特開 2021-31478 頭皮用及び／又は毛髪用組成物、及び頭皮用及び／又は毛髪用組成物の使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】特開2021-31478(P2021-31478A)

(43)【公開日】2021年3月1日

(54)【発明の名称】頭皮用及び／又は毛髪用組成物、及び頭皮用及び／又は毛髪用組成物の使用方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/49 20060101AFI20210201BHJP

   A61K 8/55 20060101ALI20210201BHJP

   A61Q 7/00 20060101ALI20210201BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20210201BHJP

   A61Q 19/08 20060101ALI20210201BHJP

【ＦＩ】

   A61K8/49

   A61K8/55

   A61Q7/00

   A61Q19/00

   A61Q19/08

【審査請求】未請求

【請求項の数】4

【出願形態】ＯＬ

【全頁数】15

(21)【出願番号】特願2019-156590(P2019-156590)

(22)【出願日】2019年8月29日

(71)【出願人】

【識別番号】592255176

【氏名又は名称】株式会社ミルボン

(72)【発明者】

【氏名】安久都 卓哉

(72)【発明者】

【氏名】渡邉 紘介

【テーマコード（参考）】

4C083

【Ｆターム（参考）】

4C083AC122

4C083AC132

4C083AC172

4C083AC302

4C083AC432

4C083AC442

4C083AC581

4C083AC582

4C083AC901

4C083AC902

4C083AD641

4C083AD642

4C083AD661

4C083AD662

4C083CC02

4C083CC05

4C083CC07

4C083CC31

4C083CC33

4C083CC38

4C083CC39

4C083DD22

4C083DD23

4C083DD31

4C083EE06

4C083EE07

4C083EE11

4C083EE21

(57)【要約】

【課題】本発明は、加齢による頭皮又は毛髪の状態変化を抑制可能な頭皮用及び／又は毛髪用組成物、及び当該頭皮用及び／又は毛髪用組成物の使用方法を提供することを目的とする。
【解決手段】（Ａ）アスコルビン酸誘導体又はその塩、及びアスコルビン酸又はその塩から選ばれる１種又は２種以上、並びに、（Ｂ）フィチン酸、及びフィチン酸の塩から選ばれる１種以上が配合された頭皮用及び／又は毛髪用組成物、及び当該頭皮用及び／又は毛髪用組成物の使用方法。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（Ａ）アスコルビン酸誘導体又はその塩、及びアスコルビン酸又はその塩から選ばれる１種又は２種以上、並びに、（Ｂ）フィチン酸、及びフィチン酸の塩から選ばれる１種以上が配合された頭皮用及び／又は毛髪用組成物。

【請求項2】

（Ｃ）グリシン又はその塩が配合された請求項１に記載の頭皮用及び／又は毛髪用組成物。

【請求項3】

（Ｄ）トコフェロールが配合された請求項１又は２に記載の頭皮用及び／又は毛髪用組成物。

【請求項4】

請求項１〜３のいずれか１項に記載の頭皮用及び／又は毛髪用組成物の使用方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、頭皮用及び／又は毛髪用組成物、及び頭皮用及び／又は毛髪用組成物の使用方法に関するものである。

【背景技術】

【0002】

各種の成分が配合された頭皮用及び／又は毛髪用組成物が、頭皮及び／又は毛髪の状態改善を目的として提供されている。また、加齢によって生じる頭皮及び毛髪の状態変化の改善が要望されており、当該要望に応じた頭皮用及び／又は毛髪用組成物が開発されている。

【0003】

上記頭皮用及び／又は毛髪用組成物の一例として、所定の質量比としたローヤルゼリー、海藻エキス、及びビワ葉エキスと、ポリエチレングリコール等の経皮吸収促進剤とを含有する頭皮頭髪化粧料によって、加齢により進行する頭皮の赤み、頭皮の乾燥等が改善できる技術（特許文献１）が提案されている。また、ユーカリ属植物の抽出物を有効成分とする毛髪うねり改善剤によって、加齢の進行に伴い増加する毛髪のうねりを改善できる技術（特許文献２）が提案されている。
しかし、上記の提案がなされているが、加齢による頭皮及び／又は毛髪の状態変化を抑制できる技術開発の要望は依然として存在しており、新たな提案が望まれている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特開２０１２−１８４２２０号公報

【特許文献2】特開２００８−１８４４２２号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明は、上記事情に鑑み、加齢による頭皮及び／又は毛髪の状態変化が抑制可能な頭皮用及び／又は毛髪用組成物を提供することを目的とする。また、本発明の別の課題は、前記頭皮用及び／又は毛髪用組成物の使用方法を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明者等は、加齢による頭皮又は毛髪の状態変化について研究を進めたところ、加齢によって毛髪のうねりが生じている人は、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌の存在割合が高いとの知見を得た。また、本研究者等がさらに研究を進めたところ、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌は、活性酸素種である過酸化水素を産生することで、過酸化水素の酸化反応による頭皮の表皮角化細胞の老化及び毛髪の老化を促進させ、頭皮及び毛髪の状態変化を起こす原因となることを見出した。

【0007】

本発明者等は、上記知見に基づいて、エンテロコッカス属の細菌による頭皮及び毛髪の状態変化を抑制可能な手段を鋭意検討したところ、頭皮用及び／又は毛髪用組成物に（Ａ）アスコルビン酸誘導体又はその塩、及びアスコルビン酸又はその塩から選ばれる１種又は２種以上と、（Ｂ）フィチン酸、及びフィチン酸の塩から選ばれる１種以上とが配合されたものとすれば、エンテロコッカス属の細菌による頭皮及び／又は毛髪の状態変化が抑制可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。

【0008】

すなわち、本発明に係る頭皮用及び／又は毛髪用組成物は、（Ａ）アスコルビン酸誘導体又はその塩、及びアスコルビン酸又はその塩から選ばれる１種又は２種以上、並びに、（Ｂ）フィチン酸、及びフィチン酸の塩から選ばれる１種以上が配合された頭皮用及び／又は毛髪用組成物である。

【0009】

本発明に係る頭皮用及び／又は毛髪用組成物は、（Ｃ）グリシン又はその塩が配合されたものであれば、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌の増殖抑制が可能となるため、好ましい。

【0010】

本発明に係る頭皮用及び／又は毛髪用組成物は、（Ｄ）トコフェロールが配合されたものであれば、頭皮の表皮角化細胞の老化抑制が可能となるため、好ましい。

【0011】

また、本発明に係る使用方法は、前記頭皮用及び／又は毛髪用組成物を使用する方法である。

【発明の効果】

【0012】

本発明によれば、加齢による頭皮又は毛髪の状態変化を抑制可能な頭皮用及び／又は毛髪用組成物を提供することができる。また、加齢による頭皮又は毛髪の状態変化を抑制可能な頭皮用及び／又は毛髪用組成物の使用方法を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】頭皮用及び／又は毛髪用組成物を用いた継続試験開始前と継続試験１〜３か月後の頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌及びスタフィロコッカス属の細菌の各存在割合を示すグラフ。

【図2】頭皮用及び／又は毛髪用組成物を用いた継続試験開始前と継続試験３か月後における切り取った毛髪の写真。

【図3】エンテロコッカス属の細菌と表皮角化細胞の共培養によるＳＡ−β−Ｇａｌ活性測定試験の結果を示すグラフ。

【図4】エンテロコッカス属の細菌による過酸化水素の産生を抑制する試験の結果を示すグラフ。

【図5】エンテロコッカス属の細菌の増殖抑制試験の結果を示すグラフ。

【発明を実施するための形態】

【0014】

本発明の実施形態（以下、本実施形態と表記する）に基づき、本発明を以下に説明する。

【0015】

本実施形態に係る頭皮用及び／又は毛髪用組成物は、（Ａ）アスコルビン酸誘導体又はその塩、及びアスコルビン酸又はその塩から選ばれる１種又は２種以上、（Ｂ）フィチン酸、及びフィチン酸の塩から選ばれる１種以上、並びに水が配合されたものである（水の配合量は、例えば、５０質量％以上９９質量％以下）。
なお、上記「及び／又は」とは、両方あるいはいずれか一方の意味である（以下の記載においても同様）。

【0016】

以下の記載において、アスコルビン酸誘導体又はその塩、及びアスコルビン酸又はその塩から選ばれる１種又は２種以上を「（Ａ）成分」、フィチン酸、及びフィチン酸の塩から選ばれる１種以上を「（Ｂ）成分」とそれぞれ表記することがある。

【0017】

＜（Ａ）成分＞
本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物は、（Ａ）成分として、アスコルビン酸誘導体又はその塩、及びアスコルビン酸又はその塩から選ばれる１種又は２種以上が配合されたものである。この（Ａ）成分の配合により、頭皮の表皮角化細胞の老化を抑制することが可能となる。

【0018】

アスコルビン酸誘導体又はその塩としては、例えば、アスコルビン酸のリン酸エステル又はその塩、アスコルビン酸の硫酸エステル又はその塩、アスコルビン酸のアルキルエステル又はその塩等が挙げられる。

【0019】

アスコルビン酸のリン酸エステル又はその塩としては、例えば、アスコルビルリン酸Ｎａ、リン酸アスコルビル３Ｎａ、リン酸アスコルビルＭｇ、アスコルビルリン酸（Ｍｇ／Ｋ）、アスコルビルリン酸（Ｍｇ／Ｎａ）、アスコルビルリン酸（Ｍｇ／亜鉛）、リン酸アスコルビルアミノプロピル等が挙げられる。
アスコルビン酸の硫酸エステル又はその塩としては、例えば、アスコルビン酸硫酸２Ｎａ等が挙げられる。
アスコルビン酸のアルキルエステル又はその塩としては、例えば、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、２−Ｏ−エチルアスコルビン酸等が挙げられる。

【0020】

アスコルビン酸又はその塩としては、例えば、アスコルビン酸、アスコルビン酸Ｃａ、アスコルビン酸Ｍｇ、アスコルビン酸Ｎａ、アスコルビン酸亜鉛、アスコルビン酸アラントイン等が挙げられる。

【0021】

本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物に配合される（Ａ）成分は、頭皮用及び／又は毛髪用組成物に配合された際の（Ａ）成分の保存安定性をより高める観点から、アスコルビン酸誘導体又はその塩から選ばれる１種又は２種以上が好ましい。また、（Ａ）成分のアスコルビン酸誘導体又はその塩の中でも、アスコルビン酸のリン酸エステル又はその塩を用いると良い。

【0022】

本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物における（Ａ）成分の配合量は、特に限定されない。配合量の下限値としては、頭皮の表皮角化細胞の老化抑制をより優れたものとする観点から、０．０２０質量％以上が好ましく、０．０２５質量％以上がより好ましく、０．０５０質量％以上がさらに好ましい。また、（Ａ）成分の配合量の上限値としては、頭皮用及び／又は毛髪用組成物を使用した際に、毛髪（頭皮の根元付近の毛髪も含む）が硬い手触りとなるのを抑える観点から、１質量％以下が好ましく、０．８質量％以下がより好ましく、０．５質量％以下がさらに好ましい。

【0023】

＜（Ｂ）成分＞
本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物は、（Ｂ）成分として、フィチン酸、及びフィチン酸の塩から選ばれる１種以上が配合されたものである。この（Ｂ）成分の配合により、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌による過酸化水素の産生を抑制可能となる。

【0024】

フィチン酸の塩としては、例えば、フィチン酸のナトリウム塩、カリウム塩等が挙げられる。

【0025】

本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物における（Ｂ）成分の配合量は、特に限定されない。配合量の下限値としては、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌による過酸化水素の産生の抑制をより優れたものとする観点から、０．０１質量％以上が好ましく、０．０２質量％以上がより好ましく、０．０３質量％以上がさらに好ましい。また、（Ｂ）成分の配合量の上限値としては、頭皮用及び／又は毛髪用組成物を使用した際に毛髪（頭皮の根元付近の毛髪も含む）が硬い手触りとなるのを抑える観点から、５質量％以下が好ましく、３質量％以下がより好ましく、１質量％以下がさらに好ましい。

【0026】

本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物に、（Ａ）成分と（Ｂ）成分とが組み合わせて配合されることで、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌による頭皮及び／又は毛髪の老化を抑制することが可能となる。この（Ａ）成分と（Ｂ）成分の組み合わせによる作用の詳細は明らかではないが、（Ｂ）成分が頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌による過酸化水素の産生を抑制し、（Ａ）成分が頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌が産生した過酸化水素を除去するとともに、頭皮の表皮角化細胞の老化を抑制することで、エンテロコッカス属の細菌が産生する過酸化水素の酸化反応による頭皮及び／又は毛髪の老化が抑制されるためと推察している。

【0027】

本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物における（Ａ）成分の配合量に対する（Ｂ）成分の配合量の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］は、特に限定されないが、例えば、０．５以上１０以下である。

【0028】

本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物における（Ａ）成分の配合量と（Ｂ）成分の配合量との合計配合量［（Ａ）＋（Ｂ）］は、特に限定されないが、例えば、０．０５質量％以上１質量％以下である。

【0029】

（任意成分）
本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物に配合される上記（Ａ）成分及び（Ｂ）成分以外の任意成分は、頭皮用及び／又は毛髪用組成物に配合可能な公知の成分から、本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物の用途、目的、剤型等に応じて適宜に選定できる。
この任意成分としては、例えば、グリシン又はその塩（以下、（Ｃ）成分と表記することがある）、トコフェロール（以下、（Ｄ）成分と表記することがある）、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、アルコール、多価アルコール、糖類、エステル油、油脂、脂肪酸、炭化水素、ロウ、シリコーン、高分子化合物、前記（Ｃ）成分以外のアミノ酸、動植物抽出物、微生物由来物、無機化合物、香料、防腐剤、前記（Ｄ）成分以外の酸化防止剤、金属イオン封鎖剤、紫外線吸収剤等である。

【0030】

＜（Ｃ）成分＞
本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物は、（Ｃ）成分として、グリシン又はその塩が配合されたものであれば、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌の増殖抑制が可能となるため、好ましい。
グリシン又はその塩としては、例えば、グリシン、グリシンのアルミニウム塩、グリシンの亜鉛塩、グリシンのナトリウム塩等が挙げられる。

【0031】

本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物におけるグリシン又はその塩の配合量は、特に限定されない。配合量の下限値としては、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌の増殖抑制がより優れたものとする観点から、０．２質量％以上が好ましく、０．５質量％以上がより好ましく、０．７質量％以上がさらに好ましい。また、（Ｃ）成分の配合量の上限値としては、頭皮用及び／又は毛髪用組成物を使用した際に毛髪（頭皮の根元付近の毛髪も含む）が硬い手触りとなるのを抑える観点から、１０質量％以下が好ましく、５質量％以下がより好ましく、４質量％以下がさらに好ましい。

【0032】

＜（Ｄ）成分＞
本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物は、（Ｄ）成分として、トコフェロールが配合されたものであれば、頭皮の表皮角化細胞の老化が抑制可能となるため好ましい。
本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物におけるトコフェロールの配合量は、特に限定されない。配合量の下限値としては、頭皮の表皮角化細胞の老化抑制をより優れたものとする観点から、０．０１質量％以上が好ましく、０．０３質量％以上がより好ましく、０．０５質量％以上がさらに好ましい。また、（Ｄ）成分の配合量の上限値としては、頭皮用及び／又は毛髪用組成物の使用後に毛髪（頭皮の根元付近の毛髪も含む）が硬い感触となるのを抑える観点から、３質量％以下が好ましく、１質量％以下がより好ましく、０．５質量％以下がさらに好ましい。

【0033】

（剤型）
本実施形態に係る頭皮用及び／又は毛髪用組成物の剤型は、特に限定されず、例えば、液状、乳液状、クリーム状、ワックス状、ゲル状、フォーム状（泡状）、霧状が挙げられる。

【0034】

上記剤型の形態は、特に限定されないが、例えば、エマルジョンの形態とする場合には、Ｏ／Ｗ型エマルジョン、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョン、Ｗ／Ｏ型エマルジョンとすることができる。

【0035】

（粘度）
本実施形態に係る頭皮用及び／又は毛髪用組成物の粘度は、特に限定されず、剤型等に合わせて適宜設定することができる。
なお、剤型を液状とする場合、Ｂ型粘度計を使用して２５℃で計測した６０秒後の粘度が、例えば、１０００ｍＰａ・ｓ以下である。

【0036】

（ｐＨ）
本実施形態に係る頭皮用及び／又は毛髪用組成物のｐＨは、特に限定されない。ｐＨの下限値としては、頭皮用及び／又は毛髪用組成物に配合される（Ａ）成分の保存安定性を高める観点から、５．５以上が好ましい。また、ｐＨの上限値としては、頭皮用及び／又は毛髪用組成物を使用した際の頭皮の刺激を低く抑える観点から、８．０以下が好ましく、７．５以下がより好ましい。

【0037】

（頭皮用及び／又は毛髪用組成物）
本実施形態に係る頭皮用及び／又は毛髪用組成物は、頭皮用組成物、毛髪用組成物、又は、頭皮及び毛髪に用いる組成物を意味する。頭皮用組成物は頭皮に用いられる組成物を意味し、毛髪用組成物は毛髪に用いられる組成物を意味する。

【0038】

（用途）
本実施形態に係る頭皮用及び／又は毛髪用組成物の用途としては、例えば、スカルプケア用組成物、ヘアケア用組成物、スカルプケア用及びヘアケア用組成物、ヘアスタイリング用組成物、養毛用組成物、育毛用組成物等が挙げられる。

【0039】

前記スカルプケア用組成物としては、例えば、頭皮用シャンプー、頭皮用リンス、頭皮用コンディショナー、頭皮用トリートメント（例えば、洗い流さない頭皮用トリートメント、洗い流す頭皮用トリートメント、多剤式の頭皮用トリートメントの一構成剤）、頭皮用パック、頭皮用マスク、頭皮用ローション等が挙げられる。
前記ヘアケア用組成物としては、例えば、ヘアシャンプー、ヘアリンス、ヘアコンディショナー、ヘアトリートメント（例えば、洗い流さないヘアトリートメント、洗い流すヘアトリートメント、整髪兼用ヘアトリートメント、多剤式ヘアトリートメントの一構成剤、パーマの前処理のためのヘアトリートメント、パーマの後処理のためのヘアトリートメント、カラーリングの前処理のためのヘアトリートメント、カラーリングの後処理のためのヘアトリートメント、ブリーチの前処理のためのヘアトリートメント、ブリーチの後処理のためのヘアトリートメント）、ヘアパック、ヘアマスク、ヘアローション等が挙げられる。
ヘアスタイリング用組成物としては、例えば、ヘアクリーム、ヘアワックス、セットローション等が挙げられる。

【0040】

本実施形態に係る頭皮用及び／又は毛髪用組成物は、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌による頭皮及び／又は毛髪の老化を抑制するために用いることができる。例えば、加齢による頭皮及び／又は毛髪の状態変化が認められる人や、頭皮細菌叢の解析によりエンテロコッカス属の細菌の存在割合が比較的高いと評価された人に対して、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌による頭皮及び／又は毛髪の状態変化を改善するために、本実施形態に係る頭皮用及び／又は毛髪用組成物を用いることができる。
なお、加齢による頭皮及び／又は毛髪の状態変化が認められるかどうかの評価は、頭皮及び／又は毛髪の公知の評価方法（例えば、特開２０１５−３６０１６号公報に記載の診断方法等）により評価すればよい。また、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌の存在割合が比較的高いかどうかの評価は、評価対象者と比較対象者を適宜設定し、１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を用いた次世代シークエンサーの解析結果を比較することで評価可能である。

【0041】

（製造方法）
本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物の製造方法は、使用時の剤型に応じた公知の頭皮用及び／又は毛髪用組成物の製造方法を採用すればよい。

【0042】

（使用方法）
本実施形態の頭皮用及び／又は毛髪用組成物を使用する方法としては、公知の頭皮用及び／又は毛髪用組成物の使用方法を採用すればよい。そのため、頭皮及び／又は毛髪への塗布後に洗い流す使用方法であってもよく、頭皮及び／又は毛髪への塗布後に洗い流さない使用方法であってもよい。なお、使用後に（Ａ）成分と（Ｂ）成分とを頭皮及び／又は毛髪により残存させる観点から、塗布後に洗い流さない使用方法が好ましい。

【実施例】

【0043】

以下、実施例に基づき本発明を詳述するが、この実施例の記載に基づいて本発明が限定的に解釈されるものではない。

【0044】

（１）試験例１：頭皮用及び／又は毛髪用組成物の評価

【0045】

（頭皮用及び／又は毛髪用組成物の調製）
実施例１の頭皮用及び／又は毛髪用組成物（頭皮用ローション）を、次に示す組成となるように、公知の製造方法により成分を混合して調製した。なお、（Ａ）成分としてはリン酸アスコルビルＭｇを用いた。
実施例１の頭皮用及び／又は毛髪用組成物の組成：
リン酸アスコルビルＭｇ ０．２５質量％、フィチン酸 ０．８質量％、グリシン ４質量％、トコフェロール ０．０５質量％、プロピレングリコール ３質量％、フェノキシエタノール ０．５質量％、ＰＥＧ−４０水添ヒマシ油 ０．５質量％、ＰＥＧ−６０水添ヒマシ油 ０．５質量％、香料 ０．１質量％、クエン酸Ｎａ ２．３質量％、精製水 ８８質量％。

【0046】

（評価方法）
以下に示す継続試験を行い、調製した実施例１の頭皮用及び／又は毛髪用組成物を継続使用により評価した。

【0047】

（継続試験）
継続試験は、ヘルシンキ宣言に則り、倫理委員会の承認を得た同意書に同意した被験者（根元部分の毛髪にうねりが見られる４５〜５５歳の日本人女性１０名）を対象として、下記［１−１］〜［１−５］の手順に従って行った。

【0048】

［１−１］継続試験開始前に、各被験者に対して、毛髪の分け目とつむじの周囲を除く頭頂部の頭皮から粘着テープを用いて頭皮細菌叢の採取を行った後、後ろ姿及び頭頂部の写真撮影を行った。その後、頭頂部の毛髪数本を根元からハサミで切り取った。
［１−２］各被験者に対して、実施例１の頭皮用ローションを１日1回、１か月間継続して使用した。実施例１の頭皮用ローションは、市販のシャンプーで頭皮及び毛髪を洗浄してすすぎ後の濡れた頭皮全体及び根元付近の毛髪に約２ｇを塗布し、その後洗い流さずに、ドライヤーで頭皮と毛髪を乾燥させる方法で使用した。
［１−３］継続試験の１カ月後の各被験者に対して、上記［１−１］と同様に頭皮細菌叢の採取を行った。
［１−４］上記［１−２］、［１−３］の手順を２回繰り返し行った。
［１−５］継続試験開始３か月後における被験者の後ろ姿及び頭頂部を上記［１−１］と同様にして写真撮影を行った。また、頭頂部の毛髪数本を根元からハサミで切り取った。

【0049】

（頭皮細菌叢の解析）
上記［１−１］、［１−３］、［１−４］の手順において、各被験者から採取した頭皮細菌叢を次に示す方法で解析した。各被験者の頭皮細菌叢の採取に用いた粘着テープから、核酸を常法により抽出した。続いて、抽出後の核酸を用いて、ＰＣＲ法により１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の増幅を行った。そして、増幅した上記１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を用いて、次世代シークエンサー（Ｉｌｌｕｍｉｎａ社製のＭｉｌｓｅｑ（商品名））により、１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のＤＮＡ解析を行った。ＤＮＡ解析の結果を用いて、解析ツールのＱＩＩＭＥにより、採取した頭皮細菌叢における各種細菌の属（ｇｅｎｕｓ）レベルの存在割合を求めた。

【0050】

（頭皮細菌叢の評価）
継続試験開始前の被験者の頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌の存在割合を基準として、継続試験開始１か月後、継続試験開始２か月後、継続試験開始３か月後の頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌の存在割合について、被験者１０名から算出した各平均値を比較することで評価した。また、比較対象として、スタフィロコッカス属の細菌の存在割合も同様に評価した。

【0051】

（毛髪状態の評価）
日常的に毛髪の状態評価を行っている評価者２名に、継続試験開始前の各被験者の後ろ姿及び頭頂部の写真の毛髪状態を基準として、継続試験開始３か月後の各被験者の後ろ姿及び頭頂部の写真における根元部分（根元側から約５ｃｍまでの部位）の毛髪のツヤ、及び毛髪のまとまりについて、「優れる」、「変化がない」、又は「劣る」のいずれかを回答させて、下記評価基準に従って評価した。
なお、加齢により毛髪にうねりが生じると根元部分の毛髪のツヤと毛髪のまとまりが減少するため、各被験者の継続試験開始前と継続試験開始３か月後との根元部分の毛髪のツヤと毛髪のまとまりを比較して評価することで、継続試験開始３か月後において加齢による毛髪の状態変化に改善が見られたかどうかが評価可能となる。

【0052】

（毛髪のツヤの評価基準）
〇：評価者２名が、継続試験開始前の毛髪のツヤに比べて、継続試験開始３か月後の毛髪のツヤが優れていると回答。
−：評価者１名以上が、継続試験開始前の毛髪のツヤに比べて、継続試験開始３か月後の毛髪のツヤに変化がないと回答。
×：評価者１名以上が、継続試験開始前の毛髪のツヤに比べて、継続試験開始３か月後の毛髪のツヤが劣ると回答。

【0053】

（毛髪のまとまりの評価基準）
〇：評価者２名が、継続試験開始前の毛髪のまとまりに比べて、継続試験開始３か月後の毛髪のまとまりが優れていると回答。
−：評価者１名以上が、継続試験開始前の毛髪のまとまりに比べて、継続試験開始３か月後の毛髪のまとまりに変化がないと回答。
×：評価者１名以上が、継続試験開始前の毛髪のまとまりに比べて、継続試験開始３か月後の毛髪のまとまりが劣ると回答。

【0054】

（評価結果）
表１及び図１に頭皮細菌叢の評価結果を示す。

【0055】

【表1】

【0056】

表１、図１に示す結果から、実施例１の頭皮用及び／又は毛髪用組成物を用いた継続試験１カ月〜３か月後では、継続試験開始前に比べて、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌の存在割合が減少していた。また、比較対象のスタフィロコッカス属の細菌の存在割合は、継続試験開始前に比べて、継続試験１カ月〜３か月後で減少傾向は見られなかった。
そのため、実施例１の頭皮用及び／又は毛髪用組成物を用いれば、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌の存在割合を低下できることがわかる。

【0057】

表２に毛髪状態の評価結果を示す。なお、表２において、各被験者をＡ〜Ｊと記号化して表記している。

【0058】

【表2】

【0059】

表２に示す結果から、被験者のうち１０名中７名（７０％）が毛髪のツヤ及びまとまりの両方に優れていた（被験者Ｄ〜Ｊ）。また、被験者のうち１０名中２名（２０％）が毛髪のツヤ、毛髪のまとまりのいずれかに優れていた（被験者Ａ、Ｃ）。そのため、１０名中９名（９０％）の被験者に毛髪のツヤ、毛髪のまとまりの両方あるいはいずれか一方が優れる結果であった。したがって、実施例１の頭皮用及び／又は毛髪用組成物を用いれば、加齢に伴う毛髪の状態変化である毛髪のツヤ、毛髪のまとまりの改善に優れることがわかる。

【0060】

図２に、同一被験者における継続試験開始前と継続試験３か月後の切り取った毛髪の写真を示す。図２に示す通り、継続試験開始前の切り取った毛髪に比べて、継続試験３か月後の切り取った毛髪は、毛髪の根元部分のうねりが改善されていた。また、その他の被験者においても、同様に継続試験開始前の切り取った毛髪に比べて、毛髪の根元部分のうねりに改善が認められた。そのため、実施例１の頭皮用及び／又は毛髪用組成物を用いれば加齢による毛髪の状態変化を改善できることがわかる。

【0061】

（２）試験例２：エンテロコッカス属の細菌による細胞老化を抑制する成分の検討
表皮角化細胞とエンテロコッカス属の細菌との共培養を行い、表皮角化細胞の細胞老化の指標としてＳＡ−β−Ｇａｌ活性測定を用いることで、表皮角化細胞の老化を抑制する成分の検討を行った。評価方法は、以下［２−１］〜［２−４］で示す通りに行った。なお、以下の記載において、表皮角化細胞を「ＮＨＥＫ」、相対ＳＡ−β−Ｇａｌ活性を「相対β−Ｇａｌ活性」とそれぞれ表記することがある（（３）参考試験例１、及び（６）参考試験例４においても同様）。

【0062】

［２−１］細胞培養用の培地（クラボウ社製のＨｕｍｅｄｉａ ＫＧ−２）で増殖させたＮＨＥＫ(クラボウ社製：製品名ＫＫ−４００９)を細胞培養用の２４穴プレートに１．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し、３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した。また、市販されているエンテロコッカスの細菌であるＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ.（ＡＴＣＣ ９６２５）を培養試験管にＢＨＩ培地（ＢＤ社製）５ｍＬで３７℃の条件下において一晩培養した。
［２−２］一晩培養したＮＨＥＫの細胞培養用の２４穴プレートから細胞培養用の培地を除去し、ＰＢＳで洗浄した後、上記細胞培養用の培地からハイドロコルチゾン及び抗菌剤を除いた培地を５００μＬ加えた。また、一晩培養したエンテロコッカスの細菌の培養試験管からＢＨＩ培地を除去しＰＢＳで１度洗浄した後、吸光度ＯＤ６００＝０．２になるように、上記細胞培養用の培地からハイドロコルチゾン及び抗菌剤を除いた培地を加え、エンテロコッカス属の細菌の希釈液とした。
［２−３］ＮＨＥＫを播種した２４穴プレートに細胞培養用インサートを設置し、そこに上記［２−１］で調製したエンテロコッカス属の細菌の希釈液を５００μＬ加えたもの（試験例２ｂ〜２ｅで使用）と、エンテロコッカス属の細菌の希釈液の代わりに上記細胞培養用の培地からハイドロコルチゾン及び抗菌剤を除いた培地のみを加えたもの（試験例２ａで使用：陰性コントロール）を準備した。続いて、試験例２ｃ〜２ｅの各２４穴プレートに次の表３に示す添加成分を加えた（表３中の各添加成分の数字は培地中に添加した成分の終濃度（ｍｇ／ｍＬ））。
［２−４］上記［２−３］の操作が完了した２４穴プレートを、３７℃、５％ＣＯ_２の条件下２日間培養し、その後９６―ｗｅｌｌ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ社製）を用いて、キットに記載のプロトコルに従ってＳＡ−β−Ｇａｌ活性を測定した。そして、試験例２ａ（陰性コントロール）におけるＳＡ−β−Ｇａｌ活性を１００とした場合の各試験例２ｂ〜２ｅのＳＡ−β−Ｇａｌ活性の相対値（％）である相対ＳＡ−β―Ｇａｌ活性を求めた。なお、相対β―Ｇａｌ活性の値が低いほど、ＮＨＥＫの細胞老化がより抑制されていることを示す。

【0063】

表３、図３に、試験例２ａ〜２ｅの相対β−Ｇａｌ活性の結果を示す。なお、表３における「ＮＨＥＫとエンテロコッカス属の細菌との共培養」の欄において、「なし」の表記は、上記［２−３］においてＮＨＥＫを播種した２４穴プレートに設置した細胞培養用インサートに、細胞培養用の培地からハイドロコルチゾン及び抗菌剤を除いた培地のみを加えたものを意味する。また、「あり」の表記は、上記［２−３］においてＮＨＥＫを播種した２４穴プレートに設置した細胞培養用インサートに、上記［２−１］で調製したエンテロコッカス属の細菌の希釈液を５００μＬ加えたものを意味する。また、表３中の各添加成分の数字は培地中に添加した成分の終濃度（ｍｇ／ｍＬ）を表し、「−」は未添加であることを示す。

【0064】

【表3】

【0065】

表３及び図３に示す結果から、試験例２ｂと試験例２ａ（陰性コントロール）とを比較すると、エンテロコッカス属の細胞と共培養したＮＨＥＫの相対β−Ｇａｌ活性（試験例２ｂ）は、エンテロコッカス属の細胞と共培養しなかったＮＨＥＫの相対β−Ｇａｌ活性（試験例２ａ：陰性コントロール）よりも高くなっていることがわかる。そのため、ＮＨＥＫとエンテロコッカス属の細菌との共培養によって、ＮＨＥＫの細胞老化が促進されることが理解できる。また、各種添加成分を用いた試験例２ｃ〜２ｅを比較すると、試験例２ｃにおける相対β−Ｇａｌ活性は、試験例２ｄ、２ｅにおける相対β−Ｇａｌ活性に比べて、値が低いことがわかる。このことから、リン酸アスコルビルＭｇ及びフィチン酸を併用したもの（試験例２ｃ）は、リン酸アスコルビルＭｇ及びマンニトールを併用したもの（試験例２ｄ）やリン酸アスコルビルＭｇ単独のもの（試験例２ｅ）に比べて、エンテロコッカス属の細菌の共培養によるＮＨＥＫの細胞老化を抑制できることが理解できる。なお、試験例２ｃにおける相対β−Ｇａｌ活性は、試験例２ａ（陰性コントロール）における相対β−Ｇａｌ活性よりも値が低くなっており、ＮＨＥＫの細胞老化の抑制に優れることが認められる。
この結果から、アスコルビン酸誘導体であるリン酸アスコルビルＭｇと、フィチン酸とが頭皮用及び／又は毛髪用組成物に配合されることで、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌による頭皮又は毛髪の老化を抑制できると考えられる。

【0066】

（３）参考試験例１：ＮＨＥＫの老化抑制試験１
細胞培養用の培地（クラボウ社製のＨｕｍｅｄｉａ ＫＧ−２）で増殖させたＮＨＥＫ(クラボウ社製：製品名ＫＫ−４００９)を細胞培養用の２４穴プレートに１．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し、３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した。その後、培地を除去し、ＰＢＳで洗浄した後、上記の細胞培養用の培地からハイドロコルチゾン及び抗菌剤を除いた培地を５００μＬ加えた。続いて、試験例３ａ〜３ｆとして表４に示す各添加成分を２４穴プレートに加えた（表４中の各添加成分の数字は培地中に添加した成分の終濃度（質量％））。
その後、２４穴プレートを、３７℃、５％ＣＯ_２の条件下２日間培養し、その後９６―ｗｅｌｌ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ社製）を用いて、キットに記載のプロトコルに従って細胞老化マーカーの一種であるＳＡ−β−Ｇａｌ活性を測定した。そして、試験例３ａにおけるＳＡ−β−Ｇａｌ活性を１００とした場合の各試験例３ｂ〜３ｆのＳＡ−β−Ｇａｌ活性の相対値（％）である相対ＳＡ−β−Ｇａｌ活性を求めた。なお、相対β―Ｇａｌ活性の値が低いほど、ＮＨＥＫの細胞老化がより抑制されていることを示す。

【0067】

表４に添加成分と相対β−Ｇａｌ活性の評価結果を示す。なお、表４中の各添加成分の数字は培地中に添加した成分の終濃度（質量％）を表し、「−」は未添加であることを示す。

【0068】

【表4】

【0069】

表４に示す結果から、試験例３ｂ〜３ｅの相対β−Ｇａｌ活性は、試験例３ａの相対β−Ｇａｌ活性に比べて、値が低かった。しかし、試験例３ｆの相対β−Ｇａｌ活性は、試験例３ａの相対β−Ｇａｌ活性に比べて、値が高かった。そのため、試験例３ｂ〜３ｅに用いたアスコルビン酸誘導体又はアスコルビン酸により、ＮＨＥＫの細胞老化を抑制できることが理解できる。

【0070】

（４）参考試験例２：エンテロコッカス属の細菌による過酸化水素の産生の抑制試験
ある種のエンテロコッカス属の細菌は、細胞膜のシトクロームによって、過酸化水素を産生させることが報告されている（Mark M.Huycke, et al., (1996) The Journal of Infectious Diseases, 173:743-6）。そのため、頭皮や毛髪の老化の原因は、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌が産生した過酸化水素によって、頭皮の表皮角化細胞や毛包細胞が酸化を受けることや、毛髪が酸化を受けることが一因と考えられ、エンテロコッカス属の細菌による過酸化水素の産生を抑制できる成分を検討した。

【0071】

（評価方法）
参考試験例２の検討は、次の評価方法により行った。市販されているエンテロコッカスの細菌であるＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ.（ＡＴＣＣ ９６２５）をＢＨＩ寒天平培地（ＢＤ社製）で３７℃の条件下で一晩培養した。その後、ＢＨＩ寒天平培地の出現コロニーを培養試験管に移し、ＢＨＩ培地（ＢＤ社製）５ｍＬを加え３７℃の条件下において一晩培養した。次に、培養試験管から培地を除去した後、培養試験管にフィチン酸を０．０８質量％含むＰＢＳを加えたものと、培養試験管にＰＢＳのみを加えたものとを準備し、３７℃で８時間処理した。処理後、培養試験管中の溶液を除去し、ＰＢＳで洗浄した。その後、上記Ｍａｒｋらの報告（Mark M.Huycke, et al., (1996) The Journal of Infectious Diseases, 173:743-6）に記載の方法を用いて、フェリシトクロームｃの酸化を比色測定して過酸化水素濃度を測定した。この測定は、測定時間０分から６０分まで１分ごとの５５０ｎｍの吸光度を測定することで、０分における５５０ｎｍの吸光度の値を１とした場合の各測定時間における５５０ｎｍの吸光度の相対値である相対５５０ｎｍ吸光度を算出して行った。なお、この相対５５０ｎｍ吸光度の値が低いほど、エンテロコッカス属の細菌が産生する過酸化水素の産生量が少ないことを示す。

【0072】

（評価結果）
図４に示す評価結果から、試験成分であるフィチン酸を用いたもの（試験例４ｂ）は、試験成分を添加しなかったもの（試験例４ａ）に比べて、相対５５０ｎｍ吸光度の値が低かった（２０〜６０分における試験例４ａ、４ｂの比較）。
この結果から、フィチン酸はエンテロコッカス属の細菌による過酸化水素の産生を抑制できることがわかる。

【0073】

ここで、上記（３）参考試験例１及び上記（２）試験例２で得られた各結果と、本参考試験２で得られた結果とを合わせて考察すると、上記（３）参考試験例１でＮＨＥＫの細胞老化が抑制できた「アスコルビン酸誘導体又はアスコルビン酸」と、本参考試験例２でエンテロコッカス属の細菌による過酸化水素の産生が抑制できた「フィチン酸」とを組み合わせることによって、上記（２）試験例２で示す結果（試験例２ｂ〜２ｅの比較）と同様に、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌による頭皮又は毛髪の老化をより抑制できると考えられる。また、「アスコルビン酸誘導体又はアスコルビン酸」と「フィチン酸」とを頭皮用及び／又は毛髪用組成物に配合されたものとすれば、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌による頭皮又は毛髪の老化を抑制可能であると考えられる。

【0074】

（５）参考試験例３：エンテロコッカス属の細菌の増殖抑制試験
細胞培養用の９６穴プレートにＢＨＩ培地（ＢＤ社製）を３００μＬ入れ、市販されているエンテロコッカスの細菌であるＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ.（ＡＴＣＣ ９６２５）を終濃度がＯＤ６００=０．２の１／１００になるように播種した。次に、表５に示す添加成分をそれぞれ培地中に添加した（表５中の各添加成分の数字は培地中に添加した成分の終濃度（質量％）であり、「−」は未添加である）。
続いて、９６穴プレートの蓋に曇り止め剤（山本光学株式会社製のスイマーズデミストＳＰＳ−３１１）を塗布し、蓋を滅菌水で軽く洗浄し乾燥させた後、パラフィルムで９６穴プレートを密閉してプレートリーダー（コロナ電気株式会社製のＳＨ−９０００）にセットした。そして、上記プレートリーダーを用いて、９６穴プレートの各ウェルの培養直後（０時間目）の吸光度（６００ｎｍ）を測定した。さらに、９６穴プレートを１時間に１度、１０秒間振とうさせながら、１８時間後まで吸光度（６００ｎｍ）の測定を行った。
なお、吸光度の値が低いほど、エンテロコッカスの細菌の増殖数が少ないことを示す。

【0075】

【表5】

【0076】

結果を図５に示す。グリシンを添加した試験例５ｂは、添加成分なしの試験例５ａ及びバリンを添加した試験例５ｃに比べて、６００ｎｍ吸光度の値が低く、エンテロコッカス属の細菌の増殖を抑制していた（４〜１８時間における試験例５ａ〜５ｃの値の比較）。そのため、グリシンはエンテロコッカス属の細菌の増殖を抑制する作用を有することが理解できる。また、この結果から、頭皮用及び／又は毛髪用組成物にグリシンが配合されたものとすれば、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌の増殖を抑制できると考えられる。

【0077】

（６）参考試験例４：ＮＨＥＫの老化抑制試験２
上記の（３）参考試験例１と同様の評価方法を用い、添加成分のみを表６に示すものに変更して、相対β―Ｇａｌ活性を測定することで細胞の老化抑制効果のある成分を検討した（表６中の各添加成分の数字は培地中に添加した成分の終濃度（質量％））。
なお、相対β―Ｇａｌ活性の値が小さいほど、ＮＨＥＫの細胞老化がより抑制されていることを示す。

【0078】

表６に添加成分と相対ＳＡ−β−Ｇａｌ活性の評価結果を示す。なお、表６中の各添加成分の数字は培地中に添加した成分の終濃度（質量％）を表し、「−」は未添加であることを示す。

【0079】

【表6】

【0080】

表６に示す結果から、試験例６ｂの相対β−Ｇａｌ活性は、試験例６ａの相対β−Ｇａｌ活性に比べて、値が小さかった。また、試験例６ｃの相対β−Ｇａｌ活性は、試験例６ａの相対β−Ｇａｌ活性と値が近いものであった。そのため、試験例６ｂに用いたトコフェロールは、ＮＨＥＫの細胞老化を抑制できることが理解できる。また、この結果から、頭皮用及び／又は毛髪用組成物にトコフェロールが配合されたものとすれば、頭皮細菌叢におけるエンテロコッカス属の細菌による頭皮の細胞老化を抑制できると考えられる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】