特許 5651285 抗ＣＤ１９抗体および腫瘍学における使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】5651285

(24)【登録日】2014年11月21日

(45)【発行日】2015年1月7日

(54)【発明の名称】抗ＣＤ１９抗体および腫瘍学における使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20141211BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20141211BHJP

【ＦＩ】

   A61K39/395 UZNA

   A61P35/02

【請求項の数】29

【全頁数】131

(21)【出願番号】特願2007-555383(P2007-555383)

(86)(22)【出願日】2006年2月15日

(65)【公表番号】特表2008-530142(P2008-530142A)

(43)【公表日】2008年8月7日

(86)【国際出願番号】US2006005676

(87)【国際公開番号】WO2006089133

(87)【国際公開日】20060824

【審査請求日】2009年2月9日

【審判番号】不服2012-18918(P2012-18918/J1)

【審判請求日】2012年9月27日

(31)【優先権主張番号】60/653,587

(32)【優先日】2005年2月15日

(33)【優先権主張国】US

(31)【優先権主張番号】60/702,063

(32)【優先日】2005年7月22日

(33)【優先権主張国】US

【微生物の受託番号】ATCC  PTA-6581

(73)【特許権者】

【識別番号】502363490

【氏名又は名称】デューク ユニバーシティ

(74)【代理人】

【識別番号】100091096

【弁理士】

【氏名又は名称】平木 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100118773

【弁理士】

【氏名又は名称】藤田 節

(74)【代理人】

【識別番号】100122389

【弁理士】

【氏名又は名称】新井 栄一

(74)【代理人】

【識別番号】100111741

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 夏夫

(74)【代理人】

【識別番号】100171505

【弁理士】

【氏名又は名称】内藤 由美

(72)【発明者】

【氏名】テッダー， トーマス エフ．

(72)【発明者】

【氏名】濱口 儒人

(72)【発明者】

【氏名】グロン， ハンネ

(72)【発明者】

【氏名】矢澤 徳仁

【合議体】

【審判長】 田村 明照

【審判官】 大宅 郁治

【審判官】 川口 裕美子

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２００５／０００９０１（ＷＯ，Ａ２）

【文献】 特表２００４−５０２７４２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００３−５３５９０７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００３−５３５９０８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００３−５３１１７８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００３−５０１４０１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特表２００２−５４４１７３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００１−５８９５６（ＪＰ，Ａ）

【文献】 Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９７年，Ｖｏｌ．３４，ｐｐ．１１５７−６５．

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

A61K39/00-44

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）ＩｇＧ１ヒトアイソタイプまたはＩｇＧ３ヒトアイソタイプであるか、または（ｂ）ヒトの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する、モノクローナルヒトまたはヒト化抗ＣＤ１９抗体を含む、ヒト患者におけるＢ細胞の悪性疾患の治療用組成物であって、該抗体が、
配列番号２で示される配列のアミノ酸３３〜３７、５１〜６８および１０１〜１１５に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列と、
配列番号１６で示される配列のアミノ酸４３〜５８、７４〜８０および１１３〜１２１に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列とを含むか、または
配列番号４で示される配列のアミノ酸３３〜３７、５１〜６８および１０１〜１１４に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列と、
配列番号１８で示される配列のアミノ酸４４〜５８、７４〜８０および１１３〜１２１に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列とを含む、
上記組成物。

【請求項2】

前記抗体が配列番号２または配列番号４で示される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列からなる重鎖を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記抗体が配列番号１６または配列番号１８で示される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列からなる軽鎖を含む、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項4】

前記抗体が循環するＢ細胞を枯渇させることができる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項5】

前記抗体が骨髄のＢ細胞を枯渇させることができる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項6】

Ｂ細胞の悪性疾患が、急性リンパ芽球性白血病、マントル細胞リンパ腫、プレＢ細胞性急性リンパ性白血病、または前駆Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項7】

ＡＤＣＣを媒介する前記抗ＣＤ１９抗体が、ＩｇＧ１ヒトアイソタイプ、ＩｇＧ２ヒトアイソタイプ、ＩｇＧ３ヒトアイソタイプ、またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプの抗体である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項8】

前記Ｂ細胞の悪性疾患は、前記組成物の投与前に処置される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項9】

前記Ｂ細胞の悪性疾患は、前記組成物の投与後に、抗ＣＤ１９抗体治療以外の治療によって処置される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項10】

前記悪性疾患に対する処置は、化学療法、放射免疫治療、毒素治療、プロドラッグ活性化酵素による治療、抗体治療、単球もしくはマクロファージを増強する治療、免疫調節療法、腫瘍新生血管傷害（スタチン）療法、カリチェアミシン治療、外科的治療、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項８または９に記載の組成物。

【請求項11】

ヒトの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するモノクローナル抗ＣＤ１９抗体を含む、（ａ）ヒト患者においてＢ細胞の悪性疾患から生じる初期の疾患の処置用、または(ｂ)ヒト患者におけるＢ細胞の悪性疾患の処置用組成物であって、該ヒト患者が、該悪性疾患に対する処置を以前に受けておらず、Ｂ細胞の悪性疾患がＣＤ１９陽性であるか、または該ヒトが少なくとも１／ｄｌの単球カウントを有し、該処置のためのレジメンによって循環するＢ細胞が枯渇し、かつ該抗体が、
配列番号２で示される配列のアミノ酸３３〜３７に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列、アミノ酸５１〜６８に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列、およびアミノ酸１０１〜１１５に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列と、
配列番号１６で示される配列のアミノ酸４３〜５８に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列、アミノ酸７４〜８０に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列、およびアミノ酸１１３〜１２１に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列とを含むか、または、
配列番号４で示される配列のアミノ酸３３〜３７に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列、アミノ酸５１〜６８に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列、およびアミノ酸１０１〜１１４に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列と、
配列番号１８で示される配列のアミノ酸４４〜５８に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列、アミノ酸７４〜８０に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列、およびアミノ酸１１３〜１２１に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むものである、
上記組成物。

【請求項12】

前記抗体が配列番号２または配列番号４で示される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列からなる重鎖を含む、請求項１１に記載の組成物。

【請求項13】

前記抗体が配列番号１６または配列番号１８で示される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列からなる軽鎖を含む、請求項１１または１２に記載の組成物。

【請求項14】

抗ＣＤ１９抗体治療以外の治療が次に前記ヒト患者に適用される、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項15】

前記治療は、化学療法、放射線治療、毒素ベースの治療、放射化学ベースの治療または外科的治療である、請求項１４に記載の組成物。

【請求項16】

前記レジメンは、単一の治療剤としての、別の治療剤と組み合わせた、または毒性の副作用を減少させる薬剤と組み合わせた前記抗体の投与を含む、請求項１１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項17】

前記レジメンは、前記抗体の反復適用を含む、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項18】

前記抗ＣＤ１９抗体は、少なくとも４日間〜７日間である半減期を有する、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項19】

前記抗ＣＤ１９抗体が、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ抗体、ヒトＩｇＧ３アイソタイプ抗体、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ抗体、またはヒトＩｇＧ４アイソタイプ抗体である、請求項１１〜１８のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項20】

前記抗ＣＤ１９抗体が、ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項１１〜１９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項21】

前記Ｂ細胞の悪性疾患は、軽度悪性群／濾胞性非ホジキンリンパ腫、小リンパ球性（ＳＬ）非ホジキンリンパ腫、中等度悪性群／濾胞性非ホジキンリンパ腫、中等度悪性群のびまん性非ホジキンリンパ腫、高度悪性群の免疫芽球性非ホジキンリンパ腫、高度悪性群のリンパ芽球性非ホジキンリンパ腫、高度悪性群の小さい大細胞の非ホジキンリンパ腫および大きな病変の非ホジキンリンパ腫を含むＢ細胞サブタイプの非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；バーキットリンパ腫；多発性骨髄腫；前Ｂ細胞性急性リンパ性白血病および早期Ｂ細胞前駆体に由来する他の悪性疾患；一般的な急性リンパ性白血病；慢性リンパ性白血病；ヘアリーセル白血病；ヌル急性リンパ芽球性白血病；ヴァルデンストレームマクログロブリン血症；ならびに前リンパ性白血病；Ｌ鎖病；形質細胞腫；骨硬化性骨髄腫；形質細胞性白血病；意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）；くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）；無症候性多発性骨髄腫（ＩＭＭ）；またはホジキンリンパ腫である、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項22】

前記レジメンは、単球の機能またはマクロファージの機能を増強する化合物を投与する工程をさらに含む、請求項１１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項23】

前記ヒトは、免疫無防備状態である、請求項１４に記載の組成物。

【請求項24】

非経口経路、腹腔内経路、または筋肉内経路によって投与される、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項25】

静脈内経路または皮下経路によって投与される、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項26】

前記抗ＣＤ１９抗体は、３７．５ｍｇ／ｍ^２以下の用量で皮下経路によって投与される、請求項２５に記載の組成物。

【請求項27】

前記抗ＣＤ１９抗体は、１．５ｍｇ／ｍ^２以下の用量で投与される、請求項２６に記載の組成物。

【請求項28】

前記レジメンは、前記ヒトに対する前記抗ＣＤ１９抗体の１回より多い投与を含む、請求項１１〜２７のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項29】

前記レジメンは、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ５２抗体、またはそれらの任意の組み合わせを投与する工程をさらに含む、請求項１１〜２８のいずれか１項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、一部、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈによって授与された助成金番号ＣＡ８１７７６、ＣＡｌ ０５００１、およびＣＡ９６５４７、ならびにＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈによって授与された助成金番号ＡＩ５６３６３のに基づく政府支援によってなされた。米国政府は、本発明において特定の権利を有する。

【0002】

本願は、米国特許法第１１９条（ｅ）項の下で、米国仮特許出願第６０／６５３，５８７号（２００５年２月１５日出願）および米国仮特許出願第６０／７０２，０６３号（２００５年７月２２日出願）（それらの各々は、その全体が参考として援用される）に基づく優先権を主張する。

【0003】

（１．導入）
本発明は、ヒト被験体におけるＢ細胞の障害または疾患（Ｂ細胞の悪性疾患を含む）の、ヒトＣＤ１９抗原に結合する治療用抗体を使用した処置のための方法に関する。好ましい実施形態において、本発明の組成物および方法の治療的抗ＣＤ１９抗体は、好ましくは、ヒトの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する。本発明は、さらに、ＩｇＧ１ヒトアイソタイプおよび／またはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む組成物に関する。本発明は、さらに、好ましくはヒトのＡＤＣＣを媒介するＩｇＧ２ヒトアイソタイプおよび／またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む組成物に関する。本発明はまた、モノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体、モノクローナルヒト化抗ＣＤ１９抗体、またはモノクローナルキメラ抗ＣＤ１９抗体を包含する。

【背景技術】

【0004】

（２．発明の背景）
Ｂ細胞表面マーカーは、一般に、Ｂ細胞の障害または疾患、自己免疫疾患、および移植拒絶反応の処置のための標的として示唆されている。Ｂ細胞表面マーカーの例としては、ＣＤ１０白血球表面マーカー、ＣＤ１９白血球表面マーカー、ＣＤ２０白血球表面マーカー、ＣＤ２１白血球表面マーカー、ＣＤ２２白血球表面マーカー、ＣＤ２３白血球表面マーカー、ＣＤ２４白血球表面マーカー、ＣＤ３７白血球表面マーカー、ＣＤ５３白血球表面マーカー、ＣＤ７２白血球表面マーカー、ＣＤ７４白血球表面マーカー、ＣＤ７５白血球表面マーカー、ＣＤ７７白血球表面マーカー、ＣＤ７９ａ白血球表面マーカー、ＣＤ７９ｂ白血球表面マーカー、ＣＤ８０白血球表面マーカー、ＣＤ８１白血球表面マーカー、ＣＤ８２白血球表面マーカー、ＣＤ８３白血球表面マーカー、ＣＤ８４白血球表面マーカー、ＣＤ８５白血球表面マーカー、およびＣＤ８６白血球表面マーカーが挙げられる。特定のこれらのマーカーを特異的に結合する抗体が、開発されており、そしてその抗体は、疾患および障害の処置について試験されている。

【0005】

例えば、成熟Ｂ細胞に特異的なＣＤ２０細胞表面分子およびそれらの悪性の対応物に対するキメラモノクローナル抗体（ｍＡｂ）または放射性標識モノクローナル抗体（ｍＡｂ）ベースの治療は、非ホジキンリンパ腫に対する有効なインビボ処置であることが示されている（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０）。抗ＣＤ２０モノクローナル抗体治療はまた、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、特発性血小板減少性紫斑病および溶血性貧血の発現、ならびに他の免疫媒介性疾患を改善することが見出されている（非特許文献１１；非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５）。抗ＣＤ２２モノクローナル抗体ＬＬ−２は、化学療法の処置を受けている、攻撃的でありかつ再発したリンパ腫の患者を処置するのに有効であることが示された（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ、特許文献１および特許文献２）。抗ＣＤ２０（ＩｇＧ１）抗体、ＲＩＴＵＸＡＮ^ＴＭは、特定の疾患（例えば、成人の免疫性血小板減少性紫斑病、慢性関節リウマチ、および自己免疫性溶血性貧血）の処置において首尾よく使用されている（Ｃｕｒｅｄら、特許文献３）。この治療の効果にもかかわらず、大部分の急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）および多くの他のＢ細胞の悪性疾患は、ＣＤ２０を発現しないか、ＣＤ２０を低レベルで発現するか、またはＣＤ２０免疫療法後にＣＤ２０発現を失ったかのいずれかである（非特許文献１６）。さらに、ＣＤ２０の発現は、非ホジキンリンパ腫患者のうちの半分しかＣＤ２０指向型免疫療法に応答しないので、抗ＣＤ２０治療に対する応答を予測するものではない。

【0006】

ヒトＣＤ１９分子は、ヒトＢ細胞の表面上に発現される構造的に異なる細胞表面レセプターであり、そのＢ細胞としては、プレＢ細胞、発達初期におけるＢ細胞（すなわち、未熟Ｂ細胞）、形質細胞への最終的な分化を経る成熟Ｂ細胞、および悪性Ｂ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＤ１９は、大部分の前Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ性白血病、ヘアリーセル白血病、一般的な急性リンパ性白血病、およびいくつかのヌル急性リンパ芽球性白血病（Ｎｕｌｌ−ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ）によって発現される（非特許文献１７、非特許文献１８、非特許文献１９、非特許文献２０、非特許文献２１）。形質細胞上のＣＤ１９の発現は、それが分化したＢ細胞の腫瘍（例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ヴァルデンストレーム腫瘍）上に発現され得ることを、さらに示唆する（非特許文献２２；非特許文献２３）。ＣＤ２０とは異なり、ＣＤ１９抗原は、抗ＣＤ１９抗体によって結合される場合、細胞によって、より高いレベルで発現され、そして内在化されると考えられた。

【0007】

ＣＤ１９抗原はまた、免疫療法のための、目的とされる多くの標的のうちの１つであった。しかし、細胞による内在化に起因して標的として認知されていなかった利用可能性は、ヒト被験体において首尾よく使用され得る治療プロトコルの開発に障害を与えていると考えられた。ＣＬＢ−ＣＤ１９抗体（抗ＣＤ１９マウスＩｇＧ２ａ ｍＡｂ）は、無胸腺マウス中に移植されたヒト腫瘍の増殖を阻害することが見出された（非特許文献２４）。別の研究において、モノクローナルマウス抗体ＦＭＣ６３（ＩｇＧ２ａ）は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を用いてキメラ化された。ヒトＢ細胞リンパ腫を有するＳＣＩＤマウス（異種移植（ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）モデル）に対するこのキメラ抗体の投与は、補体媒介性細胞傷害またはＡＤＣＣを誘導しなかったが、移植された腫瘍細胞の顕著な殺傷を生じた（非特許文献２５）。

【0008】

腫瘍移植の異種移植マウスモデルを使用して得られた結果は、ヒト患者におけるマウス抗ＣＤ１９抗体を用いた研究をもたらした。マウスＣＬＢ−ＣＤ１９抗体は、進行性の非ホジキンリンパ腫と診断され、以前に従来の治療（化学療法または放射線治療）に失敗した６人の患者に投与された。これらの患者は、２２５〜１，０００ｍｇの範囲の総抗体用量を与えられた（非特許文献２６）。循環する腫瘍細胞は、抗体の注入後に２人の患者において一時的に減少したが、１人の患者だけが、２期間の抗体処置後に部分的な寛解を達成した。治療効力に関する結論を、この小さな群の治療抵抗性患者から導くことはできなかった。

【0009】

その後、これらの研究者らは、結合体化されていないＣＤ２０ ｍＡｂの抗腫瘍効果が、移植モデルにおいてＣＤ１９ ｍＡｂの抗腫瘍効果よりずっと優れていることを示した（非特許文献２７；および非特許文献２８）。さらに、この者らは、ＣＤ１９ ｍＡｂとＣＤ２０ ｍＡｂとを組み合わせて使用する場合、腫瘍発生数に対する相加効果または相乗効果を観察しなかった（非特許文献２７）。異種移植動物モデルは、ヒト被験体における効力について悪い予後を示すと認識され、これらの動物におけるこのネガティブな結果は、むき出しの抗ＣＤ１９抗体による治療への興味をなくさせた。

【0010】

抗ＣＤ１９抗体ベースの免疫毒素の使用は、思わしくない結果を等しくもたらした。初期の臨床試験において、Ｂ４抗ＣＤ１９抗体（マウスＩｇＧ１ ｍＡｂ）は、植物毒素リシンに結合体化され、そして以前に従来の治療に失敗した、多発性骨髄腫を有するヒト患者（非特許文献２９）、進行した非ホジキンリンパ腫を有するヒト患者（非特許文献３０）、および治療抵抗性であるＢ細胞の悪性疾患を有するヒト患者（非特許文献３１）に投与された。これらの試験は、一般に、Ｂ４−リシン結合体をヒトに投与することの安全性を示した；しかし、結果は、雑多なものであり、そして応答率は、ＲＩＴＵＸＡＮ^ＴＭによる臨床試験と比較して思わしくないものであった（非特許文献３０）。さらに、発症した患者の大部分は、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答またはヒト抗リシン抗体（ＨＡＲＡ）応答を生じた。

【0011】

別の試験において、以前に従来の治療によって処置された７人の軽度悪性群非ホジキンリンパ腫患者が、低用量のインターロイキン−２の持続注入と組み合わせてマウスＣＬＢ−ＣＤ１９抗体によって処置された（非特許文献３２）。部分的な寛解が、１人の白血病患者において生じ、そして循環するＢ細胞の５０％より大きい減少が、観察された。循環するＢ細胞の数は、評価された５人の残りの患者のうちの４人において変化しなかった。したがって、ヒトにおけるマウス抗ＣＤ１９抗体および抗ＣＤ１９抗体ベースの免疫毒素の治療的評価は、効力について評価されることができない逸話的なデータをもたらした。

【特許文献1】米国特許第６，１３４，９８２号明細書

【特許文献2】米国特許第６，３０６，３９３号明細書

【特許文献3】国際公開第００／６７７９６号パンフレット

【非特許文献1】Ｔｅｄｄｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、１９９４年、第１５号、ｐ．４５０−４５４

【非特許文献2】Ｐｒｅｓｓら、Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、２００１年、ｐ．２２１−２４０

【非特許文献3】Ｋａｍｉｎｓｋｉら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、１９９３年、第３２９号、ｐ．４５９−４６５

【非特許文献4】Ｗｅｉｎｅｒ、Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ、１９９９年、第２６号、ｐ．４３−５１

【非特許文献5】Ｏｎｒｕｓｔら、Ｄｒｕｇｓ、１９９９年、第５８号、ｐ．７９−８８

【非特許文献6】ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１９９８年、第１２号、ｐ．１７６３−１７６９

【非特許文献7】Ｒｅｆｆら、Ｂｌｏｏｄ、１９９４年、第８３号、ｐ．４３５−４４５

【非特許文献8】Ｍａｌｏｎｅｙら、Ｂｌｏｏｄ、１９９７年、第９０号、ｐ．２１８８−２１９５

【非特許文献9】Ｍａｌｏｎｅｙら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ、１９９７年、第１５号、ｐ．３２６６−３２７４

【非特許文献10】Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃ、１９９７年、第２５号、ｐ．７０５−７０８

【非特許文献11】Ｓｉｌｖｅｒｍａｎら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、２００２年、第４８号、ｐ．１４８４−１４９２

【非特許文献12】Ｅｄｗａｒｄｓら、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、２００１年、第４０号、ｐ．１−７

【非特許文献13】Ｄｅ Ｖｉｔａら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、２００２年、第４６号、ｐ．２０２９−２０３３

【非特許文献14】Ｌｅａｎｄｒｏら、Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．、２００２年、第６１号、ｐ．８８３−８８８

【非特許文献15】Ｌｅａｎｄｒｏら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、２００１年、第４６号、ｐ．２６７３−２６７７

【非特許文献16】Ｓｍｉｔｈら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２００３年、第２２号、ｐ．７３５９−７３６８

【非特許文献17】Ｎａｄｌｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９８３年、第１３１号、ｐ．２４４−２５０

【非特許文献18】Ｌｏｋｅｎら、Ｂｌｏｏｄ、１９８７年、第７０号、ｐ．１３１６−１３２４

【非特許文献19】Ｕｃｋｕｎら、Ｂｌｏｏｄ、１９８８年、第７１号、ｐ．１３−２９

【非特許文献20】Ａｎｄｅｒｓｏｎら、１９８４．Ｂｌｏｏｄ、１９８４年、第６３号、ｐ．１４２４−１４３３

【非特許文献21】Ｓｃｈｅｕｅｒｍａｎｎ、Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈｏｍａ、１９９５年、第１８号、ｐ．３８５−３９７

【非特許文献22】Ｇｒｏｓｓｂａｒｄら、Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ、１９９８年、第１０２号、ｐ．５０９−１５

【非特許文献23】Ｔｒｅｏｎら、Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ、２００３年、第３０号、ｐ．２４８−５２

【非特許文献24】Ｈｏｏｉｊｂｅｒｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９５年、第５５号、ｐ．８４０−８４６

【非特許文献25】Ｇｅｏｆｆｒｅｙら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、１９９５年、第４１号、ｐ．５３−６０

【非特許文献26】Ｈｅｋｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、１９９１年、第３２号、ｐ．３６４−３７２

【非特許文献27】Ｈｏｏｉｊｂｅｒｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１９９５年、第５５号、ｐ．８４０−８４６

【非特許文献28】Ｈｏｏｉｊｂｅｒｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１９９５年、第５５号、ｐ．２６２７−２６３４

【非特許文献29】Ｇｒｏｓｓｂａｒｄら、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ、１９９８年、第１０２号、ｐ．５０９−５１５

【非特許文献30】Ｇｒｏｓｓｂａｒｄら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９９年、第５号、ｐ．２３９２−２３９８

【非特許文献31】Ｇｒｏｓｓｂａｒｄら、Ｂｌｏｏｄ、１９９２年、第７９号、ｐ．５７６−５８５

【非特許文献32】Ｖｌａｓｖｅｌｄら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、１９９５年、第４０号、ｐ．３７−４７

【発明の開示】

【課題を解決するための手段】

【0012】

（３．発明の要旨）
本発明は、免疫療法組成物、ならびにヒトＣＤ１９抗原に結合し、そして好ましくは、ヒトのＡＤＣＣを媒介する治療用抗体を使用する、ヒト被験体におけるＢ細胞の疾患および障害（例えば、Ｂ細胞の悪性疾患であるが、これに限定されない）の処置のための方法に関する。本発明は、ＩｇＧ１ヒトアイソタイプまたはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。本発明は、好ましくは、ヒトのＡＤＣＣを媒介するＩｇＧ２ヒトアイソタイプまたはＩｇＧ４ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。本発明は、ヒトのＡＤＣＣを媒介するＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ、またはＩｇＧ４アイソタイプのキメラ化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。好ましい実施形態において、本発明は、モノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体、モノクローナルヒト化抗ＣＤ１９抗体、またはモノクローナルキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。

【0013】

治療用処方物および治療レジメンは、Ｂ細胞およびそれらの前駆体に由来するＢ細胞の悪性疾患と診断されたヒト被験体を処置するために記載され、この悪性疾患としては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、前リンパ性白血病、ヘアリーセル白血病、一般的な急性リンパ性白血病およびいくつかのヌル急性リンパ芽球性白血病が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法は、例えば、ヒト被験体においてＣＤ１９指向型免疫療法を評価するためのトランスジェニックマウスモデルを使用することによって示される。

【0014】

１つの実施形態において、本発明は、薬学的に受容可能なキャリア中のＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体またはモノクローナルヒト化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物を提供する。別の実施形態において、本発明は、薬学的に受容可能なキャリア中のＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルキメラ化抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効な量を含む薬学的組成物を提供する。関連する実施形態において、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルキメラ化抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効な量は、患者の体重１ｋｇあたり１ｍｇ未満である。他の関連する実施形態において、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルキメラ化抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効な量は、患者の体重１ｋｇあたり２ｍｇより大きい。

【0015】

１つの局面にしたがって、本発明は、薬学的に受容可能なキャリア中のヒトの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するモノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体またはモノクローナルヒト化抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効な量を含む薬学的組成物を提供する。別の局面にしたがって、本発明は、薬学的に受容可能なキャリア中のヒトの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）および／またはアポトーシス活性を媒介するモノクローナルキメラ化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物を提供する。

【0016】

本発明は、ヒトにおいてＢ細胞の悪性疾患を処置する方法であって、その処置が必要であるヒトに、ＩｇＧ１ヒトアイソタイプまたはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体またはモノクローナルヒト化抗ＣＤ１９抗体を、循環するＢ細胞を枯渇させるのに十分な量で投与する工程を包含する方法に関する。本発明はまた、ヒトにおいてＢ細胞の悪性疾患を処置する方法であって、その処置が必要であるヒトに、ヒトの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するモノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体またはモノクローナルヒト化抗ＣＤ１９抗体を、循環するＢ細胞を枯渇させるのに十分な量で投与する工程を包含する方法に関する。本発明は、ヒト患者においてＢ細胞の悪性疾患を処置する方法であって、このような処置が必要であるヒト患者に対する、ＩｇＧ１ヒトアイソタイプまたはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのモノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体またはモノクローナルヒト化抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効なレジメンの適用を包含する方法に関する。

【0017】

１つの実施形態において、本発明は、ヒト患者においてＢ細胞の悪性疾患を処置する方法であって、このような処置が必要であるヒト患者に対する、ヒトの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するモノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体またはモノクローナルヒト化抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効なレジメンの適用を包含する方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、ヒト患者においてＢ細胞の悪性疾患から生じる初期の疾患を処置する方法であって、このような処置が必要であるヒトに対する、ヒトの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するモノクローナル抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効なレジメンの適用を包含する方法を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、ヒト患者においてＢ細胞の悪性疾患を処置する方法であって、その処置が必要であるヒト被験体に対する、ヒトの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するモノクローナル抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効なレジメンの適用を包含する方法を提供し、ここで上記ヒト被験体は、上記悪性疾患に対する処置を以前に受けていない。本発明のなお別の実施形態は、ヒト患者においてＢ細胞の悪性疾患を処置する方法であって、このような処置が必要であるヒト患者に対する、ヒトの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するモノクローナル抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効なレジメンの適用を包含する方法を提供し、上記Ｂ細胞の悪性疾患は、ＣＤ１９陽性である。さらなる実施形態において、本発明は、ヒト患者においてＢ細胞の悪性疾患を処置する方法であって、このような処置が必要であるヒト患者に対する、ヒトの抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介するモノクローナル抗ＣＤ１９抗体の治療的に有効なレジメンの適用を包含する方法を提供し、上記ヒト患者は、１ｄＬあたり少なくとも１の単球数を有する。

【0018】

（３．１．定義）
本明細書中で使用される場合、用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」および「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」（免疫グロブリン）とは、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成される多重特異性（ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ化（ｃａｍｅｌｉｓｅｄ）抗体、キメラ抗体、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、所望の生物学的活性を示す抗体フラグメント、ジスルフィド結合したＦｖ（ｓｄＦｖ）、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体が挙げられる）、細胞内抗体、および上記のうちのいずれかのエピトープ結合フラグメントをいう。特に、抗体は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性なフラグメント（すなわち、抗原結合部位を含む分子）を含む。免疫グロブリン分子は、任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスの分子であり得る。

【0019】

ネイティブな抗体は、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質である。各軽鎖は、１つのジスルフィド共有結合によって重鎖に連結されるが、ジスルフィド連結の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間で変動する。各重鎖および各軽鎖はまた、一定間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一方の末端に可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を有し、それに続く多くの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一方の末端に可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を有し、そして他方の末端に定常ドメインを有する；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列され、そして軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列される。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられる。このような抗体は、任意の哺乳動物（ヒト、サル、ブタ、ウマ、ウサギ、イヌ、ネコ、マウスなどが挙げられるが、これらに限定されない）に由来する。

【0020】

用語「可変」とは、可変ドメインの特定の部分が、抗体の間で配列において広範に異なり、そしてその可変ドメインの特定の部分が、その特定の抗原に対するそれぞれの特定の抗体の結合特異性を担うという事実をいう。しかし、その変動性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって等しく分散されない。それは、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの両方における相補性決定領域（ＣＤＲ）と称されるセグメント中に集中する。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。ネイティブな重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、β−シート構造に連結するループを形成し、そしていくつかの場合において、β−シート構造の部分を形成する３個のＣＤＲ（概してβ−シート構造を採る）によって連結される４個のＦＲ領域を含む。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲ領域によって、他の鎖由来のＣＤＲは、ＦＲ領域によって他の鎖由来のＣＤＲと非常に接近して一緒に保持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）を参照のこと）。定常ドメインは、一般に、抗原結合に直接関与しないが、抗原結合親和性に影響し得、そしてその定常ドメインは、種々のエフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣにおける抗体の関与）を示し得る。

【0021】

用語「超可変領域」とは、本明細書中で使用される場合、その抗原に対する結合を担う、抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２４〜３４（Ｌ１）、残基５０〜５６（Ｌ２）および残基８９〜９７（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメイン中の残基３１〜３５（Ｈ１）、残基５０〜６５（Ｈ２）および残基９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１））、および／あるいは「超可変ループ」由来のアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｌ１）、残基５０〜５２（Ｌ２）および残基９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｈ１）、残基５３〜５５（Ｈ２）および残基９６〜１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、１９６：９０１−９１７（１９８７））を含む。「フレームワーク」残基または「ＦＲ」残基は、本明細書中で定義される場合、超可変領域残基以外の可変ドメイン残基であり、そしてそれらは、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ドメイン抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、ワクチボディ（ｖａｃｃｉｂｏｄｙ）、直鎖抗体（ｌｉｎｅａｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、および二重特異性抗体を含む。

【0022】

本明細書中で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体をいい、すなわち、集団を含む個々の抗体は、小さい量で存在し得る可能な天然に存在する変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原性部位に対して高度に特異的である。さらに、代表的に、異なる決定因子（エピトープ）に対する異なる抗体を含む従来（ポリクローナル性）の抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定因子に対する。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが他の免疫グロブリン産生細胞によって汚染されていないハイブリドーマ細胞によって合成されるという点で有利である。あるいは、モノクローナル抗体は、そのモノクローナル抗体をコードする重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子によって、安定かまたは一過性にトランスフェクトされた細胞によって産生され得る。

【0023】

修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に同種の集団から得られるような抗体の性質を示し、そして任意の特定の方法による抗体の操作を必要とする場合に構築されるべきではない。用語「モノクローナル」は、本明細書中で、任意の真核生物のクローン、原核生物のクローン、またはファージのクローンを含む細胞のクローンの集団に由来する抗体をいうために使用され、そしてそれは、抗体が操作された方法ではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、または例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載された技術を使用するファージ抗体ライブラリーからの単離を包含する任意の組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）によって作製され得る。これらの方法は、モノクローナル性の哺乳動物抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ドメイン抗体、ダイアボディ、ワクチボディ、直鎖抗体、および二重特異性抗体を産生するために使用され得る。

【0024】

用語「キメラ」抗体は、重鎖および／または軽鎖の少なくとも一部が特定の種に由来する抗体、または特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体において対応する配列と同一または相同であり、そしてそれらの鎖の少なくとも１つの他の部分が、別の種に由来する抗体、または別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体において対応する配列と同一または相同である抗体、ならびにこのような抗体のフラグメントを含むが、但し、それらは、所望の生物学的活性を示す（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５（１９８４））。本明細書中の目的とするキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、旧世界猿（例えば、ヒヒ、アカゲザルまたはカニクイザル））およびヒトの定常領域配列に由来する可変ドメイン抗原結合配列を含む「霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）」抗体を含む（米国特許第５，６９３，７８０号）。

【0025】

非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの部分に関して、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、ここでそのレシピエント由来の超可変領域からの残基は、所望の特異性、親和性、および能力を有する、非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類）（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基によって置換される。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。さらに、ヒト化抗体は、そのレシピエント抗体またはそのドナー抗体に見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体の性能をさらに洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１個、および代表的に２個の可変ドメインの実質的に全部を含み、その超可変ループの全部または実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、そしてそのＦＲの全部または実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（代表的に、ヒト免疫グロブリンの定常領域）の少なくとも一部を含む。さらに詳細には、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．、２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。

【0026】

「ヒト抗体」は、ヒトに由来する抗体または抗原のチャレンジに応じて特定のを産生するように「操作」されているトランスジェニック生物体から得られる抗体であり得、当該分野で公知の任意の方法によって産生され得る。好ましい技術に従って、ヒト重鎖遺伝子座およびヒト軽鎖遺伝子座のエレメントは、内因性の重鎖伝子座および軽鎖遺伝子座の標的化された破壊を含む胚性幹細胞株に由来する生物体の系統に組み込まれる。トランスジェニック生物体は、ヒト抗原に特異的なヒト抗体を合成し得、そしてその生物体は、ヒト抗体を分泌するハイブリドーマを産生するために使用され得る。ヒト抗体はまた、重鎖および軽鎖が１種以上のヒトＤＮＡに由来するヌクレオチド配列によってコードされる抗体であり得る。完全ヒト抗体はまた、遺伝子または染色体のトランスフェクション法、およびファージディスプレイ技術、またはインビトロで活性化したＢ細胞（これらの全ては、当該分野において公知である）によって構築され得る。

【0027】

「ＣＤ１９」抗原とは、例えば、ＨＤ２３７またはＢ４抗体によって同定された約９０ｋＤａの抗原をいう（Ｋｉｅｓｅｌら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＩＩ、１２：１１１９（１９８７））。ＣＤ１９は、幹細胞の段階から最終的には形質細胞に分化するＢ系統細胞の分化全体を通して細胞において見出され、そのＢ系統細胞としては、プレＢ細胞、Ｂ細胞（ナイーブなＢ細胞、抗原刺激性Ｂ細胞、記憶Ｂ細胞、形質細胞、およびＢリンパ球を含む）および濾胞性樹上細胞が挙げられる。ＣＤ１９はまた、ヒト胎児組織中のＢ細胞において見出される。好ましい実施形態において、本発明の抗体によって標的化されるＣＤ１９抗原は、ヒトＣＤ１９抗原である。

【0028】

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」とは、非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、次いで標的細胞の溶解をもたらす細胞媒介性の反応をいう。好ましい実施形態において、このような細胞は、ヒト細胞である。任意の特定の作用機構に限定されることは望まないが、ＡＤＣＣを媒介するこれらの細胞傷害性細胞は、一般に、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）を発現する。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞（ＮＫ細胞）が、ＦｃγＲＩＩＩを発現するのに対して、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよび／またはＦｃγＲＩＶを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９：４５７−９２（１９９１）において要約される。分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されるようなインビトロＡＤＣＣアッセイが、実施され得る。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替的かまたは追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボ（例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）、９５：６５２−６５６（１９９８）において開示されるような動物モデル）において評価され得る。

【0029】

「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」とは、補体の活性化を開始し、そして補体の存在下で標的を溶解する、分子の能力をいう。補体の活性化経路は、同族の抗原と複合体形成した分子（例えば、抗体）に対する補体系（Ｃ１ｑ）の第１の成分の結合によって開始される。補体の活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔａｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０２：１６３（１９９６）に記載されるようなＣＤＣアッセイが、実施され得る。

【0030】

「エフェクター細胞」は、１以上のＦｃＲを発現し、かつエフェクター機能を遂行する白血球である。好ましくは、その細胞は、少なくともＦｃγＲＩ、ＦＣγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよび／またはＦｃγＲＩＶを発現し、そしてＡＤＣＣエフェクター機能を実行する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞および好中球が挙げられる；ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が、好ましい。好ましい実施形態において、そのエフェクター細胞は、ヒト細胞である。

【0031】

用語「Ｆｃレセプター」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを記載するために使用される。好ましいＦｃＲは、ネイティブな配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体を結合するもの（γレセプター）であり、そしてＦｃＲとしては、ＦｃγＲＩサブクラス、ＦｃγＲＩＩサブクラス、ＦｃγＲＩＩＩサブクラス、およびＦｃγＲＩＶサブクラスのレセプターが挙げられる、これらは、対立遺伝子改変体、および代替的に、これらのレセプターのスプライシングされた形態を含む。ＦｃγＲＩＩレセプターとしては、主にその細胞質ドメインにおいて異なる類似のアミノ酸配列を有するＦｃγＲＩＩＡ（「活性化レセプター」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害レセプター」）が挙げられる。活性化レセプターＦｃγＲＩＩＡは、細胞質ドメイン中に免疫レセプターチロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害レセプターＦｃγＲＩＩＢは、細胞質ドメイン中に免疫レセプターチロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。（Ｄａｅｒｏｎ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５：２０３−２３４（１９９７）を参照のこと）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｅｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ、４：２５−３４（１９９４）；ならびにｄｅ Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．、１２６：３３０−４１（１９９５）において概説される。他のＦｃＲ（将来において同定されるべきものを含む）は、本明細書中の用語「ＦｃＲ」によって包含される。この用語はまた、胎児への母体のＩｇＧの移行を担う新生児のレセプター（ＦｃＲｎ）を含む（Ｇｕｙｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、２４：２４９（１９９４））。

【0032】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む最小限の抗体フラグメントである。この領域は、強固な、非共有結合または共有結合における１個の重鎖ドメインと１個の軽鎖可変ドメインとのダイマーからなる。この構造において、各可変ドメインの３個のＣＤＲは、Ｖ_Ｈ−Ｖ_Ｌダイマーの表面上に抗原結合部位を規定するように相互作用する。集合的に、６個のＣＤＲは、抗体に対して抗原結合特異性を与える。しかし、単一の可変ドメイン（抗原に特異的な３個のＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、抗原を認識しそして結合でする能力を有するが、それは、結合部位全体よりも低い親和性である。

【0033】

本明細書中に記載される処置に使用されるエピトープに対する抗体の「親和性」は、当該分野において十分に理解される用語であり、エピトープに対する抗体の結合の程度、または強度を意味する。親和性は、当該分野において公知である多くの方法で測定され、そして／または示され得、その方法としては、平衡解離定数（ＫＤまたはＫｄ）、見かけの平衡解離定数（ＫＤ’またはＫｄ’）、およびＩＣ５０（競合アッセイにおいて５０％の阻害を達成するのに必要とされる量）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の目的に関して、親和性はエピトープに結合する抗体の所与の集団に対する平均の親和性であることが、理解される。本明細書中で報告されるＫＤ’の値は、ｍｇ ｍＬまたはｍｇ／ｍＬあたりのＩｇＧに関して、１ｍＬの血清（しかし、血漿が使用され得る）あたりのｍｇ Ｉｇを示す。抗体親和性が、本明細書中に記載される処置方法の適用についての基礎、または本明細書中に記載される処置方法についての選択として使用される場合、抗体親和性は、処置の前および／または間に測定され得、そして得られた値は、ヒト患者が処置についての適切な候補者であるか否かを評価するために、臨床家によって使用され得る。

【0034】

「エピトープ」は、当該分野において十分に理解されている用語であり、そして抗体に対する特異的結合を示す任意の化学的部分を意味する「エピトープ」はまた、エピトープを含み、そしてまた、抗体に特異的に結合するような部分または分子である抗原を含み得る。

【0035】

「Ｂ細胞表面マーカー」は、本明細書中で使用される場合、Ｂ細胞の表面上に発現される抗原であり、そのＢ細胞は、そのＢ細胞に結合する薬剤によって標的化され得る。例示のＢ細胞表面マーカーとしては、ＣＤ１０白血球表面マーカー、ＣＤ１９白血球表面マーカー、ＣＤ２０白血球表面マーカー、ＣＤ２１白血球表面マーカー、ＣＤ２２白血球表面マーカー、ＣＤ２３白血球表面マーカー、ＣＤ２４白血球表面マーカー、ＣＤ２５白血球表面マーカー、ＣＤ３７白血球表面マーカー、ＣＤ５３白血球表面マーカー、ＣＤ７２白血球表面マーカー、ＣＤ７３白血球表面マーカー、ＣＤ７４白血球表面マーカー、ＣＤ７５白血球表面マーカー、ＣＤ７７白血球表面マーカー、ＣＤ７９ａ白血球表面マーカー、ＣＤ７９ｂ白血球表面マーカー、ＣＤ８０白血球表面マーカー、ＣＤ８１白血球表面マーカー、ＣＤ８２白血球表面マーカー、ＣＤ８３白血球表面マーカー、ＣＤ８４白血球表面マーカー、ＣＤ８５白血球表面マーカー、およびＣＤ８６白血球表面マーカーが挙げられる。特定の目的とするＢ細胞表面マーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織と比較してＢ細胞において優勢に発現され、そして前駆Ｂ細胞および成熟Ｂ細胞の両方において発現され得る。１つの実施形態において、好ましいマーカーは、ＣＤ１９であり、それは、プロ／プレＢ細胞の段階〜最終的に分化した形質細胞の段階までの系統の分化全体を通して、Ｂ細胞において見出される。

【0036】

用語「抗体半減期」は、本明細書中で使用される場合、投与後の抗体分子の平均生存時間の尺度である抗体の薬物動態特性を意味する。抗体半減期は、患者の身体またはその特定の区画（例えば、血清において測定される（すなわち、循環半減期））からか、あるいは他の組織において、免疫グロブリンの既知の量の５０％を排除するのに必要とされる時間として示され得る。半減期は、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンのクラスによって異なり得る。一般に、抗体半減期の増大は、投与された抗体について、循環における平均滞留時間（ＭＲＴ）の増大をもたらす。

【0037】

用語「アイソタイプ」とは、抗体の分類をいう。抗体の定常ドメインは、抗原に対する結合に関与しないが、種々のエフェクター機能を示す。重鎖定常領域のアミノ酸配列に依存して、所与の抗体または免疫グロブリンは、５種の主要な免疫グロブリンのクラスのうちの１種に割り当てられ得る：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ。これらのクラスのうちの数種は、サブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１（γ１）、ＩｇＧ２（γ２）、ＩｇＧ３（γ３）、およびＩｇＧ４（γ４）、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２）へとさらに分割され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと称される。免疫グロブリンの異なるクラスの構造および三次元立体配置は、周知である。種々のヒト免疫グロブリンのクラスのうち、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ４およびヒトＩｇＭのみは、補体を活性化することが公知である。ヒトＩｇＧ１およびヒトＩｇＧ３は、ヒトにおいてＡＤＣＣを媒介することが公知である。

【0038】

本明細書中で使用される場合、用語「免疫原性」は、化合物が（特定の抗体の産生および／または特定のＴ細胞の増殖を刺激する）免疫応答を誘発し得ることを意味する。

【0039】

本明細書中で使用される場合、用語「抗原性」は、化合物が抗体によって認識されるか、または抗体に結合し得、そして免疫応答を誘導することを意味する。

【0040】

本明細書中で使用される場合、用語「アビディティ」は、抗体が抗原を結合する全体の結合強度（すなわち、両方の抗体のアーム（ａｒｍ））の尺度である。抗体のアビディティは、当該分野で公知である任意の手段（例えば、Ｇｒａｙら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．Ｍｅｔｋ、４４：１１−２４．（１９９３）によって記載されるような間接的な蛍光抗体の改変であるが、これに限定されない）を使用して過剰な抗原における抗原−抗体結合の解離を測定することによって決定され得る。

【0041】

用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「の処置」（または文法的に等しい用語）によって、被験体の状態の重篤度が、低下するかまたは少なくとも部分的に改善もしくは回復されること、ならびに／あるいは少なくとも１つの臨床症状におけるある程度の緩和、軽減もしくは減少が達成され、そして／または状態の進行における阻害もしくは遅延ならびに／または疾患および疾病の発症の予防もしくは遅延が存在することが、意味される。したがって、用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「の処置」（または文法的に等しい用語）とは、予防的処置レジメンおよび治療的処置レジメンの両方をいう。

【0042】

本明細書中で使用される場合、「十分な量」または特定の結果を達成「するのに十分な量」とは、必要に応じて治療効果（すなわち、治療的に有効な量の投与による）である所望の効果をもたらすのに有効である本発明の抗体または組成物の量をいう。例えば、「十分な量」または「するのに十分な量」は、枯渇するＢ細胞を枯渇させるのに有効な量であり得る。

【0043】

「治療的に有効な」量は、本明細書中で使用される場合、被験体にある程度の改善または利益を提供する量である。代替的に定められる場合、「治療的に有効な」量は、少なくとも１つの臨床症状においてある程度の緩和、軽減、および／または減少を提供する量である。本発明の方法によって処置され得る障害に関連する臨床症状は、当業者に公知である。さらに、当業者は、ある程度の利益が被験体に提供される限り、治療効果が完全であるかまたは治癒的である必要はないことを認識する。

【発明を実施するための最良の形態】

【0044】

（５．発明の詳細な説明）
本発明は、ＣＤ１９抗原に結合し、そして好ましくは、ヒトのＡＤＣＣを媒介する治療用抗体を使用した、ヒト被験体におけるＢ細胞の疾患および障害（例えば、Ｂ細胞の悪性疾患であるが、これに限定されない）の処置のための免疫療法組成物ならびに免疫療法による方法に関する。本発明は、ＩｇＧ１ヒトアイソタイプまたはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。本発明はまた、好ましくは、ヒトのＡＤＣＣを媒介するＩｇＧ２ヒトアイソタイプまたはＩｇＧ４ヒトアイソタイプのヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。特定の実施形態において、本発明はまた、当該分野で公知の手段によって産生され得るモノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体、モノクローナルヒト化抗ＣＤ１９抗体、またはモノクローナルキメラ化抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物に関する。

【0045】

治療用処方物および治療レジメンは、Ｂ細胞およびそれらの前駆体に由来するＢ細胞の悪性疾患と診断されたヒト被験体を処置するために記載され、この悪性疾患としては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、前リンパ性白血病、ヘアリーセル白血病、一般的な急性リンパ性白血病およびいくつかのヌル急性リンパ芽球性白血病が挙げられるが、これらに限定されない。

【0046】

（５．１．抗ＣＤ１９抗体の産生）
（５．１．１．ポリクローナル抗ＣＤ１９抗体）
ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連する抗原およびアジュバントの複数の皮下（ｓｃ）注射または腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって動物において惹起される。関連する抗原を免疫化される種において免疫原性であるタンパク質（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、または大豆トリプシンインヒビター）に、二官能性薬剤または誘導体化剤（例えば、マレイミドベルトゾイルスルホスクシンイミドエステル（ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｅｒｔｚｏｙｌ ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ ｅｓｔｅｒ）（システイン残基を介する結合体化）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介する）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸（ｓｕｃｃｕｎｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ＳＯＣｌ_２）を使用して結合体化することは、有用であり得る。

【0047】

動物は、例えば、１００μｇまたは５μｇのタンパク質または結合体（それぞれ、ウサギまたはマウスに対する）と、３容量のフロイント完全アジュバントとを混合し、そして複数の部位にてその溶液を皮内に注射することによって、抗原、免疫原性結合体、または免疫原性誘導体に対して免疫化される。１ヵ月後、その動物は、フロイント不完全アジュバント中の本来の１／５〜１／１０の量のペプチドまたは結合体を用いて、複数の部位における皮下注射によってブーストされる。７〜１４日後、その動物は、採血され、そしてその血清は、抗体力価についてアッセイされる。動物は、その力価がプラトーになるまでブーストされる。好ましくは、その動物は、同じ抗原の結合体（しかし、異なるタンパク質に結合体化され、そして／または異なる架橋試薬を介して結合体化される）を用いてブーストされる。結合体はまた、タンパク質融合体として組換え細胞培養物において作製され得る。また、凝集剤（例えば、ミョウバン）は、免疫応答を増強するために適切に使用される。

【0048】

（５．１．２．モノクローナル抗ＣＤ１９抗体）
本発明のモノクローナル抗ＣＤ１９抗体は、ヒトＣＤ１９抗原に対する結合特異性を示し、そして好ましくは、ヒトのＡＤＣＣを媒介し得る。これらの抗体は、ハイブリドーマ技術、組換え技術、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当該分で公知の広範な種々の技術を使用して産生され得る。抗体は、単一の抗原性部位に対して高度に特異的である。さらに、代表的には異なる決定因子（エピトープ）に対する異なる抗体を含む従来（ポリクローナル性）の抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、ヒトＣＤ１９抗原上の単一の決定因子に対する。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得る、このハイブリドーマ法は、マウス抗体（または他の非ヒト哺乳動物（例えば、ラット、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ラクダなど）に由来する抗体）、またはトランスジェニック動物に由来するヒト抗体（米国特許第６，０７５，１８１号、同第６，１１４，５９８号、同第６，１５０，５８４号、および同第６，６５７，１０３号を参照のこと）を産生するために使用され得る。あるいは、モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）によって作製され得、そしてモノクローナル抗体は、キメラ抗体およびヒト化抗体を含む。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載される技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離され得る。

【0049】

操作された抗ＣＤ１９抗体は、当該分野において公知である任意の手段によって産生され得、この方法としては、以下に記載される技術およびその技術に対する改良法が挙げられる。大規模な高収量の産生は、代表的に、操作された抗ＣＤ１９抗体を産生する宿主細胞を培養すること、およびその宿主細胞培養物から抗ＣＤ１９抗体を回収することを含む。

【0050】

（５．１．３．ハイブリドーマ技術）
モノクローナル抗体は、当該分野で公知であり、そして、例えば、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、第２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ、５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８１）（これらの参考文献は、その全体が参考として援用される）において教示される技術を含むハイブリドーマ技術を使用して産生され得る。例えば、ハイブリドーマ法において、マウスまたは他の適切な宿主動物（例えば、ハムスターまたはマカクザル）は、免疫化に使用されたタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するか、または免疫化に使用されたタンパク質に特異的に結合する抗体を産生し得るリンパ球を誘発するために免疫化される。あるいは、リンパ球は、インビトロで面気化され得る。次いでリンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、適切な融合剤（例えば、ポリエチレングリコール）を使用して骨髄腫細胞と融合される（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ、ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８６））。

【0051】

そのようにして調製させたハイブリドーマ細胞は、好ましくは、融合されていない親の骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する１種以上の物質を含む適切な培養培地中に接種され、そしてその倍地中で増殖される。例えば、親の骨髄腫細胞が、酵素であるヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培養培地は、代表的に、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含み（ＨＡＴ培地）、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を妨げる。

【0052】

好ましい骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定で高レベルの産生を補助し、そして培地（例えば、ＨＡＴ培地）に対して感受性である骨髄腫細胞である。これらの間で、好ましい骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株（例えば、Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ−２１マウス腫瘍およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍に由来するもの、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ、ＵＳＡから入手可能なＳＰ−２細胞またはＸ６３−Ａｇ８．６５３細胞）である。ヒト骨髄腫細胞株およびマウス−ヒトへテロ骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８７））。

【0053】

ハイブリドーマ細胞が増殖している培養培地は、ヒトＣＤ１９抗原に対するモノクローナル抗体の産生についてアッセイされる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降またはインビトロ結合アッセイ（例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ））によって決定される。

【0054】

所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後、そのクローンが、限界希釈手順によってサブクローニングされ得、そして標準的な方法によって増殖され得る（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ、ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８６））。この目的のための適切な培養培地は、例えば、Ｄ−ＭＥＭ培地またはＲＰＭＩ １６４０を含む。さらに、ハイブリドーマ細胞は、動物における腹水腫瘍のようなインビボで増殖され得る。

【0055】

サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって培養培地、腹水流体、または血清から適切に分離される。

【0056】

（５．１．４．組換えＤＮＡ技術）
本発明の抗ＣＤ１９抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗ＣＤ１９抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に同定および配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として機能する。一旦単離されると、そのＤＮＡは、発現ベクター中に配置され得、その発現ベクターは、組換え宿主細胞中における抗ＣＤ１９抗体の合成を得るために、トランスフェクトしなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞）中にトランスフェクトされる。

【0057】

ファージディスプレイ法において、機能的抗体ドメインが、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面上に提示される。特に、Ｖ_ＨドメインおよびＶ_ＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物ｃＤＮＡライブラリー（例えば、罹患組織のヒトｃＤＮＡライブラリーまたはマウスｃＤＮＡライブラリー）から増幅される。Ｖ_ＨドメインおよびＶ_ＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーと一緒に組換えられ、そしてファージミドベクター中にクローニングされる。そのベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉ中にエレクトロポレーションされ、そしてそのＥ．ｃｏｌｉは、ヘルパーファージに感染する。これらの方法において使用されるファージは、代表的に、ｆｄおよびＭ１３を含む糸状ファージであり、そしてＶ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインは、ファージの遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組換え的に融合される。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて（例えば、標識された抗原あるいは固体表面またはビーズに結合または捕捉された抗原を使用して）選択または同定され得る。本発明の抗体を作製するために使用され得るファージディスプレイ法の例としては、Ｂｒｉｎｋｍａｎら、１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８２：４１−５０；Ａｍｅｓら、１９９５、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８４：１７７−１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、１９９４、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、２４：９５２−９５８；Ｐｅｒｓｉｃら、１９９７、Ｇｅｎｅ、１８７：９−１８；Ｂｕｒｔｏｎら、１９９４、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、５７：１９１−２８０；国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／Ｏ１ １３４；国際出願番号ＷＯ ９０／０２８０９、ＷＯ ９１／１０７３７、ＷＯ ９２／０１０４７、ＷＯ ９２／１８６１９、ＷＯ ９３／１１２３６、ＷＯ ９５／１５９８２、ＷＯ ９５／２０４０１、およびＷＯ ９７／１３８４４；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号、および同第５，９６９，１０８号（これらの各々は、その全体が参考として援用される）に開示されるものが挙げられる。

【0058】

上記の参考文献に記載される通り、ファージの選択後、ファージ由来の領域をコードする抗体は、ヒト抗体を含む全抗体、または任意の他の所望の抗原結合フラグメントを産生するために、単離され得、使用され得、そして例えば、下に記載されるような哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含む任意の所望の宿主において発現され得る。Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメントおよびＦ（ａｂ’）_２フラグメントを組換え的に産生するための技術はまた、当該分野で公知の方法（例えば、ＰＣＴ出願番号ＷＯ ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘら、１９９２、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１２（６）：８６４−８６９；Ｓａｗａｉら、１９９５、ＡＪＲＩ、３４：２６−３４；およびＢｅｔｔｅｒら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４０：１０４１−１０４３（これらの参考文献は、その全体が参考として援用される）において開示される方法）を用いて利用され得る。

【0059】

さらなる実施形態において、抗体は、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２−５５４（１９９０）．Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８（１９９１）に記載される技術を使用して作製される抗体ファージライブラリーから単離され得る。Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ、２２２：５８１−５９７（１９９１）は、ファージライブラリーをそれぞれ使用したマウス抗体およびヒト抗体の単離を記載する。鎖シャッフリングは、高親和性（ｎＭの範囲）のヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９−７８３（１９９２））、ならびに非常に大きいファージライブラリーを構築するためのストラテジーとしてのコンビナトリアル感染（ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）およびインビボ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．、２１：２２６５−２２６６（１９９３））に使用され得る。したがって、これらの技術は、抗ＣＤ１９抗体を単離するための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の実行可能な代替技術である。

【0060】

全抗体を産生するために、Ｖ_Ｈヌクレオチド配列またはＶ_Ｌヌクレオチド配列、制限酵素部位およびａ制限酵素部位を保護するフランキング（ｆｌａｎｋｉｎｇ）配列を含むＰＣＲプライマーは、そのＶ_Ｈ配列またはＶ_Ｌ配列をｓｃＦｖクローンにおいて増幅するために使用され得る。当業者に公知のクローニング技術を利用して、ＰＣＲ増幅されたＶ_Ｈドメインは、Ｖ_Ｈ定常領域（例えば、ヒトγ４定常領域）を発現するベクター中にクローニングされ得、そしてＰＣＲ増幅されたＶ_Ｌドメインは、Ｖ_Ｌ定常領域（例えば、ヒトκ定常領域またはヒトλ定常領域）を発現するベクター中にクローニングされ得る。好ましくは、Ｖ_ＨドメインまたはＶ_Ｌドメインを発現するためのベクターは、ＥＦ−１αプロモーター、分泌シグナル、可変ドメインについてのクローニング部位、定常ドメイン、および選択マーカー（例えば、ネオマイシン）を含む。Ｖ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクター中にクローニングされ得る。次いで重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターは、完全長抗体（例えば、ＩｇＧ）を発現する安定な細胞株または一過性の細胞株を産生するために、当業者に公知の技術を使用して細胞株中に同時トランスフェクトされる。

【0061】

上記ＤＮＡはまた、例えば、そのコード配列を、相同マウス配列に代えてヒト重鎖定常ドメインおよびヒト軽鎖定常ドメインに置換すること（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１（１９８４））、またはｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｊｏｉｎｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ 免疫グロブリンのコート配列に、非免疫グロブリンポリペプチドについてのコード配列の全部または一部を共有結合させることによって改変され得る。

【0062】

（５．１．５．キメラ抗体）
本明細書中の抗ＣＤ１９抗体は、具体的に、重鎖および／または軽鎖の一部は、特定の種に由来する抗体あるいは特定の抗体のクラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同である一方で、それらの鎖の別の部分は、別の種に由来する抗体あるいは別の抗体のクラスまたはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であるキメラ抗体（キメラ免疫グロブリン）およびこのような抗体のフラグメントを含むが、但しそれらは、所望の生物学的活性を示す（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５（１９８４））。本明細書中の目的とするキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、旧世界猿（例えば、ヒヒ、アカゲザルまたはカニクイザル））およびヒトの定常領域配列に由来する可変ドメイン抗原結合配列を含む「霊長類化」抗体を含む（米国特許第５，６９３，７８０号）。

【0063】

（５．１．６．ヒト化抗体）
ヒト化抗体は、当該分野で公知である種々の技術を使用して産生され得、この技術としては、ＣＤＲグラフティング（例えば、欧州特許第ＥＰ ２３９，４００号；国際出願番号ＷＯ ９１／０９９６７；および米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号および同第５，５８５，０８９号（これらの各々は、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）、薄板化（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）または再表面作成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（例えば、欧州特許第ＥＰ ５９２，１０６号および同第ＥＰ ５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ、１９９１、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、１９９４、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、７（６）：８０５−８１４；およびＲｏｇｕｓｋａら、１９９４、ＰＮＡＳ、９１：９６９−９７３（これらの各々は、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）、鎖シャッフリング（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号（これは、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）、および例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際出願番号ＷＯ ９３１７１０５、Ｔａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６９：１１１９−２５（２００２）、Ｃａｌｄａｓら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、１３（５）：３５３−６０（２０００）、Ｍｏｒｅａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０（３）：２６７−７９（２０００）、Ｂａｃａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．、２７２（１６）：１０６７８−８４（１９９７）、Ｒｏｇｕｓｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ、９（１０）：８９５−９０４（１９９６）、Ｃｏｕｔｏら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５５（第２３補遺）：５９７３−５９７７（１９９５）、Ｃｏｕｔｏら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５５（８）：１７１７−２２（１９９５）、Ｓａｎｄｈｕ ＪＳ、Ｇｅｎｅ、１５０（２）：４０９−１０（１９９４）およびＰｅｄｅｒｓｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ、２３５（３）：９５９−７３（１９９４）（これらの各々は、その全体が本明細書中に参考として援用される）に開示される技術が挙げられるが、これらに限定されない。しばしば、フレームワーク領域中のフレームワーク残基は、抗原結合を変化させる（好ましくは、改良する）ためにＣＤＲドナー抗体由来の対応する残基によって置換される。これらのフレームワークの置換は、当該分野において周知である方法（例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用のモデリング、および特定に位置における通常のフレームワーク残基を同定するための配列比較）によって同定される。（例えば、Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号；およびＲｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３（これらは、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）。

【0064】

ヒト化抗ＣＤ１９抗体は、ヒトではない供給源由来のヒト化抗ＣＤ１９抗体中に導入された１個以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、「輸入（ｉｍｐｏｒｔ）」残基と称され、その残基は、代表的に、「輸入（ｉｍｐｏｒｔ）」可変ドメインから取り入れられる。したがって、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリン分子由来の１個以上のＣＤＲおよびヒト由来のフレームワーク領域を含む。抗体のヒト化は、当該分野において周知であり、そして本質的に、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４−１５３６（１９８８））に従い、げっ歯類ＣＤＲまたはげっ歯類ＣＤＲ配列でヒト抗体の対応する配列を置換すること（すなわち、ＣＤＲグラフティング（ＥＰ ２３９，４００；ＰＣＴ出願番号ＷＯ ９１／０９９６７；および米国特許第４，８１６，５６７号；同第６，３３１，４１５号；同第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第６，５４８，６４０（これらの内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される）））によって行われ得る。このようなヒト化キメラ抗体において、実質的にインタクトのヒト可変ドメイン未満のものは、非ヒト種由来の対応する配列によって置換されている。実際には、ヒト化抗体は、代表的に、いくつかのＣＤＲ残基および可能ないくつかのＦＲ残基がげっ歯類抗体中の類似部位由来の残基によって置換されるヒト抗体である。抗ＣＤ１９抗体のヒト化はまた、薄板化または再表面作成（ＥＰ ５９２，１０６；ＥＰ ５１９，５９６；Ｐａｄｌａｎ、１９９１、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、７（６）：８０５−８１４（１９９４）；およびＲｏｇｕｓｋａら、ＰＮＡＳ、９１：９６９−９７３（１９９４））または鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）によって達成され得る（これらの内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される）。

【0065】

ヒト化抗体の作製において使用されるヒト可変ドメイン（軽鎖および重鎖の両方）の選択は、抗原性を減少させるためである。いわゆる「ベストフィット（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法に従って、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列は、公知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。次いで、げっ歯類の配列に最も近縁のヒト配列は、ヒト化抗体のためにヒトフレームワーク（ＦＲ）として受容される（Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、１９６：９０１（１９８７）（これらの内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークは、数種のヒト化抗ＣＤ１９抗体のために使用され得る（Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５（１９９２）；Ｖｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５１：２６２３（１９９３）（これらの内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される））。

【0066】

抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９に対する高い親和性の保持および他の好ましい生物学的特性を伴ってヒト化され得る。本発明の１つの局面にしたがって、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを使用した親配列および種々の概念的なヒト化産物の分析プロセスによって調製される。免疫グロブリンの三次元モデルは、一般的に利用可能であり、そして当業者に十分に知られている。選択された候補の免疫グロブリン配列の可能な三次元のコンホメーション構造を例示および表示するコンピュータープログラムが、利用可能である。これらの表示の観察は、候補の免疫グロブリン配列の機能性における残基の考えられる役割の分析（すなわち、候補の免疫グロブリンのＣＤ１９を結合する能力に影響を及ぼす残基の分析）を可能にする。この方法において、ＦＲ残基は、所望の抗体の特徴（例えば、ＣＤ１９に対する増大した親和性）が達成されるように、レシピエント配列および輸入配列から選択され、そして混合される得る。一般に、ＣＤＲ残基は、直接的かつほぼ実質的に、抗原結合に対する影響に関与する。

【0067】

「ヒト化」抗体は、元の抗体と同様の抗原特異性（すなわち、本発明において、ヒトＣＤ１９抗原を結合する能力）を保持する。しかし、ヒト化の特定の方法を使用して、ヒトＣＤ１９抗原に対する抗体の結合の親和性および／または特異性は、Ｗｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ、２９４：１５１（１９９９）（これらの内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される）によって記載されるように、「定向進化」の方法を使用して増大され得る。

【0068】

（５．１．７．ヒト抗体）
ヒトにおける抗体のインビボ使用のために、ヒト抗体を試用することが、好ましくあり得る。完全なヒト抗体は、特に、ヒト被験体の治療的処置のために望まれる。ヒト抗体は、当該分野において公知である種々の方法によって作製され得、この方法としては、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを使用した上に記載されるファージディスプレイ法（これらの技術に対する改良法を含む）が挙げられる。また、米国特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６，１１１号；ならびにＰＣＴ公開ＷＯ ９８／４６６４５、同ＷＯ ９８／５０４３３、同ＷＯ ９８／２４８９３、同ＷＯ ９８／１６６５４、同ＷＯ ９６／３４０９６、同ＷＯ ９６／３３７３５および同ＷＯ ９１／１０７４１（これらの各々は、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。ヒト抗体はまた、重鎖および軽鎖がヒトＤＮＡの１つ以上の供給源に由来するヌクレオチド配列によってコードされる抗体であり得る。

【0069】

ヒト抗ＣＤ１９抗体はまた、機能的な内因性免疫グロブリンを発現できないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現し得るトランスジェニックマウスを使用して産生され得る。例えば、ヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子複合体およびヒト軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、マウス胚性幹細胞中に、ランダムに導入されても、相同組換えによって導入されてもよい。あるいは、ヒト可変領域、ヒト定常領域およびヒト多様性領域は、ヒト重鎖遺伝子およびヒト軽鎖遺伝子に加えて、マウス胚性幹細胞中に導入され得る。マウス重鎖免疫グロブリン遺伝子およびマウス軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入によって、別個または同時に非機能的にされ得る。例えば、キメラマウスおよび生殖系列変異マウス中の抗体重鎖連結領域（Ｊ_Ｈ）遺伝子のホモ欠失は内因性の抗体産生の完全な阻害をもたらすことが、記載されている。改変された胚性幹細胞は、キメラマウスを産生するために、拡大培養（ｅｘｐａｎｄ）され、そして胚盤胞中にマイクロインジェクションされる。次いでキメラマウスは、ヒト抗体を発現するホモ接合の子孫を産生するために採決される。トランスジェニックマウス選択された抗原（例えば、本発明のポリペプチドの全部または一部）によって通常の様式で免疫化される。ヒトＣＤ１９抗原に対する抗ＣＤ１９抗体は、通常のハイブリドーマ技術を使用した免疫化されたトランスジェニックマウスから得られ得る。トランスジェニックマウスによって内包されるヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞の分化の間に再配列し、次いでクラススイッチおよび体細胞変異を受ける。したがって、このような技術を使用して、治療的に有用なＩｇＧ抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＭ抗体およびＩｇＥ抗体を産生することが、可能であり、これらの抗体としては、ＩｇＧ１（γ１）およびＩｇＧ３が挙げられるが、これらに限定されない。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要については、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ（Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３：６５−９３（１９９５））を参照のこと。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術、ならびにこのような抗体を産生するためのプロトコルの詳細な考察については、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９８／２４８９３、同ＷＯ ９６／３４０９６および同ＷＯ ９６／３３７３５；ならびに米国特許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，５４５，８０６号；同第５，８１４，３１８号および同第５，９３９，５９８号（これらの各々は、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。さらに、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ、ＣＡ）およびＧｅｎｐｈａｒｍ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）などの会社は、上に記載されるものに類似する技術を使用して、選択された抗原に対するヒト抗体を提供するために従事し得る。抗原チャレンジの際にヒト抗体の産生をもたらす生殖系列変異マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移動の特定の考察については、例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ、７：３３（１９９３）；およびＤｕｃｈｏｓａｌら、Ｎａｔｕｒｅ、３５５：２５８（１９９２）を参照のこと。

【0070】

ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリー（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、２２２：５８１−５９７（１９９１）；Ｖａｕｇｈａｎら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．、１４：３０９（１９９６））に由来し得る。ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２−５５３（１９９０））は、免疫化されていないドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レポーターからヒト抗体および抗体フラグメントをインビトロで産生するために使用され得る。この技術にしたがって、抗体Ｖドメイン遺伝子は、糸状バクテリオファージのメジャーコートタンパク質またはマイナーコートタンパク質遺伝子（例えば、Ｍ１３またはｆｄ）中にインフレームでクローニングされ、そしてファージ粒子の表面上に機能的抗体フラグメントとして提示される。糸状粒子は、ファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能的特性に基づく選択はまた、その特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択をもたらす。したがって、そのファージは、Ｂ細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは、種々の様式で行われ得る；それらの概要については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ Ｓ．およびＣｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ Ｊ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：５６４−５７１（１９９３）を参照のこと。Ｖ遺伝子セグメントの数種の供給源は、ファージディスプレイのために使用され得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫化されていないマウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小さいランダムコンビナトリアルライブラリー由来の抗オキサゾリン抗体の多様な配列を単離した。免疫化されていないヒトドナー由来のＶ遺伝子のレポーターが、構築され得、そして抗原（自己抗原を含む）の多様な配列に対する抗体は、本質的に、Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１−５９７（１９９１）、またはＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載される技術に従って単離され得る。また、米国特許第５，５６５，３３２号および同第５，５７３，９０５号（これらの各々は、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。

【0071】

ヒト抗体はまた、インビトロで活性化されたＢ細胞によって産生され得る（米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号（これらの各々は、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）ヒト抗体はまた、インビトロハイブリドーマ技術（例えば、Ｒｏｄｅｒら（Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｈ、１２１：１４０−１６７（１９８６））によって記載される技術であるが、これに限定されない）を使用してインビトロで産生され得る。

【0072】

（５．１．８．変化した抗体／変異抗体）
本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体は、変異抗体であり得る。本明細書中で使用される場合、「抗体変異体」または「変化した抗体」とは、抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸残基の１個以上が改変されている抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列改変体をいう。抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列の改変としては、その抗原に対する抗体の親和性もしくはアビディティを改良するための配列に対する改変、および／またはエフェクター機能を改良するための抗体のＦｃ部分に対する改変が挙げられる。それらの改変は、任意の公知の抗ＣＤ１９抗体または本明細書中に記載されるような抗ＣＤ１９抗体に対して行われ得る。このような変化した抗体は、必然的に、公知の抗ＣＤ１９抗体との１００％未満の配列の同一性または類似性を有する。好ましい実施形態において、変化した抗体は、抗ＣＤ１９抗体の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインのいずれかのアミノ酸配列との少なくとも２５％、３５％、４５％、５５％、６５％、または７５％（より好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％および最も好ましくは、少なくとも９５％）のアミノ酸配列の同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有する。好ましい実施形態において、変化した抗体は、抗ＣＤ１９抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のアミノ酸配列との少なくとも２５％、３５％、４５％、５５％、６５％、または７５％（より好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％および最も好ましくは、少なくとも９５％）のアミノ酸配列の同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有する。好ましい実施形態において、変改した抗体は、ヒトＣＤ１９結合能を維持する。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２ａの重鎖に対応する配列番号２（図５Ａ）のアミノ酸配列に対して約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である重鎖を含む。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２ｂの重鎖に対応する配列番号４（図５Ｂ）のアミノ酸配列に対して、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である重鎖を含む。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２ａの軽鎖に対応する配列番号１６（図６Ａ）のアミノ酸配列に対して、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である重鎖を含む。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＨＢ１２ｂの軽鎖に対応する配列番号１８（図６Ｂ）のアミノ酸配列に対して、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である軽鎖を含む。ＨＢ１２ａ抗ＣＤ１９抗体およびＨＢ １２ｂ抗ＣＤ１９抗体を産生するハイブリドーマは、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６５８０およびＰＴＡ−６５８１の下で受託されている。

【0073】

この配列に関する同一性または類似性は、配列を整列し、そして最大の％配列同一性を達成するために必要に応じてギャップを導入した後における、抗ＣＤ１９抗体残基と同一（すなわち、同じ残基）または類似（すなわち、一般的な側鎖特性に基づいた同じ群由来のアミノ酸残基、以下を参照のこと）である候補配列中のアミノ酸残基の％として本明細書中で規定される。配列の同一性または類似性に影響するような、可変ドメインの外側の抗体配列中へのＮ末端、Ｃ末端、または内部の伸長、欠失、または挿入は、構築されない。

【0074】

「％同一性」は、当該分野において公知である通り、２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチドの間の関係の尺度（それらの配列を比較することによって決定される）である。一般に、比較される２つの配列は、それらの配列間に最大の相関を与えるように整列される。それら２つの配列のアライメントが、調べられ、そしてそれら２つの配列の間で決定された正確なアミノ酸またはヌクレオチドの対応を与える位置の数は、％同一性の数値を与えるために、アライメントの全長で除算され、そして１００を乗算される。この％同一性の数値は、比較される配列の、全長にわたって決定（それらの配列は、同一または非常に類似する長さの配列に特に適切であり、そしてその配列は、高度に相同である）され得るか、またはより短い規定された長さにわたって決定（それは、等しくない長さの配列により適切であるか、またはより低い相同性のレベルを有する）され得る。

【0075】

例えば、配列は、「．ａｌｎ」拡張子を有するファイルを作成するＵｎｉｘ（登録商標） におけるソフトウェアｃｌｕｓｔａｌｗを用いて整列され得、次いでこのファイルは、．ａｌｎファイルを開くＢｉｏｅｄｉｔプログラム（Ｈａｌｌ、Ｔ．Ａ．１９９９、ＢｉｏＥｄｉｔ：ａ ｕｓｅｒ−ｆｒｉｅｎｄｌｙ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｅｄｉｔｏｒ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｐｒｏｇｒａｍ ｆｏｒ Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標） ９５／９８／ＮＴ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．４１：９５−９８）へとインポートされ得る。Ｂｉｏｅｄｉｔウィンドウにおいて、個々の配列（１回に２つずつ）を選択し得、そしてそれらを整列し得る。この方法は、配列全体の比較を可能にする。

【0076】

２つ以上の配列の同一性を比較するための方法は、当該分野において周知である。したがって、例えば、プログラムは、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ、バージョン９．１（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ Ｊら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１２：３８７−３９５、１９８４、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、ＵＳＡから利用可能である）において利用可能である。２つの配列間の％同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。例えば、プログラムＢＥＳＴＦＩＴおよびＧＡＰは、２つのポリヌクレオチド間の％同一性および２つのポリペプチド配列間の％同一性を決定するために使用され得る。ＢＥＳＴＦＩＴは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ、２：４８２−４８９、１９８１）の「局所相同性（ｌｏｃａｌ ｈｏｍｏｌｏｇｙ）」アルゴリズムを使用し、そして２つの配列間で最も類似性の単一の領域を見出す。ＢＥＳＴＦＩＴは、長さが類似していない２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド配列の比較により適合され、このプログラムは、より短い配列がより長い配列の一部を表すと仮定する。比較において、ＧＡＰは、ＮｅｄｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ、４８：４４３−３５４、１９７０）のアルゴリズムに従って、「最大の類似性」を見出す２つの配列を整列する。ＧＡＰは、ほぼ同じ長さである配列の比較により適合され、そしてアライメントは、全長にわたって予想される。好ましくは、各プログラムにおいて使用されるパラメータ「ギャップ加重（Ｇａｐ Ｗｅｉｇｈｔ）」および「長さ加重（Ｌｅｎｇｔｈ Ｗｅｉｇｈｔ）」は、それぞれ、ポリヌクレオチドについては５０および３であり、そしてポリペプチドについては１２および４ である。好ましくは、％同一性および％類似性は、比較される２つの配列が最適に整列される場合に決定される。

【0077】

配列間の同一性および／または類似性を決定するための他のプログラムもまた、当該分野において公知である（例えば、ＢＬＡＳＴファミリーのプログラム（Ｋａｒｌｉｎ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：５８７３−５８７７のように改変された、Ｋａｒｌｉｎ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ、１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８７：２２６４−２２６８（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢ）、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、ＵＳＡから入手可能であり、そしてｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖにてＮＣＢＩのホームページからアクセス可能である）））。これらのプログラムは、２つの配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの好ましい非限定的な例を例示する。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５：４０３−４１０のＮＢＬＡＳＴプログラムおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本発明の抗ＣＤ１９抗体の全部または一部をコードする核酸分子に対して相同なヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて行われ得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて行われ得る。比較目的のためのギャップ付きアライメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴが、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２５：３３８９−３４０２に記載される通りに利用され得る。あるいは、ＰＳＩ−Ｂｌａｓｔは、分子の間の距離関係を検出する反復検索を実行するために使用され得る（Ｉｄ．）。ＢＬＡＳＴプログラム、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムおよびＰＳＩ−Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、各プログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）の初期設定パラメータが、使用され得る。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照のこと。配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの別の好ましい非限定的な例は、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ、１９８８、ＣＡＢＩＯＳ ４：１１−１７のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０加重残基表、１２のギャップ長ペナルティーおよび４のギャップペナルティーが、使用され得る。

【0078】

配列間の同一性および／または類似性を決定するための当該分野において公知であるプログラムの別の非限定的な例は、ＦＡＳＴＡである（Ｐｅａｒｓｏｎ Ｗ．Ｒ．およびＬｉｐｍａｎ ＤＪ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５：２４４４−２４４８、１９８８（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅの一部として利用可能））。好ましくは、ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸置換マトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ Ｓ．およびＨｅｎｉｋｏｆｆ Ｊ．Ｇ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：１０９１５−１０９１９、１９９２）は、ヌクレオチド配列がまず比較前にアミノ酸配列に翻訳される場合を含む、ポリペプチド配列比較において使用される。

【0079】

アミノ酸配列間の同一性および／または類似性を決定するための当該分野において公知であるプログラムのなお別の非限定的な例は、プログラムの初期設定のアルゴリズムおよびパラメータ設定：ｂｌｏｓｕｍ６２、ギャップ加重８、長さ加重２を用いて利用されるＳｅｑＷｅｂ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ：Ｇａｐプログラムに対するウェブベースのインターフェース）である。

【0080】

２つの配列間の％同一性は、ギャップを許容してか、またはギャップを許容せずに上記の技術と同様の技術を使用して決定され得る、％同一性の算出において、代表的に、正確な一致が、計測される。

【0081】

好ましくは、プログラムＢＥＳＴＦＩＴは、本発明のポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列に関して、クエリーポリヌクレオチド配列またはクエリーポリペプチド配列の％同一性を決定するために使用され、クエリー配列および参照配列は、最適に整列され、そしてプログラムのパラメータは、初期値に設定される。

【0082】

変化した抗体を産生するために、１個以上のアミノ酸の変化（例えば、置換）が、種依存的抗体の１個以上の超可変領域に導入される。代替的かまたは追加的に、フレームワーク領域残基の１つ以上の変化（例えば、置換）は、抗ＣＤ１９抗体に導入され得、これらは、第２の哺乳動物種由来の抗原に対する抗体変異体の結合親和性における改善をもたらす。改変するフレームワーク領域残基の例としては、直接的に抗原を非共有結合する残基（Ａｍｉｔら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３３：７４７−７５３（１９８６））；ＣＤＲのコンホメーションと相互作用する残基／ＣＤＲのコンホメーションと相互作用に影響を及ぼす残基（Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、１９６：９０１−９１７（１９８７））；および／またはＶ_Ｌ−Ｖ_Ｈ界面に関与する残基（ＥＰ ２３９ ４００Ｂ１）が挙げられる。特定の実施形態において、１個以上のこのようなフレームワーク領域残基の改変は、第２の哺乳動物種由来の抗原に対する抗体の結合親和性の増強をもたらす。例えば、約１個〜約５個のフレームワーク残基が、本発明のこの実施形態において変更され得る。ときとして、これは、超可変領域残基が変更されていない場合でさえ、前臨床試験において使用するのに適した抗体変異体を産生するのに十分であり得る。しかし、通常は、変化した抗体は、さらなる超可変領域の変化を含む。

【0083】

変更される超可変領域残基は、ランダムに変えられ得る（特に、第２の哺乳動物種由来の抗原に対する抗ＣＤ１９抗体の結合親和性の開始が、このようなランダムに産生された変化した抗体が容易にスクリーニングされ得ることをもたらすものである場合）。

【0084】

このような変化した抗体を産生するための１つの有用な手順は、「アラニンスキャニング変異誘発（ａｌａｎｉｎｅ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）」（ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１−１０８５（１９８９））を称される。ここで、超可変領域残基の１個以上は、そのアミノ酸と、第２の哺乳動物種由来の抗原との相互作用に影響を与えるように、アラニン残基またはポリアラニン残基によって置換される。次いで、置換に対する機能的感受性を示す超可変領域残基は、置換の部位においてか、またはそれに対して、さらなる変異誘発または他の変異誘発を導入することによって洗練される。したがって、アミノ酸配列のバリエーションを導入するための部位が、予め決定される一方で、変異それ自体の性質は、予め決定される必要がない。この方法によって産生されたＡｌａ変異体は、本明細書中に記載されるような生物学的活性についてスクリーニングされる。

【0085】

このような変化した抗体を産生するための別の手順は、ファージディスプレイを使用した親和性成熟（ａｆｆｉｎｉｔｙ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ）を含む（Ｈａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、２５４：８８９−８９６（１９９２）およびＬｏｗｍａｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３０（４５）：１０８３２−１０８３７（１９９１））。簡単にいうと、数個の超可変領域部位（例えば、６〜７個の部位）は、各部位に全ての可能なアミノ酸置換をもたらすために変異される。そのようにして産生された抗体変異体は、糸状ファージ粒子から、各粒子内にパッケージ化されたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物に対する融合体として一価の様式で提示される。次いで、ファージが提示した変異体は、本明細書中に開示されるような生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。

【0086】

抗体配列における変異としては、置換、内部欠失を含む欠失、付加（融合タンパク質を生じる付加を含む）、またはアミノ酸配列内のアミノ酸残基および／もしくはアミノ酸配列に隣接するアミノ酸残基の保存的置換（しかし、それらは、「沈黙（ｓｉｌｅｎｔ）」変化（すなわち、その変化は、機能的に等価の抗ＣＤ１９抗体を産生する）をもたらす）が挙げられ得る。保存的アミノ酸置換は、関与する残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒性に基づいて行われ得る。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸としては、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびメチオニンが挙げられ；極性の中性アミノ酸としては、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギンおよびグルタミンが挙げられ；正に荷電した（塩基性）アミノ酸としては、アルギニン、リジンおよびヒスチジンが挙げられ；そして負に荷電した（酸性）アミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる。さらに、グリシンおよびプロリンは、鎖の位置付けに影響し得る残基である。非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスのメンバーに交換することを必要とする。さらに、所望される場合、非古典的アミノ酸または化学的なアミノ酸アナログは、抗体配列に対する置換または付加として導入され得る。非古典的アミノ酸としては、一般に、一般的なアミノ酸のＤ−異性体、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロ−アミノ酸、β−メチルアミノ酸、Ｃα−メチルアミノ酸、Ｎα−メチルアミノ酸およびアミノ酸アナログなどのデザイナー（ｄｅｓｉｇｎｅｒ）アミノ酸が挙げられるが、これらに限定されない。

【0087】

別の実施形態において、改変のために選択された部位は、ファージディスプレイを使用して、親和性成熟される（上記を参照のこと）。

【0088】

当該分野において公知である変異誘発のための任意の技術は、ＤＮＡ配列中の個々のヌクレオチドを改変するため、抗体配列においてアミノ酸置換を行なう目的のため、またはさらなる操作を容易にするために制限酵素部位を作製／削除するために使用され得る。このような技術としては、化学的変異誘発、インビトロ位置指定変異誘発（Ｋｕｎｋｅｌ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８２：４８８（１９８５）；Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ，Ｃ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５３：６５５１（１９７８））、オリゴヌクレオチド指定変異誘発（Ｓｍｉｔｈ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ、１９：４２３−４６３（１９８５）；Ｈｉｌｌら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、１５５：５５８−５６８（１９８７））、ＰＣＲベースのオーバーラップ伸長（Ｈｏら、Ｇｅｎｅ、７７：５１−５９（１９８９））、ＰＣＲベースのメガプライマー変異誘発（Ｓａｒｋａｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、８：４０４−４０７（１９９０））などが挙げられるが、これらに限定されない。改変は、二本鎖デオキシＤＮＡ配列決定によって確認され得る。

【0089】

本発明の特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、融合タンパク質（すなわち、異種のタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドに融合された抗体、またはフラグメント）を産生するために改変され得る。特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体の部分に融合されたタンパク質は、ＡＤＥＰＴの酵素成分である。抗ＣＤ１９抗体との融合タンパク質として操作され得る他のタンパク質またはポリペプチドの例としては、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、ＤＮａｓｅ Ｉ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリン（ｄｉｐｈｔｈｅｒｉｎ）毒素、シュードモナス属の体外毒素およびシュードモナス属の内毒素などの毒素が挙げられるが、これに限定されない。例えば、Ｐａｓｔａｎら、Ｃｅｌｌ、４７：６４１（１９８６）およびＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ、４４：４３（１９９４）を参照のこと。使用され得る酵素的に活性な毒素およびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性フラグメント、体外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシン（ｍｏｄｅｅｃｉｎ）Ａ鎖、α−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテセンが挙げられる。例えば、１９９３年１０月２８日に公開されたＷＯ ９３／２１２３２を参照のこと。

【0090】

さらなる融合タンパク質は、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エキソンシャッフリング、および／またはコドンシャッフリング（集合的に、「ＤＮＡシャッフリング」と称される）の技術によって産生され得る。ＤＮＡシャッフリングは、ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）またはそのフラグメント（例えば、より高い親和性およびより低い解離速度を有する抗体またはそのフラグメント）の活性を変化させるために利用され得る。一般に、米国特許第５，６０５，７９３号；同第５，８１１，２３８号；同第５，８３０，７２１号；同第５，８３４，２５２号および同第５，８３７，４５８号ならびにＰａｔｔｅｎら、１９９７、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、８：７２４−３３；Ｈａｒａｙａｍａ、１９９８、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６−８２；Ｈａｎｓｓｏｎら、１９９９、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ、２８７：２６５−７６；ならびにＬｏｒｅｎｚｏおよびＢｌａｓｃｏ、１９９８、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８−３１３（これらの特許および刊行物の各々は、その全体が本明細書によって参考として援用される）を参照のこと。上記抗体は、さらに、米国公開第２００３０１１８５９２号、米国公開第２００３３０１３３９３９号およびＰＣＴ公開ＷＯ ０２／０５６９１０（全ては、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒらに対するもの）（これらは、その全体が本明細書中に参考として援用される）に記載されるような結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質であり得る。

【0091】

（５．１．９．ドメイン抗体）
本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体は、ドメイン抗体（例えば、ヒト抗体の重鎖（Ｖ_Ｈ）または軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域に対応する抗体の小さな機能的結合ユニットを含む抗体）であり得る。ドメイン抗体の例としては、治療標的に特異的である、Ｄｏｍａｎｔｉｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）およびＤｏｍａｎｔｉｓ Ｉｎｃ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ、ＵＳＡ）から入手可能な抗体（例えば、ＷＯ０４／０５８８２１；ＷＯ０４／００３０１９；米国特許第６，２９１，１５８号；同第６，５８２，９１５号；同第６，６９６，２４５号；および同第６，５９３，０８１号を参照のこと）が挙げられるが、これに限定されない。ドメイン抗体の市販のライブラリーは、抗ＣＤ１９ドメイン抗体を同定するために使用され得る。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９の機能的結合ユニットおよびＦｃγレセプターの機能的結合ユニットを含む。

【0092】

（５．１．１０．ダイアボディ）
用語「ダイアボディ」とは、２個の抗原結合部位を有する小さい抗体フラグメント（フラグメントが、同じポリペプチド鎖において軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）に連結した重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む（Ｖ_Ｈ−Ｖ_Ｌ））をいう。同じ鎖上の２個のドメインの間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、それらのドメインは、別の鎖の相補ドメインと対形成させられ、そして２個の抗原結合部位を形成する。ダイアボディは、例えば、ＥＰ ４０４，０９７；ＷＯ ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３）において、より完全に記載される。

【0093】

（５．１．１１．ワクチボディ）
本発明の特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、ワクチボディである。ワクチボディは、ダイマーのポリペプチドである。ワクチボディの各々のモノマーは、ヒンジ領域およびＣγ３ドメインを介して第２のｓｃＦｖに連結したＡＰＣ上の表面分子に対する特異性を有するｓｃＦｖからなる。本発明の他の実施形態において、ｓｃＦｖのうちの１つとして抗ＣＤ１９抗体フラグメントを含むワクチボディは、破壊されたＢ細胞およびＡＤＣＣを媒介するエフェクター細胞を並置するために使用され得る。例えば、Ｂｏｇｅｎら、米国特許出願公開第２００４０２５３２３８号を参照のこと。

【0094】

（５．１．１２．直鎖抗体）
本発明の特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、直鎖抗体である。直鎖抗体は、抗原結合領域の対を形成する、縦列のＦｄセグメントの対（Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｈ１−Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｈ１）を含む。直鎖抗体は、二重特異性または単一特異性であり得る。Ｚａｐａｔａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）を参照のこと。

【0095】

（５．１．１３．親抗体）
本発明の特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、親抗体である。「親抗体」は、本明細書中に開示されるような変化した抗体／変異抗体と比較して、その１個以上の超可変領域にあるか、またはそれに隣接する１個以上のアミノ酸残基を欠くか、またはそのアミノ酸が不足しているであるアミノ酸配列を含む抗体である。したがって、親抗体は、本明細書中に開示されるような抗体変異体の対応する超可変領域よりも短い超可変領域を有する。親ポリペプチドは、ネイティブな配列（すなわち、天然に存在する）の抗体（天然に存在する対立遺伝子改変体）、または天然に存在する配列の予め存在するアミノ酸配列の改変（例えば、他の挿入、欠失および／または置換）を有する抗体を含み得る。好ましくは、親抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体である。

【0096】

（５．１．１４．抗体フラグメント）
「抗体フラグメント」は、完全長抗体の一部（一般に、その抗原結合領域または可変領域）を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントおよびＦｖフラグメント；ダイアボディ；直鎖抗体；単鎖抗体分子；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。

【0097】

伝統的に、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解性の消化によって得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、２４：１０７−１１７（１９９２）およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）を参照のこと）。しかし、これらのフラグメントは、現在、組換え宿主細胞によって直接産生され得る。例えば、抗体フラグメントは、上で考察される抗体ファージライブラリーから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され得、そして化学的にカップリングされてＦ（ａｂ’）_２フラグメントを形成し得る（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：１６３−１６７（１９９２））。別のアプローチに従って、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントは、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。抗体フラグメントの産生のための他の技術は、当業者に明らかである。他の実施形態において、選択肢である抗体は、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。例えば、ＷＯ ９３／１６１８５を参照のこと。特定の実施形態において、抗体は、Ｆａｂフラグメントではない。

【0098】

（５．１．１５．二重特異性抗体）
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示の二重特異性抗体は、Ｂ細胞表面マーカーの２つの異なるエピトープに結合し得る。他のこのような抗体は、第１のＢ細胞マーカーを結合し得、そして第２のＢ細胞表面マーカーをさらに結合し得る。あるいは、抗Ｂ細胞マーカー結合アームは、Ｂ細胞に細胞防衛機構を行なわせるために、白血球上の誘発分子（例えば、Ｔ細胞レセプター分子（例えば、ＣＤ２またはＣＤ３））またはＩｇＧに対するＦｃレセプター（ＦｃγＲ）に結合するアームと合わされ得る。二重特異性抗体はまた、細胞傷害性因子をＢ細胞に局在化させるために使用され得る。これらの抗体は、Ｂ細胞マーカー結合アームおよび細胞傷害性因子を結合するアーム（例えば、サポリン、抗インターフェロン−・、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、ｍｅｔｈｏｌａ−ｅｘａｔｅまたは放射性同位体ハプテン）を有する。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）：二重特異性抗体）として調製され得る。

【0099】

二重特異性抗体を作製するための方法は、当該分野において公知である。（例えば、Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３０５：５３７−５３９（１９８３）；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ、１０：３６５５−３６５９（１９９１）；Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１．−２１０（１９８６）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３）；Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５２：５３６８（１９９４）；米国特許第４，４７４，８９３号；同第４，７１４，６８１号；同第４，９２５，６４８号；同第５，５７３，９２０号；同第５，６０１，８１９号；同第５，７３１，１６８号；同第４，６７６，９８０号および同第４，６７６，９８０号、ＷＯ ９４／０４６９０；ＷＯ ９１／００３６０；ＷＯ ９２／２００３７３；ＷＯ ９３／１７７１５；ＷＯ ９２／０８８０２；ならびに ＥＰ ０３０８９を参照のこと）。

【0100】

本発明の特定の実施形態において、上記組成物および方法は、ヒトＣＤ１９およびＴ細胞レセプターのＣＤ３ε鎖に対する特異性を有する二重特異性マウス抗体（例えば、Ｄａｎｉｅｌら、ｂｌｏｏｄ、９２：４７５０−４７５７（１９９８）によって記載される二重特異性抗体）を含む。好ましい実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体が二重特異性である場合、その抗ＣＤ１９抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体であり、そしてヒトＣＤ１９およびＴ細胞上のエピトープに対する特異性を有するか、または例えば、細胞死をもたらす単球／マクロファージおよび／またはナチュラルキラー細胞などのヒトエフェクター細胞に結合し得る。

【0101】

（５．１．１６．エフェクター機能の操作）
本発明の抗ＣＤ１９抗体を、例えば、Ｂ細胞の悪性疾患の処置におけるその抗体の効果を増強するためにエフェクター機能に関して改変することが、望まれ得る。例えば、システイン残基が、Ｆｃ領域中に導入され得、それによってこの領域における鎖間のジスルフィド結合形成を可能にする。そのようにして産生されたホモダイマー抗体は、改良された内在化性能ならびに／または増大した補体媒介性の細胞殺傷および／もしくは抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有し得る。Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ Ｍｅｄ、１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照のこと。増強された抗腫瘍活性を有するホモダイマー抗体はまた、Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載されるようなヘテロ二官能性架橋剤を使用して調製され得る。あるいは、抗体は、操作され得、その抗体は、二重のＦｃ領域を有し、それによって増強された補体溶解性能およびＡＤＣＣ性能を有し得る。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ、３：２１９−２３０（１９８９）を参照のこと。

【0102】

エフェクター機能を変化させるように抗体のＦｃ領域を操作する他の方法は、当該分野において公知である（例えば、ＦＣγＲＩＩに対する結合親和性と比較してＦｃγＲＩＩＢに対する結合親和性を増強させるようにＦｃ領域を変化させることを記載する米国特許公開第２００４０１８５０４５号およびＰＣＴ公開第ＷＯ ２００４／０１６７５０号（両方とも、Ｋｏｅｎｉｇらに対するもの）を参照のこと；Ａｒｍｏｕｒらに対するＰＣＴ公開第ＷＯ ９９／５８５７２号、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらに対するＷＯ ９９／５１６４２およびＤｅｏらに対する米国特許第６，３９５，２７２号もまた参照のこと（これらの開示は、その全体が本明細書中に援用される））。ＦｃγＲＩＩＢに対する結合親和性を減少させるようにＦｃ領域を改変する方法もまた、当該分野において公知である（例えば、米国特許公開第２００１００３６４５９号およびＰＣＴ公開第ＷＯ ０１／７９２９９号（両方とも、Ｒａｖｅｔｃｈらに対するもの）（これらの開示は、その全体が本明細書中に援用される））。野生型Ｆｃ領域と比較してＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡに対する増強された結合親和性を有する改変体Ｆｃ領域を有する改変された抗体もまた、記載されている（例えば、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎらに対するＰＣＴ公開第ＷＯ ２００４／０６３３５１号（この開示は、その全体が本明細書中に援用される））。

【0103】

当該分野において公知であるインビトロアッセイは、本発明の組成物および方法において使用される抗ＣＤ１９抗体がＡＤＣＣを媒介し得るか否かを決定するために使用され得る（例えば、第５．３．２節に記載されるもの）。

【0104】

（５．１．１７．改変体Ｆｃ領域）
本発明は、改変体Ｆｃ領域を含むタンパク質の処方物を提供する。それは、天然に存在しないＦｃ領域（例えば、１個以上の天然に存在しないアミノ酸残基を含むＦｃ領域）である。アミノ酸の欠失、付加および／または改変を含むＦｃ領域もまた、本発明の改変体Ｆｃ領域によって包含される。

【0105】

本明細書中で使用されるＦｃ領域が第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域を含むポリペプチドを含むことが、理解される。したがって、Ｆｃとは、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメインならびにこれらのドメインに対する柔軟なヒンジＮ末端をいう。ＩｇＡおよびＩｇＭに関して、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。ＩｇＧに関して、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣガンマ２およびＣガンマ３（Ｃγ２およびＣγ３）ならびにＣγ１（Ｃγ１）とＣγ２（Ｃγ２）との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシ末端に対して残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むように規定され、番号付けは、Ｋａｂａｔら（１９９１、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ、ＶＡ）のようなＥＵインデックスに従う。「Ｋａｂａｔに示されるようなＥＵインデックス」とは、Ｋａｂａｔら（前出）に記載されるようなヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基の番号付けをいう。Ｆｃとは、単離におけるこの領域または抗体、抗体フラグメント、またはＦｃ融合タンパク質の文脈におけるこの領域をいい得る。Ｆｃ改変体タンパク質は、Ｆｃ領域を含む抗体、Ｆｃ融合体、または任意のタンパク質もしくはタンパク質ドメインであり得る。改変体Ｆｃ領域を含むタンパク質が、特に好ましく、その改変体Ｆｃ領域は、Ｆｃの天然に存在しない改変体である（注記：多型性が、多くのＦｃ位置（Ｋａｂａｔ２７０、２７２、３１２、３１５、３５６および３５８が挙げられるが、これらに限定されない）において観察されており、したがって提供された配列と先行技術における配列との間のわずかな違いが、存在し得る）。

【0106】

本発明は、類似の分子（例えば、野生型Ｆｃ領域を有することを除いて同じアミノ酸配列を有するタンパク質）と比較して、Ｆｃリガンド（例えば、Ｆｃレセプター、Ｃ１ｑ）に対する結合特性を変化させたＦｃ改変体タンパク質を包含する。結合特性の例としては、結合特異性、平衡解離定数（ＫＤ）、解離速度および会合速度（それぞれ、ＫｏｆｆおよびＫｏｎ）、結合親和性ならびに／またはアビディティが挙げられるが、これらに限定されない。低いＫＤを有する結合分子（例えば、Ｆｃ改変体タンパク質（例えば、抗体））は高いＫＤを有する結合分子に対して好ましいことが、一般的に理解される。しかし、いくつかの場合において、ｋｏｎまたはｋｏｆｆの値は、ＫＤの値よりも多くの意味を有し得る。当業者は、所与の抗体の応用に最も重要である動態パラメータを決定し得る。

【0107】

Ｆｃドメインのそのリガンドに対する親和性および結合特性は、Ｆｃ−ＦｃγＲ相互作用（すなわち、ＦｃγＲに対するＦｃ領域の特異的結合）を決定するために、当該分野において公知である種々のインビトロアッセイ法（生物化学ベースのアッセイまたは免疫学ベースのアッセイ）によって決定され得、そのインビトロアッセイ法としては、平衡法（例えば、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）、または放射免疫アッセイ（ＲＩＡ））、または動態（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析）および他の方法（例えば、間接的結合アッセイ、競合阻害アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動およびクロマトグラフィー（例えば、ゲル濾過））が挙げられるが、これらに限定されない。これらの方法および他の方法は、１つ以上の試験される成分に対する標識を利用し得、そして／または種々の検出方法（色素標識、蛍光標識、発光標識、または同位体標識が挙げられるが、これらに限定されない）を使用し得る。結合親和性および動態の詳細な記載は、抗体−免疫原相互作用に焦点をあてるＰａｕｌ，Ｗ．Ｅ．（編）、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）に見出され得る。

【0108】

１つの実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、類似の分子と比較して、１種以上のＦｃリガンドに対する増強された結合を有する。別の実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、類似の分子のＦｃリガンドに対する親和性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも７倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、または少なくとも３０倍、または少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも６０倍、または少なくとも７０倍、または少なくとも８０倍、または少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍大きいＦｃリガンドに対する親和性を有する。特定の実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、Ｆｃレセプターに対する増強された結合を有する。別の特定の実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、ＦｃレセプターＦｃγＲＩＩＩＡに対する増強された結合を有する。さらに別の特定の実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、ＦｃレセプターＦｃＲｎに対する増強された結合を有する。なお別の特定の実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、類似の分子と比較して、Ｃ１ｑに対する増強された結合を有する。

【0109】

Ｆｃ領域を含むタンパク質の血清半減期は、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合親和性を増大させることによって増大し得る。１つの実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、類似の分子と比較して増強された血清半減期を有する。

【0110】

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）上に存在するＦｃレセプター（ＦｃＲ）に結合される分泌型Ｉｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原を有する標的細胞に特異的に結合し、次いで細胞毒性によって標的細胞を殺すことを可能にするという細胞傷害性をいう。標的細胞の表面を指向する特定の高親和性ＩｇＧ抗体は、細胞傷害性細胞を「武装させ（ａｒｍ）」、そしてこのような殺傷のために絶対に必要とされる。標的細胞の溶解は、細胞外であり、細胞同士の直接的な接触を必要とし、そして補体を伴わない。抗体に加えて、抗原を有する標的細胞に特異的に結合する能力を有するＦｃ領域を含む他のタンパク質（特に、Ｆｃ融合タンパク質）が、細胞媒介生細胞傷害を達成し得ることが、企図される。単純化するために、Ｆｃ融合タンパク質の活性によって生じる細胞媒介生細胞傷害もまた、本明細書中でＡＤＣＣ活性と称される。

【0111】

任意の特定のＦｃ改変体タンパク質がＡＤＣＣによる標的細胞の溶解を媒介する能力は、アッセイされ得る。ＡＤＣＣ活性を評価するために、目的のＦｃ改変体タンパク質は、標的細胞の細胞溶解をもたらす抗原抗体複合体によって活性化され得る免疫エフェクター細胞と組み合わせて、標的細胞に添加される。細胞溶解は、一般に、溶解した細胞からの標識（例えば、放射性物質、蛍光色素または天然の細胞内タンパク質）の放出によって検出される。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。インビトロＡＤＣＣアッセイの具体的な例は、Ｗｉｓｅｃａｒｖｅｒら、１９８５ ７９：２７７−２８２；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、１９８７、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １６６：１３５１−１３６１；Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎら、２００１、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５８：１８３−１９１；Ｐａｔｅｌら、１９９５ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：２９−３８に記載される。代替的かまたは追加的に、目的のＦｃ改変体タンパク質のＡＤＣＣ活性は、インビボ（例えば、動物モデル（例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、１９９８、ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９５：６５２−６５６において開示されるもの））において評価され得る。

【0112】

１つの実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、類似の分子と比較して、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。特定の実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、類似の分子のＡＤＣＣ活性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍または少なくとも１０倍または少なくとも５０倍または少なくとも１００倍大きいＡＤＣＣ活性を有する。別の特定の実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、類似の分子と比較して、ＦｃレセプターＦｃγＲＩＩＩＡに対する増強された結合、および増強されたＡＤＣＣ活性を有する。他の実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、類似の分子と比較して、増強されたＡＤＣＣ活性および増強された血清半減期の両方を有する。

【0113】

「補体依存性細胞傷害」および「ＣＤＣ」とは、補体の存在下における標的細胞の溶解をいう。補体の活性化経路は、例えば、同族の抗原と複合体形成された分子（抗体）に対する補体系（Ｃ１ｑ）の第１の成分の結合によって開始される。補体の活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、１９９６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０２：１６３に記載されるようなＣＤＣアッセイが、行われ得る。１つの実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、類似の分子と比較して、増強されたＣＤＣ活性を有する。特定の実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、類似の分子のＣＤＣ活性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍または少なくとも１０倍または少なくとも５０倍または少なくとも１００倍大きいＣＤＣ活性を有する。他の実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、類似の分子と比較して、増強されたＣＤＣ活性および増強された血清半減期の両方を有する。

【0114】

１つの実施形態において、本発明は、処方物を提供し、そのＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに示されるようなＥＵインデックスによって番号付けされる場合に、２３４、２３５、２３６、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２５２、２５４、２５６、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６９、２９６、２９７、２９８、２９９、３１３、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３２、３３３および３３４からなる群より選択される１つ以上の位置にて天然に存在しないアミノ酸残基を含む。必要に応じて、Ｆｃ領域は、当業者に公知のさらなる位置および／または代替的な位置にて天然に存在しないアミノ酸残基を含み得る（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；同第６，２７７，３７５号；同第６，７３７，０５６号；ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ ０１／５８９５７号；同第ＷＯ ０２／０６９１９号；同第ＷＯ ０４／０１６７５０号；同第ＷＯ ０４／０２９２０７号；同第ＷＯ ０４／０３５７５２号および同第ＷＯ ０５／０４０２１７号を参照のこと）。

【0115】

特定の実施形態において、本発明は、Ｆｃ改変体タンパク質処方物を提供し、そのＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに示されるようなＥＵインデックスによって番号付けされる場合に、２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｎ、２３４Ｑ、２３４Ｔ、２３４Ｈ、２３４Ｙ、２３４１、２３４Ｖ、２３４Ｆ、２３５Ａ、２３５Ｄ、２３５Ｒ、２３５Ｗ、２３５Ｐ、２３５Ｓ、２３５Ｎ、２３５Ｑ、２３５Ｔ、２３５Ｈ、２３５Ｙ、２３５１、２３５Ｖ、２３５Ｆ、２３６Ｅ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２３９Ｎ、２３９Ｑ、２３９Ｆ、２３９Ｔ、２３９Ｈ、２３９Ｙ、２４０Ｉ、２４０Ａ、２４０Ｔ、２４０Ｍ、２４１Ｗ、２４１Ｌ、２４１Ｙ、２４１Ｅ、２４１Ｒ、２４３Ｗ、２４３Ｌ、２４３Ｙ、２４３Ｒ、２４３Ｑ、２４４Ｈ、２４５Ａ、２４７Ｖ、２４７Ｇ、２５２Ｙ、２５４Ｔ、２５６Ｅ、２６２Ｉ、２６２Ａ、２６２Ｔ、２６２Ｅ、２６３Ｉ、２６３Ａ、２６３Ｔ、２６３Ｍ、２６４Ｌ、２６４１、２６４Ｗ、２６４Ｔ、２６４Ｒ、２６４Ｆ、２６４Ｍ、２６４Ｙ、２６４Ｅ、２６５Ｇ、２６５Ｎ、２６５Ｑ、２６５Ｙ、２６５Ｆ、２６５Ｖ、２６５Ｉ、２６５Ｌ、２６５Ｈ、２６５Ｔ、２６６１、２６６Ａ、２６６Ｔ、２６６Ｍ、２６７Ｑ、２６７Ｌ、２６９Ｈ、２６９Ｙ、２６９Ｆ、２６９Ｒ、２９６Ｅ、２９６Ｑ、２９６Ｄ、２９６Ｎ、２９６Ｓ、２９６Ｔ、２９６Ｌ、２９６１、２９６Ｈ、２６９Ｇ、２９７Ｓ、２９７Ｄ、２９７Ｅ、２９８Ｈ、２９８Ｉ、２９８Ｔ、２９８Ｆ、２９９Ｉ、２９９Ｌ、２９９Ａ、２９９Ｓ、２９９Ｖ、２９９Ｈ、２９９Ｆ、２９９Ｅ、３１３Ｆ、３２５Ｑ、３２５Ｌ、３２５Ｉ、３２５Ｄ、３２５Ｅ、３２５Ａ、３２５Ｔ、３２５Ｖ、３２５Ｈ、３２７Ｇ、３２７Ｗ、３２７Ｎ、３２７Ｌ、３２８Ｓ、３２８Ｍ、３２８Ｄ、３２８Ｅ、３２８Ｎ、３２８Ｑ、３２８Ｆ、３２８Ｉ、３２８Ｖ、３２８Ｔ、３２８Ｈ、３２８Ａ、３２９Ｆ、３２９Ｈ、３２９Ｑ、３３０Ｋ、３３０Ｇ、３３０Ｔ、３３０Ｃ、３３０Ｌ、３３０Ｙ、３３０Ｖ、３３０１、３３０Ｆ、３３０Ｒ、３３０Ｈ、３３２Ｄ、３３２Ｓ、３３２Ｗ、３３２Ｆ、３３２Ｅ、３３２Ｎ、３３２Ｑ、３３２Ｔ、３３２Ｈ、３３２Ｙおよび３３２Ａからなる群より選択される少なくとも１個の天然に存在しないアミノ酸残基を含む。必要に応じて、Ｆｃ領域は、当業者に公知のさらなる天然に存在しないアミノ酸残基および／または代替的な天然に存在しないアミノ酸残基を含み得る（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；同第６，２７７，３７５号；同第６，７３７，０５６号；ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ ０１／５８９５７号；同第ＷＯ ０２／０６９１９号；同第ＷＯ ０４／０１６７５０号；同第ＷＯ ０４／０２９２０７号；同第ＷＯ ０４／０３５７５２号および同第ＷＯ ０５／０４０２１７号を参照のこと）。

【0116】

別の実施形態において、本発明は、Ｆｃ改変体タンパク質処方物を提供し、そのＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに示されるようなＥＵインデックスによって番号付けされる場合に、２３９、３３０および３３２からなる群より選択される１つ以上の位置にて少なくとも１個の天然に存在しないアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明は、Ｆｃ改変体タンパク質処方物を提供し、そのＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに示されるようなＥＵインデックスによって番号付けされる場合に、２３９Ｄ、３３０Ｌおよび３３２Ｅからなる群より選択される少なくとも１個の天然に存在しないアミノ酸を含む。必要に応じて、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに示されるようなＥＵインデックスによって番号付けされる場合に、２５２、２５４および２５６からなる群より選択される１つ以上の位置にてさらなる天然に存在しないアミノ酸をさらに含み得る。特定の実施形態において、本発明は、Ｆｃ改変体タンパク質処方物を提供し、そのＦｃ領域は、Ｋａｂａｔに示されるようなＥＵインデックスによって番号付けされる場合に、２３９Ｄ、３３０Ｌおよび３３２Ｅからなる群より選択される少なくとも１個の天然に存在しないアミノ酸を含み、および１つ以上の位置における少なくとも１個の天然に存在しないアミノ酸は、Ｋａｂａｔに示されるようなＥＵインデックスによって番号付けされる場合に、２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅからなる群より選択される。

【0117】

１つの実施形態において、本発明のＦｃ改変体は、他の公知のＦｃ改変体（例えば、Ｇｈｅｔｉｅら、１９９７、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：６３７−４０；Ｄｕｎｃａｎら、１９８８、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：５６３−５６４；Ｌｕｎｄら、１９９１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７：２６５７−２６６２；Ｌｕｎｄら、１９９２、ＭｏＩ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９：５３−５９；Ａｌｅｇｒｅら、１９９４、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７−１５４３；Ｈｕｔｃｈｉｎｓら、１９９５、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ９２：１１９８０−１１９８４；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、１９９５、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ．４４：１１１−１１７；Ｌｕｎｄら、１９９５、Ｆａｓｅｂ Ｊ ９：１１５−１１９；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、１９９６、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ５４：１０１−１０４；Ｌｕｎｄら、１９９６、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５７：４９６３−４９６９；Ａｒｍｏｕｒら、１９９９、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９：２６１３−２６２４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、２０００、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：４１７８−４１８４；Ｒｅｄｄｙら、２０００、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：１９２５−１９３３；Ｘｕら、２０００、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００：１６−２６；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、２００１、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６６：２５７１−２５７５；Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００１、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７６：６５９１−６６０４；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、２００２、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ８２：５７−６５；Ｐｒｅｓｔａら、２００２、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ ３０：４８７−４９０）；米国特許第５，６２４，８２１号；同第５，８８５，５７３号；同第５，６７７，４２５号；同第６，１６５，７４５号；同第６，２７７，３７５号；同第５，８６９，０４６号；同第６，１２１，０２２号；同第５，６２４，８２１号；同第５，６４８，２６０号；同第６，５２８，６２４号；同第６，１９４，５５１号；同第６，７３７，０５６号；同第６，８２１，５０５号；同第６，２７７，３７５号；米国特許出願第２００４／０００２５８７号およびＰＣＴ公開第ＷＯ ９４／２９３５１号；同第ＷＯ ９９／５８５７２号；同第ＷＯ ００／４２０７２号；同第ＷＯ ０２／０６０９１９号；同第ＷＯ ０４／０２９２０７号；同第ＷＯ ０４／０９９２４９号；同第ＷＯ ０４／０６３３５１において開示されるＦｃ改変体）と合わせられ得る。欠失、付加および／または改変を含むＦｃ領域もまた、本発明によって包含される。Ｆｃドメインのさらに他の改変／置換／付加／欠失は、当業者にとって容易に明白である。

【0118】

天然に存在しないＦｃ領域を産生するための方法は、当該分野において公知である。例えば、アミノ酸の置換および／または欠失は、変異誘発法によって産生され得、この方法としては、位置指定変異誘発（Ｋｕｎｋｅｌ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：４８８−４９２（１９８５））、ＰＣＲ 変異誘発（Ｈｉｇｕｃｈｉ、「ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ｐｐ．１７７−１８３（１９９０））およびカセット変異誘発（Ｗｅｌｌｓら、Ｇｅｎｅ ３４：３１５−３２３（１９８５））が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、位置指定変異誘発が、オーバーラップ伸長ＰＣＲ法（Ｈｉｇｕｃｈｉ、「ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ」、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ｐｐ．６１−７０（１９８９））によって行われる。あるいは、オーバーラップ伸長ＰＣＲの技術（Ｈｉｇｕｃｈｉ、ｉｂｉｄ．）は、標的配列（開始ＤＮＡ）に任意の所望の変異を導入するために使用され得る。例えば、オーバーラップ伸長法におけるＰＣＲの第１のラウンドは、外部プライマー（プライマー１）および内部変異誘発プライマー（プライマー３）を用い、そして別個に第２の外部プライマー（プライマー４）および内部プライマー（プライマー２）を用いて標的配列を増幅して、２つのＰＣＲセグメント（セグメントＡおよびＢ）を産生することを包含する。内部変異誘発プライマー（プライマー３）は、所望の変異を指定する標的配列に対するミスマッチを含むように設計される。ＰＣＲの第２のラウンドにおいて、ＰＣＲの第１のラウンドの産物（セグメントＡおよびＢ）は、２つの外部プライマー（プライマー１および４）を使用するＰＣＲによって増幅される。得られた完全長ＰＣＲセグメント（セグメントＣ）は、制限酵素によって消化され、そして得られた制限酵素フラグメントは、適切なベクター中にクローニングされる。変異誘発の第１の工程として、（例えば、Ｆｃ融合タンパク質、抗体またはＦｃ領域のみをコードする）開始ＤＮＡは、変異誘発ベクター中に作動可能にクローニングされる。上記プライマーは、所望のアミノ酸置換を反映するように設計される。改変体Ｆｃ領域の産生のために有用な他の方法は、当該分野において公知である（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；同第５，８８５，５７３号；同第５，６７７，４２５号；同第６，１６５，７４５号；同第６，２７７，３７５号；同第５，８６９，０４６号；同第６，１２１，０２２号；同第５，６２４，８２１号；同第５，６４８，２６０号；同第６，５２８，６２４号；同第６，１９４，５５１号；同第６，７３７，０５６号；同第６，８２１，５０５号；同第６，２７７，３７５号；米国特許出願公開第２００４／０００２５８７号およびＰＣＴ公開第ＷＯ ９４／２９３５１号；同第ＷＯ ９９／５８５７２号；同第ＷＯ ００／４２０７２号；同第ＷＯ ０２／０６０９１９号；同第ＷＯ ０４／０２９２０７号；同第ＷＯ ０４／０９９２４９号；同第ＷＯ ０４／０６３３５１を参照のこと）。

【0119】

いくつかの実施形態において、Ｆｃ改変体タンパク質は、１種以上の操作されたグリコフォーム（すなわち、Ｆｃ領域を含む分子に共有結合される炭水化物組成）を含む。操作されたグリコフォームは、種々の目的に対して有用であり得る、その目的としては、エフェクター機能を増強または減少させることが挙げられるが、これらに限定されない。操作されたグリコフォームは、当業者に公知の任意の方法例えば、操作された発現株または改変体発現株を使用すること、１種以上の酵素（例えば、ＤＩ Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩ１１））を伴う同時発現、種々の生物体または種々の生物体由来の細胞株においてＦｃ領域を含む分子を発現すること、またはＦｃ領域を含む分子を発現させた後に炭水化物を改変すること）によって産生され得る。操作されたグリコフォームを産生するための方法は、当該分野において公知であり、そしてその方法としては、Ｕｍａｎａら、１９９９、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １７：１７６−１８０；Ｄａｖｉｅｓら、２００１７ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ７４：２８８−２９４；Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００２、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７：２６７３３−２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａら、２００３、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：３４６６−３４７３）米国特許第６，６０２，６８４号；米国特許出願第１０／２７７，３７０号；米国特許出願第１０／１１３，９２９号；ＰＣＴ ＷＯ ００／６１７３９Ａ１；ＰＣＴ ＷＯ ０１／２９２２４６Ａ１；ＰＣＴ ＷＯ ０２／３１１１４０Ａ１；ＰＣＴ ＷＯ ０２／３０９５４Ａ１；Ｐｏｔｉｌｌｅｇｅｎｔ（登録商標）技術（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）；ＧｌｙｃｏＭＡｂ（登録商標）グリコシル化工学技術（ＧＬＹＣＡＲＴ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＧ、Ｚｕｒｉｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、ＷＯ ０００６１７３９；ＥＡ０１２２９１２５；ＵＳ ２００３０１１５６１４；Ｏｋａｚａｋｉら、２００４、ＪＭＢ、３３６：１２３９−４９を参照のこと。

【0120】

（５．１．１８．抗体のグリコシル化）
なお別の実施形態において、本発明に従って利用される抗体のグリコシル化は、改変される。例えば、グリコシル化された抗体が、作製され得る（すなわち、その抗体は、グリコシル化を欠く）。グリコシル化は、例えば、標的抗原に対する抗体の親和性を増大させるために変えられ得る。このような炭水化物の改変は、抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部位を変えることによって達成され得る。例えば、１つ以上のアミノ酸置換が、行われ得、この置換は、１つ以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位の排除を生じ、それによってその部位におけるグリコシル化を排除する。このようなグリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増大させ得る。このようなアプローチは、米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号においてさらに詳細に記載される。あるいは、１つ以上のアミノ酸置換が、行われ得、この置換は、Ｆｃ領域に存在するグリコシル化部位（例えば、ＩｇＧのアスパラギン２９７）の排除を生じる。さらに、グリコシル化された抗体は、必要なグリコシル化機構を欠く細菌細胞において産生され得る。

【0121】

追加的かまたは代替的に、変化した型のグリコシル化を有する抗体（例えば、減少した量のフコシル残基を有するフコシル化が少ない抗体または２つに分かれるＧｌｃＮＡｃ構造の増加を有する抗体）が、作製され得る。このような変化したグリコシル化パターンは、抗体ＡＤＣＣ能力を増大させることが示されている。このような炭水化物の改変は、例えば、変化したグリコシル化機構を有する宿主細胞中で抗体を発現させることによって達成され得る。変化したグリコシル化機構を有する細胞は、当該分野において記載されており、そして本発明の組換え抗体を発現する宿主細胞として使用され得、それによって変化したグリコシル化を伴う抗体を産生する。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ら（２００２）Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０；Ｕｍａｎａら（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１、および欧州特許第ＥＰ １，１７６，１９５号；ＰＣＴ公開第ＷＯ ０３／０３５８３５号；同第ＷＯ ９９／５４３４２号を参照のこと。

【0122】

（５．２．抗ＣＤ１９抗体の製造／生産）
一旦所望の抗ＣＤ１９抗体が操作されると、その抗ＣＤ１９抗体は、抗体を大規模に製造するための当該分野において周知である方法を用いて商業的規模で生産され得る。例えば、これは、組換え発現系（例えば、下に記載されるものであるが、これらに限定されない）を使用して達成され得る。

【0123】

（５．２．１．組換え発現系）
本発明の抗体またはその改変体の組換え発現は、一般に、その抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構築を必要とする。一旦抗体分子または抗体の重鎖もしくは軽鎖、あるいはその部分（好ましくは、重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインを含むが、必ずしもそうではない）をコードするポリヌクレオチドが得られると、抗体分子の産生のためのベクターが、当該分野において周知である技術を使用した組換えＤＮＡ技術によって産生され得る。例えば、米国特許第６，３３１，４１５号（これは、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。したがって、抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを発現させることによってタンパク質を調製するための方法が、本明細書中に記載される。当業者にとって周知である方法が、抗体コード配列および適切な転写調節シグナルおよび翻訳調節シグナルを含む発現ベクターを構築するために使用され得る。これらの方法としては、例えば、インビトロの組換えＤＮＡ技術、合成技術およびインビボの遺伝的組換えが挙げられる。本発明は、したがって、本発明の抗体分子、抗体の重鎖もしくは軽鎖、抗体の重鎖可変ドメインもしくは軽鎖可変ドメイン、あるいはそれらの一部、または重鎖ＣＤＲもしくは軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターを提供し、このヌクレオチド配列は、プロモーターに作動可能に連結される。このようなベクターは、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含み得（例えば、国際出願第ＷＯ ８６／０５８０７号および同第ＷＯ ８９／０１０３６号；ならびに米国特許第５，１２２，４６４号を参照のこと）、そしてその抗体の可変ドメインは、重鎖全体、軽鎖全体、あるいは重鎖全体および軽鎖全体の両方の発現のためにこのようなベクター中にクローニングされ得る。

【0124】

代替的な実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体は、その抗ＣＤ１９抗体の全部または一部を産生するために、標的化された相同組換えを使用して作製され得る（米国特許第６，０６３，６３０号、同第６，１８７，３０５号および同第６，６９２，７３７号を参照のこと）。特定の実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体は、その抗ＣＤ１９抗体の全部または一部を産生するためにランダム組換え（ｒａｎｄｏｍ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）技術（米国特許第６，３６１，９７２号、同第６，５２４，８１８号、同第６，５４１，２２１号および同第６，６２３，９５８号を参照のこと）を使用して作製され得る。抗ＣＤ１９抗体はまた、Ｃｒｅ媒介性の部位特異的相同組換えを使用して改変された免疫グロブリンの遺伝子座を含む細胞のゲノム配列由来の抗体を発現する細胞において産生され得る（米国特許第６，０９１，００１号を参照のこと）。ヒト抗体の産生が望まれる場合、宿主細胞は、ヒト細胞株であるべきである。これらの方法は、その抗体分子を不変に発現する安定な細胞株を設計するために、有益に使用され得る。

【0125】

一旦上記発現ベクターが従来の技術によって宿主細胞に移入されると、そのトランスフェクトされた細胞は、次いで、本発明の抗体を産生するために従来の技術によって培養される。したがって、本発明は、本発明の抗体、またはそのフラグメント、またはその重鎖もしくは軽鎖、またはそれらの部分、あるいは本発明の単鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を含み、このポリヌクレオチドは、異種プロモーターに作動可能に連結される。二本鎖抗体の発現に関して好ましい実施形態において、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターは、下に記載される通り、免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細胞において同時発現され得る。

【0126】

種々の宿主−発現ベクター系が、本発明の抗ＣＤ１９抗体またはその部分を発現するために利用され得、その宿主−発現ベクター系は、抗ＣＤ１９抗体の操作および産生において使用され得る（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照のこと）。例えば、ベクター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要な中間初期遺伝子プロモーター（ｍａｊｏｒ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｅａｒｌｙ ｇｅｎｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ）エレメント）と組み合わせた哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ））は、抗体のための有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇら、Ｇｅｎｅ、４５：１０１（１９８６）；およびＣｏｃｋｅｔｔら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、８：２（１９９０））。さらに、挿入された抗体配列の発現を調節するか、または所望される特定の様式で抗体遺伝子産物を改変もしくは加工する宿主細胞株が、選択され得る。タンパク質産物のこのような改変（例えば、グリコシル化）および加工（例えば、切断）は、タンパク質の機能に関して重要であり得る。異なる宿主細胞は、翻訳後の加工ならびにタンパク質および遺伝子産物の改変についての特徴と特定の機構とを有する。適切な細胞株または宿主系は、発現された抗体またはその部分の正しい改変および加工を確保するように選択され得る。この目的のために、一次転写産物の適切な加工（遺伝子産物のグリコシル化およびリン酸化）のための細胞機構を有する真核生物宿主細胞が、使用され得る。このような哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ細胞、ＶＥＲＹ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨｅＩａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＭＤＣＫ細胞、２９３細胞、３Ｔ３細胞、Ｗ１３８細胞、ＢＴ４８３細胞、Ｈｓ５７８Ｔ細胞、ＨＴＢ２細胞、ＢＴ２Ｏ細胞およびＴ４７Ｄ細胞、ＮＳＯ細胞（任意の免疫グロブリン鎖を内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ細胞およびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

【0127】

好ましい実施形態において、不死化ヒトリンパ球によって作製されたヒト細胞株は、モノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体を組換え的に産生するために使用され得る。

【0128】

好ましい実施形態において、ヒト細胞株ＰＥＲ．Ｃ６．（Ｃｒｕｃｅｌｌ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）は、モノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体を組換え的に産生するために使用され得る。

【0129】

細菌系において、多くの発現ベクターは、発現される抗体分子を対象とした使用に依存して、有利に選択され得る。例えば、大量のこのような抗体が産生されるべき場合（抗ＣＤ１９抗体を含む薬学的組成物のため）、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を目的とするベクターが、望まれ得る。このようなベクターとしては、抗体をコードする配列がｌａｃ Ｚコード領域とインフレームでベクター中に個別にライゲーションされ得、その結果、融合タンパク質が産生されるＥ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒら、ＥＭＢＯ、１２：１７９１（１９８３））；ｐＩＮベクターｓ（ＩｎｏｕｙｅおよびＩｎｏｕｙｅ、１９８５、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９（１９８５）；Ｖａｎ ＨｅｅｋｅおよびＳｃｈｕｓｔｅｒ、１９８９、Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２４：５５０３−５５０９（１９８９））などが挙げられるが、これらに限定されない。ｐＧＥＸベクターはまた、グルタチオン５−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を有する融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現するために使用され得る。一般に、このような融合タンパク質は、可溶性であり、そしてグルタチオンアガロースビーズのマトリックスに吸着および結合させ、次いで遊離グルタチオンの存在下で溶出させることによって、溶解した細胞から容易に精製され得る。ｐＧＥＸベクターは、トロンビンプロテアーゼ切断部位またはファクターＸａプロテアーゼ切断部位を含むように設計され、その結果クローニングされた標的遺伝子産物は、ＧＳＴ部分から切り離され得る。

【0130】

昆虫系において、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多核体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が、外来遺伝子を発現するために、ベクターとして使用される。そのウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞中で増殖する。抗体コード配列は、そのウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）中に個別にクローニングされ得、そしてＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下におかれ得る。

【0131】

哺乳動物宿主細胞において、多くのウイルスベースの発現系が、利用され得る。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合において、目的とする抗体コード配列は、アデノウイルスの転写／翻訳調節複合体（例えば、後期プロモーターおよび三分節リーダー（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ ｌｅａｄｅｒ）配列）にライゲーションされ得る、このキメラ遺伝子は、次いで、インビトロ組換えまたはインビボ組換えによってアデノウイルスゲノム中に挿入され得る。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域ＥｌまたはＥ３）における挿入は、生存可能な組換えウイルスを生じ、そしてそのウイルスは、感染した宿主において抗体分子を発現し得る（例えば、ＬｏｇａｎおよびＳｈｅｎｋ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：３５５−３５９（１９８４）を参照のこと）。特定の開始シグナルもまた、挿入された抗体コード配列の効率的な翻訳に必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接配列を含む。さらに、その開始コドンは、一般に、挿入物全体の翻訳を確保するために、所望のコード配列のリーディングフレームに同調するべきである。これらの外因性の翻訳調節シグナルおよび開始コドンは、種々の起源（天然および合成の両方）のものであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどを含むことによって増強され得る（例えば、Ｂｉｔｔｎｅｒら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ、１５３：５１−５４４（１９８７）を参照のこと）。

【0132】

組換えタンパク質の長期であり高収量の産生のために、安定な発現が、好ましい。例えば、抗体分子を安定に発現する細胞株が、設計され得る。ウイルス起源の複製を含む複製発現ベクターを使用する一過性の発現系よりもむしろ、宿主細胞は、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）および選択マーカーによって制御されたＤＮＡによって形質転換され得る。外来ＤＮＡの導入後、操作された細胞は、富栄養培地中で１〜２日間増殖され得、次いで選択培地へと切り替えられる。組換えプラスミド中の選択マーカーは、その選択に対する抵抗性を与え、細胞に、そのプラスミドがそれらの染色体中に安定に組み込まれ、次にクローニングされ得る巣からの増殖を可能にし、そして細胞株中に拡大する。上記抗ＣＤ１９抗体をコードするプラスミドは、遺伝子／ｃＤＮＡを培養における産生に適した任意の細胞株中に導入するために使用され得る。あるいは、「標的性ベクター」と称されるプラスミドは、発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサーなど）を宿主細胞中の適切な染色体の位置に導入するために使用されて、抗ＣＤ１９抗体についての内因性遺伝子を「活性化」し得る。

【0133】

多くの選択系が、使用され、それらとしては、それぞれ、ｔｋ⁻細胞、ｈｇｐｒｔ⁻細胞またはａｐｒＴ⁻細胞において使用され得る単純ヘルペスチミジンキナーゼ遺伝子（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ、１１：２２３（１９７７））、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＳｚｙｂａｌｓｋａおよびＳｚｙｂａｌｓｋｉ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、４８：２０２（１９９２））およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子（Ｌｏｗｙら、Ｃｅｌｌ、２２：８−１７（１９８０））が挙げられるが、これらに限定されない。また、代謝拮抗剤耐性が、以下の遺伝子に対する選択の基礎として使用され得る：メトトレキサートに対する耐性を与えるｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：３５７（１９８０）；Ｏ’Ｈａｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７８：１５２７（１９８１））；ミコフェノール酸に対する耐性を与えるｇｐｔ（ＭｕｌｌｉｇａｎおよびＢｅｒｇ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７８：２０７２（１９８１））；アミノグリコシドＧ−４１８に対する耐性を与えるｎｅｏ（ＷｕおよびＷｕ、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５（１９９１）；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６（１９９３）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−９３２（１９９３）；ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７（１９９３）；Ｍａｙ、ＴＩＢ ＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２ １５（１９９３））；およびハイグロマイシンに対する耐性を与えるｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅら、Ｇｅｎｅ、３０：１４７（１９８４））。組換えＤＮＡ技術の分野において一般的に公知である方法は、所望の組換えクローンを選択するために慣用的に適用され得、そしてこのような方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１９９３）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ（１９９０）；ならびに第１２章および第１３章、Ｄｒａｃｏｐｏｌｉら（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ（１９９４）；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎら、１９８１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ、１５０：１（これらは、その全体が本明細書中に参考として援用される）に記載される。

【0134】

抗体分子の発現レベルは、ベクターの増幅によって増大し得る（概説については、ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎおよびＨｅｎｔｓｃｈｅｌ、Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ、第３巻．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）を参照のこと）。抗体を発現するベクター系中のマーカーが、増幅可能な場合、宿主細胞の培養において存在するインヒビターのレベルの増加は、マーカー遺伝子のコピーの数を増加させる。増幅された領域は、抗体遺伝子に関連するので、その抗体の産生もまた、増大する（Ｇｒｏｕｓｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ、３：２５７（１９８３））。抗体の発現レベルは、組換えタンパク質の当業者に公知の組換え方法および組換えツールを使用することによって拡大され得、それらとしては、周囲の染色質を再構築し、そして活性な人工転写ドメインの形態において導入遺伝子の発現を増強する技術が挙げられる。

【0135】

宿主細胞は、本発明の２種の発現ベクター（重鎖由来のポリペプチドをコードする第１のベクターおよび軽鎖由来のポリペプチドをコードする第２のベクター）によって同時トランスフェクトされ得る。上記２種のベクターは、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする同一の選択マーカーを含み得る。あるいは、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、かつ発現し得る単一のベクターが、使用され得る。このような状態において、上記軽鎖は、過剰の有毒な遊離した重さを回避するために、重鎖の前に配置されるべきである（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ、Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５６２−６５（１９８６）；およびＫｏｈｌｅｒ、１９８０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：２１９７（１９８０））。重鎖および軽鎖についてのコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る。

【0136】

一旦本発明の抗体分子が組換え発現によって産生されると、それは、免疫グロブリン分子の精製について当該分野において公知である任意の方法（例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー（特に、プロテインＡ後の特定の抗原に対する親和性）、およびサイズ排除クロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ））またはタンパク質の精製に関する他の標準的な技術によって精製され得る。さらに、本発明の抗体またはそのフラグメントは、精製を容易にするために、本明細書中に記載されるか、またはそうでなければ当該分野において公知である異種ポリペプチド配列二融合され得る。

【0137】

（５．２．２．抗体の精製および単離）
組換え技術を使用する場合、抗体は、細胞膜周辺腔において細胞内に産生され得るか、または培地中に直接分泌され得る。抗体が細胞内に産生される場合、第１の工程として、微粒子状の破片（宿主細胞または溶解したフラグメントのいずれか）は、例えば、遠心分離または限外濾過によって除去される。Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：１６３−１６７（１９９２）は、Ｅ．ｃｏｌｉの細胞膜周辺腔に分泌される抗体を単離するための手順を記載する。簡単にいうと、細胞のペーストは、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡおよびフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）の存在下において約３０分間かけて解凍される。細胞の破片は、遠心分離によって除去され得る。抗体変異体が培地中に分泌される場合、このような発現由来の上清は、一般に、まず市販のタンパク質濃縮フィルター（例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎの限外濾過ユニット）を使用して濃縮される。プロテアーゼインヒビター（例えば、ＰＭＳＦ）は、タンパク質分解を阻害するために前述の工程のいずれかに含まれ得、そして抗生物質が、外来性の汚染因子の増殖を防ぐために含まれ得る。

【0138】

上記細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、および／またはアフィニティークロマトグラフィーを単独または他の精製工程との組み合わせのいずれかで使用することによって精製され得る。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体変異体に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトγ１重鎖、ヒトγ２重鎖、またはヒトγ４重鎖に基づく抗体を精製するために使用され得る（Ｌｉｎｄｍａｒｋら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、６２：１−１３（１９８３））。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプおよびヒトγ３について推奨される（Ｇｕｓｓら、ＥＭＢＯ Ｊ．、５：１５６７１５７５（１９８６））。親和性リガンドを結合するマトリックスは、ほとんどの場合、アガロースであるが、他のマトリックスも、利用される。機構として安定なマトリックス（例えば、多孔質ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ）またはポリ（スチレンジビニル）ベンゼン）は、アガロースによって達成され得るよりも早い流速および短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、ＮＪ）が、精製に有用である。タンパク質精製のための他の技術（例えば、イオン交換カラムにおける分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンでのクロマトグラフィー、アニオン交換樹脂またはカチオン交換樹脂でのＳＥＰＨＡＲＯＳＥクロマトグラフィー（例えば、ポリアスパラギン酸カラム）、等電点電気泳動、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび硫酸アンモニウム沈殿）もまた、回収される抗体抗体に依存して利用可能である。

【0139】

任意の予備的な精製工程の後、目的の抗体および汚染因子を含む混合物は、ｐＨ約２．５〜４．５の溶出緩衝液を使用する低いｐＨの疎水性相互作用クロマトグラフィー（好ましくは、低い塩濃度にて行われる（例えば、約０〜０．２５Ｍの塩））に供され得る。

【0140】

（５．３．治療用抗ＣＤ１９抗体）
本発明の組成物および方法において使用される抗ＣＤ１９抗体は、好ましくは、ヒトのＡＤＣＣを媒介するヒト抗体またはヒト化抗体であるか、または好ましくは、ヒトのＡＤＣＣを媒介する公知の抗ＣＤ１９抗体から選択される。特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、キメラ抗体であり得る。好ましい実施形態において、抗ＣＤ１９抗体は、モノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体、モノクローナルヒト化抗ＣＤ１９抗体、またはモノクローナルキメラ抗ＣＤ１９抗体である。本発明の組成物および方法において使用される抗ＣＤ１９抗体は、好ましくは、ＩｇＧ１ヒトアイソタイプまたはＩｇＧ３ヒトアイソタイプのヒト抗体またはヒト化抗体である。他の実施形態において、本発明の組成物および方法において使用される抗ＣＤ１９抗体は、好ましくは、ＩｇＧ２ヒトアイソタイプまたはＩｇＧ４ヒトアイソタイプのヒト抗体またはヒト化抗体であり、それらは、好ましくは、ＡＤＣＣを媒介する
このような抗体は、上に記載される技術を使用して産生され得るが、本発明の他の実施形態において、本明細書中に記載されるマウス抗体ＨＢ１２ａおよびＨＢ１２ｂまたは他の市販の抗ＣＤ１９抗体は、キメラ化され得るか、ヒト化され得るか、またはヒト抗体へと作製され得る。

【0141】

例えば、使用され得る公知の抗ＣＤ１９抗体としては、ＨＤ３７（ＩｇＧ１）（ＤＡＫＯ、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ、ＣＡ）、ＢＵ１２（Ｇ．Ｄ．Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）、４Ｇ７（ＩｇＧ１）（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｊ４．１１９（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｋｒｅｆｅｌｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｂ４３（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、ＳＪ２５Ｃ１（ＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、ＦＭＣ６３（ＩｇＧ２ａ）（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ Ｉｎｔ’ｌ．、Ｔｅｍｅｃｕｌａ、ＣＡ）（Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、３４：１１５７−１１６５（１９９７）；Ｐｉｅｔｅｒｓｚら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、４１：５３−６０（１９９５）；およびＺｏｌａら、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、６９：４１１−４２２（１９９１））、Ｂ４（ＩｇＧ１）（（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｍｉａｍｉ、ＦＬ）Ｎａｄｌｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３１：２４４−２５０（１９８３））、および／またはＨＤ２３７（ＩｇＧ２ｂ）（Ｆｏｕｒｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ ｏｎ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ Ａｎｔｉｇｅｎｓ、Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕｓｔｒｉａ、１９８９；およびＰｅｚｚｕｔｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３８：２７９３−２７９９（１９８７））が挙げられるが、これらに限定されない。

【0142】

特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号２（図５Ａ）のアミノ酸配列を含むＨＢ１２ａの重鎖を含む。他の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号４（図５Ｂ）のアミノ酸配列を含むＨＢ１２ｂの重鎖を含む。

【0143】

特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号１６（図６Ａ）のアミノ酸配列を含むＨＢ１２ａの軽鎖を含む。他の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、配列番号１８（図６Ｂ）のアミノ酸配列を含むＨＢ１２ｂの軽鎖を含む。

【0144】

特定の実施形態において、抗体は、公知の抗体の（例えば、ＩｇＧ１ヒトアイソタイプまたはＩｇＧ３ヒトアイソタイプへの）アイソタイプスイッチ改変体（例えば、上に記載されるもの（例えば、ＨＢ１２ａまたはＨＢ１２ｂ））である。

【0145】

本発明の組成物および方法において使用される抗ＣＤ１９抗体は、むき出しの抗体、免疫結合体または融合タンパク質であり得る。好ましくは、本発明の組成物および方法において使用するための上に記載される抗ＣＤ１９抗体は、それによって処置されるヒトにおいて、Ｂ細胞および循環する免疫グロブリンを減少または枯渇させ得る。Ｂ細胞の枯渇は、循環するＢ細胞、または特定の組織（例えば、骨髄、脾臓、消化管関連リンパ組織、および／またはリンパ節であるが、これらに限定されない）におけるものであり得る。このような枯渇は、種々の機構（例えば、抗体依存性細胞媒介生細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の阻害および／またはＢ細胞の死の誘導（例えば、アポトーシスによる））によって達成され得る。Ｂ細胞の「枯渇」によって、循環するＢ細胞および／または特定の組織におけるＢ細胞の、第５．４．３節に記載されるような少なくとも約２５％、４０％、５０％、６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上の減少が意味される。特定の実施形態において、実質的に全ての検出可能なＢ細胞は、循環および／または特定の組織から枯渇する。循環する免疫グロブリン（Ｉｇ）の「枯渇」によって、第５．４．３節に記載されるような少なくとも約２５％、４０％、５０％、６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上の減少が、意味される。特定の実施形態において、実質的に全ての検出可能なＩｇは、循環から枯渇する。

【0146】

（５．３．１．ヒトＣＤ１９結合についての抗体のスクリーニング）
結合アッセイは、ヒトＣＤ１９抗原を結合する抗体を同定するために使用され得る。結合アッセイは、直接結合アッセイまたは競合結合アッセイのいずれかとして行われ得る。結合は、標準的なＥＬＩＳＡアッセイまたは標準的なフローサイトメトリーアッセイを使用して検出され得る。直接結合アッセイにおいて、候補の抗体は、ヒトＣＤ１９抗原に対する結合について試験される。特定の実施形態において、上記スクリーングアッセイは、第２の工程において、ヒトＣＤ１９を発現するＢ細胞の細胞死またはアポトーシスを引き起こす能力を決定する工程を包含する。他方では、競合結合アッセイは、公知の抗ＣＤ１９抗体またはヒトＣＤ１９を結合する他の化合物と競合する候補の抗体の能力を評価する。

【0147】

直接結合アッセイにおいて、上記ヒトＣＤ１９抗原は、ヒトＣＤ１９抗原に対する候補の抗体の結合を可能にする条件下で、候補の抗体と接触される。上記結合は、溶液中または固体表面上で起こり得る。好ましくは、候補の抗体は、検出のために予め標識される。任意の検出可能な化合物（例えば、発光体、蛍光体、または放射性同位体もしくはそれを含む群、または非同位体標識（例えば、酵素または色素）であるが、これらに限定されない）が、標識化のために使用され得る。結合が起きるのに十分なインキュベーション期間の後、その反応は、過剰な抗体または非特異的に結合した抗体を除去する条件および操作に曝される。代表的に、それは、適切な緩衝液によって洗浄することを包含する。最終的に、ＣＤ１９−抗体複合体の存在が、検出される。

【0148】

競合結合アッセイにおいて、候補の抗体は、ヒトＣＤ１９抗原に対する公知の抗ＣＤ１９抗体（または他の化合物）の結合を阻害または駆逐するその能力について評価される。ＣＤ１９の標識された公知のバインダーは、候補の抗体と混合され得、そして候補の抗体の添加有り、および候補の抗体の添加無しで、それらの間の相互作用が通常に起きる条件下におかれる。ヒトＣＤ１９に結合するＣＤ１９の標識された公知のバインダーの量は、候補の抗体の存在下または非存在下において結合される量と比較され得る。

【0149】

好ましい実施形態において、抗体抗原複合体の形成および検出を容易にするために、上記結合アッセイは、固体表面上に固定化された１種以上の成分を用いて行われる。種々の実施形態において、その固体支持体は、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ガラス、ニトロセルロース、デキストラン、ナイロン、ポリアクリルアミド、およびアガロースであり得るが、これらに限定されない。その支持体の構造としては、ビーズ、膜、微粒子、（例えば、マイクロタイタープレート、試験管または他の反応容器）の内部表面が挙げられ得る。ヒトＣＤ１９、または他の成分の固定化は、共有結合または非共有結合によって行われ得る。１つの実施形態において、その結合は、間接的（すなわち、結合された抗体を介する）であり得る。別の実施形態において、ヒトＣＤ１９抗原およびネガティブコントロールは、固体表面に対する結合が市販の抗体（例えば、抗ＧＳＴ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ））によって媒介され得るようにエピトープ（例えば、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ））によってタグ化される。

【0150】

例えば、このような親和性結合アッセイは、固体支持体に固定化されるヒトＣＤ１９抗原を使用して行われ得る。代表的に、結合反応の非移動成分（ｎｏｎ−ｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）は、この場合の候補である抗ＣＤ１９抗体において、検出を可能にするために標識される。種々の標識方法が、利用可能であり、そしてそれらの標識方法が、使用され得る（例えば、発光体、発色団、蛍光体、または放射性同位体もしくはそれを含む群、および非同位体標識（例えば、酵素または色素））。好ましい実施形態において、候補の抗ＣＤ１９抗体は、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓから入手可能））などのフルオロフォアによって標識される。

【0151】

最終的に、固体表面に残る標識は、当該分野において公知である任意の検出法によって検出され得る。例えば、候補の抗ＣＤ１９抗体がフルオロフォアによって標識される場合、蛍光光度計が、複合体を検出するために使用され得る。

【0152】

好ましくは、ヒトＣＤ１９抗原は、ヒトＣＤ１９抗原を発現するインタクトな細胞の形態、またはヒトＣＤ１９抗原を含む単離された膜の形態で結合アッセイに添加される。したがって、ヒトＣＤ１９抗原に対する直接的な結合は、細胞候補の抗ＣＤ１９抗体の存在下および非存在下で、培養物または動物モデル中のインタクトな細胞においてアッセイされ得る。標識された候補の抗ＣＤ１９抗体は、ヒトＣＤ１９抗原を発現する細胞、またはこのような細胞から得られた粗抽出物と混合され得、そしてその候補の抗ＣＤ１９抗体は、添加され得る。単離された膜は、ヒトＣＤ１９と相互作用する候補の抗ＣＤ１９抗体を同定するために使用され得る。例えば、単離された膜を使用する代表的な実験において、細胞は、ヒトＣＤ１９抗原を発現するように遺伝的に操作され得る。膜は、標準的な技術によって回収され得、そしてインビトロ結合アッセイにおいて使用され得る。標識された候補の抗ＣＤ１９抗体（例えば、蛍光標識抗体）は、その膜に結合され、そして特定の活性についてアッセイされる；特異的結合は、過剰な標識されていない候補の抗ＣＤ１９抗体（非放射性）の存在下で行われる結合アッセイとの比較によって決定される。あるいは、可溶性ヒトＣＤ１９抗原は、組換え的に発現され得、そしてヒトＣＤ１９抗原に結合する抗体を同定するために、非細胞ベースのアッセイにおいて利用されえる。その組換え的に発現されたヒトＣＤ１９ポリペプチドは、非細胞ベースのスクリーニングアッセイにおいて使用され得る。あるいは、ヒトＣＤ１９抗原の結合部分の１つ以上に対応するペプチド、またはヒトＣＤ１９抗原の結合部分の１つ以上を含む融合タンパク質が、ヒトＣＤ１９抗原の部分に結合する抗体を同定するために、非細胞ベースのアッセイシステムにおいて使用され得る。非細胞ベースのアッセイにおいて、上記組換え的に発現されたヒトＣＤ１９は、当業者に周知の手段（Ａｕｓｕｂｅｌら、前出を参照のこと）によって、試験管、マイクロタイターウェルまたはカラムなどの固体基材に結合される。次いで、試験抗体は、ヒトＣＤ１９抗原に結合するそれらの能力についてアッセイされる。

【0153】

あるいは、上記結合反応は、溶液中で行われ得る。このアッセイにおいて、標識された成分は、溶液中でその結合パートナーと相互作用し得る。標識された成分とその結合パートナーとの間の大きさの違いがこのような分離を可能にする場合、その分離は、結合反応の産物を、結合していない標識された成分の通過を許容するが、その結合パートナーまたはそのパートナーに結合した標識された成分の通過を許容しない限外濾過膜に通すことによって達成され得る。分離はまた、溶液から標識された成分の結合パートナーを捕捉し得る任意の試薬（例えば、その結合パートナーに対する抗体など）を使用して達成され得る。

【0154】

１つの実施形態において、例えば、ファージライブラリーは、連続的なファージディスプレイライブラリー由来のファージを、精製されたヒトＣＤ１９抗原、またはその誘導体、アナログ、フラグメント、もしくはドメイン（固相（例えば、プラスチックビーズ）に結合されている）を含むカラムに通すことによってスクリーニングされ得る。洗浄緩衝液のストリンジェンシーを変えることによって、ヒトＣＤ１９抗原に対する高い親和性を有するペプチドを発現するファージを豊富にすることが、可能である。そのカラムから単離されたファージは、クローニングされ得、そして親和性が、直接測定され得る。抗体およびそれらのアミノ酸配列はヒトＣＤ１９抗原に対する最も強い結合を与えることが分かっているので、コンピューターモデルが、ＣＤ１９抗原と候補の抗体との間の分子の接触を同定するために使用され得る。

【0155】

本発明のこの局面の別の特定の実施形態において、上記固体支持体は、マイクロタイターディッシュに結合したヒトＣＤ１９抗原を含む膜である。候補の抗体、例えば、マイクロタイターディッシュ中のライブラリー膜の発現を可能にする条件下で培養される、ライブラリー抗体を発現する細胞を結合し得る。ヒトＣＤ１９に結合するライブラリー膜が、回収される。このような方法は、一般に、例としてＰａｒｍｌｅｙおよびＳｍｉｔｈ、１９８８、Ｇｅｎｅ、７３：３０５−３１８；Ｆｏｗｌｋｅｓら、１９９２、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１３：４２２−４２７；ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１８３１８号；ならびに以上に引用される参考文献に記載される。ヒトＣＤ１９抗原に結合することが同定された抗体は、上に記載される抗体の任意の型または改変の抗体であり得る。

【0156】

（５．３．２．ヒトＡＤＣＣエフェクター機能についての抗体のスクリーニング）
ヒトＩｇＧクラスの抗体は、本発明において使用するのに好ましい。なぜならば、それらは、血清における長い半減期のような機能的特徴を有し、そして種々のエフェクター機能を媒介し得るからである（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、第１章（１９９５））。ヒトＩｇＧクラス抗体は、以下の４種のサブクラスにさらに分類される：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４。多数の研究が、ＩｇＧクラス抗体のエフェクター機能に関する限り、ＡＤＣＣおよびＣＤＣならびにアポトーシス活性について行われており、そしてその研究は、ヒトＩｇＧクラスの抗体の間で、ＩｇＧ１サブクラスがヒトにおいて最も高いＡＤＣＣ活性およびＣＤＣ活性を有することを報告している（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、６５、８８（１９９７））。

【0157】

ヒトＩｇＧ１サブクラス抗体のＡＤＣＣ活性およびＣＤＣ活性ならびにアポトーシス活性の発現は、一般に、エフェクター細胞（例えば、キラー細胞、ナチュラルキラー細胞または活性化されたマクロファージ）の表面上に存在する抗体に対するレセプター（以下、「ＦｃγＲ」と称する）に対するその抗体のＦｃ領域の結合を含む。種々の補体成分が、結合され得る。その結合に関して、上記抗体のヒンジ領域における数個のアミノ酸残基およびＣ領域の第２のドメイン（以下、「Ｃγ２ドメイン」と称する）が重要であること（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２３、１０９８（１９９３）、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、８６、３１９（１９９５）、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、６５、８８（１９９７））、およびＣγ２ドメインにおける糖鎖（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、６５、８８（１９９７））もまた重要であることが、示唆されている。

【0158】

本発明の抗ＣＤ１９抗体は、例えば、その抗体のＡＤＣＣおよび／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）ならびに／あるいはアポトーシス活性を増強させるために、エフェクター機能に関して改変され得る。これは、抗体のＦｃ領域において１つ以上のアミノ酸置換を導入することによって達成され得る。代替的かまたは追加的に、システイン残基は、Ｆｃ領域中に導入され得、この領域における鎖間のジスルフィド結合を可能にする。このようにして、改良された内在化性能ならびに／または増大した補体媒介性の細胞殺傷およびＡＤＣＣを有し得るホモダイマーの抗体が、産生され得る（Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８：２９１８−２９２２（１９９２））。ヘテロ二官能性架橋剤もまた、増強された抗腫瘍活性を有するホモダイマー抗体を産生するために使用され得る（Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５３：２５６０−２５６５（１９９３））。抗体はまた、増強された補体溶解性能およびＡＤＣＣ性能をもたらす２つ以上のＦｃ領域を有するように操作され得る（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，（３）２１９−２３０（１９８９））。

【0159】

エフェクター機能を変えるように抗体のＦｃ領域を操作する他の方法は、当該分野において公知である（例えば、ＦＣγＲＩＩＡに対する結合親和性と比較してＦｃγＲＩＩＢに対する結合親和性を増強させるようにＦｃ領域を変化させることを記載する米国特許出願第２００４０１８５０４５号およびＰＣＴ公開第ＷＯ ２００４／０１６７５０号（両方とも、Ｋｏｅｎｉｇらに対するもの）を参照のことを参照のこと；Ａｒｍｏｕｒらに対するＰＣＴ公開第ＷＯ ９９／５８５７２号、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらに対するＷＯ ９９／５１６４２およびＤｅｏらに対する米国特許第６，３９５，２７２号もまた参照のこと（これらの開示は、その全体が本明細書中に援用される））。ＦｃγＲＩＩＢに対する結合親和性を減少させるようにＦｃ領域を改変する方法もまた、当該分野において公知である（例えば、米国特許出願第２００１００３６４５９号およびＰＣＴ公開第ＷＯ ０１／７９２９９号（両方とも、Ｒａｖｅｔｃｈらに対するもの）（これらの開示は、その全体が本明細書中に援用される））。野生型Ｆｃ領域と比較してＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡに対する増強された結合親和性を伴う、改変体Ｆｃ領域を有する改変された抗体もまた、記載されている（例えば、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎらに対するＰＣＴ公開第ＷＯ ２００４／０６３３５１号（この開示は、その全体が本明細書中に援用される））。

【0160】

少なくとも４種の異なる型のＦｃγＲが、見出されており、それらは、それぞれ、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）およびＦｃγＲＩＶと称される。ヒトにおいて、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩは、それぞれ、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩｂならびにＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂへとさらに分類される。ＦｃγＲは、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する膜タンパク質であり、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃγＲＴＩＶは、２つの免疫グロブリン様ドメインを含む細胞内領域を有するα鎖を有し、ＦｃγＲＩは、構成成分に寄与するような、３つの免疫グロブリン様ドメインを含む細胞内領域を有するα鎖を有し、そしてそのα鎖は、ＩｇＧ結合活性に関与する。さらに、ＦｃγＲＩおよびＦｃγＲＩＩＩは、α鎖に関連するシグナル伝達機能を有する成分に寄与するγ鎖またはζ鎖を有する（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１８、７０９（２０００）、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９、２７５（２００１））。ＦｃγＲＩＶは、Ｂｒｕｈｎｓら、Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．，（Ｃａｎａｄａ）２７：３Ｄ（２００４）によって記載されている。

【0161】

目的とする抗ＣＤ１９抗体のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されるようなインビトロＡＤＣＣアッセイが、使用され得る。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。例えば、任意の特定の抗体の、補体の活性化および／またはＡＤＣＣによる標的細胞の溶解を媒介する能力が、アッセイされ得る。目的の細胞は、増殖され、そしてインビトロで標識される；上記抗体は、抗原抗体複合体（すなわち、ＡＤＣＣ応答に関与するエフェクター細胞）によって活性化され得る免疫細胞と組み合わせて細胞培養物に添加される。上記抗体はまた、補体の活性化について試験され得る。いずれかの場合において、標的細胞の細胞溶解は、溶解された細胞からの標識の放出によって検出される。実際に、抗体は、補体および／または免疫細胞の供給源として患者自らの血清を使用してスクリーニングされ得る。インビトロ試験においてヒトのＡＤＣＣを媒介し得る抗体は、次いで、特定の患者において治療的に使用され得る。代替的かまたは追加的に、目的とする分子のＡＤＣＣ活性は、インビボ（例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）において開示されるような動物モデル）で評価され得る。さらに、抗体のＡＤＣＣおよびＣＤＣ（必要に応じて）活性ならびにアポトーシス活性（必要に応じて）のレベルを調節（すなわち、増大または減少）するための技術は、当該分野において周知である。例えば、米国特許第６，１９４，５５１号を参照のこと。（例えば、Ｃｈａｏｕｃｈｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３０９６−１０４（１９９５）；Ｐｅｄｅｒｓｅｎら、Ｂｌｏｏｄ、９９（４）：１３１４−１３１８（２００２）；Ａｌｂｅｒｔｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ；Ｓｔｅｅｎｓｍａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．、８５：３２３−３２，（２００３）を参照のこと）。本発明の抗体は、好ましくは、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣならびに／あるいはアポトーシスの応答を誘導する能力を有し得るか、またはＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣならびに／あるいはアポトーシスの応答を誘導する能力を有するように改変されている。好ましくは、決まったＡＤＣＣ機能に対するこのようなアッセイは、ヒトのＡＤＣＣを評価するために、ヒトエフェクター細胞を使用して行われる。

【0162】

（５．３．３．免疫結合体および融合タンパク質）
本発明の特定の局面に従って、治療剤または毒素は、本発明の組成物および方法において使用するためにキメラ化抗ＣＤ１９抗体、ヒト抗ＣＤ１９抗体、またはヒト化抗ＣＤ１９抗体と結合体化され得る。特定の実施形態において、これらの結合体は、融合タンパク質として産生され得る（第５．１．８節を参照のこと）。治療剤および毒素の例としては、エンジインファミリーの分子のメンバー（例えば、カリチェアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）およびエスペラミジン）が挙げられるが、これらに限定されない。科学的毒素はまた、デュオカルマイシン（例えば、米国特許第５，７０３，０８０号および米国特許第４，９２３，９９０号を参照のこと）、メトトレキセート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ＡＲＡ−Ｃ、ビンデシン、マイトマイシンＣ、シスプラチン、エトポシド、ブレオマイシンおよび５−フルオロウラシルからなる群より採択され得る。化学療法剤の例としてはまた、アドリアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）、シクロフォスファミド、チオテパ、タキソテール（ドセタキセル）、ブスルファン、サイトキサン、タキソール、メトトレキセート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトザントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン（Ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン系、エスペラミジン系（米国特許第４，６７５，１８７号を参照のこと）、メルファランおよび他の関連するナイトロジェンマスタードが挙げられる。

【0163】

他の実施形態に、例えば、「ＣＶＢ」（１．５ｇ／ｍ^２のシクロホスファミド、２００−４００ｍｇ／ｍ^２のエトポシドおよび１５０〜２００ｍｇ／ｍ^２のカルムスチン）は、本発明の併用療法と組み早稲て使用され得る。非ホジキンリンパ腫を処置するために使用されるＣＶＢは、レジメンである（Ｐａｔｔｉら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．、５１：１８（１９９３））。他の適切な併用化学療法レジメンは、当業者に周知である。例えば、Ｆｒｅｅｄｍａｎら、「Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ」、Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第２巻、第３版、Ｈｏｌｌａｎｄら（ｅｄｓ．）、ｐｐ．２０２８−２０６８（Ｌｅａ ＆ Ｆｅｂｉｇｅｒ １９９３）を参照こと。例として、中等度悪性群の非ホジキンリンパ腫の処置のための第１世代の化学療法レジメンとしては、Ｃ−ＭＯＰＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プロカルバジンおよびプレドニゾン）およびＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）が挙げられる。有用な第２世代の化学療法レジメンは、ｍ−ＢＡＣＯＤ（メトトレキセート、ブレオマイシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、デキサメタゾンおよびロイコボリン）であり、一方で、第３世代のレジメンは、ＭＡＣＯＰ−Ｂ（メトトレキセート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン、ブレオマイシンおよびロイコボリン）である。さらなる有効な薬物としては、フェニルブチレートおよびブロスタチン（ｂｒｏｓｔａｔｉｎ）−１が挙げられる。

【0164】

本発明の免疫結合体に使用され得る他の毒素としては、有毒なレクチン、植物毒素（例えば、リシン、アブリン、モデシン、ボツリヌス（ｂｏｔｕｌｉｎａ）毒素およびジフテリア毒素が挙げられる。当然に、種々の毒素の組み合わせもまた、１つの抗体分子と合わせられ得、それによって適切な可変の細胞傷害性を提供する。本発明の併用療法に適切に使用される毒素の例は、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、ＤＮａｓｅ Ｉ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリン毒素、シュードモナス属の体外毒素およびシュードモナス属の内毒素である。例えば、Ｐａｓｔａｎら、Ｃｅｌｌ、４７：６４１（１９８６）およびＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ、４４：４３（１９９４）を参照のこと。使用され得る酵素的に活性な毒素およびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性フラグメント、体外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン、マイトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンが挙げられる。例えば、ＷＯ ９３／２１２３２（１９９３年１０月２８日公開）を参照のこと。

【0165】

適切な毒素および化学療法剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．１９９５）およびＧｏｏｄｍａｎ Ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第７版（ＭａｃＭｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．１９８５）に記載される。他の適切な毒素および／または化学療法剤は、当業者に公知である。

【0166】

本発明の抗ＣＤ１９抗体はまた、その抗体を、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４５参照）を活性な抗癌薬に変換するプロドラッグ活性化酵素に結合体化することによってＡＤＥＰＴにおいて使用され得る。例えば、ＷＯ ８８／０７３７８および米国特許第４，９７５，２７８号を参照のこと。ＡＤＥＰＴに有用な免疫結合体の酵素成分は、そのプロドラッグをそのより活性な細胞傷害性形態に変換するためにそのような方法でプロドラッグを活性化し得る任意の酵素を含む。

【0167】

本発明の方法に有用な酵素としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ホスフェート含有プロドラッグを遊離の薬物に変換するのに有用なアルカリホスファターゼ；サルフェート含有プロドラッグを遊離の薬物に変換するのに有用なアリールスルファターゼ；非毒性の５−フルオロシトシンを抗癌薬（５−フルオロウラシル）に変換するのに有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離の薬物に変換するのに有用なプロテアーゼ（例えば、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、サブチリシン、カルボキシペプチダーゼおよびカテプシン（例えば、カテプシンＢおよびカテプシンＬ））；プロドラッグをＤ−アミノ酸置換体に変換するのに有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化されたプロドラッグを遊離の薬物に変換するのに有用な炭水化物切断酵素（例えば、β−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼ；α−ラクタムによって誘導体化された薬物を遊離の薬物に変換するのに有用なβ−ラクタマーゼ；およびアミン窒素にて、それぞれ、フェノキシアセチル基またはフェニルアセチル基によって誘導体化された薬物を遊離の薬物に変換するのに有用な、ペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼなどのペニシリンアミダーゼ。あるいは、当該分野において「アブザイム」としても公知である酵素活性を有する抗体は、本発明のプロドラッグを遊離の活性な薬物に変換するために使用され得る（例えば、Ｍａｓｓｅｙ、Ｎａｔｕｒｅ ３２８：４５７−４５８（１９８７）を参照のこと）。抗体−アブザイム結合体は、Ｂ細胞の悪性疾患に罹患するヒトの部分に対する所望されるようなアブザイムの送達のために、本明細書中に記載される通りに調製され得る。

【0168】

本発明の酵素は、当該分野において周知である技術（例えば、上で考察されるヘテロ二官能性架橋試薬の使用）によって上記抗体に共有結合され得る。あるいは、本発明の酵素の少なくとも機能的に活性な部分に結合した本発明の抗体の少なくとも抗原結合領域を有する融合タンパク質は、当該分野において周知である組換えＤＮＡ技術を使用して構築され得る（例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照のこと）。

【0169】

本発明の抗ＣＤ１９抗体の共有結合的な改変は、本発明の範囲内に含まれる。それらは、該当する場合、化学合成あるいは抗体の酵素的切断または化学的切断によって作製され得る。抗ＣＤ１９抗体の他の型の共有結合的な改変は、その抗体の標的アミノ酸残基と、選択された側鎖あるいはＮ末端残基またはＣ末端残基と反応し得る有機誘導体化剤とを反応させることによって分子中に導入される。

【0170】

システイニル残基は、最も一般的に、カルボキシメチル誘導体またはカルボキシアミドメチル誘導体を与えるように、α−ハロアセテート（および対応するアミン）（例えば、クロロ酢酸またはクロロアセトアミド）と反応させられる。同様に、ヨード試薬（ｉｏｄｏ−ｒｅａｇｅｎｔ）もまた、使用され得る。システイニル残基はまた、ブロモトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β−（５−イミドゾイル）プロピオン酸、クロロアセチルホスフェート、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィド、メチル２−ピリジルジスルフィド、ｐ−クロロ水銀安息香酸、２−クロロ水銀−４−ニトロフェノール、またはクロロ−Ｔ−ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾールとの反応によって誘導体化される。

【0171】

ヒスチジル残基は、ｐＨ５．５〜７．０におけるジエチルピロカルボネートとの反応によって誘導体化される。なぜならば、この薬剤が、ヒスチジル側鎖に比較的特異的であるからである。ｐ−ブロモフェナシルブロミドもまた、有用である；その反応は、好ましくは、０．１Ｍカコジル酸ナトリウム中でｐＨ６．０にて行われる。

【0172】

リジル残基およびアミノ末端残基は、無水コハク酸または他の無水カルボン酸と反応させられる。これらの薬剤による誘導体化は、リジニル残基の電荷を逆転させる効果を有する。α−アミノ含有残基および／またはε−アミノ含有残基を誘導体化するための他の適切な試薬としては、イミドエステル（例えば、メチルピコリニミデート（ｍｅｔｈｙｌ ｐｉｃｏｌｉｎｉｍｉｄａｔｅ）、リン酸ピリドキサール、ピリドキサール、クロロ水素化ホウ素（ｃｈｌｏｒｏｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ）、トリニトロベンゼンスルホン酸、Ｏ−メチルイソ尿素、２，４−ペンタンジオンおよびグリオキシレートとのトランスアミナーゼ触媒反応物）が挙げられる。

【0173】

アルギニル残基は、１種または数種の従来の試薬（とりわけ、フェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、１，２−シクロヘキサンジオンおよびニンヒドリン）との反応によって改変される。アルギニル残基の誘導体化は、一般に、グアニジン官能基の高いｐＫａに起因して、その反応がアルカリ性条件において行われることを必要とする。さらに、これらの試薬は、リジンのε−アミノ基およびアルギニンのε−アミノ基と反応し得る。

【0174】

チロシル残基の特定の改変は、特殊な標識をチロシル残基中に導入することへの特定の関心に伴って、芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応によって行われ得る。最も一般的に、Ｎ−アセチルイミジゾール（ａｃｅｔｙｌｉｍｉｄｉｚｏｌｅ）およびテトラニトロメタンは、それぞれ、Ｏ−アセチルチロシル化学種および３−ニトロ誘導体を形成するために使用される。チロシル残基は、放射免疫アッセイにおいて使用するためにの標識されたタンパク質を調製するために、^１２５Ｉまたは^１３１Ｉを使用してヨウ素化される。カルボキシル側差（アスパルチルまたはグルタミル）は、カルボジイミド（Ｒ−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ’）との反応によって選択的に改変され、ＲおよびＲ’は、異なるアルキル基（例えば、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル−４−エチル）カルボジイミドまたは１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミド）である。さらに、アスパルチル残基およびグルタミル残基は、アンモニウムイオンとの反応によってアスパラギニル残基およびグルタミニル残基に変換される。

【0175】

グルタミニル残基およびアスパラギニル残基は、頻繁に、それぞれ、対応するグルタミルおよびアスパルチル残基へと脱アミドされる。これらの残基は、中性条件または塩基性条件下で脱アミドされる。これらの残基の脱アミド形態は、本発明の範囲内に含まれる。

【0176】

他の改変としては、プロリンおよびリジンの水酸化、セリル残基またはトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン側鎖、アルギニン側鎖およびヒスチジン側鎖のαアミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ｐｐ．７９−８６（１９８３）、Ｎ末端アミンのアセチル化および任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化）が挙げられる。

【0177】

別の型の共有結合的な改変は、抗体にグリコシドを化学的または酵素的にカップリングすることを含む。これらの手順は、それらがＮ−結合型グリコシル化またはＯ−結合型グリコシル化のためにグ、リコシル化性能を有する宿主細胞における上記抗体の産生を必要としない点で有利である。使用されるカップリングの様式に依存して、糖は、（ａ）アルギニンおよびヒスチジン、（ｂ）遊離のカルボキシル基、（ｃ）遊離のスルフヒドリル基（例えば、システインの基）、（ｄ）遊離のヒドロキシル基（たとえば、セリン、トレオニン、またはヒドロキシプロリンの基）、（ｅ）芳香族残基（例えば、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンの基）、または（ｆ）グルタミンのアミド基に結合し得る。これらの方法は、ＷＯ ８７／０５３３０（１９８７年、９月１１年公開）およびＡｐｌｉｎおよびＷｒｉｓｔｏｎ、ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、ｐｐ．２５９−３０６（１９８１）に記載される。

【0178】

（５．４．薬学的処方物、薬学的投与および薬学的投薬）
本発明の薬学的処方物は、活性成分として、ヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む。上記処方物は、むき出しの抗体、免疫結合体、または融合タンパク質を、ヒト患者に対する投与に適した重量または容量の単位において所望の応答をもたらすのに有効な量で含み、そして好ましくは、無菌である。上記応答は、例えば、抗ＣＤ１９抗体組成物の生理学的効果（例えば、循環するＢ細胞の枯渇、組織Ｂ細胞の枯渇、Ｂ細胞の悪性疾患の後退、または疾患症状の減少であるが、これらに限定されない）を決定することによって測定され得る。他のアッセイは、当業者に公知であり、そして応答のレベルを測定するために利用され得る。

【0179】

（５．４．１．薬学的処方物）
抗ＣＤ１９抗体組成物は、薬学的に受容可能なキャリアと一緒に処方され得る。用語「薬学的に受容可能な」は、上記活性成分の生物学的活性の効果を妨害しない１種以上の非毒性の物質を意味する。このような調製物は、慣用的に、塩、緩衝剤、保存剤、適合性のキャリアおよび必要に応じて他の治療剤を含む。このような薬学的に受容可能な調製物はまた、慣用的に、ヒトに対する投与に適した適合性の固体フィラー（ｆｉｌｌｅｒ）または液体フィラー、希釈剤または封入物質（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｎｇ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）を含み得る。医薬において使用される場合、上記塩は、薬学的に受容可能であるべきであるが、薬学的に受容可能ではない塩は、便宜的に、その薬学的に受容可能な塩を調製するために使用され得、そして薬学的に受容可能ではない塩は、本発明の範囲から除外されない。このような薬理学的および薬学的に受容可能な塩としては、以下の酸から調製されるものが挙げられるが、これらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ホウ酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸など。また、薬学的に受容可能な塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩）として調製され得る。用語「キャリア」は、天然または合成の有機成分または無機成分を示し、活性成分は、適用を容易にするためにこのキャリアと組み合わされる。上記薬学的組成物の成分はまた、実質的に所望の薬学的効力を損なう相互作用が存在しないような様式で、本発明の抗体および互いと混合可能である。

【0180】

本発明の特定の局面に従って、抗ＣＤ１９抗体組成物は、所望の純度を有する抗体または免疫結合体と、必要に応じた生理学的に受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ、Ａ．編（１９９９））とを混合することによって保存のために、凍結乾燥した処方物または水溶液の形態で調製され得る。受容可能なキャリア、賦形剤、または安定化剤は、使用される投薬量および濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、そして緩衝液（リン酸、クエン酸および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノールアルコール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン（例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン）；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン）；グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む単糖類、二糖類および他の炭水化物；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖（例えば、スクロース、マンニトール、トリハロースまたはソルビトール）；塩を形成する対イオン（例えば、ナトリウム）；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ^ＴＭまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））を含む。

【0181】

抗ＣＤ１９抗体組成物はまた、必要に応じて、適切な保存料（例えば、塩化ベンザルコニウム；クロロブタノール；パラベンおよびチメロサール）を含み得る。

【0182】

上記抗ＣＤ１９抗体組成物は、便宜的に、単位投薬形態で調製され得、そして薬学の分野において周知である任意の方法によって調製され得る。全ての方法は、活性剤を、１種以上の補助成分を構成するキャリアと会合させる工程を包含する。一般に、上記組成物は、活性化合物を液体キャリア、微粉化した固体キャリア、またはその両方と均一および本質的に会合させ、次いで必要に応じて、生成物を成形することによって調製される。

【0183】

非経口投与に適した組成物は、便宜的に、抗ＣＤ１９抗体の無菌の水性調製物または非水性調製物を含み、それらは、好ましくは、レシピエントの血液と等張である。この調製物は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して公知の方法に従って処方され得る。無菌の注射可能な調製物はまた、無菌の注射可能な溶液または非毒性の非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒中の懸濁物（例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として）であり得る。とりわけ、使用され得る需要可能なビヒクルおよび溶媒は、水、リンガー溶液および等張の塩化ナトリウム溶液である。さらに、無菌の不揮発性油は、便宜的に、溶媒または懸濁媒体として使用される。この目的のために、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性の不揮発性油が、使用され得る。さらに、脂肪酸（例えば、オレイン酸）が、注射可能なものの調製において使用され得る。経口投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与などに適したキャリア処方物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡに見出され得る。特定の実施形態において、種々の投与経路に適したキャリア処方物は、ＲＩＴＵＸＡＮ^ＴＭについて記載されるものと同一または類似であり得る。Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｎｔｖａｌｅ、ＮＪ、２００５）、ｐｐ．９５８−９６０および１３５４−１３５７（これは、その全体が本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。本発明の特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体組成物は、静脈内投与のために、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物、ポリソルベート８０および滅菌水と一緒に処方され、その組成物のｐＨは、約６．５に調整される。当業者は、静脈内注射が迅速に分布する抗体において、循環の徹底に起因して有用な投与の様式を提供することを認識する。しかし、静脈内投与は、血管の内皮細胞および内皮下のマトリックスを含む血管の障壁による制限に供される。依然として、その血管の障壁は、固形腫瘍による治療用抗体の取り込みに関して、より注目すべき問題である。リンパ腫は、有効な抗体送達に寄与する比較的高い血流量を有する。皮下注射または筋肉内注射などのリンパ管内の投与経路（すなわち、リンパ管のカテーテル法）はまた、Ｂ細胞リンパ腫を処置する有用な手段を提供する。好ましい実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体は、皮下に自己投与される。このような好ましい実施形態において、上記組成物は、約５０ｍｇ／ｍＬにて、凍結乾燥された薬物としてか、または液体緩衝液（例えば、ＰＢＳおよび／またはクエン酸塩）中に処方される。

【0184】

本明細書中の処方物はまた、処置される特定の指標に対する必要性として、１種より多い活性化合物（好ましくは、互いに有害に作用しない補完的な活性を有するもの）を含み得る。例えば、免疫抑制因子をさらに提供することが、望まれ得る。このような分子は、意図された目的に対して有用である量で組成物中に適切に存在する。

【0185】

上記活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技術または界面重合（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）によって、コロイド性の薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルションにおいて調製されるマイクロカプセル中に封入され得る。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０）において開示される。

【0186】

インビボ投与のために使用される処方物は、代表的に、無菌である。これは、濾過滅菌膜を通した濾過によって容易に達成される。

【0187】

徐放処方調製物が、調製され得る。徐放調製物の適切な例としては、抗ＣＤ１９抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、そのマトリックスは、成形された物品の形態（例えば、フィルム、またはマイクロカプセル）である。徐放マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタミン酸とのコポリマー、非分解性のエチレン−ビニルアセテート、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ^ＴＭなどの分解性の乳酸−グリコール酸コポリマー（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリド）およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸から構成された注射可能なマイクロスフェアが挙げられる。エチレン−ビニルアセテートおよび酪産−グリコール酸などのポリマーが、１００日間を超えて分子の放出を可能にする一方で、特定のヒドロゲルは、より短い時間にわたってタンパク質を放出する。封入された抗体が、長時間にわたって身体中に残存する場合、それらは、３７℃における水分に対する曝露の結果として変性または凝集され得、生物額的活性の損失および免疫原性の可能な変化を生じる。合理的なストラテジーは、含まれる機構に依存して、安定化のために工夫され得る。例えば、凝集機構は、チオ−ジスルフィド交換によって分子間Ｓ−Ｓ結合形成であることが乱される場合、安定化は、スルフヒドリル残基を改変すること、酸性溶液から凍結乾燥すること、水分含量を制御すること、適切な添加剤を使用することおよび特定のポリマーマトリックス組成物を開発することによって達成され得る。特定の実施形態において、本発明の組成物において使用される薬学的に受容可能なキャリアは、ヒトのＡＤＣＣまたはＣＤＣに影響を与えない。

【0188】

本明細書中に開示される抗ＣＤ１９抗体組成物はまた、免疫リポソームとして処方され得る。「リポソーム」は、ヒトに送達するのに有用である種々の型の脂質、リン脂質および／または界面活性薬物（例えば、本明細書中に開示される抗ＣＤ１９抗体）から構成される小さいビヒクルである。リポソームの成分は、一般的に、二重層の形成において配置される（生物学的な膜の脂質配置と同様）。本発明の抗体を含むリポソームは、当該分野において公知である方法（例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４０３０（１９８０）；および米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載されるもの）によって調製される。向上した循環時間を有するリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示される。特に有用な有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相エバポレーション法によって産生され得る。リポソームは、所望の直径を有するリポソームを生じる規定された孔径のフィルターを通して押し出される。本発明の抗体は、ジスルフィド交換反応を介して、Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載されるようなリポソームと結合体化され得る。治療剤はまた、リポソーム内に含まれ得る。Ｇａｂｉｚｏｎら、Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．，（１９）１４８４（１９８９）を参照のこと。

【0189】

いくつかの好ましい薬学的処方物としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
（ａ）１００ｍｇ（１０ｍＬ）または５００ｍｇ（５０ｍＬ）いずれかの単回使用バイアル中に１０ｍｇ／ｍｌの濃度で供給される抗ＣＤ１９抗体の静脈内（ｉ．ｖ．）投与のための、無菌であり保存剤を含有しない液体濃縮物。この産物は、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム二水和物、ポリソルベートおよび注射用滅菌水を使用して、ｉ．ｖ．投与のために処方され得る。例えば、上記産物は、９．０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０および注射用滅菌水中に処方され得る。そのｐＨは、６．５に調整される。

【0190】

（ｂ）皮下（ｓ．ｃ．）注射のための単回使用ガラスバイアル中の無菌である凍結乾燥粉末。この産物は、スクロース、塩酸Ｌ−ヒスチジン一水和物、Ｌ−ヒスチジンおよびポリソルベート２０を用いて処方され得る。例えば、それぞれの単回使用バイアルは、１５０ｍｇの抗ＣＤ１９抗体、１２３．２ｍｇのスクロース、６．８ｍｇの塩酸Ｌ−ヒスチジン一水和物、４．３ｍｇのＬ−ヒスチジンおよび３ｍｇのポリソルベート２０を含み得る。単回使用バイアルの１．３ｍｌ滅菌水による再構成は、１．２５ｍｌあたり１２５ｍｇ（１００ｍｇ／ｍｌ）の抗体を送達するための、約１．５ｍｌの溶液をもたらす。

【0191】

（ｃ）静脈内（ｉ．ｖ．）投与のための無菌である保存剤を含まない凍結乾燥粉末。この産物は、α−トレハロース二水和物、Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ、ヒスチジンおよびポリソルベート２０ ＵＳＰを用いて処方され得る。例えば、各バイアルは、４４０ｍｇの抗ＣＤ１９抗体、４００ｍｇのα，α−トレハロース二水和物、９．９ｍｇのＬ−ヒスチジンＨＣｌ、６．４ｍｇのＬ−ヒスチジンおよび１．８ｍｇのポリソルベート２０，ＵＳＰを含み得る。保存剤として１．１％のベンジルアルコールを含む２０ｍｌの注射用の静菌水（ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｗａｔｅｒ）（ＢＷＦＩ），ＵＳＰによる再構成は、約６のｐＨにて２１ｍｇ／ｍｌの抗体を含む複数用量の溶液を生じる。

【0192】

（ｄ）抗ＣＤ１９抗体がスクロース、ポリソルベート、一塩基のリン酸ナトリウム一水和物および二塩基のリン酸ナトリウム二水和物を用いて処方される、静脈内注入のための無菌である凍結乾燥粉末。例えば、各単回使用バイアルは、１００ｍｇの抗体、５００ｍｇのスクロース、０．５ｍｇのポリソルベート８０、２．２ｍｇの一塩基の一塩基のリン酸ナトリウム一水和物および６．１ｍｇの二塩基のリン酸ナトリウム二水和物を含み得る。保存剤は、存在しない。１０ｍｌの注射用滅菌水，ＵＳＰによる再構成後、得られるｐＨは、約７．２である。

【0193】

（ｅ）単回使用（１ｍｌの予め充填された注射器）で供給される皮下投与のための、無菌である保存剤を含まない溶液。この産物は、塩化ナトリウム、一塩基のリン酸ナトリウム二水和物、二塩基のリン酸ナトリウム二水和物、クエン酸ナトリウム、クエン酸一水和物、マンニトール、ポリソルベート８０および注射用水，ＵＳＰを用いて処方され得る。水酸化ナトリウムが、ｐＨを約５．２に調整するために添加され得る。

【0194】

例えば、各注射器は、０．８ｍｌ（４０ｍｇ）薬物生成物を送達するために、処方され得る。各０．８ｍｌは、４０ｍｇの抗ＣＤ１９抗体、４．９３ｍｇの塩化ナトリウム、０．６９ｍｇの一塩基のリン酸ナトリウム二水和物、１．２２ｍｇの二塩基のリン酸ナトリウム二水和物、０．２４ｍｇのクエン酸ナトリウム、１．０４のクエン酸一水和物、９．６ｍｇのマンニトール、０．８ｍｇのポリソルベート８０および注射用水，ＵＳＰを含む。

【0195】

（ｆ）滅菌注射用水（ＳＷＦＩ），ＵＳＰを用いて再構成され、そして皮下（ｓ．ｃ．）注射として投与されるる単回使用バイアル中に含まれる無菌であり保存剤を含まない凍結乾燥粉末。この産物は、スクロース、塩酸ヒスチジン一水和物、Ｌ−ヒスチジンおよびポリソルベートによって処方され得る。例えば、７５ｍｇのバイアルは、１２９．６ｍｇまたは１１２．５ｍｇの上記抗ＣＤ１９抗体、９３．１ｍｇのスクロース、１．８ｍｇの塩酸Ｌ−ヒスチジン一水和物、１．２ｍｇのＬ−ヒスチジンおよび０．３ｍｇのポリソルベート２０を含み得、そして０．９ｍｌのＳＷＦＩ，ＵＳＰを用いた再構成後に、０．６ｍｌ中に７５ｍｇの上記抗体を送達するように設計される。１５０ｍｇのバイアルは、２０２．５ｍｇまたは１７５ｍｇの抗ＣＤ１９抗体、１４５．５ｍｇのスクロース、２．８ｍｇの塩酸Ｌ−ヒスチジン一水和物、１．８ｍｇのＬ−ヒスチジンおよび０．５ｍｇのポリソルベート２０を含み得、そして１．４ｍｌのＳＷＦＩ，ＵＳＰを用いた再構成後に、１．２ｍｌ中に１５０ｍｇの上記抗体を送達するように設計される。

【0196】

（ｇ）滅菌注射用水を用いた再構成のための、無菌である凍結乾燥（ｈｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）産物。この産物は、筋肉内（ＩＭ）注射のために、マンニトール、ヒスチジンおよびグリシンを使用して単回使用バイアルとして処方され得る。例えば、それぞれの単回使用バイアルは、１００ｍｇの抗体、６７．５ｍｇのマンニトール、８．７ｍｇのヒスチジンおよび０．３ｍｇのグリシンを含み得、そして１．０ｍｌの滅菌注射用水を用いて再構成された場合に、１．０ｍｌ中に１００ｍｇの抗体を送達するように設計される。あるいは、それぞれの単回使用バイアルは、５０ｍｇの抗体、４０．５ｍｇのマンニトール、５．２ｍｇのヒスチジンおよび０．２ｍｇのグリシンを含み得、そして０．６ｍｌの滅菌注射用水を用いて再構成された場合に５０ｍｇの抗体を送達するように設計される。

【0197】

（ｈ）１００ｍｇ／ｍｌの濃度で供給される、筋肉内（ＩＭ）注射のための無菌であり保存剤を含まない溶液。この産物は、ヒスチジン、グリシンおよび滅菌注射用水を用いて単回使用バイアル中に処方され得る。例えば、それぞれの単回使用バイアルは、１．２ｍｌの容量において１００ｍｇの抗体、４．７ｍｇのヒスチジンおよび０．１ｍｇのグリシンを用いて処方され得、１ｍｌ中に１００ｍｇの抗体を送達するように設計される。あるいは、それぞれの単回使用バイアルは、０．７ｍｌまたは０．５ｍｌの容量において、５０ｍｇの抗体、２．７ｍｇのヒスチジンおよび０．０８ｍｇのグリシンを用いて処方され得、０．５ｍｌ中に５０ｍｇの抗体を送達するように設計される。

【0198】

特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物は、４℃にて安定である。特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物は、室温にて安定である。

【0199】

（５．４．２．抗体半減期）
特定の実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体の半減期は、少なくとも約４日間〜７日間である。特定の実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体の平均半減期は、少なくとも約２日間〜５日間、３日間〜６日間、４日間〜７日間、５日間〜８日間、６日間〜９日間、７日間〜１０日間、８日間〜１１日間、８日間〜１２日間、９日間〜１３日間、１０日間〜１４日間、１１日間〜１５日間、１２日間〜１６日間、１３日間〜１７日間、１４日間〜１８日間、１５日間〜１９日間、または１６日間〜２０日間である。他の実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体の半減期は、約５０日間までであり得る。特定の実施形態において、本発明の組成物および方法の抗体の半減期は、当該分野において公知である方法によって延長され得る。このような延長は、次に、本発明の抗体組成物の投薬の量および／または頻度を減少させ得る。改良されたインビボの半減期を有する抗体およびそれらを調製する方法は、米国特許第６，２７７，３７５号；および国際公開第ＷＯ ９８／２３２８９号および同第ＷＯ ９７／３４６１号に開示される。

【0200】

インビボにおける本発明の抗ＣＤ１９抗体の血清循環はまた、その抗体のＮ末端もしくはＣ末端に対するＰＥＧの部位特異的な結合体化によるかまたは、リジル残基上に存在するε−アミノ基を介するかのいずれかの多官能性リンカーを用いてか、または用いずに、不活性なポリマー分子（例えば、高分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ））をその抗体に結合することによって延長され得る。生物学的活性の最小限の損失をもたらすリンカーまたは分子鎖ポリマー誘導体が、使用される。結合体化の程度は、その抗体に対するＰＥＧ分子の適切な結合体化を確保するために、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析によって厳密にモニタリングされ得る。反応しなかったＰＥＧは、サイズ排除クロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーによって、抗体−ＰＥＧ結合体から分離され得る。ＰＥＧ誘導体化抗体は、当業者に公知の方法（例えば、本明細書中に記載されるイムノアッセイ）を使用して、結合活性およびインビボでの効力について試験され得る。

【0201】

さらに、本発明の組成物および方法の抗体は、インビボでより安定な抗体を作製するか、またはより長いインビボでの半減期を有するために、アルブミンに結合体化され得る。上記技術は、当該分野において周知である（例えば、国際公開第ＷＯ ９３／１５１９９号、同第ＷＯ ９３／１５２００号および同第ＷＯ ０１／７７１３７号；および欧州特許第ＥＰ ４１３、６２２号（これらの全ては、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）。

【0202】

（５．４．３．投与および投薬）
ヒト患者に対する本発明の組成物の投与は、任意の径路によるものであり得、その経路としては、静脈内、皮内、経皮、皮下、筋肉内、吸入（例えば、エアロゾルによる）、口腔粘膜（例えば、舌下（ｓｕｂ−ｌｉｎｇｕａｌ））、局所（すなわち、皮膚表面および粘膜表面の両方）（領域カテーテルを介する灌流、または直接的な病巣内への注射による気道表面投与、鞘内投与、関節内投与、胸膜内（ｉｎｔｒａｐｌｕｒａｌ）投与、脳内投与、動脈内投与、腹腔内投与、経口投与、リンパ管内投与、鼻腔内投与、直腸投与または膣投与を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、規定の時間（例えば、０．５〜２時間）にわたって与えられる静脈内プッシュ（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｐｕｓｈ）または静脈内注入によって投与される。本発明の組成物は、蠕動手段によってか、またはデポーの形態において送達され得るが、任意の所定の場合における最も適切な経路は、当該分野において周知である通り、被験体の種、年齢、性別、および全状態、処置される状態の性質および重篤度、ならびに／または投与される特定の組成物の性質（すなわち、投薬量、処方物）に依存する。特定の実施形態において、投与経路は、週に１回または２回の時間にわたるボーラス注入または持続注入を介する。他の特定の実施形態において、投与経路は、皮下注射（必要に応じて、週に１回または２回）によるものである。１つの実施形態において、上記組成物、および／または本発明の方法は、外来患者ベースで投与される。

【0203】

特定の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体を含む組成物の用量は、患者の体重１ｋｇあたりのｍｇの単位で測定される。他の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体を含む組成物の用量は、患者の除脂肪体重（すなわち、体重から体脂肪量を減算する）１ｋｇあたりのｍｇの単位で測定される。なお他の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体を含む組成物の用量は、患者の体表面積１ｍ^２あたりのｍｇの単位で測定される。なお他の実施形態において、抗ＣＤ１９抗体を含む組成物の用量は、患者に投与される用量あたりのｍｇの単位で測定される。用量のあらゆる測定は、本発明の組成物および方法に関して使用され得、そして投薬単位は、当該分野において標準的な手段によって変換され得る。

【0204】

当業者は、投薬量が、被験体の年齢、性別、種および状態（例えば、Ｂ細胞の悪性疾患の病期）、細胞の枯渇の望ましい程度、処置される疾患および／または使用される特定の抗体または抗原結合フラグメントを含む多くの因子に基づいて選択され得ること、およびそれらが、当業者によって決定され得ることを認識する。例えば、本発明の組成物の有用な量は、インビトロ試験系または動物モデル（例えば、コットンラットまたはサル）の試験系から得られる用量−反応曲線から推定され得る。抗体の効果を評価するためのモデルおよび方法は、当該分野において公知である（Ｗｏｏｌｄｒｉｄｇｅら、ｂｌｏｏｄ、８９（８）：２９９４−２９９８（１９９７）（これは、その全体が本明細書中に参考として援用される）。特定の実施形態において、特定のＢ細胞の悪性疾患に関して、当該分野における抗体治療についての標準的な治療レジメンは、本発明の組成物および方法と一緒に使用され得る。本発明の方法において使用され得る投薬レジメンの例としては、毎日、１週間に３回（間欠的）、毎週、または１４日毎が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、投薬レジメンとしては、毎月の投薬または６〜８週間毎の投薬が挙げられるが、これらに限定されない。

【0205】

当業者は、維持レジメンと比較して、最初の処置に関しては、投薬量が一般にはより高くそして／または投与の頻度がより多いことを認識する。

【0206】

本発明の実施形態において、上記抗ＣＤ１９抗体は、Ｂ細胞に結合し、したがってより効率的（すなわち、より低い投薬量における）なＢ細胞の枯渇（本明細書中に記載されるようなもの）を生じる。より高い程度の結合は、患者のＢ細胞表面上のヒトＣＤ１９の密度が高い場合に達成され得る。例示の実施形態において、抗体（必要に応じて、薬学的組成物の一部として薬学的に受容可能なキャリア中にある）の投薬量は、少なくとも約０．０００５ｍｇ／ｍ^２、０．００１ｍｇ／ｍ^２、０．０５ｍｇ／ｍ^２、０．０７５ｍｇ／ｍ^２、０．１ｍｇ／ｍ^２、０．２５ｍｇ／ｍ^２、０．３７５ｍｇ／ｍ^２、０．５ｍｇ／ｍ^２、１ｍｇ／ｍ^２、２．５ｍｇ／ｍ^２、５ｍｇ／ｍ^２、１０ｍｇ／ｍ^２、２０ｍｇ／ｍ^２、３７．５ｍｇ／ｍ^２、または５０ｍｇ／ｍ^２および／あるいは約５００ｍｇ／ｍ^２、４７５ｍｇ／ｍ^２、４５０ｍｇ／ｍ^２、４２５ｍｇ／ｍ^２、４００ｍｇ／ｍ^２、３７５ｍｇ／ｍ^２、３５０ｍｇ／ｍ^２、３２５ｍｇ／ｍ^２、３００ｍｇ／ｍ^２、２７５ｍｇ／ｍ^２、２５０ｍｇ／ｍ^２、２２５ｍｇ／ｍ^２、２００ｍｇ／ｍ^２、１７５ｍｇ／ｍ^２、１５０ｍｇ／ｍ^２、１２５ｍｇ／ｍ^２、１００ｍｇ／ｍ^２、７５ｍｇ／ｍ^２、６０ｍｇ／ｍ^２、５０ｍｇ／ｍ^２、３７．５ｍｇ／ｍ^２、２０ｍｇ／ｍ^２、１５ｍｇ／ｍ^２、１０ｍｇ／ｍ^２、５ｍｇ／ｍ^２、２．５ｍｇ／ｍ^２、１ｍｇ／ｍ^２、０．５ｍｇ／ｍ^２、０．３７５ｍｇ／ｍ^２、０．１ｍｇ／ｍ^２、０．０７５ｍｇ／ｍ^２または０．０１ｍｇ／ｍ^２未満である。特定の実施形態において、上記投薬量は、約０．０００５〜約２００ｍｇ／ｍ^２との間、約０．００１ｍｇ／ｍ^２と１５０ｍｇ／ｍ^２との間、約０．０７５ｍｇ／ｍ^２と１２５ｍｇ／ｍ^２との間、約０．３７５ｍｇ／ｍ^２と１００ｍｇ／ｍ^２との間、約２．５ｍｇ／ｍ^２と７５ｍｇ／ｍ^２との間、約１０ｍｇ／ｍ^２と７５ｍｇ／ｍ^２との間および約２０ｍｇ／ｍ^２および５０ｍｇ／ｍ^２との間である。関連する実施形態において、使用される抗ＣＤ１９抗体の投薬量は、患者の体重１ｋｇあたり少なくとも約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１ｍｇ、１．５ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、３．５ｍｇ、４ｍｇ、４．５ｍｇ、５ｍｇ、５．５ｍｇ、６ｍｇ、６．５ｍｇ、７ｍｇ、７．５ｍｇ、８ｍｇ、８．５ｍｇ、９ｍｇ、９．５ｍｇ、１０ｍｇ、１０．５ｍｇ、１１ｍｇ、１１．５ｍｇ、１２ｍｇ、１２．５ｍｇ、１３ｍｇ、１３．５ｍｇ、１４ｍｇ、１４．５ｍｇ、１５ｍｇ、１５．５ｍｇ、１６ｍｇ、１６．５ｍｇ、１７ｍｇ、１７．５ｍｇ、１８ｍｇ、１８．５ｍｇ、１９ｍｇ、１９．５ｍｇ、２０ｍｇ、２０．５ｍｇである。特定の実施形態において、使用されるむき出しの抗ＣＤ１９抗体の用量は、患者の体重１ｋｇあたり少なくとも約１ｍｇ〜１０ｍｇ、５ｍｇ〜１５ｍｇ、１０ｍｇ〜２０ｍｇ、または１５ｍｇ〜２５ｍｇである。特定の実施形態において、使用される抗ＣＤ１９抗体の用量は、患者の体重１ｋｇあたり少なくとも約１ｍｇ〜２０ｍｇ、３ｍｇ〜１５ｍｇ、または５ｍｇ〜１０ｍｇである。好ましい実施形態において、使用される抗ＣＤ１９抗体の用量は、患者の体重１ｋｇあたり少なくとも約５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、または１０ｍｇである。特定の実施形態において、抗体（必要に応じて、薬学的組成物の一部として薬学的に受容可能なキャリア中にある）の単一の投薬単位は、少なくとも約０．５μｇ／ｍ^２、１μｇ／ｍ^２、２μｇ／ｍ^２、４μｇ／ｍ^２、６μｇ／ｍ^２、８μｇ／ｍ^２、１０μｇ／ｍ^２、１２μｇ／ｍ^２、１４μｇ／ｍ^２、１６μｇ／ｍ^２、１８μｇ／ｍ^２、２０μｇ／ｍ^２、２２μｇ／ｍ^２、２４μｇ／ｍ^２、２６μｇ／ｍ^２、２８μｇ／ｍ^２、３０μｇ／ｍ^２、３２μｇ／ｍ^２、３４μｇ／ｍ^２、３６μｇ／ｍ^２、３８μｇ／ｍ^２、４０μｇ／ｍ^２、４２μｇ／ｍ^２、４４μｇ／ｍ^２、４６μｇ／ｍ^２、４８μｇ／ｍ^２、５０μｇ／ｍ^２、５２μｇ／ｍ^２、５４μｇ／ｍ^２、５６μｇ／ｍ^２、５８μｇ／ｍ^２、６０μｇ／ｍ^２、６２μｇ／ｍ^２、６４μｇ／ｍ^２、６６μｇ／ｍ^２、６８μｇ／ｍ^２、７０μｇ／ｍ^２、７２μｇ／ｍ^２、７４μｇ／ｍ^２、７６μｇ／ｍ^２、７８μｇ／ｍ^２、８０μｇ／ｍ^２、８２μｇ／ｍ^２、８４μｇ／ｍ^２、８６μｇ／ｍ^２、８８μｇ／ｍ^２、９０μｇ／ｍ^２、９２μｇ／ｍ^２、９４μｇ／ｍ^２、９６μｇ／ｍ^２、９８μｇ／ｍ^２、１００μｇ／ｍ^２、１０２μｇ／ｍ^２、１０４μｇ／ｍ^２、１０６μｇ／ｍ^２、１０８μｇ／ｍ^２、１１０μｇ／ｍ^２、１１２μｇ／ｍ^２、１１４μｇ／ｍ^２、１１６μｇ／ｍ^２、１１８μｇ／ｍ^２、１２０μｇ／ｍ^２、１２２μｇ／ｍ^２、１２４μｇ／ｍ^２、１２６μｇ／ｍ^２、１２８μｇ／ｍ^２、１３０μｇ／ｍ^２、１３２μｇ／ｍ^２、１３４μｇ／ｍ^２、１３６μｇ／ｍ^２、１３８μｇ／ｍ^２、１４０μｇ／ｍ^２、１４２μｇ／ｍ^２、１４４μｇ／ｍ^２、１４６μｇ／ｍ^２、１４８μｇ／ｍ^２、１５０μｇ／ｍ^２、１５２μｇ／ｍ^２、１５４μｇ／ｍ^２、１５６μｇ／ｍ^２、１５８μｇ／ｍ^２、１６０μｇ／ｍ^２、１６２μｇ／ｍ^２、１６４μｇ／ｍ^２、１６６μｇ／ｍ^２、１６８μｇ／ｍ^２、１７０μｇ／ｍ^２、１７２μｇ／ｍ^２、１７４μｇ／ｍ^２、１７６μｇ／ｍ^２、１７８μｇ／ｍ^２、１８０μｇ／ｍ^２、１８２μｇ／ｍ^２、１８４μｇ／ｍ^２、１８６μｇ／ｍ^２、１８８μｇ／ｍ^２、１９０μｇ／ｍ^２、１９２μｇ／ｍ^２、１９４μｇ／ｍ^２、１９６μｇ／ｍ^２、１９８μｇ／ｍ^２、２００μｇ／ｍ^２、２０４μｇ／ｍ^２、２０６μｇ／ｍ^２、２０８μｇ／ｍ^２、２１０μｇ／ｍ^２、２１２μｇ／ｍ^２、２１４μｇ／ｍ^２、２１６μｇ／ｍ^２、２１８μｇ／ｍ^２、２２０μｇ／ｍ^２、２２２μｇ／ｍ^２、２２４μｇ／ｍ^２、２２６μｇ／ｍ^２、２２８μｇ／ｍ^２、２３０μｇ／ｍ^２、２３２μｇ／ｍ^２、２３４μｇ／ｍ^２、２３６μｇ／ｍ^２、２３８μｇ／ｍ^２、２４０μｇ／ｍ^２、２４２μｇ／ｍ^２、２４４μｇ／ｍ^２、２４６μｇ／ｍ^２、２４８μｇ／ｍ^２、または２５０μｇ／ｍ^２であり得る。他の実施形態において、用量は、単一の投薬単位あたり１ｇまでである。

【0207】

上記の用量の全ては、例示であり、そして本発明の組成物および方法と一緒に使用され得るが、しかし、抗ＣＤ１９抗体は、毒素または放射線療法剤と組み合わせて使用され、上に記載されるものより低い用量が、好ましい。特定の実施形態において、上記患者が低いレベルのＣＤ１９密度を有する場合、上に記載されるもの低い用量が好ましい。

【0208】

本発明の特定の実施形態において、キメラ抗ＣＤ１９抗体が使用される場合、そのキメラ抗体の用量または量は、患者の体重１ｋｇあたり約２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、または１６ｍｇよりも大きい。本発明の他の実施形態において、キメラ抗ＣＤ１９抗体が使用される場合、そのキメラ抗体の用量または量は、患者の体重１ｋｇあたり約１ｍｇ、０．９ｍｇ、０．８ｍｇ、０．７ｍｇ、０．６ｍｇ、０．５ｍｇ、０．４ｍｇ、０．３ｍｇ、０．２ｍｇ、または０．１ｍｇ未満である。

【0209】

本発明の方法のいくつかの実施形態において、本発明の抗体および／または組成物は、約３７５ｍｇ／ｍ^２よりも低い用量；約３７．５ｍｇ／ｍ^２よりも低い用量；約０．３７ｍｇ／ｍ^２よりも低い用量；および／または約０．０７５ｍｇ／ｍ^２と約１２５ｍｇ／ｍ^２との間の用量で投与され得る。本発明の方法の好ましい実施形態において、投薬レジメンは、間隔を空けて繰り返して投与される低い用量を含む。例えば、１つの実施形態において、本発明の組成物は、約１日毎、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、７日毎、８日毎、９日毎、１０日毎、１５日毎、２０日毎、２５日毎、３０日毎、３５日毎、４０日毎、４５日毎、５０日毎、６０日毎、７０日毎、８０日毎、９０日毎、１００日毎、１２５日毎、１５０日毎、１７５日毎、または２００日毎の間隔で約３７５ｍｇ／ｍ^２よりも低い用量を投与し得る。

【0210】

上記特定の用量は、本発明の組成物および方法を使用して少なくとも約１日間、２日間、３日間、５日間、７日間、１０日間、１４日間、２０日間、３０日間、４５日間、６０日間、７５日間、９０日間、１２０日間、１５０日間または１８０日間またはそれ以上にわたって処置されるヒトにおいてＢ細胞の枯渇をもたらし得る。特定の実施形態において、プレＢ細胞（表面の免疫グロブリンを発現しない）は、枯渇する。特定の実施形態において、成熟Ｂ細胞（表面の免疫グロブリンを発現する）は、枯渇する。他の実施形態において、全ての非悪性型のＢ細胞は、枯渇を示し得る。あらゆるこれらの型のＢ細胞は、Ｂ細胞の枯渇を測定するために使用され得る。Ｂ細胞の枯渇は、体液（例えば、血液の血清）、または組織（例えば、骨髄）において測定され得る。本発明の方法の好ましい実施形態において、Ｂ細胞は、本発明の組成物および方法の使用前に処置された患者のＢ細胞レベルと比較して、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％枯渇する。本発明の方法の好ましい実施形態において、Ｂ細胞は、ヒトに関する代表的な標準のＢ細胞レベルと比較して、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％枯渇する。関連する実施形態において、ヒトに関する代表的な標準のＢ細胞レベルは、年齢、性別、体重および他の因子に関連して処置される患者に匹敵する患者を用いて決定される。

【0211】

本発明の特定の実施形態において、約１２５ｍｇ／ｍ^２以下の投薬量の抗体または抗原結合フラグメントは、少なくとも約７日間、１４日間、２１日間、３０日間、４５日間、６０日間、９０日間、１２０日間、１５０日間、または２００日間にわたるＢ細胞の枯渇をもたらす。別の代表的な実施形態において、約３７．５ｍｇ／ｍ^２以下の投薬量は、少なくとも約７日間、１４日間、２１日間、３０日間、４５日間、６０日間、９０日間、１２０日間、１５０日間、または２００日間にわたってＢ細胞を枯渇させる。さらに他の実施形態において、約０．３７５ｍｇ／ｍ^２以下の投薬量は、少なくとも約７日間、１４日間、２１日間、３０日間、４５日間または６０日間にわたってＢ細胞の枯渇をもたらす。別の実施形態において、０．０７５ｍｇ／ｍ^２以下の投薬量は、少なくとも約７日間、１４日間、２１日間、３０日間、４５日間、６０日間、９０日間、１２０日間、１５０日間、または２００日間にわたってＢ細胞の枯渇をもたらす。なお他の実施形態において、約０．０１ｍｇ／ｍ^２、０．００５ｍｇ／ｍ^２または０．００１ｍｇ／ｍ^２以下の投薬量でさえ、少なくとも約３日間、５日間、７日間、１０日間、１４日間、２１日間、３０日間、４５日間、６０日間、９０日間、１２０日間、１５０日間、または２００日間にわたってＢ細胞の枯渇をもたらす。これらの実施形態に従って、上記投薬量は、任意の適切な経路にって投与され得るが、その投薬量は、必要に応じて、皮下経路によって投与される。

【0212】

別の局面の場合、本発明は、Ｂ細胞の枯渇および／またはＢ細胞の障害に対する処置が現在利用可能な方法において使用されるよりも低い抗体または抗体フラグメントの投薬量において達成され得るという発見を提供する。したがって、別の実施形態において、本発明は、Ｂ細胞を枯渇させる方法および／またはＢ細胞の障害を処置する方法を提供し、これらの方法は、ヒトに、ＣＤ１９に特異的に結合する抗体の有用な量を投与することを包含し、約５００ｍｇ／ｍ^２、４７５ｍｇ／ｍ^２、４５０ｍｇ／ｍ^２、４２５ｍｇ／ｍ^２、４００ｍｇ／ｍ^２、３７５ｍｇ／ｍ^２、３５０ｍｇ／ｍ^２、３２５ｍｇ／ｍ^２、３００ｍｇ／ｍ^２、２７５ｍｇ／ｍ^２、２５０ｍｇ／ｍ^２、２２５ｍｇ／ｍ^２、２００ｍｇ／ｍ^２、１７５ｍｇ／ｍ^２、１５０ｍｇ／ｍ^２、１２５ｍｇ／ｍ^２、１００ｍｇ／ｍ^２、７５ｍｇ／ｍ^２、６０ｍｇ／ｍ^２、５０ｍｇ／ｍ^２、３７．５ｍｇ／ｍ^２、２０ｍｇ／ｍ^２、１０ｍｇ／ｍ^２、５ｍｇ／ｍ^２、２．５ｍｇ／ｍ^２、１ｍｇ／ｍ^２、０．５ｍｇ／ｍ^２、０．３７５ｍｇ／ｍ^２、０．２５ｍｇ／ｍ^２、０．１ｍｇ／ｍ^２、０．０７５ｍｇ／ｍ^２、０．０５ｍｇ／ｍ^２、０．００１ｍｇ／ｍ^２、０．０００５ｍｇ／ｍ^２またはそれ以下の投薬量は、少なくとも約３日間、５日間、７日間、１０日間、１４日間、２１日間、３０日間、４５日間、６０日間、７５日間、９０日間、１２０日間、１５０日間、１８０日間、または２００日間またはそれ以上にわたって、２５％、３５％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上のＢ細胞（循環するＢ細胞および／または組織Ｂ細胞）の枯渇をもたらす。代表的な実施形態において、約１２５ｍｇ／ｍ^２または７５ｍｇ／ｍ^２またはそれ以下の投薬量は、少なくとも約７日間、１４日間、２１日間、３０日間、６０日間、７５日間、９０日間、１２０日間、１５０日間または１８０日間にわたって、少なくとも約５０％、７５％、８５％または９０％のＢ細胞の枯渇をもたらす。他の実施形態において、約５０ｍｇ／ｍ^２、３７．５ｍｇ／ｍ^２または１０ｍｇ／ｍ^２の投薬量は、少なくとも約７日間、１４日間、２１日間、３０日間、６０日間、７５日間、９０日間、１２０日間または１８０日間にわたって、少なくとも約５０％、７５％、８５％または９０％のＢ細胞の枯渇をもたらす。さらに他の実施形態において、約０．３７５ｍｇ／ｍ^２または０．１ｍｇ／ｍ^２の投薬量は、少なくとも約７日間、１４日間、２１日間、３０日間、６０日間、７５日間または９０日間にわたって、少なくとも約５０％、７５％、８５％または９０％Ｂ細胞の枯渇をもたらす。さらなる実施形態において、約０．０７５ｍｇ／ｍ^２、０．０１ｍｇ／ｍ^２、０．００１ｍｇ／ｍ^２、または０．０００５ｍｇ／ｍ^２の投薬量は、少なくとも約７日間、１４日間、２１日間、３０日間または６０日間にわたって、少なくとも約５０％、７５％、８５％または９０％のＢ細胞の枯渇をもたらす。

【0213】

本発明の特定の実施形態において、上記用量は、血液または組織（例えば、骨髄であるが、これに限定されない）において一定の用量を維持するために、漸増または減少され得る。関連する実施形態において、上記用量は、本発明の組成物および方法の抗体の所望のレベルを維持するために、約２％、５％、８％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％および９５％で漸増または減少され得る。

【0214】

特定の実施形態において、上記投薬量は、調整され得、そして／または上記注入速度は、本発明の組成物および方法に対する患者の免疫原性応答に基づいて減少され得る。

【0215】

本発明の方法の１つの局面にしたがって、本発明の抗ＣＤ１９抗体および／または組成物の負荷用量が、最初に投与され得、次いで処置されるＢ細胞の悪性疾患が進行するまで維持用量が投与され得るかまたは規定の処置過程（例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ^ＴＭ、ＭＹＬＯＴＡＲＧ^ＴＭ、またはＲＩＴＵＸＡＮ^ＴＭ、後者は患者が増加した規定の数の用量で処置されることを可能にし、これはさらなるデータをもたらす）が適用され得る。本発明の方法の別の局面にしたがって、患者は、免疫原性応答を検出、最小化するためか、または本発明の組成物および方法の有害作用を最小化するために、本発明の組成物および方法によって前処置され得る。

【0216】

（５．４．４．毒性試験）
本発明の組成物および／または処置レジメンの耐性、毒性および／または効力は、例えば、ＬＤ５０（５０％の集団の致死用量）、ＥＤ５０（５０％の集団の治療的に有効な用量）およびＩＣ５０（５０％の阻害を達成するのに有効な用量）を決定するために。細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定され得る。好ましい実施形態において、上記用量は、循環するＢ細胞もしくは循環する免疫グロブリン、またはその両方の少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の枯渇を達成するのに有効な用量である。毒性と治療効果との間の用量比は、治療指数であり、そしてそれは、ＬＤ５０／ＥＤ５０を比として表され得る。大きい治療指数を示す治療が、好ましい。毒性の副作用を示す治療が使用され得る一方で、患者管理は、ＣＤ１９陰性な細胞に対する潜在的な損傷を最小化し、それによって副作用を減少させるために、このような薬剤がＣＤ１９発現細胞を標的とするような送達系を設計するように行われるべきである。

【0217】

細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトに対する組成物の投薬量および／または処置レジメンの範囲を処方するするのに使用され得る。このような薬剤の用量は、好ましくは、毒性がほとんどないかまたは毒性を伴わないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。その投薬量は、使用される投薬量および使用される投与経路に依存してこの範囲内で変動し得る。本発明の方法において使用される任意の治療に関して、治療的に有効な用量は、適切な動物モデルによって推定され得る。動物モデルの種に依存して、上記用量は、例えば、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈら、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｇｅｎｔｓ ｉｎ ｍｏｕｓｅ、ｒａｔ、ｍｏｎｋｅｙ、ｄｏｇ ａｎｄ ｈｕｍａｎ、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｒｅｐｏｒｔｓ、ＮＣＩ １９６６ ４０：２１９−２４４によって提供されるような当該分野で受容される処方物に従ってヒトにおいて使用するために見積もられる。細胞培養アッセイから得られたデータは、潜在的な毒性を予測するのに有用であり得る。動物研究は、細胞培養物において決定されるような、ＩＣ５０（すなわち、症状の最大半量の阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度を達成する特定の用量を処方するために使用され得る。このような情報は、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定するために使用され得る。血漿薬物濃度は、高速液体クロマトグラフィー、ＥＬＩＳＡ、または細胞ベースのアッセイによって測定され得る。

【0218】

（５．５．患者の診断、病期分類および治療レジメン）
本発明の特定の局面に従って、本発明の組成物および方法と一緒に従って使用される処置レジメンおよび用量は、多くの因子に基づいて選択され、その因子としては、処置されるＢ細胞の疾患または症状の病期が挙げられるが、こらに限定されない。適切な処置レジメンは、患者または患者集団におけるＢ細胞の疾患または障害の特定の病期について、当業者によって決定され得る。用量反応曲線は、Ｂ細胞の疾患または障害の異なる病期を有する患者を処置するための本発明の組成物の有効な量を決定するために、当該分野で標準的なプロトロコルにおいて作製され得る。一般に、Ｂ細胞の疾患または障害のより進んだ病期を有する患者は、早期のＢ細胞の疾患または障害を有する患者と比較して、より長い期間にわたって投与され得る、より高い用量および／またはより多くの頻度の用量を必要とする。

【0219】

本発明の抗ＣＤ１９抗体、組成物および方法は、Ｂ細胞の悪性疾患を含むＢ細胞の疾患を処置するために実施され得る。用語「Ｂ細胞の悪性疾患」は、Ｂ細胞系の細胞に由来する任意の悪性疾患を含む。例示的なＢ細胞の悪性疾患としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：Ｂ細胞サブタイプの非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）（低度悪性群／濾胞性ＮＨＬ、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中等度悪性群／濾胞性ＮＨＬ、中等度悪性群のびまん性ＮＨＬ、高度悪性群の免疫芽球性ＮＨＬ、高度悪性群のリンパ芽球性ＮＨＬ、高度悪性群の小さい大細胞（ｓｍａｌｌ ｎｏｎ−ｃｌｅａｖｅｄ ｃｅｌｌ）のＮＨＬ；成熟細胞のリンパ腫および大きな病変（ｂｕｌｋｙ ｄｉｓｅａｓｅ）のＮＨＬを含む）；バーキットリンパ腫；多発性骨髄腫；前Ｂ細胞性急性リンパ性白血病および早期Ｂ細胞前駆体に由来する他の悪性疾患；一般的な急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（免疫グロブリン変異型ＣＬＬおよび免疫グロブリン非変異型ＣＬＬを含む）；ヘアリーセル白血病；ヌル急性リンパ芽球性白血病；ヴァルデンストレームマクログロブリン血症；胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、および３型ＤＬＢＣＬを含むびまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）；前リンパ性白血病；Ｌ鎖病；形質細胞腫；骨硬化性骨髄腫；形質細胞性白血病；意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）；くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）；無症候性多発性骨髄腫（ＩＭＭ）；古典的および結節性リンパ球優勢型を含むホジキンリンパ腫；リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；ならびに胃粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫を含む辺縁帯リンパ腫。

【0220】

本発明者らは、本発明の抗体および組成物が成熟Ｂ細胞を枯渇させ得ることを示した。したがって、別の局面として、本発明は、成熟Ｂ細胞（すなわち、その細胞表面上にＩｇを発現する）の悪性疾患を処置するために使用され得、その悪性疾患とては、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、および３型ＤＬＢＣＬを含むびまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、古典的および結節性リンパ球優勢型を含むホジキンリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）、胃粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫を含む辺縁帯リンパ腫、ならびに免疫グロブリン変異型ＣＬＬおよび免疫グロブリン非変異型ＣＬＬを含む慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0221】

さらに、ＣＤ１９は、例えば、ＣＤ２０よりも、Ｂ細胞の発達の早期に発現され、したがって、例えば、骨髄における、プレＢ細胞および未熟Ｂ細胞（すなわち、その細胞表面上にＩｇを発現しない）の悪性疾患を処置するのに特に適している。例示のプレＢ細胞および未熟Ｂ細胞の悪性疾患としては、急性リンパ芽球性白血病が挙げられるが、これに限定されない。

【0222】

他の特定の実施形態において、本発明は、結節外の腫瘍を処置するために実施され得る。

【0223】

（５．５．１．Ｂ細胞の悪性疾患の診断および病期分類）
癌（例えば、腫瘍形成が可能なＢ細胞の疾患または障害（例えば、非ホジキンリンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫およびバーキットリンパ腫）の進行は、代表的に、癌が身体全体に拡散している程度によって特徴付けられ、そしてしばしば、帰結の予測である以下の４つの段階に分けられる。第Ｉ期：癌が、特定の組織に局在し、そしてリンパ節に拡散していない。第ＩＩ期：癌が、近くのリンパ節に拡散（すなわち、転移）している。第ＩＩＩ期：癌が、元の組織から離れた身体の領域中のリンパ節において見出され、そして腫瘤または１つとは対照的に複数の腫瘍を含み得る。第ＩＶ期：癌は、身体の遠隔部位に拡散している。癌の病期は、臨床上の観察および当業者に周知である試験法によって決定され得る。上に記載される癌の病期は、伝統的に、腫瘍形成によって特徴付けられる癌の臨床診断と組み合わせて使用され、そしてＢ細胞の疾患および障害を処置する本発明の組成物および方法と組み合わせて使用され得る。代表的に、初期の疾患は、その疾患が、患者の身体の一部に局在したままであるか、または転移していないことを意味する。

【0224】

腫瘍を形成しないＢ細胞の疾患および障害（例えば、多発性骨髄腫であるが、これに限定されない）に関して、疾患の病期を決定するための判定基準は、異なる。Ｄｕｒｉｅ−Ｓａｌｍｏｎ Ｓｔａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍが、広く使用されている。この病期分類システムにおいて、疾患の臨床段階（第Ｉ期、第ＩＩ期、または第ＩＩＩ期）は、Ｍタンパク質のレベル、溶解性骨病変の数、ヘモグロビン値および血清カルシウムレベルを含む数種の測定基準に基づく。病期は、腎（腎臓）機能に従ってさらに分けられる（ＡまたはＢとして分類される）。Ｄｕｒｉｅ−Ｓａｌｍｏｎ Ｓｔａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍに従って、第Ｉ期（低い細胞量）は、以下の全てによって特徴付けられる：＞１０ｇ／ｄＬのヘモグロビン値；正常または≦１２ｍｇ／ｄＬの血清カルシウム値；骨のｘ線、正常な骨構造（スケール０）または孤立性の骨形質細胞腫のみ；および低いＭ−成分産生速度：＜５ｇ／ｄＬのＩｇＧ値、＜３ｇ／ｄのＩｇＡ値、＜４ｇ／２４時間のベンズ・ジョーンズタンパク質の。第Ｉ期患者は、代表的に、関連する器官または組織の障害または症状を有さない。第ＩＩ期（中程度の細胞量）は、第Ｉ期にも第ＩＩＩ期にも適合しないことによって特徴付けられる。第ＩＩＩ期（高い細胞量）は、以下の１つ以上によって特徴付けられる：＜８．５ｇ／ｄＬのヘモグロビン値；＞１２ｍｇ／ｄＬの血清カルシウム値；進行した溶解性骨病変（スケール３）；高いＭ−成分産生速度：＞７ｇ／ｄＬのＩｇＧ値、＞５ｇ／ｄＬのＩｇＡ値、＞１２ｇ／２４時間のベンズ・ジョーンズタンパク質、細分類（ＡまたはＢのいずれか）（Ａは、比較的正常な腎機能（＜２．０ｍｇ／ｄＬの血清クレアチニン値）であり、そしてＢは、異常な腎機能（≧２．０ｍｇ／ｄＬの血清クレアチニン値）である）。

【0225】

骨髄腫に関する別の病期分類システムは、骨髄腫に関するＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＩＳＳ）である。このシステムは、病期分類群の間をより有効に区別し得、そしてβ２−ミクログロブリン（β２−Ｍ）およびアルブミンの血清レベルの容易な測定に基づく。骨髄腫に関するＩＳＳに従って、第Ｉ期は、＜３．５のＢ２−Ｍおよび＞３．５のアルブミンによって特徴付けられ、第ＩＩ期は、＜３．５のＢ２−Ｍおよび＜３．５のアルブミンまたは３．５〜５．５のＢ２−Ｍによって特徴付けられ、そして第ＩＩＩ期は、＞５．５のＢ２−Ｍによって特徴付けられる（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｍｙｅｌｏｍａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｎｅｗ Ｃａｎａａｎ、ＣＴ）。

【0226】

患者におけるＢ細胞の悪性疾患の病期は、臨床的な決定である。上に示される通り、固形腫瘍に関して、拡散した位置および腫瘍の数は、病期の臨床的な決定における主要な因子である。腫瘍を形成しないＢ細胞の悪性疾患を有する患者における病期の決定は、上に記載されるような血清レベルの測定を必要とし、より複雑であり得る。

【0227】

上記のＢ細胞の疾患および障害の病期の記載は、限定的ではない。Ｂ細胞の疾患および障害の診断に関する当該分野において公知である他の特徴は、Ｂ細胞の疾患または障害の病期を決定するために、患者に対する判定基準として使用され得る。

【0228】

（５．５．２．Ｂ細胞の悪性疾患を診断するための臨床的判定基準）
異なるＢ細胞の悪性疾患に対する診断的判定基準は、当該分野において公知である。歴史的に、診断は、代表的に、顕微鏡所見と免疫表現型との組み合わせに基づく。より最近、分子技術（例えば、遺伝子発現プロファイリング）は、Ｂ細胞の悪性疾患の分子的な定義を開発するために応用されている（例えば、Ｓｈａｆｆｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２：９２０−９３２（２００２）を参照のこと）。特定のＢ細胞の悪性疾患の臨床的診断のための例示的な方法は、下に提供される。他の適切な方法は、当業者に明らかである。

【0229】

（５．５．２．１．濾胞性ＮＨＬ）
一般に、大部分のＮＨＬ（マントル細胞リンパ腫を除く）は、体細胞突然変異（ＳＨＭ）の結果であることが明らかである、高度に変異した免疫グロブリン遺伝子を有する。ＮＨＬにおける最も一般的な遺伝的異常性は、ＢＣＬ６遺伝子の転座および変異である。

【0230】

濾胞性ＮＨＬは、しばしば、濾胞性の増殖パターンを伴う低悪性度のＢ細胞リンパ腫である。それは、米国および西欧における第２の最も一般的なリンパ腫である。この疾患が存在する年齢中位数は、６０歳であり、そして女性においてわずかに優勢である。無痛性リンパ節症は、最も一般的な症状である。試験は、しばしば、血液髄（ｂｌｏｏｄ ｍａｒｒｏｗ）およびときとして、末梢血の関与を示す。濾胞性ＮＨＬは、濾胞における大細胞の割合に基づく細胞学的な段階に分けられ、この段階は、濾胞性の小さい大細胞から大細胞優勢までの連続体を形成する（Ｓ．Ｆｒｅｅｄｍａｎら、Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．３６７−３８８、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）；Ｔ．Ｌｉｓｔｅｒら、Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．３０９−３２４、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）を参照のこと）。

【0231】

ほとんどの濾胞性ＮＨＬは、ＢＣＬ２の過剰発現を生じる、１４染色体と１８染色体との間の転座によって特徴付けられる。濾胞性ＮＨＬはまた、ＳＨＭおよび進行するＳＨＭならびに胚中心（ＧＣ）Ｂ細胞と同様の遺伝子発現プロフィールの両方によって特徴付けられ（例えば、Ｓｈａｆｆｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２：９２０−９３２（２００２）を参照のこと）、胚中心Ｂ細胞細胞は、この悪性疾患について起源と推定される細胞である。重鎖および軽鎖の再配列は、代表的である。この疾患の腫瘍細胞は、ほとんどがＩｇＭの発現を伴うモノクローナル表面免疫グロブリンを発現する。ほぼ全ての濾胞性ＮＨＬ腫瘍細胞は、抗原ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ２１、ＣＤ３５およびＣＤ１０を発現するが、ＣＤ５およびＣＤ４３の発現を欠く。小さい大細胞による中間洞の浸潤が、骨髄において観察される（Ｓ．Ｆｒｅｅｄｍａｎら、Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．３６７−３８８、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）；Ｔ．Ｌｉｓｔｅｒら、Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．３０９−３２４、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）を参照のこと）。

【0232】

濾胞性ＮＨＬの診断は、一般に、組織構造および細胞学的特徴を評価するために、切除された節の生検による。細針吸引は、この手順が、評価され得る組織を提供する可能性が低く、そしてさらなる試験に十分な組織を提供できないので、通常、適用されない。両側性の骨髄生検もまた、病変が斑状であり得るので示される。さらなる診断手順としては、胸部ｘ線、胸、腹、首および骨盤のコンピュータ連動断層撮影（ＣＴ）スキャン、全血球算定ならびに化学プロフィールが挙げられる。フローサイトメトリーおよび免疫組織化学は、濾胞性ＮＨＬと他の成熟Ｂ細胞リンパ腫との間を区別するために使用され得る。（Ｓ．Ｆｒｅｅｄｍａｎら、Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．３６７−３８８、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）；Ｔ．Ｌｉｓｔｅｒら、Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．３０９−３２４、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）を参照のこと）。

【0233】

（５．５．２．２．マントル細胞リンパ腫）
マントル細胞リンパ腫は、二次濾胞のマントル領域に局在し、そして結節性および／またはびまん性の増殖パターンによって特徴付けられる。マントル細胞リンパ腫の患者は、６０〜６５歳の年齢中位数を有し、この疾患は、男性が優勢に罹患する。診断目的のために、通常存在する特徴は、全身性リンパ節症である。さらに、脾臓は、しばしば、腫脹する。このＢ細胞リンパ腫は、ＩｇＨ遺伝子座とサイクリンＤ１遺伝子との間に（１１；１４）で関連し、サイクリンＤ１の過剰発現をもたらす。５０％より多くの症例は、さらなる染色体異常を示す。マントル細胞リンパ腫は、代表的に、ＳＨＭによって特徴付けられない。（Ｗ．Ｈｉｄｄｅｍａｎｎら、Ｍａｎｔｌｅ Ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．４６１−４７６、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）；Ｄ．Ｗｅｉｓｅｎｂｕｒｇｅｒら、Ｍａｎｔｌｅ Ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．２８−４１、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）を参照のこと）。

【0234】

マントル細胞リンパ腫の細胞の免疫表現型分類（フローサイトメトリーまたは凍結切片）の免疫組織化学は、それらのほぼほとんどがモノクローナル性であり、表面ＩｇＭを有することを示す。マントル細胞リンパ腫細胞はまた、表面ＩｇＤを有することが記載されている。その細胞は、抗原ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２およびＣＤ２４を発現するが、ＣＤ２３を発現しない。それらはまた、表面抗原ＣＤ５を発現するが、ＣＤ１０を発現せず、マントル細胞リンパ腫を、ほぼ必ずＣＤ５陰性である真性の濾胞中心細胞リンパ腫から区別する。頻繁に、節外病変は、骨髄浸潤ならびに肝臓および胃腸管の腫瘍を含むことが見出される。軽度の貧血および白血病の発現は、マントル細胞リンパ腫に関して一般的である。（Ａ．Ｌａｌら、Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｆｉｎｅ Ｎｅｅｄｌｅ Ａｓｐｉｒａｔｉｏｎ ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．１８１−２２０、Ｗ．Ｆｉｎｎら（編）、Ｈｅｍａｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｏｒｗｅｌｌ、ＭＡ（２００４）；Ｗ．Ｈｉｄｄｅｍａｎｎら、Ｍａｎｔｌｅ Ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．４６１−４７６、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。

【0235】

マントル細胞リンパ腫の診断は、末梢血ならびに骨髄生検およびリンパ節生検の検査を含む。さらに、細胞遺伝学的な研究および免疫表現型分類は、鑑別診断において有用である。（Ｗ．Ｈｉｄｄｅｍａｎｎら、Ｍａｎｔｌｅ Ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ ｐｐ．４６１−４７６、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）；Ｄ．Ｗｅｉｓｅｎｂｕｒｇｅｒら、Ｍａｎｔｌｅ Ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．２８−４１、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）を参照のこと）。

【0236】

（５．５．２．３．バーキットリンパ腫）
バーキットリンパ腫は、子供および若年成人において代表的に観察される攻撃的なＢ細胞リンパ腫であり、そして通常、顎および／または腹の大きな病変を伴う。患者の約２０％が、骨髄病変を有する。バーキットリンパ腫の流行性形態は、悪性細胞のエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）感染を含み；孤発性形態は、ＥＢＶ感染に依存する。ｃ−ｍｙｃ遺伝子の脱調節を生じる免疫グロブリン遺伝子座へのｃ−ｍｙｃの転座は、この疾患の特徴である（ｔ（８；１４）（ｑ２４；ｑ３２））。興味深いことに、ｃ−ｍｙｃ配列の欠失は、この疾患の孤発性に関与するようであり、一方で、流行性形態は、通常、点変異または挿入を含む。（Ｖ．Ｐａｐｐａら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｐｐ．１３３−１５７、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）を参照のこと）。バーキットリンパ腫はまた、ＳＨＭによって特徴付けられ、そして悪性細胞は、ＧＣ Ｂ細胞と同様の遺伝子発現プロフィールを有し、これは、この悪性疾患がＧＣ Ｂ細胞に由来することを示唆する。

【0237】

バーキットリンパ腫の免疫表現型は、この疾患の細胞はＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２およびＣＤ７９ａを発現するが、ＣＤ５、ＣＤ２３、サイクリンＤまたはターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼを発現しない。頻繁に、これらの細胞は、ＣＤ１０およびＢＣＬ６について陽性であり、そして通常、ＢＣＬ２について陰性である。（Ｉ．Ｍａｇｒａｔｈら、Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．４７７−５０１、Ｉｎ Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。

【0238】

高度悪性群のＢ細胞バーキット様リンパ腫は、バーキットリンパ腫と大Ｂ細胞リンパ腫との間のリンパ腫の境界例である。このリンパ腫の細胞は、ＣＤ１９およびＣＤ２０を発現するが、ほぼ必ず真性のバーキットリンパ腫に存在するＣＤ１０の発現は、頻繁に、欠如する。この特徴および他の特徴に起因して、このリンパ腫は、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫として分類されるはずであると考えられる。（Ｋ．Ｍａｃｌｅｎｎａｎ、Ｄｉｆｆｕｓｅ Ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ Ｂ ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．４９−５４、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）を参照のこと）。

【0239】

バーキットリンパ腫の診断は、一般に、このリンパ腫に関連する転座の検出により；したがって、従来の細胞遺伝学的分析が、通常は行われる。長距離（ｌｏｎｇ ｄｉｓｔａｎｃｅ）ポリメラーゼ連鎖反応技術および蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）は、Ｉｇ−ｍｙｃ連結を、この疾患に関する転座および他の遺伝的変化において検出するために使用されている。（Ｒ．Ｓｉｅｂｅｒｔら、ｂｌｏｏｄ ９１：９８４−９９０（１９９８）；Ｔ．Ｄｅｎｙｓｓｅｖｙｃｈｒａ、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、１６：２７６−２８３（２００２）を参照のこと）。

【0240】

（５．５．２．４．びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ））
ＤＬＢＣＬは、ほとんどの一般的な非ホジキンリンパ腫であり、そして小Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫または辺縁帯リンパ腫から生じ得る。代表的に、患者は、リンパ節症を呈する；しかし、患者の多くの割合は、同様に、最も一般的である胃腸管の病変による節外部位の病変を示す。骨髄病変は、約１５％の患者において観察される。（Ａｒｍｉｔａｇｅら、Ｄｉｆｆｕｓｅ Ｌａｒｇｅ Ｂ ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．４２７−４５３、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。臨床的特徴、生物学的特徴および形態学的特徴における異質性は、この群のリンパ腫を細分類することを困難にする。しかし、２つの異なる下位集団が、胚中心Ｂ細胞（ＧＣ−ＤＬＢＣＬ）の発現する遺伝子の特徴および末梢血Ｂ細胞における他の過剰発現する遺伝子によって同定されている。生存率は、活性化Ｂ細胞型（ＡＢＣ）−ＤＬＢＣＬを有する患者よりもＧＣ−ＤＬＢＣＬを有する患者において有意に良好である。（Ｗ．Ｃｈａｎ、Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １２８（１２）：１３７９−１３８４（２００４）を参照のこと）。

【0241】

ＤＬＢＣＬは、細胞表面抗原ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２およびＣＤ７９ａを発現する。ＣＤ１０は、大部分の症例において発現され、そしてＣＤ５発現は、約１０％の症例において観察される。（Ｋ．Ｍａｃｌｅｎｎａｎ、Ｄｉｆｆｕｓｅ Ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ Ｂ ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．４９−５４、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）を参照のこと）。ＤＬＢＣＬは、しばしば、ＢＣＬ６の異常性および／またはＩｇＨ遺伝子座へのＢＣＬ２の転座によって特徴付けられる。ＧＣ Ｂ細胞様（ＧＣ）ＤＬＢＣＬは、高度に変異した免疫グロブリン遺伝子を有するＳＨＭおよびＧＣ Ｂ細胞様の遺伝子発現プロフィールを有する悪性クローンにおける進行するＳＨＭによって特徴付けられる。大部分のＧＣ ＤＬＢＣＬは、免疫グロブリンのクラススイッチを受ている。ＡＢＣ−ＤＬＢＣＬは、ＢＣＬ２、インターフェロン調節因子４、ＣＤ４４、ＦＬＩＰおよびサイクリンＤを含むＮＦ−κＢ標的遺伝子の高レベルの発現によって特徴付けられる。ＳＨＭ（しかし進行するＳＨＭではない）が、存在し、そしてＡＢＣ−ＤＬＢＣＬは、ＧＣ Ｂ細胞の遺伝子発現プロフィールを有さない。ほぼ全てのＡＢＣ−ＤＬＢＣＬは、高レベルのＩｇＭを発現する。

【0242】

（５．５．２．５．節外性辺縁帯リンパ腫）
節外性辺縁帯リンパ腫は、通常、器質性のリンパ組織（例えば、胃、唾液腺、肺および甲状腺）を欠く器官において生じる節外性リンパ腫である。概して、６０歳を超える年齢中位数を伴う高年齢者が罹患する疾患である。しばしば、慢性炎症プロセスまたは自己免疫プロセスは、リンパ腫の発症に先行する。胃粘膜関連のリンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫（最も一般的な型の辺縁帯リンパ腫）は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ感染に付随する。研究は、以下の抗生物質レジメンを用いたＨ．ｐｙｌｏｒｉ感染の根絶による症状の解決を示している。Ｔｈｅ胃のＭＡＬＴリンパ腫に関して示される症状としては、非特異的な消化不良、上腹部痛、悪心、胃腸出血および貧血が挙げられる。全身症状は、一般的ではなく、その全身症状は、高いレベルの乳酸デヒドロゲナーゼである（Ｊ．Ｙａｈａｌｏｍら、Ｅｘｔｒａｎｏｄａｌ Ｍａｒｇｉｎａｌ Ｚｏｎｅ Ｂ−ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ ｏｆ Ｍｕｃｏｓａ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ、ｐｐ．３４５−３６０、Ｉｎ Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）；Ｊ．Ｒａｄｆｏｒｄ、Ｏｔｈｅｒ Ｌｏｗ−Ｇｒａｄｅ Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、ｐｐ．３２５−３３０、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）を参照のこと）。全身性のＢ症状としては、感染の徴候を伴わない２週間を超える３８℃より高い発熱、寝汗、極度の疲労または直近６ヶ月間にわたる体重の１０％を超えるかもしくはそれに等しい意図していない体重減少が挙げられる。

【0243】

ＭＡＬＴリンパ腫の免疫表現型は、ＣＤ２０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ２１およびＣＤ３５の発現によって特徴付けられ、そしてＣＤ５、ＣＤ２３およびＣＤ１０の発現を欠く。ＭＡＬＴリンパ腫の約半分は、ＣＤ４３を発現する。この疾患の腫瘍細胞において発現される上記免疫グロブリンは、代表的に、ＩｇＭであるが、ＩｇＤは、発現されない。これらの特徴は、このリンパ腫を、他の小Ｂ細胞リンパ腫（例えば、マントル細胞リンパ腫、リンパ球性リンパ腫および濾胞性リンパ腫）から区別するのに重要である。トリソミー３は、６０％のＭＡＬＴリンパ腫の症例において報告されている。２５〜４０％の胃のＭＡＬＴリンパ腫および肺のＭＡＬＴリンパ腫において、ｔ（１１；１８）が、観察される・この転座は、頻繁に、他のＭＡＬＴリンパ腫においてかなり少なく観察される。ｔ（１１；１８）は、ＢＣＬ１０の核での発現に関連する。（Ｊ．Ｙａｈａｌｏｍら、Ｅｘｔｒａｎｏｄａｌ Ｍａｒｇｉｎａｌ Ｚｏｎｅ Ｂ ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ ｏｆ Ｍｕｃｏｓａ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ、ｐｐ．３４５−３６０、Ｉｎ Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。辺縁帯リンパ腫は、一般に、ＳＨＭおよび進行するＳＨＭによって特徴付けられる。

【0244】

診断手順は、細胞表面マーカーの同一性を決定するために免疫表現型分類またはフローサイトメトリーを含む。さらに、分子的な遺伝分析は、ｔ（１１；１８）の存在を決定するために行われるべきである。なぜならば、これは、この疾患が抗生物質に応答しないことを示すからである。組織学は、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉの存在を決定するために使用され得る。さらなる試験は、全血球算定、乳酸デヒドロゲナーゼについての試験；腹、胸および骨盤のＣＴスキャンならびに骨髄生検を含む基礎的な生化学的試験を含むべきである。（Ｊ．Ｙａｈａｌｏｍら、Ｅｘｔｒａｎｏｄａｌ Ｍａｒｇｉｎａｌ Ｚｏｎｅ Ｂ ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ ｏｆ Ｍｕｃｏｓａ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ、ｐｐ．３４５−３６０、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。

【0245】

（５．５．２．６．節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫）
節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫は、比較的新しく分類されたリンパ腫であり、したがって、ほとんどが、それとして公表されていない。それは、遺伝的特徴ならびに形態学的特徴を、節外および脾臓の辺縁帯リンパ腫と共有する一次結節性Ｂ細胞リンパ腫であるが、脾臓または節外に局在しない。Ｃ型肝炎ウイルスが、ジョーンズ症候群を有するようなこのリンパ腫に関連することが報告されている。（Ｆ．Ｂｅｒｇｅｒら、Ｎｏｄａｌ Ｍａｒｇｉｎａｌ Ｚｏｎｅ Ｂ ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．３６１−３６５、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。

【0246】

節性辺縁帯リンパ腫は、異質性の細胞学および形態学を有する。大細胞の比較的高い割合に起因して、このリンパ腫は、他の辺縁性リンパ腫（脾臓および節外）と異なり、真性の低度悪性群Ｂ細胞リンパ腫として分類されない可能性がある。節性辺縁帯リンパ腫の遺伝的表現型および免疫学的表現型は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＢＣＬ２、ｓｌｇＭおよび細胞質ＩｇＧ（ｃｌｇ）の発現を含む。これらの細胞は、ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ２３、ＣＤ４３またはサイクリンＤ１を発現しない。ＭＡＬＴリンパ腫の転座の特徴（ｔ（１１；１８））は、節性辺縁帯リンパ腫に関して観察されない。これらの特徴は、他の小Ｂ細胞リンパ腫からのこのリンパ腫の鑑別診断に役立つ。（Ｆ．Ｂｅｒｇｅｒら、Ｎｏｄａｌ Ｍａｒｇｉｎａｌ Ｚｏｎｅ Ｂ ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．３６１−３６５、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４））。

【0247】

（５．５．２．７．脾性辺縁帯リンパ腫）
脾性辺縁帯リンパ腫は、顕著な脾腫ならびに末梢血および骨髄の浸潤の特徴的な臨床所見を伴う無痛性の小結節性Ｂ細胞リンパ腫である。さらに、比較的高いレベルの肝臓病変が、報告されている。Ｃ型肝炎ウイルスの役割が、このリンパ腫について仮定されている。脾性変縁帯リンパ腫の免疫表現型は、代表的に、ＣＤ２０^＋、ＩｇＤ^＋、ＢＣＬ２^＋、ｐ２７^＋、ＣＤ３⁻、ＣＤ５⁻、ＣＤ１０⁻、ＣＤ２３⁻、ＣＤ３８⁻、ＣＤ４３⁻、ＢＣＬ−６⁻およびサイクリンＤ１⁻である。遺伝的特徴としては、７ｑの欠失、ｐ５３の変化およびＳＨＭが挙げられる。（Ｍ．Ｐｉｒｉｓら、Ｓｐｌｅｎｉｃ Ｍａｒｇｉｎａｌ Ｚｏｎｅ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．２７５−２８２、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。

【0248】

診断は、一般に、細胞表面マーカーの同一性を決定するために、免疫表現型分類による。遺伝的分析および生化学的分析は、細胞表面マーカーにおけるデータと組み合わせて、このリンパ腫を、他の小Ｂ細胞リンパ腫から鑑別することを補助する。（Ｍ．Ｐｉｒｉｓら、Ｓｐｌｅｎｉｃ Ｍａｒｇｉｎａｌ Ｚｏｎｅ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．２７５−２８２、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。

【0249】

（５．５．２．８．急性（Ｂ細胞）リンパ球性白血病（ＡＬＬ））
ＡＬＬは、概して子供が罹患する骨髄ベースの新生物であり、１〜５歳の間に最も高い発生数を伴う。診察時に最も一般的な症状としては、疲労、嗜眠、発熱ならびに骨および関節の痛みが挙げられる。疲労および嗜眠は、存在する貧血の程度に相関する。高い白血球数は、診察時において一般的である。胸部のＸ線写真は、しばしば、骨格病変を示す。髄外の拡散が、一般的であり、そしてその拡散は、中枢神経系、精巣、リンパ節、肝臓、脾臓および腎臓を含む。前縦隔腫瘤は、新しく診断された症例の約５〜１０％のみに観察される（Ｊ．Ｗｈｉｔｌｏｃｋら、Ａｃｕｔｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ｐｐ．２２４１−２２７１、Ｉｎ Ｗｉｎｔｒｏｂｅ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、第１０版、Ｇ．Ｌｅｅら（編）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ（１９９９）を参照のこと）。

【0250】

ＡＬＬの免疫表現型は、ＣＤ１０^＋、ＣＤ１９^＋、ＣＤ２０^＋およびＣＤ２４^＋である。前Ｂ細胞ＡＬＬの細胞は、細胞質免疫グロブリンを発現するが、表面免疫グロブリンを発現せず、一方で成熟Ｂ細胞ＡＬＬ（ＡＬＬ症例の１〜２％だけについての原因である）は、表面免疫グロブリンの発現によって、Ｂ細胞系統の他の白血病から区別される。ＡＬＬの細胞遺伝学的特徴は、ｔ（８；１４）、ｔ（２；８）およびｔ（８；２２）を含む。細胞遺伝学的レベルにおいて稀に検出されるが、ｔ（１２；２１）は、小児期ＡＬＬ（症例の約２５％において観察される）に伴う最も一般的な細胞遺伝学的異常性であり得る。（Ｍ．Ｋｉｎｎｅｙら、Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ａｃｕｔｅ Ｌｅｕｋｅｍｉａｓ、ｐｐ．２２０９−２２４０、Ｗｉｎｔｒｏｂｅ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、第１０版、Ｇ．Ｌｅｅら（編）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ（１９９９）；Ｊ Ｗｈｉｔｌｏｃｋら、Ａｃｕｔｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ｐｐ．２２４１−２２７１；Ｗｉｎｔｒｏｂｅ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、第１０版、Ｇ．Ｌｅｅら（編）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ、（１９９９）を参照のこと）。

【0251】

急性白血病の正確な診断は、通常、骨髄穿針液および生検による。吸引スミアは、形態学的評価、免疫学的評価および細胞学的評価のために使用される。骨髄におけるリンパ芽球の実証は、ＡＬＬの診断である。骨髄におけるの白血病性リンパ芽球細胞の５％より大きい存在は、ＡＬＬ診断を与えるが、確定診断のためには、ほぼ２５％より多くの存在を必要とする。腰椎穿刺が、中枢神経系を診断するために使用される。血清尿酸レベルおよび血清乳酸デヒドロゲナーゼ技術は、ＡＬＬにおいて上昇することが見出されている。（Ｍ．Ｋｉｎｎｅｙら、Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ａｃｕｔｅ Ｌｅｕｋｅｍｉａｓ、ｐｐ．２２０９−２２４０、Ｉｎ Ｗｉｎｔｒｏｂｅ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、第１０版、Ｇ．Ｌｅｅら（編）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ（１９９９）；Ｊ．Ｗｈｉｔｌｏｃｋら、Ａｃｕｔｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ｐｐ．２２４１−２２７１；Ｉｎ Ｗｉｎｔｒｏｂｅ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、第１０版、Ｇ．Ｌｅｅら（編）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ，（１９９９）を参照のこと）。

【0252】

（５．５．２．９．慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小Ｂ細胞リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ））
ＣＬＬ／ＳＬＬは、最も一般的な型の白血病である。この疾患が末梢血および骨髄に関する場合、それは、ＣＬＬと称される。しかし、リンパ節および他の組織が、ＣＬＬにおける細胞と免疫学的および形態学的に同一である細胞によって浸潤されるが、疾患の白血病性の特徴が、ない場合、次いでこの疾患は、ＳＬＬと称される。この疾患は、概して、高齢者を苦しめ、それは、女性よりも男性において多く生じる疾患の発生数である。無痛性のリンパ節症は、診察時に最も一般的な見出されるものである。低γグロブリン血症は、免疫グロブリンの任意の特定のサブクラスよりもむしろ全ての免疫グロブリンのレベルの減少を示すＣＬＬ／ＳＬＬのほとんどの症例と共通である。無症候性患者は、慣用的な血球算定の間に頻繁に診断される（１Ｌあたり５０００×１０^９個を超えるリンパ球数）。ＣＬＬ／ＳＬＬ症例の２０％程度は、Ｂ症状を報告する。さらなる診断的特徴は、未熟リンパ球による３０％よりも大きい骨髄の浸潤である。リンパ節生検は、一般に、高分化型リンパ球によるリンパ節転移の浸潤を示す。自己免疫の徴候は、しばしば、自己免疫性溶血性貧血および免疫性血小板減少を含むＣＬＬ／ＳＬＬに付随する。（Ｊ．Ｇｒｉｂｂｅｎら、Ｓｍａｌｌ Ｂ ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｍａ／Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ Ｐｒｏ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ｐｐ．２４３−２６１、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）；Ｋ．Ｍａｃｌｅｎｎａｎ、Ｄｉｆｆｕｓｅ ＩｎｄｏｌｅｎｔＢ ｃｅｌｌ Ｎｅｏｐｌａｓｍｓ、ｐｐ．４３−４７、Ｉｎ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）；Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ａ．Ｎｅａｌら、Ｎｅａｌ，ＨｏｓｋｉｎおよびＯｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、共同出版、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ（２００３）を参照のこと）。

【0253】

低度悪性群のＢ細胞の悪性疾患の多くとは対照的に、ランダムではない相互転座は、ＣＬＬ／ＳＬＬにおいて稀に見出される。しかし、他の細胞遺伝学的異常性は、１３ｑｌ４、１１ｑ２２−２３および１７ｑｌ３における欠失を含むことが報告されており、後者２つは、ｐ５３遺伝子座を含む。約２０％の症例は、トリソミー１２を示す。高いレベルのβ−２ミクログロブリン、より高いレベルのＣＤ３８発現および腫瘍壊死因子−αの産生は、ＣＬＬ／ＳＬＬの全ての特徴である。ＣＬＬ／ＳＬＬの免疫表現型は、非常に特徴的であり、そして表面免疫グロブリン（通常は、ＩｇＭ、またはＩｇＭおよびＩｇＧ）の弱い発現を含み、かつ細胞抗原ＣＤ１９、ＣＤ２０ならびに通常はＣＤ５およびＣＤ２３の発現を含む（Ｊ．Ｇｒｉｂｂｅｎら、Ｓｍａｌｌ Ｂ ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｍａ／Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ Ｐｒｏｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ｐｐ．２４３−２６１、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）；Ｋ．Ｍａｃｌｅｎｎａｎ、Ｄｉｆｆｕｓｅ 無痛性 Ｂ ｃｅｌｌ Ｎｅｏｐｌａｓｍｓ、ｐｐ．４３−４７、Ｉｎ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）を参照のこと）。

【0254】

（５．５．２．１０．Ｂ細胞性前リンパ球性白血病（ＰＬＬ））
ＰＬＬ（一旦ＣＬＬの変異形と見なされた）は、現在、異なる疾患と認識される。ＰＬＬは、一般に、高齢者の男性の疾患であり、そして非常に高い白血球数（１Ｌあたり２００×１０個より大きい）および巨脾腫によって特徴付けられる。さらなる症状としては、貧血および血小板減少が挙げられる。ＰＬＬ中の前リンパ球は、血液および骨髄中に５５％よりも多いその細胞を含む。ＣＬＬとは対照的に、自己免疫徴候は、稀に、ＰＬＬにおいて観察される。（Ｊ．Ｇｒｉｂｂｅｎら、ＳｍａｌｌＢ ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｍａ／Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ Ｐｒｏｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ｐｐ．２４３−２６１、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。

【0255】

ＰＬＬの免疫表現型は、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２４およびＦＭＣ７の発現によって特徴付けられる。ＰＬＬの細胞は、ＣＤ２３を発現せず、そして大部分は、ＣＤ５を発現しない。ＰＬＬ細胞は、複雑な染色体異常を示し、１３ｑｌ４および１１ｑ２３における欠失は、最も頻度が高いもののいくつかである。ＰＬＬ細胞におけるｐ５３変異のパターンは、ＣＬＬについて観察されるものとは異なる。鑑別診断は、通常、全血球算定、組織学的分析、免疫表現型分析および遺伝的分析による。（Ｊ．Ｇｒｉｂｂｅｎら．、Ｓｍａｌｌ Ｂ ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｍａ／Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ Ｐｒｏｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ｐｐ．２４３−２６１、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら．（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）参照のこと）。

【0256】

（５．５．２．１１．ヘアリーセル白血病（ＨＣＬ））
ＨＣＬは、稀な、女性よりも男性（中年の男性）が多く罹患する無痛性の慢性白血病である。代表的な症状としては、巨大な巨脾腫および汎血球減少が挙げられる。末梢血および骨髄は、代表的な「ヘアリー細胞」を含み、それは、細胞質突起を有するＢリンパ球である。９０％を超えるＨＣＬ患者は、骨髄浸潤を有する。（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ａ．Ｎｅａｌら、Ｎｅａｌ、Ｈｏｓｋｉｎ ａｎｄ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、共同出版、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ（２００３）；Ｊ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎ、Ｈａｉｒｙ Ｃｅｌｌ Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ｐｐ．２４２８−２４４６、Ｗｉｎｔｒｏｂｅ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、第１０版、Ｇ．Ｌｅｅら（編）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ（１９９９）を参照のこと）。

【0257】

細胞分析学的分析は、クローンの異常性が１９％の症例に存在し、そして第５染色体、第７染色体および第１４染色体の数的および構造的な異常性を含むことを示している。ＴＮＦ−αの血清レベルは、ヘアリーセル白血病において評価され、そして腫瘍量（ｔｕｍｏｒ ｂｕｒｄｅｎ）と相関する。ヘアリーセル白血病細胞は、表面免疫グロブリン（ＩｇＧおよびＩｇＭ）ならびにＣＤ１１ｃ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２および代表的に、ＣＤ２５を発現する。さらに、ＦＭＣ７、ＨＣ−２およびＣＤ１０３が、発現される。ＨＣＬ細胞は、ＣＤ５またはＣＤ１０を発現しない。診断は、一般に、骨髄穿針、細胞遺伝学的、血液スメアおよび免疫表現型分類の使用を含む。（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ａ．Ｎｅａｌら、Ｎｅａｌ、Ｈｏｓｋｉｎ ａｎｄ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、共同出版、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ（２００３）；Ｊ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎ、Ｈａｉｒｙ Ｃｅｌｌ Ｌｅｕｋｅｍｉａ、ｐｐ．２４２８−２４４６、Ｗｉｎｔｒｏｂｅ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、第１０版、Ｇ．Ｌｅｅら（編）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ（１９９９）を参照のこと）。

【0258】

（５．５．２．１２．前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫／前Ｂ細胞性急性リンパ性白血病／リンパ芽球性リンパ腫）
前駆Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫／前Ｂ細胞性急性リンパ性白血病／リンパ芽球性リンパ腫は、前駆Ｔ細胞または前駆Ｂ細胞の疾患である。Ｔ細胞リンパ芽球性リンパ腫およびＢ細胞リンパ芽球性リンパ腫は、形態学的に同一であるが、臨床的区別は、骨髄浸潤または骨髄病変の程度に基づいて行われ得る。８５〜９０％のリンパ芽球性リンパ腫は、Ｂ細胞由来である残部によって得られるＴ細胞。リンパ芽球リンパ腫は、２０歳の年齢中位数を有し、それは、男性が優勢である。末梢リンパ節病変は、診察時に一般的な特徴であり、部領域、鎖骨上領域および腋窩領域において特に生じる。この疾患は、頻繁に、骨髄病変を呈する。中枢神経系の病変は、診断時においてより一般的ではないが、しばしば、再発の症例において現れる。他の部位の病変はとしては、肝臓、脾臓、骨、皮膚、咽頭および精巣が挙げられ得る（Ｊ．Ｓｗｅｅｔｅｎｈａｍら、Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ Ｂ−ａｎｄ Ｔ−ＣｅＩｌ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．５０３−５１３、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。

【0259】

前駆Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫は、未熟マーカーであるＢ細胞マーカー（ＣＤ９９、ＣＤ３４およびターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ）を発現する。これらの細胞はまた、ＣＤ７９ａ、ＣＤ１９およびときとしてＣＤ２０を発現し、そして代表的に、ＣＤ４５および表面免疫グロブリンの発現を欠く。１１ｑ２３ならびにｔ（９；２２）（ｑ３４；ｑ１１．２）およびｔ（１２；２１）（ｐ１３；ｑ２２）における転座は、不良な予後に関連している。良好な予後は、高二倍体核型に関連し、特に、トリソミー４、トリソミー１０およびトリソミー１７およびｔ（１２；２１）（ｐｌ３；ｑ２２）に関連する。（Ｊ．Ｓｗｅｅｔｅｎｈａｍら、Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ Ｂ−ａｎｄ Ｔ−ＣｅＩｌ Ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．５０３−５１３、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。

【0260】

診断試験としては、リンパ節生検、血液検査、ｘ線、ＣＴスキャンおよび脳脊髄液（ｃｅｒｅｂｒａｌｓｐｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ）を悪性細胞について試験するための腰椎穿刺が挙げられる。

【0261】

（５．５．２．１３．縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）
縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫は、若年女性において優勢に発症するびまん性大Ｂ細胞リンパ腫であり、そして胸腺に由来する局所的に侵襲性の前縦隔腫瘤によって特徴付けられる。末梢リンパ節および骨髄の病変に対する遠隔転移は、通常ではない。全身症状は、一般的である。この疾患は、節性大細胞リンパ腫と似ているが、それは、異なる遺伝的特徴、免疫学的特徴および形態学的特徴を有する。

【0262】

縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の腫瘍細胞の免疫表現型は、しばしば、表面免疫グロブリンネガティブであるが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２およびＣＤ７９ａのようなＢ細胞関連抗原を発現する。ＣＤ１０およびＢＣＬ６はまた、共通して発現される。マーカーＣＤ１５、ＣＤ３０、上皮膜抗原（ＥＭＡ）に関連する形質細胞の発現は、稀である。ＢＣＬ６遺伝子配列およびｃ−ｍｙｃ遺伝子配列はまた、共通ではない。ＢＣＬ６超変異を伴うクローン性免疫グロブリンの再配列、免疫グロブリン可変領域および遺伝子の超変異の存在は、このリンパ腫が成熟胚中心または胚中心後のＢ細胞に由来することを示唆する。この疾患の腫瘍に関連すると考えられる染色体転座は、びまん性大細胞リンパ腫の他の形態において観察されるものと同様である。（Ｐ．Ｚｉｎｚａｎｉら、Ｐｒｉｍａｒｙ Ｍｅｄｉａｓｔｉｎａｌ Ｌａｒｇｅ Ｂ ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．４５５−４６０、Ｉｎ Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４））。

【0263】

縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫についての診断的評価としては、一般に、完全な理学的検査、完全な血液学的分析および生化学的分析、全身コンピュータ連動断層撮影ならびに骨髄生検が挙げられる。ガリウム−６７スキャニングは、病期分類、処置に対する応答および再発の評価のために有用な試験である。（Ｐ．Ｚｉｎｚａｎｉら、Ｐｒｉｍａｒｙ Ｍｅｄｉａｓｔｉｎａｌ Ｌａｒｇｅ Ｂ ｃｅｌｌ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．４５５−４６０、Ｉｎ Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４））。

【0264】

（５．５．２．１４．リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）／リンパ形質細胞性免疫細胞腫／ヴァルデンストレームマクログロブリン血症）
ＬＰＬ／リンパ形質細胞性免疫細胞腫／ヴァルデンストレームマクログロブリン血症は、通常、無痛性である節性リンパ腫であり、そしてしばしば、骨髄、リンパ節および脾臓を含む。これは、一般に、男性においてわずかに優勢である高齢者の疾患である。ほとんどの患者は、血清の過粘稠を生じるそれらの血清（＞３ｇ／ｄＬ）におけるモノクローナルＩｇＭパラプロテインを有する。腫瘍細胞は、形質細胞性の形態学を有する。ＬＰＬのサブセットは、ＰＡＸ５遺伝子座および免疫グロブリン重鎖遺伝子座を含む、第９染色体と第１４染色体との間の再発する転座によって特徴付けられる。ＬＰＬは、ＳＨＭおよび進行するＳＨＭによって特徴付けられ、そしてＧＣ後のＢ細胞に由来すると考えられる。（Ａ．Ｒｏｈａｔｉｎｅｒら、Ｌｙｍｐｈｏｐｌａｓｍａｃｙｔｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｍａ ａｎｄ Ｗａｌｄｓｔｒｏｅｍ’ｓ Ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ、ｐｐ．２６３−２７３、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）；Ｋ．Ｍａｃｌｅｎｎａｎ、Ｄｉｆｆｕｓｅ Ｉｎｄｏｌｅｎｔ Ｂ ｃｅｌｌ Ｎｅｏｐｌａｓｍｓ、ｐｐ．４３−４７、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）；Ａ．Ｌａｌら．、Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｆｉｎｅ Ｎｅｅｄｌｅ Ａｓｐｉｒａｔｉｏｎ ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．１８１−２２０、Ｗ．Ｆｉｎｎ、ら．（編）、Ｈｅｍａｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｏｒｗｅｌｌ、ＭＡ（２００４）を参照のこと）。

【0265】

この疾患の免疫表現型は、抗原ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２およびＣＤ７９ａを伴うＢ細胞の発現を示し、そしてＣＤ５、ＣＤ１０およびＣＤ２３の発現の欠如を示す。強力な表面免疫グロブリンおよびＣＤ２０の存在、ＣＤ５およびＣＤ２３の発現の欠如ならびに細胞質免疫グロブリンの存在は、この疾患を、慢性リンパ性白血病から区別するのを補助する特徴である。また、この疾患の特徴は、ｔ（９；１４）（ｐｌ３；ｑ３２）である。（Ａ．Ｒｏｈａｔｉｎｅｒ、ら、Ｌｙｍｐｈｏｐｌａｓｍａｃｙｔｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｍａ ａｎｄ Ｗａｌｄｓｔｒｏｅｍ’ｓ Ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ、ｐｐ．２６３−２７３、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）；Ｋ．Ｍａｃｌｅｎｎａｎ、Ｄｉｆｆｕｓｅ Ｉｎｄｏｌｅｎｔ Ｂ ｃｅｌｌ Ｎｅｏｐｌａｓｍｓ、ｐｐ．４３−４７、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）；Ｒ．Ｃｈａｇａｎｔｉら、Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．８０９−８２４、Ｉｎ Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。

【0266】

診断試験としては、代表的に、全血球算定、腎機能試験および肝臓機能試験、ＣＴスキャン、生検および骨髄の吸引、パラプロテインおよび血清の粘稠度を定量および特徴付けるためのタンパク質電気泳動が挙げられる。β２−ミクログロブリンの測定は、予後試験として使用される。（Ａ．Ｒｏｈａｔｉｎｅｒら、Ｌｙｍｐｈｏｐｌａｓｍａｃｙｔｉｃ Ｌｙｍｐｈｏｍａ ａｎｄ Ｗａｌｄｓｔｒｏｅｍ’ｓ Ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ、ｐｐ．２６３−２７３、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。

【0267】

（５．５．２．１５．ヌル急性リンパ芽球白血病）
ヌル急性リンパ芽球性白血病は、Ｂ細胞の特徴またはＴ細胞の特徴を欠くＡＬＬのサブセットである。白血病性芽球の表現型分析は、代表的なヌルＡＬＬパターンを示す（すなわち、ＣＤ１０（一般的なＡＬＬ抗原）陰性、強力なＨＬＡ−ＤＲ陽性およびＣＤ１９（Ｂ４）陽性）（Ｋａｔｚら（１９８８）ｂｌｏｏｄ ７１（５）：１４３８−４７を参照のこと）。

【0268】

（５．５．２．１６．ホジキンリンパ腫）
ホジキンリンパ腫は、通常、若年成人のリンパ節において生じる。それは、古典的なサブタイプおよびあまり一般的ではない結節性リンパ球性の優勢なサブタイプに分けられ得る。古典的な型は、ＳＨＭを示すが、進行するＳＨＭを示さず、そしてＧＣ Ｂ細胞遺伝子発現プロフィールを有さない。結節性リンパ球の優勢な型は、対照的に、ＳＨＭおよび進行するＳＨＭならびにＧＣ Ｂ細胞遺伝子発現プロフィールによって特徴付けられる。上記２つの型は、臨床的および生物学的に異なる一方で、それらは、良性な炎症細胞のバックグラウンド内における腫瘍性細胞の欠如などの特定の特徴を共有する。Ｂ．Ｓｃｈｎｉｔｚｅｒら、Ｈｏｄｇｋｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．２５９−２９０、Ｗ．ＦｉｎｎおよびＬ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（編）、Ｈｅｍａｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｏｒｗｅｌｌ、ＭＡ（２００４）。

【0269】

診察時における最も一般的な特徴は、通常、首におけるリンパ節の無痛性の腫脹であるが、ときとして鼡径部におけるリンパ節の無痛性の腫脹である。節の漸増および漸減もまた、この疾患の特徴である。Ｂ症状は、患者の約３分の１において観察される。単離された節外病変は、稀であり、そして播種が起きている症例において、節外病変は、約１０〜２０％の場合に観察される。（Ｐ．Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｆｅａｔｕｒｅｓ、ｐｐ．１８１−２０４、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋ、ら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）を参照のこと）。

【0270】

リード‐スターンバーグ（ＲＳ）細胞は、ホジキンリンパ腫の悪性細胞である。ＲＳ細胞およびそれらの改変体は、ＣＤ１５、ＣＤ２５、ＣＤ３０およびトランスフェリンレセプターを発現する。さらに、これらの細胞は、ポリクローナル性の細胞質免疫グロブリンを発現する。ホジキンリンパ腫のほとんどの症例において、ＲＳ細胞は、ＣＤ４５を発現しない（この疾患を非ホジキンリンパ腫と区別するのに役立つ特徴）。エプスタイン−バーウイルスは、約半分のホジキンリンパ腫症例のリード‐スターンバーグ細胞に存在することが示されているが、その役割は、不明確である。

【0271】

診断は、リンパ節生検によって最も頻繁に行われる。さらなる診断試験としては、全血球算定（しばしば、血液学的試験は、正常である；１Ｌあたり１．０×１０^９個未満の白血球数が、約２０％の症例で認められる）、赤血球沈降速度（しばしば、その疾患の進行期において高い）、生化学的試験（電解質、尿、クレアチニン、尿酸、カルシウム（高カルシウム血症は、稀であるが、存在する場合、広範な骨病変に付随する）、肝臓血液試験、乳酸デヒドロゲナーゼ（高いレベルは、しばしば、進行した疾患に付随する）、アルブミンおよびβ２−ミクログロブリン（β２−Ｍ）を含む）が挙げられる。リンパ管造影および胸部ｘ線ならびに胸、腹および骨盤のＣＴスキャンは、異常なリンパ節および節外病変の程度を同定するのに重要である。骨髄生検は、代表的に、骨髄病変は通常ではないので随意的と見なされ、そしてこのような生検の結果は、臨床的な管理または予後に影響しないようである。脾摘出は、通常、それが稀に管理に影響するので行われず、そしてＣＴまたはＭＲＩイメージングは、脾臓の状態についての情報を提供する。有意に高いレベルのｐ５５、ＴＮＦおよびｓＩＣＡＭ−１は、疾患の病期、症状の存在および完全奏功率に相関する。（Ｐ．Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｆｅａｔｕｒｅｓ、ｐｐ．１８１−２０４、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｂ．Ｈａｎｃｏｃｋら（編）、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２０００）；Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ａ．Ｎｅａｌら、Ｎｅａｌ，ＨｏｓｋｉｎおよびＯｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、共同出版、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ（２００３）；Ｒ．Ｓｔｅｉｎ、Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ、ｐｐ．２５３８−２５７１、Ｗｉｎｔｒｏｂｅ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、第１０版、Ｇ．Ｌｅｅら（編）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ（１９９９）を参照のこと）。

【0272】

（５．５．２．１７．多発性骨髄腫）
多発性骨髄腫は、形質細胞の悪性疾患である。腫瘍性細胞は、骨髄に位置し、そして溶骨性骨病変が、特徴的である。免疫グロブリン遺伝子座の１つと種々の他の遺伝子（例えば、サイクリンＤ１、サイクリンＤ３、ｃ−ＭＡＦ、ＭＭＳＥＴ（多発性骨髄腫ＳＥＴ−ドメインタンパク質）または線維芽細胞増殖因子レセプター３）との間の相互の染色体転座は、主要な発癌事象であると考えられる。多発性骨髄腫は、ＳＨＭ５によって特徴付けられ、そして起源と推定される細胞は、ＧＣ後Ｂ細胞である。多発性骨髄腫は、代表的に、まず症状（例えば、反復性の感染、疲労、疼痛および腎臓の問題）によって同定され、そして臨床的な試験によって確認される（例えば、Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．第６版．ＤｅＶｉｔａ，Ｖ．Ｔ．、Ｈｅｌｌｍａｎ，ＳおよびＲｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ａ．（編）．２００１ Ｌｉｐｐｉｎｃｏｒｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ １９１０６ ｐｐ．２４６５−２４９９を参照のこと）。

【0273】

特定の実施形態において本発明の組成物および方法による処置に対する候補である患者は、多発性骨髄腫の診断または疑いを確認するために、血液および／または尿についてのさらなる診断試験を受け得、その診断試験としては、全血球算定（ＣＢＣ）試験（ＣＢＣにおいて報告された細胞の型が当該分野において周知であるそれらの正常範囲内にあるか否かを決定する）、血液化学プロフィール（種々の血液成分（例えば、アルブミン、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、カルシウム、クレアチニンおよび乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ））のレベルが基準値から逸脱するか否かを決定する）が挙げられるが、これらに限定されない。β２−ミクログロブリン（Ｂ２−Ｍ）の血清レベルはまた、検査され得、そして骨髄腫細胞に関してＩＬ−６、増殖因子についてのマーカーを代理する。検尿は、尿中のタンパク質のレベルを測定するために使用され得る。電気泳動は、種々のタンパク質（血液（血清タンパク質電気泳動、またはＳＰＥＰと称される）または尿（尿電気泳動、またはＵＥＰと称される）中のＭタンパク質が挙げられる）のレベルを測定するために使用され得る。さらなる試験（免疫固定電気泳動（ＩＦＥ）または免疫電気泳動）もまた、異常な型の抗体タンパク質の存在についてのより具体的な情報を提供するために行われ得る。種々のタンパク質（特に、Ｍタンパク質）の変化および割合を評価することは、骨髄腫疾患の進行および処置レジメンに対する応答を追跡するために使用され得る。多発性骨髄腫は、骨髄腫腫瘍細胞によって分泌されるＭタンパク質の大きな増加によって特徴付けられる。

【0274】

骨に対する診断試験は、多発性骨髄腫の診断または疑いを確認するために行なわれ得、Ｘ線および他の画像化試験（骨（骨格）検索、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）およびコンピュータ連動断層撮影（ｃｏｍｐｕｔｅｄ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）（ＣＴ）としても公知であるコンピュータ連動断層撮影（ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ ａｘｉａｌ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）（ＣＡＴ）を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。それらの診断試験は、骨構造の変化を評価し得、そして骨における腫瘍の数および大きさを決定し得る。骨髄吸引または骨髄生検は、骨髄中の形質細胞の数の増加を検出するために使用され得る。吸引は、液体の骨髄サンプルを必要とし、そして生検は、固体骨組織サンプルを必要とする。両方の試験において、サンプルは、好ましくは、骨盤（寛骨）から採取される。胸骨（ｓｔｕｒｎｕｍ）（胸骨（ｂｒｅａｓｔ ｂｏｎｅ））はまた、骨髄の吸引のために使用され得る。

【0275】

多発性骨髄腫を有する患者は、代表的に、有効な処置レジメンの規定を補助する以下の３つの群に分類される。意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）は、代表的に、３ｇ／ｄＬ未満の血清Ｍタンパク質レベル、１０％未満の骨髄クローン形質細胞、他のＢ細胞障害の形跡がないことおよび関連した器官または組織の障害（例えば、高カルシウム血症（増大した血清カルシウムレベル）、増大した血清クレアチニンによって示される腎機能の障害、貧血、または骨病変）がないことによって特徴付けられる。無症候性の骨髄腫は、代表的に、第Ｉ期であり、そしてくすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）および無症候性多発性骨髄腫（ＩＭＭ）を含む。ＳＭＭは、３ｇ／ｄＬより大きいか、または３ｇ／ｄＬに等しい血清Ｍタンパク質によって特徴付けられ、そしてＩＭＭは、骨髄細胞の１０％より大きいか、または１０％に等しい骨髄クローン形質細胞によって特徴付けられる。症候性の骨髄腫は、血清および／または尿中のＭタンパク質によって特徴付けられ、そして骨髄クローン形質細胞または形質細胞腫の存在によって特徴付けられる第ＩＩ期の多発性骨髄腫、および関連した器官または組織の障害によって特徴付けられる第ＩＩＩ期の多発性骨髄腫を含む。

【0276】

骨硬化性骨髄腫は、稀なＰＯＥＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器巨大症、内分泌障害、単クローン性高ガンマグロブリン血症および皮膚病変）の構成要素である。ピークの発生数は、４０〜５０歳にある。全身的な特徴としては、骨格病変、＜５％の骨髄−形質細胞、正常なＣＢＣ、増加した血小板および臓器巨大症が挙げられる。ＣＳＦは、細胞の存在を伴わずに高いタンパク質を有する。Ｍ−タンパク質レベルは、低い（＜３ｇ／ｄｌ、中央値＝１．１ｇ／ｄｌ）；重鎖のクラスは、通常、αまたはγである；軽鎖のクラスは、通常、λである；稀な尿のモノクローナルタンパク質および臨時のクリオグロブリン血症。神経障害は、脱力（近位および遠位の両方）ならびに脱髄および長い遠位の潜伏時間（ｌｏｎｇ ｄｉｓｔａｌ ｌａｔｅｎｃｙ）を伴って５０％の患者で起こり、感覚の損失は、小線維よりも大線維において大きい。

【0277】

くすぶり型多発性骨髄腫患者は、一般に、数ヶ月／数年にわたって安定な疾患（貧血、骨病変、腎不全または高カルシウム血症を伴わない）を呈し、＞１０％の骨髄中の形質細胞およびモノクローナル血清タンパク質を有する。くすぶり型多発性骨髄腫についての判定基準は、多発性骨髄腫の診断に適合性であるが；しかし、進行過程の形跡は、存在しない。これらは、遅い進行を伴う症例であり、その腫瘍細胞量は、診断時に低く、そしてＳ期の骨髄形質細胞の割合は、低い（＜０．５％）。特徴的な臨床上の特徴としては、＞３ｇ／ｄＬの血清Ｍタンパク質レベルおよび／または≧１０％の骨髄形質細胞；貧血、腎不全、高カルシウム血症、溶解性骨病変の非存在が挙げられる。

【0278】

無痛性（または無症候性）の多発性骨髄腫は、通常ではスクリーニング検査室での試験後に、症状がない見込みによって診断される多発性骨髄腫である。無痛性の多発性骨髄腫は、くすぶり型骨髄腫と同様であるが、いくつかの骨病変および軽度の貧血を伴う。無症候性の多発性骨髄腫のほとんどの症例は、３年以内に顕性の多発性骨髄腫を発症する。診断上の判定基準は、以下を除いて多発性骨髄腫に対するものと同様である：骨病変がないことまたは１つの無症候性の溶解性病変（Ｘ線調査）；ＩｇＧについて＜３ｇ／ｄＬのＭ成分レベル、ＩｇＡについて２ｇ／ｄＬのＭ成分レベル、＜４ｇ／２４時間の尿軽鎖；＞１０ｇ／ｄｌのヘモグロビン、正常な血清カルシウム、＜２ｍｇ／ｄＬの血清クレアチニンおよび感染がないこと。

【0279】

（５．５．２．１８．孤立性形質細胞腫）
孤立性形質細胞腫は、良性の単クローン性高ガンマグロブリン血症から孤立性形質細胞腫〜多発性骨髄腫までの範囲である形質細胞の新生物の領域（ｓｐｅｃｔｒｕｍ）の１つである。全ての孤立性形質細胞腫の症例の約７０％が、実際に、多発性骨髄腫を生じる。これらの疾患は、特徴的なパラプロテインを産生するＢ細胞の増殖によって特徴付けられる。孤立性形質細胞腫は、孤立部位（通常は、単一の骨または髄外組織の部位）におけるクローン形質細胞の増殖を生じる。孤立性形質細胞腫の診断上の判定基準としては、組織学的に確認された単一の病変、通常の骨生検、ネガティブな骨検索、貧血を伴わないこと、正常なカルシウムおよび正常な腎機能が挙げられる。ほとんどの症例は、最小限に上昇した血清Ｍ−タンパク質（パラプロテイン）を示す。診断における年齢中位数は、５０〜５５歳（多発性骨髄腫についての年齢中位数よりも約５〜１０歳若い）である。（Ｃ．Ｗｉｌｓｏｎ、Ｔｈｅ Ｐｌａｓｍａ Ｃｅｌｌ Ｄｙｃｒａｓｉａｓ、ｐｐ．１１３−１４４、Ｉｎ Ｗ．ＦｉｎｎおよびＬ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（編）、Ｈｅｍａｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｏｒｗｅｌｌ、ＭＡ（２００４）、Ｓ．Ｃｈａｇａｎｔｉら、Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ｐｐ．８０９−８２４、Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、Ｐ．Ｍａｕｃｈら．（編）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ（２００４）を参照のこと）。

【0280】

形質細胞腫の免疫表現型的特徴および遺伝的特徴は、多発性骨髄腫に類似するようである。

【0281】

（５．５．２．１９．Ｌ鎖病／Ｌ鎖沈着症（ＬＣＤＤ））
ＬＣＤＤは、組織に沈着する免疫グロブリン軽鎖（通常は、κ軽鎖）の過剰合成によって引き起こされる形質細胞の悪液質障害である。患者は、一般に、器官の機能不全、衰弱、疲労および体重減少を伴う。ＬＣＤＤの症例の約８０％において、モノクローナル免疫グロブリンが、検出される。免疫蛍光技術を使用したモノクローナルκ軽鎖の検出は、過剰なバックグラウンド染色を与えるという軽鎖の傾向によって制限され、それによって、超微細構造の免疫金標識化が、必要とされ得る。（Ｃ．Ｗｉｌｓｏｎ、Ｔｈｅ Ｐｌａｓｍａ Ｃｅｌｌ Ｄｙｅｒ ａｓｉａｓ、ｐｐ．１１３−１４４、Ｗ．ＦｉｎｎおよびＬ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（編）、Ｈｅｍａｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｏｒｗｅｌｌ、ＭＡ（２００４）を参照のこと）。

【0282】

（５．５．２．２０．形質細胞性白血病（ＰＣＬ））
ＰＣＬ（形質細胞の悪液質）は、多発性骨髄腫の稀であり攻撃的な変異形である。形質細胞性白血病についての判定基準は、１Ｌあたり２×１０^９個より多い末梢血の絶対的な形質細胞数、または白血球の２０％より多い形質細胞である。フローサイトメトリーによる細胞質軽鎖の拘束（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ）を用いたＣＤ１３８^＋集団の存在の決定は、ＰＣＬを形質細胞の特徴を有するリンパ新生物から区別する。ＰＣＬ細胞はまた、表面の軽鎖発現およびＣＤ１９発現の欠如、ならびにＣＤ４５の発現がないことまたはＣＤ４５の弱い発現のいずれかによって特徴付けられる。ＰＣＬの症例の約５０％は、ＣＤ２０を発現し、そして約５０％は、ＣＤ５６の発現を欠く。ＰＣＬ患者において観察される遺伝的異常性は、多発性骨髄腫患者について観察されるものと同じであるが、その異常性は、ＰＣＬにおいてより高い頻度で見出される。（Ｃ．Ｗｉｌｓｏｎ、Ｔｈｅ Ｐｌａｓｍａ Ｃｅｌｌ Ｄｙｃｒａｓｉａｓ、ｐｐ．１１３−１４４、Ｗ．ＦｉｎｎおよびＬ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（編）、Ｈｅｍａｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｏｒｗｅｌｌ、ＭＡ，（２００４）を参照のこと）。

【0283】

形質細胞性白血病は、２種の形態を有する：初期診断が骨髄腫の白血病の段階に基づく場合、一次形態が存在し、そうでない場合、それは、二次形態である。一次形質細胞性白血病は、より若い年齢、肝脾腫大、リンパ節症およびより少ない溶解性骨病変を伴うが、二次形態よりも予後が不良である。形質細胞白血病患者の末梢血は、２０％より多い形質細胞を有し、１ｍｌあたり２０００個以上の絶対数を有する。

【0284】

（５．５．２．２１．意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ））
ＭＧＵＳは、電気泳動的に均質な免疫グロブリンまたは良性のＭ−成分の存在によって特徴付けられる、比較的一般的な状態である。この状態の出現は、年齢とともに増加するようである。Ｍ−成分を保有するほとんどの個体は、悪性形質細胞の悪液質（例えば、多発性骨髄腫）を発症しない。しかし、この状態を有するいくつかの個体は、悪性の状態を伴った。症状がある場合、患者は、腫脹した肝臓または脾臓、および胸膜の神経障害（ｐｌｅｕｒｏｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）を有し得る。（Ｊ．Ｆｏｅｒｓｔｅｒ、Ｐｌａｓｍａ Ｃｅｌｌ Ｄｙｃｒａｓｉａｓ：Ｇｅｎｅｒａｌ Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ、ｐｐ．２６１２−２６３０、Ｗｉｎｔｒｏｂｅ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、第１０版、Ｇ．Ｌｅｅら（編）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ（１９９９）を参照のこと）。

【0285】

ＭＧＵＳは、末梢血中の循環するモノクローナル形質細胞の数の増加の存在によって、多発性骨髄腫と鑑別され得る。Ｍ−成分の血清学的特徴は、他の形質細胞の悪液質状態と同一であるが、しかし、Ｍ−成分の総濃度は、通常、３０ｇ／Ｌ未満である。パラプロテインは、通常、ＩｇＧであるが；しかし、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭを含む複数のパラプロテインが、存在し得る。個々の免疫グロブリンクラスの各々の相対量は、代表的に、正常な血清において見出される量に比例する。タンパク質血症またはタンパク尿は、稀である。血液および尿中のＭ−タンパク質レベルの連続測定ならびに臨床上の特徴および実験室的な特徴の連続したモニタリング（タンパク質電気泳動を含む）は、ＭＧＵＳを早期の形質細胞の悪液質から区別する最も信頼に足る方法である。Ｗｉｎｔｒｏｂｅ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、第１０版、Ｇ．Ｌｅｅら（編）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ（１９９９）。

【0286】

（５．５．２．２２．成熟Ｂ細胞の悪性疾患）
本発明者らは、本発明の抗ＣＤ１９組成物が成熟Ｂ細胞を枯渇させ得ることを示した。したがって、別の局面として、本発明は、成熟Ｂ細胞の悪性疾患を処置するために実施され得、これらの悪性疾患としては、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）（胚中心のＢ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、および３型ＤＬＢＣＬを含む）、古典的および結節性リンパ球優勢型を含むホジキンリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）、胃粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫を含む辺縁帯リンパ腫、ならびに慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（免疫グロブリン変異型ＣＬＬおよび免疫グロブリン非変異型ＣＬＬを含む）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0287】

（５．５．２．２３．プレＢ細胞の悪性疾患）
さらに、ＣＤ１９は、Ｂ細胞の発達において、例えば、ＣＤ２０よりも早く発現され、したがってＣＤ１９は、例えば、骨髄におけるプレＢ細胞および未熟Ｂ細胞の悪性疾患を処置するために、特に研究される。代表的なプレＢ細胞および未熟Ｂ細胞の悪性疾患としては、マントル細胞リンパ腫、前Ｂ細胞性急性リンパ性白血病、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫、およびＣＤ１９発現によって特徴付けられる他の悪性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。

【0288】

（５．５．３．サンプルまたは被験体におけるＣＤ１９密度の決定）
必要とされないが、ＣＤ１９密度についてのアッセイは、患者の診断をさらに特徴付けるために利用され得る。細胞に対する抗体結合の密度を決定する方法は、当業者に公知である（例えば、Ｓａｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １６５：６６３５−６６４３（２０００）（これは、特定のＣＤ抗原の細胞表面密度を評価する方法を開示する）を参照のこと）。他の標準的な分析としては、スキャッチャード分析が挙げられる。例えば、上記抗体またはフラグメントは、単離され得、放射標識され得、そして放射標識された抗体の特定の活性が、決定され得る。次いでその抗体は、ＣＤ１９を発現する標的細胞と接触される。その細胞に関連する放射活性は、測定され得、そしてその放射活性は、上記特定の活性に基づき得、その細胞に結合した抗体または抗体フラグメントの量は、決定され得る。

【0289】

あるいは、蛍光細胞分離（ＦＡＣＳ）分析が、使用され得る。一般に、上記抗体または抗体フラグメントは、ＣＤ１９を発現する標的細胞に結合される。次いで、上記抗体に結合する第２の試薬（例えば、蛍光色素標識された抗免疫グロブリン抗体）が、添加される。次いで、蛍光色素染色は、上記細胞に対する抗体または抗体フラグメントの結合の密度を決定するために、測定および使用され得る。

【0290】

別の適切な方法として、上記抗体または抗体フラグメントは、検出可能な標識（フルオロフォア）によって直接標識され得、そして標的細胞に結合され得る。タンパク質に対する標識の比が、決定され、そしてその比は、標準的なビーズ（それに結合した標識の既知の量を伴う）と比較される。その細胞に結合した標識の量と、既知の標準との比較は、その細胞に結合した抗体の量を算出するために使用され得る。

【0291】

なお別の局面において、本発明は、サンプルまたは個体中のＣＤ１９の存在および／または密度を、インビトロまたはインビボで検出するための方法を提供する。これはまた、疾患および処置の効果をモニタリングするため、ならびに投与される抗体の用量を決定および調整するために有用であり得る。上記インビボの方法は、画像化技術（例えば、ＰＥＴ（陽電子断層撮影法）またはＳＰＥＣＴ（シングルフォトンエミッションコンピュータ連動断層撮影））を使用して行なわれ得る。あるいは、共有結合性キレート剤を使用してインジウムによって抗ＣＤ１９抗体を、標識し得る。得られた抗体は、ＺＥＶＡＬＩＮ^ＴＭ（インジウム標識された抗ＣＤ２０ ｍＡｂ）（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）がＣＤ２０抗原を画像化するために使用される方法と同じく、標準的なγ線カメラを使用して画像化され得る。

【0292】

１つの実施形態において、上記インビボの方法は、試験されるサンプル（必要に応じて、コントロールサンプルを伴う）とヒト本発明の抗ＣＤ１９抗体とを、本発明の抗体とヒトＣＤ１９抗原との間の複合体の形成を可能にする条件下で接触させることによって行われ得る。次いで、複合体形成は、（例えば、ＦＡＣＳ分析またはウェスタンブロッティングを使用して）検出される。試験サンプルを伴うコントロールサンプルを使用する場合、複合体は、両方のサンプルにおいて検出され、そしてそのサンプル間の複合体の形成における任意の統計的に有意な違いは、その試験サンプルにおけるヒトＣＤ１９の存在を示す。

【0293】

他の実施形態において、平均蛍光強度が、ＣＤ１９密度の測定として使用され得る。このような実施形態において、Ｂ細胞は、患者から取り出され、そしてそのＢ細胞は、蛍光標識によって標識されたＣＤ１９抗体によって染色され、そしてその蛍光強度が、フローサイトメトリーを使用して測定される。蛍光強度は、Ｂ細胞１個あたりの平均強度として測定および表わされ得る。このような方法を使用して、ＣＤ１９密度を示す平均蛍光強度は、本発明の方法および組成物を使用した処置の前後における患者に関して比較され得るか、または患者と、Ｂ細胞上のｈＣＤ１９の正常レベルとの間で比較され得る。

【0294】

Ｂ細胞上のＣＤ１９発現の密度が決定されている患者において、ＣＤ１９の密度は、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体と一緒に使用される、投薬量ならびに／または処置レジメンの決定および／または調整に影響し得る。例えば、ＣＤ１９の密度が高い場合、ヒトにおいてＡＤＣＣを効率的に媒介しない抗ＣＤ１９抗体を使用することが可能であり得る。特定の実施形態において、本発明の組成物および方法を使用して処置される患者が低いＣＤ１９密度を有する場合、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体のより高い投薬量が、使用され得る。他の実施形態において、本発明の組成物および方法を使用して処置される患者が低いＣＤ１９密度を有する場合、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体の低い投薬量が、使用され得る。特定の実施形態において、本発明の組成物および方法を使用して処置される患者が高いＣＤ１９密度を有する場合、本発明の組成物および方法の抗ＣＤ１９抗体のより低い投薬量が、使用され得る。特定の実施形態において、ＣＤ１９密度は、患者におけるＣＤ２０密度と比較され得るか、ＣＤ１９密度は、ヒトまたは特定の患者集団についての平均ＣＤ１９密度と比較され得るか、またはＣＤ１９密度は、治療前またはＢ細胞の疾患または障害の発症前における患者のＣＤ１９レベルと比較され得る。特定の実施形態において、本発明の組成物および方法を使用して処置される患者は、ＣＤ１９がＢ細胞の表面上に存在するＢ細胞の悪性疾患を有する。

【0295】

（５．６．免疫療法プロトコル）
治療レジメン／治療プロトコル（本明細書中で「抗ＣＤ１９免疫療法」と称される）において使用される抗ＣＤ１９抗体組成物は、むき出しの抗体、免疫結合体および／または融合タンパク質であり得る。本発明の組成物は、単剤療法としてか、または他の治療剤またはレジメンと組み合わせて使用され得る。その抗ＣＤ１９抗体または免疫結合体は、１種以上の治療剤の投与の前か、その投与と同時か、またはその投与の後に投与され得る。治療レジメンと本発明の組成物との組み合わせにおいて使用され得る治療剤としては、細胞の機能を阻害もしくは妨害する任意の物質および／または細胞の破壊を引き起こす任意の物質が挙げられる。例としては、放射性同意体、化学療法剤および毒素（例えば、細菌起源、真菌起源、植物起源または動物起源の酵素的に活性な毒素あるいはそのフラグメント）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0296】

本明細書中に記載される治療レジメン、または任意の所望の処置レジメンは、ネイティブなＣＤ１９抗原に加えてか、それに代えてヒトＣＤ１９抗原を発現するトランスジェニック動物モデル（例えば、第６．２節において下に記載されるマウスモデル）を使用して、効力について試験され得る。したがって、抗ＣＤ１９抗体処置レジメンは、ヒトに対する投与前に効力を決定するために、動物モデルにおいて試験され得る。

【0297】

本発明の抗ＣＤ１９抗体、組成物および方法は、Ｂ細胞の疾患を処置するために実施され得、その疾患としては、Ｂ細胞の悪性疾患が挙げられる。用語「Ｂ細胞の悪性疾患」は、Ｂ細胞系統の細胞に由来する任意の悪性疾患を含む。例示のＢ細胞の悪性疾患としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：Ｂ細胞サブタイプの非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）（低度悪性群／濾胞性ＮＨＬ、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中等度悪性群／濾胞性ＮＨＬ、中等度悪性群のびまん性ＮＨＬ、高度悪性群の免疫芽球性ＮＨＬ、高度悪性群のリンパ芽球性ＮＨＬ、高度悪性群の小さい大細胞のＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫および大きな病変のＮＨＬを含む）；バーキットリンパ腫；多発性骨髄腫；前Ｂ細胞性急性リンパ性白血病および早期Ｂ細胞前駆体に由来する他の悪性疾患；一般的な急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（免疫グロブリン変異型ＣＬＬおよび免疫グロブリン非変異型ＣＬＬを含む）；ヘアリーセル白血病；ヌル急性リンパ芽球性白血病；ヴァルデンストレームマクログロブリン血症；びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）（胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、および３型ＤＬＢＣＬを含む）；前リンパ性白血病；Ｌ鎖病；形質細胞腫；骨硬化性骨髄腫；形質細胞性白血病；意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）；くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）；無症候性多発性骨髄腫（ＩＭＭ）；古典的および結節性リンパ球優勢型を含むホジキンリンパ腫；リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；ならびに胃粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫を含む辺縁帯リンパ腫。

【0298】

本発明者らは、本発明の抗体および組成物が成熟Ｂ細胞を枯渇させ得ることを示した。したがって、別の局面として、本発明は、成熟Ｂ細胞（すなわち、その細胞表面上にＩｇを発現する）の悪性疾患を処置するために使用され得、これらの悪性疾患としては、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）（胚中心のＢ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、および３型ＤＬＢＣＬを含む）、古典的および結節性リンパ球優勢型を含むホジキンリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）、胃粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫を含む辺縁帯リンパ腫、ならびに慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（免疫グロブリン変異型ＣＬＬおよび免疫グロブリン非変異型ＣＬＬを含む）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0299】

さらに、ＣＤ１９は、例えば、ＣＤ２０よりも、Ｂ細胞の発達においてより早く発現され、したがって、例えば、骨髄における、プレＢ細胞および未熟Ｂ細胞（すなわち、その細胞表面上にＩｇを発現しない）の悪性疾患を処置するのに特に適している。例示のプレＢ細胞および未熟Ｂ細胞の悪性疾患としては、急性リンパ芽球性白血病が挙げられるが、これに限定されない。

【0300】

他の特定の実施形態において、本発明は、結節外の腫瘍を処置するために実施され得る。

【0301】

（５．６．１．抗ＣＤ１９免疫療法）
本発明に従って、「抗ＣＤ１９免疫療法」は、任意の本明細書中に記載される治療レジメンに従う任意の本発明の抗ＣＤ１９抗体の投与を包含する。その抗ＣＤ１９抗体は、むき出しの抗体としてか、または免疫結合体もしくは融合タンパク質として投与され得る。

【0302】

抗ＣＤ１９免疫療法は、Ｂ細胞の悪性疾患の処置のための単剤治療として、抗ＣＤ１９抗体の投与を包含する。抗ＣＤ１９免疫療法は、Ｂ細胞の悪性疾患から生じる初期の疾患を処置する方法を包含する。抗ＣＤ１９免疫療法は、Ｂ細胞の悪性疾患を処置する方法を包含し、その抗ＣＤ１９抗体は、ＡＤＣＣを媒介する。抗ＣＤ１９免疫療法は、Ｂ細胞の悪性疾患を処置する方法を包含し、その抗ＣＤ１９抗体は、患者がその悪性疾患に対する任意の処置を受容する前に投与される、その治療は、化学療法でも、放射化学ベースの治療でもまたは外科的治療でもよい。

【0303】

好ましい実施形態において、Ｂ細胞の悪性疾患を有するヒト被験体は、好ましくはヒトのＡＤＣＣを媒介するヒト抗体またはヒト化抗体を投与することによって処置され得る。初期の疾患または単剤療法の場合において、好ましくはＡＤＣＣを媒介する任意の抗ＣＤ１９抗体（マウス抗体およびキメラ抗体を含む）は、ヒト被験体において使用され得るが；しかし、ヒト抗体およびヒト化抗体が、好ましい。

【0304】

ＩｇＧ１ヒトアイソタイプまたはＩｇＧ３ヒトアイソタイプの抗体が、治療に好ましい。しかし、ＩｇＧ２ヒトアイソタイプまたはＩｇＧ４ヒトアイソタイプが、使用され得るが、但しそれらは、ヒトのＡＤＣＣを媒介する。このようなエフェクター機能は、エフェクター細胞による標的細胞の溶解をインビトロまたはインビボで媒介する目的の抗体の能力を測定することによって評価され得る。

【0305】

使用される抗体の用量は、循環するＢ細胞を枯渇させるのに十分であるべきである。上記治療の進行は、血液サンプルを分析することによって患者においてモニタリングされ得る。臨床的改善の他の徴候は、治療をモニタリングするために使用され得る。

【0306】

本発明の組成物および方法と組み合わせて使用され得るＢ細胞の枯渇を測定するための方法は、当該分野において周知であり、そしてその方法としては、以下の実施形態が挙げられるが、これらに限定されない。１つの実施形態において、循環するＢ細胞の枯渇は、Ｂ細胞の量を規定するための、Ｂ細胞に結合する抗ＣＤ１９抗体以外の試薬を使用したフローサイトメトリーによって測定され得る。他の実施形態において、血中の抗体レベルは、標準的な血清分析を使用してモニタリングされ得る。このような実施形態において、Ｂ細胞の枯渇は、Ｂ細胞によって産生されることが公知である抗体に対して量を規定することによって、間接的に測定される。次いでその抗体のレベルは、Ｂ細胞の枯渇および／または機能的な枯渇を決定するためにモニタリングされる。別の実施形態において、Ｂ細胞の枯渇は、Ｂ細胞を同定するための免疫化学的染色によって測定され得る。このような実施形態において、患者組織から抽出されたＢ細胞は、顕微鏡のスライドガラス上に配置され得、標識され得、そして存在または非存在について試験され得る。関連する実施形態において、比較は、Ｂ細胞の存在における違いを決定するために、治療前に抽出されたＢ細胞と、治療後に抽出されたＢ細胞との間で行なわれる。

【0307】

腫瘍量は、本発明の組成物および方法と組み合わせて測定ならびに使用され得る。腫瘍量を測定するための方法は、当該分野において周知であり、そしてとしては、以下の実施形態が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、ＰＥＴスキャンが、代謝活性を測定し、そして腫瘍を示すより高い活性の領域を同定するために、使用され得る。ＣＴスキャンおよびＭＲＩはまた、腫瘍の存在および大きさについてを試験する軟部組織ために使用され得る。他の実施形態において、骨スキャンは、腫瘍の体積および位置を測定するために使用され得る。なお他の実施形態において、腫瘍量は、ドップラー技術（例えば、超音波）を使用して腫瘍の中および外への血流を試験することによって測定され得る。このような実施形態において、患者の適切な組織における時間にわたる血流の変化または正常な血流からの偏移は、腫瘍量についての推定値を算出するために使用され得る。腫瘍量を測定するためのこのような方法は、本発明の処置の方法の前後に使用され得る。

【0308】

本発明の方法の好ましい実施形態において、Ｂ細胞は、枯渇し、そして／または腫瘍量は、減少する一方で、ＡＤＣＣ機能は、維持される。

【0309】

上記抗ＣＤ１９抗体が単剤療法として投与される本発明の実施形態において、本発明は、異なる処置レジメンの使用を企図する
本発明の特定の局面に従って、本発明の組成物および方法において使用される抗ＣＤ１９抗体は、むき出しの抗体である。関連する実施形態において、使用されるむき出しの抗ＣＤ１９抗体の用量は、患者の体重１ｋｇあたり、少なくとも約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１ｍｇ、１．５ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、３．５ｍｇ、４ｍｇ、４．５ｍｇ、５ｍｇ、５．５ｍｇ、６ｍｇ、６．５ｍｇ、７ｍｇ、７．５ｍｇ、８ｍｇ、８．５ｍｇ、９ｍｇ、９．５ｍｇ、１０ｍｇ、１０．５ｍｇ、１１ｍｇ、１１．５ｍｇ、１２ｍｇ、１２．５ｍｇ、１３ｍｇ、１３．５ｍｇ、１４ｍｇ、１４．５ｍｇ、１５ｍｇ、１５．５ｍｇ、１６ｍｇ、１６．５ｍｇ、１７ｍｇ、１７．５ｍｇ、１８ｍｇ、１８．５ｍｇ、１９ｍｇ、１９．５ｍｇ、２０ｍｇ、２０．５ｍｇである。特定の実施形態において、使用されるむき出しの抗ＣＤ１９抗体の用量は、患者の体重１ｋｇあたり、少なくとも約１ｍｇ〜１０ｍｇ、５ｍｇ〜１５ｍｇ、１０ｍｇ〜２０ｍｇ、または１５ｍｇ〜２５ｍｇである。特定の実施形態において、使用されるむき出しの抗ＣＤ１９抗体の用量は、患者の体重１ｋｇあたり、少なくとも約１ｍｇ〜２０ｍｇ、３ｍｇ〜１５ｍｇ、または５ｍｇ〜１０ｍｇである。好ましい実施形態において、使用されるむき出しの抗ＣＤ１９抗体の用量は、患者の体重１ｋｇあたり、少なくとも約５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、または１０ｍｇである。

【0310】

特定の実施形態において、上記用量は、４〜８週間連続して毎週投与される、約３７５ｍｇ／ｍ^２の抗ＣＤ１９抗体を含む。特定の実施形態において、上記用量は、４〜８週間連続して毎週投与される患者の体重１ｋｇあたり、少なくとも約１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、または１５ｍｇである。

【0311】

上に記載される抗ＣＤ１９抗体の例示の用量は、第５．４．３節に記載されるように投与され得る。１つの実施形態において、上記用量は、単一用量の注射である。他の実施形態において、上記用量は、時間の期間にわたって投与される。他の実施形態において、上記用量は、時間の期間にわたって、複数回投与される。上記時間の期間は、数日間、数ヶ月間または数週間で測定され得る。抗ＣＤ１９抗体の複数用量は、毒性の副作用とバランスをとりつつ治療的利益を達成するのに適した間隔で投与され得る。例えば、複数用量使用される場合、抗体による反復処置の前における患者の単球数を回復させる時間間隔をあけることが、好ましい。この投薬レジメンは、その単球集団が患者におけるＡＤＣＣ機能を反映するので、処置の効率を最適化する。

【0312】

特定の実施形態において、本発明の組成物は、ヒト患者に対して、その患者が治療に応答する限り投与される。他の実施形態において、本発明の組成物は、ヒト患者に対して、その患者の疾患が進行しない限り投与される。関連する実施形態において、本発明の組成物は、ヒト患者に対して、患者の疾患が、進行しないか、または時間の期間にわたって進行なくなるまで投与され、次いでその患者は、その疾患が、再発しないか、または再び進行し始めない限り本発明の組成物を投与されない。例えば、患者は、その患者が疾患の進行についてモニタリングされる時間の間、約４〜８週間にわたって任意の上記用量によって処置され得る。疾患の進行が、停止または逆転する場合、その患者は、患者が再発する（すなわち、その処置される疾患が、再発または進行する）まで、本発明の組成物を投与されない。この再発または進行の際に、その患者は、最初に使用されたものと同じ投薬レジメンを用いてか、または上に記載される他の用量を使用して、再び処置され得る。

【0313】

特定の実施形態において、本発明の組成物は、負荷用量として投与され得、次いで時間の期間にわたって、複数のより低い用量（維持用量）として投与され得る。このような実施形態において、その用量は、時期が選ばれ得、そしてその量は、有効なＢ細胞の枯渇を維持するように調整され得る。好ましい実施形態において、上記負荷用量は、患者の体重１ｋｇあたり、約１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、または１８ｍｇであり、そして上記維持用量は、患者の体重１ｋｇあたり、少なくとも約５ｍｇ〜１０ｍｇである。好ましい実施形態において、上記維持用量は、７日毎、１０日毎、１４日毎または２１日毎の間隔で投与される。上記維持用量は、毒性が出現するまでか、血小板数が減少するまでか、疾患の進行が存在しなくなるまでか、その患者がその薬物に対する免疫応答を起こすまでか、または疾患が終末期に進行するまで、無期限に継続され得る。なお他の実施形態において、本発明の組成物は、その疾患が終末期に進行するまでヒト患者に投与される。

【0314】

患者の循環する単球レベルが処置レジメンの一部としてモニタリングされる本発明の実施形態において、投与される抗ＣＤ１９抗体の用量は、単球数の回復を可能にするために、間隔を空けられ得る。例えば、本発明の組成物は、８日毎、９日毎、１０日毎、１１日毎、１２日毎、１３日毎、１４日毎、１５日毎、１６日毎、１７日毎、１８日毎、１９日毎、２０日毎、２１日毎、２２日毎、２３日毎、２４日毎、２５日毎、２６日毎、２７日毎、２８日毎、２９日毎、または３０日毎の間隔で投与され得る。

【0315】

抗ＣＤ１９抗体が、毒素に結合体化されるか、または毒素と組み合わせて投与される本発明の実施形態において、当業者は、抗ＣＤ１９抗体の用量が毒素用量に基づいて調整され得ること、およびその毒素用量が使用される特定の型の毒素に依存することを認識する。代表的に、毒素が使用される場合、抗ＣＤ１９抗体の用量は、むき出しの抗ＣＤ１９抗体によって使用される用量よりも低い。適切な用量は、当該分野において周知である技術を使用して、特定の毒素について決定され得る。例えば、用量範囲の研究が、毒素と一緒に投与されるかまたは毒素に結合体化される場合の、抗ＣＤ１９抗体の最大許容投与量を決定するために行われ得る。

【0316】

抗ＣＤ１９抗体が、放射線療法剤に結合体化されるか、または放射線療法剤と組み合わせて投与される本発明の実施形態において、その抗ＣＤ１９抗体の用量は、使用される放射線療法剤に依存して変動する。特定の好ましい実施形態において、２工程のプロセスが、使用される。第１に、ヒト患者は、むき出しの抗ＣＤ１９抗体を含む組成物を投与され、そして約６、７、８、９、または１０日後の少量の放射線療法剤が、投与される。第２に、一旦その低用量療法の耐性、分布およびクリアランスが決定されると、その患者は、上記むき出しの抗ＣＤ１９抗体の用量を投与され、次いで治療量の放射線療法剤が、投与される。このような処置レジメンは、ＺＥＶＡＬＩＮ^ＴＭ（インジウム標識された抗ＣＤ２０ ｍＡｂ）（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）またはＢＥＸＸＡＲ^ＴＭ（ＧＳＫ、Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）を使用する非ホジキンリンパ腫の処置について承認されているものと同様である。

【0317】

（５．６．２．化学療法剤との組み合わせ）
抗ＣＤ１９免疫療法（むき出しの抗体、免疫結合体、または融合タンパク質を使用する）は、他の治療と組み合わせて使用され得、その治療としては、化学療法単独、放射免疫治療（ＲＩＴ）単独、化学療法および外部照射（集学的治療（ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｍｏｄａｌｉｔｙ ｔｈｅｒａｐｙ）、ＣＭＴ）単独、または集学的放射免疫治療（ＣＭＲＩＴ）単独、あるいはそれらの組み合わせなどが挙げられるが、これらに限定されない。特定の好ましい実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体治療は、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド−ヒドロキシドキソルビシン−オンコビン（ビンクリスチン）−プレドニゾロン）（非ホジキンリンパ腫を処置するための最も一般的な化学療法レジメン）と組み合わせて適用され得る。本明細書中で使用される場合、用語「と組み合わせて適用される」は、上記抗ＣＤ１９免疫療法が使用される他の治療の前、その間、またはその後に投与され得ることを意味する。

【0318】

特定の実施形態において、上記抗ＣＤ１９免疫療法は、細胞傷害性の放射性核種または放射線療法の同位体と組み合わせてである。例えば、α線放出同位体（例えば、^２２５Ａｃ、^２２４Ａｃ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２１２Ｐｂ、^２２４Ｒａ、または^２２３Ｒａ）である。あるいは、上記細胞傷害性の放射性核種は、β線放出同位体（例えば、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^９０Ｙ、^１３１Ｉ、^６７Ｃｕ、^１７７Ｌｕ、^１５３Ｓｍ、^１６６Ｈｏ、または^６４Ｃｕ）であり得る。さらに、上記細胞傷害性の放射性核種は、オージェ電子および低エネルギー電子を放出し得、そしてその放射性核種としては、同位体^１２５Ｉ、^１２３Ｉまたは^７７Ｂｒが挙げられ得る。他の実施形態において、上記同位体は、^１９８Ａｕ、^３２Ｐなどであり得る。特定の実施形態において、被験体に投与される放射性核種の量は、約０．００１ｍＣｉ／ｋｇと約１０ｍＣｉ／ｋｇとの間である。

【0319】

いくつかの好ましい実施形態において、被験体に投与される放射性核種の量は、約０．１ｍＣｉ／ｋｇと約１．０ｍＣｉ／ｋｇとの間である。他の好ましい実施形態において、被験体に投与される放射性核種の量は、約０．００５ｍＣｉ／ｋｇと０．１ｍＣｉ／ｋｇとの間である。

【0320】

特定の実施形態において、上記抗ＣＤ１９免疫療法は、化学毒素または化学療法剤との組み合わせである。好ましくは、上記化学毒素または化学療法剤は、エンジイン（例えば、カリチェアミシンおよびエスペラミジン）；デュオカルマイシン、メトトレキセート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ＡＲＡ−Ｃ、ビンデシン、マイトマイシン Ｃ、シスプラチン、エトポシド、ブレオマイシンおよび５−フルオロウラシルからなる群より選択される。

【0321】

上記抗ＣＤ１９免疫療法との併用療法において使用され得る適切な化学毒素または化学療法剤としては、エンジインファミリーのメンバーの分子（例えば、カリチェアミシンおよびエスペラミジン）である。化学毒素はまた、デュオカルマイシン（例えば、米国特許第５，７０３，０８０号および米国特許第４，９２３，９９０号を参照のこと）、メトトレキセート、ドキソルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ＡＲＡ−Ｃ、ビンデシン、マイトマイシンＣ、シスプラチン、エトポシド、ブレオマイシンおよび５−フルオロウラシルからなる群より採択され得る。化学療法剤の例としてはまた、アドリアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソテール（ドセタキセル）、ブスルファン、サイトキサン、タキソール、メトトレキセート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトザントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン（Ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン系、エスペラミジン系（米国特許第４，６７５，１８７号を参照のこと）、メルファランおよび他の関連するナイトロジェンマスタードが挙げられる。

【0322】

他の実施形態において、例えば、「ＣＶＢ」（１．５ｇ／ｍ^２のシクロホスファミド、２００〜４００ｍｇ／ｍ^２のエトポシドおよび１５０〜２００ｍｇ／ｍ^２のカルムスチン）が、本発明の併用療法において使用され得る。ＣＶＢは、非ホジキンリンパ腫を処置するために使用されるレジメンである。Ｐａｔｔｉら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．５１：１８（１９９３）。他の適切な併用化学療法レジメンは、当業者に周知である。例えば、Ｆｒｅｅｄｍａｎら、「Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ」、ＣＡＮＣＥＲ ＭＥＤＩＣＩＮＥ、第２巻、第３版、Ｈｏｌｌａｎｄら（編）、ｐｐ．２０２８−２０６８（Ｌｅａ ＆ Ｆｅｂｉｇｅｒ １９９３）を参照のこと。例示として、中等度悪性群の非ホジキンリンパ腫の処置のための第１世代の化学療法レジメンとしては、Ｃ−ＭＯＰＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プロカルバジンおよびプレドニゾン）およびＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）が挙げられる。有用な第２世代の化学療法レジメンは、ｍ−ＢＡＣＯＤ（メトトレキセート、ブレオマイシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、デキサメタゾンおよびロイコボリン）であり、一方で、第３世代のレジメンは、ＭＡＣＯＰ−Ｂ（メトトレキセート、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン、ブレオマイシンおよびロイコボリン）である。さらなる有効な薬物としては、フェニルブチレートおよびブロスタチン−１が挙げられる。好ましい複数様式の治療において、化学療法約およびサイトカインの両方は、本発明に従って、抗体、免疫結合体または融合タンパク質と同時投与される。上記サイトカイン、化学療法薬および抗体、免疫結合体または融合タンパク質は、任意の順序で投与されても、一緒に投与されてもよい。

【0323】

本発明の組成物および方法において使用するのに好ましい他の毒素としては、有毒なレクチン、植物毒素（例えば、リシン、アブリン、モデシン、ボツリヌス（ｂｏｔｕｌｉｎａ）毒素およびジフテリア毒素が挙げられる。当然に、種々の毒素の組み合わせもまた、１つの抗体分子と合わせられ得、それによって適切な可変の細胞傷害性を提供する。本発明の併用療法に適切に使用される毒素の例は、リシン、アブリン、リボヌクレアーゼ、ＤＮａｓｅ Ｉ、ブドウ球菌エンテロトキシン−Ａ、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリン毒素、シュードモナス属の体外毒素およびシュードモナス属の内毒素である。例えば、Ｐａｓｔａｎら、Ｃｅｌｌ、４７：６４１（１９８６）およびＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃｉａｎｓ、４４：４３（１９９４）を参照のこと。使用され得る酵素的に活性な毒素およびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性フラグメント、体外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン、マイトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンが挙げられる。例えば、ＷＯ ９３／２１２３２（１９９３年１０月２８日公開）を参照のこと。

【0324】

適切な毒素および化学療法剤は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ、第１９版．（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．１９９５）、およびＧＯＯＤＭＡＮ ＡＮＤ ＧＩＬＭＡＮ’Ｓ ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ ＢＡＳＩＳ ＯＦ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ、第７版．（ＭａｃＭｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．１９８５）二記載される。他の適切な毒素および／または化学療法剤は、当業者に公知である。

【0325】

本発明の抗ＣＤ１９免疫療法はまた、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４５参照）を活性な抗癌薬に変換するプロドラッグ活性化酵素との組み合わせであり得る。例えば、ＷＯ ８８／０７３７８および米国特許第４，９７５，２７８号を参照のこと。このような組み合わせの酵素成分は、そのプロドラッグをそのより活性な細胞傷害性形態に変換するためにそのような方法でプロドラッグを活性化し得る任意の酵素を含む。本願で使用される場合、用語「プロドラッグ」とは、腫瘍細胞に対して、親薬物と比較してより低い細胞傷害性である薬学的に活性な物質の前駆物質形態または誘導体形態をいい、そしてそれらは、酵素的に活性化され得るか、またはより活性な親形態に変換され得る。例えば、Ｗｉｌｍａｎ、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」、Ｂｉｏｌｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ、１４、ｐｐ．３７５−３８２、６１５ｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ Ｂｅｌｆａｓｔ（１９８６）、およびＳｔｅｌｌａら、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｂｏｒｃｈａｒｄｔら（編）、ｐｐ．２４７−２６７、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（１９８５）を参照のこと。本発明の抗ＣＤ１９抗体と組み合わせて使用され得るプロドラッグとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：より活性な細胞傷害性の遊離薬物に変換され得る、ホスフェート含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、サルフェート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸改変プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、α−ラクタム含有プロドラッグ、必要に応じて置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグまたは必要に応じて置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシンおよび他の５−フルオロウリジンプロドラッグ。本発明で使用するためのプロドラッグ形態に誘導体化され得る細胞傷害性薬物の例としては、上に記載される化学療法剤が挙げられるが、これらに限定されない。

【0326】

特定の実施形態において、本発明の組成物および方法の適用は、毒素療法の順延を可能にし得、そして必要とされない副作用および化学療法に関連する合併症の危険性の回避を補助し得、そして化学療法に対する耐性の発生を遅らせる。特定の実施形態において、毒素療法および／または毒素療法に対する耐性は、本発明の組成物および方法を適用された患者において遅延され、約６ヶ月、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、または１０年まで遅延する。

【0327】

（５．６．３．治療用抗体との組み合わせ）
本明細書中に記載される抗ＣＤ１９免疫療法は、他の抗体と組み合わせて投与され得、その抗体としては、抗ＣＤ２０ ｍＡｂ、抗ＣＤ５２ ｍＡｂ、抗ＣＤ２２抗体（例えば、米国特許第５，４８４，８９２号、米国出願番号１０／３７１，７９７の米国特許公開番号２００４／０００１８２８、米国出願番号１０／３７２，４８１の米国特許公開番号２００３／０２０２９７５および米国仮特許出願番号６０／４２０，４７２（これらの各々の全内容は、ＣＤ２２抗原および抗ＣＤ２２抗体のそれらの教示に関して参考として本明細書中に援用される）に記載されるような）および抗ＣＤ２０抗体（例えば、ＲＩＴＵＸＡＮ^ＴＭ（Ｃ２Ｂ８；ＲＩＴＵＸＩＭＡＢ^ＴＭ；Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ））が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の抗体と組み合わせて使用され得るか、または本発明の組成物において使用され得る治療用抗体の他の例としては、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ^ＴＭ（トラスツズマブ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＭＹＬＯＴＡＲＧ^ＴＭ（ゲムツズマブオゾガマイシン；Ｗｙｅｔｈ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＣＡＭＰＡＴＨ^ＴＭ（アレムツズマブ；Ｂｅｒｌｅｘ）、ＺＥＶＡＬＩＮ^ＴＭ（イブリツモマブチウキセタン（Ｉｐｒｉｔｕｍｏｍａｂ ｔｉｕｘｅｔａｎ）；Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、ＢＥＸＸＡＲ^ＴＭ（トシツモマブ；ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｃｏｒｉｘａ）、ＥＲＢＩＴＵＸ^ＴＭ（セツキシマブ；Ｉｍｃｌｏｎｅ）およびＡＶＡＳＴＩＮ^ＴＭ（ベバシズマブ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0328】

特定の実施形態において、抗ＣＤ１９ ｍＡｂおよび抗ＣＤ２０ ｍＡｂならびに／または抗ＣＤ２２ ｍＡｂは、必要に応じて同じ薬学的組成物において、任意の適切な比で投与され得る。例示するために、上記抗ＣＤ１９抗体と抗ＣＤ２０抗体との比は、約１０００：１、約５００：１、約２５０：１、約１００：１、約９０：１、約８０：１、約７０：１、約６０；ｌ、約５０：１、約４０：１、約３０：１、約２０：１、約１９：１、約１８：１、約１７：１、約１６：１、約１５：１、約１４：１、約１３：１、約１２：１、約１１：１、約１０：１、約９：１、約８：１、約７：１、約６：１、約５：１、約４：１、約３：１、約２：１、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、約１：１０、約１：１１、約１：１２、約１：１３、約１：１４、約１：１５、約１：１６、約１：１７、約１：１８、約１：１９、約１：２０、約１：３０、約１：４０、約１：５０、約１：６０、約１：７０、約１：８０、約１：９０、約１：１００、約１：２５０、約１：５００もしくは約１：１０００またはそれ以上の比であり得る。同様に、上記抗ＣＤ１９抗体と抗ＣＤ２２抗体との比は、約１０００：１、約５００：１、約２５０：１、約１００：１、約９０：１、約８０：１、約７０：１、約６０；ｌ、約５０：１、約４０：１、約３０：１、約２０：１、約１９：１、約１８：１、約１７：１、約１６：１、約１５：１、約１４：１、約１３：１、約１２：１、約１１：１、約１０：１、約９：１、約８：１、約７：１、約６：１、約５：１、約４：１、約３：１、約２：１、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、約１：１０、約１：１１、約１：１２、約１：１３、約１：１４、約１：１５、約１：１６、約１：１７、約１：１８、約１：１９、約１：２０、約１：３０、約１：４０、約１：５０、約１：６０、約１：７０、約１：８０、約１：９０、約１：１００、約１：２５０、約１：５００もしくは約１：１０００またはそれ以上の比であり得る。

【0329】

（５．６．４．単球またはマクロファージの機能を増強する組み合わせ化合物）
本発明の方法の特定の実施形態において、単球またはマクロファージの数または機能を（例えば、少なくとも約２５％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％以上）増強する化合物は、上記抗ＣＤ１９免疫療法と組み合わせて使用され得る。このような化合物は、当該分野において公知であり、そしてその化合物としては、サイトカイン（例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１２））およびインターフェロン（例えば、αインターフェロンまたはγインターフェロン）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0330】

単球もしくはマクロファージの機能を増強する化合物または単球もしくはマクロファージの増強因子は、抗体、免疫結合体または抗原結合フラグメントとして同じ薬学的組成物に処方され得る。別々に投与される場合、その抗体／フラグメントおよびその化合物は、同時に（互いの時間の期間内で）投与されても、治療の同じ経過の間に投与されても、連続的に投与されてもよい（すなわち、その患者は、第１に抗体／フラグメント処置の経過を受容し、次いでマクロファージ／単球の機能を増強する化合物を受容するか、またはその逆も同様）。このような実施形態において、単球またはマクロファージの機能を増強する化合物は、他の治療レジメンおよび／または本発明の組成物の前か、それらと同時か、またはそれらの後に、ヒト被験体投与される。１つの実施形態において、ヒト被験体は、ヒトついての正常範囲内である、血液の白血球数、単球数、好中球数、リンパ球数、および／または好塩基球数を有する。ヒト血液の白血球（総白血球）についての正常範囲は、約３．５個〜約１０．５個（１０^９個／Ｌ）である。ヒト血液の好中球についての正常範囲は、約１．７個〜約７．０個（１０^９個／Ｌ）であり、単球は、約０．３個〜約０．９個（１０^９個／Ｌ）であり、リンパ球は、約０．９個〜約２．９個（１０^９個／Ｌ）であり、好塩基球は、約０個〜約０．３個（１０^９個／Ｌ）であり、そして好酸球は、約０．０５個〜約０．５個（１０^９個／Ｌ）である。他の実施形態において、ヒト被験体は、ヒトについての正常範囲よりも少ない血液の白血球数（例えば、少なくとも約０．０１個、０．０５個、０．１個、０．２個、０．３個、０．４個、０．５個、０．６個、０．７個、または０．８個（１０^９個／Ｌ）の白血球）を有する。

【0331】

本発明のこの実施形態は、本発明の抗体、免疫結合体もしくは抗体フラグメントまたは当該分野において公知である他の抗体と共に実施され得、そして抗ＣＤ１９抗体治療、抗ＣＤ２０抗体治療および／もしくは抗ＣＤ２２抗体治療（例えば、存在する抗体（例えば、Ｃ２Ｂ８）による治療）に対して耐性である被験体、化学療法によって現在処置を受けているか、もしくは以前に化学療法によって処置されていた被験体、Ｂ細胞の障害の再発を有している被験体、免疫無防備状態の被験体、または他にマクロファージまたは単球の機能の欠陥を有する被験体に特に適する。治療に対して耐性であるか、またはＢ細胞の生涯の再発を有する患者の有病率は、少なくとも部分的に、マクロファージまたは単球の機能の欠陥に起因し得る。したがって、本発明は、抗ＣＤ１９抗体および抗原結合フラグメントを投与する方法と組み合わせて使用される、ＡＤＣＣおよび／またはマクロファージおよび／または単球の機能を増強する方法を提供する。

【0332】

（５．６．５．免疫調節剤との組み合わせ）
本発明の抗ＣＤ１９免疫療法はまた、免疫調節剤と組み合わせて使用され得る。このアプローチにおいて、キメラ化抗体の使用が、好ましい；ヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体の使用が、最も好ましい。併用療法について本明細書中で使用される場合、用語「免疫調節剤」とは、宿主の免疫系を抑制するか、遮蔽するか、または増強するように作用する物質をいう。これとしては、サイトカイン産生を抑制する物質、自己抗原の発現をダウンレギュレートもしくは抑制する物質、またはＭＨＣ抗原を遮蔽する物質が挙げられる。このような薬剤の例としては、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（米国特許第４，６６５，０７７号を参照のこと）、アザチオプリン（またはシクロホスファミド、アザチオプリンに対する有害反応が存在する場合）；ブロモクリプチン；グルタルアルデヒド（米国特許第４，１２０，６４９号に記載される通り、ＭＨＣ抗原を遮蔽する）； ＭＨＣ抗原およびＭＨＣフラグメントに対する抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；ステロイド類（例えば、糖質コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロンおよびデキサメタゾン；サイトカインアンタゴニストもしくはサイトカインレセプターアンタゴニスト（抗インターフェロン−γ抗体、抗インターフェロン−β抗体、もしくは抗インターフェロン−α抗体を含む）；抗腫瘍壊死因子−α抗体；抗腫瘍壊死因子−β抗体；抗インターロイキン−２抗体および抗ＩＬ−２レセプター抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ−Ｔ抗体（好ましくは、抗ＣＤ３抗体または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含む可溶性ペプチド（ＷＯ ９０／０８１８７（１９９０年７月２６日公開）；ストレプトキナーゼ；ＴＧＦ−β；ストレプトドルナーゼ；宿主由来のＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；デオキシスパーガリン（ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）；ラパマイシン；Ｔ細胞レセプター（米国特許第５，１１４，７２１号）；Ｔ細胞レセプターフラグメント（Ｏｆｆｎｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：４３０−４３２（１９９１）；ＷＯ ９０／１１２９４；およびＷＯ ９１／０１１３３）；ならびにＴ細胞レセプター抗体（ＥＰ ３４０，１０９）（例えば、Ｔ１０Ｂ９）が挙げられる。サイトカインの例としては、リンホカイン、モノカインおよび伝統的なポリペプチドホルモンが挙げられるが、これらに限定されない。成長ホルモン（例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモン）；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン（例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ））；肝細胞増殖因子（ｈｅｐａｔｉｃ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子−α；ミュラー管抑制物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポイエチン（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｏｔｉｎ）（ＴＰＯ）；神経成長因子（例えば、ＮＧＦ−α）；血小板増殖因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）；トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）（例えば、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−α）；インスリン様増殖因子−Ｉおよびインスリン様増殖因子−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨形成誘導因子（ｏｓｔｅｏｉｎｄｕｃｔｉｖｅ ｆａｃｔｏｒ）；インターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）（例えば、マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣｇＰ（ＧＭ−ＣＳＰ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ））；インターロイキン（ＩＬ）（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５；腫瘍壊死因子（例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β）；ならびに他のポリペプチド因子（ＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む）が、サイトカインの間に含まれる。本明細書中で使用される場合、用語「サイトカイン」は、天然の供給源または組換え細胞培養由来のタンパク質およびネイティブな配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。特定の実施形態において、上記方法は、１種以上の免疫調節剤（ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）（好ましくは、サイトカイン）を被験体に投与することさらに包含する。好ましいサイトカインは、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、トロンボポイエチンおよびγインターフェロンからなる群より選択される
これらの免疫調節剤は、本発明の抗ＣＤ１９抗体と同時か、または異なる時間に投与され、そして当該分野において示されるものと同じか、またはそれよりも低い投薬量で使用される。好ましい免疫調節剤は、処置される障害の型、ならびに患者の履歴を含む多くの要因に依存するが、一般的で総体的な選択は、薬剤がシクロスポリンＡ、糖質コルチコステロイド（最も好ましくは、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロン）、ＯＫＴ−３モノクローナル抗体、アザチオプリン、ブロモクリプチン、異種抗リンパ球グロブリン、またはその混合物から選択されることである。

【0333】

（５．６．６．他の免疫療法剤との組み合わせ）
腫瘍新生血管傷害において作用する薬剤はまた、抗ＣＤ１９免疫療法と組み合わせて使用され得、そしてその薬剤としては、チューブリン結合剤（例えば、コンブレスタチン（ｃｏｍｂｒｅｓｔａｔｉｎ）Ａ４（Ｇｒｉｇｇｓら、Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ．２：８２，（２００１）））ならびにアンジオスタチンおよびエンドスタチン（Ｒｏｓｅｎ、Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ ５：２０、２０００（本明細書中に参考として援用される）に概説される）が挙げられる。抗ＣＤ１９抗体と組み合わせて使用するのに適した免疫調節因子としては、α−インターフェロン、γ−インターフェロン、および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、本発明の組成物および方法を使用する治療と組み合わせて使用される治療剤は、ペプチドである。

【0334】

特定の実施形態において、上記抗ＣＤ１９免疫療法は、１種以上のカリチェアミシン分子との組み合わせである。カリチェアミシンファミリーの抗生物質は、ピコモル未満の濃度で二本鎖ＤＮＡの破壊をもたらし得る。使用され得るカリチェアミシンの構造的アナログとしては、γ１１、γ２１、γ３１、Ｎ−アセチル−γ１１、ＰＳＡＧおよび０１１が挙げられるが、これらに限定されない（Ｈｉｎｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：３３３６−３３４２（１９９３）およびＬｏｄｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５８：２９２５−２９２８（１９９８））。

【0335】

あるいは、本発明の抗ＣＤ１９抗体および細胞傷害性因子を含む融合タンパク質が、例えば、組換え技術またはペプチド合成によって作製され得る。

【0336】

なお別の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９抗体は、腫瘍プレターゲット法（ｔｕｍｏｒ ｐｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）の利用のために「レセプター」（例えば、ストレプトアビジン）に結合体化され得、そのアンタゴニスト−レセプター結合体は、患者に投与され、次いで除去剤（ｃｌｅａｒｉｎｇ ａｇｅｎｔ）を使用してその循環から結合していない結合体が、除去され、その後、治療剤（例えば、放射性核種（ｒａｄｉｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）に結合体化される「リガンド」例えば、ビオチン）の投与が、行われる。

【0337】

特定の実施形態において、処置レジメンは、本発明の抗ＣＤ１９抗体組成物の細胞傷害作用を軽減する化合物を含む。このような化合物としては、鎮痛剤（例えば、アセトアミノフェン）、ビスホスホネート、抗ヒスタミン剤（例えば、マレイン酸クロルフェニラミン）およびステロイド（例えば、デキサメタゾン、レチノイド、デルトイド（ｄｅｌｔｏｉｄ）、ベタメタゾン、コルチゾール、コルチゾン、プレドニゾン、デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、エストロゲン、テストステロン、プロゲスチン）が挙げられる。

【0338】

特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法と組み合わせて使用される治療剤は、低分子（すなわち、約２５００ダルトン未満の分子量を有する無機化合物または有機化合物）である。例えば、低分子のライブラリーは、Ｓｐｅｃｓ ａｎｄ ＢｉｏＳｐｅｃｓ Ｂ．Ｖ．（Ｒｉｊｓｗｉｊｋ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、Ｃｈｅｍｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、Ｃｏｍｇｅｎｅｘ ＵＳＡ Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）およびＭａｙｂｒｉｄｇｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｌｔｄ．（Ｃｏｒｎｗａｌｌ ＰＬ３４ ＯＨＷ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）から商業的に得られ得る。

【0339】

特定の実施形態において、上記抗ＣＤ１９免疫療法は、抗菌剤と組み合わせて投与され得る。抗菌剤の非限定的な例はとしては、細菌感染を阻害しそして／または減少させ、細菌の複製を阻害しそして／また減少させ、あるいは他の細胞もしくは被験体に対する細菌の伝播を阻害しそして／また減少させる、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、融合タンパク質、抗体、核酸分子、有機分子、無機分子および低分子が挙げられる。特定の抗菌剤の例としては、抗生物質（例えば、ペニシリン、セファロスポリン、イミペネム、アクストレオナム（ａｘｔｒｅｏｎａｍ）、バンコマイシン、サイクロセリン、バシトラシン、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、クリンダマイシン、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、ゲンタマイシン、アミカシン、カナマイシン、ネオマイシン、スペクチノマイシン、トリメトプリム、ノルフロキサシン、リファンピン、ポリミキシン、アムホテリシンＢ、ナイスタチン、ケトコナゾール（ｋｅｔｏｃａｎａｚｏｌｅ）、イソニアジド、メトロニダゾールおよびペンタミジン）が挙げられるが、これに限定されない
特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法は、抗真菌剤と組み合わせて投与され得る。抗真菌剤の特定の例としては、アゾール系薬物（例えば、ミコナゾール、ケトコナゾール（ＮＩＺＯＲＡＬ（登録商標））、カスポファンギンアセテート（ＣＡＮＣＩＤＡＳ（登録商標））、イミダゾール、トリアゾール（例えば、フルコナゾール（ＤＩＦＬＵＣＡＮ（登録商標）））およびイトラコナゾール（ＳＰＯＲＡＮＯＸ（登録商標）））、ポリエン（例えば、ナイスタチン、アムホテリシンＢ（ＦＵＮＧＩＺＯＮＥ（登録商標））、アムホテリシンＢ脂質複合体（「ＡＢＬＣ」）（ＡＢＥＬＣＥＴ（登録商標））、アムホテリシンＢコロイド分散物（「ＡＢＣＤ」）（ＡＭＰＨＯＴＥＣ（登録商標））、リポソームアムホテリシンＢ（ＡＭＢＩＳＯＮＥ（登録商標）））、ヨウ化カリウム（ＫＩ）、ピリミジン（例えば、フルシトシン（ＡＮＣＯＢＯＮ（登録商標）））およびボリコナゾール（ＶＦＥＮＤ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。抗菌剤および抗真菌剤の投与は、本発明の方法において生じ得る感染症の効果または激化を軽減し得、患者のＢ細胞は、著しく枯渇する。

【0340】

本発明の特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法は、本発明の組成物の投与に付随し得る毒性の副作用を軽減するために、上に記載される１種以上の薬剤と組み合わせて適用され得る。他の実施形態において、本発明の抗ＣＤ１９免疫療法は、抗体投与、化学療法、毒素、または薬物の副作用の軽減に使用するための当該分野において周知である１種以上の薬剤と組み合わせて適用され得る。

【0341】

本発明の抗ＣＤ１９免疫療法が多発性骨髄腫を処置するために適用される本発明の特定の実施形態において、本発明の組成物は、高用量の化学療法（メルファラン、メルファラン／プレドニゾン（ＭＰ）、ビンクリスチン／ドキソルビシン／デキサメタゾン（ＶＡＤ）、リポソームドキソルビシン／ビンクリスチン、デキサメタゾン（ＤＶｄ）、シクロホスファミド、エトポシド／デキサメタゾン／シタラビン、シスプラチン（ＥＤＡＰ））、幹細胞移植（例えば、自家幹細胞移植または同種幹細胞移植、および／または小規模同種（ｍｉｎｉ−ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ）（骨髄非破壊的）幹細胞移植）、放射線治療、ステロイド（例えば、コルチコステロイド、デキサメタゾン、サリドマイド／デキサメタゾン、プレドニゾン、メルファラン／プレドニゾン）、支持療法（例えば、ビスホスホネート、増殖因子、抗生物質、静脈内免疫グロブリン、低線量の放射線治療、および／または整形的介入）、ＴＨＡＬＯＭＩＤ^ＴＭ（サリドマイド、Ｃｅｌｇｅｎｅ）、および／またはＶＥＬＣＡＤＥ^ＴＭ（ボルテゾミブ、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）を組み合わせてか、またはそれらによる処置レジメンにおいて投与され得る。

【0342】

本発明の抗ＣＤ１９免疫療法が別の抗体および／または薬剤と組み合わせて適用される本発明の実施形態において、さらなる抗体および／または薬剤は、本発明の抗体の投与に対して任意の順序で投与され得る。例えば、さらなる抗体は、本発明の抗ＣＤ１９抗体または免疫結合体の投与の前、その投与と同時および／またはその投与の後に、ヒト被験体二投与され得る。さらなる抗体は、本発明の抗体と同じ薬学的組成物中に存在し得るか、そして／またはさらなる抗体は、異なる薬学的組成物中に存在し得る。本発明の抗体の投与の用量および様式ならびにさらなる抗体の用量は、投薬量の任意の教示ならびに本願において提供されるような投与の様式および当該分野において周知であるような投与の様式に従って、同じであり得るか、または異なり得る。

【0343】

（５．７．Ｂ細胞の悪性疾患の診断における抗ＣＤ１９抗体の使用）
本発明はまた、ヒトＣＤ１９抗原に免疫特異的に結合する抗ＣＤ１９抗体およびその組成物を包含し、その抗ＣＤ１９抗体は、診断剤または検出可能な薬剤に結合体化される。好ましい実施形態において、その抗体は、ヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体である。このような抗ＣＤ１９抗体は、臨床試験手順（例えば、特定の治療の効力の決定）の一部としてＢ細胞の悪性疾患の発症または進行をモニタリングまたは予見するのに有用であり得る。このような診断および検出は、ヒトＣＤ１９抗原に免疫特異的に結合する抗ＣＤ１９抗体を検出可能な物質にカップリングすることによって達成され得、この検出可能な物質としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：種々の酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼであるが、これらに限定されない）；補欠分子族（例えば、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンであるが、これらに限定されない）；蛍光物質（例えば、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンであるが、これらに限定されない）；発光物質（例えば、ルミノールであるが、これに限定されない）；生物発光物質（例えば、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンであるが、これらに限定されない）；放射活性物質（例えば、ヨウ素（^１３１Ｉ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^１２１Ｉ）、炭素（^１４Ｃ）、硫黄（^３５Ｓ）、トリチウム（^３Ｈ）、インジウム（^１１５Ｉｎ、^１１３Ｉｎ、^１１２Ｉｎ、^１１１Ｉｎ）およびテクネチウム（^９９Ｔｃ）、タリウム（^２０１Ｔｉ）、ガリウム（^６８Ｇａ、^６７Ｇａ）、パラジウム（^１０３Ｐｄ）、モリブデン（^９９Ｍｏ）、キセノン（^１３３Ｘｅ）、フッ素（^１８Ｆ）、^１５３Ｓｍ、^１７７Ｌｕ、^１５９Ｇｄ、^１４９Ｐｍ、^１４０Ｌａ、^１７５Ｙｂ、^１６６Ｈｏ、^９０Ｙ、^４７Ｓｃ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１４２Ｐｒ、^１０５Ｒｈ、^９７Ｒｕ、^６８Ｇｅ、^５７Ｃｏ、^６５Ｚｎ、^８５Ｓｒ、^３２Ｐ、^１５３Ｇｄ、^１６９Ｙｂ、^５１Ｃｒ、^５４Ｍｎ、^７５Ｓｅ、^１１３Ｓｎ、および^１１７Ｔｍであるが、これらに限定されない）；種々の陽電子断層撮影法に使用される陽電子放出金属、放射標識されるか、または特定の放射性同位体に結合体化される非放射性で常磁性の金属イオンおよび分子。容易に測定され得る任意の検出可能な標識は、抗ＣＤ１９抗体に結合体化され得、そしてＢ細胞の悪性疾患を診断するのに使用され得る。上記検出可能な物質は、当該分野において公知である技術を使用して、抗体に直接か、または仲介物質（例えば、当該分野において公知であるリンカーなど）を介して間接的に、カップリングまたは結合体化され得る。例えば、本発明に従って診断薬として使用するための抗体に結合体化され得る金属イオンについては、米国特許第４，７４１，９００号を参照のこと。特定の実施形態において、本発明は、診断剤または検出可能な薬剤に結合体化された抗ＣＤ１９抗体を含む診断キットを提供する。

【0344】

（５．８．キット）
本発明は、Ｂ細胞の悪性疾患またはその１つ以上の症状（Ｂ細胞の悪性疾患によって強化されたか、またはＢ細胞の悪性疾患を強化する）の予防、処置、管理、あるいは改善のために、本発明の組成物によって充填された１個以上の容器を備える薬学的パックまたは薬学的キットを提供する。

【0345】

本発明は、上記の方法において使用され得るキットを提供する。１つの実施形態において、キットは、本発明の組成物を、１個以上の容器中に含む。別の実施形態において、キットは、本発明の組成物を、１個以上の容器中に含み、そしてＢ細胞の悪性疾患またはその１つ以上の症状（Ｂ細胞の悪性疾患によって強化されたか、またはＢ細胞の悪性疾患を強化する）の予防、管理、あるいは処置に有用な１種以上の他の予防薬または治療剤を、１個以上の容器中に含む。好ましくは、上記キットは、Ｂ細胞の悪性疾患を予防するか、処置するか、管理するか、または改善するための指示書、ならびに副作用および投与方法に関する投薬量情報についての指示書をさらに備える。必要に応じて、医薬品または生物製剤の製造、使用または販売を規制する政府機関によって指示された形態による通知が、このような容器に付随し得、その通知は、ヒトに対する適用に関する製造、使用、または販売の政府機関による承認を反映する。

【実施例】

【0346】

（６．実施例）
以下の実施例において、トランスジェニックマウスモデルを、免疫療法に対するヒトＣＤ１９を評価するために使用した。これらのデータは、ＣＤ１９抗原に対する結合およびＡＤＣＣの媒介の両方を行う抗体が、インビボ（ＦｃγＲ（好ましくは、ＦｃγＲＩＩＩまたはＦｃγＲＩＶ）を発現し、そしてＡＤＣＣを行うエフェクター細胞を有する被験体）でＢ細胞の枯渇を誘導するのに有効であることを示す、このような抗体は、長続きするインビボでのＢ細胞の枯渇を有するために使用され得、そして特定の実施形態においては、循環、脾臓およびリンパ節から実質的に全てのＢ細胞を排除し得る。驚くべきことに、ＣＤ１９抗原の比較的低い密度を発現する骨髄Ｂ細胞およびその前駆体も、同様に枯渇する。Ｂ細胞の枯渇の効果は、抗ＣＤ１９抗体が結合するヒトＣＤ１９の領域に依存しないが、ＣＤ１９密度（患者サンプルにおける）によって影響を受ける。Ｂ細胞クリアランスの効率は、ＡＤＣＣを媒介する抗ＣＤ１９抗体の能力と相関し得る。抗ＣＤ１９抗体を使用したＢ細胞クリアランスの効率は、宿主エフェクターＦｃγＲの発現／機能とも相関し得る。

【0347】

（６．１．材料および方法）
本明細書中に記載されるマウスＨＢ １２ａ抗ＣＤ１９抗体およびマウスＨＢ １２ｂ抗ＣＤ１９抗体は、ヒトＣＤ１９に結合する抗体の例である。このような抗体は、第５．１節において上に記載される技術を使用してヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を設計するために使用し得る。ヒトＣＤ１９またはその部分に対してＨＢ １２ａ抗体およびＨＢ １２ｂ抗体と同一の特異性を有するヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体が、本発明の組成物および方法における使用のために企図される。特に、またはＨＢ １２ａまたはＨＢ １２ｂと同一または類似の重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、および／または重鎖ＣＤＲ３領域を有するヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体が、本発明の組成物および方法における使用のために企図される。

【0348】

（６．１．１．材料および方法）
抗体産生および配列分析。ＨＢ １２ａ抗体およびＨＢ １２ｂ抗体を、ヒトＣＤ１９をコードするｃＤＮＡによってトランスフェクトしたマウスプレＢ細胞株を用いて免疫化したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて産生した（Ｚｈｏｕら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、１４：３８８４−９４（１９９４））。両方の抗体を、１９９３年１１月３日〜７日にボストンで開催されたＦｉｆｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ ａｎｄ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ Ａｎｔｉｇｅｎｓに提出した。

【0349】

重鎖鎖遺伝子の利用を、ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ（登録商標）、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を使用して１〜５×１０^６個のハイブリドーマ細胞から抽出したＲＮＡを使用して決定した。第１ｃＤＮＡ鎖を、ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ（登録商標）（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）製の２００単位のＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴ ＩＩＩ（登録商標）逆転写酵素および第１ｃＤＮＡ鎖合成緩衝液、ＰＲＯＭＥＧＡ（登録商標）（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）製の２０ｎｇのランダムヘキサマープライマーおよび２０単位のＲＮＡｓｅインヒビターならびにＤｅｎｖｉｌｌｅ（Ｍｅｔｕｃｈｅｎ、ＮＪ）製の８０ナノモルのｄＮＴＰを使用して、２μｇの全ＲＮＡから２０μＬの容量で合成した。１μｌのｃＤＮＡ溶液を、重鎖（Ｖ_Ｈ）遺伝子のＰＣＲ増幅のためにテンプレートとして使用した。ＰＣＲ反応を、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、５ｍＭ ＮＨ_４Ｃｌ、５０ｍＭ ＫＣｌ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、８００μＭ ｄＮＴＰ（Ｄｅｎｖｉｌｌｅ）、４００ｐｍｏｌの各プライマーおよび１０％ｐｆｕプルーフリーディングポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、ＬａＪｏｌｌａ、ＣＡ）を伴う２．５ＵのＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）から構成された５０μｌ容量の反応混合物中で行った。Ｖ_Ｌに関して、ＰＣＲ反応を、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．４）、５０ｍＭ ＫＣｌ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、８００μＭ ｄＮＴＰ（Ｄｅｎｖｉｌｌｅ）、４００ｐｍｏｌの各プライマーおよび１０％ｐｆｕプルーフリーディングポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）でスパイクした２．５ＵのＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）から構成された５０μｌ容量の反応混合物中で行った。３分間の変性工程の後、増幅を、３２サイクル（９４℃で１分間、５８℃で１分間、７２℃で１分間）行い、次いで７２℃（Ｔｈｅｒｍｏｃｙｃｌｅｒ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で１０分間の伸長を行った。重鎖ｃＤＮＡを、先に記載される通り（Ｋａｎｔｏｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５８：１１７５−１１８６（１９９７））、乱交雑のセンス５’Ｖ_Ｈプライマー（ＭＳＶＨＥ；５’ＧＧＧ ＡＡＴ ＴＣＧ ＡＧＧ ＴＧＣ ＡＧＣ ＴＧＣ ＡＧＧ ＡＧＴ ＣＴＧ Ｇ ３’）（配列番号１９）およびＣγコード領域と相補的なアンチセンスプライマー（プライマーＣγ１；５’ＧＡＧ ＴＴＣ ＣＡＧ ＧＴＣ ＡＣＴ ＧＴＣ ＡＣＴ ＧＧＣ ＴＣＡ ＧＧＧ Ａ ３’）（配列番号２０）を使用して増幅した。

【0350】

軽鎖遺伝子の利用を、重鎖について記載したように抽出した細胞質ＲＮＡを使用して決定した。５’可変領域のヌクレオチド配列を、ＧｅｎｅＲａｃｅｒ^ＴＭキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して産生したｃＤＮＡから得た。全ＲＮＡを、仔ウシ腸のホスファターゼによって脱リン酸化した。５’キャップ構造を、タバコの酸ピロホスファターゼによってインタクトな、完全長ｍＲＮＡから除去した。そのｍＲＮＡをｃＤＮＡに転写した後に、ＧｅｎｅＲａｃｅｒ ＲＮＡオリゴを、公知の５’プライミング部位をＧｅｎｅＲａｃｅｒ ＰＣＲプライマーに対して提供するＴ４ ＲＮＡリガーゼを使用してそのｍＲＮＡの５’末端にライゲーションした。ライゲーションしたｍＲＮＡを、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ^ＴＭＩＩＩ ＲＴおよびｔｈｅ ＧｅｎｅＲａｃｅｒランダムプライマーを用いて逆転写した。第１ｃＤＮＡ鎖を、ＧｅｎｅＲａｃｅｒ ５’プライマー（ＧｅｎｅＲａｃｅｒ ＲＮＡオリゴと相同的）および定常領域特異的アンチセンス３’プライマー（ＧＡＣ ＴＧＡ ＧＧＣ ＡＣＣ ＴＣＣ ＡＧＡ ＴＧＴ ＴＡＡ ＣＴＧ）（配列番号２１）を使用して増幅した。タッチダウンＰＣＲ増幅を、添加した１０％ｐｆｕプルーフリーディングポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を伴う２．５ＵのＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎによって推奨されるような緩衝液を用いて５０μＬ容量中で行った。２分間の変性工程の後、Ｔａｑおよびｐｆｕを、添加し、そして増幅を、３工程（９４℃で３０秒間、７２℃で６０秒間の５サイクル；９４℃で３０秒間、７２℃で６０秒間の５サイクル；９４℃で３０秒間、６５℃で３０秒間、７２℃で６０秒間の２０サイクル）で行い、次いで７２℃で１０分間の伸長を行った。２．５ＵのＴａｑを、添加し、そしてその伸長を可能にして、インタクトな３’Ａ−オーバーハング確保するためにさらに１０分間伸長を続けた。増幅したＰＣＲ産物を、スクリーニングのために、ｐＣＲ４−ＴＯＰＯベクター中にクローニングし、そしてＯｎｅＳｈｏｔ（登録商標）ＴＯＰ１０コンピテント細胞に形質転換した。８個のクローン由来のＤＮＡ挿入物を、重鎖について記載したように、ｐＣＲ４−ＴＯＰＯベクターに特異的な「Ｍ１３フォワード」プライマーおよび「Ｍ１３リバース」プライマーを使用して各ｍＡｂ軽鎖について配列決定した。

【0351】

ＡｍｐｌｉＴａｑ（登録商標）ＤＮＡポリメラーゼおよび最初のＰＣＲ増幅に使用した同じプライマーまたは軽鎖について記載したようなｐＣＲ４−ＴＯＰＯベクター特異的プライマーを用いてＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｄｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇシステムを使用した増幅の後、精製した重鎖ＰＣＲ産物および軽鎖ＰＣＲ産物を、ＡＢＩ ３７７ ＰＲＩＳＭ（登録商標）ＤＮＡシークエンサーを使用して直接的に配列決定した。ＨＢ １２ａおよびＨＢ １２ｂの重鎖領域ならびに軽鎖領域を、センスＤＮＡ鎖およびアンチセンスＤＮＡ鎖の両方において完全に配列決定した。

【0352】

抗体および免疫蛍光分析。本明細書中で用いられるヒトＣＤ１９抗原に結合するモノクローナルマウス抗ＣＤ１９抗体は、ｉｎｃｌｕｄｅｄ ＨＢ１２ａ（ＩｇＧ１）およびＨＢ１２ｂ（ＩｇＧ１）、ＦＭＣ６３（ＩｇＧ２ａ、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｔｅｍｅｃｕｌａ、ＣＡ）、Ｂ４（ＩｇＧ１、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｍｉａｍｉ、ＦＬ）（Ｎａｄｌｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３１：２４４−２５０（１９８３））ならびにＨＤ２３７（ＩｇＧ２ｂ、Ｆｏｕｒｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ ｏｎ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ Ａｎｔｉｇｅｎｓ、Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕｓｔｒｉａ、１９８９）を含んだ（ＨＤ３７抗体（Ｐｅｚｚｕｔｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３８：２７９３−２７９９（１９８７））のアイソタイプスイッチ改変体）。他の抗体は：マウスＣＤ１９に結合するモノクローナルマウス抗ＣＤ１９抗体、ＭＢ１９−１（ＩｇＡ）（Ｓａｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５７：４３７１−４３７８（１９９６））；モノクローナルマウスＣＤ２０特異的抗体（Ｕｃｈｉｄａら、Ｉｎｔｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６：１１９−１２９（２００４））；Ｂ２２０抗体ＲＡ３−６Ｂ２（ＤＮＡＸ Ｃｏｒｐ．、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）；Ｔｈｙ１．２抗体（ＣＡＬＴＡＧ^ＴＭＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）；ならびにＣＤ５抗体、ＣＤ４３抗体およびＣＤ２５抗体（ＢＤ ＰＨＡＲＭＩＮＧＥＮ^ＴＭ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）を含んだ。アイソタイプ特異的抗体および抗マウスＩｇ抗体またはＩｇＭ抗体は、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）製であった。

【0353】

ｈＣＤ１９ ｃＤＮＡ（ＴｅｄｄｅｒおよびＩｓａａｃｓ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１４３：７１２−７１７（１９８９））によってトランスフェクトしたマウスプレＢ細胞株、３００．１９（Ａｌｔら、Ｃｅｌｌ、２７：３８１−３８８（１９８１））、または単一細胞の白血球懸濁物を、確立された方法（Ｚｈｏｕら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ、１４：３８８４−３８９４（１９９４））に従って、所定の最適な濃度の各抗体を使用して氷上で２０〜３０分間染色した。リンパ球の前方光散乱特性および側方光散乱特性を有する細胞を、ＦＡＣＳＣＡＮ（登録商標）フローサイトメーターまたはＦＡＣＳＣＡＬＩＢＵＲ（登録商標）フローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を使用して分析した。バックグラウンド染色を、≧９８％の細胞を除外するように位置付けたゲートを用いて、非反応性のコントロール抗体（ＣＡＬＴＡＧ^ＴＭＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）を使用して決定した。試験した各抗体に関して、単核細胞の前方光散乱特性および側方光散乱特性を有する１万個の細胞を、４０倍の対数目盛で示される蛍光強度によって、可能な限り各サンプルについて分析した。

【0354】

マウス。ヒトＣＤ１９（ｈ１９−１）を発現するトランスジェニックマウスおよびその野生型（ＷＴ）同腹子を、先に記載される（Ｚｈｏｕら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ、１４：３８８４−３８９４（１９９４））ように産生した。ＴＧ−１マウスを、元のｈ１９−１樹立系統（Ｃ５７ＢＬ／６×Ｂ６／ＳＪＬ）から産生し、そしてＣ５７ＢＬ／６バックグラウンドに対して少なくとも７世代にわたって交雑させた。ＴＧ−２マウスを、元のｈ１９−４樹立系統（Ｃ５７ＢＬ／６×Ｂ６／ＳＪＬ）から産生した。複数の世代の戻し交雑の後、ＴＧ−１^＋／＋マウスを得た。そのＢ細胞は、ヒトＢ細胞において見出された密度とほぼ同じ細胞表面密度のヒトＣＤ１９を発現した。ヒトＣＤ１９発現マウスは、さらに記載されており、そしていくつかの研究においてモデルとして使用されている（Ｅｎｇｅｌら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、３：３９−５０（１９９５）；Ｓａｔｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９２：１１５５８−１１５６２（１９９５）；Ｓａｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５７：４３７１−４３７８（１９９６）；Ｔｅｄｄｅｒら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、６：１０７−１１８（１９９７）；Ｓａｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５８：４６６２−４６６９（１９９７）；Ｓａｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５９：３２７８−３２８７（１９９７）；Ｓａｔｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４：１３１５８−１３１６２（１９９７）；ＩｎａｏｋｉらＪ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１８６：１９２３−１９３１（１９９７）；Ｆｕｊｉｍｏｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６２：７０８８−７０９４（１９９９）；Ｆｕｊｉｍｏｔｏら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１１：１９１−２００（１９９９）；Ｓａｔｔｅｒｔｈｗａｉｔｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９７：６６８７−６６９２（２０００）；Ｆｕｊｉｍｏｔｏら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１３：４７−５７（２０００）；Ｓａｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６５：６６３５−６６４３（２０００）；Ｚｉｐｆｅｌら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６５：６８７２−６８７９（２０００）；Ｑｉａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６６：２４１２−２４１９（２００１）；Ｈａｓｅｇａｗａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６７：２４６９−２４７８（２００１）；Ｈａｓｅｇａｗａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６７：３１９０−３２００（２００１）；Ｆｕｊｉｍｏｔｏら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７６：４４８２０−４４８２７（２００１）；Ｆｕｊｉｍｏｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６８：５４６５−５４７６（２００２）；Ｓａｉｔｏら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１０９：１４５３−１４６２（２００２）；Ｙａｚａｗａら、ｂｌｏｏｄ、１０２：１３７４−８０（２００３）；Ｓｈｏｈａｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１７１：４０６２−４０７２（２００３））。ＣＤ１９欠損（ＣＤ１９^−／−）マウスおよびそのＷＴ同腹子はまた、先の通りに記載されている（Ｅｎｇｅｌら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、３：３９−５０（１９９５））。トランスジェニックマウスにおけるヒトＣＤ１９の発現は、内因性のマウスＣＤ１９発現を低下させることが示されており（Ｓａｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５７：４３７１−４３７８（１９９６）；およびＳａｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５８：４６６２−４６６９（１９９７））、そして内因性のマウスＣＤ１９発現のこの低下に関する仮説もまた、評価されている（Ｓｈｏｈａｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１７１：４０６２−４０７２（２００３））。ヒトＣＤ１９を発現するトランスジェニックマウスにおけるＣＤ１９発現の密度もまた、評価されている（Ｓａｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６５：６６３５−６６４３（２０００））。ＴＧ−１^＋／＋マウスを、Ｔａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍｓ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹ）製のＦｃＲ（Ｆｃレセプター）共通γ鎖（ＦｃＲγ）欠損マウス（ＦｃＲγ^−／−、Ｂ６．１２９Ｐ２−Ｆｃｅｒｇｌ^ｔｍｌ）と交配して、ｈＣＤ１９^＋／− ＦｃＲγ^−／−同腹子およびＷＴ同腹子を産生した。ｃ−Ｍｙｃ導入遺伝子についてヘミ接合のマウス（Ｅμ−ｃＭｙｃＴＧ、Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ−ＴｇＮ（ＩｇｈＭｙｃ）；Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）は、記載された通りである（Ｈａｒｒｉｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１６７：３５３（１９８８）およびＡｄａｍｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３１８：５３３（１９８５））。ｃ−ＭｙｃＴＧマウス（Ｂ６／１２９バックグラウンド）をｈＣＤ１９ＴＧ−１^＋／＋マウスと交雑させて、ＰＣＲスクリーニングによって決定されるようなヘミ接合性ｈＣＤ１９ＴＧ−１^＋／− ｃＭｙｃＴＧ^＋／−子孫を産生した。Ｒａｇ１^−／−（Ｂ６．１２９Ｓ７−Ｒａｇ１^{ｔｍｌＭｏｍ}／Ｊ）マウスは、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ製であった。マクロファージ欠損マウスを、標準的な方法（Ｖａｎ ＲｏｏｉｊｅｎおよびＳａｎｄｅｒｓ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１７４：８３−９３（１９９４））に従って、Ｃ５７ＢＬ／６マウスへの−２日目、１日目および４日目におけるクロドロネート封入リポソーム（１０グラムあたり０．１ｍＬ体重；Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）の尾静脈注射によって産生した。全てのマウスを、特定の病原体を含まないバリアー施設において飼育し、そして最初に、６〜９週齢にて使用した。

【0355】

ＥＬＩＳＡ。血清Ｉｇ濃度を、記載される通り（Ｅｎｇｅｌら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、３：３９（１９９５））、検量線を作成するために、アフィニティー精製したマウスＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３およびＩｇＡ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｉｎｃ．）を使用したＥＬＩＳＡによって決定した。ｄｓＤＮＡ、ｓｓＤＮＡおよびヒストンに対するＩｇＭ自己抗体ならびにＩｇＧ自己抗体の血清レベルを、記載される通り（Ｓａｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５７：４３７１（１９９６））、仔ウシ胸腺の二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、煮沸した仔ウシ胸腺のＤＮＡ（一本鎖（ｓｓ）ＤＮＡを含む）またはヒストン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）でコートしたマイクロタイタープレートを使用したＥＬＩＳＡによって決定した。

【0356】

免疫療法。２００μＬリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中の滅菌した抗ＣＤ１９抗体および非反応性のアイソタイプコントロール抗体（０．５〜２５０μｇ）を、側方尾静脈を介して注射した。全ての実験は、他に示さない限り、２５０μｇの抗体を用いた。血液の白血球数を、赤血球溶解後に血球計数器によって定量し、Ｂ２２０^＋Ｂ細胞の頻度を、フローサイトメトリー分析を用いた免疫蛍光染色によって決定した。ヒトおよびマウスにおける抗体用量を、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｔｏｏｌ Ｄｏｓｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｏｒ（ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｄｅｒ／ｃａｎｃｅｒ／ａｎｉｍａｌｆｒａｍｅ．ｈｔｍ）を使用して比較した。

【0357】

免疫化。２月齢のＷＴマウスを、生理食塩水中の５０μｇの２，４，６−トリニトロフェニル（ＴＮＰ）結合体化リポ多糖（ＬＰＳ）（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）または２５μｇ ２，４−ジニトロフェノール結合体化（ＤＮＰ）−ＦＩＣＯＬＬ（登録商標）（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓａｎ Ｒａｆａｅｌ、ＣＡ）によってｉ．ｐ．に免疫化した。マウスをまた、完全フロイントアジュバントにおける１００μｇのＤＮＰ結合体化キーホールリンペットヘモシアニン（ＤＮＰ−ＫＬＨ、ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ（登録商標）−ＮＯＶＡＢＩＯＣＨＥＭ（登録商標）Ｃｏｒｐ．、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）によってｉ．ｐ．に免疫化し、そして不完全フロイントアジュバントにおけるＤＮＰ−ＫＬＨによって２１日後にブーストした。マウスを、示される通り、免疫化の前後に採血した。個々の血清サンプルにおけるＤＮＰ特異的抗体力価またはＴＮＰ特異的抗体力価を、標準的な方法（Ｅｎｇｅｌら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、３：３９−５０（１９９５））に従って、ＤＮＰ−ＢＳＡ（ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ（登録商標）−ＮＯＶＡＢＩＯＣＨＥＭ（登録商標）Ｃｏｒｐ．、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）またはＴＮＰ−ＢＳＡ（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓａｎ Ｒａｆａｅｌ、ＣＡ）でコートしたＥＬＩＳＡプレートを使用して二連で測定した。ＴＮＰ−ＬＰＳ免疫化マウス由来の血清を、ＤＮＰ−ＦＩＣＯＬＬ（登録商標）製の血清によって１：４００に希釈し、そしてＤＮＰ−ＢＳＡ免疫化マウス由来の血清を、ＥＬＩＳＡ分析のために１：１０００に希釈した。

【0358】

腫瘍研究。ｈＣＤ１９ＴＧ−１^＋／− ｃ−ｍｙｃＴＧ^＋／−マウスから突発性のリンパ節腫瘍を、単離し、そしてインビボで拡大培養した。腫瘍細胞（１０⁻５／マウス）を、０日目にＲａｇ^−／−レシピエントマウスに対してｉ．ｖ．に投与し、ＦＭＣ６３およびアイソタイプが一致したコントロールｍＡｂ（２５０μｇ／ｍｌ）を、１日目および７日目においてｉ．ｖ．に与えた。血液の白血球をレシピエントマウスから、毎週単離し、循環するマウスＣＤ１９^＋ Ｂ２２０^＋細胞の数を、フローサイトメトリー分析を用いた免疫蛍光染色によって定量した。

【0359】

統計分析。全てのデータを、平均±ＳＥＭとして示す。ステューデントｔ検定を使用して、サンプル平均の間の差の有意性を決定した。

【0360】

（６．２．実施例１：トランスジェニックマウスにおけるヒトＣＤ１９発現）
本明細書中に記載されるトランスジェニックｈＣＤ１９ＴＧマウスまたはヒトＣＤ１９を発現する他のトランスジェニック動物は、ヒト抗ＣＤ１９抗体、ヒト化抗ＣＤ１９抗体、またはキメラ抗ＣＤ１９抗体を含む異なる治療レジメン（投薬の濃度、量、またはタイミングにおけるバリエーション）を評価するために使用され得る。異なる治療レジメンのヒト患者における効力は、下に記載される２つの指標を使用して予想され得る（すなわち、特定の体液および／または組織におけるＢ細胞の枯渇ならびにモノクローナルヒト抗ＣＤ１９抗体もしくはモノクローナルヒト化抗ＣＤ１９抗体のＢ細胞を結合する能力）。特定の実施形態において、ヒトＣＤ１９トランスジェニックマウスにおいて有効である処置レジメンは、ヒトにおいてＢ細胞の悪性疾患を処置するために、本発明の組成物および方法と一緒に使用され得る。

【0361】

ヒトＣＤ１９がヒトＣＤ１９導入遺伝子を発現するトランスジェニックマウス（ヘミ接合ＴＧ−１^＋／−）由来のＢ細胞上に発現したか否かを決定するために、Ｂ細胞を、これらのマウスの骨髄、血液、脾臓および腹膜洗浄液（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｌａｖａｇｅ）から抽出した。ヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を、その細胞と、ＣＤ１９を結合するマウスモノクローナル抗ＣＤ１９抗体とを摂食させることによって、これらの細胞において評価した。Ｂ系統細胞に対するその抗体の結合を、フローサイトメトリー分析を用いた２色免疫蛍光染色を使用して検出した。

【0362】

結果を、骨髄（ＢＭ）、血液、脾臓および腹膜洗浄液（ＰＬ）についてヒトＣＤ１９（ｈＣＤ１９）の検出された発現（ｙ軸）に対してプロットしたマウスＣＤ１９（ｍＣＤ１９）の検出された発現（ｘ軸）のグラフにおいて図１Ａに示す。この軸の単位は、左下の１を伴う４０倍の対数目盛を示す。ヒトＣＤ１９に結合するＢ４抗ＣＤ１９抗体（Ｂｅｃｋｍａｎ／Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して、ヒトＣＤ１９発現を可視化し、そしてマウスＣＤ１９に結合する１Ｄ３ ＣＤ１９抗体（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）を、マウスＣＤ１９発現を可視化した（また、図１Ｂおよび１Ｃについて使用される）。ヒトＣＤ１９発現がヒトＢ細胞の発達の間に漸増する一方で、マウスＣＤ１９は、マウス骨髄Ｂ細胞の発達の間に高レベルで発現する。図１Ａは、ヒトＣＤ１９発現が、血液、脾臓および腹膜洗浄液（ＰＬ）に見出された末梢Ｂ細胞上のマウスＣＤ１９発現に匹敵することを示し、これは、そのマウス抗ｈＣＤ１９抗体（ヒトＣＤ１９を結合する）が末梢Ｂ細胞集団を結合することを実証する。さらに、骨髄（ＢＭ）由来Ｂ細胞の小集団は、内因性のマウスＣＤ１９を発現するが、ヒトＣＤ１９（ヒトＣＤ１９に結合するモノクローナルマウス抗ＣＤ１９抗体）を発現しない。したがって、骨髄Ｂ細胞は、ヘミ接合ＴＧ−１^＋／−マウスにおいて２つの分類（ｈＣＤ１９^＋ ｍＣＤ１９^＋である成熟Ｂ系統細胞およびｍＣＤ１９^＋のみである成熟していないＢ系統細胞）に納まる（図１Ａ）。これらの結果は、これらのトランスジェニックマウスにおけるヒトＣＤ１９発現がＢ細胞の成熟に相関することを示すＺｈｏｕらの発見（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１４：３８８４−３８９４（１９９４））と一致する。血液、脾臓および腹膜腔内の全ての成熟Ｂ細胞は、ｈＣＤ１９^＋およびｍＣＤ１９^＋の両方であった。

【0363】

ｍＣＤ１９およびｈＣＤ１９の相対的な発現レベルを、それぞれ、平均蛍光強度（ｈＣＤ１９に対するマウス抗ＣＤ１９およびｍＣＤ１９に対するマウス抗ＣＤ１９）を測定することによって評価した場合、図１Ｂに示す。ｈＣＤ１９導入遺伝子（ＴＧ−１^＋／＋）についてホモ接合のＴＧ−１マウスの間で、血液由来のＢ細胞上のｈＣＤ１９発現は、ヒトＢ細胞上のｈＣＤ１９発現に匹敵した。ＴＧ−１^＋／＋トランスジェニックマウス系統、ＴＧ−１^＋／−トランスジェニックマウス系統およびＴＧ−２^＋／＋トランスジェニックマウス系統におけるｈＣＤ１９発現ならびにｍＣＤ１９発現の相対密度を比較するために、血液由来Ｂ細胞を、抽出し、そして上に記載されるように、ＣＤ１９発現についてアッセイした。その結果を、ヒト血液Ｂ細胞、ｈＣＤ１９ＴＧマウス由来のＴＧ−１^＋／＋血液Ｂ細胞、ＴＧ−１^＋／−血液Ｂ細胞およびＴＧ−２^＋／＋血液Ｂ細胞についてのヒトＣＤ１９発現の％（左）、ならびに野生型（ＷＴ）マウス血液Ｂ細胞、ｈＣＤ１９ＴＧマウス由来のＴＧ−１^＋／＋血液Ｂ細胞、ＴＧ−１^＋／−血液Ｂ細胞およびＴＧ−２^＋／＋血液Ｂ細胞についてのマウスＣＤ１９発現の％（右）を示すヒストグラムにおいて図１Ｂに示す。その値（平均蛍光強度の線形値）は、ヒトまたは野生型（ＷＴ）マウス由来の血液Ｂ細胞（１００％として示される）と比較したＣＤ１９発現の平均相対密度（±ＳＥＭ）を示す。その結果は、ホモ接合のＴＧ−１^＋／＋マウスにおいて、血液Ｂ細胞がヒト血液Ｂ細胞よりも約７２％高い平均蛍光強度によって測定されるような密度でｈＣＤ１９を発現したことを示す。ＴＧ−１^＋／−マウスにおける血液Ｂ細胞は、ヒト血液Ｂ細胞と同様の密度でｈＣＤ１９を発現し、一方で、ＴＧ−２^＋／＋マウスにおける血液Ｂ細胞は、ヒト血液Ｂ細胞よりも６５％低い密度でｈＣＤ１９を発現した。

【0364】

ＴＧ−Ｉ^＋／−マウス組織由来のＢ細胞におけるｈＣＤ１９発現およびｍＣＤ１９発現の相対密度のさらなる比較を、ｈＣＤ１９（左）およびｍＣＤ１９（右）についての、骨髄、血液、脾臓、リンパ節およびＰＬ由来のＢ細胞に対する抗ＣＤ１９抗体染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ±ＳＥＭ）を示すヒストグラムにおいて図１Ｃに示す。この結果は、ＴＧ−１^＋／−マウスにおいて、ｈＣＤ１９が、Ｂ２２０^＋細胞によって、骨髄（６３％のヒト血液レベル）＜血液（１００％）＜脾臓（１２１％）＝リンパ節（１２０％）および＜腹膜腔（１７７％）において漸増するレベルで発現されたことを実証する。ヒトＣＤ１９発現は、ｍＣＤ１９発現に対する小さい影響を有した。ｈＣＤ１９およびｍＣＤ１９についてのｍＲＮＡのレベルは、変化しなかった。

【0365】

ＩｇＧ１（ＨＢ１２ａ、ＨＢ１２ｂ、Ｂ４）アイソタイプ、ＩｇＧ２ａ（ＦＭＣ６３）アイソタイプおよびＩｇＧ２ｂ（ＨＤ２３７）アイソタイプのマウス抗ｈＣＤ１９抗体（ヒトＣＤ１９を結合する）が異なって反応するか否かを決定するために、血液および脾臓のＢ２２０^＋Ｂ細胞を、ＴＧ−１^＋／−マウスから単離した。その単離した細胞を、インビトロで上述の抗ＣＤ１９抗体と接触させ、そしてフローサイトメトリー分析を用いた、アイソタイプ特異的ＰＥを結合体化した二次抗体を使用して可視化したモノクローナル抗体染色を使用して、ヒトＣＤ１９発現トランスジェニックマウス（ｈＣＤ１９ＴＧ）のＢ細胞を結合するそれらの能力について評価した。

【0366】

その結果を、５μｇ／ｍＬにおけるＩｇＧ２ｂ（マウスアイソタイプ）抗ＣＤ１９抗体、ＩｇＧ２ａ（マウスアイソタイプ）抗ＣＤ１９抗体およびＩｇＧ１（マウスアイソタイプ）抗ＣＤ１９抗体についての蛍光強度（ｘ軸） 対 相対的なＢ細胞数（ｙ軸）のグラフにおいて図１Ｄに示す。抗ＣＤ１９抗体によって染色したＢ２２０^＋細胞の蛍光強度を、実線で示し、そしてアイソタイプが一致したコントロール（ＣＴＬ）の蛍光強度を、破線で示す。各抗体は、５μｇ／ｍＬの濃度で、脾臓Ｂ細胞との反応性の飽和レベルに達した。この結果は、ＴＧ−１^＋／−マウス由来のマウス血液およびマウス脾臓のＢ２２０^＋Ｂ細胞における抗ＣＤ１９抗体の結合密度が、試験した抗体アイソタイプならびに血液Ｂ細胞および脾臓Ｂ細胞の両方に関して均一であることを実証した。

【0367】

平均蛍光強度が抗ＣＤ１９抗体アイソタイプと無関係であったか否かを決定するために、個々の抗ＣＤ１９抗体（５μｇ／ｍＬにおける）の結合活性を、ｈＣＤ１９ ｃＤＮＡによってトランスフェクトしたマウスプレＢ細胞株（３００．１９）を、同じ抗マウスＩｇ二次抗体を使用して染色することによって評価した。抗体染色（ＭＦＩ±ＳＥＭ）を、フローサイトメトリー分析を用いて、マウスＩｇ特異的ＰＥに結合体化した二次抗体を使用して可視化した。この結果を、ＨＢ １２ａ抗ＣＤ１９抗体、ＨＢ １２ｂ抗ＣＤ１９抗体、Ｂ４抗ＣＤ１９抗体、ＦＭＣ６３抗ＣＤ１９抗体、ＨＤ２３７抗ＣＤ１９抗体およびコントロール抗体（ＣＴＬ）についての、ｈＣＤ１９ ｃＤＮＡトランスフェクト３００．１９細胞に対する抗ＣＤ１９抗体結合（染色強度によって示される場合、ｙ軸）のヒストグラムにおいてに図１Ｅ示す。各抗体は、抗ＣＤ１９抗体アイソタイプと無関係である特徴的な平均蛍光強度を伴って細胞を染色し、ＨＢ １２ｂは、最も低いレベルの染色を示し、そしてＨＤ２３７は、最も高いレベルの染色を示した。したがって、示された結果は、３００．１９細胞が、抗ＣＤ１９抗体のインビトロでＣＤ１９を結合する能力の比較のめたのモデルインビトロ系であること実証する。

【0368】

したがって、まとめると、図１に示した結果は、ｈＣＤ１９ＴＧマウスおよび３００．１９細胞が、ｈＣＤ１９が密度の範囲にわたって発現される場合、Ｂ細胞を結合する抗ｈＣＤ１９抗体の能力を評価するための適切なインビトロモデル系およびインビボモデル系に相当するを実証する。

【0369】

図１Ａ〜１Ｄは、≧３匹の各遺伝子型のマウスによって得られた結果を示す。

【0370】

（６．３．実施例２：インビボにおけるＢ細胞の抗ＣＤ１９抗体の枯渇）
マウス抗ＣＤ１９抗体（ヒトＣＤ１９に結合する）を、インビボでｈＣＤ１９ＴＧ（ＴＧ−１^＋／−）の血液、脾臓およびリンパ節のＢ細胞を枯渇させるそれらの能力について評価した。各抗体を、マウス１匹あたり２５０μｇまたは５０μｇ（ヒトにおける抗ＣＤ２０治療のために主として４回与えられる３７５ｍｇ／ｍ^２の用量よりも約１０倍〜５０倍低い単一用量）のいずれかでマウスに与えた（Ｍａｌｏｎｅｙら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ、１５：３２６６−７４（１９９７）およびＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら、１２：１７６３−９（１９９８））。

【0371】

その結果を、ＨＢ １２ａ抗ＣＤ１９抗体、ＨＢ １２ｂ抗ＣＤ１９抗体、もしくはＦＭＣ６３抗ＣＤ１９抗体またはコントロールを用いた、ＣＤ１９またはアイソタイプが一致したコントロール（ＣＴＬ）による処置後の７日間のＢ細胞量のプロットにおいて図２Ａに示す。別のプロットが、各抗ＣＤ１９抗体について、リンパ節、脾臓および血液組織に提供される。各プロット上に示される７日間のゲートをかけた枯渇したリンパ球の％は、フローサイトメトリー分析を用いた免疫蛍光染色によって決定した場合の、ＴＧ−１^＋／−マウスの血液、脾臓およびリンパ節からの代表的なＢ細胞の枯渇を示す。図２Ｂは、抗ＣＤ１９抗体（黒塗りの円）またはアイソタイプコントロール抗体（白抜きの円）による処置後のＢ２２０^＋血液Ｂ細胞の平均数（１ｍｌあたりの±ＳＥＭ）を示す。時間０の後に示される値は、１時間において得られたデータを示す。図２Ｃおよび図２Ｄは、それぞれ、示された用量の抗ＣＤ１９抗体（黒塗りのバー）またはコントロール抗体（白抜きのバー）抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後における脾臓およびリンパ節のＢ細胞数（±ＳＥＭ）を示す。図２Ｂ〜２Ｄにおいて、抗ＣＤ１９抗体またはアイソタイプコントロール抗体で処置したマウス（データポイントあたり≧３匹のマウス）についての平均結果の間の有意差を、コントロールと比較して示す；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。

【0372】

各抗体は、処置の１時間以内に大部分の循環するＢ細胞を枯渇させ（図２Ｂ）、７日目で脾臓およびリンパ節のＢ細胞の頻度（図２Ａ）ならびに数（図２Ｃ−Ｄ）に対する強力な枯渇作用を有した。ＨＢ １２ａ抗体は、７日目で、９８％の血液Ｂ細胞ならびに９０〜９５％の脾臓およびリンパ節のＢ細胞を枯渇させた。同様に、ＨＢ１２ｂ抗体、Ｂ４抗体、ＦＭＣ６３抗体およびＨＤ２３７抗体は、それぞれ、９９％、９６％、９９％および９７％の血液Ｂ細胞を枯渇させた。ＨＢ１２ｂ抗体、Ｂ４抗体、ＦＭＣ６３抗体およびＨＤ２３７抗体は、それぞれ、８８〜９３％、６４〜８５％、７２〜９５％および８８〜９０％の脾臓およびリンパ節のＢ細胞を枯渇させた。ほとんど残存しなかったＢ細胞は、主として表現型として、未熟細胞が骨髄からの潜在的な移住細胞（ｅｍｉｇｒａｎｔ）であったことを示した。ＣＤ１９抗体は、ＷＴマウスに与えた場合に、有意な効果を有さず、そして同一条件下で与えたアイソタイプが一致したコントロール抗体は、Ｂ細胞数に影響しなかった（図２Ａ〜２Ｄ）。したがって、抗ｈＣＤ１９抗体は、７日目で、ｈＣＤ１９ＴＧマウスの循環、脾臓およびリンパ節から有効にＢ細胞を枯渇させた。ＴＧ−１^＋／−マウスにおけるＢ細胞の枯渇の概要を、表１に提供する。

【0373】

【表1】

^ａＢ細胞サブセットは、以下であった：骨髄（ＢＭ）プロ−Ｂ（ＣＤ４３^＋ＩｇＭ⁻Ｂ２２０^ｌｏ）、プレ−Ｂ（ＣＤ４３^＋ＩｇＭ⁻Ｂ２２０^ｌｏ）、未熟Ｂ（ＩｇＭ^＋Ｂ２２０^ｌｏ）、成熟Ｂ（ＩｇＭ^＋Ｂ２２０^ｈｉ）；末梢Ｂ１ａ（ＣＤ５^＋Ｂ２２０^ｌｏ）、Ｂ２（ＣＤ５⁻Ｂ２２０^ｈｉ）。
^ｂ値（±ＳＥＭ）は、抗体処置後（２５０μｇ）の７日間のマウスに存在する細胞数（×１０⁻６）を示す。ＢＭ値は、左右の大腿骨についてのものである。血液数は、１ｍｌあたりのものである。ＬＮ数は、左右の鼡径リンパ節および腋窩リンパ節についてのものである。マウスの数は、括弧内に示される。平均の間の有意差は、が示される；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。

【0374】

（６．３．１．骨髄Ｂ細胞の枯渇）
公知の抗ＣＤ１９抗体をｈＣＤ１９ＴＧマウスにおいて試験して、このような抗体が種々の体液および組織からＢ細胞を枯渇させるのに有効であったか否かを決定した。本明細書中に記載されるアッセイは、他の抗ＣＤ１９抗体（例えば、ヒトＣＤ１９抗原の特異的部分に結合する抗ＣＤ１９抗体）が枯渇するＢ細胞を有効に枯渇させるか否かを決定するために使用され得る。Ｂ細胞を枯渇させ得るとして同定された抗ＣＤ１９抗体を使用した結果は、ヒトにおける使用と相関し得る。同定された抗体の特性を有する抗体は、ヒトにおけるＢ細胞の悪性疾患の処置のために、本発明の組成物および方法において使用され得る。図３Ａ〜３Ｆは、ＣＤ１９抗体処置後の骨髄Ｂ細胞の枯渇を示す。

【0375】

図３Ａは、リンパ球の前方散乱特性および側方散乱特性を有する細胞のフローサイトメトリー分析を用いた４色免疫蛍光染色によって評価した、ＴＧ−１^＋／−骨髄Ｂ細胞の下位集団によるｈＣＤ１９発現およびｍＣＤ１９発現についての、蛍光強度（ｘ軸） 対 相対的なＢ細胞数（ｙ軸）のグラフを示す。プロＢ細胞を、ＣＤ４３^＋ＩｇＭ⁻Ｂ２２０^ｌｏと規定し、プレＢ細胞は、ＣＤ４３⁻ＩｇＭ⁻ Ｂ２２０^ｌｏであり、未熟Ｂ細胞は、ＩｇＭ^＋Ｂ２２０^ｌｏであり、そして成熟Ｂ細胞は、ＩｇＭ^＋Ｂ２２０^ｈｉであった。棒グラフ（右）は、各Ｂ細胞サブセット（データポイントあたり≧３匹のマウス）によるＣＤ１９発現についての相対平均ＭＦＩ（±ＳＥＭ）値を示す。ｈＣＤ１９ＴＧマウス（図１Ａ）における通り、ＣＤ１９発現は、ヒトにおいて異質性である。なぜならば、Ｂ細胞は、成熟し、そして骨髄を出るからである。プロＢ細胞の小さい分画（２０％、ＣＤ４３^ｈｉＩｇＭ⁻Ｂ２２０^ｌｏ）のみが、ＴＧ−１^＋／−マウスにおいてｈＣＤ１９を発現したが、ほとんどのプレＢ細胞は、ｈＣＤ１９^＋であり、そして骨髄における大部分の成熟Ｂ細胞は、比較的高いレベルでｈＣＤ１９を発現した。プロＢ細胞の半分（５５％、ＩｇＭ⁻Ｂ２２０^＋）は、ＴＧ−１^＋／−マウスにおいてｍＣＤ１９を発現し、一方で、ＣＤ１９は、大部分のＢ細胞ｓおよび骨髄における成熟Ｂ細胞による比較的高いレベルで発現であった。

【0376】

図３Ｂは、フローサイトメトリー分析を用いた２色免疫蛍光染色によって評価した、ＦＭＣ６３またはアイソタイプが一致したコントロール抗体（２５０μｇ）による処置後の７日間のｈＣＤ１９ＴＧマウスにおけるｈＣＤ１９^＋細胞の枯渇を示す。数は、示されたゲート内の細胞の相対頻度を示す。結果は、各マウス遺伝子型の３つの同腹子の対によって得られた結果を示す。ＣＤ１９抗体処置後、ＴＧ−１^＋／＋マウス、ＴＧ−１^＋／−マウスおよびＴＧ−２^＋／＋マウスの骨髄におけるｈＣＤ１９^＋細胞の大部分は、２５０μｇ／マウスにて与えたＦＭＣ６３抗体によって枯渇した。

【0377】

図３Ｃは、抗ＣＤ１９抗体またはアイソタイプが一致したコントロール抗体（２５０μｇ）によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後の７日間における、体表的なＢ２２０^＋Ｂ細胞の枯渇を示す。棒グラフの値は、抗体処置マウスの左右の大腿骨内のＢ２２０^＋細胞の総数（±ＳＥＭ）を示す。サンプル平均の間の有意差（１群あたり≧３匹のマウス）が、示される；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。予想外にも、検出不可能なレベルまで低いｈＣＤ１９を発現したｍＣＤ１９^＋プレＢ細胞の大きい画分はまた、骨髄から枯渇した。これと一致して、ＦＭＣ６３抗体、ＨＢ １２ａ抗体、ＨＢ １２ｂ抗体、Ｂ４抗体およびＨＤ２３７抗体は、骨髄Ｂ２２０^＋細胞の大部分を枯渇させた。

【0378】

図３Ｄは、３色免疫蛍光染色によって評価した、ＦＭＣ６３抗体またはアイソタイプが一致したコントロール抗体（２５０μｇ）によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後の７日間における代表的な骨髄Ｂ細胞サブセットの枯渇を示す。ＩｇＭ⁻Ｂ２２０^ｌｏプロ／プレＢ細胞を、ＣＤ４３発現（下のパネル）に基づいてさらに細分した。図３Ｅは、２色免疫蛍光染色によって評価した、ＦＭＣ６３抗体またはアイソタイプが一致したコントロール抗体（２５０μｇ）によるｈＣＤ１９ＴＧマウス系統の処置後の７日間における骨髄のＣＤ２５^＋Ｂ２２ Ｂ２２０^ｌｏプレＢ細胞の代表的な枯渇を示す。結果は、異なる日において行なった実験に由来し、したがってゲートは、同一ではない。個々の骨髄の下位集団を分析した場合、大部分のＣＤ４３^ｈｉＩｇＭ⁻Ｂ２２０^ｌｏプロＢ細胞（図３Ｄ）は、ＴＧ−１^＋／＋マウス、ＴＧ−１^＋／−マウスまたはＴＧ−２^＋／＋マウスにおいてＦＭＣ６３抗体処置よって影響されなかった一方で、ＣＤ２５^＋ＣＤ４３^ｌｏＩｇＭ⁻Ｂ２２０^ｌｏプレＢ細胞（図３Ｅ）は、枯渇した。図３Ｆは、ＦＭＣ６３抗体（黒塗りのバー）またはコントロール抗体（白抜きのバー）による≧３匹の同腹子の対の処置後７日間における、左右の大腿骨内のプロＢ細胞、プレＢ細胞、未熟細胞および成熟Ｂ細胞の数（±ＳＥＭ）を示す棒グラフを示す。この結果は、大部分の未熟および成熟Ｂ細胞もまた、ＴＧ−１^＋／＋マウス、ＴＧ−１^＋／−マウスおよびＴＧ−２^＋／＋マウスの骨髄から枯渇した。したがって、ｈＣＤ１９を低レベルで発現したプレＢ細胞を含むほとんどのｈＣＤ１９^＋細胞は、ＣＤ１９抗体処置によって骨髄から枯渇した。

【0379】

（６．３．２．腹膜Ｂ細胞の枯渇）
ＴＧ−１^＋／−マウスにおける腹膜腔Ｂ細胞は、他の組織Ｂ細胞よりも高いレベルでｈＣＤ１９を発現し（図Ａおよび図１Ｃ）、それは、主として、従来の（Ｂ２）Ｂ細胞のＣＤ５⁻ＩｇＭ^ｌｏＢ２２０^ｈｉサブセットよりも約２５％高い密度でｈＣＤ１９を発現したＣＤ５^＋ＩｇＭ^ｈｉＢ２２０^ｌｏＢ１細胞に起因する（図４Ａ）。図４Ｂ〜４Ｃは、腹膜腔Ｂ細胞が抗ＣＤ１９抗体処置に対して感受性であることを示す。

【0380】

図４Ａは、ヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現（ｘ軸）対 腹膜腔のＣＤ５^＋Ｂ２２０^＋ＢＩａ Ｂ細胞およびＣＤ５⁻Ｂ２２０^ｈｉＢ２（従来）Ｂ細胞の相対数（ｙ軸）のプロットを示す。腹膜腔リンパ球の単一細胞の懸濁物を、フローサイトメトリー分析を用いて３色免疫蛍光染色によって試験した。棒グラフは、ＴＧ−１^＋／−マウスの３つの同腹子の対によるＣＤ１９発現についての平均ＭＦＩ（±ＳＥＭ）値を示す。

【0381】

図４Ｂは、ＣＤ１９抗体（２５０μｇのＨＢ１２ａ、ＨＢ１２ｂおよびＦＭＣ６３；５０μｇのＢ４およびＨＤ２３７）またはコントロール抗体（２５０μｇ）によって処置したＴＧ−１^＋／−マウス由来の腹膜腔Ｂ２２０^＋細胞の枯渇を示す。数は、７日目における示されたゲート内のＢ２２０^＋細胞の相対頻度を示す。棒グラフの値は、抗体処置マウス（１群あたり≧３匹のマウス）の腹膜内のＢ２２０^＋細胞の総数（±ＳＥＭ）を示す。サンプル平均の間の有意差が、示される；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。この結果は、２５０μｇ／マウスにおける抗ＣＤ１９抗体処置が、７日目で腹腔Ｂ２２０^＋Ｂ細胞のかなりの部分を枯渇させることを示す。図４Ｂに示す結果は、Ｂ１細胞および従来のＢ２細胞の両方の枯渇によって部分的に説明される。ｈＣＤ１９が最も高い密度でＴＧ−１^＋／＋マウスにおいて発現された場合、大部分のＢ１細胞およびＢ２細胞は、枯渇した。しかし、Ｂ１細胞およびＢ２細胞のＣＤ１９媒介性の枯渇は、ＴＧ−１^＋／−マウスおよびＴＧ−２^＋／＋マウスにおいて効率的ではなく、ｈＣＤ１９レベルは、より低かった。したがって、ＣＤ１９抗体処置は、平均蛍光強度を使用して評価した場合、腹膜のＢ１細胞およびＢ２細胞を枯渇させ、その枯渇は、ＣＤ１９発現のそれらの密度に依存したが、腹膜Ｂ細胞は、脾臓およびリンパ節のＢ細胞よりも抗ＣＤ１９抗体媒介性の枯渇に対して耐性であった。

【0382】

図４Ｃは、抗ＣＤ１９抗体またはコントロール抗体によるｈＣＤ１９ＴＧマウスの処置後の７日間における、ＣＤ５^＋Ｂ２２０^＋Ｂ１ａ Ｂ細胞およびＣＤ５⁻Ｂ２２０^ｈｉＢ２ Ｂ細胞の代表的な枯渇を示す。数は、示されたゲート内の各Ｂ細胞サブセットの相対頻度を示す。棒グラフの値は、抗体処置マウス（１群あたり＞３匹のマウス）の腹膜内の各細胞サブセットの総数（±ＳＥＭ）を示す。サンプル平均の間の有意差が、示される；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。

【0383】

（６．３．３．異なる抗ＣＤ１９抗体は、Ｂ細胞クリアランスを媒介する）
ＨＢ １２ａ抗ＣＤ１９抗体およびＨＢ １２ｂ抗ＣＤ１９抗体が公知の抗ＣＤ１９抗体と異なるか否かを決定するために、本明細書中で使用される各抗ＣＤ１９抗体可変領域のアミノ酸配列を、分析した（図５Ａおよび５Ｂ、図６Ａおよび６Ｂ、図７Ａおよび７Ｂ）
図５Ａは、ＨＢ１２ａ抗ＣＤ１９抗体の重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列についてのヌクレオチド配列（配列番号１）および予想されるアミノ酸配列（配列番号２）を示す。５’ＰＣＲプライマーと重複する配列は、二重下線によって示され、そしてその配列は、重複（ｒｅｄｕｎｄａｎｔ）プライマーを使用したので、実際のＤＮＡ配列から変化し得る。Ｖ配列と、Ｄ配列と、Ｊ配列との間の適切な連結の境界は、垂直のバー（｜）によって配列において示される。下のケースの文字におけるヌクレオチドは、連結の境界におけるヌクレオチド付加、または体細胞突然変異についての可能性がある部位のいずれかを示す。抗体のアミノ末端残基（Ｅ）は、残基１と印を付けられる。

【0384】

図５Ｂは、ＨＢ１２ｂ抗ＣＤ１９抗体の重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列についてのヌクレオチド配列（配列番号３）および予想されるアミノ酸配列（配列番号４）を示す。５’ＰＣＲプライマーと重複する配列は、二重下線によって示され、そしてその配列は、重複プライマーを使用したので、実際のＤＮＡ配列から変化し得る。Ｖ配列と、Ｄ配列と、Ｊ配列との間の適切な連結の境界は、垂直のバー（｜）によって配列において示される。下のケースの文字におけるヌクレオチドは、連結の境界におけるヌクレオチド付加、または体細胞突然変異についての可能性がある部位のいずれかを示す。抗体のアミノ末端残基（Ｅ）は、残基１と印を付けられる。

【0385】

図６Ａは、ＨＢ１２ａ抗ＣＤ１９抗体の軽鎖ＶＫ−ＪＫ連結配列についてのヌクレオチド配列（配列番号１５）および予想されるアミノ酸配列（配列番号１６）を示す。図６Ｂは、ＨＢ１２ｂ抗ＣＤ１９抗体の軽鎖Ｖ−Ｊ連結配列についてのヌクレオチド配列（配列番号１７）および予想されるアミノ酸配列（配列番号１８）を示す。アミノ酸配列分析によって決定された成熟分泌タンパク質のアミノ末端アミノ酸は、番号１として番号付けされる。３’ＰＣＲプライマーと重複する配列は、二重下線によって示される。Ｖ−Ｊ−Ｃ領域についての予想される連結の境界が、示され（／）、Ｊ領域ヌクレオチドは、太字で、体細胞突然変異についての可能性がある部位を示す。

【0386】

図７Ａおよび図７Ｂは、公開されたマウス抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列アライメントを示す。．図７Ａは、コンセンサス配列（配列番号５）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、ＨＢ１２ａ（配列番号２）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、４Ｇ７（配列番号６）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、ＨＢ１２ｂ（配列番号４）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、ＨＤ３７（配列番号７）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、Ｂ４３（配列番号８）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、およびＦＭＣ６３（配列番号９）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列についての配列アライメントを示す。各抗体のＶ領域、Ｄ領域およびＪ領域についてのアミノ酸の番号付けならびにコード配列の起点の決定は、従来の方法に従い（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．、Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｏｆｆｉｃｅ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１））、アミノ酸位置１〜９４ならびに相補性決定領域ＣＤＲ１およびＣＤＲ２は、Ｖ_Ｈ遺伝子によってコードされる。ダッシュは、類似するアミノ酸配列のアライメントを最大化するためにその配列中に挿入されたギャップを示す。ドットは、各抗ＣＤ１９抗体と、全ての抗体についてのコンセンサスアミノ酸配列との間の同一性を示す。ＣＤＲ領域は、明確性のために強調される。図７Ｂは、抗ＣＤ１９抗体の軽鎖Ｖκアミノ酸配列分析を示す。コンセンサス配列（配列番号１０）、ＨＢ１２ａ（配列番号１６）；ＨＢ１２ｂ（配列番号１８）；ＨＤ３７（配列番号１１）、Ｂ４３（配列番号１２）、ＦＭＣ６３（配列番号１３）および４Ｇ７（配列番号１４）が、整列される。アミノ酸の番号付けおよび各抗ＣＤ１９抗体についてのコード配列の起点の決定は、従来の方法に従う（Ｋａｂａｔら、（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．、Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｏｆｆｉｃｅ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）。予想されるシグナル配列切断部位の次のアミノ酸が、１と番号付けられる。ダッシュは、類似するアミノ酸配列のアライメントを最大化するためにその配列中に挿入されたギャップを示す。ＣＤＲ領域は、明確性のために強調される（囲まれる）。

【0387】

この研究において試験された各抗ＣＤ１９抗体は、インビボで有意な数のＢ細胞を枯渇させたので、各抗ＣＤ１９抗体可変領域のアミノ酸配列を、これらの抗体が、配列において異なり、そして異なるＣＤ１９エピトープに潜在的に結合するか否かを決定するために評価した。抗体は、各抗体分子の可変領域内の特定のアミノ酸によって媒介される分子相互作用によって標的抗原を結合する。したがって、タンパク質抗原と、これらの抗原上の特定のエピトープに結合する抗体との間の複雑な相互作用は、各抗体およびその特定のアミノ酸配列に対してほぼ固有である。抗原と抗体との相互作用における複雑性のレベルは、ほとんどのタンパク質抗原に対する多様な抗体レパートリーの反映である。標的抗原との抗体の相互作用が、主として、抗体分子の相補性決定領域（ＣＤＲ）内のアミノ酸によって媒介される一方で、フレームワークアミノ酸もまた、抗原結合活性に重要である。したがって、構造的に類似する抗体は、同じ抗原または標的分子の領域に結合するようである一方で、異なるＶ領域およびＣＤＲ領域を有する構造的に類似しない抗体は、異なる分子相互作用を介して抗原の異なる領域と相互作用するようである。

【0388】

標的抗原の同じ分子領域（またはエピトープ）を相互作用し、そしてそれに結合する抗体は、定義により構造的に類似するので、ＨＢ １２ａ、ＨＢ １２ｂ、ＦＭＣ６３および他の公開された抗ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列を、ＨＤ３７抗体（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９６：５１−６２（１９９６）；Ｌｅ Ｇａｌｌら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ、４５３：１６４−１６８（１９９９））、２Ｇ７抗体（Ｍｅｅｋｅｒら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、３：３０５−３２０（１９８４）；Ｂｒａｎｄｌら、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ、２７：１２６４−１２７０（１９９９））およびＢ４３抗体（Ｂｅｊｃｅｋら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５５：２３４６−２３５１（１９９５））を含めて比較した。上記抗ＣＤ１９抗体の重鎖を、Ｖ（Ｄ）Ｊ遺伝子セグメントと、Ｖ１Ｓ３９遺伝子セグメント、Ｖ１Ｓ５６遺伝子セグメント、Ｖ１Ｓ１３６遺伝子セグメント、またはＶ２Ｓ１遺伝子セグメントに由来するＶ領域と、ＦＬ１６．１遺伝子セグメントに由来するＤ領域と、Ｊ２遺伝子セグメントまたはＪ４遺伝子セグメントのいずれかに由来するＪ領域との異なる組み合わせによって産生した（表２）。Ｂ４３抗体およびＨＤ３７抗体の公開された重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、アミノ酸配列において実質的に同一であった（図７Ａ〜７Ｂ）。保存のこのレベルは、これらの抗体の各々がまた、同一のＶ_Ｈ（Ｄ）Ｊ_Ｈ連結部およびＶ_ＬＪ_Ｌ連結部を有するヌクレオチドレベルにおいて著しく類似するという事実を反映し、それらは、その違いのほとんどが、各ｃＤＮＡ配列をＰＣＲ増幅するための重複プライマーの使用によって説明される。これは、ＨＤ３７およびＢ４３ならびに抗体が共通（同一でない場合）の起源を共有し、従ってＣＤ１９タンパク質上の同一のエピトープに結合することを示す。ＨＢ １２ａ抗体および４Ｇ７抗体はまた、他の抗ＣＤ１９抗体と異なっていた。ＨＢ １２ａ抗体および４Ｇ７抗体の重鎖領域は、類似し、そして同じ生殖系列Ｖ_Ｈ（Ｄ）Ｊ_Ｈ遺伝子セグメントに由来しているようであるが、異なる連結の境界が、Ｄ−Ｊ_Ｈの構築に使用された（図７Ａ）。ＨＢ １２ｂ抗体は、異なるＶ_Ｈ遺伝子セグメントを利用し（表２）、そして他の抗ＣＤ１９抗体と明確に異なるＣＤＲ３配列を有した。ＦＭＣ６３抗体はまた、他の抗ＣＤ１９抗体と非常に異なるアミノ酸配を有した。

【0389】

【表2】

Ｎ．Ｄ．、決定されず。
^ａ括弧内の数は、ＰＣＲプライマーと重複する領域を除いて、ＣＤ１９抗体をコードする遺伝子と、現在のデータベースにおいて同定された最も相同的な生殖系列配列との間のヌクレオチドの違いの数を示す。
^ｂ遺伝子配列についてのＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号
図７Ｂに示す通り、ＨＢ１２ａ抗体、ＨＢ１２ｂ抗体、ＦＭＣ６３抗体、４Ｇ７抗体およびＨＤ３７／Ｂ４３抗体は、それぞれ、異なる軽鎖遺伝子を利用する（図７Ｂ）。軽鎖を、複数のＶ遺伝子セグメントおよびＪ遺伝子セグメントから産生した。これらの６種の抗ＣＤ１９抗体のＨ鎖配列およびＬ鎖配列の間の同種性（ｈｏｍｏｇｅｎｅｉｔｙ）の欠如は、これらの抗体がヒトＣＤ１９上の数種の異なる部位に結合すること示唆する。対になる重鎖および軽鎖のアミノ酸配列の比較は、これらの抗ＣＤ１９抗体の大部分が、構造的に異なり、したがって異なる分子相互作用を介してヒトＣＤ１９を結合することをさらに示す。したがって、抗ＣＤ１９抗体のインビボでＢ細胞を枯渇させる能力は、同一部位にてＣＤ１９を結合する限定された数の抗体に限られないが、クラスのような抗ＣＤ１９抗体の一般的特性である。

【0390】

（６．３．４．ＣＤ１９密度は、ＣＤ１９抗体誘導性のＢ細胞の枯渇の効果に影響を及ぼす）
抗ＣＤ１９抗体のＢ細胞を枯渇させる能力がＣＤ１９密度に依存するか否かを決定するために、ＨＢ １２ｂ抗ＣＤ１９抗体およびＦＭＣ６３抗ＣＤ１９抗体を、変動するレベルのＣＤ１９発現を有するマウスに投与した。その結果は、Ｂ細胞上のヒトＣＤ１９密度および抗体アイソタイプが抗ＣＤ１９抗体の存在下においてＢ細胞の枯渇に影響を及ぼし得ることを示す。同じアッセイは、他の抗ＣＤ１９抗体がＢ細胞を効率的に枯渇させる得るか否かを決定するために使用され得、そしてその結果は、変動するレベルのＣＤ１９発現を有するヒト患者の処置に相関し得る。したがって、第５．５．３節に記載されるヒト被験体においてＣＤ１９の存在および密度を試験するための方法は、特定の抗ＣＤ１９抗体がＢ細胞を枯渇させ得る患者もしくは患者集団を同定するためおよび／または適切な投薬量を決定するために使用され得る。

【0391】

上に示した結果は、試験した全５種の抗ＣＤ１９抗体は、２５０μｇまたは５０μｇで使用した場合にＴＧ−１^＋／−マウスにおいて同様に有効であったが、血液骨髄および脾臓由来のＢ細胞に対するＢ細胞の枯渇の程度は、抗体アイソタイプと相関するようであった（ＩｇＧ２ａ＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ２ｂ）（図２Ａ〜図２Ｄ）。したがって、ＨＢ １２ｂ（ＩｇＧ１）抗体およびＦＭＣ６３（ＩｇＧ２ａ）抗体の効果を、異なる密度でＣＤ１９を発現するホモ接合ＴＧ−１^＋／＋マウス、ヘテロ接合ＴＧ−１^＋／−マウスおよびホモ接合ＴＧ−２^＋／＋マウスにおいて比較した（図１Ａ〜１Ｅ）。

【0392】

ＣＤ１９密度が抗ＣＤ１９抗体誘導性のＢ細胞の枯渇の効果に影響を及ぼすか否かを決定するために、代表的な血液および脾臓のＢ細胞の枯渇を、ＨＢ １２ｂ（図８Ａ）抗体またはＦＭＣ６３（図８Ｂ）抗体による処置後のｈＣＤ１９ＴＧマウスにおいて試験した（７日間、２５０μｇ／マウス）。数は、ゲートをかけたＢ２２０^＋リンパ球の％を示す。棒グラフは、抗ＣＤ１９抗体（黒塗りのバー）またはアイソタイプコントロール（白抜きのバー）抗体による処置後の血液（１ｍＬあたり）または脾臓（総数）のＢ細胞の数（±ＳＥＭ）を示す。抗ＣＤ１９抗体またはアイソタイプコントロール抗体で処置したマウス（データポイントあたり≧３匹のマウス）についての平均結果の間の有意差が、示される；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。

【0393】

図８Ａ〜８Ｄに与えられた結果は、ＣＤ１９密度が抗ＣＤ１９抗体によるインビボでのＢ細胞の枯渇の効率に影響を及ぼすことを示す。ＴＧ−２^＋／＋マウスにおける低レベルのＣＤ１９発現は、７日目において、ＨＢ１２ｂ抗体による循環するＢ細胞または組織Ｂ細胞の枯渇に対する顕著な影響を有した（図８Ａ）。ＴＧ−１^＋／＋マウス、ＴＧ−１^＋／−マウスおよびＴＧ−２^＋／＋マウスによるＣＤ１９発現における違いはまた、ＦＭＣ６３抗体による循環するＢ細胞または組織Ｂ細胞の枯渇に影響を及ぼしたが、循環するＢ細胞の枯渇を有意に変化させなかった（図８Ｂ）。

【0394】

ＣＤ１９密度がＣＤ１９ ｍＡｂ媒介性のＢ細胞の枯渇において重要な因子であることをさらに確かめるために、ＣＤ１９ＴＧ−１^＋／＋Ｂ細胞およびＣＤ１９ＴＧ−２^＋／＋Ｂ細胞の相対枯渇速度を、直接比較した。ＣＤ１９ＴＧ−１^＋／＋マウスおよびＣＤ１９ＴＧ−２^＋／＋マウス由来の脾細胞を、ＣＦＳＥを用いて差示的に標識した（ｈＣＤ１９ＴＧ−１^＋／＋マウスおよびｈＣＤ１９ＴＧ−２^＋／＋マウス由来の分別していない脾細胞を、それぞれ、０．１μＭおよび０．０１μＭのＶｙｂｒａｎｔ^ＴＭＣＦＤＡ ＳＥ（ＣＦＳＥ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を用い、製造業者の指示書に従ってを標識することによる）。ＣＦＳＥ標識した脾細胞の間のＢ２２０^＋細胞の相対頻度を、フローサイトメトリー分析を用いた免疫蛍光染色によって決定した。次いで、等しい数のＣＦＳＥ標識したＢ２２０^＋ｈＣＤ１９ＴＧ−１^＋／＋脾細胞およびＢ２２０^＋ｈＣＤ１９ＴＧ−２^＋／＋脾細胞（２．５×１０^５）を、３匹の野生型Ｂ６マウスの腹膜腔に注射した。１時間後、そのマウスに、ＦＭＣ６３またはコントロールｍＡｂ（２５０μｇ、ｉ．ｐ．）のいずれかを与えた。２４時間後、標識されたリンパ球を、フローサイトメトリーによって評価した場合のＣＦＳＥ標識したＢ２２０^＋細胞およびＢ２２０⁻細胞の相対頻度と共に回収した。図８Ｃ中の各ヒストグラムにおけるゲートは、ＣＤ１９ＴＧ−１^＋／＋（ＣＦＳＥ^ｈｉｇｈ）脾細胞集団およびＣＤ１９ＴＧ−２^＋／＋（ＣＦＳＥ^ｌｏｗ）脾細胞集団内のＢ２２０^＋細胞の頻度を示す。棒グラフは、コントロール ｍＡｂ処置マウスと比較して抗ＣＤ１９ｍＡｂ処置マウスに存在するＣＦＳＥ標識した細胞集団の数を示す。結果は、≧３匹の野生型レシピエントマウス中に転移したｈＣＤ１９ＴＧ−１^＋／＋脾細胞（黒塗りのバー）およびｈＣＤ１９ＴＧ−２^＋／＋脾細胞（白抜きのバー）が、サンプル平均（±ＳＥＭ）の間の有意差を示したことを表す；^＊＊ｐ＜０．０１。

【0395】

Ｂ細胞クリアランスを、抗ＣＤ１９ ｍＡｂまたはコントロールｍＡｂによる個々のマウスの処置後２４時間評価した。ＣＤ１９ＴＧ−１^＋／＋ Ｂ２２０^＋Ｂ細胞は、コントロールｍＡｂ処置マウスと比較して、抗ＣＤ１９ ｍＡｂ処置マウスにおいてＣＤ１９ＴＧ−２^＋／＋ Ｂ細胞よりも有意に速い速度（ｐ＜０．０１）で枯渇した（図８Ｃ）。さらに、抗ＣＤ１９ ｍＡｂ処置マウスにおけるＣＤ１９ＴＧ−２^＋／＋ Ｂ２２０^＋Ｂ細胞に対するＣＤ１９ＴＧ−１^＋／＋ Ｂ２２０^＋Ｂ細胞の相対頻度は、コントロールｍＡｂ処置マウスにおけるＣＤ１９ＴＧ−２^＋／＋ Ｂ２２０^＋Ｂ細胞に対するＣＤ１９ＴＧ−１^＋／＋ Ｂ２２０^＋Ｂ細胞の比よりも有意に低かった（ｐ＜０．０１）。同様に、抗ＣＤ１９ ｍＡｂマウスまたはコントロールｍＡｂマウスにおけるＣＤ１９ＴＧ−１^＋／＋およびＣＤ１９ＴＧ−２^＋／＋のＣＦＳＥ標識したＢ２２０⁻細胞の数もまた、共通点を有した。したがって、高密度のＣＤ１９を発現するＣＤ１９ＴＧ−１^＋／＋Ｂ細胞は、低密度でＣＤ１９を発現するＣＤ１９ＴＧ−２^＋／＋Ｂ細胞よりも速い速度で枯渇する。

【0396】

図８Ｄは、抗体染色を用いて、ＣＤ１９抗体（太い線）、ＣＤ２０抗体（細い線）またはアイソタイプが一致したコントロール抗体（ＣＴＬ、破線）（５μｇ／ｍＬ）によって染色したＢ２２０^＋細胞の蛍光強度を示し、この抗体染色は、フローサイトメトリー分析を用いたアイソタイプ特異的な、ＰＥが結合体化した二次抗体を使用して可視化される。結果は、４回の実験において得られた結果を示す。その結果は、ＴＧ−１^＋／−マウス由来の脾臓Ｂ２２０^＋Ｂ細胞における抗ｈＣＤ１９抗体および抗ｍＣＤ２０抗体の相対結合密度を示す。抗ｍＣＤ２０抗体結合の密度は、１０〜６４％であり、それは、抗ＣＤ１９抗体と同程度に高く、各抗体について使用された抗体アイソタイプとは無関係である（図８Ｄ）。ｍＣＤ２０発現は、一般に、ｈＣＤ１９発現よりも低かったが、ＴＧ−１^＋／−マウスにおけるｈＣＤ１９発現のレベルは、依然として、ヒトＢ細胞において見出されるｈＣＤ１９発現のレベルに匹敵する（図１Ｂ）。したがって、抗ＣＤ１９抗体は、比較的低密度でｈＣＤ１９を発現したＴＧ−２^＋／＋Ｂ細胞を有効に枯渇させたが（図１Ｂ）、ＴＧ−１^＋／＋細胞およびＴＧ−１^＋／−Ｂ細胞による高レベルのＣＤ１９発現は、ＩｇＧ２ａ抗体およびＩｇＧ１抗体の効果における相対的差異を分かりにくくした。Ｂ細胞の数とＴＧ−１トランスジェニックマウスおよびＴＧ−２トランスジェニックマウスにおけるｈＣＤ１９発現の密度との間に、直接の逆相関が存在するが、ｈＣＤ１９の密度は、Ｂ細胞の枯渇に寄与する重要な因子である。抗ＣＤ１９抗体レベルは、２５０μｇ／マウスにて投与した場合に、飽和された（図１２における飽和レベルもまた、参照のこと）。したがって、遊離の抗ＣＤ１９抗体のレベルは、Ｂ細胞数に関係なく、過剰なレベルであった。

【0397】

（６．４．実施例３：組織Ｂ細胞の枯渇は、ＦＣγＲ依存性）
以下のアッセイを使用して、抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞の枯渇がＦｃγＲ発現に依存するか否かを決定した。ｈＣＤ１９ｔｇと特定のＦｃγＲの発現を欠くマウスとを異種交配する工程によって、ｈＣＤ１９を発現しかつ特定のＦｃγＲの発現を欠いたマウスを、産出した。このようなマウスをアッセイに使用して、抗ＣＤ１９抗体の、ＦｃγＲ発現を含む経路（例えば、ＡＤＣＣ）を介してＢ細胞枯渇させる能力を評価した。したがって、これらのアッセイにおいて同定された抗ＣＤ１９抗体は、上で第５．１節において記載される技術を使用してキメラ抗ＣＤ１９抗体、ヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を設計するために使用され得る。次に、このような抗体は、ヒトにおけるＢ細胞の悪性疾患の処置のための本発明の組成物および方法に使用され得る。

【0398】

先天免疫系は、ＦｃγＲ依存性の工程による抗ＣＤ２０抗体処置後のＢ細胞の枯渇を媒介する。マウスエフェクター細胞は、ＩｇＧに関して４種の異なるＦｃγＲクラス（高親和性のＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）分子および低親和性のＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）分子、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）分子ならびにＦｃγＲＩＶ分子）を発現する。ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃγＲＩＶは、各リガンド結合α鎖が一般的なγ鎖（ＦｃＲγ）と結合するへテロオリゴマー複合体である。ＦｃＲγ鎖発現は、ＦｃγＲの構築ためおよびＦｃγＲによるエフェクター機能の誘発のために必要とされ、このエフェクター機能としては、マクロファージによる貪食作用が挙げられる。ＦｃＲγ^−／−マウスは、高親和性のＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）分子および低親和性のＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）分子ならびにＦｃγＲＩＶ分子を欠くので、ｈＣＤ１９を発現するＦｃＲγ^−／−マウスを、抗ＣＤ１９抗体処置後の組織Ｂ細胞の枯渇におけるＦｃγＲの役割を評価するために使用した。図９Ａは、抗ＣＤ１９抗体またはアイソタイプ−コントロール抗体によるＦｃＲγ^＋／−同腹子またはＦｃＲγ^−／−同腹子の処置後の７日間における、それぞれ、血液および脾臓のＢ細胞の枯渇を示す。数は、示されたゲート内のＢ２２０^＋リンパ球の％を示す。図９Ｂは、０日目におけるＦｃＲγ^−／−同腹子の抗体処置後の７日間ににおける、血液および組織のＢ細胞の枯渇を示す。血液について、時間０の後に示される値は、１時間にて得られたデータを示す。棒グラフは、抗ＣＤ１９抗体（黒塗りのバー）またはアイソタイプコントロール抗体（白抜きのバー）によるマウス（１群あたり≧３匹のマウス）の処置後における、平均のＢ２２０^＋Ｂ細胞数（±ＳＥＭ）を示す。抗ＣＤ１９処置マウスまたはアイソタイプコントロール抗体処置マウスについての平均結果の間の有意差が、示される；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。図９Ａおよび９Ｂに与えられた結果は、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞の枯渇がＦｃＲγ依存性であることを示す。ＩｇＧ２ａ抗体によって処置したＦｃＲγ^−／−同腹子と比較した場合、ＦＭＣ６３抗体処置後のＦｃＲγ^−／−マウスにおける骨髄、血液、脾臓、リンパ節および腹膜腔のＢ細胞の数に、変化はなかった。対照的に、抗ＣＤ１９抗体処置は、ＦｃＲγ^＋／−同腹子においてほとんどのＢ細胞を枯渇させた。したがって、抗ＣＤ１９抗体処置は、主として、ＦｃγＲＩ発現およびＦｃγＲＩＩＩ発現を必要とする経路を介して血液Ｂ細胞および組織Ｂ細胞を枯渇させる。

【0399】

図９Ｃは、単球が枯渇したｈＣＤ１９ＴＧ−１^＋／−マウスにおける代表的なＢ細胞数を示す。マウスを、クロドロネートリポソームによって−２日目、１日目および４日目において処置し、かつ２５０μｇのＦＭＣ６３ ｍＡｂ（ｎ＝９）、アイソタイプコントロール ｍＡｂ（ｎ＝６）、またはＣＤ２０ ｍＡｂ（ｎ＝３）を０日目に与えた。ＰＢＳ−リポソームによって処置したマウスおよびＦＭＣ６３抗ＣＤ１９抗体（ｎ＝３）によって処置したマウスは、コントロールとして機能した。抗体処置後の７日間において示された代表的な血液および脾臓のＢ細胞の枯渇を、示されたゲート内のリンパ球の％を用いて示した。

【0400】

図９Ｄは、（Ｃ）にあるような、抗体処置後の７日間における血液および組織のＢ細胞の枯渇を示す。棒グラフは、マウス（１群あたり≧３匹のマウス）の抗体処置後の平均のＢ２２０^＋Ｂ細胞数（±ＳＥＭ）を示す。血液について、値は、ＦＭＣ６３抗ＣＤ１９抗体（黒塗りの三角）を伴うＰＢＳ処置マウスの循環するＢ細胞の数、またはコントロール抗体（白抜きの円）、ＣＤ２０抗体（黒塗りの四角）、もしくはＦＭＣ６３抗ＣＤ１９抗体（黒塗りの円）によって処置した単球が枯渇したマウスの循環するＢ細胞の数を示す。アイソタイプコントロールｍＡｂ処置マウスおよび他の群についての平均結果の間の有意差が、示される；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。

【0401】

図９に与えられた結果は、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞の枯渇がＦｃＲγおよび単球に依存することを示す。リポソーム封入クロドロネートを用いた処置によってマクロファージ欠損にされたマウスは、ＦＭＣ６３抗体、抗ＣＤ２０（ＭＢ２０−１１）抗体またはコントロール抗ＣＤ１９抗体による処置後の１日間において、枯渇する 循環するＢ細胞を有意に枯渇しなかったが、ＦＭＣ６３抗体処置は、ＰＢＳ充填（ｌｏａｄｅｄ）リポソームによって処置したマウスにおいて循環するＢ細胞を排除した（図９Ｃ〜９Ｄ）。４〜７日後、循環するＢ細胞数は、ＦＭＣ６３抗体処置および抗ＣＤ２０抗体処置の両方によって有意に枯渇し、抗ＣＤ１９抗体処置は、クロドロネート処置マウスにおけるＢ細胞数に対する、より劇的な効果を有した。同様に、抗ＣＤ１９抗体処置および抗ＣＤ２０抗体処置は、７日目に、コントロール抗体処置同腹子と比較して、クロドロネート処置マウスにおいて骨髄Ｂ２２０^＋細胞数を５５％減少させ、一方で抗ＣＤ１９抗体処置は、ＰＢＳ処置マウスにおいて骨髄Ｂ２２０^＋細胞数を８８％減少させた。抗ＣＤ１９抗体処置は、７日目に、コントロール抗体処置同腹子と比較して、クロドロネート処置マウスにおいて脾臓Ｂ細胞数を５２％減少させ、一方で抗ＣＤ２０抗体は、Ｂ細胞を最小限まで枯渇させ、そして抗ＣＤ１９抗体処置は、ＰＢＳ処置マウスにおいて脾臓Ｂ細胞数を８９％減少させた。抗ＣＤ１９抗体処置および抗ＣＤ２０抗体処置の両方は、７日目に、コントロール抗体処置同腹子と比較して、クロドロネート処置マウスにおいてリンパ節Ｂ細胞数を４８〜５３％減少させ、一方で抗ＣＤ１９抗体処置は、ＰＢＳ処置マウスにおいてリンパ節Ｂ細胞数を９３％減少させた。血液、脾臓およびリンパ節において、抗ＣＤ１９抗体処置は、ＰＢＳ処置同腹子においてよりもクロドロネート処置マウスにおいて有意に有効ではなかった（ｐ＜０．０１）。これらの発見は、マクロファージを、インビボにおけるＣＤ１９^＋Ｂ細胞およびＣＤ２０^＋Ｂ細胞の枯渇に対する主要なエフェクター細胞と見なし、そして抗ＣＤ１９抗体治療が、単球の数または機能が減少する場合に抗ＣＤ２０抗体治療よりも有効であり得ることを示す。

【0402】

（６．５．実施例４：抗ＣＤ１９抗体誘導性のＢ細胞の枯渇は、長持ちする）
Ｂ細胞の枯渇の効力および持続期間を評価するために、ｈＣＤ１９ＴＧマウスに、抗ＣＤ１９抗体の単一であり低用量の２５０μｇ注射を施した。図１０Ａ〜１０Ｃは、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞の枯渇の持続期間および用量反応を示す。図１０Ａは、０日目におけるＦＭＣ６３抗体またはアイソタイプコントロール抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後の、血液Ｂ２２０^＋Ｂ細胞およびＴｈｙ−１^＋ Ｔ細胞の数を示す。値は、各群における６匹のマウスからの平均（±ＳＥＭ）結果を示す。この結果は、循環するＢ細胞が１３週間にわたって枯渇し、血液由来のＢ細胞が次の１３週間にわたって緩やかに回復したことを示す。Ｔｈｙ−１^＋ Ｔ細胞の表示は、抗ＣＤ１９処置の結果として、変化しなかった。

【0403】

図１０Ｂ〜１０Ｃは、図１０Ａで示されるマウスにおける、抗体処置後の１１週目、１６週目および３０週目での代表的な組織Ｂ細胞の枯渇を示す。数は、示されたゲート内のＢ２２０^＋リンパ球の％を示す。図１０Ｂにおける結果は、骨髄、血液、脾臓、リンパ節および腹膜腔が、本質的に、抗体処置後の１１週間においてＢ細胞を欠いたことを示す（サンプル平均の間の有意差が、示される；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。循環するＢ細胞の最初の出現の後、循環するＢ細胞数は、さらに１０週間を超える期間をかけて、正常範囲に達した。抗体処置後１６週間で、血液、脾臓、ＬＮおよびＰＬのＢ細胞数が、回復し始めた一方で、ＢＭのＢ細胞成分は、図１０Ｃに示される通り、未処置コントロールと有意に異ならなかった。３０週間目で、全ての組織に、正常コントロールに匹敵するレベルでＢ細胞が再集合した。

【0404】

図１０Ｄは、血液、骨髄および脾臓のＢ細胞の枯渇に対する抗ＣＤ１９抗体の用量反応を示す。マウスを、０日目に抗ＣＤ１９抗体によって処置し、組織Ｂ細胞の表示を、７日目に評価した。結果は、各抗体用量に対して各群における３匹のマウスを用いて得られたものを示す。コントロール抗体用量は、２５０μｇである。サンプル平均の間の有意差が、示される；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。２μｇ／マウスと同程度の低さの単一ＦＭＣ６３抗体用量が、かなりの数の循環するＢ細胞を枯渇させた一方で、１０μｇのＨＢ １２ｂ抗体が、循環するＢ細胞数を有意に減少させるために必要とされた（図１０Ｄ）。骨髄および脾臓のＢ細胞の顕著な枯渇は、７日目で、１０〜５０μｇ／マウスからなる５倍高い抗体用量を必要とした。したがって、比較的低用量でのＣＤ１９抗体処置は、枯渇する大部分の循環するＢ細胞および組織Ｂ細胞を、かなりの時間の期間にわたって枯渇させ得る。

【0405】

（６．５．１．ＣＤ１９は、抗ＣＤ１９抗体の投与後にＢ細胞表面上に存続する）
ＣＤ１９の内在化がインビボでのＢ細胞の枯渇に影響を及ぼしたか否かを、２５０μｇのＨＢ １２ａ抗体処置、ＨＢ １２ｂ抗体処置およびＦＭＣ６３抗体処置後の細胞表面のＣＤ１９発現を比較することによって評価した。

【0406】

図１１Ａ〜１１Ｃは、インビボで２５０μｇのＨＢ１２ａ抗体（図１１Ａ）、ＨＢ１２ｂ抗体（図１１Ｂ）、ＦＭＣ６３抗体（図１１Ｃ）またはアイソタイプが一致したコントロール抗体によって処置したＴＧ−１^＋／−マウスにおける細胞表面のＣＤ１９発現およびＢ細胞クリアランスを示す。時間０（抗ＣＤ１９投与の前）、ならびに抗体投与の１時間後、４時間後および２４時間後において、脾臓Ｂ細胞を、回収し、そしてインビトロでアイソタイプ特異的二次抗体を用いて細胞を処理し、フローサイトメトリー分析を用いてＣＤ１９抗体結合（太い線）およびコントロール抗体結合（細い線）について評価した。単離したＢ細胞をまた、飽和濃度の各ＣＤ１９抗体を用いてインビトロで処理し、さらに、アイソタイプ特異的二次抗体を用いてインビトロで処理し、フローサイトメトリー分析を用いて、細胞表面全体のＣＤ１９発現を可視化した。各時点は、１匹のマウスによる結果を示す。図１１Ａ〜１１Ｃに与えられた結果は、細胞表面のＣＤ１９がインビボでの抗体結合後に細胞表面から排除されないことを実証し、かつ大部分の脾臓Ｂ細胞は抗体処置後２４時間までにわたって高レベルの細胞表面ｈＣＤ１９を均一に発現したが、Ｂ細胞のサブセットは、ＦＭＣ６３抗体処置後の１時間にて減少したレベルのｈＣＤ１９を発現したことを示す（図１１Ｃ）。図１１Ａ〜１１Ｃに示される結果はまた、Ｂ細胞の表面上のＣＤ１９の量が一定であることを実証し、これは、そのＢ細胞のＡＤＣＣを媒介する性能が維持されることを示す。

【0407】

この結果は、ＣＤ１９が、驚くべきことに、抗ＣＤ１９抗体の投与後に予想されるよりも低いレベルの内在化を示したことを実証する。特に、この結果は、ＣＤ１９が、予想外にも、抗ＣＤ１９抗体の結合後に細胞表面上に存続し、したがって、Ｂ細胞が、ＡＤＣＣ活性に曝され易い（ａｃｃｅｓｓｉｂｌｅ）ままであることを実証する。これらの結果は、部分的に、本発明の抗ＣＤ１９抗体および処置レジメンがＢ細胞の悪性疾患を処置するのに有効である理由を示す。図１２Ａ〜１２Ｃは、Ｂ細胞の枯渇の程度、および抗ｈＣＤ１９抗体のｈＣＤ１９を結合し、したがって他の抗ｈＣＤ１９抗体の結合を阻害する能力を記録する。図１２Ａにおける結果は、ＴＧ−１^＋／−マウスに対するＦＭＣ６３（２５０μｇ）の単回投与が抗体投与の１時間以内に血液Ｂ細胞および脾臓Ｂ細胞の両方の有意な枯渇をもたらすことを示す。この実験において、血液細胞および脾臓細胞を、回収し、そして抗ＣＤ１９抗体投与の前またはその後の種々の時間（１時間、４時間、または２４時間）においてＢ細胞の頻度を評価した。血液サンプルを、抗Ｔｈｙ１．２および抗Ｂ２２０によって染色して、右下象限（ｌｏｗｅｒ ｒｉｇｈｔ ｑｕａｄｒａｎｔ）においてＢ細胞を同定した。脾臓細胞を抗ＩｇＭ抗体および抗Ｂ２２０抗体によって染色して、示されたゲート内のＢ細胞を同定した。各時点は、１匹のマウスによる結果を示す。予想外にも、血液Ｂ細胞は、脾臓Ｂ細胞よりも迅速に除去された。

【0408】

図１２Ａに記載されるＢ細胞の枯渇は、投与した抗体が投与の１時間以内にｈＣＤ１９上の利用可能な抗体結合部位を迅速に飽和させたことを示唆した。この観察を裏付けるために、マウスを、ＦＭＣ６３（ｈＣＤ１９結合抗体）またはアイソタイプコントロール抗体のいずれかによって処置した。その後、種々の時間において、血液および脾臓のＢ細胞を、ｍＣＤ１９^＋Ｂ細胞またはｍＣＤ２０^＋Ｂ細胞の表面上の占有されていない抗体結合部位を同定するために、蛍光色素結合体化Ｂ４抗体によって染色した。上部象限（ｕｐｐｅｒ ｑｕａｄｒａｎｔ）および右下象限内の細胞の頻度が、示される。各時点は、１匹のマウスから得た結果を示す。この結果は、ＦＭＣ６３処置が、この実験の過程にわたってｈＣＤ１９を有する細胞の進行性の枯渇をもたらし、脾臓よりも迅速に枯渇する血液Ｂ細胞を伴うこと示す。各時点において残存するＢ細胞は、ｍＣＤ１９またはｍＣＤ２０のそれらの発現によって定義され得るが、Ｂ４によって染色されず、これは、投与したＦＭＣ６３がその残存するＢ細胞に結合されたことを示唆する。これらの発見は、ＦＭＣ６３の、インビボでＢ細胞を結合しそしてそれを枯渇させる能力をを裏付ける。さらに、ＦＭＣ６３は、これらの抗体がｈＣＤ１９上の重複するエピトープを認識することを示唆するＢ４結合を妨げる。図１２Ｃにおける結果は、ＨＢ １２ｂ抗体処置（２５０μｇ）がまた投与の１時間以内にｈＣＤ１９上の抗体結合部位を飽和させ、そしてｈＣＤ１９陽性Ｂ細胞の枯渇をもたらすことを裏付ける。予想外にも、ＨＢ１２ｂ抗体は、Ｂ４抗体の結合を完全には阻害せず、これは、ＦＭＣ６３とは異なり、ＨＢ １２ｂが、Ｂ４によって認識されるエピトープとは異なるｈＣＤ１９上のエピトープを認識することを示唆する。図１２Ｂ〜１２Ｃに示される結果は、ほとんどの抗ＣＤ１９抗体がほとんどの他の抗ＣＤ１９抗体の結合を阻害することを実証し、これは、ほとんどの抗ＣＤ１９抗体が、類似するか、同一か、または重複するＣＤ１９タンパク質上の領域またはエピトープに結合することを示す。あるいは、これらの観察はまた、抗体分子の大きさと比較して比較的小さい大きさのＣＤ１９細胞外ドメインによってもたらされ得る。

【0409】

（６．６．実施例５：抗ＣＤ１９抗体処置は、体液性免疫および自己免疫を廃絶する）
この実施例に記載されるアッセイは、抗ＣＤ１９抗体が免疫応答を排除または減弱し得るか否かを決定するために使用され得る。これらのアッセイにおいて同定された抗ＣＤ１９抗体は、上で第５．１節において記載される技術を使用してキメラ抗ＣＤ１９抗体、ヒト抗ＣＤ１９抗体またはヒト化抗ＣＤ１９抗体を設計するために使用され得る。次に、このような抗体は、ヒトにおけるＢ細胞の悪性疾患の処置のための本発明の組成物および方法に使用され得る。

【0410】

血清抗体レベルに対する抗ＣＤ１９抗体誘導性のＢ細胞の枯渇の効果は、ｈＣＤ１９ＴＧ^＋／−マウスに抗ＣＤ１９抗体の単回注射を与えることによって評価した。図１３Ａは、ＣＤ１９抗体処置がＴＧ−１^＋／−マウスにおいて血清免疫グロブリンレベルを減少させることを示す。２月齢の同腹子を、２５０μｇのＦＭＣ６３抗体（黒塗りの円）またはコントロール抗体（白抜きの円）の単回注射によって、０日目に処置した。抗体レベルを、ＥＬＩＳＡによって、≧５匹のマウスの各群について示される平均値（±ＳＥＭ）を用いて決定した。ＣＤ１９ ｍＡｂ処置マウスまたはコントロールｍＡｂ処置マウスの間の差は、有意であった；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。この結果は、１週間〜２週間後において、血清ＩｇＭ抗体レベル、血清ＩｇＧ２ｂ抗体レベル、血清ＩｇＧ３抗体レベルおよび血清ＩｇＡ抗体レベルが有意に減少し、そして少なくとも１０日間にわたって減少したままであることを示す（図１３Ａ）。ＩｇＧ１抗体レベルおよびＩｇＧ２ａ血清レベルは、処置後の６週間および４週間にて正常を有意に下回った。

【0411】

ｈＣＤ１９ＴＧ^＋／−マウスは２月齢を経過した後に検出可能な自己抗体を産生する （Ｓａｔｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５７：４３７１（１９９６））ので、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡおよびヒストンに対する血清自己抗体結合を評価した。図１３Ｂは、抗ＣＤ１９抗体処置が、抗ＣＤ１９抗体処置後に自己抗体の抗ｄｓＤＮＡ自己抗体レベル、抗ｓｓＤＮＡ自己抗体レベルおよび抗ヒストン自己抗体レベルを減少させることを示す。この結果は、抗ＣＤ１９抗体処置が２週間後に血清ＩｇＭ自己抗体レベルを有意に減少させたことを示し、そしてアイソタイプスイッチＩｇＧ自己抗体の産生を１０週間まで妨げたことを示す（図１３Ｂ）。したがって、Ｂ細胞の枯渇は、実質的に急性の抗体応答および長期の抗体応答を減少させ、そして正常な免疫応答および病原性の免疫応答のクラススイッチを減弱した。

【0412】

Ｔ細胞非依存性の１型（ＴＩ−１）抗体応答および２型（ＴＩ−２）抗体応答に対するＢ細胞の枯渇の影響を、ｈＣＤ１９ＴＧ^＋／−マウスをＴＮＰ−ＬＰＳまたはＤＮＰ−Ｆｉｃｏｌｌ（０日目にて）免疫化し、抗ＣＤ１９抗体（ＦＭＣ６３）またはコントロール抗体による処置後の７日間において評価した。有意なハプテン特異的なＩｇＭ抗体応答、ＩｇＧ抗体応答およびＩｇＡ抗体応答は、いずれかの抗原（図１４Ａおよび１４Ｂ）によって免疫化した抗ＣＤ１９抗体処置マウスにおいて観察されなかった。Ｔ細胞依存性（ＴＤ）Ａｇ（ＤＮＰ−ＫＬＨ）に対する抗体応答をまた、免疫化前の７日間において抗ＣＤ１９抗体によって処置したマウスを使用して評価した（図１４Ｂ）。図１４Ｃは、抗ＣＤ１９抗体によって処置したＤＮＰ−ＫＬＨ免疫化マウスが減少した体液性免疫を示したことを示す。同腹子を、０日目における一次免疫化前の７日間において２５０μｇのＦＭＣ６３抗体（黒塗りの円）またはコントロール抗体（白抜きの円）によって処置し、血清を、示された日において得たＤＮＰ−ＫＬＨ免疫化のために、全てのマウスを、２１日目において１００μｇのＤＮＰ−ＫＬＨを用いてチャレンジした。全ての値は、各群の５匹のマウス由来の血清を使用して得た平均（±ＳＥＭ）ＥＬＩＳＡ ＯＤ単位である。抗ＣＤ１９抗体処置マウスまたはコントロール抗体処置マウスの間の差は、有意であった；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。この結果は、コントロール抗体処置同腹子がＤＮＰ−ＫＬＨ免疫化後の７日間において一次ＩｇＭ抗体応答を生じ、そして２１日目における抗原チャレンジ後に二次応答を生じたことを示す（図１４Ｃ）。しかし、有意なハプテン特異的なＩｇＭ抗体応答、ＩｇＧ抗体応答またはＩｇＡ抗体応答は、抗原によって免疫化または再チャレンジしたＣＤ１９ ｍＡｂ処置マウスにおいて検出されなかった。二次抗体応答に対するＢ細胞の枯渇の効果を評価するために、マウスをまた、ＤＮＰ−ＫＬＨによって免疫化し、そして１４日後（矢印）に抗ＣＤ１９抗体によって処置した（図１４Ｄ）。２１日目で、血清ＩｇＭ抗ＤＮＰ抗体応答、血清ＩｇＧ抗ＤＮＰ抗体応答および血清ＩｇＡ 抗ＤＮＰ抗体応答は、ＣＤ１９ ｍＡｂ処置マウスにおいて、コントロールｍＡｂによって処置した免疫化マウスのレベルを下回るレベルまで減少した。しかし、ＤＮＰ−ＫＬＨによるコントロールｍＡｂ処置マウスの２１日目における再チャレンジは、有意な二次抗体応答を誘導するが、ＣＤ１９ｍＡｂ処置マウスは、抗ＤＮＰ抗体を、ＤＮＰ−ＫＬＨ再チャレンジ後に産生しなかった。したがって、ＣＤ１９ ｍＡｂ誘導性のＢ細胞の枯渇は、実質的に、一次抗体応答および二次抗体応答の両方を減少させ、そして体液性免疫応答の間のクラススイッチを妨げた。

【0413】

（６．７．実施例６：抗ＣＤ２０抗体処置と組み合わせた抗ＣＤ１９抗体処置）
本明細書中に記載されるアッセイは、他の併用療法または組み合わせ療法（例えば、化学療法、毒素治療または放射線治療と組み合わせた抗ＣＤ１９抗体）が有益な効果（例えば、相加効果またはそれ以上のＢ細胞のさらなる枯渇）を有するか否かを決定するために使用され得る。動物モデルにおいて試験した併用療法の結果は、当該分野において周知である手段によってヒトに関連付けられ得る。

【0414】

抗ＣＤ２０抗体は、インビボでヒトおよびマウスのＢ細胞を枯渇させるのに有効である。したがって、抗ＣＤ１９（ＦＭＣ６３）抗体および抗ＣＤ２０（ＭＢ２０−１１）抗体による同時治療の利点を、これがＢ細胞の枯渇を増強するか否かを決定するために評価した。マウスを、最適以下の２μｇ用量の各抗体によって個別に処置したか、または１μｇの両抗体のの組み合わせによって個別に処置したか、または組み合わせた２μｇ用量によって個別に処置した。図１５は、０日目においてコントロール（２５０μｇ）、ＦＭＣ６３（ＣＤ１９、２μｇ）、ＭＢ２０−１１（ＣＤ２０、２μｇ）、ＦＭＣ６３＋ＭＢ２０−１１（各１μｇ）、またはＦＭＣ６３＋ＭＢ２０−１１（各２μｇ）の抗体によって処置したＴＧ−１^＋／−マウスの結果を示す。血液Ｂ細胞数を、時間０、１時間ならびに１日目、４日目および７日目において測定した。組織Ｂ細胞数を、７日目において決定した。値は、３匹のマウスからなる群からの平均（±ＳＥＭ）を示す。図１５に示される結果は、同時の抗ＣＤ１９抗体処置および抗ＣＤ２０抗体処置が有益であることを示す。１μｇの両抗体の組み合わせによって処置したマウスにおけるＢ細胞の枯渇は、中間であるか、または２μｇのそれぞれ個々の抗体によるマウスの処置後に観察された枯渇と同様であった（図１５）。しかし、２μｇの両抗体によるマウスの同時治療は、いずれかの抗体単独によって観察されたものよりも有意に大きいＢ細胞の枯渇をもたらした。したがって、組み合わせた抗ＣＤ１９治療および抗ＣＤ２０抗体治療は、Ｂ細胞の枯渇を増強する有益な効果を有した。これは、個々のＢ細胞の上の治療的に有効な抗体分子の蓄積によってもたらされるようである。

【0415】

（６．８．実施例７：皮下（Ｓ．Ｃ．）抗ＣＤ１９抗体投与は、治療的に有効である）
本明細書中に記載されるアッセイは、抗ＣＤ１９抗体の投与の皮下経路がＢ細胞を有効に枯渇させ得るか否かを決定するために使用され得る。動物モデルにおいて試験した異なる送達経路の効力の結果は、当該分野において周知である手段によってヒトに関連付けられ得る。ｉ．ｖ．に与えた抗ＣＤ１９抗体は、循環するＢ細胞および組織Ｂ細胞を有効に枯渇させるので、ｓ．ｃ．またはｉ．ｐ．に与えた抗ＣＤ１９抗体がＢ細胞を等しい程度まで枯渇させるか否かを評価した。野生型マウスを、２５０μｇにおいて皮下（ｓ．ｃ）、腹腔内（ｉ．ｐ．）またはｉ．ｖ．いずれかでＦＭＣ６３抗体によって処置した。値は、７日目における、フローサイトメトリーによって評価した場合の、平均（±ＳＥＭ）の血液（１ｍＬあたり）、骨髄、脾臓、リンパ節および腹膜腔のＢ２２０^＋Ｂ細胞数を示す（ｎ≧３）。コントロールと比較して、マウスの各群についての平均結果の間の有意差が、示される；^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１。図１６における結果は、ＣＤ１９抗体の皮下（ｓ．ｃ）投与、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与およびｉ．ｖ．投与がインビボで循環するＢ細胞および組織Ｂ細胞を有効に枯渇させることを示す。大部分の循環するＢ細胞および組織Ｂ細胞は、２５０μｇ用量としてｉ．ｖ．、ｉ．ｐ．、またはｓ．ｃ．のいずれかに抗ＣＤ１９抗体を与えたマウスにおいて枯渇した（図１６）。予想外にも、抗ＣＤ１９抗体をｉ．ｐ．に与えることは、ｉ．ｖ．処置よりも有意に良好に腹膜Ｂ細胞を枯渇させなかった。したがって、抗ＣＤ１９抗体は、≦６４ｍｇのｓ．ｃ注射として与えた場合に、循環するＢ細胞および組織Ｂ細胞の両方を有効に枯渇させるために使用され得る。抗ＣＤ１９抗体は、最低で１０μｇ用量のｉ．ｖ．まで有効である（図１０Ｄ）ので、より低いｓ．ｃ抗体用量でさえ、有効であるであろう。

【0416】

（６．９．実施例８：抗ＣＤ１９抗体処置は、インビボで腫瘍増殖を廃絶する）
バーキットリンパ腫（ヒトにおけるＢ細胞の悪性疾患）は、異常なｃ−Ｍｙｃの過剰発現をもたらすＩｇ遺伝子プロモーター領域へのｃ−ｍｙｃプロトオンコジーンの転座によって特徴付けられる。同様に、ｃ−ｍｙｃプロトオンコジーンがＩｇ重鎖エンハンサーの制御下にあるＥμ−ｃＭｙｃトランスジェニック（ｃＭｙｃＴＧ）マウスは、攻撃的なＢ細胞由来のリンパ腫を早期（ｅａｒｌｙ ａｇｅ）に発症し、Ｅμ−ｃＭｙｃトランスジェニックマウスは、２０週齢にて約９０％の死亡率を有し、そして約１２週間に生存の年齢中位数を有する（Ｈａｒｒｉｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７：３５３（１９８８）およびＡｄａｍｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３１８：５３３（１９８５））。ｃ−ＭｙｃＴＧマウス由来の腫瘍は、特定の発達段階のＢ細胞に限定されないが、優勢にＩｇ遺伝子再編成およびプレＢ細胞または未熟Ｂ細胞の表現型特徴を伴って存在する（Ａｄａｍｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３１８：５３３（１９８５））。ＣＤ１９指向型免疫療法のインビボにおける効力を評価するために、ｈＣＤ１９ＴＧ−１^＋／＋マウスとｃＭｙｃＴＧマウスとを交雑させて、攻撃的なＢ細胞由来のリンパ腫を早期に発症するｈＣＤ１９ＴＧ−１^＋／− ｃＭｙｃＴＧ^＋／−マウスを産出した。１匹のマウスに由来する腫瘍細胞を、単離し、インビトロで拡大培養し、そして表現型として、ｈＣＤ１９^＋およびマウス ＣＤ１９^＋ ＣＤ２０⁻ ＣＤ４３⁻ ＩｇＭ^＋ ＩｇＤ⁻ Ｂ２２０^＋のリンパ芽球（ｃ−ｍｙｃＴＧ^＋／−マウスにおいて発症するプレＢ／未熟Ｂ細胞腫瘍のうちの代表的なものである（Ｈａｒｒｉｓら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７：３５３（１９８８）およびＡｄａｍｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３１８：５３３（１９８５）））であると特徴付けられる。ｈＣＤ１９ＴＧ−１^＋／− ｃ−ｍｙｃＴＧ^＋マウス由来の腫瘍細胞（１０^５個）を、０日目に２０匹のＲａｇ^−／−マウスに対してｉ．ｖ．に移植した。等しい数のランダムに選択したマウスを、１日目および７日目において２５０μｇのＦＭＣ６３抗体（塗潰した円）またはコントロール抗体（白抜きの円）によって処置した。図１７Ａは、６週間にわたってフローサイトメトリーによって定量した循環する腫瘍細胞の数（±ＳＥＭ）を示し、そして図１７Ｂは、７週間にわたる、生存したマウスの％を示す。各値は、それらのマウスを試験した各日における生存可能なマウスの％を示す。図１７における結果は、抗ＣＤ１９抗体処置がｈＣＤ１９^＋リンパ腫の増殖をインビボで妨げることを示す。２０匹のＲａｇ^−／−マウス中へのこれらの腫瘍細胞の移植は、コントロールｍＡｂによって処置した１０匹のランダムに選択したレシピエントにおいて２週間で、循環するマウスＣＤ１９^＋リンパ芽球およびマウスＢ２２０^＋リンパ芽球の出現をもたらし、これらのマウスは、３．５週間で死亡した。対照的に、腫瘍移植後に抗ＣＤ１９抗体によって処置（１日目および７日目）するマウスは、１０匹のレシピエントの全てにおいて循環する腫瘍細胞の出現を７週間までにわたって防いだ。１匹の抗ＣＤ１９抗体処置マウスは、血液採取の間に死亡したが、決して循環する腫瘍細胞を示していたわけではなかった。したがって、抗ＣＤ１９抗体処置は、Ｂ細胞系統の悪性疾患（特に、ＣＤ２０を発現しないか、またはＣＤ２０を低いレベルで発現する腫瘍を伴う悪性疾患）を有する患者を処置するための有効な治療を提供し得る。

【0417】

本発明は、本明細書中に記載される特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではない。実際に、本発明の種々の改変は、記載されるものに加えて、上述の説明および添付の図面から当業者に明らかとなる。このような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが意図される。

【0418】

種々の出版物が、本明細書中に引用され、それらの開示は、その全体が参考として援用される。

【0419】

本発明は、本明細書中に記載される特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではない。実際に、本発明の種々の改変は、記載されるものに加えて、上述の説明および添付の図面から当業者に明らかとなる。このような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが意図される。

【0420】

種々の出版物が、本明細書中に引用され、それらの開示は、その全体が参考として援用される。

【0421】

【表3】

【0422】

【表4】

【図面の簡単な説明】

【0423】

【図1A】図１Ａ〜１Ｅは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス系統によるＣＤ１９発現を示す。図１Ａは、ｈＣＤ１９ＴＧ（ＴＧ−１^＋／−）マウス由来のＢ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を示す。図１Ｂは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス由来のＣＤ１９^＋血液Ｂ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現の相対平均密度を示す。図１Ｃは、ＴＧ−１^＋／−マウス組織由来のＣＤ１９^＋Ｂ細胞によるｈＣＤ１９発現およびｍＣＤ１９発現の相対密度を示す。図１Ｄは、ＴＧ−１^＋／−マウス由来のマウス血液およびマウス脾臓のＢ２２０^＋Ｂ細胞に対するＣＤ１９抗体結合密度を示す。図１Ｅは、ｈＣＤ１９ ｃＤＮＡトランスフェクト３００．１９細胞に結合する抗ＣＤ１９抗体を示す。

【図1B】図１Ａ〜１Ｅは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス系統によるＣＤ１９発現を示す。図１Ａは、ｈＣＤ１９ＴＧ（ＴＧ−１^＋／−）マウス由来のＢ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を示す。図１Ｂは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス由来のＣＤ１９^＋血液Ｂ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現の相対平均密度を示す。図１Ｃは、ＴＧ−１^＋／−マウス組織由来のＣＤ１９^＋Ｂ細胞によるｈＣＤ１９発現およびｍＣＤ１９発現の相対密度を示す。図１Ｄは、ＴＧ−１^＋／−マウス由来のマウス血液およびマウス脾臓のＢ２２０^＋Ｂ細胞に対するＣＤ１９抗体結合密度を示す。図１Ｅは、ｈＣＤ１９ ｃＤＮＡトランスフェクト３００．１９細胞に結合する抗ＣＤ１９抗体を示す。

【図1C】図１Ａ〜１Ｅは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス系統によるＣＤ１９発現を示す。図１Ａは、ｈＣＤ１９ＴＧ（ＴＧ−１^＋／−）マウス由来のＢ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を示す。図１Ｂは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス由来のＣＤ１９^＋血液Ｂ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現の相対平均密度を示す。図１Ｃは、ＴＧ−１^＋／−マウス組織由来のＣＤ１９^＋Ｂ細胞によるｈＣＤ１９発現およびｍＣＤ１９発現の相対密度を示す。図１Ｄは、ＴＧ−１^＋／−マウス由来のマウス血液およびマウス脾臓のＢ２２０^＋Ｂ細胞に対するＣＤ１９抗体結合密度を示す。図１Ｅは、ｈＣＤ１９ ｃＤＮＡトランスフェクト３００．１９細胞に結合する抗ＣＤ１９抗体を示す。

【図1D】図１Ａ〜１Ｅは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス系統によるＣＤ１９発現を示す。図１Ａは、ｈＣＤ１９ＴＧ（ＴＧ−１^＋／−）マウス由来のＢ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を示す。図１Ｂは、ｈＣＤ１９ＴＧマウス由来のＣＤ１９^＋血液Ｂ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現の相対平均密度を示す。図１Ｃは、ＴＧ−１^＋／−マウス組織由来のＣＤ１９^＋Ｂ細胞によるｈＣＤ１９発現およびｍＣＤ１９発現の相対密度を示す。図１Ｄは、ＴＧ−１^＋／−マウス由来のマウス血液およびマウス脾臓のＢ２２０^＋Ｂ細胞に対するＣＤ１９抗体結合密度を示す。図１Ｅは、ｈＣＤ１９ ｃＤＮＡトランスフェクト３００．１９細胞に結合する抗ＣＤ１９抗体を示す。

【図2A】図２Ａ〜２Ｄは、ｈＣＤ１９ＴＧマウスにおける血液、脾臓、およびリンパ節のＢ細胞の枯渇を示す。図２Ａは、ＣＤ１９またはアイソタイプが一致したコントロール（ＣＴＬ）抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後の７日間における、血液、脾臓、およびリンパ節からの代表的なＢ細胞の枯渇を示す。図２Ｂは、抗ＣＤ１９抗体による循環するＢ細胞の枯渇の時間経過を示す。図２Ｃおよび図２Ｄは、それぞれ、示された用量のＣＤ１９（黒塗りのバー）またはコントロール（白抜きのバー）抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後における、脾臓およびリンパ節のＢ細胞数（±ＳＥＭ）を示す。

【図2B】図２Ａ〜２Ｄは、ｈＣＤ１９ＴＧマウスにおける血液、脾臓、およびリンパ節のＢ細胞の枯渇を示す。図２Ａは、ＣＤ１９またはアイソタイプが一致したコントロール（ＣＴＬ）抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後の７日間における、血液、脾臓、およびリンパ節からの代表的なＢ細胞の枯渇を示す。図２Ｂは、抗ＣＤ１９抗体による循環するＢ細胞の枯渇の時間経過を示す。図２Ｃおよび図２Ｄは、それぞれ、示された用量のＣＤ１９（黒塗りのバー）またはコントロール（白抜きのバー）抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後における、脾臓およびリンパ節のＢ細胞数（±ＳＥＭ）を示す。

【図2C】図２Ａ〜２Ｄは、ｈＣＤ１９ＴＧマウスにおける血液、脾臓、およびリンパ節のＢ細胞の枯渇を示す。図２Ａは、ＣＤ１９またはアイソタイプが一致したコントロール（ＣＴＬ）抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後の７日間における、血液、脾臓、およびリンパ節からの代表的なＢ細胞の枯渇を示す。図２Ｂは、抗ＣＤ１９抗体による循環するＢ細胞の枯渇の時間経過を示す。図２Ｃおよび図２Ｄは、それぞれ、示された用量のＣＤ１９（黒塗りのバー）またはコントロール（白抜きのバー）抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後における、脾臓およびリンパ節のＢ細胞数（±ＳＥＭ）を示す。

【図2D】図２Ａ〜２Ｄは、ｈＣＤ１９ＴＧマウスにおける血液、脾臓、およびリンパ節のＢ細胞の枯渇を示す。図２Ａは、ＣＤ１９またはアイソタイプが一致したコントロール（ＣＴＬ）抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後の７日間における、血液、脾臓、およびリンパ節からの代表的なＢ細胞の枯渇を示す。図２Ｂは、抗ＣＤ１９抗体による循環するＢ細胞の枯渇の時間経過を示す。図２Ｃおよび図２Ｄは、それぞれ、示された用量のＣＤ１９（黒塗りのバー）またはコントロール（白抜きのバー）抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後における、脾臓およびリンパ節のＢ細胞数（±ＳＥＭ）を示す。

【図3】図３Ａ〜３Ｆは、抗ＣＤ１９抗体処置後の骨髄Ｂ細胞の枯渇を示す。図３Ａは、それぞれ、フローサイトメトリー分析を用いた４色免疫蛍光染色によって評価された、ＴＧ−１^＋／−骨髄Ｂ細胞の下位集団による代表的なｈＣＤ１９発現およびｍＣＤ１９発現を示す。図３Ｂは、ＦＭＣ６３またはアイソタイプが一致したコントロール抗体（２５０μｇ）による処置後の７日間における、ｈＣＤ１９ＴＧマウスの骨髄におけるｈＣＤ１９^＋細胞の枯渇を示し、この枯渇は、フローサイトメトリー分析を用いた２色免疫蛍光染色によって評価された。図３Ｃは、ＣＤ１９またはアイソタイプが一致したコントロール抗体（２５０μｇ）によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後の７日間における、骨髄中の代表的なＢ２２０^＋Ｂ細胞の枯渇を示す。図３Ｄは、ＦＭＣ６３またはアイソタイプが一致したコントロール抗体（２５０μｇ）によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後の７日間における、３色免疫蛍光によって評価された場合の代表的なＢ細胞サブセットの枯渇を示す。ＩｇＭ⁻Ｂ２２０^ｌｏプロ／プレＢ細胞は、ＣＤ４３発現に基づいてさらに細分された（下のパネル）。図３Ｅは、ＦＭＣ６３またはアイソタイプが一致したコントロール抗体（２５０μｇ）によるｈＣＤ１９ＴＧマウスの処置後の７日間における、２色免疫蛍光によって評価された場合のＣＤ２５^＋Ｂ２２０^ｌｏプレＢ細胞の代表的な枯渇を示す。図３Ｆは、３匹以上の同腹子の対のＦＭＣ６３（黒塗りのバー）またはコントロール（白抜きのバー）抗体による処置後の７日間における、左右の大腿骨内のプロＢ細胞、プレＢ細胞、未熟Ｂ細胞、および成熟Ｂ細胞の数（±ＳＥＭ）を示す棒グラフを示す。

【図4A】図４Ａ〜４Ｃは、腹膜腔Ｂ細胞が抗ＣＤ１９抗体処置に感受性であることを示す。図４Ａは、腹膜腔のＣＤ５^＋Ｂ２２０^＋ Ｂ１ａＢ細胞およびＣＤ５⁻Ｂ２２０^ｈｉ Ｂ２（従来通り）Ｂ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を示す。図４Ｂは、ＣＤ１９（２５０μｇのＨＢ １２ａ、ＨＢ １２ｂ、およびＦＭＣ６３；５０μｇのＢ４およびＨＤ２３７）抗体またはコントロール抗体（２５０μｇ）によって処置されたＴＧ−１^＋／−マウスからの腹膜腔Ｂ２２０^＋細胞の枯渇を示す。図４Ｃは、抗ＣＤ１９抗体またはコントロール抗体によるｈＣＤ１９ＴＧマウスの処置後の７日間におけるＣＤ５^＋Ｂ２２０^＋ Ｂ１ａ Ｂ細胞およびＣＤ５⁻Ｂ２２０^ｈｉ Ｂ２ Ｂ細胞の代表的な枯渇を示す。

【図4B】図４Ａ〜４Ｃは、腹膜腔Ｂ細胞が抗ＣＤ１９抗体処置に感受性であることを示す。図４Ａは、腹膜腔のＣＤ５^＋Ｂ２２０^＋ Ｂ１ａＢ細胞およびＣＤ５⁻Ｂ２２０^ｈｉ Ｂ２（従来通り）Ｂ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を示す。図４Ｂは、ＣＤ１９（２５０μｇのＨＢ １２ａ、ＨＢ １２ｂ、およびＦＭＣ６３；５０μｇのＢ４およびＨＤ２３７）抗体またはコントロール抗体（２５０μｇ）によって処置されたＴＧ−１^＋／−マウスからの腹膜腔Ｂ２２０^＋細胞の枯渇を示す。図４Ｃは、抗ＣＤ１９抗体またはコントロール抗体によるｈＣＤ１９ＴＧマウスの処置後の７日間におけるＣＤ５^＋Ｂ２２０^＋ Ｂ１ａ Ｂ細胞およびＣＤ５⁻Ｂ２２０^ｈｉ Ｂ２ Ｂ細胞の代表的な枯渇を示す。

【図4C】図４Ａ〜４Ｃは、腹膜腔Ｂ細胞が抗ＣＤ１９抗体処置に感受性であることを示す。図４Ａは、腹膜腔のＣＤ５^＋Ｂ２２０^＋ Ｂ１ａＢ細胞およびＣＤ５⁻Ｂ２２０^ｈｉ Ｂ２（従来通り）Ｂ細胞によるヒトＣＤ１９発現およびマウスＣＤ１９発現を示す。図４Ｂは、ＣＤ１９（２５０μｇのＨＢ １２ａ、ＨＢ １２ｂ、およびＦＭＣ６３；５０μｇのＢ４およびＨＤ２３７）抗体またはコントロール抗体（２５０μｇ）によって処置されたＴＧ−１^＋／−マウスからの腹膜腔Ｂ２２０^＋細胞の枯渇を示す。図４Ｃは、抗ＣＤ１９抗体またはコントロール抗体によるｈＣＤ１９ＴＧマウスの処置後の７日間におけるＣＤ５^＋Ｂ２２０^＋ Ｂ１ａ Ｂ細胞およびＣＤ５⁻Ｂ２２０^ｈｉ Ｂ２ Ｂ細胞の代表的な枯渇を示す。

【図5】図５Ａは、ＨＢ１２ａ抗ＣＤ１９抗体の重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列についてのヌクレオチド配列（配列番号１）および予想されるアミノ酸配列（配列番号２）を示す。図５Ｂは、ＨＢ１２ｂ抗ＣＤ１９抗体の重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列についてのヌクレオチド配列（配列番号３）および予想されるアミノ酸配列（配列番号４）を示す。

【図6】図６Ａは、ＨＢ１２ａ抗ＣＤ１９抗体の軽鎖配列についてのヌクレオチド配列（配列番号１５）および予想されるアミノ酸配列（配列番号１６）を示す。図６Ｂは、ＨＢ１２ｂ抗ＣＤ１９抗体の軽鎖配列についてのヌクレオチド配列（配列番号１７）および予想されるアミノ酸配列（配列番号１８）を示す。

【図7A】図７Ａ〜７Ｂは、公開されたマウス抗（ヒト）ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列アライメントを示す。図７Ａは、コンセンサス配列（配列番号５）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、ＨＢ１２ａ（配列番号２）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、４Ｇ７（配列番号６）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、ＨＢ１２ｂ（配列番号４）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、ＨＤ３７（配列番号７）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、Ｂ４３（配列番号８）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、およびＦＭＣ６３（配列番号９）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列についての配列アライメントを示す。図７Ｂは、抗ＣＤ１９抗体の軽鎖ＶＫアミノ酸配列分析を示す。コンセンサス配列（配列番号１０）、ＨＢ１２ａ（配列番号１６）、ＨＢ１２ｂ（配列番号１８）、ＨＤ３７（配列番号１１）、Ｂ４３（配列番号１２）、ＦＭＣ６３（配列番号１３）、および４Ｇ７（配列番号１４）は、整列される。

【図7B】図７Ａ〜７Ｂは、公開されたマウス抗（ヒト）ＣＤ１９抗体のアミノ酸配列アライメントを示す。図７Ａは、コンセンサス配列（配列番号５）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、ＨＢ１２ａ（配列番号２）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、４Ｇ７（配列番号６）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、ＨＢ１２ｂ（配列番号４）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、ＨＤ３７（配列番号７）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、Ｂ４３（配列番号８）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列、およびＦＭＣ６３（配列番号９）を含む重鎖Ｖ_Ｈ−Ｄ−Ｊ_Ｈ連結配列についての配列アライメントを示す。図７Ｂは、抗ＣＤ１９抗体の軽鎖ＶＫアミノ酸配列分析を示す。コンセンサス配列（配列番号１０）、ＨＢ１２ａ（配列番号１６）、ＨＢ１２ｂ（配列番号１８）、ＨＤ３７（配列番号１１）、Ｂ４３（配列番号１２）、ＦＭＣ６３（配列番号１３）、および４Ｇ７（配列番号１４）は、整列される。

【図8A】図８Ａ〜８Ｃは、ＣＤ１９密度がインビボで抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞の枯渇効率に影響を及ぼすことを示す。ｈＣＤ１９ＴＧマウスにおける代表的な血液および脾臓のＢ細胞の枯渇は、ＨＢ１２ｂ（図８Ａ）抗体またはＦＭＣ６３（図８Ｂ）抗体による処置後（７日、２５０μｇ／マウス）に示される。図８Ｃは、ＴＧ−１^＋／−マウス由来の血液Ｂ２２０^＋Ｂ細胞に対する相対的な抗ＣＤ１９抗体結合密度および抗ＣＤ２０抗体結合密度を示す。図８Ｄは、ＴＧ−１^＋／−マウス由来の脾臓Ｂ２２０^＋Ｂ細胞に対する相対的な抗ＣＤ１９抗体結合密度および抗ＣＤ２０抗体結合密度を示す。

【図8B】図８Ａ〜８Ｃは、ＣＤ１９密度がインビボで抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞の枯渇効率に影響を及ぼすことを示す。ｈＣＤ１９ＴＧマウスにおける代表的な血液および脾臓のＢ細胞の枯渇は、ＨＢ１２ｂ（図８Ａ）抗体またはＦＭＣ６３（図８Ｂ）抗体による処置後（７日、２５０μｇ／マウス）に示される。図８Ｃは、ＴＧ−１^＋／−マウス由来の血液Ｂ２２０^＋Ｂ細胞に対する相対的な抗ＣＤ１９抗体結合密度および抗ＣＤ２０抗体結合密度を示す。図８Ｄは、ＴＧ−１^＋／−マウス由来の脾臓Ｂ２２０^＋Ｂ細胞に対する相対的な抗ＣＤ１９抗体結合密度および抗ＣＤ２０抗体結合密度を示す。

【図8C】図８Ａ〜８Ｃは、ＣＤ１９密度がインビボで抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞の枯渇効率に影響を及ぼすことを示す。ｈＣＤ１９ＴＧマウスにおける代表的な血液および脾臓のＢ細胞の枯渇は、ＨＢ１２ｂ（図８Ａ）抗体またはＦＭＣ６３（図８Ｂ）抗体による処置後（７日、２５０μｇ／マウス）に示される。図８Ｃは、ＴＧ−１^＋／−マウス由来の血液Ｂ２２０^＋Ｂ細胞に対する相対的な抗ＣＤ１９抗体結合密度および抗ＣＤ２０抗体結合密度を示す。図８Ｄは、ＴＧ−１^＋／−マウス由来の脾臓Ｂ２２０^＋Ｂ細胞に対する相対的な抗ＣＤ１９抗体結合密度および抗ＣＤ２０抗体結合密度を示す。

【図8D】図８Ａ〜８Ｃは、ＣＤ１９密度がインビボで抗ＣＤ１９抗体によるＢ細胞の枯渇効率に影響を及ぼすことを示す。ｈＣＤ１９ＴＧマウスにおける代表的な血液および脾臓のＢ細胞の枯渇は、ＨＢ１２ｂ（図８Ａ）抗体またはＦＭＣ６３（図８Ｂ）抗体による処置後（７日、２５０μｇ／マウス）に示される。図８Ｃは、ＴＧ−１^＋／−マウス由来の血液Ｂ２２０^＋Ｂ細胞に対する相対的な抗ＣＤ１９抗体結合密度および抗ＣＤ２０抗体結合密度を示す。図８Ｄは、ＴＧ−１^＋／−マウス由来の脾臓Ｂ２２０^＋Ｂ細胞に対する相対的な抗ＣＤ１９抗体結合密度および抗ＣＤ２０抗体結合密度を示す。

【図9】図９Ａ〜９Ｄは、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞の枯渇がｃＲγ依存性および単球依存性であることを示す。図９Ａは、ＣＤ１９またはアイソタイプコントロール抗体によるｈＣＤ１９ ＴＧ−１^＋／− ＦｃＲγ^＋／−同腹子またはｈＣＤ１９ ＴＧ−１^＋／− ＦｃＲγ^−／−同腹子の処置後の７日間における、代表的な血液および脾臓のＢ細胞の枯渇である。図９Ｂは、ＦｃＲγ^−／−同腹子の抗体処置後の７日間の０日目における血液および組織のＢ細胞の枯渇である。図９Ｃは、単球が枯渇したｈＣＤ１９ ＴＧ−１^＋／−マウスにおける代表的なＢ細胞数である。図９Ｄは、抗体処置後の７日間における、血液および組織のＢ細胞の枯渇である。

【図10A】図１０Ａ〜１０Ｄは、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞の枯渇の持続期間および用量応答を示す。図１０Ａは、ＦＭＣ６３またはアイソタイプコントロール抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後の７日間の０日目における、血液のＢ２２０^＋ Ｂ細胞およびＴｈｙ−１^＋ Ｔ細胞の数を示す。図１０Ｂ〜Ｃは、抗体処置後の１１週目、１６週目、および３０週目における、図１０Ａに示されるマウスの代表的な組織Ｂ細胞の枯渇を示す。図１０Ｄは、血液、骨髄、および脾臓のＢ細胞の枯渇についての抗ＣＤ１９抗体用量応答を示す。

【図10B】図１０Ａ〜１０Ｄは、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞の枯渇の持続期間および用量応答を示す。図１０Ａは、ＦＭＣ６３またはアイソタイプコントロール抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後の７日間の０日目における、血液のＢ２２０^＋ Ｂ細胞およびＴｈｙ−１^＋ Ｔ細胞の数を示す。図１０Ｂ〜Ｃは、抗体処置後の１１週目、１６週目、および３０週目における、図１０Ａに示されるマウスの代表的な組織Ｂ細胞の枯渇を示す。図１０Ｄは、血液、骨髄、および脾臓のＢ細胞の枯渇についての抗ＣＤ１９抗体用量応答を示す。

【図10C】図１０Ａ〜１０Ｄは、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞の枯渇の持続期間および用量応答を示す。図１０Ａは、ＦＭＣ６３またはアイソタイプコントロール抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後の７日間の０日目における、血液のＢ２２０^＋ Ｂ細胞およびＴｈｙ−１^＋ Ｔ細胞の数を示す。図１０Ｂ〜Ｃは、抗体処置後の１１週目、１６週目、および３０週目における、図１０Ａに示されるマウスの代表的な組織Ｂ細胞の枯渇を示す。図１０Ｄは、血液、骨髄、および脾臓のＢ細胞の枯渇についての抗ＣＤ１９抗体用量応答を示す。

【図10D】図１０Ａ〜１０Ｄは、抗ＣＤ１９抗体処置後のＢ細胞の枯渇の持続期間および用量応答を示す。図１０Ａは、ＦＭＣ６３またはアイソタイプコントロール抗体によるＴＧ−１^＋／−マウスの処置後の７日間の０日目における、血液のＢ２２０^＋ Ｂ細胞およびＴｈｙ−１^＋ Ｔ細胞の数を示す。図１０Ｂ〜Ｃは、抗体処置後の１１週目、１６週目、および３０週目における、図１０Ａに示されるマウスの代表的な組織Ｂ細胞の枯渇を示す。図１０Ｄは、血液、骨髄、および脾臓のＢ細胞の枯渇についての抗ＣＤ１９抗体用量応答を示す。

【図11A】図１１Ａ〜１１Ｃは、ＣＤ１９がインビボで抗体結合後に内在化されないことを示す。インビボにおける、ＨＢ１２ａ（図１１Ａ）、ＨＢ１２ｂ（図１１Ｂ）、ＦＭＣ６３（図１１Ｃ）またはアイソタイプが一致したコントロール抗体（２５０μｇ）によって処置されたＴＧ−１^＋／−マウスにおける細胞表面のＣＤ１９発現およびＢ細胞クリアランス。

【図11B】図１１Ａ〜１１Ｃは、ＣＤ１９がインビボで抗体結合後に内在化されないことを示す。インビボにおける、ＨＢ１２ａ（図１１Ａ）、ＨＢ１２ｂ（図１１Ｂ）、ＦＭＣ６３（図１１Ｃ）またはアイソタイプが一致したコントロール抗体（２５０μｇ）によって処置されたＴＧ−１^＋／−マウスにおける細胞表面のＣＤ１９発現およびＢ細胞クリアランス。

【図11C】図１１Ａ〜１１Ｃは、ＣＤ１９がインビボで抗体結合後に内在化されないことを示す。インビボにおける、ＨＢ１２ａ（図１１Ａ）、ＨＢ１２ｂ（図１１Ｂ）、ＦＭＣ６３（図１１Ｃ）またはアイソタイプが一致したコントロール抗体（２５０μｇ）によって処置されたＴＧ−１^＋／−マウスにおける細胞表面のＣＤ１９発現およびＢ細胞クリアランス。

【図12】図１２Ａ〜１２Ｃは、インビボでの、抗ＣＤ１９抗体結合後のＣＤ１９の飽和を示す。図１２Ａは、インビボにおける、ＦＭＣ６３またはアイソタイプが一致したコントロール抗体（２５０μｇ）によって処置したＴＧ−１^＋／−マウスにおけるＢ細胞クリアランスを示す。図１２Ｂは、ＦＭＣ６３抗体処置（２５０μｇ）が投与の１時間以内にｈＣＤ１９上の抗体結合部位を飽和させることを示す。図１２Ｃは、ＨＢ１２ｂ抗ＣＤ１９抗体処置（２５０μｇ）が、図１２Ｂにおいて評価されたように、投与の１時間以内にｈＣＤ１９上の抗体結合部位を飽和させることを示す。

【図13】図１３Ａ〜１３Ｂは、抗ＣＤ１９抗体処置がＴＧ−１^＋／−マウスにおける血清の免疫グロブリンレベルおよび自己抗体レベルを減少させることを示す。図１３Ａは、抗ＣＤ１９抗体処置後の血清の免疫グロブリンレベルを示し、そして図１３Ｂは、抗ＣＤ１９抗体処置後の、抗ｄｓＤＮＡ自己抗体レベル、抗ｓｓＤＮＡ自己抗体レベルおよび抗ヒストン自己抗体レベルを示す。

【図14】図１４Ａ〜１４Ｂは、抗ＣＤ１９抗体処置がＴＧ−１^＋／−マウスにおいて体液性免疫応答をブロックすることを示す。抗体処置マウスは、図１４Ａ ＴＮＰ−ＬＰＳ、図１４Ｂ ＤＮＰ−Ｆｉｃｏｌｌおよび図１４Ｃ〜１４Ｄ ＤＮＰ−ＫＬＨによって免疫化された。同腹子は、０日目における一次免疫化前の７日間（Ａ〜Ｃ）または０日目における一次免疫化後の１４日間（Ｄ）のいずれかにおいて、ＦＭＣ６３（黒塗りの円）コントロール（白抜きの円）抗体（２５０μｇ）によって処置された。

【図15】図１５は、抗ＣＤ１９抗体および抗ＣＤ２０抗体による同時の処置が相加的であることを示す。

【図16】図１６は、抗ＣＤ１９抗体の皮下（ｓ．ｃ）投与、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与およびｉ．ｖ．投与が、インビボにおいて、循環するＢ細胞および組織Ｂ細胞を有効に枯渇させることを示す。

【図17】図１７Ａ〜１７Ｂ。抗ＣＤ１９抗体処置は、インビボでｈＣＤ１９^＋リンパ腫の増殖を妨げ（図１７Ａ）、そして生存率を上昇させる（図１７Ｂ）。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]

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