特開 2021-66727 髄膜炎菌組成物およびその方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】特開2021-66727(P2021-66727A)

(43)【公開日】2021年4月30日

(54)【発明の名称】髄膜炎菌組成物およびその方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/74 20150101AFI20210402BHJP

   A61K 39/295 20060101ALI20210402BHJP

   A61K 39/095 20060101ALI20210402BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20210402BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20210402BHJP

   A61K 47/55 20170101ALI20210402BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20210402BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20210402BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20210402BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20210402BHJP

   A61K 47/18 20060101ALI20210402BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20210402BHJP

   C07K 14/22 20060101ALN20210402BHJP

【ＦＩ】

   A61K35/74 G

   A61K39/295

   A61K39/095

   A61K39/00 H

   A61K39/39

   A61K47/55

   A61K9/08

   A61K47/26

   A61K47/22

   A61K47/10

   A61K47/18

   A61K47/02

   C07K14/22ZNA

【審査請求】未請求

【請求項の数】39

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

【全頁数】112

(21)【出願番号】特願2020-160424(P2020-160424)

(22)【出願日】2020年9月25日

(31)【優先権主張番号】62/907,097

(32)【優先日】2019年9月27日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】63/040,498

(32)【優先日】2020年6月17日

(33)【優先権主張国】US

(71)【出願人】

【識別番号】593141953

【氏名又は名称】ファイザー・インク

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100120112

【弁理士】

【氏名又は名称】中西 基晴

(74)【代理人】

【識別番号】100107386

【弁理士】

【氏名又は名称】泉谷 玲子

(72)【発明者】

【氏名】ジュディス・アブサロン

(72)【発明者】

【氏名】アナリーサ・シビル・アンダーソン

(72)【発明者】

【氏名】ヨハネス・フレデリック・ビースラー

(72)【発明者】

【氏名】シャンオン・リー・ハリス

(72)【発明者】

【氏名】キャスリン・ウテ・ジャンセン

(72)【発明者】

【氏名】トーマス・リチャード・ジョーンズ

(72)【発明者】

【氏名】ポール・リベレイター

(72)【発明者】

【氏名】ジェイソン・ダグラス・マグワイヤ

(72)【発明者】

【氏名】ジョン・ランス・ペレス

(72)【発明者】

【氏名】キュイウェン・タン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA12

4C076BB11

4C076CC07

4C076CC31

4C076CC41

4C076DD09F

4C076DD23

4C076DD50Z

4C076DD60

4C076DD67

4C076EE23F

4C076EE59

4C085AA03

4C085AA04

4C085BA16

4C085BA99

4C085BB11

4C085CC07

4C085DD86

4C085EE03

4C085FF01

4C085FF02

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC50

4C087CA16

4C087MA02

4C087MA05

4C087NA14

4C087ZB09

4C087ZB35

4C087ZC75

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA11

4H045DA50

4H045DA86

4H045EA20

4H045EA31

4H045FA71

(57)【要約】

【課題】多様なＭｎＢや髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ、ならびに／またはＸ分離株に対して有効な交差保護ワクチンまたは組成物を提供すること。
【解決手段】一側面では、本開示は、Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）および髄膜炎菌非血清型Ｂ莢膜多糖を含む組成物、ならびにその使用方法に関する。本開示はさらに、ｆＨＢＰを含む組成物の使用、たとえば、髄膜炎菌血清型Ｂ株および非血清型Ｂ株に対する免疫応答を誘発させるための使用などに関する。本明細書中に記載の組成物および方法は、成人、青年、幼児、および乳児を含めたヒトにおける投与を対象とする。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトにおいて免疫応答を誘導する方法であって、前記方法は、前記ヒトに、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドと、（ｃ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖であって、前記リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖と、（ｄ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってＡＤＨリンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖であって、前記リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖と、（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖と、（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖とを含む組成物を投与するステップを含み、前記組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのうちの少なくとも１つに対する免疫応答を誘導し、前記免疫応答は血清殺菌抗体の力価を含み、前記力価は、（ａ）髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖コンジュゲートを含み、髄膜炎菌ポリペプチドをさらに含まない組成物、ならびに（ｂ）髄膜炎菌血清型Ｂポリペプチドを含み、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖コンジュゲートをさらに含まない組成物のうちの任意の１つから選択された組成物によって誘導されたものよりも高い、方法。

【請求項2】

髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖コンジュゲートを含む前記組成物が、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖に対する認可ワクチンである、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖に対する前記認可ワクチンがＭＥＮＶＥＯである、請求項１から２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項4】

髄膜炎菌血清型Ｂポリペプチドを含む前記組成物が髄膜炎菌血清型Ｂに対する認可ワクチンである、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

髄膜炎菌血清型Ｂに対する前記認可ワクチンがＴＲＵＭＥＮＢＡである、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記組成物が、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのうちの任意の１つならびに髄膜炎菌血清型Ｂから選択される髄膜炎菌血清型に対する免疫応答を誘導し、前記免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖に対する組成物によって誘導される血清殺菌抗体の力価よりも高い、選択された前記髄膜炎菌血清型に対する血清殺菌抗体の力価を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記組成物が、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのうちの任意の１つならびに髄膜炎菌血清型Ｂから選択される髄膜炎菌血清型に対する免疫応答を誘導し、前記免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂに対する組成物によって誘導される血清殺菌抗体の力価よりも高い、前記選択された髄膜炎菌血清型に対する血清殺菌抗体の力価を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記組成物がアジュバントをさらに含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記組成物がアルミニウムをさらに含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記アジュバントが水酸化アルミニウムを含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記アジュバントがリン酸アルミニウムを含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記第１のポリペプチドの少なくとも９０％が前記組成物中でアルミニウムと結合している、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記第２のポリペプチドの少なくとも９０％が前記組成物中でアルミニウムと結合している、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記組成物が無菌的な液体として配合されている、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記組成物がポリソルベート−８０をさらに含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記組成物が、トリス−ＨＣｌ、塩化ナトリウム、スクロース、ヒスチジン、ポリソルベート８０、およびリン酸アルミニウムをさらに含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記組成物が、約１２０μｇ／ｍｌの前記第１のポリペプチド、約１２０μｇ／ｍｌの前記第２のポリペプチド、リン酸アルミニウムとして約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、約０．０２ｍｇのポリソルベート−８０、約１０ｍＭのヒスチジン、および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記組成物が、約６０μｇの前記第１のポリペプチド、約７．５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約６０μｇの前記第２のポリペプチド、約７．５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＡ莢膜糖、約７．５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＣ莢膜糖、約３．７５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＷ莢膜糖、約３．２５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＹ莢膜糖、約９７μｇのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ６．８±０．３、４．６９〜４．７１ｍｇの塩化ナトリウム、約２８ｍｇのスクロース、約０．７８ｍｇのＬ−ヒスチジン、約０．０２ｍｇのポリソルベート−８０、約０．２５ｍｇのアルミニウムを含み、１用量あたり０．５ｍＬの水をさらに含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記組成物が、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのそれぞれに対する追加免疫応答を誘発することができる、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記組成物が、髄膜炎菌血清型Ｂに対する追加免疫応答を誘発することができる、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記ヒトが１０〜２６歳の年齢である、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記ヒトが１０〜１２歳である、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記ヒトに少なくとも２回の用量を投与するステップを含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記ヒトが最高で１６歳である、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

約１１歳の前記ヒトに前記組成物の少なくとも１回の用量を投与し、１回目の用量の少なくとも４年後に、前記ヒトに前記組成物のさらなる用量を投与するステップを含む、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

約１１歳の前記ヒトに前記組成物の少なくとも１回の用量を投与し、最後の用量の少なくとも４年後に、前記ヒトに前記組成物のさらなる用量を投与するステップを含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

最後の用量の約５年後に、前記組成物の前記さらなる用量を投与する、請求項１から２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

約１１歳の前記ヒトに１回の用量の前記組成物を投与し、１回目の用量の約５年後に、前記ヒトに前記組成物の少なくとも２回の用量を投与するステップを含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記ヒトが、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖に対して血清陰性である、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記ヒトが、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖に対して血清陽性である、請求項１から２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記組成物の１回目の用量および２回目の用量を投与するステップを含み、２回目の用量は１回目の用量の約６カ月後である、請求項１から３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記ヒトに１６歳までに前記組成物の３回目の用量を投与するステップを含む、請求項１から３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

最大で２回の用量の前記組成物を投与するステップを含み、２回目の用量は１回目の用量の約６カ月後である、請求項１から３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記組成物が、Ａ２２を発現する髄膜炎菌血清型Ｂ株に対する免疫応答を誘発する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記組成物が、Ａ５６を発現する髄膜炎菌血清型Ｂ株に対する免疫応答を誘発する、請求項１から３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記組成物が、Ｂ２４を発現する髄膜炎菌血清型Ｂ株に対する免疫応答を誘発する、請求項１から３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記組成物が、Ｂ４４を発現する髄膜炎菌血清型Ｂ株に対する免疫応答を誘発する、請求項１から３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記組成物が、髄膜炎菌血清型Ｂ Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、Ｂ４４株のうちの任意の１つ、またはその任意の組合せに対する殺菌性免疫応答を誘導する、請求項１から３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記組成物が、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、Ａ０７、Ｂ１５３株のうちの任意の１つ、またはその任意の組合せに対する殺菌性免疫応答を誘導する、請求項１から３８のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月２７日に出願の米国仮特許出願第６２／９０７，０９７号および２０２０年６月１７日に出願の米国仮特許出願第６３／０４０，４９８号の優先権を主張するものである。前述の出願のすべては、その全体で本明細書中に参考として組み込まれている。

【0002】

本開示は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）組成物およびその方法に関する。

【背景技術】

【0003】

髄膜炎菌は、敗血症、髄膜炎、および死を引き起こす場合がある、グラム陰性の莢膜形成菌である。髄膜炎菌は、化学的にも抗原的にも異なる莢膜多糖体に基づいて、少なくとも１２個の血清型へと分類することができる（血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、２９Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｗ−１３５（現在ではほとんどＷと呼ばれる）、Ｘ、Ｙ、およびＺを含む）。血清型のうちの５つ（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ、およびＷ１３５）を有する株が、疾患の大多数の原因となっている。

【0004】

髄膜炎菌性の髄膜炎は、抗生物質が入手可能であるにもかかわらず小児および若年成人を数時間のうちに死亡させる場合がある、壊滅的な疾患である。髄膜炎菌血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ、およびＷ１３５、ならびに／またはＸに対する改善された免疫原性組成物の必要性が存在する。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】国際公開公報ＷＯ２０１２／０３２４８９号

【特許文献2】米国特許公開２０１２００９３８５２号

【特許文献3】国際公開公報ＷＯ２０１３／１３２４５２号

【特許文献4】米国特許公開２０１６００３０５４３号

【特許文献5】ＷＯ２０１２０３２４８９号

【特許文献6】米国特許公開２０１２／００９３８５２号

【特許文献7】米国特許第１０，１８３，０７０号

【特許文献8】ＷＯ０４／０８３２５１号

【特許文献9】ＵＳ４７０９０１７号

【特許文献10】ＵＳ４９５０７４０号

【特許文献11】ＵＳ５９１７０１７号

【特許文献12】ＵＳ６４５５６７３号

【特許文献13】ＵＳ５８４３７１１号

【特許文献14】ＥＰ０３７２５０１号

【特許文献15】ＥＰ０３７８８８１号

【特許文献16】ＥＰ０４２７３４７号

【特許文献17】ＷＯ９３／１７７１２号

【特許文献18】ＷＯ９４／０３２０８号

【特許文献19】ＷＯ９８／５８６６８号

【特許文献20】ＥＰ０４７１１７７号

【特許文献21】ＷＯ９１／０１１４６号

【特許文献22】ＷＯ０２／０９１９９８号

【特許文献23】ＷＯ０１／７２３３７号

【特許文献24】ＷＯ００／６１７６１号

【特許文献25】ＥＰ５９４６１０号

【特許文献26】ＷＯ００／５６３６０号

【特許文献27】ＷＯ００／１０５９９号

【特許文献28】ＵＳ４０５７６８５号

【特許文献29】ＵＳ４６７３５７４号

【特許文献30】ＵＳ４８０８７００号

【特許文献31】ＵＳ４４５９２８６号

【特許文献32】ＷＯ９３／１５７６０号

【特許文献33】ＷＯ９５／０８３４８号

【特許文献34】ＷＯ９６／２９０９４号

【特許文献35】ＷＯ９８／４２７２１号

【特許文献36】ＵＳ４３６５１７０号（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ）

【特許文献37】ＵＳ４６７３５７４号（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）

【特許文献38】ＥＰ−０−１６１−１８８号

【特許文献39】ＥＰ−２０８３７５号

【特許文献40】ＥＰ−０−４７７５０８号

【特許文献41】ＷＯ２０１２０２５８７３号

【特許文献42】ＵＳ２０１３／０１７１１９４号

【特許文献43】ＵＳ２００９／００１６９４６号

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Ｕｃｈｉｄａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２１８巻；３８３８〜３８４４頁、１９７３年

【非特許文献2】ＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔｏｘｉｎｓ、Ｆｒａｎｋｅｌ編、Ｍａｅｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ，、１９９２年

【非特許文献3】Ｋｕｏら、（１９９５年）Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ、６３巻；２７０６〜１３頁

【非特許文献4】Ｂａｒａｌｄｏｉら、（２００４年）Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ、７２巻；４８８４〜７頁

【非特許文献5】Ｆａｌｕｇｉら、（２００１年）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、３１巻；３８１６〜３８２４頁

【非特許文献6】Ｌｏｗｒｙら、（１９５１年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９３巻、２６５〜２７５頁

【非特許文献7】Ｐｅｔｅｒｓｏｎら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１００巻、２０１〜２２０頁（１９７９年）

【非特許文献8】Ｍｏｎｓｉｇｎｙら、（１９８８年）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１７５巻、５２５〜５３０頁

【非特許文献9】Ｇｅｖｅｒら、（１９７９年）Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６５巻；１７１〜２８８頁

【非特許文献10】Ｂｅｔｈｅｌｌら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９７９年、２５４巻；２５７２〜４頁

【非特許文献11】Ｈｅａｒｎら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、１９８１年、２１８巻；５０９〜１８頁

【非特許文献12】Ｃｈｕ Ｃ．ら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１９８３年、２４５〜２５６頁

【非特許文献13】Ｅｇａｎら、Ｖａｃｃｉｎｅ、２７巻（２４号）：３１７５〜３１８０頁（２００９年）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

現在、広範囲のＭｎＢや髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ、ならびに／またはＸ分離株に対して有効な交差保護ワクチンまたは組成物は、いまだ市販されていない。したがって、多様なＭｎＢや髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ、ならびに／またはＸ分離株に対して有効な交差保護ワクチンまたは組成物が必要である。

【0008】

本開示のさらなる目的は、髄膜炎菌ワクチンを投与するための改善されたスケジュールを提供することである。現在の推奨スキームの下では、様々な年齢で与える、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、およびＢに対して与える４〜５個のワクチン接種が存在する。侵襲性髄膜炎菌性疾患（ＩＭＤ）のさらなる減少を達成するために免疫化スケジュールを単純化し、ワクチン接種率を改善させ得る、効率的なワクチン接種の満たされていない必要性が存在する。

【課題を解決するための手段】

【0009】

これらおよび他の要求を満たすために、本開示は髄膜炎菌組成物およびその方法に関する。
本発明者らは、ヒトにおいて免疫応答を誘導する方法であって、方法は、ヒトに、ａ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来するポリペプチドと、（ｂ）髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖コンジュゲートと、（ｃ）髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖コンジュゲートと、（ｄ）髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖コンジュゲートと、（ｅ）髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖コンジュゲートとを含む組成物を投与するステップを含み、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖、ならびに髄膜炎菌血清型Ｂのうちの少なくとも１つに対する免疫応答を誘導し、免疫応答は、血清型に対するそれぞれの認可ワクチンによって誘導された血清殺菌抗体の力価よりも高い、血清殺菌抗体の力価を含む、方法を見出した。

【0010】

本発明者らは、驚くべきことに、ヒトにおいて免疫応答を誘導する方法であって、方法は、ヒトに、ａ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来する第１のポリペプチドと、（ｂ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来する第２のポリペプチドと、（ｃ）髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖コンジュゲートと、（ｄ）髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖コンジュゲートと、（ｅ）髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖コンジュゲートと、（ｆ）髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖コンジュゲートとを含む組成物を投与するステップを含み、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖、ならびに髄膜炎菌血清型Ｂのうちの少なくとも１つに対する免疫応答を誘導し、免疫応答は、血清型に対するそれぞれの認可ワクチンによって誘導された血清殺菌抗体の力価よりも高い、血清殺菌抗体の力価を含む、方法を見出した。

【0011】

一部の態様では、ポリペプチドは、配列番号１から配列番号６２から選択される任意の１つのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
好ましい態様では、組成物は、（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドと、（ｃ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖と、（ｄ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってＡＤＨリンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖と、（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖と、（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖とを含む。

【0012】

一部の態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのうちの任意の１つに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い。

【0013】

一部の態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い。

【0014】

一部の態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ｃに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い。

【0015】

一部の態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ｗに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い。

【0016】

一部の態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ｙに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い。

【0017】

一部の態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのそれぞれに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い。

【0018】

一部の態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ｂに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ｂ Ｈ因子結合ワクチンによって誘発されたものよりも高い。

【0019】

一部の態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのそれぞれに対する免疫応答を誘発し、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖のそれぞれに対する前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高く、また、組成物は、髄膜炎菌血清型Ｂに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ｂ Ｈ因子結合ワクチンによって誘発されたものよりも高く、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンと認可された髄膜炎菌血清型Ｂ Ｈ因子結合ワクチンは、併用用量としてではなく順次投与される。

【0020】

一部の態様では、組成物はアジュバントを含む。一部の態様では、組成物はアルミニウムアジュバントを含む。一部の態様では、組成物は水酸化アルミニウムを含む。一部の態様では、組成物はリン酸アルミニウムを含む。一部の態様では、組成物はアルミニウムを含む。

【0021】

一部の態様では、第１のポリペプチドの少なくとも９０％が組成物中でアルミニウムと結合している。一部の態様では、第２のポリペプチドの少なくとも９０％が組成物中でアルミニウムと結合している。

【0022】

一部の態様では、組成物は無菌的な液体として配合されている。一部の態様では、組成物は薬学的に許容される保存料を含む。一部の態様では、組成物はポリソルベート−８０を含む。一部の態様では、組成物は、トリス−ＨＣｌ、塩化ナトリウム、スクロース、ヒスチジン、ポリソルベート８０、およびリン酸アルミニウムを含む。

【0023】

一部の態様では、組成物は、約１２０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチド、約１２０μｇ／ｍｌの第２のポリペプチド、リン酸アルミニウムとして約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、約０．０２ｍｇのポリソルベート−８０、約１０ｍＭのヒスチジン、および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。

【0024】

一部の態様では、組成物は、約６０μｇの第１のポリペプチド、約６０μｇの第２のポリペプチド、約７．５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＡ莢膜糖、約７．５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＣ莢膜糖、約３．７５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＷ莢膜糖、約３．２５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＹ莢膜糖、約９７μｇのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ６．８±０．３、４．６９〜４．７１ｍｇの塩化ナトリウム、約２８ｍｇのスクロース、約０．７８ｍｇのＬ−ヒスチジン、約０．０２ｍｇのポリソルベート−８０、約０．２５ｍｇのアルミニウムを含み、さらに１用量あたり０．５ｍＬの水を含む。

【0025】

一部の態様では、免疫応答は血清殺菌抗体を含む。一部の態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのうちの少なくとも１つに対する追加免疫応答を誘発することができる。一部の態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ｂに対する追加免疫応答を誘発することができる。

【0026】

一部の態様では、免疫応答は、２５歳までのヒトにおいて誘発させる。一部の態様では、免疫応答は、少なくとも２カ月齢から２５歳の年齢のヒトにおいて誘発させる。一部の態様では、免疫応答は、１０〜２５歳のヒトにおいて誘発させる。一部の態様では、免疫応答は、１０〜２６歳のヒトにおいて誘発させる。一部の態様では、免疫応答は、１２カ月齢から１８カ月齢未満または１８カ月齢から２４カ月齢未満の年齢のヒトにおいて誘発させる。一部の態様では、免疫応答は、１８カ月齢から２４カ月齢未満の年齢のヒトにおいて誘発させる。一部の態様では、免疫応答は、２４カ月齢以上１０歳未満の年齢のヒトにおいて誘発させる。

【0027】

一部の態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹに対して血清陰性であるヒトにおいて誘発させる。一部の態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹに対して血清陽性であるヒトにおいて誘発させる。

【0028】

一部の態様では、組成物は少なくとも２回の用量でヒトに投与し、２回目の用量は１回目の用量の約６カ月後である。一部の態様では、ヒトは少なくとも１０歳であり、最高で１７歳である。一部の態様では、組成物の３回目の用量をヒトに投与し、ヒトは少なくとも１６歳である。

【0029】

一部の態様では、組成物は最大で２回の用量でヒトに投与し、２回目の用量は１回目の用量の約６カ月後である。
一部の態様では、組成物は、Ａ２２に対する免疫応答を誘発する。一部の態様では、組成物は、Ａ５６に対する免疫応答を誘発する。一部の態様では、組成物は、Ｂ２４に対する免疫応答を誘発する。一部の態様では、組成物は、Ｂ４４に対する免疫応答を誘発する。

【0030】

一部の態様では、組成物は、約６０μｇの第１のポリペプチド、約６０μｇの第２のポリペプチド、約７．５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＡ莢膜糖、約７．５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＣ莢膜糖、約３．７５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＷ莢膜糖、約３．２５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＹ莢膜糖、約９７μｇのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ６．８±０．３、４．６９〜４．７１ｍｇの塩化ナトリウム、約２８ｍｇのスクロース、約０．７８ｍｇのＬ−ヒスチジン、約０．０２ｍｇのポリソルベート−８０、約０．２５ｍｇのアルミニウムを含み、さらに１用量あたり０．５ｍＬの水を含む。

【0031】

（ａ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来する第１のポリペプチドと、（ｂ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来する第２のポリペプチドと、（ｃ）髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖コンジュゲートと、（ｄ）髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖コンジュゲートと、（ｅ）髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖コンジュゲートと、（ｆ）髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖コンジュゲートとを含む組成物であって、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのうちの少なくとも１つに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、髄膜炎菌血清型に対する認可ワクチンによって誘発されたものよりも高い、組成物。

【0032】

一部の態様では、ポリペプチドは、配列番号１から配列番号６２から選択される任意の１つのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
（ａ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来する第１のポリペプチドと、（ｂ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来する第２のポリペプチドと、（ｃ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖と、（ｄ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってＡＤＨリンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖と、（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖と、（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖とを含む組成物であって、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのうちの少なくとも１つに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い、組成物。

【0033】

有効量の組成物をヒトに投与するステップを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答を誘導する方法。

【0034】

有効量の組成物をヒトに投与するステップを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌血清型Ａ、髄膜炎菌血清型Ｃ、髄膜炎菌血清型Ｗ、および／または髄膜炎菌血清型Ｙ株に対する免疫応答を誘導する方法。

【0035】

有効量の組成物をヒトに投与するステップを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌血清型Ａ、髄膜炎菌血清型Ｂ、髄膜炎菌血清型Ｃ、髄膜炎菌血清型Ｗ、および／または髄膜炎菌血清型Ｙ株に対する免疫応答を誘導する方法。

【0036】

有効量の組成物をヒトに投与するステップを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌血清型Ａ、髄膜炎菌血清型Ｂ、髄膜炎菌血清型Ｃ、髄膜炎菌血清型Ｗ、髄膜炎菌血清型Ｙ株、および／または髄膜炎菌血清型Ｘ株に対する免疫応答を誘導する方法。

【0037】

一部の態様では、患者は、組成物の最初の投与の前に、多価の髄膜炎菌莢膜糖−担体タンパク質のコンジュゲートワクチンを以前に受けていない。
一部の態様では、患者は、組成物の最初の投与の前に、多価の髄膜炎菌莢膜糖−担体タンパク質のコンジュゲートワクチンを以前に受けている。

【図面の簡単な説明】

【0038】

【図1A】ｈＳＢＡにおいて測定した、用量２の１カ月後のＭｅｎＢ試験株に対する免疫応答を示す図である。エラーバーは９５％のＣｉｓを表す。ＭｅｎＢ株は括弧内にＦＨｂｐ変異体を注記する。^＊ＭｅｎＡＢＣＷＹ、ｎ＝４１８〜４４３２；ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ、ｎ＝８１４〜８５０。^＋４つのＭｅｎＢ試験株すべてについて複合応答＝ｈＳＢＡ力価≧ＬＬＯＱ。^＋＋ＭｅｎＡＢＣＷＹ、ｎ＝２２７〜２６２；ＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ、ｎ＝４４６〜５０６。^§ＭｅｎＡＢＣＷＹ、ｎ＝１８７〜２５７；ＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ、ｎ＝３７０〜４９５。ｈＳＢＡ＝ヒト補体を用いた血清殺菌活性；ＭｅｎＡ＝髄膜炎菌血清型Ａ；ＬＬＯＱ＝定量下限；ｍ−月数；ＭｅｎＡＢＣＷＹ＝五価血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、Ｙワクチン；ＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ＝ＭＥＮＶＥＯ（登録商標）、髄膜炎菌（Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５型）オリゴ糖ＣＲＭ１９７コンジュゲートワクチン（四価髄膜炎菌ＣＲＭワクチン）；ＭｅｎＢ＝髄膜炎菌血清型Ｂ；ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ＝ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）、髄膜炎菌Ｂ型二価組換えリポタンパク質２０８６（二価ｒＬＰ２０８６）。ワクチン；ＭｅｎＣ＝髄膜炎菌血清型Ｃ；ＭｅｎＷ＝髄膜炎菌血清型Ｗ；ＭｅｎＹ＝髄膜炎菌血清型Ｙ；ＰＤ＝用量後。

【図1B】ｈＳＢＡにおいて測定した、用量１および２の１カ月後のＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ、およびＭｅｎＹ試験株に対する免疫応答を示す図である。エラーバーは９５％のＣｉｓを表す。ＭｅｎＢ株は括弧内にＦＨｂｐ変異体を注記する。^＊ＭｅｎＡＢＣＷＹ、ｎ＝４１８〜４４３２；ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ、ｎ＝８１４〜８５０。^＋４つのＭｅｎＢ試験株すべてについて複合応答＝ｈＳＢＡ力価≧ＬＬＯＱ。^＋＋ＭｅｎＡＢＣＷＹ、ｎ＝２２７〜２６２；ＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ、ｎ＝４４６〜５０６。^§ＭｅｎＡＢＣＷＹ、ｎ＝１８７〜２５７；ＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ、ｎ＝３７０〜４９５。ｈＳＢＡ＝ヒト補体を用いた血清殺菌活性；ＭｅｎＡ＝髄膜炎菌血清型Ａ；ＬＬＯＱ＝定量下限；ｍ−月数；ＭｅｎＡＢＣＷＹ＝五価血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、Ｙワクチン；ＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ＝ＭＥＮＶＥＯ（登録商標）、髄膜炎菌（Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５型）オリゴ糖ＣＲＭ１９７コンジュゲートワクチン（四価髄膜炎菌ＣＲＭワクチン）；ＭｅｎＢ＝髄膜炎菌血清型Ｂ；ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ＝ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）、髄膜炎菌Ｂ型二価組換えリポタンパク質２０８６（二価ｒＬＰ２０８６）。ワクチン；ＭｅｎＣ＝髄膜炎菌血清型Ｃ；ＭｅｎＷ＝髄膜炎菌血清型Ｗ；ＭｅｎＹ＝髄膜炎菌血清型Ｙ；ＰＤ＝用量後。

【図2A】任意の用量後の７日間以内に報告された局所反応を示す図である。ＭｅｎＡＢＣＷＹ、ｎ＝５４２；ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ＋ＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ、ｎ＝１０５０。^＊ＭｅｎＡＢＣＷＹ／ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ注入部位におけるもの。ＭｅｎＡＢＣＷＹ＝五価血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、Ｙワクチン；ＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ＝ＭＥＮＶＥＯ（登録商標）、髄膜炎菌（Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５型）オリゴ糖ＣＲＭ１９７コンジュゲートワクチン（四価髄膜炎菌ＣＲＭワクチン）；ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ＝ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）、髄膜炎菌Ｂ型二価組換えリポタンパク質２０８６（二価ｒＬＰ２０８６）。

【図2B】任意の用量後の７日間以内に報告された全身性事象を示す図である。ＭｅｎＡＢＣＷＹ、ｎ＝５４２；ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ＋ＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ、ｎ＝１０５０。^＊ＭｅｎＡＢＣＷＹ／ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ注入部位におけるもの。ＭｅｎＡＢＣＷＹ＝五価血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、Ｙワクチン；ＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ＝ＭＥＮＶＥＯ（登録商標）、髄膜炎菌（Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５型）オリゴ糖ＣＲＭ１９７コンジュゲートワクチン（四価髄膜炎菌ＣＲＭワクチン）；ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ＝ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）、髄膜炎菌Ｂ型二価組換えリポタンパク質２０８６（二価ｒＬＰ２０８６）。

【図3】仮説上のワクチン接種なしのシナリオと比較した、様々なワクチン投与戦略の下での１０年間にわたる回避された症例の推定数。

【0039】

配列識別子
配列番号１は、組換え髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０５ポリペプチド抗原のアミノ酸配列を示す。
配列番号２は、組換え髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０１ポリペプチド抗原のアミノ酸配列を示す。
配列番号３は、配列番号１および配列番号２の位置１〜４のアミノ酸残基を示す。
配列番号４は、組換えナイセリアサブファミリーＡ ＬＰ２０８６ポリペプチド（ｒＬＰ２０８６）（Ａ０５）ポリペプチドのＮ末端のアミノ酸配列を示す。
配列番号５は、ナイセリアサブファミリーＡ ＬＰ２０８６ Ｍ９８２５０７７１ポリペプチド（Ａ０５）ポリペプチドのＮ末端のアミノ酸配列を示す。
配列番号６は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ１５３のアミノ酸配列を示す。
配列番号７は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０４のアミノ酸配列を示す。
配列番号８は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０５のアミノ酸配列を示す。
配列番号９は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ１２のアミノ酸配列を示す。
配列番号１０は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号１１は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０２のアミノ酸配列を示す。
配列番号１２は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０３のアミノ酸配列を示す。
配列番号１３は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０９のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号１５は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ２４のアミノ酸配列を示す。
配列番号１６は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ４４のアミノ酸配列を示す。
配列番号１７は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ１６のアミノ酸配列を示す。
配列番号１８は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０７のアミノ酸配列を示す。
配列番号１９は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ１９のアミノ酸配列を示す。
配列番号２０は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０６のアミノ酸配列を示す。
配列番号２１は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ１５のアミノ酸配列を示す。
配列番号２２は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ２９のアミノ酸配列を示す。
配列番号２３は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ１５のアミノ酸配列を示す。
配列番号２４は、組換えナイセリアサブファミリーＢ ＬＰ２０８６ポリペプチド（ｒＬＰ２０８６）（Ｂ０１）ポリペプチドのＮ末端のアミノ酸配列を示す。
配列番号２５は、ナイセリアサブファミリーＢ ＬＰ２０８６ ＣＤＣ−１５７３ポリペプチド（Ｂ０１）ポリペプチドのＮ末端のアミノ酸配列を示す。
配列番号２６は、Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ｂ１６を発現する髄膜炎菌血清型Ａ株のアミノ酸配列を示す。
配列番号２７は、ｆＨＢＰ Ａ１０を発現する髄膜炎菌血清型Ｃ株のアミノ酸配列を示す。配列番号２７はまた、ｆＨＢＰ Ａ１０を発現する髄膜炎菌血清型Ｗ株のアミノ酸配列も示す。
配列番号２８は、ｆＨＢＰ Ａ１９を発現する髄膜炎菌血清型Ｗ株のアミノ酸配列を示す。
配列番号２９は、ｆＨＢＰ Ｂ４７を発現する髄膜炎菌血清型Ｙ株のアミノ酸配列を示す。
配列番号３０は、ｆＨＢＰ Ｂ４９を発現する髄膜炎菌血清型Ｘ株のアミノ酸配列を示す。
配列番号３１は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ１６のアミノ酸配列を示す。
配列番号３２は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０７のアミノ酸配列を示す。
配列番号３３は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ１９のアミノ酸配列を示す。
配列番号３４は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０６のアミノ酸配列を示す。
配列番号３５は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ１５のアミノ酸配列を示す。
配列番号３６は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ２９のアミノ酸配列を示す。
配列番号３７は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ１５のアミノ酸配列を示す。
配列番号３８は、Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ｂ１６を発現する髄膜炎菌血清型Ａ株のアミノ酸配列を示す。
配列番号３９は、ｆＨＢＰ Ａ１０を発現する髄膜炎菌血清型Ｃ株のアミノ酸配列を示す。配列番号３９はまた、ｆＨＢＰ Ａ１０を発現する髄膜炎菌血清型Ｗ株のアミノ酸配列も示す。
配列番号４０は、ｆＨＢＰ Ａ１９を発現する髄膜炎菌血清型Ｗ株のアミノ酸配列を示す。
配列番号４１は、ｆＨＢＰ Ｂ４７を発現する髄膜炎菌血清型Ｙ株のアミノ酸配列を示す。
配列番号４２は、ｆＨＢＰ Ｂ４９を発現する髄膜炎菌血清型Ｘ株のアミノ酸配列を示す。
配列番号４３は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ４４のアミノ酸配列を示す。
配列番号４４は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０９のアミノ酸配列を示す。
配列番号４５は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０９のアミノ酸配列を示す。
配列番号４６は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０５のアミノ酸配列を示す。
配列番号４７は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０１のアミノ酸配列を示す。
配列番号４８は、アミノ酸位置１でのＮ末端Ｃｙｓを含めた髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０１のアミノ酸配列を示す。
配列番号４９は、アミノ酸位置１でのＮ末端Ｃｙｓを含めた髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ１５のアミノ酸配列を示す。
配列番号５０は、アミノ酸位置１でのＮ末端Ｃｙｓを含めた髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ１６のアミノ酸配列を示す。
配列番号５１は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号５２は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号５３は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ１２のアミノ酸配列を示す。
配列番号５４は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号５５は、アミノ酸位置１でのＮ末端Ｃｙｓを含めた髄膜炎菌血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ６２のアミノ酸配列を示す。
配列番号５６は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ６２のアミノ酸配列を示す。
配列番号５７は、アミノ酸位置１でのＮ末端Ｃｙｓを含めた髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ２９のアミノ酸配列を示す。
配列番号５８は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ２２のアミノ酸配列を示す。
配列番号５９は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０５のアミノ酸配列を示す。
配列番号６０は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０５のアミノ酸配列を示す。
配列番号６１は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ２４のアミノ酸配列を示す。
配列番号６２は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ２４のアミノ酸配列を示す。
配列番号６３は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ０２のアミノ酸配列を示す。
配列番号６４は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ２８のアミノ酸配列を示す。
配列番号６５は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ４２のアミノ酸配列を示す。
配列番号６６は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ６３のアミノ酸配列を示す。
配列番号６７は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ７６のアミノ酸配列を示す。
配列番号６８は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０５のアミノ酸配列を示す。
配列番号６９は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０７のアミノ酸配列を示す。
配列番号７０は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ０８のアミノ酸配列を示す。
配列番号７１は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ１３のアミノ酸配列を示す。
配列番号７２は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ５２のアミノ酸配列を示す。
配列番号７３は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ｂ１０７のアミノ酸配列を示す。
配列番号７４は、髄膜炎菌、血清型Ｂ、２０８６変異体Ａ５６のアミノ酸配列を示す。

【発明を実施するための形態】

【0040】

本発明者らは、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）ならびに髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹ莢膜糖コンジュゲートを含む組成物が安定かつ免疫原性であることを見出した。本発明者らは、組成物が、ヒトにおいて髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、およびＢのうちの少なくとも２、３、４、または５つに対する免疫応答を誘導することをさらに見出した。驚くべきことに、誘発された免疫応答は、髄膜炎菌に対する認可ワクチンによって誘発された免疫応答よりも高い。

【0041】

一側面では、組成物は、担体タンパク質とコンジュゲートしている、髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質に由来する少なくとも１つのポリペプチドおよび少なくとも１つの髄膜炎菌莢膜糖を含む。
Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来するタンパク質。

【0042】

一態様では、組成物は、たとえば以下のポリペプチドのうちの任意の１つなどの、任意のｆＨＢＰを含む：Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、Ａ０７、Ａ０６、Ａ１５、Ａ２９、Ｂ０１、Ａ６２、Ｂ１５、およびその任意の組合せ。好ましくは、組成物は、Ａ０５およびＢ０１ポリペプチドの組合せを含む。別の好ましい態様では、組成物は、Ｂ２４およびＡ０５ポリペプチド組合せを含む。別の態様では、組成物は、Ａ０５、Ａ１２、Ｂ０９、およびＢ４４ポリペプチド組合せを含む。一態様では、組成物は脂質付加ｆＨＢＰを含む。一態様では、組成物は非脂質付加ｆＨＢＰを含まない。

【0043】

別の態様では、組成物は、それぞれがその全体で本明細書中に参考として組み込まれている国際公開公報ＷＯ２０１２／０３２４８９号、米国特許公開２０１２００９３８５２号、国際公開公報ＷＯ２０１３／１３２４５２号、および米国特許公開２０１６００３０５４３号に記載の非脂質付加ｆＨＢＰのうちの任意の１つなどの、非脂質付加ｆＨＢＰを含む。一態様では、組成物は、少なくとも１つの非脂質付加ｆＨＢＰおよび少なくとも１つの脂質付加ｆＨＢＰを含む。

【0044】

一部の態様では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、および配列番号６２のうちの任意の１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％の同一性を有するポリペプチドを含む。

【0045】

好ましい態様では、組成物は、（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドと、（ｃ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖と、（ｄ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってＡＤＨリンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖と、（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖と、（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖とを含む。
第１のポリペプチド、ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡ（Ａ０５）タンパク質
一態様では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチドを含む。ポリペプチドは、髄膜炎菌株Ｍ９８２５０７７１からの修飾されたＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）である。ｆＨＢＰの説明は、それぞれがその全体で参考として組み込まれているＷＯ２０１２０３２４８９号および米国特許公開２０１２／００９３８５２号に開示されている。ポリペプチドは、ポリペプチドの３つの位置で共有結合している３つの主要な脂肪酸Ｃ１６：０、Ｃ１６：１、およびＣ１８：１でＮ末端に脂質付加されている。第１のポリペプチドは合計２５８個のアミノ酸を含む。

【0046】

ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ Ａ０５タンパク質の代表的な一次構造は、米国特許第１０，１８３，０７０号の図４に提示されている。タンパク質の一次構造は、Ｎ末端システインおよびグリセリル部分（完全な化学式を使用して例示）以外のすべてのアミノ酸について一文字表記を使用して、米国特許第１０，１８３，０７０号の図４に例示されている。この構造は、Ｎ末端システイン残基が脂質付加されている、タンパク質配列の一次構造を含む。タンパク質Ｎ末端でのＮ末端システイン残基のアミノ基は脂肪酸（Ｒ１）と付着してアミド結合を形成しており、システイニルスルフヒドリル基は、２つのエステル結合した脂肪酸（Ｒ２）を含有するグリセロール部分と付着している。Ｒ１の構造はヘキサデカン酸（Ｃ１６：０）であると推測され、Ｒ２の構造はＭｎＢ ｒＬＰ２０８６アイソフォームに応じて変動する。

【0047】

第１のポリペプチドは、髄膜炎菌株Ｍ９８２５０７７１からの対応する野生型配列と比較して、ポリペプチドのＮ末端領域内に導入された２つの修飾を含む。クローニング部位を導入した結果として第２位のグリシンが付加される。第２の修飾は４個のアミノ酸の欠失を含む。したがって、一態様では、第１のポリペプチドはＮ末端にＣ−Ｇ−Ｓ−Ｓ配列（配列番号３）を含む。配列番号１の最初の４個のアミノ酸残基を参照されたい。

【0048】

第１のポリペプチド配列と野生型ナイセリア配列との間のＮ末端の相違を以下に示す。したがって、一態様では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３個、またはそれより多くのアミノ酸残基を含む。好ましくは、第１のポリペプチドは、配列番号１の少なくとも最初の４個、より好ましくは少なくとも最初の６個、最も好ましくは少なくとも最初の８個のアミノ酸残基を含む。
組換えおよびナイセリアサブファミリーＡ ＬＰ２０８６ポリペプチドの予測されるＮ末端配列の比較
ｒＬＰ２０８６ Ｍ９８２５０７７１ ＣＧＳＳ−−−−−ＧＧＧＧＶＡＡＤ（配列番号４）
ナイセリアＬＰ２０８６ Ｍ９８２５０７７１ Ｃ−ＳＳＧＳ−ＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤ（配列番号５）
＞Ａ０５（配列番号１）

【0049】

【化1】

【0050】

一態様では、第１のポリペプチドは配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。一態様では、第１のポリペプチドは合計２５８個のアミノ酸を有する。一態様では、第１のポリペプチドは、配列番号１と１００％未満の配列同一性を有するアミノ酸配列を含まない。別の態様では、第１のポリペプチドは配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。別の態様では、第１のポリペプチドはアミノ酸配列ＫＤＮを含む。たとえば配列番号１のアミノ酸残基７３〜７５を参照されたい。別の態様では、第１のポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む。別の態様では、第１のポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む。

【0051】

好ましい態様では、第１のポリペプチドは、当分野で知られている標準技法を使用して組換え宿主細胞中で容易に発現される。別の好ましい態様では、第１のポリペプチドは、配列番号１のＮおよび／またはＣドメイン上に殺菌性エピトープを含む。一態様では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個のアミノ酸残基を含む。好ましくは、第１のポリペプチドは、配列番号１の少なくとも最初の２個、より好ましくは少なくとも最初の４個、最も好ましくは、少なくとも最初の８個のアミノ酸残基を含む。

【0052】

別の態様では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最後の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個のアミノ酸残基を含む。

【0053】

一態様では、組成物は、約３０μｇ／ｍｌの、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドを含む。好ましい一態様では、組成物は、約６０μｇの、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドを含む。好ましい一態様では、組成物は、約６０μｇの、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドを含み、組成物は、好ましくは０．５ｍｌの総体積を有する。別の態様では、組成物は、約１２０μｇ／ｍｌの、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドを含む。
第２のポリペプチド、ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＢ（Ｂ０１）タンパク質
一態様では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチドを含む。ポリペプチドは、髄膜炎菌株ＣＤＣ１５７３からのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）である。ｆＨＢＰの説明は、それぞれがその全体で参考として組み込まれているＷＯ２０１２０３２４８９号および米国特許公開２０１２／００９３８５２号に開示されている。ポリペプチドは、ポリペプチドの３つの位置で共有結合している３つの主要な脂肪酸Ｃ１６：０、Ｃ１６：１、およびＣ１８：１でＮ末端に脂質付加されている。第２のポリペプチドは合計２６１個のアミノ酸を含む。

【0054】

ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ Ｂ０１タンパク質代表的な一次構造は、米国特許第１０，１８３，０７０号の図５に提示されている。タンパク質の一次構造は、Ｎ末端システインおよびグリセリル部分（完全な化学式を使用して例示）以外のすべてのアミノ酸について一文字表記を使用して、米国特許第１０，１８３，０７０号の図５に例示されている。この構造は、Ｎ末端システイン残基が脂質付加されている、タンパク質配列の一次構造を含む。タンパク質Ｎ末端でのＮ末端システイン残基のアミノ基は脂肪酸（Ｒ１）と付着してアミド結合を形成しており、システイニルスルフヒドリル基は、２つのエステル結合した脂肪酸（Ｒ２）を含有するグリセロール部分と付着している。Ｒ１の構造はヘキサデカン酸（Ｃ１６：０）であると推測され、Ｒ２の構造はｒＬＰ２０８６アイソフォームに応じて変動する。

【0055】

第２のポリペプチドは、髄膜炎菌株ＣＤＣ−１５７３からの対応する野生型配列と比較して、ｒＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質のＮ末端領域内に導入された１つの修飾を含む。第２位のグリシンはクローニング部位を導入した結果である。

【0056】

元のナイセリア配列からのＮ末端の相違を以下に示す。
組換えおよびナイセリアサブファミリーＢ ＬＰ２０８６タンパク質の予測されるＮ末端配列の比較
ｒＬＰ２０８６ ＣＤＣ−１５７３ ＣＧＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＴＡＤ（配列番号２４）
ナイセリアＬＰ２０８６ ＣＤＣ−１５７３ Ｃ−ＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＴＡＤ（配列番号２５）
一態様では、第２のポリペプチドはＮ末端にＣ−Ｇ−Ｓ−Ｓ配列（配列番号３）を含む。配列番号２の最初の４個のアミノ酸残基を参照されたい。
＞Ｂ０１（配列番号２）

【0057】

【化2】

【0058】

一態様では、第２のポリペプチドは配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。一態様では、第２のポリペプチドは合計２６１個のアミノ酸を有する。一態様では、第２のポリペプチドは配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。別の態様では、第２のポリペプチドは、配列番号２と１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドを含まない。好ましい態様では、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、それぞれのポリペプチドのＮ末端にＣ−Ｇ−Ｓ−Ｓ（配列番号３）配列を含む。

【0059】

好ましい態様では、第２のポリペプチドは、当分野で知られている標準技法を使用して組換え宿主細胞中で容易に発現される。別の好ましい態様では、第２のポリペプチドは、配列番号２のＮおよび／またはＣドメイン上に殺菌性エピトープを含む。一態様では、第２のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列少なくとも最初の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個のアミノ酸残基を含む。好ましくは、第２のポリペプチドは、配列番号２の少なくとも最初の２個、より好ましくは少なくとも最初の４個、最も好ましくは少なくとも最初の８個のアミノ酸残基を含む。

【0060】

別の態様では、第２のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列の少なくとも最後の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００個のアミノ酸残基を含む。

【0061】

一態様では、組成物は、約３０μｇ／ｍｌの、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドを含む。好ましい一態様では、組成物は、約６０μｇの、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドを含む。好ましい一態様では、組成物は、約６０μｇの、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含み、組成物は、好ましくは０．５ｍｌの総体積を有する。別の態様では、組成物は、１２０μｇ／ｍｌの、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む。
髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹ（ＭｅｎＡＣＷＹ）莢膜糖
本明細書全体にわたって用語「糖」とは、多糖またはオリゴ糖を示していてもよく、両方を含んでもよい。多糖は細菌から単離するか、または、細菌から単離し、既知の方法および任意選択で微小流動化によってある程度まで分粒する。多糖は、多糖試料において粘度を下げるため、および／またはコンジュゲート産物の濾過可能性を改善させるために、分粒することができる。オリゴ糖は反復単位数が低く（典型的には５〜３０個の反復単位）、典型的には加水分解した多糖である。

【0062】

それぞれの髄膜炎菌莢膜糖は、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片Ｃ、およびタンパク質Ｄからなる群から独立して選択された担体タンパク質とコンジュゲートしていてもよい。１つまたは複数の髄膜炎菌莢膜糖を、他のものとは異なる担体タンパク質とコンジュゲートしていてもよいが、一態様では、これらはすべて同じ担体タンパク質とコンジュゲートしている。たとえば、これらは、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片Ｃ、およびタンパク質Ｄからなる群から選択される同じ担体タンパク質とコンジュゲートしていてもよい。このコンテキストでは、ＣＲＭ１９７およびＤＴは、１個のアミノ酸しか異なっていないため、同じ担体タンパク質であるとみなし得る。好ましい態様では、存在するすべての髄膜炎菌莢膜糖はＴＴとコンジュゲートしている。

【0063】

タンパク質担体が組成物中の２つ以上の糖について同じである場合、糖は、タンパク質担体の同じ分子とコンジュゲートしていてもよい（担体分子には２つ以上の異なる糖がコンジュゲートしている）［たとえばＷＯ０４／０８３２５１号を参照されたい。たとえば、単一の担体タンパク質が、ＭｅｎＡおよびＭｅｎＣ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＣおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＣおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹとコンジュゲートしていてもよい。あるいは、糖は、それぞれタンパク質担体の異なる分子と別々にコンジュゲートしていてもよい（タンパク質担体のそれぞれの分子には１種類の糖のみがコンジュゲートしている）。

【0064】

一態様では、少なくとも２つの異なる糖コンジュゲートは、同じ種類の担体タンパク質と別々にコンジュゲートしており、ここで、１つまたは複数の糖はタンパク質担体上の第１の種類の化学基を介して担体タンパク質とコンジュゲートしており、１つまたは複数の糖はタンパク質担体上の第２の（異なる）種類の化学基を介して担体タンパク質とコンジュゲートしている。

【0065】

一態様では、２つのコンジュゲートは、同じ担体と連結しているが異なるコンジュゲーション化学によって連結している、同じ糖を含む。代替態様では、２つの異なる糖はタンパク質担体上の異なる基とコンジュゲートしている。

【0066】

「同じ種類の担体タンパク質と別々にコンジュゲートしている」とは、糖が同じ担体と個々にコンジュゲートしていることを意味する（たとえば、ＭｅｎＡは、破傷風トキソイド上のアミン基を介して破傷風トキソイドとコンジュゲートしており、ＭｅｎＣは、破傷風トキソイドの異なる分子上のカルボン酸基を介して破傷風トキソイドとコンジュゲートしている。）
莢膜糖は、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片Ｃ、およびタンパク質Ｄからなる群から独立して選択された同じ担体タンパク質とコンジュゲートしていてもよい。本開示のコンジュゲートにおいて使用し得るタンパク質担体のより完全なリストを以下に提示する。このコンテキストでは、ＣＲＭ１９７およびＤＴは、１個のアミノ酸しか異なっていないため、同じ担体タンパク質であるとみなし得る。一態様では、存在するすべての莢膜糖はＴＴとコンジュゲートしている。

【0067】

糖は、髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）、髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）、髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖（ＭｅｎＷ）、またはその任意の組合せのうちの任意の１つを含む。

【0068】

タンパク質担体上に存在する第１および第２の化学基は互いに異なり、理想的には、コンジュゲーション目的に容易に使用し得る天然の化学基である。これらは、カルボキシル基、アミノ基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、イミダゾリル基、グアニジル基、およびインドリル基からなる群から独立して選択され得る。一態様では、第１の化学基はカルボキシルであり、第２はアミノである、またはその逆である。これらの基は以下に詳述する。

【0069】

具体的な態様では、免疫原性組成物は少なくとも２つの異なる髄膜炎菌莢膜糖を含み、ここで、１つまたは複数は、タンパク質担体上の第１の種類の化学基（たとえばカルボキシル）を介して担体タンパク質とコンジュゲートしている、ＭｅｎＡおよびＭｅｎＣからなる第１の群から選択され、１つまたは複数の異なる糖は、タンパク質担体上の第２の種類の化学基（たとえばアミノ）を介して担体タンパク質とコンジュゲートしている、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＹ、およびＭｅｎＷからなる第２の群から選択される。

【0070】

さらなる態様では、本開示の免疫原性組成物は、第１の種類の化学基（たとえばカルボキシル）を介してコンジュゲートしているＭｅｎＡと、第２の種類の化学基（たとえばアミノ）を介してコンジュゲートしているＭｅｎＣとを含む。

【0071】

別の態様では、免疫原性組成物は、第１の種類の化学基（たとえばカルボキシル）を介してコンジュゲートしているＭｅｎＣと、第２の種類の化学基（たとえばアミノ）を介してコンジュゲートしているＭｅｎＹとを含む。

【0072】

別の態様では、免疫原性組成物は、第１の種類の化学基（たとえばカルボキシル）を介してコンジュゲートしているＭｅｎＡと、第２の種類の化学基（たとえばアミノ）を介してコンジュゲートしているＭｅｎＣ、ＭｅｎＹ、およびＭｅｎＷとを含む。

【0073】

別の態様では、免疫原性組成物は、第１の種類の化学基（たとえばカルボキシル）を介してコンジュゲートしているＭｅｎＡおよびＭｅｎＣと、第２の種類の化学基（たとえばアミノ）を介してコンジュゲートしているＭｅｎＹおよびＭｅｎＷとを含む。

【0074】

本開示の医薬（免疫原性）組成物中に含まれる本開示の糖は、破傷風トキソイド（ＴＴ）、破傷風トキソイド断片Ｃ、破傷風毒素の無毒性突然変異体［本開示の目的のために、ＴＴのすべてのそのような変異体は同じ種類の担体タンパク質とみなされることに注意されたい］、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、ＣＲＭ１９７、ジフテリア毒素の他の無毒性突然変異体［ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ１９７、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５（Ｕｃｈｉｄａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２１８巻；３８３８〜３８４４頁、１９７３年）；ＣＲＭ９、ＣＲＭ４５、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３、およびＣＲＭ１０７、ならびにＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔｏｘｉｎｓ、Ｆｒａｎｋｅｌ編、Ｍａｅｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ，、１９９２年に記載されている他の突然変異；Ｇｌｕ−１４８からＡｓｐ、Ｇｌｎ、もしくはＳｅｒおよび／またはＡｌａ１５８からＧｌｙへの欠失または突然変異、ならびにＵＳ４７０９０１７号もしくはＵＳ４９５０７４０号に開示されている他の突然変異；少なくとも１つ以上の残基Ｌｙｓ５１６、Ｌｙｓ５２６、Ｐｈｅ５３０、および／もしくはＬｙｓ５３４の突然変異、ならびにＵＳ５９１７０１７号もしくはＵＳ６４５５６７３号に開示されている他の突然変異；あるいはＵＳ５８４３７１１号に開示されている断片など］（本開示の目的のために、ＤＴのすべてのそのような変異体は同じ種類の担体タンパク質とみなされることに注意されたい）、肺炎球菌ニューモリシン（Ｋｕｏら、（１９９５年）Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ、６３巻；２７０６〜１３頁）、ＯＭＰＣ（髄膜炎菌外膜タンパク質−通常は髄膜炎菌血清型Ｂから抽出−ＥＰ０３７２５０１号）、合成ペプチド（ＥＰ０３７８８８１号、ＥＰ０４２７３４７号）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２号、ＷＯ９４／０３２０８号）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８号、ＥＰ０４７１１７７号）、サイトカイン、リンホカイン、成長因子もしくはホルモン（ＷＯ９１／０１１４６号）、Ｎ１９タンパク質（Ｂａｒａｌｄｏｉら、（２００４年）Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ、７２巻；４８８４〜７頁）肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ（ＷＯ０２／０９１９９８号）などの、様々な病原体に由来する抗原からの複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質（Ｆａｌｕｇｉら、（２００１年）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、３１巻；３８１６〜３８２４頁）、鉄取り込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７号）、シー・ディフィシルの毒素ＡもしくはＢ（ＷＯ００／６１７６１号）、またはタンパク質Ｄ（ＥＰ５９４６１０号およびＷＯ００／５６３６０号）等の担体タンパク質とコンジュゲートしている。

【0075】

一態様では、本開示の免疫原性組成物は、少なくとも２個、３個、４個、またはそれに含有されるそれぞれの糖において、同じ種類の担体タンパク質を（独立して）使用する。
一態様では、本開示の免疫原性組成物は、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片Ｃ、およびタンパク質Ｄからなる群から選択される担体タンパク質とコンジュゲートしている髄膜炎菌糖を含む。

【0076】

本開示の免疫原性組成物は、Ｍｅｎ糖対担体タンパク質の比が１：５〜５：１、１：２〜５：１、１：０．５〜１：２．５、または１：１．２５〜１：２．５（ｗ／ｗ）である、少なくとも１つの髄膜炎菌糖（たとえば、ＭｅｎＡ；ＭｅｎＣ；ＭｅｎＷ；ＭｅｎＹ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＣ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＣおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＣおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；またはＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ）コンジュゲートを任意選択で含む。好ましい一態様では、組成物は、それぞれ約３、約３、約１．５、および約１．３の比（トキソイド対多糖）で破傷風トキソイドとそれぞれコンジュゲートしている、ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ、およびＭｅｎＹを含む。

【0077】

コンジュゲートにおける糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、無菌コンジュゲートを使用して決定し得る。タンパク質の量はローリーアッセイを使用して決定し（たとえば、Ｌｏｗｒｙら、（１９５１年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９３巻、２６５〜２７５頁またはＰｅｔｅｒｓｏｎら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１００巻、２０１〜２２０頁（１９７９年））、糖の量は、ＭｅｎＡではＩＣＰ−ＯＥＳ（誘導結合プラズマ−発光分光法）、ＭｅｎＣではＤＭＡＰアッセイ、ならびにＭｅｎＷおよびＭｅｎＹではレソルシノールアッセイを使用して決定する（Ｍｏｎｓｉｇｎｙら、（１９８８年）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１７５巻、５２５〜５３０頁）。

【0078】

一態様では、本開示の免疫原性組成物は髄膜炎菌糖コンジュゲートを含み、髄膜炎菌糖は、リンカー、たとえば二官能性リンカーを介して担体タンパク質とコンジュゲートしている。リンカーは任意選択でヘテロ二官能性またはホモ二官能性であり、たとえば、反応性アミノ基および反応性カルボン酸基、２つの反応性アミノ基、または２つの反応性カルボン酸基を有する。リンカーは、たとえば、４〜２０、４〜１２、５〜１０個の炭素原子を有する。可能性のあるリンカーはＡＤＨである。他のリンカーは、Ｂ−プロピオンアミド（ＷＯ００／１０５９９号）、ニトロフェニル−エチルアミン（Ｇｅｖｅｒら、（１９７９年）Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６５巻；１７１〜２８８頁）、ハロゲン化ハロアルキル（ＵＳ４０５７６８５号）、グリコシド結合（ＵＳ４６７３５７４号、ＵＳ４８０８７００号）、ヘキサンジアミン、および６−アミノカプロン酸（ＵＳ４４５９２８６号）を含む。

【0079】

本開示の免疫原性組成物中に存在する糖コンジュゲートは、任意の既知のカップリング技法によって調製し得る。コンジュゲーション方法は、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート（ＣＤＡＰ）を用いて糖を活性化させてシアン酸エステルを形成することに依存し得る。したがって、活性化された糖は、直接またはスペーサー（リンカー）基を介して、担体タンパク質上のアミノ基とカップリングさせ得る。たとえば、スペーサーはシスタミンまたはシステアミンであることができ、これにより、マレイミドで活性化した担体タンパク質（たとえばＧＭＢＳを使用）またはホロアセチル化した担体タンパク質（たとえばヨードアセチミドまたはＮ−スクシンイミジルブロモアセテートを使用）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体とカップリングさせることができる、チオール化多糖が得られる。任意選択で、シアン酸エステル（任意選択でＣＤＡＰ化学によって作製）をヘキサンジアミンまたはＡＤＨとカップリングさせ、アミノ誘導体化糖を、カルボジイミド（たとえば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して、タンパク質担体上のカルボキシル基を介して、担体タンパク質とコンジュゲートさせる。そのようなコンジュゲートは、ユニフォームド・サービス大学（Ｕｎｉｆｏｒｍｅｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）のＰＣＴ公開出願ＷＯ９３／１５７６０号ならびにＷＯ９５／０８３４８号およびＷＯ９６／２９０９４号に記載されている。

【0080】

他の適切な技法は、カルビイニド（ｃａｒｂｉｉｎｉｄｅ）、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、ｐ−ニトロ安息香酸、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｓ−ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵを使用する。多くはＷＯ９８／４２７２１号に記載されている。コンジュゲーションは、糖の遊離ヒドロキシル基とＣＤＩとの反応（Ｂｅｔｈｅｌｌら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９７９年、２５４巻；２５７２〜４頁、Ｈｅａｒｎら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、１９８１年、２１８巻；５０９〜１８頁）、次いでタンパク質との反応によるカルバミン酸結合の形成によって形成され得る、カルボニルリンカーを含み得る。これは、アノマー末端から一次ヒドロキシル基への還元、一次ヒドロキシル基とＣＤＩとの反応によりＣＤＩカルバメート中間体を形成させ、ＣＤＩカルバメート中間体をタンパク質上のアミノ基とカップリングさせる、任意選択の一次ヒドロキシル基の保護／脱保護を含み得る。

【0081】

また、コンジュゲートは、ＵＳ４３６５１７０号（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ）およびＵＳ４６７３５７４号（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）に記載の直接還元性アミノ化方法によって調製することもできる。他の方法はＥＰ−０−１６１−１８８号、ＥＰ−２０８３７５号、およびＥＰ−０−４７７５０８号に記載されている。

【0082】

さらなる方法は、カルボジイミド縮合（Ｃｈｕ Ｃ．ら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１９８３年、２４５〜２５６頁）による、たとえばＥＤＡＣを使用した、アジピン酸ヒドラジド（ＡＤＨ）で誘導体化した臭化シアン（またはＣＤＡＰ）活性化糖とタンパク質担体とのカップリングを含む。

【0083】

一態様では、糖上のヒドロキシル基（任意選択で活性化されたヒドロキシル基、たとえばシアン酸エステルによって活性化されたヒドロキシル基）を、直接または間接的に（リンカーを介して）のどちらかで、タンパク質上のアミノまたはカルボキシル基と連結させる。リンカーが存在する場合、たとえばＣＤＡＰコンジュゲーションを使用することによって、糖上のヒドロキシル基をリンカー上のアミノ基と任意選択で連結させる。たとえばカルボジイミド化学を使用することによって、たとえばＥＤＡＣを使用することによって、リンカー、たとえばＡＤＨ）中のさらなるアミノ基をタンパク質上のカルボン酸基とコンジュゲートさせ得る。一態様では、リンカーを担体タンパク質とコンジュゲートさせる前に、髄膜炎菌莢膜糖（または糖全般）を最初にリンカーとコンジュゲートさせる。あるいは、糖とコンジュゲートさせる前にリンカーを担体とコンジュゲートさせ得る。

【0084】

一般に、タンパク質担体上の以下の種類の化学基をカップリング／コンジュゲーションに使用することができる：
Ａ）カルボキシル（たとえば、アスパラギン酸またはグルタミン酸を介して）。一態様では、この基は、糖上のアミノ基に直接、またはカルボジイミド化学、たとえばＥＤＡＣを用いてリンカー上のアミノ基に連結している。
Ｂ）アミノ基（たとえばリシンを介して）。一態様では、この基は、糖上のカルボキシル基に直接、またはカルボジイミド化学、たとえばＥＤＡＣを用いてリンカー上のカルボキシル基に連結している。別の態様では、この基は、糖上のＣＤＡＰまたはＣＮＢｒで活性化させたヒドロキシル基に直接、または、リンカー上のそのような基、アルデヒド基を有する糖もしくはリンカー、スクシンイミドエステル基を有する糖もしくはリンカーに連結している。
Ｃ）スルフヒドリル（たとえばシステインを介して）。一態様では、この基は、マレイミド化学でブロモもしくはクロロアセチル化糖またはリンカーと連結している。一態様では、この基はビスジアゾベンジジンで活性化／修飾されている。
Ｄ）ヒドロキシル基（たとえばチロシンを介して）。一態様では、この基はビスジアゾベンジジンで活性化／修飾されている。
Ｅ）イミダゾリル基（たとえばヒスチジンを介して）。一態様では、この基はビスジアゾベンジジンで活性化／修飾されている。
Ｆ）グアニジル基（たとえばアルギニンを介して）。
Ｇ）インドリル基（たとえばトリプトファンを介して）。

【0085】

糖上では、一般に以下の基をカップリングに使用することができる：ＯＨ、ＣＯＯＨ、またはＮＨ２。アルデヒド基は、過ヨウ素酸、酸加水分解、過酸化水素などの当分野で知られている様々な処理の後に発生させることができる。
直接カップリング手法：
糖−ＯＨ＋ＣＮＢｒまたはＣＤＡＰ→シアン酸エステル＋ＮＨ２−Ｐｒｏｔ→コンジュゲート
糖−アルデヒド＋ＮＨ２−Ｐｒｏｔ→シッフ塩基＋ＮａＣＮＢＨ３→コンジュゲート
糖−ＣＯＯＨ＋ＮＨ２−Ｐｒｏｔ＋ＥＤＡＣ→コンジュゲート
糖−ＮＨ２＋ＣＯＯＨ−Ｐｒｏｔ＋ＥＤＡＣ→コンジュゲート
スペーサー（リンカー）を介した間接的カップリング手法：
糖−ＯＨ＋ＣＮＢｒまたはＣＤＡＰ→シアン酸エステル＋ＮＨ２−ＮＨ２→糖−ＮＨ２＋ＣＯＯＨ−Ｐｒｏｔ＋ＥＤＡＣ→コンジュゲート
糖−ＯＨ＋ＣＮＢｒまたはＣＤＡＰ→シアン酸エステル＋ＮＨ２−ＳＨ→糖−ＳＨ＋ＳＨ−Ｐｒｏｔ（露出したシステインを有するネイティブタンパク質、またはたとえばＳＰＤＰによるタンパク質のアミノ基の修飾の後に得られる）→糖−Ｓ−Ｓ−Ｐｒｏｔ
糖−ＯＨ＋ＣＮＢｒまたはＣＤＡＰ→シアン酸エステル＋ＮＨ２−ＳＨ→糖−ＳＨ＋マレイミド−Ｐｒｏｔ（アミノ基の修飾）→コンジュゲート
糖−ＣＯＯＨ＋ＥＤＡＣ＋ＮＨ２−ＮＨ２→糖−ＮＨ２＋ＥＤＡＣ＋ＣＯＯＨ−Ｐｒｏｔ→コンジュゲート
糖−ＣＯＯＨ＋ＥＤＡＣ＋ＮＨ２−ＳＨ→糖−ＳＨ＋ＳＨ−Ｐｒｏｔ（露出したシステインを有するネイティブタンパク質、またはたとえばＳＰＤＰによるタンパク質のアミノ基の修飾の後に得られる）→糖−Ｓ−Ｓ−Ｐｒｏｔ
糖−ＣＯＯＨ＋ＥＤＡＣ＋ＮＨ２−ＳＨ→糖−ＳＨ＋マレイミド−Ｐｒｏｔ（アミノ基の修飾）→コンジュゲート
糖−アルデヒド＋ＮＨ２−ＮＨ２→糖−ＮＨ２＋ＥＤＡＣ＋ＣＯＯＨ−Ｐｒｏｔ→コンジュゲート
注記：上記ＥＤＡＣの代わりに任意の適切なカルボジイミドを使用し得る。

【0086】

要約すると、糖とのカップリングに一般に使用し得るタンパク質担体化学基の種類は、アミノ基（たとえばリシン残基上）、ＣＯＯＨ基（たとえば、アスパラギン酸およびグルタミン酸残基上）、ならびにＳＨ基（接近可能な場合）（たとえばシステイン残基上）である。

【0087】

一態様では、髄膜炎菌莢膜糖（または糖全般）のうちの少なくとも１つは担体タンパク質と直接コンジュゲートしており、任意選択で、ＭｅｎＷおよび／またはＭｅｎＹおよび／またはＭｅｎＣ糖は担体タンパク質と直接コンジュゲートしている。たとえば、ＭｅｎＷ；ＭｅｎＹ；ＭｅｎＣ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＣ；ＭｅｎＹおよびＭｅｎＣ；またはＭｅｎＷ、ＭｅｎＹおよびＭｅｎＣは担体タンパク質と直接連結している。任意選択で、髄膜炎菌莢膜糖のうちの少なくとも１つはＣＤＡＰによって直接コンジュゲートしている。たとえば、ＭｅｎＷ、ＭｅｎＹ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷとＭｅｎＹ、ＭｅｎＷとＭｅｎＣ、ＭｅｎＹとＭｅｎＣ、またはＭｅｎＷとＭｅｎＹとＭｅｎＣは、ＣＤＡＰによって担体タンパク質と直接連結している（ＷＯ９５／０８３４８号およびＷＯ９６／２９０９４号を参照）。一態様では、すべての髄膜炎菌莢膜糖は破傷風トキソイドとコンジュゲートしている。

【0088】

一態様では、ＭｅｎＷおよび／またはＹ糖対担体タンパク質の比は１：０．５〜１：２（ｗ／ｗ）である、および／またはＭｅｎＣ糖対担体タンパク質の比は１：０．５〜１：４または１：０．５〜１：１．５（ｗ／ｗ）であり、特にこれらの糖が任意選択でＣＤＡＰを使用してタンパク質と直接連結している場合にそうである。

【0089】

一態様では、髄膜炎菌莢膜糖（または糖全般）のうちの少なくとも１つは、リンカー、たとえば二官能性リンカーを介して担体タンパク質とコンジュゲートしている。リンカーは、任意選択でヘテロ二官能性またはホモ二官能性であり、たとえば、反応性アミン基および反応性カルボン酸基、２つの反応性アミン基、または２つの反応性カルボン酸基を有する。リンカーは、たとえば、４〜２０、４〜１２、５〜１０個の炭素原子を有する。可能性のあるリンカーはＡＤＨである。

【0090】

一態様では、ＭｅｎＡ；ＭｅｎＣ；またはＭｅｎＡおよびＭｅｎＣは、リンカーを介して担体タンパク質（たとえば破傷風トキソイド）とコンジュゲートしている。
一態様では、少なくとも１つの髄膜炎菌糖は、ＣＤＡＰおよびＥＤＡＣを使用して、リンカーを介して担体タンパク質とコンジュゲートしている。たとえば、ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、またはＭｅｎＡおよびＭｅｎＣは、上述のようにＣＤＡＰおよびＥＤＡＣを使用して、リンカー（たとえば、ＡＤＨなどの、その末端に２つのヒドラジノ基を有するもの）を介してタンパク質とコンジュゲートしている。たとえば、ＣＤＡＰは糖をリンカーにコンジュゲートさせるために使用し、ＥＤＡＣはリンカーをタンパク質にコンジュゲートさせるために使用する。任意選択で、リンカーを介したコンジュゲーションは、ＭｅｎＡ；ＭｅｎＣ；またはＭｅｎＡおよびＭｅｎＣについて１：０．５〜１：６、１：１〜１：５、または１：２〜１：４の糖対担体タンパク質の比をもたらす。

【0091】

一態様では、ＭｅｎＡ莢膜糖は、存在する場合は、反復単位の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８％が少なくとも１つの位置でＯ−アセチル化されているように、少なくとも部分的にＯ−アセチル化する。Ｏ−アセチル化は、たとえば、反復単位の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８％の少なくともＯ−３位に存在する。

【0092】

一態様では、ＭｅｎＣ莢膜糖は、存在する場合は、（α２→９）−結合ＮｅｕＮＡｃ反復単位の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８％が少なくとも１つまたは２つの位置でＯ−アセチル化されているように、少なくとも部分的にＯ−アセチル化する。Ｏ−アセチル化は、たとえば、反復単位の少なくとも３０％。４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８％のＯ−７および／またはＯ−８位に存在する。

【0093】

一態様では、ＭｅｎＷ莢膜糖は、存在する場合は、反復単位の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８％が少なくとも１つまたは２つの位置でＯ−アセチル化されているように、少なくとも部分的にＯ−アセチル化する。Ｏ−アセチル化は、たとえば、反復単位の少なくとも３０％。４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８％のＯ−７および／またはＯ−９位に存在する。

【0094】

一態様では、ＭｅｎＹ莢膜糖は、存在する場合は、反復単位の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８％が少なくとも１つまたは２つの位置でＯ−アセチル化されているように、少なくとも部分的にＯ−アセチル化する。Ｏ−アセチル化は、反復単位の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８％の７および／または９位に存在する。

【0095】

Ｏ−アセチル化の百分率とは、Ｏ−アセチル化を含有する反復単位の百分率をいう。これは、コンジュゲートの前および／またはコンジュゲーションの後に、糖において測定し得る。

【0096】

免疫原性組成物の開示の一態様では、存在する糖または存在するそれぞれの髄膜炎菌莢膜糖はＴＴとコンジュゲートしている。さらなる態様では、それぞれの髄膜炎菌莢膜糖は別々の担体タンパク質と別々にコンジュゲートしている。さらなる態様では、それぞれの髄膜炎菌莢膜糖コンジュゲートは１：５〜５：１または１：１〜１：４（ｗ／ｗ）の糖：担体の比を有する。さらなる態様では、少なくとも１つ、２つ、または３つの髄膜炎菌莢膜糖コンジュゲートは担体タンパク質と直接コンジュゲートしている。さらなる態様では、ＭｅｎＷおよび／もしくはＭｅｎＹ、ＭｅｎＷおよび／もしくはＭｅｎＣ、ＭｅｎＹおよび／もしくはＭｅｎＣ、またはＭｅｎＷとＭｅｎＣとＭｅｎＹは担体タンパク質と直接コンジュゲートしている。さらなる態様では、少なくとも１つ、２つ、または３つの髄膜炎菌糖コンジュゲートはＣＤＡＰ化学によって直接コンジュゲートしている。さらなる態様では、ＭｅｎＷおよび／またはＹ糖対担体タンパク質の比は１：０．５〜１：２（ｗ／ｗ）である。さらなる態様では、ＭｅｎＣ糖対担体タンパク質の比は１：０．５〜１：２（ｗ／ｗ）である。さらなる態様では、少なくとも１つ、２つ、または３つの髄膜炎菌莢膜糖は、リンカー（２つの反応性アミノ基（ＡＤＨなど）もしくは２つの反応性カルボキシル基を有する、または一方の末端で反応性アミノ基および他方の末端で反応性カルボキシル基を有する等、二官能性であり得る）を介して、担体タンパク質とコンジュゲートしている。リンカーは４〜１２個の炭素原子を有することができる。さらなる態様では、リンカーを介してコンジュゲートしているそのまたはそれぞれの髄膜炎菌莢膜糖は、ＣＤＡＰ化学を用いてリンカーとコンジュゲートしている。さらなる態様では、担体タンパク質は、カルボジイミド化学を使用して、たとえばＥＤＡＣを使用してリンカーとコンジュゲートしている。さらなる態様では、担体タンパク質をリンカーとコンジュゲートさせる前に、そのまたはそれぞれの髄膜炎菌莢膜糖をリンカーとコンジュゲートさせる。さらなる態様では、ＭｅｎＡは、リンカーを介して担体タンパク質とコンジュゲートしている（ＭｅｎＡ糖対担体タンパク質の比は１：２〜１：５（ｗ／ｗ）であり得る）。さらなる態様では、ＭｅｎＣは、リンカーを介して担体タンパク質とコンジュゲートしている（ＭｅｎＣ糖対担体タンパク質の比は１：２〜１：５（ｗ／ｗ）であり得る）。

【0097】

ネイティブまたはわずかに分粒した多糖コンジュゲートを使用することによって、以下の利点のうちの１つまたは複数を実現し得る：１）０．２ミクロンのフィルターを通して濾過可能な、高い免疫原性を有するコンジュゲート、２）免疫記憶が増強され得る（実施例３のように）、３）コンジュゲート中の多糖対タンパク質の比（ｗ／ｗ）が増加され得るような、コンジュゲート中の多糖対タンパク質の比の変更（これは担体抑制効果の低下をもたらす場合がある）、４）より大きな多糖をコンジュゲーションに使用することによって、加水分解する傾向がある免疫原性コンジュゲート（ＭｅｎＡコンジュゲートなど）を安定化し得る。より大きな多糖の使用は、コンジュゲート担体とのより多くの架橋結合をもたらす場合があり、コンジュゲートからの遊離糖の遊離を減らし得る。従来技術に記載されているコンジュゲートワクチンは、コンジュゲーションを改善させるために、コンジュゲーション前に多糖と脱重合させる傾向がある。より大きいサイズの糖を保持する髄膜炎菌（または糖）コンジュゲートワクチンが、髄膜炎菌性疾患に対して良好な免疫応答を提供することができる。

【0098】

したがって、本開示の免疫原性組成物は、１つまたは複数の糖コンジュゲートを含んでよく、コンジュゲーション前のそれぞれの糖の平均サイズは、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａ、１１０ｋＤａ、１２０ｋＤａ、または１３０ｋＤａを超える。一態様では、コンジュゲーション後のコンジュゲートは、濾過前試料と比較して濾過後に５０、６０、７０、８０、９０、または９５％を超える収率が得られるように、０．２ミクロンのフィルターを通して容易に濾過可能であるべきである。

【0099】

特に、本開示の免疫原性組成物は、担体タンパク質とコンジュゲートしている、血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹのうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つからの髄膜炎菌莢膜糖を含み、少なくとも１つ、２つ、３つ、もしくは４つ、またはそれぞれの髄膜炎菌糖の平均サイズ（重量平均分子量、Ｍｗ）は、５０ｋＤａ、６０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａ、１１０ｋＤａ、１２０ｋＤａ、または１３０ｋＤａを超える。

【0100】

好ましい態様では、ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの平均Ｍｗは、少なくとも２５０ｋＤａ、２６０ｋＤａ、２７０ｋＤａ、２８０ｋＤａ、または２９０ｋＤａであり、最も好ましくは約３００ｋＤａであり、最大で３５０ｋＤａまたは３３０ｋＤａである。好ましい態様では、ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの平均Ｍｗは、少なくとも１５０ｋＤａ、１６０ｋＤａ、１７０ｋＤａ、１８０ｋＤａ、または１９０ｋＤａであり、最も好ましくは約２００ｋＤａであり、最大で２５０ｋＤａまたは２３０ｋＤａである。好ましい態様では、ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートの平均Ｍｗは、少なくとも２４０、２５０ｋＤａ、２６０ｋＤａ、または２７０ｋＤａであり、最も好ましくは約２８０ｋＤａであり、最大で３３０ｋＤａまたは３１０ｋＤａである。好ましい態様では、ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートの平均Ｍｗは、少なくとも２２０ｋＤａ、２３０ｋＤａ、２４０ｋＤａ、または２５０ｋＤａであり、最も好ましくは約２７０ｋＤａであり、最大で３２０ｋＤａまたは３００ｋＤａである。

【0101】

免疫原性組成物は、担体タンパク質とコンジュゲートしている、血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹのうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つからの髄膜炎菌莢膜糖を含んでよく、少なくとも１つ、２つ、３つ、もしくは４つ、またはそれぞれの髄膜炎菌糖は、ネイティブ糖であるか、またはネイティブ多糖の重量平均分子量と比較して×２、×３、×４、×５、×６、×７、×８、×９、もしくは×１０までの係数によって分粒するかのいずれかである。

【0102】

本開示の目的のために、「ネイティブ多糖」とは、糖の大きさを縮小することが目的であるプロセスに供していない糖をいう。多糖は、通常の精製手順中に大きさがわずかに縮小される場合がある。そのような糖はそれでもネイティブである。多糖を分粒技法に供した場合にのみ、多糖はネイティブでないとみなされる。

【0103】

本開示の目的のために、「×２までの係数によって分粒する」とは、糖の大きさを縮小するが、ネイティブ多糖の大きさの半分より大きいサイズを保持することを意図するプロセスに、糖を供することを意味する。×３、×４などは、同じように解釈されるものであり、すなわち、多糖の大きさを縮小するが、ネイティブ多糖の大きさの三分の一、四分の一などより大きいサイズを保持することを意図するプロセスに、糖を供する。

【0104】

本開示の一側面では、免疫原性組成物は、担体タンパク質とコンジュゲートしている、血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹのうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つからの髄膜炎菌莢膜糖を含み、少なくとも１つ、２つ、３つ、もしくは４つ、またはそれぞれの髄膜炎菌糖はネイティブ多糖である。

【0105】

本開示の一側面では、免疫原性組成物は、担体タンパク質とコンジュゲートしている、血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹのうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つからの髄膜炎菌莢膜糖を含み、少なくとも１つ、２つ、３つ、もしくは４つ、またはそれぞれの髄膜炎菌糖は、×１．５、×２、×３、×４、×５、×６、×７、×８、×９、または×１０までの係数によって分粒する。

【0106】

本開示の免疫原性組成物は、以下のコンジュゲートを任意選択で含む：髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）、血清型Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）、血清型Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ）、血清型Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、血清型ＣとＹ莢膜糖（ＭｅｎＣＹ）、血清型ＣとＡ莢膜糖（ＭｅｎＡＣ）、血清型ＣとＷ莢膜糖（ＭｅｎＣＷ）、血清型ＡとＹ莢膜糖（ＭｅｎＡＹ）、血清型ＡとＷ莢膜糖（ＭｅｎＡＷ）、血清型ＷとＹ莢膜糖（ＭｅｎＷＹ）、血清型ＡとＣとＷ莢膜糖（ＭｅｎＡＣＷ）、血清型ＡとＣとＹ莢膜糖（ＭｅｎＡＣＹ）、血清型ＡとＷ１３５とＹ莢膜糖（ＭｅｎＡＷＹ）、血清型ＣとＷ１３５とＹ莢膜糖（ＭｅｎＣＷＹ）、または血清型ＡとＣとＷ１３５とＹ莢膜糖（ＭｅｎＡＣＷＹ）。これが、血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹ、または本明細書中に言及した場合はそれぞれの髄膜炎菌糖のうちの「１つ、２つ、３つ、もしくは４つ」または「少なくとも１つ」の定義である。

【0107】

一態様では、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれぞれの髄膜炎菌糖の平均サイズは、ＭＡＬＬＳによって決定して、５０ＫＤａ〜１５００ｋＤａ、５０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、５０ｋＤａ〜３００ＫＤａ、１０１ｋＤａ〜１５００ｋＤａ、１０１ｋＤａ〜５００ｋＤａ、１０１ｋＤａ〜３００ｋＤａである。

【0108】

一態様では、ＭｅｎＡ糖は、存在する場合は、５０〜５００ｋＤａ、５０〜１００ｋＤａ、１００〜５００ｋＤａ、５５〜９０ＫＤａ、６０〜７０ｋＤａ、または７０〜８０ｋＤａ、または６０〜８０ｋＤａの分子量を有する。

【0109】

一態様では、ＭｅｎＣ糖は、存在する場合は、１００〜２００ｋＤａ、５０〜１００ｋＤａ、１００〜１５０ｋＤａ、１０１〜１３０ｋＤａ、１５０〜２１０ｋＤａ、または１８０〜２１０ｋＤａの分子量を有する。

【0110】

一態様では、ＭｅｎＹ糖は、存在する場合は、６０〜１９０ｋＤａ、７０〜１８０ｋＤａ、８０〜１７０ｋＤａ、９０〜１６０ｋＤａ、１００〜１５０ｋＤａ、または１１０〜１４０ｋＤａ、５０〜１００ｋＤａ、１００〜１４０ｋＤａ、１４０〜１７０ｋＤａ、または１５０〜１６０ｋＤａの分子量を有する。

【0111】

一態様では、ＭｅｎＷ糖は、存在する場合は、６０〜１９０ｋＤａ、７０〜１８０ｋＤａ、８０〜１７０ｋＤａ、９０〜１６０ｋＤａ、１００〜１５０ｋＤａ、１１０〜１４０ｋＤａ、５０〜１００ｋＤａ、または１２０〜１４０ｋＤａの分子量を有する。

【0112】

本明細書中における糖の分子量または平均分子量とは、コンジュゲーションの前に測定した糖の重量平均分子量（Ｍｗ）をいい、ＭＡＬＬＳによって測定する。
ＭＡＬＬＳ技法は当分野で周知であり、典型的には実施例２に記載のように実施する。髄膜炎菌糖のＭＡＬＬＳ分析では、２つのカラム（ＴＳＫＧ６０００および５０００ＰＷｘｌ）を組み合わせて使用してよく、糖を水中に溶出させる。糖は、光散乱検出器（たとえば、１０ｍＷのアルゴンレーザー、４８８ｎｍを備えたＷｙａｔｔ Ｄａｗｎ ＤＳＰ）および干渉屈折計（たとえば、Ｐ１００セルおよび４９８ｎｍの赤色フィルターを備えたＷｙａｔｔ Ｏｔｉｌａｂ ＤＳＰ）を使用して検出する。

【0113】

一態様では、髄膜炎菌糖は、ネイティブ多糖または通常の抽出プロセス中に大きさが縮小されたネイティブ多糖である。
一態様では、髄膜炎菌糖は、機械的切断によって、たとえば、微小流動化または超音波処理によって分粒する。微小流動化および超音波処理は、より大きなネイティブ多糖のサイズを十分に減らして濾過可能なコンジュゲートを提供する利点を有する（たとえば０．２ミクロンのフィルターを通す）。分粒は、×２０、×１０、×８、×６、×５、×４、×３、×２、または×１．５未満の係数によるものである。

【0114】

一態様では、免疫原性組成物は、ネイティブ多糖および×２０未満の係数によって分粒された糖の混合物から作製した髄膜炎菌コンジュゲートを含む。たとえば、ＭｅｎＣおよび／またはＭｅｎＡからの糖はネイティブである。たとえば、ＭｅｎＹおよび／またはＭｅｎＷからの糖は、×２０、×１０、×８、×６、×５、×４、×３、または×２未満の係数によって分粒する。たとえば、免疫原性組成物は、ＭｅｎＹならびに／またはＭｅｎＷならびに／またはＭｅｎＣならびに／または×１０未満の係数によって分粒したおよび／もしくは微小流動化したＭｅｎＡから作製したコンジュゲートを含有する。たとえば、免疫原性組成物は、ネイティブＭｅｎＡおよび／またはＭｅｎＣおよび／またはＭｅｎＷおよび／またはＭｅｎＹから作製したコンジュゲートを含有する。たとえば、免疫原性組成物は、ネイティブＭｅｎＣから作製したコンジュゲートを含む。たとえば、免疫原性組成物は、ネイティブＭｅｎＣならびに×１０未満の係数によって分粒したおよび／または微小流動化したＭｅｎＡから作製したコンジュゲートを含む。たとえば、免疫原性組成物は、ネイティブＭｅｎＣならびに×１０未満の係数によって分粒したおよび／または微小流動化したＭｅｎＹから作製したコンジュゲートを含む。

【0115】

一態様では、糖の多分散性は１〜１．５、１〜１．３、１〜１．２、１〜１．１、または１〜１．０５であり、担体タンパク質とのコンジュゲーションの後、コンジュゲートの多分散性は１．０〜２．５、１．０〜２．０、１．０〜１．５、１．０〜１．２、１．５〜２．５、１．７〜２．２、または１．５〜２．０である。すべての多分散性の測定はＭＡＬＬＳによるものである。

【0116】

糖は、任意選択で、細菌から単離した多糖の大きさから１．５、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、または２０倍まで分粒する。
一態様では、それぞれの髄膜炎菌糖は、ネイティブ多糖であるか×１０未満の係数によって分粒するかのどちらかである。さらなる態様では、それぞれの髄膜炎菌莢膜糖はネイティブ多糖である。さらなる態様では、少なくとも１つ、２つ、３つ、または４つの髄膜炎菌莢膜糖は、微小流動化によって分粒する。さらなる態様では、それぞれの髄膜炎菌莢膜糖は、×１０未満の係数によって分粒する。さらなる態様では、髄膜炎菌コンジュゲートは、ネイティブ多糖および×１０未満の係数によって分粒した糖の混合物から作製する。さらなる態様では、血清型Ｙからの莢膜糖は、×１０未満の係数によって分粒する。さらなる態様では、血清型ＡおよびＣからの莢膜糖はネイティブ多糖であり、血清型Ｗ１３５およびＹからの糖は×１０未満の係数によって分粒する。さらなる態様では、それぞれの髄膜炎菌莢膜糖の平均サイズは、５０ｋＤａ〜３００ＫＤａまたは５０ｋＤａ〜２００ｋＤａである。さらなる態様では、免疫原性組成物は、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａを超える平均サイズ、または５０〜１００ｋＤａもしくは５５〜９０ＫＤａもしくは６０〜８０ｋＤａの平均サイズを有するＭｅｎＡ莢膜糖を含む。さらなる態様では、免疫原性組成物は、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａを超える、または１００〜２００ｋＤａ、１００〜１５０ｋＤａ、８０〜１２０ｋＤａ、９０〜１１０ｋＤａ、１５０〜２００ｋＤａ、１２０〜２４０ｋＤａ、１４０〜２２０ｋＤａ、１６０〜２００ｋＤａ、もしくは１９０〜２００ｋＤａの平均サイズを有するＭｅｎＣ莢膜糖を含む。さらなる態様では、免疫原性組成物は、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａを超える、または６０〜１９０ｋＤａもしくは７０〜１８０ｋＤａもしくは８０〜１７０ｋＤａもしくは９０〜１６０ｋＤａもしくは１００〜１５０ｋＤａ、１１０〜１４５ｋＤａもしくは１２０〜１４０ｋＤａの平均サイズを有するＭｅｎＹ莢膜糖を含む。さらなる態様では、免疫原性組成物は、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａを超える、または６０〜１９０ｋＤａもしくは７０〜１８０ｋＤａもしくは８０〜１７０ｋＤａもしくは９０〜１６０ｋＤａもしくは１００〜１５０ｋＤａ、１４０〜１８０ｋＤａ、１５０〜１７０ｋＤａもしくは１１０〜１４０ｋＤａの平均サイズを有するＭｅｎＷ莢膜糖を含む。

【0117】

開示の一態様では、少なくとも２つ、３つ、４つのそれぞれ、または髄膜炎菌糖コンジュゲートのそれぞれの糖用量は、任意選択で同じまたはほぼ同じである。
一態様では、本開示の免疫原性組成物は、ｐＨ７．０〜８．０、ｐＨ７．２〜７．６、または概ねもしくは正確にｐＨ７．４に調節または緩衝されている。

【0118】

本開示の免疫原性組成物またはワクチンは、任意選択で、安定化剤、たとえば、スクロースまたはトレハロースなどのポリオールの存在下で凍結乾燥されている。
上述の髄膜炎菌糖の組合せでは、任意のアルミニウム塩アジュバントまたはどのアジュバントも全く使わないことが有利であり得る。

【0119】

活性薬剤は、本開示の医薬組成物またはワクチン中において様々な濃度で存在することができる。典型的には、物質の最少濃度は、その意図する使用を達成するために必要な量である一方で、最大濃度は、初期混合物内で溶液に保たれるまたは均質に懸濁されて保たれる最大量である。たとえば、治療剤の最少量は、任意選択で、単一の治療上有効な投薬量を提供するものである。生物活性物質では、最少濃度は、再溶解の際に生物活性に必要な量であり、最大濃度は、均質な懸濁液を維持することができない時点である。

【0120】

別の態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ｘ莢膜多糖と担体分子とのコンジュゲートを含む。Ｘ型莢膜多糖の構造は、Ｏ−アセチル基を含まないａｌ−４リン酸ジエステル結合によって一緒に保たれたＮ−アセチルグルコサミン−４−リン酸残基からなる。担体分子は、ジフテリアもしくは破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７、またはタンパク質Ｄであり得る。好ましい態様では、実施例中に例示するように、組成物は髄膜炎菌血清型Ｘ莢膜多糖のコンジュゲートを含まない。

【0121】

例示的な組成物のさらなる説明の以下に記載する。
組成物およびワクチン
一部の態様では、組成物は、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いて再溶解する、凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を含む。凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物および液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は好ましくは適合性があり、再溶解後に室温で少なくとも２４時間の間安定である。

【0122】

好ましい態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型ＢおよびＢ以外の髄膜炎菌血清型に対する殺菌性抗体を誘発する。たとえば、一部の態様では、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、少なくとも髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、およびＸに対する殺菌性抗体を誘発する。

【0123】

さらに、本発明者らは、組成物が、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹに対する認可ワクチンで観察された相乗平均力価と一致した、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹに対する相乗平均力価を誘発したことを見出した。

【0124】

一部の態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹに対する認可ワクチンで観察された相乗平均力価よりも高い、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹに対する相乗平均力価を誘発する。

【0125】

さらに、本発明者らは、組成物が、髄膜炎菌血清型Ｂに対する認可ワクチンで観察された相乗平均力価と一致した、髄膜炎菌血清型Ｂに対する相乗平均力価を誘発したことを見出した。

【0126】

一部の態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ｂに対する認可ワクチンで観察された相乗平均力価よりも高い、髄膜炎菌血清型Ｂに対する相乗平均力価を誘発する。
一部の態様では、ｆＨＢＰを含めた組成物は、少なくとも１２カ月齢のヒトにおいて有効な免疫応答を誘発する。また、組成物は、髄膜炎菌血清型Ｘ株に対する免疫応答も誘発する。一部の態様では、組成物は、少なくとも１つのＨ因子結合ポリペプチド（ｆＨＢＰ）および少なくとも１つの髄膜炎菌莢膜糖コンジュゲートを含む。好ましい態様では、組成物は安定であり、多構成成分組成物中のｆＨＢＰ変異体と相同的であるｆＨＢＰ変異体を発現する株に対する免疫応答および多構成成分組成物中のｆＨＢＰ変異体と非相同的なｆＨＢＰ変異体を発現する株に対する免疫応答を誘発した。

【0127】

一部の態様では、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を容易に再溶解することができ、合わせた組成物は適合性があり、安定である。
一側面では、本開示は、髄膜炎菌に対する組成物に関する。組成物は、（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加ポリペプチドと、（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加ポリペプチドと、（ｃ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によってアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）とコンジュゲートしている莢膜糖（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）と、（ｄ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によってＡＤＨリンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）とコンジュゲートしている莢膜糖（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）と、（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）と直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）と、（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）と直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）とを含む。

【0128】

別の側面では、本開示は、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物とＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物との組合せを含む組成物に関する。ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物とは、髄膜炎菌血清型Ｂの複数の株に対して有効な広く保護的な免疫応答を誘導する、単一の髄膜炎菌ポリペプチド構成成分を含む組成物をいう。具体的には、一態様では、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質（配列番号１）およびＭｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質（配列番号２）。一態様では、組成物は融合タンパク質を含まない。一態様では、組成物はキメラタンパク質を含まない。一態様では、組成物はハイブリッドタンパク質を含まない。一態様では、組成物はペプチド断片をさらに含まない。別の態様では、組成物は、ｆＨＢＰではないナイセリアポリペプチドをさらに含まない。たとえば、一態様では、組成物はＰｏｒＡタンパク質を含まない。別の態様では、組成物はＮａｄＡタンパク質を含まない。別の態様では、組成物はナイセリアヘパリン結合抗原（ＮＨＢＡ）をさらに含まない。別の態様では、組成物はナイセリア外膜小胞（ＯＭＶ）をさらに含まない。好ましい態様では、組成物は、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチド以外の抗原をさらに含まない。好ましい態様では、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物はポリソルベート−８０をさらに含む。一態様では、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物はヒスチジン緩衝液をさらに含む。一態様では、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は塩化ナトリウムさらに含む。一態様では、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物はリン酸アルミニウムをさらに含む。一態様では、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、ポリソルベート−８０、ヒスチジン緩衝液、塩化ナトリウム、およびリン酸アルミニウムをさらに含む。好ましくは、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は液体配合物であり、ポリペプチドは、１０ｍＭのヒスチジン緩衝液、ｐＨ６．０、０．５ｍｇ／ｍＬのリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ_４）を含む１５０ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）中に１２０ｍｃｇ／ｍＬ／サブファミリーとして配合し、０．５ｍＬの用量中に０．０１８ｍｇのポリソルベート−８０をさらに含む。

【0129】

ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物とは、それぞれ独立して、それぞれ約３、約３、約１．５、および約１．３の比（多糖に対するＴＴ）でＴＴとコンジュゲートしている、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹの精製莢膜多糖を含む組成物をいう。具体的には、組成物は、（ｃ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によってアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）とコンジュゲートしている莢膜糖（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）と、（ｄ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によってＡＤＨリンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）とコンジュゲートしている莢膜糖（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）と、（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）と直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｗ_１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）と、（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）と直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）とを含む。好ましくは、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は凍結乾燥粉末として提示する。

【0130】

ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴ、ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴ、ＭｅｎＷ−ＴＴ、およびＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートは以下のステップによって調製する：多糖原薬中間体の製造、ＴＴ原薬中間体の製造、多糖の微小流動化、多糖の誘導体化（ＭｅｎＡＡＨ−ＴＴおよびＭｅｎＣＡＨ−ＴＴのプロセスのみ）、ＴＴの追加の精製、および個々の多糖とＴＴとのコンジュゲーション。

【0131】

ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートに関しては、ＭｅｎＡ多糖を最初に微小流動化して分子の大きさおよび粘度を減らし、その後、１−シアノ−４−ジメチルアミノ−ピリジニウムテトラフルオロボレート（ＣＤＡＰ）を用いたシアニル化を介して活性化する。活性化されたＭｅｎＡをアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）で誘導体化して、ＭｅｎＡ_ＡＨを形成させる。ＭｅｎＡ_ＡＨおよび破傷風トキソイド（ＴＴ）をカルボジイミド媒介縮合（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＡＣ）カップリング技術）によってカップリングさせて、ＭｅｎＡ_ＡＨ−破傷風トキソイドコンジュゲート（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴ）を形成する。

【0132】

ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートに関しては、ＭｅｎＣ多糖を最初に微小流動化して分子の大きさおよび粘度を減らし、その後、ＣＤＡＰを用いたシアニル化を介して活性化する。活性化されたＭｅｎＣをアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）で誘導体化して、ＭｅｎＣ_ＡＨを形成させる。ＭｅｎＣ_ＡＨおよびＴＴをカルボジイミド媒介縮合ＥＤＡＣカップリング技術）によってカップリングさせて、ＭｅｎＣ_ＡＨ−破傷風トキソイド（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴ）を形成する。

【0133】

ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートに関しては、ＭｅｎＷ多糖を最初に微小流動化して分子の大きさおよび粘度を減らし、その後、ＣＤＡＰを用いたシアニル化を介して活性化する。活性化されたＭｅｎＷをＴＴと直接カップリングさせて、ＭｅｎＷ−破傷風トキソイド（ＭｅｎＷ−ＴＴ）を形成する。

【0134】

ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートに関しては、ＭｅｎＹ多糖を最初に微小流動化して分子の大きさおよび粘度を減らし、その後、ＣＤＡＰを用いたシアニル化を介して活性化する。活性化されたＭｅｎＹをＴＴと直接カップリングさせて、ＭｅｎＹ−破傷風トキソイド（ＭｅｎＹ−ＴＴ）を形成する。

【0135】

別の側面では、最大で２つの髄膜炎菌血清型Ｂ株に由来するポリペプチド抗原が、髄膜炎菌血清型Ｂの複数の株に対して有効な広く保護的な免疫応答を誘導する。したがって、一態様では、組成物は、髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＢＰサブファミリーＡ Ｍ９８２５０７７１株および／または髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＢＰサブファミリーＢ ＣＤＣ１５７３株に由来しないポリペプチドをさらに含まない。

【0136】

一態様では、組成物は、配列番号１と１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドをさらに含まない。別の態様では、組成物は、配列番号２と１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドをさらに含まない。たとえば、組成物は、配列番号１および／または配列番号２の完全長と１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドをさらに含まない。

【0137】

一態様では、組成物は、ポリソルベート−８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウムをさらに含む。一態様では、組成物は、約６０μｇの、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加ポリペプチド、約６０μｇの、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加ポリペプチド、それぞれのポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート−８０、リン酸アルミニウムとして０．５ｍｇのアルミニウム／ｍＬ、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含み、組成物は、好ましくは、約０．５ｍＬの総体積を有する。

【0138】

別の側面では、組成物は、約１２０μｇ／ｍＬの配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加ポリペプチド、約１２０μｇ／ｍＬの、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加ポリペプチド、それぞれのポリペプチドに対して２．８のモル比のポリソルベート−８０、リン酸アルミニウムとして０．５ｍｇのアルミニウム／ｍＬ、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。

【0139】

さらなる側面では、組成物は、ａ）６０μｇの、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加ポリペプチドと、ｂ）６０μｇの、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加ポリペプチドと、ｃ）１８μｇのポリソルベート−８０と、ｄ）２５０μｇのアルミニウムと、ｅ）７８０μｇのヒスチジンと、ｆ）４３８０μｇの塩化ナトリウムとを含む。

【0140】

例示的な態様では、組成物は、約６０μｇの、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる第１の脂質付加ポリペプチドと、約６０μｇの、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる第２の脂質付加ポリペプチドと、２．８のモル比のポリソルベート−８０対第１の脂質付加ポリペプチドおよび対第２の脂質付加ポリペプチドと、０．５ｍｇ／ｍＬのリン酸アルミニウムと、１０ｍＭのヒスチジンと、１５０ｍＭの塩化ナトリウムとを含み、組成物は約０．５ｍＬの総体積を有する。例示的な態様では、組成物は無菌的な等張緩衝液体懸濁液である。例示的な態様では、組成物はｐＨ６．０を有する。例示的な態様では、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドはアルミニウムに吸着している。

【0141】

一態様では、組成物は、平均ＴＴ／多糖比３を有するＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートと、平均ＴＴ／多糖比３を有するＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートと、平均ＴＴ／多糖比１．５を有するＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートと、平均ＴＴ／多糖比１．３を有するＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートとを含む。好ましい態様では、組成物は、５ｍｃｇのＭｅｎＡ多糖および約１５ｍｃｇのＴＴを有するＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートと、５ｍｃｇのＭｅｎＣ多糖および約１５ｍｃｇのＴＴを有するＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートと、５ｍｃｇのＭｅｎＷ多糖および約７．５ｍｃｇのＴＴを有するＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートと、５ｍｃｇのＭｅｎＹ多糖および約６．５ｍｃｇのＴＴを有するＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートとを含む。組成物は、トリス−ＨＣｌ、スクロース、および塩化ナトリウムをさらに含み得る。

【0142】

別の態様では、組成物は、ＭｅｎＡ多糖、ＭｅｎＣ多糖、ＭｅｎＷ多糖、およびＭｅｎＹ多糖、ならびにＴＴ担体タンパク質を含む、ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート、ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート、ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート、およびＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートを含む。組成物は、スクロースおよびＴｒｏｍｅｔａｎｏｌをさらに含み得る。たとえば、一態様では、組成物は、１０μｇ／ｍＬのＭｅｎＡ多糖、１０μｇ／ｍＬのＭｅｎＣ多糖、１０μｇ／ｍＬのＭｅｎＷ多糖、および１０μｇ／ｍＬのＭｅｎＹ多糖、８８μｇ／ｍＬのＴＴ担体タンパク質、１６４ｍＭのスクロース、および１．６ｍＭのＴｒｏｍｅｔａｎｏｌを含む。

【0143】

一態様では、組成物は約０．５ｍＬの総体積を有する。一態様では、組成物の１回目の用量は約０．５ｍＬの総体積を有する。「１回目の用量」とは、０日目に投与する組成物の用量をいう。「２回目の用量」または「３回目の用量」とは、１回目の用量に続いて投与する組成物の用量をいい、１回目の用量と同じ量であっても同じ量でなくてもよい。

【0144】

一側面では、本開示は、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いて再溶解した、凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物から生じる液体免疫原性組成物に関する。再溶解とは、液体希釈剤を加えることによって、乾いた凍結乾燥組成物を液体形態に回復させることをいう。好ましい一態様では、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物と併用（ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔｌｙ）投与しない、共投与（ｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）しない、および同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）投与せず、凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物ではない液体組成物を用いて再溶解する。たとえば、好ましい一態様では、凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は塩化ナトリウムおよび水からなる水性希釈剤を用いて再溶解せず、続いて、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物と併用投与しない、共投与しない、および同時投与しない。

【0145】

そうではなく、好ましい態様では、凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は、ヒトへの１回、すなわち単一の投与において、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物と共に投与する。生じる単回投与（たとえばＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物）は、第１の容器からのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を第２の容器からの凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物と混合することから生じ得る。あるいは、ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物の単回投与は、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物および凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を含む１つ（単一）の容器から生じ得る。ワクチンまたは免疫原性組成物の送達装置は当分野で知られている。一態様では、ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物を、イブプロフェン、パラセタモール、およびアモキシシリンのうちの任意の１つと併用投与する。

【0146】

組成物は、ヒトへの１回目の用量の投与の後に免疫原性である。一態様では、１回目の用量は約０．５ｍＬの総体積である。
組成物は、同一条件下でヒト補体を使用した血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）において測定した場合に、１回目の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌性力価よりも、１回目の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも１倍よりも高い、好ましくは少なくとも２倍高い、血清免疫グロブリンの殺菌性力価を誘導する。

【0147】

殺菌性力価または殺菌性免疫応答は髄膜炎菌血清型Ｂに対するものである。好ましい態様では、殺菌性力価または殺菌性免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＢＰサブファミリーＡ株に対するものおよび髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＢＰサブファミリーＢ株に対するものである。最も好ましくは、殺菌性力価または殺菌性免疫応答は、少なくとも髄膜炎菌血清型Ｂ、ｆＨＢＰサブファミリーＢ、Ｂ０１株に対するものである。

【0148】

一態様では、同一条件下でヒト補体を使用した血清殺菌アッセイにおいて測定した場合に、組成物は、組成物の用量を受けた後のヒトにおいて、前記用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌性力価よりも少なくとも１倍よりも高い、たとえば、少なくとも１．０１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、または１６倍高いなどの、血清免疫グロブリンの殺菌性力価を誘導する。

【0149】

一態様では、組成物は免疫原性組成物である。一態様では、組成物はヒト用の免疫原性組成物である。別の態様では、組成物はワクチンである。「ワクチン」とは、その抗原に特異的な免疫応答を誘導する少なくとも１つのエピトープを含有する、抗原を含む組成物をいう。ワクチンは、皮下、経口、口鼻腔、または鼻腔内の投与経路によって、対象内に直接投与し得る。好ましくは、ワクチンを筋肉内投与する。一態様では、組成物はヒトワクチンである。一態様では、組成物は髄膜炎菌に対する免疫原性組成物である。

【0150】

一態様では、組成物は液体組成物である。好ましい態様では、組成物は液体懸濁液組成物である。別の好ましい態様では、組成物は凍結乾燥されていない。
安定性
用語「安定」および「安定性」とは、一定期間にわたって抗原が免疫原性のまま保たれる能力をいう。安定性は、経時的な効力で測定し得る。用語「安定」および「安定性」とは、免疫原性組成物の物理的、化学的、およびコンホメーション上の安定性をさらにいう。タンパク質組成物の不安定性は、より高次のポリマーを形成するタンパク質分子の化学分解または凝集、ヘテロ二量体の単量体への解離、脱グリコシル化、グリコシル化の修飾、または本開示中に含まれるタンパク質組成物の少なくとも１つの生物活性を低下させる任意の他の構造的修飾によって引き起こされ得る。安定性は、試料の光散乱の測定、光（吸光度または光学密度）の見かけの減弱、大きさ（たとえばサイズ排除クロマトグラフィーによる）、ｉｎ ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ ｖｉｖｏ生物活性、および／または示差走査熱量（ＤＳＣ）による特性を含めた、当分野で周知の方法によって評価し得る。安定性を評価するための他の方法は当分野で知られており、これも本開示に従って使用することができる。

【0151】

一部の態様では、本開示の安定配合物中の抗原は、参照標準と比較して、少なくとも１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、９カ月間、１２カ月間、１８カ月間、２４カ月間、３０カ月間、３６カ月間、４２カ月間、４８カ月間、５４カ月間、または６０カ月間の間、少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の効力を維持し得る。一部の態様では、本開示の安定配合物中の抗原は、参照標準と比較して、少なくとも１年間、２年間、３年間、４年間、または５年間の間、少なくとも５０％の効力を維持し得る。また、用語「安定」および「安定性」とは、一定期間にわたって抗原がエピトープまたは免疫反応性を維持する能力もいう。たとえば、本開示の安定配合物中の抗原は、参照標準と比較して、少なくとも１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、９カ月間、１２カ月間、１８カ月間、２４カ月間、３０カ月間、３６カ月間、４２カ月間、４８カ月間、５４カ月間、または６０カ月間の間、少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のそのエピトープまたは免疫反応性を維持し得る。一部の態様では、安定性を環境条件に関して測定する。環境条件の非限定的な例は、光、温度、凍結融解サイクル、攪拌、およびｐＨを含む。当業者は、本明細書中に開示する方法または当分野で知られている他の方法を使用して、抗原エピトープまたは免疫反応性の存在を決定できるであろう。一部の態様では、抗原の安定性は、その配合日から測定する。一部の態様では、抗原の安定性は、その貯蔵条件を変化した日から測定する。貯蔵条件の変化の非限定的な例は、冷凍から冷蔵への変化、冷凍から室温への変化、冷蔵から室温への変化、冷蔵から冷凍への変化、室温から冷凍への変化、室温から冷蔵への変化、明条件から暗条件への変化、または攪拌の導入を含む。

【0152】

一態様では、用語「安定」および「安定性」は、アルミニウムに結合される抗原の能力を含む。たとえば、本開示の安定配合物は、参照標準と比較して、少なくとも１時間、６時間、１２時間、１８時間、２４時間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、９カ月間、１２カ月間、１８カ月間、２４カ月間、３０カ月間、３６カ月間、４２カ月間、４８カ月間、５４カ月間、または６０カ月間の間、配合物中でアルミニウム（たとえばリン酸アルミニウム）と結合したタンパク質の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％を含む。たとえば実施例１３を参照されたい。好ましい態様では、全サブファミリーＡ ｒＬＰ２０８６ポリペプチド（たとえば、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド）の少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％が組成物中でアルミニウムと結合している。好ましい態様では、全サブファミリーＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチド（たとえば、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド）の少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％が組成物中でアルミニウムと結合している。

【0153】

アルミニウム結合の決定。アルミニウムおよび少なくとも１つのタンパク質抗原を含む組成物を、アルミニウムがペレット化されるように遠心分離した。アルミニウムを吸収したタンパク質の遠心分離は当分野で知られている。たとえばＥｇａｎら、Ｖａｃｃｉｎｅ、２７巻（２４号）：３１７５〜３１８０頁（２００９年）を参照されたい。アルミニウム−結合タンパク質もペレット化された一方で、非アルミニウム結合タンパク質は上清中に残った。上清およびペレット中の全タンパク質をローリーアッセイによって決定した。結合タンパク質の百分率は、上清中の全タンパク質を組成物に加えた全タンパク質によって除算し、１００％を乗算することによって計算した。同様に、未結合タンパク質の百分率は、上清中の全タンパク質を組成物に加えた全タンパク質によって除算し、１００％を乗算することによって計算した。サブファミリーＡおよびサブファミリーＢ抗原をどちらも含む組成物では、上清中の個々のサブファミリーＡおよびＢタンパク質の濃度をイオン交換クロマトグラフィーによって決定した。サブファミリーＡおよびＢタンパク質の分離および溶出は、強力な陰イオンカラムおよび高い塩濃度の溶出液を使用して実施した。サブファミリーＡおよびＢタンパク質はどちらも、励起＝２８０ｒｕｎおよび発光＝３１０ｒｕｎに設定した蛍光検出器を使用して検出および定量した。サブファミリーＡおよびサブファミリーＢタンパク質は別個の保持時間に溶出され、ｒＬＰ２０８６タンパク質参照物質に対して作成した検量線を使用して定量した。未結合タンパク質の百分率は、上清中の全タンパク質を組成物に加えた全タンパク質によって除算し、１００％を乗算することによって計算した。結合タンパク質の百分率は、未結合タンパク質の百分率を１００％から減算することによって計算した。
ポリソルベート−８０
ポリソルベート８０（ＰＳ−８０）は非イオン性界面活性剤である。ｉｎ ｖｉｔｒｏのモノクローナル抗体に基づく効力アッセイを使用した加速安定性研究により、最終配合物中のＰＳ−８０対ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質のモル比がより高い場合に、サブファミリーＢタンパク質が不安定性であることが実証された。様々な比のＰＳ−８０を用いたさらなる実験により、効力を保持するための最適なＰＳ−８０対ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質のモル比が約２．８±１．４であることが実証された。

【0154】

組成物中のＰＳ−８０の濃度は、ＰＳ−８０対ポリペプチドのモル比に依存する。一態様では、組成物は、２．８±１．４のモル比のＰＳ−８０対第１のポリペプチドおよび対第２のポリペプチドを含む。一態様では、組成物は、２．８±１．１のモル比のＰＳ−８０対第１のポリペプチドおよび対第２のポリペプチドを含む。一態様では、組成物は、少なくとも１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、または３．３のモル比のＰＳ−８０対ポリペプチドを含む。一態様では、組成物は、最大で４．０、３．９、３．８、３．７、３．６、３．５、３．４、３．３、３．２、３．１、３．０、または２．９のモル比のＰＳ−８０対ポリペプチドを含む。任意の最小値を本明細書中に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義し得る。好ましくは、組成物は、２．８のモル比のＰＳ−８０対ポリペプチドを含む。

【0155】

ＰＳ−８０対ポリペプチドのモル比は、どちらの値もモルで表す、ＰＳ−８０の測定濃度および全ポリペプチドの測定濃度からの計算によって決定する。たとえば、ＰＳ−８０対タンパク質のモル比は、どちらの値もモルで表す、最終原薬中のＰＳ−８０の測定濃度（たとえば逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）による）対全タンパク質の測定濃度（たとえばイオン交換高圧液体クロマトグラフィー（ＩＥＸ−ＨＰＬＣ）による）の計算によって決定する。

【0156】

ＲＰ−ＨＰＬＣを使用して、ワクチン配合物中のポリソルベート８０の濃度を定量する。洗剤の濃度は脂肪酸部分の鹸化によって決定する。ポリソルベート８０は、４０℃でのアルカリ性加水分解によって遊離オレイン酸へと変換する。Ｃ１８カラムを使用して試料をＲＰ−ＨＰＬＣによって分離し、２００ｎｍの波長のＵＶ検出器を使用して定量する。

【0157】

第１および第２のポリペプチドは陰イオン交換ＨＰＬＣによって分解する。ｒＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡおよびＢタンパク質は別個の保持時間に溶出され、それぞれのｒＬＰ２０８６タンパク質参照物質に対して作成した検量線を使用して定量する。

【0158】

用語「モル比」ならびにｆＨＢＰおよびＰＳ−８０を含む免疫原性組成物の説明は、それぞれがその全体で参考として組み込まれている、ＷＯ２０１２０２５８７３号および米国特許公開ＵＳ２０１３／０１７１１９４号にさらに開示されている。

【0159】

本明細書中で使用する用語「モル比」とは、組成物中の２つの異なる要素のモル数の比をいう。一部の態様では、モル比は、洗剤のモル対ポリペプチドのモルの比である。一部の態様では、モル比は、ＰＳ−８０のモル対タンパク質のモルの比である。一態様では、タンパク質およびポリソルベート８０の濃度に基づいて、モル比を以下の方程式を使用して計算し得る。

【0160】

【数1】

【0161】

一態様では、組成物は、効力を保持するために１．４〜４．２のＰＳ−８０対ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質のモル比を含む。一態様では、組成物は、少なくとも１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、または２．８を含む。一態様では、組成物は、最大で４．２、４．１、４．０、３．９、３．８、３．７、３．７、３．６、３．５、３．４、３．３、３．２、３．１、３．０、２．９、または２．８を含む。任意の最小値を本明細書中に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義し得る。

【0162】

一態様では、組成物は、約０．００１５、０．００１７、０．００１９、０．００２１、０．００２３、０．００２５、０．００２７、０．００２９、０．００３１、０．００３３、０．００３５、０．００３７、０．００３９、０．００４１、０．００４３、０．００４５、０．００４７、０．００４９、０．００５１ｍｇ／ｍＬのＰＳ−８０を含む。好ましくは、組成物は、約０．００３５ｍｇ／ｍＬのＰＳ−８０を含む。

【0163】

別の態様では、組成物は、少なくとも１０μｇ、１１μｇ、１２μｇ、１３μｇ、１４μｇ、１５μｇ、１６μｇ、１７μｇ、１８μｇ、１９μｇ、２０μｇ、２１μｇ、２２μｇ、２３μｇ、２４μｇ、または２５μｇのＰＳ−８０を含む。別の態様では、組成物は、最大で３０μｇ、２９μｇ、２８μｇ、２７μｇ、２６μｇ、２５μｇ、２４μｇ、２３μｇ、２２μｇ、２１μｇ、２０μｇ、１９μｇ、または１８μｇのＰＳ−８０を含む。任意の最小値を本明細書中に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義し得る。好ましい態様では、組成物は、少なくとも１０μｇおよび最大で２０μｇのＰＳ−８０を含む。最も好ましい態様では、組成物は、約１８μｇのＰＳ−８０を含む。

【0164】

別の態様では、組成物は、０．０００５％〜１％の範囲のＰＳ−８０濃度を含む。たとえば、組成物中のＰＳ−８０濃度は、少なくとも０．０００５％、０．００５％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１０％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、または１．１％のＰＳ−８０であり得る。一態様では、組成物中のＰＳ−８０濃度は、最大で２．０％、１．９％、１．８％、１．７％、１．６％、１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、１．０％、０．９％、０．８％、または０．７％のＰＳ−８０であり得る。好ましい態様では、組成物は約０．０７％のＰＳ−８０を含む。任意の最小値を本明細書中に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義し得る。

【0165】

一部の態様では、第１の組成物および第２の組成物の組合せを含む組成物は、第１の組成物におけるＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドに対するポリソルベート−８０のモル比と比較して、異なるＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドに対するポリソルベート−８０のモル比を有し得る。一部の態様では、組み合わせた組成物におけるＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドの溶解度および安定性を維持するために、組み合わせた組成物に追加の界面活性剤は必要ない。したがって、一態様では、キットは０．０２ｍｇを超えるポリソルベート−８０を含まない。
アルミニウム
組成物は、リン酸アルミニウムとしてアルミニウムを含む。ＡｌＰＯ_４は、製造性および安定性の増強をもたらすために安定剤として加える。リン酸アルミニウムを生成するプロセスは、その全体で参考として組み込まれている米国特許公開ＵＳ２００９／００１６９４６号に記載されている。一態様では、組成物は、アルミニウム以外の多価陽イオンをさらに含まない。一態様では、組成物は、Ａｌ（ＯＨ）_３またはＡｌ（ＳＯ_４）_３をさらに含まない。

【0166】

一態様では、組成物は、少なくとも５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ，１００μｇ，１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、１６０μｇ、１７０μｇ、１８０μｇ、１９０μｇ、２００μｇ、２１０μｇ、２２０μｇ、２３０μｇ、２４０μｇ、または２５０μｇのアルミニウムを含む。一態様では、組成物は、最大で５００μｇ、４９０μｇ、４８０μｇ、４７０μｇ、４６０μｇ、４５０μｇ、４４０μｇ、４３０μｇ、４２０μｇ、４１０μｇ、４００μｇ、３９０μｇ、３８０μｇ、３７０μｇ、３６０μｇ、３５０μｇ、３４０μｇ、３３０μｇ、３２０μｇ、３１０μｇ、３００μｇ、２９０μｇ、２８０μｇ、２７０μｇ、２６０μｇ、または２５０μｇのアルミニウムを含む。任意の最小値を本明細書中に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義し得る。最も好ましい態様では、組成物は２５０μｇのアルミニウムを含む。

【0167】

一態様では、組成物は、少なくとも０．００５ｍｇ／ｍｌ、０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０２ｍｇ／ｍｌ、０．０３ｍｇ／ｍｌ、０．０４ｍｇ／ｍｌ、０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．０６ｍｇ／ｍｌ、０．０７ｍｇ／ｍｌ、０．０８ｍｇ／ｍｌ、０．０９ｍｇ／ｍｌ、０．１０ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、または０．５ｍｇ／ｍｌのリン酸アルミニウムを含む。一態様では、組成物は、最大で２．０ｍｇ／ｍｌ、１．９ｍｇ／ｍｌ、１．８ｍｇ／ｍｌ、１．７ｍｇ／ｍｌ、１．６ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、１．４ｍｇ／ｍｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ、１．２ｍｇ／ｍｌ、１．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、または０．７ｍｇ／ｍｌのＰＳ−８０を含む。好ましい態様では、組成物は約０．０７ｍｇ／ｍｌのＰＳ−８０を含む。任意の最小値を本明細書中に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義し得る。好ましい態様では、組成物は０．５ｍｇ／ｍｌのリン酸アルミニウム。最も好ましい態様では、組成物は、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ_４）として０．５ｍｇのアルミニウム／ｍｌを含む。この濃度は、サブファミリーＡおよびＢタンパク質とアルミニウムとの結合（少なくとも９０％の結合またはそれ以上）を維持する。

【0168】

一部の態様では、第１の組成物および第２の組成物の組合せは、第１の組成物におけるアルミニウムと結合したＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドの百分率と比較した場合に、アルミニウムと結合したＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドの百分率を変化させる。一部の態様では、第１および第２の組成物の組合せは、アルミニウムに対して全ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドの少なくとも９０％の結合を維持する。したがって、一態様では、組み合わせた組成物におけるアルミニウムに対する全ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドの百分率は、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である。好ましくは、組み合わせた組成物におけるアルミニウムに対する全ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドの百分率は、少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも１００％である。

【0169】

別の態様では、凍結乾燥組成物を再溶解する前における液体組成物中のアルミニウムと結合したポリペプチドの濃度と比較して、免疫原性組成物中のアルミニウムと結合したポリペプチドの濃度は、２４時間後に減少していない。別の態様では、免疫原性組成物中のＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度は、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に減少していない。一態様では、濃度は、再溶解前の液体組成物中のそれぞれの濃度と比較して、２４時間後に最大で１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％減少する。

【0170】

別の態様では、免疫原性組成物中のＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度は、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に減少していない。別の態様では、免疫原性組成物中のＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートの濃度は、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に減少していない。別の態様では、免疫原性組成物中のＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートの濃度は、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に減少していない。一態様では、濃度は、再溶解前の凍結乾燥組成物中のそれぞれの濃度と比較して、２４時間後に最大で１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％減少する。
賦形剤
一態様では、組成物はヒスチジンを含む。一態様では、組成物は、少なくとも６５０μｇ、６６０μｇ、６７０μｇ、６８０μｇ、６９０μｇ、７００μｇ、７１０μｇ、７２０μｇ、７３０μｇ、７４０μｇ、７５０μｇ、７６０μｇ、７７０μｇ、７８０μｇ、７９０μｇ、８００μｇ、８１０μｇ、８２０μｇ、８３０μｇ、８４０μｇ、または８５０μｇのヒスチジンを含む。一態様では、組成物は、最大で１５６０μｇ、１５００μｇ、１４００μｇ、１３００μｇ、１２００μｇ、１１００μｇ、１０００μｇ、９５０μｇ、９００μｇ、８９０μｇ、８８０μｇ、８７０μｇ、８６０μｇ、８５０μｇ、８４０μｇ、８３０μｇ、８２０μｇ、８１０μｇ、８００μｇ、７９０μｇ、または７８０μｇのヒスチジンを含む。任意の最小値を本明細書中に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義し得る。好ましくは、組成物は７８０μｇのヒスチジンを含む。

【0171】

一態様では、組成物は、トリス、リン酸、またはコハク酸緩衝液を含む。好ましい態様では、組成物はトリス緩衝液を含まない。好ましいものでは、組成物はリン酸緩衝液を含まない。好ましい一態様では、組成物はコハク酸緩衝液を含まない。好ましい態様では、組成物はヒスチジン緩衝液を含む。

【0172】

一態様では、組成物は塩化ナトリウムを含む。ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物中の塩化ナトリウム濃度は１６０．５〜１６１．１ｍＭで変動し得る。
一態様では、組成物のｐＨは５．５〜７．５である。好ましい態様では、組成物のｐＨは５．８〜７．０であり、最も好ましくはｐＨ５．８〜ｐＨ６．０である。一態様では、組成物のｐＨは最大で６．１である。一態様では、組成物のｐＨは５．８である。
キット
本開示のさらなる側面は、哺乳動物において髄膜炎菌に対する殺菌性抗体を誘発するための組成物の用量を投与するためのキットである。

【0173】

一側面では、キットは、上述の第１のポリペプチドおよび上述の第２のポリペプチドを含む第１の組成物を含む。好ましい態様では、第１のポリペプチドは配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。別の好ましい態様では、第２のポリペプチドは配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。キットは、ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート、ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート、ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート、およびＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートを含む第２の組成物をさらに含む。一態様では、キットは少なくとも２つの容器を含み、第１の容器は第１の組成物を含み、第２の容器は第２の組成物を含む。

【0174】

一態様では、キットは、液体の第１の組成物および凍結乾燥された第２の組成物を含む。好ましくは、キットは、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物および凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を含む。

【0175】

一部の態様では、組成物は、第１の組成物におけるＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドに対するポリソルベート−８０のモル比を変化させる、第１の組成物および第２の組成物の組合せを含む。一部の態様では、組み合わせた組成物におけるＭｎＢ ｒＬＰ２０８６ポリペプチドの溶解度および安定性を維持するために、組み合わせた組成物に追加の界面活性剤は必要ない。したがって、一態様では、キットは０．０２ｍｇを超えるポリソルベート−８０を含まない。

【0176】

開示の一態様では、キットは、以下の市販の免疫原性組成物のうちの任意の１つをさらに含まない：ＭＥＮＡＣＴＲＡ（登録商標）、ＭＥＮＶＥＯ（登録商標）、ＡＤＡＣＥＬ（登録商標）、ＨＡＶＲＩＸ（登録商標）、ＧＡＲＤＡＳＩＬ（登録商標）、ＲＥＰＥＶＡＸ、またはその任意の組合せ。たとえば、好ましくは、キットは、髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖コンジュゲート（ＭＣＶ４）組成物をさらに含まず、担体タンパク質はジフテリアトキソイドである。一態様では、キットは、髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖コンジュゲート（ＭＣＶ４）組成物をさらに含まず、担体タンパク質はＣＲＭ_１９７である。一態様では、キットはＮＩＭＥＮＲＩＸワクチンをさらに含まず、ＮＩＭＥＮＲＩＸは、塩化ナトリウムおよび水からなる希釈剤を含む。
殺菌活性
ＭｎＢの疾患発生率は約１００，０００件に１件であり、有効性の統計的に有意な評価を支持するためには極めて多数の対象（４００，０００人から６百万人以上）が必要となることを意味する。したがって、保護およびワクチン有効性の代用である、ヒト補体を使用した血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）を使用して、臨床治験において免疫原性を評価する。

【0177】

Ｐｆｉｚｅｒは、２０００〜２００６年に、ＩＭＤを引き起こす分離株を含む大規模なＭｎＢ株コレクション（Ｎ＝少なくとも１２６３個）を構築している。ＭｎＢ分離株は、米国疾病対策予防センター（ＣＤＣ）ならびに欧州諸国の保健およびレファレンス研究室（ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）から系統的に収集した。

【0178】

一態様では、組成物をヒトに投与することによって誘導される免疫応答は、４つの髄膜炎菌血清型Ｂ（ＭｎＢ）株に対する、ヒト補体を使用した血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）を使用して決定する。ｈＳＢＡにおいて使用したＭｎＢ株は株プールから選択した。株プールは、系統的に収集した、臨床的に関連のある髄膜炎菌株のコレクションを表す。

【0179】

すべての試験株、特に、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドの両方に非相同的な配列を有するリポタンパク質２０８６変異体を発現する株に対する、高い割合のｈＳＢＡ応答は、組成物が広く保護的なワクチンであり、血清型Ｘなどの追加の血清型を含めた少なくとも血清型ＢからのｒＬＰ２０８６（ＦＨＢＰ）を発現する髄膜炎菌株に対して高い血清保護を与えるために十分であることを示唆している。
サブファミリーＡ株
一態様では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡタンパク質を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０５を発現する髄膜炎菌株に非相同的なリポタンパク質２０８６変異体を発現する、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡ株である。たとえば、一態様では、ｈＳＢＡ株は、株Ｍ９８２５０７７１に非相同的なリポタンパク質２０８６変異体を発現する、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡ株である。

【0180】

一態様では、ｈＳＢＡ株はｆＨＢＰ Ａ１０を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６を発現する髄膜炎菌株である。さらなる態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６株である。別の態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ａ０４を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ａ０５を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ａ１２を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ａ２２を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ａ１２を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ａ０４を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ａ１９を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ａ０７を発現する髄膜炎菌株である。さらなる態様では、ｈＳＢＡ株は、Ａ２２、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、およびＡ０７発現株のうちの任意の１つを含む。一態様では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０６、Ａ１５、およびＡ２９発現株のうちの任意の１つを含む。

【0181】

一態様では、免疫応答は、Ａ０５を発現する髄膜炎菌株に非相同的な髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ａ２２株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ａ５６株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ａ０６株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ａ１５株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ａ２９株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ａ６２株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌株Ｍ９８２５０７７１に非相同的な髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。

【0182】

一態様では、免疫応答は、第１のポリペプチドに対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、殺菌性である。別の態様では、免疫応答は、髄膜炎菌株Ｍ９８２５０７７１によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、殺菌性である。好ましい態様では、免疫応答は、髄膜炎菌株Ｍ９８２５０７７１によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８４％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、殺菌性である。

【0183】

別の態様では、免疫応答は、第１のポリペプチドに対して最大で８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、殺菌性である。別の態様では、免疫応答は、髄膜炎菌株Ｍ９８２５０７７１によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して最大で８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、殺菌性である。好ましい態様では、免疫応答は、髄膜炎菌株Ｍ９８２５０７７１によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して最大で８５％、より好ましくは最大で９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、殺菌性である。任意の最小値を本明細書中に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義し得る。

【0184】

一態様では、組成物によって誘発された免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＡ株だけでなく、血清型が血清型Ｂではない、ｆＨＢＰサブファミリーＡポリペプチドを発現する髄膜炎菌株に対しても殺菌性である。たとえば、好ましい一態様では、組成物によって誘発された免疫応答は、髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株に対して、およびｆＨＢＰ Ａ０５に非相同的なｆＨＢＰサブファミリーＡポリペプチドを発現する髄膜炎菌血清型Ｃ株に対して殺菌性である。たとえば、一態様では、免疫応答は、ｆＨＢＰ Ａ１０を発現する髄膜炎菌血清型Ｃ株に対するものである。別の態様では、免疫応答は、ｆＨＢＰ Ａ１９を発現する髄膜炎菌血清型Ｗ株に対するものである。一態様では、免疫応答は、ｆＨＢＰサブファミリーＡポリペプチドを発現する、髄膜炎菌株Ｍ９８２５０７７１に非相同的な髄膜炎菌株に対して殺菌性である。
サブファミリーＢ株
一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。一態様では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌株に非相同的なリポタンパク質２０８６変異体を発現する、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。たとえば、一態様では、ｈＳＢＡ株は、株ＣＤＣ１１２７に非相同的なリポタンパク質２０８６変異体を発現する、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。好ましい態様では、ｈＳＢＡ株は、株ＣＤＣ１５７３に非相同的なリポタンパク質２０８６変異体を発現する、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。

【0185】

一態様では、免疫応答は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌株に非相同的な髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ２４株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ４４株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ１６株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ０３株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ０９株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ１５株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ１５３株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌株ＣＤＣ１５７３に非相同的な髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。

【0186】

一態様では、免疫応答は、第２のポリペプチドに対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、殺菌性である。別の態様では、免疫応答は、髄膜炎菌株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、殺菌性である。好ましい態様では、免疫応答は、髄膜炎菌株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも８７％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、殺菌性である。別の好ましい態様では、免疫応答は、髄膜炎菌株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、殺菌性である。

【0187】

別の態様では、免疫応答は、第２のポリペプチドに対して最大で８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、殺菌性である。別の態様では、免疫応答は、髄膜炎菌株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して最大で８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、殺菌性である。好ましい態様では、免疫応答は、髄膜炎菌株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して最大で８８％の同一性、より好ましくは少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、殺菌性である。任意の最小値を本明細書中に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義し得る。

【0188】

一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４株である。別の態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４株である。さらなる態様では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４株を含む。一態様では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ２４、およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ４４株を含む。一態様では、ｈＳＢＡ株はＢ１５を含む。一態様では、ｈＳＢＡ株はＢ１５３を含む。別の態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ｂ１６株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ｂ０３株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ｂ０９株である。さらなる態様では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ｂ０３、およびＢ０９、またはその任意の組合せを含む。別の態様では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、およびＡ０７、またはその任意の組合せを含む。別の態様では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０６、Ａ０７、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２９、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１６、またはその任意の組合せを含む。

【0189】

一態様では、本方法は、髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答を誘導する。好ましくは、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。

【0190】

一態様では、組成物によって誘発された免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＰＢサブファミリーＢ株だけでなく、血清型が血清型Ｂではない、ｆＨＢＰサブファミリーＢポリペプチドを発現する髄膜炎菌株に対しても殺菌性である。たとえば、好ましい一態様では、組成物によって誘発された免疫応答は、髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対して、およびｆＨＢＰ Ｂ０１に非相同的なｆＨＢＰサブファミリーＢポリペプチドを発現する髄膜炎菌血清型Ｙ株に対して殺菌性である。たとえば、一態様では、免疫応答は、ｆＨＢＰ Ｂ１６を発現する髄膜炎菌血清型Ａ株に対するものである。別の態様では、免疫応答は、ｆＨＢＰ Ｂ４７を発現する髄膜炎菌血清型Ｙ株に対するものである。別の態様では、免疫応答は、ｆＨＢＰ Ｂ４９を発現する髄膜炎菌血清型Ｘ株に対するものである。一態様では、免疫応答は、ｆＨＢＰサブファミリーＢポリペプチドを発現する、髄膜炎菌血清型Ｂ株ＣＤＣ１５７３に非相同的な髄膜炎菌株に対して殺菌性である。

【0191】

一側面では、本発明は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）の第１の脂質付加ポリペプチド変異体および髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＢＰの第２の脂質付加ポリペプチド変異体を含む組成物の使用に関する。一態様では、組成物は、Ｂ Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、およびＢ１０７からなる群から選択されるポリペプチドを発現する少なくとも１つの髄膜炎菌血清型Ｂ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する。たとえば、一側面では、本発明は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加ポリペプチドおよび配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加ポリペプチドを含む組成物の使用に関する。

【0192】

一態様では、ｈＳＢＡ株はｆＨＢＰ Ｂ０５を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ０７を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ０８を発現する髄膜炎菌株である。別の態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ｂ１３を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ｂ５２を発現する髄膜炎菌株である。一態様では、ｈＳＢＡ株はＬＰ２０８６ Ｂ１０７を発現する髄膜炎菌株である。さらなる態様では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、およびＢ１０７からなる群から選択される任意の１つの株を含む。さらなる態様では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、Ｂ１０７、Ｂ０１、Ｂ２４、Ｂ４４、Ｂ１６、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１５３からなる群から選択される任意の１つの株を含む。

【0193】

一態様では、免疫応答は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌株に非相同的な髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ０５株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ０７株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ０８株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ１３株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ５２株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ１０７株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ２４株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ４４株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ１６株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ０３株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ０９株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ１５株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ１５３株に対するものである。一態様では、免疫応答は、髄膜炎菌株ＣＤＣ１５７３に非相同的な髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。

【0194】

一態様では、免疫応答は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、およびＡ７６からなる群から選択される髄膜炎菌血清型Ｂ株に対するものである。一態様では、免疫応答は、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、Ｂ１０７、Ｂ０１、Ｂ２４、Ｂ４４、Ｂ１６、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１５３、ならびにその任意の組合せからなる群から選択される髄膜炎菌血清型Ｂ株に対するものである。

【0195】

一態様では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、およびＢ１０７、ならびにその任意の組合せを含む。さらなる態様では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、およびＢ１０７、Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ｂ０３、およびＢ０９、ならびにその任意の組合せを含む。一態様では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、およびＢ１０７、ならびにその任意の組合せを含む。別の態様では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０６、Ａ０７、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２９、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１６、またはその任意の組合せをさらに含む。別の態様では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、およびＢ１０７、Ａ０６、Ａ０７、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２９、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１６、ならびにその任意の組合せを含む。

【0196】

一態様では、本方法は、髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答を誘導する。好ましくは、免疫応答は、髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一態様では、本方法は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、およびＢ１０７、ならびにその任意の組合せからなる群から選択される髄膜炎菌血清型Ｂ株に対する免疫応答を誘導する。一態様では、本方法は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、およびＢ１０７、Ａ０６、Ａ０７、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２９、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１６、ならびにその任意の組合せからなる群から選択される髄膜炎菌血清型Ｂ株に対する免疫応答を誘導する。
力価
一態様では、組成物は、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定した場合に、組成物の用量を投与する前のヒトにおける殺菌性力価と比較して、ヒトにおける殺菌性力価の増加を誘導する。一態様では、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定した場合に、殺菌性力価の増加を、組成物の１回目の用量を投与する前のヒトにおける殺菌性力価と比較して、組成物の１回目の用量を投与する前のヒトにおける殺菌性力価と比較する。一態様では、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定した場合に、組成物の２回目の用量を投与する前のヒトにおける殺菌性力価と比較して、組成物の２回目の用量の後に力価の増加が観察される。別の態様では、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定した場合に、組成物の３回目の用量を投与する前のヒトにおける殺菌性力価と比較して、組成物の３回目の用量の後に殺菌性力価の増加が観察される。

【0197】

一態様では、組成物は、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定した場合に、用量を投与した後にヒトにおいて殺菌性力価を誘導し、殺菌性力価は、用量を投与する前のヒトにおける殺菌性力価よりも少なくとも１倍を超える。たとえば、殺菌性力価は、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定した場合に、用量を投与する前のヒトにおける殺菌性力価と比較して、組成物の用量を受けた後にヒトにおいて少なくとも１．０１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、または１６倍高い場合がある。

【0198】

一態様では、「応答者」とは、組成物が用量を投与した後にヒトにおいて殺菌性力価を誘導し、殺菌性力価が用量を投与する前のヒトにおける殺菌性力価よりも少なくとも１倍を超える場合の、ヒトをいう。好ましい態様では、応答者は、用量を投与する前のヒトにおける殺菌性力価と比較して、ｈＳＢＡ力価の少なくとも４倍以上の上昇を達成する。そのような応答者は、保護的力価を有するといい得る。一部の態様では、保護的力価とは、１：４よりも高いものである。

【0199】

一態様では、ｈＳＢＡ力価は、測定可能な効果を生じる血清試料の最高希釈率の逆数である。たとえば、一態様では、ｈＳＢＡ力価は、Ｔ３０ ＣＦＵ値（すなわち、試験血清を除くすべてのアッセイ構成成分を含有するアッセイウェルにおけるインキュベーション後に生存する細菌の数、１００％の細菌生存）と比較してＭｎＢ細菌の少なくとも５０％の低下（５０％の細菌生存）をもたらす、試験血清の最も高い２倍希釈の逆数である。

【0200】

一態様では、組成物は、ｈＳＢＡにおいて同一条件下で測定した場合に、１回目の用量を受ける前のヒトにおける殺菌性力価よりも少なくとも２倍高い、１回目の用量を受けた後のヒトにおける殺菌性力価を誘導する（たとえば、１回目の用量の非存在下における、ヒトにおける殺菌性力価よりも高い）。一態様では、組成物は、ヒト補体を利用したヒト血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）において同一条件下で測定した場合に、１回目の用量を受ける前のヒトにおける殺菌性力価よりも少なくとも４倍高い、ヒトにおける殺菌性力価を誘導する。一態様では、組成物は、ヒト補体を利用したヒト血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）において同一条件下で測定した場合に、１回目の用量を受ける前のヒトにおける殺菌性力価よりも少なくとも８倍高い、ヒトにおける殺菌性力価を誘導する。

【0201】

好ましい態様では、ヒト血清補体は、所定のｈＳＢＡ試験株について低い内因性殺菌活性を有するヒトに由来する。低い内因性殺菌活性とは、たとえば、所定のｈＳＢＡ試験株に対して少なくとも１：４未満の希釈率である殺菌性力価をいう。一態様では、ヒト補体は、所定のｈＳＢＡ試験株に対して、１：２などの少なくとも１：４未満の希釈率であるｈＳＢＡ力価を有するヒトに由来し、組成物をヒトに投与しなかった。

【0202】

ヒトは、二価ｒＬＰ２０８６組成物などの組成物を投与する前に１：４未満のｈＳＢＡ力価を示し得る、または、ヒトは、組成物を投与する前に１：４以上のｈＳＢＡ力価を示し得る。したがって、好ましい態様および実施例では、組成物の少なくとも１回の用量のヒトへの投与は、投与前のヒトにおける力価よりも少なくとも４倍高いｈＳＢＡ力価をもたらす。一部の態様では、組成物の少なくとも１回の用量のヒトへの投与は、少なくとも１：４を超えるｈＳＢＡ力価、たとえば、１：８以上のｈＳＢＡ力価、１：１６以上のｈＳＢＡ力価、および１：３２以上のｈＳＢＡ力価などをもたらす。本明細書中に記載のそれぞれの実施例は、１：８以上および／または１：１６以上のｈＳＢＡ力価を有するヒト対象の割合の評価を含み、二価ｒＬＰ２０８６組成物をヒトに投与した。一部の態様では、組成物を投与する前と比較して組成物を投与した後における、ヒトにおける力価の４倍の上昇は、保護が組成物に関連していることを示す。一部の態様では、１：４を超えるｈＳＢＡ力価のそのような好ましい評価は、保護、すなわちヒトにおいて誘導される殺菌性免疫応答が、組成物に関連していることを示す。

【0203】

一態様では、ヒトは、組成物の１回目の用量を投与した後に、ｈＳＢＡの定量下限（ＬＬＯＱ）以上のｈＳＢＡ力価を有する。別の態様では、ヒトは、組成物の２回目の用量を投与した後に、ｈＳＢＡのＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を有する。別の態様では、ヒトは、組成物の３回目の用量を投与した後に、ｈＳＢＡのＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を有する。
方法および投与
一側面では、本開示は、ヒトにおいて髄膜炎菌に対する免疫応答を誘導する方法に関する。別の側面では、本開示は、ヒトにワクチン接種する方法に関する。

【0204】

一部の態様では、本方法は、組成物をヒトに投与するステップを含み、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖のそれぞれに対する免疫応答を誘導し、免疫応答は血清殺菌抗体の力価を含む、力価は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖に対する認可ワクチンによって誘導されたものよりも高い。一部の態様では、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖に対する認可ワクチンはＭＥＮＶＥＯである。

【0205】

一部の態様では、本方法は、組成物をヒトに投与するステップを含み、組成物は髄膜炎菌血清型Ｂに対する免疫応答を誘導し、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂに対する認可ワクチンによって誘導される血清殺菌抗体の力価よりも高い、血清殺菌抗体の力価を含む。一部の態様では、髄膜炎菌血清型Ｂに対する認可ワクチンはＴＲＵＭＥＮＢＡである。

【0206】

一部の態様では、本方法は、組成物をヒトに投与するステップを含み、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖のそれぞれならびに髄膜炎菌血清型Ｂに対する免疫応答を誘導し、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖に対する認可ワクチンによって誘導される血清殺菌抗体の力価よりも高い、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖のそれぞれに対する血清殺菌抗体の力価を含み、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂに対する認可ワクチンによって誘導される血清殺菌抗体の力価よりも高い、髄膜炎菌血清型Ｂに対する血清殺菌抗体の力価を含む。一部の態様では、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖に対する認可ワクチンはＭＥＮＶＥＯである。一部の態様では、髄膜炎菌血清型Ｂに対する認可ワクチンはＴＲＵＭＥＮＢＡである。

【0207】

本開示は、任意の年齢のヒトにおいて免疫応答を誘発する方法に関する。一部の態様では、ヒトは、少なくとも４週齢、５週齢、６週齢、７週齢、８週齢、９週齢、１０週齢、１１週齢、または１２週齢の年齢である。たとえば、好ましい態様では、ヒトは少なくとも６週齢の年齢である。当分野で知られているように、ＮＩＭＥＮＲＩＸ（登録商標）などの髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ型コンジュゲートワクチンが、早くも６週齢の年齢の乳児に適しており、６週齢以上の年齢の任意のヒトに投与することができる。一部の態様では、ヒトは少なくとも６カ月齢、７カ月齢、８カ月齢、９カ月齢、１０カ月齢、１１カ月齢、または１２カ月齢の年齢である。たとえば、好ましい態様では、ヒトは少なくとも１２カ月齢の年齢である。一態様では、ヒトは１２〜１８カ月齢の年齢である。別の側面では、本開示は、少なくとも１８カ月齢の年齢の患者において免疫応答を誘発する方法に関する。一態様では、ヒトは１８〜２４カ月齢の年齢である。さらに別の側面では、本開示は、少なくとも２４カ月齢の年齢の患者において免疫応答を誘発する方法に関する。一態様では、ヒトは２４カ月齢〜１０歳の年齢である。別の側面では、本開示は、１０歳以上の年齢の患者において免疫応答を誘発する方法に関する。

【0208】

一部の態様では、ヒトは１０歳〜２５歳の年齢である。一部の態様では、ヒトは１０〜２６歳の年齢である。一部の態様では、ヒトは１２カ月齢から１８カ月齢未満の年齢である。一部の態様では、ヒトは１８カ月齢から２４カ月齢未満の年齢である。一部の態様では、ヒトは１８カ月齢から２４カ月齢未満の年齢である。一部の態様では、ヒトは２４カ月齢以上１０歳未満の年齢である。

【0209】

一部の態様では、ヒトは少なくとも１６歳である。そのような態様では、本方法は、１回の用量をヒトに投与するステップ、好ましくは最大で１回の用量を少なくとも１６歳の年齢のヒトに投与するステップを含む。一部の態様では、ヒトは最高で１７歳である。

【0210】

一部の態様では、ヒトは１０〜１２歳の年齢である。そのような態様では、本方法は、少なくとも１回の用量をヒトに投与するステップを含む。好ましい態様では、１回目の用量の約６カ月後に、２回目の用量をヒトに投与する。好ましい態様では、本方法は、組成物の１回目の用量および２回目の用量を１０〜１２歳の年齢のヒトに投与し、１回目の用量の少なくとも４年後に、組成物の３回目の用量をヒトに投与するステップを含む。

【0211】

一部の態様では、本方法は、ヒトに少なくとも２回の用量を投与するステップを含む。好ましい態様では、２回の用量は少なくとも約６カ月間隔である。好ましい態様では、本方法は、１０〜１２歳の年齢のヒトに組成物の１回目の用量および２回目の用量を投与し、１回目の用量の少なくとも４年後に、ヒトに組成物の３回目の用量を投与するステップを含む。

【0212】

一部の態様では、本方法は、約１１歳のヒトに組成物の１回目の用量を投与し、１回目の用量の少なくとも４年後に、ヒトに組成物の少なくとも２回の用量を投与するステップを含む。一部の態様では、本方法は、１回目の用量の約５年後に、組成物の２回目および後続の用量を投与するステップを含む。

【0213】

一部の態様では、ヒトは髄膜炎菌血清型Ａに対して血清陰性である。一部の態様では、ヒトは髄膜炎菌血清型Ｃに対して血清陰性である。一部の態様では、ヒトは髄膜炎菌血清型Ｗに対して血清陰性である。一部の態様では、ヒトは髄膜炎菌血清型Ｙに対して血清陰性である。一部の態様では、ヒトは、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖に対して血清陰性である。

【0214】

一部の態様では、ヒトは、髄膜炎菌血清型Ａに対して血清陽性である。一部の態様では、ヒトは髄膜炎菌血清型Ｃに対して血清陽性である。一部の態様では、ヒトは髄膜炎菌血清型Ｗに対して血清陽性である。一部の態様では、ヒトは髄膜炎菌血清型Ｙに対して血清陽性である。一部の態様では、ヒトは、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖に対して血清陽性である。

【0215】

一態様では、本方法は、上述の組成物の少なくとも１回の用量をヒトに投与するステップを含む。好ましい態様では、本方法は、上述の組成物の最大で１回の用量をヒトに投与するステップを含む。別の態様では、本方法は、上述の組成物の少なくとも１回目の用量および２回目の用量をヒトに投与するステップを含む。

【0216】

一態様では、２回目の用量は、１回目の用量の少なくとも２０、３０、５０、６０、１００、１２０、１６０、１７０、または１８０日後、かつ１回目の用量の最大で２５０、２１０、２００、または１９０日後に投与する。任意の最小値を本明細書中に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義し得る。

【0217】

別の態様では、２回目の用量は、１回目の用量の約３０日後に投与する。別の態様では、たとえば０、２カ月間の免疫化スケジュールなどで、２回目の用量は１回目の用量の約６０日後に投与する。別の態様では、たとえば０、６カ月間の免疫化スケジュールなどで、２回目の用量は１回目の用量の約１８０日後に投与する。さらに別の態様では、たとえば２、６カ月間の免疫化スケジュールなどで、２回目の用量は１回目の用量の約１２０日後に投与する。

【0218】

一態様では、本方法は、組成物の２回の用量かつ最大で２回の用量をヒトに投与するステップを含む。一態様では、２回の用量は、１回目の用量後の約６カ月以内の期間に投与する。一態様では、本方法は、ヒトへの追加免疫のさらなる投与を含まない。本明細書中で使用する「追加免疫」とは、ヒトへの組成物の追加の投与をいう。組成物の最大で２回の用量をヒトに投与することは、有利であり得る。そのような利点は、たとえば、ヒトが完全な投与スケジュールに応じることを容易にすること、およびスケジュールの高い対費用効果を容易にすることを含む。

【0219】

一態様では、１回目の用量および２回目の用量を、約２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００日間の期間にわたって、かつ１回目の用量の最大で４００、３９０、３８０、３７０、３６５、３５０、３４０、３３０、３２０、３１０、３００、２９０、２８０、２７０、２６０、２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、または２００日後に、ヒトに投与する。任意の最小値を本明細書中に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義し得る。好ましくは、１回目および２回目の用量は、少なくとも４週間間隔、たとえば８週間以上の間隔、２カ月以上の間隔、３カ月以上の間隔、６カ月以上の間隔などで投与する。

【0220】

一態様では、約３０日間の期間にわたって、１回目の用量および２回目の用量をヒトに投与する。別の態様では、約６０日間の期間にわたって、１回目の用量および２回目の用量をヒトに投与する。別の態様では、約１８０日間の期間にわたって１回目の用量および２回目の用量をヒトに投与する。

【0221】

好都合に、１回目の用量は、別のワクチンと実質的に同時に（たとえば、医療専門家への同じ医療相談もしくは訪問中、または髄膜炎菌ワクチンの１回目の用量の２４時間以内）、たとえば、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン（細胞性、もしくは好ましくは無細胞性どちらかで）、ヘモフィルス・インフルエンザ菌ｂ型ワクチン、肺炎球菌ワクチン、および／またはポリオワクチン（好ましくは失活化ポリオウイルスワクチンで）と実質的に同時に投与することができる。これらの任意選択で同時投与したワクチンのそれぞれは、一価ワクチンであり得る、または組合せワクチンの一部（たとえばＤＴＰワクチンの一部として）であり得る。

【0222】

好都合に、２回目の用量は、別のワクチンと実質的に同時（たとえば、医療専門家への同じ医療相談もしくは訪問中、または髄膜炎菌ワクチンの２回目の用量の２４時間以内）、たとえば、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン（細胞性もしくは無細胞性どちらかで）、ヘモフィルス・インフルエンザ菌ｂ型ワクチン、肺炎球菌ワクチン、ポリオワクチン（好ましくは失活化ポリオウイルスワクチンで）、インフルエンザワクチン、水疱瘡ワクチン、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎ワクチン、および／または風疹ワクチンと実質的に同時に投与することができる。これらの任意選択で同時投与したワクチンのそれぞれは、一価ワクチンであり得る、または組合せワクチンの一部（たとえばＭＭＲワクチンの一部として）であり得る。

【0223】

好都合に、３回目の用量は、別のワクチンと実質的に同時に（たとえば、医療専門家への同じ医療相談もしくは訪問中、または髄膜炎菌ワクチンの３回目の用量の２４時間以内）、たとえば、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン（細胞性もしくは無細胞性どちらかで）、ヘモフィルス・インフルエンザ菌ｂ型ワクチン、肺炎球菌ワクチン、ポリオワクチン（好ましくは失活化ポリオウイルスワクチンで）、インフルエンザワクチン、水疱瘡ワクチン、麻疹ワクチン、流行性耳下腺炎ワクチン、および／または風疹ワクチンと実質的に同時に投与することができる。これらの任意選択で同時投与したワクチンのそれぞれは、一価ワクチンであり得る、または組合せワクチンの一部（たとえばＭＭＲワクチンの一部として）であり得る。

【0224】

一態様では、組成物の３回用量のスケジュールは、２回用量のスケジュールよりも高い百分率のヒトにおいて、第１および／または第２のポリペプチドに非相同的なＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）を発現する複数の株に対する殺菌性力価を誘導する。

【0225】

一態様では、本方法は、組成物の３回用量をヒトに投与するステップを含む。別の態様では、本方法は、組成物の最大で３回用量を投与するステップを含む。一態様では、３回用量は、１回目の用量後の約６カ月以内の期間に投与する。一態様では、本方法は、３回目の用量の後にヒトへの追加免疫用量の投与を含む。別の態様では、本方法は、３回目の用量の後にヒトへの追加免疫用量の投与を含まない。別の態様では、本方法は、組成物の４回目または追加免疫用量をヒトに投与するステップを、さらに含まない。さらなる態様では、最大で３回用量を約６カ月以内の期間にヒトに投与する。

【0226】

例示的な態様では、たとえば０、１、６カ月間の免疫化スケジュールなどで、２回目の用量は１回目の用量の約３０日後に投与し、３回目の用量は、２回目の用量の約１５０日後に投与する。別の例示的な態様では、たとえば０、２、６カ月間の免疫化スケジュールなどで、２回目の用量は１回目の用量の約６０日後に投与し、３回目の用量は２回目の用量の約１２０日後に投与する。

【0227】

一態様では、約１５０、１６０、１７０、または１８０日間の期間にわたって、かつ最大で２４０、２１０、２００、または１９０日間で、１回目の用量、２回目の用量、および３回目の用量をヒトに投与する。任意の最小値を本明細書中に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義し得る。好ましくは、約１８０日間または６カ月間の期間にわたって、１回目の用量、２回目の用量、および３回目の用量をヒトに投与する。たとえば、２回目の用量は１回目の用量の約６０日後にヒトに投与してよく、３回目の用量は２回目の用量の約１２０日後にヒトに投与してよい。したがって、例示的な投与スケジュールは、約０、２、および６カ月に用量をヒトに投与することを含む。

【0228】

上述のように、免疫原性組成物の複数の用量をヒトに投与してよく、それぞれの用量間の日数は変動し得る。本方法の利点は、たとえば、ヒトが投与スケジュールに応じるための柔軟性を含む。

【0229】

一態様では、本方法は、同一の免疫原性組成物の最大で３回の用量をヒトに投与するステップを含む。たとえば、好ましい態様では、本方法は、第１、第２、および第３の組成物が同一でない場合に、第１の組成物の１回目の用量をヒトに投与し、第２の組成物の２回目の用量をヒトに投与し、第３の組成物の３回目の用量をヒトに投与するステップを含まない。別の態様では、本方法は、同一の免疫原性組成物の最大で４回の用量をヒトに投与するステップを含む。

【実施例】

【0230】

以下の実施例は、本開示の態様を例示する。本明細書中で別段に注記しない限りは、以下の実施例において、１２０μｇの二価ｒＬＰ２０８６の用量レベルでのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を参照し、これは、０．５ｍＬの用量あたり６０μｇの、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加ポリペプチドと、０．５ｍＬの用量あたり６０μｇの、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加ポリペプチドと、２．８のモル比のポリソルベート−８０対第１のポリペプチドと、２．８のモル比のポリソルベート−８０対第２のポリペプチドと、０．５ｍｇのＡｌ^３＋／ｍｌの組成物と、１０ｍＭのヒスチジンと、１５０ｍＭの塩化ナトリウムとを含む、組成物の好ましい例示的な態様である。

【0231】

より詳細には、１２０μｇの二価ｒＬＰ２０８６の用量レベルでの本調査の二価組換えｒＬＰ２０８６ワクチンは、（ａ）６０μｇの、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加ポリペプチド、（ｂ）６０μｇの、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加ポリペプチド、（ｃ）１８μｇのポリソルベート−８０、（ｄ）２５０μｇのアルミニウム、（ｅ）７８０μｇのヒスチジン、および（ｆ）４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む。それぞれの用量は０．５ｍＬである。

【0232】

本明細書中で別段に注記しない限りは、以下の実施例においてＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を参照し、これは、それぞれ担体タンパク質として破傷風トキソイドとカップリングした髄膜炎菌莢膜多糖Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹを含む、四価の髄膜炎菌多糖コンジュゲート組成物の好ましい例示的な態様である。髄膜炎菌血清型ＡおよびＣ多糖は、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＨ）スペーサーとコンジュゲートし、破傷風トキソイドと間接的にコンジュゲートしている一方で、Ｗ−１３５およびＹ多糖は、破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている。組成物は保存料またはアジュバントを全く含有しない。

【0233】

より詳細には、以下の実施例に記載の凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は、１用量（０．５ｍＬ）あたり、破傷風トキソイド担体タンパク質とコンジュゲートしている５マイクログラムの髄膜炎菌血清型Ａ多糖、破傷風トキソイド担体タンパク質とコンジュゲートしている５マイクログラムの髄膜炎菌血清型Ｃ多糖、破傷風トキソイド担体タンパク質とコンジュゲートしている５マイクログラムの髄膜炎菌血清型Ｗ−１３５多糖、破傷風トキソイド担体タンパク質とコンジュゲートしている５マイクログラムの髄膜炎菌血清型Ｙ多糖、２８ｍｇのスクロース、および９７μｇのトロメタモールを含む。

【実施例1】

【0234】

ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物
最終ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物は、筋肉内注射用の０．５ｍＬの用量のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンを引き出すために、凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品（以下の実施例２に記載）のバイアルを０．６７ｍＬのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６薬物製品（以下の実施例３に記載）で再溶解することによって調製する。ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの調製において使用するすべての構成成分およびその機能を以下の表１に提供する。

【0235】

【表1】

【0236】

ＭｅｎＡＢＣＷＹは２ｍＬのタイプ１ガラスバイアル中の単一用量の凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴと、再溶解用のＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６懸濁液を含有する、目盛りのない１ｍＬのタイプＩのガラス製の標準の事前に満たされたシリンジ（ＰＦＳ）と、１３ｍｍのバイアルアダプターとを含む組合せ製品である。

【0237】

凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品は、供給されたバイアルアダプターを凍結乾燥バイアルに固定し、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６のＰＦＳをバイアルアダプターに取り付けることによって、再溶解する。このプロセスは、ＭｎＢ懸濁液のＰＦＳからバイアル内への無菌的な運搬、続いて、投与のための再溶解したワクチンのバイアルからＰＦＳ内への移動を容易にすることを意図する。再溶解後、バイアルの内容物を、バイアルアダプターを介して同じシリンジ内に引き出す。バイアルアダプターをシリンジから取り外し、筋肉内（ＩＭ）注射用に針をＰＦＳに固定する。最終ワクチン（ＭｅｎＡＢＣＷＹ）の標的用量体積（０．５ｍＬ）が運搬できることを確実にするために、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６のＰＦＳは、ＴＲＵＭＥＮＢＡよりも高い充填体積（現在の０．５７ｍＬに対して約０．６７ｍＬ）を有するように設計する。

【0238】

最終ワクチン組成物は、１０ｍＭのヒスチジン、１．２ｍＭのトリス緩衝液、１６０．５〜１６１．１ｍＭの塩化ナトリウム、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）として０．５ｍｇ／ｍＬのアルミニウム、１．３５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、および５６ｍｇ／ｍＬのスクロース中に、１２０μｇ／ｍＬ／サブファミリーで配合したｒＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質と、それぞれ約１：３、約１：３、約１：１．５、約１：１．３の比で破傷風トキソイドとコンジュゲートしている、１０μｇ／ｍＬ／型の濃度の髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹの精製莢膜多糖とを含む。

【実施例2】

【0239】

ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６薬物製品の説明および組成
ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６薬物製品は、１０ｍＭのヒスチジン緩衝液、１５０ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、ｐＨ６．０中に、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）としての０．５ｍｇ／ｍＬのアルミニウムと共に、１２０μｇ／ｍｌ／サブファミリーで配合したｒＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質からなる、無菌的な液体配合物である。ポリソルベート８０（ＰＳ−８０）を原薬に加えて標的のＰＳ−８０対タンパク質のモル比を得る。したがって、ＰＳ−８０は薬物製品の配合中に加えず、同じ比で最終薬物製品中に存在する。薬物製品を１ｍＬのシリンジ内に満たす。ワクチンの単一用量は０．５ｍＬ、保存料なしである。

【0240】

【表2】

【0241】

ポリソルベート８０濃度の効果
ポリソルベート８０（ＰＳ−８０）は非イオン性界面活性剤である。これは、温度、フィルター、チューブ、容器／閉じ具の接触、およびプロセスの混合によって引き起こされ得る凝集および吸着を防止することによって、配合物中のＭｎＢ ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質を安定化および可溶化するために使用する。ｉｎ ｖｉｔｒｏのモノクローナル抗体に基づく効力アッセイを使用した安定性研究により、最終配合物中のＰＳ−８０対ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質のモル比がより高い場合に、サブファミリーＢタンパク質が不安定性であることが実証された。ＰＳ−８０対タンパク質の様々なモル比を用いた実験により、効力を保持するための最適なＰＳ−８０対ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質のモル比が約１．４〜４．２であることが実証された。

【実施例3】

【0242】

ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の説明および組成
ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品は、それぞれ約３、約３、約１．５、および約１．３の対多糖比で破傷風トキソイドとコンジュゲートしている（ＴＴ）、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹの精製多糖からなる。

【0243】

ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品は、凍結乾燥に適したブロモブチルゴム製の閉じ具およびアルミニウム製のフリップオフ・キャップを備えた３ｍＬのガラスバイアル中で供給される、凍結乾燥粉末として提示する。ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品の製造において使用するすべての構成成分およびその機能を表３に提供する。

【0244】

【表3】

【実施例4】

【0245】

ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物の調製
最終ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物は、凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品バイアルを０．６７ｍＬのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６で再溶解することによって、診療所内で調製する。生じるＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物（ワクチン液体薬物製品）は、筋肉内注射用に、１６０．５〜１６１．１ｍＭの塩化ナトリウムを含有する１０ｍＭのヒスチジンおよび１．６ｍＭのトリス緩衝液、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）として０．５ｍｇ／ｍＬのアルミニウム、０．０３５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ならびに５６ｍｇ／ｍＬのスクロース、ｐＨ６．０５中に、１２０ｍｃｇ／ｍＬ／サブファミリーのｒＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびＢタンパク質と、それぞれ約３、約３、約１．５、および約３の比で破傷風トキソイドとコンジュゲートしている、１０ｍｃｇ／ｍＬ／型の濃度の髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹ型の精製多糖とを含有する。

【0246】

ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンは、２つの薬物製品であるＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴおよびＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６の混合によって調製する。緩衝成分および賦形剤は、それぞれの構成成分の個々の開発に基づいて選択し、長期貯蔵寿命のための必要な安定性プロフィールを提供するために示す。

【0247】

ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品およびＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６薬物製品が、ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの投与のために一緒に混合した場合に適合性があること、すべての薬物製品および投薬溶液が投与構成成分と適合性があること、ならびに、投薬溶液が、用量調製および投与操作を行うために十分な期間の間、投与構成成分中で安定であることを実証するために、投薬量の検証研究を行った。０．６７ｍＬのＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６薬物製品を用いたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ薬物製品の再溶解によって調製したＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの、ホールド時間にわたる、室温および明条件での安定性を、再溶解したバイアル中および投薬シリンジ中で確認した。

【0248】

ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの投薬溶液を表す試料を、抗原結合および純度用のＲＰ−ＨＰＬＣ、ｂｉｏｐｌｅｘ活性アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ならびに事前に決定された許容基準を用いたＩＣＰ−ＭＳなどの、安定性を示す方法を使用して試験した。この研究の結果は、２４時間、室温および明条件でのＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの許容される安定性を示す。

【実施例5】

【0249】

ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの評価
凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いて再溶解した場合に、許容される物理的適合性および短期間の安定性が存在するかどうかを評価するための研究を実施した。凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物および液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を合わせ、現実世界の条件に近似させるために非制御の室温環境で２４時間まで保存した。凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を、液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いて穏やかな手動混合で再溶解することができ、合わせたｐＨおよび重量モル浸透圧濃度は注射剤の典型的な範囲内であったことが実証された。コンジュゲートおよびタンパク質のすべての主要な特質は、非制御の室温環境で２４時間まで、対照のものに類似していた。

【0250】

物理的適合性は、合わせた薬物製品ｐＨ、外見、再溶解の容易さ、および重量モル浸透圧濃度を評価することによって評価した。抗原の安定性は、ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびサブファミリーＢタンパク質の濃度、純度、およびｉｎ ｖｉｔｒｏ相対的抗原性（ＩＶＲＡ）、ならびにコンジュゲートしている髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖の濃度をＥＬＩＳＡによって評価することによって評価した。

【0251】

実施例５から実施例１５は、凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物および液体ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物の組合せ、すなわちＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物が、適合性があり、室温で少なくとも２４時間の間安定であることが見出されたことを実証する。
ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物中のＭｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖の濃度を決定するためのＥＬＩＳＡ−Ｍｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５のＥＬＩＳＡの開発ならびに検出用のｐＡｂのスクリーニング
ＥＬＩＳＡアッセイにおいて使用するために、６個の抗体がスクリーニングに選択された。４群の１０匹ウサギのそれぞれを、Ｍｅｎ Ａ、Ｃ、Ｙ、またはＷ−１３５多糖ＴＴコンジュゲートのいずれかで免疫化し、続いて、抗体発生後にウサギを全採血した。それぞれのウサギを、結合および特異性のために担体タンパク質ＣＲＭ_１９７とコンジュゲートしているＭｅｎ Ａ、Ｃ、Ｙ、またはＷ−１３５多糖を使用して、個々にスクリーニングした。ウサギ血清を、バックグラウンド吸光度の３倍を超える吸光度の読取値に等しい、陽性結合シグナルについてスクリーニングした。さらに、ウサギ血清を、ブランクの吸光度の読取値を超える、抗原、二次抗体または検出抗体なしの血清の組合せの、任意の吸光度の読取値である低い非特異的結合、およびバックグラウンド吸光度を超える非相同種血清型の任意の吸光度の読取値である低い交差反応性についてスクリーニングした。スクリーニング基準を満たしたウサギをプールした。ＣＲＭコンジュゲートを使用して検量線範囲を確立し、再溶解した凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を用いて確認した。ＣＲＭコンジュゲートを使用して検量線範囲を確立し、再溶解した凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を用いて確認した。

【0252】

合わせた薬物製品（ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物）中のＡ、Ｃ、Ｙ、およびＷコンジュゲートを定量することの実現可能性を確立した。ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物単独ではアッセイで検出されなかったことが決定された。さらに、ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物試料中のリン酸アルミニウムが可溶化している場合、コンジュゲートの完全回収が得られた。したがって、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、ＥＬＩＳＡによるＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴコンジュゲートの定量に干渉しないことが決定された。

【実施例6】

【0253】

ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下でＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を評価する方法の適切性の評価
ＩＥＸ−ＨＰＬＣを、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下でＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物サブファミリーＡおよびＢタンパク質の強度を決定するその適切性について評価した。ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下およびＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の非存在下におけるＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物の全タンパク質および結合タンパク質の結果を評価した。

【0254】

【表4】

【実施例7】

【0255】

ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下におけるＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物の純度およびピーク比の評価
ＲＰ−ＨＰＬＣを、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下でＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物の純度を決定するその適切性について評価した。ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下およびＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の非存在下におけるＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物の純度の結果を比較した。オーバーレイしたクロマトグラムは米国特許第１０，１８３，０７０号の図２に示されている。不純物ピーク積分の例は、米国特許第１０，１８３，０７０号の図２の挿入図として示されている。評価結果は、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在は、ＲＰ−ＨＰＬＣ方法を使用したＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物の純度の評価に干渉しないことを示す。

【実施例8】

【0256】

ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下におけるＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物のＩＶＲＡの評価
ＩＶＲＡ方法を、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下でＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物サブファミリーＡ（配列番号１）およびサブファミリーＢ（配列番号２）タンパク質のｉｎ ｖｉｔｒｏ相対的抗原性を決定するその適切性について評価した。

【0257】

ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在下および非存在下におけるＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物サブファミリーＡおよびサブファミリーＢタンパク質のＩＶＲＡの結果を比較した。実現可能性の評価結果は、アッセイのばらつき内で結果は比較可能であり、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の存在はｉｎ ｖｉｔｒｏ相対的抗原性の決定に干渉しないことを示す。

【実施例9】

【0258】

ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物のバイアルの再溶解
ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物およびＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物の薬物製品は、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物の薬物製品を用いて再溶解したＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物のバイアルを使用して行った。生理食塩水またはＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物のどちらかを用いて再溶解したＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物のバイアルを、方法に応じてマトリックスプラセボを対照として使用した。

【0259】

【表5】

【0260】

ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物用の生理食塩水の再溶解体積の決定
ＮＩＭＥＮＲＩＸ（登録商標）市販製品パッケージは、凍結乾燥ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を含有するバイアルおよび再溶解に使用する０．９％の生理食塩水を含有するシリンジをどちらも含有する。ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いた再溶解の際に市販のワクチン中の最終ＮＩＭＥＮＲＩＸ（登録商標）濃度を再現するために、シリンジを使用して市販製品から分注される生理食塩水の量を決定する必要があった。その後、この同じ体積のＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物をすべての再溶解研究に使用する。
ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物のバイアルの再溶解
ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を１０ｍＬのガラスバイアル中にプールした。約８００μＬの溶液を１ｍＬのシリンジ内に引き出した。シリンジの調節した内容物をＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物を含有するバイアル内に注入した。バイアルを旋回させて内容物を溶かした。

【0261】

ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物の２つ組試料のＰＨおよび外見を決定した。重量モル浸透圧濃度を、生理食塩水を用いて再溶解したＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物およびＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いて再溶解したＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物で、３つ組で測定した。

【実施例10】

【0262】

ＤＰマトリックスにおけるＭｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖の安定性を評価するためのＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ。
Ｍｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖を、合わせた薬物製品（ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物）中のコンジュゲートしている髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖の任意の不安定性を予想できるかを評価するための代用として使用した。
Ｍｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖の処理
試薬の調製（「完全ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物緩衝マトリックス」）
２．２４ｇのスクロースおよび７．８ｍｇのトリス（トロメタミン）を、２０ｍｌの２×ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物緩衝マトリックスに、ＭｎＢ ｒＬＰ２０８６タンパク質と共に加えた（ヒスチジン ２０ｍＭ、ｐＨ６．０、ＮａＣｌ ３００ｍＭ、ＰＳ ８０ ０．０７ｍｇ／ｍｌ、ＡｌＰＯ４ １ｍｇ／ｍｌ（８ｍＭ）、ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡ（配列番号１）およびサブファミリーＢ（配列番号２）タンパク質 それぞれ２４０μｇ／ｍＬ）。
試料の調製
それぞれのＭｅｎｉｎｇ多糖を完全ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物緩衝マトリックスで１：１に希釈し、０、６、および２４時間、５℃、２５℃、および３７℃でインキュベートした。インキュベーション後、試料懸濁液を１分間、１４，０００ｒ．ｐ．ｍ．で遠心分離した。上清をＳＥＣ−ＭＡＬＬＳによって分析した。

【実施例11】

【0263】

ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物の安定性−合わせたＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６およびＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物のｐＨ、外見、および重量モル浸透圧濃度の評価
合わせたＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物およびＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物、すなわちＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物のＰＨおよび外見を、再溶解の直後および２４時間後に再度評価した。

【0264】

すべての結果は予想通りであった（表６）。

【0265】

【表6】

【0266】

ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いて再溶解したＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の平均重量モル浸透圧濃度は、生理食塩水を用いて再溶解したＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物の平均重量モル浸透圧濃度の３％以内であった。

【0267】

【表7】

【実施例12】

【0268】

合わせた薬物製品中のＭｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖コンジュゲートの濃度
ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物中のＭｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５−ＴＴコンジュゲートの濃度を初期および２４時間後に再度評価した。４つのコンジュゲートの濃度は２４時間の期間の間安定していた（表８）。

【0269】

【表8】

【実施例13】

【0270】

ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物中のＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６タンパク質の安定性の評価
合わせた薬物製品中の全および結合したｒＬＰ２０８６サブファミリーＡ（配列番号１）およびサブファミリーＢ（配列番号２）タンパク質の濃度
ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物の試料を、タンパク質濃度を決定するためにＩＥＸ−ＨＰＬＣによって分析した。表９に示すように、ＭｎＢ二価ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡ（配列番号１）およびサブファミリーＢ（配列番号２）タンパク質（アルミニウムと結合）のどちらの全タンパク質、結合タンパク質（アルミニウムと）、および％結合も２４時間以内に変化せず、ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびサブファミリーＢタンパク質が２４時間の期間にわたって安定であったことを示す。

【0271】

【表9】

【実施例14】

【0272】

合わせたＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物中のｒＬＰ２０８６タンパク質の純度およびピーク比
ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物の試料を、ｒＬＰ２０８６タンパク質の純度およびピーク比を決定するためにＲＰ−ＨＰＬＣによって分析した。米国特許第１０，１８３，０７０号の図３を参照されたい。１１．９分のピークは純度の計算から除外する。
合わせた薬物製品中のｒＬＰ２０８６サブファミリーＡおよびサブファミリーＢタンパク質のＩＶＲＡ
ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物の試料のＩＶＲＡを混合の２４時間後まで評価した。ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物中のｒＬＰ２０８６サブファミリーＡ（配列番号１）およびサブファミリーＢ（配列番号２）タンパク質の相対的抗原性が２４時間の期間にわたって安定であったことが決定された。

【実施例15】

【0273】

ＳＥＣ−ＭＡＬＳによる完全ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物緩衝マトリックス中のＭｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５多糖の安定性
様々な温度で６および２４時間のインキュベーション後における、ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳによる完全ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物緩衝マトリックス中のＭｅｎｉｎｇ Ａ ＰＳの安定性
Ｍｅｎｉｎｇ Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹ多糖を完全ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物緩衝マトリックスと混合し、５℃、２５℃、および３７℃で２４時間までインキュベーションした後に、ＳＥＣ−ＭＡＬＳによって安定性について評価した。４つの多糖すべてが５℃および２５℃で２４時間まで安定であるように見える。Ｍｅｎｉｎｇ ＡおよびＹでは３７℃で一部の分解が観察された。初期以外のすべての試験した条件下における高Ｍｗの凝集体の形成が原因で、分解の度合はＭｅｎｉｎｇ Ｙ多糖について決定することができなかった。

【0274】

【表10】

【実施例16】

【0275】

ＣＢＡ／ＪマウスにおけるＭｎ五価およびＴｒｕｍｅｎｂａ（登録商標）ワクチンの髄膜炎菌血清型Ｂ免疫原性の評価
二価Ｍｎ Ｂ ｆＨＢＰワクチン、Ｔｒｕｍｅｎｂａ、または四価ＡＣＷＹ多糖コンジュゲートワクチンと共に配合した二価Ｍｎ Ｂ ｆＨＢＰワクチン（Ｍｎ五価ＡＢＣＷＹ）のいずれかを用いたワクチン接種後の髄膜炎菌血清型Ｂ ｆＨＢＰに対する免疫応答を、ＣＢＡ／Ｊマウスにおいて評価した。ＣＢＡ／Ｊマウスの群を３つの異なるワクチンで免疫化した：五価（ＡＢＣＹＷ）、Ｔｒｕｍｅｎｂａ（登録商標）（ＭｎＢ）、およびＮｉｍｅｎｒｉｘ（登録商標）（ＡＣＹＷ）（表１１）。

【0276】

【表11】

【0277】

それぞれのアームについて、２倍希釈の用量レベルのそれぞれのワクチンを使用して、ＣＢＡ／Ｊマウス（２５匹／群）を首筋において皮下で免疫化した（表１１）。マウスをワクチンで時間０に初回刺激し、２週目に追加免疫した。ヒト補体を利用した２つの異なる血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）を使用して試験するために、血清をＰＤ２で３週目に収集した。一方のｈＳＢＡはｆＨＢＰサブファミリーＡ発現株（Ｍ９８２５０７７１）を使用し、他方はｆＨＢＰサブファミリーＢ発現株（ＣＤＣ１１２７）を使用した。

【0278】

ｈＳＢＡは、髄膜炎菌血清型Ｂ株に対する抗体依存性、補体媒介性の殺菌活性を測定する。手短に述べると、適切な希釈率の試験血清を、髄膜炎菌Ｂ株（サブファミリーＡまたはＢ）の新鮮に調製した細菌培養およびヒト補体を有する９６ウェルのマイクロタイターアッセイプレート中で混合した。アッセイプレートを軌道振盪機上に載せ、加湿インキュベーター（３７℃／５％のＣＯ_２）中で３０分間混合した。続いて、生存細菌を数えるために、それぞれのウェルからのアッセイ反応のアリコートを９６ウェルのフィルタープレートに移した。

【0279】

ワクチン接種に対する応答率を、ｈＳＢＡに応答するそれぞれの投薬群（ｎ＝２５匹）中のマウスの百分率として計算した。事前に決定した希釈レベルで試験した場合、Ｔ_３０対照髄膜炎菌細菌の５０％以上を死滅させるマウス血清試料が応答者とみなされる。Ｔ_３０対照ウェルは細菌および補体を含有するが試験血清を含有せず、３０分間のアッセイインキュベーションの終わりに計数する。
表１２および表１１
表１３は、髄膜炎菌血清型Ｂ株のサブファミリーＡおよびサブファミリーＢの両方について、ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）またはＭｎ五価のどちらかによって誘導された比較可能な用量依存的応答率を示す。予想通り、ＮＩＭＥＮＲＩＸ（商標）はＭｎ Ｂ株に対する機能的な免疫応答を誘導しなかった。

【0280】

【表12】

【0281】

【表13】

【実施例17】

【0282】

１０以上２６歳未満の健康な対象における二価ｒＬＰ２０８６含有五価ワクチン（ＭｅｎＡＢＣＷＹ）の免疫原性、安全性、および許容性を説明するための研究（Ｂ１９７１０５７）
Ｂ１９７１０５７は、１０以上２６歳未満の健康な対象における五価の安全性および免疫原性を評価するための、第２相概念証明（ＰＯＣ）研究である。研究は２０１７年４月に開始し、約５３０人の対象が五価を受けた。

【0283】

髄膜炎菌ワクチンは、ワクチン中に含まれる血清型を表す髄膜炎菌株を死滅させる、免疫血清の能力を実証する、免疫学的代用であるヒト補体を使用した血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）によって認可されている。ＭｅｎＡＣＷＹ応答には、それぞれの血清型からの１つの株をｈＳＢＡにおいて評価し、五価応答は認可ＡＣＷＹワクチンＭＥＮＶＥＯと比較した。ＭｅｎＢ評価には、ＴＲＵＭＥＮＢＡ認可研究中にも使用した４つの血清型Ｂ株を試験した。

【0284】

研究データにより、ＡＣＷＹ評価について五価が１回のワクチン接種後にＭｅｎｖｅｏに非劣性であり、また、Ｂ評価について五価が２回のワクチン接種後Ｔｒｕｍｅｎｂａに非劣性であることが示された。
本調査の五価ワクチン
この研究のための治験薬は、二価ｒＬＰ２０８６（ＴＲＵＭＥＮＢＡ）、（五価、上記の実施例１および実施例４に記載）、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ（ＭＥＮＶＥＯ）、ならびにプラセボである。
研究設計
Ｂ１９７１０５７は、約１５９０人の対象を、五価とプラセボ（生理食塩水）またはＴｒｕｍｅｎｂａ（Ｐｆｉｚｅｒ）とＭｅｎｖｅｏ（ＧＳＫ）のどちらかを受けるようにランダムに割り当てた、第３相の、ランダム化された、能動制御された、観察者盲検の、多施設治験である。すべての対象は、登録前に任意の髄膜炎菌Ｂ型ワクチンに対して未経験であった。ランダム化は、以前のワクチン接種経歴によって層別化し、約５０％のＡＣＷＹ未経験対象および約５０％のＡＣＷＹ経験済み（ランダム化の日の４年以上前に、１つまたは複数のＡＣＷＹ型を含有するワクチンの１回の以前の用量を受けたことがある）であった。米国でティーンエージャーの８６％が約１１歳でＡＣＷＹワクチンの１回の用量を受け、１６歳で追加免疫用量を受けるはずであるため、このＡＣＷＹ経験済み群を含めた。また、ランダム化は地理的地域によっても層別化した。約８０％の対象が米国の調査場からであり、約２０％の対象が欧州からであった。地域的層別化により、十分な集団表現が確実となった。研究は２段階で実施した。現在は完了している第１段階は、一次シリーズのワクチン接種相を含んでいた。第１段階の訪問スケジュールを以下の表１４に注記する。第２段階では、免疫および五価の一次シリーズの完了の約４年後に投与した追加免疫用量の持続性を評価する。

【0285】

【表14】

【0286】

免疫応答の評価のために、機能的抗体をｈＳＢＡにおいて、髄膜炎菌Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、およびＹ型の株を用いて分析した。ｈＳＢＡは、標的髄膜炎菌株の補体依存性死滅をもたらす、ヒト血清中の抗体を測定する。Ｔｒｕｍｅｎｂａおよび五価のＢ成分に対する免疫応答の評価には、４つの一次ＭｎＢ試験株、すなわちＰＭＢ８０（Ａ２２）、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）、およびＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）を、本研究における免疫原性エンドポイントを決定するためのｈＳＢＡにおいて使用した。ＭＥＮＶＥＯおよび五価のＡＣＷＹ成分に対する免疫応答の評価には、ＡＣＷＹ型のそれぞれに特異的な試験株を同定し、試験開始前にｈＳＢＡにおいて定性した。ＭｅｎＢを評価するために使用した、妥当性確認されたアッセイは、ＴＲＵＭＥＮＢＡを認可するために使用したものと同じであった。
目的
本研究は、五価の安全性、許容性、および免疫原性を記載し、五価、または米国で認可された髄膜炎菌Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ型コンジュゲートワクチンであるＴｒｕｍｅｎｂａおよびＭｅｎｖｅｏの投与後の、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、およびＹ型に対する免疫応答を記載するために設計した。Ｎｉｍｅｎｒｉｘは、米国で認可されていないため、ＡＣＷＹ比較物（ｃｏｍｐａｒａｔｏｒ）として使用しなかった。

【0287】

五価のＭｅｎＡＣＷＹ成分の免疫原性は、１回の用量後にＴｒｕｍｅｎｂａ＋Ｍｅｎｖｅｏについて観察されたｈＳＢＡ ＧＭＴと比較した場合の、単一用量後の五価のｈＳＢＡ相乗平均力価（ＧＭＴ）に基づいた。

【0288】

本発明者らは、この評価を、以前に１回の用量のＭｅｎＡＣＷＹワクチンを受けていない個体（ＡＣＷＹ未経験個体）、およびその２回目のＭｅｎＡＣＹＷ追加免疫用量を受けるであろう個体（ＡＣＷＹ経験済み個体）について実施した。五価のＭｅｎＡＣＷＹ成分のＰＯＣ基準をＡＣＷＹ未経験個体が満たしている必要があった。

【0289】

五価のＭｅｎＢ成分の免疫原性の基準は、０、６カ月スケジュールについて確立された第３相のＬＣＩ基準を満たすことを予測する、０、６カ月スケジュールで投与した２回の用量の五価の後の、４倍の上昇の達成点の推定および複合ｈＳＢＡ応答に基づいた。

【0290】

研究の二次エンドポイントは、２．０倍マージンを有する２つのＧＭＴの比の標準の非劣性評価および五価のＢ成分のパーセント応答者を含んだ。パーセント応答者の分析は、応答者を、一次ＭｅｎＢ株についてｈＳＢＡ力価の４倍以上の上昇およびワクチン接種２の１カ月後の複合応答を達成したものと定義し、その後、五価とＴｒｕｍｅｎｂａとの差を計算することによって、実施した。成功に達成するためには１０％を超えない差異が必要であった。
五価に対する免疫応答およびＰＯＣ免疫原性結果
以下において、研究Ｂ１９７１０５７は、五価およびＭｅｎｖｅｏ間でＭｅｎＡＣＷＹに対する殺菌性応答に関して、Ｍｅｎｖｅｏと比較して五価を受けた対象において、単一用量後に、ＡＣＷＹ成分について同様のｈＳＢＡ ＧＭＴが観察されたことを示す。１．５倍のＧＭＴ比の非劣性（ＮＩ）マージンがＡＣＷＹ未経験対象（表１５）で達成され、２．０倍のＧＭＴ比のＮＩマージンがＡＣＷＹ経験済み（表１６）対象で達成された。

【0291】

【表15】

【0292】

【表16】

【0293】

Ｔｒｕｍｅｎｂａは、事前に指定された下限の９５％信頼区間（ＬＣＩ）の閾値を満たした抗体価において４倍の上昇（および複合応答）を達成した対象の割合に基づいて認可された。４倍の抗体応答を評価する際、これらは、ワクチンに対して４倍応答を有する対象の割合に独立して影響を与え得る、集団におけるバックグラウンド力価によって影響を受ける場合がある。さらに、使用したｈＳＢＡアッセイは生物学的成分から構成されており、これらは、厳重に制御されているとはいえ、研究間で絶対的応答基準に影響を与え得る。認可のＬＣＩ閾値は、異なる集団で異なる補体源を使用して達成された点推定に基づいて計算したことを考慮して、本発明者らは、五価血清型Ｂの応答をＴｒｕｍｅｎｂａ＋Ｍｅｎｖｅｏアームからのものとも比較した。結果を表１７に提供する。

【0294】

【表17】

【0295】

４つの血清型Ｂ試験株のうちの３つについて、ＳＢＡの４倍の上昇および複合応答は事前に指定された点推定を相当に上回った。１つの株、ＰＭＢ８０（Ａ２２）では、ＰＯＣ基準ＰＥ７８．１％と比較して対象の７５．８％が力価の４倍の上昇を達成した（Ｔｒｕｍｅｎｂａ群では点推定（ＰＥ）は７３．８であった）。しかし、上述のように、９５％のＬＣＩ基準は、異なる集団で経時的な場合に制御がより困難である。このＰＯＣ研究用にＬＣＩを作成するために使用した第２相研究では欧州集団が登録されており、Ａ２２のベースラインｈＳＢＡ率が２２．１％であった。五価のＰＥがＴｒｕｍｅｎｂａのそれよりも高かったため、五価のＭｅｎＢ成分の免疫干渉は存在しなかったことが示唆された。この点を確認するために、二次エンドポイント分析により、２の非劣性分析においてＴｒｕｍｅｎｂａ＋Ｍｅｎｖｅｏが五価に非劣性であったことが示された。実際、これらは厳しい１．５ＧＭＲ非劣性マージン（表１８）および５％マージンでのパーセント応答者の分析（表１９）を満たしていた。

【0296】

【表18】

【0297】

【表19】

【実施例18】

【0298】

髄膜炎菌血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、ＷおよびＹを標的とする五価ワクチンの、米国における潜在的な公衆衛生への影響
目的：五価ワクチンを用いたワクチン接種スケジュールおよびコンプライアンス率の様々な仮定の下で、米国集団間のＩＭＤ症例のさらなる低下の潜在性を評価すること。

【0299】

ワクチン接種シナリオ
４つの一次ワクチン接種シナリオを分析し、現在の推奨およびコンプライアンスレベルで回避された症例の推定数（図１）と比較した
１．１６歳の年齢でのＭｅｎＡＣＷＹ／ＭｅｎＢワクチンを五価で置き換え、１１歳の年齢でのＭｅｎＡＣＷＹを保持する
２．１１歳および１６歳の年齢でのＭｅｎＡＣＷＹ／ＭｅｎＢワクチンを五価で置き換える
３．１６歳の年齢でのＭｅｎＡＣＷＹ／ＭｅｎＢを五価で置き換え、１１歳の年齢でＭｅｎＡＣＷＹワクチン接種なし
４．１１歳の年齢でのＭｅｎＡＣＷＹを２回の用量の五価で置き換え、１６歳の年齢でのＭｅｎＡＣＷＹ／ＭｅｎＢを１回の用量の五価で置き換える
ＩＭＤの減少の全体レベルに対する様々な推奨の影響を推定するために、スケジュールのそれぞれを用いたワクチン接種率を変動させた。疾患の減少の推定は、２０１８年に公開された米国における青年の免疫化率の推定に基づいた。

【0300】

− ８６．６％が１回以上の用量のＭｅｎＡＣＷＹを受けた
− 全青年の６８．１％が１回以上の用量のＨＰＶを受けた
− ５０．８％が２回以上の用量のＭｅｎＡＣＷＹを受けた
− １７．２％が１回以上の用量のＭｅｎＢを受けた
− １６歳の年齢での２回用量のシリーズにおける２回目の用量のカバレッジは、１回目の用量３の５０％であり、１１歳の年齢で７０％であったと仮定した。
結果
現在のカバレッジレベルおよび合計４回の注射を必要とするワクチン接種スケジュールでは、ＭｅｎＡＣＷＹおよびＭｅｎＢワクチンは、仮説上のワクチン接種が全くない場合と比較して、１０年間にわたって１７８件のＩＭＤ症例を回避させたと推定される。ＭｅｎＡＣＷＹまたは／およびＭｅｎＢワクチン接種を五価で置き換えることで、少なくとも１回の注射が廃止される。１６歳の年齢の免疫化率が現在のＭｅｎＡＣＷＹワクチン接種率と同様のままであると仮定すると、五価ワクチンは同様またはより多数のＩＭＤ症例を回避したと推定された（図３）。

【0301】

１１歳の年齢で２回の用量の五価および１６歳の年齢で１回の用量の五価（シナリオ１０〜１２）は、匹敵するカバレッジ率を有する他のワクチン接種スケジュールと比較して、最多の症例（２８２件まで）を防止することができた。

【0302】

１１歳の年齢で１回の用量の五価および１６歳の年齢で２回の用量の五価（シナリオ４〜６）は、２５１件までの症例を防止することができた。
１６歳の年齢で、２回目の用量の五価のカバレッジは現在のＭｅｎＢカバレッジ率よりもわずかに高いため、１１歳の年齢で１回の用量のＭｅｎＡＣＷＹワクチンおよび１６歳の年齢で２回の用量の五価（シナリオ３）または１６歳の年齢で２回の用量の五価（シナリオ８、図１を参照）を用いて同様の数のＩＭＤ症例を防止することができる。
結論
ワクチン接種戦略の疾患への影響は、得られるカバレッジのレベルに直接関連する。

【0303】

１つまたは複数のＭｅｎＡＣＷＹまたはＭｅｎＢワクチンの用量を五価で置き換えることは、５つすべての髄膜炎菌血清型によって引き起こされたＩＭＤをさらに減少させることができる、
青年のワクチン投与の回数を減らす、
ＡＣＩＰの推奨とのコンプライアンスを潜在的に改善させ、医学的訪問および個々のＩＭＤ症例に対する公衆衛生応答の費用を減少させる。

【0304】

髄膜炎菌によって引き起こされた侵襲性髄膜炎菌性疾患（ＩＭＤ）は、稀な、迅速に進行する、潜在的に致命的な感染症であり、最も高い発生率が乳児および青年の年齢層で観察される。血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、およびＹが、全世界で疾患の９４％を占める。米国では、ほとんどの疾患が血清型Ｂ、Ｃ、およびＹによって引き起こされる。米国の２０１８年の調査データよると、ＩＭＤの発生率は１００，０００人の集団あたり０．１０件の症例であった。米国の青年および若年成人の間（１６〜２３歳の間で症例の６２％）およびすべての年齢層にわたって（症例の３６％）も、血清型Ｂが主要であった。

【0305】

米国予防接種諮問委員会（Ａｄｖｉｓｏｒｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ、ＡＣＩＰ）は、健康な青年をＩＭＤに対して保護することを助けるために、現在２種類の髄膜炎菌ワクチンを推奨している。四価髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹ（ＭｅｎＡＣＷＹ）ワクチンは、１１〜１２歳の年齢での一次用量および１６歳の年齢での追加免疫用量としてルーチン的に推奨されている。共有の臨床的意思決定に基づいて、髄膜炎菌血清型Ｂ（ＭｅｎＢ）ワクチン接種は１６〜２３歳の年齢（１６〜１８歳が好ましい）の青年および若年成人に推奨されている。２０１８年には、１３〜１７歳の年齢の青年の推定ＭｅｎＡＣＷＹワクチン接種率は、１回以上の用量で８６．６％であり、２回以上の用量で５０．８％であった。対照的に、１７歳の１７．２％のみが１回以上の用量のＭｅｎＢワクチンを受け、これらの個体の５０％未満しか複数用量ワクチン接種シリーズを完了しなかった。これらのデータは、米国における多くの青年が髄膜炎菌性疾患に対して完全に保護されていないことを示唆している。

【0306】

異なるワクチン接種スケジュールを用いた２つの別々のＭｅｎＢおよびＭｅｎＡＣＷＹワクチンの代わりに、５つすべての血清型によって引き起こされる髄膜炎菌性疾患に対して保護することを助けることができる単一ワクチン（すなわちＭｅｎＡＢＣＷＹ五価ワクチン）は、免疫化を単純化し、必要な注射の回数を減らし、ワクチン接種率を潜在的に改善させることができる。本発明者らは、五価ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンを使用した様々な種類の髄膜炎菌免疫化プログラムの、公衆衛生への影響を評価するためのモデルを開発した。
２．０ 方法
２．１ モデルの説明
米国において１０年の期間にわたって回避されたＩＭＤ症例の予想数を推定するために、集団ベースの動的モデルを開発した。モデル構造は、他の箇所に既に完全に記載したものと類似している。集団を１０１個の単年の年齢帯へと層別化し、それぞれの年齢帯中の個体は、翌年は次の年齢帯に移行させた。髄膜炎菌の保菌が感染性疾患の伝染の主要な原因であり、モデル計算における主な考慮事項であった。髄膜炎菌の保菌および伝染は、集団を１０個の相互排他的な年齢層（０〜５カ月齢、６〜１２カ月齢、１歳、２〜４歳、５〜９歳、１０〜１４歳、１５〜１９歳、２０〜２４歳、２５〜５９歳、および６０歳以上）へと層別化することによってモデリングした。それぞれの年齢層は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、およびＹの保菌者であり、ＩＭＤを発生して細菌をその年齢層内でまたは他の年齢層へ伝染させる、年齢に特異的な確率を有していた個体の割合によって特徴づけた。それぞれの年について、１０個の年齢層のそれぞれ中の髄膜炎菌保菌者の割合を以下に基づいて計算した：（１）前年の保菌有病率、（２）年齢層内および間での細菌伝染および混合パターン、（３）ワクチン接種した個体の数（ワクチン接種率）、ならびに（４）保菌獲得に対するワクチンの有効性。モデル内の１０年間の計画対象期間のそれぞれの年の間に、４つの異なるスケジュールシナリオの下でＭｅｎＡＣＷＹ、ＭｅｎＢ、および／またはＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンを受ける、標的年齢層中の個体の割合を推定した。すべてのワクチン接種シナリオについて、モデルは、ＩＭＤを発生した個体は合併症ありもしくはなしで回復したか、または死亡したかを推定した。
２．２ モデルのインプット
それぞれの血清型について、平均年齢群ベースのＩＭＤ発生率を２０１５〜２０１７年の疾病予防管理センター（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、ＣＤＣ）強化髄膜炎菌性疾患調査報告から導き出した。ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンは血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、およびＹに対して直接保護を提供すると仮定された。

【0307】

１回または２回の用量のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンを受ける青年における、血清型Ｂに対するワクチンの有効性の仮定は、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐワクチン（Ｔｒｕｍｅｎｂａ（登録商標）、二価ｒＬＰ２０８６、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ、ペンシルベニア州Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ）の公開された臨床研究に基づいた。本研究では、ワクチン接種の１カ月後に、ヒト補体を使用したアッセイ（ｈＳＢＡ）における血清殺菌活性の力価≧１：８（保護の標準相関は１：４以上である）を有する対象の百分率は、１回または２回の用量のＭｅｎＢ−ＦＨｂｐの後にそれぞれ２３．８％〜６７．６％および６９．１％〜１００％の範囲であった。これらのデータに基づいて、血清型Ｂに対して３０％および８５％ワクチンの有効性の推定を、それぞれ１回または２回の用量のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンを受ける青年について仮定した。

【0308】

血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹに対するワクチンの有効性の仮定は、ワクチン接種の１カ月後に、ウサギ補体を使用したアッセイ（ｒＳＢＡ）またはｈＳＢＡにおける血清殺菌活性の力価≧１：８を有する対象の百分率が、１回の用量のＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ後に８１．９％〜９７．４％の範囲であった、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴワクチン（Ｎｉｍｅｎｒｉｘ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ Ｌｔｄ、英国Ｓａｎｄｗｉｃｈ）の臨床研究からの公開された免疫原性および有効性のデータの再調査に基づいた。これらのデータに基づいて、血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹに対して９５％ワクチンの有効性の推定を仮定した。

【0309】

保菌有病率および伝染の低下が原因の、ワクチン接種していない個体の間接的保護は、血清型Ｂでは０％、血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹでは３６．２％と仮定し、どちらもＭｅｎＢおよびＭｅｎＡＣＷＹワクチンに関する公開文献から導き出した。

【0310】

示した血清型Ｂに対するＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンについての５年期間の保護および固定１０％の年間漸減率は、（１）以前の公開された保健経済モデル、および（２）ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐワクチンによって誘発された免疫応答の持続性を評価した、青年における第３相拡張研究からの臨床データの考慮に基づいて仮定した。臨床研究からの結果により、応答率は一次ワクチン接種後にピークとなり、続く１２カ月間にかけて減少し、その後、４８カ月までベースラインを超えて安定に保たれたことが示された。一次ワクチン接種の４８カ月後に、対象の１８．０％〜６１．３％が、保護の幅を評価するために使用した４つの多様な血清型Ｂ試験株にわたって定量下限以上（すなわち、株に応じて１：１６または１：８）のｈＳＢＡ力価を有していた。

【0311】

血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹに対するＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの保護の評価には（表２）、５年期間の直接保護および１０％の年間漸減率は、１１〜５５歳の年齢の青年および成人において、一次ワクチン接種後の１０年間にわたって、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴによって誘発された免疫応答の持続性を評価した研究からの臨床データに基づいて、保守的な仮定であった。ワクチン接種の１カ月後の９９．７％〜１００％と比較して、１０年目に、ワクチン接種した対象の７０．２％〜９０．７％が、血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹにわたってｒＳＢＡ力価≧１：８を有していた。現在、認可されたＭｅｎＡＣＷＹワクチンの間接的保護の持続期間および漸減率に関するデータは利用可能でない。したがって、このモデルでは、ＭｅｎＡＣＷＹの漸減率がＭｅｎＡＢＣＷＹに等しいと仮定した。
２．３ ワクチン接種シナリオおよび感度分析
ワクチン接種シナリオは、米国における既存の青年の髄膜炎菌ワクチン接種プラットフォーム（すなわち、１１歳および１６歳）に基づいて構築した。４つの一次ワクチン接種スケジュールを調査し、現在のスケジュールと比較した：（１）１１歳の年齢で１回の用量のＭｅｎＡＣＷＹワクチンおよび１６歳の年齢で２回の用量のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチン、（２）１１歳の年齢で１回の用量のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンおよび１６歳の年齢で２回の用量のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチン、（３）１６歳の年齢で２回の用量のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンのみ、ならびに（４）１１歳の年齢で２回の用量のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンおよび１６歳の年齢で１回の用量。

【0312】

それぞれの一次スケジュールのワクチン接種率の仮定は、２０１８年の全国免疫化調査−ティーン（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ Ｓｕｒｖｅｙ−Ｔｅｅｎ、ＮＩＳ−Ｔｅｅｎ）に報告された、観察された青年ワクチン接種率、ワクチン接種年齢、および必要な用量の数から取得した。ＮＩＳ−Ｔｅｅｎ調査で観察された傾向と一致して、１１歳の年齢の青年のうちのワクチン接種率は１６歳の年齢でよりも高く仮定され、１１歳の年齢での２回用量のシリーズのコンプライアンス（すなわち、推奨投薬シリーズの完了）は、１６歳の年齢での２回用量のシリーズのコンプライアンスよりも高いと仮定された。

【0313】

基本症例の分析には、１１歳の年齢での１回目の用量のワクチン接種率は、２０１８年に報告されたＭｅｎＡＣＷＹワクチンの一次用量の全体的カバレッジと同じであると仮定され（８６．６％）、１６歳の年齢での１回目の用量のワクチン接種率は、ＭｅｎＡＣＷＹ追加免疫用量のカバレッジと同じと仮定された（５０．８％）。これらのデータに基づいて、１回目の用量のＭｅｎＡＢＣＷＹを受けた１１歳の年齢の青年の８０％が２回用量のシリーズを完了するであろうと仮定された一方で、１６歳の年齢での２回用量のシリーズのコンプライアンスは、ＭｅｎＢワクチンシリーズの完了に関する利用可能な情報に基づいて５０％と仮定された。２０１８年に報告された１６歳の年齢での青年ワクチン接種率のレベルを使用して４つの髄膜炎菌ワクチン投与スケジュールのそれぞれについて感度分析を行った。仮定された最も高いカバレッジは、１１〜１２歳の年齢での１回以上の用量のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ワクチン（６８．１％）のものと同じであり、仮定された最も低いカバレッジは、１６歳の年齢での１回以上の用量のＭｅｎＢワクチン（１７．２％）のものと同じであった。一次投薬スケジュールおよびワクチン接種率の推定を考慮した後、合計１３個の異なるシナリオを評価した。
３．０ 結果
現在のワクチン接種スケジュールならびに２０１８年に報告されたワクチン接種率（ＭｅｎＡＣＷＹ、１１歳の年齢で８６．６％および１６歳の年齢で５０．８％、ＭｅｎＢ、１６歳の年齢で１７．２％）では、それぞれ２回の用量のＭｅｎＡＣＷＹおよびＭｅｎＢワクチンを用いたワクチン接種の、１１〜１６歳で合計４回の注射により、髄膜炎菌ワクチン接種なし（現在のシナリオ）と比較して、これから１０年間にわたって１６５件のＩＭＤの症例を潜在的に回避することができる。このシナリオの下、１９件の血清型Ｂ症例（防止可能な全ＩＭＤ症例の１１．５％）がこれから１０年間にわたって防止されると推定される。ＭｅｎＡＣＷＹおよび／またはＭｅｎＢワクチンのどちらかを五価ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンで置き換えることで、ワクチン接種スケジュールに応じて１回または２回の注射が廃止され、より多数のＩＭＤ症例が潜在的に回避される（シナリオ１、２、４、５、７、８、１０、および１１）。これは、１６歳でのＭｅｎＡＢＣＷＹワクチン接種率が２０１８年のＭｅｎＡＣＷＹワクチン接種率と同様に保たれる（５０．８％、シナリオ１、４、７、および１０）、またはおそらくは１１〜１２歳の年齢で観察されるわずかにより高いＨＰＶワクチン接種率まで上昇する（６８．１％、シナリオ２、５、８、および１１）ことを仮定した場合のものである。

【0314】

しかし、１６歳の年齢でのＭｅｎＡＢＣＷＹワクチン接種率が、現在の１６歳の年齢での２回の用量のＭｅｎＢワクチン接種スケジュール（１７．２％）と同じであると仮定すると、１１歳の年齢で１回の用量および１６歳の年齢で２回の用量のＭｅｎＡＢＣＷＹレジメン（すなわち、現在のスケジュールと同様）は、現在のワクチン接種スケジュールと比較してより少ないＩＭＤ症例（ｎ＝１３７人）を防止するであろう（図２、シナリオ６）。これらの結果は、１６歳の年齢で現在報告されているよりも低いＭｅｎＡＣＷＹワクチン接種率の仮定によって主に駆動されており、現在のスケジュールと比較してより低い血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹの回避された症例の推定数（ｎ＝８９人、６５．０％）をもたらす。
３．１ 基本症例ワクチン接種率の仮定
すべての基本症例ワクチン接種シナリオ（シナリオ１、４、７、および１０）において、ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチン接種率が、１１歳の年齢（８６．６％）または１６歳の年齢（５０．８％）でのＭｅｎＡＣＷＹワクチンの現在のカバレッジと同じであると仮定すると、ＭｅｎＡＣＷＹおよび／またはＭｅｎＢワクチンのどちらかを五価ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンで置き換えることで、現在のスケジュールよりも多数のＩＭＤ症例が回避されるであろう（範囲、１８９〜２５６件の回避されたＩＭＤ症例、スケジュールに応じる）。現在のワクチン接種スケジュールと比較した、より多数の回避された全ＩＭＤ症例は、より多数の防止された血清型Ｂ症例（範囲、５５〜１１１件の血清型Ｂ症例）によって主に駆動されている。評価したすべての基本症例ワクチン接種シナリオのうち、疾患の防止は、１１歳の年齢で２回の用量のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンおよび１６歳の年齢で１回の用量を投与することによって最大となるであろう（シナリオ１０、２５６件の回避された症例［１１１件の血清型Ｂ、１４６件の血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹ］）。
３．２ 代替ワクチン接種率に基づいた感度分析
１６歳の年齢でのＭｅｎＡＢＣＷＹワクチン接種率が、１１〜１２歳でのＨＰＶワクチンで観察されるレベル（６８．１％）まで上昇した場合、髄膜炎菌性疾患の防止に対する最大の影響は、１１歳で２回の用量のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンおよび１６歳の年齢で１回の用量によって提供されるであろう（シナリオ１１、２９９件の回避された全症例）。また、このスケジュールは、１０年期間にわたって防止可能な全症例の中で最大数および百分率の血清型Ｂ症例を防止するであろう（１４０件の回避された血清型Ｂの症例［４６．８％］）。次善のレジメンは、１１歳で１回の用量のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンおよび１６歳の年齢で２回の用量のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンであった（シナリオ５、２６３件の回避された症例、１０３件の血清型Ｂ、１５９件の血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹ）。さらに、現在推奨されている１１歳の年齢でＭｅｎＡＣＷＹの用量を含めても、含めなくても、同様の数の症例が回避されるであろう（シナリオ２［２３４件の回避された症例、７４件の血清型Ｂ、１５９件の血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹ］ならびに８［２２０件の回避された症例、７４件の血清型Ｂ、１４６件の血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹ］）。対照的に、ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチン接種率が、現在の１６歳の年齢での２回の用量のＭｅｎＢワクチン接種スケジュール（１回以上の用量で１７．２％）と同じであると仮定したレジメンは、より少ない回避された血清型Ｂの症例（シナリオ３、６、９、および１２）が主に原因で、はるかに少ない推定ＩＭＤ防止症例をもたらした。このワクチン接種率の仮定の下、最も少ない数の全ＩＭＤ防止症例は、１６歳の年齢で２回のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンのレジメンによるものとなるであろう（シナリオ９、９３件の回避された全症例［１９件の血清型Ｂ、７４件の血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹ］）。
４．０ 考察
本発明者らが知る限り、これは、米国の青年髄膜炎菌免疫化プラットフォームのコンテキストにおいて、５つの最も普及している疾患を引き起こす血清型（すなわち、血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、およびＹ）によって引き起こされる髄膜炎菌性疾患に対して保護する、五価ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの影響をモデリングする、最初の研究である。世界規模では、これら５つの血清型の様々な組合せを標的とする、様々な一価、二価、または四価の髄膜炎菌ワクチン配合物を使用して、髄膜炎菌性疾患に対して保護することを助ける。いくつかの国では、継続中の調査の努力により、循環している疾患を引き起こす髄膜炎菌血清型の変化が検出されている。これらの疫学的シフトは、ＩＭＤに対する包括的な保護のためにＭｅｎＡＣＷＹワクチンを含めるよう、一部の国家的なワクチン接種戦略の変化を促した。ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンを配備することにより、世界中でこれらの５つの血清型によって引き起こされたと推定されるＩＭＤ症例の９４％に対して潜在的に保護されるであろう。

【0315】

米国では、青年のＭｅｎＡＣＷＹワクチン接種が２００５年から推奨されており、ＭｅｎＢワクチン接種の推奨が２０１５年に発行された。単一の五価ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンが、２つの異なるワクチンを異なる年齢で使用する複数回の注射の必要性を廃止することによって、免疫化スケジュールを単純化することができ、ワクチン接種率を潜在的に改善させ、ほとんどの普及している疾患を引き起こす血清型に対する保護を増強させる。米国におけるＭｅｎＡＣＷＹおよびＭｅｎＢワクチンの現在のスケジュールおよびワクチン接種率に基づいて、本発明者らのモデルは、ＭｅｎＡＣＷＹおよびＭｅｎＢワクチンをどちらも用いたワクチン接種が、ワクチン接種なしと比較して、１０年間にわたって１６５件のＩＭＤの症例を潜在的に回避できると推定する。ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチン接種率が、２０１８年のＣＤＣ ＮＩＳ−Ｔｅｅｎ調査で留意された現在のＭｅｎＡＣＷＹワクチン接種率と同様であると仮定すると、本発明者らのモデルは、１つまたは複数のＭｅｎＡＣＷＹまたはＭｅｎＢワクチンの用量をＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンで置き換えることで、米国の青年の間で２５６件もの回避されたＩＭＤ症例がもたらされる一方で、同時に推奨ワクチン注射回数が減ると推定する。実際、本研究において調査したシナリオのほとんどは、現在のスケジュールと比較して、より多数の回避された症例に関する単一のＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンの付加利点を実証している。

【0316】

免疫化が典型的に起こる防止的な健康訪問の割合が１６歳より後に着々と減少することが部分的な原因で青年の免疫化送達は困難であり、また、小児科医から、青年の免疫化への関与が典型的により少ない医療提供者への移行と組み合わせた場合に、この年齢群における疾患に対する最適以下の保護に寄与し得る。ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチン接種のための年齢ベースのプラットフォームが、青年が複数用量のレジメンを受けてそれに応じ、注射および訪問の回数を減らす可能性がより高い年齢でのワクチン投与を可能にすることによって、青年の免疫化を支援および触媒するであろう。重要なことに、ＭｅｎＡＣＷＹコンジュゲートワクチンおよび組換えタンパク質ＭｅｎＢワクチンを用いた青年の免疫化はどちらも、一次ワクチン接種後に保護的免疫応答を誘発し、追加免疫用量後に頑強な応答を誘発する。これらのデータは一緒になって、既存の米国青年のＭｅｎＡＣＷＹおよびＭｅｎＢ免疫化プラットフォームを支援するだけでなく、青年がワクチン接種シリーズを１１から１６歳の間のどこかの年齢で開始し、最も高いリスクの期間の間中保護を維持することができる、柔軟なＭｅｎＡＢＣＷＹワクチン接種スケジュールの支援もする。

【0317】

研究により、社会経済状況、教育、および人種も、ワクチン接種の認識、アクセス、および利用、ならびにシリーズ完了率において役割を果たすことが示されている。したがって、ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンは、髄膜炎菌ワクチン接種の推奨を単純化し、それによってワクチンのアクセスの問題を減らし、既存のＭｅｎＢおよびＭｅｎＡＣＷＹワクチンの推奨を取り囲む混乱を排除することによって、これらの格差を減らすことを助けることができる。さらに、組合せワクチンは、一般に、様々な年齢層においてワクチン接種率を改善させることが示されている。

【実施例19】

【0318】

ＴＲＵＭＥＮＢＡに対するヒト免疫応答の幅：ｈＳＢＡにおいて感受性であるＭｅｎＢ株によって発現されるｆＨＢＰ変異体の要約
導入および目的：ＴＲＵＭＥＮＢＡ（二価ｒＬＰ２０８６）、髄膜炎菌血清型Ｂ（ＭｅｎＢ）疾患を防止するためのワクチンは、２つのタンパク質抗原、髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）の変異体を含む。ｆＨＢＰは２つのサブファミリー、ＡおよびＢとして存在する。それぞれのサブファミリー内では、数百個のユニークなｆＨＢＰ変異体が同定されている。この配列多様性にもかかわらず、それぞれのサブファミリーから１つのタンパク質を含有するワクチンが、ＭｅｎＢ株にわたって幅広いカバレッジを誘導することが実証され、これはｆＨＢＰ変異体の多様性を表す。認可は、ヒト補体を使用した血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）において侵襲性ＭｅｎＢ株の補体媒介性死滅を開始させる抗体を誘発する、ワクチンの能力に基づいた。髄膜炎菌性疾患の風土性の性質が原因で、個体がどのｆＨＢＰ変異体に暴露され得るかを予測することはできない。そのため、ＴＲＵＭＥＮＢＡによって与えられたカバレッジを調査し続け、免疫カバレッジの幅を例示するさらなる証拠を本明細書中に提示する。

【0319】

材料および方法：ＭｅｎＢ侵襲性株（ｎ＝１０９個）を選択して、ＴＲＵＭＥＮＢＡのカバレッジ幅を確認した。株は、それぞれ２２および１６個のユニークなサブファミリーＡおよびサブファミリーＢ ｆＨＢＰ変異体をコードしていた。細菌表面でのｆＨＢＰの発現は、フローサイトメトリー髄膜炎菌抗原表面発現（ＭＥｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ Ａｎｔｉｇｅｎ ＳＵＲｆａｃｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、ＭＥＡＳＵＲＥ）アッセイを使用して決定した。調査用ｈＳＢＡは、若年成人からのワクチン接種前および後の血清（対象を整合した）を使用して行った。ワクチン接種前および後の血清試料の間でｈＳＢＡ力価の４倍の上昇が達成された場合に、株はＴＲＵＭＥＮＢＡ免疫血清に対して感受性であるとみなした。

【0320】

結果：１０９個の株のうち、８７個（ほぼ８０％）がｈＳＢＡにおいてＴＲＵＭＥＮＢＡ免疫血清に対して感受性であった。これには、以前に報告された変異体に加えて、ｆＨＢＰ変異体Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、およびＢ１０７を発現する株が含まれていた。死滅させることができなかった株の大多数は、ｈＳＢＡにおいて殺菌死滅を開始させるために十分とみなされるレベル未満のｆＨＢＰ発現レベルを有していた。図３、表１、表２、および表３を参照されたい。

【0321】

【表20】

【0322】

表２１
ｈＳＢＡにおいてＴＲＵＭＥＮＢＡ免疫血清で死滅したＭｅｎＢ株によって発現されたｆＨＢＰ変異体
（Ａ０５（配列番号１）およびＢ０１（配列番号２）との％アミノ酸配列同一性）

【0323】

【表21】

【0324】

表２２
１０００ＭＦＩ未満であり、ｈＳＢＡにおいてＴＲＵＭＥＮＢＡ免疫血清で死滅しなかった株によって発現されたｆＨＢＰ変異体^＊（ワクチン抗原Ａ０５（配列番号１）およびＢ０１（配列番号２）との％アミノ酸配列同一性）

【0325】

【表22】

【0326】

結論：ｈＳＢＡは髄膜炎菌ワクチンの有効性の代用として認識されている。アッセイの複雑さが、数百個のユニークなｆＨＢＰ配列変異体のそれぞれを発現するＭｅｎＢ株に対するＴＲＵＭＥＮＢＡ免疫血清の殺菌活性の実証を妨げている。ＴＲＵＭＥＮＢＡによって与えられた免疫カバレッジの幅を例示するために、本発明者らは、さらなる多様なｆＨＢＰ変異体を発現するＭｅｎＢ株が、ワクチン抗原に非相同的であるにもかかわらず、ｈＳＢＡにおいて死滅させられる場合があることを示す。

【実施例20】

【0327】

二価ＦＨｂｐ髄膜炎菌Ｂワクチンの幅広いカバレッジを評価するための、多様な株の選択
髄膜炎菌の伝染は、通常、上気道の無症候性コロニー形成をもたらすが、一部の個体においては、菌血症および侵襲性髄膜炎菌性疾患（ＩＭＤ）が発生する。ＩＭＤは、一般的に髄膜炎および／または敗血症として提示され、肺炎、敗血症性関節炎、咽頭蓋炎、および中耳炎がより低い頻度で観察される。高い致死率がＩＭＤ（１０％〜１５％）と関連しており、生存者の約２０％が、肢の切断、聴覚損失、および神経性機能障害などの重篤な生涯の続発症を有する。

【0328】

世界中でほぼすべての髄膜炎菌性疾患が１２個の特徴づけられた髄膜炎菌血清型のうちの６個（すなわち、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、Ｘ、およびＹ）によって引き起こされている。莢膜多糖に基づく有効なワクチンが血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹについて開発されている。しかし、ヒト神経細胞上に存在するポリシアル酸構造との類似度が原因で、ＭｅｎＢ多糖の免疫原性は乏しい。近年、特に髄膜炎菌血清型Ｂ（ＭｅｎＢ）が、欧州、米国、カナダ、オーストラリア、およびニュージーランドにおけるＩＭＤの大部分と関連付けられている。外膜小胞（ＯＭＶ）に基づくワクチンは、単一のＭｅｎＢ大発生株によって引き起こされた流行を制御するための使用が成功したが、生じた免疫応答は主に高度に可変性のポリンＡタンパク質（ＰｏｒＡ）に対するものである。したがって、有効性は一般に標的株に限定される。その結果、多様なＭｅｎＢ株にわたって保護的殺菌性抗体を誘導することができる、表面が露出したタンパク質が、幅広く有効なＭｅｎＢワクチンの開発のために探求されている。

【0329】

ＭｅｎＢのほぼすべての株上で発現される、保存的な表面が露出したリポタンパク質である、Ｈ因子結合タンパク質（ＦＨｂｐ、ＬＰ２０８６およびＧＮＡ１８７０としても知られる）が、そのような標的として同定された。アミノ酸配列に基づいて、ＦＨｂｐ変異体は２つの免疫学的に別個のサブファミリー（サブファミリーＡおよびサブファミリーＢと呼ぶ）へと分離され、それぞれのＭｅｎＢ株は単一のサブファミリー変異体を発現する（図１Ａを参照）。

【0330】

ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ（ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）、二価ｒＬＰ２０８６、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ、米国ペンシルベニア州Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ）は、一方はサブファミリーＡ（変異体Ａ０５）からで他方はサブファミリーＢ（変異体Ｂ０１）からの、等量の２つの組換え脂質付加ＦＨｂｐ抗原から構成される、二価の組換えタンパク質ＭｅｎＢワクチンである。重要なことに、このＦＨｂｐ変異体の組合せが、多様なＭｅｎＢ株に対して保護を提供できることが予測されている。ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐは、米国、カナダ、欧州、およびオーストラリアを含めたいくつかの国および地域において、ＩＭＤの防止について認可されている。別のＭｅｎＢワクチン、ＭｅｎＢ−４Ｃ（Ｂｅｘｓｅｒｏ（登録商標）、４ＣＭｅｎＢ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ｓｒｌ、イタリア、シエナ）は、組換えＦＨｂｐ成分（サブファミリーＢからの非脂質付加変異体１．１）ならびに２つの他の組換えタンパク質抗原およびＯＭＶも有する。したがって、ＭｅｎＢ−４Ｃは、単一の抗原の２つの変異体を含有して幅広いカバレッジを与えるＭｅｎＢ−ＦＨｂｐとは異なる。

【0331】

ヒト補体を使用した血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）は、補体依存性、抗体媒介性の、髄膜炎菌細菌の溶解を測定する。ｈＳＢＡ力価とは、アッセイ細菌の５０％以上を死滅させる、最も高い血清の希釈率として定義される。ｈＳＢＡ力価≧１：４が髄膜炎菌性疾患に対する許容される保護の相関であり、この相関に基づいたｈＳＢＡ応答率が髄膜炎菌ワクチンの有効性の代用して使用されている。ＳＢＡ応答率は、血清型ＣおよびＡ多糖ワクチンの天然の保護と具体的に相関されている。血清型に特異的な多糖は可変性ではないため、それぞれの血清型からの単一の株が、幅広いワクチン接種率を推論するために十分であった。また、ＭｅｎＢ ＯＭＶワクチンも有効であり、ワクチンに誘発されたｈＳＢＡ力価は、流行を引き起こす標的株に対する保護と相関した。タンパク質配列の多様性および発現レベルのばらつきが異なる髄膜炎菌性疾患株間で異なることを考慮すると、タンパク質に基づくワクチンの株カバレッジを正確に予測することは、莢膜多糖を標的とするワクチンについてよりも、ｈＳＢＡを使用してより複雑である。たとえば、（ＰｏｒＡは血清殺菌抗体の主要な標的であり、ＯＭＶワクチンの免疫化後に保護を与える。ＰｏｒＡは、小さな細胞表面の露出した領域が高い度合の配列多様性を有する、細胞表面ポリンである。米国において散発性のＭｅｎＢ疾患を引き起こす株の約８０％に対して保護するために、２０個の異なるＰｏｒＡ血清亜型を発現する株で保護的免疫を実証する必要があるであろうことが推定される。歴史的に、ＯＭＶワクチンは１つのＰｏｒＡを含有しており、ワクチン抗原と比較してアミノ酸配列が非相同的であるＰｏｒＡ配列を有する株に対する保護が実証されていない。したがって、ワクチンに誘発された抗体が髄膜炎菌性疾患株に対して有効となることができることを実証するための、代表的な試験株の選択は、タンパク質に基づくワクチンにおいて最も重要である。

【0332】

前臨床および初期臨床研究においてＭｅｎＢ−ＦＨｂｐによって誘発された免疫血清は、ワクチンＦＨｂｐ変異体Ａ０５およびＢ０１に非相同的なＦＨｂｐサブファミリーＡおよびＢ変異体を含有する多様なＭｅｎＢ株を死滅させることができる、幅広い殺菌性抗体を実証した。ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐカバレッジの潜在的な幅の初期評価では、多様なＦＨｂｐ変異体、地理的起源、および遺伝的背景を有する１００個のＭｅｎＢ分離株を、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ免疫ウサギ血清を使用したｈＳＢＡにおいて試験した。試験した１００個の株のうち、８７個がこれらのｈＳＢＡ中で死滅した。死滅しなかった１３個の株の分析により、所定のＭｅｎＢ株上での閾値ＦＨｂｐ表面発現レベルがｈＳＢＡ応答に影響を与えたことが示唆された。続いて、それを超えると分離株がｈＳＢＡにおいて死滅すると予測される、閾値ＦＨｂｐ表面発現レベルを決定した。株の感受性を決定する潜在的な要因の追加の調査により、死滅が、ＦＨｂｐ配列変異体、多座配列型、またはＰｏｒＡ亜型とは大きく独立していたことが見出された。

【0333】

臨床試験のために幅広い抗原性および疫学的多様性を有する株を選択するために、１２００個を超える侵襲性ＭｅｎＢ疾患分離株を米国および欧州の研究室および衛生機関から収集して、収集時の同時期に存在したＭｅｎＢ分離株の有病率を表した。すべての株がＦＨｂｐ遺伝子を含有していた。ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ免疫原性研究において使用するために、不偏手法を使用して４つの抗原的および疫学的に多様な代表的な試験株を選択した。選択基準は、ワクチン抗原に非相同的であり、ＭｅｎＢ疾患分離株におけるＦＨｂｐの多様性を十分に反映するＦＨｂｐ変異体の発現、低から中程度のＦＨｂｐ表面発現レベル、ならびに低ベースラインのｈＳＢＡ血清陽性率を含んだ。これら４つの一次ＭｅｎＢ試験株は、両方のＦＨｂｐサブファミリーからのＦＨｂｐ変異体を発現する（株［変異体］：ＰＭＢ２００１［Ａ２２］、ＰＭＢ８０［Ａ５６］、ＰＭＢ２７０７［Ｂ２４］、およびＰＭＢ２９４８［Ｂ４４］、図１Ａを参照）。

【0334】

４つの一次ＭｅｎＢ試験株を使用して作成された免疫原性データを補い、４つの一次ＭｅｎＢ試験株に対する免疫応答がＭｅｎＢ疾患を引き起こす分離株によって発現されたＦＨｂｐ変異体の多様性に対する免疫応答の予測的なものであることを実証するために、１０個の追加の試験株を使用したｈＳＢＡを開発した。１０個の追加の試験株は、米国および欧州においてＭｅｎＢ疾患を引き起こす株中に見つかる、普及しているＦＨｂｐ変異体を含むように選択した。ここでは、本発明者らは（ｉ）１０個の追加の試験株を選択するために使用した戦略および基準を説明し、（ｉｉ）４つの一次ＭｅｎＢ株を使用してｈＳＢＡによって測定した免疫応答が、１０個の追加の試験株を使用して得られた反応の予測的なものであることを実証し、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐによって誘発された免疫応答の幅広いカバレッジをさらに実証および支援するデータを提示する。
結果
追加のＭｅｎＢ試験株の供給源および選択基準
１０個の追加のＭｅｎＢ試験株のうちの９個は、１２６３個の侵襲性疾患を引き起こすＭｅｎＢ株のコレクション（ＭｅｎＢ単離体コレクション）から得た。ＭｅｎＢ単離体コレクションには、米国株は、集団の約１３％をカバーするアクティブ細菌コア調査（Ａｃｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｃｏｒｅ Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ）サイト（２０００〜２００５年）からのものであった。欧州分離株（２００１〜２００６年）は、ノルウェー、フランス、チェコ共和国の公衆衛生研究所、ならびにマンチェスター健康保護局（イングランド、ウェールズ、および北アイルランドがカバーされる）からのものであり、系統的に収集し（国の参照研究所で受け取った順番に７個ごとまたは８個ごとの単離体を含めた）、期間中の侵襲性ＭｅｎＢ分離株の約１３％を表していた。ＦＨｂｐ変異体Ａ０７を発現する株は、スペインおよびドイツからのさらに５５１個の疾患を引き起こすＭｅｎＢ株が含まれるＭｅｎＢ単離体コレクションの拡張から得た（ｎ＝１８１４個）。ＭｅｎＢ単離体コレクション中のＡ０７発現株として使用した拡張ＭｅｎＢ単離体コレクションは、これらの株上でのＦＨｂｐの低い表面発現、高いベースライン血清陽性、および補体の容易に利用可能な供給源の欠如が理由で適切でなかった。

【0335】

追加のＭｅｎＢ試験株を選択するために使用した基準は、（ｉ）米国および／または欧州においてＭｅｎＢ疾患を引き起こす株間のＦＨｂｐ変異体有病率、（ｉｉ）ＭｅｎＢ一次試験株によって発現されるものと異なるために必要なＦＨｂｐ変異体、（ｉｉｉ）株が、それが属する変異体群の代表的なものであることを確実にするために、それぞれのＦＨｂｐ変異体群の中央値レベル以下のｉｎ ｖｉｔｒｏ ＦＨｂｐ発現レベル、（ｉｖ）ｈＳＢＡにおける技術的適合性、ならびに（ｖ）変異体群の主要なクローン複合体としてみなされること（主要な複合体が存在する場合）である。これらの基準を満たす株は、適切なヒト補体ロットが十分に利用可能であることを含めて、ｈＳＢＡと技術的に適合性があることも必要である（図２）。カットオフレベル未満（すなわち、それぞれのＦＨｂｐ変異体群の中央値レベル以下）の発現レベルを有するそれぞれのＦＨｂｐ変異体群中の株をランダムに選択し、必要な遺伝的、表現型、およびｈＳＢＡ開発の基準を満たすＦＨｂｐ変異体群内の最初の株が追加のＭｅｎＢ試験株となる。この方法の例外を、第２相研究におけるその以前の使用に基づいて、ＵＳ ＦＤＡと協力し、かつ提供された指針を使用して選択したＦＨｂｐ変異体Ｂ０３を発現する株に対して行った。
追加のＭｅｎＢ試験株の特徴
１０個の追加の選択されたＭｅｎＢ試験株は、４つの一次試験株（Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、Ｂ４４）中のものとは異なり、ワクチン抗原と比較して異なる配列を有する、ＦＨｂｐ変異体Ａ０６、Ａ０７、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２９、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１６を発現する（表２３）。４つの一次試験株によって発現された特定の変異体は、ＭｅｎＢ単離体コレクション中の疾患を引き起こす分離株の４２．０％（５３０／１２６３個）に存在し、１０個の追加の試験株によって発現された特定の変異体は、ＭｅｎＢ単離体コレクション中の疾患を引き起こす分離株の追加の重複しない３８．８％（４９０／１２６３個）に存在する（図１Ｂ）。

【0336】

【表23】

【0337】

免疫原性分析：１０個の追加の株についてｈＳＢＡ力価≧ＬＬＯＱを有する対象
４つの一次株を使用して、青年および若年成人における２つの中心的な第３相研究に参加している対象において、２または３回の用量のＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ後の血清学的応答を評価した。１０個の追加のｈＳＢＡ株に対する血清学的応答を研究対象の部分群で評価した。大多数の対象が、用量２の１カ月後および用量３の１カ月後に、一次（それぞれ６４．０％〜９９．１％および８７．１％〜９９．５％）ならびに１０個の追加のＭｅｎＢ試験株（それぞれ５１．６％〜１００．０％および７１．３％〜９９．３％）のそれぞれについて、ｈＳＢＡ≧定量下限（ＬＬＯＱ、すなわち、株に応じてｈＳＢＡ力価が１：８または１：１６に等しい）を有していた（表２４）。一次および追加のＭｅｎＢ試験株では、ｈＳＢＡ力価≧ＬＬＯＱを達成する対象の割合の、ベースラインからの実質的な増加がＭｅｎＢ−ＦＨｂｐレシピエント（０、２、６カ月スケジュール）で、２回目のＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ用量の後に観察され、３回目の用量の後にさらなる増加が観察された。

【0338】

【表24-1】

【0339】

【表24-2】

【0340】

一次および追加の株の陽性予測値
一次ＭｅｎＢ試験株と１０個の追加のＭｅｎＢ試験株との間の、ワクチン誘導性ｈＳＢＡ応答の関係性を評価した（表２５）。ＦＨｂｐサブファミリー内で、陽性予測値（ＰＰＶ）は、用量３の１カ月後にほとんどの一次／追加の株の対で８０％を超えていた。したがって、一次試験株を使用してｈＳＢＡで測定した免疫応答は、同じサブファミリー内の追加の株の免疫応答の高度に予測的なものであった。用量２の１カ月後のＰＰＶは、通常は用量３の１カ月後に観察されたものよりもわずかに低く、研究にわたって、サブファミリーＡおよびＢ株の対でそれぞれ６１．６％〜１００％および７０．０％〜１００％の範囲であった。要約すると、一次および追加の株のｈＳＢＡ応答と比較して、すべてのＰＰＶが保護的応答について高い予測可能性を示した。

【0341】

【表25-1】

【0342】

【表25-2】

【0343】

考察
保護の幅を決定するためのＭｅｎＢ−ＦＨｂｐワクチンの臨床評価の重大な構成成分は、配列および発現のばらつきが、収集時の同時期に存在したＭｅｎＢ疾患を引き起こす株の多様性の代表的なものである、表面タンパク質抗原を有する試験株を使用したｈＳＢＡの開発であった。青年および若年成人における第３相研究に記載のように、すべてワクチン抗原に非相同的なＦＨｂｐ変異体を発現する４つの一次ＭｅｎＢ試験株のｈＳＢＡ応答データは、二価のＭｅｎＢ−ＦＨｂｐワクチンが、多様な疾患を引き起こす髄膜炎菌株にわたって幅広いカバレッジを提供することを強く示唆している。本明細書中に記載の１０個の追加のＭｅｎＢ試験株は、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐの支援的な免疫学的データを提供し、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐに対する免疫応答を測定するための４つの一次試験株の使用の妥当性をさらに確認する。４つの一次試験株について得られた応答が、追加の１０個の試験株について得られた応答の予測的なものであるため、一次株をｈＳＢＡにおいて評価することによって得られた免疫学的応答は、侵襲性ＭｅｎＢ疾患を引き起こす株の多様性の代表的なものである。

【0344】

ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐの認可研究における仮説試験駆動の免疫原性評価では、不偏手法を使用して、米国および欧州で収集した疾患を引き起こすＭｅｎＢのパネルから４つの一次ＭｅｎＢ試験株を選択した。試験株がＭｅｎＢ分離株の抗原多様性の代表的なものであることを確実にするために特定の選択基準を考慮して、同様の方法を使用して１０個の追加のＭｅｎＢ ｈＳＢＡ試験株を選択した。合わせると、１４個のＭｅｎＢ試験株が普及している髄膜炎菌ＦＨｂｐの大多数を表し、ＦＨｂｐ変異体は、米国および欧州において循環中の侵襲性疾患を引き起こす分離株の約８０％に対応する。

【0345】

陽性予測値の分析を使用して、同じサブファミリー内のＦＨｂｐを発現する一次および追加の試験株間の、ｈＳＢＡによって測定した免疫応答の関連を決定した。すべてのＰＰＶ分析が、追加の株に対して観察された保護的応答についての、一次株に対する保護的応答の高い予測可能性を示した。これらのＰＰＶ分析は、４つの一次ＭｅｎＢ試験株に対して観察された応答が、ワクチン抗原変異体とは異なる、追加の配列が多様なＦＨｂｐ変異体を発現する、他の疾患を引き起こすＭｅｎＢ株に対する応答の代表的なものであることを示す。

【0346】

４つの一次および１０個の追加のＭｅｎＢ試験株に対する、ｈＳＢＡによって測定したＭｅｎＢ−ＦＨｂｐに誘発された応答を、個々のワクチンレシピエントからの血清を使用して評価した。機能的殺菌性抗体を有する、ワクチン接種した対象の割合を決定することによって、個々のレベルでのＭｅｎＢ−ＦＨｂｐカバレッジの幅の評価が決定され、これは、プールした血清では可能ではない。４つの一次ＭｅｎＢ試験株は、ＭｅｎＢ疾患を引き起こすＩＭＤの多様性を表すように選択し、したがって、ｈＳＢＡを使用したＭｅｎＢ−ＦＨｂｐのカバレッジの潜在的な幅を支援する。ｈＳＢＡ力価≧１：４を有する個体の応答が許容される保護の相関であり、髄膜炎菌ワクチンの有効性の代用である。したがって、応答は、ワクチン接種率の幅の包括的かつ生物学的に予測的な評価を提供する。４つの一次ＭｅｎＢ試験株に対するｈＳＢＡ応答の、ワクチン接種率の幅を説明する関連性は、欧州および米国からの多様かつ同時期に存在するＭｅｎＢ大発生株に対して、ならびにＭｅｎＢ疾患を引き起こさない株（すなわち、髄膜炎菌血清型Ｃ、Ｙ、Ｗ、およびＸ）に対しても観察される、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐによる保護的殺菌性応答の実証によって支援される。

【0347】

別の方法である酵素結合免疫吸着アッセイに基づく髄膜炎菌抗原タイピングシステム（ＭＡＴＳ）は、ＭｅｎＢ−４Ｃのワクチン接種率を予測するために使用されている。しかし、ＭＡＴＳはＭｅｎＢ−４Ｃに特異的な抗原のカバレッジのみを予測し、異なる抗原組成を有する他のワクチンのカバレッジの評価には有用でない。具体的には、ＭＡＴＳは殺菌活性ではなく抗原発現を測定し、それぞれの抗原の参照株と比較した相対効力として報告される。構成成分抗原のうちの任意の１つの相対効力がＭｅｎＢ−４Ｃ免疫血清の殺菌活性と釣り合っている場合に（すなわち、陽性の殺菌閾値を達成する）、株は死滅に対して感受性であるとみなされる。しかし、ワクチン接種した個体からの血清をＭＡＴＳで使用しないため、アッセイでは免疫化に応答してｈＳＢＡ力価≧１：４（すなわち保護の相関）を達成する集団の割合を予測することができない。

【0348】

注目すべきは、ｈＳＢＡを行うことに制限が存在することである。たとえば、ｈＳＢＡは労働集約的であり、特により多数の株および／または血清を評価する場合に、大量の血清およびアッセイに適合性がある補体を必要とする場合がある。さらに、ｈＳＢＡにおいて使用するアッセイ試薬および株の性能の研究室間の相違が、ワクチン間の応答の比較およびカバレッジ幅の評価を制限する。ＰＰＶ分析の知られている制限は、有病率に対する応答の程度の依存性である（すなわち、この設定では、追加の株についてｈＳＢＡ≧ＬＬＯＱを達成する対象の割合）。しかし、この分析では、追加の株に対して一定範囲のワクチン接種後応答が存在したが（用量２および用量３の１カ月後）、ＰＰＶは均一に高かったことが注目すべきである。

【0349】

まとめると、１０個の追加のＭｅｎＢ ｈＳＢＡ試験株から得られた免疫原性データは４つの一次ＭｅｎＢ ｈＳＢＡ試験株から得られた応答データを支援しており、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐによって与えられたＭｅｎＢ分離株の幅広いカバレッジを確認している。これは、ＭｅｎＢ株の疫学を使用して、ワクチン抗原の配列および発現に関して、認識されている保護の代用（ｈＳＢＡ）と併せて、ＭｅｎＢワクチンの誘発された免疫応答の厳密な評価を応用した、最初の研究であり、この知識を使用して、ワクチン認可がもたらされた。
方法
ＦＨｂｐ表面発現の定量
すべての株について、ＦＨｂｐ表面発現を、両方のＦＨｂｐサブファミリーに共通した保存的なＦＨｂｐエピトープのモノクローナル抗体（ＭＮ８６−９９４−１１）認識を使用したフローサイトメトリーアッセイである、ＭＥＡＳＵＲＥアッセイによって定量した。ＭＥＡＳＵＲＥアッセイの詳細は既に記載した。それぞれのＦＨｂｐ変異体群について採用したカットオフレベルは、２５．２％の相対標準偏差の精度推定を使用して、観察された中央値平均蛍光強度＋１標準偏差であった。
免疫原性分析
１０個の追加のＭｅｎＢ試験株のそれぞれを、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐの２つの中心的な第３相研究に参加する対象からの試験血清に対するｈＳＢＡにおいて使用した。それぞれの研究からの合計９００人の対象を３つの部分組に分割し（それぞれｎ＝３００人）、１０個の追加の試験株をこれらの部分組にわたって割り当てて、２つの部分組にそれぞれ３つの試験株が含まれ、１つの部分組に４つの試験株が含まれるようにした。それぞれの研究から１５０個以上の評価可能なｈＳＢＡ結果が得られることを確実にするために、部分組には３００人の対象からの試料を含めた。第３相臨床研究血清を使用してｈＳＢＡによって測定した免疫応答は、株に応じて１：８または１：１６に等しいｈＳＢＡ力価であったアッセイＬＬＯＱに基づいた。
陽性予測値分析
ＦＨｂｐサブファミリー内のそれぞれの一次／追加の株の対のＰＰＶは、一次株応答者（一次株についてｈＳＢＡ力価≧ＬＬＯＱ）の合計数の中で追加の株に応答する対象の割合（追加の株についてｈＳＢＡ力価≧ＬＬＯＱ）として定義した。ＰＰＶ分析は、４つの一次株に対する観察されたｈＳＢＡ応答が、同じサブファミリーからのＦＨｂｐを発現する追加の株に対する免疫応答を予測したかどうかを評価した。

【実施例21】

【0350】

五価髄膜炎菌（ＭｅｎＡＢＣＷＹ）ワクチンは安全かつ良好に耐用され、健康な青年および若年成人の第２相研究において、共投与したＭｅｎＢ−ＦＨｂｐおよびＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭに劣らない免疫原性を有する
背景：髄膜炎菌血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、ＷおよびＹが、世界中でほぼすべての髄膜炎菌性疾患を引き起こしている。ワクチン接種は血清型Ｂ（ＭｅｎＢ）および四価（ＭｅｎＡＣＷＹ）ワクチンの異なる投薬推奨によって複雑になっており、これは単一の五価ワクチンによって解決することができる。青年および若年成人における本研究では、２つの認可ワクチン、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ（ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）、二価ｒＬＰ２０８６）およびＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ（ＮＩＭＥＮＲＩＸ（登録商標））を単一のワクチンへと合わせる新しい五価ＭｅｎＡＢＣＷＹワクチンを評価した。

【0351】

方法：この進行中の、ランダム化された、制御された、観察者盲検の、多施設研究（ＮＣＴ０３１３５８３４）では、ＭｅｎＢワクチン未経験およびＭｅｎＡＣＷＹ未経験または経験済みの健康な１０〜２５歳を、１：２でＭｅｎＡＢＣＷＹ（０、６カ月）またはＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ（０、６カ月）およびＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ（０カ月）へとランダム化した。免疫応答は、血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹ株ならびに４つの多様なワクチン非相同的ＭｅｎＢ株に対する、ヒト補体を用いた血清殺菌活性アッセイ（ｈＳＢＡ）によって測定した。エンドポイントは、ベースラインから力価の４倍以上の上昇を達成する対象の百分率を含んだ。免疫応答の非劣性は１０％のマージン（９５％のＣＩ下限＞−１０％）で先験的に評価した。安全性を評価した。

【0352】

結果：用量２に続いて、高い百分率のＭｅｎＡＢＣＷＹ（ｎ＝５４３人）およびＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ（ｎ＝１０５７人）のレシピエントが４つのＭｅｎＢ株のそれぞれに対して４倍以上の上昇（７５．８〜９４．７％対６７．４〜９５．０％）、４つの株すべての合計に対して少なくとも定量下限の力価（７９．９％対７４．３％、図１Ａ）を達成した。ＭｅｎＡＢＣＷＹは、５つすべてのエンドポイントについてＭｅｎＢ−ＦＨｂｐに非劣性であった。また、ＭｅｎＡＢＣＷＹは単一のＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ用量にも非劣性であり、以前のＭｅｎＡＣＷＹ経験に応じて、それぞれ用量１または２の後にＭｅｎＡＢＣＷＹレシピエントの７５．５〜９６．９％および９３．０〜９７．４％が、血清型Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹに対して４倍以上の上昇を達成した（図１Ｂ）。ＭｅｎＡＢＣＷＹまたはＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ後の局所反応および全身性事象は同様に頻繁であり、ほとんどは重篤度が軽度／中等度であり（図２）、ＭｅｎＡＣＷＹ経験に影響を受けなかった。
６．２．２．３ ＭｅｎＡＢＣＷＹ臨床開発プログラムからの免疫原性結果
（研究Ｂ１９７１０５７）研究のこの部分は全体的研究の第２相構成成分であった。ＭｅｎＡＢＣＷＹのＭｅｎＢ構成成分では、ワクチン接種２の１カ月後にｈＳＢＡ力価のベースラインから４倍の上昇を達成するＭｅｎＡＢＣＷＹおよび二価ｒＬＰ２０８６＋ＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭレシピエントの割合は、ＰＭＢ８０（Ａ２２）ではそれぞれ７５．８％および７３．８％、ＰＭＢ２００１（Ａ５６）ではそれぞれ９４．７％および９５．０％、ＰＭＢ２９４８（Ｂ２４）ではそれぞれ７６．１％および６７．４％、ならびにＰＭＢ２７０７（Ｂ４４）ではそれぞれ９１．７％８６．４％であった。ワクチン接種２の１カ月後に複合応答（４つのＭｅｎＢ試験株すべてについてｈＳＢＡ力価≧ＬＬＯＱ）を達成するＭｅｎＡＢＣＷＹおよび二価ｒＬＰ２０８６＋ＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭレシピエントの割合はそれぞれ７９．９％および７４．３％であった。

【0353】

結論：これらの結果は、以前のＡＣＷＹ経験にかかわらず、ＭｅｎＡＢＣＷＹは、単一用量として与えるであれ６カ月間隔てられた２回用量のシリーズとして与えるであれ、２回の用量後にＭｅｎＢに対して、および１回または２回の用量後にＭｅｎＡＣＷＹに対して、二価ｒＬＰ２０８６（０、６カ月）およびＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭ（０カ月）を別々に投与した場合に達成されるものに類似の、高い度合の保護的免疫を提供することを示す。ＭｅｎＡＢＣＷＹのベースラインから４倍の免疫応答は、頑強であり、別々に投与したＭｅｎＢ−ＦＨｂｐおよびＭｅｎＡＣＷＹ−ＣＲＭに非劣性であった。０、６カ月スケジュールのワクチン接種は安全かつ良好に耐用される。有利な損益プロフィールは、現在の髄膜炎菌ワクチン接種の実施の単純化された代替案として、さらなるＭｅｎＡＢＣＷＹの開発を支援する。

【0354】

研究Ｂ１９７１０５７（ＭｅｎＡＢＣＷＹ［ＦＩＨ］）から作成されたデータにより、１０〜２５歳の健康な個体に投与した場合に、ＭｅｎＡＢＣＷＹに対する応答がＴＲＵＭＥＮＢＡ（髄膜炎菌Ｂ型二価組換えリポタンパク質２０８６ワクチン）（ＭｅｎＢ評価）およびＭＥＮＶＥＯ（髄膜炎菌（Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ−１３５型）オリゴ糖ＣＲＭ１９７コンジュゲートワクチン）（ＭｅｎＡＣＷＹＣＲＭ評価）に非劣性であることが実証された（セクション５．２を参照）。このＦＩＨ研究では、ＭｅｎＡＢＣＷＹの構成成分部分間の免疫干渉は観察されなかった。

【実施例22】

【0355】

懸濁液ワクチンに対する輸送ストレスの効果
本実施例は、懸濁液ワクチンに対する輸送ストレスの効果（ショック／落下、振動、低圧／高高度、および温度）を例示する。ワクチン懸濁液の再分散は重要な検討事項である。末端使用者の再分散時間を最小限にするために、再分散時間に影響を与える可能性のある要因を理解することは、主要な製品開発目的である。本発明者らは、懸濁液ワクチンの再分散時間に影響を与えるパラメータを評価する系統的な方法および関連する制御戦略を提示する。

【0356】

懸濁液ワクチンは、液体または凍結乾燥粉末と比較して貯蔵および輸送中に物理特性を維持することにおける著しい課題を構成する、熱力学的に不安定な系である。輸送ストレスは製品品質およびワクチン製品の物理特性に影響を与える可能性があるが、本実施例では、懸濁液ワクチンの物理特性に対する輸送ストレスの影響に注目する。製品品質は分子依存性であり、製品に特異的な分析学的および生物学的方法によって評価することができるため、製品品質への暗示は範囲外である。

【0357】

アルミニウム含有アジュバントは、７０年以上もの間、抗原に対する免疫応答を増強させるまたは改変するためにワクチンに含められてきた。アルミニウム含有ワクチンは、内相が不溶性アルミニウム含有塩（リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）からなり、外相が液体ビヒクルである懸濁液である。不溶性アジュバントをワクチン薬物製品に加えることで、分散相が時間と共に沈殿する傾向にある懸濁液が生じる。理想的には、懸濁液は均一であるべきであり、貯蔵中に沈降が起こる場合はすべて、攪拌した際に容易に再分散され得る。ワクチン懸濁液を含有する事前に満たされたシリンジを、再分散の前と後で比較する。しばしば、再分散の問題は、懸濁液を事前に満たすシリンジに満たし、長期貯蔵された後によく見られる。数えきれないほどの研究が、大きな遊離した容易に分散可能な沈殿物を形成するために制御された凝集剤またはポリマー添加剤を添加することに注目してきた。いくつかの市販のアルミニウムに基づくワクチンでは、その添付文書に「使用直前に勢いよく振ること」と明確に指示されている。２０１０年４月２６日に、ＷＨＯは、再懸濁させるのが困難または不可能な白色沈殿物がＳＨＡＮ ５ワクチンバイアルに固着していた出来事の後に、予防的手段としてＳＨＡＮ ５ワクチンのすべてのロットの回収および破棄を推奨した。したがって、再分散時間に影響を与える要因を理解するために、ワクチン懸濁液の再分散を徹底的に評価するべきであり、必要な場合は、緩和対策を行うことができる。

【0358】

粒径、荷電、および沈殿速度の間の相互作用。再分散時間の増加の原因を探求するにあたって、懸濁液の安定性に影響を与える要因を理解することが不可欠である。本セクションでは、懸濁液の粒径、荷電、および沈殿の間の相互作用を理解するために、懸濁液の安定性への考慮の背景を２つの懸濁液の事例調査と共に提示する。

【0359】

理想的な懸濁液系では、分散相を長期間懸濁させ、まばらな系の沈殿が起こった場合、分散系を容易に再懸濁または分散させることができる。懸濁液の安定性は、熱力学的または動力学的手段によって達成することができる。熱力学的な安定性手法は、懸濁液粒子表面上を帯電させ、それによって、粒子間反発が原因の立体障害を誘導して懸濁液の安定化をもたらすことを含む。他方では、動力学的手法は、懸濁液の粘度を増加させ、その結果、懸濁液の沈殿の低下をもたらし、したがって安定性を提供することを含む。粒径は、熱力学的および動力学的な安定性のこの相互作用において不可欠な役割を果たす。サブミクロンより大きい粒径を有する懸濁液系では、透明相と分散相との間の密度の差異が著しい要因であり、重力が原因で分散相の沈殿をもたらす場合がある。粒径が懸濁液系の凝結または凝固に影響を与え得ることが報告されている。たとえば、固体の活性成分粒子がより大きな凝結沈殿物を形成し、したがって沈殿物をより再懸濁させ易くすることを可能にするために、ＰＥＧを注射用の固体／液体懸濁液のロットに加える。溶解の動力学的を遅くするためにはスーパーミクロン粒子が理想的には適している一方で、これらは重力の効果によってはるかにより大きな影響を受け、それにより、ややコンパクトでほとんど再懸濁されない沈殿物がもたらされ得る。

【0360】

沈降または沈殿は、濃縮懸濁液中における集団的な相互作用の結果である。集団的な相互作用は流体力学および粒子間相互作用（荷電−荷電の相互作用によって決定される）を含む。流体力学的効果は、沈殿粒子の動きを相殺するための流体の逆流である、逆流の遅延の原因となる。粒子間相互作用は、濃縮分散体における誘引性自己枯渇および反発的構造力が原因である。

【0361】

荷電、沈殿速度、および粒径の間の相互作用を説明するために、２つの懸濁液系を例示する。研究中のワクチン懸濁液薬物製品は、この例示において懸濁液１および２と命名する。懸濁液１および懸濁液２は匹敵する粒径（約１５μｍ）を示す。これらの懸濁液は、沈殿速度を比較した場合に非常に異なる挙動をする。懸濁液１は約０．０４ａｂｓ／分の沈殿速度で著しく速く沈殿する一方で、懸濁液２は沈殿を開始するまでにさえ数週間かかる。この差異は、匹敵する粒径分布を有するにもかかわらず明確である。以前に考察したように、粒子表面上の荷電の理解が不可欠となる。懸濁液１のゼータ電位は約−５ｍＶである一方で、懸濁液２は−４５ｍＶのゼータ電位を有する。懸濁液１は粒子表面上にわずかな荷電しか有さないため、熱力学的な懸濁液の不安定性が粒子間誘引および最終的には分散相の沈殿を促進する。

【0362】

他方では、懸濁液２の系の高い荷電が系を熱力学的に安定にし、粒子間反発が著しく遅い分散相の沈殿をもたらす。これに基づいて、懸濁液２は最大の熱力学的な安定性を与え、望ましい。最大の疑問は、熱力学的に安定した懸濁液の方が、分散系が沈殿した後に分散し易いかどうか、またはその逆であるが、これは、ワクチン懸濁液用のシリンジ中の懸濁液の容易性にどのようにつながるのか。これら２つの懸濁液を用いた本発明者らのデータは、懸濁液１は荷電の欠如が原因で熱力学的に不安定であるが、粒子間相互作用および場合によってはより大きな凝結沈殿物の形成をもたらし、それにより、より速い沈降がもたらされ、それゆえ、分散相系が容易に再懸濁可能となることが示唆される。他方では、懸濁液２は、荷電−荷電極性が原因で沈殿に著しくより長い時間がかかるが、一度沈殿すると、より細かい粒子が密に詰まって、再懸濁が著しくより困難な、沈殿した分散相を形成する。

【0363】

これらの観察および背景に基づいて、懸濁液１ワクチンの再分散時間の増加を理解するために、２つの主要な疑問を本発明者らの研究において試験した：輸送ストレスは熱力学的な懸濁液の安定性を変更して再分散時間の増加をもたらす可能性があるのか。輸送中の個々の輸送ストレスの構成成分の影響は何か、および増加した再分散時間との相関は存在するのか。
熱力学的な懸濁液の安定性に対する輸送ストレスの効果
別の研究では、ワクチン薬物製品懸濁液を、輸送温度、ショック／落下、および振動を含めた輸送ストレスのシミュレーションに供した。熱力学的な懸濁液の安定性を、輸送前後の荷電（ゼータ電位）、粒径分布、および沈殿速度の測定によって決定した。

【0364】

薬物製品懸濁液は約−５ｍＶのゼータ電位値を示し、これは、懸濁液粒子上にわずかな荷電が存在することを示唆する。懸濁液のこの熱力学的不安定性が粒子間誘引および最終的には分散相の沈殿を促進する。本発明者らのデータは、シリンジの輸送のシミュレーションの前後でゼータ電位値、粒径分布、および測定された沈殿速度に明白な変化は存在しなかったことを示唆する。これらの結果は、輸送ストレスが薬物製品懸濁液の熱力学的な懸濁液の安定性を変更しないことを示唆する。これらの特性は輸送後に変化しないため、熱力学的な安定性は観察された再分散時間の増加の推進的な要因ではないと結論づけることができ、輸送ストレスの効果を評価し、任意の特定の物理的機構が観察された再分散時間に寄与しているかどうかを理解する必要性が必然的に伴う。
再分散時間に対する個々の輸送ストレスの影響
パッケージを輸送する際、製品は疑いようもなく様々な輸送ストレスを経験する。これらには、パッケージが様々な高さから落下した際のショック／落下ストレス、（振動数の振幅は航空機とトラックの間で異なるが）トラックまたは航空機のいずれかの輸送中の振動が含まれる。再分散時間に対する個々の輸送ストレスの影響を、薬物製品シリンジを輸送のシミュレーションに供した際に評価した^１１。また、研究設計は、シリンジの方向の関数としての輸送ストレスの影響の評価も含む。シリンジは３つの別々の方向で保管した：チップキャップ下、チップキャップ上、およびチップキャップ水平。本研究は、個々のストレスを解読し、影響を理解することを目的とする。

【0365】

ショック／落下ストレスはチップキャップ下方向の再分散時間を減らし、チップキャップ水平およびチップキャップ上の方向では再分散に対するショック／落下の効果はわずかであったことが観察された。

【0366】

他方では、航空機の振動はチップキャップ下方向の再分散時間を増加させた。これは興味深い発見であり、航空機輸送中に経験する振動数に関連している可能性がある。シリンジがチップキャップ下方向にある場合の振動数は、懸濁液の粒子がシリンジの内径を下がることをさらに促進する可能性がある。チップキャップ上および水平に配置したシリンジに対して航空機の振動の効果はわずかであった。航空機の振動と同様、トラックの振動はチップキャップ下方向において再分散時間を増加させた。これらの発見は航空機の振動と同様であるが、再分散時間の増加の程度は航空機の振動の場合よりも多かった。さらに、航空機の振動と一貫して、チップキャップ上および水平に配置したシリンジに対してトラックの振動の効果はわずかであった。

【0367】

また、シリンジを組合せストレス（ショック／落下、航空機の振動、トラックの振動ショック／落下）についての再分散時間について評価した場合、データは混乱しており、これは、実際の輸送では、恐らくは１つまたは複数の輸送ストレス様式が結果を支配し、全く異なる結果を生じる可能性があることを示唆する。

【0368】

航空機およびトラックの振動で見られた差異に基づいて、振動数の強度が重要な要因であることに注目することは興味深かった。シリンジをチップキャップ下方向に置いた場合の再分散時間の増加は、重力に起因し、振動によって増大した懸濁液粒子の下方向の動きが、より大きな粒子が密に詰まり、より小さな粒子が空いた空間を満たすことを促進することが原因の可能性がある。底部、特にシリンジの内径の粒子が、上のものの重力によって徐々に押し付けられる。

【0369】

薬物製品をチップキャップ上方向で輸送する場合、重力の効果は依然として存在するが、沈降は、狭い内径ではなく、プランジャーのより幅広い表面で起こる。塊の詰め込みは明白ではない。薬物製品をチップキャップ水平方向で輸送する場合、ブラウン運動から生じた側方動作および振動からの対流電流が重力に打ち勝つ。沈降が起こった場合でも、シリンジ壁の広い表面上で起こり、粒子が詰め込まれる確率はわずかである。したがって、チップキャップ上およびチップキャップ水平のどちらの方向でも再懸濁は問題でなく、チップキャップ水平方向の方が、恐らくはより大きな表面積が原因で、わずかに良好な結果を与える。輸送した際、輸送振動が、沈降物が詰め込まれる最終状態をもたらす支配的な力である。シリンジの方向および利用可能な様々な表面積次第で、再分散時間はこれらの開放表面積に対応する。
高い再分散時間を減らすための緩和戦略
輸送のシミュレーションの研究データに基づいて、チップキャップ水平またはチップキャップ上のいずれかの方向が、ワクチン懸濁液のより高い再分散時間を緩和させることができることが明らかである。
懸濁液ワクチンに対する輸送温度の影響
再分散に加えて、ワクチン懸濁液の製品品質は輸送中の温度によっても影響を受ける可能性がある。凍結後、アジュバントと抗原との間の結合が切断されている可能性がある。分離されたアジュバントは粒径および重量がより大きくなる凝集塊を形成する傾向にあり、その後、容器の底部に徐々に沈殿する。凝集塊の大きさは凍結解凍サイクルを繰り返した後に増加し得る。凝集塊の形成は、再分散と製品の物理的および化学的特性との両方に影響を与える。ワクチンの国際パッケージングおよび輸送に関するＷＨＯの指針は、吸着したワクチンが凍結によって影響を受けたかどうかを決定する振盪試験プロトコルを添付している。また、指針は、輸送中に温度がゼロ未満に下がったという徴候があった場合に、ワクチンのランダム試料に対して振盪試験を行うことも明記している。他方では、より高い温度もワクチン懸濁液の製品品質に影響を与え、粒子形成および化学的特性の変化または両方をもたらす可能性がある。したがって、ＷＨＯは、少なくとも４８時間の国際輸送中に絶縁クラスＡパッケージング内に許容される最大温度を＋８℃として明記している。クラスＢおよびＣパッケージングに許容される最大温度は＋３０℃である。

【0370】

以下の条項は、本発明の追加の態様を記載する：
Ｃ１．（ａ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来する第１のポリペプチドと、（ｂ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来する第２のポリペプチドと、（ｃ）髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖コンジュゲートと、（ｄ）髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖コンジュゲートと、（ｅ）髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖コンジュゲートと、（ｆ）髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖コンジュゲートとを含む組成物であって、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖のうちの任意の１つに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、髄膜炎菌血清型に対する認可ワクチンによって誘発されたものよりも高い、組成物。
Ｃ２．ポリペプチドが、配列番号１から配列番号６２から選択される任意の１つのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、条項Ｃ１に記載の方法。
Ｃ３．組成物が、（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドと、（ｃ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖と、（ｄ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってＡＤＨリンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖と、（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖と、（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖とを含む、条項Ｃ１に記載の方法。
Ｃ４．組成物が、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのうちの任意の１つに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ５．組成物が、髄膜炎菌血清型Ａに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ６．組成物が、髄膜炎菌血清型Ｃに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ７．組成物が、髄膜炎菌血清型Ｗに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ８．組成物が、髄膜炎菌血清型Ｙに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ９．組成物が、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのそれぞれに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１０．組成物が、髄膜炎菌血清型Ｂに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ｂ Ｈ因子結合ワクチンによって誘発されたものよりも高い、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１１．組成物が、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのそれぞれに対する免疫応答を誘発し、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖のそれぞれに対する前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高く、また、組成物は、髄膜炎菌血清型Ｂに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ｂ Ｈ因子結合ワクチンによって誘発されたものよりも高く、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンと認可された髄膜炎菌血清型Ｂ Ｈ因子結合ワクチンは、併用用量としてではなく順次投与される、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１２．組成物がアジュバントを含む、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１３．組成物がアルミニウムアジュバントを含む、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１４．組成物が水酸化アルミニウムを含む、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１５．組成物がリン酸アルミニウムを含む、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１６．組成物がアルミニウムを含む、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１７．第１のポリペプチドの少なくとも９０％が組成物中でアルミニウムと結合している、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１８．第２のポリペプチドの少なくとも９０％が組成物中でアルミニウムと結合している、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１９．組成物が無菌的な液体として配合されている、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ２０．組成物が薬学的に許容される保存料を含む、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ２１．組成物がポリソルベート−８０を含む、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ２２．組成物が、トリス−ＨＣｌ、塩化ナトリウム、スクロース、ヒスチジン、ポリソルベート８０、およびリン酸アルミニウムを含む、条項１から条項３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ２３．組成物が、約１２０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチド、約１２０μｇ／ｍｌの第２のポリペプチド、リン酸アルミニウムとして約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、約０．０２ｍｇのポリソルベート−８０、約１０ｍＭのヒスチジン、および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、条項１から条項３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ２４．組成物が、約６０μｇの第１のポリペプチド、約６０μｇの第２のポリペプチド、約７．５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＡ莢膜糖、約７．５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＣ莢膜糖、約３．７５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＷ莢膜糖、約３．２５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＹ莢膜糖、約９７μｇのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ６．８±０．３、４．６９〜４．７１ｍｇの塩化ナトリウム、約２８ｍｇのスクロース、約０．７８ｍｇのＬ−ヒスチジン、約０．０２ｍｇのポリソルベート−８０、約０．２５ｍｇのアルミニウムを含み、１用量あたり０．５ｍＬの水をさらに含む、条項１から条項３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ２５．免疫応答が血清殺菌抗体を含む、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ２６．組成物が、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのうちの少なくとも１つに対する追加免疫応答を誘発することができる、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ２７．組成物が、髄膜炎菌血清型Ｂに対する追加免疫応答を誘発することができる、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ２８．免疫応答を１０〜２６歳のヒトにおいて誘発させる、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ２９．免疫応答を１２カ月齢から１８カ月齢未満または１８カ月齢から２４カ月齢未満の年齢のヒトにおいて誘発させる、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ３０．免疫応答を１８カ月齢から２４カ月齢未満の年齢のヒトにおいて誘発させる、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ３１．免疫応答を２４カ月齢以上１０歳未満の年齢のヒトにおいて誘発させる、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ３２．免疫応答を髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹに対して血清陰性であるヒトにおいて誘発させる、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ３３．免疫応答を髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹに対して血清陽性であるヒトにおいて誘発させる、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ３４．組成物を少なくとも２回の用量でヒトに投与し、２回目の用量は１回目の用量の約６カ月後である、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ３５．ヒトが少なくとも１０歳であり、最高で１７歳である、条項Ｃ３４に記載の方法。
Ｃ３６．組成物の３回目の用量をヒトに投与し、ヒトは少なくとも１６歳である、条項Ｃ３５に記載の方法。
Ｃ３７．組成物を最大で２回の用量でヒトに投与し、２回目の用量は１回目の用量の約６カ月後である、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ３８．組成物がＡ２２に対する免疫応答を誘発する、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ３９．組成物がＡ５６に対する免疫応答を誘発する、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ４０．組成物がＢ２４に対する免疫応答を誘発する、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ４１．組成物がＢ４４に対する免疫応答を誘発する、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ４２．組成物が、約６０μｇの第１のポリペプチド、約６０μｇの第２のポリペプチド、約７．５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＡ莢膜糖、約７．５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＣ莢膜糖、約３．７５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＷ莢膜糖、約３．２５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＹ莢膜糖、約９７μｇのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ６．８±０．３、４．６９〜４．７１ｍｇの塩化ナトリウム、約２８ｍｇのスクロース、約０．７８ｍｇのＬ−ヒスチジン、約０．０２ｍｇのポリソルベート−８０、約０．２５ｍｇのアルミニウムを含み、１用量あたり０．５ｍＬの水をさらに含む、条項Ｃ１から条項Ｃ３のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ４３．（ａ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来する第１のポリペプチドと、（ｂ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来する第２のポリペプチドと、（ｃ）髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖コンジュゲートと、（ｄ）髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖コンジュゲートと、（ｅ）髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖コンジュゲートと、（ｆ）髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖コンジュゲートとを含む組成物であって、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのうちの少なくとも１つに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、髄膜炎菌血清型に対する認可ワクチンによって誘発されたものよりも高い、組成物。
Ｃ４４．ポリペプチドが、配列番号１から配列番号６２から選択される任意の１つのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、条項Ｃ４３に記載の組成物。
Ｃ４５．（ａ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来する第１のポリペプチドと、（ｂ）髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）に由来する第２のポリペプチドと、（ｃ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖と、（ｄ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってＡＤＨリンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖と、（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖と、（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖とを含む組成物であって、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖のそれぞれに対する免疫応答を誘発し、前記血清殺菌抗体応答は、認可された髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖ワクチンによって誘発されたものよりも高い、組成物。
Ｃ４６．条項Ｃ４３から条項Ｃ４５のいずれか一項に記載の有効量の組成物をヒトに投与するステップを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌血清型ＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答を誘導する方法。
Ｃ４７．条項Ｃ４３から条項Ｃ４５のいずれか一項に記載の有効量の組成物をヒトに投与するステップを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌血清型Ａ、髄膜炎菌血清型Ｃ、髄膜炎菌血清型Ｗ、および／または髄膜炎菌血清型Ｙ株に対する免疫応答を誘導する方法。
Ｃ４８．条項Ｃ４３から条項Ｃ４５のいずれか一項に記載の有効量の組成物をヒトに投与するステップを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌血清型Ａ、髄膜炎菌血清型Ｂ、髄膜炎菌血清型Ｃ、髄膜炎菌血清型Ｗ、および／または髄膜炎菌血清型Ｙ株に対する免疫応答を誘導する方法。
Ｃ４９．条項Ｃ４３から条項Ｃ４５のいずれか一項に記載の有効量の組成物をヒトに投与するステップを含む、ヒトにおいて髄膜炎菌血清型Ａ、髄膜炎菌血清型Ｂ、髄膜炎菌血清型Ｃ、髄膜炎菌血清型Ｗ、髄膜炎菌血清型Ｙ株、および／または髄膜炎菌血清型Ｘ株に対する免疫応答を誘導する方法。
Ｃ５０．患者が、条項Ｃ４３から条項Ｃ４５のいずれか一項に記載の組成物の最初の投与の前に、多価の髄膜炎菌莢膜糖−担体タンパク質のコンジュゲートワクチンを以前に受けていない、条項Ｃ４６からＣ４９のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ５１．患者が、条項Ｃ１および条項Ｃ１０のいずれか一項に記載の組成物の最初の投与の前に、多価の髄膜炎菌莢膜糖−担体タンパク質のコンジュゲートワクチンを以前に受けている、条項Ｃ４６からＣ４９のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ５２．組成物が、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加ポリペプチドと、ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加ポリペプチドとを含み、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、およびＢ１０７からなる群から選択されるポリペプチドを発現する少なくとも１つの髄膜炎菌血清型Ｂ株に対する免疫応答を誘導する、ヒトにおいて髄膜炎菌血清型Ｂに対する免疫応答を誘導するための有効量の組成物の使用。
Ｃ５３．誘導される免疫応答が殺菌性である、条項Ｃ５２に記載の使用。
Ｃ５４．組成物がポリソルベート−８０をさらに含む、条項Ｃ５２に記載の使用。
Ｃ５５．組成物がアルミニウムをさらに含む、条項Ｃ５２からＣ５４のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ５６．組成物がヒスチジン緩衝液をさらに含む、条項Ｃ５２からＣ５５のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ５７．組成物が塩化ナトリウムをさらに含む、条項Ｃ５２からＣ５６のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ５８．組成物が、約１２０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチド、約１２０μｇ／ｍｌの第２のポリペプチド、約２．８のモル比のポリソルベート−８０、約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、約１０ｍＭのヒスチジン、および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、条項Ｃ５２からＣ５７のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ５９．組成物が、約６０μｇの第１のポリペプチド、約６０μｇの第２のポリペプチド、約１８μｇのポリソルベート−８０、約２５０μｇのアルミニウム、約７８０μｇのヒスチジン、および約４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む、条項Ｃ５２からＣ５８のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ６０．組成物が、４つの別個かつ別々に作製したタンパク質−莢膜多糖コンジュゲートの混合物を含む、少なくとも１つの追加の免疫原性組成物をさらに含み、第１のコンジュゲートが担体タンパク質とコンジュゲートしている血清型Ｗの髄膜炎菌莢膜多糖を含み、第２のコンジュゲートが担体タンパク質とコンジュゲートしている血清型Ｙの髄膜炎菌莢膜多糖を含み、第３のコンジュゲートが担体タンパク質とコンジュゲートしている血清型Ａの髄膜炎菌莢膜多糖を含み、第４のコンジュゲートが担体タンパク質とコンジュゲートしている血清型Ｃの髄膜炎菌莢膜多糖を含み、担体タンパク質が、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ_１９７、および破傷風トキソイドからなる群から選択される、条項Ｃ５２からＣ５９のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ６１．担体タンパク質がジフテリアトキソイドである、条項Ｃ６０に記載の使用。
Ｃ６２．担体タンパク質が破傷風トキソイドである、条項Ｃ６０に記載の使用。
Ｃ６３．少なくとも１つの追加の免疫原性組成物が液体組成物である、条項Ｃ６０に記載の使用。
Ｃ６４．少なくとも１つの追加の免疫原性組成物が凍結乾燥されていない、条項Ｃ６０に記載の使用。
Ｃ６５．組成物が、少なくとも１つの髄膜炎菌血清型Ａ株に対する免疫応答を誘導する、条項Ｃ６０からＣ６４のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ６６．組成物が、少なくとも１つの髄膜炎菌血清型Ｃ株に対する免疫応答を誘導する、条項Ｃ６０からＣ６４のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ６７．組成物が、少なくとも１つの髄膜炎菌血清型Ｗ株に対する免疫応答を誘導する、条項Ｃ６０からＣ６４のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ６８．組成物が、少なくとも１つの髄膜炎菌血清型Ｙ株に対する免疫応答を誘導する、条項Ｃ６０からＣ６４のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ６９．組成物が、髄膜炎菌血清型Ａ株、髄膜炎菌血清型Ｃ株、髄膜炎菌血清型Ｙ株、髄膜炎菌血清型Ｗ株のうちの少なくとも１つ、およびその任意の組合せに対する免疫応答を誘導する、条項Ｃ６０からＣ６４のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ７０．有効量の組成物が１回の用量を含む、条項Ｃ５２からＣ６９のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ７１．有効量の組成物が２回の用量を含む、条項Ｃ５２からＣ７０のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ７２．有効量の組成物が追加免疫用量をさらに含む、条項Ｃ５２からＣ７０のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ７３．有効量の組成物が最大で２回の用量を含む、条項Ｃ５２からＣ７０のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ７４．有効量の組成物が最大で３回用量を含む、条項Ｃ５２からＣ７０のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ７５．組成物がハイブリッドタンパク質を含まない、条項Ｃ５２に記載の使用。
Ｃ７６．組成物が融合タンパク質を含まない、条項Ｃ５２に記載の使用。
Ｃ７７．組成物が凍結乾燥されていない、条項Ｃ５２に記載の使用。
Ｃ７８．組成物がホルムアルデヒドを含まない、条項Ｃ５２に記載の使用。
Ｃ７９．組成物がジフテリアトキソイドまたはＣＲＭを含まない、条項Ｃ６０に記載の使用。
Ｃ８０．髄膜炎菌血清型Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖が１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によってアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーとコンジュゲートし、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）とコンジュゲートしている（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）、条項Ｃ６０に記載の使用。
Ｃ８１．髄膜炎菌血清型Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖が１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によってＡＤＨリンカーとコンジュゲートし、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）とコンジュゲートしている（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）、条項Ｃ６０に記載の使用。
Ｃ８２．リンカーの非存在下で、髄膜炎菌血清型Ｗ（ＭｅｎＷ）莢膜糖が１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）と直接コンジュゲートしている（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）、条項Ｃ６０に記載の使用。
Ｃ８３．リンカーの非存在下で、髄膜炎菌血清型Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖が１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）と直接コンジュゲートしている（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）、条項Ｃ６０に記載の使用。
Ｃ８４．髄膜炎菌血清型Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖が１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によってアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーとコンジュゲートし、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）とコンジュゲートしており（ＭｅｎＡ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）、髄膜炎菌血清型Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖が１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によってＡＤＨリンカーとコンジュゲートし、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）とコンジュゲートしており（ＭｅｎＣ_ＡＨ−ＴＴコンジュゲート）、リンカーの非存在下で、髄膜炎菌血清型Ｗ（ＭｅｎＷ）莢膜糖が１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）と直接コンジュゲートしており（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）、リンカーの非存在下で、髄膜炎菌血清型Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖が１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）と直接コンジュゲートしている（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）、条項Ｃ６０に記載の使用。
Ｃ８５．組成物が、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーの非存在下でＭｅｎＡ莢膜糖を含まない、条項Ｃ６０に記載の使用。
Ｃ８６．患者が１２カ月齢から１８カ月齢未満または１８カ月齢から２４カ月齢未満の年齢である、条項Ｃ５２からＣ８５のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ８７．患者が１８カ月齢から２４カ月齢未満の年齢である、条項Ｃ５２からＣ８５のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ８８．患者が２４カ月齢以上１０歳未満の年齢である、条項Ｃ５２からＣ８５のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ８９．同一条件下でヒト補体を使用した血清殺菌アッセイにおいて測定した場合に、組成物が、１回目の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌性力価よりも、１回目の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも２倍高い血清免疫グロブリンの殺菌性力価を誘導する、条項Ｃ５２からＣ８８のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ９０．同一条件下でヒト補体を使用した血清殺菌アッセイにおいて測定した場合に、組成物が、１回目の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌性力価よりも、１回目の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも４倍高い血清免疫グロブリンの殺菌性力価を誘導する、条項Ｃ５２からＣ８９のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ９１．同一条件下でヒト補体を使用した血清殺菌アッセイにおいて測定した場合に、組成物が、１回目の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌性力価よりも、１回目の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも８倍高い血清免疫グロブリンの殺菌性力価を誘導する、条項Ｃ５２からＣ９０のいずれか一項に記載の使用。
Ｃ９２．ヒトにおいて免疫応答を誘導する方法であって、方法は、ヒトに、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドと、（ｃ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖と、（ｄ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってＡＤＨリンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖と、（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖と、（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖とを含む組成物を投与するステップを含み、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのうちの少なくとも１つに対する免疫応答を誘導し、免疫応答は血清殺菌抗体の力価を含み、力価は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖に対する認可ワクチンによって誘導されたものよりも高い、方法。
Ｃ９３．髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖に対する認可ワクチンがＭＥＮＶＥＯである、請求項１に記載の方法。
Ｃ９４．ヒトにおいて免疫応答を誘導する方法であって、方法は、ヒトに、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドと、（ｃ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖と、（ｄ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってＡＤＨリンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖と、（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖と、（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖とを含む組成物を投与するステップを含み、組成物は、髄膜炎菌血清型Ｂに対する免疫応答を誘導し、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂに対する認可ワクチンによって誘導される血清殺菌抗体の力価よりも高い、血清殺菌抗体の力価を含む、方法。
Ｃ９５．髄膜炎菌血清型Ｂに対する認可ワクチンがＴＲＵＭＥＮＢＡである、条項Ｃ９４に記載の方法。
Ｃ９６．ヒトにおいて免疫応答を誘導する方法であって、方法は、ヒトに、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドと、（ｃ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ａ莢膜糖と、（ｄ）１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってＡＤＨリンカーとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖であって、リンカーがカルボジイミド化学によって破傷風トキソイドとコンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｃ莢膜糖と、（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｗ莢膜糖と、（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによって破傷風トキソイドと直接コンジュゲートしている髄膜炎菌血清型Ｙ莢膜糖とを含む組成物を投与するステップを含み、組成物は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹならびに髄膜炎菌血清型Ｂのうちの少なくとも１つに対する免疫応答を誘導し、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖に対する認可ワクチンによって誘導される血清殺菌抗体の力価よりも高い、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのそれぞれに対する血清殺菌抗体の力価を含み、免疫応答は、髄膜炎菌血清型Ｂに対する認可ワクチンによって誘導される血清殺菌抗体の力価よりも高い、髄膜炎菌血清型Ｂに対する血清殺菌抗体の力価を含む、方法。
Ｃ９７．髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ髄膜炎菌莢膜多糖に対する認可ワクチンがＭＥＮＶＥＯである、条項Ｃ９６に記載の方法。
Ｃ９８．組成物がアジュバントをさらに含む、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ９９．組成物がアルミニウムをさらに含む、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１００．アジュバントが水酸化アルミニウムを含む、条項Ｃ９９に記載の方法。
Ｃ１０１．アジュバントがリン酸アルミニウムを含む、条項Ｃ９９に記載の方法。
Ｃ１０２．第１のポリペプチドの少なくとも９０％が組成物中でアルミニウムと結合している、条項Ｃ９４に記載の方法。
Ｃ１０３．第２のポリペプチドの少なくとも９０％が組成物中でアルミニウムと結合している、条項Ｃ９４に記載の方法。
Ｃ１０４．組成物が無菌的な液体として配合されている、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１０５．組成物がポリソルベート−８０をさらに含む、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１０６．組成物が、トリス−ＨＣｌ、塩化ナトリウム、スクロース、ヒスチジン、ポリソルベート８０、およびリン酸アルミニウムをさらに含む、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１０７．組成物が、約１２０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチド、約１２０μｇ／ｍｌの第２のポリペプチド、リン酸アルミニウムとして約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム、約０．０２ｍｇのポリソルベート−８０、約１０ｍＭのヒスチジン、および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１０８．組成物が、約６０μｇの第１のポリペプチド、約６０μｇの第２のポリペプチド、約７．５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＡ莢膜糖、約７．５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＣ莢膜糖、約３．７５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＷ莢膜糖、約３．２５μｇのＴＴとコンジュゲートしている約５μｇのＭｅｎＹ莢膜糖、約９７μｇのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ６．８±０．３、４．６９〜４．７１ｍｇの塩化ナトリウム、約２８ｍｇのスクロース、約０．７８ｍｇのＬ−ヒスチジン、約０．０２ｍｇのポリソルベート−８０、約０．２５ｍｇのアルミニウムを含み、１用量あたり０．５ｍＬの水をさらに含む、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１０９．組成物が、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹのそれぞれに対する追加免疫応答を誘発することができる、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１１０．組成物が、髄膜炎菌血清型Ｂに対する追加免疫応答を誘発することができる、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１１１．ヒトが１０〜２６歳の年齢である、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１１２．ヒトが１２カ月齢から１８カ月齢未満または１８カ月齢から２４カ月齢未満の年齢である、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１１３．ヒトが１８カ月齢から２４カ月齢未満の年齢である、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１１４．ヒトが２４カ月齢以上１０歳未満の年齢である、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１１５．ヒトが少なくとも１６歳である、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１１６．１回の用量をヒトに投与するステップを含む、条項Ｃ１１５に記載の方法。
Ｃ１１７．ヒトが１０〜１２歳である、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１１８．ヒトに少なくとも２回の用量を投与するステップを含む、条項Ｃ１１３に記載の方法。
Ｃ１１９．ヒトが最高で１６歳である、条項Ｃ１１３に記載の方法。
Ｃ１２０．組成物の少なくとも１回の用量を約１１歳のヒトに投与し、１回目の用量の少なくとも４年後に、組成物のさらなる用量をヒトに投与するステップを含む、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１２１．組成物の少なくとも１回の用量を約１１歳のヒトに投与し、最後の用量の少なくとも４年後に、組成物のさらなる用量をヒトに投与するステップを含む、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１２２．最後の用量の約５年後に、組成物のさらなる用量を投与する、条項Ｃ１１６に記載の方法。
Ｃ１２３．約１１歳のヒトに１回の用量の組成物を投与し、１回目の用量の約５年後に、ヒトに組成物の少なくとも２回の用量を投与するステップを含む、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１２４．ヒトが、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖に対して血清陰性である、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１２５．ヒトが、髄膜炎菌血清型Ａ、Ｃ、Ｗ−１３５、およびＹ莢膜多糖に対して血清陽性である、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１２６組成物の１回目の用量および２回目の用量を投与するステップを含み、２回目の用量は１回目の用量の約６カ月後である、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１２７．ヒトが最高で１７歳である、条項Ｃ１２２に記載の方法。
Ｃ１２８．組成物の３回目の用量を１６歳のヒトに投与するステップを含む、条項Ｃ１２２に記載の方法。
Ｃ１２９．最高で２回の用量の組成物を投与するステップを含み、２回目の用量は１回目の用量の約６カ月後である、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１３０．組成物が、Ａ２２を発現する髄膜炎菌血清型Ｂ株に対する免疫応答を誘発する、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１３１．組成物が、Ａ５６を発現する髄膜炎菌血清型Ｂ株に対する免疫応答を誘発する、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１３２．組成物が、Ｂ２４を発現する髄膜炎菌血清型Ｂ株に対する免疫応答を誘発する、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１３３．組成物が、Ｂ４４を発現する髄膜炎菌血清型Ｂ株に対する免疫応答を誘発する、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１３４．組成物が、髄膜炎菌血清型Ｂ Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、Ｂ４４株のうちの任意の１つ、またはその任意の組合せに対する殺菌性免疫応答を誘導する、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。
Ｃ１３５．組成物が、髄膜炎菌血清型Ｂ Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、Ａ０７、Ｂ１５３株のうちの任意の１つ、またはその任意の組合せに対する殺菌性免疫応答を誘導する、条項Ｃ９４からＣ９７のいずれか一項に記載の方法。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]

【外国語明細書】

2021066727000001.pdf