特開 2019-99527 ペプチド含有組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】特開2019-99527(P2019-99527A)

(43)【公開日】2019年6月24日

(54)【発明の名称】ペプチド含有組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/06 20060101AFI20190603BHJP

   A23L 33/18 20160101ALI20190603BHJP

   A61P 9/14 20060101ALI20190603BHJP

   A61P 7/02 20060101ALI20190603BHJP

   A61P 1/02 20060101ALI20190603BHJP

   A61P 17/14 20060101ALI20190603BHJP

   A61P 15/10 20060101ALI20190603BHJP

   A61P 13/02 20060101ALI20190603BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20190603BHJP

   A61P 17/16 20060101ALI20190603BHJP

   A61P 27/10 20060101ALI20190603BHJP

   A61P 1/14 20060101ALI20190603BHJP

   A61K 8/64 20060101ALI20190603BHJP

   A61Q 19/08 20060101ALI20190603BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20190603BHJP

   A61Q 3/00 20060101ALI20190603BHJP

【ＦＩ】

   A61K38/06

   A23L33/18

   A61P9/14

   A61P7/02

   A61P1/02

   A61P17/14

   A61P15/10

   A61P13/02

   A61P17/00

   A61P17/16

   A61P27/10

   A61P1/14

   A61K8/64

   A61Q19/08

   A61Q19/00

   A61Q3/00

【審査請求】未請求

【請求項の数】5

【出願形態】ＯＬ

【全頁数】11

(21)【出願番号】特願2017-234361(P2017-234361)

(22)【出願日】2017年12月6日

(71)【出願人】

【識別番号】000106324

【氏名又は名称】サンスター株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】特許業務法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】正箱 尚久

(72)【発明者】

【氏名】石角 篤

(72)【発明者】

【氏名】小川 雄太郎

【テーマコード（参考）】

4B018

4C083

4C084

【Ｆターム（参考）】

4B018MD20

4B018ME02

4B018ME11

4C083AD411

4C083AD412

4C083CC02

4C083CC37

4C083EE12

4C083EE13

4C083EE22

4C084AA01

4C084AA02

4C084AA03

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA15

4C084BA23

4C084CA59

4C084MA52

4C084NA14

4C084ZA332

4C084ZA442

4C084ZA542

4C084ZA672

4C084ZA692

4C084ZA812

4C084ZA892

4C084ZA922

(57)【要約】      （修正有）

【課題】ＮＯ（一酸化窒素）産生亢進手段の提供。
【解決手段】Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドを含む組成物。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドを含む、血管弾力性向上又は維持用組成物。

【請求項2】

Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドを含む、血小板凝集抑制、歯周病又は歯肉炎の改善熱産生の改善、育毛、男性機能不全予防又は治療、頻尿の改善、しわ又はたるみの改善、肌の調子を整える、肌保水、くすみ改善、健康的な肌色維持、爪の血色を整える、視力維持、又は腸内環境の改善のための、組成物。

【請求項3】

経口組成物である、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項4】

食品組成物又は医薬品組成物である、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。

【請求項5】

対象がヒトである、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、一酸化窒素に基づく効果を奏する、特定のペプチドを含有する組成物等に関する。

【背景技術】

【0002】

一酸化窒素（ＮＯ）は、血管内皮細胞から産生されることが知られている。より詳細には、血管内皮細胞において、一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）の１種である内皮型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）によりＮＯが合成される。そして、血管内皮細胞から産生されるＮＯには、血管拡張効果（降圧効果）、血管弛緩効果及びこれに基づく血管弾力性の向上又は維持効果、並びに血小板凝集抑制効果及びこれに基づく抗動脈硬化効果、等があることも知られている。

【0003】

従って、血管内皮細胞において、ＮＯ産生を亢進させることができれば、例えば前述したようなＮＯに基づく効果を得ることができる。このようなＮＯ産生亢進手段の提供が望まれている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特開２０１２−１９７２８３号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明は、ＮＯ産生亢進手段の提供を課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明者らは、特定のペプチドを摂取することによりＮＯ産生が亢進されることを見出し、さらに改良を重ねて本発明を完成させるに至った。

【0007】

本発明は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドを含む、血管弾力性向上又は維持用組成物。
項２．
Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドを含む、血小板凝集抑制、歯周病又は歯肉炎の改善熱産生の改善、育毛、男性機能不全予防又は治療、頻尿の改善、しわ又はたるみの改善、肌の調子を整える、肌保水、くすみ改善、健康的な肌色維持、爪の血色を整える、視力維持、又は腸内環境の改善のための、組成物。
項３．
経口組成物である、項１又は２に記載の組成物。
項４．
食品組成物又は医薬品組成物である、項１〜３のいずれかに記載の組成物。
項５．
対象がヒトである、項１〜４のいずれかに記載の組成物。

【発明の効果】

【0008】

本発明により、血管におけるＮＯ産生が亢進され、これよりＮＯに基づく効果を得ることができる。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】実施例１で行った血圧降下作用の検討試験の結果を示すグラフである。図中、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は対照群の結果を示し、「ＬＲＡ ０．２５ｍｇ／ｋｇ」はＬＲＡペプチド投与群の結果を示し、「※」は対照群に対して有意差（ｐ＜０．０５）があったことを示す。また、ＳＢＰは収縮期血圧を示す。

【図2】収縮期血圧測定結果を、投与４時間後の収縮期血圧の変化量（投与０時間と比較）で示す。

【図3】ラット腸間膜動脈標本を用いてＬＲＡペプチドの血管弛緩効果を検討した際の、実験器具の概要を示す。

【図4】ラット腸間膜動脈標本を用いてＬＲＡペプチドの血管弛緩効果を検討した結果、得られたポリグラフの概要を示す。

【図5】ラット腸間膜動脈標本を用いてＬＲＡペプチドの血管弛緩効果を検討した結果、得られたポリグラフから産出した弛緩率を示す。

【発明を実施するための形態】

【0010】

以下、本発明の各実施形態について、さらに詳細に説明する。

【0011】

本発明に包含される組成物は、Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチド（本明細書において「ＬＲＡペプチド」と記載する場合がある）を含む。なお、当該組成物を、「本発明の組成物」と記載する場合がある。

【0012】

ＬＲＡペプチドの製造方法は特に制限されず、例えば、公知のペプチド合成法を用いて化学合成により調製することができる。ペプチド合成法としては、例えば、アジド法、酸クロライド法、酸無水物法、混合酸無水物法、ＤＤＣ法、活性エステル法、カルボイミダゾール法、酸化還元法などのペプチド合成法を挙げることができる。これらのペプチド合成法は、固相合成法又は液相合成法のいずれによっても行うことができる。

【0013】

上記したペプチド合成法では、アミノ基、カルボキシ基、及び／又は側鎖官能基（例えば、アルギニン（Ａｒｇ）のグアニジノ基など）を保護基により保護しておくことが好ましい。保護基としては、特に限定されず公知の保護基を用いることができ、例えば、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）、ベンジル基（Ｂｚ）、ｐ−トルエンスルホニル基（ｐ−Ｔｓ）などが挙げられる。

【0014】

また、上記したペプチド合成法によりＬＲＡペプチドを合成した後、必要に応じて、公知の方法により精製したものをＬＲＡペプチドとして用いることができる。

【0015】

ＬＲＡペプチドは、ＮＯＳ（特にｅＮＯＳ）でのＮＯ産生を亢進させる。このため、本発明の組成物は、血管におけるＮＯ産生に基づく効果を得るために有用である。このような効果としては、ＮＯの公知の効果及び公知の効果から容易に想到される効果が挙げられる。例えば、本発明の組成物は、血圧降下効果、血管弛緩効果及び特に当該効果に基づく血管弾力性の向上又は維持効果、あるいは血小板凝集抑制効果及び特に当該効果に基づく抗動脈硬化効果、を得るために好ましく用いることができる。血管弾力性向上又は維持により、特に血管のしなやかさが向上又は維持され、血管の抗老化にもつながる。また、その他にも、例えば次に記載する効果を得るために好ましく用いることができる。歯周病又は歯肉炎の改善（健全な歯肉の維持、丈夫で健康的な歯肉の維持、など）、熱産生の改善（熱産生を亢進させることで（特に肥満ぎみな方の）体重・ウエスト・周囲径を減らす、など）、育毛（育毛を促進する、毛髪の成長を助ける、脱毛の進行を予防、抜け毛又は薄毛を防ぐなど）、男性機能不全予防又は治療（男性機能を健全に保つなど）、頻尿の改善（排尿の回数を整える、夜水分を取ると心配というヒト用など）、しわ又はたるみの改善、肌の調子を整える（（特に末梢での血流を改善することで）、肌保水（乾燥を緩和する、など）、（特に血行を改善することによる）くすみの改善、健康的な肌色維持など）爪の血色を整える（健康的な爪の維持に役立つなど）網膜の維持（健全な視力の維持など）、腸内環境の改善（腸内細菌層を改善する、腸内環境を整えることで（特に肥満ぎみなヒトの）体重・ウエスト・周囲径を減らす、など）。

【0016】

本発明の組成物を用いる対象としては、例えば、ヒト、及びペット又は家畜などの非ヒト哺乳動物が挙げられ、特にヒトが好ましい。ヒトの場合、特に制限はされないが、例えば中年、初老又は老人程度の年齢のヒトが好ましく、より具体的には例えば３０〜７０歳、又は４０〜６０歳程度を挙げることができる。

【0017】

本発明の組成物の摂取量、摂取間隔などは特に限定的ではなく、適宜設定することができる。例えば、摂取量は、摂取対象の年齢、性別、体重、対象の健康状態、その他の条件（例えば種）に応じて適宜設定することができる。また、例えば、投与間隔については、１日１回又は複数回（好ましくは２〜３回）としてもよいし、数日〜数週間に１回又は複数回としてもよい。

【0018】

特に摂取対象がヒトである場合、ＬＲＡペプチド投与量は、例えば、成人一日あたり、１０〜３００μｇ程度が好ましく、１５〜２００μｇ程度がより好ましく、２０〜１００μｇ程度がさらに好ましく、３０〜８０μｇ程度がよりさらに好ましく、３５〜７０μｇ程度がなお好ましく、４０〜６０μｇ程度が特に好ましい。

【0019】

また、投与期間は、特に制限はされないが、３〜１２週間又はそれ以上（３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２週間又はこれら以上）であることが好ましく、９〜１２週又はそれ以上であることがより好ましい。

【0020】

投与対象が非ヒト哺乳動物の場合の投与形態、剤型、投与量、投与間隔などは、ヒトを投与対象とする場合を参考として適宜設定することができる。

【0021】

また、本発明の組成物の投与形態は本発明の効果が得られる限り特に制限されないが、経口組成物、又は経血管（経静脈又は経動脈）組成物が好ましく、経口組成物がより好ましい。

【0022】

本発明の組成物は、医薬組成物又は食品組成物などとして好ましく用いることができる。

【0023】

なお、本明細書において、食品組成物は、食品組成物のみならず、食塩代替物や甘味料、飲料等への添加物などの食品添加用組成物、業務用や家庭用の食材プレミックス品などの食品用材料組成物など、広く飲食品として摂取される組成物を包含する。

【0024】

本発明の組成物を医薬組成物として用いる場合、本発明の組成物は、ＬＲＡペプチドに加え、必要に応じて他の成分を含むことができる。当該他の成分としては特に制限されず、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、薬学的に許容される基剤、担体、及び／又は添加剤（例えば、溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等）等が挙げられる。当該他の成分の配合量は目的に応じて適宜設定することができる。

【0025】

本発明の組成物を医薬組成物として用いる場合、その投与形態は特に限定的ではなく、例えば、経口投与、静脈内注射などが挙げられる。中でも、経口投与が好ましい。

【0026】

本発明の組成物を医薬組成物として用いる場合、その剤型は特に限定的ではなく、例えば、口腔内崩壊錠、チュアブル錠、発泡錠、分散錠、溶解錠などの錠剤；トローチ剤；散剤；懸濁剤；乳剤；エリキシル剤；リモナーデ剤；シロップ剤；ローション剤；顆粒剤；硬カプセル剤や軟カプセル剤などのカプセル剤；クリーム剤；軟膏剤；坐剤；パップ剤、テープ剤、マイクロニードル、イオントフォレシスやエレクトロポレーションなどの経皮／粘膜投与剤；エアゾール剤等が挙げられる。これらの形態は、ＬＲＡペプチドと、必要に応じて上記した他の成分とを組み合わせて常法により調製することができる。

【0027】

本発明の組成物を医薬組成物や医薬部外品として用いる場合、当該医薬組成物におけるＬＲＡペプチドの配合量は、ＬＲＡペプチドの有する前記効果が発揮される量であれば特に限定的ではなく、適宜設定することができる。

【0028】

また、本発明の組成物を医薬組成物として用いる場合、投与量、投与間隔などは特に限定的ではなく、適宜設定することができる。例えば、投与量は、投与対象の年齢、性別、体重、対象の健康状態、その他の条件に応じて適宜設定することができる。また、例えば、投与間隔については、１日１回又は複数回（好ましくは２〜３回）としてもよいし、数日〜数週間に１回又は複数回としてもよい。また、投与対象は例えばヒト、及びペット又は家畜などの非ヒト哺乳動物が挙げられ、特にヒトが好ましい。

【0029】

特に投与対象がヒトである場合、ＬＲＡペプチド投与量は、例えば、成人一日あたり、１０〜３００μｇ程度が好ましく、１５〜２００μｇ程度がより好ましく、２０〜１００μｇ程度がさらに好ましく、３０〜８０μｇ程度がよりさらに好ましく、３５〜７０μｇ程度がなお好ましく、４０〜６０μｇ程度が特に好ましい。

【0030】

また、投与期間は、特に制限はされないが、３〜１２週間又はそれ以上（３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２週間又はこれら以上）であることが好ましく、９〜１２週又はそれ以上であることがより好ましい。

【0031】

投与対象が非ヒト哺乳動物の場合の投与形態、剤型、投与量、投与間隔などは、ヒトを投与対象とする場合を参考として適宜設定することができる。

【0032】

本発明の組成物を食品組成物として用いる場合、本発明の組成物は、ＬＲＡペプチドに加え、必要に応じて他の成分を含むことができる。当該他の成分としては特に制限されず、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、食品衛生学上許容される基剤、担体、添加剤や、その他食品として利用され得る成分・材料等が例示できる。

【0033】

本発明の組成物を食品組成物として用いる場合、その摂取形態は経口摂取である。この場合、本発明の組成物の形態は特に制限されず、一般食品や保健機能食品、特別用途食品に使用することができる。例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病者用食品、嚥下困難者用食品、健康補助食品、栄養補助食品、病院食、介護食、加工食品、飲料、などが挙げられる。これらは常法により調製することができる。また、食品組成物の剤形形態としては、例えば、ハードカプセル、ソフトカプセル、サプリメント、チュアブル錠、飲料、粉末飲料、顆粒、フィルムなどの形態のほか、飲食品として使用する場合、例えば、茶系飲料、スポーツ飲料、美容飲料、果汁飲料、炭酸飲料、アルコール飲料、清涼飲料、ゼリー飲料、水や湯、炭酸水等で希釈する濃縮タイプの飲料等の飲料、水や湯等に溶解または懸濁させて飲用する粉末や顆粒、タブレット等の乾燥固形物、タブレット菓子、ゼリー類、スナック類、焼き菓子、揚げ菓子、ケーキ類、チョコレート、ガム、飴、グミなどの菓子類、スープ類、めん類、米飯類、シリアル等などの食品形態にすることもできる。このうち通常の生活においては、サプリメントタイプ、チュアブル錠、ワンショットドリンクタイプなどの形態が好ましく、運動効果を高める目的で摂取する場合には、スポーツ飲料などの飲料の形態も好ましい。特に、保健機能食品、健康補助食品や栄養補助食品などとする場合には、継続的に摂取し易くするようにするため、例えば、顆粒、カプセル、タブレットや錠剤（チュアブル剤等を含む）、飲料（飲料パウダー、ドリンク剤等）、ゼリー剤などの形態とすることが好ましい。

【0034】

また、本発明の組成物を食品添加用組成物や食品用材料組成物として用いる場合には、その形態としては特に制限されず、例えば、液状、粉末状、フレーク状、顆粒状、ペースト状のものが挙げられる。より具体的には、調味料（甘味料、食塩代替組成物、醤油、酢、味噌、ソース、ケチャップ、ドレッシング、スパイス、ハーブ等、フレーク（ふりかけ、炊飯添加剤など）、焼き肉のたれ、ルーペースト（カレールーペースト等）、食材プレミックス品等が挙げられる。

【0035】

本発明の組成物を食品組成物として用いる場合、当該食品組成物におけるＬＲＡペプチドの配合量は、ＬＲＡペプチドの有する前記効果が発揮される量であれば特に限定的ではなく、適宜設定することができる。

【0036】

また、本発明の組成物を食品組成物として用いる場合、摂取量、摂取間隔などは特に限定的ではなく、適宜設定することができる。例えば、摂取量は、摂取対象の年齢、性別、体重、対象の健康状態、その他の条件に応じて適宜設定することができる。例えば、摂取間隔については、上記した量を摂取する場合、１日１回又は複数回（好ましくは２〜３回）としてもよいし、数日〜数週間に１回又は複数回としてもよい。また、摂取対象はヒト、及びペット又は家畜などの非ヒト哺乳動物であってもよい。

【0037】

特に投与対象がヒトである場合、ＬＲＡペプチド摂取量は、例えば、成人一日あたり、１０〜３００μｇ程度が好ましく、１５〜２００μｇ程度がより好ましく、２０〜１００μｇ程度がさらに好ましく、３０〜８０μｇ程度がよりさらに好ましく、３５〜７０μｇ程度がなお好ましく、４０〜６０μｇ程度が特に好ましい。

【0038】

また、摂取期間は、特に制限はされないが、３〜１２週間又はそれ以上（３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２週間又はこれら以上）であることが好ましく、９〜１２週又はそれ以上であることがより好ましい。

【0039】

摂取対象となるヒトは、上記の通り例えば中年、初老又は老人程度の年齢のヒトが好ましく、より具体的には例えば３０〜７０歳、又は４０〜６０歳程度を挙げることができる。特に、年齢に伴う血管
摂取対象が非ヒト哺乳動物の場合の形態、摂取量、摂取間隔などは、ヒトが摂取対象である場合を参考として適宜設定することができる。

【0040】

なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。

【実施例】

【0041】

以下、本発明をより具体的に説明するが、本発明は下記の例に限定されるものではない。
参考例１：血圧降下作用の検討
実験動物として、雄性の高血圧自然発症ラット （ＳＨＲ／Ｉｚｍ、１２週齢；清水実験材料社）を用いた。飼料は固形ＳＰ飼料（船橋農場）、飲用水は水道水を使用し、試験中も含め自由摂食・自由飲水とした。ラットは、３週間（１３〜１５週齢）血圧測定への馴化期間を設けた後、本試験に使用した。なお、ラットは、ＬＲＡペプチド投与群及び対照群の２群に群分けした（各群：Ｎ＝５）。また、ＬＲＡペプチドは、株式会社ペプチド研究所がＢｏｃ法により合成したものを用いた。納品されたＬＲＡペプチドは、ＲＰ−ＨＰＬＣ、質量分析及びアミノ酸分析により、Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａからなるトリペプチドであることが確認されたものであった
上記製造例２で合成したＬＲＡペプチドを生理食塩水に溶解させて、０．２５ｍｇ／ｍｌペプチド溶液を調製した。ＬＲＡペプチド投与群には、当該ペプチド溶液を０．２５ｍｇ／ｋｇとなるように、１ｍｌ容シリンジ及びテフロン（登録商標）製胃ゾンデを用いて胃内に強制経口投与し、対照群には、生理食塩水をサンプル投与群と同様にして強制経口投与した。投与前、並びに投与後２時間後及び４時間後の収縮期血圧をＴａｉｌ−ｃｕｆｆ法で測定した。なお、血圧の測定には、室町機械株式会社製の血圧測定器（ＭＫ−２０００ＳＴ）を用いた。なお、投与後２時間後及び４時間後の収縮期血圧が投与前の収縮期血圧に比べてどの程度低下したかを指標とした。結果を図１に示す。

【0042】

ＬＲＡペプチド投与群は対照群に比べて投与後２時間後及び４時間後の収縮期血圧が有意に低下したことが分かった。当該結果から、ＬＲＡペプチドは優れた血圧降下作用を有することが分かった。

【0043】

参考例２：血圧降下作用への一酸化窒素の影響の検討
ＬＲＡペプチドが奏する血圧降下効果が、一酸化窒素（ＮＯ）を介して得られているものかを調べるため、一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）阻害剤であるＬ−ＮＡＭＥを投与した場合にも血圧降下効果が得られるのかを検討した。なお、同人堂社から購入したＬ−ＮＡＭＥ塩酸塩を検討に用いた。

【0044】

【化1】

【0045】

また、上記と同様に調達した雄性の高血圧自然発症ラット （ＳＨＲ／Ｉｚｍ、１８〜２６週齢；清水実験材料社）を検討に用いた。ＬＲＡペプチドは、ＲＳ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ社に合成依頼して調製した。

【0046】

なお、ＬＲＡペプチド及びＬ−ＮＡＭＥ塩酸塩は、それぞれ生理食塩水に溶解させ、溶液として用いた。ＬＲＡペプチド溶液の濃度は１０μＭ、Ｌ−ＮＡＭＥ溶液の濃度は１００μＭとした。

【0047】

各ラットの収縮期血圧を測定した直後にＬＲＡペプチド溶液をゾンデを用いて経口投与し、さらにＬ−ＮＡＭＥ溶液を腹腔内投与した。さらに、当該投与２及び４時間後に収縮期血圧を測定した。血圧測定には、室町機械株式会社製の血圧測定器（ＭＫ−２０００ＳＴ）を用い、Ｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法で測定した。一回の測定につき、６回収縮期血圧を測定し、その平均値を採用した。

【0048】

以下に、ラットの群分けについて示す。

【0049】

【表1】

【0050】

収縮期血圧測定結果を図２に示す。図２では、縦軸は各群での、投与４時間後の収縮期血圧の変化量（投与０時間と比較）を示している。各群とも平均値±ＳＥ（標準誤差）で示している。＊はＰ＜０．０５を示す。

【0051】

１ｍｇ／ｋｇのＬＲＡペプチドを投与したラット（群２）では、コントロール（群１）に対して有意な血圧降下が確認できた。一方、ＬＲＡペプチドに加えＬ−ＮＡＭＥも投与されたラット（群３）では、有意な血圧降下は確認できず、このことからＬＲＡの血圧降下作用がＬ−ＮＡＭＥにより阻害されたことがわかった。なお、Ｌ−ＮＡＭＥのみ投与したラット（群４）では有意な血圧降下は確認されなかった。

【0052】

ＬＲＡペプチドの血圧降下作用は、ＮＯＳの阻害剤であるＬ−ＮＡＭＥによって完全に阻害された（図２）ことから、当該血圧降下作用は、主にＮＯＳでのＮＯ産出を亢進することにより発揮されていると考えられた。

【0053】

実施例１：ＬＲＡペプチドによる血管機能改善効果の検討
上記結果から、ＬＲＡペプチドは、経口摂取により、ＮＯ産出を亢進すると考えられ、このためＮＯ産出による血圧降下作用以外の効果も発揮する可能性が考えられた。例えば、ＮＯは血管機能の改善（特に血管弾力性の向上又は維持）のために有用であることが知られている。そこで、ＬＲＡペプチドを摂取することにより、当該効果が得られるかを検討した。具体的には、ＬＲＡペプチドにより血管弛緩効果が得られるかどうかを検討した。なお、ＮＯにより血管が弛緩することで、血圧降下効果のみならず、

【0054】

高血圧自然発症ラット （ＳＨＲ／Ｉｚｍ、１５〜３４週齢；清水実験材料社）を検討に用いた。ＬＲＡペプチドは、ＲＳ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ社に合成依頼して調製した。ＬＲＡペプチド及びＬ−ＮＡＭＥ塩酸塩は、それぞれ生理食塩水に溶解させ、溶液として用いた。ＬＲＡペプチド溶液の濃度は１０μＭ、Ｌ−ＮＡＭＥ溶液の濃度は１００μＭとした。

【0055】

前記ラットの腸間膜動脈を摘出し、螺旋状に切開して標本を作成した。Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ栄養液｛（１２０ ｍＭ ＮａＣｌ， ４．７ ｍＭ ＫＣｌ， １．２ ｍＭ ＭｇＳＯ_４， １．２ ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４， ２．５ ｍＭ ＣａＣｌ_２， ２５ ｍＭ ＮａＨＣＯ_３， １０ ｍＭ Ｇｌｕｃｏｓｅ）、３７℃、５ ％ ＣＯ_２、９５ ％ Ｏ_２混合ガス飽和｝を満たしたマグヌス管中に当該標本を懸垂し、その張力 （緊張）変化を歪みトランスデューサー （三栄）を介してポリグラフ上に記録した 。なお、本検討では、腸間膜動脈標本をあらかじめフェニレフリン （血管収縮剤）で収縮させ、その後ＬＲＡペプチド、あるいはＬＲＡペプチド及びＬ−ＮＡＭＥを添加して、添加後の反応を観察した。その後、パパベリン（平滑筋弛緩剤）を添加して、腸間膜動脈標本を完全に弛緩させた。

【0056】

当該検討の実験器具の概要を図３に示す。また、当該検討において得られたポリグラフの概要を図４に示す。図４のポリグラフの縦軸（収縮度合い）において、Ａ（フェニレフリン添加時）からＣ（完全に弛緩した状態）を差し引いた値で、Ｂ（ＬＲＡペプチド添加時、又はＬＲＡペプチド及びＬ−ＮＡＭＥ添加時）からＣ（完全に弛緩した状態）を差し引いた値を割って算出される値（％）を弛緩率とした。すなわち、次のようにして弛緩率を求めた。

【0057】

弛緩率（％）＝（Ａ−Ｂ）／（Ａ−Ｃ）×１００

【0058】

ＬＲＡペプチドを添加した場合と、ＬＲＡペプチド及びＬ−ＮＡＭＥを添加した場合との、弛緩率を、図５に示す。＊はＰ＜０．０５を示す。当該結果から、ＬＲＡペプチドは血管を弛緩させる作用を有すること、及び当該血管弛緩作用はＮＯＳ阻害剤であるＬ−ＮＡＭＥにより阻害されること、が確認できた。このことから、ＬＲＡペプチドはＮＯＳを亢進させ、ＮＯ産生を増大させることで血管弛緩作用を奏することが分かった。

【0059】

従って、ＬＲＡペプチドは、ＮＯＳを亢進させ、ＮＯ産生を増大させるために有用であり、また、ＮＯは特に血管機能の改善（特に血管弾力性の向上又は維持）に大きく寄与していることが知られていることから、ＬＲＡペプチドは血管機能の改善（特に血管弾力性の向上又は維持）のために有用であることがわかった。さらには、ＬＲＡペプチドがＮＯ産生を増大させることが確認されたことから、ＮＯにより奏されることが知られている各効果、あるいは当該公知効果から容易に想到される効果を得るために、ＬＲＡペプチドを好ましく用いることができることもわかった。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】