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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】特開2021-187848(P2021-187848A)
(43)【公開日】2021年12月13日
(54)【発明の名称】ピロロ［２，３−Ｄ］ピリミジン誘導体
(51)【国際特許分類】
C07D 487/04 20060101AFI20211115BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20211115BHJP
A61P 17/04 20060101ALI20211115BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20211115BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20211115BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20211115BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20211115BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20211115BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20211115BHJP
A61P 9/04 20060101ALI20211115BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20211115BHJP
A61P 7/02 20060101ALI20211115BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20211115BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20211115BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20211115BHJP
A61P 19/08 20060101ALI20211115BHJP
A61P 25/04 20060101ALI20211115BHJP
A61P 7/10 20060101ALI20211115BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20211115BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20211115BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20211115BHJP
A61P 27/06 20060101ALI20211115BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20211115BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20211115BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20211115BHJP
A61P 39/02 20060101ALI20211115BHJP
A61P 19/10 20060101ALI20211115BHJP
A61P 15/00 20060101ALI20211115BHJP
A61P 15/02 20060101ALI20211115BHJP
A61P 31/10 20060101ALI20211115BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20211115BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20211115BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20211115BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20211115BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20211115BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20211115BHJP
A61P 17/14 20060101ALI20211115BHJP
A61P 9/14 20060101ALI20211115BHJP
A61P 25/24 20060101ALI20211115BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20211115BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20211115BHJP
A61P 27/04 20060101ALI20211115BHJP
A61P 21/04 20060101ALI20211115BHJP
A61P 7/04 20060101ALI20211115BHJP
A61P 7/00 20060101ALI20211115BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20211115BHJP
【ＦＩ】
C07D487/04 140
C07D487/04CSP
A61P17/00ZNA
A61P17/04
A61P29/00
A61P43/00 111
A61P37/02
A61P29/00 101
A61P19/02
A61P25/00
A61P21/00
A61P9/04
A61P9/10
A61P9/10 101
A61P7/02
A61P9/00
A61P11/00
A61P13/12
A61P19/08
A61P25/04
A61P7/10
A61P1/16
A61P1/04
A61P27/02
A61P27/06
A61P3/10
A61P31/12
A61P31/04
A61P39/02
A61P19/10
A61P15/00
A61P15/02
A61P31/10
A61P35/00
A61P43/00 105
A61P3/04
A61P17/02
A61P17/06
A61P25/28
A61P1/16 101
A61P11/06
A61P17/14
A61P9/14
A61P25/24
A61P37/08
A61P37/06
A61P27/04
A61P21/04
A61P7/04
A61P7/00
A61K31/519
【審査請求】未請求
【請求項の数】14
【出願形態】ＯＬ
【外国語出願】
【全頁数】51
(21)【出願番号】特願2021-88059(P2021-88059)
(22)【出願日】2021年5月26日
(31)【優先権主張番号】62/704796
(32)【優先日】2020年5月28日
(33)【優先権主張国】US
(31)【優先権主張番号】63/037366
(32)【優先日】2020年6月10日
(33)【優先権主張国】US
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】593141953
【氏名又は名称】ファイザー・インク
(74)【代理人】
【識別番号】100133927
【弁理士】
【氏名又は名称】四本 能尚
(74)【代理人】
【識別番号】100147186
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 眞紀
(74)【代理人】
【識別番号】100174447
【弁理士】
【氏名又は名称】龍田 美幸
(74)【代理人】
【識別番号】100185960
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 理愛
(72)【発明者】
【氏名】マーティン ユージーン ダウティ
(72)【発明者】
【氏名】ビマル クマール マルハトラ
(72)【発明者】
【氏名】イワン ヨルダン サマードジエフ
(72)【発明者】
【氏名】ブライアン マシュー サマズ
(72)【発明者】
【氏名】ジョゼフ ウォルター ストローバック
【テーマコード（参考）】
4C050
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C050AA01
4C050BB04
4C050CC08
4C050EE03
4C050FF01
4C050GG04
4C050HH01
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086CB05
4C086GA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA01
4C086ZA02
4C086ZA07
4C086ZA08
4C086ZA12
4C086ZA16
4C086ZA33
4C086ZA36
4C086ZA37
4C086ZA44
4C086ZA45
4C086ZA51
4C086ZA53
4C086ZA54
4C086ZA59
4C086ZA68
4C086ZA70
4C086ZA75
4C086ZA76
4C086ZA81
4C086ZA89
4C086ZA92
4C086ZA94
4C086ZA96
4C086ZA97
4C086ZB07
4C086ZB08
4C086ZB11
4C086ZB13
4C086ZB15
4C086ZB21
4C086ZB26
4C086ZB33
4C086ZB35
4C086ZC20
4C086ZC35
4C086ZC37
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ヤヌスキナーゼを阻害するピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン化合物を提供する。【解決手段】具体的には、例えば下記化合物（Ｒ１はＨ、かつＲ２はＯＨ）が示される。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の構造を有する式Ｉの化合物：
（式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に水素またはヒドロキシであり、Ｒ１が水素である場合、Ｒ２はヒドロキシであり、Ｒ２が水素である場合、Ｒ１はヒドロキシである）
または薬学的に許容できる塩。
【化1】
または薬学的に許容できる塩。
【請求項2】
以下の構造を有する式ＩＡの化合物：
または薬学的に許容できるその塩。
【化2】
【請求項3】
以下の構造を有する式ＩＢの化合物：
または薬学的に許容できるその塩。
【化3】
【請求項4】
（Ｓ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミドまたは薬学的に許容できるその塩。
【請求項5】
３−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミドまたは薬学的に許容できるその塩。
【請求項6】
単離された形態での、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項7】
請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩、および薬学的に許容できる賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項8】
炎症、自己免疫疾患、神経炎症、関節炎、リウマチ性関節炎、脊椎関節症、全身性エリトマトーデス、ループス腎炎、骨関節炎、痛風性関節炎、疼痛、発熱、肺サルコイドーシス、ケイ肺症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、血栓症、鬱血性心不全および心臓再灌流障害、心筋症、脳卒中、虚血、再灌流障害、脳浮腫、脳外傷、神経変性、肝疾患、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、腎炎、網膜炎、網膜症、黄斑変性症、緑内障、糖尿病（１型および２型）、糖尿病性神経障害、ウイルスおよび細菌感染、筋肉痛、内毒素ショック、毒素ショック症候群、骨粗鬆症、多発性硬化症、子宮内膜症、月経痛、腟炎、カンジダ症、癌、線維症、肥満、筋ジストロフィ、多発性筋炎、皮膚筋炎、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、白斑症、アルツハイマー病、皮膚潮紅、湿疹、乾癬、アトピー性皮膚炎、日光皮膚炎、ケロイド、肥厚性瘢痕、リウマチ性疾患、じん麻疹、円板状ループス、皮膚ループス、中枢神経ループス、乾癬性関節炎、喘息、アレルギー性喘息、アイカルディ・グティエール症候群およびＩ型インターフェロン過剰発現の他のメンデル性疾患を含むＩ型インターフェロノパチー、一次性進行型多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、強皮症、円形脱毛症、瘢痕性脱毛症、痒疹、結節性痒疹、ＣＰＵＯ、苔癬疾患、扁平苔癬、スティーヴンス・ジョンソン症候群、脊椎症、筋炎、血管炎、天疱瘡、狼瘡、大うつ病性障害、アレルギー、ドライアイ症候群、移植片拒絶、癌、敗血症性ショック、心肺機能不全、急性呼吸器疾患、強直性脊椎炎、悪液質、慢性移植片対宿主病、急性移植片対宿主病、セリアックスプルー、特発性血小板減少性血栓性紫斑、血栓性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、シェーグレン症候群、表皮過形成、軟骨炎症、骨分解、若年性関節炎、若年性関節リウマチ、少関節型若年性関節リウマチ、多関節型若年性関節リウマチ、全身型若年性関節リウマチ、若年性強直性脊椎炎、若年性腸炎性関節炎、若年性ライター症候群、ＳＥＡ症候群、若年性皮膚筋炎、若年性乾癬性関節炎、若年性強皮症、若年性全身性エリトマトーデス、若年性血管炎、少関節型関節リウマチ、多関節型関節リウマチ、全身型関節リウマチ、腸炎性関節炎、反応性関節炎、ライター症候群、ミオリチス、多発性ミオリチス、皮膚ミオリチス、結節性多発性動脈炎（ｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｔｉｓ ｎｏｄｏｓｓａ）、ウェゲナー肉芽腫症、動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、サルコイドーシス、硬化症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、皮膚炎、スチル病、慢性閉塞性肺疾患、ギラン・バレー疾患、グレーブス病、アジソン病、レイノー現象、乾癬性表皮過形成、尋常性乾癬、滴状乾癬、逆性乾癬、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、病原性リンパ球の活動に関連または起因する免疫障害、非感染性ぶどう膜炎、ベーチェット病、ならびにフォークト−小柳−原田症候群から選択される疾患または状態を治療または予防する方法であって、治療上有効な量の、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
【請求項9】
前記化合物が、単離された形態での、（Ｓ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミドまたは薬学的に許容できるその塩である、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記化合物が、単離された形態での、３−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミドまたは薬学的に許容できる塩である、請求項８に記載の方法。
【請求項11】
前記疾患または状態が、アトピー性皮膚炎である、請求項８から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記疾患または状態が、手湿疹である、請求項８から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記疾患または状態が、皮膚ループスである、請求項８から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
ＪＡＫ１阻害薬が適応である障害を治療するための医薬品の製造のための、請求項１から１３のいずれか一項に記載の単離された形態での化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン化合物およびそのような化合物の単離された形態に関する。本発明はまた、前記化合物の調製、および前記調製に使用する中間体、前記化合物を含有する組成物、およびヤヌスキナーゼ（Ｊａｎｕｓ Ｋｉｎａｓｅ）（ＪＡＫ）を阻害するための前記化合物の使用、およびＪＡＫ１により媒介される状態を治療および予防するための方法に関する。
【背景技術】
【0002】
タンパク質キナーゼは、タンパク質中の特定の残基のリン酸化を触媒する酵素のファミリーであり、チロシンおよびセリン／スレオニンキナーゼに大きく分類される。突然変異、過剰発現、または不適当な調節、調節不全もしくは調節解除、ならびに増殖因子またはサイトカインの過剰もしくは過少産生から生じる不適当なキナーゼ活性は、癌、心血管疾患、アレルギー、喘息および他の呼吸器疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、骨疾患、代謝障害、ならびにアルツハイマー病などの神経および神経変性障害を含むがそれらだけに限らない多くの疾患に関与している。不適当なキナーゼ活性は、前述のおよび関連する疾患に関与する細胞増殖、細胞分化、生存、アポトーシス、有糸分裂誘発、細胞周期制御、および細胞可動性に関連する種々の生物学的細胞応答を引き起こす。
【0003】
したがって、タンパク質キナーゼは、治療介入の標的としての酵素の重要なクラスとして浮上している。特に、細胞性タンパク質チロシンキナーゼ（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびＴｙｋ２）のＪＡＫファミリーは、サイトカインシグナル伝達において中心的な役割を果たす（Ｋｉｓｓｅｌｅｖａら、Ｇｅｎｅ、２００２、２８５、１；Ｙａｍａｏｋａら、Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２００４、５、２５３）。それらの受容体と結合した後、サイトカインはＪＡＫを活性化し、次いで、サイトカイン受容体をリン酸化し、それによって、シグナル伝達分子、特に、最終的に遺伝子発現をもたらすシグナル伝達性転写因子（ＳＴＡＴ）ファミリーのメンバーのためのドッキング部位が形成される。多くのサイトカインは、ＪＡＫファミリーを活性化することが既知である。これらのサイトカインとしては、ＩＦＮファミリー（ＩＦＮ−アルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮ−オメガ、リミチン、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２２）、ｇｐ１３０ファミリー（ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＯＳＭ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、ＮＮＴ−１／ＢＳＦ−３、Ｇ−ＣＳＦ、ＣＴ−１、レプチン、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３）、ガンマＣファミリー（ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＴＳＬＰ、ＩＬ−９、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−４、ＩＬ−１３）、ＩＬ−３ファミリー（ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＧＭ−ＣＳＦ）、単鎖ファミリー（ＥＰＯ、ＧＨ、ＰＲＬ、ＴＰＯ）、受容体チロシンキナーゼ（ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＣＳＦ−１、ＨＧＦ）、およびＧタンパク質共役受容体（ＡＴ１）が挙げられる。
【0004】
特異的ＪＡＫ酵素、およびＪＡＫ１を特にＪＡＫ２に対して効果的にかつ選択的に阻害する新しい化合物が依然として必要である。ＪＡＫ１は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２から構成されるタンパク質キナーゼのヤヌスファミリーのメンバーである。ＪＡＫ１は、すべての組織において様々なレベルで発現される。多くのサイトカイン受容体は、以下の組合せ：ＪＡＫ１／ＪＡＫ２、ＪＡＫ１／ＪＡＫ３、ＪＡＫ１／ＴＹＫ２、ＪＡＫ２／ＴＹＫ２、またはＪＡＫ２／ＪＡＫ２におけるＪＡＫキナーゼの対を介してシグナル伝達する。ＪＡＫ１は、この状況で最も広く対をなすＪＡＫキナーゼであり、γ−共通（ＩＬ−２Ｒγ）サイトカイン受容体、ＩＬ−６受容体ファミリー、Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ型受容体ファミリー、ならびにＩＬ−１０受容体ファミリーによるシグナル伝達に必要とされる。動物研究から、ＪＡＫ１が免疫系の発達、機能、および恒常性に必要であることが示されている。ＪＡＫ１キナーゼ活性の阻害による免疫活性の調節は、ＪＡＫ２依存性エリスロポエチン（ＥＰＯ）およびトロンボポエチン（ＴＰＯ）伝達を回避しながら（Ｎｅｕｂａｕｅｒ Ｈ．ら、Ｃｅｌｌ、９３（３）、３９７〜４０９（１９９８）；Ｐａｒｇａｎａｓ Ｅ．ら、Ｃｅｌｌ、９３（３）、３８５〜９５（１９９８））、様々な免疫障害の治療に有用であることを証明できる（Ｍｕｒｒａｙ，Ｐ．Ｊ．、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７８、２６２３〜２６２９（２００７）；Ｋｉｓｓｅｌｅｖａ，Ｔ．ら、Ｇｅｎｅ、２８５、１〜２４（２００２）；Ｏ’Ｓｈｅａ，Ｊ．Ｊ．ら、Ｃｅｌｌ、１０９（付録）Ｓ１２１〜Ｓ１３１（２００２））。
【0005】
ヒトおよび動物の両方において、アトピー性皮膚炎など、ＪＡＫに関連する障害を制御する安全で効果的な薬剤が実質的に必要とされている。現在、アトピー性皮膚炎の治療に関する市場は、苦痛および望ましくない副作用が生じるコルチコステロイドに独占されている。抗ヒスタミン剤も使用されているが、効果が不十分である。ＪＡＫ１に対して選択的な効能を有するＪＡＫ阻害薬であり、ステロイド用法の代替法を提供し、アトピー性皮膚炎で持続する、またはアレルゲンもしくは原因物質の除去後にゆっくりと退行する慢性のそう痒症および炎症の消散を促進する新しい化合物が必要である。
【0006】
最近確認されたＮ−（（１Ｓ，３Ｓ）−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミドは、一般的にアブロシチニブとして知られており、内容全体を参照により本明細書に援用する、本願の譲受人に譲渡された米国特許第９，０３５，０７４号に記載されており、化学式Ｃ１４Ｈ２１Ｎ５Ｏ２Ｓおよび以下の構造式を有する。
【0007】
【化1】
【先行技術文献】
【特許文献】
【0008】
【特許文献1】米国特許第９，０３５，０７４号
【非特許文献】
【0009】
【非特許文献1】Ｋｉｓｓｅｌｅｖａら、Ｇｅｎｅ、２００２、２８５、１
【非特許文献2】Ｙａｍａｏｋａら、Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２００４、５、２５３
【非特許文献3】Ｍｕｒｒａｙ，Ｐ．Ｊ．、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７８、２６２３〜２６２９（２００７）
【非特許文献4】Ｋｉｓｓｅｌｅｖａ，Ｔ．ら、Ｇｅｎｅ、２８５、１〜２４（２００２）
【非特許文献5】Ｏ’Ｓｈｅａ，Ｊ．Ｊ．ら、Ｃｅｌｌ、１０９（付録）Ｓ１２１〜Ｓ１３１（２００２）
【非特許文献6】Ｎｅｕｂａｕｅｒ Ｈ．ら、Ｃｅｌｌ、９３（３）、３９７〜４０９（１９９８）
【非特許文献7】Ｐａｒｇａｎａｓ Ｅ．ら、Ｃｅｌｌ、９３（３）、３８５〜９５（１９９８）
【非特許文献8】Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ、ＳｔａｈｌおよびＷｅｒｍｕｔｈ著（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００２）
【非特許文献9】「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１）
【非特許文献10】Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１８、６１（３）、１１３０〜１１５２
【非特許文献11】Ａ．Ｌ．Ｓｐｅｋ、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．２００３、３６、７〜１３
【非特許文献12】Ｃ．Ｆ．Ｍａｃｒａｅ、Ｐ．Ｒ．Ｅｄｉｎｇｔｏｎ、Ｐ．ＭｃＣａｂｅ、Ｅ．Ｐｉｄｃｏｃｋ、Ｇ．Ｐ．Ｓｈｉｅｌｄｓ、Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ、Ｍ．Ｔｏｗｌｅｒ、およびＪ．ｖａｎ ｄｅ Ｓｔｒｅｅｋ、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．３９、４５３〜４５７、２００６
【非特許文献13】Ｄｏｌｏｍａｎｏｖ，Ｏ．Ｖ．、Ｂｏｕｒｈｉｓ，Ｌ．Ｊ．、Ｇｉｌｄｅａ，Ｒ．Ｊ．、Ｈｏｗａｒｄ，Ｊ．Ａ．Ｋ．、Ｐｕｓｃｈｍａｎｎ，Ｈ．、（２００９）、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．、４２、３３９〜３４１
【非特許文献14】Ｒ．Ｗ．Ｗ．Ｈｏｏｆｔら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．（２００８）、４１、９６〜１０３
【非特許文献15】Ｈ．Ｄ．Ｆｌａｃｋ、Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．１９８３、Ａ３９、８６７〜８８１
【非特許文献16】Ｇｏｏｄｅｒｈａｍ Ｍ．Ｊ．ら、ＪＡＭＡ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、１５５（１２）、１３７１〜１３７９（２０１９年１０月）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0010】
【課題を解決するための手段】
【0011】
本発明は、ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン化合物およびそのような化合物の単離された形態に関する。本発明の単離された化合物は、より高い効能および有害作用の発生の減少を含む、予想外に有利な活性を有することが分かった。この単離された化合物は、薬学的に許容できる賦形剤と組み合わせた医薬組成物において、およびＪＡＫ１により媒介される状態を治療する方法において使用することができる。
【0012】
本発明は、以下の構造を有する式Ｉの化合物：
【0013】
【化2】
または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【0014】
他の態様では、本発明はまた、単離された形態での、式Ｉの化合物または薬学的に許容できる塩を提供する。
【0015】
他の態様では、本発明はまた、薬学的に許容できる賦形剤および式Ｉの化合物または薬学的に許容できるその塩を含む医薬組成物を提供する。
【0016】
別の態様では、本発明はまた、筋炎、血管炎、天疱瘡、クローン病、狼瘡、腎炎、乾癬、多発性硬化症、大うつ病性障害、アレルギー、喘息、シェーグレン疾患、ドライアイ症候群、移植片拒絶、癌、炎症性腸疾患、敗血症性ショック、心肺機能不全、急性呼吸器疾患、または悪液質を含む状態または障害を、治療上有効な量の式Ｉの化合物または薬学的に許容できる塩を、それを必要とする対象に投与することによって治療する方法を提供する。
【0017】
別の態様では、本発明はまた、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、強皮症、狼瘡、そう痒症、その他のそう痒性状態、哺乳動物のアレルギー性皮膚炎を含むアレルギー反応、炎症性気道疾患、再発性気道閉塞、気道過敏症、および慢性閉塞性肺疾患を含む状態または障害を、治療上有効な量の式Ｉの化合物または薬学的に許容できるその塩を、それを必要とする対象に投与することを含むことによって治療する方法を提供する。
【0018】
別の態様では、本発明はまた、本発明の化合物を調製する方法を提供する。
【0019】
本発明は、例としてのみ示す以下の説明からさらに理解されるであろう。以下の考察および実施例を通じて本発明の様々な態様の理解が得られるが、本発明はそのように限定されるものではない。
【0020】
用語「対象」は、ヒト、家畜、または愛玩動物を指す。
【0021】
用語「治療する」または「治療」は、疾患、障害、もしくは状態に関連する症状の緩和、またはそれらの症状のさらなる進行もしくは悪化の停止を意味する。対象の疾患および状態に応じて、用語「治療」は、本明細書で使用する場合、治癒的、姑息的、および予防的治療のうちの１つまたは複数を含んでよい。治療はまた、他の療法と組み合わせて、本発明の医薬製剤を投与することを含んでよい。
【0022】
用語「治療上有効な」は、代替療法に通常関連する有害な副作用を回避しながら、障害を予防または障害の重症度を改善する薬剤の能力を示す。語句「治療上有効な」は、語句「治療、予防、または回復に有効な」と同等であると理解すべきであり、両方とも、代替療法に通常関連する有害な副作用を回避しながら、癌、心血管疾患、または疼痛および炎症の重症度、ならびに罹患頻度において各薬剤単独での治療を上回る改善という目標を達成するであろう併用療法で使用するための、各薬剤の量を認定するように意図されている。
【0023】
「薬学的に許容できる」は、対象での使用に適していることを意味する。
【0024】
置換基がある群から「独立に選択される」と記載されている場合、各置換基は他と無関係に選択される。したがって、各置換基は、他の置換基と同一であっても異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、代謝産物化合物またはその塩は、実質的に単離されている。
【0025】
用語「単離された」、「精製された」、「精製された形態で」、「単離された形態で」、または「精製された物質」は、化合物、または化合物に関するその塩が、合成方法、例えば反応混合物から単離された後の化合物の物理的状態を意味する。したがって、化合物に関する用語「単離された」、「精製された」、「精製された形態で」、「単離された形態で」、または「精製された物質」は、本明細書に記載または当業者に周知の１つまたは複数の精製方法（例えば、クロマトグラフィ、再結晶など）から、本明細書に記載または当業者に周知の標準的な分析技術によって特徴付けが可能なほど十分な純度で得られた後の前記化合物の物理的状態を意味する。例として、本明細書に開示する精製技術（例えば、ＬＣ−ＭＳおよびＬＣ−ＭＳ／ＭＳ技術）は、主題化合物の単離された形態をもたらす。このような単離および精製技術は、化合物またはその塩を少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、または少なくとも約９９重量％含有する生成物純度をもたらすと予想される。
【発明を実施するための形態】
【0026】
本発明は、ＪＡＫ１の調節不全に関連する疾患および状態の治療に有用な選択的ＪＡＫ１モジュレーターである化合物に関する。本発明は、ＪＡＫ１の調節不全に関連する疾患および状態の治療に有用な選択的ＪＡＫ１モジュレーターである単離された化合物をさらに提供する。本発明はまた、そのようなＪＡＫ１モジュレーターを含むプロドラッグおよび医薬組成物ならびにそのような疾患および状態を治療および／または予防する方法を提供する。
【0027】
第１の態様では、本発明は、以下の構造を有する式Ｉの化合物：
【0028】
【化3】
または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【0029】
以下に本発明のこの第１の態様の実施形態（Ｅ）を説明するが、便宜上、Ｅ１はこれと同一である。
【0030】
Ｅ１． 以下の構造を有する式Ｉの化合物：
【0031】
【化4】
または薬学的に許容できるその塩。
【0032】
Ｅ２． Ｒ１がヒドロキシであり、Ｒ２が水素である、Ｅ１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【0033】
Ｅ３． Ｒ１が水素であり、Ｒ２がヒドロキシである、Ｅ１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【0034】
Ｅ４． 以下の構造を有する式ＩＡの化合物：
【0035】
【化5】
【0036】
Ｅ５． 以下の構造を有する式ＩＢの化合物：
【0037】
【化6】
【0038】
Ｅ６．（Ｓ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド；および、
３−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド；
からなる群から選択される化合物または薬学的に許容できるその塩。
【0039】
Ｅ７． （Ｓ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミドまたは薬学的に許容できるその塩。
【0040】
Ｅ８． ３−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミドまたは薬学的に許容できるその塩。
【0041】
Ｅ９． （Ｓ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド。
【0042】
Ｅ１０． ３−ヒドロキシ−Ｎ−（３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド。
【0043】
Ｅ１１． 単離された形態での、実施形態Ｅ１からＥ１０のいずれか１つに記載の化合物。
【0044】
Ｅ１２． 結晶形態での、実施形態Ｅ１からＥ１１のいずれか１つに記載の化合物。
【0045】
Ｅ１３． ＪＡＫ１阻害薬が適応である疾患または状態を、そのような治療を必要とする対象において予防または治療する方法であって、治療上有効な量の、実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれか１つに記載の化合物、または薬学的に許容できる塩を対象に投与することを含む、方法。
【0046】
Ｅ１４． 炎症性または自己免疫性状態を治療または予防する方法であって、治療上有効な量の、実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれか１つに記載の化合物、または薬学的に許容できるその塩をそれに罹患している対象に投与することを含む、方法。
【0047】
Ｅ１５． 実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれか１つに記載の化合物、および薬学的に許容できる賦形剤を含む医薬組成物。
【0048】
Ｅ１６． 炎症、自己免疫疾患、神経炎症、関節炎、リウマチ性関節炎、脊椎関節症、全身性エリトマトーデス（ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｕｓ）、ループス腎炎、骨関節炎、痛風性関節炎、疼痛、発熱、肺サルコイドーシス、ケイ肺症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、血栓症、鬱血性心不全および心臓再灌流障害、心筋症、脳卒中、虚血、再灌流障害、脳浮腫、脳外傷、神経変性、肝疾患、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、腎炎、網膜炎、網膜症、黄斑変性症、緑内障、糖尿病（１型および２型）、糖尿病性神経障害、ウイルスおよび細菌感染、筋肉痛、内毒素ショック、毒素ショック症候群、骨粗鬆症、多発性硬化症、子宮内膜症、月経痛、腟炎、カンジダ症、癌、線維症、肥満、筋ジストロフィ、多発性筋炎、皮膚筋炎、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、白斑症、アルツハイマー病、皮膚潮紅、湿疹、乾癬、アトピー性皮膚炎、日光皮膚炎、ケロイド、肥厚性瘢痕、リウマチ性疾患、じん麻疹、円板状ループス、皮膚ループス、中枢神経ループス、乾癬性関節炎、喘息、アレルギー性喘息、アイカルディ・グティエール症候群およびＩ型インターフェロン過剰発現の他のメンデル性疾患を含むＩ型インターフェロノパチー、一次性進行型多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、強皮症、円形脱毛症、瘢痕性脱毛症、痒疹、結節性痒疹、ＣＰＵＯ、苔癬疾患、扁平苔癬、スティーヴンス・ジョンソン症候群、脊椎症、筋炎、血管炎、天疱瘡、狼瘡、大うつ病性障害、アレルギー、ドライアイ症候群、移植片拒絶、癌、敗血症性ショック、心肺機能不全、急性呼吸器疾患、強直性脊椎炎、悪液質、慢性移植片対宿主病、急性移植片対宿主病、セリアックスプルー、特発性血小板減少性血栓性紫斑、血栓性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、シェーグレン症候群、表皮過形成、軟骨炎症、骨分解、若年性関節炎、若年性関節リウマチ、少関節型若年性関節リウマチ、多関節型若年性関節リウマチ、全身型若年性関節リウマチ、若年性強直性脊椎炎、若年性腸炎性関節炎、若年性ライター（Ｒｅｔｅｒ’ｓ）症候群、ＳＥＡ症候群、若年性皮膚筋炎、若年性乾癬性関節炎、若年性強皮症、若年性全身性エリトマトーデス、若年性血管炎、少関節型関節リウマチ、多関節型関節リウマチ、全身型関節リウマチ、腸炎性関節炎、反応性関節炎、ライター症候群、ミオリチス（ｍｙｏｌｉｔｉｓ）、多発性ミオリチス（ｐｏｌｙｍｙｏｌｉｔｉｓ）、皮膚ミオリチス（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｌｉｔｉｓ）、結節性多発性動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、サルコイドーシス、硬化症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、皮膚炎、スチル病、慢性閉塞性肺疾患、ギラン・バレー疾患、グレーブス病、アジソン病、レイノー現象、乾癬性表皮過形成、尋常性乾癬、滴状乾癬、逆性乾癬、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、病原性リンパ球の活動に関連または起因する免疫障害、非感染性ぶどう膜炎、ベーチェット病、ならびにフォークト−小柳−原田症候群から選択される疾患または状態を治療または予防する方法であって、治療上有効な量の、実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれか１つに記載の化合物または薬学的に許容できるその塩を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
【0049】
Ｅ１７． 乾癬を治療または予防する方法であって、治療上有効な量の、実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれか１つに記載の化合物または薬学的に許容できるその塩を含む組成物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法。
【0050】
Ｅ１８． アトピー性皮膚炎を治療または予防する方法であって、治療上有効な量の、実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれか１つに記載の化合物または薬学的に許容できるその塩を含む組成物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法。
【0051】
Ｅ１９． 手湿疹を治療または予防する方法であって、治療上有効な量の、実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれか１つに記載の化合物または薬学的に許容できるその塩を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法。
【0052】
Ｅ２０． そう痒症を治療または予防する方法であって、治療上有効な量の、実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれか１つに記載の化合物または薬学的に許容できるその塩を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法。
【0053】
Ｅ２１． 皮膚ループスを治療または予防する方法であって、治療上有効な量の、実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれか１つに記載の化合物または薬学的に許容できるその塩を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、方法。
【0054】
Ｅ２２． ＪＡＫ、特にＪＡＫ１の調節不全と関連する障害または状態を、その治療を必要とする対象において治療する方法であって、治療上有効な量の、実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれか１つに記載の化合物または薬学的に許容できるその塩を対象に投与することを含む、方法。
【0055】
Ｅ２３． 治療または予防する障害または状態が、炎症、自己免疫疾患、神経炎症、関節炎、リウマチ性関節炎、脊椎関節症、全身性エリトマトーデス、ループス腎炎、骨関節炎、痛風性関節炎、疼痛、発熱、肺サルコイドーシス、ケイ肺症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、血栓症、鬱血性心不全および心臓再灌流障害、心筋症、脳卒中、虚血、再灌流障害、脳浮腫、脳外傷、神経変性、肝疾患、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、腎炎、網膜炎、網膜症、黄斑変性症、緑内障、糖尿病（１型および２型）、糖尿病性神経障害、ウイルスおよび細菌感染、筋肉痛、内毒素ショック、毒素ショック症候群、骨粗鬆症、多発性硬化症、子宮内膜症、月経痛、腟炎、カンジダ症、癌、線維症、肥満、筋ジストロフィ、多発性筋炎、皮膚筋炎、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、白斑症、アルツハイマー病、皮膚潮紅、湿疹、乾癬、アトピー性皮膚炎、日光皮膚炎、ケロイド、肥厚性瘢痕、リウマチ性疾患、じん麻疹、円板状ループス、皮膚ループス、中枢神経ループス、乾癬性関節炎、喘息、アレルギー性喘息、アイカルディ・グティエール症候群およびＩ型インターフェロン過剰発現の他のメンデル性疾患を含むＩ型インターフェロノパチー、一次性進行型多発性硬化症、再発寛解型多発性硬化症、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、強皮症、円形脱毛症、脊椎症、筋炎、血管炎、天疱瘡、狼瘡、大うつ病性障害、アレルギー、ドライアイ症候群、移植片拒絶、癌、敗血症性ショック、心肺機能不全、急性呼吸器疾患、強直性脊椎炎、悪液質、慢性移植片対宿主病、急性移植片対宿主病、セリアックスプルー、特発性血小板減少性血栓性紫斑、重症筋無力症、シェーグレン症候群、表皮過形成、軟骨炎症、骨分解、若年性関節炎、若年性関節リウマチ、少関節型若年性関節リウマチ、多関節型若年性関節リウマチ、全身型若年性関節リウマチ、若年性強直性脊椎炎、若年性腸炎性関節炎、若年性ライター症候群、ＳＥＡ症候群、若年性皮膚筋炎、若年性乾癬性関節炎、若年性強皮症、若年性全身性エリトマトーデス、若年性血管炎、少関節型関節リウマチ、多関節型関節リウマチ、全身型関節リウマチ、腸炎性関節炎、反応性関節炎、ライター症候群、ミオリチス、多発性ミオリチス、皮膚ミオリチス、結節性多発性動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、サルコイドーシス、硬化症、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、皮膚炎、スチル病、慢性閉塞性肺疾患、ギラン・バレー疾患、グレーブス病、アジソン病、レイノー現象、乾癬性表皮過形成、尋常性乾癬、滴状乾癬、逆性乾癬、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、病原性リンパ球の活動に関連または起因する免疫障害、非感染性ぶどう膜炎、ベーチェット病、ならびにフォークト−小柳−原田症候群からなる群から選択される、Ｅ２２に記載の方法。
【0056】
Ｅ２４． 治療上有効な量が、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日である、実施形態Ｅ１３からＥ２３に記載の方法。
【0057】
Ｅ２５． 治療上有効な量が、０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜１０ｍｇ／ｋｇ体重／日である、Ｅ２４に記載の方法。
【0058】
Ｅ２６． ＪＡＫ１阻害薬が適応である障害を治療するための医薬品の製造のための、実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれかに記載の化合物の使用。
【0059】
Ｅ２９． ＪＡＫ１阻害薬が適応である障害の治療で使用するための、実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれかに記載の化合物。
【0060】
Ｅ３０． ＪＡＫ１阻害薬が適応である障害を治療するための医薬品の製造のための、実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれかに記載の単離された形態での化合物の使用。
【0061】
Ｅ３１． ＪＡＫ１阻害薬が適応である障害の治療で使用するための、実施形態Ｅ１からＥ１２のいずれかに記載の単離された形態での化合物。
【0062】
Ｅ３２． 実施形態Ｅ１からＥ１２の化合物、または薬学的に許容できるその塩、および１種もしくは複数種の追加の薬理学的に有効な化合物を含む医薬組合せ。
【0063】
同じ分子式を有するが、それらの原子の結合の性質もしくは順序、またはそれらの原子の空間的な配置が異なる化合物または単離された形態での化合物は、「異性体」と呼ばれる。それらの原子の空間的な配置が異なる異性体は、「立体異性体」と呼ばれる。式Ｉ、ＩＡ、またはＩＢの化合物または単離された形態での化合物がシスおよびトランス−アキラルジアステレオ異性体として存在できることは、当業者なら理解されよう。一例は、式ＩＣの化合物または単離された形態での化合物である。
【0064】
記載する化合物および単離された形態での化合物の範囲内に含まれているのは、本明細書に記載の化合物のすべての異性体（例えば、シス、トランス、またはジアステレオ異性体）単独ならびに任意の混合物である。鏡像異性体、ジアステレオ異性体、シス、トランス、シン、アンチ、溶媒和物（水和物を含む）、互変異性体、およびこれらの混合物を含むこれらの形態すべてが記載する化合物または単離された形態での化合物に含まれる。立体異性体混合物、例えば、ジアステレオ異性体の混合物は、適切な分離法による既知の方法においてそれらの対応する異性体に分離することができる。ジアステレオ異性体混合物は、例えば、分別結晶化、クロマトグラフィ、溶媒分散、および類似の手順によってそれらの個々のジアステレオ異性体に分離することができる。この分離は、１個の出発化合物のレベルで、または式Ｉ、ＩＡ、もしくはＩＢの化合物自体において行うことができる。鏡像異性体は、ジアステレオ異性体塩の形成によって、例えば、純粋な鏡像異性体キラル酸との塩形成によって、またはクロマトグラフィ、例えば、キラル配位子を有するクロマトグラフ基質を用いたＨＰＬＣによって、分離することができる。
【0065】
対象における障害を治療するための治療的使用では、本発明の化合物もしくは単離された形態での化合物、またはその医薬組成物は、経口、非経口、局所、経直腸、経粘膜、または経腸的に投与することができる。非経口投与には、全身作用を生じる間接注入または罹患範囲への直接注入が含まれる。局所投与には、局所施用によって容易に接近できる皮膚または臓器、例えば、眼または耳の治療が含まれる。これにはまた、全身作用を生じる経皮送達も含まれる。直腸投与には、坐薬の形態が含まれる。好ましい投与経路は、経口および非経口である。
【0066】
式Ｉ、ＩＡ、またはＩＢの化合物または単離された形態での化合物の薬学的に許容できる塩には、その酸付加塩および塩基塩が含まれる。適切な酸付加塩は、非毒性塩を形成する酸から形成される。例として、酢酸塩、アジピン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、シクラミン酸塩、エジシル酸塩、エシル酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフチル酸塩、２−ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロチン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ピログルタミン酸塩、サッカリン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリフルオロ酢酸塩、およびキシノホ酸塩（ｘｉｎｏｆｏａｔｅ）が挙げられる。
【0067】
適切な塩基塩は、非毒性塩を形成する塩基から形成される。例として、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、カルシウム、コリン、ジエチルアミン、ジオールアミン、グリシン、リシン、マグネシウム、メグルミン、オラミン、カリウム、ナトリウム、トロメタミン、および亜鉛の塩が挙げられる。
【0068】
酸および塩基のヘミ塩、例えば、ヘミ硫酸塩およびヘミカルシウム塩も形成することができる。適切な塩についての概説に関しては、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ、ＳｔａｈｌおよびＷｅｒｍｕｔｈ著（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００２）を参照されたい。
【0069】
式Ｉ、ＩＡ、またはＩＢの化合物および単離された形態での化合物の薬学的に許容できる塩は、以下の３種の方法のうちの１種または複数種によりそれぞれ調製することができる：（ｉ）式Ｉ、ＩＡ、またはＩＢの化合物または単離された形態での化合物を所望の酸または塩基と反応させる方法；（ｉｉ）式Ｉ、ＩＡ、もしくはＩＢの化合物もしくは単離された形態での化合物の適切な前駆体から酸もしくは塩基不安定性保護基を除去するか、または所望の酸もしくは塩基を使用して、適切な環式前駆体、例えばラクトンもしくはラクタムを開環する方法；または（ｉｉｉ）適切な酸もしくは塩基との反応により、または適切なイオン交換カラムを用いて、式Ｉ、ＩＡまたはＩＢの化合物または単離された形態での化合物のある塩を他の塩に変換する方法。３種の反応はすべて、典型的には溶液中で実施する。生じた塩を沈殿させ、ろ過で収集してもよいし、溶媒を蒸発させて回収してもよい。生じた塩のイオン化度は、完全イオン化からほぼ非イオン化まで変化し得る。
【0070】
本発明の医薬組成物は、当技術分野で周知の方法によって、例えば、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣形成、研和、乳化、カプセル化、封入、凍結乾燥、または噴霧乾燥によって製造することができる。
【0071】
本発明に従って使用する医薬組成物は、有効な化合物または単離された形態での化合物の製剤への加工を容易にし、薬学的に使用することができる賦形剤および助剤を含む１種または複数の薬学的に許容できる担体を使用して、従来の方法で製剤化することができる。適切な製剤は、選択する投与経路に依存する。薬学的に許容できる添加剤および担体は、一般に当業者に既知であり、このように本発明に含まれる。このような賦形剤および担体は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（１９９１）に記載されている。本発明の製剤は、短時間作用型、速放出型、長時間作用型、および持続放出型になるように設計することができる。したがって、医薬製剤はまた、制御放出または緩放出用に製剤化することができる。
【0072】
本発明での使用に適する医薬組成物には、有効成分が意図される目的、すなわち、障害または疾患の制御または治療を達成するのに十分な量で含有されている組成物が含まれる。より詳細には、治療上有効な量は、疾患の症状／徴候の予防、軽減、もしくは改善、または治療対象の延命に有効な化合物または単離された形態での化合物の量を意味する。
【0073】
医薬組成物およびその単位剤形における本発明の化合物または単離された形態での化合物である有効成分の量は、投与の方法、特定の化合物または単離された形態での化合物の効能、および所望の濃度に応じて広く変更または調整することができる。治療上有効な量の決定は、当業者の能力の範囲内で十分に行うことができる。通常、有効成分の量は、組成物の０．０１重量％〜９９重量％の範囲である。
【0074】
通常、有効成分の治療上有効な投与量は、約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日、より好ましくは約０．３〜３ｍｇ／ｋｇ体重／日、さらにより好ましくは約０．３〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲である。投与量は、各対象の必要量および治療している障害または疾患の重症度に応じて異なる可能性があることを理解されたい。
【0075】
所望の用量は、好都合には、１回用量、または適切な間隔で投与される分割用量として、例えば、１日当たり２、３、４回、またはそれ以上の副用量（ｓｕｂ−ｄｏｓｅ）として提供することができる。副用量自体をさらに、例えば、注入器からの複数回吸入または眼に複数回滴下することによってなど、ばらばらに間隔を置いた何回かの投与に分けることができる。
【0076】
また、投与する初期投与量は、所望の血漿濃度を速やかに達成させるために、上記の上限レベルを超えて増加させてもよいことを理解されたい。一方、初期投与量は、最適より少なくてもよく、１日投与量は、特定の状況に応じて治療中に次第に増加させてもよい。所望により、また、１日量を複数回の投与量、例えば１日当たり２〜４回に分けることもできる。
【0077】
本発明の化合物および単離された形態での化合物は、薬学的に許容できる形態で単独で、または哺乳動物の免疫系を調節する１種もしくは複数種の別の薬剤または抗炎症剤と組み合わせて投与することができる。これらの薬剤として、限定するものではないが、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）拮抗薬；ＬＴＢ４、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４、ＣｙｓＬＴ１、またはＣｙｓＬＴ２の拮抗薬などのロイコトリエン拮抗薬（ＬＴＲＡ）、例えば、モンテルカストまたはザフィルルカスト；ヒスタミン１型受容体拮抗薬またはヒスタミン２型受容体拮抗薬などのヒスタミン受容体拮抗薬、例えば、ロラチジン、フェキソフェナジン、デスロラチジン、レボセチリジン、メタピリレン、またはセチリジン；α１−アドレナリン受容体作動薬またはα２−アドレナリン受容体作動薬、例えば、フェニレフリン、メトキサミン、オキシメタゾリン、またはメチルノルエフリン（ｍｅｔｈｙｌｎｏｒｅｐｈｒｉｎｅ）；ムスカリンＭ３受容体拮抗薬、例えば、チオトロピウムまたはイプラトロピウム；二重ムスカリンＭ３受容体拮抗薬／β２作動薬；ＰＤＥ３阻害薬、ＰＤＥ４阻害薬、またはＰＤＥ５阻害薬などのＰＤＥ阻害薬、例えば、テオフィリン、シルデナフィル、バルデナフィル、タダラフィル、イブジラスト、シロミラスト、またはロフルミラスト；クロモグリク酸ナトリウムまたはネドクロミルナトリウム；非選択性阻害薬（例えば、アスピリンもしくはイブプロフェン）または選択的阻害薬（例えば、セレコキシブもしくはバルデコキシブ）などのシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害薬；副腎皮質ステロイド、例えば、フルチカゾン、モメタゾン、デキサメタゾン、プレドニゾロン、ブデソニド、シクレソニド、またはベクラメタゾン（ｂｅｃｌａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）；抗炎症性モノクローナル抗体、例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、タネズマブ、ラニビズマブ、ベバシズマブ、またはメポリズマブ；β２作動薬、例えば、サルメテロール、アルブテロール、サルブタモール、フェノテロール、またはホルモテロール、特に、長時間作用性β２作動薬；インテグリン拮抗薬、例えば、ナタリズマブ；ＶＬＡ−４拮抗薬などの接着分子阻害薬；キニンＢ１またはＢ２受容体拮抗薬；ＩｇＥ経路の阻害薬（例えば、オマリズマブ）またはシクロスポリンなどの免疫抑制剤；ＭＭＰ−９またはＭＭＰ−１２の阻害薬などのマトリクスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害薬；タキキニンＮＫ１、ＮＫ２、またはＮＫ３受容体拮抗薬；エラスターゼ、キマーゼ、またはカテオプシン（ｃａｔｈｅｏｐｓｉｎ）Ｇの阻害薬などのプロテアーゼ阻害薬；アデノシンＡ２ａ受容体作動薬；アデノシンＡ２ｂ受容体拮抗薬；ウロキナーゼ阻害薬；ドーパミン受容体作動薬（例えば、ロピニロール）、特に、ドーパミンＤ２受容体作動薬（例えばブロモクリプチン）；ＩＫＫ阻害薬などのＮＦκＢ経路のモジュレーター；ＪＡＫキナーゼ、ｓｙｋキナーゼ、ｐ３８キナーゼ、ＳＰＨＫ−１キナーゼ、Ｒｈｏキナーゼ、ＥＧＦ−Ｒ、またはＭＫ−２の阻害薬などのサイトカインシグナル伝達経路のさらなるモジュレーター；粘液溶解薬、粘液作動薬、または鎮咳薬；抗生剤；抗ウイルス剤；ワクチン；ケモカイン；上皮型ナトリウムチャネル（ＥＮａＣ）遮断薬または上皮型ナトリウムチャネル（ＥＮａＣ）阻害薬；Ｐ２Ｙ２作動薬などのヌクレオチド受容体作動薬；トロンボキサン阻害薬；ナイアシン；５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）阻害薬、例えば、ジロートン；ＶＬＡＭ、ＩＣＡＭ、またはＥＬＡＭなどの接着因子；ＣＲＴＨ２受容体（ＤＰ２）拮抗薬；プロスタグランジンＤ２受容体（ＤＰ１）拮抗薬；造血性プロスタグランジンＤ２シンターゼ（ＨＰＧＤＳ）阻害薬；インターフェロン−β；可溶性ヒトＴＮＦ受容体、例えば、エタネルセプト；ＨＤＡＣ阻害薬；ホスホイノシトチド（ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｏｔｉｄｅ）３−キナーゼガンマ（ＰＩ３Ｋγ）阻害薬；ホスホイノシチド３−キナーゼデルタ（ＰＩ３Ｋδ）阻害薬；ＣＸＣＲ−１またはＣＸＣＲ−２受容体拮抗薬；ＩＲＡＫ−４阻害薬；およびＴＬＲ−４またはＴＬＲ−９阻害薬を挙げることができ、これには具体的に名前を挙げた化合物の薬学的に許容できる塩が含まれる。薬剤は別の活性剤と一緒に投与してよく、その場合、第２の活性剤は経口または局所的に投与してよい。
【0078】
式Ｉ、ＩＡ、もしくはＩＢの化合物もしくは単離された形態での化合物または薬学的に許容できるその塩との併用療法で使用する適切な特異的薬剤は、スルファサラジン、メサラジン、プレドニゾン、アザチオプリン、インフリキシマブ、アダリムマブ、ベリムマブ、ベセルトリズマブ（ｂｅｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂ）、ナタリズマブ、ベドリズマブ、ヒドロコルチゾン、ブデソニド、シクロスポリン、タクロリムス、フェキソフェナジン、６−メルカプトプリン、メトトレキセート、ウルソデオキシコール酸、オベチコール酸、抗ヒスタミン剤、リファンピン、プレドニゾン、メトトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、ヒドロキシクロロキン、モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、タクロリムス、レフルノミド、クロロキンおよびキナクリン、サリドマイド、リツキサン、ＮＳＡＩＤ、ソルメドロール、デポメドロールおよびデキサメタゾンである。
【0079】
化学合成以下のスキームおよび書面による説明は、本発明の化合物の調製に関する一般的な詳細を提供する。
【0080】
【化7】
【0081】
実施例１および実施例２の両方に関係する合成経路をスキーム１に示す。第一級アミン（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１８、６１（３）、１１３０〜１１５２）を、トリエチルアミンを含有するジクロロメタン中で２−オキソ−１−プロパンスルホニルクロリド（クロロアセトンから２工程で調製）で処理する。次いで、得られたスルホンアミドをメタノール中で水素化ホウ素ナトリウムで処理して、ケトンを還元し、第二級アルコールの異性体混合物を得る。次いで、ピロロピリミジン環からトシル保護を除去する。次いで、記載の条件下で、第二級アルコールをＳＦＣにより分離して、化合物ＩＡに相当する実施例１で形成した化合物（ピーク１）、および実施例２で形成した化合物（ピーク２）を得る。
【0082】
実施例１の代替調製をスキーム２に示す。
【0083】
【化8】
【0084】
ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリドを含む、溶媒としてのジメチルホルムアミド、および塩基としてのピリジンを使用して、（Ｓ）−１−クロロ−２−プロパノールをシリルエーテルとして保護する。第一級塩化物をチオ酢酸カリウムで置き換えて、チオエステルを得る。チオエステルを塩素ガスで酸化して、塩化スルホニルを得る。この反応条件下で、シリル保護基を付随して除去することができる。ｃｉｓ−Ｎ−メチル−Ｎ−｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル｝シクロブタン−１，３−ジアミンを塩化スルホニルと反応させて、スルホンアミドを得る。次いで、水とテトラヒドロフランとの混合物中で水酸化リチウムを使用して、ピロロピリミジンからトシル保護基を除去して、ＳＦＣ精製後に化合物ＩＡ（実施例１）を得る。
【0085】
【化9】
【0086】
ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリドを含む、溶媒としてのジメチルホルムアミド、および塩基としてのピリジンを使用して、（Ｒ）−１−クロロ−２−プロパノールをシリルエーテルとして保護する。第一級塩化物をチオ酢酸カリウムで置き換えて、チオエステルを得る。チオエステルを塩素ガスで酸化して、塩化スルホニルを得る。シリル保護基のいくらかの損失が観察される。ｃｉｓ−Ｎ−メチル−Ｎ−｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル｝シクロブタン−１，３−ジアミンを塩化スルホニルと反応させて、スルホンアミドを得る。シリル保護基をトリフルオロ酢酸で切断して、第二級アルコールを得る。次いで、水とテトラヒドロフランとの混合物中で水酸化リチウムを使用して、ピロロピリミジンからトシル保護基を除去して、ＳＦＣ精製後に実施例２の化合物を得る。
【0087】
実施例５に記載するように、化合物ＩＢの調製をスキーム４に示す。ｃｉｓ−Ｎ−メチル−Ｎ−｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル｝シクロブタン−１，３−ジアミンをメチル３−（クロロスルホニル）プロパノエートと反応させて、スルホンアミドを得る。スルホンアミドを水素化アルミニウムリチウムで還元して、３−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（ＩＢ）を得る。
【0088】
【化10】
【0089】
実施例６に記載するように、化合物ＩＢの代替調製をスキーム５に示す。ｃｉｓ−Ｎ−メチル−Ｎ−｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］−ピリミジン−４−イル｝シクロブタン−１，３−ジアミンジヒドロブロミドを、トリエチルアミンおよびエチル３−（クロロスルホニル）プロパノエートなどの塩基で処理して、エチル３−（Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）スルファモイル）プロパノエートを得る。後者のスルファモイルプロパノエートを水素化アルミニウムリチウムで還元し、後処理をして、粗生成物の３−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミドを得、これをさらに精製することなく使用する。後者のスルホンアミドをＬｉＯＨなどの塩基で処理して、３−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（ＩＢ）を得る。
【0090】
【化11】
【0091】
本発明の化合物の合成を実行する際、当業者は、反応の進行を監視し、反応を継続すべきか、または所望の生成物を得るための後処理の準備ができているかを決定するために、後処理の前に反応混合物を試料採取し、アッセイする必要性を認識するであろう。反応混合物をアッセイする一般の方法には、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）、液体クロマトグラフィ／質量分析（ＬＣＭＳ）、および核磁気共鳴（ＮＭＲ）がある。
【0092】
当業者はまた、本発明の化合物および単離された形態での化合物が、ジアステレオ異性体または幾何異性体（例えば、シクロアルカン環上のシスおよびトランス置換）の混合物として調製され得ることを認識するであろう。これらの異性体は、シリカゲルによる順相クロマトグラフィ、逆相分取高圧液体クロマトグラフィ、または超臨界流体クロマトグラフィなどの標準的なクロマトグラフィ技術によって分離することができる。当業者はまた、本発明のいくつかの化合物がキラルであり、したがって、鏡像異性体のラセミまたはスケールミック混合物として調製することができることを認識するであろう。鏡像異性体の分離には、いくつかの方法が利用可能であり、当業者に周知である。鏡像異性体を分離するための好ましい慣例的な方法は、キラル固定相を用いる超臨界流体クロマトグラフィである。
【実施例】
【0093】
特に明記しない限り、反応は窒素雰囲気下で行った。シリカゲルによるクロマトグラフィは、２５０〜４００メッシュのシリカゲルを使用し、加圧窒素（約１０〜１５ｐｓｉ）を使用して溶媒をカラムに通して行った（「フラッシュクロマトグラフィ」）。表示がある場合、溶液および反応混合物を真空下でロータリーエバポレーションにより濃縮した。
【0094】
調製および実施例調製１． ２−オキソプロパン−１−スルホン酸、ナトリウム塩
【0095】
【化12】
【0096】
調製２． ２−オキソプロパン−１−スルホニルクロリド
【0097】
【化13】
【0098】
調製３． ｃｉｓ−Ｎ−（３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）−２−オキソプロパン−１−スルホンアミド
【0099】
【化14】
【0100】
調製４． ２−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド
【0101】
【化15】
【0102】
調製５． ２−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド
【0103】
【化16】
7.15 (m, 1H), 6.65 - 6.64 (m, 1H), 5.02 - 4.81 (m, 2H), 4.15 - 3.94 (m, 1H),
3.67 - 3.54 (m, 1H), 3.26 (s, 3H), 3.14 - 2.95 (m, 2H), 2.71 - 2.56 (m, 2H),
2.31 - 2.19 (m, 2H), 1.22 (d, J = 6.0 Hz, 3H), LC/MS [M+H] = 339.9.
【0104】
（実施例１）（Ｓ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（ＩＡ）
【0105】
【化17】
7.16 - 7.12 (m, 1H), 6.67 - 6.61 (m, 1H), 4.92 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.90 - 4.84
(m, 1H), 4.11 - 4.01 (m, 1H), 3.63 - 3.53 (m, 1H), 3.27 - 3.23 (m, 3H), 3.11 -
2.96 (m, 2H), 2.63 - 2.53 (m, 2H), 2.29 - 2.20 (m, 2H), 1.21 (d, J = 6.0 Hz,
3H), LC/MS [M+H] = 340.2.結晶性材料は酢酸エチルから調製することができる。
【0106】
単結晶Ｘ線構造データ収集は、Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ Ｑｕｅｓｔ回折計を用いて室温で行った。データ収集は、オメガおよびファイスキャンからなる。三斜晶系空間群Ｐ１においてＳＨＥＬＸソフトウェアスイートを使用する固有位相決定法によって、構造を解明した。続いて、完全行列最小二乗法によって構造を精密化した。すべての非水素原子を見つけ、異方性変位パラメータを使用して精密化した。
【0107】
フーリエ示差マップから窒素および酸素上に位置する水素原子を見つけ、距離を制限することで精密化した。残りの水素原子を計算位置に配置し、それらのキャリア原子上に載せた。最終的な精密化は、すべての水素原子に対する等方性変位パラメータを含んだ。尤度法（Ｈｏｏｆｔ ２００８）を使用する絶対構造の解析を、ＰＬＡＴＯＮ（Ｓｐｅｋ ２００３）を使用して実行した。提示した試料がエナンチオピュアであると仮定すると、結果は、絶対構造が正確に割り当てられたことを示す。この方法から、構造が正確である確率が１００％であることが計算される。Ｈｏｏｆｔパラメータは（１５）のＥｓｄで０．１０４として報告され、Ｐａｒｓｏｎパラメータは（１６）のＥｓｄで０．０９７として報告されている。非対称単位あたりの２つの同一分子のＣ１３＿Ｃ２７での絶対立体配置は、（−Ｓ）＿（−Ｓ）として確認された。最終Ｒ指数は５．９％であった。最終的な示差フーリエから、電子密度の損失または配置の間違いがなかったことが解明された。適正な結晶、データ収集、および精密化を表１にまとめる。原子座標を表２に列挙する。
【0108】
ソフトウェアおよび参考文献ＳＨＥＬＸＴＬ、バージョン５．１、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ、１９９７。ＰＬＡＴＯＮ、Ａ．Ｌ．Ｓｐｅｋ、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．２００３、３６、７〜１３。ＭＥＲＣＵＲＹ、Ｃ．Ｆ．Ｍａｃｒａｅ、Ｐ．Ｒ．Ｅｄｉｎｇｔｏｎ、Ｐ．ＭｃＣａｂｅ、Ｅ．Ｐｉｄｃｏｃｋ、Ｇ．Ｐ．Ｓｈｉｅｌｄｓ、Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ、Ｍ．Ｔｏｗｌｅｒ、およびＪ．ｖａｎ ｄｅ Ｓｔｒｅｅｋ、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．３９、４５３〜４５７、２００６。ＯＬＥＸ２、Ｄｏｌｏｍａｎｏｖ，Ｏ．Ｖ．、Ｂｏｕｒｈｉｓ，Ｌ．Ｊ．、Ｇｉｌｄｅａ，Ｒ．Ｊ．、Ｈｏｗａｒｄ，Ｊ．Ａ．Ｋ．、Ｐｕｓｃｈｍａｎｎ，Ｈ．、（２００９）、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．、４２、３３９〜３４１。Ｒ．Ｗ．Ｗ．Ｈｏｏｆｔら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．（２００８）、４１、９６〜１０３。Ｈ．Ｄ．Ｆｌａｃｋ、Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．１９８３、Ａ３９、８６７〜８８１。
【0109】
【表1】
【0110】
【表2-1】
【0111】
【表2-2】
【0112】
（実施例２）（Ｒ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（ＩＣ）
【0113】
【化18】
7.18 - 7.11 (m, 1H), 6.66 - 6.60 (m, 1H), 4.96 - 4.84 (m, 2H), 4.12 - 3.99 (m,
1H), 3.66 - 3.54 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 3.12 - 2.94 (m, 2H), 2.64 - 2.56 (m,
2H), 2.30 - 2.18 (m, 2H), 1.20 (d, J = 6.5 Hz, 3H), LC/MS [M+H] = 340.2.結晶性材料は酢酸エチルから調製することができる。
【0114】
単結晶Ｘ線構造データ収集は、Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ Ｑｕｅｓｔ回折計を用いて室温で行った。データ収集は、オメガおよびファイスキャンからなる。このロットでは積層した板様結晶が得られ、収集のために結晶を分け、載置した。三斜晶系クラス空間群Ｐ１においてＳＨＥＬＸソフトウェアスイートを使用する固有位相決定法によって、構造を解明した。続いて、完全行列最小二乗法によって構造を精密化した。すべての非水素原子を見つけ、異方性変位パラメータを使用して精密化した。フーリエ示差マップから窒素および酸素上に位置する水素原子を見つけ、距離を制限することで精密化した。残りの水素原子を計算位置に配置し、それらのキャリア原子上に載せた。最終的な精密化は、すべての水素原子に対する等方性変位パラメータを含んだ。尤度法（Ｈｏｏｆｔ ２００８）を使用する絶対構造の分析を、ＰＬＡＴＯＮ（Ｓｐｅｋ ２００３）を使用して実行した。提示した試料がエナンチオピュアであると仮定すると、結果は、絶対構造が正確に割り当てられたことを示す。この方法から、構造が正確である確率が１００．０であることが計算される。Ｈｏｏｆｔパラメータは（１８）のＥｓｄで０．０４４として報告され、Ｐａｒｓｏｎパラメータは（１９）のＥｓｄで００．０５０として報告されている。非対称単位あたりの２つの同一分子のＣ１３およびＣ２７での絶対立体配置は、（−Ｒ）＿（−Ｒ）として確認された。Ｐ−１に対して偽対称。最終Ｒ指数は４．５％であった。最終的な示差フーリエから、電子密度の損失または配置の間違いがなかったことが解明された。適正な結晶、データ収集、および精密化を表３にまとめる。原子座標を表４に列挙する。
【0115】
ソフトウェアおよび参考文献ＳＨＥＬＸＴＬ、バージョン５．１、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ、１９９７。ＰＬＡＴＯＮ、Ａ．Ｌ．Ｓｐｅｋ、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．２００３、３６、７〜１３。ＭＥＲＣＵＲＹ、Ｃ．Ｆ．Ｍａｃｒａｅ、Ｐ．Ｒ．Ｅｄｉｎｇｔｏｎ、Ｐ．ＭｃＣａｂｅ、Ｅ．Ｐｉｄｃｏｃｋ、Ｇ．Ｐ．Ｓｈｉｅｌｄｓ、Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ、Ｍ．Ｔｏｗｌｅｒ、およびＪ．ｖａｎ ｄｅ Ｓｔｒｅｅｋ、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．３９、４５３〜４５７、２００６。ＯＬＥＸ２、Ｄｏｌｏｍａｎｏｖ，Ｏ．Ｖ．、Ｂｏｕｒｈｉｓ，Ｌ．Ｊ．、Ｇｉｌｄｅａ，Ｒ．Ｊ．、Ｈｏｗａｒｄ，Ｊ．Ａ．Ｋ．、Ｐｕｓｃｈｍａｎｎ，Ｈ．、（２００９）、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．、４２、３３９〜３４１。Ｒ．Ｗ．Ｗ．Ｈｏｏｆｔら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．（２００８）、４１、９６〜１０３。Ｈ．Ｄ．Ｆｌａｃｋ、Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．１９８３、Ａ３９、８６７〜８８１。
【0116】
【表3】
【0117】
【表4-1】
【0118】
【表4-2】
【0119】
（実施例３）（Ｓ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（ＩＡ）の代替調製
【0120】
【化19】
（Ｓ）−（＋）−１−クロロプロパン−２−オール（１．０ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）を含むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）の溶液に、ピリジン（１．０ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（１．９１ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。２０℃で撹拌した後、反応を水（４０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×４０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させた。溶媒を除去して、表題化合物（２．２ｇ）を得、これをさらに精製することなく使用した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.96 (m, 1H), 3.42 (dd, J = 10.8, 5.9 Hz, 1H), 3.34 (dd, J = 10.7,
5.9 Hz, 1H), 1.23 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.89 (s, 9H), 0.08 (d, J = 4.1 Hz, 6H).
【0121】
工程２． （Ｓ）−Ｓ−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロピル）エタンチオエート（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（（１−クロロプロパン−２−イル）オキシ）ジメチルシラン（２．２ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を含むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）の溶液に、チオ酢酸カリウム（２．４１ｇ、２１．１ｍｍｏｌ）およびヨウ化カリウム（１７．５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。反応を８０℃に温め、２０時間撹拌した。反応を室温に冷却し、水（５０ｍＬ）で希釈し、混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（４０ｍＬ×２）で抽出した。有機抽出物を集め、ブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、溶媒を除去して表題化合物（２．４０ｇ）を得、これを精製することなく使用した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.91 (m, 1H), 3.00 - 2.91 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.18 (d, J = 6.1
Hz, 3H), 0.89 (s, 9H), 0.07 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
【0122】
工程３． （Ｓ）−２−ヒドロキシプロパン−１−スルホニルクロリドＣｌ２（ｇ）を、（Ｓ）−Ｓ−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロピル）エタンチオエート（０．５ｇ、２．０１ｍｍｏｌ）を含むジクロロメタン（２０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）の溶液に０℃で５分間通過させると、溶液が黄色になった。Ｃｌ２（ｇ）の流れを止め、反応を０℃で０．５時間撹拌した。次いで、Ｎ２（ｇ）を反応に通気させて、無色溶液を得た。ＴＬＣが、出発材料の減失および新しいスポットの形成を示した。水（２０ｍＬ）を反応混合物に添加し、次いで、これをジクロロメタン（４０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を１０％ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させた。溶媒を除去して、粗表題化合物（０．６ｇ）を無色の油状物として得、これを精製することなく次の工程で使用した。
【0123】
工程４． （Ｓ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド４０ｍＬ容のバイアルに、ｃｉｓ−Ｎ１−メチル−Ｎ１−（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）シクロブタン−１，３−ジアミン（２００ｍｇ、０．３７５ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（１９９ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（７ｍＬ）、および水（２．５ｍＬ）を添加した。２分後、実施例１の工程３（２９２ｍｇ）を含むテトラヒドロフラン（２ｍＬ）の溶液を添加した。得られた懸濁液を５０℃に加熱し、１８時間撹拌した。反応を室温に冷却し、水（２０ｍＬ）を添加した。得られた混合物を酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出した。有機抽出物を集め、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、溶媒を除去して、粗材料を得、それをクロマトグラフィ（シリカ、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル、２０〜１００％）で精製して、表題化合物（３０ｍｇ）を得た。LC/MS m/z (M+H)+=494.3。
【0124】
工程５． （Ｓ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（Ｓ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（４５ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）を含むテトラヒドロフラン：水（５ｍＬ：１ｍＬ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（２３．０ｍｇ、０．５４７ｍｍｏｌ）を１５℃で添加した。次いで、反応を６０℃に温め、１６時間撹拌した。水（１０ｍＬ）を反応に添加し、得られた混合物を酢酸エチル（１５ｍＬ×４）で抽出した。有機抽出物を合わせ、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、溶媒を除去して、粗材料（３０ｍｇ）を得、次いで、これをＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ−１８（商標）、２５０×５０ｍｍ、１０μ、Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ＮＨ４ＯＨ、１０分かけて１５〜３５％）で精製して、表題化合物（１６ｍｇ）を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.63 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.14 (d, J = 3.6 Hz,
1H), 6.62 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.89 (ddd, J = 17.2, 7.9, 5.9 Hz, 2H), 4.04 (m,
1H), 3.58 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 3.14 - 2.86 (m, 2H), 2.62 - 2.51 (m, 2H), 2.23
(m, 2H), 1.20 (d, J = 6.2 Hz, 3H);LC/MS m/z (M+H)+ = 340.1.;Ｃｈｉｒａｌ ＳＦＣ（商標）（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−３（商標）、１５０×４．６ｍｍ、３μ、４０％ＭｅＯＨ（０．０５％ＤＥＡ）を含むＣＯ２、無勾配で１０分、２．５ｍＬ／分、Ｔ＝３５℃）Ｒｔ＝５．５４分、９９％ｅｅ。
【0125】
（実施例４）（Ｒ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（ＩＣ）の代替調製
【0126】
【化20】
（Ｒ）−（−）−１−クロロプロパン−２−オール（２．０ｇ、２１．２ｍｍｏｌ、ＣＡＳ：１９１４１−３９−０）を含むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）の溶液に、ピリジン（２．０ｇ、２５．４ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（３．８３ｇ、２５．４ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。２０時間撹拌した後、反応を水（６０ｍＬ）で希釈し、得られた混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×８０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を集め、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させた。溶媒を除去して、表題化合物（４．６０ｇ）を得、これをさらに精製することなく使用した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.96 (m, 1H), 3.42 (dd, J = 10.8, 5.9 Hz, 1H), 3.34 (dd, J = 10.7,
5.9 Hz, 1H), 1.23 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.89 (s, 9H), 0.08 (d, J = 4.1 Hz, 6H).
【0127】
工程２． （Ｒ）−Ｓ−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロピル）エタンチオエート（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（（１−クロロプロパン−２−イル）オキシ）ジメチルシラン（４．６０ｇ、２２．０３ｍｍｏｌ）を含むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）の溶液に、チオ酢酸カリウム（５．０３ｇ、４４．１ｍｍｏｌ）およびヨウ化カリウム（３６．６ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を添加した。８０℃で２０時間後、反応を室温に冷却し、水（１００ｍＬ）で希釈し、得られた混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機抽出物を合わせ、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、溶媒を除去して、表題化合物（５．０ｇ）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.90 (m, 1H), 3.00 - 2.91 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.18 (d, J = 6.1
Hz, 3H), 0.88 (s, 9H), 0.06 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
【0128】
工程３． （Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパン−１−スルホニルクロリドＣｌ２（ｇ）を、（Ｒ）−Ｓ−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロピル）エタンチオエート（０．５ｇ、２．０１ｍｍｏｌ）を含むジクロロメタン（２０ｍＬ）および水（１０．０ｍＬ）の溶液に０℃で５分間通過させると、溶液が黄色になった。Ｃｌ２（ｇ）の流れを止め、反応を０℃で０．５時間撹拌した。次いで、Ｎ２を反応に通気させて、無色の溶液を得た。ＴＬＣが、出発材料の減失および新しいスポットの形成を示した。水（２０ｍＬ）を反応混合物に添加し、次いで、これをジクロロメタン（４０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を１０％ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させた。溶媒を除去して、表題化合物（０．４ｇ）を無色の油状物として得、これを精製することなく次の工程で使用した。
【0129】
工程４． （Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−Ｎ−（（１Ｓ，３Ｓ）−３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド４０ｍＬのバイアルに、ｃｉｓ−Ｎ１−メチル−Ｎ１−（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）シクロブタン−１，３−ジアミン（１５０ｍｇ、０．２８１ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（１４９ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）、および水（２．０ｍＬ）を添加した。２分後、実施例２の工程３（２９２ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（２ｍＬ）の溶液を添加した。得られた懸濁液を５０℃に加熱し、２０時間撹拌した。反応を室温に冷却し、水（２０ｍＬ）を添加した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×２）で抽出した。有機抽出物を集め、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、溶媒を除去して、粗材料を得、これをクロマトグラフィ（シリカ、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル、２０〜１００％）で精製して、表題化合物（６０ｍｇ）およびＴＢＳ基を欠いた材料（２０ｍｇ）を得た。LC/MS m/z(M+H)+=608.3（ピーク１）；LC/MS
m/z(M+H)+=494.3（ピーク２）。
【0130】
工程５． （Ｒ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（６０ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）を含むジクロロメタン（５ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１．５ｍＬ）を０℃で添加した。１５℃で１６時間した後、溶媒を除去し、残留物を酢酸エチル（１５ｍＬ）に溶解した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、溶媒を除去して、表題化合物（５０ｍｇ）を得、これを精製することなく次の工程で使用した。LC/MS m/z(M+H)+=494.3。
【0131】
工程６． （Ｒ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（Ｒ）−２−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を含むテトラヒドロフラン：水（５ｍＬ：１ｍＬ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（４２．５ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を１５℃で添加した。６５℃で１６時間後、水（１０ｍＬ）を添加し、混合物を酢酸エチル（４×１０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、溶媒を除去して、粗材料を得、これを分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ−１８（商標）、２５０×５０ｍｍ、１０μ、Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ＋０．０５％ＮＨ４ＯＨ、１０分かけて１５〜３５％）で精製して、表題化合物（１８ｍｇ）を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.63 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.43 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.15 (dd, J
= 3.6, 2.4 Hz, 1H), 6.64 (dd, J = 3.6, 1.9 Hz, 1H), 4.97 - 4.83 (m, 2H), 4.12 -
3.98 (m, 1H), 3.59 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.13 - 2.92 (m, 2H), 2.58 (m, 2H),
2.24 (m, 2H), 1.21 (d, J = 6.2 Hz, 3H).; LC/MS m/z (M+H)+ = 340.0.;Ｃｈｉｒａｌ ＳＦＣ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ−３（商標）、１５０×４．６ｍｍ、３μ、４０％ＭｅＯＨ（０．０５％ＤＥＡ）を含むＣＯ２、無勾配で１０分、２．５ｍＬ／分、Ｔ＝３５℃）Ｒｔ＝６．７５分、９９％ｅｅ。
【0132】
（実施例５）３−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（ＩＢ）
ｃｉｓ−Ｎ−メチル−Ｎ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルシクロブタン−１，３−ジアミン（１９０ｍｇ）および炭酸カリウム（２４０ｍｇ）を含む１：１のテトラヒドロフラン：水（各５ｍＬ）溶媒混合物の撹拌混合物に、メチル３−（クロロスルホニル）プロパノエート（２５０ｍｇ）を１０℃で添加した。混合物を室温に温め、１０分間撹拌した。混合物を真空下で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィ（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ １：２０）で精製して、メチル３−（Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）スルファモイル）プロパノエート（１４０ｍｇ）を白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4): 8.13 (s, 1H), 7.13 (d, 1H), 6.70 (d, 1H), 4.89 (m,
1H), 3.73 (s, 3H), 3.69 (m, 1H), 3.4 (m, 5H), 2.82 (m, 4H), 2.34 (m, 2H). C15H21N5O4SのMS m/z: 390.2 (M+Na)+.ＨＰＬＣ：Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ−Ｃ１８、３ｐｍ、３．０＊５０ｍｍカラム、保持時間：２．１３分、移動相：０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）を含む水〜６０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）を含む水、波長：２２０ｎｍ。
【0133】
メチル３−（Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）スルファモイル）プロパノエート（１２０ｍｇ）を含む乾燥テトラヒドロフラン（５ｍＬ）の撹拌溶液に、水素化アルミニウムリチウム（５０ｍｇ）を窒素下０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、０．５時間撹拌した。混合物を、メタノールを注意深く添加してクエンチし、カラムクロマトグラフィ（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、１：１０）で直接精製して、３−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（５０ｍｇ）を白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, メタノール-d4): 8.12(s, 1H), 7.13 (d, 1H), 6.70 (d, 1H), 4.89 (m, 1H), 3.73 (m, 3H), 3.36 (s, 3H),
3.15 (m, 2H), 2.81 (m, 2H), 2.35 (m, 2H), 2.03 (m, 2H); C14H21N5O3SのMS m/z: 340.2 (M+H)+;ＨＰＬＣ：Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ−Ｃ１８、３ｐｍ、３．０＊５０ｍｍカラム、保持時間：１．８５分、移動相：０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）を含む水〜６０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）を含む水、波長：２２０ｎｍ。
【0134】
（実施例６）３−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミドの代替調製
ｃｉｓ−Ｎ−メチル−Ｎ−｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］−ピリミジン−４−イル｝シクロブタン−１，３−ジアミンジヒドロブロミド（９８８ｍｇ）を含むジクロロメタン５０ｍＬの混合物に、トリエチルアミン（５６２ｍｇ）およびエチル３−（クロロスルホニル）プロパノエート（７４３ｍｇ）を０℃で添加した。反応混合物を２５℃に温め、２時間撹拌した。反応混合物を真空下で蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィ（Ｂｉｏｔａｇｅ、２０ｇのシリコンカラム、石油エーテル：酢酸エチル１：０〜０：１、酢酸エチル：メタノール２０：１）で精製して、エチル３−（Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）スルファモイル）プロパノエートを得た。Ｃ２３Ｈ２９Ｎ５Ｏ６Ｓ２のＬＣＭＳ ｍ／ｚ：５３５．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【0135】
エチル３−（Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）スルファモイル）プロパノエート（７００ｍｇ）を含むテトラヒドロフラン５０ｍＬの溶液に、水素化アルミニウムリチウム（７４．４ｍｇ）を０℃で添加した。反応混合物を１５時間２５℃に温めた。反応混合物を水１ｍＬで注意深くクエンチし、次いで、ろ過した。ろ液を真空下で蒸発させて、粗生成物の３−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミドを得、これをさらに精製することなく使用した。Ｃ２１Ｈ２７Ｎ５Ｏ５Ｓ２のＬＣＭＳ ｍ／ｚ：４９４．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【0136】
３−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７−トシル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミド（４００ｍｇ）を含むエタノール２０ｍＬおよび水１０ｍＬの溶液に、ＬｉＯＨ（９７ｍｇ）を２５℃で添加した。反応混合物を９０℃に加熱し、２時間撹拌した。反応混合物を冷却し、真空下で蒸発させて、粗生成物を得、これを分取ＨＰＬＣで精製して、１８１ｍｇの３−ヒドロキシ−Ｎ−（ｃｉｓ−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）シクロブチル）プロパン−１−スルホンアミドを白色固体として得た。ＨＰＬＣ条件：カラム：ＤｕｒａＳｈｅｌｌ（商標）１５０＊２５ｍｍ＊５μｍ、水（０．０５％水酸化アンモニウムｖ／ｖ）−アセトニトリル、１〜４１％Ｂ、勾配１０分、維持時間１分１００％Ｂ、流速２５ｍＬ／分；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):11.6 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.15 (d, 1H), 6.65 (d, 1H), 4.89 (m,
1H), 4.68 (s, 1H), 3.58 (m, 1H), 3.49 (m, 2H), 3.26 (s, 3H), 3.0 (m, 2H), 2.58
(m, 2H), 2.24 (m, 2H), 1.81 (m, 2H).
【0137】
生物学的評価１ｍＭのＡＴＰにおけるＪＡＫ Ｃａｌｉｐｅｒ酵素アッセイ
被験物を、３０ｍＭのストック濃度になるようにジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。１１点半対数希釈シリーズをＤＭＳＯ中で作製し、最大濃度を６００μＭとした。試験化合物プレートには、１００％阻害を定義するために既知の阻害薬を入れた陽性対照ウェル、および阻害なしを定義するためにＤＭＳＯを入れた陰性対照ウェルも含めた。化合物プレートを、１〜６０倍に希釈して、最大最終アッセイ化合物濃度を１０μＭ、ＤＭＳＯ濃度を２％にした。被験物およびアッセイ対照を、３８４ウェルプレートに添加した。反応混合物は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１０ｍＭの塩化マグネシウム、０．０１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、０．０００５％のＴｗｅｅｎ２０、１ｍＭのＡＴＰ、および１μＭのペプチド基質を含有していた。ＪＡＫ１およびＴＹＫ２アッセイは、１μＭのＩＲＳｔｉｄｅペプチド（５ＦＡＭ−ＫＫＳＲＧＤＹＭＴＭＱＩＤ）を含有しており、ＪＡＫ２およびＪＡＫ３アッセイは、１μＭのＪＡＫｔｉｄｅペプチド（ＦＩＴＣ−ＫＧＧＥＥＥＥＹＦＥＬＶＫＫ）を含有していた。アッセイを、２０ｎＭのＪＡＫ１、１ｎＭのＪＡＫ２、１ｎＭのＪＡＫ３、または１ｎＭのＴＹＫ２酵素を添加することによって開始し、ＪＡＫ１では３時間、ＪＡＫ２では６０分間、ＪＡＫ３では７５分間、またはＴＹＫ２では１３５分間、室温でインキュベートした。酵素濃度およびインキュベーション時間を、新たな酵素調製物ごとに最適化し、確実に２０％〜３０％リン酸化するように経時的にわずかに変更した。１０ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％のコーティング試薬、および１００ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ＝７．４の最終濃度物でアッセイを停止させた。アッセイプレートを、Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌａｂ Ｃｈｉｐ ３０００（ＬＣ３０００）機器上に置き、各ウェルから、適切な分離条件を使用して試料採取して、非リン酸化およびリン酸化ペプチドを測定した。データを表５に示す。
【0138】
【表5】
【0139】
細胞効能アッセイ：ヒト全血、ヒトケラチノサイト、およびＩＦＮγプライム化ＴＨＰ−１細胞におけるサイトカイン誘導性ＳＴＡＴリン酸化Ｓｈｕｌｍａｎ施設内審査委員会により承認されたＰｆｉｚｅｒプロトコル（プロトコル番号ＧＯＨＷ ＲＤＰ−０１）に従って、ヒト全血を、健常ドナーから静脈穿刺を介してナトリウムヘパリンが入っているバキュテイナ採血管に収集した。血液を使用前に３７℃に温めた。ヒト全血を、９６ウェル深型ウェルＶ底プレート中にアリコート（９０μＬ／ウェル）し、最大６０μＭの様々な濃度（０．２％ＤＭＳＯ最終）の化合物（５μＬ／ウェル）を用いて３７℃で６０分間処理した。これに続いて、ＩＦＮα（５０００Ｕ／ｍＬ）、ＩＦＮγ（１００ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−６（５０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−１０（３０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−１２（３０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−１５（３０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−２１（５０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−２３（２５ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−２７（１０００ｎｇ／ｍＬ）、ＥＰＯ（２Ｕ／ｍＬ）、ＴＳＬＰ（５０ｎｇ／ｍＬ）またはＰＢＳでチャレンジし、１５分間インキュベートした。サイトカイン刺激の１５分前に抗細胞表面抗体を添加し、ＩＬ−６処理およびＴＳＬＰ処理試料には抗ＣＤ３−ＢＶ４２１（０．５μＬ／ウェル）を、ＩＦＮγ処理試料には抗ＣＤ１４−ＢＶ４２１（０．５μＬ／ウェル）を添加した。試料を温かい１倍溶解／固定緩衝液（７００μＬ／ウェル）で処理して活性化を終了させ、３７℃で２０分間インキュベートして、赤血球を溶解させた。プレートを３００ｘｇで５分間遠心分離し、上清を吸引し、ウェル当たり８００μＬの染色緩衝液（０．１％ＦＢＳおよび０．０１％アジ化ナトリウムを含有するＤ−ＰＢＳ）で細胞を洗浄した。洗浄した細胞ペレットをウェル当たり３５０μＬの予め冷やした９０％メタノールに再懸濁させ、４℃で３０分間インキュベートした。９０％メタノールの除去後、細胞を染色緩衝液で１回洗浄した。すべての試料を、ウェル当たり１５０μＬの、１：１５０希釈の所望の抗リン酸化ＳＴＡＴ抗体を含む染色緩衝液に最終的に再懸濁させ、ＩＦＮγ処理試料では抗ｐＳＴＡＴ１−ＡＦ６４７；ＩＬ−６処理試料では抗ｐＳＴＡＴ１−ＡＦ４８８および抗ｐＳＴＡＴ３−ＡＦ６４７；ＩＦＮα、ＩＬ−１０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、およびＩＬ−２７処理試料では抗ｐＳＴＡＴ３−ＡＦ６４７；ＩＬ−１２処理試料では抗ｐＳＴＡＴ４−ＡＦ６４７；ＥＰＯ、ＩＬ−１５、およびＴＳＬＰ処理試料では抗ｐＳＴＡＴ５−ＡＦ−６４７で行った。
【0140】
ヒト初代ケラチノサイトをサプリメントキットと共にＤｅｒｍａＬｉｆｅ（商標）培地で培養して、細胞集団を拡大させた。アッセイには細胞の継代２〜５代目を使用した。約８０％集密状態で細胞を採取し、温かいＤｅｒｍａＬｉｆｅ（商標）培地に懸濁させ、９６ウェル深型ウェルＶ底プレート中にアリコート（９０μＬ／ウェル）にし、３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を化合物（０．０００３〜２０μＭ）で６０分間処理し、続いて、ＩＬ−４（２ｎｇ／ｍＬ）またはＩＬ−１３（２０ｎｇ／ｍＬ）で３７℃で１５分間刺激した。ＩＬ−２２誘導性ｐＳＴＡＴ３アッセイでは、ケラチノサイトを２４ウェルプレートに播種し、１８時間培養した。細胞をＤｅｒｍａＬｉｆｅ（商標）基本培地に切り替え、化合物（０．０００３〜２０μＭ）で６０分間処理し、次いで、ＩＬ−２２（１００ｎｇ／ｍＬ）で３０分間刺激した。０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡ処理によって細胞を剥離した。刺激したケラチノサイトを２％パラホルムアルデヒドで固定し、９０％メタノールで透過処理した。固定し透過処理した細胞を、ＩＬ−４およびＩＬ−１３処理試料ではＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７（商標）標識抗ｐＳＴＡＴ６抗体（１〜１５０希釈）で、ＩＬ−２２処理試料ではＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７標識抗ｐＳＴＡＴ３（１〜１５０希釈）で染色した。
【0141】
ＴＨＰ−１細胞を、１０％ＦＢＳ、５０μＭの２−メルカプトエタノール、５０Ｕ／ｍＬのペニシリン、５０μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、および２ｍＭのＬ−グルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地で維持した。ＴＨＰ−１細胞をＩＦＮγ（２０ｎｇ／ｍＬ）で１８時間処理した。ＩＦＮγプライム化ＴＨＰ−１細胞をＲＰＭＩ１６４０培地に再懸濁させ、化合物（０．０００３〜２０μＭ）で６０分間処理し、続いて、ＩＬ−３１（１μｇ／ｍＬ）でさらに１０分間刺激した。次いで、２％パラホルムアルデヒドで細胞を固定し、９０％メタノールで透過処理した。固定し透過処理した細胞を、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７（商標）標識抗ｐＳＴＡＴ３抗体（１〜１５０希釈）で染色した。
【0142】
４℃で一晩インキュベートした後、抗ｐＳＴＡＴで染色した試料を９６ウェルポリプロピレンＵ底プレートに移し、ＨＴＳプレートローダーを装備したＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（商標）でフローサイトメトリー分析を行った。ヒト全血試料に関して、ｐＳＴＡＴヒストグラム解析のために、ＩＦＮα、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、およびＩＬ−２７処理試料ではリンパ球集団を、ＩＦＮγ処理試料ではＣＤ１４＋細胞を、ＩＬ−６およびＴＳＬＰ処理試料ではＣＤ３＋細胞を、ＥＰＯ処理試料では全事象（全集団）をゲーティングした。ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−２２、およびＩＬ−３１アッセイでは、ケラチノサイトおよびＴＨＰ−１細胞の全集団をゲーティングした。バックグラウンド蛍光を、非刺激細胞を使用して定義し、約０．５％のゲーティングされた集団を含むようにゲートをピークの裾に置いた。ヒストグラム統計解析は、ＦＡＣＳＤｉｖａバージョン８．０を使用して行った。ｐＳＴＡＴのレベルを評価する相対蛍光単位は、陽性集団の百分率とその平均蛍光を掛けることによって計算した。阻害曲線および半最大阻害濃度（ＩＣ５０）値は、Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェア（バージョン８）またはＡｃｔｉｖｉｔｙ Ｂａｓｅデータ分析ソフトウェア（ＩＤ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を使用して決定した。
【0143】
サイトカイン誘導性ＳＴＡＴリン酸化に対する細胞効能実施例１および３ならびに実施例５および６に従って調製した式ＩＡおよびＩＢの化合物はそれぞれ、アブロシチニブを摂取するとヒト代謝においてｉｎ ｖｉｖｏで形成され、ヒトケラチノサイト、インターフェロンγプライム化ＴＨＰ−１細胞、またはヒト全血におけるＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−２２、ＩＬ−３１、およびＴＳＬＰ誘導性のＳＴＡＴリン酸化に対して、強力なＪＡＫ１阻害薬であるアブロシチニブと同様の活性を示す。Ｇｏｏｄｅｒｈａｍ Ｍ．Ｊ．ら、ＪＡＭＡ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、１５５（１２）、１３７１〜１３７９（２０１９年１０月）。特に、アブロシチニブのように、これらの化合物はすべて、ＪＡＫ１非依存経路を介してシグナルを伝達するサイトカインとは対照的にＪＡＫ１依存経路を介してシグナルを伝達するサイトカインに対してより効能があり、そのため、主にＪＡＫ１への影響を介して薬理活性に寄与すると考えられる。同様のシグナル伝達経路におけるアブロシチニブならびに式ＩＡおよびＩＢの化合物の細胞効能の比較を表６に示す。
【0144】
【表6】
【外国語明細書】