特開 2020-51873 分析用シート

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】特開2020-51873(P2020-51873A)

(43)【公開日】2020年4月2日

(54)【発明の名称】分析用シート

(51)【国際特許分類】

   G01N 1/28 20060101AFI20200306BHJP

【ＦＩ】

   G01N1/28 U

   G01N1/28 J

【審査請求】未請求

【請求項の数】7

【出願形態】ＯＬ

【全頁数】21

(21)【出願番号】特願2018-180966(P2018-180966)

(22)【出願日】2018年9月26日

【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成３０年度、国立研究開発法人科学技術振興機構、研究成果展開事業 大学発新産業創出プログラム「質量顕微鏡法を用いた新しい薬物動態解析及び創薬標的探索事業」委託研究、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願

(71)【出願人】

【識別番号】504300181

【氏名又は名称】国立大学法人浜松医科大学

(74)【代理人】

【識別番号】100131705

【弁理士】

【氏名又は名称】新山 雄一

(74)【代理人】

【識別番号】100190621

【弁理士】

【氏名又は名称】崎間 伸洋

(72)【発明者】

【氏名】瀬藤 光利

(72)【発明者】

【氏名】山崎 文義

(72)【発明者】

【氏名】中嶋 裕子

【テーマコード（参考）】

2G052

【Ｆターム（参考）】

2G052AA28

2G052AA33

2G052AA35

2G052AA37

2G052DA05

2G052DA21

2G052FA00

2G052GA11

2G052GA15

2G052GA24

2G052GA31

2G052JA04

2G052JA08

2G052JA15

2G052JA16

(57)【要約】

【課題】組織切片等のハンドリングに好適な分析用シートを提供すること。
【解決手段】プロトン供与物質、プロトン受容物質、電子供与物質及び電子受容物質よりなる群から選択される少なくとも１種の物質を含む分析用シート。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

プロトン供与物質、プロトン受容物質、電子供与物質及び電子受容物質よりなる群から選択される少なくとも１種の物質を含む分析用シート。

【請求項2】

不織布、不織紙、樹脂及び金属よりなる群から選択される少なくとも１種を更に含む、請求項１に記載の分析用シート。

【請求項3】

前記樹脂が、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む、請求項２に記載の分析用シート。

【請求項4】

組織切片ハンドリング用である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の分析用シート。

【請求項5】

イメージング分析用である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の分析用シート。

【請求項6】

プロトン供与性基を含む樹脂、電子受容性基を含む樹脂、プロトン供与物質及び電子受容物質よりなる群から選択される少なくとも１種を含み、ポジティブモード用である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の分析用シート。

【請求項7】

プロトン受容性基を含む樹脂、電子供与性基を含む樹脂、プロトン受容物質及び電子供与物質よりなる群から選択される少なくとも１種を含み、ネガティブモード用である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の分析用シート。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、組織切片等のハンドリングに好適な分析用シートに関する。

【背景技術】

【0002】

凍結生体組織薄切片の作製（切り出し）作業は、ミクロトームを用い作業者が行っている。固形試料には主として生体試料をパラフィン包埋したものが用いられ、これを切断し薄切片を作製する。この薄切片作製工程において、切断中及び切断工程終了後の薄切片のハンドリングが重要かつ困難な作業となっていることが知られている。
例えば、特許文献１には、薄切片支持用粘着性プラスチックフィルムを使用した生物組織薄切片作製方法が開示されている。

【0003】

また、上記凍結生体組織薄切片を分析に供するまでのハンドリングについても、往々にして作業者の技術等の習熟度を要し、仮に作業者の習熟度が高かったとしても、上記薄切片の物理化学的性質、分析環境等に起因して分析データの精度、再現性及び定量性が低下するという問題があった。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特開２００４−３７４３４号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明は、上記従来技術の課題に鑑みなされたものであって、組織切片等の被分析物のハンドリングに好適な分析用シートの提供を目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明者らは、ＳＥＴ（Ｓｈｅｅｔ Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）に基づき、プロトン供与物質、プロトン受容物質、電子供与物質及び電子受容物質よりなる群から選択される少なくとも１種の物質を含む分析用シート（ｉＤＳ：Ｉｏｎ Ｄｏｎｏｒ Ｓｈｅｅｔ）を凍結生体組織薄切片に貼り合せてハンドリングすることにより、少なくとも作業者の習熟度による影響を排除して、分析データの精度、再現性及び定量性を向上し得ることを見出した。本発明は、この知見に基づき完成するに至ったものである。すなわち、本発明は以下の通りである。

【0007】

（１）プロトン供与物質、プロトン受容物質、電子供与物質及び電子受容物質よりなる群から選択される少なくとも１種の物質を含む分析用シート。
（２）不織布、不織紙、樹脂及び金属よりなる群から選択される少なくとも１種を更に含む、（１）に記載の分析用シート。
（３）前記樹脂が、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む、（２）に記載の分析用シート。
（４）組織切片ハンドリング用である、（１）〜（３）のいずれか１項に記載の分析用シート。
（５）イメージング用である、（１）〜（４）のいずれか１項に記載の分析用シート。
（６）プロトン供与性基を含む樹脂、電子受容性基を含む樹脂、プロトン供与物質及び電子受容物質よりなる群から選択される少なくとも１種を含み、ポジティブモード用である、（１）〜（５）のいずれか１項に記載の分析用シート。
（７）プロトン受容性基を含む樹脂、電子供与性基を含む樹脂、プロトン受容物質及び電子供与物質よりなる群から選択される少なくとも１種を含み、ネガティブモード用である、（１）〜（５）のいずれか１項に記載の分析用シート。

【発明の効果】

【0008】

本発明の分析用シートは、組織切片等の被分析物のハンドリングに好適であり、少なくとも作業者の習熟度による影響を排除して、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得る。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】ラット脳の凍結切片のイメージング質量顕微鏡解析結果を示す図である。

【図2】ラット脳の凍結切片のイメージング質量顕微鏡解析結果を示す図である。

【図3】ポジティブイオンモードにてレーザー強度３５（％）の場合の測定結果（マススペクトル）を示す図である。

【図4】比較例としてラット脳の凍結切片を貼り付けずに、レーザー強度３５にてマススペクトルを測定した結果を示す図である。

【図5】ポジティブイオンモードにてレーザー強度４０の場合の測定結果を示す図である。

【図6】ポジティブイオンモードにてレーザー強度４５の場合の測定結果を示す図である。

【図7】ポジティブイオンモードにてレーザー強度５０の場合の測定結果を示す図である。

【図8】ネガティブイオンモードにてレーザー強度３０の場合の測定結果を示す図である。

【図9】シートＮｏ．５８５を用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【図10】シートＧＡ５９０５を用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【図11】シートＮｏ．５００を用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【図12】シートＮｏ．５０３５Ｋを用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【図13】シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【図14】シートＶＲ−５３００を用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【図15】シートＧＲ−５３３１を用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【図16】シートＮｏ．５８５を用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【図17】シートＧＡ５９０５を用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【図18】シートＮｏ．５００を用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【図19】シートＮｏ．５０３５Ｋを用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【図20】シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【図21】シートＶＲ−５３００を用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【図22】シートＧＲ−５３３１を用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0010】

以下、本発明の実施態様について詳細に説明するが、本発明は、以下の実施態様に何ら限定されるものではなく、本発明の目的の範囲内において、適宜変更を加えて実施することができる。
また、本明細書において、「〜」は特に断りがなければ以上から以下を表す。

【0011】

≪分析用シート≫
本発明の分析用シートは、プロトン供与物質、プロトン受容物質、電子供与物質及び電子受容物質よりなる群から選択される少なくとも１種の物質を含む。上記物質１種を単独で含んでいても、２種以上を組み合わせて含んでいても良い。
本発明の分析用シートは、上記少なくとも１種の物質を含むことにより、被分析物のイオン化、散乱光（例えば、ラマン散乱光）等を促進し、各種分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得る。

【0012】

本発明の分析用シートを適用し得る被分析物としては特に制限はなく、低分子化合物から高分子化合物までのいかなる物質であってもよいし、それらを含む組成物ないし組織切片であってもよい。上記組織切片は凍結生体組織薄切片が好ましい。
本発明の分析用シートを適用し得る分析としては本発明の効果を損なわない限り特に制限はないが、組織染色、質量分析、ラマン分光分析等が挙げられ、レーザー又は光を用いない分析（例えば、組織染色、二次イオン（ＳＩ）質量分析等）であってもよいが、レーザー又は光を用いて被分析物のイオン化、散乱光発生等を行うことを含む分析（例えば、脱離エレクトロスプレーイオン化（ＤＥＳＩ）質量分析、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）質量分析、ラマン分光分析、表面ないし局在プラズモン分析、赤外線分析、蛍光分析等）が好ましい。
本発明の分析用シートは、シート形状であることにより、分析領域内（例えば、分析領域内の微小スポット）を走査して面情報を得る等のイメージング分析に好適に適用し得る。

【0013】

本明細書において、「プロトン供与物質」は、ブレンステッド・ローリーによる酸であってもよい。
「プロトン受容物質」は、ブレンステッド・ローリーによる塩基であってもよい。
「電子供与物質」は、ルイスによる塩基であってもよい。
「電子受容物質」は、ルイスによる酸であってもよい。

【0014】

レーザーによる被分析物のイオン化、散乱光等の促進の観点から、上記物質は波長２６０ｎｍ以上３８０ｎｍ以下に極大吸収を有することが好ましく、波長２６５ｎｍ以上３７０ｎｍ以下に極大吸収を有することがより好ましく、波長３２０ｎｍ以上３６０ｎｍ以下に極大吸収を有することが更に好ましく、波長３３０ｎｍ以上３５５ｎｍ以下に極大吸収を有することが特に好ましく、波長３３５ｎｍ以上３５０ｎｍ以下に極大吸収を有することが最も好ましい。

【0015】

プロトン供与物質、プロトン受容物質、電子供与物質及び電子受容物質よりなる群から選択される少なくとも１種の上記物質は、プロトン供与物質、プロトン受容物質、電子供与物質及び電子受容物質よりなる群から選択される２種以上を兼ねる物質であってもよい。
上記プロトン供与物質又は電子受容物質としては、ヘテロ原子（例えば、酸素原子、窒素原子、イオウ原子等）を含んでいてもよい炭素原子数４以上３０以下の芳香族性有機酸化合物が好ましい。上記芳香族性有機酸化合物としては、ケイ皮酸化合物、安息香酸化合物、ピコリン酸化合物、ニコチン酸化合物等が挙げられる。

【0016】

上記ケイ皮酸化合物としては、２以上の置換基（例えば、水酸基、炭素原子数１以上５以下のアルコキシ基、アミノ基等）を有するケイ皮酸化合物が好ましく、具体的には、α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸（ＣＨＣＡ）、シナピン酸（ＳＡ；３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシケイ皮酸）、フェルラ酸（４−ヒドロキシ−３−メトキシケイ皮酸）、ｐ−クマル酸（ｔｒａｎｓ−４−ヒドロキシケイ皮酸）等が挙げられる。
上記安息香酸化合物としては、１以上（好ましくは２以上）の置換基（例えば、水酸基、炭素原子数１以上５以下のアルコキシ基、アミノ基等）を有する安息香酸化合物が好ましく、具体的には、２，５−ジヒドロキシ安息香酸（ＤＨＢ）、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸（ＡＨＢＡ）等が挙げられる。
上記ピコリン酸化合物としては、１以上の置換基（例えば、水酸基、炭素原子数１以上５以下のアルコキシ基、アミノ基等）を有するピコリン酸化合物が好ましく、具体的には、ピコリン酸、３−ヒドロキシピコリン酸、３−アミノピコリン酸（ＡＰＡ）等が挙げられる。

【0017】

上記プロトン受容物質又は電子供与物質としては、１，１，３，３−テトラメチルグアニジン、ｎ−ブチルアミン、エチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン、Ｎ，Ｎ−ジエチルメチルアミン、ジエチルベンゼンアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミン、トリエチルアミン、トリ−ｎ−ブチルアミン、トリ−ｎ−プロピルアミン、エタノールアミン、ポリエーテルテールドトリエチルアミン、ポリエステルテールドトリエチルアミン、ニトロフェノール、アニリン、２，４−ジニトロアニリン、２−ニトロフェニルオクチルエーテル（ＮＰＯＥ）、ピリジン、２−アミノ−４−メチル−５−ニトロピリジン、３−アミノキノリン、３−ヒドロキシピリジン、１−メチルイミダゾール、１−ブチル−３−メチルイミダゾール、１−（１−ヒドロキシプロピル）−３−メチルイミダゾール、１，３−ジメチルイミダゾール、１，５−ジアミノナフタレン（１，５−ＤＡＮ）、６−アザ−２−チオチミン（ＡＴＴ）、クマリン、６，７−ジヒドロキシクマリン、１，８−ジヒドロキシ−９［１０Ｈ］−アントラセノン、９−アミノアクリジン（９ＡＡ）、カルボリン類（ノルハルマン、ハルマン、ハルミン、ハルモル、ハルマリン、ハルマロールなど）等が挙げられる。

【0018】

本発明の分析用シートが、プロトン供与物質及び電子受容物質よりなる群から選択される少なくとも１種を含む場合、ポジティブモード用に好適である。
例えば、被分析物が、プロトンを受け取り易いないし電子を放出し易い官能基を有する物質である場合、被分析物をポジティブイオン化することができ、ポジティブモードにて分析することが好ましい。

【0019】

本発明の分析用シートが、プロトン受容物質及び電子供与物質よりなる群から選択される少なくとも１種を含む場合、ネガティブモード用に好適である。
例えば、被分析物が、リン酸化又は硫酸化されたペプチド類、オリゴヌクレオチド類、酸性オリゴ糖等のプロトンを放出し易いないし電子を受け取り易い官能基を有する物質である場合、被分析物をネガティブイオン化することができ、ネガティブモードにて分析することが好ましい。
本発明の分析用シートが、散乱光の促進の観点から、電子供与物質及び電子受容物質よりなる群から選択される少なくとも１種の物質を含む場合、ラマン分光分析、表面ないし局在プラズモン分析、赤外線分析又は蛍光分析に好適に適用し得る。

【0020】

本発明の分析用シートにおける上記少なくとも１種の物質の含有量としては本発明の効果を損なわない限り特に制限はないが、上記少なくとも１種の物質の含有量（複数種含有される場合にはその合計の含有量）が、上記分析用シートの全質量に対して、例えば１〜９０質量％が挙げられ、３〜８５質量％が好ましく、５〜８０質量％がより好ましく、１０〜７０質量％が更に好ましい。

【0021】

本発明の分析用シートは、組織切片等の被分析物のハンドリング性の観点から、不織布、不織紙、樹脂及び金属よりなる群から選択される少なくとも１種を更に含むことが好ましい。
本発明の分析用シートが不織布ないし不織紙を更に含む場合、上記不織布ないし不織紙を更に含む市販のシートを用いてもよい。
上記市販のシートとしては、不織布ないし不織紙を含むテープＮｏ．５０３５Ｋ（日東電工社製）等が挙げられる。

【0022】

上記樹脂としては、プラスチックではないことが好ましい。
上記樹脂としては、アクリル系樹脂、特殊ゴム系樹脂、セルロース系樹脂、ポリエステル系樹脂等が挙げられる。
本発明の分析用シートが樹脂を含む場合、プロトン供与物質、プロトン受容物質、電子供与物質及び電子受容物質よりなる群から選択される少なくとも１種の上記物質として、上記樹脂が、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含むことが好ましい。

【0023】

本発明の分析用シートが樹脂を含み、上記樹脂が、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む場合、上記樹脂を含む市販のシートを用いてもよい。
上記市販のシートとしては、アクリル系樹脂を含むテープ（例えば、Ｎｏ．５８５、Ｎｏ．５００、ＧＡ５９０５、Ｎｏ．５９１９ＭＬＷ）、特殊ゴム系樹脂を含むテープ（例えば、ＶＲ−５３００）、ＧＲ−５３３１（いずれも日東電工社製）等が挙げられる。

【0024】

上記金属としては、シート形状であっても粒子形状であってもよく、上記イオン化、散乱光（例えば、ラマン散乱光）等を促進に伴う帯電をアースする観点から、導電性金属であることが好ましく、例えば、ステンレス鋼（ＳＵＳ）、鉄（Ｆｅ）、マンガン（Ｍｎ）、コバルト（Ｃｏ）、銅（Ｃｕ）、アルミニウム（Ａｌ）、金（Ａｕ）、銀（Ａｇ）、白金（Ｐｔ）、及びそれらの合金等が挙げられる。
上記金属としては、鉄（Ｆｅ）、マンガン（Ｍｎ）、コバルト（Ｃｏ）等の金属ナノ粒子も挙げられ、ＳＡＬＤＩ、ＧＡＬＤＩ、ＤＩＯＳ質量分析に好適に適用し得る。
本発明の分析用シートは、組織切片等の被分析物のハンドリング性の観点から、粘着剤を含んでいてもいなくてもよく、表面に粘着剤層を有していてもいなくてもよい。

【0025】

シートの厚みとしては特に制限はないが、例えば、１μｍ〜１ｍｍが挙げられ、５μｍ〜７００μｍが好ましく、１０μｍ〜５００μｍがより好ましく、３０μｍ〜３００μｍが更に好ましく、４０μｍ〜２００μｍが特に好ましい。
シートの幅、長さについては特に制限はない。

【実施例】

【0026】

以下、実施例を示して本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は、これらの実施例に限定されるものではない。

【0027】

＜実施例１＞
２，５−ジヒドロキシ安息香酸（ＤＨＢ）を含むセロハンシートと、ＤＨＢを含まないセロハンシートとを準備し、それぞれをＩＴＯスライドガラスに導電性両面テープを用いて接着した。
テープ部分に厚さ１０μｍのラット脳の凍結切片を貼り付けた。
これをイメージング質量顕微鏡（商品名ｉＭＳｃｏｐｅ；島津製作所社製）を用いて正（ポジティブ）イオンモードにて解析した。結果を図１及び２に示す。

【0028】

図１ａ）は上記得られたラット脳の凍結切片の電子顕微鏡写真を示す図である。また、図２は、図１ａ）に対応するイメージング質量分析画像であって、ｍ／ｚ：７９８．５のピークの強度をＡＵ（任意強度）で表してイメージングした画像である。
図１ａ）中、ＲＯＩ（Ｒｅｇｉｏｎ Ｏｆ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）矩形１は、ＤＨＢ（＋）切片（＋）の領域を示し、
ＲＯＩ矩形２は、ＤＨＢ（−）切片（＋）の領域を示し、
ＲＯＩ矩形３は、ＤＨＢ（＋）切片（−）の領域を示し、
ＲＯＩ矩形４は、ＤＨＢ（−）切片（−）の領域を示す。
図１ｂ）における１は、ＲＯＩ矩形１におけるＭＳスペクトルを示し、２は、ＲＯＩ矩形２におけるＭＳスペクトルを示し、３は、ＲＯＩ矩形３におけるＭＳスペクトルを示し、４は、ＲＯＩ矩形４におけるＭＳスペクトルを示す。
図１ｂ）の１及び２の比較から、ＤＨＢを含むシートを用いることにより生体分子のイオン化が促進されていることが分かる。
特に、図１ｂ）の１及び３の比較から、ＤＨＢを含むシートを用いることにより、ラット脳切片におけるｍ／ｚ：７９８．５の生体分子（リン脂質の一種）由来のピークが検出されたことが分かる。

【0029】

また、図２から、ｍ／ｚ：７９８．５の生体分子（リン脂質の一種）の切片中における分布の濃淡が分かる。

【0030】

＜実施例２＞ポジティブイオンモード
厚さ１０μｍのラット脳の凍結切片を貼り付けた各種シート（Ｎｏ．５８５、ＧＡ５９０５、Ｎｏ．５００、Ｎｏ．５０３５Ｋ、Ｎｏ．５９１９ＭＬＷ、ＶＲ−５３００、ＧＲ−５３３１（いずれも日東電工社製））をそれぞれＩＴＯスライドガラスに接着してイメージング質量顕微鏡（商品名ｉＭＳｃｏｐｅ；島津製作所社製）を用いてポジティブイオンモードにてｍ／ｚ６５０〜９００の範囲のマススペクトルを測定した。分析条件は、以下の通りであり、下記（１）〜（４）のように各種レーザー強度にて測定した。

【0031】

（レーザー照射条件）
レーザー照射回数：２００ショット
レーザー繰り返し周波数：１０００Ｈｚ
照射径：最小
（質量分析条件）
サンプル電圧：３．５ｋＶ
検出器電圧：２．１ｋＶ
ＭＳ段階：１
積算回数：１回／ピクセル

【0032】

また、比較例としてＤＨＢを含むマトリックスを用いてＭＡＬＤＩ法によっても厚さ１０μｍのラット脳のマススペクトルを測定した。

【0033】

（１）レーザー強度３５の場合
図３は、レーザー強度３５（％）の場合の測定結果を示す図であり、ａ）はシートＶＲ−５３００を、ｂ）はシートＧＲ−５３３１をそれぞれ用いた場合、ｃ）は比較例としてＭＡＬＤＩ法による場合の測定結果を示す図である。

【0034】

図３ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ＭＡＬＤＩ法による比較例はベースラインに数多のノイズピークが観測されるのに対し、シートＶＲ−５３００を用いた実施例、シートＧＲ−５３３１を用いた実施例はいずれも、ノイズピークがほとんどみられず、Ｓ／Ｎ比が向上していることが分かる。また、ＭＡＬＤＩ法による比較例における生体分子由来と思われるｍ／ｚ：７７２．５付近、７９８．５付近のピークとは、異なる多くの生体分子由来と思われるピークが、シートＶＲ−５３００を用いた実施例、シートＧＲ−５３３１を用いた実施例において検出された。それらピークは上記各種シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0035】

比較例として、ラット脳の凍結切片を貼り付けていない各種シート（Ｎｏ．５８５、ＧＡ５９０５、Ｎｏ．５００、Ｎｏ．５０３５Ｋ、Ｎｏ．５９１９ＭＬＷ、ＶＲ−５３００、ＧＲ−５３３１）をそれぞれＩＴＯスライドガラスに接着したこと以外は上記と同様にポジティブイオンモードにてマススペクトルを測定した。
図４は、比較例としてラット脳の凍結切片を貼り付けずに、レーザー強度３５（％）にてマススペクトルを測定した結果を示す図であり、ａ）はシートＮｏ．５８５を、ｂ）はシートＧＡ５９０５を、ｃ）はシートＮｏ．５００を、ｄ）はシートＮｏ．５０３５Ｋを、ｅ）はシートＮｏ．５９１９ＭＬＷを、ｆ）はシートＶＲ−５３００を、ｇ）はシートＧＲ−５３３１をそれぞれ用いた場合の測定結果を示す図である。

【0036】

図４ａ）〜ｇ）に示した結果から明らかなように、図３ａ）及びｂ）に示した実施例の結果とは異なり、ラット脳の凍結切片を貼り付けない各種シート（Ｎｏ．５８５、ＧＡ５９０５、Ｎｏ．５００、Ｎｏ．５０３５Ｋ、Ｎｏ．５９１９ＭＬＷ、ＶＲ−５３００、ＧＲ−５３３１）では全くピークが観察されないことが分かる。
なお、図４ｇ）に観られるｍ／ｚ：７０７付近、８１０．６付近のピークはスパイクノイズと考えられる。

【0037】

（２）レーザー強度４０の場合
図５は、レーザー強度４０（％）の場合の測定結果を示す図であり、ａ）はシートＮｏ．５００を、ｂ）はシートＮｏ．５９１９ＭＬＷを、ｃ）はシートＧＲ−５３３１をそれぞれ用いた場合、ｄ）は比較例としてＭＡＬＤＩ法による場合の測定結果を示す図である。

【0038】

図５ａ）〜ｄ）に示した結果から明らかなように、ＭＡＬＤＩ法による比較例はベースラインに数多のノイズピークが観測されるのに対し、シートＮｏ．５００を用いた実施例、シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを用いた実施例、シートＧＲ−５３３１を用いた実施例はいずれも、ノイズピークがほとんどみられず、Ｓ／Ｎ比が向上していることが分かる。また、ＭＡＬＤＩ法による比較例における生体分子由来と思われるｍ／ｚ：７７２．５付近、７９８．５付近のピークとは、異なる多くの生体分子由来と思われるピークが、シートＮｏ．５００を用いた実施例、シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを用いた実施例、シートＧＲ−５３３１を用いた実施例において検出された。それらピークは上記各種シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0039】

（３）レーザー強度４５の場合
図６は、レーザー強度４５（％）の場合の測定結果を示す図であり、ａ）はシートＮｏ．５８５を、ｂ）はシートＮｏ．５０３５Ｋを、ｃ）はシートＮｏ．５９１９ＭＬＷをそれぞれ用いた場合、ｄ）は比較例としてＭＡＬＤＩ法による場合の測定結果を示す図である。

【0040】

図６ａ）〜ｄ）に示した結果から明らかなように、ＭＡＬＤＩ法による比較例はベースラインに数多のノイズピークが観測されるのに対し、シートＮｏ．５８５を用いた実施例、シートＮｏ．５０３５Ｋを用いた実施例、シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを用いた実施例はいずれも、ノイズピークがほとんどみられず、Ｓ／Ｎ比が向上していることが分かる。また、ＭＡＬＤＩ法による比較例における生体分子由来と思われるｍ／ｚ：７７２．５付近、７９８．５付近のピークとは、異なる多くの生体分子由来と思われるピークが、シートＮｏ．５８５を用いた実施例、シートＮｏ．５０３５Ｋを用いた実施例、シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを用いた実施例において検出された。それらピークは上記各種シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0041】

（４）レーザー強度５０の場合
図７は、レーザー強度５０（％）の場合の測定結果を示す図であり、ａ）はシートＮｏ．５００を、ｂ）はシートＮｏ．５０３５Ｋを、ｃ）はシートＮｏ．５９１９ＭＬＷを、ｄ）はシートＶＲ−５３００をそれぞれ用いた場合、ｅ）は比較例としてＭＡＬＤＩ法による場合の測定結果を示す図である。

【0042】

図７ａ）〜ｅ）に示した結果から明らかなように、ＭＡＬＤＩ法による比較例はベースラインに数多のノイズピークが観測されるのに対し、シートＮｏ．５００を用いた実施例、シートＮｏ．５０３５Ｋを用いた実施例、シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを用いた実施例、シートＶＲ−５３００を用いた実施例はいずれも、ノイズピークがほとんどみられず、Ｓ／Ｎ比が向上していることが分かる。また、ＭＡＬＤＩ法による比較例における生体分子由来と思われるｍ／ｚ：７７２．５付近、７９８．５付近のピークとは、異なる多くの生体分子由来と思われるピークが、シートＮｏ．５００を用いた実施例、シートＮｏ．５０３５Ｋを用いた実施例、シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを用いた実施例、シートＶＲ−５３００を用いた実施例において検出された。それらピークは上記各種シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0043】

＜実施例３＞ネガティブイオンモード
測定モードをネガティブイオンモードに変更し、レーザー強度を３０に変更すること以外は実施例２と同様にしてマススペクトルを測定した。
比較例として９−アミノアクリジン（９ＡＡ）を含むマトリックスを用いてＭＡＬＤＩ法によってもラット脳のマススペクトルを測定した。

【0044】

図８は、ネガティブイオンモードにてレーザー強度３０（％）の場合の測定結果を示す図であり、ａ）はシートＮｏ．５９１９ＭＬＷを用いた場合、ｂ）は比較例としてＭＡＬＤＩ法による場合の測定結果を示す図である。

【0045】

図８ａ）及びｂ）に示した結果から明らかなように、ＭＡＬＤＩ法による比較例はベースラインに数多のノイズピークが観測されるのに対し、シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを用いた実施例は、ノイズピークがほとんどみられず、Ｓ／Ｎ比が向上していることが分かる。また、ＭＡＬＤＩ法による比較例における生体分子由来と思われるピークとは、異なる多くの生体分子由来と思われるピークが、シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを用いた実施例、シートＧＲ−５３３１を用いた実施例において検出された。それらピークは上記各種シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0046】

＜実施例４＞ＤＥＳＩポジティブイオンモード
厚さ１０μｍのラット脳の凍結切片を貼り付けた各種シート（Ｎｏ．５８５、ＧＡ５９０５、Ｎｏ．５００、Ｎｏ．５０３５Ｋ、Ｎｏ．５９１９ＭＬＷ、ＶＲ−５３００、ＧＲ−５３３１（いずれも日東電工社製））をそれぞれＩＴＯスライドガラスに接着してイメージング質量分析計（商品名Ｘｅｖｏ Ｇ２−ＸＳ；日本ウォーターズ社製）を用いてＤＥＳＩにてｍ／ｚ５０〜１２００の範囲のマススペクトルを測定した。分析条件は、以下の通りであり、下記（１）〜（７）のように各種シートを用いて測定した。

【0047】

（条件）
ポジティブイオンモード
溶媒：９８％メタノール
溶媒流速：２μＬ／分
インレット温度：１２０℃
窒素ガス圧：０．４ＭＰａ
スプレーインパクト角：８０°
キャピラリー電圧：４ｋＶ
ピクセルサイズ：１００μｍ
スキャン速度：２００μｍ／秒
結果を図９〜１５におけるａ）に示す。

【0048】

比較例として、ラット脳の凍結切片を貼り付けていない各種シート（Ｎｏ．５８５、ＧＡ５９０５、Ｎｏ．５００、Ｎｏ．５０３５Ｋ、Ｎｏ．５９１９ＭＬＷ、ＶＲ−５３００、ＧＲ−５３３１）をそれぞれＩＴＯスライドガラスに接着したこと以外は上記と同様にＤＥＳＩポジティブイオンモードにてマススペクトルを測定した。結果を図９〜１５におけるｂ）に示す。

【0049】

また、別の比較例として、シートを使用せずに、厚さ１０μｍのラット脳の凍結切片を直接貼り付けたこと以外は上記と同様にＤＥＳＩポジティブイオンモードにてマススペクトルを測定した。結果を図９〜１５におけるｃ）に示す。

【0050】

（１）シートＮｏ．５８５を使用
図９ａ）は、シートＮｏ．５８５を用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0051】

図９ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｃ）に示したシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの比較例の測定結果に比べて、ａ）に示した実施例のピーク強度はおおよそ半分程度になったものの、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：５４６付近、８２６．６付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。これらピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0052】

（２）シートＧＡ５９０５を使用
図１０ａ）は、シートＧＡ５９０５を用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0053】

図１０ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｃ）に示したシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの比較例の測定結果に比べて、ａ）に示した実施例のピーク強度はおおよそ半分程度になったものの、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：２１２．９付近、８２６．６付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。これらピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0054】

（３）シートＮｏ．５００を使用
図１１ａ）は、シートＮｏ．５００を用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0055】

図１１ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：３３７．２付近、４４１．２付近、４８５．３付近、５８９．３付近、６３３．４付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。これらピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0056】

（４）シートＮｏ．５０３５Ｋを使用
図１２ａ）は、シートＮｏ．５０３５Ｋを用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0057】

図１２ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：２０８付近、４０７．３付近、４０８．３付近、５９２．４付近、９５９．８付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。これらピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0058】

（５）シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを使用
図１３ａ）は、シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0059】

図１３ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｃ）に示したシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの比較例の測定結果に比べて、ａ）に示した実施例のピーク強度はおおよそ半分程度になったものの、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：２０９．１付近、５９１．４付近、９５５．６付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。これらピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0060】

（６）シートＶＲ−５３００を使用
図１４ａ）は、シートＶＲ−５３００を用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0061】

図１４ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｃ）に示したシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの比較例の測定結果に比べて、ａ）に示した実施例のピーク強度はおおよそ半分程度になったものの、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：８２６．６付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。このピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0062】

（７）シートＧＲ−５３３１を使用
図１５ａ）は、シートＧＲ−５３３１を用いたＤＥＳＩポジティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0063】

図１５ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：３４１．２付近、４３７．３付近、８２６．６付近、８７２．６付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。これらピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0064】

＜実施例５＞ＤＥＳＩネガティブイオンモード
測定モードをネガティブイオンモードに変更すること以外は実施例４と同様にしてＤＥＳＩにてマススペクトルを測定した。

【0065】

（１）シートＮｏ．５８５を使用
図１６ａ）は、シートＮｏ．５８５を用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0066】

図１６ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｃ）に示したシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの比較例の測定結果に比べて、ａ）に示した実施例のピーク強度はおおよそ半分程度になったものの、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：３４６．１付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。このピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0067】

（２）シートＧＡ５９０５を使用
図１７ａ）は、シートＧＡ５９０５を用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0068】

図１７ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：２１５付近、３９６．３付近、８３４．５付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。これらピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0069】

（３）シートＮｏ．５００を使用
図１８ａ）は、シートＮｏ．５００を用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0070】

図１８ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：２１５付近、３９６．３付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。これらピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0071】

（４）シートＮｏ．５０３５Ｋを使用
図１９ａ）は、シートＮｏ．５０３５Ｋを用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0072】

図１９ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｃ）に示したシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの比較例の測定結果に比べて、ａ）に示した実施例のピーク強度はおおよそ半分程度になったものの、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：３４６．１付近、８３４．５付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。これらピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0073】

（５）シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを使用
図２０ａ）は、シートＮｏ．５９１９ＭＬＷを用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0074】

図２０ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：３４６．１付近、８３４．５付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。これらピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0075】

（６）シートＶＲ−５３００を使用
図２１ａ）は、シートＶＲ−５３００を用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0076】

図２１ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：３４６．１付近、３８５．３付近、４５９．３付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。これらピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【0077】

（７）シートＧＲ−５３３１を使用
図２２ａ）は、シートＧＲ−５３３１を用いたＤＥＳＩネガティブイオンモードの測定結果を示す図であり、ｂ）はラット脳の凍結切片を貼り付けていないシートのみの測定結果を示す図であり、ｃ）はシートを使用していないラット脳の凍結切片のみの測定結果を示す図である。

【0078】

図２２ａ）〜ｃ）に示した結果から明らかなように、ｂ）及びｃ）に示した比較例では観察されない生体分子由来と思われるｍ／ｚ：３９５．５付近、３９６．３付近のピークがａ）に示した実施例において検出された。これらピークは上記シートが、プロトン供与性基、プロトン受容性基、電子供与性基及び電子受容性基よりなる群から選択される少なくとも１種の基を含む樹脂を含むことにより増強されたピークと考えられ、分析検出データの精度、再現性及び定量性を向上し得るといえる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】