特開 2021-31464 妊娠促進組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】特開2021-31464(P2021-31464A)

(43)【公開日】2021年3月1日

(54)【発明の名称】妊娠促進組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/198 20060101AFI20210201BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20210201BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20210201BHJP

   A61K 47/04 20060101ALI20210201BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20210201BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/198

   A61K31/519

   A61K47/22

   A61K47/04

   A61P15/00

【審査請求】未請求

【請求項の数】6

【出願形態】ＯＬ

【全頁数】20

(21)【出願番号】特願2019-155208(P2019-155208)

(22)【出願日】2019年8月28日

(71)【出願人】

【識別番号】504300181

【氏名又は名称】国立大学法人浜松医科大学

(71)【出願人】

【識別番号】519312544

【氏名又は名称】医療法人社団俵ＩＶＦクリニック

(71)【出願人】

【識別番号】519312555

【氏名又は名称】株式会社Ａ−ＬＩＦＥ

(74)【代理人】

【識別番号】100116850

【弁理士】

【氏名又は名称】廣瀬 隆行

(74)【代理人】

【識別番号】100165847

【弁理士】

【氏名又は名称】関 大祐

(72)【発明者】

【氏名】金山 尚裕

(72)【発明者】

【氏名】俵 史子

(72)【発明者】

【氏名】木苗 貴秀

(72)【発明者】

【氏名】武田 泉穂

【テーマコード（参考）】

4C076

4C086

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C076BB01

4C076CC17

4C076DD22T

4C076DD59S

4C076FF52

4C076FF63

4C086AA01

4C086AA02

4C086CB09

4C086MA03

4C086MA05

4C086MA52

4C086NA14

4C086ZA81

4C086ZC75

4C206AA01

4C206AA02

4C206FA53

4C206MA03

4C206MA05

4C206MA72

4C206NA14

4C206ZA81

4C206ZC75

(57)【要約】      （修正有）

【課題】妊娠確率を有意に高めることができる妊娠促進組成物を提供する。
【解決手段】アルギニン，アルギニン誘導体又はその薬学的に許容される塩，葉酸，葉酸誘導体又はその薬学的に許容される塩及びビタミン系酸化防止剤を有効成分として含む妊娠促進組成物。
【選択図】図２

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アルギニン，アルギニン誘導体又はその薬学的に許容される塩，葉酸，葉酸誘導体又はその薬学的に許容される塩及びビタミン系酸化防止剤を有効成分として含む妊娠促進組成物。

【請求項2】

請求項１に記載の妊娠促進組成物であって，前記ビタミン系酸化防止剤がビタミンＥ，ビタミンＥ誘導体，又はその薬学的に許容される塩である，妊娠促進組成物。

【請求項3】

請求項２に記載の妊娠促進組成物であって，アルギニン，アルギニン誘導体又はその薬学的に許容される塩を１５００ｍｇ以上３０００ｍｇ以下，葉酸，葉酸誘導体又はその薬学的に許容される塩を３００μｇ以上９００μｇ以下，ビタミンＥ，ビタミンＥ誘導体，又はその薬学的に許容される塩を５ｍｇ以上２００ｍｇ以下含む，妊娠促進組成物。

【請求項4】

請求項３に記載の妊娠促進組成物であって，アルギニン，又はその薬学的に許容される塩を１５００ｍｇ以上３０００ｍｇ以下，葉酸又はその薬学的に許容される塩を３００μｇ以上９００μｇ以下，ビタミンＥ，又はその薬学的に許容される塩を５ｍｇ以上２００ｍｇ以下含む，妊娠促進組成物。

【請求項5】

請求項３に記載の妊娠促進組成物であって，グレープフルーツ果汁又はグレープフルーツ香料をさらに含む，妊娠促進組成物。

【請求項6】

請求項３〜５のいずれかに記載の妊娠促進組成物であって，５００ｍｇ以上３０００ｍｇ以下のリン酸，又はその薬学的に許容される塩をさらに含む，妊娠促進組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

この発明は，妊娠促進組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

特表２００８−５４４９９４号公報には，妊娠結果を改善する方法および組成物が記載されている。そして，妊娠結果を改善する組成物の例として，約４００Ｉ.Ｕ.のビタミンＥ，約１００ ｍｇのビタミンＣ； 約６ｍｇのリコピン；約２６μｇのセレン； 約２５ ｍｇの亜鉛；約５００μgの葉酸；および 約１，０００ ｍｇのニンニクを含む組成物が記載されている（請求項５１）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【特許文献1】特表２００８−５４４９９４号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

妊娠確率を有意に高めることができる妊娠促進組成物が望まれた。

【課題を解決するための手段】

【0005】

この明細書に記載されるある態様の発明は，（１）アルギニン源である，アルギニン，アルギニン誘導体又はその薬学的に許容される塩，（２）葉酸源である，葉酸，葉酸誘導体又はその薬学的に許容される塩，及び（３）ビタミン系酸化防止剤の組み合わせにより，相乗効果を発揮し，有意に妊娠効果を高めることができるという，実施例による知見に基づく。

【0006】

この明細書に記載される発明のある態様は，（１）アルギニン源である，アルギニン，アルギニン誘導体又はその薬学的に許容される塩，（２）葉酸源である，葉酸，葉酸誘導体，又はその薬学的に許容される塩，及び（３）ビタミン系酸化防止剤を有効成分として含む妊娠促進組成物に関する。

【0007】

ビタミン系酸化防止剤の例は，ビタミンＥ，ビタミンＥ誘導体又はその薬学的に許容される塩である。

【0008】

具体的な妊娠促進組成物中の組成例は，（１）アルギニン，アルギニン誘導体又はその薬学的に許容される塩を１５００ｍｇ以上３０００ｍｇ以下，（２）葉酸，葉酸誘導体又はその薬学的に許容される塩を３００μｇ以上９００μｇ以下，（３）ビタミンＥ，ビタミンＥ誘導体，又はその薬学的に許容される塩を５ｍｇ以上２００ｍｇ以下含むものである。さらに具体的な組成の例は，（１）アルギニン，又はその薬学的に許容される塩を１５００ｍｇ以上３０００ｍｇ以下，（２）葉酸又はその薬学的に許容される塩を３００μｇ以上９００μｇ以下，（３）ビタミンＥ，又はその薬学的に許容される塩を５ｍｇ以上２００ｍｇ以下含むものである。

【0009】

後述する実施例により示された通り，１日１回〜３回投与における１回当たりのアルギニン，アルギニン誘導体又はその薬学的に許容される塩の投与量が，０ｍｇの対象に比べて，１０００ｍｇのものは優位に妊娠率を向上させた。さらに２０００ｍｇの投与量のものは，１０００ｍｇの投与量のものに比べて妊娠率を向上させた。このことから，アルギニン，アルギニン誘導体又はその薬学的に許容される塩を１５００ｍｇ以上３０００ｍｇ以下であれば，顕著に妊娠率を向上させることができると考えられる。

【0010】

後述する実施例により示された通り，グレープフルーツ果汁を含むものは，良好な味が得られた。これは，グレープフルーツ果汁に替えて，グレープフルーツ香料を用いた場合も同様であると考えられる。また，５００ｍｇ以上３０００ｍｇ以下のリン酸，又はその薬学的に許容される塩をさらに含むものも良好な味が得られた。

【発明の効果】

【0011】

この明細書によれば，妊娠確率を有意に高めることができる妊娠促進組成物を提供できる。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】図１は，被験者のＲＣＴへの参加フローチャートを示す図面に代わるフローチャートである。

【図2】図２は，ｈＣＧ陽性率と妊娠率(自然妊娠含む)を示す図面に代わるグラフである。

【図3】図３は，ＡＭＨ２．０未満におけるｈＣＧ陽性率と妊娠率を示す図面に代わるグラフである。

【図4】図４は，中等度胚におけるｈＣＧ陽性率と妊娠率を示す図面に代わるグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0013】

以下，本発明を実施するための形態について説明する。本発明は，以下に説明する実施の形態に限定されるものではなく，以下の形態から当業者が自明な範囲で適宜修正したものも含む。

【0014】

この明細書に記載される発明のある態様は，アルギニン，アルギニン誘導体又はその薬学的に許容される塩，葉酸，葉酸誘導体又はその薬学的に許容される塩及びビタミン系酸化防止剤を有効成分として含む妊娠促進組成物に関する。実施例により示された通り，（１）アルギニン，アルギニン誘導体又はその薬学的に許容される塩，（２）葉酸，葉酸誘導体又はその薬学的に許容される塩及び（３）ビタミン系酸化防止剤の組み合わせにより，相乗効果を発揮し，有意に妊娠効果を高めることができる。

【0015】

アルギニンは，２−アミノ−５−グアニジノペンタン酸（又は２−アミノ−５−グアニジノ吉草酸）ともよばれるアミノ酸である。第１の成分であるアルギニンは，アルギニンの薬学的に許容される塩であってもよいし，アルギニンのプロドラック（生体内でアルギニンとなる化合物）やアルギニン誘導体（プロドラックを含む。）であってもよいし，アルギニン誘導体の薬学的に許容される塩であってもよい。これらの中では，アルギニン又はその薬学的に許容される塩が好ましい。アルギニン誘導体は，例えば特許６３８６８４９号公報，特許５６２５９１４ 号公報，特許４０１０９５１ 号公報，及び特許４３５２１１４号公報に記載される通り，公知である。アルギニン誘導体の例は，アルギニンとリン酸とのエステルや，アルギニンの配糖体である。アルギニン誘導体の塩の例は，アルキルオキシヒドロキシプロピルアルギニン塩、例えば、Ｎ−［３−アルキル（１２，１４）オキシ−２−ヒドロキシプロピル］−Ｌ−アルギニン塩酸塩である。以下，これらをまとめて単にアルギニンとも表記する。

【0016】

葉酸は，ビタミンＭ，ビタミンＢ９，及びプテロイルグルタミン酸ともよばれるビタミンである。葉酸は，葉酸の薬学的に許容される塩であってもよいし，葉酸誘導体や，葉酸のプロドラック（生体内で葉酸となる化合物，葉酸の誘導体に含まれる）であってもよいし，葉酸誘導体の薬学的に許容される塩であってもよい。葉酸誘導体の例は，葉酸とリン酸とのエステルや，葉酸の配糖体である。葉酸誘導体は，例えば特許５３６６９４０号公報，特許４５９０１９８号公報，及び特公平０２−０２２９０９号公報に記載される通り，公知である。以下これらをまとめて単に葉酸とも表記する。

【0017】

薬学的に許容される塩の例は，ナトリウム塩，カリウム塩，マグネシウム塩，カルシウム塩，バリウム塩，アンモニウム塩，モノエタノールアミン塩，ジエタノールアミン塩，トリエタノールアミン塩，モノイソプロパノールアミン塩，トリイソプロパノールアミン塩，塩酸塩，及び硫酸塩である。

【0018】

妊娠促進組成物は，対象に投与することで，妊娠する確率を高めるための組成物である。妊娠促進組成物が投与される対象は，通常ヒト又は非ヒト哺乳動物であり，妊娠が期待される年齢の男性又は女性（非ヒト哺乳動物においては雄又は雌）である。非ヒト哺乳動物の例は，馬（例えば，サラブレッド），犬，猫，牛，熊，パンダ，ゴリラ及び象である。妊娠促進組成物の投与時期は，任意である。この組成物は，特に妊娠を希望する女性に投与することが好ましい。つまり，この組成物の好ましい態様は，女性により経口投与される妊娠促進組成物である。

【0019】

ビタミン系酸化防止剤の例は，ビタミンＥ，ビタミンＥ誘導体又はこれらの薬学的に許容される塩（例：ナトリウム塩，カリウム塩）（以下，単にビタミンＥともいう。）である。ビタミンＥ誘導体の例は，酢酸トコフェロール，（リノール酸／オレイン酸）トコフェロール，コハク酸トコフェロール，ニコチン酸トコフェロール及びリノール酸トコフェロールである。

【0020】

具体的な妊娠促進組成物中の組成例は，アルギニンを１５００ｍｇ以上３０００ｍｇ以下，葉酸を３００μｇ以上９００μｇ以下，ビタミンＥを５ｍｇ以上２００ｍｇ以下含むものである。アルギニンの量は１５００ｍｇ以上２５００ｍｇ以下でもよい。葉酸の量は３００μｇ以上７００μｇ以下でもよいし，３００μｇ以上６００μｇ以下でもよいし，３５０μｇ以上５００μｇ以下でもよい。葉酸の量は，アルギニンの量の１万分の１以上１００分の１が好ましい。ビタミンＥの量は，５ｍｇ以上１００ｍｇ以下でもよいし，５ｍｇ以上３０ｍｇ以下でもよいし，５ｍｇ以上１５ｍｇ以下でもよいし，１０ｍｇ以上１００ｍｇ以下でもよい。ビタミンＥの量は，アルギニンの量の１０００分の１以上１０分の１以下が好ましい。もっとも，ビタミンＥは，過剰に含んでもよい。この場合，アルギニンを１５００ｍｇ以上３０００ｍｇ以下，葉酸を３００μｇ以上９００μｇ以下含み，ビタミンＥが過剰に存在することとなる。後述する実施例により示された通り，グレープフルーツ果汁を含むものは，良好な味が得られた。これは，グレープフルーツ果汁に替えて，グレープフルーツ香料を用いた場合も同様であると考えられる。グレープフルーツ果汁やグレープフルーツ香料は，例えば１錠あたり，合計で０．１ｇ以上３ｇ以下含まれればよい。また，５００ｍｇ以上３０００ｍｇ以下のリン酸（特にオルトリン酸），又はその薬学的に許容される塩をさらに含むものも良好な味が得られた。上記の量は，１回あたりの投与量であり，例えば，上記の量を２剤にて達成しても構わない。対象者は，例えば，上記の量を１日１回又は１日２回〜３回摂取すればよい。これらの量は，基本的には，原材料の量であるから，組成物を製造する際に量を把握できる。また，製品から，これらの組成物の含有量を分析するためには，ガスクロマトグラフ,高速液体クロマトグラフ,キャピラリー電気泳動，ガスクロマトグラフ質量分析計といった公知の方法を適宜用いればよい。

【0021】

妊娠促進組成物の剤型は任意である。妊娠促進組成物の例は，顆粒剤，粉末剤，錠剤，ゼリー，飲料，及び注射剤である。これらは，公知の素材を用いて，公知の方法にて製造することができる。例えば，ゼリー状の妊娠促進組成物は，寒天やゼラチンに，上記の有効成分と，着色剤，甘味料，及び香料を適宜混合することで，製造できる。妊娠促進組成物は，医薬組成物であっても，サプリメントであっても構わないし，健康補助食品であっても構わない。

【0022】

この明細書は，妊娠を希望する対象に，妊娠促進組成物を投与する工程を含む，妊娠促進方法をも提供する。投与方法の例は，経口投与である。

【実施例1】

【0023】

Ｌアルギニンサプリメント
本研究では、２種類のアルギニンサプリメントを使用した。
ＡＳ２０００（実施例）は、１錠あたり、Ｌ−アルギニン２０００ｍｇ、葉酸４００μｇ、ビタミンＥ１０ｍｇを含有するサプリメントである。
ＡＳ１０００（参考例）は、１錠あたり、Ｌ−アルギニン１０００ｍｇ、葉酸２００μｇを含むサプリメントである。ＡＳ１０００は、ビタミンＥを含まない。
１日１回、最長３ヶ月間服用した。

【0024】

サブジェクト
俵ＩＶＦクリニック倫理委員会の承認を受けて、２０１７年１１月から書面ＩＣにて本臨床試験の患者募集を開始した。選択基準は、１）試験参加の同意を得た時点で４０歳未満の女性、２）研究参加時に生殖補助医療技術（Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ＡＲＴ）の実施予定の女性、３）本試験の目的、内容について十分な説明を受け、同意能力があり、よく理解した上で自発的に参加を志願し、書面で本試験参加に同意できる者、４）試験責任医師が本試験への参加を適当と認めた者とした。
除外基準は、１）不妊治療以外の薬を服用している人、２）この研究に対してアレルギー反応を起こしそうな人、および３）検査担当医がこの検査に不適切であると判断した者である。被験者は、ファイルメーカー（ＦｉｌｅＭａｋｅｒ、Ｉｎｃ．、ＵＳＡ）により、ＡＳ２０００群、ＡＳ１０００群または対照群に無作為に割り当てられた。
計算式：Ｒｏｕｎｄ （ （ Ｒａｎｄｏｍ ＊ Ｉｎｔ（ ＄加算値 ） ） ＋ Ｉｎｔ（ ＄最小値 ） ； ０ ）、変数 ： ＄加算値 ＝ ４ ＄最小値 ＝ １）
対照群にはＬ−アルギニンを含むサプリメントを配布しなかった。試験開始後、我々はＬ−アルギニンを服用した被験者の３か月間の胚移植の結果を追跡した。試験開始後、連絡が取れなかった被験者、１０日以上摂取を忘れた被験者、胚移植を行わなかった被験者はこの研究解析から除外した。

【0025】

不妊症の原因
不妊原因は以下のように分類した：排卵障害 ［乏排卵（３５日以上の月経周期）、無排卵、多嚢胞性卵巣（ＰＣＯ）］、卵管因子［子宮頸管造影（ＨＳＧ）検査により片側または両側卵管閉塞と診断］、子宮因子［子宮筋腫、子宮腺筋症、または子宮内膜ポリープ］、頸管因子［少なくとも２回のフーナー検査結果の不良］、子宮内膜症、精液所見不良［少なくとも２回の精液所見不良（精子濃度＜１５００万／ｍｌまたは運動率＜４０％）］および性交障害。精液所見不良および性交障害は男性不妊症として分類した。

【0026】

胚移植
新鮮胚移植は、ＩＶＦまたはＩＣＳＩの２日後または３日後のいずれかに実施した。凍結胚移植では、ホルモン補充周期（ＨＲＣ）において、経皮エストラジオール（Ｅｓｔｒａｎａ（登録商標）０．７２ｍｇ、久光製薬、日本）を月経の２−４日目に開始し、妊娠判定日まで２日ごとに２．２６ｍｇ／日で適用した。妊娠後、経皮エストラジオールは妊娠７週まで２日ごとに１．４４ｍｇ／投与を続けた。経口および経腟黄体ホルモン補充は血中Ｅ２濃度が１００ｐｇ／ｍｌを超え、子宮内膜の厚さが７ｍｍ以上になった日から開始した（この日を排卵日として定義した）。自然排卵周期（ＮＣ）では、経膣超音波による卵胞サイズの定期的測定、血中または尿中ＬＨおよび血中Ｅ２測定により、排卵日を同定した。ＨＲＣおよびＮＣでは、分割期胚および胚盤胞はそれぞれ排卵日から２日目（または３日目）および５日目に移植された。移植された胚盤胞は、内部細胞塊および栄養外胚葉の質に基づいて、良好胚（ＡＡ、ＡＢ、ＢＡ、ＢＢ）および中等度胚（ＢＣ、ＣＢ）に分類された。妊娠４週の血中ｈＣＧ１０ＩＵ／ＬをｈＣＧ陽性として定義した。胎嚢の確認を臨床妊娠として定義した。

【0027】

統計解析
試験群（ＡＳ２０００群およびＡＳ１０００群）と対照群の比較は、ｔ検定による統計解析を行った。また、比率の比較は観察数に応じてピアソンのカイ２乗またはフィッシャーの正確確率検定を用いて行った。Ｐ＜０．０５を統計学的に有意と見なした。統計分析は、ＲソフトウェアおよびＪＭＰ９ソフトウェア（ＳＡＳ、ＵＳＡ）を用いて行った。

【0028】

結果
２０１７年１１月から２０１８年３月までの期間中に、胚移植のための採卵を計画している患者を対象とした。１２０名の被験者を無作為に次の３群に分けた：対照群（ｎ＝４０）、ＡＳ１０００群（ｎ＝４０）、ＡＳ２０００群（ｎ＝４０）（補足表１、図１）。被験者は３ヶ月間の試験期間中に胚移植後のｈＣＧ陽性または臨床妊娠の有無が追跡された。胚移植を実施しなかった被験者を除外した最終的な症例数は、対照群、ＡＳ１０００、ＡＳ２０００において、それぞれ３６人、３７人、３７人であった。患者の背景を比較した結果、年齢、ＢＭＩ、ＡＭＨ、妊娠歴、ＡＲＴ治療歴、および不妊原因は対照群と試験群の間に違いを認めなかった（表１）。

【0029】

さらに、移植方法（新鮮胚移植、凍結融解胚移植［ホルモン補充周期および自然排卵周期］の比率）、移植胚の発生段階（分割期胚と胚盤胞の比率）、胚盤胞の質（良好胚と中等度胚の比率）、子宮内膜の厚さ、移植時の血中Ｅ２濃度にも違いを認めなかった（表２）。

【0030】

試験開始後の最初の胚移植における対照群、ＡＳ１０００群、およびＡＳ２０００群のｈＣＧ陽性率は４８．６％、４８．７％、５４．３％、妊娠率は４２．９％、３７．８％、４８．６％であった（表２）。初回移植周期において妊娠に至らなかった患者のうち、試験期間中に２回目の移植を実施した対照群、ＡＳ１０００群とＡＳ２０００群のｈＣＧ陽性率はそれぞれ２８．６％、７２．７％、４４．４％、妊娠率はそれぞれ２８．６％、５４．６％、４４．４％であった（表２）。また、期間中にＡＳ２０００群では、２例の自然妊娠が報告された（表２）。累積ｈＣＧ陽性率と累積妊娠率は、対照群で４５．２％と４０．５％、ＡＳ１０００群で５４．２％と４１．７％、そしてＡＳ２０００群で５４．４％と５０．０％であった（表２）。ＡＳ１０００群とＡＳ２０００群をＬ−アルギニン摂取群として、対照群に対する摂取群のｈＣＧ陽性率および妊娠率のオッズ比を算出した（表３）。

【0031】

ｈＣＧ陽性率と妊娠率のオッズ比はそれぞれ１．４６ ［９５％ＣＩ ０．７１−３．０５］と１．２７ ［０．６１−２．６６］であった。続いて、各サブグループにおけるｈＣＧ陽性率および妊娠率を以下に示す：良好胚盤胞移植のみの症例では１．１０ ［０．４２−２．８４］および０．９３ ［０．３６−２．３８］、３５歳未満の患者では１．５９ ［０．５４−４．６４］および１．４７ ［ＣＩ］ ０．５１−４．２７］、３５歳以上の患者では１．３４ ［０．４８−３．８９］および１．０４ ［０．３６−３．１８］、ＢＭＩ２０未満の患者では０．７９ ［０．２６−２．３０］および０．９４ ［０．３２−２．７７］、ＢＭＩ２０を超える患者では２．４８ ［０．９１−７．１８］および１．６２ ［０．５９−４．６７］、ＡＭＨ２ｎｇ／ｍｌ未満の患者では３．２４ ［１．０３−１１．５９］および２．１９ ［０．６９−７．８２］、ＡＭＨ２ｎｇ／ｍｌを超える患者では０．８３ ［０．３１−２．１８］および０．８６ ［０．３３−２．２７］、ＨＲＣによる胚移植者では１．４０ ［０．３５−５．８４］および１．２５ ［０．３１−５．７０］、ＮＣによる胚移植では１．４７ ［０．６２−３．５１］および１．３０ ［０．５５−３．１３］、男性不妊が原因の患者では１０．００ ［１．５２−１９９．８］および１０．００ ［１．５２−１９９．８］、女性に不妊の原因がある（男性の不妊の原因はない）患者の場合では０．５６ ［０．１５−１．９０］と０．４４ ［０．１２−１．５２］、不妊原因が不明の患者では１．４８ ［０．４６−４．７２］および１．２４ ［０．４０−３．９５］であった。卵巣予備能が低い患者（ＡＭＨ＜２．０ｎｇ／ｍｌ）では、Ｌ−アルギニン摂取群は対照群と比較してｈＣＧ陽性率の増加を示し、特にＡＳ２０００群では増加したが、ＡＳ１０００群では増加しなかった（補足表２および３）。さらに、不妊の原因としての男性不妊の場合、ｈＣＧ陽性率と妊娠率の両方が、特にＡＳ１０００群ではなくＡＳ２０００群で、非摂取群と比較して有意な増加を示した。

【0032】

考察
本研究では、ＡＲＴに対するアルギニン摂取の効果を調べるために無作為化対照研究を実施した。その結果、ＡＳ１０００（Ｌ−アルギニン１０００ｍｇ、葉酸２００μｇ）とＡＳ２０００（Ｌ−アルギニン２０００ｍｇ、葉酸４００μｇ、ビタミンＥ １０ｍｇ）との間でｈＣＧ陽性率と妊娠率の両方がＬ−アルギニン摂取群の方が量依存的に高くなる傾向があった（表１および図２）。さらに、Ｌ−アルギニンを摂取することの有益な効果が期待できる患者のグループを抽出することを目的として、サブグループ分析を行った（表３）。その結果、ＡＭＨが２ｎｇ／ｍｌ未満の場合、Ｌ−アルギニン摂取群ではｈＣＧ陽性率が増加することがわかった（表３、図３）。この結果はＡＭＨが低い患者にＬ−アルギニンを服用することの有用性を示唆している。
さらに、Ｌ−アルギニン摂取群および非摂取群との間で中等度の胚盤胞（Ｆａｉｒ ＢＴ）移植率に差が見られ、Ｆａｉｒ ＢＴのｎ数は、非摂取群：ＡＳ１０００群：ＡＳ２０００群におけるｈＣＧ陽性率は、それぞれ１８．８％、４１．７％、４７．４％、妊娠率はそれぞれ１２．５％、２９．２％、４２．１％であった。胚盤胞の質が良好でない場合でも、アルギニンの摂取は有効性を示す事が示唆された（表２、３、補足表２、３および図４）。

【0033】

この研究は、自然妊娠または一般不妊治療によって妊娠しなかった患者を対象としている。そのため、原因不明を含む難治性の不妊原因のために、Ｌ−アルギニンの有益な効果が得られにくい患者が多く含まれている可能性がある。この点を考慮する方法として、我々は男性不妊症のためにＡＲＴ適応となった女性に着目した。その理由は男性不妊症が不妊原因のためにＡＲＴ適応となった場合、パートナーの女性は生殖機能が正常もしくは軽度の不妊症である可能性が高く、Ｌ−アルギニンの補助的な効果が得られやすいのではないかと考えた。結果として、男性不妊症のパートナーを持つ女性についてのみ調べた場合、ｈＣＧ陽性率と妊娠率の両方がＬ−アルギニン摂取群で有意な増加を示した（表３）。本検討では女性だけがＬ−アルギニンを服用している。したがって、この結果の一つの解釈は上記仮説を支持し、妊娠を希望する女性においてＬ−アルギニンの有効性があるものの、不妊原因が深刻である場合、その効果が現れにくいことを示唆している。本検討期間中、Ｌ−アルギニン摂取群において２例の自然妊娠が報告された。このこともまた、上記の仮説を支持し、非難治性女性不妊症において妊娠を希望する女性におけるＬ−アルギニンの有効性を示している。しかし、ＡＳ２０００はＡＳ１０００よりも多くの葉酸を含み、そしてビタミンＥも含まれている。したがって、ＡＳ１０００と比較したＡＳ２０００のより優れた効果は、Ｌ−アルギニンの量と、これらのビタミンとの相乗効果が発揮されることが示唆された。

【0034】

したがって、不妊の原因がより深刻な場合には少なくとも本検討で用いた量のＬ−アルギニンでは十分な効果が得られない可能性がある。
この場合、アルギニン摂取量もまた将来研究されるべき重要なテーマである。Ｔａｋａｓａｋｉらによる子宮内膜増殖作用の向上を示した研究におけるＬ−アルギニンの投与量は６ｇ／日である（Ｔａｋａｓａｋｉ Ａ， Ｔａｍｕｒａ Ｈ， Ｍｉｗａ Ｉ， Ｔａｋｅｔａｎｉ Ｔ， Ｓｈｉｍａｍｕｒａ Ｋ， Ｓｕｇｉｎｏ Ｎ． Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｕｔｅｒｉｎｅ ｂｌｏｏｄ ｆｌｏｗ： ａ ｐｉｌｏｔ ｓｔｕｄｙ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａ ｔｈｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｕｍ． Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ ２０１０； ９３： １８５１−８．）。
さらに、卵巣機能の改善を示したＢａｔｔａｇｌｉａ ｅｔ ａｌ による研究におけるＬ−アルギニンの用量は１６ｇ／日であった（Ｂａｔｔａｇｌｉａ Ｃ， Ｓａｌｖａｔｏｒｉ Ｍ， Ｍａｘｉａ Ｎ， Ｐｅｔｒａｇｌｉａ Ｆ， Ｆａｃｃｈｉｎｅｔｔｉ Ｆ， Ｖｏｌｐｅ Ａ． Ａｄｊｕｖａｎｔ Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ｉｎ−ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ｐｏｏｒ ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ． Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ １９９９； １４： １６９０−７．）。一方、我々の研究におけるＬ−アルギニンの投与量は１０００ｍｇ／日または２０００ｍｇ／日であり、これは上記の研究で摂取されたＬ−アルギニンの量より数倍少ない。しかし、妊娠を望む女性における１日当たりアルギニンの適切な投与量に関する研究はない。我々のいくつかのサブグループ解析では、ＡＳ２０００と非摂取群の間で統計的有意差が生じていた（補足表２と３）。この結果は、ＡＲＴ患者において１日当たり少なくとも２０００ｍｇのＬ−アルギニンが１０００ｍｇ／日よりも高い有効性を有し得ることを示唆している。しかし、ＡＳ２０００はＡＳ１０００よりも多くの葉酸を含み、そしてビタミンＥも含まれている。したがって、ＡＳ１０００と比較したＡＳ２０００のより優れた効果は、これらのビタミンがプラスの影響を与えている可能性もある。

【0035】

これらのことから、アルギニン源、葉酸源、及びビタミン系酸化防止剤の組み合わせは、妊娠率向上に関して、相乗効果を発揮すると考えられる。そして、Ｌ−アルギニンの投与量は、１５００ｍｇ以上３０００ｍｇ以下が好ましいと考えられる。

【0036】

結論
まとめると、この研究は、Ｌ−アルギニンを服用している群において、ＡＲＴ治療後のｈＣＧ陽性率と妊娠率を改善する傾向を示した。サブグループ解析の結果、ＡＭＨ＜２ｎｇ／ｍｌ及び中等度胚群のアルギニン摂取群でｈＣＧ陽性率の増加が観察された。さらに、男性不妊症をパートナーとする女性を正常／軽度不妊症として分類したサブ解析では、Ｌ−アルギニン摂取群でｈＣＧ陽性率と妊娠率の増加が観察された。

【0037】

【表1】

【0038】

【表2】

【0039】

【表3】

【0040】

【表4】

【0041】

【表5】

【0042】

【表6】

【実施例2】

【0043】

以下の配合のサプリメントを製造した。
葉酸 ０．７０ｍｇ
Ｌ−アルギニン ２，１００ｍｇ
ビタミンＥ ６３．００ｍｇ
還元水飴 １，５００ｍｇ
ゲル化剤（ゲル化剤ＦＧ−２５４３ 新田ゼラチン株式会社） １８０．００ ｍｇ
ゲル化剤（増粘多糖類：ビストップＤ−２０２９（グアーガム） 三栄源エフ・エフ・アイ株式会社） １５．００ｍｇ
甘味料（アセスルファムＫ） ５．００ｍｇ
甘味料（スクラロース） ２０．００ｍｇ
甘味料（ステビア） ８．００ｍｇ
オルトリン酸（８５％燐酸） １，４４５ｍｇ
グレープフルーツ果汁 １５０ｍｇ

【0044】

グレープフルーツ果汁は，他の果汁を添加したものに比べ，Ｌ−アルギニン特有の苦みをごまかすことができた。このため，グレープフルーツフレーバーのサプリメントは，摂取しやすいサプリメントであった。さらに，Ｌ−アルギニンの酸性を中和するために様々な酸を検討した。その結果，酸そのものは，クエン酸やリンゴ酸の方がリン酸よりも風味に優れるものの，Ｌ−アルギニンを含むサプリメントにおいては，リン酸（特にオルトリン酸）を含むものの方が，官能検査の結果，味が良かった。特に，柑橘系フレーバー（例えば，グレープフルーツフレーバー）のサプリメントを製造した際には，リン酸を用いてＬ−アルギニンを中和したものが，風味に優れていた。

【産業上の利用可能性】

【0045】

この発明は，妊娠促進組成物に関するので，健康食品産業，サプリメント産業，又は製薬産業において利用され得る。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【手続補正書】

【提出日】2019年8月30日

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３８

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0038】

【表2】

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0039】

【表3】

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0041】

【表5】

【手続補正4】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４２

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0042】

【表6】