特開 2018-23326 発酵物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】特開2018-23326(P2018-23326A)

(43)【公開日】2018年2月15日

(54)【発明の名称】発酵物

(51)【国際特許分類】

   C12P 21/00 20060101AFI20180119BHJP

   C07K 14/78 20060101ALI20180119BHJP

   C07K 1/12 20060101ALI20180119BHJP

【ＦＩ】

   C12P21/00 A

   C07K14/78

   C07K1/12

【審査請求】未請求

【請求項の数】7

【出願形態】ＯＬ

【全頁数】9

(21)【出願番号】特願2016-158100(P2016-158100)

(22)【出願日】2016年8月10日

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 〔発行者〕 株式会社ヘルスビジネスマガジン 〔刊行物名〕 ヘルスライフビジネス 〔発行日〕 平成２８年２月１５日

(71)【出願人】

【識別番号】516046835

【氏名又は名称】株式会社ラビジェ

(71)【出願人】

【識別番号】591210622

【氏名又は名称】ヤヱガキ醗酵技研株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110000914

【氏名又は名称】特許業務法人 安富国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】高垣 輝嘉

(72)【発明者】

【氏名】杉本 隆史

(72)【発明者】

【氏名】石原 伸治

(72)【発明者】

【氏名】平田 徹

【テーマコード（参考）】

4B064

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG01

4B064CA02

4B064CB06

4B064CD20

4B064DA20

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA52

4H045EA15

4H045FA73

(57)【要約】

【課題】低分子化とは別の機能を合わせ持つコラーゲン原料を提供する。
【解決手段】本発明は、コラーゲンの乳酸菌による発酵物に関し、乳酸菌はラクトコッカス属微生物であることが好ましく、ラクトコッカス属微生物はラクトコッカス・ラクティスであることが好ましい。また、本発明は、コラーゲンを乳酸菌で発酵させる工程を有する、コラーゲンの低分子化方法に関する。また、本発明は、コラーゲンを乳酸菌で発酵させる工程を有する、アルギニン含量の低減方法に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

コラーゲンの乳酸菌による発酵物。

【請求項2】

乳酸菌がラクトコッカス属微生物である、請求項１に記載の発酵物。

【請求項3】

ラクトコッカス属微生物がラクトコッカス・ラクティスである、請求項２に記載の発酵物。

【請求項4】

コラーゲンが魚類由来のコラーゲンである、請求項１〜３のいずれかに記載の発酵物。

【請求項5】

発酵物において、コラーゲンの重量平均分子量が３２００以下である、請求項１〜４のいずれかに記載の発酵物。

【請求項6】

コラーゲンを乳酸菌で発酵させる工程を有する、コラーゲンの低分子化方法。

【請求項7】

コラーゲンを乳酸菌で発酵させる工程を有する、アルギニン含量の低減方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、発酵物に関し、特にコラーゲンの乳酸菌による発酵物に関する。

【背景技術】

【0002】

コラーゲンは美容用途などに有用な素材として注目されており、なかでもコラーゲンを酵素によって低分子化したコラーゲンペプチドは、高分子のコラーゲンに比べて体内への吸収性が高まることが期待できることから、高機能のコラーゲン原料として知られている（特許文献１）。しかしながら、消費者の多様化するニーズに応えるためには、低分子化だけでは不充分であり、低分子化とは別の機能を合わせ持つコラーゲン原料を提供することが求められている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【特許文献1】特開２００４−２３８３６５号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

本発明は、低分子化とは別の機能を合わせ持つコラーゲン原料を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0005】

本発明者らは、コラーゲンを低分子化する方法について、種々検討したところ、コラーゲンを乳酸菌で発酵させると、コラーゲンが低分子化されるだけではなく、乳酸菌体の機能を合わせ持つことも期待でき、さらにアルギニン含量の低減も実現できることを見出し、本発明を完成した。

【0006】

すなわち、本発明は、コラーゲンの乳酸菌による発酵物に関する。

【0007】

乳酸菌はラクトコッカス属微生物であることが好ましい。

【0008】

ラクトコッカス属微生物はラクトコッカス・ラクティスであることが好ましい。

【0009】

コラーゲンは魚類由来のコラーゲンであることが好ましい。

【0010】

発酵物において、コラーゲンの重量平均分子量は３２００以下であることが好ましい。

【0011】

また、本発明は、コラーゲンを乳酸菌で発酵させる工程を有する、コラーゲンの低分子化方法に関する。

【0012】

また、本発明は、コラーゲンを乳酸菌で発酵させる工程を有する、アルギニン含量の低減方法に関する。

【発明の効果】

【0013】

本発明によれば、コラーゲンを乳酸菌で発酵させることで、コラーゲンが低分子化され、得られた発酵物を摂取した場合において、体内への吸収性がより高まることが期待できる。また、本発明の発酵物には発酵工程で使用した乳酸菌も含まれるため、乳酸菌自体の機能を合わせ持つことも期待できる。さらに、該発酵により、アルギニン含量が原料コラーゲンに比べて低減されることも期待できる。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】実施例１で得られた発酵物の分子量分布を示すクロマトグラムである。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本発明の発酵物は、コラーゲンの乳酸菌による発酵物であることを特徴とする。

【0016】

コラーゲンとしては、特に限定されず、たとえば動物などから抽出したものが使用できる。由来する動物種についても特に限定されず、たとえばティラピア等の淡水魚類、タラ、鮭等の海水魚類、牛、豚等の哺乳動物、鶏等の鳥類が挙げられる。この中でも、魚類由来のものが好ましく、ティラピア由来のものがより好ましい。また、由来する部位についても特に限定されず、魚類を使用する場合には、たとえば鱗、皮、骨、軟骨、ひれ、臓器などが挙げられる。この中でも鱗が好ましい。

【0017】

また、コラーゲンとしては、前述したコラーゲンを酵素によって低分子化したコラーゲンペプチドを使用してもよい。コラーゲンペプチドを得るための酵素としては、特に限定されず、たとえばプロテアーゼ、ペプチダーゼ、コラーゲナーゼなどが挙げられる。これらの酵素は単独で用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。酵素反応の条件は特に限定されないが、温度は４０℃以下が好ましく、３５〜３８℃がより好ましい。

【0018】

乳酸菌としては、コラーゲンを含む培地中で増殖するものであれば特に限定されず、たとえばラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属などに属する微生物が挙げられるが、ラクトコッカス属、ラクトバチルス属が好ましい。ラクトコッカス属に属する乳酸菌としては、たとえばラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ラクトコッカス・ラクティス サブスピーシーズラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）などが挙げられるが、ラクトコッカス・ラクティス サブスピーシーズラクティスが好ましい。前述した属および種に該当する乳酸菌であれば市販品だけでなく、独自に分離した菌株でも使用することができる。

【0019】

発酵方法は、コラーゲンを含む培地を使用する限り、特に限定されず、たとえば静置培養、ｐＨを一定にした中和培養や、回分培養、連続培養等、菌体が良好に生育する条件であれば、特に制限はない。

【0020】

必要に応じて発酵促進物質、例えば糖類、澱粉、デキストリンなどの炭素源、酵母エキス、ペプトンなどの窒素源、ビタミン類、ミネラル類などを加えることができる。

【0021】

糖類としては、たとえばグルコース、アラビノース、ショ糖、乳糖、ソルビトール、フラクトース、トレハロースが挙げられる。なかでもグルコース、アラビノースを含有することが好ましい。

【0022】

培地中のコラーゲンの濃度は５〜４０重量％が好ましく、１５〜３０重量％がより好ましい。糖類を使用する場合、使用量は培地中に０．１〜５重量％が好ましく、０．５〜２重量％がより好ましい。

【0023】

発酵温度は特に限定されないが、２０〜４２℃が好ましく、２５〜３７℃がより好ましい。４２℃を超えると、培養できなくなる傾向があり、２０℃未満では、培養時間が長くなる傾向がある。

【0024】

発酵時間は特に限定されないが、４〜１２０時間が好ましく、１２〜４８時間がより好ましく、１８〜３６時間がさらに好ましい。

【0025】

発酵時の雰囲気は限定されないが、好気条件下であることが好ましい。

【0026】

乳酸菌の増殖能および発酵能を活性化させるため、発酵工程前に乳酸菌を前培養することが好ましい。前培養は前述した発酵条件で行うことができる。

【0027】

前述の発酵工程終了後、得られた発酵物をそのまま用いることもできるが、必要に応じて、殺菌処理、濃縮処理を行ってもよい。また、発酵物の形態についても特に限定されず、液状、粉末状等の形態で用いることができる。

【0028】

前述の発酵工程によって、コラーゲンが低分子化される。本発明の発酵物は、低分子化されたコラーゲンとともに、発酵工程で使用した乳酸菌を含む点に特徴がある。また、原料コラーゲンに比べて、発酵物のアルギニン含量が低減する。ここで、発酵物のアルギニン含量とは、発酵物中の遊離アルギニン、および、低分子化されたコラーゲンの構成アルギニンの合計量をいう。アルギニン含量が低減する理由としては、コラーゲンが発酵により低分子化される際に遊離したアルギニンが、乳酸菌により代謝されることによるものと推測される。

【0029】

本発明の発酵物において、コラーゲンの重量平均分子量は３２００以下であることが好ましく、３０００以下であることがより好ましく、２８００以下であることがさらに好ましい。

【0030】

本発明の発酵物において、乳酸菌数は、固体基準で１．０×１０^１０ｃｆｕ／ｇ以上が好ましく、１．５×１０^１０ｃｆｕ／ｇ以上がより好ましく、２．５×１０^１０ｃｆｕ／ｇ以上がさらに好ましい。

【0031】

本発明の発酵物において、アルギニン含量は５〜６ｇ／１００ｇが好ましく、５〜５．５ｇ／１００ｇがより好ましい。

【0032】

本発明の発酵物は、食品、飲料、医薬品、医薬部外品、化粧品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、栄養補助食品（サプリメント）、飼料などに適用可能である。これらの中でも食品、サプリメントが好ましい。食品の形態としては特に限定されず、たとえばゼリー、ドリンク、菓子、介護食などが挙げられる。サプリメントの形態としては、固形剤や液状剤などに適用可能であるが、錠剤、カプセル、顆粒等の固形剤が好ましい。このような食品やサプリメントを摂取することで、腸内環境改善作用、免疫賦活作用、美容・美肌作用などが期待できる。

【0033】

本発明のコラーゲンの低分子化方法は、コラーゲンを乳酸菌で発酵させる工程を有することを特徴とする。また、本発明のアルギニン含量の低減方法は、コラーゲンを乳酸菌で発酵させる工程を有することを特徴とする。発酵工程において、コラーゲン、乳酸菌は、前述のものを使用することができ、発酵は前述した条件で行うことができる。

【実施例】

【0034】

以下、実施例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらのみに限定されるものではない。

【0035】

（比較例１）コラーゲンペプチドの作製
ティラピアの鱗を希塩酸中に１時間浸漬することで脱灰処理を行い、続いて苛性ソーダを用いて中和および水洗を行った。水洗後の鱗を熱水中に投入し、９５℃で４時間以上かけてゼラチンを抽出した。得られたゼラチン溶液の固形分に対し、０．４〜０．８重量％のプロテアーゼを添加し３８℃で酵素反応を行った。反応終了後、酵素反応液の固形分に対し１〜２重量％の活性炭を添加し、ろ過助剤として珪藻土を用いたフィルターろ過、減圧濃縮および加熱殺菌（８５℃、１５分）を行ったあと、スプレードライして粉末状のコラーゲンペプチドを得た。

【0036】

（実施例１）発酵物の作製
前培養として、比較例１で得られたコラーゲンペプチド２５重量％、グルコース１重量％、残部を水とする培地１００ｍｌに、本発明者らが分離したラクトコッカス・ラクティス サブスピーシーズラクティス ＲＴ２２１株（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ ＲＴ２２１）を植菌し、３０℃で２４時間培養した。ついで、本培養として、比較例１で得られたコラーゲンペプチド２５重量％、グルコース１重量％、残部を水とする培地に対して前培養液が２重量％になるように植菌し、３０℃で２４時間培養した。培養終了後、加熱殺菌し、噴霧乾燥して、粉末状の発酵物を得た。

【0037】

（測定例１）乳酸菌数の測定
実施例１における、本培養終了後で加熱殺菌前の培養液に含まれる生菌数を、ＢＣＰ寒天培地を用いて測定し、培養液の固形分と合わせて発酵物の重量当たりの菌数を算出した。

【0038】

実施例１で得られた発酵物の乳酸菌数は、１．６×１０^１０ｃｆｕ／ｇであった。

【0039】

（測定例２）重量平均分子量の測定
実施例１で得られた発酵物、および比較例１のコラーゲンペプチドの重量平均分子量を、下記の条件にてゲルろ過クロマトグラフィーによって測定した。分子量１８９〜１２５００の分子量マーカー（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ：分子量１８９、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ：分子量４５１、ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＩＩ：分子量１０４６、Ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ：分子量１４５０、Ａｐｒｏｔｉｎｉｎ：分子量６５１２、Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｃ：分子量１２５００）の溶出時間から別途作成した検量線を用い、発酵物の溶出時間に基づき重量平均分子量を算出した。

【0040】

（ゲルろ過クロマトグラフィー試験溶液）
発酵物０．０２ｇを採取し、４５％アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸含有）１０ｍｌを加え、室温で一晩放置した後、孔径０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過し、得られた溶液を試験溶液とした。

【0041】

（ゲルろ過クロマトグラフィー分析条件）
機種：Ｓｈｏｄｅｘ ＧＰＣ−１０１（昭和電工株式会社製）
カラム：ＴＳＫｇｅｌ Ｇ２５００ＰＷ_ＸＬ（東ソー株式会社製、３００ｍｍ×７．８ｍｍ）
移動相：４５％アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸含有）
流量：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
測定波長：２２０ｎｍ

【0042】

実施例１で得られた発酵物の重量平均分子量は２８００であった。一方、比較例１のコラーゲンペプチドの重量平均分子量は３５００であった。該コラーゲンペプチドを乳酸菌で発酵させることで、重量平均分子量が７００低下することが分かった。なお、実施例１で得られた発酵物の重量平均分子量の分布を図１に示す。

【0043】

（測定例３）アミノ酸組成の測定
実施例１で得られた発酵物から乳酸菌をフィルターろ過したものを検体とし、該検体を常法で加水分解し、アミノ酸自動分析法でアミノ酸組成を測定した。同様の方法で、比較例１のコラーゲンペプチドのアミノ酸組成を測定した。その結果を表１に示す。

【0044】

【表1】

【0045】

比較例１のアルギニン含量が８．３６ｇ／１００ｇであるのに対し、実施例１のアルギニン含量は５．３４ｇ／１００ｇに低減していた。アルギニン含量が低減した理由としては、コラーゲンペプチドが低分子化される際に遊離したアルギニンが、乳酸菌により代謝されたものと推測される。

【図1】