特開 2021-67491 液体試料の処理方法および液体試料の処理装置

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】特開2021-67491(P2021-67491A)

(43)【公開日】2021年4月30日

(54)【発明の名称】液体試料の処理方法および液体試料の処理装置

(51)【国際特許分類】

   G01N 1/10 20060101AFI20210402BHJP

   G01N 1/04 20060101ALI20210402BHJP

   C12M 3/06 20060101ALI20210402BHJP

   C12Q 1/24 20060101ALN20210402BHJP

【ＦＩ】

   G01N1/10 B

   G01N1/04 M

   G01N1/04 H

   C12M3/06

   C12Q1/24

【審査請求】未請求

【請求項の数】17

【出願形態】ＯＬ

【全頁数】14

(21)【出願番号】特願2019-191185(P2019-191185)

(22)【出願日】2019年10月18日

(71)【出願人】

【識別番号】000001993

【氏名又は名称】株式会社島津製作所

(74)【代理人】

【識別番号】110001195

【氏名又は名称】特許業務法人深見特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】岩田 祐士

【テーマコード（参考）】

2G052

4B063

【Ｆターム（参考）】

2G052AA30

2G052AA36

2G052BA22

2G052CA11

2G052EA03

2G052EA11

2G052JA04

4B063QQ02

4B063QQ03

4B063QQ08

4B063QS10

4B063QS39

(57)【要約】

【課題】簡便に血球を除去することが可能な液体試料の処理方法を提供する。
【解決手段】血球を含む液体試料から血球を除去するための液体試料の処理方法であって、液体試料を濾過することで、測定対象物を血球に対して先行させるステップと、測定対象物を血球に対して先行させた状態で液体試料を濾過することで、血球を除去するステップとを含む。
【選択図】図３

【特許請求の範囲】

【請求項1】

血球と前記血球よりも小さい測定対象物を含む液体試料に対して、前記測定対象物に対する濾過抵抗が、前記血球に対する濾過抵抗よりも小さい第１フィルタを用いた第１濾過を行い、これにより前記血球に対して前記測定対象物を先行させるステップと、
前記第１フィルタに前記血球が残った状態で、前記測定対象物を含む濾液に対して第２フィルタを用いた第２濾過を行って前記測定対象物をサイズ選択的に透過させ、これにより前記液体試料から前記血球が除去された濾液を得るステップとを備える、液体試料の処理方法。

【請求項2】

前記先行させるステップにおいては、前記液体試料が深層濾過される、請求項１に記載の液体試料の処理方法。

【請求項3】

前記濾液を得るステップにおいては、前記測定対象物を含む濾液が表面濾過される、請求項１または請求項２に記載の液体試料の処理方法。

【請求項4】

前記濾液を得るステップで得られた濾液から、前記測定対象物を濾別するステップをさらに備える、請求項１〜請求項３のうちいずれか１項に記載の液体試料の処理方法。

【請求項5】

前記測定対象物は、微生物である、請求項１〜請求項４のうちいずれか１項に記載の液体試料の処理方法。

【請求項6】

前記先行させるステップおよび前記濾液を得るステップは、前記第１濾過の一次側からの加圧プロセスおよび前記第２濾過の二次側からの減圧プロセスのうちの少なくとも一方を含む、請求項１〜請求項５のうちいずれか１項に記載の液体試料の処理方法。

【請求項7】

血球を含む液体試料を受ける容器と、
前記容器内に配置され、前記血球および前記血球よりも小さい測定対象物を透過可能であって、前記測定対象物を前記血球よりも先に透過させる性質を有する第１フィルタと、
前記容器内において前記第１フィルタの下流側に配置され、前記血球をサイズ選択的に捕捉し且つ前記測定対象物をサイズ選択的に透過させることが可能な第２フィルタとを備える、液体試料の処理装置。

【請求項8】

前記第１フィルタは、前記第２フィルタの上流側に重ねて配置される、請求項７に記載の液体試料の処理装置。

【請求項9】

前記第１フィルタは、前記血球を一時的に捕捉する機構を有する、請求項７または請求項８に記載の液体試料の処理装置。

【請求項10】

前記第１フィルタは、デプスフィルタである、請求項９に記載の液体試料の処理装置。

【請求項11】

前記デプスフィルタは、ガラス繊維フィルタである、請求項１０に記載の液体試料の処理装置。

【請求項12】

前記第２フィルタは、前記血球よりも小さく前記測定対象物よりも大きい径の孔を有する、請求項７〜請求項１１のうちいずれか１項に記載の液体試料の処理装置。

【請求項13】

前記第２フィルタは、メンブレンフィルタである、請求項７〜請求項１２のうちいずれか１項に記載の液体試料の処理装置。

【請求項14】

前記第２フィルタは、２μｍ以上６μｍ以下のフィルタ径を有する、請求項７〜請求項１３のうちいずれか１項に記載の液体試料の処理装置。

【請求項15】

前記容器内において前記第２フィルタの下流側に配置され、前記測定対象物をサイズ選択的に捕捉する性質を有する第３フィルタをさらに備える、請求項７〜請求項１４のうちいずれか１項に記載の液体試料の処理装置。

【請求項16】

前記容器は、前記第１フィルタおよび前記第２フィルタが配置された第１濾過器と、前記第１濾過器の下流側に設けられた前記第３フィルタが配置された第２濾過器とを含む、請求項１５に記載の液体試料の処理装置。

【請求項17】

前記測定対象物は、微生物である、請求項７〜請求項１６に記載のうちいずれか１項に記載の液体試料の処理装置。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、液体試料の処理方法および液体試料の処理装置に関する。

【背景技術】

【0002】

血液試料を分析するにあたり、測定の障害となる血球成分を除去し、測定対象物として菌などの微生物および核酸などを精製する方法が知られている。たとえば、非特許文献１は、培養後の血液から細菌を精製する方法として、段階的に遠心分離と濾過を行う方法が開示されている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0003】

【非特許文献1】Martin Christner, Holger Rohde, Manuel Wolters, Ingo Sobottka, Karl Wegscheider, and Martin Aepfelbacher1, "JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY", 48 （５）, 1584-1591 (2010)

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

非特許文献１に開示の方法では、段階的な操作が必要であり、多くの時間と手間がかかる。

【0005】

本発明は、かかる問題を解決するためになされたものであり、その１つの目的は、血球を含む液体試料から簡便に血球を除去することが可能な液体試料の処理方法および液体試料の処理装置を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本開示の液体試料の処理方法は、血球と血球よりも小さい測定対象物を含む液体試料に対して、測定対象物に対する濾過抵抗が、血球に対する濾過抵抗よりも小さい第１フィルタを用いた第１濾過を行い、これにより血球に対して測定対象物を先行させるステップと、第１フィルタに血球が残った状態で、測定対象物を含む濾液に対して第２フィルタを用いた第２濾過を行って測定対象物をサイズ選択的に透過させ、これにより液体試料から血球が除去された濾液を得るステップとを含む。

【0007】

本開示の液体試料の処理装置は、血球を含む液体試料を受ける容器と、容器内に配置され、血球および血球よりも小さい測定対象物を透過可能であって、測定対象物を血球よりも先に透過させる性質を有する第１フィルタと、容器内において第１フィルタの下流側に配置され、血球をサイズ選択的に捕捉し且つ測定対象物をサイズ選択的に透過させることが可能な第２フィルタとを含む。

【発明の効果】

【0008】

上記の液体試料の処理方法および液体試料の処理装置においては、簡便な方法で血球を除去した濾液を得ることができる。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】実施形態１にかかる処理装置を含む回収装置の全体構成を模式的に示す図である。

【図2】実施形態１にかかる処理装置の構成を模式的に示す図である。

【図3】実施形態１にかかる処理装置内の第１フィルタおよび第２フィルタで液体試料を濾過した際の血球および測定対象物の移動を模式的に示した図である。

【図4】実施形態２にかかる処理装置を含む回収装置の全体構成を模式的に示す図である。

【図5】実施形態３にかかる処理装置を含む回収装置の全体構成を模式的に示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0010】

以下、本開示の実施形態について、図面を参照しながら詳細に説明する。なお、図中同一又は相当部分には同一符号を付してその説明は繰り返さない。

【0011】

本開示にかかる液体試料の処理装置は、血球を含む血液等の液体試料を処理するための装置であって、たとえば、血液中の血球よりも小さいサイズの物質（測定対象物）を測定する際の前処理工程に利用される。また、本開示にかかる液体試料の処理装置は、全量濾過方式で血液などの血球成分を含む液体試料を濾過するための装置である。また、本開示にかかる液体試料の処理装置は、測定対象の物質を得ることを目的としているという性質上、ディスポーザブルであることが好ましい。なお、測定対象物は、血球（特に、赤血球）よりも小さいものであればよく、たとえば、微生物、核酸、および、血漿中のタンパク質を含む。微生物は、たとえば、細菌および真菌などの菌、ウィルス、ならびにカビなどを含む。なお、以下では、液体試料の処理装置を単に処理装置ともいう。

【0012】

［実施形態１］
実施形態１にかかる液体試料の処理装置は、血球を除去する機能を有する血球除去装置であって、液体試料から測定対象物を回収するための回収装置に組み込まれて利用される。

【0013】

＜回収装置の構成＞
図１は、実施形態１にかかる処理装置を含む回収装置の全体構成を模式的に示す図である。図１を参照して、回収装置１は、処理装置１００と、吸引ボックス２００と、吸引ボックス２００内に設置された回収容器２２０とを備える。

【0014】

処理装置１００は、濾過器である。処理装置１００の出口側（二次側）は、吸引ボックス２００に接続されている。吸引ボックス２００は、図示していないものの、チューブを介して真空ポンプに接続されている。

【0015】

真空ポンプを駆動して、吸引ボックス２００内を減圧する。処理装置１００に全血などの液体試料がセットされている場合、吸引ボックス２００内を減圧すると、処理装置１００内の液体試料は吸引濾過される。濾液は、回収容器２２０内に回収される。

【0016】

回収容器２２０内に回収された濾液は、測定対象物に応じて任意に選択された測定装置にセットされる。なお、回収容器２２０内に回収された濾液は、さらに別の前処理工程を経て、測定装置にセットされてもよい。

【0017】

＜処理装置の構成＞
図２は、実施形態１にかかる処理装置の構成を模式的に示す図である。図２を参照して、処理装置１００は、容器１２０と、第１フィルタ１４０と、第２フィルタ１６０とを含む。容器１２０は、液体試料を収容する内部空間２２と、底面に設けられた排出口２４とを備える。

【0018】

第１フィルタ１４０および第２フィルタ１６０は、容器１２０内であって、容器１２０の底部に設けられている。第２フィルタ１６０は、第１フィルタ１４０の下流側（排出口２４側）に設けられている。第１フィルタ１４０は第２フィルタ１６０の上（上流側）に重ねて配置されている。そのため、排出口２４から吸引されると、第１フィルタ１４０は、第２フィルタ１６０に密着する。

【0019】

第１フィルタ１４０は、血球および血球よりも小さい成分を透過可能に構成されている。血球および血球よりも小さい測定対象物を含む全血などの液体試料を第１フィルタ１４０で濾過した場合、測定対象物は血球よりも先に透過する。なお、測定対象物のうちの少なくとも一部が血球よりも先に第１フィルタ１４０を透過すればよく、血球の一部が測定対象物の一部よりも先に第１フィルタ１４０を透過してもよい。

【0020】

第１フィルタ１４０は、血球および血球よりも小さい成分を透過可能に構成されており、かつ、測定対象物を血球よりも先に透過させる性質を有するものであればよく、表面濾過用のフィルタであっても、深層濾過用のフィルタであってもよい。

【0021】

第１フィルタ１４０は、血球を三次元的に、かつ一時的に捕捉する機構を有する。血球を一時的に捕捉する機構を有するフィルタとしては、具体的には、図２に示すような、深層濾過用のフィルタなどが挙げられる。第１フィルタ１４０は、血球を三次元的に、かつ一時的に捕捉しつつも、血球に対して推進力をかけ続けた場合に、当該経路を血球が抜けて、血球が第１フィルタ１４０を透過する程度の径の経路を有する。

【0022】

血球の成分は、主に、白血球と赤血球とから構成されている。白血球は、粒子径が１０〜１５μｍ程度と、比較的大きい粒子である。赤血球は、粒子径が７〜８μｍ程度である。血液中において、白血球および赤血球のうち、赤血球の数が最も多い。そのため、第１フィルタ１４０の経路は、好ましくは、白血球、および赤血球のうち、少なくとも赤血球を三次元的に、かつ一時的に捕捉しつつ、透過させることのできる程度の径を有していることが好ましい。具体的には、第１フィルタ１４０は、少なくとも、７μｍより大きい径の経路を有している。また、他の観点から、第１フィルタ１４０は、粒子保持能が２．７μｍである。

【0023】

なお、第１フィルタ１４０は、血液中に含まれる粒子径が２μｍ程度の血小板を三次元的に、かつ一時的に捕捉できるような大きさの孔を有していてもよい。

【0024】

深層濾過用のフィルタは、たとえば、繊維状の素材を押し固めて作られるデプスフィルタ、または多孔質構造を有する多孔質膜である。

【0025】

第１フィルタ１４０の材質は、ガラス、樹脂、金属、セラミックス等のいかなる材料により構成されていてもよい。血球が吸着し、吸着した血球により経路が塞がれてしまうことを考慮すると、第１フィルタ１４０の材質は、血球を吸着したとしても脱着するものである。たとえば、第１フィルタ１４０は、ガラス繊維フィルタ、またはセルロースフィルタである。

【0026】

第２フィルタ１６０は、血球をサイズ選択的に捕捉し、かつ、測定対象物をサイズ選択的に透過させる。具体的には、第２フィルタ１６０は、血球よりも小さく、測定対象物よりも大きい径の孔を有する。たとえば、第２フィルタ１６０のフィルタ径は、血球のうち、少なくとも赤血球の大きさ以上の成分を除去することが可能な大きさの径であって、たとえば、２μｍ以上６μｍ以下である。なお、「血球をサイズ選択的に捕捉し、かつ、測定対象物をサイズ選択的に透過させる」とは、血球が濾材の孔に捕捉されるのに対して、測定対象物は濾材の孔に捕捉されることなく透過することを意味する。なお、測定対象物が慣性力により直進し、濾材に衝突して一時的に捕捉されてもよい。

【0027】

第２フィルタ１６０は、血球を除去できればよく、表面濾過用のフィルタであっても、深層濾過用のフィルタであってもよい。なお、第２フィルタ１６０として表面濾過用のメンブレンフィルタを採用すると、深層濾過用のフィルタを用いる場合に比べて血球を確実に除去することができ、濾液に血球が混入する可能性を下げることができる。

【0028】

第２フィルタ１６０の材質としては、例えば、ポリエーテルスルホン、セルロース混合エステル、酢酸セルロース、ニトロセルロース、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ポリカーボネート等が挙げられる。

【0029】

＜処理方法＞
図３を参照して、処理装置を利用した液体試料の処理方法について説明する。図３は、実施形態１にかかる処理装置内の第１フィルタおよび第２フィルタで液体試料を濾過した際の血球および測定対象物の移動を模式的に示した図である。

【0030】

図３においては、血球３２０および測定対象物である微生物３４０を含む液体試料３００を濾過したものとして説明する。微生物３４０の大きさは、血球３２０よりも小さい。微生物が菌である場合、微生物３４０の大きさは１μｍ程度である。

【0031】

血球３２０および微生物３４０を含む液体試料３００は、たとえば、患者から採取した血液を培養した後の試料である。一般的に、患者からは血液培養用に１０ｍｌ〜３０ｍｌ程度の血液が採取される。培養した後の１０ｍｌ〜３０ｍｌ程度の血液は、測定対象物を高濃度かつ高純度で回収するため、好ましくは、希釈されることなく回収装置１を用いて処理される。

【0032】

図３中の黒丸は、血球３２０を示す。図３中の白丸は、微生物３４０を、図３中の斜線は血漿（液体成分）を示す。図３中、一部、符号を省略している。図３中のグラフは、膜（第１フィルタ１４０および第２フィルタ１６０）の厚み方向の濃度分布の一例を示す。実線で示したグラフは、血球の濃度分布を示す。破線で示したグラフは、微生物の濃度分布を示す。

【0033】

図３中の（１）は、濾過前のタイミングの状態を示す。図３中の（２）および（３）は、濾過途中のタイミングの状態を示す。図３中の（４）は、濾過後の状態を示す。すなわち、液体試料３００を処理装置１００によって濾過した場合、処理装置１００内の状態は、図３中の（１）〜（４）の順で経時的に変化することとなる。

【0034】

図３中の（１）に示すように、濾過前において、血球３２０および微生物３４０は、いずれも、液体試料３００中に分散している。

【0035】

吸引されて濾過が始まると、液体試料３００は、まず、第１フィルタ１４０を透過する。このとき、血球３２０は、第１フィルタ１４０の経路内で濾材に衝突して一時的に捕捉される。これに対して、血球３２０よりも小さい微生物３４０は、血球３２０に比べて第１フィルタ１４０の経路内で一時的に捕捉されにくい。そのため、第１フィルタ１４０を用いた第１濾過において、微生物３４０にかかる濾過抵抗は、血球３２０にかかる濾過抵抗よりも小さくなる。すなわち、第１フィルタ１４０の微生物３４０に対する濾過抵抗は、血球３２０に対する濾過抵抗よりも小さい。その結果、図３中の（２）および（３）に示すように、時間が経過するごとに、液体試料３００中で血球３２０と微生物３４０とが徐々に分離し、液体試料３００の移動方向に対して血球３２０よりも微生物３４０が先行することとなる。

【0036】

図３中の（３）に示すように、第１フィルタ１４０と第２フィルタ１６０とが重ねて配置されており、液体試料３００を第１フィルタ１４０で濾過することで液体試料３００の移動方向に対して血球３２０よりも微生物３４０が先行することになるため、微生物３４０が血球３２０よりも先に第２フィルタ１６０に到達する。

【0037】

そして、液体試料３００の移動方向に対して血球３２０よりも微生物３４０の方が先行しており、第１フィルタ１４０に血球３２０が残った状態で液体試料３００を第２フィルタ１６０を用いた第２濾過を行い、微生物３４０をサイズ選択的に透過させることで、図３中の（４）に示すように、微生物３４０を残しつつ血球３２０が除去された濾液を得られる。

【0038】

以上のように、実施形態１にかかる処理装置１００を利用して液体試料３００を濾過することで、微生物３４０に対する濾過抵抗が、血球３２０に対する濾過抵抗よりも小さい第１フィルタ１４０を用いた第１濾過を液体試料３００に対して行い、これにより血球３２０に対して微生物３４０を先行させるステップ（Ｓ１００）と、第１フィルタ１４０に血球３２０が残った状態で第２フィルタ１６０を用いた第２濾過を行って微生物３４０をサイズ選択的に透過させ、これにより液体試料３００から血球３２０が除去された濾液を得るステップ（Ｓ２００）とを含む液体試料の処理方法が実現される。

【0039】

第１フィルタ１４０が、デプスフィルタ等の深層濾過用のフィルタである場合、第１濾過においては深層濾過がされる。また、第２フィルタ１６０がメンブレンフィルタ等の表面濾過用のフィルタである場合、第２濾過においては表面濾過がされる。

【0040】

第１フィルタ１４０を設けることなく、第２フィルタ１６０で血液のような液体試料を濾過した場合、微生物３４０が第２フィルタ１６０を透過する前に、第２フィルタ１６０上に血球３２０が堆積して目詰まりを起こしてしまう。そのため、第２フィルタ１６０だけで血液のような液体試料を濾過した場合、微生物３４０の回収効率は高くない。

【0041】

実施形態１においては、第１フィルタ１４０で液体試料３００を濾過することで液体試料３００の移動方向に対して血球３２０よりも微生物３４０の方が先行した状態を作りだす。液体試料３００の移動方向に対して血球３２０よりも微生物３４０の方が先行した状態で液体試料３００を第２フィルタ１６０で濾過することで、第２フィルタ１６０上に血球３２０が堆積して目詰まりが起こる前に微生物３４０が第２フィルタ１６０を透過させることができる。その結果、液体試料３００中の微生物３４０を効率的に回収しつつ、血球３２０を除去することができる。

【0042】

なお、第１フィルタ１４０の厚みは、たとえば、血球３２０の膜透過速度と微生物３４０の膜透過速度との差に応じて設計され、微生物３４０が第２フィルタ１６０を透過してから第２フィルタ１６０上に血球３２０が堆積するように血球３２０と微生物３４０とを分離させることができる厚みであればよい。たとえば、第１フィルタ１４０は、１．３ｍｍ以上の厚みを有する。

【0043】

なお、液体試料３００の全量を濾過し終わったタイミングで、血球３２０が第２フィルタ１６０に到達していないような構成であってもよく、また、血球３２０の全部または一部が到達しているような構成であってもよい。第１フィルタ１４０で第１濾過を液体試料３００に行うことで、血球３２０よりも微生物３４０を先行させた状態を作りだし、その状態のまま、微生物３４０をサイズ選択的に透過させることで、第２濾過中に目詰まりを起こすことなく、血球が除去された濾液を得られればよい。

【0044】

［実施形態２］
実施形態２にかかる液体試料の処理装置は、測定対象物を回収するための回収用の濾過器を含む。

【0045】

図４は、実施形態２にかかる処理装置を含む回収装置の全体構成を模式的に示す図である。実施形態２にかかる回収装置１ａは、実施形態１にかかる回収装置１と比較して、処理装置１００に代えて処理装置１００ａを備え、吸引ボックス２００に代えて廃液ボックス２００ａを備え、回収容器２２０を備えていない点で異なる。

【0046】

処理装置１００ａは、容器１２０ａから構成されている。容器１２０ａは、第１濾過器１２２と、第２濾過器１２４と、第１濾過器１２２と第２濾過器１２４とを連結する連結管１３０とを含む。

【0047】

第１濾過器１２２は、実施形態１にかかる処理装置１００と共通の構成を備える。具体的には、第１濾過器１２２内には、第１フィルタ１４０と第２フィルタ１６０とが配置されている。第１濾過器１２２の構成は、処理装置１００と共通するため、その説明を省略する。液体試料３００を第１濾過器１２２によって濾過することで、図３を参照して説明したステップＳ１００とステップＳ２００とが実現され、血球３２０が取り除かれた濾液が得られる。

【0048】

第１濾過器１２２で濾過されて得られた濾液は、連結管１３０を通って第２濾過器１２４に導かれる。第２濾過器１２４内には、測定対象物をサイズ選択的に補足する性質を有する第３フィルタ１８０が配置されている。具体的には、第３フィルタ１８０は、測定対象物よりも小さい径の孔を有する。測定対象物が微生物のうちの菌である場合、第３フィルタ１８０は、たとえば、一般的な滅菌フィルタであって、フィルタ径が０．２〜０．４５μｍのフィルタである。

【0049】

第３フィルタ１８０は、回収したい測定対象物の大きさに応じて設計される。第３フィルタ１８０は、回収したい測定対象物を濾別できればよく、表面濾過用のフィルタであっても、深層濾過用のフィルタであってもよい。なお、第３フィルタ１８０として表面濾過用のメンブレンフィルタを採用した場合、測定対象物が第３フィルタ１８０の上に堆積する一方、第３フィルタ１８０として深層濾過用のフィルタを採用すると、フィルタ内部で測定対象物が捕捉される。そのため、第３フィルタ１８０として表面濾過用のメンブレンフィルタを採用した場合の方が、深層濾過用のフィルタを採用した場合に比べて、測定対象物を回収しやすいことが予想される。

【0050】

第１濾過器１２２で濾過されて得られた濾液を第２濾過器１２４で濾別することで、測定対象物を第３フィルタ１８０によって捕捉することができる。第２濾過器１２４によって濾過されて得られた濾液は、廃液ボックス２００ａ内に回収される。

【0051】

廃液ボックス２００ａは、測定に利用されない廃液を回収するための廃液タンクとしての機能と、真空ポンプが接続される吸引ボックスとしての機能とを兼ね備えている。

【0052】

実施形態２にかかる処理装置１００ａを利用して液体試料３００を濾過することで、微生物３４０に対する濾過抵抗が、血球３２０に対する濾過抵抗よりも小さい第１フィルタ１４０を用いた第１濾過を液体試料３００に対して行い、これにより血球３２０に対して微生物３４０を先行させるステップ（Ｓ１００）と、第１フィルタ１４０に血球３２０が残った状態で第２フィルタ１６０を用いた第２濾過を行って微生物３４０をサイズ選択的に透過させ、これにより液体試料３００から血球３２０が除去された濾液を得るステップ（Ｓ２００）と、この濾液から微生物３４０を濾別ステップ（Ｓ３００）とを含む液体試料の処理方法が実現される。

【0053】

実施形態２にかかる処理装置１００ａは、実施形態１にかかる処理装置１００と比して、第２フィルタ１６０の下流側に配置された第３フィルタ１８０をさらに備える。そのため、処理装置１００ａで液体試料３００を濾過するという一の単位操作で測定対象物を回収することができ、簡便な処理で測定対象物を回収することができる。

【0054】

また、実施形態２にかかる処理装置１００ａは、第１濾過器１２２により血球３２０が除去され、第２濾過器１２４内に微生物３４０が回収される。その結果、微生物３４０を回収するにあたり、血球３２０が第２濾過器１２４内に混入してしまうことを防止することができる。また、第１濾過器１２２と第２濾過器１２４とが別体で構成されているため、液体試料３００を濾過した後、第３フィルタ１８０によって回収された微生物を収集する操作を行いやすい。

【0055】

［実施形態３］
実施形態３にかかる処理装置は、濾液が排出される出口側（二次側）から吸引して濾過する構成ではなく、入り口側（一次側）から圧力をかけることで液体試料３００を濾過する構成である。

【0056】

図５は、実施形態３にかかる処理装置を含む回収装置の全体構成を模式的に示す図である。実施形態３にかかる回収装置１ｂは、実施形態２にかかる回収装置１ａと比較して、処理装置１００ａに代えて処理装置１００ｂを備え、廃液ボックス２００ａに代えて廃液タンク２００ｂを備える。廃液タンク２００ｂは、廃液ボックス２００ａと異なり吸引ボックスとしての機能を有していない。処理装置１００ｂは、容器１２０ａに代えて容器１２０ｂから構成されている。容器１２０ｂは、第１濾過器１２２に代えて第１濾過器１２２ｂを備える点で処理装置１００ａと異なるものの、他の構成は処理装置１００ａと共通する。なお、第１濾過器１２２ｂは、第１濾過器１２２と比して、コネクタ２６を入り口側に備える点で異なるものの、その他の構成は共通する。

【0057】

第１濾過器１２２ｂは、シリンジフィルタであって、シリンジ４００の筒先４２０と接続するためのコネクタ２６を入り口側（一次側）に備える。液体試料３００が充填されたシリンジ４００の筒先４２０を第１濾過器１２２ｂのコネクタ２６に接続し、押し子４４０を押すことで、第２濾過器１２４上に測定対象物が回収される。

【0058】

［変形例］
実施形態１〜実施形態３においては、圧力をかけて液体試料３００を濾過する例を示したが、圧力をかけずに濾過してもよい。また、遠心濾過用のチューブ内に第１フィルタ１４０と第２フィルタ１６０を配置し、当該チューブに対して遠心力をかけて濾過してもよい。なお、液体試料が遠心分離機内で飛散するリスクを考慮すると、実施形態１または実施形態２にかかる吸引濾過または、実施形態３にかかるシリンジを用いた濾過（加圧濾過）が好ましい。なお、加圧濾過と吸引濾過とを組み合わせて液体試料３００を濾過するようにしてもよい。すなわち、第１フィルタ１４０を用いた第１濾過の一次側からの加圧プロセスおよび、第２フィルタ１６０を用いた第２濾過の二次側からの減圧プロセスのうちの少なくとも一方により、血球を除去して濾液を得る工程を実現してもよい。なお、加圧プロセスおよび減圧プロセスの少なくとも一方により、血球を除去して濾液を得る工程と、測定対象物を濾別する工程とを実現してもよい。

【0059】

上記実施形態１〜３において、第１フィルタ１４０と第２フィルタ１６０とは重ねて配置されているとしたが、これに限られない。たとえば、第１フィルタ１４０と第２フィルタ１６０とを密着させて容器１２０内に配置してもよい。また、第１フィルタ１４０と第２フィルタ１６０とが一体で成形されていてもよい。また、第１フィルタ１４０と第２フィルタ１６０とは重ねて配置されていなくとも、第２フィルタ１６０上に血球３２０が堆積して目詰まりが起こる前に微生物３４０が第２フィルタ１６０を透過できるような構成であればよく、第１フィルタ１４０と第２フィルタ１６０との間に隙間を設けられていてもよい。

【0060】

［態様］
上述した複数の例示的な実施の形態及びその変形例は、以下の態様の具体例であることが当業者により理解される。

【0061】

（第１項）一態様に係る液体試料の処理方法は、血球と血球よりも小さい測定対象物を含む液体試料に対して、測定対象物に対する濾過抵抗が、血球に対する濾過抵抗よりも小さい第１フィルタを用いた第１濾過を行い、これにより血球に対して測定対象物を先行させるステップと、第１フィルタに血球が残った状態で、測定対象物を含む濾液に対して第２フィルタを用いた第２濾過を行って測定対象物をサイズ選択的に透過させ、これにより液体試料から血球が除去された濾液を得るステップとを含む。

【0062】

このような構成によれば、第１フィルタに血球が残った状態で、第２濾過を行って測定対象物を透過させるため、血球により目詰まりが生じることを防止することができ、濾過という簡便な方法で血球を除去することができる。

【0063】

（第２項）第１項に記載の液体試料の処理方法の先行させるステップにおいては、液体試料が深層濾過されてもよい。

【0064】

このような構成によれば、血球が内部捕捉されることで血球の移動が測定対象物に比べて遅くなり、その結果、測定対象物を血球に対して先行させることとなる。

【0065】

（第３項）第１項または第２項に記載の液体試料の処理方法の濾液を得るステップにおいては、測定対象物を含む濾液が表面濾過される。

【0066】

このような構成によれば、深層濾過に比べて血球を確実に除去することができる。

【0067】

（第４項）第１項から第３項のいずれか１項に記載の液体試料の処理方法は、濾液を得るステップで得られた濾液から、測定対象物を濾別するステップをさらに備えてもよい。

【0068】

このような構成によれば、血球を取り除いた状態で測定対象物を回収することができ、測定対象物の精製ができる。

【0069】

（第５項）第１項から第４項のいずれか１項に記載の液体試料の処理方法において、測定対象物は、微生物を含む。

【0070】

このような構成によれば、血球を含む液体試料から微生物を精製することができる。また、第１フィルタに血球が残った状態で第２濾過を行って微生物を透過させるため、血球により目詰まりが生じることなく微生物が透過し、濾液内に効率的に微生物を残すことができる。そのため、微生物を効率的に回収することができ、その結果、回収した微生物を培養して所定の数まで育てるまでに必要な時間を短縮することができる。

【0071】

（第６項）第１項から第５項のいずれか１項に記載の液体試料の処理方法の先行させるステップおよび濾液を得るステップは、第１濾過の一次側からの加圧プロセスおよび第２濾過の二次側からの減圧プロセスのうちの少なくとも一方を含む。

【0072】

（第７項）また、一態様に係る液体試料の処理装置は、血球を含む液体試料を受ける容器と、容器内に配置された第１フィルタと、容器内において第１フィルタの下流側に配置された第２フィルタとを含む。第１フィルタは、血球および血球よりも小さい測定対象物を透過可能であって、測定対象物を血球よりも先に透過させる性質を有する。第２フィルタは、血球をサイズ選択的に捕捉し且つ測定対象物をサイズ選択的に透過させることが可能である。

【0073】

このような構成によれば、第１フィルタが血球よりも測定対象物を先に透過させる性質を有するため、第１フィルタの下流側に配置された第２フィルタに血球よりも測定対象物の方が先に到達し、測定対象物が血球よりも先に第２フィルタを透過するため、血球により目詰まりが生じることを防止することができ、濾過という簡便な方法で血球を除去することができる。

【0074】

（第８項）第７項に記載の液体試料の処理装置において、第１フィルタは、第２フィルタの上流側に重ねて配置されてもよい。

【0075】

（第９項）第７項または第８項に記載の液体試料の処理装置において、第１フィルタは、血球を一時的に捕捉する機構を有していてもよい。

【0076】

このような構成によれば、血球が内部捕捉されることで血球の移動が測定対象物に比べて遅くなり、その結果、血球よりも測定対象物が先に第１フィルタを透過することとなる。

【0077】

（第１０項）第９項に記載の液体試料の処理装置において、第１フィルタは、デプスフィルタであってもよい。

【0078】

（第１１項）第１０項に記載の液体試料の処理装置において、デプスフィルタは、ガラス繊維フィルタであってもよい。

【0079】

（第１２項）第７項〜第１１項に記載の液体試料の処理装置において、第２フィルタは、血球よりも小さく測定対象物よりも大きい孔の径を有していてもよい。

【0080】

（第１３項）第７項から第１２項のいずれか１項に記載の液体試料の処理装置において、第２フィルタは、メンブレンフィルタであってもよい。

【0081】

このような構成によれば、デプスフィルターに比べて血球を確実に除去することができる。

【0082】

（第１４項）第７項〜第１３項のいずれか１項に記載の液体試料の処理装置において、第２フィルタは、２μｍ以上６μｍ以下のフィルタ径を有していてもよい。

【0083】

（第１５項）第７項から第１４項のいずれか１項に記載の液体試料の処理装置は、容器内において第２フィルタの下流側に配置され、測定対象物をサイズ選択的に捕捉する性質を有する第３フィルタをさらに備えていてもよい。

【0084】

このような構成によれば、血球を取り除いた状態で測定対象物を回収することができ、測定対象物の精製ができる。

【0085】

（第１６項）第１５項に記載の液体試料の処理装置において、容器は、第１フィルタおよび第２フィルタが配置された第１濾過器と、第１濾過器の下流側に設けられた第３フィルタが配置された第２濾過器とを含む。

【0086】

この構成によれば、第１濾過器により血球が除去され、第２濾過器内に測定対象物が回収される。その結果、測定対象物を回収するにあたり、血球が第２濾過器内に混入してしまうことを防止することができる。

【0087】

（第１７項）第７項から第１６項のいずれか１項に記載の液体試料の処理装置において、測定対象物は、微生物を含む。

【0088】

このような構成によれば、血球を含む液体試料から微生物を精製することができる。また、微生物が血球よりも先に第２フィルタを透過するため、血球により第２フィルタが目詰まりを起こす前に微生物を透過させることができ、濾液内に効率的に微生物を残すことができる。そのため、微生物を効率的に回収することができ、その結果、回収した微生物を培養して所定の数まで育てるまでに必要な時間を短縮することができる。

【0089】

今回開示された実施の形態は、全ての点で例示であって制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は、上記した実施の形態の説明ではなくて特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等の意味及び範囲内での全ての変更が含まれることが意図される。

【符号の説明】

【0090】

１，１ａ，１ｂ 回収装置、２２ 内部空間、２４ 排出口、２６ コネクタ、１００，１００ａ，１００ｂ 処理装置、１２０，１２０ａ，１２０ｂ 容器、１２２，１２２ｂ 第１濾過器、１２４ 第２濾過器、１３０ 連結管、１４０ 第１フィルタ、１６０ 第２フィルタ、１８０ 第３フィルタ、２００ 吸引ボックス、２００ａ 廃液ボックス、２００ｂ 廃液タンク、２２０ 回収容器、３００ 液体試料、３２０ 血球、３４０ 微生物、４００ シリンジ、４２０ 筒先、４４０ 押し子。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】