゲル状剤、チュアブル状剤、スティック状剤等を挙げることができる。これらの中でも、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、液剤の形態が特に好ましい。具体的には、サプリメントや、ペットボトル、缶、瓶等に充填された容器詰飲料や、水（湯）、牛乳、果汁、青汁等に溶解して飲むためのインスタント粉末飲料、インスタント顆粒飲料を例示することができる。これらは食事の際などに手軽に飲用しやすく、また嗜好性を高めることができるという点で好ましい。

【0027】

本発明の網膜保護組成物におけるルテイン及び他成分（有効成分）の含有量としては、その効果の奏する範囲で適宜含有させればよい。

【0028】

一般的には、本発明の網膜保護組成物が医薬品やサプリメント（錠剤，カプセル剤）の場合には、有効成分が乾燥質量換算で全体の０．０１〜１００質量％含まれていることが好ましく、０．１〜８５質量％含まれていることがより好ましく、０．５〜７０質量％含まれていることがさらに好ましい。

【0029】

本発明の網膜保護組成物が容器詰飲料（液剤）である場合には、有効成分が乾燥質量換算で全体の０．０１〜１５質量％含まれていることが好ましく、０．０３〜１２．５質量％含まれていることがより好ましく、０．０５〜１０質量％含まれていることがさらに好ましい。

【0030】

また、本発明の網膜保護組成物がインスタント粉末飲料（粉末剤）、インスタント顆粒飲料（顆粒剤）である場合には、有効成分が乾燥質量換算で全体の０．１〜８０質量％含まれていることが好ましく、０．５〜７０質量％含まれていることがより好ましく、１〜６０質量％含まれていることがさらに好ましい。

【0031】

本発明の効果をより有効に発揮させるためには、有効成分が乾燥質量換算で本発明の網膜保護組成物全体（水分を除く）の８０質量％以上含まれていることが好ましく、９０質量％以上含まれていることがより好ましく、９５質量％以上含まれていることがさらに好ましく、１００質量％であることが特に好ましい。さらに、本発明の網膜保護組成物が成分（ａ）〜（ｄ）のいずれかを含有する場合、その含有される成分は、本発明における有効成分のみで構成されることが好ましい。すなわち、本発明の網膜保護組成物が例えば成分（ａ）（植物素材）を含む場合には、葛、稲、及びココヤシ以外の植物素材を含まないように構成することが好ましい。

【0032】

本発明の網膜保護組成物の摂取量としては特に制限はないが、本発明の効果をより顕著に発揮させる観点から、１日当たりの有効成分の摂取量が、１ｍｇ／日以上となるように摂取することが好ましく、５ｍｇ／日以上となるように摂取することがより好ましく、１０ｍｇ／日以上となるように摂取することが特に好ましい。その上限は特に制限されないが、例えば、４ｇ／日であり、好ましくは２ｇ／日である。

【0033】

本発明の網膜保護組成物は、1日の摂取量が前記摂取量となるように、１つの容器に、又は例えば２〜３の複数の容器に分けて、1日分として収容することができる。

【0034】

ルテイン及び他成分の配合質量比としては、乾燥質量換算で、０．５：１〜７０：１の範囲であることが好ましく、０．７５：１〜６０：１の範囲であることがより好ましく、１：１〜６０：１の範囲であることがさらに好ましく、１：１〜５０：１の範囲であることが特に好ましい。ルテイン及び他成分の配合比が、上記範囲であることにより、本発明の効果をより有効に発揮することができる。

【0035】

本発明の網膜保護組成物は、必要に応じて、経口剤として許容される有効成分以外の成分を添加して、公知の方法によって製造することができる。

【0036】

また、本発明の経口剤としての網膜保護組成物としては、有効成分を含有する網膜保護組成物の他、食品に対して有効成分を添加して得た網膜保護組成物（網膜保護食品）を挙げることができ、例えば、通常の食品（天然の食品を含む）に比して本発明の有効成分含有量を増加させた食品や、本発明の有効成分を通常含まない食品に対して有効成分を添加した食品を挙げることができる。有効成分の添加は、それぞれの成分を別々に添加してもよいし、同時に添加してもよく、また、有効成分以外の他の成分と共に添加してもよい。

【0037】

本発明の網膜保護食品としては、例えば、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料、スムージー、青汁等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳、ヨーグルト等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及びその加工食品；ソース、醤油等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、牛丼、ハヤシライス、オムライス、おでん、マーボドーフ、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール、各種ソース、各種スープ等のレトルトパウチ食品などを挙げることができる。

【0038】

本発明の眼機能維持方法としては、上記説明した本発明の網膜保護組成物を摂取させることを特徴とするが、医療行為は含まれない。本発明の網膜保護組成物は、上記の効果が気になる人であれば性別や年齢に関係なく摂取させことができるが、本発明の網膜保護組成物の効果をより有効に享受することができることから、疾病者を除く健常者に摂取させることが望ましい。また、眼を長時間酷使する作業を行う者に摂取させることが望ましく、特にパソコンなどで長時間作業を行うデスクワーク者に摂取させることが望ましい。発明の方法としては、例えば、レストラン等の飲食店において、本発明の網膜保護食品を提供することにより、眼機能維持効果を得る方法を挙げることができる。

【実施例】

【0039】

以下、本発明を実施例に基づき説明する。
［実施例１］
１．細胞培養
（１）３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーター内で、７５ｃｍ^２フラスコを用いて、ヒト網膜色素上皮細胞（ＡＲＰＥ−１９）を培養した。培地はＤＭＥＭ培地とＦ−１２ＨＡＭ培地を１：１で混合し、ＦＢＳが１０％となるように調製したものを用いた。
（２）トリプシン処理により浮遊させた細胞を、７５ｃｍ^２フラスコから９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅの各ｗｅｌｌに１．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で播種した。
（３）３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーター内で７２時間前培養した。
（４）各ｗｅｌｌより培地を除去後、所定濃度に調製した被験物質含有培地を２００μＬずつ添加し、ＣＯ_２インキュベーター内で２０時間培養した。

【0040】

なお、ルテインと他成分との併用サンプルについては、それぞれ２倍濃度の被験物質含有培地を調製し、１００μＬずつ添加することで目的の濃度とした。また、ｃｏｎｔｒｏｌは、被験物質をＤＭＳＯに溶解したものに対しては０．５％ＤＭＳＯ含有培地を用いて調製し、その他の被験物質に対しては０．２５％ＤＭＳＯ培地を用いて調製した。

【0041】

ルテインについては、市販のルテインを用いた。ルテインと共に用いる他成分としては、表１〜表４に示す物質を用いた。

【0042】

（５）２０時間培養後、無血清培地で１．５ｍＭまたは２．５ｍＭに調製した過酸化水素水を５０μＬ添加し２０時間培養した。他成分が、植物素材、ビタミン類のものについては、過酸化水素水終濃度３００μＭとし、他成分が、アミノ酸、ミネラル類、ポリフェノールのものについては、過酸化水素水終濃度５００μＭとした。ｃｏｎｔｒｏｌについては、試験区と過酸化水素水終濃度を合わせた。

【0043】

２．ＴＧＦβ１の発現解析
（１）２０時間培養後、培養した細胞から培地を除去し、ＣｅｌｌＡｍｐ^ＴＭ Ｄｉｒｅｃｔ ＲＮＡ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔ ｆｏｒ ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）（Ｔａｋａｒａ製）を用いて、ＲＮＡを回収し、Ｎ＝３のサンプルを混合して１つのＲＮＡサンプルとした。
（２）検量線を作成するため、１つのサンプルを３倍、９倍希釈した。Ｏｎｅ Ｓｔｅｐ ＳＹＢＲ（登録商標） ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ^ＴＭ ＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ ＩＩ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）（Ｔａｋａｒａ製）を用いてＰＣＲを実施した。プライマーはＴＧＦβ１（ＱＩＡＧＥＮ製）とＲＰＬＰ０（ＱＩＡＧＥＮ製）を使用した。
（３）１倍、３倍、９倍希釈したサンプルから作成した検量線を用いて、各サンプルにおける遺伝子発現量を算出した。解析は相対定量により行い、ＲＰＬＰ０（ハウスキーピング遺伝子）を内部標準として ｍＲＮＡ量を補正した。

【0044】

その結果を表１〜表４、及び図１〜図７に示す。

【0045】

各図は、左から、「コントロール（過酸化水素添加）」、「ルテインの単独添加」、「他成分の単独添加」、「ルテイン＋他成分添加」の結果を表す。また、グラフ下部の説明における数値は、サンプル濃度を示し、例えば、図１の左上のグラフの「ルテイン_０．６２」は、ルテイン０．６２（μｇ／ｍＬ）を示す。添加成分の濃度単位は、すべてのグラフにおいて、μｇ／ｍＬである。縦軸は「％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ」を示す。

【0046】

【表1】

【0047】

葛については、花の熱水抽出物（乾燥粉末）を用いた。
米ぬかについては、市販品を用いた。
ココナッツについては、市販のココナッツミルクを乾燥後、油分を除いたものを用いた。
ヨモギについては、生葉の微粉砕末を用いた。
マキベリーについては、市販品の果実の乾燥粉末を用いた。

【0048】

【表2】

【0049】

【表3】

【0050】

【表4】

【0051】

表１〜表４、及び図１〜図７に示すように、ルテインと、本発明の特定の他成分を組み合わせることにより、ヒト網膜色素上皮細胞（ＡＲＰＥ−１９）の酸化ストレスによるＴＧＦβ１の発現量が相乗的に低下した。したがって、本発明の網膜保護組成物によれば、網膜色素上皮細胞を有効に保護することができる。

【0052】

［実施例２］（錠剤の製造）
下記成分からなるタブレット（２００ｍｇ）を製造した。

【0053】

ルテイン（マリーゴールド抽出物） １０ｍｇ
ビルベリー抽出物 ６０ｍｇ
ブルーベリー抽出物 ５０ｍｇ
ステアリン酸カルシウム ５ｍｇ
アルギニン １．５ｍｇ
フェニルアラニン １．５ｍｇ
トリプトファン １ｍｇ
クロロゲン酸 １ｍｇ
ビタミンＢ１ ０．５ｍｇ
ビタミンＫ ０．５ｍｇ
塩化カルシウム ０．５ｍｇ
グルコン酸亜鉛 ０．５ｍｇ
セルロース 残部

【0054】

上記錠剤は一日に２粒を噛まずに水と共に服用する。

【0055】

［実施例３］（カプセル剤の製造）
下記混合物をソフトカプセルに封入し、カプセル剤を製造した。

【0056】

重量比
ルテイン（マリーゴールド抽出物） ３０％（ルテインとして２０ｍｇ）
紅花油 ５０％
ミツロウ １０％
葛の花エキス ２％
ブルーベリーエキス １％
水溶性β−カロテン末 ０．２％
ヘマトコッカス藻色素 ０．２％
ビタミンＢ１２ ０．０１％
ビオチン ０．０１％
没食子酸 ０．０１％
ビタミンＥ ０．０１％
塩化鉄 ０．０１％

【0057】

上記カプセル剤は、一日に１粒を噛まずに水と共に服用する。

【0058】

［実施例４］（顆粒剤の製造）
下記成分を混合して常法により顆粒剤（３０００ｍｇ）を製造した。

【0059】

ルテイン（マリーゴールド抽出物） １５ｍｇ
松樹皮抽出物 ５０ｍｇ
ココナッツミルク ２００ｍｇ
アスパルテーム ５００ｍｇ
チロシン ５０ｍｇ
トレオニン ５０ｍｇ
トリプトファン ３０ｍｇ
クロロゲン酸 ２０ｍｇ
ビタミンＢ１ ５ｍｇ
ビタミンＫ ５ｍｇ
塩化カルシウム ２ｍｇ
グルコン酸銅 １ｍｇ
デキストリン 残部

【0060】

上記顆粒剤は一日に１包を水と共に服用する。

【0061】

［実施例６］（液剤の製造）
下記成分からなる液剤（１２５ｍＬ）を製造した。

【0062】

ルテイン（マリーゴールド抽出物） １８ｍｇ
ビルベリー抽出物 １５０ｍｇ
カシス抽出物 ５０ｍｇ
米ぬか抽出物 ２５ｍｇ
ビタミンＣ １０ｍｇ
クエン酸 ５ｍｇ
アルギニン １．５ｍｇ
フェニルアラニン １．５ｍｇ
トリプトファン １ｍｇ
ビタミンＢ１ ０．５ｍｇ
ビタミンＫ ０．５ｍｇ
塩化カルシウム ０．５ｍｇ
グルコン酸亜鉛 ０．５ｍｇ
水 残部

【0063】

上記液剤は一日１パックを飲用する。

【産業上の利用可能性】

【0064】

本発明の網膜保護組成物は、高い網膜保護効果を有し、経口剤として用いることができることから、本発明の産業上の有用性は高い。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】